JP6964290B2

JP6964290B2 - Ａｔｐ産生促進用剤

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Publication number: JP6964290B2
Application number: JP2017200782A
Authority: JP
Inventors: 淑萍惠; 逸興馬; 震陳; 博敏布田; 浩志佐藤
Original assignee: Hokkaido University NUC
Current assignee: Hokkaido University NUC
Priority date: 2017-10-17
Filing date: 2017-10-17
Publication date: 2021-11-10
Anticipated expiration: 2037-10-17
Also published as: JP2019073476A

Description

本発明は、ＡＴＰ産生促進用剤に関し、さらに詳しくは、大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分を有効成分として含むＡＴＰ産生促進用剤、該ＡＴＰ産生促進用剤を含んでなる、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）用飲食品に関する。

ＡＴＰ（adenosine triphosphate；アデノシン三リン酸）は、全ての生体の細胞に広く分布し、特に真核生物の生体内反応のエネルギー源として、重要な役割を担っている。ＡＴＰは、例えば、糖代謝、筋収縮、能動輸送、生合成等の諸種の生体内反応において、重要なエネルギー源として機能している。
したがって、運動時に限らず、安静時においても、ＡＴＰの産生を促進し、該ＡＴＰを細胞に補給することで、細胞の増殖、代謝、修復等の細胞機能の活性化や抗老化（アンチエイジング）の効果が期待できる。

このため、安全性が高く、長期間服用しても副作用がない天然物由来のＡＴＰ産生促進作用を有する成分が着目され諸種の提案がなされている（例えば、特許文献１〜５参照）。しかしながら、より効果が高く、安全性が優れ、日常的に安心して服用可能な物質が期待されている。

一方、麦類の若葉、特に大麦若葉は、抗潰瘍作用、抗高コレステロール作用、抗炎症作用、血糖降下作用、抗変異原作用、抗血栓作用、血管保護作用、脂肪細胞分化抑制作用、メラミン合成阻害作用、骨粗鬆症予防作用、活性酸素消去酵素（ＳＯＤ）遺伝子発現促進作用等の多彩な生理作用を有することが報告されている（例えば、非特許文献1、特許文献６〜９参照）。また、その製造方法についても諸種の提案がなされている（例えば、特許文献１０〜１２参照）。しかしながら、大麦若葉が、ＡＴＰ産生促進作用を有することについて、本発明者らの知る限り、報告はなされていない。

特開２０１３−１３９３９４号公報特開２０１１−１８４３８１号公報特開２０１１−１６２５０４号公報特開２０１０−１２０９０８号公報特開２００９−２５６２７２号公報特開２００８−５６５８０号公報特開２０１１−５１９４８号公報特開２０１３−６３９４０号公報特開２０１５−１４０３３８号公報特開２００９−１４８２１３号公報特開２００３−３３１５１号公報特開２００２−６５２０４号公報

萩原義秀、他「大麦若葉青汁粉末の生理機能性物質」日本食品化学工学会誌第４８巻第１０号第７１２〜７２５頁２００１年１０月

細胞内でＡＴＰ産生を促進できれば、前記のとおり、細胞機能の活性化や抗老化（アンチエイジング）の効果が期待できる。そこで、本発明の課題は、安全性が高く、より高いＡＴＰ産生促進効果を有し、長期間にわたって安心して服用できるＡＴＰ産生促進剤や、該ＡＴＰ産生促進剤を含む、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）用飲食品を提供することにある。

本発明者らは、上記課題について鋭意検討した結果、長期間服用しても安全である大麦若葉が、ＡＴＰ産生の促進作用を有すること、また大麦若葉に含まれる特定の成分がＡＴＰ産生の促進作用を有することを見いだし、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下のとおりである。

（１）大麦若葉、又は大麦若葉に含まれる特定成分を有効成分として含む、ＡＴＰ産生促進用剤。
（２）大麦若葉が、大麦若葉の搾汁粉末又は乾燥粉末である、（１）に記載のＡＴＰ産生促進用剤。
（３）大麦若葉に含まれる特定成分が、下記の化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含む、（１）又は（２）に記載のＡＴＰ産生促進用剤。
（ａ）組成式：Ｃ_３３Ｈ_４０Ｏ_１９、分子量：７４０、化合物名：ロビニン
（ｂ）組成式：Ｃ_２７Ｈ_３０Ｏ_１５、分子量：５９４、化合物名：サポナリン
（ｃ）組成式：Ｃ_２５Ｈ_３７Ｏ_５Ｎ_２、分子量：４４５
（ｄ）組成式：Ｃ_２１Ｈ_２０Ｏ_１０、分子量：４３２、化合物名：アフゼリン
（４）下記の化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分として含む、ＡＴＰ産生促進用剤。
（ａ）組成式：Ｃ_３３Ｈ_４０Ｏ_１９、分子量：７４０、化合物名：ロビニン
（ｂ）組成式：Ｃ_２７Ｈ_３０Ｏ_１５、分子量：５９４、化合物名：サポナリン
（ｃ）大麦若葉に由来する組成式：Ｃ_２５Ｈ_３７Ｏ_５Ｎ_２、分子量：４４５の化合物
（ｄ）組成式：Ｃ_２１Ｈ_２０Ｏ_１０、分子量：４３２、化合物名：アフゼリン
（５）上記（１）〜（４）の何れかに記載のＡＴＰ産生促進用剤を含んでなる、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患もしくは状態（症状）の予防又は改善（治療）用飲食品。

また、本発明の実施の他の形態として、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）を必要とする対象者に、大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分、あるいは上記化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を投与する工程を備えた、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）を予防又は改善（治療）する方法や、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）剤として使用するための大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分、あるいは上記化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物や、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）における使用のための大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分、あるいは上記化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物や、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）剤を製造するための大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分、あるいは上記化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物の使用を挙げることができる。

本発明によれば、有効成分である大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分、あるいは上記化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物が細胞内のＡＴＰ産生促進作用、すなわちエネルギー産生促進作用を有するので、細胞の増殖、代謝、修復等の細胞機能の活性化や抗老化（アンチエイジング）等の効果が期待できる。また、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）を必要とする対象者に、副作用を伴うことなく、かかる疾患若しくは状態の予防又は改善（治療）が期待される。

本発明に用いられる大麦若葉は、安全性には全く問題がなく飲食品又は医薬品の形態に自由に調製することができるため、健常者はもとより、老齢者、病弱者、病後の人等も長期間に亘って摂取することができる。

搾汁液の分画フローを示す図である。細胞毒性試験（ＭＴＴアッセイ）の結果を示す図である。酢酸エチル分画（ＢＬＥ）、水層分画（ＢＬＷ）のＡＴＰ産生量を示す図である。酢酸エチル分画（ＢＬＥ）のＨＰＬＣ分析によるクロマトグラムを示す図である。ＨＰＬＣにより得られた各画分のＡＴＰ産生量を示す図である。ＨＰＬＣ画分（ＢＬＥ−５）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析結果を示す図である。ＨＰＬＣ画分（ＢＬＥ−６）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析結果を示す図である。ＨＰＬＣ画分（ＢＬＥ−８）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析結果を示す図である。ＨＰＬＣ画分（ＢＬＥ−９）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析結果を示す図である。

以下に本発明の実施の形態を詳細に説明するが、以下の説明は、本発明の実施の形態の一例であり、本発明は、以下の記載内容に限定されるものではない。なお、本明細書において「〜」という表現を用いる場合、その前後の数値又は物性値を含む表現として用いるものとする。

本発明の好ましい態様において、ＡＴＰ産生促進用剤は、大麦若葉を有効成分として含むものであり、大麦若葉には、分けつ開始期から出穂開始前期（草丈が２０〜４０ｃｍ程度）に収穫された大麦の若葉（茎葉）が好適に用いられる。

ここで、大麦としては、例えば、二条大麦、四条大麦、六条大麦、裸大麦等のHordeum vulgare種に属するものであれば、如何なる種でもよく、どの品種も用いることができるが、二条大麦、六条大麦、裸大麦が好ましく、六条大麦が特に好ましい。

さらに具体的には、二条大麦（ビール大麦）の品種としては、例えば、あおみのり、あぐりもち、アサカゴールド、きぬゆたか、おうみゆたか、キリニジョウ、はるな二条、あまぎ二条、ふじ二条、イシュクシラズ、ミサトゴールデン、カワホナミ、カワミズキ、きぬか二条、こまき二条、さきたま二条、とね二条、サチホゴールデン、さつきばれ、しゅんれい、ミハルゴールド、スカイゴールデン、タカチホゴールデン、つゆしらず、とね二条、なす二条、ニシノゴールド、ニシノチカラ、ニシノホシ、はるか二条、にらさき二条、にら二条、はるしずく、さつき二条、ほうしゅん、ミカモゴールデン、ミホゴールデン、みょうぎ二条、ヤシオゴールデン、ヤチホゴールデン、北育４１号、彩の星、りょうふう等が挙げられる。

六条大麦の品種としては、例えば、アサマムギ、カシマゴール、ミノリムギ、カトリムギ、ムサシノムギ、ドリルムギ、サナダムギ、はがねむぎ、さやかぜ、すずかぜ、シュンライ、シルキースノウ、シンジュボシ、すずかぜ、セツゲンモチ、ナトリオオムギ、ハマユタカ、ハヤミオオムギ、ファイバースノウ、倍取、ミユキオオムギ等が挙げられる。

裸大麦の品種としては、例えば、イチバンボシ、センボンハダカ、サヌキハダカ、キカイハダカ、サンシュウ、ナンプウハダカ、シラタマハダカ、ユウナギハダカ、ダイシモチ、トヨノカゼ、ハヤテハダカ、赤神力、一早生、ビワイロハダカ、ユウナギハダカ、ベニハダカ、ハシリハダカ、マンネンボシ（旧マンテンボシ）、センボンハダカ等が挙げられる。

これら品種は各農業試験場、農業研究センター、民間企業等により育成され、実や若葉等が食用（飲料を含む。）に利用されているものである。これら品種から、その栽培地域に適した品種を選択して育成し、若葉（茎葉）を収穫するのが好ましい。

本発明における大麦若葉とは、上記のとおり、分けつ開始期から出穂開始前期までの背丈が２０〜４０ｃｍ程度に成長した若葉（茎葉）そのものやその処理物であれば如何なる形態のものであってもよい。

若葉（茎葉）の処理物としては、例えば、その搾汁処理物、粉砕処理物、細断処理物、乾燥処理物、焙煎処理物、抽出処理物、粉末化処理物、凍結処理物の他、搾汁・乾燥粉末化処理物、乾燥処理物、粉砕・濾過処理物（ピューレ、ジュース）、細断・熱湯抽出処理物等の処理物、これらの組み合わせ処理物等が挙げられる。

これらの中で、通常用いられる形態としては、若葉（茎葉）の搾汁処理物（搾汁液）の粉末化処理物（以下「搾汁粉末」ということがある。）、若葉の乾燥処理物（以下「乾燥粉末」ということがある。）が好適である。

ここで、搾汁粉末は、例えば、特許文献６〜１０等に記載の方法に準じて、大麦の若葉を収穫した（刈り取った）後に、圧搾により搾り出した液を、必要に応じて適当な賦形剤と混合し、噴霧乾燥することにより調製することができる。この搾汁粉末は、そのままで、あるいは他の賦形剤等を配合して、本発明のＡＴＰ産生促進用剤として好適に利用できる。

また、乾燥粉末は、例えば、特許文献１１、１２等に記載の方法に準じて、大麦の若葉を収穫した（刈り取った）後に、細断し、乾燥処理及び粉砕処理、必要に応じてブランチング処理を組み合わせて調製することができる。この乾燥粉末は、そのままで、あるいは他の賦形剤等を配合して、本発明のＡＴＰ産生促進用剤として好適に利用できる。

本発明において、大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分は、後述する実施例において具体的に示す通り、細胞内のＡＴＰ産生促進作用、すなわちエネルギー産生促進作用を有するので、本発明のＡＴＰ産生促進用剤を用いることにより、細胞の増殖、代謝、修復等の細胞機能の活性化や抗老化（アンチエイジング）等の効果が期待できる。また、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）を必要とする対象者に、副作用を伴うことなく、かかる疾患若しくは状態の予防又は改善（治療）が期待される。かかるＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態としては、例えば、神経変性疾患（アルツハイマー病やパーキンソン病等）、慢性腎臓病、糖尿病、心疾患、肝機能障害等が挙げられる（「新たなＡＴＰ産生メカニズムの解明とそのミトコンドリア病治療薬への応用‐治療薬候補ＭＡ−５はミトコンドリア機能を活性化する‐」東北大学２０１７年プレスリリース（２０１７年６月１日）https://www.tohoku.ac.jp/japanese/2017/06/press20170601-01.html参照）。

大麦若葉には、既に諸種の生理活性成分の存在することが確認されている（例えば、非特許文献１参照）。本発明者らの検討によれば、少なくとも下記の化合物（ａ）〜（ｄ）が、上記ＡＴＰ産生促進作用の活性成分であることが推察された。
（ａ）組成式：Ｃ_３３Ｈ_４０Ｏ_１９、分子量：７４０、化合物名：ロビニン
（ｂ）組成式：Ｃ_２７Ｈ_３０Ｏ_１５、分子量：５９４、化合物名：サポナリン
（ｃ）組成式：Ｃ_２５Ｈ_３７Ｏ_５Ｎ_２、分子量：４４５
（ｄ）組成式：Ｃ_２１Ｈ_２０Ｏ_１０、分子量：４３２、化合物名：アフゼリン
ただし、本発明におけるＡＴＰ産生促進用剤の活性成分は、大麦若葉に由来するものであれば、これら４種の化合物に限定されるものではなく、如何なる成分であってもよい。

ここで、ロビニン（robinin）、サポナリン（Saponarin）及びアフゼリン（Afzelin）は、何れも３−ヒドロキシフラボン（３−ヒドロキシ−２−フェニルクロメン−４−オン）骨格を有するフラボノイドに糖がグリコシド結合により結合した化合物、即ちフラボノール配糖体（flavonol glycoside）である。したがって、本発明におけるＡＴＰ産生促進用剤は、フラボノール配糖体が有効成分である可能性がある。

フラボノール配糖体としては、上記３種の化合物に限定されず、単独又複数の種でＡＴＰ産生促進作用を有するものであれば、如何なるフラボノール配糖体であってもよい。具体的は、例えば、上記３種の化合物の他に、アストラガリン（astragalin）、アザレイン（azalein）、ヒペロシド（hyperoside）、イソクェルシトリン（イソクエルシトリン、イソケルシトリン、isoquercitrin）、ケンペリトリン（kaempferitrin）、クェルシトリン（クエルシトリン、ケルシトリン、quercitrin）、ルチン（rutin、ルトサイド、クェルセチン−３−ルチノシド）、アムレンシン（amurensin）、イカリイン（icariin）等が挙げられる。

よって、本発明のＡＴＰ産生促進用剤は、上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる何れかの化合物を含み、ＡＴＰ産生の促進作用を有するものであれば、上記化合物やフラボノール配糖体が大麦若葉に由来するものに限られず、如何なる植物に由来するものでもよい。また、本発明のＡＴＰ産生促進用剤は、単離された化合物やフラボノール配糖体を有効成分として含むものでもよく、これら何れの剤も本発明に包含される。なお、本明細書において、上記化合物及び／又はフラボノール配糖体を「特定成分」と称することがある。

また、本発明のＡＴＰ産生促進用剤は、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）を必要とする対象者に、大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分を投与する工程を備えた、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）を予防又は改善（治療）する方法や、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）剤として使用するための大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分や、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）における使用のための大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分や、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）剤を製造するための大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分の使用が期待される。

なお、本明細書において、疾患若しくは状態の「予防又は改善」とは、疾患若しくは状態の、調節、進行の遅延、緩和、発症予防、再発予防、抑制等を包含する意味で使用される。

本発明における大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分は、水との親和性が高く、溶解又は懸濁状態とすることができ、飲食品及び医薬品に通常添加され得る成分との混和性に優れている。また、大麦若葉は既に飲食品として長年にわたって用いられている成分であり、また特定成分は大麦若葉に含まれている成分であるため安全性に優れている。したがって、この大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分を有効成分とするＡＴＰ産生促進用剤は、日常の食生活に適宜取り入れて無理なく安心して摂取することができる。

本発明のＡＴＰ産生促進用剤は、「ＡＴＰ産生を促進するために用いる」という用途が限定された、細胞内のＡＴＰ産生促進の有効成分として大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分を含有する剤であり、単独でも飲食品や医薬品（製剤）として使用することができる。また、飲食品や医薬品等の種々の組成物に、ＡＴＰ産生促進の有効成分として含有させることができる。これにより、ＡＴＰ産生促進用の飲食品組成物又は医薬品組成物を得ることができる。得られたＡＴＰ産生促進用の飲食品組成物又は医薬品組成物は、上述のＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）に有効に用いることができる。

本発明におけるＡＴＰ産生促進用剤は、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、固体成形物等、経口摂取可能な形態であればよく特に限定されない。具体的には、例えば、粉末剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤の他、飲料、食品等の通常の食品や医薬品で用いられる形態を挙げることができる。また、製剤の形態としては、摂取量を調節しやすい粉末剤やカプセル剤、錠剤、顆粒剤、ドリンク等を好適に例示することができる。

本発明において、大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分は、そのまま用いてもよく、従来から知られている通常の方法で所望の製剤を製造して用いてもよい。例えば、製剤の製造上許可される諸種の添加剤と混合し、組成物として成型することができる。添加剤としては、本発明の効果を損なわない範囲において添加されるものであればよく、例えば、生薬、ビタミン、ミネラル等の他に、賦形剤、界面活性剤、被膜剤、油脂類、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料；着色料；香料；緩衝剤；酸化防止剤；ｐＨ調整剤；クエン酸、リンゴ酸、グルコン酸等の酸味料；等が挙げられる。

上記賦形剤としては、例えば、乳糖、デンプン、セルロース、マルチトール、デキストリン等を挙げることができる。上記界面活性剤としては、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等を挙げることができる。上記被膜剤としては、例えば、ゼラチン、プルラン、シェラック、ツェイン等を挙げることができる。上記油脂類としては、例えば、小麦胚芽油、米胚芽油、サフラワー油等を挙げることができる。上記ワックス類としては、例えば、ミツロウ、米糠ロウ、カルナウバロウ等を挙げることができる。上記甘味料としては、ショ糖、ブドウ糖、果糖、ステビア、サッカリン、スクラロース等を挙げることができる。

上記生薬としては、例えば、高麗人参、アメリカ人参、田七人参、霊芝、プロポリス、アガリクス、ブルーベリー、イチョウ葉及びその抽出物等を挙げることができる。上記ビタミンとしては、例えば、ビタミンＤ、Ｋ等の油溶性ビタミン、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、Ｃ、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン等の水溶性ビタミンを挙げることができる。

また、本発明によれば、大麦若葉又は大麦若葉に含まれる特定成分を有効成分とするＡＴＰ産生促進用剤を含んでなる飲食品又は医薬品が提供される。ここで「含んでなる」とは、所望する製品形態に応じた生理学的に許容されうる担体を含んでいてもよく、また併用可能な他の補助成分を含有する場合も意味する。

本発明において、飲食品とは、医薬品以外のものであって、前記のとおり経口摂取可能な形態であればよく特に限定されない。具体的には、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、アルコール飲料等の飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、唐揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品；飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレーやシチューの素類等の調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品；卵加工品、魚肉ハムやソーセージ、水産練り製品等の水産加工品；畜肉ハムやソーセージ等の畜産加工品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品；冷凍食品等が挙げられる。

また飲食品には、健康食品（例えば、機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、栄養強化食品、栄養調整食品、サプリメント等）、保健機能食品（例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品等）、特別用途食品（例えば、病者用食品、乳幼児用調整粉乳、妊産婦又は授乳婦用粉乳等）等の他、脂質吸収の増加やＡＴＰ産生の低下に起因する疾患又は状態（症状）のリスク低減、予防又は改善の表示を付した飲食品のような分類のものも包含される。

本発明の別の態様によれば、ＡＴＰ産生促進用剤を含んでなる飲食品であって、細胞内のＡＴＰ産生促進により予防又は改善しうる疾患若しくは状態の予防、又は改善する機能が表示された飲食品が提供されうる。

本発明において、医薬品とは、製剤化のために許容されうる添加剤を併用して、常法に従い、経口製剤又は非経口製剤として調製したものである。経口製剤の場合には、前記のとおり、経口摂取可能な形態であれば特に限定されない。また、非経口製剤の場合には、注射剤や座剤の形態をとることができる。簡易性の点からは、経口製剤であることが好ましい。製剤化のために許容されうる添加剤としては、前記と同様のものが挙げられる。

本発明において、ＡＴＰ産生促進用剤中の有効成分の含有量は、製剤の種類、形態や、予防又は改善の目的等により一律に規定は難しいが、例えば、成人（体重６０ｋｇ）１日あたり、大麦若葉の搾汁粉末として、通常１５ｍｇ〜１５ｇ程度、好ましくは５０ｍｇ〜９ｇ程度、また、大麦若葉の乾燥粉末として、通常５０ｍｇ〜１５ｇ程度、好ましくは１００ｍｇ〜９ｇ程度である。さらに、必要な１日あたりの有効成分の摂取量を摂取（服用）できるように、１日あたりの摂取量を考慮し、製剤中の含有量を適宜設定すればよい。また、特定成分の含有量は、上記大麦若葉の搾汁粉末又は乾燥粉末に含まれる程度の量であればよい。

以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。

［実施例１］大麦若葉搾汁液の製造
特開２００９−１４８２１３号公報（特許文献１０）に記載の方法に準じて、刈り取った大麦の若葉（茎葉）１０ｋｇを圧搾し、搾汁液を８ｋｇ得た。

［実施例２］大麦若葉搾汁液の機能性評価
２−１．序論
長鎖脂肪酸は骨格筋収縮時のエネルギー産生のための重要な燃料である。パルミチン酸が飽和すると筋細胞中のＡＴＰ減少のような脂肪毒性が誘導されることがわかっている。オレイン酸のような不飽和脂肪酸は、脂肪滴中のパルミチン酸を変換することによってパルミチン酸に誘導される脂肪毒性を無毒化し、ミトコンドリアの脂肪酸酸化が増加することが報告されている（参考文献[1]、[2]参照）。

筋細胞中の脂質代謝やミトコンドリアの機能を評価するために、ラットＬ６筋管におけるパルミチン酸で誘導されるＡＴＰの減少を天然物（大麦若葉）からの抽出成分を対象とした機能性スクリーニングのインビトロモデルとして実施した。

参考文献
[1] Yuzefovych L.; Wilson G.; Rachek L. Different effects of oleate vs. palmitate on mitochondrial function, apoptosis, and insulin signaling in L6 skeletal muscle cells: role of oxidative stress. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2010, 299, E1096-1105.
[2] Henique C.; Mansouri A.; Fumey G.; Lenoir V.; Girard J.; Bouillaud F.; Prip-Buus C.; Cohen I. Increased mitochondrial fatty acid oxidation is sufficient to protect skeletal muscle cells from palmitate-induced apoptosis. J Biol Chem. 2010, 285, 36818-36827.

２−２．筋芽細胞の培養
ラットＬ６筋芽細胞培養は１０％ＦＢＳを含むハイグルコースＤＭＥＭ（Dulbecco's modified Eagle medium）にて手順どおりに培養した。筋管への分化のために、筋芽細胞がコンフルエントに達すると分化用の培地（３％馬血清と５０ｎｇ／ｍｌ濃度のインシュリンを含むハイグルコースＤＭＥＭ）で培養した。分化用の培地は頻繁に交換を行った。筋管は６日間から８日間分化させた後、様々な検討に使用した。

２−３．細胞毒性試験（ＭＴＴアッセイ）
細胞毒性試験として、ＭＴＴアッセイを行った。ＭＴＴ溶液を分化用培地に０．５ｍｇ／ｍｌ加え、３０分間インキュベートした。変換されたフォルマザンブルー結晶は酸性イソプロパノール（０．０４Ｍの塩酸を含んだイソプロパノール）で溶解し、５７０ｎｍの吸光度を測定した。

２−４．ＡＴＰアッセイ
ＡＴＰアッセイは、モレキュラープローブ社のＡＴＰ検出キットもしくはこれの同等品を用いて測定を行った。まず筋管を０．５ｍｌの氷冷していたＰＢＳで洗浄した。次に０．５ｍｌの氷冷していた細胞溶解液（０．５％ＮＰ−４０）で細胞を溶解させた。１２，０００ｇ、４℃、１０分間の遠心分離を行い、不溶性物質を沈殿させた後、５μｌずつ分注し、反応液を５０μｌ加え、室温で２０分間インキュベートした。生物発光の発光強度を測定し、ＡＴＰ標準液の検量線より定量した。全ての測定は少なくとも２回繰り返し行った。

２−５．大麦若葉抽出液（搾汁液）の分画
大麦若葉抽出液（搾汁液）３．５リットルを吸引ろ過でろ過し、そのろ液に酢酸エチルを同量加え、液液分配した。酢酸エチル層（以下「ＢＬＥ」という。）から１０．４ｇ、水層（以下「ＢＬＷ」という。）から３９．４ｇ、中間層（以下「ＢＬＧ」という。）から１６．３ｇの固形物を回収した（図１）。

２−６．ＭＴＴアッセイ結果
ＢＬＥ及びＢＬＷの細胞毒性をＭＴＴアッセイで測定した結果を図２（図２（Ａ）、図２（Ｂ））に示す。いずれの分画にも細胞毒性は見られなかった。なお、図２の結果は２例の平均値である。

２−７．ＡＴＰ産生量
ＢＬＥ及びＢＬＷのＡＴＰアッセイ結果を図３（図３（Ａ）、図３（Ｂ））に示す。図３から明らかなとおり、ＢＬＥ及びＢＬＷのＡＴＰ産生量は濃度依存的な増加を示した。なお、図３の結果は４例の平均値である。また、図３中、「*」及び「**」は、それぞれ、スチューデントｔ検定（Student's t-test）における「p<0.05」及び「p<0.01」を示す。

２−８．ＢＬＥのＨＰＬＣ分析
まず、下記の条件で、ＢＬＥから分画を進めＨＰＬＣにて２６の画分に分画した。その結果を図４に示す。
ＨＰＬＣ条件
カラム：CAPCELL PAK C18，２５０ｍｍ×１０ｍｍ，５μｍ
グラジエント：０〜３分、メタノール：水＝３５：６５
３０分までにメタノール１００％後、１５分間保持
５分間メタノール：水＝３５：６５でコンディショニング
検出波長：２１０ｎｍ
流速：４ｍｌ／ｍｉｎ

２−９．ＨＰＬＣ画分のＡＴＰ産生量
得られた２６画分の内、３〜２０画分までのＡＴＰ産生量の評価を行った。その結果を図５に示す。図５中のＢＬＥはその他画分として図４で分画した画分以外の部分をまとめたものである。図５から明らかなとおり、ＢＬＥ−３、５、６、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５画分で有意にＡＴＰ産生量の増加が確認された。特にＢＬＥ−５、６、１３、１４、１５は５０％以上の増加量を示した。

なお、図５（Ａ）〜（Ｄ）の画分の成分濃度（μｇ／ｍｌ）、例数（ｎ）は次のとおりである。
（Ａ）２５μｇ／ｍｌ、ｎ＝３
（Ｂ）２５μｇ／ｍｌ、ｎ＝４
（Ｃ）２５μｇ／ｍｌ、ｎ＝４
（Ｄ）２０μｇ／ｍｌ、ｎ＝４
また、図５中、「*」及び「**」は、それぞれ、スチューデントｔ検定（Student's t-test）における有意差、「p<0.05」及び「p<0.01」を示す。

［実施例３］活性成分の分析
３−１．ＢＬＥ−５のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
ＢＬＥ−５について、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析を行った結果、得られた分子量及びフラグメントイオンからロビニン（robinin；kaempferol-3-O-robinoside-7-O-rhamnoside）であることが推定された。分析結果を図６に示す。

３−２．ＢＬＥ−６のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
ＢＬＥ−６について、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析を行った結果、得られた分子量及びフラグメントイオンからサポナリン（saponarin）であることが推定された。分析結果を図７に示す。

３−３．ＢＬＥ−８のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
ＢＬＥ−８について、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析を行ったが、得られた分子量及びフラグメントイオンでは成分の化学構造を推定することができなかった。分析結果を図８に示す。

３−４．ＢＬＥ−９のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
ＢＬＥ−９について、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析を行った結果、得られた分子量及びフラグメントイオンからアフゼリン（afzelin；kaempferol 3-rhamnoside)であることが推定された。分析結果を図９に示す。

Claims

大麦若葉に含まれる特定成分を有効成分として含む、ＡＴＰ産生促進用剤であって、前記特定成分が、下記の化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）よりなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含む、前記ＡＴＰ産生促進用剤。
（ａ）組成式：Ｃ _３３Ｈ _４０Ｏ _１９、分子量：７４０、化合物名：ロビニン
（ｂ）組成式：Ｃ _２７Ｈ _３０Ｏ _１５、分子量：５９４、化合物名：サポナリン
（ｃ）大麦若葉を圧搾することにより得られた搾汁液から酢酸エチルにより抽出することにより得ることができる、組成式：Ｃ _２５Ｈ _３７Ｏ _５Ｎ _２、分子量：４４５の化合物
（ｄ）組成式：Ｃ _２１Ｈ _２０Ｏ _１０、分子量：４３２、化合物名：アフゼリン
請求項１に記載のＡＴＰ産生促進用剤を含んでなる、ＡＴＰ産生の低下に起因する疾患若しくは状態（症状）の予防又は改善（治療）用飲食品。