CN103562200A - 用于治疗关节炎的新咪唑衍生物 - Google Patents

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CN103562200A
CN103562200A CN201280025230.2A CN201280025230A CN103562200A CN 103562200 A CN103562200 A CN 103562200A CN 201280025230 A CN201280025230 A CN 201280025230A CN 103562200 A CN103562200 A CN 103562200A
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T.A.伍兹
B.H.诺尔曼
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Abstract

本发明提供了下式的化合物∶其中A、X和R1-R6如本文所描述，其可药用盐和包含该化合物的可药物组合物；使用一种该化合物或其可药用盐来治疗与骨关节炎相关的疼痛的方法，以及制备该化合物的方法。

Description

用于治疗关节炎的新咪唑衍生物
骨关节炎是关节的复杂变性疾病，其特征在于：关节软骨、关节周围结构(包括骨、滑膜和相关的纤维关节组织)的渐进性破坏和不同程度的炎症。现有药物治疗可以减轻与骨关节炎相关的疼痛，但随着时间的推移，可能只具有适度的效果，并且各自具有不定的危险/益处问题。使用非甾体抗炎症药物(NSAID)和环加氧酶-2抑制剂(COX-2抑制剂)的现行治疗很有效，但可能导致显著的心血管和胃肠不适当的作用。因此，对于许多患者来说，由于先前存在或突然出现心血管和/或胃肠病症，这类药物可能被禁忌。另外，随着时间推移，个体可能对指定药物治疗变得反应不佳。
通过用环氧合酶代谢花生四烯酸，产生前列腺素E2，形成不稳定的中间体前列腺素H2(PGH2)。然后，前列腺素H2被微粒体前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)进一步代谢为PGE2。前列腺素E2是与骨关节炎相关的病症的重要媒介，例如，发烧、疼痛和炎症。
因此，还需要治疗和减轻与骨关节炎相关的疼痛和/或炎症的其它选择。本发明提供了mPGEs-1的新抑制剂，并且可能有益于治疗承受骨关节炎的疼痛和/或炎症的患者。
本发明提供了式I的化合物∶
Figure 714413DEST_PATH_IMAGE002
其中
R1选自∶-C1-4烷基；
R2是Cl或-CHF2；
R3是H或-CH3；
R4选自∶H、F、Cl、-CH3、-CHF2和-CF3；
R5选自∶H、F、Cl和-CH3；
R6选自∶H、F、Cl和-CH3；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH；
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl，而当X是N时，R2不是Cl；
或其可药用盐。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中R1选自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；更优选，R1是-CH(CH3)2。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中R3是-CH3。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中R5选自H、F、Cl。优选，R5是H。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中R6是H。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中R4选自H、-CH3、-CHF2和-CF3。在一个实施方案中，A是N，X是CH。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中R4选自F、Cl、-CHF2和-CF3。更优选，R4选自Cl、-CHF2和-CF3。更加优选，R4是CF3。在一个实施方案中，A是CH，X是N。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中R2是Cl。
在一个实施方案中，A是N，X是CH。在另一个实施方案中，A是CH，X是N。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中
R1是-CH(CH3)2或-C(CH3)3；
R2是Cl或-CHF2；
R3是-CH3；
R4选自F、Cl、-CH3、-CHF2和-CF3；
R5选自H、F、Cl和-CH3；
R6选自H、F、Cl和-CH3；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH，
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl，而当X是N时，R2不是Cl。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中
R1是-CH(CH3)2；
R2是Cl或-CHF2；
R3是H或-CH3；
R4选自F、Cl、-CH3、-CHF2和-CF3；
R5选自H、F、Cl和-CH3；
R6是H；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH，
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl，而当X是N时，R2不是Cl。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中
R1是-CH(CH3)2；
R2是-CHF2；
R3是H或-CH3；
R4选自F、Cl、-CH3、-CHF2和-CF3；
R5选自H、F、Cl和-CH3；
R6是H；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH，
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl，而当X是N时，R2不是Cl。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中
R1是-C(CH3)3；
R2是Cl或-CHF2；
R3是-CH3；
R4选自H、F、Cl、-CH3和-CF3；
R5选自H、F、Cl、-CH3；
R6选自H、F、Cl和-CH3；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH；
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl，而当X是N时，R2不是Cl。
本发明提供了按照式I的化合物和其可药用盐，其中
R1是-CH(CH3)或-C(CH3)3；
R2是-CHF2；
R3是H或-CH3；
R4选自H、F、Cl、-CH3、-CF3；
R5选自H、F、Cl、-CH3和-CF3；
R6选自H、F、Cl、-CH3；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH；
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中
R1选自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；
R2是Cl或-CHF2；
R3是H或-CH3；
R4选自H、-CH3、-CHF2和-CF3；
R5是H；
R6选自H、F、-CH3；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH；
条件是，当X是N时，R2不是Cl。
在一个实施方案中，X是CH，A是N。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中
R1选自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；
R2是Cl或-CHF2；
R3是-CH3；
R4选自∶H、F、Cl、-CH3、-CHF2和-CF3；
R5选自H、F、Cl、-CH3；
R6选自H、F、Cl、-CH3；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH；
条件是，当X是N时，R2不是Cl，当A是N时，R4不是F或Cl。
在一个实施方案中，X是N，A是CH。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中
R1选自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；
R2是Cl或-CHF2；
R3是H或-CH3；
R4选自Cl、-CHF2和-CF3；
R5是H或Cl；
R6是H、F、-CH3；
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH；
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl，而当X是N时，R2不是Cl。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，
R1选自-CH(CH3)2或-C(CH3)3；
R2是Cl或-CHF2；
R3是H或-CH3；
R4是CF3；
R5是H；
R6选自H、F和-CH3；
X和A中的一个是N，X和A中的另一个是-CH；
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl，而当X是N时，R2不是Cl。
本发明提供了式I的化合物或其可药用盐，其中A是N，条件是，R4不是F或Cl。
本发明提供了按照式I的化合物或其可药用盐，其中X是N，条件是，R2不是Cl。
本发明提供了式I的化合物和其可药用盐，其中
R1选自-CH(CH3)或-C(CH3)3；
R2是Cl；
R3是-CH3；
R4是H；
R5是H；
R6是H；
X是CH，A是N。
本发明提供了式II的化合物∶
Figure 631553DEST_PATH_IMAGE004
或其可药用盐。优选的本发明化合物的酸加成盐是磷酸氢盐加成盐。
本发明还提供了结晶形式的2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐，其特征在于：用CuKα源(λ=1.54056Å)所获得的X射线粉末衍射图包含在下列位置的峰(2θ)：
a) 4.85°、20.37°和22.27° +/-0.2°；或
b) 4.85°、11.00°、17.93°、20.37°、22.27°和24.85°+/-0.2°；或
c) 4.85°、11.00°、12.22°、12.67°、17.93°、20.37°、22.27°、23.51°和24.85°+/-0.2°；或
d) 4.85°、9.77°、16.68°、17.93°、19.15°、22.27°和24.84°+/-0.2°。
本发明还提供了组合物，其包含足够纯的结晶形式的2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐。本文使用的“足够纯”是指：含有大于80% w/w晶体物质的组合物，更优选大于95% w/w的晶体物质，更加优选大于98% w/w的晶体2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐。
本发明还提供了可药物组合物，其包含按照式I或II的化合物和其可药用盐以及至少一种可药用载体、稀释剂或赋形剂。
本发明提供了可药物组合物，其包含按照式I的化合物和/或其可药用盐以及至少一种可药用载体、稀释剂或赋形剂，并且进一步包含一或多种其它治疗剂。
本发明提供了治疗哺乳动物的与骨关节炎相关的疼痛和/或炎症的方法；更加优选，治疗与骨关节炎相关的疼痛和/或炎症的方法。该方法包括：给予需要其的哺乳动物按照式I或II的化合物、其可药用盐或包含该化合物的药用组合物。
本发明提供了按照式I或II的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，该药物用于治疗与骨关节炎相关的疼痛和/或炎症。
本发明提供了用作药物的按照式I或II的化合物、其可药用盐或包含该化合物的可药物组合物。
本发明提供了用于治疗的按照式I或II的化合物、其可药用盐或包含该化合物的可药物组合物。
本发明还提供了按照式I或II的化合物、其可药用盐或包含该化合物的可药物组合物，在需要治疗其下述疾病的哺乳动物中用于治疗与骨关节炎相关的疼痛和/或炎症；更加优选，本发明提供在需要其的哺乳动物中治疗与骨关节炎相关的疼痛的方法。
图1是-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐的代表性的XRD谱图。如下面实施例26所述，获得XRD谱图。
短语“可药用盐”是指临床和/或兽用考虑可接受的本发明化合物的盐。可药用盐和制备这种盐的普通方法在本领域为大家所熟知。参见，例如，P. Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use,(VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge等人，"Pharmaceutical Salts,"　Journal　of　Pharmaceutical　Sciences,　Vol. 66, No. 1, January 1977。在一个实施方案中，磷酸氢盐加成盐是优选的盐形式。
本发明的化合物可以与其它治疗方法和/或其它治疗剂结合，优选治疗关节炎的药剂，包括与骨关节炎相关的疼痛和炎症。实例包括：NSAID或COX-2抑制剂，例如，布洛芬，阿司匹林，醋氨酚，西乐葆，萘普生和酮洛芬；鸦片样(物质)，例如氧可酮和芬太尼；和皮质类甾醇，例如氢化可的松，氢化泼尼松和脱氢可的松。
可以利用本领域已知的各种方法制备本发明的化合物或其盐，在下面的反应路线、制备和实施例中说明了其中一些方法。为了制备式I和II的化合物或其盐，可以将每个所描述途径的具体合成步骤用不同方式结合，或将不同反应路线的步骤结合。在下面反应路线中，可以利用常规方法回收每个步骤的产物，包括提取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研磨和结晶。
另外，下面反应路线所描述的中间体包含许多保护基。变量保护基在每次出现时，根据具体反应条件和所进行的具体转化形式，可以相同或不同。技术人员熟知保护和脱保护条件，并且在文献中进行了描述。参见，例如，Greene and Wuts,　Protective　Groups　in　Organic　Synthesis。
按照Aldrichimica Acta, Vol. 17, No. 1, 1984，定义了本文所使用的缩写。其它缩写定义如下∶ “ACN”是指乙腈；“Boc2O”是指二碳酸二叔丁基酯；“BOP”是指苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-磷鎓六氟磷酸盐；“DCM”是指二氯甲烷；“DIPEA”是指二异丙基乙胺；“DMF”是指N,N-二甲基甲酰胺；“DMSO”是指二甲亚砜；“EDCI”是指N-乙基,N'-(二甲基氨基)丙基碳二亚胺盐酸盐；“EDTA”是指乙二胺四乙酸；“Et2O”是指二乙醚；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“EtOH”是指乙醇；h是指小时；“HATU”是指2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)--1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸甲铵盐；“HOBT”是指1-羟基苯并三唑水合物；“iPr”是指异丙醇；“IC50”是指药剂可以产生对该试剂最大可能的抑制反应的50%时的药剂浓度；“MeOH”是指甲基醇或甲醇；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“RT”是指室温； “T3P®”是指丙基磷酸酐；“TBTU”是指o-苯并三唑-1-基-N,N,N'N'-四甲基脲四氟硼酸盐；“THF”是指四氢呋喃。
在下面的反应路线中，所有的取代基如先前所定义，除非另外指明。试剂和起始原料是本领域普通技术人员通常容易得到的试剂和起始原料。其它的可以利用有机和杂环化学的标准技术来制备，其类似于已知的结构上相似的化合物的合成方法和在随后的制备例和实施例中所描述的方法，包括任何新的工艺规程。本发明的化合物可以利用下面反应路线所概括说明的方法来制备。
Figure 348974DEST_PATH_IMAGE006
反应路线1说明了化合物4的制备方法，芳基或杂芳基取代的3-甲酸与反应路线2中的化合物8偶合，制备式I、II或Ia的化合物。
反应路线1描述了取代的4-芳基卤或取代的4-杂芳基卤转化为氰基(2，步骤1)，而后用氢还原氰基，得到胺(3，步骤2)，将胺烷基化并脱保护，得到酰胺化合物4(步骤3)。“PG”基团是酰基的酯保护基，例如甲基、乙基或叔丁基。这种保护基在本领域为大家所熟知和了解。
例如，技术人员可以认识到，各种条件可用于选择性引入氰基，例如，钯催化的卤代芳烃（haloarenes）的氰化。在极性非质子溶剂(例如DMF、ACN或THF)中，使用氰化物源，例如Zn(CN)2、K4[Fe(CN)6]、(CH3)3SiCN、NaCN或KCN，和钯催化剂，例如四(三苯基膦基)钯或三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，得到化合物2(步骤1)。在使用酸(例如盐酸)的酸性条件下，在大约60 psi的氢气氛围中，用钯源(例如5%钯/炭)氢化，可以将苄腈还原为苄胺。可以使用酰氯和有机碱(例如二异丙基乙胺或三乙胺)制备(步骤3)的中间产物，得到酰胺。在使用碱(例如，氢氧化锂)水溶液的碱性条件下，将酯脱保护，得到酰胺(4)。
Figure 744183DEST_PATH_IMAGE008
反应路线2说明，制备取代的芳基或取代的杂芳基咪唑嘧啶，取代的芳基或取代的杂芳基咪唑嘧啶用于制备取代的芳基或取代的杂芳基咪唑胺，该咪唑胺与反应路线1的芳基或杂芳基取代的3-甲酸偶合，得到式Ia的化合物。
例如，可以在极性质子溶剂(例如异丙醇或乙醇)或非极性溶剂(例如甲苯)中，在使用或不使用碱(例如碳酸氢钠)的条件下，由合适的α-溴或α-氯代酮与2-氨基嘧啶，得到咪唑并[1,2-a]嘧啶(7)，可制备咪唑并嘧啶(7，步骤4)。使用肼、水合肼或盐酸肼或羟胺，咪唑并[1,2-a]嘧啶(7)可以转变为目标咪唑-2-胺(8，步骤5)。然后，使用偶合剂，可以使化合物8的伯氨基团与反应路线1中化合物5的羧酸偶合，得到式Ia、I和II的化合物。常见的偶合条件包括使用偶合剂，例如苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-磷鎓六氟磷酸盐，丙基磷酸酐，二环己基碳二亚胺，o-苯并三唑-1-基-N,N,N'N'-四甲基脲四氟硼酸盐和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸甲铵盐，以及有机碱，例如N-甲基吗啉或二异丙基胺，得到式Ia的化合物。
除非指出与此相反，否则，使用Symyx® Draw version 3.2(Symyx Solutions, Inc.)或IUPACNAME ACDLABS为本文举例说明的化合物命名和编号。
制备例1
4,4-二氟-3-氧代-丁酸乙酯
将金属钠(7 kg，300 mol)分为几部分加入到EtOH(53.6 kg)中，同时保持温度低于60℃。搅拌该反应混合物，直到钠溶解为止，然后将该混合物冷却至20-30℃。在25-40℃的温度下，将二氟乙酸乙酯(34 kg，274 mol)的EtOAc(63 kg)溶液加入到乙醇钠中。将该反应混合物加热至65℃，同时搅拌。2小时之后，将该混合物冷却至室温。将10% HCl(30 kg HCl和204 kg水)加入到该混合物中，直到该混合物的pH值是6-7为止。用EtOAc(64 kg)提取该混合物，分离，并用EtOAc(60 kg)再次提取水层。合并有机相，并用盐水(NaCl(48 kg)，在水(136 kg)中)洗涤。用4A分子筛粉末(15 kg)干燥有机相，浓缩，得到标题化合物黄褐色油(33 kg，产率73%，GC纯度96%)。1H NMR(500 MHz, CDCl3,)δ 5.91(t, J=54 Hz, 1H), 4.23(m, 2H), 3.70(s, 2H), 1.27(m, 3H)。
制备例2
(2Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4-二氟-3-氧代-丁酸乙酯
将乙酸酐(166 kg，1625 mol)加入到4,4-二氟乙酰醋酸乙酯(33 kg，199 mol)和原甲酸三乙酯(60 kg，407 mol)的混合物中，并保持在90-100℃。将该混合物在90-100℃搅拌8.5小时，使用Dean-Stark装置除去乙酸乙酯。浓缩该反应混合物，得到标题化合物(37.8 kg，产率86%，GC纯度97%)。1H NMR(500 MHz, CDCl3,)δ 7.88(d, J=6 Hz, 1H), 6.3(m, 1H), 4.3(m, 4H), 1.4(m, 3H), 1.32(m, 3H)。
制备例3
3-二甲基氨基丙-2-烯腈
将二甲基乙缩醛(49 kg，412 mol)(在1,4-二噁烷(30 kg)中)加入到氰基乙酸(30 kg，353 mol)的1,4-二噁烷(120 kg)溶液中，并保持在80℃下。将得到的混合物搅拌4小时。而后浓缩该混合物。用MTBE(44 kg)稀释残余物；通过硅胶垫过滤；用MTBE(112 kg)洗涤硅胶垫。收集滤液，真空浓缩，得到48 kg粗品(在溶液中)(19.6 kg，产率57%)。1H NMR(500MHz, CDCl3,)δ 6.91(d, J=13.5 Hz, 1H), 3.7(d, J=13.5 Hz, 1H), 2.86(s, 6H)。
制备例4
5-溴-2-甲酰吡啶-3-甲酸乙酯
向106个独立的20 mL微波管瓶的每个管瓶中加入∶5-溴-2-甲基吡啶-3-甲酸乙酯(5 g，20.48 mmol，1.0当量)、二氧化硒(2.98 g，26.63 mmol，1.3当量)和1,4-二噁烷(13 mL)。利用微波辐射，将这些容器加热至180℃，保持20分钟。将反应容器的内含物合并，通过硅胶垫(2 kg)过滤，并用DCM(3升)洗涤该垫。将合并的滤液减压浓缩。将该物质分为两个相等大小的批次，并各自通过硅胶垫(2 kg)，用DCM洗脱。减压浓缩滤液，提供标题化合物黄色或淡橙色固体(473 g，产率93.2%)。MS(m/z)(79Br/81Br)258/260(M+1)。
制备例5
5-溴-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯
在氮气氛围下，将5-溴-2-甲酰吡啶-3-甲酸乙酯(473 g，1.83 mol，1.0当量)和DCM(4.73升)的混合物冷却至0-5℃。经过2小时，加入二乙基氨基三氟化硫(364 mL，2.75 mol，1.5当量)的无水DCM(473 mL)溶液。将该混合物升温至室温，并搅拌16小时。用3小时将该反应混合物的等分样品转移到冰(2.5升)、水(2.5升)和NaOH(50 wt%水溶液，400 mL)的搅拌混合物中，注意控制发烟。将得到的混合物用DCM(1升)和水(1升)稀释。分离各层，并用DCM(2.5升)提取水层。用水(2.5升)洗涤有机层，并使该混合物沉降10分钟。分离各层，用MgSO4干燥合并的有机层，过滤除去固体，减压浓缩滤液。将得到的物质溶解在DCM(600 mL)中，通过硅胶垫(2 kg)，用DCM(20升)洗脱。减压浓缩洗脱液，用热的异己烷(1升)将得到的物质重结晶。将该混合物冷却至室温，过滤收集固体，用冷异己烷洗涤该固体，在40℃减压干燥，得到标题化合物类白色晶体粉末(367 g)。将所有的异己烷滤液合并，并冷却至-20℃。收集所得到的橙色固体，作为第二批标题化合物(37.5 g，合并产率79%)。MS(m/z)(79Br/81Br)280/282(M+1)。
制备例6
5-氰基-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯
在烧瓶中，将5-溴-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯(150 g，536 mmol，1.0当量)溶解在DMF(1.5升)中。通过真空方法，将得到的混合物脱气，然后用氮气反填充烧瓶，共三次。加入氰化锌(II)(51 g，434 mmol，0.81当量)，而后加入四(三苯基膦基)钯(25.2 g，21.8 mmol，0.04当量)。将得到的悬浮液加热至100℃的内部温度，保持3小时。将该混合物冷却至室温，用水(2升)稀释，并用二乙醚(3×2.5升)提取。用盐水(3×2.5升)洗涤合并的有机相。用Et2O(2.5升)提取合并的水相。合并所有的有机相，用MgSO4干燥。过滤取出固体，并将滤液减压浓缩。将得到的物质用硅胶(2 kg)快速色谱纯化，用1:1 DCM/异己烷至100% DCM的梯度进行洗脱。获得标题化合物无色油，静置时，其固化(114 g，94.1%)。MS(m/z)227(M+1)。
替代的制备例6
将无水DMF(57 kg)加热至60-65℃，并加入(2Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4-二氟-3-氧代-丁酸乙酯(30 kg，135 mol)，而后逐滴加入3-二甲基氨基丙-2-烯腈(31.6 kg，135.1 mol)溶液。将得到的混合物在60-65℃搅拌大约5小时。加入乙酸铵(16 kg，202 mol)，并将该混合物在60-65℃搅拌12小时。将该反应混合物冷却至室温，用水(270 kg)淬灭，用MTBE(114 kg)提取，并分离各层。用MTBE(228 kg)再次提取水相。合并有机相，用水(300 kg)洗涤，通过硅胶(15 kg)过滤，用MTBE(114 kg)洗涤硅胶，收集滤液，浓缩，得到粗品(26 kg)，将粗品用EtOH(47.7 kg)重结晶，进行纯化，得到标题化合物(26 kg，产率85%，GC纯度98.6%)。1H NMR(500 MHz, CDCl3,)δ 9.09(s, 1H), 8.61(s, 1H), 7.44(t, J=54 Hz, 1H), 4.49(q, J=7 Hz, 2H), 1.46(t, J=7 Hz, 3H)。
制备例7
5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯盐酸盐
用氮气吹扫5-氰基-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(160 g，707.4 mmol)和EtOH(2升)的混合物，并搅拌15分钟。加入盐酸(37 wt%水溶液，273 mL，3183.2 mmol，4.5当量)和钯(5%，在炭上，48 g，22.5 mmol，0.031当量)(在EtOH(100 mL)中)，并将得到的悬浮液在60 psi氢气氛围中、在室温搅拌70分钟。用硅藻土过滤，取出固体，用EtOH(1升)洗涤固体滤饼，减压浓缩滤液。将该过程重复两次，合并固体，并在Et2O:DCM[10:1，5.5升]中形成浆液。过滤固体，将得到的物质在45℃下干燥3小时，得到标题化合物浅棕色固体(714 g，产率96%)。MS(m/z)216(M+1)。
制备例8
5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯二盐酸盐
将5-氰基-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯(24 kg，122 mol)、EtOH(234 kg)、Et3N(16 kg，157 mol)、Boc2O(57 kg，251 mol)和湿润5% Pd/C(14.2 kg，KF=50%，0.6 g/g)的混合物加入到高压釜中。将该反应混合物在20-30℃、在0.3-0.4 MPa氢气压力搅拌。将高压釜排空，每小时用新鲜的氢气再填充，填充14.5小时。而后过滤该反应混合物，并用EtOH(28.4 kg)洗涤。将合并的滤液浓缩，得到叔丁氧羰基(BOC)保护的中间体。将该物质用水(70 kg)稀释，并用DCM(124 kg)提取。用活性炭(1.9 kg，0.1 g/g)和4Å分子筛粉末(9.5 kg)分离有机层。将该混合物搅拌3小时，而后过滤。用MTBE(140 kg)稀释滤液，在20-30℃用HCl(19.2 kg)和1,4-二噁烷(80 kg)处理，得到悬浮液。逐滴加入水(5.0 kg)和1,4二噁烷(15 kg)溶液，然后将得到的混合物过滤。用MTBE(48 kg)和DCM(138 kg)洗涤所得到的滤饼，得到标题产物类白色固体(18.5 kg，66.3%，98% HPLC)。1H NMR(500 MHz, d6-DMSO)δ 9.00(s, 1H), 8.85(s, 2H), 8.56(s, 1H), 7.42(t, J=54 Hz, 1H), 4.37(q, J=7 Hz, 2H), 4.20(q, J=7 Hz, 2H), 1.34(t, J=7 Hz, 3H)。
制备例9
2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}吡啶-3-甲酸乙酯
在热控反应器中，将5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯盐酸盐(198 g，742.4 mmol，1.0当量)、DCM(3040 mL)和DIPEA(520 mL，2.98 mol，4当量)的混合物搅拌，然后加入异丁酰氯溶液(95 mL，903 mmol，1.2当量)，加入速率应该使得内部温度保持在18℃和22℃之间。搅拌90分钟。用NaHCO3(饱和，1升)提取该反应混合物。加入水(1升)和DCM(1升)，将得到的悬浮液通过硅藻土过滤。合并所有的有机相，用MgSO4干燥。过滤取出固体，并将滤液减压浓缩。通过与异己烷∶Et2O[1:1，1升]形成浆液，将得到的物质纯化。过滤收集固体，用冷异己烷(500 mL)洗涤，在50℃真空干燥，得到标题化合物类白色晶体粉末(164 g)。MS(m/z)301(M+1)。
制备例10
2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}吡啶-3-甲酸
将2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}吡啶-3-甲酸乙酯(414 g，1.38 mol，1.0当量)溶解在1,4-二噁烷(4.97升)中。加入水(2.48升)和氢氧化锂(125.6 g，2.96 mol，2.5当量)，然后将得到的混合物在室温搅拌60分钟。将1,4-二噁烷溶液减压浓缩至一半体积，慢慢地加入盐酸(5N，1.16升，5.79 mol，4.2当量)，保持温度小于20℃，直到pH值是2为止。过滤收集固体，空气干燥18小时，而后在真空烘箱中、在40℃下放置18小时，得到白色固体(355.4 g，产率94.7%)。MS(m/z)303(M+1)。
替代的制备例10
在氮气氛围中，将5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯二盐酸盐(0.5003 kg，1.649 mol)、无水甲苯(3.0277(kg)和三乙胺(0.8347 kg，8.24 mol)加入到15升反应器中。将该反应冷却至5℃。用6分钟逐滴加入异丁酰氯(0.2110 kg，1.98 mol)的无水甲苯，(0.4352 kg)溶液，同时保持温度在0-15℃。将得到的浆液加热至20℃，并继续搅拌1.25小时。用20分钟将氢氧化锂溶液(使用LiOH一水合物(0.3561 kg)和水(2.5377 kg)制备)加入到该反应浆液中。将该混合物在15-25℃搅拌过夜(18.8小时)。分离各层，用无水甲苯(1.0796 kg)洗涤水层。分离各层，将水相用6N HCl(0.5521 kg，用12N HCl和水制备)酸化至pH=3.5-4.5。将该浆液在15-25℃搅拌1.6小时。过滤分离固体。用滤液冲洗反应器两次，而后用水(1.0 kg)和无水甲苯(0.867 kg)洗涤固体。将湿润的固体在70℃减压干燥65.2小时，得到标题化合物(0.3146 kg，产率70%)。1H-NMR(400 MHz, d6-DMSO)δ 8.72(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.48(t, J=5.8 Hz, 1H), 8.17(s, 1H), 7.51(t, J=54.3 Hz, 1H), 4.38(d, J=5.8 Hz, 2H), 2.45(m, J=6.8 Hz, 1H), 1.03(d, J=6.8 Hz, 6H)。
制备例11
2-溴-1-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮
在20至25℃，将4-三氟甲基苯丙酮(100 g，0.494 mol)加入到冰醋酸(200 mL)中。用60分钟加入在冰醋酸(200 mL)中的溴(79 g，0.494 mol)。将该反应混合物搅拌1至1.5小时。用1.2升冷水(0至5°)淬灭该反应，并将该混合物在相同温度搅拌3小时。过滤该浆液，在10至15℃用水(1升)洗涤固体，将该固体在25至30℃下真空干燥15小时，得到标题化合物(128.1 g，产率92.1%)。1H NMR(300 MHz, d6-DMSO)δ 8.20-8.23(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.80-7.93(d, J=8.4 Hz, 2H), 5.82-5.89(q, J=6.3 Hz, 1H), 1.79-1.81(d, J=6.3 Hz, 3H)。
制备例12
2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
在热控反应器中，将2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(500 g，1.78 mol，1当量)、IPA(5升)、2-氨基嘧啶(205 g，2.13 mol，1.2当量)和碳酸氢钠(298.8 g，3.55 mol，2当量)的混合物在80℃搅拌18小时。冷却该悬浮液，并真空浓缩。将得到的混合物在DCM(5升)中稀释，并用盐水(2升)洗涤。用DCM(2.5升)再提取盐水洗液，合并所有的有机相，用MgSO4干燥，过滤，收集滤液。将滤液减压浓缩至干，并使得到的红色胶质在Et2O(1.5升)中形成浆液。过滤收集所得到的固体，空气干燥45分钟，得到标题化合物细末状灰白色固体(108 g，产率22%)。MS(m/z)278(M+1)。
替代的方法A∶制备例12
2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
将2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(7.120 g，25.332 mmol)和2-氨基嘧啶(5.464 g，55.729 mmol)溶解在EtOH(40.0 mL)中。将该混合物加热至回流，并搅拌24小时。真空浓缩。将残余物溶解在EtOAc(750 mL)中，用饱和Na2S2O3水溶液(250 mL)、饱和NaHCO3水溶液(250 mL)和饱和NaCl(350 mL)顺序洗涤。将橙色残余物用庚烷/EtOAc结晶，得到标题产物白色固体(3.29 g，产率46.85%)。1H NMR(399.83 MHz, d6-DMSO)δ 8.84(dd, J=1.9, 7.0 Hz, 1H), 8.54(dd, J=2.0, 4.2 Hz, 1H), 8.06-8.04(m, 2H), 7.83-7.81(m, 2H), 7.10(dd, J=4.1, 6.9 Hz, 1H), 2.68(s, 3H)。
替代的方法B∶制备例12
2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
在25至30℃，将2-溴-1-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮(100 g，0.356 mol)、2-氨基嘧啶(33.85 g，0.356 mol)和碳酸氢钠(59.8 g，0.811 mol)加入到甲苯(500 mL)中。将该混合物加热至90到100℃，并搅拌24小时。而后，将该混合物冷却至40到45℃，并将标题化合物减压蒸馏。将馏分冷却至25至30℃，加入水(1升)，并将该混合物搅拌4小时。过滤该混合物，收集固体，而后用10% MTBE(200 mL)的己烷溶液洗涤固体。在45至50℃下，将固体真空干燥12小时，得到标题化合物(35.4 g，产率35%)。1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ 8.58(q, 1H), 8.24-8.26(d, J=6.6 Hz, 1H), 8.00-8.02(d, J=8.1 Hz, 2H), 7.72-7.75(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.92-6.96 dd, J=3.9 Hz and 4.2 Hz, 1H), 2.69(s, 3H)。
制备例13
4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺
将2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶(180 g，649.2 mmol，1当量)（在EtOH(1.4升)中）和羟胺(159 mL，2.596 mol，4当量)的混合物在82℃的内部温度搅拌48小时。冷却该混合物，并浓缩至干。用DCM(1.5升)稀释该残余物，并用水(2 ×500 mL)和盐水(500 mL)顺序洗涤。用MgSO4干燥有机相，过滤，收集滤液，真空除去溶剂，得到黄色胶质。将得到的物质用硅胶(2 kg)快速色谱纯化，用4:1:0.02 DCM/MeOH/NH3的梯度进行洗脱，获得标题化合物黄色泡沫体(产率95%)。MS(m/z)242(M+1)。
基本上利用制备例13的方法，使用合适的咪唑并嘧啶，制备下列表1中的化合物。
Figure 496238DEST_PATH_IMAGE010
制备例20
3-溴-4-(二溴甲基)苄腈
将3-溴-4-甲基苄腈(25.0 g，127.5 mmol，1.0当量)和N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)(5.53 g，306.1 mmol，2.4当量)的混合物在四氯化碳(200 mL)中加热至95℃，保持两天。冷却所得到的悬浮液，并过滤取出固体。减压浓缩滤液，用硅胶色谱纯化所得到的粗品，用2-5% THF/己烷的梯度进行洗脱，提供标题化合物(37.09 g，产率82%)。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ 8.10(d, 1H, J=8.2 Hz), 7.79(d, 1H, J=1.3 Hz), 7.67(dd, 1H, J=8.2, 1.3 Hz), 6.99(s, 1H)。
制备例21
3-溴-4-(二氟甲基)苄腈
在氮气氛围下，将四氟硼酸银(26.69 g，135.7 mmol，2.5当量)加入到3-溴-4-(二溴甲基)苄腈(19.2 g，54.3 mmol，1.0当量)的DCM(200 mL)溶液中，并在室温搅拌过夜。过滤取出固体，减压浓缩滤液，对得到的粗品进行硅胶色谱，用2-5% THF/己烷的梯度进行洗脱，提供标题化合物(9.0 g，产率71%)。ES/MS(m/z)(79Br/81Br)231/233(M)。
制备例22
5-氰基-2-(二氟甲基)苯甲酸甲酯
用氮气吹扫3-溴-4-(二氟甲基)苄腈(8.87 g，38.2 mmol，1.0当量)、三乙胺(16.0 mL，114.7 mmol，3.0当量)、MeOH(70 mL)和DMF(120 mL)的混合物，然后用醋酸钯(II)(867 mg，3.82 mmol，0.1当量)和1,3-二(二苯基膦基)丙烷(1.61 g，3.82 mmol，0.1当量)处理该混合物。将该混合物在138 kPag一氧化碳中、在室温搅拌两天，而后在80℃搅拌一天。将该混合物冷却至室温，并用Et2O(300 mL)稀释。用水和饱和氯化钠洗涤该混合物，并分离有机层。用硫酸钠干燥有机层，过滤，收集滤液，并减压浓缩。对所得到的粗品进行硅胶色谱，用10-15% THF/己烷的梯度进行洗脱，得到标题化合物(6.19 g，产率77%)。ES/MS(m/z)211(M)。
制备例23
5-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
将5-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸(10 g，0.044 mol)溶解在MeOH(150 mL)中。慢慢地加入亚硫酰氯(50 g，0.421 mol)。将得到的混合物加热至70℃，并搅拌12小时。将该混合物减压浓缩。将残余物倾倒在水(100 mL)中，并用EtOAc(2 200 mL)提取水溶液。用硫酸钠干燥合并的有机物，减压浓缩，得到标题化合物(11.5 g，96.5%)油。1H NMR(300 MHz, CDCl3,)δ 7.78(d, J=2.1 Hz, 1H), 7.69(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.57(dd, J=2.1, 8.7 Hz, 1H), 3.95(s, 3H)。
制备例24
5-氰基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
将5-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(500 mg，2.1 mmol)、氰化锌(II)(197 mg，1.68 mmol)、锌(55 mg，0.84 mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(II)(192 mg，0.21 mmol)和二苯基膦基二茂铁(233 mg，0.42 mmol)溶解在二甲基乙酰胺(20 mL)中。将该反应混合物加热至85℃，并搅拌12小时。将得到的混合物倾倒在水中，并用EtOAc(2×100 mL)提取。用硫酸钠干燥合并的有机物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用硅胶色谱纯化残余物，用50∶1石油醚∶EtOAc洗脱，得到标题化合物(320 mg，产率66.5%)白色固体。1H NMR(300 MHz, CDCl3,)δ 8.09(s, 1H), 7.90(s, 2H), 3.80(s, 3H)。
制备例25
5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)苯甲酸甲酯盐酸盐
用氮气吹扫5-氰基-2-(二氟甲基)苯甲酸甲酯(9.37 g，44.4 mmol，1.0当量)、钯(10%，在炭上，3.00 g，2.82 mmol，0.064当量)和MeOH(50 mL)的混合物，然后加入盐酸(37 wt%水溶液，8.0 mL，105.6 mmol，2.38当量)，并将得到的悬浮液在275 kPag氢气氛围中、在室温搅拌过夜。过滤取出固体，减压浓缩滤液，将得到的粗品在40℃、在真空烘箱中干燥过夜，得到标题化合物浅棕色固体(7.01 g，产率83%)。ES/MS(m/z)216(M+1)。
制备例26
5-(氨甲基)-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯盐酸盐
基本上利用制备方法25，使用合适的腈来制备。ES/MS m/z 234(M+1-Cl)。
制备例27
2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙酰基氨基)甲基]苯甲酸
在室温下，将异丁酰氯(0.571 mL，5.42 mmol，1.05当量)加入到5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)苯甲酸甲酯盐酸盐(1.30 g，5.17 mmol，1.0当量)和三乙胺(1.51 mL，10.85 mmol，2.1当量)在DCM(50 mL)中的混合物中，并搅拌该混合物一小时。用DCM稀释该混合物，用水洗涤，然后用饱和氯化钠水溶液洗涤。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩滤液。将得到的粗品溶解在1,4-二噁烷(10 mL)中，并加入氢氧化钠(5N，2 mL，10 mmol，1.93当量)。将得到的悬浮液在40℃搅拌过夜。将该混合物减压浓缩，用1N盐酸水溶液处理所得到的残余物，直到pH值达到3为止。用EtOAc(2×30 mL)提取所得到的悬浮液。用饱和氯化钠水溶液(50 mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到标题化合物白色固体(1.32 g，产率94%)。ES/MS(m/z)272(M+1)。
制备例28
2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙酰基氨基)甲基]吡啶-3-甲酸乙酯
用异丁酰氯(8.95 mL，85.05 mmol，1.36当量)处理5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯二盐酸盐(18.9 g，62.3 mmol，1.0当量)、DCM(300 mL)和N,N-二异丙基乙胺(49.4 mL，283.5 mmol，4.54当量)的混合物。将得到的悬浮液在室温搅拌90分钟，将该混合物倾倒在饱和碳酸氢钠水溶液(50 mL)中，并用DCM(3×20 mL)提取。合并有机提取物，用MgSO4干燥，过滤取出固体，减压浓缩滤液，得到黄色的半固体。将该物质与1∶1 Et2O∶异己烷(100 mL)一起研磨，过滤，分离出标题化合物白色固体(17.5 g，产率93.6%)。ES/MS(m/z)301(M+1)。
替代的制备例28
2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙酰基氨基)甲基]吡啶-3-甲酸乙酯
将5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯二盐酸盐(29.8 g，111.8 mmol，1.0当量)、DCM(510 mL)，和三乙胺(59.2 mL，424.6 mmol，3.8当量)的混合物冷却至0℃，然后用20分钟逐滴加入异丁酰氯(15.3 mL，145.3 mmol，1.3当量)的DCM(23 mL)溶液。搅拌过夜，同时将该混合物升温至室温。过滤取出固体沉淀，并用EtOAc(500 mL)冲洗过滤器。将滤液减压浓缩，过滤浓缩物，取出固体，用EtOAc冲洗固体。减压浓缩滤液，得到黄色油。对该粗品进行硅胶色谱，用40-90% EtOAc/己烷的梯度进行洗脱，得到标题化合物浅黄色结晶固体(25.8 g，产率77%)。ES/MS(m/z)301(M+1)。
基本上利用制备例28的方法，使用合适的铵盐或伯胺，制备下列表2中的化合物。
Figure 318701DEST_PATH_IMAGE012
制备例35
5-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯
将5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸乙酯盐酸盐(17.849 mmol，4.760 g)、THF(180 mL)和叔丁氧羰基叔丁基碳酸酯(21.419 mmol，4.675 mL)合并。将该混合物在室温搅拌大约10分钟。加入三乙胺(5.225 mL，37.484 mmol)，并在室温搅拌16小时。真空过滤取出固体，并用EtOAc冲洗。减压浓缩滤液。用硅胶色谱(220 g RediSep®硅胶柱)纯化所得到的黄色油，用5-45% EtOAc/己烷的梯度进行洗脱，得到标题化合物(3.62 g，产率68%)浅黄色结晶固体。1H NMR(399.80 MHz, d6-DMSO)δ 8.71(d, J=2.1 Hz, 1H), 8.15-8.13(m, 1H), 7.56-7.24(m, 2H), 4.33(q, J=7.1 Hz, 2H), 4.24-4.21(m, 2H), 1.36(s, 9H), 1.30(t, J=7.1 Hz, 3H)。LCMS(m/z) 331(M+1)。
制备例36
2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙酰基氨基)甲基]吡啶-3-甲酸
将2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙酰基氨基)甲基]吡啶-3-甲酸乙酯(19.0 g，63.3 mmol，1.0当量)、1,4-二噁烷(244 mL)、水(125 mL)和氢氧化锂(5.71 g，136 mmol，2.15当量)的混合物在室温搅拌1小时。将该混合物用盐酸水溶液(5N，53.1 mL，266 mmol，4.2当量)酸化至pH=2。减压除去有机溶剂，将得到的悬浮液用水(500 mL)稀释，过滤。收集所得到的白色固体，用水(2×150 mL)洗涤白色固体，空气干燥18小时，得到标题化合物细白色固体(18.0 g，产率92%)。ES/MS(m/z)273(M+1)。
基本上利用制备例36的方法，使用合适的酯，制备下列表3中的化合物。
Figure 585734DEST_PATH_IMAGE014
制备例45
5-溴-2-(二氟甲基)吡啶
将5-溴吡啶-2-甲醛(10.0g，53.76 mmol)溶解在DCM(200 mL)中。慢慢地加入二(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(39 g，134.4 mmol)。将得到的溶液加热至45℃，并搅拌16小时。将反应物慢慢地倾倒在冰水(50 mL)中。将该溶液的pH值用饱和NaHCO3水溶液调节至7。用DCM(3×20 mL)提取该水溶液。用硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用快速色谱纯化残余物，用4:1比例的石油醚/EtOAc洗脱，得到标题化合物(8.5 g，74%产率)黄色液体。1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ 8.73(d, J=2.4 Hz, 1H), 8.00(dd, J=2.4, 8.1 Hz, 1H), 7.56(d, J=8.1 Hz, 1H), 6.44-6.80(t, J=54.9 Hz, 1Hz)。
制备例46
6-(二氟甲基)-N-甲氧基-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺
将5-溴-2-(二氟甲基)吡啶(5.00 g，24.03 mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(3.52 g，36.09 mmol)、醋酸钯(II)(0.162 g，0.722 mmol)、4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽(0.695 g，1.201 mmol)和磷酸钾(三碱基)(15.3 g，72.07 mmol)在间二甲苯(50 mL)中混合。将反应容器用一氧化碳气体吹扫。将该溶液加热至100℃，并在一氧化碳氛围中搅拌16小时。在通风良好的地方，用氮气安全地吹扫容器，直到容器中不含一氧化碳为止。加入水(200 mL)，淬灭该反应。将该混合物的pH值用饱和碳酸氢钠水溶液调节至7。用EtOAc提取该混合物。用硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用硅胶色谱纯化所得到的残余物，用2:1比例的石油醚/EtOAc洗脱，得到标题化合物(2.5 g，产率48%)透明油。LCMS(m/z)216(M+1)。
制备例47
4-(二氟甲基)苯甲酸甲酯
将对甲酯基苯甲醛(3.103 g，18.713 mmol)溶解在DCM(50 mL)中。加入二(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(9.079 mL，46.783 mmol)，并搅拌16小时。将该反应混合物慢慢地倒入饱和NaHCO3水溶液(300 mL)中。搅拌，直到气体完全逸出为止(大约2小时)。用DCM(2×100 mL)提取。用Na2SO4干燥有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用硅胶色谱纯化(Analogix® 80 g @ 55 mL/min)，用己烷至20%乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱30分钟，得到标题化合物白色固体(2.863 g，产率82%)。1H NMR(400.15 MHz, d6-DMSO)δ 8.08-8.06(m, 2H), 7.70(ddd, J=8.7, 1.1, 0.6 Hz, 2H), 7.26-6.98(t, J=55.2 Hz, 1H), 3.86(s, 3H)。
制备例48
4-(二氟甲基)苯甲酸
将4-(二氟甲基)苯甲酸甲酯(2.855 g，15.336 mmol)溶解在MeOH(30 mL)中。加入氢氧化钾(8.41 mL，2当量，30.7 mmol)，并搅拌该混合物16小时。减压浓缩该反应混合物，并加入EtOAc(100 mL)和1N HCl(50 mL)。搅拌30分钟。分离各层。用Na2SO4干燥有机物，过滤，收集滤液，减压浓缩滤液，得到标题化合物白色固体(2.541 g，产率96%)。1H NMR(399.83 MHz, d6-DMSO)δ 13.29-13.28(m, 1H), 8.04(d, J=7.8 Hz, 2H), 7.67(d, J=8.0 Hz, 2H), 7.24-6.97(t, J=55.6, 1H)。
制备例49
N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺
将6-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸(0.949 g，4.767 mmol)溶解在DMF(10 mL)中，并加入N,O-二甲基羟胺盐酸盐(0.590 g，5.959 mmol)和DIPEA(1.67 mL，9.534 mmol)，而后加入BOP(2.259 g，5.005 mmol)。将得到的混合物搅拌大约60小时。将反应混合物倾倒在水(200 mL)中。用EtOAc(4×75 mL)提取。用饱和氯化钠水溶液(5×75 mL)洗涤合并的有机提取物。用硫酸钠干燥有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。将残余物溶解在EtOAc(100 mL)中。用饱和NaHCO3水溶液(50 mL)洗涤EtOAc中的残余物，除去任何残留的酸起始原料，而后用水(2×50 mL)洗涤，而后用饱和氯化钠水溶液(2×50 mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤，收集滤液，减压浓缩滤液，得到标题化合物澄清液(1.04 g，产率93%)。1H NMR(400.43 MHz, d6-DMSO)δ 8.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.25-8.23(m, 1H), 7.96(dd, J=0.7, 8.1 Hz, 1H), 3.52(s, 3H), 3.27(s, 3H)。
基本上利用制备例49的方法，使用合适的酸，制备下列表4中的化合物。
Figure 220852DEST_PATH_IMAGE016
制备例53
1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙酮
将N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(0.685 g，2.92 mmol)溶解在THF(20 mL)中。加入甲基溴化镁(3.0M，在EtO2中，1.950 mL，5.850 mmol)。将该混合物搅拌16小时。将该反应混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(20 mL)中。用EtOAc(3×20 mL)提取。用水(30 mL)和饱和氯化钠(2×30 mL)洗涤合并的有机提取物。用硫酸钠干燥有机提取物，过滤，收集滤液，减压浓缩滤液，得到标题化合物(0.545 g，98%)浅黄色固体。1H NMR(400.43 MHz, d6-DMSO)δ 9.21-9.21(m, 1H), 8.51-8.49(m, 1H), 8.03(d, J=8.2 Hz, 1H), 2.64(s, 3H)。
基本上利用制备例53的方法，使用合适的Weinreb酰胺，使用乙基溴化镁代替甲基溴化镁，制备下列表5中的化合物。
Figure 889731DEST_PATH_IMAGE018
制备例57
1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-醇
将6-三氟甲基-吡啶-3-甲醛(3.526 g，20.136 mmol)溶解在THF(50 mL)中。快速加入乙基溴化镁(3.0M，在Et2O中，7.38 mL，22.1 mmol)。搅拌30分钟。将该反应混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(100 mL)中。用EtOAc(3×50 mL)提取。用饱和NaCl水溶液(75 mL)洗涤合并的有机提取物。用Na2SO4干燥有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用快速色谱纯化残余物(Analogix® 40g @ 40 mL/min)，用EtOAc/己烷(5%至50%)的梯度洗脱30分钟，得到标题化合物(2.01 g，49%产率)黄色油。1H NMR(400.43 MHz, d6-DMSO)δ 8.66(d, J=1.6 Hz, 1H), 7.95(dd, J=1.9, 8.1 Hz, 1H), 7.81(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.47(d, J=4.5 Hz, 1H), 4.60(q, J=5.8 Hz, 1H), 1.65-1.59(m, 2H), 0.79(t, J=7.4 Hz, 3H)。
制备例58
1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-酮
将1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-醇(2.010 g，9.796 mmol)溶解在DCM(40 mL)中。加入3,3,3-三乙酰氧基-3-碘代苯酞(4.712 g，10.776 mmol)，并搅拌16小时。用DCM(100 mL)稀释。用0.5N NaOH(100 mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机提取物，过滤，收集滤液，减压浓缩滤液，得到标题化合物(1.910 g，产率96%)白色固体。1H NMR(400.43 MHz, d6-DMSO)δ 9.21(dd, J=0.5, 1.4 Hz, 1H), 8.51-8.49(m, 1H), 8.03(dd, J=0.7, 8.1 Hz, 1H), 3.12(q, J=7.1 Hz, 2H), 1.05(t, J=7.1 Hz, 3H)。
制备例59
1-[4-(二氟甲基)苯基]乙酮
将4-乙酰基苯甲醛(1.270 mL，8.956 mmol)溶解在DCM(20 mL)中。加入(3.963 g，17.913 mmol)，并搅拌5天。将该反应混合物慢慢地倒入饱和碳酸氢钠水溶液(250 mL)中。搅拌该混合物，直到气体完全逸出为止(～2小时)。用DCM(2×100 mL)提取。用Na2SO4干燥有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用快速色谱纯化残余物(Analogix® 40g @ 40 mL/min)，用己烷至20% EtOAc/己烷的梯度洗脱30分钟，得到标题化合物透明油(0.714 g，产率47%)。1H NMR(399.83 MHz, d6-DMSO)δ 8.06(d, J=8.1 Hz, 2H), 7.70(d, J=8.1 Hz, 2H), 7.25-6.97(t, J=55.6 Hz, 1H), 2.60(s, 3H)。
制备例60
1-[2-甲基-4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮
将1-溴-2-甲基-4-(三氟甲基)苯(2.00 g，8.367 mmol)和THF(17 mL)的溶液冷却至-71℃，而后用5分钟加入正丁基锂(2.5M，在己烷中，9.204 mmol，3.681 mL)。将该混合物在-71℃搅拌15分钟。用3-4分钟将N-甲氧基-N-甲基丙酰胺(0.980 g，8.367 mmol)滴加入到该混合物中，保持温度低于-65℃。将该溶液在-71℃下继续搅拌15-20分钟，然后将该溶液升温到室温。在室温搅拌40分钟。用饱和氯化铵水溶液淬灭该反应。用Et2O提取水层。用水和盐水洗涤合并的有机提取物。用硫酸钠干燥该混合物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用快速色谱纯化残余物(40 g RediSep®柱)，用0-40% DCM/戊烷的梯度进行洗脱，得到标题化合物无色油(1.490 g，产率82%)。1H NMR(399.80 MHz, d6-DMSO)δ 7.84(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.64-7.61(m, 2H), 2.93(q, J=7.1 Hz, 2H), 2.39(s, 3H), 1.03(t, J=7.2 Hz, 3H)。
基本上利用制备例60的方法，使用合适的芳基溴，制备下列表6中的化合物。
Figure 820778DEST_PATH_IMAGE020
制备例64
2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮
将对三氟甲基苯丙酮(5.130 g，25.120 mmol)溶解在氢溴酸(30.00 mL)和乙酸(20 mL)中。用30分钟滴加入溴(1.23 mL，23.864 mmol)/乙酸(25 mL)。将该反应混合物搅拌48小时，并用水(1升)和EtOAc(250 mL)稀释该反应混合物。以份额方式加入固体碳酸钠，将pH值调节到～7，在加入之间允许气体逸出终止。用EtOAc(2×250 mL)提取所得到的混合物。用Na2SO4干燥有机提取物。过滤，收集滤液，减压浓缩滤液，得到标题化合物透明油(7.140 g，粗品产率100%)。1H NMR(399.83 MHz, d6-DMSO)δ 8.20(dd, J=0.7, 8.8 Hz, 2H), 7.92-7.90(m, 2H), 5.85(q, J=6.5 Hz, 1H), 1.78(d, J=6.5 Hz, 3H)。
基本上利用制备例64的方法，使用合适的酮，制备下列表7中的化合物。
替代的制备例70
2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮
将对三氟甲基苯丙酮(propiophenone，75 g，360 mmol，1.0当量)加入到乙酸(375 mL)中。用45分钟滴加入溴(18.1 mL，352 mmol，0.98当量)/乙酸(375 mL)。加入完毕后，将该混合物加热到40℃的内部温度，并搅拌90分钟。减压除去挥发组分，并将残余物溶解在Et2O(300 mL)中。用饱和碳酸氢钠水溶液(4×200 mL)处理，小心气体剧烈逸出。分离有机相，并用MgSO4干燥。过滤取出固体，收集滤液，减压浓缩滤液，得到标题化合物无色油，其静置时固化(93 g，产率92.0%)。1H NMR(400 MHz, d6-DMSO)δ 8.13(d, J=8.3 Hz, 2H), 7.76(d, J=8.3 Hz, 2H), 5.27(q, J=6.5 Hz, 1H), 1.93(d, J=6.5 Hz, 3H)。
制备例71
2-溴-1-[2-甲基-4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮
将1-[2-甲基-4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(0.805g，3.723 mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(0.662 g，3.723 mmol)、SCX-2®(1 mmol/g；0.298 g，0.298 mmol)和Et2O(11 mL)加入到配备有搅拌棒的螺帽盖管瓶中。将该反应在室温搅拌2小时。加入N-溴代琥珀酰亚胺(0.663 g，3.723 mmol)，并在室温下继续搅拌另外2小时。加入更多的N-溴代琥珀酰亚胺(0.663 g，3.723 mmol)，并在室温下继续搅拌2小时。过滤该反应，并用足够的Et2O洗涤固体。收集滤液，并将滤液减压浓缩。将得到的混合物放置在冰箱中过夜。用快速色谱纯化所得到的物质(120 RediSep®硅胶柱)，用0-30% DCM/戊烷的梯度进行洗脱，得到标题化合物无色油(0.820 g，产率75%)。1H NMR(399.80 MHz, d6-DMSO)δ 7.95(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.69-7.65(m, 2H), 5.64(q, J=6.5 Hz, 1H), 2.39(s, 3H), 1.74(d, J=6.5 Hz, 3H)。
基本上利用制备例71的方法，使用合适的酮，制备下列表8中的化合物。
Figure 249802DEST_PATH_IMAGE024
制备例82
N-[5-[6-(二氟甲基)-3-吡啶基]-4-甲基-1H-咪唑-2-基]乙酰胺
将2-溴-1-[6-(二氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-酮(0.500 g，1.89 mmol)和乙酰基胍(0.514 g，5.68 mmol)溶解在DMF(12 mL)中。将该混合物加热至50℃，并搅拌16小时。将该混合物倾倒在水中，并用EtOAc(3×20 mL)提取。用硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用快速色谱(硅胶)纯化所得到的残余物，用40:1比例的DCM/MeOH洗脱，得到标题化合物白色固体(0.229 g，产率46%)。LCMS(m/z)267(M+1)。
制备例83
2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
在热控反应器中，将2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(500 g，1.78 mol，1当量)、IPA(5升)、2-氨基嘧啶(205 g，2.13 mol，1.2当量)和碳酸氢钠(298.8 g，3.55 mol，2当量)的混合物在80℃搅拌18小时。冷却该悬浮液，并真空浓缩。将得到的混合物用DCM(5升)稀释，并用盐水(2升)洗涤。用DCM(2.5升)再提取盐水洗液，合并所有的有机提取物，用MgSO4干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩滤液，得到红色胶质。使所得到的红色胶质在Et2O(1.5 L)中形成浆液，过滤，收集固体。将固体空气干燥45分钟，得到产物细的类白色固体(108 g，产率22%)。ES/MS(m/z)278(M+1)。
替代的制备例83
2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶
将2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]丙-1-酮(7.120 g，25.332 mmol)和2-氨基嘧啶(5.464 g，55.729 mmol)溶解在EtOH(40 mL)中。将该混合物加热至回流，并搅拌24小时。冷却至室温，并减压浓缩。将残余物溶解在EtOAc(750 mL)中。用饱和Na2S2O3水溶液(250 mL)、饱和NaHCO3水溶液(250 mL)和饱和NaCl水溶液(350 mL)顺序洗涤有机提取物。用庚烷/EtOAc将橙色残余物结晶。收集标题化合物白色固体(3.290g，产率46.85%)。1H NMR(399.83 MHz, d6-DMSO)δ 8.84(dd, J=1.9, 7.0 Hz, 1H), 8.54(dd, J=2.0, 4.2 Hz, 1H), 8.06-8.04(m, 2H), 7.83-7.81(m, 2H), 7.10(dd, J=4.1, 6.9 Hz, 1H), 2.68(s, 3H)。ES/MS(m/z)277.99。
基本上利用制备例83的方法，使用合适的α-溴代酮或α-氯代酮，制备下列表9中的化合物。
制备例90
2-甲基-3-(对甲苯基)咪唑并[1,2-a]嘧啶
将3-(4-溴苯基)-2-甲基-咪唑并[1,2-a]嘧啶(1.00 g，3.470 mmol)和DMF(17 mL)加入到50 mL螺旋帽管瓶(配备搅拌棒)中。将该溶液用氮气脱气3分钟。将四甲基锡烷(1.91 mL，13.88 mmol)和二(三苯基膦)氯化钯(II)(0.36 g，520.57 μmol)加到该管瓶中，并将管瓶封闭。将该混合物在油浴中加热到130℃，保持2小时。将该反应冷却到室温，并用过量的水淬灭。用EtOAc提取该混合物。用盐水洗涤合并的有机提取物。用碳酸钾干燥有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用硅胶色谱纯化粗品混合物，使用50-100%己烷/EtOAc的梯度，得到标题化合物白色固体(0.50 g，产率64%)。LCMS(m/z)224.2(M+1). . 1H NMR(399.83 MHz, d6-DMSO)δ 8.81-8.79(m, 1H), 8.51-8.49(m, 1H), 7.73(d, J=7.9 Hz, 2H), 7.31(d, J=7.9 Hz, 2H), 7.09-7.06(m, 1H), 2.64(s, 3H), 2.36(s, 3H)。
制备例91
5-[6-(二氟甲基)-3-吡啶基]-4-甲基-1H-咪唑-2-胺
将N-[5-[6-(二氟甲基)-3-吡啶基]-4-甲基-1H-咪唑-2-基]乙酰胺(0.172 g，0.65 mmol)溶解在MeOH(5 mL)和水(5 mL)中。将该混合物加热至60℃。加入盐酸(12N，5 mL，60 mmol)。将该混合物在60℃搅拌2小时。将该混合物浓缩至大约10 mL体积。将水溶液的pH值调节至8。用EtOAc(2×20 mL)提取所得到的溶液。用硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤，收集滤液，减压浓缩滤液，得到标题化合物黄色油(0.153 g，粗品产率100%)。LCMS(m/z)225(M+1)。
制备例92
[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]铵甲酸盐
将2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶(2.176 g，7.849 mmol)悬浮在EtOH(15.00 mL，257.646 mmol)中。加入水合肼(4.00 mL，81.821 mmol)。用微波辐射加热至125℃。搅拌30分钟，并减压浓缩。将残余物溶解在EtOAc(75 mL)中，用水(3×50 mL)洗涤有机提取物，而后用饱和NaCl水溶液(50 mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机提取物，过滤，收集滤液，并真空浓缩滤液。用反相快速色谱纯化(Analogix® 150 g @ 40 mL/min)，用5-30% ACN/水的梯度洗脱35分钟。通过加载samplet（样本），物质沉淀出来。从samplet中收集所得到的白色物质，将其在MeOH中回流15分钟。通过硅藻土过滤该MeOH混合物，收集滤液，用MeOH洗涤硅藻土。减压浓缩合并的滤液，得到标题化合物(1.643 g，72.9%产率)白色结晶固体。1H NMR(400.43 MHz, d6-DMSO)δ 13.14-13.11(m, 2H), 7.77(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.66(d, J=8.2 Hz, 2H), 7.47(s, 2H), 2.26(s, 3H)。ES/MS(m/z)241.99 (母体+1，未检出甲酸盐（ not detected）)。
制备例93
4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺；草酸
在25至30℃，将2-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]咪唑并[1,2-a]嘧啶(50 g，0.180 mol)、ACN(500 mL)和肼一水合物(20.1 g 0.628 mol)加在一起。将该反应混合物加热至78至82℃，并搅拌40至48小时。用HPLC监测反应进展。当反应完成时，将该混合物冷却至40至45℃，浓缩至残余体积100 mL，通过与甲苯(3×250 mL)共沸蒸馏，除去残留水分。将该反应混合物冷却至25至30℃，加入DCM(250 mL)，然后搅拌该混合物15分钟。将水(500 mL)加入到该混合物中，并搅拌30分钟。分离各层，用水(4×500 mL)洗涤有机层。在30至40℃，将有机层减压浓缩至50 mL的剩余体积，得到粗品碱。将该混合物冷却至25至30℃，并加入MeOH(100 mL)。用60分钟加入草酸二水合物(45.5 g，0.500 mol)的MeOH(300 mL)溶液，并在25至30℃搅拌该混合物2小时。将该浆液冷却至0至5℃，并搅拌一小时。过滤该混合物，用MeOH(100 mL)洗涤固体，收集固体，将固体在45至50℃下真空干燥12小时，得到标题化合物(41.0 g，产率78%)。1H NMR(300 MHz, d6-DMSO)δ 7.82(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.69(d, J=8.1 Hz, 2H), 2.32(s, 3H)。
制备例94
4-甲基-5-[2-甲基-4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺
将2-溴-1-(2,3-二氯苯基)丙-1-酮(0.214 g，0.759 mmol)、2-氨基嘧啶(0.123 g，1.290 mmol)和ACN(1.5 mL)加入到微波容器(配备有搅拌棒)中。将该混合物用微波辐射加热至140℃，并搅拌45分钟。将该混合物冷却至室温，并加入肼(0.23 mL，4.554 mmol)。将该混合物用微波辐射加热至100℃，同时搅拌30分钟。用水稀释该反应，并用乙酸乙酯提取该含水混合物。用水洗涤有机提取物，收集提取物，用硫酸钠干燥提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。使用DCM，在SCX-2®柱(10 g)上纯化该物质。用DCM、40% MeOH/DCM、80% MeOH/DCM冲洗该柱，然后用50% DCM/7M氨-MeOH洗脱产物。减压浓缩氨级分。在2 mm硅胶板上用径向色谱纯化残余物，用75%-100% EtOAc/己烷的梯度进行洗脱，然后用1-4% 7M NH3-MeOH/EtOAc的梯度进行洗脱，得到标题化合物淡米色泡沫体(0.042 g，产率23%)。1H NMR(399.80 MHz, d6-DMSO)δ 10.50-10.48(m, 1H), 7.45-7.42(m, 1H), 7.25-7.23(m, 2H), 5.07(s, 2H), 1.89(s, 3H)。
基本上利用制备例94的方法，使用合适的α-溴代酮，制备下列表10中的化合物。
Figure 382340DEST_PATH_IMAGE030
制备例109
N-[[6-(二氟甲基)-5-[[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]氨基甲酰基]-3-吡啶基]甲基]氨基甲酸叔丁基酯
将[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]甲酸铵(0.205 g，0.714 mmol)和5-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-(二氟甲基)吡啶-3-甲酸(0.283 g，0.749 mmol)溶解在DCM(5 mL)中。加入DIPEA(0.50 mL，2.855 mmol)，而后加入BOP(0.350 g，0.792 mmol)。将该混合物加热至60℃，并搅拌16小时。加入苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(0.150 g，0.339 mmol)。将该混合物搅拌2小时。将该反应混合物倾倒在水(15 mL)中。用EtOAc(3×15 mL)提取，用饱和氯化钠水溶液(4×15 mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(15 mL)顺序洗涤合并的有机物。用硫酸钠干燥有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用反相快速色谱纯化残余物(Analogix® 55g @ 40 mL/min)，用5-75% ACN/水的梯度洗脱30分钟。将合适的级分减压浓缩，直到只剩余水为止，产物是悬浮的固体。加入饱和NaHCO3水溶液(50 mL)，用EtOAc(2×30 mL)提取，得到标题化合物(0.212 g，56%)白色固体。LCMS(m/z)526(M+1)524(M-1)。
制备例110
5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)-N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]吡啶-3-甲酰胺
将盐酸(10 mL，40.0 mmol，4M，在1,4二噁烷中)加入到N-[[6-(二氟甲基)-5-[[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]氨基甲酰基]-3-吡啶基]甲基]氨基甲酸叔丁基酯(0.212 g，0.403 mmol)中，并搅拌过夜。用水稀释，并用Et2O提取。将pH值用饱和碳酸氢钠水溶液调节至～8。用EtOAc(3×30 mL)提取。用硫酸钠干燥有机提取物，过滤，收集滤液，并减压浓缩滤液。用反相快速色谱纯化(Analogix® 40g @ 40 mL/min)，用2-55% ACN/水的梯度洗脱30分钟。将合适的级分减压浓缩，直到除去所有的ACN并且只剩余水为止。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30 mL)，并用EtOAc(3×20 mL)提取。用硫酸钠干燥有机提取物，过滤，收集滤液，减压浓缩滤液，得到标题化合物浅黄色固体(0.098 g，产率57%)。1H NMR(400.43 MHz, d6-DMSO)δ 8.71-8.69(m, 1H), 8.16(s, 1H), 7.79-7.77(m, 2H), 7.69-7.67(m, 2H), 7.42-7.28(m, 1H), 3.81(s, 2H), 2.43(s, 3H)。
实施例1
2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺
Figure 657464DEST_PATH_IMAGE032
在热控反应器中，在75℃的内部温度下，搅拌4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺(395 g，1.63 mol，1当量)、2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}吡啶-3-甲酸(445.8 g，1.63 mol，1当量)、DMF(3.16升)、DIPEA(856 mL，4.91 mol，3当量)和TBTU(630 g，1.965 mol，1.2当量)的混合物18小时。冷却该混合物，用EtOAc(2.5升)稀释，并用水(3×5升)和盐水(2×2.5升)洗涤。用EtOAc(2.5升)提取合并的水相。合并有机提取物，并用MgSO4干燥。浓缩至干，得到黄色半固体。使该固体与Et2O(2.5升)一起浆化液3小时，过滤收集固体，空气干燥16小时，然后在50℃下进一步真空干燥48小时，得到标题产物自由流动性细白色固体(568 g，产率66%)。1H NMR(MeOD-d 4, 500 MHz): δ 8.63(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.74(d, 2H, J=8.1 Hz), 7.67(d, 2H, J=8.1 Hz), 7.36(t, 1H, J=54.2 Hz), 4.47(s, 2H), 2.52-2.45(m, 4H), 1.13(d, 6H, J=6.8 Hz); MS(m/z)496(M+1)。
替代方法A，实施例1
将2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}吡啶-3-甲酸(230 g，0.845 mol，1 eq)、4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-胺(280.6 g，0.845 mol，1 eq)和4-甲基吗啉(427.8 g，4.22 mol，5 eq)加入到EtOAc，(2.5升)中。将该反应混合物在15-25℃搅拌1小时。用17分钟加入丙基磷酸酐(T3P®)(50% w/w，在EtOAc中，1.884 kg，2.95 mol，3.5 eq)，同时保持温度<40℃。用EtOAc(415 mL)冲洗该加入容器，并将冲洗液加入到该反应混合物中。将该反应混合物在15-25℃搅拌1小时，而后加热到65-75℃过夜。将该反应混合物冷却到15-25℃，并用EtOAc(3升)稀释。用水(2×2升)洗涤该反应混合物。用1N HCl(2× 2升)、盐水(2升)、10% Na2CO3水溶液(2× 2升)和去离子水(2× 2升)顺序洗涤有机相。将有机层在65℃真空浓缩，直到观察到固体为止(大约4升，除去62%体积)。加入绝对EtOH(3升)，并将该溶液再浓缩到大约3升。加入绝对EtOH(1升)，将该浆液在65-75℃搅拌30分钟，然后在15-25℃搅拌大约63小时。将该浆液冷却至-15至-5℃，同时搅拌2小时或2小时以上。过滤分离固体，并用绝对EtOH(-10℃，420 mL)冲洗固体。将得到的固体在50℃下真空干燥两夜，得到标题化合物(268 g，产率64%)。1H NMR(400 MHz, d6-DMSO)δ 12.09(s, 宽峰， 2H), 8.66(s, 1H), 8.44(t, J=5.6 Hz, 1H), 8.07(s, 1H), 7.78(dd, J=38.6 and 8.2 Hz, 4H), 7.37(t, J=54.3 Hz, 1H), 4.40(d, J=5.6 Hz, 2H), 2.46(s, 3H), 2.46(m, J=6.8 Hz, 1H), 1.05(d, J=6.8 Hz, 6H)。
替代方法B，实施例1
将[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]铵甲酸盐(1.011 g，1.00当量，3.520 mmol)和2-(二氟甲基)-5-[(2-甲基丙酰基氨基)甲基]吡啶-3-甲酸(1.497 g，1.25当量，4.400 mmol)溶解在DMF(25.00 mL，323.313 mmol)中。加入DIPEA(2.46 mL，14.079 mmol)，而后加入BOP(2.065 g，4.576 mmol)。加热至60℃，并搅拌过夜。将该反应混合物倾倒在水(200 mL)中。用EtOAc(3×75 mL)提取该混合物。用饱和NaCl水溶液(4×100 mL)洗涤合并的有机提取物，然后用饱和NaHCO3水溶液(100 mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机物，过滤，收集滤液，并真空浓缩滤液。用快速色谱纯化(Analogix® 80g @ 55 mL/min)，用DCM至8% 7N NH3-MeOH/DCM的梯度洗脱40分钟。收集1.592 g物质。用EtOAc/MeOH/庚烷结晶。过滤固体产物，用己烷洗涤，真空干燥过夜，得到标题化合物(1.298 g，产率74.43%)白色固体。1H NMR(400.43 MHz, d6-DMSO)δ 12.34-12.26(m, 2H), 8.61(d, J=1.8 Hz, 1H), 8.41-8.37(m, 1H), 8.05-8.02(m, 1H), 7.77(d, J=8.2 Hz, 2H), 7.70-7.68(m, 2H), 7.56-7.50(m, 1H), 4.34(d, J=5.7 Hz, 2H), 2.42-2.38(m, 1H), 1.00(d, J=6.9 Hz, 6H)。ES/MS(m/z)496.17。
基本上利用实施例1的替代方法B，使用合适的2-氨基咪唑(或其盐)和酸，制备下列表11中的化合物。
Figure 760591DEST_PATH_IMAGE034
Figure 95757DEST_PATH_IMAGE036
Figure 824679DEST_PATH_IMAGE038
Figure 841176DEST_PATH_IMAGE040
Figure 339154DEST_PATH_IMAGE042
实施例26
2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐
Figure 48484DEST_PATH_IMAGE044
向250 mL圆底烧瓶中加入5.58 g的2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺和85%磷酸(800μl)。用20分钟过程向该混合物中加入乙腈(40 mL)，得到松散的浆液。将该浆液在环境温度搅拌30分钟。真空过滤收集固体，并将固体在100℃下减压干燥几小时，提供磷酸盐(5.6359 g，92%)。
XRD 光谱分析
利用配备有CuKa源(λ=1.54060Å)和Vantec检测器的Bruker D4 Endeavor X射线粉末衍射仪(在35 kV和50 mA下操作)获得结晶固体的XRD图。在4和40°(2θ)之间扫描样品，步长为0.0087°(2θ)，扫描速率为0.5秒/步，0.6 mm发散狭缝，5.28 mm固定的防散射狭缝，探测器狭缝9.5 mm。将干燥粉填充在石英样品座上，并使用载玻片获得光滑表面。±0.2(2θ)的峰位置变化考虑了可能变化，但不妨碍明确鉴定所表明的晶体形式。基于8.85和26.77度(2θ)的NIST 675标准峰，对在环境温度和相对湿度下收集的晶体形式衍射图进行调整。
按照实施例26制备的2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐的样品的特点在于：使用CuKa辐射的XRD图，并且具有衍射峰(2θ值)。具体地说，该图形包含在4.85处的峰，与一个或多个选自下列的峰组合：9.77、16.68、17.93、19.15、22.27和24.84，衍射角的容许误差为0.2度。在下面表12中提供了2θ主尖峰的列表。
实施例26
替代方法
将2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺(250 g，0.505mol，1 eq)加入到ACN(5升)中。将85% H3PO4(110.7 g，0.960 mol H3PO4，1.90 eq)的去离子水(1升)溶液加入到该混合物中。将该反应混合物加热至60-70℃，而后通过1.2μm囊式滤器过滤到15升反应器中。将得到的浆液加热至55-65℃，并在环境温度搅拌过夜。而后，将该浆液冷却至5℃，并搅拌大约2小时，同时保持反应温度在5℃。收集固体，用冷的ACN(0-10℃，2×475 mL)和冷的去离子水(0-10℃，2×475 mL)冲洗固体。将湿润的固体(354 g)放回到反应器中，并在环境温度下，使固体与去离子水(2.5升)一起形成浆液2小时。过滤收集固体，用滤液(3次)冲洗固体，而后用去离子水(1.25升)冲洗。在110℃用氮气流减压干燥该类白色固体，得到标题化合物浅黄色固体(237 g，产率79%)。C23H22F5N5O2 .H2PO4的分析∶计算值∶C, 46.55; H 4.25; F 16.01; N 11.80; 实测值∶C, 46.63; H, 4.22; F, 16.30; N, 11.91。1H-NMR(400 MHz, d6-DMSO)δ 8.66(d, J=1.8 Hz, 1H), 8.45(t, J=5.8 Hz, 1H), 8.08(s, 1H), 7.76(dd, J=33.3 Hz, 4H), 7.36(t, J=54.3 Hz, 1H), 4.40(d, J=5.8 Hz, 2H), 2.45(s, 3H), 2.45(m, J=6.9 Hz, 1H), 1.04(d, J=6.9 Hz, 6H)。
实施例27
5-(乙酰胺基甲基)-2-(二氟甲基)-N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]吡啶-3-甲酰胺
Figure 819311DEST_PATH_IMAGE048
将5-(氨甲基)-2-(二氟甲基)-N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]吡啶-3-甲酰胺(0.047 g，0.110 mmol)溶解在DCM(3 mL)中。加入三乙胺(0.038 mL，0.276 mmol)，而后加入乙酰氯(9.830μl，0.138 mmol)，并搅拌过夜。将反应物倾倒在饱和NH4Cl水溶液(15 mL)中，并用EtOAc(2×10 mL)提取。合并有机提取物，用硫酸钠干燥有机提取物，过滤，收集滤液，减压浓缩滤液至干，得到标题化合物(0.039 g，产率75%)浅黄色固体。LCMS(m/z)468(M+1)。
实施例28
2-(二氟甲基)-N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基]-5-[(丙酰基氨基)甲基]吡啶-3-甲酰胺
Figure 171795DEST_PATH_IMAGE050
基本上利用实施例27的方法，使用合适的胺和酰氯制备。ES/MS(m/z) 482(M+1)。
生物学试验
人类mPGES-1酶抑制试验
将人类mPGES-1(Invitrogen™(Cat# 97002RG，克隆ID 6374722))亚克隆到pcDNA3.1中，并短暂地在293E细胞中表达。基于公开的方法，由细胞团制备微粒体(Oullet等人，Purification and characterization of recombinant microsomal prostaglandin E synthase-1, Protein Expression and Purification, 26 pp 489-495(2002); 和Thoren等人，Human Microsomal Prostanglandin E Synthase-1, J. Biol Chem. 278(25)pp 22199-22209(2003))。简要地说，将团块在均化缓冲液(15 mM Tris-HCl，pH8.0；0.25M蔗糖、0.1 mM EDTA、1 mM谷胱甘肽)中培养，并在冰上超声处理5×30秒。将均浆在5000×g下、在4℃离心10分钟。倾析上清液级分，加载到Beckman Quick-Seal®试管中，并在4℃、在150,000×g下离心90分钟。倾析除去上清液级分，并将团块再悬浮在试验缓冲液(10 mM磷酸钠(pH7.0)、10%甘油和2.5 mM谷胱甘肽、完全蛋白酶抑制剂混合物(Roche))中。使用Pierce Coomassie Plus™试剂，测定蛋白浓度。
对于酶试验，将微粒体稀释到试验缓冲液中，并以7μ L/孔加入到384孔板中。在Multimek™上形成化合物稀释板(Nunc Cat #249944)，并以1 μL/孔加入到试验板中。在临近使用之前，将前列腺素H2(PGH2)稀释到试验缓冲液中，并加入7 μL/孔。最后浓度是4.4 μg/mL微粒体和1.69 μM PGH2。在室温下培养2.5分钟之后，加入2.5 μL/孔的1 mg/mL SnCl2(在0.5N HCl中)，使该反应停止。将5 μL反应物转入384孔板中，用Multidrop加入乙腈(45 μL)(包含氘化PGE2作为内标)，并将该板在-20℃保存。使用标准LC/MS分析(Biocius Lifesciences(Wakefield，MA 01880))，分析该板的PGE2。该数据用于计算IC50值(μM)。结果表明，实施例1(2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺)抑制人类mPGES-1，IC50值(μM)为0.000944±0.00059μM(平均值±标准偏差；n=10/22)。列举的化合物显示IC50值小于100 nM。由此，在分离的酶制剂中，列举的化合物是mPGES-1酶的有效抑制剂。
测定类花生酸选择性的基于细胞的试验
从ATCC(CCL-185)获得人类上皮肺癌细胞系A549，并保存在Kaighn's F12培养基(“F12K”)+ 10%胎牛血清，(FBS)(涂覆培养基)和5% CO2中。使细胞以1:3的比例传代每周两次。
对于该试验，通过用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤一次，从烧瓶中释放细胞，然后用Trypsin（胰蛋白酶）/EDTA洗涤一次。在37℃下经过3-5分钟之后，将细胞悬浮在10 mL平板培养基中，并在25℃、在2,000 rpm下离心5分钟。吸出上清液，并将细胞团再悬浮在10 mL F12K中。在血细胞计数器上统计细胞的等分样品(已经稀释在PBS和台盼蓝中)，确定细胞数量。在处理之前24小时，将细胞以40,000个/孔的密度涂覆在96孔Falcon板中。在Screen Mates试管中，将化合物在DMSO中稀释至100×最后浓度。从细胞中除去培养基，并将新鲜的培养基(90 μL/孔)加入到细胞中。加入化合物，1 μL/孔，n=2，每个化合物得到七个浓度。将细胞在37℃、5% CO2中预先处理30分钟。通过加入重组人类白介素1β(rhIL-1β)(稀释在平板培养基中，达到10×最后浓度)，诱导前列腺素E2产生。加入10 μL/孔等分样品，得到0.1-0.2 ng/mL的最终rhIL – 1β浓度。处理时间为大约18小时。将条件培养基移至V形底聚丙烯板中。将不含血清的F12K(50 μL/孔)以及CellTiter96试剂(Promega™)(10 μL/孔)加入到细胞中。将板在室温下培养30-45分钟，而后在读板机(A490)上读数，确定存活力。对照孔接受10 μL/孔10% triton X-100，作为毒性对照。
按照生产商的方案(Cayman)，通过特异性酶免疫试验(EIA)，检验条件培养基的PGE2和PGI2的水平。简要地说，将条件培养基(1 μL)加入到96孔板的每个孔中，该96孔板涂覆了捕获抗体，并且包含生产商供应的EIA缓冲液(49 μL)。用EIA缓冲液稀释示踪物，并加入示踪物(50 μL/孔)。用EIA缓冲液稀释检测抗体，并加入检测抗体(50 μL/孔)。用粘性密封薄膜覆盖该板，并在室温下、在定轨振荡器(100 rpm)上培养1小时。将洗涤缓冲液稀释到微孔净化水中，并使用洗板器洗涤该板，5×350 μL/孔。将底物(Ellman's试剂)稀释在微孔净化水中，并加入底物(200 μL/孔)。在定轨振荡器(100 rpm)上、在室温下经过大约45分钟之后，在读板机上将板读数(A412)。PGE2的标准曲线用于校正未知物。实施例1(2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺)抑制PGE2形成，IC50值为0.0121±0.0061μM(平均值±标准偏差；n=4)，不影响其它前列腺素类化合物的合成。由此，列举的化合物显示出可选择性地抑制PGE2合成，同时不抑制其它前列腺素类化合物的合成。
人类全血检验
将正常志愿者供体的血液收集到肝素钠真空采血管中。在供血的两周内，供血者没有摄取NSAID、阿司匹林、Celebrex或糖皮质激素。将所有的试管/供血者合并到250 mL Corning尖底离心管中，并以436.5 μL/孔的数量分配到深孔聚丙烯板中。将化合物在DMSO中稀释至100×最终浓度，加入4.5 μL/孔(一式两份或一式三份)，得到7点曲线。将血液(用硅氧烷封垫简单覆盖)在湿润氛围中、在37℃和5% CO2条件下预先处理30分钟，而后加入9 μL/孔的5 mg/mL脂多糖(LPS)(Sigma 0111:B4)溶液(在1 mg/mL牛血清白蛋白(BSA)/PBS中)，得到100 μg/mL的最终LPS浓度。在大约100 rpm的定轨振荡器上，在湿润氛围中，将简单覆盖的板在37℃和5% CO2中培养20-24小时。将板用硅氧烷封垫紧密地密封，并在冰上冷却大约1小时。然后，在4℃，在Eppendorf 5810R离心机中，将板在1800×g下离心10分钟。使用Rainin L200(带有无菌过滤吸头)，从细胞层中除去血浆，并转入V形底聚丙烯板中。将一百微升定量转入Costar排管单元（Costar cluster tubes blocks）中，并加入400 μL/孔的甲醇终止试剂和内标d-4PGE2、d-4PGF2 α和d-4TX2 β。将样品旋转5分钟，并在-20℃下放置至少一小时。在Eppendorf 5810R中，将样品在4000 rpm下离心10分钟。
使用Waters HLB(30 mg/床，96孔板)，在真空歧管上进行固相提取∶ 1)用甲醇(1 mL)洗涤基质，而后用0.1%甲酸/水(1 mL)洗涤；2)与0.1%甲酸/水(900μL)一起施加400μL样品，并使之结合5分钟；3)用0.1%甲酸/水(600μL)洗涤基质，而后用80/20的水/甲醇(600μL)洗涤；4)用2 – 500μL体积的乙酸乙酯洗脱产物；5)将样品在氮气氛围中干燥，并在含有0.1%甲酸的75/25的水/乙腈(50μL)中重新构成。用LC/MS/MS分析产物。化合物2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺(实施例1)选择性地抑制PGE2产生，IC50值为0.012±0.0.008μM(几何平均值±标准偏差；n=11)，同时不抑制PGF2 α和TXB2产生。
单碘乙酸盐(MIA)体内模型
在MIA模型中，将注射MIA时的重量为大约200-250克的雄性Dunkin Hartley豚鼠用于测定疼痛。将豚鼠分组放在儿童浅水池中，并维持恒温和12小时照明/12小时黑暗循环。在研究之前的当天，将豚鼠移到标准笼中，每个笼2只动物。除了数据收集期间之外，动物始终可以自由接触食物和水。所有的实验按照Eli Lilly Institutional Animal Care and Use Committees批准的方案进行。
在标准MIA模型中，给每个豚鼠的右膝注射MIA(0.3 mg)(在盐水(50μl)中)，并给左膝注射盐水(50μl)。在MIA注射之后第9天，使用失能测试来测定疼痛。失能测试测量在注射MIA和盐水的膝部之间的后爪负重的差异，并且每个值代表3次单独测定(每次测定1秒钟)的平均值。
对于该研究，给豚鼠服用赋形剂(10% Cremophor® EL(CAS 61791-12-6，在盐水中)或实施例1(10或50 mg/kg)。还给第四组的豚鼠服用非甾体抗炎症药物双氯芬酸(赋形剂盐水，30 mg/kg)，由于其以前在该模型中显示了效果，所以其充当该研究的阳性对照。所有给药都是皮下给药，剂量体积为5 mL/kg，组的规模是n=6。将剂量组随机分配给每个动物，并且交错10分钟对每个豚鼠给药。给药后四个小时，使用失能测试来测定疼痛。结果以注射盐水和MIA的膝盖之间的荷重平均差别形式报道在表13中，并且在赋形剂处理和化合物处理的动物之间进行统计比较，以评价实施例1的化合物在该模型中对膝痛的效果。
Figure 550561DEST_PATH_IMAGE052
用变量的单向分析来评价数据；与赋形剂比较的Dunnett's试验，p<0.05；Bonferroni调整用于各组之间对比。
与赋形剂相比，实施例1的化合物和双氯芬酸的两者的剂量显著地减轻疼痛，实施例1的50 mg/kg组显著地不同于10 mg/kg组和双氯芬酸组。
按照已接受的实践方式，例如，在以下文献中得到的实践方式，可以容易地将列举的本发明化合物配制为可药物组合物：Remington’s Pharmaceutical Sciences, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co. Easton Pa. 1990。
可以将优选的可药物组合物配制为口服给药的片剂或胶囊剂。片剂或胶囊剂包括有效量的本发明化合物。以有效治疗骨关节炎疼痛的数量给予患者可药物组合物。卫生保健提供者可以确定治疗患者的有效合适数量或剂量。

Claims (27)

1. 下式的化合物∶
Figure 2012800252302100001DEST_PATH_IMAGE002
其中
R1选自∶-C1-4烷基；
R2是Cl或-CHF2；
R3是H或-CH3；
R4选自∶H、F、Cl、-CH3、-CHF2和-CF3；
R5选自H、F、Cl和-CH3；
R6选自∶H、F、Cl和-CH3；和
X和A中的一个是N，而X和A中的另一个是CH；
条件是，当A是N时，R4不是F或Cl，而当X是N时，R2不是Cl；
或其可药用盐。
2. 按照权利要求1的化合物，其中R1是-CH(CH3)2或-C(CH3)3，或其可药用盐。
3. 按照权利要求1或2的化合物，其中R1是-CH(CH3)2，或其可药用盐。
4. 按照权利要求1至3的任一项的化合物，其中R3是-CH3，或其可药用盐。
5. 按照权利要求1至4的任一项的化合物，其中R5选自H、F和Cl，或其可药用盐。
6. 按照权利要求1至5的任一项的化合物，其中R5是H，或其可药用盐。
7. 按照权利要求1至6的任一项的化合物，其中R6是H，或其可药用盐。
8. 按照权利要求1至7的任一项的化合物，其中R4选自H、-CH3、-CHF2和-CF3，或其可药用盐。
9. 按照权利要求1至8的任一项的化合物，其中A是N，或其可药用盐。
10. 按照权利要求1至8的任一项的化合物，其中R4选自F、Cl、-CHF2和-CF3，或其可药用盐。
11. 按照权利要求1至8的任一项的化合物，其中R4选自Cl、-CHF2和-CF3，或其可药用盐。
12. 按照权利要求1至8的任一项的化合物，其中R4是-CF3，或其可药用盐。
13. 按照权利要求1至12的任一项的化合物，其中R2是Cl，或其可药用盐。
14. 按照权利要求1至13的任一项的化合物，其中R2是-CHF2，或其可药用盐。
15. 按照权利要求1至12和14的任一项的化合物，其中X是N，或其可药用盐。
16. 下式的化合物∶
Figure 2012800252302100001DEST_PATH_IMAGE004
或其可药用盐。
17. 按照权利要求16的化合物，其中盐是磷酸氢盐。
18. 化合物，其是结晶形式的2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐，其特征在于：用CuKα源(λ=1.54056Å)所获得的X射线粉末衍射图包含下列位置的峰，以2θ表示：
a) 4.85°、20.37°和22.27°+/-0.2°；或
b) 4.85°、11.00°、17.93°、20.37°、22.27°和24.85°+/-0.2°；或
c) 4.85°、11.00°、12.22°、12.67°、17.93°、20.37°、22.27°、23.51°和24.85°+/-0.2°。
19. 组合物，其包含足够纯的按照权利要求18的结晶形式的2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐。
20. 按照权利要求19的组合物，其包含大于80% w/w的晶体2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐。
21. 可药物组合物，其包含按照权利要求1至17的任一项的化合物或其可药用盐和至少一种可药用载体、稀释剂或赋形剂。
22. 可药物组合物，其包含足够纯的按照权利要求18或19的结晶形式的2-(二氟甲基)-5-{[(2-甲基丙酰基)氨基]甲基}-N-{4-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-咪唑-2-基}吡啶-3-甲酰胺磷酸氢盐和至少一种可药用载体、稀释剂或赋形剂。
23. 在需要治疗的患者中治疗与关节炎相关的疼痛的方法，所述方法包括：给予患者有效量的按照权利要求1至18的任一项的化合物或其药用盐。
24. 按照权利要求1至18的任一项的化合物或其可药用盐，其用作药物。
25. 按照权利要求1至18的任一项的化合物或其可药用盐，其用于治疗。
26. 按照权利要求1至18的任一项的化合物或其可药用盐，其用于治疗与关节炎相关的疼痛。
27. 按照权利要求1至18的任一项的化合物或其可药用盐在制备治疗与关节炎相关的疼痛的药物中的用途。
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