TWI740861B - 育髮/生髮促進劑 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種含有式(I)所表示之一種或複數種類黃酮類作為有效成分之育髮/生髮促進劑。又，本發明提供一種含有式(II)所表示之一種或複數種苯基丙烷類作為有效成分之育髮/生髮促進劑。

Description

育髮/生髮促進劑 【相關申請案之交互參照】

本國際申請案係主張基於2015年12月2日向日本專利廳提出申請之日本專利申請案第2015-235965號之優先權，藉由參照而將日本專利申請案第2015-235965號之全部內容援用於本國際申請案。

本發明係關於一種育髮/生髮促進劑。

毛髮之生長係根據包含生長期、退化期及休止期之週期性之毛髮週期(hair cycle)而反覆進行生長及脫落。於毛髮週期中，各種細胞發揮作用，但在控制該毛髮週期之方面發揮最重要作用的是毛乳頭細胞。毛乳頭細胞係位於毛根之根幹部分之細胞。毛乳頭細胞對毛髮之分化承擔著重要之作用，例如對存在於毛乳頭細胞之周圍之毛母細胞起作用，而促進毛母細胞之增殖。

又，脫髮係因年齡之增長、由生活環境主要因素所導致之壓力、激素平衡之崩壞、藥劑之副作用等而產生。若因上述各種原因而使毛乳頭細胞之代謝降低，則毛母細胞 之活化及分化被抑制。並且，因毛髮週期之時間縮短，而產生脫髮。

近年來，由於壓力之增加或飲食生活之變化等各種主要因素，導致因毛髮稀疏或脫髮而煩惱之男女有增加之傾向，從而對育髮/生髮促進劑之期待提高。根據此種社會性要求而開發了各種育髮/生髮促進劑。作為育髮/生髮促進劑之有效成分，例如已知有敏樂定(minoxidil)(化學名：6-(1-哌啶基)-2,4-嘧啶二胺-3-氧化物)或腺苷相關化合物等。

已知，敏樂定係藉由擴張末梢血管，而促進血液循環，刺激毛乳頭細胞，藉此促進育髮。又，報告了如下情況，腺苷及其衍生物有對毛乳頭細胞之腺苷受體發揮作用，促進纖維母細胞增殖因子之產生，而活化毛母細胞之效果(參照專利文獻1)。

[先前技術文獻]

[專利文獻]

[專利文獻1]日本專利特開2000-297015號公報

然而，關於如上所述之公知之育髮/生髮促進劑，仍未充分地滿足需求者之要求。基於此種情況，市場上需求育髮/生髮促進效果更高之育髮/生髮促進劑。

為了解決如上所述之問題，本發明者等人進行了努力研究，結果發現，先前與育髮作用之關係完全未知之類黃酮類及苯基丙烷類有育髮作用。

即，本發明之一態樣提供一種含有下述所記載之式(I)所表示之一種或複數種類黃酮類作為有效成分之育髮/生髮促進劑。

其中，上述式(I)中，R¹為醣苷基、醣苷基-醣苷基-O-芥子醯基或H，R²為O-芥子醯基或OH，R³為H或OH，R⁴為O-醣苷基、OH或O-醣苷基-芥子醯基。

又，本發明之一態樣提供一種含有下述所記載之式(II)所表示之一種或複數種苯基丙烷類作為有效成分之育髮/生髮促進劑。

[式(II)]

其中，上述式(II)中，R⁵為H或OH，R⁶為OH或OCH₃。

根據本發明者等人之研究結果，上述式(I)所表示之一種或複數種類黃酮類及上述式(II)所表示之一種或複數種苯基丙烷類有活化毛乳頭細胞之作用。由下述實施形態而明確知道有此種作用。因此，若利用含有上述類黃酮類及上述苯基丙烷類作為有效成分之育髮/生髮促進劑，則可期待極其優異之育髮/生髮效果。

圖1係表示使用人頭髮毛乳頭細胞進行異肥皂草苷 (Isosaponarin)之細胞毒性試驗所得之結果之圖。

圖2係表示對使用人頭髮毛乳頭細胞進行異肥皂草苷處理1天後之細胞活化作用進行研究所得之結果之圖。

圖3係表示對使用人頭髮毛乳頭細胞進行異肥皂草苷處理3天後之細胞活化作用進行研究所得之結果之圖。

圖4係表示對使用人頭髮毛乳頭細胞進行異肥皂草苷處理3天後之VEGF產生促進作用進行研究所得之結果之圖。

圖5係表示使用人頭髮毛乳頭細胞進行芹菜素(Apigenin)之細胞毒性試驗所得之結果之圖。

圖6係表示使用人頭髮毛乳頭細胞進行香豆酸之細胞毒性試驗所得之結果之圖。

圖7係表示使用人頭髮毛乳頭細胞進行咖啡酸甲酯之細胞毒性試驗所得之結果之圖。

圖8係表示對由使用人頭髮毛乳頭細胞之除異肥皂草苷以外之受驗物質所產生之細胞活化作用進行研究所得之結果之圖。

圖9係表示由使用人頭髮毛乳頭細胞之除異肥皂草苷以外之受驗物質所產生之VEGF產生量之圖。

圖10係表示由使用人頭髮毛乳頭細胞之除異肥皂草苷以外之受驗物質所產生之FGF-7基因表現量之圖。

本發明之育髮/生髮促進劑含有上述式(I)所表示之一種或複數種類黃酮類作為有效成分。又，本發明之育髮/生髮促進劑含有上述式(II)所表示之一種或複數種苯基丙烷類作為有效成分。此處，「含有」意指本發明之育髮/生髮促進劑可為包含一種或複數種類黃酮類者，又，亦可於育髮/生髮促進劑中含有除一種或複數種類黃酮類以外之其他成分。又，本發明之「育髮/生髮促進劑」係指藉由下述機制而發揮育髮效果、生髮效果、育髮效果兼生髮效果之物質。育髮效果意指使毛髮發育，而預防脫髮及減少脫髮之效果。生髮效 果意指使毛髮產生之效果。由此，本發明之育髮/生髮促進劑可用作育髮劑、生髮劑、及育髮劑兼生髮劑之任一者。

作為上述式(I)所表示之類黃酮類，例如可列舉：上述式(I)中，R¹為醣苷基，R²為OH，R³為H，及R⁴為O-醣苷基所表示之異肥皂草苷[別名：異牡荊黃素4'-O-β-D-葡哌喃糖苷(isovitexin4'-O-β-D-glucopyranoside)]；上述式(I)中，R¹為醣苷基，R²為O-芥子醯基，R³為H，及R⁴為O-醣苷基所表示之7-O-反式-芥子醯基異牡荊黃素4'-O-β-D-葡哌喃糖苷(7-O-trans-sinapoylisovitexin4'-O-β-D-glucopyranoside)；上述式(I)中，R¹為醣苷基，R²為O-芥子醯基，R³為H，及R⁴為OH者所表示之7-O-反式-芥子醯基異牡荊黃素(7-O-trans-sinapoylisovitexin)；上述式(I)中，R¹為醣苷基，R²為O-芥子醯基，R³為H，及R⁴為O-醣苷基-芥子醯基者所表示之7-O-反式-芥子醯基異牡荊黃素4'-O-(6-O-反式-芥子醯基-β-D-葡哌喃糖苷)(7-O-trans-sinapoylisovitexin4'-O-(6-O-trans-sinapoyl-β-D-glucopyranoside))；上述式(I)中，R¹為醣苷基-醣苷基-O-芥子醯基，R²為O-芥子醯基，R³為H，及R⁴為OH所表示之6"-O-(2-O-反式-芥子醯基-β-D-葡萄呱喃糖苷)-7-O-反式-芥子醯基異牡荊黃素(6"-O-(2-O-trans-sinapoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-O-trans-sina poylisovitexin)；上述式(I)中，R¹為醣苷基-醣苷基-O-芥子醯 基，R²為O-芥子醯基，R³為H，及R⁴為O-醣苷基所表示之6"-O-(2-O-反式-芥子醯基-β-D-葡萄呱喃糖苷)-7-O-反式-芥子醯基異牡荊黃素4'-O-β-D-葡哌喃糖苷(6"-O-(2-O-trans-sinapoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-O-trans-sina poylisovitexin4'-O-β-D-glucopyranoside)；上述式(I)中，R¹為醣苷基，R²為OH，R³為H，及R⁴為OH所表示之異牡荊黃素(isovitexin)；上述式(I)中，R¹為醣苷基，R²為OH，R³為OH，及R⁴為OH所表示之異葒草素(isoorientin)；上述式(I)中，R¹為醣苷基，R²為OH，R³為OH，及R⁴為O-醣苷基所表示之異葒草素4'-O-β-D-葡哌喃糖苷(isoorientin4'-O-β-D-glucopyranoside)；上述式(I)中，R¹為H，R²為OH，R³為H，及R⁴為OH所表示之芹菜素[別名：2-(4-羥苯)-5-羥基-7-羥基-4H-1-苯并哌喃-4-酮(2-(4-hydroxyphenyl)-5-hydroxy-7-hydroxy-4H-1-benzopyran-4-one)]；上述式(I)中，R¹為H，R²為OH，R³為OH，及R⁴為OH所表示之葉黃酮(luteolin)[別名：2-(3-羥基-4-羥苯)-5-羥基-7-羥基-4H-1-苯并哌喃-4-酮(2-(3-hydroxy-4-hydroxyphenyl)-5-hydroxy-7-hydroxy-4H-1-benzopyran-4-one)]等。進而，上述式(I)所表示之類黃酮類較佳為異肥皂草苷。再者，異肥皂草苷之基於IUPAC(International Union of Pure and Applied Chemistry，國際純粹與應用化學聯合會)之名稱為4'-(β-D-葡萄呱喃糖苷氧 基)-5,7-二羥基-6-β-D-吡喃葡萄糖黃酮。該等類黃酮類可單獨使用，亦可將複數種混合使用。

作為上述式(II)所表示之苯基丙烷類，例如可列舉：上述式(II)中，R⁵為H，R⁶為OH所表示之香豆酸；R⁵為OH，R⁶為OCH₃所表示之咖啡酸甲酯等。該等苯基丙烷類可單獨使用，亦可將複數種混合使用。又，亦可將類黃酮類及苯基丙烷類混合使用。

上述式(I)所表示之類黃酮類及上述式(II)所表示之苯基丙烷類可藉由化學合成法而獲得，亦可為自植物萃取、精製而成者。作為上述植物，例如可列舉：十字花科植物、石竹科植物(王不留行，學名：Vaccaria segetalis)、香芹科植物、禾本亞目植物、白花菜科植物、番瓜樹科植物、木樨草科植物、旱金蓮科植物等。由此，上述式(I)所表示之類黃酮類及上述式(II)所表示之苯基丙烷類可為自該等植物之中至少1種萃取之成分。例如，上述式(I)所表示之類黃酮類及上述式(II)所表示之苯基丙烷類可為自作為十字花科植物之山葵(Wasabia japonica)[別名：山萮菜]及西洋山葵(Armoracia rusticana)[別名：辣根]之中至少一者萃取之成分。

作為自上述植物之萃取、精製方法，例如可列舉：自山葵或西洋山葵萃取上述式(I)所表示之類黃酮類及上述式(II)所表示之苯基丙烷類之方法等。尤其是，自山萮菜萃取異肥皂草苷之方法揭示於國際公開第2011/058661號中。異 肥皂草苷於自山萮菜萃取之萃取物中之含量多於除異肥皂草苷以外之上述式(I)所表示之類黃酮類。因此，異肥皂草苷可為自山萮菜萃取之成分。

如下述實施例1所示，確認到上述式(I)所表示之類黃酮類會活化毛乳頭細胞。

又，如下述實施例2所示，確認到上述式(I)所表示之類黃酮類會增加毛乳頭細胞中之血管內皮細胞增殖因子(VEGF：vascular endothelial growth factor)之量。

如下述實施例7所示，確認到上述式(II)所表示之苯基丙烷類會活化毛乳頭細胞，增加VEGF產生量，及增加FGF-7基因表現量。

此處，已知VEGF對血管內皮細胞起作用，促進細胞之增殖、遊走，或者促進血管新生，又或者提高血管滲透性。VEGF產生於所有細胞中，亦自毛乳頭細胞產生。認為，自毛乳頭細胞產生之VEGF促進血管新生，藉此存在於毛乳頭細胞之周圍之毛母細胞活化，從而促進生髮。因此認為，若具有VEGF產生促進作用，則有助於毛母細胞活化作用、生髮促進作用等。

FGF-7係自毛乳頭細胞分泌之纖維母細胞增殖因子。認為，FGF-7對毛母細胞起作用而促進其增殖，藉此促進毛髮之生長，對毛髮週期中之生長期有效。

認為，由於上述式(I)所表示之類黃酮類如上所 述般，對毛乳頭細胞具有細胞活化作用及VEGF產生促進作用，故而有非常好之育髮/生髮作用。由此，本發明之育髮/生髮促進劑因含有上述式(I)所表示之類黃酮類，而發揮優異之育髮效果、生髮效果、及育髮效果兼生髮效果。又，認為，由於上述式(II)所表示之苯基丙烷類如上所述般，具有毛乳頭細胞活化作用、VEGF產生促進作用、及FGF-7基因促進作用，故而有非常好之育髮/生髮作用。由此，本發明之育髮/生髮促進劑因含有上述式(II)所表示之苯基丙烷類，而發揮優異之育髮效果、生髮效果、及育髮效果兼生髮效果。又，本發明之育髮/生髮促進劑亦可用作毛乳頭細胞活化促進劑、及毛乳頭細胞之VEGF產生促進劑。

上述式(I)所表示之類黃酮類可調配於化妝品、準藥品及醫藥品、或食品中。又，上述式(II)所表示之苯基丙烷類可調配於化妝品、準藥品及醫藥品、或食品中。因此，本發明之育髮/生髮促進劑可用作化妝品、準藥品及醫藥品、或食品。

於將本發明之育髮/生髮促進劑以化妝品、準藥品、醫藥品之形態實施之情形時，可用作皮膚外用劑。但是，育髮/生髮促進劑亦可經口攝取，故而並不限定於皮膚外用劑。

於將本發明之育髮/生髮促進劑以化妝品之形態實施之情形時，化妝品中之類黃酮類之含量較佳為0.001μmol/L~5,000μmol/L，進而較佳為0.1μmol/L~1,000 μmol/L。於將本發明之育髮/生髮促進劑以準藥品之形態實施之情形時，準藥品中之類黃酮類之含量較佳為0.001μmol/L~5,000μmol/L，進而較佳為0.1μmol/L~1,000μmol/L。於將本發明之育髮/生髮促進劑以醫藥品之形態實施之情形時，醫藥品中之類黃酮類之含量較佳為0.1mg~5.0g，進而較佳為0.2mg~1.0g。又，該醫藥品之成人每人1天之投予量較佳為1mg~10g，進而較佳為20mg~1.0g。

於將本發明之育髮/生髮促進劑以食品之形態實施之情形時，可用作功能性食品，例如特定保健用食品或標示功能性之食品等。於將本發明之育髮/生髮促進劑以食品之形態實施之情形時，食品中之類黃酮類之含量較佳為0.1mg~5.0g，進而較佳為0.2mg~1.0g。

本發明之育髮/生髮促進劑，除了作為有效成分之上述式(I)所表示之類黃酮類，亦可於不損害本發明之效果之範圍內，視需要適當調配增加一般於化妝品、準藥品及醫藥品、或食品中使用之各種任意成分。又，本發明之育髮/生髮促進劑除了作為有效成分之上述式(II)所表示之苯基丙烷類，可於不損害本發明之效果之範圍內，視需要適當調配增加一般於化妝品、準藥品及醫藥品、或食品中使用之各種任意成分。例如，可任意地選擇、併用下述例示之成分或添加劑。進而，有時基於增強育髮/生髮效果之目的而視需要調配抗氧化劑等任意之藥效成分、生理活性物質、及一般已知對 育髮/生髮效果有效之成分等，藉此發揮與本發明之構成成分之協同效應，而帶來通常之預期以上之優異之使用效果。

例如，作為油脂類，可列舉：大豆油、月見草油、米胚芽油、米糠油、小麥胚芽油、鰐梨油、葡萄籽油、山茶油、荷荷芭油、紫蘇油、橄欖油、芝麻油、可可油、甘菊油、胡蘿蔔油、黃瓜油、牛油脂肪酸、椰子(coconut)油、紅花油、玉米油、菜籽油、蓖麻油、棉籽油、花生油、貂油、蛋黃油、棕櫚油、棕櫚仁油、椰子油、牛油、豬油、乳油木果油、角鯊烯、角鯊烷、姥鮫烷或該等油脂類之氫化物(硬化油等)等。

例如，作為蠟類，可列舉：蜂蠟、白蜂蠟、巴西棕櫚蠟、鯨蠟、羊毛脂類、小燭樹蠟、褐煤蠟、蟲膠蠟、米糠蠟等。

例如，作為礦物油，可列舉：液態石蠟、凡士林、石蠟、地蠟(ozocerite)、地蠟(ceresin)、微晶蠟等。

例如，作為脂肪酸，可列舉：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、山萮酸、油酸、亞麻油酸、次亞麻油酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、羊毛脂脂肪酸等天然脂肪酸、異戊酸等脂肪酸等。

例如，作為醇類，可列舉：乙醇、異丙醇、乙二醇、月桂醇、鯨蠟醇、硬脂醇、油醇、羊毛脂醇、膽固醇、苯氧乙醇、2-己基癸醇、異硬脂醇、2-辛基十二烷醇等，作為多元醇類，可列舉：乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、乙二醇 單乙醚、乙二醇單丁醚、聚乙二醇、環氧丙烷、丙二醇、聚丙二醇、1,3-丁二醇、戊二醇、甘油、新戊四醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、半乳糖醇、山梨糖醇、甘露醇、乳糖醇、麥芽糖醇等。

例如，作為酯類，可列舉：肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、油酸油酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、二甲基辛酸己基癸酯、乳酸鯨蠟酯、乳酸肉豆蔻酯、磷苯二甲酸二乙酯、磷苯二甲酸二丁酯、乙酸羊毛脂、乙二醇單硬脂酸酯、丙二醇單硬脂酸酯、甘油單硬脂酸酯、丙二醇二油酸酯等。

例如，作為金屬皂類，可列舉：硬脂酸鋁、硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸鈣、棕櫚酸鋅、肉豆蔻酸鎂、月桂酸鋅等。

例如，作為膠質、糖類或水溶性高分子化合物，可列舉：阿拉伯膠、三仙膠、瓜爾膠、刺梧桐樹膠、瓊脂、酪蛋白、乳糖、果糖、蔗糖或其酯、海藻糖或其衍生物、糊精、白明膠、果膠、澱粉、鹿角菜膠、甲殼素或聚葡萄胺糖類、海藻酸或透明質酸及硫酸軟骨素或其鹽、肝素、乙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羧乙基纖維素、結晶纖維素、β-葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯甲醚、聚丙烯酸鹽、聚環氧烷或其交聯聚合物、羧乙烯聚合物等。

例如，作為界面活性劑，可列舉：烷基羧酸鹽、 烷基磺酸鹽、烷基硫酸酯鹽、烷基磷酸酯鹽等陰離子界面活性劑、烷胺鹽、烷基四級銨鹽等陽離子界面活性劑、羧酸型兩性界面活性劑、硫酸酯型兩性界面活性劑、磺酸型兩性界面活性劑、磷酸酯型兩性界面活性劑、非離子界面活性劑等兩性界面活性劑、天然界面活性劑、蛋白質水解物之衍生物、高分子界面活性劑、包含鈦、矽之界面活性劑、氟化碳系界面活性劑等其他界面活性劑等。

例如，作為維生素類，可列舉：視網醇、視網醛、脫氫視網醛、胡蘿蔔素、茄紅素等維生素A群、鹽酸硫胺素、硫酸硫胺素、核黃素、吡哆醇、氰鈷胺素、葉酸類等維生素B群、維生素C、生物素、泛酸、抗壞血酸磷酸酯鎂鹽、抗壞血酸磷酸酯鈉鹽、抗壞血酸四己基癸酸酯等維生素C衍生物、維生素D群、維生素E群及其衍生物、維生素K群，此外可列舉：必需脂肪酸、肉鹼、阿魏酸、γ-穀維素(γ-oryzanol)、維生素P類、維生素U類等。

例如，作為胺基酸，可列舉：纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、蘇胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、離胺酸、甘胺酸、丙胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、絲胺酸、半胱胺酸、胱胺酸、酪胺酸、脯胺酸、羥基脯胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、精胺酸、鳥胺酸、組胺酸等、或其等之硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸、或者吡咯啶酮羧酸等胺基酸衍生物等。

例如，作為紫外線吸收/阻斷劑，可列舉：β-異丙 基呋喃酮衍生物、尿刊酸、尿刊酸乙酯、對二甲基苯甲酸辛酯、2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸等二苯甲酮衍生物、對胺基苯甲酸、對胺基苯甲酸乙酯等對胺基苯甲酸衍生物、對甲氧基肉桂酸乙酯、對甲氧基肉桂酸異丙酯等甲氧基肉桂酸衍生物、水楊酸衍生物、鄰胺苯甲酸衍生物、尿刊酸衍生物、香豆素衍生物、胺基酸系化合物、苯并三唑衍生物、四唑衍生物、咪唑啉衍生物、嘧啶衍生物、二

烷衍生物、樟腦衍生物、呋喃衍生物、吡喃酮衍生物、核酸衍生物、尿囊素衍生物、煙鹼酸衍生物、維生素B6衍生物、繖形酮、馬栗樹皮苷(Aesculin)、肉桂酸苄酯、甲氧基肉桂酸乙基己酯(Cinoxate)、2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮(oxybenzone)、2,2'-二羥基-4-甲氧基二苯甲酮(dioxybenzone)、2-羥基-4-正辛氧基二苯甲酮(octabenzone)、磺異苯酮、苯醯間苯二酚、熊果苷、愈創薁、紫草寧、黃芩苷、黃芩素、小檗鹼、Neo Heliopan、Escalol、氧化鋅、氧化鈦、滑石、高嶺土等。

例如，作為代謝促進作用/細胞活化物質，可列舉：對苯二酚、乳酸菌萃取物、胎盤萃取物、靈芝萃取物、維生素A、維生素E、尿囊素、脾臟萃取物、胸腺萃取物、酵母萃取物、醱酵乳萃取物、植物萃取物(蘆薈、黃芩、木賊、龍膽、牛蒡、紫根、胡蘿蔔、金縷梅、啤酒花、薏仁、蕁麻、當藥、當歸、金盞花、甘茶、小連翹、黃瓜、百里香、迷迭 香、洋芹)等。

例如，作為活性氧消除劑，亦使用琥珀酸、單寧酸、尿囊素、氯化鋅、硫酸鋅等收斂劑，可列舉：超氧化歧化酶(SOD，Superoxide Dismutase)、觸酶、麩胱甘肽過氧化酶等。

例如，作為抗氧化劑，可列舉：維生素C或其鹽、硬脂酸酯、維生素E或其衍生物、正二氫愈創酸、丁基羥基甲苯(BHT，Butylated Hydroxytoluene)、丁基羥基苯甲醚(BHA，Butylated Hydroxyanisole)、羥基酪醇、對羥基苯甲醚、沒食子酸丙酯、芝麻酚、芝麻林素、棉籽酚、蜂膠等。

例如，作為過氧化脂質生成抑制劑，可列舉：β-胡蘿蔔素、植物萃取物(芝麻、甘茶、小連翹、金縷梅、丁香、蜜蜂花、香茶菜、白樺、鼠尾草、迷迭香、南天竹籽、玫瑰果、銀杏、綠茶)等。

例如，作為抗炎症劑，可列舉：魚石脂、吲哚美辛、高嶺土、水楊酸、水楊酸鈉、水楊酸甲酯、乙醯水楊酸、鹽酸苯海拉明、d-樟腦、dl-樟腦、氫化可體松、愈創薁、母菊薁、馬來酸氯苯那敏、甘草酸或其鹽、甘草次酸或其鹽、甘草萃取物、紫根萃取物、玫瑰果萃取物、虎耳草萃取物、紫蘇萃取物、薏仁萃取物、蜂膠等。

例如，作為抗菌、殺菌、消毒藥，可列舉：檜木醇、利凡諾、硫磺、葡萄糖酸鈣、葡萄糖酸氯己定(Chlorhexidine Gluconate)、胺基磺酸、汞溴紅、乳鐵蛋白或水解物、氯化烷基二胺基乙基甘胺酸液、三氯生、次氯酸鈉、氯胺T、漂白粉、碘化合物、碘仿、己二烯酸或鹽、丙酸或鹽、水楊酸、脫氫乙酸、苯甲酸、苯甲酸鈉、對羥基苯甲酸酯類、十一碳烯酸、硫胺素月桂基硫酸鹽、硫胺素月桂基硝酸鹽、苯酚、甲酚、對氯酚、對氯間二甲苯酚、對氯間甲酚、瑞香草酚、苯乙醇、O-苯基苯酚、玉潔新(Irgasan)CH3565、鹵卡班、六氯酚、氯己定、乙醇、甲醇、異丙醇、苄醇、乙二醇、丙二醇、苯氧乙醇、1,2-戊二醇、吡啶硫酮鋅、氯丁醇、異丙基甲基苯酚、聚氧乙烯月桂醚等非離子界面活性劑、兩性界面活性劑、月桂基硫酸鈉等陰離子界面活性劑、氯化苄烷銨等陽離子界面活性劑、甲醛、六胺、感光素101號、感光素201號、感光素401號、N-長鏈醯基鹼性胺基酸衍生物及其酸加成鹽、氧化鋅、檜木醇、苦蔘、蜂膠、油溶性甘草萃取物等。

例如，作為保濕劑，可列舉：甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、聚乙二醇、甘油三辛基癸酸酯、乙醇酸(-羥酸)、透明質酸或其鹽、硫酸軟骨素或其鹽、水溶性甲殼素或其衍生物或聚葡萄胺糖衍生物、吡咯啶酮羧酸或其鹽、乳酸鈉、脲、山梨糖醇、胺基酸或其衍生物、橄欖油、洋甘菊油、蓖麻油等油脂類(包含硬化油)、蜂蠟、羊毛脂、蟲膠蠟等蠟類、液態石蠟、凡士林、石蠟等礦物油、納豆菌代謝物、納豆萃取物、絹纖維萃取物、洋甘菊、蘆薈等植物萃取物等。

例如，作為角質溶解劑，可列舉：氟磷酸二異丙酯、植物萃取物(黃芩、小連翹、苦蔘根、桑葉、桂皮、牻牛兒苗、康富力、鼠尾草、歐洲接骨木、菩提樹、牡丹皮)、海藻萃取物等彈性蛋白酶活性抑制劑、維生素E或其衍生物、當藥萃取物、大蒜萃取物、胡蘿蔔萃取物、蘆薈萃取物、龍膽萃取物、當歸萃取物、頭花千金藤鹼、卡普氯銨(Carpronium Chloride)、敏樂定等末梢血管血流促進劑，進而可列舉：辣椒酊、壬酸香草醯胺、斑蝥酊、薑酊、薄荷油、1-薄荷腦、樟腦、煙鹼酸苄酯等刺激劑、吡哆醇或其衍生物、硫磺、維生素B6等抗脂溢劑、間苯二酚、水楊酸、乳酸、脲等。

例如，作為香料，可列舉：麝香等天然動物性香料、薄荷腦、綠薄荷、胡椒薄荷、大茴香精油、柑橘精油、小豆蔻精油、愈創木精油、小茴香精油、桂皮精油、錫蘭肉桂精油、老鸛草精油、芫荽精油、紫蘇精油、雪松精油、香茅精油、茉莉精油、薑草精油、杉精油、綠薄荷精油、歐洲薄荷精油、橙花精油、冬青精油、玫瑰精油、扁柏精油、扁柏葉精油、白檀精油、月桂精油、佛手柑精油、桉樹精油、萊姆精油、熏衣草精油、檸檬精油、迷迭香精油、日本薄荷精油等植物性香料、其他合成香料等。

例如，作為激素類，可列舉：雌二醇及其酯、雌酮、乙炔雌二醇、可體松及其酯、氫化可體松及其酯、潑尼松、潑尼松龍等。

例如，作為一般已知對育髮/生髮效果有效之成分，可列舉：十五碳酸甘油酯、錦紫蘇萃取物、龍膽萃取物、松球萃取物、蜂王漿萃取物、熊笹草萃取物、第三黃烷酮(t-flavanone)、6-苄基胺基嘌呤、當藥萃取物、卡普氯銨、敏樂定、非那利得(Finasteride)、腺苷、煙鹼醯胺、桑根萃取物、地黃萃取物、5-胺基乙醯丙酸等。

作為其他成分，可列舉：金屬離子封阻劑、pH調整劑、螯合劑、防腐/防黴劑、清涼劑、穩定劑、乳化劑、動植物蛋白質及其分解物、動植物性多糖類及其分解物、動植物性糖蛋白質及其分解物、血流促進劑、抗炎症劑、消炎劑、防腐劑、抗過敏劑、創傷治療劑、增泡劑、增黏劑、酶、色素、純化水、口腔用劑、消炎/除臭劑、苦味劑等。

又，本發明之育髮/生髮促進劑之利用形態為任意，並無限定。具體而言，作為化妝品、準藥品、醫藥品，例如可列舉：內用/外用劑、化妝水、乳液、乳霜、軟膏、洗液(lotion)、油、髮膜(mask)、皮膚清潔劑、洗髮精、潤絲精、護髮素(hair treatment)、髮霜(hair cream)、潤髮油(pomade)、造型噴霧、整髮劑、燙髮劑、養髮露(hair tonic)、染髮劑等。作為食品，例如可列舉：健康食品、標示功能性之食品、特定保健用食品等保健功能食品及特定用途食品、清涼飲料水、茶飲料、飲劑、酒精飲料等液體食品、點心、米飯類、麵包類、麵類、家常菜類、調味料等。

於將本發明之育髮/生髮促進劑以化妝品、準藥品、醫藥品之形態實施之情形時，劑型並無限定，可製成安瓿、膠囊、粉末、顆粒、丸劑、錠劑、固體劑、液劑、凝膠、氣泡、乳液、乳霜、軟膏、薄片、慕絲等多樣者。

以下，為了更詳細地對本發明進行說明而列舉實施例，但本發明並不受該等實施例任何限定。

[實施例1：毛乳頭細胞活化作用之評價]

(1-1)人頭髮毛乳頭細胞之培養方法

試驗對象細胞係使用作為廣泛用於育髮劑之藥效評價之細胞之人頭髮毛乳頭細胞(目錄編號：CA60205a，批號：2548，白色人種，來自47歲女性，銷售商：東洋紡股份有限公司)。人頭髮毛乳頭細胞係使用毛乳頭細胞增殖培養基(目錄編號：TMTPGM-250，銷售商：東洋紡股份有限公司)，於二氧化碳培養箱(5%CO₂，37℃)內進行培養。用於培養之燒瓶係利用I型膠原蛋白進行塗佈後使用。關於細胞之繼代，使用毛乳頭細胞專用繼代培養組件(目錄編號：CA090K，銷售商：東洋紡股份有限公司)，將細胞自燒瓶剝離而使用。

(1-2)人毛乳頭細胞毒性試驗

於本實施例中，將異肥皂草苷作為受驗物質，評價其對人頭髮毛乳頭細胞有無毒性。

以成為5×10³個/孔(於本試驗中為0.1mL/孔)之方式，將人頭髮毛乳頭細胞播種於有I型膠原蛋白之96孔板。於二氧化碳培養箱(5%CO₂，37℃)內培養1天之後(50%融合)，置 換為包含異肥皂草苷之試驗培養基，其後，培養3天。利用活細胞數量測定試劑SF(目錄編號：07553，銷售商：Nacalai Tesque股份有限公司)對細胞之增殖性進行比較研究。考慮到測定活細胞數量時之吸光度測定時附著於細胞之析出物對吸光度造成影響之可能性，於結束3天之培養後，將培養之上清液去除，並利用磷酸鹽緩衝生理鹽水(略稱：PBS)將細胞洗淨。利用PBS洗淨之後，針對每1孔添加包含10%之活細胞測定試劑SF之培養基100μL。添加之後，於30分鐘後及90分鐘後，對培養上清液之吸光度(測定波長450nm，參照波長595nm)進行測定。由90分鐘及30分鐘之值算出每1小時之吸光度ABS之變化量(單位：ABS/hr)。實施3次試驗。

如圖1所示，若異肥皂草苷為1000μmol/L以下，則並未對人頭髮毛乳頭細胞表現出毒性。因此，於下述異肥皂草苷之評價實驗中，使用0.1μmol/L、10μmol/L、1000μmol/L之異肥皂草苷試驗濃度。該試驗濃度係由將異肥皂草苷(分子量594.52)以成為100mmol/L之方式溶解於毛乳頭細胞增殖培養基而成之儲備溶液製備而得。

(1-3)人頭髮毛乳頭細胞活化作用之評價

以成為1.2×10⁴個/孔(於本試驗中為0.3mL/孔)之方式，將人頭髮毛乳頭細胞播種於48孔板。於二氧化碳培養箱內培養1天之後，置換為以最終濃度成為0.1μmol/L、10μmol/L、1000μmol/L之方式溶解有異肥皂草苷之毛乳頭細胞增殖培養基。 其後，培養1天及3天，利用活細胞數量測定試劑SF對各個細胞之增殖性進行比較研究。分別結束1天及3天之培養之後，將培養之上清液去除，並利用PBS將細胞洗淨。利用PBS洗淨之後，針對每1孔添加包含10%之活細胞測定試劑SF之培養基300μL。添加之後，於30分鐘後及90分鐘後，將每1孔之培養上清液100μL移至另一96孔板，並藉由微盤讀取器對吸光度(測定波長450nm，參照波長595nm)進行測定。由90分鐘及30分鐘之值算出每1小時之吸光度ABS之變化量(單位：ABS/hr)，而對細胞活化作用進行評價。實施5次試驗。再者，使用無添加對照區作為異肥皂草苷之比較對照區。

作為陽性對照，針對添加最終濃度100μmol/L之腺苷(目錄編號：016-10493，銷售商：和光純藥工業股份有限公司)及最終濃度30μmol/L之敏樂定(目錄編號：M4145-25MG，銷售商：Sigma-Aldrich Japan股份有限公司)之情形，亦進行同樣之試驗。再者，腺苷係溶解於二甲亞碸(略稱：DMSO)之後，以DMSO之最終濃度成為0.1%之方式添加至試驗培養基中。作為溶劑對照，設置0.1%DMSO試驗區。敏樂定係溶解於乙醇之後，以乙醇之最終濃度成為0.1%之方式添加至試驗培養基中。一般而言，於毛乳頭細胞中，0.1%以下之乙醇濃度不會對細胞功能造成影響，故而使用無添加對照區作為敏樂定之比較對照區。

添加作為受驗物質之異肥皂草苷之後，將培養1天後之測定結果示於圖2中，添加異肥皂草苷之後，將培養3 天後之測定結果示於圖3中。於比較試驗區間進行顯著差異(significant difference)檢驗。檢驗係以學生T-檢驗之形式而進行，對於P<0.05(歸零假說(null hypothesis)未達5%)者，判斷為有顯著性，並記載於圖中。

由圖2可明確，關於進行了處理時間為1天之異肥皂草苷處理之群，於0.1μmol/L~1000μmol/L之範圍內確認到雖較無添加對照區僅為稍許但仍顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。又，由圖3可明確，關於進行了處理時間為3天之異肥皂草苷處理之群，於0.1μmol/L~1000μmol/L之範圍內確認到較無添加對照區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。並確認到，該細胞活化作用係利用敏樂定進行處理情形之約3倍之作用。

另一方面，關於作為陽性對照物之腺苷，於3天之處理時間下，確認到較0.1%DMSO試驗區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。又，關於作為陽性對照物之敏樂定，於1天之處理時間下，確認到雖較無添加對照區僅為稍許但仍顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。關於敏樂定，於3天之處理時間下，確認到較無添加對照區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。

由該結果揭示，藉由將異肥皂草苷應用於頭皮等，可發揮極其優異之毛乳頭細胞活化作用，而可期待育髮效果及生髮效果。

[實施例2：異肥皂草苷之VEGF產生促進作用之評價]

藉由對實施了異肥皂草苷處理之人頭髮毛乳頭細胞所產生之VEGF量進行測定，而評價異肥皂草苷對人頭髮毛乳頭細胞之VEGF產生促進作用。

對於利用異肥皂草苷對人頭髮毛乳頭細胞進行了3天處理所得之培養上清液中之VEGF量，藉由ELISA套組(製品名：Human VEGF Quantikine ELISA，目錄編號：DVE00，銷售商：R & D system公司)進行測定。關於利用異肥皂草苷進行了3天處理所得之培養上清液，使用了於上述(1-3)項中培養3天時之上清液。具體而言，於上述(1-3)項中，為了對吸光度進行測定，添加異肥皂草苷3天之後，將培養之上清液去除，但於VEGF產生促進作用之評價試驗中，將添加異肥皂草苷3天之後之培養上清液回收，並將該上清液作為檢體而使用。實施5次試驗。

以下，對VEGF之測定方法進行詳細敍述。再者，關於VEGF之測定，不稀釋上清液，而使用原液。

步驟1-1.以VEGF標準原液(2000pg/mL)為基礎，使用反應緩衝液，而製備1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6pg/mL之VEGF標準溶液。

步驟1-2.將VEGF標準溶液及檢體(培養上清液)200μL添加至於各孔中添加了50μL之稀釋用液之VEGF固相化微量盤中，於室溫下反應2小時(一次反應)。

步驟1-3.將孔內之溶液去除，並利用洗淨液進行3次洗淨。

步驟1-4.將西洋山葵過氧化酶結合VEGF抗體溶液於各孔中各添加200μL，於室溫下使其反應2小時(二次反應)。

步驟1-5.將孔內之溶液去除，並利用洗淨液進行3次洗淨。

步驟1-6.將基質溶液200μL添加至各孔中，於室溫下使其反應20分鐘。

步驟1-7.將反應終止溶液於各孔中各添加50μL，並利用盤式混合器(plate mixer)混合1分鐘之後，利用盤式讀取器(plate reader)對各孔之吸光度進行測定(測定波長450nm)。

步驟1-8.由標準曲線算出檢體中之VEGF濃度。

又，使用無添加對照區作為異肥皂草苷之比較對照區。

作為陽性對照，針對添加最終濃度30μmol/L之敏樂定之情形，亦進行同樣之試驗。使用無添加對照區作為敏樂定之比較對照區。

將利用受驗物質進行了3天處理所得之培養上清液中之VEGF量之測定結果示於圖4中。與上述(1-3)項同樣地進行顯著差異檢驗，並記載於圖中。

由圖4可明確，於異肥皂草苷1000μmol/L濃度區中，與無添加對照區相比，對於人頭髮毛乳頭細胞，VEGF量顯著地增加。另一方面，關於作為陽性對照物之敏樂定，與無添加對照區相比，對於人頭髮毛乳頭細胞，VEGF量顯著地增加。

由該結果揭示，藉由將異肥皂草苷應用於頭皮等，可提高VEGF產生量，而可期待優異之育髮效果及生髮效果。

[實施例3：化妝品之製造]

將山萮菜100kg用水洗淨之後，切成1cm寬，並藉由切碎混合器將其粉碎。於經粉碎之山萮菜中添加50%丁二醇200kg，並攪拌1小時。其後，進行壓榨而獲得180kg之壓榨液。進而，於90℃下對該壓榨液進行30分鐘之加熱殺菌，而獲得萃取物。使用以此方式而獲得之山萮菜之萃取物，製造如下列成分之頭髮用化妝品。下述成分係將總量設為100g而表示。於該頭髮用化妝品100g中含有異肥皂草苷1.5mg。

[實施例3之變化例]

於上述實施例3中，作為化妝品，列舉了於頭髮用化妝品100g中含有異肥皂草苷1.5mg之例，但並不限定於此。例如，亦可於化妝品100mL中含有異肥皂草苷5μg(0.1μmol/L)~59.0mg(1,000μmol/L)。

又，於上述實施例3中，列舉了於頭髮用化妝品中含有異肥皂草苷之例，亦可含有苯基丙烷類。具體而言，可於頭髮用化妝品100mL中包含苯基丙烷類1.0mg。又，苯 基丙烷類之含量並不限定於此。例如，亦可於化妝品100mL中含有苯基丙烷類0.001~100mg。

[實施例4：食品之製造(其一)]

將山萮菜100kg用水洗淨之後，切成1cm寬，並藉由切碎混合器將其粉碎。於經粉碎之山萮菜中添加50%乙醇200kg，並攪拌1小時。其後，進行壓榨而獲得180kg之液體。進而，將該液體濃縮而去除醇成分之後，於90℃下進行30分鐘之加熱處理，藉此進行殺菌。添加纖維素10kg並進行混練之後，進行乾燥、粉碎，而獲得山萮菜之萃取物粉末。將以此方式而獲得之萃取物粉末200mg填充於硬膠囊(3號)中，而製造劑型為膠囊之食品(例如，補充品等)。該膠囊中之異肥皂草苷係以1mg/粒而含有。

[實施例5：食品之製造(其二)]

使用實施例4中所製作之萃取物粉末150mg，以如下所示之調配比製備原料組合物，並進行乾壓製錠，而製造劑型為錠劑之食品(例如，補充品等)。該錠劑中之異肥皂草苷之含量為0.75mg/粒。

[實施例6：食品之製造(其三)]

將山萮菜100kg洗淨並切斷，添加50%乙醇200kg，而獲得180kg之萃取液。將所獲得之萃取液濃縮而去除醇成分，添加纖維素30kg並進行乾燥，而將其粉末化。對所獲得之粉末進行乾壓製錠，而製成1錠200mg之錠劑。於1錠中包含1.0mg之苯基丙烷類。

[實施例4、5、6之變化例]

於上述實施例5中，作為劑型為錠劑之食品，列舉了於1.5g/粒之錠劑中含有異肥皂草苷0.75mg/粒之例，但並不限定於此。例如，亦可於250mg/粒之錠劑中含有異肥皂草苷0.5mg~100mg/粒。

又，於上述實施例5中，列舉了錠劑之製造方法之例，但並不限定於此。例如，亦可將異肥皂草苷與糊精混合，並進行乾壓製錠，而製造錠劑。又，例如，亦可將實施例4中所製作之萃取物粉末與糊精混合，並進行乾壓製錠，而製造錠劑。

又，於上述實施例6中，列舉了於1錠中含有1.0mg之苯基丙烷類之例，但並不限定於此。例如，亦可藉由改變濃縮率，而於1錠中含有1.0mg~100mg之苯基丙烷類。

[實施例7：除異肥皂草苷以外之受驗物質之評價]

於實施例7中，在利用分別添加有表1所示之受驗物質之培養液培養人頭髮毛乳頭細胞之後，對活細胞數量進行測定，並對VEGF產生量、及FGF-7基因表現量進行驗證。

[表1]

作為受驗物質之芹菜素，使用和光純藥工業股份有限公司之目錄編號為012-18913者。作為受驗物質之香豆酸，使用Sigma-Aldrich公司之目錄編號為C9008者。作為受驗物質之咖啡酸甲酯，使用Alfa Aesar公司之目錄編號為J63876者。

又，將為了製作各受驗物質之儲備溶液而使用之溶劑及儲備溶液之濃度示於表1中。各儲備溶液係過濾殺菌後用於試驗。

關於作為陽性對照之腺苷，將DMSO作為溶劑而製作100mmol/L之儲備溶液，並以最終濃度成為100μmol/L之方式將其添加至試驗培養基中(使用0.1%DMSO試驗區作為溶劑對照)。關於敏樂定，使用50%乙醇而製作濃度15mmol/L之儲備溶液，並以最終濃度成為30μmol/L之方式將其添加至試驗培養基中。由於此時之溶劑(乙醇)濃度為0.2%，故而將0.2%乙醇試驗區作為對照區。

(7-1)人頭髮毛乳頭細胞之培養方法

試驗對象細胞係使用人頭髮毛乳頭細胞(目錄編號：CA602t05a，批號：2868，白色人種，來自51歲男性，頭頂部，銷售商：東洋紡股份有限公司)。與實施例1之(1-1)項所 記載之方法同樣地培養人頭髮毛乳頭細胞。

(7-2)人毛乳頭細胞毒性試驗

與實施例1之(1-2)項所記載之方法同樣地評價受驗物質對人頭髮毛乳頭細胞有無毒性。將其結果示於圖5~圖7中。

如圖5所示，芹菜素為0.08mmol/L以上時，對人頭髮毛乳頭細胞表現出了毒性。如圖6所示，香豆酸為2mmol/L以上時，對人頭髮毛乳頭細胞表現出了毒性。如圖7所示，咖啡酸甲酯為0.016mmol/L以上時，對人頭髮毛乳頭細胞表現出了毒性。基於細胞毒性試驗之結果，如表2所示般設定本試驗中之試驗濃度。

由於各受驗物質之試驗最高濃度下之溶劑濃度為0.1%以下，故而判斷本試驗中不存在溶劑之影響，於顯著差異比較中，將無添加對照區作為比較基準。再者，檢驗係以學生T-檢驗之形式而進行，對於P<0.1、P<0.05、P<0.01、及P<0.001者，判斷為有顯著性，並記載於圖中。

(7-3)人頭髮毛乳頭細胞活化作用及VEGF產生促進作用之評價

以成為1.2×10⁴個/孔(於本試驗中為0.3mL/孔)之方式，將人頭髮毛乳頭細胞播種於48孔板。於二氧化碳培養箱 (5%CO₂，37℃)內培養1天之後，置換為包含受驗物質之培養基。其後，培養3天，並利用活細胞數量測定試劑SF對各個細胞之增殖性進行比較研究。實施5次試驗。結束3天之培養之後，將培養之上清液回收，與實施例2同樣地藉由ELISA套組對該上清液中之VEGF產生量進行測定。

進而，去除該上清液，並利用PBS將細胞洗淨之後，添加包含10%之活細胞測定試劑SF之培養基(300μL/孔)。添加之後，於30分鐘後及90分鐘後將每1孔之培養上清液100μL移至另一96孔板，並藉由微盤讀取器對吸光度(測定波長450nm，參照波長595nm)進行測定。由90分鐘及30分鐘之值算出每1小時之吸光度ABS之變化量(單位：ABS/hr)，而對細胞活化作用進行評價。

對於藉由顯著差異檢驗而判斷為有顯著性之受驗物質，將活細胞數量之測定結果示於圖8中，將VEGF蛋白產生量之結果示於圖9中。

如圖8所示，關於利用芹菜素進行處理之群，於0.001μmol/L~1μmol/L之範圍內確認到較無添加對照區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。又，關於利用芹菜素進行處理之群，於10μmol/L並未表現出顯著性。由此，關於利用芹菜素進行處理之群，認為於0.001μmol/L~9μmol/L之範圍內確認到較無添加對照區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。

關於利用香豆酸進行處理之群，於0.1μmol/L確 認到較無添加對照區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。又，關於利用香豆酸進行處理之群，於0.01μmol/L及10μmol/L並未表現出顯著性。由此，關於利用香豆酸進行處理之群，認為於0.011μmol/L~9μmol/L，較佳為於0.011μmol/L~5μmol/L，確認到較無添加對照區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。

另一方面，關於作為陽性對照物之腺苷，確認到較0.1%DMSO試驗區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。又，關於作為陽性對照物之敏樂定，確認到較0.2%乙醇試驗區顯著之對人頭髮毛乳頭細胞之細胞活化作用。

由該結果揭示，藉由將芹菜素及香豆酸應用於頭皮等，可發揮優異之毛乳頭細胞活化作用，而可期待育髮效果及生髮效果。

又，如圖9所示，關於利用芹菜素進行處理之群，於0.001μmol/L~0.01μmol/L之範圍內，對於人頭髮毛乳頭細胞，較無添加對照區顯著地增加了VEGF量。又，關於利用芹菜素進行處理之群，於0.1μmol/L並未表現出顯著性。由此，關於利用芹菜素進行處理之群，認為於0.001μmol/L~0.09μmol/L之範圍內，對於人頭髮毛乳頭細胞，較無添加對照區顯著地增加VEGF量。

關於利用咖啡酸甲酯進行處理之群，於1μmol/L，對於人頭髮毛乳頭細胞，較無添加對照區顯著地增加了VEGF量。又，關於利用咖啡酸甲酯進行處理之群，於0.1 μmol/L及10μmol/L並未表現出顯著性。由此，關於利用咖啡酸甲酯進行處理之群，認為於0.11μmol/L~9μmol/L，較佳為於0.011μmol/L~5μmol/L，對於人頭髮毛乳頭細胞，較無添加對照區顯著地增加VEGF量。

另一方面，關於作為陽性對照物之腺苷，對於人頭髮毛乳頭細胞，雖較0.1%DMSO試驗區僅為稍許但仍顯著地增加了VEGF量。又，關於作為陽性對照物之敏樂定，對於人頭髮毛乳頭細胞，較0.2%乙醇試驗區顯著地增加了VEGF量。

(7-4)FGF-7基因表現之評價

以成為1×10⁵個/孔(於本試驗中為0.3mL/孔)之方式，將人頭髮毛乳頭細胞播種於有膠原蛋白之48孔板。於二氧化碳培養箱內(5%CO₂，37℃)培養1天之後(確認100%融合)，置換為包含受驗物質(3個階段濃度：無毒性濃度區域)之培養基。其後，培養2小時，將總RNA(Ribonucleic Acid，核糖核酸)回收，並反轉錄為cDNA(complementary Deoxyribonucleic Acid，互補去氧核糖核酸)之後，藉由即時PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈鎖反應)法對FGF-7基因表現進行測定。使用GAPDH(Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase，甘油醛-3-磷酸脫氫酶)基因作為內部標準，以與陰性對照群之相對值之形式算出，實施3次試驗。各方法之詳細內容如下所示。

首先，自細胞之總RNA之回收及cDNA化係根據FastLane Cell RT-PCR套組之步驟而進行。

步驟7-1.於每1孔之利用PBS洗淨之細胞中添加500μL之緩衝劑FCW，並立即將緩衝劑FCW去除抽吸。

步驟7-2.針對每1孔添加200μL之緩衝劑FCP，於室溫(25℃)下培養5分鐘之後，將FastLane溶解產物移至96孔之PCR管。於進行下列之cDNA化作業之前將管以-80℃保存。

步驟7-3.於室溫下將步驟7-2之溶解產物溶解。於新的PCR管中添加2μL之gDNA Wipeout Buffer、1μL之FastLane溶解產物、11μL之無RNase(Ribonuclease，核糖核酸酶)之水，並於42℃下反應5分鐘。其後，立即移至冰上(實際上，於裝有溶解產物之管中適量添加gDNA Wipeout Buffer與無RNase之水之預混試劑(Master mix))。

步驟7-4.於步驟7-3中所獲得之反應液14μL中添加反轉錄反應預混試劑(1μL之Quantiscript Reverse Transcriptase、4μL之Quantiscript RT Buffer、1μL之RT Primer Mix/管)6μL，並於42℃下培養30分鐘。

步驟7-5.藉由於95℃下對反應液進行3分鐘之處理而使反轉錄酶失活。將該反應液作為合成cDNA用於即時PCR。用於解析之前以-80℃進行保存。

其次，如下所示般於即時PCR專用管中調整反應液，並進行PCR。作為PCR反應，進行60個循環之95℃ 10秒鐘及60℃ 30秒鐘之反應。

用於試驗之FGF-7之特異性引子、及作為內部標準之GADPH之特異性引子如下所示。

FGF-7之引子

正向引子：tctgtcgaacacagtggtacctgag(序列編號1)

反向引子：gccactgtcctgatttccatga(序列編號2)

GADPH之引子

正向引子：catccctgcctctactggcgctgcc(序列編號3)

反向引子：ccaggatgcccttgagggggccctc(序列編號4)

如下所示般算出各基因之相對表現量。由各基因之增幅曲線與閾值線之交點算出Ct值(PCR循環數)。自目標基因之Ct值減去內部標準GAPDH基因之Ct值，即Ct(目標基因)-Ct(GAPDH2)=ΔCt值。進而，自ΔCt值減去空白組之平均ΔCt值，即ΔCt(樣本處理區)-ΔCt(空白組區)=ΔΔCt值。將ΔΔCt值代入乘數項而得之2^-ΔΔCt值為相對表現量。

對於藉由顯著差異檢驗而判斷為有顯著性之受驗物質，將FGF-7基因表現量之結果示於圖10中。

如圖10所示，關於利用香豆酸進行處理之群，於0.001 μmol/L，對於人頭髮毛乳頭細胞，較無添加對照區顯著地表現出了FGF-7基因表現之上升。又，關於利用香豆酸進行處理之群，於0.01μmol/L並未表現出顯著性。由此，關於利用香豆酸進行處理之群，認為於0.001μmol/L~0.009μmol/L，較佳為於0.001μmol/L~0.005μmol/L，對於人頭髮毛乳頭細胞，較無添加對照區顯著地表現出FGF-7基因表現之上升。

另一方面，關於作為陽性對照物之腺苷，對於人頭髮毛乳頭細胞，較0.1%DMSO試驗區顯著地表現出了FGF-7基因表現之上升。

以上，對育髮/生髮促進劑之實施例進行了說明，但關於上述實施例中例示之構成，可進行各種變化。例如，於上述實施例中，列舉了使用異肥皂草苷及芹菜素之例作為上述式(I)所表示之類黃酮類之例，但並不限定於此。除了異肥皂草苷及芹菜素以外，亦可使用已於本說明書中例示之類黃酮類，於使用該等類黃酮類之情形時，亦可期待與使用異肥皂草苷之情形同樣之育髮/生髮促進效果。

又，於上述實施例中，列舉了利用山萮菜作為化妝品及食品之原料之例，但並不限定於此。化妝品及食品之原料例如可為西洋山葵，亦可將山萮菜與西洋山葵併用。

<110> 金印股份有限公司

<120> 育髮/生髮促進劑

<160> 6

<210> 1

<211>

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成DNA

<400>1

<160> 6

<210> 2

<211>

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成DNA

<400> 2

<160> 6

<210> 3

<211>

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成DNA

<400>3

<160> 6

<210> 4

<211>

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成DNA

<400>4

Claims (11)

1. 一種異肥皂草苷在製備育髮/生髮促進劑上的用途。
2. 如請求項第1項之異肥皂草苷的用途，其中該異肥皂草苷為自山葵及西洋山葵之中至少一者萃取之成分。
3. 一種異肥皂草苷在製備醫藥品上的用途，其中該醫藥品用以藉由促進毛乳頭細胞產生血管內皮細胞增殖因子(VEGF)來促進育髮/生髮的治療或預防脫髮。
4. 一種異肥皂草苷在製備醫藥品上的用途，其中該醫藥品用以促進毛乳頭細胞產生血管內皮細胞增殖因子(VEGF)的治療或預防脫髮。
5. 一種異肥皂草苷在製備醫藥品上的用途，其中該醫藥品用以藉由促進毛乳頭細胞之細胞活化來促進育髮/生髮的治療或預防脫髮。
6. 一種異肥皂草苷在製備醫藥品上的用途，其中該醫藥品用以促進毛乳頭細胞之細胞活化的治療或預防脫髮。
7. 如請求項第3至6項中任一項之異肥皂草苷的用途，其中該異肥皂草苷為自山葵及西洋山葵之中至少一者 萃取之成分。
8. 如請求項第3至6項中任一項之異肥皂草苷的用途，其中該醫藥品包含於化妝品中，該化妝品中之異肥皂草苷之含量為0.001μmol/L至5,000μmol/L。
9. 如請求項第3至6項中任一項之異肥皂草苷的用途，其中該醫藥品係經口攝取。
10. 如請求項第3至6項中任一項之異肥皂草苷的用途，其中該醫藥品係應用於頭皮。
11. 如請求項第3至6項中任一項之異肥皂草苷的用途，其中該醫藥品係以自安瓿、膠囊、粉末、顆粒、丸劑、錠劑、固體劑、液劑、凝膠、氣泡、乳液、乳霜、軟膏、薄片、及慕絲中任選的形態攝取。

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