CN111670197A

CN111670197A - 治疗癌症的抗前胃泌激素抗体与免疫疗法的组合疗法

Info

Publication number: CN111670197A
Application number: CN201880088139.2A
Authority: CN
Inventors: A·普里厄
Original assignee: Progastrine et Cancers SARL
Current assignee: Progastrine et Cancers SARL
Priority date: 2017-12-05
Filing date: 2018-12-05
Publication date: 2020-09-15
Also published as: ES2920283T3; CA3084687A1; EP3720879B1; AU2018379320B2; EP3720879A1; US20210009680A1; PT3720879T; TW201927805A; TWI763956B; AU2018379320A1; RU2020121176A; CA3084687C; PL3720879T3; RU2020121176A3; SG11202005296SA; US20210324069A1; US11046758B2; KR102461238B1; KR20200118409A; JP2021505576A

Abstract

本发明涉及包含抗前胃泌激素(抗hPG)单克隆抗体和免疫检查点抑制剂的组合，以及包含所述组合的药物组合物。还提供使用所述组合的癌症治疗方法。

Description

治疗癌症的抗前胃泌激素抗体与免疫疗法的组合疗法

发明背景

免疫疗法已经改变癌症疗法领域的游戏规则。人类癌症携带众多的体基因突变和表观遗传改变的基因，其产物可被认为是外来抗原。肿瘤细胞通过诱发肿瘤特异性T细胞的耐受性而逃避内源性免疫反应。一旦肿瘤抗原已刺激反应，为了确保免疫发炎反应不会被持续活化，多个控制或“检查点”出现在适当的位置或被活化。这些免疫检查点主要表现为T细胞受体与周围肿瘤微环境中细胞上的配体结合，形成免疫突触，其进而调控T细胞功能。

一种触发抗肿瘤免疫反应的方法被称为“检查点阻断”，其是指阻断由癌细胞活化的免疫抑制途径。基于免疫检查点的疗法正以惊人的速度发展。作用于免疫系统(一种针对病原体的生物防御系统)且对某些癌症有效的新分子的出现已经成为了一个主要的转折点。利用这些新分子使得能够在一些皮肤黑色素瘤的患者中观察到肿瘤退化。最近批准的数个细胞毒性T淋巴细胞(CTL)相关抗原-4-CD80/CD86途径(伊匹单抗(Ipilimumab)/易普利姆玛(Yervoy))和PD-1-PD-L1/PD-L2途径的阻断剂，诸如纳武单抗(nivolumab)(欧狄沃(Opdivo))、派姆单抗(pembrolizumab)(可瑞达(Keytruda))、或阿特珠单抗(atezolizumab)(特善奇(Tecentriq))，开辟了免疫检查点(IC)抑制剂(ICI)作为引领晚期癌症治疗的关键组分。

然而，即使是黑色素瘤，多数患者仅表现出有限或暂时的反应，而常见的癌症诸如乳腺癌、前列腺癌或结肠癌却只是偶发地响应。此外，胰脏癌和结肠直肠癌对这些治疗模式(具体为单一制剂PD-1阻断)，仍然保持且很大的抗性。尽管观察到对检查点阻断抗体有持久反应，但是很明显，并不是所有患者，甚至在免疫疗法反应性癌症的亚组内，都显示出肿瘤消退。

因此，仍然需要鉴定出对现有的免疫检查点抑制剂途径提供激动作用或额外的抑制作用的额外途径。

发明内容

本发明人已展现与前胃泌激素结合的分子和免疫检查点抑制剂的组合导致更大的对抗癌症治疗功效。值得注意的是，本发明人展现了与免疫检查点抑制剂诸如抗-PD-1抗体组合施用抗前胃泌激素单克隆抗体使结肠直肠癌细胞系异种移植的小鼠的存活显著增加。这由与单独的每种疗法相比，中位存活时间显著增加来说明。而且，所述抗前胃泌激素单克隆抗体和免疫检查点抑制剂的组合导致干扰素γ的表达水平增加了一倍多。

在第一方面，本发明涉及包含结合前胃泌激素的分子和免疫检查点抑制剂的组合。优选地，本发明涉及结合前胃泌激素的分子和免疫检查点抑制剂的组合。

免疫检查点抑制剂

如本文所用的，“检查点抑制剂”是指靶向免疫检查点且阻断所述免疫检查点的功能的分子，诸如，例如，小分子、可溶性受体或抗体。更具体地，如本文所用的，“检查点抑制剂”是指阻断由一些类型的免疫系统细胞(诸如T细胞)和一些癌细胞制得的某些蛋白的分子，诸如，例如，小分子、可溶性受体或抗体。此类蛋白，如本文所用的“免疫检查点”或“免疫检查点蛋白”，调控免疫系统的T细胞功能。值得注意的是，它们有助于保持检查中的免疫反应，并可防止T细胞杀死癌细胞。所述免疫检查点蛋白通过与特异性配体相互作用来实现此结果，该特异性配体将信号发送至T细胞并基本上关闭或抑制T细胞功能。这些蛋白的抑制导致T细胞功能的恢复和对癌细胞的免疫反应。检查点蛋白的实例包括，但不限于：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4(属于CD2家族分子且在所有的NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称作BY55)、CGEN-15049、CHK 1和CHK2激酶、IDO1、A2aR和多种B-7家族配体。

在第一实施方案中，该免疫检查点蛋白是下列中任一者的抑制剂：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4(属于CD2家族分子且在所有的NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称作BY55)、CGEN-15049、CHK 1和CHK2激酶、IDO1、A2aR和多种B-7家族配体中的任一者。

如本文所用的，“抑制剂”或“拮抗剂”是指一种能抑制或者以其它方式降低靶蛋白(例如上述任一种免疫检查点蛋白)的一种或多种生物活性的分子。在一些实施方案中，免疫检查点蛋白的抑制剂(例如，本文提供的拮抗抗体)可以，例如，通过抑制或者以其它方式降低表达所述免疫检查点蛋白的细胞(例如T细胞)的活化和/或细胞信号传导路径而起作用，由此相对于在缺少该拮抗剂情况下的生物活性，抑制该细胞的生物活性。

示例性免疫检查点抑制剂包括抗CTLA-4抗体(例如伊匹单抗)、抗LAG-3抗体(例如BMS-986016)、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗Tim3抗体(例如TSR-022、MBG453)、抗BTLA抗体、抗KIR抗体、抗A2aR抗体、抗CD200抗体、抗PD-1抗体(例如，派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、匹利珠单抗)、抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗、阿维单抗、度伐单抗、BMS 936559)、抗VISTA抗体(例如JNJ 61610588)、抗CD28抗体、抗CD80或CD86抗体、抗B7RP1抗体、抗B7-H3抗体、抗HVEM抗体、抗CD137抗体(例如乌洛单抗(urelumab))、抗CD137L抗体、抗OX40(例如9B12、PF-04518600、MEDI6469)、抗OX40L抗体、抗CD40或CD40L抗体、抗GAL9抗体、抗IL-10抗体、PD-1配体如PDL-1或PD-L2的细胞外域的融合蛋白和IgG1(例如，AMP-224)、OX40配体如OX40L的细胞外域的融合蛋白和IgG1(例如，MEDI6383)、IDO1药物(例如艾卡哚司他(epacadostat))和A2aR药物。许多免疫检查点抑制剂已经被批准或目前正在进行临床试验。此类抑制剂包括伊匹单抗(ipilimumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、西米普利单抗(cemiplimab)、匹利珠单抗(pidilizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维单抗(avelumab)、度伐单抗(durvalumab)、BMS 936559、JNJ61610588、乌洛单抗(urelumab)、9B12、PF-04518600、BMS-986016、TSR-022、MBG453、MEDI6469、MEDI6383及艾卡哚司他。

免疫检查点蛋白的实例列于，例如，Marin-Acevedo等人，Journal ofHematology&Oncology 11:8,2018；Kavecansky和Pavlick,AJHO 13(2):9-20,2017；Wei等人，Cancer Discov 8(9):1069–86,2018。

优选地，该免疫检查点抑制剂为CTLA-4、LAG-3、Tim3、PD-1、PD-L1、VISTA、CD137、OX40或IDO1的抑制剂。

在一些实施方案中，该抑制剂为小分子药物。在一些实施方案中，该抑制剂为可溶性受体。在一些实施方案中，该抑制剂为抗体。

“小分子药物”在本文中广泛用来提及一种典型具有小于约1000的分子量的有机、无机或有机金属化合物。本发明的小分子药物包含具有小于约1000的分子量的寡肽和其它生物分子。

对于“可溶性受体”，其本文是指包含受体的细胞外域，但非其跨膜域或细胞质域的肽或多肽。

如本文所用的，术语“抗体”旨在包括多克隆抗体和单克隆抗体。抗体(或“免疫球蛋白”)由糖蛋白组成，该糖蛋白包含由二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包含重链可变区(或域)(在此缩写为HCVR或VH)与重链恒定区。重链恒定区包含三个域，CH1、CH2与CH3。每条轻链包含轻链可变区(在此缩写为LCVR或VL)与轻链恒定区域。轻链恒定区包含一个域，CL。VH和VL区可进一步细分成高可变区域，称为“互补性决定区”(CDR)或“高可变区”，其主要负责与抗原的表位结合，并且散置在更加保守的区域，该区域被称为框架区域(FR)。用于鉴定抗体的轻和重链内的CDR以及确定它们的序列的方法是本领域技术人员所熟知的。为避免疑义，在本文没有任何相反指示的情况下，表述CDR意指由IMGT所定义的抗体的重链和轻链的高可变区，其中IMGT独特的编号提供了框架区域以及互补决定区：CDR1-IMGT:27至38、CDR2，的标准化定界。

IMGT独特的编号已经被定义为比较可变域，无论抗原受体、链类型或种类如何[Lefranc M.-P.,Immunology Today 18,509(1997)/Lefranc M.-P.,The Immunologist,7,132-136(1999)/Lefranc,M.-P.,Pommié,C.,Ruiz,M.,Giudicelli,V.,Foulquier,E.,Truong,L.,Thouvenin-Contet,V.以及Lefranc,Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003)]。在IMGT独特的编号中，保守性氨基酸总是具有相同的位置，例如半胱氨酸23(1st-CYS)、色氨酸41(保守性-TRP(CONSERVED-TRP))、疏水性氨基酸89、半胱氨酸104(2nd-CYS)、苯丙氨酸或色氨酸118(J-PHE或J-TRP)。IMGT独特的编号提供了框架区(FR1-IMGT：位置1至26，FR2-IMGT：39至55，FR3-IMGT：66至104和FR4-IMGT：118至128)以及互补决定区：CDR1-IMGT：27至38、CDR2-IMGT：56至65和CDR3-IMGT：105至117，的标准化定界。由于空位表示未被占用的位置，所以CDR-IMGT的长度(显示在括号之间且由点分开，例如[8.8.13])成为重要信息。IMGT独特的编号用于2D图形表示法，其被指定为IMGT Colliers de Perles[Ruiz,M.andLefranc,M.-P.,Immunogenetics,53,857-883(2002)/Kaas,Q.and Lefranc,M.-P.,Current Bioinformatics,2,21-30(2007)]，以及用于IMGT/3D结构-DB中的3D结构[Kaas,Q.,Ruiz,M.和Lefranc,M.-P.,T cell receptor and MHC structuraldata.Nucl.Acids.Res.,32,D208-D210(2004)]。

各VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端至羧基端以下列顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链与轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的多种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(CIq))的结合。抗体可以是不同同种型(即IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)的。

“多克隆抗体”是在一种或多种其它非同一的抗体中或在其存在下产生的抗体。一般而言，多克隆抗体是在产生非同一的抗体的几种其它B淋巴细胞存在的情况下由B淋巴细胞产生的。通常，多克隆抗体是从经免疫的动物直接获得的。

术语“单克隆抗体”表明由几乎同源的抗体群体所产生的抗体，其中群体包含，除了可以以最小比例找到的一些可能天然存在的突变之外，同一的抗体。单克隆抗体由单个细胞克隆(诸如杂交瘤)的生长所产生，并且特征在于一类和亚类的重链，以及一种类型的轻链。

在一些实施方案中，该抑制剂是拮抗性抗体，即一种能抑制或者降低抗原(如本文所述的任一种免疫检查点蛋白)的一种或多种生物活性的抗体。某些拮抗性抗体基本上或完全抑制所述抗原的一种或多种生物活性。术语“抑制”或其语法的等同物当用于抗体的背景中时，是指一种抑止、限制或降低该抗体所结合的抗原的生物活性的抗体。抗体的抑制效应可以是导致抗原可测量的生物活性变化的抑制效应。

在一实施方案中，该免疫检查点蛋白抑制剂选自由下列组成的组：伊匹单抗、派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、匹利珠单抗、阿特珠单抗、阿维单抗、度伐单抗、BMS936559、JNJ 61610588、乌洛单抗、9B12、PF-04518600、BMS-986016、TSR-022、MBG453、MEDI6469、MEDI6383和艾卡哚司他。

在一实施方案中，该免疫检查点抑制剂是CTLA-4、PD-1或PD-L1的抑制剂。在优选地实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4、PD-1或PD-L1中任一种的抗体。更优选地，所述抗体是拮抗性抗体。甚至更优选地，所述拮抗性抗体选自伊匹单抗、派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、匹利珠单抗、阿特珠单抗、阿维单抗和度伐单抗之间。

在一实施方案中，该免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在优选的实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1的抗体。更优选地，所述抗体是拮抗性抗体。甚至更优选地，该免疫检查点抑制剂是派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗或匹利珠单抗。

抗hPG抗体

前胃泌激素(PG)由结肠直肠肿瘤细胞产生且认为其通过引发阻断细胞正常分化过程(包括导致细胞死亡的过程)的信号传导路径来刺激这些细胞的增殖。缺失编码前胃泌激素的胃泌激素基因转录本在体外和体内CRC模型中诱导肿瘤细胞的细胞分化和程序性细胞死亡，减少肿瘤细胞增殖。虽然不旨在受任何操作理论的束缚，但认为抗hPG抗体通过结合PG而阻断或抑制前胃泌激素与其信号传导配偶体相互作用的能力。这从而抑制结肠直肠肿瘤细胞的信号传导路径，否则该信号传导路径会导致增殖。

人前胃泌激素原，一种101个氨基酸肽(氨基酸序列参考：AAB19304.1)，为胃泌激素基因的主要翻译产物。通过从前胃泌激素原切割前21个氨基酸(信号肽)而形成前胃泌激素(PG)。通过切割和修饰酶进一步加工前胃泌激素的80个氨基酸链以得到几个生物活性胃泌激素激素形式：胃泌激素34(G34)和甘氨酸延伸的胃泌激素34(G34-Gly)，其包含前胃泌激素的氨基酸38-71，胃泌激素17(G17)和甘氨酸延伸的胃泌激素17(G17-Gly)，其包含前胃泌激素的氨基酸55至71。

术语“胃泌激素”是指哺乳动物前胃泌激素肽，且特别是人前胃泌激素。为避免疑义，在没有任何说明的情况下，表述“人前胃泌激素”或“hPG”是指序列SEQ ID No.1的人PG。人前胃泌激素包含特别是上文提及的生物活性胃泌激素激素形式中不存在的N端域和C端域。优选地，所述N端域的序列由SEQ ID NO:2表示。在另一优选的实施方案中，所述C端域的序列由SEQ ID NO:3表示。

对于“前胃泌激素结合分子”，其在本文中是指结合前胃泌激素但不结合胃泌激素-17(G17)、胃泌激素-34(G34)、甘氨酸延伸的胃泌激素-17(G17-Gly)或甘氨酸延伸的胃泌激素-34(G34-Gly)和C端侧翼肽(CTFP)的任何分子。本发明的前胃泌激素结合分子可以是任何前胃泌激素结合分子，诸如，例如，抗体分子或受体分子。优选地，前胃泌激素结合分子是抗前胃泌激素抗体(抗hPG抗体)或其抗原结合片段。

对于“结合(binding)”、“结合(binds)”，或类似物，其意指该抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。确定两种分子是否结合的方法在本领域中是众所周知的，并且包括，例如，平衡透析、表面等离子共振等。在特定的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与前胃泌激素结合的亲和力比其与非特异性分子如BSA或酪蛋白结合的亲和力大至少两倍。在更特定的实施方案中，该抗体或其抗原结合片段仅与前胃泌激素结合。

在更具体的实施方案中，本抗hPG抗体识别前胃泌激素的表位，其中所述表位包括与前胃泌激素的N端部分的氨基酸序列对应的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可包括hPG的残基10至14、hPG的残基9至14、hPG的残基4至10、hPG的残基2至10或hPG的残基2至14，其中hPG的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。

在更具体的实施方案中，该抗hPG抗体识别前胃泌激素的表位，其中所述表位包括与前胃泌激素的C端部分的氨基酸序列对应的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可包括hPG的残基71至74、hPG的残基69至73、hPG的残基71至80(SEQ ID NO:40)、hPG的残基76至80或hPG的残基67至74，其中hPG的该氨基酸序列为SEQ ID NO:1。

在更特别的实施方案中，如通过本文所述的方法确定的，该抗hPG抗体对前胃泌激素的亲和力为至少5000nM、至少500nM、100nM、80nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、7nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM、5pM、1pM、或至少0.1pM。

优选地，该抗hPG抗体为中和抗hPG抗体。

表述“中和抗hPG抗体”是指这样的抗体：结合PG并阻断PG依赖性信号传导，从而导致对肿瘤细胞，且特别是CRC肿瘤细胞中PG诱导的反应的抑制。可通过细胞分化抑制、细胞死亡抑制和/或刺激细胞增殖介导抑制癌细胞的PG诱导的反应。

在特定的实施方案中，所述前胃泌激素结合抗体或其抗原结合片段选自由下列组成的组：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、骆驼化抗体、IgA1抗体、IgA2抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgM抗体。

在另一特定的实施方案中，结合前胃泌激素的抗体已通过本领域技术人员已知的免疫方法来获得，其中使用肽作为免疫原，该肽的氨基酸序列包含前胃泌激素的氨基酸序列的总体或一部分。更特别地，所述免疫原包含选自下列的肽：

·其氨基酸序列包含以下，或由以下组成的肽：全长前胃泌激素的氨基酸序列，且特别是SEQ ID NO:1的全长人前胃泌激素，

·其氨基酸序列对应于前胃泌激素，且特别是SEQ ID NO:1的全长人前胃泌激素的氨基酸序列的一部分的肽，

·其氨基酸序列对应于前胃泌激素的N端部分的一部分或整个氨基酸序列的肽，且特别是包含氨基酸序列SWKPRSQQPDAPLG(SEQ ID NO:2)，或由其组成的肽，和

·其氨基酸序列对应于前胃泌激素的C端部分的一部分或整个氨基酸序列的肽，且特别是包含氨基酸序列QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN(SEQ ID NO:3)，或由其组成的肽，

·其氨基酸序列对应于前胃泌激素的C端部分的一部分氨基酸序列的肽，且特别是包含对应于前胃泌激素的氨基酸71-80的氨基酸序列FGRRSAEDEN(SEQ ID NO:40)的肽。

技术人员将认识到此类免疫作用可根据需要，用于生成多克隆抗体或单克隆抗体。用于获得这些类型抗体中每种抗体的方法在本领域中是众所周知的。因此，技术人员将容易地选择和实施生成抗任何指定抗原的多克隆抗体和/或单克隆抗体的方法。

通过使用包含对应于人前胃泌激素的氨基酸1-14(N端末端)的氨基酸序列“SWKPRSQQPDAPLG”的免疫原生成的单克隆抗体的实例包括但不限于，称作mAb3、mAb4、mAb16、和mAb19和mAb20的单克隆抗体，如下列表1至表4所述。其它单克隆抗体已被描述，虽然尚不清楚这些抗体是否实际上结合前胃泌激素(WO 2006/032980)。表位作图的实验结果显示mAb3、mAb4、mAb16、和mAb19和mAb20确实与所述hPG N端氨基酸序列内的表位特异性结合。本领域已描述特异性识别由SEQ ID NO:2表示的前胃泌激素N端内的表位的多克隆抗体(参见例如，WO 2011/083088)。

表1

表2

表3

表4

可通过使用包含对应于人前胃泌激素的氨基酸55-80的氨基酸序列“QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN”(前胃泌激素的C端部分)的免疫原生成的单克隆抗体的实例包括但不限于，下表5和表6中称作mAb8和mAb13的抗体。表位作图的实验结果显示mAb13确实与所述hPG C端氨基酸序列内的表位特异性结合。

表5

表6

其它实例包括通过使用包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的免疫原生成的抗hPG单克隆抗体和/或多克隆抗体。

术语“N端抗hPG抗体”和“C端抗hPG抗体”分别指定为与包含位于hPG的N端部分的氨基酸的表位结合的抗体，或与包含位于hPG的C端部分的氨基酸的表位结合的抗体。优选地，术语“N端抗hPG抗体”是指与位于前胃泌激素的域的表位结合的抗体，该表位的序列由SEQ ID NO:2表示。在另一优选的实施方案中，术语“C端抗hPG抗体”是指与位于前胃泌激素的域的表位结合的抗体，该表位的序列由SEQ ID NO:3表示。

术语“表位”是指抗原的与抗体结合的区域。表位可被定义为结构性或功能性的。功能性表位通常为结构性表位的亚组，并且具有直接有助于相互作用的亲和力的那些氨基酸。表位还可以为构型的。在某些实施方案中，表位可包括决定簇，其为分子(诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基基团或磺酰基基团)的化学活性表面组群，并且在某些实施方案中，可具有特定的三维结构特性，和/或特定的电荷特性。由抗体结合的表位的确定可以通过本领域技术人员已知的任何表位作图技术来执行。表位可包含不同的氨基酸，其顺序位于蛋白质的氨基酸序列内。表位也可包含非顺序位于蛋白的氨基酸序列内的氨基酸。

在特定的实施方案中，所述抗体为选自由下列组成的组的单克隆抗体：

·包含下列重链和轻链的单克隆抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:4、5和6的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:4、5和6最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:7、8和9的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:7、8和9最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，

·包含下列重链和轻链的单克隆抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:10、11和12的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:10、11和12最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:13、14和15的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:13、14和15最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，

·包含下列重链和轻链的单克隆抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO16、17和18最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:19、20和21最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，

·包含下列重链和轻链的单克隆抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:22、23和24的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列22、23和24最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:25、26和27的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:25、26和27最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，

·包含下列重链和轻链的单克隆抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:28、29和30的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列28、29和30最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:31、32和33的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:31、32和33最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，和

·包含下列重链和轻链的单克隆抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:34、35和36的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列34、35和36最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:37、38和39的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:37、38和39最佳比对后具有至少80％、优选至少85％、90％、95％和98％同一性的序列。

从本发明的意义上说，两个核酸或氨基酸序列之间的“同一性百分比”或“同一性％”意指两个待比较的序列之间在最佳比对后获得的相同核苷酸或氨基酸残基的百分比，此百分比仅仅为统计上的，并且介于两个序列之间的差异系沿着其长度随机分布。通常两个核酸或氨基酸序列的比较通过在最佳比对所述序列之后进行比较所述序列来进行，所述比较能够通过区段或通过使用“比对窗口”予以实施。供比较的序列的最佳比对除了可通过手工比较来进行之外，还可以通过本领域技术人员已知的方法来进行。

关于与参考氨基酸序列展现出至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的氨基酸序列，优选的实例包括含有参考序列，某些修饰，尤其是至少一个氨基酸的缺失、添加或取代，截断或延伸的氨基酸序列。在取代一个或多个连续氨基酸或非连续氨基酸的情况下，优选其中取代的氨基酸被“等效”氨基酸替代的取代。在此，表述“等效氨基酸”意指可能取代结构性氨基酸之一的任何氨基酸，但不修饰相应抗体和下文定义的那些具体实例的生物学活性。

可以根据其与被其取代的氨基酸的结构同源性，或者根据可能生成的各种抗体之间的生物活性的比较测试结果，确定等效氨基酸。

在更特定的实施方案中，所述抗体是选自由下列组成的组的单克隆抗体：

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:41的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:42的轻链的单克隆抗体；

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:43的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:44的轻链的单克隆抗体；

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:45的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:46的轻链的单克隆抗体；

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:47的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:48的轻链的单克隆抗体；

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:49的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:50的轻链的单克隆抗体；和

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:51的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:52的轻链的单克隆抗体。

在特定的实施方案中，本组合的抗体为嵌合抗体。

如本文所用的，“嵌合抗体”是这样一种抗体：其中恒定区域或其部分经改变、替代或交换，使得可变区与不同物种的恒定区，或属于另一抗体类别或亚类的恒定区连接。“嵌合抗体”还指这样一种抗体：其中可变区或其部分经改变、替代或交换，使得恒定区与不同物种的可变区，或属于另一抗体类别或亚类的可变区连接。

在另一特定的实施方案中，本组合的抗体为人源化抗体。

如本文所用的，表述“人源化抗体”意指这样的抗体：其含有衍生自非人类来源的抗体的CDR区，抗体分子的其它部分衍生自一种或几种人抗体。此外，一些骨架区段残基(框架称为FR)可以根据本领域技术人员已知的技术予以修饰以保留结合亲和力(Jones等人，Nature,321:522-525,1986)。人源化的目的是降低引入人的异种基因抗体(如鼠类抗体)的免疫原性，同时维持抗体完整的抗原结合亲和力和特异性。

本发明的人源化抗体或其片段可以通过本领域技术人员已知的技术进行制备(诸如，例如，在文档Singer等人，J.Immun.,150:2844-2857,1992中所述的技术)。对于其在涉及体外诊断或体内预防和/或治疗的方法中的用途而言，优选此类人源化抗体。其它人源化技术对于本领域技术人员而言是已知的。事实上，可使用多种技术来人源化抗体，所述技术包括CDR移植(EP 0 451 261；EP 0 682 040；EP 0 939 127；EP 0 566 647；US 5,530,101；US 6,180,370；US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,639,641；US 6,054,297；US 5,886,152；和US 5,877,293)、镶饰或表面再造(EP 0 592 106；EP 0 519 596；Padlan E.A.,1991,Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka G.M.等人，1994,ProteinEngineering 7(6):805-814；Roguska M.A.等人，1994,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,91:969-973)，和链改组(chain shuffling)(美国专利号5,565,332)。可通过本领域已知的多种方法来制作人抗体，所述方法包括噬菌体展示方法。还参见美国专利号4,444,887、4,716,111、5,545,806、和5,814,318；以及国际专利申请公开号WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735、和WO 91/10741。

在更特定的实施方案中，所述抗体为选自由下列组成的组的人源化抗体：

·包含以下重链和轻链的人源化抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:4、5和6的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:4、5和6最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:7、8和9的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:7、8和9最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，

·包含以下重链和轻链的人源化抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:10、11和12的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:10、11和12最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:13、14和15的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:13、14和15最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，

·包含以下重链和轻链的人源化抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:16、17和18最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％的同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:19、20和21最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，

·包含以下重链和轻链的人源化抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:22、23和24的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:22、23和24最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:25、26和27的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:25、26和27最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，

·包含以下重链和轻链的人源化抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:28、29和30的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:28、29和30最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:31、32和33的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:31、32和33最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，和

·包含以下重链和轻链的人源化抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:34、35和36的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:34、35和36最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:37、38和39的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，或分别与序列SEQ ID NO:37、38和39最佳比对后具有至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的序列。

其中所述抗体还包含衍生自人抗体的重链和轻链的恒定区。

在另一更特定的实施方案中，所述抗体为选自由下列组成的组的人源化抗体：

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:53的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ IDNO:54的轻链可变区的人源化抗体；

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:55的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ IDNO:56的轻链可变区的人源化抗体；

·包含具有选自SEQ ID NO:57、58和59之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID NO:60、61和62之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；

·包含具有选自SEQ ID NO:63、64和65之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID NO:66、67和68之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；

·包含具有选自SEQ ID NO:69和71之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID NO:70和72之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；和

·包含具有选自SEQ ID NO:75和76之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID NO:77和78之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体。

其中所述抗体还包含衍生自人抗体的重链和轻链的恒定区。

更优选地，所述抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:72的轻链可变区，所述抗体还包含衍生自人抗体的轻链和重链的恒定区。

甚至更优选地，所述抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:73的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:74的轻链。

抗体片段

本发明还包含抗体片段，特别是其抗原结合片段。

“抗体片段”包含全长抗体的一部分，通常为其抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')₂、Fv片段和Scfv；双抗体；线性抗体；微型抗体(Olafsen等人(2004)Protein Eng.Design&Sel.17(4):315-323)、通过Fab表达库生成的片段、抗独特型(抗-Id)抗体、CDR(互补性决定区)和本文所述的任何表位结合片段，其免疫特异性结合癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原、单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。

术语抗体的“抗原结合域”(或“抗原结合片段”)是指抗体的一个或多个保留与抗原(例如hPG)特异性结合的能力的片段。已经显示出可通过全长抗体的片段执行抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合域”内包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，其是由V_L、V_H、CL和CH1域组成的单价片段；(ii)F(ab′)₂片段，一种包含由铰链区处的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其由V_H和CH1域组成；(iv)Fv片段，其由抗体的单臂的V_L和V_H域组成；(v)单一域或dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)，其由V_H域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)两个或多个分离的CDR的组合，其可任选地由合成的接头连结。而且，尽管Fv片段的两个域，V_L和V_H，由单独的基因编码，但可使用重组方法通过合成的接头使它们连结，以使其被制成单一蛋白链，其中V_L和V_H区配对以形成单价分子(称作单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人(1988)Science 242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。术语抗体的“抗原结合域”也旨在涵盖此类单链抗体。

使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。可通过重组DNA技术或酵素或完整免疫球蛋白的酶切割或化学切割来产生抗原结合部分。

抗体衍生物

本发明的抗hPG抗体可进一步经修饰以包含本领域已知且易于获得的额外非蛋白质性部分。特别地，本文包括经衍生化、共价修饰或与其它分子缀合的抗hPG单克隆抗体供在诊断和治疗应用中使用。例如，但不是限制性的，衍生化抗体包括例如已通过以下方式进行修饰的抗体：糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护基/阻断基衍生化、蛋白水解切割、与细胞配体或其它蛋白质的连接。多种化学修饰中的任一种均可通过已知的技术进行，所述技术包括，但不限于：特定化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。另外，衍生物可含有一或多个非经典的氨基酸。

优选地，适用于衍生抗体的部分为水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括，但不限于，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三氧杂环己烷、乙烯/顺丁烯二酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化的多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚合物可具有任何分子量，且可以是支链的或无支链的。附着至抗体的聚合物的数目可有所变化，且如果附着一个以上的聚合物，则它们可以是相同或不同分子。通常，用于衍生化的聚合物的数目和/或类型可基于考虑因素来确定，所述考虑因素包括，但不限于，待改善的抗体的特定性质或功能、抗体衍生物是否将在限定的条件下用于疗法等。

在具体的实例中，本公开的抗hPG抗体可附着至聚(乙二醇)(PEG)部分。在具体的实施方案中，抗体为抗体片段且PEG部分经由任何位于抗体片段中的可用氨基酸侧链或末端氨基酸官能团，例如任何游离氨基、亚氨基、硫醇基、羟基或羧基进行附着。此类氨基酸可天然存在于抗体片段中或可使用重组DNA方法工程化至片段中。参见，例如，美国专利号5,219,996。可使用多个位点来附着两个或更多个PEG分子。PEG部分可经由至少一个位于抗体片段中的半胱氨酸残基的硫醇基共价连接。当硫醇基用作附着点时，可使用经适当活化的效应子部分，例如硫醇选择性衍生物，诸如马来酰亚胺和半胱氨酸衍生物。

在具体的实例中，抗hPG抗体缀合物是经修饰的Fab’片段，其是PEG化的，即，具有例如根据EP0948544中公开的方法共价附着于此的PEG(聚(乙二醇))。还参见Poly(ethyleneglycol)Chemistry,Biotechnical and Biomedical Applications,(J.MiltonHarris(ed.),Plenum Press,New York,1992)；Poly(ethyleneglycol)Chemistry andBiological Applications,(J.Milton Harris and S.Zalipsky,eds.,AmericanChemical Society,Washington D.C.,1997)；和Bioconjugation Protein CouplingTechniques for the Biomedical Sciences,(M.Aslam and A.Dent,eds.,GrovePublishers,New York,1998)；和Chapman,2002,Advanced Drug Delivery Reviews 54:531-545。PEG可附着至铰链区中的半胱氨酸。在一个实例中，经PEG修饰的Fab’片段具有共价连接至经修饰的铰链区中的单个硫醇基的马来酰酰亚胺基。赖氨酸残基可共价连接至马来酰亚胺基且分子量为约20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)聚合物可附着至赖氨酸残基上的各氨基。附着至Fab’片段的PEG的总分子量因此可为约40,000Da。

在另一实施方案中，提供抗体和非蛋白性部分的缀合物，其可通过暴露于辐射来选择性加热。在一个实施方案中，非蛋白性部分是碳纳米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可具有任何波长，且包括，但不限于以下波长的辐射：其不危害正常细胞，但将非蛋白性部分加热至将毗邻抗体-非蛋白性部分的细胞杀死的温度。

免疫缀合物

在另一方面中，本发明还提供免疫缀合物(可互换地称为“抗体-药物缀合物”或“ADC”)，其包含如本文所述的抗hPG抗体，所述抗体缀合至一种或多种细胞毒性剂，诸如化学治疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如，蛋白质毒素、细菌、真菌、植物或动物来源的经酶解的活性毒素或其片段)或放射性同位素(即，放射性缀合物)。

免疫缀合物已经在癌症治疗中用于局部递送细胞毒性剂，即杀死或抑制细胞的生长或增殖的药物(Lambert,J.(2005)Curr.Opinion in Pharmacology 5:543-549；Wu等人(2005)Nature Biotechnology 23(9):1137-1146；Payne,G.(2003)i 3:207-212；Syrigosand Epenetos(1999)Anticancer Research 19:605-614；Niculescu-Duvaz and Springer(1997)Adv.Drug Deliv.Rev.26:151-172；美国专利号4,975,278)。在全身施用未缀合的药物可导致正常细胞以及试图被消灭的肿瘤细胞无法接受的毒性水平的情况中，免疫缀合物能允许药物部分靶向递送至肿瘤，且细胞内累积在其中(Baldwin等人，Lancet(Mar.15,1986)pp.603-05；Thorpe(1985)“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In CancerTherapy:A Review,”in Monoclonal Antibodies'84:Biological And ClinicalApplications(A.Pinchera等人，eds)pp.475-506。已报道多克隆抗体和单克隆抗体二者均可用于这些策略中(Rowland等人，(1986)Cancer Immunol.Immunother.21:183-87)。这些方法中使用的药物包括道诺霉素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、甲氨蝶呤(methotrexate)和长春地辛(vindesine)(Rowland等人，(1986)上述)。抗体-毒素缀合物使用的毒素包括细菌毒素如白喉毒素、植物毒素如蓖麻毒素、小分子毒素如格尔德霉素(geldanamycin)(Mandler等人(2000)J.Nat.Cancer Inst.92(19):1573-1581；Mandler等人(2000)Bioorganic&Med.Chem.Letters 10:1025-1028；Mandler等人(2002)Bioconjugate Chem.13:786-791)、类美坦素(maytansinoid)(EP 1391213；Liu等人，(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:8618-8623)和卡奇霉素(calicheamicin)(Lode等人(1998)Cancer Res.58:2928；Hinman等人(1993)Cancer Res.53:3336-3342)。毒素可通过包括微管蛋白结合、DNA结合或拓扑异构酶抑制的机制而发挥其细胞毒性效应。一些细胞毒性药物当与大的抗体或蛋白质受体配体缀合时，倾向于非活性的或较小活性。

在某些实施方案中，免疫缀合物包含抗体和化学治疗剂或其它毒素。可用于生成免疫缀合物的化学治疗剂如本文(例如，以上)所述。可使用的酶解的活性毒素及其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自绿脓假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa))、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素(modeccin)A链、α-帚曲菌素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白质、石竹素(dianthin)蛋白质、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白质(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、麻风树毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、sapaonaria officinalis抑制剂、白树毒素(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和单端孢霉烯族毒素(tricothecene)。参见，例如，1993年10月28日公开的WO 93/21232。多种放射性核素可用于产生放射性缀合的抗体。实例包括²¹²Bi、¹³¹I、¹³¹In、⁹⁰Y和¹⁸⁶Re。抗体与细胞毒性剂的缀合物是使用多种双功能的蛋白偶合剂来制得的，诸如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二巯基)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(iminothiolane，IT)、亚氨酸酯的双官能团衍生物(诸如二亚胺代己二酸二甲酯HCl)、活性酯(诸如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(诸如戊二醛)、双-叠氮基化合物(诸如双(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双-重氮衍生物(诸如双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双-活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta et ah,Science,238:1098(1987)中所述来制备。碳-14标记的1-异硫氰酸根合苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于缀合放射性核素与抗体的示例性螯合剂。参见WO94/11026。

本文还预期抗体和一种或多种小分子毒素的缀合物，该小分子毒素诸如加利车霉素(calicheamicin)、类美坦素(maytansinoid)、尾海兔素(dolastatin)、澳瑞他汀(aurostatins)、单端胞霉烯(trichothecene)和CC 1065，以及这些毒素的具有毒素活性的衍生物。

本发明的免疫缀合物可进一步包含接头。

“接头”、“接头单元”或“连接”意指一种包含共价键或原子链的化学部分，其使结合蛋白共价附着至至少一种细胞毒性剂。

可使用多种双功能蛋白质偶合剂制备接头，诸如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二巯基)丙酸酯(SPDP)、4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯的双官能团衍生物(诸如二亚胺代己二酸二甲酯HCl)、活性酯(诸如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(例如戊二醛)、双-叠氮基化合物(诸如双(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双-重氮衍生物(诸如双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双-活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。碳-14-标记的1-异硫氰酸根合苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于缀合细胞毒性剂与访问系统(addressing system)的示例性螯合剂。其它交联剂试剂可以是BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、和磺基-SMPB，以及SVSB(琥珀酰亚胺-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，以上试剂均可自市面购得(例如，可购自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,Ill.,U.S.A)。

接头可以是“不可切割的”或“可切割的”。

核酸和表达系统

本公开涵盖编码抗体，特别是抗hPG抗体的免疫球蛋白轻链和重链基因的多核苷酸、包含此类核酸的载体、以及能够产生本公开的抗体的宿主细胞。

在第一方面，本发明设计编码抗体，特别是能够特异性结合如以上所述的前胃泌激素的抗体的一或多种多核苷酸。

第一实施方案提供编码以上所述的抗hPG抗体的重链的多核苷酸。优选地，所述重链包含序列SEQ ID NO:4、5和6的三个重链CDR。更优选地，所述重链包含包含序列SEQ IDNO:14的可变区的重链。甚至更优选地，所述重链具有完整序列SEQ ID NO:16。

在另一实施方案中，该多核苷酸编码上述的抗hPG抗体的轻链。优选地，所述重链包含序列SEQ ID NO:7、8和9的三个重链CDR。更优选地，所述重链包含包含序列SEQ ID NO:15的可变区的重链。甚至更优选地，所述重链具有完整序列SEQ ID NO:17。

依据本发明，可使用多种表达系统来表达本发明的抗体。在一方面，此；类表达系统代表以下载体，该载体可产生感兴趣的编码序列且随后予以纯化，而且还代表以下细胞，该细胞瞬时转染合适的核苷酸编码序列时可在原位表达IgG抗体。

本发明提供包含上述多核苷酸的载体。在一个实施方案中，该载体含有编码感兴趣的抗体(例如抗hPG抗体)的重链的多核苷酸。在另一实施方案中，所述多核苷酸编码感兴趣的抗体(例如抗hPG抗体)的轻链。本发明还提供包含编码融合蛋白、经修饰的抗体、抗体片段及其探针的多核苷酸分子的载体。

为了表达感兴趣的抗体(例如抗hPG抗体)的重链和/或轻链，将编码所述重链和/或轻链的多核苷酸插入表达载体中以使该基因可操纵地连接至转录和翻译序列。

“可操纵地连接”序列包括与感兴趣的基因相邻的表达控制序列和以反式作用或以一段距离控制感兴趣的基因的表达控制序列二者。如本文所用的术语“表达控制序列”是指以下多核苷酸序列，其对于实现它们所连接的编码序列的表达与加工是必需的。表达控制序列包括适当的转录起始、终止、启动子与增强子序列；有效的RNA加工信号诸如剪切和聚腺苷酸化信号；稳定胞质mRNA的序列；提高翻译效率的序列(亦即，科扎克(Kozak)共有序列)；提高蛋白质稳定性的序列；以及当期望时，提高蛋白质分泌的序列。此类控制序列的性质根据宿主生物而有所不同；在原核生物中，此类控制序列通常包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列；在真核生物中，此类控制序列通常包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”旨在包括，在最低限度下，其存在对于表达与加工必不可少的所有组成，并且还可包括额外的组成，该额外的组成的存在是有利的，例如前导序列与融合配偶体序列。

如本文所用的，术语“载体”旨在指一种能够转运另一种核酸至其已经被连接的核酸分子。载体的一种类型是“质粒”，其是指一种环状双股DNA环，其内可连接额外的DNA区段。载体的另一种类型是病毒载体，其中额外的DNA区段可连接至病毒基因组中。某些载体能够在引入它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌的复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)一旦引入到宿主细胞中可整合至宿主细胞的基因组中，由此与宿主基因体一起复制。

某些载体能够指导可操纵地连接它们的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。通常，在重组DNA技术中有用的表达载体是质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是载体的最常用形式。然而，本发明旨在包括此类形式的表达载体，诸如细菌质体、YAC、粘粒、逆转录病毒、EBV衍生的附加体，以及技术人员会知道对于确保感兴趣的抗体(例如抗hPG抗体)的重链和/或轻链的表达方便的所有其它载体。技术人员会了解到编码重链和轻链的多核苷酸可被克隆至不同的载体或相同的载体中。在优选的实施方案中，所述多核苷酸被克隆至两种载体种。

可使用本发明的多核苷酸和包含这些分子的载体来转化合适的宿主细胞。如本文所用的，术语“宿主细胞”旨在指已经被导入重组表达载体的细胞以便表达感兴趣的抗体(例如，抗hPG抗体)的细胞。应理解，此类术语不仅旨在指特定的个体细胞，还旨在指此细胞的子代。由于后继世代中可能由于突变或环境影响而发生某些修饰，因此事实上此类子代可不与亲代细胞相同，但仍包括在本文所用的术语“宿主细胞”的范围内。

可通过任何已知用于将多核苷酸引入细胞宿主中的方法来进行转化。此类方法是本领域技术人员熟知的且包括聚葡糖介导的转化、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、将多核苷酸囊封于脂质体中、生物射弹注射和直接显微注射DNA至细胞核中。

可用一或多个表达载体共转染宿主细胞。例如，可用编码感兴趣的抗体(例如抗hPG抗体)的重链和轻链二者的载体转染宿主细胞，如以上所述。或者，可用编码感兴趣的抗体(例如抗hPG抗体)的重链的第一载体和编码所述抗体的轻链的第二载体来转化宿主细胞。哺乳动物细胞常用于表达重组治疗性免疫球蛋白，尤其是用于表达完整重组抗体。例如，哺乳动物细胞诸如HEK293或CHO细胞组合含有表达信号(诸如携带来自人巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子元件的信号)的载体是用于本发明的人源化抗hPG抗体的有效系统(Foecking等人，1986,Gene 45:101；Cockett等人，1990,Bio/Technology 8:2)。

此外，选择可调控插入的序列的表达或以所期望的特定方式修饰和加工基因产物的宿主细胞。蛋白质产物的此类修饰(例如糖基化)和加工对于蛋白质功能可能是重要的。不同的宿主细胞具有蛋白质和基因产物的翻译后加工和修饰的特征和特定机制。选择适当的细胞系或宿主系统以确保表达的感兴趣的抗体的正确修饰和加工。因此，可使用拥有用于一级转录本的正确加工、基因产物的糖基化的细胞机构的真核宿主细胞。此类哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、COS、HEK293、NS/0、BHK、Y2/0、3T3或骨髓瘤细胞(所有这些细胞系均可从公共保藏机构得到，诸如法国，巴黎，Collection Nationale des Cultures deMicroorganismes，或美国，VA，马纳萨斯，American Type Culture Collection)。

对于长期高产率产生重组蛋白而言，稳定表达是优选的。在本发明的一个实施方案中，可工程化稳定表达抗体的细胞系。除了使用含有病毒复制起点的表达载体外，可用在适当表达调控元件(包括启动子、增强子、转录终止子、聚腺苷酸化位点及本领域技术人员已知的其它合适的序列)调控下的DNA和可筛选标记来转化宿主细胞。引入外源DNA后，可使经工程化的细胞在富集培养基上生长1至2天，随后将其转移至选择性培养基上。重组质体上的可筛选标记赋予对选择的抗性且允许细胞将质粒稳定整合到染色体中并在细胞系中扩增。用于构建稳定细胞系的其它方法在本领域中是已知的。特别地，已经发展了用于位点特异性整合的方法。依据这些方法，在适当表达调控元件(包括启动子、增强子、转录终止子、聚腺苷酸化位点和其它合适的序列)调控下的转化的DNA在先前已经被切割的特异性靶位点处整合至宿主细胞基因组中(Moele等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,104(9):3055-3060；US 5,792,632；US 5,830,729；US 6,238,924；WO 2009/054985；WO 03/025183；WO2004/067753)。

依据本发明可使用许多筛选系统，包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人，Cell 11:223,1977)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Szybalska等人，Proc NatlAcad Sci USA 48:202,1992)、在甲硫氨酸磺酰亚胺的存在下的谷氨酸合成酶选择(AdvDrug Del Rev,58:671,2006，以及Lonza Group Ltd.的网站或文献)以及tk、hgprt或aprt细胞中的腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因(Lowy等人，Cell 22:817,1980)。而且，可使用抗代谢物的抗性作为选择下列基因的基础：dhfr，其赋予对甲氨蝶呤的抗性(Wigler等人，ProcNatl Acad Sci USA 77:357,1980)；gpt，其赋予对霉酚酸的抗性(Mulligan等人，ProcNatl Acad Sci USA 78:2072,1981)；neo，其赋予氨基糖苷类，G-418的抗性(Wu等人，Biotherapy 3:87,1991)；和hygro，其赋予对潮霉素的抗性(Santerre等人，Gene 30:147,1984)。可常规应用重组DNA技术领域中已知的方法来选择所期望的重组克隆，且此类方法的描述见于例如Ausubel等人，eds.,Current Protocols in Molecular Biology,JohnWiley&Sons(1993)。通过载体扩增可增加抗体的表达水平。当表达抗体的载体系统中的标记可扩增时，培养物中存在的抑制剂水平的升高会增加标记基因的拷贝数目。由于扩增的区域与编码本发明的IgG抗体的基因有关联，所以所述抗体的产生也会增加((Crouse等人，Mol Cell Biol 3:257,1983)。存在表达本发明的基因的替代方法且其是本领域技术人员已知的。例如，经修饰的锌指蛋白可经工程化以能够结合本发明基因上游的表达调控元件；所述经工程化的锌指蛋白(ZFN)在本发明的宿主细胞中的表达导致蛋白产生增加(参见例如Reik等人，Biotechnol.Bioeng.,97(5):1180-1189,2006)。而且，ZFN可促进DNA整合至预定的基因组位置中，导致高效率的位点特异性基因添加(Moehle等人，Proc Natl Acad SciUSA,104:3055,2007)。

感兴趣的抗体(例如抗hPG抗体)可通过使经转化的宿主细胞培养物在表达期望抗体所必需的培养条件下生长来制备。然后，所得的经表达的抗体可从培养基或细胞提取物中纯化。可从培养悬浮液回收该感兴趣的抗体(例如抗hPG抗体)的可溶形式。然后，其可通过本领域已知用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法来纯化，例如，通过色谱法(例如，离子交换，亲和力，特别是通过Fc的蛋白A亲和力，等等)、离心、差异溶解度或通过用于蛋白质纯化的任何其它标准技术。适合的纯化方法对于本领域普通技术人员而言是显而易见的。

因此，本发明的另一方面涉及一种用于产生本文所述的抗体(例如抗hPG抗体)的方法，所述方法包括下列步骤：

a)使上述宿主细胞在合适的培养条件下在培养基中生长；和

b)从该培养基或从所述培养的细胞中回收该抗体(例如抗hPG抗体)。

药物组合物

抗hPG单克隆抗体和免疫检查点抑制剂的组合可配制成组合物。任选地，组合物可包含一种或多种额外的治疗剂，诸如下文所述的第三治疗剂。该组合物通常以一般包括药学上可接受的载剂和/或赋形剂的无菌药物组合物的一部分供应。在另一方面，本发明因此提供一种药物组合物，其包含抗hPG抗体、免疫检查点抑制剂和药学上可接受的媒介物和/或赋形剂。

此组合物可以任何适合形式(取决于患者施用该组合物所期望的方法)。如本文所用的，“施用”意指向受试者给予一定剂量的化合物(例如抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂，如上所述)或组合物(例如药物组合物，例如含有抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂的药物组合物，如上所述)的方法。本文所述方法中利用的组合物可以通过下列方式施用，例如玻璃体内(例如通过玻璃体内注射)、通过滴眼剂、肌肉内、静脉内、皮内、经皮、动脉内、腹膜内、病灶内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鞘内、鼻内、阴道内、直肠内、局部、肿瘤内、腹膜、皮下、结膜下、囊泡内、黏膜、心包内、脐内、眼内、眼眶内、经口、局部、穿皮、通过吸入、通过注射、通过移植、通过输注、通过连续输注、通过直接局部灌注沐浴靶细胞、通过导管、通过灌洗法、在乳膏中、或在脂质组合物中。本文所述方法中利用的组合物也可全身性或局部施用。施用方法可取决于多种因素而变化(例如，待施用的化合物或组合物以及待治疗的病况、疾病或病症的严重程度)。在任何给定的情况下最合适的施用途径将取决于特定抗体、受试者和疾病的性质和严重程度，以及受试者的身体状况。抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂可配制成水溶液且通过皮下注射施用。

药物组合物可以每剂量含有预定量的抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂的单位剂量形式呈现。此类单位可含有例如但不限于5mg至5g，例如10mg至1g，或20至50mg。用于本公开的药学上可接受的载剂可采取多种形式，取决于例如待治疗的病况或施用途径。

可通过将具有期望纯度的抗体与本领域中通常采用的任选地药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂(在本文中全体均称为“载剂”)，即缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂、非离子型去垢剂、抗氧化剂及其它各种添加剂混合，将本公开的药物组合物制备成冻干配制剂或水溶液以供储存。参见，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版(Osol,ed.1980)。此类添加剂在所用剂量和浓度下对接受者须无毒。

缓冲剂有助于将pH值维持在接近生理条件的范围内。它们的浓度可在约2mM至约50mM的范围内。适用于本公开的缓冲剂包括有机酸与无机酸二者及其盐类，诸如柠檬酸盐缓冲液(例如，柠檬酸一钠-柠檬酸二钠混合物、柠檬酸-柠檬酸三钠混合物、柠檬酸-柠檬酸一钠混合物等)、琥珀酸盐缓冲液(例如，琥珀酸-琥珀酸一钠混合物、琥珀酸-氢氧化钠混合物、琥珀酸-琥珀酸二钠混合物等)、酒石酸盐缓冲液(例如，酒石酸-酒石酸钠混合物、酒石酸-酒石酸钾混合物、酒石酸-氢氧化钠混合物等)、延胡索酸盐缓冲液(例如，延胡索酸-延胡索酸一钠混合物、延胡索酸-延胡索酸二钠混合物、延胡索酸一钠-延胡索酸二钠混合物等)、葡糖酸盐缓冲液(例如，葡糖酸-葡糖酸钠混合物、葡糖酸-氢氧化钠混合物、葡糖酸-葡糖酸钾混合物等)、草酸盐缓冲液(例如，草酸-草酸钠混合物、草酸-氢氧化钠混合物、草酸-草酸钾混合物等)、乳酸盐缓冲液(例如，乳酸-乳酸钠混合物、乳酸-氢氧化钠混合物、乳酸-乳酸钾混合物等)和乙酸盐缓冲液(例如，乙酸-乙酸钠混合物、乙酸-氢氧化钠混合物等)。另外，可使用磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液和三甲胺盐诸如Tris。

可添加防腐剂以阻止微生物生长，且其添加量可在0.2％-1％(w/v)范围内。适用于本公开的防腐剂包括苯酚、苯甲醇、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、十八烷基苯甲基二甲基氯化铵、卤化苯甲烃铵(benzalconium halide)(例如氯化苯甲烃铵、溴化苯甲烃铵和碘化苯甲烃铵)、氯化六烃季铵(hexamethonium chloride)，以及对羟基苯甲酸烷酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、儿茶酚、间苯二酚、环己醇和3-戊醇。有时可添加称为“稳定剂”的等渗剂以确保本公开的液体组合物的等渗性且包括多元糖醇，例如三元或更多元糖醇，诸如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇。稳定剂是指一大类赋形剂，其功能范围从填充剂至溶解治疗剂或帮助防止变性或与容器壁黏着的添加剂。典型的稳定剂可为多元糖醇(上文所列举)；氨基酸如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等；有机糖或糖醇，诸如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、肌醇(myoinisitol)、半乳糖醇、甘油等，包括环多醇诸如肌醇(inositol)；聚乙二醇；氨基酸聚合物；含硫还原剂，诸如脲、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、α-单硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量多肽(例如，具有10个残基或更少的肽)；蛋白质诸如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮单糖(polyvinylpyrrolidone monosaccharides)，诸如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二糖诸如乳糖、麦芽糖、蔗糖和三糖诸如棉子糖；和多糖诸如聚葡糖。每重量份活性蛋白可存在0.1至10,000重量的范围内的稳定剂。

可添加非离子型表面活性剂或去垢剂(也称为“湿润剂”)以帮助治疗剂溶解以及保护治疗性蛋白质免受搅动诱导的聚集，其还允许配制剂暴露于承受应力的剪切表面而不引起蛋白质变性。适合的非离子型表面活性剂包括聚山梨醇酯(20、80等)、泊洛沙姆(polyoxamer)(184、188等)、普朗尼克多元醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单醚(

-20、

-80等)。非离子型表面活性剂可在约0.05mg/ml至约1.0mg/ml，例如约0.07mg/ml至约0.2mg/ml的范围内存在。

额外的各种赋形剂包括填充剂(例如，淀粉)、螯合剂(例如，EDTA)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、甲硫氨酸、维生素E)和共溶剂。

本发明还涉及一种药物组合物，其至少包含：

i)一种抗hPG抗体和

ii)免疫检查点抑制剂，

作为组合产品供同时、分开或顺序使用。

如本文所用的“同时使用”是指根据本发明的组合物中的两种化合物以单一且相同的药学形式施用。

如本文所用的“分开使用”是指根据本发明的组合物中的两种化合物以不同的药学形式同时施用。

如本文所用的“顺序使用”是指根据本发明的组合物中的两种化合物各自以不同的药学形式依次施用。

抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合物可单独施用，以一种或多种抗hPG单克隆抗体和/或一种或多种免疫检查点抑制剂的混合物施用，与其它可用于治疗癌症，特别是CRC的药剂混合或组合施用，或辅助用于癌症，特别是CRC的其它疗法施用。在下文中提供适合的组合和辅助疗法的实例。

本公开涵盖含有本文所述的中和抗hPG抗体(包括抗体缀合物)和免疫检查点抑制剂的药物试剂盒。该药物试剂盒是包含中和抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂(例如呈冻干形式或水溶液形式)以及一或多种以下物质的包装：

·第三治疗剂，例如以下所述的；

·用于施用该中和抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂的装置，例如笔、针和/或注射器；和

·如果该抗体和/或抑制剂呈冻干形式的话，重悬该抗体的药物级水或缓冲液。

每单位剂量的抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂可单独封装，且试剂盒可含有一个或多个单位剂量(例如，两个单位剂量、三个单位剂量、四个单位剂量、五个单位剂量、八个单位剂量、十个单位剂量或更多个单位剂量)。在特定的实施方案中，一个或多个单位剂量各自放于注射器或笔中。

有效剂量

抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合通常会以有效达成预期结果的量，例如有效治疗有需要的受试者的癌症的量使用。可以以治疗有效剂量向患者施用包含抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂的药物组合物(例如，人类受试者)。

术语“治疗有效剂量”意指在受试者中引发期望的生物反应的活性化合物或缀合物的量。此类反应包括缓解待治疗的疾病或病症的症状；预防、抑制或延迟疾病或病症的症状自身的复发；与缺少治疗相比，使受试者寿命增长；或预防、抑制或延迟疾病或病症的症状自身的进展。更具体地，如本文所用的，“治疗有效”剂量是赋予治疗效益的量。治疗有效剂量也是该制剂之治疗有益的作用胜过任何有毒或有害的作用的量。在CRC疗法的情况中，治疗效益意指癌症的任何改善，包括以下任一种或其组合：制止或减缓癌症的进展(例如，制止或减缓癌症自一期进展至下一期)、制止或延迟癌症的症状或病征加重或恶化、降低癌症的严重程度、诱使癌症缓解、抑制肿瘤细胞增殖、肿瘤大小或肿瘤数目、或降低PG血清水平。

有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本文提供的详细公开内容。化合物或缀合物在细胞培养物和实验动物中的毒性和治疗功效可通过标准药学程序来确定。待施用至受试者的本组合或其它治疗剂的有效量将取决于多发性骨髓瘤的时期、类别和状态和受试者的特性，诸如总体健康、年龄、性别、体重和耐药性。待施用的本组合或其它治疗剂的有效量也将取决于施用途径和剂量形式。可单独调整剂量和间隔来提供足够维持期望的治疗作用的活性化合物血浆水平。

所施用的抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合的量将取决于多种因素，包括所治疗的CRC的性质和时期、施用形式、途径和位点、治疗方案(例如，是否使用另一种治疗剂)、所治疗的特定受试者的年龄和病况、所治疗的患者对抗hPG抗体和/或免疫检查点抑制剂的敏感性。本领域技术人员可容易确定适当的剂量。最终，医师将确定待使用的适当剂量。此剂量可适当地重复。如果副作用发展，则可根据正常临床实践改变或降低剂量的量和/或频率。可通过使用本领域技术人员已知的常规技术监测疗法进展来确定适当剂量和治疗方案。

有效剂量最初可由体外测定来估计。例如，用于动物的初始剂量可经配制以实现人源化抗hPG抗体的循环血液或血清浓度等于或高于如体外测量的该抗体对前胃泌激素的结合亲和力。同样地，用于动物的初始剂量可经配制以实现免疫检查点抑制剂的循环血液或血清浓度等于或高于如体外测量的该抑制剂对于相应的免疫检查点蛋白的结合亲和力。在考虑特定抗体的生物利用度下计算实现此类循环血液或血清浓度的剂量完全在本领域技术人员的能力范围内。关于指导，读者请参考Fingl&Woodbury,“General Principles”inGoodman and Gilman’s The Pharmaceutical Basis of Therapeutics，第1章，最新版，Pagamonon出版社，及其中引用的参考文献。

可根据体内数据，诸如动物模型来估计初始剂量。适用于测试化合物治疗CRC的功效的动物模型在本领域中是众所周知的。另外，在以下实施例中描述了CRC的动物模型。本领域普通技术人员可按常规修改此类信息以确定适用于人类施用的剂量。

本文所述的抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合的有效剂量在每单次(例如单次剂量)施用、多次施用或连续施用中的范围可以是约0.001至约75mg/kg，或每单次(例如单次剂量)施用、多次施用或连续施用中实现0.01-5000μg/ml血清浓度的血清浓度，或是其中任何有效范围或值，取决于治疗的病况、施用途径和受试者的年龄、体重和病况。在某一实施方案中，各剂量得范围可以为每公斤体重约0.5μg至约50μg，例如每公斤体重约3μg至约30μg。

施用的量、频率和持续时间将取决于多种因素，诸如患者年龄、体重和疾病病况。施用的治疗方案可持续2周至无限期、2周至6个月、3个月至5年、6个月至1年或2年、8个月至18个月等。任选地，治疗方案提供重复的施用，例如每日一次、每日两次、每两天一次、每三天一次、每五天一次、每周一次、每两周一次或每月一次。重复施用的剂量可以是相同或不同的。施用可重复一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次或更多次。抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合的治疗有效量可以以单次剂量施用或经治疗方案的时程施用，例如经一周、两周、三周、一个月、三个月、六个月、一年或更长的时程施用。

治疗方法

抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的本组合阻断PG依赖性反应(包括细胞增殖)和改善免疫疗法反应的能力，使其适用于治疗癌症。因此，本发明的一个方面涉及抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的本组合作为一种药物。

在另一方面，本公开提供治疗有需要的患者的癌症的方法。可用本发明的组合治疗的癌症特别是依赖前胃泌激素而生长和/或增殖的癌症。优选地，前胃泌激素依赖性癌症为结肠直肠癌(CRC)。通常，该方法包括向患者施用治疗有效量的本文所述的抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合。在另一实施方案中，本公开提供本文所述的抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合供用于治疗CRC。

施用本抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合的“个体”或“患者”优选为哺乳动物，诸如非灵长类动物(例如，母牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)或灵长类动物(例如，猴或人类)。受试者或患者可以是人类，诸如成人患者或儿科患者。

适用于抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合疗法的患者为经诊断患有CRC的患者。CRC可为任何类型且处于任何临床阶段或表现。适合的受试者包括患有CRC肿瘤(可手术或不可手术)的患者、肿瘤已被手术移除或切除的患者、患有包含携带致癌基因(诸如例如RAS或APC)突变的细胞的CRC肿瘤的患者、已经接受或接受与人源化抗hPG抗体疗法组合或辅助人源化抗hPG抗体疗法的其它CRC疗法的患者。其它CRC疗法包括，但不限于，化疗治疗、放射疗法、手术切除及以一或多种其它治疗性抗体进行之治疗，如下文所详述。

依据另外的实施方案，如本文公开的抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合以组合物以治疗有效量施用至需要预防转移性结肠直肠癌的受试者。此类受试者包括，但不限于确定具有原发性结肠直肠癌但不知道已扩散至远距离组织或器官的受试者。在这些方法的某些实施方案中，抗hPG抗体为人源化抗hPG抗体。

根据另外的实施方案，如本文公开的抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合系以组合物以治疗有效量施用至需要预防转移性结肠直肠癌复发的受试者。此类受试者包括，但不限于先前已治疗原发或转移性结肠直肠癌，治疗之后此类癌症显然消失的受试者。在这些方法的某些实施方案中，抗hPG抗体为人源化抗hPG抗体。

根据其它实施方案，如本文公开的抗hPG抗体和免疫检查点抑制剂的组合以组合物以治疗有效量施用至需要抑制结肠直肠癌干细胞生长的受试者。此类受试者包括，但不限于具有结肠直肠癌、结肠直肠癌的生长或转移至少部分归因于其内存在癌症干细胞的受试者。其它实施方案提供用于预防或抑制结肠直肠癌干细胞生长的方法，其是通过使此类干细胞与有效预防或抑制此类细胞生长的抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合物接触来预防或抑制。此类方法可在体外或体内进行。在这些方法的某些实施方案中，抗hPG抗体为人源化抗hPG抗体。

抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合疗法可与一种或多种其它治疗组合或辅助一种或多种其它治疗。如本文所述的，其它治疗包括，但不限于，化疗治疗、放射疗法、手术切除和抗体疗法。

抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合疗法可辅助其它治疗，包括手术切除。

如本文所提供的组合疗法涉及向患者施用至少两种药剂，第一种为本公开的抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合，第二种为另一种治疗剂。根据此实施方案，本发明涉及上述抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合，用于治疗CRC，其中所述组合与所述其它治疗剂一起施用。该抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合与其它治疗剂可同时、依次或分开施用。

“治疗剂”涵盖生物制剂，诸如抗体、肽、蛋白质、酶和化学治疗剂。治疗剂还涵盖细胞结合剂(CBA)和化学化合物的免疫缀合物，诸如抗体-药物缀合物(ADC)。缀合物中的药物可以为细胞毒性剂，诸如本文所述的一种细胞毒性剂。

如本文所用的，如果在同一日，例如在同一次患者访问期间向患者施用抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合和另一种治疗剂，则认为抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合和另一种治疗剂是依次施用的。依次施用可在间隔1、2、3、4、5、6、7或8小时发生。相反地，如果不在同一日向患者施用本公开的组合和另一种治疗剂，例如以1天、2天或3天、1周、2周或每月的间隔施用本公开的组合和另一种治疗剂，则认为本公开的组合和另一种治疗剂是分开施用的。在本公开的方法中，可在施用另一种治疗剂之前或之后施用本公开的组合。

作为非限制性实例，可同时施用本组合和另一种治疗剂一段时间，随后在第二段时间内交替施用本公开的人源化抗hPG抗体和另一治疗剂。

本公开的组合疗法可导致大于累加效应或协同效应，所提供的治疗效益为该抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合或另一治疗剂以治疗有效量单独施用下所无法实现的。因此，此类药剂可以以较低量施用，减小副作用的可能性和/或严重程度。

在优选的实施方案中，另一种治疗剂为化学治疗剂。如本文所用的，“化学治疗剂”是指当被施用至受试者时，治疗受试者身体中的癌症或预防受试者身体中的癌症发展的物质。

化学治疗剂包括包括，但不限于，烷化剂、抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂、染色质功能抑制剂、抗血管生成剂、抗雌激素、抗雄激素或免疫调节剂。

“烷化剂”是指可在细胞内交联或烷基化任何分子，优选为核酸(如DNA)的任何物质。烷化剂的实例包括氮芥例如二氯甲基二乙胺、苯丁酸氮介(chlorambucol)、苯丙氨酸氮介(melphalen)、chlorydrate、哌泊溴烷(pipobromen)、泼尼莫司汀(prednimustin)、二钠-磷酸盐(disodic-phosphate)或雌莫司汀(estramustine)；氧氮磷环类(oxazophorines)诸如环磷酰胺(cyclophosphamide)、六甲蜜胺(altretamine)、曲磷胺(trofosfamide)、硫酰胺(sulfofosfamide)或异环磷酰胺(ifosfamide)；氮杂环丙烷(aziridines)或亚胺-乙烯(imine-ethylenes)，诸如噻替派(thioepa)、三乙基胺(triethylenamine)或四胺(altetramine)；亚硝基脲诸如卡莫司汀(carmustine)、链脲菌素(streptozocin)、fotemustin或洛莫司汀(lomustine)；烷基磺酸盐诸如白消安(busulfan)、曲奥舒凡(treosulfan)或英丙舒凡(improsulfan)；三氮烯(triazenes)诸如达卡巴嗪(dacarbazine)；或铂复合物诸如顺铂、奥沙利铂(oxaliplatin)和卡铂(carboplatin)。

“抗代谢剂”是指通过干扰某些活性，通常为DNA合成而阻断细胞生长和/或代谢的物质。抗代谢剂的实例包括甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、5-氟脱氧尿苷、卡培他滨(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟达拉滨(fludarabine)、阿糖胞苷(cytosinearabinoside)、6-巯嘌呤(6-MP)、6-硫代鸟嘌呤(6-TG)、氯脱氧腺苷、5-氮杂胞苷、吉西他滨(gemcitabine)、克拉屈滨(cladribine)、脱氧助间型霉素(deoxycoformycin)与喷司他丁(pentostatin)。

“抗肿瘤抗生素”是指可预防或抑制DNA、RNA和/或蛋白质合成的化合物。抗肿瘤抗生素的实例包括多柔比星(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、伊达比星(idarubicin)、戊柔比星(valrubicin)、米拖蒽醌(mitoxantrone)、更生霉素(dactinomycin)、光神霉素(mithramycin)、普卡霉素(plicamycin)、丝裂霉素C(mitomycinC)、博莱霉素和甲基苄肼(procarbazine)。

“有丝分裂抑制剂”预防细胞周期和有丝分裂的正常进展。通常，微小管抑制剂或紫杉烷诸如紫杉醇(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel)能够抑制细胞分裂。长春花生物碱诸如长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)和长春瑞滨(vinorelbine)也可抑制有丝分裂。

“染色质功能抑制剂”或“拓扑异构酶抑制剂”是指抑制染色质塑造蛋白诸如拓扑异构酶I或拓扑异构酶II的正常功能的物质。染色质功能抑制剂的实例包括，对于拓扑异构酶I，其为喜树碱(camptothecine)及其衍生物，诸如拓朴替康(topotecan)或伊立替康(irinotecan)，对于拓扑异构酶II，其为依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷(etoposidephosphate)和替尼泊苷(teniposide)。

“抗血管生成剂”是指可抑制血管生长的任何药物、化合物、物质或药剂。示例性抗血管生成制剂包括，但不局限于，razoxin、马立马司他(marimastat)、巴替马司他(batimastat)、普马司他(prinomastat)、坦诺司他(tanomastat)、伊洛马司他(ilomastat)、CGS-27023A、halofuginon、COL-3、新伐司他(neovastat)、BMS-275291、沙利度胺(thalidomide)、CDC 501、DMXAA、L-651582、角鲨胺(squalamine)、内皮抑素(endostatin)、SU5416、SU6668、干扰素-α、EMD121974、介白素-12、IM862、血管抑制素与vitaxin。

“抗雌激素”或“抗雌激素药剂”是指降低、拮抗或抑制雌激素的作用的任何物质。抗雌激素制剂的实例为它莫西芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、碘氧芬(iodoxyfene)、阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrozole)和依西美坦(exemestane)。

“抗雄激素”或“抗雄激素药剂”是指降低、拮抗或抑制雄激素的作用的任何物质。抗雄激素的实例为氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、sprironolactone、醋酸环丙孕酮(cyproterone acetate)、非那雄胺(finasteride)与西咪替丁(cimitidine)。

“免疫调控剂”是刺激免疫系统的物质。

免疫调控剂的实例包括干扰素、白介素诸如阿地白介素(aldesleukine)、OCT-43、地尼白介素(denileukin diflitox)和介白素-2、肿瘤坏死因子诸如tasonermine或其它免疫调节剂诸如香菇多糖(lentinan)、西佐糖(sizofiran)、罗喹美克(roquinimex)、匹多莫德(pidotimod)、培家酶(pegademase)、thymopentine、poly I:C或与5-氟尿嘧啶组合的左旋咪唑(levamisole)。

关于进一步的细节，本领域技术人员可以参考由“Association

desEnseignants de Chimie Thérapeutique”编辑且标题为“Traité de chimie thérapeutique”,vol.6,Médicaments antitumouraux et perspectives dans letraitement des cancers,edition TEC&DOC,2003的手册。

还可提及为化学剂或细胞毒性剂，所有激酶抑制剂，诸如，例如，吉非替尼(gefitinib)或厄洛替尼(erlotinib)。

更普遍地，合适的化学治疗剂的实例包括但不限于1-去氢睾丸素、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪(5-fluorouracil decarbazine)、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、放线菌素D、阿霉素(adriamycin)、阿地白介素(aldesleukin)、烷基化剂、别嘌醇钠(allopurinol sodium)、六甲蜜胺、氨磷汀(amifostine)、阿那曲唑(anastrozole)、氨茴霉素(anthramycin，AMC)、抗有丝分裂剂、顺-二氯二胺铂(II)(DDP)(顺铂)、二胺基二氯铂、蒽环霉素(anthracycline)、抗生素、抗代谢物、天冬酰胺酶、活BCG(膀胱内)、倍他米松磷酸钠和醋酸倍他米松、比卡鲁胺(bicalutamide)、硫酸博莱霉素、白消安、甲酰四氢叶酸钙(calcium leucouorin)、卡奇霉素(calicheamicin)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、洛莫司汀(CCNU)、卡莫司汀(BSNU))、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、顺铂、克拉屈滨(Cladribine)、秋水仙碱(Colchicin)、缀合的雌激素、环磷酰胺、环硫磷酰胺(Cyclothosphamide)、阿糖胞苷(Cytarabine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、细胞松弛素B(cytochalasin B)、癌得星(Cytoxan)、达卡巴嗪、更生霉素(Dactinomycin)、更生霉素(dactinomycin，先前称作放线菌素)、盐酸柔红霉素(daunirubicin HCL)、柠檬酸柔红霉素、denileukin diftitox、右雷佐生(Dexrazoxane)、二溴甘露醇、二羟炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、多西他赛(Docetaxel)、甲磺酸多拉司琼(dolasetron mesylate)、盐酸多柔比星(doxorubicinHCL)、屈大麻酚(dronabinol)、大肠杆菌L-天冬酰胺酶、吐根碱(emetine)、依泊汀-α(epoetin-α)、欧文氏菌属L-天冬酰胺酶、酯化的雌激素、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、溴化乙锭、乙炔雌二醇、依替膦酸盐、依托泊苷、citrororum因子、磷酸依托泊苷、非格司亭(filgrastim)、氟尿苷、氟康唑(fluconazole)、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟他米特、亚叶酸、盐酸吉西他滨、糖皮质激素、醋酸戈舍瑞林、短杆菌素D(gramicidin D)、盐酸格拉司琼(granisetron HCL)、羟基脲、盐酸伊达霉素(idarubicin HCL)、异环磷酰胺(ifosfamide)、干扰素α-2b、盐酸伊立替康、来曲唑(letrozole)、甲酰四氢叶酸钙、醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、盐酸左旋咪唑(levamisole HCL)、利多卡因(lidocaine)、洛莫司汀(lomustine)、类美坦素(maytansinoid)、盐酸二氯甲基二乙胺(mechlorethamine HCL)、醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、盐酸美法仑(melphalan HCL)、巯基嘌呤(mercaptipurine)、美司钠(mesna)、甲氨蝶呤、甲基睾甾酮(methyltestosterone)、光神霉素(mithramycin)、丝裂霉素C、米托坦(mitotane)、双羟蒽醌(mitoxantrone)、尼鲁米特(nilutamide)、醋酸奥曲肽(octreotide acetate)、盐酸昂丹司琼(ondansetron HCL)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、帕米膦酸二钠(pamidronate disodium)、喷司他丁(pentostatin)、盐酸匹鲁卡品(pilocarpineHCL)、plimycin、聚苯丙生20(polifeprosan 20)与卡莫司汀植入物、卟吩姆钠(porfimersodium)、普鲁卡因、盐酸甲基苄肼(procarbazine HCL)、普萘洛尔、利妥昔单抗(rituximab)、沙格司亭(sargramostim)、链脲霉素(streptozotocin)、它莫西芬(tamoxifen)、紫杉醇(taxol)、喃氟啶(tegafur)、替尼泊苷(teniposide)、tenoposide、睾内酯(testolactone)、丁卡因(tetracaine)、噻替派苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、硫鸟嘌呤、噻替派、盐酸拓扑替康(topotecan HCL)、柠檬酸托瑞米芬(toremifenecitrate)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、维甲酸(tretinoin)、戊柔比星(valrubicin)、硫酸长春花碱(vinblastine sulfate)、硫酸长春新碱(vincristine sulfate)和酒石酸长春瑞滨(vinorelbine tartrate)。

本文公开的抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合可被施用至有需要治疗结肠直肠癌且正接受化学治疗剂组合的患者。示例性化学治疗剂组合包括5-氟尿嘧啶(5FU)与甲酰四氢叶酸(亚叶酸或LV)组合；卡培他滨与尿嘧啶(UFT)和甲酰四氢叶酸组合；喃氟啶与尿嘧啶(UFT)和甲酰四氢叶酸组合；奥沙利铂与5FU组合或与卡培他滨组合；伊立替康与卡培他滨组合、丝裂霉素C与5FU、伊立替康或卡培他滨组合。还可使用本文公开的化学治疗剂的其它组合。

如相关技术中已知的，使用不同化学治疗剂的组合的结肠直肠癌的化学疗法方案在临床试验中已标准化。此类方案通常以首字母缩写著称且包括5FU Mayo、5FU RoswellPark、LVFU2、FOLFOX、FOLFOX4、FOLFOX6、bFOL、FUFOX、FOLFIRI、IFL、XELOX、CAPOX、XELIRI、CAPIRI、FOLFOXIRI。参见例如Chau,I.等人，2009,Br.J.Cancer 100:1704-19和Field,K.等人，2007,World J.Gastroenterol.13:3806-15，二者均通过提述而并入。

抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合还可与其它治疗性抗体组合。因此，抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合疗法可组合或辅助不同单克隆抗体施用，该不同单克隆抗体诸如，例如，但不限于抗EGFR(EGF受体)单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体。抗EGFR抗体的具体实例包括西妥昔单抗(cetuximab)和帕尼单抗(panitumumab)。抗VEGF抗体的具体实例为贝伐单抗(bevacizumab)。

根据此实施方案，本发明涉及上述抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合，用于治疗CRC，其中所述组合与化学治疗剂一起施用。该抗hPG抗体/免疫检查点抑制剂组合和化学治疗剂可同时、依次或分别施用。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语与本发明所属的技术领域中的技术人员所通常了解的意义相同。

附图简述

图1：BALB/cAnNRj小鼠被植入了结肠直肠癌细胞系CT26.WT，且用对照抗体、抗PD-1抗体、抗PG抗体、或抗PD-1抗体和抗PG抗体的组合进行治疗：(A)卡普兰-梅尔(Kaplan-Meier)存活图；(B)中位数存活时间(以天数计)。

图2：异种移植结肠直肠癌细胞系，CT26.WT，且用对照抗体、抗PD-1抗体、抗PG抗体、或抗PD-1抗体和抗PG抗体的组合进行治疗的BALB/cAnNRj小鼠的INFγ表达的qPCR分析。

实施例

实施例1

每只小鼠在第1天皮下植入0.5M的CT26.WT(ATCC-CRL-2638)细胞至BALB/cAnNRj小鼠的侧腹。小鼠随机分成如下所示的单独治疗组(每组n＝15只小鼠)：

对照(ctrl)组：15只小鼠腹膜内注射NaCl(5mL/kg)+大鼠IgG2A(10mg/kg-5mL/kg)，一周两次。

抗PG组：15只小鼠腹膜内注射NaCl(5mL/kg)+抗PG(30mg/kg-5mL/kg)，一周两次。

抗PD-1组：15只小鼠腹膜内注射NaCl(5mL/kg)+抗PD1(10mg/kg-5mL/kg)，一周两次。

第4组抗PG+抗-PD1：15只小鼠腹膜内注射抗PG(30mg/kg-5mL/kg)+抗-PD1(10mg/kg-5mL/kg)，一周两次。

抗PG抗体为Mab8，其CDR、V_H和V_L描述于表5中。

抗PD-1抗体为29F.1A12单克隆抗体(获自BioXCell,10Technology Dr,Suite 2BWest Lebanon,NH 03784,USA)。

每周观察并称重动物两次，同时使用数字卡尺来测量肿瘤体积。使用下式来计算肿瘤大小：V＝长度x宽度²/2，式中的长度代表最大的肿瘤直径且宽度代表垂直的肿瘤直径。研究结束或肿瘤体积达到1500mm³时，如果观察到肿瘤溃疡，如果体重减轻超过20％或如果观察到小鼠健康显著恶化，则处死动物。气体麻醉(异氟醚)后通过颈椎脱位术进行安乐死。

图1显示每组的卡普兰-梅尔存活。对数秩(Mantel-Cox)检验显示组合组(抗PG+抗PD1)与单一治疗组(抗PG或抗PD1)之间的存活有统计学的增加且中位数存活从15天增加至20天(+33％，p<0.0001)，这证实该组合与各个单一疗法相比之下优越的活性。

实施例2

对照组：15只小鼠腹膜内注射NaCl(5mL/kg)+大鼠IgG2A(10mg/kg-5mL/kg)，一周两次。

抗PD-1组：15只小鼠腹膜内注射NaCl(5mL/kg)+抗-PD1(10mg/kg-5mL/kg)，一周两次。

第4组抗PG+抗PD1：15只小鼠腹膜内注射抗PG(30mg/kg-5mL/kg)+抗PD1(10mg/kg-5mL/kg)，一周两次。

开始治疗一周后，每组处死4只小鼠且回收肿瘤以提取RNA并进行qPCR来测量干扰素γ(INFγ)的表达。事实上，几个出版物已证明了CTLA-4和PD-1抑制剂以及其它免疫检查点阻断疗法导致IFNγ生成增加。图2显示抗PD1抗体在现有鼠类模型中诱导IFNγ生成，如所预期的(3.2倍增加)。更有趣的是，在组合疗法抗PG+抗PD1抗体的情况下，观察到IFNγ生成增加更多(6倍增加)，这证明了该组合与各个单一疗法相比之下优越的活性。

序列表

<110> 普莱戈斯瑞恩癌症有限责任公司

<120> 治疗癌症的抗前胃泌激素抗体与免疫疗法的组合疗法

<130> B375576TWD37823

<150> US 62/594,755

<151> 20171205

<160> 78

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 80

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly Thr Gly

1 5 10 15

Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu Gln Gln Gly Pro Ala

20 25 30

Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val

35 40 45

Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu

50 55 60

Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn

65 70 75 80

<210> 2

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人前胃泌激素的N端末端氨基酸1-14

<400> 2

Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly

1 5 10

<210> 3

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人前胃泌激素的C端末端氨基酸55-80

<400> 3

Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp

1 5 10 15

Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn

20 25

<210> 4

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 4

Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Trp

1 5

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 5

Phe Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ser

1 5

<210> 6

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 6

Thr Arg Arg Asp Ser Pro Gln Tyr

1 5

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 7

Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 8

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 8

Lys Val Ser

1

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 9

Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 10

Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Trp

1 5

<210> 11

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 11

Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 12

Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 13

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 13

Gln Ser Leu Val His Ser Ser Gly Val Thr Tyr

1 5 10

<210> 14

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 14

Lys Val Ser

1

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 15

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr

1 5

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 16

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr

1 5

<210> 17

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 17

Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr

1 5

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 18

Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 19

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 19

Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr

1 5 10

<210> 20

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 20

Leu Val Ser

1

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 21

Trp Gln Gly Thr His Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 22

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 22

Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala

1 5

<210> 23

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 23

Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr

1 5

<210> 24

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 24

Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 25

Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr

1 5

<210> 26

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 26

Val Lys Lys Asp Gly Ser His

1 5

<210> 27

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 27

Gly Val Gly Asp Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val

1 5 10

<210> 28

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 28

Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr Ala

1 5

<210> 29

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 29

Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr

1 5

<210> 30

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 30

Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe

1 5 10

<210> 31

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 31

Lys Ser Leu Arg His Thr Lys Gly Ile Thr Phe

1 5 10

<210> 32

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 32

Gln Met Ser

1

<210> 33

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 33

Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 34

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 34

Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 35

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 35

Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr

1 5

<210> 36

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 36

Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr

1 5

<210> 37

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 37

Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr

1 5 10

<210> 38

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<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

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<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人前胃泌激素的C端末端氨基酸71-80

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<220>

<223> 合成肽

<400> 41

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<223> 合成肽

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<223> 合成肽

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<223> 合成肽

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<220>

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<220>

<223> 合成肽

<400> 65

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<220>

<223> 合成肽

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<220>

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<220>

<223> 合成肽

<400> 68

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85 90 95

Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val

100 105 110

Glu Ile Lys

115

<210> 69

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 69

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 70

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 70

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr

20 25 30

Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn

85 90 95

Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 71

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 71

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 72

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 72

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr

20 25 30

Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn

85 90 95

Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 73

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 73

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 74

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 74

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr

20 25 30

Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn

85 90 95

Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 75

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 75

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 76

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 76

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

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65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

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100 105 110

Ser Ser

<210> 77

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 77

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly

85 90 95

Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 78

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成肽

<400> 78

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly

85 90 95

Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Claims

1.一种包含抗前胃泌激素(抗hPG)单克隆抗体和免疫检查点抑制剂的组合。

2.根据权利要求1所述的组合，其中所述抗hPG抗体选自单链抗体、骆驼化抗体、嵌合抗体、IgA1抗体、IgA2抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgM抗体。

3.根据权利要求1或2所述的组合，其中所述抗hPG抗体选自N端抗前胃泌激素抗体和C端抗前胃泌激素抗体。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合，其中所述抗hPG抗体是中和抗体。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合，其中所述抗hPG抗体选自由下列组成的组：

-包含重链和轻链的抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:7、8和9的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，

-包含重链和轻链的抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:10、11和12的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:13、14和15的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，

-包含重链和轻链的抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，

-包含重链和轻链的抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:22、23和24的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:25、26和27的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，

-包含重链和轻链的抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:28、29和30的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:31、32和33的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，和

-包含重链和轻链的抗体，该重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:34、35和36的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者，该轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID NO:37、38和39的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一者、优选为至少两者、优选为三者。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合，其中所述抗hPG抗体选自由下列组成的组：

7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合，其中所述抗hPG抗体是人源化抗体。

8.根据权利要求7所述的组合，其中所述抗hPG抗体选自有下列组成的组：

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:53的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:54的轻链可变区的人源化抗体；

·包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:55的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:56的轻链可变区的人源化抗体；

·包含具有选自SEQ ID NO:69和71之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQID N NO:70和72之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；和

·包含具有选自SEQ ID NO:75和76之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQID NO:77和78之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；

其中所述抗体还包含衍生自人抗体的轻链和重链的恒定区。

9.根据权利要求7或8所述的组合，其中所述抗hPG抗体包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:71的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:72的轻链可变区，所述抗体还包含衍生自人抗体的轻链和重链的恒定区。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的组合，其中所述抗hPG抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:73的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:74的轻链。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合，其中所述免疫检查点抑制剂为下列中任一者的抑制剂：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD 160、CGEN-15049、CHK 1和CHK2激酶、IDO1、A2aR和多种B-7家族配体中的任一者。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合，其中所述免疫检查点抑制剂为CTLA-4、LAG-3、Tim3、PD-1、PD-L1、VISTA、CD137、OX40或IDO1的抑制剂。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合，其中所述免疫检查点抑制剂选自由下列组成的组：伊匹单抗(ipilimumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、西米普利单抗(cemiplimab)、匹利珠单抗(pidilizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维单抗(avelumab)、度伐单抗(durvalumab)、BMS 936559、JNJ 61610588、乌洛单抗(urelumab)、9B12、PF-04518600、BMS-986016、TSR-022、MBG453、MEDI6469、MEDI6383和艾卡哚司他(epacadostat)。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1的抗体。

15.根据权利要求14所述的组合，其中所述免疫检查点抑制剂是派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、西米普利单抗(cemiplimab)或匹利珠单抗(pidilizumab)。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合，其供用作药物。

17.根据权利要求1至15中任一项所述的组合，其供用于治疗癌症。

18.根据权利要求17所述的组合，其中所述癌症为结肠直肠癌。

19.一种药学组合物，其包含根据权利要求1至15中任一项所述的组合、药学上可接受的媒介物和/或赋形剂。

20.根据权利要求19所述的药物组合物，其供同时、分开或顺序使用。