CN112368579A - 作为生物标记物的前胃泌素用于免疫疗法 - Google Patents

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Abstract

本文公开了用于选择对免疫检查点抑制剂具有反应的患者的方法。还提供了用免疫检查点抑制剂治疗癌症患者的方法。

Description

作为生物标记物的前胃泌素用于免疫疗法
引言
免疫疗法已经成为癌症疗法领域的重大突破。基于免疫检查点的疗法的发展正在以惊人的速度进行。为了确保并不始终活化免疫炎性反应，一旦肿瘤抗原刺激了反应，多种控制或“检查点”就运行或被活化。这些检查点主要由T细胞受体表示，所述T细胞受体结合周围肿瘤微环境中的细胞上的配体，从而形成免疫突触，然后所述免疫突触调节T细胞的功能。
虽然免疫疗法有希望用于治疗晚期癌症，但是仍然存在许多挑战。通常，仅少部分的患者实现对于疗法的持久长效反应。此外，测量肿瘤反应由于以下事实而变得复杂化，即有反应的患者可能在放射图形图像上最初经历肿瘤大小增加或者似乎发展新的病灶。
癌症免疫疗法的特定挑战是鉴定基于机制的生物标记物，其可以用于选择针对这种治疗的候选人并且指导疾病管控决策(Topalian等人,N Engl J Med,366(26):2443-54(2012))。因此，非常需要标准化且经验证的生物标记物，其在癌症发展的每个阶段产生对于免疫疗法功效的可据以采取行动的见解。除了帮助鉴定可以从可用的疗法受益的患者之外，生物标记物可以用于监测治疗反应。这些指示物还具有解释治疗的作用机制的潜力，这将为优化治疗方法和定义合理的组合疗法提供重要的见解。然而，恶性肿瘤的固有特征(诸如其异质性、可塑性和多样性)对生物标记物发展形成了挑战。
遗传突变是恶性肿瘤的标志，并且是各种各样的癌症的危及生命的特征(诸如不断生长和转移或在体内扩散)的原因。这些突变中的一些与对免疫检查点抑制剂的反应相关联。肿瘤积累的突变数量(被称为肿瘤突变负荷(TMB))本身是生物标记物。最近，已经显示对免疫疗法的反应由肠微生物群的组成决定。这些特征已经用于设计对免疫疗法的结果进行预后的生物标记物，所述生物标记物主要是遗传的(Yan等人,Front Pharmacol.9:10502018)。然而，使用此类生物标记物需要下一代测序，其可能难以在临床实验室中常规地使用。因此，仍然需要可以容易且可靠地用于预测患者对免疫疗法的反应的生物标记物。
发明内容
本公开文本涉及以下发现，即癌症患者的体液中包括前胃泌素在内的某些生物标记物的水平是对用免疫检查点抑制剂进行的治疗有反应的患者的阴性预测物。
因此，在第一方面，本文提供了一种用于选择具有免疫检查点抑制剂反应性或非反应性表型的癌症患者的方法。此方法包括检测前胃泌素结合分子与所述患者的生物样品的结合，其中所述结合指示所述患者对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应，并且因此具有免疫检查点抑制剂非反应性表型。
在本公开文本的另一方面，提供了一种用于患者中不易受用免疫检查点抑制剂进行的治疗影响的癌症的体外诊断的方法。换言之，所述癌症对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应。根据此方法，前胃泌素分子与所述患者的生物样品的结合指示所述癌症对所述治疗没有反应。
本文提供的另一种方法涉及患者中不易受用免疫检查点抑制剂进行的治疗影响的转移性癌症的体外诊断。换言之，所述转移性癌症对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应。根据此方法，前胃泌素分子与所述患者的生物样品的结合指示所述转移性癌症对所述治疗没有反应。
另一方面，本发明涉及一种对患者中用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗进行体外预后的方法。此方法包括检测前胃泌素结合分子与所述患者的生物样品的结合，其中所述结合指示阴性预后。
在这些方法的优选实施方案中，测量所述样品中前胃泌素的水平。所述生物样品中至少3pM、至少5pM、至少10pM、至少20pM、至少30pM的前胃泌素浓度指示用免疫检查点抑制剂进行的治疗不产生显著反应。
另一方面涉及一种用免疫检查点抑制剂治疗癌症的方法。另一方面，还提供了一种用于设计用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗的方法。所述方法均包括通过以上所述的方法中的任一种选择对免疫检查点抑制剂具有反应的患者的先前步骤。
本公开文本还提供了一种适应性调整用免疫检查点抑制剂进行的患者中的癌症治疗的方法。此方法还包括通过以上所述的方法中的任一种测定所述患者的免疫检查点抑制剂反应性或非反应性表型的先前步骤。如果所述患者的表型是非反应性的，则免疫检查点抑制剂治疗的所述适应性调整可以由所述治疗的减少或抑制组成，或者可替代地，如果所述表型是反应性的，则所述适应性调整可以由所述治疗的延续组成。
与本文所述的方法和材料类似或等效的所有方法和材料可以用于本发明的实践或测试中，其中本文描述了合适的方法和材料。除非另外其他指示，否则本发明的实践采用常规技术或蛋白质化学、分子病毒学、微生物学、重组DNA技术和药理学，其在本领域的技术范围内。此类技术在文献中被充分解释(参见例如，Ausubel等人,Short Protocols inMolecular Biology,Current Protocols；第5版,2002；Remington’s PharmaceuticalSciences,第17版,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1985；以及Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press；第3版,2001)。结合本文所述的分子和细胞生物学、蛋白质生物化学、酶学以及医学和药物化学使用的术语以及本文所述的分子和细胞生物学、蛋白质生物化学、酶学以及医学和药物化学的实验室程序和技术是本领域熟知且常用的那些。本文提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献均通过引用以其整体并入。此外，除非另外指定，否则材料、方法和例子仅是说明性的而非旨在是限制性的。
从以下具体实施方式以及从权利要求中，本发明的其他特征和优点将变得清楚。
附图说明
图1：用免疫疗法治疗的黑色素瘤患者的总存活率。在治疗之前测量PG水平。研究中仅包括死亡的患者。
具体实施方式
将根据本文给出的详细描述和附图来更全面地理解本发明，所述详细描述和附图仅以说明的方式给出并且不限制本发明的预期范围。
定义
除非明确定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与化学、生物化学、细胞生物学、分子生物学和医学科学中技术人员通常所理解的相同的含义。
术语“约”或“大约”是指给定值的正常误差范围或本领域技术人员已知的范围。它通常意指在给定值或范围的20％内，诸如10％内或5％(或1％或更小)内。
如本文所用，“给予(administer)”或“给予(administration)”是指将体外存在的物质(例如，本文提供的抗前胃泌素抗体)注射或以其他方式物理地递送到患者中的行为，诸如通过粘膜、皮内、静脉内、肌肉内递送和/或本文所述或本领域已知的任何其他物理递送方法进行递送。在治疗疾病或其症状时，物质的给予通常在疾病或其症状发作之后发生。在预防疾病或其症状时，物质的给予通常在疾病或其症状发作之前发生。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”或“Ig”在本文中可互换使用。这些术语在本文中以最广泛的意义使用，并且特别地覆盖任何同种型(诸如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE)的单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体、嵌合抗体和抗体片段，前提是所述片段保留所需的生物功能。这些术语旨在包括多肽的免疫球蛋白类别内的B细胞的多肽产物，其能够与特定分子抗原结合并且由通过二硫键互相连接的两个相同的多肽链对构成，其中每对具有一条重链(约50-70kDa)和一条轻链(约25kDa)，并且每条链的每个氨基末端部分包括约100个至约130个或更多个氨基酸的可变区，并且每条链的每个羧基末端部分包括恒定区(参见Borrebaeck(编辑)(1995)Antibody Engineering,第二版,Oxford UniversityPress.；Kuby(1997)Immunology,第三版,W.H.Freeman and Company,纽约)。每条重链和轻链的每个可变区由三个互补决定区(CDR，其还被称为高变区)和四个框架(FR，可变结构域的更高度保守部分)构成，所述互补决定区和框架按以下顺序从氨基末端向羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括各种免疫系统细胞(例如，效应细胞)或经典补体系统的第一组分(C1q)。在一些实施方案中，特定分子抗原可以被本文提供的抗体结合，所述本文提供的抗体包括靶前胃泌素多肽、片段或表位。与特定抗原具有反应性的抗体可以由重组方法(诸如噬菌体或类似载体中重组抗体文库的选择)生成，或者通过用抗原或编码抗原的核酸对动物进行免疫来生成。
抗体还包括但不限于合成抗体、单克隆抗体、重组产生的抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、驼源化抗体、嵌合抗体、内抗体、抗独特型(抗Id)抗体和以上任一种的功能片段，所述功能片段是指抗体重链或轻链多肽的一部分，其保留片段所源自的抗体的一些或全部生物功能。本文提供的抗体可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b)。
术语“抗前胃泌素抗体”、“与前胃泌素结合的抗体”、“与前胃泌素表位结合的抗体”和类似术语在本文中可互换使用，并且是指与前胃泌素多肽(诸如前胃泌素抗原或表位)结合的抗体。此类抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体，包括嵌合抗体和人源化抗体。与前胃泌素抗原结合的抗体可以与相关抗原交叉反应。在一些实施方案中，与前胃泌素结合的抗体不与其他抗原(例如像源自胃泌素基因的其他肽或多肽)交叉反应。与前胃泌素结合的抗体可以例如通过免疫测定、BIAcore或本领域技术人员已知的其他技术来鉴定。例如当抗体与前胃泌素的结合亲和力高于与任何交叉反应性抗原的结合亲和力(如使用实验技术(诸如放射免疫测定(RIA)和酶联免疫吸附测定(ELISA))所测定的)时，抗体(例如，与前胃泌素特异性地结合的抗体)与前胃泌素结合。--通常，特异性或选择性反应为背景信号或噪声的至少两倍，并且可以为背景的超过10倍。关于抗体特异性的讨论，参见例如，Paul编辑,1989,Fundamental Immunology Second Edition,Raven Press,纽约，第332-336页。在一些实施方案中，“结合”目的抗原的抗体是一种抗体，其以足够的亲和力结合抗原，使得抗体可用作靶向表达所述抗原的细胞或组织的诊断剂和/或治疗剂，并且不与其他蛋白质显著交叉反应。在此类实施方案中，抗体与“非靶”蛋白的结合程度为抗体与其特定靶蛋白的结合的小于约10％，如通过荧光活化细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀(RIPA)测定的。关于抗体与靶分子的结合，术语与特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性结合”或“特异性地结合”或对于特定多肽或特定多肽靶标上的表位“具有特异性”意指可测量地不同于非特异性相互作用的结合。特异性结合可以例如通过测定与对照分子结合相比的分子结合来测量，对照分子通常是不具有结合活性的类似结构的分子。例如，可以通过与类似于靶标的对照分子(例如，过量的非标记靶标)竞争来测定特异性结合。在这种情况下，如果标记靶标与探针的结合被过量非标记靶标竞争性地抑制，则指示特异性结合。如本文所用的术语与特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性结合”或与特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性地结合”或对于特定多肽或特定多肽靶标上的表位“具有特异性”可以例如通过对于靶标具有如下KD的分子来展现：至少约10-4M、可替代地至少约10-5M、可替代地至少约10- 6M、可替代地至少约10-7M、可替代地至少约10-8M、可替代地至少约10-9M、可替代地至少约10-10M、可替代地至少约10-11M、可替代地至少约10-12M或更大。在一些实施方案中，术语“特异性结合”是指这样的结合，其中分子与特定多肽或特定多肽上的表位结合而基本上不与任何其他多肽或多肽表位结合。在一些实施方案中，与前胃泌素结合的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤0.1nM的解离常数(KD)。
如本文所用，术语“抗原”是指抗体可以选择性地结合的预先确定的抗原。靶抗原可以是多肽、碳水化合物、核酸、脂质、半抗原或其他天然存在或合成的化合物。在一些实施方案中，靶抗原是多肽，包括例如前胃泌素多肽。
术语“抗原结合片段”、“抗原结合结构域”、“抗原结合区”和类似术语是指抗体中包含如下氨基酸残基的部分，所述氨基酸残基与抗原相互作用并且为结合剂赋予对于抗原的特异性和亲和力(例如，互补决定区(CDR))。表述抗体的“抗原结合片段”旨在指示任何肽、多肽或蛋白质，其保留所述抗体的与靶标(通常还被称为抗原，通常是相同表位)结合的能力，并且包含抗体的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基或至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在特定实施方案中，所述抗原结合片段包含其所源自的抗体的至少一个CDR。仍然在优选的实施方案中，所述抗原结合片段包含其所源自的抗体的2、3、4或5个CDR，更优选地6个CDR。
“抗原结合片段”可以选自但不限于Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(对于单链，sc)、Bis-scFv、scFv-Fc片段、Fab2、Fab3、微型抗体(minibodies)、双抗体(diabodies)、三抗体(triabodies)、四抗体(tetrabodies)、和纳米抗体、以及具有无序肽(诸如XTEN(延伸重组多肽))或PAS基序的融合蛋白、和通过化学修饰或通过并入脂质体中增加半衰期的任何片段，所述化学修饰诸如添加聚(亚烷基)二醇(诸如聚(乙烯)二醇)(“PEG化”)(聚乙二醇化片段，被称为Fv-PEG、scFv-PEG、Fab-PEG、F(ab’)2-PEG或Fab’-PEG)(对于聚(乙烯)二醇，“PEG”)，所述片段具有根据本发明的抗体的特征性CDR中的至少一个。优选地，所述“抗原结合片段”由它们所源自的抗体的可变重链或可变轻链的部分序列构成或包含所述部分序列，所述部分序列足以保留与其所来源的抗体相同的对于靶标的结合特异性和对于靶标的足够的亲和力，所述亲和力优选地至少等于其所来源的抗体的亲和力的1/100，以更优选的方式等于至少1/10。此类抗体片段可以见于例如Harlow和Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York(1989)；Myers(编辑),Molec.Biology and Biotechnology:A Comprehensive Desk Reference,New York:VCH Publisher,Inc.；Huston等人,Cell Biophysics,22:189-224(1993)；Plückthun和Skerra,Meth.Enzymol.,178:497-515(1989)以及Day,E.D.,Advanced Immunochemistry,第二版,Wiley-Liss,Inc.,纽约,纽约州(1990)。
如本文所用，术语“结合(binds)”或“结合(binding)”是指分子之间的相互作用，以形成在生理条件下相对稳定的复合物。相互作用可以是例如非共价相互作用(包括氢键、离子键)、疏水性相互作用和/或范德华相互作用。复合物还可以包括通过共价键或非共价键、相互作用或力保持在一起的两个或更多个分子的结合。抗体上的单个抗原结合位点与靶分子(诸如前胃泌素)的单个表位之间的总非共价相互作用的强度是抗体或功能片段对于此表位的亲和力。抗体对于单价抗原的缔和(k1)与解离(k-1)的比率(k1/k-1)是缔和常数K，其是亲和力的量度。K值对于抗体和抗原的不同复合物而言是不同的并且取决于k1和k-1两者。本文提供的抗体的缔和常数K可以使用本文提供的任何方法或本领域技术人员熟知的任何其他方法来测定。一个结合位点处的亲和力并不总是反映抗体与抗原之间的相互作用的真实强度。当含有多个重复抗原决定簇的复合抗原(诸如多价前胃泌素)与含有多个结合位点的抗体接触时，抗体与抗原在一个位点处的相互作用将增加第二个位点处的反应的可能性。多价抗体与抗原之间的此类多个相互作用的强度被称为亲合力。与抗体的单独结合位点的亲和力相比，抗体的亲合力可以是对其结合能力的更好的量度。例如，高亲合力可以补偿低亲和力，如有时对于五聚IgM抗体所发现的，所述五聚IgM抗体可能具有比IgG低的亲和力，但由于IgM的多价而产生的高亲合力使得其能够有效地结合抗原。用于确定两个分子是否进行结合的方法是本领域熟知的，并且包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。在特定实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以一定的亲和力与前胃泌素结合，所述亲和力比其与非特异性分子(诸如BSA或酪蛋白)结合的亲和力大至少两倍。在更特定的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段仅与前胃泌素结合。
如本文所用，术语“生物样品”或“样品”是指从生物来源(诸如患者或受试者)获得的样品。如本文所用的“生物样品”尤其是指整个生物体或其组织、细胞或组分部分的子集(例如，血管，包括动脉、静脉和毛细血管；体液，包括但不限于血液、血清、粘液、淋巴液、滑液、脑脊髓液、唾液、羊水、羊膜脐血、尿液、阴道液和精液)。“生物样品”还是指由整个生物体或其组织、细胞或组分部分的子集或其级分或部分制备的匀浆、裂解物或提取物。最近，“生物样品”是指生物体在其中繁殖的培养基(诸如营养肉汤或凝胶)，其含有细胞组分(诸如蛋白质或核酸分子)。
如本文所用，术语“生物标记物”旨在涵盖用作生物状态的指示物的生物化学特征，并且包括基因(和此类基因的核苷酸序列)、mRNA(和此类mRNA的核苷酸序列)和蛋白质(和此类蛋白质的氨基酸序列)以及蛋白质的翻译后修饰形式(即，磷酸化和非磷酸化形式)。生物标记物可以尤其是指可用于诊断疾病或病症或测量疾病或病症的进展或对于疾病或病症的治疗效果的物质。生物标记物可以是例如与个体的癌症或另一种疾病的存在相关联的核酸、蛋白质或抗体的存在。“生物标记物表达模式”旨在是指诸如与标准物或对照相比，受试者中一种或多种生物标记物的表达的定量或定性总结。
术语“阻断”或其语法等效物在抗体的环境中使用时，是指防止或阻止抗体所结合的抗原的生物活性的抗体。阻断抗体包括与抗原组合而不引发反应，但是阻断另一种蛋白质随后与此抗原组合或复合的抗体。抗体的阻断作用可以是导致抗原的生物活性的可测量变化的作用。
术语“细胞增殖性障碍”和“增殖性障碍”是指与某种程度的异常细胞增殖相关联的障碍。在一些实施方案中，细胞增殖障碍是肿瘤或癌症。如本文所用，“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖(无论恶性或良性)以及所有癌前和癌性细胞和组织。术语“癌症”、“癌性的”、“细胞增殖性障碍”、“增殖性障碍”和“肿瘤”与本文所提及的并不相互排斥。术语“癌症”和“癌性的”是指或描述哺乳动物中典型地以不受调节的细胞生长为特征的生理学病症。如本文所用，“癌症”是由生物体中受损细胞的不希望的生长、侵袭以及在某些条件下转移导致的任何恶性肿瘤。导致癌症的细胞在基因上受损，并且通常已经丧失其控制细胞分裂、细胞迁移行为、分化状态和/或细胞死亡机制的能力。大部分癌症形成肿瘤，但是一些造血癌症(诸如白血病)不形成肿瘤。因此，如本文所用，“癌症”可以包括良性和恶性癌症两者。
“化疗剂”是无论其作用机制如何，可用于治疗癌症的化学剂或生物剂(例如，包括小分子药物或生物物质(诸如抗体或细胞)在内的药剂)。化疗剂包括用于靶向疗法和常规化疗的化合物。化疗剂包括但不限于烷基化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂、染色质功能抑制剂、抗血管生成剂、抗雌激素、抗雄激素或免疫调节剂。
术语“嵌合”抗体是指这样的抗体，其中重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种。在一个实施方案中，“嵌合抗体”是这样的抗体，其中恒定区或其部分被改变、替换或更换，使得可变区与不同物种或属于另一种抗体类别或亚类的恒定区连接。在另一个实施方案中，“嵌合抗体”是指这样的抗体，其中可变区或其部分被改变、替换或更换，使得恒定区与不同物种或属于另一种抗体类别或亚类的可变区连接。
如本文所用，“CDR”是指免疫球蛋白(Ig或抗体)VHβ-折叠框架的非框架区内的三个高变区(H1、H2或H3)中的一个，或者抗体VLβ-折叠框架的非框架区内的三个高变区(L1、L2或L3)中的一个。因此，CDR是散布在框架区序列内的可变区序列。CDR区是本领域技术人员熟知的，并且通过例如Kabat被定义为抗体可变(V)结构域内最大高变性的区域(Kabat等人,J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat,Adv.Prot.Chem.32:1-75(1978))。KabatCDR是以序列可变性为基础的，并且是最常用的(Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,贝塞斯达,马里兰州(1991))。而Chot hia是指结构环的位置(Chothia和Lesk JMol.Bioi.196:901-917(1987))。CDR区序列还通过Chothia在结构上被定义为不是保守β-折叠框架的一部分并且因此能够采取不同构象的那些残基(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。在使用Kabat编号规则编号时，Chothia CDR-H1环的末端根据环的长度在H32与H34之间变化(这是因为Kabat编号方案在H35A和H35B处放置插入；如果35A和35B均不存在，则环在32处终止；如果仅存在35A，则环在33处终止；如果35A和35B均存在，则环在34处终止)。两个术语在本领域中是公认的。CDR区序列还通过AbM、Contact和IMGT定义。AbM高变区表示Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且通过OxfordMolecular的AbM抗体建模软件来使用。“contact”高变区是基于对可用的复杂晶体结构的分析。最近，已经开发并广泛采用了通用编号系统，即ImMunoGeneTic s(IMGT)Information
Figure BDA0002731720040000101
(Lafranc等人,Dev.Comp.Immunol.27(1):55-77(2003))。IMGT通用编号被定义以比较可变结构域，无论抗原受体、链类型或物种如何[Lefranc M.-P.,Immunology Today18,509(1997)/Lef ranc M.-P.,The Immunologist,7,132-136(1999)]。在IMGT通用编号中，保守氨基酸总是具有相同位置，例如半胱氨酸23(第一个CYS)、色氨酸41(保守TRP)、疏水氨基酸89、半胱氨酸104(第二个CYS)、苯丙氨酸或色氨酸118(J-PHE或J-TRP)。IMGT通用编号提供了框架区(FR1-IMGT：第1-26位，FR2-IMGT：第39-55位，FR3-IMGT：第66-104位和FR4-IMGT：第118-128位)和互补决定区(CDR1-IMGT：第27-38位，CDR2-IMGT：第56-65位和CDR3-IMGT：第105-117位)的标准化界定。因为空位代表未占据的位置，所以CDR-IMGT长度(在括号之间显示并且由点分隔开，例如[8.8.13])成为关键信息。IMGT通用编号用于二维图形表示中，被命名为IMGT Colliers de Perles[Ruiz,M.和Lefranc,M.-P.,Immunogenetics,53,857-883(2002)/K aas,Q.和Lefranc,M.-P.,CurrentBioinformatics,2,21-30(2007)]，并且用于IMGT/3Dstructure-DB中的三维结构中[Kaas,Q.,Ruiz,M.和Lefranc,M.-P.,T cell receptor and MHC structuraldata.Nucl.Acids.Res.,32,D208-D210(2004)]。经典抗体可变结构域内的CDR的位置已通过多个结构的比较来确定(Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；Morea等人,Metho ds 20:267-279(2000))。因为高变区内的残基数量在不同抗体中不同，所以相对于经典位置的另外的残基紧挨着在经典可变结构域编号方案中的残基编号常规地用a、b、c等来编号(Al-Lazikani等人,同上(1997))。这种命名法同样是本领域技术人员熟知的。
高变区可以包括如下的“延伸高变区”：在VL中，24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)以及89-97或89-96(L3)，并且在VH中，26-35或26-35A(H1)、50-65或49-65(H2)以及93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每一个，可变结构域残基是根据Kabat等人，同上来编号的。如本文所用，术语“HVR”和“CDR”可互换使用。
如本文所用，“检查点抑制剂”是指靶向免疫检查点并且阻断所述免疫检查点的功能的分子，例如像小分子、可溶性受体或抗体。更特别地，如本文所用的“检查点抑制剂”是能够抑制或以其他方式降低免疫检查点的一种或多种生物活性的分子，例如像小分子、可溶性受体或抗体。在一些实施方案中，免疫检查点蛋白的抑制剂(例如，本文提供的拮抗性抗体)可以例如通过抑制或以其他方式降低表达所述免疫检查点蛋白的细胞(例如，T细胞)的活化和/或细胞信号传导途径，从而相对于在不存在拮抗剂的情况下的生物活性，抑制细胞的生物活性来起作用。免疫检查点抑制剂的例子包括小分子药物、可溶性受体和抗体。
术语“恒定区”或“恒定结构域”是指轻链和重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但是展现出各种效应子功能，诸如与Fc受体的相互作用。所述术语是指相对于免疫球蛋白的其他部分即可变结构域(其含有抗原结合位点)，具有更保守的氨基酸序列的免疫球蛋白分子的部分。恒定结构域含有重链的CH1、CH2和CH3结构域以及轻链的CL结构域。
如本文所用，术语“降低的”是指受试者的生物标记物(例如，前胃泌素)的水平比其参考值低至少1倍(例如，1、2、3、4、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、1000、10,000倍或更多)。当其是指受试者的生物标记物(例如，前胃泌素)的水平时，“降低的”还表示比参考样品中的水平或相对于所述标记物的参考值低至少5％(例如，5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％)。
如本文所用，术语“检测”涵盖定量或定性检测。
如本文所用，术语“可检测探针”或“可检测剂”是指提供可检测信号的组合物。所述术语是指可以用于确定样品或受试者中所需分子(诸如本文提供的抗体)的不存在或存在的物质。可检测剂可以是能够可视化的物质或者以其他方式能够被测定和/或测量(例如，通过定量)的物质。所述术语包括但不限于通过其活性提供可检测信号的任何荧光团、发色团、放射性标记、酶、抗体或抗体片段等。
如本文所用，“诊断”或“鉴定患有……的受试者”是指通过其体征和症状鉴定疾病、病症或损伤的过程。诊断尤其是确定个体是否患有疾病或病痛(例如，癌症)的过程。癌症是例如通过检测与癌症相关联的标记物(例如像前胃泌素)的存在来诊断的。
术语“诊断剂”是指向受试者给予的帮助疾病诊断的物质。此类物质可以用于揭示、定位和/或限定致病过程的定位。在一些实施方案中，诊断剂包括与本文提供的抗体缀合的物质，其在向受试者给予或接触来自受试者的样品时，帮助诊断癌症、肿瘤形成或任何其他细胞增殖性疾病、障碍或病症。
当其关于核酸分子使用时，术语“编码”或其语法等效物是指核酸分子呈其天然状态或当通过本领域技术人员熟知的方法操纵时可以进行转录以产生mRNA，然后翻译成多肽和/或其片段。反义链是这种核酸分子的互补序列，并且可以由此推断编码序列。
药剂(例如，药物配制品)的“有效量”是指在必需剂量下且持续必需的时间段，以有效实现所需治疗或预防结果的量。有效量可以在一次或多次给予、施加或剂量中给予。这种递送取决于多种变量，包括使用个体剂量单位的时间段、药剂的生物利用度、给予途径等。在一些实施方案中，有效量还指实现指定结果(例如，抑制免疫检查点生物活性，诸如调节T细胞活化)的本文提供的抗体的量。在一些实施方案中，此术语是指足以减少和/或改善给定疾病、障碍或病症和/或与其相关的症状的严重性和/或持续时间的疗法(例如，免疫检查点抑制剂)的量。此术语还涵盖用于减少或改善给定疾病、障碍或病症的发展或进展，减少或改善给定疾病、障碍或病症的复发、发展或发作和/或提高或增强另一种疗法(例如，除所述免疫检查点抑制剂之外的疗法)的一种或多种预防或治疗作用所必需的量。在一些实施方案中，抗体的有效量是约0.1mg/kg(mg抗体/kg受试者体重)至约100mg/kg。在一些实施方案中，本文提供的抗体的有效量是约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约70mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg或约100mg/kg(或其中的范围)。
如本文所用，术语“表位”是指抗体所结合的抗原(诸如前胃泌素多肽或前胃泌素多肽片段)的区域。优选地，如本文所用，表位是抗原(诸如前胃泌素多肽或前胃泌素多肽片段)的表面上的局部区域，其能够与抗体的一个或多个抗原结合区域结合并且在动物(诸如哺乳动物(例如，人))中具有能够引发免疫应答的抗原性或免疫原性活性。具有免疫原性活性的表位是在动物中引发抗体反应的多肽的一部分。具有抗原性活性的表位是抗体所结合的多肽的一部分，如通过本领域熟知的任何方法(例如通过免疫测定)测定。抗原表位不一定需要是免疫原性的。表位通常由分子的化学活性表面基团(诸如氨基酸)组成，并且通常具有特定三维结构特征，以及特定电荷特征。在某些实施方案中，表位可以包括作为分子的化学活性表面基团(诸如糖侧链、磷酰基或磺酰基)的决定簇，并且在某些实施方案中可以具有特定三维结构特征和/或特定电荷特征。表位可以由连续残基形成，或者由通过抗原蛋白的折叠而紧密接近的非连续残基形成。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时得以保留，而由非连续氨基酸形成的表位通常在所述暴露下丧失。通常，抗原具有若干或许多不同的表位，并且与许多不同的抗体反应。抗体所结合的表位的确定可以通过本领域技术人员已知的任何表位作图技术进行。
在关于抗体使用时，术语“重链”是指约50-70kDa的多肽链，其中氨基末端部分包括约120至130或更多个氨基酸的可变区并且羧基末端部分包括恒定区。基于重链恒定区的氨基酸序列，恒定区可以是被称为alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)和mu(μ)的五种不同类型中的一种。不同重链的大小不同：α、δ和γ含有大约450个氨基酸，而μ和ε含有大约550个氨基酸。在与轻链组合时，这些不同类型的重链分别产生五种熟知的抗体类别，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，包括四种IgG亚类，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重链可以是人重链。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用并且是指其中已引入外源性核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括初级转化细胞和源自其的后代而不考虑传代次数。后代的核酸含量与亲代细胞可以不完全相同，但是可以含有突变。本文中包括与原始转化细胞中筛选或选择的具有相同的功能或生物活性的突变体后代。
“人源化”抗体是指含有源自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的CDR的残基被来自诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的非人物种(供体抗体)的CDR的具有所需特异性、亲和力和/或能力的残基替换。在一些情况下，骨架区段残基(被称为FR或框架)中的一些可以根据本领域技术人员已知的技术进行修饰以保持结合亲和力(Jones等人,Nature,321:522-525,1986)。在一些实施方案下，人免疫球蛋白的FR残基被相应的非人残基替换。在某些实施方案中，人源化抗体将包含至少一个并且通常两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部CDR对应于非人抗体的CDR，并且全部或基本上全部FR对应于人抗体的FR。人源化抗体任选地可以包含抗体恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。抗体(例如，非人抗体)的“人源化形式”是指已经经历人源化的抗体。人源化的目标是降低异种抗体(诸如鼠抗体)的免疫原性以用于引入到人中，同时维持抗体的完全抗原结合亲和力和特异性。关于进一步的细节，参见例如Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。还参见例如，Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；和美国专利号6,982,321和7,087,409。
如本文所用，在涉及患有病症的受试者时，“鉴定”是指评估受试者并且确定受试者患有病症(例如患有癌症)的过程。
如本文所用，术语“免疫检查点”或“免疫检查点蛋白”是指通过一些类型的免疫系统细胞(诸如T细胞)和一些癌症细胞制备的某些蛋白质。此类蛋白质调节免疫系统的T细胞功能。值得注意的是，它们帮助保持免疫应答受到检查并且可以防止T细胞杀伤癌细胞。所述免疫检查点蛋白通过与特定配体相互作用来实现此结果，所述特定配体将信号发送到T细胞中并且基本上关闭或抑制T细胞功能。这些蛋白质的抑制导致恢复T细胞功能和对于癌细胞的免疫应答。检查点蛋白的例子包括但不限于CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4(属于CD2分子家族并且在所有的NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD 160(还被称为BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、IDO1、A2aR和各种B-7家族配体。
如本文所用，术语“增加的”是指受试者的生物标记物(例如，前胃泌素)的水平比其参考值大至少1倍(例如，1、2、3、4、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、1000、10,000倍或更多)。当其是指受试者的生物标记物(例如，前胃泌素)的水平时，“增加的”还表示比参考样品中的水平或相对于所述标记物的参考值大至少5％(例如，5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％)。
如本文所用，“抑制剂”或“拮抗剂”是指能够抑制或以其他方式降低靶蛋白(诸如以上所述的免疫检查点蛋白中的任一种)的一种或多种生物活性的分子。
“分离的”抗体是已与其天然环境的组分分离的抗体。在一些实施方案中，将抗体纯化至纯度大于95％或99％，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱法(例如，离子交换或逆相HPLC)所测定。对于评估抗体纯度的方法的综述，参见例如，Flatman等人,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
“分离的”核酸是指已与其天然环境的组分分离的核酸分子。分离的核酸包括细胞中含有的核酸分子，所述细胞通常含有所述核酸分子，但是核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置处。
如本文所预期的，生物标记物(例如前胃泌素)的“水平”由样品中(例如从患有癌症的患者采集的样品中)所述预后标记物的定量值组成。在一些实施方案中，所述定量值不由实际测量的绝对值组成，而是由以下最终值组成，所述最终值是由于考虑到在所使用的测定形式的情况下发生的信噪比和/或考虑到用于增加在测定之间癌症标记物的水平的测量值的再现性的校准参考值而产生的。在一些实施方案中，生物标记物(例如前胃泌素)的“水平”表述为任意单位，因为重要的是相同种类的任意单位在(i)测定之间，或(ii)一个患癌患者与其他患者，或(iii)对于同一患者在不同时间段处进行的测定，或(iv)患者的样品中测量的生物标记物水平与预先确定的参考值(其在本文中还被称为“截断”值)之间进行比较。
在关于抗体使用时，术语“轻链”是指约25kDa的多肽链，其中氨基末端部分包括约100至约110或更多个氨基酸的可变区并且羧基末端部分包括恒定区。轻链的大约长度是211至217个氨基酸。基于恒定结构域的氨基酸序列，存在两种不同的类型，其被称为kappa(κ)或lambda(λ)。轻链氨基酸序列是本领域熟知的。轻链可以是人轻链。
如本文所用，“监测疾病进展”是指确定患有疾病或病痛的个体中疾病的严重性或阶段的过程。
如本文所用，术语“单克隆抗体”指由几乎同种的抗体群体产生的抗体，其中除了可能以最小比例发现的少量可能天然存在的突变之外，群体包含相同的抗体。单克隆抗体由单细胞克隆(诸如杂交瘤)的生长产生，并且特征在于一种类别和亚类的重链和一种类型的轻链。
如本文所用，两个核酸或氨基酸序列之间的“同一性百分比”或“％同一性”是指在最佳比对之后获得的待比较的两个序列之间的相同核苷酸或氨基酸残基的百分比，此百分比完全是统计的并且两个序列之间的差异沿其长度随机分布。两个核酸或氨基酸序列的比较传统上通过将其最佳比对之后比较序列来进行，所述比较能够通过区段或通过使用“比对窗口”进行。除了手动比较之外，还可以通过本领域技术人员已知的方法进行用于比较的序列的最佳比对。
对于展现出与参考氨基酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，优选的例子包括含有参考序列、某些修饰(尤其是至少一个氨基酸的缺失、添加或取代)、截短或延伸的那些。在一个或多个连续或非连续氨基酸的取代的情况下，其中取代的氨基酸被“等效”氨基酸替换的取代是优选的。在此，表述“等效氨基酸”意在指示可能取代结构氨基酸中的一个而不改变相应抗体和以下定义的那些特定例子的生物活性的任何氨基酸。等效氨基酸可以根据与它们所取代的氨基酸的结构同源性或根据可能生成的各种抗体之间的生物活性的比较性测试的结果来确定。
如本文所用，术语“多克隆抗体”是指在一种或多种其他不相同抗体之间或在一种或多种其他不相同抗体的存在下产生的抗体。通常，多克隆抗体在产生不相同抗体的若干其他B淋巴细胞的存在下由B淋巴细胞产生。通常，多克隆抗体直接从免疫动物获得。
如本文所用，术语“前胃泌素”是指哺乳动物前胃泌素肽，并且特别地是人前胃泌素。为了避免疑义，在没有任何说明的情况下，表述“人前胃泌素”或“hPG”是指序列SEQ IDNo.1的人PG。人前胃泌素尤其包含N末端结构域和C末端结构域，其在以上提及的生物活性胃泌素激素形式中不存在。优选地，所述N末端结构域的序列由SEQ ID NO.2表示。在另一个优选实施方案中，所述C末端结构域的序列由SEQ ID NO.3表示。
“前胃泌素结合分子”在本文中是指结合前胃泌素但是不结合胃泌素-17(G17)、胃泌素-34(G34)、甘氨酸延伸的胃泌素-17(G17-Gly)或甘氨酸延伸的胃泌素-34(G34-Gly)和C末端侧接肽(CTFP)的任何分子。本发明的前胃泌素结合分子可以是任何前胃泌素结合分子，例如像抗体分子或受体分子。优选地，前胃泌素结合分子是抗前胃泌素抗体(抗hPG抗体)或其抗原结合片段。
如本文所用，“预后”是指预测患有疾病或病痛(例如，癌症)的个体中疾病的可能病程和结果或者个体从疾病(例如，癌症)恢复的可能性的过程。如本文所用，“预后”意指从疾病恢复的可能性或者疾病的可能发展或结果的预测。例如，如果来自受试者的样品对于前胃泌素的存在是阴性的，则此受试者的“预后”好于样品对于前胃泌素是阳性的情况。
如本文所用，术语“参考值”是指参考样品中所考虑的生物标记物(例如，前胃泌素)的表达水平。如本文所用，“参考样品”意指从已知未患疾病的受试者，优选地两个或更多个受试者，可替代地从普通人群获得的样品。生物标记物的合适参考表达水平可以通过测量若干合适的受试者中所述生物标记物的表达水平来确定，并且此类参考水平可以根据特定受试者群体进行调整。参考值或参考水平可以是绝对值；相对值；具有上限或下限的值；值的范围；平均值；中值、均值或与特定对照或基线值相比的值。参考值可以是基于个体样品值，例如像从来自所测试的受试者的样品但是在较早时间点获得的值。参考值可以是基于诸如来自年龄匹配组的受试者群体的较大数量的样品，或者基于包括或排除待测试的样品的样品池。
如本文所用，“反应”是指由于治疗而得到的改善。所述改善可以通过临床症状的观察来检测。应理解，尽管不能排除，但是观察到这种改善并不要求完全地消除所述障碍、病症或与其相关联的症状。患者可以具有的反应类型是完全反应(CR)、部分反应(PR)、进行性疾病(PD)和稳定疾病(SD)。
如本文所用，“选择”是指确定鉴定的患者接受剂以治疗病症(例如，癌症)的发生的过程。选择是基于个体由于例如家族历史、生活方式、年龄、种族或其他因素而对于特定疾病或病症的易感性。
“小分子药物”在本文中广泛地用于是指通常具有小于约1000的分子量的有机、无机或有机金属化合物。本发明的小分子药物涵盖寡肽和具有小于约1000的分子量的其他生物分子。
“可溶性受体”在本文中是指包含受体的细胞外结构域但是不包含其跨膜或胞质结构域的肽或多肽。
可以经受本文所述的方法的“受试者”可以是任一种哺乳动物，包括人、狗、猫、牛、山羊、猪(pig)、猪(swine)、绵羊和猴。人受试者可以被称为患者。在一个实施方案中，“受试者”或“有需要的受试者”是指患有癌症或怀疑患有癌症或已经诊断患有癌症的哺乳动物。如本文所用，“患癌受试者”是指患有癌症或已经诊断患有癌症的哺乳动物。“对照受试者”是指未患癌症并且未怀疑患有癌症的哺乳动物。
如本文所用，“治疗”受试者的疾病或“治疗”患有疾病的受试者是指使受试者经受药物治疗，例如给予药物，使得降低或预防疾病的程度。例如，治疗导致疾病或病症的至少一种体征或症状的减少。治疗包括(但不限于)给予组合物，诸如药物组合物，并且可以预防性地或在开始预防事件之后进行。治疗可能需要给予剂和/或治疗超过一次。
抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。这些结构域通常是抗体中最可变的部分并且含有抗原结合位点。
如本文所用，术语“载体”是指核酸分子，所述核酸分子能够使其所连接的另一核酸增殖。所述术语包括作为自复制核酸结构的载体以及并入宿主细胞的基因组中的载体，将所述载体引入所述宿主细胞中。某些载体能够指导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中被称为“表达载体”。
诊断方法
人前胃泌素原，一种101个氨基酸的肽(氨基酸序列参考号：AAB19304.1)，其为胃泌素基因的初级翻译产物。前胃泌素通过来自前胃泌素原的前21个氨基酸(信号肽)的切割形成。前胃泌素的80个氨基酸链通过切割和修饰酶进一步处理成若干生物活性胃泌素激素形式：胃泌素34(G34)和甘氨酸延伸的胃泌素34(G34-Gly)，其包含前胃泌素的氨基酸38-71；胃泌素17(G17)和甘氨酸延伸的胃泌素17(G17-Gly)，其包含前胃泌素的氨基酸55至71。
前胃泌素(PG)由结直肠肿瘤细胞产生，并且被认为通过触发阻断细胞的正常分化过程(包括导致细胞死亡的那些过程)的信号转导途径来刺激这些细胞的增殖。编码前胃泌素的胃泌素基因转录物的耗尽包括体外和体内癌症模型中肿瘤细胞中的细胞分化和程序性细胞死亡，从而减少肿瘤细胞增殖。虽然不旨在受任何操作理论的约束，但是通过PG的结合，抗hPG抗体被认为阻断或抑制其与一种或多种信号传导配偶体相互作用的能力。这进而抑制结直肠肿瘤细胞中以其他方式导致增殖的信号转导途径。先前已经显示PG是用于诊断癌症的特别有用的工具。参见例如，关于结直肠癌的WO 2011/083088，关于乳腺癌的WO2011/083 090，关于胰腺癌的WO 2011/083 091，关于结直肠癌和胃肠道癌的WO 2011/116954，关于肝病变的WO 2012/013 609和WO 2011/083089，关于卵巢癌的表WO 2017114972，关于食管癌的WO2017114976，关于胃癌的WO 2017114975，关于肺癌的WO 2018178364和关于前列腺癌的WO 2018178352。
本申请现在公开前胃泌素作为对用免疫检查点抑制剂进行的治疗产生反应的可能性的临床上重要的阴性预测标记物。本发明人意外地发现治疗之前液体中可检测的前胃泌素水平指示患者不太可能对疗法产生反应。实际上，发明人发现此类别的患者显示显著降低的总存活率。相比之下，在治疗之前液体中没有可检测的前胃泌素的患者存活两倍之久。
这代表重要且医学上有用的发现。此发现使得能够在治疗之前将患者区分为可能对用免疫检查点抑制剂进行的治疗产生反应的患者组和最不可能产生反应并且因此需要特定和靶向治疗性治疗的患者组。确定患者可能不对用免疫检查点抑制剂进行的治疗产生反应的患者可以帮助医师决定采用更可能对癌症有效的另一种疗法。此诊断工具因此可以使此类患者免于进行具有显著副作用的昂贵治疗，同时确保他们接受在其情况下最有效的疗法。
本发明现在提供了用于体外鉴定易于对免疫疗法产生反应的癌症患者的方法，其中所述方法包括检测来自受试者的生物样品中的前胃泌素。优选地，测定所述样品中前胃泌素的量，从而允许定量前胃泌素。
在第一方面，本发明涉及一种选择具有免疫检查点抑制剂反应性表型的癌症患者的方法，其中所述方法包括检测来自受试者的生物样品中的前胃泌素的步骤。样品中前胃泌素的存在指示患者展示免疫检查点抑制剂非反应性表型。
因此，在第一实施方案中，本发明涉及一种用于选择具有免疫检查点抑制剂反应性或非反应性表型的癌症患者的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
以及
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述患者展示免疫检查点抑制剂非反应性表型。
前胃泌素结合分子的结合可以通过技术人员可用的各种测定来检测。虽然本发明中包括如下详细描述的用于进行测定的任何合适的手段，但是可以特别提及免疫测定，尤其是ELISA。
如本文所用，“免疫检查点抑制剂反应性或非反应性表型”是指受试者对于给予所述免疫检查点抑制剂的反应状态。“反应状态”意指所述受试者(被称为免疫检查点抑制剂(非)反应性表型或(非)反应性受试者或(非)反应性受试者：出于本申请的目的，这些术语基本上是同义的)对于治疗产生或不产生反应。
在根据本发明的方法的更特定的实施方案中，所述生物样品中至少3pM、至少5pM、至少10pM、至少20pM、至少30pM的前胃泌素浓度指示免疫检查点抑制剂非反应性表型。
在另一方面，本发明涉及一种用于选择易于对用免疫检查点抑制剂进行的治疗产生反应的癌症患者的体外方法，其中所述方法包括检测来自受试者的生物样品中的前胃泌素的步骤。易于对用免疫检查点抑制剂进行的治疗产生反应的癌症患者是在给予所述免疫检查点抑制剂时展示免疫检查点抑制剂反应性表型的受试者。因此，样品中前胃泌素的存在指示患者不易于对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应性。
因此，在第一实施方案中，本发明涉及一种用于选择易于对用免疫检查点抑制剂进行的治疗产生反应的癌症患者的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，以及
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述患者对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应。
在一个优选的实施方案中，根据本发明的用于体外选择易于对用免疫检查点抑制剂进行的治疗产生反应的癌症患者的方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的所述生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)确定所述生物样品中的前胃泌素浓度，其中所述生物样品中至少3pM的前胃泌素浓度指示对用免疫检查点抑制剂进行的治疗的反应性不存在。
一旦测定了样品中存在的前胃泌素的浓度，就可以将结果与一个或多个对照样品的结果进行比较，所述一个或多个对照样品是以与测试样品类似的方式获得的，但是来自已知患有癌症并且对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应的一个或多个个体。如果测试样品中前胃泌素浓度显著更高，则可以得出结论，即所述测试样品所源自的受试者对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应的可能性增加。在另一个实施方案中，可以将样品中存在的前胃泌素的浓度与一个或多个对照样品的前胃泌素浓度进行比较，所述一个或多个对照样品是以与测试样品类似的方式获得的，但是来自已知患有癌症并且对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的一个或多个个体。如果测试样品中前胃泌素浓度显著更低，则可以得出结论，即所述测试样品所源自的受试者对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的可能性增加。
因此，在一个更优选的实施方案中，本发明的方法包括以下另外的步骤：
c)确定参考样品中的参考前胃泌素浓度，
d)将所述生物样品中的前胃泌素浓度与所述参考前胃泌素浓度进行比较，
e)由步骤d)的比较来确定所述患者对用免疫检查点抑制剂进行的治疗是否具有反应。
根据另一方面，本发明涉及一种用于体外诊断受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的癌症的方法，其包括确定生物样品中的前胃泌素浓度。更特别地，使所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，其中所述前胃泌素结合分子是抗体或其抗原结合片段。
因此，此实施方案提供了一种用于诊断受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的癌症的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，以及
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述癌症不是对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的癌症。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及一种用于体外诊断受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的癌症的方法，其包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的所述生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)确定所述生物样品中的前胃泌素浓度，其中所述生物样品中至少3pM的前胃泌素浓度指示对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应的癌症的存在。
在根据本发明的方法的更特定的实施方案中，所述生物样品中至少3pM、至少5pM、至少10pM、至少20pM、至少30pM的前胃泌素浓度指示所述受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应的癌症的存在。
在更特定的实施方案中，诊断受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的癌症涉及将在受试者的所述生物样品中测量的前胃泌素浓度与参考样品中的前胃泌素浓度进行比较。
因此，本发明的方法包括以下另外的步骤：
c)确定参考样品中的参考前胃泌素浓度，
d)将所述生物样品中的前胃泌素浓度与所述参考前胃泌素水平或浓度进行比较，
e)由步骤d)的比较诊断所述癌症对用免疫检查点抑制剂进行的治疗是否具有反应。
根据另一方面，本发明涉及一种用于诊断受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的转移性癌症的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，以及
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应的转移性癌症。
在优选的实施方案中，本发明涉及一种用于由受试者的生物样品体外诊断所述受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗具有反应的转移性癌症的方法，其包括以下步骤：
a)使所述生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)通过生物化学测定确定所述生物样品中的前胃泌素水平或浓度，其中所述生物样品中至少3pM的前胃泌素浓度指示所述受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应的转移性癌症的存在。
在根据本发明的方法的更特定的实施方案中，所述生物样品中至少3pM、至少5pM、至少10pM、至少20pM、至少30pM的前胃泌素浓度指示所述受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应的转移性癌症的存在。
在更优选的实施方案中，本发明的方法包括以下另外的步骤：
c)确定参考样品中的参考前胃泌素浓度，
d)将所述生物样品中的前胃泌素浓度与所述参考前胃泌素浓度进行比较，
e)由步骤d)的比较诊断所述癌症对用免疫检查点抑制剂进行的治疗是否具有反应。
根据另一方面，本发明涉及一种用于对受试者中用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗进行体外预后的方法，其包括确定生物样品中的前胃泌素浓度。更特别地，使所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，其中所述前胃泌素结合分子是抗体或其抗原结合片段。
因此，此实施方案提供了一种用于对受试者中用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗进行预后的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，以及
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述预后是阴性的。
在优选的实施方案中，本发明涉及一种用于对受试者中用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗进行体外预后的方法，其包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的所述生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)确定所述生物样品中的前胃泌素浓度，其中所述生物样品中至少10pM的前胃泌素浓度指示阴性预后。
在根据本发明的方法的更特定的实施方案中，所述生物样品中至少3pM、至少5pM、至少10pM、至少20pM、至少30pM的前胃泌素浓度指示阴性预后。
在更优选的实施方案中，对受试者中用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗进行预后涉及将在受试者的所述生物样品中测量的前胃泌素浓度与参考样品中的前胃泌素浓度进行比较。
因此，本发明的方法包括以下另外的步骤：
c)确定参考样品中的参考前胃泌素浓度，
d)将所述生物样品中的前胃泌素浓度与所述参考前胃泌素水平或浓度进行比较，
e)根据步骤d)的比较对所述用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗进行预后。
抗hPG抗体
用于本发明的方法的PG结合分子是结合前胃泌素，包括PG多肽、PG多肽片段或PG表位，但是不结合胃泌素-17(G17)、胃泌素-34(G34)、甘氨酸延伸的胃泌素-17(G17-Gly)或甘氨酸延伸的胃泌素-34(G34-Gly)和C末端侧接肽(CTFP)的分子。优选地，PG结合分子结合人前胃泌素，即由SEQ ID NO 1表示的氨基酸序列的多肽。
在一个实施方案中，PG结合分子是与PG结合的抗体(抗PG抗体)或其抗原结合片段。优选地，所述抗前胃泌素抗体与hPG结合(抗hPG抗体)。
在特定实施方案中，所述前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段选自：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、驼源化抗体、IgA1抗体、IgA2抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgM抗体。
在更具体的实施方案中，本发明的抗PG抗体识别前胃泌素的表位，其中所述表位包含对应于前胃泌素的N末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以包含hPG的残基10至14、hPG的残基9至14、hPG的残基4至10、hPG的残基2至10或hPG的残基2至14，其中hPG的氨基酸序列是SEQ ID N 1。
在更具体的实施方案中，抗PG抗体识别前胃泌素的表位，其中所述表位包含对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以包含hPG的残基71至74、hPG的残基69至73、hPG的残基71至80(SEQ ID N 40)、hPG的残基76至80或hPG的残基67至74，其中hPG的氨基酸序列是SEQ ID N 1。
在更特定的实施方案中，抗PG抗体对前胃泌素具有至少5000nM、至少500nM、100nM、80nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、7nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM、5pM、1pM或至少0.1pM的亲和力，如通过诸如本文所述的那些方法所测定。
在另一个特定实施方案中，与前胃泌素结合的抗体是通过本领域技术人员已知的免疫方法获得的，其中使用如下肽作为免疫原，所述肽的氨基酸序列包含前胃泌素的氨基酸序列的全部或一部分。更特别地，所述免疫原包括选自以下的肽：
·如下肽，所述肽的氨基酸序列包含全长前胃泌素并且特别是SEQ ID N 1的全长人前胃泌素的氨基酸序列或者由其组成，
·如下肽，所述肽的氨基酸序列对应于前胃泌素并且特别是SEQ ID N 1的全长人前胃泌素的氨基酸序列的一部分，
·如下肽，所述肽的氨基酸序列对应于前胃泌素的N末端部分的一部分或N末端部分的全部氨基酸序列，并且特别是包含以下氨基酸序列或者由其组成的肽：SWKPRSQQPDAPLG(SEQ ID N 2)，以及
·如下肽，所述肽的氨基酸序列对应于前胃泌素的C末端部分的一部分或C末端部分的全部氨基酸序列，并且特别是包含以下氨基酸序列或者由其组成的肽：QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN(SEQ ID N 3)，
·如下肽，所述肽的氨基酸序列对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的一部分，并且特别是包含对应于前胃泌素的氨基酸71-80的氨基酸序列FGRRSAEDEN(SEQ ID N40)的肽。
技术人员将认识到，这种免疫可以用于根据需要生成多克隆或单克隆抗体。用于获得这些类型的抗体中的每一种的方法是本领域熟知的。因此，技术人员将容易地选择并实施用于生成针对任何给定抗原的多克隆和/或单克隆抗体的方法。
通过使用包含对应于人前胃泌素的氨基酸序列1-14(N末端)的氨基酸序列“SWKPRSQQPDAPLG”的免疫原生成的单克隆抗体的例子包括但不限于被命名为以下的单克隆抗体：mAb3、mAb4、mAb16和mAb19和mAb20，如以下表1至表4中所述。描述了其他单克隆抗体，但是并不清楚这些抗体是否真的结合前胃泌素(WO 2006/032980)。表位作图的实验结果显示，mAb3、mAb4、mAb16和mAb19和mAb20特异性结合所述hPG N末端氨基酸序列(SEQ IDNO.2)内的表位。特异性识别由SEQ ID NO.2表示的前胃泌素的N末端内的表位的多克隆抗体已经在本领域中进行了描述(参见例如，WO 2011/083088)。
Figure BDA0002731720040000261
Figure BDA0002731720040000271
表1
Figure BDA0002731720040000272
表2
Figure BDA0002731720040000273
Figure BDA0002731720040000281
Figure BDA0002731720040000291
表3
Figure BDA0002731720040000292
Figure BDA0002731720040000301
表4
可以通过使用包含对应于人前胃泌素的氨基酸序列55-80的氨基酸序列“QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN”(前胃泌素的C末端部分)的免疫原生成的单克隆抗体的例子包括但不限于被命名为以下的抗体：在以下表5和表6中的mAb8和mAb13。可以由此生成的单克隆抗体的另一个例子是WO 2011/083088中所述的通过杂交瘤2H9F4B7产生的抗体Mab14。杂交瘤2H9F4B7在布达佩斯条约下于2016年12月27日保藏在法国，75724巴黎CEDEX15，25-28rue du Docteur Roux，巴斯德研究所的CNCM，参考号为I-5158。表位作图的实验结果显示这些抗体确实特异性地结合所述hPG C末端氨基酸序列(SEQ ID NO.3)内的表位。
Figure BDA0002731720040000302
Figure BDA0002731720040000311
Figure BDA0002731720040000321
表5
Figure BDA0002731720040000322
Figure BDA0002731720040000331
表6
其他例子包括通过使用包含SEQ ID N 40的氨基酸序列的免疫原生成的抗hPG单克隆和/或多克隆抗体。
在本发明的方法的更特定的实施方案中，使所述生物样品与抗hPG抗体或其抗原结合片段接触，其中所述抗hPG抗体选自N末端抗hPG抗体和C末端抗hPG抗体。
术语“N末端抗hPG抗体”和“C末端抗hPG抗体”分别指结合包含位于hPG的N末端部分中的氨基酸的表位或包含位于hPG的C末端部分中的氨基酸的表位的抗体。优选地，术语“N末端抗hPG抗体”是指与位于前胃泌素的结构域中的表位结合的抗体，所述前胃泌素的结构域的序列由SEQ ID NO 2表示。在另一个优选的实施方案中，术语“C末端抗hPG抗体”是指与位于前胃泌素的结构域中的表位结合的抗体，所述前胃泌素的结构域的序列由SEQ IDNO 3表示。
在特定实施方案中，所述抗体是选自以下的单克隆抗体：
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 4、5和6或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 4、5和6具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 7、8和9或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 7、8和9具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 10、11和12或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 10、11和12具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 13、14和15或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 13、14和15具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 16、17和18或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 16、17和18具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 19、20和21或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 19、20和21具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 22、23和24或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 22、23和24具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 25、26和27或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 25、26和27具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 28、29和30或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 28、29和30具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地至少三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 31、32和33或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 31、32和33具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，以及
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 34、35和36或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 34、35和36具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 37、38和39或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 37、38和39具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个。
在另一个实施方案中，抗体是由杂交瘤产生的单克隆抗体，所述杂交瘤于2016年12月27日保藏在法国，75724巴黎CEDEX 15，25-28rue du Docteur Roux，巴斯德研究所的CNCM，参考号为I-5158。
在更特定的实施方案中，所述抗体是选自以下的单克隆抗体：
·包含具有氨基酸序列SEQ ID N 41的重链和具有氨基酸序列SEQ ID N 42的轻链的单克隆抗体；
·包含具有氨基酸序列SEQ ID N 43的重链和具有氨基酸序列SEQ ID N 44的轻链的单克隆抗体；
·包含具有氨基酸序列SEQ ID N 45的重链和具有氨基酸序列SEQ ID N 46的轻链的单克隆抗体；
·包含具有氨基酸序列SEQ ID N 47的重链和具有氨基酸序列SEQ ID N 48的轻链的单克隆抗体；
·包含具有氨基酸序列SEQ ID N 49的重链和具有氨基酸序列SEQ ID N 50的轻链的单克隆抗体；以及
·包含具有氨基酸序列SEQ ID N 51的重链和具有氨基酸序列SEQ ID N 52的轻链的单克隆抗体。
在另一个特定实施方案中，本发明的方法中使用的抗体是人源化抗体。人源化的目标是降低异种抗体(诸如鼠抗hPG抗体)的免疫原性以用于引入到人中，同时维持抗体的完全抗原结合亲和力和特异性。本发明的人源化抗体或其片段可以通过本领域技术人员已知的技术(例如像，文献Singer等人,J.Immun.,150:2844-2857,1992中所述的那些)制备。此类人源化抗体由于其在涉及体外诊断或体内预防性和/或治疗性治疗的方法中的用途而是优选的。其他人源化技术也是本领域技术人员已知的。事实上，可以使用多种技术对抗体进行人源化，所述技术包括CDR-移植(EP 0 451 261；EP 0 682 040；EP 0 939 127；EP 0566 647；US 5,530,101；US 6,180,370；US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,639,641；US6,054,297；US 5,886,152；和US 5,877,293)、镶饰或重塑(EP 0 592 106；EP 0 519 596；Padlan E.A.,1991,Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka G.M.等人,1994,Protein Engineering7(6):805-814；Roguska M.A.等人,1994,Proc.Natl.Acad.ScLU.S.A.,91:969-973)和链改组(美国专利号5,565,332)。人抗体可以通过本领域已知的各种方法(包括噬菌体展示方法)制备。还参见，美国专利号4,444,887、4,716,111、5,545,806和5,814,318；以及国际专利申请公开号WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741。
在更特定的实施方案中，所述抗体是选自以下的人源化抗体：
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 4、5和6或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 4、5和6具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 7、8和9或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 7、8和9具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 10、11和12或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 10、11和12具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 13、14和15或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 13、14和15具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 16、17和18或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 6、17和18具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 19、20和21或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 19、20和21具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 22、23和24或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 22、23和24具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 25、26和27或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 25、26和27具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 28、29和30或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 28、29和30具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 31、32和33或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 31、32和33具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，以及
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN 34、35和36或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 34、35和36具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 37、38和39或在最佳比对之后分别与序列SEQ ID N 37、38和39具有至少80％、优选地85％、90％、95％和98％同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
其中所述抗体还包含源自人抗体的轻链和重链的恒定区。
在另一个更特定的实施方案中，所述抗体是选自以下的人源化抗体：
·包含具有氨基酸序列SEQ ID N 53的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID N54的轻链可变区的人源化抗体；
·包含具有氨基酸序列SEQ ID N 55的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID N56的轻链可变区的人源化抗体；
·包含具有选自SEQ ID N 57、58和59之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N 60、61和62之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；
·包含具有选自SEQ ID N 63、64和65之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N 66、67和68之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；
·包含具有选自SEQ ID N 69和71之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N 70和72之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；以及
·包含具有选自SEQ ID N 75和76之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N 77和78之间的氨基酸序列的轻链可变区的人源化抗体；
其中所述抗体还包含源自人抗体的轻链和重链的恒定区。
本文还包括抗hPG抗体，其衍生化、共价修饰或与其他分子缀合，以用于诊断性和治疗性应用。例如但不限于，衍生化抗体包括例如通过以下进行修饰的抗体：糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/封闭基团的衍生化、蛋白水解切割、与细胞配体或其他蛋白质的连接等。可以通过已知技术进行许多化学修饰中的任一种，所述技术包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素(tunicamycin)的代谢合成等。另外，衍生物可以含有一种或多种非经典氨基酸。
在另一个例子中，本公开文本的抗体可以附接至聚(乙二醇)(PEG)部分。在具体实施方案中，所述抗体是抗体片段，并且PEG部分通过位于抗体片段中的任何可用的氨基酸侧链或末端氨基酸官能团(例如任何游离氨基、亚氨基、硫醇、羟基或羧基)附接。此类氨基酸可以天然存在于抗体片段中，或者可以使用重组DNA方法工程化成片段。参见，例如美国专利号5,219,996。多个位点可以用于附接两个或更多个PEG分子。PEG部分可以通过位于抗体片段中的至少一个半胱氨酸残基的硫醇基团共价连接。在使用硫醇基团作为附接点的情况下，可以使用适当活化的效应子部分，例如硫醇选择性衍生物(诸如马来酰亚胺和半胱氨酸衍生物)。
在具体例子中，抗hPG抗体缀合物是经修饰的Fab'片段，其例如根据EP0948544中公开的方法进行PEG化，即具有与其共价附接的PEG(聚(乙二醇))。还参见Poly(ethyleneglycol)Chemistry,Biotechnical and Biomedical Applications,(J.MiltonHarris(编辑),Plenum Press,New York,1992)；Poly(ethyleneglycol)Chemistry andBiological Applications,(J.Milton Harris和S.Zalipsky,编辑,American ChemicalSociety,Washington D.C.,1997)；以及Bioconjugation Protein Coupling Techniquesfor the Biomedical Sciences,(M.Aslam和A.Dent,编辑,Grove Publishers,New York,1998)；以及Chapman,2002,Advanced Drug Delivery Reviews 54:531-545。PEG可以附接至铰链区中的半胱氨酸。在一个例子中，PEG修饰的Fab'片段具有共价连接到经修饰的铰链区中的单个硫醇基团的马来酰亚胺基团。赖氨酸残基可以与马来酰亚胺基团共价连接，并且具有大约20,000Da的分子量的甲氧基聚(乙二醇)聚合物可以附接至赖氨酸残基上的每一个胺基团。因此，附接至Fab'片段的PEG的总分子量可以是大约40,000Da。
抗hPG抗体包括可用于诊断性应用的经标记的抗体。所述抗体可以诊断性地用于例如检测特定细胞、组织或血清中目的靶的表达；或监测免疫应答的发展或进展作为例如测定给定治疗方案的功效的临床测试程序的一部分。可以通过将抗体偶联到可检测物质或“标记”来促进检测。标记可以直接或间接缀合至本公开文本的抗hPG抗体。标记本身可以是可检测的(例如，放射性同位素标记、同位素标记或荧光标记)，或在酶标记的情况下，可以催化可检测的底物化合物或组合物的化学改变。可检测物质的例子包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性材料、使用各种正电子发射断层扫描的正电子发射金属以及非放射性顺磁性金属离子。可检测物质可以直接与抗体(或其片段)偶联或缀合，或者使用本领域已知的技术通过中间体(例如像本领域已知的接头)间接地与所述抗体(或其片段)偶联或缀合。酶标记的例子包括萤光素酶(例如，萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶；美国专利号4,737,456)、荧光素、2,3-二氢酞嗪二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶诸如辣根过氧化物酶(HRPO)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、糖化酶、溶菌酶、糖类氧化酶(例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等。合适的辅基复合物的例子包括链酶亲和素/生物素和亲和素/生物素；合适的荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯、二甲胺-1-萘磺酰氯或藻红蛋白等；发光材料的例子包括鲁米诺；生物发光材料的例子包括萤光素酶、荧光素和水母发光蛋白；合适的同位素材料的例子包括13C、15N和氘；并且合适的放射性材料的例子包括125I、131I、111In或99Tc。
使用抗hPG抗体检测前胃泌素
前胃泌素结合分子(例如像抗PG抗体)可用于依赖于PG检测的应用，诸如鉴定易于对免疫检查点抑制剂疗法产生反应的受试者。因此，前胃泌素结合分子(包括抗PG抗体)可以用于本文所述的任何方法中。通常，所述方法包括使用本公开文本的抗hPG抗体测量从患者获得的样品中的前胃泌素，其中样品中至少3pM、至少5pM、至少10pM、至少20pM、至少30pM的前胃泌素测量值指示对于免疫检查点抑制剂疗法的反应性不存在。可以在例如血液、血清、血浆、组织和/或细胞的样品中测量前胃泌素。hPG检测可以使用本领域已知和/或本文所述的测定来进行，所述测定诸如ELISA、夹心ELISA、免疫印迹法(蛋白质印迹法)、免疫沉淀、BIAcore技术等。
如本文所指出，前胃泌素仅是由胃泌素基因产物的翻译后加工产生的多种不同多肽中的一种。本文所述的诊断、监测和其他方法特异性地检测hPG而不是其他胃泌素基因产物，包括降解产物。前胃泌素的水平可以通过本领域技术人员已知的任何方法来测量。
优选地，确定样品中的前胃泌素水平包括使所述样品与前胃泌素结合分子接触，并且测量所述前胃泌素结合分子与前胃泌素的结合。
当在蛋白质水平下测量表达水平时，它可以尤其使用特异性前胃泌素结合分子(例如像抗体)，特别地使用熟知的技术(诸如使用生物素化的细胞膜染色或其他等效技术)，接着用特异性抗体进行免疫沉淀、蛋白质印迹、ELISA或ELISPOT、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫组织化学(IHC)、免疫荧光(IF)、抗体微阵列或组织阵列偶联免疫组织化学来进行。其他合适的技术包括FRET或BRET，单细胞显微镜检或使用单个或多个激发波长并应用任何适合的光学方法(诸如电化学方法(伏安法和电流法技术))的组织化学方法，原子力显微镜检和射频方法(例如多极共振谱)，荧光、发光、化学发光、吸光度、反射率、透射率和双折射率或折射率的共焦和非共焦检测(例如，表面等离子共振、椭圆偏振法、共振镜面法、光栅耦合器波导法或干涉测量法)，细胞ELISA，流式细胞术，放射性同位素，磁共振成像，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析；HPLC-质谱；液相色谱/质谱/质谱(LC-MS/MS)。所有这些技术是本领域熟知的并且不需要在此进一步详细描述。这些不同的技术可以用于测量前胃泌素水平。
本发明的前胃泌素结合分子、尤其是抗前胃泌素抗体特别可用于免疫测定。所述免疫测定可以是酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫扩散测定、或免疫检测测定(诸如表面等离子体电阻测定(例如，
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测定)、ELISPOT、狭缝印迹(slot-blot)或蛋白质印迹)。关于此类技术的一般指导，参见例如，Ausubel等人(编辑)(1987)在“Current Protocols in Molecular Biology”John Wiley and Sons,纽约,纽约州中。
抗体是用于医学、兽医和其他免疫检测领域的多种测定技术中的关键试剂。此类测试包括许多常规使用的免疫测定技术，例如像酶联ELISA、RIA、IHC和IF测定。前胃泌素水平优选地通过本领域技术人员已知的任何方法，使用针对所述蛋白质的抗体来测定。优选地，使用免疫酶测定优选基于选自RIA和ELISA的技术用至少一种前胃泌素结合分子测定前胃泌素水平。最优选地，通过ELISA用至少一种前胃泌素结合分子来测定所述水平。更优选地，使用免疫酶测定、最优选ELISA测定，用一种前胃泌素结合分子测量前胃泌素水平。
在特别可用的实施方案中，本文公开的方法包括使用免疫酶测定，优选地基于选自RIA和ELISA的技术用前胃泌素结合分子确定来自受试者的生物样品中的前胃泌素水平。
通常，用于使用抗hPG抗体确定hPG水平的ELISA程序如下。准备结合已知量的hPG的第一“捕获”抗体的表面，诸如96孔板的孔。捕获抗体可以是例如与hPG的C末端或N末端结合的抗hPG抗体。在封闭之后，将测试样品施加到表面上，接着孵育一段时间。然后洗涤表面以去除未结合的抗原，并且施加含有hPG的第二“检测”抗体的溶液。检测抗体可以是本文所述的抗hPG抗体中的任一种，前提是检测抗体结合来自捕获抗体的不同表位。例如，如果捕获抗体结合hPG的C末端肽区域，则合适的检测抗体是结合hPG的N末端肽区域的抗体。可替代地，如果捕获抗体结合hPG的N末端肽区域，则合适的检测抗体是结合hPG的C末端肽区域的抗体。然后可以直接(如果例如检测抗体与可检测标记缀合)或间接(通过结合检测抗hPG抗体的标记的二级抗体)检测前胃泌素水平。
在具体实施方案中，如下测量来自测试样品的hPG水平。向96孔微量滴定板涂覆0.5与10μg/mL之间的兔C末端抗hPG多克隆抗体并孵育过夜。然后将板在PBS-Tween(0.05％)中洗涤三次，并且用在PBS-Tween(0.05％)中2％(w/v)脱脂干燥牛奶封闭。分别在适当的稀释剂(例如，PBS-Tween 0.05％)中制备测试样品、对照样品(空白或PG阴性血浆或血清样品)和约5pM(0.5x 10-11M)与约0.1nM(1x10-10 M)之间的hPG参考标准物(在PG阴性血浆或血清中稀释的冻干的hPG)。将样品在经涂覆的板上在37℃下孵育2与4小时之间或可替代地在21℃下孵育12与16小时之间。在孵育之后，将板用PBS-Tween(0.05％)洗涤三次，并且在21℃下用0.001与0.1μg/mL之间的如本文所述的偶联到辣根过氧化物酶(HRP)的N末端抗hPG单克隆抗体孵育(Nakane等人,1974,J.Histochem.Cytochem.22(12):1084-1091)30分钟。然后将板用PBS-Tween(0.05％)洗涤三次，并且在21℃下添加HRP底物，持续15分钟。通过添加100μL的0.5M硫酸使反应停止，并且在405nm处取光密度测量值。通过与由源自hPG参考标准物的测量值构建的标准曲线进行比较来测定测试样品hPG水平。
在第一实施方案中，根据本发明的方法包括使生物样品与结合hPG的表位的抗hPG抗体接触，其中所述表位位于hPG的C末端部分内或位于hPG的N末端部分内。
在更具体的实施方案中，根据本发明的方法包括使生物样品与结合hPG的表位的抗hPG抗体接触，其中所述表位包含对应于前胃泌素的N末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，所述氨基酸序列选自对应于hPG的氨基酸10至14、hPG的氨基酸9至14、hPG的氨基酸4至10、hPG的氨基酸2至10和hPG的氨基酸2至14的氨基酸序列，其中hPG的氨基酸序列是SEQ IDN 1。
在更具体的实施方案中，根据本发明的方法包括使生物样品与结合hPG的表位的抗hPG抗体接触，其中所述表位包含对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，所述氨基酸序列选自对应于hPG的氨基酸71至74、hPG的氨基酸69至73、hPG的氨基酸71至80(SEQ ID N 40)、hPG的氨基酸76至80和hPG的氨基酸67至74的氨基酸序列，其中hPG的氨基酸序列是SEQ ID N 1。
在本发明的检测PG的方法的特定实施方案中，所述方法包括使来自受试者的生物样品与结合前胃泌素的第一部分的第一分子和与结合前胃泌素的第二部分的第二分子接触的步骤。在更特定的实施方案中，其中所述前胃泌素结合分子是抗体，使来自受试者的生物样品与结合前胃泌素的第一表位的抗体和与结合前胃泌素的第二表位的第二抗体接触。
根据一个优选的实施方案，所述第一抗体结合不溶性或部分可溶性载体。所述第一抗体结合前胃泌素导致捕获来自所述生物样品的前胃泌素。优选地，所述第一抗体是结合hPG的表位的抗体，其中所述表位包含对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，如上所述。更优选地，所述第一抗体是WO 2011/083088中所述的通过杂交瘤2H9F4B7产生的单克隆抗体Mab14。杂交瘤2H9F4B7在布达佩斯条约下于2016年12月27日保藏在法国，75724巴黎CEDEX 15，25-28rue du Docteur Roux巴斯德研究所的CNCM，参考号为I-5158。
根据另一个优选的实施方案，所述第二抗体用可检测部分标记，如下所述。第二抗体结合前胃泌素使得能够检测生物样品中存在的前胃泌素分子。此外，第二抗体结合前胃泌素使得能够定量生物样品中存在的前胃泌素分子。优选地，所述第二抗体是结合hPG的表位的抗体，其中所述表位包含对应于前胃泌素的N末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，如上所述。更优选地，所述N末端抗体是多克隆抗体，如上所述。可替代地，可以使用结合前胃泌素的N末端内的表位的单克隆抗体，例如像以上所述的N末端单克隆抗体，尤其是包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别氨基酸序列SEQ ID N 16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID N 19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一个特别优选的实施方案中，第一抗体结合不溶性或部分可溶性载体，并且第二抗体用可检测部分标记。
在一个优选的实施方案中，本发明的用于诊断肺癌的方法包括检测来自人受试者的生物样品中的前胃泌素。
免疫检查点抑制剂
在第一实施方案中，免疫检查点抑制剂是以下中的任一种的抑制剂：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4(属于CD2分子家族并且在所有的NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD 160(还被称为BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、IDO1、A2aR和各种B-7家族配体中的任一种。
示例性免疫检查点抑制剂包括抗CTLA-4抗体(例如，伊匹单抗)、抗LAG-3抗体(例如，BMS-986016)、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗Tim3抗体(例如，TSR-022、MBG453)、抗BTLA抗体、抗KIR抗体、抗A2aR抗体、抗CD200抗体、抗PD-1抗体(例如，派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、匹地利珠单抗)、抗PD-L1抗体(例如，阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、BMS936559)、抗VISTA抗体(例如，JNJ 61610588)、抗CD28抗体、抗CD80或CD86抗体、抗B7RP1抗体、抗B7-H3抗体、抗HVEM抗体、抗CD137抗体(例如，乌瑞鲁单抗)、抗CD137L抗体、抗OX40(例如，9B12、PF-04518600、MEDI6469)、抗OX40L抗体、抗CD40或CD40L抗体、抗GAL9抗体、抗IL-10抗体、PD-1配体(例如，PDL-1或PD-L2)的细胞外结构域与IgG1的融合蛋白(例如，AMP-224)、OX40配体(例如，OX40L)的细胞外结构域与IgG1的融合蛋白(例如，MEDI6383)、IDO1药物(例如，艾卡哚司他(epacadostat))和A2aR药物。多种免疫检查点抑制剂已经被批准或当前正用于临床试验。此类抑制剂包括伊匹单抗、派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、匹地利珠单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、BMS 936559、JNJ 61610588、乌瑞鲁单抗、9B12、PF-04518600、BMS-986016、TSR-022、MBG453、MEDI6469、MEDI6383和艾卡哚司他。
免疫检查点抑制剂的例子例如在以下中列出：Marin-Acevedo等人,Journal ofHematology&Oncology 11:8,2018；Kavecansky和Pavlick,AJHO 13(2):9-20,2017；Wei等人,Cancer Discov 8(9):1069–86,2018。
优选地，免疫检查点抑制剂是CTLA-4、LAG-3、Tim3、PD-1、PD-L1、VISTA、CD137、OX40或IDO1的抑制剂。
在一些实施方案中，抑制剂是小分子药物。在一些实施方案中，抑制剂是可溶性受体。在一些实施方案中，抑制剂是抗体。
在一些实施方案中，抑制剂是拮抗性抗体，即抑制或降低抗原(诸如本文所述的任一种免疫检查点蛋白)的一种或多种生物活性的抗体。某些拮抗性抗体基本上或完全抑制所述抗原的一种或多种生物活性。术语“抑制”或其语法等效物在抗体的环境中使用时，是指抑制、约束或降低抗体所结合的抗原的生物活性的抗体。抗体的抑制性作用可以是导致抗原的生物活性的可测量变化的作用。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂选自伊匹单抗、派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、匹地利珠单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、BMS 936559、JNJ61610588、乌瑞鲁单抗、9B12、PF-04518600、BMS-986016、TSR-022、MBG453、MEDI6469、MEDI6383和艾卡哚司他。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4、PD-1或PD-L1的抑制剂。在一个优选的实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4、PD-1或PD-L1中的任一种的抗体。更优选地，所述抗体是拮抗剂抗体。甚至更优选地，所述拮抗剂抗体选自伊匹单抗、派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、匹地利珠单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗和德瓦鲁单抗。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在一个优选的实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是针对PD-1的抗体。更优选地，所述抗体是拮抗剂抗体。甚至更优选地，免疫检查点抑制剂是派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗或匹地利珠单抗。
核酸和表达载体
本公开文本涵盖编码抗体，尤其是抗hPG抗体的免疫球蛋白轻链和重链基因的多核苷酸，包含此类核酸的载体，以及能够产生本公开文本的抗体的宿主细胞。
在第一方面，本发明涉及一种或多种编码抗体，尤其是如上所述的能够与前胃泌素特异性地结合的抗体的多核苷酸。
第一实施方案提供了一种编码以上所述的抗hPG抗体的重链的多核苷酸。优选地，所述重链包含序列SEQ ID NO.4、5和6的三个重链CDR。更优选地，所述重链包括包含序列SEQ ID NO.14的可变区的重链。甚至更优选地，所述重链具有完整序列SEQ ID NO.16。
在另一个实施方案中，所述多核苷酸编码以上所述的抗hPG抗体的轻链。优选地，所述重链包含序列SEQ ID NO.7、8和9的三个重链CDR。更优选地，所述重链包括包含序列SEQ ID NO.15的可变区的重链。甚至更优选地，所述重链具有完整序列SEQ ID NO.17。
根据本发明，各种表达系统可以用于表达本发明的抗体。在一方面，此类表达系统代表可以借以产生并随后纯化目的编码序列的媒介物，而且还代表在用适当的核苷酸编码序列瞬时转染时可以原位表达IgG抗体的细胞。
本发明提供了包含以上所述的多核苷酸的载体。在一个实施方案中，载体含有编码目的抗体(例如，抗hPG抗体)的重链的多核苷酸。在另一个实施方案中，所述多核苷酸编码目的抗体(例如，抗hPG抗体)的轻链。本发明还提供了包含编码融合蛋白的多核苷酸分子的载体、经修饰的抗体、抗体片段及其探针。
为了表达目的抗体(例如，抗hPG抗体)的重链和/或轻链，将编码所述重链和/或轻链的多核苷酸插入到表达载体中，使得基因可操作地连接到转录和翻译序列。
“可操作地连接的”序列包括与目的基因邻接的表达控制序列，和以反式或在远处起作用以控制目的基因的表达控制序列。如本文所用，术语“表达控制序列”是指影响表达和加工与它们连接的编码序列所必需的多核苷酸序列。表达控制序列包括：适当转录起始序列、终止序列、启动子序列和强化子序列；高效RNA加工信号，诸如剪接信号和聚腺苷酸化信号；使细胞质mRNA稳定的序列；增强翻译效率的序列(即，Kozak共有序列)；增强蛋白质稳定性的序列；以及当需要时，增强蛋白质分泌的序列。此类控制序列的性质根据宿主生物体而有所不同；在原核生物中，此类控制序列通常包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列；在真核生物中，通常此类控制序列包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”旨在至少包括其存在对于表达和加工必需的所有部件，并且还可以包括其存在有利的另外部件，例如前导序列和融合配偶体序列。
如本文所用，术语“载体”旨在是指能够转运其所连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，所述质粒是指可以将另外的DNA区段连接到其中的环状双链DNA环。另一种类型的载体是病毒载体，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组中。某些载体能够在它们被引入到其中的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其他载体(例如，非游离型哺乳动物载体)可以在引入到宿主细胞中之后整合到宿主细胞的基因组中，并且因此与宿主基因组一起复制。
某些载体能够指导它们所操作性地连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简单地“表达载体”)。通常，在重组DNA技术中使用的表达载体呈质粒的形式。在本发明说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常使用的载体形式。然而，本发明旨在包括此类形式的表达载体，诸如细菌质粒、YAC、粘粒、逆转录病毒、EBV来源的游离体以及技术人员已知方便确保目的抗体(例如，抗hPG抗体)的重链和/或轻链的表达的所有其他载体。技术人员将理解，可以将编码重链和轻链的多核苷酸克隆到不同的载体中或相同载体中。在优选的实施方案中，将所述多核苷酸克隆到两个载体中。
本发明的多核苷酸和包含这些分子的载体可以用于转化合适的宿主细胞。如本文所用，术语“宿主细胞”意图是指重组表达载体引入到其中以表达目的抗体(例如，抗hPG抗体)的细胞。应理解，此类术语旨在不仅是指特定受试者细胞，还是指这种细胞的后代。因为某些修饰可能由于突变或环境影响而在后代中发生，所以这种后代可能实际上与亲代细胞是不同的，但是仍然包括在如本文所用的术语“宿主细胞”的范围内。
转化可以通过用于将多核苷酸引入到细胞宿主中的任何已知方法来进行。此类方法是本领域技术人员熟知的，并且包括葡聚糖介导的转化、磷酸钙沉淀、凝聚胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、将多核苷酸包封到脂质体中、基因枪注射和将DNA直接微注射到核中。
可以将宿主细胞用一种或多种表达载体共转染。例如，可以将宿主细胞用编码目的抗体(例如，抗hPG抗体)的重链和轻链两者的载体转染，如上所述。可替代地，可以宿主细胞用编码目的抗体(例如，抗hPG抗体)的重链的第一载体和编码所述抗体的轻链的第二载体转化。哺乳动物细胞常用于表达重组治疗性免疫球蛋白，尤其是用于表达完整重组抗体。例如，哺乳动物细胞(诸如HEK293或CHO细胞)结合含有表达信号的载体(诸如携带来自人巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子元件的载体)是用于表达本发明的人源化抗hPG抗体的有效系统(Foecking等人,1986,Gene 45:101；Cockett等人,1990,Bio/Technology 8:2)。
此外，可以选择调控插入序列的表达或以所需具体方式修饰并加工基因产物的宿主细胞。对蛋白质产物的此类修饰(例如，糖基化)和加工可能对蛋白质功能而言是重要的。不同宿主细胞具有翻译后加工和修饰蛋白质和基因产物的特征和特定机制。选择适当细胞系或宿主系统以确保表达的目的抗体的正确修饰和加工。因此，可以使用具有用于适当加工初级转录物、使基因产物糖基化的细胞机制的真核宿主细胞。此类哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、COS、HEK293、NS/0、BHK、Y2/0、3T3或骨髓瘤细胞(所有这些细胞系可从公共保藏机构获得，诸如法国巴黎的国立微生物保藏中心(Collection Nationale desCultures de Microorganismes)或美国弗吉尼亚州马纳萨斯的美国典型培养物保藏中心)。
对于重组蛋白的长期高产率产生，稳定表达是优选的。在本发明的一个实施方案中，可以对稳定表达抗体的细胞系进行工程化。并非使用含有病毒复制起点的表达载体，而是在适当的表达调节元件的控制下用DNA转化宿主细胞，所述表达调节元件包括启动子、增强子、转录终止子、聚腺苷酸化位点和本领域技术人员已知的其他适当序列和可选择的标记物。在引入外来DNA之后，可以使工程化细胞在富集培养基中生长一至两天，然后移到选择性培养基。重组质粒上的可选择标记物赋予选择抗性，并且允许细胞将质粒稳定整合到染色体中并扩增成细胞系。用于构建稳定细胞系的其他方法是本领域已知的。特别地，开发了用于位点特异性整合的方法。根据这些方法，将在适当的表达调节元件的控制下转化的DNA整合在宿主细胞基因组中先前切割的特异性靶位点处，所述表达调节元件包括启动子、增强子、转录终止子、聚腺苷酸化位点和其他适当序列(Moele等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,104(9):3055-3060；US 5,792,632；US 5,830,729；US 6,238,924；WO 2009/054985；WO 03/025183；WO 2004/067753)。
根据本发明可以使用许多选择系统，分别包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人,Cell 11:223,1977)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Szybalska等人,Proc Natl Acad Sci USA 48:202,1992)、在蛋氨酸亚砜酰亚胺的存在下的谷氨酸合酶选择(Adv Drug Del Rev,58:671,2006，和Lonza Group Ltd.的网站或文献)以及tk、hgprt或aprt细胞中的腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy等人,Cell 22:817,1980)。另外，抗代谢物抗性可以用作以下基因的选择基础：dhfr，其赋予对甲氨蝶呤的抗性(Wigler等人,Proc NatlAcad Sci USA77:357,1980)；gpt，其赋予对霉酚酸的抗性(Mulligan等人,Proc Natl AcadSci USA78:2072,1981)；neo，其赋予对氨基糖苷G-418的抗性(Wu等人,Biotherapy 3:87,1991)；以及hygro，其赋予对潮霉素的抗性(Santerre等人,Gene 30:147,1984)。本领域中已知的重组DNA技术的方法可以常规地应用于选择所需的重组克隆体，并且此类方法例如在Ausubel等人,eds.,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons(1993)中描述。抗体的表达水平可以通过载体扩增增加。当表达抗体的载体系统中的标记物是可扩增的时，培养物中存在的抑制剂的水平增加将使标记物基因的拷贝数增加。因为扩增的区域与编码本发明的IgG抗体的基因缔合，所以所述抗体的产生也将增加(Crouse等人,Mol Cell Biol 3:257,1983)。存在表达本发明的基因的替代性方法并且是本领域技术人员已知的。例如，可以对经修饰的锌指蛋白进行工程化，其能够结合本发明的基因上游的表达调节元件；所述经修饰的锌指蛋白(ZFN)在本发明的宿主细胞中的表达导致蛋白质产生增加(参见例如，Reik等人,Biotechnol.Bioeng.,97(5):1180-1189,2006)。此外，ZFN可以促进DNA整合到预先确定的基因组位置中，从而导致高效率位点特异性基因添加(Moehle等人,Proc Natl Acad Sci USA,104:3055,2007)。
目的抗体(例如，抗hPG抗体)可以通过在表达所需抗体所需的培养条件下生长转化的宿主细胞的培养物来制备。然后可以从培养基或细胞提取物纯化所得的表达抗体。可以从培养物上清液回收可溶性形式的目的抗体(例如，抗hPG抗体)。然后可以通过本领域已知的用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法，例如，通过色谱法(例如，离子交换色谱、亲和色谱(特别是通过对于Fc的蛋白A亲和力等)、离心、差别溶解度或者通过用于纯化蛋白质的任何其他标准技术将其纯化。合适的纯化方法对于本领域普通技术人员而言是清楚的。
因此，本发明的另一方面涉及一种用于产生本文所述的抗体(例如，抗hPG抗体)的方法，所述方法包括以下步骤：
a)在合适的培养条件下在培养基中生长以上所述的宿主细胞；以及
b)从培养基或从所述培养细胞回收抗体(例如，抗hPG抗体)。
药物组合物
本发明的免疫检查点抑制剂可以配制在组合物中。任选地，所述组合物可以包含一种或多种另外的治疗剂，诸如以下所述的第二治疗剂。组合物通常作为无菌药物组合物的一部分提供，所述无菌药物组合物通常包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。因此，在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含免疫检查点抑制剂和药学上可接受的媒介物和/或赋形剂。
此组合物可以呈任何合适的形式(取决于向患者给予组合物的所需方法)。如本文所用，“给予”意指向受试者提供一个剂量的化合物(例如，如上所述的免疫检查点抑制剂)或组合物(例如，药物组合物，例如含有如上所述的免疫检查点抑制剂的药物组合物)的方法。在本文所述的方法中所用的组合物可以例如以如下方式来给予：在玻璃体内(例如，通过玻璃体内注射)、通过滴眼剂、肌肉内、静脉内、皮内、经由皮肤、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鞘内、鼻内、阴道内、直肠内、局部、肿瘤内、腹膜内、皮下、结膜下、膀胱内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、眼眶内、口服、局部、经皮、通过吸入、通过注射、通过植入、通过输注、通过连续输注、通过直接局部灌注浸浴靶细胞、通过导管、通过灌洗、以霜剂或以脂质组合物的形式。在本文所述的方法中所用的组合物还可以全身性地或局部给予。给予的方法可以根据各种因素(例如，所给予的化合物或组合物和所治疗的病症、疾病或障碍的严重性)而变化。在任何给定情况下用于给予的最合适的途径取决于特定抑制剂、受试者以及疾病的性质和严重性和受试者的身体状况。免疫检查点抑制剂可以被配制为水性溶液并且通过皮下注射给予。
药物组合物可以方便地以每个剂量含有预先确定的量的免疫检查点抑制剂的单位剂型呈现。这种单位可以含有例如但不限于5mg至5g，例如10mg至1g或者20至50mg。用于本公开文本的药学上可接受的载体可以根据例如待治疗的病症或给予途径而采取各种形式。
可以通过将具有所需纯度的抗体与任选的本领域中通常所用的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(在本文中全部被称为“载体”)，即缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂、非离子洗涤剂、抗氧化剂和其他各种添加剂混合，制备本公开文本的药物组合物以作为冻干配制品或水性溶液以供储存。参见Remington’s Pharmaceutical Sciences,第16版(Osol,编辑1980)。此类添加剂在所采用的剂量和浓度下必须对于受者是无毒的。
缓冲剂帮助将pH维持在接近生理条件的范围内。它们可以范围是约2mM至约50mM的浓度存在。用于本公开文本的合适的缓冲剂包括有机酸和无机酸及其盐，诸如柠檬酸盐缓冲液(例如，柠檬酸单钠-柠檬酸二钠混合物、柠檬酸-柠檬酸三钠混合物、柠檬酸-柠檬酸单钠混合物等)、琥珀酸盐缓冲液(例如，琥珀酸-琥珀酸单钠混合物、琥珀酸-氢氧化钠混合物、琥珀酸-琥珀酸二钠混合物等)、酒石酸盐缓冲液(例如，酒石酸-酒石酸钠混合物、酒石酸-酒石酸钾混合物、酒石酸-氢氧化钠混合物等)、富马酸盐缓冲液(例如，富马酸-富马酸单钠混合物、富马酸-富马酸二钠混合物、富马酸单钠-富马酸二钠混合物等)、葡萄糖酸盐缓冲液(例如，葡萄糖酸-葡萄糖酸钠混合物、葡萄糖酸-氢氧化钠混合物、葡萄糖酸-葡萄糖酸钾混合物等)、草酸盐缓冲液(例如，草酸-草酸钠混合物、草酸-氢氧化钠混合物、草酸-草酸钾混合物等)、乳酸盐缓冲液(例如，乳酸-乳酸钠混合物、乳酸-氢氧化钠混合物、乳酸-乳酸钾混合物等)以及乙酸盐缓冲液(例如，乙酸-乙酸钠混合物、乙酸-氢氧化钠混合物等)。另外，可以使用磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液和三甲胺盐(诸如Tris)。
可以添加防腐剂以延缓微生物生长，并且可以范围为0.2％-1％(w/v)的量添加防腐剂。用于本公开文本的合适的防腐剂包括苯酚、苯甲醇、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基苄基氯化铵、苯扎卤铵(例如，苯扎氯铵、苯扎溴铵和苯扎碘铵)、氯化六甲铵和对羟基苯甲酸烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、儿茶酚、间苯二酚、环己醇和3-戊醇。可以添加有时被称为“稳定剂”的等渗剂以确保本公开文本的液体组合物的等渗性，并且包括多元糖醇(例如三元或更高级糖醇，诸如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇)。稳定剂是指广泛类别的赋形剂，其功能范围可以是从填充剂到添加剂，所述添加剂使治疗剂稳定或帮助防止变性或附着到容器壁。典型的稳定剂可以是多元糖醇(以上所列举的)；氨基酸，诸如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等；有机糖或糖醇(诸如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、核糖醇、肌醇、半乳糖醇、甘油等)，包括环醇诸如肌醇；聚乙二醇；氨基酸聚合物；含硫还原剂，诸如脲、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、α-单硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量多肽(例如，诸如10个残基或更少的肽)；蛋白质，诸如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；单糖，诸如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二糖，诸如乳糖、麦芽糖、蔗糖；和三糖，诸如棉子糖；以及多糖，诸如葡聚糖。稳定剂可以以如下范围存在：0.1至10,000份重量/份活性蛋白重量。
可以添加非离子表面活性剂或洗涤剂(也被称为“润湿剂”)以帮助溶解治疗剂以及保护治疗性蛋白免受搅动诱导的聚集，这也允许配制品暴露于剪切表面应力而不引起蛋白质的变性。合适的非离子表面活性剂包括聚山梨醇酯(20、80等)、泊洛沙姆(184、188等)、复合多元醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单醚(
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等)。非离子表面活性剂可以约0.05mg/ml至约1.0mg/ml，例如约0.07mg/ml至约0.2mg/ml的范围存在。
另外的各种赋形剂包括填充剂(例如，淀粉)、螯合剂(例如，EDTA)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、蛋氨酸、维生素E)和助溶剂。
本发明还涉及一种药物组合物，其至少包含：
i)免疫检查点抑制剂，和
ii)第二治疗剂，例如如下所述，
作为用于同时、单独或顺序使用的组合产品。
如本文所用，“同时使用”是指以单一且相同的药物形式给予根据本发明的组合物的两种化合物。
如本文所用，“单独使用”是指以不同的药物形式同时给予根据本发明的组合物的两种化合物。
如本文所用，“顺序使用”是指各自以不同的药物形式连续给予根据本发明的组合物的两种化合物。
免疫检查点抑制剂和第二治疗剂的组合物可以作为一种或多种免疫检查点抑制剂和/或一种或多种第二治疗剂的混合物单一给予，与可用于治疗癌症的其他剂(尤其是CRC)或用于癌症的辅助或其他疗法(尤其是CRC)混合或组合给予。合适的组合和辅助疗法的例子在以下提供。
本公开文本涵盖含有本文所述的免疫检查点抑制剂的药物试剂盒。所述药物试剂盒是包括免疫检查点抑制剂(例如，呈冻干形式或作为水性溶液)和以下中的一种或多种的包装：
·第二治疗剂，例如如下所述；
·用于给予免疫检查点抑制剂的装置，例如笔、针和/或注射筒；以及
·如果抑制剂呈冻干形式，用于重悬浮抑制剂的药物等级水或缓冲液。
每个单位剂量的免疫检查点抑制剂可以单独包装，并且试剂盒可以含有一个或多个单位剂量(例如，两个单位剂量、三个单位剂量、四个单位剂量、五个单位剂量、八个单位剂量、十个单位剂量或更多)。在具体实施方案中，一个或多个单位剂量各自容纳在注射筒或笔中。
有效剂量
免疫检查点抑制剂通常以有效实现预期结果的量，例如有效治疗通过以上所述的任何方法被鉴定为展示免疫检查点抑制剂反应性表型的受试者的癌症的量使用。可以向此类患者(例如，人受试者)给予治疗有效剂量的包含免疫检查点抑制剂的药物组合物。
术语“治疗有效剂量”意指在受试者中引发所需的生物反应的活性化合物或缀合物的量。这种反应包括改善所治疗的疾病或障碍的症状，预防、抑制或延迟疾病症状或疾病本身的复发，与治疗不存在的情况相比增加受试者的寿命，或者预防、抑制或延迟疾病症状或疾病本身的进展。更特别地，如本文所用，“治疗有效”剂量是赋予治疗益处的量。治疗有效剂量还是其中治疗上有益的效果超过剂的任何毒性或有害影响的剂量。在CRC疗法的情况下，治疗益处意指癌症的任何改善，包括停止或减慢癌症进展(例如，从癌症的一个阶段到下一个阶段)，停止或延迟癌症症状或体征的加重或恶化，降低癌症的严重性，诱导癌症缓解，抑制肿瘤细胞增殖、肿瘤大小或肿瘤数量，或者降低PG血清水平中的一个或组合。
有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是在根据本文提供的详细公开文本的情况下。化合物或缀合物的毒性和治疗功效可以通过标准药物程序在细胞培养物和实验动物中测定。向受试者给予的本发明的免疫检查点抑制剂或其他治疗剂的有效量取决于多发性骨髓瘤的阶段、类别和状态和受试者的特征，诸如一般健康状况、年龄、性别、体重和药物耐受性。待给予的本发明的免疫检查点抑制剂或其他治疗剂的有效量还取决于给予途径和剂型。剂量量和间隔可以个别地进行调整，以提供足以维持所需治疗作用的活性化合物的血浆水平。
所给予的免疫检查点抑制剂的量取决于各种因素，包括所治疗的癌症的性质和阶段，给予的形式、途径和位点，治疗方案(例如，是否使用另一种治疗剂)，所治疗的特定受试者的年龄和状况，免疫检查点抑制剂治疗的患者的敏感性。本领域技术人员可以容易地确定适当的途径。最后，医师将决定所使用的适当剂量。此剂量可以尽可能地经常重复。如果出现了副作用，则可以根据正常临床实践改变或降低剂量的量和/或频率。可以通过使用本领域技术人员已知的常规技术监测疗法的进展来建立适当的剂量和治疗方案。
有效剂量可以初始地根据体外测定估计。例如，可以配制在动物中使用的初始计量，以实现处于如体外测量的抑制剂对于对应的免疫检查点蛋白的结合亲和力下或高于所述结合亲和力的免疫检查点抑制剂的循环血液或血清浓度。考虑特定抑制剂的生物利用度，计算实现此类循环血液或血清浓度的剂量完全在技术人员的能力范围内。关于指导，读者参考Fingl&Woodbury,“General Principles”在Goodman和Gilman的ThePharmaceutical Basis of Therapeutics,第1章,最新版,Pagamonon Press中以及其中引用的参考文献。
初始剂量可以根据体内数据(诸如动物模型)估计。可用于测试治疗每种癌症类型的化合物的功效的动物模型是本领域熟知的。普通技术人员可以常规地适应性调整此类信息以确定适用于人给予的剂量。
如本文所述的免疫检查点抑制剂的有效剂量的范围可以是约0.001至约75mg/kg/单个(例如，推注)给予、多个给予或连续给予，或者实现0.01-5000μg/ml血清浓度/单个(例如，推注)给予、多个给予或连续给予的血清浓度或其中的任何有效范围或值，这取决于所治疗的病症、给予途径以及受试者的年龄、体重和状况。在某个实施方案中，每个剂量的范围可以是约0.5μg至约50μg/kg体重，例如约3μg至约30μg/kg体重。
给予的量、频率和持续时间将取决于各种因素，诸如患者的年龄、体重和疾病状况。给予的治疗方案可以持续2周至无限期、持续2周至6个月、3个月至5年、6个月至1或2年、8个月至18个月等。任选地，治疗方案提供重复给予，例如每天一次，每天两次，每两天、三天、五天、一周、两周或一个月一次。重复给予可以相同剂量或不同剂量进行。给予可以重复一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次或更多次。治疗有效量的免疫检查点抑制剂可以作为单剂量给予或在治疗方案的过程中给予，例如在一周、两周、三周、一个月、三个月、六个月、一年或更长时间的过程中给予。
治疗方法
本文公开的方法尤其可用于治疗癌症，因为它们允许选择对于免疫疗法产生反应的患者。
因此，本公开文本的一方面因此涉及一种治疗癌症的方法，其包括向癌症患者给予免疫检查点抑制剂，所述方法包括选择对于免疫检查点抑制剂具有反应的患者的先前步骤。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于治疗癌症的免疫检查点抑制剂，其中所述用途包括选择对于免疫检查点抑制剂具有反应的患者的先前步骤。
因此，本文提供了一种用于治疗癌症的免疫检查点抑制剂，所述用途包括：
a)使用根据本发明的方法选择对于免疫检查点抑制剂具有反应的患者。
另一个实施方案涉及免疫检查点抑制剂用于制备治疗癌症的药剂的用途，其中所述治疗包括选择对于免疫检查点抑制剂具有反应的患者的先前步骤。
所述患者选择通过以上所述的任一种方法进行。
本公开文本还涉及一种用于设计针对患有癌症的受试者的免疫检查点抑制剂治疗的方法，所述方法包括：
a)根据以上所述的方法确定免疫检查点抑制剂反应或非反应表型，以及
b)根据所述鉴定的免疫检查点抑制剂反应或非反应表型设计免疫检查点抑制剂治疗的剂量。
本公开文本还涉及一种用免疫检查点抑制剂治疗患癌受试者的方法，其包括：
a)使用根据本发明的方法，从所述患癌受试者的生物样品确定免疫检查点抑制剂反应或非反应表型的存在，以及
b)根据步骤(a)的结果适应性调整免疫检查点抑制剂治疗。
任选地，向受试者给予步骤(b)中所确定的免疫检查点抑制剂的剂量。
另一个实施方案涉及一种用于治疗癌症的免疫检查点抑制剂，所述用途包括：
a)使用根据本发明的方法，从所述患癌受试者的生物样品确定免疫检查点抑制剂反应或非反应表型的存在，以及
b)根据步骤(a)的结果适应性调整免疫检查点抑制剂治疗。
任选地，向受试者给予步骤(b)中所确定的免疫检查点抑制剂的剂量。
另一个实施方案涉及免疫检查点抑制剂用于制备治疗癌症的药剂的用途，所述治疗包括：
a)使用根据本发明的方法，从所述患癌受试者的生物样品确定免疫检查点抑制剂反应或非反应表型的存在，以及
b)根据步骤(a)的结果适应性调整免疫检查点抑制剂治疗。
免疫检查点抑制剂治疗的所述适应性调整可以由以下组成：
-如果所述受试者被鉴定为免疫检查点抑制剂非反应性，则减少或抑制所述免疫检查点抑制剂治疗，或者
-如果所述受试者被鉴定为免疫检查点抑制剂反应性，则继续所述免疫检查点抑制剂治疗。
因此，本公开文本提供了治疗有需要的患者的癌症的方法。通常，所述方法包括向患者给予治疗有效量的本文所述的免疫检查点抑制剂。在另一个实施方案中，本公开文本提供了本文所述的免疫检查点抑制剂，其用于治疗癌症。可以根据本文公开的方法治疗的癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。更特别地，根据本发明的癌症选自鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状癌)、口咽癌、鼻咽癌、喉癌、腹膜癌、食管癌、肝细胞癌、胃癌或胃部癌症(包括胃肠癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、脑癌、神经系统癌症、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿道癌、肝细胞癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌症或肾癌、前列腺癌、胆囊癌、外阴癌、睾丸癌、甲状腺癌、卡波西肉瘤、肝癌、肛门癌、阴茎癌、非黑色素瘤皮肤癌、黑色素瘤、皮肤黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、恶性雀斑样痣黑色素瘤、肢端雀斑样痣性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤，例如像低级别/滤泡型非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞性(SL)NHL；中等级别/滤泡型NHL；中等级别弥散NHL；高级别免疫母细胞NHL；高级别淋巴母细胞NHL；高级别小非裂细胞NHL；bulky疾病NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；以及沃尔丹斯特伦巨球蛋白血症)；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞性白血病(CML)；急性成髓细胞性白血病(AML)；和移植后淋巴组织增生性障碍(PTLD)以及与瘢痣病相关联的异常血管增殖、水肿(诸如与脑肿瘤相关联的水肿)、梅格斯氏综合征、脑癌以及头颈癌(包括唇癌和口腔癌)和相关联的转移瘤。
在一个优选的实施方案中，所述癌症是肺癌、唇癌和口腔癌、口咽癌、鼻咽癌、喉癌、前列腺癌、食管癌、胆囊癌、肝癌、肝细胞癌、胃癌或胃部癌症(包括胃肠癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤、肾癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、肝细胞癌、肝癌、肛门癌、甲状腺癌、非黑色素瘤皮肤癌、皮肤黑色素瘤、脑癌、神经系统癌症、睾丸癌、子宫颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、卵巢癌或乳腺癌。
在一个更优选的实施方案中，所述癌症是食管癌、肝癌、肝细胞癌、胃癌或胃部癌症(包括胃肠癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、肝细胞癌、肝癌、肛门癌、非黑色素瘤皮肤癌、皮肤黑色素瘤、子宫颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、卵巢癌或乳腺癌。
给予本发明的免疫检查点抑制剂的受试者优选是哺乳动物，诸如非灵长类动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)或灵长类动物(例如，猴或人)。受试者或患者优选是人，诸如成人患者或儿科患者。
适用于免疫检查点抑制剂疗法的患者是被诊断患有癌症的患者。癌症可以是任何类型，并且可以在任何临床阶段或表现。合适的受试者包括患有肿瘤(可手术或不可手术)的患者，已经通过手术去除或切除肿瘤的患者，患有包含携带癌基因(例如像RAS或APC)突变的细胞的肿瘤的患者，已经接受或接受与免疫检查点抑制剂疗法组合或辅助使用的其他癌症疗法的患者。其他癌症疗法包括但不限于化疗治疗、放射疗法、手术切除以及用一种或多种其他治疗性抗体进行的治疗，如下所述。
根据其他实施方案，向需要预防转移性癌症的受试者给予治疗有效量的如本文公开的呈组合物形式的免疫检查点抑制剂。此类受试者包括但不限于确定患有原发性癌症但不知癌症已扩散到远处的组织或器官的那些受试者。
根据又其他的实施方案，向需要预防转移性癌症复发的受试者给予治疗有效量的如本文公开的呈组合物形式的免疫检查点抑制剂。此类受试者包括但不限于先前针对原发性或转移性癌症进行了治疗，治疗之后这种癌症显然消失的那些受试者。
根据其他实施方案，向需要抑制癌干细胞生长的受试者给予治疗有效量的如本文公开的呈组合物形式的免疫检查点抑制剂。此类受试者包括但不限于患有癌症，癌症的生长或转移至少部分可归因于其中存在癌干细胞的那些受试者。其他实施方案提供了预防或抑制癌干细胞生长的方法，其通过使此类干细胞与有效预防或抑制此类细胞生长的量的免疫检查点抑制剂组合物接触来进行。此类方法可以在体外或体内进行。
血清PG水平也可以用于评估癌症治疗的功效。因此，本公开文本提供了一种用于监测用免疫检查点抑制剂进行的癌症疗法的有效性的方法，其包括确定用所述抑制剂治疗癌症的患者中的PG水平。用于监测癌症疗法的有效性的方法包括在正在经历癌症治疗的癌症患者中使用本公开文本的抗PG单克隆抗体重复确定hPG水平，所述治疗包括给予免疫检查点抑制剂，其中在治疗间隔内患者的循环hPG水平降低指示治疗功效。例如，可以对患者的循环hPG水平进行第一次测量，接着在患者接受结直肠癌治疗时或之后进行第二次测量。然后将两个测量值进行比较，并且hPG水平的降低指示治疗性益处。
免疫检查点抑制剂疗法可以与一种或多种其他治疗组合或辅助使用。其他治疗包括但不限于化疗治疗、放射疗法、手术切除和抗体疗法，如本文所述。
免疫检查点抑制剂疗法可以辅助其他治疗，包括手术切除。
如本文提供的组合疗法涉及向患者给予至少两种剂，第一种是本公开文本的免疫检查点抑制剂组合，并且第二种是另一种治疗剂。根据此实施方案，本发明涉及用于治疗癌症的以上所述的免疫检查点抑制剂，其中所述免疫检查点抑制剂与所述另一种治疗剂一起给予。免疫检查点抑制剂和另一种治疗剂可以同时、连续或单独给予。
“治疗剂”涵盖生物剂(诸如抗体、肽、蛋白质、酶)和化疗剂。治疗剂还涵盖细胞结合剂(CBA)和化合物的免疫缀合物，诸如抗体-药物缀合物(ADC)。缀合物中的药物可以是细胞毒性剂，诸如本文所述的细胞毒性剂。
如本文所用，如果将免疫检查点抑制剂和另一种治疗剂在同一天例如在同一患者访视期间向患者给予，则被称为是连续给予的。可以相隔1、2、3、4、5、6、7或8小时进行连续给予。相比之下，如果将本公开文本的免疫检查点抑制剂和另一种治疗剂在不同的日期向患者给予，例如，可以将本公开文本的免疫检查点抑制剂和另一种治疗剂以1天、2天或3天、1周、2周或每月的间隔给予，则称它们是单独给予的。在本公开文本的方法中，可以在给予另一种治疗剂之前或之后给予本公开文本的免疫检查点抑制剂。
作为非限制性例子，可以将本发明的免疫检查点抑制剂和另一种治疗剂同时给予一段时间，接着交替给予本公开文本的免疫检查点抑制剂和另一种治疗剂，持续第二时间段。
本公开文本的组合疗法可以产生大于累加或协同的作用，从而提供治疗益处，其中免疫检查点抑制剂或另一种治疗剂都不以单独治疗有效的量给予。因此，可以较低的量给予此类剂，从而降低了不良作用的可能性和/或严重性。
在优选的实施方案中，另一种治疗剂是化疗剂。所述化疗剂优选是烷基化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂、染色质功能抑制剂、抗血管生成剂、抗雌激素、抗雄激素或免疫调节剂。
如本文所用，术语“烷基化剂”是指可以使细胞内的任何分子，优选核酸(例如，DNA)交联或烷基化的任何物质。烷基化剂的例子包括氮芥，诸如二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、chlorambucol、美法仑、chlorydrate、双溴丙基哌嗪(pipobromen)、泼尼莫司汀、磷酸氢二钠或雌莫司汀；oxazophorins，诸如环磷酰胺、六甲蜜胺、曲磷胺、硫代异环磷酰胺(sulfofosfamide)或异环磷酰胺；氮丙啶或亚胺乙烯诸如塞替派、三乙胺或altetramine；亚硝基脲，诸如卡莫司汀、链球菌素、福莫司汀或洛莫司汀；烷基磺酸盐，诸如白消安、曲奥舒凡或英丙舒凡；三氮烯，诸如达卡巴嗪；或铂络合物，诸如顺铂、奥沙利铂和卡铂。
如本文所用，表述“抗代谢物”是指通过干扰某些活性(通常是DNA合成)来阻断细胞生长和/或代谢的物质。抗代谢物的例子包括甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、5-氟脱氧尿苷、卡培他滨、阿糖胞苷、氟达拉滨、胞嘧啶阿拉伯糖苷、6-巯基嘌呤(6-MP)、6-硫鸟嘌呤(6-TG)、氯脱氧腺苷、5-氮杂胞苷、吉西他滨、克拉屈滨、脱氧助间型霉素和喷司他丁。
如本文所用，“抗肿瘤抗生素”是可以预防或抑制DNA、RNA和/或蛋白质合成的化合物。抗肿瘤抗生素的例子包括多柔比星、道诺霉素、伊达比星、戊柔比星、米托蒽醌、放线菌素D、光神霉素、普卡霉素、丝裂霉素C、博来霉素和丙卡巴肼。
如本文所用，“有丝分裂抑制剂”阻止细胞周期和有丝分裂的正常进程。通常，微管抑制剂或紫杉类化合物诸如紫杉醇和多西紫杉醇能够抑制有丝分裂。长春花生物碱(诸如长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨)也能够抑制有丝分裂。
如本文所用，术语“染色质功能抑制剂”或“拓扑异构酶抑制剂”是指抑制染色质建模蛋白(诸如拓扑异构酶I或拓扑异构酶II)的正常功能的物质。染色质功能抑制剂的例子包括对于拓扑异构酶I，喜树碱及其衍生物，诸如拓扑替康或伊立替康；以及对于拓扑异构酶II，依托泊苷、磷酸依托泊苷和替尼泊苷。
如本文所用，术语“抗血管生成剂”是指抑制血管生长的任何药物、化合物、物质或剂。示例性抗血管生成剂包括但不限于雷佐生、马立马司他、巴马司他、普啉司他、坦诺司他、伊洛马司他、CGS-27023A、常山酮(halofuginon)、COL-3、新伐司他、BMS-275291、沙利度胺、CDC 501、DMXAA、L-651582、角鲨胺、内皮抑素、SU5416、SU6668、干扰素-α、EMD121974、白介素-12、IM862、血管抑制素和vitaxin。
如本文所用，术语“抗雌激素”或“抗雌激素剂”是指减少、拮抗或抑制雌激素作用的任何物质。抗雌激素剂的例子是他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛西芬、碘多昔芬、阿那曲唑、来曲唑和依西美坦。
如本文所用，术语“抗雄激素”或“抗雄激素剂”是指减少、拮抗或抑制雄激素作用的任何物质。抗雄激素的例子是氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、螺内酯、醋酸环丙孕酮、非那雄胺和西米替丁。
如本文所用，“免疫调节剂”是刺激免疫系统的物质。
免疫调节剂的例子包括干扰素、白介素(诸如阿地白介素(aldesleukine)、OCT-43、地尼白介素(denileukin diflitox)和白介素-2)、肿瘤坏死因子(诸如tasonermine)或其他免疫调节剂诸如香菇多糖、西佐喃、罗喹美克、匹多莫德、培加酶、胸腺五肽(thymopentine)、聚肌苷酸-聚胞苷酸(poly I:C)或左旋咪唑结合5-氟尿嘧啶。
对于更多细节，本领域技术人员可以参考由“Association
Figure BDA0002731720040000601
desEnseignants de Chimie Thérapeutique”编辑且标题为“Traitéde chimie thérapeutique”,第6卷,Médicaments antitumouraux et perspectives dans letraitement des cancers,TEC&DOC版,2003的手册。
还可以提及化学剂或细胞毒性剂、所有的激酶抑制剂，例如像吉非替尼或厄洛替尼。
更一般而言，合适的化疗剂的例子包括但不限于1-脱氢睾酮、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、放线菌素D、阿霉素、阿地白介素、烷基化剂、别嘌醇钠、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、氨茴霉素(AMC)、抗有丝分裂剂、顺二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂、二氨基二氯铂、蒽环类药物、抗生素、抗代谢物、天冬酰胺酶、活性BCG(膀胱内)、倍他米松磷酸钠和醋酸倍他米松、比卡鲁胺、硫酸博莱霉素、白消安、亚叶酸钙、卡奇霉素、卡培他滨、卡铂、洛莫司汀(CCNU)、卡莫司汀(BSNU)、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、秋水仙素、缀合的雌激素、环磷酰胺、Cyclothosphamide、阿糖胞苷、阿糖胞苷、细胞松弛素B、癌得星(Cytoxan)、达卡巴嗪、放线菌素D、放线菌素d(以前被称为放线菌素)、道诺霉素HCL、柠檬酸道诺霉素、地尼白介素、右雷佐生、二溴甘露醇、二羟基炭疽菌素二酮、多西紫杉醇、甲磺酸多拉司琼、多柔比星HCL、屈大麻酚、大肠杆菌L-天冬酰胺酶、吐根碱、红细胞生成素-α、欧文氏菌属L-天冬酰胺酶、酯化雌激素、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、溴化乙锭、乙炔雌二醇、依替膦酸盐、依托泊苷嗜橙菌因子、磷酸依托泊苷、非格司亭、氟尿苷、氟康唑、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟他胺、亚叶酸、盐酸吉西他滨、糖皮质激素、醋酸戈舍瑞林、短杆菌肽D、盐酸格拉司琼、羟基脲、盐酸伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α-2b、盐酸伊立替康、来曲唑、甲酰四氢叶酸钙、醋酸亮丙瑞林、盐酸左旋咪唑、利多卡因、洛莫司汀、美登素类化合物、盐酸二氯甲二乙胺、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、盐酸美法仑、巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、甲基睾酮、光神霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、乙酸奥曲肽、盐酸奥坦西隆、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸二钠、喷司他丁、盐酸毛果芸香碱、皮利霉素、具有卡莫司汀植入物的聚苯丙生20、卟吩姆钠、普鲁卡因、盐酸丙卡巴肼、普萘洛尔、利妥昔单抗、沙莫司亭、链脲佐菌素、他莫昔芬、泰素、替加氟(tegafur)、替尼泊苷(teniposide)、替尼泊苷(tenoposide)、睾内酯、丁卡因、噻替哌苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、硫鸟嘌呤、噻替派、盐酸拓扑替康、柠檬酸托瑞米芬、曲妥珠单抗、维甲酸、戊柔比星、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、和酒石酸长春瑞滨。
可以向需要治疗结直肠癌的接受化疗剂组合的患者给予本文公开的免疫检查点抑制剂。化疗剂的示例性组合包括5-氟尿嘧啶(5FU)与甲酰四氢叶酸(亚叶酸或LV)的组合；卡培他滨与尿嘧啶(UFT)和甲酰四氢叶酸的组合；替加氟与尿嘧啶(UFT)和甲酰四氢叶酸的组合；奥沙利铂与5FU或与卡培他滨的组合；伊立替康与卡培他滨的组合，丝裂霉素C与5FU、伊立替康或卡培他滨的组合。还可以使用本文公开的化疗剂的其他组合。
如相关领域中已知的，在临床试验中已经标准化了针对结直肠癌使用不同化疗剂的组合的化疗方案。此类方案通常以首字母缩写词而为人所知，并且包括5FU Mayo、5FURoswell Park、LVFU2、FOLFOX、FOLFOX4、FOLFOX6、bFOL、FUFOX、FOLFIRI、IFL、XELOX、CAPOX、XELIRI、CAPIRI、FOLFOXIRI。参见例如，Chau,I.等人,2009,Br.J.Cancer 100:1704-19和Field,K.等人,2007,World J.Gastroenterol.13:3806-15，将两者均通过引用并入。
免疫检查点抑制剂也可以与其他治疗性抗体组合使用。因此，可以将免疫检查点抑制剂疗法与不同的单克隆抗体(例如但不限于，抗EGFR(EGF受体)单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体)组合给予或辅助所述不同的单克隆抗体给予。抗EGFR抗体的具体例子包括西妥昔单抗和帕尼单抗。抗VEGF抗体的具体例子是贝伐单抗。
根据此实施方案，本发明涉及用于治疗癌症的以上所述的免疫检查点抑制剂，其中将所述抑制剂与治疗剂一起给予。可以将免疫检查点抑制剂和化疗剂同时、连续或单独给予。
诊断试剂盒
在一方面，本公开文本提供了含有抗PG抗体(包括抗体缀合物)的诊断试剂盒。诊断试剂盒是一种包装物，其包含本公开文本的至少一种抗PG抗体(例如，呈冻干形式或作为水溶液)和一种或多种可用于进行诊断测定的试剂(例如，稀释剂、与抗PG抗体结合的标记的抗体、标记的抗体的适当底物、呈适于用作阳性对照和参考标准物(阴性对照)的形式的PG)。在具体实施方案中，试剂盒包含两种抗PG抗体，其中至少一种抗体是抗PG单克隆抗体。任选地，第二抗体是多克隆抗PG抗体。在一些实施方案中，本公开文本的试剂盒包含如本文所述的N端抗PG单克隆抗体。
如上所述，可以对抗PG抗体进行标记。在一个实施方案中，如本文详述的抗PG抗体或其抗原结合片段以用可检测部分标记的形式提供，使得它们可以被包装和用于例如试剂盒中，以诊断或鉴定具有前述抗原的细胞。此类标记的非限制性例子包括荧光团，诸如异硫氰酸荧光素；发色团、放射性核素、生物素或酶。例如，此类标记的抗PG抗体可以用于例如抗原的组织学定位、ELISA、细胞分选以及用于检测或定量PG以及带有此抗原的细胞的其他免疫学技术。
可替代地，试剂盒可以包含结合抗PG单克隆抗体并与酶缀合的标记的抗体。当抗PG单克隆抗体或其他抗体与酶缀合以用于检测时，试剂盒可以包含酶所需的底物和辅因子(例如，提供可检测的发色团或荧光团的底物前体)。此外，可以包含其他添加剂，诸如稳定剂、缓冲液(例如，封闭缓冲液或裂解缓冲液)等。诊断试剂盒中包含的抗hPG单克隆抗体可以固定在固体表面上，或者可替代地，试剂盒中可以包含可固定抗体的固体表面(例如，载玻片)。各种试剂的相对量可以广泛地变化，以提供试剂溶液中的浓度，这实质上优化了测定的灵敏度。抗体和其他试剂可以作为通常冻干的干燥粉末提供(单独或组合)，所述其他试剂包括在溶解后将提供具有适当浓度的试剂溶液的赋形剂。
试剂盒可以包含指导材料，其含有用于实践诊断方法的说明(例如，方案)。虽然所述说明材料通常包含书写或印刷材料，但其并不限于此。本发明设想能够存储此类说明并将其传达到终端用户的媒介。此类媒介包括但不限于电子存储媒介(例如，磁盘、磁带、磁片盒、芯片)、光学媒介(例如，CD ROM)等。此类媒介可以包括提供此类说明材料的互联网站的网址。
本发明的其他特征和优点在说明书的附加部分以及实施例和其图例在以下呈现的附图中显示。
实施例
在此研究中，在开始用免疫检查点抑制剂疗法进行治疗之前，对来自患有黑色素瘤的患者的43个血浆样品进行了血液前胃泌素水平的测试。
在ELISA测定中使用每孔50μL血浆一式两份地测试每个血浆EDTA样品。简而言之，所述测定利用了对预涂覆在96孔板上的hPG具有特异性的捕获抗体。将hPG用WO 2011/083088中所述的由杂交瘤2H9F4B7产生的C末端单克隆抗体mAb 14进行捕获(杂交瘤2H9F4B7在布达佩斯条约下于2016年12月27日保藏在法国，75724巴黎CEDEX 15，25-28ruedu Docteur Roux，巴斯德研究所的CNCM，参考号为I-5158)。添加到孔中的标准物和样品中存在的hPG与固定的捕获抗体结合。洗涤孔，并且添加辣根过氧化物酶(HRP)缀合的抗hPG检测抗体(用对N末端具有特异性的标记的多克隆抗体进行检测)，得到抗体-抗原-抗体复合物。第二次洗涤之后，将3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物溶液添加到孔中，其产生的蓝色与初始样品中存在的hPG的量成正比。终止溶液将颜色从蓝色变为黄色，并且用酶标仪在450nm处对黄色的强度进行定量。
将这些患者分为两组：前胃泌素血液水平低于3pM(n＝21)和高于3pM(n＝22)的患者。在GraphPad中通过对数秩检验(Mantel-Cox)和Gehan-Breslow-Wilcoxon检验进行Kaplan-Meier存活分析。PG<3pM组和PG>3pM组的中位存活期分别为151天和68.5天，从而显示具有低PG水平(PG<3pM)的患者的中位存活期增加了2.2倍(所述比率的95％CI在1.651与2.758之间)。
序列表
<110> ECS前胃泌素股份有限公司
<120> 作为生物标记物的前胃泌素用于免疫疗法
<130> B375862PCTD38101
<150> US 62/635,620
<151> 20180227
<160> 78
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 80
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
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20 25 30
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<223> 人前胃泌素的氨基酸1-14 N末端
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<223> 人前胃泌素的氨基酸55-80 C末端
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<223> 合成肽
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<213> 人工
<220>
<223> 人前胃泌素的氨基酸71-80 C末端
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<220>
<223> 合成肽
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<220>
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<220>
<223> 合成肽
<400> 68
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Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 69
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 70
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 70
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 71
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 71
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 72
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 73
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 74
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 74
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
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Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 75
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 75
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Ser Ser
<210> 76
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val
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100 105 110
Ser Ser
<210> 77
<211> 112
<212> PRT
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<220>
<223> 合成肽
<400> 77
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
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Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<220>
<223> 合成肽
<400> 78
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110

Claims (20)

1.一种用于选择易于对用免疫检查点抑制剂进行的治疗有反应的癌症患者的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，以及
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述患者对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物样品中至少3pM、至少5pM、至少10pM、至少20pM、至少30pM的前胃泌素浓度指示所述受试者中对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应的癌症的存在。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下另外的步骤：
c)确定参考样品中的参考前胃泌素浓度，
d)将所述生物样品中的前胃泌素浓度与所述参考前胃泌素浓度进行比较，
e)由步骤d)的比较来确定所述患者对用免疫检查点抑制剂进行的治疗是否具有反应。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述前胃泌素结合分子是，其中所述前胃泌素结合分子是抗体或其抗原结合片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自N末端抗前胃泌素单克隆抗体和C末端抗前胃泌素单克隆抗体。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述与前胃泌素结合的抗体是单克隆抗体，所述单克隆抗体选自：
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 4、5和6的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 7、8和9的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N10、11和12的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 13、14和15的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N22、23和24的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 25、26和27的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N28、29和30的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 31、32和33的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N34、35和36的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N 37、38和39的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优选地至少两个、优选地三个，以及
-由杂交瘤产生的单克隆抗体，所述杂交瘤于2016年12月27日保藏在法国，75724巴黎CEDEX 15，25-28rue du Docteur Roux，巴斯德研究所的CNCM，参考号为I-5158。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述步骤a)的测定包括：
(i)使所述样品与第一前胃泌素结合分子接触，所述第一前胃泌素结合分子与前胃泌素的第一部分结合，以及
(ii)使所述样品与第二前胃泌素结合分子接触，所述第二前胃泌素结合分子与前胃泌素的第二部分结合。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第一前胃泌素结合分子结合前胃泌素的C末端内的表位。
9.根据权利要求7或8中任一项所述的方法，其中所述前胃泌素结合分子是由杂交瘤产生的单克隆抗体，所述杂交瘤于2016年12月27日保藏在法国，75724巴黎CEDEX 15，25-28rue du Docteur Roux，巴斯德研究所的CNCM，参考号为I-5158。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述第二前胃泌素结合分子结合前胃泌素的N末端内的表位。
11.根据权利要求7至10中任一项所述的方法，其中所述第二前胃泌素结合分子是结合前胃泌素的N末端内的表位的多克隆抗体或包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含以下三个CDR：分别具有氨基酸序列SEQ ID N 16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含以下三个CDR：分别具有氨基酸序列SEQ ID N 19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中在步骤a)中用ELISA测定前胃泌素的水平。
13.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中使所述生物样品与第一分子和第二分子接触，所述第一分子与前胃泌素的第一部分结合，所述第二分子与前胃泌素的第二部分结合。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述生物样品选自：血液、血清和血浆。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述癌症是食管癌、肝癌、肝细胞癌、包括胃肠癌和胃肠道间质癌在内的胃癌或胃部癌症、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、肝细胞癌、肝癌、肛门癌、非黑色素瘤皮肤癌、皮肤黑色素瘤、子宫颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、卵巢癌或乳腺癌。
16.一种用于在治疗癌症中使用的免疫检查点抑制剂，所述用途包括以下先前步骤：
a)使用根据权利要求1至15中任一项所述的方法选择对免疫检查点抑制剂具有反应的患者。
17.一种用于在治疗癌症中使用的免疫检查点抑制剂，所述用途包括：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述患者对用免疫检查点抑制剂进行的治疗没有反应，以及
c)根据步骤b)的结果适应性调整所述免疫检查点抑制剂治疗。
18.一种用于对受试者中用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗进行预后的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，以及
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述预后是阴性的。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述生物样品中至少3pM、至少5pM、至少10pM、至少20pM、至少30pM的前胃泌素浓度指示阴性预后。
20.根据权利要求18和19中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下另外的步骤：
c)确定参考样品中的参考前胃泌素浓度，
d)将所述生物样品中的前胃泌素浓度与所述参考前胃泌素浓度进行比较，
e)根据步骤d)的比较对所述用免疫检查点抑制剂进行的癌症治疗进行预后。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3720879B1 (en) * 2017-12-05 2022-05-11 Progastrine et Cancers S.à r.l. Combination therapy between anti-progastrin antibody and immunotherapy to treat cancer
KR20240025729A (ko) 2022-08-19 2024-02-27 울산대학교 산학협력단 특발성 폐섬유증 환자의 진단 및 예후예측용 신규 바이오마커 VISTA (V-domain immunoglobulin suppressor of T-cell activation)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006032980A1 (en) * 2004-09-22 2006-03-30 Receptor Biologix, Inc. Monoclonal antibolies to progastrin
CN101460196A (zh) * 2006-05-22 2009-06-17 国立医学与健康研究所 在结肠癌治疗中的前胃泌素抑制剂
CN102791735A (zh) * 2009-10-16 2012-11-21 拜若提 抗前胃泌素的单克隆抗体及其用途
CN103261224A (zh) * 2010-07-26 2013-08-21 瑟维尔实验室 用于肝癌治疗的方法和组合物

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8924581D0 (en) 1989-11-01 1989-12-20 Pa Consulting Services Bleaching of hair
ATE356869T1 (de) 1990-01-12 2007-04-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5792632A (en) 1992-05-05 1998-08-11 Institut Pasteur Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof
US5474896A (en) 1992-05-05 1995-12-12 Institut Pasteur Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
AU5632296A (en) 1995-04-27 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO1996034096A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5830729A (en) 1996-04-18 1998-11-03 Institut Pasteur I Sce I-induced gene replacement and gene conversion in embryonic stem cells
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
WO1998024893A2 (en) 1996-12-03 1998-06-11 Abgenix, Inc. TRANSGENIC MAMMALS HAVING HUMAN IG LOCI INCLUDING PLURAL VH AND Vλ REGIONS AND ANTIBODIES PRODUCED THEREFROM
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
JP3876002B2 (ja) 1997-04-14 2007-01-31 ミクロメート・アクチエンゲゼルシャフト 抗ヒト抗原受容体を産生するための斬新な方法およびそれらの使用
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
BR9813365A (pt) 1997-12-05 2004-06-15 Scripps Research Inst Método para produção e humanização de um anticorpo monoclonal de rato
ATE466088T1 (de) 2001-09-14 2010-05-15 Cellectis Zufällige integration von polynukleotide nach in vivo linearisierung
US20060206949A1 (en) 2003-01-28 2006-09-14 Sylvain Arnould Custom-made meganuclease and use thereof
EP2205752B1 (en) 2007-10-25 2016-08-10 Sangamo BioSciences, Inc. Methods and compositions for targeted integration
US8900817B2 (en) 2010-01-08 2014-12-02 Les Laboratories Servier Progastrin and liver pathologies
US8900588B2 (en) 2010-01-08 2014-12-02 Les Laboratories Servier Methods for treating breast cancer
US9217032B2 (en) 2010-01-08 2015-12-22 Les Laboratoires Servier Methods for treating colorectal cancer
KR101570404B1 (ko) 2010-03-24 2015-11-20 르 라보레또레 쎄르비에르 결장직장암 및 위창자암의 예방
CA3194356A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Progastrine Et Cancers S.A R.L. Compositions and methods for detecting and treating ovarian cancer
WO2017114975A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Progastrine Et Cancers S.À R.L. Compositions and methods for detecting and treating gastric cancer
KR102620651B1 (ko) * 2015-12-31 2024-01-04 신케레스 에스.에이 알.엘. 암 발생의 위험도를 평가하기 위한 조성물 및 방법
US11789021B2 (en) 2015-12-31 2023-10-17 Progastrine Et Cancers S.À R.L. Compositions and methods for detecting and treating esophageal cancer
WO2018028449A1 (en) * 2016-08-08 2018-02-15 Beigene, Ltd. Method for predicting efficacy of immune checkpoint inhibitors in cancer patients
EA201992317A1 (ru) 2017-03-30 2020-03-05 Эсс-Прогастрин Са Композиции и способы для диагностики рака легких
BR112019020414A2 (pt) 2017-03-30 2020-06-09 Progastrine Et Cancers S A R L composições e métodos para detectar e tratar câncer de próstata usando moléculas de ligação à progastrina
EP3720879B1 (en) * 2017-12-05 2022-05-11 Progastrine et Cancers S.à r.l. Combination therapy between anti-progastrin antibody and immunotherapy to treat cancer

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006032980A1 (en) * 2004-09-22 2006-03-30 Receptor Biologix, Inc. Monoclonal antibolies to progastrin
CN101460196A (zh) * 2006-05-22 2009-06-17 国立医学与健康研究所 在结肠癌治疗中的前胃泌素抑制剂
CN102791735A (zh) * 2009-10-16 2012-11-21 拜若提 抗前胃泌素的单克隆抗体及其用途
CN103261224A (zh) * 2010-07-26 2013-08-21 瑟维尔实验室 用于肝癌治疗的方法和组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
高晓天;周小林;梁克;陈林;: "抗前胃泌素释放肽单克隆抗体在小细胞肺癌诊断应用", 中国热带医学, no. 01 *

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