KR20160127140A - 옥세판-2-일-피라졸-4-일-헤테로사이클릴-카복사마이드 화합물 및 사용 방법 - Google Patents

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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

하기 화학식 I(이때, X가 티아졸일, 피라진일, 피리딘일, 또는 피리미딘일임)의 옥세판-2-일 피라졸-4-일-헤테로사이클릴-카복사미드 화합물(이의 입체이성질체, 기하이성질체, 호변이성질체, 및 약학적으로 허용가능한 염 포함)은 Pim 키나아제를 억제하고, Pim 키나아제로 매개된 암 같은 장애의 치료하는 데 유용하다. 하기 화학식 I의 화합물을 포유 동물 세포, 유기체 또는 연관된 병리학적 증상의 시험관 내, 동일 반응계 내 및 생체 내 진단 또는 치료에 사용하는 방법이 개시된다.

Description

옥세판-2-일-피라졸-4-일-헤테로사이클릴-카복사마이드 화합물 및 사용 방법{OXEPAN-2-YL-PYRAZOL-4-YL-HETEROCYCLYL-CARBOXAMIDE COMPOUNDS AND METHODS OF USE}
본 발명은, 일반적으로 Pim 키나아제(Pim-1, Pim-2, 및/또는 Pim-3) 억제제에 의해 매개되는 장애의 치료를 위한, 따라서 암 치료제로서 유용한, 옥세판-2-일 피라졸-4-일-헤테로사이클릴-카복사마이드 화합물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 조성물, 보다 구체적으로 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물, 및 다양한 형태의 암 및 과증식성 장애를 치료하기 위해 이를 단독으로 또는 조합으로 사용하는 방법, 및 포유 동물 세포 또는 연관된 병리학적 증상의 시험관 내, 동일 반응계 내 및 생체 내 진단 또는 치료에 상기 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
Pim 키나아제는 유전자 Pim-1, Pim-2 및 Pim-3에 의해 코딩되는 3종의 고도로 연관된 세린 및 트레오닌 단백질 키나아제의 부류이다. 유전자 명칭은 문구 "프로바이럴 인서션 몰로니(Proviral Insertion Moloney)"(쥐과 몰로니 바이러스에 대한 흔한 삽입 부위)에서 유래되었고, 이때 삽입은 Pim 키나아제의 과발현과 유전자 변형 Myc-유도 림프종 모델에서 새로운(de novo) T-세포 림프종 또는 매우 급속적인 종양발생을 초래한다(문헌 [Cuypers et al. (1984) Cell, vol. 37 (1) pp. 141-50]; [Selten et al. (1985) EMBO J. vol. 4 (7) pp. 1793-8]; [van der Lugt et al. (1995) EMBO J. vol. 14 (11) pp. 2536-44]; [Mikkers et al. (2002) Nature Genetics, vol. 32 (1) pp. 153-9]; 및 [van Lohuizen et al. (1991) Cell, vol. 65 (5) pp. 737-52]). 이런 실험은 종양유전자 c-Myc와의 상승작용을 밝혀 내었고, Pim 키나아제의 억제가 치료 효과를 가질 수 있음을 제안한다.
마우스 유전학은, Pim 키나아제를 길항하는 것이 허용가능한 안전한 프로파일을 가질 수 있음을 제안한다(야생형 새끼(littlermate)보다 약간 더 작지만 Pim 1 -/-; Pim 2 -/-; Pim 3 -/- 마우스 넉아웃(knockout)은 생존가능하다)(문헌[Mikkers et al. (2004) Mol Cell Biol vol. 24 (13) pp. 6104-154]). 상기 3종의 유전자는 단백질 키나아제 도메인을 포함하며 인식가능한 조절 도메인이 명확하게 없는 6종의 단백질 이소형태를 생성한다. 모든 6종의 이소형태는, 활성에 있어서 번역-후 변형을 필요로 하지 않는 구조적 활성 단백질 키나아제이므로, Pim 키나아제는 전사 수준에서 우선적으로 조절된다(문헌[Qian et al. (2005) J Biol Chem, vol. 280 (7) pp. 6130-7]). Pim 키나아제 발현은 사이토카인 및 성장 인자 수용체에 의해 잘 유발가능하고, Pim은 Stat 단백질(Stat3 및 Stat5 포함)의 직접 전사 표적이다. 예컨대, Pim-1은 gp130-매개 Stat3 증식 신호를 필요로 한다(문헌[Aksoy et al. (2007) Stem Cells, vol. 25 (12) pp. 2996-3004]; [Hirano et al. (2000) Oncogene vol. 19 (21) pp. 2548-56]; [Shirogane et al. (1999) Immunity vol. 11 (6) pp. 709-19]).
Pim 키아나제는 세포 증식 및 PI3k/Akt/mTor 신호 축에 평행한 생존 경로에서 기능한다(문헌[Hammerman et al. (2005) Blood vol. 105 (11) pp. 4477-83]). 실제로, Bad 및 eIF4E-BP1를 비롯한 PI3K 축의 몇몇 인산화 표적은 세포 성장 및 세포자멸사 조절제이고, 또한 Pim 키아나제의 인산화 표적이다(문헌[Fox et al. (2003) Genes Dev vol. 17 (15) pp. 1841-54]; [Macdonald et al. (2006) Cell Biol vol. 7 pp. 1]; [Aho et al. (2004) FEBS Letters vol. 571 (1-3) pp. 43-9]; 및 [Tamburini et al. (2009) Blood vol. 114 (8) pp. 1618-27]). Pim 키아나제는, Bad의 인산화가 Bcl-2 활성을 증가시켜 세포 생존을 증진시키기 때문에 세포 생존에 영향을 줄 수 있다. 마찬가지로, mTOR 또는 Pim 키아나제에 의한 eIF4E-BP1의 인산화는 eIF4E의 불발현(depression)을 초래하고, mRNA 번역 및 세포 성장을 촉진시킨다. 또한, Pim-1은 CDC25A, p21 및 Cdc25C의 인산화를 통해 세포 주기 진행(progression)을 촉진하는 것으로 인식되어 왔다(문헌[Mochizuki et al. (1999) J Biol Chemvol. 274 (26) pp. 18659-66]; [Bachmann et al. (2006) Int J Biochem Cell Biol vol. 38 (3) pp. 430-43]; 및 [Wang et al. (2002) Biochim Biophys Acta vol. 1593 (1) pp. 45-55]).
Pim 키아나제는 c-Myc-유도 및 Akt-유도 종양을 갖는 유전자 변형 마우스 모델에서 상승작용을 보인다(문헌[Verbeek et al. (1991) Mol Cell Biol vol. 11 (2) pp. 1176-9]; [Allen et al. Oncogene (1997) vol. 15 (10) pp. 1133-41]; 및 [Hammerman et al. (2005) Blood vol. 105 (11) pp. 4477-83]). Pim 키아나제는 Flt3-ITD, BCR-abl, 및 Tel-Jak2를 비롯한 급성 골수성 백혈병에서 확인된 종양유전자의 활성 변화에 관여한다. PaF3 세포에서 이런 종양유전자의 발현은 Pim-1 및 Pim-2 발현을 상향조절하고, IL-3 독립적 성장을 가능케 하고, 차후에 Pim 억제는 세포자멸사 및 세포 성장 중단(arrest)를 초래한다(문헌[Adam et al. (2006) Cancer Research 66 (7): 3828-35]). Pim 과발현 및 조절곤란은 백혈병 및 림프종(문헌[Amson et al. (1989) Proc Natl Acad Sci USA 86 (22): 8857-61)]; [Cohen et al. (2004) Leuk Lymphoma 45 (5): 951-5]; 및 [Huttmann et al. (2006) Leukemia 20 (10): 1774-82])뿐만 아니라 다발성 골수종(문헌[Claudio et al. (2002) Blood 100 (6): 2175-86])을 비롯한 많은 조혈성 암을 종종 발생시키는 것으로 알려져 있다. 다발성 골수종(MM)은 무성 번식의 B-림프구 악성 종양이고, 이는 골수에서 말단 분화된 항체-생성 세포의 축적으로 특징지어진다.
Pim-1은 전립선 암 진행에서 과발현되고 관련되는 것으로 나타났다(문헌[Cibull et al. (2006) J Clin Pathol 59 (3): 285-8]; 및 [Dhanasekaran et al. (2001) Nature vol. 412 (6849): 822-6]). Pim-1 발현은 질병 진행을 겪는 마우스 모델에서 증가한다(문헌[Kim et al. (2002) Proc Natl Acad Sci USA 99 (5): 2884-9]). Pim-1은 c-Myc-유도 유전자 시그네쳐를 갖는 인간 전립선 종양 샘플의 하위세트에서의 가장 높게 과발현된 mRNA인 것으로 보고되었다(문헌[Ellwood-Yen et al. (2003) Cancer Cell 4 (3): 223-38]). Pim-3는 또한 췌장암 및 간세포 암종에서 과발현되고 기능적 역할을 갖는 것으로 알려졌다(문헌[Li et al. (2006) Cancer Research 66 (13): 6741-7; Fujii et al. (2005) Int J Cancer 114 (2): 209-18]).
종양유전자 치료 및 진단 분야 외에, Pim 키아나제는 정상 면역계 기능에 중요한 역할을 할 수 있고, Pim 억제는 암발생(문헌[Nawijn et al (2011) Nature Rev. 11:23-34]), 염증, 자가면역 증상, 알러지 및 기관 이식에서의 면역 억제를 비롯한 많은 상이한 면역학적 병리학에서의 치료능이 있을 수 있다(문헌[Aho et al. (2005) Immunology 116 (1): 82-8]).
본 발명은 화학식 I의 화합물로 표시되는 Pim 키나아제(Pim-1, Pim-2, 및/또는 Pim-3)로 매개되는 장애를 치료하기 위한, 화학식 I의 옥세판-2-일 피라졸-4-일-헤테로사이클릴-카복사마이드 화합물 및 이의 입체이성질체, 기하이성질체, 호변이성질체, 및 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다.
화학식 I의 화합물은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00001
I
이때, X는 티아졸릴, 피라진일, 피리딘일 또는 피리미딘일이다.
R1, R2 및 X를 비롯한 다양한 치환체는 본원에 정의된 바와 같다.
본 발명의 하나의 양태는 화학식 I의 화합물, 및 약학적으로 허용가능한 담체, 활택제(glidant), 희석제, 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물이다. 상기 약학 조성물은 화학치료제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명은, 암, 면역 장애, 심혈관계 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애 중에서 선택되고 Pim 키나아제에 의해 매개되는 질환 또는 장애를 가진 환자에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 질환 또는 장애의 치료 방법을 포함한다. 상기 방법은 화학치료제, 항염증제, 면역 조절제, 신경 영양 인자, 심혈관계 질환 치료제, 간 질환 치료제, 항바이러스제, 혈액 질환 치료제, 당뇨병 치료제 및 면역 결핍 장애 치료제로부터 선택된 추가 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명은, Pim 키나아제를 매개하며 암, 면역 장애, 심혈관계 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식 I의 화합물의 용도를 포함한다.
본 발명은 Pim 키나아제에 의해 매개되는 증상의 치료를 위한 키트를 포함하며, 상기 키트는 a) 화학식 I의 화합물을 포함하는 제 1 약학 조성물; 및 b) 사용 설명서를 포함한다.
본 발명은, 약제로서 사용하고, 암, 면역 장애, 심혈관계 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애 중에서 선택되고 Pim 키나아제에 의해 매개되는 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물을 포함한다.
본 발명은 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 포함한다.
도 1은 니트로-1H-피라졸 1로부터 4-아미노피라졸 화합물 5의 예시적인 합성을 도시한다.
도 2는 티아졸-4-카복실레이트 에스터 화합물 7로부터 2-치환된 티아졸-4-카복실산 화합물 6의 예시적인 합성을 도시한다.
도 3은 1,5-이치환된-1H-피라졸-4-아민 화합물 5 및 2-치환된 티아졸-4-카복실산 화합물 6의 커플링으로부터 N-(1,5-이치환된-1H-피라졸-4-일)-2-치환된 티아졸-4-카복사미드 화합물 10의 예시적인 합성을 도시한다.
도 4는 5-클로로-4-니트로-1H-피라졸 화합물 3으로부터 6-(4-니트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-아민 화합물 19의 예시적인 합성을 도시한다.
도 5는 1-치환된-4-니트로-1H-피라졸 화합물 2로부터 5-(5-아지도-6-플루오로옥세판-2-일)-1-치환된-4-니트로-1H-피라졸 화합물 26의 예시적인 합성을 도시한다.
도 6은 5-(1-(알릴옥시)펜트-4-엔일)-1-치환된-4-니트로-1H-피라졸 화합물 22로부터 5-(5-아지도-4-플루오로옥세판-2-일)-1-치환된-4-니트로-1H-피라졸 화합물 31 및 5-(4-아지도-5-플루오로옥세판-2-일)-1-치환된-4-니트로-1H-피라졸 화합물 32의 예시적인 합성을 도시한다.
도 7은 1-치환된-4-니트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드록시옥세핀-2-일)-1H-피라졸 화합물 23으로부터 5-(5-아지도-6-플루오로옥세판-2-일)-1-치환된-4-니트로-1H-피라졸 화합물 35의 예시적인 합성을 도시한다.
도 8은 5-클로로-4-니트로-1H-피라졸 화합물 3으로부터 2-메틸-N-(2-치환된-7-(1-치환된-4-니트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)프로판-2-설핀아미드 화합물 40의 예시적인 합성을 도시한다.
도 9는 1-치환된-4-니트로-1H-피라졸-5-카브알데하이드 화합물 36으로부터 3급-부틸 (2R,3R,4S,5R)-5-하이드록시-3,5-다이메틸-2-(1-치환된-4-니트로-1H-피라졸-5-일)테트라하이드로-2H-피란-4-일카바메이트 화합물 47의 예시적인 합성을 도시한다.
도 10은 1-(1-치환된-4-니트로-1H-피라졸-5-일)펜트-4-엔-1-올 화합물 21로부터 3급-부틸 3-메톡시-2-메틸-7-(1-치환된-4-니트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일카바메이트 화합물 52의 예시적인 합성을 도시한다.
본 발명의 특정 실시양태를 참조하여 상세하게 기술될 것이고, 그 실시예는 구조식 및 화학식과 함께 도시된다. 본 발명은 열거된 실시양태들과 함께 기재될 것이고, 이들은 본 발명을 그 실시양태로 한정하려고 의도된 것이 아님이 이해될 것이다. 반대로 본 발명은 본 발명의 범주 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형 및 균등물을 망라하도록 의도된다. 당업자는 본 명세서에 기재된 것들과 유사하거나 균등한 많은 방법 및 재료를 인식할 것이고, 이들을 본 발명의 실시에 사용할 수 있다. 본 발명은 기재된 방법 및 재료에 한정되지 않는다. 정의된 용어, 용어 사용, 기재된 기술 등을 비롯하여, 하나 이상의 인용된 문헌, 특허 및 유사한 자료가 본 출원과 상이하거나 모순되는 경우에는 본 출원에 따른다. 다르게 정의되지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 숙련자에 의해 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 균등한 방법 및 물질을 본 발명의 실시 및 시험에 사용할 수 있지만, 적합한 방법 및 물질을 이하에서 설명한다.　 모든　공보, 특허 출원, 특허 및 기타 본원에 언급되는 문헌은 그 전체로 본원에 참고로 인용된다.　 달리 언급하지 않는 한, 본원에 사용된 명명법은 IUPAC 체계의 명명법에 기초한다.
정의
치환기의 수를 나타내는 경우, 용어 "하나 이상"은 하나의 치환기로부터 가능한 최대 개수의 치환기 범위, 즉 하나의 수소를 치환기로 대체하는 것으로부터 모든 수소를 치환기로 대체하는 것을 의미한다. 용어 "치환기"는 모 분자 상의 수소 원자를 대체하는 원자 또는 원자단을 나타낸다. 용어 "치환된"은 명시된 기가 하나 이상의 치환기를 갖는 것을 나타낸다.　 임의의 기가 다수의 치환기를 갖고 각종 가능한 치환기가 제공되는 경우, 이들 치환기는 독립적으로 선택되며 동일할 필요는 없다.　 용어 "비치환된"은 명시된 기가 치환기를 보유하지 않음을 의미한다.　 용어 "임의적으로 치환되는"은, 명시된 기가, 가능한 치환기 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 치환되거나 비치환되는 것을 의미한다. 치환기의 수를 나타내는 경우, 용어 "하나 이상"은 하나 이상의 치환기로부터 가능한 최대 개수의 치환기 범위, 즉 하나의 수소를 치환기로 대체하는 것으로부터 모든 수소를 치환기로 대체하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 "알킬"이라는 용어는 탄소수 1 내지 12개(C1-C12)의 포화 직쇄 또는 분지쇄 1가 탄화수소 라디칼을 의미하며, 여기서 알킬 라디칼은 독립적으로 하기에 기술된 하나 이상의 치환체로 임의적으로 치환될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 알킬 라디칼은 탄소수 1 내지 8개(C1-C8), 또는 탄소수 1 내지 6개(C1-C6)이다. 알킬 기의 예로는 비제한적으로, 메틸(Me, -CH3), 에틸(Et, -CH2CH3), 1-프로필(n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필(i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸(n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필(i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸(s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필(t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸(n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸(-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸(-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸(-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸(-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸(-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸(-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-다이메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-다이메틸-2-부틸(-CH(CH3)C(CH3)3, 1-헵틸, 1-옥틸 등을 포함한다.
본원에 사용된 "알킬렌"이라는 용어는 탄소수 1 내지 12개(C1-C12)의 포화 직쇄 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 의미하며, 여기서 알킬렌 라디칼은 독립적으로 하기에 기술된 하나 이상의 치환체로 임의적으로 치환될 수 있다. 다른 실시양태에서, 알킬렌 라디칼은 탄소수 1 내지 8개(C1-C8), 또는 탄소수 1 내지 6개(C1-C6)이다. 알킬렌 기의 예로는 비제한적으로, 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2CH2-), 프로필렌(-CH2CH2CH2-) 등을 포함한다.
"알켄일"이라는 용어는 적어도 하나의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소 sp2 이중결합을 갖는 탄소수 2 내지 8개(C2-C8)인 직쇄 또는 분지쇄 1가 탄화수소 라디칼을 의미하며, 여기서 알켄일 라디칼은 독립적으로 본 명세서에 기술된 하나 이상의 치환체로 임의적으로 치환될 수 있고, 그 예로는 "시스" 및 "트랜스" 배향인 라디칼, 또는 다르게는 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼을 포함한다. 예컨대, 에틸레닐 또는 비닐(-CH=CH2), 알릴(-CH2CH=CH2) 등을 비제한적으로 포함한다.
"알켄일렌"이라는 용어는 적어도 하나의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소 sp2 이중결합을 갖는 탄소수 2 내지 8개의 직쇄 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 의미하고, 여기서 알켄일렌 라디칼은 임의적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 치환될 수 있고, 그 예로는 "시스" 및 "트랜스" 배향, 또는 다르게는 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼을 포함한다. 예컨대, 비제한적으로 에틸렌일렌 또는 비닐렌(-CH=CH-) 또는 알릴(-CH2CH=CH-) 등을 포함한다.
"알킨일"이라는 용어는 적어도 하나의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소 sp 삼중 결합을 갖는 탄소수 2 내지 8개(C2-C8)의 직쇄 또는 분지쇄 1가 탄화수소 라디칼을 의미하고, 여기서 알킨일 라디칼은 독립적으로 본 명세서에 기술된 하나 이상의 치환체로 임의적으로 치환될 수 있다. 예컨대, 비제한적으로 에틴일(-C≡CH), 프로핀일(프로파길, -CH2C≡CH) 등을 포함한다.
"알킨일렌"이라는 용어는 적어도 하나의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소 sp 삼중 결합을 갖는 탄소수 2 내지 8개(C2-C8)의 직쇄 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 의미하고, 여기서 알킨일 라디칼은 임의적으로 본 명세서에 기술된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 치환될 수 있다. 그 예로는 비제한적으로 에틴일렌(-C≡C-), 프로핀일렌(프로파길렌, -CH2C≡C-) 등을 포함한다.
"카보사이클", "카보사이클릴", "카보사이클릭 고리" 및 "사이클로알킬"이라는 용어는 모노사이클릭 고리로 탄소수 3 내지 12개(C3-C12) 또는 바이사이클릭 고리로 탄소수 7 내지 12개를 갖는 1가 비방향족, 포화 또는 부분 불포화 고리를 의미한다. 탄소수 7 내지 12개의 바이사이클릭 카보사이클은 예컨대 바이사이클로[4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열될 수 있고, 9 내지 10개의 고리원자를 갖는 바이사이클릭 카보사이클은 바이사이클로[5,6] 또는 [6,6] 시스템으로, 또는 바이사이클로[2.2.1]헵탄, 바이사이클로[2.2.2]옥탄 및 바이사이클로[3.2.2]노난과 같은 가교 시스템으로 배열될 수 있다. 스피로 잔기가 또한 이러한 정의의 범주 안에 포함된다. 모노사이클릭 카보사이클의 예로는 비제한적으로 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 1-사이클로펜트-1-에닐, 1-사이클로펜트-2-에닐, 1-사이클로펜트-3-에닐, 사이클로헥실, 1-사이클로헥스-1-에닐, 1-사이클로헥스-2-에닐, 1-사이클로헥스-3-에닐, 사이클로헥사디엔일, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐, 사이클로데실, 사이클로운데실, 사이클로도데실 등을 포함한다. 카보사이클릴 기는 임의적으로, 본원에 기술된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 치환된다.
"아릴"은 모 방향족 고리 시스템의 하나의 탄소원자로부터 하나의 수소원자가 제거되어 유도된 탄소수 6 내지 20개(C6-C20)의 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴 기는 "Ar"과 같은 예시적 구조로 표시된다. 아릴은 포화, 부분 불포화 고리 또는 방향족 카보사이클릭 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 바이사이클릭 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴 기는 비제한적으로 벤젠(페닐), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐, 인데닐, 인다닐, 1,2-다이하이드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸 등으로부터 유도된 라디칼을 포함한다. 아릴 기는 독립적으로 본 명세서에 기술된 하나 이상의 치환체로 임의적으로 치환된다.
"아릴렌"은 모 방향족 고리 시스템의 2개의 탄소원자로부터 2개의 수소원자를 제거하여 유도된 탄소수 6 내지 20개(C6-C20)인 2가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴렌 기는 예시적 구조에서 "Ar"로 표현된다. 아릴렌은 포화, 부분 불포화 고리 또는 방향족 카보사이클릭 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 바이사이클릭 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴렌 기로는 비제한적으로 벤젠(페닐렌), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐렌, 인데닐렌, 인다닐렌, 1,2-다이하이드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸 등으로부터 유도된 라디칼을 포함한다. 아릴렌 기는 임의적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환체로 치환된다.
"헤테로사이클", "헤테로사이클릴" 및 "헤테로사이클릭 고리"라는 용어는 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용되며, 고리 원자가 3 내지 20개인 포화 또는 부분 불포화(즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 카보사이클릭 라디칼을 의미하며, 여기서 적어도 하나의 고리 원자는 질소, 산소, 인 및 황 중에서 선택되는 헤테로 원자이고, 나머지 고리 원자는 C이며, 이때 하나 이상의 고리 원자는 임의적으로 이하에 기술되는 하나 이상의 치환체에 의해 독립적으로 치환된다. 헤테로사이클은 고리 멤버가 3 내지 7개(탄소원자 2 내지 6개 및 N, O, P 및 S 중에서 선택되는 헤테로원자 1 내지 4개)인 모노사이클, 또는 고리 멤버가 7 내지 10개(탄소 원자 4 내지 9개 및 N, O, P 및 S 중에서 선택되는 헤테로원자 1 내지 6개)인 바이사이클, 예컨대 바이사이클로[4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템일 수 있다. 헤테로사이클은 문헌[Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry(W.A. Benjamin, New York, 1968), 특히 1, 3, 4, 6, 7 및 9장]; ["The Chemistry of Heterocyclic Chemicals, A series of Monographs(John Wiley & Sons, New York, 1950 ~ 현재), 특히 13, 14, 16, 19, 및 28 편]; 및 [J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566]에 기술되어 있다. 또한, "헤테로사이클릴"은 헤테로사이클 라디칼이 포화, 부분 불포화 고리 또는 방향족 카보사이클릭 또는 헤테로 사이클릭 고리와 융합되어 있는 라디칼을 포함한다. 헤테로사이클릭 고리의 예로는 비제한적으로 모폴린-4-일, 피페리딘-1-일, 피페라진일, 피페라진-4-일-2-온, 피페라진-4-일-3-온, 피롤리딘-1-일, 티오모폴린-4-일, S-다이옥소티오모폴린-4-일, 아조칸-1-일, 아제티딘-1-일, 옥타하이드로피리도[1,2-a]피라진-2-일, [1,4]다이아제판-1-일, 피롤리딘일, 테트라하이드로퓨란일, 다이하이드로퓨란일, 테트라하이드로티엔일, 테트라하이드로피란일, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 피페리디노, 모폴리노, 티오모폴리노, 티옥산일, 피페라진일, 호모피페라진일, 아제티딘일, 옥세탄일, 티에탄일, 호모피페리딘일, 옥세판일, 티에판일, 옥사제핀일, 다이아제핀일, 티아제핀일, 2-피롤린일, 3-피롤린일, 인돌린일, 2H-피란일, 4H-피란일, 다이옥산일, 1,3-다이옥솔란일, 피라졸린일, 다이티안일, 다이티올란일, 다이하이드로피란일, 다이하이드로티엔일, 다이하이드로퓨란일, 피라졸리딘일이미다졸린일, 이미다졸리딘일, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산일, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵탄일, 아자바이사이클로[2.2.2]헥산일, 3H-인돌일 퀴놀리진일 및 N-피리딜 우레아이다. 또한, 스피로 잔기도 본 정의의 범주에 포함된다. 2개의 고리 탄소원자가 옥소(=O) 잔기로 치환된 헤테로사이클릭 기의 예는 피리미디노닐 및 1,1-다이옥소-티오모르폴린일이다. 여기서 헤테로사이클 기는 독립적으로 본 명세서에 기술된 하나 이상의 치환체로 임의적으로 치환된다.
"헤테로아릴"이라는 용어는 5-, 6-또는 7-원 고리의 1가 방향족 라디칼을 의미하고, 그 예로는 질소, 산소 및 황 중에서 독립적으로 선택되는 헤테로원자를 하나 이상 함유하는 5 내지 20개 원자의 융합 고리 시스템(이 중 적어도 하나는 방향족임)을 포함한다. 헤테로아릴 기의 예는 피리딜(예컨대, 2-하이드록시피리딘일 포함), 이미다졸릴, 이미다조피리딘일, 피리미딘일(예컨대, 4-하이드록시피리미딘일 포함), 피라졸릴, 트라이아졸릴, 피라진일, 테트라졸릴, 퓨릴, 티엔일, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사다이아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀린일, 이소퀴놀린일, 테트라하이드로이소퀴놀린일, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조퓨란일, 신놀린일, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트라이아지닐, 이소인돌릴, 프테리딘일, 퓨린일, 옥사다이아졸릴, 트라이아졸릴, 티아다이아졸릴, 티아디아졸릴, 퓨라잔일, 벤조퓨라잔일, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 퀴나졸린일, 퀴녹살린일, 나프티리딘일 및 퓨로피리딘일이다. 헤테로아릴 기는 독립적으로 본 명세서에 기술된 하나 이상의 치환체로 임의적으로 치환된다.
헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 가능한 경우, 탄소(탄소-연결된), 또는 질소(질소-연결된) 결합되어 있을 수 있다. 예시적으로 및 비제한적으로, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 피리딘의 2, 3, 4, 5 또는 6번 위치, 피리다진의 3, 4, 5 또는 6번 위치, 피리미딘의 2, 4, 5 또는 6번 위치, 피라진의 2, 3, 5 또는 6번 위치, 퓨란, 테트라하이드로퓨란, 티오퓨란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 2, 3, 4 또는 5번 위치, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 2, 4 또는 5번 위치, 이속사졸, 피라졸 또는 이소티아졸의 3, 4 또는 5번 위치, 아지리딘의 2 또는 3번 위치, 아제티딘의 2, 3 또는 4번 위치, 퀴놀린의 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8번 위치, 또는 이소퀴놀린의 1, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8번의 위치에 결합된다.
예시적 및 비제한적으로, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸, 벤즈이미다졸의 1번 위치에, 이소인돌 또는 이소인돌린의 2번 위치에, 모르폴린의 4번 위치 및 카바졸 또는 β-카볼린의 9번 위치에 결합된다.
"치료하다" 및 "치료"라는 용어는 치료법상의 치료 및 예방 또는 방지 수단 모두를 일컫고, 그 목적은 암의 발달 또는 전이와 같은 원치 않는 생리학적 변화 또는 질환을 예방하거나 늦추는(줄이는) 것이다. 본 발명의 목적을 위해 유리하거나 목적으로 하는 임상 결과는 검출되든 검출되지 않든 증상의 완화, 질병 정도의 감소, 질병의 안정화된(즉, 악화되지 않는) 상태, 질병 진행의 지연 또는 둔화, 질병 상태의 완화 또는 경감 및 (부분적이거나 전체적인) 차도를 포함하나 이에 한정되지는 않는다. 또한, "치료"는 치료를 받지 않았을 때 예상되는 생존에 비해 생존이 연장됨을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 개체는 이미 질환 또는 장애를 갖는 개체뿐만 아니라 질환 또는 장애를 갖기 쉬운 개체 또는 질환 또는 장애를 예방해야 하는 개체를 포함한다.
"치료 효과량"이라는 표현은 (i) 본원에 기재된 특정 질환, 증상 또는 장애를 치료 또는 예방하거나, (ii) 하나 이상의 특정 질환, 증상 또는 장애의 징후를 약화, 개선 또는 제거하거나, 또는 (iii) 하나 이상의 특정 질환, 증상 또는 장애의 개시를 예방 또는 지연시키는 본 발명의 화합물 양을 의미한다. 암의 경우, 치료 효과량의 약물은 암 세포의 수를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키고; 암 세포의 말초 기관으로의 침투를 억제하고(즉, 일부 정도를 지연시키고, 바람직하게는 정지시킴); 종양 전이를 억제하고(즉, 일부 정도를 지연시키고, 바람직하게는 정지시킴); 종양 성장을 어느 정도 억제하고; 및/또는 암과 연관된 하나 이상의 일부 증상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 상기 약물은 기존의 암 세포의 성장을 억제하고/하거나 기존의 암 세포를 사멸시킬 수 있을 정도로 세포정지성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료의 경우, 효율은, 예컨대 질병의 진행 정도에 대한 시간(TTP)을 측정하고/하거나 반응 속도(RR)를 측정함으로써 측정될 수 있다.
"암"이라는 용어는 일반적으로 조절되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 포유 동물의 생리적 증상를 의미하거나 나타낸다. "종양"은 하나 이상의 암성 세포를 포함한다. 암의 비제한적인 예로는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함한다. 이러한 암의 더 구체적인 예로는 편평상피세포암(예컨대, 상피 편평상피 세포암), 폐암, 예컨대 소세포 폐암, 비-소세포 폐암("NSCLC"), 폐의 아데노암종 및 폐의 편평상피세포 암종, 복강암, 간세포암, 위암, 예컨대 위장암, 췌장암, 교아세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간암, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막암 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종 뿐만 아니라 두경부암을 포함한다.
"화학치료제"는 작용 기전에 관계없이 암 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학치료제의 부류에는 비제한적으로 알킬화제, 항대사물질, 스핀들 포이즌(spindle poison) 식물 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 항체, 광증감제 및 키나아제 억제제가 포함된다. 화학치료제로는 "표적화된 치료법" 및 통상의 화학치료에 사용된 화합물을 포함한다. 화학치료제의 예로는 에를로티니브(TARCEVA®, 제넨테크(Genentech)/OSI 팜(Pharm)), 도세탁셀(TAXOTERE®, 사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis)), 5-FU(플루오로우라실, 5-플루오로우라실, 카스 번호 51-21-8), 젬시타빈(GEMZAR®, 릴리(Lilly)), PD-0325901(카스 번호 391210-10-9, 화이자(Pfizer)), 시스플라틴(시스-다이아민,다이클로로백금(II), 카스 번호 15663-27-1), 카보플라틴(카스 번호 41575-94-4), 파클리탁셀(TAXOL®, 뉴저지주 프린스턴 소재의 브리스톨-마이어스 스퀴브 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)), 트라스투주마브(HERCEPTIN®, 제넨테크), 테모졸로마이드(4-메틸-5-옥소-2,3,4,6,8-펜타자바이사이클로[4.3.0] 노나-2,7,9-트리엔-9-카복사마이드, 카스 번호 85622-93-1, TEMODAR, TEMODAL®, 쉐링 폴로(Schering Plough)), 타목시펜((Z)-2-[4-(1,2-디페닐부트-1-에닐)페녹시]-N,N-다이메틸에탄아민, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®, 및 독소루비신(ADRIAMYCIN), 악티(Akti)-1/2, HPPD 및 라파마이신을 포함한다.
화학치료제의 더 많은 예로는 옥살리플라틴(ELOXATIN®, 사노피), 보르테조미브(VELCADE®, 밀레니엄 팜(Millennium Pharm)), 수텐트(SUNITINIB®, SU11248, 화이자), 레트로졸(FEMARA®, 노바티스(Novartis)), 이마티니브 메실레이트(GLEEVEC®, 노바티스), XL-518(MEK 억제제, 엑셀릭시스(Exelixis), WO 2007/044515), ARRY-886(MEK 억제제, AZD6244, 어레이 바이오파마(Array BioPharma), 아스트라 제네카(Astra Zeneca)), SF-1126(PI3K 억제제, 세마포어 파마슈티컬스(Semafore Pharmaceuticals)), BEZ-235(PI3K 억제제, 노바티스), XL-147(PI3K 억제제, Exelixis), PTK787/ZK 222584(노바티스), 풀베스트란트(FASLODEX®, 아스트라제네카), 류코보린(폴린산), 라파마이신(시롤리무스, RAPAMUNE®, 와이어쓰), 라파마이신 유사체, mTOR 억제제 예컨대 에베로리무스, MEK 억제제(GDC-0973), BCL-2 억제제 예컨대 나비토클락스, (ABT-263) 또는 (ABT-199), 라파티니브(TYKERB®, GSK572016, 글락소 스미스 클라인(Glaxo Smith Kline)), 로나파니브(SARASAR™, SCH 66336, 쉐링 플로), 소라페니브(NEXAVAR®, BAY43-9006, 바이어 랩스(Bayer Labs)), 제피티니브(IRESSA®, 아스트라 제네카), 이리노테칸(CAMPTOSAR®, CPT-11, 화이자), 티피파니브(ZARNESTRA®, 존슨&존슨(Johnson&Johnson)), ABRAXANE™(크레모포-무함유), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 포뮬레이션(일리노이주 샤움버그 소재의 아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Il)), 반데타니브(rINN, ZD6474, ZACTIMA®, 아스트라 제네카), 클로람부실, AG1478, AG1571(SU 5271; 수겐(Sugen)), 템시롤리무스(TORISEL®, 와이어쓰), 파조파니브(글락소 스미스 클라인), 칸포스파마이드(TELCYTA®, 텔릭(Telik)), 티오테파 및 사이클로스포스파마이드(CYTOXAN®, NEOSAR®; 알킬 설포네이트, 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민류, 예컨대 알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포아마이드, 트라이에틸렌티오포스포아마이드 및 트라이메틸로멜라민; 아세토제닌(특히, 불라탁신 및 불라탁시논); 캠토테신(예컨대, 합성 유사체 토포테칸); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(예컨대, 이의 아도젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 합성 유사체); 크립토피신(구체적으로, 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카마이신(예컨대, 합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 염산염, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님누스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제(예컨대, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마1I, 칼리케아미신 오메가I1(문헌[Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186]); 다인미신(dynemicin), 다인미신 A; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노미신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 캑티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, 모폴리노-독소루비신, 시아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 네모루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 피플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물질, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트라이메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘; 안드로겐, 예컨대 칼러스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신류, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파마이드 글리코사이드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜친; 다이아지쿠온; 엘프오르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구라존; 미토잔트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로소잔트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체(오리건주 유진 소재의 JHS 네추럴 프로덕츠(JHS Natural Products, Eugene, OR)); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트라이아지쿠온; 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트라이초테세네스(특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 사이클로포스파마이드; 티오테파; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이드; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 에토포사이드(VP-16); 이포스파마이드; 미토잔트론; 빈크리스틴; 비노렐빈(NAVELBINE®); 노반트론; 테니포사이드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈(XELODA®, 로슈(Roche)); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 다이플루오로메틸 오르니틴(DMFO); 레티노이드, 예컨대 레틴산; 및 전술한 임의의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염, 산 및 유도체를 포함한다.
또한, "화학치료제"의 정의에는 (i) 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절인자(SERM)와 같이 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 저해하는 작용을 하는 항호르몬 제제, 예컨대 타목시펜(예컨대, 놀바덱스(NOLVADEX®), 타목시펜시트레이트), 랄옥시펜, 드롤옥시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트라이옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 파레스톤(FARESTON®)(토레미핀 시트레이트); (ii) 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 저해하는 아로마타제 억제제, 예컨대 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가세(MEGASE®)(메제스트롤 아세테이트), 아로마신(AROMASIN®)(엑세메스탄; 화이자), 포메스타니, 파드로졸, 리비솔(RIVISOR®)(보로졸), 페마레(FEMARA®)(레트로졸; 노바티스), 및 아리미덱스(ARIMIDEX®)(아나스트로졸; 아스트라제네카); (iii) 항-안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈(1,3-다이옥솔란 뉴클레오사이드 사이토신 유사체); (iv) 단백질 키나아제 억제제, 예컨대 MEK 억제제(WO 2007/044515); (v) 지질 키나아제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 구체적으로 이상 세포 증식에 관련된 신호 전달 경로에서 유전자의 발현을 저해하는 것, 예컨대 PKC-알파, Raf 및 H-Ras, 예컨대 오블리머센(제나센스(GENASENSE®), 젠타 인코포레이티드(Genta Inc.)); (vii) 리보자임, 예컨대 VEGF 발현 억제제(예컨대, 안지오자임(ANGIOZYME®)) 및 HER2 발현 억제제; (viii) 백신, 예컨대 유전자 요법 백신, 예컨대, 알로벡틴(ALLOVECTIN®), 류벡틴(LEUVECTIN®) 및 바시드(VAXID®), 프로류킨(PROLEUKIN®) rIL-2; (ix)토포이소머라제 1 억제제, 예컨대 루르토테칸(LURTOTECAN®); 아바렐릭스(ABARELIX®) rmRH; (x) 항-혈관형성제, 예컨대 베바시주마드(아바스틴(AVASTIN®), 제넨테크); 및 전술한 임의의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염, 산 및 유도체가 포함된다.
또한, "화학치료제"의 정의에는 치료 항체, 예컨대 알렘투주마브(CAMPATH®), 베박시주마브(아바스틴(AVASTIN®), 제넨테크); 세툭시마브(에르비툭스(ERBITUX®), 임클론(Imclone)); 파니투무마브(벡티빅스(VECTIBIX®), 암젠(Amgen)), 리툭시마브(리툭산(RITUXAN®), 제넨테크/바이오겐 아이덱(Biogen Idec)), 퍼투주마브(옴니타그(OMNITARG™), 2C4, 제넨테크), 트라스투주마브(허셉틴(HERCEPTIN®), 제넨테크), 토시투모마브(베사르(BEXXAR®), 코릭시아(Corixia), 글락소스미쓰클라인(GlaxoSmithKline))이 포함된다.
본 발명의 화학식 I의 화합물과 함께 화학치료제로 치료 잠재력이 있는 인간화된 단클론 항체로는, 알렘투주마브, 아폴리주마브, 아셀리주마브, 아틀리주마브, 바피뉴주마브, 베박시주마브, 비바투주마브 머탄신, 칸투주마브 머탄신, 세델리주마브, 세르톨리주마브 페골, 시드푸시투주마브, 시드투주마브, 다클리주마브, 에큘리주마브, 에팔리주마브, 에프라투주마브, 에를리주마브, 펠비주마브, 폰톨리주마브, 젬투주마브 오조가미신, 이노투주마브 오조가미신, 이필리무마브, 라베투주마브, 레브리키주마브, 린투주마브, 마투주마브, 메폴리주마브, 모타비주마브, 모토비주마브, 나탈리주마브, 니모투주마브, 놀로비주마브, 누마비주마브, 오클레리주마브, 오마리주마브, 팔리비주마브, 파스콜리주마브, 펙푸시투주마브, 펙투주마브, 퍼투주마브, 펙셀리주마브, 랄리비주마브, 라니비주마브, 레슬리비주마브, 레슬리주마브, 레시비주마브, 로벨리주마브, 루플리주마브, 시브로투주마브, 시플리주마브, 손투주마브, 타카투주마브 테트락세탄, 타도시주마브, 탈리주마브, 테피바주마브, 토실리주마브, 토랄리주마브, 트라스투주마브, 투코투주마브 셀모류킨, 투쿠시투주마브, 우마비주마브, 우르톡사주마브 및 비실리주마브를 포함한다.
"대사물질"은 특정 화합물 또는 이의 염이 몸에서 대사를 통해 생산된 산물이다. 화합물의 대사물질은 당업계에 알려진 통상적인 기술을 사용하여 동정될 수 있고 그 활성은 본 명세서에 기재된 것들과 같은 시험을 사용하여 측정될 수 있다. 이러한 산물은 투여된 화합물의, 예를 들어 산화, 환원, 가수분해, 아마이드화, 디아마이드화, 에스터화, 디에스터화, 효소적 절단 등으로 인해 생길 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 이의 대사산물을 산출하기에 충분한 시간 동안 포유 동물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성되는 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물의 대사물질을 포함한다.
"패키지 동봉물(package insert)"이라는 용어는 상업적 치료 제품 패키지에 통상적으로 포함된 설명서를 지칭하기 위해 사용되며 상기 치료 제품의 사용에 관한 지시, 용법, 투약량, 투여, 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 포함한다.
"키랄"이라는 용어는 거울상 파트너의 비중첩성을 나타내는 분자를 의미하는 반면, "비키랄(achiral)"이라는 용어는 거울상 파트너에 중첩할 수 있는 분자를 의미한다.
"입체 이성질체"라는 용어는 화학적 구성은 동일하지만 원자 또는 기의 공간 배열에서 상이한 화합물을 의미한다.
"부분입체 이성질체"라는 용어는 2 이상의 키랄성 중심을 보유하고 분자가 서로 거울상이 아닌 입체 이성질체를 의미한다. 부분입체 이성질체는 물성, 예컨대 융점, 비등점, 분광 성질 및 반응성이 다르다. 부분입체 이성질체의 혼합물은 전기영동 및 크로마토그래피와 같은 고해상능 분석 절차로 분리할 수 있다.
"거울상 이성질체"는 서로 비중첩성 거울상인 화합물의 2종의 입체 이성질체를 의미한다.
본원에 사용된 입체화학적 정의와 관례는 일반적으로 문헌[S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York]; 및 [Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Chemicals", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]을 따른다. 본 발명의 화합물은 비대칭 또는 키랄 중심을 함유할 수 있고, 따라서 상이한 입체 이성질체 형태로 존재한다. 본 발명의 화합물의 모든 입체 이성질체 형태, 예컨대 비제한적으로 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체 및 아트로프 이성질체뿐만 아니라 이들의 혼합물, 예컨대 라세미 혼합물도 본 발명의 일부를 구성한다. 많은 유기 화합물은 광학적 활성 형태로 존재하며, 즉 평면-편광의 평면을 회전시키는 능력을 나타낸다. 광학적 활성 화합물을 나타내는데 있어서, 접두사 D 및 L, 또는 R 및 S는 키랄 중심(들)에 대한 분자의 절대 배열을 의미한다. 접두사 d 및 l, 또는 (+) 및 (-)는 화합물에 의한 평면-편광의 회전 기호를 나타내는데 사용되고, (-) 또는 l은 화합물이 좌선성임을 의미한다. (+) 또는 d 접두어가 있는 화합물은 우선성이다. 주어진 화학 구조에서, 이 입체 이성질체는 동일하지만, 단 서로 거울상이다. 특정 입체 이성질체는 거울상 이성질체라 불릴 수 있고, 이러한 이성질체의 혼합물은 종종 거울상 이성질체 혼합물이라 불린다. 거울상 이성질체의 50:50 혼합물은 라세미 혼합물 또는 라세메이트라 불리며, 화학 반응 또는 과정에서 입체선택 또는 입체특이성이 전혀 없는 경우 나타날 수 있다. "라세미 혼합물" 및 "라세메이트"라는 용어는 광학 활성이 없는 2종의 거울상 이성질체의 등몰(equimolar) 혼합물을 의미한다. 거울상 이성질체는 초 임계 유체 크로마토그래피(SFC)와 같은 키랄 분리 방법에 의해 라세미 혼합물로부터 분리될 수 있다.　 분리된 거울상 이성질체의 키랄 중심에서의 구조 배치는 임시적이며 표 1의 구조로 예시될 수 있지만, 입체화학 결정은 예컨대 x-선 결정학적 데이터를 기다린다.
"호변 이성질체" 또는 "호변 이성질체 형태"라는 용어는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호변환할 수 있는 에너지가 다른 구조 이성질체를 의미한다. 예를 들어, 광자 호변 이성질체(또한, 양성자성 호변 이성질체로도 알려져 있음)는 광자의 이동을 통한 상호변환, 예컨대 케토-에놀 및 이민-엔아민 이성질체화를 포함한다. 원자가 호변 이성질체로는 결합 전자 중 일부 전자의 재편성에 의한 상호전환을 포함한다.
"약학적으로 허용가능한 염"이라는 용어는 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 염을 의미한다.　 약학적으로 허용 가능한 염은 산 부가 염 및 염기 부가 염을 모두 포함한다. "약학적으로 허용가능한"이라는 표현은 물질 또는 조성물이 제형을 포함하는 다른 성분 및/또는 그것으로 처리되는 포유 동물과 화학적 및/또는 독성학적으로 상용성이어야만 한다는 것을 나타낸다.
"약학적으로 허용가능한 산 부가 염"이라는 용어는 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 탄산, 인산 등과 같은 무기 산, 및 폼산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 아스파르트산, 아스코브산, 글루탐산, 안트라닐산, 벤조산, 신남산, 만델산, 엠본산, 페닐아세트산, 메탄설폰산 "메실레이트", 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산 및 살리실산 등과 같은 유기 산의 지방족, 지환족, 방향족, 방향지방족, 헤테로사이클릭, 카복실 및 설폰산 류로부터 선택되는 유기 산으로 형성된 약학적으로 허용가능한 염을 가리킨다.
"약학적으로 허용가능한 염기 부가 염"이라는 용어는 유기 또는 무기 염기로 형성된 약학적으로 허용가능한 염을 가리킨다. 허용가능한 무기 염기의 예로는 나트륨, 칼륨, 암모늄, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간 및 알루미늄 염을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 유기 비독성 염기로부터 유도되는 염으로는 1급, 2급 및 3급 아민, 치환된 아민 예를 들어 천연의 치환된 아민, 환형 아민 및 염기성 이온 교환 수지 예컨대 아이소프로필아민, 트라이메틸아민, 다이에틸아민, 트라이에틸아민, 트라이프로필아민, 에탄올아민, 2-다이에틸아미노에탄올, 트라이메타민, 다이사이클로헥실아민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 하이드라바민, 콜린, 베타인, 에틸렌다이아민, 글루코사민, 메틸글루카민, 티오브로민, 퓨린, 피페리진, 피페리딘, N-에틸피페리딘 및 폴리아민 수지를 포함한다.
"용매화물"이란 하나 이상의 용매 분자와 본 발명의 화합물의 회합체 또는 착체를 의미한다. 용매화물을 형성하는 용매의 예는 비제한적으로, 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸아세테이트, 아세트산 및 에탄올아민을 포함한다.
용어 "EC50"은 50% 최대 유효 농도이고 생체 내에서 특정 효과의 최대의 50%를 얻는 데 필요한 특정 화합물의 혈장 농도를 나타낸다.
용어 "Ki"는 억제 상수이고 수용체에 대한 특정 억제제의 절대 결합 친화도를 나타낸다.　 이는 경쟁 결합 분석을 사용하여 측정하고, 경쟁 리간드(예컨대, 방사성 리간드)가 존재하지 않는 경우, 특정 억제제가 수용체의 50%를 차지하게 되는 농도와 같다.　 Ki 값은 pKi 값(-log Ki)으로 대수적으로 변환시킬 수 있으며, 이 경우 높은 값은 기하급수적으로 더 큰 효능을 나타낸다.
용어 "IC50"은 50% 최대 억제 농도이고 시험관 내 생물학적 과정의 50% 억제율을 얻는 데 필요한 특정 화합물의 농도를 나타낸다.　 IC50　값은 pIC50 값(-log IC50)으로 대수적으로 변환할 수 있으며, 이 경우 높은 값은 기하급수적으로 더 큰 효능을 나타낸다. IC50　값은 절대값은 아니지만 사용되는 농도와 같은 실험 조건에 의존하고 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff) 방정식(문헌[Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099])을 이용하여 절대 억제 상수(Ki)로 변환될 수 있다.
"본 발명의 화합물" 및 "화학식 I의 화합물"이라는 용어는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 기하 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물질 및 약학적으로 허용가능한 염 및 전구 약물을 포함한다.
또한, 본원에 기재된 임의의 화학식은 수화물, 용매화물 및 이들의 화합물의다형체(polymorph), 및 이들 혼합물을 나타내도록 의도된다.
또한, 본원에 주어진 임의의 화학식 또는 구조(화학식 I의 화합물 포함)는 화합물의 동위 원소로 표지된 형태뿐만 아니라 미표지된 형태를 나타내도록 의도된다. 동위 원소로 표지된 화합물은, 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체되는 것을 제외하고 본원에 주어진 화학식으로 묘사된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위 원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 및 염소의 동위 원소, 예컨대 2H(중수소), 3H(삼중수소), 11C, 13C, 14C, 15N, 31P, 32P, 35S, 36Cl 및 125I 각각을 포함한다. 본 발명의 다양한 동위 원소로 표지된 화합물은 방사성 동위원소, 예컨대 3H, 13C 및 14C가 혼입된 화합물을 포함한다. 이러한 동위 원소로 표지된 화합물은 대사 연구, 반응 속도 연구, 검출 또는 영상 기술, 예컨대 약물 또는 기질 조직 분배 어세이를 비롯한 양전자 방출 단층 촬영술(PET) 또는 단일광자 단층 촬영(SPECT), 또는 환자의 방사성 치료에 유용하다. 중수소 표지 또는 치환된 본 발명의 치료 화합물은 분포, 대사 및 배설(ADME)과 관련된 개선된 DMPK(약물 대사 및 약동학) 특성을 가질 수 있다. 중수소와 같은 무거운 동위 원소를 갖는 치환체는 예를 들어 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건과 같은 보다 큰 대사 안정성으로 인한 특정 치료 이점을 제공할 수 있다. 특히, 18F 또는 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 본 발명의 동위 원소 표지 화합물 및 이의 전구 약물은 일반적으로 하기에 기재된 비 동위 원소 표지된 시약을 용이하게 수득가능한 동위 원소 표지된 시약으로 대체하여 반응식 또는 실시예 및 제조예에 개시된 절차를 수행함으로써 제조될 수 있다. 또한, 무거운 동위 원소, 특히 중수소(예컨대, 2H 또는 D)를 갖는 치환체는 증가된 생체 내 반감기, 감소된 투여량 요건 또는 치료 지수의 향상과 같은 보다 큰 대사 안정성으로 인한 생성된 특정한 치료 이점을 제공할 수 있다. 여기서 중수소가 화학식 I의 화합물의 치환체로서 고려된다는 것이 이해될 것이다. 무거운 동위 원소, 구체적으로 중수소의 농도는 동위 원소 풍부 인자(isotopic enrichment factor)로 정의될 수 있다. 본 발명의 화합물에서, 특정한 동위 원소로 구체적으로 지칭되지 않은 임의의 원자는 상기 원자의 임의의 안정한 동위 원소를 의미한다. 달리 기재되지 않으면, 위치가 "H" 또는 "수소"로서 구체적으로 지칭될 때, 그 위치는 자연 존재 동위 원소 조성에서 수소를 갖는 것으로 이해된다. 따라서, 본 발명의 화합물에서, 중수소(D)로서 구체적으로 지칭된 임의의 원소는, 예컨대 상기에 주어진 범위에서의 중수소를 나타낸다.
옥세판 -2-일- 피라졸 -4-일- 헤테로사이클릴 - 카복사마이드 화합물
본 발명은 화학식 Ia-i를 비롯한 화학식 I의 옥세판-2-일-피라졸-4-일-헤테로사이클릴-카복사마이드 화합물 및 이의 약학 제형을 제공하고, 이는 잠재적으로 Pim 키나아제로 매개되는 질환, 증상 및/또는 장애의 치료에 유용하다.
하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체이성질체, 기하이성질체, 호변이성질체, 또는 약학적으로 허용가능한 염은 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00002
I
상기 식에서,
R1은 H, C1-C12 알킬, C2-C12 알켄일, C2-C12 알킨일, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C1-C20 헤테로아릴 및 -(C1-C12 알킬렌)-(C2-C20 헤테로사이클릴)로부터 선택되고;
R2는, 독립적으로, F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -CH2CH(CH3)2, -CH=CH2, -CH=C(CH3)2, =CH2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2NH2, -CH2NHCH3, -CH2CH2NH2, -CH2CHCH2NH2, -CH2CH(CH3)NH2, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CN, -CO2H, -COCH3, -COCH2NH2, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2CHF2, -NHCH2CF3, -NHCH2CH2OH, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHC(O)OCH2CH3, -NHC(O)OCH2Cl3, -NHC(O)OC6H5, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCH2F, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -OCH2CH(CH3)2, -OC(CH3)3, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -CH2OCH3, -S(O)2CH3, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 아제티딘일, 아제판일, 옥세탄일, 옥세탄-3-일메틸아미노, (3-메틸옥세탄-3-일)메틸아미노, 피롤리딘일, 피페라진일, 피페리딘일, (피페리딘-4-일에틸), 피란일, (피페리딘-4-일메틸), 모폴리노메틸, 및 모폴리노로부터 선택되고;
n은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이고;
X는 하기 구조로부터 선택되고:
Figure pct00003
(이때, 물결선은 부착 부위를 나타냄);
R3은 H, Cl, Br, C1-C12 알킬, -(-O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬렌)-O-(C3-C12 카보사이클릴), -(-(C1-C12 알킬렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(-(C2-C8 알켄일렌)-O-(C3-C12 카보사이클릴), -(-(C2-C8 알켄일렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), C6-C20 아릴, -(-(C6-C20 아릴렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(-(C6-C20 아릴렌)-(C1-)-(C6-C20 아릴렌), -(C6-C20 아릴렌)-(C1-C12 알킬렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C6-C20 아릴렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C6-C20 아릴렌)-O-(C1-C12 알킬), C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C1-C20 헤테로아릴, -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴), 및 -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬)로부터 선택되고; 이때, 알킬, 알켄일, 알킨일, 알킬렌, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴, 아릴, 및 헤테로아릴은 F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2NH2, -CH2CH2NH2, -CH2CHCH2NH2, -CH2CH(CH3)NH2, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH(CH2OH)2, -C(CH2OH)3, -CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CN, -CF3, -CHF2, -CH2F, -CO2H, -COCH3, -COCH(CH3)2, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCF3, -OCH(CH3)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -CH2OCH3, -S(O)2CH3, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 아제티딘일, 아제판일, 옥세탄일, 페닐, 피롤리딘일, 피페라진일, 피페리딘일, (피페리딘-4-일)에틸), 피란일, (피페리딘-4-일메틸), 모폴리노메틸, 및 모폴리노로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는, R1이 H인 것을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 R1이 C1-C12 알킬 또는 C3-C12 카보사이클릴인 것을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 R1이 -CH3, -CH2CH3, -CH2CHF2 및 -CH2CF3로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는, R2가 독립적으로 F, Cl, -OH, -CH3, -CH2CH3, -CF3, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2CHF2, -NHCH2CF3, -CH2NHCH3, 및 -OCH3으로부터 선택되고; n이 1, 2, 또는 3인 것을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는, R3이 하나 이상의 F로 치환된 페닐을 비롯한 C6-C20 아릴인 것을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는, 하기 화학식 Ia 내지 Id의 구조를 포함한다:
Figure pct00004
.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 하기 화학식 Ie의 구조를 포함한다:
Figure pct00005
Ie.
화학식 Ie의 화합물의 예시적인 실시양태는 R2가 F 또는 OCH3인 것을 포함한다.
화학식 Ie의 화합물의 예시적인 실시양태는 X가 티아졸릴인 것을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 하기 화학식 If의 구조를 포함한다:
Figure pct00006
If.
화학식 If의 화합물의 예시적인 실시양태는 R3이 C6-C20 아릴, 예를 들면 페닐 또는 피리딜인 것을 포함하며, 이때 페닐 또는 피리딜은 임의적으로 F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2NH2, -CH2CH2NH2, -CH2CHCH2NH2, -CH2CH(CH3)NH2, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH(CH2OH)2, -C(CH2OH)3, -CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CN, -CF3, -CHF2, -CH2F, -CO2H, -COCH3, -COCH(CH3)2, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCF3, -OCH(CH3)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -CH2OCH3, -S(O)2CH3, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 아제티딘일, 아제판일, 옥세탄일, 페닐, 피롤리딘일, 피페라진일, 피페리딘일, (피페리딘-4-일)에틸), 피란일, (피페리딘-4-일메틸), 모폴리노메틸 및 모폴리노로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 치환된다.
화학식 If의 화합물의 예시적인 실시양태는 R3이 페닐, 2-플루오로페닐, 2,6-다이플루오로페닐, 2,6-다이플루오로-4-메틸페닐, 2,4,6-트라이플루오로페닐, 2,4-다이플루오로페닐, 2-플루오로-4-하이드록시페닐 및 3-메틸피리딘-2-일로부터 선택되는 것을 포함한다.
생물학적 평가
화학식 I의 화합물의 Pim 키나아제 활성은 다수의 직접 및 간접 검출 방법으로 측정가능하다. 본원에 기재된 특정의 예시적 화합물을 이의 Pim 키나아제(이소형태 Pim-1, Pim-2, 및 Pim-3 포함) 결합 활성(실시예 901) 및 종양 세포에 대한 시험관 내 활성(실시예 902)에 대해 분석하였다. 본원에 기재된 특정의 예시적 화합물은 약 1 마이크로몰(μM) 미만의 Pim 결합 활성 IC50 값을 가졌다. 본원에 기재된 특정의 예시적 화합물은, 예를 들어 키나아제 종양 유전자의 잠재성 및 파생 신호 둘 모두를 평가하는 모델 시스템에 유용한 세포주 BaF3, 뮤린 인터루킨-3 의존 프로-B 세포주(문헌["Ba/F3 cells and their use in kinase drug discovery", Warmuth, M, et al, (January 2007) Current Opinion in Oncology, Vol 19(l):55-60]), 및 다발성 골수종 환자의 치료에서 Pim 억제제의 효능을 평가하는 모델 시스템으로 유용한 MM1.S, 다발성 골수종 세포주(문헌[Greenstein et al (2003) Exper. Hematol. 31(4):271-282])에 대향하여 약 1 마이크로몰(μM) 미만의 종양 세포-기반 활성 EC50 값을 가졌다. 실시예 901 및 902에서 기술된 분석에서 1 μM 미만의 Ki/IC50/EC50을 갖는 화학식 I의 화합물은, Pim 키나아제 억제제(Pim-1, Pim-2 및/또는 Pim-3)로서 치료적으로 유용할 수 있다.
hERG(인간 Ether-a-go-go-Related Gene)는, Kv11.1(칼륨 이온 채널의 알파 서브유닛)로 공지된 단백질을 코딩하는 유전자(KCNH2)이다. 상기 이온 채널(때때로 'hERG'로 간략히 나타냄)은 심박수를 조정하는 심장의 전기적 활성에 기여하는 것으로 잘 알려져있다(즉, hERG 채널은 심근 활동 전위에서 IKr 전류의 재양극화를 매개함). 약물 투입 또는 몇몇 패밀리에서의 희귀 돌연변이(문헌[Hedley PL et al. (2009) Human Mutation 30 (11): 1486-511] 참조)에 의해, 세포막을 가로질러 전기 전류를 전도하는 채널의 능력이 억제되거나 절충되지 못하는 경우, 이는 장기 QT 증후군이라 불리는 잠재적으로 치명적인 장애를 나타낼 수 있고; 시장에서 임상적으로 성공한 다수의 약물이 hERG를 억제하는 경향을 보이고, 부작용으로 돌연사의 공존 위험을 발생시키며, 이는 hERG 억제(약물 전개 중에 피해야만 하는 중요한 항표적(antitarget))를 야기한다(문헌[Sanguinetti MC, Tristani-Firouzi M (March 2006) Nature 440(7083): 463-9]). hERG는, 신경 시스템의 일부 세포의 기능을 조절하는 것(문헌[Chiesa N et al (June 1997) J. Physiol. (Lond.). 501 (Pt 2) (2): 313-8]; [Overholt JL, et al (2000) Adv. Exp. Med. Biol. 475: 241-8]), 및 백혈병 세포에서 암-유사 특징부를 구축하고 유지하는 것과 연관된다. hERG 분석은 실시예 903에 따라 수행하였다.
표 1의 예시적인 화학식 I의 화합물은 본 발명의 방법에 따라 제조되고 동정되고 Pim 키나아제의 억제에 대해 시험되었으며, 하기의 구조 및 상응하는 명칭(매사추세츠주 캠브릿지 소재의 캠브릿지소프트 코포레이션(CambridgeSoft Corp.)의 켐바이오드로 울트라(ChemBioDraw Ultra), 버전 11.0)를 가진다. 표 1의 키랄 원자를 갖는 일부 화합물은 입체화학으로 완전히 특성분석되지 않았다. 　입체화학 또는 다른 기와의 입체화학적 관계는 임시 배정하여 구조로 나타내었다. 입체 이성질체의 분리 수단 및 특성분석 데이터는 실시예에 나타내었다.
표 1
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Figure pct00008
Figure pct00009
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Figure pct00011
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Figure pct00013
화학식 I의 화합물의 투여
본 발명의 화합물(이하, "활성 화합물(들)")의 투여는 화합물을 작용 부위로 전달할 수 있는 임의의 방법으로 수행할 수 있다. 이들 방법은 경구 경로, 십이지장내 경로, 비경구 주사(정맥내, 피하, 근육내, 혈관내 또는 주입), 국소, 흡입 및 직장 투여를 포함한다.
투여되는 활성 화합물의 양은 치료되는 대상, 질환 또는 상태의 중증도, 투여 속도, 화합물의 특성 및 처방 전문의의 판단에 따라 좌우될 것이다. 그러나, 유효 투여량은 하루에 체중 1kg 당 약 0.001 내지 약 100mg의 범위, 바람직하게는 약 1 내지 약 35mg/kg/일의 범위이며, 단일 또는 분할 투여된다. 70kg 인간의 경우, 이는 약 0.05 내지 7g/일, 바람직하게는 약 0.05 내지 약 2.5g/일 범위의 양일 것이다. 몇몇 경우에, 상기된 범위의 하한보다 낮은 투여량 수준이 보다 적합할 수 있고, 다른 경우에는 훨씬 더 많은 투여량이 임의의 유해한 부작용을 유발하지 않고 사용될 수 있되, 이러한 많은 투여량은 우선 하루에 걸쳐 투여하기 위해 여러 작은 투여량으로 분할된다.
활성 화합물은 단독 요법으로 적용되거나, 또는 하나 이상의 화학치료제, 예를 들어 본 명세서에 기재된 것들과 함께 적용될 수 있다. 이러한 공동 치료는 개별 치료 성분을 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여함으로써 달성될 수 있다.
본 발명의 화학식 I의 화합물은 치료해야 하는 증상에 적합한 임의의 경로로 투여될 수 있다. 적당한 경로로는 경구, 비경구(예컨대, 피하, 근육내, 정맥내, 동맥내, 피내, 경막내 및 경막외), 경피, 직장, 비측, 국부(예컨대, 협측 및 설하), 질, 복강내, 폐내 및 비내 투여를 포함한다. 국소 면역억제 치료에서, 화합물은 병변 내 투여로 투여할 수 있으며, 예컨대 관류 또는 이식 전에 억제제와 이식편을 접촉시켜 투여할 수 있다. 바람직한 경로는 수혜자의 증상 등에 따라 달라질 수 있음을 알 수 있을 것이다. 화합물이 경구 투여되는 경우에는 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 환제, 캡슐, 정제 등으로 제형화될 수 있다. 화합물이 비경구 투여되는 경우에는 약학적으로 허용가능한 비경구 부형제와 함께 이하에 기술되는 단위 투약 주사성 형태로 제형화할 수 있다.
인간 환자를 치료하는 투여량은 화학식 I의 화합물 약 10mg 내지 약 1000mg의 범위일 수 있다. 일반적인 투여량은 화합물 약 100mg 내지 약 300mg일 수 있다. 투여량은 특정 화합물의 흡수, 분포, 대사 및 배출을 비롯한 약동학 및 약력학적 성질에 따라 1일 1회(QID), 1일 2회(BID), 또는 더 자주 투여할 수 있다. 또한, 독성 인자는 투약량 및 투여 섭생에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 경구 투여될 때, 환제, 캡슐 또는 정제는 특정 시간 기간 동안 매일 또는 더 드물게 투여될 수도 있다. 섭생은 다양한 치료 사이클로 반복될 수 있다.
화학식 I의 화합물에 의한 치료 방법
본 발명의 화합물은 Pim 키나아제, 예컨대, Pim-1, Pim-2, 및 Pim-3 키나아제의 과발현의 특징을 갖는 것들을 비제한적으로 포함하는 과증식성 질환, 증상 및/또는 장애의 치료에 유용하다. 따라서, 본 발명의 또 다른 양태는 Pim 키나아제의 억제에 의해 치료 또는 예방될 수 있는 질환 또는 증상의 치료 또는 예방 방법을 포함한다. 하나의 실시양태에서, 상기 방법은 치료 또는 예방이 필요한 포유 동물에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 기하 이성질체, 호변 이성질체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함한다. 하나의 실시양태에서, 인간 환자는 화학식 I의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체, 보조제 또는 비히클로 치료되며, 이때 상기 화학식 I의 화합물은 Pim 키나아제 활성을 검출가능하게 억제하는 양으로 존재한다.
본 발명은 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 및 담체(약학적으로 허용가능한 담체)를 포함하는 조성물(예컨대, 약학 조성물)을 포함한다. 본 발명은 또한, 화학식 I의 화합물 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 및 담체(약학적으로 허용가능한 담체)를 포함하고, 제 2 화학치료제(예컨대 본원에 기재된 것들)를 추가로 포함하는 조성물(예컨대, 약학 조성물)을 포함한다. 본 조성물은 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 비정상적 세포 성장의 억제 또는 고증식성 장애, 예컨대 암의 치료에 유용하다. 예컨대, 본 화합물 및 조성물은 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 다발성 골수종, 림프종, 급성 골수성 백혈병, 전립선암, 유방암, 간세포 암종, 췌장암, 및/또는 결장직장 암의 치료에 유용하다.
본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 비정상적 세포 성장의 억제 또는 고증식성 장애, 예컨대 암의 치료 방법을 포함한다. 예컨대, 본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염) 또는 이의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 다발성 골수종, 림프종, 급성 골수성 백혈병, 전립선암, 유방암, 간세포 암종, 췌장암, 및/또는 결장직장 암의 치료 방법을 포함한다.
본 발명의 방법에 따라 처리될 수 있는 암은 유방, 난소, 자궁, 정소, 비뇨 기관, 식도, 후두, 위, 피부, 폐, 뼈, 결장, 췌장, 간, 담도 통로, 인두(구강), 입술, 혀, 입, 소장, 대장-직장, 대장, 직장, 뇌 및 중추 신경계를 포함하나, 이들에 국한되지 않는다. 본 발명의 방법에 따라 처리될 수 있는 암 유형은 다발성 골수종, 아교 모세포종, 신경 모세포종, 각화증세포종, 대 세포 암종, 비소 세포 폐암(NSCLC), 소세포 암종, 폐 선암종, 선종, 선암, 갑상선암, 여포암, 미분화 암, 유두 암종, 정상 피종, 흑색종, 육종, 방광암, 간암 및 신장암, 골수 장애, 림프 장애, 털 세포, 구강 및 호지킨(Hodgkin) 및 백혈병을 포함하나, 이들에 국한되지 않는다.
본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을, 제 2 화학치료제, 예컨대 본원에 기재된 것들과 함께 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 비정상적 세포 성장의 억제 또는 고증식성 장애, 예컨대 암의 치료 방법을 포함한다. 예컨대, 본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을, 제 2 화학치료제, 예컨대 본원에 기재된 것들과 함께 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 다발성 골수종, 림프종, 급성 골수성 백혈병, 전립선암, 유방암, 간세포 암종, 췌장암, 및/또는 결장직장 암의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을 단독으로, 또는 제 2 화학치료제 예컨대 항-B-세포 항체 치료제(예컨대, 리툭산(RITUXAN)(상품명) 및/또는 다세투주맙), 젬시타빈, 코티코스테로이드(예컨대, 프레드니솔론 및/또는 덱사메타손), 화학치료 칵테일(예컨대, CHOP(사이클로포스파마이드, 독소루비신, 빈크리스틴, 프레드니솔론) 및/또는 ICE(이스포스파마이드, 사이톡산, 에토포사이드)), 생물학제 및 화학치료제의 조합(예컨대, 리툭산-ICE, 다세투주맙-리툭산-ICE, R-Gem, 및/또는 D-R-Gem), Akt 억제제, PI3K 억제제(예컨대, GDC-0941(제넨테크) 및/또는 GDC-0980(제넨테크)), 라파마이신, 라파마이신 유사체, mTOR 억제제 예컨대 에베로리무스 또는시롤리무스, MEK 억제제(GDC-0973) 및 Bcl-2 억제제(ABT-263 또는 ABT-199)와 함께 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 림프종의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을 단독으로, 또는 제 2 화학치료제, 예컨대 멜팔란, "이미즈(Imids)"(면역-조절제, 예컨대 탈리도마이드, 레날리도마이드, 및/또는 포몰리다마이드), 코티코스테로이드(예컨대, 덱사메타손 및/또는 프레드니솔론), 및 보테조미브 또는 기타 프로테아좀(proteasome) 억제제와 함께 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 다발성 골수종의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을 단독으로, 또는 제 2 화학치료제, 예컨대 사이타라빈(araC), 안트라사이클린(예컨대, 다우노루비신 및/또는 이다루비신), 항골수성 항체 치료제(예컨대, SGN-33), 항골수성 항체-약물 접합체(예컨대, 마일로타그(MYLOTARG)(상품명))와 함께 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 또는 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을 단독으로, 또는 제 2 화학치료제, 예컨대 플루다라빈, 사이클로포스파마이드, 항 B 세포 항체 치료제(예컨대, 리툭산 및/또는 다세투주맙)와 함께 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 만성 림프구성 백혈병(CLL)의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을 단독으로, 또는 제 2 화학치료제, 예컨대 BCR-abl 억제제(예컨대, 이마티니브, 닐로티니브, 및/또는 다사티니브)와 함께 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 만성 골수성 백혈병(CML)의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은, 포유 동물(예컨대, 인간)에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물, 및/또는 이의 용매화물, 수화물 및/또는 염, 또는 이의 조성물을 단독으로 또는 조합으로 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물(예컨대, 인간)에서의 골수형성이상 질환(MDS) 및 진성 적혈구증가증(PV), 본태성 혈소판증가증(ET) 또는 골수섬유증(MF)을 비롯한 골수 증식 질환의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은 본 화합물을 포유 동물 세포, 유기체 또는 연관된 병리학적 증상의 시험관 내, 동일 반응계 내 및 생체 내 진단 또는 치료에 사용하는 방법을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 전술된 질환 또는 증상을 겪는 포유 동물, 예컨대 인간에서의 전술된 질환 또는 증상의 치료에서 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 또한, 전술된 장애를 겪는 온혈 동물, 예를 들어 포유 동물, 예컨대 인간에서의 전술된 질환 및 증상 치료용 약제의 제조에서의 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
약학 제형
인간을 비롯한 포유 동물의 치료(예방적 치료를 포함함)에 화학식 I의 화합물을 사용하기 위해, 이는 일반적으로 약학 조성물로서의 표준 약학적 관례에 따라 제형화된다. 이러한 본 발명의 양태에 따르면, 본 발명의 화합물을 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
약학적 조성물은 예를 들어 정제, 캡슐제, 환제, 분말제, 지속형 제제, 용액, 현탁액과 같이 경구 투여에 적합한 형태이거나, 멸균 용액, 현탁액 또는 에멀젼과 같이 비경구 주사에 적합한 형태이거나, 연고 또는 크림과 같이 국소 투여에 적합한 형태이거나, 또는 좌제와 같이 직장 투여에 적합한 형태일 수 있다. 약학적 조성물은 정확한 투여량의 단일 투여에 적합한 단위 투여 형태일 수 있다. 약학적 조성물은 통상의 약학적 담체 또는 부형제, 및 활성 성분으로서의 본 발명에 따른 화합물을 포함할 것이다. 덧붙여, 이는 다른 의약 또는 약학적 작용제, 담체, 보조제 등을 포함할 수 있다.
예시적인 비경구 투여 형태는 멸균 수용액, 예를 들어 수성 프로필렌 글리콜 또는 덱스트로스 용액에서 활성 화합물의 용액 또는 현탁액을 포함한다. 원한다면, 이러한 투여 형태는 적합하게 완충될 수 있다.
적합한 약학적 담체는 불활성 희석제 또는 충전제, 물 및 다양한 유기 용매를 포함한다. 필요한 경우, 약학적 조성물은 추가의 성분, 예를 들어 향미제, 결합제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 그러므로, 경구 투여의 경우에 다양한 부형제, 예를 들어 시트르산을 함유하는 정제가 다양한 붕해제, 예를 들어 전분, 알긴산 및 특정 착물 실리케이트 및 결합제, 예를 들어 수크로스, 젤라틴 및 아카시아와 함께 사용될 수 있다. 추가로, 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘, 나트륨 라우릴 설페이트 및 활석은 흔히 정제화 목적에 유용하다. 유사한 유형의 고체 조성물이 또한 연질 및 경질 충전된 젤라틴 캡슐로 사용될 수 있다. 따라서, 바람직한 물질은 락토스 또는 유당, 및 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 수성 현탁액 또는 엘릭시르제가 경구 투여에 바람직한 경우, 그 안의 활성 화합물은 다양한 감미제 또는 향미제, 착색 물질 또는 염료 및 필요에 따라 에멀젼화제 또는 현탁화제 및 희석제, 예를 들어 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 또는 이들의 조합물과 합해질 수 있다.
특정 양의 활성 화합물을 갖는 다양한 약학적 조성물을 제조하는 방법은 공지되어 있거나 당업자에게 명백할 것이다. 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Ester, Pa., 15th Edition(1975)]을 참조한다.
전형적인 제형은 본 발명의 화합물과 담체, 희석제 또는 부형제를 혼합하여 제조된다. 적당한 담체, 희석제 및 부형제는 당업자에게 공지되어 있고, 탄수화물, 왁스, 수용성 및/또는 팽윤성 중합체, 친수성 또는 소수성 물질, 젤라틴, 오일, 용매, 물 등과 같은 물질을 포함한다. 사용되는 특정 담체, 희석제 또는 부형제는 본 발명의 화합물이 적용되는 수단 및 목적에 따라 달라질 것이다. 용매는 일반적으로 포유 동물에게 투여하기에 안전한 것으로 당업자에게 인식된 용매(GRAS)를 기초로 하여 선택한다. 일반적으로, 안전한 용매는 물과 같은 비독성 수성 용매, 및 물에 용해성 또는 혼화성인 다른 비독성 용매이다. 적당한 수성 용매로는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG400, PEG300) 등, 및 이의 혼합물을 포함한다. 또한, 제형은 완충액, 안정제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁제, 보존제, 항산화제, 불투명화제, 활택제, 가공보조제, 착색제, 감미제, 향미제, 방향제 및 기타 약물(즉, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물)의 우아한 외양을 제공하거나 약학적 산물(즉, 약제)의 제조를 돕는 기타 공지된 첨가제를 하나 이상 포함할 수 있다.
제형은 통상적인 용해 및 혼합 절차를 이용해 제조될 수 있다. 예컨대, 벌크 약물 물질(즉, 본 발명의 화합물 또는 이 화합물의 안정화된 형태(예컨대, 사이클로덱스트린 유도체 또는 다른 공지된 착제를 갖는 착물))은 전술한 하나 이상의 부형제의 존재 하에 적당한 용매에 용해된다. 본 발명의 화합물은 일반적으로 용이하게 조절가능한 약물 투약량을 제공하고 환자의 처방된 요법에 맞는 약학적 투약 형태로 제형화된다.
적용하기 위한 약학 조성물(또는 제형)은 약물 투여에 사용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 일반적으로, 분배용 물품은 적당한 형태의 약학 조성물이 담겨 있는 용기를 포함한다. 적당한 용기는 당업자에게 공지되어 있고, 병(플라스틱 및 유리), 항낭, 앰플, 플라스틱 백, 금속 실린더 등과 같은 소재를 포함한다. 또한, 용기는 패키지의 내용물에 부주의한 접근을 방지하기 위해 손댐방지 어셈블리를 포함할 수도 있다. 또한, 용기는 용기의 내용물을 기재한 라벨이 부착된다. 또한, 상기 라벨은 적절한 경고를 포함한다.
본 발명의 화합물의 약학 조성물은 다양한 투여 경로 및 종류로 제조할 수 있다. 예컨대, 목적하는 순도를 갖는 화학식 I의 화합물을 경우에 따라 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 부형제 또는 안정제와 혼합하여(문헌[Reminton's Pharmaceutical Sciences(1980) 16th edition, Osol, A. Ed.]) 동결건조 제형, 밀링된 분말 또는 수용액 형태로 제조할 수 있다. 상온에서 적당한 pH 및 바람직한 정도의 순도에서 생리적으로 허용가능한 담체, 즉 이용되는 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성인 담체와 혼합하여 제형화 할 수 있다. 상기 제형의 pH는 주로 화합물의 특정 용도 및 농도에 따라 달라지지만, 약 3 내지 약 8 범위일 수 있다. pH 5의 아세테이트 완충액 중의 제형이 적합한 실시양태이다.
본원에서 사용하기 위한 이 발명의 화합물은 바람직하게는 멸균성이다. 특히, 생체 내 투여용으로 사용되는 제형은 멸균성이어야 한다. 이런 멸균화는 멸균 여과막을 통한 여과로 용이하게 성취된다.
상기 화합물은 보통 고체 조성물, 동결건조 제형 또는 수성 용액으로 보관될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 좋은 의학적 관례와 일치하는 방식, 즉 투여 양, 농도, 스케줄, 과정, 비히클 및 경로로 제형화, 용량화 및 투여될 수 있다. 이러한 상황에서 고찰해야 하는 요인으로는 치료받는 특정 장애, 치료받는 특정 포유 동물, 각 환자의 임상 증상, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 의료업자에게 공지된 기타 요인을 포함한다. 투여되는 화합물의 "치료 효과량"은 이러한 고찰 내용을 따라야하고 과증식성 장애를 예방, 호전 또는 치료하는데 필요한 최소량이다. 이러한 양은 바람직하게는, 숙주에 대해 독성이고 숙주를 상당히 더 취약하게 하는 양보다 적다.
일반적 처방으로, 용량 당 비경구 투여되는 억제제의 초기 약학적 유효량은 약 0.01 내지 100mg/kg 범위, 즉 환자 체중 kg 당 하루에 약 0.1 내지 20 mg이고, 사용되는 화합물의 전형적인 초기 범위는 0.3 내지 15mg/kg/일이다.
허용가능한 희석제, 담체, 부형제 및 안정제는 이용되는 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이고, 예컨대 인산염, 구연산염 및 다른 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제(예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물, 예컨대 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물(예컨대, Zn-단백질 착물); 및/또는 비이온 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN™), 플루로닉스(PLURONICS™) 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 활성 약학적 성분은 또한 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합 등에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예컨대 각각 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예컨대, 리포좀, 알부민 미소구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.(1980)]에 개시되어 있다.
화학식 I의 화합물의 지속 방출형 제제가 제조될 수도 있다. 지속 방출 제제의 적당한 예로는 매트릭스가 성형 물품 형태, 예컨대 필름 또는 마이크로캡슐인, 화학식 I의 화합물을 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함한다. 지속 방출형 매트릭스의 예로는 폴리에스터, 하이드로겔(예컨대, 폴리(2-하이드록시 에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐 알콜)), 폴리락타이드(미국 특허 3,773,919), L-글루탐산과 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 젖산-글리콜산 공중합체, 예컨대 루프론 디폿(LUPRON DEPOT™)(젖산-글리콜산 공중합체와 류프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사성 미소구) 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다.
제형은 본 명세서에서 상술한 투여 경로에 적합한 것을 포함한다. 제형은 단위 투약 형태로 편리하게 제공될 수 있고 약학 분야에 공지된 임의의 방법으로 제조할 수 있다. 기술 및 제형은 일반적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA]에서 찾을 수 있다. 이러한 방법은 하나 이상의 보조 성분을 함유하는 담체와 활성 성분을 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 성분과 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 이 둘 모두를 균일하게 친밀하게 회합시키고, 그 다음 필요하면 산물을 성형하여 제조한다.
경구 투여에 적합한 화학식 I의 화합물의 제형은 소정량의 화학식 I의 화합물을 각각 함유하는 환제, 캡슐, 사쉐, 액체 또는 정제와 같은 개별 단위로 제조할 수 있다.
압축 정제는 경우에 따라 결합체, 윤활제, 불활성 희석제, 충전제, 붕해제, 보존제, 계면활성제 및 분산제로부터 선택되는 하나 이상의 부형제와 혼합한, 분말 또는 과립과 같은 자유 유동 형태의 활성 성분을 적당한 기계로 압축하여 제조할 수 있다. 성형 정제는 분말화된 활성 성분을 불활성 액체 희석제로 습윤화시킨 혼합물을 적당한 기계에서 성형하여 제조할 수 있다. 정제는 경우에 따라 코팅하거나 스코어링할 수 있고, 경우에 따라 활성 성분의 저속 방출 또는 조절 방출을 제공하도록 제형화한다.
정제, 트로키, 로젠지, 수성 또는 오일 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 예컨대 젤라틴 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르는 경구용으로 제조할 수 있다. 경구용으로 의도된 화학식 I의 화합물의 제형은 약학 조성물의 제조에 대해 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조할 수 있고, 이러한 조성물은 감미제, 방향제, 착색제 및 보존제를 비롯한 하나 이상의 제제를 함유하여 맛좋은 제제를 제공할 수 있다. 활성 성분을 함유하는 정제는 이 정제의 제조에 적당한 비독성 약학적으로 허용가능한 부형제와 혼합된 것이 적당하다. 이러한 부형제로는, 예컨대 불활성 희석제, 예컨대 칼슘 또는 나트륨 카보네이트, 락토오스, 칼슘 또는 나트륨 포스페이트; 과립화 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분 또는 알긴산; 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 정제는 비코팅되거나 또는 마이크로캡슐화를 비롯한 공지의 기술로 코팅하여 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시키고 장기간 동안 지속적인 작용을 제공할 수 있다. 예컨대, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 다이스테아레이트와 같은 시간 지연 물질을 단독으로 또는 왁스와 함께 사용할 수 있다.
눈 또는 다른 외부 조직, 예컨대 입 및 피부의 치료를 위해, 제형은 활성 성분(들)을 예컨대 0.075 내지 20%w/w의 양으로 함유하는 국부 연고 또는 크림으로 적용되는 것이 바람직하다. 연고로 제형화될 때, 활성 성분은 파라핀계 또는 수혼화성 연고 베이스와 함께 이용될 수 있다. 다르게는, 활성 성분은 수중유 크림 베이스와 함께 크림으로 제형화되기도 한다.
필요하다면, 크림 베이스의 수성 상은 다가 알콜, 즉 하이드록시 기가 2개 이상인 알콜, 예컨대 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3-다이올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG 400) 및 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 국부 제형은 피부 또는 다른 환부를 통해 활성 성분의 흡수 또는 침투를 증강시키는 화합물을 적당하게 포함할 수 있다. 이러한 피부 침투 증강제의 예로는 다이메틸 설폭사이드 및 관련 유사체를 포함한다.
본 발명의 에멀젼의 오일 상은 지방 또는 오일 또는 지방 및 오일과 함께 적어도 하나의 유화제를 함유한 혼합물을 포함하는 공지된 성분으로부터 공지의 방식으로 구성될 수 있다. 친수성 유화제는 안정제로 작용하는 친지성 유화제와 함께 포함되는 것이 바람직하다. 종합하면, 유화제(들)는 안정제(들)와 함께 또는 안정제 없이 소위 유화 왁스를 구성하고, 오일 및 지방과 함께 왁스는 크림 제형의 오일 분산 상을 형성하는 소위 유화 연고 베이스를 구성한다. 본 발명의 제형에 사용하기에 적합한 유화제 및 에멀젼 안정제는 트윈® 60, 스팬(Span®) 80, 세토스테아릴 알콜, 벤질 알콜, 미리스틸 알콜, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 나트륨 라우릴 설페이트를 포함한다.
화학식 I의 화합물의 수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 이러한 부형제로는 현탁제, 예컨대 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 크로스카멜로스, 포비돈, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 나트륨 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 검 트라가칸트 및 검 아카시아 및 분산제 또는 습윤화제, 예컨대 천연 포스파타이드(예컨대, 레시틴), 지방산과 알킬렌 옥사이드의 축합 산물(예컨대, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 장쇄 지방족 알콜과 에틸렌 옥사이드의 축합 산물(예컨대, 헵타데카에틸렌옥시세타놀), 지방산과 헥시톨 무수물 유래의 부분 에스터와 에틸렌 옥사이드의 축합 산물(예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트)을 포함한다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제, 예컨대 에틸 또는 n-프로필 p-하이드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 방향제 및 하나 이상의 감미제, 예컨대 수크로오스 또는 사카린을 함유할 수 있다.
화학식 I의 화합물의 약학 조성물은 멸균 주사성 제제, 예컨대 멸균 주사성 수성 또는 유성 현탁액 형태일 수 있다. 이 현탁액은 앞에서 언급한 적당한 분산제 또는 습윤화제 및 현탁화제를 이용하여 공지된 기술에 따라 제조할 수 있다. 멸균 주사성 제제는 또한 비독성의 비경구 허용가능한 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사성 용액 또는 현탁액, 예컨대 1,3-부탄다이올 중의 용액이거나, 또는 동결건조 분말로 제조될 수 있다. 이용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로 이용될 수 있다. 이 목적을 위해, 모든 상표의 고정 오일이 이용될 수 있고, 그 예로는 합성 모노글리세라이드 또는 다이글리세라이드를 포함한다. 또한, 지방산, 예컨대 올레산이 마찬가지로 주사제의 제조에 이용될 수 있다.
단일 투약 형태를 생산하기 위해 담체 물질과 배합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료받는 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 인간에게 경구 투여하려는 시간-방출 제형은 약 1 내지 1000 mg의 활성 물질을, 총 조성물의 약 5 내지 약 95%(중량:중량)로 변할 수 있는 적당하고 편리한 양의 담체 물질과 함께 함유할 수 있다. 이 약학 조성물은 투여 시 쉽게 측정가능한 양을 제공하도록 제조할 수 있다. 예컨대, 정맥내 주입용으로 제조된 수용액은 용액 1ml당 활성 성분 약 3 내지 500 ㎍을 함유하여 약 30ml/hr 속도의 적당한 용량이 주입될 수 있다.
비경구 투여에 적합한 제형은 항산화제, 완충액, 세균발육정지제 및 제형을 의도한 수용체의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다.
또한, 눈에 국부 투여하기에 적합한 제형은 적당한 담체, 특히 활성 성분의 수성 용매에 활성 성분이 용해 또는 현탁된 점안제를 포함한다. 이러한 제형에서 활성 성분은 약 0.5 내지 20%w/w, 예컨대 약 0.5 내지 10%w/w 농도, 예컨대 약 1.5%w/w의 농도로 존재하는 것이 바람직하다.
입에 국부 투여하기에 적당한 제형은 방향성 베이스, 보통 수크로오스 및 아카시아 또는 트라가칸트에 활성 성분을 함유하는 로젠지; 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로오스 및 아카시아와 같은 불활성 베이스 중에 활성 성분을 함유하는 파스틸; 및 적당한 액체 담체에 활성 성분을 함유하는 구강세정제를 포함한다.
직장 투여용 제형은 예컨대 코코아 버터 또는 살리실레이트를 함유하는 적당한 베이스와 함께 좌약으로 제공될 수 있다.
폐내 또는 비측 투여에 적합한 제형은 입자 크기가 예컨대 0.1 내지 500 마이크론 범위(예컨대, 0.5, 1, 30 마이크론, 35 마이크론 등과 같은 마이크론 증분으로 0.1 내지 500 마이크론 범위의 입자 크기를 포함함)이고, 비강을 통한 급속 흡입 또는 폐포낭에 도달하도록 구강을 통한 흡입에 의해 투여된다. 적당한 제형은 활성 성분의 수성 또는 오일 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 무수 분말 투여에 적합한 제형은 통상의 방법에 따라 제조할 수 있고, 이하에 기술된 장애를 치료 또는 예방하는데 지금까지 사용된 화합물과 같은 다른 치료제와 함께 전달될 수 있다.
질 투여에 적합한 제형은 활성 성분 외에 당업자에게 적당한 것으로 공지된 담체를 함유하는 페사리, 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 포움 또는 스프레이 제형으로 제공될 수 있다.
이 제형은 단위 용량 또는 다회 용량 용기, 예컨대 밀봉 앰플 및 바이엘에 포장될 수 있고, 사용 직전에 주사를 위해 멸균 액체 담체, 예컨대 물의 첨가만을 필요로 하는 동결건조 상태로 보관될 수 있다. 임시 주사 용액 및 현탁액은 앞서 기술된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로 제조된다. 바람직한 단위 투약 제형은 위에서 언급한 활성 성분의 1일 용량 또는 단위 1일 분할용량이나 이의 적당한 분획을 함유하는 제형이다.
또한, 본 발명은 위에서 정의한 적어도 하나의 활성 성분을 수의용 담체와 함께 함유하는 수의용 조성물을 제공한다. 수의용 담체는 조성물 투여 목적에 유용한 물질이고, 수의학적으로 불활성이거나 허용가능하고 활성 성분과 융화성인 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있다. 이러한 수의용 조성물은 비경구, 경구 또는 임의의 다른 바람직한 경로를 통해 투여될 수 있다.
병용 요법
화학식 I의 화합물을 단독으로 또는 다른 치료제와 함께 본 명세서에 기술된 질환 또는 장애, 예컨대 염증 또는 과증식 장애(예컨대, 암)를 치료하는데 이용할 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 약학적 복합 제형 또는 병용 요법과 같은 용량투여 섭생으로, 항 염증 성질 또는 항-과증식 성질을 갖거나 염증, 면역 반응 장애 또는 과증식 장애(예컨대, 암)를 치료하는데 유용한 제 2 치료 화합물과 함께 배합된다. 약학적 복합 제형 또는 용량투여 섭생의 제 2 화합물은 서로 악영향을 미치지 않도록 화학식 I의 화합물에 보충 활성을 나타내는 것이다. 이러한 화합물은 의도한 목적에 효과적인 양으로 함께 적당하게 존재한다. 하나의 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 화학식 I의 화합물을 본원에 기재된 것들과 같은 화학치료제와 함께 포함한다.
병용 요법은 동시 또는 연속 섭생으로 투여될 수 있다. 연속 투여될 때, 복합물은 2회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 병용 투여는 별도의 제형 또는 단일 약학 조성물의 공동투여, 및 임의의 순서로의 연속 투여를 포함하고, 이때 두 활성제(또는 모든 활성제)가 각각의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 시간 기간을 두는 것이 바람직하다.
상기 임의의 공동투여 제제의 적당한 투약량은 현재 사용되는 양이고, 새로 동정된 제제 및 다른 치료제 또는 치료의 복합 작용(상승작용)으로 인해 저하될 수 있다.
병용 요법은 "상승작용" 및 "상승 효과"(즉, 화합물을 별도로 사용하여 수득되는 효과의 합보다 활성 성분을 함께 사용할 때 더 큰 효과)를 달성할 수 있다. 상승 효과는 활성 성분이 (1) 공동조제되고 병용의 단위 투약 제형으로 동시에 투여 또는 전달될 때; (2) 별도의 제형으로 교대로 또는 병행해서 전달될 때; 또는 (3) 일부 다른 섭생으로 달성될 수 있다. 교대 요법으로 전달될 때, 상승 효과는 화합물이, 예컨대 다른 주사기로 다른 주입에 의해, 별개의 환제 또는 캡슐로 또는 분리 주입으로 연속해서 투여 또는 전달될 때 달성될 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안, 각 활성 성분의 유효 투약량은 연속, 즉 계대로 투여되는 반면, 병용 요법에서는 2종 이상의 활성 성분의 유효 투여량이 함께 투여된다.
항암 요법의 특정한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 기하 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물질 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구 약물은 본 명세서에 기술된 바와 같은 다른 치료제, 호르몬제 또는 항체 제제와 조합되기도 하고, 수술 요법 및 방사선요법과 조합되기도 한다. 따라서, 본 발명에 따른 병용 요법은 적어도 하나의 화학식 I의 화합물, 이의 입체 이성질체, 기하 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물질 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구 약물의 투여, 및 적어도 하나의 다른 암 치료 방법의 이용을 포함한다. 화학식 I의 화합물(들) 및 다른 약학적 활성 화학치료제(들)의 양 및 상대적 투여 타이밍은 바람직한 병용 치료 효과를 달성하도록 선택한다.
화학식 I의 화합물의 대사물
또한, 본 발명의 범위에는 본 명세서에 기술된 화학식 I의 생체내 대사산물이 포함된다. 이 산물은 예컨대, 투여된 화합물의 산화, 환원, 가수분해, 아마이드화, 탈아마이드화, 에스터화, 탈에스터화, 효소 절단 등으로부터 산출될 수 있다. 따라서, 본 발명은 화학식 I의 화합물의 대사물질, 예컨대 본 발명의 화합물을 이의 대사산물을 산출하기에 충분한 시간 동안 포유 동물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법에 의해 생성되는 화합물을 포함한다.
대사물질은 일반적으로 본 발명의 화합물의 방사능표지된(예컨대, 14C 또는 3H) 동위원소를 제조하는 단계, 이것을 동물, 예컨대 래트, 마우스, 기니아 피그, 원숭이 또는 사람에게 검출가능한 용량(예컨대, 약 0.5mg/kg 이상)으로 투여하는 단계, 충분한 시간 동안(예컨대, 약 30초 내지 30시간) 대사가 일어나도록 하는 단계, 및 이의 변환 산물을 소변, 혈액 또는 다른 생물학적 시료로부터 분리하는 단계에 의해 동정된다. 이 산물은 표지되어 있기 때문에 쉽게 분리된다(다른 것은 대사물질에 생존하는 에피토프에 결합할 수 있는 항체를 이용하여 분리한다). 대사물질의 구조는 통상의 방식, 예컨대 MS, LC/MS 또는 NMR 분석으로 측정한다. 일반적으로, 대사물질의 분석은 당업계에 공지된 통상의 약물 대사 연구와 같은 방식으로 수행한다. 대사물질은 생체내에서 다르게 발견되지 않는 한, 본 발명의 화합물의 치료적 용량에 대한 진단 분석에 유용할 수 있다.
제품
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 전술한 질환 및 장애의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품 또는 "키트"가 제공된다. 하나의 실시 양태에서, 이 키트는 화학식 I의 화합물을 함유하는 용기를 포함한다. 키트는 또한 라벨 또는 패키지 동봉물을 용기 위에 또는 용기에 결합시켜 포함한다. "패키지 동봉물"이라는 용어는 치료 제품의 상업적 패키지에 통상적으로 포함되는 설명서로서, 이 치료 제품의 사용에 관한 지시, 용법, 투약량, 투여, 금기 및/또는 경고를 포함하는 설명서를 의미하는 것이다. 적당한 용기로는 예컨대 병, 바이엘, 주사기, 블리스터 팩 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 소재로 제조될 수 있다. 용기는 증상의 치료에 효과적인 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 이의 제형을 담고 있을 수 있고 멸균 접근 입구를 보유할 수 있다(예컨대, 용기는 피하 주사 바늘로 찌를 수 있는 스토퍼를 보유한 바이알 또는 정맥 내 용액 백일 수 있다). 조성물 중의 적어도 하나의 활성제는 화학식 I의 화합물이다. 라벨 또는 패키지 동봉물은 선택한 증상, 예컨대 암을 치료하는데 조성물이 사용된다는 것을 나타낸다. 또한, 라벨 또는 패키지 동봉물은 치료할 환자가 과증식 장애, 신경 변성, 심장 비대, 통증, 편두통 또는 신경외상 질환 또는 사태와 같은 장애를 가진 자임을 나타낼 수 있다. 하나의 실시양태에서, 라벨 또는 패키지 동봉물은 화학식 I의 화합물을 함유하는 조성물이 비정상적 세포 증식으로부터 초래되는 장애를 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 나타낸다. 또한, 라벨 또는 패키지 동봉물은 조성물이 다른 장애를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타낼 수도 있다. 다르게는, 또는 추가로, 제조 물품은 약학적으로 허용가능한 완충액, 예컨대 세포발육정지성 주사용수(BWFI), 인산염-완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 함유하는 제 2 용기를 포함할 수 있다. 또한, 상업적 및 사용자 견지에서 바람직한 다른 재료, 예컨대 다른 완충액, 희석제, 필터, 주사바늘 및 주사기를 포함할 수 있다.
키트는 추가로 화학식 I의 화합물의 투여에 대한 안내서, 및 존재한다면 제 2 약학 조성물을 포함할 수 있다. 예컨대, 키트가 화학식 I의 화합물을 함유하는 제 1 조성물, 및 제 2 약학 조성물을 포함한다면, 키트는 추가로 치료가 필요한 환자에게 제 1 및 제 2 약학 조성물을 동시, 연속 또는 분할 투여하는 것에 대한 지침서를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 키트는 화학식 I의 화합물의 고체 경구 형태, 예컨대 정제 또는 캡슐을 전달하기에 적합하다. 이러한 키트는 다수의 단위 투약량을 포함하는 것이 바람직하다. 이러한 키트는 투약량이 의도한 사용 순서대로 배열되어 있는 카드를 포함할 수 있다. 이러한 카드의 한 예는 "블리스터 팩"이다. 블리스터 팩은 포장 산업에 공지되어 있고 약학적 단위 투약 형태를 포장하는데 널리 사용된다. 원한다면, 기억 보조자가 예컨대 수, 문자 또는 다른 표식 형태로 또는 투약량이 투여될 수 있는 치료 스케줄의 날짜를 표시한 달력 동봉물로 구비될 수 있다.
하나의 실시양태에 따르면, 키트는 (a) 화학식 I의 화합물이 담겨있는 제 1 용기; 및 임의적으로 (b) 항-과증식 활성이 있는 제 2 화합물을 포함하는 제 2 약학 조성물이 담겨있는 제 2 용기를 포함할 수 있다. 다르게는, 또는 추가로 키트는 약학적으로 허용가능한 완충액, 예컨대 세균발육정지성 주사용수(BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 함유하는 제 3 용기를 포함할 수 있다. 상업적 및 사용자 견지에서 바람직한, 다른 완충액, 희석제, 필터, 주사바늘 및 주사기를 비롯한 다른 재료를 추가로 포함할 수 있다.
키트가 화학식 I의 조성물 및 제 2 치료제를 함유하는 다른 특정한 실시양태에서, 키트는 각 조성물을 담기 위한 용기, 예컨대 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함할 수 있지만, 각 조성물은 분할되지 않은 단일 용기에 담겨있을 수도 있다. 일반적으로, 키트는 각 성분의 투여에 대한 지시 사항을 포함한다. 키트 형태는 각 성분이 다른 투약 형태(예컨대, 경구 및 비경구)로 투여되는 것이 바람직하거나, 다른 투약 간격으로 투여될 때, 또는 제형의 각 성분의 역가가 주치의 처방이 필요할 때 특히 유리하다.
화학식 I의 화합물의 제조
화학식 I의 화합물은 화학 업계에 공지된 것과 유사한 공정을 포함하는 합성 경로에 의해, 특히 본 명세서에 있는 설명 및 다른 헤테로사이클에 대해 본원에 참고로서 인용된 문헌(문헌[Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier, 1997, e.g. Volume 3]; [Liebigs Annalen der Chemie,(9):1910-16,(1985)]; [Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60,(1958)]; [Arzneimittel-Forschung, 40(12):1328-31,(1990)])에 비추어서 합성할 수 있다. 출발 물질은 일반적으로 알드리치 케미컬스(Aldrich Chemicals, 위스콘신 밀워키 소재)와 같은 시판원에서 입수할 수 있거나 당업자에게 공지된 방법을 이용해 용이하게 제조할 수 있다(예컨대, 문헌[Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y.(1967-2006) ed.], 또는 문헌[Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin(부록 포함)(또한, 바일슈타인(Beilstein) 온라인 데이터베이스를 통해서도 입수할 수 있음)]에 일반적으로 기술된 방법에 의해 제조될 수 있다.
화학식 I의 화합물, 필요한 시약 및 중간체 합성에 유용한 합성 화학 변형 및 보호기 방법(보호 및 탈보호)은 당 분야에 공지되어 있고, 예를 들면 문헌[R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers(1989)]; [T. W. Greene and P. G .M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley and Sons(1999)] 및 [L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1995)] 및 이의 후속 판에 기재된 것을 포함한다.
화학식 I의 화합물을 단독으로 제조하거나 또는 적어도 2개, 예컨대 5 내지 1000개의 화합물 또는 10 내지 100개의 화합물을 포함하는 화합물 라이브러리로 제조할 수 있다. 화학식 I의 화합물의 라이브러리는 조합적 "분리 및 혼합(split and mix)" 접근법으로 제조하거나, 또는 용액상 또는 고상 화학을 이용하는 여러 병행 합성법 또는 당업자에게 공지된 절차에 의해 제조할 수 있다. 본 발명의 추가 양태에 따르면 적어도 2개의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 화합물 라이브러리가 제공된다.
일반적 절차 및 실시예는 화학식 I의 화합물의 예시적 제조 방법을 제공한다. 당업자는 다른 합성 경로를 이용해서 본 발명의 화합물을 합성할 수 있다는 것을 잘 알고 있다. 특정 출발 물질과 시약이 도면, 중간체 및 실시예에 묘사하고 논의되고 있지만, 다른 출발 물질과 시약으로 대체하여 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공할 수도 있다. 또한, 이하에 기술된 방법으로 제조한 다수의 예시적 화합물은 당업자에게 공지된 통상의 화학을 이용하여 본 개시내용에 비추어 추가 변형시킬 수도 있다.
화학식 I의 화합물을 제조하는데 있어서, 중간체의 원위(remote) 작용기(예컨대, 1급 또는 2급 아민)를 보호할 필요가 있을 수 있다. 이러한 보호의 필요는 원위 작용기의 성질 및 제조방법의 조건에 따라 달라질 것이다. 적당한 아미노-보호기로는 아세틸, 트라이플루오로아세틸, t-부톡시카보닐(BOC), 벤질옥시카보닐(CBz) 및 9-플루오레닐 메틸렌옥시카보닐(Fmoc)을 포함한다. 이러한 보호의 필요는 당업자에 의해 쉽게 결정된다. 보호기 및 이의 사용에 대한 일반적인 설명은 문헌[T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]을 참조한다.
화학식 I의 화합물을 제조하는 방법에서, 반응 산물을 서로 및/또는 출발 물질과 분리하는 것이 유익할 수 있다. 각 단계 또는 일련의 단계들의 원하는 산물은 당업계에 일상적인 기술을 통해 바람직한 균질도로 분리 및/또는 정제된다. 전형적으로, 이러한 분리는 다중상 추출, 용매 또는 용매 혼합물로부터 결정화, 증류, 승화 또는 크로마토그래피를 수반한다. 크로마토그래피는 예컨대 역상 및 정상상; 크기 배제; 이온 교환; 고압, 중간압 및 저압의 액체 크로마토그래피 방법 및 장치; 소규모 분석; 모의 이동상(SMB) 및 제조용 박층 또는 후막층 크로마토그래피뿐만 아니라 소규모 박층 및 플래쉬 크로마토그래피 기술을 비롯한 임의의 여러 방법을 포함할 수 있다.
다른 부류의 분리 방법은 원하는 산물, 미반응 출발 물질, 반응 부산물 등에 결합하거나 이들을 분리할 수 있도록 선택한 시약으로 혼합물을 처리하는 것을 포함한다. 이러한 시약으로는 활성탄, 분자체, 이온교환 매질 등과 같은 흡착제 또는 흡수제를 포함한다. 다르게는, 시약은 염기성 물질인 경우에는 산, 산성 물질의 경우에는 염기, 항체와 같은 결합 시약, 결합 단백질, 크라운 에터와 같은 선택적 킬레이트제, 액체/액체 이온 추출 시약(LIX) 등일 수 있다. 적당한 분리 방법의 선택은 관계된 물질의 성질, 예컨대, 증류 및 승화 중의 비등점 및 분자량, 크로마토그래피 중의 극성 작용기의 존재 또는 부재, 다중상 추출에서 산성 및 염기성 매질 중의 물질의 안정성 등에 따라 달라진다.
부분입체 이성질체 혼합물은 크로마토그래피 및/또는 분별 결정과 같은 당업자에게 공지된 방법으로 이화학적 차이를 기초로 하여 각 부분입체 이성질체로 분리할 수 있다. 거울상 이성질체는 거울상 이성질체 혼합물을 적당한 광학 활성 화합물(예컨대, 키랄 알콜 또는 모셔(Mosher)의 산 클로라이드와 같은 키랄 보조제)과 반응시켜 부분입체 이성질체 혼합물로 변환시키고, 부분입체 이성질체를 분리한 뒤, 각 부분입체 이성질체를 대응하는 순수 거울상 이성질체로 변환(예컨대, 가수분해)시켜 분리할 수 있다. 또한, 본 발명의 일부 화합물은 아트로프이성질체(예컨대, 치환된 바이아릴)일 수 있고 본 발명의 일부로 간주된다. 또한, 거울상 이성질체는 키랄 HPLC 컬럼을 이용하여 분리할 수도 있다.
단독 입체 이성질체(예컨대, 실질적으로 입체 이성질체가 없는 거울상 이성질체)는 라세미 혼합물을 광학 활성 분할제를 이용한 부분입체 이성질체의 형성과 같은 방법으로 분할하여 수득할 수 있다(문헌[Eliel, E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]; [Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302]). 본 발명의 키랄 화합물의 라세미 혼합물은 임의의 적당한 방법으로 분리 및 정제할 수 있는데, 그 예로는 (1) 키랄 화합물을 이용한 이온성 부분입체 이성질체 염의 형성 및 분별결정 또는 다른 방법에 의한 분리, (2) 키랄 유도체화 시약을 이용한 부분입체 이성질체 화합물의 형성, 부분입체 이성질체의 분리 및 순수 입체 이성질체로의 변환, (3) 키랄 조건 하에 예컨대 HPLC 또는 SFC(초 임계 유체 크로마토그래피)에 의해 키랄 흡착제 상에서 직접 실질적으로 순수하거나 농축된 입체 이성질체의 분리가 있다(문헌[White and Burnett (2005) Jour. of Chrom. A1074:175-185]; 및 ["Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology", (1993) Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York]).
방법 (1) 하에, 부분입체 이성질체 염은 거울상 이성질적으로 순수한 키랄 염기, 예컨대 브루신, 퀴닌, 에페드린, 스트리크닌, α-메틸-β-페닐에틸아민(암페타민) 등을 카복시산 및 설폰산과 같은 산성 작용기를 보유한 비대칭 화합물과 반응시켜 제조할 수 있다. 부분입체 이성질체 염은 분별결정 또는 이온 크로마토그래피에 의해 분리 유도될 수 있다. 아미노 화합물의 광학 이성질체 분리의 경우, 키랄 카복시산 또는 설폰산, 예컨대 캄포설폰산, 타르타르산, 만델산 또는 젖산의 첨가는 부분입체 이성질체 염을 형성시킬 수 있다.
다르게는, 방법 (2)에서는 분할할 기질을 키랄 화합물의 하나의 거울상 이성질체와 반응시켜 부분입체 이성질체 쌍을 형성한다(문헌[E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322]). 부분입체 이성질체 화합물은, 비대칭 화합물을 거울상 이성질적으로 순수한 키랄 유도체화 시약, 예컨대 멘틸 유도체와 반응시킨 뒤, 이 부분입체 이성질체를 분리하고 가수분해하여 순수한 또는 농축된 거울상 이성질체를 수득함으로써 형성할 수 있다. 광학 순도를 측정하는 방법은 염기의 존재하에 키랄 에스터, 예컨대 멘틸 에스터, 예컨대 (-) 멘틸 클로로포르메이트를 제조하거나, 또는 라세미 혼합물의 모셔 에스터, 즉 α-메톡시-α-(트라이플루오로메틸)페닐 아세테이트를 제조하고(문헌[Jacob III. J. Org. Chem. (1982) 47:4165]), 두 아트로프 이성질체성 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체의 존재에 대해 1H NMR 스펙트럼을 분석하는 것을 포함한다. 아트로프 이성질체 화합물의 안정한 부분입체 이성질체는 아트로프 이성질체성 나프틸-이소퀴놀린을 분리하는 방법에 따라 정상 및 역상 크로마토그래피로 분리 및 정제할 수 있다(WO 96/15111). 방법 (3)에 의하면, 두 거울상 이성질체의 라세미 혼합물은 키랄 정지상을 이용한 크로마토그래피로 분리할 수 있다(문헌["Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513:375-378]). 농축 또는 정제된 거울상 이성질체는 다른 키랄 분자를 비대칭 탄소 원자와 구별하는데 사용되는 방법, 예컨대 광학 회전 및 원편광 이색성 등으로 구별할 수 있다.
일반 제조 절차
도 1은 4-아미노피라졸 화합물 5의 예시적인 합성을 보여준다. 4-나이트로-1H-피라졸 1을 적절한 용매 또는 순수(neat) 상태에서 염기로 처리한 후 알킬화제, 예컨대 다이메틸 설페이트를 첨가하여 1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 2로 전환시킨다. 화합물 2를 적절한 온도, 예컨대 -78 ℃에서, 적절한 용매, 예컨대 THF (테트라하이드로퓨란) 중에서, 염기, 예컨대 리튬 헥사메틸다이실라자이드(LHMDS), 또는 nBuLi(부틸리튬)로 처리하여 5-클로로-4-나이트로-1H-피라졸 3으로 전환시킬 수 있다. 공지된 방법 하에서 직접 SnAr에 의하거나, 또는 전이 금속 촉매 작용된 교차 커플링 반응, 예컨대, 스즈키(Suzuki), 소노가시라(Sonogashira), 헥크(Heck), 부흐발트(Buchwald), 골드버그(Goldberg) 조건에 의해 화합물 3을 화합물 4로 전환시킬 수 있다. 적절한 환원 방법, 예컨대 테트라하이드로퓨란 중의 아연 분말 및 암모늄 포름에이트로 처리함에 의해, 또는 H2 및 전이 금속 촉매, 예컨대 탄소 상의 팔라듐을 사용한 수소화에 의해, 화합물 4로부터 4-아미노피라졸 5를 합성할 수 있다. 시약 R2Br 및 R2H의 R2 기는 전구체로서 중간체를 형성하여 화학식 I의 화합물을 제조한다.
도 2는 티아졸-4-카복실레이트 에스터 화합물 7로부터 2-치환된 티아졸-4-카복실산 화합물 6의 예시적인 합성을 도시한다. 7의 브롬화는 2-브로모티아졸-4-카복실레이트 에스터 화합물 8을 제공하고, 이는 스즈키 반응에 의해 팔라듐 촉매 및 예비-촉매, 및 R3-X(여기서, R3은 아릴 또는 헤테로아릴 라디칼이고, X는 보론산 또는 보로네이트 에스터 기이다) 시약과 반응하여 2-치환된 티아졸-4-카복실레이트 에스터 화합물 9를 제공한다. 상기 에스터의 수성 염기 가수분해는 6을 제공한다.
부흐발트 커플링 반응은, 부흐발트 팔라듐 촉매 반응 조건 하에서 부흐발트 예비-촉매 팔라다사이클 및 리간드 시약을 이용하여, 하기 표 및 문헌[Biscoe et al (2008) J. Am. Chem. Soc. 130:6686-6687]; [Kinzel et al (2010) J. Am. Chem. Soc. 132:14073-14075]; [Molander et al (2012) J. Am. Chem. Soc. 134:11667-11673]; [Walker et al (2004) Angew. Chem. Int. Ed. 43:1871]; [Billingsley et al (2007) Angew. Chem. Int. Ed. 46:5359-5363]; US 6946560; US 7026498; US 7247731; US 7560582; US 6307087; US 6395916; US 7223879; US 7858784(이는 본원에 참조로써 인용됨)에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다. 상기 시약은 상업적으로 입수가능하다(문헌[Johnson Matthey Inc., Wayne, PA]; [Sigma Aldrich Fine Chemical, St. Louis, MO]; [Strem Chemicals, Inc., Newburyport, MA]).
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Figure pct00015
Figure pct00016
도 2는 5-아미노티아졸-4-카복실레이트 에스터 예컨대 7의 C-2 브롬화 이후 스즈키 반응에 의한 2-치환된 4-카복시-5-아미노티아졸 6의 예시적인 합성을 도시한다. 5-아미노티아졸-4-카복실레이트 에스터 예컨대 7을 적절한 용매 중의 브롬화제, 예컨대 다이클로로메탄 중의 NBS(N-브로모석신이미드)를 사용하여 브롬화시켜 8을 제공할 수 있다. 스즈키-유형 커플링 반응은, 화학식 I의 화합물의 합성에서, 티아졸, 피리딜, 피라진일, 또는 피리미딘일 고리의 2-위치에 할라이드를 대체시킴으로써 헤테로사이클 또는 헤테로아릴을 부착시키는데 유용하다. 예를 들어, 아세토나이트릴 중에서 2-브로모(또는 클로로) 티아졸 8을 약 1.5 당량의 아릴, 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴 보론산 또는 에스터 반응제 R3-X 및 과량의 수성 탄산 나트륨과 반응시킬 수 있다. 촉매량 또는 그 이상의, 저가(low valent)의 팔라듐 반응제, 예컨대 비스(트라이페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드를 첨가한다. 다양한 보론산 또는 보론산 에스터를 반응제 R3-X의 X 기로서 사용할 수 있다. 보론산 에스터는 피나콜 에스터 (4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)을 포함한다. 또한, 헤테로사이클 또는 헤테로아릴의 질소 원자는 예를 들어 N-THP로 보호될 수 있다. 반응제 R3-X의 R3 기는 화학식 I의 화합물에서 정의된 바와 같거나 화학식 I의 화합물을 제조하는 데 유용한 전구체이다. 일부의 경우, 수성 층의 pH를 조절하기 위해 탄산 나트륨 대신에 칼륨 아세테이트가 사용된다. 상기 반응은 마이크로파 반응기, 예컨대 바이오타지 옵티마이저(Biotage Optimizer(바이오타지 인코포레이티드(Biotage, Inc.)) 내에서 10 내지 30 분 동안 압력 하에서 약 140 내지 150 ℃로 가열할 수 있다. 내용물을 에틸 아세테이트, 또는 또 다른 유기 용매로 추출한다. 유기 층을 증발시킨 후, 스즈키 커플링 생성물 9 또는 6을 실리카 상에서 또는 역상 HPLC로 정제할 수 있다.
스즈키 커플링 단계 동안 다양한 팔라듐 촉매를 사용하여 예시적인 화학식 I의 화합물을 수득할 수 있다. 저가의 Pd(II) 및 Pd(0) 촉매, 예컨대 PdCl2(PPh3)2, Pd(t-Bu)3, PdCl2 dppf CH2Cl2, Pd(PPh3)4, Pd(OAc)/PPh3, Cl2Pd[(Pet3)]2, Pd(DIPHOS)2, Cl2Pd(Bipy), [PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2, Cl2Pd[P(o-tol)3]2, Pd2(dba)3/P(o-tol)3, Pd2(dba)/P(furyl)3, Cl2Pd[P(furyl)3]2, Cl2Pd(PmePh2)2, Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2, Cl2Pd[P(C6F6)3]2, Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2, Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2, 및 캡슐화된 촉매 Pd EnCatTM 30, Pd EnCatTM TPP30, 및 Pd(II)EnCatTM BINAP30 (US 2004/0254066)을 스즈키 커플링 반응에 사용할 수 있다.
스즈키, 스즈키-미야우라, 또는 부흐발트 반응 후에 다양한 고체 흡착성 팔라듐 스캐빈저(scavenger)를 사용하여 팔라듐을 제거할 수 있다. 팔라듐 스캐빈저의 예시적인 실시양태는 플로리실(FLORISIL®), 실리아본드(SILIABOND®) 티올, 및 실리아본드(SILIABOND®) 티오우레아를 포함한다. 다른 팔라듐 스캐빈저는 실리카 겔, 조절된-기공 유리(토소하스(TosoHaas)), 및 유도체화된 저 교차결합 폴리스티렌 콰드라퓨어(QuadraPure™) AEA, 콰드라퓨어 IMDAZ, 콰드라퓨어 MPA, 콰드라퓨어 TU(리악사 리미티드[Reaxa Ltd.], 시그마 알드리치 케미칼 캄파니[Sigma-Aldrich Chemical Co.])를 포함한다.
도 3은 커플링된 피라졸-티아졸 화합물 10의 예시적인 합성을 보여준다. 적절한 용매, 예컨대 다이클로로메탄 또는 DMF 중에서, 아미드-형성(펩타이드) 커플링제, 예컨대 다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC), 다이이소프로필카보다이이미드(DIC), HATU(O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사 플루오로포스페이트), HBTU(O-(벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사 플루오로포스페이트, 또는 PyBOP((벤조트라이아졸-1-일옥시)트라이피롤리디노 포스포늄 헥사플루오로포스페이트)를 사용하여 4-아미노피라졸 화합물 5와 2-치환된 4-카복실-5-아미노티아졸 6을 커플링시켜 10에서의 아미드 결합을 형성한다(문헌[Hermanson, G. in Bioconjugate Techniques, 2nd Edition (2008) Academic Press, San Diego]). 통상의 조건 하에서 5의 Boc 및 다른 보호기가 5의 4-아미노 기로부터 제거되며, 예컨대 다이옥산 및 물 중의 HCl 또는 다이클로로메탄 중의 트라이플루오로아세트산 하에서, Boc, Fmoc 또는 다른 산-불안정성 보호기가 제거될 수 있다.
도 4는 5-클로로-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 3으로부터의 6-(4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-아민 화합물 19, 예컨대 6-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-아민(19에서 R1이 메틸인 경우)의 예시적인 합성을 보여준다. 적절한 용매, 예컨대 DMSO 중에서, 염기, 예컨대 칼륨 카보네이트의 존재 하에서 또는 문헌에 기술된 유사한 방법에 의해 3으로부터 클로로를 다이메틸 말로네이트로 대체하여, 2-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)말로네이트 화합물 11을 수득하였다. 문헌에 기술된 염기성 조건, 산성 조건 또는 두 조건 모두의 조합 하에 11을 탈카복시화하여 알킬 2-(4-나이트로-1H-피라졸-5-일)아세테이트 에스터 화합물 12를 제공하였다. 적절한 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 염기, 예컨대 나트륨 하이드라이드를 사용하여 또는 문헌에 기술된 방법에 의해 12를 알릴화하여 알킬 2-(4-나이트로-1H-피라졸-5-일)펜트-4-에노에이트 에스터 화합물 13을 제공한다. 적절한 용매, 예컨대 THF 중에서 적절한 환원제, 예컨대 DIBAL로, 또는 문헌에 기술된 방법에 의해, 13을 환원시켜서 2-(4-나이트로-1H-피라졸-5-일)펜트-4-엔-1-올 화합물 14를 수득할 수 있다. 적절한 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 염기, 예컨대 나트륨 하이드라이드를 사용하거나 문헌에 기술된 방법을 사용하여, 화학식 14의 화합물을 알릴화시켜 5-(1-(알릴옥시)펜트-4-엔-2-일)-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 15를 수득할 수 있다. 적절한 조건 하에서, 그루브(Grubb's) 또는 관련 루테늄 촉매(RCM = 루테늄-촉매된 복분해)를 사용하여, 15의 폐환 복분해시킴으로써 4-나이트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-3-일)-1H-피라졸 화합물 16을 수득하였다. 그루브 촉매 또는 윌킨슨(Wilkinson's) 촉매를 사용하여 16을 이성질화시켜 4-나이트로-5-(2,3,4,5-테트라하이드로옥세핀-3-일)-1H-피라졸 화합물 17을 수득할 수 있다. 문헌에 기술된 폐환 복분해 조건을 사용하여 화합물 15를 원 포트 절차로 17로 직접 전환시킬 수 있다. 문헌에 기술된 조건을 사용하여 17을 수소화 붕소 첨가 반응시켜 6-(4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올 화합물 18을 제공할 수 있고, 이를 케톤으로 산화시킨 다음 환원 아민화시켜, 또는 설폰화 후 아민 반응제로 대체함으로써 6-(4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-아민 화합물 19를 수득할 수 있다.
도 5는 1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 2로부터의 5-(5-아자이도-6-플루오로옥세판-2-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 26의 예시적인 합성을 보여준다. 필요한 온도에서 적절한 용매, 예컨대 THF 중에서 적절한 염기, 예컨대 리튬 헥사메틸다이실라자이드를 사용하거나 또는 문헌에 기술된 방법에 따라 2 및 펜트-4-엔올 20를 반응시켜 1-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)펜트-4-엔-1-올 화합물 21을 수득한다. 용매, 예컨대 다이옥산 중에서 적절한 촉매, 예컨대 트리스(다이벤질리덴아세톤)-다이팔라듐(0) 및 트라이페닐포스핀의 존재 하에서 또는 문헌에 기술된 방법을 사용하여 21을 비스-알릴카보네이트와 함께 가열시켜서 5-(1-(알릴옥시)펜트-4-엔일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 22를 제공한다. 적절한 용매, 예컨대 톨루엔 중에서 적절한 촉매, 예컨대 그루브 제1대 촉매(RCM)와 함께 가열하거나 문헌에 기술된 방법에 의해 22를 고리화시켜 1-치환된-4-나이트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일)-1H-피라졸 화합물 23을 수득한다. 용매, 예컨대 다이클로로메탄 중에서 에폭시화제, 예컨대 m-CPBA(메타-클로로퍼벤조산)으로 또는 문헌에 기술된 방법으로 23을 처리하여 5-(3,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 24를 제공한다. 문헌 방법에 따라 나트륨 아자이드를 사용하여 24의 에폭사이드를 개환시켜 4-아자이도-7-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올 화합물 25를 제공한다. 적절한 용매, 예컨대 DCM 중에서 또는 문헌에 기술된 방법으로 반응제, 예컨대 데옥소-플루오르®를 사용하여 25를 플루오르화시켜서 26을 제공한다.
도 6은 5-(1-(알릴옥시)펜트-4-엔일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 22로부터의 5-(5-아자이도-4-플루오로옥세판-2-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 31 및 5-(4-아자이도-5-플루오로옥세판-2-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 32의 합성을 보여준다. 적절한 용매, 예컨대 다이클로로메탄 중에서 적절한 촉매, 예컨대 그루브 제2대 촉매(RCM)를 사용하여 가열하거나 문헌에 기술된 방법으로 22를 고리화시켜서 1-치환된-4-나이트로-5-(2,3,6,7-테트라하이드로옥세핀-2-일)-1H-피라졸 화합물 27을 제공한다. 용매, 예컨대 다이클로로메탄 중에서 에폭시화제, 예컨대 m-CPBA를 사용하거나 문헌에 기술된 유사한 방법에 의해 27을 에폭시화시켜 5-(4,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-3-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 28을 제공한다. 아자이드 반응제를 사용하여 28을 처리(아자이드화)하여 개환된 화합물 5-아자이도-2-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-올 29 및 5-아자이도-7-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-올 30의 혼합물을 제공할 수 있다. 적절한 용매, 예컨대 DCM 중에서 데옥소-플루오르®(시그마-알드리치) 같은 플루오르화제로 또는 문헌에 기술된 방법으로 29 및 30을 플루오르화시켜서 각각 33 및 34를 제공한다.
도 7은 1-치환된-4-나이트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일)-1H-피라졸 화합물 23으로부터의 5-(5-아자이도-6-플루오로옥세판-2-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 35의 예시적인 합성을 보여준다. 적절한 용매, 예컨대 다이클로로메탄 중에서 분자체의 존재 하에서 N-브로모석신이미드 및 아세트 산으로 23을 처리한 후 적절한 용매, 예컨대 메탄올 중에서 칼륨 카보네이트로 처리하거나 또는 문헌에 기술된 방법으로 5-(3,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 33을 제공한다. 문헌 방법에 따라 나트륨 아자이드를 사용하여 33의 에폭사이드를 개환시켜 4-아자이도-7-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올 화합물 34를 제공한다. 용매, 예컨대 DCM 중에서 플루오르화제, 예컨대 데옥소-플루오르®를 사용하여 34를 플루오르화하거나 문헌에 기술된 방법으로 35를 제공한다.
도 8은 5-클로로-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 3으로부터의 2-메틸-N-(2-치환된-7-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)프로판-2-설핀아미드 화합물 40의 예시적인 합성을 보여준다. 용매, 예컨대 DMF 및 물 중에서 적절한 촉매, 예컨대 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)다이클로라이드 다이클로로메탄 착물의 존재 하에서, 칼륨 비닐 트라이플루오로보레이트 및 세슘카보네이트와 함께 가열하여 3을 스즈키 반응시킨 후, 생성된 알켄을 적절한 용매, 예컨대 다이클로로메탄 중에서 오존으로 처리하여 또는 문헌에 기술된 방법을 사용하여 1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-카브알데하이드 화합물 36을 수득한다. 적절한 용매, 예컨대 다이클로로메탄 중에서 36을 (R)-트라이메틸(1-(1-(트라이메틸실릴옥시)사이클로프로필)프로판-2-일옥시)실란 화합물 37 및 트라이메틸실릴 트라이플레이트로 치리하거나 또는 문헌[Minbiole et al (2005) Org. Lett. 7:515]에 기술된 방법을 사용하여 5-((5R,7R)-7-치환된-4,6-다이옥사스피로[2.5]옥탄-5-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 38을 제공한다. 용매, 예컨대 다이클로로메탄 중에서 적절한 루이스 산, 예컨대 티타늄 테트라클로라이드로 38을 처리하거나 또는 문헌에 기술된 방법을 사용하여, 재배열된 생성물, (2R,7R)-2-치환된-7-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-온 화합물 39를 제공한다. 용매, 예컨대 THF 중에서 적절한 루이스 산, 예컨대 티타늄(IV) 에톡사이드의 존재 하에서 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드와 함께 가열하여 39를 환원성 아민화시킨 후 적절한 용매 중에서 나트륨 보로하이드라이드로 처리하거나 또는 문헌에 기술된 방법을 사용하여 40을 제공한다.
도 9는 1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-카브알데하이드 화합물 36으로부터의 3급-부틸 (2R,3R,4S,5R)-5-하이드록시-3,5-다이메틸-2-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)테트라하이드로-2H-피란-4-일카바메이트 화합물 47의 예시적인 합성을 보여준다. 적절한 용매, 예컨대 클로로포름 중에서 리졸브-AlTM EuFOD(유로퓸(III)-트리스(1,1,1,2,2,3,3-헵타플루오로-7,7-다이메틸-4,6-옥탄다이오에이트), 시베르스(Sievers®) 반응제, 트리스(6,6,7,7,8,8,8-헵타플루오로-2,2-다이메틸-3,5-옥탄다이오나토)유로퓸, 시그마-알드리치 제품 번호 160938, CAS 번호 17631-68-4)의 존재 하에서 다이엔 ((1E,3Z)-1-메톡시-2-메틸펜타-1,3-다이엔-3-일옥시)트라이메틸실란 48과 함께 36을 가열하여 또는 문헌에 기술된 방법에 의해 3,5-다이메틸-2-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-2H-피란-4(3H)-온 화합물 41을 제공한다. 세륨(III) 클로라이드 헵타하이드레이트의 존재 하에서, 적절한 용매, 예컨대 메탄올 중에서 적절한 환원제, 예컨대 나트륨 보로하이드라이드로 41을 처리하거나 문헌에 기술된 유사한 방법을 사용하여 3,5-다이메틸-2-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-3,4-다이하이드로-2H-피란-4-올 화합물 42를 수득한다. 메탄올 중에서 p-톨루엔 설폰산과 함께 42를 가열하거나 문헌에 기술된 방법을 사용하여 재배열된 생성물, 5-(6-메톡시-3,5-다이메틸-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 43을 제공한다. 43을 루이스 산, 예컨대 보론 트라이플루오라이드 다이 에틸 에터레이트 및 환원제, 예컨대 트라이에틸실란으로 처리하거나 문헌에 기술된 방법을 사용하여 5-(3,5-다이메틸-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 44를 제공한다. 에폭시화제, 예컨대 m-CPBA로 44를 에폭시화하거나 문헌에 보고된 절차를 사용하여 5-(1,5-다이메틸-3,7-다이옥사바이사이클로[4.1.0]헵탄-4-일)-1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸 화합물 45를 제공한다. 문헌 방법에 따라 45의 에폭사이드를 나트륨 아자이드로 개환하여 4-아자이도-3,5-다이메틸-6-(1-치환된-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)테트라하이드로-2H-피란-3-올 화합물 46을 제공한다. THF 및 물 중의 트라이메틸포스핀으로 가열함으로써 46을 슈타우딩거(Staudinger) 아자이드 환원시킨 후, 생성된 아민을 적절한 보호기, 예컨대 문헌에 개략된 방법 및 기술된 방법을 사용하여 Boc-보호기로 보호하여 47을 제공한다.
도 10은 1-(1-치환된-4-니트로-1H-피라졸-5-일)펜트-4-엔-1-올 화합물 21로부터 3급-부틸 3-메톡시-2-메틸-7-(1-치환된-4-니트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일카바메이트 화합물 52의 예시적인 합성을 보여준다. 3-클로로부트-1-엔 또는 부트-3-엔-2-일 아세테이트에 의한 21의 팔라듐-촉매화된 O-알킬화는 5-(1-(부트-3-엔-2-일옥시)펜트-4-엔일)-1-치환된-4-니트로-1H-피라졸 화합물 49를 제공한다. 49의 그루브 촉매 폐환 반응은 1-치환된-5-(7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세판-2-일)-4-니트로-1H-피라졸 화합물 50을 제공한다. 메타-클로로퍼벤조산에 의한 50의 올레핀 에폭시화 이후 아자이드 에폭사이드 개환 반응은 4-아자이도-2-메틸-7-(1-치환된-4-니트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올 화합물 51을 제공한다. 51의 메틸 요오다이드에 의한 하이드록실 메틸화, 트라이페닐포스핀에 의한 아자이드 환원 및 Boc 보호는 화학식 I의 화합물의 제조에 중간체로서 유용한 52를 제공한다.
실시예
중간체 1. 5-클로로-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00017
4-나이트로-1-H-피라졸(5g, 44.2 Bol)을 함유하는 500 mL 환저 플라스크에 나트륨 하이드록사이드(1M, 200 mL) 및 다이메틸 설페이트(31 mL, 330 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하고, 이 혼합물을 CH2Cl2(2 x 150 mL)로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 용매를 증류하여, 1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 회색 고체로서 수득하였다(4.30 g, 76%).
WO2007/99326에 따라, 500 mL 3구-환저 플라스크에 1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(4.30 g, 33.8 mmol) 및 THF(12 mL)를 가했다. 이 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중의 리튬 헥사메틸다이실라자이드(1M, 88.4 mL, 90 mmol)를 적가 깔때기를 통해 20분에 걸쳐 적가하였다. 이 갈색 혼합물을 30분 동안 교반하고, 30분에 걸쳐 -45℃로 가온하였다. 이 혼합물을 -78℃로 다시 냉각시키고, THF(20 mL)에 용해된 헥사클로로에탄(10.5 g, 44.2 mmol)을 적가 깔때기를 통해 15분에 걸쳐 가했다. 이 혼합물을 2.5시간 동안 교반하고, -78℃에서 -40℃로 가온하고, 반응을 LCMS로 모니터링하였다. 반응이 종결되자, 이 반응물을 포화 NH4Cl의 용액(150 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL)를 가했다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 물(150 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 유기 용매를 증류하였다. 조 생성물을 플래시 크로마토그래피(CH2Cl2/ 7% MeOH)를 통해 정제하여, 5-클로로-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 회색 고체로서 수득하였다(1.40 g, 20%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (s, 1H), 3.92 (s, 3H); ESIMS m/z = 162.0 (M+1)
중간체 2. 에틸 2-아미노-2-시아노아세테이트
Figure pct00018
물(250 mL) 중의 (E)-에틸 2-시아노-2-(하이드록시이미노)아세테이트(20g, 0.14 mol)의 교반된 용액에 물 중의 NaHCO3의 포화 용액(160 mL)을 가하고, 이어서 Na2S2O4(60 g, 0.423 mol)를 가했다. 반응 혼합물을 35℃로 가온하고, 추가로 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 이를 NaCl(150 g)로 포화시키고, DCM(3 x 350 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(2 x 25 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축시켜, 에틸 2-아미노-2-시아노아세테이트를 적색 오일로서 수득하고(7.8 g, 43%), 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ (ppm): 4.45 (s, 1H), 4.34 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H); MS (ESI) m/z: 129 [M+H+].
중간체 3. 에틸 2-벤즈아미도-2-시아노아세테이트
Figure pct00019
DCM(15 mL) 중의 에틸 2-아미노-2-시아노아세테이트 화합물(0.64 g, 5 mmol)의 교반된 용액에 물(15 mL) 중의 NaHCO3의 포화 용액을 가했다. 격렬히 교반하면서, 벤조일 클로라이드(0.84 g, 6 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 주변 온도에서 추가로 30분 동안 교반하였으며, 이때 이를 DCM(3 x 15 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축시켰다. 생성 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EtOAc(5:1))로 정제하여, 에틸 2-벤즈아미도-2-시아노아세테이트(0.25 g, 22%)를 백색 고체로서 수득하였다: 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ (ppm): 7.83-7.85 (m, 2H), 7.59 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.40 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.39 (t, J = 7.0 Hz, 3H); MS (ESI) m/z: 233 [M+H+].
중간체 4. 2-(4-사이클로프로필-2-플루오로페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란
Figure pct00020
단계 A: 3-플루오로-4-나이트로페닐 트라이플루오로메탄설포네이트
무수 DCM(100.0 mL) 중의 3-플루오로-4-나이트로페닐(10.00 g, 63.65 mmol) 및 트라이플루오로메탄설폰산 무수물(20.0 mL, 119 mmol, 1.87 당량)의 교반된 용액에 0℃에서 트라이에틸아민(33.27 mL, 238.7 mmol, 3.75 당량)을 적가하였다. 생성된 갈색 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 주변 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 천천히 켄칭하고, DCM(3 x 100 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(1x)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조질 오일을, 0 내지 65% DCM/헥산으로 용리하는 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여, 15.67 g(85.1%)의 3-플루오로-4-나이트로페닐 트라이플루오로메탄설포네이트를 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.23 (t, J = 8.52 Hz, 1H), 7.34-7.27 (m, 2H).
단계 B: 4-사이클로프로필-2-플루오로-1-나이트로벤젠
톨루엔(39.5 mL) 중의 3-플루오로-4-나이트로페닐 트라이플루오로메탄설포네이트(7.15 g, 24.73 mmol), 사이클로프로필보론산(2.55 g, 29.67 mmol), [1,1'-비스, 다이클로로메탄과 착체화된 (다이페닐포스피노)-페로센]다이클로로팔라듐(II)(1:1)(1.62 g, 1.98 mmol), 및 물 중의 2M 세슘 카보네이트(19.8 mL, 39.56 mmol)의 혼합물을 20분 동안 탈기시켰다. 반응 혼합물을 90℃에서 N2 하에 2.5시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 RT로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 여액을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조질 잔사를, 0 내지 75% DCM/헥산으로 용리하는 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 여과하여, 4.11 g(91.7%)의 4-사이클로프로필-2-플루오로-1-나이트로벤젠을 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.98 (dd, J = 10.2, 6.6 Hz, 1H), 7.12 - 7.02 (m, 2H), 2.11 - 1.97 (m, 1H), 1.20 - 1.11 (m, 2H), 0.89 - 0.82 (m, 2H).
단계 C: 4-사이클로프로필-2-플루오로아닐린
4-사이클로프로필-2-플루오로-1-나이트로벤젠(3.36 g, 18.55 mmol), 분말화된 철(4.35 g, 77.9 mmol), 물 중의 2M 암모늄 클로라이드(19.8 mL) 및 EtOH:THF:H2O(3:2:1 부피비, 86 mL)의 혼합물을 N2 하에 17시간 동안 환류 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 셀라이트 패드를 에틸 아세테이트(약 50 mL)로 잘 세척하였다. 포화 수성 NaHCO3 용액을 상기 여액에 천천히 가하여, 반응 혼합물을 중화시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 200 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조질 잔사를, 0 내지 75% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리하는 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여, 2.80 g(99%)의 오렌지색 오일을 수득하였으며, 이는 20℃에서 고화되었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.75 - 6.63 (m, 3H), 3.57 (s, 2H), 1.87 - 1.72 (m, 1H), 0.93 - 0.83 (m, 2H), 0.64 - 0.51 (m, 2H) ; MS (ESI) m/z: 152.3 [M+H] +.
단계 D: 4-사이클로프로필-2-플루오로-1-요오드벤젠
0℃에서, 물(20 mL) 중의 4-사이클로프로필-2-플루오로아닐린(1.63 g, 10.78 mmol)의 교반된 혼합물에 0℃로 일정한 온도를 유지하면서 진한 황산(8.6 mL, 15.0 당량)을 적가하였다. 물(2.7 mL) 중의 나트륨 나이트라이트(781.0 mg, 11.32 mmol, 1.05 당량)의 용액을 가하고, 5분 동안 교반하였다. 이어서, 생성된 반응 혼합물을 물(9.7 mL) 중의 칼륨 아이오다이드(3.76 g, 22.64 mmol, 2.1 당량)의 용액에 가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이 냉각된 반응물에 DCM(400 mL)을 가했다. 2상 층들을 분리하고, 수성 층을 DCM(2 x 150 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화 수성 Na2S2O4, 물, 및 염수(2 x 25 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조질 잔사를, 100% 헵탄으로 용리하는 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여, 2.01 g(71.28%)의 4-사이클로프로필-2-플루오로-1-요오드벤젠을 투명한 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.57 (dd, J = 8.0, 6.9 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 9.4, 1.9 Hz, 1H), 6.64 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H), 1.94 - 1.77 (m, 1H), 1.09 - 0.95 (m, 2H), 0.79 - 0.56 (m, 2H).
단계 E: 고압 튜브에 4-사이클로프로필-2-플루오로-1-요오드-벤젠(1.32 g, 5.04 mmol), 비스피나콜 에스터 보로네이트(1.53 g, 6.04 mmol), 칼륨 아세테이트(1.98 g, 20.15 mmol), [1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센]다이클로로팔라듐(II)(368.5 mg, 0.50 mmol), 및 N,N-다이메틸포름아미드(35 mL)를 넣었다. 반응 혼합물을 N2로 15분 동안 탈기시켰다. 이 용기를 밀봉하고, 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(75 mL) 및 물(25 mL)로 희석하고, 이어서 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 2상 층들을 분리하고, 유기 층을 물 및 염수(2 x 25 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조질 잔사를, 0 내지 75% EA/헵탄으로 용리하는 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여, 859.0 mg(65.1%)의 2-(4-사이클로프로필-2-플루오로페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란을 투명한 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 (s, 1H), 6.83 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.91 - 1.81 (m, 1H), 1.33 (s, 12 H), 0.98 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 2H), 0.74 - 0.66 (m, 2H)
중간체 5. 5-클로로-1-에틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00021
중간체 1에 대한 절차에 따라, 1-에틸-4-나이트로피라졸로부터 출발하여, 5-클로로-1-에틸-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(1.3 g, 74%). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 (s, 1H), 4.26 (q, J = 7Hz, 2H), 1.50 (t, J = 7Hz, 3H).
중간체 6. 5-클로로-1-사이클로프로필메틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00022
중간체 1에 대한 절차에 따라, 1-사이클로프로필메틸-4-나이트로피라졸로부터 출발하여, 5-클로로-1-사이클로프로필메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 오일로서 수득하였다(1.16 g, 56%). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17 (s, 1H), 4.07 (d, J = 7Hz, 2H), 1.39-1.28 (m, 1H), 0.66-0.59 (m, 2H), 0.50-0.40 (m, 2H).
중간체 7. 5-클로로-1-사이클로프로필-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00023
중간체 1에 대한 절차에 따라, 1-사이클로프로필-4-나이트로피라졸로부터 출발하여 5-클로로-1-사이클로프로필-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(0.23 g, 63%). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 3.62-3.54 (m, 1H), 1.38-1.28 (m, 2H), 1.25-1.13 (m, 2H).
중간체 8. 5-클로로-1-(2,2-다이플루오로에틸)-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00024
-70℃로 냉각된 건조 THF(20 mL) 중의 1-(2,2-다이플루오로에틸)-4-나이트로-1H-피라졸(1.0 g, 5.13 mmol)의 교반된 용액에 리튬 헥사메틸다이실라자이드(THF 중의 1 M, 8.47 mL, 8.47 mmol)의 용액을 적가하였다. -70℃에서 40분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 20분에 걸쳐 -55℃로 가온하였다. -70℃로 다시 냉각시킨 후, THF(10 mL) 중의 퍼클로로에탄(1.74 g, 7.34 mmol)의 용액을 천천히 가하고, 반응 혼합물을 -70℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 포화 수성 암모늄 클로라이드 용액(30 mL) 및 이어서 물(15 mL)을 가하고, 이 혼합물을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-클로로-1-(2,2-다이플루오로에틸)-4-나이트로-1H-피라졸을 회백색 고체로서 수득하였다(438 mg, 37%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.24 (s, 1H), 6.18 (tt, J = 54.8, 4.2 Hz, 1H), 4.58 (td, J = 12.8, 4.2 Hz, 2H).
중간체 9. 5-클로로-1-사이클로프로필-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00025
중간체 8에 따라, 1-사이클로프로필-4-나이트로피라졸을 염소화하여, 5-클로로-1-사이클로프로필-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(0.23 g, 63%). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 3.62-3.54 (m, 1H), 1.38-1.28 (m, 2H), 1.25-1.13 (m, 2H).
중간체 10. 5-클로로-1-(4-메톡시벤질)-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00026
중간체 8에 따라, 1-(4-메톡시벤질)-4-나이트로-1H-피라졸을 염소화하여, 5-클로로-1-(4-메톡시벤질)-4-나이트로-1H-피라졸을 황색 고체로서 수득하였다(536 mg, 46%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.30 (s, 2H), 3.80 (s, 3H).
중간체 11. 5-브로모-4-나이트로-1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)-1H-피라졸
Figure pct00027
아세트산(5 mL) 중의 1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)-1H-피라졸-5-아민(990 mg, 6.0 mmol)이 교반된 용액에 아세트산 무수물(0.57 mL, 6.0 mmol)을 적가하고, 이 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물에 추가의 아세트산 무수물(0.57 mL, 6.0 mmol)을 가하고, 이를 빙욕 내에서 냉각시키고, 발연 질산(0.28 mL, 6 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 7시간 동안 교반하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 EtOH(15 mL)에 용해시키고, 진한 염산(10 mL)을 가했다. 이 혼합물을 16시간 동안 가열 환류시켰다. 감압 하에서 농축한 후, 잔사를 DCM(50 mL)과 5% 수성 NaHCO3 용액(100 mL) 사이에 분배하였다. 이 혼합물을 여과하고, 수성 층을 DCM(100 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 합치고, MgSO4 상에서 건조하고, 용매를 감압 하에서 제거하여, 연한 오렌지색 고체를 수득하였다(540 mg). 이 고체(540 mg, 2.57 mmol)를 브로모포름(2.9 mL, 33 mmol)에 용해시키고, 이 용액에 3급-부틸 나이트라이트(0.92 mL, 7.71 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하고, 이어서 145℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-브로모-4-나이트로-1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)-1H-피라졸을 연황색 고체로서 수득하였다(536 mg, 4단계에 걸쳐 33%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 4.86 (q, J = 7.8 Hz, 2H).
중간체 12. 5-클로로-1-에틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00028
중간체 5에 대한 절차에 따라, 1-에틸-4-나이트로피라졸로부터 출발하여, 5-클로로-1-에틸-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(1.3 g, 74%). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 (s, 1H), 4.26 (q, J = 7Hz, 2H), 1.50 (t, J = 7Hz, 3H).
중간체 13. 1-((3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-아민
Figure pct00029
MeCN(50 mL) 중의 4-나이트로피라졸(1.13 g, 10 mmol) 및 K2CO3(3.4 g, 25 mmol)의 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 후, 3-(브로모메틸)-3-메틸옥세탄(1.8 g, 11 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 여과하고, 필터 케이크를 MeCN로 세척하였다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산 구배)로 정제하여, 1-((3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(1.43 g, 73%). MeOH(20 mL)에 용해시킨 상기 고체의 일부(206 mg, 1.04 mmol)를 암모늄 포름에이트(260 mg, 4.13 mmol) 및 10% Pd/C(50 mg)로 처리하였다. 이 혼합물을 80℃로 1.5시간 동안 가열하고, 냉각시키고, 셀라이트(Celite, 등록상표)를 통해 여과하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜, 1-((3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-아민을 연분홍색 검으로서 수득하였다(160 mg, 92%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.15 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.66 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 4.37 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 4.19 (s, 2H), 2.91 (s, 2H), 1.23 (s, 3H).
중간체 14. 5-클로로-1-사이클로프로필메틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00030
중간체 5에 대한 절차에 따라, 1-사이클로프로필메틸-4-나이트로피라졸로부터 출발하여, 5-클로로-1-사이클로프로필메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 오일로서 수득하였다(1.16 g, 56%). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17 (s, 1H), 4.07 (d, J = 7Hz, 2H), 1.39-1.28 (m, 1H), 0.66-0.59 (m, 2H), 0.50-0.40 (m, 2H).
중간체 15. 5-(3,4-다이하이드로-2H-피란-6-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00031
THF(3 mL) 중의 5-클로로-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(200 mg, 1.25 mmol), 칼륨 플루오라이드 다이하이드레이트(235 mg, 2.5 mmol) 및 3,4-다이하이드로-2H-피란-6-보론산 피나콜 에스터(394 mg, 1.88 mmol)의 혼합물을 통해 15분 동안 질소를 버블링하여 탈기시켰다. 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐/3급-3급-부틸 포스포늄 테트라플루오로보레이트 혼합물(몰비: 1/1.2, 151 mg, 0.13 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 추가로 10분 동안 탈기시킨 후, 마이크로파 반응기 내에서 85℃로 2시간 동안 가열하였다. 물(10 mL)을 가하고, 이 혼합물을 EtOAc(3 x 5 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(0-5% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(3,4-다이하이드로-2H-피란-6-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 황색 고체로서 수득하였다(215 mg, 82%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 5.22 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 4.20 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.31-2.24 (m, 2H), 2.05-1.96 (m, 2H).
중간체 16. 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드
Figure pct00032
DMF(100 mL) 중의 3-클로로-2-메틸-4-나이트로-피라졸(16 g, 100 mmol), 칼륨 비닐트라이플루오로보레이트(18 g, 134 mmol) 및 세슘 카보네이트(물 중의 3.7 M, 50 mL, 190 mmol)의 용액을 통해 질소를 버블링하였다. 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)다이클로라이드 다이클로로메탄 착체(900 mg, 1.10 mmol)를 가하고, 30분 동안 계속 탈기시켰다. 반응 혼합물을 110℃로 18시간 동안 가열하였다. 추가의 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)다이클로라이드 다이클로로메탄 착체(900 mg, 1.10 mmol)를 가하고, 24시간 동안 계속 가열하였다. 추가의 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)다이클로라이드 다이클로로메탄 착체(400 mg, 0.49 mmol)를 가하고, 4시간 동안 계속 가열하였다. 이 반응물을 실온으로 냉각시키고, 염수(200 mL) 및 EtOAc(500 mL)를 가했다. 유기 층을 물(4 x 300 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-40% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 1-메틸-4-나이트로-5-비닐-1H-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(9.1 g). -78℃로 냉각된 DCM(400 mL) 중의 상기 고체(9.1 g, 59 mmol)의 용액을 통해 오존을 버블링하였다. 용액이 청색으로 되자, 오존 첨가를 종료하였다. 청색이 사라질 때까지, 이 용액에 질소를 통과시켰다. 이 혼합물을 실온으로 가온하고, 질소로 15분 동안 플러쉬시켰다. 무수 다이메틸 설파이드(5 mL)를 가하고, 이 혼합물을 실온으로 가온하였다. 12시간 동안 교반한 후, 용매를 감압 하에서 제거하였다. DCM(150 mL)을 가하고, 이 혼합물을 물(50 mL)로 세척하였다. 수성 층을 DCM(3 x 100 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 농축시켜, 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드를 황색-오렌지색 고체로서 수득하였다(6.6 g, 2단계에 걸쳐 43%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.51 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 4.23 (s, 3H).
중간체 17. 1-메틸-5-(5-메틸-6,8-다이옥사스피로[2.5]옥탄-7-일)-4-나이트로-피라졸
Figure pct00033
DCM(35 mL) 중의 1-(2-하이드록시프로필)사이클로프로판올(2.0 g, 17.2 mmol)의 용액에 0℃에서 2,6-루티딘(5 mL, 42.9 mmol) 및 이어서 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(6 mL, 32.9 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 0℃에서 추가량의 2,6-루티딘(5 mL, 42.9 mmol) 및 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(6 mL, 32.9 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 포화 수성 NaHCO3(30 mL)로 켄칭하였다. 이 혼합물을 DCM(50 mL)으로 추출하고, 유기 층을 수성 0.1 M HCl(2 x 15 mL)로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통과시켰다. 이 용액에 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드(1.40 g, 9.03 mmol)를 가하고, 생성 용액을 -78℃로 냉각시키고, 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(4.11 mL, 22.6 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 0℃로 가온하고, 3시간 동안 교반하고, -78℃로 냉각시키고, 추가의 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(4.11 mL, 22.6 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 0℃로 가온하고, 1시간 동안 교반하고, 고체 나트륨 카보네이트(2.5 g)를 가했다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 포화 수성 NaHCO3(100 mL)를 가했다. 유기 층을 물(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 1-메틸-5-(5-메틸-6,8-다이옥사스피로[2.5]옥탄-7-일)-4-나이트로-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(1.0 g, 2단계에 걸쳐 44%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.00 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 4.29-4.02 (m, 4H), 2.33-2.23 (m, 1H), 1.33 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.17-1.12 (m, 1H), 1.02-0.89 (m, 2H), 0.70-0.52 (m, 2H).
중간체 18. 2-메틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-온
Figure pct00034
DCM(20 mL) 중의 1-메틸-5-(5-메틸-6,8-다이옥사스피로[2.5]옥탄-7-일)-4-나이트로-피라졸(1.0 g, 3.95 mmol)의 용액에 -78℃에서 티타늄 테트라클로라이드(6.6 mL, 59.3 mmol)를 적가하였다. 첨가 중간 쯤에, 반응 혼합물을 교반하기 어려워져서, 추가의 DCM(10 mL)을 가했다. 이 갈색 슬러리를 0℃로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 고체 나트륨 카보네이트(5 g)를 조심스럽게 가하고, 이어서 포화 수성 NaHCO3(100 mL) 및 DCM(100 mL)을 가했다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 2-메틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-온을 무색 고체로서 수득하였다(749 mg, 75%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.69 (dd, J = 11.0, 2.4 Hz, 1H), 4.21-4.14 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.07-2.97 (m, 1H), 2.79-2.63 (m, 3H), 2.19-2.07 (m, 1H), 2.07-1.91 (m, 1H), 1.30 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
중간체 19. 2-메틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올
Figure pct00035
질소 하에 -78℃로 냉각된 THF (1 mL) 중의 2-메틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-온(65 mg, 0.26 mmol)의 용액에 L-셀렉트라이드(THF 중의 1 M, 0.28 mL, 0.28 mmol)의 용액을 적가하였다. 1시간 후, 이 혼합물을 MeOH(1 mL)로 켄칭하고, 실온으로 가온하였다. EtOAc(10 mL) 및 염수(10 mL)를 가하고, 층들을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc(3 x 10 mL)로 추출하고, 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 2-메틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올을 무색 고체로서 수득하였다(54 mg, 81%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (2s, 1 H), 5.63-5.59 및 5.56-5.50 (2m, 1H), 4.26-4.01 (m, 5H), 3.88-3.73 (m, 1H), 2.21-1.72 (m, 4H), 1.28-1.23 (m, 3H), 0.99-0.81 (m, 2H).
중간체 20. 5-(1-알릴옥시펜트-4-엔일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸
Figure pct00036
THF(250 mL) 중의 1-메틸-4-나이트로-피라졸(9.7 g, 76.7 mmol) 및 펜트-4-엔알(10.0 g, 84.4 mmol)의 용액에 -78℃에서 THF 중의 LiHMDS의 용액(1 M, 192 mL, 191.7 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -40℃로 가온하고, 4시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 암모늄 클로라이드의 포화 용액(100 mL)으로 켄칭하고, 실온으로 가온하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 EtOAc(100 mL)에 용해시키고, 물(30 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-30% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 투명한 오일을 수득하였다. 질소 하에 상기 오일(7.1 g, 33.6 mmol), 다이알릴 카보네이트(14.33 g, 100.9 mmol) 및 트라이페닐포스핀(880 mg, 3.35 mmol)을 다이옥산(236 mL)에 용해시킨 후, 트리스(다이벤질리덴아세톤)-다이팔라듐(0)(780 mg, 0.84 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 가열하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-40% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(1-알릴옥시펜트-4-엔일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 황색 오일로서 수득하였다(8.35 g, 2단계에 걸쳐 43%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 5.90-5.73 (m, 2H), 5.46 (dd, J = 8.8, 5.1 Hz, 1H), 5.29-5.16 (m, 2H), 5.10-5.00 (m, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.92 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 2.37-2.25 (m, 1H), 2.22-2.09 (m, 1H), 2.09-1.96 (m, 1H), 1.84 (dddd, J = 13.7, 9.2, 6.9, 5.1 Hz, 1H).
중간체 21. 1-메틸-4-나이트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일)피라졸
Figure pct00037
5-(1-알릴옥시펜트-4-엔일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(5 g, 19.92 mmol)을 톨루엔(1 L)에 용해시키고, 이 혼합물을 30분 동안 탈기시킨 후, 벤질리덴-비스(트라이사이클로헥실포스핀)다이클로로루테늄, 비스(트라이사이클로헥실포스핀)벤질리딘 루테늄(IV) 다이클로라이드, 및 "그럽스(Grubbs) 1세대 촉매"(CAS 번호 172222-30-9, 시그마 알드리치(Sigma-Aldrich) 제품 번호 579726, US 6,111,121)(878 mg, 0.99 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 추가로 20분 동안 탈기시키고, 이어서 가열 환류시켰다 2시간 동안, 실온으로 냉각시키고, 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 EtOAc(200 mL)에 용해시키고, 수성 1 M HCl(150 mL), 물(150 mL), 포화 수성 NaHCO3(2 x 150 mL) 및 염수(150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-20% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 1-메틸-4-나이트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일)피라졸을 투명한 오일로서 수득하였다(3.3 g, 75%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.99-5.91 (m, 1H), 5.83-5.76 (m, 1H), 5.59 (dd, J = 9.4, 3.0 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 15.8, 5.5 Hz, 1H), 4.24-4.17 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.58-2.48 (m, 1H), 2.46-2.36 (m, 1H), 2.14 (ddt, J = 14.1, 6.8, 3.5 Hz, 1H), 1.99-1.88 (m, 1H).
중간체 22. 7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3,4-다이올
Figure pct00038
3급-부탄올(5.4 mL) 및 물(5.5 mL) 중의 AD-mix α(1.51 g)의 용액에 0℃에서 3급-부탄올(0.8 mL) 중의 1-메틸-4-나이트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일)피라졸(240 mg, 1.08 mmol)의 용액을 가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 고체 나트륨 티오설페이트(1.4 g)를 천천히 가했다. 이 혼합물을 추가로 1시간 동안 교반하고, EtOAc(20 mL)로 희석하였다. 수성 층을 EtOAc(4 x 15 mL)로 추출하고, 유기 층을 합치고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-2.5% MeOH/EtOAc)를 통해 정제하여, 7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3,4-다이올을 무색 고체로서 수득하였다(30 mg, 10%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06-7.98 (m, 1H), 5.49 (dd, J = 8.9, 5.7 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 13.7, 3.2 Hz, 1H), 4.16-4.10 (m, 1H), 4.09 (s, 3H), 4.04-3.97 (m, 1H), 3.73 (dd, J = 13.7, 2.5 Hz, 1H), 2.53-2.46 (m, 1H), 2.32 (dtd, J = 14.3, 8.8, 4.9 Hz, 1H), 2.23 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.19-2.01 (m, 2H), 1.84-1.75 (m, 1H).
중간체 23. 1-메틸-5-(5-에틸-6,8-다이옥사스피로[2.5]옥탄-7-일)-4-나이트로-피라졸
Figure pct00039
질소 하에 THF(100 mL) 중의 (3R)-에틸 3-하이드록시부타노에이트(2.5 g, 18.9 mmol)의 용액에 THF(15 mL) 중의 티타늄(IV) 이소프로폭사이드(6.02 mL, 19.9 mmol)의 용액 및 이어서 다이에틸 에터(3 M, 30.2 mL, 90.7 mmol) 중의 에틸 마그네슘 브로마이드의 용액을 2시간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 추가로 2시간 동안 교반한 후, 0℃로 냉각시키고, 포화 수성 암모늄 클로라이드(75 mL)를 천천히 가하여 켄칭하였다. 이 용액을 여과하고, 여액을 DCM(3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(75 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 1-[(2R)-2-하이드록시부틸]-사이클로프로판올을 황색 오일로서 수득하였다(1.50 g). 0℃로 냉각된 DCM(15 mL) 중의 상기 오일(900 mg, 7.76 mmol)의 용액에 2,6-루티딘(2.26 mL, 19.40 mmol) 및 이어서 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(3.1 mL, 17.10 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 추가의 2,6-루티딘(2.26 mL, 19.40 mmol) 및 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(3.1 mL, 17.10 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 0℃로 냉각하고, 0.1 M 수성 HCl(15 mL)로 켄칭하고, DCM(50 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 0.1 M 수성 HCl(2 x 15 mL)로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통과시켰다. 이 용액에 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드(1.90 g, 7.13 mmol)를 가하고, 생성 용액을 -78℃로 냉각시킨 후, 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(0.64 mL, 3.56 mmol)를 적가하였다. 이 혼합물을 0℃로 가온하고, 3시간 동안 교반한 후, -78℃로 냉각시키고, 추가의 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(1 mL, 5.49 mmol)를 가했다. 0℃에서 3시간 동안 교반한 후, 상기 절차를 반복하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 추가로 2시간 동안 교반한 후, 고체 나트륨 카보네이트(2.5 g)를 가했다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, NaHCO3의 포화 용액(10 mL)을 가했다. 유기 층을 물(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 1-메틸-5-(5-에틸-6,8-다이옥사스피로[2.5]옥탄-7-일)-4-나이트로-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(655 mg, 3단계에 걸쳐 4%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.00 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.13 (s, 3H), 4.00-3.92 (m, 1H), 2.29 (t, J = 12.4 Hz, 1H), 1.75-1.47 (m, 3H), 1.00-0.87 (m, 5H), 0.67-0.53 (m, 2H).
중간체 24. 2-에틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-온
Figure pct00040
중간체 5에 대한 절차에 따라, 1-메틸-5-(5-에틸-6,8-다이옥사스피로[2.5]옥탄-7-일)-4-나이트로-피라졸로부터 출발하여, 2-에틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-온을 무색 고체로서 수득하였다(240 mg, 2단계에 걸쳐 13%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 5.67 (dd, J = 11.0, 2.4 Hz, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.94 (dd, J = 10.2, 5.2 Hz, 1H), 3.04 (td, J = 13.3, 3.3 Hz, 1H), 2.79-2.63 (m, 3H), 2.20-2.12 (m, 1H), 2.05-1.92 (m, 1H), 1.67-1.57 (m, 2H), 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
중간체 25. N-(2-에틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)-2-메틸-프로판-2-설핀아미드
Figure pct00041
THF(3 mL) 중의 2-에틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-온(120 mg, 0.45 mmol)의 용액에 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(70 mg, 0.58 mmol) 및 이어서 티타늄(IV) 에톡사이드(0.30 mL, 1.12 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 4시간 동안 가열 환류시키고, 이어서 실온으로 냉각시켰다. -60℃에서, 이 조질 용액을 THF(3 mL) 중의 나트륨 보로하이드라이드(69 mg, 1.80 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온하고, MeOH(3 mL) 및 염수(50 mL)로 켄칭하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하고, EtOAc(200 mL)로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc(3 x 50 mL)로 추출하고, 합친 유기 층을 염수(150 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-10% MeOH/DCM)를 통해 정제하여, N-(2-에틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)-2-메틸-프로판-2-설핀아미드를 부분입체 이성질체들의 혼합물로서(5:2 비) 무색 고체로서 수득하였다(118 mg, 2단계에 걸쳐 71%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 및 8.02 (2s, 1H), 5.60-5.51 (m, 1H), 4.08 및 4.06 (2s, 3H), 3.83-3.66 (m, 2H), 3.62-3.50 (m, 1H), 3.22 및 3.15 (d, J = 6.2 및 4.0 Hz, 1H), 2.11-1.96 (m, 4H), 1.76 (s, 1H), 1.63-1.54 (m, 2H), 1.28-1.15 (m, 9H), 0.91 (td, J = 7.4, 2.4 Hz, 3H).
중간체 26. N-(2-메틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)-2-메틸-프로판-2-설핀아미드
Figure pct00042
중간체 13에 대한 절차에 따라, 2-메틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-온으로부터 출발하여, N-(2-메틸-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)-2-메틸-프로판-2-설핀아미드를 회백색 고체로서 수득하였다(208 mg, 2단계에 걸쳐 40%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.63-5.51 (m, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.86-3.72 (m, 2H), 3.19-3.11 (m, 1H), 2.22-1.69 (m, 6H), 1.29-1.20 (m, 12H).
중간체 27. 3-알릴옥시-3-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)프로판산
Figure pct00043
건조 Et2O(120 mL) 중의 아연 가루(<10 μm, 10.3 g, 159 mmol)의 현탁액에 트라이메틸실릴 클로라이드를 몇 방울 가하여, 반응을 개시하였다. 이어서, 반응 혼합물을 5분 동안 가열 환류시키고, 몇 방울의 1,2-다이브로모에탄을 조심스럽게 가했다. 3급-부틸 2-브로모아세테이트의 용액(18.8 mL, 127 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 가열 환류시켰다. 실온에서 THF(120 mL) 중의 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드(DMSO 중의 77 중량%, 6.4 g, 31.8 mmol)의 용액을 가하고, 150분 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(200 mL) 및 포화 암모늄 클로라이드/1 M HCl(100 mL/100 mL)로 희석하고, 18시간 동안 교반하였다. 층들을 분리하고, 수성 층을 EtOAc(3 x 200 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 3-하이드록시-3-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)프로판오에이트를 무색 고체로서 수득하였다(6.52 g, 77%). 다이옥산(168 mL) 중의 상기 고체(6.52 g, 24 mmol)의 용액에 비스알릴카보네이트(10.2 g, 72 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 질소로 30분 동안 탈기시켰다. 트리스(다이벤질리덴아세톤)-다이팔라듐(0)(557 mg, 0.60 mmol) 및 트라이페닐포스핀(630 mg, 2.40 mmol)을 한꺼번에 가하고, 15분 동안 계속 탈기시켰다. 반응 혼합물을 65℃로 1시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. 염수(100 mL) 및 EtOAc(150 mL)를 가하고, 층들을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc(3 x 150 mL)로 추출하고, 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 3-(알릴옥시)-3-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)프로판오에이트를 무색 고체로서 수득하였다(7.7 g, 99%). DCM(80 mL) 중의 상기 고체(7.7 g, 24 mmol)의 용액에 TFA(40 mL)를 가하고, 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후, 거품발생이 끝날 때까지, 나트륨 카보네이트(5 g), 포화 수성 NaHCO3(100 mL) 및 DCM(200 mL)을 조심스럽게 가했다. 이 용액이 pH 4가 될 때까지, 진한 HCl을 천천히 가했다. 수성 층을 DCM(3 x 200 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켜, 3-알릴옥시-3-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)프로판산을 황색 오일로서 수득하였다(4.33 g, 3단계에 걸쳐 55%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.5-10.3 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 5.90-5.78 (m, 3H), 5.28-5.18 (m, 1H), 4.07 (s, 3H), 4.06-3.96 (m, 2H), 2.99 (dd, J = 16.2, 9.3 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 16.2, 4.3 Hz, 1H).
중간체 28. 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3,7-다이하이드로-2H-옥세핀-4-온
Figure pct00044
0℃에서 질소 하에, DCM(48 mL) 중의 3-알릴옥시-3-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)프로판산(4.33 g, 17 mmol)의 용액에 옥살일 클로라이드(4.37 mL, 51 mmol)를 가하고, 이어서 DMF(0.05 mL)를 조심스럽게 가하여, 아실화를 개시하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 DME(28 mL)에 용해시키고, 비닐트라이부틸주석(2.48 mL, 8.50 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 질소로 30분 동안 탈기시켰다. 트랜스-벤질(클로로)-비스(트라이페닐포스핀)팔라듐(II)(129 mg, 0.17 mmol)을 가하고, 10분 동안 계속 탈기시켰다. 반응 혼합물을 65℃로 1시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(알릴옥시)-5-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)펜트-1-엔-3-온을 황색 시럽으로서 수득하였다(2.76 g, 61%). 톨루엔(90 mL) 중의 상기 시럽(250 mg, 0.94 mmol)의 용액을 35℃에서 30분 동안 질소로 탈기시켰다. 톨루엔(2 mL)에 용해된 잔(Zhan) 1B 촉매(26 mg, 0.04 mmol)를 반응 혼합물에 가하고, 15분 동안 계속 탈기시켰다. 35℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3,7-다이하이드로-2H-옥세핀-4-온을 무색 고체로서 수득하였다(107 mg, 3단계에 걸쳐 30%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 6.44 (ddd, J = 12.8, 3.4, 2.3 Hz, 1H), 6.15 (m, 1H), 6.01 (dd, J = 11.1, 3.4 Hz, 1H), 4.72 (ddd, J = 19.8, 3.4, 1.7 Hz, 1H), 4.61 (ddd, J = 19.6, 2.4 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 3.20-3.12 (m, 2H).
중간체 29. 5-(6-아자이도-4,4-다이플루오로-옥세판-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(부분입체 이성질체 1)
Figure pct00045
MeCN(3 mL) 중의 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3,7-다이하이드로-2H-옥세핀-4-온(440 mg, 0.42 mmol)의 용액에 앰버라이트(Amberlite) IRA 900F 수지(79 mg, 0.19 mmol) 및 트라이메틸실릴아자이드(1.2 mL, 9.35 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 폭발(blast) 스크린 뒤에서 65℃로 24시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 생성물 및 출발 물질을 함유하는 혼합된 분획과 함께, 순수한 6-아자이도-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-온을 수득하였다. 이를 감압 하에서 농축시키고, 동일한 반응 조건으로 처리하였다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 최종 정제하여, 6-아자이도-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-온을 무색 고체로서 수득하였다(449 mg). 상기 고체(449 mg, 1.60 mmol)에 데옥소-플루오르(Deoxo-Fluor, 등록상표)(THF 중의 50%, 5 mL)를 가하고, 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. DCM(50 mL)을 가하고, 반응 혼합물 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 포화 수성 NaHCO3(30 mL)을 조심스럽게 가했다. 수성 층을 DCM(3 x 30 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(6-아자이도-4,4-다이플루오로-옥세판-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(부분입체 이성질체 1 - 다량)을 무색 고체로서 수득하였다(264 mg, 2단계에 걸쳐 47%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 5.67-5.58 (m, 1H), 4.18-3.91 (m, 3H), 4.08 (s, 3H), 2.79-2.63 (m, 1H), 2.63-2.40 (m, 3H).
중간체 30. 5-(6-아자이도-4,4-다이플루오로-옥세판-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(부분입체 이성질체 2)
Figure pct00046
중간체 17에 대한 절차에 따라, 또한 5-(6-아자이도-4,4-다이플루오로-옥세판-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(부분입체 이성질체 2 - 소량)을 무색 고체로서 수득하였다(69 mg, 2단계에 걸쳐 12%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.73 (dd, J = 10.9, 4.5 Hz, 1H), 4.34-4.29 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 4.01-3.93 (m, 1H), 3.53 (dd, J = 11.4, 11.4 Hz, 1H), 2.71-2.49 (m, 4H).
중간체 32. 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸
Figure pct00047
DCM(25 mL) 중의 1-메틸-4-나이트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일)피라졸(1.00 g, 4.74 mmol)의 용액에 m-CPBA(70-75%, 1.75 g, 7.11 mmol)를 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 mL)으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3(50 mL), 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-30% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 라세미체 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(490 mg, 43%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22-7.87 (m, 1H), 5.07 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 4.50 (dd, J = 14.5, 3.1 Hz, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.93 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.35 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 3.13 (t, J = 3.6 Hz, 1H), 2.55-2.47 (m, 1H), 2.31-2.21 (m, 1H), 2.16-2.04 (m, 1H), 1.79 (dd, J = 14.4, 1.8 Hz, 1H).
중간체 33. 3급-부틸 N-(4-메톡시-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-일]카바메이트
Figure pct00048
MeOH/물(6 mL/1.2 mL) 중의 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(220 mg, 0.92 mmol)(중간체 19)의 용액을 암모늄 클로라이드(122 mg, 2.30 mmol) 및 나트륨 아자이드(299 mg, 4.60 mmol)로 처리하고, 이 혼합물을 폭발 스크린 뒤에서 70℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(100 mL)로 추출하고, 유기 층을 물(2 x 50 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사(500 mg, 1.77 mmol)를 건조 DMF(15 mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중 60%, 106 mg, 2.66 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 요오드메탄(0.17 mL, 2.66 mmol)을 가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 물(20 mL)을 가하고, 이 혼합물을 EtOAc(2 x 150 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-30% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 4-아자이도-5-메톡시-1-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)아제판을 황색 오일로서 수득하였다(280 mg). THF/물(13 mL/2.5 mL) 중의 상기 오일(270 mg, 0.91 mmol)의 용액을 트라이페닐포스핀(263 mg, 1.00 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물을 폭발 스크린 뒤에서 70℃로 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 0℃에서 잔사를 건조 DCM(15 mL)에 용해시키고, 다이-3급-부틸-다이카보네이트(238 mg, 1.09 mmol) 및 이어서 DIPEA(0.66 mL, 4.55 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 3시간 동안 교반한 후, 물(20 mL)로 켄칭하고, DCM(100 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-40% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 4개의 부분입체 이성질체를 단리하였다. 소 분획으로부터 3급-부틸 N-(4-메톡시-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-일]카바메이트(라세미체)를 무색 고체로서 수득하였다(60 mg, 4단계에 걸쳐 17%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.58-5.51 (m, 1H), 4.82 (br s, 1H), 4.31 (dd, J = 12.7, 3.0 Hz, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.87 (br s, 1H), 3.62-3.48 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 2.28-2.09 (m, 2H), 2.03-1.83 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
중간체 34. 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-3-메톡시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00049
중간체 20에 대한 절차에 따라, 단리된 주된 분획(290 mg)을 키랄 SFC를 통해 정제하여, 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-3-메톡시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트를 무색 고체로서 수득하였다(101 mg, 4단계에 걸쳐 29%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.39 (dd, J = 10.6, 3.6 Hz, 1H), 4.75 (br s, 1H), 4.33 (dd, J = 14.2, 1.9 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.91-3.83 (m, 1H), 3.75 (dd, J = 14.2, 3.2 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.39-3.34 (m, 1H), 2.22-2.12 (m, 1H), 2.12-2.03 (m, 1H), 2.03-1.82 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
중간체 35. 3급-부틸 ((3R,4S,7R)-3-메톡시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00050
중간체 21에 대한 절차에 따라, 또한 3급-부틸 ((3R,4S,7R)-3-메톡시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트를 무색 고체로서 수득하였다(101 mg, 4단계에 걸쳐 29%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05-7.99 (m, 1H), 5.39 (dd, J = 10.6, 3.6 Hz, 1H), 4.75 (br s, 1H), 4.33 (dd, J = 14.2, 1.9 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.90-3.82 (m, 1H), 3.75 (dd, J = 14.2, 3.2 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.42-3.31 (m, 1H), 2.22-2.12 (m, 1H), 2.12-2.03 (m, 1H), 2.03-1.83 (m, 2H), 1.62-1.29 (m, 9H).
중간체 36. 3급-부틸 N-(3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00051
MeOH/물(3 mL/0.6 mL) 중의 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(130 mg, 0.54 mmol)(중간체 19)의 용액을 암모늄 클로라이드(72 mg, 1.35 mmol) 및 나트륨 아자이드(177 mg, 2.72 mmol)로 처리하고, 이 혼합물을 폭발 스크린 뒤에서 70℃로 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(100 mL)로 추출하고, 유기 층을 물(3 x 20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. DCM(3 mL) 중의 생성 잔사(100 mg, 0.35 mmol)의 용액에 데옥소-플루오르(등록상표)(THF 중의 50%, 0.32 mL, 0.89 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 DCM(30 mL)으로 희석하고, 빙수 욕 내에서 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3(30 mL)를 적가하여 켄칭하였다. 생성 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-40% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 오일을 수득하였다(90 mg). THF/물(4 mL/0.8 mL) 중의 상기 오일(90 mg, 0.35 mmol)의 용액을 트라이페닐포스핀(92 mg, 0.35 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 폭발 스크린 뒤에서 70℃로 18시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 0℃에서 건조 DCM(7 mL)에 용해시키고, 다이-3급-부틸-다이카보네이트(84 mg, 0.38 mmol) 및 DIPEA(0.22 mL, 1.6 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 물(10 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-40% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 거울상 이성질체의 혼합물로서의 3급-부틸 N-(3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트를 회백색 고체로서 수득하였다(70 mg, 4단계에 걸쳐 36%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.55-5.49 (m, 1H), 5.10-4.92 (m, 2H), 4.36-4.09 (m, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.97-3.83 (m, 1H), 2.32-2.18 (m, 1H), 2.02-1.89 (m, 2H), 1.83 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H).
중간체 37. 3급-부틸 ((3R,4R,7S)-3-플루오로-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00052
3급-부틸 N-(3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트를 키랄 SFC를 통해 추가로 정제하여, 3급-부틸 ((3R,4R,7S)-3-플루오로-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트를 회백색 고체로서 수득하였다(52 mg). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.55-5.49 (m, 1H), 5.09-4.91 (m, 2H), 4.36-4.10 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.91 (ddd, J = 26.6, 14.4, 2.2 Hz, 1H), 2.31-2.19 (m, 1H), 2.02-1.95 (m, 2H), 1.83 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H).
중간체 38. 3급-부틸 ((3S,4S,7R)-3-플루오로-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00053
중간체 24에 대한 절차에 따라, 또한 3급-부틸 ((3S,4S,7R)-3-플루오로-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트를 회백색 고체로서 수득하였다(61 mg). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.55-5.49 (m, 1H), 5.10-4.92 (m, 2H), 4.36-4.09 (m, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.97-3.83 (m, 1H), 2.32-2.18 (m, 1H), 2.02-1.89 (m, 2H), 1.83 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H).
중간체 39. 5-(4,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-5-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸
Figure pct00054
5-(1-알릴옥시펜트-4-엔일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(7.08 g, 28.2 mmol)을 DCM(910 mL)에 용해시키고, 이 혼합물을 30분 동안 탈기시킨 후, 그럽스 2세대 촉매(1.19 g, 1.41 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 40℃로 18시간 동안 가열하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-10% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하고, 이어서 역상 분취용 HPLC로 처리하여, 1-메틸-4-나이트로-5-(테트라하이드로옥세핀-2-일)피라졸(66/34)의 이성질체들의 혼합물을 투명한 오일로서 수득하였다(2.3 g). DCM(50 mL) 중의 상기 오일(2.3 g, 10.31 mmol)의 용액에 m-CPBA(70-75%, 3.56 g, 14.40 mmol)를 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 mL)으로 희석하고, 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(2 x 50 mL), 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-30% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(4,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-5-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(1.0 g, 2단계에 걸쳐 14%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.51-5.44 (m, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.93 (dt, J = 12.7, 3.4 Hz, 1H), 3.62-3.53 (m, 1H), 3.35-3.27 (m, 2H), 2.58-2.51 (m, 1H), 2.41-2.25 (m, 3H).
중간체 40. 5-아자이도-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올
Figure pct00055
MeOH:물(4:1, 30 mL) 중의 5-(4,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-5-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(1.04 g, 4.35 mmol)의 용액에 암모늄 클로라이드(0.58 g, 10.88 mmol) 및 나트륨 아자이드(1.41 g, 21.75 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 폭발 스크린 뒤에서 70℃로 16시간 동안 가열하였다. MeOH를 감압 하에서 제거하고, EtOAc(20 mL)를 가했다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(20 mL)로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(0-60% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-아자이도-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올을 연황색 검으로서 수득하였다(718 mg, 58% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 5.76 (dd, J = 9.3, 3.2 Hz, 1H), 4.18-4.10 (m, 1H), 4.08-4.04 (m, 4H), 3.91 (ddd, J = 9.4, 6.6, 6.2 Hz, 1H), 3.79 (ddd, J = 12.6, 8.6, 3.5 Hz, 1H), 2.44 (ddd, J = 15.3, 9.4, 3.8 Hz, 1H), 2.37-2.29 (m, 1H), 2.24 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 2.12 (ddd, J = 15.3, 5.7, 3.2 Hz, 1H), 2.06-1.96 (m, 1H).
중간체 41. 5-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올
Figure pct00056
중간체 26에 대한 절차에 따라, 또한 5-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올을 연황색 검으로서 수득하였다(285 mg, 23% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 5.64 (dd, J = 10.8, 1.4 Hz, 1H), 4.06-3.96 (m, 4H), 3.95-3.83 (m, 2H), 3.72 (ddd, J = 10.8, 9.0, 4.9 Hz, 1H), 2.43 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 2.28 (ddd, J = 14.1, 4.9, 1.4 Hz, 1H), 2.21-2.12 (m, 2H), 2.09-2.00 (m, 1H).
중간체 42. 3급-부틸 N-(5-플루오로-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00057
0℃로 냉각된 DCM(6 mL) 중의 5-아자이도-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올(282 mg, 1.00 mmol)의 용액에 데옥소-플루오르(등록상표)의 용액(THF 중의 50%, 0.46 mL, 1.25 mmol)을 적가하였다. 이 혼합물을 실온으로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 추가의 데옥소-플루오르(등록상표)(THF 중의 50%, 0.23 mL, 0.63 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 빙욕 내에서 냉각시킨 후, 포화 수성 NaHCO3(10 mL)를 천천히 가했다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)을 통해 정제하여, 상기 플루오로 화합물을 투명한 검으로서 수득하였다(205 mg). THF(5 mL) 및 물(1 mL) 중의 상기 검(200 mg, 0.70 mmol)의 용액에 트라이페닐포스핀(202 mg, 0.77 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 60℃로 2시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 EtOAc(10 mL)로 희석하고, 염수(2 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 DCM(2 mL)에 용해시키고, DIPEA(0.24 mL, 1.40 mmol) 및 다이-3급-부틸 다이카보네이트(183 mg, 0.84 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물(2 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(3 x 2 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 N-(5-플루오로-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트를 투명한 검으로서 수득하였다(240 mg, 3단계에 걸쳐 66%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.62 (dd, J = 11.3, 2.3 Hz, 1H), 5.28-4.79 (m, 2H), 4.29-4.19 (m, 1H), 4.15-4.07 (m, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.77 (ddd, J = 12.9, 8.1, 4.5 Hz, 1H), 2.41-2.07 (m, 3H), 2.04 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.44 (s, 9H).
중간체 43. 3급-부틸 N-(5-메톡시-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00058
질소 하에 0℃로 냉각된 건조 THF(6 mL) 중의 5-아자이도-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올(352 mg, 1.25 mmol)의 용액에 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중 60%, 55 mg, 1.38 mmol)를 가했다. 20분 동안 교반한 후, 요오드메탄(0.09 mL, 1.38 mmol)을 가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 90분 동안 교반하였다. 이 혼합물을 0℃로 재냉각시키고, 추가의 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중 60%, 55 mg, 1.38 mmol)를 가했다. 20분 동안 교반한 후, 추가의 요오드메탄(0.09 mL, 1.38 mmol)을 가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 5시간 동안 교반하였다. 물(5 mL)을 가하고, 이 혼합물을 EtOAc(3 x 5 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 중간체인 메틸 에터를 투명한 검으로서 수득하였다(155 mg). THF/물(5 mL/1 mL) 중의 상기 검(154 mg, 0.52 mmol)의 용액을 트라이페닐포스핀(150 mg, 0.57 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물을 폭발 스크린 뒤에서 60℃로 2시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 EtOAc(10 mL)로 희석하고, 염수(2 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 건조 DCM(2 mL)에 용해시키고, DIPEA(0.18 mL, 1.04 mmol) 및 다이-3급-부틸-다이카보네이트(136 mg, 0.62 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 물(2 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(3 x 2 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 N-(5-메톡시-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트를 투명한 검으로서 수득하였다(190 mg, 3단계에 걸쳐 41%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 5.67 (dd, J = 10.5, 2.0 Hz, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 4.06 (s, 3H), 4.02-3.84 (m, 2H), 3.62 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 2.52 (dddd, J = 15.1, 9.9, 7.5, 2.1 Hz, 1H), 2.20-2.01 (m, 2H), 1.90-1.78 (m, 1H), 1.48 (s, 9H).
중간체 44. 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-4-온
Figure pct00059
CDCl3 (20 mL) 중의 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드(600 mg, 3.87 mmol)의 용액에 다니세프스키(Danishefsky)의 다이엔(836 mg, 5.81 mmol) 및 리졸브(Resolve)-Al(상표명) EuFOD(157 mg, 0.39 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 80℃로 24시간 동안 가열하였다. 추가의 리졸브-Al(상표명) EuFOD(250 mg, 0.62 mmol)를 가하고, 추가로 24시간 동안 계속 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-2H-피란-4(3H)-온을 황색 고체로서 수득하였다(710 mg, 82%). 상기 고체(300 mg, 1.35 mmol)의 일부를 질소 하에 THF(10 mL)에 용해시키고, -78℃로 냉각시켰다. L-셀렉트라이드의 용액(THF 중의 1 M, 1.48 mL, 1.48 mmol)을 적가하고, 이 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 이 혼합물을 MeOH(2 mL)로 켄칭하고, 실온으로 가온하였다. EtOAc(30 mL) 및 염수(30 mL)를 가하고, 층들을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하고, 이어서 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-4-온을 무색 고체로서 수득하였다(224 mg, 2단계에 걸쳐 61%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 5.70 (dd, J = 11.8, 3.3 Hz, 1H), 4.49 (ddd, J = 11.8, 7.5, 1.3 Hz, 1H), 4.15 (s, 3H), 3.94-3.86 (m, 1H), 2.83-2.63 (m, 3H), 2.58-2.50 (m, 1H).
중간체 45. 7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올
Figure pct00060
-70℃에서 DCM(12 mL) 중의 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-4-온(300 mg, 1.33 mmol)의 용액에 붕소 트라이플루오라이드 에터레이트(0.75 mL, 1.73 mmol)를 적가하고, 이어서 (트라이메틸실릴)다이아조메탄 용액(헥산 중의 2 M, 0.87 mL, 1.73 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 -70℃에서 90분 동안 교반하고, 물(10 mL)로 켄칭하고, DCM(12 mL)으로 희석하고, 실온으로 가온하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 무색 고체로서 7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-온(121 mg) 및 이의 입체 이성질체인 2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-온(151 mg)을 수득하였다. 0℃에서 MeOH(5 mL) 중의 7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-온(121 mg, 0.51 mmol)의 용액에 NaBH4(23 mg, 0.61 mmol)를 적가하였다. 1시간 동안 계속 교반하고, 반응 혼합물을 1 M HCl(5 mL) 및 EtOAc(10 mL)로 켄칭하였다. 수성 층을 EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하고, 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켜, 부분입체 이성질체들의 1:1 혼합물로서 7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올을 무색 오일로서 수득하였다(85 mg, 2단계에 걸쳐 27%). 부분입체 이성질체들의 1:1 혼합물로서의 생성물을추가의 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 및 8.01 (s, 1H), 5.61-5.56 및 5.54-5.50 (m, 1H), 4.26-4.14 (m, 1H), 4.07 및 4.04 (s, 3H), 3.90-3.80 및 3.81-3.63 (m, 1H), 2.20-1.80 (m, 8H).
중간체 46. 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸
Figure pct00061
DCM(18 mL) 중의 1-메틸-4-나이트로-5-(2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일)피라졸(1.0 g, 4.5 mmol)의 용액에 3Å 분자체 및 이어서 NBS(0.80 g, 4.48 mmol) 및 아세트산(0.26 mL, 4.48 mol)을 가했다. 반응 혼합물을 실온에서 60시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 DCM(30 mL)으로 희석하고, 물(15 mL), 포화 수성 NaHCO3(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 위치 이성질체들의 혼합물로서 중간체인 브로모아세테이트를 투명한 오일로서 수득하였다(1.17 g). 상기 절차를 반복하여, 추가의 물질을 수득하였다. MeOH(60 mL) 중의 상기 오일(1.55 g, 4.3 mmol)의 용액에 K2CO3(2.66 g, 19.2 mmol)를 한꺼번에 가했다. 이 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, 물(50 mL)을 가했다. EtOAc(150 mL)를 가하고, 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 용매를 감압 하에서 제거하여, 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]-옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 투명한 오일로서 수득하였다(0.86 g, 2단계에 걸쳐 61%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3). δ 8.02 (s, 1H), 5.53-5.45 (m, 1H), 4.53 (dd, J = 13.5, 5.2 Hz, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.58-3.48 (m, 1H), 3.36-3.25 (m, 2H), 2.55-2.42 (m, 1H), 2.07-1.87 (m, 3H).
중간체 47. 3급-부틸 N-(3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00062
중간체 23에 대한 절차에 따라, 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(중간체 33)로부터 출발하여, 3급-부틸 N-(3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일)카바메이트(290 mg, 4단계에 걸쳐 53%)를 회백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.50 (dd, J = 9.9, 3.8 Hz, 1H), 4.96-4.73 (m, 2H), 4.14-3.95 (m, 3H), 4.03 (s, 3H), 2.30-2.16 (m, 3H), 1.95-1.84 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
중간체 48. 5-(6-메톡시-3,5-다이메틸-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸
Figure pct00063
CDCl3(12 mL) 중의 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드(487 mg, 3.14 mmol)의 용액에 [(Z)-1-[(E)-2-메톡시-1-메틸-비닐]프로프-1-엔옥시]-트라이메틸-실란(944 mg, 4.71 mmol) 및 리졸브-Al(상표명) EuFOD(127 mg, 0.31 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 80℃로 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 부분입체 이성질체들의 혼합물로서 3,5-다이메틸-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-2,3-다이하이드로피란-4-온을 황색 오일로서 수득하였다(829 mg). MeOH(10 mL) 중의 상기 오일(829 mg, 3.14 mmol) 및 세륨(III) 클로라이드 헵타하이드레이트(4.8 g, 12.56 mmol)의 용액을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후, 나트륨 보로하이드라이드(143 mg, 3.8 mmol)를 적가하고, 이 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 1 M 수성 HCl(10 mL)로 켄칭하고, EtOAc(50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 MeOH(40 mL)에 용해시키고, 토스산 모노하이드레이트(87 mg)로 처리하였다. 이 혼합물을 18시간 동안 가열 환류시시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 DCM(30 mL)에 용해시키고, 유기 층을 수성 NaHCO3(2 x 20 mL)로 세척하고, 염수(20 mL)로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켜, 5-(6-메톡시-3,5-다이메틸-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 황색 오일로서 수득하였다(558 mg, 3단계에 걸쳐 51%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15-7.98 (m, 1H), 5.90 (d, J = 3.6 Hz) 및 5.78 (d, J = 3.2 Hz) (1H), 5.72 (d, J = 5.6 Hz) 및 5.64 (d, J = 10.8 Hz) (1H), 4.80 및 4.76 (2s, 1H), 4.16 및 4.06 (2s, 3H), 3.42 및 3.40 (2s, 3H), 2.65-2.58 (m, 1H), 1.77 및 1.65 (2s, 3H), 0.90 (d, J = 7.2 Hz) 및 0.83 (d, J = 7.2 Hz) (3H).
중간체 49. 5-(2,6-다이메틸-4,7-다이옥사바이사이클로[4.1.0]헵탄-3-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸
Figure pct00064
-78℃로 냉각된 DCM(1 mL) 중의 5-(6-메톡시-3,5-다이메틸-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(100 mg, 0.38 mmol)의 용액에 붕소 트라이플루오라이드 다이에틸 에터레이트(0.14 mL, 1.13 mmol) 및 트라이에틸실란(0.36 mL), 2.68 mmol)을 가했다. -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3(5 mL) 및 DCM(5 mL)을 가하고, 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-60% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(3,5-다이메틸-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 황색 오일로서 수득하였다. 상기 반응을 반복하여, 추가의 물질을 수득하였다. 0℃로 냉각된 DCM(6.5 mL) 중의 5-(3,5-다이메틸-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(305 mg, 1.29 mmol)의 용액에 m-CPBA(70-75%, 382 mg, 1.54 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 0℃에서 90분 동안 교반하였다. 추가의 m-CPBA(70-75%, 191 mg, 0.774 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 6시간에 걸쳐 천천히 실온으로 가온하였다. 이 혼합물을 DCM(15 mL)으로 세척하면서 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하고, 여액을 포화 수성 NaHCO3(2 x 10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-60% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 단일 부분입체 이성질체로서 5-(2,6-다이메틸-4,7-다이옥사바이사이클로[4.1.0]헵탄-3-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 회백색 고체로서 수득하였다(189 mg, 2단계에 걸쳐 53%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (s, 1H), 5.32-5.28 (m, 1H), 4.15-4.08 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.78 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.30 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 2.71-2.61 (m, 1H), 1.38 (s, 3H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3H).
중간체 50. 4-아자이도-3,5-다이메틸-6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-3-올
Figure pct00065
중간체 27에 대한 절차에 따라, 5-(2,6-다이메틸-4,7-다이옥사바이사이클로[4.1.0]헵탄-3-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸로부터 출발하여, 4-아자이도-3,5-다이메틸-6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-3-올을 회백색 고체로서 수득하였다(140 mg, 63%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 5.74 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.79-3.64 (m, 3H), 3.58 (s, 1H), 2.58 (qdd, J = 7.6, 2.9, 2.2 Hz, 1H), 1.81 (s, 1H), 1.25 (s, 3H), 1.18 (d, J = 7.6 Hz, 3H).
중간체 51. 3급-부틸 N-[5-하이드록시-3,5-다이메틸-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-4-일]카바메이트
Figure pct00066
THF/물(1 mL/0.2 mL) 중의 4-아자이도-3,5-다이메틸-6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-3-올(140 mg, 0.47 mmol)의 용액을 트라이페닐포스핀(373 mg, 1.42 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물을 폭발 스크린 뒤에서 65℃로 18시간 동안 가열하였다. 추가의 THF(1 mL)를 트라이메틸포스핀(톨루엔 중의 1 M, 1 mL, 1.0 mmol)과 함께 가했다. 이 혼합물을 폭발 스크린 뒤에서 65℃로 3시간 동안 가열하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔사를 건조 DCM(4 mL)에 용해시켰다. 다이-3급-부틸-다이카보네이트(115 mg, 0.53 mmol) 및 이어서 DIPEA(0.18 mL, 1.05 mmol)를 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-60% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 N-[5-하이드록시-3,5-다이메틸-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-4-일]카바메이트를 회백색 고체로서 수득하였다(112 mg, 2단계에 걸쳐 64%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 5.52 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.11-4.01 (m, 6H), 2.67-2.58 (m, 1H), 2.54 (s, 1H), 1.61 (s, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.36 (s, 3H), 0.98 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
중간체 52. 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-4-올
Figure pct00067
중간체 30에 대한 절차에 따라, 또한 부분입체 이성질체들의 혼합물로서 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-4-올을 황색 검으로서 수득하였다(91 mg, 2단계에 걸쳐 12%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 및 8.03 (2s, 1H), 5.88 (dd, J = 8.3, 6.1 Hz) 및 5.70 (dd, J = 11.8, 3.2 Hz) (1H), 4.49 (dd, J = 11.8, 7.4 Hz) 및 4.40 (s) (1H), 4.15-3.72 (m, 2H), 4.15 및 4.09 (s, 3H), 2.85-2.55 (m, 1H), 2.03-1.89 (m, 3H), 1.79-1.66 (m, 1H).
중간체 53. 1-3급-부틸 3-메틸 2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)말로네이트
Figure pct00068
질소 하에, 무수 DMSO(100 mL) 중의 5-클로로-1-메틸-4-나이트로-피라졸(6.0 g, 37.140 mmol) 및 3급-부틸 메틸 멜로네이트(8.74 g, 50.139 mmol)의 교반된 RT 용액에 칼륨 카보네이트(15.40 g, 111.42 mmol)을 한꺼번에 가했다. 이 혼합물을 75℃로 3시간 동안 가열한 후, 냉각시키고, RT에서 밤새도록 정치하였다. 이 혼합물을 물(500 mL)에 붓고, 2N HCl(80ml, pH 5)로 산성화시키고, EtOAc(2 x 250 mL, 2x200ml)로 추출하였다. 합친 유기물을 건조하고(MgSO4), 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(0 - 30% EtOAc/헵탄)를 통해 정제하여, 1-3급-부틸 3-메틸 2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)말로네이트를 무색 고체로서 수득하였다(10.3g, 92.7%).
중간체 54. 메틸 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)아세테이트
Figure pct00069
1-3급-부틸 3-메틸 2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)말로네이트(6.92 g, 23.1 mmol) 및 포름산(100 mL)의 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 가열한 후, 실온으로 냉각시켰다. 포름산 감압 하에서 제거하고, 잔사를 염수로 희석하고, DCM(3x)으로 추출하였다. 합친 유기물을 건조하고(MgSO4), 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(0 - 60% EtOAc/헵탄)를 통해 정제하여, 메틸 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)아세테이트(4.15g, 90%).
중간체 55. 메틸 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)펜트-4-에노에이트
Figure pct00070
무수 DMF(10 mL) 중의 메틸 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)아세테이트(869 mg, 4.36 mmol)의 용액에 0℃에서 나트륨 하이드라이드(218mg, 5.45 mmol, 60 중량%)를 가하자, 이 혼합물이 즉시 진적색이 되었다. 0℃에서 15분 동안 교반한 후, 알릴 브로마이드(0.57 mL, 6.54 mmol)를 천천히 가하고, 0℃에서 10분 동안 이어서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 물(20 mL)로 켄칭하고, EA(200 mL, 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 물(15x3 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하고, 건조하고(MgSO4), 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(0 - 100% EtOAc/헵탄)를 통해 정제하여, 메틸 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)펜트-4-에노에이트를 수득하였다(713mg, 68%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (s, 1H), 5.71 - 5.54 (m, 1H), 5.01 (d, J = 13.1 Hz, 2H), 4.43 (dd, J = 9.8, 5.5 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.14 - 3.02 (m, 1H), 2.79 - 2.62 (m, 1H).
중간체 56. 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)펜트-4-엔-1-올
Figure pct00071
질소 하에 기체 0℃에서 톨루엔(16.03 mmol, 16 mL) 중의 DIBAL-H(1.0 mol/L)를 THF(16 mL) 중의 메틸 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)펜트-4-에노에이트(959 mg, 4.01 mmol)의 용액에 가했다. 이 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 1N HCl(25 mL) 용액을 0℃에서 반응 혼합물에 가하고, 이어서 에틸 아세테이트(30 mL)를 가했다. 층을 분리한 후, 유기 층을 포화 NaHCO3 용액(30 mL) 및 식염수(30 mL)로 세척하였다. 수성 층 중에 목적 생성물이 존재하지 않을 때까지, 합친 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 합치고, 후속적으로 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 증발시켜, 연갈색 오일을 수득하였다(610 mg). 조 물질을 헵탄 중의 0-100% 에틸 아세테이트를 사용하는 실리카 겔 상에서 정제하여, 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)펜트-4-엔-1-올을 연황색 고체로서 수득하였다(676 mg, 80%).
중간체 57. 5-[1-(알릴옥시메틸)부트-3-엔일]-1-메틸-4-나이트로-피라졸
Figure pct00072
무수 DMF(5 mL) 중의 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)펜트-4-엔-1-올(91 mg, 0.43)의 용액에 0℃에서 나트륨 하이드라이드(20mg, 0.49 mmol, 60 중량%)를 가했다. 0℃에서 15분 동안 교반한 후, 알릴 브로마이드(79, 0.64 mmol)를 천천히 가하고, 0℃에서 10분 동안 교반하고, 이어서 실온으로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 물(10 ml)로 켄칭하고, EA(3x50ml)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, 농축 건조하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(0 - 100% EtOAc/헵탄)를 통해 정제하여, 5-[1-(알릴옥시메틸)부트-3-엔일]-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 수득하였다(84mg, 78%).
중간체 58. 1-메틸-4-나이트로-5-(2,3,4,5-테트라하이드로옥세핀-3-일)피라졸
Figure pct00073
톨루엔(15ml) 중의 1,3-비스(2,4,6-트라이메틸페닐)-2-이미다졸리딘일리덴)다이클로로(페닐메틸렌)(트라이사이클로헥실포스핀)루테늄 및 "그럽스 2세대 촉매"(CAS 등록 번호 246047-72-3, 시그마-알드리치 제품 번호 569747, US 6,111,121, US 7,329,758)(375mg, 0.42 mmol)의 용액을 톨루엔(115 mL) 중의 5-[1-(알릴옥시메틸)부트-3-엔일]-1-메틸-4-나이트로-피라졸(527 mg, 2.10 mmol)의 용액에 가했다. 생성 용액을 가열 환류시키고(120℃), 2.5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(0 - 100% EtOAc/헵탄)를 통해 정제하여, 1-메틸-4-나이트로-5-(2,3,4,5-테트라하이드로옥세핀-3-일)피라졸을 수득하였다(133mg, 30%).
중간체 59. 6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올
Figure pct00074
THF(0.91 mL, 1.82 mmol) 중의 보란 다이메틸 설파이드 착체(2.0 mol/L)를 0℃에서 THF(8 mL) 중의 1-메틸-4-나이트로-5-(2,3,4,5-테트라하이드로옥세핀-3-일)피라졸(204 mg, 0.91 mmol)의 용액에 가했다. 이 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 이어서 RT로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 1M NaOH(1.5 mL) 및 하이드로젠 퍼옥사이드(물 중의 30 중량%) (0.8 mL)를 가하고, 이 혼합물을 RT에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 물로 켄칭하고, DCM(2x) 및 EA(1x)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, 농축 건조하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(0 - 100% EtOAc/헵탄)를 통해 정제하여, 6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올을 수득하였다(53mg, 24%).
중간체 60. 6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온
Figure pct00075
DCM(6 mL) 중의 6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올(53 mg, 0.22 mmol)의 용액에 데스-마틴(Dess-Martin) 페리오디난(192mg, 0.44 mmol) 및 나트륨 바이카보네이트(93mg, 1.10 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하고, 물로 켄칭하고, DCM(3x)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 농축 건조하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0 - 100% EtOAc/헵탄)를 통해 정제하여, 6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온을 수득하였다(53mg, 정량적).
중간체 61. 3급-부틸 N-[6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-일]카바메이트
Figure pct00076
6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온(53 mg, 0.23 mmol) , 암모늄 아세테이트(219mg, 2.76 mmol), 나트륨 시아노보로하이드라이드(38mg, 0.57 mmol) 및 4A 분자체의 약간의 펠렛을 메탄올(2 mL)에 용해시켰다. 아세트산(35mg, 0.57 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 RT에서 N2 대기 하에 3일 동안 교반하였다. 이 반응물을 포화 나트륨 바이카보네이트로 켄칭하고, DCM(3x)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 건조하고(MgSO4), 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 DCM(5 mL)에 용해시키고, 다이-3급-부틸-다이카보네이트(63mg, 0.69 mmol) 및 DIPEA(0.067 mL, 0.38 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하고, 이어서 실리카 겔 크로마토그래피(0 - 100% EtOAc/헵탄)를 통해 정제하여, 3급-부틸 N-[6-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-일]카바메이트를 수득하였다(53mg, 81%).
중간체 62. 3급-부틸 N-[4-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-일]카바메이트 및 3급-부틸 N-[3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00077
중간체 23에 대한 절차에 따라, 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(중간체 33)로부터 출발하여,3급-부틸 N-[4-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-일]카바메이트 및 3급-부틸 N-[3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트의 분리가능하지 않은 혼합물을 오일로서 수득하였다(290 mg, 4단계에 걸쳐 53%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.58-5.47 (m, 1H), 4.96-4.73 (m, 2H), 4.14-3.93 (m, 5H), 2.30-2.16 (m, 3H), 2.04-1.83 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
중간체 63. 3급-부틸 N-[5-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00078
데옥소-플루오르의 용액(THF 중의 50%, 0.576 mL, 1.56 mmol)을 DCM(6 mL) 중의 5-아자이도-2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-올(353 mg, 1.25 mmol, 중간체 27)의 빙냉 용액에 적가하였다. 이 혼합물을 16시간 동안 교반하면서 실온으로 가온한 후, 빙욕 내에서 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3(10 mL) 천천히 가했다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(5-아자이도-4-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 투명한 검으로서 수득하였다. THF(5 mL) 및 물(1 mL) 중의 상기 검(145 mg, 0.51 mmol)의 용액에 트라이페닐포스핀(147 mg, 0.56 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 60℃로 2시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 EtOAc(10 mL)로 희석하고, 염수(2 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 DCM(2 mL)에 용해시키고, DIPEA(0.178 mL, 1.02 mmol) 및 다이-3급-부틸 다이카보네이트(134 mg, 0.61 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물(2 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(3 x 2 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 상 분리 카트리지에 통과시키고, 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)을 통해 정제하여, 3급-부틸 N-[5-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트를 투명한 검으로서 수득하였다(180 mg, 3단계에 걸쳐 39%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.54 (dd, J = 10.5, 4.2 Hz, 1H), 5.10-4.92 (m, 2H), 4.21-4.09 (m, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.74-3.62 (m, 1H), 2.57-2.38 (m, 1H), 2.35-2.15 (m, 2H), 1.91-1.81 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
중간체 64. 4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온
Figure pct00079
MeOH(60 mL) 및 물(11.5 mL) 중의 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(2.85 g, 11.9 mmol, 중간체 19)의 용액에 NH4Cl(1.58 g, 29.8 mmol) 및 이어서 나트륨 아자이드(3.87 g, 59.5 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 70℃로 18시간 동안 가열하고, 이어서 실온으로 냉각시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔사를 EtOAc(150 mL)에 용해시켰다. 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켜, 위치 이성질체들의 80:20 혼합물로서 상기 아자이도 알코올을 오렌지색 오일로서 수득하였다. DCM(40 mL) 중의 상기 오일(1.9 g, 6.7 mmol)의 용액에 데스-마틴 페리오디난(1.8 g, 4.26 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 수성 포화 NaHCO3(50 mL) 및 20% 나트륨 티오설페이트 용액(50 mL)을 가하고, 염의 완전한 용해가 관찰될 때까지, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 이 혼합물을 DCM(50 mL)으로 희석하고, 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온을 오일로서 수득하였다(1.05 g, 2단계에 걸쳐 86%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 5.38 (dd, J = 10.1, 2.7 Hz, 1H), 4.63-4.51 (m, 2H), 4.30-4.20 (m, 1H), 4.08 (s, 3H), 2.29-2.16 (m, 4H).
중간체 65. 3급-부틸 N-[3,3-다이플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00080
DCM(10 mL) 중의 4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온 (440 mg, 1.57 mmol, 중간체 55)의 용액에 데옥소-플루오르(등록상표)(THF 중의 50%, 1.42 mL, 3.92 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. DCM(20 mL)을 가하고, 이 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3(20 mL)를 조심스럽게 가했다. 수성 층을 DCM(3 x 20 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-30% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(5-아자이도-6,6-다이플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 오일로서 수득하였다(280 mg). THF/물(10 mL/1.8 mL) 중의 상기 오일(280 mg, 0.93 mmol)의 용액을 트라이페닐포스핀(267 mg, 1.02 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 70℃로 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 건조 DCM(15 mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각된 및 다이-3급-부틸-다이카보네이트(243 mg, 1.12 mmol) 및 이어서 DIPEA(0.15 mL, 1.12 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 72시간 동안 교반하였다. 물(20 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(100 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-35% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 N-[3,3-다이플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트를 투명한 오일로서 수득하였다(310 mg, 3단계에 걸쳐 59%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 5.48-5.42 (m, 1H), 5.10-5.01 (m, 1H), 4.49-4.35 (m, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.99-3.80 (m, 1H), 2.17-1.98 (m, 4H), 1.48 (s, 9H).
중간체 66. 4-아자이도-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올
Figure pct00081
질소 하에 -78℃로 냉각된 건조 THF(25 mL) 중의 4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온(중간체 55)(1 g, 3.57 mmol)의 용액에 L-셀렉트라이드(THF 중의 1 M, 4.3 mL, 4.3 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 -78℃에서 45분 동안 교반하였다. 이 혼합물을 실온으로 가온하고, 물(10 mL)을 가했다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔사를 EtOAc(100 mL)에 용해시켰다. 유기 층을 물(40 mL) 및 염수(40 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-60% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 라세미체인 4-아자이도-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올(상대적 입체 화학은 상기 도시된 바와 같음)을 황색 오일로서 수득하였다(580 mg, 58%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.63 (dd, J = 10.6, 3.5 Hz, 1H), 4.21-4.14 (m, 3H), 4.01 (s, 3H), 3.69-3.58 (m, 1H), 2.45-2.33 (m, 1H), 2.27-2.08 (m, 2H), 2.01-1.84 (m, 2H).
중간체 67. 3급-부틸 N-[3-메톡시-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00082
무수 DMF(5 mL) 중의 4-아자이도-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올, (중간체 57)(182 mg, 0.65 mmol)의 용액에 질소 하에 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중의 60% 분산액, 39 mg, 0.97 mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 추가로 45분 후에, 메틸 아이오다이드(0.06 mL, 0.97 mmol)를 적가하고, 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 추가의 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중의 60% 분산액, 39 mg, 0.97 mmol) 및 이어서 메틸 아이오다이드(0.06 mL, 0.97 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(20 mL)로 켄칭하고, EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(5-아자이도-6-메톡시옥세판-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 오일로서 수득하였다(100 mg). THF/물(5 mL/1 mL) 중의 상기 오일(100 mg, 0.37 mmol)의 용액을 트라이페닐포스핀(97 mg, 0.37 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물 폭발 차폐막 뒤에서 70℃로 18시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 0℃에서 잔사를 건조 DCM(3 mL)에 용해시키고, 다이-3급-부틸-다이카보네이트(89 mg, 0.4 mmol) 및 DIPEA(0.18 mL, 1.02 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 물(10 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-50% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 라세미체인 3급-부틸-(3-메톡시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트(상대적 입체 화학은 상기 도시된 바와 같음)를 투명한 오일로서 수득하였다(119 mg, 3단계에 걸쳐 47%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.39 (dd, J = 10.6, 3.6 Hz, 1H), 4.75 (br s, 1H), 4.33 (dd, J = 14.2, 1.9 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.91-3.83 (m, 1H), 3.75 (dd, J = 14.2, 3.2 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.39-3.34 (m, 1H), 2.22-2.12 (m, 1H), 2.12-2.03 (m, 1H), 2.03-1.82 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
중간체 68. 1-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)펜트-4-엔-1-올
Figure pct00083
건조 THF(250 mL) 중의 1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(9.7 g, 76.7 mmol) 및 4-펜텐알(10 g, 84.4 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, 질소 하에 교반하였다. LiHMDS의 용액(THF 중의 1 M, 192 mL, 191.7 mmol)을 3시간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -40℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하고, 포화 암모늄 클로라이드 용액(100 mL)을 적가하여 켄칭하고, 실온으로 가온하고, EtOAc(200 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 포화 암모늄 클로라이드 용액(50 mL)으로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(0-100% EtOAc/DCM) 및 이어서 실리카 겔 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 1-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)펜트-4-엔-1-올을 연황색 오일로서 수득하였다(5.75 g, 36%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 5.85-5.78 (m, 1H), 5.32-5.26 (m, 1H), 5.12-5.04 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.45 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 2.92-2.09 (m, 3H), 1.90-1.86 (m, 1H).
중간체 69. 5-(5-(요오드메틸)테트라하이드로퓨란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00084
건조 THF(25 mL) 중의 1-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)펜트-4-엔-1-올(0.84 g, 3.98 mmol, 중간체 59)의 교반된 용액에 질소 하에 요오드(1.52 g, 5.97 mmol)를 가했다. 5분 동안 교반한 후, Na2CO3(0.63 g, 5.97 mmol) 및 이어서 은 트라이플레이트(3.07 g, 11.94 mmol)를 가하자, 암적색 용액이 황색이 되었다. 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, THF(25 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 이 황색 고체를 THF/DCM으로 세척하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(0-40% EtOAc/DCM)를 통해 정제하여, 5-(5-(요오드메틸)테트라하이드로퓨란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 연황색 검으로서 수득하였다(640 mg, 48%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 5.91-5.87 (m, 1H), 4.39-4.35 (m, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.37-3.30 (m, 2H), 2.69-2.67 (m, 1H), 2.45-2.41 (m, 1H), 2.05-1.89 (m, 2H).
중간체 70. 5-(5-(아자이도메틸)테트라하이드로퓨란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00085
건조 DMF(10 mL) 중의 5-(5-(요오드메틸)테트라하이드로퓨란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(640 mg, 1.90 mmol, 중간체 60)의 용액에 나트륨 아자이드(250 mg, 3.80 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 실온에서 36시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 EtOAc(25 mL)로 희석하고, 물(2 x 10 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켜, 5-(5-(아자이도메틸)테트라하이드로퓨란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 황색 오일로서 수득하였다(480 mg, 100%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 5.84-5.70 (m, 1H), 4.49-4.45 (m, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.56-3.39 (m, 2H), 2.66-2.65 (m, 1H), 2.29-2.22 (m, 1H), 2.02-1.92 (m, 2H).
중간체 71. 3급-부틸 ((5-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)테트라하이드로퓨란-2-일)메틸)카바메이트
Figure pct00086
THF/물(20 mL/4 mL) 중의 5-(5-(아자이도메틸)테트라하이드로퓨란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(520 mg, 2.07 mmol, 중간체 61)의 용액을 트라이페닐포스핀(600 mg, 2.28 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물 폭발 차폐막 뒤에서 70℃로 1.5시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 유기 용매를 감압 하에서 제거하였다. 수성 층을 DCM(40 mL)으로 추출하고, 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켜, 연황색 오일을 수득하였다. 상기 오일 DCM(20 mL)에 용해시키고, DIPEA(0.72 mL, 4.14 mmol)를 가하고, 이어서 DCM(1 mL) 중의 다이-3급-부틸-다이카보네이트(540 mg, 2.48 mmol)의 용액을 2개의 분획으로 가했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물(10 mL)을 가하고, 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-60% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 ((5-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)테트라하이드로퓨란-2-일)메틸)카바메이트를 무색 검으로서 수득하였다(145 mg, 2단계에 걸쳐 21%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 5.80-5.76 (m, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.35 (br s, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.50-3.40 (m, 1H), 3.25-3.19 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-2.20 (m, 1H), 2.00-1.80 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
중간체 72. 2-아자이도-5-플루오로-5-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)사이클로헵탄올
Figure pct00087
DMF/물(35 mL/10 mL) 중의 5-(4-플루오로-8-옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(2.75 g, 10.8 mmol, 중간체 155)의 용액을 암모늄 클로라이드(1.43 g, 27.0 mmol) 및 나트륨 아자이드(3.5 g, 53.9 mmol)로 처리하고, 이 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 18시간 동안 100℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(200 mL)으로 추출하고, 유기 층을 물(8 x 30 mL)로 세척하고, 염수(30 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(30-40% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 제 2 용리 이성질체로서 2-아자이도-5-플루오로-5-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)사이클로헵탄올을 백색 고체로서 수득하였다(2.16 g, 67%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 및 8.05 (2s, 1H), 4.08 및 4.06 (2s, 3H), 3.88-3.78 (m, 1H), 3.65-3.58 (m, 1H), 2.87-2.55 (m, 2H), 2.31-2.21 (m, 2H), 2.18-2.00 (m, 3H), 1.98-1.85 (m, 2H).
중간체 73. 3급-부틸 N-[5-플루오로-2-하이드록시-5-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)사이클로헵틸]카바메이트
Figure pct00088
THF/물(15 mL/3 mL) 중의 2-아자이도-5-플루오로-5-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)사이클로헵탄올(300 mg, 1.05 mmol, 중간체 63)의 용액을 트라이페닐포스핀(290 mg, 1.11 mmol)으로 처리하고, 이 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 60℃로 18시간 동안 가열하였다. 염수(5 mL)를 가하고, 이 혼합물을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합치고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 건조 DCM(20 mL) 중의 생성 오일의 용액에 질소 하에 DIPEA(0.88 mL, 5.03 mmol) 및 이어서 건조 DCM(10 mL) 중의 다이-3급-부틸-다이카보네이트(263 mg, 1.21 mmol)의 용액을 천천히 가했다. 반응 혼합물을 실온에서 4일 동안 교반하였다. 물(30 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(80 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(40-50% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 N-[5-플루오로-2-하이드록시-5-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)사이클로헵틸]카바메이트를 무색 오일로서 수득하였다(218 mg, 2단계에 걸쳐 58%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 및 8.05 (2s, 1H), 4.86 (br s, 1H), 4.08 및 4.06 (2s, 3H), 3.88-3.79 (m, 1H), 3.75-3.67 (m, 2H), 2.77-2.48 (m, 2H), 2.40-2.30 (m, 1H), 2.21-1.95 (m, 3H), 1.95-1.67 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
중간체 74. (5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(트랜스 이성질체)
Figure pct00089
톨루엔(50 mL) 중의 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드(370 mg, 2.39 mmol, 중간체 3)의 용액에 2-에틸-2-(하이드록시메틸)프로판-1,3-다이올(315 mg, 2.35 mmol) 및 이어서 p-톨루엔설폰산(20 mg, 0.10 mmol)을 가했다. 물을 공비 제거하면서, 반응 혼합물을 36시간 동안 가열 환류시켰다. 이 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 제 1 용리 이성질체로서 (5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(트랜스 이성질체)을 무색 고체로서 수득하였다(244 mg, 38%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.16 (s, 3H), 4.02 (d, J = 11.5 Hz, 2H), 3.97 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.42 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 1.90 (m, 3H), 0.99 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
중간체 75. (5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(시스 이성질체)
Figure pct00090
중간체 66에 대한 절차에 따라, 또한 제 2 용리 이성질체로서 (5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(시스 이성질체)을 무색 고체로서 수득하였다(118 mg, 18%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 4.13 (s, 3H), 4.12 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 3.98 (d, J = 3.9 Hz, 2H), 3.73 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 1.74 (br s, 1H), 1.31 (q, J = 7.7 Hz, 2H), 0.89 (t, J = 7.7 Hz, 3H).
중간체 76. (2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(트랜스 이성질체)
Figure pct00091
톨루엔(100 mL) 중의 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드(718 mg, 4.63 mmol, 중간체 3)의 용액에 2-(하이드록시메틸)프로판-1,3-다이올(700 mg, 6.73 mmol) 및 이어서 p-톨루엔설폰산(88 mg, 0.463 mmol)을 가했다. 물을 공비 제거하면서, 반응 혼합물을 18시간 동안 가열 환류시켰다. 이 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 DCM(50 mL)으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 제 1 용리 이성질체로서 (2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(트랜스 이성질체)을 무색 고체로서 수득하였다(220 mg, 20%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 4.34 (dd, J = 11.6, 4.7 Hz, 2H), 4.12 (s, 3H), 3.81 (t, J = 11.5 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 2.53-2.38 (m, 1H), 1.67 (t, J = 4.6 Hz, 1H).
중간체 77. (2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(시스 이성질체)
Figure pct00092
중간체 68에 대한 절차에 따라, 또한 (2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(시스 이성질체)을 무색 고체로서 수득하였다(268 mg, 24%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 4.28 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 4.20 (d, J = 3.3 Hz, 2H), 4.12 (s, 3H), 4.06 (dd, J = 7.8, 3.7 Hz, 2H), 1.82 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 1.78-1.71 (m, 1H).
중간체 78. (5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(트랜스 이성질체)
Figure pct00093
중간체 68에 대한 절차에 따라, 2-메틸-2-(하이드록시메틸)프로판-1,3-다이올로부터 출발하여, 제 1 용리 이성질체로서 (5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올을 무색 고체로서 수득하였다(167 mg, 13%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.19 (s, 3H), 4.02 (d, J = 11.3 Hz, 2H), 3.89 (d, J = 11.3 Hz, 2H), 3.43 (d, J = 4.5 Hz, 2H), 1.65-1.40 (m, 1H), 1.36 (s, 3H).
중간체 79. (5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(시스 이성질체)
Figure pct00094
중간체 70에 대한 절차에 따라, 또한 (5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(시스 이성질체)을 제 2 용리 이성질체로서 수득하였다(480 mg, 38%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 6.40 (s, 1H), 4.16-4.06 (m, 5H), 3.91 (s, 2H), 3.72 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 0.85 (s, 3H). OH는 관찰되지 않았다.
중간체 80. 3급-부틸 N-[(4R,7S)-3,3-다이플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00095
3급-부틸 N-[3,3-다이플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트(중간체 56)를 키랄 SFC를 통해 추가로 정제하여, 제 2 용리 이성질체로서 3급-부틸 N-[(4R)-3,3-다이플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트를 회백색 고체로서 수득하였다(57 mg, 47%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 5.48-5.42 (m, 1H), 5.06 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.49-4.38 (m, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.98-3.82 (m, 1H), 2.18-2.00 (m, 4H), 1.48 (s, 9H).
중간체 81. 3급-부틸 N-[(4S,7R)-3,3-다이플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00096
중간체 72에 대한 절차에 따라, 또한 제 1 용리 이성질체로서 3급-부틸 N-[(4S,7R)-3,3-다이플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트를 회백색 고체로서 수득하였다(65 mg, 53%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 5.48-5.42 (m, 1H), 5.05 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.50-4.36 (m, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.98-3.84 (m, 1H), 2.18-2.00 (m, 4H), 1.48 (s, 9H).
중간체 82. (5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸 메탄설포네이트
Figure pct00097
건조 DCM(15 mL) 중의 (5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(트랜스 이성질체)(610 mg, 2.25 mmol, 중간체 66)의 용액에 0℃에서 Et3N(0.45 mL, 3.38 mmol) 및 이어서 메탄설폰일 클로라이드(0.21 mL, 2.70 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 1.5시간에 걸쳐 천천히 실온으로 가온하였다. 이 혼합물을 0℃로 재냉각시키고, 수성 1 M HCl(10 mL) 및 DCM(20 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 수성 포화 NaHCO3(15 mL) 및 물(15 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켜, (5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸 메탄설포네이트를 백색 고체로서 수득하였다(816 mg, 정량적). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.14 (s, 3H), 4.05-3.88 (m, 6H), 3.22-2.92 (m, 3H), 1.96 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.03 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
중간체 83. 2-((5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸)이소인돌린-1,3-다이온
Figure pct00098
건조 DMSO(10 mL) 중의 (5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸 메탄설포네이트(816 mg, 2.25 mmol, 중간체 74)의 용액에 칼륨 프탈아미드(2.1 g, 11.3 mmol)를 한꺼번에 가했다. 반응 혼합물을 180℃로 5시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, EtOAc(50 mL) 및 물(30 mL)로 희석하였다. 유기 층을 물(3 x 30 mL), 2 N NaOH(2 x 20 mL) 및 물(20 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 2-((5-에틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸)이소인돌린-1,3-다이온을 무색 고체로서 수득하였다(317 mg, 35%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.00 (s, 1H), 7.93-7.88 (m, 2H), 7.82-7.76 (m, 2H), 6.31 (s, 1H), 4.14 (s, 3H), 4.06 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 3.85 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 3.51 (s, 2H), 1.92 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.14 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
중간체 84. 3급-부틸 N-[7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3-(트라이듀테리오메톡시)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00099
MeOH/물(9 mL/1.7 mL) 중의 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(400 mg, 1.67 mmol, 중간체 19)의 용액을 암모늄 클로라이드(221 mg, 4.2 mmol) 및 나트륨 아자이드(544 mg, 8.37 mmol)로 처리하고, 이 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 70℃로 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(100 mL)로 추출하고, 유기 층을 물(3 x 20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 무수 DMF(5 mL) 중의 상기 잔사(310 mg, 1.1 mmol)의 용액에 질소 하에 실온에서 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중의 60% 분산액, 53 mg, 1.32 mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 추가로 45분 후에, 3-중수소결합된 메틸 아이오다이드(0.21 mL, 3.3 mmol)를 적가하고, 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 추가의 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중의 60% 분산액, 310 mg, 1.1 mmol) 및 이어서 추가의 3-중수소결합된 메틸 아이오다이드(0.21 mL, 3.3 mmol)를 가하고, 이 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 물(20 mL)을 가하고, 이 혼합물을 EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-40% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-[5-아자이도-6-(트라이듀테리오메톡시)옥세판-2-일]-1-메틸-4-나이트로-피라졸을 오일로서 수득하였다(140 mg). THF/물(5 mL/0.9 mL) 중의 상기 오일(140 mg, 0.47 mmol)의 용액을 트라이페닐포스핀(135 mg, 0.52 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 70℃로 18시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 0℃에서 건조 DCM(9 mL)에 용해시키고, 다이-3급-부틸-다이카보네이트(123 mg, 0.56 mmol) 및 DIPEA(0.25 mL, 1.41 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 물(10 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-60% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 라세미체인 3급-부틸 N-[7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3-(트라이듀테리오메톡시)옥세판-4-일]카바메이트(상대적 입체 화학은 상기 도시된 바와 같음)를 회백색 고체로서 수득하였다(125 mg, 4단계에 걸쳐 28%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.39 (dd, J = 10.6, 3.6 Hz, 1H), 4.85-4.67 (m, 1H), 4.32 (dd, J = 14.2, 1.9 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.90-3.82 (m, 1H), 3.75 (dd, J = 14.2, 3.2 Hz, 1H), 3.40-3.33 (m, 1H), 2.20-1.82 (m, 4H), 1.46 (m, 9H).
중간체 85. 3급-부틸 N-[(3R,4S,7R)-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3-(트라이듀테리오메톡시)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00100
키랄 SFC를 통해 3급-부틸 N-[7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3-(트라이듀테리오메톡시)옥세판-4-일]카바메이트를 추가로 정제하여, 제 1 용리 이성질체로서 3급-부틸 N-[(3R,4S)-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3-(트라이듀테리오메톡시)옥세판-4-일]카바메이트를 회백색 고체로서 수득하였다(54 mg, 43%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.39 (dd, J = 10.6, 3.6 Hz, 1H), 4.85-4.68 (m, 1H), 4.32 (dd, J = 14.2, 1.9 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.90-3.82 (m, 1H), 3.75 (dd, J = 14.0, 3.2 Hz, 1H), 3.40-3.33 (m, 1H), 2.20-1.83 (m, 4H), 1.46 (s, 9H).
중간체 86. 3급-부틸 N-[(3S,4R,7S)-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3-(트라이듀테리오메톡시)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00101
중간체 77에 대한 절차에 따라, 또한 제 2 용리 이성질체로서 3급-부틸 N-[(3S,4R,7S)-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)-3-(트라이듀테리오메톡시)옥세판-4-일]카바메이트를 회백색 고체로서 수득하였다(52 mg, 41%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.39 (dd, J = 10.6, 3.6 Hz, 1H), 4.85-4.66 (m, 1H), 4.33 (dd, J = 14.2, 1.9 Hz, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.90-3.83 (m, 1H), 3.75 (dd, J = 14.2, 3.2 Hz, 1H), 3.40-3.33 (m, 1H), 2.21-1.83 (m, 4H), 1.47 (m, 9H).
중간체 87. 5-(5-(아자이도메틸)-5-메틸-1,3-다이옥산-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(트랜스 이성질체)
Figure pct00102
건조 DCM(10 mL) 중의 (5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(트랜스 이성질체)(248 mg, 1.02 mmol, 중간체 66)의 용액에 0℃에서 Et3N(0.20 mL, 1.53 mmol) 및 이어서 메탄설폰일 클로라이드(0.10 mL, 1.22 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 1.5시간에 걸쳐 천천히 실온으로 가온하였다. 이 혼합물을 0℃로 재냉각시키고, 1 M 수성 HCl(5 mL) 및 DCM(20 mL)을 가했다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(10 mL) 및 물(10 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켜, 무색 오일을 수득하였다. 상기 오일을 DMF(20 mL)에 용해시키고, 나트륨 아자이드(400 mg, 6.12 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 140℃로 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(20 mL) 및 EtOAc(50 mL)로 희석하였다. 유기 층을 물(3 x 20 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켜, 5-(5-(아자이도메틸)-5-메틸-1,3-다이옥산-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(300 mg, 2단계에 걸쳐 정량적). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 6.36 (s, 1H), 4.17 (s, 3H), 3.88 (s, 4H), 3.20 (s, 2H), 1.40 (s, 3H).
중간체 88. 3급-부틸 N-[(3S,4R,7S)-3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00103
DCM(12 mL) 중의 4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올(660 mg, 2.34 mmol, 중간체 57)의 용액에 데옥소-플루오르(등록상표)(THF 중의 50%, 2.12 mL)을 가하고, 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 DCM(22 mL)으로 희석하고, 0℃로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3(20 mL)를 조심스럽게 가했다. 수성 층을 DCM(3 x 20 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-30% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(5-아자이도-6-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 오일로서 수득하였다(440 mg). THF/물(15 mL/2.8 mL) 중의 상기 오일(440 mg, 1.54 mmol)의 용액을 트라이페닐포스핀(487 mg, 1.86 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 70℃로 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 건조 DCM(15 mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, 다이-3급-부틸-다이카보네이트(402 mg, 1.84 mmol) 및 이어서 DIPEA(0.8 mL, 4.62 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 물(20 mL)을 가하고, 이 혼합물을 DCM(100 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-35% EtOAc/이소헥산) 및 이어서 키랄 분취용 SFC를 통해 정제하여, 3급-부틸 N-[(3S,4R,7S)-3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트를 백색 고체로서 수득하였다(223 mg, 3단계에 걸쳐 27%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.37 (dd, J = 10.5, 3.0 Hz, 1H), 4.89 (br s, 1H), 4.61 (ddd, J = 49.1, 7.7, 3.2 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 22.2, 15.0 Hz, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.98-3.80 (m, 1H), 3.49 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 2.15-1.90 (m, 4H), 1.47 (s, 9H).
중간체 89. 3급-부틸 N-[(3R,4S,7R)-3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00104
중간체 80에 대한 절차에 따라, 또한 3급-부틸 N-[(3R,4S,7R)-3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트를 백색 고체로서 수득하였다(247 mg, 91%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 5.39 (dd, J = 10.7, 2.9 Hz, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.61 (ddd, J = 49.3, 7.7, 3.17 Hz, 1H), 4.52-4.40 (m, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.97-3.84 (m, 1H), 3.49 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 2.15-1.88 (m, 4H), 1.49 (s, 9H).
중간체 90. 5-(5-(아자이도메틸)-5-메틸-1,3-다이옥산-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(시스 이성질체)
Figure pct00105
중간체 79에 대한 절차에 따라, (5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메탄올(시스 이성질체, 중간체 67)로부터 출발항, 5-(5-(아자이도메틸)-5-메틸-1,3-다이옥산-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 고체로서 수득하였다(519 mg, 2단계에 걸쳐 87%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 6.39 (s, 1H), 4.14 (s, 3H), 4.04 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.73 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.70 (s, 2H), 0.87 (s, 3H).
중간체 91. 2,2,2-트라이플루오로-N-((5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸)아세트아미드(시스 이성질체)
Figure pct00106
건조 MeOH(25 mL) 및 THF(10 mL) 중의 5-(5-(아자이도메틸)-5-메틸-1,3-다이옥산-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(시스 이성질체)(519 mg, 1.84 mmol, 중간체 82)의 용액에 암모늄 포름에이트(300 mg, 4.76 mmol) 및 10% Pd/C(300 mg, 0.28 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 30분 동안 가열 환류시키고, 이어서 실온으로 냉각시켰다. 이 현탁액을 셀라이트를 통해 여과하고, 케이크를 EtOAc(200 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 조질 잔사를 건조 THF(11 mL) 및 DCM(2 mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. Et3N(0.38 mL, 2.86 mmol) 및 이어서 트라이플루오로아세트산 무수물(0.30 mL, 2.10 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 0℃로 재냉각시키고, 물(10 ml)로 켄칭하고, EtOAc(20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 2,2,2-트라이플루오로-N-((5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸)아세트아미드를 무색 오일로서 수득하였다(410 mg, 2단계에 걸쳐 63%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.95 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 4.17 (s, 3H), 3.92 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.75 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.71 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 0.80 (s, 3H).
중간체 92. 2,2,2-트라이플루오로-N-((5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸)아세트아미드(트랜스 이성질체)
Figure pct00107
THF(3 mL) 및 물(0.3 mL) 중의 5-(5-(아자이도메틸)-5-메틸-1,3-다이옥산-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(트랜스 이성질체; 300 mg, 1.02 mmol, 중간체 79)의 용액에 트라이페닐포스핀(322 mg, 1.22 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 70℃로 1시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 건조 THF(10 mL) 중의 조질 잔사의 용액에 0℃에서 Et3N(0.20 mL, 1.53 mmol) 및 이어서 트라이플루오로메탄설폰산 무수물(0.16 mL, 1.12 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 0℃로 재냉각시키고, 추가의 Et3N(0.20 mL, 1.53 mmol) 및 트라이플루오로메탄설폰산 무수물(0.16 mL, 1.12 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고, 6시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 0℃로 재냉각시키고, 물(10 ml)로 켄칭하고, DCM(20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 2,2,2-트라이플루오로-N-((5-메틸-2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)-1,3-다이옥산-5-일)메틸)아세트아미드를 무색 고체로서 수득하였다(171 mg, 0.49 mmol).
중간체 93. 5-(5,6-다이메틸-4-((트라이에틸실릴)옥시)-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00108
0℃로 냉각된 DCM(200 mL) 중의 (E)-3-메틸펜트-3-엔-2-온(2.69 mL, 24.1 mmol)의 용액에 Et3N(10.5 mL, 79.5 mmol) 및 이어서 TESOTf(6.0 mL, 26.5 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3 용액(100 mL) 및 DCM(200 mL)을 가했다. 수성 층을 DCM(3 x 200 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켜, (E)-트라이에틸((3-메틸펜타-1,3-다이엔-2-일)옥시)실란을 수득하였다. CDCl3(28 mL) 중의 2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-카브알데하이드(1.0 g, 8 mmol, 중간체 3)의 용액에 (E)-트라이에틸((3-메틸펜타-1,3-다이엔-2-일)옥시)실란(1.6 g, 7.55 mmol) 및 이어서 EuFOD(220 mg, 0.50 mmol)를 가했다. 압력 튜브 내의 반응 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 65℃로 18시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(5,6-다이메틸-4-((트라이에틸실릴)옥시)-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸을 무색 오일로서 수득하였다(2.92 g, 정량적). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (s, 1H), 5.64 (dd, J = 10.9, 3.6 Hz, 1H), 4.33-4.28 (m, 1H), 4.25-3.94 (m, 3H), 2.50-2.41 (m, 1H), 2.31 (m, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.05-0.97 (m, 6H), 0.73-0.61 (m, 9H).
중간체 94. 3-아자이도-2,3-다이메틸-6-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)다이하이드로-2H-피란-4(3H)-온
Figure pct00109
-20℃로 냉각된 건조 MeCN(3.5 mL) 중의 5-(5,6-다이메틸-4-((트라이에틸실릴)옥시)-3,6-다이하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(507 mg, 1.38 mmol, 중간체 85)의 용액에 나트륨 아자이드(404 mg, 6.22 mmol) 및 이어서 CH3CN(10.4 mL) 중의 세륨 암모늄 나이트레이트(2.27 g, 4.15 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 -20℃에서 1시간 동안 교반하고, 1시간에 걸쳐 천천히 0℃로 가온하고, 이어서 물(20 mL)로 켄칭하고, EtOAc(20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 물(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3-아자이도-2,3-다이메틸-6-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)다이하이드로-2H-피란-4(3H)-온을 백색 고체로서 수득하였다(187 mg, 46%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 5.78 (dd, J = 12.3, 3.2 Hz, 1H), 4.21 (s, 3H), 3.73 (dd, J = 12.3, 6.2 Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 14.6, 12.3 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 14.6, 3.2 Hz, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.41 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
중간체 95. 5-(5-아자이도-4,4-다이플루오로-5,6-다이메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸
Figure pct00110
건조 DCM(10 ml) 중의 3-아자이도-2,3-다이메틸-6-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)다이하이드로-2H-피란-4(3H)-온(335 mg,1.14 mmol, 중간체 86)의 용액에 데옥소-플루오르(등록상표)의 용액(THF 중의 50%, 830 mg, 1.88 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3 용액(20 mL) 및 DCM(20 mL)을 가했다. 수성 층을 DCM(3 x 20 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(20% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 5-(5-아자이도-4,4-다이플루오로-5,6-다이메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸(약간의 비닐 플루오라이드로 오염됨)을 연황색 오일로서 수득하였다(157 mg, 44%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 5.69 (dd, J = 12.2, 2.9 Hz, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.76 (qd, J = 6.3, 1.6 Hz, 1H), 2.59-2.40 (m, 1H), 2.38-2.28 (m, 1H), 1.48 (s, 3H), 1.32 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
중간체 96. 3급-부틸 (2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)테트라하이드로-2H-피란-4-일)카바메이트
Figure pct00111
건조 DCM(24 mL) 중의 2-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)테트라하이드로피란-4-올(450 mg, 1.98 mmol, 중간체 39)의 용액에 0℃에서 Et3N(0.33 mL, 2.97 mmol) 및 이어서 MsCl(0.44 mL, 4.0 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 이어서 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 0℃로 재냉각시키고, 수성 포화 NaHCO3(10 mL)로 켄칭하였다. 유기 층을 0.1 M HCl(5 mL)로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켜, 무색 오일을 수득하였다. 상기 오일을 DMF(10 mL)에 용해시키고, 나트륨 아자이드(660 mg, 10 mmol)를 가했다. 반응 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 110℃로 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(20 mL)로 희석하고, EtOAc(50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 물(3 x 20 mL)로 세척하고, 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켜, 무색 고체를 수득하였다(220 mg). THF(2.5 mL) 및 물(0.5 mL) 중의 상기 고체(220 mg, 0.87 mmol)의 용액에 트라이페닐포스핀(344 mg, 1.31 mmol)을 가했다. 반응 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 65℃로 4시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 실온으로 재냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 DCM(5 mL)에 용해시키고, 다이-3급-부틸-다이카보네이트(287 mg, 1.31 mmol) 및 DIPEA(0.44 mL, 2.62 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. P 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(30% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 (2-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)테트라하이드로-2H-피란-4-일)카바메이트를 황색 오일로서 수득하였다(155 mg, 4단계에 걸쳐 24%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 5.44 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.52 (s, 1H), 4.19 (dd, J = 11.9, 4.6 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.68-3.60 (m, 1H), 2.29 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 2.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.75 (s, 1H), 1.61-1.47 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
중간체 97. (3S,4R,7S)-4-아자이도-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올
Figure pct00112
MeOH/물(60 mL/15 mL) 중의 5-(5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일)-1-메틸-4-나이트로-피라졸(2.7 g, 11.3 mmol, 중간체 19)의 용액에 암모늄 클로라이드(1.51 g, 28.3 mmol) 및 나트륨 아자이드(3.67 g, 56.5 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 폭발 차폐막 뒤에서 70℃로 4시간 동안 가열하였다. MeOH를 감압 하에서 제거하고, 수성 잔사를 EtOAc(100 mL)로 추출하였다. 유기 층을 수성 NaHCO3(3 x 20 mL)로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-100% EtOAc/이소헥산) 및 이어서 키랄 SFC 크로마토그래피를 통해 정제하여, 제 2 용리 이성질체로서 (3S,4R,7S)-4-아자이도-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올을 투명한 검으로서 수득하였다(1.4 g, 41%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 5.43-5.37 (m, 1H), 4.18 (dd, J = 13.9, 2.1 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.97-3.77 (m, 3H), 2.45 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 2.32-2.09 (m, 2H), 2.10-1.85 (m, 2H).
중간체 98. (4R,7S)-4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온
Figure pct00113
DCM(35 mL) 중의 (3S,4R,7S)-4-아자이도-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-3-올(1.4 g, 4.96 mmol, 중간체 90)의 용액에 데스-마틴 페리디오난(2.52 g, 5.96 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 수성 포화 NaHCO3(60 mL) 및 20% 나트륨 티오설페이트 용액(50 mL)을 가하고, 염의 완전한 용해가 관찰될 때까지, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(0-40% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, (4R,7S)-4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온을 회백색 고체로서 수득하였다(1.1 g, 82%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 5.38 (dd, J = 10.2, 2.7 Hz, 1H), 4.62-4.49 (m, 2H), 4.31-4.22 (m, 1H), 4.08 (s, 3H), 2.31-2.17 (m, 3H), 2.15-2.04 (m, 1H).
중간체 99. (3R,4R,7S)-4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올
Figure pct00114
중간체 57에 대한 절차에 따라, (4R,7S)-4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온으로부터 출발하여 (3R,4R,7S)-4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올을 진한 오렌지색 오일로서 수득하였다(850 mg, 74%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.68-5.60 (m, 1H), 4.24-4.14 (m, 3H), 4.01 (s, 3H), 3.72-3.58 (m, 1H), 2.45-2.31 (m, 1H), 2.30-2.09 (m, 2H), 2.01-1.81 (m, 2H).
중간체 100. 3급-부틸 N-[(3R,4R,7S)-3-메톡시-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00115
중간체 58에 대한 절차에 따라, (3R,4R,7S)-4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올로부터 출발하여, 3급-부틸 N-[(3R,4R,7S)-3-메톡시-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트를 무색 오일로서 수득하였다(357 mg, 3단계에 걸쳐 32%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.00 (s, 1H), 5.60-5.53 (m, 1H), 5.12-5.02 (m, 1H), 4.21-4.08 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.79 (dd, J = 13.2, 4.4 Hz, 1H), 3.75-3.70 (m, 1H), 3.41 (s, 3H), 2.28-2.07 (m, 1H), 1.97-1.89 (m, 2H), 1.80-1.72 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
중간체 101. 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-3-하이드록시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00116
THF(50 mL) 및 물(10 mL) 중의 (3S,4R,7R)-4-아자이도-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올(중간체 90)(1.19 g, 4.22 mmol)의 용액에 트라이페닐포스핀(1.22 g, 4.64 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 70℃로 24시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 EtOAc(100 mL)로 희석하고, 염수(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를, MeOH로 세척하고 MeOH/DCM 중의 3%의 7 N NH3로 용리하는 SCX 컬럼에 통과시켜, 오일을 수득하였다. 상기 오일을 DCM(13.5 mL)에 용해시키고, DIPEA(1.08 mL, 6.21 mmol) 및 다이-3급-부틸-다이카보네이트(1.36 g, 6.21 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이어서 감압 하에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(0-60% EtOAc/이소헥산)를 통해 정제하여, 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-3-하이드록시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트(약간의 트라이페닐포스핀 옥사이드로 오염됨)를 투명한 검으로서 수득하였다(895 mg, 2단계에 걸쳐 60%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.42-5.36 (m, 1H), 4.83 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 13.4 Hz, 2H), 4.08 (s, 3H), 3.86-3.76 (m, 3H), 2.18-2.07 (m, 1H), 2.02-1.89 (m, 3H), 1.47 (s, 9H).
중간체 102. 3급-부틸 N-[(3R,4R,7S)-7-[4-[(6-브로모-5-플루오로-피리딘-2-카본일)아미노]-2-메틸-피라졸-3-일]-3-메톡시-옥세판-4-일]카바메이트
Figure pct00117
중간체 65에 대한 절차에 따라, 3급-부틸 N-[(3R,4R,7S)-3-메톡시-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트(중간체 100)로부터 출발하고, 2-브로모-5-(3급-부톡시카본일아미노)티아졸-4-카복실산을 6-브로모-5-플루오로-피리딘-2-카복실산(US2010/56576 A1 참조)으로 대체하여, 3급-부틸 N-[(3R,4R,7S)-7-[4-[(6-브로모-5-플루오로-피리딘-2-카본일)아미노]-2-메틸-피라졸-3-일]-3-메톡시-옥세판-4-일]카바메이트(테트라메틸우레아로 오염됨)를 투명한 오일로서 수득하였다(169 mg, 2단계에 걸쳐 30%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.37 (s, 1H), 8.26-8.17 (m, 2H), 7.63-7.55 (m, 1H), 5.02 (br s, 1H), 4.96 (dd, J = 9.0, 3.6 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 13.2, 4.4 Hz, 1H), 4.05-3.94 (m, 2H), 3.85-3.80 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.47 (s, 3H), 2.10-1.91 (m, 3H), 1.86-1.78 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).
중간체 103. 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-7-(4-(2-브로모티아졸-4-카복스아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-플루오로옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00118
중간체 65에 대한 절차에 따라, 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-3-플루오로-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트(중간체 80)로부터 출발하고, 2-브로모-5-(3급-부톡시카본일아미노)티아졸-4-카복실산을 2-브로모티아졸-4-카복실산(시판)으로 대체하여, 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-7-(4-(2-브로모티아졸-4-카복스아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-플루오로옥세판-4-일)카바메이트를 수득하였다.
중간체 104. 3급-부틸 ((3R,4R,7S)-7-(4-(2-브로모티아졸-4-카복스아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-플루오로옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00119
중간체 65에 대한 절차에 따라, 3급-부틸 ((3R,4R,7S)-3-플루오로-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트(중간체 24)로부터 출발하고, 2-브로모-5-(3급-부톡시카본일아미노)티아졸-4-카복실산을 2-브로모티아졸-4-카복실산(시판)으로 대체하여, 3급-부틸 ((3R,4R,7S)-7-(4-(2-브로모티아졸-4-카복스아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-플루오로옥세판-4-일)카바메이트를 수득하였다.
중간체 105. 3급-부틸 ((3R,4R,7S)-7-(4-(2-브로모티아졸-4-카복스아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00120
중간체 65에 대한 절차에 따라, 3급-부틸 ((3R,4R,7S)-3-메톡시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트(중간체 93)로부터 출발하고, 2-브로모-5-(3급-부톡시카본일아미노)티아졸-4-카복실산을 2-브로모티아졸-4-카복실산(시판)으로 대체하여, 3급-부틸 ((3R,4R,7S)-7-(4-(2-브로모티아졸-4-카복스아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시옥세판-4-일)카바메이트를 수득하였다.
중간체 106. 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-7-(4-(2-브로모티아졸-4-카복스아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00121
중간체 65에 대한 절차에 따라, 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-3-메톡시-7-(1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일)카바메이트(중간체 21)로부터 출발하고, 2-브로모-5-(3급-부톡시카본일아미노)티아졸-4-카복실산을 2-브로모티아졸-4-카복실산(시판)으로 대체하여, 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-7-(4-(2-브로모티아졸-4-카복스아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시옥세판-4-일)카바메이트를 수득하였다.
중간체 107. 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-7-(4-(6-브로모-5-플루오로피콜린아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-플루오로옥세판-4-일)카바메이트
Figure pct00122
중간체 65에 대한 절차에 따라, 3급-부틸 N-[(3S,4R,7S)-3-플루오로-7-(2-메틸-4-나이트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트(중간체 80)로부터 출발하고, 2-브로모-5-(3급-부톡시카본일아미노)티아졸-4-카복실산을 6-브로모-5-플루오로-피리딘-2-카복실산(US2010/56576 A1 참조)으로 대체하여, 3급-부틸 ((3S,4R,7S)-7-(4-(6-브로모-5-플루오로피콜린아미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-플루오로옥세판-4-일)카바메이트를 수득하였다.
중간체 108. 2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00123
테트라하이드로퓨란(15 mL) 및 물(1.5 mL) 중의 메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트(3.27 mmol, 741 mg)의 용액에 2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐보론산(1.8 당량, 5.88 mmol, 1160 mg) 및 칼륨 플루오라이드(3.3 당량, 10.8 mmol, 627 mg)를 가했다. 이 혼합물을 질소로 탈기시키고, 이어서 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(0.2 당량, 0.654 mmol, 617 mg) 및 3급-3급-부틸포스핀(톨루엔 중의 1.0 M; 0.4 당량, 1.31 mmol, 1.3 mL)을 가하고, 반응 혼합물을 마이크로파 하에 100℃로 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔사를, 헵탄 중의 0 내지 50% EtOAc로 용리하는 실리카 상에서 정제하여, 메틸 2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시-페닐)티아졸-4-카복실레이트(2.40 mmol, 685 mg, 74% 수율)를 수득하였다.
메탄올(15 mL) 및 물(5 mL) 중의 메틸 2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시-페닐)티아졸-4-카복실레이트(2.403 mmol, 685.5 mg)의 용액에 리튬 하이드록사이드(1.9 당량, 4.54 mmol, 111 mg)를 가했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 1N HCl(수성)로 켄칭하고, 이어서 EtOAc와 염수 사이에 분배하였다. 유기 층을 농축시켰다. 잔사를 고진공 하에 건조하여, 2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시-페닐)티아졸-4-카복실산(650 mg, 정량적)을 갈색 고체로서 수득하였다.
중간체 109. 2-(2-플루오로-4-메톡시페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00124
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 2-플루오로-4-메톡시페닐보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 110. 1-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)에탄올
Figure pct00125
테트라하이드로퓨란(100 mL) 중의 1-(3,5-다이플루오로페닐)에탄올(10.2 mmol, 1660 mg, 시판)의 용액에 -78℃에서 헥산(2.4 당량, 24.4 mmol, 9.8 mL) 중의 n-부틸리튬(2.5 mol/L)을 적가하였다. 이 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란(2.50 당량, 25.4 mmol, 5.29 mL)을 가하고, 반응 혼합물을 밤새도록 교반하여, 실온으로 가온하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3(수성)로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수(2 x 25 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 여액을 농축시켜, 목적 생성물을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
중간체 111. 2-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)프로판-2-올
Figure pct00126
2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란과 2-(3,5-다이플루오로페닐)프로판-2-올(US2012/225062 참조)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 112. 1-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)사이클로부탄올
Figure pct00127
2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란과 1-(3,5-다이플루오로페닐)에탄올을 1-(3,5-다이플루오로페닐)사이클로부탄올(US2012/225062 참조)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 113. 2-(2,6-다이플루오로-4-(1-하이드록시에틸)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00128
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 1-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)에탄올의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 114. 2-(2,6-다이플루오로-4-(1-하이드록시사이클로부틸)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00129
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 1-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)사이클로부탄올의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 115. 2-(2,6-다이플루오로-4-(2-하이드록시프로판-2-일)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00130
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 2-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)프로판-2-올의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 116. 2-(2-(다이플루오로메틸)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00131
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (2-(다이플루오로메틸)페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 117. 2-(3-플루오로피리딘-4-일)티아졸-4-카복실산
Figure pct00132
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (3-플루오로피리딘-4-일)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 118. 2-(2,5-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00133
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (2,5-다이플루오로페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 119. 2-(5-클로로-2-플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00134
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (5-클로로-2-플루오로페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 120. 2-(2,6-다이플루오로-3-메틸페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00135
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (2,6-다이플루오로-3-메틸페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 121. (R)-2-(2,6-다이플루오로-4-(1-하이드록시에틸)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00136
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (R)-1-(3,5-다이플루오로페닐)에탄올(시판 공급원)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 122. (S)-2-(2,6-다이플루오로-4-(1-하이드록시에틸)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00137
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (S)-1-(3,5-다이플루오로페닐)에탄올(시판 공급원)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 123. 2-(2,3-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00138
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (2,3-다이플루오로페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 124. 2-(5-에틸-2-플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00139
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (5-에틸-2-플루오로페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 125. 2-(3-클로로-2-플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00140
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (3-클로로-2-플루오로페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 126. 2-(2-클로로-3-플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00141
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (2-클로로-3-플루오로페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 127. 2-(5-사이클로프로필-2-플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00142
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (5-사이클로프로필-2-플루오로페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 128. 2-(2-(트라이플루오로메틸)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00143
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (2-(트라이플루오로메틸)페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 129. 2-(2,6-다이플루오로-4-메틸페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란
Figure pct00144
1,3-다이플루오로-5-메틸벤젠과 부틸 리튬 및 2-이소프로폭시-4,4,5,5,-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 130. 2-(2,6-다이플루오로-4-메틸페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00145
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 2-(2,6-다이플루오로-4-메틸페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 131. 2-(4-클로로-2-플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00146
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (4-클로로-2-플루오로페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 132. 2-(2-플루오로-6-메틸페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00147
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 (2-플루오로-6-메틸페닐)보론산의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 133. 2-(5-브로모-2-플루오로페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00148
피리딘(6.5 mL) 중의 5-브로모-2-플루오로-벤조나이트릴(12.4 mmol, 2470 mg)을 암모늄 설파이드(물 중의 40 중량%, 1.1 당량, 13.6 mmol, 2.32 mL) 및 트라이에틸아민(1.1 당량 , 13.6 mmol, 1.90 mL)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 50℃로 3시간 동안 가열하고, 이어서 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 물(3x) 및 염수(3x)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조하고, 이어서 농축시켰다. 잔사를, 헵탄 중의 0 내지 50% EtOAc로 용리하는 실리카 상에서 정제하여, 5-브로모-2-플루오로-벤젠카보티오아미드를 수득하였다(2.84 g, 94% 수율).
에탄올(30 mL) 중의 5-브로모-2-플루오로-벤젠카보티오아미드(11.8 mmol, 2840 mg) 및 에틸 브로모피루베이트(1.05 당량, 12.4 mmol, 1.56 mL)의 혼합물을 80℃로 밤새도록 가열하였다. 이 혼합물을 농축시키고, 잔사를, 헵탄 중의 0 내지 20% EtOAc로 용리하는 실리카 상에서 정제하여, 에틸 2-(5-브로모-2-플루오로-페닐)티아졸-4-카복실레이트(2960 mg, 76.14% 수율)를 투명한 오일로서 수득하였다.
메탄올(40 mL) 및 물(10 mL) 중의 에틸 2-(5-브로모-2-플루오로-페닐)티아졸-4-카복실레이트(8.97 mmol, 2960 mg)의 용액에 리튬 하이드록사이드(1.6 당량, 14.2 mmol, 347 mg)를 가했다. 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시키고, 물에 현탁시키고, 이어서 2N HCl(수성)로 켄칭하였다. 고체를 모으고, 물로 세척하고, 고진공 하에 건조하여, 2-(5-브로모-2-플루오로-페닐)티아졸-4-카복실산(2410 mg, 89% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 134. 2-(6-(트라이플루오로메틸)피리딘-2-일)티아졸-4-카복실산
Figure pct00149
중간체 133에 대한 절차에 따라, 5-브로모-2-플루오로-벤조나이트릴을 6-(트라이플루오로메틸)피콜리노나이트릴로 대체하여, 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 135. 2-(2-플루오로-4-메틸페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00150
중간체 133에 대한 절차에 따라, 5-브로모-2-플루오로-벤조나이트릴을 2-플루오로-4-메틸벤조나이트릴로 대체하여, 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 136. 6-(2,6-다이플루오로-4-(2-하이드록시프로판-2-일)페닐)-5-플루오로피콜린산
Figure pct00151
2-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)프로판-2-올과 메틸 6-브로모-5-플루오로피콜린에이트(US2012/225062 참조)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 137. 6-(2,6-다이플루오로-4-하이드록시사이클로부틸)페닐)-5-플루오로피콜린산
Figure pct00152
1-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)사이클로부탄올과 메틸 6-브로모-5-플루오로피콜린에이트(US2012/225062 참조)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 138. 6-(2,6-다이플루오로-4-(1-하이드록시에틸)페닐)-5-플루오로피콜린산
Figure pct00153
1-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)에탄올과 메틸 6-브로모-5-플루오로피콜린에이트(US2012/225062 참조)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 139. 6-(2,6-다이플루오로-4-하이드록시페닐)-5-플루오로피콜린산
Figure pct00154
(2,6-다이플루오로-4-하이드록시페닐)보론산과 메틸 6-브로모-5-플루오로피콜린에이트(US2012/225062 참조)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 140. 6-(2,6-다이플루오로-4-(1-메톡시에틸)페닐)-5-플루오로피콜린산
Figure pct00155
N,N-다이메틸포름아미드(50 mL) 중의 메틸 6-[2,6-다이플루오로-4-(1-하이드록시에틸)페닐]-5-플루오로-피리딘-2-카복실레이트(1.21 mmol, 376 mg; 중간체 136의 경로에서 끝에서 두번째의 중간)의 용액에 0℃에서 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중의 60 중량%, 1.5 당량, 1.81 mmol, 72.5 mg)를 가했다. 이 혼합물을 2분 동안 교반하고, 이어서 요오드메탄(3.0 당량, 3.62 mmol, 0.226 mL)을 가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수(2 x 25 mL)로 세척하고, 건조하고(Na2SO4), 농축시켰다. 잔사를, 헵탄 중의 0 내지 50% EtOAc로 용리하는 실리카 상에서 정제하여, 메틸 6-(2,6-다이플루오로-4-(1-메톡시에틸)페닐)-5-플루오로피콜린에이트를 수득하였다(392 mg, 63%). 이 에스터를 MeOH(15 mL) 및 물(5 mL)로 희석하고, 리튬 하이드록사이드(60 mg)를 가했다. 이 혼합물을 RT에서 밤새도록 교반하였다. 1 N HCl(수성)을 가하여 이 반응물을 켄칭하고, 이어서 이 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 염수(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 건조하고(Na2SO4), 진공 중에서 농축시켜, 표제 화합물(정량적)을 수득하고, 이룰 추가의 정제 없이 사용하였다.
중간체 141. 사이클로프로필(3,5-다이플루오로페닐)메탄올
Figure pct00156
테트라하이드로퓨란(10 mL)에 용해된 3,5-다이플루오로벤즈알데하이드의 용액(1.0 g, 7.0 mmol)을 빙욕 내에서 냉각시켰다. 사이클로프로필마그네슘 브로마이드(THF 중의 0.5 M, 1.2 당량, 8.4 mmol)를 천천히 가하고, 이 혼합물을 0℃에서 60분 동안 교반하였다. 이 반응물을 포화 암모늄 클로라이드로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 농축시켜, 직접 사용하기에 충분하 순도의 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 141. 사이클로프로필(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)메탄올
Figure pct00157
2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란, 부틸리튬 및 사이클로프로필(3,5-다이플루오로페닐)메탄올의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 142. 6-(4-(사이클로프로필(하이드록시)메틸)-2,6-다이플루오로페닐)-5-플루오로피콜린산
Figure pct00158
사이클로프로필(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)메탄올과 메틸 6-브로모-5-플루오로피콜린에이트(US2012/225062 참조)의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 143. 3-(3,5-다이플루오로페닐)테트라하이드로퓨란-3-올
Figure pct00159
테트라하이드로퓨란(70 mL) 중의 1-브로모-3,5-다이플루오로-벤젠(4.00 g, 20.7 mmol)의 용액에 질소 하에 마그네슘(6.0 당량, 124 mmol)을 가하고, 이 용액을 3시간 동안 85℃로 가열하였다. 이 용액을 실온(RT)으로 냉각시키고, THF(20 mL) 중의 3-옥소테트라하이드로퓨란(1 당량, 20.726 mmol)을 시린지를 통해 가했다. 이 혼합물을 RT에서 3일 동안 교반하였다. 이 반응물을 NaHCO3로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 염수(2 x 25 mL)로 세척하였다. 콤비플래시(CombiFlash)(헵탄 중의 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여, 표제 화합물(405 mg, 9.7%)을 수득하였다.
중간체 144. 3-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)테트라하이드로퓨란-3-올
Figure pct00160
3-(3,5-다이플루오로페닐)테트라하이드로퓨란-3-올, 부틸리튬 및 2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 145. 2-(2,6-다이플루오로-4-(3-하이드록시테트라하이드로퓨란-3-일)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00161
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 3-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)테트라하이드로퓨란-3-올의 반응은 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 146. 2-(2,6-다이플루오로-4-(테트라하이드로퓨란-3-일)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00162
다이클로로메탄(1 mL) 중의 메틸 2-[2,6-다이플루오로-4-(3-하이드록시테트라하이드로퓨란-3-일)페닐]티아졸-4-카복실레이트(250 mg, 0.732 mmol)의 용액에 트라이플루오로아세트산(1 mL)을 가했다. 이 혼합물을 마이크로파 반응기 내에서 120℃로 2시간 동안 가열하였다. 진공 중에서 농축한 후, 콤비플래시(등록상표)(헵탄 중의 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여, 메틸 2-(4-(2,5-다이하이드로퓨란-3-일)-2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복실레이트(57 mg, 24% 수율)를 올레핀 이성질체들의 혼합물로서 수득하였다.
이 혼합물을 30 mL의 MeOH로 희석하고, H-큐브 수소화반응기(hydrogenator)(1 mL/min, 60 bar, 70 deg C)에 통과시키고, 농축한 후, 메틸 2-(2,6-다이플루오로-4-(테트라하이드로퓨란-3-일)페닐)티아졸-4-카복실레이트(44 mg)를 수득하였다. 이 에스터를 THF(3 mL) 및 물(1.5 mL)로 희석하고, LiOH(6.5 mg, 2.0 당량)를 가했다. RT에서 2.5시간 동안 교반한 후, 이 혼합물을 1 N HCl(수성)로 중화시키고, EtOAc로 희석하고, 염수(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 건조하고(Na2SO4), 진공 중에서 농축시켜, 표제 화합물(42 mg, 정량적)을 수득하였다.
중간체 147. 메틸 2-(2,6-다이플루오로-4-하이드록시페닐)티아졸-4-카복실레이트
Figure pct00163
테트라하이드로퓨란(10 mL) 및 물(1 mL) 중의 메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트(500 mg, 2.16 mmol), 2,6-다이플루오로-4-하이드록시페닐보론산(2 당량, 767 mg) 및 칼륨 플루오라이드(3.3 당량, 414 mg)의 현탁액에 비스(3급-3급-부틸포스핀)팔라듐(0)(0.1 당량, 110 mg)을 가하고, 이 혼합물을 마이크로파 반응기 내에서 120℃로 15분 동안 가열하였다. 진공 중에서 농축한 후, 반응 혼합물을 콤비플래시(헵탄 중의 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여, 241 mg의 표제 화합물을 메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와의 1:1 혼합물로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 직접 사용하였다.
중간체 148. (R)-2-(2,6-다이플루오로-4-((테트라하이드로퓨란-3-일)옥시)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00164
테트라하이드로퓨란(5 mL) 중의 메틸 2-(2,6-다이플루오로-4-하이드록시-페닐)티아졸-4-카복실레이트(207 mg, 0.763 mmol) 및 (R)-3-하이드록시테트라하이드로퓨란(3 당량, 206 mg)의 용액에 트라이페닐포스핀(3 당량, 600 mg) 및 다이이소프로필 아조다이카복실레이트(3 당량, 0.45 mL)를 가했다. 이 혼합물을 RT에서 2일 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시키고, EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 농축시켰다. 잔사를 THF(3 mL) 및 물(1 mL)로 희석하고, LiOH(36 mg)를 가했다. RT에서 2.5시간 동안 교반한 후, 이 반응물을 1 N HCl(수성)로 중화시키고, EtOAc로 희석하고, 염수(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 건조하고(Na2SO4), 진공 중에서 농축시켜, 트라이페닐포스핀 옥사이드로 오염된 표제 화합물 및 다른 부산물을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
중간체 149. (S)-2-(2,6-다이플루오로-4-((테트라하이드로퓨란-3-일)옥시)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00165
중간체 147에 대한 절차에 따라, (R)-3-하이드록시테트라하이드로퓨란을 (S)-3-하이드록시테트라하이드로퓨란으로 대체하여, 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 150. 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-5-(트라이플루오로메틸)-1H-피라졸
Figure pct00166
마이크로파 반응 바이알 내에서, 4-브로모-1-메틸-5-(트라이플루오로메틸)피라졸(520 mg, 2.27 mmol, 시판), 비스(피나콜레이토)이붕소(1.3 당량, 749 mg), 비스(트라이페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드(0.05 당량, 79 mg) 및 칼륨 아세테이트(2 당량, 4445 mg)를 톨루엔(15 mL)에 용해시켰다. 이 혼합물을 마이크로파 반응기 내에서 150℃로 10분 동안 가열하였다. rt로 냉각시킨 후, 이 혼합물을 셀라이트(EtOAc 세척) 상에서 여과하였다. 여액을 농축시켜, 직접 사용하기에 충분한 순도의 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 151. 5-플루오로-1,3-다이메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸
Figure pct00167
브로모-5-플루오로-1,3-다이메틸-1H-피라졸(시판), 비스(피나콜레이토)다이보론, 비스(트라이페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드 및 칼륨 아세테이트는 톨루엔 중에서 반응하여 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 152. 2-(2,6-다이플루오로-4-(3-플루오로옥세탄-3-일)페닐)티아졸-4-카복실산
Figure pct00168
메틸 2-브로모티아졸-4-카복실레이트와 3-(3,5-다이플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)옥세탄-3-올(US2012/225062 참조)의 반응은, 에스터 가수분해 이전에 하기 불화 단계를 추가한 후, 표제 화합물을 수득하였다: 다이클로로메탄(5 mL) 중의 메틸 2-(2,6-다이플루오로-4-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)티아졸-4-카복실레이트(50 mg)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, 이어서 데옥소-플루오르(1.5 당량, 톨루엔 중의 50 중량% 용액)를 가했다. 이 혼합물을 30분에 걸쳐 천천히 실온으로 가온하였다. 이어서, 포화 NaHCO3(수성)를 가하여 이 반응물을 켄칭하고, 이어서 이 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 염수(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 건조하고(Na2SO4), 진공 중에서 농축시켰다. 콤비플래시(헵탄 중의 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여, 메틸 2-(2,6-다이플루오로-4-(3-플루오로옥세탄-3-일)페닐)티아졸-4-카복실레이트를 수득하였다.
중간체 153. 3급-부틸 ((2R*,3S*,4R*,6R*)-6-(4-아미노-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-하이드록시-2,3-다이메틸테트라하이드로-2H-피란-4-일)카바메이트(라세미체)
Figure pct00169
3급-부틸 ((2R*,3S*,4R*,6R*)-6-(3-아미노피리딘-4-일)-3-하이드록시-2,3-다이메틸테트라하이드로-2H-피란-4-일)카바메이트(WO2012/004217)와 유사한 방식으로 제조하되, 3-나이트로이소니코틴알데하이드를 1-메틸-4-나이트로-1H-피라졸-5-카브알데하이드로 대체하였다.
표 1. 화학식 I의 화합물
실시예 101 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로-4-((S)-1-플루오로에틸)페닐)티아졸-4-카복사미드 101
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 498.18
실시예 102 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(2-플루오로-6-하이드록시-페닐)티아졸-4-카복사미드 102
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 450.1643
실시예 103 N-[5-[(2R,5S,6R)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-사이클로프로필-피라졸-4-일]-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 103
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 478.1722
실시예 104 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(2,3-다이하이드로벤조푸란-5-일)티아졸-4-카복사미드 104
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 458.1878
실시예 105 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-피라진-2-일-티아졸-4-카복사미드 105
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 418.1565
실시예 106 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로-4-((R)-1-플루오로에틸)페닐)티아졸-4-카복사미드 106
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 498.18
실시예 107 N-(5-((2R,5S,6R,7S)-5-아미노-6-메톡시-7-메틸옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 107
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 478.1956
실시예 108 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(5-클로로-2-플루오로-4-메톡시-페닐)티아졸-4-카복사미드 108
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 498.1722
실시예 109 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(5-플루오로-1H-인다졸-6-일)티아졸-4-카복사미드 109
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 474.1643
실시예 110 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(5-메틸피라진-2-일)티아졸-4-카복사미드 110
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 432.1722
실시예 111 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-((S)-6,8-다이플루오로-4-하이드록시크로만-7-일)티아졸-4-카복사미드 111
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 524.1878
실시예 112 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-((R)-6,8-다이플루오로-4-하이드록시크로만-7-일)티아졸-4-카복사미드 112
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 524.1878
실시예 113 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(1,4,5,6-테트라하이드로사이클로펜타[c]피라졸-3-일)티아졸-4-카복사미드 113
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 446.1878
실시예 114 N-[5-[(2R,5S,6R)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-사이클로프로필-피라졸-4-일]-6-(2,6-다이플루오로페닐)-5-플루오로-피리딘-2-카복사미드 114
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 490.18
실시예 115 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-(2,2-다이플루오로에틸)-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 115
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 501.47
실시예 116 N-(5-((2R,5S,6R)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-(2,2-다이플루오로에틸)-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 116
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 501.47
실시예 117 N-[5-[(2S,5R,6S,7S)-5-아미노-6-메톡시-7-메틸-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 117
Figure pct00170
단계 1: 1-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)펜트-4-엔-1-올을 제조하고, 2개의 거울상 이성질체를 하기 조건을 사용하여 키랄 정지상에서 초임계 유체(SFC) 크로마토그래피로 분리하였다:
칼럼: 키랄팩 AD-H (5 x 25 cm; 5 ㎛)
이동상: CO2:MeOH(+0.2% Et2NH) = 55:45
유량: 180 g/min
배압: 100 bar
칼럼 온도: 35℃
2개의 거울상 이성질체는 2.82 및 3.98분에서 용리하고, 후자의 피크는 이후 원하는 거울상 이성질체 (1S)-1-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)펜트-4-엔-1-올 117a인 것으로 측정되었고 이후의 모든 화학에 사용되었다. 무수 테트라하이드로푸란(109 mL) 중의 (1S)-1-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)펜트-4-엔-1-올 117a(101.8 g, 481.9 mmol)의 용액에 헥산 중의 다이에틸아연(1 mol/L, 240.9 mL, 240.9 mmol, 1.10 당량)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반하고, 이때 대부분의 발생된 가스가 가라앉았지만 여전히 생성되었다. 1-메틸알릴 아세테이트(25.0 g, 219.0 mmol), 팔라듐(II) 아세테이트(2.46 g, 10.95 mmol, 0.05 당량), 2-(다이-3급-부틸포스피노)바이페닐(4.95 g, 16.43 mmol, 0.075 당량), 암모늄 아세테이트(16.88 g, 219.0 mmol, 1.00 당량), 및 무수 테트라하이드로푸란(219 mL)을 혼합물에 가하고 3일 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 물 및 에틸 아세테이트로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고, EtOAc로 5회 추출하고, MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시켰다. 잔사를 4개의 배취로 분리하고, 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(330g, 헵탄 중의 0-20% EtOAc, 26.6 min 구배, UV 하에 4:1 헵탄:EtOAc에서 생성물의 Rf 약 0.3, UV 하에 4:1 헵탄:EtOAc에서 출발물질의 Rf 약 0.1)하여 목적 생성물 1-메틸-5-[(1S)-1-(1-메틸알릴옥시)펜트-4-엔일]-4-니트로-피라졸을 2개의 부분입체 이성질체 117b(19.17 g, 33% 수율)의 혼합물로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 - 8.00 (m, 1H), 5.88 - 5.41 (m, 3H), 5.24 - 4.89 (m, 4H), 4.09 - 4.01 (m, 3H), 3.94 - 3.58 (m, 1H), 2.38 - 1.64 (m, 4H), 1.31 - 1.18 (m, 3H). LCMS: m/z = 266.2 (M + H). 또한 89.46g의 출발 물질이 회수되었다.
Figure pct00171
단계 2: 무수 다이클로로메탄(942 mL) 중의 1-메틸-5-[(1S)-1-(1-메틸알릴옥시)펜트-4-엔일]-4-니트로-피라졸 117b(2.50 g, 9.42 mmol)의 용액에 (1,3-비스-(2,4,6-트라이메틸페닐)-2-이미다졸리딘일리덴)다이클로로(o-이소프로폭시페닐메틸렌)루테늄(그루브 촉매 2세대, CAS 등록 번호 301224-40-8, 825 mg, 0.94 mmol, 0.10 당량)을 가했다. 이어서, 혼합물을 42℃로 가열하고 3일 동안 교반하였다. 반응물을 농축하고 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(80g, 헵탄 중의 0-20% EtOAc, 25 min 구배, UV 하에 또는 KMnO4로 염색된 4:1헵탄:EtOAc에서 생성물의 Rf 약 0.4 및 0.3)하였다. 샘플을 SFC 정제(하기 조건 참조)하여 부분입체 이성질체를 단리하였다. 1-메틸-5-[(2S,7S)-7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일]-4-니트로-피라졸 117c(0.54 g, 24%) 및 1-메틸-5-[(2S,7R)-7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일]-4-니트로-피라졸 117d(0.49 g, 22%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) 1-메틸-5-[(2S,7S)-7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일]-4-니트로-피라졸 δ 8.21 (s, 1H), 5.89 - 5.81 (m, 1H), 5.66 - 5.61 (m, 1H), 5.57 (dd, J = 9.6, 3.7 Hz, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 2.56 - 2.44 (m, 1H), 2.37 - 2.24 (m, 1H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.96 - 1.86 (m, 1H), 1.26 (d, J = 6.7 Hz, 3H). LCMS: m/z = 238.12 (M + H). 1H NMR (400 MHz, DMSO) 1-메틸-5-[(2S,7R)-7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일]-4-니트로-피라졸 δ 8.21 (s, 1H), 5.79 - 5.70 (m, 2H), 5.53 - 5.47 (m, 1H), 4.90 - 4.80 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 2.63 - 2.52 (m, 1H), 2.34 - 2.18 (m, 2H), 2.01 - 1.90 (m, 1H), 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: m/z = 238.12 (M + H).
SFC 조건:
칼럼: 페노메넥스 셀룰로오스(Phenomenex Cellulose)-1 (4.6 x 50 mm; 3 ㎛)
이동상: CO2:MeOH(+0.1% 폼산) = 95:5
유량: 4 mL/min
배압: 120 bar
칼럼 온도: 40℃
체류 시간: 1-메틸-5-[(2S,7S)-7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일]-4-니트로-피라졸(0.588분); 1-메틸-5-[(2S,7R)-7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일]-4-니트로-피라졸(0.678분)
Figure pct00172
단계 3: 무수 다이클로로메탄(16 mL) 중의 1-메틸-5-[(2S,7S)-7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일]-4-니트로-피라졸 117c(0.20 g, 0.84 mmol)의 용액에 m-클로로퍼옥시벤조산(727 mg, 4.215 mmol, 5.0 당량)을 가했다. 샘플을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔사를 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(40g, 헵탄 중의 0-30% EtOAc, 28 min 구배, UV 하에서 2:1 헵탄:EtOAc에서 생성물의 Rf 약 0.3)하여 1-메틸-5-[(1S,4S,6S,7R)-6-메틸-5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일]-4-니트로-피라졸 117e(213.5 mg, 66%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.00 (s, 1H), 5.16 (dd, J = 9.8, 1.3 Hz, 1H), 4.14 - 4.08 (m, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.30 - 3.25 (m, 1H), 2.98 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 2.52 - 2.43 (m, 1H), 2.32 - 2.22 (m, 1H), 2.15 - 2.04 (m, 1H), 1.82 - 1.75 (m, 1H), 1.48 (d, J = 6.6 Hz, 3H). LCMS: m/z = 254.4 (M + H).
Figure pct00173
단계 4: 1-메틸-5-[(1S,4S,6S,7R)-6-메틸-5,8-다이옥사바이사이클로[5.1.0]옥탄-4-일]-4-니트로-피라졸 117e(0.14 g, 0.56 mmol), 메탄올(5 mL), 및 물(1 mL)을 조합하였다. 여기에 염화 암모늄(149 mg, 2.78 mmol, 5.0 당량)을 가하고, 이후 아자이드화 나트륨(182.5 mg, 2.780 mmol, 5.0 당량)을 가했다. 혼합물을 밤새 70℃로 가열했다. LC-MS는 대부분 생성물을 나타내는 것처럼 보였지만, 미량의 출발 물질이 여전히 존재하는 것처림 보였다. 염화 암모늄(149 mg, 2.78 mmol, 5.0 당량) 및 아자이드화 나트륨(182.5 mg, 2.780 mmol, 5.0 당량)을 가하고, 혼합물을 밤새 70℃로 가열했다. 실온으로 냉각한 후, 반응물을 물로 희석하고 CH2Cl2로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시키고, 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(4g, 헵탄 중의 0-100% EtOAc, 11분 구배, UV 하에서 1:1 헵탄:EtOAc에서 Rf 약 0.3)하여 (2S,3S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올 117g(148 mg, 90%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.53 (dd, J = 10.3, 4.3 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.99 - 3.92 (m, 1H), 3.84 - 3.78 (m, 1H), 3.75 - 3.70 (m, 1H), 2.31 - 2.23 (m, 1H), 2.19 - 2.16 (m, 1H), 2.16 - 2.10 (m, 1H), 2.07 - 1.82 (m, 2H), 1.29 (d, J = 6.6 Hz, 3H). LCMS: m/z = 297.3 (M + H).
단계 3 및 4에서와 동일한 절차에 따라, 1-메틸-5-[(2S,7R)-7-메틸-2,3,4,7-테트라하이드로옥세핀-2-일]-4-니트로-피라졸을 (2R,3S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올 117h로 전환시켰다.
Figure pct00174
117i
단계 5: 0℃에서 무수 테트라하이드로푸란(4 mL) 중의 (2S,3S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올 117g(0.15 g, 0.50 mmol)의 용액에 나트륨 하이드라이드(광유 중의 60%, 60.0 mg, 1.50 mmol, 3.0 당량)를 가했다. 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반하고, 이어서 요오도메탄(0.15 mL, 2.50 mmol, 5.0 당량)을 적가했다. 반응물을 서서히 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 물을 적가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하고, MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시키고, 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(4g, 헵탄 중의 0-30% EtOAc, 22분 구배, UV 하에 2:1 헵탄:EtOAc에서 생성물의 Rf 약 0.3)하여 5-[(2S,5R,6S,7S)-5-아자이도-6-메톡시-7-메틸-옥세판-2-일]-1-메틸-4-니트로-피라졸 117i(121 mg, 78%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.54 (dd, J = 10.0, 4.5 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.95 - 3.84 (m, 2H), 3.55 (s, 3H), 3.22 (dd, J = 5.8, 2.6 Hz, 1H), 2.29 - 2.20 (m, 1H), 2.15 - 2.07 (m, 1H), 2.01 - 1.79 (m, 2H), 1.29 (d, J = 6.5 Hz, 3H). LCMS: m/z = 311.1 (M + H).
Figure pct00175
117j
단계 6: 5-[(2S,5R,6S,7S)-5-아자이도-6-메톡시-7-메틸-옥세판-2-일]-1-메틸-4-니트로-피라졸 117i(0.12 g, 0.39 mmol), 트라이페닐포스핀(123 mg, 0.47 mmol, 1.20 당량), 테트라하이드로푸란(5 mL), 및 물(1mL)을 조합하고, 60℃에서 가열하고, 4일 동안 교반하였다. 반응물을 H2O 및 EtOAc로 희석하고, EtOAc로 3회 추출하고, MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시켰다. 잔사를 무수 다이클로로메탄(5 mL)에 재용해시켰다. N,N-다이이소프로필에틸아민(0.14 mL, 0.78 mmol, 2.0 당량) 및 다이-3급-부틸 다이카보네이트(112 mg, 0.51 mmol, 1.30 당량)를 가하고 1시간 동안 교반했다. 반응물을 증발시키고, 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(12g, 헵탄 중의 0-40% EtOAc, 22분 구배, UV 하에 2:1 헵탄:EtOAc에서 Rf 약0.2)하여 3급-부틸 N-[(2S,3S,4R,7S)-3-메톡시-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트 117j(116 mg, 77%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.48 (dd, J = 9.7, 4.1 Hz, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.08 (s, 3H), 3.99 - 3.85 (m, 2H), 3.53 (s, 3H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 2.20 - 2.01 (m, 2H), 2.00 - 1.82 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.29 (d, J = 6.5 Hz, 3H). LCMS: m/z = 385.3 (M + H).
Figure pct00176
117
단계 7: 3급-부틸 N-[(2S,3S,4R,7S)-3-메톡시-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-4-일]카바메이트 117j을 MeOH 중의 탄소 상의 10% Pd으로 환원하고, 중간체 아민 3급-부틸 (2S,3S,4R,7S)-7-(4-아미노-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시-2-메틸옥세판-4-일카바메이트을 DIPEA 및 CH2Cl2 중의 2,2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복실산 및 PyBOP와 커플링하였다. 생성된 커플링 중간체를 다이옥산 중의 4M HCl 및 MeOH로 처리하여 Boc 기를 제거함으로써 N-[5-[(2S,5R,6S,7S)-5-아미노-6-메톡시-7-메틸-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 117를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.08 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.71 - 7.62 (m, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 5.04 - 4.99 (m, 1H), 4.05 - 3.98 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.07 - 3.02 (m, 1H), 2.94 (s, 3H), 2.84 - 2.80 (m, 1H), 2.26 - 2.17 (m, 1H), 1.76 - 1.67 (m, 1H), 1.66 - 1.43 (m, 4H), 1.15 (d, J = 6.5 Hz, 3H). LCMS: m/z = 478.2 (M + H).
실시예 118 N-(5-((2S,5R,6S,7R)-5-아미노-6-메톡시-7-메틸옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 118
Figure pct00177
실시예 117의 절차에 따라, (2R,3S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올을 O-메틸화하여 5-((2S,5R,6S,7R)-5-아자이도-6-메톡시-7-메틸옥세판-2-일)-1-메틸-4-니트로-1H-피라졸 118b을 수득하고, 이를 환원하고 Boc-보호하여 3급-부틸 (2R,3S,4R,7S)-3-메톡시-2-메틸-7-(1-메틸-4-니트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일카바메이트 118c를 수득하였다.
Figure pct00178
118c
실시예 117의 단계 7에 따라, 중간체 118c를 N-[5-[(2S,5R,6S,7R)-5-아미노-6-메톡시-7-메틸-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 118로 전환했다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.02 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.71 - 7.63 (m, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 2H), 5.00 - 4.94 (m, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.85 - 3.75 (m, 4H), 3.42 (s, 3H), 3.02 - 2.88 (m, 2H), 1.95 - 1.82 (m, 3H), 1.64 - 1.51 (m, 1H), 1.21 (d, J = 6.5 Hz, 3H). LCMS: m/z = 478.17 (M + H).
실시예 119 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(5-메톡시-3-메틸-2-피리딜)티아졸-4-카복사미드 119
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 461.1956
실시예 120 N-[5-[(2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(8-퀴놀릴)티아졸-4-카복사미드 120
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 467.18
실시예 121 N-(5-((2S,5R,6R,7S)-5-아미노-6-플루오로-7-메틸옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 121
Figure pct00179
무수 다이클로로메탄(6 mL) 중의 (2S,3S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올 117g(0.085 g, 0.286 mmol)의 용액에 비스(2-메톡시에틸)아미노황 트라이플루오라이드(데옥소-플루오르, CAS 등록 번호 202289-38-1, 톨루엔 중의 50 질량%)(0.37 mL, 0.858 mmol, 3.0 당량)를 가했다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 이를 서서히 포화 Na2CO3로 급냉하였다. 혼합물을 CH2Cl2로 3회 추출하고, MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시키고, 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(4g, 헵탄 중의 0-100% EtOAc, 22분 구배, UV 하에 2:1 헵탄:EtOAc에서 생성물의 Rf 약 0.3)하여 5-((2S,5R,6R,7S)-5-아자이도-6-플루오로-7-메틸옥세판-2-일)-1-메틸-4-니트로-1H-피라졸 121a(44.6 mg, 52%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.73 - 5.68 (m, 1H), 4.59 (ddd, J = 48.6, 4.2, 1.6 Hz, 1H), 4.14 - 3.88 (m, 5H), 2.48 - 2.33 (m, 1H), 2.21 - 2.12 (m, 1H), 2.02 - 1.83 (m, 2H), 1.33 (dd, J = 6.6, 1.2 Hz, 3H). LCMS: m/z = 299.2 (M + H).
실시예 117의 단계 6 및 7의 절차에 따라, 121a를 N-(5-((2S,5R,6R,7S)-5-아미노-6-플루오로-7-메틸옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 121로 전환했다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.03 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.72 - 7.63 (m, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 2H), 5.06 (dd, J = 8.7, 3.8 Hz, 1H), 4.44 (ddd, J = 49.0, 5.2, 2.4 Hz, 1H), 4.11 - 3.98 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.37 - 3.22 (m, 1H), 2.21 - 2.11 (m, 1H), 1.92 - 1.80 (m, 1H), 1.72 - 1.55 (m, 2H), 1.15 (dd, J = 6.5, 1.3 Hz, 3H). LCMS: m/z = 466.2 (M + H).
실시예 122 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(이미다조[1,2-a]피라진-6-일)티아졸-4-카복사미드 122
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 457.1643
실시예 123 N-(5-((2R,5S,6R)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 123
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 452.1565
실시예 124 N-[5-[(2S,5R,6S,7S)-5-아미노-6-플루오로-7-메틸-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 124
Figure pct00180
무수 다이클로로메탄(12 mL) 중의 (2S,3S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올 117g(0.59 g, 1.98 mmol)의 용액에 중탄산나트륨(831 mg, 9.89 mmol, 5.0 당량)을 가하고, 이후 데스-마틴(Dess-Martin) 퍼요오디난(1.27 g, 2.966 mmol, 1.5 당량)을 가했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 이를 물로 희석하고, 다이클로로메탄으로 3회 추출하고, MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시키고, 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(40g, 헵탄 중의 0-40% EtOAc, 28분 구배, UV 하에 1:1 헵탄:EtOAc에서 생성물의 Rf 약 0.5)하여 (2S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온 124a(525 mg, 90%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 5.40 - 5.36 (m, 1H), 4.52 (dd, J = 11.9, 2.7 Hz, 1H), 4.22 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 2.31 - 2.24 (m, 1H), 2.23 - 2.12 (m, 2H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.44 (d, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS: m/z = 295.5 (M + H).
Figure pct00181
124b
-78℃에서 무수 테트라하이드로푸란(16 mL) 중의 (2S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-온 124a(525 mg, 1.78 mmol)의 용액에 리튬 트라이-2급-부틸보로하이드라이드(THF 중의 1.0 M, 2.1 mL, 2.1 mmol, 1.2 당량)를 적가했다. 생성 용액을 1시간 동안 -78℃에서 교반하고 H2O로 급냉하였다. 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하고, MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시키고, 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(4g, 헵탄 중의 0-50% EtOAc, 22분 구배)하였다. (2S,3R,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올 124b(UV 하에 1:1 헵탄:EtOAc에서 Rf 약 0.5)(294 mg, 55%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.68 (dd, J = 11.0, 3.5 Hz, 1H), 4.04 - 3.97 (m, 4H), 3.78 - 3.73 (m, 1H), 3.73 - 3.68 (m, 1H), 2.46 - 2.34 (m, 1H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 2.13 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 1.97 - 1.80 (m, 2H), 1.32 (d, J = 6.3 Hz, 3H). LCMS: m/z = 297.3 (M + H). 다른 이성질체 (2S,3S,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올 117g을 또한 수득하였다(UV 하에 1:1 헵탄:EtOAc에서 Rf 약 0.3)(178 mg, 34%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 5.68 (dd, J = 11.0, 3.6 Hz, 1H), 4.04 - 3.97 (m, 4H), 3.78 - 3.73 (m, 1H), 3.72 - 3.68 (m, 1H), 2.46 - 2.35 (m, 1H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 2.10 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 1.97 - 1.80 (m, 2H), 1.32 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Figure pct00182
124c
무수 다이클로로메탄(20 mL) 중의 (2S,3R,4R,7S)-4-아자이도-2-메틸-7-(2-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)옥세판-3-올 124b(294 mg, 0.991 mmol)의 용액에 비스(2-메톡시에틸)아미노황 트라이플루오라이드(톨루엔 중의 50 질량%, 1.29 mL, 2.97 mmol, 3.0 당량)를 가했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 이를 조심스럽게 포화 Na2CO3로 급냉하였다. 생성 용액을 CH2Cl2로 3회 추출하고, MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시키고, 실리카 겔을 통해 크로마토그래피(4g, 헵탄 중의 0-20% EtOAc, 33분 구배, UV 하에 2:1 헵탄:EtOAc에서 생성물의 Rf 약 0.3)하여 5-[(2S,5R,6S,7S)-5-아자이도-6-플루오로-7-메틸-옥세판-2-일]-1-메틸-4-니트로-피라졸 124c(26.5 mg, 9%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.53 (dd, J = 10.7, 3.9 Hz, 1H), 4.51 (ddd, J = 47.7, 6.3, 2.6 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 4.05 - 3.87 (m, 2H), 2.31 - 2.22 (m, 1H), 2.14 - 1.83 (m, 3H), 1.34 (dd, J = 6.7, 2.4 Hz, 3H). LCMS: m/z = 299.4 (M + H). 다른 이성질체 및 재배열된 생성물을 또한 수득하였다.
Figure pct00183
124d
실시예 117의 단계 6 및 7의 절차에 따라, 5-((2S,5R,6S,7S)-5-아자이도-6-플루오로-7-메틸옥세판-2-일)-1-메틸-4-니트로-1H-피라졸 124c을 환원하고 Boc-탈보호하여 3급-부틸 (2S,3S,4R,7S)-3-플루오로-2-메틸-7-(1-메틸-4-니트로-1H-피라졸-5-일)옥세판-4-일카바메이트 124d를 수득하고, 이를 MeOH 중의 탄소 상의 10% Pd으로 환원하고 중간체 아민인 3급-부틸 (2S,3S,4R,7S)-7-(4-아미노-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-플루오로-2-메틸옥세판-4-일카바메이트를 DIPEA 및 CH2Cl2 중에서 2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복실산 및 PyBOP와 커플링하였다. 생성된 커플링 중간체인 3급-부틸 (2S,3S,4R,7S)-7-(4-(2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미도)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)-3-플루오로-2-메틸옥세판-4-일카바메이트를 다이옥산 중의 4M HCl 및 MeOH로 처리하여 Boc 기를 제거함으로써 N-[5-[(2S,5R,6S,7S)-5-아미노-6-플루오로-7-메틸-옥세판-2-일]-1-메틸-피라졸-4-일]-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 124를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.96 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.69 - 7.61 (m, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 4.95 (dd, J = 9.1, 4.2 Hz, 1H), 4.24 - 3.97 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.20 - 3.09 (m, 1H), 2.16 - 2.05 (m, 1H), 1.77 - 1.58 (m, 5H), 1.15 (dd, J = 6.6, 2.3 Hz, 3H). LCMS: m/z = 466.2 (M + H).
실시예 125 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(이미다조[1,2-a]피라진-2-일)티아졸-4-카복사미드 125
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 457.1643
실시예 126 N-(5-((2R,5S,6R)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 126
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 438.1409
실시예 127 N-(5-((2R,5S,6R)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1H-피라졸-4-일)-2-(3-메틸피리딘-2-일)티아졸-4-카복사미드 127
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 417.1643
실시예 128 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1H-피라졸-4-일)-2-(3-메틸피리딘-2-일)티아졸-4-카복사미드 128
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 417.1643
실시예 129 N-(5-((2S,5R,6S)-5-아미노-6-플루오로옥세판-2-일)-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드 129
본원에 개시된 절차 및 중간체에 따라 상기 화합물을 제조하였다. MS (M+H/1) = 438.1409
실시예 901 Pim 키나아제 결합 활성
박테리아에서 발현되고 IMAC 컬럼 크로마토그래피로 정제된 융합 단백질로서 PIM-1, -2, 및 -3 효소를 생성하였다(문헌[Sun, X., Chiu, J.F., and He, Q.Y. (2005) Expert Rev. Proteomics, 2:649-657]). 형광-표지된 Pim-특이성 펩타이드 기질을 아메리칸 펩타이드 캄파니(캘리포니아주 서니베일 소재)에서 주문 합성하였다. 반응 완충액은 10 mM 헤페스(HEPES), pH 7.2, 10 mM MgCl2, 0.01% 트윈(Tween) 20, 2 mM DTT를 함유하였다. 종결 완충액은 190 mM 헤페스, pH 7.2, 0.015% 브리즈(Brij)-35, 0.2% 코팅 리에이전트(Coating Reagent) 3(매사추세츠주 홉킨턴 소재의 캘리퍼 라이프 사이언스), 20 mM EDTA를 함유하였다. 분리 완충액은 100 mM 헤페스, pH 7.2, 0.015% 브리즈-35, 0.1% 코팅 리에이전트 3, 1:200 코팅 리에이전트 8(매사추세츠주 홉킨턴 소재의 캘리퍼 라이프 사이언스), 10 mM EDTA 및 5% DMSO를 함유하였다.
PIM 반응을 384-웰 플레이트에서 웰 당 10 μL의 최종 부피로 수행하였다. 표준 효소 반응은 5 μL 2X ATP 및 시험 화합물을 반응 완충액 중의 5 μL의 2X 효소 및 FAM-펩타이드(20 pM PIM1, 50 pM PIM2, 또는 55 pM PIM3, 1 μM FAM-펩타이드, 및 10 μM ATP 함유)에 첨가하여 개시되었다. 실온에서 90분의 항온 처리 후, 인산화 반응을 10 μL 종결 완충액을 첨가하여 중단시켰다. 각 독립 반응에서의 생성물 및 기질을, 캘리퍼 LC3000(등록상표)(매사추세츠주 홉킨턴 소재의 캘리퍼 라이프 사이언스) 상에서 수행되는 12-시퍼(sipper) 미세유체 칩(매사추세츠주 홉킨턴 소재의 캘리퍼 라이프 사이언스) 상에서 분리하였다. 생성물 및 기질의 분리를 캘리퍼 사의 옵티마이저 소프트웨어(매사추세츠주 홉킨턴 소재)를 사용하여 전압 및 압력을 선택하여 최적화하였다. 분리 조건으로는 -500V의 하류 전압, -2150V의 상류 전압, 및 -1.2 psi의 스크리닝 압력을 사용하였다. 생성물 및 기질 형광단을 488 nm에서 여기시키고, 530 nm에서 검출하였다. 기질 전환율을 HTS 웰 분석기 소프트웨어(매사추세츠주 홉킨턴 소재의 캘리퍼 라이프 사이언스)를 이용하여 전기영동도로부터 계산하였다. 시험 화합물에 대한 Ki 값을 계산하였다. 예시적인 화합물의 대표적인 PIM1 LC3K Ki(마이크로몰 값)에 대해 표 1을 참조한다.
실시예 902 시험관내 세포 증식능 분석
BaF3 모 라인(parental line)을 DSMZ 기탁소로부터 입수하였다. PIM1 또는 PIM2로 형질주입된 BaF3 라인을 생성하였다. 마우스 IL-3를 R&D 시스템즈(Systems)로부터 구입하였다. G418을 클론테크(Clontech)로부터 구입하였다. BaF3 모 라인에 대한 배지는 RPMI, 10% FBS, 2 mM L-글루타민, 2 ng/mL mIL-3을 함유하였다. BaF3 PIM1 및 2 라인에 대한 배지는 RPMI, 10% FBS, 2 mM L-글루타민, 250 μg/mL을 함유하였다. MM1.S(다발성 골수종 세포) 라인에 대한 배지는 RPMI, 10% FBS, 2 mM L-글루타민을 함유하였다.
BaF3, 뮤린(Murine) 인터루킨-3 의존성 프로-B 세포 라인, 모 세포, BaF3 PIM1 세포, BaF3 PIM2 세포, 및 MM1.S(다발성 골수종) 세포를 45 μL/웰의 384-웰 플레이트에 각각 2k/웰, 5k/웰, 5k/웰, 및 10k/웰로 씨딩하였다. 시험 화합물을 5 μL/웰로 첨가하였다. (모 라인 및 형질도입된) BaF3 세포를 밤새 항온처리하고, MM1.S 세포를 72시간 동안 37℃에서 5% CO2에서 항온처리하였다. 셀 타이터 글로 시약(CELL TITER GLO® Reagent)(프로메가(Promega))을 50 μL/웰로 첨가하고, 그 플레이트를 30분 동안 항온처리하고, 발광도를 HT 어낼리스트(Analyst) 상에서 판독하였다. 시험 화합물에 대한 IC50/EC50 값을 계산하였다.
본 발명의 대표적 화합물을 전술된 바와 같이 시험하였고, 하기 표 2에서와 같은 μM(마이크로몰)의 Ki/IC50/EC50 을 보임을 확인하였다.
표 2
Figure pct00184
Figure pct00185
실시예 903 hERG 분석
hERG 분석(2-pt)은 하기와 같이 수행하였다:
본 발명의 화합물을 선택하여 hERG(인간 Ether-a-go-go-Related Gene) 칼륨 채널 전류 억제에 대한 시험관내 잠재성을 연구소 표준 절차(미국 오하이오주 클리브랜드 챈테스트(ChanTest))에 따라 평가하였다. 간략히하면, 시험체를 첨가한 후, hERG-발현 HEK-293 세포(n=2/농도)를 자동 패치엑스프레스(PatchXpress) 7000A 시스템(미국 캘리포니아주 써니베일 소재의 몰레큘러 디바이시즈(Molecular Devices))으로 5분 동안, 1 및 10 mM에서 평가하였다. hERG 분석(2-pt) 데이터를 최대 전류 퍼센트로 표현하였다.
hERG 분석(IC50)은 하기와 같이 수행하였다:
hERG 칼륨 채널 전류 억제에 대한 시험관내 잠재성을 연구소 표준 절차(미국 오하이오주 클리브랜드 소재의 챈테스트)에 따라 평가하였다. 간략히하면, 시험체를 첨가한 후, 자동 패치엑스프레스 7000A 시스템(미국 캘리포니아주 써니베일 소재의 몰레큘러 디바이시즈))을 5 분 동안 사용하여 hERG-발현 HEK-293 세포(n=2 /농도)에서 hERG 억제율(최대 %)을 측정하였다. 0.01, 0.1, 1, 10, 30, 및 100 μM의 시험체 농도에서 hERG 억제율을 기초로한 IC50 값을 계산하였다.
본 발명의 특정 화합물의 hERG IC50 및 IC20 값을 측정하고, 상응하는 R2가 N-연결된 헤테로사이클릴 또는 C-연결된 카보사이클릴 잔기인 PIM 억제제의 시리즈(US 2013/0079321)로부터의 5-아미노-N-(5-((4R,5R)-4-아미노-5-플루오로아제판-1-일)-1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2,6-다이플루오로페닐)티아졸-4-카복사미드(화합물 번호 139)와 비교하였다. 이러한 hERG 데이터는 본 발명의 화합물이 QTc 연장(prolongation)에 대한 민감성이 감소할 수 있음을 나타낸다. 과도하게 연장된 QTc-간격은 심각한 심실 부정맥 및 돌연사를 유도할 수 있다(문헌[De Bruin, M.L et al (2005) European Heart Journal, 26:590-597]; [Redfern, W.S. et al (2003) Cardiovascular Research, 58:32-45]).
본원 명세서 및 특허청구범위에 사용된 "포함" 및 "포함하는"이라는 용어는 언급된 특징부, 정수, 성분 또는 단계의 존재를 명시하고자 의도된 것이지만, 하나 이상의 다른 특징부, 정수, 성분, 단계 또는 그룹의 존재 또는 추가를 제외하거나 배제하지 않는다.
본 발명은 기재내용의 명확한 이해를 목적으로 예시 및 실시예에 의해 일부 상세히 기술되었지만, 이러한 기재내용 및 실시예가 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그 전체가 본원에 참고로 인용된다.

Claims (28)

  1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 기하 이성질체, 호변 이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00186
    I
    상기 식에서,
    R1은 H, C1-C12 알킬, C2-C12 알켄일, C2-C12 알킨일, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C1-C20 헤테로아릴 및 -(C1-C12 알킬렌)-(C2-C20 헤테로사이클릴)로부터 선택되고;
    R2는 독립적으로 F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -CH2CH(CH3)2, -CH=CH2, -CH=C(CH3)2, =CH2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2NH2, -CH2NHCH3, -CH2CH2NH2, -CH2CHCH2NH2, -CH2CH(CH3)NH2, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CN, -CO2H, -COCH3, -COCH2NH2, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2CHF2, -NHCH2CF3, -NHCH2CH2OH, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHC(O)OCH2CH3, -NHC(O)OCH2Cl3, -NHC(O)OC6H5, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCH2F, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -OCH2CH(CH3)2, -OC(CH3)3, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -CH2OCH3, -S(O)2CH3, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 아제티딘일, 아제판일, 옥세탄일, 옥세탄-3-일메틸아미노, (3-메틸옥세탄-3-일)메틸아미노, 피롤리딘일, 피페라진일, 피페리딘일, (피페리딘-4-일에틸), 피란일, (피페리딘-4-일메틸), 모폴리노메틸, 및 모폴리노로부터 선택되고;
    n은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이고;
    X는 하기 구조로부터 선택되고:
    Figure pct00187

    (이때, 물결선은 부착 부위를 나타냄);
    R3은 H, Cl, Br, C1-C12 알킬, -(-O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬렌)-O-(C3-C12 카보사이클릴), -(-(C1-C12 알킬렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(-(C2-C8 알켄일렌)-O-(C3-C12 카보사이클릴), -(-(C2-C8 알켄일렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), C6-C20 아릴, -(-(C6-C20 아릴렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(-(C6-C20 아릴렌)-(C1-)-(C6-C20 아릴렌), -(C6-C20 아릴렌)-(C1-C12 알킬렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C6-C20 아릴렌)-O-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C6-C20 아릴렌)-O-(C1-C12 알킬), C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C1-C20 헤테로아릴, -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴), 및 -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬)로부터 선택되고; 이때, 알킬, 알켄일, 알킨일, 알킬렌, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴, 아릴, 및 헤테로아릴은 F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2NH2, -CH2CH2NH2, -CH2CHCH2NH2, -CH2CH(CH3)NH2, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH(CH2OH)2, -C(CH2OH)3, -CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CN, -CF3, -CHF2, -CH2F, -CO2H, -COCH3, -COCH(CH3)2, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCF3, -OCH(CH3)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -CH2OCH3, -S(O)2CH3, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 아제티딘일, 아제판일, 옥세탄일, 페닐, 피롤리딘일, 피페라진일, 피페리딘일, (피페리딘-4-일)에틸), 피란일, (피페리딘-4-일메틸), 모폴리노메틸, 및 모폴리노로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    R1이 H인, 화합물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    R1이 C1-C12 알킬 또는 C3-C12 카보사이클릴인, 화합물.
  4. 제 3 항에 있어서,
    R1이 -CH3, -CH2CH3, -CH2CHF2 및 -CH2CF3으로부터 선택되는, 화합물.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2가 독립적으로 F, Cl, -OH, -CH3, -CH2CH3, -CF3, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2CHF2, -NHCH2CF3, -CH2NHCH3, 및 -OCH3으로부터 선택되고; n이 1, 2 또는 3인, 화합물.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R3이 C6-C20 아릴인, 화합물.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R3이 하나 이상의 F로 치환된 페닐인, 화합물.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 화학식 Ia, Ib, Ic 및 Id로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00188
  9. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 화학식 Ie로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00189
    Ie.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2가 F 또는 OCH3인, 화합물.
  11. 제 8 항에 있어서,
    하기 화학식 If로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00190
    If.
  12. 제 11 항에 있어서,
    R3이 C6-C20 아릴인, 화합물.
  13. 제 11 항 또는 제 12 항에 있어서,
    R3이 페닐 또는 피리딜이고, 이때 페닐 또는 피리딜은 임의적으로, F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2NH2, -CH2CH2NH2, -CH2CHCH2NH2, -CH2CH(CH3)NH2, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH(CH2OH)2, -C(CH2OH)3, -CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CN, -CF3, -CHF2, -CH2F, -CO2H, -COCH3, -COCH(CH3)2, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCF3, -OCH(CH3)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -CH2OCH3, -S(O)2CH3, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 아제티딘일, 아제판일, 옥세탄일, 페닐, 피롤리딘일, 피페라진일, 피페리딘일, (피페리딘-4-일)에틸), 피란일, (피페리딘-4-일메틸), 모폴리노메틸 및 모폴리노로부터 선택되는 하나 이상의 기로 치환되는, 화합물.
  14. 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R3이 페닐, 2-플루오로페닐, 2,6-다이플루오로페닐, 2,6-다이플루오로-4-메틸페닐, 2,4,6-트라이플루오로페닐, 2,4-다이플루오로페닐, 2-플루오로-4-하이드록시페닐 및 3-메틸피리딘-2-일로부터 선택되는, 화합물.
  15. 제 1 항에 있어서,
    표 1로부터 선택되는 화합물.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항의 화합물, 및 약학적으로 허용가능한 담체, 활택제(glidant), 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  17. 제 16 항에 있어서,
    화학치료제를 추가로 포함하는 약학 조성물.
  18. 제 16 항에 있어서,
    암, 면역 장애, 심혈관계 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애로부터 선택되고 Pim 키나아제에 의해 매개되는 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물.
  19. 암, 면역 장애, 심혈관계 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애로부터 선택되고 Pim 키나아제에 의해 매개되는 질환 또는 장애를 가진 환자에게 치료 효과량의 제 16 항에 따른 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 장애의 치료 방법.
  20. 제 19 항에 있어서,
    상기 질환 또는 장애가 다발성 골수종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 전립선암, 고환암, 비뇨생식관 암, 식도암, 후두암, 교모세포종, 신경아세포종, 위암, 피부암, 각질가시세포종, 폐암, 표피 암종, 대세포 암종, 비소세포성 폐암종(NSCLC), 소세포 암종, 폐 선암종, 골암, 결장암, 선종, 췌장암, 선암종, 갑상선암, 여포 암종, 미분화 암종, 유두 암종, 정상피종, 악성 흑색종, 육종, 방광 암종, 간 및 담도 암종, 신장 암종, 췌장암, 골수 장애, 림프종, 모발세포암, 협강암, 비인두암, 인두암, 구순암, 설암, 입암, 소장암, 결장-직장암, 대장암, 직장암, 뇌암 및 중추신경계 종양, 호지킨병, 백혈병, 기관지암, 갑상선암, 간 및 담관 암, 간세포암, 위암, 신경교종/교모세포종, 자궁내막암, 악성 흑색종, 신장 및 신우 암, 방광암, 자궁 근종, 자궁경부암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 골수성 백혈병, 구강 및 인두 암, 비호지킨 림프종, 악성 흑색종, 및 융모 결장 샘종으로부터 선택된 암인, 방법.
  21. 제 21 항에 있어서,
    상기 암이 다발성 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  22. 제 19 항에 있어서,
    화학치료제, 항염증제, 면역 조절제, 신경 영양 인자, 심혈관계 질환 치료제, 간 질환 치료제, 항바이러스제, 혈액 질환 치료제, 당뇨병 치료제 및 면역 결핍 장애 치료제로부터 선택되는 추가 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  23. a) 제 16 항의 약학 조성물; 및
    b) 사용 설명서
    를 포함하는, Pim 키나아제에 의해 매개되는 증상을 치료하기 위한 키트(kit).
  24. Pim 키나아제에 의해 매개되며 암, 면역 장애, 심혈관계 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애로부터 선택되는 질환 또는 장애 치료용 약제의 제조에서의 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
  25. 제 24 항에 있어서,
    상기 질환 또는 장애가 다발성 골수종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 전립선암, 고환암, 비뇨생식관 암, 식도암, 후두암, 교모세포종, 신경아세포종, 위암, 피부암, 각질가시세포종, 폐암, 표피 암종, 대세포 암종, 비소세포성 폐암종(NSCLC), 소세포 암종, 폐 선암종, 골암, 결장암, 선종, 췌장암, 선암종, 갑상선암, 여포 암종, 미분화 암종, 유두 암종, 정상피종, 악성 흑색종, 육종, 방광 암종, 간 및 담도 암종, 신장 암종, 췌장암, 골수 장애, 림프종, 모발세포암, 협강암, 비인두암, 인두암, 구순암, 설암, 입암, 소장암, 결장-직장암, 대장암, 직장암, 뇌암 및 중추신경계 종양, 호지킨병, 백혈병, 기관지암, 갑상선암, 간 및 담관 암, 간세포암, 위암, 신경교종/교모세포종, 자궁내막암, 악성 흑색종, 신장 및 신우 암, 방광암, 자궁 근종, 자궁경부암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 골수성 백혈병, 구강 및 인두 암, 비호지킨 림프종, 악성 흑색종, 및 융모 결장 샘종으로부터 선택된 암인, 용도.
  26. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    Pim 키나아제에 의해 매개되며 암, 면역 장애, 심혈관계 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애로부터 선택되는 질환 또는 장애의 치료를 위한 화합물.
  27. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    다발성 골수종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 전립선암, 고환암, 비뇨생식관 암, 식도암, 후두암, 교모세포종, 신경아세포종, 위암, 피부암, 각질가시세포종, 폐암, 표피 암종, 대세포 암종, 비소세포성 폐암종(NSCLC), 소세포 암종, 폐 선암종, 골암, 결장암, 선종, 췌장암, 선암종, 갑상선암, 여포 암종, 미분화 암종, 유두 암종, 정상피종, 악성 흑색종, 육종, 방광 암종, 간 및 담도 암종, 신장 암종, 췌장암, 골수 장애, 림프종, 모발세포암, 협강암, 비인두암, 인두암, 구순암, 설암, 입암, 소장암, 결장-직장암, 대장암, 직장암, 뇌암 및 중추신경계 종양, 호지킨병, 백혈병, 기관지암, 갑상선암, 간 및 담관 암, 간세포암, 위암, 신경교종/교모세포종, 자궁내막암, 악성 흑색종, 신장 및 신우 암, 방광암, 자궁 근종, 자궁경부암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 골수성 백혈병, 구강 및 인두 암, 비호지킨 림프종, 악성 흑색종, 및 융모 결장 샘종으로부터 선택되는 암의 치료를 위한 화합물.
  28. 본원에 전술된 발명.
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