KR20200144541A - 면역치료요법용 생체표지자로서 프로가스트린 - Google Patents

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KR20200144541A
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이씨에스-프로가스트린 에스에이
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Abstract

면역 체크포인트 억제제에 대해 반응성인 환자를 선택하는 방법이 본원에 개시되어 있다. 면역 체크포인트 억제제를 사용하여 암 환자를 치료하는 방법이 또한 제공된다.

Description

면역치료요법용 생체표지자로서 프로가스트린
도입
면역치료요법(immunotherapy)은 암 치료요법(cancer therapy) 분야에서 게임-체인저(game-changer)가 되어 왔다. 면역 체크포인트-기반 치료요법(immune checkpoint-based therapy)에서의 발달은 놀랄만한 속도로 진행 중에 있다. 종양 항원이 반응을 자극하면 면역 염증 반응이 일정하게 활성화되지 않도록 보증하기 위하여, 다수의 제어(control) 또는 "체크포인트(checkpoint)"가 제자리에 있거나 활성화된다. 이러한 체크포인트는 주변 종양 미세환경에서 세포 상의 리간드에 대한 T-세포 수용체 결합에 의해, 면역학적 시냅스(immunological synapse)를 형성하고 이는 이후 T 세포의 기능을 조절함에 의해 대부분 나타난다.
진전된 암을 치료하기 위한 면역치료요법의 장래성에도 불구하고, 다수의 도전과제가 남아있다. 전형적으로, 환자의 작은 부분 만이 치료요법에 대해 내구성이 있는 장기-지속 반응을 달성한다. 추가로, 종양 반응을 측정하는 것은 반응하는 환자가 초기에 종양 크기의 증가를 경험하거나 방사선-그래픽 영상(radio-graphic image)에서 외견상 새로운 병변이 발달할 수 있다는 사실로 인해 복잡하다.
암 면역치료요법에서 특수한 도전과제는 이러한 치료에 대한 후보물질을 선택하여 질환-관리 결정을 안내하는데 사용될 수 있는 메카니즘-기반 생체표지자(biomarker)의 확인에 있어 왔다(Topalian et al., N Engl J Med, 366(26): 2443-54 (2012)). 따라서, 암 발달의 모든 단계에서 면역치료요법 효능으로의 실행가능한 통찰력을 생성하는 표준화되고 입증된 생체표지자에 대한 중요한 필요성이 존재한다. 이용가능한 치료요법으로부터 유리할 수 있는 환자를 확인하는데 도움을 주는 것 외에, 생체표지자는 치료 반응을 모니터링하는데 유용할 수 있다. 이러한 지시인자는 또한 작용의 치료 메카니즘에 대한 실마리를 던져줄 가능성을 가지고 있으며, 이는 치료 접근법을 최적화하고 합리적인 조합 치료요법을 정의하기 위한 중요한 통찰력을 제공할 수 있다. 그러나, 악성 종양의 고유한 특성, 예를 들면, 이의 이종성(heterogeneity), 가소성, 및 다양성은 생체표지자 개발에 대해 도전과제를 제기한다.
유전적 돌연변이는 악성 종양의 특징이며 대다수의 암의 생명을 위협하는 특성, 예를 들면, 끊임없는 성장 및 전이, 또는 체내 확장에 관여한다. 이러한 돌연변이 중 일부는 면역 체크포인트 억제제(immune checkpoint inhibitor)에 대한 반응과 관련되어 있다. 종양 돌연변이 부담(tumour mutational burden: TMB)으로 지칭된, 종양이 축적한 돌연변이의 수는 자체적으로 생체표지자이다. 최근에, 면역치료요법에 대한 반응은 위 미소생물학(gut microbiota)의 조성물에 의해 측정됨이 밝혀졌다. 이러한 특징은 대부분이 유전성인 면역치료요법의 결과를 예측하는 생체표지자를 설계하는데 사용되어 왔다(Yan et al., Front Pharmacol. 9: 1050 2018). 그러나, 이러한 생체표지자의 사용은 차세대 서열분석을 요구하며, 이는 임상 실험실에서 정규적으로 사용하기 어려울 수 있다. 따라서, 면역치료요법에 대한 환자의 반응을 용이하고 신뢰가능하게 예측하는데 사용될 수 있는 생체표지자에 대한 요구가 여전히 존재한다.
설명의 요약
본 개시내용은 암 환자의 유액 속의 특정 생체표지자, 예를 들면, 프로가스트린의 수준이 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응할 이러한 환자의 부정적인 예측변수(predictor)라는 발견에 관한 것이다.
따라서, 제1 양태에서, 면역-체크포인트 억제제 반응성이거나 비-반응성인 표현형을 갖는 암 환자를 선택하는 방법이 본원에 제공된다. 이러한 방법은 상기 환자의 생물학적 샘플에 대한 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 결합은 환자가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 반응하지 않을 것이므로 면역-체크포인트 억제제 비-반응성 표현형을 가질 것임을 나타낸다.
본 개시내용의 다른 양태에서, 환자에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 민감하지 않은 암의 시험관내(in vitro) 진단을 위한 방법이 제공된다. 다시 말해서, 상기 암은 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아니다. 이러한 방법에 따라서, 상기 환자의 생물학적 샘플에 대한 프로가스트린-분자의 결합은 암이 상기 치료에 대해 반응하지 않을 것임을 나타낸다.
본원에 제공된 다른 방법은 환자에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 민감하지 않은 전이된 암의 시험관내 진단에 관한 것이다. 다시 말해서, 상기 전이된 암은 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아니다. 이러한 방법에 따라서, 상기 환자의 생물학적 샘플에 대한 프로가스트린-분자의 결합은 전이된 암이 상기 치료에 대해 반응하지 않을 것임을 나타낸다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암 치료의 시험관내 예측 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 상기 환자의 생물학적 샘플에 대한 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 결합은 부정적인 예후(prognosis)를 나타낸다.
이러한 방법의 바람직한 구현예에서, 상기 샘플 속의 프로가스트린의 수준이 측정된다. 상기 생물학적 샘플 속에서, 적어도 3 pM, 적어도 5 pM, 적어도 10 pM, 적어도 20 pM, 적어도 30 pM의 프로가스트린의 농도는 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료가 유의적인 반응을 생성하지 않을 것임을 나타낸다.
다른 양태는 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암의 치료 방법에 관한 것이다. 다른 양태에서, 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암 치료를 설계하는 방법이 또한 제공된다. 상기 방법 둘 다는 상술한 임의의 방법에 의해 면역 체크포인트 억제제에 대해 반응성인 환자를 선택하는 사전 단계를 포함한다.
본 개시내용은 또한 면역 체크포인트 억제제를 사용하여 환자 내의 암 치료를 조정하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 또한 상술한 임의의 방법에 의해 환자의 면역-체크포인트 억제제 반응성이거나 비-반응성인 표현형을 검정하는 사전 단계를 포함한다. 면역-체크포인트-억제제 치료의 상기 조정은 환자의 표현형이 비-빈응성인 경우 상기 치료의 감소 또는 억제, 또는 대안적으로, 상기 표현형이 반응성인 경우 상기 치료의 지속으로 이루어질 수 있다.
본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질은 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있으며, 적합한 방법 및 물질이 본원에 기술되어 있다. 본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한, 당해 분야의 기술 내에 있는 통상의 기술 또는 단백질 화학, 분자 바이러스학, 미생물학, 재조합 DNA 기술, 및 약리학을 사용한다. 이러한 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있다(참고: 예를 들면, Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols; 5th Ed., 2002; Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985; 및 Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 3rd Ed., 2001). 본원에 기술된 분자 및 세포 생물학, 단백질 생화학, 효소학 및 의약 및 약제 화학과 관련하여 사용된 명명법, 및 이의 실험 과정 및 기술은 당해 분야에서 잘 공지되고 일반적으로 사용된 것이다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허원, 특허, 및 다른 참고문헌은 이의 전문이 참고로 포함된다. 또한, 물질, 방법, 및 실시예는 단지 설명적이며 달리 규정하지 않는 한, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 다른 특징 및 장점은 다음의 상세한 설명으로부터, 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.
도면의 설명
도 1: 면역치료요법을 사용하여 치료된 흑색종 환자의 전체 생존. PG 수준은 치료 전에 측정되었다. 사망한 환자 만이 연구에 포함된다.
상세한 설명
본 발명은 본원에 제공된 상세한 설명으로부터 및 첨부된 도면으로부터 보다 충분히 이해될 것이며, 이는 단지 설명 방식으로 제공되며 본 발명의 의도된 영역을 제한하지 않는다.
정의
구체적으로 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 화학, 생화학, 세포 생물학, 분자 생물학, 및 의과학에서 기술자가 일반적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다.
용어 "약" 또는 "대략"은 당해 분야의 기술자에게 공지된 주어진 값 또는 범위에 대한 정상의 오차 범위를 지칭한다. 이는 일반적으로 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 예를 들면, 10% 이내, 또는 5% 이내(또는 1% 이하)를 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, "투여하다" 또는 "투여"는 물질이 신체 외부에 존재하므로 물질(예컨대, 본원에 제공된 항-프로가스트린 항체)을 점막, 피내, 정맥내, 근육내 전달에 의해 및/또는 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 임의의 다른 물리적 전달 방법에 의해, 환자내로 주사하거나 달리는 물리적으로 전달하는 작용을 지칭한다. 질환, 또는 이의 증상이 치료되는 경우, 물질의 투여는 전형적으로 질환 또는 이의 증상의 발병 후에 발생한다. 질환, 또는 이의 증상이 예방되는 경우, 물질의 투여는 전형적으로 질환 또는 이의 증상의 발병 전에 발생한다.
용어 "항체" 및 "면역글로불린" 또는 "Ig"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이러한 용어는 본원에서 최광의의 의미에서 사용되며 구체적으로 임의의 동형, 예를 들면, IgG, IgM, IgA, IgD, 및 IgE의 모노클로날 항체(전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다특이적 항체, 키메라 항체, 및 항체 단편을 포함하며, 단 상기 단편은 목적한 생물학적 기능을 보유한다. 이러한 용어는 구체적인 분자 항원에 결합할 수 있는 폴리펩타이드의 면역글로불린 부류 내 B 세포의 폴리펩타이드 생성물을 포함하는 것으로 의도되며 이황화물 결합에 의해 상호-연결된 폴리펩타이드 쇄의 2개의 동일한 쌍으로 구성되며, 여기서 각각의 쌍은 하나의 중쇄(약 50-70 kDa) 및 하나의 경쇄(약 25 kDa)를 가지며 각각의 쇄의 각각의 아미노-말단 부위는 약 100 내지 약 130개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하며 각각의 쇄의 각각의 카복시-말단 부위는 불변 영역(참고: Borrebaeck (ed.) (1995) Antibody Engineering, Second Ed., Oxford University Press.; Kuby (1997) Immunology, Third Ed., W.H. Freeman and Company, New York)을 포함한다. 각각의 중쇄 및 경쇄의 각각의 가변 영역은 3개의 상보성 결정 영역(CDR)으로 구성되며, 이는 또한 아미노-말단으로부터 카복시-말단까지 다음의 순서로 배열된, 초가변 영역 및 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부위인, 4개의 골격(FR)으로서 공지되어 있다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인(binding domain)을 함유한다. 항체의 불변 영역은 숙주 조직 또는 인자, 예를 들면, 면역계의 다양한 세포(예컨대, 효과기 세포) 및 전통적인 보체 시스템의 제1 구성성분(C1q)에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체에 의해 결합될 수 있는 구체적인 분자 항원은 표적 프로가스트린 폴리펩타이드, 단편 또는 에피토프를 포함한다. 구체적인 항원과 반응성인 항체는 재조합 방법, 예를 들면, 파아지 또는 유사한 벡터 내 재조합 항체의 라이브러리(library)의 선택에 의해, 또는 동물을 항원 또는 항원-암호화 핵산으로 면역화시킴에 의해 생성시킬 수 있다.
항체는 합성 항체, 모노클로날 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 다특이적 항체(이-특이적 항체 포함), 사람 항체, 사람화된 항체, 카멜화된 항체(camelised 항체), 키메라 항체(chimeric antibody), 인트라바디(intrabody), 항-이디오타입 항체(항-idiotypic (anti-Id) antibody), 및 임의의 상기의 기능성 단편을 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 이는 이로부터 단편이 유래된 항체의 생물학적 기능 중 일부 또는 모두를 보유하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩타이드의 일부를 지칭한다. 본원에 제공된 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 임의의 부류(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 또는 임의의 소부류(예컨대, IgG2a 및 IgG2b)일 수 있다.
용어 "항-프로가스트린 항체", "프로가스트린에 결합하는 항체", "프로가스트린 에피토프에 결합하는 항체", 및 유사한 용어는 본원에사 상호교환적으로 사용되며 프로가스트린 폴리펩타이드, 예를 들면, 프로가스트린 항원 또는 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다. 이러한 항체는 폴리클로날 및 모노클로날 항체, 예를 들면, 키메라 및 사람화된 항체를 포함한다. 프로가스트린 항원에 결합하는 항체는 관련된 항원과 교차-반응성일 수 있다. 일부 구현예에서, 프로가스트린에 결합하는 항체는 다른 항원, 예컨대, 가스트린 유전자로부터 유래된 다른 펩타이드 또는 폴리펩타이드와 교차-반응하지 않는다. 프로가스트린에 결합하는 항체는 예를 들면, 면역검정, BIAcore, 또는 당해 분야에 공지된 기술자에 공지된 다른 기술에 의해 확인될 수 있다. 항체는 예를 들면, 이것이 실험 기술, 예를 들면, 방사선면역검정(RIA) 및 효소-결합된 면역흡착성검정(ELISA)를 사용하여 측정된 임의의 교차-반응성 항원에 대해서 보다 더 높은 친화성으로 프로가스트린에 결합하는데, 예를 들면, 항체는 프로가스트린에 특이적으로 결합한다. 전형적으로, 구체적인 또는 선택적인 반응은 배경 신호(background signal) 또는 노이즈(noise)의 적어도 2배일 것이며 배경의 10배 이상일 수 있다. 예컨대, 항체 특이성에 관한 논의에 대해서는 문헌: Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336을 참고한다. 일부 구현예에서, 목적한 항원에 "결합하는" 항체는 충분한 친화성으로 항원과 결합함으로써 항체가 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적화(targeting)하는데 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하고, 다른 단백질과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것이다. 이러한 구현예에서, "비-표적" 단백질에 대한 항체의 결합 정도는 형광 활성화된 세포 분류(FACS) 분석 또는 방사선면역침전(RIPA)에 의해 측정된 바와 같은 이의 특수한 표적 단백질에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만일 것이다. 표적 분자에 대한 항체의 결합과 관련하여, 특수한 폴리펩타이드 또는 특수한 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 대해 용어 "특이적인 결합" 또는 "~에 특이적으로 결합하는" 또는 "~에 대해 특이적인"은 비-특이적인 상호작용과는 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적인 결합은 예를 들면, 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 측정함으로써 측정될 수 있으며, 이는 일반적으로 결합 활성을 가지지 않는 유사한 구조의 분자이다. 예를 들면, 특이적인 결합은 표적, 예를 들면, 과도한 표지되지 않은 표적과 유사한 대조군 분자와의 경쟁에 의해 측정될 수 있다. 이러한 경우에, 특이적인 결합은 프로브에 대한 표지된 표적의 결합이 과도한 표지되지 않은 표적에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우 나타난다. 용어 본원에 사용된 바와 같은 특수한 폴리펩타이드 또는 특수한 폴리펩타이드 표적상의 에피토프에 대한 "특이적인 결합" 또는 "~에 특이적으로 결합하는" 또는 "~에 대해 특이적인"은 예를 들면, 적어도 약 10-4 M, 대안적으로 적어도 약 10-5 M, 대안적으로 적어도 약 10-6 M, 대안적으로 적어도 약 10-7 M, 대안적으로 적어도 약 10-8 M, 대안적으로 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 대안적으로 적어도 약 10-11 M, 대안적으로 적어도 약 10-12 M 이상의 표적에 대해 KD를 갖는 분자에 의해 억제될 수 있다. 일부 구현예에서, 용어 "특이적인 결합"은 분자가 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 대해 실질적으로 결합하지 않고 특수한 폴리펩타이드 또는 특수한 폴리펩타이드 상의 에피토프에 결합하는 경우의 결합을 지칭한다. 일부 구현예에서, 프로가스트린에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1nM, 또는 ≤ 0.1nM의 해리 상수(KD)를 갖는다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항원"은 항체가 특이적을 결합할 수 있는 예정된 항원을 지칭한다. 표적 항원은 폴리펩타이드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐(hapten) 또는 다른 천연 생성 또는 합성 화합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 폴리펩타이드, 예를 들면, 프로가스트린 폴리펩타이드이다.
용어 "항원 결합 단편", "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역" 및 유사한 용어는 항원과 상호작용하고 결합제에 항원(예컨대, 상보성 결정 영역(CDR))에 대해 이의 특이성 및 친화성을 부여하는 항체의 부위를 지칭한다. 항체의 "항원-결합 단편"이라는 표현은 상기 항체의 표적(또한 일반적으로 항원으로서 지칭됨), 일반적으로 동일한 에피토프에 결합하는 능력을 보유하고, 항체의 아미노산 서열의 적어도 5개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 10개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 15개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 20개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 25개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 40개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 50개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 60개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 70개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 80개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 90개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 100개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 125개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 150개의 연속된 아미노산 잔기, 적어도 175개의 연속된 아미노산 잔기, 또는 적어도 200개의 연속된 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 임의의 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질을 나타내는 것으로 의도된다. 특수한 구현예에서, 상기 항원-결합 단편은 이것이 유래된 항체의 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 여전히 바람직한 구현예에서, 상기 항원 결합 단편은 이것이 유래된 항체의 2, 3, 4 또 5개의 CDR, 보다 바람직하게는 6개의 CDR을 포함한다.
"항원-결합 단편"은 제한없이, Fab, Fab', (Fab')2, Fv, scFv(단일 쇄의 경우 sc), Bis-scFv, scFv-Fc 단편, Fab2, Fab3, 미니보디(minibody), 디아보디(diabody), 트리아보디(triabody), 테트라보디(tetrabody), 및 나노보디(nanobody), 및 장애가 있는 펩타이드를 지닌 융합 단백질, 예를 들면, XTEN(연장된 재조합 폴리펩타이드) 또는 PAS 모티프(motif), 및 이의 반감기가 화학적 변형, 예를 들면, 폴리(알킬렌) 글리콜, 예를 들면, 폴리(에틸렌)글리콜("페길화(PEGylation)의 첨가에 의해 증가될 수 있는 임의의 단편(Fv-PEG, scFv-PEG, Fab-PEG, F(ab')2-PEG 또는 Fab'-PEG로 불리는 페길화된 단편)(폴리(에틸렌)글리콜의 경우 "PEG"), 또는 리포좀내 혼입에 의해 증가될 수 있는 임의의 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있으며, 상기 단편은 본 발명에 따른 항체의 특징적인 CDR 중 적어도 하나를 갖는다. 바람직하게는, 상기 "항원-결합 단편"은 이로부터 이들이 유래된 항체의 중 가변 쇄 및 경 가변 쇄의 부분 서열로 구성되거나 이를 포함할 것이며, 상기 부분 서열은 표적과 관련하여, 이로부터 이것이 이어지는 항체와 동일한 결합 특이성 및 바람직하게는 이로부터 이것이 이어지는 항체의 친화성의 1/100까지, 보다 바람직한 방식으로 적어도 1/10까지의 충분한 친화성을 보유하기에 충분하다. 이러한 항체 단편은 예를 들면, 문헌: Harlow 및 Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Myers (ed.), Molec. Biology 및 Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.; Huston et al., Cell Biophysics, 22:189-224 (1993); Pluckthun 및 Skerra, Meth. Enzymol., 178:497-515 (1989) 및 in Day, E.D., Advanced Immunochemistry, Second Ed., Wiley-Liss, Inc., New York, NY (1990)에 기술된 것을 발견할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "결합하다" 또는 "결합"은 생리학적 조건 하에서, 비교적 안정한 복합체를 형성하기 위한 분자 사이의 상호작용을 지칭한다. 상호작용은 예를 들면, 비-공유결합성 상호작용, 예를 들면, 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호작용, 및/또는 반 데르 바알스(van der Waals) 상호작용일 수 있다. 복합체는 또한 공유결합성 또는 비-공유결합성 결합, 상호작용 또는 힘에 의해 함께 유지된 2개 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 항체 상의 단일 항원-결합 부위와 표적 분자, 예를 들면, 프로가스트린의 단일 에피토프 사이의 전체적인 비-공유결합성 상호작용의 강도는 이러한 에피토프에 대한 항체 또는 기능적 단편의 친화성이다. 1가 항원에 대한 항체의 결합(k 1 ) 대 해리(k -1 )의 비(k 1 / k -1 )는 결합 상수 K이며, 이는 친화성의 척도이다. K의 값은 항체 및 항원의 상이한 복합체에 대해 변하며 k 1 및 k -1 둘 다에 의존한다. 본원에 제공된 항체에 대한 결합 상수 K는 본원에 제공된 임의의 방법 또는 당해 분야의 기술자에게 잘 공지된 임의의 다른 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화성은 항체와 항원 사이의 상호작용의 실제 강도를 항상 반영하지는 않는다. 다수의, 반복되는 항원성 결정인자를 함유하는 복합체 항원, 예를 들면, 다가 프로가스트린이 다수의 결합 부위를 함유하는 항체와 접촉하는 경우, 하나의 부위에서 항체와 항원의 상호작용은 두번째 부위에서 반응의 가능성을 증가시킬 것이다. 다가 항체와 항원 사이의 이러한 다수의 상호작용의 강도는 항원항체결합력(avidity)으로 불린다. 항체의 항원항체결합력은 이의 개개 결합 부위의 친화성보다 이의 결합능의 보다 우수한 척도일 수 있다. 예를 들면, 높은 항원항체결합력은 IgG보다 더 낮은 친화성을 가질 수 있는, 오량체성 IgM 항체에 대해 때때로 발견되는 바와 같은 낮은 친화성을 보상할 수 있지만, 이의 다가로부터 생성되는 IgM의 높은 항원항체결합력은 이것이 항원에 효과적으로 결합할 수 있도록 한다. 2개의 분자가 결합하는지 여부를 측정하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며, 예를 들면, 평형 투석, 표면 플라스몬 공명 등을 포함한다. 특수한 구현예에서, 상기 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 프로가스트린에 대해 비-특이적인 분자, 예를 들면, BSA 또는 카제인에 대해 결합하기 위한 이의 친화성보다 적어도 2배 더 큰 친화성으로 결합한다. 보다 특수한 구현예에서, 상기 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 프로가스트린에만 결합한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "생물학적 샘플" 또는 "샘플"은 생물학적 공급원, 예를 들면, 환자 또는 대상체로부터 수득된 샘플을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 "생물학적 샘플"은 특히 전체 유기체 또는 이의 조직, 세포 또는 구성성분 부분(예를 들면, 혈관, 예를 들면, 동맥, 정맥 및 모세관, 체액, 예를 들면 이에 한정되지 않는 혈액, 혈청, 점액, 림프액, 관절낭액, 뇌척수액, 타액, 양수, 제대혈, 뇨, 질액 및 정액)의 서브세트(subset)를 지칭한다. "생물학적 샘플"은 또한 전체 유기체 또는 이의 조직, 세포 또는 구성성분 부분의 서브세트, 또는 이의 분획 또는 부분으로부터 제조된 균질물, 분해물 또는 추출물을 지칭한다. 마지막으로, "생물학적 샘플"은 매질, 예를 들면, 유기체가 증식되고, 세포 구성성분, 예를 들면, 단백질 또는 핵산 분자를 함유하는, 영양 브로쓰(nutrient broth) 또는 겔(gel)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "생체표지자"는 생물학적 상태의 지시인자로서 사용되고 유전자(및 이러한 유전자의 뉴클레오타이드 서열), mRNA(및 이러한 mRNA의 뉴클레오타이드 서열) 및 단백질(및 이러한 단백질의 아미노산 서열) 및 단백질의 후-해독적으로 변형된 형태(즉, 인산화된 및 인산화되지 않은 형태)를 포함하는 생화학적 특성을 포함하는 것으로 의도된다. 생체표지자는 특히 질환 또는 상태의 진행을 진단하거나, 측정하는데 사용될 수 있는 물질을 지칭할 수 있으며, 질환 또는 상태의 치료 효과를 의미한다. 생체표지자는, 예를 들면, 개인에서 암 또는 다른 질환의 존재와 관련된 핵산, 단백질, 또는 항체의 존재일 수 있다. "생체표지자 발현 패턴"은 표준물 또는 대조군과의 비교와 같이, 대상체내에서 하나 이상의 생체표지자의 발현의 정량적 또는 정성적 요약을 지칭한다.
용어 "차단하다", 또는 이의 문법적 등가물은, 항체의 맥락에서 사용된 경우, 항체가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 방지하거나 정지시키는 항체를 지칭한다. 항체를 차단하는 것은 반응을 이끌지 않으면서 항원과 결합하지만, 이러한 항원과의 이후 조합 또는 복합체화(complexing)로부터 다른 단백질을 차단하는 항체를 포함한다. 항체의 차단 효과는 항원의 생물학적 활성에서 측정가능한 변화를 야기하는 것일 수 있다.
용어 "세포 증식 장애" 및 "증식 장애"는 일부 정도의 비정상적인 세포 증식과 관련된 장애를 지칭한다. 일부 구현예에서, 세포 증식 장애는 종양 또는 암이다. 본원에 사용된 바와 같은 "종양"은 악성 또는 양성, 및 모든 전-암성 및 암성 세포 및 조직에 상관없이, 모든 신생물 세포 성장 및 증식을 지칭한다. 용어 "암", "암성", "세포 증식 장애", "증식 장애" 및 "종양"은 본원에 지칭된 바와 같이 상호 배타적이지 않다. 용어 "암" 및 "암성"은 조절되지 않는 세포 성장에 의해 전형적으로 특징화되는 포유동물내 생리학적 상태를 지칭하거나 이를 기술한다. 본원에 사용된 바와 같은 "암"은 목적하지 않은 성장, 침입으로부터, 및 특정 상태 하에서 유기체 내에서 손상된 세포의 전이로부터 생성되는 임의의 악성 신생물이다. 암을 유발하는 세포는 유전적으로 손상되고 일반적으로 세포 분열, 세포 이주 거동, 분화 상태 및/또는 세포 사멸 절차를 제어하는 이의 능력을 상실하였다. 대부분의 암은 종양을 형성하지만, 일부 조혈세포 암, 예를 들면, 백혈병은 그렇지 않다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 "암"은 양성 및 암성 암 둘 다를 포함할 수 있다.
"화학치료제"는 작용 메카니즘에 상관없이, 암의 치료에 유용한 화학적 또는 생물학적 제제(예컨대, 소 분자 약물 또는 생물학적 제제, 예를 들면, 항체 또는 세포를 포함하는 제제)이다. 화학치료제는 표적화된 치료요법 및 통상의 화학치료제에서 사용된 화합물을 포함한다. 화학치료제는 알킬화제, 항-대사제, 항-종양 항생물제, 유사분열 억제제, 크로마틴 작용 억제제, 항-혈관형성제, 항-에스트로겐, 항-안드로겐 또는 면역조절제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특수한 공급원 또는 종(species)으로부터 유래되지만, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다. 구현예에서, "키메라 항체"는 불변 영역, 또는 이의 부위가 변경되거나, 대체되거나, 교환됨으로써, 가변 영역이 상이한 종, 또는 다른 항체 부류 또는 소부류에 속하는 종의 불변 영역에 연결된 항체이다. 다른 구현예에서 "키메라 항체"는 가변 영역, 또는 이의 부위가 변경되거나, 대체되거나, 교환됨으로써 불변 영역이 상이한 종의, 또는 다른 항체 부류 또는 소부류에 속하는 가변 영역에 결합된 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "CDR"은 면역글로불린 (Ig 또는 항체) VH β-시이트(sheet) 골격의 비-골격 영역 내 3개의 초가변 영역 중 하나(H1, H2 또는 H3), 또는 항체 VL β-시이트 골격의 비-골격 영역 내 3개의 초가변 영역 중 하나(L1, L2 또는 L3)를 지칭한다. 따라서, CDR은 골격 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다. CDR 영역은 당해 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있으며, 예를 들면, 항체 가변(V) 도메인 내 가장 고가변성인 영역으로서 카밧(Kabat)에 의해 정의되어 있다(Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat, Adv. Prot. Chem. 32:1-75 (1978)). 카밧(Kabat) CDR은 서열 가변성을 기반으로 하며 가장 일반적으로 사용된다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). 초티아(Chothia)는 대신 구조적 루프(loop)의 위치를 지칭한다(Chothia 및 Lesk J Mol. Bioi. 196:901-917 (1987)). CDR 영역 서열은 또한 초티아에 의해 보존된 β-시이트 골격의 부분이 아닌 잔기로서 정의되었으므로, 상이한 구조를 채택할 수 있다(Chothia 및 Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). 초티아 CDR-H1 루프의 말단은 카밧 번호매김 규정을 사용하여 번호매김하는 경우 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다(이는 카밧 번호매김 방식이 H35A 및 H35B에서 삽입을 위치시키고; 35A 또는 35B가 존재하지 않는 경우, 루프가 32에서 끝나며; 35A가 존재하는 경우, 루프가 33에서 끝나고; 35A 및 35B 둘 다가 존재하는 경우, 루프가 34에서 끝나기 때문이다). 기술 둘 다는 당해 분야에 잘 인식되어 있다. CDR 영역 서열은 AbM, Contact 및 IMGT로 정의되어 왔다. AbM 초가변 영역은 카밧 CDR과 초티아 구조적 루프 사이의 중간물(compromise)을 나타내며, 옥스포드 분자의 AbM 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular's AbM antibody modelling software)에 의해 사용된다. "접촉(contact)" 초가변 영역은 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 최근에, 공통의 번호매김 시스템이 개발되어 광범위하게 채택되었다, ImMunoGeneTics (IMGT) Information System®(Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77 (2003)). IMGT 공통의 번호매김은 항원 수용체, 쇄 유형, 또는 종에 상관없이 가변 도메인을 비교하기 위해 정의되었다[Lefranc M.-P., Immunology Today 18, 509 (1997) / Lefranc M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999)]. IMGT 공통의 번호매김에서, 보존된 아미노산, 예를 들어, 시스테인 23(제1의-CYS), 트립토판 41(보존된-TRP), 소수성 아미노산 89, 시스테인 104(제2의-CYS), 페닐알라닌 또는 트립토판 118(J-PHE 또는 J-TRP)는 항상 동일한 위치를 갖는다. IMGT 공통의 번호매김은 골격 영역(FR1-IMGT: 1 내지 26번 위치, FR2-IMGT: 39 내지 55번, FR3-IMGT: 66 내지 104번 및 FR4-IMGT: 118 내지 128번) 및 상보성 결정 영역: CDR1-IMGT: 27 내지 38번, CDR2-IMGT: 56 내지 65번 및 CDR3-IMGT: 105 내지 117번의 표준화된 경계를 제공한다. 갭(gap)은 점유되지 않은 위치를 나타내므로, CDR-IMGT 길이(괄호 사이에 나타내고 점으로 분리됨, 예컨대, [8.8.13])는 결정적인 정보가 된다. IMGT 공통의 번호매김은 IMGT 컬리어스 드 펄(Colliers de Perles)[Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002) / Kaas, Q. and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)]로 지정된, 2D 그래프적 표시, 및 IMGT/3D구조-DB[Kaas, Q., Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)]에서의 3D 구조로 나타낸다. 기본 항체(canonical antibody) 가변 도메인내 CDR의 위치는 다수의 구조를 비교함으로써 측정되었다(Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); Morea et al., Methods 20:267-279 (2000)). 고가변 영역내 잔기의 수는 상이한 항체에서 변하므로, 기본 위치에 대한 추가의 잔기는 기본 가변 도메인 번호메김 방식에서 잔기 번호 다음에 a, b, c 등으로 통상 번호매김된다(Al-Lazikani et al., 상기 참고 (1997)). 이러한 명명법은 당해 분야의 기술자에게 유사하게 잘 공지되어 있다.
초가변 영역은 다음과 같은 "연장된 초가변 영역"을 포함할 수 있다: VL 내에서 24 내지 36번 또는 24 내지 34번(L1), 46 내지 56번 또는 50 내지 56번(L2) 및 89 내지 97번 또는 89 내지 96번(L3) 및 VH에서 26 내지 35번 또는 26번 내지 35A번(H1), 50번 내지 65번 또는 49번 내지 65번(H2) 및 93번 내지 102번, 94번 내지 102번, 또는 95번 내지 102번(H3). 가변 도메인 잔기는 이러한 정의 각각에 대해 카밧 등(상기 참고)에 따라 번호매김된 25개이다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "HVR" 및 "CDR"은 상호교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은, "체크포인트 억제제(checkpoint inhibitor)"는 예컨대, 소 분자, 가용성 수용체, 또는 항체와 같은 분자를 지칭하며, 이는 면역 체크포인트를 표적화하여 상기 면역 체크포인트의 기능을 차단한다. 보다 구체적으로, 본원에 사용된 바와 같은 "체크포인트 억제제"는 예컨대, 소 분자, 가용성 수용체, 또는 항체와 같은 분자이며, 이는 면역 체크포인트의 생물학적 활성 중 하나 이상을 억제하거나 달리는 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 단백질의 억제제(예컨대, 본원에 제공된 길항적 항체)는 예를 들면, 상기 면역 체크포인트 단백질(예컨대, T 세포)를 발현하는 세포의 활성화 및/또는 세포 신호전달(signalling) 경로를 억제하고, 이에 의해 길항제의 부재하에서 생물학적 활성과 관련된 세포의 생물학적 활성을 억제함으로써 작용한다. 면역 체크포인트 억제제의 예는 소 분자 약물, 가용성 수용체, 및 항체를 포함한다.
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 관여하지 않지만 다양한 효과기 기능, 예를 들면, Fc 수용체와의 상호작용을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카복시 말단 부위를 지칭한다. 용어는 면역글로불린의 다른 부위에 대해 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부위, 가변 도메인을 지칭하며, 이는 항원 결합 부위를 함유한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인 및 경쇄의 CL 도메인을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "감소된"은 이의 참고 값보다 적어도 1배(예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 1000, 10,000배 이상) 더 낮은 대상체의 생체표지자, 예컨대, 프로가스트린의 수준을 지칭한다. "감소된"은, 대상체의 생체표지자, 예컨대, 프로가스트린의 수준을 지칭하므로, 참고 샘플 내 수준보다 또는 상기 마커에 대한 참고 값과 관련하여 적어도 5% 더 낮음(예컨대 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%), 95%), 99%), 또는 100%)을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "검출하는"은 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "검출가능한 프로브(probe)" 또는 "검출가능한 제제"는 검출가능한 신호를 제공하는 조성물을 지칭한다. 용어는 샘플 또는 대상체 내에서, 목적한 분자, 예를 들면, 본원에 제공된 항체의 실재 또는 존재를 확인하는데 사용될 수 있는 물질을 지칭한다. 검출가능한 제제는 가시화될 수 있는 물질 또는 달리는 결정되고/되거나 측정될 수 있는(예컨대, 정량화에 의해) 물질일 수 있다. 용어는 제한없이, 임의의 형광단, 발색단, 방사선표지(radiolabel), 효소, 항체 또는 항체 단편 등을 포함하며, 이는 이의 활성을 통해 검출가능한 신호를 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은, "진단" 또는 "~를 갖는 대상체를 확인하는"은 이의 신호 및 증상로부터 질환, 상태, 또는 손상을 확인하는 과정을 지칭한다. 진단은 특히 개인이 질환 또는 질병(예컨대, 암)으로 영향을 받는지의 여부를 결정하는 과정이다. 암은 예를 들면 암과 관련된 마커, 예컨대, 프로가스트린의 존재를 검출함으로써 진단된다.
용어 "진단제"는 질환의 진단시 도움이 되는 대상체에 투여된 물질을 지칭한다. 이러한 물질을 질환-유발 과정의 국재화(localisation)를 나타내고/내거나, 정확히 기술하고/하거나 정의하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 진단제는 본원에 제공된 항체와 접합된 물질을 포함하며, 이는 대상체에게 투여되거나 대상체로부터의 샘플과 접촉되는 경우, 암, 종양 형성, 또는 임의의 다른 세포 증식 질환, 장애 또는 상태의 진단시 보조한다.
용어 "암호화하다" 또는 이의 문법적 등가물은, 이것이 핵산 분자를 참고로 사용되므로, 이의 천연 상태에서 또는 당해 분야의 기술자에게 잘 공지된 방법으로 조작되는 경우, 전사되어 mRNA를 생산할 수 있고, 이후에 폴리펩타이드 및/또는 이의 단편으로 해독되는 핵산 분자를 지칭한다. 안티센스 가닥(antisense strand)은 이러한 핵산 분자의 상보체이며, 암호화 서열은 이로부터 추론된다.
제제, 예컨대, 약제학적 제형의 "유효량"은 투여량에서 및 필수적인 기간 동안, 목적한 치료학적 또는 예방학적 결과를 달성하기에 효과적인 양을 지칭한다. 유효량은 1회 이상의 투여, 적용 또는 투여량으로 투여될 수 있다. 이러한 전달은 개개 투여량 단위가 사용될 기간, 제제의 생체이용률(bioavailability), 투여 경로 등을 포함하는 다수의 변수에 의존한다. 일부 구현예에서, 유효량은 또한 구체적인 결과(예컨대, 면역 체크포인트 생물학적 활성의 억제, 예를 들면, T 세포 활성화의 조절)를 달성하기 위한 본원에 제공된 항체의 양을 지칭한다. 일부 구현예에서, 이러한 용어는 주어진 질환, 장애 또는 상태 및/또는 이와 관련된 증상의 중증도 및/또는 기간을 감소시키고/시키거나 완화시키는데 충분한 치료요법(예컨대, 면역 체크포인트 억제제)의 양을 지칭한다. 이러한 용어는 또한 주어진 질환, 장애 또는 상태의 진전 또는 진행의 감소 또는 완화, 주어진 질환, 장애 또는 상태의 재발, 발달 또는 발병의 감소 또는 완화에 필요하고/하거나 다른 치료요법(예컨대, 상기 면역 체크포인트 억제제 이외의 치료요법)의 예방학적 또는 치료학적 효과(들)을 증진시키거나 향상시키는데 필수적인 양을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체의 유효량은 0.1 mg/kg(대상체의 체중 kg 당 항체의 mg) 내지 약 100 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체의 유효량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 80 mg/kg 약 90 mg/kg 또는 약 100 mg/kg(또는 이들 사이의 범위)이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "에피토프(epitope)"는 이에 대해 항체가 결합하는, 항원의 영역, 예를 들면, 프로가스트린 폴리펩타이드 또는 프로가스트린 폴리펩타이드 단편을 지칭한다. 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 에피토프는 항체의 하나 이상의 항원 결합 영역에 결합할 수 있고, 동물, 예를 들면, 포유동물(예컨대, 사람)에서 항원성 또는 면역원성 활성을 갖고, 면역 반응을 유발시킬 수 있는, 항원의 표면 상의 국재화된 영역(localised region), 예를 들면, 프로가스트린 폴리펩타이드 또는 프로가스트린 폴리펩타이드 단편이다. 면역원성 활성을 갖는 에피토프는 동물에서 항체 반응을 유발하는 폴리펩타이드의 부위이다. 항원성 활성을 갖는 에피토프는 당해 분야에 잘 공지된 임의의 방법, 예를 들면, 면역검정에 의해 측정된 바와 같은 이에 대해 항체가 결합하는 폴리펩타이드의 부위이다. 항원성 에피토프는 필수적으로 면역원성일 필요는 없다. 에피토프는 일반적으로 분자, 예를 들면, 아미노산의 화학적으로 활성인 표면 그룹화(grouping)로 이루어지며 특이적인 3차원 구조적 특성 뿐만 아니라 특이적인 전하 특성을 갖는다. 특정의 구현예에서, 에피토프는 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹화인 결정인자(determinant), 예를 들면, 당 측쇄, 포스포릴 그룹, 또는 설포닐 그룹을 포함하며, 특정의 구현예에서, 특이적인 3차원 구조적 특성, 및/또는 특이적인 전하 특성을 가질 수 있다. 에피토프는 항원성 단백질의 폴딩(folding)에 의해 매우 근접하게 되는 연속된 잔기 또는 비-연속된 잔기에 의해 형성될 수 있다. 연속된 아미노산에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출 시 보유되지만, 비-연속된 아미노산에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 상기 노출 하에 상실된다. 일반적으로, 항원은 수개 또는 많은 상이한 에피토프를 가지며 많은 상이한 항체와 반응한다. 항체에 의해 결합된 에피토프의 측정은 당해 분야의 기술자에게 공지된 임의의 에피토프 맵핑 기술(epitope mapping technique)에 의해 수행될 수 있다.
항체를 참고로 사용된 경우 용어 "중쇄"는 약 50 내지 70 kDa의 폴리펩타이드 쇄를 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부위는 약 120 내지 130개 이상의 아미노산의 가변 영역 및, 불변 영역을 포함하는 카복시-말단 부위를 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 기반으로 하여, 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)로 지칭된, 5개의 명확한 유형 중 하나일 수 있다. 명백한 중쇄는 크기가 상이하다: α, δ 및 γ는 대략 450개 아미노산을 함유하지만, μ 및 ε은 대략 550개 아미노산을 함유한다. 경쇄와 합해지는 경우, 중쇄의 이러한 명백한 유형은 IgG의 4개의 소부류, 즉, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는, 5개의 잘 공지된 항체의 부류, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 각각을 생성한다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주", 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되며 이러한 세포의 후대세포(progeny)를 포함하는, 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하며, 이는 1차 형질전환된 세포 및 계대배양의 수와 관련없이 이로부터 유래된 후대세포(progeny)를 포함한다. 후대세포는 핵산 함량에 있어서 모 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있지만 돌연변이를 포함할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에 대해 스크리닝되거나 선택된 바와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 후대세포가 본원에 포함된다.
"사람화된" 항체는 비-사람 면역글로불린으로부터 유래된 최소의 서열을 함유하는 키메라 항체를 지칭한다. 일 구현예에서, 사람화된 항체는 사람 면역글로불린(수용체 항체)이며 여기서 수용체의 CDR로부터의 잔기는 비-사람 종(공여체 항체), 예를 들면, 목적한 특이성, 친화성, 및/또는 능력을 갖는 마우스, 랫트, 토끼, 또는 비사람 영장류의 CDR로부터의 잔기로 대체된다. 일부 예에서, 골격 분절 잔기 중 일부(골격에 대하여 FR로 불린다)는 당해 분야의 기술자에게 공지된 기술에 따라 결합 친화성을 보존하도록 변형될 수 있다(Jones et al., Nature, 321:522-525, 1986). 일부 구현예에서, 사람 면역글로불린의 FR 잔기는 상응하는 비-사람 잔기로 대체된다. 특정의 구현예에서, 사람화된 항체는 실질적으로 모든 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR은 비-사람 항체의 것에 상응하며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 사람 항체의 것에 상응한다. 사람화된 항체는 임의로 항체 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 사람 면역글로불린의 것을 포함할 수 있다. 항체, 예컨대, 비-사람 항체의 "사람화된 형태"는 사람화를 겪은 항체를 지칭한다. 사람화의 목표는 전체 항원 결합 친화성 및 항체의 특이성을 유지시키면서, 사람 내로 도입하기 위한, 이종 항체, 예를 들면 쥐 항체의 면역원성에 있어서의 감소이다. 추가의 세부사항에 대해서는, 예컨대, 문헌: Jones et al, Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)을 참고한다. 또한, 예컨대, 문헌: Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1 :105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); 및 미국 특허 제6,982,321호 및 제7,087,409호를 참고한다.
본원에 사용된 바와 같이, "확인하는"은, 이것이 상태를 갖는 대상체를 지칭하므로, 대상체를 평가하고 대상체가 상태를 갖는지, 예를 들면, 암을 앓고 있는지를 측정하는 과정을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "면역 체크포인트" 또는 "면역 체크포인트 단백질"은 면역계계 세포, 예를 들면, T 세포의 일부 유형, 및 일부 암 세포에 의해 이루어진 특정 단백질을 지칭한다. 이러한 단백질은 면역계 내에서 T 세포 기능을 조절한다. 특히, 이들은 점검시 면역 반응을 유지하는 것을 도우며 암세포를 사멸하는 것으로부터 T 세포를 유지시킬 수 있다. 상기 면역 체크포인트 단백질은 신호를 T 세포 내로 전달하고 T 세포 기능을 필수적으로 스위치 오프(switch off)하거나 억제하는 특이적인 리간드와 상호작용함으로써 이러한 결과를 달성한다. 이러한 단백질의 억제는 T 세포 기능의 회복 및 암 세포에 대한 면역 반응을 생성한다. 체크포인트 단백질의 예는 CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4(분자의 CD2 계열에 속하며 모두 NK, γδ, 및 기억 CD8+(αβ) T 세포로 표현됨), CD 160(또한 BY55로서 지칭됨), CGEN-15049, CHK 1 및 CHK2 키나제, IDO1, A2aR 및 다양한 B-7 계열 리간드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "증가된"은 이의 참고 값보다 적어도 1배(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 1000, 10,000배 이상) 더 큰 대상체의 생체표지자, 예컨대, 프로가스트린의 수준을 지칭한다. "증가된"은, 이것이 대상체의 생체표지자, 예컨대, 프로가스트린의 수준을 지칭하므로, 또한 참고 샘플에서 또는 상기 마커에 대한 참고 값과 관련하여 수준 보다 적어도 5% 이상(예컨대, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%), 95%), 99%), 또는 100%) 더 큼을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은, "억제제" 또는 "길항제"는 표적 단백질, 예를 들면, 상술한 면역 체크포인트 단백질 중 임의의 하나의 하나 이상의 생물학적 활성을 억제하거나 그렇지 않으면 감소시킬 수 있는 분자를 지칭한다.
"단리된" 항체는 이의 천연 환경의 구성성분으로부터 분리된 것이다. 일부 구현예에서, 항체는 예를 들면, 전기영동(예컨대, SDS-PAGE, 등전점 전기영동(isoelectric focusing: IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예컨대, 이온 교환 또는 역상 HPLC)로 측정하여 95% 또는 99%보다 더 큰 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가를 위한 방법의 고찰을 위해서는, 예컨대, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)을 참고한다.
"단리된" 핵산은 이의 천연 환경의 구성성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 통상적으로 핵산 분자를 함유하는 세포 내에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체외적으로(extrachromosomally) 또는 이의 천연 염색체 위치와는 상이한 염색체 위치에서 존재한다.
본원에서 의도된 바와 같이, 생체표지자, 예컨대, 프로가스트린의 "수준"은 샘플, 예컨대, 암을 앓고 있는 환자로부터 수집된 샘플 속의 상기 예후 마커의 정량적 값으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 상기 정량적 값은 실제 측정되는 절대값으로 이루어지지 않으며, 오히려 사용된 검정 양식으로 발생하는 신호 대 노이즈 비(signal to noise ratio)를 고려하고/하거나 검정-대-검정(assay-to-assay)으로부터, 암 마커의 수준의 측정의 재생산성을 증가시키기 위해 사용된 교정 참고 값을 고려하여 생성된 최종 값으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 생체표지자, 예컨대, 프로가스트린의 "수준"은 임의 단위로 표시되는데, 이는 중요한 것이 동일한 종류의 임의의 단위를 (i) 검정-대-검정으로부터, 또는 (ii) 하나의 암을 앓고 있는 환자 대 다른 환자로부터, 또는 (iii) 동일한 환자에 대해 명백한 기간에 수행된 검정으로부터, 또는 (iv) 환자의 샘플에서 측정된 생체표지자 수준과 예정된 참고 값(이는 또한 본원에서 "컷-오프" 값으로 명명될 수 있다) 사이에서 비교하는 것이기 때문이다.
용어 "경쇄"는 항체를 참고로 사용된 경우 약 25 kDa의 폴리펩타이드 쇄를 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부위는 약 100 내지 약 110개 이상의 아미노산의 가변 영역 및, 불변 영역을 포함하는 카복시-말단 부위를 포함한다. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217개 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 하여 람다(λ)의 카파(κ)로 지칭된, 2개의 명백한 유형이 존재한다. 경쇄 아미노산 서열은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 경쇄는 사람 경쇄일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "질병 진행을 모니터링하는"은 질환 또는 질병(예컨대, 암)으로 고통받는 개체(individual)에서 질환의 중증도 또는 단계를 결정하는 과정을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "모노클로날 항체"는 거의 동종 항체 집단으로부터 발생한 항체를 나타내며, 여기서 집단은 최소의 비율로 발견될 수 있는 몇가지의 천연적으로 발생하는 돌연변이를 제외하고는 동일한 항체를 포함한다. 모노클로날 항체는 단일 세포 클론, 예를 들면, 하이브리도마의 성장으로부터 발생하며, 하나의 부류 및 소부류의 중쇄, 및 하나의 유형의 경쇄를 특징으로 한다.
본원에 사용된 바와 같은, 핵산 또는 아미노산의 2개의 서열 사이의 "동질성 퍼센트(percent identity)" 또는 "동질성 %"는 최적의 정렬로부터 비교되어 수득될 2개의 서열 사이의 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기의 퍼센트를 지칭하며, 이러한 퍼센트는 순수하게 통계적이고 2개의 서열 사이의 차이는 이들의 길이를 따라 무작위적으로 분포한다. 2개의 핵산 또는 아미노산 서열의 비교는 전통적으로 서열을 최적으로 정렬시킨 후 서열을 비교함으로써 수행되며, 상기 비교는 분절에 의해 또는 "정렬 윈도우(alignment window)"에 의해 수행될 수 있다. 비교를 위한 서열의 최적의 정렬은 수동으로 비교하는 것 외에, 당해 분야의 기술자에게 공지된 방법의 수단으로 수행될 수 있다.
참고 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 나타내는 아미노산 서열의 경우, 바람직한 예는 참고 서열, 특정의 변형, 특히 적어도 하나의 아미노산의 결실, 첨가 또는 치환, 트렁케이션(truncation) 또는 연장을 함유하는 것을 포함한다. 하나 이상의 연속적 또는 비-연속적 아미노산의 치환의 경우에, 치환된 아미노산이 "등가"의 아미노산에 의해 대체된 치환이 바람직하다. 여기서, 표현 "등가의 아미노산"은 그러나 상응하는 항체 및 하기 정의된 구체적인 실시예의 생물학적 활성을 변형시키지 않으면서 구조적 아미노산 중 하나에 대해 치환될 수 있는 임의의 아미노산을 나타냄을 의미한다. 등가의 아미노산은 이에 대해 이들이 치환되는 아미노산과 이들의 구조적 상동성 또는 생성될 수 있는 다양한 항체 사이의 생물학적 활성의 비교 시험의 결과로 측정될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "폴리클로날 항체"는 하나 이상의 다른, 동일하지 않은 항체 중에서 또는 이의 존재하에서 생산된 항체를 지칭한다. 일반적으로 폴리클로날 항체는 동일하지 않은 항체를 생산하는 수개의 다른 B-림프구의 존재하에서 B-림프구로부터 생산된다. 일반적으로, 폴리클로날 항체는 면역화된 동물로부터 직접 수득된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "프로가스트린"은 포유동물 프로가스트린 펩타이드, 및 특히 사람 프로가스트린을 지칭한다. 의구심을 피하기 위해, 표현 "사람 프로가스트린" 또는 "hPG"는 서열 번호: 1의 서열의 사람 PG를 지칭한다. 사람 프로가스트린은 특히 상기 언급한 생물학적으로 활성인 가스트린 호르몬 형태 속에 존재하지 않는 N-말단 도메인 및 C-말단 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 상기 N-말단 도메인의 서열은 서열 번호: 2로 나타낸다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 C-말단 도메인의 서열은 서열 번호: 3으로 나타낸다.
"프로가스트린-결합 분자"는, 본원에서 가스트린에 결합하지만, 가스트린-17(G17), 가스트린-34(G34), 글리신-연장된 가스트린-17(G17-Gly), 또는 글리신-연장된 가스트린-34(G34-Gly) 및 C-말단 플랭킹(flanking) 펩타이드(CTFP)에 결합하지 않는 임의의 분자를 지칭한다. 본 발명의 프로가스트린-결합 분자는 예를 들면, 항체 분자 또는 수용체 분자와 같은, 임의의 프로가스트린-결합 분자일 수 있다. 바람직하게는, 프로가스트린-결합 분자는 항-프로가스트린 항체(항-hPG 항체) 또는 이의 항원-결합 단편이다.
본원에 사용된 바와 같은, "예후"는 질환 또는 질병(예컨대, 암)으로 고통받는 개체에서 질환의 가능한 과정 및 결과, 또는 질환(예컨대, 암)으로부터 개체의 회복 가능성을 예측하는 과정을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 "예후"는 특히 질환으로부터의 회복 가능성 또는 질환의 가능한 발달 또는 결과의 예측을 의미한다. 예를 들면, 대상체로부터의 샘플이 프로가스트린의 존재에 대해 음성인 경우, 이러한 대상체에 대한 "예후"는 샘플이 프로가스트린에 대해 양성인 경우보다 더 우수하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "참고 값"은 참고 샘플에서의 고려 하의 생체표지자(예컨대, 프로가스트린)의 발현 수준을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은, "참고 샘플"은 질환이 없는 것으로 알려진, 대상체, 바람직하게는 2명 이상의 대상체로부터, 또는, 대안적으로, 일반적인 집단으로부터 수득된 샘플을 의미한다. 생체표지자의 적합한 참고 발현 수준은 몇가지 적합한 대상체 내에서 상기 생체표지자의 발현 수준을 측정함으로써 측정할 수 있으며, 이러한 참고 수준은 구체적인 대상체 집단에 대해 조절될 수 있다. 참고 값 또는 참고 수준은 절대 값; 상대 값; 상한치 또는 하한치를 갖는 값; 값의 범위; 평균 값; 중간 값(median value), 평균 값, 또는 특수한 대조군 또는 기본선 값과 비교한 값일 수 있다. 참고 값은 예를 들면, 시험하는, 그러나 더 이른 시점에 대상체로부터의 샘플로부터 수득된 값과 같은 개개의 샘플 값을 기반으로 할 수 있다. 참고 값은 생활연령이 일치하는 그룹의 대상체의 집단으로부터와 같은, 다수의 샘플을 기반으로 할 수 있거나, 시험할 샘플을 포함하거나 배제하는 샘플의 풀(pool)을 기반으로 할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "반응"은 치료에 기인한 증진을 지칭한다. 이러한 증진은 임상 증상의 관찰을 통해 검출할 수 있다. 불가능하진 않지만, 이러한 증진을 관찰하는 것은 장애, 상태 또는 이와 관련된 증상이 완전히 제거됨을 요구하지는 않는다. 환자가 가질 수 있는 반응 유형은 완전한 반응(CR), 부분 반응(PR), 진행성 질환(PD), 및 안정한 질환(SD)이다.
본원에 사용된 바와 같은, "선택하는 것(selecting)"은 확인된 대상체가 상태(예컨대, 암)의 발생을 치료하기 위한 제제를 수용할 것을 측정하는 과정을 지칭한다. 선택하는 것은 예를 들면, 가족 이력, 생활방식, 연령, 민족성, 또는 다른 인자로 인한 특수한 질환 또는 상태에 대한 개체의 민감성을 기반으로 할 수 있다.
"소 분자 약물"은 전형적으로 약 1000 미만의 분자량을 갖는 유기, 무기, 또는 유기금속 화합물을 지칭하기 위해 본원에서 광범위하게 사용된다. 본 발명의 소 분자 약물은 약 1000 미만의 분자량을 갖는 올리고펩타이드 및 다른 생물분자를 포함한다.
"가용성 수용체"는 본원에서 수용체의 세포외 도메인을 포함하지만, 막관통(transmembrane) 또는 이의 세포질성 도메인을 포함하지 않는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 지칭한다.
본원에 기술된 방법에 적용시킬 수 있는 "대상체"는 사람, 개, 고양이, 소(cattle), 염소, 돼지(pig), 돼지(swine), 양 및 원숭이를 포함하는 임의의 포유동물 동물일 수 있다. 사람 대상체는 환자로서 공지될 수 있다. 일 구현예에서, "대상체" 또는 "필요한 대상체"는 암을 앓거나 암을 앓고 있는 것으로 의심되거나 암으로 진단된 포유동물을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은, "암을 앓고 있는 대상체"는 암을 앓고 있거나 암으로 진단된 포유동물을 지칭한다. "대조군 대상체"는 암을 앓고 있지 않고, 암을 앓고 있는 것으로 의심되지 않은 포유동물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 대상체에서 질환을 "치료하는 것" 또는 질환을 갖는 대상체를 "치료하는 것"은 대상체를 약제학적 치료, 예컨대, 약물의 투여에 적용하여, 질환의 정도가 감소되거나 방지되도록 하는 것을 지칭한다. 예를 들면, 치료하는 것은 질환 또는 상태의 적어도 하나의 신호 또는 증상의 감소를 야기한다. 치료는 조성물, 예를 들면, 약제학적 조성물의 투여를 포함하며(그러나 이에 한정되지 않음), 예방학적으로, 또는 병리학적 현상의 개시에 대해 후속적으로 수행할 수 있다. 치료는 제제 및/또는 치료의 1회 이상 투여를 필요로 할 수 있다.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄의 가변 도메인은 "VH"로서 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 도메인은 "VL"로서 지칭될 수 있다. 이러한 도메인은 일반적으로 항체의 가장 가변성인 부분이며 항원-결합 부위를 함유한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "벡터"는 이것이 연결된 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 이러한 용어는 자가-복제하는 핵산 구조물로서의 벡터 뿐만 아니라 이것이 도입된 숙주 세포의 게놈 내로 혼입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로서 지칭된다.
진단 방법
사람 프레(pre)-프로가스트린인, 101개 아미노산 펩타이드(아미노산 서열 참고: AAB19304.1)는 가스트린 유전자의 1차 해독 생성물이다. 프로가스트린은 프레프로가스트린으로부터 처음 21개 아미노산(신호 펩타이드)의 절단에 의해 형성된다. 프로가스트린의 80개 아미노산 쇄는 효소를 수개의 활성 가스트린 호르몬 형태로 절단 및 변형시킴으로써 추가로 프로세싱된다: 프로가스트린의 38 내지 71번 아미노산을 포함하는, 가스트린 34(G34) 및 글리신-연장된 가스트린 34(G34-Gly), 프로가스트린의 55 내지 71번 아미노산을 포함하는, 가스트린 17(G17) 및 글리신-연장된 가스트린 17(G17-Gly).
프로가스트린(PG)은 결장직장 종양 세포에 의해 생산되며 세포의 정상적인 분화 과정, 예를 들면, 세포 사멸을 초래하는 과정을 차단하는 신호 형질도입 경로(signal transduction pathway)를 개시함으로써 이러한 세포의 증식을 자극하는 것으로 고려된다. 프로가스트린을 암호화하는 가스트린 유전자 전사체의 고갈은 시험관내(in vitro) 및 생체내(in vivo) 암 모델에서 종양 세포 내의 세포 분화 및 프로그램화된 세포 사멸을 유도하여, 종양 세포 증식을 감소시킨다. 임의의 작동 이론으로 얽매이려는 의도는 아니지만, PG의 결합을 통해, 항-hPG 항체는 이의 신호전달 파트너(들)와 상호작용하는 이의 능력을 차단하거나 억제하는 것으로 고려된다. 따라서, 궁극적으로 이는 달리 증식을 초래할 수 있는 직장결장 종양 세포 내에서 신호 형질도입 경로를 억제한다. PG는 암을 진단하기 위한 특히 유용한 도구인 것으로 이미 밝혀졌다. 예컨대, 결장직장 암의 경우 제WO 2011/083 088호, 유방 암의 경우 제WO 2011/083 090호, 췌장 암의 경우 제WO 2011/083 091호, 결장직장 및 위장 암의 경우 제WO 2011/116 954호, 간 병리학의 경우 제WO 2012/013 609호 및 제WO 2011/083089호, 난소암의 경우 제WO2017114972호, 식도암의 경우 제WO2017114976호, 위암의 경우 제WO2017114975호, 폐암의 경우 제WO2018178364호 및 전립선 암의 경우 제WO2018178352호를 참고한다.
본 출원은 이제 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응하는 가능성에 대한 임상적으로 중요한 음성 예측 마커로서의 프로가스트린을 개시한다. 본 발명자는 놀랍게도, 치료 전 유체(fluid) 속의 검출가능한 프로가스트린 수준이 환자가 치료요법에 대해 반응하는 경향이 거의 없음을 나타냄을 발견하였다. 실제로, 본 발명자는 이러한 범주의 환자가 유의적으로 감소된 전체 생존율(overall survival)을 나타냄을 발견하였다. 비교시, 치료 전에 유체 속에서 검출가능한 프로가스트린이 없는 환자는 2배 오래 생존한다.
이는 중요하고 의학적으로 유용한 발견을 나타낸다. 이러한 발견은 치료 전에, 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 반응하는 경향이 있는 환자의 그룹 및 확실하게 반응하지 않음으로써 특이적이고 표적화된 치료학적 치료를 필요로 하게 될 환자의 그룹으로 환자의 구별이 가능하도록 한다. 환자가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 반응하지 않을 수 있음을 측정하는 것은 의사가 암에 대해 보다 효과적일 수 있는 다른 치료요법을 결정하는데 보조할 수 있다. 따라서, 이러한 진단 도구는 이러한 환자가 이들의 상황에서 가장 효과적인 치료요법을 제공받음을 보증하면서, 유의적인 부작용이 있는 값비싼 치료로부터 비용을 절감할 수 있다.
본 발명은 이제 면역치료요법에 반응하는데 민감한 암 환자의 시험관내 확인을 위한 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린을 검출함을 포함한다. 바람직하게는, 상기 샘플 속의 프로가스트린의 양을 측정함으로써, 프로가스트린의 정량화를 가능하도록 한다.
제1 양태에서, 본 발명은 면역-체크포인트-억제제 반응성 표현형을 갖는 암 환자의 선택 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린을 검출하는 단계를 포함한다. 샘플 속의 프로가스트린의 존재는 환자가 면역-체크포인트-억제제 비-반응성 표현형을 표시함을 나타낸다.
따라서, 제1 구현예에서, 본 발명은 면역-체크포인트-억제제 반응성 또는 비-반응성 표현형을 갖는 암 환자를 선택하는 시험관내 방법에 관한 것이며, 상기 방법은:
a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
b) 샘플 속에서 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합은 환자가 면역-체크포인트-억제제 비-반응성 표현형을 표시함을 나타내는 단계를 포함한다.
프로가스트린-결합 분자의 결합은 기술자에게 이용가능한 다양한 검정에 의해 검출될 수 있다. 후술된 바와 같은 검정을 수행하기 위한 임의의 적합한 수단이 본 발명 내에 포함되어 있지만, 면역검정, 특히 ELISA가 특히 언급될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "면역-체크포인트-억제제 반응성 또는 비-반응성 표현형"은 상기 면역 체크포인트 억제제의 투여에 대한 대상체의 반응 상태를 지칭한다. "반응 상태"는 상기 대상체(면역-체크포인트-억제제 (비-)반응성 표현형 또는 (비-)반응성 대상체 또는 (비-)반응성 대상체로 지칭됨: 본 출원의 목적을 위해, 이러한 용어는 필수적으로 동의어이다)가 치료에 대해 반응하거나 반응하지 않음을 지칭한다.
본 발명에 따른 방법의 보다 특수한 구현예에서, 상기 생물학적 샘플 속에 적어도 3 pM, 적어도 5 pM, 적어도 10 pM, 적어도 20 pM, 적어도 30 pM의 프로가스트린의 농도가 면역-체크포인트-억제제 비-반응성 표현형의 지표이다.
다른 양태에서, 본 발명은 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응에 민감한 암 환자의 선택을 위한 시험관내 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린을 검출하는 단계를 포함한다. 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응하는데 민감한 암 환자는 상기 면역 체크포인트 억제제를 투여받는 경우 면역 체크포인트 억제제 반응성 표현형을 표시할 대상체이다. 따라서, 샘플 속에서 프로가스트린의 존재는 환자가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 되는데 민감하지 않음을 나타낸다.
따라서, 제1 구현예에서, 본 발명은 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응하는데 민감한 암 환자를 선택하는 시험관내 방법에 관한 것이며, 상기 방법은:
a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
b) 상기 샘플 속에서 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 여기서 상기 결합은 환자가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아님을 나타내는 단계를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응하는데 민감한 암 환자의 시험관내 선택을 위한 본 발명에 따른 방법은:
a) 상기 대상체로부터의 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
b) 상기 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린의 농도를 측정하는 단계로서, 상기 생물학적 샘플 속에 적어도 3 pM의 프로가스트린의 농도는 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대한 반응성의 부재의 지표인 단계를 포함한다.
샘플 속에 존재하는 프로가스트린의 농도가 측정되면, 결과를 대조군 샘플(들)의 것과 비교할 수 있으며, 대조군 샘플(들)은 시험 샘플과 유사한 방식으로 수득되지만 암을 앓고 있고 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 비-반응성인 것으로 알려진 개체(들)로부터는 수득되지 않는다. 프로가스트린의 농도가 시험 샘플 속에서 유의적으로 보다 상승하는 경우, 이것이 유래된 대상체가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아닌 증가된 가능성이 존재한다. 다른 구현예에서, 샘플 속에 존재하는 프로가스트린의 농도는 대조군 샘플(들)의 것과 비교할 수 있으며, 대조군 샘플(들)은 시험 샘플과 유사한 방식으로 수득되지만, 암을 앓고 있고 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 것으로 알려진 개인(들)로부터 수득된다. 프로가스트린의 농도가 시험 샘플 속에서 유의적으로 더 낮은 경우, 이것이 유래된 대상체가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 증가된 가능성이 존재한다.
따라서, 보다 바람직한 구현예에서, 본 방법은:
c) 참고 샘플 속에서 프로가스트린의 참고 농도를 측정하는 단계,
d) 상기 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참고 농도와 비교하는 단계,
e) 단계 d)의 비교로부터, 상기 환자가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인지 또는 반응성이 아닌지를 측정하는 단계를 추가로 포함한다.
다른 양태에 따라서, 본 발명은 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 암의 시험관내 진단 방법에 관한 것이다. 보다 특히, 상기 대상체의 생물학적 샘플은 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉되며, 상기 프로가스트린-결합 분자는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다.
따라서, 이러한 구현예는 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 암을 진단하는 시험관내 방법을 제공하며, 상기 방법은:
a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
b) 상기 샘플에서 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 측정하는 단계로서, 여기서 상기 결합은 암이 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 암이 아님을 나타내는 단계를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은
a) 상기 대상체로부터 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
b) 상기 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린의 농도를 측정하는 단계로서, 상기 생물학적 샘플 속에서, 적어도 3 pM의 프로가스트린의 농도는 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이지 않은 암의 존재의 지표인 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 암의 시험관내 진단 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 방법의 보다 특수한 구현예에서, 상기 생물학적 샘플에서 적어도 3 pM, 적어도 5 pM, 적어도 10 pM, 적어도 20 pM, 적어도 30 pM의 프로가스트린의 농도는 상기 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아닌 암의 존재의 지표이다.
보다 바람직한 구현예에서, 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 암을 진단하는 것은 대상체의 상기 생물학적 샘플 속에서 측정된 프로가스트린의 농도를 참고 샘플 속의 프로가스트린의 농도와 비교하는 단계를 포함한다.
따라서, 본 발명은:
c) 참고 샘플 속의 프로가스트린의 참고 농도를 측정하는 단계,
d) 상기 생물학적 샘플 속의 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참고 수준 또는 농도와 비교하는 단계,
e) 단계 d)의 비교로부터 상기 암이 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인지 또는 반응성이 아닌지를 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
다른 양태에 따라서, 본 발명은 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 전이된 암을 진단하는 시험관내 방법에 관한 것이며, 상기 방법은:
a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
b) 상기 샘플에서 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합은 전이된 암이 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아닌 전이된 암을 나타내는 단계를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은
a) 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
b) 생화학적 검정에 의해, 상기 생물학적 샘플 속의 프로가스트린의 수준 또는 농도를 측정하는 단계로서 상기 생물학적 샘플 속에서 적어도 3 pM의 프로가스트린의 농도는 상기 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아닌 전이된 암의 존재를 나타내는 단계를 포함하는, 대상체의 생물학적 샘플로부터, 상기 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인 전이된 암의 시험관내 진단 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 방법의 보다 특수한 구현예에서, 상기 생물학적 샘플 속에서, 적어도 3 pM, 적어도 5 pM, 적어도 10 pM, 적어도 20 pM, 적어도 30 pM의 프로가스트린의 농도는 상기 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아닌 전이된 암의 존재를 나타낸다.
보다 바람직한 구현예에서, 본 발명은:
c) 참고 샘플 속에서 프로가스트린의 참고 농도를 측정하는 단계,
d) 상기 생물학적 샘플 속의 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참고 농도와 비교하는 단계,
e) 단계 d)의 비교로부터 상기 암이 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인지 또는 반응성이 아닌지를 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
다른 양태에 따라서, 본 발명은 생물학적 샘플 속의 프로가스트린의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암 치료의 시험관내 예후 방법에 관한 것이다. 보다 특히, 상기 대상체의 생물학적 샘플은 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉되며, 여기서 상기 프로가스트린-결합 분자는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다.
따라서, 본 구현예는 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암 치료를 예후하는 시험관내 방법을 제공하며, 상기 방법은:
a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
b) 상기 샘플 속의 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합은 예후가 음성임을 나타내는 단계를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은
a) 상기 대상체로부터의 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
b) 상기 생물학적 샘플 속의 프로가스트린의 농도를 측정하는 단계로서, 상기 생물학적 샘플 속에서 적어도 10 pM의 프로가스트린의 농도는 음성 예후를 나타내는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암 치료의 시험관내 예후 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 방법의 보다 특수한 구현예에서, 상기 생물학적 샘플 속에서, 적어도 3 pM, 적어도 5 pM, 적어도 10 pM, 적어도 20 pM, 적어도 30 pM의 프로가스트린의 농도는 음성 예후를 나타낸다.
보다 바람직한 구현예에서, 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암 치료를 예측하는 것은 대상체의 상기 생물학적 샘플 속에서 측정된 프로가스트린의 농도를 참고 샘플 속의 프로가스트린의 농도에 대해 비교하는 단계를 포함한다.
따라서, 본 발명의 방법은:
c) 참고 샘플 속에서 프로가스트린의 참고 농도를 측정하는 단계,
d) 상기 생물학적 샘플 속의 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참고 수준 또는 농도와 비교하는 단계,
e) 단계 d)의 비교로부터 면역 체크포인트 억제제를 사용한 상기 암 치료를 예측하는 단계를 추가로 포함한다.
항-hPG 항체
본 방법에 사용하기 위한 PG-결합 분자는 프로가스트린에 결합하지만, 가스트린-17(G17), 가스트린-34(G34), 글리신-연장된 가스트린-17(G17-Gly), 또는 글리신-연장된 가스트린-34(G34-Gly) 및 C-말단 플랭킹(flanking) 펩타이드(CTFP)에는 결합하지 않는 분자, 예를 들면, PG 폴리펩타이드, PG 폴리펩타이드 단편, 또는 PG 에피토프이다. 바람직하게는, PG-결합 분자는 사람 프로가스트린, 즉, 서열 번호 1로 나타낸 아미노산 서열의 폴리펩타이드에 결합한다.
구현예에서, PG-결합-분자는 PG에 결합하는 항체(항-PG 항체) 또는 이의 항원-결합 단편이다. 바람직하게는, 상기 항-프로가스트린 항체는 hPG(항-hPG 항체)에 결합한다.
특수한 구현예에서, 상기 프로가스트린-결합 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체, 단일 쇄 항체, 카멜화된 항체, IgA1 항체, IgA2 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgG1 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체 및 IgM 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
보다 구체적인 구현예에서, 본 발명의 항-PG 항체는 프로가스트린의 에피토프를 인식하며, 상기 에피토프는 프로가스트린의 N-말단의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열은 hPG의 10 내지 14번 잔기, hPG의 9 내지 14번 잔기, hPG의 4 내지 10번 잔기, hPG의 2 내지 10번 잔기 또는 hPG의 2 내지 14번 잔기를 포함할 수 있고, 여기서 hPG의 아미노산 서열은 서열 번호 1이다.
보다 구체적인 구현예에서, 항-PG 항체는 프로가스트린의 에피토프를 인식하며, 상기 에피토프는 프로가스트린의 C-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 상기 아미노산 서열은 hPG의 71 내지 74번 잔기, hPG의 69 내지 73번 잔기, hPG의 71 내지 80번 잔기(서열 번호 40), hPG의 76 내지 80번 잔기, 또는 hPG의 67 내지 74번 잔기를 포함하고, 여기서 hPG의 아미노산 서열은 서열 번호 1이다.
보다 특수한 구현예에서, 항-PG 항체는 본원에 기술된 방법과 같은 방법으로 측정된 바와 같이, 프로가스트린에 대해 적어도 5000 nM, 적어도 500 nM, 100 nM, 80 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM, 7 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.1nM, 50 pM, 10 pM, 5 pM, 1 pM, 또는 적어도 0.1 pM의 친화성을 갖는다.
다른 특수한 구현예에서, 프로가스트린에 결합하는 항체는 당해 분야의 기술자에게 공지된 면역화 방법으로 수득하였으며, 여기서 면역원으로서 아미노산 서열이 프로가스트린의 아미노산 서열 전체 또는 부분을 포함하는 펩타이드를 사용한다. 보다 특히, 상기 면역원은 다음 중에서 선택된 펩타이드를 포함한다:
· 아미노산 서열이 전체 길이의 프로가스트린, 및 특히 서열 번호 1의 전체 길이의 사람 프로가스트린의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드,
· 아미노산 서열이 프로가스트린의 아미노산 서열의 부분, 및 특히 서열 번호 1의 전체 길이의 사람 프로가스트린에 상응하는 펩타이드,
· 아미노산 서열이 프로가스트린의 N-말단 부분의 부분 또는 전체 아미노산 서열에 상응하는 펩타이드, 및 특히 아미노산 서열: SWKPRSQQPDAPLG(서열 번호 2)를 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드, 및
· 아미노산 서열이 프로가스트린의 C-말단 부분의 부분 또는 전체 아미노산 서열에 상응하는 펩타이드, 및 특히 아미노산 서열: QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN(서열 번호 3)을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드,
·아미노산 서열이 프로가스트린의 C-말단 부분의 아미노산 서열의 부분에 상응하는 펩타이드, 및 특히 프로가스트린의 71 내지 80번 아미노산에 상응하는 아미노산 서열 FGRRSAEDEN(서열 번호 40)을 포함하는 펩타이드.
기술자는 이러한 면역화가 목적한 바와 같은 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 생성하는데 사용될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 이러한 유형의 항체 각각을 수득하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 따라서, 기술자는 임의의 주어진 항원에 대해 폴리클로날 및/또는 모노클로날 항체를 생성하는 방법을 용이하게 선택하고 시행할 것이다.
사람 프로가스트린의 1 내지 14번 아미노산 서열(N-말단 맨 끝)에 상응하는, 아미노산 서열 "SWKPRSQQPDAPLG"를 포함하는 면역원을 사용함으로써 생성된 모노클로날 항체의 예는 다음의 표 1 내지 표 4에 기술된 바와 같은 mAb3, mAb4, mAb16, 및 mAb19 및 mAb20으로 지정된 모노클로날 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 다른 모노클로날 항체가 프로가스트린에 실제로 결합하는지의 여부는 명확하지 않지만, 기술되었다(WO 2006/032980). 에피토프 맵핑(mapping)의 실험 결과는 mAb3, mAb4, mAb16, 및 mAb19 및 mAb20이 상기 hPG N-말단 아미노산 서열(서열 번호 2)내 에피토프에 특이적으로 결합함을 나타낸다. 서열 번호 2로 나타낸 프로가스트린의 N-말단내 에피토프를 특이적으로 인신하는 폴리클로날 항체가 당해 분야에 기술되었다(참고: 예컨대, WO 2011/083088).
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
사람 프로가스트린의 55 내지 80번 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열 "QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN"(프로가스트린의 C-말단 부분)을 포함하는 면역원을 사용함으로써 생성시킬 수 있는 모노클로날 항체의 예는 다음 표 5 및 6에서 mAb8 및 mAb13으로 지정된 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 따라서 이에 의해 생성될 수 있는 모노클로날 항체의 다른 예는 제WO 2011/083088호에 기술된 하이브리도마 2H9F4B7에 의해 생산된 항체 Mab14이다. 하이브리도마 2H9F4B7은 참고번호 I-5158 하에, 2016년 12월 27일에 프랑스 75724 파리 세덱스(CEDEX) 15, 뤼 듀 독테우르 로욱스(rue du Docteur Roux) 25-28 소재의 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르(Institut Pasteur)에 부다페스트 조약(Budapest Treaty) 하에 기탁되었다. 에피토프 맵핑의 실험 결과는 이러한 항체가 상기 hPG C-말단 아미노산 서열(서열 번호 3) 내 에피토프에 특이적으로 결합한다.
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다른 예는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 면역원을 사용함으로써 생성된 항-hPG 모노클로날 및/또는 폴리클로날 항체를 포함한다.
본 방법의 보다 특수한 구현예에서, 상기 생물학적 샘플은 항-hPG 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉되며, 여기서 상기 항-hPG 항체는 N-말단 항-hPG 항체 및 C-말단 항-hPG 항체 중에서 선택된다.
용어 "N-말단 항-hPG 항체" 및 "C-말단 항-hPG 항체"는 hPG의 N-말단 부분 내에 위치하는 아미노산을 포함하는 에피토프 또는 hPG의 C-말단 부분 내에 위치하는 아미노산을 포함하는 에피토프에 대한 hPG의 N-말단 내에 위치하는 아미노산을 포함하는 에피토프 각각에 결합하는 항체를 나타낸다. 바람직하게는, 용어 "N-말단 항-hPG 항체"는 이의 서열을 서열 번호 2로 나타낸 프로가스트린의 도메인 내에 위치한 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다. 다른 바람직한 구현예에서, 용어 "C-말단 항-hPG 항체"는 이의 서열을 서열 번호 3으로 나타낸 프로가스트린의 도메인 내에 위치한 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다.
특수한 구현예에서, 상기 항체는:
· 서열 번호 4, 5 및 6의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 4, 5 및 6의 각각의 서열과 최적의 정렬 후에 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 7, 8 및 9의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 7, 8 및 9의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 적어도 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 서열 번호 10, 11 및 12의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 10, 11 및 12의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 13, 14 및 15의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 13, 14 및 15의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 서열 번호 16, 17 및 18의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 16, 17 및 18의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 19, 20 및 21의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 19, 20 및 21의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 서열 번호 22, 23 및 24의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 22, 23 및 24의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 25, 26 및 27의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 25, 26 및 27의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 서열 번호 28, 29 및 30의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 28, 29 및 30의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 31, 32 및 33의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 31, 32 및 33의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 서열 번호 34, 35 및 36의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 34, 35 및 36의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 37, 38 및 39의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 37, 38 및 39의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 모노클로날 항체이다.
다른 구현예에서, 항체는 참고번호 I-5158 하에, 2016년 12월 27일에 프랑스 75724 파리 세덱스 15, 뤼 듀 독테우르 로욱스 25-28 소재의 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르에 부다페스트 조약 하에 기탁되었다.
보다 특수한 구현예에서, 상기 항체는:
· 서열 번호 41의 아미노산 서열의 중쇄 및 서열 번호 42의 아미노산 서열의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체;
· 서열 번호 43의 아미노산 서열의 중쇄 및 서열 번호 44의 아미노산 서열의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체;
· 서열 번호 45의 아미노산 서열의 중쇄 및 서열 번호 46의 아미노산 서열의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체;
· 서열 번호 47의 아미노산 서열의 중쇄 및 서열 번호 48의 아미노산 서열의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체;
· 서열 번호 49의 아미노산 서열의 중쇄 및 서열 번호 50의 아미노산 서열의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체; 및
· 서열 번호 51의 아미노산 서열의 중쇄 및 서열 번호 52의 아미노산 서열의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체로 이루어진 그룹에서 선택된 모노클로날 항체이다.
다른 특수한 구현예에서, 본 발명의 방법에 사용된 항체는 사람화된 항체이다. 사람화의 목표는 항체의 전체 항원 결합 친화성 및 특이성을 유지하면서, 사람 내로 도입하기 위한, 이종 항체, 예를 들면, 쥐 항-hPG 항체의 면역원성에 있어서의 감소이다. 본 발명의 사람화된 항체 또는 이의 단편은 당해 분야의 기술자에게 공지된 기술에 의해 제조될 수 있다(예를 들면, 문헌: Singer et al., J. Immun., 150:2844-2857, 1992에 기술된 것과 같음). 이러한 사람화된 항체는 시험관내 진단 또는 생체내에서 예방적 및/또는 치료학적 치료를 포함하는 방법에서 이의 용도에 바람직하다. 다른 사람화 기술은 또한 당해 분야의 기술자에게 공지되어 있다. 실제로, 항체는 다양한 기술, 예를 들면, CDR-그래프팅(grafting)(EP 0 451 261; EP 0 682 040; EP 0 939 127; EP 0 566 647; US 5,530,101; US 6,180,370; US 5,585,089; US 5,693,761; US 5,639,641; US 6,054,297; US 5,886,152; 및 US 5,877,293), 베니어링(veneering) 또는 재표면화(resurfacing)(EP 0 592 106; EP 0 519 596; Padlan E. A., 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489-498; Studnicka G. M. et al., 1994, Protein Engineering 7(6): 805-814; Roguska M.A. et al., 1994, Proc. Natl. Acad. ScL U.S.A., 91:969-973), 및 쇄 셔플링(chain shuffling)(미국 특허 제5,565,332호)을 사용하여 사람화시킬 수 있다. 사람 항체는 파아지 디스플레이 방법을 포함하는 당해 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 제조할 수 있다. 또한, 미국 특허 제4,444,887호, 제4,716,111호, 제5,545,806호, 및 제5,814,318호; 및 국제 특허원 공보 제WO 98/46645호, 제WO 98/50433호, 제WO 98/24893호, 제WO 98/16654호, 제WO 96/34096호, 제WO 96/33735호, 및 제WO 91/10741호를 참고한다.
보다 특수한 구현예에서, 상기 항체는:
· 서열 번호 4, 5 및 6의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 4, 5 및 6의 각각의 서열과 최적의 정렬 후에 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 7, 8 및 9의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 7, 8 및 9의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 사람화된 항체,
· 서열 번호 10, 11 및 12의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 10, 11 및 12의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 13, 14 및 15의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 13, 14 및 15의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 사람화된 항체,
· 서열 번호 16, 17 및 18의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 16, 17 및 18의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 19, 20 및 21의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 19, 20 및 21의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 사람화된 항체,
· 서열 번호 22, 23 및 24의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 22, 23 및 24의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 25, 26 및 27의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 25, 26 및 27의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 사람화된 항체,
· 서열 번호 28, 29 및 30의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 28, 29 및 30의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 31, 32 및 33의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 31, 32 및 33의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 사람화된 항체,
· 서열 번호 34, 35 및 36의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 34, 35 및 36의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 지닌 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 37, 38 및 39의 각각의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 37, 38 및 39의 각각의 서열과 최적의 정렬 후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98%의 동일성을 지닌 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 사람화된 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 사람화된 항체이며,
여기서 상기 항체는 또한 사람 항체로부터 유래된 경쇄 및 중쇄의 불변 영역을 포함한다.
다른 보다 특수한 구현예에서, 상기 항체는:
· 서열 번호 53의 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 54의 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 항체;
· 서열 번호 55의 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 항체;
· 서열 번호 57, 58 및 59 사이에서 선택된 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 60, 61 및 62 사이에서 선택된 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 항체;
· 서열 번호 63, 64 및 65 사이에서 선택된 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 66, 67 및 68 사이에서 선택된 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 항체;
· 서열 번호 69와 서열 번호 71 사이에서 선택된 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 70과 서열 번호 72 사이에서 선택된 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 항체; 및
· 서열 번호 75와 서열 번호 76 사이에서 선택된 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 77과 서열 번호 78 사이에서 선택된 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 항체로 이루어진 그룹에서 선택된 사람화된 항체이고;
여기서 상기 항체는 또한 사람 항체로부터 유래된 경쇄 및 중쇄의 불변 영역을 포함한다.
또한 진단 및 치료학적 적용에서 사용하기 위한, 유도체화되거나, 공유결합적으로 변형되거나, 다른 분자에 접합된 항-hPG 항체가 본원에 포함된다. 예를 들면, 그러나 제한없이, 유도체화된 항체는 예컨대, 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 아미드화, 공지된 보호/차단 그룹에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결 등에 의해 변형된 항체를 포함한다. 임의의 다수의 화학적 변형이 공지된 기술, 예를 들면, 이에 대한 제한없이, 특이적인 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 투니카마이신의 물질대사 합성 등에 의해 수행될 수 있다. 추가로, 유도체화는 하나 이상의 비-전통적인 아미노산을 함유할 수 있다.
다른 예에서, 본 개시내용의 항체는 폴리(에틸렌글리콜)(PEG) 모이어티(moiety)에 부착될 수 있다. 구체적인 구현예에서, 항체는 항체 단편이고 PEG 모이어티는 항체 단편 내에 위치한 임의의 이용가능한 아미노산 측쇄 또는 말단 아미노산 작용 그룹, 예를 들면, 임의의 유리된 아미노, 이미노, 티올, 하이드록실 또는 카복실 그룹을 통해 부착된다. 이러한 아미노산은 항체 단편 내에 천연적으로 존재할 수 있거나 재조합 DNA 방법을 사용하여 단편으로 가공시킬 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제5,219,996호를 참고한다. 다수의 부위를 사용하여 2개 이상의 PEG 분자에 부착시킬 수 있다. PEG 모이어티는 항체 단편에 위치하는 적어도 하나의 시스테인 잔기의 티올 그룹을 통해 공유결합으로 연결시킬 수 있다. 티올 그룹이 부착 점으로서 사용되는 경우, 적절히 활성화된 효과기 모이어티, 예를 들면, 티올 선택적인 유도체, 예를 들면, 말레이미드 및 시스테인 유도체를 사용할 수 있다.
구체적인 예에서, 항-hPG 항체 접합체는 페길화된(PEGylated), 즉, 예컨대, 제EP0948544호에 개시된 방법에 따라, 이에 공유결합으로 부착된 PEG(폴리(에틸렌글리콜))을 갖는 변형된 Fab' 단편이다. 또한, 문헌: Poly(ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications, (J. Milton Harris (ed.), Plenum Press, New York, 1992); Poly(ethyleneglycol) Chemistry 및 Biological Applications, (J. Milton Harris and S. Zalipsky, eds., American Chemical Society, Washington D.C., 1997); 및 Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences, (M. Aslam and A. Dent, eds., Grove Publishers, New York, 1998); 및 Chapman, 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 54:531-545를 참고한다. PEG는 힌지 영역(hinge region) 내 시스테인에 부착될 수 있다. 하나의 예에서, PEG-변형된 Fab' 단편은 변형된 힌지 영역 내 단일의 티올 그룹에 공유결합으로 연결된 말레이미드 그룹을 갖는다. 말레이미드 그룹 및 라이신 잔기 상의 아민 그룹 각각에 공유결합으로 연결될 수 있는 라이신 잔기는 대략 20,000 Da의 분자량을 갖는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체에 부착될 수 있다. 따라서, Fab' 단편에 부착된 PEG의 총 분자량은 대략 40,000 Da일 수 있다.
항-hPG 항체는 진단 적용시 유용한 표지된 항체를 포함한다. 항체는 진단적으로, 예를 들면, 특정 세포, 조직, 또는 혈청 속에서 목적한 표적의 발현을 검출하거나; 예컨대, 주어진 치료 요법(regimen)의 효능을 측정하기 위한 임상 시험 과정의 부분으로서 면역학적 반응의 발달 또는 진행을 모니터링할 수 있다. 검출은 항체를 검출가능한 물질 또는 "표지(label)"에 커플링(coupling)시킴으로써 촉진시킬 수 있다. 표지는 본 개시내용의 항-hPG 항체에 직접 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 표지 자체는 검출가능하거나(예컨대, 방사선동위원소 표지, 동위원소 표지, 또는 형광성 표지) 또는, 효소적 표지의 경우에, 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매할 수 있다. 검출가능한 물질의 예는 다양한 효소, 보철 그룹(prosthetic group), 형광성 물질, 발광성 물질, 생물발광성 물질, 방사활성 물질, 다양한 양전자 방사 단층 촬영을 사용하는 양전자 방출 금속(positron emitting metal), 및 비방사활성 상자성 금속 이온을 포함한다. 검출가능한 물질은 항체(또는 이의 단편)에 직접적으로 또는 당해 분야에 공지된 기술을 사용하여 중간체(예를 들면, 당해 분야에 공지된 링커(linker)와 같은)를 통해 간접적으로 커플링되거나 접합될 수 있다. 효소적 표지의 예는 루시퍼라제(예컨대, 개똥벌레 루시퍼라제 및 세균 루시퍼라제; 미국 특허 제4,737,456호), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 말레이트 데하이드로게나제, 우레아제, 퍼옥시다제, 예를 들면, 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRPO), 알칼린 포스파타제, β-갈락토시다제, 아세틸콜린에스테라제, 글루코아밀라제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다제(예컨대, 글루코즈 옥시다제, 갈락토즈 옥시다제, 및 글루코즈-6-포스페이트 데하이드로게나제), 헤테로사이클릭 옥시다제(예를 들면, 우리카제 및 크산틴 옥시다제), 락토퍼옥시다제, 마이크로옥시다제 등을 포함한다. 적합한 보철 그룹 복합체의 예는 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴을 포함하고; 적합한 형광성 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오로레세인, 단실 클로라이드, 디메틸아민-1-나프탈렌설포닐 클로라이드, 또는 피코에리트린 등을 포함하고; 발광성 물질의 예는 루시퍼라제, 루시페린, 및 애쿠오린(aequorin)을 포함하고; 적합한 동위원소 물질의 예는 13C, 15N, 및 중수소를 포함하고; 적합한 방사활성 물질의 예는 125I, 131I, 111In 또는 99Tc를 포함한다.
항-hPG 항체를 사용한 프로가스트린의 검출
예컨대, 항-PG 항체와 같은 프로가스트린-결합 분자는 면역 체크포인트 억제제 치료요법에 대해 반응하는데 민감한 대상체를 확인하는 것과 같은 PG 검출에 의존한 적용에 유용하다. 따라서, 프로가스트린-결합 분자, 예를 들어, 항-PG 항체는 본원에 기술된 임의의 방법에서 사용될 수 있다. 일반적으로, 상기 방법은 본 개시내용의 항-hPG 항체를 사용하여 환자로부터 수득된 샘플 속의 프로가스트린을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 샘플 속에서, 적어도 3 pM, 적어도 5 pM, 적어도 10 pM, 적어도 20 pM, 적어도 30 pM의 프로가스트린의 측정은 면역 체크포인트 억제제 치료요법에 대한 반응성의 부재를 나타낸다. 프로가스트린은 예컨대, 혈액, 혈청, 혈장, 조직, 및/또는 세포의 샘플 속에서 측정할 수 있다. hPG 검출은 당해 분야에 공지되고/되거나 본원에 기술된 검정, 예를 들면, ELISA, 샌드위치 ELISA, 면역블롯팅(웨스턴 블롯팅(Western blotting)), 면역침전, BIAcore 기술 등을 사용하여 수행할 수 있다.
본원에 나타낸 바와 같이, 프로가스트린은 그러나 가스트린 유전자 생성물의 해독 후 프로세싱으로부터 생성된 다수의 상이한 폴리펩타이드 중 하나이다. 본원에 기술된 진단, 모니터링 및 다른 방법은 붕해 생성물(degradation product)을 포함하는 다른 가스트린 유전자 생성물과는 대조적으로 hPG를 특이적으로 검출한다. 프로가스트린의 수준은 당해 분야의 기술자에게 공지된 임의의 방법으로 측정할 수 있다.
바람직하게는, 샘플 속의 프로가스트린의 수준을 측정하는 것은 상기 샘플을 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계 및 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 측정하는 단계를 포함한다.
발현 수준이 단백질 수준에서 측정되는 경우, 이는 주목하게는 특히 바이오티닐화 또는 다른 동등한 기술을 사용한 세포막 염색(staining)에 이어 특이적인 항체를 사용한 면역침전, 웨스턴 블롯, ELISA 또는 ELISPOT, 효소-연결된 면역흡착 검정(ELISA), 방사선면역검정(RIA), 면역조직화학(IHC), 면역형광성(IF), 항체 미세배열, 또는 면역조직화학에 커플링된 조직 미세배열에 의해서와 같은 잘 공지된 기술을 사용하여 예컨대, 항체와 같은 특이적인 프로가스트린-결합 분자를 사용하여 수행할 수 있다. 다른 적합한 기술은 FRET 또는 BRET, 단일 또는 다수의 여기 파장을 사용하고 임의의 채택된 광학적 방법, 예를 들면, 전기화학적 방법(전압전류법 및 전류법적정 기술), 원자력 현미경 검사, 및 무선 주파수 방법, 예컨대, 다극성 공명 분광법, 공초점 및 비-공초점, 형광성, 발광성, 화학발광성, 흡광도, 반사, 투광성, 복굴절 또는 굴절률(예컨대, 표면 플라스몬 공명, 차원편광법(ellipsometry), 공명 거울 방법(resonant mirror method), 그래프팅 커플러 도파관 방법(grating coupler waveguide method) 또는 간섭계법)의 검출, 세포 ELISA, 유동 세포분석법, 방사선동위원소, 자기 공명 영상, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의한 분석; HPLC-질량 분광분석법; 액체 크로마토그래피/질량 분광분석법/질량 분광분석법(LC-MS/MS))을 적용하는 현미경검사적 또는 조직화학적 방법을 포함한다. 이러한 모든 기술은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며 여기서 추가로 상세히 설명할 필요는 없다. 이러한 상이한 기술을 사용하여 프로가스트린 수준을 측정할 수 있다.
본 발명의 프로가스트린-결합 분자, 특히 항-프로가스트린 항체가 면역검정에 특히 유용하다. 면역검정은 효소-연결된 면역흡착 검정(ELISA), 방사면역검정(RIA), 면역확산 검정(immunodiffusion assay), 또는 면역-검출 검정, 예를 들면, 표면 플라스몬 내성 검정(예컨대, Biacore® 검정), ELISPOT, 슬롯-블롯(slot-blot), 또는 웨스턴 블롯일 수 있다. 이러한 기술에 대한 일반적인 안내로서, 예를 들면, 문헌: Ausubel et al. (eds) (1987) in "Current Protocols in Molecular Biology" John Wiley and Sons, New York, N.Y.를 참고한다.
항체는 의학, 수의학 및 다른 면역검출 분야에서 사용된 다수의 검정 기술에서 주요 시약이다. 이러한 시험은 예를 들면, 효소-연결된 ELISA, RIA, IHC, 및 IF 검정을 포함하는 많은 통상적으로 사용된 면역검정 기술을 포함한다. 프로가스트린의 수준은 바람직하게는 상기 단백질에 대해 지시된 항체를 사용하여 당해 분야의 기술자에게 공지된 임의의 방법에 의해 검정된다. 바람직하게는, 프로가스트린의 수준은 바람직하게는 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자를 사용하여 RIA와 ELISA 사이에서 선택된 기술을 기반으로, 면역효소 검정을 사용하여 측정한다. 가장 바람직하게는, 상기 수준은 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자를 사용하여 ELISA로 측정한다. 보다 바람직하게는, 프로가스트린의 수준은 하나의 프로가스트린-결합 분자로, 면역효소 검정, 가장 바람직하게는 ELISA 검정을 사용하여 측정한다.
특히 유용한 구현예에서, 본원에 개시된 방법은 바람직하게는 프로가스트린-결합 분자를 사용하여, RIA와 ELISA 사이에서 선택된 기술을 기반으로, 면역효소 검정을 사용하여 대상체로부터의 생물학적 샘플 속의 프로가스트린의 수준을 측정하는 단계를 포함한다.
일반적으로, 항-hPG 항체를 사용하여 hPG 수준을 측정하기 위한 ELISA 공정은 다음과 같다. 표면, 예를 들면, 96-웰 플레이트(well plate) 속의 웰을 제조하고 여기에 hPG에 대한 제1의 "포획" 항체의 공지된 양을 결합시킨다. 포획 항체는 예를 들면, hPG의 C- 또는 N-말단과 결합하는 항-hPG 항체이다. 차단 후, 시험 샘플을 표면에 적용시킨 다음 항온처리 기간을 적용시킨다. 이후에 표면을 세척하여 결합하지 않은 항원 및 hPG가 적용된 제2의 "검출" 항체를 함유하는 용액을 제거한다. 검출 항체는 본원에 기술된 임의의 항-hPG 항체일 수 있으며, 단 검출 항체는 포획 항체로부터의 상이한 에피토프에 결합한다. 예를 들면, 포획 항체가 hPG의 C-말단 펩타이드 영역에 결합하는 경우, 이후에, 적합한 검출 항체는 hPG의 N-말단 펩타이드 영역에 결합하는 것일 수 있다. 대안적으로, 포획 항체가 hPG의 N-말단 펩타이드 영역에 결합하는 경우, 이후에 적합한 검출 항체는 hPG의 C-말단 펩타이드 영역에 결합하는 것일 수 있다. 이후에, 프로가스트린 수준은 직접적으로(예를 들면, 검출 항체가 검출가능한 수준에 접합되는 경우) 또는 간접적으로(검출 항-hPG 항체에 결합하는 표지된 제2의 항체를 통해) 검출될 수 있다.
구체적인 구현예에서, hPG 수준은 시험 샘플로부터 다음과 같이 측정된다. 96-웰 미세역가(microtiter) 플레이트를 0.5 내지 10 μg/mL의 토끼의 C-말단 항-hPG 폴리클로날 항체로 코팅하고 밤새 항온처리한다. 다음에 플레이트를 PBS-트윈(0.05%) 속에서 3회 세척하고 PBS-트윈(0.05%) 속에서 2%(w/v) 탈지 분유(non-fat dried milk)로 차단시킨다. 별도로, 시험 샘플, 대조군 샘플(블랭크(blank) 또는 PG-음성 혈장 또는 혈청 샘플), 및 약 5 pM(0.5 x 10-11 M) 내지 약 0.1 nM(1x10-10 M)의 hPG 참고 표준(PG-음성 혈장 또는 혈청 속에 희석된 동결건조된 hPG)을 적절한 희석제(예컨대, PBS-트윈 0.05%) 속에서 제조하였다. 샘플을 코팅된 플레이트 상에서 2 내지 4시간 동안 37℃에서, 또는 대안적으로 12 내지 16시간 동안 21℃에서 항온처리한다. 항온처리 후, 플레이트를 PBS-트윈(0.05%)으로 3회 세척하고 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)에 커플링된, 본원에 기술된 바와 같은 0.001 내지 0.1 μg/mL의 N-말단 항-hPG 모노클로날 항체와 함께 21℃에서 30분 동안 항온처리한다(Nakane et al., 1974, J. Histochem. Cytochem. 22(12): 1084-1091). 이후에, 플레이트를 PBS-트윈(0.05%) 속에서 3회 세척하고 HRP 기질을 21℃에서 15분 동안 가한다. 100 μL의 0.5M 황산을 가하여 반응을 정지시키고 405 nm에서 광학 밀도 측정을 수행하였다. 시험 샘플 hPG 수준은 hPG 참고 표준으로부터 유도된 측정으로부터 구축된 표준 곡선과 비교하여 측정한다.
제1 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 생물학적 샘플을 hPG의 에피토프에 결합하는 항-hPG 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 에피토프는 hPG의 C-말단 부분 내에 또는 hPG의 N-말단 부분 내에 위치한 에피토프에 위치한다.
보다 구체적인 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 생물학적 샘플을 hPG의 에피토프에 결합하는 항-hPG 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 에피토프는 hPG의 10 내지 14번 아미노산, hPG의 9 내지 14번 아미노산, hPG의 4 내지 10번 아미노산, hPG의 2 내지 10번 아미노산 및 hPG의 2 내지 14번 아미노산에 상응하는 아미노산 서열 중에서 선택된 프로가스트린의 N-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 hPG의 아미노산 서열은 서열 번호 1이다.
보다 구체적인 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 생물학적 샘플을 hPG의 에피토프에 결합하는 항-hPG 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 에피토프는 hPG의 71 내지 74번 아미노산, hPG의 69 내지 73번 아미노산, hPG의 71 내지 80번 아미노산(서열 번호 40), hPG의 76 내지 80번 아미노산, 및 hPG의 67 내지 74번 아미노산에 상응하는 아미노산 서열 중에서 선택된, 프로가스트린의 C-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 hPG의 아미노산 서열은 서열 번호 1이다.
PG를 검출하는 본 방법의 특수한 구현예에서, 상기 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 프로가스트린의 제1 부분에 결합하는 제1 분자 및 프로가스트린의 제2 부분에 결합하는 제2 분자와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 특수한 구현예에서, 여기서 상기 프로가스트린-결합 분자는 항체이고, 대상체로부터의 생물학적 샘플은 프로가스트린의 제1의 에피토프에 결합하는 항체 및 프로가스트린의 제2의 에피토프에 결합하는 제2의 항체와 접촉된다.
바람직한 구현예에 따라서, 상기 제1의 항체는 불용성 또는 부분 가용성 담체에 결합된다. 상기 제1의 항체에 의한 프로가스트린의 결합은 상기 생물학적 샘플로부터의 프로가스트린의 포획을 야기한다. 바람직하게는, 상기 제1의 항체는 hPG의 에피토프에 결합하는 항체이며, 여기서 상기 에피토프는 상술한 바와 같이, 프로가스트린의 C-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 제1의 항체는 제WO 2011/083088호에 기술된, 하이브리도마 2H9F4B7에 의해 생산된 모노클로날 항체 Mab14이다. 하이브리도마 2H9F4B7은 참고번호 I-5158 하에, 2016년 12월 27일에 프랑스 75724 파리 세덱스 15, 뤼 듀 독테우르 로욱스 25-28 소재의 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르에 부다페스트 조약 하에 기탁되었다.
다른 바람직한 구현예에 따라서, 상기 제2의 항체는 후술된 바와 같은 검출가능한 모이어티로 표지된다. 제2의 항체에 의한 프로가스트린의 결합은 생물학적 샘플 속에 존재한 프로가스트린 분자의 검출을 가능하게 한다. 또한, 제2의 항체에 의한 프로가스트린의 결합은 생물학적 샘플 속에 존재한 프로가스트린 분자의 정량화를 가능하게 한다. 바람직하게는, 상기 제2의 항체는 hPG의 에피토프에 결합하는 항체이고, 여기서 상기 에피토프는 상술한 바와 같이 프로가스트린의 N-말단의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 N-말단 항체는 상술한 바와 같은, 폴리클로날 항체이다. 대안적으로, 예컨대, 상술한 N-말단 모노클로날 항체, 특히 서열 번호 16, 17 및 18의 각각의 아미노산 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 19, 20 및 21의 각각의 아미노산 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체와 같은, 프로가스트린의 N-말단 내의 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체를 사용하는 것이 가능하다.
특히 바람직한 구현예에서, 제1의 항체는 불용성 또는 부분 가용성인 담체에 결합하고 제2의 항체는 검출가능한 모이어티로 표지된다.
바람직한 구현예에서, 폐암의 진단을 위한 본 발명의 방법은 사람 대상체로부터의 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린의 검출을 포함한다.
면역 체크포인트 억제제
제1의 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4(분자의 CD2 계열에 속하며 모든 NK, γδ, 및 기억 CD8+(αβ) T 세포 상에서 발현된다), CD 160(또한 BY55로서 지칭됨), CGEN-15049, CHK 1 및 CHK2 키나제, IDO1, A2aR 및 임의의 다양한 B-7 계열 리간드 중 어느 하나의 억제제이다.
예시적인 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체(예컨대, 이필리무맙), 항-LAG-3 항체(예컨대, BMS-986016), 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 항-Tim3 항체 (예컨대, TSR-022, MBG453), 항-BTLA 항체, 항-KIR 항체, 항-A2aR 항체, 항-CD200 항체, 항-PD-1 항체(예컨대, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 피딜리주맙), 항-PD-L1 항체(예컨대, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두르발루맙, BMS 936559), 항-VISTA 항체(예컨대, JNJ 61610588), 항-CD28 항체, 항-CD80 또는 -CD86 항체, 항-B7RP1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-HVEM 항체, 항-CD137 항체(예컨대, 우렐루맙), 항-CD137L 항체, 항-OX40(예컨대, 9B12, PF-04518600, MEDI6469), 항-OX40L 항체, 항-CD40 또는 -CD40L 항체, 항-GAL9 항체, 항-IL-10 항체, PD-1 리간드, 예컨대 PDL-1 또는 PD-L2의 세포외 도메인의 융합 단백질, 및 IgG1(예컨대, AMP-224), OX40 리간드의 세포외 도메인의 융합 단백질, 예컨대 OX40L, 및 IgG1(예컨대, MEDI6383), IDO1 약물(예컨대, 에파카도스타트) 및 A2aR 약물을 포함한다. 다수의 면역 체크포인트 억제제가 승인되었거나 현재 임상 시험 중에 있다. 이러한 억제제는 이필리무맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두르발루맙, BMS 936559, JNJ 61610588, 우렐루맙, 9B12, PF-04518600, BMS-986016, TSR-022, MBG453, MEDI6469, MEDI6383, 및 에파카도스타트를 포함한다.
면역 체크포인트 억제제의 예는 예를 들면, 문헌: Marin-Acevedo et al., Journal of Hematology & Oncology 11: 8, 2018; Kavecansky 및 Pavlick, AJHO 13(2): 9-20, 2017; Wei et al., Cancer Discov 8(9): 1069?86, 2018에 나열되어 있다.
바람직하게는, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4, LAG-3, Tim3, PD-1, PD-L1, VISTA, CD137, OX40, 또는 IDO1의 억제제이다.
일부 구현예에서, 억제제는 소 분자 약물이다. 일부 구현예에서, 억제제는 가용성 수용체이다. 일부 구현예에서, 억제제는 항체이다.
일부 구현예에서, 억제제는 길항성 항체, 즉, 항원의 생물학적 활성 중 하나 이상을 억제하거나 감소시키는 항체, 예를 들면, 본원에 기술된 면역 체크포인트 단백질 중 어느 하나이다. 특정의 길항성 항체는 상기 항원의 생물학적 활성 중 하나 이상을 실질적으로 또는 완전히 억제한다. 용어 "억제하다" 또는 이의 문법적 등가물은, 항체의 맥락에서 사용되는 경우 이에 대해 항체가 ?첫謀求? 항원의 생물학적 활성을 억제하거나, 구속하거나 감소시키는 항체를 지칭한다. 항체의 억제 효과는 항원의 생물학적 활성에 있어서 측정가능한 변화를 야기하는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 이필리무맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두르발루맙, BMS 936559, JNJ 61610588, urelumab, 9B12, PF-04518600, BMS-986016, TSR-022, MBG453, MEDI6469, MEDI6383, 및 에파카도스타트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4, PD-1, 또는 PD-L1의 억제제이다. 바람직한 구현예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4, PD-1, 또는 PD-L1 중 어느 하나에 대한 항체이다. 보다 바람직하게는, 상기 항체는 길항제 항체이다. 심지어 보다 바람직하게는, 상기 길항제 항체는 이필리무맙, 펨블롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 및 두르발루맙 사이에서 선택된다.
일 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1의 억제제이다. 바람직한 구현예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 PD-1에 대한 항체이다. 보다 바람직하게는, 상기 항체는 길항제 항체이다. 심지어 보다 바람직하게는, 면역 체크포인트 억제제는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 또는 피딜리주맙이다.
핵산 및 발현 시스템
본 개시내용은 항체, 특히 항-hPG 항체에 대한 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 이러한 핵산을 포함하는 벡터, 및 본 개시내용의 항체를 생산할 수 있는 숙주 세포를 포함한다.
제1의 양태에서, 본 발명은 항체, 특히 상술한 바와 같이 프로가스트린에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다.
제1 구현예는 살술한 항-hPG 항체의 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 바람직하게는, 상기 중쇄는 서열 번호 4, 5 및 6의 서열의 3개의 중쇄 CDR을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 중쇄는 서열 번호 14의 서열의 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함한다. 심지어 보다 바람직하게는, 상기 중쇄는 서열 번호 16의 완전한 서열을 갖는다.
다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 상술한 항-hPG 항체의 경쇄를 암호화한다. 바람직하게는, 상기 중쇄는 서열 번호 7, 8 및 9의 서열의 3개의 중쇄 CDR을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 중쇄는 서열 번호 15의 서열의 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함한다. 심지어 보다 바람직하게는, 상기 중쇄는 서열 번호 17의 완전한 서열을 갖는다.
본 발명에 따라서, 다양한 발현 시스템을 사용하여 본 발명의 항체를 발현시킬 수 있다. 일 양태에서, 이러한 발현 시스템은 이에 의해 목적한 암호화 서열이 생산될 수 있고 후속적으로 정제될 수 있는 비히클(vehicle)을 나타내나, 또한 적절한 뉴클레오타이드 암호화 서열로 일시적으로 형질감염되는 경우 반응계내(in situ) 내에서 IgG 항체를 발현할 수 있는 세포를 나타낸다.
본 발명은 상술한 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 제공한다. 일 구현예에서, 벡터는 목적한 항체의 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예컨대, 항-hPG 항체)를 함유한다. 다른 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 목적한 항체의 경쇄(예컨대, 항-hPG 항체)를 암호화한다. 본 발명은 또한 융합 단백질, 변형된 항체, 항체 단편, 및 이의 프로브(probe)를 포함하는 벡터를 제공한다.
목적한 항체(예컨대, 항-hPG 항체)의 중쇄 및/또는 경쇄를 발현시키기 위하여, 상기 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 발현 벡터내로 삽입시켜 유전자가 전사 및 해독 서열에 작동적으로 연결되도록 한다.
"작동적으로 연결된" 서열은 목적한 유전자와 연속된 발현 제어 서열 및 목적한 유전자를 조절하기 위한 거리에서 또는 트랜스(trans)로 작용하는 발현 제어 서열 둘 다를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "발현 제어 서열"은 이들이 연결된 암호화 서열의 발현 및 프로세싱에 영향을 미치기에 필수적인 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 발현 제어 서열은 적절한 전사 개시, 종결, 프로모터 및 인핸서(enhancer) 서열; 효율적인 RNA 프로세싱 신호, 예를 들면, 스플라이싱(splicing) 및 폴리아데닐화 신호; 세포질성 mRNA를 안정화시키는 서열; 해독 효율을 향상시키는 서열(즉, 코작 컨센서스(Kozak consensus) 서열); 단백질 안전성을 향상시키는 서열; 및 요구되는 경우, 단백질 분비를 향상시키는 서열을 포함한다. 이러한 제어 서열의 특성은 숙주 유기체에 따라 상이하며; 원핵세포에서, 이러한 제어 서열은 일반적으로 프로모터, 리보소옴 결합 부위, 및 전사 종결 서열을 포함하고; 진핵 세포에서, 일반적으로 이러한 제어 서열은 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함한다. 용어 "제어 서열"은 이의 존재가 발현 및 프로세싱에 필수적이고, 이의 존재가 유리할 수 있는 추가의 구성성분, 예를 들면, 리더(leader) 서열 및 융합 파트너 서열을 포함할 수도 있는 최소의, 모든 구성성분을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "벡터"는 이것이 연결되는 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하기 위해 의도된다. 벡터의 하나의 유형은 "플라스미드"이며, 이는 내부로 DNA 분절이 연결될 수 있는 환형의 이중 가닥 DNA 루프(loop)를 지칭한다. 벡터의 다른 유형은 바이러스 벡터이며, 여기서 추가의 DNA 분절이 바이러스 게놈내로 연결될 수 있다. 특정의 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포 내에서 자가 복제할 수 있다(예컨대, 세균성 복제 오리진(origin of replication) 및 에피솜 포유동물 벡터를 갖는 세균 벡터). 다른 벡터(예컨대, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포내로 도입시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있으며, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다.
특정의 벡터는 이것이 작동적으로 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터"(또는 단순히, "발현 벡터")로서 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용한 발현 벡터는 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 플라스미드가 벡터의 가장 일반적으로 사용된 형태이므로 상호교환적으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 발현 벡터의 이러한 형태, 예를 들면, 세균 플라스미드, YAC, 코스미드, 레트로바이러스, EBV-유래된 에피소옴(episome), 및 기술자가 목적한 항체(예컨대, 항-hPG 항체)의 중쇄 및/또는 경쇄의 발현을 보증하는데 편리한 것으로 알고 있을 모든 다른 벡터를 포함하는 것으로 이해된다. 기술자는 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 상이한 벡터 또는 동일한 벡터내로 클로닝될 수 있음을 실현할 것이다. 바람직한 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 2개의 벡터 내로 클로닝된다.
본 발명의 폴리뉴클레오타이드 및 이러한 분자를 포함하는 벡터는 적합한 숙주 세포의 형질전환을 위해 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "숙주 세포"는 내부로 재조합 발현 벡터가 도입되어 목적한 항체(예컨대, 항-hPG 항체)를 발현시키는 세포를 지칭하는 것으로 의도된다. 이러한 용어는 특수한 대상 세포 뿐만 아니라, 이러한 세포의 후대세포를 지칭하는 것으로 의도된다. 특정의 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인하여 다음 세대에서도 발생할 수 있으므로, 이러한 후대세포는 실제로 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "숙주 세포"의 영역 내에 여전히 포함된다.
형질전환은 폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포내로 도입하기 위한 임의의 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 이러한 방법은 당해 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있고 덱스트란-매개된 형질전환, 인산칼슘 침전, 폴리브렌-매개된 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 리포좀 내로의 폴리뉴클레오타이드의 캡슐화(encapsulation), 바이오블리스틱 주사(biolistic injection) 및 핵 내로 DNA의 직접적인 미세주입을 포함한다.
숙주 세포는 하나 이상의 발현 벡터로 동시-형질감염될 수 있다. 예를 들면, 숙주 세포는 상기 기술된 바와 같이, 목적한 항체(예컨대, 항-hPG 항체)의 중쇄 및 경쇄 둘 다를 암호화하는 벡터로 형질감염될 수 있다. 대안적으로, 숙주 세포는 목적한 항체(예컨대, 항-hPG 항체)의 중쇄를 암호화하는 제1의 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 암호화하는 제2의 벡터로 형질감염될 수 있다. 포유동물 세포는 재조합체 치료학적 면역글로불린의 발현을 위해, 특히 전체 재조합 항체의 발현을 위해 일반적으로 사용된다. 예를 들면, 포유동물 세포, 예를 들면, HEK293 또는 CHO 세포는, 사람 사이토메갈로바이러스로부터의 주요한 중간 얼리 유전자 프로모터 요소(major intermediate early gene promoter element)를 수반하는 것과 같은 발현 신호를 함유하는 벡터와 함께, 본 발명의 사람화된 항-hPG 항체를 발현하기에 효과적인 시스템이다(Foecking et al., 1986, Gene 45:101; Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8: 2).
또한, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나, 목적한 특정 양식으로 유전자 생성물을 변형시키고 프로세싱시키는 숙주 세포를 선택할 수 있다. 이러한 변형(예컨대, 글리코실화) 및 단백질 생성물의 발현은 단백질의 기능에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 해독 후 프로세싱 및 단백질 및 유전자 생성물의 변형을 위한 특징 및 특정 메카니즘을 갖는다. 적절한 세포주 또는 숙주 시스템을 선택하여 목적한 발현된 항체의 정확한 변형 및 프로세싱을 보증한다. 따라서, 주요 전사체의 적절한 프로세싱, 유전자 생성물의 글리코실화를 위한 세포 기관(cellular machinery)을 지닌 진핵세포 숙주 세포를 사용할 수 있다. 이러한 포유동물 숙주 세포는 CHO, COS, HEK293, NS/0, BHK, Y2/0, 3T3 또는 골수 세포(이들 세포주 모두는 공공 기탁기관, 예를 들면, 프랑스 파리의 콜렉숑 나쇼날 데 컬쳐 듀 미크로오르가니즘(Collection Nationale des Cultures de Microorganismes), 또는 미국 버지니아주 메사츄세츠 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)으로부터 이용가능하다)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
재조합 단백질의 장기간, 고-수율 생산을 위하여, 안정한 발현이 바람직하다. 본 발명의 일 구현예에서, 항체를 안정하게 발현하는 세포주를 가공할 수 있다. 바이러스 복제 오리진을 함유하는 발현 벡터르 사용하는 것 대신에, 숙주 세포를 적절한 발현 조절 성분, 예를 들면, 프로모터, 인핸서, 전사 종결인자, 폴리아데닐화 부위, 및 당해 분야의 기술자에게 공지된 다른 적절한 서열, 및 선택가능한 마커를 포함하는 적절한 발현 조절 성분의 제어 하에서 형질전환시킨다. 외부 DNA의 도입 후, 가공된 세포를 농축된 배지 속에서 1 내지 2일 동안 성장하도록 할 수 있으며, 이후에 선택 배지로 이동시킨다. 재조합 플라스미드 상의 선택가능한 마커는 선택에 대해 내성을 부여하고 세포가 플라스미드를 염색체내로 안정하게 통합되어 세포 주 내로 확장되도록 한다. 안정한 세포주를 작제하는 다른 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 특히, 부위-특이적인 통합 방법이 개발되었다. 이러한 방법에 따라서, 적절한 발현 조절 성분, 예를 들면, 프로모터, 인핸서, 전사 종결인자, 폴리아데닐화 부위, 및 다른 적절한 서열의 제어 하에서 형질전환된 DNA는 이미 절단된 특정 표적 부위에서 숙주 세포 게놈 내에 통합된다(Moele et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 104(9): 3055-3060; US 5,792,632; US 5,830,729; US 6,238,924; WO 2009/054985; WO 03/025183; WO 2004/067753).
다수의 선택 시스템, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, 헤르페스 단성 바이러스 티미딘 키나제(Herpes simplex virus thymidine kinase)(Wigler et al., Cell 11:223, 1977), 하이포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Szybalska et al., Proc Natl Acad Sci USA 48: 202, 1992), 메티오닌 설폭스이미드의 존재하에서 글루타메이트 신타제 선택(Adv Drug Del Rev, 58: 671, 2006, 및 website or literature of Lonza Group Ltd.) 및 tk, hgprt 또는 aprt 세포 각각 내에서 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Lowy et al., Cell 22: 817, 1980) 유전자를 본 발명에 따라 사용할 수 있다. 또한, 항대사산물 내성을 다음 유전자에 대한 선택의 기준으로 사용할 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 dhfr(Wigler et al., Proc Natl Acad Sci USA 77: 357, 1980); 마이코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt(Mulligan et al., Proc Natl Acad Sci USA 78: 2072, 1981); 아미노글리코시드에 대한 내성을 부여하는 neo, G-418(Wu et al., Biotherapy 3: 87, 1991); 및 하이그로마이신에 대한 내성을 부여하는 hygro(Santerre et al., Gene 30: 147, 1984). 재조합 DNA 기술의 당해 분야에 공지된 방법을 통상적으로 적용하여 목적한 재조합체 클론을 선택할 수 있으며, 이러한 방법은 예를 들면, 문헌: Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1993)에 기술되어 있다. 항체의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가될 수 있다. 항체를 발현하는 벡터 시스템 내에서 마커가 증폭가능한 경우, 배양물 속에 존재하는 억제제의 수준에 있어서의 증가는 마커 유전자의 카피의 수를 증가시킬 것이다. 이러한 증폭된 영역은 본 발명의 IgG 항체를 암호화하는 유전자와 관련되므로, 상기 항체의 생산이 또한 증가될 것이다(Crouse et al., Mol Cell Biol 3: 257, 1983). 본 발명의 유전자를 발현시키는 대안적인 방법은 존재하며 당해 분야의 기술자에게 공지되어 있다. 예를 들면, 본 발명의 유전자의 상부의 발현 조절 성분에 결합할 수 있는 변형된 아연 핑거 단백질(zinc finger protein)을 가공할 수 있으며; 본 발명의 숙주 세포 내에서 상기 가공된 아연 핑거 단백질(ZFN)의 발현은 단백질 생산에 있어서의 증가를 가져온다(참고: 예컨대 Reik et al., Biotechnol. Bioeng., 97(5): 1180-1189, 2006). 더욱이, ZFN은 예정된 게놈 위치내로 DNA의 통합을 자극하여 고-효율 부위-특이적인 유전자 첨가를 생성할 수 있다(Moehle et al, Proc Natl Acad Sci USA, 104: 3055, 2007).
목적한 항체(예컨대, 항-hPG 항체)는 목적한 항체를 발현하는데 필수적인 배양 조건 하에서 형질전환된 숙주 세포의 배양물을 성장시킴으로써 제조할 수 있다. 수득되는 발현된 항체는 이후에 배양 배지 또는 세포 추출물로부터 정제할 수 있다. 목적한 항체(예컨대, 항-hPG 항체)의 가용성 형태는 배양물 상층액으로부터 회수할 수 있다. 이는 이후에 면역글로불린 분자의 정제를 위해 당해 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들면, 크로마토그래피(예컨대, 이온 교환, 특히 Fc에 대한 단백질 A 친화성에 의한 친화성 등), 원심분리, 차등적 용해도(differential solubility)에 의해 또는 단백질의 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제할 수 있다. 적합한 정제 방법은 당해 분야의 통상의 기술자에게 명확할 것이다.
따라서, 본 발명의 다른 양태는 본원에 기술된 항체(예컨대, 항-hPG 항체)의 생산 방법에 관한 것이며, 상기 방법은:
a) 상술한 숙주 세포를 배양 배지 속에서 적합한 배양 조건 하에 성장시키는 단계; 및
b) 배양 배지 또는 상기 배양된 세포로부터 항체(예컨대, 항-hPG 항체)를 회수하는 단계를 포함한다.
약제학적 조성물
본 면역 체크포인트 억제제는 조성물로 제형화될 수 있다. 임의로, 조성물은 하나 이상의 추가의 치료제, 예를 들면, 후술된 제2의 치료제를 포함할 수 있다. 조성물을 일반적으로 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함할 멸균된, 약제학적 조성물의 부분으로서 적용될 것이다. 다른 양태에서, 본 발명은 따라서, 면역 체크포인트 억제제 및 약제학적으로 허용되는 비히클 및/또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
이러한 조성물은 임의의 적합한 형태(이를 환자에게 투여하는 목적한 방법에 의존함)일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, "투여하는"은 화합물“(예컨대, 상술한 바와 같은, 면역 체크포인트 억제제) 또는 조성물(예컨대, 약제학적 조성물, 예컨대, 상술한 바와 같은 면역 체크포인트 억제제를 함유하는 약제학적 조성물)의 투여량을 대상체에게 제공하는 방법을 의미한다. 본원에 기술된 방법에서 이용된 조성물은 예를 들면, 유리체강내(예컨대, 유리체 내 주사에 의해)에 의해, 눈 소적(eye drop)에 의해, 근육내, 정맥내, 피내, 피하, 동맥내, 복강내, 병변내, 구개내(intracranially), 관절내(intraarticularly), 전립선내(intraprostatically), 흉막내(intrapleurally), 기관내(intratracheally), 척추강내(intrathecally), 비강내, 질내, 직장내로, 국소적으로, 종양내로, 복막내로, 피하내로, 결막하로(subconjunctivally), 방광내로, 점막으로, 심막내로, 탯줄내로(intraumbilically), 안구내로, 안와내로(intraorbitally), 경구로, 국소적으로, 경피적으로, 흡입에 의해, 주사에 의해, 이식에 의해, 주입에 의해, 연속 주입에 의해, 직접적으로 표적 세포의 국재화된 관류 배싱(localised perfusion bathing target cells directly)에 의해, 카테터(catheter)에 의해, 세척(lavage)에 의해, 크림제로, 또는 지질 조성물로 투여할 수 있다. 본원에 기술된 방법에서 이용된 조성물은 또한 전신적으로 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 투여 방법은 다양한 인자(예컨대, 투여되는 화합물 또는 조성물 및 치료되는 상태, 질환, 또는 장애의 중증도)에 따라 변할 수 있다. 임의의 주어진 경우에 투여에 가장 적합한 경로는 특수한 억제제, 대상체, 및 질환의 특성 및 중증도 및 대상체의 육체적 상태에 의존할 것이다. 면역 체크포인트 억제제는 수용액으로서 제형화될 수 있으며 피하 주사에 의해 투여될 수 있다.
약제학적 조성물은 용량 당 예정된 양의 면역 체크포인트 억제제를 함유하는 단위 용량형으로 편리하게 나타낼 수 있다. 이러한 단위는 예를 들면 그러나 제한없이 5 mg 내지 5 g, 예를 들면 10 mg 내지 1 g, 또는 20 내지 50 mg을 함유할 수 있다. 본 개시내용에서 사용하기 위한 약제학적으로 허용되는 담체는 예컨대, 치료될 상태 또는 투여 경로에 따라 광범위한 형태를 취할 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물은 목적한 정도의 순도를 가진 항체를 당해 분야에서 전형적으로 사용된 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제(이들 모두는 본원에서 "담체"로서 지칭된다), 즉, 완충화제, 안정화제, 보존제, 등장화제(isotonifier), 비-이온성 세제, 항산화제, 및 다른 다양한 첨가제와 혼합함으로써 동결건조된 제형 또는 수용액으로서 저장하기 위해 제조할 수 있다. 참고: Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed. 1980). 이러한 첨가제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용체에 대해 무독성이어야 한다.
완충제는 생리학적 조건에 거의 근접한 범위에서 pH를 유지시키는데 도움을 준다. 이들은 약 2 mM 내지 약 50 mM의 범위의 농도에서 존재할 수 있다. 본 개시내용과 함께 사용하기에 적합한 완충화제는 유기 및 무기 산 둘 다 및 이의 염, 예를 들면, 시트레이트 완충제(예컨대, 시트르산일나트륨-시트르산이나트륨 혼합물, 시트르산-시트르산삼나트륨 혼합물, 시트르산-시트르산일나트륨 혼합물 등), 석시네이트 완충제(예컨대, 석신산-석신산일나트륨 혼합물, 석신산-수산화나트륨 혼합물, 석신산-석신산이나트륨 혼합물 등), 타르트레이트 완충제(예컨대, 타르타르산-타르트산나트륨 혼합물, 타르트산-타르트산칼륨 혼합물, 타르타르산-수산화나트륨 혼합물 등), 포르메이트 완충제(예컨대, 포름산-푸마르산일나트륨 혼합물, 푸마르산-푸마르산 이나트륨 혼합물, 푸마르산일나트륨-푸마르산이나트륨 혼합물 등), 글루코네이트 완충제(예컨대, 글루콘산-글루콘산나트륨 혼합물, 글루콘산-수산화나트륨 혼합물, 글루콘산-글루콘산칼륨 혼합물 등), 옥살레이트 완충제(예컨대, 옥살산-옥살산나트륨 혼합물, 옥살산-수산화나트륨 혼합물, 옥살산-옥살산칼륨 혼합물 등), 락테이트 완충제(예컨대, 락트산-락트산나트륨, 락트산-수산화나트륨 혼합물, 락트산-락트산칼륨 혼합물 등) 및 아세테이트 완충제(예컨대, 아세트산-아세트산나트륨 혼합물, 아세트산-수산화나트륨 혼합물 등)을 포함한다. 추가로, 인산염 완충제, 히스티딘 완충제 및 트리메틸아민 염, 예를 들면, 트리스(Tris)를 사용할 수 있다.
보존제를 가하여 미생물 성장을 지연시킬 수 있고, 0.2% 내지 1%(w/v) 범위의 양으로 첨가될 수 있다. 본 개시내용과 함께 사용하기에 적합한 보존제는 페놀, 벤질 알코올, 메타-크레졸, 메타-크레졸, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 벤즈알코늄 할라이드(예컨대, 클로라이드, 브로마이드, 및 요오다이드), 헥사메토늄 클로라이드, 및 알킬 파라벤, 예를 들면, 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 사이클로헥산올, 및 3-펜탄올을 포함한다. "안정화제"로서 때때로 공지된 등장화제(isotonicifier)는 본 개시내용의 액체 조성물의 등장성을 보증하기 위해 가해질 수 있으며 다가-당 알코올, 예를 들면, 3가 이상의 당 알코올, 예를 들면, 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만니톨을 포함한다. 안정화제는 증량화제(bulking agent)로부터 치료제를 안정화시키거나 변성을 방지하거나 용기 벽에 부착하는데 도움을 주는 첨가제까지의 기능 범위일 수 있는 광범위한 범주의 부형제를 지칭한다. 대표적인 안정화제는 다가 당 알코올(상기 열거됨); 아미노산, 예를 들면, 아르기닌, 라이신, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 알라닌, 오르니틴, L-루이신, 2-페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌 등, 유기 당 또는 당 알코올, 예를 들면, 락토즈, 트레할로즈, 스타키오즈, 만니톨, 소르비톨, 크실리톨, 리비톨, 미노이니시톨, 갈락티톨, 글리세롤 등, 예를 들면, 사이클리톨, 예를 들면, 이노시톨; 폴리에틸렌 글리콜; 아미노산 중합체; 황 함유 환원제, 예를 들면, 우레아, 글루타티온, 티옥트산, 나트륨 티오글리콜레이트, 티오글리세롤, α-모노티오글리세롤 및 나트륨 티오 설페이트; 저 분자량 폴리펩타이드(예컨대, 10개 이하의 잔기의 펩타이드); 단백질, 예를 들면, 사람 혈청 알부민, 소 혈철 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체(hydrophylic polymer), 예를 들면, 폴리비닐피롤리돈 모노사카라이드, 예를 들면, 크실로즈, 만노즈, 프럭토즈, 글루코즈; 이당류, 예를 들면, 락토즈, 말토즈, 슈크로즈 및 삼당류, 예를 들면, 라피노즈; 및 다당류, 예를 들면, 덱스트란일 수 있다. 안정화제는 활성 단백질 중량부당 0.1 내지 10,000 중량의 범위로 존재할 수 있다.
비-이온성 계면활성제 또는 세제(또한 "습윤제"로서 공지됨)은 치료제를 가용화시키는데 도움을 줄 뿐 아니라 교반-유도된 응집에 대해 치료학적 단백질을 보호하는데 도움을 주기 위해 첨가될 수 있으며, 이는 또한 제형이 단백질의 변성을 유발시키지 않고 스트레스된(stressed) 전단 표면에 노출되도록 한다. 적합한 비-이온성 계면활성제는 폴리소르베이트(20, 80 등), 폴리옥사머(184, 188 등), 플루로닉 폴리올, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노에테르(TWEEN®-20, TWEEN®-80 등)을 포함한다. 비-이온성 계면활성제는 약 0.05 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml, 예를 들면 약 0.07 mg/ml 내지 약 0.2 mg/ml의 범위로 존재할 수 있다.
추가의 다양한 부형제는 증량제(예컨대, 전분), 킬레이팅제(chelating agent)(예컨대, EDTA), 항산화제(예컨대, 아스코르브산, 메티오닌, 비타민 E), 및 공용매(cosolvent)를 포함한다.
본 발명은 또한:
i) 면역 체크포인트 억제제 및
ii) 예를 들면, 후술된 바와 같은 제2의 치료제를 동시, 별도 또는 순차적 용도를 위한 조합 생성물로서 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 "동시 사용"은 단일 및 동일한 약제학적 형태의 본 발명에 따른 조성물의 2개의 화합물의 투여를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "별도의 사용"은 동시에, 별개의 약제학적 형태의 본 발명에 따른 조성물 중 2개의 화합물의 투여를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "순차적인 사용"은 각각 별개의 약제학적 형태의, 본 발명에 따른 조성물 중 2개의 화합물의 연속 투여를 지칭한다.
면역 체크포인트 억제제 및 제2의 치료학적 제제의 조성물은 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제 및/또는 하나 이상의 제2의 치료제의 혼합물로서, 암, 특히 CRRC를 치료하는데 유용한 다른 제제와 함께, 또는 암, 특히 CRC용 다른 치료요법에 대한 보조제로서, 단독으로 투여될 수 있다. 적합한 조합 및 보조 치료요법의 예는 하기에 제공된다.
본원에 기술된 면역 체크포인트 억제제를 함유하는 약제학적 키트(kit)가 본 개시내용에 포함된다. 약제학적 키트는 면역 체크포인트 억제제(예컨대, 동결건조된 형태로 또는 수용액으로서) 및 다음 중 하나 이상을 포함하는 패키지(package)이다:
예를 들면, 후술된 바와 같은 제2의 치료제;
· 면역 체크포인트 억제제를 투여하기 위한 장치, 예를 들면, 펜(pen), 침(needle) 및/또는 주사기; 및
· 억제제가 동결건조된 형태인 경우 억제제를 재현탁시키기 위한 약제학적 등급의 물 또는 완충제.
면역 체크포인트 억제제의 각각의 단위 용량은 별도로 패키지될 수 있으며, 키트(kit)는 하나 이상의 단위 용량(예컨대, 2개의 단위 용량, 3개의 단위 용량, 4개의 단위 용량, 5개의 단위 용량, 8개의 단위 용량, 10개의 단위 용량 또는 그 이상)을 함유할 수 있다. 구체적인 구현예에서, 하나 이상의 단위 용량은 주사기 또는 펜 속에 각각 수용된다.
유효 투여량
면역 체크포인트 억제제는 일반적으로 의도된 결과를 달성하는데 효과적인 양, 예를 들면, 상술한 임의의 방법을 사용함으로써 면역 체크포인트-억제제 반응성 표현형을 나타낸 것으로 확인된 대상체에서 암을 치료하는데 효과적인 양으로 사용될 것이다. 면역 체크포인트 억제제를 포함하는 약제학적 조성물은 치료학적으로 효과적인 투여량에서 이러한 환자(예컨대, 사람 대상체)에게 투여될 수 있다.
용어 "치료학적 유효 투여량"은 대상체에서 목적한 생물학적 반응을 유발하는 활성 화합물 또는 접합체의 양을 의미한다. 이러한 반응은 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화, 질환 또는 질환 자체의 증상의 재발의 억제 또는 지연, 치료 또는 예방의 부재하에서와 비교하여 대상체의 수명에 있어서의 증가, 질환 또는 질환 자체의 증상의 진행에 있어서의 억제 또는 지연을 포함한다. 보다 구체적으로, 본원에 사용된 바와 같은 "치료학적으로 효과적인" 용량은 치료학적 이점을 부여하는 양이다. 치료학적 유효 투여량은 또한 제제의 임의의 독성 또는 유해한 효과보다 치료학적으로 유리한 효과가 더 큰 것이다. CRC 치료요법의 맥락에서, 치료학적 이점은 암의 진행(예컨대, 암의 한 단계로부터 다음 단계로의 진행)을 중단시키거나 지연시키고, 암의 증상 또는 신호의 악화(aggravation) 또는 열화(deterioration)를 중단시키거나 지연시키거나, 암의 중증도를 감소시키거나, 암의 완화를 유도하거나, 종양 세포 증식, 종양 크기, 또는 종양 수를 억제하거나, PG 혈청 수준을 감소시키는 것 중 임의의 하나, 또는 이의 조합을 포함하는, 암의 임의의 완화를 의미한다.
유효량의 측정은 특히 본원에 제공된 상세한 개시내용의 맥락에서, 당해 분야의 기술자의 능력 내에 있다. 화합물 또는 접합체의 독성 및 치료학적 효능은 세포 배양 및 실험 동물에서 표준 약제학적 과정에 의해 측정될 수 있다. 대상체에게 투여될 본 발명의 면역 체크포인트 억제제 또는 다른 치료제의 유효량은 다발 골수종의 단계, 범주 및 상태 및 대상체의 특성, 예를 들면, 일반적인 건강, 연령, 성별, 체중 및 약물 내성에 의존할 것이다. 투여될 본 발명의 면역 체크포인트 억제제 또는 다른 치료제의 유효량은 또한 투여 경로 및 투여량 형태에 의존할 것이다. 투여량 및 간격은 목적한 치료학적 효과를 유지하기에 충분한 활성 화합물의 혈장 수준을 제공하기 위해 개별적으로 조절될 수 있다.
투여될 면역 체크포인트 억제제의 양은 다양한 인자, 예를 들면, 치료되는 암의 특성 및 단계, 투여 형태, 경로 및 부위, 치료학적 요법(예컨대, 다른 치료제가 사용되는지의 여부), 치료되는 특수한 대상체의 연령 및 상태, 면역 체크포인트 억제제에 대해 치료되는 환자의 민감도(sensitivity)에 의존할 것이다. 적절한 용량은 당해 분야의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 궁극적으로, 주치의는 사용될 적절한 투여량을 결정할 것이다. 이러한 투여량은 적절하게 흔히 반복될 수 있다. 부작용이 발달하는 경우 투여량의 양 및/또는 빈도는 정상의 임상 실시에 따라서, 변경되거나 감소될 수 있다. 적절한 투여량 및 치료 요법은 당해 분야의 기술자에게 공지된 통상의 기술을 사용하여 치료요법의 진행을 모니터링함으로써 확립할 수 있다.
유효 투여량은 시험관내 검정으로부터 초기에 확립될 수 있다. 예를 들면, 동물에서 사용하기 위한 초기 용량은 시험관내에서 측정된 바와 같이 상응하는 면역 체크포인트 단백질에 대한 억제제의 결합 친화성 이상인 면역 체크포인트 억제제의 순환하는 혈액 또는 혈청 농도를 달성하기 위해 제형화될 수 있다. 특수한 억제제의 생체이용률을 고려하여 이러한 순환하는 혈액 또는 혈청 농도를 달성하기 위한 순환하는 투여량은 기술자의 능력 내에 있다. 안내를 위해, 독자는 문헌: Fingl & Woodbury, "General Principles" in Goodman and Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Chapter 1, latest edition, Pagamonon Press, 및 이에 인용된 문헌을 참고한다.
초기 투여량은 시험관내 데이타, 예를 들면, 동물 모델로부터 측정할 수 있다. 각각의 암 유형을 치료하기 위한 화합물의 효능을 시험하는데 유용한 동물 모델은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 통상의 기술자는 사람 투여에 적합한 투여량을 측정하기 위한 이러한 정보를 통상적으로 채택할 수 있다.
본원에 기술된 바와 같은 면역 체크포인트 억제제의 유효 용량은 단일(예컨대, 거환(bolus)) 투여, 다중 투여 또는 연속 투여당 약 0.001 내지 약 75 mg/kg, 또는 단일(예컨대, 거환) 투여, 다중 투여 또는 연속 투여 당 0.01 내지 5000 μg/ml의 혈청 농도를 달성하기 위한 범위, 또는 치료되는 상태, 투여 경로 및 대상체의 연령, 체중 및 상태에 따라 임의의 유효 범위 또는 이의 내부 값의 범위일 수 있다. 특정 구현예에서, 각각의 용량은 체중 킬로그램당 약 0.5 μg 내지 약 50 μg, 예를 들면, 체중 킬로그램당 약 3 μg 내지 약 30 μg의 범위일 수 있다.
투여량, 투여 빈도, 및 투여 기간은 환자의 연령, 체중, 및 질환 상태와 같은 다양한 인자에 의존할 것이다. 투여용의 치료학적 요법은 2주 내지 무기한, 2주 내지 6개월, 3개월 내지 5년, 6개월 내지 1 또는 2년, 8개월 내지 18개월 등 동안 지속될 수 있다. 임의로, 치료학적 요법은 반복된 투여, 예컨대, 1일 1회, 1일 2회, 격일, 3일마다, 5일마다, 1주마다, 2주마다, 또는 1개월마다 제공된다. 반복된 투여는 동일한 용량 또는 상이한 용량에서 이루어질 수 있다. 투여는 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회 이상 반복될 수 있다. 면역 체크포인트 억제제의 치료학적 유효량은 단일 요량으로서 또는 치료 요법의 과정에 걸쳐, 예컨대, 1주, 2주, 3주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년 이상의 기간에 걸쳐 투여될 수 있다.
치료학적 방법
본원에 개시된 방법은 이것이 면역치료요법에 반응할 환자를 선택하도록 하므로, 암을 치료하는데 특히 유용하다.
따라서, 본 개시내용의 양태는 면역 체크포인트 억제제를 암 환자에게 투여함을 포함하는, 암의 치료 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 면역 체크포인트 억제제에 대해 반응성인 환자를 선택하는 사전 단계를 포함한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 암을 치료하는데 사용하기 위한 면역 체크포인트 억제제에 관한 것이며, 여기서 상기 용도는 면역 체크포인트 억제제에 대해 반응성인 환자를 선택하는 사전 단계를 포함한다.
따라서, 암을 치료하는데 사용하기 위한 면역 체크포인트 억제제가 본원에 제공되며, 상기 용도는:
a) 본 발명에 따른 방법을 사용하여 면역 체크포인트 억제제에 대해 반응성인 환자를 선택하는 단계를 포함한다.
다른 구현예는 암을 치료하기 위한 의약 제조용의 면역 체크포인트 억제제의 용도에 관한 것이며, 여기서 상기 치료는 면역 체크포인트 억제제에 대해 반응성인 환자를 선택하는 사전 단계를 포함한다.
상기 환자 선택은 상술한 임의의 방법으로 수행된다.
본 개시내용은 또한 암을 앓고 있는 대상체에 대해 면역 체크포인트 억제제 치료를 설계하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은:
a) 상술한 방법에 따른 면역 체크포인트 억제제 반응성 또는 비-반응성 표현형을 측정하는 단계, 및
b) 상기 확인된 면역-체크포인트-억제제 반응성 또는 비-반응성 표현형에 따라 면역 체크포인트 억제제 치료의 용량를 설계하는 단계를 포함한다.
본 개시내용은 또한:
a) 암을 앓고 있는 대상체의 생물학적 샘플로부터 면역 체크포인트 억제제 반응성 또는 비-반응성 표현형의 존재를 본 발명에 따른 방법을 사용하여 측정하는 단계, 및
b) 면역 체크포인트 억제제 치료를 단계 (a)의 결과의 함수로서 조정하는 단계를 포함하는, 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암을 앓고 있는 대상체의 치료 방법에 관한 것이다.
임의로, 단계 (b)에서 측정된 면역 체크포인트 억제제의 용량은 대상체에게 투여된다.
다른 구현예는 암의 치료용 의약을 제조하기 위한 면역 체크포인트 억제제의 용도에 관한 것이며, 상기 용도는:
a) 본 발명에 따른 방법을 사용하여 상기 암을 앓고 있는 대상체의 생물학적 샘플로부터 면역 체크포인트 억제제 반응성 또는 비-반응성 표현형의 존재를 측정하는 단계, 및
b) 면역 체크포인트 억제제 치료를 단계 (a)의 결과의 함수로서 조정하는 단계를 포함한다.
임의로, 단계 (b)에서 측정된 면역 체크포인트 억제제의 용량은 대상체에게 투여된다.
다른 구현예는 암의 치료용 의약을 제조하기 위한 면역 체크포인트 억제제의 용도에 관한 것이며, 상기 치료는:
a) 본 발명에 따른 방법을 사용하여 상기 암을 앓고 있는 대상체의 샘플로부터 면역-체크포인트-억제제 반응성 또는 비-반응성 표현형을 측정하는 단계, 및
b) 면역 체크포인트 억제제 치료를 단계 (a)의 결과의 함수로서 조정하는 단계를 포함한다.
상기 면역-체크포인트-억제제 치료의 조정은:
- 대상체가 면역-체크포인트-억제제 비 반응성인 것으로 확인된 경우 상기 면역-체크포인트-억제제 치료의 감소 또는 억제, 또는
- 대상체가 면역-체크포인트-억제제 반응성인 것으로 확인된 경우 상기 면역-체크포인트-억제제 치료의 지속으로 이루어질 수 있다.
따라서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일반적으로, 이러한 방법은 환자에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 면역-체크포인트-억제제를 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 개시내용은 암의 치료시 사용하기 위한 본원에 기술된 면역 체크포인트 억제제를 제공한다. 본원에 개시된 방법에 따라 치료될 수 있는 암의 예는 암종(carcinoma), 림프종(lymphoma), 아세포종(blastoma), 육종(sarcoma), 및 백혈병(leukaemia) 또는 악성 림프종(lymphoid malignancy)을 포함하나, 이제 한정되지 않는다. 보다 구체적으로, 본 발명에 따른 암은 편평 세포암(squamous cell cancer)(예컨대, 상피 평편 세포암(epithelial squamous cell cancer)), 폐암(lung cancer), 예를 들면, 소-세포 폐암(small-cell lung cancer), 비-소-세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐의 선암종(adenocarcinoma of the lung) 및 폐의 편평 암종(squamous carcinoma of lung), 구강인두암(oropharyngeal cancer), 비인두암(nasopharyngeal cancer), 후두암(laryngeal cancer), 복막의 암(cancer of the peritoneum), 식도암(oesophageal cancer), 간세포암(hepatocellular cancer), 위암(gastric cancer) 또는 위장 암(stomach cancer), 예를 들면, 위장암(gastrointestinal cancer) 및 위장 기질암(gastrointestinal stromal cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 교아세포종(glioblastoma), 뇌암(brain cancer), 신경계 암(nervous system cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 난소암(ovarian cancer), 간암(liver cancer), 방광암(bladder cancer), 요로의 암(cancer of the urinary tract), 간종양(hepatoma), 유방암(breast cancer), 결장암(colon cancer), 직장암(rectal cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 자궁내막 암종(endometrial carcinoma) 또는 자궁 암종(uterine carcinoma), 타액선 암종(salivary gland carcinoma), 콩팥 암(kidney cancer) 또는 신장암(renal cancer), 전립선 암(prostate cancer), 담낭암(gallbladder cancer), 음문 암(vulval cancer), 고환 암(testicular cancer), 갑상선 암(thyroid cancer), 카포시 육종(Kaposi sarcoma), 간 암종(hepatic carcinoma), 항문 암종(anal carcinoma), 음경 암종(penile carcinoma), 비-흑색종 피부 암(non-melanoma skin cancer), 흑색종(melanoma), 피부 흑색종(skin melanoma), 표재 확장성 흑색종(superficial spreading melanoma), 악성 흑색점 암종(lentigo maligna melanoma), 말단 흑자 흑색종(acral lentiginous melanoma), 결절성 흑색종(nodular melanoma), 다발성 골수종(multiple myeloma) 및 B-세포 림프종(B-cell lymphoma)(예를 들면, 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma); 비-호지킨 림프종, 예를 들면, 예컨대, 저 등급/여포성 비-호지킨 림프종(follicular non-Hodgkin's lymphoma: NHL); 소 림프구성(small lymphocytic: SL) NHL; 중간 등급(intermediate grade)/여포성 NHL; 중간 등급 확장성(intermediate grade diffuse) NHL; 고 등급 면역아세포성(high grade immunoblastic) NHL; 고 등급 림프아구성(high grade lymphoblastic) NHL; 고 등급의 소 비-절단된 세포(high grade small non-cleaved cell) NHL; 거대 질환(bulky disease) NHL; 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma); AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom's Macroglobulinemia); 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukaemia: CLL); 급성 림프아구성 백혈병(acute lymphoblastic leukaemia)(ALL); 모발 세포 백혈병(hairy cell leukaemia); 만성 골수아세포 백혈병(chronic myeloblastic leukaemia)(CML); 급성 골수아세포 백혈병(Acute Myeloblastic Leukaemia)(AML); 및 이식후 림프세포증식 질환(post-transplant lymphoproliferative disorder)(PTLD) 뿐만 아니라 모반증과 관련된 비정상적인 혈관 증식(abnormal vascular proliferation associated with phacomatoses), 부종(oedema)(예를 들면, 뇌 종양과 관련된 것), 메이그 증후군(Meigs' syndrome), 뇌 뿐만 아니라 두경부 암(head and neck cancer), 예를 들면, 입술 및 구강암(lip & oral cavity cancer), 및 관련 전이를 포함하는 그룹으로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 상기 암은 폐 암, 입술 및 구강 암, 구인두 암, 비인두 암, 후두암, 전립선 암(prostate cancer), 식도 암, 담낭 암(gallbladder cancer), 간 암, 간세포 암, 위 암 또는 위장 암, 예를 들면, 위장암 및 위장 기질 암, 췌장 암, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 백혈병, 다발 골수종, 카포시 육종(Kaposi sarcoma), 콩팥 암, 방광 암, 결장 암, 직장 암, 결장직장 암, 간세포 암, 간 암종, 항문 암종, 갑상선 암, 비-흑색종 피부 암, 피부 흑색종(skin melanoma), 뇌 암, 신경계 암, 고환 암, 자궁경부 암, 자궁 암, 자궁내막 암, 난소 암, 또는 유방 암이다.
보다 바람직한 구현예에서, 상기 암은 식도 암, 간 암, 간세포 암, 위 암 또는 위장 암, 예를 들면, 위장암 및 위장 기질 암, 췌장 암, 호지킨 림프종, 결장 암, 직장 암, 결장직장 암, 간세포 암, 간 암종, 항문 암종, 비-흑색종 피부 암, 피부 흑색종, 자궁경부 암, 자궁 암, 자궁내막 암, 난소 암, 또는 유방 암이다.
본 면역 체크포인트 억제제가 투여되는 대상체는 바람직하게는 포유동물, 예를 들면, 비-영장류(예컨대, 소(cow), 돼지, 말, 고양이, 개, 랫트 등) 또는 영장류(예컨대, 원숭이 또는 사람)이다. 대상체 또는 환자는 바람직하게는 사람, 예를 들면, 성인 환자 또는 소아청소년 환자이다.
면역 체크포인트 억제제 치료요법에 적합한 환자는 암으로 진단된 환자이다. 암은 임의의 유형 및 임의의 임상 단계 또는 징후일 수 있다. 적합한 대상체는 종양(수술가능하거나 수술가능하지 않은) 환자, 종양이 수술로 제거되거나 절제된 환자, 종양 유전자 내에 돌연변이, 예를 들면, RAS 또는 APC를 수반하는 세포를 포함하는 종양을 지닌 환자, 면역 체크포인트 억제제 치료요법과 함께 또는 이에 부가적으로 암에 대한 다른 치료요법을 받았거나 받는 환자이다. 암에 대한 다른 치료요법은 화학치료적 치료, 방사선 치료요법, 수술적 절제, 및 후술된 바와 같은, 하나 이상의 다른 치료학적 항체를 사용한 치료를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 구현예에 따라서, 본원에 개시된 바와 같은 면역 체크포인트 억제제는 치료학적 유효량으로 전이 암을 예방할 필요가 있는 대상체에게 조성물로서 투여된다. 이러한 대상체는 원발성 암을 지닌 것으로 측정되나 원위(distant) 조직 또는 기관으로 확산된 것으로 밝혀지지 않은 대상체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
여전히 다른 구현예에 따라서, 본원에 개시된 바와 같은 면역 체크포인트 억제제는 치료학적 유효량으로 전이 암의 재발을 예방할 필요가 있는 대상체에게 조성물로서 투여된다. 이러한 대상체는 원발성 또는 전이 암에 대해 이미 치료받고, 이러한 치료 후, 이러한 암이 명백하게 사라진 대상체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 구현예에 따라서, 본원에 개시된 바와 같은 면역 체크포인트 억제제는 치료학적 유효량으로 암 줄기 세포의 성장의 억제가 필요한 대상체에게 조성물로서 투여된다. 이러한 대상체는 이의 성장 또는 전이가 이의 내부에 암 줄기 세포의 존재에 적어도 부분적으로 기여할 수 있는 암을 가진 대상체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 다른 구현예는 이러한 줄기 세포를 이러한 세포의 성장을 예방하거나 억제하는데 효과적인 양의 면역 체크포인트 억제제 조성물과 접촉시킴으로써 암 줄기 세포의 성장을 예방하거나 억제하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있다.
혈청 PG 수준은 또한 암 치료의 효능을 평가하는데 유용하다. 따라서, 본 개시내용은 상기 억제제를 사용하여 암을 치료하는 환자에서 PG 수준을 측정함을 포함하는, 면역 체크포인트 억제제를 사용한 암 치료요법의 효능을 모니터링하는 방법을 제공한다. 암 치료요법의 효능을 모니터링하는 방법은 암에 대해 치료 중인 암 환자에서 본 개시내용의 항-PG 모노클로날 항체를 사용하여 hPG 수준을 반복적으로 측정하는 단계를 포함하며, 상기 치료는 면역 체크포인트 억제제를 투여함을 포함하고, 여기서 치료의 간격에 걸쳐 환자의 순환하는 hPG 수준에 있어서의 감소는 치료 효능의 지표이다. 예를 들면, 환자가 결장직장 암에 대한 치료를 받는 동안 또는 후에 환자의 순환하는 hPG 수준의 제1 측정이 수행된 다음 제2 측정까지 수행될 수 있다. 이후에 2개의 측정을 비교하며, hPG 수준에서의 감소는 치료학적 이점의 지표이다.
면역 체크포인트 억제제 치료요법은 하나 이상의 다른 치료와 조합되거나, 이에 대해 부가적일 수 있다. 다른 치료는 제한 없이, 본원에 기술된 바와 같은, 화학치료적 치료, 방사선 치료요법, 수술적 절개, 및 항체 치료요법을 포함한다.
면역 체크포인트 억제제 치료요법은 다른 치료, 예를 들면, 수술적 절개에 대해 부가적일 수 있다.
본원에 제공된 바와 같은 조합 치료요법은 환자에게 적어도 2개의 제제를 투여함을 포함하며, 이중 첫번째는 본 개시내용의 면역 체크포인트 억제제 조합이고, 이중 두번째는 다른 치료학적 제제이다. 이러한 구현예에 따라서, 본 발명은 암의 치료를 위한, 상술한 면역 체크포인트 억제제에 관한 것이며, 여기서 상기 면역 체크포인트 억제제는 상기 다른 치료제와 함께 투여된다. 면역 체크포인트 억제제 및 다른 치료제는 동시에, 연속적으로, 또는 별도로 투여될 수 있다.
"치료제"는 생물학적 제제, 예를 들면, 항체, 펩타이드, 단백질, 효소, 및 화학치료제를 포함한다. 치료제는 또한 세포-결합제(CBA) 및 화학적 화합물의 면역-접합체, 예를 들면, 항체-약물 접합체(ADC)를 포함한다. 접합체 속의 약물은 본원에 기술된 것과 같은, 세포독성제일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 면역 체크포인트 억제제 및 다른 치료제는 이들이 동일자에, 예를 들면, 동일한 환자가 방문한 동안에 환자에게 투여되는 경우 연속적으로 투여되어야 한다. 연속 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 시간 간격으로 발생할 수 있다. 대조적으로, 본 개시내용의 면역 체크포인트 억제제 및 다른 치료제는 이들이 상이한 날에 환자에게 투여되는 경우 별도로 투여되어야 하는데, 예를 들면, 본 개시내용의 면역 체크포인트 억제제 및 다른 치료제는 1일, 2일 또는 3일, 1주, 2주 또는 달 간격으로 투여될 수 있다. 본 개시내용의 방법에서, 본 개시내용의 면역 체크포인트 억제제의 투여는 다른 치료제의 투여에 앞서 또는 후일 수 있다.
비-제한적인 예로서, 본 면역 체크포인트 억제제 및 다른 치료제는 기간 동안 동시에, 이후 본 개시내용의 면역 체크포인트 억제제와 다른 치료제의 투여가 교대되는 제2 기간 까지 투여될 수 있다.
본 개시내용의 조합 치료요법은 치료학적 이점을 제공하면서, 부가, 또는 상승 효과 이상을 생성할 수 있으며 여기서 면역 체크포인트 억제제 또는 다른 치료제는 단독으로서도, 치료학적으로 유효한 양으로 투여된다. 따라서, 이러한 제제는 부작용의 가능성 및/또는 중증도를 감소시키는, 소량으로 투여될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 다른 치료제는 화학치료제이다. 상기 화학치료제는 바람직하게는 알킬화제, 항-대사제, 항-종양 항생제, 유사분열 억제제, 크로마틴 기능 억제제, 항-혈관형성제, 항-에스트로겐, 항-안드로겐 또는 면역조절인자이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "알킬화제"는 세포 내에서, 임의의 분자, 바람직하게는 핵산(예컨대, DNA)을 가교-결합시키거나 알킬화할 수 있는 임의의 물질을 지칭한다. 알킬화제의 예는 질소 머스타드, 예를 들면, 메클로르에타민, 클로람부콜, 멜팔렌, 클로리드레이트(chlorydrate), 피포브로멘, 프레드니무스틴, 디소딕-포스페이트(disodic-phosphate) 또는 에스트라무스틴; 옥사조포린, 예를 들면, 사이클로포스파미드, 알트레타민, 트로포스파미드, 설포포스파미드 또는 이포스파미드; 아지리딘 또는 이민-에틸렌, 예를 들면, 티오테파, 트리에틸렌아민 또는 알테트라민; 니트로소우레아, 예를 들면, 카르무스틴, 스트렙토조신, 포테무스틴 또는 로무스틴; 알킬-설포네이트, 예를 들면, 부설판, 트레오설판 또는 임프로설판; 트리아젠, 예를 들면, 다카르바진; 또는 백금 복합체, 예를 들면, 시스-백금, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 표현 "항-대사물질"은 특정 활성, 일반적으로 DNA 합성을 방해함으로써 세포 성장 및/또는 물질대사를 차단하는 물질을 지칭한다. 항-대사물질의 예는 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 플록수리딘, 5-플루오로데옥시우리딘, 카펙시타빈, 사이타라빈, 플루다라빈, 사이토신 아라비노시드, 6-머캅토푸린(6-MP), 6-티오구아닌(6-TG), 클로로데속시아데노신, 5-아자사이티딘, 겜시타빈, 클라드리빈, 데옥시코포르마이신 및 펜토스타틴을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "항-종양 항생제"는 DNA, RNA 및/또는 단백질 합성을 예방하거나 억제할 수 있는 화합물이다. 항-종양 항생제의 예는 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 발루비신, 미톡산트론, 닥티노마이신, 미트라마이신, 플리카마이신, 미토마이신 C, 블레오마이신, 및 프로카르바진을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "유사분열 억제제"는 세포 주기 및 유사분열의 정상적인 진행을 방지한다. 일반적으로, 미소관(microtubule) 억제제 또는 탁소이드(taxoid), 예를 들어, 파클리탁셀 및 도세탁셀은 유사분열을 억제할 수 있다. 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid), 예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 및 비노렐빈은 또한 유사분열을 억제할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "크로마틴 기능 억제제" 또는 "토포이소머라제 억제제"는 토포이소머라제 I 또는 토포이소머라제 II와 같이 크로마틴 모델링 단백질의 정상 기능을 억제하는 물질을 지칭한다. 크로마틴 기능 억제제의 예는 토모이소머라제 I의 경우, 캄프토테신 및 이의 유도체, 예를 들면, 토포테칸 또는 이리노테칸, 및 토포이소머라제 II의 경우, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트 및 테니포시드를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항-혈관형성제"는 혈관의 성장을 억제하는 임의의 약물, 화합물, 물질 또는 제제를 지칭한다. 예시적인 항-혈관형성제는 라족신, 마리마스타트, 바티마스타트, 프리노마스타트, 타노마스타트, 일로마스타트, CGS-27023A, 할로푸기논, COL-3, 네오바스타트, BMS-275291, 탈리도미드, CDC 501, DMXAA, L-651582, 스쿠알라민, 엔도스타틴, SU5416, SU6668, 인터페론-알파, EMD121974, 인터류킨-12, IM862, 안지오스타틴 및 비탁신을 포함하나, 어떠한 수단으로도 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항-에스트로겐" 또는 "항-에스트로겐제"는 에스트로겐의 작용을 길항하거나 억제하는 임의의 물질을 지칭한다. 항-에스트로겐제의 예는 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 요오독시펜, 아나스트로졸, 레트로졸, 및 엑세메스탄이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항-안드로겐" 또는 "항-안드로겐제"는 안드로겐의 작용을 감소시키거나, 길항하거나 억제하는 임의의 물질을 지칭한다. 항-안드로겐의 예는 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 스피로놀락톤, 사이프로테론 아세테이트, 피나스테리드 및 시미티딘이다.
본원에 사용된 바와 같은 "면역조절제"는 면역계를 자극하는 물질이다.
면역조절제의 예는 인터페론, 인터류킨, 예를 들면, 알데스류킨, OCT-43, 데니루킨 디플리톡스 및 인터류킨-2, 종양 괴사 인자, 예를 들면, 타소네르민 또는 다른 면역조절제, 예를 들면, 레티난, 시조피란, 로퀴니멕스, 피도티모드, 페가데마제, 티모펜틴, 폴리 I:C 또는 레바미솔을 5-플루오로우라실과 함께 포함한다.
보다 상세하게는, 당해 분야의 기술자는 문헌: "Association Francaise des Enseignants de Chimie Therapeutique"에 의해 편집되고 "Traite de chimie therapeutique", vol. 6, Medicaments antitumouraux et perspectives dans le traitement des cancers, edition TEC & DOC, 2003 표제의 메뉴얼을 참고할 수 있다.
화학제 또는 세포독성제로서, 모든 키나제 억제제, 예를 들면, 게피티닙 또는 에를로티닙이 또한 언급될 수 있다.
보다 일반적으로, 적합한 화학치료제의 예는 1-데하이드로테스토스테론, 5-플루오로우라실 데카르바진, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 악티노마이신 D, 아드리아마이신, 알데스류킨, 알킬화제, 알로푸리놀 나트륨, 알트레타민, 아미포스틴, 아나스트로졸, 안트라마이신(AMC)), 항-유사분열제, 시스-디클로로디아민 플라티늄(II)(DDP) 시스플라틴), 디아미노 디클로로 플라티늄, 안트라사이클린, 항생제, 항대사제, 아스파라기나제, 생 BCG(인트라베시칼), 베타메타손 나트륨 포스페이트 및 베타메타손 아세테이트, 비칼루타미드, 블레오마이신 설페이트, 부설판, 칼슘 루코우오린, 칼리케아미신, 카펙시타빈, 카르보플라틴, 로무스틴(CCNU), 카르무스틴(BSNU), 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 콜치신(Colchicin), 접합된 에스트로겐, 사이클로포스파미드, 사이클로토스파미드(Cyclothosphamide), 사이타라빈, 사이타라빈, 사이토찰라신(cytochalasin) B, 사이톡산, 다카르바진, 닥티노마이신, 닥티노마이신(이전에는 악티노마이신), 다우니루비신 HCL, 다우노룩비신 시트레이트(daunorucbicin citrate), 데니류킨 디프티톡스(denileukin diftitox), 덱스라족산, 디브로모만니톨, 디하이드록시 안트라신 디온, 도세탁셀, 돌라세트론 메실레이트, 독소루비신 HCL, 드로나비놀, 이. 콜라이(E. coli) L-아스파라기나제, 에메틴, 에포에틴-α, 에르위니아(Erwinia) L-아스파라기나제, 에스테르화된 에스트로겐, 에스트라디올, 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨, 에티디움 브로마이드, 에티닐 에스트라디올, 에티드로네이트, 에토포시드 시트로로룸 인자, 에포포시드 포스페이트, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루코나졸, 플루다라빈 포스페이트, 플루오로우라실, 플루타미드, 폴린산, 겜시타빈 HCL, 글루코코르티코이드, 고세렐린 아세테이트, 그라미시딘 D, 그라니세트론 HCL, 하이드록시우레아, 이다루비신 HCL, 이포스파미드, 인터페론 α-2b, 이리노테칸 HCL, 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류프롤리드 아세테이트, 레바미솔 HCL, 리도카인, 로무스틴, 마이탄시노이드, 메클로르에타민 HCL, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란 HCL, 머캅티푸린, 메스나(mesna), 메토트렉세이트, 메틸테스토스테론, 미트라마이신, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 닐루타미드, 옥트레오티드 아세테이트, 온단세트론 HCL, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파미드로네이트 이나트륨, 펜토스타틴, 필로카르핀 HCL, 플리마이신, 카르무스틴 이식체와 함께 폴리페프로산 20, 포르피머 나트륨(porfimer sodium), 프로카인, 프로카르바진 HCL, 프로프라놀롤, 리툭시맙, 사르그라모스팀, 스트렙토조토신, 타목시펜, 탁솔, 테가푸르, 테니포시드, 테노포시드, 테스톨락톤, 테트라카인, 티오에파 클로람부실, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸 HCL, 토레미펜 시트레이트, 트라스투주맙, 트레티노인, 발루비신, 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트, 및 비노렐빈 타르트레이트를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 개시된 면역 체크포인트 억제제는 화학치료제의 조합을 제공받는 결장직장 암에 대한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 화학치료제의 예시적인 조합은 류코보린(폴린산 또는 LV)과 조합된 5-플루오로우라실(5FU); 우라실(UFT) 및 류코보린과 조합된, 카펙시타빈; 우라실(UFT) 및 류코보린과 조합된 테가푸르; 5FU와 조합되거나, 카펙시타빈과 조합된 옥살리플라틴; 카펙시타빈과 조합된 이리노테칸, 5FU와 조합된 미토마이신 C, 이리노테칸 또는 카펙시타빈을 포함한다. 본원에 개시된 화학치료제의 다른 조합의 용도도 또한 가능하다.
관련 분야에 공지된 바와 같이, 상이한 화학치료제의 조합을 사용한 결장직장 암에 대한 화학치료요법의 요법은 임상 시험에서 표준화되었다. 이러한 요법은 흔히 머리글자(acronym)로 알려져 있고 5FU 마요(Mayo), 5FU 로스웰 파크(Roswell Park), LVFU2, FOLFOX, FOLFOX4, FOLFOX6, bFOL, FUFOX, FOLFIRI, IFL, XELOX, CAPOX, XELIRI, CAPIRI, FOLFOXIRI를 포함한다. 예컨대, 문헌: Chau, I., et al., 2009, Br. J. Cancer 100:1704-19 및 Field, K., et al., 2007, World J. Gastroenterol. 13:3806-15를 참고하며, 이들 둘 다는 참고로 포함된다.
면역 체크포인트 억제제는 다른 치료학적 항체와 조합될 수 있다. 따라서, 면역 체크포인트 억제제 치료요법은 상이한 모노클로날 항체, 예를 들면, 제한 없이, 항-EGFR(EGF 수용체) 모노클로날 항체 또는 항-VEGF 모노클로날 항체와 조합될 수 있거나, 이에 대해 부가적으로 투여될 수 있다. 항-EGFR 항체의 구체적인 예는 세툭시맙 및 페니투무맙을 포함한다. 항-VEGF 항체의 구체적인 예는 베바시주맙이다.
이러한 구현예에 따라서, 본 발명은 암의 치료를 위한, 상술한 면역 체크포인트 억제제에 관한 것이며, 여기서 상기 억제제는 화학치료제와 함께 투여된다. 면역 체크포인트 억제제 및 화학치료제는 동시에, 연속적으로, 또는 별도로 투여될 수 있다.
진단 키트(Diagnostic kit)
한가지 양태에서, 본 개시내용은 항-PG 항체(항체 접합체 포함)를 함유하는 진단 키트를 제공한다. 진단 키트는 본 개시내용의 적어도 하나의 항-PG 항체(예컨대, 동결건조된 형태로 또는 수용액으로서) 및 진단 검정을 수행하는데 유용한 하나 이상의 시약(예컨대, 희석제, 항-PG 항체에 결합하는 표지된 항체, 표지된 항체에 대한 적절한 기질, 양성 대조군 및 참고 표준, 음성 대조군으로서 사용하기에 적절한 형태의 PG)을 포함하는 패키지(package)이다. 구체적인 구현예에서, 키트는 2개의 항-PG 항체를 포함하고, 여기서 항체 중 적어도 하나는 항-PG 모노클로날 항체이다. 임의로, 제2 항체는 폴리클로날 항-PG 항체이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 키트는 본원에 기술된 바와 같은 N-말단 항-PG 모노클로날 항체를 포함한다.
항-PG 항체는 상술한 바와 같이, 표지될 수 있다. 일 구현예에서, 본원에 상세히 설명된 바와 같은 항-PG 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 모이어티로 표지되어 제공됨으로써, 이들은 패키지될 수 있고 예를 들면 키트로서, 전술한 항원을 가진 세포를 진단하거나 확인하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 표지의 비-제한적 예는 형광단, 예를 들면, 플루오레세인 이소티오시아네이트; 발색단(chromophore), 방사성핵종, 바이오틴 또는 효소를 포함한다. 이러한 표지된 항-PG 항체는 항원의 조직학적 국재화, ELISA, 세포 분류 뿐만 아니라 PG, 및 예를 들면, 이러한 항원을 지닌 세포를 검출하거나 정량화하기 위한 다른 면역학적 기술에 사용될 수 있다.
대안적으로, 키트는 항-PG 모노클로날 항체에 결합하는 표지된 항원을 포함할 수 있으며 효소에 접합된다. 항-PG 모노클로날 항체 또는 다른 항체가 검출용 효소에 접합되는 경우, 키트는 효소가 필요로 하는 기질 및 보조인자(예컨대, 검출가능한 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체)를 포함할 수 있다. 또한, 다른 첨가제, 예를 들면, 안정화제, 완충제(예컨대, 블록 완충제(block buffer) 또는 분해 완충제(lysis buffer)) 등이 포함될 수 있다. 진단 키트에 포함된 항-hPG 모노클로날 항체는 고체 표면에 고정될 수 있거나, 대안적으로, 항체가 고정될 수 있는 고체 표면(예컨대, 슬라이드)는 키트 내에 포함된다. 다양한 시약의 상대적인 양은 검정의 민감도를 실질적으로 최적화시키는 시약의 용액 속에 농도를 위해 제공하기 위해 광범위하게 변할 수 있다. 항체 및 다른 시약은 일반적으로 동결건조된 무수 분말, 예를 들면, 용해가 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공할 부형제를 제공(개별적으로 또는 함께)할 수 있다.
키트는 진단 방법의 실시를 위한 설명서(예컨대, 프로토콜)를 포함하는 설명 자료를 포함할 수 있다. 설명 자료는 전형적으로 기재되거나 프린트된 자료를 포함할 수 있지만, 이들이 이에 한정되지는 않는다. 이러한 설명서를 저장할 수 있고 이들을 최종 사용자에게 전달할 수 있는 매체가 본 발명에 의해 고려된다. 이러한 매체는 전자 저장 매체(예컨대, 자기 디스크, 테이프, 카트릿지, 칩), 광학 매체(예컨대, CD 롬(ROM)) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 매체는 이러한 설명자료를 제공하는 인터넷 사이트에 대한 주소를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 특성 및 장점은 이의 범례가 하기 나타나 있는 실시예 및 도면의 설명에 연속하여 나타난다.
실시예
본 연구에서, 흑색종을 가진 환자로부터의 43개의 혈장 샘플을 면역 체크포인트 억제제 치료요법을 사용한 치료를 시작하기 전에 혈액 프로가스트린 수준에 대해 시험하였다.
각각의 혈장 EDTA 샘플을 ELISA 검정에서 웰당 50 μL 혈장을 사용하여 2회 시험하였다. 요약하면, 검정은 96-웰 플레이트 상에 예비-코팅된(pre-coated) hPG에 대해 특이적인 포획 항체를 이용한다. hPG는 제WO 2011/083088호에 기술된 하이브리도마 2H9F4B7에 의해 생산된 C-말단 모노클로날 항체 mAb 14로 포획된다(하이브리도마 2H9F4B7은 참고 번호 I-5158 하에, 2016년 12월 27일자로, 프랑스 75724 파리 세덱스 15, 뤼 듀 독테우르 로욱스 25-28 소재의 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르에 부다페스트 조약하게 기탁되어 있다). 웰에 첨가된 표준물 및 샘플 속에 존재하는 hPG를 고정된 포획 항체에 결합시킨다. 웰을 세척하고 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 접합된 항-hPG 검출 항체를 가하여(검출은 N-말단에 대해 특이적인 표지된 폴리클로날 항체를 사용하여 수행한다), 항체-항원-항체 복합체를 생성한다. 2회 세척 후, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB) 기질 용액을 웰에 가하여, 초기 샘플 속에 존재하는 hPG의 양과 직접 비례하는 청색 색상을 생산한다. 정지 용액(stop solution)은 색상을 청색으로부터 황색으로 변화시키고, 황색의 강도는 미세플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 정량화한다.
이러한 환자들을 2개의 그룹으로 분리하였다: 프로가스트린 혈액 수준이 3 pM 미만인 환자(n=21) 및 3 pM 초과인 환자(n=22). 카플란-마이어 생존 분석(Kaplan-Meier survival analysis)을 그래프패드(GraphPad)에서 로그-순위 시험(log-rank test)(Mantel-Cox) 및 게한-브레슬로우-윌콕손 시험(Gehan-Breslow-Wilcoxon test)으로 수행하였다. 그룹 PG<3 pM 및 그룹 PG>3 pM의 중간 생존율은 각각 151일 및 68.5일이었으며 낮은 수준의 PG (PG<3pM)를 지닌 환자의 경우 2.2(1.651 내지 2.758 사이의 비의 95% CI)의 중간 생존률의 증가를 나타내었다.
SEQUENCE LISTING <110> ECS-Progastrin SA <120> PROGASTRIN AS A BIOMARKER FOR IMMUNOTHERAPY <130> IPA201112-FR <150> US 62/635,620 <151> 2018-02-27 <160> 78 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 80 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly Thr Gly 1 5 10 15 Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu Gln Gln Gly Pro Ala 20 25 30 Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val 35 40 45 Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu 50 55 60 Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn 65 70 75 80 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acids 1-14 N-terminal extremity of human progastrin <400> 2 Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly 1 5 10 <210> 3 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acids 55-80 C-terminal extremity of human progastrin <400> 3 Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp 1 5 10 15 Phe Gly Arg 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<213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 12 Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 13 Gln Ser Leu Val His Ser Ser Gly Val Thr Tyr 1 5 10 <210> 14 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 14 Lys Val Ser 1 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 15 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr 1 5 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 16 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr 1 5 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 17 Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr 1 5 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 18 Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 19 Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr 1 5 10 <210> 20 <211> 3 <212> PRT <213> 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Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 71 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 71 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 72 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 72 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 73 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 73 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 74 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 74 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 75 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 75 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 76 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 76 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 77 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 77 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 78 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 78 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (20)

  1. 면역 체크포인트 억제제(immune checkpoint inhibitor)를 사용한 치료에 대해 반응하는데 민감한 암 환자를 선택하기 위한 시험관내(in vitro) 방법으로서, 상기 방법이:
    a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
    b) 상기 샘플 속에서 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합이 환자가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아님을 나타내는 단계를 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 생물학적 샘플 속에서, 적어도 3 pM, 적어도 5 pM, 적어도 10 pM, 적어도 20 pM, 적어도 30 pM의 프로가스트린 농도가 상기 대상체에서 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아닌 암의 존재의 지표인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 방법이:
    c) 참고 샘플 속에서 프로가스트린의 참고 농도를 측정하는 단계,
    d) 상기 생물학적 샘플 속에서 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참고 농도와 비교하는 단계,
    e) 단계 d)의 비교로부터, 상기 환자가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성인지 또는 반응성이 아닌지를 측정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프로가스트린-결합 분자가 항체, 또는 이의 항원-결합 단편인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 N-말단 항-프로가스트린 모노클로날 항체 및 C-말단 항-프로가스트린 모노클로날 항체 중에서 선택되는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 프로가스트린에 결합하는 상기 항체가 다음으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 모노클로날 항체인 방법:
    - 서열 번호 4, 5 및 6의 각각의 아미노산 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 7, 8 및 9의 각각의 아미노산 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 서열 번호 10, 11 및 12의 각각의 아미노산 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 13, 14 및 15의 각각의 아미노산 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 서열 번호 16, 17 및 18의 각각의 아미노산 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 19, 20 및 21의 각각의 아미노산 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 서열 번호 22, 23 및 24의 각각의 아미노산 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 25, 26 및 27의 각각의 아미노산 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 서열 번호 28, 29 및 30의 각각의 아미노산 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 31, 32 및 33의 각각의 아미노산 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 서열 번호 34, 35 및 36의 각각의 아미노산 서열의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 37, 38 및 39의 각각의 아미노산 서열의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 바람직하게는 3개를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체, 및
    - 참고번호 I-5158 하에, 2016년 12월 27일자로 프랑스 75724 파리 세덱스(CEDEX) 15, 뤼 듀 독테우르 로욱스(rue du Docteur Roux) 25-28 소재의 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르(Institut Pasteur)에 기탁된 하이브리도마에 의해 생산된 모노클로날 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 a)의 측정이:
    i) 상기 샘플을 프로가스트린의 제1 부분에 결합하는 제1의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
    ii) 상기 샘플을 프로가스트린의 제2 부분에 결합하는 제2의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 제1의 프로가스트린-결합 분자가 프로가스트린의 C-말단 내의 에피토프(epitope)에 결합하는 방법.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 프로가스트린-결합 분자가 참고번호 I-5158 하에, 2016년 12월 27일자로 프랑스 75724 파리 세덱스 15, 뤼 듀 독테우르 로욱스 25-28 소재의 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르에 기탁된 하이브리도마에 의해 생산된 모노클로날 항체인 방법.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제2의 프로가스트린-결합 분자가 프로가스트린의 N-말단 내의 에피토프에 결합하는 방법.
  11. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2의 프로가스트린-결합 분자가 서열 번호 16, 17 및 18의 각각의 아미노산 서열의 다음 3개의 CDR, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3를 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 19, 20 및 21의 각각의 아미노산 서열의 다음 3개의 CDR, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3를 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체 또는 프로가스트린의 N-말단 내에 에피토프에 결합하는 폴리클로날 항체인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 프로가스트린의 수준이 단계 a)에서 ELISA로 측정되는 방법.
  13. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 프로가스트린의 제1 부분에 결합하는, 제1 분자와, 및 프로가스트린의 제2 부분에 결합하는, 제2 분자와 접촉되는 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 혈액, 혈청 및 혈장 중에서 선택되는 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이, 식도 암(oesophageal cancer), 간 암(liver cancer), 간세포 암(hepatocellular cancer), 위 암(gastric cancer) 또는 위장 암(stomach cancer), 예를 들면, 위장암(gastrointestinal cancer) 및 위장 기질 암(gastrointestinal stromal cancer), 췌장 암, 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma), 결장 암(colon cancer), 직장 암(rectal cancer), 결장직장 암(colorectal cancer), 간세포 암(hepatoma), 간 암종(hepatic carcinoma), 항문 암종(anal carcinoma), 비-흑색종 피부 암(non-melanoma skin cancer), 피부 흑색종(skin melanoma), 자궁경부 암(cervical cancer), 자궁 암(uterine cancer), 자궁내막 암(endometrial cancer), 난소 암(ovarian cancer), 또는 유방 암(breast cancer)인 방법.
  16. 암을 치료하는데 사용하기 위한 면역 체크포인트 억제제로서, 상기 용도가
    a) 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 방법을 사용하여 면역 체크포인트 억제제에 대해 반응성인 환자를 선택하는 이전 단계를 포함하는 면역 체크포인트 억제제.
  17. 암을 치료하는데 사용하기 위한 면역 체크포인트 억제제로서, 상기 용도가:
    a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
    b) 상기 샘플 속에서 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합이 환자가 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이 아님을 나타내는 단계, 및
    c) 면역 체크포인트 억제제 치료를 단계 b)의 결과의 함수로서 조정하는 단계를 포함하는 면역 체크포인트 억제제.
  18. 대상체 내에서 면역 체크포인트 억제제를 사용하여 암 치료를 예측하는 시험관내 방법으로서, 상기 방법이:
    a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
    b) 상기 샘플 속에서 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합이 예후(prognosis)가 음성임을 나타내는 단계를 포함하는 시험관내 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 생물학적 샘플 속에서, 적어도 3 pM, 적어도 5 pM, 적어도 10 pM, 적어도 20 pM, 적어도 30 pM의 프로가스트린의 농도가 음성 예후의 지표인 방법.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 방법이:
    c) 참고 샘플 속에서 프로가스트린의 참고 농도를 측정하는 단계,
    d) 상기 생물학적 샘플 속의 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참고 농도와 비교하는 단계,
    e) 단계 d)의 비교로부터, 면역 체크포인트 억제제를 사용하여 상기 암 치료를 예측하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240025729A (ko) 2022-08-19 2024-02-27 울산대학교 산학협력단 특발성 폐섬유증 환자의 진단 및 예후예측용 신규 바이오마커 VISTA (V-domain immunoglobulin suppressor of T-cell activation)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT3720879T (pt) * 2017-12-05 2022-07-13 Progastrine Et Cancers S A R L Terapia de combinação entre anticorpo anti-progastrina e imunoterapia para tratar o cancro

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
GB8924581D0 (en) 1989-11-01 1989-12-20 Pa Consulting Services Bleaching of hair
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5474896A (en) 1992-05-05 1995-12-12 Institut Pasteur Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof
US5792632A (en) 1992-05-05 1998-08-11 Institut Pasteur Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
ES2304786T3 (es) 1995-04-27 2008-10-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos anti-il-8 humanos, derivados a partir de xenoratones inmunizados.
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
US5830729A (en) 1996-04-18 1998-11-03 Institut Pasteur I Sce I-induced gene replacement and gene conversion in embryonic stem cells
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
DK1500329T3 (da) 1996-12-03 2012-07-09 Amgen Fremont Inc Humane antistoffer, der specifikt binder TNF-alfa
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
WO1998046645A2 (en) 1997-04-14 1998-10-22 Micromet Gesellschaft Für Biomedizinische Forschung Mbh Method for the production of antihuman antigen receptors and uses thereof
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
ATE531812T1 (de) 1997-12-05 2011-11-15 Scripps Research Inst Humanisierung von nager-antikörpern
JP4436130B2 (ja) 2001-09-14 2010-03-24 セレクティス インビトロ直鎖化によるポリヌクレオチドのランダム組込
US20060206949A1 (en) 2003-01-28 2006-09-14 Sylvain Arnould Custom-made meganuclease and use thereof
KR101333168B1 (ko) 2004-09-22 2013-11-28 리셉터 바이오로직스 인크 프로가스트린에 대한 모노클로날 항체
AU2008317354B2 (en) 2007-10-25 2014-04-10 Ospedale San Raffaele S.R.L. Methods and compositions for targeted integration
PT2488551T (pt) * 2009-10-16 2018-10-31 Inst Nat Sante Rech Med Anticorpos monoclonais contra a progastrina e suas utilizações
US8900817B2 (en) 2010-01-08 2014-12-02 Les Laboratories Servier Progastrin and liver pathologies
US8900588B2 (en) 2010-01-08 2014-12-02 Les Laboratories Servier Methods for treating breast cancer
US9217032B2 (en) 2010-01-08 2015-12-22 Les Laboratoires Servier Methods for treating colorectal cancer
PL2550294T3 (pl) 2010-03-24 2020-03-31 Progastrine Et Cancers S.À R.L. Profilaktyka nowotworu jelita grubego i nowotworu przewodu pokarmowego
CA2806157C (en) 2010-07-26 2016-11-22 Les Laboratoires Servier Methods and compositions for liver cancer therapy
EP3397965A1 (en) * 2015-12-31 2018-11-07 Syncerus S.à R.l. Compositions and methods for assessing the risk of cancer occurrence
ES2861587T3 (es) 2015-12-31 2021-10-06 Progastrine Et Cancers S A R L Composiciones y métodos para detectar y tratar el cáncer de esófago
EP3954999A1 (en) 2015-12-31 2022-02-16 Progastrine et Cancers S.à r.l. Compositions and methods for detecting and treating ovarian cancer
JP6909795B2 (ja) 2015-12-31 2021-07-28 プロガストリン、エ、カンセル、エス、アー エル、エルＰｒｏｇａｓｔｒｉｎｅ Ｅｔ Ｃａｎｃｅｒｓ Ｓ．Ａ Ｒ．Ｌ． 胃癌の検出および治療のための組成物および方法
US20190170752A1 (en) * 2016-08-08 2019-06-06 Beigene, Ltd. Method for predicting efficacy of immune checkpoint inhibitors in cancer patients
JP7071994B2 (ja) 2017-03-30 2022-05-19 プロガストリン、エ、カンセル、エス、アー エル、エル 前立腺がんを治療するための組成物および方法
CN110678753B (zh) 2017-03-30 2023-10-24 普莱戈斯瑞恩癌症有限责任公司 用于治疗肺癌的组合物和方法
PT3720879T (pt) * 2017-12-05 2022-07-13 Progastrine Et Cancers S A R L Terapia de combinação entre anticorpo anti-progastrina e imunoterapia para tratar o cancro

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240025729A (ko) 2022-08-19 2024-02-27 울산대학교 산학협력단 특발성 폐섬유증 환자의 진단 및 예후예측용 신규 바이오마커 VISTA (V-domain immunoglobulin suppressor of T-cell activation)

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