CN104531574A - 一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4及其组合物 - Google Patents

一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4及其组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN104531574A
CN104531574A CN201410788578.8A CN201410788578A CN104531574A CN 104531574 A CN104531574 A CN 104531574A CN 201410788578 A CN201410788578 A CN 201410788578A CN 104531574 A CN104531574 A CN 104531574A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gfj
active components
bacillus amyloliquefaciens
weight ratio
agent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410788578.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104531574B (zh
Inventor
段海明
余利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anhui University of Science and Technology
Original Assignee
Anhui University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anhui University of Science and Technology filed Critical Anhui University of Science and Technology
Priority to CN201410788578.8A priority Critical patent/CN104531574B/zh
Publication of CN104531574A publication Critical patent/CN104531574A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104531574B publication Critical patent/CN104531574B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/64—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/647—Triazoles; Hydrogenated triazoles
    • A01N43/653—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
    • A01N47/10—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof
    • A01N47/12—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof containing a —O—CO—N< group, or a thio analogue thereof, neither directly attached to a ring nor the nitrogen atom being a member of a heterocyclic ring
    • A01N47/14—Di-thio analogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
    • A01N47/10—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof
    • A01N47/18—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof containing a —O—CO—N< group, or a thio analogue thereof, directly attached to a heterocyclic or cycloaliphatic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
    • A01N47/10—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof
    • A01N47/26—Oxidation products of dithiocarbamic acid derivatives, e.g. thiuram sulfides

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4，该菌株已于2014年9月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2014444，还提供一种含解淀粉芽孢杆菌gfj-4的组合物包括活性成分A和活性成分B，所述的活性成分A与活性成分B的重量比为9:1～1:9，所述的活性成分A为解淀粉芽孢杆菌gfj-4的灭活发酵液，所述的活性成分B选自咯菌腈、多菌灵、戊唑醇、苯醚甲环唑、腈菌唑、福美双、代森锰锌或三唑酮中的一种。本发明组合物对禾谷镰孢菌所引起的病害防治效果高达95％，同时具有对人畜安全，环境相容性好的特点。

Description

一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4及其组合物
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4及其组合物。
背景技术
禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)是多种植物病害的致病菌，危害非常严重，损失较大。目前，由此病菌引致的病害主要以施用化学杀菌剂防治为主。但是，化学杀菌剂作为环境中的异源化合物，较难发生生物降解，化学杀菌剂的大量使用对生态环境的破坏已日益引起政府和人们的重视。所以，化学杀菌剂的减量使用和微生物源天然产物农药的开发已成为当今植物病害防控研究的热点。
本研究以自主筛选得到的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)gfj-4为研究对象，通过无菌发酵培养、离心和高温高压灭活后得到无菌发酵液，经测定表明此发酵液对玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、玉米弯孢霉叶斑病菌(Curvularia lunata)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、小麦赤霉病-禾谷镰孢菌(Fusariumgraminearum)、瓜叶菊菌核病菌(Sclerotinia sp.)等重要植物病害具有较强的抑制作用，在此基础上，开展了生防菌灭活发酵液和化学杀菌剂—福美双、代森锰锌、多菌灵、戊唑醇、苯醚甲环唑、三唑酮、腈菌唑和咯菌腈的混配研究，得出了一系列室内对菌丝生长抑制活性较好的增效组合。
发明内容
本发明的目的在于提供一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4，还提供了一种含有解淀粉芽孢杆菌gfj-4的组合物，该组合物可以有效地抑制禾谷镰孢菌菌丝的生长。
本发明具体通过以下技术方案实现：
一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4，该菌株已进行保藏，保藏单位：中国典型培养物保藏中心；地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号；保藏日期：2014年9月24日；保藏编号为CCTCC NO：M2014444。
菌体的形态为：在NA培养基，28℃培养2天，菌体杆状，革兰氏阳性菌，菌体大小约为0.5～0.7μm×1.5～3.0μm；菌落奶白色，半透明，圆形，微凸，边缘不整齐，表面干燥。
本发明解淀粉芽孢杆菌gfj-4的16S rRNA基因序列如SEQ IDNO.1所示。
一种含解淀粉芽孢杆菌gfj-4的组合物，包括活性成分A和活性成分B，所述的活性成分A与活性成分B的重量比为9:1～1:9，所述的活性成分A为解淀粉芽孢杆菌gfj-4的灭活发酵液，所述的活性成分B选自咯菌腈、多菌灵、戊唑醇、苯醚甲环唑、腈菌唑、福美双、代森锰锌或三唑酮中的一种。
优选的活性成分A与咯菌腈的重量比为2:3；活性成分A与多菌灵的重量比为7:3；活性成分A与戊唑醇的重量比为3:7；活性成分A与苯醚甲环唑的重量比为9:1；活性成分A与腈菌唑的重量比为4:1；活性成分A与腈菌唑的重量比为4:1；活性成分A与福美双的重量比为2:3；活性成分A与代森锰锌的重量比为3:2；活性成分A与三唑酮的重量比为2:3。
本发明提出的含解淀粉芽孢杆菌gfj-4的组合物用于防治农作物上病害的用途，所述的农作物包括粮食作物、豆类作物、纤维作物、糖料作物、瓜类作物、水果类作物、干果类作物、嗜好作物、根茎类作物、油料作物、花卉作物、药用作物、原料作物、绿肥牧草作物。所述的病害包括赤霉病、腥黑穗病、雪腐病、雪霉病、纹枯病、根腐病、全蚀病、颖枯病、秆黑粉病、条纹病、网斑病、坚黑穗病、青枯病、茎基腐病、猝倒病、立枯病、红腐病、炭疽病、黑根病、锈病或白粉病。
活性成分A、活性成分B的重量比为1:80～60:1。通常组合物中活性组分的重量百分含量为总重量的0.5％～90％，较佳的为5％～80％。根据不同的制剂类型，活性组分含量范围有所不同。通常，液体制剂含有按重量计1％～70％的活性物质，较佳的为5％～50％；固体制剂含有按重量计5％～80％的活性物质，较佳的为10％～80％。
本发明组合物中至少含有一种表面活性剂，以利于施用时活性组分在水中的分散。表面活性剂含量为制剂总重量的5％～30％，余量为固体或液体稀释剂。
本发明组合物可以由使用者在使用前经稀释或直接使用。其配制可由通常的本领域技术人员所公知的加工方法制备，即将活性物质与液体溶剂或固体载体混合后，再加入表面活性剂如分散剂、稳定剂、湿润剂、粘结剂、消泡剂、崩解剂、抗冻剂等中的一种或几种。
本发明组合物，可以按需要加工成任何杀菌上可接受的剂型，其中较优选的剂型为可湿性粉剂、水分散粒剂、悬浮剂、悬乳剂、水乳剂、微乳剂、微囊悬浮剂、微囊悬浮-悬浮剂。
组合物制成可湿性粉剂时包含如下组分含量：活性成分A0.5％～60％、活性成分B0.5％～80％、分散剂2％～10％、湿润剂2％～10％、填料余量。
组合物制成水分散粒剂时包括如下组分含量：活性成分A0.5％～60％、活性成分B0.5％～80％、分散剂3％～12％、湿润剂1％～8％、崩解剂1％～10％、粘结剂0～8％、填料余量。
组合物制成悬浮剂时包括如下组分含量：活性成分A0.5％～50％、活性成分B0.5％～50％、分散剂2％～10％、湿润剂2％～10％、消泡剂0.01％～2％、增稠剂0～2％、抗冻剂0～8％、去离子水加至100％。
组合物制成悬乳剂时包括如下组分含量：活性成分A0.5％～50％、活性成分B0.5％～50％、分散剂2％～10％、消泡剂0.01％～2％、溶剂1％～15％、增稠剂0～2％、乳化剂2％～12％、抗冻剂0～8％、去离子水加至100％。
组合物制成水乳剂时包含如下组分含量：活性成分A0.5％～50％、活性成分B0.5％～50％、溶剂1％～30％、乳化剂1％～15％、抗冻剂0～8％、增稠剂0～2％、消泡剂0.01％～2％、去离子水补足余量。
组合物制成微乳剂时包含如下组分含量：活性成分A0.5％～50％、活性成分B0.5％～50％、溶剂1％～30％、乳化剂3％～25％、抗冻剂0～8％、消泡剂0.01％～2％、去离子水补足余量。
组合物制成微囊悬浮剂时包括如下组分含量：活性成分A0.5％～50％、活性成分B0.5％～50％、高分子囊壁材料2％～10％、分散剂1％～10％、有机溶剂1％～10％、乳化剂1％～7％、消泡剂0.01％～2％、pH调节剂0.01％～5％、去离子水加至100％。
组合物制成微囊悬浮-悬浮剂时包括如下组分含量：活性成分A0.5％～50％、活性成分B0.5％～50％、高分子囊壁材料2％～10％、分散剂1％～12％、湿润剂1％～8％、有机溶剂1％～15％、乳化剂1％～6％、消泡剂0.01％～2％、增稠剂0～2％、pH调节剂0.01％～5％、去离子水加至100％。
本发明的有益效果为:1)对于生防菌解淀粉芽孢杆菌gfj-4的开发应用具有重要价值，同时通过生防菌发酵液和化学杀菌剂增效组合的优选，可以更加有效的防治由禾谷镰孢菌引致的病害、而且减少了化学杀菌剂的使用量，从而逐步降低化学杀菌剂向环境的释放量，从源头上控制其对环境的影响，符合现代植物保护的发展要求；2)减少了农药用药量，降低了农药在作物上的残留量，减轻了环境污染；3)对人畜安全，环境相容性好；并且制剂粘着力增强，耐雨水冲刷。
附图说明
图1是本发明生防菌株gfj-4的显微镜观察图；
图2是菌株gfj-4的平板菌落形态检测图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
实施例1生防菌株的鉴定
本研究从采集到的罹病番茄果实中分离到一株对植物病原真菌具有广谱拮抗活性的细菌gfj-4，菌株经形态观察、生理生化特性分析和16S rRNA基因序列分析三者相结合的方法鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
菌株gfj-4的分离纯化过程如下：
1)菌液制备
把采集到的罹病番茄果实先用浸润有75％酒精的医用棉球进行表面消毒，然后用无菌解剖刀切取果实放在无菌研钵中充分研磨匀浆，然后采用逐级稀释法将匀浆梯度稀释至10-2、10-3和10-4三个浓度备用。
2)无菌培养
首先融化已灭菌的NA培养基，在超净工作台上倒平板，待冷凝后，吸取200μL不同稀释度的菌液涂布于NA平板上，每梯度3个重复，静置20min后，28℃倒置培养48h。
3)挑取单菌落，分离纯化得纯培养
2天后，观察各浓度梯度细菌的生长状况，挑取单菌落，至少分离纯化3次得到细菌的纯培养。
4)对峙培养法初步验证抑菌活性
通过对峙培养法，首先把植物病原菌接种到PDA培养基平板的正中央，然后在同一条直线上距中心2.0cm处点接筛选到的细菌，于28℃倒置培养72h，初步验证其对植物病菌的抑制活性。选取抑菌带宽的菌株命名为gfj-4。
鉴定结果菌体如图1所示，菌体杆状，革兰氏阳性，菌体大小约为0.5-0.7μm×1.5-3.0μm。菌落形态如图2所示，菌落奶白色，半透明，圆形，微凸，边缘不整齐，表面干燥。
生理特性：
碳源同化特性如表1所示：
表1 菌株gfj-4生理生化特性——碳源同化
酶活测定如表2所示：
表2 菌株gfj-4生理生化特性——酶活、碳源同化
该菌株已于2014年9月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏号为CCTCC NO：M2014444。
实施例2解淀粉芽孢杆菌gfj-4的抑菌活性
1、发酵培养基的制备
土豆(去皮)200.0g，葡萄糖18.0g，硫酸镁1.0g，硝酸铵1.0g，磷酸二氢钾0.60g，去离子水1.0L，可以添加16％的琼脂条制成固体培养基使用。
2、灭活发酵液的制备
将解淀粉芽孢杆菌gfj-4菌株先在普通培养基平板上培养48h，挑取单菌落菌苔转接到发酵培养基中，于33℃、140r·min-1摇培72h后把培养好的发酵液放在115℃高压蒸汽灭菌锅中灭菌20min。然后把灭活发酵液置于离心机中，以8000r·min-1，15℃，离心30min，取上清液于4℃冰箱备用。
3、抑菌活性测定
利用平板菌落生长速率法验证gfj-4灭活发酵液(115℃，15min高压蒸汽灭活)不同倍数的稀释液对植物病原真菌的菌丝生长具有较强的抑制作用。菌株的灭活发酵液对玉米小斑病菌的抑制活性最高，稀释倍数从200扩大到800倍时，在28℃霉菌培养箱培养96h对玉米小斑病菌的抑制率分布31.3％～88.1％之间(表3)。
灭活发酵液的稀释倍数从200扩大到800倍时，在28℃霉菌培养箱培养96h对玉米弯孢病菌的抑菌率分布在19.0％～66.7％之间(表4)。
灭活发酵液的稀释倍数从6扩大到14倍时，在26℃霉菌培养箱培养84h对番茄灰霉病菌的抑菌率分布在48.6％～86.1％之间(表5)。
灭活发酵液的稀释倍数从4扩大到20倍时，在26℃霉菌培养箱培养84h对小麦赤霉病禾谷镰孢菌的抑菌率分布在46.1％～72.0％之间(表6)。
灭活发酵液的稀释倍数从2扩大到10倍时，在26℃霉菌培养箱培养84h对瓜叶菊菌核病菌的抑菌率分布在38.3％～96.9％之间(表7)。
与对照相比可以发现供试植物病原真菌菌丝生长稀疏、扭曲、畸形，生长量减少，扩展缓慢。通过灭活发酵液的抑菌试验可以得出菌株的抑菌谱较宽，而且抑菌物质具有耐高温的特性，经过高压蒸汽灭活而不失效。
表3 不同稀释倍数的灭活发酵液对玉米小斑病菌的抑菌率(96h)
表4 不同稀释倍数的灭活发酵液对玉米弯孢病菌的抑菌率(96h)
表5 不同稀释倍数的灭活发酵液对番茄灰霉病菌的抑菌率(84h)
表6 不同稀释倍数的灭活发酵液对小麦赤霉病禾谷镰孢菌的抑菌率(84h)
表7 不同稀释倍数的灭活发酵液对瓜叶菊菌核病菌的抑菌率(84h)
实施例3灭活发酵液和化学杀菌剂的增效组合
采用菌丝生长速率法得出，生防菌灭活发酵液稀释10倍对禾谷镰孢菌菌丝生长的抑制率达到50％，8种化学杀菌剂对禾谷镰孢菌菌丝生长的EC50分别为：咯菌腈的EC500.06μg/mL，多菌灵为0.85μg/mL、戊唑醇为0.32μg/mL、苯醚甲环唑为1.71μg/mL，腈菌唑为1.80μg/mL，福美双为8.90μg/mL、代森锰锌为11.16μg/mL和三唑酮为9.65μg/mL。
采用Horsfall的毒力试验设计进行灭活发酵液和化学杀菌剂的混配剂对禾谷镰孢菌的抑制效果。Horsfall毒力试验的计算公式如下：
实际抑菌率(％)＝[(对照菌落直径–处理菌落直径)/(对照菌落直径–菌饼直径)]×100；
理论抑制率(％)＝[A有效中量(EC50)实际抑制率×A在配比中所占的比例+B有效中量(EC50)实际抑制率×B在配比中所占的比例]×100。
表1 灭活发酵液和咯菌腈混配的毒性比率测定
从表1可见，灭活发酵液和咯菌腈的EC50值剂量的混配比例为9:1、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8和1:9时的毒性比率均大于1，其中当灭活发酵液和咯菌腈的比例为4:6时，毒性比率为1.19，增效作用最大。
表2 灭活发酵液和多菌灵混配的毒性比率测定
从表2可见，灭活发酵液和多菌灵的EC50值剂量的混配比例为9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8和1:9时的毒性比率均大于1，其中混配比例为7:3时，毒性比率为1.22，增效作用最大。
表3 灭活发酵液和戊唑醇混配的毒性比率测定
从表3可见，灭活发酵液和戊唑醇的EC50值剂量的混配比例9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8和1:9时的毒性比率均大于1，其中混配比例为3:7时，毒性比率为1.35，增效作用最大。
表4 灭活发酵液和苯醚甲环唑混配的毒性比率测定
从表4可见，灭活发酵液和苯醚甲环唑的混配比例为9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7和2:8时的毒性比率均大于1，其中混配比例为9:1时，毒性比率为1.29，增效作用最大。
表5 灭活发酵液和腈菌唑混配的毒性比率测定
从表5可见，灭活发酵液和腈菌唑的混配比例为9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8和1:9时的毒性比率均大于1，其中混配比例为8:2时，毒性比率为1.29，增效作用最大。
表6 灭活发酵液和福美双混配的毒性比率测定
从表6可见，灭活发酵液和福美双的混配比例为8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8和1:9时的毒性比率均大于1，其中混配比例为4:6时，毒性比率为1.18，增效作用最大。
表7 灭活发酵液和代森锰锌混配的毒性比率测定
从表7可见，灭活发酵液和代森锰锌的混配比例为9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8和1:9时的毒性比率均大于1，其中混配比例为6:4时，毒性比率为1.42，增效作用最大。
表8 灭活发酵液和三唑酮混配的毒性比率测定
从表8可以看出，灭活发酵液和三唑酮的混配比例为9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8和1:9时的毒性比率均大于1，其中混配比例为4:6时，毒性比率为1.29，增效作用最大。
药效实验部分：实验药剂均有申请人提供，对照药剂50％咯菌腈可湿性粉剂、50％多菌灵可湿性粉剂、50％戊唑醇悬浮剂、60％苯醚甲环唑水分散粒剂、12％腈菌唑乳油、50％福美双可湿性粉剂、80％代森锰锌可湿性粉剂、20％三唑酮乳油。
实施例4组合物防治小麦赤霉病的药效试验
本实验安排在河南省三门峡市，分别采用组合物如表9，药前调查小麦赤霉病病害指数，在病害发生初期施药，施药后5天、15天、30天调查病害指数并计算防效。试验结果如表10所示：
表9 组合物配方
表10 组合物防治小麦赤霉病的药效试验
由表10可知，组合物对于小麦赤霉病均有很好的防治效果，防效均在95％以上，效果远远好于对照组，说明本发明组合物具有很好的增效作用。
后经试验组合物还可以有效防治赤霉病、腥黑穗病、雪腐病、雪霉病、纹枯病、根腐病、全蚀病、颖枯病、秆黑粉病、条纹病、网斑病、坚黑穗病、青枯病、茎基腐病、猝倒病、立枯病、红腐病、炭疽病、黑根病、锈病或白粉病，防治效果均高于95％，优于单剂的防效，且防效期长。在试验用药范围内对标靶作物无不良影响。

Claims (7)

1.一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4，其特征在于：该菌株已于2014年9月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M 2014444。
2.根据权利要求1所述的一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4，其特征在于：该菌株的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种含解淀粉芽孢杆菌gfj-4的组合物，包括活性成分A和活性成分B，其特征在于：所述的活性成分A与活性成分B的重量比为9:1～1:9，所述的活性成分A为解淀粉芽孢杆菌gfj-4的灭活发酵液，所述的活性成分B选自咯菌腈、多菌灵、戊唑醇、苯醚甲环唑、腈菌唑、福美双、代森锰锌或三唑酮中的一种。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：
活性成分A与咯菌腈的重量比为2:3；
活性成分A与多菌灵的重量比为7:3；
活性成分A与戊唑醇的重量比为3:7；
活性成分A与苯醚甲环唑的重量比为9:1；
活性成分A与腈菌唑的重量比为4:1；
活性成分A与腈菌唑的重量比为4:1；
活性成分A与福美双的重量比为2:3；
活性成分A与代森锰锌的重量比为3:2；
活性成分A与三唑酮的重量比为2:3。
5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：组合物制成可湿性粉剂、水分散粒剂、悬浮剂、悬乳剂、水乳剂、微乳剂、微囊悬浮剂或微囊悬浮-悬浮剂。
6.权利要求3所述组合物用于防治农作物上病害的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的病害为赤霉病、腥黑穗病、雪腐病、雪霉病、纹枯病、根腐病、全蚀病、颖枯病、秆黑粉病、条纹病、网斑病、坚黑穗病、青枯病、茎基腐病、猝倒病、立枯病、红腐病、炭疽病、黑根病、锈病或白粉病。
CN201410788578.8A 2014-12-17 2014-12-17 一种解淀粉芽孢杆菌gfj‑4及其组合物 Active CN104531574B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410788578.8A CN104531574B (zh) 2014-12-17 2014-12-17 一种解淀粉芽孢杆菌gfj‑4及其组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410788578.8A CN104531574B (zh) 2014-12-17 2014-12-17 一种解淀粉芽孢杆菌gfj‑4及其组合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104531574A true CN104531574A (zh) 2015-04-22
CN104531574B CN104531574B (zh) 2018-02-09

Family

ID=52847209

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410788578.8A Active CN104531574B (zh) 2014-12-17 2014-12-17 一种解淀粉芽孢杆菌gfj‑4及其组合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104531574B (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105494446A (zh) * 2015-12-21 2016-04-20 云南农业大学 一种生物复合种衣剂及应用
CN106035383A (zh) * 2016-06-27 2016-10-26 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种含有化学杀菌剂和生防菌的菌药组合物、制剂及其应用
CN106172503A (zh) * 2016-06-27 2016-12-07 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种含有二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂和生防菌的菌药组合物、制剂及其应用
CN107006519A (zh) * 2017-04-19 2017-08-04 陕西康禾立丰生物科技药业有限公司 一种含解淀粉芽孢杆菌的高效杀菌组合物
CN107660557A (zh) * 2017-05-19 2018-02-06 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所 一种含解淀粉芽孢杆菌和苯醚甲环唑的杀菌组合物
CN108135179A (zh) * 2015-08-22 2018-06-08 尼奥齐姆国际有限公司 无毒植物剂组合物及其方法和用途
CN109414022A (zh) * 2016-06-02 2019-03-01 丹斯塔发酵股份公司 用于改善植物发育的组合物和方法
CN110558332A (zh) * 2019-10-22 2019-12-13 天津市植物保护研究所 一种含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物及其用途
CN114164144A (zh) * 2021-11-17 2022-03-11 河北农业大学 耐受农药酷拉斯的小麦全蚀病生防解淀粉芽孢杆菌及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101985608A (zh) * 2010-10-25 2011-03-16 江苏省农业科学院 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
CN103749542A (zh) * 2014-02-21 2014-04-30 江苏省农业科学院 解淀粉芽孢杆菌井冈霉素复配生物杀菌剂及其应用
CN103875713A (zh) * 2014-01-26 2014-06-25 江苏省农业科学院 解淀粉芽孢杆菌噻枯唑复配可湿性杀菌粉剂及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101985608A (zh) * 2010-10-25 2011-03-16 江苏省农业科学院 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
CN103875713A (zh) * 2014-01-26 2014-06-25 江苏省农业科学院 解淀粉芽孢杆菌噻枯唑复配可湿性杀菌粉剂及其应用
CN103749542A (zh) * 2014-02-21 2014-04-30 江苏省农业科学院 解淀粉芽孢杆菌井冈霉素复配生物杀菌剂及其应用

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108135179A (zh) * 2015-08-22 2018-06-08 尼奥齐姆国际有限公司 无毒植物剂组合物及其方法和用途
CN105494446A (zh) * 2015-12-21 2016-04-20 云南农业大学 一种生物复合种衣剂及应用
CN109414022A (zh) * 2016-06-02 2019-03-01 丹斯塔发酵股份公司 用于改善植物发育的组合物和方法
CN106035383A (zh) * 2016-06-27 2016-10-26 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种含有化学杀菌剂和生防菌的菌药组合物、制剂及其应用
CN106172503A (zh) * 2016-06-27 2016-12-07 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种含有二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂和生防菌的菌药组合物、制剂及其应用
CN107006519A (zh) * 2017-04-19 2017-08-04 陕西康禾立丰生物科技药业有限公司 一种含解淀粉芽孢杆菌的高效杀菌组合物
CN107660557A (zh) * 2017-05-19 2018-02-06 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所 一种含解淀粉芽孢杆菌和苯醚甲环唑的杀菌组合物
CN107660557B (zh) * 2017-05-19 2020-07-21 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所 一种含解淀粉芽孢杆菌和苯醚甲环唑的杀菌组合物
CN110558332A (zh) * 2019-10-22 2019-12-13 天津市植物保护研究所 一种含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物及其用途
CN114164144A (zh) * 2021-11-17 2022-03-11 河北农业大学 耐受农药酷拉斯的小麦全蚀病生防解淀粉芽孢杆菌及应用
CN114164144B (zh) * 2021-11-17 2022-08-26 河北农业大学 耐受农药酷拉斯的小麦全蚀病生防解淀粉芽孢杆菌及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN104531574B (zh) 2018-02-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104531574A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌gfj-4及其组合物
CN102010835B (zh) 一种黄麻链霉菌nf0919菌株、用途及其活性发酵液的制备方法
CN103484384B (zh) 一种防控蔬菜真菌病害的深绿木霉制剂及其制备方法
CN101124915B (zh) 一种防治农作物土传病害的生防菌复配剂及制备方法
CN101575574A (zh) 一种哈茨木霉类复合菌培养物及其在植保方面的应用
CN100445370C (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其菌剂和应用
CN102199563B (zh) 一种防治植物病害的生防菌及其制备方法
CN103004884B (zh) 西瓜生物种衣剂及其制备和应用
CN103952328B (zh) 一种枯草芽孢杆菌菌株a33、菌剂及制备方法和应用
CN105331557B (zh) 解淀粉芽孢杆菌hz179及其在制备微生物杀虫剂中的应用
CN102021122B (zh) 一种高效杀虫真菌及其用途
CN105532735A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌和苦参碱的杀菌杀虫组合物
CN103039468A (zh) 一种壳寡糖与丙森锌的植保用组合物
CN107660557A (zh) 一种含解淀粉芽孢杆菌和苯醚甲环唑的杀菌组合物
CN102533603B (zh) 一株用于防治棉花黄萎病的假单胞菌及其应用
CN105410031B (zh) 一株深褐芽孢杆菌yl3及其应用
CN102835403B (zh) 一种杀菌组合物及其制剂和应用
CN107041384A (zh) 一种含解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯的杀菌组合物及其应用
CN112889843B (zh) 一种防治柑橘红蜘蛛的死亡谷芽胞杆菌可湿性粉剂及应用
CN103444721B (zh) 一种杀菌农药组合物、农药制剂及其用途
CN102648713B (zh) 一种利用真菌激活蛋白提高木霉菌剂生物防病活性的技术
CN103352020A (zh) 一种枯草芽孢杆菌的微生物制剂制备方法及其应用
CN106942284B (zh) 一种防治葡萄病害的复配生物杀菌剂及其应用
WO2019012541A1 (en) MICROBIAL COMPOSITION AND METHODS OF USE THEREOF
CN104982459B (zh) 一株短小芽孢杆菌n103‑1及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant