RU2568903C2 - Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов - Google Patents
Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2568903C2 RU2568903C2 RU2014113536/15A RU2014113536A RU2568903C2 RU 2568903 C2 RU2568903 C2 RU 2568903C2 RU 2014113536/15 A RU2014113536/15 A RU 2014113536/15A RU 2014113536 A RU2014113536 A RU 2014113536A RU 2568903 C2 RU2568903 C2 RU 2568903C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- muscle
- histological
- medicinal preparations
- nuclei
- drugs
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, гистологии и патологической анатомии, и может быть использовано для оценки анаболического действия лекарственных препаратов. Сущность заявляемого способа заключается в том, что дополнительно определяют интенсивность биосинтетических процессов в миосимпластах путем подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами, на основании которого делают заключение об анаболическом действии лекарственных препаратов. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности морфологической оценки анаболического действия лекарственных препаратов за счет применения комплекса современных методов исследования (гистологического, гистохимического и морфометрического). Заявляемый способ обладает высокой точностью, прост в применении, эффективен и легко выполним в любой гистологической лаборатории. 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, гистологии и патологической анатомии, и может быть использовано для морфологической оценки анаболического действия лекарственных препаратов.
Одним из клинических проявлений анаболического действия лекарственных препаратов является увеличение объема скелетной мышечной ткани. Этот процесс может осуществляться по саркоплазматическому или миофибриллярному типу (Foss М, Kateyian S.: «Fox′s Physiological Basis for Exercise and Sport.» McGraw Hill. 1998.; G.T. Mangine, N.A. Ratamess, J.R. Hoffman, A.D. Faigenbaum, J. Kang, A. Chilakos The effects of combined ballistic and heavy resistance training on maximal lower - and upper-body strength in recreationally trained men / J Strength Cond Res, Vol. 22 (2008), 132-139).
Рост мышцы при гипертрофии неизменно сопряжен с активацией процессов синтеза белков на рибосомах (Bodine SC et al. Akt/mTOR pathway is a crucial regulator of skeletal muscle hypertrophy and can prevent muscle atrophy in vivo. Nat Cell Biol. 2001 Nov; 3 (11): 1014-9.; Pallafacchina G, Calabria E, Serrano A, Kalhovde JM & Schiaffmo S (2002). A protein kinase B-dependent and rapamycin-sensitive pathway controls skeletal muscle growth but not fiber type specification. Proc Natl Acad Sci USA 99, 9213-9218), то есть с активацией биосинтетических процессов в миосимпластах мышечных волокон. Масса и объем скелетной мышцы может меняться за счет изменения содержания белка, реализуемого через изменение числа ядер миосимпластов, скорости процессов транскрипции, трансляции и интенсивности протеолиза.
Известен способ морфологической оценки гипертрофии мышечных волокон путем биопсии с последующим микроскопическим исследованием и определением площади поперечного сечения мышечных волокон морфометрическими методами, который используется для диагностики нейродистрофических состояний, анаболического действия лекарственных препаратов.
Однако известный способ недостаточно точен, т.к. мышечная ткань при биопсии сильно сокращается и нормальное расположение мышечных волокон нарушается. Площадь поперечного сечения мышечных волокон - величина значительно варьирующая. Она зависит от места, где взята биопсийная проба, угла сечения, количества разрезов мышечного волокна (Hoppeler, Н. Exercise-induced ultrastructural changes in skeletal muscle. 1986. Int. J. Sports Med. 7, 187-204).
Наиболее близким по достигаемому техническому результату является способ оценки функциональной (биосинтетической) активности клеток путем окраски срезов, позволяющий дифференцировать в ядрах эу - и гетерохроматин (Яцковский, А.Н. Метод оценки функциональной активности клеточных ядер / А.Н. Яцковский // Арх. анат. - 1987. - Т. 92. - Вып. 1. - С. 76-79) и по преобладающему типу хроматина оценить интенсивность процессов транскрипции, а следовательно и биосинтетической активности клеток. Способ заключается в заборе участка скелетной мышцы для исследования, гистологической проводке материала, морфометрической оценке гипертрофии мышечных волокон путем измерения поперечного сечения мышечных волокон, изготовления и окраски гистологических препаратов на ядрышковые организаторы альциановым синим и сафранином, имеющих разную молекулярную массу. Различие размеров молекул определяет их способность диффундировать в неодинаковые по плотности структуры. Вследствие этого гетерохроматин окрашивается сафранином, а эухроматин - альциановым синим.
Способ достаточно прост и воспроизводим, используется для диагностики нейродистрофических состояний, анаболического действия лекарственных препаратов, но недостаточно точен из-за низкой информативности, что приводит к затруднению дифференцировки, кроме того, требует учитывать особенности фиксации скелетных мышц.
Авторы предлагают способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов, позволяющий с высокой точностью оценить морфологические признаки анаболического действия лекарственных препаратов.
Техническим результатом заявляемого способа является повышение точности оценки анаболического действия лекарственных препаратов за счет подбора комплекса современных методов исследования (гистологического, гистохимического и морфометрического), позволяющих оценить гипертрофию и биосинтетическую активность мышечных волокон скелетной мышечной ткани.
Технический результат достигается тем, что интенсивность биосинтетических процессов в миосимпластах достигается путем определения (измерения) поперечного сечения мышечных волокон, подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро миосимпласта и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами в сравнении с интактными (контрольными) животными.
Способ осуществляют поэтапно следующим образом:
1. Забор участка скелетной мышцы для исследования и изготовление гистологических препаратов.
После эвтаназии экспериментальных животных методом декапитации, мышечную область левой задней конечности освобождают от соединительной и жировой ткани, из центральной ее части вырезают кусочки размером 0,5×0,3 см и помещают в 10% раствор забуференного формалина. Гистологический материал фиксируют 24 часа. Используют проводку с изопропанолом и заливку в парафин (Пешков М.В. Метод гистологической проводки тканей с использованием изопропанола и минерального масла / М.В. Пешков, И.И. Дыгало // Архив патологии. - 2009. - №3. - С. 39-41). Срезы тканей толщиной 6-8 мкм изготавливают на ротационном микротоме. Гистологические препараты окрашивают гематоксилином и эозином на ядрышковые организаторы (Бобров И.П. Модификация гистохимического метода выявления ядрышковых организаторов на гистологических срезах / И.П. Бобров, A.M. Авдалян, В.В. Климачев и др. // Архив патологии. - 2010. - №3. - С. 35-37).
2. Ход определения.
Оценивают гипертрофию мышечных волокон путем измерения поперечного сечения мышечных волокон. Для этого препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, рассматривают в светооптическом микроскопе ЛОМО Микмед-6 на увеличении ×400. Изготавливают снимки гистологических препаратов с использованием цифровой камеры Canon PS А520. Препараты анализируют на фотографиях с помощью программного пакета Axio Vision 3.4LE.
Определение биосинтетической активности ядер миосимпластов производят путем изучения гистологического препарата и подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами на увеличении ×400 светооптического микроскопа.
При определении поперечного сечения мышечных волокон и подсчете среднего количества гранул серебра на 1 ядро миосимпласта и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами анализируют не менее 100 мышечных волокон.
Заявляемый способ позволяет с высокой точностью оценить морфологические признаки анаболического действия лекарственных препаратов.
Корректность оценки анаболического действия лекарственных препаратов была апробирована экспериментальным путем.
Эксперименты проводились на 30 аутбредных крысах-самцах сток Вистар массой 200-250 г, которые находились в индивидуальных клетках в условиях стандартной лабораторной диеты. Для создания необходимых экспериментальных условий животные были разделены на 2 группы: 1-я группа - интактные крысы; 2-я группа - крысы, которые получали лекарственный препарат.
Результаты исследований представлены в примерах 1-2.
Пример 1. Установлено, что у крыс 1-й группы средний размер поперечного среза мышечного волокна составил 4,7±0,16 мкм. При этом процент ядер с одним ядрышковым организатором составил 46%, с двумя - 48%, с тремя и более - 6%.
Пример 2. У крыс 2-й группы средний размер поперечного среза мышечного волокна составил 5,9±0,14 мкм, что в 1,3 раза превышало показатели в 1-й группе (p<0,05). При этом процент ядер с одним ядрышковым организатором уменьшился в 1,5 раза (31,6%), с двумя практически не изменился (49,2%), а с тремя возрос в 3,2 раза до 19,2% (p<0,001).
Таким образом, полученные результаты наглядно демонстрируют точность применения заявляемого способа, позволяющего с высокой точностью морфологически оценивать анаболический эффект лекарственных препаратов.
Claims (1)
- Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов, заключающийся в заборе от экспериментального животного участка скелетной мышцы для исследования, гистологической проводке участка скелетной мышцы, изготовлении и окраске гистологических препаратов гематоксилином и эозином на ядрышковые организаторы, морфометрической оценке гипертрофии мышечных волокон путем измерения поперечного сечения мышечных волокон и определения интенсивности биосинтетических процессов в миосимпластах путем подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами по сравнению с интактными (контрольными) животными.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014113536/15A RU2568903C2 (ru) | 2014-04-07 | 2014-04-07 | Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014113536/15A RU2568903C2 (ru) | 2014-04-07 | 2014-04-07 | Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014113536A RU2014113536A (ru) | 2015-10-20 |
RU2568903C2 true RU2568903C2 (ru) | 2015-11-20 |
Family
ID=54326754
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014113536/15A RU2568903C2 (ru) | 2014-04-07 | 2014-04-07 | Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2568903C2 (ru) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2260805C2 (ru) * | 2001-03-06 | 2005-09-20 | Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани | Способы идентификации соединений для регуляции мышечной массы или функции с применением рецепторов рилизинг-фактора кортикотропина |
RU2499242C2 (ru) * | 2011-08-29 | 2013-11-20 | Андрей Викторович Иванченко | Способ подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям |
-
2014
- 2014-04-07 RU RU2014113536/15A patent/RU2568903C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2260805C2 (ru) * | 2001-03-06 | 2005-09-20 | Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани | Способы идентификации соединений для регуляции мышечной массы или функции с применением рецепторов рилизинг-фактора кортикотропина |
RU2499242C2 (ru) * | 2011-08-29 | 2013-11-20 | Андрей Викторович Иванченко | Способ подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Пешков, М.В. Метод гистологической проводки тканей с использованием изопропанола и минерального масла / М.В. Пешков, И.И. Дыгало // Архив патологии. - 2009. - N3. - C. 39-41. * |
Яцковский, А.H. Метод оценки функциональной активности клеточных ядер / А.Н. Яцковский // Арх. анат. - 1987. - Т. 92. - Вып. 1. - С. 76-79. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2014113536A (ru) | 2015-10-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Feliciano et al. | Single-cell Tsc1 knockout during corticogenesis generates tuber-like lesions and reduces seizure threshold in mice | |
Butti et al. | Reduced C9orf72 function leads to defective synaptic vesicle release and neuromuscular dysfunction in zebrafish | |
Lueckoff et al. | Comprehensive analysis of mouse retinal mononuclear phagocytes | |
Nixon et al. | Caveolin-1 is required for lateral line neuromast and notochord development | |
CN106526156B (zh) | 一种检测、筛选及鉴定肾阳虚证代谢生物标记物的方法 | |
Penke et al. | Contribution of Egr1/zif268 to activity-dependent Arc/Arg3. 1 transcription in the dentate gyrus and area CA1 of the hippocampus | |
Sun et al. | Characterization of cellular senescence in doxorubicin-induced aging mice | |
Chen et al. | Integrating image-based high-content screening with mouse models identifies 5-hydroxydecanoate as a neuroprotective drug for paclitaxel-induced neuropathy | |
Müller-Deile et al. | Glomerular endothelial cell-derived microRNA-192 regulates nephronectin expression in idiopathic membranous glomerulonephritis | |
Salazar-Silva et al. | NCOA3 identified as a new candidate to explain autosomal dominant progressive hearing loss | |
US20160169870A1 (en) | Method for diagnosis of diseases using morphological characteristics of luterial | |
Middelkamp et al. | Overexpression of Lin28A in neural progenitor cells in vivo does not lead to brain tumor formation but results in reduced spine density | |
Zhuang et al. | YTHDF2 in dentate gyrus is the m6A reader mediating m6A modification in hippocampus-dependent learning and memory | |
Wiatr et al. | Broad influence of mutant ataxin-3 on the proteome of the adult brain, young neurons, and axons reveals central molecular processes and biomarkers in SCA3/MJD using knock-in mouse model | |
RU2568903C2 (ru) | Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов | |
CN101448952A (zh) | 使用硬骨鱼胚胎筛选具有血管调节活性的试剂的方法 | |
Gessert et al. | The spatio‐temporal expression of ProSAP/shank family members and their interaction partner LAPSER1 during Xenopus laevis development | |
US10031128B2 (en) | Screening method, screening kit and analysis program | |
Russell et al. | Isolation and characterization of extracellular vesicles from Caenorhabditis elegans for multi-omic analysis | |
Cotter et al. | Introduction to Histology | |
Revishchin et al. | Audiogenic epilepsy and structural features of superior colliculus in KM Rats | |
Pierron et al. | Centriole elimination during C. elegans oogenesis initiates with loss of the central tube protein SAS-1 | |
Rysted et al. | Techniques for Simultaneous Mitochondrial and Cytosolic Ca 2+ Imaging in Neurons | |
Seiffer et al. | Reliable detection of RNA in hippocampus sections of mice by FISH up to a post-mortem delay of 24 h | |
García-Magro et al. | Stereological Approaches to Microglia Morphometry |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160408 |