TWI227780B - Methods for identifying compounds for regulating muscle mass or function using corticotropin releasing factor receptors - Google Patents

Description

1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印紫 Α7 Β7 五、發明説明（1 ) 技術範圍 本發明係關於鑑定供調節骨骼肌質量或功能或調節促 皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )活性或表現之候選 化合物之方法。本發明亦關於使用促皮質素釋放因子- 2 受體（C R F 2 R )作爲間插標的以治療骨骼肌萎縮或誘使 肌肥大之方法及使用促皮質素釋放因子- 2受體（ CRF2R)及促皮質素釋放因子—1受體（CRFiR) 作爲標的以治療肌失養症之方法。 背景 促皮質素釋放因子受體（C R F R )及配位體 迄今已鑑定出兩種隸屬於G -蛋白質偶合性受體（ GP CR)類之促皮質素釋放因子受體（CRFiR及 C R F 2 R ) 。C R F i R或C R F 2 R之激動劑活化作用 將導致腺苷酸環化酶之G α s活化。腺苷酸環化酶可催化 c. A Μ Ρ之形成，c A Μ Ρ則具有多重之效應包括蛋白質 激酶Α之活化，細胞內鈣之釋出及有絲分裂原一活化性蛋 白質激酶（M A P激酶）之活化。其它硏究中，促皮質素 釋放因子受體之激動劑活化作用後所呈現之細胞內肌醇三 磷酸合成增強之現象顯示促皮質素釋放因子受體（ C R F R )亦偶合至G α q上。 CRF1R&CRF2RE由人類，鼠，鼷鼠，雞，母 牛，鯰魚，青蛙及綿羊中選殖出。CRFiR及CRF2R 各具有獨一之分佈型式。在人類中已選殖出α， Θ及T三 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇>< 297公羞） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-4 1227780 A7 B7 五、發明説明（2 ) 種CRF2R之同功型。α及0CRF2R之同源物已於鼠 中鑑定出。 促皮質素釋放因子受體（C R F R )之一些配位體/ 激動劑係已知。促皮質素釋放因子（或激素，C R F或 CRH)可結合至CRF1R&CRF2R上並使其活化。 促皮質素釋放因子（CRF)爲身體對壓力之反應之主要 調節劑。此含有4 1個胺基酸之肽係作爲下視丘-腦下垂 體-腎上腺激素軸（Η P A軸）之主要調節劑以負責全套 之神經元，內分泌及免疫過程。此外，促皮質素釋放因子 (C R F )與兩生（amphibian )肽沙維京（sauvagine )及 提洛斯坦（telostian )肽尿緊張素（urotensin )間具有實質 之序列同源性，而沙維京（sauvagine )及尿緊張素（ u 1· 〇 t e n s i η )均充作C R F 1 R及C R F 2 R之激動劑。這三 種肽在作爲降血壓劑及A C Τ Η促分泌劑方面具有類同之 生物學性質。此外，尿緊張素（urotensin )之哺乳類同質物 ，尿皮質素（urocortin )，已予特徵化。 促皮質素釋放因子受體在藥學上可經由受體選擇性激 動劑及拮抗劑之使用而與非-促皮質素釋放因子受體區分 。這些選擇性激動劑及拮抗劑，加上促皮質素釋放因子受 體（C R F R )基因剔除鼷鼠，已有用以測定何種促皮質 素釋放因子受體（CRFR)可促成特異之生物學反應。 C R F i R之角色已充分.確立。C R F i R基因經剔除 之鼷鼠證實可使壓力反應減弱及使焦慮狀之行爲減低。 C R F i R爲下視丘—腦下垂體一腎上腺激素軸（Η P A軸 本紙張尺度適用中周國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 -5 - 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ___B7_五、發明説明（3 ) )之主要促成劑。尤其，促皮質素釋放因子，其乃由下視 丘釋出並經由下視丘-腦下垂體門系統運送至前腦下垂體 ，可與座落在前腦下垂體中之細胞上所存在之〇11广111交 互作用。C R F i R之激動劑活化作用導致A C T Η由前腦 下垂體之細胞中釋放至系統循環中。所釋出之A C Τ Η與 位在腎上腺皮質中之細胞上所存在之A C Τ Η受體結合， 導致腎上腺激素包括皮質類固醇之釋出。皮質類固醇可促 成許多效應包括，但不限定於，經由涉及胸腺及脾臟萎縮 之機轉所促成之免疫系統抑制作用。故C R F : R之活化間 接導致免疫系統經由下視丘-腦下垂體-腎上腺激素軸（ Η P A軸）之活化而產生負調節。 CRFsR之角色較未充分發展。CRF2R基因經剔 除之鼷鼠證實以尿皮質素（ur〇c or tin )刺激後減少食物攝取 之現象減弱，血管擴張作用缺乏，但有正常之壓力反應。 以C R F 2R進行之實驗證實C R F2R負責促皮質素釋放 因子受體（C R F R)之降血壓/血管擴張效應及負責以 C R F R治療鼷鼠後所觀察到之食物攝取降低現象。 骨骼肌萎縮及肥大 骨骼肌爲可輕易適應工作之生理學需求或代謝需求方 面之變化之成形組織。肥大係指骨骼肌質量增加，而骨骼 肌萎縮則指骨骼肌質量降低。急性骨骼肌萎縮乃歸於各種 不同之原因包括，但不限定於：因手術，臥床，或斷骨所 致之廢用；因脊髓損傷，自體免疫疾病，或感染性疾病所 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -6- 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（4 ) 致之去神經/神經損傷；供不相關病況用之糖皮質激素之 使用i因感染或其它原因所致之敗血症；因疾病或飢餓所 致之營養限制；及太空旅行。骨骼肌萎縮乃經由正常之生 理學過程發生，然而在某些醫學狀況下，此正常生理學過 程將_致衰弱程度之肌萎縮。例如，急性骨骼肌萎縮使得 制動病患，包括，但不限定於，伴隨矯形處置者，之復健 造成顯著之限制。此些案例中，使骨骼肌萎縮逆轉所需之 復健時間通常遠長於恢復原始損傷所需之時間。此急性廢 用性萎縮特別對年長者（其已受肌肉功能及質量之實質年 齢相關性不足所苦）造成問題，因爲此萎縮可導致永久失 能及過早死亡之故。 骨骼肌萎縮亦可因慢性病況諸如癌症惡病質，慢性炎 症，愛滋病惡病質，慢性阻塞性肺病（C〇P D )，充血 性心_哀竭，遺傳病症，例如肌失養症，神經變性疾病及 肌減少症（年齡相關性肌肉減少）等所引起。這些慢性病 況中，骨骼肌之萎縮可導致移動力之過早喪失，因而增加 疾病相關性死亡率。 有關控制骨骼肌之萎縮或肥大之分子過程鮮少已知。 雖然骨骼肌萎縮之初始誘發乃因各種不同之萎縮起始狀況 而異，然而在受影響之骨骼肌纖維中會發生一些常見之生 化變化，包括蛋白質合成作用之降低，蛋白質降解作用之 增加，及表現緩慢（高度氧化性代謝作用/緩慢收縮性蛋 白質同功型）至快速（高度糖分解性代謝作兩/快速收縮 性蛋白質同功型）纖維開關特性之收縮及代謝兩種酵素蛋 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) #·

’1T

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 at B7 五、發明説明（5 ) 白質同功酶均有變化。骨骼肌所發生之外加變化包括血管 分佈之減少及細胞外基質之再造。快速及緩慢牽搦肌均證 實於適當狀況下之萎縮，並依特定之萎縮刺激或狀況而伴 隨相關之肌肉減少。重要的是，所有之這些變化均對等地 調節且依生理學及代謝需求中之變化而予開或關。 萎縮及肥大之發生過程乃橫跨哺乳類之間保存。許多 硏究證實，齧齒類及人類在萎縮期間所發生之基本分子， 細胞，及生理學過程均相同。故，骨骼肌萎縮之齧齒類模 型已成功地用以了解及預測人類之萎縮反應。例如齧齒類 及人類體內藉由各種不同方法所誘生之萎縮均導致組織解 剖，代表性區域，功能，纖維型式開關，收縮蛋白質表現 ，及組織學中之類同變化。此外，一些製劑已證實可調節 齧齒類及人類之骨骼肌萎縮。這些製劑包括合成類固醇， 生長激素，類胰島素生長因子I，及/3腎上腺素激導性激 動劑。同時，這些資料證實，骨骼肌萎縮在齧齒類及人類 體內均由共同之機轉所引起。 雖然一些製劑已顯示可調節骨骼肌萎縮且已認可供人 類之此適應症所用，然而這些製劑具有不期望之副作用諸 如心肌肥大，贅瘤形成，多毛症，女子男性化，發病及死 亡率增加，肝損傷，低血糖症，肌骨骼疼痛，組織腫脹增 加，心跳過速，及水腫。現今並無高度有效及選擇性治療 法以供治療急性或慢性骨骼肌萎縮。故需要鑑定可調節骨 骼肌萎縮之其它醫療劑。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-8- 1227780 A 7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（6 ) 肌失養症 肌失養症爲一群遺傳性，進行性肌肉病症，臨床上係 藉由骨骼肌衰弱之選擇性分佈來區分。兩種最常見之肌失 養症形式爲裘馨型及貝克型失養症，各自係由位在 Xp 2 1位點上之蛋白質失養素（dystrophin)基因中之遺 傳性突變所引起。其它失養症包括，但不限定於，由多重 遺傳位點包括p 9 4鈣蛋白酶（calpain )，阿得哈林（ adhalin )， r —肌聚糖，及/3 —肌聚糖位點之突變所引起 之肢帶型肌失養症；筋膜肩胛與肱骨（郎度齊-台捷林） 肌失養症，肌強直性失養症，及埃米利-瑞弗斯（Emery-Dreif us s )肌失養症。裘馨型肌失養症（其幾乎僅發生於男 性身上）之症狀包括搖擺步式，腳趾行走，脊椎前彎，經 常性跌倒及站立及爬樓梯困難。約3 - 7歲開始出現症狀 ，大部分病患在1 0 - 1 2歲時受限在輪椅上且許多病患 約在2 0歲時由於呼吸倂發症而死亡。現今之裘馨型肌失 養症治療法包括潑尼松（一種皮質類固醇）之投服，其雖 然不能治癒，但能減緩肌力之衰退及延緩失能。皮質類固 醇，諸如潑尼松，之作用咸信係阻斷因爲疾病所致之肌纖 維損傷而促生之免疫細胞活化作用及浸潤作用。不幸的是 ，皮質類固醇之治療亦導致骨骼肌萎縮，因而抹煞了彼等 在這些病患體內阻斷免疫反應之一些潛在優點。故需要鑑 定可減緩肌失養症病患之肌纖維損傷及延緩失能發作，但 比現今療法導致較低程度骨骼肌萎縮之醫療劑。 與鑑定供用以治療骨骼肌萎縮或肌失養症之化合物有 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· 、11

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -9- 1227780 A7 ___ _ B7 五、發明説明（7 ) 關之一個問題爲缺乏供鑑定此些化合物之良好篩檢法。申 請專利者如今發現，促皮質素釋放因子- 2受體（ C R F 2 R s )涉及骨骼肌質量或功能之調節且發現促皮質 素釋放因子一 2受體（C R F 2 R s )激動劑可阻斷骨骼肌 萎縮及/或誘使骨豁肌肥大。本發明則解決了鑑定治療肌 萎縮之化合物方面之問題，其係提供使用促皮質素釋放因 子一 2受體（C R F 2 R )以用以鑑定有用以供治療肌萎縮 之候選化合物之篩檢方法。本發明亦解決了發現供治療肌 萎縮之化合物方面之問題，其係提供鑑定可活化促皮質素 釋放因子一 1受體（CRFiR)及促皮質素釋放因子一 2 受體（C R F 2 R )二者之候選化合物之篩檢方法。 發_明之略要說明 本發明係關於使用促皮質素釋放因子受體（ C R F R s )以鑑定潛在有用以治療骨骼肌萎縮及/或誘 使骨骼肌肥大之候選化合物。尤其，本發明係提供供鑑定 可調節骨骼肌質量或功能之候選化合物之試管內方法，其 包含令測試化合物與表現促皮質素釋放因子- 2受體（ C R F 2 R )之細胞接合，或令測試化合物與已離析出之促 皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )之細胞接合，再測 定測試化合物是否可結合至促皮質素釋放因子- 2受體（ C R F 2 R )上或使促皮質素釋放因子一 2受體（ C R F 2 R )活化。本發明之另一具體實例係關於由一群已 測知可結合至促皮質素釋放因子- 2受體（C R F 2 R )上 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -10- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（8 )

或使促皮質素釋放因子一 2受體（CRF2R)活化之一或 更多種候選化合物中鑑定出候選醫療化合物之方法，其包 含將候選化合物投服予非-人類之動物，再測定候選化合 物是否可調節經處理動物之骨豁肌質量或肌肉功能。本發 明之更進一步具體實例係關於以下列任何次序鑑定可調節 骨骼肌質量或功能之候選化合物之方法：（i )令測試化 合物與表現功能性促皮質素釋放因子- 2受體（C R F 2 R )之細胞接合，再測定因測試化合物所致之促皮質素釋放 因子一 2受體（C R F 2 R )之活化程度；（ϋ )令測試化

合物與表現功能性促皮質素釋放因子- 1受體（C R F i R )之細胞接合，再測定因測試化合物所致之促皮質素釋放 因子—1受體（C R F ! R )之活化程度；繼而（iii )將促 皮質素釋放因子- 2受體（C R F 2 R )之活化程度與促皮 質素釋放因子一 1受體（C R F i R )之活化程度相比較； 及（iv)鑑定對促皮質素釋放因子一 2受體（CRF2R) 及促皮質素釋放因子- 1受體（C R F i R )具有類似活性 或對促皮質素釋放因子-2受體（C R F 2 R )顯現選擇性 之彼些化合物以作爲供調節骨骼肌質量或功能之候選化合 物。 本發明更進一步提供鑑定可延長或增大促皮質素釋放 因子—2受體（C R F 2 R )之激動劑一誘導性活化作用或 促皮質素釋放因子- 2受體（C R F 2 R )訊息傳遞路徑之 候選化合物之方法。這些方法包含任何次序或同時之：（ i )令測試化合物與表現功能性促皮質素釋放因子一 2受 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇><297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-11 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 __B7五、發明説明（9 ) 體（C R F 2 R )之細胞接合，（U )將細胞以足夠濃度之 促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )激動劑處理一段 足夠之時間以導致促皮質素釋放因子- 2受體（C R F 2 R )於控制細胞中之脫敏作用；繼而（iii )測定促皮質素釋 放因子一 2受體（CRF2R)之活化程度及鑑定可延長或 增大促皮質素釋放因子受體（C R F R )之活化作用或促 皮質素釋放因子受體（C R F R )訊息傳遞路徑之測試化 合物以作爲供調節骨骼肌質量或功能之候選化合物。特別 具體實施例中，本發明係關於由一群已測知可延長或增大 促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )之活化作用或促 皮質素釋放因子- 2受體（C R F 2 R )訊息傳遞路徑之候 選化合物中鑑定出候選醫療化合物之方法，其包含將候選 化合物與促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )激動劑 共同投服予非-人類之動物，再測定候選化合物是否可調 節經處理動物之骨骼肌質量或功能。 本發明更進一步提供鑑定可增加促皮質素釋放因子-2受體（C R F 2 R )表現之候選化合物之方法，其包含令

作 運 在 有 含 與 物 合 F 化R 試 C 測C

R 包 1aH-> llD'/g 受溶 2 及 I 胞 子細 因之 放因 釋基 素導 質報 皮之 促關 與相 上素 元 節 1言 因 基 現體 表受 因 2 基 I 導子 報因 加放 增釋 可素 。 質 現皮 表促 之加 因增 基可 導爲 報定 測鑑 檢經 再物 , 合 合化 接試 物測 產之

本 { 骨 ， 體節 中受調 例 2 內 施 I 體 實子活 體因於 具放以 別釋用 特素可 。 質否 物^是 合砠物 化0{合 選曾化 候以選 之_bp一候 現"之 表5現 R f > 2於 F 關 R係 F C 明R C 發 C

R (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -12- 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（10) 骼肌質量或功能之方法，其係藉將候選化合物投服予非-人類之動物，再測定候選化合物是否可調節經處理動物之 骨骼肌質量或功能。 本發明更進一步提供鑑定可增加促皮質素釋放因子（ C R F )表現之候選化合物之方法，其包含令測試化合物 與含有在運作上與促皮質素釋放因子（C R F )基因調節 元素相關之報導基因之細胞及溶胞產物接合，再檢測報導 基因之表現。可增加報導基因表現之測試化合物經鑑定爲 可增加促皮質素釋放因子（C R F )表現之候選化合物。 特別具體實施例中，本發明係關於測定彼些可增加促皮質 素釋放因子（C R F )表現之候選化合物是否可用以於活 體內調節骨骼肌質量或功能之方法，其係藉將候選化合物 投服予非-人類之動物，再測定候選化合物是否可調節經 處理動物之骨骼肌質量或功能。 本發明亦關於使用促皮質素釋放因子- 2受體（ C R F 2 R )激動劑，編有功能性促皮質素釋放因子- 2受 體（C R F 2 R )密碼之表現載體，編有架構活性促皮質素 釋放因子一 2受體（C R F 2 R )密碼之表現載體或可增力口 促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )表現之化合物， 或促皮質素釋放因子（C R F )以治療骨骼肌萎縮上之用 途。尤其，本發明係提供治療需此治療之病患之骨骼肌萎 縮之方法，其包含將安全且有效量之促皮質素釋放因子-2受體（C R F 2 R )激動劑，編有功能性促皮質素釋放因 子一 2受體（C R F 2 R )密碼之表現載體，編有架構活性 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -13- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 ___ _B7_ 五、發明説明（彳彳） 促皮質素釋放因子- 2受體（C R F 2 R )密碼之表現載體 ，編有促皮質素釋放因子（C R F )或促皮質素釋放因子 (C R F )·類似物密碼之表現載體，或可增加促皮質素釋 放因子一 2受體（CRF2R)表現之化合物，或促皮質素 釋放因子（C R F )投服予病患。特別具體實施例中，本 發明係關於治療需此治療之病患之骨骼肌萎縮之方法，其 包含將安全且有效量之促皮質素釋放因子- 2受體（ CRF2R)激動劑與安全且有效量之可延長或增大促皮質 素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )之激動劑-誘導性活化 作用或促皮質素釋放因子-2受體（C R F 2 R )訊息傳遞 路徑之化合物共同投服予病患。 本發明亦關於使用促皮質素釋放因子- 2受體（ C+ R F 2 R )激動劑以增加病患骨骼肌質量或功能上之用途 。尤其，本發明係提供增加有此需求之病患之骨骼肌質量 或功能之方法，其包含鑑定出期望增加骨骼肌質量或功能 之病患，再將安全且有效量之促皮質素釋放因子受體（ C R F R )激動劑投服予病患。 本發明更進一步提供含有安全且有效量之促皮質素釋 放因子一 2受體（C R F 2 R )激動劑及製藥學上可接受性 載體之製藥學組成物。特別具體實施例中，製藥學組成物 含有對促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )具專一性 之嵌合型或人類抗體。另一特別具體實施例中，製藥學組 成物含有促皮質素釋放因子（C R F )或促皮質素釋放因 子C C R F )類似物，最好是尿皮質素（urocortin )。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-14- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（12 ) 本發明亦提供對促皮質素釋放因子- 2受體（ CRF2R)之抗體。尤其是爲促皮質素釋放因子一2受體 (C R F 2 R )激動劑之嵌合型或人類抗體。 在整個本專利申請案中，乃提及各種不同之公報。這 些公報之揭示文乃整體倂入本文中以供參考以求更完整地 說明本發明所有關之技藝狀態。 序列列表之說明 序列列表中所包括之每一種促皮質素釋放因子受體（ C R F R )核苷酸及蛋白質序列或;[足皮質素釋放因子（ C R F )類似物蛋白質序列，乃與相關之基因庫（Genbank )及德旺（Derwent )登錄號以及所選殖之動物品系，共同 示於表I中。亦顯示者爲編有與序列列表中所示序列相同 ，或幾近相同，胺基酸序列密碼之相關核苷酸序列之登錄 號。這些相關序列主要在所示5 ’或3 ’未轉譯序列之量 方面相異。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-15- 1227780 A7 B7 五、發明説明（13 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 表] 序列說明 SEQ ID NO:核 苷酸,胺基酸 品系 核苷酸序列之基 因庫(GB)或德旺 (D)登錄號 相關基因K(GB烕 德旺(D)登錄號 CRRR 1，2 智人 X72304(GB) E11431(GB)L23332(GB) 192584(D) T37068(D) T28968(D) Q81952(D) CRFiR 變異體 3,4 智人 L23333(GB) CRRR 變異體 5,6 智人 NM_004382(GB) CRRR 變異體 7,8 智人 AF180301(GB) CRFiR a 9,10 智人 U34587(GB) NM_001883(GB) E12752(GB)T12247(D) T66508(D) CRRR/9 11,12 智人 AF011406(GB) CRRRr 13,14 智人 AF01938KGB) CRFiR 15,16 溝鼠 T28970(D) L25438(GB) L24096(GB) 192586(D) Q81954(D) AH006791(GB) CRF2R a 17,18 溝鼠 U16253(GB) NM_022714(GB) X01009(D) T12243(D) CRRR/3 變異體 19,20 溝鼠 T12244(D) CRFiR 21,22 小家鼠 NM_007762(GB) X72305(D) CRF2R 23,24 小家鼠 T28972(D) U17858(GB) CRF2R 25,26 小家鼠 NM_009953(GB) CRFiR 27,28 綿羊 AF054582(GB) CRRR 29,30 非洲爪蟾 Y14036(GB) CRF2R 31,32 非洲爪蟾 Y14037(GB) CRFiR 33,34 雲紋鼠尾 鯰魚 AF229359(GB) CRFiR 35,36 雲紋鼠尾 鯰魚 AF229361(GB) CRF2R 37,38 雲紋鼠尾 鯰魚 AF229360(GB) CRFiR 39,40 特羅斯牛 AB055434(GB) CRFiR 41,42 紅原雞 M1563(GB) 尿皮質素II 43 小家鼠 AF331517 — 尿皮質素-相關肽 44 智人 BC002647 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -16- 1227780 A7 B7 五、發明説明（Μ ) 圖1證實C R F i R / C R F 2 R激動劑，沙維京（ s^vagme )(皮下投服，每日2次），對鼷鼠坐骨神經除 神經萎縮模型中之內側腓腸肌之抗萎縮效應。 圖2證實沙維京（sauvagine )(藉滲透迷你泵連綠I 服）對鼷鼠坐骨神經除神經萎縮模型中之前脛肌之抗萎縮 效應。 圖3 A及3 B證實沙維京（sauvagine )(藉滲透迷你 泵連續投服）對前脛肌（圖3 A )及對內側腓腸肌（圖 3 B )之糖皮質激素一誘導性萎縮之抗萎縮效應。 圖4 A證實沙維京（sauvagine )(皮下投服，每日2 次），對前脛肌之造模-誘導性萎縮之抗萎縮效應及對未 造模（正常）前脛肌之肥大-誘導效應。圖4 B證實沙維 京（sauvagine )對內側勝腸肌之造模-誘導性萎縮之抗萎 縮效應及對未造模（正常）內側腓腸肌之肥大-誘導效應 〇 圖5證實沙維京（s a u v a g i n e )及尿皮質素（u 1· 〇 c 〇 r t i η ) (藉滲透迷你泵連續投服）對鼷鼠坐骨神經除神經萎縮模 型中之前脛肌之抗萎縮及肥大-誘導效應。 圖6Α及6Β證實尿皮質素（urocortin)(皮下投服， 每日2次）對前脛肌（圖6 A )及對內側腓腸肌（圖6 B )之廢用-誘導性萎縮之抗萎縮效應。 ，圖7證實沙維京（sauvagine )(皮下投服，每日2次 )於腎上腺經切除鼠坐骨神經除神經-誘導性萎縮模型中 之抗萎縮效應中，對前脛肌（圖7 A )，伸趾長肌（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -17- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 __B7 五、發明説明（15 ) E D L )(圖7 B )，比目魚肌（圖7 c )及內側腓腸肌 (圖7 D )之除神經一誘導性萎縮之抗萎縮效應。 圖8證實於鼷鼠坐骨神經除神經萎縮模型中，沙維京 (sauvagine )(藉滲透迷你泵連續投服）對野生型鼷鼠之 前脛肌具有抗萎縮效應，但對C R F 2 R基因剔除鼷鼠者貝ij 無。 圖9 A及B證實於鼷鼠腿造模廢用性萎縮模型中，藉 由質量（圖9 A )及肌肉功能（圖9 B )測知沙維京對伸 趾長肌（E D L )及比目魚肌具有抗萎縮效應。 發明之詳細說明 I ·名詞及定義 下列者爲本文所用名詞之定義表。 “激動劑”意指任何化合物，包括，但不限定於，可 活化受體之抗體。例如，促皮質素釋放因子受體（ C R F R )激動劑包拷，但不限定於，促皮質素釋放因子 (C R F )或促皮質素釋放因子（C R F )類似物。 “等位基因變異體”意指既定基因或基因產物之變異 體形式。熟知技藝者已知，有大量之基因係以二或更多之 等位基因形式存在於群體中且有一些基因具有許多之等位 基因。 “抗體”，以其各種不同之文法形式，意指免疫球蛋 白分子及免疫球蛋白分子之免疫學活性部分，亦即含有可 專一地與抗原結合之抗原結合位之分子。”純化之抗體” 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-18- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 ____ B7五、發明説明（16 ) 蒽指已部分或完全地由與其天然相關之蛋白質及天然存在 之有機分子中分離出之抗體。製劑最好含有至少6 〇 %之 抗體，尤其至少7 5%之抗體，更尤其至少9 0%之抗體 ，以至少9 9 % (乾重％ )之抗體最佳。 “結合親合力”意指配位體與受體交互作用之傾向且 其乃與專一性促皮質素釋放因子（C R F )配位體-促皮 質素釋放因子受體（CRFR)交互作用之解離常數成反 關聯。解離常數可經由標準飽和法，競爭法，或動力結合 技術直接測得或經由涉及函數分析及終點之藥學技術間接 測得。 “嵌合型抗體”意指含有來自二或更多種不同抗體分 子，亦即來自不同動物品系，之結構元素之抗體。嵌合型 抗體包括，但不限定於，已知爲”人類化抗體”之抗體， 其包括，但不限定於，藉由已知爲互補決定區嫁接法之技 術所產生之嵌合型抗體。 “促皮質素釋放因子（C R F ) ”意指促皮質素釋放 因子，其與促皮質素釋放激素（CRH)相同。促皮質素 釋放因子（C R F )肽包括r / h促皮質素釋放因子（ C R F )及綿羊促皮質素釋放因子（C R F )(參見美國 專利第4，4 1 5，5 5 8號）等。 “促皮質素釋放因子（C R F )類似物”意指充作促 皮質素釋放因子受體（C RF R s )之配位體之物質。適 當之促皮質素釋放因子（C R F )類似物可由各種脊椎動 物品系中獲得且包括，但不限定於，物質諸如沙維京（ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -19- 1227780 A7 B7 五、發明説明（17) sauvagme )(例如參見美國專利第4， 6 Ο 5， 6 4 2號 )，尿緊張素（urotensin)(例如參見美國專利第 4， 908， 352;及 4， 533， 654 號），鼷鼠 尿皮質素 Π ( urocortin II) (SEQ ID NO :43) ，人類尿皮質素一相關性肽（S E Q ID N Ο ： 4 4 )(Reyes，丁·Μ· et al·，Proc· Nat，l Acad Sci 98:2843-2848(2001))，尿皮質素（urocortin)(例如參見 W 0 9/7/0006 3 )及述於美國專利第 4，415，558;4，489，16 3； 4，594，3 2 9 ； 4 , 6 0 5, 6 4 2； 5，109，1 1 1 ； 5 , 2 3 5, 0 3 6； 5，2 7 8, 1 4 6 ； 5 , 4 3 9, 8 8 5； 5，493，〇06;5，663，2 9 2； 5，284，771; 5，844，074;及 5， 869，450號中之促皮質素釋放因子（CRF) 類似物。每一者均倂入本文中以供參考。理想之促皮質素 釋放因子（C R F )類似物爲沙維京（sauvagine )，尿皮 質素（urocortin)，尿皮質素一相關性肽，尿皮質素Π及尿 緊張素（u 1· 〇 t e n s i η )。 “促皮質素釋放因子受體（C R F R )激動劑”意指 具有可活化促皮質素釋放因子一 1受體（CRFiR)或促 皮質素釋放因子一 2受體（CRF2R)，或二者均可，之 能力之化合物或分子。促皮質素釋放因子受體（ C R F R s )之活化作用可依下文所述之法測量。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 -20- 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（18) “促皮質素釋放因子受體（C R F R ) ”意指促皮質 素釋放因子一 1受體（C R F i R )或促皮質素釋放因子-2 受體（C R F 2 R )。 “促皮質素釋放因子一 1受體（C R F i R ) ”意指來 自任何動物品系之促皮質素釋放因子一 1受體（C R F i R )之任何同功型。促皮質素釋放因子一 1受體（CRFiR )先前被稱 CRF — RA，PC — RRF， CRF，( Perrin, Μ.H., et al. Endocrinology 133:3058-3061 (1993), Chen, R., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8967-8971 (1 993)，Chang，C-P. et al·，Neuron 1 1:1 1 87- 1 1 95 (1 993)， Kishimoto, T., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:1108-1 1 1 2 ( 1 995)及，Vita，N. et al·，FEBS Lett· 3 3 5: 1 - 5 ( 1 99 3)) 或C R H受體。 促皮質素釋放因子-1受體（CRFiR)之定義包括 ，但不限定於，彼些受體，其編有受體密碼之c D N A或 基因組序列已寄存於序列資料庫中。這些序列包括登錄號 * X72304, E11431， L23332, 192584， T37068， T28968, Q81952, L23 3 3 3，NM_0043 82, AF 1 8030 1，T28970，L2543 8，L24096, 192586，Q8 1 954, AH006791，NM —007762，X72305, AF054582, Y14036，AF229359，AF22936 1，AB055434 及 L4 1 563。這些受 體之核苷酸及蛋白質序列可由基因庫（Genbank)及德旺（ Derwent)中獲得，且爲求便利起見，代表性序列乃示於本 文序列列表中。 “促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R ) ”意指來 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） - 21 - 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（19 ) 自任何動物品系之促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )之任何同功型。促.皮質素釋放因子—2受體（CRFsR )亦被稱爲 HM— CRF， CRF — RB， （ Kishimoto, T.，et al·，Pi.oc· Natl. Acad. Sci· USA，92:1 1 08- 1 1 1 2 ( 1995)及 Perrin, M. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:2969-2973 (1995))。 促皮質素釋放因子一 2受體（CRFsR)之定義包括 ，但不限定於，彼些受體，其編有受體密碼之c D N A或 基因組序列已寄存於序列資料庫中。這些序列包括登錄號 :U345 87，E 1 2752，NM —001 883，T1 2247，T66508，AF01 1406, AF01 93 8 1, U 1 6253, T12244, T28972, U 1 785 8, NM_009953, Y 1403 7及AF2293 60。這些受體之核苷酸及蛋白質序列可由 基因庫（Genbank)及德旺（Derwent)中獲得，且爲求便利 起見，代表性序列乃示於本文序列列表中。 所謂”促皮質素釋放因子受體（C R F R )，，亦包括 縮短及/或突變蛋白質，其中，非配位體結合或傳訊息所 之受體分子區已被刪除或修飾。例如，熟知技藝者已知 ，在一級胺基酸序列中有一或更多保守變化之促皮質素釋 放因卞又體（CRFR)乃有用於本發明中。技藝中已知 ，以具有類似結構或性質之不同胺基酸進行某些胺基酸之 取代作用（保守取代作用）可導致安靜之變化，亦即不會 顯著改變功能之變化。保守取代基爲技藝中所詳知。例如 ，G P C R s可容忍跨膜α 一螺族構型（其傾向脂肪性） 中之胺基酸殘基以其它疏水性胺基酸進行取代作用，且仍 酬家標準（CNS ) Α4規格（21Gx2^^p--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

>22- 1227780 A7 B7 五、發明説明（2〇 ) 保持功能。藉由縮短及/或突變諸如保守胺基酸取代作用 而與天然存在胺基酸不同之促皮質素釋放因子- 1受體（ CRFiRs)亦包括在促皮質素釋放因子-1受體（ C R F iR)之定義中。藉由縮短及/或突變諸如保守胺基 酸取代作用而與天然存在胺基酸不同之促皮質素釋放因子 一 2受體（C R F 2 R s )亦包括在促皮質素釋放因子一 2 受體（CRF2R)之定義中。 熟知技藝者亦已知，來自非上列者之品系中，尤其是 來自哺乳類中，之促皮質素釋放因子受體（CRFRs) 乃有用於本發明中。熟知技藝者更進一步已知，藉由使用 得自已知促皮質素釋放因子受體（C R F R )品系之序列 之探子，則與已知序列同源之c D N A或基因組序列可藉 已知之選殖法由相同或其它品系中獲得。此種促皮質素釋 放因子一 1受體（CRFiR)亦包括在促皮質素釋放因子 一 1受體（CRFiR)之定義中且此種促皮質素釋放因子 -2受體（CRF2R)亦包括在促皮質素釋放因子- 2受 體（CRF2R)之定義中。 此外，熟知技藝者已知，促皮質素釋放因子受體（ C R F R s )之功能性等位基因變異體或功能性剪接變異 體可存在於特別之品系中且這些變異體乃有用於本發明中 。促皮質素釋放因子受體（CRFR s )之剪接變異體乃 於，例如，美國專利第5，8 8 8，8 8 1 ; 5,786, 2〇3;及5， 728， 545中已知，每 一者均倂入本文中以供參考。此促皮質素釋放因子-1受 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)M規格（210x297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-23- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 B7五、發明説明（21 ) 體（CRFiR)變異體亦包括在促皮質素釋放因子一 1受 體（CRFiR)之定義中且此促皮質素釋放因子一 2受體 (CRFsR)變異體亦包括在促皮質素釋放因子一2受體 (CRF2R)之定義中。 促皮質素釋放因子- 1受體（CRFiR)或促皮質素 釋放因子-2受體（C R F 2 R )多肽，或促皮質素釋放因 子一 1受體（CRF iR)或促皮質素釋放因子一 2受體（ CRF2R)片段與非一促皮質素釋放因子受體（CRFR )之多肽之融合稱之爲促皮質素釋放因子受體（c R F R )融合蛋白質。使用已知之方法，熟知技藝者可製造促皮 質素釋放因子一 1受體（CRFiR)或促皮質素釋放因子 一 2受體（CRF2R)之融合蛋白質，其雖然與天然之促 皮質素釋放因子一 1受體（CRFiR)及促皮質素釋放因 子一 2受體（C R F 2 R )不同，但仍保持有用於本發明中 。例如，非一 C R F R之多肽可爲訊息（或領導）之多肽 序列，其共轉譯地或轉譯後地指引蛋白質由其合成位轉移 至另一位置上（例如酵母菌α -因子領導子）。或者非-C R F R之多肽可予加入以協助促皮質素釋放因子受體（ C R F R )之純化或鑑定（例如，多—H i s，或 Flag肽）。促皮質素釋放因子—1受體（CRFiR) 融合蛋白質亦包括在促皮質素釋放因子- 1受體（ CRFiR)之定義中且促皮質素釋放因子一2受體（ C R F 2 R )融合蛋白質亦包括在促皮質素釋放因子- 2受 體（CRF2R)之定義中。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-24- 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（22 ) “促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )訊息傳遞 路徑”意指任何傳訊息路徑（例如c A Μ P，M A P激酶 )或傳訊息路徑之結合，彼等係藉將內源性或外源性配位 體結合至促皮質素釋放因子一 2受體（CRF2R)上而調 整。 “功能性促皮質素釋放因子受體（C R F R s :) ”意 指促皮質素釋放因子受體（CRFRs)，其可於活體內 或試管內與促皮質素釋放因子（C R F )或促皮質素釋放 因子（C R F )類似物結合，且因配位體結合作用而活化 〇 “融合基因”意指二或更多之在運作上相關之D N A 密碼序列以便編有一個雜交蛋白質之密碼。”融合蛋白質 ”則爲融合基因之蛋白質產物。 “抑制”意指部分或完全地阻斷特別之過程或活性。 例如，如果化合物可完全或部分地預防肌萎縮，則此化合 物可抑制骨骼肌萎縮。 如同本文所用，如果兩個D N A序列間之鍵之特性不 會（1 )導致移碼突變作用之介入，（2 )干擾啓動區指 引密碼序列轉錄之能力，或（3 )干擾相關R N A轉錄本 轉譯成蛋白質之能力，則稱此兩個D N A序列爲”運作上 相關”。例如，當密碼基因及調節基因係以使密碼基因之 轉錄作用處於調節基因之影響及控制之下，則稱此密碼基 因及調節基因爲運作上相關。故，當啓動區可達成彼 D N A序列之轉錄作用，因而使所得轉錄本可轉譯成期望 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、τ

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -25- 1227780 經濟部智慧財產局員工涓費合作社印製 A7 _ ΒΊ_五、發明説明（23 ) 蛋白質或多肽時，則啓動區與密碼基因爲運作上相關。 “同一性百分比”意指兩個序列中所共有（依下列之 法計算）之核苷酸及胺基酸之百分比。欲計算特定序列（ 查詢序列）之同一性百分比，乃將查詢序列之相關部分與 參考序列使用得自 Genetics Computer Group公司之Best fit 比較電腦程式，Wisconsin Package，Version 10.1來比對。此 程式係採用 Smith and Waterman, Advances in Applied M a t h e m a t i c s，I s s u e 2:4 8 2 - 4 8 9 ( 1 9 8 1)之演算法。同一性百分比 係以供Bestfit程式用之下列預設參數計算：分數矩陣爲 bl〇SUm62.cmp，空隙創造罰分爲8且空隙延伸罰分爲2。當 將序列與參考序列比對時，查詢序列之相關部分爲由促皮 質素釋放因子受體（C R F R )序列中所衍出者。例如， 當查詢者爲促皮質素釋放因子受體（C R F R ) /純化標 記融合蛋白質時，則序列中僅有促皮質素釋放因子受體（ C R F R )多肽部分用來計算同一性百分比分數。 “多肽”意指胺基酸之任何鏈，無視長度或轉譯後修 飾作用（例如磷酸化作用或糖苷化作用）爲何。 “啓動子”意指可控制基因或密碼區開始轉錄作用及 控制轉錄速率之D N A序列。 “預防性治療”意指現今未顯現骨骼肌萎縮現象之病 患之預防性治療，以求完全或部分地阻斷骨骼肌萎縮之發 生。熟知技藝者已知，某些個體乃處於如同本文背景文節 中所討論之骨骼肌萎縮之危險中。此外，熟知技藝者已知 ，如果將導致骨骼肌萎縮之生化變化予以適度調整，則可 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -26- 1227780 A7 B7 五、發明説明（24 ) 預防或降低處於危險之個體之萎縮之發生。例如，開始以 皮質類固醇治療之肌失養症病患乃處於發展骨骼肌萎縮之 危險下，顯示此些病患適於進行預防性治療。 所有其文法形式之”調節”乃意指增加，降低或保持 ，例如，調節骨骼肌質量或功能乃意指增加，降低或保持 骨骼肌質量或功能之程度。 “骨骼肌質量或功能之調節”乃意指骨骼肌質量，骨 骼肌功能或二者之調節。 “調節元素”意指可控制由運作上相關之D N A序列 中轉錄之程度之D N A序列。此調節元素定義中所包含者 爲啓動子及強化子。例如，促皮質素釋放因子受體（ CRFR)基因調節元素爲可控制由CRFR基因中轉錄 之程度之D N A序列。 “報導基因”意指一種密碼序列，彼之產物可予（最 好定量地）檢測，其中此報導基因在運作上乃與對待測量 之訊息有反應之異源啓動子或強化子元素相關。本文中之 啓動子或強化子元素乃稱爲”感應元素”。 “選擇性激動劑，，意指激動劑對某些受體具有比對其 它受體顯著更大之活性，而非對其它受體完全鈍化。 “骨骼肌肥大，，意指骨骼肌質量，骨骼肌功能或二者 之增加。 “骨骼肌萎縮，，的意思與，，肌耗損”相同且意指骨豁 肌質量，骨骼肌功能或二者之降低。 “剪接變異體”意指因其它外顯子之使用而致之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -27- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7_五、發明説明（25 ) m R N A或蛋白質。熟知技藝者已知，依細胞之型式而定 ，或甚至在單一細胞型式內，m R N A在作爲剪接變異體 方面，可以不同之形式表現，故經轉譯之蛋白質乃因所表 現之m R N A而異。 物質之“有效醫療量”爲可使經治療之病患得到期望 之醫學結果，例如降低骨骼肌萎縮，增加骨骼肌質量或增 加骨骼肌功能，之量，同時伴隨人類或非-人類之哺乳類 之可接受優勢；危險率。 “醫療性治療”意指期望增加骨骼肌質量或增加骨骼 肌功能之病患之治療。例如，對現今已顯現骨骼肌萎縮現 象之病患進行之爲求使已發生之骨骼肌萎縮部分或完全地 逆轉或完全或部分地阻斷更進一步骨骼肌萎縮之發生之治 療則爲彼病患之醫療性治療。所謂“醫療性治療”亦包括 ，例如，對未顯現骨骼肌萎縮現象但欲求誘使骨骼肌肥大 之病患之治療，例如對家畜之治療以增加肌質量。 所謂“治療”意指預防性或醫療性治療。 除非另有定義，否則本文中所用之所有技術及科學名 詞均具有與熟知蛋白質化學技藝者一般已知相同之定義。 本文中所述之方法，物料及實例並不欲加以限制。與本文 所述者類似或同等之其它方法或物料亦可用於本發明之操 作及測試中。 π ·促皮，質素釋故恩子曼_體（C R F R q V於骨骼flJA 之調節中之角色 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^衣_

、1T

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇χ29?公羡） -28- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _ B7_五、發明説明（26 ) 熟知技藝者可經由先前技藝之資訊及下文之教示而認 知本發明之用途。本文所述之結果證實，投服可活化促皮 質素釋放因子一 1受體（CRFiR)以及促皮質素釋放因 子一 2受體（CRF2R)之促皮質素釋放因子（CRF) 受體激動劑（非-選擇性C R F R激動劑）後，可阻斷及 /或抑制骨骼肌萎縮模型中除神經，廢用或地塞米松治療 所引起之骨骼肌萎縮誘導效應。此外，資料顯示C R F R 激動劑在促皮質素釋放因子一 2受體（C R F 2 R )基因剔 除鼷鼠體內不會顯示此抗萎縮效應。而且，於其中 C R F i R促成性Η P A軸已藉由腎上腺之移除（腎上腺切 除手術）而中斷之鼠中，以非-選擇性C R F R激動劑治 療這些動物能顯現抗萎縮效應，由此可知促皮質素釋放因 子一 2受體（C R F 2 R )可促成抗萎縮效應。此外，結果 證實非-選擇性C R F R激動劑之投服可顯現肥大誘導效 應。而且，這些資料顯示促皮質素釋放因子- 2受體（ C R F 2 R )於骨骼肌萎縮過程中之調節角色。 促皮質素釋放因子受體（C R F R )於活體內之特定 角色係使用藥學劑，沙維京（sauvagine ) ( Bachem Biosciences, Inc. King of Prussia, PA)及尿皮質素（ u r o c o r t i η ) ( B a c h e m B i o s c i e n c e s，I n c ·)進行硏究，彼等爲各 種骨骼肌萎縮模型中之促皮質素釋放因子受體選擇性激動 劑（述於下文中）。這些製劑已充分特徵化且述於科學文 獻中。 圖1 - 7及9顯示，實驗之結果證實促皮質素釋放因 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（210Χ297公釐） -29- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7_五、發明説明（27 ) 子受體選擇性激動劑之投服在統計上可顯著地抑制骨骼肌 萎縮。圖8顯示促皮質素釋放因子受體（C R F R )激動 劑，沙維京（sauvagine )，之抗 萎縮效應係經由促皮質素 釋放因子一 2受體（C R F 2 R )所促成。C R F R激動劑 每日兩次地與磷酸二酯酶抑制劑，茶鹼，結合投服，將導 致骨骼肌萎縮動物模型中之骨骼肌萎縮抑制作用。茶鹼之 加入係欲增強C R F R激動劑之作用期限及強度，因而使 這些化合物之功效增加。單獨投服茶鹼妗這些萎縮模型中 則不具效應，證實C R F R激動劑與茶鹼結合之抗萎縮效 應係由於C R F R激動劑之效應所致。此外，於茶鹼之缺 乏下經由滲透迷你泵連續投服C R F R激動劑，亦可抑制 骨骼肌萎縮及/或導致骨骼肌肥大。結果之統計顯著性係 使用 ANCOVA ( Douglas C. Montgomery，Design and Analysis of Experiments, John Wiley and Sons, New York (2 nd ed. 19 84))測定。圖1 — 9中之縮寫·· g —克；S E M —平均 値之標準誤差。 尤其，圖1顯示沙維凉（sauvagine )可抑制鼷鼠坐骨 神經除神經萎縮模型中之內側腓腸肌之除神經-誘導性萎 縮。說明：A -生理食鹽水（對照組）；B -沙維京（ 〇 · 01毫克/公斤）+茶鹼；C 一沙維京（0 · 03毫 克/公斤）+茶鹼；D -沙維京（〇 · 1毫克/公斤）+ 茶鹼；E -沙維京（1 · 〇毫克/公斤）+茶鹼；* —與鹽 水相比P ‘ 0 · 〇 5。右坐骨神經進行除神經後，將沙維 京以以上所指定之量或將載劑對照組（生理食鹽水）於中 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-30- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _____B7 _ 五、發明説明（28 ) 肩胛區處由皮下注射予雄鼷鼠達九天。沙維京乃與3 0毫 克/公斤毫克/公斤共投服。第九天時，將內側腓腸肌移 出並予稱重以測定萎縮程度。 圖2顯示沙維京（sauvagine )可抑制鼷鼠坐骨神經除 神經萎縮模型中之前脛肌之除神經-誘導性萎縮。說明： A -水（對照組）；B -沙維京（〇 . 1毫克/公斤/天 );C 一沙維京（〇 · 3毫克/公斤/天）；D -沙維京 (1 · 0毫克/公斤/天）；* —與水相比p$0 · 05。 右坐骨神經進行除神經後，將沙維京或載劑對照組（生理 食鹽水）藉使用Alzet滲透迷你泵以5微升/小時之速連續 輸注予雄鼷鼠直至實驗期終了爲止（無外加之茶鹼）。沙 維京之每日遞送劑量乃如同上文所指定。迷你泵之植入乃 於坐骨神經除神經之時進行。第九天時，將前脛肌移出並 予稱重以測定萎縮程度。 圖3證實沙維京（sauvagine )可抑制鼷鼠糖皮質激素 -誘導性萎縮模型中之前脛肌（圖3 A )及內側腓腸肌（ 圖3 B )之糖皮質激素一誘導性萎縮。說明：A -僅有水 而無地塞米松於飮水中（非萎縮型對照組B -水+地 塞米松（萎縮型對照組）；C 一沙維京（0 · 1毫克/公 斤/天）+地塞米松；D -沙維京（0 . 3毫克/公斤/ 天）+地塞米松；E -沙維京（1 · 〇毫克/公斤/天） +地塞米松；* 一與水相比p $ 〇 _ 〇 5 · # -與水+地塞 米松相比p ^ 〇 . 〇 5。將糖皮質激素，地塞米松，加至 飮水（1 · 2毫克/公斤/天）中後，將上文指定之製劑 本紙張尺度適用中.國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-31 - 1227780 A7 B7_ 五、發明説明（29 ) 或載劑對照組（生理食鹽水）藉使用Alzet滲透迷你泵以5 微升/小時之速連續輸注予雄鼷鼠直至實驗期終了爲止（ 無外加之茶鹼）。沙維京之每日遞送劑量乃如同上文所指 定。迷你泵之植入乃於地塞米松開始暴露之時進行。開始 投服沙維京後之第九天，將內側腓腸肌及前脛肌移出並予 稱重以測定萎縮程度。 圖4證實沙維京（sauvagine )可抑制前脛肌（圖4 A )及內側腓腸肌（圖4 B )之廢用一誘導性萎縮。此外， 沙維京之治療在未-造模之腿上可觀察到內側腓腸肌及前 脛肌之統計上顯著之肥大。說明：A -生理食鹽水（對照 組）；B -茶鹼；C 一沙維京（0 · 0 3毫克/公斤）+ 茶鹼；D -沙維京（〇 · 1毫克/公斤）+茶鹼；E -沙 維京（0 · 3毫克/公斤）+茶鹼；* 一與鹽水相比p S 〇· 0 5。將右後腿造膜後，將沙維足或將載劑對照組（ 生理食鹽水）以所指定之每日遞送劑量於中肩胛區處每日 兩次地由皮下注射予雄鼷鼠達十天。沙維京乃與每日兩次 由腹膜內給予之磷酸二酯酶抑制劑茶鹼（3 0毫克/公斤 )共同投服。第十天時，將內側腓腸肌及前脛肌移出並予 稱重以測定萎縮程度。 圖5證實沙維京（sauvagine )及尿皮質素（ur oc or tin ) 均可抑制鼷鼠坐骨神經除神經萎縮模型中之前脛肌之除神 經-誘導性萎縮。此外，使用尿皮質素 (u r 〇 c 〇 r t i η )治療亦 可觀察到未除神經之腿之肥大。說明·· A -水（對照組） ;B -沙維京（1毫克/公斤/天）；c 一尿皮質素（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -32- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _______^___ 五、發明説明（3〇 ) 1 · 0毫克/公斤/天）；* 一與水相比ρ^ο · 05。右 坐骨神經進行除神經後，將上文指定之製劑或載劑對照組 (生埋食鹽水）藉使用Alzet滲透迷你泵以5微升/小時之 ®連續輸注予雄鼷鼠直至實驗期終了爲止（無外加之茶鹼 )。製劑之每日遞送劑量乃如同上文所指定。迷你泵之植 入乃於坐骨神經除神經之同時進行。第九天時，將前脛肌 #出並予稱重以測定萎縮程度。 圖6證實尿皮質素（urocortin )可抑制鼷鼠腿造膜廢用 性萎縮模型中之前脛肌（圖6 A )及內側腓腸肌（圖6 B )之廢用-誘導性萎縮。說明·· A -生理食鹽水（對照組 );B -尿皮質素（〇 · 3毫克/公斤）+茶鹼；*一與鹽 水相比p S 0 . 〇 5。將右後腿造膜後，將尿皮質素或將 載劑對照組（生理食鹽水）於中肩胛區處每日兩次地由皮 下注射予雄鼷鼠達十天。尿皮質素係以圖6 A及6 B之說 明中所指定之劑量投服。尿皮質素乃與每日兩次由腹膜內 給予之磷酸二酯酶抑制劑茶鹼（3 0毫克/公斤）共同投 服。第十天時，將內側腓腸肌及前脛肌移出並予稱重以測 定萎縮程度。 圖7證實沙維京（sauvagme )可抑制前脛肌（圖7 A )，伸趾長肌（E D L )(圖7 B )，比目魚肌（圖7 C )及內側腓腸肌（圖7 D )之除神經-誘導性萎縮。此外 ，沙維京可導致未除神經之伸趾長肌產生統計上顯著之肥 大（圖7 B )。說明：A —生理食鹽水（對照組）；B -沙維京（0 · 0 0 3毫克/公斤）+茶鹼；C 一沙維京（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

- 33- 1227780 A7 B7 五、發明説明（3彳） 〇.〇 1毫克/公斤）+茶鹼；D —沙維京（〇 · 〇 3毫 克/公斤）+茶鹼；# 一與相關之對照組相比p $ 〇 . 〇 5 。右坐骨神經進行除神經後，將沙維京或載劑對照組（生 理食鹽水）以上文所示之量每日兩次地於中肩胛區處由皮 下注射予雄腎上腺切除鼠（腎上腺切除鼠乃用以移除 ΗΡΑ軸經由促皮質素釋放因子一 1受體（CRFiR)之 激動而活化所致之骨胳肌萎縮-誘導效應）達九天。沙維 京乃與30毫克/公斤茶鹼共同投服。第九天時，將前脛 肌，伸趾長肌，比目魚肌，內側腓腸肌及躕肌移出並予稱 重以測定萎縮程度。 圖8證實於鼷鼠坐骨神經除神經萎縮模型中，沙維京 (sauvagine )可抑制於野生型鼷鼠中所觀察到之萎縮，但 對C R F 2 R基因剔除鼷鼠者則無。說明：A — C -野生型 鼷鼠；D — F — C R F 2 R基因剔除鼷鼠。A及D -水（對 照組）；B及E —沙維京（〇 . 3毫克/公斤/天）；C 及F -沙維京（1 _ 〇毫克/公斤/天）；* 一與鹽水相比 P S 0 · 0 5。右坐骨神經進行除神經後，將沙維京或載 劑對照組以上文所指定之每日遞送劑量藉使用Alzet滲透迷 你泵以5微升/小時之速連續輸注予雌野生型及C R F 2 R 基因剔除鼷鼠達九天。第九天時，將前脛肌移出並予稱重 以測定萎縮程度。 圖9證實於鼷鼠腿造模廢用性萎縮模型中，沙維京（ sauvaghie )可抑制伸趾長肌及比目魚肌質量之廢用—誘導 性喪失（圖9 A )且藉由測量絕對力而估測得知可抑制肌 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -34- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _ B7__ 五、發明説明（32 ) 肉功能之喪失（圖9 B )。說明：A -未造模肌肉對照組 ;B -造模肌，鹽水對照組；C -造模肌，沙維京（ 0.3毫克/公斤）+茶鹼（30毫克/公斤）；*一與鹽 水相比p $ 〇 . 〇 5。將右後腿造膜後，將沙維京或將載 劑對照組（生理食鹽水）以上文所指定之劑量於中肩胛區 處每日兩次地由皮下注射予雄鼷鼠達十天。沙維京乃與 3〇毫克/公斤茶鹼共同投服。第十天時，將伸趾長肌及 比目魚肌移出，再進行絕對力及質量之測量以測定萎縮之 程度。 1Π .促皮質素釋放因子受體（CRFR s )，促皮質素釋 放因子（C R F )或促皮質素釋放因子（c R F )類似物 ，或表現促皮質素釋放因子受體（C _R F R s )之細胞系 C R F 1 R , C R F 2 R , CRF及CRF類似物可製 備以供各種不同之用途，包括，但不限定於，抗體之產生 ，用以作爲本發明篩檢分析法中之試劑，及用以作爲供治 療骨骼肌萎縮中之藥學試劑。熟知技藝者明暸，對本發明 之某些具體實施例而言，以純化之多肽最爲有用，而其它 具體實施例則以表現多肽之細胞系最爲有用。例如，在保 持C R F R之結構及功能特徵較爲重要之狀況下，例如在 鑑定可活化C R F R s之候選化合物之篩檢方法中，最好 使用可表現功能性C R F R s之細胞。 因爲C R F及C R F類似物爲短多肽，故熟練之技藝 者已知，這些多肽最便於使用技藝中詳知之技術藉直接合 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-35- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（33 ) 成法而非重組方式提供。此外，這些分子中有許多可由市 面獲得。 當C R F R s的來源爲表現多肽之細胞時，則細胞可 ，例如，內源地表現C R F R，予刺激以增加內源性 C R F R之表現或予遺傳工程化以表現C R F R。測定細 胞系是否可表現主流多肽之方法爲技藝中已知，例如，以 適當之抗體進行多肽之檢測，使用D N A探子以檢測編有 蛋白質密碼之m R N A (例如北方點墨法或聚合酶鏈鎖反 應技術）或測量製劑選擇性地結合至主流多肽之能力（例 如放射標記選擇性激動劑）。 使用重組D N A技術以製備C R F i R , C R F 2 R或 表現這些多肽之細胞系乃特別令人期待。此重組方法爲技 藝中所詳知。欲表現重組C R F i R或C R F 2 R，乃製備 於一或更多調節元素控制下之含有編有主流多肽密碼之核 酸之表現載體。編有來自一些品系中之C R F 111或 C R F 2R之基因組或c DNA序列業已述及且可由基因庫 (G e n b a n k )資料庫（可於 < h 11 p: / / w w w · η c b u · η 1 m. n i h · g 〇 v / > 獲 得）及德旺 （Derwent) 資料庫（可於 <http://www.derwent.co.uk/geneseq/index.html> 獲得）以及此 專利申請案之序列列表中輕易獲得。C R F : R及 C R F 2 R序列之登錄號及相關S E Q ID N〇S ·乃 示於表I中。使用此公然可得之序列資訊，一種離析編有 C R F 1 R或C R F 2 R密碼之核酸分子之方法爲以天然或 人工合成之D N A探子，使用技藝中詳知之方法，例如由 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-36- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ___B7_五、發明説明（34 ) 適當文庫中進行序列之聚合酶鏈鎖反應擴增作用，以篩檢 基因組D N A或c D N A文庫。另一種方法係使用對主流 之受體具專一性之寡核苷酸以直接由特殊組織（諸如骨骼 肌）中離析出之m R N A中進行c D N A之聚合酶鏈鎖反 應擴增。此離析之m R N A可由市面獲得。熟知技藝者亦 已知，藉使用相當於已知C R F R受體序列之部分之核酸 探子，則來自其它品系之同源c D N A s或基因組序列可 使用已知之方法獲得。本發明中特別有用者爲來自品系包 括，但不限定於，人類，鼷鼠，鼠，豬，猴，黑猩猩，狨 猴，狗，母牛，綿羊，貓，雞及火雞中之CRFR受體。 藉由技藝中詳知之方法，繼而將已離出之編有主流 C R F R密碼之核酸分子連接至適當之表現載體中。所製 得之表現載體乃於宿主細胞中表現，而表現受體之宿主細 胞乃直接用於篩檢分析法中，或者將受體由表現受體之宿 主細胞中離析出，再將離析出之受體用於篩檢分析法中。 可供本發明目的用之宿主-表現載體系統包括，但不 限定於：微生物諸如以含C R F R核苷酸序列之重組噬菌 體DNA，質粒DNA，或噬菌體—質粒複合（cosmid) D N A表現載體轉化之細菌（例如大腸桿菌，枯草桿菌） ;以含C R F R核苷酸序列之重組酵母菌表現載體轉化之 酵母菌（例如酵母屬，赤酵母屬）；以含C R F R核苷酸 序列之重組病毒表現載體（例如杆狀病毒）侵染之昆蟲細 胞系統；以含C R F R核苷酸序列之重組病毒表現載體（ 例如花椰菜花葉病毒，煙草花葉病毒）侵染或重組質粒表 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-37- 1227780 A7 B7 五、發明説明（35 ) 現載體（例如T i質粒）轉化之植物細胞系統；或懷有含 有由哺乳類細胞之基因組中所衍出之啓動子（例如金屬硫 因啓動子）或由哺乳類病毒中所衍出之啓動子（例如反錄 病毒L T R )且亦含有C R F R核苷酸序列之重組病毒表 現架溝之哺乳類細胞系統（例如 C〇S，CH〇，HEK293, NIH3T3)。 宿主細胞乃用以製造主流之多肽。因爲C R F R爲膜 結合性分子，故其係由宿主細胞膜中純化出或者C R F R 使用時係固著於細胞膜中，亦即使用整個細胞或使用細胞 之膜部分。C R F R s由此表現系統中之純化作用或加富 作用係使用適.當之去垢劑及脂肪微膠粒藉技藝中詳知之方 法完成。 細菌系統中，可依待表現基因產物所欲之用途而有利 地選擇一些表現載體。例如，當大量地製造此蛋白質以供 生成C R F R s之抗體時，則期望能指引蛋白質產物高度 表現之載體，熟知技藝者可生成此些載體架構且可藉各種 不同之方法包括選擇性純化技術諸如融合蛋白質選擇柱及 抗體柱，以及非-選擇性純化技術將蛋白質純化。 昆蟲蛋白質表現系統中，杆狀病毒苜蓿銀紋夜蛾顆粒 體病毒（A c N P V )乃用以作爲載體以表現秋粘蟲顆粒 體病毒細胞之外來基因。此事例中，乃將C R F R核苷酸 序列選殖至病毒之非-必要區域中並置於A c N P V啓動 子之控制之下。重組病毒乃繼而用以侵染可表現所插入基 因之細胞中，再將蛋白質藉熟知技藝者已右之許多技術中 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -38- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 __ B7五、發明説明（36 ) 之一種技術予以純化。 哺乳類宿主細胞中，可使用一些以病毒爲基底之表現 系統。這些表現系統之利用通常需要於載體中創造特殊之 起始訊息以供所插入核苷酸序列之充分轉譯。此點在當所 用之C R F R基因部分不含有內源性起始訊息時特別重要 。此起始訊息之放置（於含有所插入核苷酸序列密碼區域 之骨架中），以及轉錄及轉譯增強元素之添加及重組蛋白 質之純化，可藉技藝中已知之許多方法中之一種方法達成 。哺乳類宿主細胞中亦重要的是要選擇適當之細胞型式， 此細胞型式能夠進行重組蛋白質之必要轉譯後修飾作用。 此修飾作用，例如，裂解，磷酸化，糖苷化等，需要選擇 含有修飾酵素之適當宿主細胞。此些宿主細胞包括，但不 限定於，CH〇，HEK293，NIH3T3，COS等，且爲熟知技藝者 已知。 欲供重組蛋白質之長期，高度表現，以安定之表現較 爲理想。例如，可將可安定表現C R F R s之細胞系予以 工程化。熟知技藝者，在進行已知之方法諸如電穿孔法， 磷酸鈣轉染法，或脂質體轉染法後，可生成可安定表現 C R F R s之細胞系。此通常係藉使用含有適當表現控制 元素（例如啓動子序列，轉錄終止序列，多腺苷酸化位， 轉譯起始位等），可選擇性標記，及主流基因之表現載體 將細胞轉染而完成。可選擇性標記可如同主流基因一樣地 含於相同之載體內，或於另一載體上，而與含有CRFR 序列之載體共轉染。表現載體中之可選擇性標記可提供對 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁}

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -39- 1227780 A7 B7 五、發明説明（37 ) 選擇性之抗性且可令細胞安定地將載體整合至其染色體中 並成長以形成灶，繼而可予選殖並擴展成細胞系。另外， 表現載體可利用標記之物理特性而得以令表現選擇性標記 之細胞進行選擇，亦即綠色螢光蛋白質（G F P )之表現 得以利用螢光活化性細胞分類分析法（F A C S )令表現 標記之細胞進行選擇。 熟知技藝者可選擇供轉染用之適當細胞型式以得以令 主流基因已成功整合進入之細胞進行選擇。例如，當可選 擇性標記爲單純疱疹病毒胸腺核苷激酶，次黃質-鳥嘌呤 磷酸核糖苷轉移酶或腺嘌呤磷酸核糖苷轉移酶時，適當之 細胞型式分別爲t k 一，h g p r t —，或a p r t —細 胞。或者可使用正常之細胞且其中之可選擇性標記爲 dhfr， gpt， neo或hygro，彼等分別可提 供對胺甲蝶呤，黴酚酸，G - 1 4 8或潮黴素之抗性。此 重組細胞系乃有用以供鑑定可影響C R F R活性之候選化 合物。 W 0 F R抗體之製備 可選擇性地認知C R F R之一或更多表位之抗體亦涵 蓋於本發明中。此些抗體包括，例如，多株抗體，單株抗 體，嵌合型抗體，人類抗體，單鏈抗體，Fab片段， F ( a b ) 2片段，，使用f a b表現文庫所製之分子， 於基因轉殖鼷鼠中所製之人類抗體（多株或單株）及上述 任一者之表位結合性片段。供醫療用途方面，以嵌合型或 本紙張國國家冗（CNS) Α4·210χ29^α ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -40- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _ _ B7五、發明説明（38 ) 人類抗體較理想；又以人類抗體最爲理想。 抗體可與本文所述之化合物篩檢方案結合使用以供估 測測試化合物，例如，供C R F R多肽之固定，或者此些 抗體可與基因醫療技術結合使用以估測，例如， C R F R s於細胞中或直接於已有這些基因置入之病患組 織中之表現。此外，本發明之抗體乃有用以治療骨骼肌萎 縮。對C R F R具選擇性之抗體可藉本發明之方法篩檢以 鑑定出作爲C R F R激動劑之副組抗體。此外，對抗對 C R F或C R F類似物具專一性之抗體所生成之抗-個體 基因型抗體可有用以作爲C R F R激動劑，而類抗-C R F R抗體可藉本發明之方法篩檢其活化C R F R之能 力。 供抗體之製造方面，各種宿主動物可藉技藝中詳知之 方法以C R F R，C R F或C R F類似物，抗一 C R F抗 體，抗- C R F類似物抗體，或其致免疫性片段予以免疫 。供製備抗-個體基因型抗體方面，免疫原爲抗-CRF 抗體或- C R F類似物抗體。抗-個體基因型抗體之製造 乃述於，例如，美國專利第4，6 9 9， 8 8 0中，其乃 倂入本文中以供參考。適當之宿主動物包括，但不限定於 ，兔，麗鼠，山羊，綿羊及馬。免疫技術爲技藝中已a羊知 。多株抗體可由致免疫之動物之血淸中純化，或者單株抗 體可藉技藝中詳知之方法生成。這些技術包括，但不限定 於，Kohlr及Mi Is tin之已詳知之雜種瘤技術，人類B -細 胞雜種瘤技術及E B V雜種瘤技術。單株抗體可具有任何 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-41 - 1227780 A7 B7五、發明説明（39 ) 之免疫球蛋白類，包括含有/c或λ輕鏈之I g G， I g E ，IgM，IgA，及 IgD〇 因爲非-人類抗體於人類中之致免疫性，故當用在醫 療上供人類病患之治療時，嵌合型抗體優於非-人類抗體 。製造及使用嵌合型抗體技術爲技藝中已知且述於，例如 ，美國專利第5， 807， 715;4， 816， 397 ;4，816，5 6 7 ； 5 , 5 3 0, 1 0 1； 5，585，0 8 9 ； 5 , 693，7 6 1； 5，693，7 6 2 ； 6 , 180，37 0;及 5，8 2 4，3 0 7號中，所有均倂入本文中以供參考。 完全之人類抗體特別適於醫療上供治療人類病患，因 爲彼等比起嵌合型抗體或非-人類抗體較不具致免疫性。 此些抗體可使用實質上不可表現內源性免疫球蛋白重及輕 鏈基因，但可表現人類重及輕鏈基因之基因轉殖鼷鼠中製 得。將基因轉殖鼷鼠依正常型式以經選定之抗原，例如所 有或一部分之C R F 2R予以免疫。引導對抗抗原之單株抗 體係使用慣用之雜種瘤技術由這些經免疫之基因轉殖鼷鼠 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 第 利， 專 7 國 7 美 8 於， 述 5 細·’ 詳 9 乃 9 術 2 技， 此 4 〇 7 得 8 獲， 中 5 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

9 3 ο U二 雜 ， 由 5 接 7 直 ο 種,一 6 另 及。 ; 考 9 參 2 供 4 以 ，中 ο 文 7 本 7 入 ，，倂 5 5 均 6 5 2 8 6 6

r*H 有得 所獲 ， 中 中胞 號細 1 瘤 8 種 重古冋 排有 重然 爲既 作。 以作 用操 可因 胞基 細或 瘤現 種表 雜之 ，續 中接 法供 方以 之源 白來 蛋之 球灶 疫鏈 免輕 類及 人鏈 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -42- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 __B7五、發明説明（40 ) 濃度之m R N A s可得，故基因由此製造抗體之細胞中離 析之作用爲直接易做的。所復收之重排灶可依所期望予以 操作。例如，恆定區域可消除或換成不同之同功型，而可 變區域可予連鎖以編有單鏈F v區域之密碼。此技術乃述 於贾〇 96/33735及W096/34096中， 所有均倂入本文中以供參考。 V ·測試化合物之潠擇 可根據本發明法篩檢之化合物包括，但不限定於，已 知化合物之文庫，包括天然產物，諸如植物或動物萃，合 成化學品，生物學活性物料包括蛋白質，肽諸如可溶性肽 ，包括但不限定於任意肽文庫及由D -及L -構型胺基酸 ，磷肽（包括，但不限定於，任意或部分簡并，定向磷肽 文庫），抗體（包括，但不限定於，多株，單株，嵌合型 ，人類，抗一個體基因型或單鏈抗體，及Fab， F ( a b ’ ）2及F a b表現文庫片段，及其表位結合性片 段），有機及無機分子所組成之組合化學衍生性分子文庫 中之成員。 除了較傳統之測試化合物來源外，電腦模擬及搜尋技 術允許化合物藉使用由C R F R配位體結合位或由已鑑定 出之C R F R s激動劑中所得之結構資訊進行理性選擇。 測試化合物之此理性選擇可降低爲求鑑定候選醫療化合物 所必需篩檢之測試化合物數目。C R F R s爲G P C R s ，故有關C R F R蛋白質序列之知識要思及可用以篩檢潛 (請先閱讀背面之注意事項存填寫本頁)

本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -43 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 __B7五、發明説明（41 ) 在配位體之其結合模型之生成。此法可藉數種技藝中詳知 之方式完成。略言之，最健全之方法包括生成CRFR序 列之序列比對至模板（由細菌-視紅紫或視紅紫結晶結構 或其它G P C R模型中衍出）上，將胺基酸結構轉換，再 藉分子力學及目視檢查將模型精製。如果不能得到強序列 比對，則模型亦可藉建構疏水性螺族構型之模型而生成。 彼等可繼而藉將彼此有關之每一個螺族構型由已知視紅紫 結構之一般配置開始進行旋轉及轉譯而安裝一起。指明殘 基-殘基接合作用之突變資料亦可用以將彼此有關之螺族 構型定位，故能達成接合作用。此過程期間，將已知配位 體對接至螺族構型內之結合位穴中之作用亦可藉發展出可 安定配位體結合作用之交互作用而用以協助螺族構型之定 位。模型可藉使用分子力學進行精製及使用標準同源性模 擬技術進行分子內及分子外迴帶之迴帶建構作用而完成。 有關G P C R結構及模擬之一般資訊可見於Schoneberg，T. et al.，Molecular and Cellular Endocrinology, 151:181-193 (1999)， Flower, D.， Biochimi ca et Biophy sica Acta, 1422:207-234 ( 1 999)，and Sexton, P.M.，Current Opinion in Drug Discovery and Development, 2(5):440-448 (1999) ° 一旦模型完成後，其可與數種現存之電腦程式中之一 種結合使用以減少藉由本發明篩檢法所待篩檢之化合物數 目。這些中最常使用者爲 DOCK程式（1103?1^(^(：111&1· Design Institute, 5 33 Parnassus Ave, U-64? Box 0446, San Francisco，California 94143-0446)。在其數種變化中，其可 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -44- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 ^_ B7_ 五、發明説明（42 ) 篩檢商業及/或專利化合物之資料庫之有關對結合位之空 間適合性及粗略靜電互補性。吾人時常發現，計分充分在 DOCK範圍內之化合物有較佳之機會成爲配位體。可予使用 之另一程式爲 FLEXX ( Tripos Inc·，1 699 South Hanley Rd.， St. Louis，Missouri，63144-2913(www.tripos.com))。此程式 ，顯著較慢，通常限制在經由較小之化合物資料庫進行之 硏究。FLEXX內之計分方案較爲詳盡且通常在結合力方面 可得到比DOCK更佳之估測。FLEXX最適於用以確認DOCK 之建議，或用以檢測由已知配位體或模板所組合生成之化 合物文庫。 VI .鑑定供調節骨骼肌質景或功能之候選化合物之篩掄分 析法 C R F 2 R在調節骨骼肌萎縮上扮演角色之發現使得各 種不同之篩檢一或更多種測試化合物以鑑定出最終可用以 預防或醫療治療骨骼肌萎縮之候選化合物之方法產生。本 發明係提供篩檢測試化合物之結合至C R F 2 R上，活化 CRF2R，延長或增大CRF2R或CRF2R訊息傳遞 路徑之激動劑一誘導性活化作用或增加C R F 2 R或C R F 基因表現之能力之方法。 因爲CRFsR及同源性蛋白質，故預料 有某些比例之C R F 2 R之激動劑亦可充作c R F i R之激 動劑。如上所討論，C R F i R之活化可誘導Η P A軸之活 化作用及伴隨皮質類固醇之產生。在大部分之期望增加肌 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -- -45- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 B7 五、發明説明（43 ) 肉質量或功能之事例中，並不期望使Η P A軸活化。因此 ，除了篩檢測試化合物之活化C R F 2 R之能力外，本發明 亦提供使用C R F 2 R及C R F i R以篩檢C R F 2 R之選 擇性激動劑。當選擇有用以供治療急性或慢性肌萎縮（其 與肌失養症無關）之候選化合物時，候選化合物最好對 C R F 2 R具選擇性。候選化合物顯現對C R F 2 R之選擇 性最好爲對C R F i R者之1 0倍（亦即對C R F 2 R比對 C R F 1 R 1 0倍有效），尤其1 0 0倍選擇性，以 1 0 0 0倍或更高倍選擇性最佳。已公布之硏究已證實皮 質類固醇療法在治療肌失養症上之優勢，故c R F 2 R激動 劑當用以治療肌失養症時，最好保留一些程度之C R F i R 激動作用。因而在供治療肌失養症方面，在類似之濃度範 圍下，以可活化C R F 2 R以及C R F i R之具較低選擇性 之化合物較理想。此候選化合物對C R F 2 R之選擇性最好 爲對C R F i R者之1 0 0倍，尤其1 0倍選擇性，以對 C R F 2 R及對C R F i R不具選擇性最佳（亦即候選化合 物對C R F 2 R及對C R F i R之效力實質類似）。而且， 既然如此，故化合物最好爲C R F 2 R之完全激動劑，同時 爲C R F i R之部分激動劑。因此此候選化合物對供肌萎縮 用之最大程度之氫基可體松增加及潛能具有內置之限制， 而經由C R F 2 R所促成之抗-萎縮效應可藉由增加劑量而 增強。熟知技藝者可輕易使用技藝中已知之方法測知候選 化合物是否爲C R F i R或C R F 2 R之完全或部分激動劑 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -46- 1227780 A7 B7 五、發明説明（44 ) J衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 供篩檢最終用以經由C R F 2 R而調節人類之骨骼肌質 量或功能之化合物方面，初始之試管內篩檢最好係使用 C R F 2 R進行且此C R F 2 R所具有之胺基酸序列乃與 SEQ ID NO ·· 1〇有80%以上之同一性且更尤 其與SEQ ID NO . 1〇有90%以上之同一性。 測試化合物最好利用人類，鼷鼠或鼠之C R F 2 R進行篩檢 ，以利用人類進行者最佳。供篩檢最終用以經由C R F 2 R 以調節非-人類品系之骨骼肌質量或功能之化合物方面， 最好使用來自欲治療之品系中之C R F 2 R。 供篩檢測定測試化合物或候選化合物對C R F i R之效 力之程度以測知候選化合物對C R F 2 R及對C R F i R之 選擇性爲何方面，初始之篩檢最好使用C R F i R進行且此 CRFiR所具有之胺基酸序列乃與SEQ ID NO:

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2有80%以上之同一性且更尤其與SEQ ID Ν Ο :2有9 0 %以上之同一性。測試化合物最好利用人類， 鼷鼠或鼠之C R F i R進行篩檢，以利用人類進行者最佳。 供篩檢最終用以調節非-人類品系之骨骼肌質量或功能之 化合物方面，最好使用來自欲治療之品系中之C R F i R。 本發明法適於高生產量之運用；然而，於方法中使用 少至一種之化合物亦涵蓋在所謂”篩檢”內。藉本發明法 所測定之可結合至C R F 2 R上，活化C R F 2 R，延長或 增大C R F 2 R或C R F 2 R訊息傳遞路徑之激動劑一誘導 1生活化作用或增加C R F 2 R或C R F基因表現之測試化合 物，在本文中乃稱爲”候選化合物”。此候選化合物可用 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -47- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 B7五、發明説明（45 ) 以調節骨骼肌質量或功能。然而，更典型之第一層級之試 管內篩檢係提供可選擇較窄範圍之化合物，亦即候選化合 物，之方法，其應於另一層級之篩檢中進行更進一步之研 究。熟知技藝者已知，本發明之用途係欲由一或更多之測 試化合物中鑑定出可供更進一步硏究之亞組化合物。熟知 技藝者亦已知，本發明之分析法乃有用以將特定候選化合 物相對於其它候選化合物之可能用途加以分等。例如，可 於1 0 0 0 η Μ下（但不於1 0 η Μ下）活化C R F 2 R之 化合物比於1 0 η Μ下可活化C R F 2 R者較不令人注目。 使用此資訊，熟知技藝者可選擇出亞組之候選化合物（於 第一層級之篩檢中鑑定出）以供更進一步之硏究。舉例而 言，可於小於2 0 0 η Μ之濃度下活化C R F 2 R之化合物 可更進一步於骨骼肌萎縮之動物模型中測試，然而超過此 閾値者則不再進一步測試。熟知技藝者亦已知，依所選擇 之化合物爲何，及依所選擇之陽性物爲何而定，僅有某些 比例之測試化合物經鑑定可作爲候選化合物，且此比例極 小。 下述之分析系統可調配至含有C R F 2R或含有表現 C R F 2 R之細胞之套組中，彼等可包裝在各種容器例如管 瓶，管，微滴定孔盤，瓶等容器內。其它試劑可含在不同 之容器中且裝配成套組，例如陽性對照組，陰性對照組， 緩衝液及細胞培養基。 一具體實施例中，本發明係提供篩檢一或更多之測試 化合物以鑑定可結合至C R F 2 R上之候選化合物之方法。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝·

、1T

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -48 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _ B7 __ 五、發明説明（46 ) 通常，分析法乃包括將C R F 2 R之來源與已知可結合至受 體上之標記化合物，於測試化合物之存在或缺乏下保溫， 再測定已結合之標記化合物之量之步驟。C R F 2 R之來源 可爲本文已述之表現C R F 2 R之細胞或一些離析之 C R F 2 R形式。標記化合物可爲已標記之C R F或C R F 類似物使其可予測量，最好定量地測量（例如1 2 5 I -標 記，銪一標記，螢光素一標記，G F P標記，3 5 S -蛋胺 酸標記）。此標記之方法爲技藝中所詳知。結合至 C R F R上之測試化合物將導致結合至受體上之標記配位 體之量降低，因而與對照組樣品（缺乏測試化合物）相比 之下之訊息値降低。此技術之變化業已述及，其中，於G -蛋白質非偶合劑之存在及缺乏下之受體結合作用可區分 激動劑及拮抗劑（例如於鳥嘌呤核苷酸類似物亦即 GpppNHp之缺乏及存在下之結合作用）。參見Keen，M.， Radioligand Binding Methods for Membrane Preparations and Intact cells in Receptor Signal Transduction Protocols, R.A.J. Challis，（ed)，Humana Press Inc., Totoway N. J. ( 1997) 〇 因爲期望將可專一地結合至C R F 2 R上之化合物與結 合至C R F 1 R上者區分，故上述分析法必需使用僅可表現 C R F 2 R之細胞或細胞之膜進行，或者分析法可使用 C R F 2 R之重組來源進行。表現兩種C .R F R形式之細胞 可使用同源重組作用將.C R F 1 R基因予以鈍化或另予失能 而修飾。另外，如果C R F R之來源含有一個以上之 C R F R形式，則非主流之受體所產生之背景訊息必需由 本紙張尺度適用ϋ國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' " ~ -- -49- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1227780 A7 __ _B7 _ 五、發明説明（47 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 分析所得之訊息中扣除。背景反應可藉一些方法包括使用 反義，抗體或選擇性激動劑以消除來自非主流之C R F R 所產生之背景訊息而測定。 。已知之C R F R拮抗劑包括抗阿拉明（antalaninn ) (C R F ! R選擇性），抗沙維京一 3 0 ( C R F 2 R選擇 性），及阿斯崔辛（astressin)(對 C R F 1 R / C R F 2 R 不 具選擇性）。 另一具體實施例中，本發明提供篩檢測試化合物以鑑 定出可活化C R F2R及/或C R F iR之候選化合物之方 法。通常，分析法係以細胞爲基底；然而，不含細胞而可 如上所述地區分激動劑及拮抗劑結合作用之分析法亦已知 。以細胞爲基底之分析法包括將可表現C R F i R或 C R F 2 R之細胞與測試化合物或對照組接合，及藉測量 C R F R訊息傳遞路徑組份之表現及活性而測知C r f R 之活化作用之步.驟。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 如同上示背景文節中所述，C R F R s似乎可經由數 種不同之路徑包括依細胞型式使用G « Q或G a i偶 合，C R F R之激動劑活化作用經認爲可使受體經由這些 路徑中之任一種路徑而發出訊息，惟必要之路徑組份乃存 在於特定之細胞型式中。故，欲篩檢C R F R之活化作用 ，分析法可使用任何訊息傳遞路徑作爲讀出，即使供治療 之相關細胞型式於活體內係經由不同路徑將C R F R f禺合 至骨骼肌萎縮上亦然。熟知技藝者已知，篩檢分析法乃有 效以鑑定出有用之C R F R激動劑，其乃無關於測量受體 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） -50- 1227780 A7 _B7 五、發明説明（48 ) 活化作用所經之路徑。供測量這些訊息路徑活化作用之分 析法爲技藝中已知。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 例如，與測試化合物接合後，可製得細胞之溶胞產物 並用以分析c AMP之誘導作用。c AMP係因應於 活化作用而誘導。因爲G 〇： 1被C R F R以外之受體所活化 且因爲測試化合物可藉由C R F R s或藉其它機轉而展現 其效應，故需兩種對照比較以測定測試化合物是否可經由 C R F R之活化作用而增加c A Μ P之濃度。一種對照法 係將與測試化合物接合後之細胞c A Μ Ρ濃度及與對照化 合物（亦即載劑且其中之測試化合物已予淸除）接合後之 細胞c A Μ Ρ濃度相比較。如果測試化合物相對於對照化 合物之下，可增加c A Μ Ρ濃度，則表示測試化合物可經 由某些機轉而增加c A Μ Ρ。另一對照法係將表現 C R F R之細胞系與實質上相同但不表現c R F R之細胞 系之c A Μ Ρ濃度相比較（此兩種細胞系均已以測試化合 物處理）。相對於不表現C R F R之細胞系之下，如果測 試化合物可增加表現C R F R之細胞系中之c A Μ Ρ濃度 ，則表示測試化合物可經由C R F R s之活化作用而增加 c A Μ Ρ。 本發明之特殊具體實施例中，c A Μ Ρ誘導作用係使 用含有c AMP感應元素之D ΝΑ構體（已連接至任何可 置入表現C R F R之細胞中之報導基因上）測量。這些報 導基因包括，但不限定於，氯黴素乙醯轉移酶（C A T ) ，蟲螢光素酶，葡萄糖醛酸合成酶，生長激素，螢光蛋白 本矣氏張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐1 _ -51 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _ B7五、發明説明（49 ) 質（例如綠色螢光蛋白質），或鹼性磷酸酶。將細胞暴露 至測試化合物後，報導基因表現之程度可予定量以測定測 試化合物增加c A Μ P之能力，因而測知測試化合物活化 C R F R之能力。 有用於此分析法中之細胞與上述C R F R結合分析法 中所用者相同，惟活化作用分析法中所用之細胞所表現之 功能性受體最好可對C R F或一或更多C R F類似物產生 統計上顯著之反應。除了使用可表現全長C R F R s之細 胞外，細胞可予工程化以使所表現之C R F R s含有偶合 至，或物理修飾成含有，報導元素或與訊號傳遞蛋白質交 互作用之配位體結合性結構域。例如野生型C R F R或 C R F R片段可融合至G -蛋白質上，而於激動劑結合至 融合蛋白質之CRFR部分上後，可導致融合G—蛋白質 之活化作用。（Siefert，R. et al·，Trends Pharmacol. Sci. 20: 3 8 3-3 89( 1 999))。細胞最好亦必需具有一些特徵（依讀出 而定）以使C R F或C R F類似物所致之誘導反應增至最 大，例如，以供檢測C R E報導基因之強力誘導作用；以 (a )低天然濃度之c A Μ P ; ( b )可與C R F R s交 互作用之G蛋白質；（c )高活性之腺苷酸環化酶；（d )高活性之蛋白.質激酶A ;( e )低活性之磷酸二酯酶； V 及（f )高濃度之c A Μ P感應元素結合性蛋白質較爲理 想。欲增加對C R F或C R F類似物之反應，宿主細胞必 需予以工程化以表現較大量之合適因子或較小量之不合適 因子。此外，供誘導C R Ε報導子之其它路徑可予消除以 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） -52- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 ____B7五、發明説明（5〇) 降低基礎値。 某些狀況下，長期暴露至激動劑後，g蛋白質-偶合 性受體反應乃沉澱下來，或者變得不敏感，本發明之另一 具體實施例係提供鑑定可延長或增大C R F 2 R或 C R F 2 R訊息傳遞路徑之激動劑一誘導性活化作用（因應 於C R F 2 R激動劑）之化合物之方法。此些化合物可，例 如，與C R F 2 R激動劑結合使用以治療骨骼肌萎縮。方法 通常係使用以細胞爲基底之分析法。其包含以任何次序或 同時進行之下列步驟：（i )將細胞與測試化合物接合； (ϋ )將表現功能性C R F 2 R之細胞以c R F 2 R激動劑 於足以令受體脫敏之激動劑濃度及激動劑-受體暴露時間 下處理；其後（迅）測定C R F 2 R之活化程度。熟知技藝 者已知，某些機轉乃促成受體之脫敏，包括，但不限定於 ，受體磷酸化作用，受體吞噬作用或降解作用及C R F R 訊息傳遞路徑下向調節作用。熟知技藝者已依所針對之脫 敏機轉而決定供將細胞與測試化合物接合之適當時間（亦 即激動劑處理之前，之期間或之後）。例如，細胞與測試 化合物之接合如在激動劑處理之後進行，則可檢出可阻斷 因受體之磷酸化作用所發生之受體脫敏作用之測試化合物 〇 另一具體實施例中，本發明係提供篩檢一或更多種測 試化合物以鑑定出可調節c R F 2 R基因中之轉錄作用或調 節C. R F 2 R表現之候選化合物之方法。可調節C R F 2 R 基因中之轉錄活性之候選化合物可使用在運作上與 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂

-53 - 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（51 ) c R F 2 R調節區相關之報導基因（報導基因構體）鑑定。 此方法爲技藝中已知。一種此法係將報導基因構體與測試 化合物於細胞因子來源之存在下接合，再測定報導基因表 現之程度。與對照組樣品相比之下，、可導致表現程度增加 之測試化合物則顯示爲可增加C R F 2 R基因轉錄作用之候 選化合物。欲提供試管內或活體內轉錄作用所需之細胞因 子，乃由可正常表現CRF2R之任何細胞型式中製備適當 之細胞或細胞萃。 調節C R F 2 R表現之候選化合物亦可於下列方法中鑑 定出，此法係將細胞與測試化合物接合，再測定C R F R 之表現。將測試化合物存在下之C R F 2 R之表現程度與測 試化合物缺乏下之表現程度相比較。可增加C R F 2 R表現 之測試化合物經鑑定爲供增加肌肉質量或肌肉功能之候選 化合物。此法可檢出可增加C R F 2 R之轉錄或轉譯或可增 加m R N A或C R F 2 R蛋白質安定性之候選化合物。 另一具體實施例中，本發明係提供篩檢一或更多種測 試化合物以鑑定出可調節C R F或C R F類似物之表現之 候選化合物之方法。此分析法基本上乃如同上述供鑑定可 調節C R F R s表現之候選化合物之分析法進行，並加上 下列之修飾。欲鑑定出可調節C R F基因或C R F類似物 基因之轉錄作用之候選化合物，報導基因在運作上乃與主 流之C R F基因或C R F類似物基因相關且細胞因子之來 源必需來自可表現主流基因之細胞型式中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) β 、1Τ

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ29<7公釐） -54- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 ___B7 —_五、發明説明（52 ) 现.使用骨骼肌萎縮模型谁行之_候選化」合物之篩檢 藉上述試管內分析法由一或更多測試化合物中所擇出 之候選化合物可更進一步測試其於骨骼肌萎縮及/或肥大 之模型系統中之調節骨骼肌質量或功能之能力。此骨骼肌 萎縮或肥大之模型包括試管內之細胞培養物模型及活體內 之骨骼肌萎縮模型。此另外層級之篩檢乃有用以更進一步 縮小供進行另加硏究，例如臨床試驗，之候選化合物之範 圍。 肌萎縮之細胞培養物模型 試管內之肌萎縮模型爲技藝中已知。此模型乃述於， 例如，Vandenburgh，H.H.，In Vitro 24:609-6 1 9 ( 1 988)， V andenburgh, Η.H. e t al.，J of Biomechanics，24 Suppl 1:91-99 (1991), Vandenburgh, H.H. et al.? In Vitro Cell. Dev. Biol. 24(3):166-174 (1988)，Chromiak, J. A.，et al.，In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim.， 3 4(9):694-703 ( 1 998), Shansky, J.5 et al., In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim., 3 3 (9):65 9-66 1 ( 1 997), Perrone, C.E. et al.? J. Biol. Chem. 2 7 0(5):2099-2 1 06 (1 995), Chromiac, J.A. and Vandenburgh, H.H.， J. Cell. Physiol. 1 5 9(3):407-4 1 4 (1 994),及 Vandenburgh, H.H. and ICarlisch, P.3 In Vitro Cell. Dev. Biol. 25(7):607-6 1 6 ( 1 989)中。此候選化合物乃有用於（但 非必需）在上述試管內篩檢之後供更進一步縮小供進行動 物模型試驗之候選化合物之範圍。將細胞培養物模型以候 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4ϋ ( 210X297公羞） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-55- 1227780 A7 B7五、發明説明（53 ) 選化合物處理，再藉估測肌肉標記之變化諸如肌肉蛋白質 之合成或降解，骨骼肌質量或收縮功能之變化等而測量模 型對此處理之反應。可誘使肌肉標記產生顯著變化之彼些 化合物通常更進一步於骨骼肌萎縮之動物模型中進行篩檢 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 骨骼肌萎縮之動物模型 將候選化合物投服予非-人類之動物，再，例如，藉 估測萎縮或肥大之標記之變化諸如：骨骼肌質量，骨骼肌 功能，肌肉或肌纖維橫斷面面積，收縮蛋白質含量，非-收縮蛋白質含量或與骨骼肌質量或功能變化有關之生化或 遺傳標記等而監測動物之反應。可誘使骨骼肌肥大或預防 任何骨骼肌萎縮樣態之候選化合物將被視爲供治療人類骨 骼肌萎縮之預期醫療候選者，在本文中稱之爲候選醫療化 合物。除了估測候選化合物調節骨骼肌萎縮之能力之外， 不期望之副作用諸如毒性亦可於此篩檢中檢出。不存在不 可接受性副作用之條件可用以作爲供選擇候選醫療化合物 之另一標準。 有各種骨骼肌萎縮之動物模型爲技藝中已知，諸如於 下列參考資料中所述者：H e r b i s ο η，G. J.，e t a 1 · A r c h. P h y s. Med. Rehabil. 60:401-404 (1979)，Appell，H-J. Sports Medicine 10:42-58 (1990), Hasselgren, P-0, and Fischer, J.E. World J. Surg. 22:203-208 ( 1 998), Agbenyega, E.T. and Wareham, A. C. Comp. Biochem. Physiol. 1 02 A : 1 4 1 -1 45 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210><297公釐） -56- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 B7 五、發明説明（54 ) ( 1 992), Thomason, D.B. and Booth, F.W. J. Appl. Physiol. 68:1 - 1 2 ( 1 990), Fitts, R.H., et al. J. Appl. Physiol. 60:1946-1 9 5 3 ( 1 9 8 6)，B r a m a n t i，P.，e t a 1. I n t · J · A n a t · E m b r y o 1 · 1 03:45-64 ( 1 998), Cartee, G.D. J, Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 50:1 37- 14 1 (1995), Cork, L.C., et al. Prog. Clin. Biol. Res. 229:241-269 (1987), Booth, F.W. and Gollnick, P.D. Med. Sci. Sports Exerc. 15:415-420 (1983), Bloomfield, S.A. Med. Sci. Sports Exerc. 29:1 97-206 ( 1 997)。供這些模型用之 理想動物爲鼷鼠及鼠。這些模型包括，例如，廢用-誘導 性萎縮之模型諸如造模或其它方法之固定肢，後肢懸吊， 完整動物固定，及降低重力狀況。神經損傷誘導性萎縮之 模型包括，例如，神經壓傷，支配特定肌肉之神經片段之 切除，毒素之施用予神經及受病毒，細菌或真核細胞感染 源感染之神經。糖皮質激素-誘導性萎縮之模型包括萎縮 誘導性劑量之外源性糖皮質激素之施用予動物，及內源性 皮質類固醇製造之刺激；例如，藉投服可活化下視丘-腦 下垂體一腎上腺（Η P A )軸而刺激。敗血症-誘導性萎 縮之模型包括，例如，接種敗血症-誘導性生物體諸如細 菌，將動物以免疫-活化性化合物諸如細菌細胞壁萃或內 毒素處理，及腸壁之穿刺。惡病質-誘導性萎縮之模型包 括，例如，將動物接種上具有惡病質形成潛能之致腫瘤之 細胞，將動物感染上可導致惡病質之感染源（諸如導致愛 滋病之病毒）及將動物以可誘導惡病質之激素或細胞活素 諸如 C N T F，T N F , I L - 6 , I L — 1 處理。心臟 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-57- 1227780 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 __ B7五、發明説明（55 ) 衰竭-誘導性萎縮包括將動物處理以使心臟衰竭與骨骼肌 萎縮同時發生。神經變性疾病誘導性萎縮之模型包括自體 免疫動物模型諸如因將動物以神經元組份免疫所致者。萎 縮中之肌失養症-誘導性模型包括肌失養症之天然或人造 基因-誘導性模型諸如發生在Md X鼷鼠中之蛋白質失養 素（.dystrophin)基因之突變。 骨骼肌肥大之動物模型包括，例如，因爲對側肢之鈍 化而增加肢使用率，廢用性萎縮誘導性狀況後之再增重， 因短暫神經損傷而已萎縮之肌肉之再利用，因爲協同性肌 肉之鈍化所致之選擇性肌肉之使用率增加（例如代償性肥 大），因爲置於肌肉上之負載力增加所致之肌肉利用率之 增加及由於移除糖皮質激素誘導性萎縮後之糖皮質激素而 致之肥大之模型。理想之動物萎縮模型包括下列所更進一 步詳述之坐骨神經除神經萎縮模型，糖皮質激素誘導性萎 縮模型及腿造模廢用性萎縮模型。 坐骨神經除神經萎縮模型之步驟係將動物麻醉後，藉 由手術移出一短段之右或左坐骨神經，例如於鼷鼠中，先 將坐骨神經約於沿著股骨之中點處隔離，再移出3 - 5毫 米段。此下後肢肌肉組織之除神經乃導致這些骨骼肌之萎 縮。通常，股二頭肌之神經分佈仍保時完整以提供膝蓋令 人滿意之運動而供實質正常之移動。通常，在未經治療之 動物中，除神經肌肉之肌肉質量在除神經之十天後減少 3 0 - 5 0 %。除神經後，將測試化合物例如藉注射法或 連續輸注法，例如藉經由滲透迷你泵（例如，Alzet，Palo 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格i2l〇X 297公釐） — ' -58- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1227780 A7 _ B7 五、發明説明（56 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Alto，CA)之植入而投服，以測定彼等對除神經誘導性骨骼 肌萎縮之效應。於除神經後之各個不同時間，將動物安樂 死，快速由除神經及未除除神經之腿中切開下腿肌肉，再 將已淸除腱及結締組織之肌肉稱重。而後，例如，藉測量 肌肉質量，肌肉橫斷面面積，肌纖維橫斷面面積，或收縮 蛋白質含量而分析受影響肌肉之萎縮程度。 糖皮質激素-誘導性萎縮模型包括將糖皮質激素，例 如1 . 2毫克/公斤/天之地塞米松於飮水中，投服予測 試動物。通常，在未經治療之動物中，骨骼肌質量在地塞 米松投服之十天後減少3 0 - 5 0 %。在糖皮質激素投服 之同時或之後，將測試化合物例如藉注射法或連續輸注法 投服以測定彼等對糖皮質激素-誘導性骨骼肌萎縮之效應 。於糖皮質激素投服之後之各個不同時間，依上述供除神 經模型所用之法分析受影響肌肉之萎縮程度。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 腿造模廢用性萎縮模型包含將動物之一隻後腿由膝蓋 下至腳部予以造模。通常，肌肉質量乃在造模之十天後減 少2 0 - 4 0 %。造模後，將測試化合物藉注射法或藉經 由滲透迷你泵（例如Alzet，Palo Alto，CA )連續輸注而投服 以測定彼等對腿造模誘導性骨骼肌萎縮之效應。於腿造丰莫 後之各個不同時間，依上述供除神經模型所用之法分析g 影響肌肉之萎縮程度。 熟知技藝者已知，在供人類使用之化合物之篩檢φ ^ 因爲人類C R F 2 R與其它動物品系C R F 2 R間之差異， 故當使用非-人類之C R F 2 R進行篩檢時，可能有一 Μ -- |/iT>y 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -59- 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（57) 陽性或陰性之結果。故最好使用人類C R F 2 R進行初始之 試管內篩檢。某些狀況下，經鑑定之候選化合物僅對人類 受體具有活性但對非一人類受體則無。此狀況下，仍期望 測定這些候選化合物是否可以在第二層級之篩檢中調節骨 骨各肌質量或功能。因爲這些候選者不能活化非-人類之 c R F 2 R，故不建議使用以非-人類之動物進行之標準活 體內篩檢。此狀況下，供這些候選者用之第二級層級之篩 檢可於表現人類C R F R s之基因轉殖動物中進行。 任何品系之動物，尤其是晡乳類，包括，但不限定於 ，鼷鼠，鼠，兔，天竺鼠，豬，山羊，狗及非一人類之靈 長類均可用以生成C R F R基因轉殖動物。以鼷鼠及鼠較 理想，又以鼷鼠最理想。有各種不同之技術爲技藝中已知 且可用以將人類C R F R轉殖基因置入動物體內以產生基 因轉殖動物之創始者株系。此些技術包括，但不限定於， 前核顯微注射法，反錄病毒-促成性基因轉移至種系中， 於胚胎幹細胞中之基因標的法，胚胎之電穿孔法，及精液 -促成性基因轉移。 m .供治療骨骼肌萎縮之基因療法 C R F 2R之整體表現可藉過度表現適當組織中之 C R F 2 R基因（以增加C R F 2 R之表現）或結構活性 C R F 2 R而增加。C R F値可（於活體內）同樣地藉過度 表現C R F基因而增加、。這些基因之過度表現將增加總細 胞C R F 2 R活性，故而調節骨骼肌萎縮。主流基因乃插入 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、言

Γ

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公楚） -60- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _ B7 五、發明説明（58 ) 適於供病患表現之載體內。這些載體包括，但不限定於， 腺病毒，腺病毒相關性病毒，反錄病毒及疱疹病毒載體。 除了可將D N A置入細胞中之其它微粒（例如微脂粒，金 微粒等）外，亦可藉將含有主流基因之D N A表現載體直 接注射至人類組織（例如肌肉）中。 K ·製藥學組成物及用法 藉本文所述篩檢法而鑑定出之候選化合物或候選醫療 化合物可投服予個體以治療骨骼肌萎縮，或誘使骨骼肌肥 大。爲此目的，故本發明乃涵蓋供調節骨骼肌萎縮，包括 ，但不限定於，因手術，臥床，斷骨所致之廢用；因脊髓 損傷所致之去神經/神經損傷；自體免疫疾病；感染性疾 病；供不相關病況用之糖皮質激素之使用；因感染或其它 原因所致之敗血症；因疾病或飢餓所致之營養限制；癌症 惡病質；慢性炎症；愛滋病惡病質；C〇P D ;充血性心 臟衰竭；肌減少症及遺傳病症，例如肌失養症，神經變性 疾病，所誘導之骨骼肌萎縮之方法及組成物。C R F 2 R之 激動劑可用抑制骨骼肌萎縮。有效化合物不必証實對 C R F R具有絕對專一性。其它受影響受體之專一性拮抗 劑預期可與有效，但非專一性，激動劑共同投服。此外， 此專一性之缺乏可藉由單只調節劑量或調節劑量攝服法而 應付。 藉本文所述篩檢法而鑑定出之候選化合物或候選醫療 化合物可與可延長或增大C R F 2R或C R F 2R訊息傳遞 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公釐f ^ -61 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1227780 A7B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（59 ) 路徑之活化作用之化合物結合投服。彼等可爲已知化合物 ，例如，茶鹼，或者彼等可藉由本發明中用以篩檢可延長 或增大C R F 2 R或C R F 2 R訊息傳遞路徑之活化作用之 方法鑑定出。 劑量之測定 可激動C R F R之具安全性及醫療功效之化合物可藉 標準步驟，使用試管內或活體內技術測定。以顯現大醫療 指數之化合物較爲理想，然而如果副作用之程度可以令人 接受，則具低醫療指數之化合物亦有用。由試管內及活體 內之毒物學及藥學技術中所得之資料可用以調配人類有用 之劑量範圍。理想之劑量範圍爲化合物之循環濃度爲最大 醫療濃度且具有可接受之安全性者。化合物之循環濃度可 依劑型，投藥後之時間及投服路徑而定。在範圍外之劑量 倘若副作用可接受，則亦有用。病患之年齡及體重等事項 可用以決定慣用方法中之事項。藥物遺傳方法可有用以使 臨床族群中化合物之選擇，劑量及投藥攝服法最理想化。 配方及用涂 根據本發明之供用以調節骨骼肌萎縮之製藥學組成物 可使用慣用之方法，使用製藥學上可接受性載體及賦形劑 予以調配。本發明之組成物最好以劑型方式供應。本文中 所用之”單位劑型”爲含有適於根據良好之醫學操作以單 一劑量投服予動物，最好哺乳類，尤其人類病患之量之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-62- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（60 ) C R F 2 R激動劑之本發明組成物。製藥學組成物可予調配 以供藉由，例如，鼻內，經皮，吸入，非經腸部，皮膚， 經口或直腸部投服而遞送。供經口投服方面，製藥學組成 物可採用含有藥學有效化合物及添加劑包括，但不限定於 ，結合劑，塡料，潤滑劑，崩解劑，或濕化劑之片劑或膠 囊形式。片劑可予包衣。供經口投服用之液態製劑包括， 但不限定於，糖漿，懸浮液或使用前以液態載劑予以再構 成之乾燥產物，其含有藥學有效化合物及添加劑包括，但 不限定於，懸浮劑，乳化劑，非-水性載劑，防腐劑，緩 衝鹽，增香劑，著色劑，甜化劑等。供經口投服之製藥學 組成物可予調配以使藥學有效化合物於口，胃或腸道中控 釋出。 供吸入投服方面，供根據本發明使用之化合物可藉， 但不限定於，下列形式遞送：液體，氣體，凝膠或使用加 壓或非-加壓推進劑以預先測量或非-預先測量之劑量遞 送之氣溶膠形式。藥學有效化合物可以適當塡料，載劑， 防腐劑，緩衝劑等調配。供非經腸部投服方面，藥學有效 化合物可使用可接受性生理學載體，防腐劑等調配且可製 成懸浮液，溶液，乳膠，可輕易構成之粉末等，以供大九 劑之注射或輸注。這些化合物之劑量可藉各種不同之技術 包括皮下注射針，高壓裝置等投服。供直腸部投服方面， 藥學有效化合物可使用可接受性生理學載體，防腐劑等調 配以供以坐藥，灌腸劑等形式遞送。供皮膚投服方面，藥 學有效化合物可使用可接受性生理學載體包括洗劑，軟化 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-63 - 1227780 A7 __B7 五、發明説明（61 ) 劑等調配或納入貼布型裝置中。供長期投服方面，藥學有 效化合物及適當添加劑諸如，但限定於，聚合物，疏水性 物料，樹脂等，可調配成沉積製劑之形式注射或植入多重 位置包括但不限定於肌內及皮下位置。此外，藥學有效化 合物亦藉由調劑裝置而投服。 臨床試驗期間之效應之監測 化合物（例如藥物）對C R F 2 R表現或活性之影響之 監測不僅用於基礎藥物篩檢中，亦可用於臨床試驗中。例 如，藉由篩檢分析法測定化合物增加C R F 2 R受體活性或 C R F 2 R受體表現之效力可於患有骨骼肌萎縮或有骨骼肌 萎縮危險性之病患之臨床試驗中估測。在投服測試化合物 或安慰劑後之各個不同時間，化合物對病患之效應可，例 如，藉觀察骨骼肌質量，骨骼肌功能，肌肉破壞之生化標 記或生活品質評量之變化而測知。測量人類病患骨骼肌質 量之方法爲技藝中已知且包括，例如：測量肢之肚帶；以 例如電腦斷層攝影法，磁共振影像法或超音波法測量肌肉 '之厚度；或採用肌肉活組織以檢測形態及生化參數（例如 橫斷面纖維面積，纖維直徑或酵素活性）。而且，因爲骨 肌質量與骨骼肌功能有關，故肌肉功能可用以作爲質量 t代理標記且肌肉質量之變化可使用功能性測量法，例如 強度，協同肌肉群之力度，或肌動電流圖描記中所發現之 收縮特徵而估測。此外，因肌萎縮所致之肌肉蛋白質流失 可藉定量病患尿或血中之胺基酸或胺基酸衍生物，亦即3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -64 - 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（62 ) -甲基組織胺酸之値而測量。此方法之回顧請參見Appel 1， Sports Med.10:42-58 ( 1 990)。生化品質評量包括，但不限定 於，由椅子上離開之容易度，疲勞前所踏之階梯數或爬樓 梯之能力。 ‘ 實例 實例1 ·供人類C R F 2 R表現用之載體之建構 將人類CRF2R (hCRF2R) DNA序列，登錄 號E12752號，取回，再合成兩個寡核苷酸，一個含 有由起始密碼子開始之基因之5 ’端（5 ’寡核酸）且一 個含有含終止密碼子之基因之3 ’端。這些寡核苷酸乃設 計成含有不存在於h C R F 2 R中之核酸內切限制酶部位， 在5 ’核苷酸中有一個獨特部位且於3 ’核苷酸中有一個 不同之獨特核酸內切限制酶部位。此外，3 ’寡核苷酸亦 含有聚腺苷酸化加成訊息序列。人類骨骼肌之雙股 c. D N A 乃購自 Univernal QUICK-Clone cDNA 保藏中心（ Clonetecli Inc.，Palo Alto，CA，USA) 〇 使用上述 5 ’ 及 3 寡核苷酸，則h C R F 2 R c D N A可藉將人類骨骼肌 c. D N A 使用 AdvanTag PCR 套組（Clonetecli Inc·，Palo Alto，CA，USA )進行聚合酶鏈鎖反應（P C R )而擴增。 h CRF2R基因P CR產物係由P CR人爲產物中藉瓊脂 糖凝膠電泳法予以純化，而h C R F 2 R基因D N A片段則 由瓊脂糖凝膠中使用純化產物諸如NucleoTrap ( Clonetech Inc.，Palo Alto, CA，USA)予以純化。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -65- 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（63 ) 將hCRFsR PCR產物選殖至pIRESneo載體（ Clonetech Inc.，Palo Alto, CA，USA )中之作用係藉先將 h C R F 2 R PCR產物與pIRESneo載體以適當之核酸 內切限制酶切割以使5 ’及3 ’核酸內切限制酶部位有進 行連接之準備而完成。將pIRESneo載體DNA使用DNA 連接酶，得自 AdvanTageTMPCR 選殖套組（Clonetech Inc·， Palo Alto, CA, USA)，根據製造商之建議而連接至 h C R F 2 R PCR產物DNA中。已連接之載體及嵌接 構體乃繼而用以轉化 TOP 10Γ勝任性大腸桿菌細胞（ Clonetech Inc·, Palo Alto，CA，USA)。將轉化之細胞塗佈至 含有LB/X - ga 1/IPTG加上氨苄青黴素之瓊脂 上。選出白色群落（陽性純系），再個別於L B培養基中 培養。將質粒D N A使用 NucleoBond DNA純化系統（ Clonetech Inc·，Palo Alto，CA，USA)予以離析。將來自至少 一個純系中之嵌接體進行序列分析以確認h C R F 2 R序列 是正確的。使用C a 1P h 〇 sτ M哺乳類轉染套組（C1 ο n e t e c h I n c.， Palo Alt〇，CA，USA)將含有安定整合性 Mercury CRE-LUC 質粒（Clonetech Inc·，Palo Alto，CA，USA)之 HEK293 細胞 以具有正確序列嵌接體之純化pIRESneo/hCRF2R DNA轉染 。藉將細胞於G418中培養以將以pIRESneo/hCRF2R DNA安 定轉染之細胞選擇出。再將安定轉染之細胞（HEK293/CRE-LUC/pIRESneo/hCRF2R細胞）於含有1 〇 %胎牛血淸 Clonetech Inc.，Palo Alto，CA，USA)，青黴素 / 鏈黴素溶液 (Life Technologies，Rockville，MD)，L —榖胺醯胺（Life (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .

、1T

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） -66- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _ B7 五、發明説明（64 ) Technologies，Rockville，MD )，及非必要胺基酸（Life Technologies，Rockville，MD)之 DMEM (Life Technologies， Rockville, MD )中，於 3 7。〇下，於 5 % 二氧化碳 / 9 5 %大氣下繁殖。依實例2及實例3所述之法暴露至C R F 後，將純系就有關C R F結合力及CRE-LUC活化作用方面 予以特徵化。於適當値下可表現h C R F 2 R受體且能適當 偶合至CRE-LUC報導系統上之細胞則繼而用以供更進一步 之硏究。 實例2 ·受體結合力分析法 化合物之受體結合力分析係於整體細胞中藉將實例1 中之HEK293/CRE-LUC/pIRESneo/hCRF2R細胞塗佈於塗覆上 聚賴胺酸之9 6孔式培養皿中進行。將細胞種至於3 7 t 下，於5%二氧化碳/9 5%大氣下之含1 0%胎牛血淸 ，青黴素/鏈黴素溶液，L -榖胺醯胺，及非必要胺基酸 之DMEM培養基中，再保溫過夜。而後將培養基移除，再 將於 DMEM ( Life Technologies，Rockville，MD )中之共價標 記上銪之適量 C R F + 1 〇 % Seablock(Clonetech Inc.， Palo Alto，CA，USA)加入。繼而將細胞與Eu-CRF於室溫下 保溫9 0分鐘，再以缺鎂及鈣之磷酸鹽緩衝鹽水（Life Technologies，Rockville，MD )淸洗 4 次。最終之淸洗後， 將增強作用溶液（Wallac Inc.，Gaithersburg，MD )加入，再 將培養皿於 Wallac 培養皿判讀器 （Wallac Inc., Gaithersburg，MD)上使用 BioWorks Eropium 程式判讀。供 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） - 67- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _ B7_五、發明説明（65 ) 飽和結合力分析方面，乃將1 〇 ( 一12)至1〇( — 3 )Μ範圍內之對數劑量之E u 一 c R F加至細胞中，再於 飽和濃度之未標記C R F之缺乏及存在下分析結合力以供 估測非專一性結合作用。供競爭性結合力方面，除了使用 不同濃度之主流化合物外，乃將達最大結合力之一半之濃 度之Eu-CRF加入。 實例·3 ·受體活化作用分析法 受體活化作用分析法係藉將實例1之^^冗293/0只£-LUC/pIRESneo/hCRFaR 細胞種至 Packard View Plate-96 ( Packard Inc.，CA )中來進行。將細胞種至於3 7 °C下，於 5%二氧化碳/9 5%大氣下之含1 〇%胎牛血淸，青黴 素/鏈黴素溶液，L -榖胺醯胺，及非必要胺基酸之 DMEM培養基中，再保溫過夜。而後將培養基移除，再以 含〇· ◦ 1%牛白蛋白V部分（SIGMA，St. Louis，M〇）且 含主流化合物之 DMEM (Life Technologies，Rockville，MD) 替代。而後將細胞於3 7 °C下，於5 %二氧化碳/ 9 5 %大氣下保溫四小時，其後將培養基移除，將細胞以 漢克氏（Hanks)均衡鹽溶液（Life Technologies，Rockville， MD)淸洗兩次。繼而將溶解試劑（Promega Inc.，Madison， WI )加至已淸洗之細胞中，再將細胞於3 7 °C下，於5 % 二氧化碳/ 9 5 %大氣下保溫2 0分鐘。而後將細胞置於 一 8 0 °C下2 0分鐘，繼而於3 7 °C下，於5 %二氧化碳 / 9 5 %大氣下保溫2 0分鐘。經此保溫後，將蟲螢光素 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁：>

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -68- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _____ B7 五、發明説明（66 ) 酉母分析緩衝丨仪及蟲螢光素酶分析基質（p r ◦ 1Ή e g a I n c .， Madison，WI)加至溶胞產物中，再使用冷光儀定量蟲螢光 素酶活性。化合物之相對活性係藉將暴露至化合物後之增 加程度與將含有CRE-LUC構體而無h CRF2R之HEK 細胞暴露至化合物後之蟲螢光素酶活性相比較而估測。反 應之專一性亦藉於1 0倍過量之h C R F 2 R拮抗劑之存在 及缺乏下，估測hCRFaR/CRE-LUC HEK細胞對化合物之蟲 螢光素酶反應而檢出。 實例4.鑑定可延長或增大CRF2R或CRF2R受體訊 息傳遞路徑之活化作用之候選化合物之篩檢法 鑑定可延長或增大CRF2R或CRF2R受體訊息傳 遞路徑之激動劑-誘導性活化作用之候選化合物之方法包 含實例3所述受體活化作用分析法之變化。尤其，此分析 法係藉將HEK293/CRE-LUC/pIRESneo/hCRF2R受體細胞種至 Packard View Plate-96 (Packard Inc.，CA)中來進行。將細 胞種至於3 7 °C下，於5%二氧化碳/ 9 5%大氣下之含 1 0 %胎牛血淸，青黴素/鏈黴素溶液，L -榖胺醯胺， 非必要胺基酸，及飽和量C R F之DMEM培養基中，再保 溫4 8小時。而後將培養基移除，再以除了主流化合物外 ，亦含〇.〇1 %牛白蛋白V部分（SIGMA，St. Louis，M〇 )及 C R F 之 DMEM (Life Technologies, Rockville，MD)替 代。而後將細胞於3 7 °C下，於5 %二氧化碳/ 9 5 %大 氣下保溫四小時，其後將培養基移除，將細胞以漢克氏（ 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-69- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 B7五、發明説明（67 ) H a n k s )均衡鹽溶液（L i f e T e c h η ο 1 〇 g i e s，R 〇 c k v i 11 e，M D )淸 洗兩次。繼而將溶解試劑（P r o m e g a I n c.，M a d i s ο η, WI )加 至已淸洗之細胞中，再將細胞於3 7 t下，於5 %二氧化 碳/ 9 5 %大氣下保溫2 0分鐘。而後將細胞置於一 8 0 °C下2 0分鐘，繼而於3 7 °C下，於5 %二氧化碳/ 9 5 %大氣下保溫2 0分鐘。經此保溫後，將蟲螢光素酶分析 緩衝液及蟲螢光素酶分析基質（Promega Inc.，Madison，WI )加至溶胞產物中，再使用冷光儀定量蟲螢光素酶活性。 經校正細胞密度之變化後，可刺激螢光顯著地超過對照組 未經處理細胞之値之測試化合物乃被視爲可供調節骨骼肌 質量及功能之候選化合物。最主流之化合物爲可誘導產生 較高螢光値者。 實例5 ·鑑定對C R F 2 R專一之候選化合物之篩檢法 可活化C R F 2 R之化合物乃如同實例3之法予以鑑定 。欲選擇對C R F 2 R之選擇性超過對C R F i R之彼些化 合物，則將這些化合物對C R F i R進行篩檢。 HEK293/CRE-LUC/pIRESneo/hCRFiR 細胞基本上係依實例 1 之法進行，惟係使用人類C R F : R ( h C R F ! R ) D N A序列，登錄號X72304，供初始之P C R擴增作用所 用。欲測定化合物對C R F i R之活性爲何，活化作用分析 法基本上係依實例3所述之法進行，惟係將HEK293/CRE-LUC/pIRESneo/hCRF^R細胞種至培養皿上。將化合物於表現 C R F 2 R之細胞中所刺激之螢光量與化合物於表現 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -70- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 B7五、發明説明（68 ) C R F : R之細胞中所刺激之螢光量相比較。繼而將證實於 表現C R F 2 R之細胞中比於表現C R F i R之細胞中具有 1 0 -倍較佳反應之彼些化合物更進一步檢測反應之專一 性以排除因純系之變化所致之差異。將 HEK293/CRE-LUC/pIRESneo/hCRF2R細胞以化合物，於1 0 —倍過量 C R F 2 R拮抗劑，抗沙維京一 3 0，之存在及缺乏下進行 分析。對C R F 2 R顯現大於1 0 -倍之選擇性且活性可被 抗沙維京- 3 0所抑制之彼些化合物經選定爲候選化合物 〇 實例6 ·鑑定可增加h C R F 2 R表現之候選化合物之篩檢 法 將含有h C R F 2 R基因啓動區之序列，由轉錄起始位 之夠遠上流處開始以含有供適當組織中h C R F 2 R基因之 生理學表現所需之所有調節元素，由人類基因組資料庫中 取出。再合成兩個寡核苷酸，一個含有啓動區之5 ’端（ 5 ’寡核苷酸）且一個含有包括轉錄起始位之啓動區之 3 ’端（3 ’寡核苷酸）。這些寡核苷酸亦含有不存在於 h C R F 2 R中之核酸內切限制酶部位，在5 ’寡核苷酸中 有一個獨特部位且於3 ’寡核苷酸中有一個不同之獨特核 酸內切限制酶部位。此5 ’及3 ’寡核苷酸乃用以供將來 自人類DNA之h C RF2R基因調節區使用P CR套組， Advantage®Genomic PCR 套組（Clonetech Inc·，Palo Alto, CA，USA)進行聚合酶鏈鎖反應（P C R )擴增作用。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-71 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 ___B7五、發明説明（69 ) h C R F 2 R基因調節區？011產物係由？011人爲產物中 藉瓊脂糖凝膠電泳法予以純化，而h C R F 2 R基因調節區 D N A片段則由瓊脂糖凝膠中使用純化產物諸如 NucleoTi’ap(Clonetech Inc.，Palo Alto，CA，USA)予以純化。 將h C RF2R基因調節區P CR產物選殖至p E C F P — 1 載體（Cion etech Inc·，Palo Alto，CA，USA)中之作用係藉 先將h CRF2R基因調節區P CR產物與p E C F P - 1 載體以適當之核酸內切限制酶切割以使5 ’及3 ’核酸內 切限制酶部位有進行連接之準備而完成。將p E C F P -1載體DNA使用DNA連接酶，得自AdvanTageTMPCR選 殖套組（Clonetech Inc·，Palo Alto，CA，USA)，根據製造商 之建議而連接至h C RF2R基因調節區P CR產物DNA 上。已連接之載體及嵌接構體乃繼而用以轉化ΤΟΡ10Γ勝任 性大腸桿菌細胞（Clonetech Inc·，Palo Alto，CA, USA )。將 細胞塗佈至含有L B加上卡那黴素之瓊脂上。選出抗卡那 黴素之群落以供更進一步分析。將抗卡那黴素之純系於含 L B之卡那黴素培養基中培養再將質粒D N A使用 NucleoBond DNA 純化系統（Clonetech Inc.，Palo Alto，CA， USA)予以離析並將含有h V P A C 2基因調節區之構體藉 D N A定序分析以確認構體之正確性及完整性。使用磷酸 鈣促成性轉染作用，使用 CalPhosTM哺乳類轉染套組（ Clonetech 111 c.，Palo Alto，CA，USA)將含有 h C R F 2 R 基 因調節區之純化構體質粒D N A轉染至HEK293細胞中。使 用G4 1 8將轉染細胞純系選擇出，離析再於含有1 0 %胎牛 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -72- 1227780 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 _ B7五、發明説明（70 ) 血淸（Clonetech Inc·，Palo Alto，CA，USA)，青黴素 / 鏈黴 素溶液（Life Technologies，Rockville，MD )，L —榖胺醯 胺（L i f e T e c h η o 1 o g i e s，R o c k v i 11 e，M D )，非必要胺基酸（ Life Technologies, Rockville， MD )及 G418 ( Life Technologies,Rockville, MD ) 之 DMEM ( Life Technologies，Rockville，MD)中，於 3 7 °C 下，於 5% 二氧 化碳/ 9 5%大氣下繁殖。抗G418純系乃藉南方墨點法予 以特徵化以確認彼等含有h C R F 2 R基因啓動序列；此外 ，h C R F 2 R基因調節區之活化作用乃使用適當之剌激劑 進行分析。於適當値下可表現h C RF2R基因調節區- E C F P之細胞乃繼而用於下述之設計以估測可調節 h C. R F 2 R基因調節區活性之化合物之分析法中。調節區 活化作用分析法係藉將含有h C R F 2 R基因調節區-E C F P之HEK293細胞於適當密度下種至黑且淸澈底部之 96孔式微滴定培養皿中，再令其生長過夜。隔天，將培 養基移除，而後將於新鮮生長培養基中之測試化合物加入 。繼而將細胞於3 7 °C下，於5 %二氧化碳/ 9 5 %大氣 下保溫1 6小時，其後使用螢光儀（bioluminTM 960, Molecular D y n a m i c s / A m e r s h a m Pharmacia Biotech, P i s c a t a w a y，N J )藉測量於4 3 3 ( 4 5 3 ) n m下激發及 於4 7 5 ( 5 0 1 ) n m下發射之螢光。經校正細胞密度 之變化後，可刺激螢光顯著地超過對照組未經處理細胞之 値之測試化合物乃被視爲可供調節骨骼肌賢量及功能之候 選化合物。最主流之化合物爲可誘導產生較高螢光値者。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐1 ~ -73 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1227780 A7 _ B7 五、發明説明（71 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 實例7 ·鑑定可增加人類C R F表現之候選化合物之篩檢 法 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 供鑑定可增加人類C R F ( h C R F )表現之化合物 之方法基本上乃與供鑑定可增加h V P A C 2受體表現之化 合物之方法相同，惟所用之調節區爲供h C R F者。將含 有h C R F基因調節區之序列，由轉錄起始位之夠遠上流 處開始以含有供適當組織中h C R F基因之生理學表現所 需之所有調節元素，由人類基因組資料庫中取出。再合成 兩個寡核苷酸，一個含有調節區之5 ’端（5 ’寡核苷酸 )且一個含有包括轉錄起始位之調節區之3 端（3 ’寡 核苷酸）。這些寡核苷酸亦含有不存在於h C R F中之核 酸內切限制酶部位，在5 ’寡核苷酸中有一個獨特部位且 於3 ’寡核苷酸中有一個不同之獨特核酸內切限制酶部位 。此5 ’及3 ’寡核苷酸乃用以供將來自人類D N A之 h C· R F基因調節區使用 Advantage®Genomic PCR套組（ C1 ο n e t e c h I n c ·，P a 1 〇 A11 〇，C A，U S A )進行聚合酶鏈鎖反應（ P C R )擴增作用。h C R F基因調節區P C R產物係由 P C R人爲產物中藉瓊脂糖凝膠電泳法予以純化，而 h C R F基因調節區D N A片段則由瓊脂糖凝膠中使用純 化產物，NucleoT rap ( Cion etech Inc.，Palo Alto，CA，USA) 予以純化。將h C R F基因調節區P C R產物選殖至 p E C F P — 1 載體（Clonetech Inc.，Palo Alto，CA，USA) 中之作用係藉先將hCRF基因調節區P CR產物與 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -74- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 ____ B7五、發明説明（72 ) P E C F P - 1載體以適當之核酸內切限制酶切割以使 5 ’及3 ’核酸內切限制酶部位有進行連接之準備而完成 。將pECFP — 1載體DNA使用DNA連接酶，得自 AdvanTageTMPCR 選殖套組（Cion etech Inc.，Palo Alto，CA， USA)，根據製造商之建議而連接至hCRF基因調節區 P C R產物D ΝΑ上。已連接之載體及嵌接構體乃繼而用 以轉化Τ〇Ρ 1 0 F ’勝任性大腸桿菌細胞（C1 ο n e t e c h I n c .，P a 1 〇 Alto，CA，USA )。將細胞塗佈至含有L B加上卡那黴素之 瓊脂上。選出抗卡那黴素之群落以供更進一步分析。將抗 卡那黴素之純系於含L B之卡那黴素培養基中培養再將質 粒 D N A 使用 NucleoBond DNA 純化系統（Clonetech Inc·， Palo Alto, CA，USA)予以離析並將含有h C R F基因調節 區之構體藉D N A定序分析以確認構體之正確性及完整性 。使用磷酸鈣促成性轉染作用，使用CalPho，M哺乳類轉染 套組（Clonetech Inc·，Palo Alto，CA，USA)將含有 h C R F 基因調節區之純化構體質粒D N A轉染至HEK293細胞中。 使用G41 8將轉染細胞純系選擇出，離析再於含有1 〇 %胎 牛血淸（Clonetech Inc.，Palo Alto, CA，USA)，青黴素 / 鏈 黴素溶液（Life Technologies，Rockville，MD)，L —穀胺 醯胺（Life Technologies, Rockville，MD)，非必要胺基酸 (Life Technologies, Rockville， MD )及 G418 ( Life Technologies, Rockville，MD)之 DMEM(Life Technologies， Rockville，MD )中，於 3 7 °C 下，於 5 % 二氧化碳 / 9 5 %大氣下繁殖。抗G4 1 8純系乃藉南方墨點法予以特徵化以 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -75- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _B7_五、發明説明（73 ) 確認彼等含有h C R F基因調節區序列；此外，h C R F 基因調節區之活化作用乃使用適當之刺激劑進行分析。於 適當値下可表現h CRF基因調節區一 E C F P之細胞乃 繼而用於下述之設計以估測可調節h C R F基因調節區活 性之化合物之分析法中。調節區活化作用分析法係依實例 5之法進行，惟係使用含有h C R F基因調節區構體之純 系。 實例8 ·可活化h C R F 2 R之人類化合物之製法 可活化h C R F 2R之完全人類單株抗體係先藉下述之 法生成重組蛋白質而製得。遵循實例1之步驟以得 h C R F 2 R PCR產物。而後藉先將hCRF2R基因 P C R產物與pHAT20載體以適當之核酸內切限制酶切割以 使5 ’及3 ’核酸內切限制酶部位有進行連接之準備而將 此hCRF2R PCR產物連接至 pHAT20載體（ Clonetech Inc·，Palo Alto，CA，USA)上。將 PHAT20 載體 D ΝΑ連接至h CRF2R基因P CR產物DNA上之方法係 使用D N A連接酶，得自 AdvanTageTMPCR選殖套組（ Clonetech Inc·，Palo Alto，CA，USA)，根據製造商之建議而 完成。已連接之載體/嵌接構體乃繼而用以轉化T〇p 10F’勝 任性大腸桿菌細胞（C1 ο η e t e c h I n c ·，P a 1 〇 A11 〇，C A，U S A ) 0 將細胞塗佈至含有L B加上氨苄青黴素之瓊脂上。選出抗 氨苄青黴素之群落以供更進一步分析。將陽性純系於含氨 苄青黴素之L B培養基中培養再將質粒D N A使用 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -76- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _B7 五、發明説明（74 ) NucleoBond DNA 純化系統（Clonetech Inc·，Palo Alto, CA， USA )予以離析並將含有hCRF2R基因之構體藉DNA 定序分析以確認構體之正確性及完整性。hCRF2R-pHAT20 載體D N A乃繼而用以供藉使用含H A T序列開端之5 ’ 寡核苷酸及不存在於hCRF2R-pHAT20構體中之獨特核酸內 切限制酶部位及先前所用之3 ’ h C R F 2 R寡核苷酸進 行外加之P C R選殖作用。寡核苷酸引子乃用以將來自 hCRF2R-pHAT20構體之HAT-hCRF2R融合基因進行P C R擴 增，而P C R產物則依上述法予以純化。HAT-hCRF2R融合 基因P C R產物乃繼而用以使用來自Clonetech ( Clonetech Inc.，Palo Alto，CA，USA)之BacPAK杆狀病毒表現系統以 選殖至pBacPAK8載體中。HAT-hCRFsR融合基因連接至 pBacPAK8載體上之方法基本上乃如上所述。而後將 hCRF2R/HAT-pBacPAK8構體轉染至TOP10F，勝任性大腸桿菌 細胞中，將抗氨苄青黴素之細胞選出，將質粒D N A離析 出，再如上述之法以檢測構體之完整性。繼而使用 CalPhosTM 哺乳類轉染套組（Clonetech Inc.，Palo Alto，CA， USA )將此構體與直線化之BacPAK6 DNA共同轉染至 S f 2 1昆蟲宿主胞中。再將昆蟲細胞保溫2 - 3天，其 後由個別之淸澈空斑中採收病毒。再將病毒於S f 2 1細 胞中擴增，將採收之病毒滴定，並使用BacPAK昆蟲細胞培 養基將滴定之病毒用以對S f 2 1細胞進行大規模感染-所有均根據製造商之建議（Clonetech Inc.，Palo Alto，CA， USA )。而後將重組之HAT-hCRF2R融合蛋白質使用來自 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐） -77- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 __B7五、發明説明（75 ) Clonetech ( Clonetech Inc., Palo Alto， CA, USA )之 TAL〇N®CellThru純化套組，使用製造商所建議之狀況予以 純化。簡言之，係將經感染之S f 2 1細胞於感染後4 8 小時採收，再於萃取/塡充緩衝液中音波化。而後令溶胞 產物通過TALON®CelIThru柱中。將柱以萃取/塡充緩衝液 淸洗兩次，再將結合之白質以洗提緩衝液洗 提。藉SDS-PAGE法分析洗提蛋白質之完整性，再使用 Bio-Rad SDS-PAGE系統及蛋白質定量系統根據製造商之建 議（Bio-Rad Laboratories，Hercules，CA)以定量蛋白質濃度 。純化之 HAT-hCRF2R融合蛋白質乃繼而用以供將 XenoMouse 動物（Abgenix Inc·，Fremont，CA)進行免疫以供 以下列之法製造人類單株抗體。使用結合上2 5微克輔劑 單磷醯脂A ( Sigma，St. Louis，M〇）之1 〇微克純化重組 HAT-hCRF^R融合蛋白質於8星期期間對1 0隻XenoMonse 動物接種疫苗。由接受疫苗之動物中取得血淸，並用於使 用純化HAT-hCRF2R融合蛋白質進行之抗原捕捉酵素連結性 免疫吸附分析法（ELISA)中以檢測對抗HAT-hCRbR蛋白 質之抗體，其方法係將聚苯乙烯ELISA盤（Corning Glass Works，Corning, NY)塗覆上 HAT-hCRF2R 融合蛋白質，以 PBS— 1%BSA保護，淸洗及於37t：下與1 : 5〇 倍稀釋之血淸樣品共同保溫1小時。以P B S淸洗5次後 ，將盤與對抗人類免疫球蛋白G之鹼性磷酸酶-軛合性山 羊抗體於3 7 t下保溫1小時。繼而將盤以P B S淸洗5 次，再以磷酸鹽對位一硝苯酯基質（S i g m a，S t · L 〇 u i s，Μ〇） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) Α4規格（210X297公釐） -78- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 B7 五、發明説明（76 ) 之緩衝液來檢測抗體。使用盤判讀器於4 0 5 n m下測量 光密度並將訊號予以定量。證實具有高抗體製造量之鼷鼠 乃用以供雜種瘤之形成所用。雜種瘤係藉將XenoMouse動 物之脾臟細胞與非分泌性骨髓瘤細胞系N S A - b c 1 2以4 : 1之脾臟細胞對N S A - b c 1 2之比率， 於3 0 %聚乙二醇PEG 1 450之存在下融合而生成。將融合 之細胞藉限制性稀釋而選殖至9 6孔式盤中，再於含1 0 %胎牛血淸，非必要胺基酸，丙酮酸鈉，L -榖胺醯胺， 1 〇 〇單位/毫升 青黴素-鏈黴素及次黃嘌呤-胺基蝶 呤—胸腺核苷之RPMI- 1640培養基（所有均來自Life Tech n ologies，Rockville，MD)中培養。將次黃曝D令—胺基蝶 呤-胸腺核苷之選擇性雜種瘤之上層液藉上述ELISA以篩 檢人類抗體之製造。可製造抗HAT-hCRF2R融合蛋白質之人 類抗體之雜種瘤乃被選定供大規模抗體之製造。單株抗體 則藉蛋白質G -瓊脂糖凝膠（Protem G-Sapharose )色層分 離法予以純化。簡言之，係將經培養之稚種瘤純系裝載至 於塡充緩衝液內之 Protein G-Sapharose 柱（Sigma，St. Louis，M〇）上，淸洗3次，再將I g G以洗提緩衝液洗提 。這些抗體乃繼而用來篩檢以估測h C R F 2 R活化作用（ 激動作用）之潛能。其可使用實例3所述之方法完成。證 實對h C R F 2 R具有激動劑活性之彼些人類單株抗體乃指 定爲候選化合物。 實例9 ·肌肉之絕對力度之測量 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-79- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 _ B7 五、發明説明（77 ) 將伸趾長肌（E D L )及比目魚肌由造模之鼷鼠腿中 鍵-對-鍵地移出。用絲縫線將分離出之肌肉之每一^個鍵 繫緊，再將肌肉置入塡滿林格溶液（1 3 7 m Μ氯化鈉， 2 4 m Μ碳酸氫鈉，1 1 m Μ葡萄糖，5 m Μ氯化鉀，1 m Μ硫酸鎂，1 m Μ磷酸鈉，0 . 0 2 5 m Μ箭毒塊莖鹼 ，所有均於ΡΗ7 . 4下且以9 5%氧/5%二氧化碳予 以充氧）並有9 5 %氧/ 5 %二氧化碳恆定成泡吹入且保 持於2 5 °C下之塑膠玻璃室中。將肌肉平行地排列在伺服 電動機之桿臂（Model 305B-LR Cambridge Technology Inc.， Watertown MA，USA)與力量傳感器（Model BG-50; Kulite Semiconductor Products Inc.，Leon ia, NJ，USA)之不鏽鋼釣 間，而力場係由縱向置於肌肉兩側之兩個鉑電極間所傳送 之脈衝所刺激。將藉由含有Labview板（]\/[〇(^1?1-1^1〇16£-4)，Labview Inc.，Austin，TX，USA)之個人電腦所生成之 光波脈衝（0 · 2毫秒之持續時間）予以擴大（Acinus功 率放大器A25型，Dobbs Ferry, NY，USA)以增加極大之收 縮作用。刺激電壓及肌內強度（L 〇 )乃予調整以得最大 之等長性抽搐力度。最大之極大力度製造（P 〇 )則由頻 率-力度關聯之平台期中測定。 實例1 0 .使用作爲h C R F 2 R受體激動劑之人類抗體進 行之骨骼肌萎縮之醫療性治療 將重5 0公斤且因爲長期臥床而具有臂及腿之顯著肌 萎縮之病患予以治療以使骨骼肌萎縮逆轉。將含有 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-80- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227780 A7 B7 五、發明説明（78 ) h C R F 2 R受體之活化性抗體之1 5毫升P Η 6水性溶液 每星期一次地經由靜脈內注射法投服予病患，如此進行3 個月。溶液含有下列之成分： 組份 濃复 h C R F 2 R受體激動劑抗體 20 L 一組織胺酸氫氯酸鹽 0 · 4 7 L 一組織胺酸 0 · 3 α，α-海藻糖二水合物 20 縮聚山梨醇油酸酯2 0 0 · 1 抑菌性無菌水 加至1毫升 於治療期終了之時，病患之臂及腿之肌肉質量，強度 及可動性顯現可測量之增加。 實例1 1 .使用作爲h C R F 2 R受體激動劑之人類抗體進 行之骨骼肌萎縮之預防性治療 安排重5 5公斤之女性病人於一個月內進行髖關節置 換手術。將病人於手術之前及之後治療以增強骨骼肌質量 ，因而最終降低因爲手術後之復原期間之肌肉廢用所致之 骨骼肌萎縮之程度。尤其，係在手術前1個月及手術後2 個月期間，每星期一次地將含有h C R F 2 R受體之活化性 抗體之1 8毫升P Η 6 . 0水性溶液經由靜脈內注射法投 服予病人。溶液含有下列之成分： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項存填寫本頁)

-81 - 1227780 A7 __ B7 ^-—-— 五、發明説明（79 ) 組份 濃度 h C R F 2 R活化性抗體 20 L 一組織胺酸氫氯酸鹽 0.47 L 一組織胺酸 0.3 α， α -海藻糖二水合物 2〇 縮聚山梨醇油酸酯2 0 0.1 抑菌性無菌水 加至1毫升 與無抗體療法時之病患預期狀態相比之下，於治療期 終了之時，病患之臂及腿之肌肉質量，強度及可動性顯現 可測量之預防。 實例1 2 ·使用作爲h C R F 2 R受體激動劑之人類抗體進 行之骨骼肌萎縮之預防性治療 令重4 5公斤之女性病人接受造模步驟以治療跌倒後 肱骨之單純骨折。將病人予以治療以預防由於骨折復原期 間之廢用及限制使用而致之受影響之臂及肩之骨骼肌萎縮 。尤其，係由造模之日開始，每星期一次地將含有 h C R F 2 R受體之活化性抗體之1 3毫升P Η 6 . 0水性 溶液經由靜脈內注射法投服予病人。溶液含有下列之成分 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -82- 1227780 Α7 Β7 五、發明説明（80 ) 組1 濃度 h C R F 2 R活化性抗體 20 L 一組織胺酸氫氯酸鹽 0.47 L 一組織胺酸 α，α -海藻糖二水合物 20 縮聚山梨醇油酸酯2 0 0.1 抑菌性無菌水 加至1毫升 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁}

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 與無抗體療法時之病患預期狀態及追蹤治療相比之下 ，於治療期終了之時，病患之受影響臂及肩之肌肉質量， 強度及可動性顯現可測量之預防且物理醫療之療程減少。 實例1 3 ·使用尿皮質素一 Π ( urocortin-II )進行之骨骼 肌萎縮之預防性治療 令重6 0公斤昏迷狀態中之女性病人住院。將病人藉 此法治療以預防整個身體因昏迷狀態中之廢用而致之骨骼 肌萎縮。尤其係在昏迷期間，每星期一次地將5 0 0毫升 水性溶液（其係藉將5毫升下列儲液加至5 0 0毫升無菌 鹽水中而製得）經由徐緩之靜脈內輸注法投服予病患： 組份 濃度（毫克/毫升） 尿皮質素—Π (urocortin-II) 12 磷酸鹽緩衝液，p Η 4 140 與無藥物療法之病人狀態相比之下，在昏迷期間及恢 、τ

本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210'乂 297公釐） -83 - 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明说明（81 ) 復意識之後，病人之骨骼肌質量及功能顯現可測量之預防 ，且對物理醫療之需求減少。 實例1 4 _使用C R F對裘馨氏肌失養症病患進行之醫療 性治療 將重4 0公斤之正診斷患有裘馨氏肌失養症之男性病 患以顯現h C R F : - R及h C R F 2 — R激動作用之化合 物以類同之劑量範圍治療。將病患以化合物之持釋型，沉 積性配方治療以改善或保持疾病進行期間之肌肉強度及功 能。尤其係每個月一次地將含有下列者之3毫升 p Η 6 _ 〇水性溶液經由肌內注射法投服予病患： 組份 濃度（毫克/臺升） C R Η (促皮質素釋放激素） 4 D，L乳酸及羥基乙酸 5 治療之結果，與疾病自然進行期間所顯現者相比之下 ，病患之肌肉強度或肌肉功能之衰退於時間-函數之估測 中有所改善或減少。 本發明之範圍不爲已述之特定具體實施例所限制，這 些具體實施例僅供本發明個別觀點之說明所用，而功能相 等之方法及組份亦在本發明之範圍內。彼等包括，但不限 定於，測試動物之品系，C R F R激動劑之特性及型式， 動物姓別，萎縮模型，活化C R F R之方法包括基因方法 等。除了本文所示及所述者之外，熟知技藝者可於閱讀上 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-84- 1227780

7 7 A B 明説 明發五 落 欲 亦 良 改 些 此 ο 良 改 種 各 之 明 發 本 暸 明 利 後專 圖請 附申 及之 明加 說附 述在 內 圍 $ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -85- 1227780 A7 B7 五、發明説明（83 ) .序列表 <110> The Procter &： Gamble 公司 利用促皮質素釋放因子受體鑑定調節肌肉質量或 功能之化合物的方法

<130> 8448/VB <160> 44 <170> Patentln version 3.0 <210> 1 <211> 2536

<212> DNA <213>智人 <220>

<221> CDS <222> (227) . . (1474) <400> 1 ggggaaacgg cggccagact tccccgggaa ggggcgagcg agagccgggc cgggccgggc 60 cgggccgcgg ggccgggaag cgccgagccg ggcatctcct caccaggcag cgaccgagga 120 gcccggccgc ccaccccgtg ccgcccgagc ccgcagccgc ccgccggtcc ctctgggatg 180 tccgtaggac ccgggcattc aggacggtag ccgagcgagc ccgagg atg gga ggg 235

Met Gly Gly 1 cac ccg cag etc cgt etc gtc aag gcc ett etc ett ctg ggg ctg aac 283

His Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu Gly Leu Asn 5 10 15 ccc gtc tet gcc tcc etc cag gac cag cac tgc gag age ctg tee ctg 331

Pro Val Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser Leu Ser Leu 20 25 30 35 gcc age aac ate tea gga ctg cag tgc aac gca tec gtg gac etc att 379

Ala Ser Asn lie Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val Asp Leu lie 40 45 50 ggc acc tgc tgg ccc ege age cct geg ggg cag eta gtg gtt egg ccc 427

Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val Val Arg Pro 55 60 65 tgc cct gcc ttt ttc tat ggt gtc ege tac aat acc aca aac aat ggc 475

Cys Pro Ala Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Asn Gly 70 75 80 tac egg gag tgc ctg gcc aat ggc age tgg gcc gcc ege gtg aat tac 523

Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg Val Asn Tyr 85 90 95 tec gag tgc cag gag ate etc aat gag gag aaa aaa age aag gtg cac 571

Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser Lys Val His 100 105 110 115 tac cat gtc gca gtc ate ate aac tac ctg ggc cac tgt ate tec ctg 619

Tyr His Val Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie Ser Leu 120 125 130 9^9 9CC etc ctg gtg gcc ttt gtc etc ttt ctg egg etc agg age ate 667 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-86- 1227780 A7 B7 五、發明説明（84 )

Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu Arg Ser lie 135 140 145 egg tgc ctg ega aac ate ate cac tgg aac etc ate tee gee ttc ate 715

Arg Cys Leu Arg Asn He He His Trp Asn Leu He Ser Ala Phe He 150 155 160 ctg ege aac gee acc tgg ttc gtg gtc cag eta acc atg age ccc gag 763

Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met Ser Pro Glu 165 170 175 gtc cac cag age aac gtg ggc tgg tgc agg ttg gtg aca gee gee tac 811

Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala Tyr 180 185 190 195 aac tac ttc cat gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttc ggc gag ggc tgc 859

Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys 200 205 210 tac ctg cac aca gee ate gtg etc acc tac tee act gac egg ctg ege 907

Tyr Leu His Thr Ala He Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Arg Leu Arg 215 220 225 aaa tgg atg ttc ate tgc att ggc tgg ggt gtg ccc ttc ccc ate att 955

Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe Pro lie lie 230 235 240 gtg gee tgg gee att ggg aag ctg tac tac gac aat gag aag tgc tgg 1003

Val Ala Trp Ala He Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp 245 250 255 ttt ggc aaa agg cct ggg gtg tac acc gac tac ate tac cag ggc ccc 1051

Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro 260 265 270 275 atg ate ctg gtc ctg ctg ate aat ttc ate ttc ett ttc aac ate gtc 1099

Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe Asn lie Val 280 285 290 ege ate etc atg acc aag etc egg gca tee acc aeg tet gag acc att 1147

Arg He Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr He 295 300 305 cag tac agg aag get gtg aaa gee act ctg gtg ctg ctg ccc etc ctg 1195

Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu 310 315 320 ggc ate acc tac atg ctg ttc ttc gtc aat ccc ggg gag gat gag gtc 1243

Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu Val 325 330 335 tee egg gtc gtc ttc ate tac ttc aac tee ttc ctg gaa tee ttc cag 1291

Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe Gin 340 345 350 355 ggc ttc ttt gtg tet gtg ttc tac tgt ttc etc aat agt gag gtc cgt 1339

Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg 360 365 370 tet gee ate egg aag agg tgg cac egg tgg cag gac aag cac teg ate 1387

Ser Ala He Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys His Ser lie 375 380 385 cgt gee ega gtg gee cgt gee atg tee ate ccc acc tee cca acc cgt 1435

Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg 390 395 400 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-87- 1227780 A7 B7五、發明説明（85 ) gtc age ttt cac age ate aag cag tcc aca gca gtc tga gctggcaggt Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415 catggagcag cccccaaaga gctgtggctg gggggatgac ggccaggctc cctgaccacc ctgcctgtgg aggtgacctg ttaggtctca tgcccactcc cccaggagca gctggcactg acagcctggg ggggccgctc tccccctgca geegtgeagg actctagctc atgagtggaa agtcacctac aggactgggc cgggcccagg gcctctggct tccctgccca atcctccctg gagaagggac atgggaatga attgaaatgg ggcgctggac acctacagca gcacgcatgt ccctccaagg ctgtcttctc ccagagcaca agaaggccag cccactgggc cctggggctg ccctcggcaa ccgtggggag gccatttgct gccctggggc atcatgggca actcgtgaca gcctctgact caccacgatg acgcctctgg acctcggtga tgccttccga caccactggg aaccaagggc cctcactcag gaaccctgga gacagaagtc aggtgtcatc atcagacttg cggccacagc actagagtca cccccccagg cctccagaac cttactggca ctgtggcact gccaccagca atgccctgcc ttgctgcctt caccctgaac atttagtacc ctgcaggcca ggccagcttc ccctcactta accaccccat accagtcacc tcctgctcct tttcctcttt tgtgagaaga tgggggctgg agggggcaga gtggcctgtg agcaagagcc aggggtgtcc cagtcccagc ctctggggca gagettgtag ccctggatgg cctctggggc aggaccacta gctaagcaag ccaggagaag acccctgccc aagtggctct tgggacaacg tgctgcttac actccaggtg tggaccggcc gcagccccca ctgacctgcc catgtccaga gggactggac agccagggca gggctttggg gggcactaga agatgagggt gtcggctgtg aggcgggtgg ctggtataaa taatatttat cttttcaacc ag 1484 1544 1604 1664 1724 1784 1844 1904 1964 2024 2084 2144 2204 2264 2324 2384 2444 2504 2536 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < 2 415 PRT智人 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 2 Met Gly Gly His Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15

Gly Leu Asn Pro Val Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30

Leu Ser Leu Ala Ser Asn lie Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45

Asp Leu lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60

Val Arg Pro Cys Pro Ala Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -88- 1227780 A7 B7 五、發明説明（86 ) 65 70 75 80

Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg 85 90 95

Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu He Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser 100 105 110

Lys Val His Tyr His Val Ala Val lie He Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 lie Ser Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140

Arg Ser 工le Arg Cys Leu Arg Asn lie He His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160

Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met 165 170 175

Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190

Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205

Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220

Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240

Pro lie 工le Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255

Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270

Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu He Asn Phe lie Phe Leu Phe 2Ί5 280 285

Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320

Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-89- 1227780 A7 B7 五、發明説明（87

Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365

Glu Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380

His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400

Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415 <210> 3 <211> 1285 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (38) . . (1285) <400> 3 cccgggcatt caggacgg 55 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

Met Gly Gly His Pro Gin 1 5 etc cgt etc gtc aag gcc ett etc ett ctg ggg ctg aac ccc gtc tet Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Val Ser 10 15 20 103 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 gcc tcc etc cag gac cag cac tgc gag age ctg tcc ctg gcc age aac Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser Leu Ser Leu Ala Ser Asn 25 30 35 ate tea gga ctg cag tgc aac gca tcc gtg gac etc att ggc acc tgc 工le Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val Asp Leu lie Gly Thr Cys 40 45 50 tgg ccc ege age cct geg ggg cag eta gtg gtt egg ccc tgc cct gcc Trp Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val Val Arg Pro Cys Pro Ala 55 60 65 70 ttt ttc tat ggt gtc ege tac aat acc aca aac aat ggc tac egg gag Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Asn Gly Tyr Arg Glu 75 80 85 tgc ctg gcc aat ggc age tgg gcc gcc ege gtg aat tac tcc gag tgc Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg Val Asn Tyr Ser Glu Cys 90 95 100 cag gag ate etc aat gag gag aaa aaa age aag gtg cac tac cat gtc Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser Lys Val His Tyr His Val 105 110 115 gca gtc ate ate aac tac ctg ggc cac tgt ate tcc ctg gtg gcc etc Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie Ser Leu Val Ala Leu 120 125 130 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 151 199 24 7 295 343 391 439

- 90- 1227780 五、發明説明（88 ) A7 B7 ct9 9^9 9CC ttt gtc etc ttt ctg egg etc agg age ate egg tgc ctg 487

Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu 135 140 145 150 ega aac ate ate cac tgg aac etc ate tee gee ttc ate ctg ege aac 535

Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser Ala Phe lie Leu Arg Asn 155 160 165 gee acc tgg ttc gtg gtc cag eta acc atg age ccc gag gtc cac cag 583

Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met Ser Pro Glu Val His Gin 170 175 180 age aac gtg ggc tgg tgc agg ttg gtg aca gee gee tac aac tac ttc 631

Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe 185 190 195 cat gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttc ggc gag ggc tgc tac ctg cac 679

His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys Tyr Leu His 200 205 210 aca gee ate gtg etc acc tac tee act gac egg ctg ege aaa tgg atg 727

Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Arg Leu Arg Lys Trp Met 215 220 225 230 ttc ate tgc att ggc tgg ggt gtg ccc ttc ccc ate att gtg gee tgg 775

Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe Pro lie lie Val Ala Trp 235 240 245 gee att ggg aag ctg tac tac gac aat gag aag tgc tgg ttt ggc aaa 823

Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp Phe Gly Lys 250 255 260 agg cct ggg gtg tac acc gac tac ate tac cag ggc ccc atg'ate ctg 871

Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro Met lie Leu 265 270 275 gtc ctg ctg ate aat ttc ate ttc ett ttc aac ate gtc ege ate etc 919

Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu 280 285 290 atg acc aag etc egg gca tee acc aeg tet gag acc att cag tac agg 967

Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg 295 300 305 310 aag get gtg aaa gee act ctg gtg ctg ctg ccc etc ctg ggc ate acc 1015

Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr 315 320 325 tac atg ctg ttc ttc gtc aat ccc ggg gag gat gag gtc tee egg gtc 1063

Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu Val Ser Arg Val 330 335 340 gtc ttc ate tac ttc aac tee ttc ctg gaa tee ttc cag ggc ttc ttt 1111

Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe Gin Gly Phe Phe 345 350 355 gtg tet gtg ttc tac tgt ttc etc aat agt gag gtc cgt tet gee ate 1159

Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg Ser Ala lie 360 365 370 egg aag agg tgg cac egg tgg cag gac aag cac teg ate cgt gee ega 1207

Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys His Ser lie Arg Ala Arg 375 380 385 390 gtg gee cgt gee atg tee ate ccc acc tee cca acc cgt gtc age ttt 1255 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-91 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（89 )

Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg Val Ser Phe 395 400 405 cac age ate aag cag tcc aca gca gtc tga 1285

His Ser He Lys Gin Ser Thr Ala Val 410 415 <210> 4 <211> 415

<212> PRT

<213>智人 I <400> 4

Met Gly Gly His Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15

Gly Leu Asn Pro Val Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30

Leu Ser Leu Ala Ser Asn lie Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45

Asp Leu 工le Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60

Val Arg Pro Cys Pro Ala Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 70 75 80

Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg 85 90 95

Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu He Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser 100 105 110

Lys Val His Tyr His Val Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125

He Ser Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140

Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160

Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met 165 170 175

Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190

Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

- 92- 1227780 A7 B7 五、發明説明（90 )

Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala He Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220

Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240

Pro lie He Val Ala Trp Ala He Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255

Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270

Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285

Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320

Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335

Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365

Glu Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380

His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工涓費合作社印製

Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415 <210> 5 <211> 1146 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (19) . . (1146) <400> 5 agccgagcga gcccgagg 51

Met Gly Gly His Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys 1 5 10

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -93- 1227780 五、發明説明（91 ) A7 B7 gcc ctt etc ett ctg ggg ctg aac ccc gtc tet gee tee etc cag gac 99

Ala Leu Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Val Ser Ala Ser Leu Gin Asp 15 20 25 cag cac tgc gag age ctg tee ctg gcc age aac ate tea gac aat ggc 147

Gin His Cys Glu S专r Leu Ser Leu Ala Ser Asn lie Ser Asp Asn Gly 30 35 40 tac egg gag tgc ctg gcc aat ggc age tgg gcc gcc ege gtg aat tac 195

Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg Val Asn Tyr 45 50 55 tee gag tgc cag gag ate etc aat gag gag aaa aaa age aag gtg cac 243

Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser Lys Val His 60 65 70 75 tac cat gtc gca gtc ate ate aac tac ctg ggc cac tgt ate tee ctg 291

Tyr His Val Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie Ser Leu 80 85 90 gtg gcc etc ctg gtg gcc ttt gtc etc ttt ctg egg etc agg age ate 339

Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu Arg Ser lie 95 100 105 egg tgc ctg ega aac ate ate cac tgg aac etc ate tee gcc ttc ate 387

Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser Ala Phe lie 110 115 120 ctg ege aac gcc acc tgg ttc gtg gtc cag eta acc atg age ccc gag 435

Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met Ser Pro Glu 125 130 135 gtc cac cag age aac gtg ggc tgg tgc agg ttg gtg aca gcc gcc tac 483

Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala Tyr 140 145 150 155 aac tac ttc cat gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttc ggc gag ggc tgc 531

Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys 160 165 170 tac ctg cac aca gcc ate gtg etc acc tac tee act gac egg ctg ege 579

Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Arg Leu Arg 175 180 185 aaa tgg atg ttc ate tgc att ggc tgg ggt gtg ccc ttc ccc ate att 627

Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe Pro lie lie 190 195 200 gtg gcc tgg gcc att ggg aag ctg tac tac gac aat gag aag tgc tgg 675

Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp 205 210 215 ttt ggc aaa agg cct ggg gtg tac acc gac tac ate tac cag ggc ccc 723

Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro 220 225 230 235 atg ate ctg gtc ctg ctg ate aat ttc ate ttc ctt ttc aac ate gtc 771

Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe Asn lie Val 240 245 250 ege ate etc atg acc aag etc egg gca tee acc aeg tet gag acc att 819

Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie 255 260 265 cag tac agg aag get gtg aaa gcc act ctg gtg ctg ctg ccc etc ctg 867 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

- 94- 1227780 A7 B7 五、發明説明（92 ) Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu 270 275 280 ggc ate acc tac atg ctg ttc ttc gtc aat ccc ggg gag gat gag gtc 915 Gly He Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu Val 285 290 295 tec egg gtc gtc ttc ate tac ttc aac tcc ttc ctg gaa tcc ttc cag 963 Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe Gin 300 305 310 315 ggc ttc ttt gtg tet gtg ttc tac tgt ttc etc aat agt gag gtc cgt 1011 Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg 320 325 330 tet gcc ate egg aag agg tgg cac egg tgg cag gac aag cac teg ate 1059 Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys His Ser He 335 340 345 cgt gcc ega gtg gcc cgt gcc atg tcc ate ccc acc tcc cca acc cgt 1107 Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg 350 355 360 gtc age ttt cac age ate aag cag tcc aca gca gtc tga 1146 Val Ser Phe His Ser He Lys Gin Ser Thr Ala Val 365 370 375 <210> 6 <211> 375 <212> PRT 智人 ！ <400> 6 Met Gly Gly His Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 15 10 15

Gly Leu Asn Pro Val Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30

Leu Ser Leu Ala Ser Asn lie Ser Asp Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu 35 40 45 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 訂

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu 50 55 60 lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser Lys Val His Tyr His Val Ala Val 65 70 75 80 lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie Ser Leu Val Ala Leu Leu Val 85 90 95

Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn 100 105 110

He lie His Trp Asn Leu lie Ser Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr 115 120 125 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ：297公釐） -95- 1227780 A7 B7 五、發明説明（93 )

Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn 130 135 140

Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val 145 150 155 160

Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala 165 170 175 lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie 180 185 190

Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie 195 200 205

Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro 210 215 220

Gly Val Tyr Thr Asp Tyr He Tyr Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu 225 230 235 240

Leu He Asn Phe He Phe Leu Phe Asn He Val Arg He Leu Met Thr 245 250 255

Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr He Gin Tyr Arg Lys Ala 260 265 270

Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met 275 280 285

Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe 290 295 300 lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser 305 310 315 320 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg Ser Ala He Arg Lys 325 330 335

Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys His Ser He Arg Ala Arg Val Ala 340 345 350

Arg Ala Met Ser He Pro Thr Ser Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser 355 360 365 lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 370 375 <210> 7

本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -96- 1227780 A7 B7 五、發明説明（94 <211> 1206 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (1) . . (1206) <400> 7 99a 999 cac ccg cag etc cgt etc gtc aag gee ett etc ett ctg Met Gly Gly His Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 48 ggg ctg aac ccc gtc tet gee tee etc cag gac cag cac tgc gag age Gly Leu Asn Pro Val Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30 96 ctg tee ctg gee age aac ate tea gga ctg cag tgc aac gca tee gtg Leu Ser Leu Ala Ser Asn lie Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45 144 gac etc att ggc acc tgc tgg ccc ege age cct geg ggg cag eta gtg Asp Leu lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60 gtt egg ccc tgc cct gee ttt ttc tat ggt gtc ege tac aat acc aca Val Arg Pro Cys Pro Ala Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 70 75 80 192 240 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) aac aat ggc tac egg gag tgc ctg gee aat ggc age tgg gee gee ege Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg 85 90 95 288 gtg aat tac tee gag tgc cag gag ate etc aat gag gag aaa aaa age Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser 100 105 110 336 aag gtg cac tac cat gtc gca gtc ate ate aac tac ctg ggc cac tgt Lys Val His Tyr His Val Ala Val lie He Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 ate tee ctg gtg gee etc ctg gtg gee ttt gtc etc ttt ctg egg etc lie Ser Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140 384 432 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 a99 agc ate egg tgc ctg ega aac ate ate cac tgg aac etc ate tee 480 Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160 gee ttc ate ctg ege aac gee acc tgg ttc gtg gtc cag eta acc atg 528 Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met 165 170 175 age ccc gag gtc cac cag age aac gtg ggc tgg tgc agg ttg gtg aca Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190 gee gee tac aac tac ttc cat gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttc ggc Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205 9a9 99° tgc tac ctg cac aca gee ate gtg etc acc tac tee act gac Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220 egg ctg ege aaa tgg atg ttc ate tgc att ggc tgg ggt gtg ccc ttc 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 576 624 6 72 720

-97 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（95

Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys He Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240 ccc ate att gtg gcc tgg gcc att ggg aag ctg tac tac gac aat gag Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255 768 aag tgc tgg ttt ggc aaa agg cct ggg gtg tac acc gac tac ate tac Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270 816 cag ggc ccc atg ate ctg gtc ctg ctg ate aat ttc ate ttc ett ttc Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285 864 aac ate gtc ege ate etc atg acc aag etc egg gca tcc acc aeg tet Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300 912 gag acc att cag tac agg aag get gtg aaa gcc act ctg gtg ctg ctg Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320 960 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ccc etc ctg ggc ate acc tac atg ctg ttc ttc gtc aat ccc ggg gag Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335 1008 gat gag gtc tcc egg gtc gtc ttc ate tac ttc aac tcc ttc ctg gaa Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350 1056 tcc ttc cag gtc cgt tet gcc ate egg aag agg tgg cac egg tgg cag Ser Phe Gin Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin 355 360 365 1104 gac aag cac teg ate cgt gcc ega gtg gcc cgt gcc atg tcc ate ccc Asp Lys His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser He Pro 370 375 380 1152 acc tcc cca acc cgt gtc age ttt cac age ate aag cag tcc aca gca Thr Ser Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala 1200 385 390 395 400 gtc tga Val 1206 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 8 <211> 401 <212> PRT <213>智人 <400> 8 Met Gly Gly His Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15

Gly Leu Asn Pro Val Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30

Leu Ser Leu Ala Ser Asn lie Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇x 297公釐） -98- 1227780 A7 B7 五、發明説明（96 )

Asp Leu lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60

Val Arg Pro Cys Pro Ala Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 70 75 80

Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg 85 90 95

Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser 100 105 110

Lys Val His Tyr His Val Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 lie Ser Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140

Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160

Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met 165 170 175

Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190

Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205

Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220

Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240

Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255

Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270

Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285

Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-99- 1227780 A7 B7 五、發明説明（97 ) 305 310 315 320

Pro Leu Leu Gly He Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335

Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350

Ser Phe Gin Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin 355 360 365

Asp Lys His Ser He Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro 370 375 380

Thr Ser Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser He Lys Gin Ser Thr Ala 385 390 395 400

Val <210> 9 <211> 2110 <212> DNA <213>智人 ！ <220> <221> CDS <222> (1)..(1236) (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 9 atg gac gcg gca ctg etc cac age ctg ctg gag gcc aac tgc age ctg 48 Met Asp Ala Ala Leu Leu His Ser Leu Leu Glu Ala Asn Cys Ser Leu 15 10 15 gcg ctg get gaa gag ctg etc ttg gac ggc tgg ggg cca ccc ctg gac 96 Ala Leu Ala Glu Glu Leu Leu Leu Asp Gly Trp Gly Pro Pro Leu Asp 20 25 30 ccc gag ggt ccc tac tcc tac tgc aac aeg acc ttg gac cag ate gga 144 Pro Glu Gly Pro Tyr Ser Tyr Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin lie Gly 35 40 45 aeg tgc tgg ccc ege age get gcc gga gcc etc gtg gag agg ccg tgc 192 Thr Cys Trp Pro Arg Ser Ala Ala Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys 50 55 60 ccc gag tac ttc aac ggc gtc aag tac aac aeg acc egg aat gcc tat 240 Pro Glu Tyr Phe Asn Gly Val Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr 65 70 75 80 ega gaa tgc ttg gag aat ggg aeg tgg gcc tea aag ate aac tac tea 288 Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Lys lie Asn Tyr Ser 85 90 95 cag tgt gag ccc att ttg gat gac aag cag agg aag tat gac ctg cac 336 Gin Cys Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His 100 105 110 tac ege ate gcc ett gtc gtc aac tac ctg ggc cac tgc gta tet gtg 384

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -100 - 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（98 ) Tyr Arg lie Ala Leu Val Val Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val 115 120 125 gca gcc ctg gtg gcc gcc ttc ctg ctt ttc ctg gcc ctg egg age att 432 Ala Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Ala Leu Arg Ser lie 130 135 140 ege tgt ctg egg aat gtg att cac tgg aac etc ate acc acc ttt ate 480 Arg Cys Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie 145 150 155 160 ctg ega aat gtc atg tgg ttc ctg ctg cag etc gtt gac cat gaa gtg 528 Leu Arg Asn Val Met Trp Phe Leu Leu Gin Leu Val Asp His Glu Val 165 170 175 cac gag age aat gag gtc tgg tgc cac tgc ate acc acc ate ttc aac 576 His Glu Ser Asn Glu Val Trp Cys His Cys lie Thr Thr lie Phe Asn 180 185 190 tac ttc gtg gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttt gtg gaa ggc tgc tac 624 Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr 195 200 205 ctg cac aeg gcc att gtc atg acc tac tcc act gag ege ctg ege aag 672 Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu Arg Leu Arg Lys 210 215 220 tgc etc ttc etc ttc ate gga tgg tgc ate ccc ttc ccc ate ate gtc 720 Cys Leu Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro lie 工le Val 225 230 235 240 gcc tgg gcc ate ggc aag etc tac tat gag aat gaa cag tgc tgg ttt 768 Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe 245 250 255 ggc aag gag cct ggc gac ctg gtg gac tac ate tac caa ggc ccc ate 816 Gly Lys Glu Pro Gly Asp Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro lie 260 265 270 att etc gtg etc ctg ate aat ttc gta ttt ctg ttc aac ate gtc agg 864 lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg 275 280 285 ate eta atg aca aag tta ege geg tec acc aca tec gag aca ate cag 912 lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin 290 295 300 tac agg aag gca gtg aag gcc acc ctg gtg etc ctg ccc etc ctg ggc 960 Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly 305 310 315 320 ate acc tac atg etc ttc ttc gtc aat ccc ggg gag gac gac ctg tea 1008 lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser 325 330 335 cag ate atg ttc ate tat ttc aac tec ttc ctg cag teg ttc cag ggt 1056 Gin lie Met Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly 340 345 350 ttc ttc gtg tet gtc ttc tac tgc ttc ttc aat gga gag gtg ege tea 1104 Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ser 355 360 365 gee gtg agg aag agg tgg cac ege tgg cag gac cat cac tec ctt ega 1152 Ala Val Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser Leu Arg 370 375 380 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -101 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（99 ) gtc ccc atg gcc egg gee atg tee ate cct aca tea ccc aca egg ate 1200 Val Pro Met Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie 385 390 395 400 age ttc cac age ate aag cag aeg gcc get gtg tga cccctcggtc 1246 Ser Phe His Ser lie Lys Gin Thr Ala Ala Val 405 410 gcccacctgc acagctcccc tgtcctcctc caccttcttc ctctgggttc tctgtgctgg 1306 gcaggctctc gtggggcagg agatgggagg ggagagacca gctctccagc ctggcaggaa 1366 agagggggtg cggcagccaa gggggactgc aagggacagg gatgagtggg ggccaccagg 1426 ctcagcgcaa gaggaageag agggaattca caggaccccc tgagaagage cagtcagatg 1486 tetgeaggea tttgcccatc ccagcctctc tggccagggc cttactgggc ccagagcaga 1546 gaaggacctg tccaacacac acagctattt atagtageag acacagggct cccctgccct 1606 actcatggag ccagcagcca ggcaatggtg tggccctgca ctggcccttg gactccacac 1666 tcagtggtgc cctgcagttg 99tgggttaa cgccaagcaa aggatcagtt tggctgcctt 1726 atcccagggc tgtcacctag agaggctcac ttgtacccca ccctgttcct gtgtcccctc 1786 cccagccatc ctccccgcct tgggggctcc atgaaggatg caggcttcca ggcctggctt 1846 cctctcttgg gagacccctt ctctgcctag tccacagatt aggcaatcaa ggaagaegee 1906 atcagggaag ccacatcctt agtcaaccag ttgcatcgtg cggggcaaaa tgaggagcag 1966 aggeatggag gagggaggcg tgggatggga atagcagaac caccatgtct tcagtgattg 2026 aaactcatac cccattgccc tttgccctcc agtctcccct tcagaaacat ctctgctctc 2086 tgtgaaataa accatgcctc ttgg 2110 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 10 <211> 411 <212> PRT <213>智人 ^ <400> 10 Met Asp Ala Ala Leu Leu His Ser Leu Leu Glu Ala Asn Cys Ser Leu 15 10 15 Ala Leu Ala Glu Glu Leu Leu Leu Asp Gly Trp Gly Pro Pro Leu Asp 20 25 30

Pro Glu Gly Pro Tyr Ser Tyr Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin lie Gly 35 40 45

Thr Cys Trp Pro Arg Ser Ala Ala Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys 50 55 60

Pro Glu Tyr Phe Asn Gly Val Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr 65 70 75 80

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -102- 1227780 A7 B7 五、發明説明（100)

Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Lys He Asn Tyr Ser 85 90 95

Gin Cys Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His 100 105 110

Tyr Arg lie Ala Leu Val Val Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val 115 120 125

Ala Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Ala Leu Arg Ser lie 130 135 140

Arg Cys Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie 145 150 155 160

Leu Arg Asn Val Met Trp Phe Leu Leu Gin Leu Val Asp His Glu Val 165 170 175

His Glu Ser Asn Glu Val Trp Cys His Cys 工le Thr Thr lie Phe Asn 180 185 190

Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr 195 200 205

Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu Arg Leu Arg Lys 210 215 220

Cys Leu Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro lie lie Val 225 230 235 240

Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe 245 250 255

Gly Lys Glu Pro Gly Asp Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro lie 260 265 270 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣·

、1T

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg 275 280 285 工le Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin 290 295 300

Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly 305 310 315 320

He Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser 325 330 335

Gin lie Met Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） -103- 1227780 A7 B7 五、發明説明（101 ) 340 345 350

Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ser 355 360 365

Ala Val Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser Leu Arg 370 375 380

Val Pro Met Ala Arg Ala Met Ser He Pro Thr Ser Pro Thr Arg He 385 390 395 4〇〇

Ser Phe His Ser He Lys Gin Thr Ala Ala Val 405 <210> 11 <211> 1600 <212> DNA <213> 智人 1 <220> <221> CDS <222> (71) . . (1387) <400> 11 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ggggctggcc agggtgtgac caccgtgctg ggcagcaggc tccagtccct aacccccagc 60 cactactggc atg agg ggt ccc tea ggg ccc cca ggc etc etc tac gtc 109 Met Arg Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Leu Leu Tyr Val 1 5 10 cca cac etc etc etc tgc ctg'etc tgc etc etc cca ccg ccg etc caa 157 Pro His Leu Leu Leu Cys Leu Leu Cys Leu Leu Pro Pro Pro Leu Gin 15 20 25 tac gca gcc ggg cag age cag atg ccc aaa gac cag ccc ctg tgg gca 205 Tyr Ala Ala Gly Gin Ser Gin Met Pro Lys Asp Gin Pro Leu Trp Ala 3〇 35 40 45 ett ctg gag cag tac tgc cac acc ate atg acc etc acc aac etc tea 253 Leu Leu Glu Gin Tyr Cys His Thr lie Met Thr Leu Thr Asn Leu Ser 50 55 60 ggt ccc tac tcc tac tgc aac aeg acc ttg gac cag ate gga aeg tgc 301 Gly Pro Tyr Ser Tyr Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin He Gly Thr Cys 65 70 75 tgg ccc ege age get gcc gga gcc etc gtg gag agg ccg tgc ccc gag 349 Trp Pro Arg Ser Ala Ala Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys Pro Glu 80 85 90 tac ttc aac ggc gtc aag tac aac aeg acc egg aat gcc tat ega gaa 397 Tyr Phe Asn Gly Val Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr Arg Glu 95 100 105 tgc ttg gag aat ggg aeg tgg gcc tea aag ate aac tac tea cag tgt 445 Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Lys lie Asn Tyr Ser Gin Cys 110 115 120 125 gag ccc att ttg gat gac aag cag agg aag tat gac ctg cac tac ege 493 Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His Tyr Arg 130 135 140

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -104- 1227780 五、發明説明（102) A7 B7 ate gee ett gtc gtc aac tac ctg ggc cac tgc gta tet gtg gca gee 541 lie Ala Leu Val Val Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val Ala Ala 145 150 155 ctg gtg gee gee ttc ctg ett ttc ctg gee ctg egg age att ege tgt 589

Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Ala Leu Arg Ser lie Arg Cys 160 165 170 ctg egg aat gtg att cac tgg aac etc ate acc acc ttt ate ctg ega 637

Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie Leu Arg 175 180 185 aat gtc atg tgg ttc ctg ctg cag etc gtt gac cat gaa gtg cac gag 685

Asn Val Met Trp Phe Leu Leu Gin Leu Val Asp His Glu Val His Glu 190 195 200 205 age aat gag gtc tgg tgc ege tgc ate acc acc ate ttc aac tac ttc 733

Ser Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys lie Thr Thr lie Phe Asn Tyr Phe 210 215 220 gtg gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttt gtg gaa ggc tgc tac ctg cac 781

Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr Leu His 225 230 235 aeg gee att gtc atg acc tac tee act gag ege ctg ege aag tgc etc 829

Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu Arg Leu Arg Lys Cys Leu 240 245 250 ttc etc ttc ate gga tgg tgc ate ccc ttc ccc ate ate gtc gee tgg 877

Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro lie lie Val Ala Trp 255 260 265 gee ate ggc aag etc tac tat gag aat gaa cag tgc tgg ttt ggc aag 925

Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe Gly Lys 270 275 280 285 gag cct ggc gac ctg gtg gac tac ate tac caa ggc ccc ate att etc 973

Glu Pro Gly Asp Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro lie lie Leu 290 295 300 gtg etc ctg ate aat ttc gta ttt ctg ttc aac ate gtc agg ate eta 1021

Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu 305 310 315 atg aca aag tta ege geg tee acc aca tee gag aca ate cag tac agg 1069

Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg 320 325 330 aag gca gtg aag gee acc ctg gtg etc ctg ccc etc ctg ggc ate acc 1117

Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr 335 340 345 tac atg etc ttc ttc gtc aat ccc ggg gag gac gac ctg tea cag ate 1165

Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser Gin lie 350 355 360 365 atg ttc ate tat ttc aac tee ttc ctg cag teg ttc cag ggt ttc ttc 1213

Met Phe 工le Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe 370 375 380 gtg tet gtc ttc tac tgc ttc ttc aat gga gag gtg ege tea gee gtg 1261

Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ser Ala Val 385 390 395 agg aag agg tgg cac ege tgg cag gac cat cac tee ett ega gtc ccc 1309 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X：Z97公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-105- 1227780 A7 B7 五、發明説明（103)

Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser Leu Arg Val Pro 400 405 410 atg gcc egg gcc atg tcc ate cct aca tea ccc aca egg ate age ttc 1357

Met Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie Ser Phe 415 420 425 cac age ate aag cag aeg gcc get gtg tga cccctcggtc gcccacctgc 1407

His Ser lie Lys Gin Thr Ala Ala Val 430 435 acagctcccc tgtcctcctc caccttcttc ctctgggttc tctgtgctgg gcaggctctc 1467 gtggggcagg agatgggagg ggagagacca gctctccagc ctggcaggaa agagggggtg 1527 cggcagccaa gggggactgc aagggacagg gatgagtggg ggccaccagg ctcagcgcaa 1587 gaggaageag agg 1600 <210> 12 <211> 438 <212> PRT <213> 智人 <400> 12

Met Arg Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Leu Leu Tyr Val Pro His Leu 1 5 10 15

Leu Leu Cys Leu Leu Cys Leu Leu Pro Pro Pro Leu Gin Tyr Ala Ala 20 25 30

Gly Gin Ser Gin Met Pro Lys Asp Gin Pro Leu Trp Ala Leu Leu Glu 35 40 45

Gin Tyr Cys His Thr lie Met Thr Leu Thr Asn Leu Ser Gly Pro Tyr 50 55 60

Ser Tyr Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin He Gly Thr Cys Trp Pro Arg 65 70 75 80

Ser Ala Ala Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn 85 90 95

Gly Val Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu 100 105 110

Asn Gly Thr Trp Ala Ser Lys lie Asn Tyr Ser Gin Cys Glu Pro lie 115 120 125

Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His Tyr Arg lie Ala Leu 130 135 140

Val Val Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val Ala Ala Leu Val Ala 145 150 155 160 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-106- 1227780 A7 B7 五、發明説明（104) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Ala Phe Leu Leu Phe Leu Ala Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn 165 170 175 Val lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn Val Met 180 185 190 Trp Phe Leu Leu Gin Leu Val Asp His Glu Val His Glu Ser Asn Glu 195 200 205 Val Trp Cys Arg Cys lie Thr Thr lie Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr 210 215 220 Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie 225 230 235 240 Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu Arg Leu Arg Lys Cys Leu Phe Leu Phe 245 250 255 lie Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro He lie Val Ala Trp Ala He Gly 260 265 270 Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Pro Gly 275 280 285 Asp Leu Val Asp Tyr He Tyr Gin Gly Pro lie lie Leu Val Leu Leu 290 295 300 lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys 305 310 315 320 Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val 325 330 335 Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly He Thr Tyr Met Leu 340 345 350 Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser Gin lie Met Phe lie 355 360 365 Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val 370 375 380 Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg 385 390 395 400 Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser Leu Arg Val Pro Met Ala Arg 405 410 415 Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -107 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（105) 420 425 430

Lys Gin Thr Ala Ala Val 435 <210> 13 <211> 1558 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (152) . . (1345) <400> 13 ctgtgctcaa gcaatctgcc taccttggct tccccaagtg ctgagattat gggtgtgagc 60 cactgcacct ggccaagaat ccgaatggat tcaaagatac cttgaaataa ttcctcaatg 120 caacacacac acatatgcca gggttggtca a atg gga aga gag cct tgg cct 172

Met Gly Arg Glu Pro Trp Pro 1 5 gaa gac agg gac ctg ggc ttt cct cag etc ttc tgc caa ggt ccc tac 220

Glu Asp Arg Asp Leu Gly Phe Pro Gin Leu Phe Cys Gin Gly Pro Tyr 10 15 20 tcc tac tgc aac aeg acc ttg gac cag ate gga aeg tgc tgg ccc ege 268

Ser Tyr Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg 25 30 35 age get gee gga gee etc gtg gag agg ccg tgc ccc gag tac ttc aac 316

Ser Ala Ala Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn 40 45 50 55 ggc gtc aag tac aac aeg acc egg aat gee tat ega gaa tgc ttg gag 364

Gly Val Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu 60 65 70 aat ggg aeg tgg gee tea aag ate aac tac tea cag tgt gag ccc att 412

Asn Gly Thr Trp Ala Ser Lys lie Asn Tyr Ser Gin Cys Glu Pro lie 75 80 85 ttg gat gac aag cag agg aag tat gac ctg cac tac ege ate gee ett 460

Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His Tyr Arg lie Ala Leu 90 95 100 gtc gtc aac tac ctg ggc cac tgc gta tet gtg gca gee ctg gtg gee 508

Val Val Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val Ala Ala Leu Val Ala 105 110 115 gee ttc ctg ett ttc ctg gee ctg egg age att ege tgt ctg egg aat 556

Ala Phe Leu Leu Phe Leu Ala Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn 120 125 130 135 gtg att cac tgg aac etc ate acc acc ttt ate ctg ega aat gtc atg 604

Val lie His Trp A(sn Leu lie Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn Val Met 140 145 150 tgg ttc ctg ctg cag etc gtt gac cat gaa gtg cac gag age aat gag 652

Trp Phe Leu Leu Gin Leu Val Asp His Glu Val His Glu Ser Asn Glu 155 160 165 gtc tgg tgc ege tgc ate acc acc ate ttc aac tac ttc gtg gtg acc 700 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-108- 1227780 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（106 ) Val Trp Cys Arg Cys lie Thr Thr lie Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr 170 175 180 aac ttc ttc tgg atg ttt gtg gaa ggc tgc tac ctg cac acg gcc att 748 Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie 185 190 195 gtc atg acc tac tcc act gag cgc ctg cgc aag tgc etc ttc etc ttc 796 Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu Arg Leu Arg Lys Cys Leu Phe Leu Phe 200 205 210 215 ate gga tgg tgc ate ccc ttc ccc ate ate gtc gcc tgg gcc ate ggc 844 He Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly 220 225 230 aag etc tac tat gag aat gaa cag tgc tgg ttt ggc aag gag cct ggc 892 Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Pro Gly 235 240 245 gac ctg gtg gac tac ate tac caa ggc ccc ate att etc gtg etc ctg 940 Asp Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro 工le lie Leu Val Leu Leu 250 255 260 ate aat ttc gta ttt ctg ttc aac ate gtc agg ate eta atg aca aag 988 lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys 265 270 275 tta cgc geg tcc acc aca tcc gag aca ate cag tac agg aag gca gtg 1036 Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val 280 285 290 295 aag gcc acc ctg gtg etc ctg ccc etc ctg ggc ate acc tac atg etc 1084 Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu 300 305 310 ttc ttc gtc aat ccc ggg gag gac gac ctg tea cag ate atg ttc ate 1132 Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser Gin lie Met Phe lie 315 320 325 tat ttc aac tcc ttc ctg cag teg ttc cag ggt ttc ttc gtg tet gtc 1180 Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val 330 335 340 ttc tac tgc ttc ttc aat gga gag gtg cgc tea gcc gtg agg aag agg 1228 Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg 345 350 355 tgg cac cgc tgg cag gac cat cac tcc ett ega gtc ccc atg gcc egg 1276 Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser Leu Arg Val Pro Met Ala Arg 360 365 370 375 gcc atg tcc ate cct aca tea ccc aca egg ate age ttc cac age ate 1324 Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie 380 385 390 aag cag acg gcc get gtg tga cccctcggtc gcccacctgc acagctcccc 1375 Lys Gin Thr Ala Ala Val 395 tgtcctcctc caccttcttc ctctgggttc tctgtgctgg gcaggctctc gtggggcagg 1435 agatgggagg ggagagacca gctctccagc ctggcaggaa agagggggtg cggcagccaa 1495 gggggactgc aagggacagg gatgagtggg ggccaccagg ctcagcgcaa gaggaageag 1555 agg 1558 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

糾衣· 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -109- 1227780 A7 B7 五、發明説明（107) <210> 14 <211> 397 <212> PRT <213> 智人 <400> 14

Met Gly Arg Glu Pro Trp Pro Glu Asp Arg Asp Leu Gly Phe Pro Gin 1 5 10 15

Leu Phe Cys Gin Gly Pro Tyr Ser Tyr Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin 20 25 30

He Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Ala Ala Gly Ala Leu Val Glu Arg 35 40 45

Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn Gly Val Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn 50 55 60

Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Lys 工le Asn 65 70 75 80

Tyr Ser Gin Cys Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp 85 90 95

Leu His Tyr Arg lie Ala Leu Val Val Asn Tyr Leu Gly His Cys Val 100 105 110

Ser Val Ala Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Ala Leu Arg 115 120 125

Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr 130 135 140

Phe lie Leu Arg Asn Val Met Trp Phe Leu Leu Gin Leu Val Asp His 145 150 155 160 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Glu Val His Glu Ser Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys lie Thr Thr lie 165 170 175

Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly 180 185 190

Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu Arg Leu 195 200 205

Arg Lys Cys Leu Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro lie 210 215 220 lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） -110- 1227780 A7 B7 五、發明説明（108) 225 230 235 240

Trp Phe Gly Lys Glu Pro Gly Asp Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly 245 250 255

Pro lie lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie 260 265 270

Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr 275 280 285 lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu 290 295 300

Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp 305 310 315 320

Leu Ser Gin lie Met Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe 325 330 335

Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val 340 345 350

Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser 355 360 365

Leu Arg Val Pro Met Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr 370 375 380

Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys Gin Thr Ala Ala Val 385 390 395 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 15 <211> 1411 <212> DNA <213>溝鼠 1 <220> <221> CDS <222> (80) ·· (1327) <400> 15 agaccgcagc cgcccgccct ccgctctggg atgtcggagc gatccaggca tccaggacgc 60 tgacggagcg agcccgagg atg gga egg ege ccg cag etc egg etc gtg aag 112 Met Gly Arg Arg Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys 1 5 10 gec ett etc ett ctg ggg ctg aac cct gtg tcc acc tcc ett cag gat 160 Ala Leu Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Val Ser Thr Ser.Leu Gin Asp 15 20 25 cag ege tgt gag aac ctg tcc ctg acc age aat gtt tet ggc ctg cag 208 Gin Arg Cys Glu Asn Leu Ser Leu Thr Ser Asn Val Ser Gly Leu Gin 30 35 40 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -111 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（109) tgc aat gca tcc gtg gac etc att ggc acc tgc tgg ccc egg age cct 256

Cys Asn Ala Ser Val Asp Leu lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Pro 45 50 55 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 9C9 99c cag ttg gtg gtc ega ccc tgc cct gee ttt ttc tac ggt gtc 304

Ala Gly Gin Leu Val Val Arg Pro Cys Pro Ala Phe Phe Tyr Gly Val 60 65 70 75 ege tac aac aeg aca aac aat ggc tac egg gag tgc ctg gee aac ggc 352

Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly 80 85 90 age tgg gca gee cgt gtg aat tat tet gag tgc cag gag att etc aac 400

Ser Trp Ala Ala Arg Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Asn 95 100 105 gaa gag aag aag age aaa gta cac tac cat gtt gca gtc ate ate aac 448

Glu Glu Lys Lys Ser Lys Val His Tyr His Val Ala Val lie lie Asn 110 115 120 tac ctg ggt cac tgc ate tec ctg gta gee etc ctg gtg gee ttt gtc 496

Tyr Leu Gly His Cys lie Ser Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val 125 130 135 etc ttc ttg egg etc agg age ate egg tgc ctg aga aac ate ate cac 544

Leu Phe Leu Arg Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His 140 145 150 155 tgg aac etc ate teg get ttc ate eta ege aac gee aeg tgg ttt gtg 592

Trp Asn Leu lie Ser Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val 160 165 170 gtc cag etc acc gtg age ccc gag gtg cac cag age aat gtg gee tgg 640

Val Gin Leu Thr Val Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Ala Trp 175 180 185 tgt agg ttg gtg aca gee gee tac aat tac ttc cat gta acc aac ttc 688

Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe 190 195 200 ttc tgg atg ttc ggt gag ggc tgc tac ctg cac aca gee att gtg etc 736

Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu 205 210 215 aeg tac tec acc gac cgt ctg ege aag tgg atg ttc gtc tgc att ggc 784 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Thr Tyr Ser Thr Asp Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe Val Cys lie Gly 220 225 230 235 tgg ggt gta cct ttc ccc ate att gtg get tgg gee att ggg aag ctg 832

Trp Gly Val Pro Phe Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu 240 245 250 cac tac gac aat gaa aag tgc tgg ttt ggc aaa cgt cct ggg gta tac 880

His Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr 255 260 265 act gac tac ate tac cag ggc ccc atg ate ctg gtc ctg ctg ate aac 928

Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn 270 275 280 ttt ate ttt etc ttc aac att gtc ege ate etc atg acc aaa etc egg 976

Phe lie Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg 285 290 295 gca tec act aca tet gag acc att cag tac agg aag get gtg aag gee 1024 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -112- 1227780 A7 B7 五、發明説明（110)

Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala 300 305 310 315 act ctg gtg etc ctg ccc ett ctg ggc ate acc tac atg ttg ttc ttc 1072 Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe 320 325 330 gtc aac cct gga gag gac gag gtc tcc agg gtc gtc ttc ate tac ttc 1120 Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe 335 340 345 aac tet ttt ctg gag tcc ttt cag ggc ttc ttt gtg tet gtg ttc tac 1168 Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr 350 355 360 tgt ttt ctg aac agt gag gtc ege tcc get ate egg aag agg tgg cgt 1216 Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp Arg 365 370 375 egg tgg cag gac aag cac tcc ate aga gcc ega gtg gcc ega get atg 1264 Arg Trp Gin Asp Lys His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met 380 385 390 395 tcc ate ccc acc tcc ccg acc aga gtc age ttt cac age ate aag cag 1312 Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin 400 405 410 tcc aca gca gtg tga gctccaggcc acagagcagc ccccaagacc tgaggccggg 1367 Ser Thr Ala Val 415 gagatgatgc aagctcactg acgagccagt ctgcagacgc aage 1411 <210> 16 <211> 415 <212> PRT <213> 溝鼠 <400> 16

Met Gly Arg Arg Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 15 10 15 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Gly Leu Asn Pro Val Ser Thr Ser Leu Gin Asp Gin Arg Cys Glu Asn 20 25 30

Leu Ser Leu Thr Ser Asn Val Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45

Asp Leu lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60

Val Arg Pro Cys Pro Ala Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 70 75 80

Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg 85 90 95 -- Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser '紙張尺度適用中周國家標準（CNS ) M規格（210 X別公釐）

-113- 1227780 A7 B7 五、發明説明（111 ) 100 105 110

Lys Val His Tyr His Val Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 lie Ser Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140

Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160

Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Val 165 170 175

Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Ala Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190

Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205

Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220

Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe Val Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240

Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu His Tyr Asp Asn Glu 245 250 255

Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270

Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320

Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335

Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -114- 1227780 A7 B7 五、發明説明（112)

Glu Val Arg Ser Ala He Arg Lys Arg Trp Arg Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380

His Ser He Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser He Pro Thr Ser 385 390 395 400

Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 17 <211> 1626 <212> DNA <213>溝鼠 ’ <220> <221> CDS <222> (216) · . (1451) <400> 17 gcggcccctc atctccgtga gccccgaggc ttctcttggc caaggtccta ggagtgatcc 60 gattgagagc ggcgccccaa agctgccggg ctggccgggg tgggcgggga ggcacctgga 120 cgctgcactc tctggtggct ccgcgtcgcg ccaggtccct cgcagccacg cggggcgcgc 180 actcccactc ccaacgcgcg cggctccgga gcgca atg gac gcg gcg ctg etc 233 Met Asp Ala Ala Leu Leu 1 5 etc age ctg ctg gag gcc aac tgc age ctg gca ctg gcc gaa gag ctg 281 Leu Ser Leu Leu Glu Ala Asn Cys Ser Leu Ala Leu Ala Glu Glu Leu 10 15 20 ett ttg gac ggc tgg gga gag ccc ccg gac ccc gaa ggt ccc tac tcc 329 Leu Leu Asp Gly Trp Gly Glu Pro Pro Asp Pro Glu Gly Pro Tyr Ser 25 30 35 tac tgc aac aeg acc ttg gac cag ate ggg acc tgc tgg ccc cag age 377 Tyr Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser 40 45 50 gcg cct gga gcc eta gtg gag aga cca tgc ccc gaa tac ttc aac ggc 425 Ala Pro Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn Gly 55 60 65 70 ate aag tac aac aeg acc egg aat gcc tac aga gaa tgc ctg gag aat 473 lie Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu Asn 75 80 85 ggg acc tgg gcc tea agg ate aac tac tea cac tgt gaa ccc att ttg 521 Gly Thr Trp Ala Ser Arg lie Asn Tyr Ser His Cys Glu Pro lie Leu 90 95 100 gat gac aag cag agg aag tat gac ctg cat tac ega ate gcc etc ate 569 Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His Tyr Arg lie Ala Leu lie 105 110 115 ate aac tac ctg ggc cac tgt gtt tcc gtg gtg gcc ctg gtg get get 617 lie Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val Val Ala Leu Val Ala Ala 120 125 130 ttc ctg ett ttc eta gtg ctg egg agt ate ege tgc ctg egg aat gtg 665 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -115- 1227780 A7 B7 五、發明説明（113) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Phe Leu Leu Phe Leu Val Leu Arg Ser 工le Arg Cys Leu Arg Asn Val 135 140 145 150 ate cac tgg aac etc ate acc acc ttc ate ctg aga aac ate aeg tgg 713 lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn lie Thr Trp 155 160 165 ttc ctg ctg caa etc ate gac cac gaa gtg cat gag ggc aat gag gtc 761 Phe Leu Leu Gin Leu lie Asp His Glu Val His Glu Gly Asn Glu Val 170 175 180 t99 t9c cgc tgc gtc acc acc ata ttc aac tac ttt gtg gtc acc aac 809 Trp Cys Arg Cys Val Thr Thr lie Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn 185 190 195 ttc ttc tgg atg ttt gtg gaa ggc tgc tac ctg cac aeg gcc ate gtc 857 Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val 200 205 210 atg aeg tac tcc aeg gag cat ctg ege aag tgg etc ttc etc ttc att 905 Met Thr Tyr Ser Thr Glu His Leu Arg Lys Trp Leu Phe Leu Phe lie 215 220 225 230 gga tgg tgc ata ccc tgc cct ate att gtc gcc tgg gca gtt ggc aaa 953 Gly Trp Cys lie Pro Cys Pro lie lie Val Ala Trp Ala Val Gly Lys 235 240 245 etc tac tat gag aat gag cag tgc tgg ttt ggc aag gaa cct ggt gac 1001 Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Pro Gly Asp 250 255 260 tta gtg gac tac ate tac cag ggc ccc ate ate etc gtg etc etc ate 1049 Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro lie lie Leu Val Leu Leu lie 265 270 275 aat ttt gtg ttt ctg ttc aac ate gtc agg ate ctg atg aca aaa ctg 1097 Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu 280 285 290 ega gcc tcc acc aca tcc gag acc ate cag tac agg aag gca gtg aag 1145 Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys 295 300 305 310 gcc acc ctg gtc etc etc ccc ctg ttg ggc ate acc tac atg etc ttc 1193 Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe 315 320 325 ttt gtc aat cct gga gag gac gac ctg tea cag att gtg ttc ate tac 1241 Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser Gin lie Val Phe lie Tyr 330 335 340 ttc aac tet ttc ctg cag tcc ttt cag ggt ttc ttt gtg tcc gtt ttc 1289 Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe 345 350 355 tac tgc ttc ttc aat gga gag gtg ege tcc gcc ctg aga aag egg tgg 1337 Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ser Ala Leu Arg Lys Arg Trp 360 365 370 cac cgt tgg cag gac cac cac gcc etc ega gtg cct gtg gcc egg gcc 1385 His Arg Trp Gin Asp His His Ala Leu Arg Val Pro Val Ala Arg Ala 375 380 385 390 atg tcc att ccc aca teg ccc acc agg ate age ttc cac age ate aag 1433 Met Ser He Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys 395 400 405 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -116- 1227780 A7 B7 五、發明説明（114) cag aca get gee gtg tga tcccctgtca cccatctgcc cagcactcca 1481

Gin Thr Ala Ala Val 410 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ccaccgaggc ggcttcctca ttcttcacag ccttccctgg gtcctccttg ctacactgac 1541 ccttgggtgc aggagaaggg ggggtggatg aactctcctg ccggaagaaa ggaaaactat 1601 gaaatggagg ctctgaaaga ccagg 1626 <210> 18 <211> 411 <212 > PRT <213> 溝鼠 <400> 18

Met Asp Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Leu Glu Ala Asn Cys Ser Leu 1. 5 10 15

Ala Leu Ala Glu Glu Leu Leu Leu Asp Gly Trp Gly Glu Pro Pro Asp 20 25 30

Pro Glu Gly Pro Tyr Ser Tyr Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin lie Gly 35 40 45

Thr Cys Trp Pro Gin Ser Ala Pro Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys 50 55 60

Pro Glu Tyr Phe Asn Gly lie Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr 65 70 75 80

Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Arg lie Asn Tyr Ser 85 90 95

His Cys Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His 100 105 110 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Tyr Arg lie Ala Leu lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val 115 120 125

Val Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Val Leu Arg Ser lie 130 135 140

Arg Cys Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie 145 150 155 160

Leu Arg Asn lie Thr Trp Phe Leu Leu Gin Leu lie Asp His Glu Val 165 170 175

His Glu Gly Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys Val Thr Thr lie Phe Asn 180 185 190 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -117- 1227780 A7 B7 五、發明説明（115)

Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr 195 200 205

Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu His Leu Arg Lys 210 215 220

Trp Leu Phe Leu Phe He Gly Trp Cys lie Pro Cys Pro lie lie Val 225 230 235 240

Ala Trp Ala Val Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe 245 250 255

Gly Lys Glu Pro Gly Asp Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro lie 260 265 270

He Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg 275 280 285 lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin 290 295 300

Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly 305 310 315 320 lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser 325 330 335

Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly 340 345 350

Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ser 355 360 365

Ala Leu Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ala Leu Arg 370 375 380 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Val Pro Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie 385 390 395 400

Ser Phe His Ser lie Lys Gin Thr Ala Ala Val <210> 19 405 <211> 1514 <212> DNA <213> 溝鼠 <220> <221> CDS <222> (44). _ (1339)

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -118- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（116) <4UU> 19 gatccctatc cctgagcaag cgagtggcag gatctggtgt ccc atg ggg cac cca

Met Gly His Pro 1 ggc tct: ctt ccc agt gca caa etc etc etc tgc eta tac tet ctg etc

Gly Ser Leu Pro Ser Ala Gin Leu Leu Leu Cys Leu Tyr Ser Leu Leu 5 10 15 20 cca ctg etc cag gtg gee caa cca ggc agg cca etc cag gac cag ccc

Pro Leu Leu Gin Val Ala Gin Pro Gly Arg Pro Leu Gin Asp Gin Pro 25 30 35 ctg tgg aca ctt ttg gag cag tac tgc cat agg acc aca act egg aat

Leu Trp Thr Leu Leu Glu Gin Tyr Cys His Arg Thr Thr Thr Arg Asn 40 45 50 ttt tea ggt ccc tac tee tac tgc tac aeg acc ttg gac cag ate ggg

Phe Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Cys Tyr Thr Thr Leu Asp Gin lie Gly 55 60 65 acc tgc tgg ccc cag age geg cct gga gee eta gtg gag aga cca tgc

Thr Cys Trp Pro Gin Ser Ala Pro Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys 70 75 80 ccc gaa tac ttc aac ggc ate aag tac aac aeg acc egg aat gee tac

Pro Glu Tyr Phe Asn Gly lie Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr 85 90 95 100 aga gaa tgc ctg gag aat ggg acc tgg gee tea agg ate aac tac tea

Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Arg lie Asn Tyr Ser 105 110 115 cac tgt gaa ccc att ttg gat gac aag cag agg aag tat gac ctg cat

His Cys Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His 120 125 130 tac ega ate gee etc ate ate aac tac ctg ggc cac tgt gtt tee gtg

Tyr Arg lie Ala Leu lie He Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val 135 > 140 145 gtg gee ctg gtg get get ttc ctg ctt ttc eta gtg ctg egg agt ate

Val Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Val Leu Arg Ser lie 150 155 160 ege tgc ctg egg aat gtg ate cac tgg aac etc ate acc acc ttc ate

Arg Cys Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie 165 170 175 180 ctg aga aac ate aeg tgg ttc ctg ctg caa etc ate gac cac gaa gtg

Leu Arg Asn lie Thr Trp Phe Leu Leu Gin Leu He Asp His Glu Val 185 190 195 cat gag ggc aat gag gtc tgg tgc ege tgc gtc acc acc ata ttc aac

His Glu Gly Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys Val Thr Thr He Phe Asn 200 205 210 tac ttt gtg gtc acc aac ttc ttc tgg atg ttt gtg gaa ggc tgc tac

Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr 215 220 225 ctg cac aeg gee ate gtc atg aeg tac tee aeg gag cat ctg ege aag

Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu His Leu Arg Lys 230 235 240 tgg etc ttc etc ttc att gga tgg tgc ata ccc tgc cct ate att gtc —一 财關家標準（ €灿）八4規格（210父297公釐）

-119- 1227780 B7 五、發明説明（117)

Trp Leu Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Cys Pro lie lie Val 245 250 255 260 gcc tgg gca gtt ggc aaa etc tac tat gag aat gag cag tgc tgg ttt 871

Ala Trp Ala Val Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe 265 270 275 ggc aag gaa cct ggt gac tta gtg gac tac ate tac cag ggc ccc ate 919

Gly Lys Glu Pro Gly Asp Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro lie 280 285 290 ate etc gtg etc etc ate aat ttt gtg ttt ctg ttc aac ate gtc agg 967 lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg 295 300 305 ate ctg atg aca aaa ctg ega gcc tcc acc aca tcc gag acc ate cag 1015 lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin 310 315 320 tac agg aag gca gtg aag gcc aac ctg gtc etc etc ccc ctg ttg ggc 1063

Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Asn Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly 325 330 335 340 ate acc tac atg etc ttc ttt gtc aat cct gga gag gac gac ctg tea 1111 lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser 345 350 355 cag att gtg ttc ate tac ttc aac tet ttc ctg cag tcc ttt cag ggt 1159

Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly 360 365 370 ttc ttt gtg tcc gtt ttc tac tgc ttc ttc aat gga gag gtg ege tcc 1207

Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ser 375 380 385 gcc ctg aga aag egg tgg cac cgt tgg cag gac cac cac gcc etc ega 1255

Ala Leu Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ala Leu Arg 390 395 400 gtg cct gtg gcc egg gcc atg tcc att ccc aca teg ccc acc agg ate 1303

Val Pro Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie 405 410 415 420 age ttc cac age ate aag cag aca get gcc gtg tga tcccctgtca 1349

Ser Phe His Ser He Lys Gin Thr Ala Ala Val 425 430 cccatctgcc cagcactcca ccaccgaggc ggcttcctca ttcttcacag ccttccctgg 1409 gtcctccttg ctacactgac ccttgggtgc aggagaaggg ggggtggatg aactctcctg 1469 ccggaagaaa ggaaaactat gaaatggagg ctctgaaaga ccagg 1514 <210> 20 <211> 431

<212> PRT <213>溝鼠 ’ <400> 20

Met Gly His Pro Gly Ser Leu Pro Ser Ala Gin Leu Leu Leu Cys Leu 1 5 10 15

Tyr Ser Leu Leu Pro Leu Leu Gin Val Ala Gin Pro Gly Arg Pro Leu 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-120- 1227780 A7 B7 五、發明説明（118) 20 25 30

Gin Asp Gin Pro Leu Trp Thr Leu Leu Glu Gin Tyr Cys His Arg Thr 35 40 45

Thr Thr Arg Asn Phe Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Cys Tyr Thr Thr Leu 50 55 60

Asp Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Ala Pro Gly Ala Leu Val 65 70 75 80

Glu Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn Gly lie Lys Tyr Asn Thr Thr 85 90 95

Arg Asn Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Arg 100 105 110 lie Asn Tyr Ser His Cys Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys 115 120 125

Tyr Asp Leu His Tyr Arg He Ala Leu lie He Asn Tyr Leu Gly His 130 135 140

Cys Val Ser Val Val Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Val 145 150 155 160

Leu Arg Ser He Arg Cys Leu Arg Asn Val He His Trp Asn Leu lie 165 170 175

Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn lie Thr Trp Phe Leu Leu Gin Leu lie 180 185 190

Asp His Glu Val His Glu Gly Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys Val Thr 195 200 205 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Thr lie Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val 210 215 220

Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu 225 230 235 240

His Leu Arg Lys Trp Leu Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Cys 245 250 255

Pro He He Val Ala Trp Ala Val Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu 260 265 270

Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Pro Gly Asp Leu Val Asp Tyr He Tyr 275 280 285- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -121 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（119)

Gin Gly Pro lie lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe 290 295 300

Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 305 310 315 320

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Asn Leu Val Leu Leu 325 330 335

Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 340 345 350

Asp Asp Leu Ser Gin He Val Phe He Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin 355 360 365

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly 370 375 380

Glu Val Arg Ser Ala Leu Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His 385 390 395 400

His Ala Leu Arg Val Pro Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 405 410 415

Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser He Lys Gin Thr Ala Ala Val 420 425 430 <210> 21 <211> 2273 <212> DNA <213> 小家鼠 <220> <221> CDS <222> (32) . . (1279) <400> 21 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 tatccaggac gctgacagag cgagcccgag g atg gga cag cgc ccg cag etc 52 Met Gly Gin Arg Pro Gin Leu 1 5 egg etc gtg aag gcc ett etc ett ctg ggg ctg aac ccc gtc tcc acc 100 Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Val Ser Thr 10 15 20 tcc etc cag gat cag cag tgt gag age ctg tcc ctg gcc age aat gtc 148 Ser Leu Gin Asp Gin Gin Cys Glu Ser Leu Ser Leu Ala Ser Asn Val 25 30 35 tet ggc ctg cag tgc aat gcc tcc gtg gac etc att ggc acc tgc tgg 196 Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val Asp Leu lie Gly Thr Cys Trp 40 45 50 55 ccc agg age cct gca ggg cag ttg gtg gtt egg ccc tgc cct gcc ttt 244 Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val Val Arg Pro Cys Pro Ala Phe 60 65 70

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -122- 1227780 五、發明説明（彳20) A7 B7 ttc tac ggt gtc cgc tac aac acc aca aac aat ggc tac egg gaa tgc 292

Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys 75 80 85 ctg gee aac ggc age tgg gca gee cgt gtg aat tat tet gag tgc cag 340

Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin 90 95 100 gag att etc aac gaa gag aag aag age aaa gtg cac tac cac att gee 388

Glu He Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser Lys Val His Tyr His He Ala 105 110 115 gtc ate ate aac tac ctg ggc cac tgc ate tee ctg gtg gee etc ctg 436

Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys He Ser Leu Val Ala Leu Leu 120 125 130 135 gtg gee ttt gtc etc ttc ctg egg etc agg age ate egg tgc ctg agg 484

Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg 140 145 150 aac ate ate cac tgg aac etc ate teg get ttc ate ctg cgc aac gee 532

Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser Ala Phe 工le Leu Arg Asn Ala 155 160 165 aeg tgg ttt gtg gtc cag etc acc gtg age ccc gag gtc cac cag age 580

Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Val Ser Pro Glu Val His Gin Ser 170 175 180 aac gtg gee tgg tgc agg ctg gtg aca gee gee tac aac tac ttc cac 628

Asn Val Ala Trp Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His 185 190 195 gta acc aac ttc ttc tgg atg ttc ggt gag ggc tgc tac ctg cac aca 676

Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr 200 205 210 215 gee ate gta etc aeg tac tee acc gac cgt ctg cgc aag tgg atg ttc 724

Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe 220 225 230 gtc tgc ate ggc tgg ggt gtg cct ttc ccc ate att gtg get tgg gee 112

Val Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe Pro lie lie Val Ala Trp Ala 235 240 245 att ggg aaa ett tac tac gac aat gaa aag tgc tgg ttt ggc aaa cgt 820 lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg 250 255 260 cct gga gta tat act gac tac ate tac cag ggc ccc atg ate ctg gtc 868

Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro Met lie Leu Val 265 270 275 ctg ctg ate aac ttt ate ttt etc ttc aac att gtc cgc ate etc atg 916

Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met 280 285 290 295 acc aaa etc ega gca tee acc aca tet gag act att cag tac agg aag 964

Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys 300 305 310 get gtg aag gee act ctg gtg etc ttg ccc etc ctg ggc ate acc tac 1012

Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr 315 320 325 atg ttg ttc ttc gtc aac cct ggg gag gac gag gtc tee agg gtt gtc 1060 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-123- 1227780 A7 B7 五、發明説明（121)

Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu Val Ser Arg Val Val 330 335 340 ttc ate tac ttc aac tet ttc ctig gag tcc ttt cag ggc ttc ttc gtg 1108

Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val 345 350 355 tet gtg ttc tat tgt ttt ctg aac agt gag gtc ege tet gcc ate egg 1156

Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg Ser Ala lie Arg 360 365 370 375 aag agg tgg egg ega tgg cag gac aag cac tcc ate aga gcc ega gtg 1204

Lys Arg Trp Arg Arg Trp Gin Asp Lys His Ser lie Arg Ala Arg Val 380 385 390 gcc ege gcc atg tcc ate ccc acc tcc ccc acc aga gtc age ttc cac 1252

Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg Val Ser Phe His 395 400 405 age ate aag cag tcc aca gca gtg tga acctcaggcc acagagcagc 1299

Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 410 415 ccccaagacc cgaggcfcggg gaaatgatgc aagctcacta gcgagcctgt ctgcagaggc 1359 aggeageett cccatccctg cccctgggat gcagacctgt aagcctgccc agccgtggac 1419 aaagcccata gcactggggt gggcccttgg catctagctc cctgctgccc attctccctg 1479 ggaagttgaa atgggcattg ggggctggaa accctgcagc agtttgatgg gcctgtgagc 1539 gctgtcttct cccagagcag cttactgaag atctgtcgtc tccaggagct gttggggagg 1599 ccaactgtta ccctggggca tcatggaaaa ctcccttctg agactgtaaa gtctctgagt 1659 gttagcgatg ccttgggatg ctaccgagga ccaacatggt ccagtcagga gaccgggaga 1719 tageggtaga aatctgggaa cgtcatcaga tggcactcca cctccctaca agtcactcct 1779 gagccaccag gatttcatca gcactgtggc actgccactg gaaagccctg ccttgctgct 1839 ttgctgccct gcacctttag acatttacta ttctgcaggc caagccagct ttctgtcact 1899 tatccactga cagcaacggt cccctcgccc ccaaatcctc ccacctctgg gtatetteta 1959 acctgtgaga agatgggggt cgggaagggg acttgagttg ccaggaacca gagtgggccc 2019 agtetatgag gaaggagtgg cccctgggta cccaggccac tggcttcagt ggctggcctc 2079 ttgaacacag tcacaagctg ggggaaggat ctattcaagt gccctgacca gcgacaggtg 2139 gctcctggga caactaacta actaagccct tgctcccagg cttggaatgg cccagtcctc 2199 agtgggtagg agagetgagg agccgcagca ggactgaggt gggggtgata taaataatat 2259 ttatcttttc aact 2273 <210> 22 <211> 415 <212> PRT <213> 小家鼠 <400> 22

Met Gly Gin Arg Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） -124- 1227780 A7 B7 五、發明説明（122) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 5 10 15 Gly Leu Asn Pro Val Ser Thr Ser Leu Gin Asp Gin Gin Cys Glu Ser 20 25 30 Leu Ser Leu Ala Ser Asn Val Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45 Asp Leu He Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60 Val Arg Pro Cys Pro Ala Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 7 0 75 80 Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg 85 90 95 Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser 100 105 110 Lys Val His Tyr His He Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 lie Ser Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140 Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160 Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Val 165 17 0 175 Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Ala Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190 Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205 Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220 Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe Val Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240 Pro lie He Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255 Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -125- 1227780 A7 B7 五、發明説明（123)

Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285

Asn He Val Arg He Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320

Pro Leu Leu Gly He Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335

Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe He Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365

Glu Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp Arg Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380 His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400

Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser He Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415 <210> 23 <211> 1374 <212> DNA<213>小家鼠 <220> <221> CDS <222> (79) . . (1374) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 23 、 gccggacaga cctcctttgg aagcagccac ttctggtccc catccctgga gcgatcgagc ggcaggatct gctgtccc atg ggg acc cca ggc tct ctt ccc agt gca cag Met Gly Thr Pro Gly Ser Leu Pro Ser Ala Gin 15 10 ctt etc etc tgc ctg ttt tcc ctg ctt cca gtg etc cag gtg gcc caa Leu Leu Leu Cys Leu Phe Ser Leu Leu Pro Val Leu Gin Val Ala Gin 15 20 25 cca ggc cag gca ccc cag gac cag ccc ctg tgg aca ctt ttg gag cag Pro Gly Gin Ala Pro Gin Asp Gin Pro Leu Trp Thr Leu Leu Glu Gin 30 35 40 tac tgc cac agg acc aca att ggg aat ttt tea ggt ccc tac acc tac Tyr Cys His Arg Thr Thr lie Gly Asn Phe Ser Gly Pro Tyr Thr Tyr 45 50 55 tgc aac aeg acc ttg gac cag ate ggg acc tgc tgg cca cag age gca 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 60 111 159 207 255 303

-126- 1227780 五、發明説明（124) A7 B7

Cys Asn Thr Thr Leu Asp Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Ala 60 65 70 75 ccc gga gcc eta gta gag aga ccg tgc ccc gag tac ttc aat ggc ate 351

Pro Gly Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn Gly lie 80 85 90 aag tac aac aeg acc egg aat gcc tac aga gag tgc ctg gag aac ggg 399

Lys Tyr Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly 95 100 105 acc tgg gcc tea agg gtc aac tac tea cac tgc gaa ccc att ttg gat 447

Thr Trp Ala Ser Arg Val Asn Tyr Ser His Cys Glu Pro lie Leu Asp 110 115 120 gac aag cag aga aag tat gac ctg cat tac ega ate gcc etc att gtc 495

Asp Lys Gin Arg Lys Tyr Asp Leu His Tyr Arg lie Ala Leu lie Val 125 130 135 aac tac ctg ggt cac tgt gtt tee gtg gtg gcc ctg gtg gcc get ttc 543

Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Val Val Ala Leu Val Ala Ala Phe 140 145 150 155 ctg ett ttc eta gtg ctg egg agt ate ege tgc ctg agg aat gtg ate 591

Leu Leu Phe Leu Val Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn Val lie 160 165 170 cac tgg aac etc ate acc acc ttc att ctg aga aac ate geg tgg ttc 639

His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn lie Ala Trp Phe 175 180 185 ctg ctg caa etc ate gac cac gaa gtg cac gag ggc aat gag gtc tgg 687

Leu Leu Gin Leu lie Asp His Glu Val His Glu Gly Asn Glu Val Trp 190 195 200 tgc ege tgc ate acc acc ate ttc aac tat ttt gtg gtc acc aac ttc 735

Cys Arg Cys lie Thr Thr lie Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe 205 210 215 ttc tgg atg ttt gtg gag ggc tgc tac ctg cac aeg gcc att gtc atg 783

Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Met 220 225 230 235 aeg tac tee aca gag cac ctg ege aag tgg ett ttc etc ttc att gga 831

Thr Tyr Ser Thr Glu His Leu Arg Lys Trp Leu Phe Leu Phe lie Gly 240 245 250 tgg tgc att ccc tgc cct ate ate ate gcc tgg gca gtt ggc aaa etc 879

Trp Cys lie Pro Cys Pro lie lie lie Ala Trp Ala Val Gly Lys Leu 255 260 265 tac tat gag aat gag cag tgc tgg ttt ggc aag gaa get ggt gat ttg 927

Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Ala Gly Asp Leu 270 275 280 gtg gac tac ate tac cag ggc ccc gtc atg ett gtg ctg ttg ate aat 975

Val Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro Val Met Leu Val Leu Leu lie Asn 285 290 295 ttt gta ttt ctg ttt aac ate gtc agg ate ctg atg aeg aag tta ega 1023

Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg 工le Leu Met Thr Lys Leu Arg 300 305 310 315 gca tee acc aeg tee gag aca ate caa tac agg aag gca gtg aag gcc 1071

Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala 320 325 330 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-127- 1227780 五、發明説明（125) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 acg ctg gtc etc etc ccc ctg ttg ggc ate acc tac atg etc ttc ttt 1119

Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe 335 340 345 gtc aat cct ggc gag gac gac ctg tcc cag att gtg ttc ate tac ttc 1167

Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp Leu Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe .350 355 360 aac tet ttc ctg cag tcc ttc cag ggt ttc ttt gtg tcc gtt ttc tac 1215

Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr 365 370 375 tgc ttc ttc aat gga gag gtg ege geg gcc ctg aga aag egg tgg cac 1263

Cys Phe Phe Asn Gly Glu Val Arg Ala Ala Leu Arg Lys Arg Trp His 380 385 390 395 ege tgg cag gac cac cac gcc etc egg gtg cct gtg gcc egg gcc atg 1311

Arg Trp Gin Asp His His Ala Leu Arg Val Pro Val Ala Arg Ala Met 400 405 410 tcc ate cct acg teg ccc acc agg ate age ttc cac age ate aag cag 1359

Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys Gin 415 420 425 aca get get gtg tga 1374

Thr Ala Ala Val 430 <210> 24 <211> 431

<212> PRT <213>小家鼠 <400> 24

Met Gly Thr Pro Gly Ser Leu Pro Ser Ala Gin Leu Leu Leu Cys Leu 15 10 15

Phe Ser Leu Leu Pro Val Leu Gin Val Ala Gin Pro Gly Gin Ala Pro 20 25 30

Gin Asp Gin Pro Leu Trp Thr Leu Leu Glu Gin Tyr Cys His Arg Thr 35 40 45

Thr lie Gly Asn Phe Ser Gly Pro Tyr Thr Tyr Cys Asn Thr Thr Leu 50 55 60

Asp Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Ala Pro Gly Ala Leu Val 65 70 75 80

Glu Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn Gly lie Lys Tyr Asn Thr Thr 85 90 95

Arg Asn Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Arg 100 105 110

Val Asn Tyr Ser His Cys Glu Pro 工le Leu Asp Asp Lys Gin Arg Lys 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-128- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（126) 115 120 125 Tyr Asp Leu His Tyr Arg lie Ala Leu He Val Asn Tyr Leu Gly His 130 135 140 Cys Val Ser Val Val Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Val 145 150 155 160 Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn Leu lie 165 170 175 Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn lie Ala Trp Phe Leu Leu Gin Leu lie 180 185 190 Asp His Glu Val His Glu Gly Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys lie Thr 195 200 205 Thr He Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val 210 215 220 Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu 225 230 235 240 His Leu Arg Lys Trp Leu Phe Leu Phe He Gly Trp Cys lie Pro Cys 245 250 255 Pro lie He lie Ala Trp Ala Val Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu 260 265 21Q Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Ala Gly Asp Leu Val Asp Tyr He Tyr 275 280 285 Gin Gly Pro Val Met Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe 290 295 300 Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 305 310 315 320 Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 325 330 335 Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 340 345 350 Asp Asp Leu Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin 355 360 365 Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly 370 375 380 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -129- 1227780 A7 B7 五、發明説明（127)

Glu Val Arg Ala Ala Leu Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His 385 390 395 400

His Ala Leu Arg Val Pro Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 405 410 415

Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys Gin Thr Ala Ala Val 420 425 430 <210> 25 <211> 2617 <212> DNA <213> 小家鼠 1 <220> <221> CDS <222> (132)..(1424) <400> 25 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 gggcattacc ttggtgggta ggtcgggcag ggtaggacag gcctaagaga gaggccggac 60 agacctcctt tggaagcagc cacttctggt ccccatccct ggagcgatcg agcggcagga 120 tctgctgtcc c atg ggg acc cca ggc tct ctt ccc agt gca cag ctt etc 170 Met Gly Thr Pro Gly Ser Leu Pro Ser Ala Gin Leu Leu 1 _ 5 10 etc tgc ctg ttt tcc ctg ctt cca gtg etc cag gtg gcc caa cca ggc 218 Leu Cys Leu Phe Ser Leu Leu Pro Val Leu Gin Val Ala Gin Pro Gly 15 20 25 cag gca ccc cag gac cag ccc ctg tgg aca ctt ttg gag cag tac tgc 266 Gin Ala Pro Gin Asp Gin Pro Leu Trp Thr Leu Leu Glu Gin Tyr Cys 30 35 40 45 cac agg acc aca att ggg aat ttt tea ggt ccc tac acc tac tgc aac 314 His Arg Thr Thr lie Gly Asn Phe Ser Gly Pro Tyr Thr Tyr Cys Asn 50 55 60 aeg acc ttg gac cag ate ggg acc tgc tgg cca cag age gca ccc gga 362 Thr Thr Leu Asp Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Ala Pro Gly 65 70 75 gcc eta gta gag aga ccg tgc ccc gag tac ttc aat ggc ate aag tac 410 Ala Leu Val Glu Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn Gly lie Lys Tyr 80 85 90 aac aeg acc egg aat gcc tac aga gag tgc ctg gag aac ggg acc tgg 458 Asn Thr Thr Arg Asn Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp 95 100 105 gcc tea agg gtc aac tac tea cac tgc gaa ccc att ttg gat gac aag 506 Ala Ser Arg Val Asn Tyr Ser His Cys Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys 110 115 120 125 aga aag tat gac ctg cat tac ega ate gcc etc att gtc aac tac ctg 554 Arg Lys Tyr Asp Leu His Tyr Arg lie Ala Leu lie Val Asn Tyr Leu 130 135 140 ggt cac tgt gtt tcc gtg gtg gcc ctg gtg gcc get ttc ctg ctt ttc 602 Gly His Cys Val Ser Val Val Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe 145 150 155

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -130- 1227780 A7 B7 五、發明説明（128) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 eta gtg ctg egg agt ate ege tgc ctg agg aat gtg ate cac tgg aac 650 Leu Val Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn 160 165 170 etc ate acc acc ttc att: ctg aga aac ate geg tgg ttc ctg ctg caa 698 Leu lie *Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn lie Ala Trp Phe Leu Leu Gin 175 180 185 etc ate gac cac gaa gtg cac gag ggc aat gag gtc tgg tgc ege tgc 746 Leu lie Asp His Glu Val His Glu Gly Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys 190 195 200 205 ate acc acc ate ttc aac tat ttt gtg gtc acc aac ttc ttc tgg atg 794 lie Thr Thr lie Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met 210 215 220 ttt gtg gag ggc tgc tac ctg cac aeg gee att gtc atg aeg tac tee 842 Phe Val Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala He Val Met Thr Tyr Ser 225 230 235 aca gag cac ctg ege aag tgg ett ttc etc ttc att gga tgg tgc att 890 Thr Glu His Leu Arg Lys Trp Leu Phe Leu Phe He Gly Trp Cys He 240 245 250 ccc tgc cct ate ate ate gee tgg gca gtt ggc aaa etc tac tat gag 938 Pro Cys Pro lie lie lie Ala Trp Ala Val Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu 255 260 265 aat gag cag tgc tgg ttt ggc aag gaa get ggt gat ttg gtg gac tac 986 Asn Glu Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Ala Gly Asp Leu Val Asp Tyr 270 275 280 285 ate tac cag ggc ccc gtc atg ett gtg ctg ttg ate aat ttt gta ttt 1034 lie Tyr Gin Gly Pro Val Met Leu Val Leu Leu He Asn Phe Val Phe 290 295 300 ctg ttt aac ate gtc agg ate ctg atg aeg aag tta ega gca tee acc 1082 Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr 305 310 315 aeg tee gag aca ate caa tac agg aag gca gtg aag gee aeg ctg gtc 1130 Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val 320 325 330 etc etc ccc ctg ttg ggc ate acc tac atg etc ttc ttt gtc aat cct 1178 Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro 335 340 345 ggc gag gac gac ctg tee cag att gtg ttc ate tac ttc aac tet ttc 1226 Gly Glu Asp Asp Leu Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe 350 355 360 365 ctg cag tee ttc cag ggt ttc ttt gtg tee gtt ttc tac tgc ttc ttc 1274 Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe 370 375 380 aat gga gag gtg ege geg gee ctg aga aac ggg tgg cac ege tgg cag 1322 Asn Gly Glu Val Arg Ala Ala Leu Arg Asn Gly Trp His Arg Trp Gin 385 390 395 gac cac cac gee etc egg gtg cct gtg gee egg gee atg tee ate cct 1370 Asp His His Ala Leu Arg Val Pro Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro 400 405 410 aeg teg ccc acc agg ate age ttc cac age ate aag cag aca get get 1418 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX297公釐） — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-131 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（129)

Thr Ser Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys Gl.n Thr Ala Ala 415 420 425 gtg tga ccctctgtca ccgtctgccc ggcagtccac cactgaggca gcttctccat 1474 Val 430 cctttacagc cttcccctgg gtcctccttg ctaccctgac ccacagggta caaggtacag 1534 gagaagggag gagaacgaac actcccgcct ggaaggaaag gaaagctatg acatgggggg 1594 gctctgaagg accagggccc agtgcagcca gccacacatc tccaagcacg aaggagcagg 1654 aggacatcac aggaccctca gaagggatgc atctcacacc atcaagcctc tgtgcaccca 1714 gcctcttttg tggggtcctc actgcagcac catttacatc tgaagaaact gaggctcaga 1774 gcaggcaggg acctggccaa gtcacatagc tacttgcccc acccacagca cccacagttg 1834 gctctgctcc ttgctttcca tctccacacg tgagggcgcc ctctaaaggt gagggagaca 1894 agaatgacct tatctggctt catcccagaa gctgtcgagc agagatgacc agccctttac 1954 caaggtagcc ttcttcttcc ccagtctgtt tcccatgtgt ctccaggaga atgctggctt 2014 tcagtcggcc atccctcctg ggagtcccca attcagtctg ggctcagtct ggggacctag 2074 accacgggaa gtgagttaga tggaaagtca cactctccac agtgccagac agaagggaga 2134 acagaagcgc ctggggaaga agggtgagga tcccccaaat cagagtatgc ctgggagtga 2194 ttgaaacaag ggccccagga tctcagtgac atcagccagg catctgtgga gttggccaca 2254 attcaagcaa cgagatgttg gagagatatt gtgagccagt aataaaggca gaatgtctgc 2314 aggacatatc catgcccctc ttcttactgg ctaggcccaa gcaggccttc ctgtggagtc 2374 tttaggttca aagggcccga atcattcctg tcaccccaaa gggtggcatc tgcaccaccc 2434 ccagcgtaga ccccacctgt gccagggact aatattctgg aattgggagg gagaggaggc 2494 aaggcccttc aggctccgaa agcaagaaga cacagtttga tttcaggctt ctcttccatt 2554 cctctgtccc tggagcagaa gaggggtgtt ggggcaagcc aacagacttg aaaaggcccc 2614 egg 2617 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 26 <211> 430 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 26 Met Gly Thr Pro Gly Ser Leu Pro Ser Ala Gin Leu Leu Leu Cys Leu 15 10 15

Phe Ser Leu Leu Pro Val Leu Gin Val Ala Gin Pro Gly Gin Ala Pro 20 25 30

Gin Asp Gin Pro Leu Trp Thr Leu Leu Glu Gin Tyr Cys His Arg Thr 35 40 45

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -132- 1227780 A7 B7 五、發明説明（130 )

Thr lie Gly Asn Phe Ser Gly Pro Tyr Thr Tyr Cys Asn Thr Thr Leu 50 55 60

Asp Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Ala Pro Gly Ala Leu Val 65 70 75 80

Glu Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Asn Gly He Lys Tyr Asn Thr Thr 85 90 95

Arg Asn Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Arg 100 105 110

Val Asn Tyr Ser His Cys Glu Pro lie Leu Asp Asp Lys Arg Lys Tyr 115 、 120 125

Asp Leu His Tyr Arg lie Ala Leu lie Val Asn Tyr Leu Gly His Cys 130 135 140

Val Ser Val Val Ala Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Phe Leu Val Leu 145 150 155 160

Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn Val lie His Trp Asn Leu lie Thr 165 170 175

Thr Phe lie Leu Arg Asn lie Ala Trp Phe Leu Leu Gin Leu lie Asp 180 185 190

His Glu Val His Glu Gly Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys lie Thr Thr 195 200 205 lie Phe Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu 210 215 220

Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Glu His 225 230 235 240 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Leu Arg Lys Trp Leu Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Cys Pro 245 250 255

He lie lie Ala Trp Ala Val Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Asn Glu Gin 260 265 270

Cys Trp Phe Gly Lys Glu Ala Gly Asp Leu Val Asp Tyr lie Tyr Gin 275 280 285

Gly Pro Val Met Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn 290 295 300

He Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu

本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -133- 1227780 A7 B7 五、發明説明（131) 305 310 315 320

Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro 325 330 335

Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp 340 345 350

Asp Leu Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser 355 360 365

Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Phe Asn Gly Glu 370 375 380

Val Arg Ala Ala Leu Arg Asn Gly Trp His Arg Trp Gin Asp His His 3.85 390 395 400

Ala Leu Arg Val Pro Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro 405 410 415

Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys Gin Thr Ala Ala Val 420 425 430 <210> 2Ί <211> 1248 <212> DNA <213> 綿羊 <220> <221> CDS <222> (1)..(1248) <400> 27 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 at9 egg cgc ccg cag etc egg ett gtc aag gcc ett etc etc ctg Met Gly Arg Arg Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 15 10 15 999 ctg aac tcc ate tcc gcc tcc etc cag gac cag cat tgc gag age Gly Leu Asn Ser lie Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30 ttg tcc ctg gcc age aac gtc tet gga ctg cag tgc aac get tcc gtg Leu Ser Leu Ala Ser Asn Val Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45 gac ett aat ggc acc tgc tgg ccc cag agt cct gca ggg cag ttg gtg Asp Leu Asn Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60 gtt ega ccc tgc etc gta ttt ttc tat ggt gtc ege tac aat acc aca Val Arg Pro Cys Leu Val Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 70 75 80 age aat ggc tac egg gtg tgc ctg gcc aat ggc aeg tgg gca gcc ege Ser Asn Gly Tyr Arg Val Cys Leu Ala Asn Gly Thr Trp Ala Ala Arg 85 90 95 gtg aat cac tcc gag tgc caa gag ate etc age gaa gga gag aag age 48 96 144 192 240 288 336

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX297公釐） -134- 1227780 A7 B7 五、發明説明（132) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Val Asn His Ser.Glu Cys Gin Glu lie Leu Ser Glu Gly Glu Lys Ser 100 105 110 aag gcg cac tac cac ate gcc gtc ate ate aac tac ctg ggc cac tgc 384 Lys Ala His Tyr His lie Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 ate tcc ctg gcg gcc etc ctg gtg gcc ttt gtc etc ttt ctg egg etc 432 lie Ser Leu Ala Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140 agg age ate egg tgc gtg aga aac ate ate cac tgg aac etc ate tea 480 Arg Ser lie Arg Cys Val Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160 gcc ttc ate ctg ege aat gcc aeg tgg ttc gtg gtc cag etc acc atg 528 Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met 165 170 175 age ccc gaa gtc cat cag age aac gtg ggc tgg tgc agg ctg gtg aca 576 Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190 gcc gcc tac aac tac ttc cac gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttc ggc 624 Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205 9a9 99c tgc tac ctg cac aeg get gtc gtg etc aca tac tec aeg gac 672 Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala Val Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220 egg ctg ege aaa tgg atg ttt ate tgc ate ggc tgg ggt gtg ccc ttc 720 Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240 ccc ate att gtg gcc tgg gcc att gga aag ttg tac tac gac aat gag 768 Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255 aag tgc tgg ttt ggc aaa agg cct ggg gtg tac act gat tac ate tac 816 Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 、 265 270 cag ggc ccg atg ate ttg gtc ctg ctg ate aat ttc ate ttc ett ttc 864 Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285 aac ate gtt ege ate etc atg acc aaa etc egg gca tec acc acc tet 912 Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300 gag acc att cag tac agg aag get gtg aag gcc act ctg gtg ctg etc 960 Glu Thr He Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320 ccc etc ctg ggc ate aeg tac atg ctg ttc ttc gtg aac ccc ggg gag 1008 Pro Leu Leu Gly He Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335 gac gag gtc tec egg gtc gtc ttc ate tac ttc aac tec ttc ctg gaa 1056 Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350 tet ttc cag ggc ttc ttc gtg tet gtg ttc tac tgc ttc etc aac age 1104 Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

裝-

、1T

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -135- 1227780 A7 B7 五、發明説明（133 ) gag gtc ege tet gcc ate egg aag agg tgg cac ege tgg cag gac aag 1152 Glu Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380 cac tea ate cgt gcc cgt gtg get ege gcc atg tcc ate ccc acc tcc 1200 His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400 ccc acc cgt gtc age ttt cac age ate aag cag tcc aca gca gtg tga 1248 Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415 <210> 28 <211> 415 <212> PRT <213>綿羊 <400> 28 Met Gly Arg Arg Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 15 10 15

Gly Leu Asn Ser lie Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30

Leu Ser Leu Ala Ser Asn Val Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45

Asp Leu Asn Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60

Val Arg Pro Cys Leu Val Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 70 75 80

Ser Asn Gly Tyr Arg Val Cys Leu Ala Asn Gly Thr Trp Ala Ala Arg 85 90 95

Val Asn His Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Ser Glu Gly Glu Lys Ser 100 105 110 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Lys Ala His Tyr His lie Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 lie Ser Leu Ala Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140

Arg Ser lie Arg Cys Val Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160

Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met 165 170 175

Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210>< 297公釐） -136 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（134) 180 185 190

Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205

Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala Val Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220

Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240

Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255

Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270

Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285

Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320

Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335

Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Glu Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380

His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400

Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415

<210> 29 <211> 1248 <212> DNA <213> 非洲爪蟾 <220> <221> CDS

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -137- 1227780 五、發明説明（135) <222> (1) . . (1248) A7 B7 <400> 29 atg ctg ttg gcc aaa act cca tgt eta eta ctg gtg cag gtg ate get 48

Met Leu Leu Ala Lys Thr Pro Cys Leu Leu Leu Val Gin Val lie Ala 15 10 15 get gga ate agt ttt gcc etc acc tet etc cag gac caa tgt gaa acc 96

Ala Gly lie Ser Phe Ala Leu Thr Ser Leu Gin Asp Gin Cys Glu Thr 20 25 30 ctg cag cac aat tet aac ttc aca ggt ett gcc tgc aac get tee att 144

Leu Gin His Asn Ser Asn Phe Thr Gly Leu Ala Cys Asn Ala Ser lie 35 40 45 gat atg ate ggc act tgc tgg ccc agt act gca get gga cag atg gtg 192

Asp Met 工le Gly Thr Cys Trp Pro Ser Thr Ala Ala Gly Gin Met Val 50 55 60 gcc aga ccc tgc ccc gag tac ttc cat ggg gtg caa tac aac aca aca 240

Ala Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe His Gly Val Gin Tyr Asn Thr Thr 65 70 75 80 ggg aat gtg tac aga gaa tgt cac ctg aac ggc age tgg get ggg aga 288

Gly Asn Val Tyr Arg Glu Cys His Leu Asn Gly Ser Trp Ala Gly Arg 85 90 95 gga gac tac get caa tgc cag gag att eta aag caa gag aag aaa acc 336

Gly Asp Tyr Ala Gin Cys Gin Glu lie Leu Lys Gin Glu Lys Lys Thr 100 105 110 aaa gtt cat tat cac ata gcc ate gtg att aac ttc ctg ggt cac tee 384

Lys Val His Tyr His lie Ala lie Val lie Asn Phe Leu Gly His Ser 115 120 125 att tee ett tgt get etc ctg gtg get ttt ate ctg ttc ttg agg ttg 432 lie Ser Leu Cys Ala Leu Leu Val Ala Phe lie Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140 a99 a9c atc egg tgc eta cgt aat ate ate cac tgg aac ctg ate aeg 480

Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Thr 145 150 155 160 get ttt att ctg cgt aat gta acc tgg ttt gtg atg cag etc act etc 528

Ala Phe lie Leu Arg Asn Val Thr Trp Phe Val Met Gin Leu Thr Leu 165 170 175 age cat gaa gcc cac gac age aat gtg gtt tgg tgc ege ctg gtc acc 576

Ser His Glu Ala His Asp Ser Asn Val Val Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190 atc get cac aat tat ttt tat gtt acc aac ttc ttc tgg atg ttt ggg 624 lie Ala His Asn Tyr Phe Tyr Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205 9a9 99C tgt tac ctg cac aeg gcc att gtt eta acc tac tea act gac 672

Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220 aaa ctg ege aaa tgg atg ttc atc tgt att ggc tgg tgt atc ccc ttt 720

Lys Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Cys lie Pro Phe 225 230 235 240 ccc atc att gtg get tgg gcc att ggc aaa ett tac tac gac aat gaa 768

Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-138- 1227780 A7 B7 五、發明説明（136 ) aag tgc tgg ttt ggg aag aaa gcg gga gtc tac aca gat ttt ate tac 816

Lys Cys Trp Phe Gly Lys Lys Ala Gly Val Tyr Thr Asp Phe lie Tyr 260 265 270 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) caa gga cct gtc ate ett gtg ctg ctg ate aac ttc ata ttt tta ttc 864

Gin Gly Pro Val lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285 aac att gta egg att ctg atg aca aag etc aga get tee acc act tea 912

Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300 gag acc ata cag tac agg aaa get gtt aaa gee acc ctg gtg etc ctg 960

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 ^ 310 315 320 cct ttg ett ggg ate acc tac atg ett ttc ttt gtg aeg ccc ggg gag 1008

Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Thr Pro Gly Glu 325 330 335 gat gaa ate tea cgt ate gtc ttt ate tat ttc aac tet ttc ctg cag 1056

Asp Glu lie Ser Arg lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin 340 345 350 tee ttt cag ggt ttc ttt gtt tea gtt ttc tac tgc ttc ett aat agt 1104

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365 gag gtg ege tea gca gtc egg aag ega tgg cac ega tgg cag gac aag 1152

Glu Val Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380 cat tea ate cgt get ege gtg gee cgt gee atg tee att ccc aca tea 1200

His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400 ccc act egg att agt ttc cac age ate aag caa tet tet gee att tga 1248

Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Ser Ala lie 405 410 415 <210> 30 <211> 415 <212> PRT <213> 非洲爪蟾 <400> 30 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Met Leu Leu Ala Lys Thr Pro Cys Leu Leu Leu Val Gin Val lie Ala 1 5 10 15

Ala Gly lie Ser Phe Ala Leu Thr Ser Leu Gin Asp Gin Cys Glu Thr 20 25 30

Leu Gin His Asn Ser Asn Phe Thr Gly Leu Ala Cys Asn Ala Ser lie 35 40 45

Asp Met lie Gly Thr Cys Trp Pro Ser Thr Ala Ala Gly Gin Met Val 50 55 60

Ala Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe His Gly Val Gin Tyr Asn Thr Thr 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -139- 1227780 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（137) 65 70 75 80 Gly Asn Val Tyr Arg Glu Cys His Leu Asn Gly Ser Trp Ala Gly Arg 85 90 95 Gly Asp Tyr Ala Gin Cys Gin Glu lie Leu Lys Gin Glu Lys Lys Thr 100 105 110 Lys Val His Tyr His He Ala lie Val He Asn Phe Leu Gly His Ser 115 120 125 lie Ser Leu Cys Ala Leu Leu Val Ala Phe lie Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140 Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Thr 145 150 155 160 Ala Phe lie Leu Arg Asn Val Thr Trp Phe Val Met Gin Leu Thr Leu 165 170 175 Ser His Glu Ala His Asp Ser Asn Val Val Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190 lie Ala His Asn Tyr Phe Tyr Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205 Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220 Lys Leu Arg Lys Trp Met Phe He Cys lie Gly Trp Cys He Pro Phe 225 230 235 240 Pro lie He Val Ala Trp Ala He Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255 Lys Cys Trp Phe Gly Lys Lys Ala Gly Val Tyr Thr Asp Phe lie Tyr 260 265 270 Gin Gly Pro Val lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe He Phe Leu Phe 275 280 285 Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300 Glu Thr He Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320 Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Thr Pro Gly Glu 325 330 335 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -140- 1227780 A7 B7 五、發明説明（138)

Asp Glu lie Ser Arg lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin 340 345 350

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365

Glu Val Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380

His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400

Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser He Lys Gin Ser Ser Ala lie 405 410 415 <210> 31 <211> 1242 <212> DNA <213> 非洲爪蟾 <220> <221> CDS <222> (1)..(1242) <400> 31 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 atg gac age acc ate ttt gag att ate att gat gaa ttt gat gcc aac 48 Met Asp Ser Thr lie Phe Glu lie lie 工le Asp Glu Phe Asp Ala Asn 15 10 15 tgc age ett ttg gat get ttt cag gac agt ttt ttg cac tet gag tcc 96 Cys Ser Leu Leu Asp Ala Phe Gin Asp Ser Phe Leu His Ser Glu Ser 20 25 30 tcc tet ttc ttt ggc ttt gaa ggt ccc tat tgt age get acc att gac 144 Ser Ser Phe Phe Gly Phe Glu Gly Pro Tyr Cys Ser Ala Thr lie Asp 35 40 45 cag att ggc aeg tgc tgg ccc agg age eta gcc ggg gaa ett gtg gaa 192 Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Leu Ala Gly Glu Leu Val Glu 50 55 60 aga ccc tgc ccg gat tcc ttc aat ggg ate aga tac aac aca act aga 240 Arg Pro Cys Pro Asp Ser Phe Asn Gly lie Arg Tyr Asn Thr Thr Arg 65 70 7 5 80 aac gtc tac aga gaa tgc ttt gag aat gga acc tgg geg tcc tgg atg 288 Asn Val Tyr Arg Glu Cys Phe Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Trp Met 85 90 95 aat tac tet cag tgt gtg ccc att ctg gat aat aag agg aag tac gcc 336 Asn Tyr Ser Gin Cys Val Pro lie Leu Asp Asn Lys Arg Lys Tyr Ala 100 105 110 ett cat tac aag att get etc ate ata aac tac ctg ggg cac tgc ate 384 Leu His Tyr Lys lie Ala Leu lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie 115 120 125 tcc ate ttg get etc gtt ate get ttc ttg etc ttt ctg tgt ttg agg 432 Ser lie Leu Ala Leu Val lie Ala Phe Leu Leu Phe Leu Cys Leu Arg 130 135 140

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1227780 A7 B7 五、發明説明（139) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 agt ata aga tgc ctt egg aac att ate cac tgg aat tta ate act act 480 Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr 145 150 155 160 ttc ate ctg agg aac ate atg tgg ttc ctg ctg cag atg att gac cat 528 Phe lie Leu Arg Asn lie Met Trp Phe Leu Leu Gin Met lie Asp His 165 170 175 aac att cat gaa age aac gag gtc tgg tgt egg tgt ate aca act att 576 Asn lie His Glu Ser Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys lie Thr Thr lie 180 185 190 tac aat tac ttt gtg gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttt gtg gaa gga 624 Tyr Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly 195 200 205 tgt tac eta cac aca get ata gtg atg aca tac tea aeg gac aaa ctt 672 Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu 210 215 220 agg aaa tgg gtg ttc etc ttc ata gga tgg tgt att cca tet ccg ate 720 Arg Lys Trp Val Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Ser Pro lie 225 230 235 240 att gtc acc tgg gcc ate tgc aag ctt ttc tat gaa aat gaa cag tgt 768 lie Val Thr Trp Ala lie Cys Lys Leu Phe Tyr Glu Asn Glu Gin Cys 245 250 255 tgg att ggg aag gag ccc ggg aaa tac att gat tac att tac cag ggc 816 Trp lie Gly Lys Glu Pro Gly Lys Tyr lie Asp Tyr lie Tyr Gin Gly 260 265 270 egg gtg att etc gta ctt ctg ata aat ttt gtg ttc tta ttc aac att 864 Arg Val lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie 275 280 285 gta aga att ttg atg aca aaa ctg aga get tea act aca tet gaa aeg 912 Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr 290 295 300 ata cag tac agg aag get gtg aag gca aeg tta gtc ctt etc cct ctt 960 lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu 305 310 315 320 ct9 99a atc acc tac atg etc ttc ttc gtc aac cct gga gag gat gac 1008 Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp 325 330 335 gtt tet cag ate gtt ttt att tac ttc aac teg ttt ctt cag tcc ttt 1056 Val Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe 340 345 350 cag ggt ttc ttt gtg tea gta ttt tac tgc ttc ctt aat ggg gag gtc 1104 Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Gly Glu Val 355 360 365 egg teg get gca agg aaa aga tgg cac ege tgg caa gac cac cat tet 1152 Arg Ser Ala Ala Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser 370 375 380 ctg egg gtt egg gta gcc aga gcc atg tcc ata cca aca tea ccg acc 1200 Leu Arg Val Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr 385 390 395 400 aga ate age ttt cac agt ata aag caa aeg gca gcc gtc tga 1242 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -142- 1227780 A7 B7 五、發明説明（14d) Arg He Ser Phe His Ser He Lys Gin Thr Ala Ala Val 405 410 <210> 32 <211> 413 <212> PRT <213>非洲爪蟾 , <400> 32 Met Asp Ser Thr He Phe Glu He He He Asp Glu Phe Asp Ala Asn 1 5 10 15

Cys Ser Leu Leu Asp Ala Phe Gin Asp Ser Phe Leu His Ser Glu Ser 20 25 30

Ser Ser Phe Phe Gly Phe Glu Gly Pro Tyr Cys Ser Ala Thr lie Asp 35 40 45

Gin lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Leu Ala Gly Glu Leu Val Glu 50 55 60

Arg Pro Cys Pro Asp Ser Phe Asn Gly lie Arg Tyr Asn Thr Thr Arg 65 70 75 80

Asn Val Tyr Arg Glu Cys Phe Glu Asn Gly Thr Trp Ala Ser Trp Met 85 90 95

Asn Tyr Ser Gin Cys Val Pro lie Leu Asp Asn Lys Arg Lys Tyr Ala 100 105 110

Leu His Tyr Lys 工le Ala Leu lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie 115 120 125

Ser lie Leu Ala Leu Val lie Ala Phe Leu Leu Phe Leu Cys Leu Arg 130 135 140 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr 145 150 155 160

Phe lie Leu Arg Asn lie Met Trp Phe Leu Leu Gin Met lie Asp His 165 170 175

Asn lie His Glu Ser Asn Glu Val Trp Cys Arg Cys He Thr Thr lie 180 185 190

Tyr Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly 195 200 205

Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Met Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu 210 215 220

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -143- 1227780 A7 B7 五、發明説明（141)

Arg Lys Trp Val Phe Leu Phe lie Gly Trp Cys lie Pro Ser Pro lie 225 230 235 240 lie Val Thr Trp Ala lie Cys Lys Leu Phe Tyr Glu Asn Glu Gin Cys 245 250 255

Trp lie Gly Lys Glu Pro Gly Lys Tyr lie Asp Tyr lie Tyr Gin Gly 260 265 270

Arg Val lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie 275 280 285

Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr 290 295 300 lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu 305 310 315 320

Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Asp 325 330 335

Val Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe 340 345 350

Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Gly Glu Val 355 360 365

Arg Ser Ala Ala Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser 370 375 380

Leu Arg Val Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr 385 390 395 400

Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys Gin Thr Ala Ala Val 405 410 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 33 <211> 1338 <212> DNA <213> 雲紋鼠尾鯰魚 <220> <221> CDS <222> (1)..(1338) <400> 33 atg cat ttc ctt eta cgt cct cag gtg ttt tet ate tgg ate aca eta 48 Met His Phe Leu Leu Arg Pro Gin Val Phe Ser lie Trp lie Thr Leu 1 5 10 15 ttc tet ggg gcc aca get gag etc aca tgc gac act ctg etc ctg etc 96 Phe Ser Gly Ala Thr Ala Glu Leu Thr Cys Asp Thr Leu Leu Leu Leu 20 25 30

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -144- 1227780 五、發明説明（142) A7 B7 tec acc aac ege aca get ege aca tta ata eta tgg aac cag aeg teg 144

Ser Thr Asn Arg Thr Ala Arg Thr Leu He Leu Trp Asn Gin Thr Ser 35 40 45 age tea agt aat gee aca ggt aca age tea agt aat gee aca ggt aca 192

Ser Ser Ser Asn Ala Thr Gly Thr Ser Ser Ser Asn Ala Thr Gly Thr 50 55 60 age tea age aat gee aca ggt ttg ttc tgt aat ata tet ata gat ggc 240

Ser Ser Ser Asn Ala Thr Gly Leu Phe Cys Asn lie Ser lie Asp Gly 65 7 0 75 80 ate ggg aeg tgt tgg ccc agg age aac gca ggg gaa ata gta tea cgt 288 lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Asn Ala Gly Glu lie Val Ser Arg 85 90 95 cca tgt cct gag acc ttc ttg ggt gtc ege tac aac acc acc aat aac 336

Pro Cys Pro Glu Thr Phe Leu Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Asn 100 105 110 gtc tac aga gaa tgc etc gee aat gga aeg tgg geg aag aag ggg aat 384

Val Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Thr Trp Ala Lys Lys Gly Asn 115 120 125 tat tet cag tgt cag gaa att etc aat gaa gag aaa aag age aag ctg 432

Tyr Ser Gin Cys Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser Lys Leu 130 135 140 cac tac cac att gca gtg att ata aac tac ctg ggc cac tgc ate tet 480

His Tyr His lie Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie Ser 145 150 155 160 etc gga gee ctg ctg gtt gee ttc att etc ttt atg agg ctg agg atg 528

Leu Gly Ala Leu Leu Val Ala Phe lie Leu Phe Met Arg Leu Arg Met 165 170 175 ate ege tgc etc agg aac ate att cac tgg aat ctg att atg get ttc 576 lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Met Ala Phe 180 185 190 ate ctg ege aat get aca tgg ttc gta gtg cag ctg acc atg aac cca 624 lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met Asn Pro 195 200 205 gag gtg cat gag age aat gtg ate tgg tgc agg ctg gtt aca gca geg 672

Glu Val His Glu Ser Asn Val lie Trp Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala 210 215 220 tat aat tac ttt cat gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttt ggt gag ggc 720

Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly 225 230 235 240 tgc tat ctg cac aeg gee ate gtg ctg act tac tee act gat aag etc 768

Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu 245 250 255 agg aag tgg ctg ttc ate tgt ate ggc tgg tgt att ccc ttt cct ate 816

Arg Lys Trp Leu Phe lie Cys lie Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro lie 260 265 270 ate gtt gca tgg gee att ggt aag ctg tat tac gac aat gaa aag tgc 864 lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys 275 280 285 tgg ttt gga aaa ega get ggt gtt tat act gac tac ate tat cag ggc 912 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-145- 1227780A7B7 五、發明説明（143) Trp Phe Gly Lys Arg Ala Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly 290 295 300 ccc atg ate ett gtt ett ctg ate aac ttt att ttc ett ttc aac ate 960 Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe Asn lie 305 310 315 320 gtg agg ate ctg atg aca aag eta aga gee tee acc aca tea gag aeg 1008 Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr 325 330 335 att cag tac agg aaa get gtg aag gee act ctg gtc ctg ctg cct etc 1056 lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu 340 345 350 etc ggg ate acc tac atg ett ttc ttt gtt aac cct gga gag gac gag 1104 Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu 355 360 365 ate tee caa ate gtc ttc ate tat ttc aat tet ttc etc gag tee ttt 1152 lie Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe 370 、 375 380 caa ggt ttc ttc gtg tet gtg ttt tat tgc ttc ctg aac agt gaa gtc 1200 Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val 385 390 395 400 cgt teg get gtt egg aag ege tgg cac ege egg cag gac aag cac tea 1248 Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg Trp His Arg Arg Gin Asp Lys His Ser 405 410 415 ate egg gca egg gtg gca egg gee atg tee att ccc acc teg cct act 1296 lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr 420 425 430 c99 9tc a9c ttc cac age ate aag caa tee tea gca gtg tga 1338 Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Ser Ala Val 435 440 445 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 34 <211> 445 <212> PRT <213>雲紋鼠尾鯰魚 <400> 34 Met His Phe Leu Leu Arg Pro Gin Val Phe Ser lie Trp lie Thr Leu 1 5 10 15

Phe Ser Gly-Ala Thr Ala Glu Leu Thr Cys Asp Thr Leu Leu Leu Leu 20 25 30

Ser Thr Asn Arg Thr Ala Arg Thr Leu lie Leu Trp Asn Gin Thr Ser 35 40 45

Ser Ser Ser Asn Ala Thr Gly Thr Ser Ser Ser Asn Ala Thr Gly Thr 50 55 60

Ser Ser Ser Asn Ala Thr Gly Leu Phe Cys Asn lie Ser lie Asp Gly 65 70 7 5 80

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -146- 1227780 A7 B7 五、發明説明（144)

He Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Asn Ala Gly Glu lie Val Ser Arg 85 90 95

Pro Cys Pro Glu Thr Phe Leu Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Asn 100 105 HO

Val Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Thr Trp Ala Lys Lys Gly Asn 115 120 125

Tyr Ser Gin Cys Gin Glu lie Leu Asn Glu Glu Lys Lys Ser Lys Leu 130 135 140

His Tyr His lie Ala Val lie He Asn Tyr Leu Gly His Cys lie Ser 145 150 155 160

Leu Gly Ala Leu Leu Val Ala Phe lie Leu Phe Met Arg Leu Arg Met 165 170 175 lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Met Ala Phe 180 185 190 lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met Asn Pro 195 200 205

Glu Val His Glu Ser Asn Val 工le Trp Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala 210 215 220

Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly 225 230 235 240

Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu 245 250 255

Arg Lys Trp Leu Phe lie Cys lie Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro lie 260 265 270 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys 275 280 285

Trp Phe Gly Lys Arg Ala Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly 290 295 300

Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe Asn lie 305 310 315 320

Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr 325 330 335 lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） >147- 1227780 A7 B7 五、發明説明（145 ) 340 345 350

Leu Gly He Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu 355 360 365 lie Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe 370 375 380

Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val 385 390 395 400

Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg Trp His Arg Arg Gin Asp Lys His Ser 405 410 415 lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr 420 425 430

Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Ser Ala Val 435 440 445 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 35 <211> 1442 <212> DNA <213>雲紋鼠尾鯰魚 ； <220> <221> CDS <222> (102) . . (1388) <400> 35 cagaaatatg gagatggaga ctgctttaca gtcactcggg tcaaacagga tgttaagctg 60 aactgattaa taatcctgcc agctgatcaa ctggaaaggg a atg tgg ate tgc eta 116 Met Trp lie Cys Leu 1 5 atg eta aag gtc ttg tet ate ttg tet ttt gtg gtt gtg aag gtg tea 164 Met Leu Lys Val I?eu Ser lie Leu Ser Phe Val Val Val Lys Val Ser 10 15 20 get gat ett acc tgc gat gcc gtg eta atg ctg get tet gga aac cac 212 Ala Asp Leu Thr Cys Asp Ala Val Leu Met Leu Ala Ser Gly Asn His 25 30 35 aca ttg tac cat ctg gat gcc get aat cac tet gac act aat aac teg 260 Thr Leu Tyr His Leu Asp Ala Ala Asn His Ser Asp Thr Asn Asn Ser 40 45 50 ggt gtg ttt tgc age aca gtt ate gat ggc ate ggc acc tgc tgg ccg 308 Gly Val Phe Cys Ser Thr Val lie Asp Gly lie Gly Thr Cys Trp Pro 55 60 65 ege age gtg gcc ggg gag atg gtg teg cgt ccg tgt ccg gaa ttc etc 356 Arg Ser Val Ala Gly Glu Met Val Ser Arg Pro Cys Pro Glu Phe Leu 70 75 80 85 tac gga gtc ega tac aac acc acc aat aaa ate ttc egg aaa tgt ett 404 Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Lys lie Phe Arg Lys Cys Leu 90 95 100

本紙張尺度適用中國國家檬準（CNS ) A4規格（2丨〇><297公釐） -148- 1227780 A7 B7 五、發明説明（146) get: aat gga acc tgg geg ccc aaa age aac tac tet cag tgc aag get 452

Ala Asn Gly Thr Trp Ala Pro Lys Ser Asn Tyr Ser Gin Cys Lys Ala 105 110 115 att etc aat gta cag agg aag age aag ctg cat tat ega ate get gtc 500

He Leu Asn Val Gin Arg Lys Ser Lys Leu His Tyr Arg He Ala Val 120 125 130 ate att aac tac ctg ggt cac tgc ttg tea ctg ttc act ett ett ate 548 lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys Leu Ser Leu Phe Thr Leu Leu lie 135 140 145 gee ttc ata ate ttc tta ega etc agg agt att ege tgt tta agg aac 596

Ala Phe lie lie Phe Leu Arg Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn 150 155 160 165 ate ate cac tgg aat eta acc tet gee ttc ate ctg aga aat geg aeg 644

He He His Trp Asn Leu Thr Ser Ala Phe He Leu Arg Asn Ala Thr 170 175 180 tgg ttc ate gtt cag etc acc atg aac cct gat gta cac gag age aac 692

Trp Phe lie Val Gin Leu Thr Met Asn Pro Asp Val His Glu Ser Asn 185 190 195 gtg cca tgg tgc cgt tta gtg aeg aeg gca tat aac tac ttc cac atg 740

Val Pro Trp Cys Arg Leu Val Thr Thr Ala Tyr Asn Tyr Phe His Met 200 205 210 gee aat ttt ttc tgg atg ttc ggc gaa ggc tgt tat ett cac aca gee 788

Ala Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala 215 220 225 ate gtg etc acc tac tee act gac aaa etc aag aaa tgg atg ttc ate 836 lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu Lys Lys Trp Met Phe lie 230 235 240 245 tgc ate gga tgg tgt att cct teg cct att ate gtc gee tgg gee ate 884

Cys lie Gly Trp Cys He Pro Ser Pro lie He Val Ala Trp Ala He 250 255 260 gga aag ctg tac tac gac aac gag aag tgt tgg ttt ggg aag aga gca 932

Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Ala 265 270 275 ggc ata tac aca gac tac ate tac cag ggc ccc atg ate ctg gta ett 980

Gly lie Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu 280 285 290 atg ate aat ttc gtg ttc etc ttc aac ata gta agg ate etc atg acc 1028

Met lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg He Leu Met Thr 295 300 305 aaa etc egg gee tee acc aca tee gaa acc ate cag tac agg aag geg 1076

Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr He Gin Tyr Arg Lys Ala 310 315 320 325 gtg aag gee aeg etc gtg tta ctg cct ctg etc ggg ate aeg tac atg 1124

Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly He Thr Tyr Met 330 335 340 ctg ttc ttc gta aac cca gga gag gac gaa ate teg cag ate gtc ttc 1172

Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu He Ser Gin He Val Phe 345 350 355 ate tac ttc aat tee ttt ctg cag tee ttt cag ggc ttc ttt gtg tee 1220 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 •149- 1227780 A7 B7 五、發明説明（147 )

He Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser 360 365 370 gtg ttc tac tgt ttt eta aac age gag gtc ege teg get gtt egg aag 1268 Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg Ser Ala Val Arg Lys 375 380 385 cac tgg cac ege tgg cag gac cac cat tee ate ege gca ega gtt geg 1316 His Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala 390 395 400 405 aga geg atg tee att ccc acc tea cct teg ege etc age ttc cac age 1364 Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Ser Arg Leu Ser Phe His Ser 410 415 420 ate aaa cag tee acc tet gtc tga tacagggacg cataacattg aaaaagaaag 1418 lie Lys Gin Ser Thr Ser Val 425 aggeaggeae tctatcagtg agga 1442 <210> 36 <211> 428 <212> PRT <213 >雲紋鼠尾I念魚 <400> 36 Met Trp lie Cys Leu Met Leu Lys Val Leu Ser lie Leu Ser Phe Val 15 10 15

Val Val Lys Val Ser Ala Asp Leu Thr Cys Asp Ala Val Leu Met Leu 20 25 30

Ala Ser Gly Asn His Thr Leu Tyr His Leu Asp Ala Ala Asn His Ser 35 40 45

Asp Thr Asn Asn Ser Gly Val Phe Cys Ser Thr Val lie Asp Gly lie 50 55 60

Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Val Ala Gly Glu Met Val Ser Arg Pro 65 7 0 75 80 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Cys Pro Glu Phe Leu Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Lys lie 85 90 95

Phe Arg Lys Cys Leu Ala Asn Gly Thr Trp Ala Pro Lys Ser Asn Tyr 100 105 110

Ser Gin Cys Lys Ala lie Leu Asn Val Gin Arg Lys Ser Lys Leu His 115 120 125

Tyr Arg 工le Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys Leu Ser Leu 130 135 140

Phe Thr Leu Leu lie Ala Phe lie lie Phe Leu Arg Leu Arg Ser lie 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -150- 1227780 A7 B7 五、發明説明（148) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 145 150 155 160 Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu Thr Ser Ala Phe lie 165 170 175 Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe lie Val Gin Leu Thr Met Asn Pro Asp 180 185 190 Val His Glu Ser Asn Val Pro Trp Cys Arg Leu Val Thr Thr Ala Tyr 195 200 205 Asn Tyr Phe His Met Ala Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys 210 215 220 Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu Lys 225 230 235 240 Lys Trp Met Phe lie Cys He Gly Trp Cys lie Pro Ser Pro lie lie 245 250 255 Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp 260 265 270 Phe Gly Lys Arg Ala Gly lie Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro 275 280 285 Met lie Leu Val Leu Met lie Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val 290 295 300 Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie 305 310 315 320 Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu 325 330 335 Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu lie 340 345 350 Ser Gin lie Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin 355 360 365 Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg 370 375 380 Ser Ala Val Arg Lys His Trp His Arg Trp Gin Asp His His Ser lie 385 390 395 400 Arg Ala .Arg Val Ala Arg Ala Met Ser He Pro Thr Ser Pro Ser Arg 405 410 415 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X：297公釐） -151 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（149)

Leu Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ser Val 420 425 <210> 37 <211> 1218 <212> DNA <213> 雲紋鼠尾鯰魚 <220> <221> CDS <222> (1)..(1218) <400> 37 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 atg gag gtc agt ctg ctg gag ctg etc agt gtg gag gtg aac tgc age 48 Met Glu Val Ser Leu Leu Glu Leu Leu Ser Val Glu Val Asn Cys Ser 1 10 15 etc geg gac geg ttt gga gac cct geg tac gga aac gca tea gac get 96 Leu Ala Asp Ala Phe Gly Asp Pro Ala Tyr Gly Asn Ala Ser Asp Ala 20 25 30 ctg tac tgc aac gcc aeg geg gat gag ate ggc aeg tgc tgg ccg agg 144 Leu Tyr Cys Asn Ala Thr Ala Asp Glu lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg 35 40 45 age ggc geg ggg aga gtg gtg geg egg ccg tgc ccc gac ttc ate aac 192 Ser Gly Ala Gly Arg Val Val Ala Arg Pro Cys Pro Asp Phe lie Asn 50 55 60 ggg gtc aag tac aac age acc agg age geg tat aga gaa tgc ctg gag 240 Gly Val Lys Tyr Asn Ser Thr Arg Ser Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu 65 70 75 80 aac ggc aca tgg get ttc aag ate aac tac tee age tgc gag ccc att 288 Asn Gly Thr Trp Ala Phe Lys lie Asn Tyr Ser Ser Cys Glu Pro lie 85 90 95 tta gag gaa aag agg aag tac ccg gtc cac tac aag ate get etc ate 336 Leu Glu Glu Lys Arg Lys Tyr Pro Val His Tyr Lys lie Ala Leu lie 100 105 110 ate aac tat ttg gga cac tgc ata tet gta ggt get etc gtc ate gcc 384 lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie Ser Val Gly Ala Leu Val lie Ala 115 120 125 ttc gtt etc ttc ctg tgc ttg aga age ate egg tgt ttg egg aat gta 432 Phe Val Leu Phe Leu Cys Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn Val 130 135 140 att cac tgg aat tta ata acc acc ttc ate ctg agg aac ate atg tgg 480 lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn lie Met Trp 145 150 155 160 ett ctg ctg cag etc ate gac cac aac ate cat gaa agg aac gag ccg 528 Leu Leu Leu Gin Leu lie Asp His Asn lie His Glu Arg Asn Glu Pro 165 170 175 tgg tgc ege etc ata acc acc gtc tat aac tat ttt gtg gtg aeg aat 576 Trp Cys Arg Leu He Thr Thr Val Tyr Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn 180 185 190 ttt ttc tgg atg ttc gtg gag ggc tgt tat ett cac aca gcc ate gtt 624 Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala He Val 195 200 205 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -152- 1227780 A7 B7 五、發明説明（150) atg acc tac tcc acc gac aag etc egg aag tgg gtc ttc etc ttc ate Met Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu Arg Lys Trp Val Phe Leu Phe He 210 215 220 672 999 tgg tgt att ccg tgt ccg gtc ate att geg tgg gee gtc ggg aag Gly Trp Cys lie Pro Cys Pro Val lie He Ala Trp Ala Val Gly Lys 225 230 235 240 720 ctg tac aac gaa aac gaa cag tgc tgg ttt gga aaa gaa ccc gga aaa Leu Tyr Asn Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Pro Gly Lys 245 250 255 768 tac gtg gac tac att tat cag ggt cct gtg att gtt gtt ctg ctg ata Tyr Val Asp Tyr He Tyr Gin Gly Pro Val He Val Val Leu Leu He 260 265 270 816 aac ttc gtg ttc ctg ttc aac ate gta cgt att etc atg aeg aag ctg Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu 275 280 285 864 ega gcc tcc acc aeg tea gag acc ata cag tac agg aaa geg gtg aag Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys 290 295 300 912 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) geg aeg tta gtg ctg ett cct ctg etc ggc ate aca tac atg ctg ttc Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe 305 310 315 320 960 ttc gtg aat ccg ggg gat gat gac ate tea cag att gtc ttt att tat Phe Val Asn Pro Gly Asp Asp Asp lie Ser Gin lie Val Phe lie Tyr 325 330 335 1008 ttc aat tcc ttc ctg cag tcc ttt cag ggt ttc ttc gtc tea gtg ttt Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe 340 345 350 1056 tac tgc ttc etc aac ggt gag gta egg tea gca gta agg aaa cgt tgg Tyr Cys Phe Leu Asn Gly Glu Val Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg Trp 355 360 365 1104 cac aga tgg cag gat aac cac get etc cgt gtt egg gtt gcc agg geg His Arg Trp Gin Asp Asn His Ala Leu Arg Val Arg Val Ala Arg Ala 370 375 380 1152 atg tcc ate cca aca tea cct act ege ate age ttc cac age att aaa Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys 1200 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 385 390 395 400 cac acc acc get gtg tga His Thr Thr Ala Val 405 1218 <210> 38 <211> 405 <212> PRT <213>雲紋鼠尾鯰魚 <400> 38 Met Glu Val Ser Leu Leu Glu Leu Leu Ser Val Glu Val Asn Cys Ser 1 5 10 15

Leu Ala Asp Ala Phe Gly Asp Pro Ala Tyr Gly Asn Ala Ser Asp Ala 、紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐1

1227780 A7 B7 五、發明説明（151 ) 20 25 30

Leu Tyr Cys Asn Ala Thr Ala Asp Glu lie Gly Thr Cys Trp Pro Arg 35 40 45

Ser Gly Ala Gly Arg Val Val Ala Arg Pro Cys Pro Asp Phe lie Asn 50 55 60

Gly Val Lys Tyr Asn Ser Thr Arg Ser Ala Tyr Arg Glu Cys Leu Glu 65 70 75 80

Asn Gly Thr Trp Ala Phe Lys lie Asn Tyr Ser Ser Cys Glu Pro lie 85 90 95

Leu Glu Glu Lys Arg Lys Tyr Pro Val His Tyr Lys lie Ala Leu lie 100 105 110 lie Asn Tyr Leu Gly His Cys lie Ser Val Gly Ala Leu Val lie Ala 115 120 125

Phe Val Leu Phe Leu Cys Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn Val 130 135 140 lie His Trp Asn Leu lie Thr Thr Phe lie Leu Arg Asn lie Met Trp 145 150 155 160

Leu Leu Leu Gin Leu lie Asp His Asn lie His Glu Arg Asn Glu Pro 165 170 175

Trp Cys Arg Leu lie Thr Thr Val Tyr Asn Tyr Phe Val Val Thr Asn 180 . 185 190

Phe Phe Trp Met Phe Val Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val 195 200 205 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Met Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu Arg Lys Trp Val Phe Leu Phe lie 210 215 220

Gly Trp Cys lie Pro Cys Pro Val lie lie Ala Trp Ala Val Gly Lys 225 230 235 240

Leu Tyr Asn Glu Asn Glu Gin Cys Trp Phe Gly Lys Glu Pro Gly Lys 245 250 255

Tyr Val Asp Tyr He Tyr Gin Gly Pro Val He Val Val Leu Leu lie 260 265 270

Asn Phe Val Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu 275 280 285

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -154- 1227780 A7 B7 五、發明説明（152)

Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr He Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys 290 295 300

Ala Thr Leu Val Leu Leu Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe 305 310 315 320

Phe Val Asn Pro Gly Asp Asp Asp He Ser Gin lie Val Phe He Tyr 325 330 335

Phe Asn Ser Phe Leu Gin Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe 340 345 350

Tyr Cys Phe Leu Asn Gly Glu Val Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg Trp 355 360 365

His Arg Trp Gin Asp Asn His Ala Leu Arg Val Arg Val Ala Arg Ala 370 375 380

Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg lie Ser Phe His Ser lie Lys 385 390 395 400

His Thr Thr Ala Val 405 <210> 39 <211> 1248 <212> DNA <213^ 特羅斯牛 <220> <221> CDS <222> (1) . . (1248) <400> 39 at9 gga egg cgc ccg cag etc egg ett gtc aag gcc ett etc etc ctg Met Gly Arg Arg Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 48 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ggg ctg aac tcc ate tet gcc tcc etc cag gac cag cat tgc gag age Gly Leu Asn Ser lie Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30 ttg tcc gtg gcc age aac gtc tet gga ctg cag tgc aat get tcc gtg Leu Ser Val Ala Ser Asn Val Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45 gac ett att ggt acc tgc tgg ccc cag agt cct gca ggg cag ttg gtg Asp Leu lie Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60 gtt ega ccc tgc etc gta ttt ttc tat ggt gtc ege tac aat acc aca Val Arg Pro Cys Leu Val Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 70 75 80 aac aac ggc tac egg gag tgc ctg gcc aat ggc aeg tgg gcc gcc ege Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Thr Trp Ala Ala Arg 85 90 95 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 96 144 192 240 288

-155- 1227780 五、發明説明（153) A7 B7 gtg aac tac tcc gag tgc caa gag ate etc age gag gag aag aag age 336

Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Ser Glu Glu Lys Lys Ser

100 105 HO aag gtg cac tac cac ate get gtc ate ate aac tac eta ggc cac tgc 384

Lys Val His Tyr His lie Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 ate tec ctg geg gee etc ctg gtg gee ttt gtc etc ttt ctg egg etc 432 lie Ser Leu Ala Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140 agg age ate egg tgc ctg aga aac ate ate cac tgg aac etc ate tea 480

Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160 gee ttc ate ctg ege aat gee aeg tgg ttc gtg gtc cag etc acc atg 528

Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met 165 170 175 age ccc gaa gtc cat cag age aac gtg ggc tgg tgc agg ctg gtg aca 576

Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 . 190 gee gee tac aac tac ttc cac gtg acc aac ttc ttc tgg atg ttc ggt 624

Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205 gag ggc tgc tac ctg cac aeg gee ate gtg etc aeg tac tec aca gac 672

Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220 egg ctg ega aag tgg atg ttt ate tgc ate ggc tgg ggt gtg cct ttc 720

Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240 ccc ate att gtg gee tgg gee att ggg aag ctg tac tac gac aat gag 768

Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255 aag tgc tgg ttt ggc aaa agg cct ggg gtg tac act gac tac ate tac 816

Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270 cag ggc ccg atg ate ttg gtc ctg ctg ate aat ttc ate ttc ett ttc 864

Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285 aac ate gtc ege ate etc atg acc aaa etc egg gca tec acc acc tet 912

Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300 gag acc att cag tac agg aag get gtg aag gee act ctg gtg ctg etc 960

Glu Thr lie Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 . 310 315 320 ccc etc ctg ggc ate aeg tac atg ctg ttc ttc gtg aac cct ggg gag 1008

Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335 gac gag gtc tec agg gtc gtc ttc ate tac ttc aac tee ttc ctg gaa 1056

Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350 tet ttc cag ggc ttc ttc gtg tet gtg ttc tac tgc ttc etc aac age 1104 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-156- 1227780 A7 B7 五、發明説明（154)

Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365 gag gtc cgc tct gcc ate egg aag agg tgg cac ege tgg cag gac aag 1152 Glu Val Arg Ser Ala lie Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys 370 375 380 cac tea ate cgt gcc cgc gtg get cgc gcc atg tcc ate ccc acc tee 1200 His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400 ccc acc cgt gtc age ttt cac age ate aag cag tee aca gca gtg tga 1248 Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser He Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415 <210> 40 <211> 415 <212> PRT <213> 特羅斯牛 <400> 40

Met Gly Arg Arg Pro Gin Leu Arg Leu Val Lys Ala Leu Leu Leu Leu 15 10 15

Gly Leu Asn Ser lie Ser Ala Ser Leu Gin Asp Gin His Cys Glu Ser 20 25 30

Leu Ser Val Ala Ser Asn Val Ser Gly Leu Gin Cys Asn Ala Ser Val 35 40 45

Asp Leu lie Gly Thr Cys Trp Pro Gin Ser Pro Ala Gly Gin Leu Val 50 55 60

Val Arg Pro Cys Leu Val Phe Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr 65 " 70 75 80

Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly Thr Trp Ala Ala Arg 85 90 95 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Val Asn Tyr Ser Glu Cys Gin Glu lie Leu Ser Glu Glu Lys Lys Ser 100 105 110

Lys Val His Tyr His lie Ala Val lie 工le Asn Tyr Leu Gly His Cys 115 120 125 lie Ser Leu Ala Ala Leu Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Leu Arg Leu 130 135 140

Arg Ser lie Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Ser 145 150 155 160

Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met 165 170 175 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210>< 297公釐） >157- 1227780 A7 B7 五、發明説明（155) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Ser Pro Glu Val His Gin Ser Asn Val Gly Trp Cys Arg Leu Val Thr 180 185 190 Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly 195 200 205 Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp 210 215 220 Arg Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly Trp Gly Val Pro Phe 225 230 235 240 Pro He lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu 245 250 255 Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr 260 265 270 Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe 275 280 285 Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser 290 295 300 Glu Thr He Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu 305 310 315 320 Pro Leu Leu Gly lie Thr Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu 325 330 335 Asp Glu Val Ser Arg Val Val Phe He Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu 340 345 350 Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser 355 360 365 Glu Val Arg Ser Ala He Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys 370 v 37 5 380 His Ser lie Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser 385 390 395 400 Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin Ser Thr Ala Val 405 410 415 <210> 41 <211> 1422 <212> DNA <213> 紅原雞 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-158- 1227780 五、發明説明（156) A7 B7 <220>

<221> CDS <222> (138) . . (1400) <400> 41 tcacagggag gttataaaag gcagtgagtg gggagcgggg cacgcggagc cacctgagca 60 cgaggatttg gagccccgac ggcagcggga gcggagccgg ccatgccccg ggtcgttggg 120 tgcggaggga gctaagg atg gtg ccc ggc ccg cgt cct gcc etc etc etc l7〇

Met Val Pro Gly Pro Arg Pro Ala Leu Leu Leu 1 5 10 etc etc ttt etc ctg cag geg ttt etc etc tgg gat agt ccc gtt gca 218

Leu Leu Phe Leu Leu Gin Ala Phe Leu Leu Trp Asp Ser Pro Val Ala 15 20 25 gee tee ate caa gag cag tac tgt gag age ctg ctg ccc acc acc aac 266

Ala Ser lie Gin Glu Gin Tyr Cys Glu Ser Leu Leu Pro Thr Thr Asn 30 35 40 cac aca gga cct cag tgc aac gcc teg gtg gac ctg att ggc aeg tgc 314

His Thr Gly Pro Gin Cys Asn Ala Ser Val Asp Leu lie Gly Thr Cys 45 50 55 tgg ccc ege agt gca gtg gga caa ctg gtg get egg ccc tgc ccc gag 362

Trp Pro Arg Ser Ala Val Gly Gin Leu Val Ala Arg Pro Cys Pro Glu 60 65 70 75 tat ttc tac ggc gtg egg tac aac acc aca aac aat ggc tac agg gaa 410

Tyr Phe Tyr Gly Val Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Asn Gly Tyr Arg Glu 80 85 90 tgc etc get aac ggg age tgg gca gca egg gtc aac tac tee cag tgc 458

Cys Leu Ala Asn Gly Ser Trp Ala Ala Arg Val Asn Tyr Ser Gin Cys 95 100 105 cag gag ate etc agt gag gag aag agg age aag ctg cac tac cac ate 506

Gin Glu lie Leu Ser Glu Glu Lys Arg Ser Lys Leu His Tyr His lie 110 115 120 get gtc ate ate aac tac ctg ggg cac tgc gtc teg ctg ggg acc etc 554

Ala Val lie lie Asn Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Leu Gly Thr Leu 125 130 135 ett gtg gee ttc gtc etc ttc atg ege ctg egg age ate egg tgc ttg 602

Leu Val Ala Phe Val Leu Phe Met Arg Leu Arg Ser lie Arg Cys Leu 140 145 150 155 agg aac ate ate cac tgg aac ctg ate aca gcc ttc ate eta ege aat 650

Arg Asn lie lie His Trp Asn Leu lie Thr Ala Phe lie Leu Arg Asn 160 165 170 gcc aeg tgg ttt gtg gtg cag etc aeg atg aac cca gag gtg cac gag 698

Ala Thr Trp Phe Val Val Gin Leu Thr Met Asn Pro Glu Val His Glu 175 180 185 age aac gtg gtc tgg tgc ege ttg gtc act get gcc tac aat tac ttc 746

Ser Asn Val Val Trp Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe 190 195 200 cat gtc acc aac ttc ttc tgg atg ttt ggc gag ggc tgc tac ctg cac 794

His Val Thr Asn Phe Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys Tyr Leu His 205 210 215 aca gcc ate gtc etc acc tat tee acc gac aag etc ege aag tgg atg 842 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210><297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-159- 1227780 A7 B7 五、發明説明（157) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Thr Ala lie Val Leu Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu Arg Lys Trp Met 220 ' 225 230 235 ttc ate tgc att ggc tgg tgt ate ccc ttt ccc ate att gtc gee tgg 890 Phe lie Cys lie Gly Trp Cys lie Pro Phe Pro lie lie Val Ala Trp 240 245 250 gcc ate ggg aag ctg tac tac gac aac gag aag tgc tgg ttt ggg aag 938 Ala lie Gly Lys Leu Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp Phe Gly Lys 255 260 265 ega gca gga gtt tat act gac tac ate tat caa ggt ccc atg ate ctg 986 Arg Ala Gly Val Tyr Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro Met lie Leu 270 275 280 gtg ett ctg ate aac ttc ate ttt ctg ttc aac att gtt egg att etc 1034 Val Leu Leu lie Asn Phe lie Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu 285 290 295 atg acc aag etc ega gca tea acc aeg tea gag aca ate cag tac aga 1082 Met Thr Lys Leu Arg Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr lie Gin Tyr Arg 300 305 310 315 aaa gca gtc aag get aeg ctg gtg ctg ctg tee ttg ctg gga ate acc 1130 Lys Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Leu Leu Ser Leu Leu Gly lie Thr 320 325 330 tac atg ctg ttc ttt gtc aat ccg ggg gag gat gag ate tee agg ate 1178 Tyr Met Leu Phe Phe Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu lie Ser Arg lie 335 340 345 gtc ttc ate tac ttc aac tee ttc ctg gag tee ttc cag ggc ttc ttt 1226 Val Phe lie Tyr Phe Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe Gin Gly Phe Phe 350 355 360 gtc tet gtc ttc tac tgc ttc ctg aac age gag gtg cgt teg get gtg 1274 Val Ser Val Phe Tyr Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg Ser Ala Val 365 370 375 egg aag egg tgg cac ega tgg cag gac aag cac tee ate ege get egg 1322 Arg Lys Arg Trp His Arg Trp Gin Asp Lys His Ser lie Arg Ala Arg 380 385 390 395 gtg get egg gcc atg tee ate ccc acc tee cca acc egg gtc age ttc 1370 Val Ala Arg Ala Met Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg Val Ser Phe 400 405 410 cac age ate aag cag tee tea gca gtg tga ggcaggagga ggcagctgcc ga 1422 His Ser lie Lys Gin Ser Ser Ala Val 415 420 <210> 42 <211> 420 <212> PRT <213> 紅原雞 <400> 42

Met Val Pro Gly Pro Arg Pro Ala Leu Leu Leu Leu Leu Phe Leu Leu 15 10 15

Gin Ala Phe Leu Leu Trp Asp Ser Pro Val Ala Ala Ser lie Gin Glu 20 25 30 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-160- 1227780 A7 B7 五、發明説明（158) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Gin Tyr Cys Glu Ser Leu Leu Pro Thr Thr Asn His Thr Gly Pro Gin 35 40 45

Cys Asn Ala Ser Val Asp Leu He Gly Thr Cys Trp Pro Arg Ser Ala 50 55 60

Val Gly Gin Leu Val Ala Arg Pro Cys Pro Glu Tyr Phe Tyr Gly Val 65 70 75 80

Arg Tyr Asn Thr Thr Asn Asn Gly Tyr Arg Glu Cys Leu Ala Asn Gly 85 90 95

Ser Trp Ala Ala Arg Val Asn Tyr Ser Gin Cys Gin Glu lie Leu Ser 100 105 110

Glu Glu Lys Arg Ser Lys Leu His Tyr His He Ala Val He He Asn 115 120 125

Tyr Leu Gly His Cys Val Ser Leu Gly Thr Leu Leu Val Ala Phe Val 130 135 140

Leu Phe Met Arg Leu Arg Ser He Arg Cys Leu Arg Asn lie lie His 145 150 155 160

Trp Asn Leu He Thr Ala Phe lie Leu Arg Asn Ala Thr Trp Phe Val 165 170 175

Val Gin Leu Thr Met Asn Pro Glu Val His Glu Ser Asn Val Val Trp 180 185 190

Cys Arg Leu Val Thr Ala Ala Tyr Asn Tyr Phe His Val Thr Asn Phe 195 200 205

Phe Trp Met Phe Gly Glu Gly Cys Tyr Leu His Thr Ala lie Val Leu 210 215 220

Thr Tyr Ser Thr Asp Lys Leu Arg Lys Trp Met Phe lie Cys lie Gly 225 230 235 240

Trp Cys lie Pro Phe Pro lie lie Val Ala Trp Ala lie Gly Lys Leu 245 250 255

Tyr Tyr Asp Asn Glu Lys Cys Trp Phe Gly Lys Arg Ala Gly Val Tyr 260 265 270

Thr Asp Tyr lie Tyr Gin Gly Pro Met lie Leu Val Leu Leu lie Asn 275 280 285

Phe lie Phe Leu Phe Asn lie Val Arg lie Leu Met Thr Lys Leu Arg 本紙張尺適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-161 - 1227780 A7 B7 五、發明説明（159) 290 295 300

Ala Ser Thr Thr Ser Glu Thr He Gin Tyr Arg Lys Ala Val Lys Ala 305 310 315 320

Thr Leu Val Leu Leu Ser Leu Leu Gly He Thr Tyr Met Leu Phe Phe 325 330 335

Val Asn Pro Gly Glu Asp Glu He Ser Arg He Val Phe lie Tyr Phe 340 345 350

Asn Ser Phe Leu Glu Ser Phe Gin Gly Phe Phe Val Ser Val Phe Tyr 355 360 365

Cys Phe Leu Asn Ser Glu Val Arg Ser Ala Val Arg Lys Arg Trp His 370 375 380

Arg Trp Gin Asp Lys His Ser He Arg Ala Arg Val Ala Arg Ala Met 385 390 395 400

Ser lie Pro Thr Ser Pro Thr Arg Val Ser Phe His Ser lie Lys Gin 405 410 415

Ser Ser Ala Val 420 <210> 43 <211> 38 <212> PRT <213> 小家鼠 <400> 43 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Val lie Leu Ser Leu Asp Val Pro lie Gly Leu Leu Arg lie Leu Leu 15 10 15 Glu Gin Ala Arg Tyr Lys Ala Ala Arg Asn Gin Ala Ala Thr Asn Ala 20 25 30 Gin lie Leu Ala His Val 35 <210> 44 <211> 38 <212> PRT <213 >智人 <400> 44 lie Val Leu Ser Leu Asp Val Pro lie Gly Leu Leu Gin lie Leu Leu 1 5 , 10 15 Glu Gin Ala Arg Ala Arg Ala Ala Arg Glu Gin Ala Thr Thr Asn Ala 20 25 30 Arg lie Leu Ala Arg Val 35

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇>< 297公釐） -162-

Claims (1)

1. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 H 月10.年絍 ABCD 六、申請專利範圍1附件二A ··第911〇4〇25號修正後無劃線之中文申請專利範圍替換本民國93年1〇月I2日壬 1. 一種鑑定供調節骨骼肌質量或功能用之候選化合物 之方法，其包含： (a)令測試化合物與CRF2R接觸； (b )測定該測試化合物是否與CRF2R結合； (c)選擇與CRF2R結合之化合物並進一步測定該測 試化合物是否於骨骼肌萎縮模式系統中增加肌肉質量或功 能；及 (d )鑑定能調節肌肉質量或功能之測試化合物以作 爲供調節骨骼肌質量或功能用之候選化合物。 2 . —種鑑定供調節骨骼肌質量或功能用之候選化合物 之方法，其包含： (a)令測試化合物與表現功能性CRF2R之細胞接觸 (b )測定該測試化合物是否活化CRF2R ; (c)選擇能活化CRF2R之化合物並進一步測定該測 試化合物是否於骨骼肌萎縮模式系統中增加肌肉質量或功 能；及 (d )鑑定能調節肌肉質量或功能之測試化合物以作 爲供調節骨骼肌質量或功能用之候選化合物。 3 .如申請專利範圍第1或2項之方法，其進一步包含 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ABCD 1227780 六、申請專利範圍2 產生經由申請專利範圍第1或2項所述之步驟（a )至（d )所鑑定之多個候選化合物。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4·如申請專利範圍第i或2項之方法，其中該CRF2R 具有與SEQ ID NO: 10序列大於約80%相同性之胺基酸 序歹I」。 5·如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該CRF2R 具有與SEQ ID NO: 10序列大於約90%相同性之胺基酸 序歹ϋ。 6·如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該CRF2R 具有對應胺基酸序列SEQ ID NO ·· 10、SEQ ID NO : ] 2、 SEQ ID NO ： 14、SEQ ID NO ·· 18、SEQ ID NO : 20、SEQ ID NO : 24、SEQ ID NO : 26、SEQ ID NO : 32 或 SEQ ID N O : 3 8之胺基酸序列。 7 ·如申請專利範圍第2項之方法，其中該CRF2R係於 真核細胞中表現。 8 .如申請專利範圍第7項之方法，其中測定該測試化 合物是否活化CRF2R涉及測量細胞cAMP量。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9 .如申請專利範圍第8項之方法，其中該細胞進一步 包含與cAMP反應單元操作性連接之報導子基因且測量細 胞CAMP量涉及測量報導子基因之表現。 1 〇. 一種鑑定供調節骨骼肌質量或功能用之候選化合 物之方法，其包含： (a )令測試化合物與表現功能性CRF2R之細胞接觸 ’並測定因該測試化合物與CRF2R之相互作用所導致之 本&張尺度適用^國國( CNS )八料見格（210χ297公釐) ΤΤΊ "" 1227780 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 CRF2R活化量； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} (b )令測試化合物與表現功能性CRF; R之細胞接觸 ，並測定因該測試化合物與CRF; R之相互作用所導致之 CRF】R活化量； (c)比較CRF2R之活化量與CRF]R之活化量； (d )選擇能選擇性活化CRF2R超過活化CRF!R之測 試化合物並進一步測定該測試化合物是否於骨骼肌萎縮模 式系統中增加肌肉質量或功能；及 (e )鑑定能調節肌肉質量或功能之測試化合物以作 爲供調節骨骼肌質量或功能用之候選化合物。 1 1 ·如申請專利範圍第1 〇項之方法，其中該候選化合 物對CRF2R顯現]00倍或更高之選擇性。 1 2 ·如申請專利範圍第1 1項之方法，其中該候選化合 物對CRF2R顯現1 000倍或更高之選擇性。 1 3 ·如申請專利範圍第1 〇項之方法，其中該候選化合 物對CRF2R顯現1至100倍之選擇性。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 I4.如申請專利範圍第10項之方法’其中該CRF2R具 有與SEQ ID NO: 10序列大於約80%相同性之胺基酸序 列。 15·如申請專利範圍第】4項之方法，其中該CRF2R具 有與SEQ ID NO : 10序列大於約90%相同性之胺基酸序 列。 1 6 ·如申g靑專利範圍第]〇項之方法’其中該c R ρτ 2 R亘 泪 Μ 應 S女基酸序列 S E Q ID Ν Ο · 1 〇、S E Q ]； d Ν 0 : ] 9、 本紙張尺度適用中國國家禚準（CNS ) Α4規格（210Χ297公董1 ^~ 一 ABCD 1227780 六、申請專利範圍 SEQ ID N0 : 14、SEQ ID NO : 1 8、S EQ ID N〇 : 2 0、S EQ ID NO : 24、SEQ ① NO : 26、SEQ ID NO : 32 或 SEQ ID N O : 3 8之胺基酸序列。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 7 .如申請專利範圍第1至1 6項中任一項之方法，其 進一步包含： (a )投遞該候選化合物至非人類之動物體內；及 (b )測定該候選化合物是否能調節該動物之骨骼肌 質量或功能。 1 8. —種增加個體所欲之骨骼肌質量或功能之醫藥組 成物，其包含： (a) 安全且有效量之CRF2R激動劑（尿皮質素， Urocortin II);及 (b) 醫藥上可接受之載體。 1 9 · 一種用於需要治療之個體以治療骨骼肌萎縮之醫 藥組成物，其包含： (a) 安全且有效量之CRF2R激動劑（尿皮質素-π， Urocortinll);及 (b) 醫藥上可接受之載體。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） · 4 -