TWI434843B - 激酶抑制劑及其使用方法 - Google Patents

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TWI434843B
TWI434843B TW098129413A TW98129413A TWI434843B TW I434843 B TWI434843 B TW I434843B TW 098129413 A TW098129413 A TW 098129413A TW 98129413 A TW98129413 A TW 98129413A TW I434843 B TWI434843 B TW I434843B
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Description

激酶抑制劑及其使用方法
本發明係關於新穎化合物及其互變異構物與立體異構物，及其藥學上可接受之鹽、酯、新陳代謝產物或前體藥物，該新穎化合物伴隨著藥學上可接受載劑之組合物，及該新穎化合物單獨或併用至少一種其他治療劑在預防或治療癌症上之用途。
本申請案係依美國專利法§119(e)第35條主張2008年9月02日提出申請之美國專利臨時申請案序號61/093,666與2009年7月15日提出申請之美國專利臨時申請案序號61/225,660之權益，其係以全文併於本文供參考。
被馬洛尼(Maloney)反轉錄酶病毒感染及在宿主細胞基因組中之基因組整合，會造成老鼠中淋巴瘤之發展。馬洛尼(Maloney)前病毒整合激酶(PIM-激酶)係經確認為能夠以轉錄方式藉由此反轉錄酶病毒整合事件活化之時常發生原致癌基因之一(Cuypers HT等人,"老鼠白血病病毒所引致之T-細胞淋巴瘤生成：於不同染色體區域中之前病毒整合",Cell 37(1)： 141-50(1984)；Selten G等人,"推斷致癌基因Pim-1在MuLV所引致之T-細胞淋巴瘤中之前病毒活化作用"EMBO J 4(7)： 1793-8(1985))，因此在此激酶之過度表現與其致癌可能性之間建立關聯性。順序類同性分析証實有3種高度類同之Pim-激酶(Pim1、2及3)，Pim1為最初藉由反轉錄酶病毒整合所確認之原致癌基因。再者，過度表現Pim1或Pim2之轉基因老鼠係顯示T-細胞淋巴瘤之經增加發生率(Breuer M等人,"在pim-1轉基因老鼠中藉由化學致癌物之淋巴瘤誘發之極高頻率"Nature 340(6228)： 61-3(1989))，而伴隨c-myc之過度表現係與B-細胞淋巴瘤之發生率有關聯(Verbeek S等人,"帶有E mu-myc與E mu-pim-1轉基因之老鼠係於分娩前發展前-B-細胞白血病"Mol Cell Biol 11(2)： 1176-9(1991))。因此，此等動物模式係在造血惡性病症中，於Pim過度表現與腫瘤生成之間建立強烈關聯性。除了此等動物模式以外，Pim過度表現已被報告於許多其他人類惡性病症中。Pim1、2及3過度表現係經常被發現於許多造血惡性病症中(Amson R等人,"人類原致癌基因產物p33pim係在胎兒造血期間及在各種不同白血病中被表現",PNAS USA 86(22)：8857-61(1989)；Cohen AM等人,"hPim-2基因在人類慢性淋巴球白血病與非霍奇金(non-Hodgkin)氏淋巴瘤中之經增加表現",Leuk Lymph 45(5)：951-5(2004)，Huttmann A等人,"基因表現記號係分隔藉由ZAP-70與CD38表現狀態所定義之B-細胞慢性淋巴球白血病預後亞組",Leukemia 20： 1774-1782(2006))，及在前列腺癌中(Dhanasekaran SM等人,"預後生物標記物在前列腺癌中之描繪",Nature 412(6849)：822-6(2001)；Cibull TL等人,"在前列腺癌進展期間Pim-1之過度表現",J Clin Pathol 59(3)：285-8(2006))，而Pim3之過度表現係經常被發現於肝細胞癌(Fujii C等人,"絲胺酸/蘇胺酸激酶Pim-3於肝細胞癌發展中之迷行表現及其在人類肝細胞瘤細胞系增生上之角色",Int J Cancer 114： 209-218(2005))與胰癌(Li YY等人,"Pim-3，一種具有絲胺酸/蘇胺酸激酶活性之原致癌基因，係迷行地被表現於人類胰癌中，且使bad磷醯基化，以在人類胰癌細胞系中阻斷bad所媒介之細胞凋零",Cancer Res 66(13)： 6741-7(2006))中。
Pim1、2及3為絲胺酸/蘇胺酸激酶，其通常係在造血細胞之存活與增生上發揮功能，以回應生長因子與細胞活素。經過Jak/Stat途徑之細胞活素發出訊息會導致Pim基因轉錄之活化作用及蛋白質之合成。沒有其他轉譯後改質物係為激酶Pim活性所需要。因此，發出訊息下游係主要在轉錄/轉譯與蛋白質轉換含量下經控制。關於Pim激酶之受質包括細胞凋零之調節劑，譬如Bcl-2族群成員BAD(Aho T等人,"Pim-1激酶係促進前細胞凋零Bad蛋白質之失活，其方式是使其在Ser112守門者位置上磷醯基化：FEBS Letters 571： 43-49(2004))，細胞循環調節劑，譬如p21WFA1/CIP1 (Wang Z等人,"細胞循環抑制劑p21Cip1/WAF1藉由Pim-1激酶之磷醯化作用",Biochem Biophys Acta 1593： 45-55(2002))、CDC25A(1999)、C-TAK(Bachmann M等人,"致癌性絲胺酸/蘇胺酸激酶Pim-1係磷醯基化及抑制Cdc25C-有關聯激酶1(C-TAK1)之活性.關於Pim-1在G2/M細胞循環查核點上之一項新穎角色",J Biol Chem 179 ：48319-48328(2004))及NuMA(Bhattacharya N等人,"Pim-1係與有絲分裂所必須之蛋白質複合物有關聯",Chromosoma 111(2)： 80-95(2002))，以及蛋白質合成調節劑4EBP1(Hammerman PS等人,"Pim與Akt致癌基因為造血細胞生長與存活之獨立調節劑",Blood 105(11)： 4477-83(2005))。Pim於此等調節劑中之作用係與一項在保護以防止細胞凋零及促進細胞增生與生長上之角色一致。因此，Pim於癌症中之過度表現係被認為在促進癌細胞之存活與增生上扮演一項角色，因此，其抑制應為治療其係被過度表現於其上之癌症之有效方式。事實上，數份報告指出以siRNA打倒Pim之表現，會造成增生之抑制與細胞死亡(Dai JM等人,"以絲胺酸/蘇胺酸激酶Pim-2作為標的之反有意義寡脫氧核苷酸係抑制DU-145細胞之增生",Acta Pharmacol Sin 26(3)： 364-8(2005)；Fujii等人2005；Li等人2006)。再者，數種習知致癌基因在造血惡性病症中之突變活化作用係被認為至少部份經過Pim施加其作用。例如，pim表現之標的向下調節會減弱藉由Flt3與BCR/ABL所轉變之造血細胞之存活(Adam等人2006)。因此，對Pim1、2及3之抑制劑可用於治療此等惡性病症。除了在癌症治療與骨髓增生疾病上之潛在角色以外，此種抑制劑可用以控制免疫細胞在其他病理學症狀中之擴大，譬如自身免疫疾病、過敏性反應，及在器官移植排斥徵候簇中。此觀念係藉由以下發現所支持，Th1輔助T-細胞藉由IL-12與IFN-α之分化會造成Pim1與2兩者之表現之誘發(Aho T等人,"人類Pim族群基因之表現係選擇性地藉由會促進T輔助類型1而非T輔助類型2細胞分化之細胞活素而向上調節",Immunology 116： 82-88(2005))。再者，Pim表現係在兩種細胞類型中藉由免疫壓抑TGF-β抑制(Aho等人2005)。此等結果指出Pim激酶係涉及輔助T-細胞之早期分化過程，其係協調自身免疫疾病、過敏性反應及組織移植排斥中之免疫學回應。
仍持續需要會抑制微血管之增生、抑制腫瘤生長、治療癌症、調制細胞循環遏制及/或抑制分子(譬如Pim1、Pim2及Pim3)之化合物，及含有此種化合物之醫藥配方與藥劑。亦需要關於對有需要之患者或病患投予此種化合物、醫藥配方及藥劑之方法。
提供新穎式I化合物及其立體異構物、互變異構物及藥學上可接受之鹽
其中，X1 ,X2 ,X3 及X4 係獨立選自CR2 與N；其條件是，X1 ,X2 ,X3 及X4 之至少一個但不超過兩個為N；Y係選自下列組成之組群：環烷基、部份不飽和環烷基及雜環烷基，其中該組群之各成員可被至高四個取代基取代；Z2 與Z3 係獨立選自CR12 與N；其條件是，Z2 與Z3 中不超過一個可為N；R1 係選自下列組成之組群：氫、-NHR3 、鹵基、羥基、烷基、氰基及硝基；R2 與R12 在每一存在處係獨立選自下列組成之組群：氫、鹵基、羥基、硝基、氰基、SO3 H，及經取代或未經取代之烷基、烯基、炔基、烷氧基、胺基、環烷基、雜環烷基及部份飽和環烷基；R3 係選自下列組成之組群：氫、-CO-R4 ，及經取代或未經取代之烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基；R4 係選自下列組成之組群：烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基及烷胺基；且R5 表示選自經取代或未經取代之芳基、C3 -C7 環烷基、雜芳基、部份不飽和環烷基及烷基之基團，其中各該經取代之R5 基團可被至高四個取代基取代，取代基選自鹵基、氰基、胺基、C1-4 烷基、C3-6 環烷基、烷氧基、硝基、羧基、羰基、烷氧羰基、胺基羧基、經取代之胺基羰基、胺基磺醯基、經取代之胺基磺醯基及烷氧烷基。
在一些具體實施例中，係提供新穎式I化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中X2 為N，且X1 、X3 及X4 為CR2 。
在一些具體實施例中，係提供新穎式I化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R2 係選自氫、甲基、乙基、鹵基、氰基。
在一些具體實施例中，係提供式I化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Z2 與Z3 為CR12 。
在一些具體實施例中，係提供式I化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R12 係選自氫、鹵基、甲基、乙基及氰基。
在其他具體實施例中，係提供新穎式II化合物及其立體異構物、互變異構物及藥學上可接受之鹽
其中，Y係選自下列組成之組群：環己基、部份不飽和環己基及雜環基-C5 -烷基，其中該組群之各成員可被至高四個取代基取代；R1 係選自下列組成之組群：氫、-NHR3 、鹵基、羥基、烷基、C3-4 環烷基、氰基及硝基；R12 在每一存在處係獨立選自下列組成之組群：氫、鹵基、羥基、胺基、硝基、氰基、SO3 H，及經取代或未經取代之烷基、烯基、炔基、烷氧基、胺基、環烷基、雜環烷基及部份飽和環烷基；R3 係選自下列組成之組群：氫、-CO-R4 ，及經取代或未經取代之烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基；R4 係選自下列組成之組群：烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基及烷胺基；且R5 表示選自氫與經取代或未經取代之烷基、C6 -環烷基、芳基及雜芳基之基團，其中各該經取代之R5 基團可被至高四個取代基取代，取代基選自鹵基、氰基、胺基、C1-4 烷基、C3-6 環烷基、烷氧基、硝基、羧基、羰基、烷氧羰基、胺基羧基、經取代之胺基羰基、胺基磺醯基、經取代之胺基磺醯基及烷氧烷基。
在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之環烷基、環烯基、六氫吡啶基及六氫吡基，其中該組群之各成員係被至高四個取代基取代。在一些具體實施例中，Y係被至高四個取代基取代，取代基選自氰基、硝基、鹵基、羥基、胺基、烷氧基、經取代之胺基、C1-4 烷基、C1-4 鹵烷基及C3-4 環烷基。在又其他具體實施例中，Y係被至高四個取代基取代，取代基選自甲基、丙基、異-丙基、乙基、羥基、胺基、鹵基、單鹵基C1-3 烷基、三鹵基C1-3 烷基及二鹵基C1-3 烷基。
在一些具體實施例中，係提供新穎式II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之環己基、環己炔基及六氫吡啶基，其中該組群之各成員係被至高四個取代基取代。
在一些具體實施例中，係提供新穎式II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係被至高四個取代基取代，取代基獨立選自氫、氰基、硝基、鹵基、羥基、胺基、烷氧基、經取代之胺基、C1-4 烷基、C1-4 鹵烷基及C3-4 環烷基。在一些具體實施例中，取代基係獨立選自甲基、丙基、異-丙基、乙基、羥基、胺基、鹵基、單鹵基C1-3 烷基、三鹵基C1-3 烷基及二鹵基C1-3 烷基。
在一些具體實施例中，係提供式II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R12 係選自氫、鹵基、甲基、乙基及氰基。
在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之環己基、環己烯基、六氫吡啶基、六氫吡基，其中該Y基團可被至高三個取代基取代，取代基選自甲基、乙基、羥基、胺基及甲氧基；R1 係選自氫與胺基所組成之組群；且R12 在每一存在處係獨立表示氫、鹵基或甲基。
在一些具體實施例中，係提供式II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係選自下列組成之組群：經取代之環己基、環己烯基、六氫吡啶基及六氫吡基；R1 係選自下列組成之組群：氫、-NH2 、鹵基、C1-4 烷基、C3-4 環烷基及-CN；R12 在每一存在處係獨立選自下列組成之組群：氫、鹵基、C1-4 烷基及胺基；且R5 係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之苯基、環己基、環戊基、噻唑吡啶基、嘧啶基及吡基，其中R5 基團可被至高三個取代基取代，取代基選自鹵基、氫、甲基、經取代之胺基羰基及烷氧基。
在代表性具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其係選自下列組成之組群：N-(4-((1R,3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺、N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟-甲基吡啶醯胺、N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺、3-胺基-N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺及N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺及3-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺。
在其他方面，本發明係提供在需要治療之人類或動物病患中治療馬洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)相關病症之方法，其包括對該病患投予一數量之有效抑制病患中PIM活性之式I或II化合物。
在其他方面，本發明係提供在需要治療之人類或動物病患中治療PIM相關病症之方法，其包括對該病患投予一數量之有效降低或預防病患中腫瘤生長之式I或II化合物。
在又其他方面，本發明係提供在需要治療之人類或動物病患中治療PIM相關病症之方法，其包括對該病患投予一數量之有效降低或預防病患中腫瘤生長之式I或II化合物，且併用至少一種關於治療癌症之其他藥劑。
在又其他方面，本發明係提供治療組合物，其包含至少一種式I或II化合物，且併用一或多種關於治療癌症之其他藥劑，如癌症療法中所常用者。
本發明化合物可用於治療癌症，包括造血惡性病症、癌瘤(例如肺臟、肝臟、胰臟、卵巢、甲狀腺、膀胱或結腸者)、黑色素瘤、髓樣病症(例如髓樣白血病、多發性骨髓瘤及紅白血病)、腺瘤(例如絨毛結腸腺瘤)、肉瘤(例如骨肉瘤)、自身免疫疾病、過敏性反應，及在器官移植排斥徵候簇中。
本發明進一步提供如發明詳述中所述之組合物、使用方法及製法。
詳細說明
根據本發明之一方面，係提供新穎式I化合物及其立體異構物、互變異構物及藥學上可接受之鹽：
其中，X1 ,X2 ,X3 及X4 係獨立選自CR2 與N；其條件是，X1 ,X2 ,X3 及X4 之至少一個但不超過兩個為N；Y係選自下列組成之組群：環烷基、部份不飽和環烷基及雜環烷基，其中該組群之各成員可被至高四個取代基取代；Z2 與Z3 係獨立選自CR12 與N；其條件是，Z2 與Z3 中不超過一個可為N；R1 係選自下列組成之組群：氫、-NHR3 、鹵基、羥基、烷基、氰基及硝基；R2 與R12 在每一存在處係獨立選自下列組成之組群：氫、鹵基、羥基、硝基、氰基、SO3 H，及經取代或未經取代之烷基、烯基、炔基、烷氧基、胺基、環烷基、雜環烷基及部份飽和環烷基；R3 係選自下列組成之組群：氫、-CO-R4 ，及經取代或未經取代之烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基；R4 係選自下列組成之組群：烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基及烷胺基；且R5 表示選自經取代或未經取代之芳基、C3 -C7 環烷基、雜芳基、部份不飽和環烷基及烷基之基團，其中各該經取代之R5 基團可被至高四個取代基取代，取代基選自鹵基、氰基、胺基、C1-4 烷基、C3-6 環烷基、烷氧基、硝基、羧基、羰基、烷氧羰基、胺基羧基、經取代之胺基羰基、胺基磺醯基、經取代之胺基磺醯基及烷氧烷基。
在一些具體實施例中，係提供新穎式I化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中X2 為N，且X1 、X3 及X4 為CR2 。
在一些具體實施例中，係提供新穎式I化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R2 係選自氫、甲基、乙基、鹵基、氰基。
在一些具體實施例中，係提供式I化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Z2 與Z3 為CR12 。
在一些具體實施例中，係提供式I化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R12 係選自氫、鹵基、甲基、乙基及氰基。
在其他具體實施例中，係提供新穎式II化合物及其立體異構物、互變異構物及藥學上可接受之鹽
其中，Y係選自下列組成之組群：環己基、部份不飽和環己基及雜環基-C5 -烷基，其中該組群之各成員可被至高四個取代基取代；R1 係選自下列組成之組群：氫、-NHR3 、鹵基、羥基、烷基、C3-4 環烷基、氰基及硝基；R12 在每一存在處係獨立選自下列組成之組群：氫、鹵基、羥基、胺基、硝基、氰基、SO3 H，及經取代或未經取代之烷基、烯基、炔基、烷氧基、胺基、環烷基、雜環烷基及部份飽和環烷基；R3 係選自下列組成之組群：氫、-CO-R4 ，及經取代或未經取代之烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基；R4 係選自下列組成之組群：烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基及烷胺基；且R5 表示選自氫與經取代或未經取代之烷基、C6 -環烷基、芳基及雜芳基之基團。
在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之環烷基、環烯基、六氫吡啶基及六氫吡基，其中該組群之各成員係被至高四個取代基取代。在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之環己基、環己炔基及六氫吡啶基，其中該組群之各成員係被至高四個取代基取代。在一些具體實施例中，Y係被至高四個取代基取代，取代基選自氫、氰基、硝基、鹵基、羥基、胺基、烷氧基、經取代之胺基、C1-4 烷基、C1-4 鹵烷基及C3-4 環烷基。在又其他具體實施例中，Y係被至高四個取代基取代，取代基選自甲基、丙基、異-丙基、乙基、羥基、胺基、鹵基、單鹵基C1-3 烷基、三鹵基C1-3 烷基及二鹵基C1-3 烷基。
在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R1 為氫、胺基或氟基。於一項具體實施例中，係提供選自表I或表II之式II化合物。
在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R5 係選自經取代或未經取代之芳基、C5 -C6 環烷基、雜芳基、部份不飽和C5 -C6 環烷基及C1 -C4 烷基，其中各該基團可被至高四個取代基取代，取代基選自鹵基、氰基、胺基、C1-4 烷基、C3-5 環烷基、烷氧基、硝基、羧基、羰基、烷氧羰基、胺基羧基、經取代之胺基羰基、胺基磺醯基、經取代之胺基磺醯基及烷氧烷基。在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R5 為經取代或未經取代之苯基，其中苯基可被至高四個取代基取代，取代基選自氫、氰基、硝基、鹵基、羥基、胺基、烷氧基、經取代之胺基、C1-4 烷基、C1-4 鹵烷基及C3-4 環烷基。在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R5 為2,6-二氟苯基。
在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中R12 係選自氫、鹵基、甲基、乙基及氰基。在一些具體實施例中，係提供式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之環己基、環己烯基、六氫吡啶基、六氫吡基，其中該Y基團可被至高三個取代基取代，取代基選自甲基、乙基、羥基、胺基及甲氧基；R1 係選自氫與胺基所組成之組群；且R12 在每一存在處係獨立表示氫、鹵基或甲基。
在一些具體實施例中，係提供式II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽，其中Y係選自下列組成之組群：經取代之環己基、環己烯基、六氫吡啶基及六氫吡基；R1 係選自下列組成之組群：氫、-NH2 、鹵基、C1-4 烷基、C3-4 環烷基及-CN；R12 在每一存在處係獨立選自下列組成之組群：氫、鹵基、C1-4 烷基及胺基；且R5 係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之苯基、環己基、環戊基、噻唑吡啶基、嘧啶基及吡基，其中R5 基團可被至高三個取代基取代，取代基選自鹵基、氫、甲基、經取代之胺基羰基及烷氧基。
本發明之較佳具體實施例為式(II)化合物，其中Y為被一至三個取代基取代之環己基，該取代基較佳係選自羥基、胺基、C1-4 烷基或C1-4 鹵烷基，而更佳係選自甲基、羥基、胺基及CF3 ，而最佳係選自甲基、胺基及羥基；R1 為氫、NH2 或鹵基(R1 較佳為氫、胺基或氟基，R1 更佳為氫)；R12 係各獨立為氫或鹵基(各R12 較佳為氫、氯基或氟基)；R5 為環己基、苯基或吡啶基，其中該環己基、該苯基及該吡啶基係各獨立被至高三個取代基取代，取代基選自鹵基、羥基、C1-4 烷基及C1-4 烷氧基(較佳情況是，R5 為吡啶基或苯基，各獨立被至高三個取代基取代，取代基選自鹵基、羥基、C1-4 烷基或C1-4 烷氧基，更佳情況是，R5 為被至高三個取代基取代之苯基，取代基選自鹵基、羥基、C1-4 烷氧基及C1-4 烷基，最佳為被至高三個取代基取代之苯基，取代基選自氟基、羥基、甲基、乙基、甲氧基或丙氧基，R5 最佳為2，6-二氟苯基。
本發明之又再另一項較佳具體實施例係提供式II化合物，其中Y為被甲基、羥基及胺基取代之六氫吡啶基；R1 為氫、NH2 或氟基；R12 在每一存在處係獨立選自氫與鹵基所組成之組群；且R5 為吡啶基、氟基吡啶基、環己基或苯基，其中該苯基係被至高三個取代基取代，取代基選自氟基、羥基及甲基，R5 較佳為二氟苯基。在進一步較佳具體實施例中，Y較佳為3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基；R1 為氫；且R5 為2,6-二氟苯基。
在代表性具體實施例中，較佳式I或II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽係選自下列組成之組群：N-(4-((3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((1R,3R,4S,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)甲基吡啶醯胺；N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((1R,3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟-甲基吡啶醯胺)；N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)-吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟-甲基吡啶醯胺；及3-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺。
在其他方面，本發明係提供在需要治療之人類或動物病患中治療馬洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)相關病症之方法，其包括對該病患投予一數量之有效抑制病患中PIM活性之式I或II化合物。本發明之較佳具體實施例係提供一種藉由調制馬洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性而治療症狀之方法，其包括對需要此種治療之病患投予有效量之式I化合物。
在其他方面，本發明係提供在需要治療之人類或動物病患中治療PIM相關病症之方法，其包括對該病患投予一數量之有效降低或預防病患中腫瘤生長之式I或II化合物。於又其他方面，本發明係提供在需要治療之人類或動物病患中治療PIM相關病症之方法，其包括對該病患投予一數量之有效降低或預防病患中腫瘤生長之式I或II化合物，且併用至少一種關於治療癌症之其他藥劑。
於又其他方面，本發明係提供治療組合物，其包含至少一種式I或II化合物，且併用一或多種關於治療癌症之其他藥劑，如癌症療法中所常用者。本發明因此提供包含式I或式II化合物之醫藥組合物。此方面之較佳具體實施例係提供一種醫藥組合物，其包含選自以下之化合物，N-(4-((3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((1R,3R,4S,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)甲基吡啶醯胺；N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((1R,3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟-甲基吡啶醯胺)；N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)-吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟-甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟-苯基)-5-氟基甲基吡2醯胺；N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；及N-(4-((3R,4R,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺。另一項較佳具體實施例係提供一種醫藥組合物，其進一步包含關於治療癌症之另一種藥劑，其中該另一種藥劑較佳係選自伊利諾提肯(irinotecan)、拓波提肯(topotecan)、真西塔賓(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶、甲醯四氫葉酸碳氯胺鉑、順氯胺鉑、紅豆杉烷類、帖札西塔賓(tezacitabine)、環磷醯胺、長春花植物鹼、愛馬汀尼伯(imatinib)(葛里維克(Gleevec))、蒽環素、利圖西馬伯(rituximab)及搓史圖諸馬伯(trastuzumab)。
本發明化合物可用於治療癌症，包括造血惡性病症、癌瘤(例如肺臟、肝臟、胰臟、卵巢、甲狀腺、膀胱或結腸者)、黑色素瘤、髓樣病症(例如髓樣白血病、多發性骨髓瘤及紅白血病)、腺瘤(例如絨毛結腸腺瘤)、肉瘤(例如骨肉瘤)、自身免疫疾病、過敏性反應，及在器官移植排斥徵候簇中。
於本發明之又再另一方面係提供式I或式II化合物於製備藥劑上之用途，該藥劑係藉由調制馬洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性而治療症狀。在本發明此方面之一項較佳具體實施例中，該症狀為癌症，選自肺臟、胰臟、甲狀腺、卵巢、膀胱、乳房、前列腺或結腸之癌瘤，黑色素瘤、髓樣白血病、多發性骨髓瘤與紅白血病、絨毛結腸腺瘤及骨肉瘤。
於另一方面，本發明係關於在病患中抑制選自Pim1、Pim2及Pim3所組成之組群之至少一種激酶活性或在需要治療之人類或動物病患中治療藉由至少一種Pim1、Pim2及Pim3所媒介生物學症狀之方法，其包括對該病患以在病患中有效抑制該激酶之量投予至少一種式I或II化合物。該治療化合物可用於治療需要此種抑制劑之病患(例如患有藉由異常絲胺酸/蘇胺酸激酶受體發出訊息所媒介之癌症者)。
定義
"PIM抑制劑"係於本文中用以指稱一種化合物，當在下文所述之PIM耗乏檢測中度量時，其關於PIM激酶活性顯示IC50 不超過約100μM，而更典型上為不超過約50μM。
"烷基"措辭係指未含有雜原子之烷基。因此，該措辭包括直鏈烷基，譬如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基等。該措辭亦包括直鏈烷基之分枝鏈異構物，包括但不限於下述，其係以實例方式提供；-CH(CH3 )2 、-CH(CH3 )(CH2 CH3 )、-CH(CH2 CH3 )2 、-C(CH3 )3 、-C(CH2 CH3 )3 、-CH2 CH(CH3 )2 、-CH2 CH(CH3 )(CH2 CH3 )、-CH2 CH(CH2 CH3 )2 、-CH2 C(CH3 )3 、-CH2 C(CH2 CH3 )3 、-CH(CH3 )-CH(CH3 )(CH2 CH3 )、-CH2 CH2 CH(CH3 )2 、-CH2 CH2 CH(CH3 )(CH2 CH3 )、-CH2 CH2 CH(CH2 CH3 )2 、-CH2 CH2 C(CH3 )3 、-CH2 CH2 C(CH2 CH3 )3 、-CH(CH3 )CH2 -CH(CH3 )2 、-CH(CH3 )CH(CH3 )CH(CH3 )2 、-CH(CH2 CH3 )-CH(CH3 )CH(CH3 )(CH2 CH3 )及其他。因此，措辭烷基包括一級烷基、二級烷基及三級烷基。較佳烷基包括具有1至12個碳原子之直鏈與分枝鏈烷基。較佳"烷基"定義係指C1-4 直鏈烷基，譬如甲基、乙基、正-丙基及正-丁基。較佳烷基定義亦包括C3-5 分枝狀烷基，包括CH(CH3 )2 、CH2 CH(CH3 )2 、CH(CH3 )CH2 CH3 、C(CH3 )3 、CH(CH3 )CH2 CH2 CH3 、CH(CH3 )CH(CH3 )2 、CH2 CH(CH3 )CH2 CH3 、CH2 CH2 CH(CH3 )2 及CH(CH2 CH3 )2 等。
"烯基"一詞係指如上文定義之烷基，其中有至少一個不飽和點，意即其中兩個相鄰碳原子係藉由雙鍵連接。"炔基"一詞係指其中兩個相鄰碳原子係藉由參鍵連接之烷基。"烷氧基"一詞係指-OR，其中R為烷基。
於本文中使用之"鹵素"或"鹵基"術語，係指氯基、溴基、氟基及碘基。"鹵烷基"係指被一或多個鹵原子取代之烷基。"鹵烷基"一詞因此包括單鹵烷基、二鹵烷基、三鹵烷基等。代表性單鹵烷基包括-CH2 F、-CH2 Cl、-CH2 CH2 F、-CH2 CH2 Cl、-CH(F)CH3 、-CH(Ck)CH3 ；代表性二鹵烷基包括CHCl2 、-CHF2 、-CCl2 CH3 、-CH(Cl)CH2 Cl、-CH2 CHCl2 、-CH2 CHF2 ；代表性三鹵烷基包括-CCl3 、-CF3 、-CCl2 CH2 Cl、-CF2 CH2 F、-CH(Cl)CHCl2 、-CH(F)CHF2 ；及代表性全鹵烷基包括-CCl3 、-CF3 、-CCl2 CCl3 、-CF2 CF3 。
"胺基"於本文中係指基團-NH2 。"烷胺基"一詞於本文中係指基團-NRR'，其中R與R'係各獨立選自氫或低碳烷基。"芳胺基"一詞於本文中係指基團-NRR'，其中R為芳基，且R'為氫、低碳烷基或芳基。"芳烷胺基"一詞於本文中係指基團-NRR'，其中R為低碳芳烷基，且R'為氫、低碳烷基、芳基或低碳芳烷基。氰基此術語係指基團-CN。硝基術語係指基團-NO2 。
"烷氧烷基"一詞係指基團-alk1 -O-alk2 ，其中alk1 為烷基或烯基，且alk2 為烷基或烯基。"低碳烷氧基烷基"一詞係指烷氧烷基，其中alk1 為低碳烷基或低碳烯基，且alk2 為低碳烷基或低碳烯基。"芳氧基烷基"一詞係指基團-烷基-O-芳基。"芳烷氧基烷基"一詞係指基團-伸烷基-O-芳烷基，其中芳烷基為低碳芳烷基。
"胺基羰基"一詞於本文中係指基團-C(O)-NH2 。"經取代之胺基羰基"於本文中係指基團-C(O)-NRR'，其中R為低碳烷基，且R'為氫或低碳烷基。在一些具體實施例中，R與R'和連接至彼等之N原子一起，可一起採用而形成"雜環烷基羰基"。"芳胺基羰基"一詞於本文中係指基團-C(O)-NRR'，其中R為芳基，且R'為氫、低碳烷基或芳基。"芳烷胺基羰基"於本文中係指基團-C(O)-NRR'，其中R為低碳芳烷基，且R'為氫、低碳烷基、芳基或低碳芳烷基。
"胺基磺醯基"於本文中係指基團-S(O)2 -NH2 。"經取代之胺基磺醯基"於本文中係指基團-S(O)2 -NRR'，其中R為低碳烷基，且R'為氫或低碳烷基。"芳烷胺基磺醯基芳基"一詞於本文中係指基團-芳基-S(O)2 -NH-芳烷基，其中芳烷基為低碳芳烷基。
"羰基"係指二價基團-C(O)-。"羧基"係指-C(=O)-OH。"烷氧羰基"係指酯-C(=O)-OR，其中R為烷基。"低碳烷氧基羰基"係指酯-C(=O)-OR，其中R為低碳烷基。"環烷基氧基羰基"係指-C(=O)-OR，其中R為環烷基。
"環烷基"係指單-或多環狀碳環族烷基取代基。碳環烷基係為其中所有環原子為碳之環烷基。典型環烷基取代基具有3至8個主鏈(意即環)原子，其中各主鏈原子為碳或雜原子。"雜環烷基"一詞於本文中係指環烷基取代基，其具有1至5個，而更典型上為1至4個雜原子在環結構中。被採用於本發明化合物中之適當雜原子為氮、氧及硫。代表性雜環烷基部份基團包括例如嗎福啉基、六氫吡基、六氫吡啶基等。碳環烷基係為其中所有環原子為碳之環烷基。當連同環烷基取代基使用時，"多環狀"一詞於本文中係指稠合與非稠合烷基環狀結構。"部份不飽和環烷基"、"部份飽和環烷基"及"環烯基"術語，全部均指環烷基，其中有至少一個不飽和點，意即其中對相鄰環原子係藉由雙鍵或參鍵連接。說明例包括環己炔基、環己炔基、環丙烯基、環丁炔基等。
於本文中使用之"經取代之雜環"、"雜環族基團"或"雜環"術語，係指任何3-或4-員環，含有選自氮、氧及硫之雜原子，或5-或6-員環，含有一至三個雜原子，選自氮、氧或硫所組成之組群；其中5-員環具有0-2個雙鍵，而6-員環具有0-3個雙鍵；其中氮與硫原子可視情況被氧化；其中氮與硫雜原子可視情況被四級化；且包括任何雙環狀基團，其中任何上述雜環狀環係經稠合至苯環或另一個上文所獨立定義之5-或6-員雜環。於本文中使用之"雜環烷基"一詞係指5-或6-員環，含有一至三個雜原子，選自氮、氧或硫所組成之組群，其中該環未具有雙鍵。例如，雜環基-C5 -烷基一詞係指含有5個碳原子與一個雜原子譬如N之6-員環。"雜環"一詞因此包括其中氮為雜原子之環，以及部份與完全飽和環。較佳雜環包括例如：二氮七圜烯基、吡咯基、二氫吡咯基、四氫吡咯基、吡唑基、二氫吡唑基、四氫吡唑基、咪唑基、二氫咪唑基、四氫咪唑基、吡啶基、六氫吡啶基、吡基、六氫吡基、N-甲基六氫吡基、一氮四圜基、N-甲基一氮四圜基、嘧啶基、嗒基、唑基、四氫唑基、異唑基、異唑啶基、嗎福啉基、噻唑基、噻唑啶基、異噻唑基、異噻唑啶基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并唑基、呋喃基、噻吩基、三唑基及苯并噻吩基。
雜環族部份基團可為未經取代，或被不同取代基單取代或二取代或三取代，取代基獨立選自羥基、鹵基、酮基(C=O)、烷基亞胺基(RN=，其中R為低碳烷基或低碳烷氧基)、胺基、烷胺基、二烷胺基、醯基胺基烷基、烷氧基、硫代烷氧基、多烷氧基、低碳烷基、環烷基或鹵烷基。
雜環族基團可在不同位置處連接，其將為熟諳有機與醫藥化學技藝者搭配本文之揭示內容所明瞭。
代表性雜環族包括例如咪唑基、吡啶基、六氫吡基、六氫吡啶基、一氮四圜基、噻唑基、呋喃基、三唑基苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并唑基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、喹喏啉基、呔基、吲哚基、萘吡啶基、吲唑基及喹基。
"芳基"係指視情況經取代之單環狀與多環狀芳族基團，具有3至14個主鏈碳或雜原子，且包括碳環族芳基與雜環族芳基兩者。碳環族芳基係為其中在芳族環中之所有環原子為碳之芳基。"雜芳基"一詞於本文中係指芳基，具有1至4個雜原子在芳族環中作為環原子，而環原子之其餘部份為碳原子。當連同芳基取代基使用時，"多環狀芳基"一詞於本文中係指稠合與非稠合環狀結構，其中至少一個環狀結構為芳族，例如苯并二唑并(其具有經稠合至苯基(意即萘基)等之雜環族結構)。被採用作為本發明化合物中之取代基之舉例芳基部份基團，包括苯基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基、吲哚基、咪唑基、二唑基、四唑基、吡基、三唑基、硫苯基、呋喃基、喹啉基、嘌呤基、萘基、苯并噻唑基、苯并吡啶基及苯并咪唑基等。
"視情況經取代"或"經取代"係指一或多個氫原子以單價或二價基團之置換。適當取代基團包括例如羥基、硝基、胺基、亞胺基、氰基、鹵基、硫基磺醯基、硫醯胺基、甲脒基、亞脒基、酮基、氧甲脒基、甲氧甲脒基、亞脒基、胍基、磺醯胺基、羧基、甲醯基、低碳烷基、鹵基低碳烷基、低碳烷胺基、鹵基低碳烷基胺基、低碳烷氧基、鹵基低碳烷氧基、低碳烷氧基烷基、烷羰基、胺基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、烷硫基、胺基烷基、氰基烷基、芳基等。
取代基團可本身經取代。在取代基團上經取代之基團可為羧基、鹵基；硝基、胺基、氰基、羥基、低碳烷基、低碳烷氧基、胺基羰基、-SR、硫醯胺基、-SO3 H、-SO2 R或環烷基，其中R典型上為氫、羥基或低碳烷基。
當經取代之取代基包括直鏈基團時，取代可在鏈內(例如2-羥丙基、2-胺基丁基等)或在鏈末端(例如2-羥乙基、3-氰基丙基等)處發生。經取代之取代基可為共價結合碳或雜原子之直鏈、分枝狀或環狀排列。應明瞭的是，上文定義並不意欲包括不容許之取代型式(例如被五個氟基取代之甲基或被另一個鹵原子取代之鹵原子)。此種不容許取代型式係為熟練技師所習知。
熟諳此藝者亦明瞭的是，本發明化合物或其立體異構物，以及其任一種之藥學上可接受之鹽、酯、新陳代謝產物及前體藥物，可接受互變異構現象，且可因此以各種互變異構形式存在，其中分子之一個原子之質子係移轉至另一個原子，且在該分子之原子間之化學鍵係因此重排。參閱，例如March,高等有機化學：反應、機制及結構 ，第四版,John Wiley ＆ Sons,第69-74頁(1992)。於本文中使用之"互變異構物"一詞，係指藉由質子位移所產生之化合物，且應明瞭的是，所有互變異構形式，就其可存在而論，係被包含在本發明內。
本發明化合物或其互變異構物，以及其任一種之藥學上可接受鹽、酯、新陳代謝產物及前體藥物，可包含經不對稱取代之碳原子。此種經不對稱取代之碳原子可造成本發明化合物以對掌異構物、非對映異構物及其他立體異構形式存在，其可以絕對立體化學為觀點經定義，譬如呈(R)-或(S)-形式。因此，本發明化合物之所有此種可能異構物、呈其光學上純形式之個別立體異構物、其混合物、外消旋混合物(或"外消旋物")、非對映異構物之混合物以及單一非對映異構物，係被包含在本發明中。於本文中使用之"S"與"R"組態之術語，均如IUPAC 1974關於段落E基本立體化學之建議 ,Pure Appl. Chem. 45 ：13-30(1976)所定義。α與β術語係被採用於環狀化合物之環位置。參考平面之α-側係為在較低編號位置下，較佳取代基所位在之側面。位於參考平面之相反側上之取代基係被指定為β描述符號。應注意的是，此使用法係與環狀立體母核不同，其中"α"係意謂"平面下方"，且表示絕對組態。於本文中使用之α與β組態之術語，均如化學文摘索引指南-附錄IV(1987)段落203所定義。
於本文中使用之"藥學上可接受之鹽"一詞，係指式I或II化合物之無毒性酸或鹼土金屬鹽。此等鹽可在式I或II化合物之最後單離與純化期間當場製成，或分開地經由使鹼或酸官能基個別與適當有機或無機酸或鹼反應。代表性鹽類包括但不限於下述：醋酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、酸性硫酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、環戊烷丙酸鹽、十二基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、葡萄糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、菸鹼酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、三甲基醋酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對-甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。而且，鹼性含氮基團可以作用劑四級化，該作用劑譬如低碳烷基鹵化物，譬如甲基、乙基、丙基及丁基氯化物、溴化物及碘化物；二烷基硫酸鹽，例如二甲基、二乙基、二丁基及二戊基硫酸鹽，長鏈鹵化物，譬如癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂基氯化物、溴化物及碘化物，芳烷基鹵化物，例如苄基與苯乙基溴化物，及其他。於是獲得水或油可溶性或可分散性產物。
可被採用以形成藥學上可接受之酸加成鹽類之酸類，其實例包括無機酸類，譬如鹽酸、硫酸及磷酸，與有機酸類，譬如草酸、順丁烯二酸、甲烷磺酸、琥珀酸及檸檬酸。鹼性加成鹽可在式(I)化合物之最後單離與純化期間當場製成，或分開地經由使羧酸部份基團與適當鹼，譬如藥學上可接受之金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或重碳酸鹽，或與氨或有機一級、二級或三級胺反應。藥學上可接受之鹽包括但不限於以鹼金屬與鹼土金屬為基礎之陽離子，譬如鈉、鋰、鉀、鈣、鎂、鋁鹽等，以及無毒性銨、四級銨及胺陽離子，包括但不限於銨、四甲基銨、四乙基鍍、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。其他可用於形成鹼加成鹽之代表性有機胺類，包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、六氫吡等。
於本文中使用之"藥學上可接受之酯"一詞係指酯類，其係於活體內水解，且包括易在人類體中分解，而留下母體化合物或其鹽者。適當酯基包括例如衍生自藥學上可接受之脂族羧酸類者，特別是烷酸、烯酸、環烷酸及烷二酸，其中各烷基或烯基部份基團係有利地具有不超過6個碳原子。特定酯類之實例包括甲酸酯、醋酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯及乙基琥珀酸酯。
於本文中使用之"藥學上可接受之前體藥物"一詞，係指本發明化合物之前體藥物，其係在安全可靠醫學判斷之範圍內，適用於與人類及低等動物之組織接觸，而無不當毒性、刺激性、過敏性回應等，伴隨著合理利益/風險比，且對於其所意欲之用途有效，以及在可能之情況下，為本發明化合物之兩性離子形式。"前體藥物"一詞係指會在活體內迅速地轉變，以產生上式母體化合物之化合物，例如經由在血液中水解。充分討論係被提供於T. Higuchi與V. Stella,前體藥物作為新穎傳輸系統,A.C.S.論集系列第14卷，與在Edward B. Roche編著，在藥物設計中之生物可逆載劑，美國醫藥協會與Pergamon出版社,1987內，此兩者均併於本文供參考。
本文所予之任何化學式亦意欲表示化合物之未標識形式以及同位素標識形式。以同位素方式標識之化合物具有藉由本文所予之化學式所描繪之結構，惟一或多個原子係被一個具有經選擇之原子質量或質量數之原子置換。可被併入本發明化合物中之同位素，其實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，譬如個別為2 H,3 H,11 C,13 C,14 C,15 N,18 F,31 P,32 P,35 S,36 Cl,125 I。本發明包括各種如本文所定義之以同位素方式標識之化合物，例如於其中係存在放射性同位素譬如3 H、13 C及14 C者。此種以同位素方式標識之化合物可使用於代謝研究(以14 C)、反應動力學研究(以例如2 H或3 H)、偵測或成像技術中，譬如陽電子發射局部X射線檢法(PET)或單一光子發射計算之局部X射線檢法(SPECT)，包括藥物或受質組織分佈檢測，或用於病患之放射性治療。特定言之，18 F或經標識之化合物可為PET或SPECT研究所特別期望。以同位素方式標識之本發明化合物與其前體藥物通常可以下述方式製成，進行圖式或實例中所揭示之程序及下文所述之製備，經由以容易取得之以同位素方式標識之試劑取代未以同位素方式標識之試劑。
再者，以較重質同位素之取代，特別是氘(意即2 H或D)，可提供由於較大代謝安定性所造成之某些治療利益，例如增加之活體內半生期或降低之劑量需要量，或治療指數上之改善。應明瞭的是，氘關於此點係被認為是式(I)化合物之取代基。此種較重質同位素之濃度，特別是氘，可藉由同位素富含因子定義。於本文中使用之"同位素富含因子"一詞，係意謂在特定同位素之同位素豐度與天然豐度間之比例。若在本發明化合物中之取代基係表示氘，則此種化合物具有關於各所指定氘原子之同位素富含因子為至少3500(在各所指定之氘原子上52.5%氘併入)、至少4000(60%氘併入)、至少4500(67.5%氘併入)、至少5000(75%氘併入)、至少5500(82.5%氘併入)、至少6000(90%氘併入)、至少6333.3(95%氘併入)、至少6466.7(97%氘併入)、至少6600(99%氘併入)或至少6633.3(99.5%氘併入)。
以同位素方式標識之式(I)化合物通常可藉熟諳此藝者已知之習用技術，或藉由類似隨文所附實例與製備中所述之方法，使用適當以同位素方式標識之試劑替代先前所採用之未經標識試劑而製成。
熟諳此藝者將顯而易見的是，本發明化合物或其互變異構物、前體藥物及立體異構物，以及其任一種之藥學上可接受之鹽、酯及前體藥物，可於活體內經過人類或動物身體或細胞中之新陳代謝作用而被處理，以產生新陳代謝產物。於本文中使用之"新陳代謝產物"一詞，係指在投予母體化合物之後，於病患中所產生任何衍生物之化學式。此等衍生物可藉由病患中之各種生物化學轉變，產生自母體化合物，例如氧化作用、還原作用、水解作用或共軛作用，且包括例如氧化物與去甲基化衍生物。本發明化合物之新陳代謝產物可使用此項技藝中已知之例行技術確認。參閱，例如Bertolini，G等人,J. Med. Chem. 40 :2011-2016(1997)；Shan,D.等人,J. Pharm. Sci. 86(7)：765-767；Bagshawe K.,Drug Dev. Res. 34 ：220-230(1995)；Bodor,N.,Advancesin Drug Res. 13 ：224-331(1984)；Bundgaard,H.,前體藥物之設計 (Elsevier出版社1985)；及Larsen,I. K.,前體藥物之設計與應用，藥物設計與發展 (Krogsgaard-Larsen等人編著,Harwood大學出版社,1991)。應明瞭的是，個別化學化合物，其係為以下之新陳代謝產物，式I、式II化合物或其互變異構物、前體藥物及立體異構物，以及其任一種之藥學上可接受之鹽、酯及前體藥物，係被包含在本發明內。
"癌症"一詞係指可有利地藉由抑制Pim激酶而被治療之癌症疾病，包括例如固體癌症，譬如癌瘤(例如肺臟、胰臟、甲狀腺、卵巢、膀胱、乳房、前列腺或結腸者)、黑色素瘤、髓樣病症(例如髓樣白血病、多發性骨髓瘤及紅白血病)、腺瘤(例如絨毛結腸腺瘤)及肉瘤(例如骨肉瘤)。
合成方法
本發明化合物可經過熟諳此藝者所已知之程序獲得。例如，如圖式1中所示，環己烷二酮類可經由單三氟甲烷磺酸鹽被轉化成其相應之環己烯酮二羥基硼烷酯類，其可接受與4-氯基,3-硝基吡啶之鈀所媒介之碳鍵形成，而產生硝基吡啶取代之環己烯酮I。烯酮官能基之還原作用可產生環己烯醇II，在醇保護、硝基與烯烴還原作用、醯胺偶合及去除保護時，其可產生環己醇醯胺類III。環己烯醇II亦可接受與鄰苯二甲醯亞胺之Mitsunobu反應，而產生經保護之胺基環己烯IV。在硝基與烯烴還原作用之後，鄰苯二甲醯亞胺保護之胺基環己基吡啶基苯胺Va可接受醯胺偶合與去除保護，而產生胺基環己烷醯胺類VI。其相應之Boc保護之胺基環己烷吡啶基苯胺Vb亦可以下述方式製自環己烯醇II：醇保護、烯烴與硝基還原作用、吡啶基胺Cbz保護、矽烷基醚去除保護、Dess-Martin氧化成環己酮、以苄胺之還原胺化作用、Cbz與Bn去除保護及一級脂族胺Boc保護。在醯胺產物III與VI中，若R2 為鹵基或三氟甲烷磺酸鹽，則醯胺類III與VI可藉由標準修正進一步經修改，以在R2 上引進經取代之芳基、烷基及雜芳基。例如，若R2 為Br，藉由與二羥基硼烷或有機金屬試劑之反應，或轉化成其相應之二羥基硼烷酯，及與芳基/雜芳基鹵化物或三氟甲烷磺酸鹽之反應，則多種R2 修改係為可能。
或者，如圖式2中所示，可使環己烯醇II脫水，產生環己二烯，其係在環氧化作用(經由溴醇形成與HBr脫除，或直接自mCPBA)與疊氮化環氧化物開環時產生環己烯基疊氮基醇VI。環己烯基疊氮基醇VI可藉由疊氮化物還原作用、醇保護及烯烴與硝基還原作用，而被轉化成反式經保護之胺基羥基苯胺VIIa。或者，環己烯基疊氮基醇VI可被轉化成經保護之順式胺基羥基苯胺VIIb，藉由疊氮化物還原作用與Boc保護、醇甲磺醯化作用及分子內環化成順式環狀胺基甲酸酯，接著為Boc保護及烯烴與硝基還原作用。所形成之環己基吡啶基苯胺VIIa與VIIb可藉由醯胺偶合、醋酸酯或環狀胺基甲酸酯分裂及Boc去除保護，而被轉化成其相應之吡啶醯胺類VIIIa與VIIIb。若R2 為鹵基或三氟甲烷磺酸鹽，則醯胺類VIIIa與VIIIb可藉由標準修正進一步經修改，以在醯胺鍵結形成之後，及在完全去除保護之前，於R2 上引進經取代之芳基、烷基及雜芳基。例如，若R2 為Br，藉由與二羥基硼烷或有機金屬試劑之反應，或轉化成其相應之二羥基硼烷酯，及與芳基/雜芳基鹵化物或三氟甲烷磺酸鹽之反應，則多種R2 修改係為可能。
或者，如圖式3中所示，三取代之5-烷基,4-羥基,3-胺基六氫吡啶類可經製成及修改，而產生三取代之5-烷基,4-羥基,3-胺基六氫吡啶基吡啶醯胺類IX，如下述。Garner氏醛與(R)-4-苄基-3-丙醯基四氫唑-2-酮之反應，接著為所形成醇之TBS保護，係獲得化合物X。唑啶酮之還原作用，接著為疊氮化物基團之引進，產生中間物XI。於酸性條件下之去除保護係顯現出其相應之胺基醇，其在以Boc基團保護，接著為一級醇之甲磺醯化作用時，係產生中間物XII。疊氮化物之還原作用係獲得六氫吡啶之形成，接著使其與4-氯基-3-硝基吡啶反應，還原成胺，與其相應之羧酸偶合，及去除保護，以提供三取代之5-甲基,4-羥基-3-胺基六氫吡啶基吡啶醯胺類IX。若R1 為鹵基或三氟甲烷磺酸鹽，則醯胺IX可藉由標準修正進一步經修改，以在醯胺鍵結形成之後，及在完全去除保護之前，於R1 上引進經取代之芳基、烷基及雜芳基。例如，若R1 為Br，藉由與二羥基硼烷或有機金屬試劑之反應，或轉化成其相應之二羥基硼烷酯，及與芳基/雜芳基鹵化物或三氟甲烷磺酸鹽之反應，則多種R1 修改係為可能。
或者，如圖式4中所示，三取代之5-甲基,4-羥基,3-胺基六氫吡啶類亦可經製成及修改，而產生三取代之5-甲基,4-羥基,3-胺基六氫吡啶基醯胺類XIII，如下述。巴豆基二羥基硼烷酯類與SerOBn醛之反應，接著為環狀胺基甲酸酯形成、烯烴氧化性分裂及還原作用，產生羥基化合物XIV。苄基去除保護，接著為雙甲苯磺醯化作用及與對-甲氧基苄胺之反應，及胺去除保護，產生六氫吡啶XV。經取代之六氫吡啶XV與鹵基硝基取代之芳環類或雜芳環之反應，接著為胺基甲酸酯保護、硝基還原作用、醯胺偶合、環狀胺基甲酸酯開環及去除保護，產生三取代之5-甲基,4-羥基,3-胺基六氫吡啶基醯胺類XIII。若R3 為鹵基或三氟甲烷磺酸鹽，則醯胺XV可藉由標準修正進一步經修改，以在R3 上引進經取代之芳基、烷基及雜芳基。例如，若R3 為Br，藉由與二羥基硼烷或有機金屬試劑之反應，或轉化成其相應之二羥基硼烷酯，及與芳基/雜芳基鹵化物或三氟甲烷磺酸鹽之反應，則多種R3 修改係為可能。
本發明化合物可用於活體外及/或活體內，以抑制癌細胞之生長。該化合物可單獨或在伴隨著藥學上可接受之載劑或賦形劑之組合物中使用。適當藥學上可接受之載劑或賦形劑包括例如處理劑與藥物傳輸改質劑及增強劑，例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、單醣、雙醣、澱粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉。右旋糖、羥丙基-β-環糊精、聚乙烯基四氫吡咯酮、低熔點蠟類、離子交換樹脂等，以及其任兩種或多種之組合。其他適當藥學上可接受之賦形劑係被描述於"Remington氏醫藥科學",Mack出版公司,New Jersey(1991)，併於本文供參考。
本發明化合物之有效量通常包括藉由本文中所述之任何檢測，藉由具有此項技藝中一般技術者所已知之其他Pim激酶活性檢測，或藉由偵測癌症徵候之抑制或減輕，而足以可偵測地抑制Pim活性之任何量。可與或劑物質合併以產生單一劑型之活性成份量，係依經治療之宿主及特定投藥模式而改變。但是，應明瞭的是，對任何特定病患之特定劑量程度係依多種因素而定，包括所採用特定化合物之活性，年齡、體重、一般健康狀態、性別、飲食、投藥時間、投藥途徑、排泄速率、藥物組合，及接受治療之特定疾病之嚴重性。對特定狀況之治療上有效量可容易地藉由例行實驗術測定，且係在一般臨床家之技術與判斷範圍內。
對本發明之目的而言，治療上有效劑量通常係為以單一或分離劑量投予宿主之總日服劑量，可以例如每日0.001至1000毫克/公斤體重，而更佳為每日1.0至30毫克/公斤體重之量。劑量單位組合物可含有其約數之量，以構成該日服劑量。
本發明化合物可以口服方式、非經腸方式、舌下方式、藉氣溶膠化或吸入噴霧、直腸方式或局部方式，以包含習用無毒性藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑之劑量單位配方投藥，按需要而定。局部投藥亦可涉及使用經皮投藥，譬如經皮貼藥或離子電泳裝置。於本文中使用之非經腸一詞，係包括皮下注射，靜脈內、肌內、胸骨內注射，或灌注技術。
可注射製劑，例如無菌可注射水性或油性懸浮液，可根據已知技藝，使用適當分散或潤濕劑與懸浮劑調配。無菌可注射製劑亦可為無菌可注射溶液或懸浮液，在無毒性非經腸上可接受之稀釋劑或溶劑中，例如在1,3-丙二醇中作成溶液。其中可採用之可接受媒劑與溶劑，係為水、林格氏溶液及等滲氯化鈉溶液。此外，習用上係採用無菌不揮發油作為溶劑或懸浮媒質。對此項目的而言，任何溫和之不揮發油均可採用，包括合成單-或二-酸甘油酯。此外，脂肪酸類，譬如油酸，已發現可用於可注射劑之製備上。
供藥物直腸投藥之栓劑可經由將藥物與適當無刺激性賦形劑譬如可可豆脂與聚乙二醇混合而製成，其在一般溫度下為固體，但在直腸溫度下為液體，因此將在直腸中熔解，並釋出藥物。
供口服投藥之固體劑型可包括膠囊、片劑、丸劑、粉末及顆粒。在此種固體劑型中，可將活性化合物與至少一種惰性稀釋劑混合，譬如蔗糖、乳糖或澱粉。如同正常實施一般，此種劑型亦可包含惰性稀釋劑以外之其他物質，例如潤滑劑，譬如硬脂酸鎂。在膠囊、片劑及丸劑之情況中，劑型亦可包含緩衝劑。片劑與丸劑可另外被製成具有腸溶性塗層。供口服投藥之液體劑型可包括藥學上可接受之乳化液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑，含有常用於此項技藝中之惰性稀釋劑，譬如水。此種組合物亦可包含佐劑，譬如潤濕劑、乳化與懸浮劑、環糊精，以及增甜、矯味及芳香劑。
本發明之化合物亦可以微脂粒形式投藥。正如此項技藝中所已知，微脂粒通常係衍生自磷脂或其他脂質物質。微脂粒係藉由被分散在水性媒質中之單-或多層狀水合液晶所形成。可使用能夠形成微脂粒之任何無毒性生理學上可接受且可生物代謝之脂質。呈微脂粒形式之本發明組合物，除了本發明化合物以外，可包含安定劑、防腐劑、賦形劑等。較佳脂質為磷脂與磷脂醯膽鹼(卵磷脂)，天然與合成兩者。形成微脂粒之方法係為此項技藝中已知。參閱，例如Prescott編著，細胞生物學上之方法 ，第XIV卷，大學出版社,New York,N.W.,第33頁及其後文(1976)。
雖然本發明化合物可以單獨活性藥劑投藥，但其亦可與一或多種用於癌症治療上之其他藥劑合併使用。本發明化合物亦可與已知治療劑及抗癌劑合併使用，且目前所揭示之化合物與其他抗癌或化學治療劑之組合係在本發明之範圍內。此種藥劑之實例可參閱腫瘤學之癌症原理與實務 ,V.T. Devita與S. Hellman(編輯者),第6版(2001年2月15日),Lippincott Williams＆Wilkins出版社。一般熟諳此藝者係能夠以藥物之特定特徵與所涉及之癌症為基礎，辨識何種藥劑組合為可用。此種抗癌劑包括但不限於下列：雌激素受體調制劑、雄激素受體調制劑、類視色素受體調制劑、細胞毒性/細胞抑制劑、抗增生劑、異戊烯基-蛋白質轉移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑及其他血管生成抑制劑、細胞增生與存活發出訊息之抑制劑、細胞凋零誘發劑及會干擾細胞循環查核點之藥劑。當與放射療法共同投藥時，本發明化合物亦可使用。
因此，於本發明之一項具體實施例中，本發明化合物亦可與已知抗癌劑合併使用，包括例如雌激素受體調制劑、雄激素受體調制劑、類視色素受體調制劑、細胞毒劑、抗增生劑、異戊烯基-蛋白質轉移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白酶抑制劑、反轉錄酶抑制劑及其他血管生成抑制劑。
在本發明之某些目前較佳具體實施例中，可與本發明化合物合併使用於癌症治療之代表性藥劑，包括例如伊利諾提肯(irinotecan)、拓波提肯(topotecan)、真西塔賓(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶、甲醯四氫葉酸碳氯胺鉑、順氯胺鉑、紅豆杉烷類、帖札西塔賓(tezacitabine)、環磷醯胺、長春花植物鹼、愛馬汀尼伯(imatinib)(葛里維克(Gleevec))、蒽環素、利圖西馬伯(rituximab)、搓史圖諸馬伯(trastuzumab)，以及其他癌症化學治療劑。
欲與本發明化合物合併採用之上述化合物，係以如醫師之桌上參考資料 (Physicians'Desk Reference )(PDR )第47版(1993)中所指示之治療量使用，其係併於本文供參考，或譬如一般熟諳此藝者所已知之治療上可使用量。
本發明化合物與其他抗癌劑可在所建議之最高臨床劑量或在較低劑量下投予。在本發明組合物中之活性化合物之劑量程度可以改變，以致能夠獲得所要之治療回應，依投藥途徑、疾病之嚴重性及病患之回應而定。此組合可以個別組合物或以含有兩種藥劑之單一劑型投予。當以組合投藥時，治療劑可被調配成個別組合物，其係在相同時間或不同時間下給予，或治療劑可以單一組合物給予。
於一項具體實施例中，本發明係提供一種在人類或動物病患中抑制Pim1、Pim2或Pim3之方法。此方法包括對有需要之病患投予有效量之式I或II化合物任何具體實施例之化合物或其藥學上可接受之鹽。
本發明將參考下述實例而更容易地明瞭，其係以說明方式提供，並非意欲成為本發明之限制。
 實例
關於下文實例，較佳具體實施例之化合物係使用本文中所述之方法，或其他此項技藝中已知之方法合成而得。
化合物及/或中間物係藉由高性能液相層析法(HPLC)，使用具有2695分離模組(Milford,MA)之Waters Millenium層析系統作特徵鑒定。分析管柱為逆相Phenomenex Luna C18-5μ，4.6 x 50毫米，得自Alltech(Deerfield,IL)。使用梯度溶離(流量2.5毫升/分鐘)，典型上以5%乙腈/95%水開始，並進展至100%乙腈，歷經10分鐘期間。所有溶劑均含有0.1%三氟醋酸(TFA)。化合物係在220或254毫微米下，藉由紫外光(UV)吸收偵測。HPLC溶劑係得自Burdick與Jackson(Muskegan,MI)或Fisher Scientific(Pittsburgh,PA)。
於一些情況中，純度係藉由薄層層析法(TLC)，使用玻璃或塑膠背襯之矽膠板評估，例如Baker-FLex矽膠1B2-F可撓性薄片。TLC結果係容易地於紫外光下，或藉由採用習知碘蒸氣及其他各種染色技術，以目視方式偵測。
質譜分析係於三種LCMS儀器之一上進行：Waters系統(Alliance HT HPLC與Micromass ZQ質譜儀；管柱：Eclipse XDB-C18，2.1 x 50毫米；梯度液：在具有0.05% TFA之水中之5-95%(或35-95%，或65-95%，或95-95%)乙腈，歷經4分鐘期間；流率0.8毫升/分鐘；分子量範圍200-1500；圓錐體電壓20V；柱溫40℃)，另一種Waters系統(ACQUITY UPLC系統與ZQ 2000系統；管柱：ACQUITY UPLC HSS-C18，1.8微米，2.1 x 50毫米；梯度液：在具有0.05% TFA之水中之5-95%(或35-95%，或65-95%，或95-95%)乙腈，歷經1.3分鐘期間；流率1.2毫升/分鐘；分子量範圍150-850；圓錐體電壓20V；柱溫50℃)，或Hewlett Packard系統(系列1100HPLC；管柱：Eclipse XDB-C18，2.1 x 50毫米；梯度液：在具有0.05% TFA之水中之5-95%乙腈，歷經4分鐘期間；流率0.8毫升/分鐘；分子量範圍150-850；圓錐體電壓50V；柱溫30℃)。所有質量均以質子化母離子作報告。
核磁共振(NMR)分析係在一些化合物上，以Varian 400MHzNMR(Palo Alto,CA)進行。光譜參考為TMS或該溶劑之已知化學位移。
製備分離係使用急驟式40層析系統與KP-Sil，60A(Biotage,Charlottesville,VA)，或藉急驟式管柱層析，使用矽膠(230-400網目)填充材料，或藉HPLC，使用Waters 2767試樣處理器，C-18逆相管柱，30X50毫米，流量75毫升/分鐘進行。供急驟式40 Biotage系統與急驟式管柱層析所採用之典型溶劑為二氯甲烷、甲醇、醋酸乙酯、己烷、丙酮、氨水(或氫氧化銨)及三乙胺。供逆相HPLC所採用之典型溶劑為不同濃度之具有0.1%三氟醋酸之乙腈與水。
應明瞭的是，根據較佳具體實施例之有機化合物可顯示互變異構現象。因在本專利說明書內之化學結構可能僅表示可能互變異構形式之一，故應明瞭的是，較佳具體實施例係涵蓋所畫出結構之任何互變異構形式。
應明瞭的是，本發明並不限於本文中所提出用於說明之具體實施例，而是當來自上文揭示內容之範圍內時，係包含其所有此種形式。
下文實例以及在整個本申請案中，下列縮寫具有下述意義。若未定義，則術語具有其一般所接受之意義。
三氟甲烷磺酸3-酮基環己-1-烯酯之合成
於環己烷-1,3-二酮(1當量)在DCM(0.4M)中之溶液內，添加Na2 CO3 (1.0當量)，並冷卻至0℃。在室溫及氮大氣下，逐滴添加DCM(5M)中之Tf2 O(1.0當量)，歷經1小時。於添加時，將反應物攪拌2小時(暗紅色溶液)。過濾溶液，且於濾液中添加飽和NaHCO3 (小心地)，然後，萃取有機物質，以鹽水，接著以Na2 SO4 脫水乾燥，及濃縮。將粗製物使用於下一步驟，無需進一步純化。獲得三氟甲烷磺酸3-酮基環己-1-烯酯，67%產率。三氟甲烷磺酸酯係在儲存時分解，且應立即使用於下一反應。LC/MS=244.9/286.0(M+H與M+CH3 CN)；Rt=0.88分鐘。
3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)環己-2-烯酮之合成
於三氟甲烷磺酸3-酮基環己-1-烯酯(1.0當量)在經脫氣二氧陸圜(0.3M)中之溶液內，添加雙(品吶可基)二硼(2.0當量)、KOAc(3.0當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)。將反應物加熱至80℃，歷經2小時，然後過濾。將二氧陸圜溶液使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS=140.9(二羥基硼烷之M+H)。
3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮之合成
於3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)環己-2-烯酮(1.0當量)在經脫氣二氧陸圜與2M Na2 CO3 中之溶液內，添加4-氯基-3-硝基吡啶(1.2當量)與Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)。將反應物在油浴中加熱至110℃，歷經2小時。冷卻至室溫，然後以EtOAc稀釋，添加H2 O-暗色溶液，大量乳化液。過濾，以除去固體，接著萃取有機相，以Na2 SO4 脫水乾燥，及濃縮。使粗製物經由矽膠層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:1)溶離，產生3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮(55%，2個步驟)。LC/MS=219(M+H),LC=2.294分鐘。
3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇之合成
於3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮(1.0當量)之溶液中，添加EtOH(0.2M)與CeCl3 -7H2 O(1.3當量)。使反應物冷卻至0℃，然後分次添加NaBH4 (1.3當量)。在0℃下攪拌2小時，接著藉由添加水使反應淬滅，濃縮，以移除EtOH，添加EtOAc，萃取有機物質，以鹽水，然後以Na2 SO4 脫水乾燥，及濃縮，產生3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(99%)。LC/MS=221.1(M+H),LC=2.235分鐘。
2-(3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮之合成
於3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(1.0當量)、三苯膦(1.5當量)及鄰苯二甲醯亞胺(1.5當量)在THF(0.3M)中之溶液內，在0℃下，逐滴添加(E)-重氮烯-1,2-二羧酸二-第三-丁酯(1.5當量)。將反應物於0℃下攪拌2小時。在真空下濃縮至乾涸，然後，使粗製物經由矽膠管柱層析純化，以EtOAc與己烷(1:1，具有5%甲醇)溶離，獲得2-(3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮(63%產率)。LC/MS=350.3(M+H),LC=3.936分鐘。
2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮之合成
於2-(3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮(1.0當量)在AcOH(0.38M)中之溶液內，添加Fe(6.0當量)，並將反應物在室溫下攪拌2小時。過濾，然後以甲醇洗滌，且濃縮濾液。於粗製物中，添加醋酸乙酯與飽和NaHCO3 ，使有機物質以Na2 SO4 脫水乾燥，及濃縮，獲得2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮，為黃色濃稠膠質，96%產率。LC/MS=320.0(M+H),LC=2.410分鐘。
2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)環己基)異吲哚啉-1,3-二酮之合成
於2-(3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮(1.0當量)在醋酸(0.1M)中之溶液內，添加10% Pd/C(0.2當量)，並將反應物在H2 氣瓶下攪拌。3天後，使反應物經過矽藻土過濾，以醋酸乙酯與甲醇洗滌，將濾液以醋酸乙酯稀釋，且以飽和2M Na2 CO3 洗滌兩次。使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。將粗製物質以己烷與醋酸乙酯研製，獲得2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)環己基)異吲哚啉-1,3-二酮，73%產率。LC/MS=322.2(M+H),Rt=0.64分鐘。
三氟甲烷磺酸5,5-二甲基-3-酮基環己-1-烯酯之合成
於3頸圓底燒瓶中，使5,5-二甲基環己烷-1,3-二酮(1.0當量)溶於DCM(0.2M)中。在N2 下，添加碳酸鈉(1.1當量)，並將混合物在冰/鹽水浴上冷卻至~-5℃，且磁性攪拌。經由添液漏斗，逐滴添加已於DCM中稀釋之三氟甲烷磺酐(1.05當量)，歷經90分鐘。在添加完成時，將反應物於~0℃下攪拌1小時。得自LCMS與1H NMR，仍然有起始物質留下。添加另外之碳酸鈉(0.51當量)與三氟甲烷磺酐(0.50當量)。2小時後，使混合物經過粗燒結玻璃漏斗過濾(以DCM洗滌濾餅)，轉移至錐形瓶，經由小心添加飽和碳酸氫鈉水溶液使反應淬滅，且激烈攪拌，直到pH=7為止，轉移至分液漏斗，並分離液層。將有機層以鹽水洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，獲得三氟甲烷磺酸5,5-二甲基-3-酮基環己-1-烯酯，將其使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS(m/z)：MH+ =273.1,Rt=1.03。
5,5-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)環己-2-烯酮之合成
於圓形底部燒瓶中，將所有試劑三氟甲烷磺酸5,5-二甲基-3-酮基環己-1-烯酯(1.0當量)、醋酸鉀(3.0當量)及雙(品吶可基)二硼(2.0當量)添加至1,4-二氧陸圜(0.2M)中，並藉由使N2 起泡經過混合物，歷經10分鐘而脫氣。添加PdCl2 (dppf)-DCM加成物(0.03當量)，且將反應物於油浴上在N2 下加熱至80℃過夜，裝上回流冷凝管。使混合物冷卻至室溫，經過粗燒結玻璃漏斗過濾，以1,4-二氧陸圜沖洗濾餅，獲得1,4-二氧陸圜中之5,5-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)環己-2-烯酮，將其使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS(m/z)：MH+ (二羥基硼烷)=169.1,Rt=0.50。
5,5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮之合成
於圓形底部燒瓶中，使二羥基硼烷酯5,5-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)環己-2-烯酮(1.0當量)溶於1,4-二氧陸圜中，並藉由使N2 起泡經過溶液，歷經30分鐘而脫氣。添加4-氯基-3-硝基-吡啶(1.3當量)與2M(水溶液)碳酸鈉(2.0當量)，且使N2 起泡經過10分鐘，然後添加PdCl2 (dppf)-DCM(0.05當量)。將反應混合物在110℃下攪拌2小時。將混合物添加至EtOAc與水中。使所形成之混合物經過矽藻土過濾，以EtOAc洗滌濾餅。分離有機層，並以EtOAc萃取水溶液。 將合併之有機層以鹽水洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉矽膠層析純化(以EtOAc：己烷=1:10至2:1溶離)，獲得5,5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮(46.7%，歷經三個步驟)。LC/MS(m/z)：MH+ =247.2,Rt=0.79。
5,5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇之合成
在0℃下，於5,5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮(1.0當量)與CeCl3 -7H2 O(1.2當量)在MeOH(0.2M)中之溶液內，添加NaBH4 (1.0當量)。將溶液攪拌1小時，然後藉由添加5毫升水使反應淬滅。在真空中移除揮發性物質，並使殘留物於EtOAc與H2 O之間作分液處理。分離有機層，且以鹽水洗滌。將合併之水溶液以EtOAc逆萃取，並將有機物質以鹽水洗滌。使合併之有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(5%甲醇在1:1醋酸乙酯與己烷中)，獲得5,5-二甲基-3-(3-硝基吡定-4-基)環己-2-烯醇(74%)。LC/MS(m/z)：MH+ =249.2,Rt=0.76。
2-(5,5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)-環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮之合成
於5,5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(1.0當量)、三苯膦(1.5當量)及鄰苯二甲醯亞胺(1.5當量)在THF(0.2M)中，已冷卻至0℃之均勻溶液內，將THF中之偶氮二羧酸二-第三丁酯(1.5當量)添加至此溶液內。將混合物在0℃下攪拌2小時。使反應物於真空中濃縮。使殘留物藉管柱純化(5%甲醇在1:1醋酸乙酯與己烷中)，獲得2-(5,5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮(99%)。LC/MS(m/z)：MH+ =378.2,Rt=1.10。
2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)-5,5-二甲基-環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮之合成
將2-(5,5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮(1當量)在醋酸(0.1M)中之溶液以氮滌氣10分鐘。然後添加10% Pd/C(0.10當量)。將反應混合物於室溫及氫大氣下攪拌過夜。將固體在矽藻土上藉過濾移除，接著以EtOAc與MeOH沖洗。濃縮濾液，以EtOAc稀釋，並以飽和2M Na2 CO3 水溶液洗滌(2x)。使有機層以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(5%甲醇在1:1醋酸乙酯與己烷中)，獲得2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)-5,5-二甲基環己-2-烯基)異吲哚啉-1,3-二酮(89%)。LC/MS(m/z)：MH+ =348.3,Rt=0.79。
2-(5-(3-胺基吡啶-4-基)-3,3-二甲基環己基)異吲哚啉-1,3-二酮之合成
將2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)-5,5-二甲基環己-2-烯基)異吲哚啉-1，3-二酮(1.0當量)在醋酸(0.1M)中之溶液以氮滌氣10分鐘。然後添加10% Pd/C(0.1當量)。將反應混合物於鋼彈形容器中，在45℃，300psi氫大氣下攪拌過夜，並於65℃，300psi下5小時。將固體在矽藻土上藉過濾移除，接著以EtOAc與MeOH沖洗。濃縮濾液，以EtOAc稀釋，且以飽和2M Na2 CO3 水溶液洗滌(2x)。使有機層以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(5%甲醇在1:1醋酸乙酯與己烷中)，獲得2-(5-(3-胺基吡啶-4-基)-3,3-二甲基環己基)異吲哚啉-1,3-二酮(53%)。LC/MS(m/z)：MH+ =350.3,Rt=0.78。使對掌異構上純2-((1R,5R)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-3,3-二甲基環己基)異吲哚啉-1,3-二酮與2-((1S,5S)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-3,3-二甲基環己基)異吲哚啉-1,3-二酮藉對掌性HPLC解析(關於分析，個別為Rt =7.526分鐘與13.105分鐘；己烷：乙醇=80:20(v:v)，Chiralcel OJ-H 100x4.6毫米，在1毫升/分鐘下。關於製備型分離，己烷：乙醇=80:20(v:v)，Chiralcel OJ-H(250x20毫米，在20毫升/分鐘下)。1 H NMR(CDCl3 ):δ8.04(s,1H),8.00(d,1H),7.82(m,2H),7.71(m,2H),7.06(d,1H),4.54(m,1H),3.71(m,2H),2.89(m,1H),2.23-2.44(m,2H),1.90(m,1H),1.20-1.60(m,3H),1.18(s,3H),1.07(s,3H)。
4-(環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶之合成
於3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(1.0當量)之溶液中，添加二氧陸圜(0.18M)與pTSA(1.1當量)。將溶液加熱至100℃，歷經4小時。冷卻至室溫，以飽和NaHCO3 與醋酸乙酯處理，使有機相以Na2 SO4 脫水乾燥，及濃縮。使粗製物經由矽膠管柱層析純化，以100% DCM溶離，獲得4-(環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶，為黃色油(27%產率)。LCMS(m/z)：203.1(MH+ ),LC Rt =3.53分鐘,1 H-NMR(CDCl3 )：9.02(s,1H),8.70(d,J=5.3,1H),7.30(d,J=5.3,1H),6.15-6.17(m,1H),6.02-6.11(m,2H),2.35-2.38(m,4H)。
(+/-)-2-疊氮基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇之合成
於4-(環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在DCM(0.1M)中之溶液內，添加NaHCO3 (1.2當量)，獲得黃色溶液。冷卻至0℃，然後，將m-CPBA(1.0當量)立即以固體添加至溶液中。將反應物在0℃下攪拌3.5小時。藉TLC與LC/MS兩者監測。產物係於UPLC上離子化成M+H=237(二醇)；Rt=0.41分鐘。以飽和NaHCO3 使反應淬滅，接著以DCM萃取(3次)。使有機相以鹽水，然後以Na2 SO4 進一步脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得粗製環氧化物，為黃色油，使用之而無需進一步純化。
於上述粗製物質在EtOH與水(3:1)中之溶液(混濁黃色溶液)內，添加NaN3 (2.0當量)與NH4 Cl(2.0當量)，獲得透明橘色溶液。將反應物攪拌16小時，然後濃縮。添加EtOAc與水，使有機相以MgSO4 進一步脫水乾燥，並濃縮，獲得褐色油。將此油裝填於矽膠中，且經由管柱層析純化(1SCO，0-50%EtOAc)，而得(+/-)-2-疊氮基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇，為黃色油(44%，歷經2個步驟)。LCMS(m/z)=262(MH+ ),LC Rt =2.35分鐘。
(+/-)-4-(3-疊氮基-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己-1-烯基)-3-硝基吡啶之合成
在室溫下，於(+/-)-2-疊氮基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇(1.0當量)在DCM(0.15M)中之溶液內，添加TBSCl(2.0當量)、咪唑(2.0當量)及DMAP(0.1當量)。18小時後，添加水，使有機物質以鹽水，然後以Na2 SO4 脫水乾燥，並濃縮。將粗製物質裝填至矽膠，且經由管柱層析純化(ISCO)，以醋酸乙酯與己烷(20%)溶離。獲得(+/-)-4-(3-疊氮基-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己-1-烯基)-3-硝基吡啶，為黃色油，60%產率。LCMS(m/z)：376.3(MH+ ),LCRt =5.848分鐘。
(+/-)-6-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於圓底燒瓶中，添加(+/-)-4-(3-疊氮基-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)與吡啶(0.1M)，獲得黃色溶液。添加氫氧化銨(10:1吡啶：氫氧化銨)，接著為PMe3 (3.0當量)。10分鐘後，反應物轉變成深褐色。在室溫下攪拌1.5小時。藉由添加EtOH使反應淬滅，並濃縮。再重複2次。於粗製物中，添加飽和NaHCO3 與二氧陸圜(1:1，0.1M)。添加Boc2 O(1.0當量)。在室溫下攪拌一小時。以H2 O與EtOAc洗滌，使有機相以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物經由矽膠管柱層析純化(ISCO，5:1己烷/EtOAc)。收集純溶離份，且濃縮，而得(+/-)-6-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯，為泡沫物。LCMS(m/z)：450.3(MH+ ),LC Rt =5.83分鐘。
(+/-)-3-(3-胺基吡啶-4-基)-6-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-6-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在AcOH(0.18M)中之溶液內，添加Fe(6.0當量)，並將反應物攪拌20小時。處理係經由將反應物以甲醇稀釋，過濾，且濃縮此濾液。在此粗製物中，添加醋酸乙酯與飽和NaHCO3 ，使有機物質以硫酸鈉脫水乾燥，及濃縮，獲得(+/-)-3-(3-胺基吡啶-4-基)-6-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯，為黃色油，94%產率。LCMS(m/z)：420.3(MH+ ),LC Rt =3.88分鐘。
(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-2-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-3-(3-胺基吡啶-4-基)-6-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在MeOH(0.1M)中之溶液內，添加Pd/C(20%重量)，並將反應物在氫氣瓶下攪拌18小時。反應物之LC/MS顯示非對映異構物之混合物，將反應物過濾，以EtOAc洗滌，且濃縮濾液。使粗製物質經由製備型-HPLC純化(在DMSO中)，並合併純溶離份，以固體NaHCO3 中和，以醋酸乙酯萃取，以鹽水洗滌，在Na2 SO4 下脫水乾燥，及濃縮，獲得產物A(8%產率)與產物B(51%產率)。
產物A：LCMS(m/z)：422.4(MH+ ),LC Rt =3.75分鐘。
產物B：LCMS(m/z)：422.4(MH+ ),LC Rt =3.94分鐘。
三氟甲烷磺酸1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯之合成
使1,4-二氧螺[4.5]癸-8-酮(1.0當量)溶於醚(0.1M)中，並於-15℃下攪拌，然後添加1M NaHMDS(1.05當量)，且攪拌70分鐘，接著添加Tf2 O(1.05當量)，並使反應物慢慢溫熱至室溫。將混合物攪拌28小時，以飽和NaHCO3 水溶液，然後以水洗滌。將水層合併，且以醚萃取。合併有機層，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(乙醚：己烷=1:4)，獲得三氟甲烷磺酸1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯(65%)。LC/MS(m/z)：MH+ =289.0,Rt=0.97.HPLC Rt=3.77。
4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼伍圜之合成
將三氟甲烷磺酸1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯(1.0當量)在二氧陸圜(0.5M)中之溶液以氮滌氣30分鐘。然後添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧硼伍圜)(1.0當量)、KOAc(3.0當量)、Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.2當量)，並將溶液於密封彈形容器中在80℃下攪拌。將反應物於矽藻土墊上過濾，接著在濾液中添加醋酸乙酯，且以鹽水洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(醋酸乙酯：己烷=1:1)，獲得4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼伍圜(95%)。LC/MS(m/z)：MH+ =267.1,Rt=0.95。
3-硝基-4-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶之合成
將DME(0.2M)與2M碳酸鈉水溶液(1.7當量)之溶液以氮滌氣20分鐘。然後添加4-氯基-3-硝基吡啶(1.6當量)、4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼伍圜(1.0當量)、Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，並於密封彈形容器中在110℃下攪拌。將反應物於該溫度下攪拌3.5小時。將反應物以醋酸乙酯稀釋，以水洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(醋酸乙酯：己烷=1:1，具有10%甲醇)，獲得3-硝基-4-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶(83%)。LC/MS(m/z)：MH+ =263.2,Rt=0.71。
4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酮之合成
將3-硝基-4-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶(1.0當量)在CH2 Cl2 中之20% TFA(0.2M)內之混合物，於室溫下攪拌過夜。在減壓下移除溶劑。使殘留物以醋酸乙酯(200毫升)溶解，並以飽和NaHCO3 (30毫升)與飽和NaCl(30毫升)洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，獲得4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酮(85%)。將此粗產物使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS(m/z)：MH+ =218.9,Rt=0.60
4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇之合成
於4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酮(1.0當量)在甲醇(0.2M)中之溶液內，在0℃下，添加硼氫化鈉(1.8當量)。將反應混合物於0℃下攪拌2小時。在減壓下移除甲醇。使殘留物以醋酸乙酯(200毫升)溶解，並以飽和NaCl(30毫升)洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，獲得4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇(85%)。將此粗產物使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS(m/z)：MH+ =221.0,Rt=0.55
甲烷磺酸4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯之合成
於4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇(1.0當量)與DIPEA(2.5當量)在CH2 Cl2 (0.15M)中之溶液內，在0℃下，添加氯化甲烷磺醯(1.8當量)。將反應混合物於0℃下攪拌1小時。以醋酸乙酯(200毫升)稀釋反應混合物，並以飽和NaCl(30毫升)洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，獲得甲烷磺酸4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯(93%)。將殘留物使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS(m/z)：MH+ =299.0,Rt=0.70
4-(環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶之合成
於甲烷磺酸4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯(1.0當量)在四氫呋喃(0.1M)中之溶液內，在室溫下，添加DBU(1.8當量)。將反應混合物於室溫下攪拌過夜。以醋酸乙酯(200毫升)稀釋反應混合物，並以飽和NaCl(30毫升)洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(5%甲醇在1:1醋酸乙酯與己烷中)，獲得4-(環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶。LC/MS(m/z)：MH+ =203.2,Rt=0.85。
(+/-)-6-羥基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-2-疊氮基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇(1.0當量)在吡啶與NH4 OH(8:1，0.23M)中之溶液內，在室溫下，添加三甲膦(3.0當量)。將混合物於室溫下攪拌3小時。移除溶劑。於殘留物中添加乙醇。然後在真空中移除乙醇，以確保氨之完全移除。使殘留物溶於1,4-二氧陸圜與飽和碳酸氫鈉水溶液中，接著，將THF中之Boc2 O(1.0當量)添加至混合物中。將所形成之混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物以醋酸乙酯稀釋，且以飽和NaCl洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(5%甲醇在1:1醋酸乙酯與己烷中)，獲得(+/-)-6-羥基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯(82%)。LC/MS(m/z)：MH+ =336.0,Rt=0.71
甲烷磺酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯之合成
於(+/-)-6-羥基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)與三乙胺(1.5當量)在CH2 Cl2 (0.2M)中之溶液內，在0℃下，添加氯化甲烷磺醯(1.2當量)。將混合物於該溫度下攪拌2小時。將反應混合物以醋酸乙酯稀釋，並以飽和NaCl洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，獲得甲烷磺酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯(85%)，將其使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS(m/z)：MH+ =414.0,Rt=0.82
(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-3,3a,7,7a-四氫苯并[d] 唑-2(6H)-酮之合成
將甲烷磺酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯(1.0當量)在吡啶(0.21M)中之混合物，於微波中，在110℃下攪拌10分鐘。於減壓下移除吡啶。使殘留物溶於醋酸乙酯中，並以飽和NaCl洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，獲得(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-3,3a,7,7a-四氫苯并[d]唑-2(6H)-酮(85%)，將其使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS(m/z)：MH+ =262.1,Rt=0.49
(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d] 唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-3,3a,7,7a-四氫苯并[d]唑-2(6H)-酮(1.0當量)、TEA(1.8當量)及催化量DMAP在CH2 Cl2 (0.19M)中之溶液內，在室溫下，添加二碳酸二-第三-丁酯(1.2當量)。將反應混合物攪拌1小時。以醋酸乙酯(100毫升)稀釋反應混合物，並以飽和NaCl(30毫升)洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(5%甲醇在1:1醋酸乙酯與己烷中)，獲得(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯(98%)。LC/MS(m/z)：MH+ =306.0,Rt=0.75
(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-2-酮基六氫苯并[d] 唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯(1.0當量)在甲醇與醋酸乙酯(1:1，0.1M)中之溶液內，添加10% Pd/C(0.1當量)。將所形成之混合物在H2 大氣下攪拌6小時。藉過濾移除固體。於減壓下濃縮濾液，獲得(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-2-酮基六氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯(87%)，將其使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS(m/z)：MH+ =334.1,Rt=0.51。
三氟甲烷磺酸5-甲基-3-酮基環己-1-烯酯之合成
於5-甲基環己烷-1,3-二酮(1.0當量)在DCM(0.5M)中之溶液內，添加Na2 CO3 (1.1當量)，並冷卻至0℃。在0℃及氮大氣下，逐滴添加DCM(5.0M)中之Tf2 O(1.0當量)，歷經1小時。於添加時，將反應物在室溫下攪拌1小時(暗紅色溶液)。過濾溶液，且藉由小心添加飽和NaHCO3 使濾液淬滅，並激烈攪拌，直到pH=7為止。將溶液轉移至分液漏斗，且分離液層。將有機層以鹽水洗滌，以Na2 SO4 脫水乾燥，過濾，於真空下濃縮，及在高真空下乾燥，歷經15分鐘，產生三氟甲烷磺酸5-甲基-3-酮基環己-1-烯酯，為淡黃色油，78%產率。三氟甲烷磺酸酯係在儲存時分解，且應立即使用於下一反應。LC/MS=259.1/300.1(M+H與M+CH3 CN)；Rt=0.86分鐘,LC=3.84分鐘。1 H-NMR(400MHz,CDCl3 )δppm：6.05(s,1H),2.70(dd,J=17.2,4.3,1H),2.53(dd,J=16.6,3.7,1H),2.48-2.31(m,2H),2.16(dd,J=16.4,11.7,1H),1.16(d,J=5.9,3H)。
5-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)環己-2-烯酮之合成
於三氟甲烷磺酸5-甲基-3-酮基環己-1-烯酯(1.0當量)在經脫氣二氧陸圜(0.7M)中之溶液內，添加雙(品吶可基)二硼(2.0當量)、KOAc(3.0當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.03當量)。將反應物加熱至80℃，歷經10小時(在大規模下之最初加熱，會造成溶液上方橘色泡沫物之放熱形成，應移除加熱浴，直到泡沫物縮小為止，此時再加熱至80℃，呈現係為微細)，然後冷卻至室溫，及經過粗燒結玻璃漏斗過濾。將濾餅以更多二氧陸圜沖洗，並將濾液使用於下一步驟，無需進一步純化。LC/MS=155.1(二羥基硼烷之M+H)；Rt=0.41分鐘,LC=1.37分鐘。
5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮之合成
於5-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)環己-2-烯酮(1.0當量)在經脫氣二氧陸圜(0.5M)與2M Na2 CO3 (2當量)中之溶液內，添加4-氯基-3-硝基吡啶(1.3當量)與Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)。將反應物置於回流冷凝管下，並在油浴中加熱至110℃，歷經1小時。冷卻至室溫，經過矽藻土墊過濾，以醋酸乙酯洗滌此墊片，且於真空下濃縮濾液。使殘留物在80℃下於迴轉式蒸發器上進一步泵送一小時，以經由昇華作用移除二羥基硼烷酯副產物(M+H=101)。使殘留物於鹽水與醋酸乙酯之間作分液處理，並分離液層，將水相以醋酸乙酯進一步萃取(4x)，合併有機物質，以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製物經由矽膠層析純化，裝填於DCM中，並以2-50%醋酸乙酯與己烷溶離。在真空中濃縮純溶離份，產生橘色油。將此油與種晶於高真空(~500毫托)下放置過夜，產生橘色固體。使固體經由在己烷中研製而進一步純化，產生5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮(48%，2個步驟)。LC/MS=233.2(M+H)；Rt=0.69分鐘,LC=2.70分鐘。1 H-NMR(400MHz,CdCl3 )δppm：9.31(s,1H),8.88(d,J=5.1,1H),7.30(d,J=5.1,1H),6.00(d,J=2.4,1H),2.62(dd,J=16.4,3.5,1H),2.53-2.34(m,3H),2.23(dd,J=16.1,11.7,1H),1.16(d,J=6.3,3H)。
順式-(+/-)-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇之合成
於5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯酮(1.0當量)在EtOH(0.3M)中之溶液內，添加CeCl3 -7H2 O(1.2當量)。使反應物冷卻至0℃，然後分次添加NaBH4 (1.2當量)。在0℃下攪拌1小時，接著藉由添加水使反應淬滅，濃縮，以移除EtOH，添加EtOAc，萃取有機物質，以鹽水洗滌，然後以Na2 S04 脫水乾燥，過濾，及濃縮，產生順式-(+/-)-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(94%)。LC/MS=235.2(M+H),LC=2.62分鐘。
4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝 基吡啶之合成
於5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(1.0當量)在DMF(0.5M)中之溶液內，添加咪唑(4.0當量)與TBDMSC1(2.5當量)。在攪拌18小時後，將溶液在EtOAc與H2 O之間分配，並分離。在以H2 O(3x)與NaCl(飽和) 進一步洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及移除溶劑後，獲得4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(85%)。LC/MS=349.2(M+H),LC=5.99分鐘。
4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)吡啶-3-胺之合成
將4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)與鐵(6.0當量)在醋酸中之不均勻溶液，於0.4M之濃度下，激烈攪拌2小時。然後，使混合物通過矽藻土墊，以MeOH溶離。在真空中移除揮發性物質時，使殘留物溶於EtOAc中，以Na2 CO3(飽和) 、NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及在真空中移除揮發性物質，產生4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)吡啶-3-胺(78%)。LCMS(m/z)：319.3(MH+ )；LC Rt =3.77分鐘。
4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺之合成
於4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在甲醇中之溶液內，在0.1M之濃度下，添加10%鈀/碳(0.1當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌15小時。在此段時間下，使混合物經過以甲醇溶離之矽藻土墊過濾。於真空中移除揮發性物質，產生4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺(90%)。LCMS(m/z)：321.3(MH+ )；LC Rt =3.85分鐘。
順式(+/-)4-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯之合成
於順式-(+/-)-4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺在二氯甲烷中之溶液內，在0.5M之濃度下，添加碳酸苄基2,5-二酮基四氫吡咯-1-基酯(1.1當量)與DMAP(0.05當量)。於室溫下攪拌16小時後，添加另外之碳酸苄基2,5-二酮基四氫吡咯-1-基酯(0.55當量)與DMAP(0.03當量)。於室溫下再攪拌24小時後，添加另外之碳酸苄基2,5-二酮基四氫吡咯-1-基酯(0.1當量)與DMAP(0.03當量)。再攪拌18小時後，使溶液於EtOAc與Na2 CO3(飽和) 之間作分液處理，並分離。在以Na2 CO3(飽和) (2x)與NaCl(飽和) 進一步洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及移除溶劑時，獲得順式(+/-)4-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯。將粗製物質以其本身使用。LC/MS=455.3(M+H),LC=4.39分鐘。
順式-(+/-)4-(3-羥基-5-甲基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯之合成
將順式(+/-)4-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯在1:2:1 6N HCl/THF/MeOH中之溶液，於0.1M之濃度下，在室溫下攪拌6小時。然後，藉由添加6N NaOH將pH值調整至pH=7，並於真空中移除揮發性物質。以EtOAc萃取水層，且將有機物質以NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及在真空中移除揮發性物質時，獲得順式-(+/-)4-(3-羥基-5-甲基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯。將粗製物質以其本身使用。LC/MS=341.2(M+H),LC=2.38分鐘。
順式(+/-)4-(3-甲基-5-酮基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯之合成
於順式-(+/-)-4-(3-羥基-5-甲基-環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯在經潤濕CH2 Cl2 中之0℃溶液內，在0.16M之濃度下，添加Dess-Martin過碘烷(1.5當量)，且當溶液溫熱至室溫時，將其攪拌18小時。使溶液於EtOAc與1:1 10% Na2 S2 O3 /NaHCO3(飽和) 之間作分液處理，並分離。在以1:1 10% Na2 S2 O3 /NaHCO3(飽和) (2x)與NaCl(飽和) 進一步洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，移除溶劑，及藉矽膠層析純化(75-100% EtOAc/己烷)時，獲得順式-(+/-)-4-(3-甲基-5-酮基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯，為白色固體(53%，5個步驟)。LC/MS=339.2(M+H)。
順式-(+/-)-4-(-3-(苄胺基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯之合成
將順式-(+/-)-4-(3-甲基-5-酮基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯(1.0當量)與苄胺(3.0當量)在MeOH中之溶液，於0.25M之濃度下，在室溫下攪拌2小時。於-78℃浴中冷卻時，添加LiBH4 (1.1當量，2.0M，在THF中)，並使溶液溫熱至室溫，且攪拌16小時。使溶液於EtOAc與NaHCO3(飽和) 之間作分液處理，分離，進一步以NaHCO3(飽和) 與NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及在真空中移除揮發性物質後，順式-(+/-)-4-(-3-(苄胺基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯係以異構物之4:1混合物獲得，其中所有順式為主要，LC/MS=430.3(M+H),LC=0.62分鐘。
順式(+/-)-(-3-(3-胺基吡啶-4-基)-5-甲基環己基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於順式-(+/-)-4-(-3-(苄胺基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基胺基甲酸苄酯(1.0當量)在甲醇中之溶液內，在0.07M之濃度下，添加20%氫氧化鈀/碳(0.2當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌14小時。在此段時間下，將反應物以Ar滌氣，添加Boc2 O(1.0當量)，且將溶液攪拌8小時。添加另外之Boc2 O(1.0當量)，並將溶液再攪拌16小時。於此段時間下，使混合物經過以甲醇溶離之矽藻土墊過濾。在真空中移除揮發性物質時，藉矽膠層析純化(2.5-2.5 MeOH/CH2 Cl2 ，具有0.1% DIEA)，及自10% EtOAc/己烷再結晶，產生順式(+/-)-(-3-(3-胺基吡啶-4-基)-5-甲基環己基胺基甲酸第三-丁酯(49%)。LCMS(m/z)：306.3(MH+ ),LC Rt =2.59分鐘。純對掌異構物可藉由對掌性層析獲得。
(+/-)-4-(5-甲基環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶之合成
於(+/-)-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(1.0當量)在二氧陸圜(0.1M)中之溶液內，添加p-TSA(1.0當量)，並將反應物在100℃下攪拌3小時。使溶液冷卻至室溫，然後通過中性氧化鋁墊片，以EtOAc溶離，產生(+/-)-4-(5-甲基環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶，為黃色油，68%產率。LC/MS=217.1(M+H),LC=3.908分鐘。
(+/-)-2-疊氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇之合成
於(+/-)-4-(5-甲基環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在DCM(0.1M)中之溶液內，在0℃下，添加m-CPBA(1.1當量)，並使反應物溫熱至室溫。3小時後，以飽和NaHCO3 使混合物淬滅，以DCM萃取，且使有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮，獲得黃色油。使粗製物溶於乙醇與水(3:1，0.1M)中，並添加疊氮化鈉(2.0當量)與氯化銨(2.0當量)。將反應物攪拌4小時，然後在真空中濃縮。於粗製物中添加醋酸乙酯與水，將有機相以鹽水洗滌，以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製物質經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:1)溶離，而得(+/-)-2-疊氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇，為油狀物，49%產率。LC/MS=276.1(M+H),Rt=0.71分鐘。
(+/-)-6-羥基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-2-疊氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇(1.0當量)在吡啶與氫氧化銨(8:1，0.08M)中之溶液內，添加三甲膦(3.0當量)，並將褐色溶液在室溫下攪拌2小時。將乙醇添加至混合物中，且使溶液於真空下濃縮(2x)。然後，使粗製混合物溶於二氧陸圜與飽和NaHCO3 (1:1，0.08M)中，並添加Boc2 O(1.0當量)。將溶液在室溫下攪拌2小時，接著於醋酸乙酯與水之間作分液處理。使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮。使粗產物經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:1)溶離，獲得(+/-)-6-羥基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯，69%產率。LC/MS=350.1(M+H),Rt=0.76分鐘。
甲烷磺酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯之合成
於(+/-)-6-羥基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在DCM(0.09M)中之溶液內，添加三乙胺(1.5當量)。使反應混合物冷卻至0℃，並將MsCl(1.2當量)添加至反應物中，且攪拌3小時。在此溶液中添加水，使有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製物質經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1：1)溶離，獲得甲烷磺酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯，為白色泡沫物，65%產率。LC/MS=428.2(M+H),Rt=0.88分鐘。
(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d] 唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
將甲烷磺酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯(1.0當量)在吡啶(0.2M)中之溶液，於微波容器中加熱至110℃，歷經10分鐘。然後，使橘色溶液濃縮至乾涸，且藉由在醋酸乙酯與水之間分配而處理。使有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製物質溶於DCM(0.2M)中，且將三乙胺(1.8當量)添加至反應物中，接著為Boc2 O(1.2當量)。在室溫下攪拌40分鐘後，使反應物於真空中濃縮，並經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1：1)溶離，獲得(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯，白色泡沫物，66%產率。LC/MS=376.0(M+H),Rt=0.87分鐘。
(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫苯并[d] 唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯(1.0當量)在MeOH與醋酸乙酯(1:1，0.07M)中之溶液內，添加10% Pd/C(0.1當量)，並將反應物在室溫及氫大氣下攪拌。於反應完成時，使溶液經過矽藻土墊過濾，以MeOH與醋酸乙酯洗滌，使濾液在真空下濃縮至乾涸，獲得(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯，為非對映異構物之混合物，>99%產率。LC/MS=3-48.2(M+H),Rt=0.50分鐘。
(+/-)-6-溴基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇之合成
於4-(5-甲基環己-1,3-二烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在THF與水(1:1，0.13M)中之溶液內，添加NBS(1.5當量)，並將反應物在室溫下攪拌30分鐘。於完成時，將醋酸乙酯與水添加至反應物中，使有機相以鹽水，然後以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製物質經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:1)溶離，獲得(+/-)-6-溴基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇，為黃色油，80%產率。LC/MS=315.0/313.0(M+H),LC=2.966分鐘。
(+/-)-2-疊氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇之合成
於(+/-)-6-溴基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(1.0當量)在THF(0.1M)中之溶液內，添加第三-丁醇鉀(1.5當量)。反應物幾乎立即自橘色轉變成黑色。藉TLC，產物之形成在30分鐘內為完全。藉由添加飽和氯化銨與醋酸乙酯使反應淬滅。使有機相以鹽水，然後以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗產物溶於乙醇與水(3:1，0.1M)中，且添加氯化銨(2.0當量)與疊氮化鈉(2.0當量)。將暗橘色反應物在室溫下攪拌過夜。完全轉化成產物，如藉LC/MS顯示。使反應物濃縮，以移除乙醇，添加醋酸乙酯與水，並使有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製物質經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:1)溶離，獲得(+/-)-2-疊氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇，55%產率。LC/MS=276.0(M+H)，LC=2.803分鐘。
(+/-)-6-羥基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-2-疊氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯醇(1.0當量)在吡啶與氫氧化銨(8:1，0.08M)中之溶液內，添加三甲膦(3.0當量)，並將褐色溶液在室溫下攪拌2小時。於完成時，添加EtOH，且使溶液在真空中濃縮。添加更多乙醇，並使反應物再一次濃縮。將二氧陸圜與飽和NaHCO3 (1:1，0.08M)添加至粗製物中，接著為Boc2 O(1.0當量)。將反應混合物於室溫下攪拌2小時，然後添加水與醋酸乙酯。使有機相以MgSO4 脫水乾燥，及濃縮。使粗產物經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:1)溶離，獲得(+/-)-6-羥基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯(59%)。LC/MS=350.1(M+H),Rt：0.76分鐘。
醋酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯之合成
於(+/-)-6-羥基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在吡啶(0.1M)中之溶液內，添加Ac2 O(2.0當量)，並將反應物在室溫下攪拌過夜。於完成時，使反應物濃縮至乾涸，然後以醋酸乙酯與水處理。使有機相以鹽水，接著以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮，獲得醋酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯，94%產率。LC/MS=392.2(M+H),Rt=0.94分鐘。
(+/-)-4-(3-胺基吡啶-4-基)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基醋酸 環己酯之合成
於醋酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯(1.0當量)在MeOH與EtOAc(1:1，0.1M)中之經脫氣溶液內，添加10% Pd/C(0.1當量)，並將反應物在室溫及氫氣瓶下攪拌3天。於完成時，使溶液經過矽藻土墊過濾，將墊片以醋酸乙酯洗滌，且濃縮濾液。粗製物質含有約10%不期望之異構物。使粗製物溶於醋酸乙酯(~20%)與己烷中，並加熱，直到全部溶解為止。使溶液在室溫下靜置2天。然後，收集沉澱物，獲得(+/-)-4-(3-胺基吡啶-4-基)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基醋酸環己酯，為純產物，59%產率。LC/MS=364.3(M+H),Rt=0.63分鐘。
甲烷磺酸2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯之合成
於6-羥基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在DCM(0.09M)中之溶液內，添加三乙胺(1.5當量)，並使反應物冷卻至0℃。將MsCl(1.2當量)添加至反應物中，且攪拌3小時。將另外1.0當量之MsCl添加至反應物中，並再攪拌2小時。藉由添加水處理反應物，使有機相以鹽水、硫酸鈉脫水乾燥，及濃縮。使粗產物經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:1)溶離，獲得甲烷磺酸2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯，為白色泡沫物，65%產率。LC/MS=428.2(M+H),LC：3.542分鐘。
(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d] 唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
將甲烷磺酸(+/-)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯酯(1.0當量)在吡啶(0.2M)中之溶液，於微波中，在110℃下加熱10分鐘。然後，在真空下濃縮橘色反應物，使粗製物溶於醋酸乙酯與水中，使有機相以硫酸鈉脫水乾燥，並在真空下濃縮。使粗製物質溶於DCM(0.2M)中，添加三乙胺(1.8當量)，接著為Boc2 O(1.2當量)。將反應物攪拌化分鐘，然後濃縮至乾涸。使粗製物質經由矽膠管柱層析純化，以己烷與醋酸乙酯(1：1)溶離，獲得(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯，為白色泡沫物，66%產率。LC/MS=376.0(M+H),LC：3.424分鐘。
(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫苯并[d] 唑-3(2H)- 羧酸第三-丁酯之合成
於(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶廿基)-2-酮基-3a,6,7,7a-四氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯(1.0當量)在MeOH與EtOAc(1:1，0.1M)中之經脫氣溶液內，添加10% Pd/C(0.1當量)。將反應物在氫氣瓶下攪拌過夜。於完成時，使溶液經過矽藻土墊過濾，並以醋酸乙酯洗滌墊片。使濾液在真空下濃縮，獲得(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯，為所要之產物，為黃色泡沫物，93%產率。LC/MS=348.1(M+H),Rt=0.55分鐘。
((+/-)-(1R,2R,6S)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯-1,2-二醇與(+/-)-(1R,2S,6S)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯-1,2-二醇)之合成
於(+/-)-(1S,5S,6S)-6-溴基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)環己-2-烯醇(1.0當量)在THF(0.1M)中之溶液內，在室溫下添加第三-丁醇鉀(1.5當量)。將反應混合物攪拌10分鐘。以NH4 Cl溶液使反應混合物淬滅，並藉由以水與鹽水洗滌，以EtOAc處理。使有機層以無水硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及在真空中乾燥。將此粗產物使用於下一步驟，無需進一步純化。Rf=0.5(50%EtOAc/己烷)。LCMS：MH+251.2(為二醇),Rt =0.49分鐘。於粗製(+/-)-4-((1S,5S)-5-甲基-7-氧雙環并[4.1.0]庚-2-烯-3-基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在2:1 CH3 CN/H2 O(0.1M)中之溶液內，在室溫下，添加醋酸(0.3當量)。將反應混合物於室溫下攪拌16小時。在以NaHCO3 溶液使反應淬滅後，使反應混合物濃縮，以移除大部份CH3 CN，並使殘留物於EtOAc與水之間作分液處理。將合併之有機層以水與鹽水洗滌，以無水硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮。二醇類((+/-)-(1R,2R,6S)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯-1,2-二醇與(+/-)-(1R,2S,6S)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)環己-3-烯-1,2-二醇)之混合物係藉急驟式管柱層析以33.1%產率獲得，為白色固體。Rf =0.3(100%EtOAc；二醇類於TLC上並非可分離)。LCMS：MH+251.2,Rt =0.49分鐘。
(+/-)-4-((3S,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶與(+/-)-4-((3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶之合成
於二醇類之混合物(1.0當量)在DMF(0.3M)中之溶液內，在室溫下，添加TBDMSCl(7.0當量)與咪唑(9當量)。將反應混合物於室溫下攪拌過夜。在以飽和NaHCO3 使反應淬滅後，將反應混合物以EtOAc萃取。將合併之有機層以水與鹽水洗滌，以無水硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮。使混合物藉連續自動化矽膠管柱層析(以EtOAc與己烷溶離之梯度液)，與製備型逆相HPLC(在水中之55%-95%乙腈，然後進行水中之5%-95%乙腈)純化，產生(+/-)-4-((3S,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(27.2%)與(+/-)-4-((3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(50.2%)。LCMS：MH+479.2,Rt =1.60與1.63分鐘。
4-((1S,3S,4S,5R)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺與4-((1R,3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺之合成
於(+/-)-4-((3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基-矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在乙醇/EtOAc中之溶液內，在0.1M之濃度下，添加10%鈀/碳(0.1當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌14小時。在此段時間下，使混合物經過以EtOAc溶離之矽藻土墊過濾，於真空中移除揮發性物質，且使粗製物質藉自動化矽膠管柱層析純化(Rf =0.2，40% EtOAc在庚烷中)，產生純外消旋產物。LCMS：MH+451.3,Rt=1.35分鐘。使外消旋化合物藉對掌性層析解析(IC管柱，1毫升/分鐘，5% IPA在庚烷中)，產生4-((1S,3S,4S,5R)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺(6.01分鐘)與4-((1R,3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺(8.34分鐘)。
4-((1R,3R,4S,5R)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺與4-((1S,3S,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺之合成
於(+/-)-4-((3S,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基-矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在乙醇中之溶液內，在0.1M之濃度下，添加10%鈀/碳(0.1當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌14小時。在此段時間下，使混合物經過以乙醇溶離之矽藻土墊過濾。於真空中移除揮發性物質，且使粗製物質藉自動化矽膠管柱層析純化(Rf =0.2，40% EtOAc在庚烷中)，產生純外消旋產物(50.4%)。LCMS：MH+ 451.3,Rt =1.35分鐘。使外消旋化合物藉對掌性層析解析(IC管柱，1毫升/分鐘，5% IPA在庚烷中)，產生4-((1R,3R,4S,5R)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺(6.98分鐘)與4-((1S,3S,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基-環己基)吡啶-3-胺(8.67分鐘)。
6-(甲氧羰基)-3-酮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯醇化鈉之合成
於鈉(1.0當量)在t-BuOH(1M)中之剛製成溶液內，逐滴添加乙醯醋酸乙酯(1.0當量)，並將混合物在冰浴上攪拌另外15分鐘。逐滴添加4,4,4-三氟巴豆酸乙酯(1.0當量)，且將混合物於室溫下攪拌另外30分鐘。在回流2小時後，使混合物冷卻，並添加己烷。過濾沉澱物，無需進一步純化，獲得6-(甲氧羰基)-3-酮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯醇化鈉(46%)。LC/MS(m/z)：MH+ =253.1,Rt=0.70分鐘。
5-(三氟甲基)環己烷-1,3-二酮之合成
使6-(甲氧羰基)-3-酮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯醇化鈉(1.0當量)溶於1M NaOH(1.0當量)中，並使混合物回流1小時。於冷卻至室溫後，以5M硫酸使混合物酸化。將混合物以EtOAc萃取。在以水洗滌後，使有機層以硫酸鎂脫水乾燥，於減壓下移除溶劑，獲得5-(三氟甲基)環己烷-1,3-二酮，將其使用於下一步驟，無需進一步純化(98%)。LC/MS(m/z)：MH+ =181.1,Rt=0.55分鐘。
三氟甲烷磺酸3-酮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯酯之合成
於5-(三氟甲基)環己烷-1,3-二酮(1.0當量)在DCM(0.23M)中之懸浮液內，添加TEA(1.2當量)，獲得透明溶液。使混合物冷卻至0℃。然後，逐滴添加DCM中之Tf2 O(1.05當量)。將反應混合物在該溫度下攪拌2小時。將反應混合物以DCM稀釋，並以水、NaHCO3 水溶液、鹽水洗滌，且以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得三氟甲烷磺酸3-酮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯酯，將其直接使用於下一步驟。LC/MS(m/z)：MH+ =313.0,Rt=1.02分鐘。
3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯酮之合成
於圓底燒瓶中，將所有試劑三氟甲烷磺酸3-酮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯酯(1.0當量)、NaOAc(3.0當量)及雙(品吶可基)二硼(2.0當量)添加至1,4-二氧陸圜(0.23M)中，並藉由使N2 起泡經過混合物，歷經10分鐘而脫氣。添加PdCl2 (dppf).CH2 Cl2 加成物(0.1當量)，且將反應物在油浴上於N2 下加熱至80℃，歷經兩小時，裝上回流冷凝管。使混合物冷卻至室溫，經過粗燒結玻璃漏斗過濾，以~10毫升1,4-二氧陸圜沖洗濾餅，獲得1,4-二氧陸圜中之3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯酮，將其直接使用於下一步驟。LC/MS(m/z)：MH+ =209.1(二羥基硼烷),Rt=0.60分鐘。
3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯酮之合成
於圓底燒瓶中，使二羥基硼烷酯3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯酮(1.0當量)溶於1,4-二氧陸圜(0.14M)中，藉由使N2 起泡經過此溶液，歷經30分鐘而脫氣。添加4-氯基-3-硝基吡啶(1.3當量)與Na2 CO3 水溶液(2M，2.0當量)，並使N2 起泡經過10分鐘，然後添加PdCl2 (dppf).CH2 Cl2 加成物(0.1當量)。將反應混合物在100℃下攪拌2小時。於混合物中添加EtOAc與鹽水。使所形成之混合物經過矽藻土過濾，以EtOAc洗滌濾餅。分離有機層，且以鹽水洗滌，以MgSO4脫水乾燥，且過濾，及濃縮。使粗產物藉矽膠層析純化(以EtOAc：己烷=1:10至2:1溶離)，獲得3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯酮(73%，歷經三個步驟，得自二酮)。LC/MS(m/z)：MH+ =287.1,Rt=0.85分鐘。
順式-3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯醇之合成
將3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯酮(1.0當量)與氯化鈰(III)七水合物(1.0當量)混合，並添加無水乙醇(0.17)。將混合物於環境溫度下攪拌，直到所有固體溶解為止。使混合物在冰浴上冷卻，並分次添加NaBH4 (1.2當量)。將反應物於冰浴上攪拌1小時。將混合物以EtOAc稀釋，以水洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(1:1醋酸乙酯與己烷)，獲得順式-3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯醇(66%)。LC/MS(m/z)：MH+ =289.2,Rt=0.72分鐘。
順式-4-(3-疊氮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯基)-3-硝基吡啶之合成
在室溫下，於順式-3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己-2-烯醇(1.0當量)在DCM(0.14M)中之溶液內，添加TEA(2.5當量)，接著為MsCl(1.8當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。移除溶劑。使殘留物溶於DMF(0.19M)中，然後，在混合物中添加疊氮化鈉(1.2當量)。將所形成之混合物於室溫下攪拌1小時。添加另外1.2當量之疊氮化鈉。將混合物在室溫下攪拌過夜。以醋酸乙酯與庚烷稀釋反應混合物，並以飽和NaCl洗滌。使有機物質以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉管柱純化(1:1醋酸乙酯與己烷)，獲得順式-4-(3-疊氮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(58%)。LC/MS(m/z)：MH+ =314.1,Rt=0.96分鐘。
(1R,3R,5S)-3-(3-胺基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己基胺基甲酸第三-丁酯之合成
使順式-4-(3-疊氮基-5-(三氟甲基)環己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在乙醇(0.13M)中之溶液以N2 起泡20分鐘。然後，於反應混合物中添加Boc-酐(1.5當量)與Pd/C(0.2當量)。將反應混合物在室溫與H2 大氣下攪拌過夜。將固體於矽藻土上藉過濾移除，並以EtOH沖洗。使殘留物藉管柱純化(5%甲醇在1:1醋酸乙酯與己烷中)，獲得外消旋順式-3-(3-胺基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己基胺基甲酸酯(57%)。LC/MS(m/z)：MH+=360.2,Rt=0.72分鐘。使對掌異構上純(1R,3R,5S)-3-(3-胺基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)環己基胺基甲酸第三-丁酯與N-(4-((1S,3S,5R)-3-胺基-5-(三氟甲基)環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺藉對掌性HPLC解析(關於分析，個別為Rt =8.14分鐘與10.59分鐘；庚烷：異丙醇=90:10(v:v)，Chiralcel IC 100 x 4.6毫米，在1毫升/分鐘下。關於製備型分離，庚烷：異丙醇=90:10(v:v)，Chiralcel IC 250 x 20毫米，於15毫升/分鐘下)。
(R)-4-苄基-3-((2R,3R)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-3-羥基-2-甲基丙醯基)四氫 唑-2-酮之合成
(R)-4-苄基-3-((2R,3R)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-3-羥基-2-甲基丙醯基)四氫唑-2-酮係以關於對掌異構化合物所報告之方式(Proc. Nat. Acad. Science,101,33,2004,第12042-12047頁)，藉由以(R)-4-苄基-3-丙醯基四氫唑-2-酮與R-丙二羥醛丙酮化物開始而製成。
(R)-4-苄基-3-((2R,3R)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙醯基)四氫 唑-2-酮之合成
(R)-4-苄基-3-((2R,3R)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙醯基)四氫唑-2-酮係以關於對掌異構化合物所報告之方式(Proc. Nat. Acad. Science,101,33,2004,第12042-12047頁)，藉由以(R)-4-苄基-3-((2R,3R)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-3-羥基-2-甲基丙醯基)四氫唑-2-酮開始而製成。
(2S,3R)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙-1-醇之合成
於(R)-4-苄基-3-((2R,3R)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙醯基)四氫唑-2-酮(1.0當量)與乙醇(3.0當量)在THF(0.09M)中之溶液內，在-40℃下，添加LiBH4 (1.0當量)。使反應混合物慢慢溫熱至室溫，並於該溫度下攪拌12小時。使溶液冷卻回復至-40℃，且添加另外之LiBH4 (0.3當量)。在溫熱回復至室溫，並攪拌2小時後，接著，以乙醚稀釋溶液，且添加1N NaOH。將所形成之混合物以醋酸乙酯萃取，分離有機層，以NaCl(飽和) 洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物經由矽膠管柱層析純化(10-30% EtOAc/正-庚烷)，產生(2S,3R)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙-1-醇(75%)。LC/MS=247.1(M+H-縮酮-H2 O),Rt =0.64分鐘。
((1R,2S)-3-疊氮基-1-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙氧基)(第三-丁基)二甲基矽烷之合成
於(2S,3R)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙-1-醇(1.0當量)、DIAD(2.0當量)及PPh3 (2.0當量)在THF(0.18M)中之溶液內，添加DPPA(1.0當量，在THF中之1M溶液)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。於真空下移除揮發性物質時，使殘留物藉矽膠管柱層析純化(2-3-5% EtOAc/正-庚烷)，產生((1R,2S)-3-疊氮基-1-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙氧基)(第三-丁基)二甲基矽烷(62%)。1 H-NMR(400MHz,CDCl3 )：δ4.04-4.10(m,1H),3.94(dd,J=8.0,6.4,1H),3.72(d,J=7.2,1H),3.53(t,J=8.0,1H),3.36(dd,J=12,8.0,1H),3.19(dd,J=12.0,6.7,1H),1.52-1.60(m,1H),1.41(s,3H),1.34(s,3H),0.92(d,J=7.2,3H),0.90(s,9H),0.12(s,3H),0.09(s,3H)。
(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-4-甲基戊烷-1,2-二醇之合成
於((1R,2S)-3-疊氮基-1-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧伍圜-4-基)-2-甲基丙氧基)(第三-丁基)二甲基矽烷(1.0當量)在MeOH(0.1M)中之溶液內,添加PPTS(1.0當量)，並將混合物在室溫下攪拌14小時，於50℃下2小時，及在80℃下1小時。於真空下移除揮發性物質，且使殘留物經由矽膠管柱層析純化(10-25% EtOAc/正-庚烷)，產生(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-4-甲基戊烷-1,2-二醇(40%)。
(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-羥基-4-甲基戊基4-苯磺酸甲酯之合成
於(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-1-羥基-4-甲基戊烷-2-基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在吡啶(0.2M)中之溶液內，在0℃下，添加pTsCl(1.3當量)。將混合物於此溫度下保持16小時。在真空中移除揮發性物質，並使殘留物藉矽膠管柱層析純化(10-15-20% EtOAc/正-庚烷)，產生(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-羥基-4-甲基戊基4-苯磺酸甲酯。
(2R,3R,4S)-5-疊氮基-2,3-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-4-甲基戊基4-苯磺酸甲酯之合成
於(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-羥基-4-甲基戊基4-苯磺酸甲酯(1.0當量)與2,6-二甲基吡啶(3.4當量)之溶液中，在0℃下，添加TBDMSOTf(1.7當量)。當使溶液溫熱至室溫時，將其攪拌7小時。將溶液以EtOAc稀釋，以10% CuSO4 、H2 O、Na2 CO3(飽和) 、NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉矽膠管柱層析純化(2.5-5-10-20% EtOAc/正-庚烷)，產生(2R,3R,4S)-5-疊氮基-2,3-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-4-甲基戊基4-苯磺酸甲酯(75%)。
4-((3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-1-基)-3-硝基吡啶之合成
使(2R,3R,4S)-5-疊氮基-2,3-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-4-甲基戊基4-苯磺酸甲酯在EtOH(0.05M)中之溶液以氬脫氣。添加DIEA(1.5當量)，接著為10% Pd/C(0.1當量)。將反應混合物於氫氣瓶下攪拌3小時。使溶液脫氣，並以氬滌氣，此時，添加4-氯基-3-硝基吡啶(1.5當量)與另外之DIEA(1.5當量)。在室溫下攪拌15小時後，將溶液過濾，以移除Pd/C，且於真空中移除揮發性物質。將殘留物以醋酸乙酯稀釋，並以Na2 CO3 (飽和)、NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉矽膠管柱層析純化(10-15% EtOAc/正-庚烷)，產生4-((3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-1-基)-3-硝基吡啶(40%)。LC/MS=482.4(M+H),Rt =1.26分鐘。
4-((3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-胺之合成
於4-((3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-1-基)-3-硝基吡啶(1.0當量)在乙醇中之溶液內，在0.05M之濃度下，添加10%鈀/碳(0.1當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌14小時。在此段時間下，使混合物經過以乙醇溶離之矽藻土墊過濾。於真空中移除揮發性物質，產生4-((3R,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-1-基)吡啶-3-胺。LC/MS=452.4(M+H),Rt =1.31分鐘。
(R)-4-((1R,2R)-3-((R)-4-苄基-2-酮基四氫 唑-3-基)-1-羥基-2-甲基-3-酮基丙基)-2,2-二甲基四氫 唑-3-羧酸第三-丁酯之合成
於(R)-4-苄基-3-丙醯基四氫唑-2-酮(1.0當量)在DCM(0.13M)中之溶液內，在-40℃下，添加TiCl4 (1.0當量)。將混合物於-40℃下攪拌10分鐘(黃色懸浮液)，然後添加DIPEA(2.5當量)(暗紅色溶液)，並在0℃下攪拌20分鐘。接著，逐滴添加DCM(0.5M)中之(R)-4-甲醯基-2，2-二甲基四氫唑-3-羧酸第三-丁酯(1.0當量)，且將所形成之混合物攪拌1.5小時。藉由添加氯化鍍水溶液使反應淬滅，並將混合物以醋酸乙酯萃取。分離有機相，以鹽水洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物經由管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:4)溶離，獲得(R)-4-((1R,2R)-3-((R)-4-苄基-2-酮基四氫唑-3-基)-1-羥基-2-甲基-3-酮基丙基)-2,2-二甲基四氫唑-3-羧酸第三-丁酯，為主要產物(5：2)，58%產率。LC/MS=363.3(M+H-Boc),Rt=1.09分鐘。
(R)-4-((1R,2R)-3-((R)-4-苄基-2-酮基四氫 唑-3-基)-1-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-甲基-3-酮基丙基)-2,2-二甲基四氫 唑-3-羧酸第三-丁酯之合成
於(R)-4-((1R,2R)-3-((R)-4-苄基-2-酮基四氫唑-3-基)-1-羥基-2-甲基-3-酮基丙基)-2,2-二甲基四氫唑-3-羧酸第三-丁酯(1.0當量)與二甲基吡啶(1.8當量)在DCM(0.1M)中之溶液內，在-40℃下，添加TBSOTf(1.4當量)。將反應混合物於-40℃下攪拌2小時。將溶液以醋酸乙酯稀釋，並以飽和NaHCO3 、飽和NaCl洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:4)溶離，獲得(R)-4-((1R,2R)-3-((R)-4-苄基-2-酮基四氫唑-3-基)-1-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-甲基-3-酮基丙基)-2,2-二甲基四氫唑-3-羧酸第三-丁酯，為主要產物(5:2)，83%產率。LC/MS=577.3(M+H),Rt=1.33分鐘(Frac 65%-95%方法)。
(R)-4-((1R,2S)-1-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-羥基-2-甲基丙基)-2,2-二甲基四氫 唑-3-羧酸第三-丁酯之合成
於(R)-4-((1R,2R)-3-((R)-4-苄基-2-酮基四氫唑-3-基)-1-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-甲基-3-酮基丙基)-2,2-二甲基-四氫唑-3-羧酸第三-丁酯(1.0當量)與乙醇(3.0當量)在THF(0.09M)中之溶液內，在-30℃下，添加LiBH4 (3.0當量)。使反應混合物溫熱至0℃，並於該溫度下攪拌3小時。然後，將溶液以乙醚稀釋，且添加1N NaOH。將所形成之混合物以醋酸乙酯萃取，分離有機層，以飽和NaCl洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:4)溶離，獲得(R)-4-((1R,2S)-1-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-3-羥基-2-甲基丙基)-2,2-二甲基四氫唑-3-羧酸第三-丁酯，為主要產物(5:2比例)，71%產率。LC/MS=304.3(M+H-Boc),Rt=0.95分鐘(Frac 65%-95%方法)。
(R)-4-((1R,2S)-3-疊氮基-1-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-甲基丙基)-2,2-二甲基四氫 唑-3-羧酸第三-丁酯之合成
於(R)-4-((1R,2S)-1-(第三-丁基二甲基-矽烷基氧基)-3-羥基-2-甲基丙基)-2,2-二甲基四氫唑-3-羧酸第三-丁酯(1.0當量)、DIAD(2.0當量)及PPh3 (2.0當量)在THF(0.18M)中之溶液內，添加DPPA(2.0當量，在THF中之1M溶液)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。於真空下移除揮發性物質時，使殘留物藉矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:6)溶離，獲得(R)-4-((1R,2S)-3-疊氮基-1-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-甲基丙基)-2,2-二甲基四氫唑-3-羧酸第三-丁酯，為主要產物(5:2)，86%產率。LC/MS=329.3(M+H-Boc),Rt=1.40分鐘(Frac 65%-95%方法)。
(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-1-羥基-4-甲基戊烷-2-基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於(R)-4-((1R,2S)-3-疊氮基-1-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-2-甲基丙基)-2,2-二甲基四氫唑-3-羧酸第三-丁酯(1.0當量)在EtOH(0.1M)中之溶液內，添加PPTS(1.3當量)，並使混合物回流2天。在真空下移除揮發性物質，使殘留物溶於DCM(0.1M)中，且將DIEA(1.5當量)與Boc2 O(1.0當量)添加至反應混合物中。將溶液在室溫下攪拌3小時。於減壓下移除溶劑，並將殘留物以醋酸乙酯稀釋，以水、NaHSO4 水溶液、NaHCO3 水溶液、飽和NaCl洗滌，使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:3)溶離，獲得(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-1-羥基-4-甲基戊烷-2-基胺基甲酸第三-丁酯，為主要異構物(5：2)，70%產率。LC/MS=289.3(M+H-Boc),Rt=0.76分鐘(Frac 65%-95%方法)。
甲烷磺酸(2R,3R,4S)-5-疊氮基-2-(第三-丁氧羰基胺基)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-4-甲基戊酯之合成
於(2R,3R,4S)-5-疊氮基-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-1-羥基-4-甲基戊烷-2-基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在吡啶(0.2M)中之溶液內，在0℃下，添加MsCl(1.3當量)，接著為DMAP(催化量)。將混合物在該溫度下攪拌1小時。將溶液以醚與醋酸乙酯(4:1)稀釋，以NaHSO4 水溶液、飽和NaHCO3 、鹽水洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物藉矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:3)溶離，獲得甲烷磺酸(2R,3R,4S)-5-疊氮基-2-(第三-丁氧羰基胺基)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-4-甲基戊酯，為主要異構物(5:2)，90%產率。LC/MS=367.3(M+H-BOc),Rt=0.81分鐘(Frac 65%-95%方法)。
(3R,4R,5S)-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-3-基胺基甲酸第三-丁酯之合成
使甲烷磺酸(2R,3R,4S)-5-疊氮基-2-(第三-丁氧羰基胺基)-3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-4-甲基戊酯在MeOH中之溶液(0.09M)以氮脫氣20分鐘。添加DIEA(2.5當量)，接著為10%Pd/C(0.1當量)。將反應混合物於氫氣瓶下攪拌2小時。過濾溶液，並使濾液在真空下濃縮，獲得(3R,4R,5S)-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-3-基胺基甲酸第三-丁酯，為主要異構物(5:2)，>99%產率。LC/MS=345.2(M+H-Boc),Rt=0.95與0.99分鐘。
(3R,4R,5S)-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基-1-(3-硝基吡啶-4-基)六氫吡啶-3-基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於(3R,4R,5S)-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-3-基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在i-PrOH(0.09M)中之溶液內，添加DIEA(2.5當量)與4-氯基-3-硝基吡啶(1.5當量)。將反應混合物在60℃下攪拌2小時。於真空下移除揮發性物質，將殘留物以醋酸乙酯稀釋，並以飽和NaCl洗滌。使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製物質藉矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:2)溶離，獲得(3R,4R,5S)-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基-1-(3-硝基吡啶-4-基)六氫吡啶-3-基胺基甲酸第三-丁酯，76%產率。LC/MS=467.3(M+H),Rt=1.09分鐘。
(3R,4R,5S)-1-(3-胺基吡啶-4-基)-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-3-基胺基甲酸第三-丁酯之合成
使(3R,4R,5S)-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基-1-(3-硝基吡啶-4-基)六氫吡啶-3-基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在MeOH(0.05M)中之溶液以氮脫氣20分鐘。將10% Pd/C(0.2當量)添加至混合物中，並將溶液於氫氣瓶下攪拌3小時。過濾反應物，且使濾液在減壓下濃縮，獲得(3R,4R,5S)-1-(3-胺基吡啶-4-基)-4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基六氫吡啶-3-基胺基甲酸第三-丁酯，為所要之產物，94%產率。
LC/MS=437.4(M+H),Rt=1.08分鐘。1 H-NMR(300MHz,CDCl3 )：δ 8.01(s,1H),7.95(d,J=6.0Hz,1H),6.76(d,J=6.0Hz,1H),4.44(br s,1H),3.74(br s,2H),3.59-3.55(m,1H),3.25-3.13(m,2H),2.47-2.35(m,2H),1.89(br s,2H),1.44(s,9H),1.04(d,J=6.0,3H),0.92(s,9H),0.13(d,J=9.0,6H)。
(2R)-1-(苄氧基)-3-羥基-4-甲基己-5-烯-2-基胺基甲酸第三-丁酯之合成
於N-Boc,O-苄基-D-絲胺酸醛(1.0當量)在DCM(0.1M)中之溶液內，在-78℃及Ar大氣下，添加(Z)-2-(丁-2-烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜(1.1當量)，且當使透明溶液溫熱至室溫時，將其攪拌16小時。將溶液添加至EtOAc中，並以H2 O(3x)與NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，且藉矽膠層析純化(15% EtOAc/己烷)，產生(2R)-1-(苄氧基)-3-羥基-4-甲基己-5-烯-2-基胺基甲酸第三-丁酯(54%)，為異構物之3:1混合物，如藉1 H NMR判斷。LCMS(m/z)：236.3(MH+ -Boc)；LC Rt =4.37與4.51分鐘。
(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(丁-3-烯-2-基)四氫 唑-2-酮之合成
於(2R)-1-(苄氧基)-3-羥基-4-甲基己-5-烯-2-酮在THF(0.1M)中之溶液內，添加礦油中之60%氫化鈉(1.5當量)。於攪拌3天後，藉由添加NH4 Cl(飽和) 使反應淬滅，並將溶液以EtOAc稀釋，且以NH4 Cl(飽和) 與NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，及藉矽膠層析純化(50% EtOAc/己烷)，產生(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(丁-3-烯-2-基)四氫唑-2-酮(89%)，為3:1混合物。LCMS(m/z)：262.2(MH+ )；LC Rt =3.47分鐘。
(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(1-羥丙-2-基)四氫 唑-2-酮之合成
於(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(丁-3-烯-2-基)四氫唑-2-酮(1.0當量)在2:1 MeOH/H2 O(0.04M)中之溶液內，添加H2 O中之四氧化鋨4%(0.07當量)與過碘酸鈉(3.0當量)。在攪拌3小時後，過濾白色沉澱物，並以EtOAc沖洗。使合併之濾液在真空中濃縮，且使殘留物溶於EtOAc中，以NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製醛溶於EtOH(0.08M)中，並在冷卻至0℃時，添加硼氫化鈉(2.0當量)。於攪拌15小時，且來到室溫後，藉由添加H2 O使反應淬滅。在攪拌20分鐘後，於真空中移除EtOH，添加EtOAc，並將溶液以1N HCl、NaHCO3(飽和) 及NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，在藉矽膠層析純化後，產生(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(1-羥丙-2-基)四氫唑-2-酮，為異構物之3:1混合物(60%)。LCMS(m/z)：266.1(MH+ )；LC Rt =2.28分鐘。
(4R)-4-(羥甲基)-5-(1-羥丙-2-基)四氫 唑-2-酮之合成
於(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(1-羥丙-2-基)四氫唑-2-酮(1.0當量)在甲醇中之溶液內，在0.1M之濃度下，添加10%鈀/碳(0.1當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌15小時。在此段時間下，使混合物經過以甲醇溶離之矽藻土墊過濾。於真空中移除揮發性物質，產生(4R)-4-(羥甲基)-5-(1-羥丙-2-基)四氫唑-2-酮(99%)。LCMS(m/z)：176.1(MH+ )。
2-((4R)-2-酮基-4-(甲苯磺醯基氧基甲基)四氫 唑-5-基)-丙基4-苯磺酸甲酯之合成
於(4R)-4-(羥甲基)-5-(1-羥丙-2-基)四氫唑-2-酮(1.0當量)在吡啶(0.15M)中之溶液內，在0℃下，添加氯化對-甲苯磺醯(2.1當量)。當將溶液攪拌14小時之時，使其溫熱至室溫，此時，添加EtOAc，並將溶液以H2 O(3x)、CuSO4(飽和) (2x)、H2 O、Na2 CO3(飽和) 及NaCl(飽和) 洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，濃縮，及藉矽膠層析純化(75% EtOAc/己烷溶離劑)，產生2-((4R)-2-酮基-4-(甲苯磺醯基氧基甲基)四氫唑-5-基)丙基4-苯磺酸甲酯(68%)。LCMS(m/z)：484.1(MH+ )；LC Rt =4.06分鐘。
(3aR,7R,7aS)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氫 唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮與(3aR,7S,7aR)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氫 唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮之合成
將2-((4R)-2-酮基-4-(甲苯磺醯基氧基甲基)四氫唑-5-基)丙基4-苯磺酸甲酯(1.0當量)、二異丙基乙胺(3.0當量)及對-甲氧基苄基胺(1.5當量)在NMP(0.05M)中之溶液，於100℃下加熱14小時。使溶液藉RP HPLC直接純化。使產物溶離份藉由添加至EtOAc與Na2 CO3(s) 中而脫鹽，以NaCl(飽和)進一步洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，及濃縮，產生(3aR,7R,7aS)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氫唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮與(3aR,7S,7aR)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氫唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮之兩種個別異構物(27%與8%)。LCMS(m/z)：277.2(MH+ )，於0.40與0.42分鐘下。
(3aR,7R,7aS)-7-甲基六氫 唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮之合成
於(3aR,7R,7aS)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氫唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(1.0當量)在甲醇中之溶液內，在0.1M之濃度下，添加20%氫氧化鈀/碳(0.3當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌2小時。在此段時間下，使混合物經過以甲醇溶離之矽藻土墊過濾。於真空中移除揮發性物質，產生(3aR,7R,7aS)-7-甲基六氫唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(99%)。LCMS(m/z)：157.1(MH+ )，在0.16分鐘下。
(3aR,7R,7aS)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基六氫 唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
將4-氯基-3-硝基吡啶(1.3當量)與(3aR,7R,7aS)-7-甲基六氫唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(1.5當量)在CH2 Cl2 中之溶液，於0.1M之濃度下，在室溫下攪拌48小時，此時，添加六氫吡啶(0.4當量)，以消耗過量4-氯基-3-硝基吡啶。再攪拌2小時後，添加二碳酸二-第三-丁酯(2.0當量)與二甲胺基吡啶(0.1當量)。在攪拌4小時後，使溶液於EtOAc與NaHCO3(飽和) 之間作分液處理，以NaHCO3(飽和) 與NaCl(飽和) 進一步洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，並藉矽膠層析純化，產生(3aR,7R,7aS)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基六氫唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯(62%)。LCMS(m/z)：379.0(MH+ )，在0.58分鐘下。
(3aR,7R,7aS)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫 唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
於(3aR,7R,7aS)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基六氫唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯(1.0當量)在甲醇中之溶液內，在0.1M之濃度下，添加10%鈀/碳(0.1當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌14小時。在此段時間下，使混合物經過以甲醇溶離之矽藻土墊過濾。於真空中移除揮發性物質，產生(3aR,7R,7aS)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯。LCMS(m/z)：349.1(MH+ )：LC Rt =2.06分鐘。
(3aR,7S,7aR)-7-甲基六氫 唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮之合成
於(3aR,7S,7aR)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氫唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(1.0當量)在甲醇中之溶液內，在0.1M之濃度下，添加20%氫氧化鈀/碳(0.3當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌2小時。在此段時間下，使混合物經過以甲醇溶離之矽藻土墊過濾。於真空中移除揮發性物質，產生(3aR,7S,7aR)-7-甲基六氫唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(99%)。LCMS(m/z)：157.1(MH+ )，在0.17分鐘下。
(3aR,7S,7aR)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基六氫 唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
將4-氯基-3-硝基吡啶(1.3當量)與(3aR,7S,7aR)-7-甲基六氫唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(1.5當量)在CH2 Cl2 中之溶液，於0.1M之濃度下，在室溫下攪拌48小時，此時，添加六氫吡啶(0.4當量)，以消耗過量4-氯基-3-硝基吡啶。再攪拌2小時後，添加二碳酸二-第三-丁酯(2.0當量)與二甲胺基吡啶(0.1當量)。在攪拌4小時後，使溶液於EtOAc與 NaHCO3(飽和) 之間作分液處理，以NaHCO3(飽和) 與NaCl(飽和) 進一步洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，並藉矽膠層析純化(75% EtOAc/己烷溶離劑)，產生(3aR,7S,7aR)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基六氫唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯(35%)。LCMS(m/z)：379.0(MH+ ). LC Rt =2.42分鐘。
(3aR,7R,7aS)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫 唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
於(3aR,7S,7aR)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-酮基六氫唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯(1.0當量)在甲醇中之溶液內，在0.1M之濃度下，添加10%鈀/碳(0.1當量)。將所形成之不均勻溶液置於氫大氣下，並攪拌14小時。在此段時間下，使混合物經過以甲醇溶離之矽藻土墊過濾。於真空中移除揮發性物質，產生(3aR,7S,7aR)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-羧酸第三-丁酯。LCMS(m/z)：349.1(MH+ )；LC Rt =2.18分鐘。
方法1 3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
使3-胺基-6-溴基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)、2,6-二氟苯基-二羥基硼烷(3.0當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.1當量)在3:1 DME/2M Na2 CO3 (0.5M)中之溶液，於120℃下接受微波照射，歷經15分鐘間隔。過濾反應物，並以EtOAc洗滌。使有機物質以H2 O(25毫升)分配，以NaCl(飽和) (25毫升)進一步洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，及在真空中移除揮發性物質。將殘留物於EtOAc中稀釋，並通過矽膠填充柱，及在真空中移除揮發性物質，產生3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)吡啶羧酸甲酯(47%)。LCMS(m/z)：265.1(MH+ )；LC Rt =2.70分鐘
6-(2,3-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
在微波小玻瓶中，於6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)在DME與2M Na2 CO3 (3:1，0.25M)中之溶液內，添加2,3-二氟苯基二羥基硼烷(1.3當量)與Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)。將小玻瓶在微波中於120℃下加熱30分鐘。將混合物以醋酸乙酯稀釋，並添加1N NaOH。分離有機相，且以1N NaOH再萃取三次，及以6N NaOH一次。將合併之水相過濾，並藉由添加濃HCl酸化至pH 1，且以醋酸乙酯萃取。使有機層以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得6-(2,3-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸，78%。LC/MS=254.1(M+H),Rt=0.75分鐘。
方法2 3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)吡啶羧酸之合成
於3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在THF(0.5M)中之溶液內，添加1M LiOH(4.0當量)。在60℃下攪拌4小時後，添加1N HCl(4.0當量)，並於真空中移除THF。過濾所形成之固體，且以冷H2 O(3 x 20毫升)沖洗，而產生3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)吡啶羧酸(90%)。LCMS(m/z)：251.1(MH+ )；LC Rt =2.1分鐘。
3-胺基-6-(2-氟基-5-丙氧基苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用3-胺基-6-溴基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟基-5-丙氧基苯基二羥基硼烷(1.5當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得3-胺基-6-(2-氟基-5-丙氧基苯基)吡啶羧酸，75%產率。LC/MS=291.0(M+H),Rt=0.81分鐘。
3-胺基-5-氟基-6-(2-氟基-5-丙氧基苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用3-胺基-6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟基-5-丙氧基苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得3-胺基-5-氟基-6-(2-氟基-5-丙氧基苯基)吡啶羧酸，28%產率。LC/MS=309.1(M+H),Rt=1.00分鐘。
3-胺基-5-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
按照方法1，使用3-胺基-6-溴基-5-氟基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)與2-氟苯基二羥基硼烷(1.5當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得3-胺基-5-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸甲酯，>99%產率。LC/MS=265.0(M+H),Rt=0.77分鐘。
3-胺基-5-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法2，使用3-胺基-5-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸酯(1.0當量)與LiOH(5.0當量)，獲得3-胺基-5-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸，90%產率。LC/MS=251.1(M+H),Rt=0.80分鐘。
3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯之合成
按照方法1，使用3-胺基-6-溴基-5-氟-吡啶羧酸甲酯(1.0當量)與2,6-二氟苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸酯，94%產率。LC/MS=283.0(M+H),Rt=0.76分鐘。
3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法2，使用3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸酯(1.0當量)與LiOH(1.0當量)，獲得3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸，79%產率。LC/MS=269.0(M+H),Rt =0.79分鐘。
5-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得5-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸，43%產率。LC/MS=236.1(M+H),Rt=0.72分鐘。
6-(3,4-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與3,4-二氟苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得6-(3,4-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸，70%產率。LC/MS=254.1(M+H),Rt=0.81分鐘。
6-(2,5-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2,5-二氟苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得6-(2,5-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸，80%產率。LC/MS=254.1(M+H),Rt=0.74分鐘。
6-(2,4-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2,4-二氟苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得6-(2,4-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸，79%產率。LC/MS=254.1(M+H),Rt=0.75分鐘。
5-氟基-6-(2-氟基-5-丙氧基苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟基-5-丙氧基苯基二羥基硼烷(1.5當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得5-氟基-6-(2-氟基-5-丙氧基苯基)吡啶羧酸。LC/MS=294.2(M+H),Rt=0.95分鐘。
6-(2-氟苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟苯基二羥基硼烷(1.5當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得6-(2-氟苯基)吡啶羧酸，93%產率。LC/MS=218.0(M+H),Rt=0.66分鐘。
6-(2,6-二氟苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基吡啶羧酸(1.0當量)與2,6-二氟苯基二羥基硼烷(1.5當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得6-(2,6-二氟苯基)吡啶羧酸，38%產率。LC/MS=236.0(M+H),Rt=0.87分鐘。
6-(2-氟基-5-甲氧苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟基-5-甲氧苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得6-(2-氟基-5-甲氧苯基)吡啶羧酸，95%產率。LC/MS=248.2(M+H),Rt=0.78分鐘。
6-(2-氟基-5-丙氧基苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟基-5-丙氧基苯基二羥基硼烷(1.5當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得6-(2-氟基-5-丙氧基苯基)吡啶羧酸，20%產率。LC/MS=276.0(M+H),Rt=0.87分鐘。
6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基吡啶羧酸(1.0當量)與2,6-二氟-4-甲氧苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)吡啶羧酸，42%產率。LC/MS=266.1(M+H),Rt=0.75分鐘。
3-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-3-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟苯基二羥基硼烷(1.5當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)，獲得3-氟基-6-(2-氟苯基)吡啶羧酸，81%產率。LC/MS=236.1(M+H),Rt=0.72分鐘。
3-氟基-6-(2-氟基-5-甲氧苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-3-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟基-5-甲氧苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得3-氟基-6-(2-氟基-5-甲氧苯基)吡啶羧酸，89%產率。LC/MS=266.1(M+H),Rt=0.79分鐘。
5-氟基-6-(2-氟基-5-甲氧苯基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2-氟基-5-甲氧苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得5-氟基-6-(2-氟基-5-甲氧苯基)吡啶羧酸，86%產率。LC/MS=266.1(M+H),Rt=0.79分鐘。
6-(4-(苄氧基)-2-氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與4-(苄氧基)-2-氟苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得6-(4-(苄氧基)-2-氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸，28%產率。LC/MS=342.1(M+H),Rt=1.05分鐘。
6-(4-(苄氧基)-2-氟苯基)-3-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-3-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與4-(苄氧基)-2-氟苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得6-(4-(苄氧基)-2-氟苯基)-3-氟基吡啶羧酸，41%產率。LC/MS=342.1(M+H),Rt=1.06分鐘。
6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)-3-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-3-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與2,6-二氟-4-甲氧苯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)-3-氟基吡啶羧酸，9%產率。LC/MS=284.0(M+H),Rt=0.74分鐘。
6-環己烯基-5-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與環己烯基二羥基硼烷(1.3當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.15當量)，獲得6-環己烯基-5-氟基吡啶羧酸，61%產率。LC/MS=222.0(M+H),Rt=0.52分鐘。
方法3 6-環己基-5-氟基吡啶羧酸之合成
於6-環己烯基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)在MeOH(0.07M)中之經脫氣溶液內，添加10% Pd/C(0.1當量)，並將反應物在氫氣瓶下攪拌過夜。然後過濾溶液，以MeOH沖洗，並使濾液濃縮，而得6-環己基-5-氟基吡啶羧酸，65%產率。LC/MS=224.2(M+H),Rt=0.95分鐘。
5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶羧酸之合成
按照方法1，使用6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)與4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼伍圜(2.0當量)及Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.2當量)，獲得5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶羧酸。LC/MS=280.2(M+H),Rt=0.66分鐘。
5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶羧酸甲酯之合成
於5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶羧酸(1.0當量)在DCM(0.3M)中之溶液內，添加EDC-HCl(1.0當量)、DMAP(1.0當量)及MeOH(10當量)。將反應混合物在室溫下攪拌5天，然後以醋酸乙酯稀釋，以水、鹽水洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗產物藉矽膠管柱層析純化，以己烷中之25-50%醋酸乙酯溶離，而產生5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶羧酸甲酯，為所要之產物，35%產率。LC/MS=294.2(M+H),Rt=0.79分鐘。
5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-8-基)吡啶羧酸甲酯之合成
於5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在MeOH(0.07M)中之經脫氣溶液內，添加10% Pd/C(0.1當量)，並將反應物在氫氣瓶下攪拌過夜。然後過濾溶液，以MeOH沖洗，及濃縮濾液，而得5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-8-基)吡啶羧酸甲酯，91%產率。LC/MS=296.2(M+H),Rt=0.83分鐘。
5-氟基-6-(4-酮基環己基)吡啶羧酸甲酯之合成
於5-氟基-6-(1,4-二氧螺[4.5]癸-8-基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在丙酮與水(1:1，0.04M)中之溶液內，添加草酸脫水物(2.0當量)，並將反應混合物攪拌3天。然後，藉由添加固體NaHCO3 使溶液中和，將混合物添加至醋酸乙酯與鹽水中，使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。獲得5-氟基-6-(4-酮基環己基)吡啶羧酸甲酯，98%產率。LC/MS=252.1(M+H),Rt=0.68分鐘。
5-氟基-6-(4-羥基環己基)吡啶羧酸甲酯之合成
於5-氟基-6-(4-酮基環己基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在MeOH(0.08M)中之0℃溶液內，添加NaBH4 。使溶液溫熱至室溫過夜，然後在醋酸乙酯與鹽水之間作分液處理，使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得5-氟基-6-(4-羥基環己基)吡啶羧酸甲酯，為兩種異構物之混合物(5:1)。LC/MS=254.2(M+H),Rt=0.63分鐘。
6-(4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯之合成
於5-氟基-6-(4-羥基環己基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在DMF(0.15M)中之溶液內，添加咪唑(4.0當量)與TBDMSCl(2.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2天，然後添加至醋酸乙酯中，以水、鹽水洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得6-(4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯，97%產率，為異構物之混合物(3:1)。LC/MS=368.3(M+H),Rt=1.4與1.42分鐘。
6-(4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
於6-(4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在THF/MeOH(2:1，0.09M)中之溶液內，添加LiOH(1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後添加1N HCl與醋酸乙酯，將有機相以鹽水洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得6-(4-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己基)-5-氟基吡啶羧酸，為異構物之混合物(3:1)，82%產率。LC/MS=354.2(M+H),Rt=1.38與1.41分鐘。
6-溴基-5-氟基吡啶羧酸之合成
於H2 O(30毫升)中之2-溴基-3-氟基-6-甲基吡啶(1.0當量)內，添加過錳酸鉀(1.0當量)。將溶液在100℃下加熱5小時，此時，添加更多過錳酸鉀(1.0當量)。於再加熱48小時後，使此物質經過矽藻土(4公分x 2英吋)過濾，並以H2 O(150毫升)沖洗。以1N HCl使合併之水溶液酸化至pH=4，以醋酸乙酯(200毫升)萃取，以NaCl(飽和)洗滌，以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及濃縮，而產生6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(17%)，為白色固體。LCMS(m/z)：221.9(MH+)；LC Rt=2.05分鐘。
方法4 2-(2,6-二氟苯基)-3-氟基-6-甲基吡啶之合成
於2-溴基-3-氟基-6-甲基吡啶(1.0當量)在THF與水(10:1，0.2M)中之溶液內，添加2,6-二氟苯基二羥基硼烷(2.0當量)與氟化鉀(3.3當量)。使反應物脫氣10分鐘，然後添加Pd2 (dba)3 (0.05當量)，接著為三-第三-丁基膦(0.1當量)。將反應物攪拌1小時至60℃，此時，所有起始物質已被消耗，如藉LC/MS所顯示。使反應物冷卻至室溫，以醋酸乙酯與水進行分液處理，使有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。將粗製物質在EtOH中稀釋成0.1M，並添加0.5當量NaBH4 ，以使dba還原。將反應物於室溫下攪拌一小時，然後，以水使反應淬滅，及在真空下濃縮，以移除乙醇。將產物於醚中萃取，以鹽水洗滌，使有機物質以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮。將粗製物質裝填於矽膠上，並經由管柱層析(ISCO)純化，以己烷與醋酸乙酯(0%-10%醋酸乙酯)溶離。合併純溶離份，並濃縮，而產生2-(2,6-二氟苯基)-3-氟基-6-甲基吡啶，為淡黃色油，86%產率。LC/MS=224.0(M+H),Rt=0.84分鐘。
方法5 6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
於2-(2,6-二氟苯基)-3-氟基-6-甲基吡啶(1.0當量)在水(0.05M)中之溶液內，添加KMnO4 (2.0當量)，並將反應物加熱至回流過夜。添加另外2.0當量之KMnO4 ，且於回流下再攪拌8小時。使溶液冷卻至室溫，經過矽藻土過濾，及以水洗滌。以6N HCl使濾液酸化至pH=3，過濾白色沉澱物。使濾液進一步酸化至pH=1，並再一次過濾。以醋酸乙酯萃取濾液，直到不再有產物在水層中為止。將有機相以鹽水洗滌，並以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使殘留物溶於醋酸乙酯中，以1N NaOH洗滌，使水層酸化至pH=1，且過濾白色結晶。合併之產物係產生6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸，32%產率，為白色固體。LC/MS=254.0(M+H),Rt=0.71分鐘。
6-(2,6-二氟苯基)-3-氟基-2-甲基吡啶之合成
於6-溴基-3-氟基-2-甲基吡啶(1.0當量)在乙醇與甲苯(1:1，0.2M)中之溶液內，添加2,6-二氟苯基二羥基硼烷、DIEA(5當量)及Pd(PPh3 )4 (0.2當量)。將反應物在微波中於120℃下加熱30分鐘。過濾溶液，並以醋酸乙酯沖洗。在真空中移除揮發性物質，且使粗製物經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(2.5-20%醋酸乙酯)溶離。在濃縮純溶離份時，6-(2,6-二氟苯基)-3-氟基-2-甲基吡啶係以88%產率單離。LC/MS=224.1(M+H),Rt=0.87分鐘。
6-(2,6-二氟苯基)-3-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法5，使用6-(2,6-二氟苯基)-3-氟基-2-甲基吡啶(1.0當量)與過錳酸鉀(6.0當量)，獲得6-(2,6-二氟苯基)-3-氟基吡啶羧酸，30%產率。LC/MS=254.1(M+H),Rt=0.70分鐘。
2-(2,6-二氟-3-甲氧苯基)-3-氟基-6-甲基吡啶之合成
按照方法4，使用2-溴基-3-氟基-6-甲基吡啶(1.0當量)與2,6-二氟-3-甲氧苯基二羥基硼烷(2.0當量)，獲得2-(2,6-二氟-3-甲氧苯基)-3-氟基-6-甲基吡啶，60%產率。LC/MS=254.1(M+H),Rt=0.85分鐘。
6-(2,6-二氟-3-甲氧苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
按照方法5，使用2-(2,6-二氟-3-甲氧苯基)-3-氟基-6-甲基吡啶(1.0當量)與過錳酸鉀(4.0當量)，獲得6-(2,6-二氟-3-甲氧苯基)-5-氟基吡啶羧酸，27%產率。LC/MS=284.1(M+H),Rt=0.75分鐘。
3-氟基-6-甲基-2-(2,3,5-三氟苯基)吡啶之合成
於2-溴基-3-氟基-6-甲基吡啶(1.0當量)在二氧陸圜(0.2M)中之溶液內，添加2,3,5-三氟苯基二羥基硼烷與Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.1當量)。添加碳酸鈉水溶液(2M溶液，2.0當量)，並將反應物在微波中於120℃下加熱15分鐘。使溶液於醋酸乙酯與飽和NaHCO3 之間作分液處理，將有機相以鹽水洗滌，以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製物質經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷(1:3)溶離，而得3-氟基-6-甲基-2-(2,3,5-三氟苯基)吡啶，87%產率。LC/MS=242.1(M+H),Rt=0.98分鐘。
5-氟基-6-(2,3,5-三氟苯基)吡啶羧酸之合成
於3-氟基-6-甲基-2-(2,3,5-三氟苯基)吡啶(1.0當量)在水與t-BuOH(2:1，0.06M)中之溶液內，添加過錳酸鉀(10當量)，並將溶液在90℃下加熱5小時。於冷卻至室溫後，過濾溶液，且使濾液在減壓下濃縮，而產生5-氟基-6-(2,3,5-三氟苯基)吡啶羧酸，89%產率。LC/MS=272.0(M+H),Rt=0.80分鐘。
6-溴基-5-氟基吡啶羧酸甲酯之合成
於6-溴基-5-氟基吡啶羧酸(1.0當量)在甲醇(0.2M)中之溶液內，添加H2 SO4 (4.2當量)，並將反應物在室溫下攪拌兩小時。在藉LC/MS監測反應完成時，將反應物以醋酸乙酯稀釋，且以飽和NaHCO3 水溶液慢慢地使反應淬滅。將反應物倒入分液漏斗中，並以醋酸乙酯萃取。使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，以提供6-溴基-5-氟基吡啶羧酸甲酯，為白色固體(>99%)。LC/MS=233.9/235.9(M+H),Rt=0.69分鐘。
方法6 6-(3-(苄氧基)-2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯之合成
於6-溴基-5-氟基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在THF與水(10:1，0.1M)中之溶液內，添加3-(苄氧基)-2,6-二氟苯基二羥基硼烷(2.5當量)與氟化鉀(3.3當量)。使反應物以氮脫氣，然後添加Pd2 (dba)3 (0.25當量)與三-第三-丁基膦(0.5當量)，並將反應物加熱至80℃，歷經一小時。LC/MS分析顯示起始物質完全轉化成產物。使反應物冷卻至室溫，接著在真空中濃縮，且熔凝至矽膠。使粗產物藉ISCO急驟式層析純化，以醋酸乙酯與己烷(0%至30%醋酸乙酯)溶離，以提供6-(3-(苄氧基)-2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯，為所要之產物，為淡黃色油，96%產率。LC/MS=374.0(M+H),Rt=1.07分鐘。
6-(3-(苄氧基)-2,6-二氟苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
按照方法6，使用6-溴基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)與3-(苄氧基)-2,6-二氟苯基二羥基硼烷(2.5當量)，獲得6-(3-(苄氧基)-2,6-二氟苯基)吡啶羧酸甲酯，為淡黃色固體，95%產率。LC/MS=356.2(M+H),Rt=1.03分鐘。
6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯之合成
按照方法6，使用6-溴基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)與2,6-二氟-4-甲氧苯基二羥基硼烷(2.5當量)，獲得6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯，為白色固體，85%產率。LC/MS=298.0(M+H),Rt=0.89分鐘。
6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
於6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在THF/MeOH(2:1，0.09M)中之溶液內，添加LiOH(1.5當量)，並將反應物在室溫下攪拌1小時。以1N HCl使溶液淬滅，以醋酸乙酯萃取，以鹽水洗滌，以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得6-(2,6-二氟-4-甲氧苯基)-5-氟基吡啶羧酸，84%產率。LC/MS=284.1(M+H),Rt=0.76分鐘。
方法7 6-(2,6-二氟-3-羥苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯之合成
於6-(3-(苄氧基)-2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在甲醇(0.1M)中之溶液內，添加醋酸乙酯中之10% Pd/C(0.1當量)。將反應物放置在氫大氣下，並攪拌2小時。於完成時，在矽藻土墊上過濾溶液，以甲醇洗滌墊片，於真空中濃縮濾液，而得6-(2,6-二氟-3-羥苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯，為灰色油，86%產率。LC/MS=284.0(M+H),Rt=0.90分鐘。
6-(2,6-二氟-3-羥苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
按照方法7，使用6-(3-(苄氧基)-2,6-二氟苯基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)，而產生6-(2,6-二氟-3-羥苯基)吡啶羧酸甲酯，為淡褐色固體，96%產率。LC/MS=266.0(M+H),Rt=0.68分鐘。
6-(2-氟基-5-甲醯基苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
在微波小玻瓶中，於6-溴基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在DME(0.03M)中之溶液內，添加Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.05當量)、2-氟基-5-甲醯基苯基二羥基硼烷(1.5當量)及2M Na2 CO3 (2當量)。將試劑加熱至120℃，歷經20分鐘。所要產物與其相應羧酸之混合物係藉LC/MS偵測，將反應物以醋酸乙酯稀釋，以HCl洗滌(pH=5)，將酸性液相以醋酸乙酯萃取，使合併之有機層以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，以提供淡褐色固體。使固體溶於MeOH中，並在室溫下以3當量TMS-重氮甲烷處理。在羧酸完全轉化成其相應甲酯時，於真空中濃縮反應物，且使粗製物質經由矽膠管柱層析(ISCO)純化，以己烷中之30%醋酸乙酯溶離，以提供6-(2-氟基-5-甲醯基苯基)吡啶羧酸甲酯，為黃色固體，58%產率。LC/MS=260.0(M+H),Rt=0.70分鐘。
(E)-6-(2-氟基-5-(丙-1-烯基)苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
於6-(2-氟基-5-甲醯基苯基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在MeOH(0.17M)中之溶液內，添加溴化乙基三苯基鏻(1.0當量)，接著為甲醇鈉(1.5當量)。將反應物加熱至65℃，歷經5小時，然後冷卻至室溫，及在真空中濃縮。使粗製物質經由矽膠管柱層析(ISCO)純化，以己烷中之50%醋酸乙酯溶離，以提供(E)-6-(2-氟基-5-(丙-1-烯基)苯基)吡啶羧酸甲酯，為白色固體，81%產率。LC/MS=272.0(M+H),Rt=0.73分鐘。
6-(2-氟基-5-丙基苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
於(E)-6-(2-氟基-5-(丙-1-烯基)苯基)-吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在MeOH(0.04M)中之溶液內，添加10% Pd/C(0.5當量)，並將反應物放置在氫大氣下，並留置攪拌過夜。使混合物於矽藻土墊上過濾，且以MeOH洗滌。使濾液在真空中濃縮，以提供6-(2-氟基-5-丙基苯基)吡啶羧酸甲酯，為淡灰色油，97%產率。LC/MS=274.2(M+H),Rt=0.61分鐘。
6-(2-氟基-5-丙基苯基)吡啶羧酸之合成
於6-(2-氟基-5-丙基苯基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在THF中之溶液內，添加氫氧化鋰(10當量)，並將反應物在室溫下攪拌1小時。於真空中移除THF溶劑，且使用濃HCl使殘留之鹼性液相酸化。以醋酸乙酯萃取(2x)水層。將有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得6-(2-氟基-5-丙基苯基)吡啶羧酸，35%產率。LC/MS=260.2(M+H),Rt=0.36分鐘。
方法8 6-(2,6-二氟-3-(三氟甲基-磺醯氧基)苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯之合成
於6-(2,6-二氟-3-羥苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在DCM(0.2M)中之溶液內，添加DIEA(2.0當量)與1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺醯基)甲烷磺醯胺(1.5當量)。將反應物在室溫下攪拌過夜。以水使溶液淬滅，將有機相以硫酸鈉脫水乾燥，及濃縮。使粗製物質經由ISCO層析純化，以醋酸乙酯與己烷(0-30%醋酸乙酯)溶離。使純溶離份濃縮，而得6-(2,6-二氟-3-(三氟甲基磺醯氧基)苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯，為所要之產物，為透明油，68%產率。LC/MS=416.1(M+H),Rt=1.08分鐘。
6-(2,6-二氟-3-(三氟甲基磺醯氧基)-苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
按照方法8，使用6-(2,6-二氟-3-(三氟甲基磺醯氧基)苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)，而產生6-(2,6-二氟-3-(三氟甲基磺醯氧基)苯基)吡啶羧酸甲酯，為無色油，>99%產率。LC/MS=397.9(M+H),Rt=1.03分鐘。
6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟基吡啶羧酸之合成
於6-(2,6-二氟-3-(三氟甲基磺醯氧基)苯基)-5-氟基吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在二氧陸圜與水(10:1，0.15M)中之溶液內，添加甲基二羥基硼烷(3.0當量)與碳酸鉀(3.0當量)。使反應物以氮脫氣10分鐘，然後，將Pd(PPh3 )4 (0.1當量)添加至溶液中，並加熱至100℃，歷經3小時。此時，反應物之LC/MS顯示完全轉化成羧酸產物(M+H=268)。冷卻至室溫，並添加水與醋酸乙酯。分離兩液層，使用濃HCl使水相酸化至pH=1，且以醋酸乙酯萃取。將有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾，及在真空下濃縮，而得6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟基吡啶羧酸，為透明油，97%產率。LC/MS=268.1(M+H),Rt=0.82分鐘。
6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)吡啶羧酸甲酯之合成
於6-(2,6-二氟-3-(三氟甲基磺醯氧基)-苯基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在甲苯中之溶液內，添加Pd(dppf)Cl2 -DCM(0.1當量)，接著為二甲鋅(3.0當量)。溶液從橘色轉變成鮮明黃色。將反應物加熱至80℃，歷經2小時，此時，LC/MS分析顯示完全轉化成產物。使反應物冷卻至室溫，以醋酸乙酯稀釋，並以鹽水洗滌。將有機層以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，以提供6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)吡啶羧酸甲酯，為褐色油，定量產率。LC/MS=264.0(M+H),Rt=0.90分鐘。
6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)吡啶羧酸之合成
於6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在THF中之溶液內，添加氫氧化鈉(10當量)，並將反應物攪拌2小時。將溶液以醋酸乙酯稀釋，且以1N NaOH洗滌(2x)。將合併之鹼性含水洗液合併，並以濃HCl酸化。以醋酸乙酯萃取(2x)酸性水相，使合併之有機層以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，以提供6-(2,6-二氟-3-甲基苯基)吡啶羧酸，為白色固體，85%產率。LC/MS=250.0(M+H),Rt=0.76分鐘。
6-(3-乙基-2,6-二氟苯基)吡啶羧酸之合成
於6-(2,6-二氟-3-(三氟甲基磺醯氧基)-苯基)吡啶羧酸甲酯(1.0當量)在甲苯(0.15M)中之溶液內，添加Rd(dppf)Cl2 -DCM(0.1當量)，接著為二乙鋅(3.0當量)。溶液從橘色轉變成鮮明黃色。將反應物加熱至70℃，歷經2小時，此時，LC/MS分析顯示1:3:1比例之水解產物、所要產物及未知副產物之混合物。使反應物冷卻至室溫，以醋酸乙酯稀釋，並以1NNaOH洗滌(2x)。將有機層以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，以提供褐色油。使此油再溶解於THF中，且以1N NaOH處理一小時。然後，將反應物以醋酸乙酯稀釋，並以1N NaOH洗滌(2x)。合併鹼性洗液，使用濃HCl酸化，且以醋酸乙酯萃取(3x)。將有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，以提供6-(3-乙基-2,6-二氟苯基)吡啶羧酸，為淡褐色油，>99%產率。LC/MS=264.1(M+H),Rt=0.88分鐘。
方法9
使各1當量胺、羧酸、HOAT及EDC在DMF中之均勻溶液於0.5M濃度下留置24小時，此時，添加水與醋酸乙酯。將有機相以硫酸鈉脫水乾燥，並經由矽膠管柱層析純化，以醋酸乙酯與己烷溶離，而得所要之保護醯胺產物。或者，使粗製反應混合物藉HPLC直接純化。於凍乾時，獲得經保護醯胺產物之TFA鹽。或者，可將HPLC溶離份添加至EtOAc與固體Na2 CO3 中，分離，並以NaCl(飽和) 洗滌。在以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及在真空中移除揮發性物質時，獲得經保護之醯胺產物，為自由態鹼。或者，將粗製反應混合物使用於去除保護步驟，無需進一步純化。
若N-Boc保護胺存在，則將其藉由以過量4M HCl/二氧陸圜處理14小時，或藉由以25% TFA/CH2 Cl2 處理2小時而移除。在真空中移除揮發性物質時，使此物質藉RP HPLC純化，於凍乾後，產生醯胺產物，為TFA鹽。或者，可將HPLC溶離份添加至EtOAC與固體Na2 CO3 中，分離，並以NaCl(飽和) 洗滌。於以MgSO4 脫水乾燥，過濾，及在真空中移除揮發性物質時，獲得自由態鹼。在溶於MeCN/H2 O中，添加1當量1N HCl，及凍乾時，獲得醯胺產物之HCl鹽。
若N-Boc 1,2胺基醇環狀胺基甲酸酯存在，則在Boc去除保護之前，環狀胺基甲酸酯可藉由以Cs2 CO3 (0.5當量)，在乙醇中，於0.1M之濃度下處理三小時而分裂。在真空中移除揮發性物質後，使Boc胺基按上述去除保護。
若N-Boc、OAc基團存在，則在Boc去除保護之前，醋酸根基團可藉由以K2 CO3 (2.0當量)，在乙醇中，於0.1M之濃度下處理24小時而分裂。
若N-鄰苯二甲醯亞胺基團存在，則使胺藉由以肼在MeOH中於65℃下處理三小時而去除保護。在冷卻及濾出白色沉澱物時，使濾液濃縮，並藉RP HPLC純化，而產生胺基醯胺產物。
若TBDMS醚存在，則在Boc移除之前，使其藉由以6N HCl、THF、甲醇(1:2:1)在室溫下處理12小時而去除保護。在真空中移除揮發性物質後，使Boc胺基按上述去除保護。或者，若在室溫下留置24小時或在60℃下加熱3小時，則TBDMS醚與Boc基團兩者可使用6N HCl、THF、甲醇(1:2:1)去除保護。
若OMe基團存在，則使其藉由以DCM中之1M BBr3 (2.0當量)處理24小時而去除保護。逐滴添加水，及在真空中移除揮發性物質。使此物質按上述經由逆相HPLC純化。
若OBn基團存在，則使其經由以10% Pd/C(0.2當量)，於氫大氣下，在醋酸乙酯與甲醇(1:2)中處理而去除保護。於完成時，使反應物經過矽藻土過濾，以甲醇洗滌，並於真空中濃縮濾液。
(+/-)-3-胺基-N-(4-(3-胺基-4-羥基環己-1-烯基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)甲基吡啶醯胺之合成
按照方法9，使(+/-)-3-(3-胺基吡啶-4-基)-6-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己-2-烯基胺基甲酸第三-丁酯與3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)-吡啶羧酸偶合，並去除保護，而產生(+/-)-3-胺基-N-(4-(3-胺基-4-羥基環己-1-烯基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)甲基吡啶醯胺，為TFA鹽。LCMS(m/z)：438.2(MH+ ),LC Rt =2.00分鐘。
(+/-)-3-胺基-N-(4-(3-胺基-4-羥基環己基)-吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)甲基吡啶醯胺之合成
按照方法9，使(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-2-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)環己基胺基甲酸第三-丁酯與3-胺基-6-(2,6-二氟苯基)吡啶羧酸偶合，並去除保護，而產生(+/-)-3-胺基-N-(4-(3-胺基-4-羥基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)甲基吡啶醯胺，為TFA鹽，18%產率。LCMS(m/z)：440.3(MH+ ),LC Rt =2.04分鐘。
按照方法9之程序，製成下列化合物：
6-溴-N-(4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
按照方法9，使4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環-己-1-烯基)吡啶-3-胺與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和) 洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得6-溴-N-(4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己-1-烯基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺。LCMS(m/z)：455.3(MH+ )；LC Rt =2.09分鐘。
6-溴-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)-環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
按照方法9，使2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)環己基)異二氫吲哚-1,3-二酮與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和) 洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得6-溴-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺。LCMS(m/z)：523.2/525.2(MH+ )；LC Rt =3.31分鐘。
3-胺基-6-溴-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
按照方法9，使2-(3-(3-胺基吡啶-4-基)環己基)-異吲哚啉-1,3-二酮與3-胺基-6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和) 洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得3-胺基-6-溴-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺。LCMS(m/z)：538.1/540.1(MH+ )；LC Rt =3.46分鐘。
(1S,3R,5S)-3-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)-吡啶-4-基)-5-甲基環己基胺基甲酸第三-丁酯之合成
按照方法9，使(1S,3R,5S)-3-(3-胺基吡啶-4-基)-5-甲基環己基胺基甲酸第三-丁酯與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和)洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得(1S,3R,5S)-3-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-5-甲基環己基胺基甲酸第三-丁酯。LCMS(m/z)：507.1/509.1(MH+ ),Rt =0.90分鐘。
醋酸(1R,2R,4R,6S)-4-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基環己酯之合成
按照方法9，使醋酸(1R,2R,4R,6S)-4-(3-胺基吡啶-4-基)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基環己酯與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和)洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得醋酸(1R,2R,4R,6S)-4-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-2-(第三-丁氧羰基胺基)-6-甲基環己酯。LCMS(m/z)：567.2(MH+ ),Rt =0.82分鐘。
(+/-)-5-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)7-甲基-2-酮基六氫苯并[d] 唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
按照方法9，使(+/-)-5-(3-胺基吡啶-4-基)7-甲基-2-酮基六氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和) 洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得(+/-)-5-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-7-甲基-2-酮基六氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯。LCMS(m/z)：549.2/551.2(MH+ ),Rt =0.78分鐘。
5-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-2-酮基六氫苯并[d] 唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯之合成
按照方法9，使5-(3-胺基吡啶-4-基)-2-酮基六氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和) 洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得5-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-2-酮基六氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯。LCMS(m/z)：537.1(MH+ )；LCMS Rt =0.71分鐘。
6-溴-N-(4-((1R,5R)-5-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)-3,3-二甲基環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
按照方法9，使2-((1R,5R)-5-(3-胺基吡啶-4-基)-3,3-二甲基環己基)異吲哚啉-1,3-二酮與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和) 洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得6-溴-N-(4-((1R,5R)-5-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)-3,3-二甲基環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺。LCMS(m/z)：551/553(MH+ ),Rt =0.95分鐘。
N-(4-((1R,3R,4S,5R)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-溴基-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
按照方法9，使4-((1R,3R,4S,5R)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和) 洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得N-(4-((1R,3R,4S,5R)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-溴基-5-氟基甲基吡啶醯胺。LCMS(m/z)：652.5,652.4(MH+ )；LC Rt =5.82分鐘。
N-(4-((1S,3S,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-溴基-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
按照方法9，使4-((1S,3S,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-胺與6-溴基-5-氟基吡啶羧酸偶合，且在添加EtOAc，並以H2 O、NaCl(飽和) 洗滌，及以MgSO4 脫水乾燥之後，獲得N-(4-((1S,3S,4R,5S)-3,4-雙(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-溴基-5-氟基甲基吡啶醯胺。LCMS(m/z)：652.5,652.4(MH+ )；LC Rt =5.83分鐘。
方法10 6-(2,6-二氟苯基)-5-氟-N-(4-(3-羥基-5-甲基環己-1-烯基)吡啶-3-基)甲基吡啶醯胺之合成
將6-溴-N-(4-(3-(第三-丁基二甲基矽烷基氧基)-5-甲基-環己-1-烯基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺(1.0當量)、2,6-二氟苯基二羥基硼烷(3.0當量)、肆三苯膦(0.2當量)及三乙胺(3.0當量)在1:1EtOH/甲苯(0.1M)中之溶液，於120℃下使用微波照射加熱1200秒。在冷卻時，於真空中移除揮發性物質，使Suzuki產物藉逆相HPLC直接純化。使產物溶離份凍乾，並使所形成之TBDMS醚按方法9中所述去除保護，在RP HPLC純化及凍乾後，產生6-(2,6-二氟苯基)-5-氟-N-(4-(3-羥基-5-甲基環己-1-烯基)吡啶-3-基)甲基吡啶醯胺，為TFA鹽。LCMS(m/z)：438.2(MH+)；LC Rt=2.00分鐘。
N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基 甲基吡啶醯胺之合成
將6-溴-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)-環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺(1.0當量)、2,6-二氟苯基二羥基硼烷(3.0當量)、肆三苯膦(0.2當量)及三乙胺(3.0當量)在1:1 EtOH/甲苯(0.1M)中之溶液，於120℃下使用微波照射加熱1200秒。在冷卻時，於真空中移除揮發性物質，使Suzuki產物藉逆相HPLC直接純化。使產物溶離份凍乾，並使所形成之鄰苯二甲醯亞胺基團按方法9中所述去除保護，在RP HPLC純化及凍乾後，產生N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺，為TFA鹽。LCMS(m/z)：427.2(MH+)；LC Rt=2.26分鐘。
3-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
將3-胺基-6-溴-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺(1.0當量)、2,6-二氟苯基二羥基硼烷(3.0當量)、肆三苯膦(0.2當量)及三乙胺(3.0當量)在1:1 EtOH/甲苯(0.1M)中之溶液，於120℃下使用微波照射加熱1200秒。在冷卻時，於真空中移除揮發性物質，使Suzuki產物藉逆相HPLC直接純化。使產物溶離份凍乾，並使所形成之鄰苯二甲醯亞胺基團按方法9中所述去除保護，在RP HPLC純化及凍乾後，產生3-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環-己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺，為TFA鹽。LCMS(m/z)：442.2(MH+)；LC Rt=2.24分鐘。
N-(4-(3-胺基-4-羥基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
將5-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-2-酮基六氫苯并[d]唑-3(2H)-羧酸第三-丁酯(1.0當量)、2,6-二氟苯基二羥基硼烷(3.0當量)、肆三苯膦(0.2當量)及三乙胺(3.0當量)在1:1 EtOH/甲苯(0.1M)中之溶液，於120℃下使用微波照射加熱1200秒。在冷卻時，於真空中移除揮發性物質，使Suzuki產物藉逆相HPLC直接純化。使產物溶離份凍乾，並使所形成之環狀胺基甲酸酯與Boc基團按方法9中所述去除保護，在RP HPLC純化及凍乾後，產生N-(4-(3-胺基-4-羥基環-己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺，為TFA鹽。LCMS(m/z)：443.2(MH+)；LC Rt=2.11分鐘。
5-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-3,3'-二氟-2,4'-聯吡啶-6-羧醯胺之合成
將3-胺基-6-溴-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-二酮基異吲哚啉-2-基)環己基)吡啶-3-基)-5-氟基甲基吡啶醯胺(1.0當量)、3-氟基吡啶-4-基-二羥基硼烷(3.0當量)、肆三苯膦(0.2當量)及三乙胺(3.0當量)在1:1 EtOH/甲苯(0.1M)中之溶液，於120℃下使用微波照射加熱1200秒。在冷卻時，於真空中移除揮發性物質，使Suzuki產物藉逆相HPLC直接純化。使產物溶離份凍乾，並使所形成之鄰苯二甲醯亞胺基團按方法9中所述去除保護，在RP HPLC純化及凍乾後，產生5-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)-吡啶-3-基)-3,3'-二氟-2,4'-聯吡啶-6-羧醯胺，為TFA鹽。LCMS(m/z)：425.1(MH+)；LC Rt=2.08分鐘。
N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟-3-羥苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
在微波小玻瓶中，於(1S,3R,5S)-3-(3-(6-溴基-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-5-甲基環己基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)之溶液中，添加2,6-二氟-3-羥苯基二羥基硼烷(5.0當量)、KF(5.5當量)及Pd2 (dba)3 (0.2當量)，接著為THF與水(10:1，0.03M)。於此混合物中，添加P(t-Bu)3 (0.4當量)，並將反應物在微波中於100℃下加熱30分鐘。然後分離有機相，以醋酸乙酯洗滌水層，且合併有機物質，及在真空中濃縮。將粗製混合物經由製備型HPLC純化，使產物溶離份凍乾，並使所形成之BOC基團按方法9中所述去除保護，在RP HPLC純化及凍乾後，產生N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟-3-羥苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺，為TFA鹽。LCMS(m/z)：457.2(MH+)；LC Rt=2.17分鐘。
下列化合物係使用方法10製成：
實例139 N-(4-((1R,3R,4S,5S)-3-胺基-4-氟基-5-甲基環己基)-吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺之合成
於(1R,2R,3S,5R)-5-(3-(6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基吡啶醯胺基)吡啶-4-基)-2-羥基-3-甲基環己基胺基甲酸第三-丁酯(1.0當量)在DCM(0.04M)中之溶液內，在0℃下，添加DAST(1.0當量)。將反應物於0℃下攪拌1.5小時，然後，將TFA(10當量)添加至反應物中。2小時後，在真空中濃縮反應物，並使殘留物經由製備型HPLC純化，而得N-(4-((1R,3R,4S,5S)-3-胺基-4-氟基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟-苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺，為TFA鹽。LCMS(m/z)：459.3(MH+)；LC Rt=2.39分鐘。
除了LC/MS與LC特徵鑒定以外，代表性化合物係藉由1 H-NMR分析。下文為本發明化合物之典型光譜。
實例140 Pim1 ATP耗乏檢測
PIM1之活性係使用蟲螢光素酶-蟲螢光素為基礎之ATP偵測試劑度量，以定量由於激酶催化之磷醯基轉移至肽受質所造成之ATP耗乏。使欲被測試之化合物溶於100% DMSO中，並在每井0.5微升下直接分配至白色384-井板中。為使反應開始，將10微升在檢測緩衝液(50mM HEPES pH 7.5,5mM MgCl2 ,1mM DTT,0.05% BSA)中之5nM Pim1激酶與80μM BAD肽(RSRHSSYPAGT-OH)添加至各井中。於15分鐘後，添加10微升在檢測緩衝液中之40μM ATP。最後檢測濃度為2.5nM PIM1、20μM ATP、40μM BAD肽及2.5% DMSO。進行反應直到大約50% ATP被耗盡為止，然後藉由添加20微升KinaseGlo Plus(Promega公司)溶液使其停止。使已停止之反應物培養10分鐘，並經由發光，在Victor2(Perkin Elmer)上偵測其餘ATP。前文實例之化合物係藉由Pim1 ATP耗乏檢測測試，且發現會顯示如下文表3中所示之IC50 值。IC50 ，一半最高抑制濃度，係表示於活體外，其標的之50%抑制作用所需要之待測化合物濃度。
實例141 Pim2 ATP耗乏檢測
PIM2之活性係使用蟲螢光素酶-蟲螢光素為基礎之ATP偵測試劑度量，以定量由於激酶催化之磷醯基轉移至肽受質所造成之ATP耗乏。使欲被測試之化合物溶於100% DMSO中，並在每井0.5微升下直接分配至白色384-井板中。為使反應開始，將10微升在檢測緩衝液(50mM HEPES pH 7.5,5mM MgCl2 ,1mM DTT,0.05% BSA)中之10nM Pim2激酶與20μM BAD肽(RSRHSSYPAGT-OH)添加至各井中。於15分鐘後，添加10微升在檢測緩衝液中之8μM ATP。最後檢測濃度為5nM PIM2、4μM ATP、10μM BAD肽及2.5% DMSO。進行反應直到大約50% ATP被耗盡為止，然後藉由添加20微升KinaseGlo Plus(Promega公司)溶液使其停止。使已停止之反應物培養10分鐘，並經由發光，在Victor2(Perkin Elmer)上偵測其餘ATP。前文實例之化合物係藉由Pim2 ATP耗乏檢測測試，且發現會顯示如下文表3中所示之IC50 值。
實例142 Pim3 ATP耗乏檢測
PIM3之活性係使用蟲螢光素酶-蟲螢光素為基礎之ATP偵測試劑度量，以定量由於激酶催化之磷醯基轉移至肽受質所造成之ATP耗乏。使欲被測試之化合物溶於100% DMSO中，並在每井0.5微升下直接分配至白色384-井板中。為使反應開始，將10微升在檢測緩衝液(50mM HEPES pH 7.5,5mM MgCl2 ,1mM DTT,0.05% BSA)中之10nM Pim3激酶與200μM BAD肽(RSRHSSYPAGT-OH)添加至各井中。於15分鐘後，添加10微升在檢測緩衝液中之80μM ATP。最後檢測濃度為5nM PIM1、40μM ATP、100μM BAD肽及2.5% DMSO。進行反應直到大約50% ATP被耗盡為止，然後藉由添加20微升KinaseGlo Plus(Promega公司)溶液使其停止。使已停止之反應物培養10分鐘，並經由發光，在Victor2(Perkin Elmer)上偵測其餘ATP。前文實例之化合物係藉由Pim3 ATP耗乏檢測測試，且發現會顯示如下文表3中所示之IC50 值。
實例143 細胞增生檢測
將KMS11(人類骨髓細胞瘤細胞系)於經補充10% FBS、丙酮酸鈉及抗生素之IMDM中培養。在檢測當天，將細胞覆蓋於相同培養基中，在每井2000個細胞之密度下，置於96井組織培養板內，其中外部井空缺。將MM1.s(人類骨髓細胞瘤細胞系)於經補充10% FBS、丙酮酸鈉及抗生素之RPMI1640中培養。在檢測當天，將細胞覆蓋於相同培養基中，在每井5000個細胞之密度下，置於96井組織培養板中，其中外部井空缺。
將DMSO中所提供之待測化合物於所要最後濃度之500倍下，稀釋至DMSO中，然後稀釋至培養基中，達最後濃度之2倍。將等體積之2x化合物添加至96井板中之細胞內，並在37℃下培養3天。
於3天後，使板達成平衡至室溫，並將等體積之CellTiter-Glow試劑(Promega)添加至培養井中。將板短暫地攪動，且發光信號係以發光計度量。計算以單獨DMSO處理細胞中所見及之信號對以對照化合物處理細胞之抑制百分比，且用以測定關於所測試化合物之EC50 值(意即在細胞中獲得最大作用之50%所需要之待測化合物濃度)，如表3中所示。
使用實例140(Pim1 ATP耗乏檢測)、141(Pim2 ATP耗乏檢測)及142(Pim3 ATP耗乏檢測)之程序，測得前述實例化合物之IC50 濃度，如下表3中所示。
使用實例143(細胞增生檢測)之程序，在KMS11細胞中測得實例化合物之EC50 濃度，如表3中所示。
實例144 生物學方法：在多發性骨髓瘤異種移植模式中之藥理學標的調制與功效研究
得自Suzanne Trudel(大學健康網絡,Toronto,Canada)之KMS11-luc多發性骨髓瘤癌細胞會表現藉由反轉錄酶病毒轉移感染所達成之安定蟲螢光素酶，且被保持在經補充具有1%麩醯胺之10%熱失活牛胎兒血清(Invitrogen公司)之DMEM中。將雌性SCID/bg老鼠(8-12週大，20-25克，查理士河(Charles River))使用於所有活體內藥理學研究中。根據州與聯邦對實驗室動物之人道處理與照顧之指引，收容與扶養老鼠，並使其無限制地接受食物與水。癌細胞係自中對數期培養物採集，存活細胞計數係以自動化細胞計數器(Vi-CELL,Beckman-Coulter)建立，並使細胞再懸浮於相等份數HBSS與Matrigel(Invitrogen公司)中。將一千萬個細胞以皮下方式注入每隻老鼠之右腰窩中。當腫瘤大小達到對PK/PD研究為250-350立方毫米，而對功效研究為150-250立方毫米時，即起始化合物治療，其中腫瘤體積係使用StudyDirector軟體(StudyLog系統公司)測定。所有化合物治療均以經口方式投予。
關於在PK/PD時間過程研究中之活體內標的調制，帶有腫瘤之老鼠係在不同濃度下被投予單一口服劑量之媒劑或化合物。於服藥後1、8及24小時下，自個別老鼠採取腫瘤組織與血液試樣。使經切除之腫瘤組織驟然冷凍，並使用經液態氮冷卻之低溫研缽與杵棒粉碎。藉由心臟穿刺採取血液試樣，並將血漿利用含有鋰肝素之離心管與血漿分離器(BD微濾器)分離。使經冷凍之腫瘤試樣根據製造者之說明書，溶解在經補充不含EDTA之蛋白酶抑制劑(Roche)、磷酸酶抑制劑1與2及1M NaF(Sigma)之冷緩衝劑(Meso Scale Discovery)中。以dounce裝置或藉由MagNA溶化器(Roche)均化之後，透明上層清液係於4℃下，在300x克下離心30分鐘之後獲得，且蛋白質濃度係藉由BCA(BioRad)測定。標的調制係使用Meso Scale磷醯基-BadSer112 /總Bad雙重套件，根據製造者之說明書測定。簡言之，將等量之蛋白質裝填至Meso Scale磷醯基-Serine112 /總Bad雙重96-井板(Meso Scale Discovery)中，並使試樣在室溫下培養30分鐘，或於4℃下過夜，振盪。將板以1x MSD洗滌緩衝劑洗滌，並將Sulfo-Tag偵測抗體添加至井中，及在室溫下培養1小時，振盪。將板再一次洗滌，並捕獲於添加讀取緩衝劑T至井中後所檢出之分析物。板係在SECTOR成像器6000儀器(Meso Scale Discovery)上讀取。得自pBad對總Bad之信號比，係用以校正試樣間之變異性。於下表中所示之數據表示pBadSer112 磷醯化作用相對於總Bad磷醯化作用藉由本發明之代表性化合物之抑制百分比，其係被正規化至媒劑對照組。調制之程度係以相對於媒劑對照物之百分比表示(n.d.未測得)。
關於功效研究，係利用StudyDirector軟體(StudyLog系統公司)將帶有腫瘤之老鼠隨機分成數組，具有相等腫瘤體積偏差範圍為150-250立方毫米。於隨機化之後，使老鼠在多種化合物濃度下，以200微升初始，每日或每日兩次以經口方式服藥。腫瘤生長與動物體重係每週度量至少兩次，且每日臨床觀察係用以監測與治療有關聯之潛在毒性。若腫瘤體積超過2500立方毫米，或若體重損失超過最初度量值之20%，則將動物自研究移除。
實例99化合物之功效係在KMS11-luc異種移植模式中評估，其中老鼠係接受實例99化合物之口服投藥，在50與100毫克/公斤下每日兩次，及在100毫克/公斤下每日一次，歷經14天。當腫瘤大小達到大約250立方毫米時，即開始服藥。如圖1中所示，實例99之化合物在活體內顯示劑量依賴性作用，其中腫瘤生長抑制係以每日兩次50毫克/公斤(92%)及每日兩次100毫克/公斤(4%退化)發現。每日一次投予100毫克/公斤係比每日服藥兩次時較不有效(65%)。此等結果係與pBadSer112 調制之程度與量有關聯，且指出廣泛與長期標的調制係為最高功效所需要。
實例70化合物之功效係在KMS11-luc異種移植模式中評估，其中老鼠係接受實例80化合物之口服投藥，在25與50毫克/公斤下每日兩次，及在100毫克/公斤下每日一次，歷經14天。當腫瘤大小達到大約225立方毫米時，即開始服藥。如圖2中所示，實例70之化合物在活體內顯示劑量依賴性作用，其中對於25毫克/公斤(65%)與50毫克/公斤(100%)發現腫瘤生長抑制。對於每日一次100毫克/公斤(84%)亦發現顯著腫瘤生長抑制。
實例96化合物之功效係在KMS11-luc異種移植模式中評估，其中老鼠係接受實例96化合物之口服投藥，在25與50毫克/公斤下每日兩次，及在100毫克/公斤下每日一次，歷經14天。當腫瘤大小達到大約225立方毫米時，即開始服藥。如圖3中所示，實例96之化合物在活體內顯示劑量依賴性作用，其中對於25毫克/公斤(67%)與50毫克/公斤(96%)發現腫瘤生長抑制。對於每日一次100毫克/公斤(88%)亦發現顯著腫瘤生長抑制。
雖然已說明且描述本發明之較佳具體實施例，但應明瞭的是可在未偏離本發明之精神與範圍下，於其中施行各種改變。
前述本發明之各方面及許多附帶優點將變得更易於明瞭，因其參考上文詳細說明，而當搭配附圖一起採用時，變得更為明瞭，其中：
圖1為一圖表，顯示得自KMS11-luc異種移植模式中評估之實例99化合物之功效，如實例144中所述。
圖2為一圖表，顯示得自KMS11-luc異種移植模式中評估之實例70化合物之功效，如實例144中所述。
圖3為一圖表，顯示得自KMS11-luc異種移植模式中評估之實例96化合物之功效，如實例144中所述。
(無元件符號說明)

Claims (16)

  1. 一種式II化合物或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽， 其中，Y為被一至三個選自羥基、胺基、C1-4 烷基或C1-4 鹵烷基之取代基取代之環己基；R1 為氫、-NH2 或鹵基；R12 在每一存在處係獨立選自氫與鹵基所組成之組群；且R5係選自環己基、苯基及吡啶基，其中該環己基、該苯基及該吡啶基係各獨立被至高三個取代基取代，取代基選自鹵基、羥基、C1-4 烷基及OC1-4 烷基。
  2. 如請求項1之化合物，其中Y係被一至三個取代基取代，取代基選自甲基、羥基、胺基及CF3 。
  3. 如請求項1之化合物，其中R1為氫、胺基或氟基。
  4. 如請求項1之化合物，其中R5 為吡啶基或苯基。
  5. 如請求項4之化合物，其中R5 為被至高三個取代基取代之苯基，取代基選自鹵基、羥基、烷氧基及C1-4 烷基。
  6. 如請求項4之化合物，其中Y係被一至三個取代基取代，取代基選自甲基、羥基、胺基及CF3 ；R1 為氫；且R5 為被至高三個取代基取代之苯基，取代基選自氟基、羥基、甲 基、乙基、甲氧基及丙氧基。
  7. 如請求項6之化合物，其中R5 為2,6-二氟苯基。
  8. 如請求項1之化合物，其係選自下列組成之群N-(4-((3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((1R,3R,4S,5S)-3-胺基-4-羥基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)甲基吡啶醯胺；N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟-甲基吡啶醯胺；3-胺基-N-(4-((1R,3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺；及N-(4-((3S)-3-胺基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟基甲基吡啶醯胺，或其立體異構物、互變異構物或藥學上可接受之鹽。
  9. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至8中任一項之化合物。
  10. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至8中任一項之化合物，其中該醫藥組合物包含用於治療癌症之另一種藥劑。
  11. 如請求項10之醫藥組合物，其中該另一種藥劑係選自伊利諾提肯(irinotecan)、拓波提肯(topotecan)、真西塔賓(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶、甲醯四氫葉酸碳氯胺鉑、順氯胺鉑、紅豆杉烷類、帖札西塔賓(tezacitabine)、環磷醯胺、長春花植物鹼、愛馬汀尼伯(imatinib)(葛里維克(Gleevec))、蒽環素、利 圖西馬伯(rituximab)及搓史圖諸馬伯(trastuzumab)。
  12. 一種如請求項1至8中任一項之化合物於藥劑製備上之用途，該藥劑係藉由調制馬洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性而治療症狀。
  13. 如請求項12之用途，其中症狀為癌症，選自肺臟、胰臟、甲狀腺、卵巢、膀胱、乳房、前列腺或結腸之癌瘤，黑色素瘤、髓樣白血病、多發性骨髓瘤與紅白血病、絨毛結腸腺瘤及骨肉瘤。
  14. 如請求項1至8中任一項之化合物，其係藉由調制馬洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性而用於治療症狀。
  15. 如請求項14之化合物，其中症狀為癌症，選自肺臟、胰臟、甲狀腺、卵巢、膀胱、乳房、前列腺或結腸之癌瘤，黑色素瘤、髓樣白血病、多發性骨髓瘤與紅白血病、絨毛結腸腺瘤及骨肉瘤。
  16. 如請求項1之化合物，其係選自下列組成之群 或其藥學上可接受之鹽。
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