TW201311658A - 有益於治療關節炎之新穎咪唑衍生物 - Google Patents

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Abstract

本發明提供下式化合物：□其中A、X及R1-R6係如本文所述，其醫藥鹽，及含有此化合物之醫藥組合物；使用該等化合物之一或其醫藥上可接受鹽治療與骨關節炎相關之疼痛之方法，及製備該等化合物之方法。

Description

有益於治療關節炎之新穎咪唑衍生物
骨關節炎係複雜退化性關節疾病，其特徵在於關節軟骨、關節周圍結構(包括骨、滑膜及相關纖維連接組織)之進行性破壞及不同程度的發炎。現有藥物療法可減少與骨關節炎相關之疼痛，但僅可在一段時間內適度有效且每一者皆具有可變風險/益處考慮。使用非類固醇類消炎藥(NSAID)及環氧合酶-2抑制劑(COX-2抑制劑)之當前治療係有效的，但會引起明顯心血管及胃腸副作用。因此，許多患者因先天性或突發性心血管及/或胃腸病況可能禁忌此等類別藥物。另外，個體會隨時間變得耐受特定藥物治療。
前列腺素E2係經由以下方式產生：花生四烯酸藉由環氧合酶代謝產生不穩定中間體前列腺素H2(PGH2)。然後前列腺素H2藉由微粒體前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)進一步代謝產生PGE2。前列腺素E2係與骨關節炎相關之病況(例如，發燒、疼痛及發炎)之重要調介物。
業內仍需要治療及減輕與骨關節炎相關之疼痛及/或發炎之額外選擇。本發明提供新穎mPGEs-1抑制劑且可有益於治療患有骨關節炎之疼痛及/或發炎之患者。
本發明提供式I化合物： 其中R1選自：-C1-4烷基；R2係Cl或-CHF2；R3係H或-CH3；R4選自：H、F、Cl、-CH3、-CHF2及-CF3；R5選自：H、F、Cl及-CH3；且R6選自：H、F、Cl及-CH3；且X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH；條件係當A為N時，R4不為F或Cl，且當X為N時，R2不為Cl；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1選自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；更佳地，R1係-CH(CH3)2。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R3係-CH3。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R5選自：H、F、Cl。較佳地，R5係H。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R6係H。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R4選自：H、-CH3、-CHF2及-CF3。在一實施例中，A係N且X係CH。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R4選自：F、Cl、-CHF2及-CF3。更佳地R4選自：Cl、-CHF2及-CF3。亦更佳地，R4係CF3。在一實施例中，A係CH且X 係N。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R2係Cl。
在一實施例中，A係N且X係CH。在另一實施例中，A係CH且X係N。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1係-CH(CH3)2或-C(CH3)3；R2係Cl或-CHF2；R3係-CH3；R4選自：F、Cl、-CH3、-CHF2及-CF3；R5選自：H、F、Cl及-CH3；R6選自：H、F、Cl及-CH3；X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH，條件係當A為N時，R4不為F或Cl，且當X為N時，R2不為Cl。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1係-CH(CH3)2；R2係Cl或-CHF2；R3係H或-CH3；R4選自：F、Cl、-CH3、-CHF2及-CF3；R5選自：H、F、Cl及-CH3；R6係H；X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH，條件係當A為N時，R4不為F或Cl，且當X為N時，R2不為Cl。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1係-CH(CH3)2；R2係-CHF2；R3係H或-CH3；R4選自：F、Cl、-CH3、-CHF2及-CF3；R5選自：H、F、Cl及-CH3；R6係H；X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH，條件係當A為N時，R4不為F或Cl，且當X為N時，R2不為Cl。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1係-C(CH3)3；R2係Cl或-CHF2；R3係-CH3；R4選自：H、 F、Cl、-CH3及-CF3；R5選自：H、F、Cl、-CH3；R6選自：H、F、Cl及-CH3；X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH；條件係當A為N時，R4不為F或Cl，且當X為N時，R2不為Cl。
本發明提供式I化合物及其醫藥上可接受之鹽，其中R1係-CH(CH3)或-C(CH3)3；R2係-CHF2；R3係H或-CH3；R4選自：H、F、Cl、-CH3、-CF3；R5選自：H、F、Cl、-CH3及-CF3；R6選自：H、F、Cl、-CH3；且X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH；條件係當A為N時，R4不為F或Cl。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1選自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；R2係Cl或-CHF2；R3係H或-CH3；R4選自：H、-CH3、-CHF2及-CF3；R5係H；R6選自：H、F、-CH3；且X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH；條件係當X為N時，R2不為Cl。在一實施例中，X係CH且A係N。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1選自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；R2係Cl或-CHF2；R3係-CH3；R4選自：H、F、Cl、-CH3、-CHF2及-CF3；R5選自：H、F、Cl、-CH3，R6選自：H、F、Cl、-CH3，且X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH；條件係當X為N時，R2不為Cl，且當A為N時，R4不為F或Cl。在一實施例中，X係N且A係CH。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 選自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；R2係Cl或-CHF2；R3係H或-CH3；R4選自：Cl、-CHF2及-CF3，R5係H或Cl；R6係H、F、-CH3；且X及A中之一者係N且X及A中之另一者係CH；條件係當A為N時，R4不為F或Cl，且當X為N時，R2不為Cl。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，R1選自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；R2係Cl或-CHF2；R3係H；或-CH3；R4係CF3，R5係H；R6選自：H、F及-CH3；且X及A中之一者係N且X及A中之另一者係-CH；條件係當A為N時，R4不為F或Cl，且當X為N時，R2不為Cl。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中A係N，條件係R4不為F或Cl。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係N，條件係R2不為Cl。
本發明提式I供化合物及其醫藥上可接受之鹽，其中R1選自-CH(CH3)或-C(CH3)3；R2係Cl；R3係-CH3；R4係H；R5係H；R6係H；X係CH且A係N。
本發明提供具有式II之化合物： 或其醫藥上可接受之鹽。本發明化合物之較佳酸加成鹽係 磷酸氫鹽加成鹽。
本發明亦提供結晶型2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽，其藉由自CuKα源(λ=1.54056 Å)獲得之X-射線粉末繞射圖案來表徵，該圖案包含以下位置處之峰：a)4.85°、20.37°及22.27° 2θ +/- 0.2° 2θ；或b)4.85°、11.00°、17.93°、20.37°、22.27°及24.85° 2θ +/- 0.2° 2θ；或c)4.85°、11.00°、12.22°、12.67°、17.93°、20.37°、22.27°、23.51°及24.85° 2θ +/- 0.2° 2θ；或d)4.85°、9.77°、16.68°、17.93°、19.15°、22.27°及24.84° +/- 0.2°。
本發明亦提供包含實質上純淨的結晶型2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽之組合物。本文所用「實質上純淨」係指組合物具有大於80% w/w結晶材料、更佳地大於95% w/w結晶材料且亦更佳地大於98% w/w結晶2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽。
本發明亦提供醫藥組合物，其包含式I或II之化合物及其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑中之至少一者。
本發明提供醫藥組合物，其包含式I化合物或及其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑中 之至少一者，且進一步包含一或多種額外治療劑。
本發明提供治療哺乳動物與骨關節炎相關之疼痛及/或發炎之方法；亦更佳地，治療與骨關節炎相關之疼痛及/或發炎之方法。該方法包含向有需要的哺乳動物投與式I或II之化合物、其醫藥上可接受之鹽或包括該化合物之醫藥上可接受之組合物。
本發明提供式I或II之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療與骨關節炎相關之疼痛及/或發炎之藥劑。
本發明提供式I或II化合物、其醫藥上可接受之鹽或包括該化合物之醫藥組合物以用作藥劑。
本發明提供式I或II化合物、其醫藥上可接受之鹽或包括該化合物之醫藥組合物以用於療法。
本發明亦提供式I或II化合物、其醫藥上可接受之鹽或包括該化合物之醫藥組合物以用於治療需要治療的哺乳動物與骨關節炎相關之疼痛及/或發炎；亦更佳地，本發明提供治療有需要的哺乳動物與骨關節炎相關之疼痛之方法。
圖1係2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽之代表性XRD圖案之光譜圖。XRD光譜圖係如下文實例26中所述獲得。
片語「醫藥上可接受之鹽」係指視為對於臨床及/或獸醫使用可接受之本發明化合物之鹽。醫藥上可接受之鹽及 製備該等鹽之一般方法為業內所熟知。參見(例如)P.Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection and Use,(VCHA/Wiley-VCH,2002)；S.M.Berge等人，「Pharmaceutical Salts」，Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷，第1冊，1977年1月。在一實施例中，磷酸氫鹽加成鹽係較佳鹽形式。
本發明化合物可與其他治療方法及/或額外治療劑組合，較佳地用於治療關節炎(包括與骨關節炎相關之疼痛及發炎)之試劑。實例包括NSAID或COX-2抑制劑，例如布洛芬(ibuprofen)、阿司匹林(aspirin)、撲熱息痛(acetaminophen)、塞來考昔(celecoxib)、萘普生(naproxen)及酮洛芬(ketoprofen)；類阿片物質，例如羥考酮(oxycodone)及芬太尼(fentanyl)；及皮質類固醇類，例如氫化可的松(hydrocortisone)、潑尼松龍(prednisolone)及潑尼松(prednisone)。
本發明化合物或其鹽可藉由業內已知之多種程序製備，其中一些將在下文反應圖、製備及實例中予以闡釋。可將所述途徑中每一者之特定合成步驟以不同方式組合或與來自不同反應圖之步驟結合來製備式I及II之化合物或其鹽。下文反應圖中每一步驟之產物可藉由習用方法回收，包括萃取、蒸發、沈澱、層析、過濾、研磨及結晶。
另外，下列反應圖中所述中間體含有多個保護基團。不同保護基團在每次出現時端視具體反應條件及欲實施之具體轉化可相同或不同。保護及去保護條件為熟習此項技術 者所熟知且闡述於文獻中。參見(例如)Greene及Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis。
本文所用縮寫根據Aldrichimica Acta，第17卷，第1冊，1984定義。其他縮寫定義如下：「ACN」係指乙腈；「Boc2O」係指二碳酸二-第三丁基酯；「BOP」係指苯并三唑-1-基氧基-叁(二甲基胺基)-鏻六氟磷酸鹽；「DCM」係指二氯甲烷；「DIPEA」係指二異丙基乙基胺；「DMF」係指N,N-二甲基甲醯胺；「DMSO」係指二甲基亞碸；「EDCI」係指N-乙基，N'-(二甲基胺基)丙基碳二亞胺鹽酸鹽；「EDTA」係指乙二胺四乙酸；「Et2O」係指二乙基醚；「EtOAc」係指乙酸乙酯；「EtOH」係指乙醇(ethyl alcohol或ethanol)；h係指小時；「HATU」係指2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)--1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽甲銨；「HOBT」係指1-羥基苯并三唑水合物；「iPr」係指異丙醇(isopropyl alcohol或isopropanol)；「IC50」係指產生試劑可能最大抑制反應的50%的試劑濃度；「MeOH」係指甲醇(methyl alcohol或methanol)；「MTBE」係指甲基第三丁基醚；「RT」係指室溫；「T3P®」係指丙基磷酸酐；且「TBTU」係指o-苯并三唑-1-基-N,N,N'N'-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽；「THF」係指四氫呋喃。
在下文反應圖中，除非另外指明，否則所有取代基均如先前所定義。熟習此項技術者通常容易地獲得試劑及起始材料。其他可藉由類似於已知結構類似化合物之合成的有機及雜環化學之標準技術及包括任何新穎程序之以下製備 及實例中所述程序來製備。本發明化合物可如下文反應圖中以下概述來製備。
反應圖1闡述化合物4芳基或雜芳基經取代之3-甲酸之製備，使其與反應圖2中之化合物8偶合來製備式I、II或Ia之化合物。
反應圖1繪示將經取代-4-芳基鹵素或經取代-4-雜芳基鹵素轉化成氰基(2，步驟1)，隨後用氫氣還原氰基得到胺(3，步驟2)，使其烷基化及去保護得到醯胺化合物4(步驟3)。「PG」基團係針對醯基形成之酯保護基團，例如甲基、乙基或第三丁基。該等保護基團為業內所熟知並瞭解。
舉例而言，熟習此項技術者將認識到，存在多種可用於選擇性引入氰基之條件，例如鈀催化之鹵代芳烴之氰化。氰化物源(例如Zn(CN)2、K4[Fe(CN)6]、(CH3)3SiCN、NaCN或KCN)與鈀觸媒(例如四(三苯基膦基)鈀或叁(二亞 苄基丙酮)二鈀(0))在極性非質子溶劑(例如DMF、ACN或THF)中得到化合物2(步驟1)。苄腈至苄基胺之還原可藉由以下方式達成：在步驟2中在酸性條件(使用諸如鹽酸等酸)及約60 psi氫氣下用鈀源(例如5%鈀炭)氫化，得到化合物3。中間體產物(步驟3)可藉由以下方式製備：使用醯氯與有機鹼(例如二異丙基乙基胺或三乙胺)得到醯胺。在鹼性條件下(使用諸如氫氧化鋰等水性鹼)對酯實施去保護，得到醯胺(4)。
反應圖2闡述經取代芳基或經取代雜芳基咪唑嘧啶之製備，其用於製備經取代芳基或經取代雜芳基咪唑胺，使該咪唑胺與來自反應圖1之芳基或雜芳基經取代之3-甲酸偶合，得到式Ia化合物。
舉例而言，咪唑并嘧啶(7，步驟4)可藉由以下方式製備：適當α-溴或α-氯酮與2-胺基嘧啶在極性質子溶劑(例如異丙醇或乙醇)或非極性溶劑(例如甲苯)使用或不使用鹼(例如碳酸氫鈉)得到咪唑并[1,2-a]嘧啶(7)。可用肼、肼水合物或肼鹽酸鹽或羥基胺將咪唑并[1,2-a]嘧啶(7)轉化成期望咪唑-2-胺(8，步驟5)。然後可使用偶合劑將化合物8之一級胺基與反應圖1中化合物5之羧酸偶合，得到式Ia、I及II之化合物。常用偶合條件涉及使用偶合劑(例如苯并三唑-1-基氧基-叁(二甲基胺基)-鏻六氟磷酸鹽、丙基磷酸酐、二環己基碳二亞胺、o-苯并三唑-1-基-N,N,N'N'-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽及2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)--1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽甲銨)及有機鹼(例如N-甲基嗎啉或二異丙基胺)得到式Ia化合物。
除非說明相反情形，否則本文所闡釋化合物係使用Symyx® Draw 3.2版本(Symyx Solutions公司)或IUPACNAME ACDLABS命名及編號。
製備1
4,4-二氟-3-側氧基-丁酸乙基酯將鈉金屬(7 kg,300 mol)逐份添加至EtOH(53.6 kg)中，同時維持溫度低於60℃。攪拌反應混合物直至鈉溶解，然後將混合物冷卻至20℃至30℃。在25℃至40℃之溫度下將二氟乙酸乙酯(34 kg,274 mol)於EtOAc(63 kg)中之溶液添加至乙醇鈉中。將反應混合物加熱至65℃，同時攪拌。2 h後，將混合物冷卻至室溫。將10% HCl(30 kg HCl及204 kg水)添加至混合物中直 至混合物之pH為6至7。用EtOAc(64 kg)萃取混合物；分離；並再次用EtOAc(60 kg)萃取水層。合併有機相，並用鹽水(存於水(136 kg)中之NaCl(48 kg))洗滌。用4A分子篩粉末(15 kg)乾燥有機相並濃縮，得到呈黃褐色油狀物形式標題化合物(33 kg，產率為73%，GC純度為96%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3,)δ 5.91(t,J=54 Hz,1H),4.23(m,2H),3.70(s,2H),1.27(m,3H)。
製備2 (2Z)-2-(乙氧基亞甲基)-4,4-二氟-3-側氧基-丁酸乙基酯
將乙酸酐(166 kg,1625 mol)添加至維持於90℃至100℃下之4,4-二氟乙醯乙酸乙酯(33 kg,199 mol)與原甲酸三乙酯(60 kg,407 mol)之混合物中。在90℃至100℃下將混合物攪拌8.5小時並使用Dean-Stark裝置去除乙酸乙酯。濃縮反應混合物，得到標題化合物(37.8 kg，產率為86%，GC純度為97%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3,)δ 7.88(d,J=6 Hz,1H),6.3(m,1H),4.3(m,4H),1.4(m,3H),1.32(m,3H)。
製備3 3-二甲基胺基丙-2-烯腈
將存於1,4-二噁烷(30 kg)中之二甲縮醛(49 kg,412 mol)添加至維持於80℃下之氰基乙酸(30 kg,353 mol)於1,4-二噁烷(120 kg)中之溶液中。將所得混合物攪拌4小時。此後濃縮混合物。用MTBE(44 kg)稀釋殘餘物；藉助矽膠墊過濾；並用MTBE(112 kg)洗滌矽膠墊。收集濾液，並在真 空下濃縮，得到48 kg存於溶液中之粗產物(19.6 kg，產率為57%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3,)δ 6.91(d,J=13.5 Hz,1H),3.7(d,J=13.5 Hz,1H),2.86(s,6H)。
製備4 5-溴-2-甲醯基吡啶-3-甲酸乙基酯
向106個單獨20-mL微波小瓶中之每一者中添加：5-溴-2-甲基吡啶-3-甲酸乙基酯(5 g,20.48 mmol，1.0當量)、二氧化硒(2.98 g,26.63 mmol，1.3當量)及1,4-二噁烷(13 mL)。利用微波輻照將容器加熱至180℃，保持20 min。合併反應容器之內含物；經由矽膠墊(2 kg)過濾；並用DCM(3 L)沖洗墊。在減壓下濃縮合併之濾液。將材料分成兩份同等大小批料，並用DCM洗脫使每一者通過矽膠墊(2 kg)。在減壓下濃縮濾液，提供呈黃色或淺橙色固體形式之標題化合物(473 g，產率為93.2%)。MS(m/z)(79Br/81Br)258/260(M+1)。
製備5 5-溴-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯
在氮氣氣氛下，將5-溴-2-甲醯基吡啶-3-甲酸乙基酯(473 g,1.83 mol，1,0當量)與DCM(4.73 L)之混合物冷卻至0℃至5℃。經2 h時間段，添加二乙基胺基三氟化硫(364 mL,2.75 mol，1.5當量)於無水DCM(473 mL)中之溶液。使混合物升溫至室溫，並攪拌16 h。經3 h時間段，將反應混合物以等份試樣轉移至冰(2.5 L)、水(2.5 L)及NaOH(50 wt%水溶液，400 mL)之攪拌混合物中，注意控制發煙。用 DCM(1 L)及水(1 L)稀釋所得混合物。分離各層，並用DCM(2.5 L)萃取水層。用水(2.5 L)洗滌有機層，並使混合物沉降10分鐘。分離各層；經MgSO4乾燥合併之有機層；藉由過濾去除固體；並在減壓下濃縮濾液。將所得材料溶於DCM(600 mL)中，並用DCM(20 L)洗脫通過矽膠墊(2 kg)。在減壓下濃縮洗脫液，並使所得材料自熱異己烷(1 L)重結晶。使混合物冷卻至室溫；藉由過濾來收集固體；用冷異己烷洗滌固體；並在減壓及40℃下乾燥，得到呈灰白色結晶粉末形式之標題化合物(367 g)。合併所有異己烷濾液，並冷卻至-20℃。收集所得橙色固體作為第二批標題化合物(37.5 g，合併產率為79%)。MS(m/z)(79Br/81Br)280/282(M+1)。
製備6 5-氰基-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯
在燒瓶中，將5-溴-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯(150 g,536 mmol，1.0當量)溶於DMF(1.5 L)中。藉由抽真空使所得混合物脫氣，然後用氮氣回填燒瓶三次。添加氰化鋅(II)(51 g,434 mmol，0.81當量)，隨後添加四(三苯基膦基)鈀(25.2 g,21.8 mmol，0.04當量)。將所得懸浮液加熱至100℃內部溫度，保持3 h。將混合物冷卻至室溫；用水(2 L)稀釋；並用二乙基醚(3×2.5 L)萃取。用鹽水(3×2.5 L)洗滌合併之有機相。用Et2O(2.5 L)萃取合併之水相。合併全部有機相，並經MgSO4乾燥。藉由過濾去除固體，並在減壓下濃縮濾液。藉由在矽膠(2 kg)上實施急驟層析用1：1 DCM/異己烷至100% DCM之梯度洗脫來純化所得材料。獲得呈無色油狀物形式之標題化合物(114 g,94.1%)，其靜置時固化。MS(m/z)227(M+1)。
替代製備6
將無水DMF(57 kg)加熱至60℃至65℃並添加(2Z)-2-(乙氧基亞甲基)-4,4-二氟-3-側氧基-丁酸乙基酯(30 kg,135 mol)，隨後逐滴添加3-二甲基胺基丙-2-烯腈溶液(31.6 kg,135.1 mol)。在60℃至65℃下將所得混合物攪拌約5 h。添加乙酸銨(16 kg,202 mol)，並在60℃至65℃下將混合物攪拌12小時。將反應混合物冷卻至室溫；用水(270 kg)驟冷；用MTBE(114 kg)萃取；並分離各層。用MTBE(228 kg)再次萃取水相。合併有機相；用水(300 kg)洗滌；經由矽膠(15 kg)過濾；用MTBE(114 kg)洗滌矽膠；收集濾液；並濃縮，得到粗產物(26 kg)，藉由用EtOH(47.7 kg)重結晶使其純化，得到標題化合物(26 kg，產率為85%，GC純度為98.6%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3,)δ 9.09(s,1H),8.61(s,1H),7.44(t,J=54 Hz,1H),4.49(q,J=7 Hz,2H),1.46(t,J=7 Hz,3H)。
製備7 5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯鹽酸鹽
用氮沖洗5-氰基-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(160 g,707.4 mmol)與EtOH(2 L)之混合物並攪拌15 min。添加鹽酸(37 wt%水溶液，273 mL,3183.2 mmol，4.5當量)及於EtOH(100 mL)中之鈀(5%於碳上，48 g,22.5 mmol，0.031 當量)，並在60 psi氫氣下在室溫將所得懸浮液攪拌70 min。藉由在矽藻土上過濾去除固體；用EtOH(1 L)洗固體濾餅；並在減壓下濃縮濾液。重複此程序兩次；合併固體；並在Et2O：DCM[10：1,5.5 L]中漿化。過濾固體，並在45℃將所得物質乾燥3小時，得到呈淺褐色固體之標題化合物(714 g，產率為96%)。MS(m/z)216(M+1)。
製備8 5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯二鹽酸鹽
將5-氰基-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯(24 kg,122 mol)、EtOH(234 kg)、Et3N(16 kg,157 mol)、Boc2O(57 kg,251 mol)及濕5% Pd/C(14.2 kg,KF=50%,0.6 g/g)之混合物添加至高壓釜中。反應混合物在20℃至30℃在0.3 MPa至0.4 MPa氫氣壓力下攪拌。排空高壓釜，並每小時用新鮮氫氣再填充歷經14.5小時。此後過濾反應混合物，並用EtOH(28.4 kg)洗。濃縮合併之濾液，得到第三丁氧基羰基(BOC)保護之中間體。用水(70 kg)稀釋物質，並用DCM(124 kg)萃取。用活性碳(1.9 kg,0.1 g/g)及4Å分子篩粉末(9.5 kg)分離有機層。將混合物攪拌3小時且然後過濾。用MTBE(140 kg)稀釋濾液，並在20℃至30℃用HCl(19.2 kg)及1,4-二噁烷(80 kg)處理，得到懸浮液。逐滴添加水(5.0 kg)與1,4-二噁烷(15 kg)之溶液，然後過濾所得混合物。用MTBE(48 kg)及DCM(138 kg)洗所得濾餅，得到呈灰白色固體之標題產物(18.5 kg,66.3%,98% HPLC)。1H NMR(500 MHz,d6-DMSO)δ 9.00(s,1H),8.85(s,2H), 8.56(s,1H),7.42(t,J=54 Hz,1H),4.37(q,J=7 Hz,2H),4.20(q,J=7 Hz,2H),1.34(t,J=7 Hz,3H)。
製備9 2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}吡啶-3-甲酸乙基酯
在受熱控制之反應器中攪拌5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯鹽酸鹽(198 g,742.4 mmol，1.0當量)、DCM(3040 mL)及DIPEA(520 mL,2.98 mol，4當量)之混合物，然後以使內部溫度保持在18℃與22℃之間之速率添加異丁醯氯溶液(95 mL,903 mmol，1.2當量)。攪拌90 min。用NaHCO3(飽和，1 L)萃取反應混合物。添加水(1 L)及DCM(1 L)，並藉助矽藻土過濾所得懸浮液。合併全部有機相，並經MgSO4乾燥。藉由過濾去除固體，並在減壓下濃縮濾液。藉由用異己烷：Et2O[1：1,1 L]漿化來純化所得材料。藉由過濾來收集固體，用冷異己烷(500 ml)洗滌，並在真空及50℃下乾燥，得到呈灰白色結晶粉末形式之標題化合物(164 g)。MS(m/z)301(M+1)。
製備10 2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}吡啶-3-甲酸
將2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}吡啶-3-甲酸乙基酯(414 g,1.38 mol，1.0當量)溶於1,4-二噁烷(4.97 L)中。添加水(2.48 L)及氫氧化鋰(125.6 g,2.96 mol，2.5當量)；然後在室溫下將所得混合物攪拌60 min。在減壓下將1,4-二噁烷溶液濃縮至½體積，並緩慢添加鹽 酸(5 N,1.16 L,5.79 mol，4.2當量)以維持溫度低於20℃直至pH為2。藉由過濾來收集固體；風乾18小時；且然後在真空烘箱中在40℃下乾燥18小時，得到白色固體(355.4 g，產率為94.7%)。MS(m/z)303(M+1)。
替代製備10
在氮氣下將5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯二鹽酸鹽(0.5003 kg,1.649 mol)、無水甲苯(3.0277 kg)及三乙胺(0.8347 kg,8.24 mol)添加至15-L反應器中。將反應冷卻至5℃。經6 min逐滴添加異丁醯氯(0.2110 kg,1.98 mol)於無水甲苯中之溶液(0.4352 kg)，同時將溫度維持在0℃至15℃。將所得漿液升溫至20℃，並繼續攪拌1.25 h。經20分鐘將氫氧化鋰溶液(藉由使用一水LiOH(0.3561 kg)及水(2.5377 kg)來製備)添加至反應漿液中。在15℃至25℃下攪拌混合物，過夜(18.8小時)。分離各層，並用無水甲苯(1.0796 kg)洗滌水層。分離各層，並用6 N HCl(0.5521 kg，由12 N HCl及水製造)將水相酸化至pH=3.5-4.5。在15℃至25℃下將漿液攪拌1.6小時。藉由過濾分離出固體。用濾液沖洗反應器兩次，且然後用水(1.0 kg)及無水甲苯(0.867 kg)洗滌固體。在減壓及70℃下將濕固體乾燥65.2小時，得到標題化合物(0.3146 kg，產率為70%)。1H-NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.72(d,J=2.0 Hz,1H),8.48(t,J=5.8 Hz,1H),8.17(s,1H),7.51(t,J=54.3 Hz,1H),4.38(d,J=5.8 Hz,2H),2.45(m,J=6.8 Hz,1H),1.03(d,J=6.8 Hz,6H)
製備11 2-溴-1-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮
在20℃至25℃下將4-三氟甲基苯丙酮(100 g,0.494 mol)添加至冰乙酸(200 mL)中。經60分鐘將溴(79 g,0.494 mol)添加至冰乙酸(200 mL)中。將反應混合物攪拌1至1.5小時。在1.2 L冷凍水(0至5°)中驟冷反應並在相同溫度下將混合物攪拌3小時。過濾漿液；在10℃至15℃下用水(1 L)洗滌固體；並在真空及25℃至30℃下將固體乾燥15小時，得到標題化合物(128.1 g，產率為92.1%)。1H NMR(300 MHz,d6-DMSO)δ 8.20-8.23(d,J=8.4 Hz,2H),7.80-7.93(d,J=8.4 Hz,2H),5.82-5.89(q,J=6.3 Hz,1H),1.79-1.81(d,J=6.3 Hz,3H)。
製備12 2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
在受熱控制之反應器中，在80℃下將2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(500 g,1.78 mol，1當量)、IPA(5 L)、2-胺基嘧啶(205 g,2.13 mol，1.2當量)及碳酸氫鈉(298.8 g,3.55 mol,2當量)之混合物攪拌18小時。冷卻懸浮液，並在真空中濃縮。將所得混合物稀釋於DCM(5 L)中，並用鹽水(2 L)洗滌。再次萃取鹽水，用DCM(2.5 L)洗滌；合併全部有機相；並經MgSO4乾燥；過濾；並收集濾液。在減壓下將濾液濃縮至乾燥，並使所得紅色膠狀物在Et2O(1.5 L)中漿化。藉由過濾收集所得固體，並風乾45 min，得到呈細緻灰白色固體形式之標題化合物(108 g，產率為 22%)。MS(m/z)278(M+1)。
替代程序A：製備12 2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
將2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(7.120 g,25.332 mmol)及2-胺基嘧啶(5.464 g,55.729 mmol)溶於EtOH(40.0 mL)中。將混合物加熱至回流，並攪拌24小時。在真空中濃縮。將殘餘物溶於EtOAc(750 mL)中；並依次用飽和NaS2O3水溶液(250 mL)、飽和NaHCO3水溶液(250 mL)及飽和NaCl(350 mL)洗滌。使橙色殘餘物自庚烷/EtOAc結晶，得到呈白色固體形式之標題產物(3.29 g，產率為46.85%)。1H NMR(399.83 MHz,d6-DMSO)δ 8.84(dd,J=1.9,7.0 Hz,1H),8.54(dd,J=2.0,4.2 Hz,1H),8.06-8.04(m,2H),7.83-7.81(m,2H),7.10(dd,J=4.1,6.9 Hz,1H),2.68(s,3H)。
替代程序B製備12 2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
在25℃至30℃下將2-溴-1-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮(100 g,0.356 mol)、2-胺基嘧啶(33.85 g,0.356 mol)及碳酸氫鈉(59.8 g,0.811 mol)添加至甲苯(500 mL)中。將混合物加熱至90℃至100℃並攪拌24小時。此後將混合物冷卻至40℃至45℃，並在減壓下蒸餾標題化合物。將餾出物冷卻至25℃至30℃；添加水(1 L)；並將混合物攪拌4小時。過濾混合物，收集固體，且然後用MTBE(200 mL)於己烷中之10%溶液洗滌固體。在真空及45℃至50℃下將固體乾燥 12小時，得到標題化合物(35.4 g，產率為35%)。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 8.58(q,1H),8.24-8.26(d,J=6.6 Hz,1H),8.00-8.02(d,J=8.1 Hz,2H),7.72-7.75(d,J=8.4 Hz,2H),6.92-6.96 dd,J=3.9 Hz及4.2 Hz,1H),2.69(s,3H)。
製備13 4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺
在82℃內部溫度下將2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶(180 g,649.2 mmol，1當量)於EtOH(1.4 L)及羥基胺(159 ml,2.596 mol，4當量)中之混合物攪拌48小時。冷卻混合物，並濃縮至乾燥。用DCM(1.5 L)稀釋殘餘物，並依次用水(2×500 ml)及鹽水(500 ml)洗滌。經MgSO4乾燥有機相；過濾；收集濾液並；並在真空中去除溶劑，得到黃色膠狀物。藉由在矽膠(2 kg)上實施急驟層析用4：1：0.02 DCM/MeOH/NH3之梯度洗脫來純化所得材料，獲得呈黃色發泡體形式之標題化合物(產率為95%)。MS(m/z)242(M+1)。
基本上藉由製備13之方法用適當咪唑并-嘧啶來製備下列表1中化合物。
製備20 3-溴-4-(二溴甲基)苄腈
將3-溴-4-甲基苄腈(25.0 g,127.5 mmol，1.0當量)及n-溴琥珀醯亞胺(NBS)(5.53 g,306.1 mmol，2.4當量)於四氯化碳(200 mL)中之混合物加熱至95℃，保持兩天。冷卻所得懸浮液，並藉由過濾去除固體。在減壓下濃縮濾液，並藉由在矽膠上實施層析用2-5% THF/己烷之梯度洗脫來純化所得粗製材料，提供標題化合物(37.09 g，產率為82%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.10(d,1H,J=8.2 Hz),7.79(d,1H,J=1.3 Hz),7.67(dd,1H,J=8.2,1.3 Hz),6.99(s,1H)。
製備21 3-溴-4-(二氟甲基)苄腈
在氮氣氣氛下將四氟硼酸銀(26.69 g,135.7 mmol，2.5當量)添加至3-溴-4-(二溴甲基)苄腈(19.2 g,54.3 mmol，1.0當量)於DCM(200 mL)中之溶液，並在室溫下攪拌過 夜。藉由過濾去除固體；在減壓下濃縮濾液；並用2-5% THF/己烷之梯度洗脫對所得粗製材料實施矽膠層析，提供標題化合物(9.0 g，產率為71%)。ES/MS(m/z)(79Br/81Br)231/233(M)。
製備22 5-氰基-2-(二氟甲基)苯甲酸甲基酯
用氮氣沖洗3-溴-4-(二氟甲基)苄腈(8.87 g,38.2 mmol，1.0當量)、三乙胺(16.0 mL,114.7 mmol，3.0當量)、MeOH(70 mL)及DMF(120 mL)之混合物；然後用乙酸鈀(II)(867 mg,3.82 mmol，0.1當量)及1,3-雙(二苯基膦基)丙烷(1.61 g,3.82 mmol，0.1當量)處理混合物。在138 kPag一氧化碳及室溫下將混合物攪拌兩天且然後在80℃下攪拌1天。將混合物冷卻至室溫，並用Et2O(300 mL)稀釋。用水及飽和氯化鈉洗滌混合物，並分離出有機層。經硫酸鈉乾燥有機層；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮。用10-15% THF/己烷梯度之梯度洗脫對所得粗製材料實施矽膠層析，得到標題化合物(6.19 g，產率為77%)。ES/MS(m/z)211(M)。
製備23 5-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸甲基酯
將5-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸(10 g,0.044 mol)溶於MeOH(150 mL)中。緩慢添加亞硫醯氯(50 g,0.421 mol)。將所得混合物加熱至70℃，並攪拌12小時。在減壓下濃縮混合物。將殘餘物倒入水(100 mL)中並用EtOAc(2×200 mL)萃取水溶液。經硫酸鈉乾燥合併之有機物，並在減壓下濃 縮，得到呈油狀物形式之標題化合物(11.5 g,96.5%)。1H NMR(300 MHz,CDCl3,)δ 7.78(d,J=2.1 Hz,1H),7.69(d,J=8.4 Hz,1H),7.57(dd,J=2.1,8.7 Hz,1H),3.95(s,3H)。
製備24 5-氰基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲基酯
將5-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸甲基酯(500 mg,2.1 mmol)、氰化鋅(II)(197 mg,1.68 mmol)、鋅(55 mg,0.84 mmol)、叁(二亞苄基丙酮)二鈀(II)(192 mg,0.21 mmol)及二苯基膦基二茂鐵(233 mg,0.42 mmol)溶於二甲基乙醯胺(20 mL)中。將反應混合物加熱至85℃，並攪拌12小時。將所得混合物倒入水中，並用EtOAc(2×100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析用50：1石油醚：EtOAc洗脫來純化殘餘物，得到呈白色固體形式之標題化合物(320 mg，產率為66.5%)。1H NMR(300 MHz,CDCl3,)δ 8.09(s,1H),7.90(s,2H),3.80(s,3H)。
製備25 5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)苯甲酸甲基酯鹽酸鹽
用氮氣沖洗5-氰基-2-(二氟甲基)苯甲酸甲基酯(9.37 g,44.4 mmol，1.0當量)、鈀(10%存於碳上，3.00 g,2.82 mmol，0.064當量)及MeOH(50 mL)之混合物；然後添加鹽酸(37 wt%水溶液，8.0 mL,105.6 mmol，2.38當量)；並在275 kPag氫氣及室溫下攪拌所得懸浮液，過夜。藉由過濾去除固體；在減壓下濃縮濾液；並在40℃真空烘箱中乾燥所得材料，過夜，得到呈淺褐色固體形式之標題化合物 (7.01 g，產率為83%)。ES/MS(m/z)216(M+1)。
製備26 5-(胺基甲基)-2-(三氟甲基)苯甲酸甲基酯鹽酸鹽
基本上藉由製備25之方法用適當腈來製備。ES/MS m/z 234(M+1-Cl)。
製備27 2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙醯基胺基)甲基]苯甲酸
在室溫下將異丁醯氯(0.571 mL,5.42 mmol,1.05當量)添加至5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)苯甲酸甲基酯鹽酸鹽(1.30 g,5.17 mmol，1.0當量)及三乙胺(1.51 mL,10.85 mmol，2.1當量)於DCM(50 mL)中之混合物中並將混合物攪拌1小時。用DCM稀釋混合物；用水洗滌；然後用飽和氯化鈉水溶液洗滌。分離出有機層；經硫酸鈉乾燥；過濾；並在減壓下濃縮濾液。將所得粗製材料溶於1,4-二噁烷(10 mL)中，並添加氫氧化鈉(5 N,2 mL,10 mmol，1.93當量)。在40℃下攪拌所得懸浮液，過夜。在減壓下濃縮混合物，並用1 N鹽酸水溶液處理所得殘餘物直至pH達到3。用EtOAc(2×30 mL)萃取所得懸浮液。用飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌合併之有機層；經硫酸鈉乾燥；過濾；並在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體形式之標題化合物(1.32 g，產率為94%)。ES/MS(m/z)272(M+1)。
製備28 2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙醯基胺基)甲基]吡啶-3-甲酸乙基酯
用異丁醯氯(8.95 mL,85.05 mmol，1.36當量)處理5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯二鹽酸鹽(18.9 g,62.3 mmol，1.0當量)、DCM(300 mL)及N,N-二異丙基乙基胺(49.4 mL,283.5 mmol,4.54當量)之混合物。在室溫下將所得懸浮液攪拌90分鐘；將混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)中；並用DCM(3×20 mL)萃取。合併有機萃取物；經MgSO4乾燥；藉由過濾去除固體；並在減壓下濃縮濾液，得到黃色半固體。用1：1 Et2O：異己烷(100 mL)研磨材料，並過濾以分離出呈白色固體形式之標題化合物(17.5 g，產率為93.6%)。ES/MS(m/z)301(M+1)。
替代製備28 2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙醯基胺基)甲基]吡啶-3-甲酸乙基酯
將5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯二鹽酸鹽(29.8 g,111.8 mmol，1.0當量)、DCM(510 mL)及三乙胺(59.2 mL,424.6 mmol，3.8當量)之混合物冷卻至0℃，然後經20 min逐滴添加異丁醯氯(15.3 mL,145.3 mmol，1.3當量)於DCM(23 mL)中之溶液。攪拌過夜，同時使混合物升溫至室溫。藉由過濾去除固體沈澱，並用EtOAc(500 mL)沖洗濾出物。在減壓下濃縮濾液；過濾濃縮物以去除固體；並用EtOAc沖洗固體。在減壓下濃縮濾液，得到黃色油狀物。用40-90% EtOAc/己烷梯度之梯度洗脫對此粗製材料實施矽膠層析，得到呈淺黃色結晶固體形式之標題化合物(25.8 g，產率為77%)。ES/MS(m/z)301(M+1)。
基本上藉由製備28之方法用適當銨鹽或一級胺來製備下列表2中化合物。
製備35 5-[(第三丁氧基羰基胺基)甲基]-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯
將5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙基酯鹽酸鹽(17.849 mmol,4.760 g)、THF(180 mL)及碳酸第三丁氧基羰基酯第三丁基酯(21.419 mmol,4.675 mL)合併。在室溫下將混合物攪拌約10分鐘。添加三乙胺(5.225 mL,37.484 mmol)，並在室溫下攪拌16小時。藉由真空過濾去除固 體，並用EtOAc沖洗。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析(220 g RediSep®矽膠管柱)用5-45% EtOAc梯度存於己烷中之梯度洗脫來純化所得黃色油狀物，得到呈淺黃色結晶固體形式之標題化合物(3.62 g，產率為68%)。1H NMR(399.80 MHz,d6-DMSO)δ 8.71(d,J=2.1 Hz,1H),8.15-8.13(m,1H),7.56-7.24(m,2H),4.33(q,J=7.1 Hz,2H),4.24-4.21(m,2H),1.36(s,9H),1.30(t,J=7.1 Hz,3H)。LCMS(m/z)331(M+1)。
製備36 2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙醯基胺基)甲基]吡啶-3-甲酸
在室溫下將2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙醯基胺基)甲基]吡啶-3-甲酸乙基酯(19.0 g,63.3 mmol，1.0當量)、1,4-二噁烷(244 mL)、水(125 mL)及氫氧化鋰(5.71 g,136 mmol,2.15當量)之混合物攪拌1 h。用鹽酸水溶液(5 N,53.1 mL,266 mmol,4.2當量)將混合物酸化至pH=2。在減壓下去除有機溶劑；用水(500 mL)稀釋所得懸浮液；並過濾。收集所得白色固體；用水(2×150 mL)洗滌白色固體；並風乾18 h，得到呈細緻白色固體形式之標題化合物(18.0 g，產率為92%)。ES/MS(m/z)273(M+1)。
基本上藉由製備36之方法用適當酯來製備下列表3中化合物。
製備45 5-溴-2-(二氟甲基)吡啶
將5-溴吡啶-2-甲醛(10.0 g,53.76 mmol)溶於DCM(200 mL)。緩慢添加雙(2-甲氧基乙基)胺基三氟化硫(39 g,134.4 mmol)。將所得溶液加熱至45℃並攪拌16小時。將反應物緩慢倒入冰水(50 mL)中。用飽和NaHCO3水溶液將溶液之pH調節至7。用DCM(3×20 mL)萃取水溶液。經硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析用4：1石油醚與EtOAc之比率洗脫來純化殘餘物，得到呈黃色液體形式之標題化合物(8.5 g，產率為74%)。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 8.73(d,J=2.4 Hz,1H),8.00(dd,J=2.4,8.1 Hz,1H),7.56(d,J=8.1 Hz,1H),6.44-6.80(t,J=54.9 Hz,1Hz)。
製備46 6-(二氟甲基)-N-甲氧基-N-甲基-吡啶-3-甲醯銨
將5-溴-2-(二氟甲基)吡啶(5.00 g,24.03 mmol)、N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(3.52 g,36.09 mmol)、乙酸鈀(II)(0.162 g,0.722 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫噸(0.695 g,1.201 mmol)及磷酸三鉀(15.3 g,72.07 mmol)組合於間-二甲苯(50 mL)中。用一氧化碳氣體沖洗反應容器。將溶液加熱至100℃，並在一氧化碳氣氛下攪拌16小時。在通風良好區域中用氮氣安全地沖洗容器直至其不含一氧化碳。添加水(200 mL)以驟冷反應。用飽和碳酸氫鈉水溶液將混合物之pH調節至7。用EtOAc萃取混合物。經硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析用2：1石油醚與EtOAc之比率洗脫來純化所得殘餘物，得到呈透明油狀物形式之標題化合物 (2.5 g，產率為48%)。LCMS(m/z)216(M+1)。
製備47 4-(二氟甲基)苯甲酸甲基酯
將對-甲氧羰基苯甲醛(3.103 g,18.713 mmol)溶於DCM(50 mL)中。添加雙(2-甲氧基乙基)胺基三氟化硫(9.079 mL,46.783 mmol)，並攪拌16小時。將反應混合物緩慢倒入飽和NaHCO3水溶液(300 mL)中。攪拌直至氣體完全逸出(約2小時)。用DCM(2×100 mL)萃取。經Na2SO4乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析(Analogix® 80 g，以55 mL/min)經30分鐘用己烷至20%乙酸乙酯/己烷之梯度洗脫來純化，得到呈白色固體形式之標題化合物(2.863 g，產率為82%)。1H NMR(400.15 MHz,d6-DMSO)δ 8.08-8.06(m,2H),7.70(ddd,J=8.7,1.1,0.6 Hz,2H),7.26-6.98(t,J=55.2 Hz,1H),3.86(s,3H)。
製備48 4-(二氟甲基)苯甲酸
將4-(二氟甲基)苯甲酸甲基酯(2.855 g,15.336 mmol)溶於MeOH(30 mL)中。添加氫氧化鉀(8.41 mL，2當量，30.7 mmol)，並將混合物攪拌16小時。在減壓下濃縮反應混合物，並添加EtOAc(100 mL)及1 N HCl(50 mL)。攪拌30分鐘。分離各層。經Na2SO4乾燥有機物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體形式之標題化合物(2.541 g，產率為96%)。1H NMR(399.83 MHz,d6- DMSO)δ 13.29-13.28(m,1H),8.04(d,J=7.8 Hz,2H),7.67(d,J=8.0 Hz,2H),7.24-6.97(t,J=55.6,1H)。
製備49 N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-甲醯胺
將6-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸(0.949 g,4.767 mmol)溶於DMF(10 mL)中並添加N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(0.590 g,5.959 mmol)及DIPEA(1.67 mL,9.534 mmol)，隨後添加BOP(2.259 g,5.005 mmol)。將所得混合物攪拌約60小時。將反應混合物倒入水(200 mL)中。用EtOAc(4×75 mL)萃取。用飽和氯化鈉水溶液(5×75 mL)洗滌合併之有機萃取物。經硫酸鈉乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。將殘餘物溶於EtOAc(100 mL)中。依次用飽和NaHCO3水溶液(50 mL)、水(2×50 mL)及飽和氯化鈉水溶液(2×50 mL)洗滌存於EtOAc中之殘餘物以去除任一殘餘酸起始材料。經硫酸鈉乾燥有機層；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液，得到呈透明液體形式之標題化合物(1.04 g，產率為93%)。1H NMR(400.43 MHz,d6-DMSO)δ 8.90(d,J=2.0 Hz,1H),8.25-8.23(m,1H),7.96(dd,J=0.7,8.1 Hz,1H),3.52(s,3H),3.27(s,3H)。
基本上藉由製備49之方法用適當酸來製備下列表4中化合物。
製備53 1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙酮
將N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-甲醯胺(0.685 g,2.92 mmol)溶於THF(20 mL)中。添加甲基溴化鎂(3.0 M存於EtO2中，1.950 mL,5.850 mmol)。將混合物攪拌16小時。將反應混合物倒入飽和NaHCO3水溶液(20 mL)中。用EtOAc(3×20 mL)萃取。用水(30 mL)及飽和氯化鈉(2×30 mL)洗滌合併之有機萃取物。經硫酸鈉乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液，得到呈淺黃色固體形式之標題化合物(0.545 g,98%)。1H NMR(400.43 MHz,d6-DMSO)δ 9.21-9.21(m,1H),8.51-8.49(m,1H),8.03(d,J=8.2 Hz,1H),2.64(s,3H)。
基本上藉由製備53之方法用適當Weinreb醯胺使用乙基溴化鎂代替甲基溴化鎂來製備下列表5中化合物。
製備57 1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-醇
將6-三氟甲基-吡啶-3-甲醛(3.526 g,20.136 mmol)溶於THF(50 mL)中。迅速添加乙基溴化鎂(3.0 M存於Et2O中，7.38 mL,22.1 mmol)。攪拌30分鐘。將反應混合物倒入飽和NaHCO3水溶液(100 mL)中。用EtOAc(3×50 mL)萃取。用飽和NaCl水溶液(75 mL)洗滌合併之有機萃取物。經Na2SO4乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析(Analogix® 40 g，以40 mL/min)經30分鐘用EtOAc/己烷(5%至50%)之梯度洗脫來純化殘餘物，得到呈黃色油狀物形式之標題化合物(2.01 g，產率為49%)。1H NMR(400.43 MHz,d6-DMSO)δ 8.66(d,J=1.6 Hz,1H),7.95(dd,J=1.9,8.1 Hz,1H),7.81(d,J=8.0 Hz,1H),5.47(d,J=4.5 Hz,1H),4.60(q,J=5.8 Hz,1H),1.65-1.59(m,2H),0.79(t,J=7.4 Hz,3H)。
製備58 1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-酮
將1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-醇(2.010 g,9.796 mmol)溶於DCM(40 mL)中。添加3,3,3-三乙醯氧基-3-碘四氯苯酞(4.712 g,10.776 mmol)，並攪拌16小時。用DCM(100 mL)稀釋。用0.5 N NaOH(100 mL)洗滌。經Na2SO4乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體形式之標題化合物(1.910 g，產率為96%)。1H NMR(400.43 MHz,d6-DMSO)δ 9.21(dd,J=0.5,1.4 Hz,1H),8.51-8.49(m,1H),8.03(dd,J=0.7,8.1 Hz,1H),3.12(q,J=7.1 Hz,2H),1.05(t,J=7.1 Hz,3H)。
製備59 1-[4-(二氟甲基)苯基]乙酮
將4-乙醯基苯甲醛(1.270 mL,8.956 mmol)溶於DCM(20 mL)中。添加(3.963 g,17.913 mmol)，並攪拌5天。將反應混合物緩慢倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(250 mL)中。攪拌混合物直至氣體完全逸出(約2小時)。用DCM(2×100 mL)萃取。經Na2SO4乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析(Analogix® 40 g，以40 mL/min)經30分鐘用己烷至20% EtOAc/己烷之梯度洗脫來純化殘餘物，得到呈無色油狀物形式之標題化合物(0.714 g，產率為47%)。1H NMR(399.83 MHz,d6-DMSO)δ 8.06(d,J=8.1 Hz,2H),7.70(d,J=8.1 Hz,2H),7.25-6.97(t,J=55.6 Hz,1H),2.60(s,3H)。
製備60 1-[2-甲基-4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮
將1-溴-2-甲基-4-(三氟甲基)苯(2.00 g,8.367 mmol)與THF(17 mL)之溶液冷卻至-71℃，且然後經5分鐘添加正丁基鋰(2.5 M存於己烷中，9.204 mmol,3.681 mL)。在-71℃下將混合物攪拌15分鐘。經3至4分鐘將N-甲氧基-N-甲基丙醯胺(0.980 g,8.367 mmol)逐滴添加至混合物中，保持溫低於-65℃。在-71℃下將溶液繼續攪拌15至20分鐘；然後將溶液升溫至室溫。在室溫下攪拌40分鐘。用飽和氯化銨水溶液驟冷反應。用Et2O萃取水層。用水及鹽水洗滌合併之有機萃取物。經硫酸鈉乾燥混合物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析(40 g RediSep®管柱)用0-40% DCM/戊烷之梯度洗脫來純化殘餘物，得到呈無色油狀物形式之標題化合物(1.490 g，產率為82%)。1H NMR(399.80 MHz,d6-DMSO)δ 7.84(d,J=7.8 Hz,1H),7.64-7.61(m,2H),2.93(q,J=7.1 Hz,2H),2.39(s,3H),1.03(t,J=7.2 Hz,3H)。
基本上藉由製備60之方法用適當芳基溴來製備下列表6中化合物。
製備64 2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮
將對-三氟甲基苯丙酮(5.130 g,25.120 mmol)溶於溴化氫(30.00 mL)及乙酸(20 mL)中。經30分鐘將溴(1.23 mL,23.864 mmol)逐滴添加至乙酸(25 mL)中。將反應混合物攪拌48小時，並用水(1 L)及EtOAc(250 mL)稀釋反應混合物。逐份添加固體碳酸鈉以將pH調節至約7，每次添加均係在氣體停止逸出後實施。用EtOAc(2×250 mL)萃取所得混合物。經Na2SO4乾燥有機萃取物。過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液，得到呈透明油狀物形式之標題化合物(7.140 g，粗產率為100%)。1H NMR(399.83 MHz,d6-DMSO)δ 8.20(dd,J=0.7,8.8 Hz,2H),7.92-7.90(m,2H),5.85(q,J=6.5 Hz,1H),1.78(d,J=6.5 Hz,3H)。
基本上藉由製備64之方法用適當酮來製備下列表7中化合物。
替代製備70 2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮
將對-三氟甲基苯丙酮(75 g,360 mmol，1.0當量)添加至乙酸(375 mL)中。經45分鐘以逐滴方式添加存於乙酸(375 mL)中之溴(18.1 mL,352 mmol，0.98當量)。在添加完成後，將混合物升溫至40℃內部溫度，並攪拌90分鐘。在減壓下去除揮發性組份，並將殘餘物溶於Et2O(300 mL)中。用飽和碳酸氫鈉水溶液(4×200 mL)處理，小心劇烈氣體逸出。分離出有機相，並經MgSO4乾燥。藉由過濾去除固體；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液，得到呈無色油狀物形式之標題化合物(93 g，產率為92.0%)，其靜置時固化。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.13(d,J=8.3 Hz,2H),7.76(d,J=8.3 Hz,2H),5.27(q,J=6.5 Hz,1H),1.93(d,J=6.5 Hz,3H)。
製備71 2-溴-1-[2-甲基-4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮
將1-[2-甲基-4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(0.805g,3.723 mmol)、N-溴琥珀醯亞胺(0.662 g,3.723 mmol)、SCX-2®(1 mmol/g；0.298 g,0.298 mmol)及Et2O(11 mL)添加至安裝有攪拌棒之螺旋帽小瓶中。在室溫下將反應攪拌2小時。添加N-溴琥珀醯亞胺(0.663 g,3.723 mmol)並在室溫下繼續攪拌2小時。添加更多N-溴琥珀醯亞胺(0.663 g,3.723 mmol)，並在室溫下再繼續攪拌2小時。過濾反應，並用大量Et2O洗滌固體。收集濾液，並在減壓下濃縮濾液。將所得混合物置於冰箱中，過夜。藉由急驟層析(120 RediSep®矽膠管柱)用0-30% DCM/戊烷之梯度洗脫來純化所得材料，得到呈無色油狀物形式之標題化合物(0.820 g，產率為75%)。1H NMR(399.80 MHz,d6-DMSO)δ 7.95(d,J=8.0 Hz,1H),7.69-7.65(m,2H),5.64(q,J=6.5 Hz,1H),2.39(s,3H),1.74(d,J=6.5 Hz,3H)。
基本上藉由製備71之方法用適當酮來製備下列表8中化合物。
製備82 N-[5-[6-(二氟甲基)-3-吡啶基]-4-甲基-1H-咪唑-2-基]乙醯胺
將2-溴-1-[6-(二氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-酮(0.500 g,1.89 mmol)及乙醯基胍(0.514 g,5.68 mmol)溶於DMF(12 mL)。將混合物加熱至50℃，並攪拌16小時。將混合物倒入水 中，並用EtOAc(3×20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析(矽膠)用40：1 DCM/MeOH之比率洗脫來純化所得殘餘物，得到呈白色固體形式之標題化合物(0.229 g，產率為46%)。LCMS(m/z)267(M+1)。
製備83 2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
在受熱控制之反應器中在80℃下將2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(500 g,1.78 mol，1當量)、IPA(5 L)、2-胺基嘧啶(205 g,2.13 mol，1.2當量)及碳酸氫鈉(298.8 g,3.55 mol，2當量)之混合物攪拌18小時。冷卻懸浮液，並在真空中濃縮。用DCM(5 L)稀釋所得混合物並用鹽水(2 L)洗滌。再次萃取鹽水，用DCM(2.5 L)洗滌；合併所有有機萃取物；經MgSO4乾燥；過濾；收集濾液；並在減壓下將濾液濃縮成紅色膠狀物。使所得紅色膠狀物在Et2O(1.5 L)中漿化；過濾；並收集固體。將固體風乾45 min，得到呈細緻灰白色固體形式之產物(108 g，產率為22%)。ES/MS(m/z)278(M+1)。
替代製備83 2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
將2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(7.120 g,25.332 mmol)及2-胺基嘧啶(5.464 g,55.729 mmol)溶於EtOH(40 mL)中。將混合物加熱至回流，並攪拌24小時。冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。將殘餘物溶於EtOAc(750 mL)中。 依次用飽和NaS2O3水溶液(250 mL)、飽和NaHCO3水溶液(250 mL)及飽和NaCl水溶液(350 mL)洗滌有機萃取物。使橙色殘餘物自庚烷/EtOAc結晶。收集呈白色固體形式之標題化合物(3.290 g，產率為46.85%)。1H NMR(399.83 MHz,d6-DMSO)δ 8.84(dd,J=1.9,7.0 Hz,1H),8.54(dd,J=2.0,4.2 Hz,1H),8.06-8.04(m,2H),7.83-7.81(m,2H),7.10(dd,J=4.1,6.9 Hz,1H),2.68(s,3H)。ES/MS(m/z)277.99。
基本上藉由製備83之方法用適當α-溴酮或α-氯酮來製備下列表9中化合物。
製備90 2-甲基-3-(對-甲苯基)咪唑并[1,2-a]嘧啶
將3-(4-溴苯基)-2-甲基-咪唑并[1,2-a]嘧啶(1.00 g,3.470 mmol)及DMF(17 mL)添加至50 mL螺旋帽小瓶(安裝有攪拌棒)中。用氮氣使溶液脫氣3 min。將四甲基錫烷(1.91 mL,13.88 mmol)及雙(三苯基膦)氯化鈀(II)(0.36 g,520.57 μmol)添加至小瓶中，並密封小瓶。在油浴中將混合物加熱至130℃，保持2小時。將反應冷卻至室溫，並用過量水驟冷。用EtOAc萃取混合物。用鹽水洗滌合併之有機萃取物。經碳酸鉀乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析用50-100%己烷/EtOAc之梯度來純化粗製混合物，得到呈白色固體形式之標題化合物(0.50 g，產率為64%)。LCMS(m/z)224.2(M+1)。1H NMR(399.83 MHz,d6-DMSO)δ 8.81-8.79(m,1H),8.51-8.49(m,1H),7.73(d,J=7.9 Hz,2H),7.31(d,J=7.9 Hz,2H),7.09-7.06(m,1H),2.64(s,3H),2.36(s,3H)。
製備91 5-[6-(二氟甲基)-3-吡啶基]-4-甲基-1H-咪唑-2-胺
將N-[5-[6-(二氟甲基)-3-吡啶基]-4-甲基-1H-咪唑-2-基]乙醯胺(0.172 g,0.65 mmol)溶於MeOH(5 mL)及水(5 mL)中。將混合物加熱至60℃。添加鹽酸(12 N,5 mL,60 mmol)。在60℃下將混合物攪拌2小時。將混合物濃縮至約10 mL體積。將水溶液之pH調節至8。用EtOAc(2×20 mL)萃取所得溶液。經硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物；過濾； 收集濾液；並在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色油狀物形式之標題化合物(0.153 g，粗產率為100%)。LCMS(m/z)225(M+1)。
製備92 [4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]甲酸銨
將2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶(2.176 g,7.849 mmol)懸浮於EtOH(15.00 mL,257.646 mmol)中。添加肼水合物(4.00 mL,81.821 mmol)。用微波輻照加熱至125℃。攪拌30分鐘，並在減壓下濃縮。將殘餘物溶於EtOAc(75 mL)中；用水(3×50 mL)洗滌有機萃取物；且然後用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌。經Na2SO4乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在真空中濃縮濾液。藉由反相急驟層析(Analogix® 150 g，以40 mL/min)經35分鐘用5-30% ACN/水之梯度洗脫進行純化。在加載samplet時材料沈澱。自samplet收集所得白色材料並使其在MeOH中回流15分鐘。經由矽藻土過濾MeOH混合物，收集濾液，並用MeOH洗滌矽藻土。在減壓下濃縮合併之濾液，得到呈白色結晶固體形式之標題化合物(1.643 g，產率為72.9%)。1H NMR(400.43 MHz,d6-DMSO)δ 13.14-13.11(m,2H),7.77(d,J=8.4 Hz,2H),7.66(d,J=8.2 Hz,2H),7.47(s,2H),2.26(s,3H)。ES/MS(m/z)241.99(母離子+1，未檢測到甲酸鹽)。
製備93 4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺；草酸
在25℃至30℃一起添加2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-A]嘧啶(50 g,0.180 mol)、ACN(500 mL)及肼一水合物(20.1 g 0.628 mol)。將反應混合物加熱至78℃至82℃，並攪拌40至48小時。藉由HPLC監測反應進行。當完成反應時，將混合物冷卻至40℃至45℃；濃縮至100 mL殘餘體積；並藉由與甲苯(3×250 mL)共沸蒸餾去除殘餘水分。將反應混合物冷卻至25℃至30℃；添加DCM(250 mL)；然後將混合物攪拌15分鐘。將水(500 mL)添加至混合物中，並攪拌30分鐘。分離各層，並用水(4×500 mL)洗有機層。在30℃至40℃在減壓下將有機層濃縮至50 mL殘餘物體積，得到粗製鹼。將此混合物冷卻至25℃至30℃，並添加MeOH(100 mL)。經60分鐘添加草酸二水合物(45.5 g,0.500 mol)於MeOH(300 mL)中之溶液，並在25℃至30℃將混合物攪拌2小時。將漿液冷卻至0℃至5℃，並攪拌1小時。過濾混合物；用MeOH(100 mL)洗固體；收集固體；並在45℃至50℃在真空下將固體乾燥12小時，得到標題化合物(41.0 g，產率為78%)。1H NMR(300 MHz,d6-DMSO)δ 7.82(d,J=8.4 Hz,2H),7.69(d,J=8.1 Hz,2H),2.32(s,3H)。
製備94 4-甲基-5-[2-甲基-4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺
將2-溴-1-(2,3-二氯苯基)丙-1-酮(0.214g,0.759 mmol)、2-胺基嘧啶(0.123 g,1.290 mmol)及ACN(1.5 mL)添加至微波容器(安裝有攪拌棒)中。用微波輻照將混合物加熱至 140℃，並攪拌45分鐘。將混合物冷卻至室溫，並添加肼(0.23 mL,4.554 mmol)。用微波輻照將混合物加熱至100℃，同時攪拌30分鐘。用水稀釋反應物，並用EtOAc萃取水性混合物。用水洗有機萃取物；收集萃取物；萃取物經硫酸鈉乾燥；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。在SCX-2®管柱(10 g)上用DCM純化物質。用DCM、於DCM中之40% MeOH、於DCM中之80% MeOH沖洗管柱，然後用50% DCM/於MeOH中之7 M氨洗脫產物。在減壓下濃縮氨流份。藉由徑向層析在2 mm矽膠板上用75%-100% EtOAc/己烷之梯度、然後1-4%於EtOAc中之於MeOH中之7 M NH3之梯度洗脫純化殘餘物，得到呈淺米黃色發泡體之標題化合物(0.042 g，產率為23%)。1H NMR(399.80 MHz,d6-DMSO)δ 10.50-10.48(m,1H),7.45-7.42(m,1H),7.25-7.23(m,2H),5.07(s,2H),1.89(s,3H)。
基本上藉由製備94之方法使用適當α-溴酮來製備下列表10中化合物。
製備109 N-[[6-(二氟甲基)-5-[[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]胺基甲醯基]-3-吡啶基]甲基]胺基甲酸第三丁基酯
將[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]甲酸銨(0.205 g,0.714 mmol)及5-[(第三丁氧基羰基胺基)甲基]-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸(0.283 g,0.749 mmol)溶於DCM(5 mL)中。添加DIPEA(0.50 mL,2.855 mmol)，隨後添加BOP(0.350 g,0.792 mmol)。將混合物加熱至60℃，並攪拌16小時。添加苯并三唑-1-基氧基-叁(二甲基胺基)鏻六氟磷酸鹽(0.150 g,0.339 mmol)。將混合物攪拌2小時。將反應混合物倒入水(15 mL)中。用EtOAc(3×15 mL)萃取，並依次用飽和氯化鈉水溶液(4×15 mL)及飽和碳酸氫鈉水溶液(15 mL)洗滌合併之有機物。經硫酸鈉乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由反相急驟層析(Analogix® 55 g，以40 mL/min)經30分鐘用5-75% ACN/水之梯度洗脫來純化殘餘物。在減壓下濃縮適當流份直至 僅留下水且產物係懸浮固體。添加飽和NaHCO3水溶液(50 mL)並用EtOAc(2×30 mL)萃取，得到呈白色固體形式之標題化合物(0.212 g,56%)。LCMS(m/z)526(M+1)524(M-1)。
製備110 5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)-N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]吡啶-3-甲醯胺
將鹽酸(10 mL,40.0 mmol，4M存於1,4二噁烷中)添加至N-[[6-(二氟甲基)-5-[[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]胺基甲醯基]-3-吡啶基]甲基]第三丁基胺基甲酸酯(0.212 g,0.403 mmol)中並攪拌過夜。用水稀釋，並用Et2O萃取。用飽和碳酸氫鈉水溶液將pH調節至約8。用EtOAc(3×30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液。藉由反相急驟層析(Analogix® 40 g，以40 mL/min)經30分鐘用2-55% ACN/水之梯度洗脫進行純化。在減壓下濃縮適當流份直至去除所有CAN並僅留下水。添加飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)並用EtOAc(3×20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下濃縮濾液，得到呈淺黃色固體形式之標題化合物(0.098 g，產率為57%)。1H NMR(400.43 MHz,d6-DMSO)δ 8.71-8.69(m,1H),8.16(s,1H),7.79-7.77(m,2H),7.69-7.67(m,2H),7.42-7.28(m,1H),3.81(s,2H),2.43(s,3H)。
實例1 2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲 基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺
在受熱控制之反應器中在75℃內部溫度下將4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺(395 g,1.63 mol，1當量)、2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}吡啶-3-甲酸(445.8 g,1.63 mol，1當量)、DMF(3.16 L)、DIPEA(856 ml,4.91 mol，3當量)及TBTU(630 g,1.965 mol,1.2當量)之混合物攪拌18小時。冷卻混合物；用EtOAc(2.5 L)稀釋；並用水(3×5 L)及鹽水(2×2.5 L)洗滌。用EtOAc(2.5 L)萃取合併之水相。合併有機萃取物，並經MgSO4乾燥。濃縮至乾燥，得到黃色半固體。用Et2O(2.5 L)漿化此固體3小時；藉由過濾收集固體；並風乾16小時，然後在真空中在50℃下再乾燥48小時，得到呈細緻自由流動白色固體形式之標題產物(568 g，產率為66%)。1H NMR(MeOD-d 4,500 MHz)：δ 8.63(s,1H),8.13(s,1H),7.74(d,2H,J=8.1 Hz),7.67(d,2H,J=8.1 Hz),7.36(t,1H,J=54.2 Hz),4.47(s,2H),2.52-2.45(m,4H),1.13(d,6H,J=6.8 Hz)；MS(m/z)496(M+1)。
替代程序A，實例1
將2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}吡啶-3- 甲酸(230 g,0.845 mol，1當量)、4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺(280.6 g,0.845 mol，1當量)及4-甲基嗎啉(427.8 g,4.22 mol，5當量)添加至EtOAc(2.5 L)中。在15至25℃下將反應混合物攪拌1 h。經17 min添加丙基磷酸酐(T3P®)(50% w/w存於EtOAc中，1.884 kg,2.95 mol，3.5當量)，同時維持溫度40℃。用EtOAc(415 mL)沖洗添加容器，並將沖洗物添加至反應混合物中。在15℃至25℃下將反應混合物攪拌1 h，且然後加熱至65℃至75℃，過夜。將反應混合物冷卻至15℃至25℃，並用EtOAc(3 L)稀釋。用水(2×2 L)洗滌反應混合物。依次用1 N HCl(2×2 L)、鹽水(2 L)、10% Na2CO3水溶液(2×2 L)及去離子水(2×2 L)洗滌有機相。在65℃及真空下濃縮有機層直至觀察到固體(約4 L，去除62%體積)。添加無水EtOH(3 L)及將溶液再濃縮至約3 L。添加無水EtOH(1 L)，並在65℃至75℃下將漿液攪拌30 min，然後在15℃至25℃下攪拌約63小時。將漿液冷卻至-15℃至-5℃，同時攪拌2 h。藉由過濾分離出固體，並用冷無水EtOH(-10℃,420 mL)沖洗固體。在50℃及真空下將所得固體乾燥2夜，得到標題化合物(268 g，產率為64%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 12.09(s，寬，2H),8.66(s,1H),8.44(t,J=5.6 Hz,1H),8.07(s,1H),7.78(dd,J=38.6及8.2 Hz,4H),7.37(t,J=54.3 Hz,1H),4.40(d,J=5.6 Hz,2H),2.46(s,3H),2.46(m,J=6.8 Hz,1H),1.05(d,J=6.8 Hz,6H)。
替代程序B，實例1
將[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]甲酸銨(1.011 g，1.00當量，3.520 mmol)及2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙醯基胺基)甲基]吡啶-3-甲酸(1.497 g，1.25當量，4.400 mmol)溶於DMF(25.00 mL,323.313 mmol)中。添加DIPEA(2.46 mL,14.079 mmol)，隨後添加BOP(2.065 g,4.576 mmol)。加熱至60℃，並攪拌過夜。將反應混合物倒入水(200 mL)中。用EtOAc(3×75 mL)萃取混合物。用飽和NaCl水溶液(4×100 mL)洗滌合併之有機萃取物，然後用飽和NaHCO3水溶液(100 mL)洗滌。經Na2SO4乾燥有機物；過濾；收集濾液；並在真空中濃縮濾液。藉由急驟層析(Analogix® 80 g，以55 mL/min)經40分鐘用DCM至存於MeOH/DCM中之8% 7 N NH3之梯度洗脫進行純化。收集到1.592 g材料。自EtOAc/MeOH/庚烷結晶。過濾固體產物，用己烷洗滌並在真空下乾燥過夜，得到呈白色固體形式之標題化合物(1.298 g，產率為74.43%)。1H NMR(400.43 MHz,d6-DMSO)δ 12.34-12.26(m,2H),8.61(d,J=1.8 Hz,1H),8.41-8.37(m,1H),8.05-8.02(m,1H),7.77(d,J=8.2 Hz,2H),7.70-7.68(m,2H),7.56-7.50(m,1H),4.34(d,J=5.7 Hz,2H),2.42-2.38(m,1H),1.00(d,J=6.9 Hz,6H)。ES/MS(m/z)496.17。
基本上藉由實例1之替代程序B用適當2-胺基咪唑(或其鹽)及酸來製備下列表11中化合物。
實例26 2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽
用5.58 g 2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺及85%磷酸(800 μL)裝填250 mL圓底燒瓶。經20分鐘向此混合物中添加乙腈(40 mL)以產生稀漿液。在環境溫度下將漿液攪拌30分鐘。藉由真空過濾收集固體，並在100℃及減壓下乾燥固體，保持數小時以提供磷酸鹽(5.6359 g,92%)。
XRD攝譜儀分析
在於35 kV及50 mA下操作之安裝有CuKa源(λ=1.54060 Å)及Vantec檢測器之Bruker D4 Endeavor X-射線粉末繞射計上獲得結晶固體之XRD圖案。在4°與40°2θ之間掃描樣品，步長為0.0087° 2θ且掃描速率為0.5秒/步，且散度為0.6 mm，固定防散射狹縫為5.28 mm，且檢測器狹縫為9.5 mm。將乾燥粉末堆積於石英樣品架上並使用載玻片獲得光滑表面。在不妨礙明確識別所指示晶型之情況下，±0.2° 2θ之峰位置變化量將考慮在潛在變化內。在8.85°及26.77° 2θ下基於NIST 675標準峰調節於環境溫度及相對濕度下收集之晶型繞射圖案。
根據實例26製備之2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基} 吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽樣品藉由使用CuKa輻射且具有繞射峰(2-θ值)之XRD圖案來表徵。特定而言，該圖案在4.85處含有峰且含有選自由下列組成之群之峰中之一或多者：9.77、16.68、17.93、19.15、22.27及24.84，其中繞射角公差為0.2度。主要2-θ峰之列表提供於下表12中。
實例26 替代程序
將2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺(250 g,0.505 mol，1當量)添加至ACN(5 L)中。將85% H3PO4(110.7 g,0.960 mol H3PO4，1.90當量)於去離子水中之溶液(1 L)添加至混合物中。將反應混合物加熱至60℃至70℃，且然後經由1.2 μm囊式過濾器過濾至15 L反應器中。將所得漿液加熱至55℃至65℃並在環境溫度下攪拌過夜。此後將漿液冷卻至5℃並攪拌約2小時，同時將反應溫度維持在5℃。收集固體，並用冷ACN(0℃至10℃，2×475 mL)及冷去離子水(0℃至10℃，2×475 mL)沖洗固體。將濕固體(354 g)放回反應器中，並在環境溫度下用去離子水(2.5 L)漿化固體2 h。藉由過濾收集固體，並用濾液沖洗固體(3次)，隨後用去離子水(1.25 L)沖洗。在110℃及減壓下用氮氣氣流乾燥該灰白色固體，得到呈淺黃色固體形式之標題化合物(237 g，產率為79%)。對C23H22F5N5O2．H2PO4進行分析：計算值：C,46.55；H 4.25；F 16.01；N 11.80；實驗值：C,46.63；H,4.22；F,16.30；N,11.91。1H-NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.66(d,J=1.8 Hz,1H),8.45(t,J=5.8 Hz,1H),8.08(s,1H),7.76(dd,J=33.3 Hz,4H),7.36(t,J=54.3 Hz,1H),4.40(d,J=5.8 Hz,2H),2.45(s,3H),2.45(m,J=6.9 Hz,1H),1.04(d,J=6.9 Hz,6H)。
實例27 5-(乙醯胺基甲基)-2-(二氟甲基)-N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]吡啶-3-甲醯胺
將5-(胺基甲基)-2-(二氟甲基)-N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]吡啶-3-甲醯胺(0.047 g,0.110 mmol)溶於DCM(3 mL)中。添加三乙胺(0.038 mL,0.276 mmol)，隨後添加乙醯氯(9.830 μL,0.138 mmol)，並攪拌過夜。將反應物倒入飽和NH4Cl水溶液(15 mL)中，並用EtOAc(2×10 mL)萃取。合併有機萃取物；經硫酸鈉乾燥有機萃取物；過濾；收集濾液；並在減壓下將濾液濃縮至乾燥，得到呈淺黃色固體形式之標題化合物(0.039 g，產率為75%)。LCMS(m/z)468(M+1)。
實例28 2-(二氟甲基)-N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]-5-[(丙醯基胺基)甲基]吡啶-3-甲醯胺
基本上藉由實例27之方法用適當胺及醯氯來製備。ES/MS(m/z)482(M+1)
生物分析 人類mPGES-1酶抑制分析
將人類mPGES-1(InvitrogenTM(目錄編號97002RG，選殖體編號6374722))亞選殖至pcDNA3.1中並使其瞬時表現於293E細胞中。根據公開方法自細胞沈澱物製備微粒體 (Oullet等人，Purification and characterization of recombinant microsomal prostaglandin E synthase-1,Protein Expression and Purification，26，第489頁至第495頁(2002)；及Thoren等人，Human Microsomal Prostanglandin E Synthase-1,J.Biol Chem.278(25)，第22199頁至第22209頁(2003))。簡言之，在均質緩衝液(15 mM Tris-HCl,pH 8.0；0.25 M蔗糖；0.1 mM EDTA；1 mM麩胱甘肽)中培養沈澱物並在冰上超音波處理5×30秒。在4℃下以5000×g使均質物離心10分鐘。對上清液部分實施傾析；加載至Beckman Quick-Seal®管中；並在4℃下以150,000×g離心90分鐘。藉由傾析丟棄上清液部分；並將沈澱物重新懸浮於分析緩衝液(10 mM磷酸鈉(pH 7.0)、10%甘油及2.5 mM麩胱甘肽)中。完成蛋白酶抑制劑混合液(Roche))。使用Pierce Coomassie PlusTM試劑來測定蛋白濃度。
對於酶分析，將微粒體稀釋於分析緩衝液並以7 μL/孔添加至384孔板中。在MultimekTM上產生化合物稀釋板(Nunc目錄編號249944)，並以1 μL/孔添加至分析板中。在即將使用前將前列腺素H2(PGH2)稀釋於分析緩衝液中並以7 μL/孔添加。最終濃度為4.4 μg/mL微粒體及1.69 μM PGH2。在室溫下培育2.5分鐘後，添加2.5 μL/孔存於0.5 N HCl中之1 mg/mL SnCl2以終止反應。將5 μL反應物轉移至384孔板中並利用Multidrop添加含有氘化PGE2之乙腈(45 μL)作為內部標準；並將板儲存於-20℃下。使用標準LC/MS分析來分析板之PGE2(Biocius Lifesciences (Wakefield,MA 01880)。數據用於計算IC50(μM)。結果指示實例1(2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺)抑制人類mPGES-1，其中IC50(μM)值為0.000944±0.00059 μM(平均值±標準偏差；n=10/22)。所例示化合物展示小於100 nM之IC50。因此，在分離酶製備中所例示化合物係mPGES-1酶之有效抑制劑。
用於量測類花生酸選擇性之基於細胞之分析
人類上皮肺癌細胞系A549係自ATCC(CCL-185)獲得且維持在Kaighn F12(「F12K」)+10%胎牛血清(FBS)(平板培養基)及5% CO2中。每週兩次使細胞以1：3傳代。
對於此分析，藉由用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌一次，然後用胰蛋白酶/EDTA洗滌一次使細胞自燒瓶釋放出來。在37℃下3至5分鐘後，將細胞懸浮於10 mL平板培養基中，並在25℃下以2,000 rpm離心5分鐘。抽吸掉上清液，並將細胞沈澱物重新懸浮於10 mL F12K中。藉由在血球計上對已稀釋於PBS及台盼藍(Trypan blue)中之細胞等份試樣進行計數來測定細胞數。在處理前24小時將細胞以40,000/孔平鋪於96孔Falcon板中。在Screen Mates管中將化合物在DMSO中稀釋至100×最終濃度。自細胞去除培養基，並將新鮮培養基(90 μL/孔)添加至細胞中。以1 μL/孔添加化合物(n=2)，每一者得到7個濃度。在37℃、5% CO2下將細胞再處理30分鐘。藉由添加於平板培養基中稀釋至10×最終濃度之重組人類介白素1β(rhIL-1)來誘導前列腺 素E2產生。添加10 μL/孔等份試樣，得到0.1 ng/mL至0.2 ng/mL之最終rhIL-1β濃度。處理時間為約18小時。將條件培養基移至v形底部聚丙烯板中。將不含血清之F12K(50 μL/孔)連同CellTiter96試劑(PromegaTM)(10 μL/孔)一起添加至細胞中在室溫下將板培育30至45分鐘，且然後在讀數板上在A490下讀數以測定活力。對照孔接收10 μL/孔10% triton X-100以充當毒性對照。
根據製造商方案(Cayman)藉由特異性酶免疫-分析(EIA)來分析條件培養基之PGE2及PGI2含量。簡言之，將條件培養基(1 μL)添加至由製造商供應之經捕獲抗體塗佈且含有EIA緩衝液(49 μL)之96孔板之各孔中。用EIA緩衝液稀釋示蹤劑，並添加(50 μL/孔)。用EIA緩衝液稀釋檢測抗體並添加(50 μL/孔)。用黏著密封膜塗佈板，並在室溫下在定軌振盪器上以100 rpm培育1小時。將洗滌緩衝液稀釋於Millipore純化水中，並使用板洗滌器洗滌板(5×350 μL/孔)。將受質(Ellman試劑)稀釋於Millipore純化水中並添加(200 μL/孔)。在室溫下在定軌振盪器上以100 rpm約45分鐘後，在讀數板上在A412下對板進行讀數。使用PGE2之標準曲線來校準未知物。實例1(2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺)抑制PGE2形成，其中IC50為0.0121±0.0061 μM(平均值±標準偏差；n=4)，而不影響其他類前列腺素之合成。因此，顯示所例示化合物選擇性抑制PGE2合成，而不抑制其他類前列腺素之合成。
人類全血分析
將來自正常人受試者供體之血液收集至肝素鈉真空采血管中。供體在捐贈兩週內不曾服用NSAID、阿司匹林(aspirin)、西樂葆(Celebrex)或糖皮質激素類。將所有管/供體彙集於250 mL Corning圓錐形離心管中並以436.5 μL/孔分配至深孔聚丙烯板中。將化合物在DMSO中稀釋至100×最終濃度並以4.5 μL/孔一式兩份或一式三份添加，得到7點曲線。在37℃、5% CO2下在潮濕氣氛中預處理血液，用聚矽氧蓋墊寬鬆地覆蓋，保持30分鐘，然後以9 μL/孔添加5 mg/mL脂多糖(LPS)(Sigma 0111：B4)於1 mg/mL牛血清白蛋白(BSA)/PBS中之溶液，得到100 μg/mL之最終LPS濃度。在37℃、5% CO2下在潮濕氣氛中在定軌振盪器上以約100 rpm將板培育20至24小時，寬鬆地覆蓋。用聚矽氧蓋墊緊密地密封板並在冰上冷凍約1小時。然後在Eppendorf 5810R離心機中將板以1800×g離心10分鐘(4℃)。使用具有無菌過濾嘴之Rainin L200自細胞層移走血漿並轉移至v形底部聚丙烯板中。將100微升定量地轉移至Costar聯排管組(cluster tubes blocks)中，並添加400 μL/孔甲醇終止劑及內部標準d-4PGE2、d-4PGF2α及d-4TX2β。使樣品旋轉5分鐘並在-20℃下放置至少1小時。在Eppendorf 5810R中使樣品以4000 rpm離心10分鐘。在真空歧管上使用Waters HLB 30 mg/床96孔板來實施固相萃取：1)用甲醇(1 mL)洗滌基質，隨後用存於水中之0.1%甲酸(1 mL)洗滌；2)將400 μL樣品連同存於水中之0.1%甲酸(900 μL)一起施加並使其結 合5分鐘；3)用存於水中之0.1%甲酸(600 μL)洗滌基質，隨後用80/20水/甲醇(600 μL)洗滌；4)用2 μL至500 μL體積乙酸乙酯洗脫產物；5)在氮氣下乾燥樣品並重構於具有0.1%甲酸之75/25水/乙腈(50 μL)中。藉由LC/MS/MS來分析產物。化合物2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺(實例1)選擇性抑制PGE2產生，其中IC50為0.012±0.0.008 μM(幾何平均值±標準偏差；n=11)，而不抑制PGF2α及TXB2產生。
單碘乙酸鹽(MIA)活體內模型
在MIA模型中使用在MIA注射時重約200至250克之雄性Dunkin Hartley豚鼠來量測疼痛。將豚鼠分組圈養於兒童涉水池中並維持在恒溫中並維持12小時光照/12小時黑暗循環。在研究前一天，將豚鼠移至標準籠框中，每個籠2只動物。在除數據收集期間以外的所有時間動物均自由進食及飲水。所有實驗均根據由Eli Lilly動物管理及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committees)批准之方案實施。
在標準MIA模型中，每一豚鼠之右膝注射存於鹽水(50 μl)中之MIA(0.3 mg)且左膝注射鹽水(50 μl)。在MIA注射後第9天使用雙足平衡(incapacitance)測試來量測疼痛。雙足平衡測試量測MIA注射膝與鹽水注射膝之間之後腳爪承重差值，且每一值代表3個各自經1秒量測之單獨量測值之平均值。
對於此研究，對豚鼠投用媒劑(存於鹽水中之10% Cremophor® EL(CAS 61791-12-6))或實例1(10 mg/kg或50 mg/kg)。亦對第四組豚鼠投用非類固醇類消炎藥雙氯芬酸(diclofenac)(媒劑鹽水，30 mg/kg)，其因先前在模型中已顯示效力而用作研究之正性對照。所有投用均係以5 ml/kg之劑量體積皮下進行且組大小為n=6。劑量組係隨機指配給每一動物且每一豚鼠交錯10分鐘投用。投用後4小時，使用雙足平衡測試來量測疼痛。結果以鹽水注射膝與MIA注射膝之間之平均承重差值形式報告於表13中並在經媒劑治療之動物與經化合物治療之動物之間作出統計學比較以評估實例1化合物在模型中對膝疼痛之效果。
平均值±SEM；SEM=平均值之標準誤差
藉由單因素方差分析來評價數據；藉由Dunnett檢驗與媒劑進行比較，p<0.05，並將Bonferroni校正用於組間比較。
相對於媒劑，投用實例1之化合物及雙氯芬酸二者均顯著減少疼痛，其中實例1之50 mg/kg組顯著不同於10 mg/kg組及雙氯芬酸組。
按照公認實踐可將所例示本發明之化合物容易地調配成 醫藥組合物，例如參見Remington's Pharmaceutical Sciences，Gennaro編輯，Mack Publishing公司，Easton Pa.1990。
可將較佳之醫藥組合物調配為用於口服投與之錠劑或膠囊。錠劑或膠囊包括有效量的本發明化合物。該醫藥組合物係以有效治療骨關節炎疼痛之量投與患者。有效治療患者之適當量或劑量可由醫療保健提供者確定。
圖1係2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽之代表性XRD圖案之光譜圖。

Claims (26)

  1. 一種下式化合物， 其中R1選自：-C1-4烷基；R2係Cl或-CHF2；R3係H或-CH3；R4選自：H、F、Cl、-CH3、-CHF2及-CF3；R5選自：H、F、Cl及-CH3；R6選自：H、F、Cl及-CH3；及X及A中之一者係N，且X及A中之另一者係CH；條件係當A為N時，R4不為F或Cl，且當X為N時，R2不為Cl；或其醫藥上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中R1係-CH(CH3)2或-C(CH3)3，或其醫藥上可接受之鹽。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中R1係-CH(CH3)2，或其醫藥上可接受之鹽。
  4. 如請求項1或2之化合物，其中R3係-CH3，或其醫藥上可接受之鹽。
  5. 如請求項1或2之化合物，其中R5選自：H、F及Cl，或其 醫藥上可接受之鹽。
  6. 如請求項1或2之化合物，其中R5係H，或其醫藥上可接受之鹽。
  7. 如請求項1或2之化合物，其中R6係H，或其醫藥上可接受之鹽。
  8. 如請求項1或2之化合物，其中R4選自：H、-CH3、-CHF2及-CF3，或其醫藥上可接受之鹽。
  9. 如請求項1或2之化合物，其中A係N，或其醫藥上可接受之鹽。
  10. 如請求項1或2之化合物，其中R4選自：F、Cl、-CHF2及-CF3，或其醫藥上可接受之鹽。
  11. 如請求項1或2之化合物，其中R4選自：Cl、-CHF2及-CF3，或其醫藥上可接受之鹽。
  12. 如請求項1或2之化合物，其中R4係-CF3，或其醫藥上可接受之鹽。
  13. 如請求項1或2之化合物，其中R2係Cl，或其醫藥上可接受之鹽。
  14. 如請求項1或2之化合物，其中R2係-CHF2，或其醫藥上可接受之鹽。
  15. 如請求項1或2之化合物，其中X係N，或其醫藥上可接受之鹽。
  16. 一種化合物，其係： 或其醫藥上可接受之鹽。
  17. 如請求項16之化合物，其中該鹽係磷酸氫鹽。
  18. 一種化合物，其係結晶型2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽，其特徵在於獲自CuKα源(λ=1.54056 Å)之X-射線粉末繞射圖案，該圖案包含在以下之峰：a)4.85°、20.37°及22.27° +/-0.2° 2θ；或b)4.85°、11.00°、17.93°、20.37°、22.27°及24.85° +/-0.2° 2θ；或c)4.85°、11.00°、12.22°、12.67°、17.93°、20.37°、22.27°、23.51°及24.85° +/-0.2° 2θ。
  19. 一種組合物，其包含實質上純的如請求項18之結晶型2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽。
  20. 如請求項19之組合物，其包含大於80% w/w之結晶2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽。
  21. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑中之至少一者。
  22. 一種醫藥組合物，其包含實質上純的如請求項18或19之結晶型2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙醯基)胺基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲醯胺．磷酸氫鹽，及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑中之至少一者。
  23. 如請求項1至18中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其用作藥劑。
  24. 如請求項1至18中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法。
  25. 如請求項1至18中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療與關節炎相關之疼痛。
  26. 一種如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造藥劑以治療與關節炎相關之疼痛。
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