TW202136306A

TW202136306A - 用於治療實性瘤的靶向間皮素的ｃｄ４０激動性多特異性抗體構建體

Info

Publication number: TW202136306A
Application number: TW109145345A
Authority: TW
Inventors: 欣于; 傑克森葛雷米雅爵; 費南多加瑟斯; 岳中俊介; 愛爾揚金; 迪帕理史汪特
Original assignee: 美商安進公司
Priority date: 2019-12-20
Filing date: 2020-12-21
Publication date: 2021-10-01
Also published as: AU2020405230A1; UY38995A; JP2023507323A; IL293640A; US20240150481A1; AR120832A1; BR112022012191A2; EP4077392A1; ZA202206541B; US11926672B2; CL2022001697A1; CN115175936A; WO2021127528A1; CA3164129A1; US20210347905A1; KR20220117300A; MX2022007688A

Abstract

本發明關於用於治療實性瘤的人激動性CD40多特異性抗體構建體，其藉由對特異性地靶向腫瘤相關的APC上的CD40通路的分子進行工程化，而無需全身的CD40激活。

Description

用於治療實性瘤的靶向間皮素的CD40激動性多特異性抗體構建體

本發明關於腫瘤學，特別地癌症免疫療法的領域。本發明關於人激動性CD40抗體，其藉由對特異性地靶向腫瘤相關的APC上的CD40通路的分子進行工程化，而無需全身性CD40激活。

在快速變化的免疫療法領域，治療對免疫檢查點抑制劑（如抗PD1）無反應的癌症患者代表著主要挑戰和令人興奮的機遇。實性瘤中PD1阻斷的反應的主要決定因素係治療前腫瘤相關的T細胞浸潤的程度，浸潤較弱的、「冷」腫瘤患者顯示最小的臨床益處。雖然臨床數據仍在出現，但PD1阻斷以外的其他靶向T細胞的免疫療法（如實性瘤BiTE®抗體構建體或CAR-T方法）的臨床活性也可僅限於「冷」腫瘤。靶向T細胞的方法與能增強T細胞向實性瘤浸潤的新療法的結合對於最大化受益於免疫療法的患者數量可能是關鍵的。

CD40係TNF受體（TNFR）超家族的成員，其優先地藉由抗原呈現細胞（APC）（如樹突狀細胞、B細胞和巨噬細胞）表現。與其在激活的T輔助細胞上的三聚體配體相互作用導致APC激活，該激活包括細胞介素/趨化因子（如介白素12 [IL-12]和CxCL10）、參與抗原呈遞的蛋白質（如MHC I類和II類配體）、T細胞共刺激配體（如CD80和CD86）和一系列其他免疫調節因子（即，黏附分子和其他TNFR）的上調。然後，該等「得到許可」的APC可以觸發一系列事件，從而導致穩健的適應性免疫反應。

能激活CD40傳訊的治療劑具有通過其增強抗腫瘤T細胞的生成和增強T細胞直接募集到腫瘤病變中的能力來使實性瘤發炎的潛力。用抗CD40促效劑進行的臨床前研究表明，用APC上的交聯抗體觸發的CD40可以替代CD4 T細胞，以幫助許可APC，並促進CD8效應T細胞的激活及擴增。此外，激活CD40的巨噬細胞也可發揮直接的殺腫瘤功能。已經證明單獨該等抗CD40促效劑抗體或與其他療法組合在多種同基因腫瘤模型中係有效的。基於該等臨床前研究，在實性瘤患者的I/II期臨床試驗中，正在研究幾種CD40激動抗體。迄今為止，該等單株抗CD40抗體已顯示一些臨床活性的跡象，但通常與免疫相關的不良反應有關，如細胞介素釋放綜合症和肝損傷的證據。該等毒性限制了可以被遞送的CD40促效劑的劑量，並且因此可導致與腫瘤相關的APC群體中CD40途徑的激活不足，從而對此治療方法的功效產生負面影響。能在腫瘤組織中局部激活CD40傳訊的治療劑可改善抗腫瘤作用，同時限制全身毒性。

為了實現腫瘤定位，設計了結合CD40和腫瘤相關抗原（TAA）、間皮素（MSLN）的激動性多特異性抗體構建體。在表現CD40的APC上，此多特異性抗體構建體的穩健的促效劑活性完全取決於相鄰的表現MSLN的細胞的存在。將多特異性抗體構建體特異性工程化，以在不存在表現MSLN的細胞中與CD40結合後缺乏CD40促效劑活性。另外，將突變引入IgG Fc結構域限制了與Fc受體的結合，因此防止Fc受體介導的CD40促效劑活性。因此，本文所述之MSLN依賴性CD40促效劑多特異性抗體構建體具有以主要限於腫瘤組織的方式驅動穩健的CD40介導的APC的激活的潛力，因此最小化全身毒性的誘導。

本發明關於多特異性抗體構建體，該多特異性抗體構建體包含：

(i) 含有兩個輕鏈和兩個重鏈的第一抗體，其中

輕鏈包含第一可變區（VL1）和輕鏈恒定區（CL）；

重鏈包含第一重可變區（VH1）和CH1、鉸鏈、CH2、和CH3區；

重鏈包含至少一個胺基酸取代，該取代導致該重鏈對人FcγRI受體的結合親和力降低（與未取代的重鏈相比）；和

(ii) 含有第二抗體的第二輕鏈可變區（VL2）和第二重鏈可變區（VH2）的scFv，其中該VL2和該VH2經由第一肽連接子連接，

其中scFv在其胺基末端通過第二肽連接子與每個重鏈的羧基末端融合，以形成重鏈融合蛋白；並且

其中該第一抗體特異性地結合至並激動人CD40（SEQ ID NO: 1），並且該scFv特異性地結合至人間皮素（mesothelin，MSLN）（SEQ ID NO: 2）。

在一個實施方式中，多特異性抗體構建體以MSLN依賴性方式特異性激動CD40。

在一個實施方式中，多特異性抗體構建體包含限制Fc受體結合的突變並且因此減少Fc受體依賴型CD40激動作用。

在一個實施方式中，兩個輕鏈相同並且兩個重鏈融合蛋白相同。

在一個實施方式中，重鏈包含選自由以下組成之群組的胺基酸取代：

(i) N297G或N297A；

(ii) L234A和L235A；和

(iii) R292C和V302C；

其中胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。

在一個實施方式中，重鏈包含N297G、R292C、和V302C突變，其中胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。

在一個實施方式中，VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；

VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；

分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；

分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和

分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；

並且VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。

在一個實施方式中，1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 76、77、和6780；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

e) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

f) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

g) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

h) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

i) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

j) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

k) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

l) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

m) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。

在一個實施方式中，VL1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；

VH1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、和54；

VL2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 213、217、221、和225；

VH2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 214、218、222、和226。

在一個實施方式中，

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL1和包含SEQ ID NO: 6的VH1；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL1和包含SEQ ID NO: 10的VH1；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL1和包含SEQ ID NO: 14的VH1；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL1和包含SEQ ID NO: 18的VH1；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL1和包含SEQ ID NO: 22的VH1；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL1和包含SEQ ID NO: 26的VH1；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL1和包含SEQ ID NO: 30的VH1；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL1和包含SEQ ID NO: 34的VH1；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL1和包含SEQ ID NO: 38的VH1；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL1和包含SEQ ID NO: 42的VH1；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL1和包含SEQ ID NO: 46的VH1；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL1和包含SEQ ID NO: 50的VH1；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL1和包含SEQ ID NO: 54的VH1；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 213的VL2和包含SEQ ID NO: 214的VH2；

b) 包含SEQ ID NO: 217的VL2和包含SEQ ID NO: 218的VH2；

c) 包含SEQ ID NO: 221的VL2和包含SEQ ID NO: 222的VH2；以及

d) 包含SEQ ID NO: 225的VL2和包含SEQ ID NO: 226的VH2。

在一個實施方式中，輕鏈的CL選自由SEQ ID NO: 883和SEQ ID NO: 884組成之群組。

在一個實施方式中，重鏈的CH1-鉸鏈-CH2-CH3選自由SEQ ID NO: 885和SEQ ID NO: 886組成之群組。

在一個實施方式中，第一肽連接子選自由SEQ ID NO: 888-893組成之群組。

在一個實施方式中，第二肽連接子選自由SEQ ID NO: 887-893組成之群組。

在一個實施方式中，第一肽連接子包含SEQ ID NO: 889並且第二肽連接子包含SEQ ID NO: 887。

在一個實施方式中，

輕鏈包含選自由以下組成之群組的序列：SEQ ID NO: 286、290、294、298、302、306、310、314、318、322、326、330、336、342、346、350、354、358、362、366、370、374、和378；並且

重鏈融合蛋白包含選自由以下組成之群組的序列：SEQ ID NO: 285、289、293、297、301、305、309、313、317、321、325、329、333、337、341、345、349、353、357、361、365、369、373、和377。

在一個實施方式中，輕鏈和重鏈融合蛋白包含多肽，該等多肽包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：

分別是SEQ ID NO: 286和SEQ ID NO: 285；

分別是SEQ ID NO: 290和SEQ ID NO: 289；

分別是SEQ ID NO: 294和SEQ ID NO: 293；

分別是SEQ ID NO: 298和SEQ ID NO: 297；

分別是SEQ ID NO: 302和SEQ ID NO: 301；

分別是SEQ ID NO: 306和SEQ ID NO: 305；

分別是SEQ ID NO: 310和SEQ ID NO: 309；

分別是SEQ ID NO: 314和SEQ ID NO: 313；

分別是SEQ ID NO: 318和SEQ ID NO: 317；

分別是SEQ ID NO: 322和SEQ ID NO: 321；

分別是SEQ ID NO: 326和SEQ ID NO: 325；

分別是SEQ ID NO: 330和SEQ ID NO: 329；

分別是SEQ ID NO: 334和SEQ ID NO: 333；

分別是SEQ ID NO: 338和SEQ ID NO: 337；

分別是SEQ ID NO: 342和SEQ ID NO: 341；

分別是SEQ ID NO: 346和SEQ ID NO: 345；

分別是SEQ ID NO: 350和SEQ ID NO: 349；

分別是SEQ ID NO: 354和SEQ ID NO: 353；

分別是SEQ ID NO: 358和SEQ ID NO: 357；

分別是SEQ ID NO: 362和SEQ ID NO: 361；

分別是SEQ ID NO: 366和SEQ ID NO: 365；

分別是SEQ ID NO: 370和SEQ ID NO: 369；

分別是SEQ ID NO: 374和SEQ ID NO: 373；以及

分別是SEQ ID NO: 378和SEQ ID NO: 377。

在一方面，本發明關於編碼本發明之抗體構建體的輕鏈之多核苷酸。

在一方面，本發明關於編碼本發明之抗體構建體的重鏈融合蛋白的多核苷酸。

在一方面，本發明關於包含編碼抗體構建體的輕鏈之多核苷酸、編碼抗體構建體的重鏈之多核苷酸、或兩者的載體。

在一方面，本發明關於用載體或編碼抗體構建體的輕鏈之多核苷酸和編碼抗體構建體的重鏈之多核苷酸轉化或轉染的宿主細胞。

在一方面，本發明關於用於產生本發明之抗體構建體之方法，該方法包括在允許表現該抗體構建體的條件下，培養包含編碼輕鏈的多核苷酸以及還包含編碼重鏈融合蛋白的多核苷酸的宿主細胞，並且從培養物回收產生的抗體構建體。

在一方面，本發明關於藥物組成物，該藥物組成物包含根據本發明之抗體構建體和載劑、穩定劑、賦形劑、稀釋劑、增溶劑、表面活性劑、乳化劑、防腐劑或輔助劑。

在一方面，本發明關於用於治療或改善實性瘤疾病或轉移性癌症疾病之方法，該方法包括向有需要的受試者投與有效量的根據本發明之抗體構建體。

在一個實施方式中，實性瘤疾病選自由以下組成之群組：卵巢癌、胰臟癌、間皮瘤、肺癌、胃部癌和三陰性乳癌疾病或源自任何前述疾病的轉移性癌症疾病。

在一方面，本發明關於套組（kit），該套組包含根據本發明之抗體構建體和視需要，使用說明書。

在一方面，本發明關於多特異性抗體構建體，該多特異性抗體構建體包含：

(i) 含有兩個輕鏈和兩個重鏈的第一抗體，其中

輕鏈包含第一可變區（VL1）和輕鏈恒定區（CL）；

重鏈包含第一重可變區（VH1）和CH1、鉸鏈、CH2、和CH3區；

重鏈包含至少一個胺基酸取代，該取代導致該重鏈對人FcγRI受體的結合親和力降低（與未取代的重鏈相比）；以及

其中第一抗體特異性地結合至人間皮素（MSLN）（SEQ ID NO: 2），並且scFv特異性地結合至並激動人CD40（SEQ ID NO: 1）。

(i) N297G或N297A；

(ii) L234A和L235A；以及

(iii) R292C和V302C；

其中胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。

在一個實施方式中：

VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；

分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；

分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和

分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；

VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；和

分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；

VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

並且

VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。

在一個實施方式中，

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；和

d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 76、77、和6780；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

e) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

f) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

g) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

h) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

i) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

j) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

k) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

l) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

m) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。

在一個實施方式中：

VL1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 213、217、221、和225；

VH1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 214、218、222、和226；

VL2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；並且

VH2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、和54。

在一個實施方式中：

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 213的VL1和包含SEQ ID NO: 214的VH1；

b) 包含SEQ ID NO: 217的VL1和包含SEQ ID NO: 218的VH1；

c) 包含SEQ ID NO: 221的VL1和包含SEQ ID NO: 222的VH1；以及

d) 包含SEQ ID NO: 225的VL1和包含SEQ ID NO: 226的VH1；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL2和包含SEQ ID NO: 6的VH2；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL2和包含SEQ ID NO: 10的VH2；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL2和包含SEQ ID NO: 14的VH2；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL2和包含SEQ ID NO: 18的VH2；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL2和包含SEQ ID NO: 22的VH2；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL2和包含SEQ ID NO: 26的VH2；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL2和包含SEQ ID NO: 30的VH2；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL2和包含SEQ ID NO: 34的VH2；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL2和包含SEQ ID NO: 38的VH2；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL2和包含SEQ ID NO: 42的VH2；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL2和包含SEQ ID NO: 46的VH2；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL2和包含SEQ ID NO: 50的VH2；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL2和包含SEQ ID NO: 54的VH2。

在一個實施方式中，

輕鏈包含選自由以下組成之群組的序列：SEQ ID NO: 382、386、390、394、398、402、406、410、414、418、422、426、430、434、438、442、446、和450；並且

重鏈融合蛋白包含選自由以下組成之群組的序列：SEQ ID NO: 381、385、389、393、397、401、405、409、413、417、421、425、429、433、437、441、445、和449。

分別是SEQ ID NO: 382和SEQ ID NO: 381；

分別是SEQ ID NO: 386和SEQ ID NO: 385；

分別是SEQ ID NO: 390和SEQ ID NO: 389；

分別是SEQ ID NO: 394和SEQ ID NO: 393；

分別是SEQ ID NO: 398和SEQ ID NO: 397；

分別是SEQ ID NO: 402和SEQ ID NO: 401；

分別是SEQ ID NO: 406和SEQ ID NO: 405；

分別是SEQ ID NO: 410和SEQ ID NO: 409；

分別是SEQ ID NO: 414和SEQ ID NO: 413；

分別是SEQ ID NO: 418和SEQ ID NO: 417；

分別是SEQ ID NO: 422和SEQ ID NO: 421；

分別是SEQ ID NO: 426和SEQ ID NO: 425；

分別是SEQ ID NO: 430和SEQ ID NO: 429；

分別是SEQ ID NO: 434和SEQ ID NO: 433；

分別是SEQ ID NO: 438和SEQ ID NO: 437；

分別是SEQ ID NO: 442和SEQ ID NO: 441；

分別是SEQ ID NO: 446和SEQ ID NO: 445；以及

分別是SEQ ID NO: 450和SEQ ID NO: 449。

a) 每個都包含第一重鏈可變區（VH1）和第一CH1結構域的兩個相同重鏈融合蛋白，其中該第一CH1結構域連接至鉸鏈-CH2-CH3多肽，並且其中該鉸鏈-CH2-CH3多肽連接至第二重鏈可變區（VH2），其中該VH2連接至第二CH1結構域；其中

i) VH1或第一CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；並且

ii) VH2或第二CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由對應於以下位置的殘基組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；以及

b) 包含第一輕鏈的第二多肽，其中該第一輕鏈包含第一輕鏈可變區（VL1）和第一CL區；並且其中VL1或第一CL結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：38、100、和176，使用EU編號；以及

c) 包含第二輕鏈的第三多肽，其中該第二輕鏈包含第二輕鏈可變區（VL2）和第二CL區；並且其中VL2或第二CL結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：38、100、和176，使用EU編號；

其中VH1和VL1相互作用以結合第一抗原並且其中VH2和VL2相互作用以結合第二抗原；

其中：

第一抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）並且第二抗原係人間皮素（「MSLN」；SEQ ID NO: 2）；或者

第一抗原係人MSLN（SEQ ID NO: 2）並且第二抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）。

i) VH1或第一CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；並且

ii) VH2或第二CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由對應於以下位置的殘基組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；以及

b) 包含第一輕鏈的第二多肽，其中該第一輕鏈包含第一輕鏈可變區（VL1）和第一CL區；並且其中VL1或第一CL結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：38、100、和176，使用EU編號；以及

c) 包含第二輕鏈的第三多肽，其中該第二輕鏈包含第二輕鏈可變區（VL2）和第二CL區；並且其中VL2或第二CL結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：38、100、和176，使用EU編號；

其中：

在一個實施方式中，將鉸鏈-CH2-CH3多肽經由肽連接子連接至VH2。

在一個實施方式中，肽連接子包含選自由以下組成之群組的序列：(Gly₃ Ser)₂ （SEQ ID NO: 916）、(Gly₄ Ser)₂ （SEQ ID NO: 888）、(Gly₃ Ser)₃ （SEQ ID NO: 917）、(Gly₄ Ser)₃ （SEQ ID NO: 889）、(Gly₃ Ser)₄ （SEQ ID NO: 918）、(Gly₄ Ser)₄ （SEQ ID NO: 890）、(Gly₃ Ser)₅ （SEQ ID NO: 919）、(Gly₄ Ser)₅ （SEQ ID NO: 920）、(Gly₃ Ser)₆ （SEQ ID NO: 921）、和(Gly₄ Ser)₆ （SEQ ID NO: 922）。

在一個實施方式中，

a) VH1或第一CH1結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q39K、G44K、和S183K，使用EU編號；

b) VH2或第二CH1結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q39E、G44E、和S183E，使用EU編號；

c) VL1或第一CL結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q38E、G100E、和S176E，使用EU編號；並且

d) VL2或第二CL結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q38K、G100K、和S176K，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) 第一CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號；

b) 第二CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號；

c) 第一CL結構域包含S176E突變，使用EU編號；並且

d) 第二CL結構域包含S176K突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) VH1包含Q39K突變並且第一CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號；

b) VH2包含Q39E突變並且第二CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號；

c) VL1包含Q38E突變並且第一CL結構域包含S176E突變，使用EU編號；並且

d) VL2包含Q38K突變並且第二CL結構域包含S176K突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) 第一CH1結構域包含G44K和S183K突變，使用EU編號；

b) 第二CH1結構域包含G44E和S183E突變，使用EU編號；

c) 第一CL結構域包含G100E和S176E突變，使用EU編號；並且

d) 第二CL結構域包含G100K和S176K突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) VH1或第一CH1結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q39E、G44E、和S183E，使用EU編號；

b) VH2或第二CH1結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q39K、G44K、和S183K，使用EU編號；

c) VL1或第一CL結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q38K、G100K、和S176K，使用EU編號；並且

d) VL2或第二CL結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q38E、G100E、和S176E，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) 第一CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號；

b) 第二CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號；

c) 第一CL結構域包含S176K突變，使用EU編號；並且

d) 第二CL結構域包含S176E突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) VH1包含Q39E突變並且第一CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號；

b) VH2包含Q39K突變並且第二CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號；

c) VL1包含Q38K突變並且第一CL結構域包含S176K突變，使用EU編號；並且

d) VL2包含Q38E突變並且第二CL結構域包含S176E突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) 第一CH1結構域包含G44E和S183E突變，使用EU編號；

b) 第二CH1結構域包含G44K和S183K突變，使用EU編號；

c) 第一CL結構域包含G100K和S176K突變，使用EU編號；並且

d) 第二CL結構域包含G100E和S176E突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，鉸鏈-CH2-CH3多肽包含選自由以下組成之群組的胺基酸取代：

(i) N297G或N297A；

(ii) L234A和L235A；以及

(iii) R292C和V302C；

其中胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。

在一個實施方式中，鉸鏈-CH2-CH3多肽包含N297G、R292C、和V302C突變，其中胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。

在一個實施方式中，第一抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）並且第二抗原係人MSLN（SEQ ID NO: 2）；並且

VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；

VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；

分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；

分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及

分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；

並且VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。

64. 如請求項63所述之抗體構建體，其中

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

以及

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

在一個實施方式中：

VL1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；

在一個實施方式中：

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL1和包含SEQ ID NO: 6的VH1；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL1和包含SEQ ID NO: 10的VH1；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL1和包含SEQ ID NO: 14的VH1；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL1和包含SEQ ID NO: 18的VH1；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL1和包含SEQ ID NO: 22的VH1；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL1和包含SEQ ID NO: 26的VH1；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL1和包含SEQ ID NO: 30的VH1；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL1和包含SEQ ID NO: 34的VH1；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL1和包含SEQ ID NO: 38的VH1；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL1和包含SEQ ID NO: 42的VH1；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL1和包含SEQ ID NO: 46的VH1；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL1和包含SEQ ID NO: 50的VH1；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL1和包含SEQ ID NO: 54的VH1；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 213的VL2和包含SEQ ID NO: 214的VH2；

b) 包含SEQ ID NO: 217的VL2和包含SEQ ID NO: 218的VH2；

c) 包含SEQ ID NO: 221的VL2和包含SEQ ID NO: 222的VH2；以及

d) 包含SEQ ID NO: 225的VL2和包含SEQ ID NO: 226的VH2。

在一方面，本發明關於編碼抗體構建體的第一輕鏈的多核苷酸。

在一方面，本發明關於編碼抗體構建體的第二輕鏈的多核苷酸。

在一方面，本發明關於編碼抗體構建體的重鏈融合蛋白的多核苷酸。

在一方面，本發明關於載體，該載體包含：

a) 編碼抗體構建體的第一輕鏈的多核苷酸，

b) 編碼抗體構建體的第二輕鏈的多核苷酸，

c) 編碼抗體構建體的重鏈融合蛋白的多核苷酸，或

d) a)、b)、和c) 的任何組合。

在一方面，本發明關於用根據本發明之載體或多核苷酸轉化或轉染宿主細胞。

在一方面，本發明關於用於產生根據本發明之抗體構建體之方法，該方法包括在允許表現該抗體構建體的條件下，培養包含編碼第一輕鏈的多核苷酸、編碼第二輕鏈的多核苷酸、和編碼重鏈融合蛋白的多核苷酸的宿主細胞，並且從培養物回收產生的抗體構建體。

在一方面，本發明關於套組，該套組包含根據本發明之抗體構建體和視需要，使用說明書。

在一個實施方式中，該第一抗原係人MSLN（SEQ ID NO: 2）並且該第二抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）；其中：

VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；

分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；

分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及

分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；

VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；

VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

並且

VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。

在一個實施方式中，

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

在一個實施方式中，

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 213的VL1和包含SEQ ID NO: 214的VH1；

b) 包含SEQ ID NO: 217的VL1和包含SEQ ID NO: 218的VH1；

c) 包含SEQ ID NO: 221的VL1和包含SEQ ID NO: 222的VH1；以及

d) 包含SEQ ID NO: 225的VL1和包含SEQ ID NO: 226的VH1；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL2和包含SEQ ID NO: 6的VH2；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL2和包含SEQ ID NO: 10的VH2；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL2和包含SEQ ID NO: 14的VH2；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL2和包含SEQ ID NO: 18的VH2；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL2和包含SEQ ID NO: 22的VH2；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL2和包含SEQ ID NO: 26的VH2；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL2和包含SEQ ID NO: 30的VH2；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL2和包含SEQ ID NO: 34的VH2；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL2和包含SEQ ID NO: 38的VH2；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL2和包含SEQ ID NO: 42的VH2；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL2和包含SEQ ID NO: 46的VH2；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL2和包含SEQ ID NO: 50的VH2；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL2和包含SEQ ID NO: 54的VH2。

在一方面，本發明關於抗原結合蛋白，該抗原結合蛋白特異性地結合並且激動人CD40（SEQ ID NO: 1），該抗原結合蛋白包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），其中：

VL包含選自由以下組成之群組：CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

並且

VH包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。

在一個實施方式中，

VL和VH選自由以下組成之群組：

a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 76、77、和6780；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

e) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

f) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

g) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

h) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

i) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

j) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

k) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

l) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

m) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。

在一個實施方式中，

VL包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；並且

VH包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、和54。

在一個實施方式中，

VL和VH選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL和包含SEQ ID NO: 6的VH；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL和包含SEQ ID NO: 10的VH；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL和包含SEQ ID NO: 14的VH；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL和包含SEQ ID NO: 18的VH；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL和包含SEQ ID NO: 22的VH；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL和包含SEQ ID NO: 26的VH；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL和包含SEQ ID NO: 30的VH；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL和包含SEQ ID NO: 34的VH；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL和包含SEQ ID NO: 38的VH；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL和包含SEQ ID NO: 42的VH；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL和包含SEQ ID NO: 46的VH；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL和包含SEQ ID NO: 50的VH；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL和包含SEQ ID NO: 54的VH。

(i) N297G或N297A；

(ii) L234A和L235A；和

(iii) R292C和V302C；

其中胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。

在一個實施方式中，抗原結合蛋白進一步包含連接至VL的輕鏈CL多肽，其中該CL多肽選自由SEQ ID NO: 883和SEQ ID NO: 884組成之群組。

在一個實施方式中，抗原結合蛋白進一步包含重鏈CH1-鉸鏈-CH2-CH3多肽，其中該CH1-鉸鏈-CH2-CH3多肽選自由SEQ ID NO: 885和SEQ ID NO: 886組成之群組。

在一個實施方式中，抗原結合蛋白進一步包含第二抗原結合部分，該第二抗原結合部分特異性地結合第二抗原。

在一個實施方式中，第二抗原係腫瘤相關抗原（TAA）。

除非另外指明，否則在一系列元素前面的術語「至少」應被理解為指該系列中的每一個元素。熟悉該項技術者將認識到，或能夠僅使用常規試驗確定本文所述之本發明之具體實施方式的許多等效內容。此類等效物旨在由本發明所涵蓋。

術語「和/或」在本文使用時包括「和」、「或」和「由所述術語連接的要素的全部或任何其他組合」的含義。

如本文所用的，術語「約」或「大約」意指在給定值或範圍的 ± 20%內，較佳的是在 ± 15%內，更較佳的是在 ± 10%內，最較佳的是在 ± 5%內。

貫穿本說明書及以下申請專利範圍，除非上下文另有要求，否則單詞「包含（comprise）」及變化形式如「包含（comprises和comprising）」應理解為隱含包括所陳述的整數或步驟或者整數或步驟的組，而不是排除任何其他整數或步驟或者整數或步驟的組。當在本文中使用時，術語「包含」可以用術語「含有」或「包括」取代，或者有時在本文中取代為術語「具有」。

當在本文中使用時，「由……組成」排除在申請專利範圍中未指定的任何元件、步驟或成分。如本文使用的，「基本上由……組成」並不排除不實質性地影響請求項的基本和新穎特徵的材料或步驟。

在本文的每種情況下，術語「包含」、「基本上由……組成」和「由……組成」中的任一者都可以用另外兩個術語中的任一者來替換。

如本文所用的，術語「抗原結合蛋白」係指特異性地結合至一個或多個靶抗原的蛋白質。抗原結合蛋白可包括抗體及其功能片段。「功能性抗體片段」係抗體中不含全長重鏈和/或輕鏈中存在的胺基酸的至少一部分，但仍能夠特異性地結合至抗原的部分。功能性抗體片段包括但不限於Fab片段、Fab'片段、F(ab')₂ 片段、Fv片段、Fd片段和互補決定區（CDR）片段，且可以衍生自任何哺乳動物來源，例如人、小鼠、大鼠、兔或駱駝。功能性抗體片段可以與完整抗體競爭結合靶抗原且該等片段可以藉由修飾完整抗體（例如酶或化學裂解）或使用重組DNA技術或肽合成從頭合成獲得。

術語「抗體構建體」係指其中結構和/或功能係基於抗體（例如，全長或完整免疫球蛋白分子）的結構和/或功能的分子。因此，抗體構建體能夠與其特異性靶標或抗原結合。此外，根據本發明之抗體構建體包含允許靶結合的抗體的最小結構要求。這種最小要求可以例如藉由至少三個輕鏈CDR（即VL區的CDR1、CDR2和CDR3）和/或三個重鏈CDR（即VH區的CDR1、CDR2和CDR3）、較佳的全部六個CDR的存在來定義。根據本發明之構建體所基於的抗體包括例如單株、重組、嵌合、去免疫、人源化和人抗體。

在某些實施方式中，本發明之抗原結合蛋白包含抗體。如本文所用的，術語「抗體」係指包含兩個輕鏈多肽（各自約25 kDa）和兩個重鏈多肽（各自約50-70 kDa）的四聚免疫球蛋白。術語「輕鏈」或「免疫球蛋白輕鏈」係指自胺基末端至羧基末端包含單一免疫球蛋白輕鏈可變區（VL）和單一免疫球蛋白輕鏈恒定結構域（CL）之多肽。免疫球蛋白輕鏈恒定結構域（CL）可為kappa（κ）或lambda（λ）。術語「重鏈」或「免疫球蛋白重鏈」係指自胺基末端至羧基末端包含單一免疫球蛋白重鏈可變區（VH）、免疫球蛋白重鏈恒定結構域1（CH1）、免疫球蛋白鉸鏈區、免疫球蛋白重鏈恒定結構域2（CH2）、免疫球蛋白重鏈恒定結構域3（CH3）和視需要免疫球蛋白重鏈恒定結構域4（CH4）之多肽。重鏈分類為mu（μ）、delta（Δ）、gamma（γ）、alpha（α）、和epsilon（ε）鏈，且其分別將抗體同型（isotype）定義為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG類別和IgA類別的抗體進一步細分為數個亞類，即分別為IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2。IgG、IgA和IgD抗體中的重鏈具有三個結構域（CH1、CH2和CH3），而IgM和IgE抗體中的重鏈具有四個結構域（CH1、CH2、CH3和CH4）。免疫球蛋白重鏈恒定結構域可以來自任何免疫球蛋白同型，包括亞型。抗體鏈係經由在CL結構域與CH1結構域之間（即，在輕鏈與重鏈之間）和在抗體重鏈的鉸鏈區之間的多肽間二硫鍵連接在一起。

在人抗體中，CH1係指在EU索引的位置118-215處具有胺基酸序列的區域。稱為「鉸鏈區」的高度柔性胺基酸區在CH1與CH2之間存在。CH2表示在EU索引的位置231至340處具有胺基酸序列的區域，並且CH3表示在EU索引的位置341至446處具有胺基酸序列的區域。

「CL」表示輕鏈的恒定區。在人抗體的中κ鏈的情況下，CL表示在EU索引的位置108-214處具有胺基酸序列的區域。在λ鏈中，CL表示在位置108至215處具有胺基酸序列的區域。

EU索引（如Kabat等人., Sequences of Proteins of Immunological Interest [免疫學目的蛋白的序列], 5th Ed. Public Health Service [公共衛生服務第5版], National Institutes of Health [美國國立衛生研究院], 貝塞斯達，馬里蘭州（Bethesda, MD.）(1991) 中的）和AHo編號方案（Honegger A. 和Plückthun A.J Mol Biol. [分子生物學雜誌] 2001年6月8日; 309 (3): 657-70）可用於本發明。給定抗體的胺基酸位置和互補決定區（CDR）和框架區（FR）可以使用任一系統標識。例如，39、44、183、356、357、360、370、392、399、和409的EU重鏈位置分別等效於AHo重鏈位置46、51、230、484、485、491、501、528、535、和551。

VL包含選自由以下組成之群組：CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

並且

VH包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。

在一個實施方式中，

VL和VH選自由以下組成之群組：

在一個實施方式中，

VL和VH選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL和包含SEQ ID NO: 6的VH；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL和包含SEQ ID NO: 10的VH；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL和包含SEQ ID NO: 14的VH；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL和包含SEQ ID NO: 18的VH；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL和包含SEQ ID NO: 22的VH；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL和包含SEQ ID NO: 26的VH；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL和包含SEQ ID NO: 30的VH；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL和包含SEQ ID NO: 34的VH；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL和包含SEQ ID NO: 38的VH；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL和包含SEQ ID NO: 42的VH；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL和包含SEQ ID NO: 46的VH；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL和包含SEQ ID NO: 50的VH；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL和包含SEQ ID NO: 54的VH。

在一個實施方式中，第二抗原係腫瘤相關抗原（TAA）。

根據本發明之抗體構建體係全長抗體的片段，如VH、VHH、VL、(s)dAb、Fv、Fd、Fab、Fab’、F(ab')2或「r IgG」（「半抗體」）。根據本發明之抗體構建體還可以包括抗體的經修飾的片段（也稱為抗體變體，如scFv、二scFv或雙(s)-scFv、scFv-Fc、scFv-拉鍊、scFab、Fab2、Fab3、雙抗體、單鏈雙抗體、串聯雙抗體（Tandab）、串聯二scFv、串聯三scFv）、「微型抗體」（其由如下結構示例：(VH-VL-CH3)2、(scFv-CH3)2、((scFv)2-CH3 + CH3)、((scFv)2-CH3)或(scFv-CH3-scFv)2）、多體抗體（multibody）如三抗體（triabody）或四抗體（tetrabody）、和單結構域抗體（如奈米抗體或僅包含一個可變結構域的單可變結構域抗體，該結構域可為VHH、VH或VL，它獨立於其他V區或結構域而特異性地結合抗原或表位）。另外，包括在「抗體構建體」的定義內的是多特異性分子，該多特異性分子包含多種類型的抗體和抗體構建體，例如包含與IgG或IgG-Fab連接的scFv、包含與IgG連接的Fab片段的IgG-scFv。在一個實施方式中，將連接至免疫球蛋白重鏈的scFv稱為「重鏈融合蛋白」。在其他實施方式中，連接至免疫球蛋白重鏈的VH-CH1多肽稱為「重鏈融合蛋白」。

「結合結構域」或「抗原結合結構域」典型地可以包含抗體輕鏈可變區（VL）和抗體重鏈可變區（VH）；然而，它不一定包含兩者。例如，Fd片段具有兩個VH區並且通常保留完整抗原結合結構域的一些抗原結合功能。抗體片段、抗體變體或結合結構域的形式的另外實例包括 (1) Fab片段，一種具有VL、VH、CL和CH1結構域的單價片段；(2) F(ab')₂ 片段，一種具有由二硫橋在鉸鏈區連接的兩個Fab片段的雙價片段；(3) 具有兩個VH和CH1結構域的Fd片段；(4) 具有抗體的單一臂的VL和VH結構域的Fv片段；(5) 具有VH結構域的dAb片段（Ward等人, (1989) Nature [自然] 341: 544-546）；(6) 分離的互補決定區（CDR），和 (7) 單鏈Fv（scFv），後者係較佳的（例如，衍生自scFV文庫）。根據本發明之抗體構建體的實施方式之實例例如描述於以下中：WO 00/006605、WO 2005/040220、WO 2008/1 19567、WO 2010/037838、WO 2013/026837、WO 2013/026833、US 2014/0308285、US 2014/0302037、W 02014/144722、WO 2014/151910、和WO 2015/048272。

此外，術語「抗體構建體」的定義包括單價、二價和多價（polyvalent/multivalent）構建體，並且由此包括特異性地結合至僅一個抗原性結構的單特異性構建體，以及通過獨特的結合結構域特異性地結合多於一個（例如，兩個、三個或更多個）抗原性結構的雙特異性和多特異性構建體。此外，術語「抗體構建體」的定義包括由僅一條多肽鏈組成的分子以及由多於一條多肽鏈組成的分子，該等鏈可以相同（同二聚體、同三聚體或同寡聚體）或不同（異二聚體、異三聚體或異寡聚體）。上文鑒定的抗體及其變體或衍生物的實例尤其描述於以下中：Harlow和Lane, Antibodies a laboratory manual [抗體：實驗室手冊], CSHL Press [冷泉港實驗室出版社] (1988) 和Using Antibodies: a laboratory manual [使用抗體：實驗室手冊], CSHL Press [冷泉港實驗室出版社] (1999)；Kontermann和Dubel, Antibody Engineering [抗體工程], Springer [施普林格], 第2版2010和Little, Recombinant Antibodies for Immunotherapy [用於免疫療法的重組抗體], Cambridge University Press [劍橋大學出版社] 2009。

本發明之抗體構建體較佳的是「體外產生的抗體構建體」。此術語係指根據上述定義的抗體構建體，其中在非免疫細胞選擇中生成全部或部分可變區（例如，至少一個CDR），例如體外噬菌體展示、蛋白質晶片或可以測試候選序列結合抗原的能力的任何其他方法。因此，該術語較佳的排除僅藉由動物的免疫細胞中的基因組重排生成的序列。「重組抗體」係通過使用重組DNA技術或基因工程制得的抗體。

(i) 含有兩個輕鏈和兩個重鏈的第一抗體，其中

輕鏈包含第一可變區（VL1）和輕鏈恒定區（CL）；

重鏈包含第一重可變區（VH1）和CH1、鉸鏈、CH2、和CH3區；

其中該第一抗體特異性地結合至並激動人CD40（SEQ ID NO: 1），並且該scFv特異性地結合至人間皮素（MSLN）（SEQ ID NO: 2）。

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；

VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；

分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；

分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及

分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；

並且VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。

在一個實施方式中，1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

在一個實施方式中，

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL1和包含SEQ ID NO: 6的VH1；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL1和包含SEQ ID NO: 10的VH1；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL1和包含SEQ ID NO: 14的VH1；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL1和包含SEQ ID NO: 18的VH1；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL1和包含SEQ ID NO: 22的VH1；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL1和包含SEQ ID NO: 26的VH1；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL1和包含SEQ ID NO: 30的VH1；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL1和包含SEQ ID NO: 34的VH1；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL1和包含SEQ ID NO: 38的VH1；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL1和包含SEQ ID NO: 42的VH1；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL1和包含SEQ ID NO: 46的VH1；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL1和包含SEQ ID NO: 50的VH1；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL1和包含SEQ ID NO: 54的VH1；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 213的VL2和包含SEQ ID NO: 214的VH2；

b) 包含SEQ ID NO: 217的VL2和包含SEQ ID NO: 218的VH2；

c) 包含SEQ ID NO: 221的VL2和包含SEQ ID NO: 222的VH2；以及

d) 包含SEQ ID NO: 225的VL2和包含SEQ ID NO: 226的VH2。

在一個實施方式中，

分別是SEQ ID NO: 286和SEQ ID NO: 285；

分別是SEQ ID NO: 290和SEQ ID NO: 289；

分別是SEQ ID NO: 294和SEQ ID NO: 293；

分別是SEQ ID NO: 298和SEQ ID NO: 297；

分別是SEQ ID NO: 302和SEQ ID NO: 301；

分別是SEQ ID NO: 306和SEQ ID NO: 305；

分別是SEQ ID NO: 310和SEQ ID NO: 309；

分別是SEQ ID NO: 314和SEQ ID NO: 313；

分別是SEQ ID NO: 318和SEQ ID NO: 317；

分別是SEQ ID NO: 322和SEQ ID NO: 321；

分別是SEQ ID NO: 326和SEQ ID NO: 325；

分別是SEQ ID NO: 330和SEQ ID NO: 329；

分別是SEQ ID NO: 334和SEQ ID NO: 333；

分別是SEQ ID NO: 338和SEQ ID NO: 337；

分別是SEQ ID NO: 342和SEQ ID NO: 341；

分別是SEQ ID NO: 346和SEQ ID NO: 345；

分別是SEQ ID NO: 350和SEQ ID NO: 349；

分別是SEQ ID NO: 354和SEQ ID NO: 353；

分別是SEQ ID NO: 358和SEQ ID NO: 357；

分別是SEQ ID NO: 362和SEQ ID NO: 361；

分別是SEQ ID NO: 366和SEQ ID NO: 365；

分別是SEQ ID NO: 370和SEQ ID NO: 369；

分別是SEQ ID NO: 374和SEQ ID NO: 373；以及

分別是SEQ ID NO: 378和SEQ ID NO: 377。

在另一方面，本發明關於多特異性抗體構建體，該多特異性抗體構建體包含：

(i) 含有兩個輕鏈和兩個重鏈的第一抗體，其中

輕鏈包含第一可變區（VL1）和輕鏈恒定區（CL）；

重鏈包含第一重可變區（VH1）和CH1、鉸鏈、CH2、和CH3區；

在一個實施方式中：

VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；

分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；

分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及

分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；

VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；

VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

並且

VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。

在一個實施方式中，

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

在一個實施方式中：

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 213的VL1和包含SEQ ID NO: 214的VH1；

b) 包含SEQ ID NO: 217的VL1和包含SEQ ID NO: 218的VH1；

c) 包含SEQ ID NO: 221的VL1和包含SEQ ID NO: 222的VH1；以及

d) 包含SEQ ID NO: 225的VL1和包含SEQ ID NO: 226的VH1；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL2和包含SEQ ID NO: 6的VH2；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL2和包含SEQ ID NO: 10的VH2；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL2和包含SEQ ID NO: 14的VH2；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL2和包含SEQ ID NO: 18的VH2；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL2和包含SEQ ID NO: 22的VH2；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL2和包含SEQ ID NO: 26的VH2；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL2和包含SEQ ID NO: 30的VH2；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL2和包含SEQ ID NO: 34的VH2；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL2和包含SEQ ID NO: 38的VH2；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL2和包含SEQ ID NO: 42的VH2；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL2和包含SEQ ID NO: 46的VH2；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL2和包含SEQ ID NO: 50的VH2；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL2和包含SEQ ID NO: 54的VH2。

在一個實施方式中，

分別是SEQ ID NO: 382和SEQ ID NO: 381；

分別是SEQ ID NO: 386和SEQ ID NO: 385；

分別是SEQ ID NO: 390和SEQ ID NO: 389；

分別是SEQ ID NO: 394和SEQ ID NO: 393；

分別是SEQ ID NO: 398和SEQ ID NO: 397；

分別是SEQ ID NO: 402和SEQ ID NO: 401；

分別是SEQ ID NO: 406和SEQ ID NO: 405；

分別是SEQ ID NO: 410和SEQ ID NO: 409；

分別是SEQ ID NO: 414和SEQ ID NO: 413；

分別是SEQ ID NO: 418和SEQ ID NO: 417；

分別是SEQ ID NO: 422和SEQ ID NO: 421；

分別是SEQ ID NO: 426和SEQ ID NO: 425；

分別是SEQ ID NO: 430和SEQ ID NO: 429；

分別是SEQ ID NO: 434和SEQ ID NO: 433；

分別是SEQ ID NO: 438和SEQ ID NO: 437；

分別是SEQ ID NO: 442和SEQ ID NO: 441；

分別是SEQ ID NO: 446和SEQ ID NO: 445；以及

分別是SEQ ID NO: 450和SEQ ID NO: 449。

如本文所用的，術語「單株抗體」（mAb）或單株抗體構建體係指從基本上均質的抗體群體獲得的抗體，即，除了可能少量存在的可能的天然存在的突變和/或翻譯後修飾（例如，異構化、醯胺化）以外，構成該群體的單獨抗體係相同的。單株抗體具有高度特異性，針對抗原上的單一抗原性位點或決定簇，與常規（多株）抗體製劑相反，該等常規（多株）抗體製劑典型地包括針對不同決定簇（或表位）的不同抗體。除了它們的特異性之外，單株抗體的優點還在於它們藉由融合瘤培養合成，因此不被其他免疫球蛋白污染。修飾語「單株」指示抗體的特徵為，是從基本上均質的抗體群獲得，並且不應視為需要藉由任何特定方法產生抗體。

為了製備單株抗體，可以使用提供藉由連續細胞系培養產生的抗體的任何技術。例如，有待使用的單株抗體可以藉由Koehler等人, Nature [自然], 256: 495 (1975) 首次描述的融合瘤方法，或可以藉由重組DNA方法（參見，例如美國專利案號4,816,567）製備。用於產生人單株抗體的其他技術的實例包括三瘤（trioma）技術、人B細胞融合瘤技術（Kozbor, Immunology Today [今日免疫學] 4 (1983), 72）和EBV-融合瘤技術（Cole等人, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy [單株抗體和癌症療法], Alan R. Liss公司 (1985), 77-96）。

然後可以使用標準方法如酶聯免疫吸附測定（ELISA）和表面電漿共振（BIACORE™）分析來篩選融合瘤，以鑒定產生與特定抗原特異性地結合的抗體的一種或多種融合瘤。任何形式的相關抗原可用作免疫原，例如重組抗原、天然存在的形式、其任何變體或片段及其抗原肽。如在BIAcore系統中採用的表面電漿共振可以用於增加與靶抗原（MSLN或CD40）的表位結合的噬菌體抗體的效率（Schier, Human Antibodies Hybridomas [人抗體融合瘤] 7 (1996), 97-105；Malmborg, J. Immunol. Methods [免疫學方法雜誌] 183 (1995), 7-13）。

製備單株抗體的另一種示例性方法包括篩選蛋白質表現文庫，例如噬菌體展示或核糖體展示文庫。噬菌體展示例如描述於以下中：Ladner等人, 美國專利案號5,223,409；Smith (1985) Science [科學] 228: 1315-1317、Clackson等人, Nature [自然], 352: 624-628 (1991) 和Marks等人, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], 222: 581-597 (1991)。

除了使用展示文庫外，相關抗原可用於免疫非人動物，例如齧齒動物（諸如小鼠、倉鼠、兔或大鼠）。在一個實施方式中，非人動物至少包括人免疫球蛋白基因的一部分。例如，可以採用人Ig（免疫球蛋白）基因座的大片段來工程化在小鼠抗體產生方面有缺陷的小鼠品系。藉由使用融合瘤技術，可以產生和選擇源自具有所需特異性的基因的抗原特異性單株抗體。參見，例如，XENOMOUSE™、Green等人 (1994) Nature Genetics [自然遺傳學] 7: 13-21、US 2003-0070185、WO 96/34096和WO 96/33735。

單株抗體也可以從非人動物獲得，然後使用本領域已知的重組DNA技術進行修飾，例如人源化、去免疫、呈現嵌合等。修飾的抗體構建體的實例包括非人抗體的人源化變體、「親和力成熟」抗體（參見，例如Hawkins等人 J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 254, 889-896 (1992) 和Lowman等人, Biochemistry [生物化學] 30, 10832-10837 (1991)）和具有改變的一種或多種效應子功能的抗體突變體（參見，例如美國專利5,648,260、Kontermann和Dubel (2010), 上述引文和Little (2009), 上述引文）。

在免疫學中，親和力成熟係這樣的過程：藉由該過程，在免疫反應的過程中B細胞產生與抗原的親和力增加的抗體。通過反復暴露於相同抗原，宿主將產生相繼更大親和力的抗體。與天然原型類似，體外親和力成熟係基於突變和選擇的原理。體外親和力成熟已經成功地用於優化抗體、抗體構建體和抗體片段。使用輻射、化學誘變劑或易錯PCR引入CDR內的隨機突變。此外，藉由鏈改組可以增加遺傳多樣性。使用噬菌體展示等展示方法進行兩輪或三輪突變和選擇通常會產生具有低納莫耳範圍親和力的抗體片段。

抗體構建體的較佳的類型的胺基酸取代變異包括取代親本抗體（例如人源化或人抗體）的一個或多個高變區殘基。通常，選擇用於進一步開發的一種或多種所得變體相對於生成它們的親本抗體將具有改善的生物學特性。用於生成此類取代變體的便利方式包括使用噬菌體展示的親和力成熟。簡單來說，使幾個超變區位點（例如，6-7個位點）突變以在每個位點產生所有可能的胺基酸取代。由此產生的抗體變體以單價方式從絲狀噬菌體顆粒展示為與每個顆粒內包裝的M13的基因III產物的融合物。然後針對如本文所揭露的噬菌體展示的變體的生物活性（例如結合親和力）對其進行篩選。為了鑒定用於修飾的候選超變區位點，可以進行丙胺酸掃描誘變以鑒定對抗原結合有重要貢獻的超變區殘基。可替代地或另外，分析抗原-抗體複合物的晶體結構以鑒定結合結構域與例如人MSLN之間的接觸點可能是有利的。根據本文詳述的技術，此類接觸殘基和相鄰殘基係取代的候選物。一旦生成這樣的變體，對變體組進行如本文所述之篩選，並且可以選擇在一種或多種相關測定中具有優異特性的抗體以用於進一步開發。

本發明之單株抗體和抗體構建體特別包括「嵌合」抗體（免疫球蛋白），其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或亞類的抗體中的相應序列一致或同源，而一個或多個鏈的其餘部分與衍生自另一物種或屬於另一抗體類別或亞類的抗體中的相應序列一致或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現出所希望的生物活性即可（美國專利案號4,816,567；Morrison等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊], 81: 6851-6855 (1984)）。本文感興趣的嵌合抗體包括「靈長類化（primitized）」抗體，其包含源自非人靈長類動物（例如，舊大陸猴（Old World Monkey）、猿等）的可變結構域抗原結合序列和人恒定區序列。已經描述了多種製備嵌合抗體之方法。參見，例如Morrison等人, Proc. Natl. Acad. ScL U.S.A. [美國國家科學院院刊] 81: 6851, 1985；Takeda等人, Nature [自然] 314: 452, 1985；Cabilly等人, 美國專利案號4,816,567；Boss等人, 美國專利案號4,816,397；Tanaguchi等人, EP 0171496；EP 0173494；和GB 2177096。

抗體、抗體構建體、抗體片段或抗體變體還可以藉由例如WO 98/52976或WO 00/34317中揭露的方法特定地缺失人T細胞表位（稱為「去免疫」的方法）來進行修飾。簡而言之，可以針對與II類MHC結合的肽分析抗體的重鏈和輕鏈可變結構域；該等肽代表潛在的T細胞表位（如WO 98/52976和WO 00/34317中所定義）。為了檢測潛在T細胞表位，可以應用稱為「肽穿線」的電腦建模方法，並且此外針對VH和VL序列中存在的模體，可以搜索人MHC II類結合肽的數據庫，如WO 98/52976和WO 00/34317中所述。該等模體與18種主要的MHC II類DR同種異型中的任一種結合，並且因此構成潛在T細胞表位。檢測到的潛在T細胞表位可以藉由取代可變結構域中的少量胺基酸殘基，或者較佳的藉由單個胺基酸取代來消除。典型地，進行保守取代。通常但非唯一地，可以使用人種系抗體序列中的位置所共有的胺基酸。人種系序列例如揭露於以下中：Tomlinson等人 (1992) J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 227: 776-798；Cook, G.P. 等人 (1995) Immunol. Today [今日免疫學] 第16卷 (5): 237-242；和Tomlinson等人 (1995) EMBO J. [歐洲分子生物學學會雜誌] 14: 14: 4628-4638。V BASE目錄提供了人免疫球蛋白可變區序列的綜合目錄（由Tomlinson, LA. 等人編輯 MRC Centre for Protein Engineering [醫學研究理事會蛋白質工程中心], Cambridge, UK [英國劍橋]）。該等序列可用作例如框架區和CDR的人序列的來源。也可以使用共有的人框架區，例如如美國專利案號6,300,064中所述。

「人源化」抗體、抗體構建體、其變體或片段（如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗體的其他抗原結合子序列）係大多數人序列的抗體或免疫球蛋白，其含有一個或多個源自非人免疫球蛋白的最小序列。在大多數情況下，人源化抗體係人免疫球蛋白（受體抗體），其中來自受體的高變區（也稱CDR）之殘基被來自非人（例如齧齒動物）物種（如小鼠、大鼠、倉鼠或兔）的具有所需特異性、親和力和容量的高變區（供體抗體）的殘基替代。在一些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架區（FR）殘基被相應的非人殘基替代。此外，如本文所用的「人源化抗體」也可以包含在受體抗體或供體抗體中都未發現的殘基。進行該等修飾以進一步改進和優化抗體性能。人源化抗體還可以包含典型地是人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定區（Fc）的至少一部分。對於更多的細節，參見Jones等人, Nature [自然], 321: 522-525 (1986)；Reichmann等人, Nature [自然], 332: 323-329 (1988)；和Presta, Curr. Op. Struct. Biol. [結構生物學新見], 2: 593-596 (1992)。

可以藉由用來自人Fv可變結構域的等價序列替代不直接參與抗原結合的Fv可變結構域的序列來生成人源化抗體或其片段。用於產生人源化抗體或其片段的示例性方法由以下提供：Morrison (1985) Science [科學] 229: 1202-1207；Oi等人 (1986) BioTechniques [生物技術] 4: 214；以及US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,693,762；US 5,859,205；和US 6,407,213。那些方法包括分離、操作和表現編碼來自重鏈或輕鏈中的至少一種的全部或部分免疫球蛋白Fv可變結構域的核酸序列。這種核酸可以如上所述藉由產生針對預定靶標的抗體從融合瘤獲得以及從其他來源獲得。然後可以將編碼人源化抗體分子的重組DNA選殖至合適的表現載體中。

人源化抗體也可以使用轉基因動物如表現人重鏈和輕鏈基因但不能表現內源小鼠免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因的小鼠產生。Winter描述了可用於製備本文所述之人源化抗體的示例性CDR移植方法（美國專利案號5,225,539）。特定人抗體的全部CDR可以用至少一部分非人CDR替換，或者僅一些CDR可以用非人CDR替換。僅需要替代人源化抗體與預定抗原結合所需的CDR數量。

可以藉由引入保守取代、一致序列取代、種系取代和/或回復突變來優化人源化抗體。此類經改變的免疫球蛋白分子可以藉由幾種本領域已知的技術中的任一種來製備（例如，Teng等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國國家科學院院刊], 80: 7308-7312, 1983；Kozbor等人, Immunology Today [今日免疫學], 4: 7279, 1983；Olsson等人, Meth. Enzymol. [酶學方法], 92: 3-16, 1982；和EP 239 400）。

術語「人抗體」、「人抗體構建體」和「人結合結構域」包括具有抗體區的抗體、抗體構建體和結合結構域，該等抗體區諸如基本上對應於本領域中已知的人種系免疫球蛋白序列的可變和恒定區或結構域，包括例如由Kabat等人 (1991)（上述引文）描述的那些。本發明之人抗體、抗體構建體或結合結構域可以包含例如CDR中且特別是CDR3中不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基（例如，藉由體外隨機或位點特異性誘變或藉由體內體細胞突變引入的突變）。人抗體、抗體構建體或結合結構域可以具有至少一個、兩個、三個、四個、五個或更多個被胺基酸殘基替換的位置，該胺基酸殘基不由人種系免疫球蛋白序列編碼。然而，如本文所用的人抗體、抗體構建體和結合結構域的定義還涵蓋「完全人抗體」，該等完全人抗體僅包含非人工和/或遺傳改變的人抗體序列，如可藉由使用諸如Xenomouse技術或系統衍生的那些。

在一些實施方式中，本發明之抗體構建體係「分離的」或「基本上純的」抗體構建體。在用於描述本文所揭露的抗體構建體時，「分離的」或「基本上純的」意味著抗體構建體已經從其產生環境的組分鑒定、分離和/或回收。較佳的是，抗體構建體不含來自其生產環境的所有其他組分或基本上不與來自其生產環境的所有其他組分相關。其生產環境的污染組分（如由重組轉染細胞產生的污染組分）係通常會干擾多肽的診斷或治療用途的物質，並且該物質可包括酶、激素和其他蛋白質或非蛋白質溶質。按重量計，抗體構建體可以例如占給定樣本中總蛋白質的至少約5%或至少約50%。應當理解，按重量計，分離的蛋白質可根據情況占總蛋白質含量的5%至99.9%。可以通過使用誘導型啟動子或高表現啟動子以製備顯著更高濃度的多肽，使得製備增加的濃度水平之多肽。該定義包括在本領域已知的多種生物和/或宿主細胞中產生抗體構建體。在較佳的實施方式中，將抗體構建體 (1) 純化至足以藉由使用旋轉杯定序儀獲得至少15個N-末端或內部胺基酸序列殘基的程度，或 (2) 藉由SDS-PAGE在非還原或還原條件下使用考馬斯藍或較佳的銀染色來純化至均勻。然而，通常，分離的抗體構建體藉由至少一個純化步驟來製備。

術語「結合結構域」關於本發明表徵了（特異性地）與靶分子（抗原）（此處：分別為MSLN和CD40）上的給定靶表位或給定靶側結合/相互作用/識別該給定靶表位或給定靶側的結構域。一個結合結構域（識別MSLN）的結構和功能以及較佳的是還有另一個結合結構域（識別CD40）的結構和/或功能係基於抗體（例如，全長或完整免疫球蛋白分子）的結構和/或功能。根據本發明，結合結構域的特徵在於，三個輕鏈CDR（即，VL區的CDRL1、CDRL2和CDRL3）和三個重鏈CDR（即，VH區的CDRH1、CDRH2和CDRH3）的存在。設想結合結構域由噬菌體展示或文庫篩選方法產生或可藉由噬菌體展示或文庫篩選方法獲得，而不是藉由將CDR序列從預先存在的（單株）抗體移植到支架中產生或獲得。根據本發明，結合結構域呈一種或多種多肽的形式。此類多肽可包括蛋白質部分和非蛋白質部分（例如化學連接子或化學交聯劑，如戊二醛）。蛋白質（包括其片段、較佳的生物活性片段，以及通常具有少於30個胺基酸的肽）包含經由共價肽鍵彼此偶合的兩個或更多個胺基酸（產生胺基酸鏈）。如本文所用的，術語「多肽」描述了一組分子，其通常由多於30個胺基酸組成。多肽可以進一步形成多聚體，如二聚體、三聚體和更高級的寡聚體，即由多於一種多肽分子組成。形成這種二聚體、三聚體等的多肽分子可以相同或不同。因此，將此類多聚體的相應較高階結構稱為同二聚體或異二聚體、同三聚體或異三聚體等。異多聚體之實例係抗體分子，其在其天然存在的形式中由兩條相同的輕多肽鏈和兩條相同的重多肽鏈組成。術語「肽」、「多肽」和「蛋白質」還係指天然修飾的肽/多肽/蛋白質，其中該修飾係藉由例如翻譯後修飾（如糖基化、乙醯化、磷酸化等）來實現。當在本文中提及時，「肽」、「多肽」或「蛋白質」也可為化學修飾的，如聚乙二醇化的。此類修飾在本領域中係熟知的並且在下文中描述。

較佳的是，與MSLN結合的結合結構域和/或與CD40結合的結合結構域係人結合結構域。包含至少一種人結合結構域的抗體和抗體構建體避免了與具有非人如齧齒動物（例如鼠、大鼠、倉鼠或兔）可變區和/或恒定區的抗體或抗體構建體相關的一些問題。這種齧齒動物來源的蛋白質的存在可以導致抗體或抗體構建體的快速清除，或者可以導致患者生成針對抗體或抗體構建體的免疫反應。為了避免使用齧齒動物衍生的抗體或抗體構建體，可以通過將人抗體功能引入到齧齒動物中以使齧齒動物產生完全人抗體來產生人或完全人抗體/抗體構建體。

在YAC中選殖和重建兆鹼基大小的人基因座並將它們引入小鼠種系的能力提供了一種強有力的方法，用於闡明非常大或粗略作圖的基因座的功能組分以及生成有用的人疾病模型。此外，使用這種技術將小鼠基因座取代為其人類等同物可以提供關於對人類基因產物在發育期間的表現和調節、它們與其他系統的交流以及它們參與疾病誘導和進展的獨特見解。

這種策略的重要實際應用係小鼠體液免疫系統的「人源化」。將人免疫球蛋白（Ig）基因座引入其中內源Ig基因已經失活的小鼠中提供了研究抗體的程式化表現和組裝的機制以及它們在B細胞發育中的作用的機會。此外，這種策略可以為完全人單株抗體（mAb）的產生提供理想來源-這係有助於實現抗體療法在人疾病中的前景的重要里程碑。預期完全人抗體或抗體構建體將小鼠或小鼠衍生的mAb所固有的免疫性和變應性反應最小化，並且由此增加投與的抗體/抗體構建體的功效和安全性。可以預期使用完全人抗體或抗體構建體在治療需要重複化合物投與的慢性和復發性人類疾病如炎症、自體免疫和癌症方面提供了顯著優勢。

實現該目標的一種方法係用人Ig基因座的大片段工程化在小鼠抗體產生方面有缺陷的小鼠品系，預期這樣的小鼠在沒有小鼠抗體的情況下會產生大量的人抗體。大的人Ig片段將保留大的可變基因多樣性以及對抗體產生和表現的適當調節。藉由利用小鼠的抗體多樣化和選擇機制以及缺乏對人蛋白質的免疫耐受性，該等小鼠品系中的再生人抗體庫應產生針對任何感興趣的抗原（包括人抗原）的高親和力抗體。通過使用融合瘤技術，可以容易地產生和選擇具有所需特異性的抗原特異性人mAb。這種一般策略與第一代XenoMouse小鼠品系有關（參見Green等人Nature Genetics [自然遺傳學] 7: 13-21 (1994)）。用酵母人工染色體（YAC）工程化XenoMouse品系，該等酵母人工染色體分別含有人重鏈基因座和κ輕鏈基因座的245 kb和190 kb大小的種系構型片段，該等片段含有核心可變區和恒定區序列。證明含有人Ig的YAC與小鼠系統關於抗體的重排和表現係相容的，並且能夠取代失活的小鼠Ig基因。這藉由其誘導B細胞發育、產生完全人抗體的成人樣人組庫和產生抗原特異性人mAb的能力來證明。該等結果還表明，引入含有更多V基因、附加調節元件和人Ig恒定區的更大部分的人Ig基因座可能基本上概括具有感染和免疫的人體液反應特徵的完整庫。Green等人的工作最近擴展到通過分別引入人重鏈基因座和κ輕鏈基因座的兆鹼基大小的種系構型YAC片段來引入大於約80%的人抗體庫。參見Mendez等人Nature Genetics [自然遺傳學] 15: 146-156 (1997) 和美國專利申請序號08/759,620。

XenoMouse小鼠的產生進一步論述和描繪於以下中：美國專利申請序號07/466,008、序號07/610,515、序號07/919,297、序號07/922,649、序號08/031,801、序號08/112,848、序號08/234,145、序號08/376,279、序號08/430,938、序號08/464,584、序號08/464,582、序號08/463,191、序號08/462,837、序號08/486,853、序號08/486,857、序號08/486,859、序號08/462,513、序號08/724,752、和序號08/759,620；和美國專利案號6,162,963；6,150,584；6,114,598；6,075,181和5,939,598以及日本專利案號3 068 180 B2、3 068 506 B2、和3 068 507 B2。還參見Mendez等人Nature Genetics [自然遺傳學] 15: 146-156 (1997) 和Green和Jakobovits J. Exp. Med. [實驗醫學雜誌] 188:483-495 (1998)、EP 0 463 151 B1、WO 94/02602、WO 96/34096、WO 98/24893、WO 00/76310和WO 03/47336。

在一種替代方法中，其他公司（包括GenPharm國際公司）利用了「微基因座」方法。在迷你基因座方法中，通過包含來自Ig基因座的碎片（單獨基因）來模擬外源Ig基因座。因此，一個或多個VH基因、一個或多個DH基因、一個或多個JH基因、mu恒定區和第二恒定區（較佳的γ恒定區）形成用於插入動物中的構建體。此方法描述於以下中：Surani等人的美國專利案號5,545,807和美國專利案號5,545,806；5,625,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016；5,770,429；5,789,650；5,814,318；5,877,397；5,874,299；和6,255,458（各自為Lonberg和Kay）、Krimpenfort和Berns的美國專利案號5,591,669和6,023.010、Berns等人的美國專利案號5,612,205；5,721,367；和5,789,215、以及Choi和Dunn的美國專利案號5,643,763、以及GenPharm國際美國專利申請序號07/574,748、序號07/575,962、序號07/810,279、序號07/853,408、序號07/904,068、序號07/990,860、序號08/053,131、序號08/096,762、序號08/155,301、序號08/161,739、序號08/165,699、序號08/209,741中。還參見EP 0 546 073 B1、WO 92/03918、WO 92/22645、WO 92/22647、WO 92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO 96/14436、WO 97/13852、和WO 98/24884以及美國專利案號5,981,175。進一步參見Taylor等人 (1992)，Chen等人 (1993)，Tuaillon等人 (1993)，Choi等人 (1993)，Lonberg等人 (1994)，Taylor等人 (1994)，以及Tuaillon等人 (1995)，Fishwild等人 (1996)。

Kirin還證明了從小鼠中生成人抗體，在該小鼠中通過微細胞融合已經引入了大的染色體碎片或整個染色體。參見歐洲專利申請案號773 288和843 961。Xenerex生物科學正在開發一種可能生成人抗體的技術。在這種技術中，用人淋巴細胞（例如B和/或T細胞）重構SCID小鼠。然後用抗原免疫小鼠並可以生成針對抗原的免疫反應。參見美國專利案號5,476,996；5,698,767；和5,958,765。

人抗小鼠抗體（HAMA）反應已引導該行業製備嵌合抗體或其他人源化抗體。然而，預期將觀察到特別是在抗體的長期或多劑量利用中某些人抗嵌合抗體（HACA）反應。因此，期望提供抗體構建體，該等抗體構建體包含針對MSLN的人結合結構域和針對CD40的人結合結構域以便消除HAMA或HACA反應的問題和/或效應。

術語「與……（特異性）結合」、「（特異性）識別」、「（特異性）針對」和「與……（特異性）反應」意指根據本發明，結合結構域與靶分子（抗原）（此處：分別為MSLN和CD40）上的給定表位或給定位點相互作用或特異性相互作用。

術語「表位」係指抗原上的位點，該抗原係結合結構域如抗體或免疫球蛋白或者抗體或免疫球蛋白的衍生物、片段或變體所特異性地結合的。「表位」係抗原性的，因此術語表位有時在本文中也稱為「抗原結構」或「表位」。因此，結合結構域係「抗原相互作用位點」。所述結合/相互作用也被理解為定義為「特異性識別」。

「表位」可以由連續胺基酸或藉由蛋白質的三級折疊並置的非連續胺基酸形成。「線性表位」係胺基酸一級序列包含識別的表位。線性表位通常包括獨特序列中的至少3個或至少4個、以及更通常至少5個或至少6個或至少7個例如約8個至約10個胺基酸。

與線性表位相反，「構象表位」係如下表位，其中構成表位的一級胺基酸序列並非所識別表位的唯一定義性組分（例如，其中一級胺基酸序列不一定被結合結構域識別的表位）。典型地，構象表位相對於線性表位包含增加數量的胺基酸。關於構象表位的識別，結合結構域識別抗原的三維結構，較佳的肽或蛋白質或其片段（在本發明之上下文中，一種結合結構域的抗原結構包含在MSLN蛋白內）。例如，當蛋白質分子折疊形成三維結構時，形成構象表位的某些胺基酸和/或多肽骨架被並置，使得抗體能夠識別表位。確定表位構象的方法包括但不限於X射線晶體學、二維核磁共振（2D-NMR）光譜和定點自旋標記和電子順磁共振（EPR）光譜。

以下描述了用於表位定位之方法：當人MSLN蛋白中的區（連續胺基酸拉伸物）與其非人和非靈長類動物MSLN抗原（例如小鼠MSLN，但其他如雞、大鼠、倉鼠、兔等也是可能的）的相應區交換或替換時，預期發生結合結構域結合的降低，除非結合結構域對於所使用的非人、非靈長類動物MSLN具有交叉反應性。相比於與人MSLN蛋白中的對應區的結合，所述降低較佳的是至少10%、20%、30%、40%或50%；更較佳的至少60%、70%或80%，並且最較佳的90%、95%或甚至100%，由此將與人MSLN蛋白中對應區的結合設定為100%。設想前述人MSLN/非人MSLN嵌合體在CHO細胞中表現。人MSLN/非人MSLN嵌合體也可以與不同膜結合蛋白（如EpCAM）的跨膜結構域和/或細胞質結構域融合，儘管此技術對於實例1和2中所述之方法不是必需的。

在用於表位定位的替代或額外的方法中，可以產生幾種截短形式的人MSLN細胞外結構域以便確定由結合結構域識別的特異性區。在該等截短形式中，不同的細胞外MSLN結構域/亞結構域或區從N末端開始逐步缺失。截短的MSLN形式可在CHO細胞中表現。還設想截短的MSLN形式可以與不同膜結合蛋白（諸如EpCAM）的跨膜結構域和/或細胞質結構域融合。還設想截短的MSLN形式可以在其N末端涵蓋訊息肽結構域，例如衍生自小鼠IgG重鏈訊息肽的訊息肽。此外設想，截短的MSLN形式可以在其N末端（在訊息肽後）涵蓋v5結構域，這允許驗證其在細胞表面上的正確表現。預期對不再涵蓋由結合結構域識別的MSLN區的那些截短的MSLN形式發生結合的減少或喪失。結合降低較佳的是為至少10%、20%、30%、40%、50%；更較佳的是至少60%、70%、80%，並且最較佳的是90%、95%或甚至100%，由此將與整個人MSLN蛋白（或其細胞外區域或結構域）的結合設定為100%。

確定靶抗原的特定殘基對抗體構建體或結合結構域的識別的貢獻的另一種方法係丙胺酸掃描（參見，例如Morrison KL和Weiss GA. Cur Opin Chem Biol. [化學生物學新見] 2001年6月; 5 (3): 302-7），其中有待分析的每個殘基例如經由定點誘變被丙胺酸替換。丙胺酸的使用係因為其具有非巨大的、化學惰性的甲基官能基，但仍然模仿許多其他胺基酸所具有的二級結構參考。在需要保守突變殘基的大小的情形下，有時可以使用巨大的胺基酸（如纈胺酸或白胺酸）。丙胺酸掃描係一項已經使用了很長一段時間的成熟技術。

結合結構域與表位或包含表位的區之間的相互作用意味著結合結構域對特定蛋白或抗原（此處：分別為MSLN和CD40）上的表位/包含表位的區表現出可觀的親和力，並且通常與MSLN或CD40以外的蛋白質或抗原不表現出顯著反應性。「可觀的親和力」包括以約10^-6 M（KD）或更強的親和力結合。較佳的是，當結合親和力為約10^-12 至1^0-8 M、10^-12 至10^-9 M、10^-12 至10^-10 M、10^-11 至10^-8 M，較佳的約10^-11 至10^-9 M時，結合被認為係特異性的。結合結構域係否與靶標特異性地反應或結合可以尤其藉由以下方式容易地測試：比較所述結合結構域與靶蛋白或抗原的反應與所述結合結構域與除MSLN或CD40之外的蛋白質或抗原的反應。較佳的是，本發明之結合結構域基本上或基本上不與MSLN或CD40以外的蛋白質或抗原結合（例如，一個結合結構域不能與MSLN以外的蛋白質結合，並且其他結合結構域不能與CD40以外的蛋白質結合）。

術語「基本上/基本上不結合」或「不能結合」意指本發明之結合結構域不結合MSLN或CD40以外的蛋白質或抗原，即與MSLN或CD40以外的蛋白質或抗原不顯示超過30%、較佳的不超過20%、更較佳的不超過10%、特別較佳的不超過9%、8%、7%、6%或5%的反應性，由此將與MSLN或CD40的結合分別設定為100%。

認為特異性結合受結合結構域和抗原的胺基酸序列中的特定模體的影響。因此，由於它們的一級、二級和/或三級結構以及所述結構的二次修飾的結果，實現了結合。抗原相互作用位點與其特異性抗原的特異性相互作用可以導致所述位點與抗原的簡單結合。此外，抗原相互作用位點與其特異性抗原的特異性相互作用可以可替代地或另外地導致訊息的引發，例如由於誘導抗原構象變化、抗原寡聚化等所致。

抗體的Fc區與多個Fc受體和配體相互作用，賦予一系列重要的功能性性能（稱為效應子功能）。對於IgG，Fc區包含Ig結構域CH2和CH3。IgG同型的Fc受體的重要家族係Fcγ受體（FcγR）。該等受體介導抗體與免疫系統細胞臂之間的通信。在人中，此蛋白質家族包括FcγRI（CD64），包括同種型（isoforms）FcγRIa、FcγRIb、和FcγRIc；FcγRII（CD32），包括同種型FcγRlla（包括同種異型H131和R131）、FcγRllb（包括FcγRllb-1和FcγRllb-2）、和FcγRllc；和FcγRIII（CD16），包括同種型FcγRllla（包括同種異型V158和F158）和FcγRlllb（包括同種異型FcγRlilb-NA1和FcγRlllb-NA2）（Jefferis等人., 2002, Immunol Lett [免疫學通訊] 82: 57-65）。該等受體通常具有細胞外結構域（介導與Fc的結合）、跨膜區域、和細胞內結構域（可介導細胞內一些傳訊事件）。該等受體在多種免疫細胞中表現，該等免疫細胞包括單核細胞、巨噬細胞、嗜中性球、樹突狀細胞、嗜酸性球、肥胖細胞、血小板、B細胞、大顆粒淋巴細胞、蘭格漢氏細胞（Langerhans' cell）、自然殺傷（NK）細胞和γδT細胞。Fc/FcγR複合物的形成將該等效應細胞募集到結合抗原的位點，通常導致細胞內的傳訊事件和重要的後續免疫反應，如炎症介質的釋放、B細胞激活、內吞作用、吞噬作用和細胞毒性攻擊。介導細胞毒性和吞噬效應子功能的能力係抗體破壞靶細胞的潛在機制。其中表現FcγR的非特異性細胞毒性細胞識別靶細胞上結合的抗體並且隨後導致靶細胞裂解的細胞介導的反應稱為抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）。其中表現FcγR的非特異性細胞毒性細胞識別靶細胞上結合的抗體並且隨後導致靶細胞的吞噬作用的細胞介導的反應稱為抗體依賴性細胞介導的吞噬（ADCP）。

不同的IgG亞類對FcγR具有不同的親和力，IgG1和IgG3與受體的結合通常比IgG2和IgG4更好。所有的FcγRs都結合IgG Fc上的相同區域，但親和力不同：高親和力的結合劑FcγRI對於lgG1具有10-8 M-1的Kd，而低親和力受體FcγRII和FcγRIII通常分別在10-6和10-5結合。

藉由如本文所用的「Fcγ受體」或「FcγR」來表示結合IgG抗體Fc區並基本上由FcγR基因編碼的蛋白質家族的任何成員。在人中，該家族包括但不限於FcγRI（CD64），包括同種型FcγRIa、FcγRIb、和FcγRIc；FcγRII（CD32），包括同種型FcγRlla（包括同種異型H131和R131）、FcγRllb（包括FcγRllb-1和FcγRllb-2）、和FcγRllc；和FcγRIII（CD16），包括同種型FcγRllla（包括同種異型V158和F158）和FcγRlllb（包括同種異型FcγRlllb-NA1和FcγRlllb-NA2）（Jefferis等人., 2002, Immunol Lett [免疫學通訊]82: 57-65），以及任何未發現的人FcγRs或FcγR同種型或同種異型。FcγR可以來自任何生物，包括但不限於人、小鼠、大鼠、兔和猴。小鼠FcγRs包括但不限於FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）、FcγRIII（CD16）、和FcγRIII-2（CD16-2），以及任何未發現的小鼠FcγRs或FcγR同種型或同種異型。

可藉由確定抗體對FcγR的親和力來直接進行與FcγR的結合。或者可以藉由在基於細胞的測定中測量細胞介素的釋放來間接確定結合。

為了促進特定重鏈與其同源輕鏈的締合，重鏈和輕鏈都可以包含互補性胺基酸取代。如本文所用的，「互補性胺基酸取代」係指一個鏈中帶正電的胺基酸的取代與另一個鏈中帶負電的胺基酸的取代配對。例如，在一些實施方式中，重鏈包含至少一個胺基酸取代以引入帶電胺基酸，並且相應的輕鏈包含至少一個胺基酸取代以引入帶電胺基酸，其中引入重鏈的帶電胺基酸具有與引入輕鏈的胺基酸相反的電荷。在某些實施方式中，可以將一個或多個帶正電的殘基（例如離胺酸、組胺酸或精胺酸）引入第一輕鏈（LC1）並且可以將一個或多個帶負電的殘基（例如天冬胺酸或麩胺酸）引入LC1/HC1結合介面處的相伴重鏈（HC1），而可以將一個或多個帶負電的殘基（例如，天冬胺酸或麩胺酸）引入第二輕鏈（LC2）中，並且可以將一個或多個帶正電的殘基（例如，離胺酸、組胺酸或精胺酸）引入LC2/HC2結合介面處的相伴重鏈（HC2）中。當介面處相反的帶電殘基（極性）吸引時，靜電相互作用將引導LC1與HC1成對，LC2與HC2成對。在介面處具有相同帶電殘基（極性）的重/輕鏈對（例如LC1/HC2和LC2/HC1）將排斥，導致抑制不需要的HC/LC配對。

在該等和其他實施方式中，重鏈的CH1結構域或輕鏈的CL結構域包含與野生型IgG胺基酸序列不同的胺基酸序列，使得野生型IgG胺基酸序列中的一個或多個帶正電的胺基酸被一個或多個帶負電的胺基酸替換。可替代地，重鏈的CH1結構域或輕鏈的CL結構域包含與野生型IgG胺基酸序列不同的胺基酸序列，使得野生型IgG胺基酸序列中的一個或多個帶負電的胺基酸被一個或多個帶正電的胺基酸替換。在一些實施方式中，多特異性抗體構建體中的第一和/或第二重鏈的CH1結構域中在選自F126、P127、L128、A141、L145、K147、D148、H168、F170、P171、V173、Q175、S176、S183、V185和K213的EU位置處的一個或多個胺基酸被帶電胺基酸替換。在某些實施方式中，用帶負電或正電的胺基酸取代的重鏈殘基係S183（EU編號系統）。在一些實施方式中，S183被帶正電的胺基酸取代。在可替代的實施方式中，S183被帶負電的胺基酸取代。例如，在一個實施方式中，S183在第一重鏈中被帶負電的胺基酸（例如S183E）取代，並且S183在第二重鏈中被帶正電的胺基酸（例如S183K）取代。

在輕鏈為κ輕鏈的實施方式中，多特異性抗體構建體中的第一和/或第二輕鏈的CL結構域中在選自F116、F118、S121、D122、E123、Q124、S131、V133、L135、N137、N138、Q160、S162、T164、S174和S176的位置（在κ輕鏈中以EU編號）處的一個或多個胺基酸被帶電胺基酸替換。在輕鏈為λ輕鏈的實施方式中，多特異性抗體構建體中的第一和/或第二輕鏈的CL結構域中在選自T116、F118、S121、E123、E124、K129、T131、V133、L135、S137、E160、T162、S165、Q167、A174、S176和Y178的位置（在λ鏈中以EU編號）處的一個或多個胺基酸被帶電胺基酸替換。在一些實施方式中，用帶負電或正電的胺基酸取代的殘基係κ或λ輕鏈的CL結構域的S176（EU編號系統）。在某些實施方式中，CL結構域的S176被帶正電的胺基酸替換。在可替代的實施方式中，CL結構域的S176被帶負電的胺基酸替換。在一個實施方式中，S176在第一輕鏈中被帶正電的胺基酸（例如S176K）取代，並且S176在第二輕鏈中被帶負電的胺基酸（例如S176E）取代。

除了CH1和CL結構域中的互補性胺基酸取代或作為替代，多特異性抗體構建體中輕鏈和重鏈的可變區可包含一個或多個互補性胺基酸取代以引入帶電胺基酸。例如，在一些實施方式中，多特異性抗體構建體的重鏈的VH區或輕鏈的VL區包含與野生型IgG胺基酸序列不同的胺基酸序列，使得野生型IgG胺基酸序列中的一個或多個帶正電的胺基酸被一個或多個帶負電的胺基酸替換。可替代地，重鏈的VH區或輕鏈的VL區包含與野生型IgG胺基酸序列不同的胺基酸序列，使得野生型IgG胺基酸序列中的一個或多個帶負電的胺基酸被一個或多個帶正電的胺基酸替換。

VH區內的V區介面殘基（即，介導VH和VL區組裝的胺基酸殘基）包括EU位置1、3、35、37、39、43、44、45、46、47、50、59、89、91和93。VH區中的該等介面殘基中的一個或多個可以被帶電（帶正電或負電）胺基酸取代。在某些實施方式中，第一和/或第二重鏈的VH區中EU位置39處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如離胺酸）取代。在可替代的實施方式中，第一和/或第二重鏈的VH區中EU位置39處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如麩胺酸）取代。在一些實施方式中，第一重鏈的VH區中的EU位置39處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如G39E）取代，並且第二重鏈的VH區中的EU位置39處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如G39K）取代。在一些實施方式中，第一和/或第二重鏈的VH區中EU位置44處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如離胺酸）取代。在可替代的實施方式中，第一和/或第二重鏈的VH區中EU位置44處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如麩胺酸）取代。在某些實施方式中，第一重鏈的VH區中的EU位置44處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如G44E）取代，並且第二重鏈的VH區中的EU位置44處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如G44K）取代。

VL區內的V區介面殘基（即，介導VH和VL區組裝的胺基酸殘基）包括EU位置32、34、35、36、38、41、42、43、44、45、46、48、49、50、51、53、54、55、56、57、58、85、87、89、90、91和100。VL區中的一個或多個介面殘基可以用帶電胺基酸（較佳的與引入同源重鏈的VH區中的那些具有相反電荷的胺基酸）取代。在一些實施方式中，第一和/或第二輕鏈的VL區中EU位置100處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如離胺酸）取代。在可替代的實施方式中，第一和/或第二輕鏈的VL區中EU位置100處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如麩胺酸）取代。在某些實施方式中，第一輕鏈的VL區中的EU位置100處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如G100K）取代，並且第二輕鏈的VL區中的EU位置100處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如G100E）取代。

可以修飾任何恒定結構域以含有以上所述之電荷對突變的一種或多種，以促進多特異性抗體構建體的正確組裝。

如本文所用的，術語「Fc區」係指免疫球蛋白重鏈的C末端區域，其可藉由木瓜酶消化完整抗體產生。免疫球蛋白的Fc區一般包含兩個恒定結構域，即CH2結構域和CH3結構域，且視需要包含CH4結構域。在某些實施方式中，Fc區係來自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4免疫球蛋白的Fc區。在一些實施方式中，Fc區包含來自人IgG1或人IgG2免疫球蛋白的CH2和CH3結構域。Fc區可以保持效應子功能，例如C1q結合、補體依賴性細胞毒性（CDC）、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）和吞噬作用。在其他實施方式中，Fc區可以修飾成降低或消除效應子功能，如本文更詳細地描述。

本文所述之多特異性抗體構建體的重鏈恒定區或Fc區可包含影響抗原結合蛋白的糖基化和/或效應子功能的一個或多個胺基酸取代。免疫球蛋白Fc區的功能之一係當免疫球蛋白結合其靶時與免疫系統通信。此通常稱為「效應子功能」。通信導致抗體依賴性細胞毒性（ADCC）、抗體依賴性細胞吞噬（ADCP）和/或補體依賴性細胞毒性（CDC）。ADCC和ADCP係經由Fc區結合至免疫系統細胞表面上的Fc受體介導。CDC係經由Fc與補體系統，例如C1q的蛋白質結合所介導。在一些實施方式中，本發明之多特異性抗體構建體在恒定區中包含一個或多個增強該抗原結合蛋白的效應子功能（包括ADCC活性、CDC活性、ADCP活性和/或清除率或半衰期）的胺基酸取代。可以增強效應子功能的示例性胺基酸取代（EU編號）包括但不限於，E233L、L234I、L234Y、L235S、G236A、S239D、F243L、F243V、P247I、D280H、K290S、K290E、K290N、K290Y、R292P、E294L、Y296W、S298A、S298D、S298V、S298G、S298T、T299A、Y300L、V305I、Q311M、K326A、K326E、K326W、A330S、A330L、A330M、A330F、I332E、D333A、E333S、E333A、K334A、K334V、A339D、A339Q、P396L或前述中任何的組合。

在其他實施方式中，本發明之多特異性抗體構建體在恒定區中包含一個或多個降低效應子功能的胺基酸取代。可以降低效應子功能的示例性胺基酸取代（EU編號）包括但不限於，C220S、C226S、C229S、E233P、L234A、L234V、V234A、L234F、L235A、L235E、G237A、P238S、S267E、H268Q、N297A、N297G、V309L、E318A、L328F、A330S、A331S、P331S或前述中任何的組合。

糖基化可以促進抗體，特別是IgG1抗體的效應子功能。因此，在一些實施方式中，本發明之多特異性抗體構建體包含影響結合蛋白糖基化的水平或類型的一個或多個胺基酸取代。多肽的糖基化通常是N-連接的或O-連接的。N-連接係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基的側鏈連接。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸和天冬醯胺-X-蘇胺酸（其中X係除脯胺酸之外的任何胺基酸）係碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈酶促連接的識別序列。因此，多肽中該等三肽序列中任一個的存在產生潛在的糖基化位點。O-連接糖基化係指將糖N-乙醯半乳糖胺、半乳糖或木糖之一連接到羥基胺基酸上，最通常為絲胺酸或蘇胺酸，儘管也可以使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸。

在某些實施方式中，藉由向例如結合蛋白的Fc區中添加一個或多個糖基化位點來增加本文所述之多特異性抗體構建體的糖基化。在抗原結合蛋白中添加糖基化位點通常可以藉由改變胺基酸序列，以使其含有上述三肽序列（對於N-連接的糖基化位點）中的一個或多個來實現。也可以藉由將一個或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基添加至起始序列或被一個或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基取代（對於O-連接的糖基化位點）來進行改變。為便利起見，可以藉由在DNA層面上的變化，特別是藉由使編碼靶多肽的DNA在預先選擇的鹼基處突變，由此產生會翻譯成所需胺基酸的密碼子，來改變抗原結合蛋白的胺基酸序列。

本發明還涵蓋產生具有改變的碳水化合物結構而引起效應子活性改變的多特異性抗體構建體分子，包括岩藻糖基化不存在或減少的展現改善的ADCC活性的抗原結合蛋白。本領域中已知各種減少或消除岩藻糖基化之方法。例如，藉由使抗體分子與FcγRIII受體結合來介導ADCC效應子活性，經顯示此取決於在CH2結構域N297殘基處N-連接的糖基化的碳水化合物結構。相較於天然、岩藻糖基化抗體，非岩藻糖基化抗體以增加的親和力結合此受體且更有效地觸發FcγRIII介導的效應子功能。例如，在α-1,6-岩藻糖基轉移酶已敲除的CHO細胞中重組產生非岩藻糖基化抗體使抗體具有100倍增加的ADCC活性（參見Yamane-Ohnuki等人, Biotechnol Bioeng. [生物技術及生物工程] 87 (5): 614-22, 2004）。通過降低α-1,6-岩藻糖基轉移酶或岩藻糖基化路徑中的其他酶的活性，例如通過siRNA或反義RNA處理，將細胞系工程改造以敲除一種或多種酶，或與選擇性糖基化抑制劑一起培養可以實現類似作用（參見Rothman等人，Mol Immunol. [分子免疫學] 26 (12): 1113-23, 1989）。一些宿主細胞系，例如Lec13或大鼠融合瘤YB2/0細胞系天然地產生岩藻糖基化程度較低的抗體（參見Shields等人, J Biol Chem. [生物化學雜誌] 277 (30): 26733-40, 2002；以及Shinkawa等人, J Biol Chem. [生物化學雜誌] 278 (5): 3466-73, 2003）。還已確定例如經由在過度表現GnTIII酶的細胞中重組產生抗體以增加等分碳水化合物的含量，可增加ADCC活性（參見Umana等人, Nat Biotechnol. [自然生物技術] 17 (2): 176-80, 1999）。

在其他實施方式中，藉由例如自結合蛋白的Fc區移除一個或多個糖基化位點來減少或消除本文所述之多特異性抗體構建體的糖基化。消除或改變N-連接的糖基化位點的胺基酸取代可以減少或消除抗原結合蛋白的N-連接的糖基化。在某些實施方式中，本文所述之多特異性抗體構建體包含在位置N297（EU編號）處的突變，例如N297Q、N297A或N297G。在某些實施方式中，本文所述之多特異性抗體構建體包含在位置L234和L235（EU編號），如L234A和L235A處的突變。在一個特定實施方式中，本發明之多特異性抗體構建體包含來自人IgG1抗體的具有N297G突變的Fc區。為了改善含N297突變的分子的穩定性，可以對分子的Fc區進行進一步工程改造。例如，在一些實施方式中，Fc區中的一個或多個胺基酸經半胱胺酸取代以促進二聚體狀態下二硫鍵的形成。對應於IgG1 Fc區的V259、A287、R292、V302、L306、V323或I332（EU編號）的殘基因此可以經半胱胺酸取代。在一個實施方式中，特定殘基對經半胱胺酸取代以使其優先彼此形成二硫鍵，由此限制或防止二硫鍵混亂。在某些實施方式中，對包括但不限於，A287C與L306C、V259C與L306C、R292C與V302C、以及V323C與I332C。在特定實施方式中，本文所述之多特異性抗體構建體包含來自人IgG1抗體的具有R292C和V302C突變的Fc區。在此類實施方式中，Fc區還可包含N297G突變。

(i) N297G或N297A；

(ii) L234A和L235A；和

(iii) R292C和V302C；

其中胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。

還可能希望對本發明之多特異性抗體構建體進行修飾以增加血清半衰期，例如藉由併入或添加補救受體結合表位（例如藉由使適當區域突變或藉由將該表位併入肽標籤中，接著使其與抗原結合蛋白在任一端或在中間融合，例如藉由DNA或肽合成；參見，例如WO 96/32478）或添加例如PEG或其他水溶性聚合物的分子，包括多糖聚合物。補救受體結合表位較佳的是構成這樣一種區域，其中來自Fc區中一個或兩個環的任一個或多個胺基酸殘基轉移至抗原結合蛋白中的類似位置。在一個實施方式中，來自Fc區中一個或兩個環的三個或更多個胺基酸殘基經轉移。在一個實施方式中，自Fc區（例如IgG Fc區）的CH2結構域取得表位並將其轉移至抗原結合蛋白的CH1、CH3或VH區，或超過一個此類區域。可替代地，自Fc區的CH2結構域取得表位並將其轉移至抗原結合蛋白的CL區或VL區，或這兩個區域。有關Fc變體及其與補救受體相互作用的說明，參見國際公開WO 97/34631和WO 96/32478。

在本發明之多特異性抗體構建體的某些實施方式中，位於Fc區的胺基末端的結合結構域（即，胺基末端結合結構域）係通過本文所述之肽連接子或通過免疫球蛋白鉸鏈區與Fc區的胺基末端融合的Fab片段。「免疫球蛋白鉸鏈區」指連接免疫球蛋白重鏈的CH1結構域和CH2結構域的胺基酸序列。通常將人IgG1的鉸鏈區定義為從約Glu216或約Cys226，至約Pro230的胺基酸序列。其他IgG同型的鉸鏈區可藉由將形成重鏈間二硫鍵的第一個和最後一個半胱胺酸殘基置於相同位置來與IgG1序列比對，並且對熟悉該項技術者而言係確定的。在一些實施方式中，將胺基末端結合結構域通過人IgG1鉸鏈區連接到Fc區的胺基末端。在其他實施方式中，將胺基末端結合結構域通過人IgG2鉸鏈區連接到Fc區的胺基末端。在一個實施方式中，將胺基末端結合結構域（例如Fab片段）通過Fab的CH1區的羧基末端融合至Fc區。

在本發明之重鏈融合蛋白的一些實施方式中，位於Fc區羧基末端的結合結構域（即羧基末端結合結構域）係Fab片段。在這樣的實施方式中，Fab通過肽連接子通過Fab片段的VH區的胺基末端融合或以其它方式連接到Fc區的羧基末端（例如CH3結構域的羧基末端）。因此，在一個實施方式中，Fab通過Fab的VH區的胺基末端與Fc區融合，使得所得融合蛋白從N末端到C末端包含CH2結構域、CH3結構域、肽連接子、VH區和CH1區。

將Fc區連接至羧基末端Fab的肽連接子可為本文所述之任何肽連接子。在特定實施方式中，將Fc區連接至羧基末端Fab片段的肽連接子長度為至少5個胺基酸。在其他實施方式中，將Fc區連接至羧基末端Fab片段的肽連接子長度為至少8個胺基酸。用於將Fc區連接至羧基末端Fab片段的特別合適的肽連接子係甘胺酸-絲胺酸連接子，如(Gly_x Ser)_n ，其中x = 3或4並且n = 2、3、4、5或6（SEQ ID NO: 923）。在一個實施方式中，將Fc區連接至羧基末端Fab片段的肽連接子係L10 (G₄ S)₂ 連接子（SEQ ID NO: 888）。在另一個實施方式中，將Fc區連接至羧基末端Fab片段的肽連接子係L9或G₃ SG₄ S連接子（SEQ ID NO: 924）。

在本發明之抗原結合蛋白的一些實施方式中，其中羧基末端結合結構域係Fab片段，位於Fc區胺基末端的結合結構域（即，胺基末端結合結構域）也是Fab片段。胺基末端Fab片段可通過本文所述之肽連接子或免疫球蛋白鉸鏈區融合至Fc區的胺基末端。在一些實施方式中，將胺基末端Fab片段通過人IgG1鉸鏈區連接到Fc區的胺基末端。在其他實施方式中，將胺基末端Fab片段通過人IgG2鉸鏈區連接到Fc區的胺基末端。在一個實施方式中，將胺基末端Fab片段通過Fab的CH1區的羧基末端融合至Fc區。

在一些實施方式中，本發明之多特異性抗體構建體包含與第一靶標特異性地結合的第一抗體，其中來自第二抗體（與第二靶標特異性地結合）的Fab片段的一個多肽鏈（例如重鏈（VH2-CH1））融合到第一抗體的重鏈的羧基末端。在此實施方式中的多特異性抗體構建體還包含含有來自第二抗體的Fab片段的另一半的多肽鏈（例如，輕鏈（VL2-CL））。此形式在本文中稱為「IgG-Fab」形式，並且此類型的分子的一個實施方式示意性地顯示在圖1中。因此，在某些實施方式中，本發明包括包含以下的雙特異性、多價抗原結合蛋白：(i) 來自第一抗體的輕鏈，(ii) 來自第一抗體的重鏈，其中該重鏈在其羧基末端通過肽連接子與包含第二抗體的VH-CH1結構域的第一多肽融合以形成修飾的重鏈，和 (iii) 包含第二抗體的VL-CL結構域的第二多肽。當二聚化時，多特異性抗體構建物係包含兩個修飾的重鏈、兩個輕鏈（來自第一抗體）和含有來自第二抗體的Fab片段（Fd片段）的另一半的兩個多肽鏈組成的同源六聚體（homohexamer）。在一個實施方式中，第一多肽（與重鏈的羧基末端融合）包含來自第二抗體的VH和CH1結構域，並且第二多肽包含來自第二抗體的VL和CL結構域。

可以將本文所述之電荷對突變或互補性胺基酸取代引入第一抗體（Fab 1）或第二抗體（Fab 2）的Fab區，以促進正確的重鏈-輕鏈配對。例如，在一些實施方式中，Fab1中的VL結構域的EU位置38處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如，麩胺酸）替換並且Fab1中的VH結構域的EU位置39處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如，離胺酸）替換。在其他實施方式中，Fab1中的VL結構域的EU位置38處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如，離胺酸）替換並且Fab1中的VH結構域的EU位置39處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如，麩胺酸）替換。在某些實施方式中，Fab2中的VL結構域的EU位置38處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如，麩胺酸）替換並且Fab2中的VH結構域的EU位置39處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如，離胺酸）替換。在其他實施方式中，Fab2中的VL結構域的EU位置38處之胺基酸被帶正電的胺基酸（例如，離胺酸）替換並且Fab2中的VH結構域的EU位置39處之胺基酸被帶負電的胺基酸（例如，麩胺酸）替換。

在來自第二抗體的VH-CH1區（即Fd片段）與第一抗體的重鏈融合的實施方式中，來自第一抗體的重鏈包含S183E突變（EU編號），來自第一抗體的輕鏈包含S176K突變（EU編號），來自第二抗體的輕鏈包含S176E突變（EU編號），並且來自第二抗體的Fd區（與來自第一抗體的重鏈的C末端融合）包含S183K突變（EU編號）。在其他實施方式中，來自第一抗體的重鏈包含G44E突變（EU）和S183E突變（EU編號），來自第一抗體的輕鏈包含G100K突變（EU）和S176K突變（EU編號），來自第二抗體的輕鏈包含G100E突變（EU）和S176E突變（EU編號），和來自第二抗體的Fd區（與來自第一抗體的重鏈的C末端融合）包含G44K突變（EU）和S183K突變（EU編號）。前述實例中的電荷可以顛倒，只要相應的輕鏈或重鏈上的電荷也顛倒，以使正確的重/輕鏈對具有相反的電荷。

如與VH2和第二CH1結構域有關的「對應」意指如果沒有連接子，則從第一重鏈的C末端計數VH2和第二CH1結構域的胺基酸殘基。如果有肽連接子，從肽連接子的C末端計數VH2和第二CH1結構域的胺基酸殘基。在兩種情況下均不從第一重鏈的N末端計數胺基酸殘基。具體而言，對於VH2和第二CH1結構域，計數在VH2結構域的第一胺基酸殘基處開始。使用EU或AHo慣例進行胺基酸殘基的計數。

在某些實施方式中：a) VH1包含Q39E突變並且第一CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號；b) VH2包含Q39K突變並且第二CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號；c) VL1包含Q38K突變並且第一CL結構域包含S176E突變，使用EU編號；並且d) VL2包含Q38E突變並且該第二CL結構域包含S176K突變，使用EU編號。

在某些實施方式中：a) 第一CH1結構域包含G44E和S183K突變，使用EU編號；b) 第二CH1結構域包含G44K和S183E突變，使用EU編號；c) 第一CL結構域包含G100K和S176E突變，使用EU編號；並且d) 第二CL結構域包含G100E和S176K突變，使用EU編號。

在某些實施方式中：a) VH1包含Q39K突變並且第一CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號；b) VH2包含Q39E突變並且第二CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號；c) VL1包含Q38E突變並且第一CL結構域包含S176K突變，使用EU編號；並且d) VL2包含Q38K突變並且該第二CL結構域包含S176E突變，使用EU編號。

在某些實施方式中：a) 第一CH1結構域包含G44K和S183E突變，使用EU編號；b) 第二CH1結構域包含G44E和S183K突變，使用EU編號；c) 第一CL結構域包含G100E和S176K突變，使用EU編號；並且d) 第二CL結構域包含G100K和S176E突變，使用EU編號。

在某些實施方式中，將第一重鏈經由肽連接子融合至VH2。在某些實施方式中，肽連接子包含選自由以下組成之群組的序列：(Gly₃ Ser)₂ （SEQ ID NO: 916）、(Gly₄ Ser)₂ （SEQ ID NO: 888）、(Gly₃ Ser)₃ （SEQ ID NO: 917）、(Gly₄ Ser)₃ （SEQ ID NO: 889）、(Gly₃ Ser)₄ （SEQ ID NO: 918）、(Gly₄ Ser)₄ （SEQ ID NO: 890）、(Gly₃ Ser)₅ （SEQ ID NO: 919）、(Gly₄ Ser)₅ （SEQ ID NO: 920）、(Gly₃ Ser)₆ （SEQ ID NO: 921）、和(Gly₄ Ser)₆ （SEQ ID NO: 922）。該等序列也可以寫成：GGGSGGGS（SEQ ID NO: 916）、GGGGSGGGGS（SEQ ID NO: 888）、GGGSGGGSGGGS（SEQ ID NO: 917）、GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO: 889）、GGGSGGGSGGGSGGGS（SEQ ID NO: 918）、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO: 890）、GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS（SEQ ID NO: 919）、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO: 920）、GGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGS（SEQ ID NO: 921）、和GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO: 922）。

另外或替代性地，可以藉由交換羧基末端Fab結合結構域中的CH1和CL結構域來促進正確的重-輕鏈配對。舉例來說，第一多肽（融合至重鏈的羧基末端）可包含來自第二抗體的VL結構域和CH1結構域，並且第二多肽可包含來自第二抗體的VH結構域和CL結構域。在其他實施方式中，第一多肽（融合至重鏈的羧基末端）可包含來自第二抗體的VH結構域和CL結構域，並且第二多肽可包含來自第二抗體的VL結構域和CH1結構域。

ii) VH2或第二CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由對應於以下位置的殘基組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；和

其中：

ii) VH2或第二CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由對應於以下位置的殘基組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；和

其中：

在一個實施方式中，

a) 第一CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號；

b) 第二CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號；

c) 第一CL結構域包含S176E突變，使用EU編號；並且

d) 第二CL結構域包含S176K突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) 第一CH1結構域包含G44K和S183K突變，使用EU編號；

b) 第二CH1結構域包含G44E和S183E突變，使用EU編號；

c) 第一CL結構域包含G100E和S176E突變，使用EU編號；並且

d) 第二CL結構域包含G100K和S176K突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) 第一CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號；

b) 第二CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號；

c) 第一CL結構域包含S176K突變，使用EU編號；並且

d) 第二CL結構域包含S176E突變，使用EU編號。

在一個實施方式中，

a) 第一CH1結構域包含G44E和S183E突變，使用EU編號；

b) 第二CH1結構域包含G44K和S183K突變，使用EU編號；

c) 第一CL結構域包含G100K和S176K突變，使用EU編號；並且

d) 第二CL結構域包含G100E和S176E突變，使用EU編號。

(i) N297G或N297A；

(ii) L234A和L235A；和

(iii) R292C和V302C；

其中胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。

VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；

VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；

分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；

分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及

分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；

並且VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。

64. 如請求項63所述之抗體構建體，其中

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

在一個實施方式中：

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL1和包含SEQ ID NO: 6的VH1；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL1和包含SEQ ID NO: 10的VH1；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL1和包含SEQ ID NO: 14的VH1；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL1和包含SEQ ID NO: 18的VH1；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL1和包含SEQ ID NO: 22的VH1；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL1和包含SEQ ID NO: 26的VH1；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL1和包含SEQ ID NO: 30的VH1；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL1和包含SEQ ID NO: 34的VH1；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL1和包含SEQ ID NO: 38的VH1；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL1和包含SEQ ID NO: 42的VH1；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL1和包含SEQ ID NO: 46的VH1；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL1和包含SEQ ID NO: 50的VH1；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL1和包含SEQ ID NO: 54的VH1；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 213的VL2和包含SEQ ID NO: 214的VH2；

b) 包含SEQ ID NO: 217的VL2和包含SEQ ID NO: 218的VH2；

c) 包含SEQ ID NO: 221的VL2和包含SEQ ID NO: 222的VH2；以及

d) 包含SEQ ID NO: 225的VL2和包含SEQ ID NO: 226的VH2。

VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；

分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；

分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及

分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；

VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；

分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；

分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及

分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；

VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：

分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；

分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；

分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；

分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；

分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；

分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；

分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；

分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；

分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；

分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；

分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；

分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及

分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；

並且

VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：

分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；

分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；

分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；

分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；

分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；

分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；

分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；

分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；

分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；

分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；

分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；

分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及

分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。

在一個實施方式中，

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

在一個實施方式中，

1) VL1和VH1選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 213的VL1和包含SEQ ID NO: 214的VH1；

b) 包含SEQ ID NO: 217的VL1和包含SEQ ID NO: 218的VH1；

c) 包含SEQ ID NO: 221的VL1和包含SEQ ID NO: 222的VH1；以及

d) 包含SEQ ID NO: 225的VL1和包含SEQ ID NO: 226的VH1；

並且

2) VL2和VH2選自由以下組成之群組：

a) 包含SEQ ID NO: 5的VL2和包含SEQ ID NO: 6的VH2；

b) 包含SEQ ID NO: 9的VL2和包含SEQ ID NO: 10的VH2；

c) 包含SEQ ID NO: 13的VL2和包含SEQ ID NO: 14的VH2；

d) 包含SEQ ID NO: 17的VL2和包含SEQ ID NO: 18的VH2；

e) 包含SEQ ID NO: 21的VL2和包含SEQ ID NO: 22的VH2；

f) 包含SEQ ID NO: 25的VL2和包含SEQ ID NO: 26的VH2；

g) 包含SEQ ID NO: 29的VL2和包含SEQ ID NO: 30的VH2；

h) 包含SEQ ID NO: 33的VL2和包含SEQ ID NO: 34的VH2；

i) 包含SEQ ID NO: 37的VL2和包含SEQ ID NO: 38的VH2；

j) 包含SEQ ID NO: 41的VL2和包含SEQ ID NO: 42的VH2；

k) 包含SEQ ID NO: 45的VL2和包含SEQ ID NO: 46的VH2；

l) 包含SEQ ID NO: 49的VL2和包含SEQ ID NO: 50的VH2；以及

m) 包含SEQ ID NO: 53的VL2和包含SEQ ID NO: 54的VH2。

本發明包括編碼本文所述之多特異性抗體構建體及其組分的一種或多種分離的核酸。本發明之核酸分子包括呈單鏈和雙鏈形式的DNA和RNA，以及相應互補序列。DNA包括例如cDNA、基因組DNA、化學合成的DNA、藉由PCR擴增的DNA及其組合。本發明之核酸分子包括全長基因或cDNA分子，以及其片段組合。在一個實施方式中，本發明之核酸衍生自人源，但本發明也包括衍生自非人物種的核酸。

「分離的核酸」在本文中與「分離的多核苷酸」可互換使用，在自天然存在的來源分離核酸的情況下，係指已與分離出核酸的生物體基因組中存在的相鄰基因序列分離的核酸。在由模板酶法合成或化學合成核酸，例如PCR產物、cDNA分子或寡核苷酸的情況下，應理解，由此類方法獲得的核酸係分離的核酸。分離的核酸分子係指呈獨立片段形式或作為較大核酸構建體的一種組分的核酸分子。在一個實施方式中，核酸基本上不含污染性內源物質。該核酸分子衍生自基本上純的形式和能夠利用標準生物化學方法（例如Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊], 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory [冷泉港實驗室], Cold Spring Harbor [冷泉港], NY [紐約州]（1989）中概述的方法）鑒別、操作和回收其組分核苷酸序列的量或濃度分離至少一次的DNA或RNA。此類序列以不含典型地存在於真核基因中的內部非翻譯序列或內含子的可讀框形式提供和/或構建。非翻譯DNA序列可以存在於可讀框的5'或3'處，其中該等序列不干擾編碼區的操作或表現。除非另外說明，否則本文所論述的任何單鏈多核苷酸序列的左手端係5’端；雙鏈多核苷酸序列的左手方向稱為5’。新生RNA轉錄物的5'至3'產生方向稱為轉錄方向；在具有與RNA轉錄物的序列相同序列的DNA鏈上作為RNA轉錄物5'端至5'端的序列區稱為「上游序列」；在具有與RNA轉錄物的序列相同序列的DNA鏈上作為RNA轉錄物3'端至3'端的序列區稱為「下游序列」。

如本文所概述，可以藉由使用盒式或PCR誘變，或本領域中熟知的其他技術對編碼多肽的DNA中的核苷酸進行位點特異性誘變，以產生編碼變體的DNA，且隨後在細胞培養中表現重組DNA來製備本文所述之抗原結合蛋白的變體。不過，還可使用確定的技術，藉由體外合成製備包含具有多達約100-150個殘基的變體CDR的抗原結合蛋白。該等變體典型地展現與天然存在的類似物相同的定性生物活性，例如結合至抗原。此類變體包括例如在抗原結合蛋白的胺基酸序列內殘基的缺失和/或插入和/或取代。進行缺失、插入和取代的任何組合以得到最終構建體，條件是最終構建體具有所需的特徵。胺基酸變化還可能改變抗原結合蛋白的翻譯後加工，例如改變糖基化位點之數目或位置。在某些實施方式中，抗原結合蛋白變體的製備意圖修飾直接參與表位結合的胺基酸殘基。在其他實施方式中，出於本文所論述的目的，需要對不直接參與表位結合的殘基或不以任何方式參與表位結合的殘基進行修飾。預期在任何CDR區和/或框架區內的誘變。熟悉該項技術者可以採用協方差分析設計抗原結合蛋白的胺基酸序列中的有用修飾。參見例如，Choulier等人, Proteins [蛋白質] 41: 475-484, 2000；Demarest等人, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 335: 41-48, 2004；Hugo等人, Protein Engineering [蛋白質工程改造] 16 (5): 381-86, 2003；Aurora等人, 美國專利公開號2008/0318207 A1；Glaser等人, 美國專利公開號2009/0048122 A1；Urech等人, WO 2008/110348 A1；Borras等人, WO 2009/000099 A2。由協方差分析確定的此類修飾可以改善抗原結合蛋白的效力、藥物動力學、藥效學和/或可製造特徵。

本發明之核酸序列。熟悉該項技術者應理解，由於遺傳密碼的簡並性，所以可能獲得極大數量的核酸，其全部編碼本文的CDR（和本文所述之抗原結合蛋白的重鏈和輕鏈或其他組分）。因此，藉由以不改變編碼蛋白的胺基酸序列的方式簡單地修飾一個或多個密碼子序列來標識特定胺基酸序列，熟悉該項技術者可以制得多種不同的核酸。

本發明還包括載體，其包含編碼本發明之多特異性抗體構建體的一種或多種組分（例如可變區、輕鏈、重鏈、修飾的重鏈、和Fd片段）的一個或多個核酸。術語「載體」係指用於將蛋白質編碼資訊轉移至宿主細胞中的任何分子或實體（例如核酸、質體、噬菌體或病毒）。載體的實例包括但不限於，質體、病毒載體、非游離型哺乳動物載體和表現載體，例如重組表現載體。如本文所用的，術語「表現載體」或「表現構建體」係指含有所需編碼序列和用於在特定宿主細胞中表現可操作地連接的編碼序列所必需的適合的核酸控制序列的重組DNA分子。表現載體可包括但不限於，影響或控制轉錄、翻譯且在存在內含子時，影響與其可操作地連接的編碼區的RNA剪接的序列。用於在原核生物中表現所必需的核酸序列包括啟動子，視需要操縱序列、核糖體結合位點和可能的其他序列。已知真核細胞利用啟動子、增強子、和終止子以及多腺苷酸化訊息。分泌訊息肽序列還可以視需要由表現載體編碼，與目的編碼序列可操作地連接，使得表現的多肽可以由重組宿主細胞分泌，如果需要，以便更容易地從細胞中分離目的多肽。例如，在一些實施方式中，訊息肽序列可以被附接/融合到本發明之任何多肽序列的胺基末端。在某些實施方式中，具有MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC（SEQ ID NO: 894）胺基酸序列的訊息肽與本發明之任何多肽序列的胺基末端融合。在其他實施方式中，具有MAWALLLLTLLTQGTGSWA（SEQ ID NO: 895）胺基酸序列的訊息肽與本發明之任何多肽序列的胺基末端融合。在又其他實施方式中，具有MTCSPLLLTLLIHCTGSWA（SEQ ID NO: 896）胺基酸序列的訊息肽與本發明之任何多肽序列的胺基末端融合。可以與本文所述之多肽序列的胺基末端融合的其他適合訊息肽序列包括：MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG（SEQ ID NO: 897）、MEWTWRVLFLVAAATGAHS（SEQ ID NO: 898）、METPAQLLFLLLLWLPDTTG（SEQ ID NO: 899）、METPAQLLFLLLLWLPDTTG（SEQ ID NO: 900）、MKHLWFFLLLVAAPRWVLS（SEQ ID NO: 901）、和MEWSWVFLFFLSVTTGVHS（SEQ ID NO: 902）。其他訊息肽係熟悉該項技術者已知的，並且可以與本發明之任何多肽鏈融合，例如以促進或優化在特定宿主細胞中的表現。

典型地，用於宿主細胞中以產生本發明之雙特異性抗原蛋白的表現載體將含有用於質體維持以及用於選殖和表現編碼多特異性抗體構建體各組分的外源核苷酸序列的序列。在某些實施方式中，此序列，統稱為「側接序列」，典型地將包括以下核苷酸序列中的一個或多個：啟動子、一個或多個增強子序列、複製起點、轉錄終止序列、含有供體和受體剪接位點的完整內含子序列、編碼用於多肽分泌的前導序列的序列、核糖體結合位點、聚腺苷酸化序列、用於插入編碼待表現的多肽的核酸的多連接子區和可選擇標記物元件。該等序列分別於下文論述。

視需要，載體可以含有「標籤」編碼序列，即，位於多肽編碼序列的5'或3'端的寡核苷酸分子；該寡核苷酸標籤序列編碼聚組胺酸（例如六組胺酸（SEQ ID NO: 925））、FLAG、HA（血凝素流感病毒）、myc或現有可商購抗體所針對的另一「標籤」分子。該標籤典型地在多肽表現時與該抗體融合，且可以用作一種自宿主細胞親和純化或檢測多肽的方式。親和純化可以藉由例如柱層析法，使用針對標籤的抗體作為親和基質來實現。視需要，隨後可以藉由各種方式，例如使用某些肽酶裂解，自純化的多肽移除標籤。

側接序列可以為同源的（即，來自與宿主細胞相同的物種和/或品系）、異源的（即，來自與宿主細胞物種或品系不同的物種）、混合的（即，來自超過一種來源的側接序列的組合）、合成的或天然的。因此，側接序列的來源可以為任何原核或真核生物體、任何脊椎動物或非脊椎動物生物體，或任何植物，只要該側接序列在宿主細胞機器中起作用且可以經宿主細胞機器激活。

可用於本發明載體中的側接序列可以藉由本領域中熟知的幾種方法中的任一種獲得。典型地，可用於本文中的側接序列將預先藉由定位和/或藉由限制性核酸內切酶消化鑒別且因此可以使用適當限制性核酸內切酶自適當組織來源分離。在一些情況下，側接序列的全核苷酸序列可為已知的。此處，側接序列可以使用常規核酸合成或選殖方法合成。

無論已知側接序列的全部抑或僅一部分，其均可使用聚合酶鏈反應（PCR）和/或藉由用適合探針，例如來自相同或另一物種的寡核苷酸和/或側接序列片段篩選基因組文庫來獲得。若側接序列未知，則可以自可能含有例如編碼序列或甚至另外一個或多個基因的較大DNA片段分離含有側接序列的DNA片段。可以藉由限制性核酸內切酶消化產生適當DNA片段，隨後使用瓊脂糖凝膠純化、Qiagen®柱層析法（加利福尼亞州查茨沃斯（Chatsworth, CA））或技術者已知的其他方法分離來實現分離。熟悉該項技術者將易於瞭解實現此目的的適合酶的選擇。

複製起點典型地係可商購的原核表現載體的一部分，且該起點有助於在宿主細胞中擴增載體。若所選載體不含複製起點，則可以基於已知序列以化學方式合成，並將其連接到載體中。例如，來自質體pBR322（麻塞諸塞州貝芙麗的新英格蘭生物實驗室（New England Biolabs, Beverly, MA））的複製起點適合大多數革蘭氏陰性細菌，且各種病毒起點（例如SV40、多瘤病毒、腺病毒、水皰性口炎病毒（VSV），或乳頭瘤病毒，例如HPV或BPV）可用於在哺乳動物細胞中選殖載體。一般而言，哺乳動物表現載體不需要複製起點組分（例如，通常僅使用SV40起點，因為其還含有病毒早期啟動子）。

轉錄終止序列典型地位於多肽編碼區3'端且用於終止轉錄。通常，原核細胞中的轉錄終止序列係富含G-C的片段，後接聚T序列。儘管該序列易於自文庫選殖或甚至作為載體的一部分商購獲得，但其還可使用核酸合成方法容易地合成。

可選擇標記物基因編碼選擇性培養基中生長的宿主細胞存活和生長所需的蛋白質。典型的選擇標記基因編碼如下蛋白質：(a) 賦予針對抗生素或其他毒素（例如，對於原核宿主細胞，胺苄青黴素、四環素或康黴素）的抗性；(b) 補充細胞的營養缺陷；或 (c) 提供不可得自複雜培養基或限定培養基的重要營養物。特定的可選擇標記物為康黴素抗性基因、胺苄青黴素抗性基因及四環素抗性基因。有利地，新黴素抗性基因還可用於在原核及真核宿主細胞二者中進行選擇。

可以使用其他可選擇基因擴增有待表現的基因。擴增是使生長或細胞存活必要的蛋白質產生所需的基因在連續數代重組細胞的染色體內串聯性複製的過程。適用於哺乳動物細胞的可選擇標記物的實例包括二氫葉酸還原酶（DHFR）和無啟動子胸苷激酶基因。使哺乳動物細胞轉化株處於選擇壓力下，其中由於載體中存在可選擇基因，所以僅轉化株唯一適於存活。選擇壓力係藉由在連續地增加培養基中選擇劑的濃度的條件下培養經轉化細胞，由此使可選擇基因和編碼另一基因，例如本文所述之多特異性抗體構建體的一種或多種組分的DNA擴增來施加。因此，由擴增的DNA合成較多量之多肽。

核糖體結合位點通常是mRNA翻譯起始所必需的，且以夏因-達爾加諾（Shine-Dalgarno）序列（原核生物）或科紮克（Kozak）序列（真核生物）表徵。該元件典型地位於啟動子的3'端且在待表現的多肽的編碼序列的5'端。在某些實施方式中，一個或多個編碼區可以可操作地連接到內部核糖體結合位點（IRES），由此允許自單一RNA轉錄物翻譯兩個可讀框。

在一些情況下，例如在真核宿主細胞表現系統中需要糖基化的情況下，可以操作各種前序列或原序列以改善糖基化或產率。例如，可以改變特定訊息肽的肽酶裂解位點，或添加原序列，該等序列還可影響糖基化。最終蛋白質產物可以在位置-1（相對於成熟蛋白質的第一個胺基酸）具有一個或多個易於表現的另外的胺基酸，該等胺基酸可能未完全移除。例如，最終蛋白質產物可能具有一個或兩個在肽酶裂解位點中發現的附接至胺基末端的胺基酸殘基。可替代地，當酶在成熟多肽內的此類區域切割時，使用一些酶裂解位點可能產生所需多肽的略微截短的形式。

本發明之表現和選殖載體典型地將含有由宿主生物體識別且可操作地連接至編碼多肽的分子的啟動子。如本文所用的，術語「可操作地連接」係指兩個或多個核酸序列以使得產生能夠引導給定基因的轉錄和/或所需蛋白質分子的合成的核酸分子的方式連接。例如，載體中「可操作地連接」至蛋白質編碼序列的控制序列是與該編碼序列連接以使得在與控制序列的轉錄活性相適應的條件下實現該蛋白質編碼序列的表現。更具體地，若啟動子和/或增強子序列（包括順式作用轉錄控制元件的任何組合）在適合宿主細胞或其他表現系統中刺激或調節編碼序列的轉錄，則其可操作地連接至該編碼序列。

啟動子為位於控制結構基因轉錄的結構基因起始密碼子（一般在約100至1000 bp內）上游（即，5'）的非轉錄序列。啟動子通常分組為兩種類別中的一個：誘導型啟動子及組成型啟動子。誘導型啟動子起始處於其控制下的DNA反應於培養條件的某種變化（如營養素的存在或不存在，或者溫度變化）以提高的水平轉錄。另一方面，組成型啟動子一致地轉錄其可操作地連接的基因，即，對基因表現具有極小控制或無控制。許多由多種潛在宿主細胞識別的啟動子係熟知的。藉由限制性酶消化移除源DNA啟動子，並將所需啟動子序列插入載體中，將適合的啟動子可操作地連接至編碼例如本發明多特異性抗體構建體的重鏈、輕鏈、修飾的重鏈或其他組分的DNA。

適用於酵母宿主的適合啟動子還是本領域中熟知的。酵母增強子宜與酵母啟動子一起使用。用於哺乳動物宿主細胞的適合啟動子係熟知的，且包括但不限於獲自病毒基因組的那些啟動子，該等病毒為諸如多形瘤病毒、傳染性上皮瘤病毒、腺病毒（諸如腺病毒2）、牛乳頭狀瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨細胞病毒、反轉錄病毒、B型肝炎病毒及猿猴病毒40（SV40）。其他適合哺乳動物啟動子包括異源哺乳動物啟動子，例如熱休克啟動子及肌動蛋白啟動子。

其他感興趣的啟動子包括但不限於：SV40早期啟動子（Benoist和Chambon, 1981, Nature [自然] 290: 304-310）；CMV啟動子（Thornsen等人, 1984, Proc. Natl. Acad. U.S.A. [美國科學院院報] 81: 659-663）；勞斯肉瘤病毒（Rous sarcoma virus）的3'長末端重複序列中所含的啟動子（Yamamoto等人, 1980, Cell [細胞] 22: 787-797）；皰疹胸苷激酶啟動子（Wagner等人, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國科學院院報] 78: 1444-1445）；來自金屬硫蛋白基因的啟動子和調節序列（Prinster等人, 1982, Nature [自然] 296: 39-42）；和原核啟動子，例如β-內醯胺酶啟動子（Villa-Kamaroff等人, 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國科學院院報] 75: 3727-3731）；或tac啟動子（DeBoer等人, 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國科學院院報] 80: 21-25）。有意義的還有以下動物轉錄控制區，它們表現出組織特異性並已用於轉基因動物中：在胰臟腺泡細胞中具有活性的彈性蛋白酶I基因控制區（Swift等人, 1984, Cell [細胞] 38: 639-646；Ornitz等人, 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. [冷泉港數量生物學研討會] 50: 399-409；MacDonald, 1987, Hepatology [肝臟病學] 7: 425-515）；在胰臟β細胞中具有活性的胰島素基因控制區（Hanahan, 1985, Nature [自然] 315: 115-122）；在淋巴樣細胞中有活性的免疫球蛋白基因控制區（Grosschedl等人, 1984, Cell [細胞] 38: 647-658；Adames等人, 1985, Nature [自然] 318: 533-538；Alexander等人, 1987, Mol. Cell. Biol. [分子細胞生物學] 7: 1436-1444）；在睪丸、乳房、淋巴和肥胖細胞中具有活性的小鼠乳房腫瘤病毒控制區（Leder等人, 1986, Cell [細胞] 45: 485-495）；在肝中具有活性的白蛋白基因控制區（Pinkert等人, 1987, Genes and Devel. [基因與發育] 1: 268-276）；在肝中具有活性的α-胎蛋白基因控制區（Krumlauf等人, 1985, Mol. Cell. Biol. [分子細胞生物學] 5: 1639-1648；Hammer等人，1987, Science [科學] 253: 53-58）；在肝中具有活性的α1-抗胰蛋白酶基因控制區（Kelsey等人, 1987, Genes and Devel. [基因與發育] 1: 161-171）；在骨髓細胞中具有活性的β-球蛋白基因控制區（Mogram等人, 1985, Nature [自然] 315: 338-340；Kollias等人, 1986, Cell [細胞] 46: 89-94）；在腦中的寡樹突細胞中具有活性的髓磷脂鹼性蛋白基因控制區（Readhead等人, 1987, Cell [細胞] 48: 703-712）；在骨骼肌中具有活性的肌球蛋白輕鏈-2基因控制區（Sani, 1985, Nature [自然] 314: 283-286）；和在下視丘中具有活性的促性腺激素釋放激素基因控制區（Mason等人, 1986, Science [科學] 234: 1372-1378）。

可以將增強子序列插入載體中以增加高等真核細胞中編碼多特異性抗體構建體的組分（例如，輕鏈、重鏈、修飾的重鏈、Fd片段）的DNA的轉錄。增強子為DNA的順式作用元件，長度通常為約10-300 bp，作用於啟動子以增加轉錄。增強子在方向及位置方面為相對獨立的，已見於轉錄單元的5'及3'位置。已知可得自哺乳動物基因的幾種增強子序列（例如，球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白及胰島素）。然而，典型地使用來自於病毒的增強子。本領域中已知的SV40增強子、巨細胞病毒早期啟動子增強子、多瘤病毒增強子和腺病毒增強子係用於激活真核啟動子的示例性強化元件。儘管增強子可以定位於載體中編碼序列的5'或3'，但其典型地位於啟動子5'的位點處。可將編碼適當天然或異源訊息序列（前導序列或訊息肽）的序列併入表現載體中，以促進抗體的細胞外分泌。訊息肽或前導序列的選擇取決於待產生抗體的宿主細胞的類型，且異源信號序列可替換天然訊息序列。訊息肽之實例在上文有描述。在哺乳動物宿主細胞中起作用的其他訊息肽包括美國專利案號4,965,195中所述之介白素-7（IL-7）的訊息序列；Cosman等人, 1984, Nature [自然] 312: 768中所述之介白素-2受體的訊息序列；歐洲專利案號0367 566中所述之介白素-4受體訊息肽；美國專利案號4,968,607中所述之I型介白素-1受體訊息肽；EP專利案號0 460 846中所述之II型介白素-1受體訊息肽。

可由起始載體（例如市售載體）構建所提供的表現載體。該等載體可含有或可不含所有所需側接序列。在載體中不存在一個或多個本文所述之側接序列的情況下，其可以獨立地獲得且連接到載體中。用於獲得各側接序列的方法係熟悉該項技術者熟知的。可以將表現載體引入宿主細胞中，由此產生由如本文所述之核酸所編碼的蛋白質，包括融合蛋白。

在某些實施方式中，可以將編碼本發明之多特異性抗體構建體的不同組分的核酸插入相同表現載體中。例如，編碼抗第一靶抗原輕鏈的核酸可被選殖到與編碼抗第一靶抗原重鏈的核酸相同的載體中。在此類實施方式中，該兩個核酸可以由內部核糖體進入位點（IRES）隔開且處於單一啟動子控制下，由此使輕鏈和重鏈由相同mRNA轉錄物表現。可替代地，該兩個核酸可以處於兩個獨立啟動子控制下，由此使輕鏈和重鏈由兩個獨立的mRNA轉錄物表現。在一些實施方式中，編碼抗第一靶抗原輕鏈和抗第一靶抗原重鏈的核酸可被選殖到一個表現載體中，並且編碼抗第二靶抗原輕鏈和抗第二靶抗原重鏈的核酸可被選殖到第二表現載體中。

類似地，對於IgG-Fab多特異性抗體構建體，編碼三個組分中的每一個的核酸可被選殖到相同的表現載體中。在一些實施方式中，編碼IgG-Fab分子的輕鏈的核酸和編碼第二多肽（包含C末端Fab結構域的另一半）的核酸被選殖到一個表現載體中，而編碼修飾的重鏈（包含重鏈和Fab結構域的一半的融合蛋白）的核酸被選殖到第二表現載體中。在某些實施方式中，本文所述之多特異性抗體構建體的所有組分都從相同的宿主細胞群表現。例如，即使將一種或多種組分選殖到單獨的表現載體中，宿主細胞也用兩種表現載體共轉染，使得一個細胞產生多特異性抗體構建體的所有組分。

在構建出載體並將編碼本文所述之多特異性抗體構建體各組分的一個或多個核酸分子插入一個或多個載體的一個或多個適當位點中之後，可以將一個或多個完整載體插入適當宿主細胞中以進行擴增和/或多肽表現。因此，本發明包括分離的宿主細胞，其包含編碼多特異性抗體構建體組分的一個或多個表現載體。如本文所用的，術語「宿主細胞」係指經核酸轉化或能夠經核酸轉化且由此表現目的基因的細胞。該術語包括親本細胞的後代，無論後代是否與原始親本細胞在形態上或遺傳構成方面相同，只要存在目的基因即可。包含本發明之分離核酸的宿主細胞（在一個實施方式中可操作地連接到至少一個表現控制序列（例如啟動子或增強子））係「重組宿主細胞」。

可以藉由熟知方法，包括轉染、感染、磷酸鈣共沈澱、電穿孔、顯微注射、脂質體轉染、DEAE-葡聚糖介導的轉染或其他已知技術將抗原結合蛋白的表現載體轉化至所選宿主細胞中。該方法將部分隨所用宿主細胞的類型而變化。該等方法及其他適合的方法對於技術者係熟知的，並且闡述於例如Sambrook等人, 2001, 同上中。

宿主細胞當在適當條件下培養時合成抗原結合蛋白，該抗原結合蛋白隨後可以自培養基收集（若宿主細胞將其分泌至培養基中）或直接由產生該抗原結合蛋白的宿主細胞收集（若其並非分泌的）。合適的宿主細胞的選擇將取決於各種因素，例如所需的表現水平、活性所需或必需的多肽修飾（例如糖基化或磷酸化）以及易於折疊成生物活性分子。

示例性宿主細胞包括原核生物細胞、酵母或高等真核細胞。原核宿主細胞包括真細菌，如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物，例如腸桿菌科（Enterobacteriaceae ）如埃希氏桿菌屬（Escherichia ），例如大腸桿菌（E. coli ）、腸桿菌屬（Enterobacter ）、歐文氏菌屬（Erwinia ）、克雷白氏桿菌屬（Klebsiella ）、變形桿菌屬（Proteus ）、沙門氏菌屬（Salmonella ），例如鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium ）、沙雷氏菌屬（Serratia ），例如如黏質沙雷氏菌（Serratia marcescans ）、和志賀桿菌（Shigella ）、還有芽孢桿菌屬（Bacillus ），例如枯草桿菌（B. subtilis ）和地衣芽孢桿菌（B. licheniformis ）、假單胞菌屬（Pseudomonas ）、和鏈黴菌屬（Streptomyces ）。真核微生物（如絲狀真菌或酵母）係用於重組多肽的合適的選殖或表現宿主。釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）或普通麵包酵母係低等真核宿主微生物中最常用的。不過，多種其他屬、種和菌株係常用的且可用於本文中，例如畢赤酵母屬（Pichia ），例如巴斯德畢赤酵母（P. pastoris ）、裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe ）；克魯維酵母屬（Kluyveromyces ），耶氏酵母屬（Yarrowia ）；假絲酵母屬（Candida ）；瑞氏木黴（Trichoderma reesia ）；粗糙脈孢菌（Neurospora crassa ）；許旺酵母屬（Schwanniomyces ），例如西方許旺酵母（Schwanniomyces occidentalis ）；和絲狀真菌，如，例如脈孢菌屬（Neurospora ）、青黴菌屬（Penicillium ）、木黴菌屬（Tolypocladium ）和麯黴屬（Aspergillus ）宿主，例如構巢麯黴（A. nidulans ）和黑麯黴（A. niger ）。

用於表現糖基化抗原結合蛋白的宿主細胞可以來源於多細胞生物體。無脊椎動物細胞的實例包括植物和昆蟲細胞。已經鑒定了許多桿狀病毒株和變體以及來自以下宿主的相應的許可性昆蟲宿主細胞，例如草地貪夜蛾（Spodoptera frugiperda ）（毛蟲），埃及伊蚊（Aedes aegypti ）（蚊子），白紋伊蚊（Aedes albopictus ）（蚊子），黑腹果蠅（Drosophila melanogaster ）（果蠅）和家蠶（Bombyx mori ）。用於轉染此類細胞的多種病毒株係公開可獲得的，例如，苜蓿銀紋夜蛾（Autographa californica ）NPV的L-1變體和家蠶NPV的Bm-5株。

脊椎動物宿主細胞還為適合宿主，且由此類細胞重組產生抗原結合蛋白已成為常規程式。可用作表現的宿主的哺乳動物細胞系係本領域熟知的，並且包括但不限於可從美國種質保存中心（ATCC）獲得的永生化細胞系，包括但不限於中國倉鼠卵巢（CHO）細胞，包括CHOK1細胞（ATCC CCL61）、DXB-11、DG-44和中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR（CHO，Urlaub等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊] 77: 4216, 1980）；由SV40轉化的猴腎CV1系（COS-7，ATCC CRL 1651）；人胚胎腎系（293細胞或亞選殖用於在懸浮培養中生長的293細胞（Graham等人, J. Gen Virol. [普通病毒學雜誌]36: 59, 1977）；幼倉鼠腎細胞（BHK，ATCC CCL 10）；小鼠塞托利細胞（TM4, Mather, Biol. Reprod. [生殖生物學] 23: 243-251, 1980）；猴腎細胞（CV1、ATCC CCL 70）；非洲綠猴腎細胞（VERO-76, ATCC CRL-1587）；人子宮頸癌細胞（HELA, ATCC CCL 2）；犬腎細胞（MDCK，ATCC CCL 34）；布法羅大鼠肝細胞（BRL 3A，ATCC CRL 1442）；人肺細胞（W138，ATCC CCL 75）；人肝癌細胞（Hep G2，HB 8065）；小鼠乳腺腫瘤（MMT 060562, ATCC CCL51）；TRI細胞（Mather等人, Annals N.Y Acad. Sci. [紐約科學院年報] 383: 44-68, 1982）；MRC 5細胞或FS4細胞；哺乳動物骨髓瘤細胞，以及許多其他的細胞系。在某些實施方式中，可通過確定何種細胞系具有高表現水平且組成型地產生本發明之多特異性抗體構建體來選擇細胞系。在另一實施方式中，可以自B細胞譜系選擇不產生自身抗體但能夠製備並分泌異源抗體的細胞系。CHO細胞係用於表現本發明之多特異性抗體構建體的宿主細胞。

用上述核酸或載體轉化或轉染宿主細胞以產生多特異性抗體構建體，並在適當改進用於誘導啟動子、選擇轉化子、或擴增編碼所需序列的基因的常規營養培養基中培養。此外，具有由選擇性標記物隔開的多個轉錄單元拷貝的新穎載體和經轉染細胞系特別適用於表現抗原結合蛋白。因此，本發明還提供了製備本文所述之多特異性抗體構建體之方法，該方法包括在允許由本文所述之一種或多種表現載體編碼的多特異性抗體構建體表現的條件下，在培養基中培養包含該一種或多種表現載體的宿主細胞；並且從該培養基中回收該多特異性抗體構建體。

用於產生本發明之抗原結合蛋白的宿主細胞可以在多種培養基中培養。諸如Ham's F10（西格瑪公司（Sigma））、最小必需培養基（（MEM），（西格瑪公司））、RPMI-1640（西格瑪公司）和杜爾貝科改良型伊戈爾培養基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）（（DMEM），西格瑪公司））等市售培養基適用於培養宿主細胞。另外，在Ham等人, Meth. Enz. [酶學方法] 58: 44, 1979；Barnes等人, Anal. Biochem. [分析生物化學]102: 255, 1980；美國專利案號4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；WO 90103430；WO 87/00195；或美國專利註冊號30,985中描述的任何培養基可以用作宿主細胞的培養基。必要時，該等培養基中的任一種可以補充有激素和/或其他生長因子（例如胰島素、運鐵蛋白或表皮生長因子）、鹽（例如氯化鈉、鈣、鎂和磷酸鹽）、緩衝液（例如HEPES）、核苷酸（例如腺苷和胸苷）、抗生素（例如健他黴素（Gentamycin™）藥物）、微量元素（定義為通常以在微莫耳濃度範圍內的最終濃度存在的無機化合物）和葡萄糖或等效能量來源。還可以按熟悉該項技術者已知的適當濃度包含任何其他必需的補充劑。培養條件，例如溫度、pH等，係先前與選擇用於表現的宿主細胞一起使用的條件，並且對於普通技術者來說是顯而易見的。

在培養宿主細胞後，多特異性抗體構建體可以在細胞內、周質間隙中產生，或直接分泌到培養基中。若在細胞內產生抗原結合蛋白，則作為第一個步驟，例如藉由離心或超濾來移除宿主細胞或溶解片段的顆粒狀碎片。雙特異性抗原結合蛋白可以使用例如羥基磷灰石層析、陽離子或陰離子交換層析、或親和層析、使用一種或多種目的抗原或蛋白A或蛋白G作為親和配體來純化。蛋白A可用於純化包括基於人γ1、γ2或γ4重鏈的多肽的蛋白質（Lindmark等人, J. Immunol. Meth. [免疫學方法雜誌] 62: 1-13, 1983）。對於所有小鼠同型和對於人γ3推薦蛋白G（Guss等人, EMBO J. [歐洲分子生物學學會雜誌] 5: 15671575, 1986）。親和配體所附接的基質通常是瓊脂糖，但也可以使用其他基質。相較於用瓊脂糖，機械穩定的基質，例如可控孔度玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯可以提高流動速率並縮短加工時間。在蛋白質包含CH3結構域的情況下，Bakerbond ABX™樹脂（J. T. Baker, Phillipsburg, N.J. [新澤西州菲力浦斯堡]）可用於純化。依據待回收的特定多特異性抗體構建體，還可採用其他蛋白質純化技術，例如乙醇沈澱法、逆相HPLC、層析聚焦法、SDS-PAGE和硫酸銨沈澱法。

將本發明之多特異性抗體構建體用於檢測一種或多種靶抗原（生物樣本中）並且鑒定表現一種或多種靶抗原的細胞或組織。本文所述之多特異性抗體構建體可用於診斷目的以檢測、診斷或監測與一種或多種靶抗原相關的疾病和/或病症。還提供了使用熟悉該項技術者已知的經典免疫組織學方法在樣本中檢測一種或多種靶抗原的存在的方法（例如Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays [酶免疫分析的實踐與理論], 第15卷（R.H. Burdon和P.H. van Knippenberg編輯, 愛思唯爾出版公司（Elsevier）, 阿姆斯特丹）；Zola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques [單株抗體：技術手冊], 第147-158頁（CRC出版公司（CRC Press, Inc.））；Jalkanen等人, 1985, J. Cell. Biol. [細胞生物學雜誌] 101: 976-985；Jalkanen等人, 1987, J. Cell Biol. [分子生物學雜誌] 105: 3087-3096）。任一靶標的檢測可以在體內或體外進行。

一個實施方式提供了本發明之多特異性抗體構建體或根據本發明之方法產生的多特異性抗體構建體，用於在預防、治療或緩解腫瘤或癌症疾病或轉移性癌症疾病中使用。

根據本發明之較佳的實施方式，所述腫瘤或癌症疾病係實性瘤疾病。

本文所述之製劑可用作在有需要的患者中治療、改善和/或預防本文所述之病理醫學病況的藥物組成物。術語「治療」係指治療性治療和預防性（prophylactic或preventative）措施兩者。治療包括將製劑應用或投與至來自具有疾病/病症、疾病/病症的症狀或對疾病/病症的傾向的患者的身體、分離的組織或細胞，目的係治療、治癒、緩解、減輕、改變、補救、減輕、改善或影響疾病、疾病的症狀或向疾病的傾向。

如本文所用的，術語「減輕」係指藉由向有需要的受試者投與根據本發明之多特異性抗體構建體，對患有如本文所述之腫瘤或癌症或轉移性癌症的患者的疾病狀態的任何改善。這種改善還可以被視為減緩或停止患者的腫瘤或癌症或轉移性癌症的p進展。如本文所用的，術語「預防」意指藉由向有需要的受試者投與根據本發明之多特異性抗體構建體，避免患有如下文所述之腫瘤或癌症或轉移性癌症的患者的發病或復發。

術語「疾病」係指將受益於用本文所述之多特異性抗體構建體或藥物組成物治療的任何病況。這包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳動物易患所討論的疾病的那些病理狀況。「贅生物」係組織的異常生長，通常但不總是形成腫塊。當還形成腫塊時，通常將其稱為「腫瘤」。贅生物或腫瘤或可為良性的、潛在惡性（癌前）或惡性的。惡性腫瘤通常被稱為癌症。它們通常侵入並破壞周圍組織並可形成轉移瘤，即它們擴散到身體的其他部位、組織或器官。因此，術語「轉移癌」包括原始腫瘤之外的其他組織或器官的轉移瘤。淋巴瘤和白血病係淋巴樣腫瘤。出於本發明之目的，它們也涵蓋在術語「腫瘤」或「癌症」中。

在本發明較佳的實施方式中，腫瘤或癌症疾病係實性瘤疾病並且轉移性癌症疾病可源自前述任一種。

與本發明有關的較佳的腫瘤或癌症疾病選自由以下組成之群組：乳癌、類癌、子宮頸癌、結直腸癌、子宮內膜癌、胃部癌、頭頸癌、間皮瘤、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、皮膚癌、腎癌和胃癌。更較佳的是，腫瘤或癌症疾病（較佳的實性瘤疾病）可選自由以下組成之群組：卵巢癌、胰臟癌、間皮瘤、肺癌、胃部癌和三陰性乳癌。轉移性癌症疾病可源自前述的任一種。

本發明還提供治療或緩解腫瘤或癌症疾病或轉移性癌症疾病之方法，該方法包括向有需要的受試者投與本發明之多特異性抗體構建體或根據本發明之方法產生的多特異性抗體構建體之步驟。

術語「有需要的受試者」或「需要治療」的那些術語包括已經患有該病症的那些受試者，以及要預防該病症的那些受試者。有需要的受試者或「患者」包括接受預防性或治療性治療的人和其他哺乳動物受試者。

本發明之多特異性抗體構建體通常以生物可用度和持久性的範圍等被設計用於特定的投與途徑和方法、特定的投與劑量和頻率、特定疾病的特定治療。組成物的材料較佳的以投與部位可接受的濃度配製。

因此，可以根據本發明設計製劑和組成物用於藉由任何合適的投與途徑遞送。在本發明之上下文中，投與途徑包括但不限於

• 局部途徑（如表皮、吸入、鼻、眼、耳（auricular/aural）、陰道、黏膜）；

• 腸內途徑（如口服、胃腸道、舌下、唇下部、經頰、直腸）；以及

• 腸胃外途徑（如靜脈內、動脈內、骨內、肌內、腦內、腦室內、硬膜外、鞘內、皮下、腹膜內、羊膜外、關節內、心內、真皮內、病灶內、子宮內、膀胱內、玻璃體內、經皮、鼻內、經黏膜、滑膜內、管腔內）。

本發明之藥物組成物和多特異性抗體構建體特別適用於腸胃外投與，例如皮下或靜脈內遞送，例如藉由注射如彈丸注射或藉由輸注如連續輸注。可以使用醫療設備投與藥物組成物。用於投與藥物組成物的醫療裝置的實例描述於美國專利案號4,475,196；4,439,196；4,447,224；4,447,233；4,486,194；4,487,603；4,596,556；4,790,824；4,941,880；5,064,413；5,312,335；5,312,335；5,383,851；和5,399,163中。

特別地，本發明提供了合適組成物的不間斷投與。作為非限制性實例，不間斷或基本上不間斷的，即連續的投與可以藉由患者佩戴的用於計量流入患者體內的治療劑的小泵系統實現。包含本發明之多特異性抗體構建體的藥物組成物可以藉由使用所述泵系統投與。這種泵系統在本領域中通常是已知的，並且通常依賴於含有待輸注的治療劑的藥筒的定期更換。當在這種泵系統中更換藥筒時，治療劑不間斷流入患者體內可能會發生暫時中斷。在這種情況下，在更換藥筒之前的投與階段和更換藥筒之後的投與階段仍將被認為是在本發明之藥學手段和方法的含義內，其共同構成這種治療劑的一種「不間斷的投與」。

本發明之多特異性抗體構建體的可以藉由流體遞送設備或小泵系統來靜脈內或皮下連續或不間斷投與，該流體遞送設備或小泵系統包括用於驅動流體離開儲器的流體驅動機構和用於驅使驅動機構的驅使機構。用於皮下投與的泵系統可包括用於穿透患者皮膚並將合適的組成物遞送到患者體內的針或套管。所述泵系統可以獨立於靜脈、動脈或血管直接固定或附接至患者的皮膚，從而允許泵系統與患者皮膚之間的直接接觸。泵系統可以附接至患者的皮膚上24小時至數天。泵系統可為小尺寸的，其中儲器適用於小體積。作為非限制性實例，待投與的適合的藥物組成物的儲器容積可以為0.1與50 ml之間。

連續投與也可以藉由佩戴在皮膚上的貼劑進行透皮投與，並且每隔一段時間更換一次。熟悉該項技術者瞭解適用於該目的之用於藥物遞送的貼劑系統。值得注意的是，透皮投與尤其適用於不間斷的投與，因為第一次耗盡的貼劑的更換可以有利地與例如在緊鄰第一次耗盡的貼劑的皮膚表面上放置新的第二貼劑同時地且在去除第一次耗盡的貼劑之前立即完成。不會出現流量中斷或電池故障的問題。

如果藥物組成物已經凍乾，則凍乾材料首先在投與之前在合適的液體中重構。可以將凍乾物質在例如抑菌注射用水（BWFI）、生理鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）或與冷凍乾燥前蛋白質所處於的相同配製物中重構。

本發明之組成物可以以合適的劑量投與受試者，合適的劑量可以例如藉由投與漸增劑量的本發明之多特異性抗體構建體（其顯示出對於非黑猩猩靈長類動物例如獼猴的本文所述之跨物種特異性）的劑量遞增研究來確定。如上所述，顯示出本文所述之跨物種特異性的本發明之多特異性抗體構建體可有利地以相同形式用於非黑猩猩靈長類動物的臨床前試驗中以及作為藥物用於人。劑量方案將由主治醫師和臨床因素確定。如在醫學領域中熟知的，任何一個患者的劑量取決於許多因素，包括患者體型、體表面積、年齡、有待投與的具體化合物、性別、投與時間和途徑、一般健康狀況和同時投與的其他藥物。

術語「有效劑量（effective dose或effective dosage）」定義為足以實現或至少部分實現所希望效應的量。術語「治療有效劑量」定義為足以治癒或至少部分阻止已罹患疾病的患者的疾病及其併發症的量。對此用途有效的量或劑量將取決於有待治療的病狀（適應症）、遞送的多特異性抗體構建體、治療背景和目標、疾病的嚴重程度、先前療法、患者的臨床病史和對治療劑的反應、投與途徑、患者的體型（體重、體表或器官大小）和/或病狀（年齡和一般健康狀況）以及患者自體免疫系統的一般狀態。可以根據主治醫師的判斷調整適當的劑量，使得其可以向患者一次投與或經一系列給藥進行投與，並且目的係獲得最佳治療效果。

治療有效量的本發明之多特異性抗體構建體較佳的是導致疾病症狀的嚴重程度降低、疾病無症狀期的頻率或持續時間增加或預防由於疾病痛苦引起的損傷或殘疾。對於治療表現MSLN的腫瘤，治療有效量的本發明之多特異性抗體構建體例如抗MSLN/抗CD40多特異性抗體構建體較佳的是將相對於未治療的患者抑制細胞生長或腫瘤生長至少約20%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%或至少約90%。可以在預測在人腫瘤中的功效的動物模型中評價化合物抑制腫瘤生長的能力。

藥物組成物可以作為唯一的治療劑投與，或者根據需要與其他療法如抗癌療法（例如其他蛋白質和非蛋白質藥物）結合投與。該等藥物可以與包含本文所定義的本發明之多特異性抗體構建體的組成物同時投與，或者在給予所述多特異性抗體構建體之前或之後分別以時間限定的間隔和劑量投與。

如本文所用的，術語「有效和無毒劑量」係指耐受劑量的本發明多特異性抗體構建體，其足夠高以引起病理細胞耗竭、腫瘤消除、腫瘤縮小或疾病穩定而不具有或本質上不具有主要毒性作用。這樣的有效和無毒劑量可以例如藉由本領域描述的劑量遞增研究來確定，並且該有效和無毒劑量應低於誘導嚴重不良事件的劑量（劑量限制性毒性，DLT）。

如本文所用的，術語「毒性」係指在不良事件或嚴重不良事件中表現的藥物的毒性作用。該等副作用可能係指投與後藥物通常缺乏耐受性和/或缺乏局部耐受性。毒性可能還包括由藥物引起的致畸或致癌作用。

如本文所用的，術語「安全性」、「體內安全性」或「耐受性」定義了在投與後沒有立即引起嚴重不良事件（局部耐受）和在較長的用藥期間不引起嚴重不良事件的情況下藥物的投與。可以例如在治療期間和訪視期間定期評估「安全性」、「體內安全性」或「耐受性」。測量包括臨床評估（例如器官表現）和實驗室異常篩查。可以進行臨床評估，並根據NCI-CTC和/或MedDRA標準記錄/編碼與正常發現的偏差。器官表現可包括諸如過敏/免疫學、血液/骨髓、心律失常、凝血等標準，如例如在不良事件的通用術語標準v3.0（CTCAE）中所述。可以測試的實驗室參數包括例如血液學、臨床化學、凝血譜和尿液分析以及其他體液（如血清、血漿、淋巴或脊髓液、液體等）的檢查。因此可以評估安全性，例如藉由體檢、成像技術，即超音波、X射線、CT掃描、核磁共振成像（MRI）、採用技術設備的其他措施（即心電圖）、生命徵象、藉由測量實驗室參數和記錄不良事件。例如，可以藉由組織病理學和/或組織化學方法檢查非黑猩猩靈長類動物在根據本發明之用途和方法中的不良事件。以上術語也在以下中提及：例如Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals S6 [生物技術衍生藥物的臨床前安全性評價S6]；ICH Harmonised Tripartite Guideline [ICH三方協調指南]；ICH Steering Committee meeting on July 16, 1997 [1997年7月16日的ICH指導委員會會議]。

在另外的實施方式中，本發明提供了套組，該套組包含本發明之多特異性抗體構建體、根據本發明之方法產生的多特異性抗體構建體、本發明之多核苷酸、本發明之載體和/或本發明之宿主細胞。

在本發明之背景下，術語「套組」意指兩種或更多種組分（其中一種對應於本發明之多特異性抗體構建體、藥物組成物、載體或宿主細胞）一起包裝在容器、接受器或其他中。因此，套組可以被描述為足以實現特定目標的一組產品和/或器具，其可以作為單個單元銷售。

該套組可以包含具有任何適當的形狀、大小和材料（較佳的是防水，例如塑膠或玻璃）的一個或多個器皿（例如小瓶、安瓿、容器、注射器、瓶子、袋子），該一個或多個器皿含有合適的投與劑量（見上文）的本發明之多特異性抗體構建體或藥物組成物。套組可另外包含使用說明書（例如以單頁或安裝手冊的形式）、用於投與本發明之多特異性抗體構建體的裝置（如注射器、泵、輸注器等）、用於重構本發明之多特異性抗體構建體的裝置和/或用於稀釋本發明之多特異性抗體構建體的裝置。

本發明還提供了用於單劑量投與單元的套組。本發明之套組還可以含有包含乾燥/凍乾的多特異性抗體構建體的第一器皿和包含水性製劑的第二器皿。在本發明之某些實施方式中，提供了含有單室和多室預填充注射器（例如液體注射器和凍乾注射器）的藥劑盒。

實例

抗間皮素抗體的產生和表徵

抗間皮素抗體產生。

如前所述（US 20170029502 A1）或藉由對XENOMOUSE®轉基因小鼠進行免疫接種來產生針對人類間皮素的完全人抗體（美國專利第6,114,598號；第6,162,963號；第6,833,268號；第7,049,426號；第7,064,244號，將其藉由引用以其全文併入本文中；Green等人, 1994,Nature Genetics [自然遺傳學] 7: 13-21；Mendez等人, 1997,Nature Genetics [自然遺傳學] 15:146-156；Green和Jakobovits, 1998,J. Ex. Med [實驗醫學雜誌], 188: 483-495；Kellerman和Green,Current Opinion in Biotechnology [生物技術新觀點] 13, 593-597, 2002）。來自XMG4-K和XMG4-KL XENOMOUSE®品系的動物用於該等免疫接種。將動物用交替的可溶人間皮素-His和食蟹獼猴間皮素-His進行免疫接種。針對人間皮素和食蟹獼猴間皮素具有最高抗原特異性血清天然效價的動物用於產生融合瘤（Kohler和Milstein, 1975）。藉由在合適的培養基（例如達爾伯克改良伊格爾培養基（Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM）；加利福尼亞州卡爾斯巴德的英傑公司（Invitrogen, Carlsbad, CA））中研磨，自淋巴組織解離來自脾臟和/或引流淋巴結的彙集的淋巴細胞（來自各次收穫）。使用標準方法選擇和/或擴增B細胞，且使用本領域中已知的技術與合適融合配偶體融合。然後選擇與人間皮素和食蟹獼猴間皮素結合的融合瘤上清液用於進一步表徵。

抗間皮素抗體的定序。

對於XENOMOUSE®衍生抗體，使用Qiagen RNeasy mini或Invitrogen mRNA catcher plus套組，自含有產生抗間皮素抗體的融合瘤細胞的孔純化RNA（總RNA或mRNA）。經純化的RNA用於使用經由逆轉錄的cDNA合成、接著聚合酶鏈反應（RT-PCR）來擴增抗體重鏈和輕鏈可變區（V）基因。使用Qiagen單步逆轉錄酶PCR套組（凱傑公司（Qiagen））獲得完全人抗體γ重鏈。使用Qiagen單步逆轉錄酶PCR套組（凱傑公司（Qiagen））獲得完全人κ輕鏈。通過生物資訊學方法，自對應核酸序列推導出胺基酸序列。接著分析衍生的胺基酸序列，以確定抗體的種系序列起源，且鑒別與種系序列的偏差。將對應於定序抗體的互補決定區（CDR）的胺基酸序列比對，且該等比對用於藉由類似性將選殖分組。

抗體產生。

將選擇的和定序的抗間皮素抗體重鏈和輕鏈亞選殖到哺乳動物表現載體中，並且產生並純化個別抗體。將所有抗體用人IgG1 SEFL2（REF）重鏈序列重新轉換。

抗體與人和食蟹獼猴間皮素的結合。

抗間皮素抗體與人間皮素的結合藉由流動式細胞分析術在工程化以表現人間皮素的CHO細胞（huMSLN-CHO）上證實。將人MSLN轉染的CHO細胞用各種濃度的純化的抗間皮素抗體孵育，洗滌，並且用對人IgG特異性的螢光共軛的第二抗體標記。然後藉由流動式細胞分析術分析細胞。將螢光陽性細胞的百分比相對於抗體濃度作圖（圖1）並且使用Prism GraphPad軟體確定EC50（表1）。還藉由Octet測定（表1）、量化結合率（Kon）、解離率（Kdis）和平衡結合常數（KD）測量了抗人間皮素抗體與重組人和食蟹獼猴（cyno）間皮素的可溶形式的結合親和力。該等數據表明所有抗MSLN抗體與人和食蟹獼猴間皮素兩者結合。

[表 1 ]. 抗 MSLN 抗體與人和食蟹獼猴間皮素（ MSLN ）之結合

				Octet 結合人 MSLN	Octet 結合食蟹獼猴 MSLN
PL#	BioReg ID	選殖	在細胞結合人 MSLN EC50 （ uM ）中	Kon （ 1/Ms ）	Kdis （ 1/s ）	KD （ nM ）	Kon （ 1/Ms ）	Kdis （ 1/s ）	KD （ nM ）
PL-55235	4553	6F4	0.01	4.50E + 05	8.77E-05	0.19	3.35E + 05	1.75E-03	5.2
PL-55238	4559	7G11	0.003	5.48E + 05	1.85E-04	0.34	2.94E + 05	1.88E-03	6.4
PL-54455	3966	4H6	0.002	3.58E + 05	5.16E-05	0.14	3.92E + 05	7.64E-04	1.9
PL-54456	3967	4G12	0.001	8.42E + 04	1.62E-05	0.19	1.24E + 05	5.60E-04	4.5

抗 CD40 促效劑抗體的產生和表徵

抗 CD40 抗體產生。

藉由對XENOMOUSE®轉基因小鼠進行免疫接種來產生針對人CD40的完全人抗體（美國專利第6,114,598號；第6,162,963號；第6,833,268號；第7,049,426號；第7,064,244號，將其藉由引用以其全文併入本文中；Green等人, 1994,Nature Genetics [自然遺傳學] 7: 13-21；Mendez等人, 1997,Nature Genetics [自然遺傳學] 15: 146-156；Green和Jakobovits, 1998,J. Ex. Med [實驗醫學雜誌], 188: 483-495；Kellerman和Green,Current Opinion in Biotechnology [生物技術新觀點] 13, 593-597, 2002）。來自XMG4-K和XMG4-KL XENOMOUSE®品系的動物用於該等免疫接種。多種免疫原和免疫途徑用於產生抗人CD40免疫反應。對於可溶性重組蛋白免疫，將小鼠用交替的可溶性人CD40-Fc和食蟹獼猴CD40-Fc進行免疫接種。對於基於細胞的免疫，將CHO-S細胞用野生型人CD40或食蟹獼猴CD40作為免疫原的來源短暫轉染。將動物用該等短暫轉染的CHO細胞免疫接種。針對人CD40和食蟹獼猴CD40具有最高抗原特異性血清天然效價的動物用於產生融合瘤（Kohler和Milstein, 1975）。藉由在合適的培養基（例如達爾伯克改良伊格爾培養基（Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM）；加利福尼亞州卡爾斯巴德的英傑公司（Invitrogen, Carlsbad, CA））中研磨，自淋巴組織解離來自脾臟和/或引流淋巴結的彙集的淋巴細胞（來自各次收穫）。使用標準方法選擇和/或擴增B細胞，且使用本領域中已知的技術與合適融合配偶體融合。鑒定與人和食蟹獼猴CD40結合的融合瘤上清液。

抗體產生。

選擇顯示與人和食蟹獼猴CD40結合的融合瘤上清液用於產生純化的抗CD40抗體（使用本領域已知的技術）（表2）。

[表 2 ]. 抗 CD40 抗體

	HC 序列
抗體 ID	VH 種系	HC CDR3	IgG 亞類
29H10	VH1\|1-02/D5\|5-18\|RF1/JH5	ERISMVRGVGHNWFAP（SEQ ID NO: 150）	IgG4
4G7	VH1\|1-02/D3\|3-16\|RF3/JH4	EKITMTGIYFDY（SEQ ID NO: 198）	IgG4
33H6	VH1\|1-02/D1\|1-7\|RF3/JH6	EKPRYFDSFYYYLMDV（SEQ ID NO: 210）	IgG4
35F11	VH3\|3-33/D5\|5-24\|RF3/JH4	DGRNYVYFDN（SEQ ID NO: 186）	IgG4
30A12	VH3\|3-23/D6\|6-13\|RF1/JH4	GYSNSWWYFDY（SEQ ID NO: 180）	IgG4
36F3	VH6\|6-01/D6\|6-13\|RF2/JH4	GAAPFDY（SEQ ID NO: 144）	IgG4
39C2	VH1\|1-02/D1\|1-1\|RF1/JH4	ERCRTTNCYLDY（SEQ ID NO: 192）	IgG4
33H9	VH3\|3-33/D7\|7-27\|RF1/JH6	GGGHWNYEGHYYGMDV（SEQ ID NO: 138）	IgG4
37A6	VH3\|3-11/D6\|6-6\|RF2/JH4	DLAAGATGGLDC（SEQ ID NO: 174）	IgG4

與人和食蟹獼猴 CD40 結合的抗 CD40 抗體。

藉由Octet測定（表3）、量化結合率（Kon）、解離率（Kdis）和平衡結合常數（KD）測量了抗人CD40抗體與人和食蟹獼猴（cyno）CD40的結合親和力。藉由在HEK293細胞上表現人TNFR1、TNFR2、TNFR10或TNFR14（藉由暫態轉染編碼該等基因的表現載體）來評估抗CD40抗體與相關TNF受體超家族（TNFRSF）成員的交叉反應性。藉由流動式細胞分析術確定顯示的抗人CD40抗體與該等轉染細胞的結合。計算的相對於對照細胞的螢光強度的幾何平均值表明抗CD40與其他TNFRSF成員的最小化結合（表4）。藉由在HEK293細胞上表現食蟹獼猴或小鼠CD40（藉由暫態轉染編碼該等基因的表現載體）來計算抗CD40抗體與食蟹獼猴和小鼠CD40的交叉反應性。藉由流動式細胞分析術確定顯示的抗人CD40抗體與過表現食蟹獼猴和小鼠CD40的細胞的結合。計算的相對於對照細胞的螢光強度的幾何平均值表明抗CD40與食蟹獼猴（cyno）CD40穩健的結合，但不與小鼠CD40結合（表5）。總體而言，該等數據表明抗CD40抗體與人和食蟹獼猴CD40的強的和等效的結合，但是與相關的TNFRSF成員或小鼠CD40的最小化結合。 [表 3 ]. 抗 CD40 抗體與人和食蟹獼猴 CD40 的結合親和力

	人 CD40	食蟹獼猴 CD40
抗體 ID	Kon （ 1/Ms ）	Kdis （ 1/s ）	KD （ nM ）	Kon （ 1/Ms ）	Kdis （ 1/s ）	KD （ nM ）
29H10	3.98E + 05	1.64E-04	0.41	6.12E + 05	2.44E-04	0.39
4G7	1.23E + 06	1.08E-03	0.88	1.13E + 06	1.93E-03	1.72
33H6	5.09E + 05	6.80E-04	1.34	5.56E + 05	5.77E-04	1.04
35F11	5.56E + 05	3.10E-04	0.55	5.06E + 05	3.14E-04	0.62
30A12	5.33E + 05	3.68E-04	0.69	5.44E + 05	3.06E-04	0.56
36F3	6.45E + 04	4.43E-04	6.87	5.22E + 04	2.10E-04	4.02
39C2	5.99E + 05	6.14E-04	1.02	5.18E + 05	3.76E-04	0.73
33H9	4.07E + 05	2.38E-04	0.58	4.02E + 05	1.68E-04	4.17
37A6	6.12E + 05	6.72E-04	1.10	5.31E + 05	3.87E-04	0.73

[表 4 ]. 與相關的 TNF 受體超家族成員結合的抗 CD40 抗體的存在（相對於對照值的倍數）

抗體 ID	TNFR1	TNFR2	TNFR10	TNFR14
29H10	0.98	0.88	0.89	0.84
4G7	0.97	0.90	0.87	0.89
33H6	1.00	0.81	0.77	0.80
35F11	1.00	0.85	0.73	0.74
30A12	1.07	0.89	0.91	0.96
36F3	0.99	0.92	0.86	0.88
39C2	1.00	0.90	0.86	0.89
33H9	1.03	0.93	0.89	0.88
37A6	0.99	0.87	0.88	0.87

[表 5 ]. 抗 CD40 抗體與食蟹獼猴和小鼠 CD40 的物種交叉反應性（相對於對照值的倍數）

抗體 ID	食蟹獼猴	小鼠
29H10	71	0.8
4G7	57	0.9
33H6	74	0.9
35F11	76	0.8
30A12	71	1.3
36F3	82	0.9
39C2	87	0.9
33H9	73	0.9
37A6	92	0.9

藉由抗 CD40 抗體的 CD40 的交聯依賴性激活。

CD40受體對人B細胞的刺激導致激活和增殖。將純化的原代人B細胞接種到384孔測定板中並且用IL-4/IL-21（作為共分裂原）、不同濃度的抗CD40抗體、和蛋白質G存在（圖2A）或不存在（圖2B）下處理。蛋白質G的單個分子能結合多個IgG分子並且因此可以在溶液中交聯抗體。將細胞孵育5天並且使用CellTiter-Glo檢查細胞增殖。由於檢查的所有抗CD40抗體均是IgG4，因此將無關的IgG4同型抗體作為陰性對照包括。計算EC50和最大活性百分比（表6）。所有抗CD40抗體在蛋白質G存在下均誘導B細胞的穩健增殖但是在蛋白質G不存在下具有最小的活性，這表明僅與CD40結合的抗CD40抗體不足以刺激CD40，並且需要另外的交聯的抗體。 [表 6 ]. 在人 B 細胞功能測定中具有或不具有交聯的抗 CD40 抗體的活性

抗體 ID	無交聯的 EC50 （ nM ）	無交聯的最大倍數變化	具有交聯的 EC50 （ nM ）	具有交聯的最大倍數變化
29H10	＞ 16.7	1.35	0.235	18.22
4G7	＞ 16.7	1.19	0.430	18.05
33H6	＞ 16.7	1.21	0.237	18.24
35F11	＞ 16.7	1.33	0.371	24.16
30A12	＞ 16.7	1.45	0.362	23.78
36F3	＞ 16.7	1.83	0.558	16.85
39C2	＞ 16.7	1.24	0.529	23.01
33H9	＞ 16.7	1.35	0.344	23.17
37A6	＞ 16.7	1.19	0.504	27.09

抗 CD40 抗體對人 CD40 配體與人 CD40 結合的影響。

為了評估抗CD40抗體阻斷CD40配體與CD40相互作用的能力，進行了基於流動式細胞分析術的配體結合測定，以測量螢光標記的可溶性人CD40L與在293T細胞（藉由用編碼此基因的表現載體轉染）上過表現的人CD40的結合。將百分比配體結合抑制計算為[（在抗CD40不存在下的結合gMFI的CD40L）-（在抗CD40存在下的結合gMFI的CD40L）]/（在抗CD40不存在下的結合gMFI的CD40L）。gMFI：幾何平均螢光強度。所有抗CD40抗體均顯示對CD40L結合至CD40受體的能力的最小影響（表7）。 [表 7 ]. 抗 CD40 抗體不阻斷 CD40-CD40L 相互作用

抗體 ID	配體結合抑制（ % ）
20 ug/ml	10 ug/ml	5 ug/ml	2.5 ug/ml	配體阻斷劑
29H10	-7%	1%	-8%	-11%	無
4G7	3%	14%	24%	21%	無
33H6	7%	11%	4%	-8%	無
35F11	8%	51%	-5%	-15%	無
30A12	-3%	-8%	-15%	-16%	無
36F3	1%	14%	10%	1%	無
39C2	2%	3%	-6%	7%	無
33H9	1%	3%	9%	-3%	無
37A6	12%	6%	2%	-19%	無

抗人 CD40 抗體對 CD40L- 誘導的 B 細胞激活的影響。

一些對TNFRSF成員具有特異性的抗體已顯示可藉由其正常配體，可能藉由聚集受體並且降低配體誘導的激活的閾值來增強受體的激活。為了評估抗CD40抗體增強CD40配體活性的能力，將純化的原代人B細胞在1 ug/ml的顯示的CD40抗體存在或不存在下用各種濃度的重組人CD40L處理。將細胞孵育5天並且使用CellTiter-Glo檢查細胞增殖。無抗CD40抗體誘導CD40配體的EC50的顯著改變，以刺激人B細胞的增殖（表8）。 [表 8 ]. 抗 CD40 抗體不加強 CD40L 的活性

抗體 ID	CD40L EC50 （ ug/ml ）
無抗體	0.001085
29H10	0.000715
4G7	0.00104
33H6	0.001135
35F11	0.006655
30A12	0.00081
36F3	0.012975
39C2	0.000985
33H9	無活性
37A6	0.00139

抗 CD40 抗體的定序。

使用Qiagen RNeasy mini或Invitrogen mRNA catcher plus套組，自含有產生抗間皮素抗體的融合瘤細胞的孔純化RNA（總RNA或mRNA）。經純化的RNA用於使用經由逆轉錄的cDNA合成、接著聚合酶鏈反應（RT-PCR）來擴增抗體重鏈和輕鏈可變區（V）基因。使用Qiagen單步逆轉錄酶PCR套組（凱傑公司（Qiagen））獲得完全人抗體γ重鏈。使用Qiagen單步逆轉錄酶PCR套組（凱傑公司（Qiagen））獲得完全人κ輕鏈。通過生物資訊學方法，自對應核酸序列推導出胺基酸序列。接著分析衍生的胺基酸序列，以確定抗體的種系序列起源，且鑒別與種系序列的偏差。將對應於定序抗體的互補決定區（CDR）的胺基酸序列比對，且該等比對用於藉由類似性將選殖分組。

抗 CD40 抗體序列的優化。

藉由標準重組DNA技術進行選擇抗CD40抗體的工程化以去除抗體重和輕鏈可變區中的潛在的序列責任（sequence liabilities）。該等抗體藉由在細胞系中過表現來產生，並且使用本領域已知的技術純化。如上所述，然後在具有和不具有蛋白質G交聯的人B細胞增殖測定中評估純化的抗體。計算EC50和最大活性百分數（表9），其顯示工程化的抗體變體維持與其親本抗體序列相似的交聯依賴性促效劑活性。 [表 9 ]. 抗 CD40 抗體的工程化變體的功能活性

抗體名稱	抗體 ID	無交聯的 EC50 （ nM ）	無交聯的最大活性 %	具有交聯的 EC50 （ nM ）	具有交聯的最大活性 %
29H10	4877-1	＞ 16.7	4.4	0.37	65.9
30A12	4878-1	＞ 16.7	8.6	0.40	89.1
30A12.001	4894-1	＞ 5.93	12.2	0.08	87.2
30A12.002	4879-1	＞ 16.7	19.0	0.36	89.2
30A12.003	4880-1	＞ 16.7	1.2	0.41	83.3
33H6	4883-1	＞ 16.7	6.5	0.26	73.4
33H6.001	4884-1	＞ 16.7	10.8	0.46	92.7
33H6.002	4885-1	＞ 16.7	11.5	0.40	81.2
33H6.003	4895-1	＞ 6.22	6.5	0.43	61.4
33H6.004	4886-1	＞ 16.7	20.9	0.44	73.5
33H9	4897-1	＞ 13.4	2.3	0.19	88.9
35F11	4868-1	＞ 16.7	4.4	0.30	119.7
35F11.001	5052-2	＞ 16.7	12.5	0.85	96.5
35F11.002	5053-2	＞ 16.7	6.4	0.77	84.2
35F11.003	5054-2	＞ 16.7	10.5	0.60	74.6
35F11.004	5055-2	＞ 16.7	10.0	0.90	83.7
35F11.005	5056-2	＞ 16.7	5.4	0.68	77.8
35F11.006	5057-2	＞ 16.7	4.8	0.49	109.0
36F3	4891-1	＞ 16.7	8.2	0.30	81.9
37A6	4865-1	＞ 16.7	0.4	0.30	80.9
37A6.001	4866-1	＞ 16.7	-0.2	0.32	86.7
37A6.002	4892-1	＞ 5.87	-1.9	0.11	87.3
37A6.003	4867-1	＞ 16.7	-1.1	0.21	73.0
39C2	4887-1	＞ 16.7	6.1	0.21	76.6
39C2.001	4888-1	＞ 16.7	1.2	＞ 16.7	2.2
39C2.002	4889-1	＞ 16.7	21.9	4.36	86.5
39C2.003	4890-1	＞ 16.7	4.6	＞ 16.7	1.7
4G7	4869-1	＞ 16.7	6.0	0.50	70.5
4G7.001	4893-1	＞ 5.99	2.7	0.83	80.5
4G7.002	4870-1	＞ 16.7	2.1	0.62	72.2
4G7.003	4871-1	＞ 16.7	3.9	0.77	89.1
4G7.004	4872-1	＞ 16.7	2.3	1.01	96.8

靶向間皮素的 CD40 促效劑二價雙特異性抗體的產生和表徵

雙特異性抗體產生。

為了產生間皮素依賴性CD40促效劑，使用以上所述之抗間皮素和抗CD40抗體的可變區結合結構域，生成了IgG-Fab形式（圖3A）或IgG-scFv形式（圖3B）的能與人間皮素和人CD40結合的二價雙特異性抗體。

IgG-Fab 形式的間皮素 x CD40 雙特異性促效劑抗體的產生和評估。

將間皮素x CD40雙特異性抗體的小圖以IgG-Fab形式（表10）產生並且使用Octet測定評估與人和食蟹獼猴CD40以及人和食蟹獼猴間皮素的可溶性形式的結合（表11）。計算結合速率（K_on ）、解離速率（K_dis ）、和平衡結合常數（K_D ）。大多數雙特異性抗體顯示與人和食蟹獼猴CD40和間皮素兩者的高親和力結合。接下來，針對其誘導人B細胞的間皮素依賴性激活的能力評估該等雙特異性抗體。將表現人間皮素CHO細胞接種在96孔板中。第二天，將不同濃度的間皮素x CD40 IgG-Fab抗體添加至具有純化的人B細胞的孔中，並且將板孵育另外的48小時。藉由流動式細胞分析術在B細胞上量化CD86（CD40介導的B細胞激活的標記物）的上調。計算對於CD86上調的EC50值，並且該值表明大多數間皮素 x CD40 IgG-Fab雙特異性抗體在表現人間皮素的CHO細胞存在下能夠B細胞激活（表12）。 [表 10 ]. 抗 CD40xMSLN IgG-Fab 分子

抗體 ID	IgG （ MSLN ）	Fab （ CD40 ）	IgG （ CD40 ）	Fab （ MSLN ）
13468-1	4G12	30A12
5966-1	4H6	37A6
5978-1	7G11	33H9
13473-1			30A12	4G12
13474-1			35F11	4G12
13469-1	4G12	35F11
5967-1	6F4	29H10
6057-1	7G11	37A6
5991-1			30A12	6F4
6003-1			35F11	6F4
13470-1	4G12	37A6
5968-1	6F4	30A12
6058-1	7G11	39C2
5992-1			30A12	7G11
13475-1			36F3	4G12
13471-1	4G12	39C2
5970-1	6F4	33H9
5982-1			4G7	4H6
6007-1			36F3	6F4
5960-1	4H6	29H10
5972-1	6F4	36F3
5983-1			4G7	6F4
5995-1			33H6	6F4
5946-1			37A6	4H6
5961-1	4H6	30A12
5973-1	6F4	37A6
13472-1			29H10	4G12
5998-1			33H9	4H6
5947-1			37A6	7G11
5963-1	4H6	33H9
5975-1	7G11	29H10
5987-1			29H10	6F4
5999-1			33H9	6F4
5965-1	4H6	36F3
5976-1	7G11	30A12
5988-1			29H10	7G11
6000-1			33H9	7G11

[表 11 ]. 與人和食蟹獼猴 CD40 以及間皮素結合的抗 CD40xMSLN IgG-Fab 分子

huCD40 （ 1/-193 ）

食蟹獼猴 CD40 （ 1/-193 ）

huMSLN （ 296-598 ）

食蟹獼猴 MSLN （ 296-598 ）

抗體 ID

K _D （ nM ）

k _a （ M^-1 s^-1 ）

k _d （ s^-1 ）

K _D （ nM ）

k _a （ M^-1 s^-1 ）

k _d （ s^-1 ）

K _D （ nM ）

k _a （ M^-1 s^-1 ）

k _d （ s^-1 ）

K _D （ nM ）

k _a （ M^-1 s^-1 ）

k _d （ s^-1 ）

5959-1

0.4

5.11E+05

2.14E-04

0.7

6.21E + 05

4.28E-04

＜ 0.1

2.29E + 05

＞ 1.00E-05

6.0

1.10E + 05

6.58E-04

5960-1

0.4

4.20E + 05

1.82E-04

0.5

3.55E + 05

1.76E-04

0.2

7.98E + 05

1.79E-04

2.5

3.66E + 05

9.16E-04

5961-1

0.6

6.22E + 05

3.42E-04

0.8

3.39E + 05

2.66E-04

＜ 0.1

6.80E + 05

＞ 1.00E-05

2.7

3.56E + 05

9.58E-04

5963-1

＜ 0.1

8.85E + 04

＞ 1.00E-05

0.8

1.47E + 05

1.15E-04

0.2

8.46E + 05

1.56E-04

2.9

3.10E + 05

9.03E-04

5965-1

2.5

1.19E + 05

2.97E-04

2.7

9.51E + 04

2.55E-04

0.2

8.03E + 05

1.40E-04

2.1

4.24E + 05

8.96E-04

5966-1

0.7

5.84E + 05

4.03E-04

0.9

4.20E + 05

3.58E-04

0.2

8.78E + 05

1.76E-04

2.5

3.78E + 05

9.40E-04

5967-1

0.8

3.75E + 05

2.86E-04

＜ 0.1

1.83E + 05

＞ 1.00E-05

0.3

9.12E + 05

2.89E-04

6.4

3.71E + 05

2.36E-03

5968-1

0.4

6.50E + 05

2.56E-04

0.7

5.98E + 05

4.14E-04

0.3

1.03E + 06

3.53E-04

5.1

5.56E + 05

2.82E-03

5970-1

1.6

2.45E + 05

3.95E-04

1.3

1.63E + 05

2.08E-04

0.3

7.74E + 05

2.58E-04

5.8

4.31E + 05

2.48E-03

5972-1

4.0

1.34E + 05

5.31E-04

1.7

8.06E + 04

1.37E-04

0.5

5.68E + 05

2.70E-04

4.6

4.54E + 05

2.10E-03

5973-1

0.6

5.41E + 05

3.25E-04

0.6

6.69E + 05

4.04E-04

0.5

4.51E + 05

2.23E-04

5.5

3.90E + 05

2.13E-03

5975-1

＜ 0.2

4.41E + 05

＞ 1.00E-05

0.8

5.33E + 05

4.02E-04

0.8

4.20E + 05

3.41E-04

6.6

3.39E + 05

2.24E-03

5976-1

0.6

9.01E + 05

5.25E-04

0.3

7.95E + 05

2.32E-04

0.8

4.06E + 05

3.30E-04

7.6

3.15E + 05

2.40E-03

5978-1

＜ 0.3

7.77E + 04

＞ 1.00E-05

1.0

1.30E + 05

1.31E-04

0.8

3.90E + 05

2.98E-04

8.5

2.76E + 05

2.33E-03

6057-1

0.8

6.46E + 05

4.97E-04

0.7

1.00E + 06

7.04E-04

0.8

4.30E + 05

3.65E-04

9.2

2.54E + 05

2.33E-03

6058-1

0.6

9.27E + 05

5.29E-04

1.0

6.01E + 05

4.93E-04

0.8

3.81E + 05

3.17E-04

6.8

3.42E + 05

2.32E-03

5982-1

1.2

1.68E + 06

1.98E-03

1.5

1.28E + 06

1.89E-03

＜ 0.1

2.17E + 05

＞ 1.00E-05

4.7

2.27E + 05

1.06E-03

5983-1

1.7

1.12E + 06

1.95E-03

1.5

1.43E + 06

2.11E-03

1.0

2.63E + 05

2.72E-04

12.3

3.42E + 05

4.21E-03

5987-1

0.7

6.00E + 05

4.23E-04

0.7

7.52E + 05

5.26E-04

1.0

4.24E + 05

4.39E-04

18.3

2.10E + 05

3.83E-03

5988-1

0.3

1.66E + 06

4.76E-04

0.2

2.90E + 06

6.54E-04

2.5

1.44E + 05

3.61E-04

29.4

7.72E + 04

2.27E-03

5991-1

0.4

1.08E + 06

4.67E-04

0.2

1.86E + 06

4.23E-04

1.3

1.81E + 05

2.42E-04

31.9

1.52E + 05

4.83E-03

5992-1

0.3

1.34E + 06

4.21E-04

0.3

1.98E + 06

5.32E-04

1.9

1.44E + 05

2.68E-04

25.5

1.05E + 05

2.67E-03

5995-1

0.4

1.06E + 06

3.80E-04

0.2

1.80E + 06

3.77E-04

0.9

2.81E + 05

2.47E-04

26.2

1.12E + 05

2.93E-03

5998-1

0.3

7.12E + 05

2.26E-04

0.2

1.07E + 06

2.04E-04

0.6

6.20E + 05

3.81E-04

15.6

6.72E + 04

1.05E-03

5999-1

0.2

5.80E + 05

1.11E-04

0.6

3.95E + 05

2.44E-04

1.0

3.38E + 05

3.22E-04

30.9

1.26E + 05

3.89E-03

6000-1

0.3

6.59E + 05

1.83E-04

0.5

4.10E + 05

1.99E-04

1.1

3.64E + 05

3.94E-04

40.0

5.37E + 04

2.15E-03

6003-1

0.7

1.14E + 06

8.03E-04

0.5

1.58E + 06

7.73E-04

1.2

2.45E + 05

2.95E-04

62.6

8.58E + 04

5.37E-03

6007-1

3.3

1.41E + 05

4.63E-04

2.7

2.44E + 05

6.62E-04

0.8

4.92E + 05

4.09E-04

40.2

1.30E + 05

5.23E-03

5946-1

1.0

5.89E + 05

6.01E-04

0.9

5.91E + 05

5.20E-04

0.9

4.06E + 05

3.61E-04

3.1

2.64E + 05

8.25E-04

5947-1

1.1

5.14E + 05

5.72E-04

1.1

5.77E + 05

6.17E-04

1.2

2.77E + 05

3.46E-04

27.3

8.60E + 04

2.35E-03

[表 12 ]. 在表現人間皮素的 CHO 細胞存在下，人 B 細胞中的抗 CD40xMSLN IgG-Fab 分子功能活性

抗體 ID	EC50 （ nM ）
13468-1	0.007
5966-1	0.008
5978-1	0.033
13473-1	0.007
13474-1	0.009
13469-1	0.011
5967-1	0.005
6057-1	0.018
5991-1	0.004
6003-1	0.007
13470-1	0.008
5968-1	0.004
6058-1	0.010
5992-1	0.007
13475-1	0.015
13471-1	0.016
5970-1	0.005
5982-1	0.005
6007-1	0.009
5960-1	0.006
5972-1	0.007
5983-1	0.004
5995-1	0.006
5946-1	0.007
5961-1	0.004
5973-1	0.006
13472-1	＞ 0.523
5998-1	0.007
5947-1	0.003
5963-1	0.022
5975-1	0.022
5987-1	0.003
5999-1	0.005
5965-1	0.020
5976-1	0.010
5988-1	0.004
6000-1	0.002

IgG-scFv 形式的間皮素 x CD40 雙特異性促效劑抗體的產生和評估。

將間皮素x CD40雙特異性抗體的小圖以IgG-scFv形式（表13）產生並且使用Octet測定評估與人和食蟹獼猴CD40以及人和食蟹獼猴間皮素的可溶性形式的結合（表14）。計算結合速率（Kon）、解離速率（Kdis）、和平衡結合常數（KD）。大多數雙特異性抗體顯示與人和食蟹獼猴CD40和間皮素兩者的高親和力結合。接下來，針對其誘導人B細胞的間皮素依賴性激活的能力評估該等雙特異性抗體。將表現人間皮素CHO細胞接種在96孔板中。第二天，將不同濃度的間皮素x CD40 IgG-scFv抗體添加至具有純化的人B細胞的孔中，並且將板孵育另外的48小時。藉由流動式細胞分析術在B細胞上量化CD86（CD40介導的B細胞激活的標記物）的上調。計算對於CD86上調的EC50值，並且該值表明大多數間皮素 x CD40 IgG-scFv雙特異性抗體在表現人間皮素的CHO細胞存在下能夠B細胞激活（表15）。 [表 13 ]. 抗 CD40xMSLN IgG-scFv 分子

抗體 ID	IgG （ MSLN ）	scFv （ CD40 ）	IgG （ CD40 ）	scFv （ MSLN ）
6028-2	4H6	36F3
6030-2	4H6	39C2
6032-2	6F4	29H10
6043-2			30A12	4H6
6044-2			30A12	6F4
6033-2	6F4	30A12
6034-2	6F4	33H6
6035-2	6F4	33H9
6056-2	6F4	39C2
6039-2			4G7	4H6
6040-2			4G7	6F4
6041-2			29H10	4H6
6042-2			29H10	6F4
6045-2			33H6	4H6
6046-2			33H6	6F4
6047-2			33H9	4H6
6048-2			33H9	6F4
6049-2			35F11	4H6
6050-2			35F11	6F4
6051-2			36F3	4H6
6052-2			36F3	6F4
6055-2			37A6	4H6
6054-2			37A6	6F4
6053-2			39C2	4H6
6023-2			39C2	6F4

[表 14 ]. 與人和食蟹獼猴 CD40 和間皮素結合的抗 CD40 x MSLN IgG-scFv 分子

huCD40 （ 1/-193 ）

食蟹獼猴 CD40 （ 1/-193 ）

huMSLN （ 296-598 ）

食蟹獼猴 MSLN （ 296-598 ）

抗體 ID

K _D （ nM ）

k _a （ M^-1 s^-1 ）

k _d （ s^-1 ）

K _D （ nM ）

k _a （ M^-1 s^-1 ）

k _d （ s^-1 ）

K _D （ nM ）

k _a （ M^-1 s^-1 ）

k _d （ s^-1 ）

K _D （ nM ）

k _a （ M^-1 s^-1 ）

k _d （ s^-1 ）

6028-2

10

7.69E + 04

7.67E-04

7.1

9.64E + 04

6.87E-04

0.2

7.33E + 05

1.43E-04

1.8

3.71E + 05

6.80E-04

6030-2

7.9

2.14E + 05

1.68E-03

6.0

3.01E + 05

1.81E-03

0.2

7.08E + 05

1.75E-04

1.9

3.53E + 05

6.87E-04

6032-2

2.0

2.04E + 05

4.07E-04

1.7

2.38E + 05

4.07E-04

0.4

6.92E + 05

3.06E-04

5.8

3.45E + 05

1.99E-03

6043-2

1.2

3.21E + 05

4.07E-04

0.9

4.22E + 05

4.07E-04

0.1

4.44E + 05

3.87E-05

4.3

2.76E + 05

1.20E-03

6044-2

1.3

3.24E + 05

4.24E-04

0.8

4.85E + 05

3.98E-04

1.5

3.30E + 05

5.06E-04

17

3.43E + 05

5.87E-03

6033-2

4.2

3.11E + 05

1.32E-03

2.9

4.88E + 05

1.42E-03

0.4

4.49E + 05

1.97E-04

5.9

3.31E + 05

1.94E-03

6034-2

2.1

1.66E + 05

3.50E-04

2.1

1.82E + 05

3.84E-04

0.3

6.00E + 05

1.96E-04

5.4

2.96E + 05

1.59E-03

6035-2

＜ 0.1

1.03E + 05

＜ 1.00E-05

＜ 0.1

9.43E + 04

＜ 1.00E-05

0.3

6.75E + 05

2.29E-04

6.3

2.71E + 05

1.71E-03

6056-2

4.4

3.63E + 05

1.59E-03

5.8

2.98E + 05

1.73E-03

0.3

7.19E + 05

2.18E-04

5.1

3.43E + 05

1.76E-03

6039-2

1.4

1.12E + 06

1.61E-03

2.1

1.04E + 06

2.21E-03

0.3

5.13E + 05

1.77E-04

5.4

2.81E + 05

1.50E-03

6040-2

1.3

1.39E + 06

1.86E-03

1.9

9.24E + 05

1.73E-03

1.2

4.24E + 05

5.16E-04

32

2.35E + 05

7.63E-03

6041-2

0.5

7.09E + 05

3.57E-04

0.6

5.39E + 05

3.47E-04

0.4

5.04E + 05

1.79E-04

5.7

1.58E + 05

9.05E-04

6042-2

0.7

6.32E + 05

4.29E-04

0.8

3.94E + 05

3.03E-04

0.9

5.29E + 05

4.60E-04

20

2.55E + 05

5.04E-03

6045-2

0.4

8.81E + 05

3.87E-04

0.6

5.80E + 05

3.27E-04

0.3

5.23E + 05

1.45E-04

4.6

1.87E + 05

8.65E-04

6046-2

0.5

8.93E + 05

4.05E-04

0.5

5.94E + 05

3.14E-04

0.9

5.27E + 05

4.76E-04

18

2.50E + 05

4.59E-03

6047-2

0.2

5.77E + 05

1.32E-04

＜ 0.3

3.46E + 04

＜ 1.00E-05

0.4

3.75E + 05

1.38E-04

6.0

1.68E + 05

1.01E-03

6048-2

0.5

5.45E + 05

2.59E-04

0.3

4.26E + 05

1.33E-04

1.0

5.29E + 05

5.53E-04

22

2.39E + 05

5.35E-03

6049-2

0.9

8.34E + 05

7.21E-04

1.2

5.06E + 05

5.82E-04

0.3

5.36E + 05

1.71E-04

5.1

1.85E + 05

9.53E-04

6050-2

0.8

7.97E + 05

6.49E-04

1.2

5.12E + 05

6.09E-04

0.8

5.41E + 05

4.51E-04

15

2.77E + 05

4.27E-03

6051-2

3.5

1.24E + 05

4.31E-04

4.7

1.00E + 05

4.66E-04

0.2

5.99E + 05

1.35E-04

5.5

1.91E + 05

1.05E-03

6052-2

2.5

2.18E + 05

5.56E-04

3.3

1.05E + 05

3.50E-04

0.7

7.13E + 05

5.33E-04

19

2.69E + 05

5.19E-03

6055-2

0.5

1.46E + 06

7.87E-04

0.8

7.45E + 05

5.70E-04

0.4

5.52E + 05

2.11E-04

6.1

1.79E + 05

1.09E-03

6054-2

0.8

4.38E + 05

3.33E-04

1.4

2.77E + 05

4.00E-04

1.3

3.67E + 05

4.62E-04

17

3.36E + 05

5.78E-03

6053-2

0.9

4.53E + 05

4.27E-04

0.5

2.63E + 05

1.25E-04

0.4

3.41E + 05

1.51E-04

4.3

2.52E + 05

1.09E-03

6023-2

1.0

4.31E + 05

4.40E-04

0.9

4.47E + 05

4.13E-04

1.1

4.32E + 05

4.60E-04

16

3.26E + 05

5.35E-03

[表 15 ]. 在表現人間皮素的 CHO 細胞存在下，人 B 細胞中的抗 CD40xMSLN IgG-scFv 分子功能活性

抗體 ID	EC50 （ nM ）
6028-2	0.012240302
6030-2	0.010141789
6032-2	0.009349861
6043-2	0.007758607
6044-2	0.005001671
6033-2	0.006030707
6034-2	0.007262489
6035-2	0.016708182
6056-2	0.004577206
6039-2	0.003317003
6040-2	0.002665906
6041-2	0.004479453
6042-2	0.003988474
6045-2	0.004663271
6046-2	0.004723116
6047-2	0.005131571
6048-2	0.004342491
6049-2	0.005853663
6050-2	0.003388309
6051-2	0.003753076
6052-2	0.003155443
6055-2	0.004340411
6054-2	0.003331971
6053-2	0.004033184
6023-2	0.002805537

IgG-scFv 形式的間皮素 x CD40 雙特異性促效劑抗體的序列優化

藉由標準重組DNA技術進行選擇間皮素x CD40雙特異性IgG-scFv抗體的工程化以去除抗體重和輕鏈可變區中的潛在的序列責任。該等抗體藉由在細胞系中過表現來產生，並且使用本領域已知的技術純化。接下來，針對其誘導人B細胞的間皮素依賴性激活的能力評估該等雙特異性抗體。將表現人間皮素CHO細胞接種在96孔板中。第二天，將不同濃度的間皮素x CD40 IgG-scFv序列變體抗體添加至具有純化的人B細胞的孔中，並且將板孵育另外的48小時。藉由流動式細胞分析術在B細胞上量化CD86（CD40介導的B細胞激活的標記物）的上調。計算對於CD86上調的EC50值，並且該值表明大多數間皮素 x CD40 IgG-scFv序列變體雙特異性抗體在表現人間皮素的CHO細胞存在下維持誘導B細胞激活的能力（表16）。 [表 16 ]. 在表現人間皮素的 CHO 細胞存在下，人 B 細胞中的序列優化的抗 CD40 x MSLN IgG-scFv 分子功能活性

抗體 ID	EC50 （ nM ）	抗體 ID	EC50 （ nM ）	抗體 ID	EC50 （ nM ）
8861-1	0.00332	8786-1	0.00322	8826-1	0.04585
8866-1	0.00306	8787-1	0.00274	8827-1	0.06588
8862-1	0.00295	8788-1	0.00371	8828-1	＞ 0.635
8863-1	0.00557	8789-1	0.00321	8829-1	＞ 0.635
8869-1	0.00181	8790-1	0.00480	8830-1	0.00559
8871-1	0.00259	8791-1	0.00329	8831-1	0.00523
8873-1	0.00311	8766-1	0.00355	8832-1	0.00572
8875-1	0.00241	8792-1	0.00439	8833-1	0.00788
8867-1	0.00216	8793-1	0.00405	8834-1	0.03859
8868-1	0.00363	8794-1	0.00378	8835-1	0.06977
8864-1	0.00283	8795-1	0.00511	8836-1	＞ 0.635
8870-1	0.00267	8796-1	0.00437	8837-1	＞ 0.635
8872-1	0.00267	8797-1	0.00384	8838-1	＞ 0.635
8874-1	0.00262	8798-1	0.00342	8839-1	＞ 0.635
8876-1	0.00171	8804-1	0.00323	8840-1	0.00641
8865-1	0.00329	8805-1	0.00406	8841-1	0.00572
6041-3	0.00395	8806-1	0.00326	8842-1	0.00430
8764-1	0.00434	8807-1	0.00342	8843-1	0.00376
8768-1	0.00334	8808-1	0.00331	8844-1	0.00263
8769-1	0.00434	8809-1	0.00386	8845-1	0.00362
8770-1	0.02176	8810-1	0.00451	8846-1	0.00542
8771-1	0.05341	8811-1	0.00436	8847-1	＞0.635
8772-1	0.17205	8812-1	0.00415	8848-1	0.28130
8773-1	0.42410	8813-1	0.00356	8849-1	0.00315
8774-1	0.00409	8814-1	0.00453	8850-1	0.00353
8775-1	0.00309	8815-1	0.00368	8851-1	0.00648
8776-1	0.02073	8816-1	0.00438	8852-1	0.12325
8777-1	0.01153	8817-1	0.00342	8853-1	0.05720
8778-1	0.00362	8818-1	0.00518	6052-3	0.00445
8765-1	0.00305	8819-1	0.00387	8854-1	0.00303
8779-1	0.01746	8820-1	0.00366	8855-1	0.00354
8780-1	0.01673	8821-1	0.00433	8856-1	0.00363
8781-1	0.17750	8822-1	0.00404	8857-1	0.00346
8782-1	0.42500	8823-1	0.00351	8858-1	0.00357
8783-1	0.00301	8824-1	0.00331	8859-1	0.00300
8784-1	0.00311	8825-1	0.00255	8860-1	0.00357
8785-1	0.00293	8767-1	0.00209

在人 B 細胞功能測定中，不同水平的間皮素對選擇間皮素 x CD40 雙特異性抗體活性的影響

將MC38細胞工程化以表現範圍從低（MC38.MSLN1）至高（MC38.MSLN5）的不同水平的人間皮素。鑒於MC38細胞源自小鼠，其不表現人間皮素（圖4）。將表現不同水平人間皮素的親本MC38細胞和MC38細胞接種至96孔板並培養過夜。第二天，將間皮素x CD40雙特異性抗體以不同濃度添加至細胞。然後將分離的人B細胞添加至孔中並且將板孵育另外的48小時。B細胞中CD86的上調藉由流動式細胞分析術評估並且用作B細胞激活的量度。計算EC50和最大活性（Emax）值，並且表明間皮素x CD40雙特異性抗體能在所有水平的MSLN表現中誘導B細胞激活（表17）。如藉由B細胞中的CD86上調的幾何平均螢光強度測量的，表現低水平的間皮素的細胞系誘導較低的間皮素x CD40雙特異性抗體的最大活性。在親本MC38細胞存在下，間皮素x CD40雙特異性抗體無活性，這與針對CD40促效劑活性的該等分子的間皮素依賴性活性一致。 [表 17 ]. 在人 B 細胞中的抗 CD40xMSLN 雙特異性分子的活性和在各種水平的間皮素存在下的單核細胞衍生的樹突狀細胞測定

		抗體 ID
		6041	8765	8766	8767	8945	8947
人 B 細胞功能測定（ CD86 上調）	MC38.MSLN1 EC50 （ pM ）	0.2326	0.2287	0.2735	0.1472	0.2752	0.2687
MC38.MSLN2 EC50 （ pM ）	0.5723	0.6028	0.6877	0.4584	0.6637	0.6626
MC38.MSLN3 EC50 （ pM ）	0.801	0.6696	0.8764	0.5357	1.0162	0.6689
MC38.MSLN4 EC50 （ pM ）	0.9542	0.8518	1.1365	0.7048	1.4765	0.9471
MC38.MSLN5 EC50 （ pM ）	1.6005	0.8549	2.0058	1.2579	2.0122	1.0863
MC38 親本 EC50 （ pM ）	∞	∞	∞	∞	∞	∞
MC38.MSLN1 Emax （ MFI ）	803.9	903	849	742.1	660.2	809.5
MC38.MSLN2 Emax （ MFI ）	1169	1318	1223	1173	978.6	1259
MC38.MSLN3 Emax （ MFI ）	1895	1861	1869	1849	1479	1733
MC38.MSLN4 Emax （ MFI ）	1325	1400	1399	1341	1283	1406
MC38.MSLN5 Emax （ MFI ）	1396	1406	1474	1349	1186	1389
MC38 親本 Emax （ MFI ）	Bkgd	Bkgd	Bkgd	Bkgd	Bkgd	Bkgd
人單核細胞衍生的樹突狀細胞功能測定（ IL12p40 產生）	MC38.MSLN2 EC50 （ nM ）	0.179	0.089	0.183	0.101	0.168	0.184
MC38.MSLN5 EC50 （ nM ）	0.241	0.231	0.26	0.248	0.414	0.399
MC38 親本 EC50 （ nM ）	∞	∞	∞	∞	∞	∞
MC38.MSLN2 Emax （ IL12p40 pg/ml ）	1142	952	1205	1116	338.1	1010
MC38.MSLN5 EC50 （ nM ）	2400	2148	2343	2349	1004	1869
MC38 親本 Emax （ IL12p40 pg/ml ）	Bkgd	Bkgd	Bkgd	Bkgd	Bkgd	Bkgd
	* 較差的曲線擬合
	Bkgd = 背景水平的測定

在單核細胞衍生的樹突狀細胞功能測定中，不同水平的間皮素對選擇間皮素 x CD40 雙特異性抗體活性的影響。

將工程化以表現不同水平的人間皮素的MC38細胞（圖4）或親本MC38細胞接種在96孔板中並過夜培養。第二天，將間皮素x CD40雙特異性抗體以不同濃度添加至細胞。將使用GMCSF和IL4的從人單核細胞分化的單核細胞衍生的樹突狀細胞添加到孔中並將板孵育另外的48小時。收集來自每個孔的上清液並且使用ELISA套組定量從樹突狀細胞分泌的IL12p40的濃度。計算EC50和最大活性（Emax）值，並且表明間皮素x CD40雙特異性抗體能在高和低水平的MSLN表現中誘導樹突狀細胞激活（表17）。表現低水平的間皮素的細胞系誘導較低的間皮素x CD40雙特異性抗體的最大活性。在親本MC38細胞存在下，間皮素x CD40雙特異性抗體無活性，這與針對CD40促效劑活性的該等分子的間皮素依賴性活性一致。

選擇間皮素 x CD40 雙特異性抗體在用表現間皮素的食蟹獼猴 CHO 細胞的食蟹獼猴 B 細胞功能測定中之活性。

將工程化以表現食蟹獼猴間皮素的CHO細胞接種在96孔板中並培養過夜。第二天，將選擇間皮素x CD40雙特異性抗體以不同濃度添加至細胞。然後將分離的食蟹獼猴B細胞添加至孔中並且將板孵育另外的48小時。食蟹獼猴B細胞中CD23的上調藉由流動式細胞分析術評估並且用作CD40誘導的B細胞激活的量度。計算EC50，並且該值表明間皮素x CD40雙特異性抗體能誘導在食蟹獼猴間皮素存在下的食蟹獼猴B細胞的激活（表18）。 [表 18 ]. 在用表現食蟹獼猴間皮素的 CHO 細胞刺激的食蟹獼猴 B 細胞中的抗 CD40 x MSLN 雙特異性分子的活性

抗體 ID	EC50 （ nM ）
6041	0.0012
8765	0.0013
8766	0.0016
8767	0.0014
8945	0.0018
8947	0.0014

間皮素 x CD40 雙特異性抗體在小鼠中的藥物動力學和穩定性。

為了表徵間皮素x CD40雙特異性抗體體內的穩定性，將選擇的間皮素x CD40雙特異性分子注射入小鼠（1 mg/kg劑量）。注射後在不同的時間點將動物放血並且分離血清。免疫測定被用於量化血清中間皮素x CD40雙特異性抗體的濃度，用人CD40捕獲並且用抗人IgG檢測、或用人間皮素捕獲並且用抗人IgG檢測。這兩種測定法的組合提供了檢測分子降解或不穩定性的能力。CD40或間皮素捕獲測定產生相當的結果，表明分子在體內14天的過程中保持完整（圖5）。除一個分子外，所有分子均具有相似的藥物動力學特性。

在小鼠模型中，靶向腫瘤的 CD40 促效劑雙特異性抗體的免疫刺激和抗腫瘤活性

小鼠替代的人 EPCAM 依賴性 CD40 促效劑雙特異性抗體和表現人 EPCAM 的小鼠腫瘤細胞系之產生。

抗小鼠CD40促效劑抗體（選殖FGK45）和抗人EPCAM抗體（選殖4-7）被用於產生替代的具有小鼠IgG1 N297G Fc結構域的IgG-scFv形式的CD40雙特異性抗體（抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體）。雙特異性抗體含有在分子的N-末端的抗CD40和在分子的C-末端的抗EPCAM（如scFv）。藉由用編碼人EPCAM和人截短的神經生長因子受體（NGFR）報告基因的反轉錄病毒轉導，人EPCAM在小鼠MC38大腸癌細胞系和小鼠B16F10黑色素瘤細胞系中過表現（圖6）。將人EpCAM-MC38或人EpCAM-B16腫瘤細胞以每個植入物3e5個細胞接種在右側，並分別允許生長24天或11天。用數位卡尺每週兩次測量腫瘤，表明表現人EPCAM的腫瘤細胞系維持了在小鼠中生長和形成腫瘤的能力。從小鼠收穫並且進行酶解離的腫瘤的流動式細胞分析術表明，在體內腫瘤形成期間，人EPCAM表現在腫瘤細胞表面上維持（圖6）。

小鼠 B 細胞上 EPCAM x CD40 促效劑抗體的人 EPCAM- 依賴性促效劑活性。

將人EpCAM過表現MC38細胞（huEpCAM-MC38）或親本MC38細胞接種在96孔中並培養過夜。第二天，將抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體、親本抗CD40抗體（FGK54）、或同型對照抗體以各種濃度添加至細胞中。然後將分離的小鼠B細胞添加至孔中並且將板孵育另外的48小時。B細胞中CD86的上調藉由流動式細胞分析術評估並且用作B細胞激活的量度。計算EC50值並且該值表明抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體能誘導小鼠B細胞激活（圖7）。與FGK45抗CD40單株抗體相比，抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體顯示穩健的促效劑活性，該活性取決於人EPCAM的存在並且在激活B細胞中顯示顯著更高的效力。

在 MC38 腫瘤模型中，抗 muCD40 x huEPCAM 雙特異性抗體的 體內免疫刺激活性

為了評估靶向腫瘤的CD40促效劑雙特異性抗體對體內的免疫細胞激活的影響，將表現人EpCAM的MC38腫瘤細胞以每個植入物3e5個細胞接種到小鼠的右側並且允許其生長8-10天。然後藉由腫瘤體積（60-100 mm3）將小鼠隨機化並且以5 mg/kg腹膜內投與的指定抗體進行處理。在處理24-48小時後收穫腫瘤、腫瘤引流淋巴結（dLN）和非引流淋巴結（ndLN），並且藉由酶消化組織製備單細胞懸浮液。進行流動式細胞分析術分析以確定細胞比例和表型，表面免疫細胞譜系標記物和激活標記物的染色，以及細胞內細胞介素（圖8）。如預期，CD40促效劑抗體（抗CD40）處理激活位於腫瘤和包括dLN和ndLN的周圍組織中的樹突狀細胞（DC）。相反，抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體僅激活表現人EPCAM的MC38腫瘤中腫瘤浸潤DC，但不激活外周組織（dLN和ndLN）中的DC（圖8A）。此外，抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體增加腫瘤中CD8 T細胞與調節性T細胞的比率、和產生干擾素γ（IFNg）的CD4+ T細胞（圖8B）。還從用指定抗體治療的表現huEpCAM的MC38荷瘤小鼠的脾臟中分離出總T細胞。藉由與重組的GM-CSF和IL4孵育7天，從初始的C57BL/6骨髓細胞產生骨髓衍生的樹突狀細胞（BMDC）。將BMDC用指定腫瘤細胞脈衝過夜，並且然後與分離的T細胞共培養18小時。將ELISPOT測定用於測量藉由抗原特異性T細胞產生的IFNg，表明抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體顯著增加對表現人EPCAM的MC38和親本MC38抗原具有特異性的T細胞（圖9）。總體而言，該等數據表明靶向腫瘤的CD40促效劑雙特異性抗體可以以腫瘤相關的抗原依賴性方式激活腫瘤中的骨髓群體（如DC），導致增強的抗腫瘤T細胞反應。

在 B16F10 腫瘤模型中， 抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體的 體內免疫刺激活性

為了評估靶向腫瘤的CD40促效劑雙特異性抗體對另外的腫瘤模型中的免疫細胞激活的影響，將載體對照或表現人EpCAM的B16F10腫瘤細胞以每個植入物3e5個細胞接種到小鼠的右側並且允許其生長8-10天。然後藉由腫瘤體積（60-100 mm3）將小鼠隨機化並且以5 mg/kg腹膜內投與的指定抗體進行處理。在處理24-48小時後收穫腫瘤、dLN和ndLN，並且藉由酶消化組織製備單細胞懸浮液。進行流動式細胞分析術分析以確定細胞比例和表型，表面免疫細胞譜系標記物和激活標記物的染色，以及細胞內細胞介素（圖10）。如預期，CD40促效劑抗體（抗CD40）治療的DC位於腫瘤和周圍組織（包括在親本huEpCAM陰性B16F10腫瘤和在表現huEpCAM的B16F10腫瘤中的dLN和ndLN）。相反，抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體僅激活在表現huEpCAM的B16F10腫瘤中腫瘤浸潤DC，但不激活親本huEpCAM- B16F10腫瘤中的DC。抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體不激活dLN或ndLN中的DC，無論該等小鼠是否具有表現人EPCAM或不表現人EPCAM的B16F10腫瘤（圖10A）。另外，抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體在表現人EPCAM的B16F10腫瘤中增加了產生IFNg的效應子CD4+和CD8+ T細胞，但在親本B16F10腫瘤中不增加（圖10B）。該等數據提供了另外的證據，該證據表明靶向腫瘤的CD40促效劑雙特異性抗體可以以腫瘤相關抗原依賴性方式激活腫瘤浸潤免疫細胞以增強抗腫瘤T細胞反應。

抗 muCD40 x huEPCAM 雙特異性抗體不在小鼠中誘導全身血清細胞介素的上調或肝損傷

CD40促效劑抗體在臨床試驗中顯示劑量限制性毒性，包括肝損傷和升高的血清細胞介素水平，這可能是由於全身免疫細胞激活。為了比較非靶向CD40促效劑抗體和靶向腫瘤的CD40促效劑雙特異性抗體之間的全身免疫細胞激活和肝損傷，將攜帶已建立的表現人EPCAM的MC38腫瘤（上述）的小鼠用非特異性同型對照抗體、鼠CD40促效劑抗體（抗CD40）、在Fc結構域中攜帶突變（降低Fc受體結合使抗體為弱促效劑）的CD40抗體（抗CD40 N297G）、或抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體（抗CD40 x huEPCAM）處理，並且在24-48小時後收集血清。使用小鼠細胞介素/趨化因子多重測定套組測量選擇細胞介素之濃度。抗CD40抗體增加小鼠血清中幾種促炎性細胞介素的濃度，與全身免疫細胞激活一致。相反，抗CD40 N297G和抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體不誘導增加的血清細胞介素濃度（圖11A）。在B16F10腫瘤模型中觀察到相似的結果，其中，與非靶向的抗CD40抗體相比，抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體在攜帶載體對照B16F10腫瘤的小鼠或攜帶表現人EPCAM的B16F10腫瘤的小鼠中均未引起血清細胞介素濃度增加（圖11B）。還將攜帶表現人EPCAM的MC38腫瘤並且用抗CD40促效劑抗體或抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體處理的小鼠的肝臟固定在10%中性緩衝福馬林中，在石蠟中包埋，切片，並用蘇木素與伊紅染色以用於組織學分析。儘管抗CD40促效劑抗體在肝臟中誘導了多灶性單核細胞浸潤並且該等肝臟含有單細胞壞死圖像，但來自抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體處理的小鼠的肝臟不顯示任何可區分的組織病理學變化（圖11C）。綜上所述，該等數據表明靶向腫瘤的CD40促效劑抗體能誘導腫瘤中的局部免疫細胞激活，而不導致全身細胞介素產生或與抗CD40介導的毒性相關的肝損傷。

小鼠腫瘤模型中人 EPCAM x 鼠 CD40 雙特異性抗體的抗腫瘤作用

為了評估靶向腫瘤的CD40促效劑抗體對腫瘤生長的免疫介導的抑制的作用和此治療方法與免疫檢查點抑制劑PD1的阻斷結合的潛力，將攜帶表現人EPCAM的MC38腫瘤的小鼠用同型對照抗體、抗CD40促效劑抗體、抗PDL1（阻斷PD1與PDL1之間的相互作用）、抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體、抗CD40與抗PDL1的組合、和抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體與抗PDL1的組合處理（圖12）。相對於同型對照抗體處理，用抗CD40促效劑抗體或抗PDL1阻斷抗體的單劑處理對腫瘤生長（圖12A）或改進存活（圖12B）具有最小的影響，而抗CD40促效劑和抗PDL1的組合顯著抑制腫瘤生長。與其他單一療法處理相比，用抗muCD40 x huEPCAM雙特異性促效劑抗體的處理顯著抑制腫瘤生長並且增加動物存活。此外，抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體與抗PDL1的組合導致腫瘤的完全消退，所有動物都存活到研究結束。將該等完全反應的動物圈養3個月（無處理並且無腫瘤復發的跡象），之後，將它們用表現人EPCAM的MC38腫瘤細胞或B16F10腫瘤細胞進行腫瘤再激發（圖13）。該等動物完全拒絕表現人EpCAM的MC38腫瘤細胞，而對照B16F10腫瘤如預期的生長。在年齡匹配的對照動物中，兩種腫瘤細胞系均按預期的生長，該等對照動物先前未暴露於表現人EPCAM的MC38腫瘤或抗muCD40 x huEPCAM雙特異性抗體。總體而言，該等數據表明靶向腫瘤的CD40促效劑抗體療法可以增強抗腫瘤免疫反應，導致已建立的腫瘤消退（藉由與PD1/PDL1阻斷組合而進一步增強）。此外，靶向腫瘤的CD40促效劑處理與PD1/PDL1阻斷的組合可誘導持久的免疫記憶，該免疫記憶防止隨後的腫瘤再激發。

本文討論和引用的所有出版物、專利和專利申請均藉由引用以其整體結合在此。應理解，揭露的發明不限於所描述的特定方法、方案和材料，因為該等可以變化。還應理解，本文使用的術語僅用於描述特定實施方式的目的，並且不意圖限制所附請求項的範圍。

熟悉該項技術者將認識到，或能夠僅使用常規試驗確定本文所述之本發明之具體實施方式的許多等效內容。此類等效物旨在由以下請求項所涵蓋。人CD40 ＞ NP_001241.1腫瘤壞死因子受體超家族成員5同種型1前驅物[智人] （SEQ ID NO: 1） MVRLPLQCVLWGCLLTAVHPEPPTACREKQYLINSQCCSLCQPGQKLVSDCTEFTETECLPCGESEFLDTWNRETHCHQHKYCDPNLGLRVQQKGTSETDTICTCEEGWHCTSEACESCVLHRSCSPGFGVKQIATGVSDTICEPCPVGFFSNVSSAFEKCHPWTSCETKDLVVQQAGTNKTDVVCGPQDRLRALVVIPIIFGILFAILLVLVFIKKVAKKPTNKAPHPKQEPQEINFPDDLPGSNTAAPVQETLHGCQPVTQEDGKESRISVQERQ 人間皮素＞ NP_005814.2間皮素同種型1前原蛋白[智人] （SEQ ID NO: 2） MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISSLSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPSTWSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRREVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQEALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA [表 19 ]： CD40 抗體 VL 和 VH

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iPS ： 555852	21-230_35F11	(R239)G_v1_VH_PE_13623562	NA	CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGTGGTTATATCTTTGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCTGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGTCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGACTGATTATTACTGCTGCTCATATGCAGGCAACTACACTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCCTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGAGTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTACGAGAGATGGCCGGAACTACGTCTACTTTGACAACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
（SEQ ID NO: 35）	（SEQ ID NO: 36）
AA	QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYIFVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSVNTASLTISGLQAEDETDYYCCSYAGNYTYVFGTGTKVTVLG	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTLSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRVTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDGRNYVYFDNWGQGTLVTVSS
（SEQ ID NO: 37）	（SEQ ID NO: 38）
iPS ： 555862	21-230_39C2	(R301)G_v1_VH_PE_13623624	NA	CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAATTATAACCTTGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAATAGGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACAATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGAATATTACTGCTGCTCATATGCAGGTAGAGACACTTTCGTGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGACTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCCCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGGCACAAAGTATACACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCTTGACCAGGGACGCGTCCGTCAGCACAGCCTACATTGACCTGAACAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGAGAGGTGTAGGACTACCAACTGCTATTTGGACTACTGGGGCCAGGGAAGTCTGGTCACCGTCTCCTCA
（SEQ ID NO: 39）	（SEQ ID NO: 40）
AA	QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGNYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYEVNRRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEAEYYCCSYAGRDTFVVFGGGTKLTVLG	QVQLVQSGTEVKKPGASVKVSCKASGYTFPGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTKYTQKFQGRVTLTRDASVSTAYIDLNRLRSDDTAVYYCARERCRTTNCYLDYWGQGSLVTVSS
（SEQ ID NO: 41）	（SEQ ID NO: 42）
iPS ： 556018	21-230_4G7	(R013)G_v1_VH_PE_13623336	NA	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACATTCTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAACATTACCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTCTGCTGCATCCCGTTTGCGAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGTAGATTTTACAACTTTCTACTGTCAACAGACTTTCACTACCCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGA	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGAGGCACAAACTTTGCACAGCAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGATACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGGTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTTTTACTGTGCGAGAGAGAAGATAACTATGACTGGTATTTACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
（SEQ ID NO: 43）	（SEQ ID NO: 44）
AA	DIQMTQSPSSLSASVGDILTITCRASQNITTYLNWYQQKPGKAPNLLISAASRLRSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPVDFTTFYCQQTFTTPWTFGQGTKVEIKR	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFAGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNFAQQFQGRVTMTRDTSISTAYMEVSRLRSDDTAVFYCAREKITMTGIYFDYWGQGTLVTVSS
（SEQ ID NO: 45）	（SEQ ID NO: 46）
iPS ： 555826	21-230_17H5	(R072)G_v1_VH_PE_13623395	NA	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATCCTGCATCCAGTTTACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAGCGA	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGTCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGACACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGTACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGAGGTTAACACATTGTGGTGGTGACTGCTATTCCCAATGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
（SEQ ID NO: 47）	（SEQ ID NO: 48）
AA	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYPASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKR	QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYTFAGYYIHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGDTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARERLTHCGGDCYSQWFDPWGQGTLVTVSS
（SEQ ID NO: 49）	（SEQ ID NO: 50）
iPS ： 556020	21-230_33H6	(R203)G_v1_VH_PE_13623526	NA	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAGGTCAGAACATTAGCAGGCATTTAAATTGGTATCAGCAGAATCCAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCCATCCTGCATCCAGTTTGCCAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCAGTCTTACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGGAACTTACTTCTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGCTCAAACGA	CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCCCCGGCTACTATATGTACTGGTTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGACTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGACACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTTTATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCAGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGAAGCCCAGATATTTTGACTCCTTCTACTACTACCTTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
（SEQ ID NO: 51）	（SEQ ID NO: 52）
AA	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAGQNISRHLNWYQQNPGKAPKVLIHPASSLPSGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFGTYFCQQSYSTPPTFGGGTKVELKR	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPGYYMYWLRQAPGQGLEWMGWINPDSGDTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAFMELSRLRSDDTAVYYCAREKPRYFDSFYYYLMDVWGQGTTVTVSS
（SEQ ID NO: 53）	（SEQ ID NO: 54）

[表 20A ]： CD40 抗體 VL CDR

iPS#	Ab	類型	CDR1	CDR2	CDR3
iPS ： 556524	21-230_33H9	NA	ACCTTACGCAGTGGCATCAATGTTGGTTCCTCCAGGATATAT	TACACATCAGACTCAGATAAATTGCAGGGCTCT	ATGATTTGGCACAGCAGCGCTGTGGTA
（SEQ ID NO: 55）	（SEQ ID NO: 56）	（SEQ ID NO: 57）
AA	TLRSGINVGSSRIY	YTSDSDKLQGS	MIWHSSAVV
（SEQ ID NO: 58）	（SEQ ID NO: 59）	（SEQ ID NO: 60）
iPS ： 555854	21-230_36F3	NA	AGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTACTTAGCC	GCTGCATCCAACAGGGCCGCT	CAGCAGTATGGTAGCTCACCGCTCACT
（SEQ ID NO: 61）	（SEQ ID NO: 62）	（SEQ ID NO: 63）
AA	RASQSVSSNYLA	AASNRAA	QQYGSSPLT
（SEQ ID NO: 64）	（SEQ ID NO: 65）	（SEQ ID NO: 66）
iPS ： 555836	21-230_29H10	NA	CGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATAATTTAGCC	GCTGCATCCAGTTTGCACAGT	CAACAGTATAATAGTTACCCTCTCACT
（SEQ ID NO: 67）	（SEQ ID NO: 68）	（SEQ ID NO: 69）
AA	RASQDISNNLA	AASSLHS	QQYNSYPLT
（SEQ ID NO: 70）	（SEQ ID NO: 71）	（SEQ ID NO: 72）
iPS ： 555842	21-230_30B9	NA	CGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGC	GCTGCATTCAGTTTGCAAAGT	CTACAGTATAATAGTTACCCGTGGACG
（SEQ ID NO: 73）	（SEQ ID NO: 74）	（SEQ ID NO: 75）
AA	RASQGIRNDLG	AAFSLQS	LQYNSYPWT
（SEQ ID NO: 76）	（SEQ ID NO: 77）	（SEQ ID NO: 78）
iPS ： 555844	21-230_31H6	NA	CGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGAGTTAGGC	GCTGCATCCAGTTTGGACAGT	CTACAATATAGTGGGTCCCCTCTCACT
（SEQ ID NO: 79）	（SEQ ID NO: 80）	（SEQ ID NO: 81）
AA	RASQGIRNELG	AASSLDS	LQYSGSPLT
（SEQ ID NO: 82）	（SEQ ID NO: 83）	（SEQ ID NO: 84）
iPS ： 556022	21-230_33H12	NA	CGGGCAAGTCAGGACATTAGAAATGATTTAGGC	GGTGCATCCAATTTGCAAAGT	CTACAACATAATATTGCTCCGCTCACC
（SEQ ID NO: 85）	（SEQ ID NO: 86）	（SEQ ID NO: 87）
AA	RASQDIRNDLG	GASNLQS	LQHNIAPLT
（SEQ ID NO: 88）	（SEQ ID NO: 89）	（SEQ ID NO: 90）
iPS ： 555860	21-230_37A6	NA	TCTGGAGAAAGGTTGGGAAATAAATATATTTGC	CAAGATTTCAAGCGGCCCTCA	CAGGCGTGGGACAGCAGAACTGTGGTA
（SEQ ID NO: 91）	（SEQ ID NO: 92）	（SEQ ID NO: 93）
AA	SGERLGNKYIC	QDFKRPS	QAWDSRTVV
（SEQ ID NO: 94）	（SEQ ID NO: 95）	（SEQ ID NO: 96）
iPS ： 555840	21-230_30A12	NA	ACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAATTATAACCTTGTCTCC	GAGGTCAATCAGCGGCCCTCA	TGCTCATATACAACTAGTAGCACTTATGTGATA
（SEQ ID NO: 97）	（SEQ ID NO: 98）	（SEQ ID NO: 99）
AA	TGTSSDVGNYNLVS	EVNQRPS	CSYTTSSTYVI
（SEQ ID NO: 100）	（SEQ ID NO: 101）	（SEQ ID NO: 102）
iPS ： 555852	21-230_35F11	NA	ACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGTGGTTATATCTTTGTCTCC	GATGTCAGTAAGCGGCCCTCT	TGCTCATATGCAGGCAACTACACTTATGTC
（SEQ ID NO: 103）	（SEQ ID NO: 104）	（SEQ ID NO: 105）
AA	TGTSSDVGGYIFVS	DVSKRPS	CSYAGNYTYV
（SEQ ID NO: 106）	（SEQ ID NO: 107）	（SEQ ID NO: 108）
iPS ： 555862	21-230_39C2	NA	ACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAATTATAACCTTGTCTCC	GAGGTCAATAGGCGGCCCTCA	TGCTCATATGCAGGTAGAGACACTTTCGTGGTG
（SEQ ID NO: 109）	（SEQ ID NO: 110）	（SEQ ID NO: 111）
AA	TGTSSDVGNYNLVS	EVNRRPS	CSYAGRDTFVV
（SEQ ID NO: 112）	（SEQ ID NO: 113）	（SEQ ID NO: 114）
iPS ： 556018	21-230_4G7	NA	CGGGCAAGTCAGAACATTACCACCTATTTAAAT	GCTGCATCCCGTTTGCGAAGT	CAACAGACTTTCACTACCCCGTGGACG
（SEQ ID NO: 115）	（SEQ ID NO: 116）	（SEQ ID NO: 117）
AA	RASQNITTYLN	AASRLRS	QQTFTTPWT
（SEQ ID NO: 118）	（SEQ ID NO: 119）	（SEQ ID NO: 120）
iPS ： 555826	21-230_17H5	NA	CGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGC	CCTGCATCCAGTTTACAAAGT	CTACAGCATAATAGTTACCCTCTCACT
（SEQ ID NO: 121）	（SEQ ID NO: 122）	（SEQ ID NO: 123）
AA	RASQGIRNDLG	PASSLQS	LQHNSYPLT
（SEQ ID NO: 124）	（SEQ ID NO: 125）	（SEQ ID NO: 126）
iPS ： 556020	21-230_33H6	NA	CGGGCAGGTCAGAACATTAGCAGGCATTTAAAT	CCTGCATCCAGTTTGCCAAGT	CAACAGAGTTACAGTACCCCTCCCACT
（SEQ ID NO: 127）	（SEQ ID NO: 128）	（SEQ ID NO: 129）
AA	RAGQNISRHLN	PASSLPS	QQSYSTPPT
（SEQ ID NO: 130）	（SEQ ID NO: 131）	（SEQ ID NO: 132）

[表 20B ]： CD40 抗體 VH CDR

iPS#	Ab	類型	CDR1	CDR2	CDR3
iPS ： 556524	21-230_33H9	NA	AGCCATGGCATGCAC	GTTATCTGGTATGATGGAAGTAATGAATACTATGGAGACTCCGTGAAGGGC	GGGGGGGGCCACTGGAACTACGAGGGCCACTACTATGGTATGGACGTC
（SEQ ID NO: 133）	（SEQ ID NO: 134）	（SEQ ID NO: 135）
AA	SHGMH	VIWYDGSNEYYGDSVKG	GGGHWNYEGHYYGMDV
（SEQ ID NO: 136）	（SEQ ID NO: 137）	（SEQ ID NO: 138）
iPS ： 555854	21-230_36F3	NA	AGCAGCCGTACTGCTTGGAAC	AGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATCATGATTATTCAGTATCTGTGAAAAGT	GGGGCTGCTCCCTTTGACTAC
（SEQ ID NO: 139）	（SEQ ID NO: 140）	（SEQ ID NO: 141）
AA	SSRTAWN	RTYYRSKWYHDYSVSVKS	GAAPFDY
（SEQ ID NO: 142）	（SEQ ID NO: 143）	（SEQ ID NO: 144）
iPS ： 555836	21-230_29H10	NA	GGCTACTATATGCAC	TGGATCAACCCTCACAGTGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGAC	GAACGTATTTCTATGGTTCGGGGAGTCGGGCACAACTGGTTCGCCCCC
（SEQ ID NO: 145）	（SEQ ID NO: 146）	（SEQ ID NO: 147）
AA	GYYMH	WINPHSGGTNYAQKFQD	ERISMVRGVGHNWFAP
（SEQ ID NO: 148）	（SEQ ID NO: 149）	（SEQ ID NO: 150）
iPS ： 555842	21-230_30B9	NA	GCCTACTATATACAC	TGGCTCAACCCTGACAGTGGTGGCACAAACTTTGCCCCGAGGTTTCAGGAC	GAGAAGTTTAACTACAACTATGGTGCTTTTGATATC
（SEQ ID NO: 151）	（SEQ ID NO: 152）	（SEQ ID NO: 153）
AA	AYYIH	WLNPDSGGTNFAPRFQD	EKFNYNYGAFDI
（SEQ ID NO: 154）	（SEQ ID NO: 155）	（SEQ ID NO: 156）
iPS ： 555844	21-230_31H6	NA	GACTACTATATACAC	TGGATCAACCCTAACAGTGGTGACACAAGCTATGCACAGAAGTTTCAGGAC	GAGGTGGGGGGCTATGGTTCGGGGACCTACCGCTATTACGGTATGGACGTC
（SEQ ID NO: 157）	（SEQ ID NO: 158）	（SEQ ID NO: 159）
AA	DYYIH	WINPNSGDTSYAQKFQD	EVGGYGSGTYRYYGMDV
（SEQ ID NO: 160）	（SEQ ID NO: 161）	（SEQ ID NO: 162）
iPS ： 556022	21-230_33H12	NA	GACTACTATATTCAC	TGGATCAACCCTAACAGTGGCGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGC	GAAGATGGGGCAGCAGTTGGTCCCCTCTACTACTACTACGGTATGGACGTC
（SEQ ID NO: 163）	（SEQ ID NO: 164）	（SEQ ID NO: 165）
AA	DYYIH	WINPNSGGTNYAQKFQG	EDGAAVGPLYYYYGMDV
（SEQ ID NO: 166）	（SEQ ID NO: 167）	（SEQ ID NO: 168）
iPS ： 555860	21-230_37A6	NA	GACTACTACATGAGC	TATATTAGTCGAAGTGGTGATACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGC	GACTTAGCAGCAGGTGCTACAGGGGGCCTTGACTGC
（SEQ ID NO: 169）	（SEQ ID NO: 170）	（SEQ ID NO: 171）
AA	DYYMS	YISRSGDTIYYADSVKG	DLAAGATGGLDC
（SEQ ID NO: 172）	（SEQ ID NO: 173）	（SEQ ID NO: 174）
iPS ： 555840	21-230_30A12	NA	AGAAATGCCATGAGT	GCTACTGGTGGTAGTGGTATTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGC	GGTTATAGCAACAGCTGGTGGTACTTTGACTAC
（SEQ ID NO: 175）	（SEQ ID NO: 176）	（SEQ ID NO: 177）
AA	RNAMS	ATGGSGISTYYADSVKG	GYSNSWWYFDY
（SEQ ID NO: 178）	（SEQ ID NO: 179）	（SEQ ID NO: 180）
iPS ： 555852	21-230_35F11	NA	AGCTATGGCATGCAC	GTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGC	GATGGCCGGAACTACGTCTACTTTGACAAC
（SEQ ID NO: 181）	（SEQ ID NO: 182）	（SEQ ID NO: 183）
AA	SYGMH	VIWYDGSNKYYADSVKG	DGRNYVYFDN
（SEQ ID NO: 184）	（SEQ ID NO: 185）	（SEQ ID NO: 186）
iPS ： 555862	21-230_39C2	NA	GGCTACTATATGCAC	TGGATCAACCCTGACAGTGGTGGCACAAAGTATACACAGAAGTTTCAGGGC	GAGAGGTGTAGGACTACCAACTGCTATTTGGACTAC
（SEQ ID NO: 187）	（SEQ ID NO: 188）	（SEQ ID NO: 189）
AA	GYYMH	WINPDSGGTKYTQKFQG	ERCRTTNCYLDY
（SEQ ID NO: 190）	（SEQ ID NO: 191）	（SEQ ID NO: 192）
iPS ： 556018	21-230_4G7	NA	GGCTACTATATGCAC	TGGATCAACCCTGACAGTGGAGGCACAAACTTTGCACAGCAGTTTCAGGGC	GAGAAGATAACTATGACTGGTATTTACTTTGACTAT
（SEQ ID NO: 193）	（SEQ ID NO: 194）	（SEQ ID NO: 195）
AA	GYYMH	WINPDSGGTNFAQQFQG	EKITMTGIYFDY
（SEQ ID NO: 196）	（SEQ ID NO: 197）	（SEQ ID NO: 198）
iPS ： 555826	21-230_17H5	NA	GGCTACTATATACAC	TGGATCAACCCTGACAGTGGTGACACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGC	GAGAGGTTAACACATTGTGGTGGTGACTGCTATTCCCAATGGTTCGACCCC
（SEQ ID NO: 199）	（SEQ ID NO: 200）	（SEQ ID NO: 201）
AA	GYYIH	WINPDSGDTNYAQKFQG	ERLTHCGGDCYSQWFDP
（SEQ ID NO: 202）	（SEQ ID NO: 203）	（SEQ ID NO: 204）
iPS ： 556020	21-230_33H6	NA	GGCTACTATATGTAC	TGGATCAACCCTGACAGTGGTGACACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGC	GAGAAGCCCAGATATTTTGACTCCTTCTACTACTACCTTATGGACGTC
（SEQ ID NO: 205）	（SEQ ID NO: 206）	（SEQ ID NO: 207）
AA	GYYMY	WINPDSGDTNYAQKFQG	EKPRYFDSFYYYLMDV
（SEQ ID NO: 208）	（SEQ ID NO: 209）	（SEQ ID NO: 210）

[表 21 ]： MSLN 抗體 VL 和 VH 序列

iPS#	Ab	類型	LC	HC
iPS ： 563560	7G11	NA	GACATTGTGATGACTCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGAGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACG	GAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGGTTCACCGTCAGTAGCAAGTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAAGACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGCGGTGGCTGGGGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCA
（SEQ ID NO: 211）	（SEQ ID NO: 212）
AA	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVEIKR	EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFTVSSKFMTWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGKTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGGWGYFDYWGQGTLVTVSS
（SEQ ID NO: 213）	（SEQ ID NO: 214）
iPS ： 563637	6F4	NA	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCTTCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGATATTAGCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATTTCTGCTGCATCCAGATTGCAAAGTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAATTTACTATTGTCAACAGGCTAAAAGTTTTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGA	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATATATTACGTAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGTTGGGAGCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCA
（SEQ ID NO: 215）	（SEQ ID NO: 216）
AA	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISRWLAWYQQKPGKAPKLLISAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAIYYCQQAKSFPRTFGQGTKVEIKR	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWISYISSSESIIYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGSHFDYWGQGTLVTVSS
（SEQ ID NO: 217）	（SEQ ID NO: 218）
iPS ： 344086	4G12	NA
（SEQ ID NO: 219）	（SEQ ID NO: 220）
AA	QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQVPGTAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLGGWVFGGGTKLTVL	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARPSNYDAFDIWGQGTMVTVSS
（SEQ ID NO: 221）	（SEQ ID NO: 222）
iPS ： 344090	4H6	NA
（SEQ ID NO: 223）	（SEQ ID NO: 224）
AA	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGITRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASVLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNSFPRTFGQGTKVEIK	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWISYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSS
（SEQ ID NO: 225）	（SEQ ID NO: 226）

[表 22A ]MSLN 抗體 VL CDR

iPS#	Ab	類型	CDR1	CDR2	CDR3
iPS ： 563560	7G11	NA	AAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAGCT	TGGGCATCTACCCGAGAATCC	CAGCAATATTATAGTACTCCTCCGACG
（SEQ ID NO: 227）	（SEQ ID NO: 228）	（SEQ ID NO: 229）
AA	KSSQSVLYSSNNKNYLA	WASTRES	QQYYSTPPT
（SEQ ID NO: 230）	（SEQ ID NO: 231）	（SEQ ID NO: 232）
iPS ： 563637	6F4	NA	CGGGCGAGTCAGGATATTAGCAGGTGGTTAGCC	GCTGCATCCAGATTGCAAAGT	CAACAGGCTAAAAGTTTTCCTCGGACG
（SEQ ID NO: 233）	（SEQ ID NO: 234）	（SEQ ID NO: 235）
AA	RASQDISRWLA	AASRLQS	QQAKSFPRT
（SEQ ID NO: 236）	（SEQ ID NO: 237）	（SEQ ID NO: 238）
iPS ： 344086	4G12	NA	無可用的核苷酸序列	無可用的核苷酸序列	無可用的核苷酸序列
（SEQ ID NO: 239）	（SEQ ID NO: 240）	（SEQ ID NO: 241）
AA	TGSSSNIGAGYDVH	GNSKRPS	QSYDSSLGGWV
（SEQ ID NO: 242）	（SEQ ID NO: 243）	（SEQ ID NO: 244）
iPS ： 344090	4H6	NA	無可用的核苷酸序列	無可用的核苷酸序列	無可用的核苷酸序列
（SEQ ID NO: 245）	（SEQ ID NO: 246）	（SEQ ID NO: 247）
AA	RASQGITRWLA	AASVLQS	QQSNSFPRT
（SEQ ID NO: 248）	（SEQ ID NO: 249）	（SEQ ID NO: 250）

[表 22B ]MSLN 抗體 VH CDR

iPS#	Ab	類型	CDR1	CDR2	CDR3
iPS ： 563560	7G11	NA	AGCAAGTTCATGACC	GTTATTTATAGCGGTGGTAAGACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGC	GATAGCGGTGGCTGGGGGTACTTTGACTAC
（SEQ ID NO: 251）	（SEQ ID NO: 252）	（SEQ ID NO: 253）
AA	SKFMT	VIYSGGKTYYADSVKG	DSGGWGYFDY
（SEQ ID NO: 254）	（SEQ ID NO: 255）	（SEQ ID NO: 256）
iPS ： 563637	6F4	NA	GACTACTACATGAGC	TACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATATATTACGTAGACTCTGTGAAGGGC	GATGTTGGGAGCCACTTTGACTAC
（SEQ ID NO: 257）	（SEQ ID NO: 258）	（SEQ ID NO: 259）
AA	DYYMS	YISSSESIIYYVDSVKG	DVGSHFDY
（SEQ ID NO: 260）	（SEQ ID NO: 261）	（SEQ ID NO: 262）
iPS ： 344086	4G12	NA	無可用的核苷酸序列	無可用的核苷酸序列	無可用的核苷酸序列
（SEQ ID NO: 263）	（SEQ ID NO: 264）	（SEQ ID NO: 265）
AA	SSSYYWG	SIYYSGITNYNPSLKS	PSNYDAFDI
（SEQ ID NO: 266）	（SEQ ID NO: 267）	（SEQ ID NO: 268）
iPS ： 344090	4H6	NA	無可用的核苷酸序列	無可用的核苷酸序列	無可用的核苷酸序列
（SEQ ID NO: 269）	（SEQ ID NO: 270）	（SEQ ID NO: 271）
AA	DYYMT	YISSSGSTIYYADSVKG	DRNSHFDY
（SEQ ID NO: 272）	（SEQ ID NO: 273）	（SEQ ID NO: 274）

[表 23 ]： MSLN scFv 全序列

iPS#	Ab	類型	SCFV
	7G11	NA	無可用的核苷酸序列
（SEQ ID NO: 275）
AA	EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFTVSSKFMTWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGKTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGGWGYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVEIK
（SEQ ID NO: 276）
	6F4	NA	無可用的核苷酸序列
（SEQ ID NO: 277）
AA	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWISYISSSESIIYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGSHFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISRWLAWYQQKPGKAPKLLISAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAIYYCQQAKSFPRTFGQGTKVEIK
（SEQ ID NO: 278）
iPS ： 344086	4G12	NA	無可用的核苷酸序列
（SEQ ID NO: 279）
AA	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARPSNYDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQVPGTAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLGGWVFGGGTKLTVL
（SEQ ID NO: 280）
iPS ： 344090	4H6	NA	無可用的核苷酸序列
（SEQ ID NO: 281）
AA	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWISYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGITRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASVLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNSFPRTFGQGTKVEIK
（SEQ ID NO: 282）

[表 24A ]： CD40-MSLN IgG-scFv 全序列
iPS#	Ab	類型	SCFV_HC	LC
iPS ： 577383	21-230_4G7_IgG_21-233_4H6__scFv	NA	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGAGGCACAAACTTTGCACAGCAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGATACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGGTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTTTTACTGTGCGAGAGAGAAGATCACTATGACTGGTATTTACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCAGGCAGGCTCCAGGGAAGTGCCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATCTACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGAACTCCCACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCGACATTCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTACCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGTTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGTCTAACAGTTTCCCTCGGACGTTCGGCTGCGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACATTCTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAACATTACCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTCTGCTGCATCCCGTTTGCGAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGTAGATTTTACAACTTTCTACTGTCAACAGACTTTCACTACCCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
（SEQ ID NO: 283）	（SEQ ID NO: 284）
AA	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFAGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNFAQQFQGRVTMTRDTSISTAYMEVSRLRSDDTAVFYCAREKITMTGIYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKCLEWISYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGITRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASVLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNSFPRTFGCGTKVEIKR	DIQMTQSPSSLSASVGDILTITCRASQNITTYLNWYQQKPGKAPNLLISAASRLRSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPVDFTTFYCQQTFTTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（SEQ ID NO: 285）	（SEQ ID NO: 286）
iPS ： 577388	21-230_4G7_IgG_21-233_6F4__scFv	NA	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGAGGCACAAACTTTGCACAGCAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGATACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGGTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTTTTACTGTGCGAGAGAGAAGATCACTATGACTGGTATTTACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGTGCCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATCTATTACGTAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGTTGGGAGCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCTTCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGATATTAGCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATTTCTGCTGCATCCAGATTGCAAAGTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAATTTACTATTGTCAACAGGCTAAAAGTTTTCCTCGGACGTTCGGCTGCGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACATTCTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAACATTACCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTCTGCTGCATCCCGTTTGCGAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGTAGATTTTACAACTTTCTACTGTCAACAGACTTTCACTACCCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
（SEQ ID NO: 287）	（SEQ ID NO: 288）
AA	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFAGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNFAQQFQGRVTMTRDTSISTAYMEVSRLRSDDTAVFYCAREKITMTGIYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKCLEWISYISSSESIIYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGSHFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISRWLAWYQQKPGKAPKLLISAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAIYYCQQAKSFPRTFGCGTKVEIKR	DIQMTQSPSSLSASVGDILTITCRASQNITTYLNWYQQKPGKAPNLLISAASRLRSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPVDFTTFYCQQTFTTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（SEQ ID NO: 289）	（SEQ ID NO: 290）
iPS ： 577393	21-230_29H10_IgG_21-233_4H6__scFv	NA	CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGACGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTCACAGTGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGACAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAACACAGCCTACATGGAACTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAACGTATTTCTATGGTTCGGGGAGTCGGGCACAACTGGTTCGCCCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCAGGCAGGCTCCAGGGAAGTGCCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATCTACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGAACTCCCACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCGACATTCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTACCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGTTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGTCTAACAGTTTCCCTCGGACGTTCGGCTGCGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACCTGTCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATAATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAACCCCCTAAGTCCCTGATGTATGCTGCATCCAGTTTGCACAGTGGAGTCCCATCAACGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAGACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
（SEQ ID NO: 291）	（SEQ ID NO: 292）
AA	QVQLVQSGAEVTKPGASVKVSCKASGYTFAGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPHSGGTNYAQKFQDRVTMTRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARERISMVRGVGHNWFAPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKCLEWISYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGITRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASVLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNSFPRTFGCGTKVEIKR	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNNLAWFQQKPGKPPKSLMYAASSLHSGVPSTFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIRRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（SEQ ID NO: 293）	（SEQ ID NO: 294）
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（SEQ ID NO: 351）	（SEQ ID NO: 352）
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（SEQ ID NO: 353）	（SEQ ID NO: 354）

[表 25 ]
IgG-scFv v1 全序列
iPS#	Ab	類型	SCFV_HC	LC
iPS ： 616974	SST205802	NA	CAGGTACAGCTGCAACAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAGCCGTACTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATCATGATTATTCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATCACCATCGACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTTTATTATTGTGCAAGAGGGGCTGCTCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGTGCCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATCTATTACGTAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGTTGGGAGCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCTTCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGATATTAGCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATTTCTGCTGCATCCAGATTGCAAAGTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAATTTACTATTGTCAACAGGCTAAAAGTTTTCCTCGGACGTTCGGCTGCGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG	CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGAGCCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAATTATAACCTTGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAATAGGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACAATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGAATATTACTGCTCCTCATATGCAGGTAGAGACACTTTCGTGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
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（SEQ ID NO: 373）	（SEQ ID NO: 374）
iPS ： 612584	SST206128	NA	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCCTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGAGTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTACGAGAGATGGCCGGAACTACGTCTACTTTGACAACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGTGCCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATCTATTACGTAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGTTGGGAGCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCTTCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGATATTAGCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATTTCTGCTGCATCCAGATTGCAAAGTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAATTTACTATTGTCAACAGGCTAAAAGTTTTCCTCGGACGTTCGGCTGCGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG	CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGAGCCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGTGGTTATATCTTTGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCTGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGTCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGACTGATTATTACTGCTCCTCATATGCAGGCAACTACGCTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
（SEQ ID NO: 375）	（SEQ ID NO: 376）
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（SEQ ID NO: 377）	（SEQ ID NO: 378）

[表 26 ]： MSLN-CD40 IgG-scFv 全長

iPS ： 577300	21-233_4H6__IgG_21-230_4G7_scFv	NA	CAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCAGGCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATCTACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGAACTCCCACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAATGCCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGAGGCACAAACTTTGCACAGCAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGATACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGGTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTTTTACTGTGCGAGAGAGAAGATCACTATGACTGGTATTTACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACATTCTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAACATTACCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTCTGCTGCATCCCGTTTGCGAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGTAGATTTTACAACTTTCTACTGTCAACAGACTTTCACTACCCCGTGGACGTTCGGCTGCGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGA	GACATTCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTACCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGTTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGTCTAACAGTTTCCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGGACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
（SEQ ID NO: 379）	（SEQ ID NO: 380）
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（SEQ ID NO: 381）	（SEQ ID NO: 382）
iPS ： 577307	21-233_4H6__IgG_21-230_29H10_scFv	NA	CAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCAGGCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATCTACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGAACTCCCACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGACGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAATGCCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTCACAGTGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGACAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAACACAGCCTACATGGAACTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAACGTATTTCTATGGTTCGGGGAGTCGGGCACAACTGGTTCGCCCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACCTGTCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATAATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAACCCCCTAAGTCCCTGATGTATGCTGCATCCAGTTTGCACAGTGGAGTCCCATCAACGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCTGCGGGACCAAGGTGGAGATCAGACGA	GACATTCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTACCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGTTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGTCTAACAGTTTCCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGGACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
（SEQ ID NO: 383）	（SEQ ID NO: 384）
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（SEQ ID NO: 385）	（SEQ ID NO: 386）
iPS ： 577312	21-233_4H6__IgG_21-230_30A12_scFv	NA	CAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCAGGCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATCTACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGAACTCCCACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCGAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGAAATGCCATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGTGCCTGGAGTGGGTGTCAGCTACTGGTGGTAGTGGTATTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGGTTATAGCAACAGCTGGTGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCCAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGAGCCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAATTATAACCTTGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTTTGAGGTCAATCAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCACGGCCTCCCTGACAATCTCTGGGCTCCAGGCTGCGGACGAGGCTGATTATTTCTGCTGCTCATATACAACTAGTAGCACTTATGTGATCTTCGGCTGCGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT	GACATTCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTACCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGTTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGTCTAACAGTTTCCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGGACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
（SEQ ID NO: 387）	（SEQ ID NO: 388）
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（SEQ ID NO: 443）	（SEQ ID NO: 444）
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（SEQ ID NO: 445）	（SEQ ID NO: 446）
iPS ： 577379	21-233_6F4__IgG_21-230_39C2_scFv	NA	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATCTATTACGTAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGTTGGGAGCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGACTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCCCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGTGCCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGGCACAAAGTATACACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCTTGACCAGGGACGCGTCCGTCAGCACAGCCTACATTGACCTGAACAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGAGAGGTGTAGGACTACCAACTGCTATTTGGACTACTGGGGCCAGGGAAGTCTGGTCACCGTGTCCTCAGGAGGGGGCGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGTGGGGGCGGCTCCCAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGAGCCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAATTATAACCTTGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAATAGGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACAATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGAATATTACTGCTGCTCATATGCAGGTAGAGACACTTTCGTGGTGTTCGGCTGCGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCTTCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGATATTAGCAGGTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATTTCTGCTGCATCCAGATTGCAAAGTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAATTTACTATTGTCAACAGGCTAAAAGTTTTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGGACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
（SEQ ID NO: 447）	（SEQ ID NO: 448）
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（SEQ ID NO: 449）	（SEQ ID NO: 450）

[表 27A ]： CD-40-MSLN IgG-Fab

iPS#

Ab

說明

類型

LC_E

LC_K

IgFab_HCv1

iPS ： 576257

21-230_4G7_IgG_21-233_4G12__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_4G7 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_4G7 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VL]: : huLLC2-K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30855

NA

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACATTCTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAACATTACCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTCTGCTGCATCCCGTTTGCGAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGTAGATTTTACAACTTTCTACTGTCAACAGACTTTCACTACCCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCGAAAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT

CAGTCAGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTTCACTGGTACCAGCAGGTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGGGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTACAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAAGAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGAGGCACAAACTTTGCACAGCAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGATACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGGTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTTTTACTGTGCGAGAGAGAAGATCACTATGACTGGTATTTACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAAACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCAGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGATCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATCTCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATCCAGTAACTACGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

（SEQ ID NO: 451）

（SEQ ID NO: 452）

（SEQ ID NO: 453）

AA

DIQMTQSPSSLSASVGDILTITCRASQNITTYLNWYQQKPGKAPNLLISAASRLRSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPVDFTTFYCQQTFTTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLESTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQVPGTAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLGGWVFGGGTKLTVLQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAKSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFAGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNFAQQFQGRVTMTRDTSISTAYMEVSRLRSDDTAVFYCAREKITMTGIYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSSNYDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

（SEQ ID NO: 454）

（SEQ ID NO: 455）

（SEQ ID NO: 456）

iPS ： 576265

21-230_4G7_IgG_21-233_4H6__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_4G7 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_4G7 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30856

NA

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21-230_29H10_IgG_21-233_4H6__Fab

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NA

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21-230_29H10_IgG_21-233_6F4__Fab

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21-230_29H10_IgG_21-233_7G11__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_29H10 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 7G11 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_29H10 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 7G11 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30862

NA

CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGACGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCGCCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTCACAGTGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGACAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAACACAGCCTACATGGAACTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAACGTATTTCTATGGTTCGGGGAGTCGGGCACAACTGGTTCGCCCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCGAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGGTTCACCGTCAGTAGCAAGTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAAGACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGCGGTGGCTGGGGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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21-230_30A12_IgG_21-233_4G12__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_30A12 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_30A12 VL]: : huLLC2-E + [抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VL]: : huLLC2-K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30863

NA

CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGAGCCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAATTATAACCTTGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTTTGAGGTCAATCAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCACGGCCTCCCTGACAATCTCTGGGCTCCAGGCTGCGGACGAGGCTGATTATTTCTGCTGCTCATATACAACTAGTAGCACTTATGTGATCTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCGAAAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA

GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGAAATGCCATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGTCAGCTACTGGTGGTAGTGGTATTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGGTTATAGCAACAGCTGGTGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAAACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCAGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGATCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATCTCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATCCAGTAACTACGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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21-230_30A12_IgG_21-233_4H6__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_30A12 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_30A12 VL]: : huLLC2-E + [抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30864

NA

GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGAAATGCCATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGTCAGCTACTGGTGGTAGTGGTATTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGGTTATAGCAACAGCTGGTGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCAGGCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATCTACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGAACTCCCACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMSWVRQAPGKGLEWVSATGGSGISTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYSNSWWYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWISYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

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21-230_30A12_IgG_21-233_6F4__Fab

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NA

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21-230_30A12_IgG_21-233_7G11__Fab

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GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGAAATGCCATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGTCAGCTACTGGTGGTAGTGGTATTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGGTTATAGCAACAGCTGGTGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCGAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGGTTCACCGTCAGTAGCAAGTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAAGACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGCGGTGGCTGGGGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMSWVRQAPGKGLEWVSATGGSGISTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYSNSWWYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFTVSSKFMTWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGKTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGGWGYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

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21-230_33H6_IgG_21-233_4G12__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_33H6 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_33H6 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VL]: : huLLC2-K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30867

NA

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAGGTCAGAACATTAGCAGGCATTTAAATTGGTATCAGCAGAATCCAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCCATCCTGCATCCAGTTTGCCAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCAGTCTTACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGGAACTTACTTCTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGCTCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCGAAAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT

CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCCCCGGCTACTATATGTACTGGTTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGACTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGACACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTTTATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCAGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGAAGCCCAGATATTTTGACTCCTTCTACTACTACCTTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAAACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCAGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGATCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATCTCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATCCAGTAACTACGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAGQNISRHLNWYQQNPGKAPKVLIHPASSLPSGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFGTYFCQQSYSTPPTFGGGTKVELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLESTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPGYYMYWLRQAPGQGLEWMGWINPDSGDTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAFMELSRLRSDDTAVYYCAREKPRYFDSFYYYLMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSSNYDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

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21-230_33H6_IgG_21-233_4H6__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_33H6 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_33H6 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30868

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CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCCCCGGCTACTATATGTACTGGTTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGACTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGACACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTTTATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCAGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGAAGCCCAGATATTTTGACTCCTTCTACTACTACCTTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCAGGCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATCTACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGAACTCCCACTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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iPS ： 576316

21-230_33H6_IgG_21-233_6F4__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_33H6 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 6F4 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_33H6 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 6F4 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30869

NA

CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCCCCGGCTACTATATGTACTGGTTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGACTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGACACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTTTATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCAGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGAAGCCCAGATATTTTGACTCCTTCTACTACTACCTTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATCTATTACGTAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGTTGGGAGCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPGYYMYWLRQAPGQGLEWMGWINPDSGDTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAFMELSRLRSDDTAVYYCAREKPRYFDSFYYYLMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWISYISSSESIIYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGSHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

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21-230_33H6_IgG_21-233_7G11__Fab

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NA

CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCCCCGGCTACTATATGTACTGGTTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGACTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGACACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTTTATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCAGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGAAGCCCAGATATTTTGACTCCTTCTACTACTACCTTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCGAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGGTTCACCGTCAGTAGCAAGTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAAGACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGCGGTGGCTGGGGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPGYYMYWLRQAPGQGLEWMGWINPDSGDTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAFMELSRLRSDDTAVYYCAREKPRYFDSFYYYLMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFTVSSKFMTWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGKTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGGWGYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

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21-230_33H9_IgG_21-233_4G12__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_33H9 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_33H9 VL]: : huLLC2-E + [抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VL]: : huLLC2-K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30871

NA

CAGGCTGTGCCGACTCAGCCCTCTTCCCTCTCTGCATCTCCTGGAGCATCAGCCAGTCTCACCTGCACCTTACGCAGTGGCATCAATGTTGGTTCCTCCAGGATCTATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGGAGTCCTCCCCAGTTTCTCCTGAGGTACACATCAGACTCAGATAAATTGCAGGGCTCTGGAGTCCCCAGCCGCTTCTCTGGATCCAAAGATGCTTCGGCCAATGCAGGACTTTTACTCATCTCTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGACTATTACTGTATGATTTGGCACAGCAGCGCTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAACTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCGAAAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA

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21-230_33H9_IgG_21-233_4H6__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_33H9 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_33H9 VL]: : huLLC2-E + [抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30872

NA

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AA

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21-230_33H9_IgG_21-233_6F4__Fab

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NA

CAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCCATGGCATGCACTGGGTCCGCCAACCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTGGTATGATGGAAGTAATGAATACTATGGAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGTCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTACGAGAGGGGGGGGCCACTGGAACTACGAGGGCCACTACTATGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATCTATTACGTAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGTTGGGAGCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

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21-230_33H9_IgG_21-233_7G11__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_33H9 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 7G11 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_33H9 VL]: : huLLC2-E + [抗-＜hu間皮素＞ 7G11 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30874

NA

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AA

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（SEQ ID NO: 569）

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21-230_35F11_IgG_21-233_4G12__Fab

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NA

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AA

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NA

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AA

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21-230_35F11_IgG_21-233_6F4__Fab

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NA

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCCTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGAGTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTACGAGAGATGGCCGGAACTACGTCTACTTTGACAACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGCAGTGAAAGTATCATCTATTACGTAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGTTGGGAGCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

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NA

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCCTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGAGTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTACGAGAGATGGCCGGAACTACGTCTACTTTGACAACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCGAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGGTTCACCGTCAGTAGCAAGTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAAGACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGCGGTGGCTGGGGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

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[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_36F3 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_36F3 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VL]: : huLLC2-K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30879

NA

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGGCCCTTATCTATGCTGCATCCAACAGGGCCGCTGGCATCTCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTTCTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACTAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCGAAAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT

CAGGTACAGCTGCAACAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAGCCGTACTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATCATGATTATTCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATCACCATCGACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTTTATTATTGTGCAAGAGGGGCTGCTCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAAACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCAGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGATCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATCTCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATCCAGTAACTACGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRALIYAASNRAAGISDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYFCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLESTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSSRTAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYHDYSVSVKSRITIDPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGAAPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSSNYDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

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NA

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AA

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21-230_36F3_IgG_21-233_6F4__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_36F3 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 6F4 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_36F3 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 6F4 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30881

NA

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AA

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iPS ： 576361

21-230_36F3_IgG_21-233_7G11__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_36F3 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 7G11 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_36F3 VL]: : huKLC-S176E + [抗-＜hu間皮素＞ 7G11 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30882

NA

CAGGTACAGCTGCAACAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAGCCGTACTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATCATGATTATTCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATCACCATCGACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTTTATTATTGTGCAAGAGGGGCTGCTCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCGAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGGTTCACCGTCAGTAGCAAGTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAAGACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGCGGTGGCTGGGGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

（SEQ ID NO: 613）

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AA

QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSSRTAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYHDYSVSVKSRITIDPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGAAPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFTVSSKFMTWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGKTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGGWGYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

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iPS ： 576364

21-230_37A6_IgG_21-233_4G12__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_37A6 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_37A6 VL]: : huLLC2-E + [抗-＜hu間皮素＞ 4G12 VL]: : huLLC2-K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30883

NA

TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGAAAGGTTGGGAAATAAATATATTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTTCTGGTCATCTATCAAGATTTCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGATCACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGAACTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCGAAAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA

CAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGAATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATATATTAGTCGAAGTGGTGATACCATCTACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAATGGCCTGCGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGACTTAGCAGCAGGTGCTACAGGGGGCCTTGACTGCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAAGAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTGGTGGCGGATCGGGAGGTGGCGGATCCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAAACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCAGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGATCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATCTCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATCCAGTAACTACGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTGTCCTCAGCAAGCACGAAGGGGCCGTCCGTATTTCCGCTTGCGCCCTCGTCGAAGTCAACTTCGGGAGGGACCGCGGCACTTGGCTGTCTTGTCAAAGATTACTTCCCTGAGCCAGTGACAGTCAGCTGGAATTCCGGTGCCCTCACGTCAGGAGTACATACATTCCCTGCGGTATTGCAGTCCTCCGGACTCTACTCCCTGGAGTCGGTGGTAACGGTGCCCAGCTCCAGCTTGGGGACCCAGACGTACATTTGTAACGTGAATCACAAACCAAGCAATACTAAGGTAGATAAGAAAGTAGAACCGAAGAGCTGC

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AA

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGERLGNKYICWYQQKPGQSPVLVIYQDFKRPSGIPERFSGSNSGITATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSRTVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAESYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS

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iPS ： 576369

21-230_37A6_IgG_21-233_4H6__Fab

[hu抗-＜huCD40＞ 21-230_37A6 VH]: : huIgG1zSEFL2*GK-K: : (G4S)2: : [hu抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VH]: : huIgG1z-CH1-E: : EPKSC + [抗-＜huCD40＞ 21-230_37A6 VL]: : huLLC2-E + [抗-＜hu間皮素＞ 4H6 VL]: : huKLC-S176K (IgG-Fab)；LMR ID: SS-30884

NA

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AA

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iPS ： 576372

21-230_37A6_IgG_21-233_6F4__Fab

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NA

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21-230_37A6_IgG_21-233_7G11__Fab

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21-230_392_IgG_21-233_4G12__Fab

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21-230_392_IgG_21-233_4H6__Fab

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NA

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21-230_392_IgG_21-233_6F4__Fab

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21-230_392_IgG_21-233_7G11__Fab

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NA

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AA

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[ 表 27B] ： MSLN-CD40 IgG-Fab
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（SEQ ID NO: 880）	（SEQ ID NO: 881）	（SEQ ID NO: 882）

κCL (SEQ ID NO: 883) RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLESTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC（SEQ ID NO: 926） RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLKSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC（SEQ ID NO: 927） λCL (SEQ ID NO: 884) GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAKSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS（SEQ ID NO: 928） GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAESYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS（SEQ ID NO: 929）共有的CH1-鉸鏈-CH2-CH3 (SEQ ID NO: 885) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 共有的CH1-鉸鏈-CH2-CH3（K590G） (SEQ ID NO: 886) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGG （SEQ ID NO: 887） GGSGGGGS （SEQ ID NO: 888） GGGGSGGGGS （SEQ ID NO: 889） GGGGSGGGGSGGGGS （SEQ ID NO: 890） GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS （SEQ ID NO: 891） GGGGQGGGGQ （SEQ ID NO: 892） GGGGQGGGGQGGGGQ （SEQ ID NO: 893） GGGGQGGGGQGGGGQGGGGQ MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC（SEQ ID NO: 894） MAWALLLLTLLTQGTGSWA（SEQ ID NO: 895） MTCSPLLLTLLIHCTGSWA（SEQ ID NO: 896）MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG（SEQ ID NO: 897） MEWTWRVLFLVAAATGAHS（SEQ ID NO: 898） METPAQLLFLLLLWLPDTTG（SEQ ID NO: 899） METPAQLLFLLLLWLPDTTG（SEQ ID NO: 900） MKHLWFFLLLVAAPRWVLS（SEQ ID NO: 901） MEWSWVFLFFLSVTTGVHS（SEQ ID NO: 902）（SEQ ID NO: 903）人MSLN v2 NM 013404 MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISSLSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPSTWSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERILRPRFRREVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQAPRRPLPQVATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKA EERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQEALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA （SEQ ID NO: 904）人MSLN v6 AY743922 MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISSLSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTHFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPSTWSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERILRPRFRREVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVR DWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSVQEALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA （SEQ ID NO: 905）食蟹獼猴MSLN獼猴v1 LMR C52457 MALPMARPLSGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRVLAGETRQEAAPLDGILTNAPDIASLSPRQLLGFTCVEVSGLSTELVQELAVALGQKNVKLSAEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTHFFSRVAKANVDLLPRGAPERQRLLPAALTCWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEWLPRLVRCLGPLDQDQQEAARAALQRGGPPYGPPSTWSISTLDDLQSLLPVLGQPVIHSIPQGILAAWRQRSSRDPSWQQPEQTVLRPRFRRDVERTTCPPEKEVHEIDENLIFYKKRELEACVDAALLAAQMDRVDAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIRHLGHLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLKVSKGHEMSAQVATLIDRVWGRGQLDKDTADTLTAFCPGCLCSLSPERLSSVPPSVIGAVRPQDLDTCGPRQLDVLYPKARLAFQNMSGSEYFVKIRPFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRREAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKVEEQHSPVRDWILKQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLILDLSVREALSGTPCLLGPGPVLTILALLLASTLA κCL S176E （SEQ ID NO: 906） RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLESTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC κCL S176K （SEQ ID NO: 907） RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLKSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC λCL S176K （SEQ ID NO: 908） GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAKSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS λCL S176E （SEQ ID NO: 909） GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAESYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS （SEQ ID NO: 910）＞ XM_005590816.2（無N末端11aa）食蟹獼猴間皮素 MALPMARPLSGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRVLAGETRQEAAPLDGILTNAPDIASLSPRQLLGFTCVEVSGLSTELVQELAVALGQKNVKLSAEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTHFFSRVAKANVDLLPRGAPERQRLLPAALTCWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVVLPRLVRCLGPLDQDQQEAARAALQRGGPPYGPPSTWSISTLDDLQSLLPVLGQPVIHSIPQGILAAWRQRSSRDPSWQQPEQTVLRPRFRRDVERTTCPPEKEVHEIDESLIFYKKRELEACVDAALLAAQMDRVDAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIRHLGHLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLKVSKGHEMSAQVATLIDRVVVGRGQLDKDTADTLTAFCPGCLCSLSPERLSSVPPSIIGAVRPQDLDTCGPRQLDVLYPKARLAFQNMSGSEYFVKIRPFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRREAVLPLSVAEVQKLLGPHVEGLKVEEQHSPVRDWILKQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLILDLSVREALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA （SEQ ID NO: 911）＞ XP_005569274.1 PREDICTED: 腫瘤壞死因子受體超家族成員5同種型X1 [食蟹獼猴（Macaca fascicularis）] MVRLPLQCVLWGCLLTAVYPEPPTACREKQYLINSQCCSLCQPGQKLVSDCTEFTETECLPCGESEFLDTWNRETRCHQHKYCDPNLGLRVQQKGTSETDTICTCEEGLHCTSESCESCVPHRSCLPGFGVKQIATGVSDTICEPCPVGFFSNVSSAFEKCRPWTSCETKDLVVQQAGTNKTDVVCGPQDRQRALVVIPICLGILFVILLLVLVFISESSEKVAKKPNDKVPHPKQEPQEINFPDDLPGSNPAAPVQETLHGCQPVTQEDGKESRISVQERQ （SEQ ID NO: 912）共有的CH1-鉸鏈-CH2-CH3（S176K） ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGG （SEQ ID NO: 913）共有的CH1-鉸鏈-CH2-CH3（S176E） ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGG （SEQ ID NO: 914）共有的CH1-鉸鏈-CH2-CH3（S176K/K590G） ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （SEQ ID NO: 915）共有的CH1-鉸鏈-CH2-CH3（S176E/K590G） ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLESVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

無

[圖1]描繪了抗MSLN抗體與表現人MSLN之CHO細胞的細胞結合。

[圖2]描繪了在人B細胞測定中具有或不具有交聯的抗CD40抗體之活性。

[圖3]描繪了二價雙特異性抗體形式。

[圖4]描繪了表現不同水平的MSLN的細胞系之產生。

[圖5]描繪了小鼠中抗CD40xMSLN雙特異性分子的藥物動力學特性和穩定性。

[圖6]描繪了表現MC38-人EPCAM和B16F10-人EPCAM的細胞系之產生。

[圖7]描繪了小鼠替代的抗CD40x人EPCAM雙特異性分子之活性。

[圖8]描繪了小鼠替代的抗CD40x人EPCAM雙特異性分子在體內具有腫瘤-定位的、TAA-介導的X-連接的-依賴性活性。

[圖9]描繪了小鼠替代的抗CD40x人EPCAM雙特異性分子增強CD8+ T細胞抗腫瘤反應。

[圖10]描繪了小鼠替代的抗CD40x人EPCAM雙特異性分子在體內具有腫瘤-定位的、TAA-介導的X-連接的-依賴性活性。

[圖11]描繪了小鼠替代的抗CD40x人EPCAM雙特異性分子不增加全身細胞介素的水平或增加肝臟炎症。

[圖12]描繪了小鼠替代的抗CD40x人EPCAM雙特異性分子單獨和與PD1/PDL1阻斷組合誘導已建立的MC38-人EPCAM腫瘤的消退。

[圖13]描繪了小鼠替代的抗CD40x人EPCAM雙特異性分子誘導長效的免疫記憶，該免疫記憶防止腫瘤再激發。

無

Claims

一種多特異性抗體構建體，該多特異性抗體構建體包含： (i) 含有兩個輕鏈和兩個重鏈的第一抗體，其中該等輕鏈包含第一可變區（VL1）和輕鏈恒定區（CL）；該等重鏈包含第一重可變區（VH1）和CH1、鉸鏈、CH2、和CH3區；該等重鏈包含至少一個胺基酸取代，與未取代的重鏈相比，該取代導致該重鏈對人FcγRI受體的結合親和力降低；和 (ii) 含有第二抗體的第二輕鏈可變區（VL2）和第二重鏈可變區（VH2）的scFv，其中該VL2和該VH2經由第一肽連接子連接，其中該scFv在其胺基末端通過第二肽連接子與每個重鏈的羧基末端融合，以形成重鏈融合蛋白；並且其中該第一抗體特異性地結合至並激動人CD40（SEQ ID NO: 1），並且該scFv特異性地結合至人間皮素（MSLN）（SEQ ID NO: 2）。
如請求項1所述之抗體構建體，其中該兩個輕鏈相同並且該兩個重鏈融合蛋白相同。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該重鏈包含選自由以下組成之群組的胺基酸取代： (i) N297G或N297A； (ii) L234A和L235A；和 (iii) R292C和V302C；其中該胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。
如請求項3所述之抗體構建體，其中該重鏈包含N297G、R292C、和V302C突變，其中該胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；該VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；該VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；並且該VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中 1) 該VL1和VH1選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 142、143、和144； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 148、149、和150； d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 76、77、和6780；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 154、155、和156； e) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 160、161、和162； f) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 166、167、和168； g) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 172、173、和174； h) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 178、179、和180； i) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 184、185、和186； j) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 190、191、和192； k) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 196、197、和198； l) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及 m) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；並且 2) 該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 260、261、和262； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及 d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該VL1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；該VH1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、和54；該VL2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 213、217、221、和225；該VH2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 214、218、222、和226。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中 1) 該VL1和VH1選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 5的VL1和包含SEQ ID NO: 6的VH1； b) 包含SEQ ID NO: 9的VL1和包含SEQ ID NO: 10的VH1； c) 包含SEQ ID NO: 13的VL1和包含SEQ ID NO: 14的VH1； d) 包含SEQ ID NO: 17的VL1和包含SEQ ID NO: 18的VH1； e) 包含SEQ ID NO: 21的VL1和包含SEQ ID NO: 22的VH1； f) 包含SEQ ID NO: 25的VL1和包含SEQ ID NO: 26的VH1； g) 包含SEQ ID NO: 29的VL1和包含SEQ ID NO: 30的VH1； h) 包含SEQ ID NO: 33的VL1和包含SEQ ID NO: 34的VH1； i) 包含SEQ ID NO: 37的VL1和包含SEQ ID NO: 38的VH1； j) 包含SEQ ID NO: 41的VL1和包含SEQ ID NO: 42的VH1； k) 包含SEQ ID NO: 45的VL1和包含SEQ ID NO: 46的VH1； l) 包含SEQ ID NO: 49的VL1和包含SEQ ID NO: 50的VH1；以及 m) 包含SEQ ID NO: 53的VL1和包含SEQ ID NO: 54的VH1；並且 2) 該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 213的VL2和包含SEQ ID NO: 214的VH2； b) 包含SEQ ID NO: 217的VL2和包含SEQ ID NO: 218的VH2； c) 包含SEQ ID NO: 221的VL2和包含SEQ ID NO: 222的VH2；以及 d) 包含SEQ ID NO: 225的VL2和包含SEQ ID NO: 226的VH2。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該輕鏈的CL選自由SEQ ID NO: 883和SEQ ID NO: 884組成之群組。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該重鏈的CH1-鉸鏈-CH2-CH3選自由SEQ ID NO: 885和SEQ ID NO: 886組成之群組。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該第一肽連接子選自由SEQ ID NO: 888-893組成之群組。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該第二肽連接子選自由SEQ ID NO: 887-893組成之群組。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該第一肽連接子包含SEQ ID NO: 889並且該第二肽連接子包含SEQ ID NO: 887。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該輕鏈包含選自由以下組成之群組的序列：SEQ ID NO: 286、290、294、298、302、306、310、314、318、322、326、330、336、342、346、350、354、358、362、366、370、374、和378；並且該重鏈融合蛋白包含選自由以下組成之群組的序列：SEQ ID NO: 285、289、293、297、301、305、309、313、317、321、325、329、333、337、341、345、349、353、357、361、365、369、373、和377。
如任一前述請求項所述之抗體構建體，其中該輕鏈和該重鏈融合蛋白包含多肽，該等多肽包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：分別是SEQ ID NO: 286和SEQ ID NO: 285；分別是SEQ ID NO: 290和SEQ ID NO: 289；分別是SEQ ID NO: 294和SEQ ID NO: 293；分別是SEQ ID NO: 298和SEQ ID NO: 297；分別是SEQ ID NO: 302和SEQ ID NO: 301；分別是SEQ ID NO: 306和SEQ ID NO: 305；分別是SEQ ID NO: 310和SEQ ID NO: 309；分別是SEQ ID NO: 314和SEQ ID NO: 313；分別是SEQ ID NO: 318和SEQ ID NO: 317；分別是SEQ ID NO: 322和SEQ ID NO: 321；分別是SEQ ID NO: 326和SEQ ID NO: 325；分別是SEQ ID NO: 330和SEQ ID NO: 329；分別是SEQ ID NO: 334和SEQ ID NO: 333；分別是SEQ ID NO: 338和SEQ ID NO: 337；分別是SEQ ID NO: 342和SEQ ID NO: 341；分別是SEQ ID NO: 346和SEQ ID NO: 345；分別是SEQ ID NO: 350和SEQ ID NO: 349；分別是SEQ ID NO: 354和SEQ ID NO: 353；分別是SEQ ID NO: 358和SEQ ID NO: 357；分別是SEQ ID NO: 362和SEQ ID NO: 361；分別是SEQ ID NO: 366和SEQ ID NO: 365；分別是SEQ ID NO: 370和SEQ ID NO: 369；分別是SEQ ID NO: 374和SEQ ID NO: 373；以及分別是SEQ ID NO: 378和SEQ ID NO: 377。
一種多核苷酸，該多核苷酸編碼如任一前述請求項所述之抗體構建體的輕鏈。
一種多核苷酸，該多核苷酸編碼如任一前述請求項所述之抗體構建體的重鏈融合蛋白。
一種載體，該載體包含如請求項16所述之多核苷酸、如請求項17所述之多核苷酸或兩者。
一種宿主細胞，該宿主細胞用如請求項16所述之多核苷酸和如請求項17所述之多核苷酸轉化或轉染。
一種用於產生如請求項1-15中任一項所述之抗體構建體之方法，所述方法包括在允許表現該抗體構建體的條件下，培養包含編碼輕鏈的多核苷酸以及還包含編碼重鏈融合蛋白的多核苷酸的宿主細胞，並且從培養物回收產生的抗體構建體。
一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項1-15中任一項所述之抗體構建體和載劑、穩定劑、賦形劑、稀釋劑、增溶劑、表面活性劑、乳化劑、防腐劑或輔助劑。
一種用於治療或改善實性瘤疾病或轉移性癌症疾病之方法，該方法包括向有需要的受試者投與有效量的如請求項1-15中任一項所述之抗體構建體。
如請求項22所述之方法，其中該實性瘤疾病選自由以下組成之群組：卵巢癌、胰臟癌、間皮瘤、肺癌、胃部癌和三陰性乳癌疾病或源自任何前述疾病的轉移性癌症疾病。
一種套組，該套組包含如請求項1-15中任一項所述之抗體構建體和視需要，使用說明書。
一種多特異性抗體構建體，該多特異性抗體構建體包含： (i) 含有兩個輕鏈和兩個重鏈的第一抗體，其中該等輕鏈包含第一可變區（VL1）和輕鏈恒定區（CL）；該等重鏈包含第一重可變區（VH1）和CH1、鉸鏈、CH2、和CH3區；該等重鏈包含至少一個胺基酸取代，與未取代的重鏈相比，該取代導致該重鏈對人FcγRI受體的結合親和力降低；和 (ii) 含有第二抗體的第二輕鏈可變區（VL2）和第二重鏈可變區（VH2）的scFv，其中該VL2和該VH2經由第一肽連接子連接，其中該scFv在其胺基末端通過第二肽連接子與每個重鏈的羧基末端融合，以形成重鏈融合蛋白；並且其中第一抗體特異性地結合至人間皮素（MSLN）（SEQ ID NO: 2），並且scFv特異性地結合至並激動人CD40（SEQ ID NO: 1）。
如請求項25所述之抗體構建體，其中該兩個輕鏈相同並且該兩個重鏈融合蛋白相同。
如請求項25-26中任一項所述之抗體構建體，其中該重鏈包含選自由以下組成之群組的胺基酸取代： (i) N297G或N297A； (ii) L234A和L235A；和 (iii) R292C和V302C；其中該胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。
如請求項27所述之抗體構建體，其中該重鏈包含N297G、R292C、和V302C突變，其中該胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。
如請求項25-28中任一項所述之抗體構建體，其中該VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；該VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；該VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；並且該VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。
如請求項25-29中任一項所述之抗體構建體，其中 1) 該VL1和VH1選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 260、261、和262； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及 d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；並且 2) 該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 142、143、和144； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 148、149、和150； d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 76、77、和6780；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 154、155、和156； e) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 160、161、和162； f) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 166、167、和168； g) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 172、173、和174； h) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 178、179、和180； i) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 184、185、和186； j) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 190、191、和192； k) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 196、197、和198； l) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及 m) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。
如請求項25-30中任一項所述之抗體構建體，其中該VL1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 213、217、221、和225；該VH1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 214、218、222、和226；該VL2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；並且該VH2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、和54。
如請求項25-31中任一項所述之抗體構建體，其中 1) 該VL1和VH1選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 213的VL1和包含SEQ ID NO: 214的VH1； b) 包含SEQ ID NO: 217的VL1和包含SEQ ID NO: 218的VH1； c) 包含SEQ ID NO: 221的VL1和包含SEQ ID NO: 222的VH1；以及 d) 包含SEQ ID NO: 225的VL1和包含SEQ ID NO: 226的VH1；並且 2) 該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 5的VL2和包含SEQ ID NO: 6的VH2； b) 包含SEQ ID NO: 9的VL2和包含SEQ ID NO: 10的VH2； c) 包含SEQ ID NO: 13的VL2和包含SEQ ID NO: 14的VH2； d) 包含SEQ ID NO: 17的VL2和包含SEQ ID NO: 18的VH2； e) 包含SEQ ID NO: 21的VL2和包含SEQ ID NO: 22的VH2； f) 包含SEQ ID NO: 25的VL2和包含SEQ ID NO: 26的VH2； g) 包含SEQ ID NO: 29的VL2和包含SEQ ID NO: 30的VH2； h) 包含SEQ ID NO: 33的VL2和包含SEQ ID NO: 34的VH2； i) 包含SEQ ID NO: 37的VL2和包含SEQ ID NO: 38的VH2； j) 包含SEQ ID NO: 41的VL2和包含SEQ ID NO: 42的VH2； k) 包含SEQ ID NO: 45的VL2和包含SEQ ID NO: 46的VH2； l) 包含SEQ ID NO: 49的VL2和包含SEQ ID NO: 50的VH2；以及 m) 包含SEQ ID NO: 53的VL2和包含SEQ ID NO: 54的VH2。
如請求項25-32中任一項所述之抗體構建體，其中該輕鏈的CL選自由SEQ ID NO: 883和SEQ ID NO: 884組成之群組。
如請求項25-33中任一項所述之抗體構建體，其中該重鏈的CH1-鉸鏈-CH2-CH3選自由SEQ ID NO: 885和SEQ ID NO: 886組成之群組。
如請求項25-34中任一項所述之抗體構建體，其中該第一肽連接子選自由SEQ ID NO: 888-893組成之群組。
如請求項25-35中任一項所述之抗體構建體，其中該第二肽連接子選自由SEQ ID NO: 887-893組成之群組。
如請求項25-36中任一項所述之抗體構建體，其中該第一肽連接子包含SEQ ID NO: 889並且該第二肽連接子包含SEQ ID NO: 887。
如請求項25-37中任一項所述之抗體構建體，其中該輕鏈包含選自由以下組成之群組的序列：SEQ ID NO: 382、386、390、394、398、402、406、410、414、418、422、426、430、434、438、442、446、和450；並且該重鏈融合蛋白包含選自由以下組成之群組的序列：SEQ ID NO: 381、385、389、393、397、401、405、409、413、417、421、425、429、433、437、441、445、和449。
如請求項25-38中任一項所述之抗體構建體，其中該輕鏈和該重鏈融合蛋白包含多肽，該等多肽包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：分別是SEQ ID NO: 382和SEQ ID NO: 381；分別是SEQ ID NO: 386和SEQ ID NO: 385；分別是SEQ ID NO: 390和SEQ ID NO: 389；分別是SEQ ID NO: 394和SEQ ID NO: 393；分別是SEQ ID NO: 398和SEQ ID NO: 397；分別是SEQ ID NO: 402和SEQ ID NO: 401；分別是SEQ ID NO: 406和SEQ ID NO: 405；分別是SEQ ID NO: 410和SEQ ID NO: 409；分別是SEQ ID NO: 414和SEQ ID NO: 413；分別是SEQ ID NO: 418和SEQ ID NO: 417；分別是SEQ ID NO: 422和SEQ ID NO: 421；分別是SEQ ID NO: 426和SEQ ID NO: 425；分別是SEQ ID NO: 430和SEQ ID NO: 429；分別是SEQ ID NO: 434和SEQ ID NO: 433；分別是SEQ ID NO: 438和SEQ ID NO: 437；分別是SEQ ID NO: 442和SEQ ID NO: 441；分別是SEQ ID NO: 446和SEQ ID NO: 445；以及分別是SEQ ID NO: 450和SEQ ID NO: 449。
一種多核苷酸，該多核苷酸編碼如請求項25-39中任一項所述之抗體構建體的輕鏈。
一種多核苷酸，該多核苷酸編碼如請求項25-39中任一項所述之抗體構建體的重鏈融合蛋白。
一種載體，該載體包含如請求項40所述之多核苷酸、如請求項41所述之多核苷酸或兩者。
一種宿主細胞，該宿主細胞用如請求項40所述之多核苷酸和如請求項42所述之多核苷酸轉化或轉染。
一種用於產生如請求項25-39中任一項所述之抗體構建體之方法，所述方法包括在允許表現該抗體構建體的條件下，培養包含編碼輕鏈的多核苷酸以及還包含編碼重鏈融合蛋白的多核苷酸的宿主細胞，並且從培養物回收產生的抗體構建體。
一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項25-39中任一項所述之抗體構建體和載劑、穩定劑、賦形劑、稀釋劑、增溶劑、表面活性劑、乳化劑、防腐劑或輔助劑。
一種用於治療或改善實性瘤疾病或轉移性癌症疾病之方法，該方法包括向有需要的受試者投與有效量的如請求項25-39中任一項所述之抗體構建體。
如請求項46所述之方法，其中該實性瘤疾病選自由以下組成之群組：卵巢癌、胰臟癌、間皮瘤、肺癌、胃部癌和三陰性乳癌疾病或源自任何前述疾病的轉移性癌症疾病。
一種套組，該套組包含如請求項25-39中任一項所述之抗體構建體和視需要，使用說明書。
一種多特異性抗體構建體，該多特異性抗體構建體包含： a) 每個都包含第一重鏈可變區（VH1）和第一CH1結構域的兩個相同重鏈融合蛋白，其中該第一CH1結構域連接至鉸鏈-CH2-CH3多肽，並且其中該鉸鏈-CH2-CH3多肽連接至第二重鏈可變區（VH2），其中該VH2連接至第二CH1結構域；其中 i) 該VH1或第一CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；並且 ii) VH2或第二CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由對應於以下位置的殘基組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；和 b) 包含第一輕鏈的第二多肽，其中該第一輕鏈包含第一輕鏈可變區（VL1）和第一CL區；並且其中該VL1或第一CL結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：38、100、和176，使用EU編號；和 c) 包含第二輕鏈的第三多肽，其中該第二輕鏈包含第二輕鏈可變區（VL2）和第二CL區；並且其中該VL2或第二CL結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：38、100、和176，使用EU編號；其中該VH1和VL1相互作用以結合第一抗原並且其中該VH2和VL2相互作用以結合第二抗原；其中：該第一抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）並且該第二抗原係人間皮素（「MSLN」；SEQ ID NO: 2）；或者該第一抗原係人MSLN（SEQ ID NO: 2）並且該第二抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）。
一種多特異性抗體構建體，該多特異性抗體構建體包含： a) 每個都包含第一重鏈可變區（VH1）和第一CH1結構域的兩個相同重鏈融合蛋白，其中該第一CH1結構域連接至鉸鏈-CH2-CH3多肽，並且其中該鉸鏈-CH2-CH3多肽連接至第二重鏈可變區（VH2），其中該VH2連接至第二CH1結構域；其中 i) VH1或第一CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；並且 ii) VH2或第二CH1結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由對應於以下位置的殘基組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：39、44、和183，使用EU編號；和 b) 包含第一輕鏈的第二多肽，其中該第一輕鏈包含第一輕鏈可變區（VL1）和第一CL區；並且其中該VL1或第一CL結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶正電的胺基酸：38、100、和176，使用EU編號；以及 c) 包含第二輕鏈的第三多肽，其中該第二輕鏈包含第二輕鏈可變區（VL2）和第二CL區；並且其中VL2或第二CL結構域包含至少一個胺基酸取代以在選自由以下位置組成之群組的殘基處引入帶負電的胺基酸：38、100、和176，使用EU編號；其中該VH1和VL1相互作用以結合第一抗原並且其中該VH2和VL2相互作用以結合第二抗原；其中：該第一抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）並且該第二抗原係人間皮素（「MSLN」；SEQ ID NO: 2）；或者該第一抗原係人MSLN（SEQ ID NO: 2）並且該第二抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）。
如請求項49或50中任一項所述之抗體構建體，其中將該鉸鏈-CH2-CH3多肽經由肽連接子連接至該VH2。
如51所述之抗體構建體，其中該肽連接子包含選自由以下組成之群組的序列：(Gly₃ Ser)₂ （SEQ ID NO: 916）、(Gly₄ Ser)₂ （SEQ ID NO: 888）、(Gly₃ Ser)₃ （SEQ ID NO: 917）、(Gly₄ Ser)₃ （SEQ ID NO: 889）、(Gly₃ Ser)₄ （SEQ ID NO: 918）、(Gly₄ Ser)₄ （SEQ ID NO: 890）、(Gly₃ Ser)₅ （SEQ ID NO: 919）、(Gly₄ Ser)₅ （SEQ ID NO: 920）、(Gly₃ Ser)₆ （SEQ ID NO: 921）、和(Gly₄ Ser)₆ （SEQ ID NO: 922）。
如請求項49所述之抗原結合蛋白，其中 a) 該VH1或第一CH1結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q39K、G44K、和S183K，使用EU編號； b) 該VH2或第二CH1結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q39E、G44E、和S183E，使用EU編號； c) 該VL1或第一CL結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q38E、G100E、和S176E，使用EU編號；並且 d) 該VL2或第二CL結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q38K、G100K、和S176K，使用EU編號。
如請求項53所述之抗原結合蛋白，其中 a) 該第一CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號； b) 該第二CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號； c) 該第一CL結構域包含S176E突變，使用EU編號；並且 d) 該第二CL結構域包含S176K突變，使用EU編號。
如請求項53所述之抗原結合蛋白，其中 a) 該VH1包含Q39K突變並且該第一CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號； b) 該VH2包含Q39E突變並且該第二CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號； c) 該VL1包含Q38E突變並且該第一CL結構域包含S176E突變，使用EU編號；並且 d) 該VL2包含Q38K突變並且該第二CL結構域包含S176K突變，使用EU編號。
如請求項53所述之抗原結合蛋白，其中 a) 該第一CH1結構域包含G44K和S183K突變，使用EU編號； b) 該第二CH1結構域包含G44E和S183E突變，使用EU編號； c) 該第一CL結構域包含G100E和S176E突變，使用EU編號；並且 d) 該第二CL結構域包含G100K和S176K突變，使用EU編號。
如請求項50所述之抗原結合蛋白，其中 a) 該VH1或第一CH1結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q39E、G44E、和S183E，使用EU編號； b) 該VH2或第二CH1結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q39K、G44K、和S183K，使用EU編號； c) 該VL1或第一CL結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q38K、G100K、和S176K，使用EU編號；並且 d) 該VL2或第二CL結構域包含選自由以下組成之群組的突變：Q38E、G100E、和S176E，使用EU編號。
如請求項57所述之抗原結合蛋白，其中 a) 該第一CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號； b) 該第二CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號； c) 該第一CL結構域包含S176K突變，使用EU編號；並且 d) 該第二CL結構域包含S176E突變，使用EU編號。
如請求項57所述之抗原結合蛋白，其中 a) 該VH1包含Q39E突變並且該第一CH1結構域包含S183E突變，使用EU編號； b) 該VH2包含Q39K突變並且該第二CH1結構域包含S183K突變，使用EU編號； c) 該VL1包含Q38K突變並且該第一CL結構域包含S176K突變，使用EU編號；並且 d) 該VL2包含Q38E突變並且該第二CL結構域包含S176E突變，使用EU編號。
如請求項57所述之抗原結合蛋白，其中 a) 該第一CH1結構域包含G44E和S183E突變，使用EU編號； b) 該第二CH1結構域包含G44K和S183K突變，使用EU編號； c) 該第一CL結構域包含G100K和S176K突變，使用EU編號；並且 d) 該第二CL結構域包含G100E和S176E突變，使用EU編號。
如請求項49-50中任一項所述之抗體構建體，其中該鉸鏈-CH2-CH3多肽包含選自由以下組成之群組的胺基酸取代： (i) N297G或N297A； (ii) L234A和L235A；和 (iii) R292C和V302C；其中該胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。
如請求項61所述之抗體構建體，其中該鉸鏈-CH2-CH3多肽包含N297G、R292C、和V302C突變，其中該胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。
如請求項49-62中任一項所述之抗體構建體，其中該第一抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）並且該第二抗原係人MSLN（SEQ ID NO: 2）；並且該VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；該VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；該VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；並且該VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。
如請求項63所述之抗體構建體，其中 1) 該VL1和VH1選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 142、143、和144； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 148、149、和150； d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 76、77、和6780；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 154、155、和156； e) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 160、161、和162； f) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 166、167、和168； g) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 172、173、和174； h) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 178、179、和180； i) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 184、185、和186； j) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 190、191、和192； k) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 196、197、和198； l) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及 m) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 208、209、和210；並且 2) 該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 260、261、和262； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及 d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 272、273、和274。
如請求項63所述之抗體構建體，其中該VL1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；該VH1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、和54；該VL2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 213、217、221、和225；該VH2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 214、218、222、和226。
如請求項65所述之抗體構建體，其中 1) 該VL1和VH1選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 5的VL1和包含SEQ ID NO: 6的VH1； b) 包含SEQ ID NO: 9的VL1和包含SEQ ID NO: 10的VH1； c) 包含SEQ ID NO: 13的VL1和包含SEQ ID NO: 14的VH1； d) 包含SEQ ID NO: 17的VL1和包含SEQ ID NO: 18的VH1； e) 包含SEQ ID NO: 21的VL1和包含SEQ ID NO: 22的VH1； f) 包含SEQ ID NO: 25的VL1和包含SEQ ID NO: 26的VH1； g) 包含SEQ ID NO: 29的VL1和包含SEQ ID NO: 30的VH1； h) 包含SEQ ID NO: 33的VL1和包含SEQ ID NO: 34的VH1； i) 包含SEQ ID NO: 37的VL1和包含SEQ ID NO: 38的VH1； j) 包含SEQ ID NO: 41的VL1和包含SEQ ID NO: 42的VH1； k) 包含SEQ ID NO: 45的VL1和包含SEQ ID NO: 46的VH1； l) 包含SEQ ID NO: 49的VL1和包含SEQ ID NO: 50的VH1；以及 m) 包含SEQ ID NO: 53的VL1和包含SEQ ID NO: 54的VH1；並且 2) 該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 213的VL2和包含SEQ ID NO: 214的VH2； b) 包含SEQ ID NO: 217的VL2和包含SEQ ID NO: 218的VH2； c) 包含SEQ ID NO: 221的VL2和包含SEQ ID NO: 222的VH2；以及 d) 包含SEQ ID NO: 225的VL2和包含SEQ ID NO: 226的VH2。
一種多核苷酸，該多核苷酸編碼如請求項49-66和76-80中任一項所述之抗體構建體的第一輕鏈。
一種多核苷酸，該多核苷酸編碼如請求項49-66和76-80中任一項所述之抗體構建體的第二輕鏈。
一種多核苷酸，該多核苷酸編碼如請求項49-66和76-80中任一項所述之抗體構建體的重鏈融合蛋白。
一種載體，該載體包含： a) 如請求項67所述之多核苷酸， b) 如請求項68所述之多核苷酸， c) 如請求項69所述之多核苷酸，或 d) a)、b)、和c)的任何組合。
一種宿主細胞，該宿主細胞用如請求項67所述之多核苷酸、如請求項68所述之多核苷酸和如請求項69所述之多核苷酸轉化或轉染。
一種用於產生如請求項49-66和76-80中任一項所述之抗體構建體之方法，所述方法包括在允許表現該抗體構建體的條件下，培養包含編碼第一輕鏈的多核苷酸、編碼第二輕鏈的多核苷酸和編碼重鏈融合蛋白的多核苷酸的宿主細胞，並且從培養物回收產生的抗體構建體。
一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項49-66和76-80中任一項所述之抗體構建體和載劑、穩定劑、賦形劑、稀釋劑、增溶劑、表面活性劑、乳化劑、防腐劑或輔助劑。
一種用於治療或改善實性瘤疾病或轉移性癌症疾病之方法，該方法包括向有需要的受試者投與有效量的如請求項49-66和76-80中任一項所述之抗體構建體。
如請求項74所述之方法，其中該實性瘤疾病選自由以下組成之群組：卵巢癌、胰臟癌、間皮瘤、肺癌、胃部癌和三陰性乳癌疾病或源自任何前述疾病的轉移性癌症疾病。
一種套組，該套組包含如請求項49-66和76-80中任一項所述之抗體構建體和視需要，使用說明書。
如請求項49-62中任一項所述之抗體構建體，其中該第一抗原係人MSLN（SEQ ID NO: 2）並且該第二抗原係人CD40（SEQ ID NO: 1）；其中：該VL1包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；以及分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；該VH1包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256；分別是SEQ ID NO: 260、261、和262；分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；該VL2包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；並且該VH2包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。
如請求項77所述之抗體構建體，其中 1) 該VL1和VH1選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 230、231、和232；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 254、255、和256； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 236、237、和238；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 260、261、和262； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 242、243、和244；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 266、267、和268；以及 d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL1：分別是SEQ ID NO: 248、249、和250；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH1：分別是SEQ ID NO: 272、273、和274；並且 2) 該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 142、143、和144； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 148、149、和150； d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 76、77、和6780；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 154、155、和156； e) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 160、161、和162； f) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 166、167、和168； g) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 172、173、和174； h) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 178、179、和180； i) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 184、185、和186； j) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 190、191、和192； k) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 196、197、和198； l) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及 m) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL2：分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH2：分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。
如請求項77所述之抗體構建體，其中該VL1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 213、217、221、和225；該VH1包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 214、218、222、和226；該VL2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；並且該VH2包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、和54。
如請求項79所述之抗體構建體，其中 1) 該VL1和VH1選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 213的VL1和包含SEQ ID NO: 214的VH1； b) 包含SEQ ID NO: 217的VL1和包含SEQ ID NO: 218的VH1； c) 包含SEQ ID NO: 221的VL1和包含SEQ ID NO: 222的VH1；以及 d) 包含SEQ ID NO: 225的VL1和包含SEQ ID NO: 226的VH1；並且 2) 該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 5的VL2和包含SEQ ID NO: 6的VH2； b) 包含SEQ ID NO: 9的VL2和包含SEQ ID NO: 10的VH2； c) 包含SEQ ID NO: 13的VL2和包含SEQ ID NO: 14的VH2； d) 包含SEQ ID NO: 17的VL2和包含SEQ ID NO: 18的VH2； e) 包含SEQ ID NO: 21的VL2和包含SEQ ID NO: 22的VH2； f) 包含SEQ ID NO: 25的VL2和包含SEQ ID NO: 26的VH2； g) 包含SEQ ID NO: 29的VL2和包含SEQ ID NO: 30的VH2； h) 包含SEQ ID NO: 33的VL2和包含SEQ ID NO: 34的VH2； i) 包含SEQ ID NO: 37的VL2和包含SEQ ID NO: 38的VH2； j) 包含SEQ ID NO: 41的VL2和包含SEQ ID NO: 42的VH2； k) 包含SEQ ID NO: 45的VL2和包含SEQ ID NO: 46的VH2； l) 包含SEQ ID NO: 49的VL2和包含SEQ ID NO: 50的VH2；以及 m) 包含SEQ ID NO: 53的VL2和包含SEQ ID NO: 54的VH2。
一種抗原結合蛋白，該抗原結合蛋白特異性地結合並且激動人CD40（SEQ ID NO: 1），該抗原結合蛋白包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），其中：該VL包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；分別是SEQ ID NO: 76、77、和78；分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；以及分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；並且該VH包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138；分別是SEQ ID NO: 142、143、和144；分別是SEQ ID NO: 148、149、和150；分別是SEQ ID NO: 154、155、和156；分別是SEQ ID NO: 160、161、和162；分別是SEQ ID NO: 166、167、和168；分別是SEQ ID NO: 172、173、和174；分別是SEQ ID NO: 178、179、和180；分別是SEQ ID NO: 184、185、和186；分別是SEQ ID NO: 190、191、和192；分別是SEQ ID NO: 196、197、和198；分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。
如請求項81所述之抗體構建體，其中該VL和VH選自由以下組成之群組： a) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 58、59、和60；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 136、137、和138； b) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 64、65、和66；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 142、143、和144； c) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 70、71、和72；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 148、149、和150； d) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 76、77、和6780；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 154、155、和156； e) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 82、83、和84；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 160、161、和162； f) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 88、89、和90；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 166、167、和168； g) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 94、95、和96；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 172、173、和174； h) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 100、101、和102；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 178、179、和180； i) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 106、107、和108；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 184、185、和186； j) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 112、113、和114；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 190、191、和192； k) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 118、119、和120；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 196、197、和198； l) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 124、125、和126；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 202、203、和204；以及 m) 包含選自由以下組成之群組的CDRL1、CDRL2、和CDRL3的VL：分別是SEQ ID NO: 130、131、和132；和包含選自由以下組成之群組的CDRH1、CDRH2、和CDRH3的VH：分別是SEQ ID NO: 208、209、和210。
如請求項81所述之抗體構建體，其中該VL包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、和53；並且該VH包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列 SEQ ID NO: 6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、和54。
如請求項83所述之抗體構建體，其中該VL2和VH2選自由以下組成之群組： a) 包含SEQ ID NO: 5的VL和包含SEQ ID NO: 6的VH； b) 包含SEQ ID NO: 9的VL和包含SEQ ID NO: 10的VH； c) 包含SEQ ID NO: 13的VL和包含SEQ ID NO: 14的VH； d) 包含SEQ ID NO: 17的VL和包含SEQ ID NO: 18的VH； e) 包含SEQ ID NO: 21的VL和包含SEQ ID NO: 22的VH； f) 包含SEQ ID NO: 25的VL和包含SEQ ID NO: 26的VH； g) 包含SEQ ID NO: 29的VL和包含SEQ ID NO: 30的VH； h) 包含SEQ ID NO: 33的VL和包含SEQ ID NO: 34的VH； i) 包含SEQ ID NO: 37的VL和包含SEQ ID NO: 38的VH； j) 包含SEQ ID NO: 41的VL和包含SEQ ID NO: 42的VH； k) 包含SEQ ID NO: 45的VL和包含SEQ ID NO: 46的VH； l) 包含SEQ ID NO: 49的VL和包含SEQ ID NO: 50的VH；以及 m) 包含SEQ ID NO: 53的VL和包含SEQ ID NO: 54的VH。
如請求項81-84中任一項所述之抗體構建體，其中該重鏈包含選自由以下組成之群組的胺基酸取代： (i) N297G或N297A； (ii) L234A和L235A；和 (iii) R292C和V302C；其中該胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。
如請求項85所述之抗體構建體，其中該重鏈包含N297G、R292C、和V302C突變，其中該胺基酸編號係根據Kabat的EU編號。
如請求項81-86中任一項所述之抗體構建體，其中該抗原結合蛋白進一步包含連接至該VL的輕鏈CL多肽，其中該CL多肽選自由SEQ ID NO: 883和SEQ ID NO: 884組成之群組。
如請求項81-87中任一項所述之抗體構建體，其中該抗原結合蛋白進一步包含重鏈CH1-鉸鏈-CH2-CH3多肽，其中該CH1-鉸鏈-CH2-CH3多肽選自由SEQ ID NO: 885和SEQ ID NO: 886組成之群組。
如請求項81-88中任一項所述之抗體構建體，其中該抗原結合蛋白進一步包含第二抗原結合部分，該第二抗原結合部分特異性地結合第二抗原。
如請求項89所述之抗體構建體，其中該第二抗原係腫瘤相關抗原（TAA）。