CN106701614A - 一种枯草芽孢杆菌及其组合物 - Google Patents

一种枯草芽孢杆菌及其组合物 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌B‑001 CGMCC NO.13245。还公开了一种生物农药组合物，该生物农药组合物以重量百分数计含有所述的枯草芽孢杆菌B‑001 CGMCC NO.13245 10‑50％和杀菌剂10‑50％。本发明生物农药组合物应用于防治农作物病害具有良好的防控效果，特别是在防治番茄青枯病和辣椒青枯病上具有优良的防控效果。本发明生物农药组合物在保证稳定防效的同时还能够显著的减少化学药剂的使用量，减少环境污染，降低抗药性风险和药害。

Description

一种枯草芽孢杆菌及其组合物
技术领域
本发明涉及杀菌剂技术领域，更具体涉及一种枯草芽孢杆菌及其组合物。
背景技术
化学农药在有害生物防治中有着突出的优势，见效快、击倒力强，能在几天甚至是数小时内杀死有害生物，操作、使用简单直接，防治谱广，部分产品可以针对许多种类的农业有害生物，且效果显著，经济效益显著，国内外市场还有较大的需求。目前在农药大量使用情况下，全球仍有35％的农作物产量损失。根据联合国粮农组织(FAO)的调查，全世界每年被病虫害夺去的谷物量为预计收成量的20％-40％，经济损失达1200亿美元，因此，在以后的数十年化学农药仍然是植物保护的主体。
随着现代生物学技术和基因工程的发展以及它们在农药中的应用，生物农药的兴起已成为历史发展的趋势，近20年已经有了很大的发展，在世界范围内大概有1400种生物农药产品进行商业销售。生物农药的优势在于对非靶标生物、人畜、环境相对安全，多数只对某种特定病虫害起作用；能自然代谢，残留低、降解快；开发利用途径多，如天敌昆虫可人工繁育或引种，也可利用生物工程、基因重组、基因转化等多种途径开发生物化学农药；作用机理复杂、独特，它们的作用方式和靶标一般也较为复杂多样，与传统的神经毒剂不同；种类繁多，研发的选择余地大，自然界中动物、植物、微生物凡对病虫害有控制作用的活体或有效成分都可以作为研发的对象。
近年来化学农药毒性、残留、污染等问题越来越受到人们的关注，而生物农药则被过分的渲染,认为生物农药很快就会取代化学农药，这 种观点是不科学的。生物农药是否会取代化学农药是多方面因素共同作用的结果，也取决于它们各自的发展水平和其产品在市场上的认可度，而不能主观臆断。而且生物农药也存在一些不足，如田间使用受环境因素的影响较大，防治效果不稳定等。施用化学农药和生物农药都是病虫害防治的有效手段,各有所长，它们应该在有害生物综合治理(IPM)原理的指导下，结合实际择优互补使用。现今，利用化学防治与生物防治相结合的协同增效作用进行作物病虫害防治的策略越来越受到各国植物保护专家的重视，这种策略既能有效控制病虫害，又能降低化学农药的使用量，是一种有效的有害生物综合治理手段。现今已有很多利用生物防治与化学防治协同使用的手段进行病害防治研究的实例，并且取得了较好的成效。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是广泛分布于自然界的一类革兰氏阳性好氧型杆状细菌，其生理特征丰富多样，可以产生内生芽孢，在土壤和植物表面普遍存在，同时还是植物体内常见的一种内生菌，对人畜无毒无害，不污染环境，同时还能分泌多种酶和抗生素，具有防治植物病害和促进植株生长的优良作用，在植物病害生物防治上应用前景广阔。然而，生防芽孢杆菌在农业生产上的应用效果往往低于预期，且在不同情况下表现各异。噻森铜是噻唑类有机铜杀菌剂，对水稻白叶枯病、细菌性条斑病、白菜软腐病和番茄青枯病具有良好防效，是田间防治细菌病害的常用药剂。噻森铜具有高效、速效的优点，但也存在着靶标生物产生抗药性风险、生产成本高的缺点。将枯草芽孢杆菌和噻森铜协同使用防治植物病害既能弥补化学农药和生物农药的缺点，又能发挥两者的优势，是一种十分有前景的病害综合防治方法。
发明内容
(一)要解决的技术问题
本发明要解决的技术问题就是如何克服化学农药和生物农药各自的缺点，制备出一种性能优异的生物农药，而提供一种枯草芽孢杆菌 及其组合物。
(二)技术方案
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种枯草芽孢杆菌B-001CGMCC NO.13245。
本发明涉及的枯草芽孢杆菌B-001是从湖南省烟草病田中的健康烟草植株中分离获得的，该菌株于2016年11月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC No.13245，分类命名为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)。
本发明还提供了一种生物农药组合物，该生物农药组合物以重量百分数计含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌B-001CGMCC NO.1324510-50％和杀菌剂10-50％。
优选地，所述的枯草芽孢杆菌B-001CGMCC NO.13245含量为20-1000亿株/克。
优选地，所述的枯草芽孢杆菌B-001CGMCC NO.13245含量为200亿株/克。
优选地，所述的杀菌剂为噻唑类有机铜。
优选地，所述的噻唑类有机铜为噻森铜。
优选地，所述的生物农药组合物的剂型为可湿性粉剂、粉剂、颗粒剂、水剂。
本发明还提供了所述的生物农药组合物在防治农作物病害上的应用，
优选地，所述的生物农药组合物在番茄和辣椒青枯病上的应用。
(三)有益效果
本发明生物农药组合物在保证稳定防效的同时还能够显著的减少化学药剂的使用量，减少环境污染，降低抗药性风险和药害。本发明枯草芽孢杆菌和噻森铜的组合物在防治番茄青枯病和辣椒青枯病上具有优良的防控效果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。
本发明枯草芽孢杆菌B-001菌悬液制备方法为：用接种环从保存有B-001菌株的试管中挑取一环在LB固体培养基(酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl 10g，琼脂15g，无菌水1000mL，PH 7.0)平板上划线，置于28℃培养箱中培养活化；培养36-48h后挑取一环活化的B-001单菌落于LB液体培养基(酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl 10g，无菌水1000mL，PH7.0)中，于180rpm、28℃摇床中培养48h，即得到发酵原液B-001。
枯草芽孢杆菌B-001芽孢沉淀制备方法为：将枯草芽孢杆菌B-001接种于LB液体培养基中，于180rpm、28℃摇床中培养，5天后，菌悬液于离心机中8000r/min离心15min，去上清液后75℃水浴锅中水浴15min获得芽孢沉淀，沉淀先用1.0M NaCl洗涤两遍，然后用灭菌的0.05M磷酸缓冲液(PBS，PH 7.0)洗涤三遍，离心后获得芽孢沉淀。
本发明的组合物可加入常规助剂，经常规工艺可加工成可湿性粉剂、粉剂、颗粒剂、水剂等常规剂型，施用方式为喷雾、灌根等。
实施例1：枯草芽孢杆菌与噻森铜的相容性测定
将摇培过夜的200μL枯草芽孢杆菌B-001菌液接入到含有0μg/mL、50μg/mL和100μg/mL噻森铜的LB培养基中，28℃、180rpm振荡培养，分别于12，24和48小时取样，利用分光光度计测定其OD600
调查结果表明，枯草芽孢杆菌B-001在含100μg/mL的噻森铜培养基中摇培时，其细菌细胞密度与对照相比没有显著性差异，其生长不受影响，两者具有良好的相容性，因此B-001与噻森铜混用不会对枯草芽孢杆菌造成不利影响。
实施例2：枯草芽孢杆菌与噻森铜的组合物对番茄青枯病的防治效果
选取两块番茄青枯病发病较重的田块进行枯草芽孢杆菌与噻森铜协同使用防治番茄青枯病试验，施药方法为兑水50L/亩喷雾，试验处理和防治效果见下表1：
表1
由试验结果可以看出，枯草芽孢杆菌与噻森铜协同使用能够有效的防治番茄青枯病，两者的协同使用效果显著高于各自单剂的使用效果。噻森铜300mg kg-1与108cfu mL- 1B-001菌悬液混合使用的防效达到了63.55％，与单剂500mg kg-1噻森铜的防效无显著性差异，在保证稳定防效的同时还大大的减少了噻森铜的使用量。
实施例3：枯草芽孢杆菌与噻森铜的组合物对辣椒青枯病的防治效果
在辣椒大棚中进行了枯草芽孢杆菌与噻森铜的组合物防治辣椒青枯病试验，施药方式为灌根处理，每株辣椒灌根药剂200mL，试验处理和药剂浓度及防治效果见下表2：
表2
由试验结果可以看出，枯草芽孢杆菌与噻森铜协同使用能够有效的防治辣椒青枯病，枯草芽孢杆菌菌液灌根的防效为52.18％，噻森铜的防效为46.25-71.22％。当两者混合使用的防效要显著高于各自单剂的防效。400mg kg-1噻森铜与109cfu mL-1B-001混用的防效达到了71.64％，与500mg kg-1噻森铜单剂的防效相当。枯草芽孢杆菌与噻森铜的组合物不但显著地提高了对辣椒青枯病的防效，还有效地减少了杀菌剂的使用量。
以上实施方式仅用于说明本发明，而非对本发明的限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行各种组合、修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (9)

1.一种枯草芽孢杆菌B-001CGMCC NO.13245。
2.一种生物农药组合物，其特征在于，该生物农药组合物以重量百分数计含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌B-001CGMCC NO.13245 10-50％和杀菌剂10-50％。
3.根据权利要求2所述的生物农药组合物，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌B-001CGMCC NO.13245含量为20-1000亿株/克。
4.根据权利要求3所述的生物农药组合物，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌B-001CGMCC NO.13245含量为200亿株/克。
5.根据权利要求2所述的生物农药组合物，其特征在于，所述的杀菌剂为噻唑类有机铜。
6.根据权利要求5所述的生物农药组合物，其特征在于，所述的噻唑类有机铜为噻森铜。
7.根据权利要求2-6任一项所述的生物农药组合物，其特征在于，所述的生物农药组合物的剂型为可湿性粉剂、粉剂、颗粒剂、水剂。
8.权利要求2-7任一项所述的生物农药组合物的应用，其特征在于，应用于防治农作物的病害。
9.根据权利要求9所述的生物农药组合物的应用，其特征在于，应用于防治番茄和辣椒青枯病。
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