UA104990C2 - Рослина пшениці з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів - Google Patents

Рослина пшениці з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів Download PDF

Info

Publication number
UA104990C2
UA104990C2 UAA200905463A UAA200905463A UA104990C2 UA 104990 C2 UA104990 C2 UA 104990C2 UA A200905463 A UAA200905463 A UA A200905463A UA A200905463 A UAA200905463 A UA A200905463A UA 104990 C2 UA104990 C2 UA 104990C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
imi
nucleic acid
wheat plant
plant
wheat
Prior art date
Application number
UAA200905463A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Дж. Позняк Кертіс
Хакл П'єр
Original Assignee
Юніверсіті Оф Саскачеван
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Юніверсіті Оф Саскачеван filed Critical Юніверсіті Оф Саскачеван
Publication of UA104990C2 publication Critical patent/UA104990C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • A01H5/10—Seeds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/50—1,3-Diazoles; Hydrogenated 1,3-diazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8278—Sulfonylurea
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/03—Oxo-acid-lyases (4.1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Винахід належить до рослини пшениці з підвищеною резистентністю до імідазолінонового гербіциду. Даний винахід охоплює пшеничні культури, які містять ІMI нуклеїнову кислоту, яка являє собою В-геномну імідазолінон толерантну Als алель (Imi2) нуклеїнову кислоту. Даний винахід також охоплює насіння, вироблене цими пшеничними культурами, та способи контролю над бур'янами в оточенні цих пшеничних культур.

Description

Ця заявка заявляє пріоритет попередньої заявки США Моб60/311,282, поданої 9 серпня 2001р.
Даний винахід у цілому стосується рослин, які мають підвищену резистентність до імідазолінонових гербіцидів. Тобто даний винахід стосується пшеничних культур, одержаних шляхом мутагенезу та кросбридингу і перетворення, які мають підвищену резистентність до імідазолінонових гербіцидів.
Синтаза ацетогідроксіоцтової кислоти (АНА5; ЕС 4.1.3.18) є першим ферментом, який каталізує біохімічний синтез амінокислот з розгалуженими ланцюгами валіну, лейцину та ізолейцину (5іпдни В.К., 1999 Віозупінезвізв ої маїїпе, Ієисіпе апа ізоівисіпе іп: 5іпой В.К. (Ед) Ріапі атіпо асід5. Магсеї! ОеккКег Іпс.
Мем МогК, Мем МоїКк. Ру.227-247). АНА5 є місцем дії чотирьох різних за структурою груп гербіцидів, включаючи сульфонілсечовини (аНоб55за НА апа Раісо 50, 1984 Тгепав5 Віоїесппо!ї 2:158-161), імідазолінони (Зпапег еї аї., 1984 Ріапі РНузіої 76:545-546), триазолопіримідини (З5ибгатапіап апа
Сепміск, 1989 Іппірйоп ої асеюіасіаїе зупіпазе Бу ПіагоІоругітіаіпе5 іп (єд) М/нпаКкег УА, боппеї РЕ
Віосаїа|увів іп адгісийига! Біоїесппоіїоду. АС5 Зутровішт 5еїпев, Атегісап Спетіса! Босієїу. УУазпіпдіоп, 0.0. Рд.277-288) та піримідилоксибензоати (З!иргатапіап еї аї., 1990 Ріапі РНувзіо! 94: 239-244.)
Імідазолінонові та сульфонілсечовинні гербіциди широко застосовують у сучасному сільському господарстві завдяки їхній ефективності при дуже низьких нормах внесення та відносній нетоксичності для тварин. Шляхом інгібування активності АНА ці групи гербіцидів перешкоджають ростові та розвиткові чутливих до них рослин, включаючи багато видів бур'янів. Прикладами імідазолінонових гербіцидів серійного виробництва є РОВ5ОШІТФ (імазетапір), зСЕРТЕВНФ (імазахін) та АВЗБЕМАГ Ф (імазапір). Приклади сульфонілсечовинних гербіцидів є хлорсульфурон, метсульфурон-метил, сульфометурон-метил, хлоримурон-етил, трифенсульфурон-метил, трибенурон-метил, бенсульфурон-метил, нікосульфурон, етаметсульфурон-метил, римсульфурон, трифлусульфурон- метил, триасульфурон, примісульфурон-метил, циносульфурон, амідосульфурон, флузасульфурон, імазосульфурон, піразосульфурон-етил та галосульфурон.
Завдяки їх високій ефективності та низькій токсичності, імідазоліноновим гербіцидам віддають перевагу, коли йдеться про нанесення шляхом розпилення над широкими площами рослинних культур. Можливість розпилення гербіциду над великими площами рослинних культур знижує витрати, пов'язані зі створенням плантацій та доглядом за ними і зменшує потребу в підготуванні місця до застосування таких хімікатів. Розпилення над потрібними толерантними видами в результаті також забезпечує можливість досягнення максимального врожаю потрібних культур завдяки відсутності конкуруючих видів. Однак, можливість застосування таких способів розпилення залежить від наявності резистентних до імідазолінону видів потрібних рослин на площі розпилення.
Серед основних сільськогосподарських культур деякі види зернобобових, такі як соя, мають природну резистентність до імідазолінонових гербіцидів завдяки їх здатності до швидкого засвоєння гербіцидних сполук (Зпапег апа Вобіпзоп, 1985 М/еєа 5сі. 33:469-471). Інші культури, такі як кукурудза (Меж/поизе еї аї., 1992 Ріапі РНузіої. 100:882-886) та рис (Вагтейце єї а!Ї., 1989 Стор Заїепегв ог
Негбісіде5, Асадетіс Рге55 Мем мок, рр.195-220), певною мірою є чутливими до імідазолінонових гербіцидів. Розбіжності в чутливості до імідазолінонових гербіцидів залежать від хімічної природи конкретного гербіциду та характеру метаболізму сполуки від токсичної до нетоксичної форми в кожній рослині (Зпапег еї а!., 1984 Ріапі РНузіої. 76:545-546; Втомп еї а!., 1987 Резіїс. Віоспт. РНузіої!. 27:24- 29). Інші фізіологічні розбіжності рослин, такі як абсорбція та транслокація, також відіграють важливу роль у чутливості (5папег апа Робіпзоп, 1985 М/еєа 5сі. 33:469-471).
Культурні сорти, резистентні до імідазолінонів, сульфонілсечовин та триазолопіримідинів, успішно виводилися з застосуванням насіння, мікроспор, пилку та мутагенезу калюсу в 7єа тауз, Агапідорвзів
Інаійапа, Вгазвзіса пари, Сіусіпе тах, апа Місойапа їабасит (5ебавійап еї а!., 1989 Стор 5сі. 29:1403- 1408; Змапзоп еї аї., 1989 Тнеог. Аррі. Сепеї. 78:525-530; Мем/поизе еї аї., 1991 Тнеог. Аррі. Сепеї. 83:65-70; Заїйпавімап евї а!., 1991 Ріапі Рпузіої. 97:1044-1050; Мошапоа еї а)ї., 1993 3. Негеаійу 84: 91-96).
В усіх випадках резистентність забезпечував єдиний, частково домінантний ядерний ген. Раніше також були виведені чотири резистентні до імідазолінону пшеничні культури після мутагенезу насіння
Тиййсит аевімит і. см Біде! (Мем/поизе еї аїЇ., 1992 Ріапі РПузіої. 100:882-886). Дослідження успадкування підтвердили, що єдиний, частково домінантний ген забезпечував резистентність. На основі алельних досліджень автори дійшли висновку, що мутації в чотирьох ідентифікованих лініях містилися в одному місці Один з генів резистентності культури Біде було позначено як Е5-4 (Мем/поизе сеї а!., 1992 Ріапі Рпузіої. 100:882-886).
Комп'ютерне моделювання тривимірної конформації комплексу АНАФЗ-інгібітора передбачає кілька амінокислот у запропонованій кишені зв'язування інгібітора як місця, де викликані мутації можуть забезпечувати вибіркову резистентність до імідазолінонів (ОК єї аї!., 1996 9. Мої. Вісі. 263:359-368)
Пшеничні культури, одержані за допомогою деяких із цих раціонально спланованих мутацій у запропонованих місцях зв'язування ферменту АНА5, фактично інгібували специфічну резистентність до єдиного класу гербіцидів (ОЇ еї аї!., 1996 9. Мої. Віої. 263:359-368).
Про резистентність рослин до імідазолінонових гербіцидів також повідомлялося в багатьох патентах. У патентах США МоМо4,761,373, 5,331,107, 5,304,732, 6,211,438, 6,211,439 та 6,222,100 у загальних рисах описано застосування зміненого гена АНАбБ для викликання резистентності до гербіцидів у рослинах і докладно описано деякі резистентні до імідазолінону лінії кукурудзи. У патенті
США Ме5,013,659 описано рослини, які виявляють резистентність до гербіцидів і мають мутації у принаймні одній амінокислоті в одній або кількох збережених ділянках. Описані в ньому мутації кодують або перехресну резистентність до імідазолінонів та сульфонілсечовин або специфічну до сульфонілсечовини резистентність, але специфічна до імідазолінону резистентність не описується.
Крім того, в патенті США Ме5,731,180 та патенті США Ме5,767,361 обговорюється виділений ген, який має єдине амінокислотне заміщення в амінокислотній послідовності АНА5 однодольних дикого типу, яка в результаті забезпечує специфічну до імідазолінону резистентність.
До цього часу в роботах існуючого рівня техніки не було описано резистентних до імідазолінону пшеничних культур, які містять більше одного зміненого гена АНА5. Так само в роботах існуючого рівня техніки не було описано резистентних до імідазолінону пшеничних культур, які містять мутації в геномах, крім геному, від якого походить ген Е5-4. Таким чином, дана галузь потребує ідентифікації генів резистентності до імідазолінону з додаткових геномів. Дана галузь також потребує пшеничних культур, які мають підвищену резистентність до гербіцидів, таких як імідазолінон, і містять більше одного зміненого гена АНА5Б. Потрібні також способи контролю над ростом бур'янів поблизу від таких пшеничних культур. Ці композиції та способи дозволяють застосовувати технології розпилення при нанесенні гербіцидів на площі з пшеничними культурами.
Даний винахід забезпечує пшеничні культури, які включають ІМІ нуклеїнові кислоти, причому пшенична культура має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з різновидами рослини дикого типу. Пшеничні культури можуть містити одну, дві, три або більше ІМІ нуклеїнових кислот. В одному варіанті втілення пшенична культура включає кілька ІМІ нуклеїнових кислот, які містяться в різних геномах. В оптимальному варіанті ІМІ нуклеїнові кислоти кодують білки, які включають мутацію в консервативній амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з Домену А, Домену В, Домену С, Домену О та Домену Е. У ще кращому варіанті мутація міститься в консервативному Домені Е або консервативному Домені С Забезпечуються також частини рослин та насіння рослин, отримані від описаних авторами пшеничних культур. В іншому варіанті втілення пшенична культура включає ІМІ нуклеїнову кислоту, яка не є Іті! нуклеїновою кислотою. ІМІ нуклеїнова кислота може бути, наприклад, Іті2 або ІтіЗ нуклеїновою кислотою.
ЇМІ нуклеїнові кислоти даного винаходу можуть включати нуклеотидну послідовність, вибрану з групи, яка складається з: полінуклеотиду 5ЕО ІЮО МО:1; полінуклеотиду 5ЕО ІЮО МО:3; полінуклеотидної послідовності, яка кодує поліпептид 5ЕБЕО ІЮО МО:2; полінуклеотидної послідовності, яка кодує поліпептид 5ЕО 10 МО:С4, полінуклеотиду, який включає принаймні 60 послідовних нуклеотидів будь- якого з вищезгаданих полінуклеотидів; та полінуклеотиду, комплементарного будь-якому з вищезгаданих полінуклеотидів.
Рослини даного винаходу можуть бути трансгенними або нетрансгенними. Прикладами нетрансгенних пшеничних культур з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів є пшенична культура, яка має Номер патентного депонування АТОС РТА-3953 або РТА-3955; або мутантна, рекомбінантна або піддана генній інженерії похідна рослини з номером патентного депонування АТСС РТА-3953 або РТА-3955; або будь-якого потомства рослини з номером патентного депонування АТСС РТА-3953 або РТА-3955; або рослина, яка є потомством будь-якої з цих рослин.
Крім композицій даного винаходу, забезпечується кілька способів. Авторами описано способи зміни толерантності рослини до імідазолінонового гербіциду, які включають зміну експресії ІМІ нуклеїнової кислоти в рослині. Описано також способи одержання трансгенної рослини, яка має підвищену толерантність до імідазолінонового гербіциду, які включають перетворення рослинної клітини вектором експресії, що включає одну або кілька ІМІ нуклеїнових кислот, та вирощування рослини з рослинної клітини. Винахід також охоплює спосіб контролю над бур'янами в оточенні пшеничної культури, який включає нанесення імідазолінонового гербіциду на бур'яни та пшеничну культуру, причому пшенична культура має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з сортом пшеничної культури дикого типу, і рослина містить одну або кілька ІМІ нуклеїнових кислот. У деяких оптимальних варіантах втілення цих способів рослини включають множинні ІМІ нуклеїнові кислоти, які містяться в різних геномах пшениці.
Фігура 1 є таблицею, на якій показано результати оцінки резистентності однієї рослини до імазамоксу в популяціях батьківської рослини та покоління Рі, одержаного в результаті взаємного схрещування між резистентними лініями та СОС Теєаї. Цифри означають кількість рослин, занесених до кожного фенотипічного класу. Батьківські лінії позначено жирним шрифтом. Кількість батьківських ліній включає лінії, зараховані до популяцій Р».
Фігура 2 є таблицею, на якій показано реакцію на імазамокс у популяціях Ег та ВСРЇї, одержаних у результаті схрещування між резистентними лініями та СОС Теаї., і результати тестів Спі-єдцпаге однолокусних та дволокусних моделей (15А х Теа) для контролю резистентності. Символи, використані на фігурі 2, означають: а - значення Р Спі-здпйаге (1 ак) представляє ймовірність того, що відхилення від випробуваного співвідношення зумовлюються лише випадком. Значення Р Спі-хдцагев,
більші за 0,05, вказують на те, що значення, які спостерігалися, не мали значних відмінностей від очікуваних значень; Б - значення Р Спі-здпаге, яке представляє ймовірність того, що відхилення між популяціями Ег, одержаними в результаті взаємного схрещування між СОС Теа! та резистентними лініями, зумовлюються лише випадком. Значення СпНі-здцаге, більші за 0,05, вказують на те, що взаємні популяції ЕР2 були гомогенними, і дані між двома взаємними популяціями були об'єднані; с -
СОС Теаі використовували як повторну батьківську рослину; й - випробувані співвідношення грунтувалися на результатах покоління Ге; і є - значення Р Спі-здцаге (І а) для співвідношення ВС...
Фігура З є таблицею, на якій показано результати оцінки резистентності до імазамоксу в групах Егз
У результаті схрещування між резистентними лініями та СОС Теаї., і результати тестів Спі-зайаге однолокусних та дволокусних моделей (15А х Теа) для контролю резистентності. Символи, використані на Фігурі 3, означають: а - випробувані співвідношення сегрегації в групі грунтувалися на результатах популяцій Ег та ВСЕ :; Б - значення Р Спі-хдцаге (2 аб), яке представляє ймовірність того, що відхилення від випробуваного співвідношення зумовлюються лише випадком. Значення Р. сСпі- здпцагев, більші за 0,05, вказують на те, що значення, які спостерігалися, не мали значних відмінностей від очікуваних значень.
Фігура 4 є таблицею, на якій показано результати оцінки резистентності однієї рослини до імазамоксу в популяціях Ба у результаті взаємного схрещування між резистентними лініями.
Співвідношення згідно з тестом Спі-зацаге грунтувалися на результатах у групах РЕ»: та ЕРгзз, Одержаних від схрещування між резистентними лініями та СОС Теаі. Випробуване співвідношення 15:1 стосується дволокусної моделі, а випробуване співвідношення 63:1 стосується трилокусної моделі.
Символ "а", використаний на Фігурі 4, означає: значення Р СпПі-задацаге (1 аб), яке представляє ймовірність того, що відхилення від випробуваного співвідношення зумовлюються лише випадком.
Значення Р Спі-дцагевз, більші за 0,05, вказують на те, що значення, які спостерігалися, не мали значних відмінностей від очікуваних значень.
Фігура 5 є таблицею, на якій показано результати оцінки імазамоксу резистентність у групах ЕРгз у результаті сегрегуючого взаємного схрещування між резистентними лініями. Символи, використані на
Фігурі 5, означають: а - випробувані співвідношення сегрегації в групі грунтувалися на результатах досліджених популяцій Рг; Б - значення Р СпПі-здцаге (2 аю), яке представляє ймовірність того, що відхилення від випробуваного співвідношення зумовлюються лише випадком. Значення Р Спі-хдцагев, більші за 0,05, вказують на те, що значення, які спостерігалися, не мали значних відмінностей від очікуваних значень.
Фігура 6 є таблицею з порівнянням відсотка неїінгібованої іп міо активності АНА5 у чотирьох лініях пшениці у присутності зростаючих концентрацій імідазолінонового гербіциду імазамокс. Теаї є лінією дикого типу без толерантності до імідазолінонових гербіцидів, тоді як ВМ/755 містить Е54 мутантний ген.
Фігура 7 є таблицею з порівнянням витримування ураження трьома генотипами пшениці, обробленими імазамоксом у кількості 1Т0Х або ЗОХ. Норма 1Х становить 20 г/га. ВМ/755 містить Е54 мутантний ген. 15А/11А є основною кількістю змішаного потомства від схрещування Теаї 11А та Теаї 15А. Популяція ще не була гомозиготною в усіх трьох неалельних локусах.
Фігура 8 показує лінійне розташування послідовності ДНК часткових генів пшениці АЇї51 та Іті!, ампліфікованих із геномної ДНК: СОС Теаї (рядок 2; 5ЕО І МО:15 і 5ЕО ІЮ МО:16), ВМ/755 (рядок 3;
ЗЕО ІЮ МО:17 ії 5ЕО ІЮО МО':18), Теа! ІМІ 10А (рядок 4; 5ЕО ІЮ МО 19 ї 5ЕО ІЮ МО:20), Теаї ІМІ 11А (рядок 5; 5ЕО ІЮ МОС21 і 5ЕО І МО:22) і Теаї! ІМІ 15А (рядок 6; 5ЕО ІЮ МОС23 і 5ЕО І МО:24).
Часткові послідовності суміщали з повною послідовністю гена рису АЇ 5 (рядок 1; 5ЕО І МО:13 і 5ЕО
ІЮ МО:14), отриманого з банку генів (інвентарний номер АВО49822) і переносили на білкові послідовності (представлені над послідовностями ДНК). П'ять висококонсервативних амінокислотних доменів, що містять мутації, які забезпечують резистентність до інгібіторів АНА5, позначено жирним шрифтом. Заміщення гуанідину аденіном у ВМ/755, Теаї! ІМІ 10А та Теаї ІМІ 15А ведуть до заміщення серину аспарагіном (серин 627 у рисі) в домені ІРБСІЯ (Домен Е) АЇївІ гена. Відповідно, гени резистентності, присутні у рослинах ВМУ/755, Теаї ІМІ 10А та Теаї ІМІ 15А, були вказані як частина тії класу. Ці гени резистентності Теєа! вказуються авторами як Теаї ІМІ 1 10А та Теаї ІМІ 1 15 А.
Фігура 9 показує лінійне розташування послідовності ДНК часткових генів пшениці АЇї52 та Ітіг, ампліфікованих із геномної ДНК: СОС Теаї (рядок 2; 5ЕО ІЮ МО:25 і 5ЕО ІЮ МО:26), ВМУ/755 (рядок 3;
ЗЕО ІЮ МО:27 і 5ЕО ІЮО МО:28), Теаї! ІМІ 10А (рядок 4; 5ЕО ІЮ МО:С29 ії 5ЕО ІЮ МО:30), Теаї ІМІ 11А (рядок 5; ЗЕО ІО МОСЗ31 і 5ЕО ІО МО:32) і Теаї! ІМІ 15А (рядок 6; 5ЕО ІЮ МО:ЗЗ і 5ЕО І МО:34).
Часткові послідовності АНА5 суміщали з повною послідовністю АНА5 рису (рядок 1; 5ЕО ІЮ МО:13 і
ЗЕО І МО:14), отриманою з банку генів (інвентарний номер АВО49822) і переносили в білкові послідовності (представлені над послідовностями ДНК). П'ять висококонсервативних амінокислотних доменів, що містять мутації, які забезпечують резистентність до інгібіторів АНА5, позначено жирним шрифтом. Заміщення гуанідину аденіном у Теа!Ї ІМІ 11 А в результаті веде до заміщення серину аспарагіном (серин 627 у рисі) в домені ІРБСС АїІз2 гена. Відповідно, ген резистентності, присутній у рослині Теаї ІМІ 114А, було вказано як частину класу Іті2 нуклеїнових кислот. Цей ген резистентності
Теа! вказано авторами як Теаї ІМІ2 11 А.
Фігура 10 показує часткову послідовність ДНК Теаї ІМІ 1 15А (5ЕО ІО МО) та виведену з неї амінокислотну послідовність (5ЕО 1О МО:2).
Фігура 11 показує часткову послідовність ДНК ТеаІ ІМІ2 НА (5ЕО ІО МО:3) та виведену з неї амінокислотну послідовність (ЗЕО ЕО МО:4).
Фігура 12 показує нуклеїново кислотну послідовність Теа! А 51 ОВЕ дикого типу (ЗЕО ІЮ МО:5),
Теа! АГ 52 ОВЕ (ЗЕО ІО МО:6) Теаї АІ 53 ОАЕ (5ЕО ІЮ МО 77).
Фігура 13 є схематичним зображенням консервативних амінокислотних послідовностей в АНА5 генах, пов'язаних із резистентністю до різних інгібіторів АНА5. Конкретну амінокислотну ділянку, яка відповідає за резистентність, позначено підкресленням. (Модіїієа їот Оеміпе, М.О. апа Ебепівїп, С.У., 1997 Рпузіоіодіса!., Ббіоспетісаї! апа тоїіІесшіаг азресів ої Нетбісіде гезібтапсе разей оп апегед їагоеї 5іїе5 іп Нетбісіде Асіїмйу: Тохісйу, Віоспетівігу, апа Моїесшіаг Віоіоду, 05 Ргез5 Атвіегаат, р.159-185).
Даний винахід стосується пшеничних культур, частин пшеничних культур та клітин пшеничних культур з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів. Даний винахід також охоплює насіння, вироблене описаними авторами пшеничними культурами, та способи контролю над бур'янами в оточенні описаних авторами пшеничних культур. Слід розуміти, що вжита в описі та формулі форма однини може означати як однину, так і множину, залежно від контексту, в якому її вжито. Так, наприклад, посилання на "клітину" може означати використання принаймні однієї клітини.
Вжитий авторами термін "пшенична культура" стосується рослини, яка належить до роду Тийсит.
Пшеничні культури даного винаходу можуть належати до роду Тійсит, включаючи, крім інших, Т. аевіїмит, Т. їшгаідит, Т. торпеемії, Т. топососсит, Т. 7пиКом5Куї та Т. игапи і їх гібриди. Прикладами підвиду Т. аебвіїмит, які охоплюються даним винаходом, є аевзіїмит (пшениця звичайна), сотрасійп (карликова пшениця), таспа (пшениця маха), маміїомі (пшениця Вавілова), 5рейа та зрпаестососсит (пшениця спельта). Прикладами підвиду Т. Штдідит, які охоплюються даним винаходом, є Штдідит, сапніїсит, аісоссоп, дигит, раІеосоіІспісит, роіопісит, їшгкапісит та дісоссоїдез5. Прикладами підвиду Т. топососсцт5, які охоплюються даним винаходом, є топососсит (єіїпКот) та аедіюороїде5. В одному варіанті втілення даного винаходу пшенична культура належить до виду Тійсцт аевіїмит 5ресієв, точніше, сорту СОС Теаї.
Термін "пшенична культура" охоплює пшеничні культури на будь-якій стадії стиглості або розвитку, а також будь-які тканини або органи (частини рослин), взяті або одержані від будь-якої подібної рослини, якщо в контексті прямо не вказано іншого. До частин рослин належать, крім інших, стебла, коріння, квітки, насінні зачатки, тичинки, листя, зародки, ділянки меристеми, тканина калюсу, культури пиляка, гаметофіти, спорофіти, пилок, мікроспори, протопласти та ін. Даний винахід також охоплює насіння, вироблене пшеничними культурами даного винаходу. В одному варіанті втілення насіння одержують шляхом розведення гомозигот для підвищеної резистентності до імідазолінонового гербіциду порівняно з насінням сорту пшеничної культури дикого типу.
У даному винаході описано пшеничну культуру, яка включає одну або кілька ІМІ нуклеїнових кислот, причому пшенична культура має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з різновидами рослини дикого типу. Вжитий авторами термін "ІМІ нуклеїнова кислота" стосується нуклеїнової кислоти, яка є мутованою від нуклеїнової кислоти АНА5 у пшеничній культурі дикого типу, і яка надає підвищеної резистентності до імідазолінону рослині, в якій вона транскрибується. Нуклеїнові кислоти АНА5 Теаї дикого типу показано в 5ЕО ІЮ МО:5 (Теєаї АІ 51 ОРЕ),
ЗЕО І МО:6 (Тева! АІ 52 ОРЕ) ії 5ЕО І МО/7 (Теєа! АГ 53 ОРЕ). В одному варіанті втілення пшенична культура включає множинні ІМІ нуклеїнові кислоти. Вжитий в описі ІМІ нуклеїнових кислот термін "множинні" стосується ІМІ нуклеїнових кислот, які мають різні нуклеотидні послідовності і не стосується простого збільшення кількості однієї ІМІ нуклеїнової кислоти. Наприклад, ІМІ нуклеїнові кислоти можуть бути різними через те, що вони походять із різних геномів або містяться в різних геномах пшениці.
Пшеничні культури даного винаходу можуть мати множинні ІМІ нуклеїнові кислоти з різних геномів, оскільки ці рослини можуть містити більше одного геному. Наприклад, пшенична культура Тийісит аевіїмит містить три геноми, які іноді називають геномами А, В та 0. Оскільки АНА5 є потрібним метаболічним ферментом, то вважається, що геном має принаймні один ген, який кодує фермент
АНА5Б, який зазвичай спостерігається з іншими метаболічними ферментами в гексаплоїдній пшениці, підданій картуванню. Нуклеїнова кислота АНАбБ у кожному геномі може відрізнятися і зазвичай відрізняється своєю нуклеотидною послідовністю від нуклеїнової кислоти АНА в іншому геномі.
Спеціаліст у даній галузі може визначити геном походження кожної нуклеїнової кислоти АНА5, застосовуючи генетичний кросинг та/або інші способи секвенування або гідроліз екзонуклеази, які відомі спеціалістам, а також описані нижче у Прикладі 2. З точки зору цього винаходу, ІМІ нуклеїнові кислоти, які походять із одного з геномів А, В або 0, розпізнають і позначають як нуклеїнові кислоти
Ітії, Іті2 або ІтіЗ.
Автори не стверджують, що будь-який конкретний клас ІМІ нуклеїнової кислоти співвідноситься з будь-яким конкретним геномом А, В або 0. Наприклад, автори не стверджують, що тії нуклеїнові кислоти співвідносяться з нуклеїновими кислотами геному А, що Іті2 нуклеїнові кислоти співвідносяться з нуклетовими кислотами геному В і т. д. Позначення Ітії, Іті2 та ІтіЗ лише вказують, що ІМІ нуклеїнові кислоти в межах кожного такого класу не виділяються незалежно, тоді як дві ІМІ нуклеїнові кислоти різних класів виділяються незалежно і, таким чином, можуть походити з різних геномів пшениці. Клас Іті! нуклеїнових кислот включає Е5-4 ген, як описано в роботі Мем/поизе еї а. (1992 Ріапі Ріузіо!. 100:882-886), та ген Теаї Ітії 15А, детальніше описаний нижче. Клас Іті2 нуклеїнових кислот включає ген Теаї ІМІ2 11А, описаний нижче. Кожен Іті клас може включати члени інших видів пшениці. Отже, кожен Іті клас включає ІМІ нуклеїнові кислоти, які відрізняються за своєю нуклеотидною послідовністю, але, незважаючи на це, позначаються як такі, що походять або містяться в одному геномі пшениці, на основі дослідження успадкування, як описано нижче у
Прикладах і відомо спеціалістам у даній галузі.
Відповідно, даний винахід охоплює пшеничну культуру, яка включає одну або кілька ІМІ нуклеїнових кислот, причому пшенична культура має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з різновидами рослини дикого типу, і одну або кілька ІМІ нуклеїнових кислот вибирають із групи, яка складається з нуклеїнової кислоти тії, Іті2 та Іті3. В одному варіанті втілення рослина містить тії нуклеїнову кислоту та ІтіЗ нуклеїнову кислоту. В оптимальному варіанті втілення Іті! нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність, показану в 5ЕО ІЮ МО1. В іншому варіанті втілення рослина містить Іті2 нуклеїнову кислоту. В оптимальному варіанті втілення
Іті2 нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність, показану в ЕС ІЮ МОЗ.
Вжитий авторами відносно до нуклеїнових кислот термін "із" стосується нуклеїнової кислоти, яка "міститься у" або "походить із" конкретного геному. Термін "міститься у" стосується нуклеїнової кислоти, яка міститься в межах конкретного геному. Також вжитий авторами відносно до геному термін "походить із" стосується нуклеїнової кислоти, видаленої або виділеної з цього геному. Термін "виділений" детальніше визначено нижче.
В іншому варіанті втілення пшенична культура включає ІМІ нуклеїнову кислоту, причому ця нуклеїнова кислота не є Ітії нуклегїновою кислотою. Термін "не Іті!" стосується ІМІ нуклеїнової кислоти, яка не належить до Іті!ї класу, як описано вище. Приклади нуклеїнових кислот Ітії класу показано в рядках 3, 4 та 5 на Фігурі 8. Один приклад не Іті! нуклеїнової кислоти показано в рядку 5 на Фігурі 8. Відповідно, в оптимальному варіанті втілення пшенична культура містить ІМІ нуклеїнову кислоту, яка включає полінуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид 5ЕБЕО І МО4.
Полінуклеотидна послідовність може включати послідовність, показану в 5ЕО ІЮ МОЗ.
Даний винахід включає пшеничні культури, які містять одну, дві, три або більше ІМІ нуклеїнових кислот, причому пшенична культура має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з різновидами рослини дикого типу. ІМІ нуклеїнові кислоти можуть включати нуклеотидну послідовність, вибрану з групи, яка складається з полінуклеотиду 5ЕО ІЮ МО:1; полінуклеотиду 5ЕО
ІО МО:3; полінуклеотидної послідовності, яка кодує поліпептид 5ЕО ЕО МО:2; полінуклеотидної послідовності, яка кодує поліпептид 5ЕО І МО:4, полінуклеотиду, який включає принаймні 60 послідовних нуклеотидів будь-якого 3 вищезгаданих полінуклеотидів; та полінуклеотиду, комплементарного будь-якому з вищезгаданих полінуклеотидів.
Імідазоліноновий гербіцид може бути вибраний, крім інших, з-поміж РИОВБЗИЇТФ (імазетапір),
САРВЕФ (імазапіку), ВАРТОНФ (імазамокс) 5СЕРТЕНФ (імазахін) А5Б5ЕВТФ (імазетабензу),
АВЗЕМАЇ Ф (імазапір), похідної будь-якого з вищезгаданих гербіцидів або суміші двох або більшої кількості вищезгаданих гербіцидів, наприклад, імазапірулмазамоксу (О0У55ЕМЖФ). Точніше, імідазоліноновий гербіцид може бути вибраний, крім інших, з-поміж, 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2- імідазолін-2-іл)-нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл)-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-3- хінолінкарбонової кислоти, 5-етил-2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-5-(метоксиметил)-нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл-4- метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-5-метилнікотинової кислоти, та суміші метил 6-(4-ізопропіл-4-метил-5- оксо-2-імідазолін-2-іл)-т-толуату і метил 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-р-толуату.
Перевагу віддають застосуванню 5-етил-2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-нікотинової кислоти та 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-5-(метоксиметил)-нікотинової кислоти.
Особливу перевагу віддають застосуванню /2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-5- (метоксиметил)-нікотинової кислоти.
В одному варіанті втілення пшенична культура містить дві ІМІ нуклеїнові кислоти, причому нуклеїнові кислоти походять із або містяться в різних геномах пшениці. В оптимальному варіанті однією з двох нуклеїнових кислот є ті! нуклеїнова кислота, краще - якщо вона включає полінуклеотидну послідовність ФЕО І МО:1. В іншому варіанті втілення пшенична культура містить одну ІМІ нуклеїнову кислоту, причому нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність ЕС
ІО МО-1 або 5ЕО ІО МО:3. У ще одному варіанті втілення пшенична культура містить три або більше
ІМІ нуклеїнових кислот, причому кожна нуклеїнова кислота походить із свого геному. В оптимальному варіанті принаймні одна з трьох ІМІ нуклеїнових кислот включає полінуклеотидну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮО МО-1 ії БЕО І МО:3.
В оптимальному варіанті втілення даного винаходу одна або кілька ІМІ нуклеїнових кислот, які містяться в рослині, кодують амінокислотну послідовність, яка включає мутацію в домені, збереженому серед кількох білків АНА5. Ці консервативні домени вказуються авторами як Домен А,
Домен В, Домен С, Домен О та Домен Е. Фігура 13 показує загальне розташування кожного домену в білку АНА5. Вжитий авторами термін Домен А містить амінокислотну послідовність АІТСОУРАВМІСТ (5ЕО ІО МО:8); Домен В містить амінокислотну послідовність ОСМ/ЕЮ (5ЕО ІО МО:9); Домен С містить амінокислотну послідовність МЕАМРОЕСАБМЕІНОАІ! ТАБ (5ЕБО 10 МО 0) Домен 0 містить амінокислотну послідовність АБОЕТР (ЗЕО ІЮ МО:11); Домен Е містить амінокислотну послідовність
ІРБСОЯ (5ЕО 10 МО:12). Даний винахід також передбачає можливість незначних відхилень у консервативних доменах, наприклад, у куколі сериновий залишок у Домені Е заміщено аланіновим залишком.
Відповідно, даний винахід охоплює пшеничну культуру, яка включає ІМІ нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка має мутацію в консервативному Домені, вибраному з групи, яка складається з Домену А, Домену В, Домену С, Домену О та Домену Е. В одному варіанті втілення пшенична культура містить ІМІ нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка має мутацію в Домені Е. В інших оптимальних варіантах втілення мутації в консервативних доменах трапляються в місцях, позначених таким підкресленням: АІТЯОМРААМІСТ (5ЕО ІЮО МО:8); ОМЕО (ЗЕО ІО МО:9);
МЕАУРИЕаСАБМЕЇІНОАЇ ТАБ (5ЕО 10 МО:10); АРОЄЕТР (5ЕО ІО МО-11) та ІРБСІСа (5ЕО ІЮ МО: 12).
Оптимальним заміщенням є аспарагін замість серину в Домені Е (ЗЕО 10 МО:12).
Описані авторами пшеничні культури можуть бути або трансгенними пшеничними культурами, або нетрансгенними пшеничними культурами. Вжитий авторами термін "трансгенний" стосується будь-якої рослини, рослинної клітини, калюсу, рослинної тканини або частини рослини, що містить, повністю або частково, принаймні один рекомбінантний полінуклеотид. У багатьох випадках рекомбінантний полінуклеотид, частково або повністю, є стабільно включеним у хромосому або стійкий позахромосомний елемент таким чином, що він передається наступним поколінням. З точки зору винаходу термін "рекомбінантний полінуклеотид" стосується полінуклеотиду, який було змінено, перебудовано або модифіковано шляхом генної інженерії. Прикладами є будь-який клонований полінуклеотид або полінуклеотиди, які є зв'язаними або оприєднаними до гетерологічних послідовностей. Термін "рекомбінантний" не стосується змін полінуклеотидів, які є результатом природних подій, таких як спонтанні мутації, або неспонтанного мутагенезу з наступною селекцією.
Рослини, які містять мутації що виникають внаслідок неспонтанного мутагенезу та селекції, вказуються авторами як нетрансгенні рослини і охоплюються даним винаходом. У варіантах втілення, в яких пшенична культура є трансгенною і містить множинні ІМІ нуклеїнові кислоти, нуклеїнові кислоти можуть походити з різних геномів або одного геному. Або ж у варіантах втілення, в яких пшенична культура є нетрансгенною і містить множинні ІМІ нуклеїнові кислоти, нуклеїнові кислоти містяться в різних геномах.
Прикладом нетрансгенного сорту пшеничної культури, що містить одну ІМІ нуклеїнову кислоту, є сорт рослини, депонований в АТСС під номером патентного депонування РТА-3953 і вказаний авторами як сорт пшениці Теаї! ІМІ ПА. Сорт пшениці Теаї ІМІ НА містить Іті2 нуклеїнову кислоту.
Часткову нуклеотидну та виведену амінокислотну послідовності, які відповідають генові Теаї ІМІ2 11 А, показано в 5ЕО ІЮ МО:З і 5ЕО ІО МО:4, відповідно. Єдиним типом послідовностей, не включених до
ЗЕО ІЮО МО:З і 5ЕО ІО МО:4, є послідовності, які кодують і відповідають сигнальній послідовності, яка відщеплюється від зрілого білка Теаї! ІМІ2 ПА. Відповідно, 5ЕО ІЮ МО:4 являє собою повну виведену послідовність зрілого білка Теаї ІМІ2 11А.
Прикладом сорту пшеничної культури, який містить дві ІМІ нуклеїнові кислоти в різних геномах, є сорт рослини, депонований в АТСС під номером патентного депонування РТА-3955 і вказаний авторами як сорт пшениці Теаї ІМІ 15А. Сорт пшениці Теаї ІМІ 15А містить Іті! та Іті З нуклеїнові кислоти. Ітії нуклеїнова кислота включає мутацію, яка веде до заміни серину на аспарагін у кодованому нею ІМІ білку. Мутовані гени АНА5 позначено авторами як Теаї ІМІ!Ї 15А та Теаї ІМІЗ 15А.
Часткову нуклеотидну та виведену амінокислотну послідовності, які відповідають генові Теаї Ітії 15А, показано в 5ЕО ІЮ МО і 5ЕО ІО МО:2, відповідно. Єдиним типом послідовностей, не включених до
ЗЕО ІЮ МО:1 і 5ЕО ІО МО:2, є послідовності, які кодують і відповідають приблизно 100-150 парам основ на 5' кінці і приблизно 5 парам основ на 3' кінці кодуючої ділянки.
Окремі депонування 2500 зразків насіння сортів пшениці Теа! ІМІ 11А та Теаї ІМІ 15А було зроблено в Американському зібранні типових культур, Манассас, Вірджинія, З січня 2002р. Ці депонування було зроблено згідно з умовами Будапештської угоди стосовно депонування мікроорганізмів. Депонування було зроблено на термін не менше тридцяти років і не менше п'яти років після отримання АТСС останнього запиту про надання депонованого зразка. Депоновані зразки насіння отримали номери патентного депонування РТА-3953 (Теаї ІМІ 11 А)утаРТА-3955 (Теаї ІМІ 15А).
Даний охоплює пшеничну культуру, яка має номер патентного депонування РТА-3953 або РТА- 3955; мутантну, рекомбінантну або піддану генній інженерії похідну рослини з номером патентного депонування РТА-3953 або РТА-3955; будь-яке потомство з номером патентного депонування РТА- 3953 або РТА-3955; та рослину, яке є потомством будь-якої з цих рослин. В оптимальному варіанті втілення пшенична культура даного винаходу додатково має характеристики резистентності до гербіцидів, як у рослини з номером патентного депонування РТА-3953 або РТА-3955.
Даний винахід також охоплює описані авторами гібриди сортів пшениці Теаї ІМІ 11А та Теаї ІМІ 15А. Приклад 5 демонструє Теа! ІМІ 11А/Геа! ІМІ 15А гібриди з підвищеною резистентністю до імідазолінонового гербіциду. Даний винахід також охоплює гібриди сортів пшениці Теаї ІМІ 11А або
Теаї ІМІ 15А5 та іншого сорту пшениці. До інших сортів пшениці належить, крім інших, Т. аевіїмит Ї. см
Наєї! та будь-який сорт пшениці, який містить мутантний ген Е5-1, Е5-2, Е5-3 або Е5-4. (див. патент
США Моб,339,184 та патентну заявку США Ме08/474,832). В оптимальному варіанті втілення пшенична культура є гібридом між сортом Теаї ІМІ 11А та сортом Рїіде! Е5-4. Гібриди Теаї ІМІ 11А/Е5-4 містять
Іті!ї нуклеїнову кислоту та Іті2 нуклеїнову кислоту. Гібрид Теаї ІМІ 11А та сорту Ріаєї, який містить Е5- 4 ген, охоплюється даним винаходом і є депонованим в Американському зібранні типових культур,
Манассас, Вірджинія, З січня 2002р. Це депонування було зроблено згідно з умовами Будапештської угоди стосовно депонування мікроорганізмів. Депонування було здійснено на термін не менше тридцяти років і не менше п'яти років після отримання АТСС останнього запиту про надання депонованого зразка. Депоноване насіння отримало номер патентного депонування РТА-3954.
Терміни "сорт" та "різновид" стосуються групи рослин у межах виду, які мають певну кількість спільних характеристик або особливостей, які спеціалістами вважаються достатніми для відрізнення одного сорту або різновиду від іншого сорту або різновиду. Жоден з термінів не передбачає, що всі рослини будь-якого даного сорту або різновиду є генетично ідентичними на рівні повного гена або на молекулярному рівні, або що будь-яка дана рослина є гомозиготною в усіх локусах. Сорт або різновид вважають "розведенням гомозигот" для конкретної особливості, якщо в разі, коли гомозиготний сорт або різновид є самозапилюваним, усе потомство має цю особливість. У даному винаході особливість виникає внаслідок мутації в гені АНА5 пшеничної культури або насіння.
Слід розуміти, може включати дикий або немутований ген АНА5 додатково до ІМІ гена. Як описано у Прикладі 4, передбачається, що сорт пшениці Тєа! ІМІ 11А містить мутацію лише в одному з множинних АНАБ5 ізоферментів, і що сорт пшениці Тєа! ІМІ 15 А містить мутацію лише у двох із множинних АНА5 ізоферментів. Отже, даний винахід охоплює пшеничну культуру, яка включає одну або кілька ІМІ нуклеїнових кислот додатково до однієї або кількох диких або немутованих нуклеїнових кислот АНА5Б.
Крім пшеничних культур, даний винахід охоплює виділені ІМІ білки та нуклеїнові кислоти.
Нуклеїнові кислоти включають полінуклеотид, вибраний з групи, яка складається з полінуклеотиду
ЗЕО ІЮ МО:1; полінуклеотиду 5ЕО ІЮ МО:3; полінуклеотидної послідовності, яка кодує поліпептид 5ЕО
ІО МО:2; а полінуклеотидної послідовності, яка кодує поліпептид 5ЕО ІЮ МО:4, полінуклеотиду, який включає принаймні 60 послідовних нуклеотидів будь-якого з вищезгаданих полінуклеотидів; та полінуклеотиду, комплементарного будь-якому з вищезгаданих полінуклеотидів. В оптимальному варіанті втілення ІМІ нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид
ЗЕО ІЮО МО:2 або 5ЕО ІО МО:4. В іншому оптимальному варіанті втілення ІМІ нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність 5ЕО ІЮ МО:1 або 5ЕО І МОЗ.
Термін "білок АНА5" стосується білка синтази ацетогідроксіоцтової кислоти, а термін "ІМІ білок" стосується будь-якого білка АНАБЄ, який є мутованим від білка АНА5 дикого типу і який надає більшої резистентності до імідазолінону рослині, рослинній клітині, частині рослини, насінню рослини або рослинній тканині, якщо він у них експресується. В оптимальному варіанті втілення ІМІ білок включає поліпептид 5ЕО ІО МО:2 або 5ЕО ІЮ МО:4. Також вжиті авторами терміни "нуклеїнова кислота" та "полінуклеотид" стосуються РНК або ДНК, яка є лінійною або розгалуженою, одно- або дволанцюговою, або їх гібриду. Термін також охоплює гібриди РНК/ДНК. Ці терміни також охоплюють нетрансльовану послідовність, розміщену на 3' та 5' кінцях кодуючої ділянки гена: принаймні близько 1000 нуклеотидів послідовності перед 5' кінцем кодуючої ділянки, і принаймні близько 200 нуклеотидів послідовності після 3 кінця кодуючої ділянки гена. Менш поширені основи, такі як інозин, 5- метилцитозин, б-метиладенін, гіпоксантин та інші, також можуть бути використані для антисмислового, а5РНК- та рибозимного спарювання. Наприклад, було виявлено, що полінуклеотиди, які містять С-5 пропінові аналоги уридину та цитидину, зв'язуються з РНК з високою спорідненістю і є сильними антисмисловими інгібіторами експресії генів. Також здійснюють інші модифікації, наприклад модифікацію фосфодіестерного основного ланцюга або 2'-гідрокси у групі рибози РНК. Антисмислові полінуклеотиди та рибозими можуть складатися повністю з рибонуклеотидів або можуть містити змішані рибонуклеотиди та деоксирибонуклеотиди. Полінуклеотиди винаходу одержують будь-якими способами, включаючи одержання геномних препаратів, КДНК-препаратів, іп міго синтез, ВТ-ПЛР та іп міїго або іп мімо транскрипцію. "Виділеною" молекулою нуклеїнової кислоти є молекула, яка є практично відокремленою від інших молекул нуклеїнових кислот, присутніх у природному джерелі нуклеїнової кислоти (тобто послідовностей, які кодують інші поліпептиди). В оптимальному варіанті "виділена" нуклеїнова кислота є вільною від деяких із послідовностей, які у природі є фланкуючими на нуклеїновій кислоті (тобто послідовностей, розміщених на 5' та 3 кінцях нуклеїнової кислоти) в її природному репліконі.
Наприклад, клоновану нуклеїнову кислоту вважають виділеною. У різних варіантах втілення виділена молекула ІМІ нуклеїнової кислоти може містити менше, ніж приблизно 5 КБ, 4 КЬ, З КБ, 2 КБ, 1 Кр, 0,5 Кр або 0,1 Ко нуклеотидних послідовностей, які у природі є фланкуючими на молекулі нуклеїнової кислоти в геномній ДНК клітині, з якої походить нуклеїнова кислота (наприклад, клітини Тийсит аевіїмит). Нуклеїнову кислоту також вважають виділеною, якщо її було змінено через втручання людини або поміщено в локус або місце, яке не є її природним місцем, або якщо її було введено у клітину шляхом агроінфекції або біолістики. Крім того, "виділена" молекула нуклеїнової кислоти, така як молекула кДНК, може бути вільною від деякого іншого клітинного матеріалу, з яким вона пов'язана у природі, або культурального середовища, якщо її одержують рекомбінантними способами, або хімічних попередників або інших хімічних речовин, якщо її синтезують хімічним шляхом.
Прямо виключаються з визначення "виділені нуклеїнові кислоти": природні хромосоми (такі як розтягнуті хромосоми), бібліотеки штучних хромосом, геномні бібліотеки та бібліотеки кДНК, які існують або як іп міо препарат нуклеїнової кислоти, або як препарат трансфікованої/трансформованої клітини-хазяїна, причому клітини-хазяїни є або іп міго гетерогенним препаратом, або вирощеними на пластині як гетерогенна популяція окремих колоній. Також прямо виключаються вищезгадані бібліотеки, в яких зазначена нуклеїнова кислота складає менше 5 95 від кількості нуклеїновокислотних вставок у векторних молекулах. Також прямо виключаються геномні
ДНК цілих клітин або препарати РНК цілих клітин (включаючи препарати цілих клітин, які є механічно зрізаними або підданими ферментативному гідролізові). Крім того, прямо виключаються препарати цілих клітин, які існують або як іп міо препарат, або як гетерогенна суміш, відокремлена шляхом електрофорезу, в якій нуклеїнову кислоту згідно з винаходом, не було піддано подальшому відокремленню від гетерологічних нуклеїнових кислот у середовищі електрофорезу (наприклад, подальшому відокремленню шляхом вирізання однієї смуги з гетерогенної сукупності смуг в агарозному гелі або шляхом блотування на нейлон).
Молекулу нуклеїнової кислоти даного винаходу, наприклад молекулу нуклеїнової кислоти, яка містить нуклеотидну послідовність 5ЕО ІЮ МО, 5ЕО ЕО МО:З або її частину, виділяють, застосовуючи стандартні способи молекулярної біології та представлену авторами інформацію про послідовність. Наприклад, ІМІ кКДНК Т. аєвзіїмит виділяють з бібліотеки Т. аєвіїмит, застосовуючи, повністю або частково, послідовність ФЕО ІЮ МО 1 або 5ЕО ІО МО:3. Крім того, молекула нуклеїнової кислоти, яка включає, повністю або частково, 5ЕСО ІЮ МО:1 або 5ЕО ІЮО МО:3, може бути виділена шляхом полімеразної ланцюгової реакції з застосуванням олігонуклеотидних праймерів, побудованих на основі цієї послідовності. Наприклад, мРНК виділяють із рослинних клітин (наприклад, шляхом процедури виділення гуанідин тіоціанату, описаної в роботі Спікаом/іп еї а!., 1979 Віоспетівігу 18:5294- 5299), а КДНК одержують, застосовуючи зворотну транскриптазу (наприклад, Моіопеу МІ М зворотну транскриптазу, яку отримують від Сірсо/ВА!, Веїйезаа, МО; або АМУ зворотну транскриптазу, яку отримують від 5еіїКадаки Атегїіса, Іпс., І. Реїегзрига, ЕІ).
Синтетичні олігонуклеотидні праймери для ампліфікації полімеразної ланцюгової реакції можуть бути побудовані на основі нуклеотидної послідовності, показаної в 5ЕО ІЮ МО:1 або 5ЕО ІЮО МО:3.
Молекула нуклеїнової кислоти винаходу може бути ампліфікована з застосуванням кКДНК або, в альтернативному варіанті, геномної ДНК як матриці та відповідних олігонуклеотидних праймерів згідно зі стандартними способами ампліфікації ПЛР. Ампліфіковану таким чином молекулу нуклеїнової кислоти клонують у відповідний вектор і характеризують шляхом аналізу послідовності ДНК Крім того, олігонуклеотиди, які відповідають нуклеотидній послідовності ІМІ, можуть бути одержані стандартними способами синтезу, наприклад, із застосуванням автоматизованого синтезатора ДНК.
ЇМІ нуклеїнові кислоти даного винаходу можуть включати послідовності, які кодують ІМІ білок (тобто "кодуючі ділянки"), а також 5' нетрансльовані послідовності та 3' нетрансльовані послідовності.
В альтернативному варіанті молекули нуклеїнових кислот даного винаходу можуть включати лише кодуючі ділянки ІМІ гена, або можуть містити повні геномні фрагменти, виділені з геномної ДНК.
Кодуючу ділянку цих послідовностей позначають як "ОВЕ-позицію". Крім того, молекула нуклеїнової кислоти винаходу може включати частину кодуючої ділянки ІМІ гена, наприклад, фрагмент, який може бути використаний як зонд або праймер. Нуклеотидні послідовності, визначені за клонуванням ІМІ гена з Т. Аевіїмит, дозволяють утворювати зонди та праймери, призначені для застосування в розпізнанні та/або клонуванні ІМІ гомологів в інших типах клітин та організмів, а також ІМІ гомологів з інших пшеничних культур та споріднених видів. Частина кодуючої ділянки також може кодувати біологічно активний фрагмент ІМІ білка.
Вжитий авторами термін "біологічно активна частина" ІМІ білка охоплює частину, наприклад, домен/мотив ІМІ білка, який у разі вироблення в рослині підвищує резистентність рослини до імідазолінонового гербіциду порівняно з різновидами рослини дикого типу. Способи кількісного визначення підвищеної резистентності до імідазолінонових гербіцидів представлено нижче у
Прикладах. Біологічно активні частини ІМІ білюка включають пептиди, кодовані полінуклеотидними послідовностями, які включають 5ЕО ІЮ МО:1 або 5ЕО ІЮО МО:3, які включають менше амінокислот, ніж
ЇМІ білок повної довжини, і надають підвищеної резистентності до імідазолінонового гербіциду після експресії в рослині. Як правило, біологічно активні частини (наприклад, пептиди, які мають у довжину, наприклад, 5, 10, 15, 20, 30, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 50, 100 або більше амінокислот) включають домен або мотив з принаймні однією активністю ІМІ білка. Крім того, інші біологічно активні частини, в яких делетовано інші ділянки поліпептиду, одержують рекомбінантними способами і оцінюють на наявність описаних авторами однієї або кількох активностей. В оптимальному варіанті біологічно активні частини ІМІ білка включають один або кілька консервативних доменів, вибраних з групи, яка складається з Домену А, Домену В, Домену С, Домену 0 та Домену Е, причому консервативний домен містить мутацію. Винахід також забезпечує химерні або злиті ІМІ поліпептиди. Вжитий авторами термін ІМІ "химерний поліпептид" або "злитий Поліпептид" охоплює ІМІ поліпептид, функціонально зв'язаний з не-ІМІ поліпептидом. Термін "не-ІМІ поліпептид" стосується поліпептиду, який має амінокислотну послідовність, яка не має значної ідентичності ІМІ поліпептидові, наприклад, поліпептиду, який не є ІМІ ізоферментом, причому цей пептид виконує відмінну від ІМІ поліпептиду функцію. Відносно до злитого поліпептиду термін "функціонально зв'язаний" означає, що ІМІ поліпептид та не-ІМІ поліпептид є злитими один з одним таким чином, що обидві послідовності виконують передбачену функцію, характерну для даної послідовності. Не-ІМІ поліпептид може бути злитий з М-кінцем або С-кінцем ІМІ поліпептиду. Наприклад, в одному варіанті втілення злитий поліпептид є С5Т-ІМІ злитим поліпептидом, у якому ІМІ послідовність є злитою з С-кінцем 57 послідовності. Такі злиті поліпептиди можуть сприяти очищенню рекомбінантних ІМІ поліпептидів. В іншому варіанті втілення злитий поліпептид є ІМІ поліпептидом, який містить гетерологічну сигнальну послідовність на своєму М-кінці. У деяких клітинах-хазяїнах (наприклад, клітинах-хазяїнах ссавців) експресія та/або секреція ІМІ поліпептиду може бути посилена завдяки застосуванню гетерологічної сигнальної послідовності.
Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує ІМІ поліпептид, що має послідовність, ідентичну поліпептидові, який кодується полінуклеотидною послідовністю 5ЕО ІЮО МО:1 або 5ЕО ІО МО:3, може бути створена шляхом введення одного або кількох нуклеотидних заміщень, додавань або делецій у нуклеотидну послідовність 5ЕСО І МО: 1 або 5ЕО ІО МО:З3 таким чином, щоб одне або кілька амінокислотних заміщень, додавань або делецій були введені в кодований поліпептид. Мутації вводять у послідовність 5ЕСО ІО МО:1 або 5ЕО І МО:З стандартними способами, такими як сайт- специфічний мутагенез та ПЛР-опосередкований мутагенез. В оптимальному варіанті консервативні амінокислотні заміщення здійснюють в одному або кількох прогнозованих замінних амінокислотних залишках. "Консервативне амінокислотне заміщення" є таким, при якому амінокислотний залишок заміщується амінокислотним залишком, який має подібний боковий ланцюг. Спеціалістами було визначено групи амінокислотних залишків, які мають подібні бокові ланцюги. До цих груп належать амінокислоти з основними боковими ланцюгами (наприклад, лізин, аргінін, гістидин), кислотними боковими ланцюгами (наприклад, аспарагінова кислота, глутамінова кислота), незарядженими полярними боковими ланцюгами (наприклад, гліцин, аспарагін, глутамін, серин, треонін, тирозин, цистеїн), неполярними боковими ланцюгами (наприклад, аланін, валін, лейцин, ізолейцин, пролін, фенілаланін, метіонін, триптофан), бета-розгалуженими боковими ланцюгами (наприклад, треонін, валін, ізолейцин) та ароматичними боковими ланцюгами (наприклад, тирозин, фенілаланін, триптофан, гістидин). Таким чином, прогнозований замінний амінокислотний залишок в ІМІ поліпептиді оптимально заміщується іншим амінокислотним залишком з тієї саМоЇ групи бокових ланцюгів. В альтернативному варіанті втілення мутації вводять випадково по всій ІМІ кодуючій послідовності або її частині, наприклад, шляхом насиченого мутагенезу, і одержані в результаті мутанти відбирають на наявність описаної авторами ІМІ активності для розпізнання мутантів, які зберігають ІМІ активність.
Після мутагенезу послідовності 5ЕО ОО МО:1 або 5ЕО ІЮО МО:3, кодований поліпептид може бути експресований рекомбінантно, і активність поліпептиду може бути визначена шляхом аналізу резистентності до імідазолінону в рослини, яка експресує поліпептид, як описано нижче у Прикладах.
Для визначення відсотка ідентичності послідовності двох амінокислотних послідовностей (наприклад, 5ЕО ІЮО МО:2 або 5ЕО ІО МО:4 та їх мутантної форми) послідовності суміщають для оптимального порівняння (наприклад, у послідовність одного поліпептиду вставляють розриви для оптимального суміщення з іншим поліпептидом). Після цього порівнюють амінокислотні залишки у відповідних позиціях амінокислот. Якщо позиція в одній послідовності (наприклад, 5ЕО ІЮО МО:2 або
ЗЕО ІЮ МО:4) займається тим самим амінокислотним залишком, що й відповідна позиція в іншій послідовності (наприклад, мутантній формі 5ЕО ІО МО:2 або 5ЕО ІО МО 4), то молекули в цій позиції є ідентичними. Таке саме порівняння здійснюють між двома послідовностями нуклеїнових кислот.
Відсоток ідентичності послідовності між двома послідовностями залежить від кількості ідентичних позицій, спільних для цих послідовностей (тобто відсоток ідентичності послідовностей - кількість ідентичних позицій/загальна кількість позицій х 100). З точки зору винаходу відсоток ідентичності послідовностей між двома нуклеїновими кислотами або поліпептидними послідовностями визначають,
застосовуючи пакет програм Месіог МТІ 6.0 (РОС) (ІптотМах, 7600 М/ізсопвіп Аме., Веїпезаа, МО 20814).
Для визначення відсотка ідентичності двох нуклеїнових кислот виставляють показник "зар орепіпа репапйу" 15 ії показник "дар ехівепбзіоп репапйу" 6,66. Для визначення відсотка ідентичності двох поліпептидів виставляють показник "дар орепіпд репану" 10 ї показник "дар ехієпзіоп репапу" 0,1. Усі інші параметри встановлено за умовчанням. Слід розуміти, що для визначення ідентичності послідовності, якщо порівнюють послідовність ДНК з послідовністю РНК, тимідиновий нуклеотид є еквівалентом урацилового нуклеотиду. В оптимальному варіанті виділені ІМІ поліпептиди, які охоплюються даним винаходом, є принаймні приблизно на 50-60 95, краще - принаймні приблизно на 60-70 95, ще краще - принаймні приблизно на 70-75 95, 75-80 95, 80-85 95, 85-90 95 або 90-95 9р, найкраще - принаймні приблизно на 9695, 97 95, 9895, 9995 або більше ідентичними повній амінокислотній послідовності, кодованій полінуклеотидною послідовністю, показаною в 5ЕО ІЮ МО: або 5ЕО ІЮ МО:3. В іншому варіанті втілення виділені ІМІ поліпептиди, які охоплюються даним винаходом, є принаймні приблизно на 50-60 95, краще - принаймні приблизно на 60-70 95, ще краще - принаймні приблизно на 70-75 95, 75-80 95, 80-85 95, 85-90 95 або 90-95 95, найкраще - принаймні приблизно на 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або більше ідентичними повній амінокислотній послідовності, показаній у БЕО ІО МО:2 або 5ЕО ІЮ МО 4.
Крім того, можуть бути створені оптимізовані ІМІ нуклеїнові кислоти. В оптимальному варіанті оптимізована ІМІ нуклеїнова кислота кодує ІМІ поліпептид, який модулює толерантність рослини до імідазолінонових гербіцидів, ще краще - якщо підвищує толерантність рослини до імідазолінонового гербіциду після його переекспресії в рослині. Вжитий авторами термін "оптимізований" стосується нуклеїнової кислоти, підданої генній інженерії для посилення її експресії в даній рослині або тварині.
Для забезпечення оптимізованих для рослини ІМІ нуклеїнових кислот послідовність ДНК гена модифікують, щоб вона 1) включала кодони, оптимальні для високоекспресованих рослинних генів; 2) включала АжТ, який практично відповідає за складом нуклеотидної основи тому, що міститься в рослинах; 3) утворювала ініціюючу послідовність рослини, 4) не містила послідовностей які викликають дестабілізацію, неналежне поліаденілювання, деградацію та термінацію РНК, або які утворюють шпильки вторинної структури або місця сплайсингу РНК. Посилення експресії ІМІ нуклеїнових кислот у рослинах досягають шляхом застосування частоти розподілу використання кодонів у рослинах взагалі або в конкретній рослині. Способи оптимізації експресії нуклеїнових кислот у рослинах описано в ЕРА 0359472; ЕРА 0385962; заявці РСТ МеМ/О 91/16432; патенті США
Мо5,380,831; патенті США Мо5,436,391; роботах Репіаск еї аї., 1991 Ргос. Маї)!. Асайд. 5сі. ОБА 88:3324- 3328; та Митау еї а!., 1989 Мисівїс Асіа5 Нев. 17:477-498.
Вжитий авторами термін "частота переважного використання кодонів" стосується переваги, яку віддає конкретна клітина-хазяїн при використанні нуклеотидних кодонів для визначення даної амінокислоти. Для визначення частоти використання конкретного кодону в гені кількість випадків цього кодону в гені ділять на загальну кількість випадків усіх кодонів, які вказують на ту саму амінокислоту в гені. Так само частота переважного використання кодонів, яку виявляє клітина-хазяїн, може бути розрахована через середнє значення частоти переважного використання кодонів у великій кількості генів, експресованих клітиною-хазяїном. В оптимальному варіанті цей аналіз обмежують генами, які сильно експресуються клітиною-хазяїном. Відсоток відхилення частоти переважного використання кодонів для синтетичного гена від частоти використання клітиною-хазяїном розраховують спочатку шляхом визначення відсотка відхилення частоти використання одного кодону від частоти використання клітиною-хазяїном з наступним одержанням середнього показника відхилення по всіх кодонах. Як визначено авторами, цей розрахунок включає унікальні кодони (тобто АТО і ТС). Тобто загальне середнє відхилення використання кодонів оптимізованого гена від показника клітина-хазяїна розраховують, користуючись рівнянням ТА-п-17 Хи - МоХп разів 100 7, де Хи - частота використання для кодону п у клітині-хазяїні; Мп - частота використання для кодону п у синтетичному гені, п представляє окремий кодон, який визначає амінокислоту, і загальна кількість кодонів дорівнює 72.
Загальне відхилення частоти використання кодонів, А, для всіх амінокислот в оптимальному варіанті становить менше, ніж приблизно 25 95, краще - менше, ніж приблизно 10 95.
Таким чином, ІМІ нуклеїнова кислота може бути оптимізована таким чином, щоб її частота розподілу використання кодонів відхилялася в оптимальному варіанті не більше, ніж на 25 95 від частоти високоекспресованих рослинних генів, у ще кращому варіанті - не більше, ніж приблизно на 1095. Крім того, враховують відсотковий вміст (3-5 виродженої третьої основи (однодольні підтримують с1--С у цій позиції, на відміну від дводольних). Визнано також, що ХО (де Х є А, Т, С, або
С) нуклеотид є найменшим оптимальним кодоном у дводольних, тоді як ХТА кодону уникають як однодольні, так і дводольні. Оптимізовані ІМІ нуклеїнові кислоти цього винаходу також бажано мати індекси уникнення дублетів ССО і ТА, наближені до індексів вибраної рослини-хазяїна (тобто Тийісит аевіїмит). Краще, якщо ці індекси відхиляються від індексу хазяїна не більше, ніж приблизно 10-15 95.
Крім молекул нуклеїнових кислот, які кодують описані вище ІМІ поліпептиди, інший аспект винаходу стосується виділених молекул нуклеїнових кислот, які є антисмисловими до них.
Вважається, що антисмислові полінуклеотиди інгібують генну експресію полінуклеотиду-мішені шляхом специфічного зв'язування з полінуклеотидом-мішенню і впливу на транскрипцію, сплайсинг, перенесення, трансляцію та/або стійкість полінуклеотиду-мішені. В існуючому рівні техніки описано способи спрямування антисмислового полінуклеотиду на хромосомну ДНК, на первинний транскрипт
РНК або на процесовану мРНК. В оптимальному варіанті ділянки-мішені включають місця сплайсингу, кодони ініціації трансляції, кодони термінації трансляції та інші послідовності в межах відкритої рамки зчитування.
Термін "антисмислова" з точки зору винаходу стосується нуклеїнової кислоти, яка включає полінуклеотид, який є достатньо комплементарним, повністю або частково, генові, первинному транскриптові або процесованій мРНК, щоб впливати на експресію ендогенного гена. "Комплементарними" полінуклеотидами є ті, які здатні до спарювання основ згідно зі стандартними правилами комплементарності Вотсона-Кріка. Зокрема, пурини створюють пари основ з піримідинами для утворення комбінації гуаніну, спареного з цитозином (Сс:С) та аденіну, спареного або з тиміном (АТ) у разі ДНК, або аденіну, спареного з урацилом (А) у разі РНК. Слід розуміти, що два полінуклеотиди можуть гібридизуватися один 3 одним, навіть якщо вони не є повністю комплементарними один одному, якщо кожен має принаймні одну ділянку, практично комплементарну іншій. Термін "антисмислова нуклеїнова кислота" охоплює експресійні касети одноланцюгової РНК, а також дволанцюгової ДНК, які можуть бути транскрибовані для утворення антисмислової РНК. "Активними" антисмисловими нуклеїсновими кислотами є молекули антисмислової РНК, здатні селективно гібридизуватися з первинним транскриптом або мРНК, що кодує поліпептид, який має принаймні 8095 ідентичність послідовності 3 поліпептидом, кодованим полінуклеотидною послідовністю 5ЕО 10 МО:1 або 5ЕО ІО МО:3.
Крім вищеописаних ІМІ нуклеїнових кислот та поліпептидів, даний винахід охоплює ці нуклеїнові кислоти та поліпептиди, приєднані до компонента. До цих компонентів, крім інших, належать компоненти виявлення, компоненти гібридизації, компоненти очищення, компоненти доставления, компоненти реакції, компоненти зв'язування та ін. Типовою групою нуклеїнових кислот, які мають приєднані компоненти, є зонди та праймери. Зонди та праймери, як правило, включають практично ізольований олігонуклеотид. Олігонуклеотид, як правило, включає ділянку нуклеотидної послідовності, яка гібридизується за жорстких умов з принаймні приблизно 12, краще - приблизно 25, ще краще - приблизно 40, 50 або 75 послідовними нуклеотидами смислового ланцюга послідовності, вказаної в
ЗЕО ІО МО:1 або 5ЕО ІЮО МО:3, антисмисловою послідовністю послідовності, вказаної в ЗЕО ІЮ МО: або 5ЕО ІО МО:3, або їх природними мутантами. Праймери на основі нуклеотидної послідовності ФЕО
ІЮО МО:1 або 5ЕО ІО МО:З3 застосовують у ПЛР для клонування ІМІ гомологів. Зонди на основі ІМІ нуклеотидних послідовностей застосовують для виявлення транскриптів або геномних послідовностей, які кодують ті ж самі або гомологічні поліпептиди. В оптимальних варіантах втілення зонд також включає приєднану до нього мітку, наприклад мітку, яка може бути радіоізотопом, флуоресцентною сполукою, ферментом або кофактором ферменту. Такі зонди застосовують як частину випробувального комплекту геномного маркера для розпізнання клітин, які експресують ІМІ поліпептид, наприклад, шляхом вимірювання рівня ІМІ-кодуючої нуклеїнової кислоти, у зразку клітин, наприклад виявлення рівня ІМІ мРНК або визначення чи був геномний ІМІ ген мутованим, чи видаленим.
Винахід також забезпечує виділений рекомбінантний вектор експресії, який включає ІМІ нуклеїнову кислоту, як описано вище, причому вектор експресії у клітині-хазяїні в результаті забезпечує підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з різновидом клітини-хазяїна дикого типу. Вжитий авторами термін "вектор" стосується молекули нуклеїнової кислоти, здатної транспортувати іншу нуклеїнову кислоту, з якою її було з'єднано. Одним типом вектора є "плазміда", яка означає кільцеву дволанцюгову петлю ДНК, у яку можуть бути ліговані додаткові сегменти ДНК.
Іншим типом вектора є вірусний вектор, у якому додаткові сегменти ДНК можуть бути ліговані у вірусний геном. Деякі вектори здатні до самостійної реплікації у клітині-хазяїні, в яку вони є введеними (наприклад, бактеріальні вектори, які мають бактеріальне походження реплікації, та епісомні вектори ссавців). Інші вектори (наприклад, неепісомні вектори ссавців) вводять у геном клітини-хазяїна після введення у клітину-хазяїн, а отже, реплікують разом з геномом хазяїна. Крім того, деякі вектори здатні спрямовувати експресію генів, з якими вони є функціонально зв'язаними. Такі вектори названо авторами "векторами експресії". Взагалі, вектори експресії, які застосовують у технологіях рекомбінантних ДНК, часто мають форму плазмід. У даному описі терміни "плазміда" та "вектор" можуть вживатися поперемінно, оскільки плазміда є найпоширенішою формою вектора. Однак, винахід охоплює й інші форми векторів експресії, такі як вірусні вектори (наприклад, ретровіруси з недостатньою реплікацією, аденовіруси та аденоасоційовані віруси), які виконують рівноцінні функції.
Рекомбінантні вектори експресії згідно з винаходом включають нуклеїнову кислоту винаходу у формі, придатної для експресії нуклеїнової кислоти у клітині-хазяїні, що означає, що рекомбінантні вектори експресії включають одну або кілька регуляторних послідовностей, вибраних на основі клітин- хазяїв, які мають бути застосовані для експресії які є функціонально зв'язаними з нуклеїтновокислотною послідовністю, яка підлягає експресії. Відносно до рекомбінантного вектора експресії "функціонально зв'язаний" означає, що дана нуклеотидна послідовність є зв'язаною з регуляторною(ими) послідовністю (послідовностями) таким чином, що це дозволяє експресію нуклеотидної послідовності (наприклад, в іп міо транскрипційній/трансляційній системі або у клітині- хазяїні, коли вектор є введеним у клітину-хазяїн). Термін "регуляторна послідовність" охоплює промотори, енхансери та інші елементи контролю експресії (наприклад, сигнали поліаденілювання).
Такі регуляторні послідовності описано, наприклад, у роботі Сюедаєї, Сепе Ехргезвіоп Тесппоіоаду:
Метод» іп Епгутоіоду 185, Асадетіс Ргев55, Зап Оієдо, СА (1990), або в роботі Стирег апа Стовбу,
Метод іп Ріапі Моієсшціаг Віоіоду апа Віоїесппоіоду, єдв. СіїсК апа Тпотрзоп, СНарієг 7, 89-108, САС
Ргев5: Воса Нашп, Ріогіда, включаючи посилання, які в них містяться. До регуляторних послідовностей належать ті, які спрямовують конститутивну експресію нуклеотидної послідовності в багатьох типах клітин-хазяїнів, та ті, які спрямовують експресію нуклеотидної послідовності лише в деяких клітинах- хазяях або за певних умов. Спеціалістам стане зрозуміло, що побудова вектора експресії може залежати від таких чинників, як вибір клітини-хазяїна, яка підлягає трансформації, рівень експресії потрібного поліпептиду і т. д. Вектори експресії згідно з винаходом вводять у клітини-хазяїни для утворення поліпептидів або пептидів, включаючи злиті поліпептиди або пептиди, кодовані нуклеїновими кислотами, як описано авторами (наприклад, ІМІ поліпептиди, злиті поліпептиди і т. д.).
В оптимальному варіанті втілення даного винаходу ІМІ поліпептиди експресуються в рослинах та рослинних клітинах, таких як клітини одноклітинних рослин (наприклад, водоростей) (див. Раїсіаїоге єї аІ., 1999 Магіпе Віоїесппоіоду 1(3):239-251, та посилання, що містяться в цій роботі) та клітини вищих рослин (наприклад, сперматофімів, таких як хлібні злаки). ІМІ полінуклеотид може бути "введений" у рослинну клітину будь-яким способом, включаючи трансфекцію, трансформацію або трансдукцію, електропорацію, бомбардування частинками, агроінфекцію, біолістику і т. ін. Одним з відомих спеціалістам способів трансформації є занурення рослини під час цвітіння в розчин Адгобасівєгіа, в якому Адгобасієїта містить ІМІ нуклеїнову кислоту, з наступним розведенням трансформованих гамет.
Інші відомості про придатні способи трансформації або трансфекції клітин-хазяїнів, включаючи рослинні клітини, можна знайти в Затрбгоок, евї аї. (Моїесшаг Сіопіпд: А І арогаюгу Мапциаї. 279, вд., Соїд
Зрііпу Нарог І абогаїюгу, Соїд ріпа Натог І арогаїюгу Ргезв, Соїд ріпа Натотг, МУ, 1989) та інших лабораторних посібниках, таких як Меїнодз іп Моіесшіаг Віоіоду, 1995, Мої. 44, Адгобасівтцт ргоїосої!5, ей: Сапшапа апа Оамєу, Нитапа Ргев55, Тоїсула, Мем Уегзеу. Оскільки підвищена резистентність до імідазолінонових гербіцидів є загальною особливістю, успадкування якої є бажаним для багатьох видів рослин, таких як кукурудза, пшениця, жито, овес, тритикале, рис, ячмінь, соя, арахіс, бавовна, рапс та канола, маніхот, перець, соняшник та чорнобривці, пасльонові рослини, такі як картопля, тютюн, баклажан та томати, види віки, горох, люцерна, чагарникові рослини (кава, какао, чай), види верби, дерева (олійна пальма, кокос), багаторічні трави та фуражні культури, ці хлібні злаки також є оптимальними рослинами, які можуть бути об'єктами генної інженерії як ще один варіант втілення даного винаходу. До фуражних культур належать, крім інших, пирій, РНаїагі5 агипаіпасєа, Вготорвів іпегтів, дике жито, Віпедгавзв5, Оасійї5 діотегаїа І., люцерна, Зайоїіп, І оїи5 согпісціайс5 Ї., шведська конюшина, червона конюшина та буркун.
В одному варіанті втілення даного винаходу трансфекції ІМІ полінуклеотиду в рослину досягають шляхом Адгорасієегійт-опосередкованого перенесення гена. Аагобасієгійт-опосередкована трансформацію рослин здійснюють, застосовуючи, наприклад, СМЗ3101(рМРОО) (Копс2 апа 5зсенеї, 1986 Мої. СбСеп. Сепеї. 204:383-396) або І ВА4404 (Сіопівсй) штам Аагорасієтішт Шптеїасієпв.
Трансформацію здійснюють стандартними способами трансформації та регенерації (Оебріаєтге еї аї., 1994 Мисі. Асідв. ВНев5. 13:4777-4788; Сеїіміп, Зїапіоп В. апа 5спіїрегоой, Нобеп А, Ріапі Моїесшаг
Віоїоду Мапиаї!., 279 га. - Оогагесні: Кіпмег Асадетіс Рибі., 1995. - іп бесі., Віпдрис 7епігаіє бідпайиг:
ВТ11-Р ІБВМ 0-7923-2731-4; СіцісК, Ветага В. апа Тнотрзоп, Чдонп Е., Меїйоодвз іп Ріапі Моїєсшіаг Віоіїоду апа Віоїесппоіоду, Воса Найоп: САС Ргез5, 1993 360 5., ІЗВМ 0-8493-5164-2). Наприклад, рапс трансформують шляхом трансформації сім'ядолі або гіпокотиля (Моіопеу еї аї., 1989 Ріапі сеї! Вероп 8:238-242; Ое Віоск еї аї., 1989 Ріапі РНузіо!. 91:694-701). Застосування антибіотиків для вибору
Адгорасієйут та рослини залежить від бінарного вектора та штаму Аагобрасієтійт, який застосовують для трансформації. Вибір рапсу зазвичай здійснюють, застосовуючи канаміцин як маркер для селекції рослин. Аагобрасієгійт-опосередковане перенесення генів у льон здійснюють, застосовуючи, наприклад, спосіб, описаний у роботі Міупагома еєї а!., 1994 Ріапі Сеї! Верогі 13:282-285. Крім того, трансформацію сої здійснюють, застосовуючи, наприклад, спосіб, описаний у європейському патенті мо0424 047, патенті США Ме5,322,783, європейському патенті Ме0397 687, патенті США Ме5,376,543 або патенті США Мое5,169,770. Трансформації кукурудзи досягають шляхом бомбардування частинками, опосередкованого поліетиленгліколем поглинання ДНК або за допомогою волокон карбіду кремнію. (Див., наприклад, Егєвїїпа апа У/аїрої "Тне таїе Напароок" Зргіпдег Мепйад: Мем/ МОЖ (1993) ІЗВМ 3-540-97826-7). Конкретний приклад трансформації кукурудзи міститься в патенті США
Ме5,990,387, а конкретний приклад трансформації пшениці міститься в заявці РСТ МеУМ/О 93/07256.
Згідно з даним винаходом, введений ІМІ полінуклеотид може стійко утримуватись у рослинній клітині, якщо його введено в нехромосомний автономний реплікон або введено у хромосоми рослин. В альтернативному варіанті введений ІМІ полінуклеотид може бути присутній на позахромосомному невідтворюваному векторі і може бути короткочасно експресованим або короткочасно активним. В одному варіанті втілення може бути створений гомологічний рекомбінантний мікроорганізм, у якому
ІМІ полінуклеотид є введеним у хромосому, створюється вектор, який містить принаймні частину гена
АНАБб, у який введено делецію, додавання або заміщення для того, щоб змінити, наприклад, функціонально розірвати, ендогенний ген АНА5 і створити ІМІ ген. Для створення точкової мутації через гомологічну рекомбінацію, використовують ДНК-РНК гібриди, застосовуючи спосіб, відомий як химерапластія (СоІе-5ігацв5 евї аї!., 1999 Мисівїс Асіаз Везеагсй 27(5): 1323-1330 апа Ктіес, 1999 Сепе
Іегару Атегісап Зсієпіїві 87(3):240-247). Спеціалістам також добре відомі інші процедури гомологічної рекомбінації у вигляді Тийсит, можливість застосування яких авторами передбачається.
У векторі гомологічної рекомбінації до ІМІ гена на його 5' та 3' кінцях може приєднуватися додаткова молекула нуклеїнової кислоти гена АНАб, що дозволяє здійснення гомологічної рекомбінації між екзогенним ІМІ геном, що міститься у векторі, та ендогенним геном АНА5 у мікроорганізмі або рослині. Додаткова молекула фланкуючої нуклеїнової кислоти АНА5 має достатню довжину для успішної гомологічної рекомбінації ендогенним геном. Як правило, вектор включає від кількох сотень пар основ до тисяч основ фланкуючих ДНК (як на 5, так і на 3' кінцях) (див., наприклад,
Тнотавзв, К.В., апа Саресспі, М.В., 1987 Сеї 51:503, де описано вектори гомологічної рекомбінації, або зперр єї а!Ї., 1998 РМАБ, 95(8):4368-4373, де описано рекомбінацію на основі кКДНК у Рпузсотігеїйа раїєпв). Однак, оскільки ІМІ ген зазвичай відрізняється від гена АНА5бБ у дуже небагатьох амінокислотах, у фланкуючій послідовності не завжди є необхідність. Вектор гомологічної рекомбінації вводять у мікроорганізм або рослинну клітину (наприклад, через поліетиленгліколь-опосередковану
ДНК) і відбирають клітини, в яких введений ІМІ ген було гомологічно рекомбіновано ендогенним геном
АНА, застосовуючи відомі спеціалістам способи.
В іншому варіанті втілення одержують рекомбінантні мікроорганізми, які містять вибрані системи, що дозволяють здійснювати регульовану експресію введеного гена. Наприклад, включення ІМІ гена у вектор з поміщенням його під контроль Іас-оперона дозволяє експресію ІМІ гена лише у присутності
ІРТа. Такі регуляторні системи добре відомі спеціалістам.
Чи є він присутнім у позахромосомному невідтворюваному векторі, чи у векторі, введеному у хромосому, ІМІ полінуклеотид в оптимальному варіанті містяться в експресійній касеті рослини.
Експресійна касета рослини в оптимальному варіанті містить регуляторні послідовності, здатні викликати експресію гена в рослинних клітинах, які є функціонально зв'язаними таким чином, що кожна послідовність може виконувати свою функцію, наприклад, термінацію транскрипції сигналами поліаденілювання. Оптимальними сигналами ополіаденілювання є ті, що походять із т-ДНК
Адгорасієйут Штеїгасієпв, такі як ген 3, відомий як октопін синтаза Ті-плазміди рТіАСНнЗ5 (Сієїеп еї аї., 1984 ЕМВО .. 3:835) або їх функціональні еквіваленти, але придатними є також усі інші термінатори, функціонально активні в рослинах. Оскільки експресія рослинних генів дуже часто не обмежується на транскрипційних рівнях, експресійна касета рослини в оптимальному варіанті містить інші функціонально зв'язані послідовності, такі як перехідні енхансери, наприклад, надлишкова послідовність (омегагіме зедиепсе), яка містить 5'-с-етрансльовану лідерну послідовність вірусу тютюнової мозаїки, що збільшує пропорцію поліпептиду в РНК (СаїЇс еєї аї!., 1987 Мисі. Асіа5 Незеагсі 15:8693-8711). Прикладами рослинних векторів експресії можуть бути ті, які детально описано в роботах Вескег, 0. єї аї!., 1992 Мем ріапі ріпагу месіог5 м/йй зеІесіаріє тагКегз Іосаїей ргохітаї! ю Пе її рогаєг, Ріапі Мої. Віої. 20:1195-1197; Вемап, М.МУ., 1984 Віпагу Адгобасієгит месіог5 ог ріапі ігапеіоптаїййоп, Мисі. Асій. Вев5. 12:8711-8721; апа Месіогх їТог Сепе Тгапвієї іп Нідпег Ріапів; іп:
Тгапздепіс Ріапів, Мої. 1, Епдіпеегіпд апа іїїгайоп, еадв.: Кипу апа В. У, Асадетіс Ргев5, 1993, 5.15- 38.
Експресія рослинного гена має бути функціонально пов'язана з відповідним промотором, який забезпечує вчасну, клітино- або тканиноспецифічну експресію гена. До промоторів, застосовуваних в експресійних касетах, згідно з винаходом, може належати будь-який промотор, здатний ініціювати транскрипцію в рослинній клітині. До таких промоторів належать, крім інших, ті, які можуть бути одержані з рослин, рослинних вірусів та бактерій, які містять гени, що експресуються в рослинах, таких як Адгобасієтіцт та ВПіг2обійт.
Промотор може бути конститутивним, індуцибельним, специфічним до стадії розвитку, специфічним до типу клітин, тканиноспецифічним або органоспецифічним. Конститутивні промотори є активними за більшості умов. Прикладами конститутивних промоторів є Саму 195 та 35 5 промотори (Оаєеїі єї а). 1985 Майшге 313:810-812), 5Х Саму 355 промотор (Кау евї а. 1987 бсіепсе 236:1299-1302) зЗері промотор, промотор актину рису (МеЕЇгоу еї аІ. 1990 Ріапі СеїЇ 2:163-171), промотор актину
Агарідорвзів5, промотор убіхітану (СНгівієпзеп еї а)ї. 1989 Ріапі Моїєс Віої. 18:675-689); рЕти (і аві еї а). 1991 Тнеог Аррі Сепеї. 81:581-588), 355 промотор вірусу мозаїки ранника, тав промотор (Мепцеп еї а. 1984 ЕМВО 3. 3:2723-2730), апавР1І1-8 промотор, промотор дегідрогенази цинамілового спирту (Патент
США Мое5,683,439), промотори з Т-ДНК Адгобасіегійт, такі як манопін синтаза, нопалін синтаза та октопін синтаза, промотор малої субодиниці рибулоза біфосфат карбоксилази (55108ИВІ5ЗСО)
промотор та ін.
Індуцибельні промотори є активними за певних навколишніх умов, таких як наявність або відсутність поживної речовини або метаболіту, тепло або холод, світло, напад патогенів, анаеробні умови та ін. Наприклад, п5рво промотор із Вгаззіса індукується термічним ударом, РРОК промотор індукується світлом, РА-1 промотор з тютюну, Агарідорзіз та кукурудзи індукуються інфекцією патогену, а лап 1 промотор індукується гіпоксією та впливом холоду. Експресії рослинного гена також може сприяти індуцибельний промотор (див. Сзаї7, 1997 Аппи. Веу. Ріапі РНузіої. Ріапі Мої. Віо!. 48:89- 108). Хімічно індуцибельні промотори є особливо придатними, якщо потрібна специфічна до часу експресія гена. Прикладами таких промоторів є індукований саліциловою кислотою промотор (Заявка
РСТ МеМ/О 95/19443), індукований тетрацикліном промотор (Саї єї а!., 1992 Ріапі у. 2:397-404) та індукований етанолом промотор (Заявка РСТ МоУуО 93/21334).
Специфічні до стадії розвитку промотори в оптимальному варіанті експресуються на певних стадіях розвитку. До тканино- та органоспецифічних промоторів належать ті, які в оптимальному варіанті експресуються в певних тканинах або органах, таких як листя, коріння, насіння або ксилема.
Прикладами тканиноспецифічних та органоспецифічних промоторів є, крім інших, специфічні до плодів, специфічні до насінних зачатків, специфічні до чоловічих тканин, специфічні до насіння, специфічні до шкірки, специфічні до бульб, специфічні до стебел, специфічні до оплодня та специфічні до листя, специфічні до приймочок, специфічні до пилку, специфічні до пиляка, специфічні до пелюсток, специфічні до чашолистка, специфічні до квітконіжки, специфічні до стручка, специфічні до суплідь, специфічні до коріння промотори та інші. Специфічні до насіння промотори в оптимальному варіанті експресуються під час розвитку насіння або проростання. Наприклад, специфічні до насіння промотори можуть бути специфічними до ембріонів, специфічними до ендосперму та специфічними до оболонки насіння. Див. Тпотрвгоп єї аі. 1989 ВіоЕвзауз 10:108.
Прикладами специфічних до насіння промоторів є, крім інших, целюлоза-синтаза (сеїІА), Сіт!, гамма- зеїн, глобулін-1, зеїн кукурудзи 19 КО (с719ВІ) та інші.
До інших придатних тканиноспецифічних або органоспецифічних промоторів належать промотор напін-гена з рапсу (Патент США Ме5,608,152), ОБР-промотор із Місіа Таба (Ваєитівїп еї аї!., 1991 Мої
Сеп Сепеї. 225(3):459-67), олеозин-промотор із Агарідорзіз (Заявка РСТ МеУуО 98/45461), фазеолін- промотор із РпазеоЇй5 миЇдайв (Патент США Мое5,504,200), Все4-промотор із Вгаззіса (Заявка РОСТ
МеУуО 91/13980) або легумін В4 промотор (ГеВ4; Ваєитієїп сеї аї!., 1992 Ріапі дошгпа!., 2(2):233-9), а також промотори, які забезпечують специфічну до насіння експресію в однодольних рослинах, таких як кукурудза, ячмінь, пшениця, жито, рис і т. д. Придатними промоторами є промотор Ірі2 або Іри-гена з ячменю (Заявка РОХ МоУМуО 95/15389 та Заявка РСОХ МеМ/О 95/23230) або описані в заявці РОХ МО 99/16890 (промотори з гордеїн-гена ячменю, глютелін-гена рису, оризин-гена рису, проламін-гена рису, гліадин-гена пшениці, глютенін-гена пшениці, глютенін-гена вівса, касирин-гена сорго та секалін- гена жита).
До інших промоторів, які застосовують в експресійних касетах винаходу, належать, крім інших, головний промотор а/р-зв'язувального білка хлорофілу, промотори гістону, АрЗ промотор, промотор конгліцину, промотор напіну, промотор соєвого лектину, промотор зеїну кукурудзи 15КО, промотор зеїну 22КО, промотор зеїну 27КО, промотор д-зеїну, промотори уаху, зпгипКеп І, зпгипКеп 2 та ргоп26, 2т13 промотор (Патент США Ме5,086,169), промотори полігалактуронази кукурудзи (РО) (Патенти
США МомМео5,412,085 та 5,545,546) і 5286 промотор (Патент США Ме5,470,359), а також синтетичні або інші природні промотори.
Додаткової гнучкості в контролюванні експресії гетерологічного гена в рослинах досягають шляхом застосування доменів зв'язування ДНК та елементів відповіді з гетерологічних джерел (тобто доменів зв'язування ДНК з нерослинних джерел). Прикладом такого гетерологічного домену зв'язування є домен зв'язування ДНК ГехА (Вгепі апа РіазНнпе, Сеї! 43:729-736 (1985)).
Інший аспект винаходу стосується клітин-хазяїнів, у які було введено рекомбінантний вектор експресії, згідно з винаходом. Терміни "клітина-хазяїн" та "рекомбінантна клітина-хазяїн" вживаються авторами поперемінно. Слід розуміти, що такі терміни стосуються не лише конкретної клітини, але вони також стосуються потомства або можливого потомства такої клітини. Оскільки в наступних поколіннях можуть траплятися певні зміни через мутації або вплив навколишнього середовища, таке потомство фактично не може бути ідентичним батьківській клітині, але все одно охоплюється вжитим авторами терміном. Клітина-хазяїн може бути будь-якою прокаріотною або еукаріотною клітиною.
Наприклад, ІМІ полінуклеотид може бути експресований у бактеріальних клітинах, таких як с. дішатісит, клітини комах, грибкові клітини або клітини ссавців (такі як клітини яєчника китайського хом'яка (СНО) або клітини СО5), водорості, війчасті, рослинні клітини, грибки або інші мікроорганізми, такі як С. дішатісит. Інші придатні клітини-хазяїни є відомими спеціалістам.
Клітину-хазяїн, згідно з винаходом, таку як прокаріотна або еукаріотна клітина-хазяїн у культурі, використовують для вироблення (тобто експресії) ІМІ полінуклеотиду. Відповідно, винахід також забезпечує способи вироблення ІМІ поліпептидів з використанням клітин-хазяїв згідно з винаходом. В одному варіанті втілення спосіб включає культивування клітини-хазяїна, згідно з винаходом, (у яку було введено рекомбінантний вектор експресії, який кодує ІМІ поліпептид, або в геном якої було введено ген, який кодує поліпептид дикого типу або ІМІ поліпептид) у придатному середовищі до вироблення ІМІ поліпептиду. В іншому варіанті втілення спосіб також включає виділення ІМІ поліпептидів із середовища або клітини-хазяїна. Інший аспект винаходу стосується виділених ІМІ поліпептидів та їх біологічно активних частин. "Виділений" або "очищений" поліпептид або його біологічно активна частина є вільними від деякого клітинного матеріалу, якщо одержуються способами рекомбінантних ДНК, або хімічних попередників або інших хімічних речовин, якщо хімічно синтезуються. Вираз "практично вільний від клітинного матеріалу" охоплює препарати ІМІ поліпептиду, в яких поліпептид є відокремленим від деяких із клітинних компонентів клітин, у яких він природним або рекомбінантним шляхом виробляється. В одному варіанті втілення вираз "практично вільний від клітинного матеріалу" охоплює препарати ІМІ поліпептиду, що мають менше, ніж приблизно 3095 (сухої маси) відмінного від ІМІ матеріалу (який також вказується авторами як "забруднюючий поліпептид"), краще - менше, ніж приблизно 20 95 відмінного від ІМІ матеріалу, ще краще - менше, ніж приблизно 10 95 відмінного від ІМІ матеріалу, найкраще - менше, ніж приблизно 95 відмінного від ІМІ матеріалу.
Якщо ІМІ поліпептид або його біологічно активна частина виробляється рекомбінантно, вони також в оптимальному варіанті є практично вільними від культурального середовища, тобто культуральне середовище складає менше, ніж приблизно 20 95, краще - менше, ніж приблизно 10 95, найкраще - менше, ніж приблизно 5 95 об'єму препарату поліпептиду. Вираз "практично вільний від хімічних попередників або інших хімічних речовин" охоплює препарати ІМІ поліпептиду, в яких поліпептид є відокремленим від хімічних попередників або інших хімічних речовин, які беруть участь у синтезі поліпептиду. В одному варіанті втілення вираз "практично вільний від хімічних попередників або інших хімічних речовин" охоплює препарати ІМІ поліпептиду, що мають менше, ніж приблизно 30 95 (сухої маси) хімічних попередників або відмінних від ІМІ хімічних речовин, краще - менше, ніж приблизно 20 95 хімічних попередників або відмінних від ІМІ хімічних речовин, ще краще - менше, ніж приблизно
Ф5 хімічних попередників або відмінних від ІМІ хімічних речовин, найкраще - менше, ніж приблизно 5 95 хімічних попередників або відмінних від ІМІ хімічних речовин. В оптимальних варіантах втілення виділені поліпептиди або їх біологічно активні частини не містять забруднюючих поліпептидів з того організму, з якого походить ІМІ поліпептид. Як правило, такі поліпептиди одержують шляхом рекомбінантної експресії, наприклад, ІМІ поліпептиду Тийісит аевіїмит у рослинах, які не є Тийсит аевіїмит, або мікроорганізмах, таких як С. дішатісит, війчасті, водорості або грибки.
Послідовності ІМІ полінуклеотиду та поліпептиду, згідно з винаходом, мають різне застосування.
Нуклеїновокислотні та амінокислотні послідовності даного винаходу застосовують для трансформації рослин, таким чином, модулюючи резистентність рослин до імідазолінонових гербіцидів. Відповідно, винахід забезпечує спосіб одержання трансгенної рослини, яка має підвищену толерантність до імідазолінонового гербіциду, включаючи (а) трансформацію рослинної клітини одним або кількома векторами експресії, які включають одну або кілька ІМІ нуклеїнових кислот, і (б) вирощування з рослинної клітини трансгенної рослини з підвищеною резистентністю до імідазолінонового гербіциду порівняно з сортом рослини дикого типу. В одному варіанті втілення множинні ІМІ нуклеїнові кислоти походять із різних геномів. Даний винахід також охоплює способи одержання трансгенної рослини, яка має підвищену толерантність до імідазолінонового гербіциду, включаючи (а) трансформацію рослинної клітини вектором експресії, який включає ІМІ нуклеїнову кислоту, причому нуклеїнова кислота не є Ітії нуклеїновою кислотою, і (б) вирощування з рослинної клітини трансгенної рослини з підвищеною резистентністю до імідазолінонового гербіциду порівняно з сортом рослини дикого типу.
Даний винахід включає способи зміни толерантності рослини до імідазолінонового гербіциду, які включають зміну експресії однієї або кількох ІМІ нуклеїнових кислот. В оптимальному варіанті нуклеїнові кислоти містяться в різних геномах або походять із різних геномів. Резистентність рослини до імідазолінонового гербіциду може бути підвищена або знижена, що досягається посиленням або послабленням експресії ІМІ полінуклеотиду, відповідно. В оптимальному варіанті резистентність рослини до імідазолінонового гербіциду підвищують шляхом посилення експресії ІМІ полінуклеотиду.
Експресія ІМІ полінуклеотиду може змінюватися будь-якими відомими спеціалістам способами.
Застосовують способи посилення експресії ІМІ полінуклеотидів, у яких рослина є або трансгенною, або нетрансгенною. У випадках, коли рослина є трансгенною, рослина може бути трансформована вектором, який містить будь-яку з вищеописаних ІМІ кодуючих нуклеїнових кислот, або ж, рослина може бути трансформована промотором, який спрямовує експресію ендогенних ІМІ полінуклеотидів у рослині. Винахід передбачає, що такий промотор може бути тканиноспецифічним або регульованим розвитком. В альтернативному варіанті нетрансгенні рослини можуть мати експресію ендогенного ІМІ полінуклеотиду, яка змінюється включенням природного промотора. Експресія полінуклеотидів, які включають 5ЕО І МО або 5ЕО ІО МОЗ у заданих рослинах може здійснюватися, крім іншого, за допомогою: (а) конститутивного промотора, (б) хімічно індукованого промотора та (в) переекспресії підданого інженерії промотора, наприклад, похідними від цинкових пальців факторами транскрипції (Сгеівтап апа Рабо, 1997 5сіеєпсе 275:657).
В оптимальному варіанті втілення транскрипцію ІМІ полінуклеотиду модулюють, застосовуючи похідні від цинкових пальців фактори транскрипції (ЕР), які описано у Стеівтап апа Рабро, 1997
Зсіепсе 275:657, і які виробляються Запдато Віозсієпсев, Іпс. Ці 2ЕР включають як домен розпізнання
ДНК, так і функціональний домен, який викликає активацію або пригнічення заданої нуклеїнової кислоти, такої як ІМІ нуклеїнова кислота. Отже, створюють активуючі і пригнічувальні ЕР, які специфічно розпізнають промотори ІМІ полінуклеотиду, які було описано вище і які застосовують для посилення або послаблення експресії ІМІ полінуклеотиду в рослині, таким чином, модулюючи резистентність рослини до гербіцидів.
Як було детальніше описано вище, рослини, які одержують способами даного винаходу, можуть бути однодольними або дводольними. Рослини вибирають, наприклад, з-поміж кукурудзи, пшениці, жита, вівса, тритикале, рису, ячменю, сої, арахісу, бавовни, рапсу, каноли, маніхоту, перцю, соняшника, чорнобривців, пасльонових рослин, картоплі, тютюну, баклажану, томатів, видів віки, гороху, люцерни, кави, какао, чаю, видів верби, олійної пальми, кокосу, багаторічних трав та фуражних культур. До фуражних культур належать, крім інших, пирій, РІаїагіз агипаіпасєа, Вготорвів іпегтів, дике жито, Віпедгавзв5, Оасійї5 діотегаїа І., люцерна, Зайоїіп, І оїи5 согпісціайс5 Ї., шведська конюшина, червона конюшина та буркун. В оптимальному варіанті втілення рослиною є пшенична культура. У кожному з вищеописаних способів рослинна клітина включає, крім іншого, протопласт, гаметопродукуючу клітину та клітину, яка регенерується в цілу рослину. Вжитий авторами термін "грансгенний" стосується будь-якої рослини, рослинної клітини, калюсу, рослинної тканини або частини рослини, що містить, повністю або частково, принаймні один рекомбінантний полінуклеотид. У багатьох випадках рекомбінантний полінуклеотид, частково або повністю, є стабільно включеним у хромосому або стійкий позахромосомний елемент таким чином, що він передається наступним поколінням.
Як описано вище, даний винахід пропонує композиції та способи підвищення резистентності до імідазолінону у пшеничної культури або насіння порівняно з різновидами рослини або насінням дикого типу. В оптимальному варіанті втілення резистентність до імідазолінону у пшеничної культури або насіння підвищується таким чином, що рослина або насіння може витримувати нанесення імідазолінонового гербіциду в кількості приблизно 10-400 г аї/га", краще - 20-160 г айга", найкраще - 40-80 г аі/га". Вжитий авторами термін "витримувати" нанесення імідазолінонового гербіциду означає, що рослина не знищується або не зазнає ураження від такого нанесення.
Крім того, авторами пропонується спосіб контролю над бур'янами в оточенні пшеничної культури, який включає нанесення імідазолінонового гербіциду на бур'яни та пшеничну культуру, причому пшенична культура має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з сортом пшеничної культури дикого типу, і рослина містить одну або кілька ІМІ нуклеїнових кислот. В одному варіанті втілення рослина містить множинні ІМІ нуклеїнові кислоти, які містяться в різних геномах або походять із різних геномів. В іншому варіанті втілення рослина містить відмінну від Ітії нуклеїнову кислоту. Завдяки забезпеченню пшеничних культур з підвищеною резистентністю до імідазолінону, існує широкий вибір придатних до застосування композицій для захисту пшеничних культур від бур'янів з метою активізації росту рослин та зниження конкурентної боротьби за поживні речовини.
Імідазоліноновий гербіцид застосовують окремо для досходового, післясходового, передпосівного та посівного контролю над бур'янами на площах, які оточують описані авторами пшеничні культури, або ж застосовують композицію імідазолінонового гербіциду, яка містить інші додатки. Імідазоліноновий гербіцид також застосовують для обробки насіння. До додатків, які містяться в композиції імідазолінонового гербіциду, належать інші гербіциди, детергенти, ад'юванти, засоби розсіювання, засоби прилипання, стабілізатори або інші подібні агенти. Композиція імідазолінонового гербіциду може бути рідкою або сухою композицією і може включати, крім іншого, сипкі порошки, емульговані концентрати та рідкі концентрати. Імідазоліноновий гербіцид та гербіцидні композиції наносять традиційними способами, наприклад, шляхом розпилення, поливання, зрошування або іншими подібними способами.
У заявці містяться посилання на різні публікації. Описи всіх цих публікацій та посилання, наведені в цих публікаціях у їх повному обсязі, включено авторами шляхом посилання в цю заявку для більш повного опису рівня техніки, якого стосується цей винахід.
Слід також розуміти, що вищенаведене стосується оптимальних варіантів втілення даного винаходу, і що існує можливість внесення численних змін без відхилення від обсягу винаходу. Винахід далі пояснюється на представлених нижче прикладах, які не повинні розглядатись як такі, що якимось чином обмежують його обсяг. Навпаки, слід чітко розуміти, що існує можливість звернення до різних інших варіантів його втілення, модифікацій та еквівалентів, які, по ознайомленню з представленим описом, стануть зрозумілими спеціалістам без відхилення від сутності даного винаходу та/або обсягу формули винаходу, що додається.
Приклад 1
Мутагенез та відбір резистентних ліній пшениці
Приблизно 40 000 зразків насіння Тийісит аєвзіїмит І. см СОС Теаї (Ниднез апа Нисі, 1993 Сап. 3).
Ріапі сі. 73:193-197) піддавали мутагенезові, застосовуючи змінені процедури, описані в роботі
Муазнпіпдюп апа 5ваїгз (1970). Насіння попередньо вимочували в дистильованій воді протягом чотирьох годин, після чого обробляли 0,395 ЕМ5 протягом шести годин. Насіння постійно промивали водопровідною водою протягом семи годин і залишали висихати протягом приблизно чотирьох годин перед висіванням у полі. Рослини Мі змішували і насіння збирали в загальну масу. Приблизно 2 х 106 рослин Ме вирощували в полі наступного року і обприскували на стадії двох листків імазамоксом при нормі 40 г аі/га" в об'ємі аерозолю 100 л га". До розчину аерозолю додавали допоміжну речовину для злиття 0,05 95 (об'єм/об'єм). Відбирали шість ліній, резистентних до імазамоксу, які позначали як лінії 1А, 9А, 10А, 11А, 15А та 16А. Покоління Мз та Ма вирощували в камері для вирощування і відбирали рослини, резистентні до імазамоксу при нормі 20 г аї/га". Резистентні рослини відбирали в поколінні
М5 після нанесення 40 г аї/га" в полі. Насіння М5 було гомозиготним за характеристиками, оскільки випробування потомства не виявляло сегрегації щодо резистентності до імазамокс.
Приклад 2
Способи, які застосовують для визначення успадкування та алелізму ІМІ генів
Для визначення генетичного контролю резистентності до імазамоксу в шести лініях пшениці здійснювали взаємне схрещування між шістьма гомозиготними резистентними Мб лініями та СОС Теаї (чутливим до імазамоксу). Випадково відібрані рослини Еї від кожного схрещування піддавали зворотному схрещуванню з СОС Теа! для утворення зворотно схрещених (ВС)Еї популяцій. Для дослідження алелізму здійснювали всі можливі взаємні схрещування між шістьма мутантами та
ЗМ/РОб5БОО1 (Стапаіп/3"РідеІ-Е5-4). БМ/РО65001 є лінією ярової пшениці, яка є гомозиготною для Е5-4 алелі. Батьківські генотипи вирощували в камері для вирощування з 16-годинним фотоперіодом і 24 С денним та 16 "С нічним температурним режимом. Колоски, які з'являлися на 2, піддавали емаскуляції, а потім запилювали через 2-3 дні після емаскуляції. Випадково відібрані рослини Р» з усіх сегрегуючих гібридів змішували для одержання груп Ег:зз. Батьківські рослини, Е:, ВСЕ, ЕР» та групи ЕРгз випробували на реакцію на імазамокс. Усі експерименти здійснювали в камері для вирощування з 16- годинним фотоперіодом і 23 "С денним та 16 "С нічним температурним режимом. Усі експерименти здійснювали на повністю випадковій основі. В експериментах із залученням груп ЕРг2з намагалися забезпечити рандомізацію як у межах групи, так і між групами. Популяції КЕ: та Ег відбирали в такому самому експерименті разом з батьківськими генотипами та СОС Теа! як контрольними зразками.
Обидві популяції, ВСЕ: та Боз, відбирали у двох окремих експериментах разом з відповідними батьківськими генотипами як контрольними зразками.
Обробку гербіцидами застосовували до рослин, які вирощували на платформах з комірками 8 х 16, на стадії двох листків, використовуючи шланговий розпилювач, калібрований таким чином, щоб розпилювати 100 л га". Імазамокс наносили на рослини при нормі 20 г аі/га", застосовуючи насадку 8001 ЕМУ5 під тиском 275 кПа. До розчину гербіциду перед нанесенням додавали поверхнево-активну речовину для злиття (0,05 95 (об'єм/об'єм)). Через п'ятнадцять днів після нанесення гербіциду рослини розбивали по групах на основі первинної реакції і поділяли на резистентні, проміжні або чутливі.
Резистентні рослини після гербіцидної обробки були фенотипічно неушкодженими, тоді як проміжні рослини характеризувалися затримкою росту перших двох листків, потемнінням (темно-зеленим забарвленням) листя та появою колеоптильних відростків. Чутливі рослини характеризувалися відсутністю розвитку нових листків, широким хлорозом листя і, зрештою, загибеллю рослини. Для менделевського аналізу сегрегуючих популяцій рослини поділяли на резистентні та чутливі категорії і випробували на адекватність різним 1-генним, 2-генним та 3-генним моделям аналіз спі-зацаге. Для даних по рослинах Рг та ВСЕ; проміжні реакції було включено до категорії резистентної реакції. Для регулювання значення спі-здайаге застосовували корекцію за Маїез5 для безперервності, коли в аналізі спі-здциаге користувалися лише одним ступенем свободи (бієвіє апОа Топіе 1980 Р'гіпсірієбх апа ргоседигез ої віаїйівіїс5. Месстгам-НіЇ, Мем МоїК, Мем МогКк, рр.633).
Приклад З
Результати, що стосуються успадкування ІМІ генів
Усі резистентні батьківські рослини давали однаковий фенотип при розпилюванні 20 г аї/га" імазамоксу. (Фігура 1). Взаємне схрещування між резистентними лініями та чутливими батьківськими рослинами (СОС Теаї) у результаті давало рослини Рі, які витримували нанесення імазамоксу (Фігура 1), що вказувало на те, що резистентність до імазамокс є ядерною, а не цитоплазматичною характеристикою. За винятком гібриду 15А х Теаї., рослини Е;:, одержані в результаті схрещування кожної з резистентних ліній з СОС Теєаї!., виявляли проміжну реакцію (Фігура 1). Оскільки рослини Рі були фенотипічно проміжними між двома батьківськими рослинами, було зроблено висновок, що резистентність до імазамоксу в цих лініях була частково домінантною характеристикою (Фігура 1).
Генетичний аналіз резистентності до імідазолінонів та сульфонілсечовини в Агарідорвзів ІНаїЇіапа (Нацднп апа ботегіе, 1986 Мої. Сеп. Сепеї. 204:430-434) 7єа тауз (Мем/поизе еї аї., 1991 Тнеог.
Аррі. Сепеї. 83:65-70), Вгаззіса пари (Змапзоп еї аї!., 1989 Тнеог. Аррі. Сеп. 78:525-530) та Сіусіпе тах (Зебавійап єї а!., 1989 Стор 5сі. 29:1403-1408) також вказував на присутність єдиного, частково домінантного ядерного гена.
Чотирнадцять рослин Рі, одержаних у результаті схрещування 15А х Теаї., зараховували до резистентних (Фігура 1). Оцінка популяцій Рг від цього схрещування показала, що два незалежно сегреговані локуси були пов'язані з забезпеченням резистентності в цьому генотипі (Фігура 2).
Оскільки Е; має нести два гетерозиготні резистентні локуси, можна очікувати, що спостерігатиметься резистентна реакція. Якщо кожен з цих локусів окремо забезпечує часткове домінування, то в сумі два гетерозиготні локуси мають забезпечувати резистентну реакцію. Зулапзоп еї а!. (1989) комбінували дві напівдомінантні алелі резистентності до імідазолінону з Вгаззіса парих, які представляють два роз'єднані гени, для одержання гібриду НЕ, який переважав у резистентності до імідазолінону будь-яку з окремих гетерозиготних ліній.
Автори дійшли висновку, що механізми резистентності є сукупними, і вищий рівень резистентності спостерігають у лініях, які несуть більше однієї алелі резистентності.
Аналіз цитоплазматичної спадковості здійснювали в поколінні ЕР» шляхом випробування рівномірності відхилення від співвідношення сегрегації між двома взаємними популяціями РЕ». Аналіз спі-здиаге не виявив значного відхилення між взаємними популяціями, підтвердивши відсутність цитоплазматичної спадковості (Фігура 2). Оскільки цитоплазматична спадковість була відсутня, дані двох взаємних популяцій комбінували і розраховували загальний показник спі-зацаге по об'єднаних даних ГР» (Фігура 2).
За винятком Теа! х 15А, усі популяції Е2, одержані в результаті схрещувань резистентних та чутливих рослин, відповідали співвідношенню 3:1 резистентності до чутливості, вказуючи на сегрегацію єдиного головного гена резистентності до імазамоксу (Фігура 2). Коли рослини Ні схрещували з чутливими батьківськими рослинами, одержані в результаті популяції ВСЕ; відповідали співвідношенню 1:1 резистентності:чутливості, підтверджуючи однолокусну гіпотезу (Фігура 2). Дані щодо популяції Бг від схрещування 15А х Теа! відповідають співвідношенню /-15:1 резистентності:чутливості (Р-0,08), вказуючи на сегрегацію двох незалежних, комплементарних генів (Фігура 2). Популяція ВСЕ; відповідала співвідношенню 3:1 резистентності:чутливості зі значенням Р
Сні-здцаге 0,35, підтверджуючи результати для РЕ» (Фігура 2).
Оскільки на основі даних для Ег було висловлено припущення, що резистентність у лініях 1А, 9А, 10А, 11 А та 16А контролюється одним головним геном, групи Ргз мають сегрегуватися і відповідати співвідношенню 1:2:1 груп гомозиготної резистентності: сегрегації: гомозиготної чутливості. Оцінка груп ЕРг:з показала, що гібриди Теєа!Ї х 1А, Тєа! х 9А, Теєаї х 10А, ТеаїЇ х 11 А та Теаї х 16А усі відповідають співвідношенню групи Рг:зз 1:2:1 резистентності: сегрегації: чутливості зі значеннями Р
СНі-здцагез 0,64, 0,66, 0,52, 0,40 та 0,94, відповідно (Фігура 3). Ці результати підтверджують результати даних для ГР» та ВСЕ ;, за якими резистентність у лініях ТА, 10А, 9А, 11А та резистентність у 16А контролюється одним головним геном. Ця модель спадковості узгоджується з іншими даними, які свідчили про генетичний контроль резистентності до інгібуючих АНА5З гербіцидів. На даний час майже всі мутації рослин, які забезпечують резистентність до імідазолінонів, демонструють, що єдиний, частково домінантний ген контролює характеристику резистентності. У Тийісип аебвіїмит, 7еа таувх,
СПіІусіпе тах, Агарідорзіз іШайапа та Місоїйапа їарасит резистентність до інгібіторів АНА5 успадковується як єдиний частково домінантний ядерний ген (Мемпоизе еї аї. 1991; Мем/поизе еї аї. 1992; Снаен апа Рау, 1984 5сіепсе 223:1148-1151; Заїнавзімап єї а!., 1991 Ріапі Рнузіо!. 97:1044-1050).
Резистентність рослин до інгібуючих АНА5 гербіцидів відбувається здебільшого через одиночну мутацію в гені, що кодує фермент АНАЗ (Наптз вї аї. 1992, Мої. Сеп. Сепеї. 233:427-435; Міпаег апа зЗраїдіпа, 1988 Мої. Сеп. Ссепеї. 238:394-399).
Дані для популяції г, одержаної в результаті схрещування Теєа! х 15А, відповідали співвідношенню 15:1 резистентності:чутливості, вказуючи на сегрегацію двох незалежно сегрегованих локусів (Фігура 2). Якщо це так, то групи Ргз мають сегрегуватися і відповідати співвідношенню групи
Егз 7:8:1 резистентності: сегрегації:чутливості. Групи Раз від схрещування 15А х Теаї не відповідали очікуваному співвідношенню 7:8:1 (Фігура 3), підтверджуючи результати для популяцій ЕР» та ВСЕ ,, які свідчили про те, що резистентність у 15А забезпечується двома незалежними локусами. Наскільки відомо винахідникові, це перший повідомлений випадок, коли дві незалежно сегреговані резистентні даімідазолінону алелі були ідентифіковані в одній лінії після мутагенезу насіння.
Приклад 4
Результати, що стосуються алелізму ІМІ генів.
Для визначення алельних взаємозв'язків генів резистентності досліджували всі можливі схрещування між резистентними лініями. Не спостерігали чутливих рослин у популяціях Ег2, одержаних у результаті взаємного схрещування між лініями ЗУУРОбБОО1, 1А, 9А, 10А, 15А та 16А (Фігура 4).
Оскільки ці популяції не сегрегувалися, гени резистентності в цих лініях є або алелями в локусі Е5-4, або є дуже щільно зв'язаними. Оскільки ці популяції не сегрегувалися в поколінні Р», групи Е2:з від ЦИХ схрещувань не досліджували.
Усі схрещування за участі лінії 11А сегрегувалися в поколінні Ег2, вказуючи на присутність унікального гена резистентності у 11А (Фігура 4). У разі присутності двох незалежно сегрегованих генів резистентності в результаті схрещування двох ліній, кожна з яких несе один ген резистентності, слід очікувати співвідношення 15:1 резистентності: чутливості в поколінні ЕР». У поколінні Ег, гібриди
ЗМУРОб65001 х 11А, 1А х 114А, 10А х 114А та 16А х 11А відповідають очікуваному співвідношенню 15:1 резистентності:чутливості, вказуючи на незалежну сегрегацію двох головних генів резистентності (Фігура 4). Співвідношення у групі Рг від цих схрещувань також відповідали співвідношенням 7:8:1 резистентності: сегрегації: чутливості, підтверджуючи результати, отримані для покоління Р»: (Фігура 5). Гібрид 11А х 9А давав сегреговану популяцію Ег, але співвідношення не відповідало показникові сегрегації 15:11 через надлишок чутливих сегрегантів. Випробували різні інші дводенні гіпотези, але всі виявилися високозначущими (дані не показано). Однак, оцінка груп ЕРгз від цього схрещування відповідала показникові сегрегації 7:8:1, вказуючи на сегрегацію двох незалежних генів (Фігура 5). Ці результати підтверджують, що ген резистентності у 11А є відмінним від генів у лініях ЗМ/РОб6001, 1А,
ОА, 10А та 16А.
Гібрид 11А х 15А не давав сегрегованої популяції ЕР». Оскільки 15А несе два гени резистентності, один алельний до Е5-4, сегрегована популяція РЕ» у гібриді 11А х 15А має вказувати на присутність трьох сегрегованих генів. Сегреговані покоління, одержані в результаті схрещування 15А х 114А, було випробувано на сегрегацію трьох незалежних локусів. Рослини г відповідали очікуваному співвідношенню 63:1 резистентності:чутливості, вказуючи на сегрегацію трьох незалежних локусів (Фігура 4). Ці результати вказують на те, що друга мутація у 15А не є алельною генові резистентності у 11А. Групи Рг: не піддавали відборові, оскільки довелося б відбирати понад 330 рослин у кожній групі, щоб забезпечити достатню потужність критерію (Напзоп, 1959 Адгоп. .). 51:711-716).
Було ідентифіковано три незалежні локуси резистентності, кожен з яких мав алель, яка забезпечує резистентність до імазамоксу. Опубліковано рекомендовані правила для генного локусу та символізації алелей (Мсіпіові еї а!., 1998 Саїаіодиє ої Сепе бутроїв. Моїште 5, Ргосєєдіпдв ої Ше 9"
Іпіегпайіопа! МУнєаї Сепеїїйсв Зутрозійт.
ЗазКаїооп, ЗазКаїснеуап). Неалельні генні локуси ферменту, які каналізують одну реакцію, мають позначатися однаковим символом, який відповідає традиційній назві ферменту. Традиційною назвою для АНА5 є АЇ 5. За відсутності даних для призначення локусів для конкретних хромосом та геномів вони позначаються послідовною серією. Позначення фенотипу, який спостерігають у разі змін у гені, в результаті чого виникає нова алель, має відображати цей фенотип. Таким чином, пропонується, щоб алель резистентності до імідазолінону Е5-4 позначалася як Іті!, а її локус - позначався як АЇї51. Іті означає резистентність до імідазолінону. Це позначення вказує, що ген є домінантною характеристикою, і він є першою ідентифікованою алеллю. Дані для сегрегованих популяцій Рг та ЕРгз вказують, що 15А та 11А несуть дві нові незалежні алелі резистентності в різних локусах (Фігури 2 та
З). Позначеннями для цих алелей є Ітіг2 для мутації 11А в локусі А!52 і ІтіЗ для другої мутації 15А в локусі АІ53.
Авторами було ідентифіковано три незалежно сегреговані алелі, які забезпечують резистентність до імазамоксу, а саме, Ітії (1А, 9А, 10А, 15А та 16А), Іті2 (11А) та ІтіЗ (15А). Пропонується, щоб кожна з трьох ідентифікованих алелей пов'язувалася зі своїм структурним геном, який кодує нечутливі до гербіциду форми АНА5Б. Оскільки пшениця є гексаплоїдною, слід очікувати багато локусів АНА5.
Було виявлено, що інші поліплоїдні види мають більше однієї копії АНА5. У Місоїйапа їарасит, алотетраплоїді, було ідентифіковано і охарактеризовано два гени АНА5 (Ма?гиг вї а!. 1987). Снаіей апа
Вау (1984) ідентифікували два незалежно сегреговані алелі резистентності до сульфонілсечовини в
Місоїйапа їарасит, кожна з яких кодує змінену форму АНАб. 7еа таубє має два конститутивно експресовані ідентичні гени АНА5 (Рапа еї аї., 1992 Ріапі Мої. Віої. 18:1185-1187). В алотетраплоїді
Вгаззіса пари5 та Совззуріит Пітвшшт присутня багатогенна група АНАБ, яка складається з п'яти та шести членів, відповідно (Ншеадде еї аї!., 1991 Мої Сеп. Сепеї. 229:31-40; Сгціа єї а!., 1995 Ріапі Мо).
Вісі. 28:837-846). Вищий рівень резистентності до гербіцидів спостерігали в поліплоїдних видах у разі присутності багатьох алелей резистентності. Зулапзоп еї аі. (1989 ТНиеог. Аррі. Сбюеп. 78:525-530) комбінували дві унікальні алелі резистентності до імідазолінону з двох гомозиготних ліній Вгаввзіса пари, в результаті чого одержували потомство з вищим рівнем резистентності, ніж у кожної з цих гомозиготних ліній окремо. Стєазоп апа СНаїей (1988 Тнеєог. Аррі. Сепеї. 76:177-182) ідентифікували рослини Місоїйапа їарбасит, гомозиготні для двох мутацій, які забезпечували резистентність до сульфонілсечовини. Рослини, гомозиготні для обох мутацій, були в п'ять разів більш резистентними до нанесення на листя хлорсульфурону, ніж рослини, гомозиготні для кожної окремо мутації. Даний винахід пропонує вироблення вищого рівня резистентності до імідазолінонового гербіциду у пшениці шляхом комбінування будь-яких двох або всіх трьох алелей резистентності.
Приклад 5
Толерантність до імідазолінонових гербіцидів у Теаї 11А, ТеаІ11А та гібриді ТеаймтТАЛ5А
Підвищена толерантність, яку демонструють Теа! 11А та Теаі 15А до 20 грамів на гектар імазамоксу, підтверджувалася в наведених вище прикладах можливістю відрізнення толерантних від чутливих батьківських та сегрегованих рослин у дослідженні успадкування. Було виявлено, що Теаї 11А забезпечує такий самий рівень толерантності до імідазолінонових гербіцидів, як і той, що забезпечується мутацією Е54 у Біде! у різних оранжерейних та польових порівняннях. Подібність толерантності також відбивається в порівнянні іп міо активності АНА5, видобутої з толерантних рослин. Це є можливим, оскільки толерантність у Теаї 11А, Теа! 15А та Е54 зумовлюється мутаціями у ферменті АНА5, що забезпечує резистентність до інгібування імідазоліноновими гербіцидами. Фігура 6 вказує, що активність ферменту АНА5, видобутого з ТєаІ! 11А та ВМУ/755, лінії, що містить Е54, змінює подібність зі збільшенням норми імазамоксу, й обидва мають вищий відсоток активного (резистентного) ферменту при найвищій концентрації імазамоксу, ніж у контрольної рослини Теаї дикого типу.
Присутність двох ІМІ нуклеїнових кислот у Тєаі 15А забезпечує підвищену толерантність до імідазолінонових гербіцидів порівняно з такою лінією, як ВМУ755, що має лише одну ІМІ нуклеїнову кислоту. Ця підвищена толерантність відбивається й у меншому ураженні при більш високих нормах гербіциду, й у більшій неінгібованій активності АНАЄ ферменту. Фігура 7 пояснює, що при Юх нормі імазамоксу (200 г/га) усі оброблені одногенні рослини зазнавали ураження, тоді як жодна з двогенних рослин не була ураженою. При всіх концентраціях імазамоксу в іп міїго аналізі активності АНА5 (Фігура б), але особливо - при найвищих концентраціях, рослина ТеаІ 15А мала вищий відсоток активного (резистентного) ферменту, ніж у будь-якої з моногенних ліній, Теа! 11А та В)У755.
Комбінування трьох неалельних генів, кожен з яких забезпечує толерантність "І імідазолінонових гербіцидів, у результаті дає більшу толерантність, шж у разі лише двох ,єалельних генів (Фігура 7).
При нормі ЗОХ або 600 т/га імазамоксу більше половини рослин не витримали уражень у ще сегрегованій змішаній популяції Тєа! 11А, схрещеній з Теаї 15А, тоді як усі рослини гомозиготної популяції Теаї! 15А витримали ураження.
Герад Тезнст, Проміже, Чуєте Вемюом ре, що 0 ще Ї В с: нн нин нн и НИ їх щ а "ШЕ
Тевіх 1 о З ' ши. їв а па ве й В
Тех ох й 5 В ОО Ів г
Тк зе й й :
Тез хол. В 5 о в и о пу ше : ше ши ши
ТеїЇхиА В 7 ши ше Нв ї
Не ще в ЕЕ:
Тех 13А 15А х Те й В й ШЕ: г Го 154 ще В ше
Тех 30 а 7 й В І го
Фіг.
п 3 Но ЕЕ те ВИНИ
Рівномі
Випро ри. Випробуване 5. ВЗАЄМНЯ 0. СПИННДІШЕННЯЙ
Резнє Четло співвід х п
ТіК в н. Знач,. схрешщу -ібрнд 0 В ВВ Во ши ин ВІВ, ЗначИ
Тех А 3 11 аз 0 5 НЯ! 053
Тевіх АНІ 141 кі ІЗ ба яз 34 І МК,
Тева! х рт ек я ВИШ оо БЕ 97 5 Із Ф3я
А
Теві х 05 1859 КУ! щі 32 54 30 ГБ я
ТА
Тевіх не НИШКЕ Іі 68 пе 45 зо Мі 0,35 1
Тех 57 16850003 пе 035 56 54 її 075
Фіг. 2
Ок Резист. Сегрег. Чутглив. Вапр. тою зі Ля. Кількість
Гібвал тв дев (5) спінвідн. Знач Р круп
Теаїх1А НЯ ка: ни в БЖ паї 50
Тезіх ЗА 15 4 13 Гай щоб 50
Теві х 9 2 ій и п 30
ІА
Тев!х 14 аб В Не 00 48
ПА
Тезіх 36 55 а Ж де тв 1ЗА
Теві х я ії ши що 4Е
БА ши
Янг. З співвіднецення ши ше (ВВ) що іа ХА аб о - - іх ЮА 5аї й - -
ІА х 15А 50 0 - - 145 х16А 8ІЯ а - - 1; х ВЖК РОЮ Зоо 0 - -
ЗА х ПА 3 о м я
ЗА хі1А ага 0 - 5
ЗА ха 33 0 - -
ЗА х ВАРТО ду 0 м я іа х15А 7 п - й
А хів 409 0 - -
А х аб о - -
УРНИ
ІА х 1бА 995 0 - - іа х 4 В) ж -
БА ЕЗВа
Т6А. х що й ж - рік шана аа Ан А А А А А
БУР х БВя Я 15 п іа
ІА ХА 733 36 12: пжЕт
Зх А 46 ча 151 ю
МАХ А 557 46 ІЗ 19 зАхІЗА БО 15 ва п
Ах ібА 390 7 ІЗ рів фіг. ї
УиЩ Безнст. Сегрех. Чутлив. Випробув. Яна, Зах.
Гібрид т (ері (5) сТИВВІДН. ве кільк. ші Мой Шо (бек гру
ЗМЖРЗБІНН х 33 У 7 ТЕ 07 ві
А їАх іа 33 їй У ЖИ 07 м
ПАхА за 49 3 кі т? Че
ПАхХІВА ке в, 7 ля 14 100
ПАхХіВА 45 47 7 т п 29
Чи. 5
Канд. зо неїниоованої активності АНА іїмазамокеу Теві ПА Ні 15 (мем о о
ОЕ а ща 900 926 16 352 т тво Я 3 41,8 5 БА ще 5,3 ща за 366 0 15.8 рн: 429 49,6 753 250 165 о 44,5 зх,
З 126 4 А БЕ.8 14 КЕ Я 63 ріг. їх 1ох МІЖ ген 75 уражено У без зо уражено 75 без шен я Й ; й уражень уражень
ВМТ (одногений НИ 0 100 а
Те 15А (явогенняй й іо 100 0
ІЗАЛІА (тригенний) 33 а як а
Фіг. 7
Щіг. 8
НІ р ВО ЩЮВОМОх пн нянттн тя нлллжттт я тля т тот тля ттчет т тот Ролети чат от чт тот т тій я тот тече тич нтотттечюя отже
МТА ллАТАКТИСТОКЕННІОЕ 14
А КС А СИ С КО ОК З С С С С ТО С І І ЛО С Я А ОС СК а АК А КІ оба З "ххХхххХхХхХХХххХххххХхХХхХкхХЕХххХхХххХХ ії
ЩЕ юю хня ххкоюют ххх яю тихих тях жен паж ста ях дет тех я тт чих я пд тестя жк нт її "«ххУхххухХхХкХихуУххХХхХхХхХхХхХхІхххХхх 15 "«хЕкхХкхиИхХхХхХХххІхХУхХхХХхХкххкххххХхх ща рн "ххххххххухХхХхХхХхХхХххХхХхХХхХХХХхХХ
Яра дян ню яма вямхю тт жк ля хі ока ВАХОМОЮ о КАХ Кл й ХХ плсх дх вхх хо ств ках хи жамяни ОВ чЕхххиххххххххххххххххххххххХх З
Ж з 5 в ОТ Кв и кр о ОК и КК КЕ ЕН пПиУРАВОВУДвАААУНСВАТЕРМУТРВ М сист свт ов ост сова зас сова осо юс осо вс вав тос тса сов ато ос са вс Ааєсссв ге же п хххххХххХхХхХхХхХУхХхХхххХХхХхХХхХХхХхХХххих є ххххххххххХхххХххххххХхХхХХхХххххх її хххХххххххххххХххІхХххХхХхХхХхХхХхХххххХх м о о о и о А ин и и и Я ххххххХххХххххХхХххХхХхХхХххххххххХ дн ліття ролет тя рт пет иххтх теля зететттх тт тет тт сет шия стю виття лох ххххеххххЕххХхХхХхХхХхХхХихХххУхХХхХЕххх В шеюжтя лляне жен тт сети тетояжю тя тая тих тик тя туя же тя життя пня тижня птн З «Фіг. В, продонження « за хе пиття ажетня житт, зи ж нти тить и жест т ех нетчеьт ввесь я житя я гл тю вчемтьль вв жчечсьн я ж віль я я яю бе вьсиюя
Ап РАБКРЕюВРЕРКЕОРА КрРЕКЮАВІММХ КА сових Кк (а; ЛИЖ ОК ТИ ОК ОКО ТИЖ ОО СОБОЮ ОА СКС яма ОС Осо ВАЄ АТ С ТО ЗАКО ско хкххиххІххХхххХхкхХххххХххкикхихх хххххххХххХхХхХххХхХххххХххХххХхХхХхихх хххххХххХхХхххХхХхххХЕхХЕхХХхХХхХХхХХХХ ххх хНихХччУккИххихихнАкнихХхххх ххххххххХхххххХххХхХхХхХхххХхХхХхХхХххХ
ЗнХ уні кс хвУуваАаУ»"ооз5МтЕ:ноятТиЕВ
АЕС ТОСОЛ МІС м Ку Ки ВА КСО КИМ С АТО КУ А СА САС КІ А Я ТМ соо хХхкКЕХХхХОВУгТАУрасАаАч МЕ НОМ ТАВЕ шині ття ет ня КО ЗО ОСС АЮ С ОВС ЕК КС АКТИ ПАЮ АТС САС ТСАСНИХ СТ АК КОС СВОГО хХхХхХхХУхХОохХрАХ»"о0О0АЧМЕІНОгМТАВ пбо дух ххх кс ня АСВ ТС КК ТАС ОС КС ОС А АЮ АВС САС САНОК ТИН КОС КЗ ССС хиХхХххХххп"хХкаАхгссв;авмнкЕ ном аВе птн ОВС ТО ТТ СС ТАС СОС ОС ПОС КС ТОСТИ ПАЮ АТС САС САОНОСВ СТО СО ОС СО СОС ххХхХХхХХкКОУвБаАтРАСсСавМКвІнОМІКкА» п юне юних ні КІВ ОМС КО ДЮ НИ ССС КН ЦЮ СКОСТОЮ АТО МЕ АТ СА СМ ХЕ Ста о ОВ Тов осе хХхХхХхххХрУвАУВвОовАяІМБЕЦНОАВТВИ кею отяоляю зхю сих б СЕВАС НАИТО ССТ АС СК КМ МК СС ТИС АТО АС ВТС СВ ОТО СТ АС НК ОС
Фіг. 8, продовження ме 19 1мі пи в а в в
УтТЕЕНМННОКВЕНМЕвскеКкА ВВ кИи АКА ках
СЕ АС АС ВАС САС СТЕ ТКС ОО СЯЄ АЮ Сл ОВС ВАЄ ОП ТТ ТОЮ ОБ ТАС СО СОС СО тю С СОЮ ут "«ІТтїХННІХкпЕНЕСсЕЕАтазеийтаАаНнЬАвкеКУ
ТО АТС КО ВАЄ ПСАССТО ТИС ТОС САС ВАС СО СОС АСК ТИС ВС ОСТ ТС ОС ТАЄ ОС СОС ЕКО ВОК ОС СОС музи "ІТЕВІЕКЕВНІОБнНАвЕААВОчАЖВАВЦЕХ
ЧТО АТ МЖК АМІ САС СВ ТТ ЄЮ АС МЕ СКО СКМ ЗАС ЕТО ВОЗ КИ ТОЄ ОС ТАЄ ОК СОС СЮ ТОЄ сЮЄ КН: ке «БХВЕКНнНовЕАЦВвОопВАкАв,АансчАВАЗХЗИНТВКХ «САТ МЖАМ СА СТ ТТ САЄ КИ САС СВО ОЛО ЧИ ТТ ОС ОСЦПВ ТОЄ ОБО ТАС КС СОС ПЮГ ТОЄ СОС ОВС «її
У"«ІТННЕЕЕНЕОВбЕ гл У з НАВИ
ФНС АТСАЮС ААСБАС СТИ ТС ОВС СЯ САД КАЄ ОО ПАБ ЄЮ СТЕ ПСБОСО ОСС ТАС ОВЮОС КОС ОСО ТС ЦОЄ СОС
ЧЕ
"«ІТМХНІСЕНЕОСсСЕягванійттмввакях
ОС АТС АС ЗАС ПАЄЄТ ТИ КОЮ СА ОА САС ОВО сь ОС КІС ПС ОСО ОС КІС ТАС СС КОС ЮСЬ ТСС ЗОИЄ СОС
ТС то ї5б зба шитяннтттитлян ти дини иннля титана А а Ж я ААХААУА АТХ В Я ЖАХ З ЖАХИ АКА Малая ко сУсЄЧчАТВДОРСАТМІУААВАМЬОВАХ? об сокс тоЄ сто юю АС ОС ОВС ЄС КК ОСА АС ВАЄ СУС САНО ЗО ССО СИС БОС СБС ВССУ ДАЄ СТОЄ (С со
ПУсСУхАТХОВОАТНЕУВАТАВАКЕВВТВ пос САС Є Є Є АС ТО СЮ СС СЮСЬ ОК я ам СТО Є ТВОЄ ОСС ОСС п ДОС СТО о САС ТОЄ АТС сс с" с"АтТтЕСЄС» АТМ нАКАВвАЄЄВНЕ сессо тосол ак с око кс се мас стстотесс сте бас с сто люто А бес
ПусСУуатааввдаАТтМіхаіліава Ві сессур тс ето ос єс пос ос пов осо Ас вАЄ ТС Є МС ПСО СТО ЮЄ АС СС СТО СТО АС ТОС АТС їх чУустуАТтІсВвОоАТІМІ Уа АВАМІ ВІ сег ЄС ТС ки ОСС ВС ОС с осо сю є АС АЯКС ТАС ОТО ТОЮ СКС С ДАЄ СС СЕС СТАЄ КОС АЖ
СО чУсчат,ппчвлнківркАаАваАКМЕВТІ ос сте тоє сток СС ТОСтЮ Се ОО шо АС Я СТ ОТО ВОЮ СССР ОСС с КОЖ УК С КА КС АТ «Є
Фіг. 5. продовження іа ща па щу п ин о у о ЗУ У оо о У
УтчАІТтТбОУР?зБЕМіІОТВАВБОВТВІЧЧЕВТ
АТО сс ОСС с ЗОВ СЮ Са ЯТС СОС СЮ СС АТО АТС СС АСК ДАЄ СОС ТС СВО ПОЛО АСО ССС АТА СС ВАС КС
Ас
МУАІтТВбОУ?ВИІМІТВАВОВБТВІЕВТ атостус ос АТ АСВ САКСМ ОЄ СОС ЄС АТО АТС Є АСО ВАЄ ССО ГУСАК ЗЗАя ЛЕК СКС АТА ПРО ВАС ОС
МУ"АТЕС0ДУВХАМЕОТТОАЕСКТВвІМЕМХ
АЗОТ ОСС АТ А ОО СА Є СОС СОС ОК АЖ АС СОС АЕС ПАС КОЮ ТС САТ ОЗ ВОЛОС АТО СТО ПМ ОТЕ ас
НАТО" ЕКкКМмМІббІВвВАЕВБСЄСЬКТВІВКМУ
ММЗ ОС АТО АС УК СА КТ ОС КОС СКК хі АК ОК ЗО пАС ОСИ ТС САТ ВИ ВИОНОЮС АТА ТО АТ ОМО
МУАЛІТООХРНЕМІБІВАВБОВУТРІИМТ
АВС Є АТО во ВК С ОО ОС СВ СОЮ АТО А ОС КОЮ Да Є РТ Ку МИ, АККСЮЄ ТА СРО СЯ ДС
АС ммузітйао)хвЕВЕМЕсатТіІххканКтТпІхЕМм т
Аа АТС ОВО сЬпОЕСОСсОє ов я КТ КС аю ДА ОО ТР СА мМ АС СЮЄ Аа Ст ас се яса т зІКі з кан а по а а па
ІЕЕ хХУ УВУ ЕУїОХАБКЕЇАй
СОС АТ АСК А САЄ АКТ ТАС СТ ШЕ СТ САТ ОТ ПА САС АТ ССС СС ОТО ТА КАО ПАЮ ТУС ТО СТО
АТ язіукиМмчтч,сивБіІвАч НЕ КЕТАЙ са А АС АС СА АС ТАС СТО СТИ СКУ КУМ ТИ ОА АК АТ СТ СК ЕС АТС СА АКА ТТ СТЕ
СА кЕчІТКНиИХКУЬИУБВЛПІРНУ:ОБАКЕЬА
С КС АЗС АС АМИАС МІ ВК СО СК С А СК ВИ С У АТ ла А КК ГЕС КО СТ пса п кІТтТЕНМнНУ Ух ЕВІВВУТОВАРЕА
СС А ЛК АНІ СА ОААС ТАЄ СТО ЛИС ГК ОАЄ ТО АКТ ВСУ ТС АВС СА СЬКА КІС СТЕ
Ми пазітТкниуУуУаУвоІЕХІОВКАВЕА
СОС АТ АССААМСАААСІ СВК СО ПАС ОТО АЮ АТ АТС ССС СОС ТС АТС СА Яр СС ТС КОС СТІК «А кхІтТкВпкхтТчЗЬОоУВЄВІРЕУРИВАВКВЬА
ХА АК АЛІ СА ВАЄ ТАС СТО КИ ТТ МАС СИЧ А спАТАТИ ССС СС рН АТС Сак СУ КО УС ГО С
Ям.
Фіг. 5, продовження ой зо гак о ко п п п п п в п в в в
ЗЗР УіІРЕВІООО0МАУ ВУ ЩО У тес тв ес ст ОК СО КО Со АС ВТС СОС ААСОАЮ АТС СЛ СМ САС АТО СОС ОТО ОС Я ТО ДКС
АЖ
«спро щМАХХРУЩШЕТ
ВІ ТЕ ги ТС в ХА ОСАД АК А СК А ТАК ТЯ СЛ СУЕЕ СИ ТС ТЕ С, аст бІпВеОонУ"пЕІЕТКОГО0О0О0МАЧУЕВКВТ тес Хет(НкЮю сос с СО ОТО тА СК ЗАТ АТС СОС ААС ОВО АТ САС СА АТ ОСТ Тер КС ОТ ЖЕ ЛЬ
ЛЕТ - високо утіУпІТКВОІОоО0зОо0мМАаХУрРУЖЕВТ тестер сом ота тА С ПАК АТС СОС АЙ ВАЄ КТС СМ ОА САЄ АТИ ОСТ ОТО КЕКС ОС З АС
ТЕ хайакврвсовптуїітУУВіІ?"КкПпІОООМмМАХУВТЖВІ
ТИССА ВТ БАЛ АСК А ОАЄ ВС СО СА СЯ АКТ ОТО КК КЕ Сх
АСТ ха КРОВУУВІ»"ВІЦОдОомМахтитжот есте се ес сим Те СТА ТЕ ЗА АС КВ АЛ ОКИ АТС АМСА СЯЮ АКОТ ОС МИС КАЄ
АС що 2 їх зику АВЕВКЕРКАТЕЬЕОМВІУ то АТ СТАСКАКИМІТАС АК КАМ КМ МЕС СА СКС А СИ КАА ТС КВК САС ВК КК сту
ЕМ. »"ЗУЇТАНІГ КЕ» ТВЕвХОХУНЬХ
ТСА АКА ТКС КСВ ТАЄ АР ОС ДСОТ СЮ А СА САС СТ АТС СТЕК СА ОПИС УВК КЕ ВК сту вЕмегакі1іАВЕЕнНЕВИЕВТвЕЗЕУЕхУ са нат ТИССА ТАС АТМ СОС ВАМ КАСА ЗЕ АК СаАА КС ТЕОЖВИ КС СТСКСТ сот ваиусвостіЕаАВОКкигВтТЕХВОМЬКІМ
САУ АК ККАЛ ТАК АТ КВАС САС ЛЯ Я ве СА СА УК АК СА ЗК КК САС ЛАК ККС СТО КУКИ "ме, орав сгКктТУ:тТЕЇБвОоОУЬКІУ
ССАЗІЗАСТ ТАК ТАК АН С УВО СКС ло АХА НТ КИ С С КУТ В СА ал КЕКС СТВ СУК СХ ої вм," суУТАЕЖРКЕКЕ?"ЕТсВЕКОУ МКУ їсА АТО СТЕР КНТ УК ЛИС МС СУС ССС А ССА ГАС ВАТ Ав СО КЕ АЮ ТАКІ КТС СВ СУК СХ втт
«Фіг. Я, продовження сЕЗВЕРІЇ т" пвчвасхАазЗаопніІВкКкЕХМКІ си блю ОВК АТ ТАТО СКУ КИ КС СА С аа АА ТУ КОКО ля ств вени УУОвооаосьАВОВВВЕгУТІ,
ОС бла ТСА СС СОС ОВ АТ СТО ТАТ УГІ КТ СК ОБСТОЮЄ ОСТ ОС КЕ ОВС п ло ТТ Ср С ТК ОТЕ ла
СЕ
ЗЕНИК ААБВТЦТСИВЕКВІНКЕКУНЬ
МК с АК ОС А ВК СТО СТАТКУ ОС Я СКС НТ СК Ав С ГІ СС С СУ ГА ст . сЕВА?І, УВО сЛАВОСВЬВІКАТУКВ сома ОСС САМО СТО ТАКЕ КК РОК ТИС СТ АК СТ ЄС м св п С Са ТТ г ет сивини? хУйсвіаславВвКкЕВМВКкЕчТІ сосок ссА ЗТКСТО тат ск СОТ ст оше ОО ст СО СТ сс дАЄ ТТ ССО ТР ОТ п
СТЕ
ЯЕВЗВЕВИоІУХМЬСЬВИЬСЬКЕЕВБКЕКЕЕЇї, поспло тс сс ссА АРК СТО ТАТ ОК ОТ СОТ ДОЄ ТС Ост СО УСТ ФС пав АС ТТ СОЄ СОЄ ТРУ ОТТО
СЕ зх я За шііляшядил о тсднлят сли ннтитт тити тні аксони єкихтя тяжке дж кеєхяяиєксккииик твівУужуєттІмоіоксеввовЕьВМЬ
ТЕЖ АВС ЕКА В АКА АС АКОТ АН КТС ААТ ТО КК АТ АС СОЯ КЛ СЮ Сх НІ АТО
Фо твіІігУ"тТтТІтТІіМааивевЕОорввовьвкМіс
АТО АТТОСВ ОЇ АСА АКТ СТ СТО АТО КОС СТ ОС ЗАЄ ТТ СС АВ АС ПАС ОСА СПО СТ СВОЄ АТО СТЕ
КОТ. таеіІрУтттомсвомМеЕв:ввеівВі
СТО АТ СОВ КТ АсАТ АСУ СМ АТО ОСТ ОС ААС СИС ССЮ АКС КАЄ САС СК, СТ СТ СТИ СКС АТО СТЕ с твівУТтТУТоМОоБСсМЕ ев ОовівмМ
ЗИМ АТС КА АС АЕС Та Ос СН АТО СС АС ОАС АЮ СС СТ СТАЛИ ССО АТО СТЕ їх чвсівУтттімео ак" вовк аМмьо
АСтен а г ССА СК АСА АС ВЕСТ АТС СМ ВАТ СС АС ЗАС МАС СА СТ КТС СВІ АТС їх чі" УТтІТтТІ МОСТУ: вовіБІВМИЬО
АІС АТ СС АС АТ СЯ АСК ТГК АК ТС СК АНТ АС АТ А СС ТЕ СЕН А СЕТ о тріг. 8. продовження во ва зі зекчлвтя ууртетукуте няття ння тут птн тттннтнт ув федтя тя тлявт тенти тин тт нтетт я чи венлння
МНТУ УАХТТАчУВКАВЬККкАБИССУВЕВОВОВ
АТО АТО АСО ТИ АС ОЮА АКТ ТАТ СЮ КО ДАЕ АВТ ОАЄ ТО ГРИ СТР ОСИ ГЕ СКУ РО СОЮ ГТ ЗАТ АТ їЗіТ поту УААнНнНТААЧчВКкКАНВКЕЬ АТС
АТО ОСАЖ Є АСТ ОСЕТАТ ОСА ЛАК ТАЖ ОСА ОА ЗАТ ЛАЄ ОСТ ДАЄ СТО СТО СТО ОСА ГТК ОСТ ОО ЦО ТРК ЗАТ ОЖЕ
ГеУу
УНаОТУХАМУАУВбКАВЮІ С АГТсОчУЕЕВЕИТЕ
АКЕИМТ ОС АС ОТО ТАТ ОСА аАТ ТАТ ОСА ЄТЬ бАТ АВС МІСТО ТО СТ ОСА ТЕ ОО ВО СО ТІ пат ат
СЕК . кхнеТУхАМУА,УВаВКкаАпйх СА УВвВАКЕнИиК
АтасЖТ ОС АС СТО ТАТ ОСА АКТ ТАТ ОСА Та ПАТ АМС АС СТОУТО СВО ПСАОСТТЕ СМТ ВТО СО ЕЕ ДАЖЕ
ЕК
МипаТтТУТуУАНТАУОПКАБВЬкІТГгОУКРВОВ
САТ ЖИ А СТ СО ТАЗ СА АТ ТА ОСА ТА СА АВ ЦНС СА ЕТ КК кв ект ЛА
ГИ Я
ХнНОТучАВХАЧУВКАВІМАВвОТАЕРВРТЕ
АТОСАТ ЄЮ АСТ ОВ ТВ ОСА АЖ ТАТ СВ ВІТА АТ ААЄЯСТ ОВО СТО ТО ВО ОСА СРО С ОП СС КТ КАК ИЖЕ са
За Б зжкекохуюккксия Кук ККУ к Ко ЖК кКх СОУ КК Оу УЖ КОМ КУЖКХ СО ЖЖКК ХО УКОСУ ю кет я кистях "таза А ЗНАКІВ ВНІВРА БІК
СТО АСА ОО АаА ТЕ ДМ СТ КГ ОСА ОС МНЕ ОСС АЛО АТ ОТО САС АТТ ОАЄ КТ ОАХ ОСА СА ПА АТ СА Аля да "Вк нНлта:НЕКІМаІВІВвВвАКІ КМ
СТО АСТ ОСИ ЗАВ АТС Па ОСТ УГК ОС ЄЮ АСК ТЕЄ АЛ А ОКО САМЄ АК ОАЄ АТЕ ОАЄ ОСА ДСТ ПАСИ АТЕ ОО ЛА
Ам
УТтТОКІВАХАЖВЗКІУНІЙВЕОРАТЗТІСКИ
ТЕ АСК КІВ АлА АТС ПАЮ СТ ТЕТ ОСА АС АОБ ТО ЛАК АТТ ОК ОАЄ УТ САС АТТОАССОА ВСТ ПАЙ АТ КК АВ пАС чт кБнЕвБАкАНКВКІччУНВІЕОЕлЕїокК :
ТП АСУ КВ Алл АТО ОА СНУ ТТ АС НИК Я ЛАВ АКУЛА КУТ С КУТ ОА СЯ КВК КЯКХ Я СЯ лих дл "ТпЕІЕЕАкЕАБЕВКІУНІВІПВВРАВБІОКМ
СТО АС ААА ВСЕ КТК А АНІ КИ ВА АК КАЄ АТ АЮ АТ ЕМО КС КЕ ИМЯ А КОЮ ль
Ав "В Е1БКАЕвкЕАЕВКкКІВНІчІВНЧВОВАВИКК
ТЕХ АК Кт А АТС КО СТ ТУТ ОС В ОКО ТИ АС АКТ ЛИХО СА АТ КМТ А АС СА СС СИН АТ МС ВАВ
Ас
Фіг. Я, продовження зна во ак ро со По о и и и ОД ЕХ ЧО Не в вн ОД о нин и кКОгнНУяІСсСяарРУКЕАОовіІЇмМаАаткасятт
Ася ХАВАКЯТ А АТХ КЕН АК Аа ГА АЙ ТТ АКОТ ЕТ СТА СЯ А ВУ ЛЕМ ДНА я соби" зіІсавУКкьАкОСІІВОМинОоОяКкА
ААОСМ ОСА САТ СВО РОС ТТ СР ОКЮА АЖ ОТЕ ААКЄЮ СНТЕ А ЄМО ОС ТО АТ ЗАТ СТА УГА АКТ АОС Ада
ЧА х,аДнУузвісавпвкекі:аквасіомнооавкКка
А ЕММА КАТЕ С АТ КНМ АВС АМС ТТ САКЕ З ААТІЬСКА ТКА ЛЕТИ МК АХА
СУА когнхУчІсарекьакьовькоїгКкМімМевВкаА вас ААКОС Ха ТОРА АЖТ СЕ АКТ ТА АСІМН КОС АТАКА лати КАВА
Яся коРгнУчхіЕсарУкьа ьовькомимавйка
АМСУ КА С КАТЕ ВО КНТ ЗАТ СЕ АК КИ ТКА ЛСАСЕЕМИ ТАКУ ТАВРО АА
А коРрнУбзісзУкіхховвмаяка
АПА Са САТ СА ТЕО А АЙ АМТС КК АТАК СТАТІ чаї НМА А
А
4ів 4 аа
ХТПП ЕБАЧНЮВвІЙОСКЕЕХВІОЕТЕ
ААУ АСА ЛИХ КС КЕ АН А СА АКА В ПАСТА МІ А АС АС ТИС КУН ТА Ах АС тт своп ОокБа,жнквоокКввРвіоектТЕ
АТАК ВАТ ТУТ ЕК У СА АККАУНТ АК ЛАСЬ АКВА У ТУТ С СЯ НА ГИ ВАС АС тт "ОСЬ ВЕжЖНЕВОВООКкИБЕРЬСИиКК
Сас Ева ЕН СА ЗЕМ КСАЄ АЛЕХСВАКЕ ТЕС ОКСАНКА ВКА А С АЛКХ ЛИХ
ЗТ сопе жИкнірОоокавЕРБІОТКТВ
СААСАСВеНУКОвОСА КОС САЖА ОН ОАС ТТ КУА ОАЄ САТ АОС АСИСТ СТА ОА НО ДН А тт соб ОБОоРУНнНККоОООКЕЕРРВІ РК
Ал Спаса ТЕКА ВКА АКА Ь КАСА АС АВАКОВ ЗА КАМ
ТЕТ
ОО ОвЕйВЖНнНКкКвВЕВОИаКЕЕРВЬОЕКТЕ мс АСВ СТАТ УТІХ КА ВКА АКСІОМ САМ ВАМ АЕКЖ ЗАС ТЕТУ ТК ЕКЗА УТ АВМ АНСТ
ЕТ
Фіг. 8. продовження
БК а рема а п КН а А ВВ
ЗгКі"РОотАгОУВЕВТКхСсСЕАТІА Та
ЖИТ А ЗАС АТ ЕМА СКУ АХ СС КАСІ ТОК САС А КНУ АН АТС АТС МО ОКУ ст сввгатвтахатовчуг рве ткава АТХ поса АТ СОЦ СО0 АКА ТАКСІ АТС САС КА СТ САТ А СО АСА АЛА СКНИЗ САС АТС АК ОС АС ОТ «а снказрРЕхА ВХ ВЕСТ КЕЧЕАВІя ТК гм мс АЛ КВК Се ТАКТ АТ СВІ СТАС ОАТОСАСЯНЕ АС а СК МЕС МО АС АГ АТС ст
СПЕБЕАІВЕОУАНОІВВьТКкакліфатах іме ис А ТАТ АЕС ОА УПАК ОА СС АСЗ АВА ОК КИМ ЕКО ВТС АТ ОК КОС гЕЕн сЕзлІЕВтОоОтАНЧУкА КОТОВА АТО пс пе ас Со свАТАТОСЕ АТС СА ОТА СНІ САТ ОАО СТО АСА АВА ОФО КАЕОСО КТС АККОСЮ ЯВК ОК
СЕТ вв" уУузіснЕоїкКвеЕАТАТТОХ
СИС А С т АКТУ АТС АСУ ТЕКА Я СТО СА пААЗКИКАНО АТС АКТУ ОСС ТОНЕ шт я БУК «КО даОнНОМЖЖААОУХТУКЕВРВОЖІ ВА
ТОП САВСАЄ САС АТО НК ОО ОСА САА ТАТ ТАЄ АОС ТАЄ АМС КИ СТАВИ САД ОСНО СТ ТОНОЄТ 0ОУ СК ОС
КІ допом уУлАОУХІУКВЕРРВОКВЖ ВВА пОБСАСТСАЄ САЛО АТО ОСТ СТ СА АТ ТАС АСТ ТАЄ АЛ ОВО СА СКК СА ТО НОСОК ВО КВ ДОВ
Сл лаопвоМмиеавтїтїкЕвРкоОомКі вах то
САС слі АК МАО С ОМ ТАТ ТАС АС ТАЄ ААССКМУ ЮТЬ КСВ УМ КК ССС Я ГЕС ЕМО
Гея
ООН жААООуУтТУКкКЕРЕВЮ ВЗ ОО «обо САЄСЬО АТО ТИН С САС ТАТ ТАЄ М ТА АВС СКЗ ОСА СО СА ОТО ТТ ТОСОЛ ТТ Осо
А сонпночжалоОоУУТУКИЕРВОЖИиВНОИХ со гСАТСАЄ СА АТО МИ ОСТ ПС САС ТАТ ТАЄ АТ ТАЄ АЛ НЗДЄ ОСА СПО САС СТУ КОТ СО СК КК КО ба асд сОпПОМуААОУУТУТУКЕРЕСЖМВХВИ СА
СО ОАЄ СЯЄ САРА КОШТ ОСТ СВО ТАТ ТАЄ АСК ТАС А ЄСА СК САС ТОЮ СТО КОСТЮК ЦЕ КМ СК са
(ріг. Я, продовження чо зе «о в в и м МО
Ма ЕбЇп айва лнА Зав Тк дя ДА КРТ ОХ ЕТО СТ МАСУ СА ОСТ КАЄ УСТ ВТО АС КА ЗО С АХА ТЕ ОК ОА АТ ОАЕ ОО АТ
ЧК мавп айви АМАВЗЕСсКТМнІВвВсИко діє нь ТГК ТАКА СВИСТ КЕ ТО С СКАН КУ С КВ ЕТ А А КА СВУ ЛАТ сот
Ммсосвгвьупвзлаваз»"АмМрРО»"ТУтВІВОВАИ
ЕТО ЗА ТЕТ СО ТТА САТ ОКА ПСТУЮСИЄТ ОСТ С КО лес Ся ОПТ СЕТ АСА КК ОТЕ Ж АТ САТ СТ б
ЯСІСКЕ
ВИСО З Я ИН ЗД С "Я: УИНЕ: ЧИ СИ: ЧИ, Н ЛИ З А, в ЗМ, са СИ З В КТ Я ЛЬ ЧУ
ТО А ТЕ ОС: ТТЯ ССА КЕ ОСА СТ ОО ОСТ ОТ СТ ОЮЄ АС СОМ ОТ ОТ АГА ТЕ ОГРОАС АТТОАТ ЕТ ЛАТ
ЖЕ зправа АМАМВІМ ХУ МІ КК її
АТО СА ТЕР ОС ТА ОСА ВИТ ОСА ОСТ КК ОСТ ОСТ ОГО ВЮС АЯКС ССА ПОТ ТЕ АСАУТТ ОК САС АТЕ ВАТ АЕ
«яті,
МОГО АЖАМРвмІХУМ ІВ я ОПА СКК ОН ТТА ОСА СТ СА СТ КОС ОСТ ОСТ ОТО ЮЄ АМС ОСА КТ ТЕ АСА ТТ ОК САС АТЕ ВАТ ЯЮТ САТ сих кВ х3ю за
ЧЕ мМНнНІВВІаніІВІВМувУХУМУММО ат ТО ем А СА ем ТЕ ТАТО АТС СНІ АТ СА А АС ТИ УК З ло КО АЙ ГО А АС
Сл
ХЕ, ММКЕОЕМВАМКІВЕІЕсМуРУКУМІНМО
АТ ТС ССАТИЛАСАТЕ САС Па МО ЄС ТТО АТС СОС АТР ПАС ААС СТГ А ОТ ААО ЄС АТО ВАТА ПТО ад ААЄ
Ся кінні ввАКІШЖТІЕМНВУКУМІ ММК
МИТИ СКС А АС ОЛЕСЬ ОАССТТО КЕ ТО АК С МЕККА КА СЯ АКІ З АЗЕ АКА АВК А
САС
«хЕМнівЕВаАЦІВвІВКіВвУКУМІІКХКО :
АЕС СТС АТО КАЄ КАТЕ САЙ АС ТТ ОС НО АТС СОС АТ ПАЙ ААС СМС ОСА ТО А ТЯ АТ АТА СТИ АЛЄ ЗАС
КІЛ
ЗЕ МИЗОБАМТІВІВМІРУКУМЗІКНО
МУК АТ НАС АТ САМА НН АТС МГ САВА СТЮ ВО ЛАТ КО АТОАТА ТТ А ВАЄ
КА
ЕМО ЕМІВвчУЕТтУМІНКО
СОТ АКА АТ С НЯ КІ ОСС САС С КТК ЗА АС СЕ САТ А КО АТО АТ А М АС АС
СС
Фіг. 8, продовження в з: оон ОСИ І У НН КВ чаду нак ЕчКкКАНККАНТІТУ КР
Сен АКТОМ МІС КАТа КТК ТА АЛЕКС А АТ АК КОСАТ ЛА ТАС ТВ ВАСКО АХ тя ному" кКАВНАНТУБОНВИВМ сеатспсовА АТО ОТ САС НАЦ ОА АЮ ТТ ТАЄ АС КОС Аа ОКО САС АСА ТАС СТ СН ВАЄТСА ДА
БУ т Уще п: ЛИ З В и я М ЗВ з ШЕ С В пи З со ЧИ з М ЗУ МЕ У У ЗК МК ЗШ
САКЕ АЛІСИ НАТАН ТЕ РА АОС ВАТ СОН ОК СА АСАОТАС СТЕМИ А ОСА АЙ
АЖ
"соб МмМУО ВВЕ КкКАМЕВАНТХУОМРтЕК
САКЕ ЯНЕВ АІС СКК ТЕ КРАСА АНУ ТАС АМС ВАТИ СВ АСА ТАС СТ АІС А АВ
ЗАТ чес жУУОБОКЕТКкКАНКАНТХУ,ЮМРИЕВЮ
САС ОВ АКОТ СЯ КОКО КВ СК КН ТЕ ТАК АК АК КН КАС ВА КАК СТИ АКА А
АГ н,омУучавгоккЕскЕАННнНАНТХЮОВМВКВМ
КАК КА КК С Ма А А М ТИ МІ Аа ААТКЖНІ СОС САС ВА ВАС СОМ ССА ПАМ
АК
«та ква за нн ни а аа
ВБІК АЖКСЕМІРАК ЖК ТКК ХХ
ПАПА АЮ АТ ТАТ ОСА КАК УТК ОТО АСТАТЕ ОСТ АС СОС ТВ ААТ АТ ССТ ОСА ОРІ СК ОТА яса Аа ВАВ АТ ах січ УутТтТЕеАКкКвЕнНУвАУВУУтТКККЕ
ПАСТ ОАО АТА ТАТ ССА АТ ТТЕК ОМА АТТ ОСТ ВАВ ОСА ТУ АВС ОТЕОСЯ ОСА ТК ОБВА ОТО АСО лм ВАС АОС я
ВАХ" ВБЕУРТІАКаВАУВАТУКУТЕКАЕ с АКА АКА СТАТ ТА АТ ТК СР АС АЛЕ СТ АЛ сь І А ЕЕ А С Я С ст и А АС ах
ЕЗКІУчТОгУТІАКкКСЕВЕХУпАаУІЮЧЧТККАЕК
ЯКАСЕ ЛЕХК ПАК АТА ТАК ОСА САТ ТЕ С АЮ АЕС ААА ОСА АС ТКУ СА ДЮ КК КТ СЕЗ АСКЕ ви Ал КС дах
ЕЗБКІУВОПЕУТІЗАКСЕнНУТАУЕУТККУЕ па АСТ ОА УТА ТАТ ОСА АТ КК ОТ ЛЕ АТЕ ОМ АлА ЮА ТЕС АС ТТ ОСА ЦСА СТ СО СТИ АС АЛ А МОЄ пах гХЕЗУБВВЕУТтТЕАКСЕНУВваУНУТЕКИВ
ТБМО АСТРА УТА ТАТ КА ЗАТ КОТ ОТО АСО АЕС АКА ЮА ТУ ЛАЄ ТТ ОСА СА ЗТ ССА ОТО АЮ А АЛЮ АВ пал
Фіг. 8, продонження їх ій Я "ваАахІкХКМЬБЕЕРИЕРХВІЕУРНОВНУ
СКС ЖЕ КСО СЮ АТС КАВА; АРСР СУК ОА АТ СА КИ ССА ТА ТУ ТК КАТ АТО КВОТ КСО СА САД ВА САТ іже "т ААЗІКкККМІО РСР НОКИ У
СТО ЖК ОЄЯ ПС АЖО АЛ АД АКТ ОА АОС ОА ЮК СА ТАЄ ТТ ТТ АТ АЖ АХА СЕК ОС САТ САС бо СА сни "тА АІКЕМЕЬЕТРОБвБУ ВІТ ВвНнОХгИХ
ТУР М (ВІ КК А ловкя АК АЛЕ ЕХАЄХ АСК СС ЛЯ КА ТАЄ ГК КО ЗАТ АТС АТАК КМ АТ ПАСМА па "твв'кККкКМкЕТтТРОВУСЄІІУРВОЕНУ
ОТ АСТМА ККСА АТО ЛЯ АМО КТ СТЕ АК АС СА СКК ОСА ТАЄ ТИ КО ЗАТ АТС АТА СТО СО САТ САС ОАТСАЄ
"тавікКкКмМмІіЕТВОРУБЕОРІУРНОЕЮВН У
СРС СТ САС АТС АКО ВАЄ АТО СТЕ СА АСО СА ЛЮЄ ОСА ТАК ТУЮ ТО ПАХ АТС АТА ТС СО САТ САД А СЯЄ ота "тТААТЕКМІЕРРЕОІВХ МОВІ РНОКНУ
ОТ АСТ СА ОСА АТС ААО АЛКРАТКСТ САС АС СО ДОС СЯ ТАС ХТО КК АТО ТА ТС СКОБА САЮ ОАЄ САЄ
НУ
З вів мі" ЗйчАЄКОМЕї й ак
СТУ АТО АЗС ЕКА СКМ САС АЛЕКС АЛІ АТ СТОКАМИ А Ж А АТ СИМ ТАТ ТА у?" МІ" п ПА ЕОМ МЕ СО ОВ ТВ
СЯ ССТАТО АТІКА АСОМ СТ ТВ АВО САС АВ АТС АТ АЄ ОК ЗАТ ОСС АОВАЄСТСВТАЄ зї«щівоевзАККкОВМІМЕ НУ
СКС АЗЗАТИ ТА АСК СТ ОС Аа АС А МАТ АЕН АК АОС АССТОВ ГАС у" МІ:МабАЕКОМІМБЕОЮДЕНТІ В
Ста СОТ АТО АК ОЮА ДЯК КУ КУРОК лим с АЛ АТО АЛЯЗ СМ МІ СІК СНЗЄ ЛЮКИ ВКХ ОХ ТАЄ
МІ" КАК ЩІМЕО Вк
СТО АК АЖ ССА АС ОТ СТО ТИС АЙ ДАЄ АВК АТ АТО АС ОВТ АТ ОВС НК ВС ЛО ТАЄ свнІ" ОСА ВБЕКВОЧІіІВВЕОоОПпПОоВ хх
СИБОСТ АТО ВУС СА ВАС ОСУ ОСТ ТЕС ял СВС АНХ АТ АТО ВС ОТ САТ ОСС АСК ВОС ТС ТАС ОХ
Фіг. 5 їй хо ФО БЮ МОХ
МаАатТІААААаллаізавАТАаКкТОнНКиМОВ В ката сстАоваєссоси зо сс нею АС А АССОСС СИ ААЗ А САС СА
ВА 15 "хххххХххЕхХхХхХхХххХхХхХиХхХхІхХхХхХхХхХххх В "кЕхХхХхХхХХхХУХхХХУХхХХкХхХхХхХхХхХкхЕХхХхХхХхХхХ В пу на п у "«ххХххХххкххХхХхХхХхХххХххХххХхХЕххХХхХхХхХХхХх В
Щур юю сюохсяхх чек кеу ох хатою пох тех пет ми ин ж м хм помах ххх ко то яю тести лит сюе ДИ "ххУххХхХхХхХкхХхХхХххХхХхХххХхХхХхХхХхХхХххХх и "ч«ихххХхХхХхХхХхХхХхХхххХхХххХхХкхххХхХХхХхХхХХ м
ДУ. сенат тенти шини пен нння свт же хікіжтю теє сяк кет пе зле кши пет нят стю же сюсюскхи жеє сс
КІН Я хі духо ж ккскиив кістки кети жкетткюаи косяки ккктесииккилньж хи ктюкт кс єк сто жксссюхиюкеттяя чне АВКЖнУ Є лайка АКВУКрРИК 13
МИТА ССЕТ СОТ Ви ЕхНі сс с ау ас С КН КО ТК В СКК
То ГКУ ххххУххххххххххххххХхХххххххххх м ххххххХхХххХххХхХхХхХхХхХххххХхХхХЕЕкхх х пиютттояує тю тя стя пек гтя дя теж сія тях же сю ж т я ту тет ляти ткт тю ня тт ср Ії ххххххххХхххХхХхХхХхххххХхххЕххххх ю «х«кккХхХххХхххХхХххХхХхХххХхХхХхХхХЕккЕикххХхХх м» шеп пяхсчя жет ея чу тек то нят тяж тт пот уже т тні тест пит тттття пет тт тт пня ОМ «ххххХхХххХхХххХхХххІхХхХхЕхХхХхххХхХхХХхХхХ хм ааАОААМ АЮ ФІЛО МАМ ХК УЖ МАХ АЖ ПМК АЖ. КАХ ДМА СКМ, АЮ ИЙ КУМ ЖК СО ЛАК ЖК ХМ ЖАХ. МАХ СА ВАМ АХ 35
Фіг. 5, продовження 5) К м хтАБРАТВІВЖОРАЕРЕКСАРВІЕІ УА ссапсвосо со оа гоз сто од осо тов сот совасст со со вав ВАЄ АТО СТ о ПАС ОСО ся хухххххХххХхххХхХхХххХхХхХххХУухХхХххххх уххххххкхххххххХхХхХХхХхХуххХХхХЕХхххХх хХхЕХХхХХхХХхХХХХУХхХкхХхХкхХХхХХхХХхХХХхХХхХХхХХхХХхХхХхХхх ххххххххХхХххххХхХхХхХхХхХхХхХхУхХхХхХХхХХх хХхххххххХххххХхХхХхххххХхХххиххХххх с 12
Ес чУв»Укп овахннНнЕНОИОмвІ.Тикв
ЗАСТОСО АЮ АС ПТО КН СС ТАС Є СИМ СК ОС АТ ОАЄ АТ САС СВК СВО Як ШОК ОЄ се
ХХХХХХОВУ"КЕАтІРОбвбАЗМЕНОчЬТКЕ шеісея тн сн В АЮ ОТО КОЮ ЦЮ ТМ СТ ОСИ СС ТС АТО АС АТ САС СМ СТО ВОЗ СОС ТОК ОСА, хХхХХХХхХВвВУРАТУВвВОоБАВМКЕІНІАТИЯУ дах хх тил ххх мил яв КВК КЕР Р КВ ТАКТ ТТ КС КИ КЕ ТС АС Арх АХ М КВ КІ СТ АСИСТ хХхХХХХхХХПУБАУВОбАМЕІМнНОАІТЕНЕ пекти нн НО ПАС ОС КТ КС ТАС ОСТ ОВС С ОСИ ТК АТО СНИ АК САС САС ОКО СНО АСО ГО ТС ОСА хуХхХХХХХОУгАТРООбАЕМЕІНОАтТЕВ плин жею тет ДАЮ ТО ТАС СОТ ОВС ОС ОС АТО КА АС САС САС ПСО СТИ АС КОЮ ТОБ ОСА ххх хХоевнА Іва хАвІнаві кА ТЕ для ххх селотяк ах я ІВ ТТ ЕТ ТАКТ ОНС К АЛХ СКЕ К СУК САЖХ С ТКО АСМІ КК ТО А
Фіг. З. продовження зіб 320 135 шлю филлиттт ни ттннннла тт лнитинкитлтая у фени лиття вникати тки надто ляти "УЕВБВСЕВНЕСБВАВНААвВаТАЙАВОВ ХХ пса АсААССЬ СТ СС САСПАС СМ КО ОСО ТТ сс пес ес оса то ООП ОС о Тесс со сте "«1тЧНЕоЕВНЕОСБАгААИТАКАХИССВУХ
ТС АТС СС АС САС ТТ ВС Свят СМ САЦФОВЮ ПАСНИСЕР ТИС Кр ОС ТС ДОЮ КАС ЛЮСТОСЮЮ ТОСКК ООС
КЕ
"Інк сЕАКЕ авта кА
ОМ АС АСС ВАСТАСЮТС ТІ СОС САС ПАС СО ОПО ФАК ТС ССС ОС ЛОСЄВ ТРАС КОС СЮ МЮ ЗОЄ СКЮ те "рІкМНнІікКАВЕасбвАЕлАВОТВА ВАНОКУ
ПТС КК С АС САССТО КІС СОС САС ОА СО ОПО ДАЮ КТС ССО ЕД ОО ТАЄ ОС СОС ОСТ ОС ЛК СОС
ЕК
"ЗУЗУжМНЬгГЕНЕОБАЕААВОоТАНнАОВХ
ОСТС АС МС ААС КАС СТ ТТ СС САС ВА САС ОСО ДА ВСЮ ГІС ОК КЮЮ СВОЄ «НЛО ТАЄ СКК СОЮ ОБО ТОЮ ОД СИС с 1151 ихнЕвЕННВООВнагТААВОохАКНКАВОН
САТ АС АМКАС СТО ТИС ИС САС ПАЙ СЬО МІ ЯСО ТЕС КВОТОЮ ТАЄ ОС СОС ОО ТО ОС СОС
Є і І 15 рик ІН НИВА п и и зУусчатзбввоатІвіуУвАВНаХОВАВМВвЯХУЬ
ОККО КН У С АН КС Я СИ У АВК ВАК КК СС Кр КС Є КС КО ТО А СКАТ се
Ус АТтЕІОРОЗІКІУяВАВНАВАХЄМВЕ спе в ос АС ТО (С СО С АСС лаб СТО Є ОС ЕК СИС СЮ ПА ЗЄС СУС СТО КАС АТ сос дУсСУАТЕВЕСсАТХхУзаїаоАВОвЗІВ сим ОС СЕК АК ТЕ НІ С КУ ВМ ВК КОСИ КТ Ж ТЕ КК СК Я СК У ЗАС «е
ПУСсчУАТЗОР"аАТКЕХУВаМараАКЕЕКІЙВ асо юс АС СВК ССО НО ОС НС ває ОТ ТО ОС ОС СТ ОО ВАЄ ОСТ СТО СТО ВАЄ Є ТС сс сусуатауІй?»сатункЕітаАзРВвАВЬИВЕВІА
Є УС ЕК АС І КН Ух с АС А С ТС КАХ С З ЗАС ТК ЕЛ С ОАЄ ТИ АТ сс веУесчатиЕаРОзТІВіУхА КкОАКВЕР
ХНИ КСКІ КУ СИХ Я С КН ХК п АК АКСІОМ СК ЗАС С У С ПАСТИ УС
УК
Фіг. 5. продовження
ЕК ЖЕ
МУАІТООУВВВМІСТОАРОЕТВРХМСКМХ
АТОМ АТ АСК СИВС ВІАКХ СЕК КК КО С АЛЕ АТХ КН АС ЯВИ Ж КС ть АК АК ТА САМ Я ре
МУАІТООУРХАМІОТІВАРОБТКЕІУЕМІ
АЖ ОС АЛ АСК НІ ОТО СОЮ ОП СОС АТО УС ОС СО АГ ТО СА ОО АСВ ССС АТС ТО па Є м «УАІТОУРЕВМІПЙТВАВОБТРрРІУЕХУТ
АТС АТО АКТІВ САС ТИ ЯК ОК СМС АЗС АВС АС ОСА СА МАС АХ КК АГ КК СА
Асе
МАТ УВЕВМІТВАВЕОВТВІКСКІ
АМТС АТ АСОМ САС УС СКМ АТО АТС В АКО АТС ТЕС САС А АТ ОС ВЕН вже
МУАЗРСОУКВВМІВТВАВБОЕТВІтЕКТ
МАТ АН С ОС КК А А СИМ КАТЕ КА п НЯ І АС КК КИ о
МчА1ТтТООУКВВМЕІЗРТВАВБОВБТВІМУВТ наст Ах А МИ ОКСАНИ КН АТО АН АК КЕХК ЖНХ ВКАС Сак ЯМІ КТК КАК КК
ЛКК
15. Зо ма у ЗІТЕННТучЬьВУЄВІ"ВКУІОСКАЕЕ,А
СО СС АВС МКС ВАК АС А ТАС Є СКС ТЕ КАТ ОК АС А АК КК С С АТ А Ал КТ С о нЕЗІТКНЕтЗІУ,ВУВВЗІ"КТІОКАЕЕ А
І АТС АК АМІАК ТАС СТУ СТАЄ С А СОАЯ АТО Я СЕКС КВ АХА ТВ ТТ ія я чЗІтТКкКНМч У пУБтТІРВЕАЕТІА
СЕ ТЕС АТС АОС АВМО СА ААС СТА СТЮ ТО СТЕК ОТО А ЗАТ АТО СОС СЮ ТС КО САМО ОААКЄ ТВО ТІ СТО сс хзіткнитч"БбоУБВіІРВХУОБАВЕКА стат АКА ЛЕСВИ ЗАС ТАС КОС САС СО КА АКА СКС АТС АТОАА КН ТУ СТ сх нНУІТХ НЕТУ УЄПІРЕЖІСБАЕЕКХ
ГОСТ АТ АС АВ САС АВС ТАС СВО НС СТІ ВАС СТО ОМ ПАТ АТС СОС КОС ОТ АТС АЮ ОАА НС ВС КІСТИ їжа к«хітТткКинич хв БвІКУТИКАКЕЇї,А
СКС АЛ АЮ А КІ ВАС КАЄ СЕ І КАЄ ЕКО КАХ АТ АТС ХСН ЕК КУ С ВААС КС КТ
БЖ
Фіг. З, продовження зо що за чого РУЄУВІРКВВІЯЗССЗОМАУВУЖОК
МК о КУЄ СК МС Я ТО С са А СС вк А А См КУМ АЧС Я СЕ ЕКС ОК ЗА зе
ЗВаЕгОРУ ВІК ОІОСООМАУУ ЖОВТІ тОЄ ПОР ООЄ СОС ОВ ССО ОТО СТО ПЕ ПАТ АТС СОС Ам ЗАС АТС СЛІВ СМ САС АТО ОСТ ОТО СЕТ С ТО А ща баров» мамижяхт
ТС ДОК СОС Осо КОЮ тю СТО ТЕ ПАРА ССС АВ ОАЄ АТО САС САКЕ САЄ АТО ОСТ ОТО ОСТ Є ТОВ ЛАЄ
ЛАТКК
Б прУУПпІРКкЗІовОоМА ВК
ТС СТ Є ОЄ ОС О0Ю ССО ОТО СТО ОТ ЧАТ АТС ОС ААС ПАС АТС САССАЮ САЮ АТО ОСТ Я ОСТ ОТО ТО АС
Бек хЕВОВгОгУУБВІвКВІО0ООМАХУРУЖОЕ
ТЕС ТСЕКИ СОС ОС ВОЮ СО ОТО СТО ОТ САТ АН ОС АЛ АЄ АТО САС СМИ САВ АТО ОСТ ОС СС ОК ОАЄ оо чхЗзавРОоРУВІКЕВрІОаОоМАХТУХЩОТ
КС СКС СН ЕКО СИ КН С ОХ КУ КЕ АЛ А С АЮ ВАН АЛ СЯ САКЕ МАКИ АСНМЕСЮКІ С СС КР ТО ОАЄ
АС що мо зло
Пов СПАД ЗК по о ни мех, вахураЕвкЕввАтТЕМ ВОМ
Маїс са са ми А М Ю АМ СКА СС АС САТ ЗАС САС ГСК КТС
ХЕ вм: »"бжІАкіРЕРЬТЕЗ КОМІ
СО АТО АВТ ТО СА СН ТАС АТС ОСС СОС СТВ ОСС АКИ СА САС АСК ПАВЛОВ СТЕ ПАС САС НС СТО КО СТО
ЕКеШУ "мостові
ОСЯ Аа АК ЛРС А СОЮ ТАЙ АТС СЮ СЕ ТК А СА СА ТС АТ СЕАА КК ВТСВ СЯН САК ККЕ СУС КК СУ
ТЕ
"мів тіАВорРКЕВРяТЕВВвОтТВАТВХ
ССО АТО АР ГО ОСА КІ ТАС ЯН ОСС ДОС СТО ССС АС ОСА А ВИТ А Ода ТОВЯКУ АЮ СМ ЄС СТО ОДЕСІ ге
РМ? ХІАКІКРРЕТЕЗККОТБКЕУ
ОО АТО І ТО СА СИН ТАК КС СС С СА М ВС АСТЕ Аа СТО ТЕТ АВ СВ ЕС СР МК СУ ях "МСБО ЕАЕБРЕРРЯУТтТЕ:КСВОКІНЕХ
СК АЛ АСК ТТ КС НН ТАС АТС СКС СТО КОС АКА, СОС МИХ АСВ СТ АК СЯ СИС СІ ЯК С
Уже
Фіг. 5, продовження подив Зоо в в пи и ссхзннавісухУсовецнававпвіЕщеУ В,
СЕС САТИН ЄВС С АГ СТО ТАЖ ОС ОСТ ООТ ОСС ПОС СТ ОСА СТ ОСТ М ОАА СТО ОВС СО ТТ ОТ бо ек зежавнигіІ,хУссОогслАЧСКЕЕМКкАРХМИЕ мас А тСАОСКИЗ КИ СА КТК СТО ТАТ ОК ОСИ ОСИ ОС ТО ОСТ КСА ТЕ СК ОАЄ СН ТТОНОВЄ СОС ТТ ОТУ пдО
С пЕБВНКЕВІчУ аа садЗОоввБіІкЕквемЕї, смів хм ча а АТУ УК ТАТ ТТ ОСИ ЯМ Ж ТО КЕ кс СЕ КК ьо Кана У Се С ГЕ СЯ КЕ со чсЕзВЕВІ уУУСЄССОСсСаААЗОВЕБВКЕЕтНи
ТЕС КИ ОСА СС КА АЖ ТО ТАТ ЯМ КК КИ ТО СКИТ С ЕС ЕІ б САМ ССС КВ ТЕКС се с сесхвнигіІ,уУвайслАзОБЕВНнНЕК
ОС СА ТА СОТ КОС ЕС АТ СТО ТАТ ТТ КТ ОО ВУС ТОСОЄСТ ОСА КСТ ОСТ ПАС ОМ ТО СС КОС ТУТ ОТ баб о пваЕвагіІ,уУуєОосОосАаААВСЕЬТгІіАвАЕМг чик снАО КА СИМ СА АЕС А КИ ЯМ СНУ МС КА п СЕ СКК и АС ТК КС ТТ ОТГ ОАЄ му щу хв) но змі тпІгУїТїІтТмМмсьечЕевРЗЮЬЮВвВЗіВМІО
КТ Ел ас га ГЕ АЄВ Я ТІ СТ ага с Кл лк АТ ІС НЕ АС АІС Ста СИС те со тТеІРрУхтттімМмесамЕВЗВО»БЗОкМіІВ
ЗО ЯМИЗАТЕ ОСА АСА АЄТ АСТ СТЕ РО Є СТЕК вАЄ ТЕО СС АС баю ВАЄ СОЯ СТВ СТ СТВ СВ АВ СТ ж тбвІХхтТттТттІМабМнкЕх:впрввівіхмі а
ЗИМА АСВ ААУ АСВ СТІ АТО КИ СТ КС АЛ СТ С С АС ба СА СКС СТЬ СОС ТИ СТО ою тп Уи(ІтТттТтемМаОокКеЕРвЕООввувоВМЬо !
АКТ СКАТ СС СИ аа АСУ АСК СТЕ АТО КОС СТРОЮ МАС ТС СОС АКОТ ЗАС ПАС СА СТО СТ СТО СОС АТО СТО сек убір ЕЕТІіМпаевВвОорІзЕмМіІ
АС ОС АТТ ОСА КТ АСА АС АТ СТЕ АТО СЯ ОМС АС СТУС СОС АВТ ЯЄ ОАЄ СА СТО ТСУ СТО СОС АТО СТЮ де тет мМмсеьОочеЕвЗ0ви"зЗвикМио
МІК АТ ЧІВ АСАЯТК АКТІ ТЕ АС ЕНЯТК НИ АЛКОСКУЄ СС АСК АС ЛАСЬ СО БО СТО СКИТ АЛ ТЕХ
ЕКО
Фіг. 9, продовження
ЗЕ ККЗ Зх
ВНУ уУАУвКкаїЇііАВвСУВЕНСНИХЕ
А САТ СС АСК ЦТК ОСА ЛАТ ТАТ КИ СО САТ АОС СВУ ОСТ СКИТ с Сх СОХа КГ АТ сет
МнНатТУччАМНТУАХУВКарв,іАРОУАКЕОВВК
МСАТ ОК А КО ТАТ КА сь АТ ЕНСА ТА ЗАКЛАВ ЗАС КМУ МА ГУ СВУ ПЕ СС КГ ОАТ АТ
СЕ
МНТУ Ат Ах» АЗІЇ а Ес КАК
АТО СаЖ ОС АСТ ОТО ТАТ ОС АТ ТУКА СТА ПАТ АВТ ВАЄ СТО ТО СТГ ОСА ТТГ ОСТ ОТО СО ТТ ПАТ САТ сої пПипдІЧчЧ ААУ АЧУВКАРПеВАБЧУЮУУТВВЕ
АТО САТ АСК ОТО ТАТ ОСА АЖ ТАТ ОСА СТА АТ АВМ ОСТ ОАЄ СТО ТРТО КОСА ОВТ ОТО ЄМО СТЕ ПАТ БАХ саї
МНОТУУАМТУАУВКАРЬЬАБКаУКРВОоДТИ
АТО САТ ОС АСТ ОТО ТАТ ОСА АТ ТАТ ОСА СА ПАТ АОС ДАЄ СТО ТВО СТЕ ОСА ТМ ОСТ ОТО СО ТЕ ПАХ САТ
СЕ
ММ кі жкА МАТКА го
АТСАКОСМ АСІ КИТА ОСВ АХ БАХ ЯК КС (ФАКТ ЛА СК СНО СТО ТТ СТ САУ ОС сЕМО ОєЮ ТЕТ СЬКІ Ж
ХУ
КО КК
У«тТокКІЕхкК аа АКкІУУнНнВВІВвпАВБКЕцчИМ сб АСАСИ ААА АТТОАЙ ОСТ ОСА Є АОС ААУ ОН САС АТ АС АТ ЧАТ ОСА ОСА АЮ АТУ ПО ЛАЄ
АС
"«тТОКІАТАВАЗКІУНІВІВВАВІОСКМ
СИ МОСК: АХ АТО АЮ ОС ТГК ОСА АС АОС ТС ВАЄ АТТ ОТО САС АТЕОАС КТ ОАС ССА СЕ Лі АТ СОС А
Ал "ТОКІВАРАЗКЯУКІУНІОТОВКАКЬОКМ
СО АК ККЗ А АЛ АОС ТК СА ЛИС ЯК ТОЮ ЛАСЬ ТС Су АК и АТ АОС С ННЯ АТС ал
Аг
УкаКІСАВАВЗЕАЕВКІЄНІВОВРТАКІССКК «НО АМС СК АЛ АТО АКОТ ГИ ОСА АКО МИХ ТОЄ АМІАК ОБО САС АТЕОАС А ОВО ССА ВСТ ОМ АРТЕК КА
ААЄ
"«ТтТОКІВАГРгАВВОКІУНІВІВРАВІСКУ
СИ АСС КВ ААА АТС ОАЄ СЕ ТК ОСА АЮ АНТ ААО АТ ПНО СВО АТТ ОАЄ АТ КАС ССА ВС ВАЛ АТЕ КС АЮ за; "«хБКЕІЕАВвАЕИВаУКІУНІВІВВАВАКИ
СТО АС СЮ ААА АТС ШАСОЄТ ТЕГ ОКА АОС АВО ТС ААО АТ ОТО САС АТЕОАС АГ ОВС СС БДСТ ОА АТ КИ ААО
А
Фіг. ч, продовження
ЗЕ кро кю пла жа КАНА А НАТО ЖАКА ЖАКА В КК Я КАКАЖ АЮ АХА Я АКА АЖАКАХАВУ ТАКА АККЕЯ фл А ЖАЛАА ЮСТА Х каоЖнУкІсАВТЕМЙАООВМА,аТтТТ
АР АХА САРІ СА АТ ТЕНТИ АС СТУ КК ГКА САС НЄ ТК АКТ С СТУСА СА СА ВІК АКА
АКА каорнУузсАвУккаовмак,сМмиИихякАх
ААУ А АТС ТАТІ ТОК АЗАКЯТЕ ААО СТЕ ТАС ТАТО Ста ТА АК ОВО АОС АяА
СА вовна УхіА МОВІ МАХМХИаИВКкА вок С СА САТ ЕС КС АК ВО ЯН, АХ ТЕ АІС ТІ АН В АТ ТТ А ТА ААТ ОК АС КА псА й кана саАвВвУкКІіАОМАЕВНИВКА ма А СА СВОЄ ТО А ТЕ ВТ ЕМО АКТ Ам КЕКС ТА АЮ КОЮ ТХ ААТ СВ А А ААК КВ АОС АВ са кахнУВсАвпУкКАБЕССІМАММОЯКА
ВААС САТК С ТАТО СА ЗАТ С АВС ОС ТА СМІТ АЛІ КЕ ТА УТА АКТ СК С Ах їжа
КОНУСА ВО ОіМААОМОаКкКаАи
ААЮ СВ СТА САС ТО АГ СА ЗАКО ААС КТК КТ СИ ОО о ВА ОСА ТКА АКТИ АС АКА
Са в ЗА 3 ові они ис панів іонні стіні інн пінні он пн інн пінні нів повні
КІЗ БЕХЗзАКННКІіВОВКИКВВІвКИе
АКА АСВ УТ ТОКАР АК ОКА ТЕЖ СА АК САС ТЕКА САС САС АС НЯ АС ТЕТОССТ ЕС ТА АА АСТ
ТЕ заобопвБарРенкЕкіовавдкникевіаекКуе
САМ ОСА МІУ САТ ТТ СОСКА СА лм ОА ВАТ СА СМ ВАЛОМ ВАЄ ТЕТ ССТ СК А СНЗА ГО АС АСЕ
КК шен ШЕ кме М СПИ ЗД СВ В с З ЗНУ ВЕ В В СИ М М З С ЗНО МИ Я
Сай ик АТ КЕКВ ОА ОСА ВАЄ КМ МО АК ОЖИХАЮ АС КН АС ТЕКСТ СТАС ГТ АВ А чт зобов?" нкКЕБвОовКВКЕРЕгКТтТЕ
СААСАСКОМ СТО СОАВКТТКОКИ СА КО Ме АСК ТО А С СА АЛ АМС ТКУ КТ АТС Ам А
ТТ забвіопвЕИвкжникеЕ,воаакКкКкКевЕкте пах сАКИУЄ СТ КАТ ГКУ ОК А КВ КАЄ АЛ СА Є ТС КАТ БАНЯ СА ВАЄ АОС ТК КТ ШИЯ УС ХУ її зп с?» еко кКЕевнвіарРКТЕ пААСАСЬКСКУК СТО КАК ТТ СС НІ САС АКА ТО АТС СА АМОСОВА А ТЕС А У
Ж
Фіг. 7, продовження зб «за
ЗчЕБЕІЕлІРахАІОХУЕВЕЇТКкОБВА АТХ
ТМ Со ат АЖ ОСА ССО САА ЛАТ ЦЮ АКТГ ОМС ЦО МЕС СБАК ОМУ СТО АССЬ А АКА АТС ТС АТ СЮТЬ геТнй
СОПЕАІБРптАІОХЖСВЕТКОрАТІАТОМ з АОС АС КС СО АТАК АС АКТА СТАТ ЗАС ТО АСА АВАЕМИХК ОКО АТАГТТ ККУ
ЕСКНИ пПкАдівк" ов АІИМІ ЕТ КкОВА ЕТ ВУ сієтЕ ьься СС УТ СС СС САМ ТАТ СЮ АТО СА КУТ СТО САТ САС вл А СК А КОЮ АЖ АТТ ОС АОС чт ска УАІСУВЕТКИавАІАТОХ пом пак АТО ТВО сСАТАТОСТ АТО САС СТА СТО ВАК ОА СТ АСА АААЄВЮЮ ОА ОВ АТС АТ ВОС АС Юм ст
СсСЕЗІБТОХАІІ" ДОВ ТКкОВА ТАТУ
СО ОА ОСС УТ ОКОМ СА ТАКОЮ КТС САН КУА КЛ САТ САМ СТЕК яв, АльА СИ ЛЕ КАТ АК АТ ОС АОС «т
ЧчБАБкРРВ Уа ВЕМТРТКИаВБАНКІвТтТК ес СК І КК у с А СКУ АВ КАТА СОИК ОАКЕВИТК АКТІ ми СИ ЛЯ КК КІ Я ГЕ КИ А
З
БІ БУС я сон чМжАА ЧОТУУТУКИРОАО ЖІ ВвВаєйо спек САС САСЬКІЯ ОЕМ СА СА ТАТ ТАС АК ТАС АСК СА СЕК СМ ТОМ СТО СТИ СХ СТЕК ся
ЗОНОоМкнАЛАОХУХХІУЕИННОКІЗВ ОДА сопел СагсСАЄ АРМ: ЕТ СА ТАТ ТАЄ АТ ТАЄ КЛОН СОСКА СОЮ Сак ТОЮ СВТ ТА ТОС ОККО ЦЕ оса
Гек ще: ШЕ АН Я З: М: А» МВ В МИ З, Я З В З З У У п в ВЕ МЕ Я
ТБ АК КАС ЕХ ОКХ С КТ С АХІСКА С БАЄ АС ТАЄ Ап асвеух КК ся ЕМКОН УК
СА зонамУазаазахуУтТтЕКкР.РНОМХЬЗУнОВОА
СНР САСКАТКАМ АНЯ ЗЕМ НСС КК АКТА ТА АЄТ ТАЄ АСК КК СОМ ВМ ХУ НИК УАНМ СВІ ТОК
ОСА дано АлажутТУхЕиРВОКУіяЗЕСсЬОоСА
ОО САЦ САТ САЕАЖОЬ НОЮ СВ ЯКЕ ТАТ КАЄ АСК ТАЄ ДАК СОСНА ТК ТО ВК ХА ТО СВХУ УТ КК псА с ПЕ. ношжАА сх жу ще Я ж кі см АК Сак ко оз т ках Ка а а ра АК КО СТА КК АКВА КМ с З ХУ оса іріг. 7, продовження
Я ще З п в р в в ває паллЯавАЕчАВВССЬУПІВСспВ кож Кг ро СС СОСКА СЮ КОЮ ОТ ТСТ КО ОСТ АЗИ ОСА КК УС АХ ОТРИ КУЄ АТ АТ СВ ОА
Кт
МОСС пава ААКМ ВО ХУ ВвК
АТО ОА КІТ ЦОЮ ТИССА ОСТОСА СТОЮ ОСТ ОСТ ОТО СКС лАЄС ОС ПОТ ОТ АСА ЗТ ОТРОМС АТТ ОАТ ОВ дАТ сеї
МОБавАААваАаАчУАВЕСУТУУВВІВОСІВ
АРОСМЬА ТРУ ОО ГО сСА СК ОСА ОСТ ОС СТ ОСТ СО ОС АС ОСА ПОВ ЖІ А ТЕ СЛУ ВАЄ КК АТ ЦО ПАТ
ЕЙ псосв:зовпвлАлаАаАвахчаАМІОоУхУХЧРВІИАЮвОИ
АТО НА ТЕТ КР; ТМ ОСА ОСТ ОСА СЕ ОСІ СТ ОТО ОС АВС ОСА СК ТТ АСА УТ ТТ САС АТТ ДАТИ ВАТ їх
ШОЕ пав АНРОЗУТУВрОово
АтассА ТІ ки; Ти ОСА ОСТ САТ ОСТ ИСТ СОС вас ЄСА ОТ СТЕ АСА ОКО ШТ ПАС АЖ БУТ ОО САТ ої
МО ЕК ТА вом кА МОХ М МІ УК
АТО СОВА ТК СКК КН ОСА СУ ОСА ПОС ОСТ ОСТ ОО ВАС САЛЮТ ОК АС ОГО СЕТ ПАС АТ ЗАТ ОК ОАТ сої
Б Ук ве сення нет тн ши тА тет твіст но Ди и КВ КАТЯ МВ АЮ АКА АКА КАК Я АКА А ЖАТИ НИ «ТЕМНІ ЕвАіІВвВІВкіІгУукУМУвННВУ
ВО: Є АК ААС КК САС ОА СВК СА АТЄ СОЮ АТ КАМ ва ТО СК ОВК Аа СТО АТО КОТЮК
АХ
ЗЕ ММ ТАЦІ МІРУКУМІДННО
АБЕС СО АТО ААЄ АТ САНИ КО СЮ АТО СОТ АТТ СМ ААС ТО ОСА АЛ СТЮ: АТО АКА СТЮ да я сла хм ОАЕ ЕНЬВ"УЕЕУМІВНМО а ТЕС КС АТЗ АВК АТР асьсеМУ КЕ КТ АК СКК АХ ак ВАС С СЯ ТІ ОМ СКК КЕ А» ТА АВ с
ЗЕ. МиХІ0БЕкКАБСБЗЕ ЕМ РУКУМІВММНО
АСК КІ СВ АТО АВС ККУ САС МЕ ТУ СО УЛ АТО ДГ АТ ОО ЛАЄ СТ ССАСЕЮ АЛ ГО ТО ТА ТО ЛА ААЄ
САКЕ
"БЕЗ МкІВЗВЕБАСІВІСМЮрРУКУМІМНО
ЗЕ Є АТО АВС АТ САКЕ КРАЮ КТ ОС СТЕ Я МО ХУТ АКТ ОА Аа СТ САТ оо ВТО КТ ТА ТО А ААЄ кед
ВЕНИ З ВЕ М м З З ни ЗЕ ДИ с и З, с ом в З ШЕ МИ Я М ШЕ ФО
ТТ Є АТО ЗАС АТЕ ПАСОМ ТО ОСС КО КТС КУТ УМ АВ СН ОСА СТЮ ААО ТО ХТО АТА ТТ ЛАЄ ЛАЄ ся
Фіг. ХУ, продовження 55о МЕ німе ОКО КЕХКАЮКВКАНТУУСИЮЕЕС
АЙ ОПЕК АТО СТО НО САА КІ ПАСА АХ КГЕ ТАЄ АВ ОСЬ АЛЕ НІ ОС САТ ТА ТАС ТОНИ ВАС УСЮ СА че ксмУ"пкІвнНвЕУКАчЕзНнІх ав
САТ СТОПА УВО КИ САС ТОЮ І АТ ВИ ТЕ ТВ АВС АМІ СОС ОС САЄ АСВ ТАЄ СТГ ОС АС СС ОА
ЕЙ пнІЗнУУОФЕВВ"хАМННнНАЧТХХкОМРеИНМ
КАТА АЛЕКС ВИ КАЛ СЬАТ АМО ТТ А АМЕОІС ВАСІЖНК СКУ СК АКА АС СТ АСК А АВ,
Ам нон кепки икАНКХЯАНТТч СК
САТ СТО ОА АК ОЕОНОТО СВ КОЮ МЕ ДАТ ММ ТТ ТАЄ АМС ВАС СІМС СЯЄ АКА ТАС СТЕ ЗИ ААСОГА ВАЛА
Ак нНеОМУ«ОВОВКЕУКАНКАНТУГОЕМХРБМ
САТ СТО ОА АТО ОКО САС ЯН СА АТ А ІТК ТА АЖ ХНИ КАЄ СКК ОС САС АКА ТАС КТК ОС ААС ОСА ВАХ леж амеби ЕУЖКАВКАНтТУ сек
СКУ СТО КА ТО ТИ ОТО САЄ ТИС ВАТ МОЮ ГУ ТАЄ ля СС КАС ОКО ГИ САС АКА ТАССТТ ЛАЄ ОСА ПАХ
З БК ЕІ в ин о ен и п о п ну
ЕВРО) ВУТІАКИаЕМІАУВУТКАКІЕ
ОСАЙ ОА АТА ТАЖ ОСЬ САТ ТТ ОТО АСУ АТ ОСТ Ам ООО ТС АВ АК ОС ОСА ОТ С ОА АСА в ААО МК пла
ЕХ УВУ ТтТІЕАКСИЕМУГАЧУНМТККиВЕ
САКЕ АЗК ПЗ АТА ТАЖ СПА АЖ ГУК ОК АС АТТ ОСТ аААСА ТЕС ЛАСТІ ОО ОСА СТ СОТ СТ АК КАЄ АВМ МО паА
ЕЧБВБІУ"ЙПЕУТтТІАКОХМУРРАУНЯУТККЗЄ
ОА АТМ АКА ТАТ ОСА ОТ ТЕХ ОТО АС АТ ОСТ АААСКІВ МО ЯАСКУГИ ОПО СО ТЕ СОТ ОТ АСВ во ВАС АОС
А же ррЕраАаБоЕММ У ВпАУНУТ КК ВХ - пай МУК мМо ТА ТЯГ ОСА АХ ТУТ ОТО АС АКТ ОСТ АВА А ТТ АС ТЕС КИ ТЕ СКК ОТО АСО АВО А АС пл
ЕХБІУРОВБУТРЕАКаЕХУВВАУВУТЕКЕЕ
ОАСАЮТ ОМ АТА ТАТ ОСА АТ ЕТО АСО АТО ОСТ Аа а ТТ МАЄ СТЕ СОВ ОСАД СК ОТО АЮ ВО Ал АЮ пд
ЕЕГ УВО ЕУТтТЕАКарнУРтАХХНУЗККВЕ дж ЗАС АТА БАЛ СЮ С ГГ А АГ а КС АЛ КЕ САКЕ ХУК СИО я О Ех АК ца
Фіг. З, продовження
СН: й жи пн нн а а а а "ЖаввіІЖКМЕЕТЕсВХ Коннов У
СИ СК С КС пвх Ах АТХ СТ ас АСТАХОВА С ОО САС САС СИХ САТ сві сРАВнІХКЕМЕЕТнсаехІ СО жЖжеРБІвБиУ
КС АС СА ОСА АС ЯН Ом АТО С ОА АС ЮСТА іо КА ТАЄ ГК КБ АТ АТС АГ ОЗ СС САТ СО СА СЯ сх хтал,іжжкиМХЕтРСИПРчЕеІУнЕНУ
С АКТ А НА АЛ ОВО й АТО СТЕ КА АВ ССС ОА ВА ТО ГА АТС АТ СКС СКК СА АСК САС
ММК
У тАліккКнІквугагх кв чУвнакн
СВІ АКТ ОСА СА АС А АЛ АН СТЕ ЛАН АК САНИ СКАСТАЄЮ ТУ ТЕО САТ АТС АТ СУТО СУ СТА ПАЄ АЙ САС
І
"У«таАаАдІКкМЕБвтТВавУ ОК еЕнНнаЕВНУ
ОС ВИТ А СА АТ АН АЮ АНЯ ЛЯ Сіли КС САЛО СА ТАЄ У БУВ САТ АС АТ КИ С СА СВ КАСА с "ча ІЕМ ЕТгОовУССВВТІУВвВНОЕЯУ
ТАС СА АТС АС ВТК СК Са АС СС КК АТС ТО ТО АТ АТС АТО СОС СА Сл СА СТАЄ с
ГКІ аб п п а а п а пкІВс:СсССАТЕВМІЦВИНКТВЕВКУХ
СС АТО КАС а А КК ССА ТКС А АсАТ ВОСКУ Е КК ха с лкня АЛЕ КУ КАТ унНМЕІвБооАКВвБКкИЕМІМЕсвьсКХКВ
МЕТ АТАК ККУ ВО УК ККУРОСУ КЕГАЗ СА СЗУ КАСА АКТ АК АС АС ТС ТАЄ
МІВ ОО ЕЕХИМІМКЕ СОВОК
СКОТТ АТ АД КС АК СО ОХ ОС ГТ АВС АС ЯКА АТО КАС НИ УА СИ АС АКА ТОМ ТАЄ нова мМмІнНЕСоо и
СС А АС С и ОК ОК ОС ТТ лем и ах АЛ АТО СКМ ОЄКІ КЕУУ еК А ТСК ТАК с»кМІІВВОСБбсгКкКИаВщМІМЕСОВОВВ
ЕН СЯ Ах АТАК ОСЕК ЕТ СК во КК ОХ АЛ АЛ Я АКОЄКК СА ОК ВК АСК ТАС пМВІВЕКсКААБКВММІМЕИХЖХОКО6ЙЇХ ВИК
УСС АТАКА ВС ОК КАК СТ КТК Ал ма я АЛ ЛОВ ЯН ОКЕИ САТ ОК ли АС ДК ТАС
Чт. 10 «укркунаа пить МК. З відпетруня: кмнноквсих кокопзнкиметь ЗЗХЕМИЗ То
Ка ЗК СК пута АБВМЕВНОАВТНИЕВ
КЕБАЦЕКЕІНАКНІ САС СС ТАС СКК ВИС КОС ОС А САСВАСАС САС ССО СТ АСОМ чічткннІвЕВ:о0ЇвАавЕААВчАКАВНВЯЕ с АМІАК АКОТ ВІСІ КАСКИ ІУМі КЕН АСИСТ МОЮ КО ТАКЕ СКС СК ОН КН ге пПУпУАТтТЯЕОВЧАТНЕХВА КАВА
СОС ЕН ЕЕ В а ОС СО ЕК ОАЄ АСИСТ СО СТУС ОСС СВТ СОС СС ВАС ТК А ії хи: АІТВСДОУВвКАКІСТВВАРОВІВМЕ
АРОК АС АК СИН С ШК ЯК СК С ЯК АЕС МИ БАК КК СА АС АК СК АТАК ДАО
ВК І кЕВвІТКкКНнНичІікОВВУБОІРДВЕМІОнкА ВРХ
СЕ НК А АЮ Аа МИ АСТМІ сх ХЕ Ке бля ЗАЛ АК С С С АЛ СА ОКА КС ВТО СТУ
СА. вЕЕбпвроавіввІнквоасамАКВУ
ТОЖ СИ Зс Ке со пЕ тО ста с АТ АТС А ОАС АТ КАЄ САС САС АС ССТ ССЗ КС ТК ОАЄ "М:ЕРОІУ1ТАКОВЕРРЗТЕХВЕОУБИЕК ес АТО а ОСА ОС ТРАСА КВ СКС С Я ВА СА СКАЛАТ ОА КАС ОС СУК СКК СТО ст
ЗЕЗзВиЕгІуУхоасйослацйквВікЕеЕемА
ОС сАСТСВеВ ВНІ БТ ЗУ КИ сою ОК ст них ек АК КМО Гу СХ І ТКС А сту тТОозТеЕУтТтТУЇВМоОоМмеЕрРАрОВвуз | АМІО
АСУ КЕ СОЯ ОТ АСА АЄТ АСУ СН АТО ПОС СТЕ ПОМ КАЄ СС АЮ МАЄ ОКО СА ТО КОТ С СО АТО ТІ
«Ку тріг. 10, продовження
МНОТУУАМНУАУВІАВЗ С ІАВвОчУОогВОК
ВИЕСАКОКВ А І ТАТ СА АХ ТАТ СКЛ ТАК АК Ж А СКОТТ МС САТ КНУ КУ ЕКО ТЕ ЬАТ ЛАК
ЖЖ
"тек Ех АК КІЕНІОВОКІ тА КІМ
СТО СТО Авя АТС ОАО С КГРШСА ЯКЄ АС ТС я АК ОВ СА КТ АС УТ С ССА ПІСТ ОА АТЕ ОС ла
ЗАС кОРичіІсАвУКі Об ьнНОММИаЕки
ЛКК СА АХ КС ССС А ТО СТА ПАТ КТ АК ОСТК Я ТКА СНІ СК ТТ КАК САК СТА ТА АК УК ли «са собів УНнКЕВ ВОК ЕКсТІОкРКАІЕ сААЄАО ПОТ СТАТИ ОСА ТО САС АМС КМЗ ВАТ САЮ САМ ААМ АС САС УТ СТ СТА ОСА ЗЄС ААО СТ, тт сЕЗІВНвБО0АТОМЧІНВЕТКкОоКкА ВАТ
С ЕМВ СЕК ТО МО СЕ СА ТАЖ КІТ АТС СВЙ СТА СТО САТ МЕС АКА АВ СОЮ ПАЮ КИ АС АТР АС КТ ст
ЗОН жЖлААСТУчТУКкКкРЕОЖІх ВОВКА сир СЯ САС АВ АЛЕ ВОС ВО ОСТ СА ТАТСЕАЄ АСТ ТАЄ КАЄ СОЮ КСВ СОЮ СВО ТОВ ТИ КТ ТО УСТ СВІ ТК
КА вчу оі?"вйадАачллАаАУАкптсУТУУКЦВЬИВСОТВ
Ісак та са ОСА КН СС ТО АС КСВ ПТ АС РКО ОС КУБ КУ ОКХ а су хх мММнРіОБіАІЕВІВнНІЕчКкУМІМмАЙ
ЗЕ ЕК СС АТО АЗС А СллЮ КТаИМТТО АЛ СКАТ САСААС СС ОСЬ С АСОМ АТО АТА ТЕО АМІ АМ
КАМ
ПІЧ" МЕВВКЕХКАНКНКАНТТУСОМЕЕИ
САТ СТО ПОА АВРОВІОВО САО КО СЬО АЖ М ТТ ТАЄ АЛ ПОЄ ААТСОВСЮ САС КАСА ТАС СТ СС ВАС СА КАВА
ААТ
Ес ВІУзОгУТІАКСОВУВвАчКУТККЕНЬЕ
СаО АСЕАН ТА ТАТА САТ СТО СС АЕ ЗСУ Аль Ол ЕС АС ТК СА СА НТ ЕХрА УС МО ВАС АЛ пла
Фіг. 10, продовження "тААІКЕМОВЕТУРСОВТУБЬВІЇХУРНОГИУ сТС АС САС АВ ААО ААГЕ АВ Є ОА АОС ДОЦ ОСА СТАС Ю ТУОЕБАУТ АЛ АТА ОТ ОС САТ САС ЬМЕСАО
Сх є. МІВ АВЕКВМІЕСОпПОВКТХУХ
СТО ЕСТ АТО АТС СТА ЛАСЯ ОСТ СКС ТС ЗАС ДАЄ АТ А ОВО СОЕ ФАТИ БО АЮ ПОС КАЄ ТОМ
(ріг. 11
Злеукея пимхвілмвістк ДЗ і зевелічаи матка миохллнністє Ге Ма 1 й
ВкО їООхЯ оУгахвковсовамнківновиьтТкке
БЕК ЕЕЮМОСЯ Се Ти ВАТ С СС С ТК АТО ПАН АТО ПАСМО СО СТ АСОКК ТО СС «ІМУННА Т ант АНАКЕН
ОА АОС САС СТО ТИМ САС УМВС КМТ ОК ТЕ КН НК РК КН КАК ТИС ОВ ЕСЕ ОК СС що веЕУсч"АЧкРвА ТВ чААВАЄВОВЕІ
БК КИ: ОКУ ях КВУ Є ОК Я С ЕІ С АСУ А В ОС ОТ КК КИ С а МТК ТТ С ва ОС ОАЕ
ГК: вУуздіІітапаУпиИВмМіІТвАвКОИВХвРІМКТт «КУКУ КУКІ МЕ АК КК ЛКК СА С КАХ КД КЯЮХ АТО АК ЛЕ вкла кА МСЕ С СУК КАК я А КАЛ СЕРЦЕ см КУ
УСЕ е:зіІітТннІ,"еЕУ:ВвІРЕВВІБАЕВЬХ
КО С АТО АС АКА АРК ТАК ЯКО СУС КУ КАК УТ СКАЗ А АТС КОС МН АС СЕ СКААА СОЮХ ТКС КО СТИ
А зопквппУУтвіЕГПпІЗзОобМмА МРТ
Те СЕ опе СК ЕН Сх КЕ Са ОСА АЛ ОК АС СИ АС АК ПК СА СТЕ КЕ А ТЕ С ЕК АХ
Ас м: жи З В с а В а КО з ме а В М В З ЗИ я ЛВ ЗИ В КУ
СОЛІ а КЕ ЕСА СМЧО ТАС АТ КМ КУ ТЯ СК ВАК СА СА ТЯТЕ АТ ЕВАА ТКОАТКК СЕЛ; КАВИ СЯ СТІ с
Дом в ИН МИ м З Є З З Є ЧЕ и С ЗИ ЗО СМ ЗМ В З
СС я КА САКЕ КК АК СО АКТ ОК КЕ СК ТО КИ КА КС СКК СА АХ КО СК СК ЕЕ КТК СМ
СЛ таж ТТ массамеЕввіІрРІМи
АЦТЕКНО АКТ СКАТ ВКА АТ АС СТЕК АТО СВІ СТУ НО ЛАЄ СТЕК СК ЯН АЮ МИ КА ТС ПИК СУКИ АЗК
МИХ
Фіг. 11, продовження кЖкнаІУУАВНЧАВкКАВІіаКЕОчУЕЕВК
АТО ГАС АТС ТАТ НУ А ТАТ СС ТУ САТ ЛЕК МАЄ СТО ТО СУТ ГКУ ах хо ОСТ А САТ як "ток з:АБвАаАзНЕКІУМІВвІВвТАКісКК с І А КТК АК КС ТЕ СА ВС АНЯ ТОЮ АКА САС АКТА АКТ АСЕАН АКТ КН ААКЕ ас
КОЕНКХ',САОПОКкІ вва ВОМ аАБСАЛОСАЄСАТСВ АТ КА АХ ОТ АСОМ М Я САС ВОК ТКС А ССЕ СКА ТА АТО АС А
Її сво вокЕЕс?окпнЕБбЇВпадКкКЕВЕРВКЕКІ
САй АСВ ФС СТАТ ТЕ АК КК СВ а сь ТО СА СВО АК АС КАС ТЕТ ССХ СТА СК ГІС АС АС
ТЕ каз" ох,» ЕЕТЕОВІКИх
ОА КИ Я СК СЯ КАТОК АС СОС СА КО КЕ СЕЛ СЕ АКА ан СКК ОА ЕХ АТ А КК АСК НКУ
ЕТ саоноМмивАаАвпхучУтТкАвЕвйм: Віа с СА У С АК ОК КМ СИС Са ТЕ ТЛА АТ РАЮ АД СЕК СА СКМ САС СТАСКСТ пСАОКСС ИОТ5 СС псА
МИТА Аллах АмМРохТтТЕ кп тя КТК ТТ КАНАТ КС КН КУ УК КК АСОСЯТА СЕУ ТЕ АСА КЕ КИ КЕ АГАТ ОК АТ
Зх МХхІіОБЕБАГСІіВІВкКиТУКУМІИВНО
МСГ СС АУП ААС АТЕ ПАС А КТКЕ ОН ГО АС СК АГ ОАЄ АЛ СЮ ШСА КИ ВАСЬКО АЛ ТА КП ААД ЛАЄ
КАХ
Піо мМУч"ОхІОЕУКАЧКНАВТЕХЕОСОМЕВК
САУСТВ СА АТО ОКО САС ТО СЬО ОТ АЮ ТТ ТАЄ ЛАС СОС АК СОС ОГО САС АСА ТАС ТУ С АК ОСА ВА
Кл з з З М а Р в о З Я ще Де УМ ЗЕ ШЕ СИ СМ БЮ ЗА З НЕ Я
ОСА АЕС УГА АТ ССА АКА НИ АААА ТИС АКТИ КСВ КА КОКО А А КС
Ах
Фіг. 1, продовження
УутАчлІККМоОБТВОоКЕкЕБВвІ1ЧУЧВННнНИКИХ
ОМ Ар ОМА Са АЖС АХ ААО АТО СТЕ ПАЮ АС СА КО ОСА ТАС ТУЮ ТО АЖ АТС АТТ ТС ОО БАХ САК СА САЄ
ОЙ
БмМмІВкапвчЗЕКВИІМЕСССНЬКОВУ
СТІССТ АТО АТСОСА АС ОВТ ОСТ АС АС АТ АВС АТО ПАСКУ АКТСЮС АС АССТЄВ ТАЄ
Фіг. 19 дз: ЖК тей цноя (СТИ ТООСАССТИОТК ЮК САССААССТО СТОЮ
ФМ: СЕК Тевфі ФМС ГЕС ЕСКМХ ТОК НА ХЕ АП АК КС ТЕСТ
Лв СЕ Тева вет) бажав КАКАО СТЕ
Узанахьн. тої. ОМС НЮТСЮСАССТОЄИС СПО КМ ЮСАССААМСТОЮТСТОСИСЮСТ м МЕ
АР ООВЕ Теж їі Се Я АТ САТЕКСАТВ ОАЕ МКС АСВХ ліва БЕ Теж СА ВОК САТ ОСА ТЕП АЛ СО СС АТСАКСИНКИНИВКОЮ
ІМ ОВЕ Те! ВИСПСТОАЄВСТ ТЕСТОВА ТОСа КОСА ТИТА КСАСТ СЯ ОО
ЗУулеварьнь. т. дис ПАСОСОСТОТОВАСІВ КАСА ТО С АТС АСК СЯ 153 їЖї
Ма як тей ПОТОВІ ОАТСВСАСЄК АС ОС АСК А ТАКО
МЕНЕ Теві ОеБ ТЕО пеССАТОУ ТКА АТОСОТ М КАМИ АТО
АВІ СНЕ Теві ОП ЕССОСВССОСАТОКТОВСАСЗО АСВ ГОЛОК АВАСОСОСАТАНО
ХЖавгальостійї, СПУ КОС ТАТОАЗСКВ КСВ ТО КО АПАСОКЮСАТАКИИХ в Зх
Ав: ОшЕ Тед ПЗ АСИСТ ОС АТАКА ОКАСТАССТВІЮ ОСТ ЄМО ТОЮ,
ЗІ ОКЕ Тем ПХТ АКТІ ТЕТ ОСС,
МБ ОВ Те ах сАнСАСОСВС ТАТКО АОС АСТАЄСТО С ТОСТИ,
УВгвнЕм; яв. ЗИМ САС САТ САС АТ АЮ ТОК ТС ВАОСТОСА з
АВ ОВК Те СОТ ОЗВАТАМЯКТ ХНИ СА ТОПАССВАСКСК ВТ КОСА КОСИ дО ОВК Тезі ІЕОПАКАТОМОСОВСМТСАТОПАСОЛАСЮСТ СТ ПТО АТС дві ОЖЕ Тв (СМП ОСАТАТОСОВОВСО САТ АКА СТ МОСТОМ СОС НС
Жака. ВАК. СВІ САТАТКК ХУ ИН САТОСАССЬВАКМК ТЕ СТ ТОК ВСАКТЯВКС
Ж ЛОКЕ
АЖЕВЕХ Хеві СИС ОАЄ ПАТА ССС АОС САКЕ АСЮАЕ ТС
АВХ ЖЕ Тов ІВБИОСССОЖИК ІСТОТА САЛА АНА СМІСАВАТЕ
АХ СКК Ука? хін ТАТА ОСА АНА ТАТ АЕН АК
Зевклиив. Тв, пзросссики ик ТАТА ОССАМИСАСАТОСАОСАНСАЦАТО
Фіг. 12, продовження хо З 1 КЕ Те інки Ка ААУ КИ ЛЕКНЛАТИКИ М КИХ діва ОВЕ Тез виз естунюс и САСОСОДАТИ ТТ ТВОГО ТАСАТОМССКИ інт СЕ Тоні ІЕНУ ССО АТС АСАСИС СОТОК ТОССАОООТАСАТКЮЮ уж. тим. ГИ ІСУС КОС ТО ТС ТО АССКВАТІЗ АКТ ТИСА зв зав
АВ ОКЖЕ тей ОН ССТОСОСВАОССМОСАТСТАСТОААТО СТ ТО САОСОТОСТОСТТСЯЮВ іш ОК Так (В ССТООСО АСК АССАТОТАСТОАУ ВОСТІ ОСА ТТОСВИСТО ля ОВЕ Тех ЗП ССТОСОСААООСАССАТСТАСТОААТООСТИЬОСЯОО ТОСТИ
Збавеиві. щік ВУ ССТИЮ САМ САСТАТСТАСПОАТООСТ І АССЗСОТОСТОГ ОТТО «М ЕН
МАХ КЕ) Чех ЗИ пил ЗК КТК КУКИ СКОБА КНТ
А ОВУ Тоні СИ ККЗ АСТМИ САЖЕТСТИ ТАТУ НКИ КЕКС дві ОЕ Тові СУ ТТОВСВАТВОМ ОПИСОМ ЕСТИТА ТЕСТ СТО СТИСА хата тих. НУ ОСА ТАСОВЮПЕОСЛЯТ ТС ВІТ НКТ ТОСТОСОСТОГА 45 хе дві ОМЕ їе МЕТ КТОТО А СВАТИ ОСЮЗСТ ТТГ ТО АСТРА ТИМУСА
З КАБ Те ім аТ ех ха и САТ ОАЕ САТАНА ТАЄ
А ОМВК Тем пе КВ ее А Едем З: ЗЕ ВЕУ Я Ка с У КА КИ КВ ВУ
Халжеаиьа іс Ст ях КВ ЗЕ ЗА СА Ки хи хек ях СКК Кові СУ ЗАСТАЄ ТАТО ОТТО АСТМИ АОСОАОПАСЄСЬСТО ТО
АНУ НЕ Хадзі СН ла КТ ее АЛЕКС ТЕКУ, АСЕАН САС
ЕІ СКК Теж КУ АКА ТВО ТНИХ КОЮ ЗОпКНХУхАСНЛУ АН САСТУВС
Жагацье. пп. Мн злАаСта СТО АТЖИКИ ИНА ККАЛ щи кер ліні ОВК Тем У ТОВСОСАТОСТ ТАТО АТОВСАСТИ ТТ АУТОСАААТТАТОСАВТАНК
ВІКО ЗВ Те (ВТ ЕТОСЧСАТОСТОВОИАТАТОСЮСАСТ ВО ТАТОСАВАТТАТОСАКУТЛЄАТ
МАЯ ВЕ Тех БСК трек ПОСТАТІ АТОПАЛАТТАТИСАСТМАУ зезатильн, тив. ВН ТОСОИСАТИС ТТ АТЕСТАТ ТО ТАТ ОСА ВАТА ТОМИ МАТ
Фіг. 12. продовження
ІЗ ай
ВЖЕ СУК пе івазь ас Оскар ОА СХ лах КЕ беж ПЕНАЛ ТУТ АТО У МАН ТАТИ АТС КАК ліхх МКЕ Леді еп АСИСТ КТ ОКА ОК ЕТАЛОН К зуаагвньв. пит» ОТ АМНІСТО УСТ ТОСТТОСАТУ ТТ НЕТ ОАТОАТОВТО ТЬМИ
Кт ЖК
А ОК тя «ах емаль АТОЬКККТ ТТ ЗПС ПОСАДА СУ ТАТИ
АУД КА тезі ІМ СКК МАЛА АТС ТТ ТОСАМИ АКТ САЛО КУТ ТОСАСАТТ СА
АВІ СЕ Тел ЦО ПОС аАВАТССЬКИ СТИ ТИСА АСВ ИТОСААСАТ ТАС АТ ВАСА
Узатазак. тя. ФУ ТОП АВАТСО АОС ТУ ТОС АМС ТОЄ А АСЕТ ТСТКАСАТ ТЬМА хв тм лі (МЕ Теж ГКУ ТЕЗАСОСЬСТИ АТ НСААОА АСВ АССАТЮСАС ВТК САТТВК і ВЕ Тем СИНУ АСССАТСТТОАЛА В ПИКА АЮ САСАТО СТИСКУ ліз ОВЕ ев! ТЯМ ЕТОАСОСМСТОЕ МУ ТОПСВАОААСААОСАЙССАСА ТОРТУ ССАТЕТИТ
УзнеаивА. зящ. СКП ЕТЗАСОСАСЄ НОМ КТТОПСААТААСААВСАТССАСА ВИТ ТССАТЕ ТУ
ВК ЯКЕ вові МЕ тові ТВ ОСАЙУПИТТААССТТОСТАСАВООСТТОЛАТОВТСТАТ ТА АВ ТИМА
АВ СТЕ Теаі ТЕКУ АКВА ВИ МТ ТАС НО ЕИААС АТ АААТНЯЛЯЯ
МЛК СКК Те: СЕН а СУТ АС ЕС ГЕАБАОЄКНТ ПА АГ СКТЯ ГлААТИКТХ загал. ВИХ. УМСА КК АК ТК ПАСА КА ІТЕСТ А Г Аа КИКтя ої вів і СК Тел БО ПАВЛО АНТИ АТЕТІИУНСАТОС САЛО КЗАТС в СКК. Теш І СААВОСАСАМСАСЦЦСТСТОАТТ ТИССА АСААЦОВО ТВА ль КЕ Те ВО) САВА А САС ПВА ТГК САТНСАСАЛИО АС ТОТАТИ
ЖавУльк. теп. ск САЛА АКТА ГОСТИ А ТИТА ВАНІ АКТ САТ
ЗВ жо дк ВЕ Тед ІВ АЮ АВААСАСЬМУСТТ ОСТ ВЛОАТТОААВАСТК ТИВ АОСЮСАТС ліні «НЕ Тем АС АС АЖ АС КВК СТАНОАТ ЕС ЛАЄ УТ КОТА
ВІЗ ЯКЕ Ті ЕК а ТКС я САТ З ПТС АТАССНАКИ
Улівльтям. пн, ТМ ка АСВАЛІЬ ВМ ТО ТОСТИ ЛАВ АСТЕ НИКА АКТО
Фіг. 12, продовження в У
АВ ОВК. тезі ОМ ССО СО АЖТАТОСТАТОСАОЮТАСТОСАТОАОСТОИА ЛАКИ
ВІ НЕ Те СІ СОСКА АТАТИСТАТЕ С АКТ АСТОВАТОАИСТВАСЛАЗАВОВОАОЮЄ
ЛЕ ОВК Теві НИ СЕКС АХТАТИСТАТССАССТАСТОСАТОАСК ТАС АЛАНА чим Ен. ТВ ССС АТ АВС АСК ТАК НЯ ЕТ АНА ВКА 583 кю ів ОК Теж вежа а ЕТ ЕС ХУ ОМ а КЕ ТОК УА
АЙ ОЖЕ Тен 817 ВАТСАТТОСМСАССТОУ МТ ТОВ САССАТСАСАТОТОСОСОСТСАСТАТЕ
АНІ ЮНЕ Тегі С ОНА ТРОСА В КТ НН АС АЄСЛІАКОТ ЛЕВ ОСТСАОТАТУ
Жхвальм. МВ. КО ЕКС АТЕЕ О ОС А НТ А КККОНІСТСААІ
АК та до ОАЕ тезі поз АСАСТТАСЯА МИКОССЬСОВСАОТООСТО ВТО СТОО ТТ ТИСА
АВІ НЕ Тел ПИ АСАСТТАСАМИНОВОСАСОСИСАЮТОВСТОТСТ САТ ЕТО
АЖ КІ Тезі (КПТ АСАСТРАСА МИХИ СС АТО ТОД СОУС ТОСТИ ТТ з тАяВІв: ТТ. «НИНІ МУ СТАС САМКУ МК ОТТО ЕХ КЕКС,
Тр їв вікі ВЕ Тові (Об АТЗОЧАТУ МК АСОМ ВСАЗСТОВСИИ ТИТОВА ЮМІ
КХ ЛВЕ Тез ОЧЯЗ АТОСОАТУ НИВІ ТОССАСТИСАОТОСИ ТИТА
Ан ОК Тов СЯ КН А ТТ ТОГО АССАЄЮТОСАК КИТИ ТОВСТА АТ зезаиютов. ти. пози АТ Та тСЄТОТОАВСОСАЮ
Но ню
БЕ СЯ Же КО ЕАСАСТИ ЕТАП АЛСВУ НКИ АКА дО БЕ Тем ТНК СЕР АСК КА ТАТА БЕК НАЕК АК ОСА САТ сМха КК Туві іБНмі гасла пою ОАЕ КАК ТЕ САТ АЛКАТТС лягати. УМ, пк ТАКА Ми ТОАСАГТТОАТОС АХА АТО ТКОСТВХААСАККС
І па їні
АВ СМС Тез СТАС ПНТ ЕСАТССОСА ТАЗА АССТОССАСТИА АН ВАТЗАТА
ВІЖЯ ОБЕ тезі анг Аж Вста БАС КТ ВА АТ АТА
А ОКЕ Теж ВІТ АОФТАСТЕНСАТ АТО ТА ТВА АССТОССТОТО СТА ТАТА зУдоічитьн во піл АЮССАСТ КПА АТ ВАЙААССТОССАОТОВАСТАТОЯТА «ріг. 12, продовження їх 1236
А КР тещі МБТ АЛОА А ПО КУН ОС АСУ ААУ А
КЕ ОБ К Тов! с) ПАСА СОУ АКОНІТ АК ТЛА
АБЗ СР Те ПЗ ТАМ СТАТОК АЛ КОСА ЗИ АКТ
Зеавяльм зи. (ЕЗКК ТТОАВВАССАОСАТСТОСОА ОТО ОК АСК А ОСАТАОГИТТТА.
У їжею
АНІ ОСЕЖ Тео) ОМА АКИМК ЮА ТИМИ АКТ КАС ПОС ААИК ЮА АТОМ ЛЯХ
ДЕК ЖЕ Течі НІС АКА ОКА АГАТАОСТ ЧИ ЛАОССАСААЛАТОАОВТО
ЗІЗ ЕХ Те ПЕС СААТСИ ЮК АСАС АС О ОС ААСОСАСАКААТОАОКОТО з зАгЖве ТЕ. п сам СААТОПОСОСАСАСА ТАС ТКА АСВ ВАВ АКТИ їх 1 дім ОКР Тек ТІЗВРУ АСЬАТАТА СЬО ТЗАСВАТКОСТ АК АСВ ТЕСАКХ
АХ СКК Тех ПК АЛУТАТАТОСАЙАХТЕ ТП АЄССА ТИТА АХА ТАЛУ МОСС
АК ОВЕ тові СЕЗ АТ ТАТССЬСАТЕТТО АСВАТЕОСТ АЛАНА ТОСТИ
УзагинЬМ. ТЯ КСВНЗ АДАТЯТАТОСАЮ ТУТ ТО АСВ ТТЕКТ ЛАВА ТС ААСКК ОЮА
БЕ 15
АВ СН: Тем ПУНКТ АСО АПА КОСА САТ С АТС АКА АСАТИСІ
ВЛ СВК Чаї І31ахІкУК Ех А ВАСКО СВ ААТ С АВДАСАТИТ
ПЕК ОК зе пе пли АСТАМ ВКА КАСА А ОСА АВАНС западин. пат, ХК СЕКС А А АЛ АК КААОА АК КИТХ 130 хАЗ ів1 СК ел! ОЗ ПАСА ВАВ ТАС ТЕ ПО ЛАТА ТАТА СА КК
АН С Тов СЕК ТОАОАССИСАСТКИКАТАЄ ТОВ ТИ АГА ВА ОТО ТСАОВАЮВЕ
ВЗ ОЖК ТЕ СНІВ) 1 АСАСОССМ ВСЮ САТАС ТВ ЗК АТСАТОКТ ООН АСЮАСС лек. ЖИ. СЕЧУ) ОАЕ СТАС ССАТАСТ ТЕТУ АКАТ ОСС АТОСАЦМ ви ца ії СВК Леві ПЕРА ТС КАТ АТО КАСОВІ АМИОСАСАТОАТОАТО дн ОКк Че ПАХ АСОТОСТО СТА А ТОССАННСТУ ОТ ОСТТЕТаАСАСАЗСАТСАТО 1хІ МК Те ЯЗАНІ АТАКА КИТ САМА АКОАТКАТИ куліс віх. мат. Я АКА АТАКА МУКА КАК ТА, МИЛА ТІОЗАЛЯАЗХХ
Фіг. 17, продовження
ННЯ зм
АрвА СИ бак так аАЄМОСК КИ АТО АСМА ТО Т
АІКХ КК теле СЕК а ик ЕТО КИ
Ав СМ Те пог нкАТЮЮОСЕТИАТОСЛОВАЄСТОСТАЄ
Ззвгхяни. тив. КЕ! МСА НИКА СЮ ТА ніівіх Доменд А Домен В
Транзит- най
АРШЕТР Ба о Домен о Домен Є о меЕКЖеРОВАВМЕНОАЬТАЕ
Домен» ріг. їх

Claims (64)

1. Рослина пшениці, що містить ЇМІ нуклеїнову кислоту, причому рослина пшениці має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з різновидами рослини дикого типу, де ЇМІ нуклеїнова кислота являє собою В-геномну імідазолінон толерантну А15 алель (Іті2) нуклеїнову кислоту, розташовану на локусі АІ52, причому нуклеїнова кислота кодує ІМІ поліпептид, який має мутацію в Домені Е, що виявляється в заміщенні серину на аспарагін в ІМІ білку, порівняно з білком АНА» дикого типу.
2. Рослина пшениці за п. 1, у якій Іті2 нуклеїнова кислота вибрана з групи, що включає: а) полінуклеотиди, які включають 5БЕО ІЮ МО:3; Ь) полінуклеотиди, які кодують поліпептиди, що включають 5ЕО ІЮ МО:4; та с) полінуклеотиди, які кодують ІМІ поліпептиди, що мають амінокислотну послідовність, принаймні на 90 95 ідентичну до 5ЕО ІЮ МО:4, причому поліпептиди включають заміщення серину на аспарагін в Домені Е.
3. Рослина пшениці за п. 2, у якій Іті2 нуклеїнова кислота включає полінуклеотид, що містить БЕО І МО:3.
4. Рослина пшениці за п. 2, у якій Іті2 нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид БЕО ІЮ МО 4.
5. Рослина пшениці за п. 1, де рослина пшениці додатково включає ІМІ нуклеїнову кислоту, вибрану з групи, яка включає Іті! нуклеїнову кислоту та ІтіЗ нуклеїнову кислоту.
6. Рослина пшениці за п. 5, де рослина пшениці включає дві ІМІ нуклеїнові кислоти.
7. Рослина пшениці за п. 5, де рослина пшениці включає три ІМІ нуклеїнові кислоти.
8. Рослина пшениці за п. 1, де імідазоліноновий гербіцид вибраний з 2-(4-ізопропіл-4-метил- 5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл)-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2- іл)-3-хінолінкарбонової кислоти, 5-етил-2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-і1л)- нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-5-(метоксиметил)- нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-5-метилнікотинової кислоти, сумішей метил 6-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-т-толуату 1 метил 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-р-толуату та їх сумішей.
9, Рослина пшениці за п. 8, де іІмідазоліноновий гербіцид являє собою 5-етил-2-(4-1ізопропіл- 4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-нікотинову кислоту.
10. Рослина пшениці за п. 8, де імідазоліноновий гербіцид являє собою 2-(4-ізопропіл-4- метил-5-оксо-2-імідазолін-2-і1л)-5-(метоксиметил)-нікотинову кислоту.
11. Рослинна частина рослини пшениці за будь-яким з пп. 1-7, де рослинна частина включає зазначену ІМІ нуклеїнову кислоту.
12. Рослинна клітина рослини пшениці за будь-яким з пп. 1-7, де рослинна клітина включає зазначену ІМІ нуклеїнову кислоту.
13. Насіння, вироблене рослиною пшениці за будь-яким з пп. 1-7, де насіння включає зазначену ІМІ нуклеїнову кислоту.
14. Насіння за п. 13, де насіння являє собою розведення гомозигот для підвищеної резистентності до імідазолінонового гербіциду, порівняно з насінням сорту рослини пшениці дикого типу.
15. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 1-7, де рослина є трансгенною.
16. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 1-7, де рослина не є трансгенною.
17. БРослина пшениці за будь-яким з пп. 1-7, де рослина пшениці являє собою гібридну рослину рослинної лінії Теаі ІМІ 11А та іншої рослини пшениці, де представницький зразок насіння лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3953.
18. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 1-7, де рослина пшениці являє собою гібрид між рослинами ліній Теа! ІМІ 11А або їх потомства, де представницький зразок насіння гібридної лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3954; та рослини пшениці, яка включає ЇМІ нуклеїнову кислоту, де рослина пшениці має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду, порівняно з різновидами рослини дикого типу, де ІМІ нуклеїнова кислота являє собою Ю-геномну імідазолінон толерантну А15 алель (Іті!) нуклеїнову кислоту, розташовану на локусі АЇІ5І, причому нуклеїнова кислота кодує ІМІ поліпептид, який має мутацію в Домені Е, що виявляється в заміщенні серину на аспарагін в ІМІ білку, порівняно з білком АНА» дикого типу.
19. Виділена, мутагенізована, рекомбінантна або генно-інженерна ІМІ нуклеїнова кислота, яка включає полінуклеотид, вибраний з групи, яка включає: а) полінуклеотиди, які включають 5ЕО ІЮ МО:3; Ь) полінуклеотиди, які кодують поліпептид, який включає БЕО ІЮ МО 4; та с) полінуклеотиди, які кодують будь-який поліпептид, що має амінокислотну послідовність, принаймні на 90 9о ідентичну до БЕО ІЮ МО:4, причому поліпептид включає заміщення серину на аспарагін в Домені Е, де полінуклеотид, отриманий з лінії Тева! ІМІ 11А, де представницький зразок насіння лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3953.
20. Виділена ІМІ нуклеїнова кислота за п. 19, яка включає полінуклеотид 5ЕО ІЮ МО 3.
21. Виділена ІМІ нуклеїнова кислота за п. 19, яка включає полінуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид БЕО ІЮ МО 4.
22. Спосіб боротьби з бур'янами в оточенні рослини пшениці, який включає нанесення імідазолінонового гербіциду на бур'яни та рослину пшениці, де рослина пшениці, містить ІМІ нуклеїнову кислоту та має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду, порівняно з різновидами рослини пшениці дикого типу, де ІЇМІ нуклеїнова кислота являє собою В-геномну імідазолінон толерантну А15 алель (Іті2) нуклеїнову кислоту, розташовану на локусі АІ852, причому нуклеїнова кислота кодує ІМІ поліпептид, який має мутацію в Домені Е, що виявляється в заміщенні серину на аспарагін в ІМІ білку, порівняно з білком АНАФ5Б дикого типу.
23. Спосіб за п. 22, у якому Іті2 нуклеїнова кислота вибрана з групи, що включає: а) полінуклеотиди, які включають 5ЕО ІЮ МО:3; Ь) полінуклеотиди, які кодують поліпептиди, що включають 5ЕО ІЮ МО:4; та с) полінуклеотиди, які кодують ІМІ поліпептиди, що мають амінокислотну послідовність, принаймні на 90 905 ідентичну до 5ЕО ІЮ МО:4, причому поліпептиди включають заміщення серину на аспарагін в Домені Е.
24. Спосіб за п. 23, у якому ІМІ нуклеїнова кислота включає полінуклеотид 5ЕО ІЮ МО:3.
25. Спосіб за п. 23, у якому ІМІ нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид БЕО ІЮ МО:4.
26. Спосіб за п. 22, у якому рослина пшениці додатково включає ІМІ нуклеїнову кислоту, вибрану з групи, яка включає Іті! нуклеїнову кислоту та ІтіЗ3 нуклеїнову кислоту.
27. Спосіб за п. 26, у якому рослина пшениці включає дві ІМІ нуклеїнові кислоти.
28. Спосіб за п. 26, у якому рослина пшениці включає три ІМІ нуклеїнові кислоти.
29. Спосіб за будь-яким з пп. 22-28, у якому рослина пшениці являє собою рослину лінії ТеаїЇ 11А або її потомства, де представницький зразок насіння лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3953.
30. Спосіб за будь-яким з пп. 22-28, у якому рослина пшениці являє собою гібрид між рослинами ліній Теа! 11А та Е54, або їх потомства, де представницький зразок насіння гібридної лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3954.
31. Спосіб модифікації толерантності рослини до імідазолінонового гербіциду, який включає модифікацію експресії ІМІ нуклеїнової кислоти за допомогою вектора експресії, що містить ІМІ нуклеїнову кислоту, вибрану з групи, яка включає: а) полінуклеотиди, які включають 5БЕО ІЮ МО:3; Б) полінуклеотиди, які кодують поліпептид, що включає 5ЕО ІЮ МО 4; та с) полінуклеотиди, які кодують будь-який поліпептид, що має амінокислотну послідовність, принаймні на 90 9о ідентичну до БЕО ІЮ МО:4, причому поліпептид включає заміщення серину на аспарагін в Домені Е.
32. Спосіб за п. 31, у якому ІМІ нуклеїнова кислота включає полінуклеотид 5ЕО ІЮ МО 3.
33. Спосіб за п. 31, у якому ІМІ нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид БЕО ІЮ МО 4.
34. Спосіб за п. 31, у якому спосіб додатково включає модифікацію експресії ІМІ нуклеїнової кислоти, вибраної з групи, яка включає Іті! нуклеїнову кислоту та ІтіЗ нуклеїнову кислоту.
35. Спосіб одержання трансгенної рослини з підвищеною резистентністю /до імідазолінонового гербіциду, який включає а) трансформацію рослинної клітини вектором експресії, що містить ІМІ нуклеїнову кислоту, вибрану з групи, яка включає: і) полінуклеотиди, які включають 5ЕО ІЮ МО:3; іі) полінуклеотиди, які кодують поліпептид, що включає 5ЕО ІЮ МО 4; та Ні) полінуклеотиди, які кодують будь-який поліпептид, що має амінокислотну послідовність, принаймні на 90 95 ідентичну до БЕО ІЮ МО:4, причому поліпептид включає заміщення серину на аспарагін в Домені Е, та Ь) вирощування з рослинної клітини трансгенної рослини з підвищеною резистентністю до імідазолінонового гербіциду, порівняно з сортом рослини дикого типу.
36. Спосіб за п. 35, у якому ІМІ нуклеїнова кислота включає полінуклеотид 5ЕО ІЮ МО:3.
37. Спосіб за п. 35, у якому ІМІ нуклеїнова кислота включає полінуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид БЕО ІЮ МО 4.
38. Спосіб за п. 35, у якому рослина пшениці додатково включає ІМІ нуклеїнову кислоту, вибрану з групи, яка включає Іті! нуклеїнову кислоту та ІтіЗ3 нуклеїнову кислоту.
39. Рослина пшениці, що містить множину ІМІ нуклеїнових кислот, причому рослина пшениці має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду, порівняно з різновидами рослини дикого типу, де нуклеїнові кислоти мають походження від різних геномів, причому принаймні одна з множини ІМІ нуклеїнових кислот являє собою В- геномну імідазолінон толерантну А15 алель (Іті2) нуклеїнову кислоту, розташовану на локусі А152, причому принаймні одна з множини ІМІ нуклеїнових кислот кодує ІМІ поліпептид, який має мутацію в Домені Е, що виявляється в заміщенні серину на аспарагін в ІМІ білку, порівняно з білком АНА5Б дикого типу.
40. Рослина пшениці за п. 39, у якій принаймні одна з множини ІМІ нуклеїнових кислот являє собою полінуклеотид, що містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з групи, що включає: і) полінуклеотиди, які включають 5БЕО ІЮ МО:3; и) полінуклеотиди, які кодують поліпептиди, що включають 5ЕО ІЮ МО 4; та 1) ополінуклеотиди, які кодують ІМІ поліпептиди, що мають амінокислотну послідовність, принаймні на 90 905 ідентичну до 5БО І МО:4, причому поліпептиди включають заміщення серину на аспарагін в Домені Е.
41. Рослина пшениці за п. 39, у якій одна з ІЇМІ нуклеїнових кислот включає полінуклеотидну послідовність, визначену в БЕО ІЮ МО:3.
42. Рослина пшениці за п. 39, у якій одна з ІЇМІ нуклеїнових кислот включає полінуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид БЕО ІЮ МО 4.
43. Рослина пшениці за п. 39, у якій одна з ІЇМІ нуклеїнових кислот включає полінуклеотидну послідовність, що кодує поліпептид, який має амінокислотну послідовність, принаймні на 90 бо ідентичну до 5ЕО ІЮ МО:4, причому поліпептиди включають заміщення серину на аспарагін в Домені Е.
44. Рослина пшениці за п. 39, яка включає дві ІМІ нуклеїнові кислоти.
45. Рослина пшениці за п. 44, у якій друга ІМІ нуклеїнова кислота являє собою Ітії! нуклеїнову кислоту.
46. Рослина пшениці за п. 39, яка включає три ІМІ нуклеїнові кислоти.
47. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 39-46, де рослина пшениці являє собою гібридну рослину рослинної лінії Теа! ІМІ 11А та другої рослини пшениці, де представницький зразок насіння лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3953.
48. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 39-46, де рослина пшениці являє собою гібрид між рослинами ліній Теа! ІМІ 11А або їх потомства, де представницький зразок насіння гібридної лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3954; та рослини пшениці, яка включає ІМІ нуклеїнову кислоту, де рослина пшениці має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду порівняно з різновидами рослини дикого типу, де ІМІ нуклеїнова кислота являє собою Ю-геномну імідазолінон толерантну А15 алель (Іті!) нуклеїнову кислоту, розташовану на локусі АІ51І, причому нуклеїнова кислота кодує ІМІ поліпептид, який має мутацію в Домені Е, що виявляється в заміщенні серину на аспарагін в ІМІ білку, порівняно з білком АНА» дикого типу.
49. Рослина пшениці за п. 39, де імідазоліноновий гербіцид вибраний з 2-(4-ізопропіл-4- метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-нікотинової кислоти, // 2-(4-ізопропіл)-4-метил-5-оксо-2-
імідазолін-2-іл)-3-хінолінкарбонової кислоти, 5-етил-2-(4-1зопропіл-4-метил-5-оксо-2- імідазолін-2-іл)-нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-5- (метоксиметил)-нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-і1л)-5- метилнікотинової кислоти, сумішей метил 6-(4-іІзопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)- т-толуату і метил 2-(4-13зопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-р-толуату та їх сумішей.
50. Рослина пшениці за п. 49, де імідазоліноновий гербіцид являє собою 5-етил-2-(4- ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-нікотинову кислоту.
51. Рослина пшениці за п. 49, де імідазоліноновий гербіцид являє собою 2-(4-ізопропіл-4- метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-5-(метоксиметил)-нікотинову кислоту.
52. Рослинна частина рослини пшениці за п. 39, де рослинна частина включає зазначену множину ІМІ нуклеїнових кислот.
53. Рослинна клітина рослини пшениці за п. 39, де рослинна клітина включає зазначену множину ІМІ нуклеїнових кислот.
54. Насіння рослини пшениці за п. 39, де насіння включає зазначену множину ІМІ нуклеїнових кислот.
55. Насіння за п. 54, де насіння являє собою розведення гомозигот для підвищеної резистентності до імідазолінонового гербіциду, порівняно з насінням сорту рослини пшениці дикого типу.
56. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 39-46, де рослина є трансгенною.
57. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 39-46, де рослина не є трансгенною.
58. Спосіб боротьби з бур'янами в оточенні рослини пшениці, який включає нанесення імідазолінонового гербіциду на бур'яни та рослину пшениці, де рослина пшениці має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду, порівняно з різновидами рослини пшениці дикого типу, причому рослина пшениці являє собою рослину пшениці за будь-яким з пп. 39-48.
59, Спосіб за п. 58, де іІмідазоліноновий гербіцид вибраний з 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2- імідазолін-2-іл)-нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл)-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-3- хінолінкарбонової кислоти, 5-етил-2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-17л)- нікотинової кислоти, 2-(4-іїзопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-5-(метоксиметил)- нікотинової кислоти, 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-3-метилнікотинової кислоти, сумішей метил 6-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1л)-т-толуату 1 метил 2-(4-1зопропіл-4-метил-5-оксо-2-імідазолін-2-1іл)-р-толуату та їх сумішей.
60. Спосіб за п. 58, де імідазоліноновий гербіцид являє собою 5-етил-2-(4-ізопропіл-4-метил- 5-оксо-2-імідазолін-2-іл)-нікотинову кислоту.
61. Спосіб за п. 58, де імідазоліноновий гербіцид являє собою 2-(4-ізопропіл-4-метил-5-оксо- 2-імідазолін-2-1л)-5-(метоксиметил)-нікотинову кислоту.
62. Насіння рослини пшениці, де рослина пшениці має підвищену резистентність до імідазолінонового гербіциду, порівняно з різновидами рослини дикого типу, причому зазначена рослина пшениці являє собою гібрид з першої рослини пшениці та другої рослини пшениці, де перша рослина пшениці являє собою рослину лінії Теа! 114А, де представницький зразок насіння лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3953.
63. Насіння за п. 62, де друга рослина пшениці включає ІМІ нуклеїнову кислоту, яка являє собою ЮО-геномну імідазолінон толерантну АЇ15 алель (Іті!) нуклеїнову кислоту, розташовану на локусі АЇзІ, причому зазначена нуклеіїнова кислота кодує ЇМІ поліпептид, який має мутацію в Домені Е, що виявляється в заміщенні серину на аспарагін в ІМІ білку, порівняно з білком АНА5Б дикого типу.
64. Насіння за п. 62, де друга рослина пшениці являє собою рослину лінії Теа! 15А, де представницький зразок насіння лінії був депонований в АТСС з номером патентного депонування РТА-3955.
UAA200905463A 2001-08-09 2002-07-10 Рослина пшениці з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів UA104990C2 (uk)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31128201P 2001-08-09 2001-08-09

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA104990C2 true UA104990C2 (uk) 2014-04-10

Family

ID=23206205

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA200905463A UA104990C2 (uk) 2001-08-09 2002-07-10 Рослина пшениці з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів
UA2004020925A UA87261C2 (uk) 2001-08-09 2002-10-07 Рослина пшениці з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA2004020925A UA87261C2 (uk) 2001-08-09 2002-10-07 Рослина пшениці з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів

Country Status (10)

Country Link
US (7) US7897845B2 (uk)
EP (1) EP1414975B1 (uk)
AR (1) AR036336A1 (uk)
AU (2) AU2002319037B2 (uk)
BR (2) BR0211809A (uk)
CA (2) CA2456314C (uk)
MX (1) MXPA04001012A (uk)
RU (1) RU2337531C2 (uk)
UA (2) UA104990C2 (uk)
WO (1) WO2003014357A1 (uk)

Families Citing this family (273)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7232942B2 (en) 2001-05-14 2007-06-19 University Of Saskatchewan Lentil plants having increased resistance to imidazolinone herbicides
MXPA04001012A (es) 2001-08-09 2005-06-06 Univ Saskatchewan Plantas de trigo que tienen resistencia incrementada a los herbicidas de imidazolinona.
AR036138A1 (es) 2001-08-09 2004-08-11 Univ Saskatchewan Plantas de trigo que tienen resistencia aumentada a herbicidas de imidazolinona
EP2604107B1 (en) * 2001-08-09 2018-10-10 Northwest Plant Breeding Company Wheat plants having increased resistance to imidazolinone herbicides
EP2329708B1 (en) * 2002-07-10 2016-10-19 The Department of Agriculture, Western Australia Wheat plants having increased resistance to imidazolinone herbicides
WO2004106555A2 (en) * 2003-05-22 2004-12-09 Dow Agrosciences Llc High-throughput methods of screening dna for deletions and other mutations
US9382526B2 (en) * 2003-05-28 2016-07-05 Basf Aktiengesellschaft Wheat plants having increased tolerance to imidazolinone herbicides
EP2982240B1 (en) * 2003-08-29 2019-07-31 Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria Rice plants having increased tolerance to imidazolinone herbicides
US7432082B2 (en) 2004-03-22 2008-10-07 Basf Ag Methods and compositions for analyzing AHASL genes
AU2005262525A1 (en) * 2004-06-16 2006-01-19 Basf Plant Science Gmbh Polynucleotides encoding mature AHASL proteins for creating imidazolinone-tolerant plants
US7355098B2 (en) 2004-06-22 2008-04-08 Saskatchewan Wheat Poo1 Brassica AHAS genes and gene alleles that provide resistance to imidazolinone herbicides
TR200900517T2 (tr) * 2004-07-30 2009-03-23 Basf Agrochemical Products B.V. Herbisitlere dayanıklı ayçiçeği bitkileri herbisitlere dayanıklı asetohidroksiasit sintaz geniş altünite proteinlerini kodla yan polinükleotidler ve kullanma metotları.
AR051690A1 (es) 2004-12-01 2007-01-31 Basf Agrochemical Products Bv Mutacion implicada en el aumento de la tolerancia a los herbicidas imidazolinona en las plantas
ES2692594T1 (es) * 2005-03-02 2018-12-04 Instituto Nacional De Tecnologia Agropecuaria Plantas de arroz resistentes a herbicidas, polinucleótidos que codifican proteínas de la subunidad grande de la acetohidroxiácido sintasa resistentes a herbicidas y métodos para su uso
CA3006126C (en) 2005-07-01 2022-04-19 Basf Se Herbicide-resistant sunflower plants, polynucleotides encoding herbicide-resistant acetohydroxy acid synthase large subunit proteins, and methods of use
CA2623266C (en) * 2005-09-20 2018-08-21 J.R. Simplot Company Low acrylamide foods and their production comprising reduction of asparagine levels in plants
CL2007001552A1 (es) * 2006-05-31 2008-01-18 Basf Agrochemical Products Bv Metodo para producir planta de trigo con alto contenido de proteinas que comprende introducir el gen ahasl1a s653n, metodo de generacion de harina de trigo con alto contenido de proteinas, y producto alimenticio que la comprende.
JP2007319052A (ja) * 2006-05-31 2007-12-13 Sumitomo Chemical Co Ltd イヌホタルイにおけるスルホニルウレア系除草剤抵抗性能力の評価方法
WO2008055883A1 (en) 2006-11-10 2008-05-15 Basf Se Crystalline modification of fipronil
JP5877624B2 (ja) 2006-11-10 2016-03-08 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ フィプロニルの結晶変態
EP2083627A1 (en) 2006-11-10 2009-08-05 Basf Se Crystalline modification of fipronil
UA110598C2 (uk) 2006-11-10 2016-01-25 Басф Се Спосіб одержання кристалічної модифікації фіпронілу
UA108733C2 (uk) 2006-12-12 2015-06-10 Толерантна до гербіциду рослина соняшника
US20100029698A1 (en) 2007-02-06 2010-02-04 Basf Se Pesticidal Mixtures
CA2682349C (en) 2007-04-04 2017-08-22 Basf Plant Science Gmbh Ahas mutants
US10017827B2 (en) 2007-04-04 2018-07-10 Nidera S.A. Herbicide-resistant sunflower plants with multiple herbicide resistant alleles of AHASL1 and methods of use
EP2543731B1 (en) 2007-04-04 2018-08-22 Basf Se Herbicide-resistant brassica plants and methods of use
EP3199026A1 (en) 2007-04-12 2017-08-02 Basf Se Pesticidal mixtures comprising cyanosulfoximine compounds
EP2614717A1 (en) 2007-09-20 2013-07-17 Basf Se Combinations comprising a fungicidal strain and at least one additional fungicide
CN101808521A (zh) 2007-09-26 2010-08-18 巴斯夫欧洲公司 包含啶酰菌胺和百菌清的三元杀真菌组合物
US8097712B2 (en) 2007-11-07 2012-01-17 Beelogics Inc. Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof
KR20100116675A (ko) * 2008-02-22 2010-11-01 바스프 에스이 ３'-브로민-２,３,４,６'-테트라메톡시-２',６-디메틸벤조페논을 포함하는 살진균성 조성물
US20110130286A1 (en) 2008-07-29 2011-06-02 Basf Se Piperazine Compounds with Herbicidal Effect
EP2183969A3 (en) 2008-10-29 2011-01-05 Basf Se Method for increasing the number of seedlings per number of sowed grains of seed
JP2012504576A (ja) 2008-10-02 2012-02-23 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 除草活性を有するピペラジン化合物
CN104789649A (zh) 2009-01-07 2015-07-22 巴斯夫农化产品有限公司 大豆事件127和与其相关的方法
EA021068B1 (ru) 2009-01-27 2015-03-31 Басф Се Способ обработки семян, препаративная форма для дражирования семян и набор
WO2010089244A1 (en) 2009-02-03 2010-08-12 Basf Se Method for dressing seeds
WO2010092031A2 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Basf Se Pesticidal mixtures
CN102307479A (zh) 2009-02-11 2012-01-04 巴斯夫欧洲公司 农药混合物
EP2395841A1 (en) 2009-02-11 2011-12-21 Basf Se Pesticidal mixtures
AR075573A1 (es) 2009-02-11 2011-04-20 Basf Se Dimethomorph como protector de plaguicidas con efectos fitotoxicos
WO2010092014A2 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Basf Se Pesticidal mixtures
ES2444270T3 (es) 2009-03-04 2014-02-24 Basf Se Compuestos de 3-arilquinazolin-3-ona para combatir plagas de invertebrados
WO2010103065A1 (en) 2009-03-11 2010-09-16 Basf Se Fungicidal compositions and their use
CN102348380B (zh) 2009-03-16 2013-10-23 巴斯夫欧洲公司 包含氟吡菌酰胺和苯菌酮的杀真菌组合物
AU2010225016A1 (en) 2009-03-20 2011-10-13 Basf Se Method for treatment of crop with an encapsulated pesticide
CN102361551B (zh) 2009-03-26 2015-09-16 拜尔作物科学有限公司 合成的杀真菌剂和生物杀真菌剂组合用于控制有害真菌的用途
EP2414353A1 (en) 2009-04-01 2012-02-08 Basf Se Isoxazoline compounds for combating invertebrate pests
EP2413691A2 (en) 2009-04-02 2012-02-08 Basf Se Method for reducing sunburn damage in plants
WO2010142779A1 (en) 2009-06-12 2010-12-16 Basf Se Antifungal 1,2,4-triazolyl derivatives having a 5- sulfur substituent
WO2010146116A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Basf Se Triazole compounds carrying a sulfur substituent
CA2764541A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Basf Se Fungicidal mixtures
WO2010146115A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Basf Se Triazole compounds carrying a sulfur substituent
EP2443097A1 (en) 2009-06-18 2012-04-25 Basf Se Antifungal 1, 2, 4-triazolyl derivatives
CN102459241A (zh) 2009-06-18 2012-05-16 巴斯夫欧洲公司 带有硫取代基的三唑化合物
JP2012530111A (ja) 2009-06-18 2012-11-29 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア ５−硫黄置換基を有する抗菌類性１，２，４−トリアゾリル誘導体
CN102803231A (zh) 2009-06-18 2012-11-28 巴斯夫欧洲公司 杀真菌的1，2，4-三唑衍生物
CA2763938C (en) 2009-06-19 2017-07-11 Basf Se Herbicidal benzoxazinones
WO2010149758A1 (en) 2009-06-25 2010-12-29 Basf Se Antifungal 1, 2, 4-triazolyl derivatives
EP2451804B1 (en) 2009-07-06 2014-04-30 Basf Se Pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
WO2011003775A2 (de) 2009-07-09 2011-01-13 Basf Se Substituierte cyanobutyrate mit herbizider wirkung
WO2011003776A2 (de) 2009-07-09 2011-01-13 Basf Se Substituierte cyanobutyrate mit herbizider wirkung
BR112012001001A2 (pt) 2009-07-14 2016-11-16 Basf Se compositos azol das formulas i e ii, compostos das formulas i e i, compostos de formula ix, composição agricola, uso de um composto farmaceutica, metodo para tratar infecções de câncer ou virus para combater fungos zoopatigênicos ou humanopatogenicos
WO2011009804A2 (en) 2009-07-24 2011-01-27 Basf Se Pyridine derivatives compounds for controlling invertebrate pests
AU2010277748A1 (en) 2009-07-28 2012-03-08 Basf Se A method for increasing the level of free amino acids in storage tissues of perennial plants
BR112012001595B1 (pt) 2009-07-28 2018-06-05 Basf Se Composição de suspo-emulsão pesticida, método para preparar a composição de suspo-emulsão pesticida, uso de uma composição de suspo- emulsão, métodos para combater fungos fitopatogênicos e método para tratar sementes
CA2769385C (en) 2009-07-30 2017-10-17 Merial Limited Insecticidal 4-amino-thieno[2,3-d]-pyrimidine compounds and methods of their use
UY32838A (es) 2009-08-14 2011-01-31 Basf Se "composición activa herbicida que comprende benzoxazinonas
JP2013505909A (ja) 2009-09-24 2013-02-21 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 無脊椎動物害虫を駆除するためのアミノキナゾリン化合物
CA2772814A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Basf Se Method for reducing pistillate flower abortion in plants
AU2010303120A1 (en) 2009-09-29 2012-04-19 Basf Se Pesticidal mixtures
WO2011042378A1 (de) 2009-10-09 2011-04-14 Basf Se Substituierte cyanobutyrate mit herbizider wirkung
US8962584B2 (en) 2009-10-14 2015-02-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. Compositions for controlling Varroa mites in bees
WO2011051212A1 (de) 2009-10-28 2011-05-05 Basf Se Verwendung heteroaromatischer verbindungen als herbizide
DE102010042867A1 (de) 2009-10-28 2011-06-01 Basf Se Verwendung heterozyklischer Verbindungen als Herbizide
DE102010042866A1 (de) 2009-10-30 2011-05-05 Basf Se Substituierte Thioamide mit herbizider Wirkung
CN102686583A (zh) 2009-11-02 2012-09-19 巴斯夫欧洲公司 除草的四氢邻苯二甲酰亚胺类
US8329619B2 (en) 2009-11-03 2012-12-11 Basf Se Substituted quinolinones having herbicidal action
KR20120115492A (ko) 2009-11-06 2012-10-18 바스프 에스이 ４―히드록시 벤조산 및 선택된 살충제의 결정질 복합체
WO2011057989A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Basf Se Heterocyclic compounds having herbicidal action
WO2011057942A1 (en) 2009-11-12 2011-05-19 Basf Se Insecticidal methods using pyridine compounds
US8481723B2 (en) 2009-11-13 2013-07-09 Basf Se 3-(3,4-dihydro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-yl)-1H-Pyrimidin-2,4-dione compounds as herbicides
WO2011058036A1 (en) 2009-11-13 2011-05-19 Basf Se Tricyclic compounds having herbicidal action
ES2545698T3 (es) 2009-11-17 2015-09-15 Merial, Inc. Derivados de sulfuro de oxa o tia-heteroarilalquilo fluorados para combatir plagas de invertebrados
WO2011064188A1 (en) 2009-11-27 2011-06-03 Basf Se Insecticidal methods using nitrogen-containing heteroaromatic compounds
WO2011067184A1 (de) 2009-12-01 2011-06-09 Basf Se 3- (4, 5 -dihydroisoxazol- 5 -yl) benzoylpyrazolverbindungen und ihre mischungen mit safenern
US8846569B2 (en) 2009-12-04 2014-09-30 Merial Limited Pesticidal bis-organosulfur compounds
WO2011069912A1 (de) 2009-12-07 2011-06-16 Basf Se Triazolverbindungen, ihre verwendung sowie sie enthaltende mittel
WO2011069955A1 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Basf Se Sulfonimidamide compounds for combating animal pests
JP2013512934A (ja) 2009-12-08 2013-04-18 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺害虫混合物
WO2011069916A1 (de) 2009-12-08 2011-06-16 Basf Se Triazolverbindungen, ihre verwendung als fungizide sowie sie enthaltende mittel
WO2011069894A1 (de) 2009-12-08 2011-06-16 Basf Se Triazolverbindungen, ihre verwendung sowie sie enthaltende mittel
BR112012013096A2 (pt) 2009-12-08 2015-09-15 Basf Se mistura agroquímica para aumentar a saúde de uma planta, composição pesticida, método para aperfeiçoamento da saúde de uma planta e uso de uma planta
BR112012014944A2 (pt) 2009-12-18 2015-09-15 Basf Se compostos de azolina substituída , composição , uso de um composto , e, métodos para controlar pragas invertebradas e para tratar , controlar , prevenir ou proteger animais contra infestação ou infecção por parasitas.
WO2011073143A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Basf Se Substituted cyanobutyrates having herbicidal action
AU2011206563B2 (en) 2010-01-18 2015-01-22 Basf Se Compound comprising a pesticide and an alkoxylate of 2-propylheptyl amine
CN102762543B (zh) 2010-02-01 2016-03-09 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的取代的酮型异*唑啉化合物和衍生物
WO2011098417A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Basf Se Substituted cyanobutyrates having herbicidal action
WO2011101303A2 (de) 2010-02-16 2011-08-25 Basf Se Zusammensetzung umfassend ein pestizid und ein alkoxylat von iso-heptadecylamin
US20130047297A1 (en) 2010-03-08 2013-02-21 Robert D. Sammons Polynucleotide molecules for gene regulation in plants
WO2011110583A2 (en) 2010-03-10 2011-09-15 Basf Se Fungicidal mixtures comprising triazole derivatives
EP2547200B1 (de) 2010-03-17 2015-02-25 Basf Se Zusammensetzung umfassend ein pestizid und ein alkoxylat von verzweigtem nonylamin
ES2631154T3 (es) 2010-03-23 2017-08-28 Basf Se Compuestos de piridazina para controlar plagas de invertebrados
CN102812024B (zh) 2010-03-23 2015-01-21 巴斯夫欧洲公司 具有除草作用的取代吡啶
CN102822178B (zh) 2010-03-23 2015-10-21 巴斯夫欧洲公司 具有除草作用的吡啶并噻嗪
WO2011117211A1 (en) 2010-03-23 2011-09-29 Basf Se Substituted pyridazines having herbicidal action
JP2013522347A (ja) 2010-03-23 2013-06-13 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 無脊椎有害生物を防除するためのピリダジン化合物
CN102906096A (zh) 2010-03-23 2013-01-30 巴斯夫欧洲公司 具有除草作用的吡啶类
JP2013522335A (ja) 2010-03-23 2013-06-13 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 除草活性を有するピラジノチアジン
WO2011117806A2 (en) 2010-03-23 2011-09-29 Basf Se Pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
AR081526A1 (es) 2010-03-23 2012-10-03 Basf Se Piridazinas sustituidas que tienen accion herbicida
CN103025161A (zh) 2010-05-24 2013-04-03 明治制果药业株式会社 有害生物防治剂
WO2011147953A1 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Basf Se Pesticidal mixtures
MX339218B (es) 2010-05-28 2016-05-17 Basf Se Mezclas de plaguicidas.
US20130078297A1 (en) 2010-06-16 2013-03-28 Basf Se Aqueous Active Ingredient Composition
WO2012007426A1 (en) 2010-07-13 2012-01-19 Basf Se Azoline substituted isoxazoline benzamide compounds for combating animal pests
DE102011080568A1 (de) 2010-08-16 2012-02-16 Basf Se Substituierte Cyanobutyrate mit herbizider Wirkung
EP2616458B1 (en) 2010-09-13 2016-07-20 Basf Se Pyridine compounds for controlling invertebrate pests ii
BR112013005382B1 (pt) 2010-09-13 2020-02-18 Basf Se Uso de um composto 3-piridila, método para controlar pragas invertebradas, método para proteger o material de propagação vegetal e/ou plantas e composição agrícola
EP2615917A2 (en) 2010-09-13 2013-07-24 Basf Se Pyridine compounds for controlling invertebrate pests iii
KR101938020B1 (ko) 2010-09-14 2019-01-11 바스프 에스이 피리피로펜 살곤충제 및 염기를 함유하는 조성물
CN110294765A (zh) 2010-09-14 2019-10-01 巴斯夫欧洲公司 含有啶南平杀虫剂和助剂的组合物
CN103228627A (zh) 2010-10-01 2013-07-31 巴斯夫欧洲公司 作为杀虫剂的亚胺取代的2,4-二芳基吡咯啉衍生物
WO2012041789A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Basf Se Herbicidal benzoxazinones
AR084486A1 (es) 2010-10-01 2013-05-22 Basf Se Compuestos de imina
CA2819684C (en) 2010-12-03 2024-05-07 Dow Agrosciences Llc Stacked herbicide tolerance event 8264.44.06.1, related transgenic soybean lines, and detection thereof
BR112013013623A2 (pt) 2010-12-10 2016-07-12 Basf Se métodos para controlar pragas invertebradas e para proteger material de propagagação de planta e/ou as plantas, material de propagação de planta, uso de um composto da fórmula i e composto de pirazol da fórmula i
AU2011347752A1 (en) 2010-12-20 2013-07-11 Basf Se Pesticidal active mixtures comprising pyrazole compounds
WO2012085081A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Basf Se Sulfoximinamide compounds for combating invertebrate pests ii
EP2481284A3 (en) 2011-01-27 2012-10-17 Basf Se Pesticidal mixtures
JP5984851B2 (ja) 2011-02-28 2016-09-06 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ 殺有害生物剤、界面活性剤および２−プロピルヘプチルアミンのアルコキシレートを含む組成物
JP6049684B2 (ja) 2011-03-23 2016-12-21 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ イミダゾリウム基を含むポリマーのイオン性化合物を含有する組成物
CN103582639A (zh) 2011-04-06 2014-02-12 巴斯夫欧洲公司 用于防治动物害虫的取代嘧啶鎓化合物
AR085872A1 (es) 2011-04-08 2013-10-30 Basf Se Derivados heterobiciclicos n-sustituidos utiles para combatir parasitos en plantas y/o animales, composiciones que los contienen y metodos para combatir dichas plagas
EP2731426A2 (en) 2011-07-15 2014-05-21 Basf Se Pesticidal methods using substituted 3-pyridyl thiazole compounds and derivatives for combating animal pests ii
EP2742023A1 (en) 2011-08-12 2014-06-18 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
CN103842342A (zh) 2011-08-12 2014-06-04 巴斯夫欧洲公司 邻氨基苯甲酰胺化合物及其作为农药的用途
US20140179519A1 (en) 2011-08-12 2014-06-26 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
BR112014002970A2 (pt) 2011-08-12 2017-02-21 Basf Se composto, método para preparar um composto, composição agrícola ou veterinária, método para combater ou controlar pragas invertebradas, método para proteger o cultivo de plantas, método para a proteção de sementes, semente, usos do composto e método para tratar
ES2558166T3 (es) 2011-08-12 2016-02-02 Basf Se Compuestos de N-tio-antranilamida y su uso como pesticidas
WO2013024008A1 (en) 2011-08-12 2013-02-21 Basf Se Aniline type compounds
BR112014003112A2 (pt) 2011-08-12 2017-02-21 Basf Se composto da fórmula geral (i), métodos para preparar um composto da fórmula (i), composição agrícola ou veterinária, método para combater ou controlar pragas invertebradas, método para proteger o cultivo de plantas, método para a proteção de sementes, semente, usos de um composto e método para tratar um animal
IN2014CN01216A (uk) 2011-08-18 2015-04-24 Basf Se
US20140243197A1 (en) 2011-08-18 2014-08-28 Basf Se Carbamoylmethoxy- and carbamoylmethylthio- and carbamoylmethylamino benzamides for combating invertebrate pests
CN103889956A (zh) 2011-08-18 2014-06-25 巴斯夫欧洲公司 用于防治无脊椎动物害虫的氨基甲酰基甲氧基-和氨基甲酰基甲硫基-及氨基甲酰基甲基氨基苯甲酰胺
MX2014001706A (es) 2011-09-02 2014-03-21 Basf Se Mezclas activas de insecticidas que comprenden compuestos de arilquinazolinona.
CN103987261A (zh) 2011-09-02 2014-08-13 巴斯夫欧洲公司 包含芳基喹唑啉酮化合物的农业混合物
AU2012300875A1 (en) 2011-09-02 2014-03-20 Basf Se Use of pesticidal active 3-arylquinazolin-4-one derivatives in soil application methods
US10806146B2 (en) 2011-09-13 2020-10-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
EP2755466A4 (en) 2011-09-13 2015-04-15 Monsanto Technology Llc METHODS AND COMPOSITIONS FOR CONTROLLING WEEDS
US10829828B2 (en) 2011-09-13 2020-11-10 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
LT3329919T (lt) 2011-11-11 2020-02-10 Gilead Apollo, Llc Acc inhibitoriai ir jų panaudojimas
EP2780334A1 (en) 2011-11-14 2014-09-24 Basf Se Substituted 1,2,5-oxadiazole compounds and their use as herbicides
JP2014533669A (ja) 2011-11-16 2014-12-15 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ 置換型１，２，５−オキサジアゾール化合物及びその除草剤としての使用ｉｉ
AR090397A1 (es) 2011-11-18 2014-11-12 Basf Se Compuestos de 1,2,5-oxadiazol sustituido y su uso como herbicidas iii
JP2015502966A (ja) 2011-12-21 2015-01-29 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ Ｎ−チオ−アントラニルアミド化合物、及び殺有害生物剤としてのそれらの使用
WO2013113789A1 (en) 2012-02-02 2013-08-08 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
EP2819511A1 (en) 2012-03-01 2015-01-07 Basf Se Adjuvants based on optionally alkoxylated reaction products of glycerol carbonate and alkylamines
WO2013135605A1 (en) 2012-03-12 2013-09-19 Basf Se Liquid concentrate formulation containing a pyripyropene insecticide ii
CN104168769B (zh) 2012-03-12 2016-12-14 巴斯夫欧洲公司 生产啶南平杀虫剂的含水悬浮液浓缩物配制剂的方法
JP6085622B2 (ja) 2012-03-12 2017-02-22 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ ピリピロペン殺虫剤ｉを含有する液体濃厚製剤
KR102056607B1 (ko) 2012-03-13 2019-12-17 바스프 에스이 피리피로펜 살충제 ｉｉｉ 함유 액체 농축 제형
BR112014024012A8 (pt) 2012-03-29 2017-07-25 Basf Se Cocristais, processo para a preparação dos cocristais, composição agroquímica, utilização da composição agroquímica e método para o controle da vegetação indesejável
WO2013144228A1 (en) 2012-03-29 2013-10-03 Basf Se Pesticidal methods using heterocyclic compounds and derivatives for combating animal pests
WO2013144223A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Basf Se N-substituted pyrimidinylidene compounds and derivatives for combating animal pests
US9334238B2 (en) 2012-03-30 2016-05-10 Basf Se N-substituted pyridinylidenes for combating animal pests
WO2013149903A1 (en) 2012-04-03 2013-10-10 Basf Se N- substituted hetero - bicyclic furanone derivatives for combating animal
WO2013150115A1 (en) 2012-04-05 2013-10-10 Basf Se N- substituted hetero - bicyclic compounds and derivatives for combating animal pests
WO2013076316A2 (en) 2012-04-27 2013-05-30 Basf Se Substituted n-(tetrazol-5-yl)- and n-(triazol-5-yl)hetarylcarboxamide compounds and their use as herbicides
EA027847B1 (ru) 2012-04-27 2017-09-29 Басф Се Замещенные n-(тетразол-5-ил)- и n-(триазол-5-ил)арилкарбоксамидные соединения и их применение в качестве гербицидов
CN104395304A (zh) 2012-04-27 2015-03-04 巴斯夫欧洲公司 取代的n-(四唑-5-基)-和n-(三唑-5-基)芳基羧酰胺化合物及其作为除草剂的用途
US9398768B2 (en) 2012-04-27 2016-07-26 Basf Se Substituted N-(tetrazol-5-yl)- and N-(triazol-5-yl)pyridin-3-yl-carboxamide compounds and their use as herbicides
BR112014025484A2 (pt) 2012-05-04 2017-08-08 Basf Se compostos substituídos e de fórmula (i). composição agrícola, mistura, métodos para o combate ou controle das pragas, para proteção das culturas, para proteção das sementes, semente, utilização de um composto e método para o tratamento de um animal.
CN104619843B (zh) 2012-05-24 2020-03-06 A.B.种子有限公司 用于使基因表达沉默的组合物和方法
KR20150021536A (ko) 2012-05-24 2015-03-02 바스프 에스이 Ｎ－티오－안트라닐아미드 화합물 및 살충제로서의 그의 용도
WO2013186089A2 (en) 2012-06-14 2013-12-19 Basf Se Pesticidal methods using substituted 3-pyridyl thiazole compounds and derivatives for combating animal pests
BR122019015130B1 (pt) 2012-06-20 2020-04-07 Basf Se mistura pesticida, composição, composição agrícola, métodos para o combate ou controle das pragas de invertebrados, para a proteção dos vegetais em crescimento ou dos materias de propagação vegetal, para a proteção de material de propagação vegetal, uso de uma mistura pesticida e métodos para o combate dos fungos fitopatogênicos nocivos e para proteger vegetais de fungos fitopatogênicos nocivos
MX363705B (es) 2012-06-21 2019-03-29 Basf Se Adyuvante que comprende un alcoxilato de 2-propilheptilamina, tesioactivo a base de azucar y agente de control de la deriva y/o humectante.
EP2684879A1 (en) 2012-07-09 2014-01-15 Basf Se Substituted mesoionic compounds for combating animal pests
WO2014045228A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Basf Se Pyrethroid insecticide for protecting plants and seed
WO2014053407A1 (en) 2012-10-01 2014-04-10 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
KR20150067270A (ko) 2012-10-01 2015-06-17 바스프 에스이 안트라닐아미드 화합물을 포함하는 살충적으로 활성인 혼합물
AR093771A1 (es) 2012-10-01 2015-06-24 Basf Se Metodo para controlar insectos resistentes a insecticidas
AR093828A1 (es) 2012-10-01 2015-06-24 Basf Se Mezclas activas como plaguicidas, que comprenden compuestos de antranilamida
WO2014053401A2 (en) 2012-10-01 2014-04-10 Basf Se Method of improving plant health
EP2903439A1 (en) 2012-10-01 2015-08-12 Basf Se Method of controlling ryanodine-modulator insecticide resistant insects
EP2984074A1 (en) 2012-12-14 2016-02-17 Basf Se Malononitrile compounds for controlling animal pests
BR112015014792A2 (pt) 2012-12-21 2017-07-11 Basf Se utilização de um composto, composto de fórmula, método para a preparação de um composto de fórmula, composição agrícola e/ou veterinária, métodos para o controle das pragas, para a proteção de culturas, para a proteção das sementes, sementes, métodos para o tratamento ou proteção dos animais e para a preparação de uma composição
WO2014128136A1 (en) 2013-02-20 2014-08-28 Basf Se Anthranilamide compounds and their use as pesticides
JP2016516011A (ja) 2013-03-07 2016-06-02 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ ピリメタニル及び選択されたジチインテトラカルボキシイミドの共結晶
WO2014164761A1 (en) 2013-03-13 2014-10-09 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US10568328B2 (en) 2013-03-15 2020-02-25 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
CA2908512C (en) * 2013-04-05 2023-10-24 Dow Agrosciences Llc Methods and compositions for integration of an exogenous sequence within the genome of plants
US20160050923A1 (en) 2013-04-19 2016-02-25 Basf Se N-substituted acyl-imino-pyridine compounds and derivatives for combating animal pests
CA2911932A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 Nimbus Apollo, Inc. Acc inhibitors and uses thereof
JP6417402B2 (ja) 2013-05-10 2018-11-07 ギリアド アポロ， エルエルシー Ａｃｃ阻害剤及びその使用
PL2997016T3 (pl) 2013-05-15 2018-03-30 Basf Se PODSTAWIONE ZWIĄZKI N-(TETRAZOL-5-ILO)- i N-(TRIAZOL-5ILO) ARYLOKARBOKSYAMIDOWE I ICH ZASTOSOWANIE JAKO HERBICYDY
WO2014184019A1 (en) 2013-05-15 2014-11-20 Basf Se N-(1,2,5-oxadiazol-3-yl)carboxamide compounds and their use as herbicides
WO2014184014A1 (en) 2013-05-15 2014-11-20 Basf Se N-(1,2,5-oxadiazol-3-yl)carboxamide compounds and their use as herbicides
WO2014184058A1 (en) 2013-05-15 2014-11-20 Basf Se Substituted 1,2,5-oxadiazole compounds and their use as herbicides
EP2815649A1 (en) 2013-06-18 2014-12-24 Basf Se Fungicidal mixtures II comprising strobilurin-type fungicides
EP3022190B1 (en) 2013-07-18 2017-06-28 Basf Se N-(1,2,4-triazol-3-yl)-pyridin-2-yl-carboxamide derivatives as herbicides
CA2918387C (en) 2013-07-19 2021-11-02 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling leptinotarsa
EP2835052A1 (en) 2013-08-07 2015-02-11 Basf Se Fungicidal mixtures comprising pyrimidine fungicides
AR097362A1 (es) 2013-08-16 2016-03-09 Cheminova As Combinación de 2-metilbifenil-3-ilmetil (z)-(1r)-cis-3-(2-cloro-3,3,3-trifluorprop-1-enil)-2, 2-dimetilciclopropanocarboxilato con por lo menos un insecticida, acaricida, nematicida y/o fungicida
CA2922506A1 (en) 2013-09-19 2015-03-26 Basf Se N-acylimino heterocyclic compounds
WO2015052173A1 (en) 2013-10-10 2015-04-16 Basf Se Tetrazole and triazole compounds and their use as herbicides
CN105636950A (zh) 2013-10-10 2016-06-01 巴斯夫欧洲公司 取代的n-(四唑-5-基)-和n-(三唑-5-基)芳基羧酰胺化合物及其作为除草剂的用途
WO2015052178A1 (en) 2013-10-10 2015-04-16 Basf Se 1,2,5-oxadiazole compounds and their use as herbicides
EA201600326A1 (ru) 2013-10-18 2016-10-31 Басф Агрокемикэл Продактс Б.В. Применение пестицидного активного производного карбоксамида в способах применения и обработки семян и почвы
NZ719544A (en) 2013-11-04 2022-09-30 Beeologics Inc Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations
EP2868197A1 (en) 2013-11-05 2015-05-06 Basf Se Herbicidal compositions
EP2868196A1 (en) 2013-11-05 2015-05-06 Basf Se Herbicidal compositions
UA119253C2 (uk) 2013-12-10 2019-05-27 Біолоджикс, Інк. Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл
JP2017502022A (ja) 2013-12-18 2017-01-19 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ Ｎ−置換イミノ複素環式化合物
AR099092A1 (es) 2014-01-15 2016-06-29 Monsanto Technology Llc Métodos y composiciones para el control de malezas utilizando polinucleótidos epsps
AR100304A1 (es) 2014-02-05 2016-09-28 Basf Corp Formulación de recubrimiento de semillas
EP2907807A1 (en) 2014-02-18 2015-08-19 Basf Se Benzamide compounds and their use as herbicides
US11091770B2 (en) 2014-04-01 2021-08-17 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling insect pests
EP3139740B1 (en) 2014-05-06 2020-09-16 Basf Se Composition comprising a pesticide and a hydroxyalkyl polyoxylene glycol ether
AU2015280252A1 (en) 2014-06-23 2017-01-12 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for regulating gene expression via RNA interference
EP3161138A4 (en) 2014-06-25 2017-12-06 Monsanto Technology LLC Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression
US9504223B2 (en) 2014-06-25 2016-11-29 Monsanto Technology Llc Wheat cultivar BZ9WM09-1663
EP3272217A1 (en) 2014-06-25 2018-01-24 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions
EP2962567A1 (en) 2014-07-01 2016-01-06 Basf Se Ternary mixtures comprising biopesticides and at least two chemical insecticides
KR102469841B1 (ko) 2014-07-14 2022-11-22 바스프 에스이 살충 조성물
CA2955842A1 (en) 2014-07-29 2016-02-04 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling insect pests
CN105349623A (zh) * 2014-08-13 2016-02-24 深圳市作物分子设计育种研究院 抗除草剂基因OsmALS的HRM检测方法和应用
WO2016034615A1 (en) 2014-09-02 2016-03-10 BASF Agro B.V. Aqueous insecticide formulation containing hyperbranched polymer
US9648827B2 (en) 2014-10-20 2017-05-16 Monsanto Technology Llc Wheat cultivar BZ6WM09-1030
EP3028573A1 (en) 2014-12-05 2016-06-08 Basf Se Use of a triazole fungicide on transgenic plants
CN108064288B (zh) 2015-01-22 2021-11-26 孟山都技术公司 用于控制叶甲属的组合物和方法
CA2975025A1 (en) 2015-02-10 2016-08-18 Basf Se Composition comprising a pesticide and an alkoxylated ester
EP3061346A1 (en) 2015-02-26 2016-08-31 Bayer CropScience AG Use of fluopyram and biological control agents to control harmful fungi
US10463040B2 (en) 2015-03-31 2019-11-05 Basf Se Composition comprising a pesticide and isononanoic acid N,N-dimethyl amide
WO2016174042A1 (en) 2015-04-27 2016-11-03 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions
CN107750125A (zh) 2015-06-02 2018-03-02 孟山都技术有限公司 用于将多核苷酸递送至植物中的组合物和方法
WO2016196782A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for introducing nucleic acids into plants
MX2018006287A (es) 2015-11-25 2018-09-07 Gilead Apollo Llc Inhibidores de acc de triazol y usos de los mismos.
MX2018006288A (es) 2015-11-25 2018-09-07 Gilead Apollo Llc Inhibidores de acc tipo ester y usos de los mismos.
PT3380480T (pt) 2015-11-25 2023-03-14 Gilead Apollo Llc Inibidores de pirazol acc e seus usos
KR20180095901A (ko) 2015-12-17 2018-08-28 바스프 에스이 벤즈아미드 화합물 및 제초제로서 그들의 용도
UY37137A (es) 2016-02-24 2017-09-29 Merial Inc Compuestos antiparasitarios de isoxazolina, formulaciones inyectables de acción prolongada que los comprenden, métodos y usos de los mismos
BR112018017034A2 (pt) 2016-03-10 2018-12-26 Basf Se misturas e seu uso, composição agroquímica, método de controle de fungos daninhos fitopatogênicos e material de propagação vegetal
EP3245872A1 (en) 2016-05-20 2017-11-22 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions
WO2017207368A1 (en) 2016-06-02 2017-12-07 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions
EP3338552A1 (en) 2016-12-21 2018-06-27 Basf Se Use of a tetrazolinone fungicide on transgenic plants
ES2875559T3 (es) 2017-02-01 2021-11-10 Basf Se Concentrado emulsionable
EP3630735B1 (en) 2017-05-30 2021-05-05 Basf Se Benzamide compounds and their use as herbicides
EP3630734A1 (en) 2017-05-30 2020-04-08 Basf Se Benzamide compounds and their use as herbicides
AR112112A1 (es) 2017-06-20 2019-09-18 Basf Se Compuestos de benzamida y su uso como herbicidas
EP3641544A1 (en) 2017-06-23 2020-04-29 Basf Se Pesticidal mixtures comprising a pyrazole compound
WO2019012382A1 (en) 2017-07-10 2019-01-17 Basf Se MIXTURES COMPRISING A UREASE INHIBITOR (UI) AND A NITRIFICATION INHIBITOR SUCH AS 2- (3,4-DIMETHYL-1H-PYRAZOL-1-YL) SUCCINIC ACID (DMPSA) OR 3,4-DIMETHYL PYRAZOLIUM GLYCOLATE (DMPG)
AR112342A1 (es) 2017-07-21 2019-10-16 Basf Se Compuestos de benzamida y su uso como herbicidas
US20200323204A1 (en) 2017-11-15 2020-10-15 Basf Se Tank-Mix
WO2019105995A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 Basf Se Benzamide compounds and their use as herbicides
US11504748B2 (en) 2017-12-03 2022-11-22 Seedx Technologies Inc. Systems and methods for sorting of seeds
EP3707642A1 (en) 2017-12-03 2020-09-16 Seedx Technologies Inc. Systems and methods for sorting of seeds
EP3707641A2 (en) 2017-12-03 2020-09-16 Seedx Technologies Inc. Systems and methods for sorting of seeds
WO2019122347A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Basf Se N-(1,2,5-oxadiazol-3-yl)-benzamide compounds and their use as herbicides
AR114040A1 (es) 2017-12-22 2020-07-15 Basf Se Compuestos de benzamida y su uso como herbicidas
EP3508480A1 (en) 2018-01-08 2019-07-10 Basf Se Benzamide compounds and their use as herbicides
WO2019162309A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 Basf Se Benzamide compounds and their use as herbicides
WO2019162308A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 Basf Se Benzamide compounds and their use as herbicides
US20210368794A1 (en) 2018-09-19 2021-12-02 Basf Se Pesticidal mixtures comprising a mesoionic compound
BR112021004526A2 (pt) 2018-09-28 2021-06-08 Basf Se uso do composto, métodos de proteção de plantas, de controle ou combate a pragas invertebradas e de tratamento de sementes e semente
EP3680223A1 (en) 2019-01-10 2020-07-15 Basf Se Mixture comprising an urease inhibitor (ui) and a nitrification inhibitor (ni) such as an ni mixture comprising 2-(3,4-dimethyl-1h-pyrazol-1-yl)succinic acid (dmpsa) and dicyandiamide (dcd)
JP2023507527A (ja) 2019-12-23 2023-02-22 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 酵素によって増強された農薬化合物の根からの取り込み
WO2021144195A1 (en) 2020-01-16 2021-07-22 Basf Se Mixtures comprising nitrification inhibitors and carriers
US20230052403A1 (en) 2020-01-16 2023-02-16 Basf Se Mixtures comprising a solid carrier comprising an urease inhibitor and a further solid carrier comprising a nitrification inhibitor
CN116234444A (zh) 2020-07-06 2023-06-06 皮埃企业有限公司 包含硫杂环丁烷氧基化合物、其氧化物或其盐的具有杀虫活性的混合物
TW202220557A (zh) 2020-07-27 2022-06-01 印度商皮埃企業有限公司 包含吡唑並吡啶鄰氨基苯甲酰胺化合物、其氧化物或鹽的農藥活性混合物

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4761373A (en) 1984-03-06 1988-08-02 Molecular Genetics, Inc. Herbicide resistance in plants
US5331107A (en) * 1984-03-06 1994-07-19 Mgi Pharma, Inc. Herbicide resistance in plants
US5304732A (en) 1984-03-06 1994-04-19 Mgi Pharma, Inc. Herbicide resistance in plants
US6211439B1 (en) 1984-08-10 2001-04-03 Mgi Pharma, Inc Herbicide resistance in plants
US5013659A (en) 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
EP0397687B1 (en) 1987-12-21 1994-05-11 The University Of Toledo Agrobacterium mediated transformation of germinating plant seeds
US5990387A (en) 1988-06-10 1999-11-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Stable transformation of plant cells
EP0360750A3 (en) 1988-09-22 1991-01-02 Ciba-Geigy Ag Novel herbicide tolerant plants
EP0375875A3 (en) 1988-12-30 1991-01-09 American Cyanamid Company A method to improve the protection of crops from herbicidal injury
US5086169A (en) 1989-04-20 1992-02-04 The Research Foundation Of State University Of New York Isolated pollen-specific promoter of corn
WO1990014000A1 (en) * 1989-05-17 1990-11-29 Imperial Chemical Industries Plc Herbicide resistant maize
GB8911295D0 (en) * 1989-05-17 1989-07-05 Ici Plc Herbicide resistant maize
US5322783A (en) 1989-10-17 1994-06-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Soybean transformation by microparticle bombardment
US5767366A (en) * 1991-02-19 1998-06-16 Louisiana State University Board Of Supervisors, A Governing Body Of Louisiana State University Agricultural And Mechanical College Mutant acetolactate synthase gene from Ararbidopsis thaliana for conferring imidazolinone resistance to crop plants
DE69231015T2 (de) 1991-04-08 2000-09-28 American Cyanamid Co Verwendung von gegen ein AHAS-inhibierendes Herbizid resistantem Weizen und Verfahren zu dessen Selektion
US5731180A (en) 1991-07-31 1998-03-24 American Cyanamid Company Imidazolinone resistant AHAS mutants
AU2781892A (en) 1991-10-07 1993-05-03 Ciba-Geigy Ag Particle gun for introducing dna into intact cells
EP0651814B1 (en) 1992-07-09 1997-01-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize pollen-specific polygalacturonase gene
GB9324707D0 (en) 1993-12-02 1994-01-19 Olsen Odd Arne Promoter
GB9403512D0 (en) 1994-02-24 1994-04-13 Olsen Odd Arne Promoter
US5470359A (en) 1994-04-21 1995-11-28 Pioneer Hi-Bred Internation, Inc. Regulatory element conferring tapetum specificity
US5853973A (en) 1995-04-20 1998-12-29 American Cyanamid Company Structure based designed herbicide resistant products
ES2276475T5 (es) 1997-09-30 2014-07-11 The Regents Of The University Of California Producción de proteínas en semillas de plantas
US6696294B1 (en) * 1998-06-19 2004-02-24 Northwest Plant Breeding Co. Methods for generating and identifying mutant polyploid plants, and uses therefor
WO2000053763A1 (en) 1999-03-08 2000-09-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize metallothionein gene and promoter
US6613963B1 (en) * 2000-03-10 2003-09-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Herbicide tolerant Brassica juncea and method of production
US6936467B2 (en) 2000-03-27 2005-08-30 University Of Delaware Targeted chromosomal genomic alterations with modified single stranded oligonucleotides
MX233208B (es) * 2000-04-28 2005-12-20 Basf Ag Uso del gen mutante ahas 2 del maiz xi12 y herbicidas de imidazolinona para la seleccion de plantas de maiz, arroz y trigo, monocotiledoneas transgenicas, resistentes a los herbicidas de imidazolinona.
AU2001261358B2 (en) * 2000-05-10 2006-07-13 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Resistance to acetohydroxyacid synthase-inhibiting herbicides
US7232942B2 (en) 2001-05-14 2007-06-19 University Of Saskatchewan Lentil plants having increased resistance to imidazolinone herbicides
MXPA04001012A (es) * 2001-08-09 2005-06-06 Univ Saskatchewan Plantas de trigo que tienen resistencia incrementada a los herbicidas de imidazolinona.
AR036138A1 (es) * 2001-08-09 2004-08-11 Univ Saskatchewan Plantas de trigo que tienen resistencia aumentada a herbicidas de imidazolinona
EP2604107B1 (en) 2001-08-09 2018-10-10 Northwest Plant Breeding Company Wheat plants having increased resistance to imidazolinone herbicides

Also Published As

Publication number Publication date
US8110727B2 (en) 2012-02-07
US7897845B2 (en) 2011-03-01
US20090192039A1 (en) 2009-07-30
AR036336A1 (es) 2004-09-01
MXPA04001012A (es) 2005-06-06
US20120266331A1 (en) 2012-10-18
US9695438B2 (en) 2017-07-04
RU2337531C2 (ru) 2008-11-10
CA2790951C (en) 2016-08-30
AU2008203779B2 (en) 2012-03-22
RU2004106627A (ru) 2005-07-10
CA2456314C (en) 2012-11-13
UA87261C2 (uk) 2009-07-10
AU2002319037B2 (en) 2008-05-29
US20170022514A1 (en) 2017-01-26
BRPI0211809B1 (pt) 2019-04-24
US9499832B2 (en) 2016-11-22
EP1414975A1 (en) 2004-05-06
AU2008203779A1 (en) 2008-08-28
WO2003014357A1 (en) 2003-02-20
US20140011681A1 (en) 2014-01-09
US20120266330A1 (en) 2012-10-18
CA2790951A1 (en) 2003-02-20
EP1414975B1 (en) 2016-04-20
US20160097057A1 (en) 2016-04-07
BR0211809A (pt) 2004-09-08
US20040237134A1 (en) 2004-11-25
CA2456314A1 (en) 2003-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA104990C2 (uk) Рослина пшениці з підвищеною резистентністю до імідазолінонових гербіцидів
US10570411B2 (en) Wheat plants having increased tolerance to imidazolinone herbicides
ES2417012T3 (es) Plantas de trigo que exhiben resistencia aumentada a los herbicidas de imidazolinona
EP1659855B1 (en) Rice plants having increased tolerance to imidazolinone herbicides
RU2337532C2 (ru) Растения пшеницы с повышенной устойчивостью к имидазолиноновым гербицидам
RU2525933C2 (ru) Новая мутация, вовлеченная в повышенную толерантность растений к имидазолиноновым гербицидам
US20170204429A1 (en) ACETYL-CoA CARBOXYLASE HERBICIDE RESISTANT SORGHUM
ES2643945T3 (es) Sorgo resistente a herbicidas de acetolactato sintetasa
US10889828B2 (en) Transgenic plants with enhanced traits
CN114606249A (zh) 编码am79 epsps蛋白的核酸分子及其应用