TW202304997A - 新型抗ｃｄ４抗體 - Google Patents

新型抗ｃｄ４抗體 Download PDF

Info

Publication number
TW202304997A
TW202304997A TW111113078A TW111113078A TW202304997A TW 202304997 A TW202304997 A TW 202304997A TW 111113078 A TW111113078 A TW 111113078A TW 111113078 A TW111113078 A TW 111113078A TW 202304997 A TW202304997 A TW 202304997A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
antibody
sequence
antigen
cdata
Prior art date
Application number
TW111113078A
Other languages
English (en)
Inventor
自勇 孫
馬文翠
馬洪利
倩 牛
靳英
余文
張緩緩
程程 王
泱洲 王
魏京平
Original Assignee
美商冠科生物技術有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商冠科生物技術有限公司 filed Critical 美商冠科生物技術有限公司
Publication of TW202304997A publication Critical patent/TW202304997A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2812—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70514—CD4

Abstract

本揭露內容在本文中提供了抗CD4抗體或其抗原結合片段、編碼所述抗體或其抗原結合片段的分離的多核苷酸和包含所述抗體或其抗原結合片段的藥物組合物，及其用途。

Description

新型抗CD4抗體
本揭露內容大體上關於與人CD4結合的抗體及其抗原結合片段，以及使用這些抗體和抗原結合片段的方法。
CD4是一種單體I型跨膜醣蛋白，是免疫球蛋白超基因家族的成員，它包含四個胞外Ig樣域、一個疏水跨膜域和一個高度鹼性胞質尾區（ Glatzova D 等人 , (2019) 《免疫學前沿》（ Front Immunol ） 10: 618）。CD4的N端Ig樣域與MHC II類分子的α2和β2域相互作用，以組裝TCR-pMHC-CD4三元複合物，由此產生的TCR與CD4之間的緊密接近使得與CD4胞質尾區結合的酪胺酸激酶Lck能夠將CD3胞質域上免疫受體酪胺酸活化基序（ITAM）的酪胺酸殘基磷酸化，從而放大TCR產生的訊號（ Rudd CE 等人 , (1988) 《美國國家科學院院刊》（ Proc Natl Acad Sci USA ） 85: 5190 ； Barber EK 等人 , (1989) 《美國國家科學院院刊》 86: 3277 和 Li QJ 等人 , (2004) 《自然 · 免疫學》（ Nat Immunol ） 5: 791）。
CD4在大部分胸腺細胞（80-90%）和50%以上的周邊血T細胞中表達（ Nakamura K 等人 , (2003) 《分子免疫學》（ Mol Immunol ） 39: 909）。CD4在巨噬細胞、單核細胞、樹突狀細胞和朗格漢斯細胞（Langerhans cell）上也有少量表達。CD4不僅在胸腺細胞的分化和T淋巴細胞/B淋巴細胞黏附的調控中發揮重要作用，而且在MHC II類限制性T細胞活化中也發揮重要作用（ Gaubin M 等人 , (1996) 《歐洲臨床化學和臨床生物化學雜誌》（ Eur J Clin Chem Clin Biochem ） 34: 723 ； Artyomov MN 等人 , (2010) 《美國國家科學院院刊》 107: 16916 ； Yili L 等人 , (2013) 《免疫學前沿》 4: 206）。
更重要的是，CD4表達細胞，如調節性T細胞（Treg）已被證明抑制腫瘤誘導的免疫，從而損害各種癌症療法的療效（ Baba J 等人 , (2012) 《血液》（ Blood ） 120: 2417 ； Togashi Y 等人 , (2019) 《自然評論臨床腫瘤學》（ Nature Reviews Clinical Oncology ） 16: 356）。因此，需要可以有效地靶向和消除CD4表達細胞，特別是Treg的新型抗CD4抗體。
在整個本揭露內容中，冠詞「一（a/an）」和「所述」在本文中用於指一個（種）或多於一個（種）（即，至少一個（種））所述冠詞的語法對象。舉例來說，「抗體」是指一種抗體或多於一種抗體。
本揭露內容尤其提供了一種針對人CD4（hCD4）的分離抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變（V H）區和/或輕鏈可變（V L）區，其中所述重鏈可變區包含： a) HCDR1，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 1、11、21、31和41， b) HCDR2，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 2、12、22和42，以及 c)  HCDR3，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 3、13、23、33和43，和/或 其中所述輕鏈可變區包含： d) LCDR1，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 4、14、24和34， e)  LCDR2，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 5、15和25，以及 f)  LCDR3，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 6、16、26和46。
在某些實施方式中，重鏈可變區選自由以下組成的組： a) 重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 1的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 3的序列的HCDR3； b) 重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 11的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 12的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 13的序列的HCDR3； c)  重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 21的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 22的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 23的序列的HCDR3； d) 重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 31的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 33的序列的HCDR3；以及 e)  重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 41的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 42的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 43的序列的HCDR3。
在某些實施方式中，輕鏈可變區選自由以下組成的組： a) 輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 4的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3； b) 輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 14的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 15的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 16的序列的LCDR3； c)  輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 26的序列的LCDR3； d) 輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 34的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3；以及 e)  輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 46的序列的LCDR3。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段包含： a) 重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 1的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 3的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 4的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3； b) 重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 11的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 12的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 13的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 14的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 15的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 16的序列的LCDR3； c)  重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 21的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 22的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 23的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 26的序列的LCDR3； d) 重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 31的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 33的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 34的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3；或 e)  重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 41的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 42的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 43的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 46的序列的LCDR3。
在某些實施方式中，重鏈可變區包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 61和SEQ ID NO: 63，及其具有至少80%序列同一性但仍保留對CD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
在某些實施方式中，輕鏈可變區包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 62和SEQ ID NO: 64，及其具有至少80%序列同一性但仍保留對CD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段包含： a) 包含SEQ ID NO: 7的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 8的序列的輕鏈可變區；或 b) 包含SEQ ID NO: 17的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 18的序列的輕鏈可變區；或 c)  包含SEQ ID NO: 27的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 28的序列的輕鏈可變區；或 d) 包含SEQ ID NO: 37的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 38的序列的輕鏈可變區；或 e)  包含SEQ ID NO: 47的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 48的序列的輕鏈可變區；或 f)  包含SEQ ID NO: 61的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 62的序列的輕鏈可變區；或 g) 包含SEQ ID NO: 63的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 64的序列的輕鏈可變區。
在另一方面，本揭露內容提供了一種針對人CD4（hCD4）的分離抗體或其抗原結合片段，其包括：包含SEQ ID NO: 65的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 66的序列的輕鏈可變區，及其具有至少80%序列同一性但仍保留對CD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段還包含一個或多個胺基酸殘基取代或修飾，但仍保留對hCD4的特異性結合特異性或親和力。
在某些實施方式中，取代或修飾中的至少一個在V H或V L序列的一個或多個CDR序列中，和/或在一個或多個非CDR區中。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段還包含免疫球蛋白恆定區，任選地人Ig的恆定區，或任選地人IgG的恆定區。
在某些實施方式中，恆定區包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恆定區。
在某些實施方式中，恆定區包含人IgG1的恆定區。
在某些實施方式中，IgG1包含一個或多個突變，所述突變可以賦予相對於野生型恆定區增加的CDC或ADCC。
在某些實施方式中，一個或多個突變選自由以下組成的組：S239D、I332E、H268F、S324T S236A、G236A、P247I、A339(D/Q)、D280H、K290S、S298 (D/V)、F243L、R292P、Y300L、P396L、V305I、K290(E/N)、S298G、T299A、K326E、E382V、M428I、S298A、K326A、E333A、K334A、S298A、E333A和K334A，所述突變位點根據EU序列編號。
在某些實施方式中，一個或多個突變包含S298A、E333A和K334A的組合，所述突變位點根據EU序列編號。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段是人源化的。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段是雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段（dsFv）、(dsFv) 2、雙特異性dsFv（dsFv-dsFv'）、二硫鍵穩定的雙功能抗體（ds雙功能抗體）、單鏈抗體分子（scFv）、scFv二聚體（二價雙功能抗體）、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體和二價域抗體。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段是雙特異性的。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段能夠特異性結合hCD4的第一和第二表位，或能夠特異性結合hCD4和第二抗原。
在某些實施方式中，第二抗原包含免疫相關標靶。
在某些實施方式中，第二抗原包括PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGF β、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD47、CD122、ICAM-1、IDO、NKG2C、SLAMF7、SIGLEC7、NKp80、CD160、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-7、IL-15、IL-21、CD3、CD16或CD83。
在某些實施方式中，第二抗原包括腫瘤抗原。
在某些實施方式中，腫瘤抗原包括腫瘤特異性抗原或腫瘤相關抗原。
在某些實施方式中，腫瘤抗原包括前列腺特異性抗原（PSA）、CA-125、神經節苷脂G(D2)、G(M2)和G(D3)、CD20、CD52、CD33、Ep-CAM、CEA、鈴蟾素樣肽、HER2/neu、表皮生長因子受體（EGFR）、erbB2、erbB3/HER3、erbB4、CD44v6、Ki-67、癌症相關黏蛋白、VEGF、VEGFR（例如VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3）、雌激素受體、Lewis-Y抗原、TGFβ1、IGF-1受體、EGFα、c-Kit受體、轉鐵蛋白受體、Claudin 18.2、GPC-3、Nectin-4、ROR1、間皮素、PCMA、MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2、pl5、BCR-ABL、E2APRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、IL-2R、CO17-1A、TROP2或LIV-1。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段與一個或多個綴合物部分連接。
在某些實施方式中，綴合物部分包括清除修飾劑、化學治療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記、酶-受質標記、DNA烷基化劑、拓撲異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑或其它抗癌藥物如雄激素受體抑制劑。
在另一方面，本揭露內容提供了一種抗體或其抗原結合片段，其與本文提供的抗體或其抗原結合片段競爭與hCD4結合。
在另一方面，本揭露內容提供了一種藥物組合物或試劑盒，其包含本文提供的抗體或其抗原結合片段和藥學上可接受的載體。
在某些實施方式中，本文提供的藥物組合物或試劑盒還包含第二治療劑。
在某些實施方式中，第二治療劑包括抗癌劑，如mTOR抑制劑、免疫檢查點抑制劑和T細胞募集抗體。
在某些實施方式中，mTOR抑制劑是坦羅莫司（Temsirolimus）、依維莫司（Evirolimus）或雷帕黴素（Rapamycin）。
在某些實施方式中，免疫檢查點抑制劑選自PD-1抗體、PD-L1抗體、PD-L2抗體、LAG-3抗體、TIM-1抗體、CTLA-4抗體、VISTA抗體、B7-H2抗體、B7-H3抗體、B7-H4抗體、B7-H抗體6、ICOS抗體、HVEM抗體、CD160抗體、gp49B抗體、PIR-B抗體、KIR家族受體抗體、TIM-1抗體、TIM-4抗體、BTLA抗體、SIRPα（CD47）抗體、CD4抗體8、284（CD244）抗體、B7.1抗體、B7.2抗體、ILT-2抗體、ILT-4抗體、TIGIT抗體和A2aR抗體。
在某些實施方式中，T細胞募集抗體包括CD19/CD3雙特異性抗體。
在另一方面，本揭露內容提供了一種分離的多核苷酸，其編碼本文提供的抗體或其抗原結合片段。
在另一方面，本揭露內容提供了一種載體，其包含本文提供的分離的多核苷酸。
在另一方面，本揭露內容提供了一種宿主細胞，其包含本文提供的載體。
在另一方面，本揭露內容提供了一種表達本文提供的抗體或其抗原結合片段的方法，其包括在表達載體的條件下培養宿主細胞。
在另一方面，本揭露內容提供了一種治療受試者的CD4相關疾病或病況的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段或藥物組合物。
在某些實施方式中，CD4相關疾病或病況是癌症、適應性免疫疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病或感染性疾病。
在某些實施方式中，癌症選自由以下組成的組：肺癌、支氣管癌、骨癌、肝膽管癌、胰腺癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、腎癌、膀胱癌、頭頸癌、脊柱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、肛門癌、食道癌、胃腸癌、皮膚癌、前列腺癌、垂體癌、胃癌、陰道癌、甲狀腺癌、膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生異常症候群、肉瘤、畸胎瘤、腺癌、白血病（例如慢性淋巴細胞性白血病、復發性或難治性B細胞前體急性淋巴母細胞性白血病）、骨髓瘤和淋巴瘤。
在另一方面，本揭露內容提供了一種檢測樣品中CD4的存在或量的方法，其包括使所述樣品與本文提供的抗體或其抗原結合片段接觸，並確定所述樣品中CD4的存在或量。
在另一方面，本揭露內容提供了一種診斷受試者的CD4相關疾病或病況的方法，其包括：a)從所述受試者獲得樣品；b)使從所述受試者獲得的樣品與本文提供的抗體或其抗原結合片段接觸；c)確定所述樣品中CD4的存在或量；以及d)將所述CD4的存在或量與所述受試者的CD4相關疾病或病況的存在或狀態相關聯。
在另一方面，本揭露內容提供了一種消除有需要的受試者體內CD4表達細胞的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段或藥物組合物。
在某些實施方式中，CD4表達細胞是調節性T細胞（Treg）。
在另一方面，本揭露內容提供了一種增強有需要的受試者體內腫瘤微環境的免疫原性的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段或藥物組合物。
在另一方面，本揭露內容提供了一種提高免疫療法在有需要的受試者體內的療效的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段或藥物組合物。
在某些實施方式中，本文提供的方法還包括施用第二治療劑。
在某些實施方式中，第二治療劑包括抗癌劑，如mTOR抑制劑、免疫檢查點抑制劑和T細胞募集抗體。
在某些實施方式中，T細胞募集抗體包括CD19/CD3雙特異性抗體。
在另一方面，本揭露內容提供了本文提供的抗體或其抗原結合片段在製備用於治療受試者的CD4相關疾病或病況的藥物中的用途。
在另一方面，本揭露內容提供了本文提供的抗體或其抗原結合片段在製備用於增強有需要的受試者體內腫瘤微環境的免疫原性的藥物中的用途。
在另一方面，本揭露內容提供了本文提供的抗體或其抗原結合片段在製備用於提高免疫療法在有需要的受試者體內的療效的藥物中的用途。
以下對本揭露內容的描述僅旨在說明本揭露內容的各種實施方式。因此，所討論的具體修改不應被解釋為對本揭露內容範圍的限制。對本技術領域中具有通常知識者將顯而易見的是，可以在不脫離本揭露內容範圍的情況下作出各種等效物、變化和修改，並且應理解，這些等效實施方式將包括在本文中。本文引用的所有參考文獻，包括出版物、專利和專利申請，均以全文引用的方式併入本文中。
定義
如本文所用，除非本文另有說明或與上下文明顯矛盾，否則本發明上下文中（特別是在請求項上下文中）使用的術語「一（a/an）」、「所述」和類似術語應解釋為涵蓋單數和複數。
如本文所用，術語「抗體」包括任何與特異性抗原結合的免疫球蛋白、單株抗體、多株抗體、多價抗體、二價抗體、單價抗體、多特異性抗體或雙特異性抗體。原生完整抗體包含兩條重（H）鏈和兩條輕（L）鏈。哺乳動物重鏈分類為α、δ、ε、γ和μ，每條重鏈由一個可變區（V H）以及第一、第二和第三恆定區（分別為C H1、C H2、C H3）組成；哺乳動物輕鏈分類為λ或κ，而每條輕鏈由一個可變區（V L）和一個恆定區組成。抗體呈「Y」形，其中Y的莖部由透過二硫鍵結合在一起的兩條重鏈的第二和第三恆定區組成。Y的每個臂包括與單條輕鏈的可變區和恆定區結合的單條重鏈的可變區和第一恆定區。輕鏈和重鏈的可變區負責抗原結合。兩條鏈的可變區一般含有三個高度可變的環，稱為互補決定區（CDR）（輕鏈CDR包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，重鏈CDR包括HCDR1、HCDR2、HCDR3）。本文所公開的抗體和抗原結合域的CDR邊界可由Kabat、IMGT、AbM、Chothia或Al-Lazikani的約定來定義或鑒定（Al-Lazikani, B., Chothia, C., Lesk, A. M., 《分子生物學雜誌》（J. Mol. Biol.）, 273(4), 927 (1997)；Chothia, C.等人, 《分子生物學雜誌》 12月5日;186(3):651-63 (1985)；Chothia, C.和Lesk, A.M., 《分子生物學雜誌》, 196,901 (1987)；N. R. Whitelegg等人, 《蛋白質工程》（Protein Engineering）, v13(12), 819-824 (2000)；Chothia, C.等人, 《自然》（Nature）. 12月21-28日;342(6252):877-83 (1989)；Kabat E.A.等人, 美國國家衛生研究院（National Institutes of Health）, 馬裡蘭州貝塞斯達（Bethesda, Md.） (1991)；Marie-Paule Lefranc等人, 《發展與比較免疫學》（Developmental and Comparative Immunology）, 27: 55-77 (2003)；Marie-Paule Lefranc等人, 《免疫組學研究》（Immunome Research）, 1(3), (2005)；Marie-Paule Lefranc, 《B細胞分子生物學（第二版）》（Molecular Biology of B cells (second edition)）, 第26章, 481-514, (2015)）。三個CDR插入在稱為框架區（FR）的側翼片段之間，框架區比CDR更高度保守，並形成一個支撐高變環的支架。重鏈和輕鏈的恆定區不參與抗原結合，但表現出各種效應功能。根據抗體重鏈恆定區的胺基酸序列，將抗體分類。抗體的五種主要類別或同種型是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其特徵在於分別存在α、δ、ε、γ和μ重鏈。將數種主要抗體類別劃分為亞類，如IgG1（γ1重鏈）、IgG2（γ2重鏈）、IgG3（γ3重鏈）、IgG4（γ4重鏈）、IgA1（α1重鏈）或IgA2（α2重鏈）。在某些實施方式中，本文提供的抗體涵蓋其任何抗原結合片段。
如本文所用，術語「抗原結合片段」是指由包含一個或多個CDR的抗體片段，或任何其它與抗原結合但不包含完整的原生抗體結構的抗體部分形成的抗體片段。抗原結合片段的實施例包括但不限於雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段（dsFv）、(dsFv) 2、雙特異性dsFv（dsFv-dsFv'）、二硫鍵穩定的雙功能抗體（ds雙功能抗體）、單鏈可變片段（scFv）、scFv二聚體（二價雙功能抗體）、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體和二價域抗體。抗原結合片段能夠與親本抗體所結合的相同抗原結合。在某些實施方式中，抗原結合片段可以包含來自特定親本抗體的一個或多個CDR。
關於抗體的「Fab」或「F(ab)」是指抗體的單價抗原結合片段，其由單一輕鏈（可變區和恆定區）透過二硫鍵與單一重鏈的可變區和第一恆定區結合而成。Fab可以透過木瓜蛋白酶消化抗體在鉸鏈區重鏈之間的二硫鍵的N端近端殘基處獲得。
「F(ab')」是指包括一部分鉸鏈區的Fab片段，其可以透過胃蛋白酶消化抗體在鉸鏈區重鏈之間的二硫鍵的C端近端殘基處獲得，因此在鉸鏈區的少量殘基（包括一個或多個半胱胺酸）上與Fab不同。
「F(ab') 2」是指F(ab')的二聚體，其包含兩條輕鏈和兩條重鏈的一部分。
關於抗體（例如IgG、IgA或IgD同種型）的「Fc」是指抗體中由第一重鏈的第二和第三恆定域透過二硫鍵與第二重鏈的第二和第三恆定域結合組成的部分。關於IgM和IgE同種型的抗體的Fc還包含第四恆定域。抗體的Fc部分負責各種效應功能，如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）和補體依賴性細胞毒性（CDC），但不具有抗原結合的功能。
關於抗體的「Fv」是指帶有完整抗原結合位點的抗體的最小片段。Fv片段由單條輕鏈的可變區與單條重鏈的可變區結合組成。「dsFv」是指二硫鍵穩定的Fv片段，其中單條輕鏈的可變區和單條重鏈的可變區之間的連接是二硫鍵。
「單鏈可變片段」或「單鏈Fv抗體」或「scFv」是指由一個輕鏈可變區和一個重鏈可變區直接或透過肽連接子序列相互連接組成的工程化抗體（Huston JS等人. 《美國國家科學院院刊》, 85:5879(1988)）。「scFv二聚體」是指透過連接子包含兩個重鏈可變區和兩個輕鏈可變區的單鏈。在某些實施方式中，「scFv二聚體」是二價雙功能抗體或二價scFv（BsFv），其包含V H-V L（由肽連接子連接）與另一個V H-V L部分二聚，使得一個部分的V H與另一個部分的V L配位並形成可靶向相同抗原（或表位）或不同抗原（或表位）的兩個結合位點。在其它實施方式中，「scFv二聚體」是雙特異性雙功能抗體，其包含V H1-V L2（由肽連接子連接）與V L1-V H2（也由肽連接子連接）締合，使得V H1與V L1配位且V H2與V L2配位並且每個配位對具有不同的抗原特異性。
「單鏈Fv-Fc抗體」或「scFv-Fc」是指由連接至抗體Fc區的scFv組成的工程化抗體。
「駱駝化單域抗體」、「重鏈抗體」、「奈米抗體」或「HCAb」是指含有兩個V H域且不含輕鏈的抗體（Riechmann L.和Muyldermans S., 《免疫學方法雜誌》（J Immunol Methods.） 12月10日;231(1-2):25-38 (1999)；Muyldermans S., 《生物技術雜誌》（J Biotechnol.） 6月;74(4):277-302 (2001)；WO94/04678；WO94/25591；美國專利第6,005,079號）。重鏈抗體最初是從駱駝科（駱駝、單峰駝和美洲駝）獲得的。雖然不含輕鏈，但駱駝化抗體具有真實的抗原結合譜系（Hamers-Casterman C.等人, 《自然》 6月3日;363(6428):446-8 (1993)；Nguyen VK.等人, 「駱駝科重鏈抗體：進化創新案例（Heavy-chain antibodies in Camelidae; a case of evolutionary innovation）,」 《免疫遺傳學》（Immunogenetics.） 4月;54(1):39-47 (2002)；Nguyen VK.等人, 《免疫學》（Immunology.） 5月;109(1):93-101 (2003)）。重鏈抗體的可變域（VHH域）代表由適應性免疫反應產生的已知最小的抗原結合單元（Koch-Nolte F.等人, 《美國實驗生物學學會聯合會雜誌》（FASEB J.） 11月;21(13):3490-8. 電子版2007年6月15日(2007)）。「雙功能抗體」包括具有兩個抗原結合位點的小抗體片段，其中所述片段包含在單一多肽鏈中連接到V L域的V H域（V H-V L或V L-V H）（參見例如Holliger P.等人, 《美國國家科學院院刊》 7月15日;90(14):6444-8 (1993)；EP404097；WO93/11161）。同一條鏈上的兩個域無法配對，因為連接子太短，因此，迫使所述域與另一條鏈的互補域配對，從而產生兩個抗原結合位點。抗原結合位點可靶向相同或不同的抗原（或表位）。
「域抗體」是指僅含重鏈的可變區或輕鏈的可變區的抗體片段。在某些實施方式中，兩個或更多個V H域用肽連接子共價連接以形成二價或多價域抗體。二價域抗體的兩個V H域可以靶向相同或不同的抗原。
在某些實施方式中，「(dsFv) 2」包含三條肽鏈：兩個V H部分由肽連接子連接，並透過二硫橋與兩個V L部分結合。
在某些實施方式中，「雙特異性ds雙功能抗體」包含V H1-V L2（由肽連接子連接），其與V L1-V H2（也由肽連接子連接）透過V H1與V L1之間的二硫橋結合。
在某些實施方式中，「雙特異性dsFv」或「dsFv-dsFv'」包含三條肽鏈：V H1-V H2部分，其中重鏈由肽連接子（例如長柔性連接子）結合，並透過二硫橋分別與V L1和V L2部分配對。每個二硫鍵配對的重鏈和輕鏈具有不同的抗原特異性。
如本文所用，術語「人源化」是指抗體或抗原結合片段包含來源於非人動物的CDR、來源於人的FR區，以及當適用時，來源於人的恆定區。在某些實施方式中，人源化CD4抗體的可變區框架的胺基酸殘基被替換以進行序列優化。在某些實施方式中，人源化CD4抗體鏈的可變區框架序列與相應的人類可變區框架序列至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%相同。
如本文所用，術語「嵌合」是指抗體或抗原結合片段的重鏈和/或輕鏈的一部分來源於一個物種，而重鏈和/或輕鏈的其餘部分來源於不同的物種。在一個說明性實施例中，嵌合抗體可以包含來源於人類的恆定區和來源於非人類物種（如小鼠）的可變區。
術語「生殖系序列」是指編碼與所有其它已知的由生殖系免疫球蛋白可變區序列編碼的可變區胺基酸序列相比，與參考可變區胺基酸序列或子序列具有最高的確定的胺基酸序列同一性的可變區胺基酸序列或子序列的核酸序列。生殖系序列也可以指與所有其它評估的可變區胺基酸序列相比，與參考可變區胺基酸序列或子序列具有最高胺基酸序列同一性的可變區胺基酸序列或子序列。生殖系序列可以是僅框架區、僅互補決定區、框架和互補決定區、可變區段（如上文所定義）或包含可變區的序列或子序列的其它組合。序列同一性可以使用本文所述的方法確定，例如，使用BLAST、ALIGN或本領域中已知的另一種比對演算法比對兩個序列。生殖系核酸或胺基酸序列可以與參考可變區核酸或胺基酸序列具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。例如，可以透過可公開獲得的國際ImMunoGeneTics數據庫（IMGT）和V-base確定生殖系序列。
如本文所用，術語「抗人CD4抗體」是指能夠以足夠的特異性和/或親和力與人CD4（hCD4）或其變體特異性結合的抗體或其抗原結合片段，例如以提供治療用途。如本文所用，關於參考蛋白或肽（例如hCD4）的術語「變體」是指參考蛋白或肽的修飾版本，例如功能等效物、片段、融合物、衍生物、模擬物或其任何組合，其胺基酸序列與參考蛋白或肽的序列具有至少70%（例如80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%）的序列同一性，並保留了蛋白或肽（例如野生型蛋白或肽）的生物活性或結合活性的至少25%（例如35%、50%、75%、90%、95%或99%）。所述變體可以是參考蛋白或肽的片段、突變體、融合體、截短體或其任何組合。
如本文所用，術語「親和力」是指免疫球蛋白分子（即抗體）或其片段與抗原之間的非共價相互作用的強度。
如本文所用，術語「特異性結合（specific binding/specifically binds）」是指兩個分子之間，例如抗體和抗原之間的非隨機結合反應。在某些實施方式中，本文提供的抗體或抗原結合片段與人和/或非人抗原特異性結合，其結合親和力（K D）≤10 -6M（例如，≤5×10 -7M、≤2×10 -7M、≤10 -7M、≤5×10 -8M、≤2×10 -8M、≤10 -8M、≤5×10 -9M、≤4×10 -9M、≤3×10 -9M、≤2×10 -9M或≤10 -9M。本文使用的K D是指解離速率與締合速率之比（k off/k on），其可透過使用本領域中已知的任何常規方法來確定，包括但不限於表面等離子體共振法、微尺度熱泳法、HPLC-MS法和流式細胞術（如FACS）法。在某些實施方式中，K D值可以透過使用流式細胞術法適當地確定。可以使用各種免疫分析格式來選擇與特定蛋白質特異性免疫反應的抗體。例如，固相ELISA免疫分析常規地用於選擇與蛋白質特異性免疫反應的抗體（關於可用於確定特異性免疫反應的免疫分析格式和條件的描述，參見例如Harlow和Lane, 《使用抗體，實驗室手冊》（Using Antibodies, A Laboratory Manual） (1998)）。通常，特異性或選擇性結合反應將產生至少兩倍於背景訊號，更通常是至少10至100倍於背景訊號的訊號。
如本文所用，術語「胺基酸」是指含有胺（-NH 2）和羧基（-COOH）官能團以及每個胺基酸特有的側鏈的有機化合物。胺基酸的名稱在本揭露內容中也以標準的單字母或三字母代碼表示，其概述如下。
名稱 三字母代碼 單字母代碼
丙胺酸 Ala A
精胺酸 Arg R
天門冬醯胺 Asn N
天門冬胺酸 Asp D
半胱胺酸 Cys C
麩胺酸 Glu E
麩醯胺酸 Gln Q
甘胺酸 Gly G
組織胺酸 His H
異白胺酸 Ile I
白胺酸 Leu L
賴胺酸 Lys K
甲硫胺酸 Met M
苯丙胺酸 Phe F
脯胺酸 Pro P
絲胺酸 Ser S
蘇胺酸 Thr T
色胺酸 Trp W
酪胺酸 Tyr Y
纈胺酸 Val V
關於胺基酸序列的「保守取代」是指用具有相似生理化學特性的側鏈的不同胺基酸殘基置換胺基酸殘基。例如，可以在具有疏水性側鏈的胺基酸殘基（例如Met、Ala、Val、Leu和Ile）中，在具有中性親水性側鏈的殘基（例如Cys、Ser、Thr、Asn和Gln）中，在具有酸性側鏈的殘基（例如Asp、Glu）中，在具有鹼性側鏈的胺基酸（例如His、Lys和Arg）中，或在具有芳香族側鏈的殘基（例如Trp、Tyr和Phe）中進行保守取代。如本領域中已知，保守取代通常不會引起蛋白質構象結構的顯著變化，因此可以保留蛋白質的生物活性。
關於胺基酸序列（或核酸序列）的「序列同一性百分比（%）」定義為在比對序列並在必要時引入間隙以達到最大對應性之後，候選序列中的胺基酸（或核酸）殘基與參考序列中的胺基酸（或核酸）殘基相同的百分比。出於確定胺基酸（或核酸）序列同一性百分比的目的進行的比對可以例如使用可公開獲得的工具，如BLASTN、BLASTp（可在美國國家生物技術信息中心（NCBI）的網站上獲得，另參見Altschul S.F.等人, 《分子生物學雜誌》, 215:403-410 (1990)；Stephen F.等人, 《核酸研究》（Nucleic Acids Res.）, 25:3389-3402 (1997)）、ClustalW2（可在歐洲生物信息研究所（European Bioinformatics Institute）網站上獲得，另參見Higgins D.G.等人, 《酶學方法》（Methods in Enzymology）, 266:383-402 (1996)；Larkin M.A.等人, 《生物信息學（英格蘭牛津）》（Bioinformatics (Oxford, England)）, 23(21):2947-8 (2007)）和ALIGN或Megalign（DNASTAR）軟體實現。本領域中具有通常知識者可以使用所述工具提供的預設參數，或者可以自定義適合於比對的參數，例如透過選擇合適的演算法。在某些實施方式中，不相同的殘基位置可以透過保守胺基酸取代而不同。「保守胺基酸取代」是其中胺基酸殘基被具有相似化學特性（例如電荷或疏水性）的側鏈（R基團）的另一胺基酸殘基取代的胺基酸取代。一般來說，保守胺基酸取代不會實質性地改變蛋白質的功能特性。在兩個或更多個胺基酸序列因保守取代而彼此不同的情況下，可將相似性的百分比或程度向上調整，以校正取代的保守性。進行這種調整的手段是本領域中具有通常知識者所熟知的。參見例如Pearson (1994) 《分子生物學方法》（Methods Mol. Biol.） 24: 307-331，以引用的方式併入本文中。
如本文所用，「同源序列」是指與另一序列任選比對時具有至少80%（例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%）序列同一性的多核苷酸序列（或其互補鏈）或胺基酸序列。
「分離的」物質已經被人為地改變了自然狀態。如果「分離的」成分或物質出現在自然界中，則它已經被改變或從原來的環境中移除，或兩者兼而有之。例如，天然存在於活體動物中的多核苷酸或多肽並不是「分離的」，但同樣的多核苷酸或多肽如果已經與其天然狀態的共存物質充分分離，從而以基本上純淨的狀態存在，則是「分離的」。分離的「核酸」或「多核苷酸」可互換使用，指的是分離的核酸分子的序列。在某些實施方式中，「分離的抗體或其抗原結合片段」是指如透過電泳法（如SDS-PAGE、等電聚焦、毛細管電泳）或色層分析法（如離子交換色層分析或反相HPLC）所測定，純度為至少60%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的抗體或抗原結合片段。
術語「受試者」包括人類和非人類動物。非人類動物包括所有脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，如非人類靈長類動物、小鼠、大鼠、貓、兔、羊、狗、牛、雞、兩棲動物和爬行動物。除注明外，術語「患者」或「受試者」在本文中可互換使用。
如本文所用的病況的「治療（treating/treatment）」包括預防或減輕病況，減緩病況的發作或發展速率，降低罹患病況的風險，預防或延遲與病況相關的症狀的發展，減少或消除與病況相關的症狀，產生病況的完全或部分消退，治癒病狀或其某種組合。
如本文所用，術語「載體」是指一種媒介物，可將遺傳元件可操作地插入其中，以實現所述遺傳元件的表達，例如產生由所述遺傳元件編碼的蛋白質、RNA或DNA，或複製所述遺傳元件。載體可用於轉化、轉導或轉染宿主細胞，以使其在宿主細胞內表達攜帶的遺傳元件。載體的實施例包括質體；噬菌體；黏接質體；人工染色體，如酵母人工染色體（YAC）、細菌人工染色體（BAC）或P1衍生的人工染色體（PAC）；噬菌體，如λ噬菌體或M13噬菌體；和動物病毒。載體可以含有多種用於控制表達的元件，包括啟動子序列、轉錄起始序列、增強子序列、可選擇元件和報告基因。另外，載體可以含有複製起點。載體還可以包括有助於其進入細胞的材料，包括但不限於病毒顆粒、脂質體或蛋白質包膜。載體可以是表達載體或轉殖載體。本揭露內容提供了含有本文提供的編碼抗體或其抗原結合片段的核酸序列、至少一個與所述核酸序列可操作地連接的啟動子（例如SV40、CMV、EF-1α）和至少一個選擇標記的載體（例如表達載體）。
如本文所用，「宿主細胞」是指已將外源多核苷酸和/或載體引入其中的細胞。
如本文所用，術語「CD4」，即術語「分化簇4」的首字母縮寫，是指在免疫細胞如T輔助細胞、單核細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞的表面上發現的一種醣蛋白，並涵蓋CD4的所有同工型。如本文所用，「CD4相關的」疾病或病況是指與CD4和/或CD4表達細胞，例如CD4+ T細胞，特別是Treg相關的任何疾病或病況。在一些實施方式中，CD4相關的疾病或病況是例如自身免疫疾病、癌症、適應性免疫疾病、炎症性疾病或感染性疾病。
如本文所用，「癌症」是指以惡性細胞生長或腫瘤、異常增殖、浸潤或轉移為特徵的任何醫學病況，可以是良性的或惡性的，並包括實體腫瘤和非實體癌症（例如血液惡性腫瘤），如白血病。如本文所用，「實體腫瘤」是指贅生性和/或惡性細胞的實體塊。
術語「藥學上可接受的」表示指定的載體、媒劑、稀釋劑、賦形劑和/或鹽通常與構成製劑的其它成分在化學上和/或物理上相容，並與接受者在生理上相容。
在本文中提及「約」一個值或參數包括（並描述）針對所述值或參數本身的實施方式。例如，提及「約X」的描述包括「X」的描述。數字範圍包括定義所述範圍的數字。一般來說，術語「約」是指變量的指示值和變量的所有值，所述值在指示值的實驗誤差內（例如，在平均值的95%置信區間內）或在指示值的10%內，以較大者為準。當在一個時間段（年、月、週、日等）的上下文內使用術語「約」時，術語「約」是指該時間段加上或減去下一個下級時間段的一個量（例如，約1年是指11-13個月；約6個月是指6個月加上或減去1週；約1週是指6-8天等），或在指示值的10%以內，以較大者為準。
抗人 CD4 抗體
在一個方面，本揭露內容提供了抗人CD4（hCD4）抗體及其抗原結合片段。
結合親和力
在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體能夠與hCD4結合，透過Biacore所測量的Kd不超過5 nM、不超過4.5 nM、不超過4 nM、不超過3.5 nM、不超過3 nM、不超過2.5 nM、不超過2 nM、不超過1.5 nM、不超過1 nM或不超過0.5 nM。在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體能夠與hCD4結合，透過Biacore所測量的Kd不超過0.5 nM、不超過0.45 nM、不超過0.4 nM、不超過0.35 nM、不超過0.3 nM、不超過0.25 nM、不超過0.2 nM、不超過0.15 nM、不超過0.1 nM或不超過0.05 nM。本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段的結合親和力可以由K D值表示，K D值表示抗原和抗原結合分子之間的結合達到平衡時，解離速率與締合速率之比（k off/k on）。抗原結合親和力（例如K D）可以使用本領域中已知的任何合適的方法適當地確定，包括例如動力學排除分析（KinExA）、Biacore、Fortebio或流式細胞術。
一般來說，Biacore的工作原理是將恆定量的一種結合伴侶（CBP）與不同濃度的另一種結合伴侶（滴定劑）進行平衡，然後在較短的接觸時間內透過螢光標記的二級抗體捕獲一部分游離CBP，所述接觸時間小於預先形成的CBP-滴定劑複合物解離所需的時間。從捕獲的CBP產生的螢光訊號與平衡樣品中游離CBP的濃度成正比，並用於生成一系列測量時的結合曲線（游離CBP百分比與滴定劑總濃度）。更多詳情可從Schreiber, G., Fersht, A.R. 《自然·結構生物學》（Nature Structural Biology.） 1996, 3(5), 427-431獲得。當抗CD4抗體以恆定量用作CBP時，則CD4蛋白可用作滴定劑，反之亦然。
在某些實施方式中，本文提供的抗CD4抗體的K D根據本揭露內容中實施例4所述的方法測定。
在適用的情況下，也可以使用其它適合於測量K D的方法，例如放射性標記的抗原結合分析法（參見例如Chen等人, (1999) 《分子生物學雜誌》 293:865-881），或Biacore以外的表面等離子體共振分析法。
或者，本文提供的抗CD4抗體和抗原結合片段與人CD4的結合親和力也可以由「半數最大有效濃度」（EC 50）值來表示，所述值是指觀察到其最大作用（例如結合）的50%的抗體的濃度。EC 50值可以透過本領域中已知的方法來測量，例如夾心分析法如ELISA、蛋白質印跡法、流式細胞術分析法和其它結合分析法。在某些實施方式中，本文提供的抗CD4抗體及其片段與人CD4（例如表達人CD4的細胞）特異性結合，透過FACS測量的EC 50值不超過700 ng/ml（或不超過680、660、640、620、600、580、560、540、520、500、480、460、440、420、400、380、360、340、320、300、280、260、240、220、200、180、160、140、120、100、80、60、40、20、13.5、13、12.5、12、11.5、11、10.5、10、9、8、7、6、5.5、5、4.5、4、3、2或1 ng/ml）。在某些實施方式中，本文提供的抗CD4抗體及其片段與人CD4（例如表達人CD4的細胞）特異性結合，透過ELISA測量的EC50值不超過40 ng/ml（或不超過38、36、34、32、30、28、26、24、22、20、16、14、12、10、8、6、4、2或1 ng/ml）。
抗體序列
在一個方面，本揭露內容提供了本文提供的抗CD4抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變（V H）區和/或輕鏈可變（V L）區，其中所述重鏈可變區包含： a) HCDR1，其包含選自以下的序列：SEQ ID NO: 1、11、21、31和41， b) HCDR2，其包含選自以下的序列：SEQ ID NO: 2、12、22和42， c)  HCDR3，其包含選自以下的序列：SEQ ID NO: 3、13、23、33和43，和/或
其中所述輕鏈可變區包含： d) LCDR1，其包含選自以下的序列：SEQ ID NO: 4、14、24和34， e)  LCDR2，其包含選自以下的序列：SEQ ID NO: 5、15和25，以及 f)  LCDR3，其包含選自以下的序列：SEQ ID NO: 6、16、26和46。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段包含： a) 重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 1的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 3的序列的HCDR3；或 b) 重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 11的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 12的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 13的序列的HCDR3；或 c)  重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 21的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 22的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 23的序列的HCDR3；或 d) 重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 31的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 33的序列的HCDR3；或 e)  重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 41的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 42的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 43的序列的HCDR3。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段包含： a) 輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 4的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3；或 b) 輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 14的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 15的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 16的序列的LCDR3；或 c)  輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 26的序列的LCDR3；或 d) 輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 34的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3；或 e)  輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 46的序列的LCDR3。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段包含： a) 重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 1的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 3的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 4的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3； b) 重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 11的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 12的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 13的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 14的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 15的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 16的序列的LCDR3； c)  重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 21的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 22的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 23的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 26的序列的LCDR3； d) 重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 31的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 33的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 34的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3；或 e)  重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 41的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 42的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 43的序列的HCDR3；並且輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 46的序列的LCDR3。
在某些實施方式中，本文提供的抗體包含抗hCD4抗體2B6、29B7、33E12、11E12、10C2、MT412的一個或多個（例如1、2、3、4、5或6個）CDR序列。
如本文所用，「2B6」是指具有SEQ ID NO: 7的重鏈可變區和SEQ ID NO: 8的輕鏈可變區的抗體。
如本文所用，「29B7」是指具有SEQ ID NO: 17的重鏈可變區和SEQ ID NO: 18的輕鏈可變區的抗體。
如本文所用，「33E12」是指具有SEQ ID NO: 27的重鏈可變區和SEQ ID NO: 28的輕鏈可變區的抗體。
如本文所用，「11E12」是指具有SEQ ID NO: 37的重鏈可變區和SEQ ID NO: 38的輕鏈可變區的抗體。
如本文所用，「10C2」是指具有SEQ ID NO: 47的重鏈可變區和SEQ ID NO: 48的輕鏈可變區的抗體。
如本文所用，「MT412」是指具有SEQ ID NO: 57的重鏈可變區和SEQ ID NO: 58的輕鏈可變區的抗體。
如本文所用，「2B6人源化」是指具有SEQ ID NO: 61的重鏈可變區和SEQ ID NO: 62的輕鏈可變區的抗體。
如本文所用，「29B7人源化」是指具有SEQ ID NO: 63的重鏈可變區和SEQ ID NO: 64的輕鏈可變區的抗體。
如本文所用，「MT412人源化」是指具有SEQ ID NO: 65的重鏈可變區和SEQ ID NO: 66的輕鏈可變區的抗體。
表1示出了這些抗hCD4抗體的CDR序列。重鏈和輕鏈可變區序列也在下表2和表3中提供。
表 1. 抗 hCD4 抗體的 CDR 區的序列
抗體 區 CDR1 CDR2 CDR3
2B6 HCDR SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 3
SGYWN YISFADTTNYNPSLKS DDYGYYAMDY
LCDR SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO: 6
RASQDIDNYLN YTSRLHS QQGNTLPT
29B7 HCDR SEQ ID NO: 11 SEQ ID NO: 12 SEQ ID NO: 13
THWMH YINPYTGSGEYSQKFKG DSTGAMDY
LCDR SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 15 SEQ ID NO: 16
KASQDINRYLS RADRSVD YDEFPYT
33E12 HCDR SEQ ID NO: 21 SEQ ID NO: 22 SEQ ID NO: 23
SDYAWN YISYSGITSYNPSLKS  LDSSGYGAMDY
LCDR SEQ ID NO: 24 SEQ ID NO: 25 SEQ ID NO: 26
RASQSVSTSSYSYMH YASNLES QHSWDFPLT
11E12 HCDR SEQ ID NO: 31 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 33
SSYWN YISFADTTNYNPSLKS DDFGYYAMDY
LCDR SEQ ID NO: 34 SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO: 6
RASQDINNYLN YTSRLHS QQGNTLPT
10C2 HCDR SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 43
SYWIE EILPGSGSTNYNEEFTG SVSASNWYFDV
LCDR SEQ ID NO: 24 SEQ ID NO: 25 SEQ ID NO: 46
RASQSVSTSSYSYMH YASNLES QHSWEIPPT
MT412 HCDR SEQ ID NO: 51 SEQ ID NO: 52 SEQ ID NO: 53
DYSMH WINTETGEPTYADDFKG EDYYGHDGFLY
LCDR SEQ ID NO: 54 SEQ ID NO: 55 SEQ ID NO: 56
KASQDVVTTVA WASLRHT QQYSSYPYT
表 2. 抗 hCD4 抗體的 V H/V L 序列
抗體 VH VL
2B6 SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 8
EVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSGYWNWIRKFPGHKLEFLGYISFADTTNYNPSLKSRVSITRDTSKNQFDLQLKSVTTEDTATYHCARDDYGYYAMDYWGQGISVTVSS DIHLTQTTSSLSASLGDRVTIICRASQDIDNYLNWYQLKPDGTLKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTEYSLTISNLEREDVATYFCQQGNTLPTFGAGTKLELK
29B7 SEQ ID NO: 17 SEQ ID NO: 18
QVQLQQSGAELAKPGASVKMSCKTSADSLNTHWMHWVKQRPGQGLEWIGYINPYTGSGEYSQKFKGKATLTADISSSTAYMQLISLTSEDSAVYYCAYDSTGAMDYWGQGTSVTVSS DIKMTQSPSSMYASLGERITITCKASQDINRYLSWFQQKPGKSPKTPIYRADRSVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCQQYDEFPYTFGGGTKLEIK
33E12 SEQ ID NO:27 SEQ ID NO: 28
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISYSGITSYNPSLKSRFSITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCARLDSSGYGAMDYWGQGTSVTVSS DIVLTQSPASLPVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIRYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWDFPLTFGAGTKLELK
11E12 SEQ ID NO:37 SEQ ID NO: 38
EVQLEESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSSYWNWIRKFPGHKLEFLGYISFADTTNYNPSLKSRISITRDTSKNQFDLQLKSVTTEDTATYYCARDDFGYYAMDYWGQGISVTVSS DIYVTQTTSSLSASLGDRVTIICRASQDINNYLNWYQLKPDGTLKLLIYYTSRLHSGVPSRFGGSGSGTEYSLTISNLEQEDVATYFCQQGNTLPTFGAGTKLELK
10C2 SEQ ID NO:47 SEQ ID NO: 48
EVKLQQSGTELMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWIKQRPGRGLEWIGEILPGSGSTNYNEEFTGRATFTADTFSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSVSASNWYFDVWGAGTTVTVSS DIVMTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKFLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWEIPPTFGGGTKLEIK
MT412 SEQ ID NO:57 SEQ ID NO: 58
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSMHWVKQAPGKDLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCAREDYYGHDGFLYWGQGTLVTVSS DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVVTTVAWYQQKPGQSPKLLIYWASLRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQFEDLADYFCQQYSSYPYTFGGGTKLEIK
本文提供的抗體或其抗原結合片段可以是單株抗體、多株抗體、人源化抗體、嵌合抗體、重組抗體、雙特異性抗體、標記抗體、二價抗體或抗獨特型抗體。重組抗體是在體外使用重組方法而不是在動物體內製備的抗體。
已知CDR負責抗原結合，然而，已發現6個CDR不一定都是不可缺少或不可改變的。換句話說，可以替換或改變或修飾抗hCD4抗體2B6、29B7、33E12、11E12、10C2或MT412中的1、2、3個CDR，但實質上保留與hCD4的特異性結合親和力。
在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段包含抗hCD4抗體2B6、29B7、33E12、11E12、10C2或MT412之一的重鏈CDR3序列。在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段包含SEQ ID NO: 3、13、23、33、43和53的重鏈CDR3序列。重鏈CDR3區位於抗原結合位點的中心，因此被認為與抗原接觸最多，並為抗體與抗原的親和力提供了最多的自由能。也有人認為重鏈CDR3是迄今為止抗原結合位點中在長度、胺基酸組成和構象等方面最具多樣性的CDR，是透過多種多樣化機制實現的（Tonegawa S. 《自然》 302:575-81）。重鏈CDR3的多樣性足以產生大多數抗體特異性（Xu JL, Davis MM. 《免疫》（Immunity.） 13:37-45）以及所需的抗原結合親和力（Schier R等, 《分子生物學雜誌》 263:551-67）。
在一些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段包含重鏈可變域的全部或一部分和/或輕鏈可變域的全部或一部分。在一個實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段是單域抗體，其由本文提供的重鏈可變域的全部或一部分組成。這種單域抗體的更多信息可在本領域中獲得（參見例如美國專利第6,248,516號）。
在某些實施方式中，本文提供的抗體及其抗原結合片段包含合適的框架區（FR）序列，只要抗體及其抗原結合片段可以與CD4特異性結合即可。表1中提供的CDR序列是從小鼠抗體獲得的，但它們可以使用本領域中已知的合適方法如重組技術，移植到任何合適的物種如小鼠、人、大鼠、兔等的任何合適的FR序列。
在某些實施方式中，本文提供的抗體及其抗原結合片段是人源化的。人源化抗體或抗原結合片段在其降低人的免疫原性方面是合乎需要的。人源化抗體在其可變區中是嵌合的，因為非人CDR序列移植到人或基本上是人的FR序列上。抗體或抗原結合片段的人源化基本上可以透過將人免疫球蛋白基因中相應的人CDR基因替換為非人（如鼠）CDR基因來實現（參見例如Jones等人 (1986) 《自然》 321:522-525；Riechmann等人 (1988) 《自然》 332:323-327；Verhoeyen等人 (1988) 《科學》（Science） 239:1534-1536）。在這之前或之後可以對親本非人抗體的可變區或域的三維結構進行模擬。
可以使用本領域中已知的方法選擇合適的人重鏈和輕鏈可變域以實現CDR移植。在一個說明性實施例中，可以使用「最佳擬合」方法，其中針對已知的人可變域生殖系序列的數據庫（例如蛋白質數據庫，http://www.rcsb.org/）篩選或BLAST化非人（例如齧齒動物）抗體可變域序列，確定最接近非人查詢序列的人序列，並將其用作移植非人CDR序列的人支架（參見例如Sims等人, (1993) 《免疫學雜誌》（J. Immunol.） 151:2296；Chothia等人 (1987) 《分子生物學雜誌》 196:901）。或者，從所有人抗體的共有序列衍生出的框架可用於非人CDR的移植（參見例如Carter等人 (1992) 《美國國家科學院院刊》, 89:4285；Presta等人 (1993) 《免疫學雜誌》,151:2623）。
在某些實施方式中，本文提供的人源化抗體或抗原結合片段除CDR序列為非人序列外，基本上全部由人序列構成。在一些實施方式中，可變區FR和恆定區（如果存在）完全或基本上來自人免疫球蛋白序列。人FR序列和人恆定區序列可以來源於不同的人免疫球蛋白基因，例如FR序列來源於一種人抗體，恆定區來源於另一種人抗體。
在一些實施方式中，來源於人的FR區可以包含與來源於其的人免疫球蛋白相同的胺基酸序列。在一些實施方式中，人FR的一個或多個胺基酸殘基被來自親本非人抗體的相應殘基取代。在某些實施方式中，可能需要使人源化抗體或其片段緊密地接近非人親本抗體結構，以減少或避免免疫原性和/或改善或保留結合活性或結合親和力。
在某些實施方式中，本文提供的人源化抗體或抗原結合片段在每個人FR序列中包含不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸殘基取代，或者在重鏈或輕鏈可變域的所有FR中包含不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸殘基取代。在一些實施方式中，這種胺基酸殘基的變化可以僅存在於重鏈FR區，僅存在於輕鏈FR區，或存在於兩條鏈中。在某些實施方式中，一個或多個胺基酸殘基突變，例如復原突變為CDR序列所源自的非人親本抗體（例如，在小鼠框架區）中發現的相應殘基。合適的突變位置可由技術人員按照本領域中已知的原則選擇。例如，可以選擇以下突變位置：其中1)所述位置的殘基在人類生殖系序列的框架中是罕見的（例如在人類可變區序列中少於20%或少於10%）；2)所述位置緊鄰人類生殖系鏈一級序列中的3個CDR中的一個或多個，因為它有可能與CDR中的殘基相互作用；或3)所述位置在3維模型中接近CDR，因此可以有很大的概率與CDR中的胺基酸相互作用。所選位置的殘基可以突變回親本抗體中的相應殘基，或者突變為既不是人類生殖系序列中的相應殘基，也不是親本抗體中的相應殘基，而是人類序列的典型殘基，即在與人類生殖系序列屬同一亞組的已知人類序列中該位置出現頻率較高的殘基（參見美國專利第5,693,762號）。
在某些實施方式中，本揭露內容的人源化輕鏈和重鏈在人類中基本上是非免疫原性的，並且保留與親本抗體對hCD4的親和力基本上相同的親和力或甚至更高的親和力。
在某些實施方式中，本文提供的人源化抗體或抗原結合片段包含重鏈可變區，其包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 65及其具有至少80%（例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性但仍保留對hCD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
在某些實施方式中，本文提供的人源化抗體或抗原結合片段還包含輕鏈可變區，其包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66及其具有至少80%（例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性但仍保留對hCD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
在某些實施方式中，本文提供的人源化抗體或抗原結合片段包含重鏈可變區，其包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 65及其具有至少80%（例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性但仍保留對hCD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列；和輕鏈可變區，其包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66及其具有至少80%（例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性但仍保留對hCD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
在某些實施方式中，本文提供的人源化抗體或抗原結合片段包含重鏈可變區，其包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 65及其具有至少80%（例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性的同源序列；和輕鏈可變區，其包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66及其具有至少80%（例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性但仍保留對hCD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
在某些實施方式中，本文提供的人源化抗體或其抗原結合片段還包含一對重鏈可變區和輕鏈可變區序列，其選自由以下組成的組：SEQ ID NO: 61/62、63/64、65/66或其具有至少80%（例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性但仍保留對hCD4的特異性結合特異性或親和力的一對序列。
表 3. 人源化抗體 V H/V L 的序列
抗體 VH VL
2B6人源化 SEQ ID NO: 61 SEQ ID NO: 62
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSITSGYWNWIRQPPGKGLEFLGYISFADTTNYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDDYGYYAMDYWGQGTLVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPTFGQGTKLEIK
29B7人源化 SEQ ID NO: 63 SEQ ID NO: 64
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGDSLNTHWMHWVRQAPGQRLEWIGYINPYTGSGEYSQKFKGRATLTADISASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAYDSTGAMDYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINRYLSWFQQKPGKAPKTPIYRADRSVDGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYDEFPYTFGQGTKLEIK
MT412人源化 SEQ ID NO: 65 SEQ ID NO: 66
QIQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSMHWVRQAPGQGLEWMGWINTETGEPTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREDYYGHDGFLYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQDVVTTVAWYQQKPGKAPKLLIYWASLRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQYSSYPYTFGQGTKLEIKR
本文提供的人源化抗hCD4抗體保留了對hCD4的特異性結合親和力，並且在該方面至少與親本抗體相當或甚至優於親本抗體。在某些實施方式中，在該方面與親本抗體相比，本文提供的人源化抗hCD4抗體表現出對hCD4的明顯更高的特異性結合親和力。
抗體變體
本文提供的抗hCD4抗體及其抗原結合片段還涵蓋本文提供的抗體序列的各種類型的變體。
在某些實施方式中，變體包含表1中提供的1、2或3個CDR序列、一個或多個FR序列、本文提供的重鏈或輕鏈可變區序列和/或恆定區（例如Fc區）中的一個或多個修飾或取代。這樣的抗體變體保留了其親本抗體對hCD4的特異性結合親和力，但具有由修飾或取代所賦予的一種或多種期望的特性。例如，抗體變體可能具有改進的抗原結合親和力、改進的糖基化模式、減少的糖基化風險、減少的脫胺基、增加的效應功能、改進的FcRn受體結合、增加的藥物動力學半衰期、pH敏感性和/或與綴合的相容性（例如，一個或多個引入的半胱胺酸殘基）等等。
可以使用本領域已知的方法，例如「丙胺酸掃描誘變」（參見例如Cunningham和Wells (1989) 《科學》, 244:1081-1085）篩選親本抗體序列，以確定合適的或較佳的殘基進行修飾或取代。簡而言之，可以確定目標殘基（例如帶電荷的殘基，如Arg、Asp、His、Lys和Glu），用中性或帶負電荷的胺基酸（例如丙胺酸或多丙胺酸）置換，生產修飾的抗體並針對感興趣的特性進行篩選。如果在特定胺基酸位置的取代顯示出感興趣的功能變化，則所述位置可以被確定為用於修飾或取代的潛在殘基。潛在殘基可以透過用不同類型的殘基（例如半胱胺酸殘基、帶正電荷的殘基等）取代來進一步評估。
恆定區及其變體
在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體及其片段還包含免疫球蛋白恆定區。在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體及其片段還包含人Ig，如人IgG的恆定區。在一些實施方式中，免疫球蛋白恆定區包含重鏈和/或輕鏈恆定區。重鏈恆定區包含C H1、鉸鏈和/或C H2-C H3區。在某些實施方式中，重鏈恆定區包含Fc區。在某些實施方式中，輕鏈恆定區包含Cκ或Cλ。
在某些實施方式中，本文提供的人源化抗體可以包含與人IgG1同種型的恆定區融合的重鏈可變區和與人κ鏈的恆定區融合的輕鏈可變區。在某些實施方式中，κ鏈包含SEQ ID NO: 68的胺基酸序列。
不同Ig同種型的Fc區具有不同的誘導效應功能的能力。例如，已經認識到IgG1和IgG3的Fc區比IgG2和IgG4的Fc區更有效地誘導ADCC和CDC。在某些實施方式中，本文提供的抗體及其抗原結合片段包含IgG1或IgG3同種型的Fc區，其可誘導ADCC或CDC；或者，IgG4或IgG2同種型的恆定區，其具有降低或耗竭的效應功能。在一些實施方式中，Fc區來源於具有增加的效應功能（例如ADCC）的人IgG1。在某些實施方式中，本文提供的抗體及其抗原結合片段包含野生型人IgG1 Fc區或其它野生型人IgG1等位基因。在一些實施方式中，來源於人IgG1的Fc區包含具有SEQ ID NO: 69的至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中，來源於人IgG1的Fc區包含SEQ ID NO: 67的胺基酸序列。在某些實施方式中，本文提供的抗體及其抗原結合片段包括包含一個或多個突變的人IgG1 Fc區，所述突變可賦予相對於野生型恆定區增加的CDC或ADCC。
在某些實施方式中，本文提供的抗體及其抗原結合片段包括包含S298A突變、E333A突變和/或K334A突變的人IgG1 Fc區，所述突變賦予相對於野生型恆定區增加的ADCC。增加ADCC的其它此類突變包括但不限於S239D、I332E、H268F、S324T、S236A、G236A、P247I、A339(D/Q)、D280H、K290S、S298(D/V)、F243L、R292P、Y300L、P396L、V305I、K290(E/N)、S298G、T299A、K326E、E382V、M428I、S298A、K326A、E333A、K334A及其任何組合，其中Fc區中殘基的編號是根據EU編號（ Edelman, G.M. 等人 , 《美國國家科學院院刊》 , 63, 78-85 (1969).）。在某些實施方式中，本文提供的抗體及其抗原結合片段包括包含S298A突變、E333A突變和K334A突變，即如本文所用分「3A突變」的人IgG1 Fc區，所述突變賦予相對於野生型恆定區增加的ADCC。
親和力變體
親和力變體保留了親本抗體對hCD4的特異性結合親和力，或甚至具有優於親本抗體的改進的hCD4特異性結合親和力。可以使用本領域中已知的各種方法來實現這一目的。例如，可以用噬菌體展示技術生成並表達抗體變體（如Fab或scFv變體）庫，然後針對於對人CD4的結合親和力進行篩選。再例如，可以使用電腦軟體虛擬模擬抗體與人CD4的結合，並確定抗體上形成結合界面的胺基酸殘基。這樣的殘基可以在取代中避免，以防止結合親和力降低，或者靶向取代以提供更強的結合。
在某些實施方式中，CDR序列、FR序列或可變區序列中的至少一個（或全部）取代包含保守取代。
在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體或抗原結合片段包含一個或多個CDR序列和/或一個或多個FR序列中的一個或多個胺基酸殘基取代。在某些實施方式中，親和力變體包含在一個或多個CDR序列和/或FR序列中總共不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個取代。
在某些實施方式中，抗hCD4抗體及其抗原結合片段包含與表1中所列的（或那些）序列具有至少80%（例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%）序列同一性的1、2或3個CDR序列，同時保留與其親本抗體類似或甚至更高水平的對hCD4的結合親和力。
糖基化變體
本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段還涵蓋糖基化變體，其可以被獲得以增加或降低抗體或抗原結合片段的糖基化程度。如本文所用，術語「糖基化」是指將聚糖如岩藻糖、木糖、甘露糖或GlcNAc磷酸絲胺酸聚糖連接到蛋白質、脂質或其它有機分子上的酶促過程。根據與聚糖連接的碳，糖基化可分為五類，包括：N-連接的糖基化、O-連接的糖基化、磷酸糖基化、C-連接的糖基化和糖基磷脂醯肌醇化。
抗體的糖基化通常是N-連接或O-連接的。N-連接是指碳水化合物部分與天門冬醯胺殘基（例如三肽序列如天門冬醯胺-X-絲胺酸和天門冬醯胺-X-蘇胺酸中的天門冬醯胺殘基）的側鏈的連接，其中X是除脯胺酸外的任何胺基酸。O-連接糖基化是指糖N-乙醯基半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一種與羥基胺基酸的連接，最常見地與絲胺酸或蘇胺酸的連接。
經典的ADCC反應是由自然殺手（NK）細胞在FcγRIIIa與抗體分子的Fc區結合後介導的。這種結合觸發NK細胞釋放細胞因子和細胞溶解劑，最終殺死目標細胞。在不希望受任何理論束縛的情況下，認為FcγRIII透過與鉸鏈區和C H2域相互作用來結合IgG1抗體的Fc區，並且這種相互作用可以受到存在於每個C H2域中的保守 N- 糖基化位點Asn297（N297）的聚糖的顯著影響（ Krapp S 等人 , 《分子生物學雜誌》 2003;325:979-89.）。等溫滴定量熱法顯示，IgG1-FcgRIIIa結合由有利的結合焓（∆H）驅動，但受到不利的結合熵變化（∆S）對抗。岩藻糖的去除增強了有利的ΔH，導致IgG1對受體的結合常數增加了20-30倍（ Okazaki A 等人 , 《分子生物學雜誌》 2004;336:1239-49.）。因此，對Fc N-聚糖進行糖工程化以減少核心岩藻糖可以增加抗體與FcγRIII之間的親和力，從而增強ADCC活性。例如，無岩藻糖基化的IgG1與其岩藻糖基化的對應物相比，可以顯著提高體外使用周邊血單核細胞（PBMC）或NK細胞的ADCC活性（ Iida S 等人 , 《臨床癌症研究》（ Clin Cancer Res. ） 2006;12:2879-87 ； Shields RL 等人 , 《生物化學雜誌》（ J Biol Chem. ） 2002;277:26733-40 ； Shinkawa T 等人 , 《生物化學雜誌》 2003;278:3466-73）。
在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段包含糖工程化Fc區，其中所述Fc區包含的核心岩藻糖減少。在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段包含來源於無岩藻糖基化IgG1的Fc區。
半胱胺酸工程化變體
本文提供的抗hCD4抗體和抗原結合片段還涵蓋半胱胺酸工程化變體，其包含一個或多個引入的游離半胱胺酸胺基酸殘基。
游離半胱胺酸殘基是不作為二硫橋鍵的一部分的半胱胺酸殘基。半胱胺酸工程化變體可用於透過例如馬來醯亞胺或鹵乙醯基在工程化半胱胺酸的位點與例如細胞毒性和/或成像化合物、標記或放射性同種型等綴合。用於工程化抗體或抗原結合片段以引入游離半胱胺酸殘基的方法是本領域中已知的，例如參見WO2006/034488。
抗原結合片段
本文還提供了抗hCD4抗原結合片段。各種類型的抗原結合片段是本領域中已知的，並且可以基於本文提供的抗hCD4抗體進行開發，例如包括CDR序列如表1所示的示例性抗體及其不同的變體（如親和力變體、糖基化變體、Fc變體、半胱胺酸工程化變體等）。
在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗原結合片段是雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段（dsFv）、(dsFv) 2、雙特異性dsFv（dsFv-dsFv'）、二硫鍵穩定的雙功能抗體（ds雙功能抗體）、單鏈抗體分子（scFv）、scFv二聚體（二價雙功能抗體）、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體或二價域抗體。
可以使用各種技術來生產此類抗原結合片段。示例性的方法包括完整抗體的酶促消化（參見例如Morimoto等人, 《生物化學與生物物理學方法雜誌》（Journal of Biochemical and Biophysical Methods） 24:107-117 (1992)；和Brennan等人, 《科學》, 229:81 (1985)）、由宿主細胞如大腸桿菌重組表達（例如對於Fab、Fv和scFv抗體片段）、如上所述從噬菌體展示庫篩選（例如對於scFv）以及將兩個Fab'-SH片段化學偶聯以形成F(ab') 2片段（Carter等人, 《生物技術》（Bio/Technology） 10:163-167 (1992)）。生產抗體片段的其它技術對熟練的從業者來說將是顯而易見的。
在某些實施方式中，抗原結合片段是scFv。scFv的生成描述於例如WO 93/16185；美國專利第5,571,894號和第5,587,458號中。scFv可以在胺基或羧基端與效應蛋白融合以提供融合蛋白（參見例如《抗體工程》（Antibody Engineering）, Borrebaeck編）。
在某些實施方式中，本文提供的抗hCD4抗體及其抗原結合片段是二價、四價、六價或多價的。如本文所用，術語「價」是指在給定分子中存在指定數量的抗原結合位點。因此，術語「二價」、「四價」和「六價」分別表示抗原結合分子中存在兩個結合位點、四個結合位點和六個結合位點。任何大於二價的分子都被認為是多價的，涵蓋例如三價、四價、六價等。
如果兩個結合位點都對與相同抗原或相同表位的結合具有特異性，則二價分子可以是單特異性的。在某些實施方式中，這提供了比單價對應物更強的與抗原或表位的結合。類似地，多價分子也可以是單特異性的。在某些實施方式中，在二價或多價抗原結合部分中，結合位點的第一價和結合位點的第二價在結構上是相同的（即具有相同的序列），或在結構上是不同的（即具有不同的序列，儘管具有相同的特異性）。
如果兩個結合位點對不同的抗原或表位具有特異性，則二價也可以是雙特異性的。這也適用於多價分子。例如，當兩個結合位點對第一抗原（或表位）是單特異性的，而第三結合位點對第二抗原（或表位）具有特異性時，則三價分子可以是雙特異性的。
表位競爭性抗體
在另一方面，本揭露內容提供了與本文提供的抗體或其抗原結合片段所結合的相同表位結合的抗體。在另一方面，本揭露內容提供了與本文提供的抗體或其抗原結合片段競爭與hCD4結合的抗體。
如本文所用，術語「表位」是指抗體結合的抗原上的原子或胺基酸的特定基團。表位可以包括直接接觸抗體的特定胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基。本領域中具有通常知識者應認識到，有可能在無過度實驗的情況下，透過確定抗體與本揭露內容的抗體（例如融合瘤/嵌合或人源化抗體2B6、29B7、33E12、11E12、10C2、MT412及其本文提供的任何嵌合和人源化變體）是否競爭與CD4抗原多肽結合，來確定二者是否結合相同或重疊或相鄰的表位。
如本文所用，關於兩種抗原結合蛋白（例如抗體）的術語「結合競爭」是指一種抗原結合蛋白阻斷或減少另一種與抗原（例如人/小鼠CD4）的結合，如透過競爭性結合分析法所確定。競爭性結合分析法是本領域中眾所周知的，包括例如直接或間接放射免疫分析法（RIA）、直接或間接酶免疫分析法（EIA）、Fortebio、競爭性ELISA分析法和夾心競爭分析法（參見例如Stahli等人, 1983, 《酶學方法》 9:242-253）。通常，這種分析法關於使用與固體表面或帶有抗原的細胞結合的純化抗原、未標記的測試抗體和標記的參考抗體。競爭性抑制是透過測定在測試抗體存在下與固體表面或細胞結合的標記的量來測量。通常，測試抗體過量存在。如果兩種抗體競爭與hCD4結合，則兩種抗體與相同或重疊的表位結合，或者與另一種抗體結合的表位足夠近的相鄰表位結合，從而發生位阻。通常，當競爭性抗體過量存在時，它將抑制（例如降低）測試抗體與共同抗原的特異性結合至少50-55%、55-60%、60-65%、65-70%、70-75%、75-80%、80-85%、85-90%或更多。
雙特異性抗體
在某些實施方式中，本文提供的抗體及其抗原結合片段是雙特異性的。如本文所用，術語「雙特異性」涵蓋具有多於兩個特異性的分子和具有多於兩個特異性的分子，即多特異性。在某些實施方式中，本文提供的雙特異性抗體及其抗原結合片段能夠特異性結合hCD4的第一和第二表位，或者能夠特異性結合hCD4和第二抗原。在某些實施方式中，hCD4的第一表位和第二表位彼此不同或不重疊。在某些實施方式中，雙特異性抗體及其抗原結合片段可以同時與第一表位和第二表位結合。在某些實施方式中，第二抗原與hCD4不同。
在某些實施方式中，第二抗原是免疫相關標靶。如本文所用，免疫相關標靶涵蓋參與免疫反應（任選地，細胞免疫反應）的產生、抑制或調節的生物分子。免疫相關標靶的一個實施例是在腫瘤細胞上表達的免疫檢查點分子。
免疫檢查點分子可以介導共刺激訊號以增強免疫反應，或者可以介導共抑制訊號以抑制免疫反應。免疫檢查點分子的實施例包括例如PD-L1、PD-L2、PD-1、CTLA-4、TIM-3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGF β、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD47、CD122、ICAM-1、IDO、NKG2C、SLAMF7、SIGLEC7、NKp80、CD160、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-7、IL-15、IL-21、CD3、CD16和CD83。在某些實施方式中，第二抗原包括PD-1、PD-L1、CTLA-4或LAG-3。
在某些實施方式中，第二抗原包括腫瘤抗原。如本文所用，「腫瘤抗原」是指腫瘤特異性抗原（例如，腫瘤細胞特有的抗原，通常在非腫瘤細胞上不存在），以及腫瘤相關抗原（例如，在腫瘤和非腫瘤細胞中都存在，但在腫瘤細胞中表達方式不同，或在腫瘤微環境中發現）。腫瘤特異性抗原還可以包括腫瘤新抗原（例如，由於改變蛋白序列或在兩個不相關序列之間產生融合蛋白的體細胞突變而在癌細胞中表達的抗原）。
腫瘤抗原的實施例包括但不限於前列腺特異性抗原（PSA）、CA-125、神經節苷脂G(D2)、G(M2)和G(D3)、CD20、CD52、CD33、Ep-CAM、CEA、鈴蟾素樣肽、HER2/neu、表皮生長因子受體（EGFR）、erbB2、erbB3/HER3、erbB4、CD44v6、Ki-67、癌症相關黏蛋白、VEGF、VEGFR（例如VEGFR3）、雌激素受體、Lewis-Y抗原、TGFβ1、IGF-1受體、EGFα、c-Kit受體、轉鐵蛋白受體、Claudin 18.2、GPC-3、Nectin-4、ROR1、間皮素、PCMA、MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2、pl5、BCR-ABL、E2APRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、IL-2R、CO17-1A、TROP2或LIV-1。
本文提供的雙特異性抗體及其抗原結合片段可以是本領域中已知的合適格式。例如，示例性雙特異性形式可以是雙特異性雙功能抗體、基於scFv的雙特異性格式、IgG-scFv融合物、雙可變域（DVD）-Ig、四源融合瘤、杵臼、共同輕鏈（例如具有杵臼的共同輕鏈等）、BiTE、CrossMab、CrossFab、Duobody、SEEDbody、白胺酸拉鍊、雙作用Fab（DAF）-IgG和Mab2雙特異性格式（參見例如Brinkmann等人 2017, 《單抗》（Mabs）, 9(2): 182-212）。雙特異性分子可以是對稱或不對稱的架構。
本文提供的雙特異性抗體和抗原結合片段可以用本領域中已知的任何合適的方法製備。
在一個實施方式中，將兩個具有不同抗原特異性的免疫球蛋白重鏈-輕鏈對在宿主細胞中共表達，以重組的方式產生雙特異性抗體（參見例如Milstein和Cuello, 《自然》, 305: 537 (1983)），然後透過親和色層分析法純化。
綴合物
在一些實施方式中，抗hCD4抗體及其抗原結合片段連接至一個或多個綴合物部分。綴合物是可以連接至抗體或其抗原結合片段的部分。據設想，多種綴合物可以連接至本文提供的抗體或抗原結合片段（參見例如「綴合物疫苗（Conjugate Vaccines）」, 《微生物學和免疫學的貢獻》（Contributions to Microbiology and Immunology）, J. M. Cruse和R. E. Lewis, Jr. (編), Carger Press, New York, (1989)）。這些綴合物可以透過共價結合、親和力結合、嵌入、配位結合、複合、締合、摻合或添加等方法與抗體或抗原結合片段連接。在某些實施方式中，抗體或其抗原結合片段透過連接子與一個或多個綴合物連接。在某些實施方式中，連接劑是腙連接子、二硫連接子、雙官能連接子、二肽連接子、葡萄糖苷酸連接子、硫醚連接子。
在某些實施方式中，本文所公開的抗hCD4抗體和抗原結合片段可以被工程化以在表位結合部分之外含有特異性位點，所述位點可用於與一個或多個綴合物結合。例如，這樣的位點可以包括一個或多個反應性胺基酸殘基，例如半胱胺酸或組織胺酸殘基，以促進與綴合物的共價連接。
綴合物可以是清除調節劑、治療劑（例如化療劑）、毒素、放射性同位素、可檢測標記（例如鑭系元素、發光標記、螢光標記或酶-受質標記）、藥物動力學調節部分、DNA-烷基化劑、拓撲異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑、其它抗癌藥物，如雄激素受體抑制劑。
可檢測標記的實施例可以包括螢光標記（例如，螢光素、羅丹明（rhodamine）、丹醯（dansyl）、藻紅蛋白（phycoerythrin）或德克薩斯紅（Texas Red））、酶-受質標記（例如，辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、螢光素酶、葡糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶或β-D-半乳糖苷酶）、放射性同種型、其它鑭系元素、發光標記、發色部分、地高辛（digoxigenin）、生物素/親和素、DNA分子或檢測用金。
放射性同位素的實施例可包括 123I、 124I、 125I、 131I、 35S、 3H、 111In、 112In、 14C、 64Cu、 67Cu、 86Y、 88Y、 90Y、 177Lu、 211At、 186Re、 188Re、 153Sm、 212Bi和 32P。放射性同位素標記的抗體可用於受體靶向成像實驗。
在某些實施方式中，綴合物可以是藥物動力學調節部分，如PEG，其有助於增加抗體的半衰期。其它合適的聚合物包括如羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇/丙二醇的共聚物等。
在某些實施方式中，綴合物可以是純化部分，如磁珠或奈米顆粒。
藥物組合物
在另一方面，本揭露內容提供了藥物組合物，其包含本文提供的抗hCD4抗體或其抗原結合片段和一種或多種藥學上可接受的載體。
用於本文所公開的藥物組合物的藥學上可接受的載體可包括例如藥學上可接受的液體、凝膠或固體載體、水性媒劑、非水性媒劑、抗微生物劑、等滲劑、緩衝劑、抗氧化劑、麻醉劑、懸浮/分散劑、螯合劑、稀釋劑、佐劑、賦形劑或無毒輔助物質、本領域中已知的其它組分或其各種組合。
合適的組分可包括例如抗氧化劑、填充劑、黏合劑、崩解劑、緩衝劑、防腐劑、潤滑劑、調味劑、增稠劑、著色劑、乳化劑或穩定劑如糖和環糊精。合適的抗氧化劑可包括例如甲硫胺酸、抗壞血酸、EDTA、硫代硫酸鈉、鉑、過氧化氫酶、檸檬酸、半胱胺酸、硫代甘油、硫代乙醇酸、硫代山梨糖醇、丁基化羥基苯甲醚、丁基化羥基甲苯和/或沒食子酸丙酯。如本文所公開，在包含如本文所提供的抗體或抗原結合片段和綴合物的組合物中包含一種或多種抗氧化劑如甲硫胺酸，可以降低抗體或抗原結合片段的氧化。這種氧化的減少防止或減少了結合親和力的損失，從而提高了抗體的穩定性並最大限度地延長了保存期。因此，在某些實施方式中，提供了包含一種或多種如本文所公開的抗體或抗原結合片段和一種或多種抗氧化劑如甲硫胺酸的組合物。還提供了透過將抗體或抗原結合片段與一種或多種抗氧化劑如甲硫胺酸混合來防止如本文所提供的抗體或抗原結合片段的氧化、延長其保存期和/或提高其功效的方法。
為了進一步說明，藥學上可接受的載體可包括例如水性媒劑，如氯化鈉注射液、林格氏注射液（Ringer's injection）、等滲右旋糖注射液、無菌水注射液、或右旋糖和乳酸林格氏注射液；非水性媒劑，如植物來源的非揮發性油、棉籽油、玉米油、芝麻油或花生油；抑制細菌或抑制真菌濃度的抗微生物劑；等滲劑，如氯化鈉或右旋糖；緩衝劑，如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝劑；抗氧化劑，如硫酸氫鈉；局部麻醉劑，如鹽酸普魯卡因（procaine hydrochloride）；懸浮劑和分散劑，如羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；乳化劑，如聚山梨醇酯80（TWEEN-80）；螯合劑，如EDTA（乙二胺四乙酸）或EGTA（乙二醇四乙酸）、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸或乳酸。用作載體的抗微生物劑可添加至多劑量容器中的藥物組合物中，所述抗微生物劑包括苯酚或甲酚、汞劑、苯甲醇、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯紮氯銨（benzalkonium chloride）和苄索氯銨（benzethonium chloride）。合適的賦形劑可包括例如水、生理鹽水、右旋糖、甘油或乙醇。合適的無毒輔助物質可包括例如潤濕劑或乳化劑、pH緩衝劑、穩定劑、溶解度增強劑或如乙酸鈉、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯或環糊精等藥劑。
藥物組合物可以是液體溶液、懸浮液、乳液、丸劑、膠囊、片劑、緩釋製劑或粉末。口服製劑可包括標準載體，如藥用級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。
在某些實施方式中，藥物組合物被配製成可注射組合物。可注射的藥物組合物可以任何常規形式製備，例如液體溶液、懸浮液、乳液或適合生成液體溶液、懸浮液或乳液的固體形式。注射用製劑可包括準備用於注射的無菌和/或無熱原質溶液；準備在臨使用前與溶劑組合的無菌乾燥可溶性產品，如凍乾粉，包括皮下片劑；準備用於注射的無菌懸浮液；準備在臨使用前與媒劑組合的無菌乾燥不溶性產品；以及無菌和/或無熱原質乳液。溶液可以是水性或非水性的。
在某些實施方式中，單位劑量的腸胃外製劑被包裝在安瓿、小瓶或帶針頭的注射器中。所有用於腸胃外施用的製劑都應該是無菌且無熱原質的，正如本領域中已知和實踐的那樣。
在某些實施方式中，無菌凍乾粉是透過將如本文所公開的抗體或抗原結合片段溶解於合適的溶劑中來製備。溶劑可含有改善粉末或由粉末製備的重構溶液的穩定性或其它藥理學組分的賦形劑。可使用的賦形劑包括但不限於水、右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖漿、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它合適的試劑。溶劑可含有緩衝劑，如檸檬酸鹽、磷酸鈉或磷酸鉀或本領域技術人員已知的其它此類緩衝劑，在一個實施方式中，pH值約為中性。隨後在本領域技術人員已知的標準條件下對溶液進行無菌過濾，然後進行凍乾，得到所需製劑。在一個實施方式中，將所得溶液分配到小瓶中進行凍乾。每個小瓶可以含有單劑量或多劑量的抗hCD4抗體或其抗原結合片段或其組合物。用高於一個劑量或一組劑量所需的少量（例如約10%）過量填充小瓶是可以接受的，以便於準確地抽取樣品和準確地給藥。凍乾粉可以在適當的條件下儲存，例如在約4℃至室溫下儲存。
用注射用水重構凍乾粉提供了用於腸胃外施用的製劑。在一個實施方式中，為了重構，將無菌和/或無熱原質水或其它合適的液體載體添加至凍乾粉中。精確的量取決於給定的所選治療方法，並且可以憑經驗確定。
在某些實施方式中，藥物組合物還包含第二治療劑。
在某些實施方式中，第二治療劑可以是治療癌症的藥劑（即抗癌劑），例如化學治療劑、抗癌藥物（例如mTOR抑制劑）、放射療法、免疫療法（例如免疫檢查點抑制劑）、抗血管生成劑（例如VEGFR的拮抗劑，如VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3）、靶向療法（例如T細胞募集抗體）、細胞療法、基因治療劑、激素治療劑、細胞因子、姑息治療、治療癌症的手術（例如腫瘤切除術）、或一種或多種止吐藥或針對化學療法引起的併發症的其它治療劑。抗血管生成劑可以阻斷支持腫瘤生長的血管的生長。一些抗血管生成劑靶向VEGF或其受體VEGFR。抗血管生成劑的實施例包括但不限於阿西替尼（Axitinib）、貝伐單抗（Bevacizumab）、卡博替尼（Cabozantinib）、依維莫司、來那度胺（Lenalidomide）、甲磺酸樂伐替尼（Lenvatinib mesylate）、帕唑帕尼（Pazopanib）、雷莫蘆單抗（Ramucirumab）、瑞格非尼（Regorafenib）、索拉非尼（Sorafenib）、舒尼替尼（Sunitinib）、沙利度胺（Thalidomide）、凡德他尼（Vandetanib）和阿柏西普（Ziv-aflibercept）。
在某些實施方式中，第二治療劑包括T細胞募集抗體，例如CD19/CD3雙特異性抗體。CD19/CD3雙特異性抗體可以本領域中已知的任何格式設計，如雙特異性T細胞銜接子（BiTE）格式（ Nicola 等人 , 《血液》 2018 年 4 月 5 日 ; 131(14): 1522-1531）和單鏈Fv-Fc格式（ Hannah 等人 , 《血液》 . 2018 年 8 月 2 日 ; 132(5): 521-532）。示例性CD19/CD3雙特異性抗體包括但不限於博納吐單抗（Blinatumomab）（ Nicola 等人 , 《血液》 2018 年 4 月 5 日 ; 131(14): 1522-1531）和AFM11（ Uwe 等人 , 《單抗》 2015; 7(3): 584-604.）。
在某些實施方式中，第二治療劑包含免疫檢查點抑制劑，其選自由以下組成的組：PD-1抗體、PD-L1抗體、PD-L2抗體、LAG-3抗體、TIM-1抗體、CTLA-4抗體、VISTA抗體、B7-H2抗體、B7-H3抗體、B7-H4抗體、B7-H抗體、ICOS抗體、HVEM抗體、CD160抗體、gp49B抗體、PIR-B抗體、KIR家族受體抗體、TIM-1抗體、TIM-4抗體、BTLA抗體、SIRPα（CD47）抗體、CD4抗體、284（CD244）抗體、B7.1抗體、B7.2抗體、ILT-2抗體、ILT-4抗體、TIGIT抗體和A2aR抗體。在某些實施方式中，第二治療劑包含mTOR抑制劑，其選自由以下組成的組：坦羅莫司（CCI-779）或其藥物等效物、類似物、衍生物或鹽，依維莫司（RAD001）或其藥物等效物、類似物、衍生物或鹽，以及雷帕黴素或其藥物等效物、類似物、衍生物或鹽。
在某些實施方式中，第二治療劑管理或治療至少一種與癌症相關的併發症。
多核苷酸和重組方法
在另一方面，本揭露內容提供了編碼抗hCD4抗體及其抗原結合片段的分離的多核苷酸。如本文所用，術語「核酸」或「多核苷酸」是指單鏈或雙鏈形式的去氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）及其聚合物。除非另有說明，否則特定的多核苷酸序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體（例如簡併密碼子取代）、等位基因、直系同源物、SNP和互補序列以及明確指出的序列。具體而言，簡併密碼子取代可以透過產生其中一個或多個選定（或全部）密碼子的第三位被混合鹼基和/或去氧肌苷殘基取代的序列來實現（參見Batzer等人, 《核酸研究》 19:5081 (1991)；Ohtsuka等人, 《生物化學雜誌》 260:2605-2608 (1985)；和Rossolini等人, 《分子細胞探針》（Mol. Cell. Probes） 8:91-98 (1994)）。
在某些實施方式中，分離的多核苷酸包含如SEQ ID NO: 9、10、19、20、29、30、39、40、49、50、59和60中所示的一個或多個核苷酸序列，和/或其具有至少80%（例如至少85%、88%、90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性的序列，和/或其僅具有簡併取代的變體，並編碼本文提供的示例性抗體的可變區。
編碼單株抗體的DNA使用常規程序（例如，透過使用能夠特異性地與編碼抗體的重鏈和輕鏈的基因結合的寡核苷酸探針）容易地分離和定序。編碼DNA也可以透過合成方法獲得。
本揭露內容提供了包含本文提供的分離的多核苷酸的載體（例如表達載體）。在某些實施方式中，本文提供的表達載體包含編碼本文提供的抗體或其抗原結合片段的多核苷酸、至少一個與多核苷酸序列可操作地連接的啟動子（例如SV40、CMV、EF-1α）和至少一個選擇標記。載體的實施例包括但不限於反轉錄病毒（包括慢病毒）、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒（例如單純皰疹病毒）、痘病毒、桿狀病毒、乳頭瘤病毒、乳多空病毒（例如SV40）、λ噬菌體和M13噬菌體、質體，如pcDNA3.3、pMD18-T、pOptivec、pCMV、pEGFP、pIRES、pQD-Hyg-GSeu、pALTER、pBAD、pcDNA、pCal、pL、pET、pGEMEX、pGEX、pCI、pEGFT、pSV2、pFUSE、pVITRO、pVIVO、pMAL、pMONO、pSELECT、pUNO、pDUO、Psg5L、pBABE、pWPXL、pBI、p15TV-L、pPro18、pTD、pRS10、pLexA、pACT2.2、pCMV-SCRIPT.RTM.、pCDM8、pCDNA1.1/amp、pcDNA3.1、pRc/RSV、PCR 2.1、pEF-1、pFB、pSG5、pXT1、pCDEF3、pSVSPORT、pEF-Bos等。
包含編碼抗體或其抗原結合片段的多核苷酸序列的載體可以被引入宿主細胞中進行轉殖或基因表達。用於轉殖或表達本文載體中的DNA的合適宿主細胞是上述原核生物、酵母或高等真核生物細胞。用於此目的的合適的原核生物包括真細菌，如革蘭氏陰性（Gram-negative）或革蘭氏陽性（Gram-positive）生物，例如腸內菌科（ Enterobacteriaceae），如埃希氏菌屬（ Escherichia），例如大腸桿菌；腸桿菌屬（ Enterobacter）；歐文氏菌屬（ Erwinia）；克雷伯氏菌屬（ Klebsiella）；變形桿菌屬（ Proteus）；沙門氏菌屬（ Salmonella），例如鼠傷寒沙門氏菌（ Salmonella typhimurium）；沙雷氏菌屬（ Serratia），例如黏質沙雷氏菌（ Serratia marcescans ）；和志賀桿菌屬（ Shigella），以及芽孢桿菌屬（ Bacilli），如枯草芽孢桿菌（ B. subtilis）和地衣芽孢桿菌（ B. licheniformis）；假單胞菌屬（ Pseudomonas），如綠膿桿菌；和鏈黴菌屬（ Streptomyces）。
除原核生物外，真核微生物如絲狀真菌或酵母是抗hCD4抗體編碼載體的合適轉殖或表達宿主。在低等真核宿主微生物中，釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）或普通麵包酵母是最常用的。然而，多種其它屬、種和菌株在本文中是常用且有用的，如粟酒裂殖酵母（ Schizosaccharomyces pombe）；克魯維酵母屬（ Kluyveromyces）宿主，例如乳酸克魯維酵母（K. lactis）、脆壁克魯維酵母（ K. fragilis）（ATCC 12,424）、保加利亞克魯維酵母（ K. bulgaricus）（ATCC 16,045）、威克克魯維酵母（ K. wickeramii）（ATCC 24,178）、克魯維雄酵母（ K. waltii）（ATCC 56,500）、果蠅克魯維酵母（ K. drosophilarum）（ATCC 36,906）、耐熱克魯維酵母（ K. thermotolerans）和馬克斯克魯維酵母（ K. marxianus）；耶氏酵母屬（ yarrowia）（EP 402,226）；畢赤酵母（ Pichia pastoris）（EP 183,070）；假絲酵母屬（ Candida）；瑞氏木黴（ Trichoderma reesia）（EP 244,234）；粗糙脈孢菌（ Neurospora crassa）；許旺酵母屬（ Schwanniomyces），如西方許旺酵母（ Schwanniomyces occidentalis）；和絲狀真菌，例如脈孢菌屬（ Neurospora）、青黴菌屬（ Penicillium）、彎頸黴屬（ Tolypocladium）和麯黴屬（ Aspergillus）宿主，如構巢麯黴（ A. nidulans）和黑麯黴（ A. niger）。
本文提供的用於表達糖基化抗體或抗原片段的合適的宿主細胞來源於多細胞生物，如無脊椎動物細胞，例如植物和昆蟲細胞。已經鑒定出多種桿狀病毒株和變體以及來自如下宿主的相應容許的昆蟲宿主細胞：草地貪夜蛾（ Spodoptera frugiperda）（毛蟲）、埃及伊蚊（ Aedes aegypti）（蚊子）、白紋伊蚊（ Aedes albopictus）（蚊子）、黑腹果蠅（ Drosophila melanogaster）（果蠅）和家蠶（ Bombyx mori）。多種用於轉染的病毒株是可公開獲得的，例如苜蓿銀紋夜蛾（ Autographa californica）NPV的L-1變體和家蠶NPV的Bm-5病毒株，並且此類病毒可以根據本發明用作本文中的病毒，特別是用於轉染草地貪夜蛾細胞。棉花、玉米、馬鈴薯、大豆、矮牽牛、番茄和煙草的植物細胞培養物也可以用作宿主。
然而，人們對脊椎動物細胞的興趣最大，脊椎動物細胞的培養繁殖（組織培養）已成為常規程序。有用的哺乳動物宿主細胞系的實施例是由SV40轉化的猴腎CV1系（COS-7，ATCC CRL 1651）；人胚腎系（再轉殖以在懸浮培養中生長的293或293細胞；Graham等人, 《普通病毒學雜誌》（ J. Gen Virol.） 36:59 (1977)）；幼小倉鼠腎細胞（BHK，ATCC CCL 10）；中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR（CHO，Urlaub等人, 《美國國家科學院院刊》 77:4216 (1980)）；小鼠支持細胞（TM4， Mather, 《生殖生物學》( Biol. Reprod.) 23:243-251 (1980)）；猴腎細胞（CV1 ATCC CCL 70）；非洲綠猴腎細胞（VERO-76，ATCC CRL-1587）；人子宮頸癌細胞（HELA，ATCC CCL 2）；犬科動物腎細胞（MDCK，ATCC CCL 34）；布法羅大鼠（buffalo rat）肝細胞（BRL 3A，ATCC CRL 1442）；人肺細胞（W138，ATCC CCL 75）；人肝細胞（Hep G2，HB 8065）；小鼠乳腺腫瘤（MMT 060562，ATCC CCL51）；TRI細胞（Mather等人, 《紐約科學院年報》（ Annals N.Y. Acad. Sci.） 383:44-68 (1982)）；MRC 5細胞；FS4細胞；和人肝瘤系（Hep G2）。在一些較佳實施方式中，宿主細胞是哺乳動物培養的細胞系，如CHO、BHK、NS0、293及其衍生物。
用上述抗hCD4抗體生產的表達或轉殖載體轉化宿主細胞，並在經適當改良的常規營養培養基中培養，以誘導啟動子、選擇轉化體或擴增編碼所需序列的基因。在另一個實施方式中，抗體可透過本領域中已知的同源重組產生。
用於產生本文提供的抗體或抗原結合片段的宿主細胞可以在各種培養基中培養。市售培養基，如Ham's F10（Sigma）、最小必需培養基（MEM）（Sigma）、RPMI-1640（Sigma）以及杜爾貝科氏改良型伊格爾氏培養基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium，DMEM，Sigma）適用於培養宿主細胞。另外，Ham等人, 《酶學方法》 58:44 (1979)；Barnes等人, 《分析生物化學》（Anal. Biochem.） 102:255 (1980)；美國專利第4,767,704號、第4,657,866號、第4,927,762號、第4,560,655號或第5,122,469號；WO 90/03430；WO 87/00195；或美國再頒專利30,985中所述的任何培養基都可以用作宿主細胞的培養基。這些培養基中的任何一種都可以視需要補充激素和/或其它生長因子（如胰島素、轉鐵蛋白或表皮生長因子）、鹽類（如氯化鈉、鈣鹽、鎂鹽和磷酸鹽）、緩衝液（如HEPES）、核苷酸（如腺苷和胸苷）、抗生素（如GENTAMYCIN™藥物）、微量元素（定義為通常以微莫耳範圍內的最終濃度存在的無機化合物）和葡萄糖或等效能量源。還可以本領域中具有通常知識者已知的適當濃度包括任何其它必要的補充劑。培養條件，如溫度、pH等，是先前與選擇用於表達的宿主細胞一起使用的條件，並且對本領域中具有通常知識者來說將是顯而易見的。
當使用重組技術時，抗體可以在細胞內、在周質空間中產生，或直接分泌至培養基中。如果抗體在細胞內產生，則作為第一步，例如透過離心或超濾去除顆粒碎片（宿主細胞或裂解片段）。Carter等人, 《生物技術》 10:163-167 (1992)描述了一種用於分離分泌到大腸桿菌的周質空間的抗體的程序。簡而言之，在乙酸鈉（pH 3.5）、EDTA和苯甲基磺醯氟（PMSF）的存在下，在約30分鐘內將細胞糊解凍。細胞碎片可以透過離心去除。在抗體分泌到培養基中的情況下，來自此類表達系統的上清液一般首先使用市售的蛋白質濃縮過濾器，例如Amicon或Millipore Pellicon超濾裝置進行濃縮。蛋白酶抑制劑如PMSF可以包括在任何前述步驟中，以抑制蛋白水解，並且可以包括抗生素以防止外來污染物的生長。
由細胞製備的抗hCD4抗體和抗原結合片段可以使用例如羥基磷灰石色層分析法、凝膠電泳、透析、DEAE-纖維素離子交換色層分析法、硫酸銨沉澱、鹽析以及親和色層分析法純化，其中親和色層分析法是較佳的純化技術。
在某些實施方式中，固定在固相上的蛋白質A用於抗體及其抗原結合片段的免疫親和純化。蛋白質A作為親和配體的適合性取決於抗體中存在的任何免疫球蛋白Fc域的種類和同種型。蛋白質A可用於純化基於人γ1、γ2或γ4重鏈的抗體（Lindmark等人, 《免疫學方法雜誌》 62:1-13 (1983)）。蛋白質G推薦用於所有小鼠同種型和人γ3（Guss等人, 《歐洲分子生物學雜誌》（EMBO J.） 5:1567 1575 (1986)）。親和配體所附著的基質最常見的是瓊脂糖，但也可以使用其它基質。機械上穩定的基質，如可控孔度玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯，比瓊脂糖可以實現更快的流速和更短的處理時間。當抗體包含C H3域時，Bakerbond ABX.TM.樹脂（J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.）可用於純化。用於蛋白質純化的其它技術，如離子交換柱上分級分離、乙醇沉澱、反相HPLC、矽膠色層分析、肝素SEPHAROSETM上的色層分析、陰離子或陽離子交換樹脂（如聚天門冬胺酸柱）上的色層分析、色層分析焦聚、SDS-PAGE以及硫酸銨沉澱也是可用的，取決於待回收的抗體。
在任何初步純化步驟之後，可使用pH值在約2.5-4.5之間的洗脫緩衝液對包含感興趣的抗體和污染物的混合物進行低pH值疏水相互作用色層分析，較佳在低鹽濃度下進行（例如約0-0.25 M鹽）。
使用方法
在一個方面，本揭露內容提供了本文提供的抗體的治療用途。
在某些實施方式中，本揭露內容提供了治療有需要的受試者的CD4相關疾病或病況的方法，其包括：施用治療有效量的本文提供的抗體或抗原結合片段和/或本文提供的藥物組合物，從而治療CD4相關疾病或病況。
CD4相關疾病或病況可以是將受益於對CD4表達細胞（如CD4+ T細胞，尤其Treg）的CDC和/或ADCC活性的疾病或病況。CD4相關疾病或病況可以是癌症、適應性免疫疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病或感染性疾病。在某些實施方式中，癌症選自由以下組成的組：肺癌、支氣管癌、骨癌、肝膽管癌、胰腺癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、腎癌、膀胱癌、頭頸癌、脊柱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、肛門癌、食道癌、胃腸癌、皮膚癌、前列腺癌、垂體癌、胃癌、陰道癌、甲狀腺癌、膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生異常症候群、肉瘤、畸胎瘤、腺癌、白血病（例如慢性淋巴細胞性白血病、復發性或難治性B細胞前體急性淋巴母細胞性白血病）、骨髓瘤和淋巴瘤。
本揭露內容還提供了一種檢測樣品中CD4的存在或量的方法，其包括使所述樣品與本文提供的抗體或其抗原結合片段接觸，並確定所述樣品中CD4的存在或量。
本文還提供了一種診斷受試者的CD4相關疾病或病況的方法，其包括：a)從所述受試者獲得樣品；b)使從所述受試者獲得的樣品與本文提供的抗體或其抗原結合片段接觸；c)確定所述樣品中CD4的存在或量；以及d)將所述CD4的存在或量與所述受試者的CD4相關疾病或病況的存在或狀態相關聯。
在另一方面，本揭露內容還提供了一種消除有需要的受試者體內CD4表達細胞的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段或藥物組合物。在某些實施方式中，CD4表達細胞是CD4+ T細胞，任選地是調節性T細胞（Treg）。
如本文所用，術語「CD4+ T細胞」被定義為表面表達CD4的胸腺源性淋巴細胞，其參與多種細胞介導的免疫反應。
CD4+T細胞在實現對病原體的經調節的有效免疫反應中至關重要。幼稚CD4+T細胞被活化並分化成特定的亞型，這主要取決於微環境的細胞因子環境。已經鑒定出CD4+ T細胞的幾個子集，包括T輔助細胞1和T輔助細胞2、T輔助細胞9、T輔助細胞17、濾泡性輔助T細胞（Tfh）和調節性T細胞（Treg），這些子集中的每一個都表達細胞表面受體、轉錄因子和分泌的細胞因子的獨特組合（ Luckheeram RV 等人 , (2012) 《臨床與發育免疫學》（ Clin Dev Immunol ） 2012: 925135）。Th1細胞負責控制細胞內病原體，如病毒和一些細菌（ Prete GD 等人 , (1992) 《過敏》（ Allergy ） 47: 450）。Th2細胞是消除大型細胞外生物的關鍵（ Prete GD 等人 , (1992) 《過敏》 47: 450）。Th9細胞參與防禦寄生蟲、蠕蟲感染（ Rajamanickam A 等人 , (2016) 《公共科學圖書館 · 被忽視的熱帶病》（ PLoS Neglected Tropical Diseases ） 10: e0004317 ； Hosseini MAS 等人 , (2015) 《國際流行病學研究雜誌》（ International Journal of Epidemiologic Research ） 2: 233）。Th17對於針對細胞外細菌和真菌的免疫反應是重要的（ Annunziato F 等人 , (2007) 《實驗醫學雜誌》（ J Exp Med ） , 204: 1849 ； Weaver CT, (2006) 《免疫》 24: 677）。Tfh細胞是促進生髮中心B細胞的存活和增殖以及支持生髮中心發育所必需的（ Ise W 等人 , (2018) 《免疫》 48: 702 ； Mints MA 等人 , (2020) 《免疫學評論》（ Immunological Reviews ） 296: 48）。
上述效應T細胞子集的活性可以部分地由稱為調節性T細胞（Treg）的CD4+ T細胞的獨特亞群來平衡。Treg專門維持穩態和自我耐受，限制免疫反應的發展和進展（ Vignali DA 等人 , (2008) 《自然綜述免疫學》（ Nature Reviews Immunology ） 8: 523）。在某些實施方式中，CD4表達細胞是Treg。
如本文所用，術語「調節性T細胞」或可互換使用的術語「Treg」是指以表達CD4、CD25和/或叉頭家族轉錄因子FoxP3為特徵的獨特的T淋巴細胞群。它是組成性表達CD25和FoxP3轉錄因子的CD4+ T細胞的少數亞群。Treg具有透過抑制如CD8+ T細胞、NK和NKT細胞、B細胞和抗原呈現細胞（APC）等多種免疫細胞的活化、增殖和效應功能所賦予的免疫抑制特性。關於具體的實施例，Treg抑制卵巢癌中的腫瘤特異性T細胞，並且腫瘤相關的Treg數目的增加通常與存活時間的縮短有關（ Curiel 等人 , 2003, 《自然 · 醫學》（ Nat. Med. ） 9:562-567 ； Wolf 等人 , 2005, 《臨床癌症研究》 11:8326-8331 和 Curiel 等人 , 2006, 會議摘要 , Can. Immunity 6 增刊 1, 第 20 頁）。對結腸直腸癌（ Pages 等人 , 2005, 《新英格蘭醫學雜誌》（ N. Engl. J. Med. ） 353:2654-2666）、肺癌（ Woo 等人 , 2002, 《免疫學雜誌》 168:4272-4276 ）和多形性神經膠母細胞瘤（ Andaloussi 等人 , 2006, 《神經腫瘤學》（ Neuro-oncol. ） 8:234-243）也進行了類似觀察。
Treg還對某些病毒和寄生蟲感染的受試者的免疫力產生負面影響。例如，在反轉錄病毒感染的受試者、利什曼原蟲（Leishmania）和瘧疾小鼠模型以及絲蟲感染小鼠模型中已經檢測到Treg的積累和由此產生的免疫抑制（ Iwashiro 等人 , 2001, 《美國國家科學院院刊》 98:9226-9230 ； Belkaid 等人 , 《自然》 420:502 ； Hisaeda 等人 , 2004, 《自然 · 醫學》 10:29 和 Taylor 等人 , 2005, 《免疫學雜誌》 174:4924-4933）。研究進一步表明，透過抗體療法減少Treg的數目導致寄生蟲數目急劇減少（ Taylor 等人 , 2005, 《免疫學雜誌》 174:4924-4933）。
如本文所用，關於Treg的術語「消除（eliminating/eliminates/eliminated/elimination）」是指降低或減少Treg的量或百分比，或完全耗盡Treg，或抑制/減少Treg的產生或功能。Treg的百分比可以透過本領域中已知的任何方法，如流式細胞術來測定。Treg的功能可以透過本領域中已知的任何方法測量，例如透過測量Treg表達的免疫抑制性細胞因子和分子的含量，例如細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4（CTLA-4）、程序性死亡1配體1（PD-L1）、轉化生長因子β（TGF-β）、核因子κΒ配體的受體活化劑（RANKL）、LAG-3、糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體家族相關基因（GITR；TNFRSF18糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體家族相關基因（GITR；TNFRSF18）和/或IL-10。這些分子協同作用以誘導免疫耐受並促進腫瘤進展和轉移（參見例如WO2011109789A2）。Treg的功能也可以透過分析其對例如CD8淋巴細胞增殖的抑制作用來測量。
在另一方面，本揭露內容還提供了一種增強有需要的受試者體內腫瘤微環境的免疫原性的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段或藥物組合物。如本文所用，術語「腫瘤微環境」是指圍繞腫瘤細胞的組織、細胞和環境（例如細胞外環境）。腫瘤微環境可以包含基質細胞，如成纖維細胞、周細胞、內皮細胞、脂肪細胞和骨髓間充質基質細胞（MSC）。在某些實施方式中，腫瘤微環境還包含多種免疫細胞，如效應T細胞（例如CD8+效應T細胞）和Treg。
在惡性腫瘤的環境中，Treg細胞可以抑制抗癌免疫力，從而阻礙瘤形成的保護性免疫監視，阻礙有效的抗腫瘤免疫反應並促進腫瘤的發展和進展（ Baba J 等人 , (2012) 《血液》 120: 2417 ； Togashi Y 等人 , (2019) 《自然評論臨床腫瘤學》 16: 356）。腫瘤微環境中Treg的增加與多種癌症的更差預後相關（ Shang B 等人 , (2015) 《科學報告》（ Scientific Rep ） 5: 15179 ； Saleh R 等人 , (2020) 《癌症通訊》（ Cancer Letters ） 490: 174）。已經證明靶向Treg的治療有效增強腫瘤微環境的免疫原性（ Togashi Y 等人 , (2019) 《自然評論臨床腫瘤學》 16: 356 ； Onizuka S 等人 , (1999) 《癌症研究》 59: 3128 ； Rech AJ 等人 , (2012) 《科學 · 轉化醫學》（ Sci. Transl Med ） 4: 134 ； Sugiyama D 等人 , (2013) 《美國國家科學院院刊》 110: 17945 ； Kurose K 等人 , (2015) 《臨床癌症研究》 21: 4327）。
研究表明，基於CD4抗體的Treg細胞耗竭增強了mTOR抑制刺激的抗腫瘤免疫記憶（ Wang Y 等人 , (2014) 《癌症研究》 74: 2217 ； Kim HL, (2014) 《腫瘤免疫學》（ OncoImmunology ） 3: e29081），其與CD4或CD4抗體療法的組合介導了非常有效的CD8依賴性協同作用，導致攜帶神經母細胞瘤的小鼠的無瘤存活期顯著延長（ Rego V 等人 , (2017) 《科學報告》 7:14049）。在幾項針對難治性皮膚T細胞淋巴瘤和類風濕性關節炎的嵌合αCD4抗體試驗中，實現了近乎完全的CD4耗竭，並且沒有觀察到嚴重的感染或其它劑量相關的毒性（ Prinz JC 等人 , (1996) 《美國皮膚病學會雜誌》（ J Am Acad Dermatol ） 34: 244 ； Moreland LW 等人 , (1994) 《關節炎與風濕病》（ Arthritis & Rheumatism ） 37: 834 ； Moreland LW 等人 , (1994) 《關節炎與風濕病》 38: 1581）。因此，透過向受試者施用本文提供的抗CD4抗體或其抗原結合片段來耗竭Treg可以增強受試者的腫瘤微環境的免疫原性。
在另一方面，本揭露內容還提供了一種提高癌症療法（例如化學療法、免疫療法、放射療法）在有需要的受試者體內的療效的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段或藥物組合物。如本文所用，術語「免疫療法」是指刺激免疫系統對抗疾病如癌症或以一般方式增強免疫系統的一種療法。免疫療法包括被動免疫療法，透過遞送具有已建立的腫瘤免疫反應性的藥劑（如效應細胞），可以直接或間接介導抗腫瘤作用，並且不一定依賴於完整的宿主免疫系統（如抗體療法或CAR-T細胞療法）。免疫療法還可以包括主動免疫療法，其中治療依賴於體內刺激內源性宿主免疫系統，透過施用免疫反應調節劑對病變細胞作出反應。免疫療法的實施例包括但不限於檢查點調節劑、過繼性細胞轉移、細胞因子、溶瘤病毒和治療性疫苗。
檢查點調節劑可以干擾癌細胞避免免疫系統攻擊的能力，並幫助免疫系統對腫瘤做出更強烈的反應。免疫檢查點分子可以介導共刺激訊號以增強免疫反應，或者可以介導共抑制訊號以抑制免疫反應。檢查點調節劑的實施例包括例如PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGF β、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD47、CD122、ICAM-1、IDO、NKG2C、SLAMF7、SIGLEC7、NKp80、CD160、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-7、IL-15、IL-21、CD3、CD16和CD83的調節劑。在某些實施方式中，免疫檢查點調節劑包括PD-1/PD-L1軸抑制劑。
過繼性細胞轉移，這是一種試圖增強T細胞對抗癌症的天然能力的治療。在這種治療中，T細胞取自患者，並在體外擴增和活化。在某些實施方式中，T細胞在體外被修飾為CAR-T細胞。在體外大批量培養抗癌最活躍的T細胞或CAR-T細胞2至8週。在此期間，患者將接受如化學療法和放射療法等治療，以降低身體的免疫力。在這些治療後，體外培養的T細胞或CAR-T細胞將被回給予患者。在某些實施方式中，免疫療法是CAR-T療法。
細胞因子療法也可以用於增強腫瘤抗原向免疫系統的呈遞。用於治療癌症的兩種主要類型的細胞因子是干擾素和白細胞介素。細胞因子療法的實施例包括但不限於干擾素如干擾素-α、-β和-γ，集落刺激因子如巨噬細胞CSF、粒細胞巨噬細胞CSF和粒細胞CSF，胰島素生長因子（IGF-1）、血管內皮生長因子（VEGF）、轉化生長因子（TGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）、白細胞介素如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11和IL-12、腫瘤壞死因子如TNF-α和TNF-β或其任何組合。
溶瘤病毒是可以殺死癌細胞的經遺傳修飾的病毒。溶瘤病毒可以特異性地感染腫瘤細胞，從而導致腫瘤細胞溶解，隨後釋放大量的腫瘤抗原，觸發免疫系統靶向並消除具有此類腫瘤抗原的癌細胞。溶瘤病毒的實施例包括但不限於塔力拉赫（talimogene laherparepvec）。
治療性疫苗透過增強免疫系統對癌細胞的反應來對抗癌症。治療性疫苗可以包含非致病性微生物（例如，牛分枝桿菌卡介苗，BCG）、靶向腫瘤細胞的經遺傳修飾的病毒或一種或多種免疫原性組分。例如，BCG可以用導管直接插入膀胱，並可引起針對膀胱癌細胞的免疫反應。
Bedi等人（參見WO2011109789A2）已經表明，腫瘤促進Treg在其微環境中的積累，這抑制了上述一些免疫療法（例如疫苗接種、化學療法）對腫瘤反應性免疫反應的引發。Bedi等人還表明，透過Treg介導的腫瘤誘導性免疫抑制是癌症對化學療法和腫瘤靶向抗體抗性的關鍵決定因素。如先前研究所證實，用抗CD4抗體消除CD4表達細胞可以導致Treg消除，從而增強腫瘤特異性免疫力（參見例如US2017/0007698）。因此，施用本文提供的抗CD4抗體或其抗原結合片段可有效地消除CD4表達細胞（包括Treg），並且能夠增強癌症療法的療效。
在某些實施方式中，本文提供的方法還包括施用第二治療劑。第二治療劑可以包括抗癌劑，如mTOR抑制劑、免疫檢查點抑制劑或T細胞募集抗體。
在某些實施方式中，T細胞募集抗體包括CD19/CD3雙特異性抗體。
在某些實施方式中，第二治療劑包括T細胞募集抗體，例如CD19/CD3雙特異性抗體。CD19/CD3雙特異性抗體可以本領域中已知的任何格式設計，如雙特異性T細胞銜接子（BiTE）格式和單鏈Fv-Fc格式（ Hannah 等人 , 《血液》 . 2018 年 8 月 2 日 ; 132(5): 521-532）。示例性CD19/CD3雙特異性抗體包括但不限於博納吐單抗和AFM11（ Uwe 等人 , 《單抗》 2015; 7(3): 584-604.）。
在另一方面，本揭露內容提供了本文提供的抗體或其抗原結合片段在製備用於治療受試者的CD4相關疾病或病況的藥物中的用途。
在另一方面，本揭露內容提供了本文提供的抗體或其抗原結合片段在製備用於消除有需要的受試者的CD4表達細胞的藥物中的用途。
在另一方面，本揭露內容提供了本文提供的抗體或其抗原結合片段在製備用於增強有需要的受試者體內腫瘤微環境的免疫原性的藥物中的用途。
在另一方面，本揭露內容提供了本文提供的抗體或其抗原結合片段在製備用於提高免疫療法在有需要的受試者體內的療效的藥物中的用途。
施用途徑和劑量方案
本文提供的抗體或抗原結合片段可以治療有效劑量施用。本文提供的抗體或抗原結合片段的治療有效量將取決於本領域中已知的各種因素，例如受試者的體重、年齡、既往病史、目前的藥物治療、健康狀況和交叉反應的可能性、過敏性、敏感性和不良副作用，以及施用途徑和疾病發展的程度。本領域中具有通常知識者（例如醫生或獸醫）可如這些和其它情況或要求所指示按比例減少或增加劑量。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或抗原結合片段可以約0.01 mg/kg至約100 mg/kg的治療有效劑量施用。在某些實施方式中，施用劑量可以在治療過程中改變。在某些實施方式中，施用劑量可在治療過程中根據受試者的反應而變化。
可以調整劑量方案以提供最佳的期望反應（例如治療反應）。例如，可施用單次劑量，或可隨時間推移施用若干分次劑量。
本文所公開的抗體和抗原結合片段可透過本領域中已知的任何途徑施用，如腸胃外（例如皮下、腹膜內、靜脈內（包括靜脈內輸注）、肌肉內或皮內注射）或非腸胃外（例如口服、鼻內、眼內、舌下、直腸或局部）途徑。
在不希望受任何理論束縛的情況下，雖然已證明消除CD4表達細胞（例如Treg）可以增強癌症療法的療效（參見例如 US 2017/0007698 ；和 WO2011109789A2），但在刺激由特定腫瘤和/或在特定條件下誘導的免疫力之前消除或耗盡CD4（如由例如IFN-γ水平升高所指示）可能會導致CD8記憶形成不良或甚至被抑制，並加快腫瘤生長（參見例如 Fukui 等人 , 《癌症免疫與免疫療法》（ Cancer Immunol Immunother ） (2006) 55:538-546 ；和 US 2017/0007698）。因此，本文提供的抗CD4抗體或其抗原結合片段較佳在確認受試者具有腫瘤誘導的免疫力後，向有需要的受試者施用。
受試者的腫瘤誘導的免疫力可以透過本領域中已知的任何方法確定，例如透過將免疫刺激水平（例如，受試者中IFN-γ的血清水平）與免疫刺激的參考水平（例如，IFN-γ的參考血清水平）進行比較。如本文所用，關於免疫刺激的術語「參考水平」是指允許進行比較的基準水平。參考水平可由本領域中具有通常知識者根據所需目的來選擇。確定合適的參考水平的手段是本領域中具有通常知識者已知的，例如，參考水平可以根據經驗、現有知識或從臨床研究中收集的數據來確定。例如，免疫刺激的參考水平可以是具有相同性別和可比體重的正常健康人的免疫刺激水平，並且任選地具有同樣可比的其它因素，如身體狀況、藥物史、飲食、睡眠等。
組合療法
在一些實施方式中，本文所公開的抗體或抗原結合片段可單獨施用或與一種或多種額外的治療手段或藥劑組合施用，所述治療手段或藥劑可基於待治療的疾病或病況來選擇。
在一些實施方式中，本文所公開的抗體或抗原結合片段可與以下第二抗癌藥物組合施用以治療癌症：例如化療劑、抗癌藥物（例如mTOR抑制劑）、放射療法、免疫療法（例如免疫檢查點抑制劑）、抗血管生成劑、靶向療法、細胞療法、基因治療劑、激素治療劑、細胞因子、姑息治療、治療癌症的手術（例如腫瘤切除術）、一種或多種止吐藥、針對化學療法引起的併發症的其它治療劑或癌症患者的飲食補充劑。
抗血管生成劑可以阻斷支持腫瘤生長的血管的生長。一些抗血管生成劑靶向VEGF或其受體VEGFR。抗血管生成劑的實施例包括但不限於阿西替尼、貝伐單抗、卡博替尼、依維莫司、來那度胺、甲磺酸樂伐替尼、帕唑帕尼、雷莫蘆單抗、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、沙利度胺、凡德他尼和阿柏西普。
「靶向療法」是一種作用於與癌症相關的特定分子的療法，所述特定分子如存在於癌細胞中但不存在於正常細胞中的特定蛋白質或癌細胞中含量更多的特定蛋白質，或癌症微環境中有助於癌症生長和生存的靶分子。靶向療法將治療劑靶向腫瘤，從而使正常組織免受治療劑的影響。
靶向療法可以靶向例如酪胺酸激酶受體和核受體。此類受體的實施例包括erbB1（EGFR或HER1）、erbB2（HER2）、erbB3、erbB4、FGFR、血小板衍生生長因子受體（PDGFR）和胰島素樣生長因子1受體（IGF-1R）、雌激素受體（ER）、核受體（NR）和PR。
靶向療法可以靶向酪胺酸激酶或核受體訊息傳遞中的分子，如Erk和PI3K/Akt、AP-2α、AP-2β、AP-2γ、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、PTEN、p53、p19ARF、Rb、Apaf-1、CD-95/Fas、TRAIL-R1/R2、胱天蛋白酶8、叉頭盒03A、MDM2、IAPs、NF-kB、Myc、P13K、Ras、FLIP、調節蛋白（HRG）（也稱為gp30）、Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bak、Bad、Bok、Bik、Blk、Hrk、BNIP3、BimL、Bid和EGL-1。
靶向療法還可以靶向腫瘤相關的配體，如雌激素、雌二醇（E2）、孕激素、雌激素、雄激素、糖皮質激素、催乳素、甲狀腺激素、胰島素、P70 S6激酶蛋白（PS6）、存活素、成纖維細胞生長因子（FGF）、EGF、Neu分化因子（NDF）、轉化生長因子α（TGF-α）、IL-1A、TGF-β、IGF-1、IGF-II、IGFBP、IGFBP蛋白酶和IL-10。
在另一方面，本揭露內容提供了試劑盒或藥物組合物，其包含可以配製在一種組合物中或配製在不同組合物中的本文提供的抗體或其抗原結合片段和第二治療劑。可以進一步包括使用或適應症的說明書，以提供關於如何進行組合療法的資訊。
實施例
雖然已經參照具體實施方式（其中一些是較佳實施方式）特別顯示和描述了本揭露內容，但本領域中具有通常知識者應理解，在不脫離本文所公開的本揭露內容的精神和範圍的情況下，可以在其中進行形式上和細節上的各種改變。
實施例 1 ：小鼠免疫接種和針對人 CD4 的小鼠抗體的產生
為了產生針對人CD4的抗體，透過PCR獲得編碼與組織胺酸標籤（hCD4-HisTag）、小鼠Fc（hCD4-mFc）和人Fc標籤（hCD4-hFc）融合的hCD4胞外域開放閱讀框的cDNA，並分別再轉殖到表達載體pcDNA3.1（Invitrogen目錄號：V-790）中。在freestyle 293細胞中瞬時表達後，hCD4-HisTag用NTA柱（GE healthcare）純化，hCD4-mFc和hCD4-hFc用蛋白質A柱（GE healthcare）純化。
用以等體積的弗氏完全/不完全佐劑乳化的重組hCD4-mFc（100 μg/小鼠），每2週對BALB/c小鼠進行皮下免疫，持續6週。融合前三天，小鼠透過靜脈內注射不含佐劑的抗原增強免疫。將免疫小鼠的脾細胞（1×10 8）與SP2/0骨髓瘤細胞（1.5×10 7）用PEG Hybri-Max（Sigma Inc.，目錄號：7181）融合。融合後，將細胞以每孔0.1 ml分配至96孔盤中，並在37℃、5% CO 2培養箱中培育。在第1天，向各孔中添加額外0.1 ml含有血清和HAT加2×甲氨蝶呤的培養基。在第3天和第7天，用0.1 ml新鮮HT培養基替換各孔中的0.1 ml培養基。篩選通常發生在第8-9天之間，並透過ELISA測試各孔的培養上清液的hCD4-hFc結合。進行再轉殖以獲得產生單株抗體的個別融合瘤殖株。對每個融合瘤進行多輪（3-4輪）限制性稀釋。對於每一輪再轉殖，透過ELISA結合分析測試殖株。
實施例 2 ：基於結合和基因報告分析選擇抗 hCD4 融合瘤抗體
透過ELISA測量融合瘤抗體與人CD4-hFc之間的結合相互作用。將96孔盤（Costar，目錄號：9018）在4℃下用100 μL含2 μg/ml CD4-hFc（CrownBio）的PBS緩衝液（Hyclone，目錄號：SH30256.01B）塗佈過夜。抽吸各孔，透過添加200 μL含有1%（w/v）牛血清白蛋白（BSA，Roche，目錄號：738328）的阻斷緩衝液並在37℃下培育1小時來阻斷非特異性結合位點。在將各盤用含有0.05%（v/v）Tween20（Sigma，目錄號：P1379）的PBS緩衝液洗滌三次後，向每個孔中添加100 μL融合瘤上清液或在阻斷緩衝液中稀釋的一系列濃度的純化抗體（從20 μg/mL開始），並在室溫下培育1小時。將各盤洗滌並用100 μL/孔含山羊抗小鼠IgG（Thermo，目錄號：31432）的阻斷緩衝液培育60分鐘。在洗滌各盤後，添加100 μL/孔的受質溶液TMB（eBioscience，目錄號：00-4201-56），將各盤在室溫下培育2分鐘，隨後添加100 μL/孔的2N H 2SO 4以停止反應。使用SpectraMax Plus微盤讀取器（Molecular Devices）在450 nm處監測比色訊號。對於純化抗體，使用GraphPad Prism 5分析數據以計算EC 50。
使用穩定表達CD4的293T細胞系（CD4-293T）進行抗CD4抗體的細胞結合分析。將2*10^5個CD4-293T細胞添加至96孔盤的各孔中，並在4℃下用指定的融合瘤上清液或連續濃度的純化抗體（從20 μg/mL開始）培育1小時。在細胞用FACS緩衝液洗滌三次後，將二級抗體（PE山羊抗小鼠：1:200）以100 μl/孔添加至細胞，並在4℃下培育40分鐘。用FACS緩衝液洗滌細胞三次並透過FACS陣列分析。用GraphPad Prism 5計算純化抗體的結合EC 50。
將ELISA和FACS測試中CD4結合陽性的融合瘤殖株用基因報告分析進一步篩選。在96孔盤中，以1*10^4/孔的密度接種40 µL CD4-293T細胞，並用來自CD4-hFc結合陽性融合瘤殖株的20 µL培養基在37℃、5% CO 2下培育30分鐘。然後向各孔中添加含1*10^5個Jurkat-CD16a-NFAT-Luc細胞（ADCC報告T細胞系）的40 µL培養基，並繼續培養4小時，隨後添加100 µL Bright-Glo重構試劑（Promega，目錄號：E2620）。用EnVison多標記盤讀取器（Perkin Elmer）監測各孔的發光訊號。發現在基因報告分析中融合瘤殖株2B6、29B7、33E12、11E12和10C2的上清液可以誘導NFAT活化和螢光素酶表達，表明這些融合瘤殖株可以誘導ADCC效應（圖1）。然後使這些融合瘤殖株適應於無血清培養基，並使用蛋白質A柱（GE healthcare）從上清液中純化抗體。用ELISA定量這些抗體與人CD4的結合（圖2，表4）。
表 4. 透過 ELISA 的融合瘤抗體與 hCD4 結合的 EC50
抗體 33E12 10C2 2B6 11E12 29B7
EC50（ng/ml） 33.95 36.78 26.13 26.98 33.39
實施例 3 ：抗 hCD4 融合瘤抗體基因轉殖、嵌合抗體的產生和表徵
抗hCD4融合瘤殖株33E12、10C2、2B6、11E12、29B7的總RNA透過RNeasy Mini Kit（Qiagen，目錄號：74104）分離，並用作模板以根據製造商的說明，用SuperScript® II反轉錄酶（Life Technology，目錄號：18064-14）合成第一鏈cDNA。然後使用簡併的小鼠IgG引子在50 μl體積的反應混合物中對cDNA產物進行PCR（Kettleborough CA等人, (1993) 《歐洲免疫學雜誌》（European Journal of Immunology） 23:206；Strebe N等人, (2010) 《抗體工程》（Antibody Engineering） 1:3）。反應在S1000TM熱循環儀（Bio-Rad，目錄號：184-2000）中進行以下30個循環：94℃，1.5分鐘變性；50℃，1分鐘退火；72℃，1分鐘合成。在第30個循環結束時，將反應混合物在72℃下再培育7分鐘以進行延伸。在含有0.5 μg/ml溴化乙錠的1%瓊脂糖/Tris-硼酸凝膠中對PCR混合物進行電泳。從凝膠切下具有預期大小的DNA片段（重鏈和輕鏈約450 bp）並純化。將3 μl純化的PCR產物轉殖到pMD-18T載體（Takara，目錄號：D101A）中，並轉化到One Shot® TOP10化學感受態大腸桿菌（Invitrogen，目錄號：C4040-03）中。使用通用的M13正向引子和反向引子透過菌落PCR篩選殖株，從每個反應中選擇5個陽性殖株使用M13正向引子和M13反向引子進行雙向DNA定序。抗體33E12、10C2、2B6、11E12和29B7的重鏈和輕鏈可變區序列列於表2。
由JL3A3.13細胞系（ATCC，目錄號：PTA-6196）產生的MT412抗體是一種嵌合抗體，其在臨床上對CD4+ T細胞耗竭和免疫原性具有強效活性（Prinz JC等人, (1996) 《美國皮膚病學會雜誌》（J Am Acad Dermatol） 34: 244；Moreland LW等人, (1994) 《關節炎與風濕病》 37: 834；Moreland LW等人, (1994) 《關節炎與風濕病》 38: 1581）。透過次世代定序確定抗體MT412的重鏈和輕鏈可變區序列（表2）。
33E12、10C2、2B6、11E12、29B7和MT412嵌合輕鏈分別由小鼠VL區的PCR擴增cDNA與人κ鏈恆定區（SEQ ID NO: 62）連接來構建，其嵌合重鏈由小鼠V H區的cDNA與含有S298A/E333A/K334A突變的人IgG1恆定區連接來構建（Shields RL等人, (2001) 《生物化學雜誌》 276: 6591）。使用經設計以在輕鏈和重鏈上均添加前導序列的PCR引子修飾小鼠cDNA序列的5′端，將編碼各嵌合抗體的輕鏈和重鏈的DNA分別再轉殖到表達載體pcDNA3.1（Invitrogen目錄號：V-790）中。
具有 3A 突變的 IgG1 （ SEQ ID NO: 67 ）
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN A TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI AA TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
免疫球蛋白 κ 鏈恆定區（ SEQ ID NO: 68 ）
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
用100 μg每種嵌合重鏈和輕鏈表達質體轉染Freestyle 293細胞（200 mL，1*10^6/mL），並在37℃下培養6天。然後用蛋白質A柱（GE healthcare）純化上清液中的嵌合抗體。使用上文實施例2中所述的類似方法，透過ELISA（圖3，表5）和FACS（圖4，表6）測量嵌合抗體與CD4的結合。
表 5. 透過 ELISA 的嵌合抗體與 hCD4 結合的 EC50
抗體 33E12 10C2 2B6 11E12 29B7 MT412
EC50（ng/ml） 20.38 17.93 16.52 16.78 24.28 16.47
表 6. 透過 FACS 的嵌合抗體與 hCD4 結合的 EC50
抗體 33E12 10C2 2B6 11E12 29B7 MT412
EC50（ng/ml） 351.4 882.4 669.3 316.1 400.9 515.2
基於透過乳酸脫氫酶（LDH）測量評估的自然殺手（NK）細胞對CD4-293T細胞的殺傷作用，評定了CD4抗體誘導抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）的能力（Broussas M等人, (2013) 《分子生物學方法》（Methods Mol Biol） 988:305）。將懸浮在CTL測試培養基（Cellular Technology Limited）中的CD4-293T（2*10^4個細胞/孔）和人NK細胞（2*10^5個細胞/孔）與連續稀釋的CD4抗體（10 ng/mL、3 ng/mL、1 ng/mL、0.3 ng/mL）一起接種在96孔盤中。在37℃、5% CO 2中培育4小時後，透過使用細胞毒性檢測試劑盒PLUS（LDH）（Roche Applied Science）測量細胞培養上清液的LDH活性。如製造商的方案中所述，計算細胞毒性百分比。如圖5所示，嵌合抗體33E12、10C2、2B6、11E12、29B7和MT412以劑量依賴性方式引起CD4-293T的ADCC。
實施例 4 ：抗體人源化設計、人源化抗體產生和表徵
2B6、29B7和MT412抗體使用如美國專利第5,225,539號中所述的CDR移植方法進行人源化。透過搜索NCBI數據庫http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/igblast.cgi，將鼠抗體2B6、29B7和MT412的輕鏈和重鏈可變鏈序列與結構生物信息學研究協作組（RCSB）蛋白質數據庫中可獲得的序列進行比較。基於序列同源性最高的V H和V L結構，分別生成抗體2B6、29B7和MT412的模型。
透過檢索IMGT/Domain Gap Align 3D結構數據庫http://www.imgt.org/3Dstructure-DB/ cgi/DomainGapAlign.cgi，獲得與2B6、29B7和MT412小鼠抗體具有高序列同源性的人抗體生殖系。人生殖系抗體的框架用作模板，移植小鼠抗體V H和V L的互補決定區（CDR）。對於2B6，選擇的模板人V H是IGHV4-59*11和IGHJ4*01的組合，選擇的模板人V L是IGKV1-39*01和IGKJ2*01的組合。對於29B7，選擇的模板人V H是IGHV1-3*01和IGHJ4*01的組合，選擇的模板人V L是IGKV1-16*01和IGKJ2*01的組合。對於MT412，選擇的模板人V H是IGHV7-4-1*02和IGHJ4*01的組合，選擇的模板人V L是IGKV1-9*01和IGKJ2*01的組合。
前述模板人抗體的CDR胺基酸序列分別被小鼠2B6、29B7和MT412抗體的CDR的胺基酸序列取代。此外，將上述模板人抗體V H和V L的框架移植以小鼠2B6、29B7和MT412抗體的V H和V L的必需胺基酸序列，得到功能性人源化抗體。對於2B6、29B7和MT412的V H和V L，將前述模板人抗體的框架胺基酸的幾個位點復原突變為小鼠2B6、29B7和MT412抗體中的相應胺基酸序列。對於人源化2B6抗體的輕鏈可變區，第4位的胺基酸從Met（M）突變為Leu（L），第71位的胺基酸從Phe（F）突變為Tyr（Y）；而對於人源化2B6抗體的重鏈可變區，第27位的胺基酸從Gly（G）突變為Asp（D），第30位的胺基酸從Ser（S）突變為Thr（T），第47位的胺基酸從Trp（W）突變為Phe（F），第48位的胺基酸從Ile（I）突變為Leu（L），第71位的胺基酸從Val（V）突變為Arg（R）。對於人源化29B7抗體的輕鏈可變區，第46位的胺基酸從Ser（S）突變為Thr（T），第47位的胺基酸從Leu（L）突變為Pro（P），第69位的胺基酸從Thr（T）突變為Gln（Q），第71位的胺基酸從Phe（F）突變為Tyr（Y）；而對於人源化29B7抗體的重鏈可變區，第27位的胺基酸從Tyr（Y）突變為Asp（D），第28位的胺基酸從Thr（T）突變為Ser（S），第29位的胺基酸從Phe（F）突變為Leu（L），第30位的胺基酸從Thr（T）突變為Asn（N），第48位的胺基酸從Met（M）突變為Ile（I），第68位的胺基酸從Val（V）突變為Ala（A），第70位的胺基酸從Ile（I）突變為Leu（L），第72位的胺基酸從Arg（R）突變為Ala（A），第74位的胺基酸從The（T）突變為Ile（I）。對於人源化MT412抗體的輕鏈可變區，第4位的胺基酸從Leu（L）突變為Met（M），第87位的胺基酸從Tyr（Y）突變為Phe（F）；而對於人源化MT412抗體的重鏈可變區，第2位的胺基酸從Val（V）突變為Ile（I）。
人源化2B6抗體的可變輕鏈和可變重鏈的胺基酸序列分別命名為SEQ ID NO: 61和62。人源化29B6抗體的可變輕鏈和可變重鏈的胺基酸序列分別命名為SEQ ID NO: 63和64。人源化MT412抗體的可變輕鏈和可變重鏈的胺基酸序列分別命名為SEQ ID NO: 65和66。
合成編碼人源化2B6、29B7和MT412抗體輕鏈和重鏈的DNA，並轉殖到表達載體pcDNA3.1（Invitrogen，目錄號：V-790）。用100 μg每種人源化重鏈和輕鏈表達質體轉染Freestyle 293細胞（200 mL，106/mL），並在37℃下培養6天。然後用蛋白質A柱（GE healthcare）純化上清液中的人源化抗體。透過ELISA（圖6，表7）和FACS（圖7，表8）測量嵌合抗體與CD4的結合，並且所使用的方法與上文實施例2中所述的方法相似。
表 7. 透過 ELISA 的人源化抗體與 hCD4 結合的 EC50
抗體 2B6 29B7 MT412
EC50（ng/ml） 11.63 5.605 11.61
表 8. 透過 FACS 的人源化抗體與 hCD4 結合的 EC50
抗體 2B6 29B7 MT412
EC50（ng/ml） 211.3 182.0 183.0
還用PBMC評估了人源化CD4抗體誘導ADCC的能力。在96孔盤中，將PBMC（2×10^5個細胞/孔）與一系列濃度的人源化2B6、29B7和MT412抗體（1000 ng/mL、100 ng/mL、10 ng/mL、1 ng/mL、0.1 ng/mL、0 ng/mL）在37℃、5% CO 2下培育4和24小時。然後將AF-488標記的CD4抗體（OKT4-AF488，OKT4抗體的結合表位與人源化2B6、29B7、MT412抗體不重疊）添加至各孔中，在4℃下培育1小時，並用FACS檢測各孔中的活CD4+細胞。ADCC效應透過以下公式計算，顯示在圖8中： ADCC% = (1-在抗體存在下活CD4+細胞數/在抗體不存在下活CD4+細胞數)×100%
透過Biacore分析測量CD4和CD4抗體之間的結合動力學，所述分析在25℃下在Biacore T200儀器上進行。將蛋白質A（GE，目錄號：29139131-AA）用10 mM pH 5.0乙酸鈉稀釋，並使用胺偶聯試劑盒（GE，BR10050）固定在CM5生物傳感器晶片的參考和實驗流動槽上至約15000RU。在每個循環開始時，將稀釋的測試抗體（1.5 μg/mL）注射到實驗流動槽上1分鐘以捕獲。CD4-HisTag分析物系列透過用運行緩衝液將儲備液稀釋至100 nM，然後在相同緩衝液中2倍連續稀釋至0.78 nM來製備。分析物在參考和實驗流動槽上以30 μL/min的流速連續注射3分鐘。使運行緩衝液（具有0.05% P20的PBS）以30 μL/min的流速流過10分鐘。在每個循環結束時，透過以10 μL/min的流速注入10 mM pH 2.0甘胺酸-HCl緩衝液3分鐘使生物傳感器表面再生。對於每次分析物樣品注射（即每個循環），從實驗生物傳感器表面獲得的結合反應透過減去從參考表面同時記錄的反應，然後再減去單個參考運行緩衝液樣品的反應來進行雙參考。透過使用Biaevaluation軟體將整個滴定系列的雙參考傳感圖擬合到Langmuir模型（1:1），同時確定締合和解離速率常數（ka和kd）。解離常數K D由確定的速率常數透過方程K D= kd/ka計算。嵌合和人源化抗CD4抗體與人CD4-HisTag的結合親和力匯總於表9。
表 9. 嵌合和人源化抗 CD4 抗體的結合動力學
抗體 Ka(1/Ms) Kd(1/s) KD(M)
嵌合33E12 1.09E+06 0.004612 4.25E-09
嵌合10C2 1.60E+05 1.90E-04 1.19E-09
嵌合2B6 3.27E+05 1.22E-04 3.73E-10
嵌合11E12 9.87E+05 0.006182 6.26E-09
嵌合29B7 7.09E+05 5.98E-05 8.43E-11
嵌合MT412 5.86E+05 9.41E-04 1.61E-09
人源化2B6 5.20E+05 7.89E-05 1.52E-10
人源化29B7 1.03E+06 4.57E-04 4.44E-10
人源化MT412 1.11E+06 1.99E-03 1.80E-09
表 10. 本申請中提及或使用的序列
SEQ ID NO 序列 說明
1 SGYWN 2B6-HCDR1
2 YISFADTTNYNPSLKS 2B6-HCDR2/11E12-HCDR2
3 DDYGYYAMDY 2B6-HCDR3
4 RASQDIDNYLN 2B6-LCDR1
5 YTSRLHS 2B6-LCDR2/11E12-LCDR2
6 QQGNTLPT 2B6-LCDR3/11E12-LCDR3
7 EVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSGYWNWIRKFPGHKLEFLGYISFADTTNYNPSLKSRVSITRDTSKNQFDLQLKSVTTEDTATYHCARDDYGYYAMDYWGQGISVTVSS 2B6-VH
8 DIHLTQTTSSLSASLGDRVTIICRASQDIDNYLNWYQLKPDGTLKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTEYSLTISNLEREDVATYFCQQGNTLPTFGAGTKLELK 2B6-VL
9 Gaagtgcagcttcaggagtcaggacctagcctcgtgaaaccttctcagactctgtccctcacctgttctgtcactggcgactccatcaccagcggttactggaattggatccggaagttcccaggacataaacttgagtttttggggtacataagtttcgctgataccactaactacaatccatctctcaaaagtcgagtctccatcactcgagacacatccaagaaccagttcgacctgcagttgaagtctgtgactactgaggacacagccacatatcactgtgcaagagatgattatggttattatgcaatggactactggggtcaaggaatatcagtcaccgtctcctca 2B6-VH核酸
10 gatatccacttgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcatttgtagggcaagtcaggacattgacaattatttgaactggtatcagctgaagccagatggaactcttaaactcctgatctactacacatcaagactacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagaatattctctcaccattagcaacctggaacgtgaagatgttgccacttacttttgccaacagggtaatacacttcccacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaa 2B6-VL核酸
11 THWMH 29B7-HCDR1
12 YINPYTGSGEYSQKFKG 29B7-HCDR2
13 DSTGAMDY 29B7-HCDR3
14 KASQDINRYLS 29B7-LCDR1
15 RADRSVD 29B7-LCDR2
16 YDEFPYT 29B7-LCDR3
17 QVQLQQSGAELAKPGASVKMSCKTSADSLNTHWMHWVKQRPGQGLEWIGYINPYTGSGEYSQKFKGKATLTADISSSTAYMQLISLTSEDSAVYYCAYDSTGAMDYWGQGTSVTVSS 29B7-VH
18 DIKMTQSPSSMYASLGERITITCKASQDINRYLSWFQQKPGKSPKTPIYRADRSVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCQQYDEFPYTFGGGTKLEIK 29B7-VL
19 caggtccagcttcagcagtctggggctgaactggcaaaacctggggcctcagtgaagatgtcctgcaagacttctgccgacagccttaatacccactggatgcactgggtaaaacagaggcctggacagggtctggaatggattggatacattaatccttacactggttctggtgaatacagtcagaagttcaagggcaaggccacattgactgcagacatatcctccagcacagcctacatgcaactgatcagcctgacatctgaggactcagcagtctattactgtgcctatgattcgacaggtgccatggactactggggtcagggaacctcagtcaccgtctcctca 29B7-VH核酸
20 gacatcaagatgacccagtctccatcttccatgtatgcatctctaggagagagaatcactatcacttgcaaggcgagtcaggacattaataggtatttaagctggttccagcagaaaccagggaaatctcctaagaccccgatctatcgtgcagacagatcggtagatggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggcaagattattctctcaccatcagcagcctggagtatgaggatatgggaatttattattgtcaacagtatgatgagtttccgtacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaa 29B7-VL核酸
21 SDYAWN 33E12-HCDR1
22 YISYSGITSYNPSLKS 33E12-HCDR2
23 LDSSGYGAMDY 33E12-HCDR3
24 RASQSVSTSSYSYMH 33E12-LCDR1/10C2-LCDR1
25 YASNLES 33E12-LCDR2/10C2-LCDR2
26 QHSWDFPLT 33E12-LCDR3
27 DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISYSGITSYNPSLKSRFSITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCARLDSSGYGAMDYWGQGTSVTVSS 33E12-VH
28 DIVLTQSPASLPVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIRYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWDFPLTFGAGTKLELK 33E12-VL
29 gatgtgcagcttcaggagtcgggacctggcctggtgaaaccttctcagtctctgtccctcacctgcactgtcactggctactcaatcaccagtgattatgcctggaactggatccggcagtttccaggaaacaaactggagtggatgggctacataagctacagtggtatcactagctacaacccatctctcaaaagtcgattctctatcactcgagacacatccaagaaccagttcttcctgcagttgaattctgtgactactgaggacacagccacatattactgtgcaaggctagacagctcgggctacggtgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca 33E12-VH核酸
30 gacattgtgctgacacagtctcctgcttccttacctgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagccaaagtgtcagtacatctagctatagttatatgcactggtaccaacagaaaccaggacagccacccaaactcctcatcaggtatgcatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatactgcaacatattactgtcagcacagttgggactttccgctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaa 33E12-VL核酸
31 SSYWN 11E12-HCDR1
33 DDFGYYAMDY 11E12-HCDR3
34 RASQDINNYLN 11E12-LCDR1
37 EVQLEESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSSYWNWIRKFPGHKLEFLGYISFADTTNYNPSLKSRISITRDTSKNQFDLQLKSVTTEDTATYYCARDDFGYYAMDYWGQGISVTVSS 11E12-VH
38 DIYVTQTTSSLSASLGDRVTIICRASQDINNYLNWYQLKPDGTLKLLIYYTSRLHSGVPSRFGGSGSGTEYSLTISNLEQEDVATYFCQQGNTLPTFGAGTKLELK 11E12-VL
39 gaagtacagctggaggagtctggacctagcctcgtgaaaccttctcagactctgtccctcacctgttctgtcactggcgactccatcaccagcagttactggaattggatccggaagttcccaggacataaacttgagtttttggggtacataagtttcgctgataccactaactacaatccatctctcaaaagtcgaatctccatcactcgagacacatccaagaaccagttcgacctgcagttgaagtctgtgactactgaggacacagccacatattactgtgcaagagatgattttggttactatgcaatggactactggggtcaagggatatcagtcactgtctcctca 11E12-VH核酸
40 gatatttacgtgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcatttgtagggcaagtcaggacattaacaattatttgaactggtatcagttgaagccagatggaactcttaaactcctgatctactacacatcaagactacactcaggagtcccatcaaggttcggtggcagtgggtctggaacagaatattctctcaccattagcaacctggaacaagaagatgttgccacttacttttgccaacagggtaatacacttcccacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaa 11E12-VL核酸
41 SYWIE 10C2-HCDR1
42 EILPGSGSTNYNEEFTG 10C2-HCDR2
43 SVSASNWYFDV 10C2-HCDR3
46 QHSWEIPPT 10C2-LCDR3
47 EVKLQQSGTELMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWIKQRPGRGLEWIGEILPGSGSTNYNEEFTGRATFTADTFSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSVSASNWYFDVWGAGTTVTVSS 10C2-VH
48 DIVMTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKFLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWEIPPTFGGGTKLEIK 10C2-VL
49 gaggtgaagctgcagcagtctggaactgagttgatgaagcctggggcctcagtgaagatatcctgcaaggctactggctacacattcagtagctactggatagagtggataaagcagaggcctggacgtggccttgagtggattggagagattttacctggaagtggtagtactaactacaatgaggagttcacgggcagggccacattcactgcagatacattttccaatacagcctacatgcaactcagcagcctgacatctgaggactctgccgtctattactgtgcaagatctgtttcggcttccaactggtacttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcgagc 10C2-VH核酸
50 gacattgtgatgacccaatctccagcttccctagctgtgtctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagccaaagtgtcagtacatctagttacagttatatgcactggtaccaacagaagccaggacagccacccaaattcctcatcaaatatgcatccaacctggaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatactgcaacatattactgtcagcacagttgggagattcctcccacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaa 10C2-VL核酸
51 DYSMH MT412-HCDR1
52 WINTETGEPTYADDFKG MT412-HCDR2
53 EDYYGHDGFLY MT412-HCDR3
54 KASQDVVTTVA MT412-LCDR1
55 WASLRHT MT412-LCDR2
56 QQYSSYPYT MT412-LCDR3
57 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSMHWVKQAPGKDLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCAREDYYGHDGFLYWGQGTLVTVSS MT412-VH
58 DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVVTTVAWYQQKPGQSPKLLIYWASLRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQFEDLADYFCQQYSSYPYTFGGGTKLEIK MT412-VL
59 Cagatccagttggtgcagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctggttataccttcacagactattcaatgcactgggtgaagcaggctccaggaaaggatttaaagtggatgggctggataaacactgagactggtgagccaacatatgcagatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctatttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacacggctacatatttctgtgctagagaggactactatggtcacgacgggtttctttactggggccaagggactctggtcactgtctctgca MT412-VH核酸
60 gacattgtgatgacccagtctcacaaattcatgtccacttcagtaggagacagggtcagcatcacctgcaaggccagtcaggatgtggttactactgtagcctggtatcaacagaaaccagggcaatctcctaaactactgatttactgggcatccctccggcacactggagtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccattagcaatgtgcagtttgaagacttggcagattatttctgtcagcaatatagcagctatccgtacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaa MT412-VL核酸
61 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSITSGYWNWIRQPPGKGLEFLGYISFADTTNYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDDYGYYAMDYWGQGTLVTVSS 2B6人源化VH
62 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPTFGQGTKLEIK 2B6人源化VL
63 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGDSLNTHWMHWVRQAPGQRLEWIGYINPYTGSGEYSQKFKGRATLTADISASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAYDSTGAMDYWGQGTLVTVSS 29B7人源化VH
64 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINRYLSWFQQKPGKAPKTPIYRADRSVDGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYDEFPYTFGQGTKLEIK 29B7人源化VL
65 QIQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSMHWVRQAPGQGLEWMGWINTETGEPTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREDYYGHDGFLYWGQGTLVTVSS MT412人源化VH
66 DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQDVVTTVAWYQQKPGKAPKLLIYWASLRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQYSSYPYTFGQGTKLEIKR MT412人源化VL
67 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN ATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI AATISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有3A突變的人IgG1的Fc區
68 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 人免疫球蛋白κ輕鏈恆定區
69 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 人IgG1 Fc區野生型
無
圖1顯示了鼠融合瘤抗CD4抗體對293T-CD16-NFκB基因報告分析的影響。
圖2顯示了透過ELISA測量的鼠融合瘤抗CD4抗體與人CD4的結合EC 50。mIgG1的結合顯示為陰性對照。
圖3顯示了透過ELISA測量的嵌合抗CD4抗體與人CD4的結合EC 50。
圖4顯示了透過FACS測量的嵌合抗CD4抗體與293T-CD4細胞上的人CD4的結合EC 50。
圖5顯示了嵌合抗CD4抗體對NK細胞靶向的CD4+細胞的ADCC的影響。
圖6顯示了透過ELISA測量的人源化抗CD4抗體與人CD4的結合EC 50。
圖7顯示了透過FACS測量的人源化抗CD4抗體與293T-CD4細胞上的人CD4的結合EC 50。
圖8顯示了人源化抗CD4抗體對PBMC中CD4+細胞的ADCC的影響。
無
 
                         序列表
          <![CDATA[<110>  美商冠科生物技术有限公司(Crown Bioscience Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  新型抗CD4抗體]]>
          <![CDATA[<140>  TW111113078]]>
          <![CDATA[<141>  2022-04-06]]>
          <![CDATA[<150>  CN202110373640.7]]>
          <![CDATA[<151>  2021-04-07]]>
          <![CDATA[<160>  69    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Ser Gly Tyr Trp Asn 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Tyr Ile Ser Phe Ala Asp Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Asp Asp Tyr Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213> ]]> 小家鼠
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Thr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly His Lys Leu Glu Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Ser Phe Ala Asp Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Asp Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Leu Lys Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr His Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Asp Tyr Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ile 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Asp Ile His Leu Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ile Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  354]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          gaagtgcagc ttcaggagtc aggacctagc ctcgtgaaac cttctcagac tctgtccctc       60
          acctgttctg tcactggcga ctccatcacc agcggttact ggaattggat ccggaagttc      120
          ccaggacata aacttgagtt tttggggtac ataagtttcg ctgataccac taactacaat      180
          ccatctctca aaagtcgagt ctccatcact cgagacacat ccaagaacca gttcgacctg      240
          cagttgaagt ctgtgactac tgaggacaca gccacatatc actgtgcaag agatgattat      300
          ggttattatg caatggacta ctggggtcaa ggaatatcag tcaccgtctc ctca            354
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  318]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          gatatccact tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc       60
          atcatttgta gggcaagtca ggacattgac aattatttga actggtatca gctgaagcca      120
          gatggaactc ttaaactcct gatctactac acatcaagac tacactcagg agtcccatca      180
          aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagaa tattctctca ccattagcaa cctggaacgt      240
          gaagatgttg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacac ttcccacgtt cggtgctggg      300
          accaagctgg agctgaaa                                                    318
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Thr His Trp Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Tyr Ile Asn Pro Tyr Thr Gly Ser Gly Glu Tyr Ser Gln Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Asp Ser Thr Gly Ala Met Asp Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr Leu Ser 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  ]]>PRT
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Arg Ala Asp Arg Ser Val Asp 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Ala Asp Ser Leu Asn Thr His 
                      20                  25                  30          
          Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Thr Gly Ser Gly Glu Tyr Ser Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Ile Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ile Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Tyr Asp Ser Thr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ile Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Pro Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Arg Ala Asp Arg Ser Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  351]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          caggtccagc ttcagcagtc tggggctgaa ctggcaaaac ctggggcctc agtgaagatg       60
          tcctgcaaga cttctgccga cagccttaat acccactgga tgcactgggt aaaacagagg      120
          cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatcctt acactggttc tggtgaatac      180
          agtcagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca tatcctccag cacagcctac      240
          atgcaactga tcagcctgac atctgaggac tcagcagtct attactgtgc ctatgattcg      300
          acaggtgcca tggactactg gggtcaggga acctcagtca ccgtctcctc a               351
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  321]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atgtatgcat ctctaggaga gagaatcact       60
          atcacttgca aggcgagtca ggacattaat aggtatttaa gctggttcca gcagaaacca      120
          gggaaatctc ctaagacccc gatctatcgt gcagacagat cggtagatgg ggtcccatca      180
          aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctggagtat      240
          gaggatatgg gaatttatta ttgtcaacag tatgatgagt ttccgtacac gttcggaggg      300
          gggaccaagc tggaaataaa a                                                321
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Ser Asp Tyr Ala Trp Asn 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Gly Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<21]]>0>  26]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;211&gt;  9]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;212&gt;  PRT]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;213&gt;  小家鼠]]&gt;
          <br/>
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;400&gt;  26]]&gt;
          <br/>
          <br/><![CDATA[Gln His Ser Trp Asp Phe Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Arg Phe Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Arg Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 
                          85                  90                  95      
          Asp Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>]]>  29
          <![CDATA[<211>  360]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          gatgtgcagc ttcaggagtc gggacctggc ctggtgaaac cttctcagtc tctgtccctc       60
          acctgcactg tcactggcta ctcaatcacc agtgattatg cctggaactg gatccggcag      120
          tttccaggaa acaaactgga gtggatgggc tacataagct acagtggtat cactagctac      180
          aacccatctc tcaaaagtcg attctctatc actcgagaca catccaagaa ccagttcttc      240
          ctgcagttga attctgtgac tactgaggac acagccacat attactgtgc aaggctagac      300
          agctcgggct acggtgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca      360
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  333]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttacctgtat ctctggggca gagggccacc       60
          atctcatgca gggccagcca aagtgtcagt acatctagct atagttatat gcactggtac      120
          caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatcaggt atgcatccaa cctagaatct      180
          ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat      240
          cctgtggagg aggaggatac tgcaacatat tactgtcagc acagttggga ctttccgctc      300
          acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaa                                   333
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Ser Ser Tyr Trp Asn 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  0]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          000
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Asp Asp Phe Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  0]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          000
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  0]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          000
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly His Lys Leu Glu Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Ser Phe Ala Asp Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Asp Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Leu Lys Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Asp Phe Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ile 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Asp Ile Tyr Val Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ile Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Gly Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  354]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          gaagtacagc tggaggagtc tggacctagc ctcgtgaaac cttctcagac tctgtccctc       60
          acctgttctg tcactggcga ctccatcacc agcagttact ggaattggat ccggaagttc      120
          ccaggacata aacttgagtt tttggggtac ataagtttcg ctgataccac taactacaat      180
          ccatctctca aaagtcgaat ctccatcact cgagacacat ccaagaacca gttcgacctg      240
          cagttgaagt ctgtgactac tgaggacaca gccacatatt actgtgcaag agatgatttt      300
          ggttactatg caatggacta ctggggtcaa gggatatcag tcactgtctc ctca            354
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  318]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          gatatttacg tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc       60
          atcatttgta gggcaagtca ggacattaac aattatttga actggtatca gttgaagcca      120
          gatggaactc ttaaactcct gatctactac acatcaagac tacactcagg agtcccatca      180
          aggttcggtg gcagtgggtc tggaacagaa tattctctca ccattagcaa cctggaacaa      240
          gaagatgttg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacac ttcccacgtt cggtgctggg      300
          accaagctgg agctgaaa                                                    318
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Ser Tyr Trp Ile Glu 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Glu Phe Thr 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Ser Val Ser Ala Ser Asn Trp Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  0]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          000
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  0]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          000
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Gln His Ser Trp Glu Ile Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Thr Gly Arg Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Phe Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ser Val Ser Ala Ser Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Phe Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 
                          85                  90                  95      
          Glu Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  360]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          gaggtgaagc tgcagcagtc tggaactgag ttgatgaagc ctggggcctc agtgaagata       60
          tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt agctactgga tagagtggat aaagcagagg      120
          cctggacgtg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaagtggtag tactaactac      180
          aatgaggagt tcacgggcag ggccacattc actgcagata cattttccaa tacagcctac      240
          atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtgc aagatctgtt      300
          tcggcttcca actggtactt cgatgtctgg ggcgcaggga ccacggtcac cgtctcgagc      360
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  333]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          gacattgtga tgacccaatc tccagcttcc ctagctgtgt ctctggggca gagggccacc       60
          atctcatgca gggccagcca aagtgtcagt acatctagtt acagttatat gcactggtac      120
          caacagaagc caggacagcc acccaaattc ctcatcaaat atgcatccaa cctggaatct      180
          ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat      240
          cctgtggagg aggaggatac tgcaacatat tactgtcagc acagttggga gattcctccc      300
          acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa                                   333
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Asp Tyr Ser Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Glu Asp Tyr Tyr Gly His Asp Gly Phe Leu Tyr 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Thr Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Trp Ala Ser Leu Arg His Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly His Asp Gly Phe Leu Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Thr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Trp Ala Ser Leu Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  360]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  59]]>
          cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc       60
          tcctgcaagg cttctggtta taccttcaca gactattcaa tgcactgggt gaagcaggct      120
          ccaggaaagg atttaaagtg gatgggctgg ataaacactg agactggtga gccaacatat      180
          gcagatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat      240
          ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc tagagaggac      300
          tactatggtc acgacgggtt tctttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca      360
          <![CDATA[<210>  60]]>
          <![CDATA[<211>  321]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  60]]>
          gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga cagggtcagc       60
          atcacctgca aggccagtca ggatgtggtt actactgtag cctggtatca acagaaacca      120
          gggcaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccctcc ggcacactgg agtccctgat      180
          cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcagttt      240
          gaagacttgg cagattattt ctgtcagcaa tatagcagct atccgtacac gttcggaggg      300
          gggaccaagc tggaaataaa a                                                321
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  61]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Ser Phe Ala Asp Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Asp Tyr Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  62]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  62]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  63]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Ser Leu Asn Thr His 
                      20                  25                  30          
          Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Thr Gly Ser Gly Glu Tyr Ser Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Ile Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Tyr Asp Ser Thr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  64]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Pro Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Arg Ala Asp Arg Ser Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  65]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly His Asp Gly Phe Leu Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  66]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成的]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Thr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Trp Ala Ser Leu Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  67]]>
          <![CDATA[<211>  330]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人類]]>
          <![CDATA[<400>  67]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ala Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Ala Ala Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330 
          <![CDATA[<210>  68]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人類]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
          1               5                   10                  15      
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
                      20                  25                  30          
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                          85                  90                  95      
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  69]]>
          <![CDATA[<211>  330]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人類]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032

Claims (53)

  1. 一種針對人CD4（hCD4）的分離抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變（V H）區和/或輕鏈可變（V L）區，其中所述重鏈可變區包含： a)     HCDR1，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 1、11、21、31和41， b)    HCDR2，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 2、12、22和42，以及 c)     HCDR3，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 3、13、23、33和43，和/或 其中所述輕鏈可變區包含： d)    LCDR1，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 4、14、24和34， e)     LCDR2，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 5、15和25，以及 f)     LCDR3，其包含選自下組的序列：SEQ ID NO: 6、16、26和46。
  2. 根據請求項1所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述重鏈可變區選自由以下組成的組： a)     重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 1的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 3的序列的HCDR3； b)    重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 11的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 12的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 13的序列的HCDR3； c)     重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 21的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 22的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 23的序列的HCDR3； d)    重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 31的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 33的序列的HCDR3；以及 e)     重鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 41的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 42的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 43的序列的HCDR3。
  3. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述輕鏈可變區選自由以下組成的組： a)     輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 4的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3； b)    輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 14的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 15的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 16的序列的LCDR3； c)     輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 26的序列的LCDR3； d)    輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 34的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3；以及 e)     輕鏈可變區，其包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 46的序列的LCDR3。
  4. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中： a)     所述重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 1的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 3的序列的HCDR3；並且所述輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 4的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3； b)    所述重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 11的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 12的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 13的序列的HCDR3；並且所述輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 14的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 15的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 16的序列的LCDR3； c)     所述重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 21的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 22的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 23的序列的HCDR3；並且所述輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 26的序列的LCDR3； d)    所述重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 31的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 33的序列的HCDR3；並且所述輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 34的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 6的序列的LCDR3；或 e)     所述重鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 41的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 42的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO: 43的序列的HCDR3；並且所述輕鏈可變區包括包含SEQ ID NO: 24的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 25的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO: 46的序列的LCDR3。
  5. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述重鏈可變區包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 61和SEQ ID NO: 63，及其具有至少80%序列同一性但仍保留對CD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
  6. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述輕鏈可變區包含選自由以下組成的組的序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 62和SEQ ID NO: 64，及其具有至少80%序列同一性但仍保留對CD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
  7. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含： a)     包含SEQ ID NO: 7的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 8的序列的輕鏈可變區；或 b)    包含SEQ ID NO: 17的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 18的序列的輕鏈可變區；或 c)     包含SEQ ID NO: 27的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 28的序列的輕鏈可變區；或 d)    包含SEQ ID NO: 37的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 38的序列的輕鏈可變區；或 e)     包含SEQ ID NO: 47的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 48的序列的輕鏈可變區；或 f)     包含SEQ ID NO: 61的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 62的序列的輕鏈可變區；或 g)     包含SEQ ID NO: 63的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 64的序列的輕鏈可變區。
  8. 一種針對人CD4（hCD4）的分離抗體或其抗原結合片段，其包括：包含SEQ ID NO: 65的序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO: 66的序列的輕鏈可變區，及其具有至少80%序列同一性但仍保留對CD4的特異性結合特異性或親和力的同源序列。
  9. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其還包含一個或多個胺基酸殘基取代或修飾，但仍保留對hCD4的特異性結合特異性或親和力。
  10. 根據請求項9所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述取代或修飾中的至少一個在所述V H或V L序列的一個或多個CDR序列中，和/或在一個或多個非CDR區中。
  11. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其還包含免疫球蛋白恆定區，任選地人Ig的恆定區，或任選地人IgG的恆定區。
  12. 根據請求項11所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述恆定區包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恆定區。
  13. 根據請求項12所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述恆定區包含人IgG1的恆定區。
  14. 根據請求項13所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述IgG1包含一個或多個突變，所述突變可以賦予相對於野生型恆定區增加的CDC或ADCC。
  15. 根據請求項14所述的抗體或其抗原結合片段，所述一個或多個突變選自由以下組成的組：S239D、I332E、H268F、S324T S236A、G236A、P247I、A339(D/Q)、D280H、K290S、S298 (D/V)、F243L、R292P、Y300L、P396L、V305I、K290(E/N)、S298G、T299A、K326E、E382V、M428I、S298A、K326A、E333A和K334A，所述突變位點根據EU序列編號。
  16. 根據請求項15所述的抗體或其抗原結合片段，所述一個或多個突變包含S298A、E333A和K334A的組合，所述突變位點根據EU序列編號。
  17. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其是人源化的。
  18. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其是雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段（dsFv）、(dsFv) 2、雙特異性dsFv（dsFv-dsFv'）、二硫鍵穩定的雙功能抗體（ds雙功能抗體）、單鏈抗體分子（scFv）、scFv二聚體（二價雙功能抗體）、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體和二價域抗體。
  19. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其是雙特異性的。
  20. 根據請求項19所述的抗體或其抗原結合片段，其能夠特異性結合hCD4的第一和第二表位，或能夠特異性結合hCD4和第二抗原。
  21. 根據請求項20所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述第二抗原包含免疫相關標靶。
  22. 根據請求項21所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述第二抗原包括PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGF β、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD47、CD122、ICAM-1、IDO、NKG2C、SLAMF7、SIGLEC7、NKp80、CD160、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-7、IL-15、IL-21、CD3、CD16或CD83。
  23. 根據請求項20所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述第二抗原包括腫瘤抗原。
  24. 根據請求項23所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述腫瘤抗原包括腫瘤特異性抗原或腫瘤相關抗原。
  25. 根據請求項23所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述腫瘤抗原包括前列腺特異性抗原（PSA）、CA-125、神經節苷脂G(D2)、G(M2)和G(D3)、CD20、CD52、CD33、Ep-CAM、CEA、鈴蟾素樣肽、HER2/neu、表皮生長因子受體（EGFR）、erbB2、erbB3/HER3、erbB4、CD44v6、Ki-67、癌症相關黏蛋白、VEGF、VEGFR（例如VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3）、雌激素受體、Lewis-Y抗原、TGFβ1、IGF-1受體、EGFα、c-Kit受體、轉鐵蛋白受體、Claudin 18.2、GPC-3、Nectin-4、ROR1、間皮素、PCMA、MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2、pl5、BCR-ABL、E2APRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、IL-2R、CO17-1A、TROP2或LIV-1。
  26. 根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其與一個或多個綴合物部分連接。
  27. 根據請求項26所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述綴合物部分包括清除修飾劑、化學治療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記、酶-受質標記、DNA烷基化劑、拓撲異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑或其它抗癌藥物如雄激素受體抑制劑。
  28. 一種抗體或其抗原結合片段，其與根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段競爭與hCD4結合。
  29. 一種藥物組合物或試劑盒，其包含根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，以及藥學上可接受的載體。
  30. 根據請求項29所述的藥物組合物或試劑盒，其還包含第二治療劑。
  31. 根據請求項30所述的藥物組合物或試劑盒，其中所述第二治療劑包括抗癌劑，如mTOR抑制劑、免疫檢查點抑制劑或T細胞募集抗體。
  32. 根據請求項31所述的藥物組合物或試劑盒，其中所述mTOR抑制劑是坦羅莫司、依維莫司或雷帕黴素。
  33. 根據請求項31所述的藥物組合物或試劑盒，其中所述免疫檢查點抑制劑選自PD-1抗體、PD-L1抗體、PD-L2抗體、LAG-3抗體、TIM-1抗體、CTLA-4抗體、VISTA抗體、B7-H2抗體、B7-H3抗體、B7-H4抗體、B7-H抗體6、ICOS抗體、HVEM抗體、CD160抗體、gp49B抗體、PIR-B抗體、KIR家族受體抗體、TIM-1抗體、TIM-4抗體、BTLA抗體、SIRPα（CD47）抗體、CD4抗體8、284（CD244）抗體、B7.1抗體、B7.2抗體、ILT-2抗體、ILT-4抗體、TIGIT抗體和A2aR抗體。
  34. 根據請求項31所述的藥物組合物或試劑盒，其中所述T細胞募集抗體包括CD19/CD3雙特異性抗體。
  35. 一種分離的多核苷酸，其編碼根據前述請求項中任一項所述的抗體或其抗原結合片段。
  36. 一種載體，其包含根據請求項35所述的分離的多核苷酸。
  37. 一種宿主細胞，其包含根據請求項36所述的載體。
  38. 一種表達根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段的方法，其包括在表達根據請求項36所述的載體的條件下培養根據請求項37所述的宿主細胞。
  39. 一種治療受試者的CD4相關疾病或病況的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段或根據請求項29至30中任一項所述的藥物組合物。
  40. 根據請求項39所述的方法，其中所述CD4相關疾病或病況是癌症、適應性免疫疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病或感染性疾病。
  41. 根據請求項40所述的方法，其中所述癌症選自由以下組成的組：肺癌、支氣管癌、骨癌、肝膽管癌、胰腺癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、腎癌、膀胱癌、頭頸癌、脊柱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、肛門癌、食道癌、胃腸癌、皮膚癌、前列腺癌、垂體癌、胃癌、陰道癌、甲狀腺癌、膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生異常症候群、肉瘤、畸胎瘤、腺癌、白血病、骨髓瘤和淋巴瘤。
  42. 一種檢測樣品中CD4的存在或量的方法，其包括使所述樣品與根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段接觸，並確定所述樣品中CD4的存在或量。
  43. 一種診斷受試者的CD4相關疾病或病況的方法，其包括：a)從所述受試者獲得樣品；b)使從所述受試者獲得的所述樣品與根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段接觸；c)確定所述樣品中CD4的存在或量；以及d)將所述CD4的存在或量與所述受試者的所述CD4相關疾病或病況的存在或狀態相關聯。
  44. 一種消除有需要的受試者體內CD4表達細胞的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段或根據請求項29至30中任一項所述的藥物組合物。
  45. 根據請求項44所述的方法，其中所述CD4表達細胞是調節性T細胞（Treg）。
  46. 一種增強有需要的受試者體內腫瘤微環境的免疫原性的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段或根據請求項29至30中任一項所述的藥物組合物。
  47. 一種提高免疫療法在有需要的受試者體內的療效的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段或根據請求項29至30中任一項所述的藥物組合物。
  48. 根據請求項39至47中任一項所述的方法，其還包括施用第二治療劑。
  49. 根據請求項48所述的方法，其中所述第二治療劑包括抗癌劑，如mTOR抑制劑、免疫檢查點抑制劑和T細胞募集抗體。
  50. 根據請求項49所述的方法，其中所述T細胞募集抗體包括CD19/CD3雙特異性抗體。
  51. 一種根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段在製備用於治療受試者的CD4相關疾病或病況的藥物中的用途。
  52. 一種根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段在製備用於增強有需要的受試者體內腫瘤微環境的免疫原性的藥物中的用途。
  53. 一種根據請求項1至28中任一項所述的抗體或其抗原結合片段在製備用於提高免疫療法在有需要的受試者體內的療效的藥物中的用途。
TW111113078A 2021-04-07 2022-04-06 新型抗ｃｄ４抗體 TW202304997A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110373640.7 2021-04-07
CN202110373640.7A CN113045661B (zh) 2021-04-07 2021-04-07 新型抗cd4抗体

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202304997A true TW202304997A (zh) 2023-02-01

Family

ID=76518866

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111113078A TW202304997A (zh) 2021-04-07 2022-04-06 新型抗ｃｄ４抗體

Country Status (4)

Country Link
US (2) US11254745B1 (zh)
CN (2) CN113045661B (zh)
TW (1) TW202304997A (zh)
WO (1) WO2022216887A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113045661B (zh) * 2021-04-07 2022-06-21 中美冠科生物技术（太仓）有限公司 新型抗cd4抗体
WO2023143478A1 (en) * 2022-01-27 2023-08-03 Crown Bioscience Inc. Novel anti-cd4 and anti-pd-l1 bispecific antibodies

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE143377T1 (de) * 1989-12-27 1996-10-15 Centocor Inc Schimäre immunoglobuline für cd4-rezeptoren
US6136310A (en) * 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
WO2008103905A2 (en) * 2007-02-23 2008-08-28 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Antibodies that specifically bind irta and methods of use
HUE029946T2 (en) * 2008-12-26 2017-04-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Anti-CD4 antibody
CN102649818B (zh) * 2011-02-25 2014-10-08 厦门大学 抗cd4蛋白的单克隆抗体及其活性片段及用途
CN102898525A (zh) * 2012-10-29 2013-01-30 武汉生物制品研究所有限责任公司 重组抗人cd4嵌合抗体
WO2014139131A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 Crown Bioscience, Inc. Use of egfr biomarkers for the treatment of gastric cancer with anti-egfr agents
US11213583B2 (en) 2014-02-05 2022-01-04 Cedars-Sinai Medical Center Methods and compositions for treating cancer and infectious diseases
US20150283269A1 (en) * 2014-04-04 2015-10-08 Crown Bioscience Inc. Reconstituted human immune system in a patient derived xenograft mouse model
CN113045661B (zh) * 2021-04-07 2022-06-21 中美冠科生物技术（太仓）有限公司 新型抗cd4抗体

Also Published As

Publication number Publication date
US11254745B1 (en) 2022-02-22
WO2022216887A1 (en) 2022-10-13
US20220324976A1 (en) 2022-10-13
CN113045661B (zh) 2022-06-21
CN115197320A (zh) 2022-10-18
CN113045661A (zh) 2021-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11643465B2 (en) Anti-PD-1 antibodies
JP7058213B2 (ja) 改変ｊ鎖を有する結合分子
JP7066614B2 (ja) 新規抗ｐｄ－ｌ１抗体
CN108779180B (zh) 新型抗-pd-l1抗体
JP6976322B2 (ja) 新規抗ｃｔｌａ４抗体
JP2018126157A (ja) 抗ｃｄ４０抗体および使用方法
AU2020286284B2 (en) Novel anti-CD39 antibodies
US20210347908A1 (en) Novel anti-sirpa antibodies
JP2017535257A (ja) 免疫応答およびがん治療の増強に使用するための組成物および方法
US11472880B2 (en) Humanized antibodies for CD3
EP3632932A1 (en) Anti-cd40 antibody, antigen binding fragment thereof and medical use thereof
TW202304997A (zh) 新型抗ｃｄ４抗體
US20230357398A1 (en) Novel human antibodies binding to human cd3 epsilon
TWI830761B (zh) 針對cldn18.2和cd3之抗體構建體
TW202313699A (zh) 新型抗ｓｉｒｐａ抗體
TW202334218A (zh) 新型抗ｌａｇ３抗體
CA3228641A1 (en) Fap/cd40 binding molecule and medicinal use thereof
TW202337898A (zh) 新穎的抗－ｔｓｌｐ抗體
TW202241956A (zh) 新穎抗cd24抗體