TW438888B

TW438888B - Enzymatic hydroxylation process for the preparation of HMG-COA reductase inhibitors and intermediates thereof

Info

Publication number: TW438888B
Application number: TW083109094A
Authority: TW
Inventors: Brian L Davis; Paul M Cino; Laszlo J Szarka
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1993-10-22
Filing date: 1994-10-01
Publication date: 2001-06-07
Also published as: US6043064A; HU217104B; PT649907E; DE69425801D1; CN1085250C; DK0649907T3; GR3034835T3; KR950011616A; EP0649907B1; JPH07184670A; CA2134025A1; ATE196166T1; HUT69959A; SG47504A1; EP0649907A1; AU7597294A; CN1106067A; HK1014740A1; CY2216B1; DE69425801T2

Description

4 3 f ι(Α):第831〇9〇94號專利申請案中文說明書修正頁民國88年12月呈五、發明說明（0 本發明是有關製備化合物之酵素羥基化製法，其可充作HMG — C Ο A還原酶抑制劑及/或HMG — C 0A還原酶抑制劑製備時之中間物。本發明提出式（I )化合物之製法： Q '

其部份或完全氫化的類似物或其塩，其中 R是烷基或芳基： z是開鏈部份 HO、/CH2 'CH 、COOR2 I CH2 /OH >/ 或H，丨/η2 ch2 (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -- 裝·-------訂---------線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公藿） 438888 A7 ___B7_ 五、發明説明（2 ) R2是氣，院基，錄，院基—鉄或驗金屬；此製法包括將式（II )化合物：〇

II _/c\

{請先閲讀背面之注意事：再填寫本頁) _I_I_ (II), 其部份或完全氫化的類似物或塩，其中R，z及R2如式 (I )般定義，與微生物或與衍自彼之酵素，或具有衍自該微生物之酵素結構者接觸，其可催化該式（π )化合物之羥基化作用，生成式（I )化合物，並達成釋基化作用 0 在此微生物選自：諾卡氏菌屬，Amycolata ，糖多抱菌靥，鏈霉菌靥，Amyco!atopsis ，糖發菌或吉爾霉靥，限制條件爲當式（II )化合物是緊壓素（compactin )時，微生物並非Amy cd lata ，諾卡氏菌或鍵霉菌。經濟部中央桴準局肖工消費合作社印製本發明的酵素羥基化製法，提供得到式（I )化合物有效的方法，其本身可呈現HMG — COA還原酶抑制劑活性，及/或可充作其他HMG — C 〇A還原酶抑制劑製備時之中間物。應用本發明的羥基化方法可達到副產物之減少或消除，此方法也可在溫和的反應條件下進行。本發明方法詳述於下。定義本紙張尺度適用中國圉家標準(CNS)A4规格(210X297公楚）-5 - 經濟部中央標準局Μ工消費合作社印製 438888 A7 ________B7 五、發明説明（3 ) 所謂 '"酵素製法*或、酵素法#在此表示應用酵素或微生物之製法或方法。此中的1烷基，，單獨地或爲另一基團的一部份，表示直及分支鏈之視所需經取代之碳氫化物，在常鏈上有1 至12個碳，較好是1至6個碳，如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，第三丁基，異丁基，戊基，己基，異己基，庚基，4 ’ 4 —二甲基戊基，辛基，2 ，2 ，4 —三甲基戊基，壬基，癸基，十一碳基，十二碳基，其各種分支鏈異構物等。示例的取代基包括一個以上選自下列之基團 :鹵（尤其是氯），三鹵甲基，烷氧基（如，二個烷氧基取代基形成一個乙縮醛），芳基如未經取代之芳基（如苯基），烷基-芳基或鹵芳基，環烷基如未經取代之環烷基或烷基-環烷基’羥基或經保護的羥基，羧基，烷氧羰基，烷胺基，二烷胺基如二甲胺基，烷基羰基胺基如乙醯胺基，胺基，芳基羰胺基，硝基，氰基，硫醇，或烷硫基。較佳的烷基取代基爲羥基。此中所用的、烯基# ，單獨的或爲另一基團的一部份，表示視所需經取代之直或分支之碳氫化物，如先前爲烷基所述的，進一步含有至少一個碳碳雙鍵。所謂％環烷基〃此中單獨或爲另一基團的一部份，表示視所需經取代之飽和的同素環碳環系統，較好含有由1 至3個環，每個碳環含3至12個，較好是3至8個碳，如環丙基，環丁基，環戊基，環己基，環庚基，環辛基，環癸基，環十二碳基，及金剛烷基。示例的視所需取代基本紙張尺度適用中國固家標準(CNS)A4規格(210X297公爱丨-fi - ........................裝！.............可----------------線 (請先閱讀背面之注意事：再蜞寫本頁) 4388 8 8 經濟郎中央桴準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（4 ) 包括一個以上如上述的烷基，或一個以上如上述之烷基取代基。所謂％芳基#如此中所示爲單環或二環的經取代或未經取代的芳族基，在環部份含有6至12個碳，如苯基，聯苯基，棻基，經取代的苯基，經取代的聯苯基或經取代的某基。示例的取代基（較好3個以下）包括一個以上的下列基團：烷基，如未經取代的烷基，鹵烷基或環烷基烷基，鹵，烷氧基如未經取代的烷氧基鹵烷氧基，羥基，芳基如苯基或鹵苯基，芳氧基如苯氧基，烷基羰氧基或芳醯氧基，烯丙基，環烷基，烷胺基，二烷胺基，醯胺基如烷基羰基胺基或芳基羰胺基，胺基，硝基，氣基，烯基，硫醇，烷基羰基或芳基羰基，或甲二氧基，其中亞甲基可爲低碳烷基所取代（即，垸基如上述具有1至6個碳原子），芳基烯基及/或烷硫基。此中所用的 ''鹵〃表示氯，氟，漠:或碘：。此中所用的、塩類，係指與無機及/或有機鹼形成的酸性及/或鹼性塩。以無毒性之藥學上可接受之塩爲較佳。示例的藥學上可接受塩包括與陽離子形成者，如鈉，鉀，鋁，鈣，鋰，鎂，鋅及四甲銨以及與胺形成者，如銨，乙二胺，N —甲基葡糖胺，賴胺酸，精胺酸，鳥胺酸，膽鹼，N，N —-二笮基乙二胺，氯普卡因，二乙醇胺，普卡因，N-采基苯乙胺’ 1 -對位—氯爷基—2 —妣略d定 -1 > 一基-甲基苯蓝咪唑’二乙胺’六氫吡阱及參（羥甲基）胺基甲烷。本纸張尺度適用中S國家標準(CNS)A4規各(210X297公穿)-7 - -.......................裝.................耵................線 (請先閲讀背面之注意本丹蜞寫本頁〕 4 3 88 8 8

HCL A7 B7 五、發明説明（5 ) 所謂'1藥學上可接受之陽離子〃表示形成藥學上可接受塩類之陽性抗銜離子，如上述者。此中所指之>ATCC 〃爲美國標準菌種收集所之收藏編號，1 2 3 0 1 P a r k 1 a w n D r i v e，R 〇 c k v i 1 1 e , M a r y 1 a π d 208 5 2 ° g始物應用於本發明羥基化作用中之式（Π )化合物，可由精藝者已知之方法獲得。此種化合物掲示於如：美國專利案 No. 4， 450， 171。齡佳化合物式（I )化合物具下式I a者爲較佳： ch2 ch2 CH ’ CH COOR2 .......................裝—— (請先閱讀背面之注意蓽丹填寫本頁) 訂

〇II

OH 線經濟部中央栉翠局負工消費合作社印製 ch2

(la) 其部份或完全氫化的類似物或其鹼金屬塩類，其中R是烷基且R2如式（I )中所定義。特佳的實例爲：本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(21〇X297公釐）-Η - 經濟郎中央標準局貝 438888

J Η Η 2 Η

CH H2 coor2 (請先閲讀背面之注意寘再蜞寫本頁) 裝................訂

R OH c 2 Η c

OH

3 Η (Ha) 線消費合作社印製其部份或完全E化的類似物或其鹼金屬塩類，其中R是焼基且R 2如式（II )中所定義。一個特佳的實例爲：本紙張尺度通用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐)-9 - 4 3 88 8 8 A? 好7

緊壓素甲酉g .......................裝…… (請先閱讀背面之注意家再填寫本頁) 其部份或完全氫化的類似物或其鹼金屬搶類。式（ί )化合物或此中所述任何化合物，其中一個以上的雙鍵不存在，可由相當的化合物氫化而得，其中此鍵存在，依精藝者已知方法而得。本發明的任何產物可以已知的方法分離及純化’如適當時濾去細胞或钿胞物質，萃取’結晶化作用，薄層或管柱層析，高性能液相層析等。上述稱之爲緊壓素甲酯及帕法亭甲酯之結構，係這些化合物較佳的酸型。其中這些化合物之羧基是呈鹸金屬塏型，化合物在此以ii型式爲較佳。

如下文所述，進行本發明之羥基化作用方法時，以在水性介質中爲較佳。因此較好是製備’或被用來充作起始物的是如上所定義的其中Z是開鏈部份之化合物，因爲此化合物較其中內酯之相當化合物有更好的水溶性。式（II 本i張尺度適用中圉國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐)_ 1(). 訂線經濟部中央忭準局員工消費合作社印製 438888 經濟郎中央標準局3工消費合作社印製 A7 B7 五 '發明説明（8 ) 〉化合物，其中Z是內酯部份，可在用於本發明方法前先水解成開鏈型式。薛素及微牛物應用於本發明方法中之酵素或微生物可爲任何的酵素或微生物，不論來源或純度，只要具有如此中所述之催化轉化作甩之能力。適合充作催化酵素來源之微生物包括：諾卡氏菌屬’糖多孢菌屬，Amycolata ，鏈霉菌屬，Aray-colatopsis ，糖發菌或吉爾霉屬。適用於本發明的示例種屬有Amycolata autcitircipliica 如ATCC 3 5 2 0 4 ，加里福尼亞鏈霉菌（S. cal i-fornicus)如 ATCC 1 5 4 3 6 * Amycolatopsis ni- editerranei ，如 ATCC 2 1 4 1 1 ，澳州糖發菌（ S. aust;ralensis )如 ATCC 3 8 5 9 1 ，桃吉爾霉 (G. pers 丨caria )，刺蓬糖多孢菌（S. hirsuta)如 ATCC 27875， 27876，或 20501，紅霉素糖多孢菌（S. erythraea)如 ATCC 11635 等。特佳者爲 Amyco!ata autotroph ica，如 ATCC 3 5 2 0 4及刺蓬糖多孢菌如ATCC 2 0 5 0 1 。關於微生物之使用，本發明方法可利用具有此中所述催化轉化作用能力之任何微生物細胞物質來進行。細胞使用的型式如完整的濕細胞或乾細胞，如經冷凍乾燥，噴灑乾燥的或熱乾燥的細胞。細胞也可以經處理之細胞物質使甩，如經瓦解的細胞或細胞萃取物。細胞或細胞物質，如本紙張尺度適用中國圉家標準(CNS)A4規格(210X297公釐X 11 - -.......................裝................，玎................線 (請先閱讀背面之注意Μ 再填窝本頁) 4388 8 8 A7 B7 五、發明説明（9 ) 經分離的眞菌菌弱體，呈自由態型式應用或固化在載體上，如經由物理吸附或截陷。當進行本發明之製程時，可應用一種以上的微生物。本發明方法可在所應用之微生物生長後進行，如在式 II化合物之起/始物存在或不存在時培養微生物，收獲及較好洗滌（如以水）微生物，再將所得的微生物與式（π ) 起始物接觸。本發明方法也可由在原位醱酵及反應來進行，即於活躍生長之微生物存在時反應。反應之進行可在休止（靜止）狀況下，或採用攪動方式。撹動，如Μ盪瓶培養或通氣及攪動，於當式（π)起始物加至活躍生長之培養物時較好如此應用。在此例子時，可應用抗起泡劑。經濟部中央橒準局貝Η消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意衷再填寫本頁) 微生物之生長可由精藝者完成，如使用適合的培養基，其中含有營養物如碳及氮源及痕量元素。可供示例的可同化碳源包括葡萄糖，甘油，麥芽糖，糊精，澱粉，乳糖，蔗糖，糖蜜，大豆油，棉籽油等。供示例之可同化源包括大豆粉，花生粉，棉籽份，魚粉，穀類浸漬液，蛋白，膝，米糖，肉浸育，脖母，酵母浸資，硝酸鈉，硝酸銨，硫酸鉉等。無機垮如氯化鈉，磷酸埴，碳酸鈣等，可加至培養基中。也可加入少量的金屬塩或重金籣。在微生物不同的生長階段，可應用相同或不同的培養基。微生物生長的最佳培養基爲此中實例所述，其中培養基可用於本發明方法所應用的各種微生物之生長。當應用酵素時，其絞好是衍生自前述微生物，或可以本紙張尺度適用中國圉家標準(CNS)A4規格(210X297公釐；μ 12 - 43888 8 A7 __B7 五、發明説明（1〇 ) 合成或其他方法製備。如，其可衍生自經遺傳工程之宿主細胞。也包括使用經遺傳工程之宿主細胞本身，或細胞已另外被修飾，其中此細胞可產生具有衍自前述微生物種靥之酵素結構之酵素。反應條件本發明方法可於水性介質中進行，如轾緩衝之水性介質。水相可合宜地爲水，較好是去離子水，或適合的水性緩衝溶液，尤其是磷酸塩緩衝溶液。於本發明方法中以水性介質之使用爲較佳。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事抒填寫本頁〕本發明之反應也可在水性介質或在有機介質及水性介質之混合物中進行。使用有機或有機/水性介質可加强較水不溶性之式（II )起始物之溶解度，如其中Z是內酯部份之化合物。較水不溶性起始物可溶於有機溶劑中，如甲基或乙醇，且溶液加至水性介質中以進行轉化作用。形成此有機介質之液體可以是不溶於水的，或較好可溶於水。供示例之有機介質包括：甲苯，己烷，苯，丙酮，二甲亞碉，環己烷，二甲苯，三氯三氟乙烷，烷醇類如甲基或乙基醇或丁醇等。較好起始物可溶於如水或醇中，再加至反應介質中。反應介質較好含有由約0 . 5至約3奄克的式（II ) 起姶物（以每毫升液體介質計）。反應介質之pH値較好介於約6.0及約7.5之間。爲進行本發明之羥基化作用反應，可加入水或有機醇本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> 13 - 經濟郎中央忭準局：s工消費合作社印製 438888 A 7 _ B7 五、發明説明（Π ) ，如烷醇如甲醇或乙醇。較好所應用的這些物質，其用量爲莫耳濃度過量，較好是以式（II )起始物計大量過量。微生物細胞當應用於本製法中時，其用量較好是每毫克式（Π)起始物有由約1 0至約1 0 0 0毫克。本製法中若應用酵素時，其用量較好是每毫克式（II )起始物有由約1至約1 0 0毫克。反應介質較好保持在由約2 7 °C至4 0°C之間，且更好是介於約2 8及約3 4 °C之間。反應時間依據微生物細胞產生之酵素量，或其用量本身以及其比活性而變化。典型的反應時間介於約2 . 5小時及約7 2小時之間。反應時間由於增加反應溫度及/或增加反應溶液中酵素之用量可予以縮短。製備Η M G — C Ο A還原醅抑制劑 HMG — COA還原酶（3 —羥基一3 -甲基戊二醯基輔酶A還原酶，EC 1. 1. 1. 34)爲膽固醇生合成中之關鑑酵素。此酵素之抑制劑可充作抗膽固醇薬，即可降低或維持血漿中膽固醇水平。除了治療及預防高膽囿醇血症之外，HMG — COA還原酶抑制劑也可用妗治療及預防粥狀動脈硬化，高脂蛋血症，及/或高脂血症。上述的式（Π )化合物本身可呈現HMG — COA還原酶抑制活性（如緊壓素甲酯）及/或可充作中間物用於製備具HMG — C 0A還原酶抑制活性之其他化合物。壓後一例中，本發明進一步提出一種方法，其中羥基化作用本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐14 - ........................裝.................ΤΓ----------------線 (請先閲讀背面之注意*再填寫本頁) 4388 8 8 A7 B7 五 '發明説明（12 ) 依據本發明上述方法進行，且接下來如此產生的羥基化產物可應用於製備HMG - COA還原酶抑制劑（如其上之基團去保護，加入或另外修飾之）。較好，如此製備的抑制劑，其HMG - C 0A還原酶抑制活性較於自此中製備之羥基化產物所具有的任何活性都還强。依據本發明方法所得之Η M G_C 0A還原酶抑制劑，可以精藝者已知方法所選用之模式及劑量投予至晡乳動物，特別是人類。製備本發明HMG — C 0A還原酶抑制劑之特佳方法包括以下步驟： (A)羥基化式（Ila )化合物，其中R是 ch2 h3c^ 、c — /1 且 R2 是 Η，或其指，以 Amycolata aut- H3c、' i ch3 otrophica ( A T C C 3 5 2 0 4 )或刺蓬糖多孢菌 k〇-be ns l s ( A T C C 2 0 5 0 i )進行以生成具下式之帕法亭甲酯： .......................裝................·玎................線 (請先閲讀背面之注意本.丹填寫本頁) 經濟邾中央標準局貝工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐) 4 3 88 8 8 Μ Β7 五、發明説明（13 0 HC^

CH CH2 bc

OH

CH2 /OH 、CH ,ch2

或其鹸金屬塩，尤其是鈉或鋰。以下賁例說明本發明之較佳具體實例，且不因此限制本發明範圍或精義。應用於實例中之培養基組份如下。培養某 F 7 (請先閱讀背面之注意畜冉填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 K 2 8 培替基組成物麥芽浸資10毫/升’酵母浸育1〇毫/ 升，蛋白腺1毫/升，右旋糖2 0毫/升，蒸餾水至1升，在以壓熱滅菌前先調至 p Η 7 . 0。 Pharmamedia 25 毫/升，cerelose 6 奄/升，CaC〇3 9毫/升， K 2 Η P 0 4 0. 1毫/升，自來水至1 升，在以壓熱滅菌前先調之pH 6. 8 -

F 胰化蛋白陳5毫/升，麥芽浸資3毫/升本纸張尺度適用中圉國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐)_ lfi 438888 A7 B7 五、發明説明（l4 ) 經濟祁中央標準局員工消費合作社印製 > 葡萄糖 1 9 蒸餾水至 F 4 6 甘油 1 0 毫過的營養大毫 / 升 9 噴升 ) Μ g S 升白來水 P Η 値至 5 Μ 1 2 4 c e re 1 〇 s e / 升 ί 酵母毫 / 升 C 1 升 t 在以 6 8 — 7 麥倫 — 興頓肉牛肉浸液 3 汁 ( Mu eller- ύ-η m. 1 7 5 Hi n t on broth) > 懸浮於 1 { D i f c o牌）煮沸以完全胰化酪蛋白大胰化酪蛋白豆肉湯白臃 3 毫 / B B L 牌 K 2 H P 〇 4 2 5 毫 / 滅菌 0 Y 1 7 酵母氮鹼基 /升 1 Si gm 0毫/升，酵母浸資3毫/升 1升，於壓熱器中滅菌。 /升，麥芽糖4 0毫/升，烤豆粉3 0毫/升，蛋白睇1 〇灑乾燥之穀物浸潰液1 0毫/ 0 4 · 7 Η 2 0 0. 5 毫 / 至1升，在以壓熱滅菌前先調 .3 <= 1〇毫/升，1^2胺615毫浸育10毫/升，NaCi2 5 aC〇3l毫/升，自來水至壓熱滅菌前先調p Η値至 .0 « 00毫/升，酪胺基酸，技術毫/升，澱粉，1. 5毫/升升蒸餾或去離子水，並加熱至溶解，最終Ρ Η値7 . 4。蛋白陳1 7毫/升，植物膝蛋升，NaC55毫/升， 2 . 5毫/升，右旋糖升，蒸餾水至1升，以壓熟鍋 6. 7毫/升，葡萄糖5〇毫 a腺嘌呤HCJ2 0. 〇9毫/ ......................裝...............訂...............線 (請先閱讀背面之注意婁丹蜞寫本頁〕本紙择尺度適用中國國家標準(_CNS)A4規格(210X297公楚> 17 - 經濟部中央栉準局员工消費合作社印製 438888 A7 B7 五、發明説明（15 ) 升，Sigmel-酷胺酸0. 0 6毫/升，加熱至沸騰，並混以DifcQ酪胺酸2毫/ 升，瓊脂2 0毫/升，蒸餾水至1升，於壓熱鍋中滅菌。實例1 解凍 1 冷凍小瓶的 Amycolate autotrophica ( A T C C 3 5 2 0 4 )及1冷凍小瓶的刺蓬糖多孢菌（ S. hirsuta )亞種 kobensis(ATCC 2 0 5 0 1 ) ，並用來接種於各含有1 〇〇毫升F 4培養基之分開的 5.0 〇毫升燒瓶。各燒瓶置於2 5 °C下，約2 8 0 r pm 之震盪器中，並震盪72小時。將每個2. 5毫升一份的 7 2小時A, autotroph ica培養肉湯用來接種於含有 5 0毫升F 7培養基的6個2 5 0毫升燒瓶，及含有5 0 毫升K 2 8培養基的6個2 5 0毫升燒瓶。類似地，每個 2 . 5毫升一份的7 2小時刺蓬糖多孢菌培養肉湯用來接種於含有5 0毫升F 7培養基的6個2 5 0毫升燒瓶，及含有5 0毫升K 2 8培養基的6個2 5 0毫升燒瓶。所有 2 4個燒瓶置於震盪器上，並在2 5 °C約2 8 0 r pm下裒盪。於過2 4小時溴盪，將1毫升經過濾紙滅菌的5毫克 /毫升緊壓素甲酯塩溶液無菌地加至三個F 7燒瓶及三個 K 2 8燒瓶。（指溶液係製備自內酯，係將內酯溶於少量乙醇中，加入約15毫升〔其可生成某些沈澱物〕，調整本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> _ .......................裝................玎................線 (請先閱讀背面之注意寞：丹填寫本頁) 經濟郎中央標準局3工消費合作社印製 438888 A7 _ B7_ 五、發明説明（16 ) pH値至約1 1 . 8 ，接種於6 5 °C水浴中直到沈漉物溶解，再小心地將P Η値降至7 . 5。加蒸餾水至5毫克/ 毫升之估計濃度）。在此時，新的二個燒瓶加入，爲各培養基未接種之燒瓶，加有塩以爲非生物修飾之對照組。這些燒瓶之後和經接種燒瓶般相同地處理。類似地*無菌的5 0 0 +微克/毫升緊壓素加至三個 F 7及三個Κ2 8培養基燒瓶中。加入二個新燒瓶，爲各培養基未接種之燒瓶，並也加入緊壓素。（加入緊壓素燒瓶的目的是充作陽性對照組，顯示緊壓素之羥基化作用是正常地發生。未接種的燒瓶充作受質可能的非生物變化之對照組。）再震盪2 4小時。之後所有的燒瓶接受第二劑量相同的塩，此係先前已給過的。再次Μ盪2 4小時，之後回收 &個燒瓶（於Τ ^時間）包括1個各培養基-受質之組合。回收後之肉湯接受受質及羥化產物之分析。經過再2 4小時之震盪，回收其餘2 0個燒瓶（於 T2時間），包括10個帕法亭甲酯樣品及10個緊壓素樣品。肉湯接受適合的受質一產物分析。結果示於下：本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> 19 - .......................裝................玎................線 (請先閱讀背面之注意事丹填寫本頁) 438888

7 7 A B 五、發明説明（l7 ) 經濟部中央標準局3工消費合作社印製培養物培煢基緊®素 (微克/克） Τΐ Ϊ2 Τ2 帕法亭 (微克/克） Τΐ Ϊ2 Ϊ2 A.autotroph-c a F7 8.4 0 0 474 475 503 K28 4.6 0 0 470 575 512 刺蓬糖多孢菌 F7 842 127 122 347 775 753 K28 4 12 0 0 675 750 762 無（對照組） F7 -1857 - - 0 - K28 -1806 ， - 0 - —.............-.....裝................ir................線 (請先閱讀背面之注意事仵填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐) - 438888 A7 B7 五、發明説明〇8 ) 經濟邾中央桴準局員工消費合作杜印製培養物培養緊柩素甲酯帕法亭甲酯 - (微克/克） (微克/克） IU Ϊ2_ Τχ. Ιχ l2_ A.autotroph- F7 0 0 0 57.9 56.4 55 . 4 c a K28 0 0 0 59.862.4 66.7 刺蓬糖多孢菌 F7 1.70 0 71.577.1 82.9 R28 3.1 0 0 58.9 63.3 63 . 8 無（對照組） F7 - 96.5 - - 0 - K28 - 90.2 - - 0 - 眚例2 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐>· 21 .......................裝................-玎................線 (請先閱讀背面之注意事 φ場寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 438888 A7 _B7_ 五、發明説明（19 ) 一冷凍小瓶的刺蓬糖多孢菌kobensis亞種（AT C C 2 0 5 0 1 )解凍以接種於5 0 0毫升含有1 〇〇毫升 F 4培養基之燒瓶中。燒瓶置於約2 5 °C，2 8 0 r pm 之寅盪槽中，並震盪7 2小時。每7 2小時肉湯用來接種於2 5 0毫升含有4 5毫升 K2 8培養基之燒瓶中。二燒瓶置於2 5 °C’ 2 8 0 r pm之震Μ槽中。經過2 4小時之震盪，緊壓素甲酯塩溶於水中以提供過濾滅菌之溶液。此溶液化取一部份’加至κ 2 8燒瓶之一中。6小時後，相同部份加至相同燒瓶。第二個Κ 2 8 燒瓶也接受一部份，如同第三個未接種的Κ 2 8燒瓶一般。所有三個燒瓶置於雯盪槽中，並再震逯1 8小時。之後第一個燒瓶接受一個第三劑量。6小時後，第一燒瓶接受一個第四（及最後的）劑量；第二燒瓶接受第二 (及最後的）劑量，且未接種之燒瓶接受第二（及最後的 )劑量。再經4 2小時震盪後，回收三個燒瓶且所有肉湯接受緊壓素甲酯及帕法亭甲酯之分析。結果示於下：本紙强尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐)· 25¾ .......................裝................，町................線 (請先閱讀背面之注意寘冉填寫本頁) 4388 8 8 A 7 B7 經濟部中央標準局齊工消費合作社印製五、發明説明（2〇 ) 樣品緊颸素甲酯 (微克/克）帕法亭甲酯 (微克/克） 1號燒瓶 0 284.8 2號燒瓶 0 251.5 無細胞對照 418.6 0 實例3 各一個冷凍小瓶的 Amycolata autotrophica ( A T C C 3 5 2 0 4 )，加里福尼亞鏈霉菌（ATCC 1 5 4 3 6 ) ，A π y c ο 1 a t a hydrocarbonoxydans ( ATCC 1 5 1 〇 4 ) ， Amycojatamediterranei ( ATCC 2 1 4 1 1 ) ，Amyco【atopsis fastidiosa( ATCC 3 1 1 8 1 )及刺蓬糖多孢菌kobensis( ATCC 2 0 5 0 1 )解凍，再用來接種於50 0毫升含有1 0 0毫升F 7培養基之發芽器燒瓶中。所有的燒瓶置於2 5 °C約2 8 〇 r pm之震盪槽中，異盪7 2小時。各發芽器燒瓶取每3分1 0毫升：接種於各含1 2 0 毫升K 2 8培養基之分別的燒瓶中。所有的燒瓶再置於^ 盪槽中。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> I]- ........................裝................*玎................線 (請先閱讀背面之注意挛丹填寫本頁〕 4 388 8 8 A 7 B7 五、發明説明（21 ) 2 4小時，加5 0 0微克/毫升經過濾滅菌之緊壓素 (酸型）至各燒瓶。燒瓶再置於震盪槽中。 2 4小時後，自燒瓶中取出各1 5毫升，並冷凍以進一步再分析（Τχ )。第二份5 0 0微克/毫升之無菌的酸型式緊壓素加至各燒瓶中，且燒瓶再置震盪器中。之後2 4小時，第二份1 5毫升樣品取出，並冷凍以進一步再分析（T2 〉：且再2 4小時後，自各燒瓶中再取出最後的15毫升，並冷凍以再分析之（Τ3 )。所有樣品解凍並接受分析。結果示於下表。 .......................裝.................玎.........:……線 («-先閱讀背面之注意塞，丹填寫本頁) 經濟部中央桴準局負工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐) 24 - 438888 A 7 B7 五、發明説明（22 ) 經濟部中央桴準局貝工消費合作社印製培養物 Ϊ1 緊壓素帕法亭轉化作用 A .hydrocarbonoxydans 439 0 - A.inediterranei 21 142 28¾ A.fastidiosa 376 0 - 刺蓬糖多孢菌 40 201 40¾ 對照組： A.autotrophica 68 1 10 11% 加里福尼亞鏈霉菌 0 75 15¾ ........................裝................1T.....-..........線 (請先閱讀背面之注意事丹填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(2丨0X297公釐> π - 438888 A7 B7 五、發明説明（23 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製培養物 T2 緊壓素帕法亭轉化作用 A.hydrocarbonoxydans 767 0 - A.mediterranei 15 282 28¾ A.fastidiosa 19 1 0 - 刺蓬糖多孢菌 19 399 40¾ 對照組： A.autotrophica 痕跫 293 29¾ 加里福尼亞鏈霉菌 0 167 11% ........................裝................π................線 (請先閱讀背面之注意事升填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐>· - 4 3 88 8 8

7 7 A B 五、發明説明（24 ) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製培養物 T3 緊壓素帕法亭轉化作用 A .hydrocarbonoxydans 812 0 - A.mediterranei 21 290 29¾ A,fastidiosa 7 11 0 - 刺蓬糖多孢菌痕量 394 39¾ 對照組： A.autotrophica 3 276 28% 加里福尼亞鏈霉菌 2 157 16¾ 實例4 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐打 ........................裝................-耵................線 (諳先閲讀背面之注意審丹填寫本頁) 438888 經濟部中央桴準局员工消f合作社印製 A7 B7 五 '發明説明（25 ) 4 6小時的剌蓬糖多孢菌kcibensis亞種（ATCC 2 〇 5 0 1 )(生長於 2 8°C 下）及Amycolata'autotro- phica (ATCC 35204)(生長於25 °C下）用來接種各種培養基之燒瓶（5 Q毫升培養基/2 5 〇毫升燒瓶）。每個燒瓶使用5毫升接種物。刺蓬糖多孢菌接種至以下各培養基的二個不同的燒瓶中：F7，F4 6 ，K28 ’Ml 24 ，麥倫興登，胰化酪蛋白大豆肉湯（TSB )及丫 1 7。各培養基取一燒瓶置於2 5°C，約2 8 0 r ρτη溴盪槽中，各培養基的另一燒瓶置於2 8 °C，約2 8 0 r pm之震盪槽中。F7培養基及K 2 8培養基各自再一個燒瓶予以接種，並置於3 2 °C水浴震盪槽中。 A, autotrophica接種至F 7培養基及K 2 8培養基各自二個分開的燒瓶中。各培養基取—個已接種之燒瓶置於2 5 °C，約2 8 0 r pm之震盪槽中，且各培養基再一已接種燒瓶，置於2 8 °C，約2 8 0 r p m震盪槽中。 2 4小時後，於各燒瓶中加入5 0 0微克/克劑量之經過濾滅菌之緊壓素（酸型）。燒瓶再置於相同溫度之霣盪槽。又2 4小時後，各燒瓶移出每份1 〇窀升，並冷凍以進一步分析（T:)。第二份5 0 0微克/克無菌酸型之緊壓素加至各燒瓶中，且燒瓶再回至相同溫度之震盪槽中。再4 8小時後，第二份1 0毫升取出（T2 ) 。丁1 樣品解凍，並與Τ 2樣品接受分析。結果示於下表。本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐) π - ........................裝................·玎................線 (請先閱讀背面之注意寞再蜞寫本頁) 438888

7 7 A B 五、發明説明讲）經濟邨中央標準局員工消費合作社印製刺蓬糖多孢菌培養基/溫度°c Τι (冷凍並解凍）緊壓素帕法亭轉化作用 F7/25。 432 60 8¾ F7/28。 154 168 3U F7/320 450 43 9¾ F46/25。 516 10 2% F46/28。 494 17 3% K28/25。 179 147 29% K28/280 105 184 37% K28/32。 211 100 20% M124/25。 180 139 28¾ M124/28。 103 191 38¾ 麥倫-興頓/25° 496 38 8% 麥倫-興頓/28° 402 43 9% TSB/25。 358 74 15¾ TSB/280 211 163 33¾ Y17/25。 605 0 - Y17/28。 533 0 " A . autotrophica (對照組）F7/25。 334 51 10% A . autotrophica (對照組）F7/28。 111 108 22¾ A . autotrophica (對照組）K28/25° 242 79 16¾ A. autotrophica (對照組）K28/2V 60 127 25¾ (請先閱讀背面之注意寞丹填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> 四- 438888 A7 B7 五、發明説明炉）經濟部中央標準局员工消費合作社印製刺蓬糖多孢菌培養基/溫度°c Τ2 (未冷凍）緊壓素帕法亭轉化作用 F7/25。 65 452 45¾ F7/28。痕量 550 55% F7/32。痕量 570 57¾ F46/25。 965 0 - F46/28。 999 0 - K28/25。 0 405 41¾ R28/280 0 405 41¾ K28/320 5 288 29% M124/25。 233 323 32% M124/28。 286 303 30¾ 麥倫-興頓/25° 827 121 12¾ 麥倫-興頓/28° 716 81 8¾ TSB/250 465 238 24¾ TSB/280 363 289 29% Y17/25。 1086 0 - Y17/28。 881 0 - A , autotrophica (對照組）F7/25。痕量 266 27% A . autotrophica (對照組）F7/28。 0 220 22% A . autotrophica (對照組U28/25V ? 2G6 27% A. autotrophica (對照組）K28/28° 痕量 257 26¾ ...................----裝................，玎................線 {請先閲讀背面之注意玄再塡寫本頁) 本纸張尺度適用中g國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> 川- 4388 8 8 A 7 B7 五、發明説明（28 ) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製刺蓬糖多孢菌培養基/溫度°c 比率，T2 帕法亭：所有其他產物 F7/25。 19.0:1 F7/28。 13.2:1 F7/32。 13.3:1 F46/25。 0.3:1 F46/28。 0.4:1 K28/25。 15.7:1 K28/28° 10.0:1 Κ28/320 10.1:1 Μ124/25。 8.4:1 Μ124/280 9.2:1 麥倫-興頓/25° 3.9:1 麥倫-興頓/28° 4.6:1 TSB/25。 4.8:1 TSB/28。 9.6:1 Υ17/25。 - Υ17/28。 - A . autotrophica (對照組）F7/25。 4.2:1 A . autotrophica (對照組）F7/28° 5.4:1 A * autotrophica (對照組）K28/25° 4.4:1 A . autotrophica (對照組）K28/28° 4.5:1 ................................裝...............耵................線 (諳先閱讀背面之注意塞.丹填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(匚1''/5)八4規格(2】〇/297公釐>]1- 438888 A7 B7 五、發明説明（29 ) 窗例5 6 7小時的各種微生物培養物，生長在2 5 °C之F4 培養基中，用來接種於2 5 0毫升含有5 0毫升F 7毫/ 升之燒瓶，及2 5 0毫升含有5 0毫升K 2 8毫/升之燒瓶。每個燒瓶中使用5毫升接種物。所使用之微生物爲：纖維化纖維單抱菌（Cellu丨omonas cellulans)( ATCC 1 2 8 3 0 )，溶黃質厄氏菌（Oerskoviax-anthineolytica) ( A T C C 2 7 4 0 2 )，棒様原小單孢菌（Promicromon cisp ora citrea) (ATCC 1 5 9 0 8 )，綠色糖單孢菌（33(：(：1131_011101105?0以7丨1·- 1 d i s ) (ATCC 1 5 7 3 6 )，刺蓬糖多孢菌（Sa-ccharopolyspora hirsuta) ( A T C C 27875) ，澳洲糖發菌（SacGharothrix australensis)( ATCC 3 1 4 9 7 )，及郝斯泰德鏈霉菌（51:”口(:〇-myces halstedii) (ATCC 1 3 4 4 9 )。綠色糖單胞菌及剌蓬糖多孢菌（ATCC 2 7 8 7 5 )轉化瓶置於2 8 °C，約2 8 0 r pm之震盪槽：另外的培養物置經濟部中央標準局員工消费合作社印製 (請先閲讀背面之注意寞丹填寫本頁) 2 5°C，約2 8 0 r pm之震盪槽。刺蓬糖多孢菌koben-s 1 s亞種（A T C C 2 0 5 0 1 )對照組應用於2 5 °C 及 2 8。(：〇經2 4小時之後，各燒瓶中加入第二份5 0 0微克/ 克之緊壓素。 2 4小時後，各燒瓶中加入第二份5 0 〇微克/克之緊壓素。本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(2]0父297公釐)· - 438888 A7 B7 五、發明説明（3〇 ) 經2 4小時之後，各燒瓶中加入第二份5 0 0微克/ 克之緊壓素。出取中瓶燒。各。析，析分後分並時步凍小一解 6 進品 ΟΙ 以樣 .¾ 冷下 V ο 5 I 在並升毫 5 表下於示果結 111 — ——) I I I I I 1 I ----- (請先閱讀背面之注意事丹蜞寫本頁) 訂線經濟邾中央桴準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公茇}· H - 4388 8 8

7 7 A B 五、發明説明⑺）經濟部中央標準局員工消費合作社印製培養物/ 培養基溫度緊壓素帕法亭轉化率帕法亭 :副產物比率纖維化纖維單孢菌 /F7 25Ό 1107 0 - 纖維化纖維單孢菌 /K28 25°C 1072 0 - 溶黃質厄氏菌 /F7 25〇C 1116 0 - 溶黃質厄氏菌 /K28 25°C 688 0 - - 檸檬原小單孢菌 /F7 25〇C 1119 0 - 檸檬原小單孢菌 /K28 25eC 1309 0 - - 澳洲糖發菌 /F7 25〇C 63 478 43¾ 3.1:1 澳洲糖發菌 /K28 25°C 0 465 42% 4.6:1 郝斯泰德鏈霉菌 /F7 25°C 887 0 - 郝斯泰德鏈霉菌 /K28 25°C 1114 0 - 刺蓬糖多孢菌 ATCC 20501 /F7 25°C 180 532 48¾ 9.4:1 ................-.......裝................玎................線 (請先閲讀背面之注意富卉填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐}· 34 - 43 88 8 8 A7 B7 五、發明説明（以）經濟郞中央標準局員工消費合作社印製刺蓬糖多孢菌 ATCC 2051 /K28 25°C 73 5Π 46¾ 9.2:1 F7空白組 25°C 1281 0 - - K28空白組 25°C 1208 0 - 綠色糖單孢菌 /F7 28°C 1213 0 - - 綠色糖單孢菌 /K28 28〇C 1147 0 - - 刺蓬糖多孢菌 ATCC 27875 /F7 28°C 515 92 8¾ 1.6:1 刺蓬糖多孢菌 ATCC 27875 /K28 28eC 410 194 18¾ 2.0:1 刺蓬糖多孢菌 ATCC 20501 /F7 28°C 35 565 51¾ 12.8:1 刺蓬糖多孢菌 ATCC 20501 /K28 28°C 44 520 47% 8.7:1 ........................裝...............玎................線 (請先閱讀背面之注意寞再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐） 438888 A7 B7 五、發明説明（幻）啻例6_ 8種ATC C毛霉目眞菌及—種星形莖點霉ATCC 1 4 2 8 8 ，由充份生長的斜面培養接種至F 4培養基之發芽器燒瓶（1 0 0毫升F 4〆5 0 〇毫升燒瓶），並置於2 5 °C之緩慢震盪槽中（約2 0 0 r pm)。這8種毛霉目眞菌爲：分枝犁頭霉（Absidia raniosa)( ATCC 1 1 6 1 3 )，繩卷霉（Circineila muscae )(ATCC 1 6 0 0 8 )，刺孢小克銀漢刺孢變種（ C u n n i n g h a πι e 1 1 a echinulata var. echinulata)( ATCC 3 6 1 9 0 )，刺孢小克銀漢雅致變種（（：1111-ninghamella echninulata var. elegans) (ATCC 8 6 8 8 A)，桃吉爾霉（Gilbertella persicaria)( ATCC 3 8 5 9 ) » 根毛霉（Rhizomucor miehei ) (ATCC 2 6 9 1 2 )，少孢根霉（Rhizopusolig- osporus ) (ATCC 2 2 9 5 9 )，及匍枝根霉（1{}1-izopus stolonifer) (ATCC 14037)。經濟部中央桴準局3工消费合作社印製 (請先閱讀背面之注意蓽.丹場寫本頁) 經過7 2小時震盪，在所有生長器燒瓶中之生長似乎都不錯，除了刺孢小克銀漢剌包變種肉計之外，其爲一個大的固態眞菌團。將之丟棄。其餘7個毛霉且燒瓶，及一個星形莖點霉焼瓶，各自用來接種F7培養基及K2 8培養基之生物轉化燒瓶（每2 5 0毫升燒瓶中含5 0毫升培養基）。每燒瓶中使用2毫升接種物。所有燒瓶置於25 °C，固定速度（約2 8 0 r pm )之震盪槽。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(2丨0X297公釐>：¾(>- 經濟郎中央標孕局员工消費合作社印製 438888 A7 __ _ B7 五、發明説明（34 ) . 經2 4小時後，所有燒瓶接受5 〇〇微克/毫升之緊壓素。其中包括二個未經接種之燒瓶，F 7及K2 8培養基各一。所有燒瓶再置2 5°C，2 8 0 r pm之展逸槽中又再經2 4小時後，所有燒瓶接受第二份5 〇〇微克 /毫升之緊壓素，並再放回震盪槽中。 4 8小時後，各燒瓶中取出1 5至2 0毫升樣品並分析。結果如下：桃吉爾霉F 7 —緊壓素6 2 1微克/克；帕法亭 2 7 4微克/克：帕法亭：副產物比率2 · 3 : 1 ;及 K2 8 —緊壓素8 2 2微克/克：帕法亭5 4微克/ 克：帕法亭：副產物比率3 . 4:1 最好的其他二種培養物顯示痕量水平之帕法亭（分枝犁頭霉及少孢根霉）°其他所有均爲帕法亭陰性。實例7 刺蓬糖多孢菌kobensis亞種（ATCC 2 0 5 0 1 )在F 4培養基中達2天，3天及4天之接種物（每 5 0 0毫升燒瓶有1 0 0毫升F 4培養基，各以冷凍小瓶接），用來接種物K 2 8培養基之生物轉化燒瓶（每 2 5 0毫升燒瓶有5 0毫升K2 8 ) 。3個K2 8培養基燒瓶以5毫升接種物，自各發芽燒瓶中接種。此外，以3 天大發芽燒瓶中之接種物接種於K 2 8培養基燒瓶中，以不同的接種體積進行二次。特言之，使用〇· 25毫升， •.......................裝................訂…...........線 (請先閱讀背面之注意¥,冉填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> - 4388 8 8 A7 _一一______ B7 五、發明説明（35 ) 1. 0毫升，2. 5毫升，7. 5毫升及10毫升體積。所有燒瓶置於2 8 X，約2 8 0 r pm之震盪槽中。 2 4小時後，各燒瓶中加入5 0 0微克/毫升之緊壓素鈉塩。再2 4小時後，各燒瓶中加入1 〇〇〇微克/毫升之緊壓素鈉塩。 4 8小時後，回收2 5個燒瓶並分析。結果示於下： -.......................裝................，玎................線 (請先閲讀背面之注意事 4：填窝本頁) 經濟部中央揼準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> 3¾ - 43 88 8 8

7 7 A B 五、發明説明（¾ ) 48小時後，回收25個燒瓶並分析。結杲示於下：經濟部中央標準局員工消費合作社印製接種物年齡接種物體積（Vo!) 及％緊壓素微克/克 (A v . 〇 f 3 ) 帕法亭微克/克 (Av . of3) 轉化作用 48小時 5毫升U0%) 痕量 597 40¾ 7 2小時 0.25毫升 (0.5¾) 1084 138 9% 72小時 1毫升（2¾) 901 211 14¾ 72小時 2.5毫升 (10¾) 224% 692 46¾ 7 2小時 5毫升 (15¾) 痕量^ 676%% 45¾ 7 2小時 7.5毫升 (20¾) 10 609 41¾ 72小時 10毫升 (10¾) 痕量 694 46¾ 96小時 5毫升（10¾) 痕量 700 47¾ 無接種物 1201 0 - ........................裝...............玎----------------線 ¥* (請先閱讀背面之注意事.丹填寫本頁) 本纸張尺度適用中國国家標準(CNS)A4規格(210X297公釐> -

Claims

^aa_8_a 年月曰亂6, 0?補亦 A8 BS C8 -m. 六、申請專利範圍附件：（A ): ¥告本第83109094號專利申請案中文申請專利範圍修正本民國89年6月修正 1 . ~種製備式（I )化合物及其部份或完全氫化之類似物或其鹽的方法， 0 ^ ‘ II Z

其中 (X) 烷基 z是開鏈部份 HO V ,CH 2 CH 、COOR2 ch2 /OH Η1 f\ /η2 或 ----------Λ--------訂------'" (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消贲合作社印製 ch2

〇° 本紙诔尺及遠用中困困家揉率<€奶）八4現格（210><297公釐） 4388 8 8 as C8 D8 六、申請專利範圍 1 Π C ( , 式氫將 o= 是括 N 包 R 法方此屬金鹼：或物基合烷化 R C OM· Z·

經濟部智慧財產局員工消旁合作社印製 (ID , 其部份或完全氫化的類似物或塩，其中R，Z及R2如式 (I )所定義，與微生物，或與衍自彼之酵素，或具有衍自該微生物之酵素結構者接觸，其可催化式（Π )化合物或其塩，以生成式（I )化合物或其塩，並達成該羥基化作用；其中微生物係選自自營性葡霉菌（Amycolata autot-rophica) ATCC 3 5 204，加里福尼亞鏈霉菌（ S. californicus) ATC C 1 5 4 3 6 ，地中海型葡霉菌(A m y c ο 1 a t 〇 p s i s - ra e diterranei) A T C C 2 1 4 1 1，澳州糖發菌（S. australensis ) A T C C 3 1 4 9 7 ’ 桃吉爾霉（G. persicaria ) AT C C 3 8 5 9 1 ’ 刺蓬糖多孢菌（s. hirsuta) ATCC 27875，刺蓬糖多孢菌ATCC 27876，刺蓬糖多孢菌ATC C 2 0 5 0 1或紅霉素糖多孢菌（S. erythraea) ATCC 1 1 6 3 5，限制條件爲當式（ E )化合物是緊壓素時，微生物並非爲自營性葡霉菌 ATCC 35204或加里福尼亞鏈霉菌ATCC (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家揉率（CNS > A4规格（210X297公釐） 438888 ABCD _、申請專利範圍 1 5 4 3 6 ° ^镇1項之方法 2 .如申請專利範## 部份。 , β第2項之方法3 .如申請專利範_ % 院基。 ^第1項之方法 4 .如申請專利範_ f 下式之化合物： ’其中z是該開鍵其中R是C 其中係製備具有 . /CH2、々〇 H CH 、Ζ〔I . 〇H CH3 /OH 、CH

---------"---fL--〆—訂 {請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製或其部份或完全氫化類似物，或其鹼金屬塩。 5 .如申請專利範圍第1項之方法’其中式（Π)化合物係與微生物接觸。 6. 如申請專利範圍第1項之方法’其中該微生物是自營性葡霉菌ATCC 35204或刺蓬糖多孢菌 A T C C 20501。 7. 如申請專利範圍第1項之方法，其中式（π)化合物溶於水或醇中，之後再與微生物或酵素接觸。本紙張尺度速用中國國家標準（CNS)A4规格（210X297公釐） 438888 β C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製六、申請專利範圍 8 .如申請專利範圍第1項之方法，其中式（n )化合物與微生物或酵素接觸的步驟係在水性介質中進行。 9.如申請專利範圍第8項之方法’其中在每毫升水性介質中含有0 . 5至3毫克的式（Π )化合物。 1 0 .如申請專利範圍第8項之方法’其中水性介質之pH值介於6. 0及7. 5之間 1 1 .如申請專利範圍第8項之方法，其中水性介質之溫度介於2 7及4 0°C之間。 1 2 .如申請專利範圍第1 1項之方法，其中水性介質之溫度介於2 8及3 4 °C之間。 13.如申請專利範圍第1項之方法，其中式（π) 化合物與微生物或與酵素之接觸連續達2. 5及72小時之間。 1 4 .如申請專利範圍第1項之方法，其中2是內醋〇 15.如申請專利範圍第14項之方法，其中式（π )化合物先水解，再與微生物或酵素接觸。 1 6 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該式（I )化合物是用來製備HMG-COA還原酶抑制劑。 17. —種製備HMG-COA還原酶抑制劑之方法，此方法包括如申請專利範圍第1項之方法，羥基化式（ II )化合物或其煸，以生成式（I )化合物或其塩β (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) Α4说格（2丨〇〆297公釐） 4 4 3 f ι(Α):第831〇9〇94號專利申請案中文說明書修正頁民國88年12月呈五、發明說明（0 本發明是有關製備化合物之酵素羥基化製法，其可充作HMG — C Ο A還原酶抑制劑及/或HMG — C 0A還原酶抑制劑製備時之中間物。本發明提出式（I )化合物之製法： Q '

其部份或完全氫化的類似物或其塩，其中 R是烷基或芳基： z是開鏈部份 HO、/CH2 'CH 、COOR2 I CH2 /OH >/ 或H，丨/η2 ch2 (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -- 裝·-------訂---------線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公藿） ^aa_8_a 年月曰亂6, 0?補亦 A8 BS C8 -m. 六、申請專利範圍附件：（A ): ¥告本第83109094號專利申請案中文申請專利範圍修正本民國89年6月修正 1 . ~種製備式（I )化合物及其部份或完全氫化之類似物或其鹽的方法， 0 ^ ‘ II Z

其中 (X) 烷基 z是開鏈部份 HO V ,CH 2 CH 、COOR2 ch2 /OH Η1 f\ /η2 或 ----------Λ--------訂------'" (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消贲合作社印製 ch2

〇° 本紙诔尺及遠用中困困家揉率<€奶）八4現格（210><297公釐）