TWI763956B

TWI763956B - 治療癌症的抗前胃泌激素抗體與免疫療法之組合療法

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Publication number: TWI763956B
Application number: TW107143746A
Authority: TW
Inventors: 亞歷山大皮瑞爾
Original assignee: 盧森堡商前胃泌激素及癌症有限公司
Priority date: 2017-12-05
Filing date: 2018-12-05
Publication date: 2022-05-11
Also published as: KR20200118409A; JP7104153B2; CN111670197A; SG11202005296SA; KR102461238B1; DK3720879T3; CA3084687A1; EP3720879B1; TW201927805A; AU2018379320B2; AU2018379320A1; PT3720879T; RU2020121176A; ES2920283T3; PL3720879T3; US11046758B2; EP3720879A1; JP2021505576A; US20210324069A1; WO2019110662A1

Abstract

本發明係有關於包含抗前胃泌激素(抗-hPG)單株抗體及免疫查核點抑制劑之組合，以及包含該等組合之藥學組成物。亦提供使用該等組合之癌症治療方法。

Description

治療癌症的抗前胃泌激素抗體與免疫療法之組合療法

發明領域本發明係有關於治療癌症的抗前胃泌激素抗體與免疫療法之組合療法。

發明背景免疫療法已經改變癌症療法領域的遊戲規則。人類癌症攜帶眾多的體基因突變及表觀遺傳改變的基因，其等之產物可能被認為是外來抗原。腫瘤細胞透過誘發腫瘤專一性T細胞的耐受性而逃避內生的免疫反應。一旦腫瘤抗原業已刺激反應、為了確保免疫發炎反應不會一直活化，多個控制子或“檢查點”會準備就緒或活化。此等免疫查核點主要由T細胞受體來代表，T細胞受體與周圍腫瘤微環境中細胞上的配體結合，形成免疫突觸其繼而調控T細胞功能。

一種觸發抗腫瘤免疫反應的方法被稱為“檢查點阻斷”，其係指阻斷癌細胞活化的免疫抑制途徑。免疫檢查點為基的療法正以驚人的速度反應發展。作用於免疫系統(和病原體面對面的生物系統)且於某些癌症有效的新分子到來跨越了主要的轉折點。利用此等新分子使得能夠於一些皮膚黑色素瘤的患者觀察到腫瘤退化。新近許可的數個胞毒型T淋巴球(CTL)關聯性抗原-4-CD80/CD86途徑(伊匹單抗(Ipilimumab)/益伏(Yervoy))及PD-1—PD-L1/PD-L2途徑之阻斷劑，例如納武單抗(nivolumab)(保疾伏(Opdivo))、派姆單抗(pembrolizumab)(吉舒達(Keytruda))、或阿特朱單抗(atezolizumab)(癌自禦(Tecentriq))，引領了免疫查核點(IC)抑制劑(ICIs)作為引領先進癌症治療的關鍵組分。

然而，即使是黑色素瘤，多數患者僅表現出有限或暫時的反應，而如乳癌、前列腺癌或結腸癌這樣常見的癌症卻只是零星地回應。此外，胰臟癌及結腸直腸癌對此等治療模式，具體而言為單一製劑PD-1阻斷，仍然留有且很大的抗性。縱然檢查點阻斷抗體觀察到耐久的反應，但很清楚不是所有的患者，甚至是在免疫療法反應性癌症的子集之內，都有展現出腫瘤退化。

因此，仍然需要鑑定出額外的途徑以提供現存的免疫查核點抑制劑途徑致效作用或額外的抑制作用。

發明概要本發明人已展現一種與前胃泌激素結合之分子及免疫查核點抑制劑之組合會導致更大的對抗癌症治療功效。值得注意的是，本發明人展現投予抗前胃泌激素單株抗體組合以免疫查核點抑制劑如抗-PD-1抗體會使結腸直腸癌細胞株異種移植小鼠之存活顯著地增加。此係由與各療法單獨相比之中位數存活時間顯著增加予以闡明。再者，該抗前胃泌激素單株抗體及免疫查核點抑制劑之組合導致干擾素γ的表現位準超過一倍。

於第一個態樣中，本發明係有關於一種包含一前胃泌激素結合分子及免疫查核點抑制劑之組合。較佳地，本發明係有關於一種一前胃泌激素結合分子及免疫查核點抑制劑之組合。免疫查核點 抑制劑

當使用於本文中，“查核點抑制劑”係指一分子，例如舉例而言，小分子、可溶性受體或抗體，其靶定免疫查核點且阻斷該免疫查核點之功能。更具體地說，當使用於本文中，“查核點抑制劑”係指一分子，例如舉例而言，小分子、可溶性受體或抗體，其阻斷免疫系統細胞，例如T細胞與一些癌細胞製造的某些蛋白。當使用於本文中，“免疫查核點”或“免疫查核點蛋白”，此等蛋白會調控免疫系統之T細胞功能。值得注意的是，其等協助繼續檢查免疫反應且能防止T細胞殺死癌細胞。該免疫查核點蛋白透過與特異性配體交互作用來達成此結果，該交互作用會傳送訊息至T細胞內且基本上關掉或抑制T細胞功能。抑制此等蛋白導致T細胞功能及對癌細胞的免疫反應恢復。查核點蛋白之實例包括，但不限於：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4(屬於CD2家族分子且表現於所有的NK、γδ及記憶CD8+ (αβ)T細胞上)、CD160(亦稱為BY55)、CGEN-15049、CHK 1及CHK2激酶、IDO1、A2aR及各種B-7家族配體。

於一第一具體例中，該免疫查核點蛋白為下列中任一抑制劑：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4(屬於CD2家族分子且表現於所有的NK、γδ及記憶CD8+(αβ)T細胞上)、CD160(亦稱為BY55)、CGEN-15049、CHK 1及CHK2激酶、IDO1、A2aR及各種B-7家族配體之任一者。

當使用於本文中，“抑制劑”或“拮抗劑”係指一種能抑制或者降低標靶蛋白例如以上所述的任一免疫查核點蛋白，的一種或更多種生物活性的分子。於一些具體例中，免疫查核點蛋白之抑制劑(例如，本文提供的拮抗抗體)舉例而言，能藉由使表現該免疫查核點蛋白的細胞(例如T細胞)之活化及/或細胞訊息傳導路徑抑制或者降低來作用從而抑制細胞的生物活性，相對於缺少該拮抗劑的生物活性。

例示性免疫查核點抑制劑包括抗-CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)、抗-LAG-3抗體(例如BMS-986016)、抗-B7-H3抗體、抗-B7-H4抗體、抗-Tim3抗體(例如TSR-022、MBG453)、抗-BTLA抗體、抗-KIR抗體、抗-A2aR抗體、抗CD200抗體、抗-PD-1抗體(例如，派姆單抗、納武單抗、西米匹單抗(cemiplimab)、聯合利妥昔單抗(pidilizumab))、抗-PD-L1抗體(例如阿特朱單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、度伐魯單抗(durvalumab)、BMS 936559)、抗-VISTA抗體(例如JNJ 61610588)、抗-CD28抗體、抗-CD80或-CD86 抗體、抗-B7RP1抗體、抗-B7-H3抗體、抗-HVEM抗體、抗-CD137抗體(例如優瑞路單抗(urelumab))、抗-CD137L抗體、抗-OX40(例如9B12、PF-04518600、MEDI6469)、抗-OX40L抗體、抗-CD40或-CD40L抗體、抗-GAL9抗體、抗-IL-10抗體、PD-1配體如PDL-1或PD-L2之細胞外域的融合蛋白及IgG1(例如，AMP-224)、OX40配體如OX40L之細胞外域的融合蛋白及IgG1(例如，MEDI6383)、IDO1藥物(例如艾帕斯塔(epacadostat))及A2aR藥物。一些免疫查核點抑制劑已經許可或目前正在進行臨床試驗。此等抑制劑包括伊匹單抗(ipilimumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、西米匹單抗(cemiplimab)、聯合利妥昔單抗(pidilizumab)、阿特朱單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、度伐魯單抗(durvalumab)、BMS 936559、JNJ 61610588、優瑞路單抗(urelumab)、9B12、PF-04518600、BMS-986016、TSR-022、MBG453、MEDI6469、MEDI6383及艾帕斯塔(epacadostat)。

免疫查核點蛋白之實例係列舉於舉例而言，Marin-Acevedo等人，Journal of Hematology & Oncology 11 : 8, 2018；Kavecansky and Pavlick,AJHO 13 (2): 9-20, 2017；Wei等人，Cancer Discov 8 (9): 1069–86, 2018之內。

較佳地，該免疫查核點抑制劑為CTLA-4、LAG-3、Tim3、PD-1、PD-L1、VISTA、CD137、OX40或IDO1中的一抑制劑。

於一些具體例中，該抑制劑為小分子藥物。於一些具體例中，該抑制劑為可溶性受體。於一些具體例中，該抑制劑為抗體。

“小分子藥物”在此廣泛用來提及一種典型具有小於約1000的分子量之有機、無機或有機金屬化合物。本發明之小分子藥物包含具有小於約1000的分子量之寡肽及其他生物分子。

按“可溶性受體”，於本文係指一種胜肽或多肽其包含一受體之細胞外域，但非其跨膜域或細胞質域。

當使用於本文中，術語“抗體”意欲包括多株抗體及單株抗體。一種抗體(或“免疫球蛋白”)係由一醣蛋白組成，該醣蛋白包含由雙硫鍵互相連接之至少二個重(H)鏈與二個輕(L)鏈。各重鏈包含一重鏈可變異區域(或域) (在此縮寫為HCVR或VH)與一重鏈守恆區域。重鏈守恆區域包含三個域，CH1、CH2與CH3。各輕鏈包含一輕鏈可變異區域(在此縮寫為LCVR或VL)與一輕鏈恆定區域。輕鏈恆定區域包含一個域，CL。VH和VL區域能進一步再分成高度變異區域，稱為“互補性決定區”(CDR)或“高度變異區域”，其主要負責與抗原的表位結合並且穿插較恆定的區域，稱為框架區域(FR)。辨識抗體的輕及重鏈內的CDRs及判定其等之序列的方法為熟習此藝者眾所周知的。為避免疑義，在本文沒有任何相反指示的情況下，用語CDRs意指IMGT所定義的抗體之重及輕鏈的高度變異區域，其中IMGT獨特的編號提供了框架區域以及互補性決定區：CDR1-IMGT：27至38、CDR2，的標準化劃界。

已經定義出IMGT獨特的編號來比較可變異域，不管為什麼樣的抗原受體、鏈類型，或是物種[Lefranc M.-P., Immunology Today 18, 509 (1997) / Lefranc M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999) / Lefranc, M.-P., Pommié, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V.以及Lefranc, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]。於IMGT獨特的編號方面，守恆性胺基酸總是具有相同的位置，譬如半胱胺酸23(1st-CYS)、色胺酸41(CONSERVED-TRP)、疏水性胺基酸89、半胱胺酸104(2nd-CYS)、苯丙胺酸或色胺酸118(J-PHE或J-TRP)。IMGT獨特的編號提供了框架區域(FR1-IMGT：位置1至26，FR2-IMGT：39至55，FR3-IMGT：66至104和FR4-IMGT：118至128)以及互補決定區：CDR1-IMGT：27至38、CDR2-IMGT：56至65和CDR3-IMGT：105至117，的標準化劃界。因間隙表示未被佔用的位置，所以CDR-IMGT的長度(顯示於括號之間且由點分開，例如[8.8.13])變成決定性的資訊。IMGT獨特的編號係使用於2D圖形表示法中，稱為IMGT Colliers de Perles[Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002) / Kaas, Q. and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)]，以及於IMGT/3D結構-DB之3D結構中[Kaas, Q., Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)]。

各VH和VL係由三個CDR與四個FR組成，從胺基端至羧基端以下列順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈與輕鏈之可變異區域含有與一抗原交互作用的結合域。抗體之恆定區可媒介免疫球蛋白與宿主組織或因子之結合，包括免疫系統之各種細胞(例如效應子細胞)及古典補體系統之第一組分(CIq)。抗體可以是不同的同型(isotype) (亦即IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)。

“多株抗體”係一抗體，其與一種或更多種其他非同一的抗體一起產生或存在。一般而言，多株抗體係在生產非同一的抗體之數種其他B淋巴球存在的情況下由一種B淋巴球產生。通常，多株抗體係從經免疫的動物直接獲得。

術語“單株抗體”係表明由密切同源的抗體族群所產生的一抗體，其中族群除了可以以最小比例找到的一些可能天然存在的突變之外，均包含同一的抗體。一單株抗體係由一單一細胞殖株，舉例而言一融合瘤，生長所產生以及係特徵在於一類及亞類之重鏈，以及一型的輕鏈。

於一些具體例中，該抑制劑係拮抗抗體，即一種能抑制或者降低抗原，例如本文所述的任一免疫查核點蛋白的一種或更多種生物活性的抗體。某些拮抗抗體實質或完全抑制該抗原的一種或更多種生物活性。術語“抑制”或其語法的等價物當用於抗體的上下文中，係指一種抗體其抑止、限制或降低與該抗體結合的抗原之生物活性。一種抗體的抑制效應可能為會導致抗原可測得的生物活性變化者。

於一具體例中，該免疫查核點蛋白抑制劑係選自於下列構成之群組：伊匹單抗、派姆單抗、納武單抗、西米匹單抗、聯合利妥昔單抗、阿特朱單抗、阿維魯單抗、度伐魯單抗、BMS 936559、JNJ 61610588、優瑞路單抗、9B12、PF-04518600、BMS-986016、TSR-022、MBG453、MEDI6469、MEDI6383及艾帕斯塔。

於一具體例中，該免疫查核點抑制劑係CTLA-4、PD-1或PD-L1的一抑制劑。於較佳的具體例中，該免疫查核點抑制劑係對抗CTLA-4、PD-1或PD-L1中任一者的一抗體。更佳地，該抗體係拮抗抗體。甚至更佳地，該拮抗抗體係於伊匹單抗、派姆單抗、納武單抗、西米匹單抗、聯合利妥昔單抗、阿特朱單抗、阿維魯單抗及度伐魯單抗之間挑選。

於一具體例中，該免疫查核點抑制劑係PD-1的一抑制劑。於較佳的具體例中，該免疫查核點抑制劑係對抗PD-1的一抗體。更佳地，該抗體係拮抗抗體。甚至更佳地，該免疫查核點抑制劑係派姆單抗、納武單抗、西米匹單抗或聯合利妥昔單抗。抗 -hPG 抗體

前胃泌激素(PG)由結腸直腸腫瘤細胞產生且認為其藉由引發阻斷細胞正常分化過程，包括導致細胞死亡之過程之訊息傳導路徑來刺激此等細胞增殖。缺乏編碼前胃泌激素之胃泌激素基因轉錄本在活體外 及活體內 CRC模式中會誘導腫瘤細胞之細胞分化及程式性細胞死亡，減少腫瘤細胞增殖。雖然不欲受任何操作理論限制，但認為抗-hPG抗體透過結合PG而阻斷或抑制前胃泌激素與其訊息傳導伙伴交互作用之能力。此繼而抑制結腸直腸腫瘤細胞之訊息傳導路徑，否則該訊息傳導路徑會導致增殖。

人類前胃泌激素原，101個胺基酸之胜肽(胺基酸序列參考：AAB19304.1)，為胃泌激素基因主要的轉譯產物。藉由前胃泌激素原裂解前面的21個胺基酸(訊息胜肽)而形成前胃泌激素(PG)。前胃泌激素的80個胺基酸鏈進一步藉由裂解及修飾酵素予以加工成幾個生物活性胃泌激素激素形式：胃泌激素34(G34)及甘胺酸延伸的胃泌激素34(G34-Gly)，其包含前胃泌激素的胺基酸38-71，胃泌激素17(G17)及甘胺酸延伸的胃泌激素17(G17-Gly)，其包含前胃泌激素的胺基酸55至71。

術語“胃泌激素”係指哺乳動物前胃泌激素胜肽，且特別為人類前胃泌激素。為避免疑義，在沒有任何規範的情況下，用語“人類前胃泌激素”或“hPG”係指序列SEQ ID No. 1之人類PG。人類前胃泌激素特別是包含上文提到的生物活性胃泌激素激素形式內不存在的N端域及C端域。較佳地，該N端域之序列係由SEQ ID NO. 2表示。於另一較佳具體例中，該C端域之序列係由SEQ ID NO. 3表示。

按“前胃泌激素結合分子”，於本文係指結合前胃泌激素的任何分子，但是不會結合胃泌激素-17(G17)、胃泌激素-34(G34)、甘胺酸延伸的胃泌激素-17(G17-Gly)或甘胺酸延伸的胃泌激素-34(G34-Gly)及C端側接胜肽(CTFP)。本發明的前胃泌激素結合分子可以為任何前胃泌激素結合分子，諸如，舉例而言，抗體分子或受體分子。較佳地，前胃泌激素結合分子為抗前胃泌激素抗體(抗-hPG抗體)或其抗原結合片段。

按“結合(binding)”、“結合(binds)”，或類似物，意思是該抗體或其抗原結合片段與一抗原，形成一個於生理條件下相對穩定的複合物。判定是否二個分子結合的方法為本技藝熟知的以及包括，舉例而言，平衡透析、表面電漿子共振及類似物。在一特別的具體例中，該抗體或其抗原結合片段與前胃泌激素結合之親和力比其與非特異性分子如BSA或酪蛋白結合之親和力更大至少二倍。於一更特別的具體例中，該抗體或其抗原結合片段只與前胃泌激素結合。

在一更特定具體例中，本抗-hPG抗體識別前胃泌激素之表位，其中該表位包括對應於前胃泌激素之N端部分之胺基酸序列的一胺基酸序列，其中該胺基酸序列可包括hPG之殘基10至14、hPG之殘基9至14、hPG之殘基4至10、hPG之殘基2至10或hPG之殘基2至14，其中hPG之該胺基酸序列為SEQ ID N°1。

在一更特定具體例中，該抗-hPG抗體識別前胃泌激素之表位，其中該表位包括對應於前胃泌激素之C端部分之胺基酸序列的一胺基酸序列，其中該胺基酸序列可包括hPG之殘基71至74、hPG之殘基69至73、hPG之殘基71至80(SEQ ID N°40)、hPG之殘基76至80或hPG之殘基67至74，其中hPG之該胺基酸序列為SEQ ID N°1。

在一更特別的具體例中，當藉由如本文所述之方法判定時，該抗-hPG抗體對於前胃泌激素有至少5000 nM、至少500 nM、100 nM、80 nM、60 nM、50 nM、40 nM、30 nM、20 nM、10 nM、7 nM、5 nM、4 nM、3 nM、2 nM、1 nM、0.5 nM、0.1nM、50 pM、10 pM、5 pM、1 pM、或至少0.1 pM之親和力。

較佳地，該抗-hPG抗體為中和抗-hPG抗體。

用語“中和抗-hPG抗體”係指結合PG且阻斷PG依賴性訊息傳導，導致抑制腫瘤細胞，且特別是CRC腫瘤細胞內PG誘發的反應。抑制癌細胞之PG誘發的反應可能是由細胞分化抑止、細胞死亡抑止及/或刺激細胞增殖所媒介。

在一特別的具體例中，該前胃泌激素結合抗體或其抗原結合片段係選自於下列所組成的群組：多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、駱駝化抗體、IgA1抗體、IgA2抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體、IgG4抗體及IgM抗體。

在另一特別的具體例中，結合前胃泌激素的抗體業已藉由本技藝熟悉此藝者已知的免疫方法來獲得，其中使用一胜肽作為免疫原，該胜肽之胺基酸序列包含前胃泌激素之胺基酸序列的全體或一部分。更特別地，該免疫原包含選自於下列的一胜肽： ․一胜肽，其胺基酸序列包含以下，或由以下所組成：全長前胃泌激素之胺基酸序列，且特別是SEQ ID N°1之全長人類前胃泌激素， ․一胜肽，其胺基酸序列對應於前胃泌激素，且特別是SEQ ID N°1之全長人類前胃泌激素，之胺基酸序列的一部分， ․一胜肽，其胺基酸序列對應於前胃泌激素之N端部分的一部分或整個胺基酸序列，且特別是包含以下胺基酸序列，或由以下胺基酸序列所組成之胜肽：SWKPRSQQPDAPLG(SEQ ID N°2)，及 ․一胜肽，其胺基酸序列對應於前胃泌激素之C端部分的一部分或整個胺基酸序列，且特別是包含以下胺基酸序列，或由以下胺基酸序列所組成之胜肽：QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN(SEQ ID N°3)， ․一胜肽，其胺基酸序列對應於前胃泌激素之C端部分的一部分胺基酸序列，且特別是包含對應於前胃泌激素的胺基酸71-80之胺基酸序列FGRRSAEDEN(SEQ ID N°40)之胜肽。

熟悉此藝者會了解到此種免疫作用可依需要，用來產生多株抗體或單株抗體。得到此等類型抗體中每種抗體的方法為本技藝熟知的。熟悉此藝者因而可容易地選擇及實施產生對抗任何特定抗原之多株及/或單株抗體的方法。

透過使用包含對應於人類前胃泌激素的胺基酸1-14(N-端末端)之胺基酸序列“SWKPRSQQPDAPLG”的免疫原，所產生的單株抗體之實例包括但不限於，稱為：mAb3、mAb4、mAb16、及mAb19及mAb20之單株抗體，如下列表1至表4所述。其他的單株抗體已被描述，縱然尚不清楚此等抗體是否確實會結合前胃泌激素(WO 2006/032980)。表位作圖(epitope mapping)的實驗結果顯示mAb3、mAb4、mAb16、及mAb19及mAb20確實會與該hPG N-端胺基酸序列內的表位專一性結合。本技藝已有描述專一性識別SEQ ID NO. 2表示之前胃泌激素N端內的表位之多株抗體(參見例如，WO 2011/083088)。

表1

表2

表3

表4

可透過使用包含對應於人類前胃泌激素的胺基酸55-80之胺基酸序列“QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN”(前胃泌激素的C-端部分)的免疫原，產生的單株抗體之實例包括但不限於，於下列表5及6中稱為：mAb8及mAb13的抗體。表位作圖的實驗結果顯示mAb13確實會與該hPG C-端胺基酸序列內的表位專一性結合。

表5

表6

其他的實例包括透過使用包含SEQ ID N°40的胺基酸序列的免疫原產生的抗-hPG單株及/或多株抗體。

術語“N端抗-hPG抗體”及“C端抗-hPG抗體”分別指定與包含座落於hPG的N端部分的胺基酸之表位結合的抗體，或與包含座落於hPG的C端部分的胺基酸之表位結合的抗體。較佳地，術語“N端抗-hPG抗體”係指與座落於前胃泌激素的一域之表位結合的抗體，該表位之序列係由SEQ ID NO. 2表示。於另一較佳具體例中，術語“C端抗-hPG抗體”係指與座落於前胃泌激素的一域之表位結合的抗體，該表位之序列係由SEQ ID NO. 3表示。

術語“表位”係指與抗體結合的抗原之一區域。表位可以定義為結構性的或功能性的。功能性的表位通常為結構性表位的子集以及具有直接促成交互作用親和力之該等胺基酸。表位亦可以為構形的。在某些具體例中，表位可以包括決定子(determinants)，決定子為分子的化學活性表面聚集，例如胺基酸、糖側鏈、磷醯基基團或磺醯基基團，以及於某些具體例中，可以具有特定的三維結構特徵，及/或特定的電荷特徵。與抗體結合的表位之判斷可以藉由本技藝熟悉此藝者已知的任何表位作圖技術來執行。一表位可包含依序座落於一蛋白的胺基酸序列內不同的胺基酸。一表位也可包含不是依序座落於一蛋白的胺基酸序列內的胺基酸。

在一特別的具體例中，該抗體為一種選自於下列所構成的群組之單株抗體： ․一種單株抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°4、5及6之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°4、5及6分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°7、8及9之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°7、8及9分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種單株抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°10、11及12之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°10、11及12分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°13、14及15之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°13、14及15分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種單株抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°16、17及18之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°16、17及18分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°19、20及21之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°19、20及21分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種單株抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°22、23及24之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°22、23及24分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°25、26及27之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°25、26及27分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種單株抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°28、29及30之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為至少三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°28、29及30分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°31、32及33之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°31、32及33分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種單株抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°34、35及36之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°34、35及36分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°37、38及39之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°37、38及39分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列。

從本發明的意義上說，二個核酸或胺基酸序列之間的“同一性百分比”或“同一性%”意指兩個待比較的序列之間於最佳排列後所獲得的同一核苷酸或胺基酸殘基之百分比，此百分比僅僅為統計上的以及介於2個序列之間的差異係沿著其等的長度隨機分佈。傳統上2個核酸或胺基酸序列的比較係藉由在最佳排列該等序列之後予以比較其等來進行，該比較能按節段或係藉由使用“排列視窗”予以實施。供比較的序列之最佳排列除了可以手工比較來進行之外，還可以藉由本技藝熟悉此藝者已知的方法來進行。

關於與一參考胺基酸序列呈現至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%同一性之胺基酸序列，較佳的實例包括含括該參考序列，某些修飾，尤其至少一胺基酸的刪失、加入或取代，截斷或延伸的該等。於取代一個或更多個連續胺基酸或非連續胺基酸的事例中，經取代的胺基酸係以“均等的”胺基酸來代替之取代為較佳的。此處，措辭“均等的胺基酸”係意欲表示很可能取代結構性胺基酸之一的任何胺基酸，但是不會修改對應的抗體之生物活性以及以下所界定之該等特定實例之生物活性。

均等的胺基酸可以憑著其等與其等要取代之胺基酸之結構同源性來決定或是憑著很可能要產生的各種抗體之間的生物活性之比較測試的結果來判定。

在一更特別的具體例中，該抗體為一種選自於下列所構成的群組之單株抗體： ․一單株抗體，其包含胺基酸序列SEQ ID N°41之一重鏈及胺基酸序列SEQ ID N°42之一輕鏈； ․一單株抗體，其包含胺基酸序列SEQ ID N°43之一重鏈及胺基酸序列SEQ ID N°44之一輕鏈； ․一單株抗體，其包含胺基酸序列SEQ ID N°45之一重鏈及胺基酸序列SEQ ID N°46之一輕鏈； ․一單株抗體，其包含胺基酸序列SEQ ID N°47之一重鏈及胺基酸序列SEQ ID N°48之一輕鏈； ․一單株抗體，其包含胺基酸序列SEQ ID N°49之一重鏈及胺基酸序列SEQ ID N°50之一輕鏈；以及 ․一單株抗體，其包含胺基酸序列SEQ ID N°51之一重鏈及胺基酸序列SEQ ID N°52之一輕鏈。

在一特別的具體例中，本組合之抗體為一嵌合抗體。

當使用於本文中，“嵌合抗體”為一種抗體其中恆定區域或其部分係經改變、代替或交換，以使得可變異區域與不同物種，或屬於另一抗體類別或亞類之恆定區域連接。“嵌合抗體”亦指一種抗體其中可變異區域或其部分係經改變、代替或交換，以使得恆定區域與不同物種，或屬於另一抗體類別或亞類之恆定區域連接。

在另一特別的具體例中，本組合之抗體為人化抗體。

當使用於本文中，用語“人化抗體”意指一種抗體，其含有來自非人類來源所衍生的抗體之CDR區域，抗體分子的其他部分係衍生自一種或數種人類抗體。此外，一些骨架節段殘基(框架稱為FR)可以根據本技藝熟悉此藝者已知的技術予以修飾以保留結合親和力(Jones等人，Nature, 321:522-525, 1986)。人化的目的是降低導入人類的異種基因抗體，如鼠類抗體，的免疫原性(immunogenicity)，同時維持該抗體完整的抗原結合親和力及專一性。

本發明之人化抗體或其片段可以藉由本技藝熟悉此藝者已知的技術予以製備(諸如，舉例而言，在Singer等人， J. Immun., 150:2844-2857, 1992之文件中所描述的該等)。此等人化抗體對於它們用於涉及在活體外 的診斷或預防(preventive)及/或在活體內 的治療處理(therapeutic treatment)的方法而言是較佳的。其他人化技術亦為本技藝熟悉此藝者已知的。事實上，抗體可使用多種技術來人化包括CDR-移植(EP 0 451 261；EP 0 682 040；EP 0 939 127；EP 0 566 647；US 5,530,101；US 6,180,370；US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,639,641；US 6,054,297；US 5,886,152；及US 5,877,293)、面飾法或鋪面表層整修(EP 0 592 106；EP 0 519 596；Padlan E. A., 1991 , Molecular Immunology 28(4/5): 489-498；Studnicka G. M.等人，1994, Protein Engineering 7(6): 805-814；Roguska M.A.等人，1994, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 91:969-973)，及鏈改組(chain shuffling) (U.S. Pat. No. 5,565,332)。可藉由本技藝已知的多種技術方法來製作人類抗體，包括噬菌體展示法。也可參見U.S. Pat. Nos. 4,444,887、4,716,111、5,545,806、及5,814,318；以及國際專利申請案公開號WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735、及WO 91/10741。

在一更特別的具體例中，該抗體為一種選自於下列所構成的群組之人化抗體： ․一種人化抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°4、5及6之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°4、5及6分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°7、8及9之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°7、8及9分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種人化抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°10、11及12之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°10、11及12分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°13、14及15之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°13、14及15分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種人化抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°16、17及18之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°16、17及18分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°19、20及21之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°19、20及21分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種人化抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°22、23及24之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°22、23及24分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°25、26及27之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°25、26及27分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列， ․一種人化抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°28、29及30之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°28、29及30分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°31、32及33之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°31、32及33分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，以及 ․一種人化抗體，其包含一重鏈及一輕鏈，該重鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°34、35及36之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°34、35及36分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，該輕鏈包含分別為胺基酸序列SEQ ID N°37、38及39之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的至少一者、優先為至少兩者、優先為三者，或在最佳的排列後與序列SEQ ID N°37、38及39分別有至少80%，較佳為85%、90%、95%和98%的同一性之序列，其中該抗體亦包含衍生自一人類抗體的該重鏈及該輕鏈的恆定區域。

在另一更特別的具體例中，該抗體為一種選自於下列所構成的群組之人化抗體： ․一人化抗體，其包含胺基酸序列SEQ ID N°53之一重鏈可變異區域及胺基酸序列SEQ ID N°54之一輕鏈可變異區域； ․一人化抗體，其包含胺基酸序列SEQ ID N°55之一重鏈可變異區域及胺基酸序列SEQ ID N°56之一輕鏈可變異區域； ․一人化抗體，其包含SEQ ID N°57、58及59之間挑選的胺基酸序列之一重鏈可變異區域及SEQ ID N°60、61及62之間挑選的胺基酸序列之一輕鏈可變異區域； ․一人化抗體，其包含SEQ ID N°63、64及65之間挑選的胺基酸序列之一重鏈可變異區域及SEQ ID N°66、67及68之間挑選的胺基酸序列之一輕鏈可變異區域； ․一人化抗體，其包含SEQ ID N°69及71之間挑選的胺基酸序列之一重鏈可變異區域及SEQ ID N°70及72之間挑選的胺基酸序列之一輕鏈可變異區域；以及 ․一人化抗體，其包含SEQ ID N°75及76之間挑選的胺基酸序列之一重鏈可變異區域及SEQ ID N°77及78之間挑選的胺基酸序列之一輕鏈可變異區域；其中該抗體亦包含衍生自一人類抗體的該重鏈及該輕鏈的恆定區域。

更佳地，該抗體包含胺基酸序列SEQ ID N°71的一重鏈可變異區域及胺基酸序列SEQ ID N°72的一輕鏈可變異區域，該抗體亦包含衍生自一人類抗體的該輕鏈及該重鏈的恆定區域。

甚至更佳地，該抗體包含胺基酸序列SEQ ID N°73的一重鏈及胺基酸序列SEQ ID N°74的一輕鏈。抗體片段

本發明亦包含抗體片段，特別是其抗原結合片段。

“抗體片段”包含全長抗體的一部分，通常為其抗原結合或可變異區域。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')₂ 、Fv片段及Scfv；雙價抗體(diabodies)；線性抗體；微型抗體(minibodies) (Olafsen等人(2004) Protein Eng. Design & Sel. 17(4):315-323)、Fab表現庫生產的片段、抗遺傳型(anti-idiotypic) (抗-Id)抗體、CDR(互補性決定區)、及本文所述之任何表位結合片段其免疫專一性地結合癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原、單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多專一性抗體。

術語一抗體之“抗原結合域”(或“抗原結合片段”)係指抗體之一或多個片段，其保留與一抗原(例如hPG)專一性結合之能力。已經證明了全長抗體的片段可以執行一抗體之抗原結合功能。術語一抗體之“抗原結合域”之內包含的結合片段之實例包括(i)Fab片段，其係由V_L 、V_H 、CL及CH1域組成之單價片段；(ii)F(ab′)₂ 片段，包含由鉸鏈區之雙硫鍵所連接之二個Fab片段之雙價片段；(iii)Fd片段，其係由V_H 及CH1域所組成；(iv)Fv片段，其係由抗體之單臂的V_L 及V_H 域組成；(v)單一域或dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)，其係由V_H 域組成；及(vi)經單離的互補性決定區(CDR)或(vii)可選擇性地由一合成鍵接子連結的二或更多經單離的CDRs之組合。再者，縱然Fv片段的二域，V_L 及V_H ，係由各別的基因所編碼，但其等能利用重組方法，由一合成鍵接子予以連結以使得其等能製作為單一蛋白鏈，其中V_L 及V_H 區域係配對以形成單價分子(已知為單鏈Fv(scFv)；參見例如，Bird等人(1988)Science 242:423-426；及Huston等人(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。術語抗體之“抗原結合域”也打算涵蓋此等單鏈抗體。

此等抗體片段係使用本技藝熟悉此藝者已知的習知技術來獲得，且以如同完整抗體同樣的方式來篩選該片段。可通過完整免疫球蛋白的重組DNA技術或酵素或化學裂解來生產抗原結合部分。抗體衍生物

本發明之抗-hPG抗體可進一步修飾以包含業內已知且易於獲得之額外非蛋白質性部分(moieties)。特別地，本文含括經衍生化、共價修飾或與其他分子複合(conjugated)的抗-hPG單株抗體供用於診斷及治療應用。舉例而言，但不是限制性的，衍生化抗體包括例如已藉由以下方式修飾之抗體：醣化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、由已知之保護基/阻斷基衍生化、蛋白水解裂解、與細胞配體或其他蛋白質等鍵聯。多種化學修飾中之任一者皆可藉由已知之技術進行，該等技術包括，但不限於：特定化學裂解、乙醯化、甲醯化、衣黴素(tunicamycin)之代謝合成等。另外，衍生物可含有一或多個非古典胺基酸。

較佳地，適用於衍生抗體之部分為水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括，但不限於：聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧戊環(poly-1, 3-dioxolane)、聚-1,3,6-三聚甲醛(poly-l,3,6-trioxane)、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化之多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚合物可具有任何分子量，且可為具支鏈或不具支鏈。附接至抗體之聚合物的數目可有所變化，且若附接一個以上之聚合物，則其等可為相同或不同分子。通常，衍生化所使用聚合物之數量及/或類型可根據包括，但不限於以下在內之考慮因素來確定：欲改良抗體之具體性質或功能、抗體衍生物是否將用於界定條件下之療法等。

在一特定實例中，本揭示之抗-hPG抗體可連接於聚(乙二醇)(PEG)部分。在一特定具體例中，抗體為抗體片段且PEG部分經由任何位於抗體片段中之可用胺基酸側鏈或末端胺基酸官能基，例如任何游離胺基、亞胺基、硫醇基、羥基或羧基予以連接。此等胺基酸可天然存在於抗體片段中或可使用重組DNA方法經工程處理至片段中。參見，舉例而言，美國專利第5,219,996號。可使用多個位址來連接兩個或更多個PEG分子。PEG部分可經由至少一個位於抗體片段中之半胱胺酸殘基的硫醇基共價鍵聯。若用硫醇基作連接點，則可使用經適當活化之效應子部分，例如硫醇選擇性衍生物，諸如順丁烯二醯亞胺及半胱胺酸衍生物。

在一特定實例中，抗-hPG抗體複合物(conjugate)為經修飾之Fab'片段，其例如根據EP0948544中所揭示之方法予以聚乙二醇化，亦即共價連接有PEG(聚(乙二醇))。亦參見Poly(ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications, (J. Milton Harris (ed.), Plenum Press, New York, 1992)；Poly(ethyleneglycol) Chemistry and Biological Applications, (J. Milton Harris and S. Zalipsky, eds., American Chemical Society, Washington D.C., 1997)；及Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences, (M. Aslam and A. Dent, eds., Grove Publishers, New York, 1998)；及Chapman, 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 54:531-545。PEG可連接於鉸鏈區之半胱胺酸。在一實例中，經PEG修飾之Fab'片段具有順丁烯二醯亞胺基共價鍵聯於經修飾之鉸鏈區中之單個硫醇基。離胺酸殘基可共價鍵聯於順丁烯二醯亞胺基且分子量為約20,000 Da之甲氧基聚(乙二醇)聚合物可連接於離胺酸殘基上之各胺基。連接於Fab'片段之PEG的總分子量因此可為約40,000 Da。

在另一具體例中，提供抗體及非蛋白性部分之複合物，其可藉由暴露於輻射來選擇性加熱。在一具體例中，非蛋白性部分係碳奈米管(Kam等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005))。輻射可具有任何波長，且包括，但不限於以下波長之輻射：其不危害正常細胞，但將非蛋白性部分加熱至將毗鄰抗體-非蛋白性部分之細胞殺死之溫度。免疫複合物

於另一態樣中，本發明亦提供免疫複合物(可互換地稱為"抗體-藥物複合物"或"ADCs")，其包含如本文所述之抗-hPG抗體，該抗體複合一或多種細胞毒性劑，例如化學治療劑、藥物、生長抑制劑、毒素(例如，蛋白質毒素、細菌、真菌、植物或動物來源之經酵素處理的活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射性複合物)。

免疫複合物已經於癌症治療方面用於局部遞送細胞毒性劑，即殺死或抑制細胞生長或增殖之藥物(Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549；Wu等人(2005) Nature Biotechnology 23(9): 1137-1146；Payne, G. (2003) i 3:207-212；Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614；Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drug Deliv. Rev. 26:151-172；U.S. Pat. No. 4,975,278)。全身投予未複合藥物可能導致正常細胞及企圖消滅的腫瘤細胞無法接受的毒性位準的情況中，免疫複合物能使藥物部分靶定遞送至腫瘤，且細胞內累積於其內(Baldwin等人，Lancet (Mar. 15, 1986) pp. 603-05；Thorpe (1985) “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review,” in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications (A. Pinchera等人，eds) pp. 475-506。多株抗體及單株抗體二者均已被報導可用於此等策略中(Rowland 等人，(1986) Cancer Immunol. Immunother. 21 :183-87)。此等方法使用的藥物包括道諾黴素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、甲胺喋呤及長春地辛(vindesine) (Rowland等人，(1986)在前)。抗體-毒素複合物使用的毒素包括細菌毒素如白喉毒素、植物毒素如蓖麻毒素、小分子毒素如格爾德黴素(geldanamycin)(Mandler等人(2000) J. Nat. Cancer Inst. 92(19): 1573-1581；Mandler等人(2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028；Mandler等人(2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791)、類美登素(maytansinoid)(EP 1391213；Liu等人，(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623)及卡奇黴素(calicheamicin) (Lode等人(1998) Cancer Res. 58:2928；Hinman等人(1993) Cancer Res. 53:3336-3342)。毒素可藉由包括微管蛋白結合、DNA結合或拓撲異構酶抑制之機制而發揮其等之細胞毒性效應。一些細胞毒性藥物當與較大的抗體或蛋白質受體配體複合時，往往是非活性的或活性較小。

在某些具體例中，一免疫複合物包含一抗體及化學治療劑或其他毒素。可用於產生免疫複合物的化學治療劑係如本文(諸如，以上)所述。可使用的經酵素處理的活性毒素或其片段包括白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈、相思子素A鏈、蒴蓮根毒素(modeccin)A鏈、α-帚曲菌素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白質、石竹素(dianthin)蛋白質、美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白質(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、瀉果素(curcin)、巴豆毒素、皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹毒素(gelonin)、絲裂吉菌素(mitogellin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、依諾黴素(enomycin)及單端孢黴烯族毒素(tricothecene)。參見，舉例而言，1993年十月28日公開的WO 93/21232。多種放射性核種可用於產生放射性複合物抗體。實例包括²¹² Bi、¹³¹ I、¹³¹ In、⁹⁰ Y及¹⁸⁶ Re。抗體與細胞毒性劑之複合物係使用多種雙官能蛋白偶合劑來製造，例如N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、亞胺環硫丁烷(iminothiolane，IT)、亞胺酸酯之雙官能衍生物(例如二亞胺代己二酸二甲酯HCl)、活性酯(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛(例如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(例如雙(對-疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙-重氮衍生物(例如雙-(對-重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(例如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙-活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta et ah, Science, 238: 1098 (1987)中所闡述來製備。碳-14標記的1-異硫氰酸根合苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於複合放射性核種與抗體之實例性螯合劑。參見WO94/11026。

本文亦預期一抗體及一種或更多種小分子毒素之複合物，該小分子毒素為例如卡奇黴素、類美登素(maytansinoid)、尾海兔素(dolastatin)、澳瑞他汀(aurostatins)、新月毒素(trichothecene)及CC 1065，以及此等毒素有毒性活性之衍生物。

本發明的免疫複合物可進一步包含鏈接子。

“鏈接子”、“鏈接子單元”或“鏈接”意指一種包含一共價鍵或原子鏈的化學部分，其共價附接一結合蛋白與至少一細胞毒性劑。

鏈接子可使用多種雙官能蛋白質偶合劑製備，例如N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、亞胺環硫丁烷(IT)、亞胺酸酯之雙官能衍生物(例如二亞胺代己二酸二甲酯HCl)、活性酯(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛(例如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(例如雙(對-疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙-重氮衍生物(例如雙-(對-重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(例如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙-活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。碳-14-標記的1-異硫氰酸根合苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於複合細胞毒性(cyctotoxic)劑與定址系統之實例性螯合劑。其他交聯劑試劑可以為BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、及磺基-SMPB，及SVSB((4-乙烯基碸)苯甲酸琥珀醯亞胺酯)，以上試劑皆可自市面購得(例如可購自Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, Ill., U.S.A)。

鏈接子可以為“不可切割的”或“可切割的(cleavable)”。核酸及表現系統

本揭示涵蓋編碼抗體，特別是抗-hPG抗體，之免疫球蛋白輕鏈及重鏈基因的多核苷酸、包含此等核酸之載體、及能夠產生本揭示抗體之宿主細胞。

於第一個態樣中，本發明係有關於編碼一抗體，特別是能專一地結合如以上所述之前胃泌激素的抗體的一或多種多核苷酸。

第一具體例提供編碼以上所述的抗-hPG抗體之重鏈的多核苷酸。較佳地，該重鏈包含序列SEQ ID NOS. 4、5及6之三個重鏈CDRs。更佳地，該重鏈包含一種包含序列SEQ ID NO. 14之可變異區域的重鏈。甚至更佳地，該重鏈具有一種完整序列SEQ ID NO. 16。

於另一具體例中，該多核苷酸編碼以上所述的抗-hPG抗體之輕鏈。較佳地，該重鏈包含序列SEQ ID NOS. 7、8及9之三個重鏈CDRs。更佳地，該重鏈包含一種包含序列SEQ ID NO. 15之可變異區域的重鏈。甚至更佳地，該重鏈具有一種完整序列SEQ ID NO. 17。

依據本發明，可使用多種表現系統來表現本發明的抗體。於一個態樣中，此表現系統意指載體，該載體可生產該感興趣的編碼序列且隨後予以純化，但也可意指細胞，該細胞暫時轉染合適的核苷酸編碼序列時可於原位表現IgG抗體。

本發明提供包含以上所述的多核苷酸之載體。於一具體例中，該載體包含編碼感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)重鏈的多核苷酸。於另一具體例中，該多核苷酸編碼感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)之輕鏈。本發明亦提供包含多核苷酸分子之載體，該多核苷酸分子編碼融合蛋白、經修飾的抗體、抗體片段及其探針。

為表現感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)之重鏈及/或輕鏈，將編碼該重鏈及/或輕鏈之多核苷酸插入表現載體中以使該等基因可操縱地鏈接至轉錄及轉譯序列。

“可操縱地鏈接”序列包括與感興趣的基因相鄰的表現控制序列及以反式作用或以一段距離控制感興趣的基因之表現控制序列二者。術語“表現控制序列” 使用於本文中係指多核苷酸序列，其等對於實現其等所連接的編碼序列之表現與加工為必須的。表現控制序列包括適當的轉錄起始、終止、啟動子與增強子序列；有效的RNA加工訊息例如剪切與聚腺苷酸化的訊息；穩定胞質mRNA的序列；提升轉譯效率的序列(亦即，科扎克(Kozak)一致序列)；提升蛋白質穩定性的序列；以及當所欲時，提升蛋白質分泌的序列。此等控制序列的本質端視宿主生物而有所不同；於原核生物內，此等控制序列一般包括啟動子、核糖體結合位址，及轉錄終止序列；於真核生物內，一般而言，此等控制序列包括啟動子及轉錄終止序列。術語“控制序列”旨在包括，在最低程度，對於表現與加工為必須存在之全部的組份，以及也可包括額外的組份，該額外的組份之存在為有利的，舉例而言前導子序列與融合夥伴序列。

當使用於本文中，術語“載體”旨在意指一種能夠運送另一種核酸至其已經連接之處的核酸分子。一類的載體為"質體"，其係指一種環狀雙股DNA環，其內可連接額外的DNA節段。另一類的載體為一種病毒載體，其中額外的DNA節段可連接至病毒的基因體內。某些載體能夠於導入其等之宿主細胞內自發性複製(例如，具有細菌之複製起點的細菌載體與游離基因體(episomal)哺乳動物載體)。其他的載體(例如非游離基因體哺乳動物載體)一旦導入宿主細胞時可整合至宿主細胞基因體內，以及藉此和宿主基因體一起複製。

某些載體能指引可操縱地鏈接其等之基因的表現。此等載體於此稱為“重組表現載體”(或者簡單地稱為“表現載體”)。一般而言，表現載體於重組DNA技術之效用係以質體的形式。在本說明書中，“質體”和“載體”可互換使用，因為質體是載體常見的使用形式。但是，本發明旨在包括此等形式的載體，例如，細菌質體、YACs、黏接質體、反轉錄病毒、EBV-衍生的游離基因體(episome)，以及熟悉此藝者將會知道對於確保感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)之重鏈及/或輕鏈表現合宜的所有其他載體。熟悉此藝者會了解到編碼該重鏈及輕鏈之多核苷酸可選殖至不同的載體或相同的載體內。於較佳的具體例中，該多核苷酸系選殖至二種載體內。

可使用本發明的多核苷酸及包含此等分子的載體來轉形合適的宿主細胞。當使用於本文中，術語“宿主細胞”旨在意指已經導入重組表現載體俾以表現感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)的細胞。應該了解到這些術語不僅打算意指該特定個體細胞，亦打算意指此細胞之子代。由於後繼世代可能因為突變或環境影響而發生特定修飾，因此事實上該子代可能不與親代細胞完全相同，但仍包括在本文使用之術語“宿主細胞”之範圍內。

可藉由任何已知用於將多核苷酸引入細胞宿主中之方法來進行轉形。此等方法為本技藝熟悉此藝者熟知的且包括聚葡糖媒介之轉形、磷酸鈣沈澱、聚凝胺媒介之轉染、原生質體融合、電穿孔、將多核苷酸囊封於脂質體內、生物槍注射及直接顯微注射DNA至細胞核內。

一或多個表現載體可共轉染宿主細胞。舉例而言，編碼感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)之重鏈及輕鏈二者的載體可轉染宿主細胞，如以上所述。任擇地，可用兩種載體來轉形宿主細胞，第一載體編碼該感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)之重鏈，且第二載體編碼該抗體之輕鏈。哺乳動物細胞常用於表現重組治療免疫球蛋白，尤其是用於表現全長重組抗體。舉例而言，哺乳動物細胞例如HEK293或CHO細胞組合以含有表現訊息的載體，例如攜帶來自人類巨細胞病毒的主要中間體早期基因啟動子元素的一者，是本發明人化抗-hPG抗體的有效表現系統(Foecking等人，1986,Gene 45 :101；Cockett等人，1990,Bio/Technology 8 :2)。

此外，選擇可調節插入序列表現或以所需的特異方式修飾和加工基因產物的宿主細胞。這些蛋白產物修飾(例如醣化)和加工對於蛋白功能可能是重要的。不同的宿主細胞具有蛋白質及基因產物轉譯後加工和修飾的特徵和特異機制。可選擇適宜的細胞株或宿主系統以確保所表現感興趣的抗體的正確修飾和加工。因此，可使用擁有用於主要轉錄本適宜加工、基因產物醣化的細胞機構的真核宿主細胞。這些哺乳動物宿主細胞包括但不限於CHO、COS、HEK293、NS/0、BHK、Y2/0、3T3或骨髓瘤細胞(所有此等細胞株均可從公共寄存機構得到，例如法國，巴黎，Collection Nationale des Cultures de Microorganismes，或美國，VA，馬納薩斯，American Type Culture Collection, Manassas)。

穩定表現對於長期高產率生產重組蛋白而言是優選的。於本發明之一具體例中，可工程處理穩定表現抗體的細胞株。與其使用含有病毒複製起點的表現載體，可使用受適宜表現調控元素，包括啟動子、增強子、轉錄終止子、聚腺苷酸化位址及其他本技藝熟悉此藝者已知合適的序列調控的DNA，及一可篩選標記來轉形宿主細胞。引入外源DNA後，可讓經工程處理的細胞在富集培養基上生長1至2天，隨後將其轉移至選擇性培養基上。重組質體的可篩選標記賦予對選擇的抗性且使得細胞將質體穩定整合到其染色體上並在細胞株中擴增。其他建構穩定細胞株的方法為本技藝已知的。特別地，已經發展出特定位址整合的方法。依據此等方法，受適宜表現調控元素，包括啟動子、增強子、轉錄終止子、聚腺苷酸化位址及其他合適的序列調控的轉形DNA係整合至宿主細胞基因體之內、先前業已裂解的特定標靶位址處(Moele等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 104(9): 3055-3060；US 5,792,632；US 5,830,729；US 6,238,924；WO 2009/054985；WO 03/025183；WO 2004/067753)。

依據本發明可使用許多篩選系統，其包括但不限於單純疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(Wigler等人，Cell 11:223, 1977)、次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(Szybalska等人，Proc Natl Acad Sci USA 48: 202, 1992)、麩胺酸合成酶在甲硫胺酸磺醯亞胺的存在下選擇(Adv Drug Del Rev, 58: 671, 2006，並參看Lonza Group Ltd.的網站或文獻)以及tk、hgprt或aprt細胞中的腺嘌呤磷酸核糖轉移酶基因(Lowy等人，Cell 22: 817, 1980)。同樣，可使用抗代謝物的抗性作為選擇下列基因的基礎：dhfr，其賦予甲胺喋呤抗性(Wigler等人，Proc Natl Acad Sci USA 77: 357, 1980)；gpt，其賦予黴酚酸抗性(Mulligan等人，Proc Natl Acad Sci USA 78: 2072, 1981)；neo，其賦予胺基糖苷，G-418抗性(Wu等人，Biotherapy 3: 87, 1991)；以及hygro，其賦予潮黴素(hygromycin)抗性(Santerre等人，Gene 30: 147, 1984)。可常規應用重組DNA技術領域知曉的方法來選擇所需的重組殖株，且這些方法的描述見於例如Ausubel等人，eds., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1993)。通過載體擴增可增加抗體的表現位準。當表現抗體的載體系統中的標記可擴增時，培養物內存在的抑制劑位準的升高會增加標記基因的拷貝數目。由於擴增區域與編碼本發明的IgG抗體之基因有關聯，該抗體的生產也會上升((Crouse等人，Mol Cell Biol 3 : 257, 1983)。表現本發明的基因有替代的方法且為本技藝熟悉此藝者已知的。舉例而言，經修飾的鋅指蛋白可經工程處理以能夠結合本發明基因上游的表現調控元素；該經工程處理的鋅指蛋白(ZFN)表現於本發明的宿主細胞內會導致蛋白的生產上升(參見例如Reik等人，Biotechnol. Bioeng .,97 (5): 1180-1189, 2006)。再者，ZFN能刺激DNA整合至預定的基因體位置之內，導致高效率的特定位址的基因加入(Moehle等人，Proc Natl Acad Sci USA ,104 : 3055, 2007)。

該感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)可藉由使經轉形的宿主細胞培養物在表現所欲抗體必須的培養條件下生長予以製備。生成的表現抗體接而可從培養基或細胞萃取物純化。可從培養懸浮液回收該感興趣的抗體(例如抗-hPG抗體)之可溶形式。其接而可透過本技藝已知用於純化免疫球蛋白分子之任何方法來純化，舉例而言，透過層析法(例如，離子交換，親和力，特別為Fc之蛋白質A親和力，等等)、離心、差別性溶解度或是藉由任何其他的蛋白質純化標準技術。適合的純化方法對於熟悉此藝者而言會是顯而易見的。

本發明的另一個態樣因而係有關於一種用於生產本文所述之抗體(例如抗-hPG抗體)的方法，該方法包含下列步驟： a) 使以上所述之宿主細胞在合適的培養條件下於培養基內生長；以及 b) 從該培養基或從該培養細胞回收該抗體(例如抗-hPG抗體)。藥學組成物

抗-hPG單株抗體及免疫查核點抑制劑之組合可調配成組成物。選擇性地，組成物可包含一或多種額外的治療劑，諸如下文所述之第三治療劑。該等組成物通常作為一種一般包括藥學上可接受之載劑及/或賦形劑的無菌藥學組成物之一部分供應。於另一個態樣中，本發明因而提供一種藥學組成物，其包含該抗-hPG抗體、一免疫查核點抑制劑，及一藥學上可接受之載劑及/或一賦形劑。

此組成物可呈任何適合形式(視向患者投予該組成物所欲的方法而定)。當使用於本文中，“投予”係指一種給予一劑量的化合物(例如抗-hPG抗體及/或免疫查核點抑制劑，如以上所述)或組成物(例如一種藥學組成物，例如一種含抗-hPG抗體及/或免疫查核點抑制劑的藥學組成物，如以上所述)給一個體。本文所述方法中使用的組成物可以藉由下列方式投予，舉例而言玻璃體內(例如通過玻璃體內注射)、通過點眼劑、肌肉內、靜脈內、皮內、經皮、動脈內、腹膜內、病灶內、顱內、關節內、前列腺内、胸膜內、氣管內、鞘內、鼻內、陰道內、直腸內、局部、腫瘤內、腹膜、皮下、結膜下、囊泡內、黏膜、心包內、臍內、眼內、框內、經口、局部、穿皮、通過吸入、通過注射、通過植入、通過輸注、通過連續輸注、通過直接局部灌注沐浴靶細胞、經由導管、經由灌洗法、於乳膏中、或於脂質組成物中。本文所述方法中使用的組成物亦可以全身性或局部投予。投予方法可取決於各種因素而變化(例如，待投予的化合物或組成物及待治療的病況、疾病或障礙的嚴重程度)。在任何給定的情況下最合適的投予途徑將取決於特定抗體、個體、及疾病的本質及嚴重程度與個體的身體狀況。該抗-hPG抗體及/或免疫查核點抑制劑可調配為水溶液且通過皮下注射投予。

藥學組成物宜以每劑量含有預定量之抗-hPG抗體及/或免疫查核點抑制劑之單位劑量形式呈現。此一單位可含有例如但不限於5 mg至5 g，例如10 mg至1 g或20至50 mg。用於本揭示之藥學上可接受之載劑可採用各種形式，端視例如欲治療之病況或投予途徑而定。

可藉由將具有所需純度之抗體與此項技術中通常使用的視情況選用之藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(在本文中全體均稱為“載劑”)，亦即緩衝劑、穩定劑、防腐劑、等張劑、非離子型清潔劑、抗氧化劑及其他各種添加劑混合，將本揭示之藥學組成物製備成凍乾調配物或水溶液以供儲存。參見，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版(Osol, ed. 1980)。該等添加劑在所用劑量及濃度下對接受者須無毒。

緩衝劑有助於將pH值維持在接近生理條件之範圍內。其等濃度可在約2 mM至約50 mM之範圍內。適用於本揭示之緩衝劑包括有機酸與無機酸二者及其鹽類，諸如檸檬酸鹽緩衝液(例如檸檬酸一鈉-檸檬酸二鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸三鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸一鈉混合物等)、丁二酸鹽緩衝液(例如丁二酸-丁二酸一鈉混合物、丁二酸-氫氧化鈉混合物、丁二酸-丁二酸二鈉混合物等)、酒石酸鹽緩衝液(例如酒石酸-酒石酸鈉混合物、酒石酸-酒石酸鉀混合物、酒石酸-氫氧化鈉混合物等)、反丁烯二酸鹽緩衝液(例如反丁烯二酸-反丁烯二酸一鈉混合物、反丁烯二酸-反丁烯二酸二鈉混合物、反丁烯二酸一鈉-反丁烯二酸二鈉混合物等)、葡糖酸鹽緩衝液(例如葡糖酸-葡糖酸鈉混合物、葡糖酸-氫氧化鈉混合物、葡糖酸-葡糖酸鉀混合物等)、草酸鹽緩衝液(例如草酸-草酸鈉混合物、草酸-氫氧化鈉混合物、草酸-草酸鉀混合物等)、乳酸鹽緩衝液(例如乳酸-乳酸鈉混合物、乳酸-氫氧化鈉混合物、乳酸-乳酸鉀混合物等)及乙酸鹽緩衝液(例如乙酸-乙酸鈉混合物、乙酸-氫氧化鈉混合物等)。另外，可使用磷酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液及三甲胺鹽諸如Tris。

可添加防腐劑以阻止微生物生長，且其添加量可在0.2%-1%(w/v)範圍內。適用於本揭示之防腐劑包括苯酚、苯甲醇、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯化十八基二甲基苯甲基銨、鹵化苯甲烴銨(benzalconium halide)(例如氯化苯甲烴銨、溴化苯甲烴銨及碘化苯甲烴銨)、氯化六羥季銨(hexamethonium chloride)，以及對羥基苯甲酸烷酯諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯、兒茶酚、間苯二酚、環己醇及3-戊醇。可添加有時稱為“穩定劑”之等張劑以確保本揭示之液體組成物之等張性且包括多元糖醇，例如三元或更多元糖醇，諸如甘油、赤藻糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇及甘露糖醇。穩定劑係指一大類賦形劑，其功能範圍從增積劑至溶解治療劑或幫助防止變性或與容器壁黏著之添加劑。典型穩定劑可為多元糖醇(上文所列舉)；胺基酸如精胺酸、離胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、丙胺酸、鳥胺酸、L-白胺酸、2-苯丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等；有機糖或糖醇，諸如乳糖、海藻糖、水蘇糖、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、肌醇(myoinisitol)、半乳糖醇、甘油及其類似物，包括環多醇如肌醇(inositol)；聚乙二醇；胺基酸聚合物；含硫還原劑，諸如脲、麩胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油及硫代硫酸鈉；低分子量多肽(例如具有10個殘基或10個殘基以下之肽)；蛋白質諸如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮單醣(polyvinylpyrrolidone monosaccharides)，諸如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；雙醣諸如乳糖、麥芽糖、蔗糖及三醣如棉子糖；及多醣如聚葡糖。每重量份活性蛋白質可存在0.1至10,000重量之範圍內的穩定劑。

可添加非離子型界面活性劑或清潔劑(亦稱為“濕潤劑”)以幫助治療劑溶解以及保護治療蛋白質使蛋白質不因攪動而聚集，該等製劑亦允許調配物暴露於承受應力之剪切表面而不引起蛋白質變性。適合之非離子型界面活性劑包括聚山梨醇酯(20、80等)、泊洛沙姆(polyoxamer)(184、188等)、普流尼克多元醇類(Pluronic polyol)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單醚(TWEEN®-20、TWEEN®-80等)。非離子型界面活性劑可在約0.05 mg/ml至約1.0 mg/ml，例如約0.07 mg/ml至約0.2 mg/ml之範圍內存在。

額外的各種賦形劑包括增積劑(例如澱粉)、螯合劑(例如 EDTA)、抗氧化劑(例如抗壞血酸、甲硫胺酸、維生素E)及共溶劑。

本發明進一步針對一種藥學組成物，其包含至少： i) 一種抗-hPG抗體及 ii) 一種免疫查核點抑制劑，作為一種複合式產品供同時、分別或相繼使用。

當使用於本文中“同時使用”意指如本發明的組成物之二個化合物以一單一且同一藥學形式予以投予。

當使用於本文中“分別使用”意指如本發明的組成物之二個化合物以各別的藥學形式同時投予。

當使用於本文中“相繼使用”意指如本發明的組成物之二個化合物各自以各別的藥學形式依次投予。

抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組成物可單獨投予，以一或多種抗-hPG單株抗體及/或一或多種免疫查核點抑制劑之混合物投予，與其他可用於治療癌症，特別是CRC之製劑混合或組合投予，或輔助其他癌症，特別是CRC療法投予。適合的組合及輔助療法之實例提供於下文中。

本揭示涵蓋含有本文所述之中和抗-hPG抗體(包括抗體複合物)及免疫查核點抑制劑之藥學套組。該藥學套組為包含一中和抗-hPG抗體及/或免疫查核點抑制劑(例如呈凍乾形式或水溶液形式)以及一或多種以下物質之包裝： ․第三治療劑，例如以下所述者； ․一種用於投予該中和抗-hPG抗體及/或免疫查核點抑制劑之裝置，例如筆式注射器(pen)、針及/或注射器；及 ․再懸浮該抗體之藥學級水或緩衝液，若該抗體及/或抑制劑呈凍乾形式。

每單位劑量之抗-hPG抗體及/或免疫查核點抑制劑可單獨封裝，且套組可含有一或多個單位劑量(例如兩個單位劑量、三個單位劑量、四個單位劑量、五個單位劑量、八個單位劑量、十個單位劑量或十個以上單位劑量)。在一特定具體例中，一或多個單位劑量各自放於注射器或筆式注射器中。有效劑量

抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合通常會以有效達成預期結果之量，例如有效治療有需要之個體的量使用。包含抗-hPG抗體及/或免疫查核點抑制劑之藥學組成物可以治療有效劑量投予患者(例如人類個體)。

術語“治療有效劑量”意指於個體內引出所欲的生物反應之活性化合物或複合物的量。此反應包括改善待治療的疾病或障礙症狀；預防、抑制或延遲疾病或障礙症狀自身之再發；與缺少治療相比之下使個體壽命增長；或預防、抑制或延遲疾病或障礙症狀自身之進展。更具體地說，當使用於本文中，“治療有效”劑量為賦予治療效益之量。治療有效劑量亦為該製劑之治療有益的效應勝過任何有毒或有害的效應者。在CRC療法的情況中，治療效益意謂癌症之任何改善，包括以下任一者或組合：制止或減緩癌症之進展(例如制止或減緩癌症自一期進展至下一期)、制止或延遲癌症之症狀或徵象加重或惡化、降低癌症嚴重程度、促使癌症緩解、抑制腫瘤細胞增殖、腫瘤尺寸或腫瘤數目、或降低PG血清含量。

有效量為本技藝熟悉此藝者完全能夠判定的，尤其是根據本文提供的詳細揭示內容。一化合物或複合物於細胞培養物及實驗動物內之毒性及治療功效能藉由標準藥學程序來判定。待投予至個體之本組合或其他治療劑的有效量將取決於多發性骨髓瘤的期別、類別與狀態及個體的特色像是一般健康、年齡、性別、體重及耐藥性。待投予之本組合或其他治療劑的有效量也將取決於投予途徑及劑量形式。可個別調整劑量的量及時間間隔來提供足夠維持所欲的治療效應之活性化合物血漿。

所投予之抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合的量將視多種因素而定，包括所治療之CRC的性質及期別、投予形式、途徑及部位、治療方案(例如是否使用另一治療劑)、所治療之特定個體之年齡及病況、所治療的患者對抗-hPG抗體及/或及免疫查核點抑制劑之敏感性。本技藝熟悉此藝者可容易確定適合劑量。最終，醫師將確定欲使用之適合劑量。此劑量可重複適合次數。若產生副作用，則可根據正常臨床實踐改變或降低劑量之量及/或頻率。適當劑量及治療方案可藉由使用熟習此項技術者已知之習知技術監測療法進展來確定。

有效劑量最初可由活體外 檢定來估計。舉例而言，用於動物之初始劑量可經調配以達成人化抗-hPG抗體之循環血液或血清濃度等於或高於如活體外 所量測之該抗體對前胃泌激素之結合親和力。同樣地，用於動物之初始劑量可經調配以達成免疫查核點抑制劑之循環血液或血清濃度等於或高於如活體外 所量測之該抑制劑對於相應的免疫查核點蛋白之結合親和力。熟習此項技術者完全能夠在考慮特定抗體之生體可用率下計算達成該等循環血液或血清濃度之劑量。關於指導，讀者請參見Fingl & Woodbury, “General Principles” inGoodman and Gilman’s The Pharmaceutical Basis of Therapeutics ，第1章，最新版，Pagamonon Press，及其中引用之參考文獻。

初始劑量可自活體內 資料，諸如動物模式來估計。適用於測試化合物治療CRC之功效的動物模式為此項技術中所熟知。另外，CRC動物模式描述於下文實施例中。一般技術者可按常規修改該資訊以確定適用於人類投予之劑量。

本文所述之抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合的有效劑量可在每單次(例如單次劑量)投予、多次投予或連續投予約0.001至約75 mg/kg之範圍內，或每單次(例如單次劑量)投予、多次投予或連續投予達成0.01-5000 μg/ml血清濃度之血清濃度，或為其中任何有效範圍或值，視所治療之病況、投予途徑及個體年齡、體重及病況而定。在某一具體例中，各劑量可在每公斤體重約0.5 μg至約50 μg之範圍內，例如每公斤體重約3 μg至約30 μg之範圍內。

投予之量、頻率及持續時間將視多種因素而定，諸如患者年齡、體重及疾病病況。投予之治療方案可持續2週至無限期、2週至6個月、3個月至5年、6個月至1或2年、8個月至18個月或其類似時間。選擇性地，治療方案提供重複投予，例如每日一次、每日兩次、每兩天一次、每三天一次、每五天一次、每週一次、每兩週一次或每月一次。重複投予之劑量可為相同或不同的。投予可重複一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次或十次以上。抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合的治療有效量可以單次劑量投予或歷經治療方案之時程投予，例如經一週、兩週、三週、一個月、三個月、六個月、一年或更長之時程投予。治療方法

本抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合阻斷PG依賴性反應，包括細胞增殖，及改良免疫療法反應之能力，使其等適用於治療癌症。於是，本發明的一個態樣因而係有關於本抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合作為一藥劑。

於另一態樣中，本揭示提供治療有需要之患者之癌症的方法。能用本發明之組合治療的癌症特別是依賴前胃泌激素而生長及/或增殖的癌症。較佳地，前胃泌激素依賴性癌症為結腸直腸癌(CRC)。一般而言，該等方法包含向患者投予治療有效量之本文所述之抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合。於另一具體例中，本揭示提供本文所述之抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合供用於治療CRC。

投予本抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合的“個體”或“患者”較佳為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如母牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)或靈長類動物(例如猴或人類)。個體或患者可為人類，諸如成人患者或兒科患者。

適合抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合療法的患者為經診斷患有CRC之患者。CRC可為任何類型且處於任何臨床階段或表現。適合的個體包括患有CRC腫瘤(可手術或不可手術)之患者、腫瘤已手術移除或切除之患者、患有包含攜有致癌基因-諸如舉例而言RAS或APC突變之細胞的CRC腫瘤之患者、已接受或正接受與人化抗-hPG抗體療法組合或輔助人化抗-hPG抗體療法之其他CRC療法的患者。其他CRC療法包括，但不限於：化療治療、放射療法、手術切除及以一或多種其他治療性抗體進行之治療，如下文所詳述。

依據其他的具體例，如本文所揭示之抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合係以治療有效量之組成物投予至有需要預防轉移的結腸直腸癌之個體。此等個體包括，但不限於判定為具有原發結腸直腸癌但不知道已擴散至遠距離的組織或器官的該等。於此等方法之某些具體例中，該抗-hPG抗體為人化抗-hPG抗體。

依據還有其他的具體例，如本文所揭示之抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合係以治療有效量之組成物投予至有需要預防轉移的結腸直腸癌再發之個體。此等個體包括，但不限於先前已治療原發或轉移的結腸直腸癌，治療之後癌症顯然已經消失的該等。於此等方法之某些具體例中，該抗-hPG抗體為人化抗-hPG抗體。

依據其他的具體例，如本文所揭示之抗-hPG抗體及免疫查核點抑制劑之組合係以治療有效量之組成物投予至有需要抑制結腸直腸癌幹細胞生長之個體。此等個體包括，但不限於具有結腸直腸癌、結腸直腸癌的生長或轉移至少部分歸因於其內存在癌的幹細胞之該等。其他的具體例提供預防或抑制結腸直腸癌幹細胞生長的方法，其係藉由使此等幹細胞與有效預防或抑制此等細胞生長的抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組成物接觸。此等方法可於活體外 或活體內 進行。於此等方法之某些具體例中，該抗-hPG抗體為人化抗-hPG抗體。

抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑之組合療法可組合或輔助一或多種其他治療。其他治療如本文所述包括，但不限於：化療治療、放射療法、手術切除及抗體療法。

抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合療法可輔助其他治療，包括手術切除。

如本文所提供之組合療法包含向患者投予至少兩種製劑，第一種為本揭示之抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合，且第二種為另一治療劑。依據此具體例，本發明係有關於以上所述之抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合，用於治療CRC，其中該組合與該另一治療劑係一起投予。該抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合與另一治療劑可同時、依次或分別投予。

“治療劑”涵蓋生物製劑例如抗體、胜肽、蛋白質、酵素，及化學治療劑。治療劑亦涵蓋細胞結合劑(CBAs)及化學化合物之免疫-複合物，例如抗體-藥物複合物(ADCs)。複合物的藥物可以為細胞毒性劑，例如本文所述之一者。

若在同一日，例如在同一次患者就診期間向該患者投予該抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合與另一治療劑，則如本文所用，稱其等依次投予。依次投予之間可相隔1、2、3、4、5、6、7或8小時。相反地，若不在同一日向患者投予本揭示之組合與另一治療劑，例如以1天、2天或3天、1週、2週或每月之時間間隔投予本揭示之組合與另一治療劑，則稱其等分別投予。於本揭示之方法中，可在投予另一治療劑之前或之後投予本揭示之組合。

作為非限制性實例，可同時投予本組合與另一治療劑一段時間，接著交替投予本揭示之人化抗-hPG抗體與另一治療劑第二段時間。

本揭示之組合療法可產生大於累加效應之效應或協同效應，所提供之治療效益為該抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合或另一治療劑以治療有效量單獨投予下所無法達成的。因此，該等藥劑可以較低量投予，減小不利影響之可能性及/或嚴重程度。

於較佳的具體例中，另一治療劑為化學治療劑。當使用於本文中，“化學治療劑”係指一物質，當投予個體時，會治療或預防個體身體的癌症發展。

化學治療劑包括包括，但不限於：烷化劑、抗代謝劑、抗腫瘤抗生素、抗有絲分裂劑、染色質功能抑制劑、抗血管生成劑、抗雌激素、抗雄性素或免疫調控劑。

“烷化劑”係指任一物質，其可於細胞內交聯或烷基化任一分子，較佳為核酸(如DNA)。烷化劑之實例包括氮芥子氣(nitrogen mustard)例如甲基二(氯乙基)胺(mechlorethamine)、氯崙布寇(chlorambucol)、美法崙(melphalen)、鹽酸鹽(chlorydrate)、皮普波曼(pipobromen)、潑尼莫司汀(prednimustin)、二鈉-磷酸鹽(disodic-phosphate)或雌莫司汀(estramustine)；噁唑弗磷類(oxazophorines)例如環磷醯胺(cyclophosphamide)、六甲蜜胺(altretamine)、曲磷胺(trofosfamide)、硫醯胺(sulfofosfamide)或異環磷醯胺(ifosfamide)；氮雜環丙烷(aziridines)或亞胺-乙烯(imine-ethylenes)，如噻替派(thioepa)、三乙基胺(triethylenamine)或四胺(altetramine)；亞硝基尿素如卡莫司汀(carmustine)、鏈尿佐菌素(streptozocin)、福特莫司汀(fotemustin)或洛莫司汀(lomustine)；烷基磺酸鹽如白消安(busulfan)、替歐舒凡(treosulfan)或英丙舒凡(improsulfan)；三氮烯(triazenes)如達卡巴嗪(dacarbazine)；或鉑錯合物例如鉑類似物包括順鉑(cis-platinum)、奧沙利鉑(oxaliplatin)及卡鉑(carboplatin)。

“抗代謝劑”係指藉由干擾某些活性，通常為DNA合成而阻斷細胞生長及/或代謝的物質。抗代謝劑之實例包括甲胺喋呤、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、氟脲苷(floxuridine)、5-氟去氧尿苷、卡培他濱(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟達拉濱(fludarabine)、阿醣胞苷(cytosine arabinoside)、6-巰基嘌呤(6-MP)、6-硫代鳥嘌呤(6-TG)、氯去氧腺苷、5-氮胞苷、吉西他濱(gemcitabine)、克拉曲濱(cladribine)、去氧助間型黴素(deoxycoformycin)與噴司他丁(pentostatin)。

“抗腫瘤抗生素”係指可預防或抑制DNA、RNA及/或蛋白質合成的化合物。抗腫瘤抗生素之實例包括多柔比星(doxorubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、戊柔比星(valrubicin)、雙羥蒽醌(mitoxantrone)、放線菌素(dactinomycin)、光神黴素(mithramycin)、普卡黴素(plicamycin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、博萊黴素，及甲基芐肼(procarbazine)。

“有絲分裂抑制劑”可預防正常細胞週期與有絲分裂之進展。一般而言，微小管抑制劑或類紫杉醇例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)及多烯紫杉醇(docetaxel)，能抑制細胞分裂。長春花生物鹼(vinca alkaloid)諸如長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)及長春瑞濱(vinorelbine)亦可抑制細胞分裂。

“染色質功能抑制劑”或“拓撲異構酶抑制劑”係指能抑制染色質塑造蛋白質之正常功能的物質，例如第I型拓撲異構酶或第II型拓撲異構酶。染色質功能抑制劑之實例包括，第I型拓撲異構酶為喜樹鹼(camptothecine)及其衍生物，例如拓朴替康(topotecan)或伊立替康(irinotecan)，及，第II型拓撲異構酶為依託泊苷(etoposide)、磷酸依託泊苷(etoposide phosphate)及替尼泊苷(teniposide)。

“抗血管生成劑”係指可抑制血管生長之任一藥物、化合物、物質或製劑。例示性抗血管生成製劑包括，但不侷限於，瑞左新(razoxin)、馬力馬司他(marimastat)、巴替馬司他(batimastat)、皮諾馬司他(prinomastat)、他諾馬司他(tanomastat)、依諾馬司他(ilomastat)、CGS-27023A、鹵素黴菌酮(halofuginon)、COL-3、新伐司他(neovastat)、BMS-275291、沙力邁竇(thalidomide)、CDC 501、DMXAA、L-651582、角鯊多胺(squalamine)、內皮抑制素(endostatin)、SU5416、SU6668、干擾素-α、EMD121974、介白素-12、IM862、血管抑制素與維他辛(vitaxin)。

“抗雌激素”或“抗雌激素製劑”係指會降低、拮抗或抑制雌激素之作用的任一物質。抗雌激素製劑之實例為他莫西芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、羅拉昔芬(raloxifene)、左拉昔芬(droloxifene)、艾多昔芬(iodoxyfene)、阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(letrozole)，及依西美坦(exemestane)。

“抗雄性素”或“抗雄激素製劑”係指會降低、拮抗或抑制雄激素之作用的任一物質。抗雄激素之實例為氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、螺內酯(sprironolactone)、環丙氯地孕酮醋酸酯(cyproterone acetate)、柔沛(finasteride)與西咪替丁(cimitidine)。

“免疫調控劑”為可刺激免疫系統之物質。

免疫調控劑之實例包括干擾素、介白素如阿地介白素(aldesleukine)、OCT-43、地尼介白素(denileukin diflitox)與介白素-2、腫瘤壞死因子如他索那明(tasonermine)或其他免疫調控劑如香菇多醣(lentinan)、西左醣(sizofiran)、羅喹美克(roquinimex)、匹多莫得(pidotimod)、培家酶(pegademase)、賽莫噴汀(thymopentine)、poly I：C或左旋咪唑(levamisole)與5-氟尿嘧啶組合。

關於進一步的細節，此技術領域者可以參照由“Association Française des Enseignants de Chimie Thérapeutique”編輯之手冊且標題為“Traité de chimie thérapeutique”, vol. 6, Médicaments antitumouraux et perspectives dans le traitement des cancers, edition TEC & DOC, 2003。

也可以提及為化學製劑或胞毒型製劑，所有的激素抑制劑諸如，舉例而言，吉菲替尼(gefitinib)或厄洛替尼(erlotinib)。

更總體而言，合適的化學治療劑之實例包括但不限於：1-去氫睪固酮(1-dehydrotestosterone)、5-氟尿嘧啶達卡巴嗪(5-fluorouracil decarbazine)、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、放線菌素D、阿德力黴素(adriamycin)、阿地介白素(aldesleukin)、烷基化劑、別嘌醇鈉(allopurinol sodium)、六甲蜜胺(altretamine)、胺磷汀(amifostine)、阿那曲唑(anastrozole)、胺茴黴素(anthramycin(AMC))、抗有絲分裂劑、順-二氯二胺鉑(II)(DDP)(順鉑(cisplatin))、二胺基二氯鉑、蒽環黴素(anthracycline)、抗生素、抗代謝物、天冬醯胺酶、活BCG(膀胱內)、倍他米松磷酸鈉(betamethasone sodium phosphate)及醋酸倍他米松、比卡魯胺(bicalutamide)、硫酸博萊黴素(bleomycin sulfate)、白消安(busulfan)、甲醯四氫葉酸鈣(calcium leucouorin)、卡奇黴素(calicheamicin)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑(carboplatin)、洛莫司汀(lomustine(CCNU))、卡莫司汀(carmustine(BSNU))、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、順鉑、克拉曲濱(Cladribine)、秋水仙鹼(Colchicin)、複合雌激素、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、環硫磷醯胺(Cyclothosphamide)、阿糖胞苷(Cytarabine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、細胞遲緩素B(cytochalasin B)、癌得星(Cytoxan)、達卡巴嗪(Dacarbazine)、放線菌素(Dactinomycin)、放線菌素(dactinomycin) (先前稱作放線菌素(actinomycin))、鹽酸柔紅黴素(daunirubicin HCL)、檸檬酸柔紅黴素、地尼介白素-毒素連接物(denileukin diftitox)、右雷佐生(Dexrazoxane)、二溴甘露醇、二羥炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、多烯紫杉醇(Docetaxel)、甲磺酸多拉司瓊(dolasetron mesylate)、鹽酸多柔比星(doxorubicin HCL)、屈大麻酚(dronabinol)、大腸桿菌 L-天冬醯胺酶、吐根素(emetine)、依泊汀-α(epoetin-α)、伊文氏桿菌屬L-天冬醯胺酶(Erwinia L-asparaginase)、酯化雌激素、雌二醇、雌莫司汀磷酸鈉(estramustine phosphate sodium)、溴化乙錠(ethidium bromide)、炔雌醇(ethinyl estradiol)、依替膦酸鹽(etidronate)、依託泊苷(etoposide)、嗜橙菌因子(citrororum factor)、磷酸依託泊苷、非格司亭(filgrastim)、氟脲苷(floxuridine)、氟康唑(fluconazole)、磷酸氟達拉濱(fludarabine phosphate)、氟尿嘧啶、氟他胺(flutamide)、醛葉酸(folinic acid)、鹽酸吉西他濱(gemcitabine HCL)、糖皮質激素、醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、短桿菌素D(gramicidin D)、鹽酸格拉司瓊(granisetron HCL)、羥基脲、鹽酸艾達黴素(idarubicin HCL)、異環磷醯胺(ifosfamide)、干擾素α-2b、鹽酸伊立替康(irinotecan HCL)、來曲唑(letrozole)、甲醯四氫葉酸鈣、醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、鹽酸左旋咪唑(levamisole HCL)、利多卡因(lidocaine)、洛莫司汀(lomustine)、類美登素(maytansinoid)、鹽酸氮芥(mechlorethamine HCL)、醋酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、鹽酸美法侖(melphalan HCL)、巰基嘌呤(mercaptipurine)、美司鈉(mesna)、甲胺喋呤、甲基睪固酮(methyltestosterone)、光神黴素(mithramycin)、絲裂黴素C、米托坦(mitotane)、雙羥蒽醌(mitoxantrone)、尼魯米特(nilutamide)、醋酸奧曲肽(octreotide acetate)、鹽酸昂丹司瓊(ondansetron HCL)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、帕米膦酸二鈉(pamidronate disodium)、噴司他丁(pentostatin)、鹽酸匹魯卡品(pilocarpine HCL)、吡利黴素(plimycin)、聚苯丙生20(polifeprosan 20)與卡莫司汀植入物、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、普魯卡因(procaine)、鹽酸甲基芐肼(procarbazine HCL)、普萘洛爾(propranolol)、利妥昔單抗(rituximab)、沙格司亭(sargramostim)、鏈脲佐菌素(streptozotocin)、他莫西芬(tamoxifen)、紫杉醇(taxol)、喃氟啶(tegafur)、替尼泊苷(teniposide)、特諾波賽(tenoposide)、睾內酯(testolactone)、四卡因(tetracaine)、噻替派(thioepa)、苯丁酸氮芥、硫鳥嘌呤、噻替派、鹽酸拓朴替康(topotecan HCL)、檸檬酸托瑞米芬(toremifene citrate)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、維甲酸(tretinoin)、戊柔比星(valrubicin)、硫酸長春鹼(vinblastine sulfate)、硫酸長春新鹼(vincristine sulfate)及酒石酸長春瑞濱(vinorelbine tartrate)。

本文所揭示之抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合可投予有需要治療結腸直腸癌且正接受化學治療劑組合之患者。例示性化學治療劑組合包括5-氟尿嘧啶(5FU)與甲醯四氫葉酸(醛葉酸或LV)組合；卡培他濱與尿嘧啶(UFT)及甲醯四氫葉酸組合；喃氟啶與尿嘧啶(UFT)及甲醯四氫葉酸組合；奧沙利鉑與5FU組合或與卡培他濱組合；伊立替康與卡培他濱組合、絲裂黴素C與5FU、伊立替康或卡培他濱組合。亦可使用本文所揭示之化學治療劑的其他組合。

如相關技術中所知，使用不同化學治療劑之組合治療結腸直腸癌的化學療法方案在臨床試驗中已標準化。該等方案常以首字母縮寫為人知曉且包括梅奧5FU(5FU Mayo)、羅茲韋爾帕克5FU(5FU Roswell Park)、LVFU2、FOLFOX、FOLFOX4、FOLFOX6、bFOL、FUFOX、FOLFIRI、IFL、XELOX、CAPOX、XELIRI、CAPIRI、FOLFOXIRI。參見例如 Chau,I.等人，2009, Br. J. Cancer 100:1704-19及Field,K.等人，2007, World J. Gastroenterol. 13:3806-15，兩者皆併入以作為參考資料。

抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合亦可與其他治療性抗體組合。因此，抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合療法可組合或輔助不同單株抗體投予，該不同單株抗體諸如，舉例而言，但不是限制性的，抗-EGFR(EGF受體)單株抗體或抗-VEGF單株抗體。抗-EGFR抗體之特定實例包括西妥昔單抗(cetuximab)及帕尼單抗(panitumumab)。抗-VEGF抗體之特定實例為貝伐單抗(bevacizumab)。

依據此具體例，本發明係有關於以上所述之抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合，用於治療CRC，其中該組合係與一化學治療劑一起投予。該抗-hPG抗體/免疫查核點抑制劑組合及化學治療劑可同時、依次或分別投予。

除非另有定義，否則本文中所使用的所有技術和科學術語係與具有本發明所屬之技藝中具有通常技術的一般技能者所通常瞭解的意義相同。

較佳實施例之詳細說明實施例1 每隻小鼠於第一天皮下植入0.5 M的CT26.WT (ATCC-CRL-2638)細胞至BALB/cAnNRj小鼠的脅腹。小鼠隨機分成如下所示的個別治療組(每組n=15隻小鼠)：對照(ctrl)組：15隻小鼠腹膜內注射NaCl(5mL/kg)+大鼠IgG2A(10mg/kg–5mL/kg)，一週二次。抗-PG組：15隻小鼠腹膜內注射NaCl(5mL/kg)+抗-PG(30mg/kg–5mL/kg)，一週二次。抗-PD-1組：15隻小鼠腹膜內注射NaCl(5mL/kg)+抗-PD1(10mg/kg–5mL/kg)，一週二次。第4組抗-PG+抗-PD1：15隻小鼠腹膜內注射抗-PG(30mg/kg–5mL/kg)+抗-PD1(10mg/kg–5mL/kg)，一週二次。

抗-PG抗體為Mab8，其之CDRs、V_H 及V_L 係闡述於表5中。抗-PD-1抗體為29F.1A12單株抗體(得自於BioXCell, 10 Technology Dr, Suite 2B West Lebanon, NH 03784, USA)。

每週觀察並稱重動物二次，同時使用數位卡尺來測量腫瘤體積。使用下式來計算腫瘤尺寸：V=長度x寬度² / 2，式中長度代表最大的腫瘤直徑且寬度代表垂直的腫瘤直徑。研究結束或腫瘤體積達到1500 mm³ 時，設若腫瘤觀察到潰瘍、設若體重減輕超過20%或設若觀察到小鼠健康明顯惡化，便犧牲動物。氣體麻醉(異氟醚)後實施頸椎脫位術安樂死。

圖1顯示各組的卡本-麥爾存活。對數秩(Mantel-Cox)檢定顯示組合組(抗-PG+抗-PD1)與單一治療組(抗-PG或抗-PD1)之間的存活有統計學的增加且中位數存活從15天增加至20天(+33%，p＜0.0001)，確認該組合與各個單方療法相比之下優越的活性。實施例 2

每隻小鼠於第一天皮下植入0.5 M的CT26.WT(ATCC-CRL-2638)細胞至BALB/cAnNRj小鼠的脅腹。小鼠隨機分成如下所示的個別治療組(每組n=15隻小鼠)：對照組：15隻小鼠腹膜內注射NaCl(5mL/kg)+大鼠IgG2A(10mg/kg–5mL/kg)，一週二次。抗-PG組：15隻小鼠腹膜內注射NaCl(5mL/kg)+抗-PG(30mg/kg–5mL/kg)，一週二次。抗-PD-1組：15隻小鼠腹膜內注射NaCl(5mL/kg)+抗-PD1(10mg/kg–5mL/kg)，一週二次。第4組抗-PG+抗-PD1：15隻小鼠腹膜內注射抗-PG(30mg/kg–5mL/kg)+抗-PD1(10mg/kg–5mL/kg)，一週二次。

開始治療一週後，每組犧牲4隻小鼠且回收腫瘤以萃取RNA並執行qPCR來測量IFNγ(INFγ)的表現。事實上，數份刊物已證明了CTLA-4及PD-1抑制劑以及其他免疫檢查點阻斷療法導致IFNγ生產增加。圖2顯示抗-PD1抗體如預期一般於本鼠類模式中誘發IFNγ生產(3.2倍的增加)。更有趣的是，組合療法抗-PG+抗-PD1抗體之IFNγ生產觀察到增加更多(6倍的增加)，確認了該組合與各個單方療法相比之下優越的活性。

圖例

圖1 ： BALB/cAnNRj小鼠植入結腸直腸癌細胞株CT26.WT，且用對照抗體、抗-PD-1抗體、抗-PG抗體、或抗-PD-1抗體及抗-PG抗體之組合予以治療：(A)卡本－麥爾(Kaplan-Meier)存活圖形；(B)中位數存活時間(以天數)。圖2 ：異種移植結腸直腸癌細胞株，CT26.WT，且用對照抗體、抗-PD-1抗體、抗-PG抗體、或抗-PD-1抗體及抗-PG抗體之組合予以治療的BALB/cAnNRj小鼠之INFγ表現的qPCR分析。

<110> 盧森堡商前胃泌激素及癌症有限公司(PROGASTRINE ET CANCERS S.A R.L.)

<120> 治療癌症的抗前胃泌激素抗體與免疫療法之組合療法

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<151> 2017-12-05

<160> 78

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 80

<212> PRT

<213> 智人

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<400> 78

(無)

Claims

一種組合，其包含：抗前胃泌激素(抗-hPG)單株抗體，其包含：胺基酸序列SEQ ID NO：49之重鏈，及胺基酸序列SEQ ID NO：50之輕鏈，及免疫查核點抑制劑，其中該免疫查核點抑制劑為抗-PD1抗體。
一種組合，其包含：抗前胃泌激素(抗-hPG)單株抗體，其包含：胺基酸序列SEQ ID NO：73之重鏈，及胺基酸序列SEQ ID NO：74之輕鏈，及免疫查核點抑制劑，其中該免疫查核點抑制劑為抗-PD1抗體。
如請求項1或2之組合，其中該抗-hPG抗體係選自於下列所組成的群組：單鏈抗體、駱駝化抗體、嵌合抗體、IgA1抗體、IgA2抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體、IgG4抗體及IgM抗體。
如請求項1或2之組合，其中該抗-hPG抗體係人化抗體。
如請求項1或2之組合，其中該抗-hPG抗體係C端抗-前胃泌激素抗體。
如請求項1或2之組合，其中該抗-hPG抗體係中和抗體。
如請求項1或2之組合，其中該抗-PD1 抗體係派姆單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、西米匹單抗(cemiplimab)或聯合利妥昔單抗(pidilizumab)。
一種如請求項1或2之組合於製備用於治療結腸直腸癌之藥物的用途，其中該藥物是將投予至有需要的患者。
如請求項8之用途，其中該抗-hPG抗體與該免疫查核點抑制劑是同時、分別或依序投予。
一種藥學組成物，其包含如請求項1或2之組合、藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。