CN110150320A - 球孢白僵菌菌株和金龟子绿僵菌菌株联合防治椰心叶甲的应用 - Google Patents

球孢白僵菌菌株和金龟子绿僵菌菌株联合防治椰心叶甲的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740在防治椰心叶甲方面的应用，属于植物保护领域。本发明的两株菌株均能高效防治椰心叶甲，尤其以菌土撒施效果较好，防治效果分别为74.47％、61.70％，两株菌联合施用效果更佳，撒施防治效果达到84.83％，具有林间应用价值。

Description

球孢白僵菌菌株和金龟子绿僵菌菌株联合防治椰心叶甲的 应用
技术领域
本发明属于植物保护领域，具体地涉及球孢白僵菌菌株和金龟子绿僵菌菌株联合防治椰心叶甲的应用。
背景技术
椰心叶甲(Brontispa longissima(Gestro))属鞘翅(Coleoptera)，铁甲科(Hispidae)，潜甲亚科(Anisoderinae)，是全国重要危险性害虫。1999年以来，在广东、广西、海南等地入境的棕榈科植物均有检测到该虫，并以一定速度向周边地区蔓延。该虫主要危害棕榈科植物25属，约34种。其中以椰子为最主要寄主。椰心叶甲幼虫和成虫均聚集在棕榈科植物的未展开心叶中取食危害。植物受害后，被取食叶片呈现明显的与叶脉平行的褐色病斑，轻则树势减弱，引起次期性害虫进一步危害，重则植物心部逐渐腐烂，无新叶抽出，直至整株枯死。
严格的检疫措施是防止椰心叶甲在国家和地区之间进行传播的有效手段，主要检查未展开和初展开心叶的叶面和叶背是否有椰心叶甲危害状及成虫、幼虫和虫卵的存在，若发现虫情，应立即采取退回、烧毁或熏蒸等方式进行处理。在我国海南，曾使用多种方法来防止椰心叶甲的传播，如将感染区周围3公理范围内的椰树砍掉，禁止感染区椰树向外输送等。
化学防治是目前防治此虫最主要的方法。常用方法包括药剂喷雾法、挂包法、茎干注药法和根部埋药法。打孔注药法仅对大王椰子树的椰心叶甲防治效果较好，而对其它棕搁科植物的防治效果一般。高压水枪喷雾法不仅浪费药剂，污染环境，并难以准确防治10余米高的棕榈科植物心叶里的椰心叶甲。挂包法施药可真正做到靶向施药，提高药剂的有效利用率，并且使用方便，无雾滴漂移，减少了环境污染。由华南农业大学和广东省南海绿宝生化技术研究所研制的椰甲清粉剂(杀虫丹和啶虫眯)复配剂挂袋法防治椰心叶甲被认为是目前防治椰心叶甲较好的方法之一，防效在95％以上。
然而，大量化学农药的使用，不但费用投入较高，且对环境造成严重污染，同时由于用药次数的增多，使用量的增大，致使椰心叶甲对某些杀虫剂产生抗性，为此，国内外对椰心叶甲的生物防治进行了大量的研究。椰心叶甲具有多种天敌，包括寄生性天敌、捕食性天敌和微生物天敌，目前各国对椰心叶甲的生物防治主要集中在寄生蜂和病原微生物的应用上。
球孢白僵菌(Beauveria bassiana(Bals.)Vuill)是研究最多的昆虫病原真菌，其中，已记载的白僵菌寄主包括15目149科的707种昆虫。
在我国，上世纪80年代台湾进行了利用绿僵菌防治椰心叶甲的一系列研究，取得了重要进展。近年来，大陆的海南和广东等省也开展相关研究，使绿僵菌在椰心叶甲的可持续控制中展现出光明前景。
然而，作为真菌杀虫剂的关键技术-应用价值高的高效杀虫菌株的选育尚未取得重大突破。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明旨在提供一种高效、安全的用于防治椰心叶甲的球孢白僵菌和/或金龟子绿僵菌。
为了完成上述目的，本发明一方面提供了球孢白僵菌菌株Beauveria bassianaATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740在制备用于防治椰心叶甲的毒剂中的应用。
本发明第二方面提供了球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740在制备用于防治椰心叶甲的毒剂中的应用。
在本发明的一些实施方案中，所述用于防治椰心叶甲的毒剂为粉剂。在本发明的一些优选实施方案中，每g所述粉剂中含有孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860的孢子1×108～5×1011个，含有金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的孢子1×108～1×1011个。
本发明第三方面提供一种防治植物中椰心叶甲的方法，包括向所述植物施用本发明第一方面所述球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的步骤。
在本发明的一些实施方案中，所述施用是指撒施。
在本发明的一些具体实施方案中，所述撒施包括：
获得所述球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的孢子；
将获得的孢子与细土混匀，使得细土中含孢量为1.0×109个·g-1细土；
按300kg细土·hm-2的用量量，均匀撤于林地。
在本发明的另一些实施方案中，所述施用是指喷施。
在本发明的一些具体实施方案中，所述喷施包括：
获得球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的孢子；
用水调制成浓度约为1.0×108个孢子·mL-1的孢子悬液；
用背负式喷雾器，对着植物心叶均匀喷菌。
在本发明的一些实施方案中，所述获得球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的孢子包括以下步骤：
从斜面菌种上刮下孢子，并置于恒温振荡器(SHA-C-15DR)中，(25±0.5)℃，(130r·min-1)摇瓶发酵72h后备用；
按体积比约1∶10与液体培养基混合均匀后，倒入麦麸中，混合均匀，平铺于浅盘，用无纺布覆盖，室温培养；
待固体培养基上充分产孢后，置于16-18℃条件下风干，袋装备用。
在本发明中，所述植物为棕榈科植物。
本发明的有益效果
相对于现有技术，本发明提供了球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740在防治椰心叶甲方面的应用，丰富了椰心叶甲生物防治资源库，防治效果高达74.47％和61.70％，两株菌联合施用效果更佳，撒施防治效果达到84.83％，具有林间应用价值。
利用本发明的菌株，施用方式简单，仅需将孢子与细土混匀成菌土撒施，或与水混合喷施即可。且成本低廉。其中，利用菌土撒施，有利于孢子粉沉降入植物心叶，使心叶中的虫体感染，在生产中应用效果较佳。
附图说明
图1示出了不同菌不同施菌方式对椰心叶甲的防治效果。B(撒)：球孢白僵菌撒施；M(撒)：金龟子绿僵菌撒施；BM(撒)两菌株联用撒施；B(喷)：球孢白僵菌喷施；M(喷)：金龟子绿僵菌喷施；BM(喷)：两菌株联用喷施。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
实施例
以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术，因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本发明的精神或范围。
除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
实施例1
1.材料与方法
1.1供试菌株
供试的白僵菌为球孢白僵菌(Beauveria bassiana(Bals.)Vuill)菌株为Beauveria bassiana ATT 44860，购自美国模式培养物集存库(American type culturecollection，ATCC)。
供试的绿僵菌为金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae(Metsch.)Sorokin)菌株为金Metarhizium anisopliae DSM 21740，购自德国微生物菌种保藏中心(DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSM)。
该2菌株均已通过致病力测定，是椰心叶甲的高致病力菌株。
1.2供试孢子粉
1.2.1培养基
斜面培养基为PPDA固体培养基，200g去皮马铃薯，20g葡萄糖，20g蛋白胨，18g琼脂，加蒸馏水至1 000mL。液体种子培养基，200g去皮马铃薯，20g葡萄糖，20g蛋白胨，加蒸馏水至1 000mL。发酵固体培养基为麦麸。
1.2.2液体母种培养
待已灭菌的液体种子培养基冷却至室温，每100mL加入0.5g斜面刮下的湿孢子粉，并置于恒温振荡器(SHA-C-15DR)中，(25±0.5)℃，(130r·min-1)摇瓶发酵72h后备用。
1.2.3固体培养
麦麸与液体培养基分别灭菌，待其冷却至室温后备用。每1mL液体种子液加入100μg硫酸链霉素摇匀，按体积比约1∶10与液体培养基混合均匀后，倒入麦麸中，加入量以手抓起时不滴水为宜，混合均匀，平铺于浅盘(厚度约3-5cm)，用无纺布覆盖，室温培养。待固体培养基上充分产孢后，置于16-18℃条件下风干，袋装备用。经检测，白僵菌麦麸孢子粉含孢量4.17×1011个孢子·g-1，绿僵菌麦麸孢子粉含孢量5.36×1010个孢子·g-1，活孢率均大于90％。
1.2林间防治试验
1.2.1标准地概况
试验地位于厦门市同安，地点：北纬26°5′58″，东经116°57′54″，平均海拔385m。寄主老人葵，平均树高2.5m。总共设置监测定8个，厦门岛内4个，分别为：厦门市五缘湾公园、厦门机场前绿地、源昌鑫海湾附近加油站、五缘音乐岛；岛外4个，分别为：厦门市同安区方特附近、滨海东大道、滨海西大道、集美区厦门北站附近。
1.2.2防治试验
2017年5月上旬，在试验地内，选择标准地9块，每块30株。
菌土撒施(处理1)，白僵菌和绿僵菌及等比例混合菌分别标注为B(撒)、M(撒)和BM(撒)。2种麦麸孢子粉均先用细土调制成含孢量约1.0×109个孢子·g-1的菌土。3月上旬，按300kg·hm-2的施菌量，均匀撤于林地。
菌液喷菌(处理2)，白僵菌和绿僵菌及等比例混合菌分别标注为B(喷)、M(喷)和BM(喷)。用含0.01％吐温-80的水将麦麸孢子粉洗下，过滤，并用水调制成浓度约为1.0×108个孢子·mL-1的孢子悬液，用背负式喷雾器，对着植物心叶均匀喷菌。
对照(处理3)CK，以3块不做任何处理的标准地为对照。
1.2.3防治效果调查
处理后的1个月，对标准地进行每株调查。
1.4数据处理
数据应用Excel 2003和DPS数据处理系统(7.55)进行统计分析[9]。防治效果按以下公式统计，并将其反正弦平方根转换后进行方差分析和多重比较。
虫口减退率＝(对照虫口数-处理虫口数)/对照虫口数×100
2.结果与分析
2.1白僵菌不同施菌方式的防治效果
统计分析各种措施的防治效果，应用Duncan′s新复极差法进行多重比较，结果见表1和图1。由表1和图1可知，应用白僵菌进行林间防治，各种防治方式处理后1个月，B(撒)处理的虫口减退率较高，防治效果可达74.47％，显著高于B(喷)处理。可见菌土撒施，有利于孢子粉沉降入棕榈科植物心叶，使心叶中的虫体感染。
表1 白僵菌与绿僵菌防治椰心叶甲效果分析
*数据为平均值±标准误；同列数据后不同小写字母表示邓肯氏新复极差显著性检验P＜0.05水平。
2.2绿僵菌不同施菌方式的防治效果
从表1和图1可知，与白僵菌防治效果类似，应用绿僵菌不同施菌方式防治处理后，虫口减退率存在显著差异，以M(撒)防治方式效果较好，防治效果可达61.70％，显著高于M(喷)处理。
可见菌土撒施，有利于孢子粉沉降入棕榈科植物心叶，使心叶中的虫体感染，在生产中可以应用。
2.3混合菌不同施菌方式的防治效果
从表1和图1可知，BM(撒)处理的虫口减退率最高，防治效果可达84.83％，且显著高于BM(喷)处理。
可见菌土撒施，有利于孢子粉沉降入棕榈科植物心叶，使心叶中的虫体感染，在生产中可以应用。
2.4同种施菌方式白僵菌与绿僵菌的防治效果
从表1可知，比较同种施菌方式，总体上，白僵菌处理的虫口减退率比绿僵菌处理的显著更高，混合菌处理虫口减退率最高。混合菌菌土撒施，生产中可以推广应用，白僵菌次之，绿僵菌菌土撒施，也有一定的应用性。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740在制备用于防治椰心叶甲的毒剂中的应用。
2.球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和金龟子绿僵菌菌株Metarhiziumanisopliae DSM 21740在制备用于防治椰心叶甲的毒剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用于防治椰心叶甲的毒剂为粉剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，每g所述粉剂中含有孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860的孢子1×108～5×1011个，含有金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的孢子1×108～1×1011个。
5.一种防治植物中椰心叶甲的方法，其特征在于，包括向所述植物施用权利要求1所述球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhiziumanisopliae DSM 21740的步骤。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述施用是指撒施。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述撒施包括：
获得所述球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的孢子；
将获得的孢子与细土混匀，使得细土中含孢量为1.0×109个·g-1细土；按300kg细土·hm-2的用量量，均匀撤于林地。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述施用是指喷施。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述喷施包括：
获得所述球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana ATT 44860和/或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的孢子；
用水调制成浓度约为1.0×108个孢子·mL-1的孢子悬液；
用背负式喷雾器，对着植物心叶均匀喷菌。
10.根据权利要求7或9所述的方法，其特征在于，所述获得球孢白僵菌菌株Beauveriabassiana ATT 44860或金龟子绿僵菌菌株Metarhizium anisopliae DSM 21740的孢子包括以下步骤：
(1)从斜面菌种上刮下孢子，并置于恒温振荡器(SHA-C-15DR)中，(25±0.5)℃，(130r·min-1)摇瓶发酵72h后备用；
(2)按体积比约1∶10与液体培养基混合均匀后，倒入麦麸中，混合均匀，平铺于浅盘，用无纺布覆盖，室温培养；
(3)待固体培养基上充分产孢后，置于16-18℃条件下风干，袋装备用。
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