CN102203079A - 作为激酶抑制剂的吡啶甲酰胺衍生物 - Google Patents

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Abstract

提供了抑制人或动物个体中与肿瘤发生有关的马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性的新的吡啶甲酰胺化合物、组合物和方法。在某些实施方案中，该化合物和组合物可有效抑制至少一种PIM激酶的活性。该新化合物和组合物可单独使用或者可以与至少一种用于治疗丝氨酸/苏氨酸激酶-或受体酪氨酸激酶-介导的病症如癌症的另外的活性剂联用。

Description

作为激酶抑制剂的吡啶甲酰胺衍生物
相关申请的交叉参考
本申请根据35 U.S.C.§119(e)的规定，要求于2008年9月2日申请的临时申请序号为61/093,666的美国申请和于2009年7月15日申请的临时申请序号为61/225,660的美国申请的优先权，它们在这里都被全文引入作为参考。
发明领域
本发明涉及新化合物及它们的互变异构体和立体异构体、以及其可药用的盐、酯、代谢物或前体药物，这些新化合物与可药用载体组成的组合物，和这些新化合物单独或与至少一种另外的治疗剂联合在预防或治疗癌症中的用途。
发明背景
宿主细胞基因组中的马洛尼(Maloney)逆转录病毒感染和基因组整合导致了小鼠淋巴瘤的发生。马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)被鉴定为能被这种逆转录病毒整合事件转录活化的常见原癌基因之一(Cuypers HT等人，“鼠类白血病病毒诱导的T-细胞淋巴瘤的生成：不同染色体区域中的前病毒整合(Murine leukemia virus-induced T-cell lymphomagenesis：integration of proviruses in a distinct chromosomal region)”，Cell 37(1)：141-50(1984)；Selten G等人，“MuLV诱导的T-细胞淋巴瘤中推定的致癌基因Pim-1的前病毒活化(Proviral activation of the putative oncogene Pim-1 in MuLV induced T-cell lymphomas)”，EMBO J 4(7)：1793-8(1985))，因此，确定了这种激酶过表达和其致癌潜能之间的相关性。序列同源性分析证明有三种高同源的Pim-激酶(Pim1、2和3)，Pim1是由逆转录病毒整合最初鉴定的原癌基因。此外，过表达Pim1或Pim2的转基因小鼠表现出T-细胞淋巴瘤的发病率增加(Breuer M等人，“化学致癌物在pim-1转基因小鼠中极高频率的淋巴瘤诱导(Very high frequency of lymphoma induction by a chemical carcinogen in pim-1 transgenic mice)”，Nature 340(6228)：61-3(1989))，而与c-myc联合过表达则与B-细胞淋巴瘤的发生率有关(Verbeek S等人，“携带E mu-myc和E mu-pim-1转基因的小鼠在出生前就形成前-B-细胞白血病(Mice bearing the E mu-myc and E mu-pim-1 transgenes develop pre-B-cell leukemia prenatally)”，Mol Cell Biol 11(2)：1176-9(1991))。因此，这些动物模型确定了Pim过表达和造血系统恶性肿瘤的肿瘤生成之间具有强烈的关联。除这些动物模型外，还报道了Pim在许多其它人类恶性肿瘤中过表达。在许多造血系统恶性肿瘤(Amson R等人，“人原癌基因产物p33pim在胎儿红细胞生成期间和许多白血病中表达(The human protooncogene product p33pim is expressed during fetal hematopoiesis and in diverse leukemias)”，PNAS USA 86(22)：8857-61(1989)；Cohen AM等人，“hPim-2基因在人慢性淋巴细胞性白血病和非何杰金淋巴瘤中的表达增加(Increased expression of the hPim-2genein human chronic lymphocytic leukemia and non-Hodgkin lymphoma)”，Leuk Lymph 45(5)：951-5(2004)，Huttmann A等人，“区分由ZAP-70和CD38表达状态定义的B-细胞慢性淋巴细胞性白血病预后亚群的基因表达标记(Gene expression signatures separate B-cell chronic lymphocytic leukaemia prognostic subgroups defined by ZAP-70 and CD38 expression status)”，Leukemia 20：1774-1782(2006))和前列腺癌(Dhanasekaran SM等人，“前列腺癌中预后生物标记的描绘(Delineation of prognostic biomarkers in prostate cancer)”，Nature 412(6849)：822-6(2001)；Cibull TL等人，“前列腺腺癌进程中Pim-1的过表达(Overexpression of Pim-1 during progression of prostatic adenocarcinoma)”，J Clin Pathol 59(3)：285-8(2006))中常常观察到Pim1、2和3过表达，而在肝细胞癌(Fujii C等人，“丝氨酸/苏氨酸激酶Pim-3在肝细胞癌形成中的异常表达以及其在人肝癌细胞系的增殖中的作用(Aberrant expression of serine/threonine kinase Pim-3  in hepatocellular carcinoma development and its role in the proliferation of human hepatoma cell l
Pim1、2和3是丝氨酸/苏氨酸激酶，其通常响应于生长因子和细胞因子在造血细胞的存活和增殖中起作用。通过Jak/Stat途径的细胞因子信号传导导致了Pim基因转录的活化和蛋白合成。激酶Pim活性不需要进一步的翻译后修饰。因此，信号传导下游主要在转录/翻译和蛋白更新水平上被控制。Pim激酶的底物包括细胞凋亡的调节剂如Bcl-2族成员BAD(Aho T等人，“Pim-1激酶通过在Ser112门控器部位上磷酸化促细胞凋亡的Bad蛋白来促进所述蛋白的灭活(Pim-1kinase promotes inactivation of the pro-apoptotic Bad protein by phosphorylating it on the Ser112 gatekeeper site)”：FEBS Letters 571：43-49(2004))、细胞周期调节剂如p21WFA1/CIP1(Wang Z等人，“Pim-1激酶对细胞周期抑制剂p21Cip1/WAF1的磷酸化(Phosphorylation of the cell cycle inhibitor p21Cip1/WAF1 by Pim-1 kinase)”，Biochem Biophys Acta 1593：45-55(2002))、CDC25A(1999)、C-TAK(Bachmann M等人，“致癌的丝氨酸/苏氨酸激酶Pim-1对Cdc25C-相关激酶1(C-TAK1)的磷酸化和抑制。Pim-1对G2/M细胞周期关卡的新作用(The Oncogenic Serine/Threonine Kinase Pim-1 Phosphorylates and Inhibits the Activity of Cdc25C-associated Kinase 1(C-TAK1).A novel role for Pim-1at the G2/M cell cycle checkpoint)”，J Biol Chem 179：48319-48328(2004))和NuMA(Bhattacharya N等人，“Pim-1与有丝分裂所需的蛋白复合体缔合(Pim-1associates with protein complexes necessary for mitosis)”，Chromosoma 111(2)：80-95(2002))和蛋白合成调节剂4EBP1(Hammerman PS等人，“Pim和Akt致癌基因是造血细胞生长和存活的独立调节剂(Pim and Akt oncogenes are independent regulators of hematopoietic cell growth and survival)”，Blood 105(11)：4477-83(2005))。Pim在这些调节剂中的作用与其在阻止细胞凋亡和促进细胞增殖及生长中的作用一致。因此，认为Pim在癌症中的过表达在促进癌细胞的存活和增殖中起一定作用，并且因此，对Pim的抑制应当是治疗Pim在其中过表达的癌症的有效方法。实际上，一些报道表明，用siRNA剔除Pim表达导致了增殖的抑制和细胞死亡(Dai JM等人，“靶向于丝氨酸/苏氨酸激酶Pim-2的反义寡脱氧核苷酸对DU-145细胞增殖的抑制作用(Antisense oligodeoxynucleotides targeting the serine/threonine kinase Pim-2 inhibited proliferation of DU-145 cells)”，Acta Pharmacol Sin 26(3)：364-8(2005)；Fujii等人，2005；Li等人，2006)。此外，在造血系统恶性肿瘤中的一些众所周知的致癌基因的突变活化被认为至少部分通过Pim发挥其作用。例如，pim表达的定向下调损害了由Flt3和BCR/ABL转化的造血细胞的存活(Adam等人，2006)。因此，Pim1、2和3的抑制剂将可用于治疗这些恶性肿瘤。除在癌症治疗和骨髓增生性疾病中的潜在作用外，该类抑制剂还可用于控制其它一些病态情况如自身免疫性疾病、变态反应和器官移植排斥综合征中免疫细胞的膨胀。IL-12和IFN-a对Th1辅助T细胞的分化诱导了Pim1和2表达(Aho T等人，“促进1型辅助T细胞而非2型辅助T细胞分化的细胞因子对人Pim族基因表达的选择性上调(Expression of human Pim family genes is selectively up-regulated by cytokines promoting T helper type 1，but not T helper type 2，cell differentiation)”，Immunology 116：82-88(2005))的发现支持了这一主张。此外，免疫抑制性的TGF-β抑制了这两类细胞中的Pim表达(Aho等人，2005)。这些结果表明，Pim激酶参与了辅助T细胞的早期分化过程，所述辅助T细胞协调自身免疫性疾病、变态反应和组织移植排斥中的免疫应答。
一直需要抑制毛细血管增殖、抑制肿瘤生长、治疗癌症、调整细胞周期停滞和/或抑制诸如Pim1、Pim2和Pim3之类的分子的化合物和包含该类化合物的药物制剂及药物。还需要给有该类需要的患者或个体施用该类化合物、药物制剂和药物的方法。
发明概述
提供了式I的新化合物以及它们的立体异构体、互变异构体及可药用的盐
Figure BDA0000058386980000051
I
其中，
X1、X2、X3和X4独立地选自CR2和N；条件是X1、X2、X3和X4中至少一个但是最多两个是N；
Y选自环烷基、部分不饱和的环烷基和杂环烷基组成的组，其中所述组的各成员可以被最多四个取代基取代；
Z2和Z3独立地选自CR12和N；条件是Z2和Z3中至多一个可以是N；
R1选自氢、-NHR3、卤素、羟基、烷基、氰基和硝基；
R2和R12每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、氰基、SO3H和取代或未取代的烷基、链烯基、炔基、烷氧基、氨基、环烷基、杂环烷基和部分饱和的环烷基组成的组；
R3选自氢、-CO-R4和取代或未取代的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基组成的组；
R4选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基和烷基氨基组成的组；并且
R5表示选自取代或未取代的芳基、C3-C7环烷基、杂芳基、部分不饱和的环烷基和烷基的基团，其中所述的各个取代的R5基团可以被最多四个选自卤素、氰基、氨基、C1-4烷基、C3-6环烷基、烷氧基、硝基、羧基、羰基、烷氧羰基、氨基羧基、取代的氨基羰基、氨基磺酰基、取代的氨基磺酰基和烷氧基烷基的取代基取代。
在一些实施方案中，提供了其中X2是N且X1、X3和X4是CR2的新的式I化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中R2选自氢、甲基、乙基、卤素、氰基的新的式I化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中Z2和Z3是CR12的式I化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中R12选自氢、卤素、甲基、乙基和氰基的式I化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在另一些实施方案中，提供了式II的新化合物以及它们的立体异构体、互变异构体和可药用的盐
Figure BDA0000058386980000061
II
其中，
Y选自环己基、部分不饱和的环己基和杂环-C5-烷基组成的组，其中所述组的各成员可以被最多四个取代基取代；
R1选自氢、-NHR3、卤素、羟基、烷基、C3-4环烷基、氰基和硝基组成的组；
R12每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、SO3H和取代或未取代的烷基、链烯基、炔基、烷氧基、氨基、环烷基、杂环烷基和部分饱和的环烷基组成的组；
R3选自氢、-CO-R4和取代或未取代的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基组成的组；
R4选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基和烷基氨基组成的组；并且
R5表示选自氢和取代或未取代的烷基、C6-环烷基、芳基和杂芳基的基团，其中所述的各个取代的R5基团可以被最多四个选自卤素、氰基、氨基、C1-4烷基、C3-6环烷基、烷氧基、硝基、羧基、羰基、烷氧羰基、氨基羧基、取代的氨基羰基、氨基磺酰基、取代的氨基磺酰基和烷氧基烷基的取代基取代。
在一些实施方案中，提供了其中Y选自取代或未取代的环烷基、环烯基、哌啶基和哌嗪基组成的组(其中所述组的各成员被最多四个取代基取代)的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。在一些实施方案中，Y被最多四个选自氰基、硝基、卤素、羟基、氨基、烷氧基、取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-4环烷基的取代基取代。在另一些实施方案中，Y被最多四个选自甲基、丙基、异-丙基、乙基、羟基、氨基、卤素、单卤代C1-3烷基、三卤代C1-3烷基和二卤代C1-3烷基的取代基取代。
在一些实施方案中，提供了其中Y选自取代或未取代的环己基、环己炔基和哌啶基组成的组(其中所述组的各成员被最多四个取代基取代)的新的式II化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中Y被最多四个独立选自氢、氰基、硝基、卤素、羟基、氨基、烷氧基、取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-4环烷基的取代基取代的新的式II化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。在一些实施方案中，所述取代基独立地选自甲基、丙基、异-丙基、乙基、羟基、氨基、卤素、单卤代C1-3烷基、三卤代C1-3烷基和二卤代C1-3烷基。
在一些实施方案中，提供了其中R12选自氢、卤素、甲基、乙基和氰基的式II化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中Y选自取代或未取代的环己基、环己烯基、哌啶基、哌嗪基组成的组，其中所述的Y基团可被最多三个选自甲基、乙基、羟基、氨基和甲氧基的取代基取代；R1选自氢和氨基；R12每次出现时独立地表示氢、卤素或甲基的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中Y选自环己基、环己烯基、哌啶基和哌嗪基组成的组；R1选自氢、-NH2、卤素、C1-4烷基、C3-4环烷基和-CN组成的组；R12每次出现时独立地选自氢、卤素、C1-4烷基和氨基组成的组；且R5选自取代或未取代的苯基、环己基、环戊基、噻唑、吡啶基、嘧啶基和吡嗪基组成的组，其中基团R5可以被最多三个选自卤素、氢、甲基、取代的氨基羰基和烷氧基的取代基取代的式II化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一个典型的实施方案中，提供了式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐，所述化合物选自N-(4-((1R，3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺、N-(4-((1R，3S，5S)-3-氨基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺、N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺、3-氨基-N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺和N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺以及3-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺组成的组。
本发明另一些方面提供了用于治疗需要该类治疗的人或动物个体中与马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)相关的病症的方法，其包括给所述个体施用抑制个体PIM活性有效量的式I或II的化合物。
本发明另一些方面提供了用于治疗需要该类治疗的人或动物个体中与PIM相关的病症的方法，其包括给所述个体施用降低或阻止个体肿瘤生长有效量的式I或II的化合物。
本发明另一些方面还提供了用于治疗需要该类治疗的人或动物个体中与PIM相关的病症的方法，其包括与至少一种用于治疗癌症的其它活性剂联合地给所述个体施用降低或阻止个体肿瘤生长有效量的式I或II的化合物。
本发明另一些方面还提供了治疗组合物，其包含至少一种式I或II的化合物和一种或多种用于治疗癌症的其它活性剂如癌症治疗中常用的活性剂的联合。
本发明的化合物可用于治疗癌症，包括造血系统恶性肿瘤、癌(例如，肺癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、甲状腺癌、膀胱癌或结肠癌)、黑素瘤、骨髓病症(例如，髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病)、腺瘤(例如，绒毛状结肠腺瘤)、肉瘤(例如，骨肉瘤)、自身免疫性疾病、变态反应和器官移植排斥综合征。
本发明进一步提供了如本发明的详细说明中所述的组合物、使用方法、和制造方法。
附图说明
通过参考下面的详细说明并结合附图，本领域技术人员可以更容易并且更好地理解以上各方面以及本发明的优点，其中：
图1是表示按照实施例144的描述在KMS11-luc异种移植物模型中进行评估时实施例99的化合物功效的图。
图2是表示按照实施例144的描述在KMS11-luc异种移植物模型中进行评估时实施例70的化合物功效的图。
图3是表示按照实施例144的描述在KMS11-luc异种移植物模型中进行评估时实施例96的化合物功效的图。
详细说明
根据本发明的一个方面，提供了式I的新化合物以及它们的立体异构体、互变异构体和可药用的盐：
Figure BDA0000058386980000101
I
其中，
X1、X2、X3和X4独立地选自CR2和N；条件是X1、X2、X3和X4中的至少一个但是最多两个是N；
Y选自环烷基、部分不饱和的环烷基和杂环烷基组成的组，其中所述组的各成员可以被最多四个取代基取代；
Z2和Z3独立地选自CR12和N；条件是Z2和Z3中至多一个可以是N；
R1选自氢、-NHR3、卤素、羟基、烷基、氰基和硝基组成的组；
R2和R12每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、氰基、SO3H和取代或未取代的烷基、链烯基、炔基、烷氧基、氨基、环烷基、杂环烷基和部分饱和的环烷基组成的组；
R3选自氢、-CO-R4和取代或未取代的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基组成的组；
R4选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基和烷基氨基组成的组；并且
R5表示选自取代或未取代的芳基、C3-C7环烷基、杂芳基、部分不饱和的环烷基和烷基的基团，其中所述的各个取代的R5基团可以被最多四个选自卤素、氰基、氨基、C1-4烷基、C3-6环烷基、烷氧基、硝基、羧基、羰基、烷氧羰基、氨基羧基、取代的氨基羰基、氨基磺酰基、取代的氨基磺酰基和烷氧基烷基的取代基取代。
在一些实施方案中，提供了其中X2是N且X1、X3和X4是CR2的新的式I化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中R2选自氢、甲基、乙基、卤素、氰基的新的式I化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中Z2和Z3是CR12的式I化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中R12选自氢、卤素、甲基、乙基和氰基的式I化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在另一些实施方案中，提供了式II的新化合物以及它们的立体异构体、互变异构体及可药用的盐
Figure BDA0000058386980000111
II
其中，
Y选自环己基、部分不饱和的环己基和杂环-C5-烷基组成的组，其中所述组的各成员可以被最多四个取代基取代；
R1选自氢、-NHR3、卤素、羟基、烷基、C3-4环烷基、氰基和硝基组成的组；
R12每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、SO3H和取代或未取代的烷基、链烯基、炔基、烷氧基、氨基、环烷基、杂环烷基和部分饱和的环烷基组成的组；
R3选自氢、-CO-R4和取代或未取代的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基组成的组；
R4选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基和烷基氨基组成的组；并且
R5表示选自氢和取代或未取代的烷基、C6-环烷基、芳基和杂芳基的基团。
在一些实施方案中，提供了其中Y选自取代或未取代的环烷基、环烯基、哌啶基和哌嗪基组成的组(其中所述组的各成员被最多四个取代基取代)的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。在一些实施方案中，提供了其中Y选自取代或未取代的环己基、环己炔基和哌啶基组成的组(其中所述组的各成员被最多四个取代基取代)的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。在一些实施方案中，Y被最多四个选自氢、氰基、硝基、卤素、羟基、氨基、烷氧基、取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-4环烷基的取代基取代。在另一些实施方案中，Y被最多四个选自甲基、丙基、异-丙基、乙基、羟基、氨基、卤素、单卤代C1-3烷基、三卤代C1-3烷基和二卤代C1-3烷基的取代基取代。
在一些实施方案中，提供了其中R1是氢、氨基或氟的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。在一个实施方案中，提供了选自表I或表II的式II化合物。
在一些实施方案中，提供了其中R5选自取代或未取代的芳基、C5-C6环烷基、杂芳基、部分不饱和的C5-C6环烷基和C1-C4烷基，其中所述各基团被最多四个选自卤素、氰基、氨基、C1-4烷基、C3-5环烷基、烷氧基、硝基、羧基、羰基、烷氧羰基、氨基羧基、取代的氨基羰基、氨基磺酰基、取代的氨基磺酰基和烷氧基烷基的取代基取代的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。在一些实施方案中，提供了其中R5是取代或未取代的苯基，其中苯基可被最多四个选自氢、氰基、硝基、卤素、羟基、氨基、烷氧基、取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-4环烷基的取代基取代的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。在一些实施方案中，提供了其中R5是2，6-二氟苯基的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中R12选自氢、卤素、甲基、乙基和氰基的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。在一些实施方案中，提供了其中Y选自取代或未取代的环己基、环己烯基、哌啶基、哌嗪基组成的组，其中所述的Y基团可以被最多三个选自甲基、乙基、羟基、氨基和甲氧基的取代基取代；R1选自氢和氨基组成的组；并且R12每次出现时独立地表示氢、卤素或甲基的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
在一些实施方案中，提供了其中Y选自取代的环己基、环己烯基、哌啶基和哌嗪基组成的组；R1选自氢、-NH2、卤素、C1-4烷基、C3-4环烷基和-CN组成的组；R12每次出现时独立地选自氢、卤素、C1-4烷基和氨基组成的组；并且R5选自取代或未取代的苯基、环己基、环戊基、噻唑、吡啶基、嘧啶基和吡嗪基组成的组，其中基团R5可以被最多三个选自卤素、氢、甲基、取代的氨基羰基和烷氧基的取代基取代的的式II化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
本发明一个优选的实施方案是其中Y是被一至三个取代基取代的环己基，所述取代基优选选自羟基、氨基、C1-4烷基或C1-4卤代烷基和更优选选自甲基、羟基、氨基和CF3，并且最优选选自甲基、氨基和羟基；R1是氢、NH2、或卤素(R1优选是氢、氨基或氟，R1更优选是氢)；R12各自独立地是氢或卤素(各R12优选是氢、氯或氟)；R5是环己基、苯基或吡啶基，其中所述环己基、所述苯基和所述吡啶基各自独立地被最多三个选自卤素、羟基、C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基取代(R5优选是吡啶基或苯基，二者各自独立地被最多三个选自卤素、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基取代，R5更优选是被最多三个选自卤素、羟基、C1-4烷氧基和C1-4烷基的取代基取代的苯基，最优选是被最多三个选自氟、羟基、甲基、乙基、甲氧基或丙氧基的取代基取代的苯基，R5最优选是2，6-二氟苯基)的式(II)化合物。
本发明另一个优选的实施方案提供了其中Y是被甲基、羟基和氨基取代的哌啶基；R1是氢、NH2或氟；R12每次出现时独立地选自氢和卤素组成的组；R5是吡啶基、氟吡啶基、环己基或苯基，其中所述苯基被最多三个选自氟、羟基和甲基的取代基取代，R5优选是二氟苯基的式II化合物。在一个更优选的实施方案中，Y是3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基；R1是氢；且R5是2，6-二氟苯基。
在一个典型的实施方案中，优选的式I或II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐选自N-(4-((3S，5S)-3-氨基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((1R，3R，4S，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酰胺；N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((1R，3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((1R，3S，5S)-3-氨基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺)；N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；和3-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺组成的组。
本发明另一些方面提供了用于治疗需要该类治疗的人或动物个体中与马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)相关的病症的方法，其包括给所述个体施用抑制个体PIM活性有效量的式I或II的化合物。本发明一个优选的实施方案提供了一种通过调节马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性来治疗疾病的方法，其包括给需要该类治疗的个体施用有效量式I的化合物。
本发明另一些方面提供了用于治疗需要该类治疗的人或动物个体中与PIM相关的病症的方法，其包括给所述个体施用降低或阻止个体肿瘤生长有效量的式I或II的化合物。本发明另一些方面还提供了用于治疗需要该类治疗的人或动物个体中与PIM相关的病症的方法，其包括与至少一种用于治疗癌症的其它活性剂联合地给所述个体施用降低或阻止个体肿瘤生长有效量的式I或II的化合物。
本发明另一方面还提供了治疗组合物，其包含至少一种式I或II的化合物与一种或多种用于治疗癌症的其它活性剂，如癌症治疗常用的活性剂的联合。因此，本发明提供了一种包含式I或式II化合物的药物组合物。这一方面的一个优选实施方案提供了一种药物组合物，其包含选自N-(4-((3S，5S)-3-氨基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((1R，3R，4S，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酰胺；N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((1R，3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((1R，3S，5S)-3-氨基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺)；N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；3-氨基-N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；和N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟吡啶甲酰胺的化合物。另一个优选的实施方案提供了一种进一步包含用于治疗癌症的其它活性剂的药物组合物，其中所述的其它活性剂优选选自伊立替康、托泊替康、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、紫杉烷类、替扎他滨(tezacitabine)、环磷酰胺、长春花生物碱类、伊马替尼(Gleevec)、蒽环类抗生素、利妥昔单抗和曲妥单抗。
本发明的化合物可用于治疗癌症，包括造血系统恶性肿瘤、癌(例如，肺癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、甲状腺癌、膀胱癌或结肠癌)、黑素瘤、骨髓病症(例如，髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病)、腺瘤(例如，绒毛状结肠腺瘤)、肉瘤(例如，骨肉瘤)、自身免疫性疾病、变态反应和器官移植排斥综合征。
本发明另一方面还提供了式I或式II的化合物用于制备通过调节马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)的活性来治疗疾病的药物的用途。在本发明这一方面的一个优选实施方案中，所述疾病是选自肺癌、胰腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳癌、前列腺癌或结肠癌的癌症、黑素瘤、髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病、绒毛状结肠腺瘤和骨肉瘤。
在另一方面，本发明涉及一种在个体中抑制至少一种选自Pim1、Pim2和Pim3的激酶活性的方法或治疗需要该类治疗的人或动物个体中由Pim1、Pim2和Pim3中的至少一种介导的生物学情况的方法，其包括给该个体以有效抑制个体中所述激酶的量施用至少一种式I或II的化合物。所述治疗化合物可用于对该类抑制剂有需求的患者(例如，患有由异常的丝氨酸/苏氨酸激酶受体信号传导介导的癌症的那些患者)进行治疗。
定义
本文所用的“PIM抑制剂”是指在下文所述的PIM消耗试验中测量时，在PIM激酶活性方面表现出不高于约100μM并且更典型地不高于约50μM的IC50的化合物。
术语“烷基”是指不含有杂原子的烷基。因此，该术语包括直链烷基如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。该术语还包括直链烷基的支链异构体，包括但不限于例如下面的基团：-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)3、-C(CH2CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH(CH2CH3)2、-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH2CH3)2、-CH2CH2C(CH3)3、-CH2CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2、-CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)等。因此，术语烷基包括伯烷基、仲烷基和叔烷基。优选的烷基包括具有1至12个碳原子的直链和支链烷基。一种优选的“烷基”定义涉及C1-4直链烷基如甲基、乙基、正-丙基和正-丁基。优选的烷基定义还包括C3-5支链烷基，包括CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、C(CH3)3、CH(CH3)CH2CH2CH3、CH(CH3)CH(CH3)2、CH2CH(CH3)CH2CH3、CH2CH2CH(CH3)2和CH(CH2CH3)2等。
术语“链烯基”是指其中有至少一个不饱和点，即，其中两个相邻碳原子通过双键连接的上面所定义的烷基。术语“炔基”涉及其中两个相邻碳原子通过三键连接的烷基。术语“烷氧基”是指-OR，其中R是烷基。
本文所用的术语“卤素”或“卤代”是指氯、溴、氟和碘基团。“卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的烷基。因此，术语“卤代烷基”包括单卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基等。典型的单卤代烷基包括-CH2F、-CH2Cl、-CH2CH2F、-CH2CH2Cl、-CH(F)CH3、-CH(Cl)CH3；典型的二卤代烷基包括CHCl2、-CHF2、-CCl2CH3、-CH(Cl)CH2Cl、-CH2CHCl2、-CH2CHF2；典型的三卤代烷基包括-CCl3、-CF3、-CCl2CH2Cl、-CF2CH2F、-CH(Cl)CHCl2、-CH(F)CHF2；典型的全卤代烷基包括-CCl3、-CF3、-CCl2CCl3、-CF2CF3。
“氨基”在本文中是指基团-NH2。本文的术语“烷基氨基”是指其中R和R′各自独立地选自氢或低级烷基的基团-NRR′。本文的术语“芳基氨基”是指其中R是芳基且R′是氢、低级烷基或芳基的基团-NRR′。本文的术语“芳烷基氨基”是指其中R是低级芳烷基且R′是氢、低级烷基、芳基或低级芳烷基的基团-NRR′。术语氰基是指基团-CN。术语硝基是指基团-NO2。
术语“烷氧基烷基”是指其中alk1是烷基或链烯基且alk2是烷基或链烯基的基团-alk1-O-alk2。术语“低级烷氧基烷基”是指其中alk1是低级烷基或低级链烯基且alk2是低级烷基或低级链烯基的烷氧基烷基。术语“芳氧基烷基”是指基团-烷基-O-芳基。术语“芳烷氧基烷基”是指其中芳烷基是低级芳烷基的基团-亚烷基-O-芳烷基。
本文的术语“氨基羰基”是指基团-C(O)-NH2。“取代的氨基羰基”在本文中是指其中R是低级烷基且R′是氢或低级烷基的基团-C(O)-NRR′。在一些实施方案中，R和R′可以和它们所连接的N原子一起形成“杂环烷基羰基”。术语“芳基氨基羰基”在本文中是指其中R是芳基且R’是氢、低级烷基或芳基的基团-C(O)-NRR′。“芳烷基氨基羰基”在本文中是指其中R是低级芳烷基且R’是氢、低级烷基、芳基或低级芳烷基的基团-C(O)-NRR′。
“氨基磺酰基”在本文中是指基团-S(O)2-NH2。“取代的氨基磺酰基”在本文中是指其中R是低级烷基且R’是氢或低级烷基的基团-S(O)2-NRR′。术语“芳烷基氨基磺酰基芳基”在本文中是指其中芳烷基是低级芳烷基的基团-芳基-S(O)2-NH-芳烷基。
“羰基”是指二价基团-C(O)-。“羧基”是指-C(＝O)-OH。“烷氧基羰基”是指其中R是烷基的酯-C(＝O)-OR。“低级烷氧基羰基”是指其中R是低级烷基的酯-C(＝O)-OR。“环烷氧基羰基”是指其中R是环烷基的-C(＝O)-OR。
“环烷基”是指单-或多环的碳环烷基取代基。碳环烷基是其中所有环原子都是碳的环烷基。典型的环烷基取代基具有3至8个骨架(即，环)原子，其中各骨架原子是碳或杂原子。术语“杂环烷基”在本文中是指在环结构中具有1至5个，并且更典型地具有1至4个杂原子的环烷基取代基。在本发明化合物中所用的适宜杂原子是氮、氧和硫。代表性的杂环烷基部分包括例如吗啉代、哌嗪基、哌啶基等。碳环烷基是其中所有环原子都是碳的环烷基。当与环烷基取代基联合使用时，术语“多环的”在本文中是指稠合的和非稠合的烷基环状结构。术语“部分不饱和的环烷基”、“部分饱和的环烷基”和“环烯基”都指其中有至少一个不饱和点，即，其中两个相邻的环原子通过双键或三键相连的环烷基。说明性的实例包括环己炔基、环己炔基、环丙烯基、环丁炔基等。
本文所用的术语“取代的杂环”、“杂环基团”或“杂环”是指含有一个选自氮、氧和硫的杂原子的任何3-或4-员环或含有一至三个选自氮、氧或硫的杂原子的5-或6-员环；其中所述5-员环具有0-2个双键，6-员环具有0-3个双键；其中氮和硫原子可任选地被氧化；其中氮和硫杂原子可任选地被季化；并且包括其中任何上述杂环与苯环或上面独立定义的其它5-或6-员杂环稠合的任何二环基团。本文所用的术语“杂环烷基”是指含有一至三个选自氮、氧或硫的杂原子的5-或6-员环，其中该环没有双键。例如，术语杂环-C5-烷基是指含有5个碳原子和一个杂原子例如N的6-员环。因此，术语“杂环”包括其中氮是杂原子的环以及部分饱和和完全饱和的环。优选的杂环包括例如：diazapinyl、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、哌啶基、吡嗪基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、氮杂环丁烷基、N-甲基氮杂环丁烷基、嘧啶基、哒嗪基、
Figure BDA0000058386980000191
唑基、
Figure BDA0000058386980000192
唑烷基、异
Figure BDA0000058386980000193
唑基、异唑烷基、吗啉基、噻唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并
Figure BDA0000058386980000195
唑基、呋喃基、噻吩基、三唑基和苯并噻吩基。
杂环部分可以未取代或被各种取代基单取代或二取代或三取代，所述取代基独立地选自羟基、卤素、氧代(C＝O)、烷基亚氨基(RN＝，其中R是低级烷基或低级烷氧基)、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、酰基氨基烷基、烷氧基、硫代烷氧基、多烷氧基、低级烷基、环烷基或卤代烷基。
结合本文所公开的内容，有机和药物化学领域的技术人员很容易理解，杂环基团可以在各种位置上进行连接。
典型的杂环包括例如咪唑基、吡啶基、哌嗪基、哌啶基、氮杂环丁烷基、噻唑基、呋喃基、三唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、酞嗪基、吲哚基、萘啶基、吲唑基和喹嗪基。
“芳基”是指具有3至14个骨架碳或杂原子的任选取代的单环和多环芳族基团，并且包括碳环芳基和杂环芳基。碳环芳基是其中芳族环中的所有环原子都是碳的芳基。术语“杂芳基”在本文中是指在芳族环中具有1至4个杂原子作为环原子并且剩余的环原子是碳原子的芳基。当与芳基取代基结合使用时，术语“多环芳基”在本文中是指其中至少一个环结构是芳族的稠合和非稠合的环状结构，例如benzodioxozolo(其具有一种与苯基稠合的杂环结构，即，萘基等。在本发明化合物中用作取代基的芳基部分的例子包括苯基、吡啶基、吡啶基、噻唑基、吲哚基、咪唑基、
Figure BDA0000058386980000202
二唑基、四唑基、吡嗪基、三唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、嘌呤基、萘基、苯并噻唑基、苯并吡啶基和苯并咪唑基等。
“任选取代的”或“取代的”是指一个或多个氢原子被单价或二价基团替换。适宜的取代基团包括例如羟基、硝基、氨基、亚氨基、氰基、卤素、硫代基团、磺酰基、硫代酰氨基(thioamido)、脒基、imidino、氧代、氨肟基(oxamidino)、methoxamidino、imidino、胍基、磺酰氨基、羧基、甲酰基、低级烷基、卤代低级烷基、低级烷基氨基、卤代低级烷基氨基、低级烷氧基、卤代低级烷氧基、低级烷氧基烷基、烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、杂芳基羰基、杂芳烷基羰基、烷硫基、氨基烷基、氰基烷基、芳基等。
取代基本身可以被取代。取代到取代基上的基团可以是羧基、卤素；硝基、氨基、氰基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、氨基羰基、-SR、硫代酰氨基、-SO3H、-SO2R或环烷基，其中R通常是氢、羟基或低级烷基。
当取代的取代基包括直链基团时，该取代基可以位于链内(例如，2-羟基丙基、2-氨基丁基等)或链末端(例如，2-羟基乙基、3-氰基丙基等)。取代的取代基可以是共价结合的碳或杂原子的直链、支链或环状排列。应当清楚的是，上面的定义并不打算包括不允许的取代模式(例如，被五个氟基团取代的甲基或被另一个卤素原子取代的卤素原子)。该类不允许的取代模式是本领域技术人员公知的。
对本领域技术人员同样显而易见的是，本发明化合物或它们的立体异构体以及它们任何一种的可药用的盐、酯、代谢物和前体药物可以互变异构化并且因此可以以其中分子的一个原子的质子移位到另一个原子并且分子的原子间化学键因此重新排列的各种互变异构形式存在。参见，例如，March，高等有机化学：反应，机理和结构(Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms and Structures)，第四版，John Wiley&Sons，第69-74页(1992)。本文所用的术语“互变异构体”是指由质子移位产生的化合物，并且应当清楚的是，只要其可能存在，所有的互变异构形式都被包括在本发明内。
本发明的化合物或者它们的互变异构体、以及它们中任何一种的可药用的盐、酯、代谢物和前体药物可能包含不对称取代的碳原子。该类不对称取代的碳原子可产生以对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式存在的本发明化合物，这些形式可根据绝对立体化学进行定义，如(R)-或(S)-形式。因此，本发明化合物的所有该类可能的异构体、其旋光纯形式的单个立体异构体、其混合物、外消旋混合物(或“外消旋体”)、非对映异构体的混合物以及单个的非对映异构体都包括在本发明中。本文所用的术语“S”和“R”构型如IUPAC 1974RECOMMENDATIONS FOR SECTION E，FUNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY，Pure Appl.Chem.45：13-30(1976)中所定义。术语α和β用于环状化合物的环位置。参照面的α-侧是优选的取代基位于较低编号位置的那侧。位于参照面对侧的那些取代基用β来描述。应当注意，这种用法与用于环状立体母体(stereoparents)的用法不同，在后一种情况中，“α”意味着“位于平面下”并且表示绝对构型。本文所用的术语α和β构型如CHEMICAL ABSTRACTS INDEX GUIDE-APPENDIX IV(1987)第203段所定义。
本文所用的术语“可药用的盐”是指式I或II化合物的无毒的酸盐或碱土金属盐。这些盐可以在式I或II化合物的最后的分离和纯化期间就地制备，或者可以通过分别将碱或酸官能团与适宜的有机或无机酸或碱反应来制备。典型的盐包括但不限于下面的盐：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴化物、氢碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。也可以用试剂如低级烷基卤化物，如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯例如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯、长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物、芳烷基卤化物如苄基溴和苯乙基溴等将包含碱性氮的基团季铵化。由此获得水或油可溶的或水或油可分散的产物。
可用于形成可药用酸加成盐的酸的实例包括无机酸如盐酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如草酸、马来酸、甲磺酸、琥珀酸和柠檬酸。碱加成盐可以在式(I)化合物最后的分离和纯化期间就地制备，或者可以通过使羧酸部分与适宜的碱如可药用金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或氨或有机伯、仲或叔胺反应来制备。可药用的盐包括但不限于以碱和碱土金属为基础的阳离子如钠、锂、钾、钙、镁、铝盐等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等的盐。用于形成碱加成盐的其它典型有机胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。
本文所用的术语“可药用的酯”是指在体内水解的酯并，包括在人体内易于分解从而释放出母体化合物或其盐的那些酯。适宜的酯包括例如那些衍生自可药用的脂族羧酸，特别是链烷酸、链烯酸、环烷酸和链烷二酸的那些酯，其中各烷基或链烯基部分优选具有不超过6个碳原子。特定酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。
本文所用的术语“可药用的前体药物”是指在合理的医学判断内，适于与人和低级动物的组织接触同时没有过度毒性、刺激性、过敏反应等、具有合理的效益/风险比、并且对其所需应用有效的那些本发明化合物的前体药物以及可能情况中本发明化合物的两性离子形式。术语“前体药物”是指在体内迅速转化、例如通过在血液中水解来转化，从而产生上式的母体化合物的化合物。在T.Higuchi和V.Stella，作为新型传递系统的前体药物(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)，Vol.14，A.C.S.Symposium Series 和Edward B.Roche编辑，药物设计中的生物可逆性载体(Bioreversible Carriers in Drug Design)中提供了详细讨论，二者都被引入本文作为参考。
本文给出的任何结构式还表示所述化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文所示结构式所描述的结构，只是一个或多个原子被具有所选择的原子质量或质量数的原子代替。可掺入到本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本发明包括各种同位素标记的本文所定义的化合物，例如其中存在放射性同位素如3H、13C和14C的那些化合物。该类同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、探测或成像技术，如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机体层摄影术(SPECT)，包括药物或底物组织分布试验，或者可用于患者的放射性治疗中。特别地，18F或标记化合物对于PET或SPECT研究特别适用。同位素标记的本发明化合物以及其前体药物通常可通过实施流程图或下述实施例和制备例中所公开的操作，通过用易于获得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来进行制备。
此外，用较重的同位素，特别是氘(即，2H或D)置换可提供某些治疗益处，这些治疗益处得自代谢稳定性增加，例如体内半衰期增加或所需剂量降低或治疗指数改善。应当清楚的是，这一背景中的氘被认为是式(I)化合物的取代基。该类较重同位素，特别是氘的浓度可以用同位素富集因子来定义。本文所用的术语“同位素富集因子”是指所指定同位素的同位素丰度和天然丰度之间的比例。如果本发明化合物中的取代基被指定为氘，则该类化合物对于各指定的氘原子具有至少为3500(各指定氘原子上52.5％的氘混入)、至少为4000(60％的氘混入)、至少为4500(67.5％的氘混入)、至少为5000(75％的氘混入)、至少为5500(82.5％的氘混入)、至少为6000(90％的氘混入)、至少为6333.3(95％的氘混入)、至少为6466.7(97％的氘混入)、至少为6600(99％的氘混入)或至少为6633.3(99.5％的氘混入)的同位素富集因子。
同位素标记的式(I)化合物通常可用本领域技术人员已知的常规技术来制备或者可以用与所附实施例和制备例中所述那些方法类似的方法，用适宜的同位素标记的试剂代替之前所用的非同位素标记的试剂来进行制备。
对本领域技术人员显而易见的是，本发明的化合物或者它们的互变异构体、前体药物和立体异构体、以及他们中任何一种的可药用的盐、酯和前体药物可通过在人或动物体或细胞内进行代谢而被体内加工，从而产生代谢物。本文所用的术语“代谢物”是指在施用母体化合物后在个体体内产生的任何结构式的衍生物。这些衍生物可以通过个体体内的各种生物化学转化例如氧化、还原、水解或结合由母体化合物产生，并且包括例如氧化物和去甲基衍生物。可以用现有技术中已知的常规技术鉴定本发明化合物的代谢物。参见例如，Bertolini，G.等人，J.Med.Chem.40：2011-2016(1997)；Shan，D.等人，J.Pharm.Sci.86(7)：765-767；Bagshawe K.，Drug Dev.Res.34：220-230(1995)；Bodor，N.，Advances in Drug Res.13：224-331(1984)；Bundgaard，H.，Design of Prodrugs(Elsevier Press 1985)；和Larsen，I.K.，Design and Application of Prodrugs，Drug Design and Development(Krogsgaard-Larsen等人，eds.，Harwood Academic Publishers，1991)。应当清楚的是，作为式I、式II化合物或者它们的互变异构体、前体药物和立体异构体以及它们中任何一种的可药用的盐、酯和前体药物的代谢物的化学化合物都包括在本发明中。
术语“癌”是指可以通过抑制Pim激酶得到有益治疗的癌性疾病，包括例如实体瘤，如癌(例如，肺癌、胰腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳癌、前列腺癌或结肠癌)、黑素瘤、骨髓病症(例如，髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病)、腺瘤(例如，绒毛状结肠腺瘤)和肉瘤(例如，骨肉瘤)。
合成方法
本发明化合物可以用本领域技术人员已知的方法获得。例如，如流程图1中所示，可以通过单三氟甲磺酸酯将环己烷二酮转化成相应的环己烯酮硼酸酯，其可以经历钯介导的与4-氯，3-硝基吡啶的碳键形成，从而得到硝基吡啶取代的环己烯酮I。烯酮官能团的还原可产生环己烯醇II，其在进行醇保护、硝基和烯烃还原、酰胺偶合和去保护后可产生环己醇酰胺III。环己烯醇II也可以与邻苯二甲酰亚胺进行Mitsunobu反应，从而得到被保护的氨基环己烯IV。在硝基和烯烃还原后，邻苯二甲酰亚胺保护的氨基环己基吡啶基苯胺Va可经历酰胺偶合和去保护，从而得到氨基环己烷酰胺VI。相应的Boc保护的氨基环己烷吡啶基苯胺Vb也可以由环己烯醇II用下面的方式制备：醇保护，烯烃和硝基还原，吡啶基胺Cbz保护，甲硅烷基醚去保护，Dess-Martin氧化成环己酮，与苄胺一起进行还原胺化，Cbz和Bn去保护以及脂族伯胺Boc保护。在酰胺产物III和VI中，如果R2是卤素或三氟甲磺酸酯，则可以用标准修饰对酰胺III和VI进一步进行修饰以在R2上引入取代的芳基、烷基和杂芳基。例如，如果R2是Br，则通过与硼酸或有机金属试剂反应，或者转化成相应的硼酸酯并与芳基/杂芳基卤化物或三氟甲磺酸酯反应，可进行多种R2修饰。
流程图1.
或者，如流程图2中所示，可以将环己烯醇II脱水得到环己二烯，其在环氧化(经过溴醇形成和HBr消除或直接得自mCPBA)和叠氮化物环氧化物开环后得到环己烯基叠氮基醇VI。可以通过叠氮化物还原、醇保护和烯烃及硝基还原将环己烯基叠氮基醇VI转化成反式的被保护的氨基羟基苯胺VIIa。或者，可以通过叠氮化物还原和Boc保护、醇甲磺酰化和分子内环化成顺式的环状氨基甲酸酯，然后进行Boc保护和烯烃及硝基还原来将环己烯基叠氮基醇VI转化成被保护的顺式氨基羟基苯胺VIIb。可以通过酰胺偶合、乙酸酯或环状氨基甲酸酯裂解和Boc去保护来将所得的环己基吡啶基苯胺VIIa和VIIb转化成相应的吡啶甲酰胺VIIIa和VIIIb。如果R2是卤素或三氟甲磺酸酯，则可以在酰胺键形成后和完全去保护前，通过标准修饰对酰胺VIIIa和VIIIb进行进一步修饰以便在R2上引入取代的芳基、烷基和杂芳基。例如，如果R2是Br，通过与硼酸或有机金属试剂反应，或者通过转化成相应的硼酸酯并与芳基/杂芳基卤化物或三氟甲磺酸酯反应，可进行多种R2修饰。
流程图2.
Figure BDA0000058386980000271
或者，如流程图3中所示，还可以按照如下方式制备三取代的5-烷基，4-羟基，3-氨基哌啶并对其进行修饰，从而得到三取代的5-烷基，4-羟基，3-氨基哌啶基吡啶酰胺IX。Garner′s醛与(R)-4-苄基-3-丙酰基
Figure BDA0000058386980000272
唑烷-2-酮反应，然后对所得醇进行TBS保护，得到化合物X。将
Figure BDA0000058386980000273
唑烷酮还原，然后引入叠氮基，得到中间体XI。在酸性条件下去保护得到相应的氨基醇，将其用Boc基团保护，然后对伯醇进行甲磺酰化得到中间体XII。将该叠氮化物还原形成哌啶，随后使其与4-氯-3-硝基吡啶反应，将其还原成胺，使其与相应的羧酸偶合并去保护，从而得到三取代的5-甲基，4-羟基-3-氨基哌啶基吡啶酰胺IX。如果R1是卤素或三氟甲磺酸酯，则可以在酰胺键形成后和完全去保护前，用标准修饰对酰胺IX进行进一步修饰以在R1上引入取代的芳基、烷基和杂芳基。例如，如果R1是Br，则通过与硼酸或有机金属试剂反应，或者通过转化成相应的硼酸酯并与芳基/杂芳基卤化物或三氟甲磺酸酯反应，可进行多种R1修饰。
流程图3.
Figure BDA0000058386980000281
或者，如流程图4中所示，还可以按照如下方式制备三取代的5-甲基，4-羟基，3-氨基哌啶并对其进行修饰，从而得到三取代的5-甲基，4-羟基，3-氨基哌啶基酰胺XIII。使硼酸巴豆酯与SerOBn醛反应，然后形成环状氨基甲酸酯，进行烯烃氧化裂解和还原，得到羟基化合物XIV。苄基去保护，然后进行二甲苯磺酰化和与对-甲氧基苄基胺反应，进行胺去保护，得到哌啶XV。使取代的哌啶XV与卤代硝基取代的芳烃或杂芳烃反应，然后进行氨基甲酸酯保护，硝基还原，酰胺偶合，环状氨基甲酸酯开环和去保护，得到三取代的5-甲基，4-羟基，3-氨基哌啶基酰胺XIII。如果R3是卤素或三氟甲酸酯，则可以对酰胺XV进行进一步修饰以在R3上在引入取代的芳基、烷基和杂芳基。例如，如果R3是Br，则通过与硼酸或有机金属试剂反应，或者转化成相应的硼酸酯并与芳基/杂芳基卤化物或三氟甲酸酯反应，可以对R3进行多种修饰。
流程图4.
Figure BDA0000058386980000291
本发明化合物可用于在体外和/或体内抑制癌细胞的生长。该化合物可单独施用或者可以与可药用的载体或赋形剂一起在组合物中应用。适宜的可药用载体或赋形剂包括例如，加工剂和药物传递改性剂和增强剂，例如，磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、单糖、二糖、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、葡萄糖、羟基丙基-β-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡、离子交换树脂等以及它们任何两种或多种的组合。在“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，Mack Pub.Co.，新泽西(1991)中描述了其它适宜的可药用赋形剂，其被引入本文作为参考。
本发明化合物的有效量通常包括通过本文所述的任何试验、本领域普通技术人员已知的其它Pim活性试验或通过探测癌症症状的抑制或缓解，足以可察觉地抑制Pim活性的任何数量。可以与载体材料结合从而产生单一剂型的活性成分的量将随着所治疗的主体和施用的特定方式而变化。然而，应当清楚的是，对于任何特定患者而言，具体剂量水平将取决于许多因素，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用时间、施用途径、排泄速率、药物联合、以及正在接受治疗的特定疾病的严重程度。可以用常规实验容易地确定用于给定情况的治疗有效量并且其在普通临床医师的技能和判断范围内。
对于本发明的目的而言，治疗有效剂量通常是以单剂量或分割剂量施用于主体的总的日剂量，可以是例如，0.001至1000mg/kg体重/天并且更优选1.0至30mg/kg体重/天。剂量单位组合物可含有用于组成日剂量的其约数的量。
本发明的化合物可口服施用、胃肠外施用、舌下施用，或者可以通过雾化或吸入喷雾进行施用、直肠或局部施用，其以根据需要含有无毒的常规可药用载体、助剂和基质的单位剂量制剂的形式进行施用。局部施用还可能涉及经皮施用，例如使用经皮贴剂或离子电泳装置。本文所用的术语胃肠外包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或者输液技术。
可注射的制剂，例如，可注射的无菌水性或油性混悬液可根据现有技术，用适宜的分散或润湿剂和助悬剂来配制。无菌的可注射制剂可以是位于无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌的可注射溶液或混悬液，例如，在1，3-丙二醇中的溶液。可以使用的可药用基质和溶剂有水、林格氏溶液和等渗的氯化钠溶液。此外，通常用无菌的不挥发油作为溶剂或混悬介质。对于这一目的而言，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的单-或二-甘油酯。此外，在可注射制剂中可以使用脂肪酸如油酸。
用于药物直肠施用的栓剂可以通过将药物与适宜的无刺激性赋形剂如可可豆脂和聚乙二醇混合来进行制备，其在普通温度下是固体，但是在直肠温度下是液体，从而将在直肠中熔化并释放药物。
用于口服施用的固体剂型可包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在该类固体剂型中，可以将活性化合物与至少一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖或淀粉混合。按照常规实践，该类剂型除惰性稀释剂外还可包含其它物质，例如润滑剂如硬脂酸镁。在胶囊、片剂和丸剂的情况中，该剂型还可包含缓冲剂。片剂和丸剂可另外用肠包衣制备。用于口服施用的液体剂型可包括包含本领域常用惰性稀释剂如水的可药用的乳剂、溶液、混悬液、糖浆和酏剂。该类组合物还可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和助悬剂、环糊精、以及甜味剂、矫味剂和加香剂。
本发明的化合物还可以以脂质体形式进行施用。如现有技术中已知的那样，脂质体通常得自磷脂或其它脂质物质。脂质体是由分散于含水介质中的单-或多-层的水合液晶形成的。可以使用能形成脂质体的任何无毒的可药用的和可代谢的脂质。除本发明化合物外，脂质体形式的本发明组合物还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂质是磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们既可以是天然的，又可以是合成的。形成脂质体的方法在现有技术中是已知的。参见，例如，Prescott编辑，细胞生物学方法(Methods in Cell Biology)，第XIV卷，Academic Press，纽约，N.W.，第33页及以后(1976)。
虽然本发明化合物可以作为单独的活性药剂施用，但是，其也可以与一种或多种用于治疗癌症的其它活性剂联用。本发明的化合物还可以与已知的治疗剂和抗癌剂联用，并且目前公开的化合物与其它抗癌或化疗剂的联合也在本发明的范围内。在癌症原理和肿瘤学实践(Cancer Principles and Practice of Oncology)，V.T.Devita和S.Hellman(编辑)，第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams&Wilkins Publishers中可以找到该类活性剂的实例。根据药物的特定性质和所涉及的癌症，本领域普通技术人员将能辨别有用的活性剂组合。该类抗癌剂包括但不限于下面的物质：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒性剂/细胞生长抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂和其它血管生成抑制剂、细胞增殖和存活信号转导的抑制剂、细胞凋亡诱导剂和干扰细胞周期关卡的活性剂。当与放疗共同施用时，本发明化合物也是有用的。
因此，在本发明的一个实施方案中，本发明化合物还与已知的抗癌剂联用，包括例如，雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、抗增殖剂、异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂。
在本发明某些优选的实施方案中，用于与本发明化合物联合来治疗癌症的典型活性剂包括例如，伊立替康、托泊替康、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、紫杉烷类、替扎他滨、环磷酰胺、长春花生物碱类、伊马替尼(Gleevec)、蒽环类抗生素、利妥昔单抗、曲妥单抗以及其它癌症化疗剂。
与本发明化合物联用的上面的化合物将以如Physicians′Desk Reference(PDR)，第47版(1993)(其被引入作为参考)中所示的治疗量或本领域普通技术人员已知的该类治疗有用量使用。
本发明的化合物和其它抗癌剂可以在推荐的最大临床剂量或较低剂量下施用。根据施用途径、疾病的严重程度和患者响应，可以改变活性化合物在本发明组合物中的剂量水平以获得所需的治疗响应。该联合可以以单独组合物或含有两种活性剂的单一剂型的形式进行施用。当以组合形式施用时，治疗剂可以被配制为单独的组合物形式，这些组合物可以在相同的时间或不同的时间被给予，或者这些治疗剂可以以单一组合物的形式被给予。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制人或动物个体的Pim1、Pim2或Pim3的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的式I或II化合物的任何一个实施方案的化合物或其可药用的盐。
通过参考下面的实施例可更容易地理解本发明，提供这些实施例是为了进行说明，而不是要对本发明进行限制。
实施例
参考下面的实施例，用本文所述的方法或本领域已知的其它方法，合成优选实施方案的化合物。
通过使用具有2695分离模块(Milford，MA)的Waters Millenium色谱系统的高效液相色谱(HPLC)来对化合物和/或中间体进行定性。分析柱是反相Phenomenex Luna C18-5μ，4.6x50mm，得自Alltech(Deerfield，IL)。采用梯度洗脱(流速为2.5mL/min)，通常用5％乙腈/95％水开始并历经10分钟进展为100％乙腈。所有的溶剂都含有0.1％的三氟乙酸(TFA)。用220或254nm下的紫外线(UV)吸收来探测化合物。HPLC溶剂得自Burdick和Jackson(Muskegan，MI)或Fisher Scientific(Pittsburgh，PA)。
在一些情况中，用使用玻璃或塑料背衬的硅胶板例如，Baker-Flex Silica Gel 1B2-F挠性片的薄层色谱(TLC)来对纯度进行评估。TLC结果可以方便地在紫外线下目测，或者可以通过使用众所周知的碘蒸汽和其它各种染色技术来进行探测。
质谱分析是在三种LCMS仪器之一上进行的：Waters System (Alliance HT HPLC和Micromass ZQ质谱仪；柱：Eclipse XDB-C18，2.1x50mm；梯度：在4分钟内，5-95％(或35-95％，或65-95％或95-95％)含0.05％TFA的乙腈水溶液；流速0.8mL/min；分子量范围200-1500；椎体电压20V；柱温40℃)，另一种Waters System(ACQUITY UPLC系统和ZQ 2000系统；柱：ACQUITY UPLC HSS-C18，1.8um，2.1x 50mm；梯度：在1.3分钟内，5-95％(或35-95％，或65-95％或95-95％)含0.05％TFA的乙腈水溶液；流速1.2mL/min；分子量范围150-850；椎体电压20V；柱温50℃)或Hewlett Packard System(1100HPLC系列；柱：Eclipse XDB-C18，2.1x 50mm；梯度：在4分钟内，5-95％含0.05％TFA的乙腈水溶液；流速0.8mL/min；分子量范围150-850；椎体电压50V；柱温30℃)。所有的质量都是以质子化母离子质量的形式进行报告的。
用Varian 400MHz NMR(Palo Alto，CA)对一些化合物进行了核磁共振(NMR)分析。光谱参照是TMS或化学位移已知的溶剂。
制备型分离是用Flash 40色谱系统和KP-Sil，60A(Biotage，Charlottesville，VA)，或者使用硅胶(230-400目)填充材料的快速柱色谱，或者使用Waters 2767 Sample Manager，C-18反相柱，30X50mm，流速75mL/min的HPCL进行的。用于Flash 40 Biotage系统和快速柱色谱的典型溶剂有二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷、丙酮、氨水(或氢氧化铵)和三乙胺。用于反相HPLC的典型溶剂是含有0.1％三氟乙酸的各种浓度的乙腈水溶液。
应当清楚的是，优选实施方案的有机化合物可能表现出互变异构现象。由于本说明书中的化学结构仅能表示可能的互变异构形式中的一种，应当清楚的是，优选的实施方案包括所画结构的任何互变异构形式。
应当清楚的是，本发明并不限于本文用于进行说明所提出的实施方案，而是包括上面公开内容的范围内的所有该类形式。
下面的实施例以及整个申请中的下列缩写具有下面的含义。如果没有定义，则该术语具有其通常公认的含义。
Figure BDA0000058386980000341
Figure BDA0000058386980000351
三氟甲磺酸3-氧代环己-1-烯基酯的合成
Figure BDA0000058386980000352
向环己烷-1，3-二酮(1当量)在DCM(0.4M)中的溶液中加入Na2CO3(1.0当量)并将其冷却至0℃。在室温下，在氮气气氛下，历时1小时滴加Tf2O(1.0当量)的DCM(5M)溶液。加入后，将该反应搅拌2小时(深红色溶液)。将该溶液过滤并向滤液中加入饱和NaHCO3(小心加入)，然后，萃取有机物，用盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，浓缩。该粗品不进行进一步纯化直接用于下一个步骤。以67％的收率得到三氟甲磺酸3-氧代环己-1-烯基酯。该三氟甲磺酸酯在存放时分解，因此应立即用于下面的反应。LC/MS＝244.9/286.0(M+H和M+CH3CN)；Rt＝0.88分钟。
3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮的合成
Figure BDA0000058386980000361
向三氟甲磺酸3-氧代环己-1-烯基酯(1.0当量)在脱气的二恶烷(0.3M)中的溶液中加入联硼酸频那醇酯(2.0当量)、KOAc(3.0当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)。将该反应加热至80℃达2小时，然后过滤。该二恶烷溶液不进行进一步纯化直接用于下一个步骤。LC/MS＝140.9(硼酸的M+H)。
3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮的合成
Figure BDA0000058386980000362
向3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮(1.0当量)在脱气的二恶烷和2M Na2CO3中的溶液中加入4-氯-3-硝基吡啶(1.2当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)。将该反应在油浴中加热至110℃达2小时。冷却至室温，然后用EtOAc稀释，加入H2O-深色溶液，大量乳状液。过滤以除去固体，然后对有机相进行萃取，用Na2SO4干燥，浓缩。将该粗品用硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)洗脱得到3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮(55％，2步)。LC/MS＝219(M+H)，LC＝2.294分钟。
3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇的合成
Figure BDA0000058386980000363
向3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮(1.0当量)的溶液中加入EtOH(0.2M)和CeCl3-7H2O (1.3当量)。将该反应冷却至0℃，然后分批加入NaBH4(1.3当量)。在0℃下搅拌2小时，然后通过加入水终止反应，浓缩除去EtOH，加入EtOAc，萃取有机物，用盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥并浓缩得到3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(99％)。LC/MS＝221.1(M+H)，LC＝2.235分钟。
2-(3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮的合成
Figure BDA0000058386980000371
在0℃下，向3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(1.0当量)、三苯基膦(1.5当量)和邻苯二甲酰亚胺(1.5当量)在THF(0.3M)中的溶液中滴加偶氮二甲酸(E)-二-叔丁酯(1.5当量)。将该反应在0℃下搅拌2小时。真空浓缩至干燥，然后将该粗品用硅胶色谱进行纯化，用EtOAc和己烷(1∶1，含5％甲醇)进行洗脱，从而得到2-(3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮(收率为63％)。LC/MS＝350.3(M+H)，LC＝3.936分钟。
2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮的合成
Figure BDA0000058386980000372
向2-(3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮(1.0当量)在AcOH(0.38M)中的溶液中加入Fe(6.0当量)并将该反应在室温下搅拌2小时。过滤，然后用甲醇洗涤并将滤液浓缩。向该粗品中加入乙酸乙酯和饱和NaHCO3，将有机物用Na2SO4干燥，浓缩，从而以96％的收率得到黄色浓稠胶状物形式的2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮。LC/MS＝320.0(M+H)，LC＝2.410分钟。
2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮的合成
Figure BDA0000058386980000381
向2-(3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮(1.0当量)在乙酸(0.1M)中的溶液中加入10％Pd/C(0.2当量)并将该反应在H2囊下搅拌。在3天后，将该反应用硅藻土过滤，用乙酸乙酯和甲醇洗涤，将滤液用乙酸乙酯稀释并用饱和的2M Na2CO3洗涤两次。将有机相用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将该粗品用己烷和乙酸乙酯研磨，从而以73％的收率得到2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮。LC/MS＝322.2(M+H)，Rt＝0.64分钟。
三氟甲磺酸5，5-二甲基-3-氧代环己-1-烯基酯的合成
Figure BDA0000058386980000382
在一个3-颈的圆底烧瓶中，将5，5-二甲基环己烷-1，3-二酮(1.0当量)溶解于DCM(0.2M)中。加入碳酸钠(1.1当量)并将该混合物在N2下，在冰/盐水浴上在进行磁力搅拌的情况下冷却至约-5℃。历时90分钟通过加料漏斗滴加用DCM稀释的三氟甲磺酸酐(1.05当量)。在完全加入后，将该反应在约0℃下搅拌1小时。LCMS和1H NMR表明仍然有起始材料剩余。补加碳酸钠(0.51当量)和三氟甲磺酸酐(0.50当量)。2小时后，将该混合物用粗的烧结玻璃漏斗过滤(将滤饼用DCM洗涤)，转移到Erlenmeyer烧瓶中，通过在剧烈搅拌下小心地加入饱和碳酸氢钠水溶液至pH＝7来终止反应，转移到分液漏斗中进行层分离。将有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩得到三氟甲磺酸5，5-二甲基-3-氧代环己-1-烯基酯，其不进行进一步纯化直接用于下一个步骤。LC/MS(m/z)：MH+＝273.1，Rt＝1.03。
5，5-二甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮的 合成
Figure BDA0000058386980000391
将三氟甲磺酸5，5-二甲基-3-氧代环己-1-烯基酯(1.0当量)、乙酸钾(3.0当量)和联硼酸频那醇酯(2.0当量)全部都加入到位于圆底烧瓶中的1，4-二恶烷(0.2M)中并通过用N2向该混合物鼓泡10分钟来进行脱气。加入PdCl2(dPPf)-DCM加合物(0.03当量)并将该反应在N2下、在油浴中加热至80℃过夜，给该反应装配回流冷凝器。将该混合物冷却至室温，用粗的烧结玻璃漏斗过滤，将滤饼用1，4-二恶烷冲洗，从而得到5，5-二甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮的1，4-二恶烷溶液，将其在不进行进一步纯化的情况下用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+(硼酸)＝169.1，Rt＝0.50。
5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮的合成
Figure BDA0000058386980000392
将硼酸酯5，5-二甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮(1.0当量)在一个圆底烧瓶中溶解于1，4-二恶烷中并通过用N2向该溶液鼓泡30分钟来进行脱气。加入4-氯-3-硝基-吡啶(1.3当量)和2M(aq)碳酸钠(2.0当量)，用N2鼓泡10分钟，然后加入PdCl2(dppf)-DCM(0.05当量)。将该反应混合物在110℃下搅拌2小时。将该混合物加入到EtOAc和水中。将所得混合物用硅藻土过滤，将滤饼用EtOAc洗涤。将有机层分离出来并将水层用EtOAc萃取。将所合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶色谱进行纯化(用EtOAc∶己烷＝1∶10至2∶1进行洗脱)，从而得到5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮(三步的收率为46.7％)。LC/MS(m/z)：MH+＝247.2，Rt＝0.79。
5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇的合成
Figure BDA0000058386980000401
在0℃下，向5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮(1.0当量)和CeCl3-7H2O(1.2当量)在MeOH(0.2M)中的溶液中加入NaBH4(1.0当量)。将该溶液搅拌1小时，通过加入5mL水终止反应。在真空下除去挥发性物质并将残余物在EtOAc和H2O之间进行分配。将有机层分离出来并用盐水洗涤。将所合并的水层用EtOAc反萃取并将有机物用盐水洗涤。将所合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(5％的甲醇在1∶1乙酸乙酯和己烷中的溶液)，从而得到5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(74％)。LC/MS(m/z)：MH+＝249.2，Rt＝0.76。
2-(5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)-环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮的合 成
向冷却至0℃的5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(1.0eq)、三苯基膦(1.5当量)和邻苯二甲酰亚胺(1.5当量)在THF(0.2M)中的均质溶液中加入位于THF中的偶氮二甲酸二叔丁酯(1.5当量)。将该混合物在0℃下搅拌2小时。将该反应真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(5％的甲醇在1∶1乙酸乙酯和己烷中的溶液)，从而得到2-(5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮(99％)。LC/MS(m/z)：MH+＝378.2，Rt＝1.10。
2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)-5，5-二甲基-环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮的合 成
Figure BDA0000058386980000412
将2-(5，5-二甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮(1当量)在乙酸(0.1M)中的溶液用氮气净化10分钟。然后，加入10％Pd/C(0.10当量)。将该反应混合物在室温下在氢气气氛下搅拌一夜。通过用硅藻土过滤除去固体，然后用EtOAc和MeOH进行洗涤。将滤液浓缩，用EtOAc稀释并用饱和的2M Na2CO3水溶液洗涤两次。将有机层用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(5％的甲醇在1∶1乙酸乙酯和己烷中的溶液)，从而得到2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)-5，5-二甲基环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮(89％)。LC/MS(m/z)：MH+＝348.3，Rt＝0.79。
2-(5-(3-氨基吡啶-4-基)-3，3-二甲基环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮的合成
将2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)-5，5-二甲基环己-2-烯基)异二氢吲哚-1，3-二酮(1.0当量)在乙酸(0.1M)中的溶液用氮气净化10分钟。然后，加入10％Pd/C(0.1当量)。将该反应混合物在45℃、300psi氢气气氛下，在不锈钢高压釜中搅拌一夜，然后在65℃，300psi下搅拌5小时。通过用硅藻土过滤除去固体，然后用EtOAc和MeOH进行洗涤。将滤液浓缩，用EtOAc稀释并用饱和2M Na2CO3水溶液洗涤两次。将有机层用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(5％的甲醇在1∶1乙酸乙酯和己烷中的溶液)，从而得到2-(5-(3-氨基吡啶-4-基)-3，3-二甲基环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮(53％)。LC/MS(m/z)：MH+＝350.3，Rt＝0.78。用手性HPLC拆分(对于分析而言，Rt＝7.526min和13.105min；己烷∶乙醇＝80∶20(v∶v)，Chiralcel OJ-H 100x 4.6mm，1mL/min。对于制备性分离而言，己烷∶乙醇＝80∶20(v∶v)，Chiralcel OJ-H(250x 20mm，20mL/min))得到对映异构纯的2-((1R，5R)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-3，3-二甲基环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮和2-((1S，5S)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-3，3-二甲基环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮。1H NMR(CDCl3)：δ8.04(s，1H)，8.00(d，1H)，7.82(m，2H)，7.71(m，2H)，7.06(d，1H)，4.54(m，1H)，3.71(m，2H)，2.89(m，1H)，2.23-2.44(m，2H)，1.90(m，1H)，1.20-1.60(m，3H)，1.18(s，3H)，1.07(s，3H)。
4-(环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980000431
向3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(1.0当量)的溶液中加入二恶烷(0.18M)和对-TSA(1.1当量)。将该溶液加热至100℃达4小时。冷却至室温，用饱和NaHCO3和乙酸乙酯进行后处理，将有机相用Na2SO4干燥，浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用100％DCM进行洗脱，从而以黄色油状物形式得到4-(环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶(收率为27％)。LCMS(m/z)：203.1(MH+)，LC Rt＝3.53min，1H-NMR(CDCl3)：9.02(s，1H)，8.70(d，J＝5.3，1H)，7.30(d，J＝5.3，1H)，6.15-6.17(m，1H)，6.02-6.11(m，2H)，2.35-2.38(m，4H)。
(+/-)-2-叠氮基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇的合成
Figure BDA0000058386980000432
向4-(环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)在DCM(0.1M)中的溶液中加入NaHCO3(1.2当量)得到黄色溶液。冷却至0℃，然后以固体形式向该溶液中一次性加入间-CPBA(1.0当量)。将该反应在0℃下搅拌3.5小时。同时用TLC和LC/MS进行监测。产物电离为M+H＝237(二醇)；在UPLC上的Rt＝0.41min。用饱和NaHCO3终止反应，然后用DCM萃取(3次)。将有机相进一步用盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到黄色油状物形式的环氧化物粗品，将其在不进行进一步纯化的情况下应用。
向上面的粗品材料在EtOH和水(3∶1)中的溶液(混浊的黄色溶液)中加入NaN3(2.0当量)和NH4Cl(2.0当量)得到澄清的有机溶液。将该反应搅拌16小时，然后浓缩。加入EtOAc和水，将有机相进一步用MgSO4干燥，浓缩，从而得到一种褐色的油状物。将该油状物负载到硅胶上并通过柱色谱进行纯化(ISCO，0-50％EtOAc)以黄色油状物形式得到(+/-)-2-叠氮基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇(2步的收率为44％)。LCMS(m/z)＝262(MH+)，LC Rt＝2.35分钟。
(+/-)-4-(3-叠氮基-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己-1-烯基)-3-硝基吡啶的 合成
Figure BDA0000058386980000441
在室温下，向(+/-)-2-叠氮基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇(1.0当量)在DCM(0.15M)中的溶液中加入TBSCl(2.0当量)、咪唑(2.0当量)和DMAP(0.1当量)。在18小时后，加入水，将有机物用盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，浓缩。将该粗品负载到硅胶上并通过柱色谱进行纯化(ISCO)，用乙酸乙酯和己烷(20％)进行洗脱。以60％的收率得到黄色油状物形式的(+/-)-4-(3-叠氮基-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己-1-烯基)-3-硝基吡啶。LCMS(m/z)：376.3(MH+)，LC Rt＝5.848分钟。
(+/-)-6-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基 氨基甲 酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000442
在一个圆底烧瓶中加入(+/-)-4-(3-叠氮基-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)和吡啶(0.1M)得到黄色溶液。加入氢氧化铵(10∶1吡啶∶氢氧化铵)，然后加PMe3(3.0当量)。在10分钟后，该反应变成深褐色。在室温下搅拌1.5小时。通过加入EtOH终止反应，浓缩。再重复2次。向该粗品中加入饱和NaHCO3和二恶烷(1∶1，0.1M)。加入Boc2O(1.0当量)。在室温下搅拌一小时。用H2O和EtOAc洗涤，将有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(ISCO，5∶1Hex/EtOAc)。收集纯的级分并浓缩，从而以泡沫形式得到(+/-)-6-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯。
LCMS(m/z)：450.3(MH+)，LC Rt＝5.83分钟。
(+/-)-3-(3-氨基吡啶-4-基)-6-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己-2-烯基氨基甲 酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000451
向(+/-)-6-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在AcOH(0.18M)中的溶液中加入Fe(6.0当量)并将该反应搅拌20小时。通过用甲醇稀释该反应、过滤、浓缩滤液来进行后处理。向粗品中加入乙酸乙酯和饱和NaHCO3，将有机物用硫酸钠干燥，浓缩，从而以94％的收率得到黄色油状物形式的(+/-)-3-(3-氨基吡啶-4-基)-6-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯。LCMS(m/z)：420.3(MH+)，LC Rt＝3.88分钟。
(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-2-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己基氨基甲酸叔 丁酯的合成
向(+/-)-3-(3-氨基吡啶-4-基)-6-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在MeOH(0.1M)中的溶液中加入Pd/C (20％重量)并将该反应在氢气囊下搅拌18小时。该反应的LC/MS表明其是非对映异构体的混合物，将该反应液过滤，用EtOAc洗涤，浓缩滤液。将该粗品通过制备型HPLC进行纯化(在DMSO中)并将纯的级分合并，用固体NaHCO3中和，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，从而得到产物A(收率为8％)和产物B(收率为51％)。
产物A：LCMS(m/z)：422.4(MH+)，LC Rt＝3.75分钟。
产物B：LCMS(m/z)：422.4(MH+)，LC Rt＝3.94分钟。
三氟甲磺酸1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基酯的合成
Figure BDA0000058386980000462
将1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-8-酮(1.0当量)溶解于醚(0.1M)中并将其在-15℃下搅拌，然后加入1M NaHMDS(1.05当量)并搅拌70分钟，然后加入Tf2O(1.05当量)并使该反应缓慢升温至室温。将该混合物搅拌28小时，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，然后用水洗涤。将水层合并并用醚萃取。将有机层合并，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(乙醚∶己烷＝1∶4)得到三氟甲磺酸1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基酯(65％)。LC/MS(m/z)：MH+＝289.0，Rt＝0.97.HPLC Rt＝3.77。
4，4，5，5-四甲基-2-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊 烷的合成
Figure BDA0000058386980000471
将三氟甲磺酸1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基酯(1.0当量)在二恶烷(0.5M)中的溶液用氮气净化30分钟。然后，加入4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-二(1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.0当量)、KOAc(3.0当量)、Pd(dppf)Cl2-DCM(0.2当量)并将该溶液在密封高压釜中在80℃下进行搅拌。将该反应用硅藻土垫过滤，然后向滤液中加入乙酸乙酯，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(乙酸乙酯∶己烷＝1∶1)得到4，4，5，5-四甲基-2-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(95％)。LC/MS(m/z)：MH+＝267.1，Rt＝0.95。
3-硝基-4-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶的合成
将DME(0.2M)和2M碳酸钠水溶液(1.7当量)的溶液用氮气净化20分钟。然后加入4-氯-3-硝基吡啶(1.6当量)、4，4，5，5-四甲基-2-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(1.0当量)、Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)并将其在密封高压釜中在110℃下搅拌。将该反应在该温度下搅拌3.5小时。将该反应用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(乙酸乙酯∶己烷＝1∶1，含10％甲醇)得到3-硝基-4-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶(83％)。LC/MS(m/z)：MH+＝263.2，Rt＝0.71。
4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯酮的合成
Figure BDA0000058386980000481
将3-硝基-4-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶(1.0当量)在20％TFA的CH2Cl2溶液(0.2M)中的混合物在室温下搅拌一夜。减压除去溶剂。将残余物用乙酸乙酯(200mL)溶解，和用饱和NaHCO3(30mL)及饱和NaCl(30mL)洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩得到4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯酮(85％)。将该粗品在不进行进一步纯化的情况下用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+＝218.9，Rt＝0.60。
4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇的合成
在0℃下，向4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯酮(1.0当量)在甲醇(0.2M)中的溶液中加入硼氢化钠(1.8当量)。将该反应混合物在0℃下搅拌2小时。减压除去甲醇。将残余物用乙酸乙酯(200mL)溶解并用饱和NaCl(30mL)洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩得到4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇(85％)。将该粗品在不进行进一步纯化的情况下用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+＝221.0，Rt＝0.55
甲磺酸4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基酯的合成
Figure BDA0000058386980000491
在0℃下，向4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇(1.0当量)和DIPEA(2.5当量)在CH2Cl2(0.15M)中的溶液中加入甲磺酰氯(1.8当量)。将该反应混合物在0℃下搅拌1小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释(200mL)并用饱和NaCl(30mL)洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩得到甲磺酸4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基酯(93％)。将残余物在不进行进一步纯化的情况下用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+＝299.0，Rt＝0.70
4-(环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980000492
在室温下，向甲磺酸4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基酯(1.0当量)在四氢呋喃(0.1M)中的溶液中加入DBU(1.8当量)。将该反应混合物在室温下搅拌一夜。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释(200mL)并用饱和NaCl(30mL)洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(5％的甲醇在1∶1乙酸乙酯和己烷中的溶液)，从而得到4-(环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶。LC/MS(m/z)：MH+＝203.2，Rt＝0.85。
(+/-)-6-羟基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000493
在室温下，向(+/-)-2-叠氮基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇(1.0当量)在吡啶和NH4OH (8∶1，0.23M)中的溶液中加入三甲基膦(3.0当量)。将该混合物在室温下搅拌3小时。除去溶剂。向该残余物中加入乙醇。然后，真空除去乙醇以确保完全除去氨。将残余物溶解于1，4-二恶烷中，然后向其中依次加入饱和碳酸氢钠水溶液和Boc2O(1.0当量)的THF溶液。将所得混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaCl洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(5％的甲醇在1∶1乙酸乙酯和己烷中的溶液)，从而得到(+/-)-6-羟基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯(82％)。LC/MS(m/z)：MH+＝336.0，Rt＝0.71
甲磺酸(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基酯的合 成
Figure BDA0000058386980000501
在0℃下，向(+/-)-6-羟基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)和三乙胺(1.5当量)在CH2Cl2(0.2M)中的溶液中加入甲磺酰氯(1.2当量)。将该混合物在该温度下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaCl洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩，从而得到甲磺酸(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基酯(85％)，将其在不进行进一步纯化的情况下用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+＝414.0，Rt＝0.82
(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-3，3a，7，7a-四氢苯并[d] 唑-2(6H)-酮的合成
Figure BDA0000058386980000512
将甲磺酸(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基酯(1.0当量)在吡啶(0.21M)中的混合物在微波中在110℃下搅拌10分钟。减压除去吡啶。将残余物溶解于乙酸乙酯中并用饱和NaCl洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩，从而得到(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-3，3a，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000513
唑-2(6H)-酮(85％)，将其在不进行进一步纯化的情况下用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+＝262.1，Rt＝0.49
(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000514
唑-3(2H)-甲酸叔 丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000515
在室温下，向(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-3，3a，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000516
唑-2(6H)-酮(1.0当量)、TEA(1.8当量)和催化量的DMAP在CH2Cl2(0.19M)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.2当量)。将该反应混合物搅拌1小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释(100mL)并用饱和NaCl(30mL)洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(5％的甲醇在1∶1乙酸乙酯和己烷中的溶液)得到(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000517
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯(98％)。LC/MS(m/z)：MH+＝306.0，Rt＝0.75
(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000521
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯的合 成
Figure BDA0000058386980000522
向(+/-)-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000523
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯(1.0当量)在甲醇和乙酸乙酯(1∶1，0.1M)中的溶液中加入10％Pd/C(0.1当量)。将所得混合物在H2气氛下搅拌6小时。通过过滤除去固体。将滤液减压浓缩得到(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000524
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯(87％)，将其在不进行进一步纯化的情况下用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+＝334.1，Rt＝0.51。
三氟甲磺酸5-甲基-3-氧代环己-1-烯基酯的合成
向5-甲基环己烷-1，3-二酮(1.0当量)在DCM(0.5M)中的溶液中加入Na2CO3(1.1当量)并将其冷却至0℃。在0℃及氮气气氛下，在1小时内滴加位于DCM(5.0M)中的Tf2O(1.0当量)。加入后，将该反应在室温下搅拌1小时(深红色溶液)。将该溶液过滤并通过在剧烈搅拌下小心加入饱和NaHCO3至pH＝7将滤液淬熄。将该溶液转移到一个分液漏斗中并进行层分离。将有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩并在高真空下干燥15分钟，从而以78％的收率得到淡黄色油状物形式的三氟甲磺酸5-甲基-3-氧代环己-1-烯基酯。该三氟甲磺酸酯在存放时分解，因此应立即用于下面的反应。LC/MS＝259.1/300.1(M+H和M+CH3CN)；Rt＝0.86min，LC＝3.84分钟。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：6.05(s，1H)，2.70(dd，J＝17.2，4.3，1H)，2.53(dd，J＝16.6，3.7，1H)，2.48-2.31(m，2H)，2.16(dd，J＝16.4，11.7，1H)，1.16(d，J＝5.9，3H)。
5-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮的合成
Figure BDA0000058386980000531
向三氟甲磺酸5-甲基-3-氧代环己-1-烯基酯(1.0当量)在脱气的二恶烷(0.7M)中的溶液中加入联硼酸频那醇酯(2.0当量)、KOAc(3.0当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.03当量)。将该反应加热至80℃达10小时(开始时的大规模加热导致放热并在溶液顶部形成橙色泡沫，应当除去加热浴直至泡沫消退后再重新加热至80℃为好)，然后，冷却至室温并用粗的烧结玻璃漏斗过滤。将滤饼再用一些二恶烷洗涤，将滤液不进行进一步纯化地用于下一个步骤。LC/MS＝155.1(硼酸的M+H)；Rt＝0.41min，LC＝1.37分钟。
5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮的合成
Figure BDA0000058386980000532
向5-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮(1.0当量)在脱气的二恶烷(0.5M)和2M Na2CO3(2当量)中的溶液中加入4-氯-3-硝基吡啶(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)。将该反应置于回流冷凝器下并在油浴中加热至110℃达1小时。冷却至室温，用硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯对该垫进行洗涤，将滤液真空浓缩。将残余物进一步在旋转蒸发仪上在80℃下抽真空1小时以通过升华除去硼酸酯副产物(M+H＝101)。将残余物在盐水和乙酸乙酯之间进行分配并进行层分离，将水相进一步用乙酸乙酯萃取(4x)，将有机物合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗品通过硅胶色谱纯化，用DCM上样并用2-50％的乙酸乙酯和己烷进行洗脱。将纯化的级分真空浓缩得到橙色的油状物。将该油状物与晶种一起放在高真空(～500mtorr)下过夜得到橙色固体。通过在己烷中研磨进一步对该固体进行纯化，从而得到5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮(2步的收率为48％)。LC/MS＝233.2(M+H)；Rt＝0.69min，LC＝2.70分钟。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：9.31(s，1H)，8.88(d，J＝5.1，1H)，7.30(d，J＝5.1，1H)，6.00(d，J＝2.4，1H)，2.62(dd，J＝16.4，3.5，1H)，2.53-2.34(m，3H)，2.23(dd，J＝16.1，11.7，1H)，1.16(d，J＝6.3，3H)。
顺式-(+/-)-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇的合成
Figure BDA0000058386980000541
向5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯酮(1.0当量)在EtOH(0.3M)中的溶液中加入CeCl3-7H2O(1.2当量)。将该反应冷却至0℃，然后分批加入NaBH4(1.2当量)。在0℃下搅拌1小时，然后通过加入水终止反应，浓缩以除去EtOH，加入EtOAc，萃取有机物，用盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到顺式-(+/-)-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(94％)。LC/MS＝235.2(M+H)，LC＝2.62分钟。
4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980000542
向5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(1.0当量)在DMF(0.5M)中的溶液中加入咪唑(4.0当量)和TBDMSCl(2.5当量)。在搅拌18小时后，将该溶液在EtOAc和H2O之间进行分配并分离。在进一步用H2O(3x)和NaCl(饱和的)洗涤后，用MgSO4干燥，过滤并除去溶剂，得到4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(85％)。LC/MS＝349.2(M+H)，LC＝5.99分钟。
4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)吡啶-3-胺的合成
Figure BDA0000058386980000551
将浓度为0.4M的4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)和铁(6.0当量)在乙酸中的非均质溶液剧烈搅拌2小时。然后，使该混合物通过硅藻土垫，用MeOH进行洗脱。在真空除去挥发性物质后，将残余物溶解于EtOAc，用Na2CO3(饱和的)、NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在真空下除去挥发性物质，得到4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)吡啶-3-胺(78％)。LCMS(m/z)：319.3(MH+)；LC Rt＝3.77分钟。
4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺的合成
Figure BDA0000058386980000552
向浓度为0.1M的4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)的甲醇溶液中加入10％钯碳(0.1当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌15小时。然后，将该混合物用硅藻土垫过滤，用甲醇洗脱。在真空下除去挥发性物质，得到4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺(90％)。LCMS(m/z)：321.3(MH+)；LC Rt＝3.85分钟。
顺式(+/-)4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲 酸苄基酯的合成
Figure BDA0000058386980000561
向浓度为0.5M的顺式-(+/-)-4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺在二氯甲烷中的溶液中加入苄基2，5-二氧代吡咯烷-1-基碳酸酯(1.1当量)和DMAP(0.05当量)。将其在室温下搅拌16小时后，补加苄基2，5-二氧代吡咯烷-1-基碳酸酯(0.55当量)和DMAP(0.03当量)。将其在室温下再搅拌24小时后，再补加苄基2，5-二氧代吡咯烷-1-基碳酸酯(0.1当量)和DMAP(0.03当量)。将其搅拌18小时后，将该溶液在EtOAc和Na2CO3(饱和的)之间分配并对其进行分离。在进一步用Na2CO3(饱和的)(2x)和NaCl(饱和的)洗涤后，用MgSO4干燥，过滤并除去溶剂，得到顺式(+/-)4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯。将该粗品直接使用。LC/MS＝455.3(M+H)，LC＝4.39分钟。
顺式(+/-)-4-(3-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯的合成
Figure BDA0000058386980000562
将浓度为0.1M的顺式(+/-)4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯在1∶2∶1的6N HCl/THF/MeOH中的溶液在室温下搅拌6小时。然后，通过加入6N NaOH将其pH调至pH＝7并在真空下除去挥发性物质。将水层用EtOAc萃取并将有机物用NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，在真空下除去挥发性物质后得到顺式(+/-)-4-(3-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯。将该粗品直接使用。LC/MS＝341.2(M+H)，LC＝2.38分钟。
顺式(+/-)-4-(3-甲基-5-氧代环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯的合成
Figure BDA0000058386980000571
向0℃的浓度为0.16M的顺式(+/-)-4-(3-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯在含水CH2Cl2中的溶液中加入Dess-Martin Periodinane(1.5当量)，当该溶液升温至室温后将其搅拌18小时。将该溶液在EtOAc和1∶1的10％Na2S2O3/NaHCO3(饱和的)之间进行分配并对其进行分离。在进一步用1∶1的10％Na2S2O3/NaHCO3(饱和的)(2x)和NaCl(饱和的)洗涤后，用MgSO4干燥，过滤，除去溶剂并通过硅胶色谱进行纯化(75-100％EtOAc/己烷)，得到白色固体形式的顺式-(+/-)-4-(3-甲基-5-氧代环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯(53％，5步)。LC/MS＝339.2(M+H)。
顺式-(+/-)-4-(-3-(苄基氨基)-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯的合 成
Figure BDA0000058386980000572
将浓度为0.25M的顺式-(+/-)-4-(3-甲基-5-氧代环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯(1.0当量)和苄基胺(3.0当量)的MeOH溶液在室温下搅拌2小时。将其在-78℃的冷却浴上冷却，加入LiBH4(1.1当量，2.0M THF溶液)并使该溶液在搅拌下经16小时升温至室温。将该溶液在EtOAc和NaHCO3(饱和的)之间进行分配，分离，进一步用NaHCO3(饱和的)和NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，在真空下除去挥发性物质后，以4∶1的异构体混合物的形式得到顺式-(+/-)-4-(3-(苄基氨基)-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯，全顺式异构体占优势。LC/MS＝430.3(M+H)，LC＝0.62分钟。
顺式(+/-)-(3-(3-氨基吡啶-4-基)-5-甲基环己基氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000581
向浓度为0.07M的顺式-(+/-)-4-(-3-(苄基氨基)-5-甲基环己基)吡啶-3-基氨基甲酸苄基酯(1.0当量)的甲醇溶液中加入20％氢氧化钯/碳(0.2当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌14小时。然后，将该反应用Ar净化，加入Boc2O(1.0当量)并将该溶液搅拌8小时。补加Boc2O(1.0当量)并将该溶液再搅拌16小时。然后，将该混合物用硅藻土垫过滤，用甲醇洗脱。在真空下除去挥发性物质后，用硅胶色谱进行纯化(2.5-2.5 MeOH/CH2Cl2，含0.1％DIEA)并用10％EtOAc/己烷重结晶，得到顺式(+/-)-(3-(3-氨基吡啶-4-基)-5-甲基环己基氨基甲酸叔丁酯(49％)。LCMS(m/z)：306.3(MH+)，LC Rt＝2.59分钟。可以通过手性色谱获得纯的对映异构体。
(+/-)-4-(5-甲基环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980000582
向(+/-)-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(1.0当量)在二恶烷(0.1M)中的溶液中加入对-TSA(1.0当量)并将该反应在100℃下搅拌3小时。将该溶液冷却至室温，然后使其通过一个中性氧化铝垫，用EtOAc洗脱，以68％的收率得到黄色油状物形式的(+/-)-4-(5-甲基环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶。LC/MS＝217.1(M+H)，LC＝3.908分钟。
(+/-)-2-叠氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇的合成
Figure BDA0000058386980000591
在0℃下，向(+/-)-4-(5-甲基环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)在DCM(0.1M)中的溶液中加入间-CPBA(1.1当量)并使该反应升温至室温。在3小时后，将该混合物用饱和NaHCO3终止反应，用DCM萃取，并将有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到黄色油状物。将该粗品溶解于乙醇和水(3∶1，0.1M)中并加入叠氮化钠(2.0当量)和氯化铵(2.0当量)。将该反应搅拌4小时，然后真空浓缩。向该粗品中加入乙酸乙酯和水，将有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)洗脱，以49％的收率得到油状物形式的(+/-)-2-叠氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇。LC/MS＝276.1(M+H)，Rt＝0.71分钟。
(+/-)-6-羟基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯的合 成
Figure BDA0000058386980000592
向(+/-)-2-叠氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇(1.0当量)在吡啶和氢氧化铵(8∶1，0.08M)中的溶液中加入三甲基膦(3.0当量)并将该褐色溶液在室温下搅拌2小时。向该混合物中加入乙醇并将该溶液真空浓缩(2x)。然后，将该粗品混合物溶解于二恶烷和饱和NaHCO3(1∶1，0.08M)中并加入Boc2O(1.0当量)。将该溶液在室温下搅拌2小时，然后在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机相用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)进行洗脱，以69％的收率得到(+/-)-6-羟基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS＝350.1(M+H)，Rt＝0.76分钟。
(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基甲磺 酸酯的合成
Figure BDA0000058386980000601
向(+/-)-6-羟基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在DCM(0.09M)中的溶液中加入三乙胺(1.5当量)。将该反应混合物冷却至0℃并向该反应中加入MsCl(1.2当量)并搅拌3小时。向该溶液中加入水，将有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)进行洗脱，以65％的收率得到白色泡沫形式的(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基甲磺酸酯。LC/MS＝428.2(M+H)，Rt＝0.88分钟。
(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000602
唑-3(2H)- 甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000603
将(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基甲磺酸酯(1.0当量)在吡啶(0.2M)中的溶液在微波容器中加热至110℃达10分钟。然后，将该有机溶液浓缩至干燥并通过在乙酸乙酯和水之间进行分配来进行后处理。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗品溶解于DCM(0.2M)中并向该反应中加入三乙胺(1.8当量)，然后加入Boc2O(1.2当量)。将其在室温下搅拌40分钟后，将该反应真空浓缩并通过硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)进行洗脱，以66％的收率得到白色泡沫形式的(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]唑-3(2H)-甲酸叔丁酯。LC/MS＝376.0(M+H)，Rt＝0.87分钟。
(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000612
唑-3(2H)-甲酸叔丁 酯的合成
Figure BDA0000058386980000613
向(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000614
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯(1.0当量)在MeOH和乙酸乙酯(1∶1，0.07M)中的溶液中加入10％Pd/C(0.1当量)并将该反应在室温下在氢气气氛下搅拌。在反应结束时，将溶液用硅藻土垫过滤，用MeOH和乙酸乙酯洗涤，将滤液真空浓缩至干燥，以＞99％的收率得到非对映异构体混合物形式的(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000615
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯。LC/MS＝348.2(M+H)，Rt＝0.50分钟。
(+/-)-6-溴-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇的合成
Figure BDA0000058386980000616
向4-(5-甲基环己-1，3-二烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)在THF和水(1∶1，0.13M)中的溶液中加入NBS(1.5当量)并将该反应在室温下搅拌30分钟。在反应结束时，向反应液中加入乙酸乙酯和水，将有机相用盐水洗涤然后用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)进行洗脱，以80％的收率得到黄色油状物形式的(+/-)-6-溴-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇。LC/MS＝315.0/313.0(M+H)，LC＝2.966分钟。
(+/-)-2-叠氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇的合成
Figure BDA0000058386980000621
向(+/-)-6-溴-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(1.0当量)在THF(0.1M)中的溶液中加入叔丁醇钾(1.5当量)。该反应几乎立即从橙色变成黑色。TLC表明，产物的形成在30分钟内结束。通过加入饱和氯化铵和乙酸乙酯终止反应。将有机相用盐水洗涤然后用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗品溶解于乙醇和水(3∶1，0.1M)中并加入氯化铵(2.0当量)和叠氮化钠(2.0当量)。将该深橙色的反应液在室温下搅拌一夜。LC/MS表明向产物的转化完全。将反应液浓缩以除去乙醇，加入乙酸乙酯和水，将有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)进行洗脱，以55％的收率得到(+/-)-2-叠氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇。LC/MS＝276.0(M+H)，LC＝2.803分钟。
(+/-)-6-羟基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯的合 成
Figure BDA0000058386980000631
向(+/-)-2-叠氮基-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯醇(1.0当量)在吡啶和氢氧化铵(8∶1，0.08M)中的溶液中加入三甲基膦(3.0当量)并将该褐色溶液在室温下搅拌2小时。反应结束后，加入EtOH并将该溶液真空浓缩。再加入一些乙醇并将该反应液再次浓缩。向该粗品中加入二恶烷和饱和NaHCO3(1∶1，0.08M，然后加入Boc2O(1.0当量)。将该反应混合物在室温下搅拌2小时，然后加入水和乙酸乙酯。将有机相用MgSO4干燥，浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)进行洗脱，得到(+/-)-6-羟基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯(59％)。LC/MS＝350.1(M+H)，Rt：0.76分钟。
(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基乙酸 酯的合成
Figure BDA0000058386980000632
向(+/-)-6-羟基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在吡啶(0.1M)中的溶液中加入Ac2O(2.0当量)并将该反应在室温下搅拌一夜。反应结束后，将反应液浓缩至干燥，然后用乙酸乙酯和水进行后处理。将有机相用盐水洗涤然后用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以94％的收率得到(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基乙酸酯。LC/MS＝392.2(M+H)，Rt＝0.94分钟。
(+/-)-4-(3-氨基吡啶-4-基)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基环己基乙酸酯的合 成
向进行了脱气的(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基乙酸酯(1.0当量)在MeOH和EtOAc(1∶1，0.1M)中的溶液中加入10％Pd/C(0.1当量)并将该反应在室温下在氢气囊下搅拌3天。反应结束后，将溶液用硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯对该垫进行洗涤并将滤液浓缩。粗品物质中含有约10％不希望的异构体。将该粗品溶解于乙酸乙酯(～20％)和己烷中并加热至全部溶解。使该溶液在室温下放置2天。然后，收集沉淀，以59％的收率以纯产物形式得到(+/-)-4-(3-氨基吡啶-4-基)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基环己基乙酸酯。LC/MS＝364.3(M+H)，Rt＝0.63分钟。
2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基甲磺酸酯的 合成
Figure BDA0000058386980000642
向6-羟基-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在DCM(0.09M)中的溶液中加入三乙胺(1.5当量)并将该反应冷却至0℃。向该反应中加入MsCl(1.2当量)并搅拌3小时。再向该反应中加入1.0当量MsCl并将其再搅拌2小时。通过加入水对反应液进行后处理，将有机相用盐水洗涤、硫酸钠干燥，浓缩。将粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶1)进行洗脱，以65％的收率得到白色泡沫形式的2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基甲磺酸酯。LC/MS＝428.2(M+H)，LC：3.542分钟。
(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000651
唑-3(2H)- 甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000652
将(+/-)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯基甲磺酸酯(1.0当量)在吡啶(0.2M)中的溶液在微波中在110℃下加热10分钟。然后，将该橙色反应液真空浓缩，将粗品溶解于乙酸乙酯和水中，将有机相用硫酸钠干燥，真空浓缩。将粗品溶解于DCM(0.2M)中，加入三乙胺(1.8当量)，然后加入Boc2O(1.2当量)。将该反应搅拌40分钟，然后浓缩至干燥。将粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用己烷和乙酸乙酯(1∶1)进行洗脱，以66％的收率得到白色泡沫形式的(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000653
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯。LC/MS＝376.0(M+H)，LC：3.424分钟。
(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢苯并[d] 唑-3(2H)-甲酸叔丁 酯的合成
Figure BDA0000058386980000662
向进行了脱气的(+/-)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代-3a，6，7，7a-四氢苯并[d]唑-3(2H)-甲酸叔丁酯(1.0当量)在MeOH和EtOAc(1∶1，0.1M)中的溶液中加入10％Pd/C(0.1当量)。将该反应在氢气囊下搅拌一夜。反应结束后，将溶液用硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯对该垫进行洗涤。将滤液真空浓缩，以93％的收率得到黄色泡沫形式的(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980000664
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯。LC/MS＝348.1(M+H)，Rt＝055分钟。
((+/-)-(1R，2R，6S)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯-1，2-二醇和 (+/-)-(1R，2S，6S)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯-1，2-二醇)的合成
Figure BDA0000058386980000665
在室温下，向(+/-)-(1S，5S，6S)-6-溴-5-甲基-3-(3-硝基吡啶-4-基)环己-2-烯醇(1.0当量)在THF(0.1M)中的溶液中加入叔丁醇钾(1.5当量)。将该反应混合物搅拌10分钟。将该反应混合物用NH4Cl溶液终止反应并用EtOAc进行后处理，用水和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并真空干燥。将该粗品在不进行进一步纯化的情况下用于下一步。Rf＝0.5(50％EtOAc/己烷)。LCMS：MH+251.2(二醇形式)，Rt＝0.49分钟。在室温下，向(+/-)-4-((1S，5S)-5-甲基-7-氧杂二环[4.1.0]庚-2-烯-3-基)-3-硝基吡啶粗品(1.0当量)在2∶1CH3CN/H2O(0.1M)中的溶液中加入乙酸(0.3当量)。将该反应混合物在室温下搅拌16小时。在用NaHCO3溶液终止反应后，将该反应混合物浓缩以除去大部分CH3CN并将残余物在EtOAc和水之间进行分配。将所合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱，以33.1％的收率得到白色固体形式的二醇的混合物((+/-)-(1R，2R，6S)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯-1，2-二醇和(+/-)-(1R，2S，6S)-6-甲基-4-(3-硝基吡啶-4-基)环己-3-烯-1，2-二醇)。Rf＝0.3(100％EtOAc；这些二醇在TLC上不可分)。LCMS：MH+251.2，Rt＝0.49分钟。
(+/-)-4-((3S，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯 基)-3-硝基吡啶和(+/-)-4-((3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5- 甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980000671
在室温下，向二醇混合物(1.0当量)在DMF(0.3M)中的溶液中加入TBDMSCl(7.0当量)和咪唑(9当量)。将该反应混合物在室温下搅拌一夜。在用饱和NaHCO3终止反应后，将反应混合物用EtOAc萃取。将所合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将该混合物用顺序自动化的硅胶柱色谱(用EtOAc和己烷梯度洗脱)和反相制备HPLC(55％-95％的乙腈水溶液，然后5％-95％的乙腈水溶液)进行纯化，从而得到(+/-)-4-((3S，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(27.2％)和(+/-)-4-((3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(50.2％)。LCMS：MH+479.2，Rt＝1.60和1.63分钟。
4-((1S，3S，4S，5R)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3- 胺和4-((1R，3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基) 吡 啶-3-胺的合成
Figure BDA0000058386980000681
向浓度为0.1M的(+/-)-4-((3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)在乙醇/EtOAc中的溶液中加入10％钯碳(0.1当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌14小时。然后，将混合物用硅藻土垫过滤，用EtOAc洗脱。在真空下除去挥发性物质并将粗品用自动化硅胶柱色谱(Rf＝0.2，40％EtOAc的庚烷溶液)进行纯化，从而得到纯的外消旋产物。LCMS：MH+451.3，Rt＝1.35分钟。将该外消旋化合物用手性色谱进行拆分(IC柱，1mL/min，5％IPA的庚烷溶液)得到4-((1S，3S，4S，5R)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺(6.01min)和4-((1R，3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺(8.34min)。
4-((1R，3R，4S，5R)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3- 胺和4-((1S，3S，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡 啶-3-胺的合成
Figure BDA0000058386980000682
向浓度为0.1M的(+/-)-4-((3S，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)的乙醇溶液中加入10％钯碳(0.1当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌14小时。然后，将混合物用硅藻土垫过滤，用乙醇洗脱。在真空下除去挥发性物质并将粗品用自动化的硅胶柱色谱进行纯化(Rf＝0.2，40％EtOAc的庚烷溶液)，从而得到纯的外消旋产物(50.4％)。LCMS：MH+451.3，Rt＝1.35分钟。用手性色谱对该外消旋化合物进行拆分(IC柱，1mL/min，5％IPA的庚烷溶液)得到4-((1R，3R，4S，5R)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺(6.98min)和4-((1S，3S，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺(8.67min)。
6-(甲氧基羰基)-3-氧代-5-(三氟甲基)环己-1-烯醇化钠的合成
Figure BDA0000058386980000691
向新制备的钠(1.0当量)的叔-BuOH(1M)溶液中滴加乙酰乙酸乙酯(1.0当量)并将该混合物在冰浴上再搅拌15分钟。滴加4，4，4-三氟巴豆酸乙酯(1.0当量)并将该混合物在室温下再搅拌30分钟。在回流2小时后，将混合物冷却并加入己烷。将沉淀滤出并且不进行进一步的纯化，从而得到6-(甲氧基羰基)-3-氧代-5-(三氟甲基)环己-1-烯醇化钠(46％)。LC/MS(m/z)：MH+＝253.1，Rt＝0.70min。
5-(三氟甲基)环己烷-1，3-二酮的合成
Figure BDA0000058386980000692
将6-(甲氧基羰基)-3-氧代-5-(三氟甲基)环己-1-烯醇化钠(1.0当量)溶解于1M NaOH(1.0当量)中并将该混合物回流1小时。在冷却至室温后，将该混合物用5M硫酸酸化。将该混合物用EtOAc萃取。在用水洗涤后，将有机层用硫酸镁干燥，减压除去溶剂得到5-(三氟甲基)环己烷-1，3-二酮，将其不进行进一步纯化地用于下一个步骤(98％)。LC/MS(m/z)：MH+＝181.1，Rt＝0.55min。
3-氧代-5-(三氟甲基)环己-1-烯基三氟甲磺酸酯的合成
Figure BDA0000058386980000701
向5-(三氟甲基)环己烷-1，3-二酮(1.0当量)在DCM(0.23M)中的混悬液中加入TEA(1.2当量)得到澄清的溶液。将该混合物冷却至0℃。然后滴加位于DCM中的Tf2O(1.05当量)。将该反应混合物在该温度下搅拌2小时。将反应混合物用DCM稀释并用水、NaHCO3水溶液、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩得到3-氧代-5-(三氟甲基)环己-1-烯基三氟甲磺酸酯，将其直接用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+＝313.0，Rt＝1.02分钟。
3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯酮 的合成
Figure BDA0000058386980000702
将全部试剂：3-氧代-5-(三氟甲基)环己-1-烯基三氟甲磺酸酯(1.0当量)、NaOAc(3.0当量)和联硼酸频那醇酯(2.0当量)加入到位于圆底烧瓶中的1，4-二恶烷(0.23M)中并通过用N2向该混合物鼓泡10分钟来对其进行脱气。加入PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(0.1当量)并在配有回流冷凝器的条件下将该反应在油浴上在N2下加热至80℃达2小时。将混合物冷却至室温，用粗的烧结玻璃漏斗过滤，将滤饼用约10mL 1，4-二恶烷洗涤得到3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯酮的1，4-二恶烷溶液，将其直接用于下一步。LC/MS(m/z)：MH+＝209.1(硼酸)，Rt＝0.60分钟。
3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯酮的合成
Figure BDA0000058386980000711
将硼酸酯3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯酮(1.0当量)溶解于位于圆底烧瓶中的1，4-二恶烷(0.14M)中并通过用N2向该溶液鼓泡30分钟来对其进行脱气。加入4-氯-3-硝基吡啶(1.3当量)和Na2CO3水溶液(2M，2.0当量)，用N2鼓泡10分钟，然后加入PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(0.1当量)。将该反应混合物在100℃下搅拌2小时。向该混合物中加入EtOAc和盐水。将所得混合物用硅藻土过滤，将滤饼用EtOAc洗涤。将有机层分离出来并用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将该粗品用硅胶色谱进行纯化(用EtOAc∶己烷＝1∶10至2∶1进行洗脱)，从而得到3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯酮(由二酮起，3步收率为73％)。LC/MS(m/z)：MH+＝287.1，Rt＝0.85分钟。
顺式-3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯醇的合成
Figure BDA0000058386980000712
将3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯酮(1.0当量)与氯化铈(III)七水合物(1.0当量)混合并加入无水乙醇(0.17)。将该混合物在环境温度下搅拌直至所有的固体都溶解。将该混合物在冰浴上冷却并向其中分批加入NaBH4(1.2当量)。将该反应在冰浴上搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(1∶1乙酸乙酯和己烷)得到顺式-3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯醇(66％)。LC/MS(m/z)：MH+＝289.2，Rt＝0.72分钟。
顺式-4-(3-叠氮基-5-(三氟甲基)环己-1-烯基)-3-硝基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980000721
在室温下，向顺式-3-(3-硝基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己-2-烯醇(1.0当量)在DCM(0.14M)中的溶液中加入TEA(2.5当量)，然后加入MsCl(1.8当量)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。除去溶剂。将残余物溶解于DMF(0.19M)中，然后向该混合物中加入叠氮化钠(1.2当量)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。再加入1.2当量叠氮化钠。将该混合物在室温下搅拌一夜。将反应混合物用乙酸乙酯和庚烷稀释并用饱和NaCl洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(1∶1乙酸乙酯和己烷)得到顺式-4-(3-叠氮基-5-(三氟甲基)环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(58％)。LC/MS(m/z)：MH+＝314.1，Rt＝0.96分钟。
(1R，3R，5S)-3-(3-氨基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己基氨基甲酸叔丁酯的合 成
Figure BDA0000058386980000722
将顺式-4-(3-叠氮基-5-(三氟甲基)环己-1-烯基)-3-硝基吡啶(1.0当量)在乙醇(0.13M)中的溶液用N2鼓泡20分钟。然后，向该反应混合物中加入Boc-酐(1.5当量)和Pd/C(0.2当量)。将该反应混合物在室温下在H2气氛下搅拌一夜。通过用硅藻土过滤除去固体并用EtOH洗涤。将残余物通过柱色谱纯化(5％的甲醇在1∶1乙酸乙酯和己烷中的溶液)得到外消旋的顺式-3-(3-氨基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己基氨基甲酸酯(57％)。LC/MS(m/z)：MH+＝360.2，Rt＝0.72分钟。通过用手性HPLC拆分(对于分析而言，Rt＝8.14min和10.59min；庚烷∶异丙醇＝90∶10(v∶v)，Chiralcel IC 100x 4.6mm，1mL/min。对于制备型分离而言，庚烷∶异丙醇＝90∶10(v∶v)，Chiralcel IC 250x 20mm，15mL/min)得到对映异构纯的(1R，3R，5S)-3-(3-氨基吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)环己基氨基甲酸叔丁酯和N-(4-((1S，3S，5R)-3-氨基-5-(三氟甲基)环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺。
(R)-4-苄基-3-((2R，3R)-3-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟基-2-甲基 丙酰基) 唑烷-2-酮的合成
Figure BDA0000058386980000732
(R)-4-苄基-3-((2R，3R)-3-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟基-2-甲基丙酰基)
Figure BDA0000058386980000733
唑烷-2-酮是以关于对映异构化合物所报道的方式(Proc.Nat.Acad.Sciences，101，33，2004，第12042-12047页)，用(R)-4-苄基-3-丙酰基
Figure BDA0000058386980000734
唑烷-2-酮和R-甘油醛丙酮化合物开始来进行制备的。
(R)-4-苄基-3-((2R，3R)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-((R)-2，2-二甲基 -1，3-二氧戊环-4-基)-2-甲基丙酰基)
Figure BDA0000058386980000735
唑烷-2-酮的合成
(R)-4-苄基-3-((2R，3R)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-甲基丙酰基)
Figure BDA0000058386980000737
唑烷-2-酮是以关于对映异构化合物所报道的方式(Proc.Nat.Acad.Sciences，101，33，2004，第12042-12047页)，用(R)-4-苄基-3-((2R，3R)-3-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟基-2-甲基丙酰基)
Figure BDA0000058386980000738
唑烷-2-酮开始来进行制备的。
(2S，3R)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4- 基)-2-甲基丙-1-醇的合成
在-40℃下，向(R)-4-苄基-3-((2R，3R)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-甲基丙酰基)
Figure BDA0000058386980000742
唑烷-2-酮(1.0当量)和乙醇(3.0当量)在THF(0.09M)中的溶液中加入LiBH4(1.0当量)。使该反应混合物缓慢升温至室温并在该温度下搅拌12小时。将该溶液重新冷却至-40℃并补加LiBH4(0.3当量)。在重新升温至室温并搅拌2小时后，将该溶液用乙醚稀释并加入1N NaOH。将所得混合物用乙酸乙酯萃取，将有机层分离出来，用NaCl(饱和的)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(10-30％EtOAc/正-庚烷)，以(75％)的收率得到(2S，3R)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-甲基丙-1-醇。LC/MS＝247.1(M+H-缩酮-H2O)，Rt＝0.64分钟。
((1R，2S)-3-叠氮基-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-甲基丙氧 基)(叔- 丁基)二甲基甲硅烷的合成
向(2S，3R)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-甲基丙-1-醇(1.0当量)、DIAD(2.0当量)和PPh3(2.0当量)在THF(0.18M)中的溶液中加入DPPA(1.0当量，1M的THF溶液)。将该反应混合物在室温下搅拌一夜。在真空下除去挥发性物质后，将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(2-3-5％EtOAc/正-庚烷)得到((1R，2S)-3-叠氮基-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-甲基丙氧基)(叔-丁基)二甲基甲硅烷(62％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.04-4.10(m，1H)，3.94(dd，J＝8.0，6.4，1H)，3.72(d，J＝7.2，1H)，3.53(t，J＝8.0，1H)，3.36(dd，J＝12，8.0，1H)，3.19(dd，J＝12.0，6.7，1H)，1.52-1.60(m，1H)，1.41(s，3H)，1.34(s，3H)，0.92(d，J＝7.2，3H)，0.90(s，9H)，0.12(s，3H)，0.09(s，3H)。
(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-甲基戊烷-1，2-二醇的 合成
Figure BDA0000058386980000751
向((1R，2S)-3-叠氮基-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-甲基丙氧基)(叔-丁基)二甲基甲硅烷(1.0当量)在MeOH(0.1M)中的溶液中加入PPTS(1.0当量)并将该混合物在室温下搅拌14小时、50℃下搅拌2小时和80℃下搅拌1小时。在真空下除去挥发性物质并将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(10-25％EtOAc/正-庚烷)，得到(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-甲基戊烷-1，2-二醇(40％)。
(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-羟基-4-甲基戊基4- 甲基苯磺酸酯的合成
Figure BDA0000058386980000752
在0℃下，向(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-1-羟基-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在吡啶(0.2M)中的溶液中加入pTsCl(1.3当量)。将该混合物在该温度下放置16小时。在真空下除去挥发性物质并将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(10-15-20％EtOAc/正-庚烷)得到(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-羟基-4-甲基戊基4-甲基苯磺酸酯。
(2R，3R，4S)-5-叠氮基-2，3-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-甲基戊基4-甲基 苯磺酸酯的合成
Figure BDA0000058386980000761
在0℃下，向(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-羟基-4-甲基戊基4-甲基苯磺酸酯(1.0当量)和2，6-卢剔啶(3.4当量)的溶液中加入TBDMSOTf(1.7当量)。当其升温至室温后，将该溶液搅拌7小时。将该溶液用EtOAc稀释，用10％CuSO4、H2O、Na2CO3(饱和的)、NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(2.5-5-10-20％EtOAc/正-庚烷)得到(2R，3R，4S)-5-叠氮基-2，3-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-甲基戊基4-甲基苯磺酸酯(75％)。
4-((3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-1-基)-3-硝基 吡啶的合成
Figure BDA0000058386980000762
将(2R，3R，4S)-5-叠氮基-2，3-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-甲基戊基4-甲基苯磺酸酯在EtOH(0.05M)中的溶液用氩气脱气。加入DIEA(1.5当量)，然后加入10％Pd/C(0.1当量)。将该反应混合物在氢气囊下搅拌3小时。将该溶液用氩气脱气和净化，然后加入4-氯-3-硝基吡啶(1.5当量)并补加DIEA(1.5当量)。将其在室温下搅拌15小时后，将该溶液过滤除去Pd/C并在真空下除去挥发性物质。将残余物用乙酸乙酯稀释并用Na2CO3(饱和的)、NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(10-15％EtOAc/正-庚烷)得到4-((3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-1-基)-3-硝基吡啶(40％)。LC/MS＝482.4(M+H)，Rt＝1.26分钟。
4-((3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3- 胺的合成
Figure BDA0000058386980000771
向浓度为0.05M的4-((3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-1-基)-3-硝基吡啶(1.0当量)的乙醇溶液中加入10％钯碳(0.1当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌14小时。然后将该混合物用硅藻土垫过滤，用乙醇洗脱。在真空下除去挥发性物质得到4-((3R，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-胺。LC/MS＝452.4(M+H)，Rt＝1.31分钟。
(R)-4-((1R，2R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代 唑烷-3-基)-1-羟基-2-甲基-3-氧代丙 基)-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000773
唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000774
-40℃下，向(R)-4-苄基-3-丙酰基
Figure BDA0000058386980000775
唑烷-2-酮(1.0当量)在DCM(0.13M)中的溶液中加入TiCl4(1.0当量)。将该混合物在-40℃下搅拌10分钟(黄色混悬液)，然后加入DIPEA(2.5当量)(深红色溶液)并将其在0℃下搅拌20分钟。然后，滴加位于DCM(0.5M)中的(R)-4-甲酰基-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000776
唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.0当量)并将所得混合物搅拌1.5小时。通过加入氯化铵水溶液终止反应并将该混合物用乙酸乙酯萃取。将有机相分离出来，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶4)进行洗脱，以58％的收率得到作为主产物(5∶2)的(R)-4-((1R，2R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代
Figure BDA0000058386980000777
唑烷-3-基)-1-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000781
唑烷-3-甲酸叔丁酯。LC/MS＝363.3(M+H-Boc)，Rt＝1.09分钟。
(R)-4-((1R，2R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代 唑烷-3-基)-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷 氧基)-2-甲基-3-氧代丙基)-2，2-二甲基 唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000784
-40℃下，向(R)-4-((1R，2R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代
Figure BDA0000058386980000785
唑烷-3-基)-1-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000786
唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.0当量)和卢剔啶(1.8当量)在DCM(0.1M)中的溶液中加入TBSOTf(1.4当量)。将该反应混合物在-40℃下搅拌2小时。将该溶液用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO3、饱和NaCl洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶4)进行洗脱，以83％的收率得到作为主产物(5∶2)的(R)-4-((1R，2R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代
Figure BDA0000058386980000787
唑烷-3-基)-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基-3-氧代丙基)-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000788
唑烷-3-甲酸叔丁酯。LC/MS＝577.3(M+H)，Rt＝1.33min(Frac 65％-95％方法)。
(R)-4-((1R，2S)-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-羟基-2-甲基丙基)-2，2-二甲 基
Figure BDA0000058386980000789
唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA00000583869800007810
-30℃下，向(R)-4-((1R，2R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代
Figure BDA00000583869800007811
唑烷-3-基)-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基-3-氧代丙基)-2，2-二甲基
Figure BDA00000583869800007812
唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.0当量)和乙醇(3.0当量)在THF(0.09M)中的溶液中加入LiBH4(3.0当量)。使该反应混合物升温至0℃并在该温度下搅拌3小时。然后，将该溶液用乙醚稀释并加入1N NaOH。将所得混合物用乙酸乙酯萃取，将有机层分离出来，用饱和NaCl洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶4)进行洗脱，以71％的收率得当作为主产物(5∶2的比例)的(R)-4-((1R，2S)-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-羟基-2-甲基丙基)-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000791
唑烷-3-甲酸叔丁酯。LC/MS＝304.3(M+H-Boc)，Rt＝0.95min(Frac 65％-95％方法)。
(R)-4-((1R，2S)-3-叠氮基-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丙基)-2，2-二 甲基
Figure BDA0000058386980000792
唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000793
向(R)-4-((1R，2S)-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-羟基-2-甲基丙基)-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000794
唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.0当量)、DIAD(2.0当量)和PPh3(2.0当量)在THF(0.18M)中的溶液中加入DPPA(2.0当量，1M THF溶液)。将该反应混合物在室温下搅拌一夜。在真空下除去挥发性物质后，将残余物用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶6)进行洗脱，以86％的收率得到作为主产物(5∶2)的(R)-4-((1R，2S)-3-叠氮基-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丙基)-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000795
唑烷-3-甲酸叔丁酯。LC/MS＝329.3(M+H-Boc)，Rt＝1.40min(Frac 65％-95％方法)。
(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-1-羟基-4-甲基戊-2-基 氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000796
向(R)-4-((1R，2S)-3-叠氮基-1-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丙基)-2，2-二甲基
Figure BDA0000058386980000797
唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.0当量)在EtOH(0.1M)中的溶液中加入PPTS(1.3当量)并将该混合物回流2天。在真空下除去挥发性物质，将残余物溶解于DCM(0.1M)和DIEA(1.5当量)中并向该反应混合物中加入Boc2O(1.0当量)。将该溶液在室温下搅拌3小时。减压除去溶剂并将残余物用乙酸乙酯稀释，用水、NaHSO4水溶液、NaHCO3水溶液、饱和NaCl洗涤，将有机相用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶3)进行洗脱，以70％的收率得到作为主要异构体(5∶2)的(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-1-羟基-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS＝289.3(M+H-Boc)，Rt＝0.76min(Frac 65％-95％方法)。
(2R，3R，4S)-5-叠氮基-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧 基)-4-甲基戊基甲磺酸酯的合成
Figure BDA0000058386980000801
在0℃下，向(2R，3R，4S)-5-叠氮基-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-1-羟基-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在吡啶(0.2M)中的溶液中加入MsCl(1.3当量)，然后加入DMAP(催化量)。将该混合物在该温度下搅拌1小时。将溶液用醚和乙酸乙酯(4∶1)稀释，用NaHSO4水溶液、饱和NaHCO3、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶3)进行洗脱，以90％的收率得到作为主要异构体(5∶2)的(2R，3R，4S)-5-叠氮基-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-甲基戊基甲磺酸酯。LC/MS＝367.3(M+H-Boc)，Rt＝0.81min(Frac 65％-95％方法)。
(3R，4R，5S)-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-3-基氨基甲酸叔丁 酯的合成
将(2R，3R，4S)-5-叠氮基-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-甲基戊基甲磺酸酯在MeOH(0.09M)中的溶液用氮气脱气20分钟。加入DIEA(2.5当量)，然后加入10％Pd/C(0.1当量)。将该反应混合物在氢气囊下搅拌2小时。将溶液过滤并将滤液真空浓缩，以＞99％的收率得到作为主要异构体(5∶2)的(3R，4R，5S)-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS＝345.2(M+H-Boc)，Rt＝0.95和0.99分钟。
(3R，4R，5S)-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基-1-(3-硝基吡啶-4-基)哌啶 -3-基氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000811
向(3R，4R，5S)-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在i-PrOH(0.09M)中的溶液中加入DIEA(2.5当量)和4-氯-3-硝基吡啶(1.5当量)。将该反应混合物在60℃下搅拌2小时。在真空下除去挥发性物质，将残余物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaCl洗涤。将有机相用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶2)进行洗脱，以76％的收率得到(3R，4R，5S)-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基-1-(3-硝基吡啶-4-基)哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS＝467.3(M+H)，Rt＝1.09分钟。
(3R，4R，5S)-1-(3-氨基吡啶-4-基)-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶 -3-基氨基甲酸叔丁酯的合成
将(3R，4R，5S)-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基-1-(3-硝基吡啶-4-基)哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在MeOH(0.05M)中的溶液用氮气脱气20分钟。向该混合物中加入10％Pd/C(0.2当量)并将该溶液在氢气囊下搅拌3小时。将反应液过滤并将滤液减压浓缩，以＞94％的收率得到所需产物(3R，4R，5S)-1-(3-氨基吡啶-4-基)-4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS＝437.4(M+H)，Rt＝1.08分钟。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝6.0Hz，1H)，6.76(d，J＝6.0Hz，1H)，4.44(br s，1H)，3.74(br s，2H)，3.59-3.55(m，1H)，3.25-3.13(m，2H)，2.47-2.35(m，2H)，1.89(br s，2H)，1.44(s，9H)，1.04(d，J＝6.0，3H)，0.92(s，9H)，0.13(d，J＝9.0，6H)。
(2R)-1-(苄氧基)-3-羟基-4-甲基己-5-烯-2-基氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000821
在-78℃下，在Ar气氛下，向N-Boc，O-苄基-D-丝氨酸醛(serine aldehyde)(1.0当量)在DCM(0.1M)中的溶液中加入(Z)-2-(丁-2-烯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(1.1当量)并将澄清的溶液搅拌16小时使其升温至室温。向该溶液加入EtOAc并用H2O(3x)和NaCl(饱和的)进行洗涤，用MgSO4干燥并用硅胶色谱进行纯化(15％EtOAc/己烷)，从而得到(2R)-1-(苄氧基)-3-羟基-4-甲基己-5-烯-2-基氨基甲酸叔丁酯(54％)，根据1H NMR判断，其是3∶1的异构体混合物形式。LCMS(m/z)：236.3(MH+-Boc)；LC Rt＝4.37和4.51分钟。
(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(丁-3-烯-2-基)
Figure BDA0000058386980000822
唑烷-2-酮的合成
Figure BDA0000058386980000823
向(2R)-1-(苄氧基)-3-羟基-4-甲基己-5-烯-2-基氨基甲酸叔丁酯在THF(0.1M)中的溶液中加入60％位于矿物油中的氢化钠(1.5当量)。在搅拌3天后，通过加入NH4Cl(饱和的)终止反应，将溶液用EtOAc稀释并用NH4Cl(饱和的)和NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥并用硅胶色谱进行纯化(50％EtOAc/己烷)，以3∶1混合物的形式得到(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(丁-3-烯-2-基)
Figure BDA0000058386980000831
唑烷-2-酮(89％)。LCMS(m/z)：262.2(MH+)；LC Rt＝3.47分钟。
(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(1-羟基丙-2-基)
Figure BDA0000058386980000832
唑烷-2-酮的合成
向(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(丁-3-烯-2-基)
Figure BDA0000058386980000834
唑烷-2-酮(1.0当量)在2∶1的MeOH/H2O(0.04M)中的溶液中加入4％的四氧化锇水溶液(0.07当量)和高碘酸钠(3.0当量)。在搅拌3小时后，将白色沉淀滤出并用EtOAc洗涤。将合并的滤液真空浓缩并将残余物溶解于EtOAc中，用NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将该粗品醛溶解于EtOH(0.08M)中并在冷却至0℃后，加入硼氢化钠(2.0当量)。在搅拌15小时并回到室温后，通过加入H2O终止反应。搅拌20分钟后，真空除去EtOH，加入EtOAc并将该溶液用1N HCl、NaHCO3(饱和的)和NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，在用硅胶色谱进行纯化后以3∶1的异构体混合物形式得到(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(1-羟基丙-2-基)唑烷-2-酮(60％)。LCMS(m/z)：266.1(MH+)；LC Rt＝2.28分钟。
(4R)-4-(羟基甲基)-5-(1-羟基丙-2-基)
Figure BDA0000058386980000836
唑烷-2-酮的合成
Figure BDA0000058386980000837
向浓度为0.1M的(4R)-4-(苄氧基甲基)-5-(1-羟基丙-2-基)
Figure BDA0000058386980000838
唑烷-2-酮(1.0当量)在甲醇中的溶液中加入10％钯碳(0.1当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌15小时。然后将该混合物用硅藻土垫过滤，用甲醇洗脱。在真空下除去挥发性物质，得到(4R)-4-(羟基甲基)-5-(1-羟基丙-2-基)
Figure BDA0000058386980000841
唑烷-2-酮(99％)。LCMS(m/z)：176.1(MH+)。
2-((4R)-2-氧代-4-(甲苯磺酰氧基甲基)
Figure BDA0000058386980000842
唑烷-5-基)-丙基4-甲基苯磺酸酯的 合成
Figure BDA0000058386980000843
在0℃下，向(4R)-4-(羟基甲基)-5-(1-羟基丙-2-基)
Figure BDA0000058386980000844
唑烷-2-酮(1.0当量)在吡啶(0.15M)中的溶液中加入对-甲苯磺酰氯(2.1当量)。搅拌14小时，同时使该溶液升温至室温，然后加入EtOAc并将该溶液用H2O(3x)、CuSO4(饱和的)(2x)、H2O、Na2CO3(饱和的)和NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩并用硅胶色谱进行纯化(75％EtOAc/己烷洗脱)，得到2-((4R)-2-氧代-4-(甲苯磺酰氧基甲基)
Figure BDA0000058386980000845
唑烷-5-基)丙基4-甲基苯磺酸酯(68％)。LCMS(m/z)：484.1(MH+)；LC Rt＝4.06分钟。
(3aR，7R，7aS)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000846
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮和 (3aR，7S，7aR)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000847
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮的 合成
Figure BDA0000058386980000848
将2-((4R)-2-氧代-4-(甲苯磺酰氧基甲基)
Figure BDA0000058386980000849
唑烷-5-基)丙基4-甲基苯磺酸酯(1.0当量)、二异丙基乙基胺(3.0当量)和对-甲氧基苄基胺(1.5当量)在NMP(0.05M)中的溶液在100℃下加热14小时。直接用RP HPLC对该溶液进行纯化。通过加入到EtOAc和Na2CO3(s)中来将产物级分脱盐，进一步用NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，浓缩，得到两种单独的异构体(3aR，7R，7aS)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000851
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮和(3aR，7S，7aR)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000852
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮(27％和8％)。LCMS(m/z)：277.2(MH+)，0.40分钟和0.42分钟。
(3aR，7R，7aS)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000853
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮的合成
Figure BDA0000058386980000854
向浓度为0.1M的(3aR，7R，7aS)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000855
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮(1.0当量)的甲醇溶液中加入20％氢氧化钯/碳(0.3当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌2小时。然后将该混合物用硅藻土垫过滤，用甲醇洗脱。在真空下除去挥发性物质，得到(3aR，7R，7aS)-7-甲基六氢唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮(99％)。LCMS(m/z)：157.1(MH+)，0.16分钟。
(3aR，7R，7aS)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000857
唑并[4，5-c]吡啶 -3(2H)-甲酸叔丁酯的合成
将浓度为0.1M的4-氯-3-硝基吡啶(1.3当量)和(3aR，7R，7aS)-7-甲基六氢唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮(1.5当量)在CH2Cl2中的溶液在室温下搅拌48小时，然后加入哌啶(0.4当量)以消耗过量的4-氯-3-硝基吡啶。将其再搅拌2小时后，加入二碳酸二叔丁酯(2.0当量)和二甲基氨基吡啶(0.1当量)。搅拌4小时后，将该溶液在EtOAc和NaHCO3(饱和的)之间进行分配，进一步用NaHCO3(饱和的)和NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并用硅胶色谱进行纯化，得到(3aR，7R，7aS)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000861
唑并[4，5-c]吡啶-3(2H)甲酸叔丁酯(62％)。LCMS(m/z)：379.0(MH+)，0.58分钟。
(3aR，7R，7aS)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000862
唑并[4，5-c]吡啶 -3(2H)-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000863
向浓度为0.1M的(3aR，7R，7aS)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代六氢唑并[4，5-c]吡啶-3(2H)-甲酸叔丁酯(1.0当量)在甲醇中的溶液中加入10％钯碳(0.1当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌14小时。然后将该混合物用硅藻土垫过滤，用甲醇洗脱。在真空下除去挥发性物质，得到(3aR，7R，7aS)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000865
唑并[4，5-c]吡啶-3(2H)-甲酸叔丁酯。LCMS(m/z)：349.1(MH+)；LC Rt＝2.06分钟。
(3aR，7S，7aR)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000866
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮的合成
Figure BDA0000058386980000867
向浓度为0.1M的(3aR，7S，7aR)-5-(4-甲氧基苄基)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000868
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮(1.0当量)的甲醇溶液中加入20％氢氧化钯/碳(0.3当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌2小时。然后将该混合物用硅藻土垫过滤，用甲醇洗脱。在真空下除去挥发性物质，得到(3aR，7S，7aR)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000871
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮(99％)。LCMS(m/z)：157.1(MH+)，位于0.17分钟。
(3aR，7S，7aR)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000872
唑并[4，5-c]吡啶 -3(2H)-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000873
将浓度为0.1M的4-氯-3-硝基吡啶(1.3当量)和(3aR，7S，7aR)-7-甲基六氢
Figure BDA0000058386980000874
唑并[4，5-c]吡啶-2(3H)-酮(1.5当量)在CH2Cl2中的溶液在室温下搅拌48小时，然后加入哌啶(0.4当量)加入以消耗过量的4-氯-3-硝基吡啶。将其再搅拌2小时后，加入二碳酸二叔丁酯(2.0当量)和二甲基氨基吡啶(0.1当量)。搅拌4小时后，将该溶液在EtOAc和NaHCO3(饱和的)之间进行分配，进一步用NaHCO3(饱和的)和NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并用硅胶色谱进行纯化(75％EtOAc/己烷洗脱剂)，得到(3aR，7S，7aR)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000875
唑并[4，5-c]吡啶-3(2H)-甲酸叔丁酯(35％)。LCMS(m/z)：379.0(MH+)。LC Rt＝2.42分钟。
(3aR，7R，7aS)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000876
唑并[4，5-c]吡啶 -3(2H)-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980000877
向浓度为0.1M的(3aR，7S，7aR)-7-甲基-5-(3-硝基吡啶-4-基)-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000881
唑并[4，5-c]吡啶-3(2H)-甲酸叔丁酯(1.0当量)的甲醇溶液中加入10％钯碳(0.1当量)。将所得的非均质溶液在氢气气氛下搅拌14小时。然后将该混合物用硅藻土垫过滤，用甲醇洗脱。在真空下除去挥发性物质，得到(3aR，7S，7aR)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢
Figure BDA0000058386980000882
唑并[4，5-c]吡啶-3(2H)-甲酸叔丁酯。LCMS(m/z)：349.1(MH+)；LC Rt＝2.18分钟。
方法1
3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980000883
将3-氨基-6-溴吡啶甲酸甲酯(1.0当量)、2，6-二氟苯基-硼酸(3.0当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.1当量)在3∶1的DME/2M Na2CO3(0.5M)中的溶液在120℃下进行间隔为15分钟的微波辐射。将反应液过滤并用EtOAc洗涤。将有机物用H2O(25mL)分配，进一步用NaCl(饱和的)(25mL)洗涤，用MgSO4干燥并在真空下除去挥发性物质。将残余物用EtOAc稀释并通过一个硅胶塞，然后在真空下除去挥发性物质，得到3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸甲酯(47％)。LCMS(m/z)：265.1(MH+)；LC Rt＝2.70min
6-(2，3-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000884
在一个微波小瓶中，向6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)在DME和2MNa2CO3(3∶1，0.25M)中的溶液中加入2，3-二氟苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)。将该小瓶在微波中在120℃下加热30分钟。将该混合物用乙酸乙酯稀释并加入1N NaOH。将有机相分离出来并用1NNaOH萃取三次、用6N NaOH萃取一次。将所合并的水相过滤，通过加入浓HCl将其酸化至pH 1并用乙酸乙酯萃取。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，以78％的收率得到6-(2，3-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝254.1(M+H)，Rt＝0.75分钟。
方法2
3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000891
向3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在THF(0.5M)中的溶液中加入1M LiOH (4.0当量)。将其在60℃下搅拌4小时后，加入1NHCl(4.0当量)并在真空下除去THF。将所得固体滤出并用冷H2O(3x20mL)洗涤，从而得到3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸(90％)。LCMS(m/z)：251.1(MH+)；LC Rt＝2.1分钟。
3-氨基-6-(2-氟-5-丙氧基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000892
按照方法1，使用3-氨基-6-溴吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟-5-丙氧基苯基硼酸(1.5当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以75％的收率得到3-氨基-6-(2-氟-5-丙氧基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝291.0(M+H)，Rt＝0.81分钟。
3-氨基-5-氟-6-(2-氟-5-丙氧基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000901
按照方法1，使用3-氨基-6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟-5-丙氧基苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以28％的收率得到3-氨基-5-氟-6-(2-氟-5-丙氧基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝309.1(M+H)，Rt＝1.00分钟。
3-氨基-5-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980000902
按照方法1，使用3-氨基-6-溴-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)、2-氟-苯基硼酸(1.5当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以＞99％的收率得到3-氨基-5-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝265.0(M+H)，Rt＝0.77分钟。
3-氨基-5-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000903
按照方法2，使用3-氨基-5-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸酯(1.0当量)和LiOH(5.0当量)以90％的收率得到3-氨基-5-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝251.1(M+H)，Rt＝0.80分钟。
3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980000911
按照方法1，使用3-氨基-6-溴-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)、2，6-二氟苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以94％的收率得到3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝283.0(M+H)，Rt＝0.76分钟。
3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000912
按照方法2，使用3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)和LiOH(1.0当量)以79％的收率得到3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝269.0(M+H)，Rt＝0.79分钟。
5-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000913
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以43％的收率得到5-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝236.1(M+H)，Rt＝0.72分钟。
6-(3，4-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000921
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、3，4-二氟苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以70％的收率得到6-(3，4-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝254.1(M+H)，Rt＝0.81分钟。
6-(2，5-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2，5-二氟苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以80％的收率得到6-(2，5-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝254.1(M+H)，Rt＝0.74分钟。
6-(2，4-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000923
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2，4-二氟苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以79％的收率得到6-(2，4-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝254.1(M+H)，Rt＝0.75分钟。
5-氟-6-(2-氟-5-丙氧基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000931
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟-5-丙氧基苯基硼酸(1.5当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)得到5-氟-6-(2-氟-5-丙氧基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝294.2(M+H)，Rt＝0.95分钟。
6-(2-氟苯基)吡啶甲酸的合成
按照方法1，使用6-溴吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟苯基硼酸(1.5当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以93％的收率得到6-(2-氟苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝218.0(M+H)，Rt＝0.66分钟。
6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000933
按照方法1，使用6-溴吡啶甲酸(1.0当量)、2，6-二氟苯基硼酸(1.5当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以38％的收率得到6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝236.0(M+H)，Rt＝0.87分钟。
6-(2-氟-5-甲氧基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000941
按照方法1，使用6-溴吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟-5-甲氧基苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以95％的收率得到6-(2-氟-5-甲氧基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝248.2(M+H)，Rt＝0.78分钟。
6-(2-氟-5-丙氧基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000942
按照方法1，使用6-溴吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟-5-丙氧基苯基硼酸(1.5当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以20％的收率得到6-(2-氟-5-丙氧基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝276.0(M+H)，Rt＝0.87分钟。
6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000943
按照方法1，使用6-溴吡啶甲酸(1.0当量)、2，6-二氟-4-甲氧基苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以42％的收率得到6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝266.1(M+H)，Rt＝0.75分钟。
3-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000951
按照方法1，使用6-溴-3-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟苯基硼酸(1.5当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)以81％的收率得到3-氟-6-(2-氟苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝236.1(M+H)，Rt＝0.72分钟。
3-氟-6-(2-氟-5-甲氧基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000952
按照方法1，使用6-溴-3-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟-5-甲氧基苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以89％的收率得到3-氟-6-(2-氟-5-甲氧基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝266.1(M+H)，Rt＝0.79分钟。
5-氟-6-(2-氟-5-甲氧基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000953
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2-氟-5-甲氧基苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以86％的收率得到5-氟-6-(2-氟-5-甲氧基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝266.1(M+H)，Rt＝0.79分钟。
6-(4-(苄氧基)-2-氟苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000961
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、4-(苄氧基)-2-氟苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以28％的收率得到6-(4-(苄氧基)-2-氟苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝342.1(M+H)，Rt＝1.05分钟。
6-(4-(苄氧基)-2-氟苯基)-3-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000962
按照方法1，使用6-溴-3-氟吡啶甲酸(1.0当量)、4-(苄氧基)-2-氟苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以41％的收率得到6-(4-(苄氧基)-2-氟苯基)-3-氟吡啶甲酸。LC/MS＝342.1(M+H)，Rt＝1.06分钟。
6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)-3-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000963
按照方法1，使用6-溴-3-氟吡啶甲酸(1.0当量)、2，6-二氟-4-甲氧基苯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以9％的收率得到6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)-3-氟吡啶甲酸。LC/MS＝284.0(M+H)，Rt＝0.74分钟。
6-环己烯基-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000971
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、环己烯基硼酸(1.3当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.15当量)以61％的收率得到6-环己烯基-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝222.0(M+H)，Rt＝0.52分钟。
方法3
6-环己基-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000972
向进行了脱气的6-环己烯基-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)在MeOH(0.07M)中的溶液中加入10％Pd/C(0.1当量)并将该反应在氢气囊下搅拌一夜。然后，将该溶液过滤，用MeOH洗涤并将滤液浓缩，以65％的收率得到6-环己基-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝224.2(M+H)，Rt＝0.95分钟。
5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980000973
按照方法1，使用6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)、4，4，5，5-四甲基-2-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(2.0当量)和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.2当量)得到5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶甲酸。LC/MS＝280.2(M+H)，Rt＝0.66分钟。
5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980000981
向5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶甲酸(1.0当量)在DCM(0.3M)中的溶液中加入EDC-HCl(1.0当量)、DMAP(1.0当量)和MeOH(10当量)。使该反应混合物在室温下搅拌5天，然后用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用25-50％乙酸乙酯的己烷溶液进行洗脱，以35％的收率得到所需产物5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝294.2(M+H)，Rt＝0.79分钟。
5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-8-基)吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980000982
向进行了脱气的5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-7-烯-8-基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在MeOH(0.07M)中的溶液中加入10％Pd/C(0.1当量)并将该反应在氢气囊下搅拌一夜。然后，将该溶液过滤，用MeOH洗涤并将滤液浓缩，以91％的收率得到5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-8-基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝296.2(M+H)，Rt＝0.83分钟。
5-氟-6-(4-氧代环己基)吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980000991
向5-氟-6-(1，4-二氧杂螺环[4.5]癸-8-基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在丙酮和水(1∶1，0.04M)中的溶液中加入草酸脱水物(2.0当量)并将该反应混合物搅拌3天。然后，通过加入固体NaHCO3将该溶液中和，将该混合物加入到乙酸乙酯和盐水中，将有机相用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。以98％的收率得到5-氟-6-(4-氧代环己基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝252.1(M+H)，Rt＝0.68分钟。
5-氟-6-(4-羟基环己基)吡啶甲酸甲酯的合成
向0℃的5-氟-6-(4-氧代环己基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在MeOH(0.08M)中的溶液中加入NaBH4。使该溶液升温至室温过夜，然后在乙酸乙酯和盐水之间进行分配，将有机相用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，从而以两种异构体的混合物(5∶1)的形式得到5-氟-6-(4-羟基环己基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝254.2(M+H)，Rt＝0.63分钟。
6-(4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己基)-5-氟吡啶甲酸甲酯
Figure BDA0000058386980001001
向5-氟-6-(4-羟基环己基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在DMF(0.15 M)中的溶液中加入咪唑(4.0当量)和TBDMSCl(2.5当量)。将反应混合物在室温下搅拌2天，然后加入到乙酸乙酯中，用水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，以97％的收率以异构体混合物(3∶1)的形式得到6-(4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己基)-5-氟吡啶甲酸甲酯。LC/Ms＝368.3(M+H)，Rt＝1.4和1.42分钟。
6-(4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己基)-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001002
向6-(4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己基)-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在THF/MeoH(2∶1，0.09 M)中的溶液中加入LiOH(1.5当量)。将该反应混合物在室温下搅拌一夜，然后加入1N HCl和乙酸乙酯，将有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，以82％的收率以异构体混合物(3∶1)的形式得到6-(4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS=354.2(M+H)，Rt＝1.38和1.41分钟。
6-溴-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001011
向位于H2O(30mL)中的2-溴-3-氟-6-甲基吡啶(1.0当量)中加入高锰酸钾(1.0当量)。将该溶液在100℃下加热5小时，然后补加高锰酸钾(1.0当量)。将其再加热48小时后，将混合物用硅藻土过滤(4cm x 2英寸)并用H2O(150mL)洗涤。将所合并的含水物用1N HCl酸化至pH＝4，用乙酸乙酯萃取(200mL)，用NaCl(饱和的)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，以白色固体形式得到6-溴-5-氟吡啶甲酸(17％)。LCMS(m/z)：221.9(MH+)；LCRt＝2.05分钟。
方法4
2-(2，6-二氟苯基)-3-氟-6-甲基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980001012
向2-溴-3-氟-6-甲基吡啶(1.0当量)在THF和水(10∶1，0.2M)中的溶液中加入2，6-二氟苯基硼酸(2.0当量)和氟化钾(3.3当量)。将该反应脱气10分钟，然后依次加入Pd2(dba)3(0.05当量)和三-叔丁基膦(0.1当量)。将该反应在60℃搅拌1小时，此时的LC/MS表明所有的起始材料都被消耗。使该反应冷却至室温，在乙酸乙酯和水之间进行分配，将有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗品用EtOH稀释至0.1M，加入0.5当量NaBH4以还原dba。将该反应在室温下搅拌一小时，然后用水终止反应，真空浓缩以除去乙醇。将产物萃取到醚中，用盐水洗涤，将有机物用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗品负载到硅胶上并通过柱色谱进行纯化(ISCO)，用己烷和乙酸乙酯(0％-10％乙酸乙酯)进行洗脱。将纯的级分合并，浓缩，以86％的收率得到淡黄色油状物形式的2-(2，6-二氟苯基)-3-氟-6-甲基吡啶。LC/MS＝224.0(M+H)，Rt＝0.84分钟。
方法5
6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001021
向2-(2，6-二氟苯基)-3-氟-6-甲基吡啶(1.0当量)在水(0.05M)中的溶液中加入KMnO4(2.0当量)并将该反应加热至回流过夜。再加入2.0当量KMnO4并在回流下再搅拌8小时。将该溶液冷却至室温，用硅藻土过滤并用水洗涤。将滤液用6N HCl酸化至pH＝3，将白色沉淀过滤。将滤液进一步酸化至pH＝1并再次过滤。将滤液用乙酸乙酯萃取直至在水层中不再有产物。将有机相用盐水洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯，用1N NaOH洗涤，将水层酸化至pH＝1并将白色结晶滤出。将产物合并，以32％的收率得到白色固体形式的6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝254.0(M+H)，Rt＝0.71分钟。
6-(2，6-二氟苯基)-3-氟-2-甲基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980001022
向6-溴-3-氟-2-甲基吡啶(1.0当量)在乙醇和甲苯(1∶1，0.2M)中的溶液中加入2，6-二氟苯基硼酸、DIEA(5当量)和Pd(PPh3)4(0.2当量)。将该反应在微波中在120℃下加热30分钟。将该溶液过滤并用乙酸乙酯洗涤。在真空下除去挥发性物质并将该粗品通过硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(2.5-20％乙酸乙酯)洗脱。对纯净级分进行浓缩后，以88％的收率分离出6-(2，6-二氟苯基)-3-氟-2-甲基吡啶。LC/MS＝224.1(M+H)，Rt＝0.87分钟。
6-(2，6-二氟苯基)-3-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001031
按照方法5，使用6-(2，6-二氟苯基)-3-氟-2-甲基吡啶(1.0当量)和高锰酸钾(6.0当量)以30％的收率得到6-(2，6-二氟苯基)-3-氟吡啶甲酸。LC/MS＝254.1(M+H)，Rt＝0.70分钟。
2-(2，6-二氟-3-甲氧基苯基)-3-氟-6-甲基吡啶的合成
Figure BDA0000058386980001032
按照方法4，使用2-溴-3-氟-6-甲基吡啶(1.0当量)和2，6-二氟-3-甲氧基苯基硼酸(2.0当量)以60％的收率得到2-(2，6-二氟-3-甲氧基苯基)-3-氟-6-甲基吡啶。LC/MS＝254.1(M+H)，Rt＝0.85分钟。
6-(2，6-二氟-3-甲氧基苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
按照方法5，使用2-(2，6-二氟-3-甲氧基苯基)-3-氟-6-甲基吡啶(1.0当量)和高锰酸钾(4.0当量)以27％的收率得到6-(2，6-二氟-3-甲氧基苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝284.1(M+H)，Rt＝0.75分钟。
3-氟-6-甲基-2-(2，3，5-三氟苯基)吡啶的合成
Figure BDA0000058386980001041
向2-溴-3-氟-6-甲基吡啶(1.0当量)在二恶烷(0.2M)中的溶液中加入2，3，5-三氟苯基硼酸和Pd(dppf)Cl2-DCM(0.1当量)。加入碳酸钠水溶液(2M的溶液，2.0当量)并将该反应在微波中在120℃下加热15分钟。将该溶液在乙酸乙酯和饱和NaHCO3之间进行分配，将有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(1∶3)进行洗脱，以87％的收率得到3-氟-6-甲基-2-(2，3，5-三氟苯基)吡啶。LC/MS＝242.1(M+H)，Rt＝0.98分钟。
5-氟-6-(2，3，5-三氟苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001042
向3-氟-6-甲基-2-(2，3，5-三氟苯基)吡啶(1.0当量)在水和叔-BuOH(2∶1，0.06M)中的溶液中加入高锰酸钾(10当量)并将该溶液在90℃下加热5小时。在冷却至室温后，将该溶液过滤并将滤液减压浓缩，以89％的收率得到5-氟-6-(2，3，5-三氟苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝272.0(M+H)，Rt＝0.80分钟。
6-溴-5-氟吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980001051
向6-溴-5-氟吡啶甲酸(1.0当量)在甲醇(0.2M)中的溶液中加入H2SO4(4.2当量)并将该反应在室温下搅拌两小时。在LC/MS监测表明反应结束后，将反应液用乙酸乙酯稀释并缓慢用饱和NaHCO3水溶液处理。将反应液倾倒到一个分液漏斗中并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，以白色固体形式得到6-溴-5-氟吡啶甲酸甲酯(＞99％)。LC/MS＝233.9/235.9(M+H)，Rt＝0.69分钟。
方法6
6-(3-(苄氧基)-2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980001052
向6-溴-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在THF和水(10∶1，0.1M)中的溶液中加入3-(苄氧基)-2，6-二氟苯基硼酸(2.5当量)和氟化钾(3.3当量)。将该反应用氮气脱气，然后加入Pd2(dba)3(0.25当量)和三-叔丁基膦(0.5当量)并将该反应加热至80℃达1小时。LC/MS分析表明起始材料完全转化成产物。将该反应冷却至室温，然后真空浓缩并结合到硅胶上。将该粗品用ISCO快速柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(0％至30％乙酸乙酯)进行洗脱，以96％的收率得到淡黄色油状物形式的所需产物6-(3-(苄氧基)-2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝374.0(M+H)，Rt＝1.07分钟。
6-(3-(苄氧基)-2，6-二氟苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
按照方法6，使用6-溴吡啶甲酸甲酯(1.0当量)和3-(苄氧基)-2，6-二氟苯基硼酸(2.5当量)以95％的收率得到淡黄色固体形式的6-(3-(苄氧基)-2，6-二氟苯基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝356.2(M+H)，Rt＝1.03分钟。
6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980001062
按照方法6，使用6-溴吡啶甲酸甲酯(1.0当量)和2，6-二氟-4-甲氧基苯基硼酸(2.5当量)以85％的收率得到白色固体形式的6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝298.0(M+H)，Rt＝0.89分钟。
6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
向6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在THF/MeOH(2∶1，0.09M)中的溶液中加入LiOH(1.5当量)并将该反应在室温下搅拌1小时。将该溶液用1N HCl终止反应，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以84％的形式得到6-(2，6-二氟-4-甲氧基苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝284.1(M+H)，Rt＝0.76分钟。
方法7
6-(2，6-二氟-3-羟基苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯的合成
向6-(3-(苄氧基)-2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)的甲醇(0.1M)溶液中加入位于乙酸乙酯中的10％Pd/C (0.1当量)。将该反应在氢气气氛下搅拌2小时。反应结束后，将溶液用硅藻土垫过滤，用甲醇对硅藻土垫进行洗涤，将滤液真空浓缩，以86％的收率得到灰色油状物形式的6-(2，6-二氟-3-羟基苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝284.0(M+H)，Rt＝0.90分钟。
6-(2，6-二氟-3-羟基苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
按照方法7，使用6-(3-(苄氧基)-2，6-二氟苯基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)以96％的收率得到淡褐色固体形式的6-(2，6-二氟-3-羟基苯基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝266.0(M+H)，Rt＝0.68分钟。
6-(2-氟-5-甲酰基苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980001081
向位于微波小瓶中的6-溴吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在DME (0.03M)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2-DCM(0.05当量)、2-氟-5-甲酰基苯基硼酸(1.5当量)和2M Na2CO3(2当量)。将这些试剂加热至120℃达20分钟。用LC/MS探测到所需产物和相应羧酸的混合物，将该反应用乙酸乙酯稀释，用HCl洗涤(pH＝5)，将酸性相用乙酸乙酯萃取，将所合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩得到淡褐色固体。在室温下，将该固体溶解于MeOH中并用3当量TMS-重氮甲烷处理。在羧酸完全转化成相应的甲酯后，将反应液真空浓缩并将粗品用硅胶柱色谱(ISCO)进行纯化，用30％乙酸乙酯的己烷溶液进行洗脱，以58％的收率得到黄色固体形式的6-(2-氟-5-甲酰基苯基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝260.0(M+H)，Rt＝0.70分钟。
(E)-6-(2-氟-5-(丙-1-烯基)苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
向6-(2-氟-5-甲酰基苯基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在MeOH(0.17M)中的溶液中加入溴化乙基三苯基
Figure BDA0000058386980001083
(1.0当量)，然后加入甲醇钠(1.5当量)。将该反应液加热至65℃达5小时，然后将其冷却至室温并将其真空浓缩。将粗品用硅胶柱色谱(ISCO)进行纯化，用50％乙酸乙酯的己烷溶液进行洗脱，以81％的收率得到白色固体形式的(E)-6-(2-氟-5-(丙-1-烯基)苯基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝272.0(M+H)，Rt＝0.73分钟。
6-(2-氟-5-丙基苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980001091
向(E)-6-(2-氟-5-(丙-1-烯基)苯基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在MeOH(0.04M)中的溶液中加入10％Pd/C(0.5当量)，将该反应在氢气气氛下搅拌一夜。将混合物用硅藻土垫过滤并用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，以97％的收率得到淡灰色油状物形式的6-(2-氟-5-丙基苯基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝274.2(M+H)，Rt＝0.61分钟。
6-(2-氟-5-丙基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001092
向6-(2-氟-5-丙基苯基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在THF中的溶液中加入氢氧化锂(10当量)并将该反应在室温下搅拌1小时。真空除去THF溶剂并将剩余的碱性相用浓HCl酸化。将水层用乙酸乙酯萃取(2x)，将有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以35％的收率得到6-(2-氟-5-丙基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝260.2(M+H)，Rt＝0.36分钟。
方法8
6-(2，6-二氟-3-(三氟甲基-磺酰氧基)苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980001093
向6-(2，6-二氟-3-羟基苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在DCM(0.2M)中的溶液中加入DIEA(2.0当量)和1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(1.5当量)。使该反应液在室温下搅拌一夜。将该溶液用水终止反应，将有机相用硫酸钠干燥，浓缩。将粗品通过ISCO色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷(0-30％乙酸乙酯)进行洗脱。将纯净的级分浓缩，以68％的收率得到澄清油状物形式的所需产物6-(2，6-二氟-3-(三氟甲基磺酰氧基)苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝416.1(M+H)，Rt＝1.08分钟。
6-(2，6-二氟-3-(三氟甲基磺酰氧基)-苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
Figure BDA0000058386980001101
按照方法8，使用6-(2，6-二氟-3-(三氟甲基磺酰氧基)苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)以＞99％的收率得到无色油状物形式的6-(2，6-二氟-3-(三氟甲基磺酰氧基)苯基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝397.9(M+H)，Rt＝1.03分钟。
6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001102
向6-(2，6-二氟-3-(三氟甲基磺酰氧基)苯基)-5-氟吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在二恶烷和水(10∶1，0.15M)中的溶液中加入甲基硼酸(3.0当量)和碳酸钾(3.0当量)。将该反应用氮气脱气10分钟，然后向该溶液中加入Pd(PPh3)4(0.1当量)并将其加热至100℃达3小时。此时，该反应的LC/MS表明完全转化成羧酸产物(M+H＝268)。冷却至室温并加入水和乙酸乙酯。将两层分离，将水相用浓HCl酸化至pH＝1并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，以97％的收率得到澄清油状物形式的6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟吡啶甲酸。LC/MS＝268.1(M+H)，Rt＝0.82分钟。
6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)吡啶甲酸甲酯的合成
向6-(2，6-二氟-3-(三氟甲基磺酰氧基)-苯基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在甲苯中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2-DCM(0.1当量)，然后加入二甲基锌(3.0当量)。该溶液从橙色变成亮黄色。将该反应加热至80℃达2小时，此时的LC/MS分析表明其完全转化成产物。将该反应冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，以定量的收率得到褐色油状物形式的6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)吡啶甲酸甲酯。LC/MS＝264.0(M+H)，Rt＝0.90分钟。
6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001112
向6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在THF中的溶液中加入氢氧化钠(10当量)并将该反应搅拌2小时。将该溶液用乙酸乙酯稀释并用1N NaOH(2x)洗涤。将所合并的碱性水相合并并用浓HCl酸化。将酸性水相用乙酸乙酯萃取(2x)，将所合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，以85％的收率得到白色固体形式的6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝250.0(M+H)，Rt＝0.76分钟。
6-(3-乙基-2，6-二氟苯基)吡啶甲酸的合成
Figure BDA0000058386980001121
向6-(2，6-二氟-3-(三氟甲基磺酰氧基)-苯基)吡啶甲酸甲酯(1.0当量)在甲苯(0.15M)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2-DCM(0.1当量)，然后加入二乙基锌(3.0当量)。该溶液从橙色变成亮黄色。将该反应加热至70℃达2小时，此时的LC/MS分析表明其是一种比例为1∶3∶1的水解产物、所需产物和未知副产物的混合物。将该反应液冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并用1NNaOH(2x)洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩得到褐色油状物。将该油状物重新溶解于THF中并用1N NaOH处理一小时。然后，将该反应液用乙酸乙酯稀释并用1N NaOH(2x)洗涤。将碱性洗涤液合并，用浓HCl酸化并用乙酸乙酯萃取(3x)。将有机相用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，以＞99％的收率得到淡褐色油状物形式的6-(3-乙基-2，6-二氟苯基)吡啶甲酸。LC/MS＝264.1(M+H)，Rt＝0.88分钟。
方法9
在0.5M的浓度下，将各1当量的胺、羧酸、HOAT和EDC在DMF中的均质溶液放置24小时，然后加入水和乙酸乙酯。将有机相用硫酸钠干燥并通过硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯和己烷进行洗脱得到所需的被保护的酰胺产物。或者，直接用HPLC对粗的反应混合物进行纯化。在冷冻干燥后，得到被保护的酰胺产物的TFA盐。或者，可以将HPLC级分加入到EtOAc和固体Na2CO3中，分离并用NaCl(饱和的)洗涤。在用MgSO4干燥后，过滤并在真空下除去挥发性物质，以游离碱形式得到被保护的酰胺产物。或者，将粗的反应混合物在不进行进一步纯化的情况下用于去保护步骤。
如果存在N-Boc保护的胺，则通过用过量的4M HCl/二恶烷处理14小时或者通过用25％TFA/CH2Cl2处理2小时来将其除去。在真空下除去挥发性物质后，用RP HPLC对该物质进行纯化，在冷冻干燥后以TFA盐的形式得到酰胺产物。或者，可以将HPLC级分加入到EtOAc和固体Na2CO3中，分离并用NaCl(饱和的)洗涤。在用MgSO4干燥后，过滤并在真空下除去挥发性物质，得到游离碱。将其溶解于MeCN/H2O中后，加入1当量1N的HCl并冷冻干燥，得到酰胺产物的HCl盐。
如果存在N-Boc1，2氨基醇环状氨基甲酸酯，则在Boc去保护前，可以通过用Cs2CO3(0.5当量)在乙醇中在0.1M的浓度下处理三小时来裂解该环状氨基甲酸酯。在真空下除去挥发性物质后，如上所述那样对该Boc氨基进行去保护。
如果存在N-Boc，OAc基团，则在Boc去保护前，可以通过用K2CO3(2.0当量)在乙醇中在0.1M的浓度下处理24小时来裂解该乙酸酯基团。
如果存在N-邻苯二甲酰亚胺基团，则通过用肼在MeOH中在65℃下处理三小时来将该胺去保护。在冷却和将白色沉淀滤出后，将滤液浓缩并用RP HPLC进行纯化得到氨基酰胺产物。
如果存在TBDMS醚，则在Boc去保护前，通过用6N HCl、THF、甲醇(1∶2∶1)在室温下处理12小时来将其去保护。在真空下除去挥发性物质后，如上所述那样将该Boc氨基去保护。或者，如果在室温下放置24小时或者在60℃下加热3小时，则TBDMS醚和Boc基团都可以用6NHCl、THF、甲醇(1∶2∶1)去保护。
如果存在OMe基团，则通过用1M BBr3在DCM(2.0当量)中处理24小时来对其进行去保护。滴加水并在真空下除去挥发性物质。如上所述那样通过反相HPLC对该物质进行纯化。
如果存在OBn基团，则通过用10％Pd/C(0.2当量)在氢气气氛下在乙酸乙酯和甲醇(1∶2)中进行处理来对其去保护。在结束后，将反应液用硅藻土过滤，用甲醇洗涤并将滤液真空浓缩。
(+/-)-3-氨基-N-(4-(3-氨基-4-羟基环己-1-烯基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基) 吡啶甲酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001141
按照方法9，将(+/-)-3-(3-氨基吡啶-4-基)-6-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己-2-烯基氨基甲酸叔丁酯和3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸偶合并去保护，以TFA盐的形式得到(+/-)-3-氨基-N-(4-(3-氨基-4-羟基环己-1-烯基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：438.2(MH+)，LC Rt＝2.00分钟。
(+/-)-3-氨基-N-(4-(3-氨基-4-羟基环己基)-吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)吡啶 甲酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001142
按照方法9，将(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-2-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)环己基氨基甲酸叔丁酯和3-氨基-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酸偶合并去保护，以18％的收率以TFA盐形式得到(+/-)-3-氨基-N-(4-(3-氨基-4-羟基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：440.3(MH+)，LC Rt＝2.04分钟。
按照方法9的操作，制备下面的化合物：
表1
Figure BDA0000058386980001151
Figure BDA0000058386980001161
Figure BDA0000058386980001171
Figure BDA0000058386980001181
Figure BDA0000058386980001191
Figure BDA0000058386980001201
Figure BDA0000058386980001211
Figure BDA0000058386980001231
Figure BDA0000058386980001241
Figure BDA0000058386980001251
Figure BDA0000058386980001261
Figure BDA0000058386980001271
Figure BDA0000058386980001291
Figure BDA0000058386980001301
Figure BDA0000058386980001311
Figure BDA0000058386980001321
Figure BDA0000058386980001331
Figure BDA0000058386980001341
Figure BDA0000058386980001351
Figure BDA0000058386980001361
Figure BDA0000058386980001371
6-溴-N-(4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)吡啶-3-基)-5- 氟吡啶甲酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001372
按照方法9，将4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)吡啶-3-胺和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到6-溴-N-(4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：455.3(MH+)；LC Rt=2．09分钟。
6-溴-N-(4-((1R，3S)-3-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-环己基)吡啶-3-基)-5-氟 吡啶甲酰胺的合成
按照方法9，将2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到6-溴-N-(4-((1R，3S)-3-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)环己基)吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：523.2/525.2(MH+)；LC Rt＝3.31分钟。
3-氨基-6-溴-N-(4-((1R，3S)-3-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)环己基)吡啶-3- 基)-5-氟吡啶甲酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001381
按照方法9，将2-(3-(3-氨基吡啶-4-基)环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮和3-氨基-6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到3-氨基-6-溴-N-(4-((1R，3S)-3-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)环己基)吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：538.1/540.1(MH+)；LC Rt＝3.46分钟。
(1S，3R，5S)-3-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)-吡啶-4-基)-5-甲基环己基氨基甲 酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980001382
按照方法9，将(1S，3R，5S)-3-(3-氨基吡啶-4-基)-5-甲基环己基氨基甲酸叔丁酯和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到(1S，3R，5S)-3-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-5-甲基环己基氨基甲酸叔丁酯。LCMS(m/z)：507.1/509.1(MH+)，Rt＝0.90分钟。
(1R，2R，4R，6S)-4-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-2-(叔-丁氧基羰基 氨基)-6-甲基环己基乙酸酯的合成
Figure BDA0000058386980001391
按照方法9，将(1R，2R，4R，6S)-4-(3-氨基吡啶-4-基)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基环己基乙酸酯和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到(1R，2R，4R，6S)-4-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基环己基乙酸酯。LCMS(m/z)：567.2(MH+)，Rt＝0.82分钟。
(+/-)-5-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980001392
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980001393
按照方法9，将(+/-)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980001394
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到(+/-)-5-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-7-甲基-2-氧代六氢苯并[d]唑-3(2H)-甲酸叔丁酯。LCMS(m/z)：549.2/551.2(MH+)，Rt＝0.78分钟。
5-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-2-氧代六氢苯并[d] 唑-3(2H)-甲 酸叔丁酯的合成
Figure BDA0000058386980001402
按照方法9，使5-(3-氨基吡啶-4-基)-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980001403
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到5-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980001404
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯。LCMS(m/z)：537.1(MH+)；LCMS Rt＝0.71分钟。
6-溴-N-(4-((1R，5R)-5-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-3，3-二甲基环己基)吡啶 -3-基)-5-氟吡啶甲酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001405
按照方法9，使2-((1R，5R)-5-(3-氨基吡啶-4-基)-3，3-二甲基环己基)异二氢吲哚-1，3-二酮和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到6-溴-N-(4-((1R，5R)-5-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-3，3-二甲基环己基)吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：551/553(MH+)，Rt＝0.95分钟。
N-(4-((1R，3R，4S，5R)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶 -3-基)-6-溴-5-氟吡啶甲酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001411
按照方法9，使4-((1R，3R，4S，5R)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到N-(4-((1R，3R，4S，5R)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-溴-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：652.5，652.4(MH+)；LC Rt＝5.82分钟。
N-(4-((1S，3S，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶 -3-基)-6-溴-5-氟吡啶甲酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001412
按照方法9，使4-((1S，3S，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-胺和6-溴-5-氟吡啶甲酸偶合，在加入EtOAc并用H2O、NaCl(饱和的)洗涤以及用MgSO4干燥后，得到N-(4-((1S，3S，4R，5S)-3，4-二(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-溴-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：652.5，652.4(MH+)；LC Rt＝5.83分钟。
方法10
6-(2，6-二氟苯基)-5-氟-N-(4-(3-羟基-5-甲基环己-1-烯基)吡啶-3-基)吡啶甲 酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001421
将6-溴-N-(4-(3-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5-甲基环己-1-烯基)吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酰胺(1.0当量)、2，6-二氟苯基硼酸(3.0当量)、四三苯基膦(0.2当量)和三乙胺(3.0当量)在1∶1EtOH/甲苯(0.1M)中的溶液在120℃下用微波辐射加热1200秒。冷却后，在真空下除去挥发性物质，直接用反相HPLC对该Suzuki产物进行纯化。将产物级分冷冻干燥，如方法9中所述那样对所得TBDMS醚去保护，在RP HPLC纯化和冷冻干燥后，以TFA盐的形式得到6-(2，6-二氟苯基)-5-氟-N-(4-(3-羟基-5-甲基环己-1-烯基)吡啶-3-基)吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：438.2(MH+)；LC Rt＝2.00分钟。
N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺 的合成
Figure BDA0000058386980001422
将6-溴-N-(4-((1R，3S)-3-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)环己基)吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酰胺(1.0当量)、2，6-二氟苯基硼酸(3.0当量)、四三苯基膦(0.2当量)和三乙胺(3.0当量)在1∶1EtOH/甲苯(0.1M)中的溶液在120℃下用微波辐射加热1200秒。冷却后，在真空下除去挥发性物质，直接用反相HPLC对该Suzuki产物进行纯化。将产物级分冷冻干燥，如方法9中所述那样对所得邻苯二甲酰亚胺基团去保护，在RP HPLC纯化和冷冻干燥后，以TFA盐的形式得到N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：427.2(MH+)；LC Rt＝2.26分钟。
3-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶 甲酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001431
将3-氨基-6-溴-N-(4-((1R，3S)-3-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)环己基)吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酰胺(1.0当量)、2，6-二氟苯基硼酸(3.0当量)、四三苯基膦(0.2当量)和三乙胺(3.0当量)在1∶1EtOH/甲苯(0.1M)中的溶液在120℃下用微波辐射加热1200秒。冷却后，在真空下除去挥发性物质，直接用反相HPLC对该Suzuki产物进行纯化。将产物级分冷冻干燥，如方法9中所述那样对所得邻苯二甲酰亚胺基团去保护，在RP HPLC纯化和冷冻干燥后，以TFA盐的形式得到3-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：442.2(MH+)；LCRt＝2.24分钟。
N-(4-(3-氨基-4-羟基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲 酰胺的 合成
Figure BDA0000058386980001432
将5-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-2-氧代六氢苯并[d]
Figure BDA0000058386980001441
唑-3(2H)-甲酸叔丁酯(1.0当量)、2，6-二氟苯基硼酸(3.0当量)、四三苯基膦(0.2当量)和三乙胺(3.0当量)在1∶1EtOH/甲苯(0.1M)中的溶液在120℃下用微波辐射加热1200秒。冷却后，在真空下除去挥发性物质，直接用反相HPLC来该Suzuki产物进行纯化。将产物级分冷冻干燥，如方法9中所述那样对所得环状氨基甲酸酯和Boc基团去保护，在RP HPLC纯化和冷冻干燥后，以TFA盐的形式得到N-(4-(3-氨基-4-羟基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：443.2(MH+)；LC Rt＝2.11分钟。
5-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-3，3′-二氟-2，4′-联吡啶-6-甲 酰胺的合成
Figure BDA0000058386980001442
将3-氨基-6-溴-N-(4-((1R，3S)-3-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)环己基)吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酰胺(1.0当量)、3-氟吡啶-4-基硼酸(3.0当量)、四三苯基膦(0.2当量)和三乙胺(3.0当量)在1∶1EtOH/甲苯(0.1M)中的溶液在120℃下用微波辐射加热1200秒。冷却后，在真空下除去挥发性物质，直接用反相HPLC来对该Suzuki产物进行纯化。将产物级分冷冻干燥，如方法9中所述那样对所得邻苯二甲酰亚胺基团去保护，在RP HPLC纯化和冷冻干燥后，以TFA盐的形式得到5-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-3，3′-二氟-2，4′-联吡啶-6-甲酰胺。LCMS(m/z)：425.1(MH+)；LCRt＝2.08分钟。
N-(4-((1R，3S，5S)-3-氨基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟-3-羟基苯 基)-5-氟吡啶甲酰胺的合成
向位于微波小瓶中的(1S，3R，5S)-3-(3-(6-溴-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-5-甲基环己基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)的溶液中加入2，6-二氟-3-羟基苯基硼酸(5.0当量)、KF(5.5当量)和Pd2(dba)3(0.2当量)，然后加入THF和水(10∶1，0.03M)。向该混合物中加入P(t-Bu)3(0.4当量)并将该反应在微波中在100℃下加热30分钟。然后，将有机相分离出来，将水层用乙酸乙酯洗涤，将有机物合并并真空浓缩。通过制备型HPLC对该粗品混合物进行纯化，将产物级分冷冻干燥，如方法9中所述那样对所得BOC基团去保护，在RP HPLC纯化和冷冻干燥后，以TFA盐的形式得到N-(4-((1R，3S，5S)-3-氨基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟-3-羟基苯基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：457.2(MH+)；LC Rt＝2.17分钟。
用方法10制备下面的化合物：
表2
Figure BDA0000058386980001452
Figure BDA0000058386980001461
Figure BDA0000058386980001471
Figure BDA0000058386980001481
实施例139
N-(4-((1R，3R，4S，5S)-3-氨基-4-氟-5-甲基环己基)-吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯 基)-5-氟吡啶甲酰胺的合成
在0℃下，向(1R，2R，3S，5R)-5-(3-(6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰氨基)吡啶-4-基)-2-羟基-3-甲基环己基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在DCM(0.04M)中的溶液中加入DAST(1.0当量)。将该反应在0℃下搅拌1.5小时，然后向该反应中加入TFA(10当量)。在2小时后，将该反应真空浓缩并将残余物用制备型HPLC进行纯化，从而以TFA盐的形式得到N-(4-((1R，3R，4S，5S)-3-氨基-4-氟-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺。LCMS(m/z)：459.3(MH+)；LC Rt＝2.39分钟。
除LC/MS和LC特征外，还用1H-NMR对代表性的化合物进行了分析。下面是本发明化合物的典型光谱。
Figure BDA0000058386980001492
Figure BDA0000058386980001501
Figure BDA0000058386980001511
实施例140
Pim1 ATP消耗试验
用以荧光素酶-荧光素为基础的ATP检测试剂来测量PIM1的活性，所述试剂用于定量由激酶催化的向肽底物的磷酰基转移产生的ATP消耗。将进行试验的化合物溶解于100％DMSO中并将其以每孔0.5μl的量直接分配到白色384孔板中。为了启动反应，向各孔中加入10μl位于试验缓冲液(50mM HEPES pH 7.5，5mM MgCl2，1mM DTT，0.05％BSA)中的5nM的Pim1激酶和80μM BAD肽(RSRHSSYPAGT-OH)。在15分钟后，加入10μl位于试验缓冲液中的40μM的ATP。最终试验浓度为2.5nMPIM1、20μM ATP、40μM BAD肽和2.5％DMSO。使反应进行至约50％的ATP被消耗，然后通过加入20μl KinaseGlo Plus(Promega Corporation)溶液来终止反应。将终止了的反应保温10分钟并通过发光在Victor2(Perkin Elmer)上检测剩余的ATP。用Pim1 ATP消耗试验对上述实施例的化合物进行试验，发现它们表现出如下面表3中所示的IC50值。IC50(半数最大抑制浓度)表示了在体内将其靶点抑制50％所需的试验化合物的浓度。
实施例141
Pim2ATP消耗试验
用以荧光素酶-荧光素为基础的ATP检测试剂来测量PIM2的活性，所述试剂用于定量由激酶催化的向肽底物的磷酰基转移产生的ATP消耗。将进行试验的化合物溶解于100％DMSO中并将其以每孔0.5μl的量直接分配到白色384孔板中。为了启动反应，向各孔中加入10μl位于试验缓冲液(50mM HEPES pH 7.5，5mM MgCl2，1mM DTT，0.05％BSA)中的10nM的Pim2激酶和20μM BAD肽(RSRHSSYPAGT-OH)。在15分钟后，加入10μl位于试验缓冲液中的8μM的ATP。最终试验浓度为5nM PIM2、4μM ATP，10μM BAD肽和2.5％DMSO。使反应进行至约50％的ATP被消耗，然后通过加入20μl KinaseGlo Plus(Promega Corporation)溶液来终止反应。将终止了的反应保温10分钟并通过发光在Victor2(Perkin Elmer)上检测剩余的ATP。用Pim2ATP消耗试验对上述实施例的化合物进行试验，发现它们表现出如下面表3中所示的IC50值。
实施例142
Pim3ATP消耗试验
用以荧光素酶-荧光素为基础的ATP检测试剂来测量PIM3的活性，所述试剂用于定量由激酶催化的向肽底物的磷酰基转移产生的ATP消耗。将进行试验的化合物溶解于100％DMSO中并将其以每孔0.5μl的量直接分配到白色384孔板中。为了启动反应，向各孔中加入10μl位于试验缓冲液(50mM HEPES pH 7.5，5mM MgCl2，1mM DTT，0.05％BSA)中的10nM的Pim3激酶和200μM BAD肽(RSRHSSYPAGT-OH)。在15分钟后，加入10μl位于试验缓冲液中的80μM的ATP。最终试验浓度为5nMPIM1、40μM ATP、100μM BAD肽和2.5％DMSO。使反应进行至约50％的ATP被消耗，然后通过加入20μl KinaseGlo Plus(Promega Corporation)溶液来终止反应。将终止了的反应保温10分钟并通过发光在Victor2(Perkin Elmer)上检测剩余的ATP。用Pim3ATP消耗试验对上述实施例的化合物进行试验，发现它们表现出如下面表3中所示的IC50值。
实施例143
细胞增殖试验
将KMS11(人骨髓瘤细胞系)在补加了10％FBS、丙酮酸钠和抗生素的IMDM中培养。在试验当天，将细胞在相同的培养基中以每孔2000个细胞的密度涂到96孔组织培养板中，保留外侧的孔是空的。将MM1.s(人骨髓瘤细胞系)在补加了10％FBS、丙酮酸钠和抗生素的RPMI1640中培养。在试验当天，将细胞在相同的培养基中以每孔5000个细胞的密度涂到96孔组织培养板中，保留外侧的孔是空的。
在用培养基稀释至2倍终浓度前，将在DMSO中提供的试验化合物用DMSO稀释至500倍所需终浓度。向位于96孔板中的细胞中加入等体积的2倍浓度的化合物并将其在37℃下培养3天。
在3天后，使这些板平衡至室温并向培养孔中加入等体积的CellTiter-Glow试剂(Promega)。简单搅动这些板并用光度计测量发光信号。计算在仅用DMSO处理的细胞中与在用对照化合物处理的细胞中观察到的信号的抑制百分比并用其来确定试验化合物的EC50值(即，在细胞中获得50％最大效应所需的试验化合物浓度)，该值如表3中所示。
采用实施例140(Pim1ATP消耗试验)、141(Pim2ATP消耗试验)和142(Pim3ATP消耗试验)的操作，测定前面实施例化合物的IC50浓度，其如下面的表3中所示。
采用实施例143(细胞增殖试验)的操作，在KMS11细胞中测定实施例化合物的EC50浓度，其如下面表3中所示。
表3
Figure BDA0000058386980001541
Figure BDA0000058386980001551
Figure BDA0000058386980001561
Figure BDA0000058386980001571
Figure BDA0000058386980001581
Figure BDA0000058386980001591
Figure BDA0000058386980001601
Figure BDA0000058386980001611
Figure BDA0000058386980001621
Figure BDA0000058386980001631
Figure BDA0000058386980001641
Figure BDA0000058386980001661
Figure BDA0000058386980001671
Figure BDA0000058386980001681
Figure BDA0000058386980001691
Figure BDA0000058386980001701
Figure BDA0000058386980001711
Figure BDA0000058386980001721
Figure BDA0000058386980001731
实施例144
生物学方法：多发性骨髓瘤异种移植物模型中的药理学目标调整和功效研 究
得自Suzanne Trudel(University Health Network，Toronto，Canada)的KMS11-luc多发性骨髓瘤癌细胞表达通过逆转录转染获得的稳定的荧光素酶并被维持在具有1％谷氨酰胺、补加了10％热灭活胎牛血清的DMEM(Invitrogen，Inc.)中。所有的体内药理学研究都使用雌性SCID/bg小鼠(8-12周大，20-25g，Charles River)。根据州和联邦的人类治疗以及实验室动物护理指南来饲养和看护小鼠，并使其自由进食和进水。从对数中期(mid-log)培养物采集癌细胞，用自动细胞计数器(Vi-CELL，Beckman-Coulter)确定活细胞计数，将细胞重新混悬于等份的HBSS和Matrigel(Invitrogen，Inc.)中。随后，将数千万细胞皮下注射到各小鼠的右胁腹中。当肿瘤大小达到250-350mm3(对PK/PD研究而言)和150-250mm3(对功效研究而言)时，开始化合物治疗，同时用StudyDirector软件(StudyLog Systems，Inc.)测定肿瘤体积。所有的化合物治疗都是口服给药。
对于PK/PD时间-过程研究中的体内目标调整而言，给荷瘤小鼠施用基质或不同浓度化合物的单一口服剂量。在给药后第1、8和24小时，由各小鼠采集肿瘤组织和血样。将切下来的肿瘤组织迅速冷冻并用液氮冷却的低温研钵和杵粉碎。通过心脏穿刺取血样，用含有肝素锂的离心管和血浆分离器(BD Microtainer)对血浆进行分离。根据制造商的指导，使冷冻的肿瘤样品在补加了不含EDTA的蛋白酶抑制剂(Roche)、磷酸酯酶抑制剂1和2以及1M NaF(Sigma)的冷的缓冲液(Meso Scale Discovery)中溶解。在用杜恩斯(Dounce)装置或用MagNA Lyser(Roche)匀化后，将其在300xg下在4℃离心30分钟得到澄清的上清液，用BCA(BioRad)测定蛋白浓度。根据制造商的指导，用Meso Scale磷酸化-BadSer112/总Bad二联试剂盒测定目标调整。简单地说，将等量蛋白负载到Meso Scale磷酸化-丝氨酸112/总Bad二联96-孔板(Meso Scale Discovery)的各孔中，将样品在室温下培养30分钟或在4℃下培养一夜，振摇。用1x MSD洗涤缓冲液对板进行洗涤，向孔中加入Sulfo-Tag探测抗体并将其在室温下培养1小时，振摇。再次对板进行洗涤并在向孔中加入读数缓冲液T后，探测所捕获的分析物。在SECTOR Imager 6000 Instrument(Meso Scale Discovery)上对板进行读数。用pBad与总Bab的信号比例来校正样品间的差异。下表中所示的数据表示了相对于总Bad磷酸化，本发明的代表性化合物对pBadSer112磷酸化的抑制百分比，用基质对照组归一化。调整程度以相对于基质对照的百分比表示(n.d.，未测定)。
对于功效研究而言，用StudyDirector软件(StudyLog Systems，Inc.)将荷瘤小鼠随机分组，这些组具有范围为150-250mm3的等同肿瘤体积变化。在随机化后，以200μl开始(incipient)，在多个化合物浓度下每天给小鼠口服给药一次或两次。每周至少两次地测量肿瘤生长和动物体重，用每天的临床观察来监测与治疗有关的潜在毒性。如果肿瘤体积超过2500mm3，或者如果体重降低超过原始测量的20％，则将动物从研究中排除。
在KMS11-luc异种移植物模型中对实施例99的化合物的功效进行了评估，小鼠在50和100mg/kg的剂量下每天两次、在100mg/kg的剂量下每天一次地接受14天实施例99的化合物的口服给药。当肿瘤大小达到约250mm3时开始给药。如图1中所示，实施例99的化合物表现出剂量依赖性的体内作用，用50mg/kg每天两次(92％)和100mg/kg每天两次(4％消退)观察到了肿瘤生长抑制。100mg/kg每天一次给药的效力(65％)低于每天两次给药时的效力。这些结果与pBadSer112调整的程度和幅度相关，并且表明广泛的和长期的目标调整是最大功效所需的。
在KMS11-luc异种移植物模型中对实施例70的化合物的功效进行了评估，小鼠在25和50mg/kg的剂量下每天两次、在100mg/kg的剂量下每天一次地接受14天实施例80的化合物的口服给药。当肿瘤大小达到约225mm3时开始给药。如图2中所示，实施例70的化合物表现出剂量依赖性的体内作用，在25mg/kg(65％)和50mg/kg(100％)的剂量下观察到了肿瘤生长抑制。以100mg/kg每天给药一次也观察到了显著的肿瘤生长抑制(84％)。
在KMS11-luc异种移植物模型中对实施例96的化合物的功效进行了评估，小鼠在25和50mg/kg的剂量下每天两次、在100mg/kg的剂量下每天一次地接受14天实施例96的化合物的口服给药。当肿瘤大小达到约225mm3时开始给药。如图3中所示，实施例96的化合物表现出剂量依赖性的体内作用，在25mg/kg(67％)和50mg/kg(96％)的剂量下观察到了肿瘤生长抑制。以100mg/kg每天给药一次也观察到了显著的肿瘤生长抑制(88％)。
虽然已经对本发明的优选实施方案进行了举例说明和描述，但是应当意识到可以在不脱离本发明主旨和范围的情况下对其进行各种变化。

Claims (29)

1.式II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐，
Figure FDA0000058386970000011
其中，
Y是被一至三个取代基取代的环己基；
R1是氢、-NH2或卤素；
R12每次出现时独立地选自氢和卤素；并且
R5选自环己基、苯基和吡啶基，其中所述环己基、所述苯基和所述吡啶基各自独立地被最多三个选自卤素、羟基、C1-4烷基和OC1-4烷基的取代基取代。
2.权利要求1的化合物，其中Y被一至三个选自羟基、氨基、C1-4烷基和C1-4卤代烷基的取代基取代。
3.权利要求2的化合物，其中Y被一至三个选自甲基、羟基、氨基和CF3的取代基取代。
4.权利要求2的化合物，其中R1是氢、氨基或氟。
5.权利要求2的化合物，其中R5是吡啶基或苯基。
6.权利要求5的化合物，其中R5是被最多三个选自卤素、羟基、烷氧基和C1-4烷基的取代基取代的苯基。
7.权利要求5的化合物，其中Y被一至三个选自甲基、羟基、氨基和CF3的取代基取代；R1是氢；且R5是被最多三个选自氟、羟基、甲基、乙基、甲氧基和丙氧基的取代基取代的苯基。
8.权利要求7的化合物，其中R1是2，6-二氟苯基。
9.权利要求1的化合物，其选自
N-(4-((3S，5S)-3-氨基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；
3-氨基-N-(4-((1R，3R，4S，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)吡啶甲酰胺；
N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；
3-氨基-N-(4-((1R，3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺；和
N-(4-((3S)-3-氨基环己基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺，或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐。
10.一种包含权利要求1至9中任意一项的化合物的药物组合物。
11.一种包含权利要求1至9中任意一项的化合物的药物组合物，其中所述药物组合物包含用于治疗癌症的另外的活性剂。
12.权利要求11的药物组合物，其中所述的另外的活性剂选自伊立替康、托泊替康、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、紫杉烷类、替扎他滨、环磷酰胺、长春花生物碱类、伊马替尼(Gleevec)、蒽环类抗生素、利妥昔单抗和曲妥单抗。
13.权利要求1至9中任意一项的化合物用于制备通过调节马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性来治疗病症的药物的用途。
14.权利要求13的用途，其中所述病症是选自肺癌、胰腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳癌、前列腺癌或结肠癌、黑素瘤、髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病、绒毛状结肠腺瘤和骨肉瘤的癌症。
15.用于通过调节马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性来治疗病症的权利要求1至9的化合物。
16.权利要求15的化合物，其中所述病症是选自肺癌、胰腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳癌、前列腺癌或结肠癌、黑素瘤、髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病、绒毛状结肠腺瘤和骨肉瘤的癌症。
17.选自表I或表II的式II化合物。
18.式II的化合物、或者其立体异构体、互变异构体或可药用的盐，
Figure FDA0000058386970000031
其中，
Y是被甲基、羟基和氨基取代的哌啶基；
R1选自氢、NH2和氟；
R12每次出现时独立地选自氢和卤素；并且
R5选自吡啶基、氟吡啶基、环己基和苯基，其中所述苯基被最多三个选自氟、羟基和甲基的取代基取代。
19.权利要求18的化合物，其中Y表示3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基。
20.权利要求18或19的化合物，其中R1是氢。
21.权利要求20的化合物，其中R5是二氟苯基。
22.权利要求18或权利要求19的化合物，其中R5是2，6-二氟苯基。
23.权利要求18的化合物，其选自N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺、3-氨基-N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲酰胺和N-(4-((3R，4R，5S)-3-氨基-4-羟基-5-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2，6-二氟-3-甲基苯基)-5-氟吡啶甲酰胺。
24.一种包含权利要求18或权利要求23的化合物的药物组合物，其中所述药物组合物包含至少一种用于治疗癌症的另外的活性剂。
25.权利要求24的药物组合物，其中所述的另外的活性剂选自伊立替康、托泊替康、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、紫杉烷类、替扎他滨、环磷酰胺、长春花生物碱类、伊马替尼(Gleevec)、蒽环类抗生素、利妥昔单抗和曲妥单抗。
26.权利要求18的化合物用于制备通过调节马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性来治疗病症的药物的用途。
27.权利要求26的用途，其中所述病症是选自肺癌、胰腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳癌、前列腺癌或结肠癌、黑素瘤、髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病、绒毛状结肠腺瘤和骨肉瘤的癌症。
28.用于通过调节马洛尼前病毒整合激酶(PIM激酶)活性来治疗病症的权利要求18至23的化合物。
29.权利要求28的化合物，其中所述病症是选自肺癌、胰腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳癌、前列腺癌或结肠癌、黑素瘤、髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病、绒毛状结肠腺瘤和骨肉瘤的癌症。
28.选自表I或表II的式II的化合物。
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