TW202309001A - Gpr35促效劑化合物 - Google Patents

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奈吉爾 亞倫 斯溫
吉里斯 艾柏特 布朗
班哲明 懷特赫斯特
尼爾 約翰 弗拉納根
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Abstract

本文中之揭示內容係關於式(1)之新穎化合物：
Figure 111115160-A0101-11-0001-1
及其鹽及任何互變異構體，其中X、R 1及R 2在本文中定義，及其在治療、預防、改善、控制與GPR35受體相關之病症或降低該等病症之風險中的用途。

Description

GPR35促效劑化合物
本申請案係關於化合物及其作為G蛋白偶聯受體35 (GPR35)受體促效劑之用途。本文所述之化合物可用於治療或預防涉及GPR35受體之疾病。
GPR35為一種孤兒受體，屬於七個跨膜域G蛋白偶聯受體(GPCR)家族。GPCR超家族代表一個龐大的信號轉導子家族，其在調節人類生理學之各個方面起著關鍵作用。由於此等受體之藥理學可追蹤性，其已作為潛在藥物目標進行深入研究。最近的一項分析表明，超過475種藥物作用於108種獨特的GPCR，占FDA批准藥物之約34%。對於尚未鑑別出內源性配體之孤兒GPCR，仍有發現及開發新穎藥物的機會。
GPR35最初作為編碼309個胺基酸之蛋白質的開放閱讀框架被發現，且定位於人類染色體2q37.3 (O'Dowd等人 Genomics, 47, 310-3, 1998)。該受體被證明在一系列組織中表現，據報導在胃腸道組織、肺及背根神經節中具有高表現。亦發現該受體在免疫細胞以及諸如脾臟、骨骼肌及脊髓之組織中表現。
與其表現模式一致，現在有愈來愈多的證據強調GPR35在各種適應症中之治療作用，包括氣道疾病、代謝症候群(例如糖尿病)、心血管疾病(例如高血壓)及疼痛。靶向GPR35之配體可為治療廣泛的人類疾病病況提供效用。
GPR35之內源性配體的身分仍存在爭議，迄今為止已描述許多推定的配體，包括2-醯基溶血磷脂酸、CXCL17及犬尿酸。許多報導的配體在受體上僅顯示出微弱的活性或表現出缺乏生物特異性，從而引發對內源性配體之真正身分的質疑。
據報導，多種合成促效劑作用於GPR35，包括紮普司特(zaprinast)、雙羥萘酸、色甘酸、袢利尿藥(布美他尼(bumetanide)、呋喃苯胺酸(furosemide))、阿司匹林代謝物、槲皮素及雙香豆素。另外，亦報導消炎劑柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)及5-胺基水楊酸之弱促效劑活性，其廣泛用於治療發炎性腸病(EC50 ~3μM) (US20130316985)。
亦報導酪胺酸激酶類化合物酪胺酸磷酸化抑制劑(tyrophstin) (酪胺酸磷酸化抑制劑51)以及兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)抑制劑恩他卡朋(entacapone)作用於受體，突出GPR35配體類之多樣性。由於GPR35可能參與人類疾病，故對開發具有高度效力且對GPR35表現出選擇性之配體的關注逐漸增加。對GPR35生物學之闡釋在一定程度上受足夠藥理學工具之可用性的阻礙。實際上，許多所記錄之GPR35促效劑(內源性及合成的)在GPR35上僅表現出微弱或部分活性且缺乏目標特異性，使得對路徑之剖析變得困難。此外，已清楚，一些化合物顯示出物種選擇性及可能的配體偏向；推定的內源性配體犬尿酸為一個此類實例，據報導，其對人類受體之效力與大鼠直系同源物相比低至少100倍(Jenkins等人 Br J Pharmacol 162, 733-748, 2011)。因此，需要有效的、選擇性的GPR35促效劑及拮抗劑來揭示此受體之生理作用。
最近，全基因體關聯研究(GWAS)已鑑別出GPR35之單核苷酸多型性(SNP)，其與發炎性腸病(IBD)相關。已描述兩個SNP，其中之一為編碼第3跨膜域中之T108M取代的非同義SNP (rs3749171) (Ellinghaus等人 Hepatology 58, 1074-1083, 2013)。此殘基在整個哺乳動物中並不保守，且多型性對信號轉導之影響仍有待闡明。GPR35基因座之第二多型性(rs4676410)編碼GPR35之上游內含子變異體。一項使用4個大型現實世界資料群組之全表型群關聯研究證明此遺傳變異體(rs4676410)與IBD表型之關聯，證實先前在早期研究中報導之目標-疾病聯繫(Diogo等人 Nat Commun 9, 4285, 2018)。所報導之GPR35多型性在IBD中之關聯已在GPR35用於治療胃腸道疾病之潛在治療作用方面引起關注。
發炎性腸病為一種慢性復發性發炎性胃腸道病症，通常累及迴腸及/或結腸。其病理生理學被認為涉及異常的腸道免疫反應，導致黏膜發炎、腸道屏障缺陷及GI通透性增加。治療策略主要涉及經由組合使用諸如胺基水楊酸鹽、皮質類固醇、免疫抑制劑、生物製劑(例如抗TNF)及抗生素之藥劑之循序漸進的方法，然而，許多患者之疾病沒有得到完全控制，突顯出高度未滿足的需求。特定言之，仍治療不佳且未被充分認識的一個方面為腹痛。疼痛為絕大多數IBD患者在疾病過程中經歷的常見症狀，且可能由腸道發炎之直接或間接後果引起。無論何種原因，疼痛均會對IBD患者之生活品質產生負面影響。迄今為止，對IBD相關腹痛之管理仍具有挑戰性。常用鎮痛劑諸如非類固醇消炎劑(NSAID)往往會加重病況，使患者的治療選擇有限。因此，對能夠提供快速起效的疼痛緩解的藥劑存在高度未滿足的需求，且迫切需要開發新穎藥物。
在臨床前研究中，與野生型小鼠相比，GPR35突變型小鼠在化學損傷後表現出更大程度的結腸上皮損傷。GPR35基因剔除小鼠顯示發炎及重塑細胞介素之表現升高，儘管黏膜中發炎細胞流入之數目沒有顯示總體差異(Farooq等人 Digestive Diseases and Sciences, 63, 2910-22, 2018)。亦報導GPR35在屏障內穩態中之作用，諸如色甘酸鈉之藥劑在許多腸道致敏模型中顯示出降低GI通透性之能力(Forbes等人 J Exp Med 205: 897-913, 2008；Yokooji等人 Int Arch Allergy Immunol. 167:193-202, 2015)。與此等發現一致，GPR35已被證明在活體外研究中在調節緊密連接蛋白及促進上皮細胞遷移中發揮作用。最後，GPR35在背根神經節(DRG)神經元中大量表現，在此其被證明與傷害感受性離子通道共定位且在疼痛處理中發揮作用(Ohshiro等人 Biochem. Biophys. Res. Commun. 365, 344-8, 2008)。除了所報導的對屏障保護的影響外，色甘酸降低應激敏感大鼠品系之內臟超敏反應(Carroll等人 PLoS One.8:e84718, 2013)，突出其在治療疼痛方面的潛在效用。
色甘酸鈉為一種肥大細胞穩定劑，經批准用於一系列適應症，包括全身性肥大細胞增多症、預防過敏性鼻炎及哮喘、過敏性結膜炎及食物過敏(結合膳食限制)。據報導，在全身性肥大細胞增多症中使用色甘酸鹽可改善腹瀉、潮紅、頭痛、嘔吐、蕁麻疹及腹痛。評估色甘酸鈉在食物過敏中之有效性的試驗報告結果不一，通常需要高劑量才能提供保護。高達2公克/天之劑量被證明有效地減輕因食物過敏引起的大腸急躁症患者之GI症狀的嚴重程度(Lunardi等人 Clin Exp Allergy. 21:569-72, 1991)。在牛奶過敏兒童之胃腸道通透性端點上已報導類似發現。
除了胃腸道病症外，GPR35作為治療包括哮喘在內之過敏性病症的目標亦受到關注。在肺部，色甘酸長期以來一直用作有效的哮喘療法，具有良好的安全性及耐受性概況，但藥物動力學不理想。據估計，大致5-12%之藥物在氣道中沈積後被吸收，且最近，已開發出一種改良的色甘酸調配物(PA101)，其在肺部實現顯著較高的藥物沈積。
在臨床上，色甘酸在抑制過敏原攻擊後之即刻及遲發性哮喘反應方面顯示出功效。在一項II期概念驗證試驗中，PA101在減少特發性肺纖維化患者之咳嗽頻率方面顯示出療效。GPR35 mRNA響應於IgE抗體之攻擊而上調，且據報導，色甘酸阻斷IgE抗體被動致敏之人類肺切片中之發炎性介質釋放。此等作用可能涉及多種機制，包括調節肥大細胞穩定及反射誘導之支氣管收縮。
因此，新出現的資料突出GPR35促效劑之廣泛治療潛力，包括肥大細胞病症、治療急性及慢性疼痛病況以及與胃腸道系統及肺部之過敏性或發炎性疾病相關的疾病。
本發明係關於具有作為G蛋白偶聯受體35 (GPR35)受體促效劑之活性的化合物。
簡言之，在一個態樣中，本發明提供式(1)化合物：
Figure 02_image009
或其鹽或互變異構體，其中； X為N或CH； R 1為H或鹵基； R 2為H、鹵基、視情況經取代之C 1 - 6烷基、視情況經取代之C 3 - 6環烷基、視情況經取代之C 1 - 6烷氧基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基或視情況經取代之 O-芳基。
該等化合物可用作GPR35受體促效劑。該等化合物可用於製造藥物。該等化合物可用於治療、預防、改善、控制與GPR35相關之病症或降低該等病症之風險。該等化合物可用於治療肥大細胞病症、急性及慢性疼痛病況以及與胃腸道系統及肺部之過敏性或發炎性疾病相關的疾病。
本發明係關於新穎化合物。本發明係關於新穎化合物作為GPR35受體促效劑之用途。本發明亦關於新穎化合物在治療或預防涉及GPR35受體之疾病中之用途。本發明進一步關於新穎化合物在製造用作GPR35受體促效劑之藥物中之用途。
本發明提供式(1)化合物：
Figure 02_image011
或其鹽或互變異構體，其中； X為N或CH； R 1為H或鹵基； R 2為H、鹵基、視情況經取代之C 1 - 6烷基、視情況經取代之C 3 - 6環烷基、視情況經取代之C 1 - 6烷氧基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基或視情況經取代之 O-芳基。
在本文中之化合物中，X可為N。X可為CH。
在本文中之化合物中，R 1可為H。R 1可為鹵基。R 1可為Cl或F。R 1可為Cl。R 1可為F。R 1可為Br。
在本文中之化合物中，R 2可為H。R 2可為鹵基。R 2可為視情況經取代之C 1 - 6烷基。R 2可為視情況經取代之C 3 - 6環烷基。R 2可為視情況經取代之C 1 - 6烷氧基。R 2可為視情況經取代之芳基。R 2可為視情況經取代之雜芳基。R 2可為視情況經取代之單環雜芳基。R 2可為視情況經取代之雙環雜芳基。R 2可為視情況經取代之 O-芳基。
R 2可為H、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基、視情況經1至6個氟原子取代之C 3 - 6環烷基或視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷氧基。R 2可為H、三氟甲基、乙基、環丙基、環己基或甲氧基。
R 2可為視情況經R 3取代之苯基、視情況經R 3取代之吡啶基、視情況經R 3取代之 O-苯基、視情況經R 3取代之吲唑基或視情況經R 3取代之嗒𠯤基，其中R 3為H、鹵基、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基、視情況經1至6個氟原子取代之C 3 - 6環烷基、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷氧基、-CO 2R 4、-CONHCH 2R 4、-CONHCH 2CH 2OR 4、-OR 4、-OCH 2R 4、-CH 2R 4、-OCH 2R 4、-CH 2CH 2OR 4、-OCH 2CH 2OR 4、-CONHR 4或-CON(CH 3)R 4；其中R 4為H、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基或以下基團：
Figure 02_image013
； R 5、R 6及R 7獨立地為H、鹵基、CO 2R 8、CONR 8R 9或視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基，其中該C 1 - 6烷基之一或兩個碳原子可視情況經O置換； R 8及R 9獨立地為H或視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基。
R 2可為視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基或視情況經取代之 O-芳基，其中視情況選用之取代基為R 3。
R 2可為視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之單環雜芳基或視情況經取代之雙環雜芳基，其中視情況選用之取代基為R 3。
R 2可為視情況經R 3取代之苯基、視情況經R 3取代之吡啶基、視情況經R 3取代之 O-苯基、視情況經R 3取代之吲唑基或視情況經R 3取代之嗒𠯤基。
R 3可為H、鹵基、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基、視情況經1至6個氟原子取代之C 3 - 6環烷基、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷氧基、-CO 2R 4、-CONHCH 2R 4、-CONHCH 2CH 2OR 4、-OR 4、-OCH 2R 4、-CH 2R 4、-OCH 2R 4、-CH 2CH 2OR 4、-OCH 2CH 2OR 4、-CONHR 4或-CON(CH 3)R 4； 其中R 4為H、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基或以下基團：
Figure 02_image015
； R 5、R 6及R 7獨立地為H、鹵基、CO 2R 8、CONR 8R 9或視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基，其中該C 1 - 6烷基之一或兩個碳原子可視情況經O置換； R 8及R 9獨立地為H或視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基。
在本文中之化合物中，R 4可為H、甲基或選自由以下組成之群：
Figure 02_image017
在本文中之化合物中，R 5、R 6及R 7可獨立地為H、CF 3、CONH 2或-OCH 2CH 2OCH 3。
在本文中之化合物中，R 8及R 9可獨立地為H或甲基。R 3可為OMe、CO 2H、CO 2Et、CON(CH 3) 2、CONHCH 2CH 2OCH 3或選自由以下組成之群：
Figure 02_image019
在本文中之化合物中，R 2可選自由以下組成之群：
Figure 02_image021
Figure 02_image023
該化合物可為式(1a)或(1b)之化合物：
Figure 02_image025
； 或其鹽或互變異構體，其中R 1及R 2如上文所定義。
在一些實施例中，該化合物可為式(1a)化合物：
Figure 02_image027
； 或其鹽或互變異構體，其中R 1及R 2如上文所定義。
該化合物可為式(2a)或(2b)之化合物：
Figure 02_image029
； 或其鹽或互變異構體，其中R 2如上文所定義。
在一些實施例中，該化合物可為式(2a)化合物：
Figure 02_image031
； 或其鹽或互變異構體，其中R 2如上文所定義。
該化合物可為式(3a)、(3b)、(3c)、(3d)或(3e)之化合物：
Figure 02_image033
Figure 02_image035
Figure 02_image037
； 或其鹽或互變異構體；其中X、R 1及R 3如上文所定義。
在一些實施例中，該化合物可為式(3a)化合物：
Figure 02_image039
； 或其鹽或互變異構體；其中X、R 1及R 3如上文所定義。
該化合物可為式(4a)、(4b)、(4c)、(4d)或(4e)之化合物：
Figure 02_image041
Figure 02_image043
Figure 02_image045
； 或其鹽或互變異構體；其中R 3如上文所定義。
在一些實施例中，該化合物可為式(4a)化合物：
Figure 02_image047
； 或其鹽或互變異構體；其中R 3如上文所定義。
該化合物可選自由以下組成之群：
Figure 02_image049
Figure 02_image051
Figure 02_image053
Figure 02_image055
或其鹽或互變異構體。
該化合物可選自由以下組成之群： 3-((3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((5-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸乙酯； N-苯甲基-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； N-苯甲基-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲醯胺； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(2-甲氧基乙基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； 3-羥基-4-((3'-甲氧基-5-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-乙基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-N-(4-(三氟甲基)苯甲基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； 3-((4-氟-3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((4-氯-3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((5-(1H-四唑-5-基)-4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(6-(苯甲氧基)吡啶-3-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-羥基-4-((6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-羥基-4-((6-苯基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(2-(4-(三氟甲基)苯甲基)-2H-吲唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(6-((4-(三氟甲基)苯甲基)氧基)吡啶-3-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(2-苯甲基-2H-吲唑-5-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-羥基-4-((6-苯氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(2-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙基)-2H-吲唑-6-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-環丙基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-吲唑-5-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(6-(2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)吡啶-3-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(6-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)吡啶-3-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-環己基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-羥基-4-((3-(嗒𠯤-4-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N,N-二甲基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； N-(4-胺甲醯基苯甲基)-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； 或其鹽或互變異構體。
在一些實施例中，式(1)化合物之鹽為醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物為具有以下結構之化合物：
Figure 02_image057
(化合物A)， 或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為具有以下結構之化合物：
Figure 02_image059
(化合物A)。
本發明亦提供一種緩血酸胺鹽，其具有以下結構：
Figure 02_image061
。
本發明亦提供化合物A或其醫藥學上可接受之鹽之結晶形式。在一些實施例中，結晶形式包含化合物A游離酸或化合物A緩血酸胺鹽。
在一些實施例中，結晶形式包含化合物A緩血酸胺鹽。在一些實施例中，結晶化合物A緩血酸胺鹽為水合物。在一個實施例中，結晶化合物A緩血酸胺鹽為水合物I。在一個實施例中，結晶化合物A緩血酸胺鹽之特徵在於XRPD圖基本上與圖1一致。在一個實施例中，結晶化合物A緩血酸胺鹽之特徵在於當使用Cu Kα輻射來量測時，XRPD圖包含3.9±0.2、7.7±0.2、10.0±0.2及15.8±0.2 °2θ處之繞射角。
在一個實施例中，結晶化合物A緩血酸胺鹽為水合物II。在一個實施例中，結晶化合物A緩血酸胺鹽之特徵在於XRPD圖基本上與圖4一致。在一個實施例中，結晶化合物A緩血酸胺鹽之特徵在於當使用Cu Kα輻射來量測時，XRPD圖包含4.4±0.2、14.4±0.2及23.9±0.2 °2θ處之繞射角。
在一些實施例中，結晶形式包含化合物A (游離酸)。在一些實施例中，結晶化合物A (游離酸)為水合物。在一些實施例中，結晶化合物A (游離酸)為型態1。在一些實施例中，結晶化合物A (游離酸)為型態3。
在一個實施例中，結晶化合物A游離酸之特徵在於XRPD圖基本上與圖7一致。在一個實施例中，結晶化合物A游離酸之特徵在於XRPD圖基本上與圖9一致。
本文所揭示之化合物可用於療法中。本文所揭示之化合物可用於醫藥中。
該等化合物可用作GPR35受體促效劑。該等化合物可用於製造藥物。該等化合物可用於治療、預防、改善、控制與GPR35相關之病症或降低該等病症之風險。該等化合物可用於治療或預防肥大細胞病症、急性及慢性疼痛病況以及與胃腸道系統及肺部之過敏性或發炎性疾病相關的疾病。
該等化合物可用於使用選擇性地作用於GPR35受體之藥劑治療胃腸道病症及病況。此等胃腸道病症及病況包括但不限於：食物過敏、食物不耐受及過敏性病症、乳糜瀉、與全身性肥大細胞增多症及其他肥大細胞相關病症(肥大細胞活化症候群、純系肥大細胞病症、單株肥大細胞活化症候群、特發性蕁麻疹、特發性全身性過敏反應)相關之胃腸道症狀、肥大細胞性結腸炎、大腸急躁症(IBS)、胃腸道運動性病症、功能性胃腸道病症、胃食道逆流病(GERD)、十二指腸胃逆流、腹瀉疾病、嗜酸性球性胃腸炎、嗜酸性球性食道炎、感染性腹瀉(諸如艱難梭菌、沙門氏菌、志賀氏菌毒素)、顯微鏡下結腸炎、免疫介導之胃腸道疾病、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、發炎性腸病、內臟腹痛。在一些實施例中，該等化合物可用於治療大腸急躁症(IBS)，包括具有便秘之IBS (IBS-C)、具有腹瀉之IBS (IBS-D)及具有混合排便習慣之IBS (IBS-M)。在一些實施例中，該等化合物可用於治療IBS-D。
在一些實施例中，該等化合物可用於治療發炎性腸病(IBD)。在一些實施例中，該等化合物可用於治療克羅恩氏病。在一些實施例中，該等化合物可用於治療潰瘍性結腸炎。
該等化合物可用於治療與胃腸道疾病及其他內臟病況相關之疼痛症狀，包括克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、發炎性腸病、放射性結腸炎、放射性膀胱炎、乳糜瀉、麩蛋白腸病、放射性膀胱炎、間質性膀胱炎、疼痛性膀胱症候群、癌症、胃食道逆流病、化學療法及放射療法黏膜炎、胰臟炎、前列腺炎、骨盆疼痛、子宮內膜異位症、肝炎、肝纖維化及肝硬化。
該等化合物可用於治療肺部疾病及病況。此等疾病及病況包括但不限於慢性阻塞性肺病、哮喘、慢性支氣管炎、囊性纖維化、肺氣腫、慢性特發性咳嗽、氣管敏感病症及特發性肺纖維化。
本申請案亦提供根據本文所述之式(1)化合物之任何用途的治療方法。在一些實施例中，提供一種治療有需要之個體之與GPR35相關之病症的方法，其包含向該個體投與治療有效量之式(1)化合物(例如化合物A)或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，個體為人類。
在一些實施例中，病症為發炎性腸病(IBD)。在一些實施例中，病症為克羅恩氏病。在一些實施例中，病症為潰瘍性結腸炎。
在一些實施例中，病症為大腸急躁症(IBS)，包括具有便秘之IBS (IBS-C)、具有腹瀉之IBS (IBS-D)及具有混合排便習慣之IBS (IBS-M)。在一些實施例中，病症為IBS-D。
定義在本申請案中，除非另外指明，否則以下定義適用。
與本文所述之任何化合物(包括式(1)化合物)之用途有關，術語「治療」用於描述任何形式之干預，其中將化合物投與罹患、或有風險罹患、或可能有風險罹患所討論之疾病或病症的個體。因此，術語「治療」涵蓋預防性(preventative/prophylactic)治療及顯現疾病或病症之可量測或可偵測症狀之治療。
術語「有效治療量」(例如與疾病或病況之治療方法有關)係指有效產生所需治療效果之化合物的量。舉例而言，若病況為疼痛，則有效治療量為足以提供所需疼痛緩解程度的量。所需疼痛緩解程度可為例如完全消除疼痛或減輕疼痛的嚴重程度。
除非另外指明，否則術語「C 1 - 6烷基」中之「烷基」、「C 3 - 6環烷基」中之「環烷基」、「C 1 - 6烷氧基」中之「烷氧基」、「芳基」、「雜芳基」、「單環」及「雙環」均按其習知意義使用(例如，如IUPAC Gold Book中所定義)。
只要所描述之任何化合物具有對掌性中心，本發明就延伸至此類化合物之所有光學異構體，無論是外消旋體或經解析之對映異構體形式。本文所述之本發明係關於所揭示之任何化合物之所有晶體形式、溶劑合物及水合物，無論如何製備。若本文所揭示之任何化合物具有酸或鹼中心，諸如羧酸根或胺基，則該等化合物之所有鹽形式均包括在本文中。在醫藥用途之情況下，鹽應視為醫藥學上可接受之鹽。
本發明化合物可以互變異構形式存在。應理解，對所命名之化合物或結構上描繪之化合物的任何提及意欲涵蓋此類化合物之所有互變異構體。舉例而言，式(1)化合物涵蓋如下所示之互變異構體：
Figure 02_image063
Figure 02_image065
。
可提及之鹽或醫藥學上可接受之鹽包括酸加成鹽及鹼加成鹽。此類鹽可藉由習知方式形成，例如藉由使游離酸或游離鹼形式之化合物與一或多個當量之適當酸或鹼視情況在溶劑中或在鹽不可溶之介質中反應，隨後使用標準技術(例如在真空中，藉由冷凍乾燥或藉由過濾)移除該溶劑或該介質。鹽亦可藉由將呈鹽形式之化合物的抗衡離子與另一種抗衡離子交換來製備，例如使用適合的離子交換樹脂。
醫藥學上可接受之鹽之實例包括衍生自無機酸及有機酸之酸加成鹽，及衍生自諸如鈉、鎂、鉀及鈣之金屬之鹽。代表性醫藥學上可接受之鹼加成鹽亦包括但不限於鋁、銨、2-胺基-2-(羥甲基)-1,3-丙二醇(TRIS，緩血酸胺)、精胺酸、苯明(benethamine) (N-苯甲基苯乙基胺)、苄星青黴素(N,N'-二苯甲基乙二胺)、雙-(2-羥乙基)胺、鉍、鈣、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、克立咪唑(clemizole) (1-對氯苯甲基-2-吡咯啶-1'-基甲基苯并咪唑)、環己胺、二苯甲基乙二胺、二乙胺、二乙基三胺、二甲胺、二甲基乙醇胺、多巴胺、乙醇胺、乙二胺、L-組胺酸、鐵、異喹啉、萊哌啶(lepidine)、鋰、離胺酸、鎂、葡甲胺(N-甲基還原葡糖胺)、哌𠯤、哌啶、鉀、普魯卡因(procaine)、奎寧(quinine)、喹啉(quinoline)、鈉、鍶、三級丁胺及鋅。在一個實施例中，本發明中所揭示之化合物之鹽為緩血酸胺(TRIS)鹽。
酸加成鹽之實例包括用以下酸形成之酸加成鹽：乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、芳基磺酸(例如苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸及對甲苯磺酸)、抗壞血酸(例如L-抗壞血酸)、L-天冬胺酸、苯甲酸、4-乙醯胺基苯甲酸、丁酸、(+)樟腦酸、樟腦-磺酸、(+)-(1S)-樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、檸檬酸、環己胺磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡糖庚酸、葡萄糖酸(例如D-葡萄糖酸)、葡糖醛酸(例如D-葡糖醛酸)、麩胺酸(例如L-麩胺酸)、α-側氧基戊二酸、乙醇酸、馬尿酸、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸、羥乙基磺酸、乳酸(例如(+)-L-乳酸及(±)-DL-乳酸)、乳糖酸、順丁烯二酸、蘋果酸(例如(-)-L-蘋果酸)、丙二酸、(±)-DL-杏仁酸、偏磷酸、甲磺酸、1-羥基-2-萘甲酸、菸鹼酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、雙羥萘酸、磷酸、丙酸、L-焦麩胺酸、水楊酸、4-胺基-水楊酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、酒石酸(例如(+)-L-酒石酸)、硫氰酸、十一碳烯酸及戊酸。
亦涵蓋化合物及其鹽之任何溶劑合物。較佳溶劑合物為藉由將無毒的醫藥學上可接受之溶劑(下文稱為溶劑化溶劑)分子併入本發明化合物之固態結構(例如晶體結構)中而形成的溶劑合物。此類溶劑之實例包括水、醇(諸如乙醇、異丙醇及丁醇)及二甲亞碸。溶劑合物可藉由用含有溶劑化溶劑之溶劑或溶劑混合物再結晶本發明化合物來製備。在任何給定情況下是否形成溶劑合物可藉由使用眾所周知的標準技術，諸如熱解重量分析(TGA)、差示掃描熱量測定(DSC)及X射線晶體學對化合物之晶體進行分析來確定。
溶劑合物可為化學計量或非化學計量之溶劑合物。特定溶劑合物可為水合物，且水合物之實例包括半水合物、單水合物及二水合物。關於溶劑合物之更詳細論述及用於製造及表徵其之方法，參見Bryn等人, Solid-State Chemistry of Drugs, 第二版, 由West Lafayette, IN, USA之SSCI, Inc出版, 1999, ISBN 0-967-06710-3。
在本發明之上下文中，術語「醫藥組合物」意謂包含活性劑且另外包含一或多種醫藥學上可接受之載劑的組合物。該組合物可進一步含有選自例如稀釋劑、佐劑、賦形劑、媒劑、防腐劑、填充劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、調味劑、芳香劑、抗細菌劑、抗真菌劑、潤滑劑及分散劑之成分，視投與模式及劑型之性質而定。組合物可採用例如錠劑、糖衣藥丸、散劑、酏劑、糖漿、液體製劑包括懸浮液、噴霧劑、吸入劑、錠劑、口含錠、乳液、溶液、扁囊劑、顆粒劑、膠囊及栓劑，以及注射用液體製劑，包括脂質體製劑形式。
本發明化合物可含有一或多種同位素取代，且對特定元素之提及在其範疇內包括該元素之所有同位素。舉例而言，對氫之提及在其範疇內包括 1H、 2H (D)及 3H (T)。類似地，對碳及氧之提及在其範疇內分別包括 12C、 13C及 14C以及 16O及 18O。以類似方式，除非上下文另外指示，否則對特定官能基之提及在其範疇內亦包括同位素變化形式。舉例而言，對烷基諸如乙基或烷氧基諸如甲氧基之提及亦涵蓋基團中一或多個氫原子呈氘或氚同位素形式之變化形式，例如在乙基中，所有五個氫原子呈氘同位素形式(全氘乙基)或在甲氧基中，所有三個氫原子呈氘同位素形式(三氘甲氧基)。同位素可為放射性的或非放射性的。
治療劑量可視患者之要求、所治療病況之嚴重程度及所採用之化合物而變化。確定特定情形之適當劑量在此項技術之技能範圍內。一般而言，治療以小於化合物最佳劑量之較小劑量開始。此後，劑量以小增量增加，直至達到該等情況下之最佳效果。為方便起見，若需要，每日總劑量可分次且在一天內逐份投與。
當然，化合物之有效劑量的量值將隨待治療之病況之嚴重程度的性質及特定化合物及其投與途徑而變化。選擇適當的劑量在一般熟習此項技術者之能力服務內，而無過度負擔。一般而言，日劑量範圍可為每公斤人類及非人類動物體重約10 μg至約30 mg，較佳每公斤人類及非人類動物體重約50 μg至約30 mg，例如每公斤人類及非人類動物體重約50 μg至約10 mg，例如每公斤人類及非人類動物體重約100 μg至約30 mg，例如每公斤人類及非人類動物體重約100 μg至約10 mg，且最佳每公斤人類及非人類動物體重約100 μg至約1 mg。
醫藥調配物雖然活性化合物有可能單獨投與，但其較佳以醫藥組合物(例如調配物)形式呈現。
因此，在本發明之一些實施例中，提供一種醫藥組合物，其包含至少一種如上文所定義之式(1)化合物或其鹽以及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。
醫藥學上可接受之賦形劑可選自例如載劑(例如固體、液體或半固體載劑)、佐劑、稀釋劑(例如固體稀釋劑，諸如填充劑或增積劑；及液體稀釋劑，諸如溶劑及共溶劑)、造粒劑、黏合劑、助流劑、包衣劑、釋放控制劑(例如延緩或延遲釋放聚合物或蠟)、黏合劑、崩解劑、緩衝劑、潤滑劑、防腐劑、抗真菌及抗細菌劑、抗氧化劑、緩衝劑、張力調節劑、增稠劑、調味劑、甜味劑、顏料、塑化劑、味覺掩蔽劑、穩定劑或任何其他習知用於醫藥組合物之賦形劑。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受」意謂在合理醫學判斷範疇內適用於與個體(例如人類個體)之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相稱的化合物、材料、組合物及/或劑型。在與調配物之其他成分相容的意義上，各賦形劑必須亦為「可接受的」。
含有式(1)化合物之醫藥組合物可按照已知技術調配，參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA。醫藥組合物可呈適用於經口、非經腸、靜脈內、肌肉內、鞘內、皮下、局部、鼻內、支氣管內、舌下、經頰、經眼、經耳、經直腸、陰道內或經皮投與之任何形式。
適於經口投與之醫藥劑型包括錠劑(包衣或未包衣)、膠囊(硬殼或軟殼)、囊片、丸劑、口含錠、糖漿、溶液、粉劑、顆粒劑、酏劑及懸浮液、舌下錠劑、粉片或貼片，諸如經頰貼片。
該組合物可為錠劑組合物或膠囊組合物。錠劑組合物可含有單位劑量之活性化合物以及惰性稀釋劑或載劑，諸如糖或糖醇，例如乳糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇；及/或非糖衍生之稀釋劑，諸如碳酸鈉、磷酸鈣、碳酸鈣或纖維素或其衍生物，諸如微晶纖維素(MCC)、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素及澱粉，諸如玉米澱粉。錠劑亦可含有標準成分，諸如黏合劑及造粒劑(諸如聚乙烯吡咯啶酮)、崩解劑(例如可膨脹交聯聚合物，諸如交聯羧甲基纖維素)、潤滑劑(例如硬脂酸鹽)、防腐劑(例如對羥苯甲酸酯)、抗氧化劑(例如BHT)、緩衝劑(例如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝劑)及發泡劑(諸如檸檬酸鹽/碳酸氫鹽混合物)。此類賦形劑為眾所周知的且無需在此處詳細論述。
錠劑可經設計以在與胃液接觸時釋放藥物(立即釋放錠劑)或在較長時間段內或在胃腸道之特定區域以受控方式釋放(控制釋放錠劑)。
醫藥組合物通常包含大致1% (w/w)至大致95% (w/w)之活性成分及99% (w/w)至5% (w/w)之醫藥學上可接受之賦形劑(例如，如上文所定義)或此類賦形劑之組合。較佳地，組合物包含大致20% (w/w)至大致90% (w/w)之活性成分及80% (w/w)至10% (w/w)之醫藥學賦形劑或賦形劑之組合。醫藥組合物包含大致1% (w/w)至大致95%(w/w)，較佳大致20% (w/w)至大致90% (w/w)之活性成分。根據本發明之醫藥組合物可例如呈單位劑型，諸如呈安瓿、小瓶、栓劑、預填充注射器、糖衣藥丸、散劑、錠劑或膠囊形式。
錠劑及膠囊可含有例如0-20% (w/w)之崩解劑、0-5% (w/w)之潤滑劑、0-5% (w/w)之助流劑及/或0-99% (w/w)之填充劑/或增積劑(視藥物劑量而定)。其亦可含有0-10% (w/w)之聚合物黏合劑、0-5% (w/w)之抗氧化劑、0-5% (w/w)之顏料。此外，釋放錠劑將通常含有0至 99% (w/w)之釋放控制(例如延遲)聚合物(視劑量而定)。錠劑或膠囊之膜包衣通常含有0-10% (w/w)之聚合物、0-3% (w/w)之顏料及/或0-2% (w/w)之塑化劑。
組合物可為非經腸組合物。非經腸調配物可含有0-20% (w/w)之緩衝劑、0-50% (w/w)之共溶劑及/或0-99% (w/w)之注射用水(WFI) (視劑量及是否冷凍乾燥而定)。用於肌肉內儲槽之調配物亦可含有0-99% (w/w)之油。
組合物可呈適於鼻內或支氣管內投與之形式。此類組合物應適合霧化，其允許經由口腔吸入且有助於經由鼻道內之薄黏膜吸收。
許多經口投與之藥物亦可以栓劑形式經直腸投與。組合物可呈適合直腸投與之形式。在此形式中，組合物可包含插入直腸後會溶解或液化之蠟質物質。此類組合物可開具給因噁心、無法吞咽或對飲食有限制而無法口服藥物的人，如許多外科手術前後的情況。
醫藥調配物可以在單個包裝(通常泡殼包裝)中含有整個療程之「患者包裝」的形式提供給患者。
式(1)化合物通常以單位劑型呈現，且因此通常含有足夠化合物以提供所需水準之生物活性。舉例而言，調配物可含有1奈克至2公克之活性成分，例如1奈克至2毫克之活性成分。在此等範圍內，化合物之特定子範圍為0.1毫克至2公克之活性成分(更通常10毫克至1公克，例如50毫克至500毫克)，或1微克至20毫克(例如1微克至10毫克，例如0.1毫克至2毫克之活性成分)。
對於口服組合物，單位劑型可含有1毫克至2公克，更通常10毫克至1公克，例如50毫克至1公克，例如100毫克至1公克之活性化合物。
在一些實施例中，醫藥組合物包含化合物A游離酸或化合物A緩血酸胺鹽之結晶形式。在一些實施例中，醫藥組合物包含化合物A游離酸之結晶形式。在一些實施例中，醫藥組合物包含化合物A緩血酸胺鹽之結晶形式。
在一些實施例中，醫藥組合物包含化合物A緩血酸胺鹽水合物I。在一些實施例中，醫藥組合物包含化合物A緩血酸胺鹽水合物II。在一些實施例中，醫藥組合物包含化合物A緩血酸胺鹽水合物I及化合物A緩血酸胺鹽水合物I。
活性化合物將以足以達成所期望的治療效果之量(有效量)投與有需要之患者(例如人類或動物患者)。化合物之精確投與量可由負責醫師根據標準程序確定。
式 ( 1 ) 化合物之製備方法式(1)化合物可根據如本文所述之合成方法製備，其中一些將為熟習此項技術者已知的。本發明提供一種用於製備如上文式(1)所定義之化合物的方法。
式(1)化合物可如以下方案1中所述製備。
Figure 02_image067
方案1
因此，通常在疊氮化鈉及氯化銨或氯化鋅存在下，在諸如DMF、DMSO或2-丙醇之溶劑中且加熱至110-130℃範圍內之溫度，將市售或自市售材料容易獲得之式(2)之經取代之胺基芳族腈轉化為式(3)之四唑中間物。或者，式(3)之四唑可自市售或自市售材料容易獲得之式(5)之經取代之3-硝基苯甲腈獲得。如上進行腈官能基之轉化，得到相應的式(6)之四唑，且隨後通常在氯化銨存在下，在1,4-二㗁烷及水中，在加熱至回流的同時，藉由鋅粉實現硝基之還原。式(3)化合物之苯胺基團隨後藉由在鹼(通常為三乙胺)存在下，在諸如EtOH或DCM之溶劑中與方酸二乙酯反應而官能化。隨後水解式(4)之方酸酯之酯官能基，通常在HCl水溶液及THF之混合物中在溫和的溫度(通常為60℃)下進行，得到式(1)之實例。或者，式(3)之經取代之苯胺可藉由用方酸處理直接轉化為式(1)之實例，條件通常包含回流之水。
或者，式(1)化合物可如以下方案2中所述製備。式(8)之芳基溴中間物可如方案1中所述由式(7)之胺基苯胺製備。隨後在式(8)之芳基溴與適合的
Figure 111115160-A0304-1
酸(boronic acid)或
Figure 111115160-A0304-1
酸酯偶合搭配物(R＝H或烷基)之間進行鈴木反應(Suzuki reaction)，得到式(1)之實例。鈴木反應通常在微波照射下，在鹼諸如K 2CO 3及催化性鈀源諸如[1,1'-雙(二-三級丁基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)存在下，在適合的溶劑系統(通常為MeCN及H 2O之組合)中進行。
Figure 02_image069
方案2
方案3顯示製備式(1)化合物之變化形式，其中R 2為視情況經-CONHCH 2R 4、-CONHCH 2CH 2OR 4、-CONHR 4或-CON(CH 3)R 4取代之苯基。式(9)之聯芳基甲酸化合物容易自市售3-胺基-5-溴苯甲腈(7)獲得，且如方案1中所述轉化為相應的式(10)之四唑化合物。式(10)之中間化合物之苯胺基團隨後如方案1中所述官能化。式(11)化合物之甲酸基團隨後在適合的胺、偶合劑諸如1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸鹽、鹼諸如N,N-二異丙基乙胺及溶劑諸如DMF存在下轉化為醯胺。隨後水解式(12)之環丁-3-烯-1,2-二酮之酯官能基，得到式(13)之實例(對應於式(1)，其中R 2為視情況經-CONHCH 2R 4、-CONHCH 2CH 2OR 4、-CONHR 4或-CON(CH 3)R 4取代之苯基)。
Figure 02_image071
方案3
在X為N且R 1為H之情形中，式(2b)化合物可如方案4中所述製備。因此，市售2,6-二氯異菸鹼腈(14)在諸如NMP之溶劑中在加熱至110-120℃範圍內之溫度時與(4-甲氧基苯基)甲胺進行S NAr反應。式(15)之中間物之腈官能基隨後如方案1中所述轉化為四唑基團。當R 2為烷氧基或苯氧基時，吡啶(16)之氯基在諸如K 2CO 3之鹼存在或不存在下，在諸如DMSO之溶劑中且在自室溫至120℃變化之溫度下藉由適合的醇或金屬醇鹽(例如NaOMe)置換，得到經烷氧基或苯氧基取代之化合物(17)。或者，當R 2為苯基時，式(16)之吡啶氯與適當苯基
Figure 111115160-A0304-1
酸或酯之間的鈴木反應得到中間物(17)。鈴木反應通常在諸如K 2CO 3之鹼及鈀催化源(通常為[1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯鈀(II))存在下，在諸如1,4-二㗁烷之溶劑中，在120℃之溫度下進行。熟習此項技術者應理解，如方案4中列出之步驟順序可以與所示不同之順序完成，而不影響所需式(2b)化合物之總體合成成功。隨後藉由在70℃下用酸(通常為TFA)處理實現對式(17)化合物之胺基官能基之去保護。隨後如方案1中所述實現式(18)中間物之轉化，得到式(2b)之實例。
Figure 02_image073
方案4
在上述某些反應中，可能需要保護一或多個基團，以防止反應在分子上不希望的位置發生。保護基之實例以及官能基保護及去保護之方法可見於Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 第五版, 編者：Peter G. M. Wuts, John Wiley, 2014, (ISBN:9781118057483)。
藉由前述方法製備之化合物可藉由熟習此項技術者熟知的多種方法中之任一者分離及純化，且此類方法之實例包括再結晶及層析技術，諸如管柱層析(例如急驟層析)、HPLC及SFC。
一般程序在不包括製備途徑之情況下，相關中間物為市售的。市售試劑不經進一步純化即使用。最終化合物及中間物使用ChemDraw Professional, Version 17.0.0.206 (121)命名。室溫(RT)係指大致20-27℃。在Bruker、Varian或Jeol儀器上以400或500 MHz記錄1H NMR光譜。化學位移值以相對於以下溶劑之百萬分率(ppm)，亦即(δ)值表示：氯仿- d= 7.26 ppm，DMSO- d6 = 2.50 ppm，甲醇- d4 = 3.31 ppm。以下縮寫用於NMR信號之多重性：s=單峰，br=寬峰，d=二重峰，t=三重峰，q=四重峰，m=多重峰。偶合常數以Hz為單位量測之J值列出。校正NMR及質譜分析結果以考慮背景峰。層析係指使用60-120目或40-633 μm，60Å矽膠進行且在氮氣壓力(急驟層析)條件下執行之管柱層析。微波介導之反應係在Biotage Initiator或CEM Discover微波反應器中進行。
LCMS 分析化合物之LCMS分析係在電噴霧條件下使用下面給出的儀器及方法進行：
LCMS 方法 A儀器：配備G1315A DAD、Micromass ZQ之HP 1100；管柱：Phenomenex Gemini-NX C-18，3微米，2.0 × 30 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.00/2、0.10/2、2.50/95、3.50/95；溶劑：溶劑A = 2.5 L H 2O + 2.5 mL 28%氨/H 2O溶液；溶劑B = 2.5 L MeCN + 135 mL H 2O + 2.5 mL 28%氨/H 2O溶液。注入體積1 µL；UV偵測230至400 nm；質量偵測130至800 AMU；管柱溫度45℃；流動速率1.5 mL/min。
LCMS 方法 B儀器：配備二極體陣列偵測器之Agilent 1260 Infinity LC、配備API-ES源之Agilent 6120B單四極桿MS；管柱：Phenomenex Gemini-NX C-18，3微米，2.0 × 30 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.00/5、2.00/95、2.50/95、2.60/5、3.00/5；溶劑：溶劑A = 2.5 L H 2O + 2.5 mL 28% NH 3/H 2O；溶劑B = 2.5 L MeCN + 129 mL H 2O + 2.7 mL (28% NH 3/H 2O)；注入體積0.5 µL；UV偵測190至400 nm；質量偵測130至800 AMU；管柱溫度40℃；流動速率1.5 mL/min。
LCMS 方法 C 及 D儀器：配備二極體陣列偵測器之Agilent 1260 Infinity LC、配備API-ES源之Agilent 6120B單四極桿MS；管柱：Restek, Penta Fluoro Phenyl Propyl，3微米，2.1 × 30 mm。梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]： 方法 C：0.00/5、2.00/95、2.50/95、2.60/5、3.00/5 或 方法 D：0.00/2、0.1/2、8.4/95、10/95、10.1/2、12/2；溶劑：溶劑A = 具有2.5 mL甲酸之水(2.5 L)；溶劑B = 具有125 mL水及2.5 mL甲酸之MeCN (2.5 L)。注入體積0.5 µL；UV偵測190至400 nm；質量偵測130至800 AMU；管柱溫度40℃；流動速率1.5 mL/min。
LCMS 方法 E儀器：Waters Acquity H級、光電二極體陣列、SQ偵測器；管柱：BEH C18，1.7微米，2.1 × 50 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.00/5、0.40/5、0.8/35、1.20/55、2.50/100、3.30/100、4.00/5；溶劑：溶劑A = 5 mM乙酸銨及含0.1%甲酸之H 2O；溶劑B = 含0.1%甲酸之MeCN；注入體積2 µL；UV偵測200至400 nm；質量偵測100至1200 AMU；管柱在環境溫度下；流動速率0.55 mL/min。
LCMS 方法 F儀器：配備DAD/ELSD之Agilent 1100系列、Agilent LC\MSD VL (G1956A)、SL (G1956B)質譜儀；管柱：Zorbax SB-C18，1.8微米，4.6 × 15 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.0/0、1.5/100、1.8/100、1.81/0；溶劑：溶劑A = 水及0.1%甲酸；溶劑B = MeCN及0.1%甲酸；注入體積1 µL；UV偵測200至400 nm；質量偵測80-1000 AMU；管柱在環境溫度下；流動速率3.0 mL/min。
LCMS 方法 G儀器：配備PDA偵測器996之Waters 2690、Acquity QDA質譜儀；管柱：X-BRIDGE C18，5.0微米，4.6 × 100 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.0/10、1.0/10、5.0/100、7.0/100、7.50/10、8.0/10；溶劑：溶劑A = 0.1%甲酸及10 mM碳酸氫銨水溶液；溶劑B =MeCN；注入體積1 µL；UV偵測190至800 nm；質量偵測30-1250 AMU；管柱溫度35℃；流動速率1.2 mL/min。
LCMS 方法 H儀器：配備光電二極體陣列之Waters Acquity H級、SQ偵測器質譜儀；管柱：BEH C18，1.7微米，2.1 × 50 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.0/5、0.4/5、0.8/35、1.2/55、2.5/100、3.3/100、3.31/5、4.0/5；溶劑：溶劑A = 0.1%甲酸及5 mM乙酸銨水溶液；溶劑B = 含0.1%甲酸之MeCN；注入體積1 µL；UV偵測200至400 nm；質量偵測100-1200 AMU；管柱在環境溫度下；流動速率0.55 mL/min。
LCMS 方法 I 及 J 方法 I之儀器：配備光電二極體陣列之Shimadzu Nexera、LCMS-2020質譜儀或 方法 J之儀器：配備光電二極體陣列之Agilent 1290 RRLC、Agilent 6120質譜儀；管柱：X-BRIDGE C18，3.5微米，4.6 × 50 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.0/5、5.0/90、5.8/95、7.20/95、7.21/5、10.0/5；溶劑：溶劑A = 0.1%氨水；溶劑B = 含0.1%氨之MeCN；注入體積1 µL；UV偵測200至400 nm；質量偵測60-1000 AMU；管柱在環境溫度下；流動速率1.0 mL/min。
LCMS 方法 K儀器：配備PDA偵測器996之Waters 2690、Acquity QDA質譜儀；管柱：X-BRIDGE C18，5.0微米，4.6 × 100 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.0/10、3.0/10、6.0/100、7.0/100、7.01/10、10.0/10；溶劑：溶劑A = 0.1%甲酸水溶液；溶劑B = MeOH；注入體積1 µL；UV偵測190至800 nm；質量偵測30-1250 AMU；管柱溫度35℃；流動速率1.0 mL/min。
LCMS 方法 L儀器：配備Shimadzu SPD-M20A PDA之Shimadzu LCMS-2010 EV、單四極桿質譜儀；管柱：Atlantis C18，3.0微米，4.6 × 50 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.0/30、3.0/90、6.0/90、6.1/30；溶劑：溶劑A = 0.1%甲酸水溶液；溶劑B = MeCN；注入體積1 µL；UV偵測254 nm；質量偵測80-800 AMU；管柱溫度40℃；流動速率0.8 mL/min。
LCMS 方法 M儀器：配備Shimadzu SPD-M20A PDA之Shimadzu LCMS-2010 EV、單四極桿質譜儀；管柱：Capcell pack C18，3.0微米，4.6 × 150 mm；梯度[時間(min)/溶劑A中之B (%)]：0.0/30、5.0/98、9.5/98、11.5/3、12/3；溶劑：溶劑A = 0.1%甲酸水溶液；溶劑B = MeCN；注入體積1 µL；UV偵測254 nm；質量偵測80-800 AMU；管柱溫度40℃；流動速率0.8 mL/min。
縮寫Bn = 苯甲基 CDI = 羰基二咪唑 DCM = 二氯甲烷 DIPEA = N,N-二異丙基乙胺 DMF = 二甲基甲醯胺 DMSO = 二甲亞碸 ESI = 電噴霧電離 EtOAc = 乙酸乙酯 EtOH = 乙醇 h = 小時 HATU = (1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸鹽 H 2O = 水 HCl = 氯化氫、鹽酸 (prep) HPLC = (製備型)高效液相層析 IPA = 丙-2-醇 K 2CO 3= 碳酸鉀 LC = 液相層析 MeCN = 乙腈 MeOH = 甲醇 min(s) = 分鐘 MS = 質譜 nm = 奈米 NMP = N-甲基-2-吡咯啶酮 NMR = 核磁共振 POCl 3= 氧氯化磷 RT = 室溫 sat. = 飽和 SFC = 超臨界流體層析 TEA = 三乙胺 TFA = 三氟乙酸 THF = 四氫呋喃 TLC = 薄層層析
中間物之一般合成程序 途徑 1 中間物 3 ， 5 - 胺基 -[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 3 - 甲腈之製備程序
Figure 02_image075
步驟 (i) ：將 中間物 1，3-胺基-5-溴苯甲腈(200 mg，1.02 mmol)、 中間物 2，苯基
Figure 111115160-A0304-1
酸(161 mg，1.32 mmol)、K 2CO 3(281 mg，2.03 mmol)及Pd(Ph 3P) 4(60 mg，0.05 mmol)於1,4-二㗁烷(4 mL)及水(1 mL)中之溶液在微波照射下加熱至100℃持續3小時，之後用EtOAc及水稀釋。分離有機物，用鹽水洗滌，經由通過疏水性玻璃料乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至45%)/PE之梯度下純化，得到呈橙色固體狀之 中間物 3，5-胺基-[1,1'-聯苯]-3-甲腈(165 mg，0.85 mmol，85%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 2 中間物 5 ， 3 '- 胺基 - 5 '-( 1H - 四唑 - 5 - 基 )-[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 3 - 甲酸 乙 酯 之製備程序
Figure 02_image077
步驟 (i) ：向 中間物 4，3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-3-甲酸乙酯(73 mg，0.27 mmol)於DMF (0.5 mL)中之溶液中添加NaN 3(36 mg，0.55 mmol)及NH 4Cl (30 mg，0.55 mmol)。將混合物加熱至130℃持續3小時，之後將其冷卻至室溫且用1 M HCl (水溶液)酸化至pH 3-4。藉由過濾收集沈澱物且真空乾燥，得到呈桃色固體狀之 中間物 5，3'-胺基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸乙酯(76 mg，0.25 mmol，91%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 3 中間物 12 ， N - 苯甲基 - 3 '-(( 2 - 乙氧基 - 3 , 4 - 二側氧基環丁 - 1 - 烯 - 1 - 基 ) 胺基 )- 5 '-( 1H - 四唑 - 5 - 基 )-[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 4 - 甲醯胺 之製備程序
Figure 02_image079
步驟 (i) ：將 中間物 7，3-溴-5-硝基苯甲腈(1.0 g，4.41 mmol)、 中間物 6，4-(N-苯甲基胺基羰基)苯基
Figure 111115160-A0304-1
酸(1.24 g，4.85 mmol)、K 2CO 3(1.22 g，8.81 mmol)及Pd(Ph 3P) 4(0.15 g，0.130 mmol)於1,4-二㗁烷(17 mL)及水(2 mL)中之混合物在微波照射下加熱至100℃持續1小時。此後，混合物用EtOAc稀釋，用水隨後鹽水洗滌，經由通過疏水性玻璃料乾燥且濃縮。粗物質用Et 2O濕磨，且藉由過濾收集所得固體，得到呈茶色固體狀之 中間物 8，N-苯甲基-3'-氰基-5'-硝基-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(1.12 g，3.13 mmol，71%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 8，N-苯甲基-4-(3-氰基-5-硝基-苯基)苯甲醯胺(1.03 g，2.87 mmol)、NaN 3(373 mg，5.74 mmol)及NH 4Cl (307 mg，5.74 mmol)於DMF (22 mL)中之混合物加熱至130℃持續2小時。將混合物冷卻至室溫且用1 M HCl (水溶液)酸化至pH 2。藉由過濾收集固體，懸浮於甲苯中且濃縮(×2)，得到呈茶色固體狀之 中間物 9，N-苯甲基-4-[3-硝基-5-(1H-四唑-5-基)苯基]苯甲醯胺(950 mg，2.37 mmol，83%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iii) ：將 中間物 9，N-苯甲基-4-[3-硝基-5-(1H-四唑-5-基)苯基]苯甲醯胺(630 mg，1.57 mmol)、鋅粉(412 mg，6.29 mmol)及NH 4Cl (842 mg，15.7 mmol)於1,4-二㗁烷(44 mL)及水(6.3 mL)中之混合物加熱至回流持續4小時。將混合物冷卻至室溫且經由矽藻土床過濾(用MeOH洗滌)。濃縮濾液且將殘餘物溶解於1 M HCl (水溶液) (20 mL)中。藉由添加1 M NaOH (水溶液)將pH值調整至約6。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌，隨後懸浮於甲苯中且濃縮，得到呈茶色固體狀之 中間物 10，4-[3-胺基-5-(1H-四唑-5-基)苯基]-N-苯甲基-苯甲醯胺(575 mg，1.55 mmol，99%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iv) ：將 中間物 10，4-[3-胺基-5-(1H-四唑-5-基)苯基]-N-苯甲基-苯甲醯胺(575 mg，1.55 mmol)、 中間物 11，方酸二乙酯(423 mg，2.48 mmol)及TEA (0.44 mL，3.1 mmol)於EtOH中之懸浮液在室溫下攪拌24小時，之後添加1 M HCl (水溶液)。藉由過濾收集沈澱物，懸浮於甲苯中且濃縮，得到呈茶色固體狀之 中間物 12，N-苯甲基-3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(635 mg，1.28 mmol，83%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 4 中間物 15 ， 3 '- 胺基 - 5 '- 氰基 - N -( 2 - 甲氧基乙基 )-[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 4 - 甲醯胺 之製備程序
Figure 02_image081
步驟 (i) ：向 中間物 13，3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-4-甲酸(400 mg，1.68 mmol)、 中間物 14，2-甲氧基乙-1-胺(0.3 mL，3.36 mmol)及DIPEA (0.88 mL，5.04 mmol)於DMF (4.8 mL)中之溶液中添加HATU (768 mg，2.02 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時，之後用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經由通過疏水性玻璃料乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(逆相，C18)在MeCN (10%至50%)/水(含有0.1% v/v HCOOH)之梯度下純化，得到呈茶色固體狀之 中間物 15，3'-胺基-5'-氰基-N-(2-甲氧基乙基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(317 mg，1.07 mmol，64%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 5 中間物 17 ， 4 - 氯 - 3 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 苯胺之製備程序
Figure 02_image083
步驟 (i) ：將 中間物 16，5-胺基-2-氯苯甲腈(400 mg，2.63 mmol)、NaN 3(342 mg，5.26 mmol)、NH 4Cl (281 mg，5.88 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液加熱至130℃持續3天。冷卻混合物，且經由過濾移除不溶物質，用MeCN洗滌。減壓濃縮溶液，將殘餘物溶解於EtOAc中且用水洗滌。乾燥有機層且蒸發溶劑。殘餘物自DCM中結晶，得到 中間物 17，4-氯-3-(1H-四唑-5-基)苯胺。資料可在表2中獲得。
途徑 6 中間物 21 ， 3 - 環丙基 - 5 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 苯胺之製備程序
Figure 02_image085
步驟 (i) ：將 中間物 7，3-溴-5-硝基苯甲腈(3.00 g，13.3 mmol)、 中間物 18，(2-環丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦) (3.34 g，19.9 mmol)及K 2CO 3(3.68 g，26.62 mmol)在室溫下懸浮於1,4-二㗁烷(22 mL)及水(8 mL)中，且用N 2脫氣15分鐘。此後，添加PdCl 2(dppf) (0.97 g，1.32 mmol)，且將混合物加熱至100℃持續4小時。將混合物冷卻且分配於水(300 mL)與EtOAc (200 mL)之間。分離有機層，且水層用EtOAc (2 × 100 mL)進一步萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至5%)/PE之梯度下純化，得到呈黃色固體狀之 中間物 19，3-環丙基-5-硝基苯甲腈(1.30 g，6.91 mmol，52%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 19，3-環丙基-5-硝基苯甲腈(1.30 g，6.91 mmol)溶解於MeOH (7 mL)中，且添加NH 4Cl (2.01 g，37.2 mmol)及鋅粉(2.43 g，37.22 mmol)於水(7 mL)中之懸浮液。將反應物在室溫下攪拌30分鐘，之後經由矽藻土過濾。濃縮濾液，且將殘餘物分配於飽和NaHCO 3水溶液與EtOAc之間。分離有機層，且水層用EtOAc (×2)進一步萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至30%)/PE之梯度下純化，得到呈黃色液體狀之 中間物 20，3-胺基-5-環丙基苯甲腈(1.01 g，6.39 mmol，93%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iii) ：將 中間物 20，3-胺基-5-環丙基苯甲腈(1.01 g，6.39 mmol)、NaN 3(2.07 g，31.9 mmol)及ZnCl 2(4.35 g，31.9 mmol)於2-丙醇中之懸浮液加熱至130℃持續16小時。冷卻混合物，經由矽藻土過濾且濃縮濾液。將殘餘物分配於水與EtOAc之間。分離有機層，且水層用EtOAc (×2)進一步萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(逆相，C18)在0.1 N HCOOH水溶液(0%至30%)/MeCN之梯度下純化，得到 中間物 21，3-環丙基-5-(1H-四唑-5-基)苯胺(800 mg，3.98 mmol，62%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 7 中間物 23 ， 3 - 胺基 - 5 - 環己基苯甲腈之製備程序
Figure 02_image087
步驟 (i) ：將 中間物 22，5-硝基-2', 3', 4', 5'-四氫-[1,1'-聯苯]-3-甲腈(3.00 g，13.2 mmol)及10% Pd/C 50%濕度(3.00 g)於MeOH (30 mL)中之溶液在H 2氣體氛圍下在室溫下攪拌5小時。此後，混合物經由矽藻土過濾且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至25%)/DCM之梯度下純化，得到呈黃色液體狀之 中間物 23，3-胺基-5-環己基苯甲腈(1.20 g，6.0 mmol，45%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 8 中間物 25 ， 3 - 硝基 - 5 -( 嗒 𠯤 - 4 - 基 ) 苯甲腈之製備程序
Figure 02_image089
步驟 (i) ： 中間物 7，3-溴-5-硝基苯甲腈(0.35 g，1.55 mmol)、 中間物 24，4-(三丁基錫烷基)嗒𠯤(0.57 g，1.55 mmol)及CsF (0.47 g，3.10 mmol)於MeCN中之懸浮液用N 2脫氣15分鐘，之後添加Pd(Ph 3P 4) (0.09 g，0.80 mmol)及碘化銅(I) (0.06 g，0.31 mmol)。將混合物加熱至40℃持續4小時，之後將其冷卻且分配於EtOAc與水之間。分離有機物，且用EtOAc萃取水層。合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至40%)/己烷之梯度下純化，得到呈黃色固體狀之 中間物 25，3-硝基-5-(嗒𠯤-4-基)苯甲腈(0.25 g，1.10 mmol，71%)。資料可在表2中獲得。
途徑 9 中間物 29 ， 3 '-(( 2 - 乙氧基 - 3 , 4 - 二側氧基環丁 - 1 - 烯 - 1 - 基 ) 胺基 )- 5 '-( 1H - 四唑 - 5 - 基 )-[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 4 - 甲酸 之製備程序
Figure 02_image091
步驟 (i) ：將 中間物 1，3-胺基-5-溴苯甲腈(20.0 g，101.5 mmol)、 中間物 26，(4-(乙氧基羰基)苯基)
Figure 111115160-A0304-1
酸(23.6 g，121.8 mmol)、K 2CO 3(28.0 g，203 mmol)及Pd(Ph 3P) 4(2.34 g，2.03 mmol)於1,4-二㗁烷(200 mL)及水(30 mL)中之溶液加熱至90℃持續16小時，之後將其冷卻且分配於EtOAc與水之間。分離有機物，用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗產物藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至16%)/己烷之梯度下純化，得到呈灰白色固體狀之 中間物 27，3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-4-甲酸乙酯(23.0 g，86.5 mmol，85%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：向 中間物 27，3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-4-甲酸乙酯(23.0 g，86.5 mmol)於THF (130 mL)及水(130 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰單水合物(6.22 g，259.3 mmol)。將混合物在室溫下攪拌6小時，之後將其濃縮至乾。添加1 N HCl (水溶液)且藉由過濾收集所得沈澱物。真空乾燥固體，得到呈灰白色固體狀之 中間物 13，3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-4-甲酸(17.0 g，71.4 mmol，83%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iii) ：將 中間物 13，3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-4-甲酸(16.0 g，67.2 mmol)、NaN 3(8.74 g，134.4 mmol)及NH 4Cl (7.19 g，134.4 mmol)於DMF (80 mL)中之溶液加熱至130℃持續16小時，之後將其冷卻且藉由添加1 N HCl (水溶液)酸化至pH 3。藉由過濾收集所得沈澱物且真空乾燥，得到呈灰白色固體狀之 中間物 28，3'-胺基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲酸(13.0 g，46.3 mmol，69%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iv) ：向 中間物 28，3'-胺基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲酸(12.5 g，44.4 mmol)於EtOH (120 mL)中之溶液中添加TEA (12.4 mL，88.9 mmol)及 中間物 11，方酸二乙酯(7.50 g，44.4 mmol)。將混合物在室溫下攪拌16小時，之後用1 N HCl (水溶液)酸化。藉由過濾收集所得沈澱物且真空乾燥，得到呈棕色固體狀之 中間物 29，3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲酸(15.0 g，37.0 mmol，83%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 10 中間物 31 ， 3 -(( 3 - 溴 - 5 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 苯基 ) 胺基 )- 4 - 乙氧基環丁 - 3 - 烯 - 1 , 2 - 二酮 之製備程序
Figure 02_image093
步驟 (i) ：向 中間物 1，3-胺基-5-溴苯甲腈(26.0 g，132 mmol)於2-丙醇(500 mL)中之懸浮液中添加NaN 3(43.1 g，663.3 mmol)及ZnCl 2(90.4 g，663.3 mmol)。將混合物在130℃下攪拌4小時，之後經由矽藻土過濾。濃縮濾液，且將殘餘物分配於EtOAc與飽和NaHCO 3水溶液之間。分離有機層，水層用EtOAc (×3)進一步萃取且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮，得到呈黃色固體狀之 中間物 30，3-溴-5-(1H-四唑-5-基)苯胺(26.8 g，112.2 mmol，85%產率)，其不經進一步純化即使用。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：向 中間物 30，3-溴-5-(1H-四唑-5-基)苯胺(10.0 g，27.5 mmol)於DCM (100 mL)中之溶液中添加TEA (11.7 mL，83.6 mmol)。將混合物攪拌10分鐘，之後添加 中間物 11，方酸二乙酯(6.18 mL，41.8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌4小時，之後減壓濃縮。粗產物藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在MeOH (0%至15%)/DCM之梯度下純化，得到呈灰白色固體狀之 中間物 31，3-((3-溴-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-乙氧基環丁-3-烯-1,2-二酮(3.80 g，10.4 mmol，38%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 11 中間物 35 ， ( 5 -( 4 , 4 , 5 , 5 - 四甲基 - 1 , 3 , 2 - 二氧硼㖦 - 2 - 基 )- 2 -(( 4 -( 三氟甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 吡啶 ) 之製備程序
Figure 02_image095
步驟 (i) ：在室溫下，向 中間物 33，[4-(三氟甲基)苯基]甲醇(3.00 g，17.0 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加K 2CO 3(3.53 g，20.2 mmol)。將混合物攪拌10分鐘，之後添加 中間物 32，5-溴-2-氟吡啶(2.99 g，17.0 mmol)。將混合物加熱至80℃持續2小時，之後將其冷卻且分配於EtOAc與水之間。水層用EtOAc進一步萃取，且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗產物藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至5%)/己烷之梯度下純化，得到呈灰白色固體狀之 中間物 34，(5-溴-2-((4-(三氟甲基)苯甲基)氧基)吡啶) (2.00 g，6.02 mmol，35%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 34，(5-溴-2-((4-(三氟甲基)苯甲基)氧基)吡啶) (1.20 g，3.61 mmol)、KOAc (1.06 g，10.9 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(2.76 g，10.9 mmol)及PdCl 2(dppf) (0.13 g，0.18 mmol)於1,4-二㗁烷(20 mL)中之溶液在氮氣下加熱至80℃持續4小時，之後將其冷卻且分配於EtOAc與水之間。水層用EtOAc進一步萃取，且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗產物藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至8%)/己烷之梯度下純化，得到呈白色半固體狀之 中間物 35，(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-2-((4-(三氟甲基)苯甲基)氧基)吡啶) (1.20 g，3.17 mmol，87%)。資料可在表2中獲得。
途徑 12 中間物 40 ， 2 - 苯甲基 - 5 -( 4 , 4 , 5 , 5 - 四甲基 - 1 , 3 , 2 - 二氧硼㖦 - 2 - 基 )- 2 H - 吲唑之製備程序
Figure 02_image097
步驟 (i) ：將 中間物 36，5-溴-2-硝基苯甲醛(3.00 g，13.1 mmol)及 中間物 37，苯甲胺(1.82 g，17.0 mmol)於甲苯(30 mL)中之混合物加熱至80℃持續4小時。將反應物冷卻至室溫且濃縮，得到呈深棕色液體狀之粗 中間物 38， N-苯甲基-1-(5-溴-2-硝基苯基)甲亞胺(2.10 g)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 38， N-苯甲基-1-(5-溴-2-硝基苯基)甲亞胺(2.10 g，6.60 mmol)溶解於亞磷酸三乙酯(3.40 mL，19.8 mmol)中，且將混合物在微波照射下加熱至210℃持續5分鐘。將混合物分配於EtOAc與水之間，隨後分離。水層用EtOAc (×2)萃取且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥，隨後濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至20%)/己烷之梯度下純化，得到呈棕色膠狀之 中間物 39，2-苯甲基-5-溴-2 H-吲唑(1.30 g，4.54 mmol，經2個步驟35%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iii) ：在氮氣氛圍下，將中間物39，2-苯甲基-5-溴-2 H-吲唑(1.30 g，4.54 mmol)、KOAc (1.34 g，13.6 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(3.46 g，13.6 mmol)及PdCl 2(dppf) (0.17 g，0.22 mmol)溶解於1,4-二㗁烷(15 mL)中。將反應混合物在80℃下攪拌4小時，之後將其冷卻至室溫且分配於EtOAc與水之間。分離有機物，且水層用EtOAc進一步萃取。合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮，得到呈棕色膠狀之 中間物 40，2-苯甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-2 H-吲唑(1.0 g，2.99 mmol，66%產率)，其不經進一步純化即使用。資料可在表2中獲得。
途徑 13 中間物 44 ， 2 -( 4 -( 三氟甲基 ) 苯氧基 ) 乙 - 1 - 胺鹽酸鹽之製備程序
Figure 02_image099
步驟 (i) ：向 中間物 42，(2-溴乙基)胺基甲酸三級丁酯(876 mg，3.9 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加 中間物 41，4-(三氟甲基)苯酚(422 mg，2.6 mmol)及Cs 2CO 3(1.25 g，3.8 mmol)。將混合物加熱至90℃持續4小時，之後將其冷卻且倒入水中。混合物用EtOAc萃取，且有機物用鹽水洗滌，經由通過疏水性玻璃料乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至50%)/石油醚之梯度下純化，得到呈黃色油狀之 中間物 43，(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(793 mg，2.6 mmol，100%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：向 中間物 43，(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(793 mg，2.6 mmol)於1,4-二㗁烷(2 mL)中之溶液中添加4 M HCl於1,4-二㗁烷中之溶液(2 mL)。將混合物攪拌18小時，之後添加MeOH (1 mL)。將混合物再攪拌30分鐘且隨後濃縮，得到呈淡黃色固體狀之 中間物 44，2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙-1-胺鹽酸鹽(596 mg，2.5 mmol，95%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 14 中間物 48 ， 2 -( 2 -( 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 )- 5 - 溴吡啶之製備程序
Figure 02_image101
步驟 (i) ：向 中間物 45，3,5-雙(三氟甲基)苯酚(5.00 g，21.7 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液中添加K 2CO 3(8.99 g，65.2 mmol)。將混合物在室溫下攪拌20分鐘，之後添加 中間物 46，2-溴乙-1-醇(9.25 mL，130 mmol)。將混合物加熱至80℃持續4小時，之後將其冷卻且分配於EtOAc與水之間。水層用EtOAc進一步萃取，且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗產物藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至20%)/己烷之梯度下純化，得到呈油狀之 中間物 47，2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙-1-醇(3.90 g，14.2 mmol，66%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：在0℃下，向NaH (60%於礦物油中) (0.77 g，19.2 mmol)於DMF (25 mL)中之懸浮液中添加 中間物 47，2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙-1-醇(3.00 g，11.0 mmol)。混合物經15分鐘升溫至室溫，之後添加 中間物 32，5-溴-2-氟吡啶(2.30 g，13.1 mmol)。將反應物在室溫下攪拌1小時，之後將其分配於EtOAc與水之間。水層用EtOAc進一步萃取，且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗產物藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至12%)/己烷之梯度下純化，得到呈黃色半固體狀之 中間物 48，2-(2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)-5-溴吡啶(3.60 g，8.37 mmol，77%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 15 中間物 51 ， 2 -( 4 -( 三氟甲基 ) 苯氧基 ) 乙 - 1 - 醇之製備程序
Figure 02_image103
步驟 (i) ：在0℃下，向 中間物 41，4-(三氟甲基)苯酚(2.80 g，17.3 mmol)、 中間物 49，2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙-1-醇(4.00 g，22.5 mmol)及三苯基膦(5.89 g，22.5mmol)於甲苯(30 mL)中之溶液中逐滴添加DIAD (4.40 mL，22.5 mmol)。將混合物在室溫下攪拌16小時，之後將其分配於EtOAc與水之間。水層用EtOAc進一步萃取，且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至2%)/己烷之梯度下純化，得到呈黃色液體狀之 中間物 50，三級丁基二甲基(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)矽烷(3.40 g，10.6 mmol，61%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：在0℃下，向 中間物 50，三級丁基二甲基(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)矽烷(3.40 g，10.6 mmol)於THF (30 mL)中之溶液中添加1 N HCl (水溶液) (30 mL)。將混合物在室溫下攪拌1小時，之後將其分配於飽和NaHCO 3水溶液與EtOAc之間。分離有機物，經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至30%)/己烷之梯度下純化，得到呈黃色液體狀之 中間物 51，2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙-1-醇(2.50 g，12.1 mmol，假定定量)。資料可在表2中獲得。
途徑 16 中間物 54 ， ( 4 -(( 4 - 胺甲醯基苯甲基 ) 胺甲醯基 ) 苯基 )
Figure 111115160-A0304-1
酸之製備程序
Figure 02_image105
步驟 (i) ：在冰冷卻下，向 中間物 52，4-羧基苯硼酸(795 mg，4.79 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加HATU (2.27 g，5.99 mmol)。將混合物在相同溫度下攪拌10分鐘，之後依序添加 中間物 53，4-(胺基甲基)苯甲醯胺(600 mg，3.99 mmol)及DIPEA (2.02 mL，11.98 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌6小時，之後將其分配於EtOAc與水之間。分離有機物，且用EtOAc洗滌水層。合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮，得到呈黃色固體狀之 中間物 54，(4-((4-胺甲醯基苯甲基)胺甲醯基)苯基)
Figure 111115160-A0304-1
酸(0.350 g，1.17 mmol，29%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 17 中間物 60 ， N -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 6 - 苯氧基 - 4 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 吡啶 - 2 - 胺之製備程序
Figure 02_image107
步驟 (i) ：向 中間物 56，苯酚(1.31 g，14.0 mmol)於DMSO (40 mL)中之溶液中添加K 2CO 3(2.4 g，17.4 mmol)。將混合物在室溫下攪拌30分鐘，之後添加 中間物 55，2,6-二氯異菸鹼腈(2.0 g，11.6 mmol)。將混合物在室溫下攪拌24小時，之後將其倒入水中且用EtOAc (×3)萃取。合併之有機物用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至20%)/石油醚之梯度下純化，得到呈黃色液體狀之 中間物 57，2-氯-6-苯氧基異菸鹼腈(2.5 g，10.9 mmol，94%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 57，2-氯-6-苯氧基異菸鹼腈(2.5 g，10.8 mmol)及 中間物 58，4-甲氧基苯甲基胺(1.63 g，11.9 mmol)於NMP (26 mL)中之溶液加熱至120℃持續3小時，之後將混合物冷卻且倒入水中。過濾沈澱物，且粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (10%至50%)/石油醚之梯度下純化，得到呈灰白色固體狀之 中間物 59，2-((4-甲氧基苯甲基)胺基)-6-苯氧基異菸鹼腈(1.7 g，5.1 mmol，47%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iii) ：將 中間物 59，2-((4-甲氧基苯甲基)胺基)-6-苯氧基異菸鹼腈(1.7 g，5.13 mmol)、NaN 3(1.33 g，20.5 mmol)及NH 4Cl (1.1 g，20.5 mmol)於DMF (9.2 mL)中之溶液加熱至130℃持續2小時。將混合物冷卻且倒入水中。使用1 N HCl (水溶液)將水性混合物酸化至pH 1且攪拌30分鐘，之後用EtOAc (×3)萃取。合併之有機物用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在MeOH (0%至5%)/DCM之梯度下純化，得到呈棕色膠狀之 中間物 60，N-(4-甲氧基苯甲基)-6-苯氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(1.6 g，4.27 mmol，83%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 18 中間物 61 ， 6 - 苯氧基 - 4 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 吡啶 - 2 - 胺之製備程序
Figure 02_image109
步驟 (iv) ：將 中間物 60，N-(4-甲氧基苯甲基)-6-苯氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(1.6 g，4.27 mmol)於TFA (16 mL)中之溶液在密封管中加熱至70℃持續24小時，之後冷卻混合物且濃縮至乾。用DCM濕磨粗物質，得到呈棕色固體狀之 中間物 61，6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(0.75 g，3.91 mmol，93%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 19 中間物 63 ， 6 - 氯 - N -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 4 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 吡啶 - 2 - 胺之製備程序
Figure 02_image111
步驟 (i) ：將 中間物 55，2,6-二氯異菸鹼腈(4.5 g，26.2 mmol)及 中間物 58，4-甲氧基苯甲基胺(3.6 g，26.2 mmol)於NMP (45 mL)中之溶液加熱至110℃持續3小時。將混合物冷卻且倒入冰冷水(500 mL)中。過濾所得沈澱物，用水洗滌且真空乾燥，得到呈灰白色固體狀之 中間物 62，2-氯-6-((4-甲氧基苯甲基)胺基)異菸鹼腈(3.6 g，13.2 mmol，50%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 62，2-氯-6-((4-甲氧基苯甲基)胺基)異菸鹼腈(1.36 g，5 mmol)、NaN 3(650 mg，10 mmol)及NH 4Cl (535 mg，10 mmol)於DMF (9 mL)中之溶液加熱至130℃持續2小時。將混合物冷卻且倒入水中。使用1 N HCl (水溶液)將水性混合物酸化至pH 1，且過濾所得沈澱物，用水洗滌且真空乾燥，得到呈灰白色固體狀之 中間物 63，6-氯-N-(4-甲氧基苯甲基)-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(960 mg，3.04 mmol，61%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 20 中間物 64 ， 6 - 甲氧基 - N -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 4 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 吡啶 - 2 - 胺之製備程序
Figure 02_image113
步驟 (i) ：向 中間物 63，6-氯-N-(4-甲氧基苯甲基)-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(1.0 g，3.16 mmol)於DMSO (6.3 mL)中之溶液中添加NaOMe (30重量%於MeOH中，1.14 mL，6.33 mmol)。將混合物加熱至120℃持續20小時，之後將其冷卻且倒入水中。水性混合物用1 N HCl (水溶液)酸化至pH 1，且收集所得沈澱物。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在MeOH (0%至10%)/氯仿之梯度下純化，得到呈灰白色固體狀之 中間物 64，6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯甲基)-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(700 mg，2.24 mmol，71%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 21 中間物 65 ， N -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 6 - 苯基 - 4 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 吡啶 - 2 - 胺之製備程序
Figure 02_image115
步驟 (i) ：將 中間物 63，6-氯-N-(4-甲氧基苯甲基)-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(1 g，3.15 mmol)、 中間物 2，苯基
Figure 111115160-A0304-1
酸(1.15 g，9.46 mmol)、K 2CO 3(1.3 g，9.46 mmol)及Pd(dppf)Cl 2.DCM (257 mg，0.32 mmol)於1,4-二㗁烷(10 mL)中之溶液加熱至120℃持續6小時，之後將混合物冷卻且倒入水中。水性混合物用1 N HCl (水溶液)酸化至pH 1，且收集所得沈澱物。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在MeOH (0%至8%)/氯仿之梯度下純化，得到呈灰白色固體狀之 中間物 65，N-(4-甲氧基苯甲基)-6-苯基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(810 mg，2.26 mmol，72%產率)。資料可在表2中獲得。
途徑 22 中間物 71 ， 3 - 乙氧基 - 4 -[ 3 - 乙基 - 5 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 苯胺基 ] 環丁 - 3 - 烯 - 1 , 2 - 二酮之製備程序
Figure 02_image117
步驟 (i) ：將 中間物 1，3-胺基-5-溴苯甲腈(1.0 g，5.08 mmol)、 中間物 66，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼㖦(1.29 mL，7.61 mmol)、K 2CO 3(1.40 g，10.2 mmol)及Pd(Ph 3P) 4(0.118 g，0.10 mmol)於1,4-二㗁烷(24 mL)及水(6 mL)中之溶液加熱至80℃持續18小時，之後將其冷卻至室溫且分配於EtOAc與水之間。分離有機物，用鹽水洗滌，經由通過疏水性玻璃料乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至25%)/異己烷之梯度下純化，得到呈橙色固體狀之 中間物 67，3-胺基-5-乙烯基苯甲腈(695 mg，4.82 mmol，95%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：向 中間物 67，3-胺基-5-乙烯基苯甲腈(640 mg，4.44 mmol)及K 2CO 3(927 mg，6.7 mmol)於THF (37 mL)中之溶液中添加 中間物 68，氯甲酸苯甲酯(0.95 mL，6.7 mmol)。將混合物在室溫下攪拌18小時，之後將其分配於EtOAc與水之間。分離有機物，用鹽水洗滌，經由通過疏水性玻璃料乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在Et 2O (0%至60%)/異己烷之梯度下純化，得到呈灰白色固體狀之 中間物 69，(3-氰基-5-乙烯基苯基)胺基甲酸苯甲酯(944 mg，3.40 mmol，76%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iii) ：將 中間物 69，(3-氰基-5-乙烯基苯基)胺基甲酸苯甲酯(614 mg，2.2 mmol)、NaN 3(287 mg，4.4 mmol)及NH 4Cl (235 mg，4.4 mmol)於DMF (6 mL)中之溶液加熱至130℃持續2小時。此後，將混合物冷卻且分配於1 M HCl (水溶液)與EtOAc之間。分離有機物，用鹽水洗滌，經由通過疏水性玻璃料乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(逆相，C18)在MeCN (10%至60%)/水(0.1% v/v HCOOH)之梯度下純化，得到呈米色固體狀之 中間物 70，(3-(1H-四唑-5-基)-5-乙烯基苯基)胺基甲酸苯甲酯(355 mg，1.12 mmol，50%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iv) ：將 中間物 70，(3-(1H-四唑-5-基)-5-乙烯基苯基)胺基甲酸苯甲酯(270 mg，0.84 mmol)、TEA (0.12 mL，0.84 mmol)及10% Pd/C (60 mg)於MeOH (4 mL)中之混合物在氫氣氛圍下攪拌3.5小時。混合物經由矽藻土過濾(用EtOAc洗滌)且濃縮。將殘餘物溶解於EtOH (4 mL)中且添加 中間物 11，方酸二乙酯(0.12 mL，0.84 mmol)。此混合物在室溫下攪拌3小時，之後將其濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(逆相，C18)在MeCN (10%至80%)/水(0.1% v/v HCOOH)之梯度下純化，得到呈奶白色固體狀之 中間物 71，3-乙氧基-4-[3-乙基-5-(1H-四唑-5-基)苯胺基]環丁-3-烯-1,2-二酮(203 mg，0.65 mmol，77%產率)。資料可在表2中獲得。
實例之一般合成程序 途徑 A 實例 2 ， 3 -(( 3 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 )- 5 -( 三氟甲基 ) 苯基 ) 胺基 )- 4 - 羥基環丁 - 3 - 烯 - 1 , 2 - 二酮 之製備程序
Figure 02_image119
步驟 (i) ：向 中間物 72，3-胺基-5-(三氟甲基)苯甲腈(150 mg，0.81 mmol)於DMF (3mL)中之溶液中添加NaN 3(65 mg，1.62 mmol)及NH 4Cl (53.5 mg，1.62 mmol)。將混合物加熱至130℃持續20小時，之後將其冷卻至室溫且用1 M HCl (水溶液)酸化至pH 1。混合物用EtOAc萃取，且有機物用水及鹽水洗滌，經由通過疏水性玻璃料乾燥且濃縮。粗物質藉由逆相急驟層析(C18二氧化矽)在MeCN (0-50%)/改質水(含有0.1% v/v HCOOH)之梯度下純化，得到產物 中間物 73，3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯胺(144 mg，0.63 mmol，77%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：向 中間物 73，3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯胺(77 mg，0.34 mmol)於EtOH (1.4 mL)中之溶液中添加 中間物 11，方酸二乙酯(0.05 mL，0.34 mmol)及TEA (0.05 mL，0.38 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時，之後將其濃縮至乾。粗物質藉由逆相急驟層析(C18二氧化矽)在MeCN (0-60%)/改質水(0.1% v/v HCOOH)之梯度下純化，得到產物 中間物 74，3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯基)胺基)-4-乙氧基環丁-3-烯-1,2-二酮(51.6 mg，0.15 mmol，44%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iii) ：將 中間物 74，3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯基)胺基)-4-乙氧基環丁-3-烯-1,2-二酮(39 mg，0.11 mmol)溶解於THF及1 M HCl (水溶液)之10:1混合物(0.55 mL)中且加熱至60℃持續3小時，之後將其濃縮。粗物質藉由製備型HPLC [逆相(Kinetex C18，100 × 30 mm，5 µm，30 mL/min，溶劑A中溶劑B之梯度：5%至95%溶劑B (經10分鐘)，100%溶劑B (持續2分鐘)；溶劑A：0.1% TFA水溶液；溶劑B：MeCN]純化，得到 實例 2，3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮(15.3 mg，0.047 mmol，43%產率)。資料可在表3中獲得。
途徑 B 實例 5 ， N - 苯甲基 - 3 '-(( 2 - 羥基 - 3 , 4 - 二側氧基環丁 - 1 - 烯 - 1 - 基 ) 胺基 )- 5 '-( 1H - 四唑 - 5 - 基 )-[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 4 - 甲醯胺 之製備程序
Figure 02_image121
步驟 (i) ：將 中間物 12，N-苯甲基-3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(1.43 g，2.89 mmol)於THF (15 mL)及1 M HCl (水溶液) (1.5 mL)中之懸浮液加熱至60℃持續24小時，之後濃縮混合物。粗物質藉由製備型HPLC [逆相(Gemini-NX C18，100 × 30 mm，5 µm，30 mL/min，溶劑A中溶劑B之梯度：5%至35%溶劑B (經10分鐘)，100%溶劑B (持續2分鐘)；溶劑A：含有0.2% v/v 28%氨溶液之水；溶劑B：MeCN]純化。將所得固體懸浮於1 M HCl (水溶液)中且劇烈攪拌2小時，之後藉由過濾收集。將濕固體懸浮於甲苯中且濃縮，得到呈淡綠色固體狀之 實例 5，N-苯甲基-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(720 mg，1.55 mmol，53%產率)。資料可在表3中獲得。
途徑 C 實例 8 ， 3 '-(( 2 - 羥基 - 3 , 4 - 二側氧基環丁 - 1 - 烯 - 1 - 基 ) 胺基 )- N -( 4 -( 2 - 甲氧基乙氧基 ) 苯甲基 )- 5 '-( 1H - 四唑 - 5 - 基 )-[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 4 - 甲醯胺 之製備程序
Figure 02_image123
步驟 (i) ：向 中間物 29，3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲酸(60 mg，0.15 mmol)及DIPEA (0.08 mL)於DMF (0.7 mL)中之溶液中添加HATU (68.4 mg，0.18 mmol)，接著添加 中間物 75，(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)甲胺(29.5 mg，0.17 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時，之後用DMSO稀釋且藉由製備型HPLC [逆相(Kinetex C18，100 × 30 mm，5 µm，30 mL/min，溶劑A中溶劑B之梯度：40%至70%溶劑B (經10分鐘)，100%溶劑B (持續2分鐘)；溶劑A：含有0.1% TFA之水；溶劑B：MeCN]純化，得到呈淺綠色固體狀之 中間物 76，3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(36.3 mg，0.064 mmol，43%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 76，3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(36.3 mg，0.064 mmol)於THF (1 mL)及1 M HCl (水溶液) (0.1 mL)中之懸浮液加熱至60℃持續13小時，之後將其濃縮至乾。粗物質藉由製備型HPLC [逆相(Kinetex C18，100 × 30 mm，5 µm，30 mL/min，溶劑A中溶劑B之梯度：40%至30%溶劑B (經10分鐘)，100%溶劑B (持續2分鐘)；溶劑A：含有0.1% TFA之水；溶劑B：MeCN]純化，得到呈淺綠色固體狀之 實例 8，3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(16 mg，0.03 mmol，46%產率)。資料可在表3中獲得。
途徑 D 實例 15 ， 3 -(( 5 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 )- 4 '-( 三氟甲基 )-[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 3 - 基 ) 胺基 )- 4 - 羥基環丁 - 3 - 烯 - 1 , 2 - 二酮 之製備程序
Figure 02_image125
步驟 (i) ： 中間物 31，3-((3-溴-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-乙氧基環丁-3-烯-1,2-二酮(0.50 g，1.37 mmol)、 中間物 77，4,4,5,5-四甲基-2-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3,2-二氧硼㖦(0.56 g，2.06 mmol)及K 2CO 3(0.38 g，2.75 mmol)於MeCN (5 mL)及水(5 mL)中之懸浮液用N 2脫氣15分鐘。添加PdCl 2(dtbpf) (0.089 g，0.13 mmol)，且將混合物在微波照射下加熱至100℃持續1小時。此後，減壓移除溶劑且藉由製備型HPLC [逆相(X-bridge C18，250 × 30 mm，5 µm，27 mL/min，溶劑A中溶劑B之梯度：10%至98%溶劑B (經59分鐘)，10%溶劑B (持續2分鐘)；溶劑A：10 mM NH 4HCO 3水溶液，溶劑B：MeCN]純化粗物質，得到呈棕色固體狀之 實例 15，3-((5-(1H-四唑-5-基)-4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮(0.35 g，0.87 mmol，64%產率)。資料可在表3中獲得。
途徑 E 實例 17 ， 3 - 羥基 - 4 -(( 6 - 甲氧基 - 4 -( 1H - 四唑 - 5 - 基 ) 吡啶 - 2 - 基 ) 胺基 ) 環丁 - 3 - 烯 - 1 , 2 - 二酮 之製備程序
Figure 02_image127
步驟 (i) ：向 中間物 78，6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺(510 mg，2.56 mmol)於EtOH (10 mL)中之冰冷懸浮液中添加TEA (1.00 mL，7.69 mmol)。將混合物在相同溫度下攪拌15分鐘，之後逐滴添加 中間物 11，方酸二乙酯(479 mg，2.82 mmol)，且將反應物在室溫下攪拌16小時。濃縮混合物，且將殘餘物分配於EtOAc與水之間。移除有機物，且使用1 N HCl水溶液將水層酸化至pH 1-2且攪拌30分鐘。藉由過濾收集所得沈澱物，將其用冰冷水洗滌，隨後在高真空下乾燥，得到呈黃色固體狀之 中間物 79，3-乙氧基-4-((6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮(350 mg，1.11 mmol，43%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 79，3-乙氧基-4-((6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮(350 mg，1.11 mmol)於THF (5.5 mL)及1 N HCl水溶液(0.55 mL)中之懸浮液加熱至60℃持續24小時，之後將混合物濃縮至乾。殘餘物自EtOAc濕磨，得到呈黃色固體狀之 實例 17，3-羥基-4-((6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮(170 mg，0.59 mmol，53%產率)。資料可在表3中獲得。
途徑 F 實例 30 ， 3 '-(( 2 - 羥基 - 3 , 4 - 二側氧基環丁 - 1 - 烯 - 1 - 基 ) 胺基 )- N , N - 二甲基 - 5 '-( 1H - 四唑 - 5 - 基 )-[ 1 , 1 '- 聯苯 ]- 4 - 甲醯胺 之製備程序
Figure 02_image129
步驟 (i) ：將 中間物 1，3-胺基-5-溴苯甲腈(500 mg，2.53 mmol)、 中間物 80，(4-(二甲基胺甲醯基)苯基)
Figure 111115160-A0304-1
酸(587 mg，3.04 mmol)、K 2CO 3(700 mg，5.07 mmol)及Pd(Ph 3P) 4(59 mg，0.050 mmol)於1,4-二㗁烷(8 mL)及水(2 mL)中之溶液加熱至90℃持續16小時。將混合物冷卻且分配於EtOAc與水之間。分離有機物，且用EtOAc洗滌水層。合併之有機物經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗物質藉由急驟管柱層析(正相，二氧化矽)在EtOAc (0%至16%)/己烷之梯度下純化，得到呈棕色膠狀之 中間物 81，3'-胺基-5'-氰基-N,N-二甲基-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(210 mg，0.79 mmol，31%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (ii) ：將 中間物 81，3'-胺基-5'-氰基-N,N-二甲基-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(200 mg，0.754 mmol)、NaN 3(79.9 mg，1.50 mmol)及NH 4Cl (98 mg，1.50 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液加熱至130℃持續16小時。將混合物冷卻且用1 M HCl (水溶液)酸化至pH 1。藉由過濾收集所得沈澱物且藉由製備型HPLC [逆相(Sunfire C18，250 × 19 mm，5 µm，15 mL/min，溶劑A中溶劑B之梯度：8%至25%溶劑B (經22分鐘)，22至25%溶劑B (經5分鐘)，100%溶劑B (持續2分鐘)，100至8%溶劑B (經3分鐘)；溶劑A：0.1% HCOOH水溶液；溶劑B：MeCN]純化，得到呈白色固體狀之 中間物 82，3'-胺基-N,N-二甲基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(22 mg，0.071 mmol，9%產率)。資料可在表2中獲得。
步驟 (iii) ：將 中間物 82，3'-胺基-N,N-二甲基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(22 mg，0.071 mmol)及 中間物 83，方酸(8.1 mg，0.071 mmol)於水(1 mL)中之溶液在密封管中加熱至125℃持續6小時。冷卻混合物且藉由過濾收集固體，得到呈黃色固體狀之 實例 30，3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N,N-二甲基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺(10 mg，0.025 mmol，35%產率)。資料可在表3中獲得。 實例  本發明現將參照以下實例加以說明，但不限於此。
實例 1 至 31已製備下表1中所示之實例1至31之化合物。其NMR及LCMS特性以及用於製備其之方法列於表3。每個實例之起始物質列於表2。 表1 - 實例化合物
Figure 02_image131
Figure 02_image133
Figure 02_image135
Figure 02_image137
表2 - 中間物
表 2
中間物 途徑 名稱 資料
1    3-胺基-5-溴苯甲腈 市售， CAS: 49674-16-0
2    苯基
Figure 111115160-A0304-1
 市售， CAS: 98-80-6
3 途徑1 5-胺基-[1,1'-聯苯]-3-甲腈 (LC/MS 方法 A): m/z 193 [M-H] -(ES -)，在2.01 min，UV活性。
4 途徑9，步驟(i)，中間物1及84 3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-3-甲酸乙酯 (LC/MS 方法 B): m/z 267 [M+H] +(ES +)，在1.36 min，UV活性。
5 途徑2 3'-胺基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸乙酯 (LC/MS 方法 C): m/z 308 [M-H] -(ES -)，在1.17 min，UV活性。
6    4-(N-苯甲基胺基羰基)苯基
Figure 111115160-A0304-1
酸 		市售， CAS: 252663-47-1
7    3-溴-5-硝基苯甲腈 市售， CAS: 17601-94-4
8 途徑3 N-苯甲基-3'-氰基-5'-硝基-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 (LC/MS 方法 A): m/z 356 [M-H] -(ES -)，在2.26 min，UV活性。
9 途徑3 N-苯甲基-4-[3-硝基-5-(1H-四唑-5-基)苯基]苯甲醯胺 (LC/MS 方法 A): m/z 399 [M-H] -(ES -)，在1.50 min，UV活性。
10 途徑3 4-[3-胺基-5-(1H-四唑-5-基)苯基]-N-苯甲基-苯甲醯胺 (LC/MS 方法 A): m/z 369 [M-H] -(ES -)，在1.26 min，UV活性。
11    方酸二乙酯 市售， CAS: 5231-87-8
12 途徑3 N-苯甲基-3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 (LC/MS 方法 A): m/z 493 [M-H] -(ES -)，在1.43 min，UV活性。
13 途徑9 3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-4-甲酸 (LC/MS 方法 H): m/z 239 [M+H] +(ES +)，在1.60 min，UV活性。
14    2-甲氧基乙-1-胺 市售， CAS: 109-85-3
15 途徑4 3'-胺基-5'-氰基-N-(2-甲氧基乙基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 (LC/MS 方法 A): m/z 294 [M-H] -(ES -)，在1.74 min，UV活性。
16    5-胺基-2-氯苯甲腈 市售， CAS: 5922-60-1
17 途徑5 4-氯-3-(1H-四唑-5-基)苯胺 (LC/MS 方法 F): m/z 213 [M+NH 4] +(ES +)，在0.42 min，UV活性。
18    (2-環丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦) 市售， CAS: 126689-01-8
19 途徑6 3-環丙基-5-硝基苯甲腈 (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 0.88-0.95 (m, 2H), 1.07-1.16 (m, 2H), 2.16-2.26 (m, 1H), 7.99-8.02 (m, 1H), 8.24-8.26 (m, 1H), 8.46-8.48 (m, 1H).
20 途徑6 3-胺基-5-環丙基苯甲腈 (LC/MS 方法 G): m/z 159 [M+H] +(ES +)，在2.04 min，UV活性。
21 途徑6 3-環丙基-5-(1H-四唑-5-基)苯胺 (LC/MS 方法 G): m/z 202 [M+H] +(ES +)，在1.47 min，UV活性。
22 途徑6，步驟(i)，中間物7及85 5-硝基-2', 3', 4', 5'-四氫-[1,1'-聯苯]-3-甲腈 (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 1.56-1.65 (m, 2H), 1.69-1.78 (m, 2H), 2.19-2.28 (m, 2H), 2.37-2.46 (m, 2H), 6.51-6.58 (m, 1H), 8.33-8.36 (m, 1H), 8.39-8.42 (m, 1H), 8.56-8.59 (m, 1H)
23 途徑7 3-胺基-5-環己基苯甲腈 (LC/MS 方法 G): m/z 201 [M+H] +(ES +)，在2.59 min，UV活性。
24    4-(三丁基錫烷基)嗒𠯤 市售， CAS: 194865-89-9
25 途徑8 3-硝基-5-(嗒𠯤-4-基)苯甲腈 (LC/MS 方法 G): m/z 227 [M+H] +(ES +)，在1.66 min，UV活性。
26    (4-(乙氧基羰基)苯基)
Figure 111115160-A0304-1
酸 		市售， CAS: 4334-88-7
27 途徑9 3'-胺基-5'-氰基-[1,1'-聯苯]-4-甲酸乙酯 (LC/MS 方法 H): m/z 267 [M+H] +(ES +)，在2.07 min，UV活性。
28 途徑9 3'-胺基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲酸 (LC/MS 方法 H): m/z 282 [M+H] +(ES +)，在1.42 min，UV活性。
29 途徑9 3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲酸 (LC/MS 方法 I): m/z 406 [M+H] +(ES +)，在1.61 min，UV活性。
30 途徑10 3-溴-5-(1H-四唑-5-基)苯胺 (LC/MS 方法 K): m/z 242 [M+H] +(ES +)，在2.94 min，UV活性。
31 途徑10 3-((3-溴-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-乙氧基環丁-3-烯-1,2-二酮 (LC/MS 方法 K): m/z 381 [M+NH 4] +(ES +)，在3.89 min，UV活性。
32    5-溴-2-氟吡啶 市售， CAS: 766-11-0
33    [4-(三氟甲基)苯基]甲醇 市售， CAS: 349-95-1
34 途徑11 (5-溴-2-((4-(三氟甲基)苯甲基)氧基)吡啶) (LC/MS 方法 G): m/z 331 [M+H] +(ES +)，在2.98 min，UV活性。
35 途徑11 (5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-2-((4-(三氟甲基)苯甲基)氧基)吡啶) (LC/MS 方法 G): m/z 381 [M+H] +(ES +)，在3.15 min，UV活性。
36    5-溴-2-硝基苯甲醛 市售， CAS: 20357-20-4
37    苯甲胺 市售， CAS: 100-46-9
38 途徑12 N-苯甲基-1-(5-溴-2-硝基苯基)甲亞胺 (LC/MS 方法 K): m/z 320 [M+H] +(ES +)，在4.87 min，UV活性。
39 途徑12 2-苯甲基-5-溴-2 H-吲唑 (LC/MS 方法 G): m/z 288 [M+H] +(ES +)，在2.45 min，UV活性。
40 途徑12 2-苯甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-2 H-吲唑 (LC/MS 方法 G): m/z 335 [M+H] +(ES +)，在2.75 min，UV活性。
41    4-(三氟甲基)苯酚 市售， CAS: 402-45-9
42    (2-溴乙基)胺基甲酸三級丁酯 市售， CAS: 39684-80-5
43 途徑13 (2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙基)胺基甲酸三級丁酯 (LC/MS 方法 A): m/z 206 [M+H-Boc] +(ES +)，在2.42 min，UV活性
44 途徑13 2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙-1-胺鹽酸鹽 (LC/MS 方法 A): m/z 206 [M+H-Boc] +(ES +)，在1.92 min，UV活性
45    3,5-雙(三氟甲基)苯酚 市售， CAS: 349-58-6
46    2-溴乙-1-醇 市售， CAS: 540-51-2
47 途徑14 2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙-1-醇 (LC/MS 方法 G): m/z 275 [M+H] +(ES +)，在2.31 min，UV活性。
48 途徑14 2-(2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)-5-溴吡啶 (LC/MS 方法 G): m/z 431 [M+H] +(ES +)，在3.20 min，UV活性。
49    2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙-1-醇 市售， CAS: 102229-10-7
50 途徑15 三級丁基二甲基(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)矽烷 1H NMR(CDCl 3, 400 MHz): δ (ppm) 0.12 (s, 6H), 0.93 (s, 9H), 3.98 - 4.03 (m, 2H), 4.08 - 4.12 (m, 2H), 6.99 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.56 (d, J=8.2 Hz, 1H).
51 途徑15 2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙-1-醇 (LC/MS 方法 A): m/z 207 [M+H-Boc] +(ES +)，在2.09 min，UV活性
52    4-羧基苯硼酸 市售， CAS: 14047-29-1
53    4-(胺基甲基)苯甲醯胺 市售， CAS: 369-53-9
54 途徑16 (4-((4-胺甲醯基苯甲基)胺甲醯基)苯基)
Figure 111115160-A0304-1
酸 		(LC/MS 方法 H): m/z 299 [M+H] +(ES +)，在1.24 min，UV活性。
55    2,6-二氯異菸鹼腈 市售， CAS: 32710-65-9
56    苯酚 市售， CAS: 108-95-2
57 途徑17 2-氯-6-苯氧基異菸鹼腈 (LC/MS 方法 L): m/z 231 [M+H] +(ES +)，在3.61 min，UV活性。
58    4-甲氧基苯甲基胺 市售， CAS: 2393-23-9
59 途徑17 2-((4-甲氧基苯甲基)胺基)-6-苯氧基異菸鹼腈 (LC/MS 方法 L): m/z 332 [M+H] +(ES +)，在3.95 min，UV活性。
60 途徑17 N-(4-甲氧基苯甲基)-6-苯氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺 (LC/MS 方法 L): m/z 375 [M+H] +(ES +)，在3.35 min，UV活性。
61 途徑18 6-苯氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺 (LC/MS 方法 L): m/z 255 [M+H] +(ES +)，在2.08 min，UV活性。
62 途徑19 2-氯-6-((4-甲氧基苯甲基)胺基)異菸鹼腈 (LC/MS 方法 L): m/z 274 [M+H] +(ES +)，在3.65 min，UV活性。
63 途徑19 6-氯-N-(4-甲氧基苯甲基)-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺 (LC/MS 方法 L): m/z 317 [M+H] +(ES +)，在3.05 min，UV活性。
64 途徑20 6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯甲基)-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺 (LC/MS 方法 L): m/z 313 [M+H] +(ES +)，在2.80 min，UV活性。
65 途徑21 N-(4-甲氧基苯甲基)-6-苯基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺 (LC/MS 方法 L): m/z 359 [M+H] +(ES +)，在2.77 min，UV活性。
66    4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼㖦 市售， CAS: 75927-49-0
67 途徑22 3-胺基-5-乙烯基苯甲腈 (LC/MS 方法 A): m/z 143 [M-H] -(ES +)，在1.68 min，UV活性。
68    氯甲酸苯甲酯 市售， CAS: 501-53-1‎
69 途徑22 (3-氰基-5-乙烯基苯基)胺基甲酸苯甲酯 (LC/MS 方法 B): m/z 279 [M-H] -(ES +)，在1.50 min，UV活性
70 途徑22 (3-(1H-四唑-5-基)-5-乙烯基苯基)胺基甲酸苯甲酯 (LC/MS 方法 C): m/z 320 [M-H] -(ES +)，在1.29 min，UV活性。
71 途徑22 3-乙氧基-4-((3-乙基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮 (LC/MS 方法 C): m/z 312 [M-H] -(ES +)，在1.14 min，UV活性。
72    3-胺基-5-(三氟甲基)苯甲腈 市售， CAS: 49674-28-4
73 途徑A 3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯胺 (LC/MS 方法 C): m/z 227 [M-H] -(ES -)，在1.01 min，UV活性。
74 途徑A 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯基)胺基)-4-乙氧基環丁-3-烯-1,2-二酮 (LC/MS 方法 C): m/z 351 [M-H] -(ES -)，在1.28 min，UV活性。
75    (4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)甲胺 市售， CAS: 102196-20-3
76 途徑C 3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 (LC/MS 方法 C): m/z 567 [M-H] -(ES -)，在1.25 min，UV活性。
77    4,4,5,5-四甲基-2-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3,2-二氧硼㖦 市售， CAS: 214360-65-3
78 途徑18，中間物64 6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺 (LC/MS 方法 L): m/z 193 [M+H] +(ES +)，在1.01 min，UV活性。
79 途徑E 3-乙氧基-4-((6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮 (LC/MS 方法 L): m/z 317 [M+H] +(ES +)，在2.19 min，UV活性。
80    (4-(二甲基胺甲醯基)苯基)
Figure 111115160-A0304-1
酸 		市售， CAS: 405520-68-5
81 途徑F 3'-胺基-5'-氰基-N,N-二甲基-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 (LC/MS 方法 H): m/z 266 [M+H] +(ES +)，在1.43 min，UV活性。
82 途徑F 3'-胺基-N,N-二甲基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 (LC/MS 方法 H): m/z 309 [M+H] +(ES +)，在1.40 min，UV活性。
83    方酸 市售， CAS: 2892-51-5
84    3-乙氧羰基苯基
Figure 111115160-A0304-1
酸 		市售， CAS: 4334-87-6
85    2-(1-環己烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦 市售， CAS: 141091-37-4
86    5-(3-胺基苯基)四唑 市售， CAS: 73732-51-1
87 途徑9，中間物1及84 3'-((2-乙氧基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸 (LC/MS 方法 C): m/z 406 [M-H] -(ES -)，在1.08 min，UV活性。
88 途徑2，中間物15 3'-胺基-N-(2-甲氧基乙基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 (LC/MS 方法 A): m/z 337 [M-H] -(ES -)，在1.54 min，UV活性。
89    3-甲氧基苯基
Figure 111115160-A0304-1
酸 		市售， CAS: 10365-98-7
90    4-(三氟甲基)苯甲胺 市售， CAS: 3300-51-4
91 途徑5，中間物92 4-氟-3-(1H-四唑-5-基)苯胺 (LC/MS 方法 F): m/z與結構不一致，在0.69 min，UV活性。
92    5-胺基-2-氟苯甲腈 市售， CAS: 53312-81-5
93    2-(苯甲氧基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)吡啶 市售， CAS: 832735-54-3
94 途徑18，中間物65 6-苯基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-胺 (LC/MS 方法 L): m/z 239 [M+H] +(ES +)，在1.32 min，UV活性。
95 途徑12，中間物36及90 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-2-(4-(三氟甲基)苯甲基)-2H-吲唑 (LC/MS 方法 G): m/z 403 [M+H] +(ES +)，在2.83 min，UV活性。
96 途徑12，中間物36及44 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-2-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙基)-2H-吲唑 (LC/MS 方法 G): m/z 433 [M+H] +(ES +)，在2.94 min，UV活性。
97    5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1H-吲唑 市售， CAS: 862723-42-0
98 途徑11，步驟(ii)，中間物48 2-(2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)吡啶 (LC/MS 方法 G): m/z 478 [M+H] +(ES +)，在3.42 min，UV活性(
Figure 111115160-A0304-1
酸酯)；m/z 396 [M+H] +(ES +)，在2.54 min，UV活性(
Figure 111115160-A0304-1
酸)
99 途徑11，步驟(ii)，中間物100 (6-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)吡啶-3-基)
Figure 111115160-A0304-1
酸 		(LC/MS 方法 G): m/z 328 [M+H] +(ES +)，在2.32 min，UV活性。
100 途徑14，步驟(ii)，中間物32及51 5-溴-2-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)吡啶 (LC/MS 方法 G): m/z 363 [M+H] +(ES +)，在3.01 min，UV活性。
101 途徑6，步驟(iii)，中間物23 3-環己基-5-(1H-四唑-5-基)苯胺 (LC/MS 方法 G): m/z 244 [M+H] +(ES +)，在2.02 min，UV活性。
102 途徑6，步驟(ii)-(iii)，中間物25 3-(嗒𠯤-4-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯胺 (LC/MS 方法 G): m/z 240 [M+H] +(ES +)，在1.23 min，UV活性。
表3 - 實例化合物
表 3
實例編號 名稱 中間物 合成方法 1 H NMR LCMS 方法 LCMS 資料
1 3-((3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 86 及 11 途徑 A ，步驟 (ii)-(iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.50-7.54 (m, 1H), 7.59-7.61 (m, 1H), 7.66-7.69 (m, 1H), 8.09-8.10 (m, 1H), 10.49 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 255 (M-H) -(ES -) 在1.19 min，UV活性
2 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 72 途徑 A (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.85 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 10.54 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 324 (M-H) -(ES -) 在2.12 min，UV活性
3 3-((5-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 3 途徑 A (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.41-7.45 (m, 1H), 7.51-7.55 (m, 2H), 7.74-7.77 (m, 2H), 9.97-9.98 (m, 1H), 8.02-8.03 (m, 1H), 8.05-8.06 (m, 1H), 10.70 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 331 (M-H) -(ES -) 在2.41 min，UV活性
4 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸乙酯 5 及 11 途徑 A ，步驟 (ii)-(iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 1.35 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 4.37 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 7.67-7.71 (m, 1H), 7.95-7.96 (m, 1H), 8.00-8.05 (m, 2H), 8.11-8.12 (m, 1H), 8.14-8.15 (m, 1H), 8.32-8.33 (m, 1H), 10.51 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 404 (M-H) -(ES -) 在2.74 min，UV活性
5 N-苯甲基-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 12 途徑 B (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 4.51 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 7.20-7.27 (m, 1H), 7.30-7.36 (m, 4H), 7.87 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 8.02-8.07 (m, 3H), 8.07-8.12 (m, 2H), 9.14 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 10.74 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 465 (M-H) -(ES -) 在2.65 min，UV活性
6 N-苯甲基-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲醯胺 87 及 37 途徑 C (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 4.51 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 7.20-7.25 (m, 1H), 7.30-7.35 (m, 4H), 7.60-7.64 (m, 1H), 7.90-7.95 (m, 3H), 8.08-8.09 (m, 1H), 8.15-8.16 (m, 1H), 8.27-8.28 (m, 1H), 9.17 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 10.38 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 465 (M-H) -(ES -) 在2.70 min，UV活性
7 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(2-甲氧基乙基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 88 及 11 途徑 A ，步驟 (ii)-(iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 3.23-3.29 (m, 3H), 3.45 (m, 4H), 7.81-7.88 (m, 2H), 7.90 (s, 1H), 7.96-7.99 (m, 2H), 8.07 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.56-8.63 (m, 1H), 10.24 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 433 (M-H) -(ES -) 在2.08 min，UV活性
8 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 29 及 75 途徑 C (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 3.27-3.28 (m, 3H), 3.60-3.64 (m, 2H), 4.02-4.06 (m, 2H), 4.42 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 6.89 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.24 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.85 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.93 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 8.07 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 9.05 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 10.35 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 539 (M-H) -(ES -) 在2.72 min，UV活性
9 3-羥基-4-((3'-甲氧基-5-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 89 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 3.84 (s, 3H), 6.96-7.02 (m, 1H), 7.32-7.35 (m, 2H), 7.41-7.45 (m, 1H), 7.91-7.92 (m, 1H), 8.03-8.04 (m, 1H), 8.13-8.14 (m, 1H), 10.49 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 362 (M-H) -(ES -) 在2.51 min，UV活性
10 3-((3-乙基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 71 途徑 A ，步驟 (iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 1.23 (t, J= 7.3 Hz, 3H), 2.66 (q, J= 7.3 Hz, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.54-7.55 (m, 1H), 7.88-7.90 (m, 1H), 10.46 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 D m/z 284 (M-H) -(ES -) 在1.97 min，UV活性
11 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸 87 途徑 A ，步驟 (iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.59-7.71 (m, 1H), 7.91-7.96 (m, 1H), 7.97-8.03 (m, 2H), 8.08-8.12 (m, 1H), 8.14-8.21 (m, 1H), 8.34 (s, 1H), 10.40 (s, 1H)。 未觀察到三個酸性質子。 D m/z 376 (M-H) -(ES -) 在2.09 min，UV活性
12 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-N-(4-(三氟甲基)苯甲基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 29 及 90 途徑 C (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 4.61 (d, J= 6.1 Hz, 2H), 7.58 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.72 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.81 (s, 1H), 7.90 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 8.01-8.08 (m, 3H), 8.50 (s, 1H), 9.26 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 9.65 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 E m/z 533 (M-H) -(ES -) 在1.68 min，UV活性
13 3-((4-氟-3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 91 及 11 途徑 A ，步驟 (ii)-(iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.24-7.35 (m, 1H), 7.64-7.73 (m, 1H), 8.07-8.16 (m, 1H), 10.62 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 F m/z 276 (M+H) +(ES +) 在0.69 min，UV活性
14 3-((4-氯-3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 17 及 11 途徑 A ，步驟 (ii)-(iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.61-7.75 (m, 2H), 7.88 (s, 1H), 10.60 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 F m/z 290 (M-H) -(ES -) 在0.78 min，UV活性
15 3-((5-(1H-四唑-5-基)-4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 77 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.80-7.83 (m, 1H), 7.87 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.99 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 8.03-8.05 (m, 1H), 8.38-8.45 (m, 1H), 9.63 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。在 6.95-7.20 ppm 處觀察到銨信號。 K m/z 402 (M+H) +(ES +) 在3.79 min，UV活性
16 3-((3-(6-(苯甲氧基)吡啶-3-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 93 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 5.43 (s, 2H), 7.04 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.29-7.37 (m, 1H), 7.37-7.43 (m, 2H), 7.48-7.52 (m, 2H), 7.70-7.74 (m, 1H), 7.97-8.00 (m, 1H), 8.12 (dd, J= 2.6, 8.6 Hz, 1H), 8.36-8.46 (m, 1H), 8.59 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 9.64 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。在 6.95-7.20 ppm 處觀察到銨信號。 K m/z 441 (M+H) +(ES +) 在3.93 min，UV活性
17 3-羥基-4-((6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮 78 及 11 途徑 E (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 3.98 (s, 3H), 7.11 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.56 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 11.16 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 L m/z 289 (M+H) +(ES +) 在1.66 min，UV活性
18 3-羥基-4-((6-苯基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮 94 及 11 途徑 E (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.51-7.69 (m, 3H), 7.97 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 8.01-8.04 (m, 2H), 8.05 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 11.63 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 L m/z 333 (M-H) -(ES -) 在1.89 min，UV活性
19 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(2-(4-(三氟甲基)苯甲基)-2H-吲唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 95 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 5.82 (s, 2H), 7.47-7.56 (m, 2H), 7.68-7.79 (m, 4H), 7.81 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 9.64 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 K m/z 532 (M+H) +(ES +) 在4.42 min，UV活性
20 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(6-((4-(三氟甲基)苯甲基)氧基)吡啶-3-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 35 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 5.55 (s, 2H), 7.06 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.70-7.75 (m, 3H), 7.77 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.84-7.89 (m, 1H), 8.12 (dd, J= 2.5, 8.7 Hz, 1H), 8.24-8.32 (m, 1H), 8.55 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 9.45 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 K m/z 509 (M+H) +(ES +) 在4.13 min，UV活性
21 3-((3-(2-苯甲基-2H-吲唑-5-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 40 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 5.69 (s, 2H), 7.24-7.59 (m, 5H), 7.69-7.74 (m, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 9.59 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。在 6.95-7.20 ppm 處觀察到銨信號。 K m/z 464 (M+H) +(ES +) 在3.62 min，UV活性
22 3-羥基-4-((6-苯氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮 61 及 11 途徑 E (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 6.91 (s, 1H), 7.24-7.35 (m, 3H), 7.45-7.52 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 10.61 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。在 6.95-7.20 ppm 處觀察到銨信號。 M m/z 349 (M-H) -(ES -) 1.92 min，UV活性
23 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(2-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙基)-2H-吲唑-6-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 96 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 4.64 (t, J= 5.1 Hz, 2H), 4.89 (t, J= 5.1 Hz, 2H), 7.16 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.64 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.69-7.71 (m, 2H), 7.79-7.83 (m, 1H), 7.82-7.87 (m, 1H), 8.04-8.08 (m, 1H), 8.24-8.32 (m, 1H), 8.56 (s, 1H), 9.40 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 K m/z 562 (M+H) +(ES +) 在3.94 min，UV活性
24 3-((3-環丙基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 21 及 11 途徑 A ，步驟 (ii)-(iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 0.74 (s, 2H), 0.95 (s, 2H), 1.88 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 9.36 (m, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。在 6.95-7.20 ppm 處觀察到銨信號。 K m/z 298 (M+H) +(ES +) 在2.95 min，UV活性
25 3-((3-(1H-吲唑-5-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 97 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 7.66 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.76-7.87 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 8.08-8.23 (m, 2H), 8.38 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 13.16 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。在 6.95-7.20 ppm 處觀察到銨信號。 K m/z 372 (M-H) -(ES -) 在1.47 min，UV活性
26 3-((3-(6-(2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)吡啶-3-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 98 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 4.55-4.64 (m, 2H), 4.67-4.79 (m, 2H), 7.01 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.72 (s, 3H), 8.00 (s, 1H), 8.13 (dd, J= 2.6, 8.6 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.59-8.62 (m, 1H), 9.66 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。在 6.95-7.20 ppm 處觀察到銨信號。 K m/z 607 (M+H) +(ES +) 在2.13 min，UV活性
27 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(6-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)吡啶-3-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 31 及 99 途徑 D (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 4.45-4.49 (m, 2H), 4.67-4.73 (m, 2H), 7.03 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.21 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.68 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 8.10-8.14 (m, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 9.66 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 K m/z 539 (M+H) +(ES +) 在4.12 min，UV活性
28 3-((3-環己基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮 101 及 11 途徑 A ，步驟 (ii)-(iii) (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 1.19-1.30 (m, 1H), 1.33-1.50 (m, 4H), 1.69-1.76 (m, 1H), 1.78-1.83 (m, 4H), 2.41-2.47 (m, 1H), 7.31-7.34 (m, 1H), 7.72-7.77 (m, 1H), 7.79-7.84 (m, 1H), 9.35 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。在 6.95-7.20 ppm 處觀察到銨信號。 K m/z 357 (M+Na) +(ES +) 在1.43 min，UV活性
29 3-羥基-4-((3-(嗒𠯤-4-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮 102 及 11 途徑 A ，步驟 (ii)-(iii) (400 MHz, D 2O) δ: 7.59 (s, 1H), 7.70-7.86 (m, 3H), 8.94 (s, 1H), 9.25 (s, 1H)。 未觀察到三個可交換質子。 K m/z 336 (M+H) +(ES +) 在2.73 min，UV活性
30 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N,N-二甲基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 1 及 80 途徑 F (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 3.01 (s, 6H), 7.54-7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.83-7.93 (m, 3H), 8.07-8.13 (m, 2H), 8.21-8.24 (m, 1H), 9.93 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子。 J m/z 405 (M+H) +(ES +) 在1.69 min，UV活性
31 N-(4-胺甲醯基苯甲基)-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺 1 及 54 途徑 F (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 4.57-4.59 (m, 2H), 7.35-7.43 (m, 2H), 7.74-7.94 (m, 5H), 8.01-8.25 (m, 4H), 8.98-8.99 (m, 1H), 10.10 (s, 1H)。 未觀察到兩個酸性質子及兩個一級甲醯胺質子。 I m/z 508 (M-H) -(ES -) 在1.71 min，UV活性
結晶化合物 化合物 A 緩血酸胺鹽 ( 水合物 I ) 之製備 ( 未加晶種 )
Figure 02_image139
化合物A為實例5之化合物(以上結構)。將2 mL 97.6% (THF:水3:1):2.4% DMSO添加至50 mg化合物A中，且將混合物加熱至50℃，導致溶解。向溶液中添加1 eq之1 M緩血酸胺水溶液，使其在50℃下平衡一小時，隨後冷卻至室溫且保持攪拌隔夜。隨後在氮氣下蒸發溶液(至原始體積之約25%)，直至出現沈澱。過濾所得固體，用IPA洗滌，且在45℃下真空乾燥。
化合物 A 緩血酸胺鹽 ( 水合物 I ) 之製備 ( 添加晶種 )在氮氣下將化合物A (1 wt，公斤級)裝入容器中。此後添加THF (6.08 vol)，且隨後添加緩血酸胺水溶液(0.268 wt緩血酸胺溶解於2.21 vol水中)。隨後向容器中添加水(1.84 vol)。將混合物在60℃下加熱至溶解。將溶液冷卻至50℃。添加乙腈(1.29 vol)，隨後向反應物中添加化合物A緩血酸胺鹽之結晶水合物I (0.0126 wt)作為晶種。使混合物平衡1小時。隨後歷經2小時將乙腈(6.33 vol)添加至漿液中。隨後將混合物冷卻至5℃且攪拌隔夜。固體用乙腈(3.96 vol)洗滌，隨後在45℃下真空乾燥，得到化合物A緩血酸胺鹽(水合物I)。
化合物 A 緩血酸胺鹽 ( 水合物 I ) 之特性上述化合物A緩血酸胺鹽水合物I之X射線粉末繞射(XRPD)圖展示於圖1中，且繞射角及d間距之概述在表4 (特徵峰)及表5 (完整峰清單)中給出。XRPD分析係在PANalytical Xpert Pro繞射儀上對Si零背景晶圓進行。採集條件包括Cu K α輻射，發生器張力：40 kV，發生器電流：45 mA，步長0.02° 2θ，開始角度：2.0° 2θ，結束角度：40.0° 2θ。 表4
位置 [ ° 2 θ ] d 間距 [Å]
3.9 ±0.2 22.8
7.7 ±0.2 11.4
10.0 ±0.2 8.8
15.8 ±0.2 5.6
表5
位置 [ ° 2 θ ] d 間距 [Å] 位置 [ ° 2 θ ] d 間距 [Å]
3.9 ± 0.2 22.8 21.9 ±0.2 4.1
7.7 ± 0.2 11.4 22.6 ±0.2 3.9
10.0 ± 0.2 8.8 23.3 ±0.2 3.8
11.6 ±0.2 7.6 24.7 ±0.2 3.6
12.4 ±0.2 7.1 24.8 ±0.2 3.6
13.0 ±0.2 6.8 25.4 ±0.2 3.5
13.6 ±0.2 6.5 25.7 ±0.2 3.5
14.7 ±0.2 6.0 26.5 ±0.2 3.4
14.8 ±0.2 6.0 26.9 ±0.2 3.3
15.8 ± 0.2 5.6 27.2 ±0.2 3.3
16.7 ±0.2 5.3 28.4 ±0.2 3.1
17.2 ±0.2 5.2 29.2 ±0.2 3.1
18.0 ±0.2 4.9 29.9 ±0.2 3
18.4 ±0.2 4.8 31.0 ±0.2 2.9
18.9 ±0.2 4.7 32.0 ±0.2 2.8
19.7 ±0.2 4.5 33.1 ±0.2 2.7
20.1 ±0.2 4.4 35.8 ±0.2 2.5
20.6 ±0.2 4.3 40.0 ±0.2 2.3
21.3 ±0.2 4.2      
上述化合物A緩血酸胺鹽水合物I之實例差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖展示於圖2中。DSC分析係用配備有自動進樣器及冷凍冷卻系統之TA Instruments Q100差示掃描量熱計在50 mL/min N 2吹掃下進行。樣品之DSC熱分析圖係在捲曲的Al盤中以10℃/min獲得。DSC熱分析圖顯示起始溫度為約155℃之吸熱。然而，此可能視實驗條件及結晶度程度而變化。
上述化合物A緩血酸胺鹽水合物I之實例熱解重量分析(TGA)熱分析圖展示於圖3中。TGA分析係在TA Instruments Q5000熱重分析儀上在25 mL/min N 2流及10℃/min之加熱速率下進行。此水合物之TGA熱分析圖通常在30-120℃顯示6-7%之重量損失，其相當於每當量化合物A約2-2.5當量之水，亦即可變水合物。
化合物 A 緩血酸胺鹽 ( 水合物 II ) 之製備 ( 未加晶種 )將2 mL甲醇添加至100 mg化合物A緩血酸胺鹽之非晶形式中，且使懸浮液在室溫下平衡隔夜。過濾所得固體且在45℃下真空乾燥。
化合物 A 緩血酸胺鹽 ( 水合物 II ) 之製備 ( 添加晶種 )在頂部攪拌下將60 mL甲醇添加至容器中之3 g化合物A緩血酸胺鹽水合物I中。添加60 mg (2%w/w晶種負載)之化合物A緩血酸胺鹽水合物II，且使反應混合物在室溫下平衡隔夜。懸浮液隔夜增稠且變得更加蒼白。過濾所得固體且在45℃下真空乾燥。
上述化合物A緩血酸胺鹽水合物II之X射線粉末繞射(XRPD)圖展示於圖4中，且繞射角及d間距之概述在表6 (特徵峰)及表7 (完整峰清單)中給出。XRPD分析係在PANalytical Xpert Pro繞射儀上對Si零背景晶圓進行。採集條件包括Cu K α輻射，發生器張力：45 kV，發生器電流：40 mA，步長0.03° 2θ，開始角度：3.0° 2θ，結束角度：35.0° 2θ。 表6
位置 [ ° 2 θ ] d 間距 [Å]
4.4 ±0.2 20.2
14.4 ±0.2 6.1
23.9 ±0.2 3.7
表7
位置 [ ° 2 θ ] d 間距 [Å] 位置 [ ° 2 θ ] d 間距 [Å]
4.4 ± 0.2 20.2 22.4 ±0.2 4
5.4 ±0.2 16.3 22.6 ±0.2 3.9
9.0 ±0.2 9.8 23.0 ±0.2 3.9
11.1 ±0.2 7.9 23.9 ± 0.2 3.7
11.5 ±0.2 7.7 25.7 ±0.2 3.5
11.7 ±0.2 7.6 26.1 ±0.2 3.4
12.6 ±0.2 7 26.8 ±0.2 3.3
13.4 ±0.2 6.6 27.2 ±0.2 3.3
13.7 ±0.2 6.5 27.9 ±0.2 3.2
14.4 ± 0.2 6.1 28.5 ±0.2 3.1
16.8 ±0.2 5.3 29.2 ±0.2 3.1
18.0 ±0.2 4.9 29.9 ±0.2 3
18.4 ±0.2 4.8 30.4 ±0.2 2.9
18.9 ±0.2 4.7 32.0 ±0.2 2.8
20.3 ±0.2 4.4 32.8 ±0.2 2.7
21.1 ±0.2 4.2 34.0 ±0.2 2.6
21.9 ±0.2 4.1      
上述化合物A緩血酸胺鹽水合物II之實例差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖展示於圖5中。DSC分析係用配備有自動進樣器及冷凍冷卻系統之PerkinElmer Pyris 6000差示掃描量熱計在20 mL/min N 2吹掃下進行。樣品之DSC熱分析圖係在針孔Al盤中以20℃/min獲得。DSC熱分析圖顯示起始溫度為約210℃之吸熱。然而，此可能視實驗條件及結晶度程度而變化。
上述化合物A緩血酸胺鹽水合物II之實例熱解重量分析(TGA)熱分析圖展示於圖6中。TGA分析係在PerkinElmer Pyris 1熱重分析儀上在20 mL/min N 2流及20℃/min之加熱速率下進行。此水合物之TGA熱分析圖通常在30-150℃顯示1-3%之重量損失，其相當於每當量化合物A約0.3-1當量之水，亦即可變水合物。
進行水活度研究以確定水合物I及水合物II各自穩定之臨界水活度。水合物I及水合物II之競爭性漿液係在室溫下在一系列具有不同水活度之水性溶劑混合物中進行。自水活度大於0.5之所有混合物中均分離出水合物I。在水活度大於或等於0.5之溶劑混合物中，單獨水合物II之平衡證實轉化為水合物I。在室溫下，在水活度為0.2之溶劑混合物中，水合物I及水合物II之競爭性漿液產生水合物I及水合物II固體之混合物。
結晶化合物 A ( 游離酸 ) ( 型態 3 ) 之製備粗化合物A (游離酸)係藉由逆相層析，應用鹼性條件(高pH)，在水性介質(0.2%之28%氫氧化氨水溶液)中5-35%之乙腈梯度下，在12.5分鐘方法中通過Gilson半製備型HPLC上之Gemini-NX C18管柱(5 μm，100 × 30 mm)、泵332及331、GX-271液體處理器、使用30 mL/min流動速率之Trilution軟體及205 nm、210 nm及230 nm之171二極體陣列偵測器純化。合併所需溶離份，隨後在Biotage V10機器上蒸發，得到白色固體殘餘物(4 g)，亦即二銨鹽。
將二銨鹽(4 g，7.99 mmol)溶解於DMSO (39.96 mL)中且攪拌30分鐘。添加1 N HCl (59.94 mL，59.94 mmol)且藉由過濾收集所得沈澱物，用冰冷水(20 mL)洗滌且乾燥，得到粗產物，將其再懸浮於EtOH (40 mL)中且攪拌3小時。隨後過濾懸浮液，得到乾燥白色固體，將其研磨成細粉(2.94 g)。NMR顯示此粉末為所需產物；然而，大量DMSO殘留於樣品中。因此，將固體再懸浮於EtOH (25 mL)中且攪拌18小時。隨後過濾懸浮液，且收集固體，使用研杵及研缽研磨成細粉，得到呈白色結晶固體狀之化合物A游離酸(2.39 g，5.12 mmol，64.1%產率)。產物之NMR顯示，樣品中殘留少量DMSO，產物與DMSO之比率為大致1:0.05。結晶化合物A游離酸之X射線粉末繞射(XRPD)圖展示於圖7中，且此結晶固體稱為「型態3」。
上述化合物A游離酸型態3之實例熱解重量分析(TGA)熱分析圖展示於圖8中。
結晶化合物 A ( 游離酸 )( 型態 1 ) 之製備當結晶化合物A游離酸型態3藉由在45℃下真空(約10-15毫巴)加熱乾燥隔夜時，獲得不同的結晶固體，稱為「型態1」。化合物A游離酸型態1之XRPD圖展示於圖9中。
上述化合物A游離酸型態1之實例熱解重量分析(TGA)熱分析圖展示於圖10中。
生物活性 實例 A 人類 GPR35a 同功異型物結合人類GPR35a桿狀病毒在HEK293f細胞中過度表現，細胞密度為2.5×10 6個細胞/毫升且在Pro293 (Lonza) + 5% FBS、1% Glutamax及0.4% Pen/Strep中在24小時內之感染倍率為2.5。收穫細胞且在4℃下以2500 RPM離心10分鐘。隨後倒出上清液，且將離心塊儲存於-80℃下。將離心塊解凍且再懸浮於15 mL均質化緩衝液(20 mM HEPES、10 mM EDTA，pH 7.4)中。隨後在機械均質器(VMR)中均質化10秒。將膜在離心管中在4℃下以40,000 g離心15分鐘。將上清液倒掉且再懸浮於15 mL均質化緩衝液中。均質化20秒。將膜在4℃下以40,000 g離心45分鐘。將膜再懸浮於3 mL儲存緩衝液(20 mM HEPES、0.1 mM EDTA，pH 7.4)中，充分混合。隨後將所得膜儲存於-80˚下。
將GPR35細胞膜勻漿再懸浮於結合緩衝液(50mM TRIS + 10mM MgCl2 pH 7.4)中，最終分析濃度為5 μg/孔。將測試化合物稀釋於二甲亞碸(DMSO (Sigma Aldrich, UK))中，以形成10點½對數濃度曲線。每個盤添加測試化合物，隨後添加7 nM 3H-27966。
添加0.1 μM FAC洛度沙胺(Lodoxamide)以便計算非特異性結合。最後，將膜添加至盤上之各孔中。在室溫下培育60分鐘後，將膜過濾至具有鍵結GF/B過濾器之單層過濾器、96孔白色微量盤上，用TomTec細胞收集器預浸沒於ddH20中，且蒸餾水洗滌5次。將盤乾燥，隨後添加50 μl/孔閃爍體，密封且使用MicroBeta分析儀量測放射性。IC50值係自抑制曲線推導出，且親和力常數(Ki)值係使用Cheng-Prussoff方程式計算，其中； pKi= -log10 Ki。
無標記 DMR 功能分析HT-29細胞(ATCC HTB-38)在補充有10% FBS之McCoys (Thermo 16600082)中連續培養。在分析前一天，用TrypLE (Gibco12604-013)收穫細胞，且以20k/孔接種於Corning EPIC 384孔盤(5040)中總體積為50 μl之培養基中，在37℃ 5% CO2下隔夜。在分析當天，移除細胞培養基，用分析緩衝液(HBSS + 20mM HEPES pH7.4)替換且再培育1小時。在ECHO LDV 384源盤中於100% DMSO中製備化合物。細胞盤在室溫下在EPIC盤讀取器上讀取15分鐘，暫停讀取，且將細胞盤添加至LabCyte ECHO 550中，藉由聲學轉移添加每孔50 nl化合物。立即將盤放回EPIC讀取器中，不暫停讀取且量測動態質量再分佈60分鐘。原始資料藉由EPIC分析儀軟體分析，且獲取每個濃度之最大峰值，以便能夠確定EC50。所有原始DMR資料相對於洛度沙胺標準化且進行緩衝液校正。 表8 - GPR35活性及HT-29親和力
實例 人類 GPR35 Ki [nM] HT-29 EC50 [nM]
1 9.81 8.68
2 0.48 0.90
3 0.35 2.27
4 3.83 2.50
5 0.08 0.52
6 1.82 0.62
7 2.77 4.20
8 1.47 0.66
9 0.46 0.83
10 2.75 2.34
11 6.24 4.31
12 0.31 0.03
13 0.99 2.39
14 0.60 4.90
15 0.16 2.02
16 0.06 0.27
17 7.85 9.25
18 2.65 5.18
19 0.36 0.08
20 1.06 7.68
21 0.91 0.14
22 3.66 1.39
23 0.46 0.12
24 15.21 8.19
25 0.37 0.44
26 0.36 1.04
27 0.75 0.54
28 12.50 6.65
29 0.74 1.05
30 5.99 2.64
31 1.61 11.31
Ki值自過度表現GPR35a同功異型物之HEKf細胞膜中的濃度反應分析推導出。EC50值自內源性表現人類GPR35之HT-29細胞株中的濃度反應分析推導出。
化合物A對GPR35之功能效力比肥大細胞穩定劑色甘酸高約500倍，色甘酸已在臨床上以高劑量用於GI病症。化合物A亦顯示出跨臨床前物種之藥理學，包括PGE2誘導之液體分泌、吲哚美辛迴腸炎及屏障通透性、TNBS小鼠內臟疼痛模型以及急性大鼠及小鼠LPS攻擊。化合物A進一步顯示出對GPR35之強選擇性，且沒有觀察到脫靶效應。化合物A對包括CYP3A4在內之主要人類CYP具有非常低的藥物相互作用潛力。
圖1為化合物A緩血酸胺鹽之結晶形式(水合物I)的X射線粉末繞射圖。 圖2為化合物A緩血酸胺鹽之結晶形式(水合物I)的差示掃描熱量測定曲線。 圖3為化合物A緩血酸胺鹽之結晶形式(水合物I)的熱解重量分析曲線。 圖4為化合物A緩血酸胺鹽之結晶形式(水合物II)的X射線粉末繞射圖。 圖5為化合物A緩血酸胺鹽之結晶形式(水合物II)的差示掃描熱量測定曲線。 圖6為化合物A緩血酸胺鹽之結晶形式(水合物II)的熱解重量分析曲線。 圖7為化合物A游離酸之結晶形式(型態3)的X射線粉末繞射圖。 圖8為化合物A游離酸之結晶形式(型態3)的熱解重量分析曲線。 圖9為化合物A游離酸之結晶形式(型態1)的X射線粉末繞射圖。 圖10為化合物A游離酸之結晶形式(型態1)的熱解重量分析曲線。
Figure 111115160-A0101-11-0002-3

Claims (33)

  1. 一種式(1)化合物，
    Figure 03_image141
    或其鹽或互變異構體，其中； X為N或CH； R 1為H或鹵基； R 2為H、鹵基、視情況經取代之C 1 - 6烷基、視情況經取代之C 3 - 6環烷基、視情況經取代之C 1 - 6烷氧基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基或視情況經取代之 O-芳基。
  2. 如請求項1之化合物，或其鹽或互變異構體，其中X為CH。
  3. 如請求項1之化合物，或其鹽或互變異構體，其中X為N。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其鹽或互變異構體，其中R 1為H。
  5. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其鹽或互變異構體，其中R 1為Cl或F。
  6. 如請求項1之化合物，其為式(2a)或(2b)之化合物：
    Figure 03_image143
    ； 或其鹽或互變異構體。
  7. 如請求項1至6中任一項之化合物，或其鹽或互變異構體，其中R 2為H、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基、視情況經1至6個氟原子取代之C 3 - 6環烷基或視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷氧基。
  8. 如請求項7之化合物，或其鹽或互變異構體，其中R 2為H、三氟甲基、乙基、環丙基、環己基或甲氧基。
  9. 如請求項1至6中任一項之化合物，或其鹽或互變異構體，其中R 2為視情況經R 3取代之苯基、視情況經R 3取代之吡啶基、視情況經R 3取代之 O-苯基、視情況經R 3取代之吲唑基或視情況經R 3取代之嗒𠯤基，其中R 3為H、鹵基、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基、視情況經1至6個氟原子取代之C 3 - 6環烷基、視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷氧基、-CO 2R 4、-CONHCH 2R 4、-CONHCH 2CH 2OR 4、-OR 4、-OCH 2R 4、-CH 2R 4、-OCH 2R 4、-CH 2CH 2OR 4、-OCH 2CH 2OR 4、-CONHR 4或-CON(CH 3)R 4； 其中R 4為H、視情況經1至6個氟原子取代之C 1-6烷基或以下基團：
    Figure 03_image145
    ； R 5、R 6及R 7獨立地為H、鹵基、CO 2R 8、CONR 8R 9或視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基，其中該C 1 - 6烷基之一或兩個碳原子可視情況經O置換； R 8及R 9獨立地為H或視情況經1至6個氟原子取代之C 1 - 6烷基。
  10. 如請求項9之化合物，其中R 3為OMe、CO 2H、CO 2Et、CON(CH 3) 2、CONHCH 2CH 2OCH 3，或係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image147
    Figure 03_image149
    Figure 03_image151
    ， 或其鹽或互變異構體。
  11. 如請求項9或請求項10之化合物，其為式(3a)、(3b)、(3c)、(3d)或(3e)之化合物：
    Figure 03_image153
    Figure 03_image155
    ； 或其鹽或互變異構體。
  12. 如請求項9或請求項10之化合物，其為式(4a)、(4b)、(4c)、(4d)或(4e)之化合物：
    Figure 03_image157
    Figure 03_image159
    ； 或其鹽或互變異構體。
  13. 如請求項1至6中任一項之化合物，其中R 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image161
    Figure 03_image163
    Figure 03_image165
    ， 或其鹽或互變異構體。
  14. 如請求項1之化合物，其係選自由以下組成之群： 3-((3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(三氟甲基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((5-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸乙酯； N-苯甲基-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； N-苯甲基-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲醯胺； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(2-甲氧基乙基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； 3-羥基-4-((3'-甲氧基-5-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-乙基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-3-甲酸； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-N-(4-(三氟甲基)苯甲基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； 3-((4-氟-3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((4-氯-3-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((5-(1H-四唑-5-基)-4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(6-(苯甲氧基)吡啶-3-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-羥基-4-((6-甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-羥基-4-((6-苯基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(2-(4-(三氟甲基)苯甲基)-2H-吲唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(6-((4-(三氟甲基)苯甲基)氧基)吡啶-3-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(2-苯甲基-2H-吲唑-5-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-羥基-4-((6-苯氧基-4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(2-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙基)-2H-吲唑-6-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-環丙基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-吲唑-5-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(6-(2-(3,5-雙(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)吡啶-3-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-(1H-四唑-5-基)-5-(6-(2-(4-(三氟甲基)苯氧基)乙氧基)吡啶-3-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-((3-環己基-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)-4-羥基環丁-3-烯-1,2-二酮； 3-羥基-4-((3-(嗒𠯤-4-基)-5-(1H-四唑-5-基)苯基)胺基)環丁-3-烯-1,2-二酮； 3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-N,N-二甲基-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； N-(4-胺甲醯基苯甲基)-3'-((2-羥基-3,4-二側氧基環丁-1-烯-1-基)胺基)-5'-(1H-四唑-5-基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺； 或其鹽或互變異構體。
  15. 如請求項1至14中任一項之鹽，其為醫藥學上可接受之鹽。
  16. 如請求項1之化合物或鹽，其中該化合物為
    Figure 03_image167
    ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  17. 如請求項1之化合物，其中該化合物為
    Figure 03_image169
    。
  18. 如請求項16之醫藥學上可接受之鹽，其為具有以下結構之緩血酸胺鹽：
    Figure 03_image171
    。
  19. 如請求項1至18中任一項之化合物或鹽，其用於療法中。
  20. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至19中任一項之化合物或鹽及醫藥學上可接受之賦形劑。
  21. 如請求項1至20中任一項之化合物、鹽或組合物，其用於治療肥大細胞病症、急性及慢性疼痛病況或與胃腸道系統及肺部之過敏性或發炎性疾病相關的疾病。
  22. 如請求項1至20中任一項之化合物、鹽或組合物，其用於治療胃腸道病症或病況、與胃腸道疾病或其他內臟病況相關之疼痛症狀或肺部疾病或病況。
  23. 如請求項20所使用之化合物、鹽或組合物，其中該胃腸道病症或病況係選自由以下組成之群：食物過敏、食物不耐受及過敏性病症、乳糜瀉、與全身性肥大細胞增多症及其他肥大細胞相關病症(肥大細胞活化症候群、純系肥大細胞病症、單株肥大細胞活化症候群、特發性蕁麻疹、特發性全身性過敏反應)相關之胃腸道症狀、肥大細胞性結腸炎、大腸急躁症(IBS)、胃腸道運動性病症、功能性胃腸道病症、胃食道逆流病(GERD)、十二指腸胃逆流、腹瀉疾病、嗜酸性球性胃腸炎、嗜酸性球性食道炎、感染性腹瀉(諸如艱難梭菌、沙門氏菌、志賀氏菌毒素)、顯微鏡下結腸炎、免疫介導之胃腸道疾病、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、發炎性腸病及內臟腹痛。
  24. 如請求項20所使用之化合物、鹽或組合物，其中該等疼痛症狀與選自由以下組成之群的胃腸道疾病或其他內臟病況相關聯：克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、發炎性腸病、放射性結腸炎、放射性膀胱炎、乳糜瀉、麩蛋白腸病、放射性膀胱炎、間質性膀胱炎、疼痛性膀胱症候群、癌症、胃食道逆流病、化學療法及放射療法黏膜炎、胰臟炎、前列腺炎、骨盆疼痛、子宮內膜異位症、肝炎、肝纖維化及肝硬化。
  25. 如請求項20所使用之化合物、鹽或組合物，其中該肺部疾病或病況係選自由以下組成之群：慢性阻塞性肺病、哮喘、慢性支氣管炎、囊性纖維化、肺氣腫、慢性特發性咳嗽、氣管敏感病症及特發性肺纖維化。
  26. 一種治療有需要之個體之如請求項21至25中任一項之疾病、病況或病症的方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至20中任一項之化合物、鹽或組合物。
  27. 如請求項26之方法，其中該個體為人類。
  28. 如請求項18之醫藥學上可接受之鹽，其中該鹽係呈結晶形式。
  29. 如請求項28之結晶形式，其為水合物。
  30. 如請求項29之結晶形式，其XRPD圖基本上與圖1一致。
  31. 如請求項29之結晶形式，當使用Cu K α輻射來量測時，其XRPD圖包含3.9±0.2、7.7±0.2、10.0±0.2及15.8±0.2 °2θ處之繞射角。
  32. 如請求項29之結晶形式，其XRPD圖基本上與圖4一致。
  33. 如請求項29之結晶形式，當使用Cu K α輻射來量測時，其XRPD圖包含4.4±0.2、14.4±0.2及23.9±0.2 °2θ處之繞射角。
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