TWI659746B - 包含膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣之組成物 - Google Patents
包含膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣之組成物 Download PDFInfo
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Abstract
本發明的課題為提供一種組成物，其係即使在減低膠原蛋白胜肽的攝取量的情況下也能夠發揮出皮膚的美容改善效果。
課題解決手段為藉由將組成物中的膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的重量比設定為既定比率，可提供即使以低濃度的膠原蛋白胜肽也能有效發揮出皮膚的美容改善效果之組成物。
Description
本發明關於一種組成物，其係包含膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣。更詳細而言，本發明關於一種具有皮膚的美容改善效果的組成物，其特徵為：膠原蛋白胜肽的重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的合計重量為既定比率。
皮膚，由外側開始算起，是由角層、表皮、基底膜及真皮所構成。真皮是其中區域最廣的部分，細胞並不像表皮這樣緊密填充。而細胞外空間是被廣大而且稱為「細胞外基質」的巨大分子的網狀構造所充滿。已知此細胞外基質與皮膚的彈性、張力、鮮嫩度、新陳代謝等直接相關，皺紋或鬆弛這些皮膚老化症狀是由以纖維芽細胞與細胞外基質為主要構成成分的真皮結締組織纖維所造成。構成細胞外基質的膠原蛋白、彈力蛋白等的纖維性蛋白質、或玻尿酸、硫酸皮膚素等稱為酸性黏多糖的多糖類，是由纖維芽細胞所產生，因此，促進纖維芽細胞的增殖，可使皮膚
產生張力和光澤，有助於預防‧改善皺紋或鬆弛。從這樣的觀點看來，有文獻提出各種含有具備纖維芽細胞增殖促進作用的成分的飲料或化妝料等。
近年來發現膠原蛋白具有與預防‧改善骨質疏鬆症相關的骨骼強化作用(專利文獻1)、改善隨著年齡增加造成生物體組織機能降低的生物體組織新陳代謝促進作用(專利文獻2)、皮膚代謝促進作用、皮膚賦活作用(專利文獻3)、以預防和改善皺紋為目的之抗皮膚老化作用(專利文獻4)等的生理作用，而被廣泛利用在化妝品及飲食品用的原料或醫藥品用的生物體機能性材料。
然而有文獻報告指出，為了使如上述般的生理作用在體內充分發揮，必須大量攝取膠原蛋白胜肽，在口服攝取的情況，能夠表現出乾燥肌改善作用的人類每日有效攝取量，魚鱗膠原蛋白胜肽為5~10g，豬皮膠原蛋白胜肽為10g以上(非專利文獻1)。已知膠原蛋白分解物在消化吸收的過程中，會分解成胺基酸、二胜肽或三胜肽，報告指出其中二胜肽或三胜肽是有效果的。另外還有文獻報告了來自膠原蛋白的含羥基脯胺酸的二胜肽及三胜肽在作用於皮膚纖維芽細胞的情況，會使其細胞增殖活性化，促進膠原蛋白或玻尿酸的產生(非專利文獻2、專利文獻5)。
〔專利文獻1〕日本特開平9-255588號
〔專利文獻2〕日本特開平7-278012號
〔專利文獻3〕日本特開平9-67262號
〔專利文獻4〕日本特開2005-314265號
〔專利文獻5〕日本特許第4995155號
〔非專利文獻1〕日本食品化學工學會誌，2009年3月，第56卷，第3號，p.137~145
〔非專利文獻2〕Journal Of Dermatological Science，2007年7月，第47卷，p.102,179
如上述般，一般而言，在大量攝取膠原蛋白的情況，可發揮出有用的效果，然而為了抑制膠原蛋白特有的不良口味，希望開發出一種技術，藉由攝取較少量的膠原蛋白能夠發揮出有效的皮膚的美容改善效果。
亦即，本發明之目的為提供一種組成物，即使在減低膠原蛋白胜肽的攝取量的情況，也可發揮出有效的皮膚的美容改善效果。
為了解決上述課題潛心檢討的結果，發現藉由攝取以既定比率含有膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣之組成物，即使是低濃度的膠原蛋白胜肽，也能夠有效地
表現出皮膚的美容改善效果，而完成了本發明。
本發明包含以下的態樣，然而並不受該等所限定。
(1)一種組成物，其係包含膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣之組成物，並且膠原蛋白胜肽的重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的合計重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽+蛋白聚醣)]為1：10~1：0.0000001。
(2)如(1)所記載之組成物，其中膠原蛋白胜肽的重量與彈力蛋白胜肽的重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為1：5~1：0.000001。
(3)如(1)所記載之組成物，其中膠原蛋白胜肽的重量與蛋白聚醣的重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(蛋白聚醣)]為1：0.2~1：0.0000001。
(4)如(1)~(3)中任一項所記載之組成物，其係口服用。
(5)如(1)~(3)中任一項所記載之組成物，其係飲食品。
(6)一種皮膚改善劑，其係包含膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣之皮膚改善劑，並且膠原蛋白胜肽的重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的合計重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽+蛋白聚醣)]為1：10~1：0.0000001。
(7)如(6)所記載之皮膚改善劑，其係具備纖維芽細胞增殖促進作用。
(8)如(6)或(7)所記載之皮膚改善劑，其係具備膠原蛋白產生促進作用。
(9)如(6)~(8)中任一項所記載之皮膚改善劑，其係具備抗皮膚老化作用。
依據本發明，可提供一種組成物，即使是低濃度的膠原蛋白胜肽，也能夠有效發揮出皮膚的美容改善效果。
本發明的組成物的利點，還包括可降低呈現不良口味的膠原蛋白胜肽的量。
以下對於本發明的實施形態作詳細說明。
首先，本發明的一個態樣的組成物，其特徵為：含有膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣作為有效成分。本發明的組成物藉由具有促進存在於生物體組織，尤其皮膚的真皮組織中的纖維芽細胞的增殖的作用，而能夠發揮出皮膚的美容改善效果。
本發明所使用的膠原蛋白胜肽，可使用藉由對膠原蛋
白、或明膠等的變性膠原蛋白利用酵素、酸、鹼等實施水解處理等所得到者，另外還可使用人工合成者，亦可使用該等的1種或2種以上。膠原蛋白或明膠可使用例如來自牛、豬、雞等的動物或來自魚者，尤其是由動物的皮膚、骨及腱等的結締組織、或魚皮、魚鱗所萃取出的膠原蛋白蛋白質。
膠原蛋白胜肽的調製所使用的酵素，只要可將膠原蛋白或明膠的胜肽鍵切斷即可，可列舉例如膠原蛋白酶、木瓜酶、鳳梨蛋白酶、奇異果酵素、無花果蛋白酶、組織蛋白酶、胃蛋白酶、凝乳酶、胰蛋白酶、及將這些酵素混合而成的酵素製劑等。酸可使用例如鹽酸、硫酸、硝酸等。鹼可使用例如氫氧化鈉、氫氧化鈣等。
在本發明中，可直接使用水解後的膠原蛋白胜肽的水溶液，或可使用藉由乾燥等而粉末化之物。另外還可將對該水溶液實施通常使用的精製處理後的物體製成水溶液或粉末等的形態來使用。使用這些形態的任一者皆不會對本發明的效果造成任何影響。
另外還可使用各種分子量的膠原蛋白胜肽，而宜為例如分子量10,000以下者，例如100~7,000、100~5,000。膠原蛋白胜肽的分子量可藉由HPLC、膠體過濾法等的周知定量方法來測定。此處，膠原蛋白胜肽一般而言，分子量愈大，體內吸收性愈降低，若分子量小，則體內吸收性增加，然而會出現胜肽特有的不良口味(苦味，澀味等)。在本發明中，藉由併用彈力蛋白胜肽以及蛋白聚
醣，可降低膠原蛋白胜肽的使用量，因此即使在使用體內吸收性良好、分子量較小的膠原蛋白胜肽的情況，膠原蛋白胜肽特有的不良口味的問題也不易發生。
膠原蛋白胜肽可使用萃取物及精製物之任一者，而宜使用純度50重量%以上者，較佳為純度70重量%以上，更佳為純度90重量%以上。膠原蛋白胜肽亦可使用市售品，可使用例如「膠原蛋白胜肽SCP-5100」(新田明膠股份有限公司製)等。
本發明的組成物中的膠原蛋白胜肽含量難以藉由併用原料的種類或含量等來統一規定，而為1重量%~99.9重量%，宜為30重量%~99.9重量%，較佳為50重量%~90重量%。若膠原蛋白胜肽的含量低於1重量%或高於99.9重量%，則無法期待本發明所希望的效果。
本發明中的彈力蛋白胜肽，意指水溶性彈力蛋白胜肽。彈力蛋白胜肽可使用例如由牛、豬、雞、羊、魚等的動物性生物體組織所萃取者、或對於水溶性或不溶性的彈力蛋白以酵素、酸、鹼等實施水解處理等所得到的分解物，另外還可使用人工合成者，可使用該等的1種或2種以上。
本發明中所使用的彈力蛋白胜肽的分子量並不受特別限定，可使用各種分子量的彈力蛋白。
彈力蛋白胜肽可使用萃取物及精製物之任一者，而宜
使用純度50重量%以上者，較佳為純度70重量%以上，更佳為純度90重量%以上。彈力蛋白胜肽亦可使用市售品，可使用例如「美彈彈力蛋白FI」(日本水產股份有限公司製)、「鮪魚彈力蛋白HS-1」(Hagoromo Foods股份有限公司製)、「鰹魚彈力蛋白」(林兼產業股份有限公司製)等。
本發明的組成物中的彈力蛋白胜肽的含量會因為膠原蛋白胜肽等的併用原料的種類或含量等而變動，而為0.0000002重量%~10重量%，宜為0.000002重量%~1重量%，較佳為0.000004重量%~0.2重量%。
本發明中所使用的蛋白聚醣並不受特別限定，而可使用例如由鯊魚或鯨魚、鮭魚、魟魚等的動物軟骨所萃取者。
在本發明中可使用分子量為例如10,000~10,000,000的蛋白聚醣，宜為100,000~1,000,000，並未受到特別限定。
蛋白聚醣可使用萃取物及精製物之任一者，而宜使用純度5重量%以上者，較佳為純度10重量%以上，更佳為純度15重量%以上。蛋白聚醣亦可使用市售品。
本發明的組成物中的蛋白聚醣的含量會因為膠原蛋白胜肽等的併用原料的種類或含量等而變動，而為0.0000001重量%~5重量%，宜為0.000001重量%~0.5
重量%，較佳為0.000002重量%~0.1重量%。
在本發明中，組成物中的膠原蛋白胜肽的重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的合計重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽+蛋白聚醣)]為例如1：10~1：0.0000001，宜為1：5~1：0.000001，較佳為1：2~1：0.00001。本發明人等發現，藉由摻合膠原蛋白胜肽與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的組合，與使用同用量的膠原蛋白胜肽單體的情況相比，皮膚改善效果較高。所以在攝取以上述範圍的重量比含有有效成分之組成物的情況，與攝取同用量的膠原蛋白胜肽的情況相比，可期待產生較高的皮膚改善效果。另外，即使是較低濃度的膠原蛋白胜肽，也能夠有效地表現出皮膚改善效果，因此藉由攝取以上述範圍的重量比含有有效成分的組成物，可抑止膠原蛋白胜肽特有的不良的口味。
另外，本發明的組成物中，膠原蛋白胜肽的重量與彈力蛋白胜肽的重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為例如1：5~1：0.000001，宜為1：2~1：0.00001，較佳為1：1~1：0.0001，組成物中的膠原蛋白胜肽的重量與蛋白聚醣的重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(蛋白聚醣)]為例如1：0.2~1：0.0000001，宜為1：0.1~1：0.0000005，較佳為1：0.02~1：0.000002。本發明人等還藉由實驗得到預測外的見解，在
對於膠原蛋白胜肽以低比率摻合彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的情況，發揮特別高的膠原蛋白產生促進效果。亦即，在攝取同用量的膠原蛋白胜肽的情況，與組成物中的彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的重量比低的情況相比，可得到較高的皮膚改善效果。所以，只要藉由本發明的組成物，即可將有效成分量抑制得非常低，可提供容易口服攝取，且成本方面優異的組成物。
在本發明的組成物中，除了上述有效成分之外，還可摻合周知的添加物。添加物並不受特別限定，而以通常口服攝取所利用者為佳，可使用例如賦形劑、結合劑、崩壞劑、潤澤劑、防腐劑、矯味劑、矯臭劑、著色劑、香料等添加物，並且可使用已知有皮膚改善作用的材料。
另外，在本發明的組成物中亦可組合或摻合已知有皮膚改善效果的其他美容‧健康成分。可併用的成分並無特別限制，可列舉例如腦醯胺、乳酸菌、維生素(維生素C等)、礦物質(鈣等)、植物萃取物等。
此外，本發明的組成物中，亦可摻合下述所例示的具備纖維芽細胞增殖促進作用、膠原蛋白產生促進作用、抗皮膚老化作用的周知成分。
本發明的組成物係以口服組成物為佳。口服組成物並
未受到特別限定，而包括例如飲食品、醫藥品、準藥物等，以飲食品為佳，飲料為較佳。飲食品可列舉健康食品、營養補助食品，特定保健用食品、補給品、乳製品、清涼飲料、使用時溶解型粉末等，還包括寵物用飲食品、家畜飼料等。尤其以使用時溶解型粉末為佳。使用時溶解型粉末進一步可溶於咖啡、紅茶、果汁、酸凝酪、湯等，或混合於料理中來攝取。從保存中的安定性、或可溶解或添加於喜好的物品中來攝取的服用方便性的觀點看來，使用時溶解型粉末為特別優異。其他還能夠以錠劑或膠囊劑的形態來使用。醫藥品、準藥物的形態，典型來說例如顆粒劑、錠劑、膠囊劑、液劑等的口服用製劑。
本發明的組成物的用量可依照對象的年齡、體重、健康狀況等適當地決定，而例如人類成人1天的攝取量為10mg~100,000mg，宜為500mg~15,000mg，較佳為3,000mg~10,000mg，可單次或分成多次攝取‧投予。隨著膠原蛋白胜肽的低用量化，組成物的1日攝取量也能低用量化。
本發明中的組成物可使用於預防‧改善皮膚症狀，例如可預防或改善皮膚保濕機能或彈性的降低、肌膚張力或光澤的減少、乾裂，皺紋、黯沉等的症狀。
此處，已知藉由存在於生物體組織，尤其皮膚的真皮組織中的纖維芽細胞的增殖促進作用，甚至伴隨纖維芽細
胞增殖促進作用而發生的膠原蛋白產生促進作用或抗皮膚老化作用，可發揮出皮膚改善效果。所以本發明的另一個態樣為一種組成物，其係具備纖維芽細胞增殖促進作用、膠原蛋白產生促進作用、或抗皮膚老化作用。
纖維芽細胞增殖促進作用，意指促進存在於生物體組織，尤其皮膚的真皮組織中的纖維芽細胞的增殖的作用，可藉由周知的方法來評估。纖維芽細胞增殖促進作用的有效成分為膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣。可將這些成分製成固體狀，糊狀或液體的形態，並將其直接製成具備纖維芽細胞增殖促進作用的皮膚改善劑，而亦可因應必要併用具有纖維芽細胞增殖促進作用的周知添加物，藉由常法添加而調製成組成物。已知具有纖維芽細胞增殖促進作用的材料不受特別限定，而除了上述先前技術文獻列舉的文獻所記載的物品以外，還可例示綠藻、蘆薈、稻米、棗、月桃、芒果薑、野葡萄、鐵線蕨、蓮花胚芽、芝麻、辣椒、當歸、蕺菜、藍靛果忍冬果實、粗糠柴、藻類(總狀蕨藻)、橢圓懸鉤子、薏苡等的植物或藻類的乾燥物或萃取物、兒茶素類、含亞胺基的胜肽、α-硫辛酸及其鹽、酯、醯胺等的衍生物、二氫硫辛酸及其衍生物、幾丁質水解物、N-乙醯基-D-葡萄糖胺及其寡聚物等。
膠原蛋白產生增強作用，是指增強生物體內膠原蛋白的產生之作用，膠原蛋白的產生較希望由真皮組織中的纖維芽細胞來進行。膠原蛋白的產生，可藉由例如利用周知
方法測定I型膠原蛋白產生量來評估，另外還可藉由利用周知的方法評估人類皮膚纖維芽細胞的膠原蛋白合成基因(COLla1基因)的表現量來確認。
抗皮膚老化作用意指預防皮膚老化的症狀，皮膚老化的症狀包括選自皮膚的皺紋、斑點、黯沉，雀斑、鬆弛，毛孔張大、乾裂及肌膚乾裂所構成之群中的至少一個症狀。
本發明人等以實驗確認了藉由併用膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣，與使用膠原蛋白胜肽單體的情況相比，較能夠促進人類皮膚纖維芽細胞的增殖，而且膠原蛋白合成基因的表現也較高，進一步還確認了顯著促進膠原蛋白的產生。只要是業界人士，由這些見解當然可理解即使是在膠原蛋白胜肽的攝取量比以往還少的情況，藉由組合攝取膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣，也能夠得到顯著的皮膚改善效果。
本發明的組成物的製造可依據常法來進行，而有效成分的膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣可直接摻合，或以固體狀、糊狀或液體的形態來摻合。另外還可因應必要摻合具有皮膚改善作用的周知成分或添加物等的其他成分。有效成分或其他成分的含量或重量比如以上所述。
例如可將膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽及蛋白聚醣，
以及因應必要與葡萄糖(葡萄糖)、糊精、乳糖、澱粉或其加工物、纖維素粉末等的賦形劑、維生素、礦物質、動植物或魚貝類的油脂、蛋白質(來自動植物或酵母的蛋白質、其水解物等)、糖類、色素、香料、抗氧化劑、界面活性劑、其他食品添加物、各種營養機能成分等、或腦醯胺、酪蛋白等的粉末或萃取物類等的食用材料一起混合，加工成粉末、顆粒、顆粒、錠劑等的形狀，或藉由常法對前述例的飲食品實施加工處理，或將該等混合而成的液狀物以明膠，海藻酸鈉、羧甲基纖維素等的被膜劑加上被膜而加工成為成形膠囊，或飲料(飲品類)的形態。尤其以加工成營養補助食品或健康食品為佳，加工成使用時溶解型粉末的形態為較佳。
本發明再進一步的態樣，可列舉以既定比率含有膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的皮膚改善劑。皮膚改善劑中的膠原蛋白胜肽的重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的合計重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽+蛋白聚醣)]為例如1：10~1：0.0000001，宜為1：5~1：0.000001，較佳為1：2~1：0.00001。另外，膠原蛋白胜肽的重量與彈力蛋白胜肽的重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為例如1：5~1：0.000001，宜為1：2~1：0.00001，較佳為1：1~1：0.0001。此外，膠原蛋白胜肽的重量與蛋白聚醣的重量的
重量比[(膠原蛋白胜肽)：(蛋白聚醣)]為例如1：0.2~1：0.0000001，宜為1：0.1~1：0.0000005，較佳為1：0.02~1：0.000002。皮膚改善劑中所含有的有效成分、其他成分、或皮膚改善劑的形態及用量、作用‧效果，製造方法，可適用組成物相關記載的內容。
本發明中所謂「皮膚改善劑」，意指用來預防或改善皮膚的保濕機能或彈性的降低、肌膚的張力或光澤的減少、乾裂，皺紋、黯沉等的症狀的製劑。
另外，皮膚改善劑所產生的皮膚的各種症狀預防‧改善，可伴隨選自纖維芽細胞增殖促進作用、膠原蛋白產生促進作用、及抗皮膚老化作用之中1種以上的作用。
以下基於實施例對本發明作細節說明，而本發明並不受該等所限定。
藉由以下方法來調查本發明之纖維芽細胞增殖促進劑對於皮膚纖維芽細胞的增殖造成的影響。
秤量膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣，使其溶於滅菌水，以孔徑0.2μm的濾膜過濾滅菌後，以含0.1% FBS的DMEM培養基稀釋100倍，成為下述表1所
示的樣品濃度，而調製出樣品2~6。對照組採用將滅菌水以含0.1% FBS的DMEM培養基稀釋100倍而成的樣品1。此外，各待測樣品的濃度是以成分的濃度來計算。將所使用的原料的細節揭示如下。
膠原蛋白胜肽：新田明膠股份有限公司製，分子量100~1800，純度100%
彈力蛋白胜肽：「美彈彈力蛋白FI」(日本水產股份有限公司製)，純度100%
蛋白聚醣：「蛋白聚醣F」(Ichimaru Pharcos股份有限公司製)，分子量：約450,000，純度20%
將來自成人的正常人類皮膚纖維芽細胞NHDF株(由KURABO股份有限公司購入)接種至10%牛血清(FBS)含有Dulbecco氏改良的MEM培養基(DMEM，NISSUI公司製)中，以10,000細胞/孔接種至96孔板中，在37℃、5% CO2的條件下培養一晚。待測樣品在溶於水後，如上述般，以含0.1% FBS的DMEM培養基稀釋100倍，並添加至細胞。添加各待測樣品(200μl)，在24小時後測定細胞生存率。細胞生存率是使用MTS試藥(Promega公司製)，由以細胞內脫氫酵素還原所產生的甲量來計算。各待測樣品的細胞生存率是將僅添加含有1%水的含0.1% FBS的DMEM培養基的樣品的細胞生存率定為100%的情況之值(%)而求得。甲是藉由490nm的紫
外線吸收來測定。此外，本發明人還預先檢討了細胞不增殖也不減少的FBS濃度，以含0.1% FBS的DMEM培養基來培養時確認了滿足此條件，藉由將測試培養基的血清濃度調製成0.1%，可定量評估僅待測樣品的纖維芽細胞增殖促進作用。
將評估結果揭示於表1。由表1的數據，確認了若將膠原蛋白胜肽與彈力蛋白胜肽以任意比例組合，則與膠原蛋白單體相比，纖維芽細胞的增殖促進效果較為提高，然而在將膠原蛋白胜肽及彈力蛋白胜肽進一步與蛋白聚醣組合的情況，可進一步提高增殖促進效果。另外，由樣品5、6的結果，判明了即使在蛋白聚醣相對於膠原蛋白胜肽的摻合比非常低的情況，也能夠使纖維芽細胞顯著增加。
依據實施例1的方法，調製出下述表2所示的樣品1~7。
將NHDF株攝取至含10% FBS的DMEM培養基中，以125,000細胞/孔接種至24孔板中，在37℃、5% CO2的條件下培養一晚。待測樣品在溶於水後以含0.1% FBS的DMEM培養基稀釋100倍，並添加至細胞。添加各待測樣品，在72小時後測定膠原蛋白產生量。膠原蛋白產生量，是使用Collagen Type I，Human，ELISA Kit，ACEL公司製)定量出分泌至細胞培養上清液中的I型膠原蛋白。使用對於I型去端肽膠原蛋白有特異性的多株抗體使其發色，藉由450nm的紫外線吸收作測定。各待測樣品的膠原蛋白產生量，是將僅添加含有1%水的含0.1% FBS的DMEM培養基的樣品的膠原蛋白產生量定為100%的情況之值(%)而求得。培養細胞時，與實施例1同樣地，藉由降低培養液中的血清濃度，可降低對膠原蛋白合成的影響。
將評估結果揭示於表2。由表2的數據，確認了在將膠原蛋白胜肽與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣組合的情況，與膠原蛋白單體相比，可進一步提高膠原蛋白的產生的促進效果。另外，從含有最低濃度的彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的樣品3的膠原蛋白產生量最多的結果，發現了彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的濃度愈低，膠原蛋白的產生的促進作用愈強。
依據實施例1的方法，調製出下述表3所示的樣品1~4。
將NHDF株接種至含10% FBS的DMEM培養基中，以10,000細胞/孔接種至96孔板中，在37℃、5% CO2的條件下培養一晚。待測樣品在溶於水後，以含0.1% FBS的DMEM培養基稀釋100倍，並添加至細胞。在添加各待測樣品24小時後，藉由定量即時PCR定量出I型膠原蛋白合成基因(Colla1)表現。控制組的管家基因採用β-actin。將細胞以PBS洗淨，依照Taq Man Gene Expression Cell-to-CT Kit(Ambion公司)的實驗程序製作出cDNA。以此cDNA為鑄型，使用Taq Man Fast Univ.Gene Expression Master Mix(Applied Biosystems公司])實施即時PCR。即時PCR是使用Step One Plus Real Time PCR System(Applied Biosystems公司])。解析是使用△△CT法，並以將無添加待測樣品的培養細胞的修正值定為1的比值來表示。
將評估結果揭示於表3。由表3的數據，確認了在將膠原蛋白胜肽與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣組合的情況，與膠原蛋白單體相比，膠原蛋白合成基因的表現較為提高。
秤量下述表4所示的摻合量的膠原蛋白、彈力蛋白、蛋白聚醣、糊精，均勻混合，而製造出使用時溶解型粉末(6.5g)。使所得到的粉末溶於水，果汁、或法式清湯，結果任一者皆分散性良好，而為適當的使用時溶解型飲料。
藉由常法將上述的使用時溶解型粉末填充至由下述成分所構成的軟膠囊劑皮中，而得到軟膠囊。
明膠 60.0%
將下述所示的配方的混合物藉由常法造粒並且成型，而得到錠劑。
藉由攝取以既定比率含有膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣的組成物，即使是低濃度的膠原蛋白胜肽，也能夠發揮出有效的皮膚的美容改善效果。
Claims (15)
- 一種組成物，其係包含膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣之組成物，並且膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣合計重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽+蛋白聚醣)]為1：0.102~1：0.0000001。
- 如申請專利範圍第1項之組成物，其中膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為1：0.1~1：0.000001。
- 如申請專利範圍第1項之組成物，其中膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為1：0.1~1：0.0001。
- 如申請專利範圍第1項之組成物，其中膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為1：0.002~1：0.000002。
- 如申請專利範圍第1項之組成物，其中膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣合計重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽+蛋白聚醣)]為1：0.102~1：0.000102。
- 如申請專利範圍第1~5項中任一項之組成物，其係口服用。
- 如申請專利範圍第1~5項中任一項之組成物，其係飲食品。
- 一種使用，其係將包含膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣之組成物使用於製造皮膚改善劑，並且該組成物中，膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣合計重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽+蛋白聚醣)]為1：0.102~1：0.0000001。
- 如申請專利範圍第8項之使用，其中該組成物中，膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為1：0.1~1：0.000001。
- 如申請專利範圍第8項之使用，其中該組成物中，膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為1：0.1~1：0.0001。
- 如申請專利範圍第8項之使用，其中該組成物中，膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽)]為1：0.002~1：0.000002。
- 如申請專利範圍第8項之使用，其中該組成物中，膠原蛋白胜肽重量與彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣合計重量的重量比[(膠原蛋白胜肽)：(彈力蛋白胜肽+蛋白聚醣)]為1：0.102~1：0.000102。
- 如申請專利範圍第8~12項中任一項之使用，其中皮膚改善劑係具備纖維芽細胞增殖促進作用。
- 如申請專利範圍第8~12項中任一項之使用，其中皮膚改善劑係具備膠原蛋白產生促進作用。
- 如申請專利範圍第8~12項中任一項之使用，其中皮膚改善劑係具備抗皮膚老化作用。
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