CN103875715A - 一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂及其制备方法 - Google Patents

一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂及其制备方法 Download PDF

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杜春梅
李晓明
平文祥
王莉莉
范晓旭
杨智越
徐德阳
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Abstract

一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂及其制备方法，它涉及一种生物型种衣剂及其制备方法。本发明要解决目前施用农药解决土传病害的方法有剧毒、不安全环保的问题。本发明的生物型种衣剂由发酵液、10g/L～50g/L的分散剂、9g/L～29g/L的载体和9g/L～19g/L的成膜剂制成；其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。方法：一、制备侧孢短芽孢杆菌发酵液；二、制备枯草芽孢杆菌发酵液；三、加入分散剂、载体和成膜剂，混匀即得。本发明的生物种衣剂不含有任何高毒剧毒成分，安全环保，用于防治大豆根腐病和大豆孢囊线虫病。本发明用于生物型种衣剂的制备。

Description

一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种生物型种衣剂及其制备方法。
背景技术
大豆根腐病和大豆孢囊线虫病在我国各大豆产区都有发生，以东三省为重，具有危害重、难防治的特点，通常是高毒剧毒农药施用的对象，但是随着人们安全环保意识的提高，高毒剧毒农药在农业上的应用受到极大的限制。目前急需高效低毒的生物农药来解决土传病害的危害问题。而种衣剂往往是防治土传病害的主要剂型。目前还未见有利用侧孢短芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌复配制成生物种衣剂的报道。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前施用农药解决土传病害的方法有剧毒、不安全环保的问题，提供一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂及其制备方法。
本发明的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂由发酵液、10g/L～50g/L的分散剂、9g/L～29g/L的载体和9g/L～19g/L的成膜剂制成；其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。
本发明的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂的制备方法，按照以下步骤进行：
一、制备侧孢短芽孢杆菌发酵液；
二、制备枯草芽孢杆菌发酵液；
三、将步骤一制备的侧孢短芽孢杆菌发酵液和步骤二制备的枯草芽孢杆菌发酵液按等比例混合后得发酵液，向发酵液中依次加入10g/L～50g/L的分散剂、9g/L～29g/L的载体和9g/L～19g/L的成膜剂，混合均匀后即得。
其中，所述的侧孢短芽孢杆菌BL-21（Brevibacillus laterosporus BL-21）来自保藏中心，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2013717，保藏时间为2013年12月26日；所述的枯草芽孢杆菌HNDF2（Bacillus subtilis HNDF2）来自保藏中心，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2013716，保藏时间为2013年12月26日。
侧孢短芽孢杆菌BL-21（Brevibacillus laterosporus），又名侧孢芽孢杆菌（Bacilluslaterosporus）。
本发明中种衣剂助剂成分组成为分散剂、载体和成膜剂。
本发明包含以下有益效果：
本发明提供了一种利用两种芽孢杆菌制备生物种衣剂的技术，是利用两种芽孢杆菌的纯发酵液混合后再加入助剂，制成生物型种衣剂，用于防治大豆根腐病和大豆孢囊线虫病，本发明的生物种衣剂不含有任何高毒剧毒成分，安全环保，有较好的发展前景。
附图说明
图1为大豆种子包衣效果图。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂由发酵液、10g/L～50g/L的分散剂、9g/L～29g/L的载体和9g/L～19g/L的成膜剂制成；其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。
本实施方式的有益效果：
本实施方式提供了一种利用两种芽孢杆菌制备生物种衣剂的技术，是利用两种芽孢杆菌的纯发酵液混合后再加入助剂，制成生物型种衣剂，用于防治大豆根腐病和大豆孢囊线虫病，本实施方式的生物种衣剂不含有任何高毒剧毒成分，安全环保，有较好的发展前景。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的分散剂为硅藻土。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：所述的载体为木质素磺酸钠。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：所述的成膜剂由海藻酸钠、黄原胶和壳聚糖复配而成，其中海藻酸钠、黄原胶和壳聚糖的质量比为3:1:1。其它与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：所述的防治大豆土传病害的生物型种衣剂由发酵液、10g/L～30g/L的分散剂、9g/L～20g/L的载体和9g/L～15g/L的成膜剂制成；其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。其它与具体实施方式一至四之一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：所述的防治大豆土传病害的生物型种衣剂由发酵液、15g/L的分散剂、10g/L的载体和10g/L的成膜剂制成；其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。其它与具体实施方式一至五之一相同。
具体实施方式七：本实施方式一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂的制备方法，按以下步骤进行：
一、制备侧孢短芽孢杆菌发酵液；
二、制备枯草芽孢杆菌发酵液；
三、将步骤一制备的侧孢短芽孢杆菌发酵液和步骤二制备的枯草芽孢杆菌发酵液按等比例混合后得发酵液，向发酵液中依次加入10g/L～50g/L的分散剂、9g/L～29g/L的载体和9g/L～19g/L的成膜剂，混合均匀后即得。
本实施方式的有益效果：
本实施方式制备方法简单，易于操作。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式七不同的是：步骤一中所述的枯草芽孢杆菌发酵培养基配方为：葡萄糖9.64g/L、蛋白胨12.15g/L、碳酸钙2.44g/L、NaCl4g/L、KH2PO40.2g/L和MnSO40.5g/L，调节pH值至5.5～8.5。其它与具体实施方式七相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式七或八不同的是：步骤一中所述的侧孢短芽孢杆菌发酵培养基配方为：葡萄糖5.27g/L、牛肉膏13.1g/L、碳酸钙2.44g/L、NaCl5.6g/L和MnSO40.35g/L，调节pH值至5.5～8.5。其它与具体实施方式七或八相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式七至九之一不同的是：步骤一和步骤二中所述的发酵液的制备方法为：将侧孢短芽孢杆菌BL-21和枯草芽孢杆菌HNDF2分别接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃恒温培养18h～24h后，每个试管倒入10mL无菌水将菌苔洗下，用血球计数板计数，将浓度调至108个/mL待用，将上述制备好的菌悬液以体积比1/100的量分别移接到装有50mL发酵培养基的250mL三角瓶中，于30℃、180r·min-1转速下，震荡培养48h。其它与具体实施方式七至九之一相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式七至十之一不同的是：所述的分散剂为硅藻土。其它与具体实施方式七至十之一相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式七至十一之一不同的是：所述的载体为木质素磺酸钠。其它与具体实施方式七至十一之一相同。
具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式七至十二之一不同的是：所述的成膜剂由海藻酸钠、黄原胶和壳聚糖复配而成，其中海藻酸钠、黄原胶和壳聚糖的质量比为3:1:1。其它与具体实施方式七至十二之一相同。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例一：
本实施例防治大豆土传病害的生物型种衣剂的制备方法，按照以下步骤进行：
一、有效成分(发酵液)的制备
1、将侧孢短芽孢杆菌BL-21和枯草芽孢杆菌HNDF2分别接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃恒温培养18h～24h后，每个试管倒入10mL无菌水将菌苔洗下，用血球计数板计数，将浓度调至108个/mL待用；
2、将上述制备好的菌悬液以体积比1/100的量分别移接到装有50mL侧孢短芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌发酵培养基的250mL的三角瓶中，于30℃、转速为180r·min-1的条件下震荡培养48h；
3、将上述制备好的侧孢短芽孢杆菌BL-21发酵液和枯草芽孢杆菌HNDF2发酵液按照体积比为1:1的比例混合均匀，即得生物型种衣剂的有效成分。
二、种衣剂的制备
1、种衣剂助剂成分组成为：硅藻土作为分散剂（15g/L），木质素磺酸钠作为载体（10g/L），成膜剂（10g/L）由海藻酸钠、黄原胶、壳聚糖按照质量比为3:1:1的比例复配而成；
2、将培养好的两株芽孢杆菌发酵液等比例混合后，按顺序加入上述分散剂、载体和成膜剂；
3、将酸性大红按照5g/L的量加入种衣剂中，搅拌均匀，作为警戒色；
4、将配好的种衣剂按照种子质量的4%～5%，即包100克种子用种衣剂的量为4mL～5mL，将大豆种子振摇包裹均匀后，晾干。
本实施例大豆种子包衣效果图如图1所示。
发明效果验证试验如下：
1、本实施例制备的生物型种衣剂各项指标测定
表1种衣剂产品各项指标测定结果
Figure BDA0000481938490000041
注：有效成分含量=1g种衣剂中的活菌数/1g发酵液原液中的活菌数
2、本实施例的生物种衣剂对大豆孢囊线虫病的防效
本实施例的生物种衣剂对大豆孢囊线虫病防效好于对照种衣剂。
(1)盆栽防效试验
大豆孢囊线虫病温室盆栽试验结果（表1）表明，种衣剂包衣处理和菌液灌根处理对
根部孢囊数和根际土中的孢囊数均有一定的抑制作用。
表2大豆孢囊线虫病温室盆栽试验结果
Figure BDA0000481938490000051
注：表中数字后字母为Duncan氏新复极差测验结果，不同英文字母分别表示在p＜0.05水平上差异显著。表中数据均为三次重复的平均值。各种衣剂处理包衣剂量为4.0%，即100g种子用种衣剂4g；菌体和发酵液处理使用量为每株5mL根际土孢囊数用100g根际土中孢囊个数表示。
(2)田间防效试验
一共对本实施例制备的生物种衣剂进行了三轮田间小区防效试验，结果表明（表3、4、5），芽孢杆菌生物种衣剂对大豆根部孢囊数量有明显的抑制作用，防治效果好于化学种衣剂（35%多克福1.5%剂量包衣）。种衣剂的包衣剂量在4%和5%时的防治效果最好，各处理中又以混合菌液的生物种衣剂防治效果最好。第三轮田间防效试验，由于苗期受到了长期低温降雨的影响，大豆胞囊线虫病发病情况不明显，孢囊数量不足，但从孢囊抑制率上仍然可以看出不同芽孢杆菌的生物型种衣剂对大豆孢囊线虫孢囊的抑制情况（表5）。
表3生物种衣剂对大豆孢囊线虫田间防效实验结果（第一轮）
表4生物种衣剂对大豆孢囊线虫田间防效实验结果（第二轮）
Figure BDA0000481938490000062
Figure BDA0000481938490000071
注：表中数字后字母为Duncan氏新复极差测验结果，不同英文字母分别表示在p＜0.05水平上差异显著。
表5生物种衣剂对大豆孢囊线虫田间防效实验结果（第三轮）
Figure BDA0000481938490000072
注：表中数字后字母为Duncan氏新复极差测验结果，不同英文字母分别表示在p＜0.05水平上差异显著。
3、对大豆根腐病有一定的防治效果
在温室中对本实施例的生物种衣剂的抗根腐病效果进行了研究，每处理调查30株大豆苗的生长状况和病级，结果见表6，表中数据为30株苗的平均值。可以看出混合菌液种衣剂的防治效果更好，根腐病病情指数最低。
表6生物种衣剂对大豆根腐病的温室防效实验结果
Figure BDA0000481938490000081
4、有一定的促生增产作用
从表5中还可以看出，本实施例的生物种衣剂对大豆的苗期株高、根长、根瘤数等还有一定的促生作用，均高于对照。

Claims (10)

1.一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂，其特征在于防治大豆土传病害的生物型种衣剂由发酵液、10g/L～50g/L的分散剂、9g/L～29g/L的载体和9g/L～19g/L的成膜剂制成；其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。
2.根据权利要求1所述的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂，其特征在于所述的分散剂为硅藻土。
3.根据权利要求1所述的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂，其特征在于所述的载体为木质素磺酸钠。
4.根据权利要求1所述的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂，其特征在于所述的成膜剂由海藻酸钠、黄原胶和壳聚糖复配而成，其中海藻酸钠、黄原胶和壳聚糖的质量比为3:1:1。
5.根据权利要求1所述的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂，其特征在于所述的防治大豆土传病害的生物型种衣剂由发酵液、10g/L～30g/L的分散剂、9g/L～20g/L的载体和9g/L～15g/L的成膜剂制成；其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。
6.根据权利要求1所述的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂，其特征在于所述的防治大豆土传病害的生物型种衣剂由发酵液、15g/L的分散剂、10g/L的载体和10g/L的成膜剂制成；其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。
7.一种制备权利要求1所述的防治大豆土传病害的生物型种衣剂的方法，其特征在于它包括以下步骤：
一、制备侧孢短芽孢杆菌发酵液；
二、制备枯草芽孢杆菌发酵液；
三、将步骤一制备的侧孢短芽孢杆菌发酵液和步骤二制备的枯草芽孢杆菌发酵液按等比例混合后得发酵液，向发酵液中依次加入10g/L～50g/L的分散剂、9g/L～29g/L的载体和9g/L～19g/L的成膜剂，混合均匀后即得。
8.根据权利要求7所述的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂的制备方法，其特征在于步骤一中所述的枯草芽孢杆菌发酵培养基配方为：葡萄糖9.64g/L、蛋白胨12.15g/L、碳酸钙2.44g/L、NaCl4g/L、KH2PO40.2g/L和MnSO40.5g/L，调节pH值至5.5～8.5。
9.根据权利要求7所述的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂的制备方法，其特征在于步骤一中所述的侧孢短芽孢杆菌发酵培养基配方为：葡萄糖5.27g/L、牛肉膏13.1g/L、碳酸钙2.44g/L、NaCl5.6g/L和MnSO40.35g/L，调节pH值至5.5～8.5。
10.根据权利要求7所述的一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂的制备方法，其特征在于步骤一和步骤二中所述的发酵液的制备方法为：将侧孢短芽孢杆菌BL-21和枯草芽孢杆菌HNDF2分别接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃恒温培养18h～24h后，每个试管倒入10mL无菌水将菌苔洗下，用血球计数板计数，将浓度调至108个/mL待用，将上述制备好的菌悬液以体积比1/100的量分别移接到装有50mL发酵培养基的250mL三角瓶中，于30℃、180r·min-1转速下，震荡培养48h。
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