TW201811201A - 含ＳＡＭｅ之原料的製造方法、以及摻合有含ＳＡＭｅ之液體原料的外用劑、化妝品及健康食品 - Google Patents
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Abstract
提供高SAMe含量之含SAMe原料的製造方法，以及摻合有含SAMe液體原料的化妝品、外用劑及健康食品。 具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及藉由離心分離分離培養基與酵母的分離步驟，其中將培養步驟中的培養停止時間點定為從培養液的濁度由上升轉為下降時至濁度下降15%為止的時間點。又，具有在分離步驟後，將酵母冷凍乾燥而得到乾燥粉末的乾燥步驟，或是具有對所得酵母進行菌體破壞的溶菌處理步驟；以及在酸性條件下以水進行萃取的萃取步驟。
Description
本發明係關於含SAMe原料的製造方法，以及摻合有含SAMe液體原料的外用劑、化妝品及健康食品。
SAMe(S-腺苷甲硫胺酸)係於1974年世界首次在歐洲開發出作為憂鬱症的治療藥。又，在美國特別作為對關節炎有效的營養補充品而受人歡迎；此外，亦對肝臟疾病有效。特別是關節症的病患有年年增加的傾向，對輔助關節的健康食品等的需求正在提高。
此處，專利文獻1中，記載了藉由將莫柔米醋等來自於釀造的醋類與清酒粕組合，得到以安定狀態含有SAMe的健康食品。
又，專利文獻2中，記載了將含有SAMe的組成物使用於化妝品等之皮膚外用劑。
[專利文獻1]日本特開2008-11803號公報
[專利文獻2]國際公開第2012/035685號
如欲提高摻合於外用劑、化妝品或健康食品等中的含SAMe原料之SAMe含量時，必須盡可能地提高培養之酵母菌體中的SAMe含量。然而，專利文獻1、2記載的發明，無論何者均未提高酵母菌體中的SAMe含量。
又，因為以往的含SAMe原料係粉末狀，難以溶解於水或油中，故將其大量摻合於乳霜狀、凝膠狀或液狀的製品(化妝用乳霜等)中是有困難的。
因此，本發明之目的係提供一種高SAMe含量之含SAMe原料的製造方法，以及摻合有含SAMe液體原料的外用劑、化妝品及健康食品。
請求項1記載的本發明之含SAMe原料的製造方法，其特徵為具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在加溫溶解步驟後，在培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與酵母的分離步驟；以及在分離步驟後，對所得之酵母藉由溶菌處理進行菌體破壞的溶菌處理步驟；以及在溶菌處理步驟後，在酸性條件下以水進行萃取的萃取步驟，其中將培養步驟中的培養停止時間點定為 從培養液的濁度由上升轉為下降時至濁度下降15%為止的時間點。
請求項2記載的本發明之含SAMe原料的製造方法，係具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在加溫溶解步驟後，在培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與酵母的分離步驟；以及在分離步驟後，對所得之酵母藉由溶菌處理進行菌體破壞的溶菌處理步驟；以及在溶菌處理步驟後，在酸性條件下以水進行萃取的萃取步驟。
請求項3記載的本發明之含SAMe原料的製造方法，其特徵為具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在加溫溶解步驟後，在培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與酵母的分離步驟，其中將培養步驟中的培養停止時間點定為從培養液的濁度由上升轉為下降時至濁度下降15%為止的時間點。
請求項4記載之本發明，其特徵為在請求項3中記載之含SAMe原料的製造方法中，酵母為清酒酵母，加溫溶解步驟中的溫度在20℃以上、35℃以下，在培養步驟中，溫度在20℃以上、35℃以下，黑糖的濃度相對於水的重量比在6%以上、10%以下，培養基的初始pH在3以上、5以下。
請求項5記載的本發明，其特徵係在請求項3或請求項4中記載之含SAMe原料的製造方法中，具有在分離步驟後，將酵母冷凍乾燥而得到乾燥粉末的乾燥步驟。
請求項6記載的本發明之外用劑，其特徵為含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
請求項7記載的本發明之化妝品，其特徵為含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
請求項8記載的本發明之健康食品，其特徵為含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
若依據本發明，可提供高SAMe含量之含SAMe原料的製造方法，以及摻合有含SAMe液體原料的外用劑、化妝品及健康食品。
[圖1]顯示在培養步驟中不同培養條件之試驗結果的圖。
[圖2]顯示在使用了摻合有含SAMe液體原料之外用乳霜的情況下，膝關節疼痛之變化的圖。
[圖3]顯示在使用了摻合有含SAMe液體原料之外用乳霜的情況下，機能性評估之結果的圖。
依據本發明之第1實施形態的含SAMe原料之製造方法，係具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶 解的加溫溶解步驟；以及在加溫溶解步驟後，在培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與酵母的分離步驟；以及在分離步驟後，對所得之酵母藉由溶菌處理進行菌體破壞的溶菌處理步驟；以及在溶菌處理步驟後，在酸性條件下以水進行萃取的萃取步驟，其中將培養步驟中的培養停止時間點定為從培養液的濁度由上升轉為下降時至濁度下降15%為止的時間點。
依據本發明之第2實施形態的含SAMe原料之製造方法，係具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在加溫溶解步驟後，在培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與酵母的分離步驟；以及在分離步驟後，對所得之酵母藉由溶菌處理進行菌體破壞的溶菌處理步驟；以及在溶菌處理步驟後，在酸性條件下以水進行萃取的萃取步驟。
若依據此等之實施形態，可得到高SAMe含量的含SAMe原料。又，所得液狀的含SAMe原料因為溶解於水，故亦可摻合於乳霜狀、凝膠狀或液狀的外用劑、化妝品或健康食品中。
依據本發明之第3實施形態的含SAMe原料之製造方法，係具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在加溫溶解步驟後，在培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在培養步驟後，藉由離 心分離分離培養基與酵母的分離步驟，其中將培養步驟中的培養停止時間點定為從培養液的濁度由上升轉為下降時至濁度下降15%為止的時間點。
本發明之第4實施形態，係在依據第3實施形態的含SAMe原料之製造方法中，酵母為清酒酵母，加溫溶解步驟中的溫度在20℃以上、35℃以下，在培養步驟中，溫度在20℃以上、35℃以下，黑糖的濃度相對於水的重量比在6%以上、10%以下，培養基的初始pH在3以上、5以下。
若依據此等之實施形態，可得到高SAMe含量的含SAMe原料。
本發明之第5實施形態，係具有在依據第3或第4實施形態的含SAMe原料之製造方法中，在分離步驟後，將酵母冷凍乾燥而得到乾燥粉末的乾燥步驟。
若依據本實施的形態，可獲得高SAMe含量之粉末狀的含SAMe原料。
依據本發明之第6實施形態中的外用劑，係含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
依據本發明之第7實施形態中的化妝品，係含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
依據本發明之第8實施形態中的健康食品，係含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
若依據此等之實施形態，可得到摻合有含SAMe液體原料之乳霜狀、凝膠狀或液狀的外用劑、化妝品或健康食品。
以下針對依據本發明之一實施例的含SAMe原料之製造方法，以及摻合有含SAMe液體原料的外用劑、化妝品及健康食品進行說明。
首先，說明依據本實施例的含SAMe原料之製造方法。
依據本實施例的含SAMe原料之製造方法，係具有：在殺菌洗淨過的培養槽中加入水及作為酵母之營養源的黑糖，再適當地追加氮源，然後加溫至規定溫度並溶解的加溫溶解步驟；在加溫溶解步驟後，在培養槽中加入酵母並培養(發酵)的培養步驟，以及在培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與酵母的分離步驟。
加溫溶解步驟中的規定溫度係以20℃以上、35℃以下較佳，又以30℃更佳。
又，作為加溫溶解步驟中的氮源，較佳為添加胎盤萃取物粉末。
猶，黑糖係僅於加溫溶解步驟開始時加入者較佳。
對於在加溫溶解步驟後加入的酵母，係可使用選自酵母菌(Saccharomyces)屬、念珠菌(Candida)屬、圓酵母(Torulopsis)屬、接合酵母菌(Zygosaccharomyces)屬、裂殖酵母菌(Schizosaccharomyces)屬、畢赤酵母菌(Pichia)屬、漢遜氏菌(Hansenula)屬、克魯維酵母菌(Kluyveromyces)屬、德巴利氏酵母菌(Debaryomyces)屬之 中的食用酵母。其中亦特別以使用酵母菌(Saccharomyces)屬較佳，酵母菌(Saccharomyces)屬之中亦以使用清酒酵母更佳。
在培養步驟中，透過培養(發酵)酵母，在酵母之中產生SAMe。
培養步驟中的溫度，係以適合酵母生育之溫度的20℃以上、35℃以下者較佳，以30℃者更佳。在低溫下酵母的增殖速度遲緩，在高溫下酵母則死光。
又，培養步驟中的黑糖濃度，相對於水的重量比係以3%以上、10%以下者較佳，以6%以上、10%以下者更佳。
又，培養步驟中的培養液起始pH(培養開始時的pH)，係以3以上、7以下者較佳，3以上、5以下者更佳，並以4者最佳。
培養步驟中的培養停止時間點，例如係基於培養液濁度的變動，培養基pH的變動，以及酵母的菌體中SAMe含量所決定。當欲獲得高菌體中SAMe含量的含SAMe酵母時，將培養停止時間點定為從培養液濁度由上升轉為下降時(轉換點)至濁度降低15%為止者即可。即，將培養停止時間點設定為在培養液的濁度達到波峰且開始減少後，濁度從波峰值降低至15%之間的時間點。又，將培養停止時間點定為由轉換點至濁度降低5%為止者更佳。猶，當波峰轉換點可預先預測時，亦可將波峰轉換點之前設定為培養停止時間點。
在分離步驟中，係將酵母培養液通過連續離 心機，分離成培養基與酵母。透過分離成培養基與酵母菌體，可獲得含SAMe酵母。
圖1係顯示培養步驟中不同培養條件(培養基中黑糖濃度、pH調整、培養時間)之試驗結果的圖。試驗係以1t投入量的30℃培養來實施。
測定係使用紫外可見光分光光度計(UV mini 1240(股份有限公司島津製作所))，並以600nm吸光度測定酵母培養液的濁度，以作為酵母菌體量(OD600值)。
酵母菌體中SAMe含量的定量(HPLC定量)係使用機器(GL SCIENCES股份有限公司GL-7400型)，並使用管柱(股份有限公司CHEMCO Chemcopak Nucleosil 100-10SA)，流動相係由流速1.0mL/分，並以20分鐘的0.05M(NH4)2HPO4(pH3.0)，接著以5分鐘的0.5M(NH4)2HPO4(pH3.0)為止所變化組成的線性梯度來執行，並以260nm進行檢出。分析方法係依照後藤等的方法(「清酒醪中的S-腺苷甲硫胺酸之定量及變化」日本釀造協會誌，1992)。
各試驗例中的培養基中黑糖濃度(相對於水的重量比)與培養基的起始pH如下。猶，pH調整降低時係使用乳酸，提升時係使用氫氧化鈉。
試驗例1‧‧‧黑糖濃度：3%、起始pH：4(圖1(a))
試驗例2‧‧‧黑糖濃度：6%、起始pH：4(圖1(b))
試驗例3‧‧‧黑糖濃度：10%、起始pH：4(圖1(c))
試驗例4‧‧‧黑糖濃度：6%、起始pH：3(圖1(d))
試驗例5‧‧‧黑糖濃度：6%、起始pH：5(圖1(e))
試驗例6‧‧‧黑糖濃度：6%、起始pH：6(圖1(f))
試驗例7‧‧‧黑糖濃度：6%、起始pH：7(圖1(g))
圖1中，「◆」為OD600值(左軸)、「▲」為酵母菌體中SAMe含量(左軸)、「■」為pH(右軸)。猶，酵母菌體中SAMe含量係以最高的結果作為100。
在起始pH相同且著眼於比較黑糖濃度的不同之情形中，如圖1(a)~(c)所示，黑糖濃度定為6%的試驗例2，其OD600值較試驗例1更高，且酵母菌體中SAMe含量較試驗例1、3變得更高，總合來說是最優良的結果。
又，在黑糖濃度相同且著眼於比較起始pH的不同之情形中，如圖1(b)、(d)~(g)所示，起始pH為4的試驗例2，其OD600值較試驗例4、7更高，且酵母菌體中SAMe含量較試驗例4~7變得更高，總合來說是最優良的結果。
此處，說明以總合來說為最優良結果的試驗例2(培養基中黑糖濃度6%、起始pH4)作為案例之培養步驟中培養停止時間點的決定方法。
在試驗例2的培養條件中，認知到如圖1(b)所示之酵母在進入增殖期之後培養基pH與OD600值成反比例降低，並在趨向穩定期且曲線的傾斜度減緩之時穩定於pH3附近，以及在剛進入穩定期之後的SAMe含量(蓄積量)較低，且在即將進入死亡期之前的SAMe含量最高。
因此，培養停止時間點為從培養液濁度由上升轉為下降時至濁度降低15%為止，更佳為至濁度降低5%為止。 即，由於在試驗例2中OD600值的波峰約為70，故OD600值達到波峰後，至OD600值為波峰值約70的85%即約60為止之間為培養停止時間點，更佳為OD600值達到波峰後，至OD600值為波峰值約70的95%即約66為止之間為培養停止時間點。
該培養停止時間點係在培養步驟開始後73小時以上、77小時以下的經過時間內。即，就培養時間而言，係以75小時±2小時者較佳。
如此，透過確認培養液中的OD600值與培養基的pH變動及菌體中SAMe含量，可決定培養停止時間點(培養時間)。
如同上述，若依照本實施例中的含SAMe原料之製造方法，可獲得酵母菌體中SAMe含量高的含SAMe酵母。
接著，說明依據本實施例的粉末狀之含SAMe原料(以下，稱為「含SAMe酵母粉末原料」)的製造方法。
依據本實施例的含SAMe酵母粉末原料之製造方法，係具有：於上述含SAMe原料之製造方法中的分離步驟後，將所得之含SAMe酵母進行非加熱殺菌的殺菌步驟；以及在殺菌步驟後，將含SAMe酵母進行冷凍乾燥而得到乾燥粉末的乾燥步驟。
藉由經過此等步驟使得含SAMe酵母成為乾燥粉末，可得到例如含有10%以上SAMe的含SAMe酵母粉末。所得 之含SAMe酵母粉末係可利用於健康食品等之原料。
接著，說明依據本實施例的液狀之含SAMe原料(以下，稱為「含SAMe液體原料」)的製造方法。
依據本實施例的含SAMe液體原料之製造方法，係具有：在上述含SAMe原料之製造方法中的分離步驟後，將所得之含SAMe酵母進行非加熱殺菌的殺菌步驟；以及在殺菌步驟後，針對含SAMe酵母透過溶菌處理進行菌體破壞的溶菌處理步驟；以及在溶菌處理步驟後，在酸性條件下以水進行萃取的萃取步驟。
藉由針對含SAMe酵母，在溶菌處理後，在使SAMe安定化之酸性條件下以水進行萃取，並濾過溶菌萃取物，可獲得含SAMe液體原料。所得之含SAMe液體原料係可用作外用劑、化妝品或健康食品等之原料。
以往的含SAMe原料，因為是粉末狀而均不溶解於水與油中，故難以摻合在乳霜狀、凝膠狀或液狀之外用劑、化妝品或健康食品等之製品中。即便欲將含SAMe酵母粉末原料摻合在乳霜狀的製品中，因為只有強硬地揉捏進乳霜中的方法，無法安定且均一地摻合在乳霜中，故最多0.5%的摻含便是極限。相對於此，由於依據本實施例的含SAMe液體原料係與含SAMe酵母粉末原料不同為液狀，溶解於水，故例如可摻合至少5%以上於化妝用乳霜中，且最大可摻合至70%左右。因此，透過使用含SAMe液體原料，可實現含有大量SAMe的乳霜狀、凝膠狀或液狀的外用劑、化妝品或健康食品等之製品。
猶，含SAMe液體原料係含有1ppm以上的SAMe，pH係以3以上、5以下者較佳。
圖2及圖3係顯示為了確認SAMe在外用上的效果，在相對輕度之變形性膝關節症的被驗者膝蓋上塗佈摻合有含SAMe液體原料的外用乳霜，並確認過程之結果的圖。
評估方法係將摻合有含SAMe液體原料的外用乳霜1天3次塗佈於被驗者的膝蓋上，並每2週以VAS(Visual Analog Scale：視覺類比量表‧‧‧將疼痛的程度標記在100mm的水平直線上，將其數值化的方法)評估膝蓋疼痛的程度，並同時實施機能性評估。評估期間為12週(3個月)，被驗者數從開始時間到8週後為止雖然有11名，但其後減少1名，最終計算為10名。猶，評估係委託整形外科醫生。
圖2為VAS的平均分數，並顯示在使用摻合有含SAMe液體原料之外用乳霜時的膝關節疼痛之變化。如圖2所示，在使用摻合有含SAMe液體原料的外用乳霜12週後，膝關節的疼痛已經緩和。
圖3係顯示在使用摻合有含SAMe液體原料之外用乳霜時的機能性評估之結果的圖。圖3(a)為上樓梯，圖3(b)為下樓梯，圖3(c)為平地步行，圖3(d)為正坐，圖3(e)為起立。
針對上下樓梯，如圖3(a)、(b)所示，感到「有點困難」的被驗者相較於開始時，在12週後已減少。特別是關 於下樓梯，在開始時感到「有點困難」的被驗者雖有約80%，但其中約60%在12週後變為感到「沒問題」。如此，對於上下樓梯已確認到機能性的改善。
針對平地步行，如圖3(c)所示，在開始時感到「有點困難」的被驗者雖有40%以上，但在12週後全員變為感到「沒問題」。如此，對於平地步行亦已確認到機能性的改善。
針對正坐，如圖3(d)所示，在開始時感到「極為困難」的被驗者雖有約80%，但在12週後全員變為感到「沒問題」。如此，對於正坐亦已確認到機能性的改善。
針對從坐著的狀態起立，如圖3(e)所示，在開始時感到「極為困難」或「有點困難」的被驗者雖有共約90%，但在12週後變為感到「沒問題」的被驗者變成佔約80%。如此，對於起立亦已確認到機能性的改善。
因此，藉由塗佈摻合有含SAMe液體原料的外用乳霜，已確認到膝關節痛楚的緩和及日常動作的改善。
依據本發明之製造方法的含SAMe原料，可利用作為外用劑、化妝品或健康食品的原料。又，含SAMe液體原料亦可摻合於乳霜狀‧凝膠狀或液狀的製品中。
Claims (8)
- 一種含SAMe原料的製造方法，其特徵為具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在前述加溫溶解步驟後，在前述培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在前述培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與前述酵母的分離步驟；以及在前述分離步驟後，對所得之前述酵母藉由溶菌處理進行菌體破壞的溶菌處理步驟；以及在前述溶菌處理步驟後，在酸性條件下以水進行萃取的萃取步驟，其中將前述培養步驟中的培養停止時間點定為從培養液的濁度由上升轉為下降時至前述濁度下降15%為止的時間點。
- 一種含SAMe原料的製造方法，其特徵為具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在前述加溫溶解步驟後，在前述培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在前述培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與前述酵母的分離步驟；以及 在前述分離步驟後，對所得之前述酵母藉由溶菌處理進行菌體破壞的溶菌處理步驟；以及在前述溶菌處理步驟後，在酸性條件下以水進行萃取的萃取步驟。
- 一種含SAMe原料的製造方法，其特徵為具有：在培養槽中加入水及黑糖，並加溫溶解的加溫溶解步驟；以及在前述加溫溶解步驟後，在前述培養槽中加入酵母並培養的培養步驟；以及在前述培養步驟後，藉由離心分離分離培養基與前述酵母的分離步驟，其中將前述培養步驟中的培養停止時間點定為從培養液的濁度由上升轉為下降時至前述濁度下降15%為止的時間點。
- 如請求項3之含SAMe原料的製造方法，其中前述酵母為清酒酵母，前述加溫溶解步驟中之溫度為20℃以上、35℃以下，前述培養步驟中，溫度為20℃以上、35℃以下，前述黑糖之濃度相對於前述水之重量比為6%以上、10%以下，前述培養基之起始pH為3以上、5以下。
- 如請求項3或請求項4之含SAMe原料的製造方法，其 具有在前述分離步驟後將前述酵母冷凍乾燥而得到乾燥粉末的乾燥步驟。
- 一種外用劑，其特徵為含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
- 一種化妝品，其特徵為含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
- 一種健康食品，其特徵為含有經溶菌處理的含SAMe酵母之萃取液體原料。
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