JPH05192187A - 光学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステル類の製造法 - Google Patents
光学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステル類の製造法Info
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- JPH05192187A JPH05192187A JP3605992A JP3605992A JPH05192187A JP H05192187 A JPH05192187 A JP H05192187A JP 3605992 A JP3605992 A JP 3605992A JP 3605992 A JP3605992 A JP 3605992A JP H05192187 A JPH05192187 A JP H05192187A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 強誘電性液晶化合物等の合成原料として有用
な光学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸を
相当するオキソ体から選択的かつ良効率で製造する方法
を提供する。 【構成】 不斉還元反応を行う細菌またはその菌体もし
くは培養物の物理化学的処理物で２−オキソシクロアル
カンカルボン酸エステルを不斉還元する。
な光学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸を
相当するオキソ体から選択的かつ良効率で製造する方法
を提供する。 【構成】 不斉還元反応を行う細菌またはその菌体もし
くは培養物の物理化学的処理物で２−オキソシクロアル
カンカルボン酸エステルを不斉還元する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は強誘電性液晶化合物など
の合成原料として有用な光学活性２−ヒドロキシシクロ
アルカンカルボン酸エステル類の新規な製造法に関す
る。 一般式
の合成原料として有用な光学活性２−ヒドロキシシクロ
アルカンカルボン酸エステル類の新規な製造法に関す
る。 一般式
【０００２】
【化１】
【０００３】［式中、nはメチレン基の数を、Ｒはエス
テル形成基を表わす］で示される２−オキソシクロアル
カンカルボン酸エステル類を通常の化学的方法、例え
ば、ＮaＢＨ4を用いて還元すると、１位と２位の炭素が
不斉中心となるため、以下に示す４種の立体異性体が生
成する。
テル形成基を表わす］で示される２−オキソシクロアル
カンカルボン酸エステル類を通常の化学的方法、例え
ば、ＮaＢＨ4を用いて還元すると、１位と２位の炭素が
不斉中心となるため、以下に示す４種の立体異性体が生
成する。
【０００４】
【化２】
【０００５】［各式中、カッコ内の記号は１位と２位の
不斉炭素原子の絶対配位をその順に示し、nおよびＲは
前記と同意義］ 本発明は、以上の立体異性体のうち、強誘電性液晶化合
物などの合成原料として極めて応用性の高い(１Ｒ,２
Ｓ)ｃｉｓ２体を微生物を用いる不斉還元によって選択
的に製造する方法に関する。
不斉炭素原子の絶対配位をその順に示し、nおよびＲは
前記と同意義］ 本発明は、以上の立体異性体のうち、強誘電性液晶化合
物などの合成原料として極めて応用性の高い(１Ｒ,２
Ｓ)ｃｉｓ２体を微生物を用いる不斉還元によって選択
的に製造する方法に関する。
【０００６】
【従来の技術】式１で表わされる２−オキソシクロアル
カンカルボン酸エステル類から光学活性２−ヒドロキシ
シクロアルカンカルボン酸エステル類を微生物を用いる
不斉還元によって製造する方法としては、パン酵母を用
いる方法［バーダン・エス・デォールら、オーストラリ
アン・ジャーナル・オブ・ケミストリー(Badan S. Deo
l,et al.:Ａust.Ｊ.Ｃhem.)２９,２４５９(１９７６);
ディーター・ゼーバッハら、ヘルベチカ・キミカ・アク
タ(Ｄieter Ｓeebach,et al.:HELVETICA CHIMICA ACTA)
７０,１６０５(１９８７)]およびムコール・ラセモサス
(Ｍucor racemosus)などのカビを用いる方法[ディディ
ール・ブイソンら、テトラヘドロン・レターズ(Didier
BUISSON,et al.:Ｔetrahedron Ｌetters)２７,２６３
１(１９８６)]が知られているが、いずれの場合も、基
質１ｇを還元するのに乾燥重量で１０〜５０ｇの菌体が
必要であることから明らかなように、反応効率が悪い。
また、還元生成物の回収工程においても、反応に要した
大量の菌体を除去するのが困難である。そのために、得
られる生成物の収率は非常に低い。このように、これら
の方法は工業的に有利な方法といえず、また式１で示さ
れる２−オキソシクロアルカンカルボン酸エステル類の
細菌による不斉還元についてはまったく知られていな
い。
カンカルボン酸エステル類から光学活性２−ヒドロキシ
シクロアルカンカルボン酸エステル類を微生物を用いる
不斉還元によって製造する方法としては、パン酵母を用
いる方法［バーダン・エス・デォールら、オーストラリ
アン・ジャーナル・オブ・ケミストリー(Badan S. Deo
l,et al.:Ａust.Ｊ.Ｃhem.)２９,２４５９(１９７６);
ディーター・ゼーバッハら、ヘルベチカ・キミカ・アク
タ(Ｄieter Ｓeebach,et al.:HELVETICA CHIMICA ACTA)
７０,１６０５(１９８７)]およびムコール・ラセモサス
(Ｍucor racemosus)などのカビを用いる方法[ディディ
ール・ブイソンら、テトラヘドロン・レターズ(Didier
BUISSON,et al.:Ｔetrahedron Ｌetters)２７,２６３
１(１９８６)]が知られているが、いずれの場合も、基
質１ｇを還元するのに乾燥重量で１０〜５０ｇの菌体が
必要であることから明らかなように、反応効率が悪い。
また、還元生成物の回収工程においても、反応に要した
大量の菌体を除去するのが困難である。そのために、得
られる生成物の収率は非常に低い。このように、これら
の方法は工業的に有利な方法といえず、また式１で示さ
れる２−オキソシクロアルカンカルボン酸エステル類の
細菌による不斉還元についてはまったく知られていな
い。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、強誘電性液
晶化合物などの合成原料として有用な式２で示される光
学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステ
ル類を、式１で示される相当するオキソ体から微生物に
より選択的かつ効率良く製造する方法を提供するもので
ある。
晶化合物などの合成原料として有用な式２で示される光
学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステ
ル類を、式１で示される相当するオキソ体から微生物に
より選択的かつ効率良く製造する方法を提供するもので
ある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、式
【０００９】
【化３】
【００１０】で示される２−オキソシクロアルカンカル
ボン酸エステル類が細菌により不斉還元され、目的とす
る光学活性な２−ヒドロキシ体が効率良く生成すること
を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明は式１で示される２−オキソシクロアルカンカルボン
酸エステル類を細菌またはその処理物による不斉還元反
応に付すことを特徴とする、式２で示される(１Ｒ,２
Ｓ)−２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステ
ル類の製造法を提供するものである。
ボン酸エステル類が細菌により不斉還元され、目的とす
る光学活性な２−ヒドロキシ体が効率良く生成すること
を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明は式１で示される２−オキソシクロアルカンカルボン
酸エステル類を細菌またはその処理物による不斉還元反
応に付すことを特徴とする、式２で示される(１Ｒ,２
Ｓ)−２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステ
ル類の製造法を提供するものである。
【００１１】本発明の製造法において、出発物質として
用いる式１で示される２−オキソシクロアルカンカルボ
ン酸エステルのシクロアルカンの炭素数は特に限定され
ないが、シクロペンタン(式１でn＝３)またはシクロヘ
キサン(式１でn＝４)が有利に用いられる。またＲで表
わされるエステル形成基としては、特に限定するもので
はないが、例えば、低級アルキルが挙げられる。該低級
アルキルは、直鎖でも分枝鎖でもよい。また、その炭素
数は１〜６個が好ましい。更に好ましくは、メチルまた
はエチルが挙げられる。特に、エチルが実用的である。
本発明の不斉還元反応に用いられる細菌は、好ましく
は、２−オキソシクロアルカンカルボン酸エステルを不
斉還元して（１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロアルカ
ンカルボン酸エステルを与える能力を有する細菌を用い
る。代表的には、エンテロバクター属、エッシァリッヒ
ァ属、クレブジエラ属、プロテウス属、セラチア属、サ
ルモネラ属、クルトバクテリウム属、セルロモナス属ま
たはバチルス属に属する細菌が挙げられるが、新たに土
壌等から分離した菌株であっても、式１で表わされる化
合物を不斉還元して、式２で表わされる化合物を生成す
る能力を有するものであればいずれでもよい。また、そ
れらの菌株に人為的に変異を誘起させた株や、当該還元
活性の発現に必要な遺伝子断片を組み入れた他の細菌菌
体であっても、本発明の方法に使用できる。
用いる式１で示される２−オキソシクロアルカンカルボ
ン酸エステルのシクロアルカンの炭素数は特に限定され
ないが、シクロペンタン(式１でn＝３)またはシクロヘ
キサン(式１でn＝４)が有利に用いられる。またＲで表
わされるエステル形成基としては、特に限定するもので
はないが、例えば、低級アルキルが挙げられる。該低級
アルキルは、直鎖でも分枝鎖でもよい。また、その炭素
数は１〜６個が好ましい。更に好ましくは、メチルまた
はエチルが挙げられる。特に、エチルが実用的である。
本発明の不斉還元反応に用いられる細菌は、好ましく
は、２−オキソシクロアルカンカルボン酸エステルを不
斉還元して（１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロアルカ
ンカルボン酸エステルを与える能力を有する細菌を用い
る。代表的には、エンテロバクター属、エッシァリッヒ
ァ属、クレブジエラ属、プロテウス属、セラチア属、サ
ルモネラ属、クルトバクテリウム属、セルロモナス属ま
たはバチルス属に属する細菌が挙げられるが、新たに土
壌等から分離した菌株であっても、式１で表わされる化
合物を不斉還元して、式２で表わされる化合物を生成す
る能力を有するものであればいずれでもよい。また、そ
れらの菌株に人為的に変異を誘起させた株や、当該還元
活性の発現に必要な遺伝子断片を組み入れた他の細菌菌
体であっても、本発明の方法に使用できる。
【００１２】式１で表わされる２−オキソシクロアルカ
ンカルボン酸エステルの不斉還元に用いられる菌株の具
体例としては、エンテロバクター・アエロゲネス(Enter
obacter aerogenes)ＩＦＯ １３５３４、エンテロバク
ター・クロカエ(Enterobacter cloacaeＩＦＯ １３５
３５、エッシァリッヒァ・コリ(Escherichia coli)ＩＦ
Ｏ ３５４９、クレブジエラ・ニウモニエ(Klebsiella
pneumoniae)ＩＦＯ３３１９、クレブジエラ・テリゲナ
(Klebsiella terrigena)ＡＴＣＣ ３３２５７(ＩＦＯ
１４９４１、ＦＥＲＭ ＢＰ−２７１０)、プロテウ
ス・ブルガリス(Proteus vulgaris)ＩＦＯ ３０４５、
サルモネラ・チフィムリウム(Salmonella typhimurium)
ＩＦＯ １４１９４、セラチア・グリメッシイ(Serrati
a grimesii)ＩＦＯ １３５３７、クルトバクテリウム
・シトリウム（Curtobacterium citreum)ＩＦＯ １２
６７７、セルロモナス・ビアゾテア(Cellulomonas biaz
otea)ＩＦＯ １２６８０、バチルス・プミルス(Bacill
us pumilus)ＩＦＯ １２１１１およびバチルス・スフ
ェリカス(Bacillus sphaericus)ＩＦＯ １２６２２が
挙げられる。
ンカルボン酸エステルの不斉還元に用いられる菌株の具
体例としては、エンテロバクター・アエロゲネス(Enter
obacter aerogenes)ＩＦＯ １３５３４、エンテロバク
ター・クロカエ(Enterobacter cloacaeＩＦＯ １３５
３５、エッシァリッヒァ・コリ(Escherichia coli)ＩＦ
Ｏ ３５４９、クレブジエラ・ニウモニエ(Klebsiella
pneumoniae)ＩＦＯ３３１９、クレブジエラ・テリゲナ
(Klebsiella terrigena)ＡＴＣＣ ３３２５７(ＩＦＯ
１４９４１、ＦＥＲＭ ＢＰ−２７１０)、プロテウ
ス・ブルガリス(Proteus vulgaris)ＩＦＯ ３０４５、
サルモネラ・チフィムリウム(Salmonella typhimurium)
ＩＦＯ １４１９４、セラチア・グリメッシイ(Serrati
a grimesii)ＩＦＯ １３５３７、クルトバクテリウム
・シトリウム（Curtobacterium citreum)ＩＦＯ １２
６７７、セルロモナス・ビアゾテア(Cellulomonas biaz
otea)ＩＦＯ １２６８０、バチルス・プミルス(Bacill
us pumilus)ＩＦＯ １２１１１およびバチルス・スフ
ェリカス(Bacillus sphaericus)ＩＦＯ １２６２２が
挙げられる。
【００１３】以上の菌株のうち、クレブジエラ・テリゲ
ナ(Klebsiella terrigena)ＡＴＣＣ３３２５７はアメリ
カン・タイプカルチャー・コレクション(American Type
Culture Collection(ＡＴＣＣ))発行の「カタログ・オ
ブ・バクテリア・アンド・バクテリオファージ(Catalog
ue of BACTERIA & BACTERIO-PHAGES)第１７版、１９８
９」に記載されている公知菌株であり、ＡＴＣＣより容
易に入手できる。また、この菌株は財団法人発酵研究所
に１９８９年９月１４日から受託番号ＩＦＯ１４９４１
として、さらに、通商産業省工業技術院微生物工業技術
研究所(ＦＲＩ)に１９８９年１２月２６日から受託番号
ＦＥＲＭ ＢＰ−２７１０として寄託されている。その
他の菌株は財団法人発酵研究所発行の「リスト・オブ・
カルチャーズ(ＬＩＳＴ ＯＦ ＣＵＬＴＵＲＥＳ)第８
版、１９８８」に掲載されている公知菌株であり、同所
より容易に入手できる。本発明においては、以上のすべ
ての菌株を用いることができるが、これらの菌株の中に
は、ある基質に対して顕著な特異性を有するものがあ
る。例えば、クレブジエラ・ニウモニエ(Klebsiella pn
eumoniae)は、ｎが３である式（２）の化合物を生成す
るのに最も好適であり、また、クルトバクテリウム・シ
トリウム(Curtobacterimum citreum)はｎが４である式
（２）の化合物を生成するのに最も好適である。
ナ(Klebsiella terrigena)ＡＴＣＣ３３２５７はアメリ
カン・タイプカルチャー・コレクション(American Type
Culture Collection(ＡＴＣＣ))発行の「カタログ・オ
ブ・バクテリア・アンド・バクテリオファージ(Catalog
ue of BACTERIA & BACTERIO-PHAGES)第１７版、１９８
９」に記載されている公知菌株であり、ＡＴＣＣより容
易に入手できる。また、この菌株は財団法人発酵研究所
に１９８９年９月１４日から受託番号ＩＦＯ１４９４１
として、さらに、通商産業省工業技術院微生物工業技術
研究所(ＦＲＩ)に１９８９年１２月２６日から受託番号
ＦＥＲＭ ＢＰ−２７１０として寄託されている。その
他の菌株は財団法人発酵研究所発行の「リスト・オブ・
カルチャーズ(ＬＩＳＴ ＯＦ ＣＵＬＴＵＲＥＳ)第８
版、１９８８」に掲載されている公知菌株であり、同所
より容易に入手できる。本発明においては、以上のすべ
ての菌株を用いることができるが、これらの菌株の中に
は、ある基質に対して顕著な特異性を有するものがあ
る。例えば、クレブジエラ・ニウモニエ(Klebsiella pn
eumoniae)は、ｎが３である式（２）の化合物を生成す
るのに最も好適であり、また、クルトバクテリウム・シ
トリウム(Curtobacterimum citreum)はｎが４である式
（２）の化合物を生成するのに最も好適である。
【００１４】本発明の製造法を実施するには、まず、こ
れらの細菌菌株を培養する。これらの細菌菌体の培養
は、通常の静置培養、振盪培養、通気撹拌培養あるいは
固体培養などにより連続的あるいは間欠的に行うことが
できる。用いる培地は使用する細菌が生育しうる通常の
組成のものでよく、種々の炭素源、窒素源を選択するこ
とができる。該炭素源としては、たとえばグルコース、
シュクロース等の糖類、グリセロール等の糖アルコール
類をはじめ各種の有機酸類、脂肪酸類、アルコール類が
挙げられる。該窒素源としては、ペプトン、酵母エキ
ス、肉エキス、麦芽エキス、コーン・スティープ・リカ
ー、大豆かす、尿素等の有機窒素源、および(ＮＨ4)2Ｓ
Ｏ4、ＮＨ4Ｃｌ、ＮＨ4ＮＯ3、リン酸アンモニウム等の
無機窒素源が挙げられる。また、これらの他に生育に必
要なミネラル、アミノ酸あるいはビタミンなどの生育必
須因子や生育促進物質を添加するのがよい。培養中のｐ
Ｈ管理の目的で種々のアルカリ液（例、水酸化ナトリウ
ム水溶液、水酸化カリウム水溶液等）、炭酸塩類（例、
炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム等）を適宜添加するこ
とができ、また、泡の管理の目的で消泡剤（例、シリコ
ン・オイル等）を添加するのも有効である。
れらの細菌菌株を培養する。これらの細菌菌体の培養
は、通常の静置培養、振盪培養、通気撹拌培養あるいは
固体培養などにより連続的あるいは間欠的に行うことが
できる。用いる培地は使用する細菌が生育しうる通常の
組成のものでよく、種々の炭素源、窒素源を選択するこ
とができる。該炭素源としては、たとえばグルコース、
シュクロース等の糖類、グリセロール等の糖アルコール
類をはじめ各種の有機酸類、脂肪酸類、アルコール類が
挙げられる。該窒素源としては、ペプトン、酵母エキ
ス、肉エキス、麦芽エキス、コーン・スティープ・リカ
ー、大豆かす、尿素等の有機窒素源、および(ＮＨ4)2Ｓ
Ｏ4、ＮＨ4Ｃｌ、ＮＨ4ＮＯ3、リン酸アンモニウム等の
無機窒素源が挙げられる。また、これらの他に生育に必
要なミネラル、アミノ酸あるいはビタミンなどの生育必
須因子や生育促進物質を添加するのがよい。培養中のｐ
Ｈ管理の目的で種々のアルカリ液（例、水酸化ナトリウ
ム水溶液、水酸化カリウム水溶液等）、炭酸塩類（例、
炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム等）を適宜添加するこ
とができ、また、泡の管理の目的で消泡剤（例、シリコ
ン・オイル等）を添加するのも有効である。
【００１５】ついで、培養された菌体またはその処理物
と式１で示される化合物を接触させて不斉還元反応を行
う。菌体は、培養された培養物のまま、もしくは、遠心
分離、各種分離膜を用いた濾過等の手段によって分離し
たものが不斉還元反応に供される。不斉還元に使用する
菌株またはその処理物の量は、特に限定されないが、一
般には、有効量の菌株または処理物を使用する。好まし
くは、基質１ｇに対して乾燥重量で０.５〜８ｇの菌株
を使用する。より好ましくは、基質１ｇに対して乾燥重
量で０.６〜７ｇの菌株を使用する。より一層好ましく
は、基質１ｇに対して乾燥重量で０.８〜５ｇの菌株を
使用する。
と式１で示される化合物を接触させて不斉還元反応を行
う。菌体は、培養された培養物のまま、もしくは、遠心
分離、各種分離膜を用いた濾過等の手段によって分離し
たものが不斉還元反応に供される。不斉還元に使用する
菌株またはその処理物の量は、特に限定されないが、一
般には、有効量の菌株または処理物を使用する。好まし
くは、基質１ｇに対して乾燥重量で０.５〜８ｇの菌株
を使用する。より好ましくは、基質１ｇに対して乾燥重
量で０.６〜７ｇの菌株を使用する。より一層好ましく
は、基質１ｇに対して乾燥重量で０.８〜５ｇの菌株を
使用する。
【００１６】また、本発明で用いる「処理物」とは、前記
で得られる菌体もしくは培養物を種々の物理化学的方法
で処理したものであり、式１で示される化合物を不斉還
元する活性を有する菌体破砕物をさす。該処理物には、
自体公知の方法で精製して得られる、これらの菌体やそ
の破砕物に含まれる酵素や、さらには、種々の方法で固
定化した菌体もしくは該酵素も包合する。該酵素は、前
記で得られる菌体を適当な物理化学的処理に付すことに
よって可溶化し、通常の酵素精製の公知手段を適宜組み
合わせることによって精製することができる。得られた
酵素は天然および合成高分子に包括固定化あるいは、活
性炭、アガロース系物質などの担体に結合固定化するこ
とができる。
で得られる菌体もしくは培養物を種々の物理化学的方法
で処理したものであり、式１で示される化合物を不斉還
元する活性を有する菌体破砕物をさす。該処理物には、
自体公知の方法で精製して得られる、これらの菌体やそ
の破砕物に含まれる酵素や、さらには、種々の方法で固
定化した菌体もしくは該酵素も包合する。該酵素は、前
記で得られる菌体を適当な物理化学的処理に付すことに
よって可溶化し、通常の酵素精製の公知手段を適宜組み
合わせることによって精製することができる。得られた
酵素は天然および合成高分子に包括固定化あるいは、活
性炭、アガロース系物質などの担体に結合固定化するこ
とができる。
【００１７】式１で示される化合物と細菌菌体の培養物
もしくはその処理物とを接触させて行う不斉還元反応に
おける式１の化合物の反応液中濃度は、通常０.１〜３
重量％、好ましくは０.２〜２重量％、より好ましくは
０.２〜１.５重量％であり、式１の化合物をその濃度が
この範囲に入るように一括して添加してもよいし、また
分割して添加してもよい。
もしくはその処理物とを接触させて行う不斉還元反応に
おける式１の化合物の反応液中濃度は、通常０.１〜３
重量％、好ましくは０.２〜２重量％、より好ましくは
０.２〜１.５重量％であり、式１の化合物をその濃度が
この範囲に入るように一括して添加してもよいし、また
分割して添加してもよい。
【００１８】さらに、式１で示される化合物を細菌菌体
の培養物もしくはそれから分離した細菌菌体を用いて還
元する場合は、式１で示される化合物とともに水素供与
を目的として、細菌が資化しうる炭素源、たとえばグル
コース、シュクロース等の糖類、グリセロール等の糖ア
ルコール類をはじめ各種の有機酸類、脂肪酸類、アルコ
ール類を添加するのが好ましい。これらの炭素源の濃度
は特に限定されないが、反応液中へ通常は１〜６重量％
の範囲でよい。また、反応を促進するために、ミネラル
類やビタミン類を添加してもさしつかえない。
の培養物もしくはそれから分離した細菌菌体を用いて還
元する場合は、式１で示される化合物とともに水素供与
を目的として、細菌が資化しうる炭素源、たとえばグル
コース、シュクロース等の糖類、グリセロール等の糖ア
ルコール類をはじめ各種の有機酸類、脂肪酸類、アルコ
ール類を添加するのが好ましい。これらの炭素源の濃度
は特に限定されないが、反応液中へ通常は１〜６重量％
の範囲でよい。また、反応を促進するために、ミネラル
類やビタミン類を添加してもさしつかえない。
【００１９】一方、式１で示される化合物を菌体破砕物
もしくはそれから得られる酵素を用いて還元する場合
は、式１で示される化合物とともに水素供与を目的とし
て、NADPHまたはNADHを添加する必要がある。一般に、
これらの補酵素は高価であるため、その回転数を高める
目的で、補酵素再生系を共存させた方が有利である。た
とえば、NADPからNADPHを再生させるにはグルコースと
グルコース脱水素酵素を、またNADからNADHを再生させ
るにはギ酸とギ酸脱水素酵素をそれぞれ組み合わせて用
いればよい。
もしくはそれから得られる酵素を用いて還元する場合
は、式１で示される化合物とともに水素供与を目的とし
て、NADPHまたはNADHを添加する必要がある。一般に、
これらの補酵素は高価であるため、その回転数を高める
目的で、補酵素再生系を共存させた方が有利である。た
とえば、NADPからNADPHを再生させるにはグルコースと
グルコース脱水素酵素を、またNADからNADHを再生させ
るにはギ酸とギ酸脱水素酵素をそれぞれ組み合わせて用
いればよい。
【００２０】反応の温度は、２５〜５０℃の範囲が、p
Ｈは、５〜９の範囲が好ましい。また、細菌菌体の培養
物もしくはそれから分離した細菌菌体を用いて還元反応
を効率よく進行させるためには充分な好気状態を維持す
るのが好ましい。反応は式１で示される化合物が還元さ
れるまでの時間続行されるが、通常２〜９６時間であ
る。以上の方法に従って反応させたのち、生成した光学
活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステル
は通常の公知の抽出、濃縮等の精製方法を組み合わせる
ことにより、容易に回収、採取することができる。本発
明の方法によって得られる式２で示される化合物は、自
体公知の水酸基のアルキル化反応、ついで加水分解反応
に供され、対応する２−アルコキシシクロアルカンカル
ボン酸に変換される。ついで、この２−アルコキシシク
ロアルカンカルボン酸と非キラル側鎖成分(またはキラ
ル成分を含んでいてもよい側鎖成分)を有する骨格化合
物を縮合させることにより、優れた液晶特性をもつ強誘
電性液晶化合物を容易に合成することができる(特許出
願公開平２−２５６６３８号)。
Ｈは、５〜９の範囲が好ましい。また、細菌菌体の培養
物もしくはそれから分離した細菌菌体を用いて還元反応
を効率よく進行させるためには充分な好気状態を維持す
るのが好ましい。反応は式１で示される化合物が還元さ
れるまでの時間続行されるが、通常２〜９６時間であ
る。以上の方法に従って反応させたのち、生成した光学
活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステル
は通常の公知の抽出、濃縮等の精製方法を組み合わせる
ことにより、容易に回収、採取することができる。本発
明の方法によって得られる式２で示される化合物は、自
体公知の水酸基のアルキル化反応、ついで加水分解反応
に供され、対応する２−アルコキシシクロアルカンカル
ボン酸に変換される。ついで、この２−アルコキシシク
ロアルカンカルボン酸と非キラル側鎖成分(またはキラ
ル成分を含んでいてもよい側鎖成分)を有する骨格化合
物を縮合させることにより、優れた液晶特性をもつ強誘
電性液晶化合物を容易に合成することができる(特許出
願公開平２−２５６６３８号)。
【００２１】
【実施例】以下に実施例をもって本発明をより具体的に
説明するが、これらはいずれも本発明の内容を例示する
ものにすぎず、本発明の範囲を限定するものではない。実施例１ ２−オキソシクロペンタンカルボン酸エチルエステルを
基質とし、表１記載の８種の菌株を用い、以下のように
還元反応を行った。すなわち、それぞれの菌株のブイヨ
ン斜面培地培養物を、肉エキス１％、ポリペプトン１
％、ＮaＣl ０.５％、ＣaＣＯ3４％およびグルコース
２％(別滅菌)からなる滅菌種培地(pＨ７.０)５mlを含む
試験管に接種し、往復振盪しながら３０℃で２４時間培
養した。この種培養液０.３mlを、種培地と同じ組成の
滅菌主培地３０mlを含む２００ml容ヒダ付三角フラスコ
に移植し、回転数２００r.p.m.、温度３０℃で振盪培養
した。培養開始後２４時間目に、基質４５mgとグルコー
ス８００mgをそれぞれのフラスコに添加し、前記主培養
と同一条件下で２４時間反応を行わせた。この反応終了
液を等容(３０ml)の酢酸エチルで２回抽出し、酢酸エチ
ル層を水洗、脱水洗、定容とした。その一部を試料とし
て、後記するガスクロマトグラフィーによって還元体収
量およびcis／trans比を求めた。一方、残りの抽出液全
量を減圧下で濃縮した。得られた濃縮物を少量のエーテ
ルに溶解したのち、クーゲル蒸留に付し、無色油状の還
元成績体２−ヒドロキシ−シクロペンタンカルボン酸エ
チルエステルを得た。この還元成績体の光学純度(エナ
ンチオマー過剰率)を、後記する高速液体クロマトグラ
フィーによって求めた。結果を表１に示す。いずれの菌
株を用いた場合も、高いジアステレオーおよびエナンチ
オー選択性を示した。基質１ｇを還元するのに使用した
菌体量は、乾燥重量で６.７ｇであった。
説明するが、これらはいずれも本発明の内容を例示する
ものにすぎず、本発明の範囲を限定するものではない。実施例１ ２−オキソシクロペンタンカルボン酸エチルエステルを
基質とし、表１記載の８種の菌株を用い、以下のように
還元反応を行った。すなわち、それぞれの菌株のブイヨ
ン斜面培地培養物を、肉エキス１％、ポリペプトン１
％、ＮaＣl ０.５％、ＣaＣＯ3４％およびグルコース
２％(別滅菌)からなる滅菌種培地(pＨ７.０)５mlを含む
試験管に接種し、往復振盪しながら３０℃で２４時間培
養した。この種培養液０.３mlを、種培地と同じ組成の
滅菌主培地３０mlを含む２００ml容ヒダ付三角フラスコ
に移植し、回転数２００r.p.m.、温度３０℃で振盪培養
した。培養開始後２４時間目に、基質４５mgとグルコー
ス８００mgをそれぞれのフラスコに添加し、前記主培養
と同一条件下で２４時間反応を行わせた。この反応終了
液を等容(３０ml)の酢酸エチルで２回抽出し、酢酸エチ
ル層を水洗、脱水洗、定容とした。その一部を試料とし
て、後記するガスクロマトグラフィーによって還元体収
量およびcis／trans比を求めた。一方、残りの抽出液全
量を減圧下で濃縮した。得られた濃縮物を少量のエーテ
ルに溶解したのち、クーゲル蒸留に付し、無色油状の還
元成績体２−ヒドロキシ−シクロペンタンカルボン酸エ
チルエステルを得た。この還元成績体の光学純度(エナ
ンチオマー過剰率)を、後記する高速液体クロマトグラ
フィーによって求めた。結果を表１に示す。いずれの菌
株を用いた場合も、高いジアステレオーおよびエナンチ
オー選択性を示した。基質１ｇを還元するのに使用した
菌体量は、乾燥重量で６.７ｇであった。
【００２２】用いた分析法および分析条件は以下のとお
りである。 (１)ガスクロマトグラフィー 日立Ｇ−３０００形ガスクロマトグラフを用い、ノニル
アルコールを内部標準、あらかじめ調製した(１Ｒ,２
Ｓ)および(１Ｓ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロペンタン
カルボン酸エチルエステルを標準として、下記条件で分
析した。 カラム : ＵＬＢＯＮ ＨＲ−２０Ｍ(０.２５m
m×２５m) カラム温度 : １３０℃ キャリアガス : Ｈe 検出 : ＦＩＤ (２)高速液体クロマトグラフィー ウォーターズ６００−Ｅ液体クロマトグラフを用い、あ
らかじめ化学合成法で調製した２−ヒドロキシシクロペ
ンタンカルボン酸エチルエステルの４種の立体異性体を
標準として、下記条件で分析した。 カラム : ダイセルＯＤ(４.０mm×２５０mm) カラム温度 : ３０℃ 溶離液 : ヘキサン:２−プロパノール＝９８:
２ 流速 : １.０ml／min 検出 : ＵＶ２２０ｎｍ
りである。 (１)ガスクロマトグラフィー 日立Ｇ−３０００形ガスクロマトグラフを用い、ノニル
アルコールを内部標準、あらかじめ調製した(１Ｒ,２
Ｓ)および(１Ｓ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロペンタン
カルボン酸エチルエステルを標準として、下記条件で分
析した。 カラム : ＵＬＢＯＮ ＨＲ−２０Ｍ(０.２５m
m×２５m) カラム温度 : １３０℃ キャリアガス : Ｈe 検出 : ＦＩＤ (２)高速液体クロマトグラフィー ウォーターズ６００−Ｅ液体クロマトグラフを用い、あ
らかじめ化学合成法で調製した２−ヒドロキシシクロペ
ンタンカルボン酸エチルエステルの４種の立体異性体を
標準として、下記条件で分析した。 カラム : ダイセルＯＤ(４.０mm×２５０mm) カラム温度 : ３０℃ 溶離液 : ヘキサン:２−プロパノール＝９８:
２ 流速 : １.０ml／min 検出 : ＵＶ２２０ｎｍ
【００２３】
【表１】
【００２４】実施例２ ２−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチルエステルを
基質とし、表２記載の８種の菌株を用い、以下のように
還元反応を行った。すなわち、それぞれの菌株のブイヨ
ン斜面培地培養物を、実施例１に記載したと同様の方法
で培養し、主培養開始後２４時間目に、基質４５ｍｇと
グルコース８００mgをそれぞれのフラスコに添加し、主
培養と同一条件下で２４時間反応を行わせた。反応終了
後から還元生成物を実施例１に記載した方法で抽出し、
その一部を試料として、前記ガスクロマトグラフィーに
よって還元体収量およびcis／trans比を求めた。また、
この抽出液を実施例１に記載した方法に従ってクーゲル
蒸留し、還元成績体２−ヒドロキシシクロヘキサンカル
ボン酸エチルエステルを得た。得られた還元成績体の光
学純度(エナンチオマー過剰率)を前記高速液体クロマト
グラフィーによって求めた。結果を表２に示す。いずれ
の菌株を用いた場合も、高いジアステレオーおよびエナ
ンチオー選択性を示した。基質１ｇを還元するのに使用
した菌体量は、乾燥重量で６.７ｇであった。
基質とし、表２記載の８種の菌株を用い、以下のように
還元反応を行った。すなわち、それぞれの菌株のブイヨ
ン斜面培地培養物を、実施例１に記載したと同様の方法
で培養し、主培養開始後２４時間目に、基質４５ｍｇと
グルコース８００mgをそれぞれのフラスコに添加し、主
培養と同一条件下で２４時間反応を行わせた。反応終了
後から還元生成物を実施例１に記載した方法で抽出し、
その一部を試料として、前記ガスクロマトグラフィーに
よって還元体収量およびcis／trans比を求めた。また、
この抽出液を実施例１に記載した方法に従ってクーゲル
蒸留し、還元成績体２−ヒドロキシシクロヘキサンカル
ボン酸エチルエステルを得た。得られた還元成績体の光
学純度(エナンチオマー過剰率)を前記高速液体クロマト
グラフィーによって求めた。結果を表２に示す。いずれ
の菌株を用いた場合も、高いジアステレオーおよびエナ
ンチオー選択性を示した。基質１ｇを還元するのに使用
した菌体量は、乾燥重量で６.７ｇであった。
【００２５】
【表２】
【００２６】実施例３ クレブジエラ・ニウモニエ(Klebsiella pneumoniae)Ｉ
ＦＯ ３３１９のブイヨン斜面培地培養物を、肉エキス
１％、ポリペプトン１％、ＮaＣl ０.５％およびグリセ
ロール１％(別滅菌)からなる滅菌種培地(pＨ７.０)３０
mlを含む２００ml容ヒダ付三角フラスコに接種し、回転
数２００r.p.m、温度３０℃で振盪培養した。この種培
養液２０mlを肉エキス１％、ポリペプトン１％、ＮaＣl
０.５％、消泡剤０.０５％およびグリセロール２％(別
滅菌)からなる滅菌主培地(pＨ７.０)２リットルを含む
５リットル容ジャー・ファーメンターに移植し、撹拌数
８００r.p.m、通気量０.６リットル／min、温度３０℃
で通気撹拌培養した。培養中培養液のpＨが６.０を下廻
ったときは、１５％(w／v)苛性ソーダ液を添加してpＨ
を６.０に維持した。培養開始後２４時間目に、２−オ
キソシクロペンタンカルボン酸エチルエステル１２gを
添加して１０分間撹拌したのち、４０％(w／v)グリセロ
ール液２００mlを１時間あたり８.３mlの割合で間歇的
に添加しながら、前記主培養と同一条件下で反応を行わ
せた。２４時間反応後、さらに基質１２gを添加したの
ち、２０％(w／v)グリセロール液２００mlを１時間８.
３mlの割合で間歇的に添加しながら、同一条件で２４時
間反応を行わせた。反応中pＨは主培養時と同じ方法で
調整した。この反応終了液(２.４１リットル)を酢酸エ
チル２リットルで１回、さらに１リットルで２回抽出し
た。酢酸エチル層を合わせ、不溶物を濾過によって除去
したのち、濾液を水洗、脱水した。
ＦＯ ３３１９のブイヨン斜面培地培養物を、肉エキス
１％、ポリペプトン１％、ＮaＣl ０.５％およびグリセ
ロール１％(別滅菌)からなる滅菌種培地(pＨ７.０)３０
mlを含む２００ml容ヒダ付三角フラスコに接種し、回転
数２００r.p.m、温度３０℃で振盪培養した。この種培
養液２０mlを肉エキス１％、ポリペプトン１％、ＮaＣl
０.５％、消泡剤０.０５％およびグリセロール２％(別
滅菌)からなる滅菌主培地(pＨ７.０)２リットルを含む
５リットル容ジャー・ファーメンターに移植し、撹拌数
８００r.p.m、通気量０.６リットル／min、温度３０℃
で通気撹拌培養した。培養中培養液のpＨが６.０を下廻
ったときは、１５％(w／v)苛性ソーダ液を添加してpＨ
を６.０に維持した。培養開始後２４時間目に、２−オ
キソシクロペンタンカルボン酸エチルエステル１２gを
添加して１０分間撹拌したのち、４０％(w／v)グリセロ
ール液２００mlを１時間あたり８.３mlの割合で間歇的
に添加しながら、前記主培養と同一条件下で反応を行わ
せた。２４時間反応後、さらに基質１２gを添加したの
ち、２０％(w／v)グリセロール液２００mlを１時間８.
３mlの割合で間歇的に添加しながら、同一条件で２４時
間反応を行わせた。反応中pＨは主培養時と同じ方法で
調整した。この反応終了液(２.４１リットル)を酢酸エ
チル２リットルで１回、さらに１リットルで２回抽出し
た。酢酸エチル層を合わせ、不溶物を濾過によって除去
したのち、濾液を水洗、脱水した。
【００２７】この抽出液の一部を試料として、実施例１
に記載したガスクロマトグラフィーで分析したところ、
残存基質量０.３g、還元体生成量２３.３g(還元収率９
７％)、cis／trans比９９／１であった。一方、前記抽
出液から減圧下で酢酸エチルを留去したところ、濃縮物
２４.０gが得られた。これを最少量のエーテルに溶解し
たのち、クーゲル蒸留に付し、無色油状の還元成績体２
−ヒドロキシシクロペンタンカルボン酸エチルエステル
(２３.０g)を得た。この還元成績体を実施例１に記載し
た高速液体クロマトグラフィーで分離定量したところ、
cis２、trans３の生成量はそれぞれ２２.８g、０.２gで
あり、cis４およびtrans５は検出されなかった。基質１
ｇを還元するのに使用した菌体量は、乾燥重量で０.８
ｇであった。
に記載したガスクロマトグラフィーで分析したところ、
残存基質量０.３g、還元体生成量２３.３g(還元収率９
７％)、cis／trans比９９／１であった。一方、前記抽
出液から減圧下で酢酸エチルを留去したところ、濃縮物
２４.０gが得られた。これを最少量のエーテルに溶解し
たのち、クーゲル蒸留に付し、無色油状の還元成績体２
−ヒドロキシシクロペンタンカルボン酸エチルエステル
(２３.０g)を得た。この還元成績体を実施例１に記載し
た高速液体クロマトグラフィーで分離定量したところ、
cis２、trans３の生成量はそれぞれ２２.８g、０.２gで
あり、cis４およびtrans５は検出されなかった。基質１
ｇを還元するのに使用した菌体量は、乾燥重量で０.８
ｇであった。
【００２８】実施例４ クレブジエラ・ニウモニエ(Klebsiella pneumoniae)Ｉ
ＦＯ ３３１９のブイヨン斜面培地培養物を、肉エキス
１％、ポリペプトン１％、ＮaＣl ０.５％およびグル
コース１％(別滅菌)からなる滅菌培地(pＨ７.０)３０ml
を含む２００ml容ヒダ付三角フラスコに接種し、回転数
２００r.p.m、温度３０℃で２４時間振盪培養した。培
養液(１リットル)から菌体を遠心分離(１０,０００g,２
０min)で集め、５mＭ２−メルカプトエタノールと２μg
／mlフェニルメチルスルホニルフルオリドを含む１００
mＭリン酸緩衝液(pＨ７.０)で洗浄後、同緩衝液に２０
０mg湿菌体／mlになるよう懸濁した。この細胞懸濁液を
クボタインソネーター２００Ｍ型を用いて超音波処理
(１８０Ｗ,２０min)し、菌体を破砕した後、遠心分離
(３５,５００g,２０min)で不溶物を除去した。２−オキ
ソシクロペンタンカルボン酸エチルエステル還元酵素
（以下単に還元酵素（１）と記す）を、硫安分画、透析
およびＤＥＡＥ−５ＰＷイオン交換クロマトグラフィー
により、超音波処理抽出物から部分精製した。最終調製
物（ＤＥＡＥ−５ＰＷ活性画分）は、２.６Ｕ／mlの還
元酵素(１)活性を有していた。ここで、還元酵素(１)活
性の１単位(Ｕ)は、上記基質存在下で１分間に１μmol
のＮＡＤＰＨを酸化する酵素量である。
ＦＯ ３３１９のブイヨン斜面培地培養物を、肉エキス
１％、ポリペプトン１％、ＮaＣl ０.５％およびグル
コース１％(別滅菌)からなる滅菌培地(pＨ７.０)３０ml
を含む２００ml容ヒダ付三角フラスコに接種し、回転数
２００r.p.m、温度３０℃で２４時間振盪培養した。培
養液(１リットル)から菌体を遠心分離(１０,０００g,２
０min)で集め、５mＭ２−メルカプトエタノールと２μg
／mlフェニルメチルスルホニルフルオリドを含む１００
mＭリン酸緩衝液(pＨ７.０)で洗浄後、同緩衝液に２０
０mg湿菌体／mlになるよう懸濁した。この細胞懸濁液を
クボタインソネーター２００Ｍ型を用いて超音波処理
(１８０Ｗ,２０min)し、菌体を破砕した後、遠心分離
(３５,５００g,２０min)で不溶物を除去した。２−オキ
ソシクロペンタンカルボン酸エチルエステル還元酵素
（以下単に還元酵素（１）と記す）を、硫安分画、透析
およびＤＥＡＥ−５ＰＷイオン交換クロマトグラフィー
により、超音波処理抽出物から部分精製した。最終調製
物（ＤＥＡＥ−５ＰＷ活性画分）は、２.６Ｕ／mlの還
元酵素(１)活性を有していた。ここで、還元酵素(１)活
性の１単位(Ｕ)は、上記基質存在下で１分間に１μmol
のＮＡＤＰＨを酸化する酵素量である。
【００２９】この還元酵素（１）を用いて、２−オキソ
シクロペンタンカルボン酸エチルエステルを不斉還元し
た。すなわち、還元酵素（１）２Ｕ、ＮＡＤＰＨ０.８
μmol、２−オキソシクロペンタンカルボン酸エチルエ
ステル１００μmol(１６mg)、リン酸緩衝液(pＨ７.０)
４００μmol、グルコース脱水素酵素(シグマ社製,１Ｕ
はグルコース存在下１分間に１μmolのＮＡＤＰ+を還元
する酵素量)２Ｕおよびグルコース１００μmolを含む総
液量４mlの混合液を、ゆっくり振盪しながら３０℃でイ
ンキュベートして酵素反応を進行させた。６時間のイン
キュベーションの後、実施例３に記載したと同様の方法
で抽出操作を行い、抽出液を実施例１記載のガスクロマ
トグラフィーで分析したところ、cis体生成量１５．９m
g(還元収率＞９９％)で、残基質、trans体ともに全く検
出されなかった。また、前記抽出液を実施例３に記載し
た方法に従って蒸留し、還元成績体２−ヒドロキシシク
ロペンタンカルボン酸エチルエステルを得た。得られた
還元成績体を、実施例１記載の高速液体クロマトグラフ
ィーで分析したところ、cis２のみが検出され他の異性
体は全く検出されなかった。
シクロペンタンカルボン酸エチルエステルを不斉還元し
た。すなわち、還元酵素（１）２Ｕ、ＮＡＤＰＨ０.８
μmol、２−オキソシクロペンタンカルボン酸エチルエ
ステル１００μmol(１６mg)、リン酸緩衝液(pＨ７.０)
４００μmol、グルコース脱水素酵素(シグマ社製,１Ｕ
はグルコース存在下１分間に１μmolのＮＡＤＰ+を還元
する酵素量)２Ｕおよびグルコース１００μmolを含む総
液量４mlの混合液を、ゆっくり振盪しながら３０℃でイ
ンキュベートして酵素反応を進行させた。６時間のイン
キュベーションの後、実施例３に記載したと同様の方法
で抽出操作を行い、抽出液を実施例１記載のガスクロマ
トグラフィーで分析したところ、cis体生成量１５．９m
g(還元収率＞９９％)で、残基質、trans体ともに全く検
出されなかった。また、前記抽出液を実施例３に記載し
た方法に従って蒸留し、還元成績体２−ヒドロキシシク
ロペンタンカルボン酸エチルエステルを得た。得られた
還元成績体を、実施例１記載の高速液体クロマトグラフ
ィーで分析したところ、cis２のみが検出され他の異性
体は全く検出されなかった。
【００３０】実施例５ 実施例４に記載したと同じ方法でクレブジエラ・ニウモ
ニエ(Klebsiella pneumoniae)ＩＦＯ ３３１９を培養
し、得られた菌体から、実施例４に記載した方法に従っ
て、２−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチルエステ
ル還元酵素(以下単に還元酵素(２)と記す)を抽出し菌体
から部分精製した。最終調製物(ＤＥＡＥ−５ＰＷ活性
画分)は、５.４Ｕ／mlの還元酵素(２)活性を有してい
た。ここで、還元酵素(２)活性の１単位(Ｕ)は、上記基
質存在下で１分間に１μmolのＮＡＤＰＨを酸化する酵
素量である。この還元酵素（２）を用いて、２−オキソ
シクロヘキサンカルボン酸エチルエステルを不斉還元し
た。すなわち、還元酵素（２）２Ｕ、ＮＡＤＰＨ ０.８
μmol、２−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチルエ
ステル１００μmol(１７mg)、リン酸緩衝液(pＨ７.０)
４００μmol、グルコース脱水素酵素(実施例４に用いた
と同じもの)２Ｕおよびグルコース１００μmolを含む総
液量４mlの混合液を、ゆっくり振盪しながら３０℃でイ
ンキュベートして反応を進行させた。４時間のインキュ
ベーションの後、実施例３に記載したと同様の方法で抽
出操作を行い、抽出液を実施例１記載のガスクロマトグ
ラフィーで分析したところ、cis体生成量１７.０mg(還
元収率＞９９％)で、残基質、trans体ともに全く検出さ
れなかった。また、前記抽出液を実施例３に記載した方
法に従って蒸留し、還元成績体２−ヒドロキシシクロヘ
キサンカルボン酸エチルエステルを得た。得られた還元
成績体を、実施例１記載の高速液体クロマトグラフィー
で分析したところ、cis２のみが検出され他の異性体は
全く検出されなかった。
ニエ(Klebsiella pneumoniae)ＩＦＯ ３３１９を培養
し、得られた菌体から、実施例４に記載した方法に従っ
て、２−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチルエステ
ル還元酵素(以下単に還元酵素(２)と記す)を抽出し菌体
から部分精製した。最終調製物(ＤＥＡＥ−５ＰＷ活性
画分)は、５.４Ｕ／mlの還元酵素(２)活性を有してい
た。ここで、還元酵素(２)活性の１単位(Ｕ)は、上記基
質存在下で１分間に１μmolのＮＡＤＰＨを酸化する酵
素量である。この還元酵素（２）を用いて、２−オキソ
シクロヘキサンカルボン酸エチルエステルを不斉還元し
た。すなわち、還元酵素（２）２Ｕ、ＮＡＤＰＨ ０.８
μmol、２−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチルエ
ステル１００μmol(１７mg)、リン酸緩衝液(pＨ７.０)
４００μmol、グルコース脱水素酵素(実施例４に用いた
と同じもの)２Ｕおよびグルコース１００μmolを含む総
液量４mlの混合液を、ゆっくり振盪しながら３０℃でイ
ンキュベートして反応を進行させた。４時間のインキュ
ベーションの後、実施例３に記載したと同様の方法で抽
出操作を行い、抽出液を実施例１記載のガスクロマトグ
ラフィーで分析したところ、cis体生成量１７.０mg(還
元収率＞９９％)で、残基質、trans体ともに全く検出さ
れなかった。また、前記抽出液を実施例３に記載した方
法に従って蒸留し、還元成績体２−ヒドロキシシクロヘ
キサンカルボン酸エチルエステルを得た。得られた還元
成績体を、実施例１記載の高速液体クロマトグラフィー
で分析したところ、cis２のみが検出され他の異性体は
全く検出されなかった。
【００３１】実施例６ ２−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチルエステルを
基質として、表３記載の２種の菌株を用い、フラスコあ
たりの基質添加量を１２０mgとした以外は、実施例１と
同様に還元反応を行った。反応終了後、反応液から還元
生成物を実施例１に記載した方法で抽出し、２−ヒドロ
キシシクロヘキサンカルボン酸エチルエステルを得、実
施例１と同様にして還元体収量、cis／trans比および光
学純度（エナンチオマー過剰率）を求めた。結果を表３
に示す。いずれの菌株を用いた場合も、高いジアステレ
オおよびエナンチオ選択性を示した。基質１ｇを還元す
るのに使用した菌体量は、乾燥重量で２.５ｇであっ
た。
基質として、表３記載の２種の菌株を用い、フラスコあ
たりの基質添加量を１２０mgとした以外は、実施例１と
同様に還元反応を行った。反応終了後、反応液から還元
生成物を実施例１に記載した方法で抽出し、２−ヒドロ
キシシクロヘキサンカルボン酸エチルエステルを得、実
施例１と同様にして還元体収量、cis／trans比および光
学純度（エナンチオマー過剰率）を求めた。結果を表３
に示す。いずれの菌株を用いた場合も、高いジアステレ
オおよびエナンチオ選択性を示した。基質１ｇを還元す
るのに使用した菌体量は、乾燥重量で２.５ｇであっ
た。
【００３２】
【表３】
【００３３】実施例７ クルトバクテリウム シトリウム(Curtobacterium citre
um)ＩＦＯ１２６７７のブイヨン斜面培地培養物を、肉
エキス１％、ポリペプトン１％、ＮaＣｌ ０.５％およ
びグルコース１％（別滅菌）からなる滅菌種培地（ｐＨ
７.０）５００mlを含む２リットル容坂口フラスコ（２
本）に接種し、振盪数１２０s.p.m.、温度２８℃で２４
時間振盪培養した。この種培養液１リットルを肉エキス
１％、ポリペプトン１％、ＮaＣｌ ０.５％、消泡剤０.
０４％およびグルコース２％（別滅菌）からなる滅菌主
培地（ｐＨ７.０）１２０リットルを含む２００リット
ル容発酵槽に移植した。ついで、内圧１.０ｋｇ／ｃ
ｍ2、通気量４０リットル／min、撹拌速度１５０r.p.
m.、温度３０℃で液内培養した。培養中培養液のｐＨが
６.０を下廻ったときは、３０℃（Ｗ／Ｖ）苛性ソーダ
液を添加してｐＨを６.０に維持した。培養開始後２４
時間目には、グルコースは完全に消費しつくされてお
り、培養液中の菌体量は乾燥重量で１０ｇ／リットルで
あった。この時点で、４０％（Ｗ／Ｖ）グルコース溶液
６リットル、ついで２−オキソシクロヘキサンカルボン
酸エチルエステル３５０ｇを添加して、前記主培養と同
一条件下で反応を行わせた。２４時間反応後、ふたたび
４０％（Ｗ／Ｖ）グルコース溶液６リットルと基質３５
０ｇを添加して、同一条件でさらに２４時間反応を行わ
せた。反応中ｐＨは主培養時と同じ方法で調整した。
um)ＩＦＯ１２６７７のブイヨン斜面培地培養物を、肉
エキス１％、ポリペプトン１％、ＮaＣｌ ０.５％およ
びグルコース１％（別滅菌）からなる滅菌種培地（ｐＨ
７.０）５００mlを含む２リットル容坂口フラスコ（２
本）に接種し、振盪数１２０s.p.m.、温度２８℃で２４
時間振盪培養した。この種培養液１リットルを肉エキス
１％、ポリペプトン１％、ＮaＣｌ ０.５％、消泡剤０.
０４％およびグルコース２％（別滅菌）からなる滅菌主
培地（ｐＨ７.０）１２０リットルを含む２００リット
ル容発酵槽に移植した。ついで、内圧１.０ｋｇ／ｃ
ｍ2、通気量４０リットル／min、撹拌速度１５０r.p.
m.、温度３０℃で液内培養した。培養中培養液のｐＨが
６.０を下廻ったときは、３０℃（Ｗ／Ｖ）苛性ソーダ
液を添加してｐＨを６.０に維持した。培養開始後２４
時間目には、グルコースは完全に消費しつくされてお
り、培養液中の菌体量は乾燥重量で１０ｇ／リットルで
あった。この時点で、４０％（Ｗ／Ｖ）グルコース溶液
６リットル、ついで２−オキソシクロヘキサンカルボン
酸エチルエステル３５０ｇを添加して、前記主培養と同
一条件下で反応を行わせた。２４時間反応後、ふたたび
４０％（Ｗ／Ｖ）グルコース溶液６リットルと基質３５
０ｇを添加して、同一条件でさらに２４時間反応を行わ
せた。反応中ｐＨは主培養時と同じ方法で調整した。
【００３４】このようにして得た反応終了液（１３２リ
ットル）に１Ｎ ＨＣｌ ３５０mlを添加してｐＨを５.
５に修正したのち、０.５％（Ｗ／Ｖ）プレスエイド
（登録商標）１０１（栗田工業製）溶液６リットル、ラ
ジオライト（登録商標）＃５００（昭和化学工業製）
１.２ｋｇ、０.２％（Ｗ／Ｖ）プレスエイド（登録商
標）２０１（栗田工業製）溶液０.６リットルを、撹拌
しながらこの順に加えた。この混合液を、あらかじめラ
ジオライト（登録商標）＃５００をプレコートしたフィ
ルタープレス（濾過面積約１.７６ｍ2）で加圧下に濾過
した。濾過は速やかに進行し、約３０分後に清澄な濾液
１３０リットルが得られた。フィルタープレスに水１０
リットルをフィードしてケーキを洗浄し、得られた洗液
を先の濾液とあわせた。この液（１４０リットル）を酢
酸エチル１２０リットルで２回抽出し、酢酸エチル層
（２４０リットル）を得た。この抽出液を水１０リット
ルで２回水洗したのち、順次濃縮して１２リットルとし
た。この濃縮液を減圧蒸留に付し、ｂ.ｐ.９５〜９７℃
（２ｍｍＨｇ）の主留分５６８ｇを得た。この主留分に
含まれる還元成績体を、実施例１に記載した高速液体ク
ロマトグラフィーで分別定量したところ、ｃｉｓ２、ｃ
ｉｓ４、ｔｒａｎｓ３およびｔｒａｎｓ５の生成量はそ
れぞれ５５８ｇ、２ｇ、３ｇ、および４ｇであった。す
なわち、還元成績体の一貫収率は８１％、ｃｉｓ／ｔｒ
ａｎｓ比は９９／１、またｅｅはｃｉｓ２＝９９．２％
であった。
ットル）に１Ｎ ＨＣｌ ３５０mlを添加してｐＨを５.
５に修正したのち、０.５％（Ｗ／Ｖ）プレスエイド
（登録商標）１０１（栗田工業製）溶液６リットル、ラ
ジオライト（登録商標）＃５００（昭和化学工業製）
１.２ｋｇ、０.２％（Ｗ／Ｖ）プレスエイド（登録商
標）２０１（栗田工業製）溶液０.６リットルを、撹拌
しながらこの順に加えた。この混合液を、あらかじめラ
ジオライト（登録商標）＃５００をプレコートしたフィ
ルタープレス（濾過面積約１.７６ｍ2）で加圧下に濾過
した。濾過は速やかに進行し、約３０分後に清澄な濾液
１３０リットルが得られた。フィルタープレスに水１０
リットルをフィードしてケーキを洗浄し、得られた洗液
を先の濾液とあわせた。この液（１４０リットル）を酢
酸エチル１２０リットルで２回抽出し、酢酸エチル層
（２４０リットル）を得た。この抽出液を水１０リット
ルで２回水洗したのち、順次濃縮して１２リットルとし
た。この濃縮液を減圧蒸留に付し、ｂ.ｐ.９５〜９７℃
（２ｍｍＨｇ）の主留分５６８ｇを得た。この主留分に
含まれる還元成績体を、実施例１に記載した高速液体ク
ロマトグラフィーで分別定量したところ、ｃｉｓ２、ｃ
ｉｓ４、ｔｒａｎｓ３およびｔｒａｎｓ５の生成量はそ
れぞれ５５８ｇ、２ｇ、３ｇ、および４ｇであった。す
なわち、還元成績体の一貫収率は８１％、ｃｉｓ／ｔｒ
ａｎｓ比は９９／１、またｅｅはｃｉｓ２＝９９．２％
であった。
【００３５】参考例１ cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン−１−
カルボン酸の４'−オクチルオキシ−４−ビフェニルエ
ステルの製造 i)cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン−１
−カルボン酸の合成実施例３で得られたcis−(１Ｒ,２
Ｓ)−２−ヒドロキシシクロペンタン−１−カルボン酸
エチルエステルを以下に述べる常法の水酸基のメチルエ
ーテル化反応(a法:ＣＨ3Ｉ(ヨードメタン)／Ａg2Ｏ(酸
化銀)／ＣＨ3ＣＮ(アセトニトリル)またはb法:ＣＨ3Ｉ
(ヨードメタン)／ＮaＨ(水素化ナトリウム)／ＤＭＦ(ジ
メチルホルムアミド))に付し、cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−
メトキシシクロペンタン−１−カルボン酸エチルエステ
ルを得た。
カルボン酸の４'−オクチルオキシ−４−ビフェニルエ
ステルの製造 i)cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン−１
−カルボン酸の合成実施例３で得られたcis−(１Ｒ,２
Ｓ)−２−ヒドロキシシクロペンタン−１−カルボン酸
エチルエステルを以下に述べる常法の水酸基のメチルエ
ーテル化反応(a法:ＣＨ3Ｉ(ヨードメタン)／Ａg2Ｏ(酸
化銀)／ＣＨ3ＣＮ(アセトニトリル)またはb法:ＣＨ3Ｉ
(ヨードメタン)／ＮaＨ(水素化ナトリウム)／ＤＭＦ(ジ
メチルホルムアミド))に付し、cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−
メトキシシクロペンタン−１−カルボン酸エチルエステ
ルを得た。
【００３６】a法: cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシ
シクロペンタン−１−カルボン酸エチルエステル(５.６
５g)をアセトニトリル(６０ml)に溶かし、ヨードメタン
(６０ml)および酸化銀(１２.５g)を室温で撹拌しながら
添加した。反応液を５０℃で１０時間撹拌したのち、不
溶物を濾去した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物をクー
ゲル蒸留(外温:１５０℃;１７.５mmＨg)に付してcis−
(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン−１−カル
ボン酸エチルエステルを無色油状物として得た。収量は
６.１９gで定量的であった。 b法: cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロペンタ
ン−１−カルボン酸エチルエステル(２３．７２g)をジ
メチルホルムアミド(２４０ml)に溶かし、ヨードメタン
(２１３g)を加え、次いで６０％油性水素化ナトリウム
(９.０g)を、少しずつ、０℃〜５℃で撹拌しながら添加
した。添加終了後約１時間０℃〜５℃で撹拌したのち、
反応液に氷水(含希塩酸)および酢酸エチルを注意深く加
えた。酢酸エチル層を分取し、水層をさらに酢酸エチル
で抽出した。酢酸エチル層を合わせ、硫酸ナトリウムで
乾燥後、減圧下で濃縮し、残留物を減圧蒸留に付してci
s−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン−１−カ
ルボン酸エチルエステルを無色油状物として得た。収量
は２３.２g、収率は８９.８％であった。このようにし
て得たcis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン
−１−カルボン酸エチルエステル(６.１９g)をジオキサ
ン６０ml、水６０mlおよび濃塩酸６０mlに溶かし、８０
℃で３時間撹拌した。反応液を濃縮し、残留物を減圧蒸
留に付し、cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペン
タン−１−カルボン酸を無色油状物として４.７４g(収
率９１.５％)得た。この化合物の1Ｈ−ＮＭＲ、ＩＲス
ペクトルを次に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(９０ＭＨz,ＣＤＣl3) δ: １.４−２.２５(６Ｈ,m,ＣＨ2)，２.６−３.０５
(１Ｈ,m,＞ＣＨＣＯＯ),３.３５(３Ｈ,ｓ,ＯＣＨ3),３.
８５−４.１５(１Ｈ,m,＞ＣＨＯＣＨ3),７.７−８.６
(１Ｈ,broad ｓ,ＣＯ2Ｈ) ＩＲνneat maxcm-1:２７００−２４００,１７１０
シクロペンタン−１−カルボン酸エチルエステル(５.６
５g)をアセトニトリル(６０ml)に溶かし、ヨードメタン
(６０ml)および酸化銀(１２.５g)を室温で撹拌しながら
添加した。反応液を５０℃で１０時間撹拌したのち、不
溶物を濾去した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物をクー
ゲル蒸留(外温:１５０℃;１７.５mmＨg)に付してcis−
(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン−１−カル
ボン酸エチルエステルを無色油状物として得た。収量は
６.１９gで定量的であった。 b法: cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロペンタ
ン−１−カルボン酸エチルエステル(２３．７２g)をジ
メチルホルムアミド(２４０ml)に溶かし、ヨードメタン
(２１３g)を加え、次いで６０％油性水素化ナトリウム
(９.０g)を、少しずつ、０℃〜５℃で撹拌しながら添加
した。添加終了後約１時間０℃〜５℃で撹拌したのち、
反応液に氷水(含希塩酸)および酢酸エチルを注意深く加
えた。酢酸エチル層を分取し、水層をさらに酢酸エチル
で抽出した。酢酸エチル層を合わせ、硫酸ナトリウムで
乾燥後、減圧下で濃縮し、残留物を減圧蒸留に付してci
s−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン−１−カ
ルボン酸エチルエステルを無色油状物として得た。収量
は２３.２g、収率は８９.８％であった。このようにし
て得たcis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペンタン
−１−カルボン酸エチルエステル(６.１９g)をジオキサ
ン６０ml、水６０mlおよび濃塩酸６０mlに溶かし、８０
℃で３時間撹拌した。反応液を濃縮し、残留物を減圧蒸
留に付し、cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロペン
タン−１−カルボン酸を無色油状物として４.７４g(収
率９１.５％)得た。この化合物の1Ｈ−ＮＭＲ、ＩＲス
ペクトルを次に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(９０ＭＨz,ＣＤＣl3) δ: １.４−２.２５(６Ｈ,m,ＣＨ2)，２.６−３.０５
(１Ｈ,m,＞ＣＨＣＯＯ),３.３５(３Ｈ,ｓ,ＯＣＨ3),３.
８５−４.１５(１Ｈ,m,＞ＣＨＯＣＨ3),７.７−８.６
(１Ｈ,broad ｓ,ＣＯ2Ｈ) ＩＲνneat maxcm-1:２７００−２４００,１７１０
【００３７】ii)エステル化反応 ４'−オクチルオキシ−４−ビフェノール(０.６８g)お
よびピリジン(０.６ml)の乾燥テトロヒドロフラン(１０
ml)溶液に、i)項で得たcis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキ
シシクロペンタン−１−カルボン酸(４７２.５mg)にオ
キサリルクロリドを作用させて得られた酸クロリド体３
８２.５mg,ＩＲνneat maxcm-1:１８００)の乾燥トルエ
ン(５.０ml)溶液を室温で撹拌しながら加えた。不溶物
を濾去し、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲ
ル(１５０g)および四塩化炭素−エーテル(１０:１)を用
いるカラムクロマトグラフィーに付した。目的画分から
表題化合物(０.４４g)をろう状結晶とした得た。本品の
1Ｈ−ＮＭＲ,ＩＲスペクトルを次に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(９０ＭＨz,ＣＤＣl3) δ: ０.８９(３Ｈ,t,Ｊ＝６Ｈz,−ＣＨ2ＣＨ 3)１.０−
２.５(１８Ｈ,m,ＣＨ2),２.９−３.４(１Ｈ,m,＞ＣＨ−
ＣＯＯ),３.３９(３Ｈ,ｓ,ＯＣＨ3),３.９９(２Ｈ,t,Ｊ
＝６Ｈz,ＯＣＨ3),３.９−４.２５(１Ｈ,m,＞ＣＨ−Ｏ
ＣＨ3),６.７５−７.６(８Ｈ,m,芳香族Ｈ) ＩＲνneat maxcm-1:１７５５,１５００,１２４５,１２
１０,１１６５
よびピリジン(０.６ml)の乾燥テトロヒドロフラン(１０
ml)溶液に、i)項で得たcis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキ
シシクロペンタン−１−カルボン酸(４７２.５mg)にオ
キサリルクロリドを作用させて得られた酸クロリド体３
８２.５mg,ＩＲνneat maxcm-1:１８００)の乾燥トルエ
ン(５.０ml)溶液を室温で撹拌しながら加えた。不溶物
を濾去し、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲ
ル(１５０g)および四塩化炭素−エーテル(１０:１)を用
いるカラムクロマトグラフィーに付した。目的画分から
表題化合物(０.４４g)をろう状結晶とした得た。本品の
1Ｈ−ＮＭＲ,ＩＲスペクトルを次に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(９０ＭＨz,ＣＤＣl3) δ: ０.８９(３Ｈ,t,Ｊ＝６Ｈz,−ＣＨ2ＣＨ 3)１.０−
２.５(１８Ｈ,m,ＣＨ2),２.９−３.４(１Ｈ,m,＞ＣＨ−
ＣＯＯ),３.３９(３Ｈ,ｓ,ＯＣＨ3),３.９９(２Ｈ,t,Ｊ
＝６Ｈz,ＯＣＨ3),３.９−４.２５(１Ｈ,m,＞ＣＨ−Ｏ
ＣＨ3),６.７５−７.６(８Ｈ,m,芳香族Ｈ) ＩＲνneat maxcm-1:１７５５,１５００,１２４５,１２
１０,１１６５
【００３８】参考例２ cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−１−
カルボン酸の４'−(４−オクチルオキシフェニル)−４
−ビフェニルエステルの製造 i) cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−
１−カルボン酸の合成実施例２で得られたcis−(１Ｒ,
２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロヘキサン−１−カルボン
酸エチルエステルを以下に述べる常法の水酸基のメチル
エーテル化反応(a法: ＣＨ3Ｉ(ヨードメタン)／Ａg2Ｏ
(酸化銀)／ＣＨ3ＣＮ(アセトニトリル)または b法:
ＣＨ3Ｉ(ヨードメタン)／ＮaＨ(水素化ナトリウム)／Ｄ
ＭＦ(ジメチルホルムアミド))に付し、cis−(１Ｒ,２
Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−１−カルボン酸エ
チルエステルを得た。 a法: cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロヘキサ
ン−１−カルボン酸エチルエステル(５.１７g)をアセト
ニトリル(５２ml)に溶かし、ヨードメタン(５２g)、次
いで酸化銀(１０.４g)を少しずつ、室温で撹拌しながら
添加した。反応液を５０℃で１日撹拌したのち、不溶物
を濾去した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を減圧蒸留
に付して、cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキ
サン−１−カルボン酸エチルエステルを無色油状物とし
て４.８g(収率８６％)得た。 b法: cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロヘキサ
ン−１−カルボン酸エチルエステル(２０.６g)をジメチ
ルホルムアミド(２００ml)に溶かし、ヨードメタン(１
７０g)、次いで６０％油性水素化ナトリウム(７.２g)を
少しずつ、０℃−５℃で撹拌しながら添加した。添加終
了後０℃−５℃で約１時間撹拌し続けたのち、反応液に
氷水(含希塩酸)および酢酸エチルを注意深く加えた。酢
酸エチル層を分取し、水層をさらに酢酸エチルで抽出し
た。酢酸エチル層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥後減
圧下で濃縮し、残留物を減圧蒸留に付して、cis−(１
Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−１−カルボン
酸エチルエステルを無色油状物として２０.０g(収率８
９．５％)得た。このようにして得たcis−(１Ｒ,２Ｓ)
−２−メトキシシクロヘキサン−１−カルボン酸エチル
エステル(２０.０g)をジオキサン(４００ml)および４Ｎ
塩酸(１４０ml)に溶かし、還流下終夜撹拌した。反応液
を濃縮し、cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキ
サン−１−カルボン酸の粗標品１５.１g(粗収率８６.９
％)を得た。
カルボン酸の４'−(４−オクチルオキシフェニル)−４
−ビフェニルエステルの製造 i) cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−
１−カルボン酸の合成実施例２で得られたcis−(１Ｒ,
２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロヘキサン−１−カルボン
酸エチルエステルを以下に述べる常法の水酸基のメチル
エーテル化反応(a法: ＣＨ3Ｉ(ヨードメタン)／Ａg2Ｏ
(酸化銀)／ＣＨ3ＣＮ(アセトニトリル)または b法:
ＣＨ3Ｉ(ヨードメタン)／ＮaＨ(水素化ナトリウム)／Ｄ
ＭＦ(ジメチルホルムアミド))に付し、cis−(１Ｒ,２
Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−１−カルボン酸エ
チルエステルを得た。 a法: cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロヘキサ
ン−１−カルボン酸エチルエステル(５.１７g)をアセト
ニトリル(５２ml)に溶かし、ヨードメタン(５２g)、次
いで酸化銀(１０.４g)を少しずつ、室温で撹拌しながら
添加した。反応液を５０℃で１日撹拌したのち、不溶物
を濾去した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を減圧蒸留
に付して、cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキ
サン−１−カルボン酸エチルエステルを無色油状物とし
て４.８g(収率８６％)得た。 b法: cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロヘキサ
ン−１−カルボン酸エチルエステル(２０.６g)をジメチ
ルホルムアミド(２００ml)に溶かし、ヨードメタン(１
７０g)、次いで６０％油性水素化ナトリウム(７.２g)を
少しずつ、０℃−５℃で撹拌しながら添加した。添加終
了後０℃−５℃で約１時間撹拌し続けたのち、反応液に
氷水(含希塩酸)および酢酸エチルを注意深く加えた。酢
酸エチル層を分取し、水層をさらに酢酸エチルで抽出し
た。酢酸エチル層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥後減
圧下で濃縮し、残留物を減圧蒸留に付して、cis−(１
Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−１−カルボン
酸エチルエステルを無色油状物として２０.０g(収率８
９．５％)得た。このようにして得たcis−(１Ｒ,２Ｓ)
−２−メトキシシクロヘキサン−１−カルボン酸エチル
エステル(２０.０g)をジオキサン(４００ml)および４Ｎ
塩酸(１４０ml)に溶かし、還流下終夜撹拌した。反応液
を濃縮し、cis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキ
サン−１−カルボン酸の粗標品１５.１g(粗収率８６.９
％)を得た。
【００３９】ii) エステル化反応 ４'−ヒドロキシ−４−ビフェニルカルボン酸の４−オ
クチルオキシフェニルエステル１．０５g及びピリジン
０.６gの乾燥テトラヒドロフラン１０ml溶液に、i)項で
得たcis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−
１−カルボン酸４.０gにオキサリルクロリドを作用させ
て得られた酸クロリド体(ＩＲνneat maxcm-1:１８００)
２.２gのうち０.５gを、室温で撹拌しながら加えた。終
夜反応を行なった後、反応液を減圧下で濃縮した。残留
物をシリカゲルおよび四塩化炭素−エーテル(３０:１)
を用いるカラムクロマトグラフィーに付し、エタノール
より再結晶して０.３gの表題化合物を得た。本品の1Ｈ
−ＮＭＲ、ＩＲスペクトルを次に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(９０ＭＨz,ＣＤＣl3) δ: ０.８９(３Ｈ,t),１.１−２.０(２０Ｈ,m),２.６
−２.９(１Ｈ,m),３.４０(３Ｈ,ｓ),３.９−４.１(３
Ｈ,m),６.８−８.３(１２Ｈ,m) ＩＲνKBR maxcm-1:２８００〜３０００,１７４０,１６
０５
クチルオキシフェニルエステル１．０５g及びピリジン
０.６gの乾燥テトラヒドロフラン１０ml溶液に、i)項で
得たcis−(１Ｒ,２Ｓ)−２−メトキシシクロヘキサン−
１−カルボン酸４.０gにオキサリルクロリドを作用させ
て得られた酸クロリド体(ＩＲνneat maxcm-1:１８００)
２.２gのうち０.５gを、室温で撹拌しながら加えた。終
夜反応を行なった後、反応液を減圧下で濃縮した。残留
物をシリカゲルおよび四塩化炭素−エーテル(３０:１)
を用いるカラムクロマトグラフィーに付し、エタノール
より再結晶して０.３gの表題化合物を得た。本品の1Ｈ
−ＮＭＲ、ＩＲスペクトルを次に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(９０ＭＨz,ＣＤＣl3) δ: ０.８９(３Ｈ,t),１.１−２.０(２０Ｈ,m),２.６
−２.９(１Ｈ,m),３.４０(３Ｈ,ｓ),３.９−４.１(３
Ｈ,m),６.８−８.３(１２Ｈ,m) ＩＲνKBR maxcm-1:２８００〜３０００,１７４０,１６
０５
【００４０】
【発明の効果】本発明によると、強誘電性液晶化合物な
どの合成原料として重要な(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキ
シシクロペンタンカルボン酸エステル類および(１Ｒ,２
Ｓ)−２−ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸エステ
ル類を容易にかつ効率よく製造することができ、有用で
ある。特に、本発明の製造法に使用する細菌菌体量は、
酵母等を用いる公知製造法に比べて少なくてすみ、した
がって、細菌菌体の単位量あたりの目的生成物の収量
は、公知製造法の場合に比べてはるかに高い。さらに、
本発明によれば、公知製造法に比べて、生成物を容易に
分離精製することができ、回収工程における生成物の損
失も減少する。このように、本発明の製造法は工業的に
有利なものである。
どの合成原料として重要な(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキ
シシクロペンタンカルボン酸エステル類および(１Ｒ,２
Ｓ)−２−ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸エステ
ル類を容易にかつ効率よく製造することができ、有用で
ある。特に、本発明の製造法に使用する細菌菌体量は、
酵母等を用いる公知製造法に比べて少なくてすみ、した
がって、細菌菌体の単位量あたりの目的生成物の収量
は、公知製造法の場合に比べてはるかに高い。さらに、
本発明によれば、公知製造法に比べて、生成物を容易に
分離精製することができ、回収工程における生成物の損
失も減少する。このように、本発明の製造法は工業的に
有利なものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:37） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:425） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:42） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:07）
Claims (7)
- 【請求項１】 ２−オキソシクロアルカンカルボン酸エ
ステルを細菌またはその処理物による不斉還元反応に付
すことを特徴とする(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシク
ロアルカンカルボン酸エステル類の製造法。 - 【請求項２】 該細菌が２−オキソシクロアルカンカル
ボン酸エステルを(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロ
アルカンカルボン酸エステルに還元する能力を有する細
菌である請求項１記載の製造法。 - 【請求項３】 該細菌が、エンテロバクター属、エッシ
ァリッヒァ属、クレブジエラ属、プロテウス属、セラチ
ア属、サルモネラ属、クルトバクテリウム属、セルロモ
ナス属またはバチルス属に属する細菌である請求項１記
載の製造法。 - 【請求項４】 該(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロ
アルカンカルボン酸エステルが(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒド
ロキシシクロペンタンカルボン酸エステルである請求項
１記載の製造法。 - 【請求項５】 該細菌がクレブジエラ・ニウモニエであ
る請求項４記載の製造法。 - 【請求項６】 該(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒドロキシシクロ
アルカンカルボン酸エステルが(１Ｒ,２Ｓ)−２−ヒド
ロキシシクロヘキサンカルボン酸エステルである請求項
１記載の製造法。 - 【請求項７】 該細菌がクルトバクテリウム・シトリウ
ムである請求項６記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3605992A JPH05192187A (ja) | 1991-02-25 | 1992-02-24 | 光学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステル類の製造法 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5388891 | 1991-02-25 | ||
| JP3-53888 | 1991-08-05 | ||
| JP19518491 | 1991-08-05 | ||
| JP3-195184 | 1991-08-05 | ||
| JP3605992A JPH05192187A (ja) | 1991-02-25 | 1992-02-24 | 光学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステル類の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05192187A true JPH05192187A (ja) | 1993-08-03 |
Family
ID=27288962
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3605992A Withdrawn JPH05192187A (ja) | 1991-02-25 | 1992-02-24 | 光学活性２−ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステル類の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05192187A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008228575A (ja) * | 2007-03-16 | 2008-10-02 | Kaneka Corp | 光学活性なｔｒａｎｓ体含窒素環状β−ヒドロキシエステルの製造方法 |
| WO2011071058A1 (ja) * | 2009-12-08 | 2011-06-16 | 株式会社カネカ | 光学活性２－ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステルの製造方法 |
-
1992
- 1992-02-24 JP JP3605992A patent/JPH05192187A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008228575A (ja) * | 2007-03-16 | 2008-10-02 | Kaneka Corp | 光学活性なｔｒａｎｓ体含窒素環状β−ヒドロキシエステルの製造方法 |
| WO2011071058A1 (ja) * | 2009-12-08 | 2011-06-16 | 株式会社カネカ | 光学活性２－ヒドロキシシクロアルカンカルボン酸エステルの製造方法 |
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