JP2023507323A - 固形腫瘍の治療のためのメソセリン標的化ｃｄ４０アゴニスト多重特異性抗体コンストラクト - Google Patents

固形腫瘍の治療のためのメソセリン標的化ｃｄ４０アゴニスト多重特異性抗体コンストラクト Download PDF

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Abstract

本発明は、全身的なＣＤ４０の活性化を伴わずにＣＤ４０経路又は腫瘍関連ＡＰＣを特異的に標的化する分子を設計することによる固形腫瘍の治療のためのヒトアゴニストＣＤ４０多重特異性抗体コンストラクトに関する。

Description

本発明は、腫瘍学、具体的には、癌免疫療法の分野に関する。本発明は、全身的なＣＤ４０の活性化を伴わずに腫瘍関連ＡＰＣに対するＣＤ４０経路を特異的に標的化する分子を設計することによるヒトアゴニストＣＤ４０抗体に関する。
抗ＰＤ１などの免疫チェックポイント阻害剤に応答しない癌患者の治療は、急速に変化する免疫療法の分野において、主要な課題及び刺激的な機会の両方となる。固形腫瘍におけるＰＤ１遮断薬に応答する主要な決定因子は、前治療の腫瘍関連Ｔ細胞浸潤の程度であり、リンパ球浸潤が少ない「ｃｏｌｄ」腫瘍を有する患者は最小限の臨床的有用性を示す。臨床データはまだ明らかになっていないが、固形腫瘍ＢｉＴＥ（登録商標）抗体コンストラクト又はＣＡＲ－Ｔ手法などのＰＤ１遮断薬以外の他のＴ細胞標的化免疫療法の臨床効果もまた、「ｃｏｌｄ」腫瘍において制限され得る。Ｔ細胞標的化手法を固形腫瘍へのＴ細胞浸潤を増強することができる治療薬の新規のクラスと組み合わせることは、免疫療法から恩恵を受ける患者の数を最大化するのに重要であり得る。
ＣＤ４０は、樹状細胞、Ｂ細胞及びマクロファージなどの抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって優先的に発現されるＴＮＦ受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。活性化Ｔヘルパー細胞上のその三量体リガンドとの相互作用は、サイトカイン／ケモカイン（インターロイキン－１２［ＩＬ－１２］及びＣｘＣＬ１０など）、抗原提示に関与するタンパク質（ＭＨＣクラスＩ及びＩＩリガンドなど）、Ｔ細胞共刺激リガンド（ＣＤ８０及びＣＤ８６など）、並びに一連の他の免疫調節因子（すなわち、接着分子及び他のＴＮＦＲ）の上方制御を含むＡＰＣ活性化をもたらす。次に、これらの「ライセンス化された」ＡＰＣは、ロバストな適応免疫応答の誘導を引き起こす事象のカスケードを作動させることができる。
ＣＤ４０シグナル伝達を活性化することができる治療学は、抗腫瘍Ｔ細胞の生成を増強し、腫瘍病変へのＴ細胞の直接的な動員を増強するそれらの能力により固形腫瘍に炎症を起こす潜在力を有する。抗ＣＤ４０アゴニストによる前臨床試験は、ＡＰＣ上の架橋抗体によりＣＤ４０を作動させることが、ＡＰＣをライセンス化し、ＣＤ８エフェクターＴ細胞の活性化及び増殖を促進するのを助けるＣＤ４ Ｔ細胞の代わりになることができることを示唆している。加えて、ＣＤ４０活性化マクロファージもまた、直接的な殺腫瘍性機能を発揮し得る。これらの抗ＣＤ４０アゴニスト抗体は、単独又は他の療法と組み合わせて複数の同型腫瘍モデルにおいて有効であることを実証した。これらの前臨床試験に基づいて、複数のＣＤ４０アゴニスト抗体は、固形腫瘍患者の第Ｉ／ＩＩ相臨床試験における調査の下にある。現在までに、これらのモノクローナル抗ＣＤ４０抗体は、臨床効果のいくつかの徴候を示しているが、サイトカイン放出症候群及び肝損傷のエビデンスなどの免疫関連有害作用と関連する場合が多い。これらの毒性は、送達され得るＣＤ４０アゴニストの用量を制限し、したがって、腫瘍関連ＡＰＣ集団におけるＣＤ４０経路の不十分な活性化をもたらして、この治療手法の有効性に負の影響を及ぼす可能性がある。腫瘍組織におけるＣＤ４０シグナル伝達の活性化を限局化することができる治療学は、全身毒性を制限しながら抗腫瘍効果を改善させ得る。
腫瘍局在を達成するために、ＣＤ４０及び腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）であるメソセリン（ＭＳＬＮ）の両方に結合するアゴニスト多重特異性抗体コンストラクトが設計された。ＣＤ４０発現ＡＰＣに対するこの多重特異性抗体コンストラクトのロバストなアゴニスト活性は、隣接するＭＳＬＮ発現細胞の存在に完全に依存する。多重特異性抗体コンストラクトは、ＭＳＬＮ発現細胞の非存在下でＣＤ４０への結合時にＣＤ４０アゴニスト活性を欠くように特別に設計された。加えて、ＩｇＧ Ｆｃドメインへの変異の導入は、Ｆｃ受容体への結合を制限し、それによりＦｃ受容体に媒介されるＣＤ４０アゴニスト活性を妨げる。したがって、本明細書に記載されるＭＳＬＮ依存的なＣＤ４０アゴニスト多重特異性抗体コンストラクトは、主に腫瘍組織に限局される様式でＡＰＣのロバストなＣＤ４０に媒介される活性化を促進し、それにより全身毒性の誘発を最小限に抑える潜在力を有する。
本発明は、
（ｉ）２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む第１の抗体であって、
軽鎖が、第１の可変領域（ＶＬ１）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み；
重鎖が、第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及びＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、並びにＣＨ３領域を含み；
重鎖が、非置換重鎖と比較してヒトＦｃガンマＲＩ受容体に対する重鎖の結合親和性の低減をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含む第１の抗体；及び
（ｉｉ）第２の抗体の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）を含むｓｃＦｖであって、ＶＬ２及びＶＨ２が第１のペプチドリンカーを介して連結され、
ｓｃＦｖが、そのアミノ末端で、重鎖融合タンパク質が形成されるように第２のペプチドリンカーを介して重鎖の各々のカルボキシル末端に融合されるｓｃＦｖを含み；且つ
第１の抗体が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し、刺激し、且つｓｃＦｖが、ヒトメソセリン（ＭＳＬＮ）（配列番号２）に特異的に結合する、多重特異性抗体コンストラクトに関する。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、ＭＳＬＮ依存的な様式でＣＤ４０を特異的に刺激する。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、Ｆｃ受容体結合を制限する変異を含み、それにより、Ｆｃ受容体に依存的なＣＤ４０アゴニズムを低減する。
一実施形態では、２つの軽鎖は同一であり、２つの重鎖融合タンパク質は同一である。
一実施形態では、重鎖は、
（ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
（ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、重鎖は、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、ＶＬ１は、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
ＶＨ１は、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
ＶＬ２は、
それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つＶＨ２は、
それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
一実施形態では、１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、ＶＬ１は、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ１は、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＬ２は、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ２は、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）配列番号５を含むＶＬ１及び配列番号６を含むＶＨ１；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ１及び配列番号１０を含むＶＨ１；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ１及び配列番号１４を含むＶＨ１；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ１及び配列番号１８を含むＶＨ１；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ１及び配列番号２２を含むＶＨ１；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ１及び配列番号２６を含むＶＨ１；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ１及び配列番号３０を含むＶＨ１；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ１及び配列番号３４を含むＶＨ１；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ１及び配列番号３８を含むＶＨ１；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ１及び配列番号４２を含むＶＨ１；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ１及び配列番号４６を含むＶＨ１；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ１及び配列番号５０を含むＶＨ１；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ１及び配列番号５４を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）配列番号２１３を含むＶＬ２及び配列番号２１４を含むＶＨ２；
ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ２及び配列番号２１８を含むＶＨ２；
ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ２及び配列番号２２２を含むＶＨ２；並びに
ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ２及び配列番号２２６を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、軽鎖のＣＬは、配列番号８８３及び配列番号８８４からなる群から選択される。
一実施形態では、重鎖のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、配列番号８８５及び配列番号８８６からなる群から選択される。
一実施形態では、第１のペプチドリンカーは、配列番号８８８～８９３からなる群から選択される。
一実施形態では、第２のペプチドリンカーは、配列番号８８７～８９３からなる群から選択される。
一実施形態では、第１のペプチドリンカーは、配列番号８８９を含み、且つ第２のペプチドリンカーは、配列番号８８７を含む。
一実施形態では、
軽鎖は、配列番号２８６、２９０、２９４、２９８、３０２、３０６、３１０、３１４、３１８、３２２、３２６、３３０、３３６、３４２、３４６、３５０、３５４、３５８、３６２、３６６、３７０、３７４、及び３７８からなる群から選択される配列を含み；且つ
重鎖融合タンパク質は、配列番号２８５、２８９、２９３、２９７、３０１、３０５、３０９、３１３、３１７、３２１、３２５、３２９、３３３、３３７、３４１、３４５、３４９、３５３、３５７、３６１、３６５、３６９、３７３、及び３７７からなる群から選択される配列を含む。
一実施形態では、軽鎖及び重鎖融合タンパク質は、
それぞれ配列番号２８６及び配列番号２８５；
それぞれ配列番号２９０及び配列番号２８９；
それぞれ配列番号２９４及び配列番号２９３；
それぞれ配列番号２９８及び配列番号２９７；
それぞれ配列番号３０２及び配列番号３０１；
それぞれ配列番号３０６及び配列番号３０５；
それぞれ配列番号３１０及び配列番号３０９；
それぞれ配列番号３１４及び配列番号３１３；
それぞれ配列番号３１８及び配列番号３１７；
それぞれ配列番号３２２及び配列番号３２１；
それぞれ配列番号３２６及び配列番号３２５；
それぞれ配列番号３３０及び配列番号３２９；
それぞれ配列番号３３４及び配列番号３３３；
それぞれ配列番号３３８及び配列番号３３７；
それぞれ配列番号３４２及び配列番号３４１；
それぞれ配列番号３４６及び配列番号３４５；
それぞれ配列番号３５０及び配列番号３４９；
それぞれ配列番号３５４及び配列番号３５３；
それぞれ配列番号３５８及び配列番号３５７；
それぞれ配列番号３６２及び配列番号３６１；
それぞれ配列番号３６６及び配列番号３６５；
それぞれ配列番号３７０及び配列番号３６９；
それぞれ配列番号３７４及び配列番号３７３；並びに
それぞれ配列番号３７８及び配列番号３７７
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。
一態様では、本発明は、本発明の抗体コンストラクトの軽鎖をコードするポリヌクレオチドに関する。
一態様では、本発明は、本発明の抗体コンストラクトの重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドに関する。
一態様では、本発明は、抗体コンストラクトの軽鎖をコードするポリヌクレオチド、抗体コンストラクトの重鎖をコードするポリヌクレオチド、又はその両方を含むベクターに関する。
一態様では、本発明は、ベクター又は抗体コンストラクトの軽鎖をコードするポリヌクレオチド及び抗体コンストラクトの重鎖をコードするポリヌクレオチドで形質転換されるか又はトランスフェクトされる宿主細胞に関する。
一態様では、本発明は、本発明の抗体コンストラクトを生成するためのプロセスであって、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含み且つ重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドも含む宿主細胞を、抗体コンストラクトの発現を可能にする条件下で培養すること、及び培養物から生成された抗体コンストラクトを回収することを含むプロセスに関する。
一態様では、本発明は、本発明による抗体コンストラクト及び担体、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤、保存剤又はアジュバントを含む医薬組成物に関する。
一態様では、本発明は、固形腫瘍疾患又は転移性癌疾患を治療するか又は寛解させるための方法であって、必要とする対象に有効量の本発明による抗体コンストラクトを投与する工程を含む方法に関する。
一実施形態では、固形腫瘍疾患は、前述のいずれかに由来する卵巣癌、膵臓癌、中皮腫、肺癌、胃癌及び三種陰性乳癌疾患又は転移性癌疾患からなる群から選択される。
一態様では、本発明は、本発明による抗体コンストラクト、及び任意選択により使用のための指示書を含むキットに関する。
一態様では、本発明は、
（ｉ）２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む第１の抗体であって、
軽鎖が、第１の可変領域（ＶＬ１）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み；
重鎖が、第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及びＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、並びにＣＨ３領域を含み；
重鎖が、非置換重鎖と比較してヒトＦｃガンマＲＩ受容体に対する重鎖の結合親和性の低減をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含む第１の抗体；及び
（ｉｉ）第２の抗体の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）を含むｓｃＦｖであって、ＶＬ２及びＶＨ２が第１のペプチドリンカーを介して連結され、
ｓｃＦｖが、そのアミノ末端で、重鎖融合タンパク質が形成されるように第２のペプチドリンカーを介して重鎖の各々のカルボキシル末端に融合されるｓｃＦｖを含み；且つ
第１の抗体が、ヒトメソセリン（ＭＳＬＮ）（配列番号２）に特異的に結合し、且つｓｃＦｖが、ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し且つ刺激する、多重特異性抗体コンストラクトに関する。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、ＭＳＬＮ依存的な様式でＣＤ４０を特異的に刺激する。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、Ｆｃ受容体結合を制限する変異を含み、それにより、Ｆｃ受容体に依存的なＣＤ４０アゴニズムを低減する。
一実施形態では、２つの軽鎖は同一であり、２つの重鎖融合タンパク質は同一である。
一実施形態では、重鎖は、
（ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
（ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、重鎖は、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、
ＶＬ１は、
それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
ＶＨ１は、
それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
ＶＬ２は、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つ
ＶＨ２は、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、
ＶＬ１は、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ１は、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＬ２は、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
ＶＨ２は、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）配列番号２１３を含むＶＬ１及び配列番号２１４を含むＶＨ１；
ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ１及び配列番号２１８を含むＶＨ１；
ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ１及び配列番号２２２を含むＶＨ１；並びに
ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ１及び配列番号２２６を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）配列番号５を含むＶＬ２及び配列番号６を含むＶＨ２；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ２及び配列番号１０を含むＶＨ２；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ２及び配列番号１４を含むＶＨ２；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ２及び配列番号１８を含むＶＨ２；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ２及び配列番号２２を含むＶＨ２；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ２及び配列番号２６を含むＶＨ２；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ２及び配列番号３０を含むＶＨ２；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ２及び配列番号３４を含むＶＨ２；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ２及び配列番号３８を含むＶＨ２；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ２及び配列番号４２を含むＶＨ２；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ２及び配列番号４６を含むＶＨ２；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ２及び配列番号５０を含むＶＨ２；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ２及び配列番号５４を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、軽鎖のＣＬは、配列番号８８３及び配列番号８８４からなる群から選択される。
一実施形態では、重鎖のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、配列番号８８５及び配列番号８８６からなる群から選択される。
一実施形態では、第１のペプチドリンカーは、配列番号８８８～８９３からなる群から選択される。
一実施形態では、第２のペプチドリンカーは、配列番号８８７～８９３からなる群から選択される。
一実施形態では、第１のペプチドリンカーは、配列番号８８９を含み、且つ第２のペプチドリンカーは、配列番号８８７を含む。
一実施形態では、
軽鎖は、配列番号３８２、３８６、３９０、３９４、３９８、４０２、４０６、４１０、４１４、４１８、４２２、４２６、４３０、４３４、４３８、４４２、４４６、及び４５０からなる群から選択される配列を含み；且つ
重鎖融合タンパク質は、配列番号３８１、３８５、３８９、３９３、３９７、４０１、４０５、４０９、４１３、４１７、４２１、４２５、４２９、４３３、４３７、４４１、４４５、及び４４９からなる群から選択される配列を含む。
一実施形態では、軽鎖及び重鎖融合タンパク質は、
それぞれ配列番号３８２及び配列番号３８１；
それぞれ配列番号３８６及び配列番号３８５；
それぞれ配列番号３９０及び配列番号３８９；
それぞれ配列番号３９４及び配列番号３９３；
それぞれ配列番号３９８及び配列番号３９７；
それぞれ配列番号４０２及び配列番号４０１；
それぞれ配列番号４０６及び配列番号４０５；
それぞれ配列番号４１０及び配列番号４０９；
それぞれ配列番号４１４及び配列番号４１３；
それぞれ配列番号４１８及び配列番号４１７；
それぞれ配列番号４２２及び配列番号４２１；
それぞれ配列番号４２６及び配列番号４２５；
それぞれ配列番号４３０及び配列番号４２９；
それぞれ配列番号４３４及び配列番号４３３；
それぞれ配列番号４３８及び配列番号４３７；
それぞれ配列番号４４２及び配列番号４４１；
それぞれ配列番号４４６及び配列番号４４５；並びに
それぞれ配列番号４５０及び配列番号４４９
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。
一態様では、本発明は、
ａ）それぞれ第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１のＣＨ１ドメインを含む２つの同一な重鎖融合タンパク質（第１のＣＨ１ドメインは、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドに連結され、且つヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）に連結され、ＶＨ２は、第２のＣＨ１ドメインに連結され；
ｉ）ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含み；且つ
ｉｉ）ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３に対応する残基からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）；並びに
ｂ）第１の軽鎖を含む第２のポリペプチド（第１の軽鎖は、第１の軽鎖可変領域（ＶＬ１）及び第１のＣＬ領域を含み；且つＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）；並びに
ｃ）第２の軽鎖を含む第３のポリペプチド（第２の軽鎖は、第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２のＣＬ領域を含み；且つＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）
を含む多重特異性抗体コンストラクトであって、
ＶＨ１及びＶＬ１が相互作用して第１の抗原に結合し、且つＶＨ２及びＶＬ２が相互作用して、第２の抗原に結合し；
ここで、
第１の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり、且つ第２の抗原が、ヒトメソセリン（「ＭＳＬＮ」；配列番号２）であるか；又は
第１の抗原が、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり、且つ第２の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）である多重特異性抗体コンストラクトに関する。
一態様では、本発明は、
ａ）それぞれ第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１のＣＨ１ドメインを含む２つの同一な重鎖融合タンパク質（第１のＣＨ１ドメインは、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドに連結され、且つヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）に連結され、ＶＨ２は、第２のＣＨ１ドメインに連結され；
ｉ）ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含み；且つ
ｉｉ）ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３に対応する残基からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）；並びに
ｂ）第１の軽鎖を含む第２のポリペプチド（第１の軽鎖は、第１の軽鎖可変領域（ＶＬ１）及び第１のＣＬ領域を含み；且つＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）；並びに
ｃ）第２の軽鎖を含む第３のポリペプチド（第２の軽鎖は、第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２のＣＬ領域を含み；且つＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）
を含む多重特異性抗体コンストラクトであって、
ＶＨ１及びＶＬ１が相互作用して第１の抗原に結合し、且つＶＨ２及びＶＬ２が相互作用して、第２の抗原に結合し；
ここで、
第１の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり、且つ第２の抗原が、ヒトメソセリン（「ＭＳＬＮ」；配列番号２）であるか；又は
第１の抗原が、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり、且つ第２の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）である多重特異性抗体コンストラクトに関する。
一実施形態では、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、ペプチドリンカーを介してＶＨ２に連結される。
一実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）２（配列番号９１６）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号８８８）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）３（配列番号９１７）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号８８９）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）４（配列番号９１８）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号８９０）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）５（配列番号９１９）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）５（配列番号９２０）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）６（配列番号９２１）、及び（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）６（配列番号９２２）からなる群から選択される配列を含む。
一実施形態では、
ａ）ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ３９Ｋ、Ｇ４４Ｋ、及びＳ１８３Ｋからなる群から選択される変異を含み；
ｂ）ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ３９Ｅ、Ｇ４４Ｅ、及びＳ１８３Ｅからなる群から選択される変異を含み；
ｃ）ＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｅ、Ｇ１００Ｅ、及びＳ１７６Ｅからなる群から選択される変異を含み；且つ
ｄ）ＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｋ、Ｇ１００Ｋ、及びＳ１７６Ｋからなる群から選択される変異を含む。
一実施形態では、
ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
ｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）ＶＨ１は、Ｑ３９Ｋ変異を含み且つ第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｂ）ＶＨ２は、Ｑ３９Ｅ変異を含み且つ第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｃ）ＶＬ１は、Ｑ３８Ｅ変異を含み且つ第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
ｄ）ＶＬ２は、Ｑ３８Ｋ変異を含み且つ第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｋ及びＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｅ及びＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｅ及びＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
ｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｋ及びＳ１７６Ｋ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｅ、Ｇ４４Ｅ、及びＳ１８３Ｅからなる群から選択される変異を含み；
ｂ）ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｋ、Ｇ４４Ｋ、及びＳ１８３Ｋからなる群から選択される変異を含み；
ｃ）ＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｋ、Ｇ１００Ｋ、及びＳ１７６Ｋからなる群から選択される変異を含み；且つ
ｄ）ＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｅ、Ｇ１００Ｅ、及びＳ１７６Ｅからなる群から選択される変異を含む。
一実施形態では、
ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
ｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）ＶＨ１は、Ｑ３９Ｅ変異を含み且つ第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｂ）ＶＨ２は、Ｑ３９Ｋ変異を含み且つ第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｃ）ＶＬ１は、Ｑ３８Ｋ変異を含み且つ第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
ｄ）ＶＬ２は、Ｑ３８Ｅ変異を含み且つ第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｅ及びＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｋ及びＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｋ及びＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
ｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｅ及びＳ１７６Ｅ変異を含む。
一実施形態では、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチは、
（ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
（ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチは、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、第１の抗原は、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり且つ第２の抗原は、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり；且つ
ＶＬ１は、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
ＶＨ１は、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
ＶＬ２は、
それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つＶＨ２は、
それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
６４．請求項６３の抗体コンストラクトであって、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、
ＶＬ１は、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ１は、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＬ２は、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ２は、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）配列番号５を含むＶＬ１及び配列番号６を含むＶＨ１；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ１及び配列番号１０を含むＶＨ１；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ１及び配列番号１４を含むＶＨ１；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ１及び配列番号１８を含むＶＨ１；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ１及び配列番号２２を含むＶＨ１；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ１及び配列番号２６を含むＶＨ１；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ１及び配列番号３０を含むＶＨ１；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ１及び配列番号３４を含むＶＨ１；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ１及び配列番号３８を含むＶＨ１；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ１及び配列番号４２を含むＶＨ１；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ１及び配列番号４６を含むＶＨ１；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ１及び配列番号５０を含むＶＨ１；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ１及び配列番号５４を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）配列番号２１３を含むＶＬ２及び配列番号２１４を含むＶＨ２；
ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ２及び配列番号２１８を含むＶＨ２；
ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ２及び配列番号２２２を含むＶＨ２；並びに
ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ２及び配列番号２２６を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一態様では、本発明は、抗体コンストラクトの第１の軽鎖をコードするポリヌクレオチドに関する。
一態様では、本発明は、抗体コンストラクトの第２の軽鎖をコードするポリヌクレオチドに関する。
一態様では、本発明は、抗体コンストラクトの重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドに関する。
一態様では、本発明は、
ａ）抗体コンストラクトの第１の軽鎖をコードするポリヌクレオチド、
ｂ）抗体コンストラクトの第２の軽鎖をコードするポリヌクレオチド、
ｃ）抗体コンストラクトの重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、又は
ｄ）ａ）、ｂ）、及びｃ）の任意の組合せ
を含むベクターに関する。
一態様では、本発明は、本発明によるベクター又はポリヌクレオチドで形質転換されるか又はトランスフェクトされる宿主細胞に関する。
一態様では、本発明は、本発明による抗体コンストラクトを生成するためのプロセスであって、第１の軽鎖をコードするポリヌクレオチド、第２の軽鎖をコードするポリヌクレオチド及び重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、抗体コンストラクトの発現を可能にする条件下で培養すること、及び培養物から生成された抗体コンストラクトを回収することを含むプロセスに関する。
一態様では、本発明は、本発明による抗体コンストラクト及び担体、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤、保存剤又はアジュバントを含む医薬組成物に関する。
一態様では、本発明は、固形腫瘍疾患又は転移性癌疾患を治療するか又は寛解させるための方法であって、必要とする対象に有効量の本発明による抗体コンストラクトを投与する工程を含む方法に関する。
一実施形態では、固形腫瘍疾患は、前述のいずれかに由来する卵巣癌、膵臓癌、中皮腫、肺癌、胃癌及び三種陰性乳癌疾患又は転移性癌疾患からなる群から選択される。
一態様では、本発明は、本発明による抗体コンストラクト、及び任意選択により使用のための指示書を含むキットに関する。
一実施形態では、第１の抗原は、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり且つ第２の抗原は、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり；
ＶＬ１は、
それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
ＶＨ１は、
それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
ＶＬ２は、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つ
ＶＨ２は、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、
ＶＬ１は、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ１は、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＬ２は、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
ＶＨ２は、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）配列番号２１３を含むＶＬ１及び配列番号２１４を含むＶＨ１；
ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ１及び配列番号２１８を含むＶＨ１；
ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ１及び配列番号２２２を含むＶＨ１；並びに
ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ１及び配列番号２２６を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）配列番号５を含むＶＬ２及び配列番号６を含むＶＨ２；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ２及び配列番号１０を含むＶＨ２；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ２及び配列番号１４を含むＶＨ２；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ２及び配列番号１８を含むＶＨ２；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ２及び配列番号２２を含むＶＨ２；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ２及び配列番号２６を含むＶＨ２；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ２及び配列番号３０を含むＶＨ２；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ２及び配列番号３４を含むＶＨ２；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ２及び配列番号３８を含むＶＨ２；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ２及び配列番号４２を含むＶＨ２；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ２及び配列番号４６を含むＶＨ２；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ２及び配列番号５０を含むＶＨ２；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ２及び配列番号５４を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一態様では、本発明は、ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し、それを刺激する抗原結合タンパク質であって、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗原結合タンパク質に関し、
ＶＬは、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つ
ＶＨは、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、Ｆｃ受容体結合を制限する変異を含み、それにより、Ｆｃ受容体に依存的なＣＤ４０アゴニズムを低減する。
一実施形態では、
ＶＬ及びＶＨは、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ
からなる群から選択される。
一実施形態では、
ＶＬは、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
ＶＨは、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
ＶＬ及びＶＨは、
ａ）配列番号５を含むＶＬ及び配列番号６を含むＶＨ；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ及び配列番号１０を含むＶＨ；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ及び配列番号１４を含むＶＨ；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ及び配列番号１８を含むＶＨ；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ及び配列番号２２を含むＶＨ；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ及び配列番号２６を含むＶＨ；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ及び配列番号３０を含むＶＨ；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ及び配列番号３４を含むＶＨ；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ及び配列番号３８を含むＶＨ；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ及び配列番号４２を含むＶＨ；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ及び配列番号４６を含むＶＨ；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ及び配列番号５０を含むＶＨ；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ及び配列番号５４を含むＶＨ
からなる群から選択される。
一実施形態では、重鎖は、
（ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
（ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、重鎖は、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、抗原結合タンパク質はさらに、ＶＬに連結された軽鎖ＣＬポリペプチドを含み、ＣＬポリペプチドは、配列番号８８３及び配列番号８８４からなる群から選択される。
一実施形態では、抗原結合タンパク質はさらに、重鎖ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドを含み、ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、配列番号８８５及び配列番号８８６からなる群から選択される。
一実施形態では、抗原結合タンパク質はさらに、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む。
一実施形態では、第２の抗原は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。
ヒトＭＳＬＮを発現するＣＨＯ細胞に対する抗ＭＳＬＮ抗体の細胞上での結合を示す。 ヒトＢ細胞アッセイにおける架橋の有り無し両方の抗ＣＤ４０抗体の活性を示す。 二価二重特異性抗体形式を示す。 様々なレベルのＭＳＬＮを発現する細胞株の作製を示す。 マウスにおける抗ＣＤ４０×ＭＳＬＮ二重特異性分子の薬物動態特性及び安定性を示す。 ＭＣ３８－ヒトＥＰＣＡＭ及びＢ１６Ｆ１０－ヒトＥＰＣＡＭ発現細胞株の作製を示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子の活性を示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子の活性を示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子が、インビボで腫瘍に局在化され、ＴＡＡに媒介される架橋依存的な活性を有することを示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子が、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗腫瘍応答を増強することを示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子が、インビボで腫瘍に局在化され、ＴＡＡに媒介される架橋依存的な活性を有することを示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子が、全身性サイトカインのレベルを増大させないか又は肝臓炎症を増大させないことを示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子が、全身性サイトカインのレベルを増大させないか又は肝臓炎症を増大させないことを示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子が、単独で及びＰＤ１／ＰＤＬ１遮断薬と組み合わせて確立されたＭＣ３８－ヒトＥＰＣＡＭ腫瘍の退縮を誘導することを示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子が、単独で及びＰＤ１／ＰＤＬ１遮断薬と組み合わせて確立されたＭＣ３８－ヒトＥＰＣＡＭ腫瘍の退縮を誘導することを示す。 マウス代理抗ＣＤ４０×ヒトＥＰＣＡＭ二重特異性分子が、腫瘍再チャレンジから保護する長期間の免疫記憶を誘導することを示す。
別段の指示がない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、一連のあらゆる要素を指すと理解すべきである。当業者であれば、単なる通例的な実験により、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識することになるか又は確認することができるであろう。そのような均等物は、本発明に包含されることが意図されている。
用語「及び／又は」は、本明細書のいずれの箇所で使用される場合でも、「及び」、「又は」及び「前記用語によって接続される要素の全て又は任意の他の組合せ」の意味を含む。
用語「約」又は「近似的に」は、本明細書で使用されるとき、所与の値又は範囲の±２０％以内、好ましくは±１５％以内、より好ましくは±１０％以内及び最も好ましくは±５％以内を意味する。
本明細書及びそれに続く特許請求の範囲の全体において、文脈上他の意味が要求されない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのバリエーションは、述べられる整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群を含むことを意味するが、任意の他の整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群を除外することを意味するものではないことを理解されたい。本明細書で使用する場合、用語「含む」は、用語「含有する」若しくは「包含する」又は本明細書で使用する場合にはときに用語「有する」とも置き換えることができる。
本明細書で使用する場合、「～からなる」は、請求項の要素で特定されていない任意の要素、工程、又は成分を除外する。本明細書で使用する場合、「～から本質的になる」は、請求項の基本的及び新規の特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程を除外しない。
本明細書では、各場合において、「含む」、「から本質的になる」及び「からなる」という用語のいずれかは、他の２つの用語のいずれかに置き換えられてもよい。
本明細書で使用する場合、用語「抗原結合タンパク質」は、１つ以上の標的抗原に特異的に結合するタンパク質を指す。抗原結合タンパク質には、抗体及びその機能的断片を含めることができる。「機能的抗体断片」とは、完全長の重鎖及び／又は軽鎖に存在するアミノ酸の少なくとも一部を欠くが、それでもなお抗原に特異的に結合することができる、抗体の一部である。機能的抗体断片としては、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、及び相補性決定領域（ＣＤＲ）断片が挙げられるが、これらに限定されず、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、又はラクダ科の動物などの任意の哺乳動物源に由来するものとすることができる。機能的抗体断片は、標的抗原の結合について、インタクトな抗体と競合する場合があり、断片は、インタクトな抗体の修飾（例えば、酵素的又は化学的切断）によって生成され得るか、又は組換えＤＮＡ技術又はペプチド合成を使用して新規に合成され得る。
用語「抗体コンストラクト」は、その構造及び／又は機能が抗体、例えば完全長又は完全免疫グロブリン分子の構造及び／又は機能に基づく分子を指す。したがって、抗体コンストラクトは、その特異的な標的又は抗原に結合することができる。さらに、本発明による抗体コンストラクトは、標的結合を可能にする抗体の最小限の構造要件を含む。この最小限の要件は、例えば、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわち、ＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び／又は３つの重鎖ＣＤＲ（すなわち、ＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）、好ましくは６つ全てのＣＤＲの存在により定義され得る。本発明によるコンストラクトが基づく抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ抗体、脱免疫抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、抗体を含む。本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、２つの軽鎖ポリペプチド（それぞれ約２５ｋＤａ）及び２つの重鎖ポリペプチド（それぞれ約５０～７０ｋＤａ）を含む四量体免疫グロブリンタンパク質を指す。「軽鎖」又は「免疫グロブリン軽鎖」という用語は、アミノ末端からカルボキシル末端までに、単一の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）及び単一の免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含むポリペプチドを指す。免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）は、カッパ（κ）又はラムダ（λ）とすることができる。「重鎖」又は「免疫グロブリン重鎖」という用語は、アミノ末端からカルボキシル末端までに、単一の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）、免疫グロブリンヒンジ領域、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン２（ＣＨ２）、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン３（ＣＨ３）及び任意選択により、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン４（ＣＨ４）を含むポリペプチドを指す。重鎖は、ミュー（μ）、デルタ（Δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）及びイプシロン（ε）として分類され、抗体のアイソタイプを、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥと定義する。ＩｇＧクラス抗体及びＩｇＡクラス抗体は、サブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２に、それぞれさらに分けられる。ＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、及びＩｇＤ抗体の重鎖は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を有し、ＩｇＭ抗体及びＩｇＥ抗体の重鎖は、４つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４）を有する。免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、サブタイプを含む任意の免疫グロブリンアイソタイプに由来するものとすることができる。抗体鎖は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間（すなわち、軽鎖と重鎖との間）、及び抗体重鎖のヒンジ領域間の、ポリペプチド間ジスルフィド結合を介して連結されている。
ヒト抗体において、ＣＨ１は、ＥＵインデックスの１１８位～２１５位でアミノ酸配列を有する領域を意味する。「ヒンジ領域」と呼ばれる高度に柔軟なアミノ酸領域は、ＣＨ１とＣＨ２の間に存在する。ＣＨ２は、ＥＵインデックスの２３１位～３４０位でアミノ酸配列を有する領域を表し、ＣＨ３は、ＥＵインデックスの３４１位～４４６位でアミノ酸配列を有する領域を表す。
「ＣＬ」は、軽鎖の定常領域を表す。ヒト抗体においてκ鎖の場合、ＣＬは、ＥＵインデックスの１０８位～２１４位でアミノ酸配列を有する領域を表す。λ鎖において、ＣＬは、１０８位～２１５位でアミノ酸配列を有する領域を表す。
Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）におけるＥＵインデックス及びＡＨｏ付番スキーム（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ Ａ．ａｎｄ Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ Ａ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００１ Ｊｕｎ ８：３０９（３）：６５７－７０）の両方が、本発明において使用され得る。所与の抗体のアミノ酸位置並びに相補性決定領域（ＣＤＲ）及びフレームワーク領域（ＦＲ）は、いずれの系を使用しても同定され得る。例えば、３９、４４、１８３、３５６、３５７、３６０、３７０、３９２、３９９、及び４０９のＥＵ重鎖位置はそれぞれ、ＡＨｏ重鎖位置４６、５１、２３０、４８４、４８５、４９１、５０１、５２８、５３５、及び５５１と同一である。
一態様では、本発明は、ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し、それを刺激する抗原結合タンパク質であって、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗原結合タンパク質に関し、
ＶＬは、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つ
ＶＨは、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
一実施形態では、
ＶＬ及びＶＨは、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ
からなる群から選択される。
一実施形態では、
ＶＬは、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
ＶＨは、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
ＶＬ及びＶＨは、
ａ）配列番号５を含むＶＬ及び配列番号６を含むＶＨ；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ及び配列番号１０を含むＶＨ；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ及び配列番号１４を含むＶＨ；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ及び配列番号１８を含むＶＨ；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ及び配列番号２２を含むＶＨ；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ及び配列番号２６を含むＶＨ；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ及び配列番号３０を含むＶＨ；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ及び配列番号３４を含むＶＨ；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ及び配列番号３８を含むＶＨ；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ及び配列番号４２を含むＶＨ；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ及び配列番号４６を含むＶＨ；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ及び配列番号５０を含むＶＨ；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ及び配列番号５４を含むＶＨ
からなる群から選択される。
一実施形態では、抗原結合タンパク質はさらに、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む。
一実施形態では、第２の抗原は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。
本発明による「抗体コンストラクト」は、ＶＨ、ＶＨＨ、ＶＬ、（ｓ）ｄＡｂ、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は「ｒＩｇＧ」（「半抗体」）などの全長抗体の断片である。本発明による抗体コンストラクトはまた、ｓｃＦｖ、ジ－ｓｃＦｖ又はバイ（ｓ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ダイアボディ、一本鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ’ｓ）、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖ、以下の：（ＶＨ－ＶＬ－ＣＨ３）２、（ｓｃＦｖ－ＣＨ３）２、（（ｓｃＦｖ）２－ＣＨ３＋ＣＨ３）、（（ｓｃＦｖ）２－ＣＨ３）又は（ｓｃＦｖ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ）２のような構造により例示される「ミニボディ」、マルチボディ、例えば、トリアボディ又はテトラボディなど、及び単一ドメイン抗体、例えば、他のＶ領域又はドメインと無関係に抗原又はエピトープに特異的に結合する、ＶＨＨ、ＶＨ又はＶＬであり得る１つの可変ドメインのみを含むナノボディ又は単一可変ドメイン抗体などの抗体バリアントとも呼ばれる抗体の改変された断片であってもよい。また、「抗体コンストラクト」の定義には、抗体及び抗体コンストラクトの複数の型を組み込む多重特異性分子、例えば、ＩｇＧに連結されたＦａｂ断片を含むＩｇＧに連結されたｓｃＦｖ又はＩｇＧ－Ｆａｂを含むＩｇＧ－ｓｃＦｖが含まれる。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖に連結されたｓｃＦｖは、「重鎖融合タンパク質」と呼ばれる。別の実施形態では、免疫グロブリン重鎖に連結されたＶＨ－ＣＨ１ポリペプチドが、「重鎖融合タンパク質」と呼ばれる。
「結合ドメイン」、又は「抗原結合ドメイン」は通常、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み得るが；それは、両方を含む必要はない。Ｆｄ断片は、例えば、２つのＶＨ領域を有し、多くの場合、インタクトな抗原結合ドメインの一部の抗原結合機能を保持している。抗体断片、抗体バリアント又は結合ドメインの形式についてのさらなる例としては、（１）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインを有する一価の断片であるＦａｂ断片；（２）ヒンジ領域でのジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を有する二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（３）２つのＶＨ及びＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片；（４）抗体の１つのアームのＶＬ及びＶＨドメインを有するＦｖ断片、（５）ＶＨドメインを有するｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；（６）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、並びに（７）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）が挙げられ、後者が好ましい（例えば、ｓｃＦＶライブラリー由来のもの）。本発明による抗体コンストラクトの実施形態の例は、例えば、国際公開第００／００６６０５号パンフレット、国際公開第２００５／０４０２２０号パンフレット、国際公開第２００８／１１９５６７号パンフレット、国際公開第２０１０／０３７８３８号パンフレット、国際公開第２０１３／０２６８３７号パンフレット、国際公開第２０１３／０２６８３３号パンフレット、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２８５号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３０２０３７号明細書、国際公開第２０１４／１４４７２２号パンフレット、国際公開第２０１４／１５１９１０号パンフレット、及び国際公開第２０１５／０４８２７２号パンフレットに記載されている。
さらに、用語「抗体コンストラクト」の定義は、一価、二価及び多価（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）／多価（ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ）コンストラクト、したがって、１つのみの抗原性構造に特異的に結合する単一特異性コンストラクト並びに異なる結合ドメインを通じて２つ以上の抗原性構造、例えば２つ、３つ以上に特異的に結合する二重特異性及び多重特異性コンストラクトを含む。さらに、用語「抗体コンストラクト」の定義は、１つのみのポリペプチド鎖からなる分子及び鎖が同一（ホモ二量体、ホモ三量体若しくはホモオリゴマー）であるか、又は異なる（ヘテロ二量体、ヘテロ三量体若しくはヘテロオリゴマー）かのいずれかであり得る２つ以上のポリペプチド鎖からなる分子を含む。上で特定された抗体及びバリアント又はその誘導体に関する例は、とりわけ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）及びＵｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９９）、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２ｎｄ ｅｄ．２０１０及びＬｉｔｔｌｅ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ ２００９において記載されている。
本発明の抗体コンストラクトは、「インビトロで作製された抗体コンストラクト」であることが好ましい。本用語は、可変領域の全て又は一部（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ）が非免疫細胞の選択、例えばインビトロファージディスプレイ、タンパク質チップ又は抗原結合能に関して候補配列を試験することができる任意の他の方法において作製される、上記定義による抗体コンストラクトを指す。したがって、本用語は、好ましくは、動物の免疫細胞におけるゲノム再編成によってのみ作製される配列を除外する。「組換え抗体」は、組換えＤＮＡ技術又は遺伝子工学の使用により作製された抗体である。
一態様では、本発明は、
（ｉ）２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む第１の抗体であって、
軽鎖が、第１の可変領域（ＶＬ１）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み；
重鎖が、第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及びＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、並びにＣＨ３領域を含み；
重鎖が、非置換重鎖と比較してヒトＦｃガンマＲＩ受容体に対する重鎖の結合親和性の低減をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含む第１の抗体；及び
（ｉｉ）第２の抗体の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）を含むｓｃＦｖであって、ＶＬ２及びＶＨ２が第１のペプチドリンカーを介して連結され、
ｓｃＦｖが、そのアミノ末端で、重鎖融合タンパク質が形成されるように第２のペプチドリンカーを介して重鎖の各々のカルボキシル末端に融合されるｓｃＦｖを含み；且つ
第１の抗体が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し、刺激し、且つｓｃＦｖが、ヒトメソセリン（ＭＳＬＮ）（配列番号２）に特異的に結合する、多重特異性抗体コンストラクトに関する。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、ＭＳＬＮ依存的な様式でＣＤ４０を特異的に刺激する。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、Ｆｃ受容体結合を制限する変異を含み、それにより、Ｆｃ受容体に依存的なＣＤ４０アゴニズムを低減する。
一実施形態では、２つの軽鎖は同一であり、２つの重鎖融合タンパク質は同一である。
一実施形態では、ＶＬ１は、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
ＶＨ１は、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
ＶＬ２は、
それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０；
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つＶＨ２は、
それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
一実施形態では、１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、ＶＬ１は、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ１は、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＬ２は、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ２は、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）配列番号５を含むＶＬ１及び配列番号６を含むＶＨ１；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ１及び配列番号１０を含むＶＨ１；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ１及び配列番号１４を含むＶＨ１；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ１及び配列番号１８を含むＶＨ１；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ１及び配列番号２２を含むＶＨ１；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ１及び配列番号２６を含むＶＨ１；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ１及び配列番号３０を含むＶＨ１；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ１及び配列番号３４を含むＶＨ１；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ１及び配列番号３８を含むＶＨ１；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ１及び配列番号４２を含むＶＨ１；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ１及び配列番号４６を含むＶＨ１；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ１及び配列番号５０を含むＶＨ１；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ１及び配列番号５４を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）配列番号２１３を含むＶＬ２及び配列番号２１４を含むＶＨ２；
ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ２及び配列番号２１８を含むＶＨ２；
ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ２及び配列番号２２２を含むＶＨ２；並びに
ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ２及び配列番号２２６を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、
軽鎖は、配列番号２８６、２９０、２９４、２９８、３０２、３０６、３１０、３１４、３１８、３２２、３２６、３３０、３３６、３４２、３４６、３５０、３５４、３５８、３６２、３６６、３７０、３７４、及び３７８からなる群から選択される配列を含み；且つ
重鎖融合タンパク質は、配列番号２８５、２８９、２９３、２９７、３０１、３０５、３０９、３１３、３１７、３２１、３２５、３２９、３３３、３３７、３４１、３４５、３４９、３５３、３５７、３６１、３６５、３６９、３７３、及び３７７からなる群から選択される配列を含む。
一実施形態では、軽鎖及び重鎖融合タンパク質は、
それぞれ配列番号２８６及び配列番号２８５；
それぞれ配列番号２９０及び配列番号２８９；
それぞれ配列番号２９４及び配列番号２９３；
それぞれ配列番号２９８及び配列番号２９７；
それぞれ配列番号３０２及び配列番号３０１；
それぞれ配列番号３０６及び配列番号３０５；
それぞれ配列番号３１０及び配列番号３０９；
それぞれ配列番号３１４及び配列番号３１３；
それぞれ配列番号３１８及び配列番号３１７；
それぞれ配列番号３２２及び配列番号３２１；
それぞれ配列番号３２６及び配列番号３２５；
それぞれ配列番号３３０及び配列番号３２９；
それぞれ配列番号３３４及び配列番号３３３；
それぞれ配列番号３３８及び配列番号３３７；
それぞれ配列番号３４２及び配列番号３４１；
それぞれ配列番号３４６及び配列番号３４５；
それぞれ配列番号３５０及び配列番号３４９；
それぞれ配列番号３５４及び配列番号３５３；
それぞれ配列番号３５８及び配列番号３５７；
それぞれ配列番号３６２及び配列番号３６１；
それぞれ配列番号３６６及び配列番号３６５；
それぞれ配列番号３７０及び配列番号３６９；
それぞれ配列番号３７４及び配列番号３７３；並びに
それぞれ配列番号３７８及び配列番号３７７
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。
別の態様では、本発明は、
（ｉ）２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む第１の抗体であって、
軽鎖が、第１の可変領域（ＶＬ１）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み；
重鎖が、第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及びＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、並びにＣＨ３領域を含み；
重鎖が、非置換重鎖と比較してヒトＦｃガンマＲＩ受容体に対する重鎖の結合親和性の低減をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含む第１の抗体；及び
（ｉｉ）第２の抗体の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）を含むｓｃＦｖであって、ＶＬ２及びＶＨ２が第１のペプチドリンカーを介して連結され、
ｓｃＦｖが、そのアミノ末端で、重鎖融合タンパク質が形成されるように第２のペプチドリンカーを介して重鎖の各々のカルボキシル末端に融合されるｓｃＦｖを含み；且つ
第１の抗体が、ヒトメソセリン（ＭＳＬＮ）（配列番号２）に特異的に結合し、且つｓｃＦｖが、ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し且つ刺激する、多重特異性抗体コンストラクトに関する。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、ＭＳＬＮ依存的な様式でＣＤ４０を特異的に刺激する。
一実施形態では、多重特異性抗体コンストラクトは、Ｆｃ受容体結合を制限する変異を含み、それにより、Ｆｃ受容体に依存的なＣＤ４０アゴニズムを低減する。
一実施形態では、２つの軽鎖は同一であり、２つの重鎖融合タンパク質は同一である。
一実施形態では、
ＶＬ１は、
それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
ＶＨ１は、
それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
ＶＬ２は、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つ
ＶＨ２は、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２からなる群から選択される。
一実施形態では、
ＶＬ１は、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ１は、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＬ２は、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
ＶＨ２は、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）配列番号２１３を含むＶＬ１及び配列番号２１４を含むＶＨ１；
ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ１及び配列番号２１８を含むＶＨ１；
ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ１及び配列番号２２２を含むＶＨ１；並びに
ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ１及び配列番号２２６を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）配列番号５を含むＶＬ２及び配列番号６を含むＶＨ２；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ２及び配列番号１０を含むＶＨ２；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ２及び配列番号１４を含むＶＨ２；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ２及び配列番号１８を含むＶＨ２；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ２及び配列番号２２を含むＶＨ２；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ２及び配列番号２６を含むＶＨ２；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ２及び配列番号３０を含むＶＨ２；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ２及び配列番号３４を含むＶＨ２；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ２及び配列番号３８を含むＶＨ２；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ２及び配列番号４２を含むＶＨ２；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ２及び配列番号４６を含むＶＨ２；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ２及び配列番号５０を含むＶＨ２；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ２及び配列番号５４を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、軽鎖のＣＬは、配列番号８８３及び配列番号８８４からなる群から選択される。
一実施形態では、重鎖のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、配列番号８８５及び配列番号８８６からなる群から選択される。
一実施形態では、第１のペプチドリンカーは、配列番号８８８～８９３からなる群から選択される。
一実施形態では、第２のペプチドリンカーは、配列番号８８７～８９３からなる群から選択される。
一実施形態では、第１のペプチドリンカーは、配列番号８８９を含み、且つ第２のペプチドリンカーは、配列番号８８７を含む。
一実施形態では、
軽鎖は、配列番号３８２、３８６、３９０、３９４、３９８、４０２、４０６、４１０、４１４、４１８、４２２、４２６、４３０、４３４、４３８、４４２、４４６、及び４５０からなる群から選択される配列を含み；且つ
重鎖融合タンパク質は、配列番号３８１、３８５、３８９、３９３、３９７、４０１、４０５、４０９、４１３、４１７、４２１、４２５、４２９、４３３、４３７、４４１、４４５、及び４４９からなる群から選択される配列を含む。
一実施形態では、軽鎖及び重鎖融合タンパク質は、
それぞれ配列番号３８２及び配列番号３８１；
それぞれ配列番号３８６及び配列番号３８５；
それぞれ配列番号３９０及び配列番号３８９；
それぞれ配列番号３９４及び配列番号３９３；
それぞれ配列番号３９８及び配列番号３９７；
それぞれ配列番号４０２及び配列番号４０１；
それぞれ配列番号４０６及び配列番号４０５；
それぞれ配列番号４１０及び配列番号４０９；
それぞれ配列番号４１４及び配列番号４１３；
それぞれ配列番号４１８及び配列番号４１７；
それぞれ配列番号４２２及び配列番号４２１；
それぞれ配列番号４２６及び配列番号４２５；
それぞれ配列番号４３０及び配列番号４２９；
それぞれ配列番号４３４及び配列番号４３３；
それぞれ配列番号４３８及び配列番号４３７；
それぞれ配列番号４４２及び配列番号４４１；
それぞれ配列番号４４６及び配列番号４４５；並びに
それぞれ配列番号４５０及び配列番号４４９
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。
一実施形態では、軽鎖のＣＬは、配列番号８８３及び配列番号８８４からなる群から選択される。
一実施形態では、重鎖のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、配列番号８８５及び配列番号８８６からなる群から選択される。
一実施形態では、第１のペプチドリンカーは、配列番号８８８～８９３からなる群から選択される。
一実施形態では、第２のペプチドリンカーは、配列番号８８７～８９３からなる群から選択される。
一実施形態では、第１のペプチドリンカーは、配列番号８８９を含み、且つ第２のペプチドリンカーは、配列番号８８７を含む。
本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）又はモノクローナル抗体コンストラクトは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体、すなわち少量存在する可能性がある、考えられる天然に存在する変異及び／又は翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である集団を含む個々の抗体を指す。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、異なる決定基（又はエピトープ）に対して誘導された異なる抗体を通常含む従来の（ポリクローナル）抗体製剤とは対照的に、抗原上の単一の抗原部位又は決定基に対して誘導される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養によって合成されるため、他の免疫グロブリンが混入しない点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。
モノクローナル抗体の調製には、継続的な細胞株培養により産生される抗体をもたらす任意の技術を用いることができる。例えば、使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｅｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作られ得るか、又は組み換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照）によって作られ得る。ヒトモノクローナル抗体を産生するさらなる技術の例としては、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４（１９８３），７２）、及びＥＢＶ－ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５），７７－９６）が挙げられる。
次に、ハイブリドーマを、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）及び表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））分析などの標準的な方法を使用してスクリーニングして、特定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する１つ以上のハイブリドーマを同定することができる。例えば、組換え抗原、天然に存在する形態、その任意のバリアント又は断片、並びにその抗原性ペプチドなど、任意の形態の関連抗原が免疫原として使用され得る。ＢＩＡｃｏｒｅシステムで採用されている表面プラズモン共鳴を使用して、ＭＳＬＮ又はＣＤ４０などの標的抗原のエピトープにファージ抗体が結合する効率を高めることができる（Ｓｃｈｉｅｒ，Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ７（１９９６），９７－１０５、Ｍａｌｍｂｏｒｇ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８３（１９９５），７－１３）。
モノクローナル抗体を作製する別の例示的な方法としては、タンパク質発現ライブラリー、例えばファージディスプレイ又はリボソームディスプレイライブラリーのスクリーニングが挙げられる。ファージディスプレイについては、例えば、Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５，２２３，４０９号明細書；Ｓｍｉｔｈ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１３１５－１３１７、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）に記載されている。
ディスプレイライブラリーの使用に加えて、関連抗原を使用して、非ヒト動物、例えば、齧歯類（マウス、ハムスター、ウサギ又はラットなど）を免疫化することができる。一実施形態では、非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部を含む。例えば、マウス抗体産生が欠損したマウス系統を、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）遺伝子座の大きい断片を用いて改変することが可能である。ハイブリドーマ技術を用いて、所望の特異性を有する遺伝子由来の抗原特異的モノクローナル抗体を作製し、選択し得る。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３－２１、米国特許出願公開第２００３－００７０１８５号明細書、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット及び国際公開第９６／３３７３５号パンフレットを参照されたい。
モノクローナル抗体はまた、非ヒト動物から得た後、当技術分野で知られる組換えＤＮＡ技術を用いて、例えばヒト化、脱免疫、キメラ化などの改変を行うこともできる。改変抗体コンストラクトの例としては、非ヒト抗体のヒト化バリアント、「親和性成熟」抗体（例えば、Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５４，８８９－８９６（１９９２）及びＬｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０，１０８３２－１０８３７（１９９１）を参照）及びエフェクター機能が改変された抗体変異体（例えば、米国特許第５，６４８，２６０号明細書、前掲のＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ（２０１０）及び前掲のＬｉｔｔｌｅ（２００９）を参照）が挙げられる。
免疫学において、親和性成熟とは、免疫反応の過程で抗原に対する親和性の増大した抗体をＢ細胞が産生するプロセスである。同一抗原への反復暴露により、宿主は、親和性が連続的に増大する抗体を産生することになる。天然のプロトタイプと同様に、インビトロ親和性成熟は、変異と選択の原理に基づいている。インビトロ親和性成熟を問題なく使用して、抗体、抗体コンストラクト及び抗体断片を最適化している。ＣＤＲ内のランダム変異は、放射線、化学的変異原又はエラープローンＰＣＲを用いて導入される。加えて、遺伝的多様性は、チェイン・シャッフリング法によって増大させることができる。ファージディスプレイのようなディスプレイ方法を用いた２又は３ラウンドの変異及び選択により、通常、低ナノモル範囲の親和性を有する抗体断片が得られる。
抗体コンストラクトの好ましいタイプのアミノ酸置換変種は、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基の置換を伴うものである。一般に、さらなる開発のために選択されて得られるバリアントは、それらが生成された親抗体と比べて向上した生物学的特性を有することになる。そのような置換バリアントを生成するための簡便な方法には、ファージディスプレイを用いる親和性成熟が含まれる。簡潔に説明すると、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７部位）は、それぞれの部位で可能な全てのアミノ酸置換が生じるように変異される。そのようにして生成された抗体バリアントは、各粒子内にパッケージされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物との融合体として、繊維状ファージ粒子から一価形態で提示される。次に、ファージディスプレイされたバリアントを、本明細書に開示されるとおりにそれらの生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。改変のための超可変領域部位候補を同定するために、アラニンスキャニング変異導入法を実施して、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定し得る。代わりに又は加えて、結合ドメインと例えばヒトＭＳＬＮとの間の接触点を同定するために、抗原－抗体複合体の結晶構造を分析することが有益な場合がある。そのような接触残基及び隣接残基は、本明細書で詳述される技術による置換の候補である。そのようなバリアントを生成してから、バリアントのパネルに対して、本明細書に記載されるとおりのスクリーニングを行い、１つ以上の関連するアッセイにおいて優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択し得る。
本発明のモノクローナル抗体及び抗体コンストラクトは、特に重鎖及び／若しくは軽鎖の一部が特定の種に由来するか、又は特定の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一若しくは相同である一方、鎖の残部は、所望の生物活性を示す限り、別の種に由来するか、又は別の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体並びにそのような抗体の断片中の対応する配列と同一若しくは相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含む（米国特許第４，８１６，５６７号明細書；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））。本明細書における目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体が含まれる。キメラ抗体を作製するための様々な方法が記載されている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６８５１，１９８５；Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２，１９８５、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，８１６，５６７号明細書；Ｂｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，８１６，３９７号明細書；Ｔａｎａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，欧州特許第０１７１４９６号明細書；欧州特許第０１７３４９４号明細書；及び英国特許第２１７７０９６号明細書を参照されたい。
抗体、抗体コンストラクト、抗体断片又は抗体バリアントは、国際公開第９８／５２９７６号パンフレット又は国際公開第００／３４３１７号パンフレットの実施例に開示される方法によるヒトＴ細胞エピトープの特異的欠失（「脱免疫化」と呼ばれる方法）によっても改変され得る。簡潔に説明すると、ＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドについて、抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメインを分析することができる。これらのペプチドは、潜在的なＴ細胞エピトープ（国際公開第９８／５２９７６号パンフレット及び国際公開第００／３４３１７号パンフレットに定義される）に相当する。潜在的なＴ細胞エピトープの検出には、国際公開第９８／５２９７６号パンフレット及び国際公開第００／３４３１７号パンフレットに記載されるとおり、「ペプチドスレッディング法」と呼ばれるコンピューターモデリング手法を適用することができ、加えて、ヒトＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドのデータベースで、ＶＨ及びＶＬ配列に存在するモチーフを検索することができる。これらのモチーフは、１８個の主要ＭＨＣクラスＩＩ ＤＲアロタイプのいずれかに結合するため、潜在的なＴ細胞エピトープとなる。検出された潜在的なＴ細胞エピトープは、可変ドメイン内の少数のアミノ酸残基を置換することにより、又は好ましくは単一のアミノ酸置換により除去することができる。通常、保存的置換がなされる。全てではないが、多くの場合、ヒト生殖細胞系列の抗体配列内の位置に共通するアミノ酸が使用され得る。ヒト生殖細胞系列配列については、例えば、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９２），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８；Ｃｏｏｋ，Ｇ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ Ｖｏｌ．１６（５）：２３７－２４２；及びＴｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＥＭＢＯ Ｊ．１４：１４：４６２８－４６３８に開示されている。Ｖ ＢＡＳＥ総覧は、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的な総覧を提供する（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，ＬＡ．ｅｔ ａｌ．ＭＲＣ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫにより編集）。これらの配列をヒト配列の供給源として、例えばフレームワーク領域及びＣＤＲに使用することができる。例えば、米国特許第６，３００，０６４号明細書に記載されるコンセンサスヒトフレームワーク領域を使用することもできる。
「ヒト化」抗体、抗体コンストラクト、バリアント又はその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は抗体の他の抗原結合部分配列）は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含有する、大部分がヒト配列である抗体又は免疫グロブリンである。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＣＤＲともいう）由来の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、ハムスター又はウサギなどの非ヒト（例えば、齧歯類）種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基により置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合により、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基により置換される。さらに、本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基も含む場合がある。これらの改変は、抗体の性能をさらに洗練させ、最適化するためになされる。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分も含む場合がある。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。
ヒト化抗体又はその断片は、抗原結合に直接関与しないＦｖ可変ドメインの配列をヒトＦｖ可変ドメイン由来の均等な配列で置換することによって生成することができる。ヒト化抗体又はその断片を生成するための例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－１２０７；Ｏｉ ｅｔ ａｌ．（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；並びに米国特許第５，５８５，０８９号明細書；米国特許第５，６９３，７６１号明細書；米国特許第５，６９３，７６２号明細書；米国特許第５，８５９，２０５号明細書；及び米国特許第６，４０７，２１３号明細書により提供される。それらの方法は、重鎖又は軽鎖の少なくとも１つに由来する免疫グロブリンＦｖ可変ドメインの全て又は一部分をコードする核酸配列を単離、操作及び発現することを含む。そのような核酸は、上記のとおりの所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマ及び他の供給源から得ることができる。次に、ヒト化抗体分子をコードする組換えＤＮＡを適切な発現ベクターにクローニングすることができる。
ヒト化抗体は、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子を発現するが、内在性のマウス免疫グロブリン重鎖及び軽鎖遺伝子は発現することができないマウスなどのトランスジェニック動物を用いて作製され得る。Ｗｉｎｔｅｒは、本明細書に記載されるヒト化抗体の調製に使用され得る例示的なＣＤＲ移植法を記載している（米国特許第５，２２５，５３９号明細書）。特定のヒト抗体のＣＤＲの全てが非ヒトＣＤＲの少なくとも一部分で置換され得るか、又はＣＤＲの一部のみが非ヒトＣＤＲで置換され得る。所定の抗原に対するヒト化抗体の結合に必要とされる数のＣＤＲを置換することのみが必要である。
ヒト化抗体は、保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系列置換及び／又は復帰変異の導入によって最適化することができる。このような改変免疫グロブリン分子は、当技術分野で知られる複数の技術のいずれかによって作製することができる（例えば、Ｔｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０：７３０８－７３１２，１９８３；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，４：７２７９，１９８３；Ｏｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９２：３－１６，１９８２、及び欧州特許第２３９４００号明細書）。
用語「ヒト抗体」、「ヒト抗体コンストラクト」及び「ヒト結合ドメイン」は、例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）（前掲）によって記載されているものを含む、当技術分野で知られるヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に実質的に対応する、可変領域及び定常領域又はドメインなどの抗体領域を有する抗体、抗体コンストラクト及び結合ドメインを含む。本発明のヒト抗体、抗体コンストラクト又は結合ドメインは、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム変異誘発若しくは部位特異的変異誘発により、又はインビボでの体細胞変異により導入される変異）を例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３に含み得る。ヒト抗体、抗体コンストラクト又は結合ドメインは、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基で置換された少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超える位置を有し得る。本明細書で使用する場合、ヒト抗体、抗体コンストラクト及び結合ドメインの定義は、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅなどの技術又はシステムを使用することによって得ることができる、非人為的且つ／又は遺伝的に改変された抗体のヒト配列のみを含む完全ヒト抗体も意図している。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体コンストラクトは、「単離された」又は「実質的に純粋な」抗体コンストラクトである。本明細書に開示される抗体コンストラクトを記載するために使用する場合、「単離された」又は「実質的に純粋な」は、その産生環境の成分から同定、分離及び／又は回収された抗体コンストラクトを意味する。好ましくは、抗体コンストラクトは、その産生環境由来の他の全ての成分との会合を有しないか又は実質的に有しない。組換えトランスフェクト細胞から生じる成分などのその産生環境の混入成分は、通常、ポリペプチドについての診断又は治療用途を妨げる材料であり、これは、酵素、ホルモン及び他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質を含み得る。抗体コンストラクトは、例えば、所与の試料中の全タンパク質の少なくとも約５重量％又は少なくとも約５０重量％を占め得る。単離されたタンパク質は、環境に応じて総タンパク質含量の５重量％～９９．９重量％を占め得ると理解される。ポリペプチドが高い濃度レベルで作製されるように、誘導性プロモーター又は高発現プロモーターの使用によって著しく高い濃度でポリペプチドが作製され得る。この定義は、当技術分野で知られる多様な生物体及び／又は宿主細胞での抗体コンストラクトの産生を含む。好ましい実施形態では、抗体コンストラクトは、（１）スピニングカップシークエネーターを用いることによりＮ末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、又は（２）クマシーブルー若しくは好ましくは銀染色法を用いた非還元若しくは還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均一になるまで精製されることになる。ただし、通常、単離された抗体コンストラクトは、少なくとも１つの精製工程によって調製されることになる。
用語「結合ドメイン」は、本発明との関係では、標的分子（抗原）、本明細書においてそれぞれＭＳＬＮ及びＣＤ４０上の所与の標的エピトープ又は所与の標的部位と（特異的に）結合する／それらと相互作用する／それらを認識するドメインを特徴とする。一方の結合ドメインの構造及び機能（ＭＳＬＮの認識）、並びに好ましくは同様にもう一方の結合ドメイン（ＣＤ４０の認識）の構造及び／又は機能は、抗体、例えば、完全長免疫グロブリン分子又は完全免疫グロブリン分子の構造及び／又は機能に基づく。本発明によれば、結合ドメインは、３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわち、ＶＬ領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３）並びに／又は３つの重鎖ＣＤＲ（すなわち、ＶＨ領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３）の存在によって特徴付けられる。結合ドメインは、既存の（モノクローナル）抗体由来のＣＤＲ配列の足場へのグラフトではなく、ファージディスプレイ法又はライブラリースクリーニング法により作製されるか又は得られることが想定される。本発明によれば、結合ドメインは、１つ以上のポリペプチドの形態である。このようなポリペプチドは、タンパク質性部分及び非タンパク質性部分（例えば、化学的リンカー又はグルタルアルデヒドなどの化学的架橋剤）を含み得る。タンパク質（その断片、好ましくは生物学的に活性な断片、及び通常３０個未満のアミノ酸を有するペプチドを含む）は、（アミノ酸の鎖をもたらす）共有ペプチド結合を介して相互に結合された２つ以上のアミノ酸を含む。本明細書で使用する場合、用語「ポリペプチド」は、通常、３０個を超えるアミノ酸からなる分子群を表す。ポリペプチドは、二量体、三量体及びより高次のオリゴマーなどの多量体、すなわち２つ以上のポリペプチド分子からなる多量体をさらに形成し得る。このような二量体、三量体などを形成するポリペプチド分子は、同一であっても同一でなくてもよい。このような多量体の対応する高次構造は、したがって、ホモ又はヘテロ二量体、ホモ又はヘテロ三量体などと称される。ヘテロ多量体の例は、その天然に存在する形態において、２つの同一のポリペプチド軽鎖及び２つの同一のポリペプチド重鎖からなる抗体分子である。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などのような翻訳後修飾による修飾がなされた天然修飾ペプチド／ポリペプチド／タンパク質も指す。本明細書で参照される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、ペグ化などの化学修飾されたものでもあり得る。このような修飾は、当技術分野でよく知られており、本明細書で以下に記載される。
好ましくは、ＭＳＬＮに結合する結合ドメイン及び／又はＣＤ４０に結合する結合ドメインは、ヒト結合ドメインである。少なくとも１つのヒト結合ドメインを含む抗体及び抗体コンストラクトは、齧歯類（例えばマウス、ラット、ハムスター又はウサギ）などの非ヒト可変及び／又は定常領域を有する抗体又は抗体コンストラクトに伴う問題の一部を回避する。このような齧歯類由来タンパク質が存在すると、抗体又は抗体コンストラクトの迅速なクリアランスをもたらす可能性があるか、又は患者による抗体又は抗体コンストラクトに対する免疫反応を発生させる可能性がある。齧歯類由来抗体又は抗体コンストラクトの使用を避けるために、齧歯類が完全ヒト抗体を産生するようにヒト抗体機能を齧歯類に導入することにより、ヒト又は完全ヒト抗体／抗体コンストラクトを生成することができる。
ＹＡＣにおいてメガベースサイズのヒト遺伝子座をクローニング及び再構築する能力並びにそれらをマウス生殖細胞系列に導入する能力は、非常に大きいか又は粗くマッピングされた遺伝子座の機能的要素の解明並びにヒト疾患の有用なモデルの生成にとって強力な手法を提供する。さらに、マウス遺伝子座をそれらのヒト均等物で置換するそのような技術を使用すれば、発生期のヒト遺伝子産物の発現及び調節、それらと他の系との伝達並びに疾患の誘発及び進行へのそれらの関与について独特の見解を得ることができるであろう。
このような戦略の重要な実用化は、マウス液性免疫系の「ヒト化」である。内在性免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子が不活性化されたマウスへのヒトＩｇ遺伝子座の導入により、抗体のプログラムされた発現及び構築並びにＢ細胞の発生におけるそれらの役割の基礎となる機構を研究する機会が得られる。さらに、このような戦略であれば、ヒト疾患における抗体療法の可能性を実現する上で重要なマイルストーンとなる完全ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の作製にとって理想的な供給源を得ることができるであろう。完全ヒト抗体又は抗体コンストラクトは、マウスｍＡｂ又はマウス由来ｍＡｂに固有の免疫原性及びアレルギー反応を最小化し、それによって投与される抗体／抗体コンストラクトの有効性及び安全性を増大させることが期待される。完全ヒト抗体又は抗体コンストラクトの使用により、化合物の反復投与を必要とする慢性及び再発性のヒト疾患、例えば炎症、自己免疫及び癌の治療に大幅な利点が得られるものと期待され得る。
この目標に向けた手法の１つが、マウス抗体の産生に欠損があるマウス系統をヒトＩｇ遺伝子座の大きい断片を用いて操作することであり、これは、このようなマウスが、マウス抗体を生じずに広範なレパートリーのヒト抗体を産生するであろうとの予測に立つものであった。大きいヒトＩｇ断片は、可変遺伝子の広範な多様性並びに抗体の産生及び発現の適切な調節を保持すると考えられる。抗体の多様化及び選択並びにヒトタンパク質に対する免疫寛容の欠如のためにマウス機構を利用することにより、これらのマウス系統において再現されるヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原を含む目的の任意の抗原に対して高親和性の抗体を産生するはずである。ハイブリドーマ技術を使用すれば、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトｍＡｂを容易に作製及び選択することができるであろう。この一般的な戦略は、最初のＸｅｎｏＭｏｕｓｅマウス系統の生成と関連して実証された（Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３－２１（１９９４）を参照）。このＸｅｎｏＭｏｕｓｅ系統は、可変領域及び定常領域のコア配列を含有したヒト重鎖遺伝子座及びカッパ軽鎖遺伝子座のそれぞれ２４５ｋｂ及び１９０ｋｂサイズの生殖細胞系列配置断片を含有する酵母人工染色体（ＹＡＣ）を用いて操作された。このヒトＩｇを含有するＹＡＣは、抗体の再編成及び発現の両方に関してマウス系への適合性があることが証明されており、不活性化されたマウスＩｇ遺伝子を置換することが可能であった。これは、それらがＢ細胞の発生を誘導して、完全ヒト抗体の成体様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトｍＡｂを産生する能力によって実証された。これらの結果はまた、多数のＶ遺伝子、追加の調節エレメント及びヒトＩｇ定常領域を含有するヒトＩｇ遺伝子座の大部分の導入が、感染及び免疫化に対するヒト液性応答を特徴とする実質的に完全なレパートリーを再現し得ることを示唆した。最近、Ｇｒｅｅｎらの研究を発展させ、ヒト重鎖遺伝子座及びカッパ軽鎖遺伝子座のそれぞれのメガベースサイズの生殖細胞系列配置ＹＡＣ断片の導入により、ヒト抗体レパートリーのおよそ８０％超が導入された。Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６（１９９７）及び米国特許出願第０８／７５９，６２０号明細書を参照されたい。
ＸｅｎｏＭｏｕｓｅマウスの作製はさらに、米国特許出願第０７／４６６，００８号明細書、同第０７／６１０，５１５号明細書、同第０７／９１９，２９７号明細書、同第０７／９２２，６４９号明細書、同第０８／０３１，８０１号明細書、同第０８／１１２，８４８号明細書、同第０８／２３４，１４５号明細書、同第０８／３７６，２７９号明細書、同第０８／４３０，９３８号明細書、同第０８／４６４，５８４号明細書、同第０８／４６４，５８２号明細書、同第０８／４６３，１９１号明細書、同第０８／４６２，８３７号明細書、同第０８／４８６，８５３号明細書、同第０８／４８６，８５７号明細書、同第０８／４８６，８５９号明細書、同第０８／４６２，５１３号明細書、同第０８／７２４，７５２号明細書、及び同第０８／７５９，６２０号明細書；並びに米国特許第６，１６２，９６３号明細書；同第６，１５０，５８４号明細書；同第６，１１４，５９８号明細書；同第６，０７５，１８１号明細書、及び同第５，９３９，５９８号明細書並びに日本特許第３０６８１８０Ｂ２号公報、同第３０６８５０６Ｂ２号公報、及び同第３０６８５０７Ｂ２号公報でさらに議論され詳述されている。また、Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６（１９９７）及びＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３－４９５（１９９８）、欧州特許第０４６３１５１Ｂ１号明細書、国際公開第９４／０２６０２号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第００／７６３１０号パンフレット、及び国際公開第０３／４７３３６号パンフレットも参照されたい。
代替的な手法において、ＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．を含む他社は、「ミニ遺伝子座」手法を利用している。ミニ遺伝子座手法では、Ｉｇ遺伝子座からの断片（個々の遺伝子）を含めることにより外因性Ｉｇ遺伝子座が模倣される。したがって、１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、ミュー定常領域及び第２の定常領域（好ましくは、ガンマ定常領域）は、動物に挿入されるコンストラクトを形成する。この手法は、Ｓｕｒａｎｉらに対する米国特許第５，５４５，８０７号明細書、並びにそれぞれＬｏｎｂｅｒｇ及びＫａｙに対する米国特許第５，５４５，８０６号明細書；同第５，６２５，８２５号明細書；同第５，６２５，１２６号明細書；同第５，６３３，４２５号明細書；同第５，６６１，０１６号明細書；同第５，７７０，４２９号明細書；同第５，７８９，６５０号明細書；同第５，８１４，３１８号明細書；同第５，８７７，３９７号明細書；同第５，８７４，２９９号明細書；及び同第６，２５５，４５８号明細書、Ｋｒｉｍｐｅｎｆｏｒｔ及びＢｅｒｎｓに対する米国特許第５，５９１，６６９号明細書及び同第６，０２３．０１０号明細書、Ｂｅｒｎｓらに対する米国特許第５，６１２，２０５号明細書；同第５，７２１，３６７号明細書；及び同第５，７８９，２１５号明細書、並びにＣｈｏｉ及びＤｕｎｎに対する米国特許第５，６４３，７６３号明細書、並びにＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの米国特許出願第０７／５７４，７４８号明細書、同第０７／５７５，９６２号明細書、同第０７／８１０，２７９号明細書、同第０７／８５３，４０８号明細書、同第０７／９０４，０６８号明細書、同第０７／９９０，８６０号明細書、同第０８／０５３，１３１号明細書、同第０８／０９６，７６２号明細書、同第０８／１５５，３０１号明細書、同第０８／１６１，７３９号明細書、同第０８／１６５，６９９号明細書、同第０８／２０９，７４１号明細書に記載されている。欧州特許第０５４６０７３Ｂ１号明細書、国際公開第９２／０３９１８号パンフレット、国際公開第９２／２２６４５号パンフレット、国際公開第９２／２２６４７号パンフレット、国際公開第９２／２２６７０号パンフレット、国際公開第９３／１２２２７号パンフレット、国際公開第９４／００５６９号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９６／１４４３６号パンフレット、国際公開第９７／１３８５２号パンフレット及び国際公開第９８／２４８８４号パンフレット、並びに米国特許第５，９８１，１７５号明細書も参照されたい。さらに、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）、Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．（１９９３）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）及びＴｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９６）を参照されたい。
Ｋｉｒｉｎも、マイクロセル融合によって大きい染色体片又は染色体全体が導入された、マウスからのヒト抗体の産生を実証した。欧州特許出願第７７３２８８号明細書及び同第８４３９６１号明細書を参照されたい。Ｘｅｎｅｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓは、ヒト抗体の潜在的生成技術を開発中である。この技術では、ＳＣＩＤマウスをヒトリンパ細胞、例えばＢ細胞及び／又はＴ細胞で再構成する。次に、マウスは、抗原で免疫化され、その抗原に対して免疫応答を生じ得る。米国特許５，４７６，９９６号明細書；同第５，６９８，７６７号明細書；及び同第５，９５８，７６５号明細書を参照されたい。
ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）反応は、産業界がキメラ又は別の方法でヒト化された抗体を作製する要因となった。しかしながら、ある種のヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）反応は、特に慢性又は複数回用量での抗体の利用において観察されることになると予想される。したがって、ＨＡＭＡ若しくはＨＡＣＡ反応の懸念及び／又は影響をなくすために、ＭＳＬＮに対するヒト結合ドメイン及びＣＤ４０に対するヒト結合ドメインを含む抗体コンストラクトを提供することが望ましいと考えられる。
用語「（特異的に）結合する」、「（特異的に）認識する」、「（特異的に）誘導される」及び「（特異的に）反応する」は、本発明によれば、結合ドメインが標的分子（抗原）、本明細書では、それぞれＭＳＬＮ及びＣＤ４０上の所与のエピトープ又は所与の標的部位と相互作用するか又は特異的に相互作用することを意味する。
用語「エピトープ」は、抗体若しくは免疫グロブリン、又は抗体若しくは免疫グロブリンの誘導体、断片若しくはバリアントなどの結合ドメインが特異的に結合する抗原上の部位を指す。「エピトープ」は、抗原性であり、したがって、エピトープという用語は、本明細書において「抗原性構造」又は「抗原決定基」と称する場合もある。したがって、結合ドメインは、「抗原相互作用部位」である。前記結合／相互作用はまた、「特異的認識」を定義すると理解される。
「エピトープ」は、連続したアミノ酸又はタンパク質の三次元フォールディングによって並列される非連続アミノ酸の両方によって形成され得る。「線状エピトープ」は、アミノ酸一次配列が認識されるエピトープを含むエピトープである。線状エピトープは、通常、特有の配列内に少なくとも３つ又は少なくとも４つ、より一般的に少なくとも５つ又は少なくとも６つ又は少なくとも７つ、例えば約８～約１０のアミノ酸を含む。
「立体構造エピトープ」は、線状エピトープとは対照的に、エピトープを含むアミノ酸の一次配列が、認識されるエピトープを定義する唯一の要素ではないエピトープ（例えば、アミノ酸の一次配列が必ずしも結合ドメインによって認識されないエピトープ）である。一般に、立体構造エピトープは、線状エピトープと比較してより多くのアミノ酸を含む。立体構造エピトープの認識に関して、結合ドメインは、抗原、好ましくはペプチド若しくはタンパク質又はそれらの断片の三次元構造を認識する（本発明との関連では、結合ドメインの１つに対する抗原性構造がＭＳＬＮタンパク質内に含まれる）。例えば、タンパク質分子が折り畳まれて三次元構造が形成する場合、立体構造エピトープを形成する特定のアミノ酸及び／又はポリペプチド骨格が並列した状態になり、それによって抗体がそのエピトープを認識できるようになる。エピトープの立体構造の決定方法としては、Ｘ線結晶学、二次元核磁気共鳴（２Ｄ－ＮＭＲ）分光法、並びに部位特異的スピン標識及び電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）分光法が挙げられるが、これらに限定されない。
エピトープマッピングの方法を以下に記載する。ヒトＭＳＬＮタンパク質の領域（隣接するひと続きのアミノ酸）が、非ヒト及び非霊長類のＭＳＬＮ抗原（例えば、マウスＭＳＬＮであるが、他にニワトリ、ラット、ハムスター、ウサギなどのものも考えられ得る）の対応する領域で交換／置換される場合、使用されている非ヒト、非霊長類のＭＳＬＮに対して結合ドメインが交差反応性でない限り、結合ドメインの結合性の低減が起こると予想される。前述の低減は、ヒトＭＳＬＮタンパク質の対応する領域への結合を１００％とした場合、ヒトＭＳＬＮタンパク質内の対応する領域への結合と比較して好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％；より好ましくは少なくとも６０％、７０％、又は８０％、及び最も好ましくは９０％、９５％又はさらに１００％である。上記のヒトＭＳＬＮ／非ヒトＭＳＬＮのキメラは、ＣＨＯ細胞において発現されることが想定される。ヒトＭＳＬＮ／非ヒトＭＳＬＮのキメラは、ＥｐＣＡＭなど異なる膜結合タンパク質の膜貫通ドメイン及び／又は細胞質ドメインと融合され得るが、そのような手法は、実施例１及び２に記載される方法に必要ではなかった。
エピトープマッピングの代替的又は追加の方法では、結合ドメインによって認識される特定の領域を決定するために、ヒトＭＳＬＮ細胞外ドメインのいくつかの短縮型のバージョンが作製され得る。これらの短縮型のバージョンでは、細胞外の異なるＭＳＬＮドメイン／サブドメイン又は領域は、Ｎ末端から開始して段階的に欠失される。ＣＨＯ細胞において発現され得る短縮型のＭＳＬＮバージョン。また、短縮型のＭＳＬＮバージョンは、ＥｐＣＡＭなどの異なる膜結合タンパク質の膜貫通ドメイン及び／又は細胞質ドメインと融合される場合があることも想定される。また、短縮型のＭＳＬＮバージョンは、それらのＮ末端にシグナルペプチドドメイン、例えばマウスＩｇＧ重鎖シグナルペプチドに由来するシグナルペプチドを包含する場合があることも想定される。さらに、短縮型のＭＳＬＮバージョンは、細胞表面上でのそれらの正確な発現を確認できる（シグナルペプチドに続く）Ｎ末端におけるｖ５ドメインを包含する場合があることも想定される。結合ドメインによって認識されるＭＳＬＮ領域をもはや包含しない短縮型のＭＳＬＮバージョンでは、結合の低減又は喪失が起こると予想される。結合の低減は、ヒトＭＳＬＮタンパク質全体（又はその細胞外領域若しくはドメイン）への結合を１００％とした場合、好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％；より好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、及び最も好ましくは９０％、９５％又はさらに１００％である。
抗体コンストラクト又は結合ドメインによる認識に対する標的抗原の特定の残基の寄与を決定するためのさらなる方法は、分析される各残基を、例えば、部位特異的変異誘発によりアラニンに置き換えるアラニンスキャニング（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＫＬ＆Ｗｅｉｓｓ ＧＡ．Ｃｕｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２００１ Ｊｕｎ；５（３）：３０２－７を参照されたい）である。アラニンが使用される理由は、嵩高くなく、化学的に不活性であり、それでも多くの他のアミノ酸が有している二次構造基準を模倣するメチル官能基を有しているためである。変異される残基のサイズを保存することが望ましい場合、ときにバリン又はロイシンなどの嵩高いアミノ酸が使用され得る。アラニンスキャニングは、長期にわたり使用されてきた成熟した技術である。
結合ドメインと、エピトープ又はエピトープを含む領域との間の相互作用は、結合ドメインが特定のタンパク質又は抗原（本明細書では、それぞれＭＳＬＮ及びＣＤ４０）上のエピトープ／エピトープを含む領域に対して測定可能な親和性を示し、且つ一般にＭＳＬＮ又はＣＤ４０以外のタンパク質又は抗原に対して著しい反応性を示さないことを意味する。「測定可能な親和性」は、約１０－６Ｍ（ＫＤ）又はそれより強い親和性を有する結合を含む。好ましくは、結合親和性が約１０－１２～１０－８Ｍ、１０－１２～１０－９Ｍ、１０－１２～１０－１０Ｍ、１０－１１～１０－８Ｍ、好ましくは約１０－１１～１０－９Ｍである場合、結合を特異的とみなす。結合ドメインが標的と特異的に反応するか又は標的に結合するかどうかは、とりわけ、標的タンパク質又は抗原に対する前記結合ドメインの反応をＭＳＬＮ又はＣＤ４０以外のタンパク質又は抗原に対する前記結合ドメインの反応と比較することにより、容易に試験することができる。好ましくは、本発明の結合ドメインは、ＭＳＬＮ又はＣＤ４０以外のタンパク質又は抗原に本質的に又は実質的に結合しない（例えば、一方の結合ドメインは、ＭＳＬＮ以外のタンパク質に結合することができず、他方の結合ドメインは、ＣＤ４０以外のタンパク質に結合することができない）。
用語「本質的／実質的に結合しない」又は「結合することができない」は、本発明の結合ドメインがＭＳＬＮ又はＣＤ４０以外のタンパク質又は抗原に結合せず、すなわち、ＭＳＬＮ又はＣＤ４０のそれぞれに対する結合を１００％とした場合、ＭＳＬＮ又はＣＤ４０以外のタンパク質又は抗原に対して３０％超、好ましくは２０％超、より好ましくは１０％超、特に好ましくは９％、８％、７％、６％又は５％超の反応性を示さないことを意味する。
特異的結合は、結合ドメイン及び抗原のアミノ酸配列内の特異的モチーフによってもたらされると考えられる。したがって、結合は、それらの一次、二次及び／又は三次構造の結果として、並びに前記構造の二次的修飾の結果として生じる。抗原相互作用部位とその特異抗原との特異的相互作用により、抗原に対する前記部位の単純な結合が生じ得る。さらに、抗原相互作用部位とその特異抗原との特異的相互作用により、例えば抗原の立体構造変化の誘導、抗原のオリゴマー化などにより、代替的に又は追加的にシグナルの開始がもたらされ得る。
抗体のＦｃ領域は、いくつかのＦｃ受容体及びリガンドと相互作用して、エフェクター機能と称される一連の重要な機能的能力を授ける。ＩｇＧに関して、Ｆｃ領域は、ＩｇドメインのＣＨ２及びＣＨ３を含む。ＩｇＧアイソタイプに対するＦｃ受容体の重要なファミリーは、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）である。これらの受容体は、抗体と免疫系の細胞性アームの間の情報交換を媒介する。ヒトにおいて、このタンパク質ファミリーとしては、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１及びＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－１及びＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、及びＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；並びにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８及びＦ１５８を含む）及びＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩＩｂ－ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）が挙げられる（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ８２：５７－６５）。これらの受容体は通常、Ｆｃへの結合を媒介する細胞外ドメイン、膜貫通領域、及び細胞内のいくつかのシグナル伝達現象を媒介し得る細胞内ドメインを有する。これらの受容体は、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、マスト細胞、血小板、Ｂ細胞、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及びγδＴ細胞を含む様々な免疫細胞において発現される。Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、これらのエフェクター細胞を結合される抗原の部位にリクルートして、通常細胞内のシグナル伝達現象並びに炎症メディエーターの放出、Ｂ細胞活性化、エンドサイトーシス、食作用、及び細胞傷害性の攻撃などの重要なその後の免疫応答をもたらす。細胞傷害性及び食作用性エフェクター機能を媒介する能力は、抗体が標的化された細胞を破壊する潜在的な機構である。ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害細胞が標的細胞上の結合された抗体を認識し、引き続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞性反応は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）と称される。ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害細胞が標的細胞上の結合された抗体を認識し、引き続いて標的細胞の食作用を引き起こす細胞性反応は、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）と称される。
異なるＩｇＧサブクラスは、ＦｃγＲに対する異なる親和性を有し、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３は通常、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４とは異なる受容体に実質的により十分に結合する。全てのＦｃγＲは、ＩｇＧ Ｆｃ上の同じ領域に結合するが、異なる親和性を有する：高親和性結合体ＦｃγＲＩは、ＩｇＧ１に対して１０－８ Ｍ－１のＫｄを有する一方で、低親和性受容体ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩは一般に、それぞれ１０－６及び１０－５で結合する。
「Ｆｃガンマ受容体」又は「ＦｃγＲ」は、本明細書で使用する場合、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合し、且つＦｃγＲ遺伝子によって実質的にコードされるタンパク質のファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーとしては、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１及びＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－１及びＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、及びＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；並びにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８及びＦ１５８を含む）及びＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩＩｂ－ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ８２：５７－６５）、並びに任意の未発見のヒトＦｃγＲ若しくはＦｃγＲアイソフォーム又はアロタイプが挙げられるが、これらに限定されない。ＦｃγＲは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ及びサルを含むが、これらに限定されない任意の生物に由来し得る。マウスＦｃγＲとしては、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、及びＦｃγＲＩＩＩ－２（ＣＤ１６－２）、並びに任意の未発見のマウスＦｃγＲ若しくはＦｃγＲアイソフォーム又はアロタイプが挙げられるが、これらに限定されない。
ＦｃγＲへの結合は、ＦｃγＲに対する抗体の親和性を決定することによって直接的に実施され得る。或いは、結合は、細胞ベースのアッセイにおいてサイトカイン放出を測定することによって間接的に決定され得る。
特定の重鎖とその同族の軽鎖との会合を促進するために、重鎖及び軽鎖の両方は、相補的アミノ酸置換を含有し得る。本明細書で使用する場合、「相補的アミノ酸置換」は、一方の鎖における正に荷電したアミノ酸への置換と対になる他方の鎖における負に荷電したアミノ酸置換を指す。例えば、いくつかの実施形態において、重鎖は、荷電アミノ酸を導入するために少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、対応する軽鎖は、荷電アミノ酸を導入するために少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、重鎖に導入される荷電アミノ酸は、軽鎖に導入されるアミノ酸の反対の電荷を有する。ある種の実施形態では、１つ以上の正に荷電した残基（例えば、リジン、ヒスチジン又はアルギニン）を、第１の軽鎖（ＬＣ１）に導入することができ、且つ１つ以上の負に荷電した残基（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）を、ＬＣ１／ＨＣ１の結合界面で対になる重鎖（ＨＣ１）に導入することができるが、１つ以上の負に荷電した残基（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）を、第２の軽鎖（ＬＣ２）に導入することができ、且つ１つ以上の正に荷電した残基（例えば、リジン、ヒスチジン又はアルギニン）を、ＬＣ２／ＨＣ２の結合界面で対になる重鎖（ＨＣ２）に導入することができる。静電相互作用は、界面で反対に荷電した残基（極性）が引き合うため、ＬＣ１をＨＣ１と対形成させ、且つＬＣ２をＨＣ２と対形成させるように誘導することになる。界面で同じ荷電残基（極性）を有する重鎖／軽鎖の対（例えば、ＬＣ１／ＨＣ２及びＬＣ２／ＨＣ１）は、反発することになり、結果として不所望なＨＣ／ＬＣの対形成が抑制される。
これら及び他の実施形態では、重鎖のＣＨ１ドメイン又は軽鎖のＣＬドメインは、野生型ＩｇＧアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含み、その結果、野生型ＩｇＧアミノ酸配列中の１つ以上の正に荷電したアミノ酸は、１つ以上の負に荷電したアミノ酸で置き換えられる。或いは、重鎖のＣＨ１ドメイン又は軽鎖のＣＬドメインは、野生型ＩｇＧアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含み、その結果、野生型ＩｇＧアミノ酸配列中の１つ以上の負に荷電したアミノ酸は、１つ以上の正に荷電したアミノ酸で置き換えられる。いくつかの実施形態では、Ｆ１２６、Ｐ１２７、Ｌ１２８、Ａ１４１、Ｌ１４５、Ｋ１４７、Ｄ１４８、Ｈ１６８、Ｆ１７０、Ｐ１７１、Ｖ１７３、Ｑ１７５、Ｓ１７６、Ｓ１８３、Ｖ１８５及びＫ２１３から選択されるＥＵ位置での多重特異性抗体コンストラクト中の第１の及び／又は第２の重鎖のＣＨ１ドメインにおける１つ以上のアミノ酸は、荷電アミノ酸で置き換えられる。ある種の実施形態では、負又は正に荷電したアミノ酸による置換のための重鎖残基は、Ｓ１８３（ＥＵ番号付けシステム）である。いくつかの実施形態では、Ｓ１８３は、正に荷電したアミノ酸で置換される。代替的な実施形態では、Ｓ１８３は、負に荷電したアミノ酸で置換される。例えば、一実施形態において、Ｓ１８３は、第１の重鎖における負に荷電したアミノ酸（例えば、Ｓ１８３Ｅ）で置換され、且つＳ１８３は、第２の重鎖における正に荷電したアミノ酸（例えば、Ｓ１８３Ｋ）で置換される。
軽鎖がカッパ軽鎖である実施形態において、Ｆ１１６、Ｆ１１８、Ｓ１２１、Ｄ１２２、Ｅ１２３、Ｑ１２４、Ｓ１３１、Ｖ１３３、Ｌ１３５、Ｎ１３７、Ｎ１３８、Ｑ１６０、Ｓ１６２、Ｔ１６４、Ｓ１７４及びＳ１７６から選択される位置（カッパ軽鎖におけるＥＵ付番）での多量体抗体コンストラクト中の第１及び／又は第２の軽鎖のＣＬドメインにおける１つ以上のアミノ酸は、荷電アミノ酸で置き換えられる。軽鎖がラムダ軽鎖である実施形態において、Ｔ１１６、Ｆ１１８、Ｓ１２１、Ｅ１２３、Ｅ１２４、Ｋ１２９、Ｔ１３１、Ｖ１３３、Ｌ１３５、Ｓ１３７、Ｅ１６０、Ｔ１６２、Ｓ１６５、Ｑ１６７、Ａ１７４、Ｓ１７６及びＹ１７８から選択される位置（ラムダ鎖におけるＥＵ付番）での多重特異性抗体コンストラクト中の第１及び／又は第２の軽鎖のＣＬドメインにおける１つ以上のアミノ酸は、荷電アミノ酸で置き換えられる。いくつかの実施形態では、負又は正に荷電したアミノ酸による置換のための残基は、カッパ又はラムダ軽鎖のいずれかのＣＬドメインのＳ１７６（ＥＵ番号付けシステム）である。ある種の実施形態では、ＣＬドメインのＳ１７６は、正に荷電したアミノ酸で置き換えられる。代替的な実施形態では、ＣＬドメインのＳ１７６は、負に荷電したアミノ酸で置き換えられる。一実施形態では、Ｓ１７６は、第１の軽鎖における正に荷電したアミノ酸（例えば、Ｓ１７６Ｋ）で置換され、且つＳ１７６は、第２の軽鎖における負に荷電したアミノ酸（例えば、Ｓ１７６Ｅ）で置換される。
ＣＨ１及びＣＬドメインにおける相補的アミノ酸置換に加えて又はその代わりとして、多重特異性抗体コンストラクトにおける軽鎖及び重鎖の可変領域は、荷電アミノ酸を導入するために１つ以上の相補的アミノ酸置換を含有し得る。例えば、いくつかの実施形態において、多重特異性抗体コンストラクトの重鎖のＶＨ領域又は軽鎖のＶＬ領域は、野生型ＩｇＧアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含み、その結果、野生型ＩｇＧアミノ酸配列中の１つ以上の正に荷電したアミノ酸は、１つ以上の負に荷電したアミノ酸で置き換えられる。或いは、重鎖のＶＨ領域又は軽鎖のＶＬ領域は、野生型ＩｇＧアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含み、その結果、野生型ＩｇＧアミノ酸配列中の１つ以上の負に荷電したアミノ酸は、１つ以上の正に荷電したアミノ酸で置き換えられる。
ＶＨ領域内のＶ領域界面残基（すなわち、ＶＨ及びＶＬ領域の集合を媒介するアミノ酸残基）としては、ＥＵ位置１、３、３５、３７、３９、４３、４４、４５、４６、４７、５０、５９、８９、９１、及び９３が挙げられる。ＶＨ領域中のこれらの界面残基の１つ以上は、荷電した（正又は負に荷電した）アミノ酸で置換され得る。ある種の実施形態では、第１及び／又は第２の重鎖のＶＨ領域中のＥＵ位置３９のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸、例えば、リジンに置換される。代替的な実施形態では、第１及び／又は第２の重鎖のＶＨ領域中のＥＵ位置３９のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸、例えば、グルタミン酸に置換される。いくつかの実施形態では、第１の重鎖のＶＨ領域中のＥＵ位置３９のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸に置換され（例えば、Ｇ３９Ｅ）、第２の重鎖のＶＨ領域中のＥＵ位置３９のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸に置換される（例えば、Ｇ３９Ｋ）。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の重鎖のＶＨ領域中のＥＵ位置４４のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸、例えば、リジンに置換される。代替的な実施形態では、第１及び／又は第２の重鎖のＶＨ領域中のＥＵ位置４４のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸、例えば、グルタミン酸に置換される。ある種の実施形態では、第１の重鎖のＶＨ領域中のＥＵ位置４４のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸に置換され（例えば、Ｇ４４Ｅ）、第２の重鎖のＶＨ領域中のＥＵ位置４４のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸に置換される（例えば、Ｇ４４Ｋ）。
ＶＬ領域内のＶ領域界面残基（すなわち、ＶＨ及びＶＬ領域の集合を媒介するアミノ酸残基）としては、ＥＵ位置３２、３４、３５、３６、３８、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４８、４９、５０、５１、５３、５４、５５、５６、５７、５８、８５、８７、８９、９０、９１、及び１００が挙げられる。ＶＬ領域中の１つ以上の界面残基は、荷電アミノ酸、好ましくは、同族重鎖のＶＨ領域に導入されるものと反対の電荷を有するアミノ酸で置換され得る。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の軽鎖のＶＬ領域中のＥＵ位置１００のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸、例えば、リジンに置換される。代替的な実施形態では、第１及び／又は第２の軽鎖のＶＬ領域中のＥＵ位置１００のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸、例えば、グルタミン酸に置換される。ある種の実施形態では、第１の軽鎖のＶＬ領域中のＥＵ位置１００のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸に置換され（例えば、Ｇ１００Ｋ）、第２の軽鎖のＶＬ領域中のＥＵ位置１００のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸に置換される（例えば、Ｇ１００Ｅ）。
定常ドメインのいずれかは、多重特異性抗体コンストラクトの正確な集合を促進する上記の電荷対変異のうちの１つ以上を含有するように改変され得る。
本明細書で使用する場合、「Ｆｃ領域」という用語は、インタクトな抗体のパパイン消化によって生成することができる免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を指す。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、任意選択によりＣＨ４ドメインを含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４免疫グロブリン由来のＦｃ領域である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ２免疫グロブリン由来のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。Ｆｃ領域は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び貪食などのエフェクター機能を保持し得る。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、本明細書にさらに詳細に記載されるように、エフェクター機能を低減又は排除するように改変される場合がある。
本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトの重鎖定常領域又はＦｃ領域は、抗原結合タンパク質のグリコシル化及び／又はエフェクター機能に影響する１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。免疫グロブリンのＦｃ領域の機能の１つは、免疫グロブリンがその標的に結合するときに免疫系に伝達することである。これは、一般に「エフェクター機能」と呼ばれる。伝達は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）につながる。ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰは、免疫系の細胞の表面のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を介して媒介される。ＣＤＣは、補体系のタンパク質、例えばＣ１ｑと、Ｆｃとの結合を介して媒介される。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、定常領域において、エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性、ＡＤＣＰ活性、及び／又は抗原結合タンパク質のクリアランス若しくは半減期を増強する１つ以上のアミノ酸置換を含む。エフェクター機能を増強することができる例示的なアミノ酸置換（ＥＵ付番）としては、以下に限定されないが、Ｅ２３３Ｌ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｓ、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｆ２４３Ｖ、Ｐ２４７Ｉ、Ｄ２８０Ｈ、Ｋ２９０Ｓ、Ｋ２９０Ｅ、Ｋ２９０Ｎ、Ｋ２９０Ｙ、Ｒ２９２Ｐ、Ｅ２９４Ｌ、Ｙ２９６Ｗ、Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ｄ、Ｓ２９８Ｖ、Ｓ２９８Ｇ、Ｓ２９８Ｔ、Ｔ２９９Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｑ３１１Ｍ、Ｋ３２６Ａ、Ｋ３２６Ｅ、Ｋ３２６Ｗ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｍ、Ａ３３０Ｆ、Ｉ３３２Ｅ、Ｄ３３３Ａ、Ｅ３３３Ｓ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｋ３３４Ｖ、Ａ３３９Ｄ、Ａ３３９Ｑ、Ｐ３９６Ｌ、又は上記のもののいずれかの組合せが挙げられる。
他の実施形態では、本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、定常領域において、エフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。エフェクター機能を低減することができる例示的なアミノ酸置換（ＥＵ付番）としては、以下に限定されないが、Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｖ、Ｖ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｑ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３０９Ｌ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ、Ｐ３３１Ｓ又は上記のいずれかの組合せが挙げられる。
グリコシル化は、抗体、特にＩｇＧ１抗体のエフェクター機能の要因となり得る。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、結合タンパク質のグリコシル化のレベル又は型に影響する１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。ポリペプチドのグリコシル化は、通常、Ｎ結合又はＯ結合のいずれかである。Ｎ結合は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列のアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－トレオニン（Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が作り出される。Ｏ結合型グリコシル化は、糖であるＮ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースのうち１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はトレオニンへの結合を指すが、５－ヒドロキシプロリン又は５－ヒドロキシリシンを使用することもできる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトのグリコシル化は、１つ以上のグリコシル化部位を、例えば、結合タンパク質のＦｃ領域に付加することによって増加される。抗原結合タンパク質へのグリコシル化部位の付加は、上記のトリペプチド配列の１つ以上を含むようにアミノ酸配列を改変することによって都合よく達成され得る（Ｎ結合グリコシル化部位の場合）。改変は、１つ以上のセリン若しくはトレオニン残基の開始配列への付加又はそれによる置換によってもなされ得る（Ｏ結合グリコシル化部位の場合）。容易にするために、抗原結合タンパク質アミノ酸配列は、ＤＮＡレベルでの変化によって、特に、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンが生成されるように、予め選択された塩基の位置で標的ポリペプチドをコードするＤＮＡを変異させることによって、改変することができる。
本発明はまた、エフェクター活性の変化をもたらす改変糖鎖構造を有する多重特異性抗体コンストラクト分子、例えば、ＡＤＣＣ活性の向上を示すフコシル化が存在しないか又は減少した抗原結合タンパク質の生成を包含する。フコシル化を減少させるか又は排除する様々な方法が当技術分野において知られている。例えば、ＡＤＣＣエフェクター活性は、抗体分子のＦｃγＲＩＩＩ受容体への結合によって媒介され、これは、ＣＨ２ドメインのＮ２９７残基でのＮ結合型グリコシル化の炭水化物構造に依存することが示されている。非フコシル化抗体は、高い親和性でこの受容体に結合し、ＦｃγＲＩＩＩ媒介性エフェクター機能を天然のフコシル化抗体よりも効率的に誘発する。例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ酵素がノックアウトされているＣＨＯ細胞における非フコシル化抗体の組換え産生は、ＡＤＣＣ活性が１００倍増加した抗体を生じる（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．８７（５）：６１４－２２，２００４を参照されたい）。同様の効果は、フコシル化経路におけるアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ酵素又は他の酵素の活性を減少させることによって、例えば、ｓｉＲＮＡ若しくはアンチセンスＲＮＡ処理、酵素をノックアウトするための細胞株の操作、又は選択的グリコシル化阻害剤を用いる培養によって、実現することができる（Ｒｏｔｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１２）：１１１３－２３，１９８９を参照されたい）。いくつかの宿主細胞株、例えばＬｅｃ１３又はラットハイブリドーマＹＢ２／０細胞株は、より低いフコシル化レベルを有する抗体を天然に産生する（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７７（３０）：２６７３３－４０，２００２及びＳｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７８（５）：３４６６－７３，２００３を参照されたい）。例えば、ＧｎＴＩＩＩ酵素を過剰発現する細胞において抗体を組換え産生することによる、二分された糖鎖レベルの増加もＡＤＣＣ活性を増加させることが判明している（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（２）：１７６－８０，１９９９を参照されたい）。
他の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトのグリコシル化は、１つ以上のグリコシル化部位を、例えば、結合タンパク質のＦｃ領域から除くことによって減少又は排除される。Ｎ結合型グリコシル化部位を排除又は改変するアミノ酸置換により、抗原結合タンパク質のＮ結合型グリコシル化を低減又は排除することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトは、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ａ、又はＮ２９７ＧなどのＮ２９７の位置（ＥＵ付番）での変異を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５ＡなどのＬ２３４及びＬ２３５の位置（ＥＵ付番）での変異を含む。特定の一実施形態では、本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、Ｎ２９７Ｇ変異を有するヒトＩｇＧ１抗体由来のＦｃ領域を含む。Ｎ２９７変異を含む分子の安定性を向上させるために、分子のＦｃ領域はさらに操作されてもよい。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域における１つ又は複数のアミノ酸は、二量体状態でジスルフィド結合形成を促進するためにシステインで置換される。したがって、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＶ２５９、Ａ２８７、Ｒ２９２、Ｖ３０２、Ｌ３０６、Ｖ３２３、又はＩ３３２（ＥＵ付番）に対応する残基は、システインで置換され得る。一実施形態では、残基の特定の対が互いにジスルフィド結合を優先的に形成するようにシステインで置換され、それによってジスルフィド結合のスクランブルを制限又は防止する。ある種の実施形態では、対としては、Ａ２８７Ｃ及びＬ３０６Ｃ、Ｖ２５９Ｃ及びＬ３０６Ｃ、Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ、並びにＶ３２３Ｃ及びＩ３３２Ｃが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトは、Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃに変異を有するヒトＩｇＧ１抗体由来のＦｃ領域を含む。このような実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｎ２９７Ｇ変異も含む場合がある。
一実施形態では、重鎖は、
（ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
（ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、重鎖は、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
例えば、サルベージ受容体結合エピトープの組込み又は追加（例えば、適切な領域の変異による、又はエピトープをペプチドタグに組み込み、続いて、例えば、ＤＮＡ若しくはペプチド合成によって、いずれかの末端又は中央で抗原結合タンパク質に融合されることによる；例えば、国際公開第９６／３２４７８号パンフレットを参照）、或いは、ＰＥＧ又は他の水溶性ポリマー、例えば、多糖ポリマーなどの分子の追加による血清半減期を増加させるための本発明の多重特異性抗体コンストラクトの改変もまた望ましい場合がある。サルベージ受容体結合エピトープは、好ましくは、Ｆｃ領域の１つ又は２つのループ由来の任意の１つ以上のアミノ酸残基が抗原結合タンパク質中の類似の位置に移入される領域を構成する。一実施形態では、Ｆｃ領域の１つ又は２つのループ由来の３つ以上の残基が転移される。一実施形態では、エピトープがＦｃ領域（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ領域）のＣＨ２ドメインからとられ、抗原結合タンパク質のＣＨ１、ＣＨ３、若しくはＶＨ領域、又は２つ以上のそのような領域に移される。或いは、エピトープがＦｃ領域のＣＨ２ドメインからとられ、抗原結合タンパク質のＣＬ領域若しくはＶＬ領域、又はその両方に移される。Ｆｃバリアント及びそのサルベージ受容体との相互作用の説明については、国際出願である、国際公開第９７／３４６３１号パンフレット及び国際公開第９６／３２４７８号パンフレットを参照されたい。
本発明の多重特異性抗体コンストラクトのある特定の実施形態では、Ｆｃ領域のアミノ末端（すなわち、アミノ末端結合ドメイン）に位置する結合ドメインは、本明細書に記載されるペプチドリンカーを介して又は免疫グロブリンヒンジ領域を介してＦｃ領域のアミノ末端に融合されたＦａｂ断片である。「免疫グロブリンヒンジ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメインを連結するアミノ酸配列を指す。ヒトＩｇＧ１のヒンジ領域は一般に、Ｇｌｕ２１６の近傍又はＣｙｓ２２６の近傍からＰｒｏ２３０の近傍までのアミノ酸配列として定義される。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖内ジスルフィド結合を形成する最初及び最後のシステイン残基を同じ位置に置くことによってＩｇＧ１配列と整列されてもよく、当業者に決定可能である。いくつかの実施形態では、アミノ末端結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を介してＦｃ領域のアミノ末端に結合される。他の実施形態では、アミノ末端結合ドメインは、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を介してＦｃ領域のアミノ末端に結合される。一実施形態では、アミノ末端結合ドメイン（例えば、Ｆａｂ断片）は、ＦａｂのＣＨ１領域のカルボキシル末端を介してＦｃ領域に融合される。
本発明の重鎖融合タンパク質のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のカルボキシル末端に位置する結合ドメイン（すなわち、カルボキシル末端の結合ドメイン）は、Ｆａｂ断片である。そのような実施形態では、Ｆａｂは、Ｆａｂ断片のＶＨ領域のアミノ末端を介するペプチドリンカーを介してＦｃ領域のカルボキシル末端（例えば、ＣＨ３ドメインのカルボキシル末端）に融合されるか又は別の方法で連結される。したがって、一実施形態では、Ｆａｂは、ＦａｂのＶＨ領域のアミノ末端を介してＦｃ領域に融合され、その結果、得られる融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ペプチドリンカー、ＶＨ領域、及びＣＨ１領域を含む。
Ｆｃ領域をカルボキシル末端Ｆａｂに結合するペプチドリンカーは、本明細書に記載されるペプチドリンカーのいずれかであり得る。特定の実施形態では、Ｆｃ領域をカルボキシル末端Ｆａｂ断片に結合するペプチドリンカーは、少なくとも５個のアミノ酸長である。他の実施形態では、Ｆｃ領域をカルボキシル末端Ｆａｂ断片に結合するペプチドリンカーは、少なくとも８個のアミノ酸長である。Ｆｃ領域をカルボキシル末端Ｆａｂ断片に結合するための特に好適なペプチドリンカーは、（ＧｌｙｘＳｅｒ）ｎ（ｘ＝３又は４であり、ｎ＝２、３、４、５又は６である）（配列番号９２３）などのグリシン－セリンリンカーである。一実施形態では、Ｆｃ領域をカルボキシル末端Ｆａｂ断片に連結するペプチドリンカーは、Ｌ１０（Ｇ４Ｓ）２リンカー（配列番号８８８）である。別の実施形態では、Ｆｃ領域をカルボキシル末端Ｆａｂ断片に連結するペプチドリンカーは、Ｌ９又はＧ３ＳＧ４Ｓリンカー（配列番号９２４）である。
カルボキシル末端結合ドメインがＦａｂ断片である本発明の抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のアミノ末端に位置する結合ドメイン（すなわち、アミノ末端結合ドメイン）もまた、Ｆａｂ断片である。アミノ末端Ｆａｂ断片は、本明細書に記載されるペプチドリンカー又は免疫グロブリンヒンジ領域を介してＦｃ領域のアミノ末端に融合され得る。いくつかの実施形態では、アミノ末端Ｆａｂ断片は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を介してＦｃ領域のアミノ末端に結合される。他の実施形態では、アミノ末端Ｆａｂ断片は、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を介してＦｃ領域のアミノ末端に結合される。一実施形態では、アミノ末端Ｆａｂ断片は、ＦａｂのＣＨ１領域のカルボキシル末端を介してＦｃ領域に融合される。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、第１の標的に特異的に結合する第１の抗体を含み、第２の標的に特異的に結合する第２の抗体由来のＦａｂ断片の１つのポリペプチド鎖（例えば、重鎖（ＶＨ２－ＣＨ１））が、第１の抗体の重鎖のカルボキシル末端に融合される。そのような実施形態における多重特異性抗体コンストラクトはまた、第２の抗体由来のＦａｂ断片の他方の半分を含有するポリペプチド鎖（例えば、軽鎖（ＶＬ２－ＣＬ））を含む。この形式は、本明細書で「ＩｇＧ－Ｆａｂ」形式と称され、この種類の分子の一実施形態は、図１において模式的に示される。したがって、ある特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）第１の抗体由来の軽鎖、（ｉｉ）第１の抗体由来の重鎖（重鎖は、ペプチドリンカーを介してそのカルボキシル末端で第２の抗体のＶＨ－ＣＨ１ドメインを含む第１のポリペプチドに融合されて、改変された重鎖を形成する）、及び（ｉｉｉ）第２の抗体のＶＬ－ＣＬドメインを含む第２のポリペプチドを含む、二重特異性の多価抗原結合タンパク質を含む。二量体化するとき、多重特異性抗体コンストラクトは、第１の抗体由来の２つの改変された重鎖、２つの軽鎖、及び第２の抗体由来のＦａｂ断片（Ｆｄ断片）の他方の半分を含有する２つのポリペプチド鎖を含むホモ六量体である。一実施形態では、重鎖のカルボキシル末端に融合される第１のポリペプチドは、第２の抗体由来のＶＨドメイン及びのＣＨ１ドメインを含み、第２のポリペプチドは、第２の抗体由来のＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む。
本明細書に記載されるとおりの電荷対変異又は相補的アミノ酸置換は、正確な重鎖－軽鎖対形成を促進するために第１の抗体（Ｆａｂ１）又は第２の抗体（Ｆａｂ２）のＦａｂ領域に導入され得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆａｂ１におけるＶＬドメインのＥＵ位置３８のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸（例えば、グルタミン酸）で置き換えられ、Ｆａｂ１におけるＶＨドメインのＥＵ位置３９のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸（例えば、リジン）で置き換えられる。他の実施形態では、Ｆａｂ１におけるＶＬドメインのＥＵ位置３８のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸（例えば、リジン）で置き換えられ、Ｆａｂ１におけるＶＨドメインのＥＵ位置３９のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸（例えば、グルタミン酸）で置き換えられる。ある特定の実施形態では、Ｆａｂ２におけるＶＬドメインのＥＵ位置３８のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸（例えば、グルタミン酸）で置き換えられ、Ｆａｂ２におけるＶＨドメインのＥＵ位置３９のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸（例えば、リジン）で置き換えられる。他の実施形態では、Ｆａｂ２におけるＶＬドメインのＥＵ位置３８のアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸（例えば、リジン）で置き換えられ、Ｆａｂ２におけるＶＨドメインのＥＵ位置３９のアミノ酸は、負に荷電したアミノ酸（例えば、グルタミン酸）で置き換えられる。
第２の抗体由来のＶＨ－ＣＨ１領域（すなわち、Ｆｄ断片）が第１の抗体の重鎖に融合される実施形態では、第１の抗体由来の重鎖は、Ｓ１８３Ｅ変異（ＥＵ付番）を含み、第１の抗体由来の軽鎖は、Ｓ１７６Ｋ変異（ＥＵ付番）を含み、第２の抗体由来の軽鎖は、Ｓ１７６Ｅ変異（ＥＵ付番）を含み、且つ第２の抗体由来のＦｄ領域（第１の抗体由来の重鎖のＣ末端に融合される）は、Ｓ１８３Ｋ変異（ＥＵ付番）を含む。他の実施形態では、第１の抗体由来の重鎖は、Ｇ４４Ｅ変異（ＥＵ）及びＳ１８３Ｅ変異（ＥＵ付番）を含み、第１の抗体由来の軽鎖は、Ｇ１００Ｋ変異（ＥＵ）及びＳ１７６Ｋ変異（ＥＵ付番）を含み、第２の抗体由来の軽鎖は、Ｇ１００Ｅ変異（ＥＵ）及びＳ１７６Ｅ変異（ＥＵ付番）を含み、且つ第２の抗体由来のＦｄ領域（第１の抗体由来の重鎖のＣ末端に融合される）は、Ｇ４４Ｋ変異（ＥＵ）及びＳ１８３Ｋ変異（ＥＵ付番）を含む。前述の例における電荷は、対応する軽鎖又は重鎖上の電荷が、正確な重／軽鎖対が反対の電荷を有するように逆にされさえすれば、逆にされ得る。
「～に対応する」は、それがＶＨ２及び第２のＣＨ１ドメインに関する場合、ＶＨ２及び第２のＣＨ１ドメインのアミノ酸残基が、リンカーがない場合に第１の重鎖のＣ末端から数えられることを意味する。ペプチドリンカーがある場合、ＶＨ２及び第２のＣＨ１ドメインのアミノ酸残基は、ペプチドリンカーのＣ末端から数えられる。いずれの場合も、アミノ酸残基は第１の重鎖のＮ末端からは数えない。むしろ、ＶＨ２及び第２のＣＨ１ドメインに関して、ＶＨ２ドメインの第１のアミノ酸残基で計数が開始される。アミノ酸残基の計数は、ＥＵ又はＡＨｏ慣習を使用して実施される。
ある特定の実施形態では、ａ）ＶＨ１は、Ｑ３９Ｅ変異を含み、第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；ｂ）ＶＨ２は、Ｑ３９Ｋ変異を含み、第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；ｃ）ＶＬ１は、Ｑ３８Ｋ変異を含み、第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含み；且つｄ）ＶＬ２は、Ｑ３８Ｅ変異を含み、第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含む。
ある特定の実施形態では、ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｅ及びＳ１８３Ｋ変異を含み；ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｋ及びＳ１８３Ｅ変異を含み；ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｋ及びＳ１７６Ｅ変異を含み；且つｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｅ及びＳ１７６Ｋ変異を含む。
ある特定の実施形態では、ａ）ＶＨ１は、Ｑ３９Ｋ変異を含み、第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；ｂ）ＶＨ２は、Ｑ３９Ｅ変異を含み、第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；ｃ）ＶＬ１は、Ｑ３８Ｅ変異を含み、第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含み；且つｄ）ＶＬ２は、Ｑ３８Ｋ変異を含み、第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含む。
ある特定の実施形態では、ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｋ及びＳ１８３Ｅ変異を含み；ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｅ及びＳ１８３Ｋ変異を含み；ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｅ及びＳ１７６Ｋ変異を含み；且つｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｋ及びＳ１７６Ｅ変異を含む。
ある特定の実施形態では、第１の重鎖は、ペプチドリンカーを介してＶＨ２に融合される。ある特定の実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）２（配列番号９１６）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号８８８）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）３（配列番号９１７）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号８８９）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）４（配列番号９１８）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号８９０）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）５（配列番号９１９）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）５（配列番号９２０）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）６（配列番号９２１）、及び（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）６（配列番号９２２）からなる群から選択される配列を含む。これらの配列はまた、ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号９１６）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８８８）、ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号９１７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８８９）、ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号９１８）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８９０）、ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号９１９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９２０）、ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号９２１）、及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９２２）として記載され得る。
さらに、又は代わりに、正しい重－軽鎖対形成は、カルボキシル末端Ｆａｂ結合ドメイン中のＣＨ１及びＣＬドメインを交換することによって促進され得る。一例として、重鎖のカルボキシル末端に融合される第１のポリペプチドは、第２の抗体由来のＶＬドメイン及びＣＨ１ドメインを含んでもよく、且つ第２のポリペプチドは、第２の抗体由来のＶＨドメイン及びＣＬドメインを含んでもよい。別の実施形態では、重鎖のカルボキシル末端に融合される第１のポリペプチドは、第２の抗体由来のＶＨドメイン及びのＣＬドメインを含んでもよく、且つ第２のポリペプチドは、第２の抗体由来のＶＬドメイン及びＣＨ１ドメインを含んでもよい。
別の態様では、本発明は、
ａ）それぞれ第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１のＣＨ１ドメインを含む２つの同一な重鎖融合タンパク質（第１のＣＨ１ドメインは、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドに連結され、且つヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）に連結され、ＶＨ２は、第２のＣＨ１ドメインに連結され；
ｉ）ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含み；且つ
ｉｉ）ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３に対応する残基からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）；並びに
ｂ）第１の軽鎖を含む第２のポリペプチド（第１の軽鎖は、第１の軽鎖可変領域（ＶＬ１）及び第１のＣＬ領域を含み；且つＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）；並びに
ｃ）第２の軽鎖を含む第３のポリペプチド（第２の軽鎖は、第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２のＣＬ領域を含み；且つＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）
を含む多重特異性抗体コンストラクトであって、
ＶＨ１及びＶＬ１が相互作用して第１の抗原に結合し、且つＶＨ２及びＶＬ２が相互作用して、第２の抗原に結合し；
ここで、
第１の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり、且つ第２の抗原が、ヒトメソセリン（「ＭＳＬＮ」；配列番号２）であるか；又は
第１の抗原が、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり、且つ第２の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）である多重特異性抗体コンストラクトに関する。
一態様では、本発明は、
ａ）それぞれ第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１のＣＨ１ドメインを含む２つの同一な重鎖融合タンパク質（第１のＣＨ１ドメインは、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドに連結され、且つヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）に連結され、ＶＨ２は、第２のＣＨ１ドメインに連結され；
ｉ）ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含み；且つ
ｉｉ）ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３に対応する残基からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）；並びに
ｂ）第１の軽鎖を含む第２のポリペプチド（第１の軽鎖は、第１の軽鎖可変領域（ＶＬ１）及び第１のＣＬ領域を含み；且つＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）；並びに
ｃ）第２の軽鎖を含む第３のポリペプチド（第２の軽鎖は、第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２のＣＬ領域を含み；且つＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む）
を含む多重特異性抗体コンストラクトであって、
ＶＨ１及びＶＬ１が相互作用して第１の抗原に結合し、且つＶＨ２及びＶＬ２が相互作用して、第２の抗原に結合し；
ここで、
第１の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり、且つ第２の抗原が、ヒトメソセリン（「ＭＳＬＮ」；配列番号２）であるか；又は
第１の抗原が、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり、且つ第２の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）である多重特異性抗体コンストラクトに関する。
一実施形態では、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、ペプチドリンカーを介してＶＨ２に連結される。
一実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）２（配列番号９１６）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号８８８）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）３（配列番号９１７）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号８８９）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）４（配列番号９１８）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号８９０）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）５（配列番号９１９）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）５（配列番号９２０）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）６（配列番号９２１）、及び（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）６（配列番号９２２）からなる群から選択される配列を含む。
一実施形態では、
ａ）ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｋ、Ｇ４４Ｋ、及びＳ１８３Ｋからなる群から選択される変異を含み；
ｂ）ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｅ、Ｇ４４Ｅ、及びＳ１８３Ｅからなる群から選択される変異を含み；
ｃ）ＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｅ、Ｇ１００Ｅ、及びＳ１７６Ｅからなる群から選択される変異を含み；且つ
ｄ）ＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｋ、Ｇ１００Ｋ、及びＳ１７６Ｋからなる群から選択される変異を含む。
一実施形態では、
ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
ｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）ＶＨ１は、Ｑ３９Ｋ変異を含み且つ第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｂ）ＶＨ２は、Ｑ３９Ｅ変異を含み且つ第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｃ）ＶＬ１は、Ｑ３８Ｅ変異を含み且つ第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
ｄ）ＶＬ２は、Ｑ３８Ｋ変異を含み且つ第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｋ及びＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｅ及びＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｅ及びＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
ｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｋ及びＳ１７６Ｋ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｅ、Ｇ４４Ｅ、及びＳ１８３Ｅからなる群から選択される変異を含み；
ｂ）ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｋ、Ｇ４４Ｋ、及びＳ１８３Ｋからなる群から選択される変異を含み；
ｃ）ＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｋ、Ｇ１００Ｋ、及びＳ１７６Ｋからなる群から選択される変異を含み；且つ
ｄ）ＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｅ、Ｇ１００Ｅ、及びＳ１７６Ｅからなる群から選択される変異を含む。
一実施形態では、
ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
ｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）ＶＨ１は、Ｑ３９Ｅ変異を含み且つ第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｂ）ＶＨ２は、Ｑ３９Ｋ変異を含み且つ第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｃ）ＶＬ１は、Ｑ３８Ｋ変異を含み且つ第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
ｄ）ＶＬ２は、Ｑ３８Ｅ変異を含み且つ第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含む。
一実施形態では、
ａ）第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｅ及びＳ１８３Ｅ変異を含み；
ｂ）第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｋ及びＳ１８３Ｋ変異を含み；
ｃ）第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｋ及びＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
ｄ）第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｅ及びＳ１７６Ｅ変異を含む。
一実施形態では、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチは、
（ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
（ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチは、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、アミノ酸の付番は、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である。
一実施形態では、第１の抗原は、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり且つ第２の抗原は、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり；且つ
ＶＬ１は、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
ＶＨ１は、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
ＶＬ２は、
それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つＶＨ２は、
それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
６４．請求項６３の抗体コンストラクトであって、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、
ＶＬ１は、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ１は、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＬ２は、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ２は、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）配列番号５を含むＶＬ１及び配列番号６を含むＶＨ１；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ１及び配列番号１０を含むＶＨ１；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ１及び配列番号１４を含むＶＨ１；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ１及び配列番号１８を含むＶＨ１；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ１及び配列番号２２を含むＶＨ１；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ１及び配列番号２６を含むＶＨ１；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ１及び配列番号３０を含むＶＨ１；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ１及び配列番号３４を含むＶＨ１；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ１及び配列番号３８を含むＶＨ１；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ１及び配列番号４２を含むＶＨ１；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ１及び配列番号４６を含むＶＨ１；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ１及び配列番号５０を含むＶＨ１；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ１及び配列番号５４を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）配列番号２１３を含むＶＬ２及び配列番号２１４を含むＶＨ２；
ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ２及び配列番号２１８を含むＶＨ２；
ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ２及び配列番号２２２を含むＶＨ２；並びに
ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ２及び配列番号２２６を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、第１の抗原は、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり且つ第２の抗原は、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり；
ＶＬ１は、
それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
ＶＨ１は、
それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
ＶＬ２は、
それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
且つ
ＶＨ２は、
それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２からなる群から選択される。
一実施形態では、
ＶＬ１は、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＨ１は、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
ＶＬ２は、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
ＶＨ２は、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）配列番号２１３を含むＶＬ１及び配列番号２１４を含むＶＨ１；
ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ１及び配列番号２１８を含むＶＨ１；
ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ１及び配列番号２２２を含むＶＨ１；並びに
ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ１及び配列番号２２６を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）配列番号５を含むＶＬ２及び配列番号６を含むＶＨ２；
ｂ）配列番号９を含むＶＬ２及び配列番号１０を含むＶＨ２；
ｃ）配列番号１３を含むＶＬ２及び配列番号１４を含むＶＨ２；
ｄ）配列番号１７を含むＶＬ２及び配列番号１８を含むＶＨ２；
ｅ）配列番号２１を含むＶＬ２及び配列番号２２を含むＶＨ２；
ｆ）配列番号２５を含むＶＬ２及び配列番号２６を含むＶＨ２；
ｇ）配列番号２９を含むＶＬ２及び配列番号３０を含むＶＨ２；
ｈ）配列番号３３を含むＶＬ２及び配列番号３４を含むＶＨ２；
ｉ）配列番号３７を含むＶＬ２及び配列番号３８を含むＶＨ２；
ｊ）配列番号４１を含むＶＬ２及び配列番号４２を含むＶＨ２；
ｋ）配列番号４５を含むＶＬ２及び配列番号４６を含むＶＨ２；
ｌ）配列番号４９を含むＶＬ２及び配列番号５０を含むＶＨ２；並びに
ｍ）配列番号５３を含むＶＬ２及び配列番号５４を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
本発明は、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクト及びその構成要素をコードする１つ以上の単離された核酸を含む。本発明の核酸分子には、単鎖及び二本鎖の両方の形態のＤＮＡ及びＲＮＡ、並びに対応する相補的配列が含まれる。ＤＮＡには、例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、化学的に合成されたＤＮＡ、ＰＣＲによって増幅されたＤＮＡ及びそれらの組合せが含まれる。本発明の核酸分子には、完全長遺伝子又はｃＤＮＡ分子並びにそれらの断片の組合せが含まれる。一実施形態では、本発明の核酸は、ヒト供給源に由来するが、本発明には非ヒト種に由来するものも含まれる。
本明細書において「単離されたポリヌクレオチド」と互換的に使用される「単離された核酸」は、天然に存在する供給源から単離された核酸の場合、核酸が単離された生物のゲノムに存在する隣接遺伝子配列から分離された核酸である。例えば、ＰＣＲ産物、ｃＤＮＡ分子又はオリゴヌクレオチドなど、鋳型から酵素的に、又は化学的に合成された核酸の場合、このようなプロセスから得られる核酸は、単独で存在する核酸であると理解される。単離核酸分子は、別個の断片の形態の核酸分子、又はより大きな核酸コンストラクトの構成要素としての核酸分子を指す。一実施形態では、核酸は、夾雑する内因性物質を実質的に含まない。核酸分子は、実質的に純粋な形態で、且つ標準的な生化学的方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）に概説されているもの）によって、その構成要素ヌクレオチド配列の識別、操作、及び回収を可能にする量又は濃度で、少なくとも１回単離されたＤＮＡ又はＲＮＡから由来した。そのような配列は、典型的には真核生物遺伝子内に存在する内部非翻訳配列又はイントロンによって中断されないオープンリーディングフレームの形態で提供且つ／又は構築される。非翻訳のＤＮＡの配列は、オープンリーディングフレームから５’側又は３’側に存在することができ、この場合、これは、コード領域の操作又は発現を妨害しない。特に明記しない限り、本明細書に記載される任意の単鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端は、５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左側方向は、５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡ転写産物の５’から３’への産生の方向は、転写方向と呼ばれ、ＲＮＡ転写産物の５’末端の５’側にあるＲＮＡ転写産物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と呼ばれ、ＲＮＡ転写産物の３’末端の３’側にあるＲＮＡ転写産物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と呼ばれる。
一態様では、本発明は、本発明の抗体コンストラクトの軽鎖をコードするポリヌクレオチドに関する。
一態様では、本発明は、本発明の抗体コンストラクトの重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドに関する。
一態様では、本発明は、抗体コンストラクトの軽鎖をコードするポリヌクレオチド、抗体コンストラクトの重鎖をコードするポリヌクレオチド、又はその両方を含むベクターに関する。
一態様では、本発明は、ベクター又は抗体コンストラクトの軽鎖をコードするポリヌクレオチド及び抗体コンストラクトの重鎖をコードするポリヌクレオチドで形質転換されるか又はトランスフェクトされる宿主細胞に関する。
一態様では、本発明は、本発明の抗体コンストラクトを生成するためのプロセスであって、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含み且つ重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドも含む宿主細胞を、抗体コンストラクトの発現を可能にする条件下で培養すること、及び培養物から生成された抗体コンストラクトを回収することを含むプロセスに関する。
本明細書に記載される抗原結合タンパク質のバリアントは、ポリペプチドをコードするＤＮＡにおけるヌクレオチドの部位特異的な変異誘発により、カセット若しくはＰＣＲ変異誘発、又は当技術分野でよく知られる他の技術を使用して、バリアントをコードするＤＮＡを生成し、その後、本明細書に概説するように、細胞培養物中で組換えＤＮＡを発現させることによって調製することができる。しかし、約１００～１５０個までの残基を有するバリアントＣＤＲを含む抗原結合タンパク質は、確立された技術を使用してインビトロ合成によって調製することができる。バリアントは、典型的には、天然の類似体と同様の定性的生物学的活性、例えば抗原への結合を示す。このようなバリアントは、例えば、抗原結合タンパク質のアミノ酸配列内の残基の欠失及び／又は挿入及び／又は置換を含む。欠失、挿入及び置換の任意の組合せを行って、最終コンストラクトに至るのであるが、ただし、最終コンストラクトは所望の特性を保持するものとする。アミノ酸の変化はまた、グリコシル化部位の数又は位置を変化させるなど、抗原結合タンパク質の翻訳後プロセスを改変する場合もある。ある特定の実施形態では、抗原結合タンパク質バリアントは、エピトープ結合に直接関与するアミノ酸残基を改変する目的で調製される。他の実施形態では、本明細書に記載の目的のため、エピトープ結合に直接関与しない残基、又はエピトープ結合に何ら関与しない残基の改変が望ましい。ＣＤＲ領域及び／又はフレームワーク領域のいずれかにおける変異誘発が企図される。抗原結合タンパク質のアミノ酸配列における有用な改変を設計するために、当業者は共分散分析技術を使用することができる。例えば、Ｃｈｏｕｌｉｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ４１：４７５－４８４，２０００；Ｄｅｍａｒｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３５：４１－４８，２００４；Ｈｕｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １６（５）：３８１－８６，２００３；Ａｕｒｏｒａ ｅｔ ａｌ．、米国特許出願公開第２００８／０３１８２０７Ａ１号明細書；Ｇｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ．、米国特許出願公開第２００９／００４８１２２Ａ１号明細書；Ｕｒｅｃｈ ｅｔ ａｌ．、国際公開第２００８／１１０３４８Ａ１号パンフレット；Ｂｏｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．、国際公開第２００９／００００９９Ａ２号パンフレットを参照されたい。共分散分析によって決定されるそのような改変は、抗原結合タンパク質の効力、薬物動態学的、薬力学的及び／又は製造可能性の特性を改善することができる。
本発明の核酸配列．当業者に理解されるように、遺伝暗号の縮重のために、極めて多数の核酸が作製される場合があり、それらの全ては、本発明のＣＤＲ（並びに本明細書に記載される抗原結合タンパク質の重鎖及び軽鎖又は他の構成要素）をコードする。したがって、特定のアミノ酸配列を同定したら、当業者は、コードされたタンパク質のアミノ酸配列を変化させない方法で１つ以上のコドンの配列を単に改変することにより、任意の数の異なる核酸を作製し得るであろう。
本発明はまた、本発明の多重特異性抗体コンストラクトの１つ以上の構成要素（例えば、可変領域、軽鎖、重鎖、改変された重鎖、及びＦｄ断片）をコードする１つ以上の核酸を含むベクターを含む。「ベクター」という用語は、タンパク質コード情報を宿主細胞に移入するために使用される任意の分子又は実体（例えば、核酸、プラスミド、バクテリオファージ又はウイルス）を指す。ベクターの例としては、以下に限定されないが、プラスミド、ウイルスベクター、非エピソーム哺乳動物ベクター及び発現ベクター、例えば、組換え発現ベクターが挙げられる。「発現ベクター」又は「発現コンストラクト」という用語は、本明細書で使用する場合、特定の宿主細胞において作動可能に連結されるコード配列の発現に必要な、所望のコード配列及び適切な核酸制御配列を含有する組換えＤＮＡ分子を指す。発現ベクターは、転写、翻訳に影響を及ぼすか又はそれを制御し、且つイントロンが存在する場合、それに作動可能に連結されたコード領域のＲＮＡスプライシングに影響を及ぼす配列を含むことができるが、これに限定されない。原核生物での発現に必要な核酸配列には、プロモーター、任意選択によりオペレーター配列、リボソーム結合部位、及び場合によりその他の配列が含まれる。真核細胞は、プロモーター、エンハンサー、並びに終結シグナル及びポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。分泌シグナルペプチド配列もまた、任意選択により発現ベクターによってコードされ、目的のコード配列に作動可能に連結されることが可能であり、これにより、所望の場合、細胞から目的のポリペプチドがより容易に単離されるように、組換え宿主細胞に発現ポリペプチドを分泌させることができる。例えば、いくつかの実施形態では、シグナルペプチド配列は、本発明のポリペプチド配列のいずれかのアミノ末端に付加／融合され得る。ある特定の実施形態では、ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣ（配列番号８９４）のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドは、本発明のポリペプチド配列のいずれかのアミノ末端に融合される。他の実施形態では、ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡ（配列番号８９５）のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドは、本発明のポリペプチド配列のいずれかのアミノ末端に融合される。さらに他の実施形態では、ＭＴＣＳＰＬＬＬＴＬＬＩＨＣＴＧＳＷＡ（配列番号８９６）のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドは、本発明のポリペプチド配列のいずれかのアミノ末端に融合される。本明細書に記載されるポリペプチド配列のアミノ末端に融合され得る他の好適なシグナルペプチド配列には、ＭＥＡＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号８９７）、ＭＥＷＴＷＲＶＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳ（配列番号８９８）、ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号８９９）、ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号９００）、ＭＫＨＬＷＦＦＬＬＬＶＡＡＰＲＷＶＬＳ（配列番号９０１）、及びＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ（配列番号９０２）が含まれる。他のシグナルペプチドは当業者に知られており、例えば、特定の宿主細胞における発現を促進又は最適化するために、本発明のポリペプチド鎖のいずれかに融合され得る。
通常、本発明の二重特異性抗原タンパク質を産生するために宿主細胞中で使用される発現ベクターは、プラスミド維持のための配列、並びに多重特異性抗体コンストラクトの構成要素をコードする外因性ヌクレオチド配列のクローン化及び発現のための配列を含有することになる。ある特定の実施形態において一括して「フランキング配列」と呼ばれるこのような配列は、典型的には、以下のヌクレオチド配列：プロモーター、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナー及びアクセプタースプライス部位を含有する完全イントロン配列、ポリペプチド分泌のためのリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現されることになるポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、並びに選択マーカーエレメントの１つ以上を含むことになる。これらの配列の各々を以下に記載する。
任意選択により、ベクターは「タグ」コード配列、すなわち、ポリペプチドコード配列の５’又は３’末端に位置するオリゴヌクレオチド分子を含有してもよく、このオリゴヌクレオチドタグ配列はポリＨｉｓ（ヘキサＨｉｓ（配列番号９２５）など）、ＦＬＡＧ、ＨＡ（ヘマグルチニンインフルエンザウイルス）、ｍｙｃ、又は市販の抗体が存在する別の「タグ」分子をコードする。このタグは、通常、ポリペプチドの発現の際にポリペプチドに融合され、宿主細胞からのポリペプチドの親和性精製又は検出のための手段として機能し得る。親和性精製は、例えば、タグに対する抗体を親和性マトリックスとして使用するカラムクロマトグラフィーによって実現することができる。任意選択により、その後、ある特定の切断用ペプチダーゼを使用するなどの様々な手段によって、精製されたポリペプチドからタグを除去することができる。
フランキング配列は、同種（すなわち、宿主細胞と同じ種及び／又は株に由来）、異種（すなわち、宿主細胞種又は株以外の種に由来）、ハイブリッド（すなわち、２つ以上の源由来のフランキング配列の組合せ）、合成、又は天然であってもよい。したがって、フランキング配列の供給源は、そのフランキング配列が宿主細胞機構において機能的であり、且つ宿主細胞機構によって活性化され得ることを条件として、任意の原核生物若しくは真核生物、任意の脊椎生物若しくは無脊椎生物又は任意の植物であり得る。
本発明のベクターにおいて有用なフランキング配列は、当技術においてよく知られるいくつかの方法のいずれかによって得てもよい。典型的には、本明細書において有用なフランキング配列は、マッピング及び／又は制限エンドヌクレアーゼ消化によって以前に同定されていることになるため、適切な制限エンドヌクレアーゼを用いて、適切な組織源から単離することができる。場合により、フランキング配列の全ヌクレオチド配列が知られている場合がある。ここでは、フランキング配列は、核酸合成又はクローニングに日常的に行われている方法を使用して合成され得る。
フランキング配列の全てが知られているか、又はその一部のみが知られているかにかかわらず、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、且つ／又は同じ若しくは別の種に由来するオリゴヌクレオチド及び／若しくはフランキング配列断片などの好適なプローブによりゲノムライブラリーをスクリーニングすることによって、フランキング配列を得てもよい。フランキング配列が不明である場合、フランキング配列を含有するＤＮＡの断片は、例えば、コード配列又は１つ又は複数の別の遺伝子すら含有し得るより大きなＤＮＡ片から単離され得る。単離は、制限エンドヌクレアーゼ消化によって適当なＤＮＡ断片を生成し、続いてアガロースゲル精製、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）又は当業者に知られた他の方法を使用して単離することにより達成され得る。この目的を達成するのに適した酵素の選択は、当業者であれば容易に明らかとなろう。
複製起点は典型的に、市販の原核生物発現ベクターの一部であり、当該起点は、宿主細胞内でのベクターの増幅を補助する。選択したベクターが複製起点部位を含有していなければ、知られている配列に基づいて当該部位を化学的に合成して、ベクター中にライゲートしてもよい。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）に由来する複製起点は、ほとんどのグラム陰性菌に適しており、様々なウイルス性の起点（例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、又はパピローマウイルス、例えば、ＨＰＶ若しくはＢＰＶなど）が哺乳動物細胞におけるベクターのクローン化に有用である。一般に、複製起点成分は哺乳動物発現ベクターには必要でない（例えば、ＳＶ４０起点は、ウイルス初期プロモーターも含有するという理由でのみ、使用されることが多い）。
転写終結配列は典型的に、ポリペプチドコード領域の末端に対して３’側に位置しており、転写を終結させるように機能する。通常、原核細胞における転写終結配列は、Ｇ－Ｃに富む断片とそれに続くポリＴ配列である。この配列はライブラリーから容易にクローン化されるか、又はベクターの一部として、市販品を購入する場合さえあるが、既知の核酸合成の方法を使用して容易に合成することもできる。
選択マーカー遺伝子は、選択培養培地中で増殖させた宿主細胞の生存及び増殖に必要なタンパク質をコードする。典型的な選択マーカー遺伝子は、（ａ）原核生物宿主細胞に、抗生物質若しくは他の毒素、例えば、アンピシリン、テトラサイクリン、若しくはカナマイシンに対する耐性を付与し；（ｂ）細胞の栄養要求性欠損を補完し；又は（ｃ）複合培地若しくは規定培地からは利用不能の重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。特異的選択マーカーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、及びテトラサイクリン耐性遺伝子である。有利には、ネオマイシン耐性遺伝子は、原核宿主細胞及び真核宿主細胞の両方でも選択に使用され得る。
他の選択遺伝子を使用して、発現されることになる遺伝子を増幅してもよい。増幅は、増殖又は細胞生存にとって重要なタンパク質の産生に必要とされる遺伝子が、連続する世代の組換え細胞の染色体内でタンデムに反復されるプロセスである。哺乳動物細胞に好適な選択マーカーの例としては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）及びプロモーターレスチミジンキナーゼ遺伝子が挙げられる。哺乳動物細胞形質転換体を、この形質転換体のみが唯一、ベクター中に存在する選択遺伝子によって生存するように適合されている選択圧下に置く。選択圧は、培地中の選択剤の濃度が連続的に増加する条件下で形質転換された細胞を培養することによって課され、それによって、選択可能な遺伝子及び本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトの１つ以上の構成要素などの別の遺伝子をコードするＤＮＡの両方の増幅を導く。その結果、増幅されたＤＮＡから多量のポリペプチドが合成される。
リボソーム結合部位は、通常、ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、シャイン・ダルガーノ配列（原核生物）又はコザック配列（真核生物）によって特徴付けられる。このエレメントは、典型的には、プロモーターの３’側、及び発現されることになるポリペプチドのコード配列の５’側に位置する。ある特定の実施形態では、１つ以上のコード領域は、内部リボソーム結合部位（ＩＲＥＳ）に作動可能に連結され、単一のＲＮＡ転写産物から２つのオープンリーディングフレームの翻訳を可能にし得る。
真核宿主細胞発現系においてグリコシル化が所望される場合などのいくつかの場合には、グリコシル化又は収率を向上させるために、種々のプレ配列又はプロ配列を操作し得る。例えば、特定のシグナルペプチドのペプチダーゼ切断部位を改変するか、又はプロ配列を付加することができ、これもグリコシル化に影響し得る。最終タンパク質産物は－１位（成熟タンパク質の最初のアミノ酸に対して）に、発現に付随する１つ以上の追加のアミノ酸を有する場合があり、これは、完全には除去されていなかった可能性がある。例えば、最終タンパク質産物は、アミノ末端に結合した、ペプチダーゼ切断部位に見出される１つ又は２つのアミノ酸残基を有し得る。代わりに、酵素が成熟ポリペプチド内のこのような領域で切断する場合、いくつかの酵素切断部位の使用は、所望のポリペプチドのわずかに切断された形態をもたらし得る。
本発明の発現ベクター及びクローニングベクターは、通常、宿主生物によって認識され、ポリペプチドをコードする分子に作動可能に連結されたプロモーターを含有する。「作動可能に連結された」という用語は、本明細書で使用する場合、所与の遺伝子の転写及び／又は所望のタンパク質分子の合成を指令することができる核酸分子が産生されるように、２つ以上の核酸配列が連結されていることを指す。例えば、タンパク質コード配列に「作動可能に連結された」ベクター中の制御配列は、タンパク質コード配列の発現が制御配列の転写活性と適合する条件下で行われるように、タンパク質コード配列にライゲートされる。より具体的には、プロモーター及び／又はエンハンサー配列（シス作用性転写制御エレメントの任意の組合せを含む）は、それが適切な宿主細胞又は他の発現系においてコード配列の転写を刺激又は調節する場合、そのコード配列に作動可能に連結されている。
プロモーターは、構造遺伝子（一般に、約１００～１０００ｂｐ以内）の開始コドンの上流（すなわち５’側）に位置し、構造遺伝子の転写を制御する非転写配列である。従来、プロモーターは、２つのクラス：誘導性プロモーター及び構成的プロモーターの１つにグループ化される。誘導性プロモーターは、栄養素の有無又は温度の変化などの培養条件の何らかの変化に応じ、その制御下で、ＤＮＡからの転写レベルの増加を開始する。一方、構成的プロモーターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子を均一に、すなわち遺伝子発現に対する制御をほとんど又は全く行わずに転写する。種々の潜在的宿主細胞によって認識される多数のプロモーターがよく知られている。好適なプロモーターは、供給源ＤＮＡから制限酵素消化によりプロモーターを除去し、所望のプロモーター配列をベクターに挿入することによって、本発明の多重特異性抗体コンストラクトの、例えば、重鎖、軽鎖、改変された重鎖、又は他の構成要素をコードするＤＮＡに作動可能に連結される。
酵母宿主に用いるのに適したプロモーターもまた、当技術分野においてよく知られている。有利には、酵母エンハンサーが、酵母プロモーターと共に用いられる。哺乳動物宿主細胞での使用に適したプロモーターはよく知られており、こうしたプロモーターとしては、限定はされないが、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２型など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから得られたものが挙げられる。他の好適な哺乳動物プロモーターとしては、異種哺乳動物プロモーター、例えば、熱ショックプロモーター及びアクチンプロモーターが挙げられる。
対象となり得るさらなるプロモーターとしては、ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅｎｏｉｓｔ ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４－３１０）；ＣＭＶプロモーター（Ｔｈｏｒｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６５９－６６３）；ラウス羅臼肉腫ウイルスの３’側の長い末端反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９８０、Ｃｅｌｌ２２：７８７－７９７）；ヘルパスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４４－１４４５）；メタロチオネイン遺伝子由来のプロモーター及び調節配列（Ｐｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９－４２）；並びにベータ－ラクタマーゼプロモーターなどの原核生物プロモーター（Ｖｉｌｌａ－Ｋａｍａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７５：３７２７－３７３１）；又はｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２１－２５）が挙げられるが、これらに限定されない。組織特異性を示し、トランスジェニック動物で利用されている以下の動物転写制御領域も対象とする：膵腺房細胞において活性であるエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６３９－６４６；Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９－４０９；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，１９８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５－５１５）；膵β細胞において活性であるインスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１５：１１５－１２２）；リンパ細胞において活性である免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６４７－６５８；Ａｄａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１８：５３３－５３８；Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７：１４３６－１４４４）；精巣、乳房、リンパ球及び肥満細胞において活性であるマウス乳房腫瘍ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４５：４８５－４９５）；肝臓において活性であるアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８－２７６）；肝臓において活性であるα－フェト－タンパク質遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１６３９－１６４８；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：５３－５８）；肝臓において活性であるα１－アンチトリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：１６１－１７１）；骨髄細胞において活性であるβグロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１５：３３８－３４０；Ｋｏｌｌｉａｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４６：８９－９４）；脳におけるオリゴデンドロサイト細胞において活性であるミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｃｅｌｌ ４８：７０３－７１２）；骨格筋において活性であるミオシン軽鎖２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３－２８６）；及び視床下部において活性である性腺刺激放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：１３７２－１３７８）。
エンハンサー配列をベクターに挿入して、高等真核生物によって、多重特異性抗体コンストラクトの構成要素（例えば、軽鎖、重鎖、改変された重鎖、Ｆｄ断片）をコードするＤＮＡの転写を増加させてもよい。エンハンサーは、プロモーターに作用して転写を増加させる、通常、約１０～３００ｂｐ長のＤＮＡのシス作用性エレメントである。エンハンサーは、方向及び位置に比較的依存せず、転写単位に対して５’側及び３’側の両方の位置に見出されている。哺乳動物遺伝子から入手可能な複数のエンハンサー配列が知られている（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、アルファ－フェト－タンパク質、及びインスリン）。しかしながら、典型的には、ウイルス由来のエンハンサーが使用される。当技術において知られているＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーは、真核生物プロモーターの活性化のための例示的な増強エレメントである。エンハンサーは、ベクターにおいてコード配列の５’側又は３’側のいずれに位置してもよいが、典型的には、プロモーターから５’側の部位に位置する。適切な天然又は異種性のシグナル配列（リーダー配列又はシグナルペプチド）をコードする配列を発現ベクターに組み込んで、細胞外への抗体の分泌を促進することができる。シグナルペプチド又はリーダーの選択は、抗体が産生されることになる宿主細胞の型に依存し、異種性のシグナル配列が天然のシグナル配列に取って代わることができる。シグナルペプチドの例は、上に記載されている。哺乳動物宿主細胞において機能する他のシグナルペプチドには、米国特許第４，９６５，１９５号明細書に記載されるインターロイキン－７（ＩＬ－７）のシグナル配列；Ｃｏｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：７６８に記載されるインターロイキン－２受容体のシグナル配列；欧州特許第０３６７ ５６６号明細書に記載されるインターロイキン－４受容体シグナルペプチド；米国特許第４，９６８，６０７号明細書に記載されるＩ型インターロイキン－１受容体シグナルペプチド；欧州特許第０ ４６０ ８４６号に記載されるＩＩ型インターロイキン－１受容体シグナルペプチドが含まれる。
提供される発現ベクターは、市販のベクターなどの出発ベクターから構築してもよい。そのようなベクターは、所望のフランキング配列の全てを含有していてもよいし、含有していなくてもよい。本明細書中に記載されるフランキング配列の１つ以上がベクター内に最初から存在していない場合、それらを個々に得てベクター中にライゲートしてもよい。フランキング配列の各々を得るために用いられる方法は、当業者によく知られている。発現ベクターを宿主細胞に導入し、それにより、本明細書に記載される核酸によってコードされる融合タンパク質を含むタンパク質を産生することができる。
ある特定の実施形態では、本発明の多重特異性抗体コンストラクトの異なる構成要素をコードする核酸は、同じ発現ベクターに挿入され得る。例えば、抗－第１の標的抗原軽鎖をコードする核酸は、抗－第１の標的抗原重鎖をコードする核酸と同じベクターにクローン化され得る。そのような実施形態では、軽鎖及び重鎖が同じｍＲＮＡ転写産物から発現されるように、配列内リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）により、単一のプロモーターの制御下で、２つの核酸が分離されてもよい。代わりに、２つの核酸は、軽鎖及び重鎖が２つの別個のｍＲＮＡ転写産物から発現されるように、２つの別個のプロモーターの制御下にあってもよい。いくつかの実施形態では、抗－第１の標的抗原軽鎖及び重鎖をコードする核酸は、ある発現ベクターにクローン化され、抗－第２の標的抗原軽鎖及び重鎖をコードする核酸は、第２の発現ベクターにクローン化される。
同様に、ＩｇＧ－Ｆａｂ多重特異性抗体コンストラクトについては、３つの構成要素の各々をコードする核酸は、同じ発現ベクターにクローン化されてもよい。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ－Ｆａｂ分子の軽鎖をコードする核酸、及び第２のポリペプチド（Ｃ末端のＦａｂドメインのもう半分を含む）をコードする核酸は、１つの発現ベクターにクローン化され、一方、修飾された重鎖（重鎖及びＦａｂドメインの半分を含む融合タンパク質）をコードする核酸は、第２の発現ベクターにクローン化される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトの全ての構成要素は、同じ宿主細胞集団から発現される。例えば、１つ以上の構成要素が別個の発現ベクターにクローン化される場合でも、宿主細胞は、両方の発現ベクターで同時トランスフェクトされ、その結果、１つの細胞が多重特異性抗体コンストラクトの全ての構成要素を産生する。
ベクターが構築され、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトの構成要素をコードする１つ以上の核酸分子がベクターの適当な部位に挿入された後、完成したベクターは、増幅及び／又はポリペプチド発現に好適な宿主細胞に挿入され得る。したがって、本発明は、多重特異性抗体コンストラクトの構成要素をコードする１つ以上の発現ベクターを含む単離された宿主細胞を包含する。「宿主細胞」という用語は、本明細書で使用する場合、核酸で形質転換されているか、又は形質転換されることが可能であり、それにより、目的の遺伝子を発現する細胞を指す。この用語には、目的の遺伝子が存在する限り、親細胞の子孫の形態又は遺伝的構造が元の親細胞と同一であるか否かにかかわらず、親細胞の子孫が含まれる。一実施形態において少なくとも１つの発現制御配列（例えば、プロモーター又はエンハンサー）に作動可能に連結された本発明の単離された核酸を含む宿主細胞は、「組換え宿主細胞」である。
抗原結合タンパク質の発現ベクターの選択された宿主細胞への形質転換は、トランスフェクション、感染、リン酸カルシウム共沈、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、又は他の知られた技術を含むよく知られた方法によって達成され得る。選択される方法は、ある程度、使用される宿主細胞の型に応じることになる。これらの方法及び他の好適な方法は、当業者によく知られており、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１、上掲に記載されている。
宿主細胞は、適切な条件下で培養されると抗原結合タンパク質を合成し、抗原結合タンパク質はその後、（宿主細胞がそれを培地に分泌する場合は）培養培地から、又は（それが分泌されない場合は）それを産生する宿主細胞から直接的に、採取することができる。適切な宿主細胞の選択は、所望の発現レベル、活性（グリコシル化又はリン酸化など）に望ましいか又は必要であるポリペプチドの修飾、及び生物学的に活性な分子へのフォールディングの容易さなどの様々な要因に依存することになる。
例示的な宿主細胞には、原核生物、酵母、又は高等真核生物細胞が含まれる。原核生物の宿主細胞には、グラム陰性微生物又はグラム陽性微生物などの真正細菌、例えば、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えば、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えば、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えば、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、及びシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、並びにバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、例えば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）及びストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が含まれる。真核生物の微生物、例えば、糸状菌又は酵母は、組換えポリペプチドに好適なクローニング宿主又は発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、又は一般的なパン酵母は、下等真核生物宿主微生物の中で最も一般的に使用される。しかしながら、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、例えば、Ｐ．パストリス（Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、クルイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、トリコデルマ・レーシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）、アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）、シュワニオミセス属（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）、例えば、シュワニオミセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、並びに糸状菌、例えば、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）及びアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主、例えば、Ａ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）、Ａ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）などの複数の他の属、種及び株が、ここで一般に利用可能であり、有用である。
グリコシル化された抗原結合タンパク質の発現のための宿主細胞は、多細胞生物由来であり得る。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が含まれる。多くのバキュロウイルスの株及び変異体、並びにツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（イモムシ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ）（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ミバエ）及びカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）などの宿主由来の、対応する昆虫の許容宿主細胞が同定されている。このような細胞のトランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、オートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ－１バリアント、及びカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）ＮＰＶのＢｍ－５株が公的に入手可能である。
脊椎動物宿主細胞もまた好適な宿主であり、このような細胞からの抗原結合タンパク質の組換え産生は常法となっている。発現の宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当技術分野でよく知られており、限定されないが、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な不死化細胞株、例えば、限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、例えばＣＨＯＫ１細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ６１）、ＤＸＢ－１１、ＤＧ－４４及びチャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６，１９８０）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚腎臓株（２９３細胞又は懸濁培養での増殖用にサブクローン化された２９３細胞、（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９，１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１，１９８０）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞癌細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳癌（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８，１９８２）；ＭＲＣ ５細胞又はＦＳ４細胞；哺乳動物骨髄腫細胞及び多くの他の細胞株が挙げられる。ある特定の実施形態では、本発明の多重特異性抗体コンストラクトをどの細胞株が高い発現レベルを有し、恒常的に産生するかを決定することによって細胞株を選択してもよい。別の実施形態では、それ自体の抗体は作製しないが、異種性抗体を作製及び分泌する能力を有するＢ細胞系統由来の細胞株を選択することができる。いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞が、本発明の多重特異性抗体コンストラクトを発現するための宿主細胞である。
多重特異性抗体コンストラクトの産生のために、宿主細胞は上記の核酸又はベクターで形質転換又はトランスフェクトされ、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、又は所望の配列をコードする遺伝子の増幅に適するように改変された従来の栄養培地中で培養される。加えて、選択マーカーによって分離された転写単位の複数のコピーを有する新規なベクター及びトランスフェクトされた細胞株は、抗原結合タンパク質の発現に特に有用である。したがって、本発明はまた、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトを調製するための方法であって、本明細書に記載される１つ以上の発現ベクターを含む宿主細胞を、当該１つ以上の発現ベクターによってコードされる多重特異性抗体コンストラクトの発現を可能にする条件下にて培養培地中で培養すること；及び培養培地から多重特異性抗体コンストラクトを回収することを含む方法も提供する。
本発明の抗原結合タンパク質を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地中で培養され得る。ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（ＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）及びダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、宿主細胞を培養するのに適している。さらに、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４，１９７９；Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５，１９８０；米国特許第４，７６７，７０４号明細書；同第４，６５７，８６６号明細書；同第４，９２７，７６２号明細書；同第４，５６０，６５５号明細書；若しくは同第５，１２２，４６９号明細書；国際公開第９０１０３４３０号パンフレット；国際公開第８７／００１９５号パンフレット；又は米国再発行特許第３０，９８５号明細書に記載されている培地のいずれかを、宿主細胞の培養培地として使用することができる。これらの培地のいずれかは、必要に応じて、ホルモン及び／又は他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、又は上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸塩など）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質（ゲンタマイシン（商標）薬剤）、微量元素（通常、マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、並びにグルコース又は同等のエネルギー源を補充され得る。任意の他の必要な栄養補助物質も、当業者に知られる適切な濃度で含まれ得る。温度及びｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
宿主細胞を培養すると、多重特異性抗体コンストラクトは、細胞内、細胞膜周辺腔内で産生され得るか、又は培地中に直接分泌され得る。抗原結合タンパク質が細胞内で産生される場合、第１の工程として、微粒子の破片、すなわち宿主細胞又は溶解した断片を、例えば、遠心分離又は限外濾過によって除去する。二重特異性抗原結合タンパク質は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、陽イオン若しくは陰イオン交換クロマトグラフィー、又は親和性リガンドとして目的の抗原又はプロテインＡ若しくはプロテインＧを使用するアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製することができる。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２又はγ４重鎖に基づくポリペプチドを含むタンパク質を精製するために使用することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３，１９８３）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３に推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７１５７５，１９８６）。親和性リガンドが結合するマトリックスは、ほとんどの場合、アガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。コントロールドポアガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスは、アガロースで達成できるものより早い流速及び短い処理時間を可能にする。タンパク質がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。回収される特定の多重特異性抗体コンストラクトに応じて、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿などのタンパク質精製のための他の技術も可能である。
本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、生体試料中での標的抗原の検出及び標的抗原を発現する細胞又は組織の同定に有用である。本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクトは、標的抗原と関連する疾患及び／又は状態を検出するか、診断するか、又はモニターする診断上の目的のために使用され得る。また、当業者に知られる古典的な免疫組織学的方法（例えば、Ｔｉｊｓｓｅｎ，１９９３，Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｖｏｌ １５（Ｅｄｓ Ｒ．Ｈ．Ｂｕｒｄｏｎ ａｎｄ Ｐ．Ｈ．ｖａｎ Ｋｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）；Ｚｏｌａ，１９８７，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐｐ．１４７－１５８（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｊａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６－９８５；Ｊａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７－３０９６）を使用する、試料中の標的抗原の存在の検出のための方法が提供される。いずれかの標的の検出は、インビボ又はインビトロで実施することができる。
一実施形態は、腫瘍又は癌疾患若しくは転移性癌疾患の予防、治療又は改善における使用のための本発明の多重特異性抗体コンストラクト又は本発明のプロセスに従って生成された多重特異性抗体コンストラクトを提供する。
本発明の好ましい実施形態に従って、前記腫瘍又は癌疾患は、固形腫瘍疾患である。
本明細書に記載される製剤は、それを必要とする患者において、本明細書に記載される病的な医学的状態を治療、改善及び／又は予防する医薬組成物として有用である。用語「治療」は、治療的治療及び予防的又は抑止的手段の両方を指す。治療は、疾患、疾患の症状又は疾患素因を治癒する、治す、軽減する、緩和する、変化させる、矯正する、改善する、好転させる又は影響を与えることを目的とした、疾患／障害、疾患／障害の症状又は疾患／障害の素因を有する患者の身体、単離された組織又は細胞に対する製剤の適用又は投与を含む。
本明細書で使用する場合、用語「改善」は、本発明による多重特異性抗体コンストラクトのそれを必要とする対象への投与による、本明細書の以下に示す腫瘍又は癌若しくは転移性癌を有する患者の疾患状態のあらゆる好転を指す。このような好転はまた、患者の腫瘍又は癌若しくは転移性癌の進行を遅らせるか又は止めることであるとみなされてもよい。本明細書で使用する場合、用語「予防」は、本発明による多重特異性抗体コンストラクトのそれを必要とする対象への投与による、本明細書の以下に示す腫瘍又は癌若しくは転移性癌を有する患者の発症又は再発の回避を意味する。
用語「疾患」は、本明細書に記載される多重特異性抗体コンストラクト又は医薬組成物を用いた治療から恩恵を受けることになる任意の状態を指す。これには、哺乳動物を対象の疾患に罹患させやすくする病的状態を含む、慢性及び急性の障害又は疾患が含まれる。「新生物」は、組織の異常な増殖であり、必ずしもそうとは限らないが、通常は腫瘤を形成する。また、腫瘤を形成する場合、それは、一般に「腫瘍」と呼ばれる。新生物又は腫瘍は、良性、潜在性悪性（前癌性）又は悪性であり得る。悪性新生物は、一般に癌と呼ばれる。それらは通常、周囲の組織に侵入してそれを破壊し、転移を形成し得る、すなわち、それらは身体の他の部分、組織、又は臓器に広がる。したがって、用語「転移性癌」は、原発腫瘍のもの以外の他の組織又は臓器への転移を包含する。リンパ腫及び白血病は、リンパ系新生物である。本発明の目的において、それらは、用語「腫瘍」又は「癌」にも包含される。
本発明の好ましい実施形態では、腫瘍又は癌疾患は、固形腫瘍疾患であり、転移性癌疾患は、前述のいずれかに由来し得る。
本発明に関する好ましい腫瘍又は癌疾患は、乳癌、カルチノイド、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌、中皮腫、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、腎臓癌及び胃癌からなる群から選択される。より好ましくは、好ましくは固形腫瘍疾患である腫瘍又は癌疾患は、卵巣癌、膵臓癌、中皮腫、肺癌、胃癌及び三種陰性乳癌からなる群から選択され得る。転移性癌疾患は、前述のいずれかに由来し得る。
本発明はまた、腫瘍又は癌疾患若しくは転移性癌疾患の治療又は改善のための方法であって、それを必要とする対象に、本発明の多重特異性抗体コンストラクト又は本発明のプロセスに従って生成される多重特異性抗体コンストラクトを投与する工程を含む方法を提供する。
用語「必要とする対象」又は「治療を必要とする」対象は、すでにその障害を有する対象及びその障害が予防されることになる対象を含む。必要とする対象又は「患者」は、予防的治療又は治療的治療のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳動物対象を含む。
本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、一般に、とりわけバイオアベイラビリティ及び持続性の範囲において、特定の投与経路及び投与方法、特定の投与量及び投与頻度、特定の疾患の特定の治療に合わせて設計されることになる。組成物の材料は、好ましくは、投与部位に許容される濃度で製剤化される。
したがって、製剤及び組成物は、本発明に従って任意の好適な投与経路による送達に合わせて設計され得る。本発明に関連して、投与経路は、
・局所経路（例えば、皮膚上、吸入、鼻、眼、耳介／耳、膣、粘膜）；
・腸経路（例えば、経口、胃腸、舌下、唇下、頬側、直腸）；及び
・非経口経路（例えば、静脈内、動脈内、骨内、筋肉内、脳内、脳室内、硬膜外、髄腔内、皮下、腹腔内、羊膜外、関節内、心臓内、皮内、病巣内、子宮内、膀胱内、硝子体内、経皮、鼻腔内、経粘膜、滑液嚢内、管腔内）を含むが、これらに限定されない。
本発明の医薬組成物及び多重特異性抗体コンストラクトは、例えば、ボーラス注射などの注射による、又は持続注入などの注入による、非経口投与、例えば、皮下又は静脈内送達に特に有用である。医薬組成物は、医療機器を用いて投与され得る。医薬組成物を投与するための医療機器の例は、米国特許第４，４７５，１９６号明細書；同第４，４３９，１９６号明細書；同第４，４４７，２２４号明細書；同第４，４４７，２３３号明細書；同第４，４８６，１９４号明細書；同第４，４８７，６０３号明細書；同第４，５９６，５５６号明細書；同第４，７９０，８２４号明細書；同第４，９４１，８８０号明細書；同第５，０６４，４１３号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，３８３，８５１号明細書；及び同第５，３９９，１６３号明細書に記載されている。
特に、本発明は、好適な組成物の中断のない投与を実現する。非限定的な例として、中断のない又は実質的に中断のない、すなわち連続的な投与は、患者体内への治療薬の流入を調整するための、患者が装着した小型ポンプシステムによって実現され得る。本発明の多重特異性抗体コンストラクトを含む医薬組成物は、前記ポンプシステムを使用することによって投与することができる。そのようなポンプシステムは、一般に当技術分野で知られており、通常、注入する治療薬を含有するカートリッジの定期交換に依拠する。そのようなポンプシステムでカートリッジを交換する際、交換時以外には中断しない患者体内への治療薬の流入に一時的な中断が結果として生じる場合がある。そのような場合でも、カートリッジ交換前の投与段階及びカートリッジ交換後の投与段階はなお、ともにこのような治療薬の「中断のない投与」を構成する本発明の医薬的手段及び方法の意味の範囲内と見なされるであろう。
本発明の多重特異性抗体コンストラクトの連続投与又は中断のない投与は、流体をレザバーから送り出すための流体送出機構及び送出機構を駆動するための駆動機構を含む、流体送達デバイス又は小型ポンプシステムによる静脈内又は皮下投与であり得る。皮下投与のためのポンプシステムは、患者の皮膚に穿通し、好適な組成物を患者体内に送達するための針又はカニューレを含み得る。前記ポンプシステムを、静脈、動脈又は血管を問わず、患者の皮膚に直接固定又は装着することでポンプシステムと患者の皮膚とを直接接触させることが可能になる。このポンプシステムは、患者の皮膚に２４時間～数日間装着することができる。レザバーの容積が小さい小型のポンプシステムの場合もある。非限定的な例として、投与される好適な医薬組成物のためのレザバーの容積は、０．１～５０ｍｌであり得る。
連続投与は、皮膚に装着され時折交換されるパッチによって経皮的でもあり得る。当業者は、この目的に好適な薬物送達のためのパッチシステムを認識している。経皮投与は、例えば、第１の使用済みパッチの直接隣の皮膚表面に、第１の使用済みパッチを除去する直前に、新しい第２のパッチを装着すると同時に第１の使用済みパッチの交換を完了できる有利さがあることから、中断のない投与に特に適していることに注目されたい。流入の中断又は電池故障の問題は生じない。
医薬組成物が凍結乾燥されている場合、まず凍結乾燥材料を投与前に適切な液体で再構成する。凍結乾燥材料を、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は凍結乾燥前にタンパク質が存在した同じ製剤で再構成し得る。
本発明の組成物は、例えば、本明細書に記載される種間特異性を示す本発明の多重特異性抗体コンストラクトをチンパンジーではない霊長類、例えばマカクに用量を増加させながら投与することによる用量漸増試験によって決定できる好適な用量で対象に投与することができる。上述のとおり、本明細書に記載される種間特異性を示す本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、チンパンジーではない霊長類の前臨床試験において同一の形態で使用でき、且つヒトにおける薬物として使用できるという利点がある。投与計画は、主治医が臨床的要因によって決定することになる。医学分野でよく知られるとおり、ある１人の患者に対する投与量は、その患者の体格、体表面積、年齢、投与される個々の化合物、性別、投与時間及び投与経路、全身健康状態並びに同時に投与されている他の薬物を含む多くの要因に依存する。
用語「有効用量」又は「有効投与量」は、所望の効果を達成するか又は少なくとも部分的に達成するのに十分な量と定義される。用語「治療有効用量」は、疾患に既に罹患している患者の疾患及びその合併症を治癒するか又は少なくとも部分的に抑止するのに十分な量と定義される。この用途に効果的な量又は用量は、治療される病態（適応症）、送達される多重特異性抗体コンストラクト、治療の内容及び目的、疾患の重症度、前治療、患者の病歴及び治療薬に対する反応性、投与経路、体格（体重、体表面積又は臓器サイズ）及び／又は患者の状態（年齢及び全身健康状態）、並びに患者自身の免疫系の全身状態に依存することになる。適当な用量は、１回の投与又は複数回にわたる投与で患者に投与できるように、また最適な治療効果を得るために主治医の判断に従って調整することができる。
治療有効量の本発明の多重特異性抗体コンストラクトは、好ましくは、疾患症状の重症度を低下させるか、疾患症状がない期間の頻度若しくは期間を増加させるか、又は疾患の苦痛に起因する機能障害若しくは能力障害を防止する。ＭＳＬＮ発現腫瘍の治療に関して、治療有効量の本発明の多重特異性抗体コンストラクト、例えば、抗ＭＳＬＮ／抗ＣＤ４０多重特異性抗体コンストラクトは、好ましくは、細胞増殖又は腫瘍増殖を未治療の患者と比較して少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％阻害する。化合物が腫瘍増殖を阻害する能力は、ヒト腫瘍における有効性の予測指標となる動物モデルにおいて評価され得る。
医薬組成物は、単一の治療で投与するか、又は必要に応じて抗癌療法などの追加の療法、例えば他のタンパク質性及び非タンパク質性薬物と組み合わせて投与することができる。これらの薬物は、本明細書で定義される本発明の多重特異性抗体コンストラクトを含む組成物と同時に投与され得るか、又は前記多重特異性抗体コンストラクトの投与前若しくは投与後に既定の時間間隔及び用量で別々に投与され得る。
本明細書で使用する場合、用語「有効且つ非毒性用量」は、重大な毒性作用を生じさせずに又は本質的に生じさせずに、病的細胞の激減、腫瘍の除去、腫瘍の縮退又は疾患の安定化をもたらすのに十分である、本発明の多重特異性抗体コンストラクトの許容用量を指す。そのような有効且つ非毒性用量は、例えば、当技術分野で記載されている用量漸増試験によって決定してもよく、その用量は重篤な有害副事象を誘発する用量未満であるべきである（用量制限毒性、ＤＬＴ）。
本明細書で使用する場合、用語「毒性」は、有害事象又は重篤な有害事象として現れる薬物の毒性作用を指す。これらの副事象は、全身的な薬物忍容性の欠如及び／又は投与後の局所的な忍容性の欠如を指す場合がある。毒性は、その薬物によって引き起こされる催奇性作用又は発癌性作用も含み得る。
本明細書で使用する場合、用語「安全性」、「インビボ安全性」又は「忍容性」は、投与直後に（局所耐性）及びより長期の薬物適用期間中に重篤な有害事象を誘発しない薬物の投与と定義される。「安全性」、「インビボ安全性」又は「忍容性」は、例えば、治療中及び経過観察期間中に定期的に評価することができる。測定値は、臨床評価、例えば臓器の所見及び臨床検査値異常のスクリーニングを含む。臨床評価が実施され、ＮＣＩ－ＣＴＣ及び／又はＭｅｄＤＲＡ標準に従って正常所見からの逸脱が記録／コード化され得る。臓器の所見は、例えば、Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｖｅｎｔｓ ｖ３．０（ＣＴＣＡＥ）に示される、アレルギー／免疫学、血液／骨髄、心不整脈、凝固などの基準を含み得る。試験され得る検査パラメーターは、例えば、血液学、臨床化学、凝固プロファイル及び尿検査並びに他の体液、例えば血清、血漿、リンパ液又は脊髄液、髄液などの検査を含む。したがって、安全性は、例えば、身体検査、画像化技術（すなわち超音波、ｘ線、ＣＴスキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、技術的デバイスを用いた他の計測（すなわち心電図）、バイタルサインにより、検査パラメーターを測定し、有害事象を記録することにより評価することができる。例えば、本発明による使用及び方法において、チンパンジーではない霊長類における有害事象は、組織病理学的方法及び／又は組織化学的方法により試験され得る。上記の用語は、例えば、１９９７年７月１６日のＰｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｓａｆｅｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｓ６；ＩＣＨ Ｈａｒｍｏｎｉｓｅｄ Ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ；ＩＣＨ Ｓｔｅｅｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｍｅｅｔｉｎｇでも参照されている。
さらなる実施形態では、本発明は、本発明の多重特異性抗体コンストラクト、本発明の方法によって生成される多重特異性抗体コンストラクト、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、及び／又は本発明の宿主細胞を含むキットを提供する。
本発明に関連して、用語「キット」は、２つ以上の構成要素がコンテナ、容器又は他にまとめて梱包されており、構成要素の１つが本発明の多重特異性抗体コンストラクト、医薬組成物、ベクター又は宿主細胞に相当するものを意味する。したがって、キットは、単品として販売することができる特定の目的を達成するのに十分な製品及び／又は用具の一式であると説明することができる。
キットは、投与に適した投与量（上記を参照されたい）の本発明の多重特異性抗体コンストラクト又は医薬組成物を含有する任意の適切な形状、サイズ及び材質（好ましくは防水性、例えばプラスチック又はガラス）の１つ以上の容器（例えば、バイアル、アンプル、コンテナ、シリンジ、ボトル、バッグ）を含み得る。キットは、（例えば、リーフレット又は取扱説明書の形態の）使用のための指示書、本発明の多重特異性抗体コンストラクトを投与するための手段、例えばシリンジ、ポンプ、インフューザーなど、本発明の多重特異性抗体コンストラクトを再構成するための手段及び／又は本発明の多重特異性抗体コンストラクトを希釈するための手段をさらに含み得る。
本発明は、単回用量投与単位のためのキットも提供する。本発明のキットは、乾燥／凍結乾燥された多重特異性抗体コンストラクトを含む第１の容器及び水性製剤を含む第２の容器も含み得る。本発明の特定の実施形態において、シングルチャンバー及びマルチチャンバー式充填済みシリンジ（例えば、液体シリンジ及びリオシリンジ）を含有するキットが提供される。
抗メソセリン抗体の作製及び特徴付け
抗メソセリン抗体作製。
ヒトメソセリンに対する完全ヒト抗体は、以前に記載されるとおり（米国特許出願公開第２０１７００２９５０２Ａ１号明細書）又はＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスを免疫化することによって作製された（全体として参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，１１４，５９８号明細書；同第６，１６２，９６３号明細書；同第６，８３３，２６８号明細書；同第７，０４９，４２６号明細書；同第７，０６４，２４４号明細書；Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３－２１；Ｍｅｎｄｅｚｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６；Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｉｓ，１９９８，Ｊ．Ｅｘ．Ｍｅｄ，１８８：４８３－４９５；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３，５９３－５９７，２００２）。ＸＭＧ４－Ｋ及びＸＭＧ４－ＫＬ ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）株由来の動物が、これらの免疫化のために使用された。動物は、可溶性ヒトメソセリン－Ｈｉｓ及びカニクイザルメソセリン－Ｈｉｓで交互に免疫化された。ヒトメソセリン及びカニクイザルメソセリンに対して向けられる最高の抗原特異的な血清に固有の力価を有する動物が、ハイブリドーマ作製のために使用された（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５）。脾臓及び／又は流入領域リンパ節（各採取物に由来する）に由来するプールされたリンパ球は、好適な培地（例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中で磨砕することによってリンパ組織から分離された。Ｂ細胞は、標準的な方法を使用して選択され且つ／又は増殖させられ、当技術分野で知られた技術を使用して好適な融合パートナーと融合された。次に、ヒトメソセリン及びカニクイザルメソセリンに対する結合を有するハイブリドーマ上清が、さらなる特徴付けのために選択された。
抗メソセリン抗体の配列決定。
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）に由来する抗体に関して、ＲＮＡ（全て又はｍＲＮＡ）を、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ又はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ｍＲＮＡ ｃａｔｃｈｅｒ ｐｌｕｓキットを使用して、抗メソセリン抗体産生ハイブリドーマ細胞を含有するウェルから精製した。精製したＲＮＡを用いて、逆転写によるｃＤＮＡ合成、続いてポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）により抗体重鎖及び軽鎖可変領域（Ｖ）遺伝子を増幅した。完全ヒト抗体ガンマ重鎖を、Ｑｉａｇｅｎ１ステップ逆転写酵素ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて得た。完全ヒトカッパ軽鎖を、Ｑｉａｇｅｎ１ステップ逆転写酵素ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて得た。アミノ酸配列は、対応する核酸配列からバイオインフォマティックスにより推定した。次に、得られたアミノ酸配列を分析して、抗体の生殖細胞系列配列起点を決定し、生殖細胞系列配列からの差異を同定した。配列決定された抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応するアミノ酸配列を整列させ、これらのアラインメントを使用してクローンを類似性によってグループ化した。
抗体の生成。
選択され、配列決定された抗メソセリン抗体重鎖及び軽鎖は、哺乳動物発現ベクターにサブクローニングされ、個々の抗体が生成され、精製された。全ての抗体は、ヒトＩｇＧ１ ＳＥＦＬ２（ＲＥＦ）重鎖配列で再フォーマットされた。
ヒト及びカニクイザルメソセリンに対する抗体の結合。
ヒトメソセリンに対する抗メソセリン抗体の結合は、ヒトメソセリンを発現するように操作されたＣＨＯ細胞（ｈｕＭＳＬＮ－ＣＨＯ）に対するフローサイトメトリーによって確認された。ヒトＭＳＬＮトランスフェクトＣＨＯ細胞は、様々な濃度の精製された抗メソセリン抗体とインキュベートされ、洗浄され、ヒトＩｇＧに特異的な蛍光がコンジュゲートされた二次抗体で標識された。次に、細胞は、フローサイトメトリーによって分析された。蛍光陽性細胞のパーセンテージは、抗体濃度に対してプロットされ（図１）、ＥＣ５０は、Ｐｒｉｓｍ ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して決定された（表１）。組換えヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）メソセリンの可溶性形態に対する抗ヒトメソセリンの結合親和性もまた、結合速度（Ｋｏｎ）、解離速度（Ｋｄｉｓ）、及び平衡結合定数（ＫＤ）を定量化するＯｃｔｅｔアッセイ（表１）によって測定された。これらのデータは、ヒト及びカニクイザルメソセリンの両方に対する全ての抗ＭＳＬＮ抗体の結合を実証した。
Figure 2023507323000002
抗ＣＤ４０アゴニスト抗体の作製及び特徴付け
抗ＣＤ４０抗体の作製。
ヒトＣＤ４０に対する完全ヒト抗体を、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスを免疫化することによって作製した（米国特許第６，１１４，５９８号明細書；同第６，１６２，９６３号明細書；同第６，８３３，２６８号明細書；同第７，０４９，４２６号明細書；同第７，０６４，２４４号明細書；Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３－２１；Ｍｅｎｄｅｚｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６；Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｉｓ，１９９８，Ｊ．Ｅｘ．Ｍｅｄ，１８８：４８３－４９５；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３，５９３－５９７，２００２）。ＸＭＧ４－Ｋ及びＸＭＧ４－ＫＬ ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）株由来の動物が、これらの免疫化のために使用された。複数の免疫原及び免疫化の経路を使用して、抗ヒトＣＤ４０免疫応答を生成した。可溶性組換えタンパク質による免疫化のために、マウスを、可溶性ヒトＣＤ４０－Ｆｃ及びカニクイザルＣＤ４０－Ｆｃで交互に免疫化した。細胞ベースの免疫化のために、ＣＨＯ－Ｓ細胞を、免疫原の供給源として野生型ヒトＣＤ４０又はカニクイザルＣＤ４０のいずれかで一過的にトランスフェクトした。動物を、これらの一過的にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞のいずれかで免疫化した。ヒトＣＤ４０及びカニクイザルＣＤ４０に対して向けられる最高の抗原特異的な血清に固有の力価を有する動物が、ハイブリドーマ作製のために使用された（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５）。脾臓及び／又は流入領域リンパ節（各採取物に由来する）に由来するプールされたリンパ球は、好適な培地（例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中で磨砕することによってリンパ組織から分離された。Ｂ細胞は、標準的な方法を使用して選択され且つ／又は増殖させられ、当技術分野で知られた技術を使用して好適な融合パートナーと融合された。ヒト及びカニクイザルＣＤ４０に対する結合を有するハイブリドーマ上清が同定された。
抗体の生成。
ヒト及びカニクイザルＣＤ４０に対する結合を示す選択されたハイブリドーマ上清を使用して、当技術分野で知られた技術を使用して精製された抗ＣＤ４０抗体を生成した（表２）。
Figure 2023507323000003
ヒト及びカニクイザルＣＤ４０に結合する抗ＣＤ４０抗体。
ヒト及びカニクイザルＣＤ４０に対する抗ヒトＣＤ４０抗体の結合親和性もまた、結合速度（Ｋｏｎ）、解離速度（Ｋｄｉｓ）、及び平衡結合定数（ＫＤ）を定量化するＯｃｔｅｔアッセイ（表３）によって測定された。関連するＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）メンバーに対する抗ＣＤ４０抗体の交差反応性は、これらの遺伝子をコードする発現ベクターの一過的トランスフェクションによりＨＥＫ２９３細胞上でヒトＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲ１０、又はＴＮＦＲ１４を発現することによって評価された。これらのトランスフェクトされた細胞に対する指定の抗ヒトＣＤ４０抗体の結合は、フローサイトメトリーによって決定された。対照細胞と比較して幾何平均蛍光強度を評価することによって、他のＴＮＦＲＳＦメンバーに対する抗ＣＤ４０の最小限の結合を実証した（表４）。カニクイザル及びマウスＣＤ４０に対する抗ＣＤ４０抗体の交差反応性は、これらの遺伝子をコードする発現ベクターの一過的トランスフェクションによりＨＥＫ２９３細胞上でカニクイザル又はマウスＣＤ４０を発現することによって評価された。カニクイザル及びマウスＣＤ４０を過剰発現する細胞に対する指定の抗ヒトＣＤ４０抗体の結合は、フローサイトメトリーによって決定された。対照細胞と比較して幾何平均蛍光強度を評価することによって、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ４０に対する抗ＣＤ４０のロバストな結合があるが、マウスＣＤ４０に対して結合しないことを実証した（表５）。これらのデータを合わせて、ヒト及びカニクイザルＣＤ４０に対する抗ＣＤ４０抗体の強力な結合及び同等の結合があるが、関連するＴＮＦＲＳＦメンバー又はマウスＣＤ４０に対しては最小限の結合があることを実証する。
Figure 2023507323000004
Figure 2023507323000005
Figure 2023507323000006
抗ＣＤ４０抗体によるＣＤ４０の架橋依存的な活性化。
ヒトＢ細胞上のＣＤ４０受容体の刺激は、活性化及び増殖をもたらす。精製された初代ヒトＢ細胞を、３８４ウェルアッセイプレートに播種し、コマイトジェンとしてのＩＬ－４／ＩＬ－２１、様々な濃度の抗ＣＤ４０抗体、及びプロテインＧの存在（図２Ａ）又は非存在（図２Ｂ）で処理した。プロテインＧの単一の分子は、複数のＩｇＧ分子に結合することができ、したがって、溶液中で抗体を架橋することができる。細胞を、５日間インキュベートし、細胞増殖は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを使用して試験された。試験された全ての抗ＣＤ４０抗体がＩｇＧ４であったため、無関係のＩｇＧ４アイソタイプ抗体が陰性対照として含まれた。ＥＣ５０及び最大活性のパーセントが計算された（表６）。全ての抗ＣＤ４０抗体は、プロテインＧの存在下でＢ細胞のロバストな増殖を誘導したが、プロテインＧの非存在下で最小限の活性を有し、このことは、ＣＤ４０に結合する抗ＣＤ４０抗体のみではＣＤ４０を刺激するのに不十分であり、抗体の追加の架橋が必要とされたことを示している。
Figure 2023507323000007
ヒトＣＤ４０リガンドのヒトＣＤ４０への結合に対する抗ＣＤ４０抗体の効果。
ＣＤ４０とＣＤ４０リガンドの相互作用を遮断する抗ＣＤ４０抗体の能力を評価するために、フローサイトメトリーに基づくリガンド結合アッセイを実施して、この遺伝子をコードする発現ベクターによる一過的トランスフェクションにより２９３Ｔ細胞上で過剰発現されるヒトＣＤ４０に対する蛍光標識された可溶性ヒトＣＤ４０Ｌの結合を測定した。リガンド結合の阻害のパーセントは、［（抗ＣＤ４０の非存在下でのＣＤ４０Ｌ結合ｇＭＦＩ）－（抗ＣＤ４０の存在下でのＣＤ４０Ｌ結合ｇＭＦＩ）］／（抗ＣＤ４０の非存在下でのＣＤ４０Ｌ結合ｇＭＦＩ）として計算された。ｇＭＦＩ：蛍光強度の幾何平均。全ての抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０受容体に結合するＣＤ４０Ｌの能力に対する最小限の効果を示す（表７）。
Figure 2023507323000008
ＣＤ４０Ｌ誘導性Ｂ細胞活性化に対する抗ヒトＣＤ４０抗体の効果。
ＴＮＦＲＳＦメンバーに特異的ないくつかの抗体は、潜在的に受容体をクラスター化し、リガンド誘導性活性化のための閾値を低下させることによって、その正常なリガンドによる受容体の活性化を増強することが示されている。ＣＤ４０リガンド活性を増強する抗ＣＤ４０抗体の能力を評価するために、精製された初代ヒトＢ細胞を、１ｕｇ／ｍｌの指定のＣＤ４０抗体の存在下又は非存在下にて様々な濃度の組換えヒトＣＤ４０Ｌで処理した。細胞を、５日間インキュベートし、細胞増殖は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを使用して試験された。どの抗ＣＤ４０抗体も、ヒトＢ細胞の増殖を刺激するＣＤ４０リガンドのＥＣ５０における著しい変化を誘導しなかった（表８）。
Figure 2023507323000009
抗ＣＤ４０抗体の配列決定。
ＲＮＡ（全て又はｍＲＮＡ）を、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ又はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ｍＲＮＡ ｃａｔｃｈｅｒ ｐｌｕｓキットを使用して、抗メソセリン抗体産生ハイブリドーマ細胞を含有するウェルから精製した。精製したＲＮＡを用いて、逆転写によるｃＤＮＡ合成、続いてポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）により抗体重鎖及び軽鎖可変領域（Ｖ）遺伝子を増幅した。完全ヒト抗体ガンマ重鎖を、Ｑｉａｇｅｎ１ステップ逆転写酵素ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて得た。完全ヒトカッパ軽鎖を、Ｑｉａｇｅｎ１ステップ逆転写酵素ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて得た。アミノ酸配列は、対応する核酸配列からバイオインフォマティックスにより推定した。次に、得られたアミノ酸配列を分析して、抗体の生殖細胞系列配列起点を決定し、生殖細胞系列配列からの差異を同定した。配列決定された抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応するアミノ酸配列を整列させ、これらのアラインメントを使用してクローンを類似性によってグループ化した。
抗ＣＤ４０抗体配列の最適化。
選択された抗ＣＤ４０抗体の操作は、標準的な組換えＤＮＡ技術によって抗体重鎖及び軽鎖可変領域における潜在的な不都合な配列を除去するために実施された。これらの抗体は、細胞株における過剰発現によって産生され、当技術分野で知られた技術を使用して精製された。次に、精製された抗体は、上記のとおり、プロテインＧ架橋の有り無し両方でヒトＢ細胞増殖アッセイにおいて評価された。ＥＣ５０及び最大活性のパーセントが計算され（表９）、これは、操作された抗体バリアントの多くが、それらの親抗体配列と同様の架橋依存的アゴニスト活性を維持したことを示している。
Figure 2023507323000010
メソセリン標的化ＣＤ４０アゴニスト二価二重特異性抗体の作製及び特徴付け
二重特異性抗体の生成。
メソセリン依存性ＣＤ４０アゴニストを作製するために、ヒトメソセリン及びヒトＣＤ４０の両方に結合することができる二価二重特異性抗体が、上記の抗メソセリン及び抗ＣＤ４０抗体の可変領域結合ドメインを使用してＩｇＧ－Ｆａｂ形式（図３Ａ）又はＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式（図３Ｂ）のいずれかにおいて作製された。
ＩｇＧ－Ｆａｂ形式におけるメソセリン×ＣＤ４０二重特異性アゴニスト抗体の作製及び評価。
一連のメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体は、ＩｇＧ－Ｆａｂ形式において作製され（表１０）、Ｏｃｔｅｔアッセイを使用してヒト及びカニクイザルＣＤ４０並びにヒト及びカニクイザルメソセリンの可溶性形態に対する結合について評価された（表１１）。結合速度（Ｋｏｎ）、解離速度（Ｋｄｉｓ）、及び平衡結合定数（ＫＤ）が計算された。二重特異性抗体の大多数は、ヒト及びカニクイザルのＣＤ４０及びメソセリンの両方に対して高い親和性の結合を示した。次に、これらの二重特異性抗体は、ヒトＢ細胞のメソセリン誘導性活性化を誘導するそれらの能力について評価された。ヒトメソセリンを発現するＣＨＯ細胞は、９６ウェルプレートに播種された。翌日、様々な濃度のメソセリン×ＣＤ４０ ＩｇＧ－Ｆａｂ抗体を、精製されたヒトＢ細胞とともにウェルに加え、プレートを、さらに４８時間インキュベートした。ＣＤ８６の上方制御、ＣＤ４０に媒介されるＢ細胞活性化のマーカーが、フローサイトメトリーによってＢ細胞上で定量化された。ＣＤ８６の上方制御のためのＥＣ５０値が計算され、メソセリン×ＣＤ４０ ＩｇＧ－Ｆａｂ二重特異性抗体の大多数が、ヒトメソセリンを発現するＣＨＯ細胞の存在下でＢ細胞活性化を可能にしたことを実証している（表１２）。
Figure 2023507323000011
Figure 2023507323000012
Figure 2023507323000013
Figure 2023507323000014
ＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式におけるメソセリン×ＣＤ４０二重特異性アゴニスト抗体の作製及び評価。
一連のメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体は、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式において作製され（表１３）、Ｏｃｔｅｔアッセイを使用してヒト及びカニクイザルＣＤ４０並びにヒト及びカニクイザルメソセリンの可溶性形態に対する結合について評価された（表１４）。結合速度（Ｋｏｎ）、解離速度（Ｋｄｉｓ）、及び平衡結合定数（ＫＤ）が計算された。二重特異性抗体の大多数は、ヒト及びカニクイザルのＣＤ４０及びメソセリンの両方に対して高い親和性の結合を示した。次に、これらの二重特異性抗体は、ヒトＢ細胞のメソセリン誘導性活性化を誘導するそれらの能力について評価された。ヒトメソセリンを発現するＣＨＯ細胞は、９６ウェルプレートに播種された。翌日、様々な濃度のメソセリン×ＣＤ４０ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ抗体を、精製されたヒトＢ細胞とともにウェルに加え、プレートを、さらに４８時間インキュベートした。ＣＤ８６の上方制御、ＣＤ４０に媒介されるＢ細胞活性化のマーカーが、フローサイトメトリーによってＢ細胞上で定量化された。ＣＤ８６の上方制御のためのＥＣ５０値が計算され、メソセリン×ＣＤ４０ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体の大多数が、ヒトメソセリンを発現するＣＨＯ細胞の存在下でＢ細胞活性化を可能にしたことを実証している（表１５）。
Figure 2023507323000015
Figure 2023507323000016
Figure 2023507323000017
Figure 2023507323000018
Figure 2023507323000019
ＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式におけるメソセリン×ＣＤ４０二重特異性アゴニスト抗体の配列最適化。
選択されたメソセリン×ＣＤ４０二重特異性ＩｇＧ－ｓｃＦｖ抗体の操作は、標準的な組換えＤＮＡ技術によって抗体重鎖及び軽鎖可変領域における潜在的な不都合な配列を除去するために実施された。これらの抗体は、細胞株における過剰発現によって産生され、当技術分野で知られた技術を使用して精製された。次に、これらの二重特異性抗体は、ヒトＢ細胞のメソセリン誘導性活性化を誘導するそれらの能力について評価された。ヒトメソセリンを発現するＣＨＯ細胞は、９６ウェルプレートに播種された。翌日、様々な濃度のメソセリン×ＣＤ４０ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ配列バリアント抗体を、精製されたヒトＢ細胞とともにウェルに加え、プレートを、さらに４８時間インキュベートした。ＣＤ８６の上方制御、ＣＤ４０に媒介されるＢ細胞活性化のマーカーが、フローサイトメトリーによってＢ細胞上で定量化された。ＣＤ８６の上方制御のためのＥＣ５０値が計算され、メソセリン×ＣＤ４０ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ配列バリアント二重特異性抗体の大多数が、ヒトメソセリンを発現するＣＨＯ細胞の存在下でＢ細胞活性化を誘導する能力を維持することを実証している（表１６）。
Figure 2023507323000020
ヒトＢ細胞機能性アッセイにおける選択されたメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体の活性に対する様々なレベルのメソセリンの効果
ＭＣ３８細胞は、低（ＭＣ３８．ＭＳＬＮ１）～高（ＭＣ３８．ＭＳＬＮ５）の範囲の様々なレベルのヒトメソセリンを発現するように操作された。ＭＣ３８細胞はマウス由来であるため、それらはヒトメソセリンを発現しない（図４）。親ＭＣ３８細胞及び様々なレベルのヒトメソセリンを発現するＭＣ３８細胞を、９６ウェルプレートに播種し、一晩培養した。翌日、メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体を、様々な濃度で細胞に加えた。次に、単離されたヒトＢ細胞をウェルに加え、プレートをさらに４８時間インキュベートした。Ｂ細胞上でのＣＤ８６の上方制御は、フローサイトメトリーによって評価され、Ｂ細胞活性化の尺度として使用された。ＥＣ５０及び最大活性（Ｅｍａｘ）値が計算され、メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体が、全てのレベルのＭＳＬＮ発現にわたってＢ細胞活性化を誘導することができたことを実証している（表１７）。より低いレベルのメソセリンを発現する細胞株は、Ｂ細胞上でのＣＤ８６上方制御の蛍光強度の幾何平均によって測定されるとおり、メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体のより低い最大活性を誘導した。メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体は、ＣＤ４０アゴニスト活性に対するこれらの分子のメソセリン依存的な活性と一致して親ＭＣ３８細胞の存在下で活性がなかった。
Figure 2023507323000021
Figure 2023507323000022
単球に由来する樹状細胞の機能性アッセイにおける選択されたメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体の活性に対する様々なレベルのメソセリンの効果。
様々なレベルのヒトメソセリンを発現するように操作されたＭＣ３８細胞（図４）又は親ＭＣ３８細胞を、９６ウェルプレートに播種し、一晩培養した。翌日、メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体を、様々な濃度で細胞に加えた。ＧＭＣＳＦ及びＩＬ４を使用してヒト単球から分化した単球に由来する樹状細胞をウェルに加え、プレートを、さらに４８時間インキュベートした。各ウェルからの上清を回収し、樹状細胞から分泌されたＩＬ１２ｐ４０の濃度を、ＥＬＩＳＡキットを使用して定量化した。ＥＣ５０及び最大活性（Ｅｍａｘ）値が計算され、メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体が、高レベル及び低レベルの両方のＭＳＬＮ発現にわたって樹細胞活性化を誘導することができたことを実証している（表１７）。より低いレベルのメソセリンを発現する細胞株は、メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体のより低い最大活性を誘導した。メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体は、ＣＤ４０アゴニスト活性に対するこれらの分子のメソセリン依存的な活性と一致して親ＭＣ３８細胞の存在下で活性がなかった。
カニクイザルメソセリン発現ＣＨＯ細胞によるカニクイザルＢ細胞機能性アッセイにおける選択されたメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体の活性。
カニクイザルメソセリンを発現するように操作されたＣＨＯ細胞を、９６ウェルプレートに加え、一晩培養した。翌日、選択されたメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体を、様々な濃度で細胞に加えた。次に、単離されたカニクイザルＢ細胞をウェルに加え、プレートをさらに４８時間インキュベートした。カニクイザルＢ細胞上でのＣＤ２３の上方制御は、フローサイトメトリーによって評価され、ＣＤ４０に誘導されるＢ細胞活性化の尺度として使用された。ＥＣ５０が計算され、メソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体が、カニクイザルメソセリンの存在下でカニクイザルＢ細胞の活性化を誘導することができることを実証している（表１８）。
Figure 2023507323000023
マウスにおけるメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体の薬物動態及び安定性。
インビボでメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体の安定性を特徴付けるために、選択されたメソセリン×ＣＤ４０二重特異性分子を、１ｍｇ／ｋｇ用量でマウスに注射した。動物を、注射後の様々な時点で放血させ、血清を単離した。イムノアッセイを使用して、血清中のメソセリン×ＣＤ４０二重特異性抗体の濃度を定量化して、ヒトＣＤ４０で捕捉し、抗ヒトＩｇＧで検出するか又はヒトメソセリンで捕捉し、抗ヒトＩｇＧで検出した。これらの２つのアッセイの組合せは、分子分解又は不安定性を検出する能力を提供する。ＣＤ４０又はメソセリン捕捉アッセイは同等の結果をもたらし、分子がインビボで１４日間にわたって未変化のままであったことを示唆した（図５）。１つを除いて全ての分子が、同様の薬物動態特性を有した。
マウスモデルにおける腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト二重特異性抗体の免疫賦活性及び抗腫瘍活性
マウス代理ヒトＥＰＣＡＭ依存性ＣＤ４０アゴニスト二重特異性抗体及びヒトＥＰＣＡＭ発現マウス腫瘍細胞株の作製。
抗マウスＣＤ４０アゴニスト抗体（クローンＦＧＫ４５）及び抗ヒトＥＰＣＡＭ抗体（クローン４～７）を使用して、マウスＩｇＧ１ Ｎ２９７Ｇ Ｆｃドメインを有するＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式における代理ＣＤ４０二重特異性抗体（抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体）を作製した。二重特異性抗体は、分子のＮ末端で抗ＣＤ４０及び分子のＣ末端でｓｃＦｖとして抗ＥＰＣＡＭを含有する。ヒトＥＰＣＡＭは、ヒトＥＰＣＡＭ及びヒト短縮型神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ）レポーター遺伝子の両方をコードするレトロウイルスによる形質導入によって、マウスＭＣ３８結腸癌細胞株及びマウスＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞株において過剰発現された（図６）。ヒトＥｐＣＡＭ－ＭＳ３８又はヒトＥｐＣＡＭ－Ｂ１６腫瘍細胞を、移植片当たり３ｅ５細胞で右側腹部に接種し、それぞれ２４日間又は１１日間増殖させた。腫瘍をデジタルキャリパーで週に２回測定し、ヒトＥＰＣＡＭを発現する腫瘍細胞株がマウスにおいて腫瘍を増殖させ、形成する能力を維持したことを実証した。マウスから収集され、酵素的解離にかけられた腫瘍に対するフローサイトメトリーは、ヒトＥＰＣＡＭ発現が、インビボでの腫瘍形成中に腫瘍細胞の表面で維持されたことを実証した（図６）。
マウスＢ細胞上でのＥＰＣＡＭ×ＣＤ４０アゴニスト抗体のヒトＥＰＣＡＭ依存的アゴニスト活性。
ヒトＥｐＣＡＭ過剰発現ＭＣ３８細胞（ｈｕＥｐＣＡＭ－ＭＣ３８）又は親ＭＣ３８細胞を、９６プレートに播種し、一晩培養した。翌日、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体、親抗ＣＤ４０抗体（ＦＧＫ５４）、又はアイソタイプ対照抗体を、様々な濃度で細胞に加えた。次に、単離されたマウスＢ細胞をウェルに加え、プレートをさらに４８時間インキュベートした。Ｂ細胞上でのＣＤ８６の上方制御は、フローサイトメトリーによって評価され、Ｂ細胞活性化の尺度として使用された。ＥＣ５０値が計算され、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体が、マウスＢ細胞活性化を誘導することができたことを実証している（図７）。抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体は、ヒトＥＰＣＡＭの存在に依存したロバストなアゴニスト活性を実証し、ＦＧＫ４５抗ＣＤ４０モノクローナル抗体と比較してＢ細胞を活性化する際に劇的に高い効力を示した。
ＭＣ３８腫瘍モデルにおける抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体のインビボ免疫賦活活性
インビボでの免疫細胞活性化に対する腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト二重特異性抗体の効果を評価するために、ヒトＥｐＣＡＭ発現ＭＣ３８腫瘍細胞を、移植片当たり３ｅ５細胞でマウスの右側腹部に接種し、８～１０日間増殖させた。次に、マウスを腫瘍体積（６０～１００ｍ３）で無作為化し、５ｍｇ／ｋｇの指定の抗体で腹腔内投与して治療した。腫瘍、腫瘍流入領域リンパ節（ｄＬＮ）、及び非流入領域リンパ節（ｎｄＬＮ）を、治療後２４～４８時間目に収集し、組織の酵素的消化により単一細胞懸濁液を調製した。フローサイトメトリー分析を実施して、表面免疫細胞系列マーカー及び活性化マーカー、並びに細胞内サイトカインに関して染色して、細胞の割合及び表現型を決定した（図８）。予想されるとおり、ＣＤ４０アゴニスト抗体（抗ＣＤ４０）治療は、腫瘍並びにｄＬＮ及びｎｄＬＮを含む末梢組織に位置する樹状細胞（ＤＣ）を活性化した。対照的に、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体のみが、ヒトＥＰＣＡＭ発現ＭＣ３８腫瘍において腫瘍浸潤性ＤＣを活性化したが、末梢組織（ｄＬＮ及びｎｄＬＮ）においてＤＣを活性化しなかった（図８Ａ）。加えて、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体は、腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞と調節性Ｔ細胞の比及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）産生ＣＤ４＋Ｔ細胞を増加させた（図８Ｂ）。全Ｔ細胞はまた、指定の抗体で治療されたｈｕＥｐＣＡＭ発現ＭＣ３８担腫瘍マウスの脾臓から単離された。骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）は、組換えＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ４と７日間インキュベートすることによって、ナイーブなＣ５７ＢＬ／６骨髄細胞から作製された。ＢＭＤＣは、指定の腫瘍細胞で一晩瞬間適用され、続いて単離されたＴ細胞と１８時間共培養された。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して、抗原特異的なＴ細胞によってＩＦＮｇの産生を測定して、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体が、ヒトＥＰＣＡＭ発現ＭＣ３８及び親ＭＣ３８抗原の両方に特異的なＴ細胞を著しく増加させることを実証している（図９）。まとめると、これらのデータは、腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト二重特異性抗体が、腫瘍関連抗原に依存的な様式でＤＣなどの腫瘍における骨髄集団を活性化することができ、抗腫瘍Ｔ細胞応答の増強をもたらしたことを実証している。
Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおける抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体のインビボ免疫賦活活性
追加の腫瘍モデルにおける免疫細胞活性化に対する腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト二重特異性抗体の効果を評価するために、ベクター対照又はヒトＥｐＣＡＭ発現Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞を、移植片当たり３ｅ５細胞でマウスの右側腹部に接種し、８～１０日間増殖させた。次に、マウスを腫瘍体積（６０～１００ｍ３）で無作為化し、５ｍｇ／ｋｇの指定の抗体で腹腔内投与して治療した。腫瘍、腫瘍ｄＬＮ、及びｎｄＬＮを、治療後２４～４８時間目に収集し、組織の酵素的消化により単一細胞懸濁液を調製した。フローサイトメトリー分析を実施して、表面免疫細胞系列マーカー及び活性化マーカー、並びに細胞内サイトカインに関して染色して、細胞の割合及び表現型を決定した（図１０）。予想されるとおり、ＣＤ４０アゴニスト抗体（抗ＣＤ４０）は、親ｈｕＥｐＣＡＭ陰性Ｂ１６Ｆ１０腫瘍及びｈｕＥｐＣＡＭ発現Ｂ１６Ｆ１０腫瘍における腫瘍並びにｄＬＮ及びｎｄＬＮを含む末梢組織に位置するＤＣを治療する。対照的に、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体のみが、ｈｕＥｐＣＡＭ発現Ｂ１６Ｆ１０腫瘍において腫瘍浸潤性ＤＣを活性化したが、親ｈｕＥｐＣＡＭ－Ｂ１６Ｆ１０腫瘍において活性化しなかった。抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体は、これらのマウスがヒトＥＰＣＡＭ発現又は非発現Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を有したかどうかにかかわらず、ｄＬＮ又はｎｄＬＮにおいてＤＣを活性化しなかった（図１０Ａ）。加えて、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体は、ヒトＥＰＣＡＭ発現Ｂ１６Ｆ１０腫瘍におけるＩＦＮｇ産生エフェクターＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させたが、親Ｂ１６Ｆ１０腫瘍において増加しなかった（図１０Ｂ）。これらのデータは、腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト二重特異性抗体が、腫瘍関連抗原依存的な様式で腫瘍浸潤性免疫細胞を活性化して、抗腫瘍Ｔ細胞応答を増強することができるという追加の証拠を提供する。
抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体は、マウスにおいて全身性血清サイトカインの上方制御又は肝損傷を誘導しない
ＣＤ４０アゴニスト抗体は、おそらく全身性の免疫細胞活性化に起因して、臨床試験において肝損傷及び血清サイトカインレベルの上昇を含む用量制限毒性を示した。非標的化ＣＤ４０アゴニスト抗体と腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト二重特異性抗体の間で全身性の免疫細胞活性化及び肝損傷を比較するために、確立されたヒトＥＰＣＡＭ発現ＭＣ３８腫瘍（上記）を担持するマウスを、非特異的アイソタイプ対照抗体、マウスＣＤ４０アゴニスト抗体（抗ＣＤ４０）、不十分なアゴニストにするＦｃ受容体結合を減少させるＦｃドメイン中の変異を有するＣＤ４０抗体（抗ＣＤ４０ Ｎ２９７Ｇ）、又は抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体（抗ＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ）及び血清で治療し、２４～４８時間後に回収した。選択されたサイトカインの濃度は、マウスサイトカイン／ケモカインマルチプレックスアッセイキットを使用して測定された。抗ＣＤ４０抗体は、全身性の免疫細胞活性化と一致してマウスの血清においていくつかの炎症性サイトカインの濃度を増大させた。対照的に、抗ＣＤ４０ Ｎ２９７Ｇも抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体も、血清サイトカイン濃度の増大を誘導しなかった（図１１Ａ）。同様の結果は、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおいて観察され、非標的化抗ＣＤ４０抗体とは対照的に、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体は、ベクター対照Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を担持するマウス又はヒトＥＰＣＡＭ発現Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を担持するマウスのいずれかにおいて血清サイトカイン濃度の増大を誘導しなかった（図１１Ｂ）。ヒトＥＰＣＡＭ発現ＭＣ３８腫瘍を担持し、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体又は抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体で治療されたマウスの肝臓はまた、組織学的分析のために１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定され、パラフィン中で包埋され、薄片にされ、ヘマトキシリン及びエオシンで染色された。抗ＣＤ４０アゴニスト抗体は、肝臓中の多巣的単核細胞浸潤を誘導し、これらの肝臓は、単一細胞の壊死画像を含有したが、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体で治療されたマウス由来の肝臓は、識別可能な病理組織学的変化を示さなかった（図１１Ｃ）。まとめると、これらのデータは、腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト抗体が、抗ＣＤ４０に媒介される毒性と関連した全身性のサイトカイン産生又は肝損傷を引き起こさずに腫瘍において局所的な免疫細胞活性化を誘導することができることを示す。
マウス腫瘍モデルにおけるヒトＥＰＣＡＭ×マウスＣＤ４０二重特異性抗体の抗腫瘍効果
腫瘍増殖の免疫に媒介される阻害に対する腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト抗体の効果及び免疫チェックポイント阻害剤ＰＤ１の遮断薬と合わせるこの治療手法の可能性を評価するために、ヒトＥＰＣＡＭ発現ＭＣ３８腫瘍を担持するマウスを、アイソタイプ対照抗体、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体、抗ＰＤＬ１（ＰＤ１とＰＤＬ１の間の相互作用を遮断する）、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体、抗ＣＤ４０と抗ＰＤＬ１の組合せ、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性と抗ＰＤＬ１の組合せで治療した（図１２）。抗ＣＤ４０アゴニスト抗体又は抗ＰＤＬ１遮断抗体による単一の薬剤による治療は、腫瘍増殖に対して最小限の効果を有したか（図１２Ａ）又はアイソタイプ対照抗体治療と比較して生存の向上に対して最小限の効果を有したが（図１２Ｂ）、抗ＣＤ４０アゴニスト及び抗ＰＤＬ１の組合せは、腫瘍増殖を著しく阻害した。際だったことに、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性アゴニスト抗体による治療は、他の単剤療法治療と比較して腫瘍増殖を劇的に阻害し、動物の生存を増加させた。さらに、抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体と抗ＰＤＬ１の組合せは、腫瘍の完全な退縮をもたらし、全ての動物が試験の最後まで生存した。これらの完全なレスポンダー動物を、治療を伴わずに３ヶ月間飼育し、腫瘍再出現の証拠はなく、その後ヒトＥＰＣＡＭ発現ＭＣ３８腫瘍細胞又はＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞のいずれかによる腫瘍再チャレンジにかけた（図１３）。これらの動物は、ヒトＥｐＣＡＭ発現ＭＣ３８腫瘍細胞を完全に拒絶したが、対照Ｂ１６Ｆ１０腫瘍は予想通りに増殖した。両方の腫瘍株は、ヒトＥＰＣＡＭ発現ＭＣ３８腫瘍又は抗ｍｕＣＤ４０×ｈｕＥＰＣＡＭ二重特異性抗体に以前に暴露されなかった同齢の対照動物において予想されるとおりに増殖した。まとめると、これらのデータは、腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト抗体療法が、抗腫瘍免疫応答を増強することができ、ＰＤ１／ＰＤＬ１遮断薬との組合せによりさらに増強される確立された腫瘍の退縮をもたらすことを実証している。加えて、腫瘍標的化ＣＤ４０アゴニスト治療とＰＤ１／ＰＤＬ１遮断薬の組合せは、その後の腫瘍再チャレンジに対して保護することができる長期間の免疫記憶を誘導することができる。
本明細書において論じ、引用してきた全ての刊行物、特許及び特許出願は、その全体が参照により本明細書により組み込まれる。開示した本発明は、記載された特定の方法論、プロトコル及び材料に限定されず、これらは、変化し得ることが理解される。また、本明細書中で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、添付の特許請求の範囲を限定することを意図するものではないことも理解される。
当業者は、本明細書中に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの同等物を、単なる日常的な実験を使用して認識するか、又は確認可能であろう。このような同等物は、続く特許請求の範囲に包含されるものとする。
ヒトＣＤ４０＞ＮＰ＿００１２４１．１腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５アイソフォーム１前駆体［ホモサピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）］
（配列番号１）
Figure 2023507323000024
ヒトメソセリン＞ＮＰ＿００５８１４．２メソセリンアイソフォーム１プレプロタンパク質［ホモサピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）］
（配列番号２）
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カッパＣＬ
（配列番号８８３）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＥＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９２６）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＫＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９２７）
ラムダＣＬ
（配列番号８８４）
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＫＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号９２８）
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＥＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号９２９）
共通のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３
（配列番号８８５）
Figure 2023507323000463
 共通のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（Ｋ５９０Ｇ）
（配列番号８８６）
Figure 2023507323000464
 （配列番号８８７）
ＧＧＳＧＧＧＧＳ
（配列番号８８８）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
（配列番号８８９）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
（配列番号８９０）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
（配列番号８９１）
ＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱ
（配列番号８９２）
ＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱ
（配列番号８９３）
ＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱ
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣ（配列番号８９４）
ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡ（配列番号８９５）
ＭＴＣＳＰＬＬＬＴＬＬＩＨＣＴＧＳＷＡ（配列番号８９６）ＭＥＡＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号８９７）
ＭＥＷＴＷＲＶＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳ（配列番号８９８）
ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号８９９）
ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号９００）
ＭＫＨＬＷＦＦＬＬＬＶＡＡＰＲＷＶＬＳ（配列番号９０１）
ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ（配列番号９０２）
（配列番号９０３）
ヒトＭＳＬＮ ｖ２ ＮＭ ０１３４０４
Figure 2023507323000465
 （配列番号９０４）
ヒトＭＳＬＮ ｖ６ ＡＹ７４３９２２
Figure 2023507323000466
 （配列番号９０５）
ｃｙｎｏ ＭＳＬＮ マカク ｖ１ ＬＭＲ Ｃ５２４５７
Figure 2023507323000467
 カッパＣＬ Ｓ１７６Ｅ
（配列番号９０６）ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＥＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
カッパＣＬ Ｓ１７６Ｋ
（配列番号９０７）ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＫＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ラムダＣＬ Ｓ１７６Ｋ
（配列番号９０８）
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＫＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
ラムダＣＬ Ｓ１７６Ｅ
（配列番号９０９）
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＥＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
（配列番号９１０）
＞ ＸＭ＿００５５９０８１６．２（Ｎ末端に１１ａａを有しない）ｃｙｎｏメソセリン
Figure 2023507323000468
 （配列番号９１１）
＞ＸＰ＿００５５６９２７４．１ 予測された：腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５アイソフォームＸ１［カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）］
Figure 2023507323000469
 （配列番号９１２）
共通のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（Ｓ１７６Ｋ）
Figure 2023507323000470
 （配列番号９１３）
共通のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（Ｓ１７６Ｅ）
Figure 2023507323000471
 （配列番号９１４）
共通のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（Ｓ１７６Ｋ／Ｋ５９０Ｇ）
Figure 2023507323000472
 （配列番号９１５）
共通のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（Ｓ１７６Ｅ／Ｋ５９０Ｇ）
Figure 2023507323000473
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
からなる群から選択される。
一実施形態では、
１）ＶＬ１及びＶＨ１は、
ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
からなる群から選択され；
且つ
２）ＶＬ２及びＶＨ２は、
ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
からなる群から選択される。

Claims (90)

  1. 多重特異性抗体コンストラクトであって、
    （ｉ）２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む第１の抗体であって、
    前記軽鎖が、第１の可変領域（ＶＬ１）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み；
    前記重鎖が、第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及びＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、並びにＣＨ３領域を含み；
    前記重鎖が、非置換重鎖と比較してヒトＦｃガンマＲＩ受容体に対する前記重鎖の結合親和性の低減をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含む第１の抗体；及び
    （ｉｉ）第２の抗体の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）を含むｓｃＦｖであって、前記ＶＬ２及び前記ＶＨ２が第１のペプチドリンカーを介して連結され、
    前記ｓｃＦｖが、そのアミノ末端で、重鎖融合タンパク質が形成されるように第２のペプチドリンカーを介して前記重鎖の各々のカルボキシル末端に融合されるｓｃＦｖを含み；且つ
    前記第１の抗体が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し、刺激し、且つ前記ｓｃＦｖが、ヒトメソセリン（ＭＳＬＮ）（配列番号２）に特異的に結合する、多重特異性抗体コンストラクト。
  2. ２つの前記軽鎖が同一であり、２つの前記重鎖融合タンパク質が同一である、請求項１に記載の抗体コンストラクト。
  3. 前記重鎖が、
    （ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
    （ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
    （ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
    からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
    前記アミノ酸の付番が、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である、請求項１又は２のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  4. 前記重鎖が、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、前記アミノ酸の付番が、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である、請求項３に記載の抗体コンストラクト。
  5. 前記ＶＬ１が、
    それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
    それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
    それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
    それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
    それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
    それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
    それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
    それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
    それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
    それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
    それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
    それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
    それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    前記ＶＨ１が、
    それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
    それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
    それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
    それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
    それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
    それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
    それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
    それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
    それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
    それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
    それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
    それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
    それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
    前記ＶＬ２が、
    それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
    それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
    それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
    それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    且つ前記ＶＨ２が、
    それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
    それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
    それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
    それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  6. １）前記ＶＬ１及びＶＨ１が、
    ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
    ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
    からなる群から選択され；
    且つ
    ２）前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
    ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
    からなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  7. 前記ＶＬ１が、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＨ１が、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＬ２が、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＨ２が、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  8. １）前記ＶＬ１及びＶＨ１が、
    ａ）配列番号５を含むＶＬ１及び配列番号６を含むＶＨ１；
    ｂ）配列番号９を含むＶＬ１及び配列番号１０を含むＶＨ１；
    ｃ）配列番号１３を含むＶＬ１及び配列番号１４を含むＶＨ１；
    ｄ）配列番号１７を含むＶＬ１及び配列番号１８を含むＶＨ１；
    ｅ）配列番号２１を含むＶＬ１及び配列番号２２を含むＶＨ１；
    ｆ）配列番号２５を含むＶＬ１及び配列番号２６を含むＶＨ１；
    ｇ）配列番号２９を含むＶＬ１及び配列番号３０を含むＶＨ１；
    ｈ）配列番号３３を含むＶＬ１及び配列番号３４を含むＶＨ１；
    ｉ）配列番号３７を含むＶＬ１及び配列番号３８を含むＶＨ１；
    ｊ）配列番号４１を含むＶＬ１及び配列番号４２を含むＶＨ１；
    ｋ）配列番号４５を含むＶＬ１及び配列番号４６を含むＶＨ１；
    ｌ）配列番号４９を含むＶＬ１及び配列番号５０を含むＶＨ１；並びに
    ｍ）配列番号５３を含むＶＬ１及び配列番号５４を含むＶＨ１
    からなる群から選択され；
    且つ
    ２）前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）配列番号２１３を含むＶＬ２及び配列番号２１４を含むＶＨ２；
    ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ２及び配列番号２１８を含むＶＨ２；
    ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ２及び配列番号２２２を含むＶＨ２；並びに
    ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ２及び配列番号２２６を含むＶＨ２
    からなる群から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  9. 前記軽鎖の前記ＣＬが、配列番号８８３及び配列番号８８４からなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  10. 前記重鎖のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、配列番号８８５及び配列番号８８６からなる群から選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  11. 前記第１のペプチドリンカーが、配列番号８８８～８９３からなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  12. 前記第２のペプチドリンカーが、配列番号８８７～８９３からなる群から選択される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  13. 前記第１のペプチドリンカーが、配列番号８８９を含み、且つ前記第２のペプチドリンカーが、配列番号８８７を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  14. 前記軽鎖が、配列番号２８６、２９０、２９４、２９８、３０２、３０６、３１０、３１４、３１８、３２２、３２６、３３０、３３６、３４２、３４６、３５０、３５４、３５８、３６２、３６６、３７０、３７４、及び３７８からなる群から選択される配列を含み；且つ
    前記重鎖融合タンパク質が、配列番号２８５、２８９、２９３、２９７、３０１、３０５、３０９、３１３、３１７、３２１、３２５、３２９、３３３、３３７、３４１、３４５、３４９、３５３、３５７、３６１、３６５、３６９、３７３、及び３７７からなる群から選択される配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  15. 前記軽鎖及び前記重鎖融合タンパク質が、
    それぞれ配列番号２８６及び配列番号２８５；
    それぞれ配列番号２９０及び配列番号２８９；
    それぞれ配列番号２９４及び配列番号２９３；
    それぞれ配列番号２９８及び配列番号２９７；
    それぞれ配列番号３０２及び配列番号３０１；
    それぞれ配列番号３０６及び配列番号３０５；
    それぞれ配列番号３１０及び配列番号３０９；
    それぞれ配列番号３１４及び配列番号３１３；
    それぞれ配列番号３１８及び配列番号３１７；
    それぞれ配列番号３２２及び配列番号３２１；
    それぞれ配列番号３２６及び配列番号３２５；
    それぞれ配列番号３３０及び配列番号３２９；
    それぞれ配列番号３３４及び配列番号３３３；
    それぞれ配列番号３３８及び配列番号３３７；
    それぞれ配列番号３４２及び配列番号３４１；
    それぞれ配列番号３４６及び配列番号３４５；
    それぞれ配列番号３５０及び配列番号３４９；
    それぞれ配列番号３５４及び配列番号３５３；
    それぞれ配列番号３５８及び配列番号３５７；
    それぞれ配列番号３６２及び配列番号３６１；
    それぞれ配列番号３６６及び配列番号３６５；
    それぞれ配列番号３７０及び配列番号３６９；
    それぞれ配列番号３７４及び配列番号３７３；並びに
    それぞれ配列番号３７８及び配列番号３７７
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  16. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の前記抗体コンストラクトの前記軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
  17. 請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記抗体コンストラクトの前記重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  18. 請求項１６に記載のポリヌクレオチド、請求項１７に記載のポリヌクレオチド、又はその両方を含むベクター。
  19. 請求項１６に記載のポリヌクレオチド及び請求項１７に記載のポリヌクレオチドで形質転換されるか又はトランスフェクトされる宿主細胞。
  20. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトを生成するためのプロセスであって、前記軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含み且つ前記重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドも含む宿主細胞を、前記抗体コンストラクトの発現を可能にする条件下で培養すること、及び培養物から生成された前記抗体コンストラクトを回収することを含むプロセス。
  21. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト及び担体、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤、保存剤又はアジュバントを含む医薬組成物。
  22. 固形腫瘍疾患又は転移性癌疾患を治療するか又は寛解させるための方法であって、必要とする対象に有効量の請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトを投与する工程を含む方法。
  23. 前記固形腫瘍疾患が、前述のいずれかに由来する卵巣癌、膵臓癌、中皮腫、肺癌、胃癌及び三種陰性乳癌疾患又は転移性癌疾患からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
  24. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト、及び任意選択により、使用のための指示書を含むキット。
  25. 多重特異性抗体コンストラクトであって、
    （ｉ）２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む第１の抗体であって、
    前記軽鎖が、第１の可変領域（ＶＬ１）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み；
    前記重鎖が、第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及びＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、並びにＣＨ３領域を含み；
    前記重鎖が、非置換重鎖と比較してヒトＦｃガンマＲＩ受容体に対する前記重鎖の結合親和性の低減をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含む第１の抗体；及び
    （ｉｉ）第２の抗体の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）を含むｓｃＦｖであって、前記ＶＬ２及び前記ＶＨ２が第１のペプチドリンカーを介して連結され、
    前記ｓｃＦｖが、そのアミノ末端で、重鎖融合タンパク質が形成されるように第２のペプチドリンカーを介して前記重鎖の各々のカルボキシル末端に融合されるｓｃＦｖを含み；且つ
    前記第１の抗体が、ヒトメソセリン（ＭＳＬＮ）（配列番号２）に特異的に結合し、且つ前記ｓｃＦｖが、ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し且つ刺激する、多重特異性抗体コンストラクト。
  26. ２つの前記軽鎖が同一であり、２つの前記重鎖融合タンパク質が同一である、請求項２５に記載の抗体コンストラクト。
  27. 前記重鎖が、
    （ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
    （ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
    （ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
    からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
    前記アミノ酸の付番が、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である、請求項２５～２６のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  28. 前記重鎖が、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、前記アミノ酸の付番が、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である、請求項２７に記載の抗体コンストラクト。
  29. 前記ＶＬ１が、
    それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
    それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
    それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
    それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    前記ＶＨ１が、
    それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
    それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
    それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
    それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
    前記ＶＬ２が、
    それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
    それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
    それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
    それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
    それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
    それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
    それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
    それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
    それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
    それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
    それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
    それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
    それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    且つ
    前記ＶＨ２が、
    それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
    それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
    それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
    それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
    それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
    それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
    それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
    それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
    それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
    それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
    それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
    それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
    それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む、請求項２５～２８のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  30. １）前記ＶＬ１及びＶＨ１が、
    ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
    ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
    からなる群から選択され；
    且つ
    ２）前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
    ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
    からなる群から選択される、請求項２５～２９のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  31. 前記ＶＬ１が、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＨ１が、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＬ２が、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
    前記ＶＨ２が、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２５～３０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  32. １）前記ＶＬ１及びＶＨ１が、
    ａ）配列番号２１３を含むＶＬ１及び配列番号２１４を含むＶＨ１；
    ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ１及び配列番号２１８を含むＶＨ１；
    ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ１及び配列番号２２２を含むＶＨ１；並びに
    ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ１及び配列番号２２６を含むＶＨ１
    からなる群から選択され；
    且つ
    ２）前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）配列番号５を含むＶＬ２及び配列番号６を含むＶＨ２；
    ｂ）配列番号９を含むＶＬ２及び配列番号１０を含むＶＨ２；
    ｃ）配列番号１３を含むＶＬ２及び配列番号１４を含むＶＨ２；
    ｄ）配列番号１７を含むＶＬ２及び配列番号１８を含むＶＨ２；
    ｅ）配列番号２１を含むＶＬ２及び配列番号２２を含むＶＨ２；
    ｆ）配列番号２５を含むＶＬ２及び配列番号２６を含むＶＨ２；
    ｇ）配列番号２９を含むＶＬ２及び配列番号３０を含むＶＨ２；
    ｈ）配列番号３３を含むＶＬ２及び配列番号３４を含むＶＨ２；
    ｉ）配列番号３７を含むＶＬ２及び配列番号３８を含むＶＨ２；
    ｊ）配列番号４１を含むＶＬ２及び配列番号４２を含むＶＨ２；
    ｋ）配列番号４５を含むＶＬ２及び配列番号４６を含むＶＨ２；
    ｌ）配列番号４９を含むＶＬ２及び配列番号５０を含むＶＨ２；並びに
    ｍ）配列番号５３を含むＶＬ２及び配列番号５４を含むＶＨ２
    からなる群から選択される、請求項２５～３１のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  33. 前記軽鎖の前記ＣＬが、配列番号８８３及び配列番号８８４からなる群から選択される、請求項２５～３２のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  34. 前記重鎖のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、配列番号８８５及び配列番号８８６からなる群から選択される、請求項２５～３３のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  35. 前記第１のペプチドリンカーが、配列番号８８８～８９３からなる群から選択される、請求項２５～３４のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  36. 前記第２のペプチドリンカーが、配列番号８８７～８９３からなる群から選択される、請求項２５～３５のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  37. 前記第１のペプチドリンカーが、配列番号８８９を含み、且つ前記第２のペプチドリンカーが、配列番号８８７を含む、請求項２５～３６のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  38. 前記軽鎖が、配列番号３８２、３８６、３９０、３９４、３９８、４０２、４０６、４１０、４１４、４１８、４２２、４２６、４３０、４３４、４３８、４４２、４４６、及び４５０からなる群から選択される配列を含み；且つ
    前記重鎖融合タンパク質が、配列番号３８１、３８５、３８９、３９３、３９７、４０１、４０５、４０９、４１３、４１７、４２１、４２５、４２９、４３３、４３７、４４１、４４５、及び４４９からなる群から選択される配列を含む、請求項２５～３７のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  39. 前記軽鎖及び前記重鎖融合タンパク質が、
    それぞれ配列番号３８２及び配列番号３８１；
    それぞれ配列番号３８６及び配列番号３８５；
    それぞれ配列番号３９０及び配列番号３８９；
    それぞれ配列番号３９４及び配列番号３９３；
    それぞれ配列番号３９８及び配列番号３９７；
    それぞれ配列番号４０２及び配列番号４０１；
    それぞれ配列番号４０６及び配列番号４０５；
    それぞれ配列番号４１０及び配列番号４０９；
    それぞれ配列番号４１４及び配列番号４１３；
    それぞれ配列番号４１８及び配列番号４１７；
    それぞれ配列番号４２２及び配列番号４２１；
    それぞれ配列番号４２６及び配列番号４２５；
    それぞれ配列番号４３０及び配列番号４２９；
    それぞれ配列番号４３４及び配列番号４３３；
    それぞれ配列番号４３８及び配列番号４３７；
    それぞれ配列番号４４２及び配列番号４４１；
    それぞれ配列番号４４６及び配列番号４４５；並びに
    それぞれ配列番号４５０及び配列番号４４９
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項２５～３８のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  40. 請求項２５～３９のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトの前記軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
  41. 請求項２５～３９のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトの前記重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  42. 請求項４０に記載のポリヌクレオチド、請求項４１に記載のポリヌクレオチド、又はその両方を含むベクター。
  43. 請求項４０に記載のポリヌクレオチド及び請求項４２に記載のポリヌクレオチドで形質転換されるか又はトランスフェクトされる宿主細胞。
  44. 請求項２５～３９のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトを生成するためのプロセスであって、前記軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含み且つ前記重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドも含む宿主細胞を、前記抗体コンストラクトの発現を可能にする条件下で培養すること、及び培養物から生成された前記抗体コンストラクトを回収することを含むプロセス。
  45. 請求項２５～３９のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト及び担体、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤、保存剤又はアジュバントを含む医薬組成物。
  46. 固形腫瘍疾患又は転移性癌疾患を治療するか又は寛解させるための方法であって、必要とする対象に有効量の請求項２５～３９のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトを投与する工程を含む方法。
  47. 前記固形腫瘍疾患が、前述のいずれかに由来する卵巣癌、膵臓癌、中皮腫、肺癌、胃癌及び三種陰性乳癌疾患又は転移性癌疾患からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。
  48. 請求項２５～３９のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト、及び任意選択により、使用のための指示書を含むキット。
  49. 多重特異性抗体コンストラクトであって、
    ａ）それぞれ第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１のＣＨ１ドメインを含む２つの同一な重鎖融合タンパク質であって、前記第１のＣＨ１ドメインは、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドに連結され、且つ前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）に連結され、前記ＶＨ２は、第２のＣＨ１ドメインに連結され；
    ｉ）前記ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含み；且つ
    ｉｉ）前記ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３に対応する残基からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、重鎖融合タンパク質；並びに
    ｂ）第１の軽鎖を含む第２のポリペプチドであって、前記第１の軽鎖は、第１の軽鎖可変領域（ＶＬ１）及び第１のＣＬ領域を含み；且つ前記ＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、第２のポリペプチド；並びに
    ｃ）第２の軽鎖を含む第３のポリペプチドであって、前記第２の軽鎖は、第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２のＣＬ領域を含み；且つ前記ＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、第３のポリペプチド
    を含む多重特異性抗体コンストラクトであって、
    前記ＶＨ１及びＶＬ１が相互作用して第１の抗原に結合し、且つ前記ＶＨ２及びＶＬ２が相互作用して、第２の抗原に結合し；
    ここで、
    前記第１の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり、且つ前記第２の抗原が、ヒトメソセリン（「ＭＳＬＮ」；配列番号２）であるか；又は
    前記第１の抗原が、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり、且つ前記第２の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）である多重特異性抗体コンストラクト。
  50. 多重特異性抗体コンストラクトであって、
    ａ）それぞれ第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１のＣＨ１ドメインを含む２つの同一な重鎖融合タンパク質であって、前記第１のＣＨ１ドメインは、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドに連結され、且つ前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドは、第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）に連結され、前記ＶＨ２は、第２のＣＨ１ドメインに連結され；
    ｉ）前記ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含み；且つ
    ｉｉ）前記ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３９、４４、及び１８３に対応する残基からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、重鎖融合タンパク質；並びに
    ｂ）第１の軽鎖を含む第２のポリペプチドであって、前記第１の軽鎖は、第１の軽鎖可変領域（ＶＬ１）及び第１のＣＬ領域を含み；且つ前記ＶＬ１又は第１のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で正に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、第２のポリペプチド；並びに
    ｃ）第２の軽鎖を含む第３のポリペプチドであって、前記第２の軽鎖は、第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）及び第２のＣＬ領域を含み；且つ前記ＶＬ２又は第２のＣＬドメインは、ＥＵ付番を使用する位置３８、１００、及び１７６からなる群から選択される残基で負に荷電したアミノ酸を導入する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、第３のポリペプチド
    を含む多重特異性抗体コンストラクトであって、
    前記ＶＨ１及びＶＬ１が相互作用して第１の抗原に結合し、且つ前記ＶＨ２及びＶＬ２が相互作用して、第２の抗原に結合し；
    ここで、
    前記第１の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり、且つ前記第２の抗原が、ヒトメソセリン（「ＭＳＬＮ」；配列番号２）であるか；又は
    前記第１の抗原が、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり、且つ前記第２の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）である多重特異性抗体コンストラクト。
  51. 前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドが、ペプチドリンカーを介して前記ＶＨ２に連結される、請求項４９又は５０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  52. 前記ペプチドリンカーが、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）２（配列番号９１６）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号８８８）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）３（配列番号９１７）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号８８９）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）４（配列番号９１８）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号８９０）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）５（配列番号９１９）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）５（配列番号９２０）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）６（配列番号９２１）、及び（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）６（配列番号９２２）からなる群から選択される配列を含む、請求項５１に記載の抗体コンストラクト。
  53. ａ）前記ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｋ、Ｇ４４Ｋ、及びＳ１８３Ｋからなる群から選択される変異を含み；
    ｂ）前記ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｅ、Ｇ４４Ｅ、及びＳ１８３Ｅからなる群から選択される変異を含み；
    ｃ）前記ＶＬ１又は第１のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｅ、Ｇ１００Ｅ、及びＳ１７６Ｅからなる群から選択される変異を含み；且つ
    ｄ）前記ＶＬ２又は第２のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｋ、Ｇ１００Ｋ、及びＳ１７６Ｋからなる群から選択される変異を含む、請求項４９に記載の抗原結合タンパク質。
  54. ａ）前記第１のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
    ｂ）前記第２のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
    ｃ）前記第１のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
    ｄ）前記第２のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含む、請求項５３に記載の抗原結合タンパク質。
  55. ａ）前記ＶＨ１が、Ｑ３９Ｋ変異を含み且つ前記第１のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
    ｂ）前記ＶＨ２が、Ｑ３９Ｅ変異を含み且つ前記第２のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
    ｃ）前記ＶＬ１が、Ｑ３８Ｅ変異を含み且つ前記第１のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
    ｄ）前記ＶＬ２が、Ｑ３８Ｋ変異を含み且つ前記第２のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含む、請求項５３に記載の抗原結合タンパク質。
  56. ａ）前記第１のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｋ及びＳ１８３Ｋ変異を含み；
    ｂ）前記第２のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｅ及びＳ１８３Ｅ変異を含み；
    ｃ）前記第１のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｅ及びＳ１７６Ｅ変異を含み；且つ
    ｄ）前記第２のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｋ及びＳ１７６Ｋ変異を含む、請求項５３に記載の抗原結合タンパク質。
  57. ａ）前記ＶＨ１又は第１のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｅ、Ｇ４４Ｅ、及びＳ１８３Ｅからなる群から選択される変異を含み；
    ｂ）前記ＶＨ２又は第２のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＱ３９Ｋ、Ｇ４４Ｋ、及びＳ１８３Ｋからなる群から選択される変異を含み；
    ｃ）前記ＶＬ１又は第１のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｋ、Ｇ１００Ｋ、及びＳ１７６Ｋからなる群から選択される変異を含み；且つ
    ｄ）前記ＶＬ２又は第２のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＱ３８Ｅ、Ｇ１００Ｅ、及びＳ１７６Ｅからなる群から選択される変異を含む、請求項５０に記載の抗原結合タンパク質。
  58. ａ）前記第１のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
    ｂ）前記第２のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
    ｃ）前記第１のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
    ｄ）前記第２のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含む、請求項５７に記載の抗原結合タンパク質。
  59. ａ）前記ＶＨ１が、Ｑ３９Ｅ変異を含み且つ前記第１のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｅ変異を含み；
    ｂ）前記ＶＨ２が、Ｑ３９Ｋ変異を含み且つ前記第２のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１８３Ｋ変異を含み；
    ｃ）前記ＶＬ１が、Ｑ３８Ｋ変異を含み且つ前記第１のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
    ｄ）前記ＶＬ２が、Ｑ３８Ｅ変異を含み且つ前記第２のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＳ１７６Ｅ変異を含む、請求項５７に記載の抗原結合タンパク質。
  60. ａ）前記第１のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｅ及びＳ１８３Ｅ変異を含み；
    ｂ）前記第２のＣＨ１ドメインが、ＥＵ付番を使用するＧ４４Ｋ及びＳ１８３Ｋ変異を含み；
    ｃ）前記第１のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｋ及びＳ１７６Ｋ変異を含み；且つ
    ｄ）前記第２のＣＬドメインが、ＥＵ付番を使用するＧ１００Ｅ及びＳ１７６Ｅ変異を含む、請求項５７に記載の抗原結合タンパク質。
  61. 前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドが、
    （ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
    （ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
    （ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
    からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
    前記アミノ酸の付番が、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である、請求項４９～５０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  62. 前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドが、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、前記アミノ酸の付番が、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である、請求項６１に記載の抗体コンストラクト。
  63. 前記第１の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり且つ前記第２の抗原が、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり；且つ
    前記ＶＬ１が、
    それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
    それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
    それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
    それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
    それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
    それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
    それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
    それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
    それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
    それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
    それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
    それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
    それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    前記ＶＨ１が、
    それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
    それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
    それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
    それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
    それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
    それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
    それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
    それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
    それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
    それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
    それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
    それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
    それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
    前記ＶＬ２が、
    それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
    それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
    それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
    それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０；
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    且つ前記ＶＨ２が、
    それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
    それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
    それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
    それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む、請求項４９～６２のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  64. １）前記ＶＬ１及びＶＨ１が、
    ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
    ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
    からなる群から選択され；
    且つ
    ２）前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
    ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
    からなる群から選択される、請求項６３に記載の抗体コンストラクト。
  65. 前記ＶＬ１が、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＨ１が、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＬ２が、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＨ２が、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６３に記載の抗体コンストラクト。
  66. １）前記ＶＬ１及びＶＨ１が、
    ａ）配列番号５を含むＶＬ１及び配列番号６を含むＶＨ１；
    ｂ）配列番号９を含むＶＬ１及び配列番号１０を含むＶＨ１；
    ｃ）配列番号１３を含むＶＬ１及び配列番号１４を含むＶＨ１；
    ｄ）配列番号１７を含むＶＬ１及び配列番号１８を含むＶＨ１；
    ｅ）配列番号２１を含むＶＬ１及び配列番号２２を含むＶＨ１；
    ｆ）配列番号２５を含むＶＬ１及び配列番号２６を含むＶＨ１；
    ｇ）配列番号２９を含むＶＬ１及び配列番号３０を含むＶＨ１；
    ｈ）配列番号３３を含むＶＬ１及び配列番号３４を含むＶＨ１；
    ｉ）配列番号３７を含むＶＬ１及び配列番号３８を含むＶＨ１；
    ｊ）配列番号４１を含むＶＬ１及び配列番号４２を含むＶＨ１；
    ｋ）配列番号４５を含むＶＬ１及び配列番号４６を含むＶＨ１；
    ｌ）配列番号４９を含むＶＬ１及び配列番号５０を含むＶＨ１；並びに
    ｍ）配列番号５３を含むＶＬ１及び配列番号５４を含むＶＨ１
    からなる群から選択され；
    且つ
    ２）前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）配列番号２１３を含むＶＬ２及び配列番号２１４を含むＶＨ２；
    ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ２及び配列番号２１８を含むＶＨ２；
    ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ２及び配列番号２２２を含むＶＨ２；並びに
    ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ２及び配列番号２２６を含むＶＨ２
    からなる群から選択される、請求項６５に記載の抗体コンストラクト。
  67. 請求項４９～６６及び７６～８０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトの前記第１の軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
  68. 請求項４９～６６及び７６～８０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトの前記第２の軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
  69. 請求項４９～６６及び７６～８０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトの前記重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  70. ａ）請求項６７に記載のポリヌクレオチド、
    ｂ）請求項６８に記載のポリヌクレオチド、
    ｃ）請求項６９に記載のポリヌクレオチド、又は
    ｄ）ａ）、ｂ）、及びｃ）の任意の組合せ
    を含むベクター。
  71. 請求項６７に記載のポリヌクレオチド、請求項６８に記載のポリヌクレオチド及び請求項６９に記載のポリヌクレオチドで形質転換されるか又はトランスフェクトされる宿主細胞。
  72. 請求項４９～６６及び７６～８０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトを生成するためのプロセスであって、前記第１の軽鎖をコードするポリヌクレオチド、前記第２の軽鎖をコードするポリヌクレオチド及び前記重鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、前記抗体コンストラクトの発現を可能にする条件下で培養すること、及び培養物から生成された前記抗体コンストラクトを回収することを含むプロセス。
  73. 請求項４９～６６及び７６～８０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト及び担体、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤、保存剤又はアジュバントを含む医薬組成物。
  74. 固形腫瘍疾患又は転移性癌疾患を治療するか又は寛解させるための方法であって、必要とする対象に有効量の請求項４９～６６及び７６～８０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクトを投与する工程を含む方法。
  75. 前記固形腫瘍疾患が、前述のいずれかに由来する卵巣癌、膵臓癌、中皮腫、肺癌、胃癌及び三種陰性乳癌疾患又は転移性癌疾患からなる群から選択される、請求項７４に記載の方法。
  76. 請求項４９～６６及び７６～８０のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト、及び任意選択により、使用のための指示書を含むキット。
  77. 前記第１の抗原が、ヒトＭＳＬＮ（配列番号２）であり且つ前記第２の抗原が、ヒトＣＤ４０（配列番号１）であり；
    前記ＶＬ１が、
    それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２；
    それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８；
    それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４；並びに
    それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    前記ＶＨ１が、
    それぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６；
    それぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２；
    それぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８；並びに
    それぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み；
    前記ＶＬ２が、
    それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
    それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
    それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
    それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
    それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
    それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
    それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
    それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
    それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
    それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
    それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
    それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
    それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    且つ
    前記ＶＨ２が、
    それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
    それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
    それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
    それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
    それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
    それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
    それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
    それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
    それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
    それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
    それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
    それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
    それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む、請求項４９～６２のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  78. １）前記ＶＬ１及びＶＨ１が、
    ａ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２５４、２５５、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｂ）それぞれ配列番号２３６、２３７、及び２３８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６０、２６１、及び２６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；
    ｃ）それぞれ配列番号２４２、２４３、及び２４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２６６、２６７、及び２６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１；並びに
    ｄ）それぞれ配列番号２４８、２４９、及び２５０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１；並びにそれぞれ配列番号２７２、２７３、及び２７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１
    からなる群から選択され；
    且つ
    ２）前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
    ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；
    ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２；並びに
    ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ２；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ２
    からなる群から選択される、請求項７７に記載の抗体コンストラクト。
  79. 前記ＶＬ１が、配列番号２１３、２１７、２２１、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＨ１が、配列番号２１４、２１８、２２２、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
    前記ＶＬ２が、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
    前記ＶＨ２が、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７７に記載の抗体コンストラクト。
  80. １）前記ＶＬ１及びＶＨ１が、
    ａ）配列番号２１３を含むＶＬ１及び配列番号２１４を含むＶＨ１；
    ｂ）配列番号２１７を含むＶＬ１及び配列番号２１８を含むＶＨ１；
    ｃ）配列番号２２１を含むＶＬ１及び配列番号２２２を含むＶＨ１；並びに
    ｄ）配列番号２２５を含むＶＬ１及び配列番号２２６を含むＶＨ１
    からなる群から選択され；
    且つ
    ２）前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）配列番号５を含むＶＬ２及び配列番号６を含むＶＨ２；
    ｂ）配列番号９を含むＶＬ２及び配列番号１０を含むＶＨ２；
    ｃ）配列番号１３を含むＶＬ２及び配列番号１４を含むＶＨ２；
    ｄ）配列番号１７を含むＶＬ２及び配列番号１８を含むＶＨ２；
    ｅ）配列番号２１を含むＶＬ２及び配列番号２２を含むＶＨ２；
    ｆ）配列番号２５を含むＶＬ２及び配列番号２６を含むＶＨ２；
    ｇ）配列番号２９を含むＶＬ２及び配列番号３０を含むＶＨ２；
    ｈ）配列番号３３を含むＶＬ２及び配列番号３４を含むＶＨ２；
    ｉ）配列番号３７を含むＶＬ２及び配列番号３８を含むＶＨ２；
    ｊ）配列番号４１を含むＶＬ２及び配列番号４２を含むＶＨ２；
    ｋ）配列番号４５を含むＶＬ２及び配列番号４６を含むＶＨ２；
    ｌ）配列番号４９を含むＶＬ２及び配列番号５０を含むＶＨ２；並びに
    ｍ）配列番号５３を含むＶＬ２及び配列番号５４を含むＶＨ２
    からなる群から選択される、請求項７９に記載の抗体コンストラクト。
  81. ヒトＣＤ４０（配列番号１）に特異的に結合し、それを刺激する抗原結合タンパク質であって、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、
    前記ＶＬが、
    それぞれ配列番号５８、５９、及び６０；
    それぞれ配列番号６４、６５、及び６６；
    それぞれ配列番号７０、７１、及び７２；
    それぞれ配列番号７６、７７、及び７８；
    それぞれ配列番号８２、８３、及び８４；
    それぞれ配列番号８８、８９、及び９０；
    それぞれ配列番号９４、９５、及び９６；
    それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２；
    それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８；
    それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４；
    それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０；
    それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６；並びに
    それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２
    からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み；
    且つ
    前記ＶＨが、
    それぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８；
    それぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４；
    それぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０；
    それぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６；
    それぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２；
    それぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８；
    それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４；
    それぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０；
    それぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６；
    それぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２；
    それぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８；
    それぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４；並びに
    それぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０
    からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む、抗原結合タンパク質。
  82. 前記ＶＬ及びＶＨが、
    ａ）それぞれ配列番号５８、５９、及び６０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｂ）それぞれ配列番号６４、６５、及び６６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１４２、１４３、及び１４４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｃ）それぞれ配列番号７０、７１、及び７２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｄ）それぞれ配列番号７６、７７、及び６７８０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１５４、１５５、及び１５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｅ）それぞれ配列番号８２、８３、及び８４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１６０、１６１、及び１６２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｆ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１６６、１６７、及び１６８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｇ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｈ）それぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１７８、１７９、及び１８０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｉ）それぞれ配列番号１０６、１０７、及び１０８からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１８４、１８５、及び１８６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｊ）それぞれ配列番号１１２、１１３、及び１１４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１９０、１９１、及び１９２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｋ）それぞれ配列番号１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号１９６、１９７、及び１９８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；
    ｌ）それぞれ配列番号１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号２０２、２０３、及び２０４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ；並びに
    ｍ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ；並びにそれぞれ配列番号２０８、２０９、及び２１０からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ
    からなる群から選択される、請求項８１に記載の抗体コンストラクト。
  83. 前記ＶＬが、配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、及び５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；且つ
    前記ＶＨが、配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、及び５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８１に記載の抗体コンストラクト。
  84. 前記ＶＬ２及びＶＨ２が、
    ａ）配列番号５を含むＶＬ及び配列番号６を含むＶＨ；
    ｂ）配列番号９を含むＶＬ及び配列番号１０を含むＶＨ；
    ｃ）配列番号１３を含むＶＬ及び配列番号１４を含むＶＨ；
    ｄ）配列番号１７を含むＶＬ及び配列番号１８を含むＶＨ；
    ｅ）配列番号２１を含むＶＬ及び配列番号２２を含むＶＨ；
    ｆ）配列番号２５を含むＶＬ及び配列番号２６を含むＶＨ；
    ｇ）配列番号２９を含むＶＬ及び配列番号３０を含むＶＨ；
    ｈ）配列番号３３を含むＶＬ及び配列番号３４を含むＶＨ；
    ｉ）配列番号３７を含むＶＬ及び配列番号３８を含むＶＨ；
    ｊ）配列番号４１を含むＶＬ及び配列番号４２を含むＶＨ；
    ｋ）配列番号４５を含むＶＬ及び配列番号４６を含むＶＨ；
    ｌ）配列番号４９を含むＶＬ及び配列番号５０を含むＶＨ；並びに
    ｍ）配列番号５３を含むＶＬ及び配列番号５４を含むＶＨ
    からなる群から選択される、請求項８３に記載の抗体コンストラクト。
  85. 前記重鎖が、
    （ｉ）Ｎ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ；
    （ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びに
    （ｉｉｉ）Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ
    からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み；
    前記アミノ酸の付番が、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である、請求項８１～８４のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  86. 前記重鎖が、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ、及びＶ３０２Ｃ変異を含み、前記アミノ酸の付番が、Ｋａｂａｔに従うＥＵ付番である、請求項８５に記載の抗体コンストラクト。
  87. 前記抗原結合タンパク質がさらに、前記ＶＬに連結された軽鎖ＣＬポリペプチドを含み、前記ＣＬポリペプチドが、配列番号８８３及び配列番号８８４からなる群から選択される、請求項８１～８６のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  88. 前記抗原結合タンパク質がさらに、重鎖ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチを含み、前記ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドが、配列番号８８５及び配列番号８８６からなる群から選択される、請求項８１～８７のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  89. 前記抗原結合タンパク質がさらに、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む、請求項８１～８８のいずれか一項に記載の抗体コンストラクト。
  90. 前記第２の抗原が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、請求項８９に記載の抗体コンストラクト。
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Family Cites Families (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US70185A (en) 1867-10-29 fan oh be
US2003A (en) 1841-03-12 Improvement in horizontal windivhlls
US30985A (en) 1860-12-18 Thomas l
US3180193A (en) 1963-02-25 1965-04-27 Benedict David Machines for cutting lengths of strip material
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4965195A (en) 1987-10-26 1990-10-23 Immunex Corp. Interleukin-7
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
ATE108965T1 (de) 1987-12-09 1994-08-15 Omron Tateisi Electronics Co Induktives datenübertragungssystem.
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
AU643427B2 (en) 1988-10-31 1993-11-18 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
SG48759A1 (en) 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
AU651596B2 (en) 1990-06-05 1994-07-28 Immunex Corporation Type II interleukin-1 receptors
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE352612T1 (de) 1990-08-29 2007-02-15 Pharming Intellectual Pty Bv Homologe rekombination in säugetier-zellen
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
EP0546073B1 (en) 1990-08-29 1997-09-10 GenPharm International, Inc. production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
WO1992022670A1 (en) 1991-06-12 1992-12-23 Genpharm International, Inc. Early detection of transgenic embryos
WO1992022645A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genpharm International, Inc. Transgenic immunodeficient non-human animals
US6407213B1 (en) 1991-06-14 2002-06-18 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
AU3328493A (en) 1991-12-17 1993-07-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
AU4541093A (en) 1992-06-18 1994-01-24 Genpharm International, Inc. Methods for producing transgenic non-human animals harboring a yeast artificial chromosome
US5874082A (en) 1992-07-09 1999-02-23 Chiron Corporation Humanized anti-CD40 monoclonal antibodies and fragments capable of blocking B cell proliferation
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
AU675661B2 (en) 1992-07-24 1997-02-13 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5981175A (en) 1993-01-07 1999-11-09 Genpharm Internation, Inc. Methods for producing recombinant mammalian cells harboring a yeast artificial chromosome
JPH08509612A (ja) 1993-04-26 1996-10-15 ジェンファーム インターナショナル インコーポレイテッド 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
US5625825A (en) 1993-10-21 1997-04-29 Lsi Logic Corporation Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network
US5643763A (en) 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
EP1978033A3 (en) 1995-04-27 2008-12-24 Amgen Fremont Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5811524A (en) 1995-06-07 1998-09-22 Idec Pharmaceuticals Corporation Neutralizing high affinity human monoclonal antibodies specific to RSV F-protein and methods for their manufacture and therapeutic use thereof
ES2176484T3 (es) 1995-08-18 2002-12-01 Morphosys Ag Bancos de proteinas/(poli)peptidos.
KR100308764B1 (ko) 1995-08-29 2001-12-17 마나배게이사꾸 키메라동물및그의제작법
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
ES2301183T3 (es) 1996-12-03 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr.
EP0983303B1 (en) 1997-05-21 2006-03-08 Biovation Limited Method for the production of non-immunogenic proteins
US6809184B1 (en) 1997-12-01 2004-10-26 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Antibodies, including FV molecules, and immunoconjugates having high binding affinity for mesothelin and methods for their use
ES2207278T3 (es) 1998-07-28 2004-05-16 Micromet Ag Heterominicuerpos.
WO2000034317A2 (en) 1998-12-08 2000-06-15 Biovation Limited Method for reducing immunogenicity of proteins
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
MXPA02007473A (es) 2000-02-01 2003-09-22 Tanox Inc Moleculas activadoras de celulas presentadoras de antigenos (apc) que se unen a cd40.
CN1450912A (zh) 2000-04-19 2003-10-22 泰诺士公司 用于治疗牛皮癣和其它炎性皮肤病的cd40拮抗剂
DE60138715D1 (de) * 2000-09-05 2009-06-25 Amgen Inc Tnf-rezeptor-ähnliche moleküle und deren anwendungen
WO2003029296A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-10 Chiron Corporation Human anti-cd40 antibodies
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
WO2003047336A2 (en) 2001-11-30 2003-06-12 Abgenix, Inc. TRANSGENIC ANIMALS BEARING HUMAN Igμ LIGHT CHAIN GENES
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
KR20120125634A (ko) 2003-10-16 2012-11-16 마이크로메트 에이지 다중특이적 탈면역화된 ｃｄ3-바인더
US8277810B2 (en) 2003-11-04 2012-10-02 Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc. Antagonist anti-CD40 antibodies
WO2006099141A2 (en) 2005-03-10 2006-09-21 Morphotek, Inc. Anti-mesothelin antibodies
US8234145B2 (en) 2005-07-12 2012-07-31 International Business Machines Corporation Automatic computation of validation metrics for global logistics processes
JP5374359B2 (ja) 2006-03-17 2013-12-25 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 安定化されたポリペプチド化合物
US8430938B1 (en) 2006-07-13 2013-04-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Control algorithm for autothermal reformer
GB0624500D0 (en) * 2006-12-07 2007-01-17 Istituto Superiore Di Sanito A novel passive vaccine for candida infections
NZ579594A (en) 2007-03-12 2012-03-30 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
NZ580755A (en) 2007-04-03 2012-05-25 Micromet Ag Cross-species-specific cd3-epsilon binding domain
US8793074B2 (en) 2007-06-21 2014-07-29 Saint Louis University Sequence covariance networks, methods and uses therefor
CA2689941C (en) 2007-06-25 2019-10-29 Esbatech Ag Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
PL2195017T3 (pl) 2007-10-01 2015-03-31 Bristol Myers Squibb Co Ludzkie antyciała, które wiążą mezotelinę i ich zastosowania
US8464584B2 (en) 2007-10-19 2013-06-18 Food Equipment Technologies Company, Inc. Beverage dispenser with level measuring apparatus and display
US9023351B2 (en) 2007-11-26 2015-05-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Anti-mesothelin antibodies and uses thereof
US8376279B2 (en) 2008-01-23 2013-02-19 Aurora Flight Sciences Corporation Inflatable folding wings for a very high altitude aircraft
EP2352765B1 (en) 2008-10-01 2018-01-03 Amgen Research (Munich) GmbH Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
CN106432493B (zh) * 2009-03-10 2020-01-31 贝勒研究院 抗-cd40抗体及其用途
AU2011349443B2 (en) 2010-12-20 2015-12-24 Genentech, Inc. Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
CN103298648B (zh) 2010-12-30 2016-04-13 C.劳勃.汉默斯坦两合有限公司 适于机动车辆座椅的包括两对导轨的纵向调节装置
KR101905346B1 (ko) 2011-04-21 2018-10-05 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Cd40을 길항하는 항체 폴리펩티드
US20130078250A1 (en) 2011-08-23 2013-03-28 Oliver Ast Bispecific t cell activating antigen binding molecules
BR112014003769B1 (pt) 2011-08-23 2022-05-10 Roche Glycart Ag Molécula de ligação ao antígeno biespecífica ativadora de célula t, método de produção da molécula de ligação ao antígeno biespecífica ativadora de célula t, composição farmacêutica e uso da molécula de ligação ao antígeno biespecífica ativadora de célula t
CA3111357A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
WO2014004549A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
JPWO2014065402A1 (ja) 2012-10-26 2016-09-08 株式会社ペルセウスプロテオミクス 抗ヒトｃｄ４０モノクローナル抗体及びその利用
JP2016011258A (ja) 2012-10-26 2016-01-21 株式会社ペルセウスプロテオミクス 抗ヒトｃｄ４０モノクローナル抗体及びその利用
KR101846574B1 (ko) 2012-11-26 2018-04-06 현대자동차주식회사 자동차용 복합흡음재 및 그 제조방법
US20140302037A1 (en) 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
US20140308285A1 (en) 2013-03-15 2014-10-16 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
EP2970484B2 (en) 2013-03-15 2022-09-21 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
TW201605896A (zh) * 2013-08-30 2016-02-16 安美基股份有限公司 Gitr抗原結合蛋白
EP3733710A1 (en) 2013-09-25 2020-11-04 Amgen, Inc Hetrodimeric v-c-fc-v-c antibody
GB201322583D0 (en) 2013-12-19 2014-02-05 Alligator Bioscience Ab Antibodies
US10449227B2 (en) 2014-06-27 2019-10-22 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Conjugates for immunotherapy
US20170233485A1 (en) 2014-08-18 2017-08-17 Biogen Ma Inc. Anti-cd40 antibodies and uses thereof
US10105142B2 (en) 2014-09-18 2018-10-23 Ethicon Llc Surgical stapler with plurality of cutting elements
CA2874083C (en) * 2014-12-05 2024-01-02 Universite Laval Tdp-43-binding polypeptides useful for the treatment of neurodegenerative diseases
HUE048284T2 (hu) 2015-05-29 2020-07-28 Abbvie Inc Anti-CD40 antitestek és alkalmazásuk
US10479838B2 (en) 2015-06-29 2019-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to CD40 with enhanced agonist activity
TWI796283B (zh) 2015-07-31 2023-03-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｍｓｌｎ及ｃｄ３抗體構築體
AU2016332900C1 (en) * 2015-09-29 2024-02-01 Amgen Inc. ASGR inhibitors
WO2017059243A2 (en) * 2015-09-30 2017-04-06 Janssen Biotech, Inc. Agonistic antibodies specifically binding human cd40 and methods of use
BR112018071307A2 (pt) 2016-04-18 2019-02-26 Celldex Therapeutics, Inc. anticorpos agonistas que ligam cd40 humana e usos dos mesmos
PE20190562A1 (es) 2016-05-27 2019-04-22 Abbvie Biotherapeutics Inc Proteinas de union biespecificas que se unen a una proteina inmunomoduladora y un antigeno tumoral
WO2018176159A1 (en) * 2017-03-31 2018-10-04 Zymeworks Inc. Tumor antigen presentation inducer constructs and uses thereof
AU2018247796A1 (en) 2017-04-04 2019-08-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel bispecific antigen binding molecules capable of specific binding to CD40 and to FAP
WO2020070035A1 (en) 2018-10-01 2020-04-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules with trivalent binding to cd40
UA126188C2 (uk) 2018-10-01 2022-08-25 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка містить домен зв'язування з fap та домен зв'язування з сd40
WO2020230899A1 (ja) 2019-05-15 2020-11-19 協和キリン株式会社 Ｃｄ４０とｆａｐに結合するバイスペシフィック抗体

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