CN112514917A - 一种复合微生物杀虫剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种复合微生物杀虫剂及其制备方法，属于农业微生物菌剂技术领域。本发明复合微生物杀虫剂包含：解淀粉芽孢杆菌0.5‑1份、绿僵菌0.5‑1份、白僵菌0.5‑1份、烟碱10‑30份、苦皮藤5‑10份、鱼藤5‑10份和雷公藤5‑10份，其他成分为水。具体制备方法为：将具有生物活性的解淀粉芽孢杆菌、绿僵菌和白僵菌分别分别制成种子液，得到的种子液与天然植物一起在发酵罐中发酵培养。本发明提供的微生物杀虫剂可以有效抑制害虫的繁殖，可提高植物的抗虫能力，提高农作物品质，对人、畜和环境均无害。

Description

一种复合微生物杀虫剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种复合微生物杀虫剂及其制备方法，属于农业微生物菌剂技术 领域。
背景技术
随着害虫对有机杀虫剂抗药性以及有机杀虫剂对环境污染和生态平衡破坏 等成为全球关注的焦点，生物防治技术越来越受到重视。生物防治是指利用有 益生物及其代谢产物来控制有害生物，有益生物包括微生物、藻类、高等植 物，甚至昆虫和哺乳动物，它利用了生物物种间的相互关系，以一种或一类生 物抑制另一种或另一类生物。
解淀粉芽孢杆菌是植物寄生线虫的重要天敌，通过寄生于卵、侵染早期幼 虫和雌虫，导致卵中的胚胎停止发育或畸形、幼虫麻痹死亡、干扰雌虫繁殖系 统，减少虫口基数，有效抑制多种植物寄生性根结线虫、胞囊线虫、茎线虫的 侵染。
白僵菌和绿僵菌是虫生真菌中的重要种类，幼虫经白僵菌处理后取食减 少，对碰触反应迟钝；虫体渐变为淡黄色，出现僵直症状。死亡虫体长出白色 菌丝，继续保湿培养，虫体将被白色分生孢子覆盖。在绿僵菌的作用下，虫体 活动减弱，部分试虫还抽搐、翻腾，体色逐渐由绿色变为灰色，出现僵直状死 亡，保湿培养，虫体长出白色菌丝，后被绿色分生孢子覆盖。病原菌侵染虫体 的途径主要是通过表皮，当以浸叶法接种时，幼虫的胸、胸足首先被病原菌侵 染。主要通过以下几个方面一直害虫：(1)抑制昆虫的细胞免疫反应；(2)引起体液免疫中酚氧化酶活性的改变；(3)对脂肪体和体壁皮细胞层的影响；(4) 使昆虫体壁肌肉细胞发生僵直，抑制马氏管的分泌和中肠的正常功能，抑制蜕 皮甾类激素的分泌和转运旧。
功能菌群通过互生共融、协同促进，来完成土壤保育及促进作物的抗病抑 虫、增进免疫、健壮生长、丰产优质，实现绿色有机农业的生产。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述现有技术存在的问题，进而提供一种复合微生 物杀虫剂及其制备方法，用于促进植物抗病抑虫的能力，提高农产品产量和品质。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种复合微生物杀虫剂，包括以下重量份数的原料：解淀粉芽孢杆菌0.5-1 份、绿僵菌0.5-1份、白僵菌0.5-1份、烟碱10-30份、苦皮藤5-10份、鱼藤5-10份、 雷公藤5-10份和水40-60份。
一种复合微生物杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备种子液：将所述解淀粉芽孢杆菌菌株在LB平板上划线培养，48h 后挑取单菌落接入10mL LB培养液中，30℃，200r/min下培养12h得种子液；将 上述菌种于30～35℃、150～200r/min条件下分别接种至活化培养基中，培养48h， 得菌种的种子液；
(2)制备PDA培养基并接种绿僵菌，室温培养48h，制备孢子悬浮液。
(3)制备PDA培养基并接种白僵菌，室温培养48h，制备孢子悬浮液。
(4)选用质量优良的烟草、苦皮藤、鱼藤、雷公藤用水冲洗，60％-70％乙 醇浸泡5-10min，用水洗净，经搅碎机搅碎后待用；
(5)将烟碱10-30份、苦皮藤5-10份、鱼藤5-10份、雷公藤5-10份碎料放入 发酵罐中，补充自来水，进行实消灭菌，制备发酵液；
(6)将所述菌种的种子液接种到步骤(5)制备的发酵液中，30～35℃、150～ 200r/min条件下，发酵5-8d。
(7)发酵完毕后，放出发酵液，过滤，过滤后所得发酵液即为复合微生物 杀虫剂成品。
本发明的有益效果为：
(1)本发明是由完全从自然界中筛选获得的微生物，易分离培养，其代谢 产物较为丰富，具有较强的抗逆能力，生长快，稳定性较好。经独特的发酵工艺 制成，很适合作为生防菌大量生产和应用。
(2)本发明所述的解淀粉芽孢杆菌能够分泌抗菌蛋白、抗生素、酶或多肽 等活性物质，起到抑制线虫和促进植株生长的作用。并且解淀粉芽孢杆菌、绿僵 菌和白僵菌复合微生物杀虫剂具有提高农作物抗虫的能力，进而提高农作物产量 和品质。
(3)白僵菌和绿僵菌是虫生真菌中的重要种类，幼虫经白僵菌和绿僵菌侵 染后，出现僵直状死亡，保湿培养，虫体长出白色菌丝，后分生孢子覆盖。解淀 粉芽孢杆菌可以通过寄生于卵、侵染早期幼虫和雌虫，有效抑制多种植物寄生性 线虫的侵染；解淀粉芽孢杆菌作为生物肥料促进植物生长，改善植物品质。本发 明将两种微生物制成复合微生物菌剂，扩大杀虫范围的同时也起到促进植物生长 的作用，提高农作物品质。
(4)本发明所述的复合微生物菌剂使用安全方便，无毒无害，无腐蚀性， 对人畜动植物危害，不污染环境，具生态安全性。
具体实施方式
下面将对本发明做进一步的详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行 实施，给出了详细的实施方式，但本发明的保护范围不限于下述实施例。
本实施例所涉及的一种复合微生物杀虫剂及其制备方法，包括：
实施例1：复合微生物杀虫剂的制备方法
本发明提供了一种复合微生物杀虫剂。该菌剂中的活菌数不少于 1×109CFU/mL-5.0×109CFU/mL。
其制备过程如下：
将保存的解淀粉芽孢杆菌、绿僵菌和白僵菌菌种接种到固体培养基中进行筛 选和纯化，培养分离得到解淀粉芽孢杆菌、绿僵菌、白僵菌的单菌落进行再次培 养，并保存菌落备用；
步骤一：制备种子液：将所述解淀粉芽孢杆菌菌株在LB平板上划线培养， 48h后挑取单菌落接入10mL LB培养液中，30℃，200r/min下培养12h得种子液； 将上述菌种于30～35℃恒温摇床中以150～200r/min摇动条件下分别接种至活化 培养基中，培养48h，得菌种的种子液；
步骤二：制备PDA培养基并接种绿僵菌，室温培养48h，制备孢子悬浮液。
步骤三：制备PDA培养基并接种白僵菌，室温培养48h，制备孢子悬浮液。
步骤四：选用质量优良的烟草、苦皮藤、鱼藤、雷公藤用水冲洗，60％-70％ 乙醇浸泡5-10min，用水洗净，经搅碎机搅碎后待用；
步骤五：将烟碱10-30份、苦皮藤5-10份、鱼藤5-10份、雷公藤5-10份碎料放 入发酵罐中，补充自来水，进行实消灭菌，制备发酵液；
步骤六：将所述菌种的种子液接种到步骤五制备的发酵液中，30～35℃、 150～200r/min条件下，发酵5-8d。
步骤七：发酵完毕后，放出发酵液，过滤，过滤后所得发酵液即为复合微生 物杀虫剂成品。
实施例2
复合微生物杀虫剂的发酵工艺
本发明提供了复合微生物杀虫剂，主要包括解淀粉芽孢杆菌的菌体、绿僵菌 和白僵菌，菌株的活菌数为1×109CFU/mL-5.0×109CFU/mL。该复合微生物杀虫 剂的具体发酵工艺见表1-4。
表1
Figure BDA0002813986490000041
Figure BDA0002813986490000051
表2
菌种 重量份数 发酵时间 发酵温度(℃)
解淀粉芽孢杆菌 1 8d 30
绿僵菌 1 8d 30
白僵菌 1 8d 30
烟草 20 8d 30
苦皮藤 10 8d 30
鱼藤 10 8d 30
雷公藤 10 8d 30
表3
菌种 重量份数 发酵时间 发酵温度(℃)
解淀粉芽孢杆菌 1 5d 35
绿僵菌 1 5d 35
白僵菌 1 5d 35
烟草 30 5d 35
苦皮藤 10 5d 35
鱼藤 10 5d 35
雷公藤 10 5d 35
表4
菌种 重量份数 发酵时间 发酵温度(℃)
解淀粉芽孢杆菌 0.5 8d 35
绿僵菌 0.5 8d 35
白僵菌 0.5 8d 35
烟草 30 8d 35
苦皮藤 5 8d 35
鱼藤 5 8d 35
雷公藤 5 8d 35
实施例3：复合微生物杀虫剂的效果
将本发明制得的复合微生物杀虫剂在田地进行了试验，蔬菜杀虫剂作为对照 组，进行了试验效果对比，试验结果见下表5-6：
表5杀虫效果
组别 复合微生物菌剂 对照组
线虫 90％ 87％
黄曲条跳甲 91％ 88％
茶小绿叶蝉 89％ 85％
蓟马 88％ 85％
纹白蝶 90％ 87％
玉米螟 87％ 85％
表6增产效果
组别 复合微生物菌剂 对照组
白菜 30％ 17％
萝卜 28％ 18％
番茄 25％ 15％
黄瓜 29％ 15％
西瓜 26％ 17％
从表5表6中可以看出，本发明提供的复合微生物杀虫剂可有效杀灭蔬菜害 虫，提高玉蔬菜产量。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，这些具体实施方式都是基于本 发明整体构思下的不同实现方式，而且本发明的保护范围并不局限于此，任何熟 悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换， 都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书 的保护范围为准。

Claims (7)

1.一种复合微生物杀虫剂，其特征在于，复合微生物杀虫剂包括以下重量份数的原料：解淀粉芽孢杆菌0.5-1份、绿僵菌0.5-1份、白僵菌0.5-1份、烟碱10-30份、苦皮藤5-10份、鱼藤5-10份、雷公藤5-10份和水40-60份。
2.根据权利要求1所述的一种复合微生物杀虫剂，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌能够分泌抗菌蛋白、抗生素、酶或多肽等活性物质，起到抑制线虫和促进植株生长的作用。
3.根据权利要求1所述的一种复合微生物杀虫剂，其特征在于，所述绿僵菌和白僵菌能够侵染虫体，虫体呈现僵直状直至死亡。
4.根据权利要求1所述的一种复合微生物杀虫剂，其特征在于，所述烟草、苦皮藤、鱼藤和雷公藤需用水冲洗，60％-70％乙醇浸泡5-10min，再次用水洗净，经搅碎机搅碎后待用。
5.根据权利要求1所述的一种复合微生物杀虫剂，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌、绿僵菌和白僵菌的菌株的有效活菌数不少于1×1010CFU/g。
6.基于权利要求1、2、3、4或5一种复合微生物杀虫剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：将保存的解淀粉芽孢杆菌、绿僵菌和白僵菌菌种接种到固体培养基中进行筛选和纯化，培养分离得到解淀粉芽孢杆菌、绿僵菌、白僵菌的单菌落进行再次培养，并保存菌落备用；
步骤二：将分离得到的解淀粉芽孢杆菌，在30-35℃恒温摇床中以200r/min摇动培养48h，制成液体种子；
步骤三：制备PDA培养基并接种绿僵菌，室温培养48h，制备孢子悬浮液；
步骤四：制备PDA培养基并接种白僵菌，室温培养48h，制备孢子悬浮液；
步骤五：选用质量优良的烟草、苦皮藤、鱼藤、雷公藤用水冲洗，60％-70％乙醇浸泡5-10min，用水洗净，经搅碎机搅碎后待用；
步骤六：将烟草、苦皮藤、鱼藤、雷公藤碎料放入发酵罐中，补充自来水，进行实消灭菌，制备发酵液；
步骤七：将所述菌种的种子液接种到步骤六制备的发酵液中，在30～35℃、150～200r/min条件下，发酵5-8d；
步骤八：发酵完毕后，放出发酵液，过滤，过滤后所得发酵液即为复合微生物杀虫剂成品。
7.根据权利要求1所述的一种复合微生物杀虫剂及其制备方法，其特征在于，所述步骤六中的发酵液由以下重量份数的物质组成：烟碱10-30份、苦皮藤5-10份、鱼藤5-10份、雷公藤5-10份、水40-60份。
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张民照 等: "《生物农药及其应用技术问答 第2版》", 31 January 2016, 中国农业大学出版社 *

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