PT2276759E - 3-indazolil-4-piridiltiazole - Google Patents

Description

ΡΕ2276759 1 DESCRIÇÃO "3—INDAZOLIL—4—PIRIDILISOTIAZOLES" O presente invento providencia certos 3-inda-zolil-4-piridilisotiazoles, particularmente certos derivados 5-amino-3-indazolil-4-piridilisotiazole N-acilados, composições farmacêuticas destes, usos dos mesmos, processos para preparar os mesmos, e intermediários destes. L-glutamato é o principal neurotransmissor de excitação no sistema nervoso central e é referido como um aminoácido de excitação. Os receptores de glutamato são compostos de dois subtipos principais: receptores ionotró-picos de canais iónicos activados pelo ligando, e os receptores metabotrópicos de sete domínios transmembrana acoplados à proteína-G (mGluRs). A família metabotrópica compreende oito membros e está subdividida em três grupos baseados na semelhança da sequência, transdução de sinal, e farmacologia. Os receptores do Grupo I (mGluRi e mGluRs, e suas variantes splice) são acoplados de forma positiva a hidrólise do inositol fosfato e à geração de um sinal de cálcio intracelular. Os receptores do Grupo II (mGluR2 e mGluRs) e os receptores do Grupo III (mGluRs mGluR6, mGluRv, e mGluRs) são acoplados negativamente à adenil-ciclase e regulam os níveis de AMP cíclico por inibição indirecta da actividade da adenilciclase. Os subtipos do 2 ΡΕ2276759 receptor mGlu têm padrões de expressão única no sistema nervoso central, que pode ser alvo de agentes novos e selectivos. Ver, por exemplo, Slassi, A. et al. ., Current Topics in Medicinal Chemistry (2005), 5, 897-911, no qual os antagonistas do mGluRs são descritos como úteis como agentes (anti)ansiedade em modelos animais relacionados com o stress. Também, foi mostrado que os antagonistas do mGluRs são úteis em modelos de dependência e privação de substâncias incluindo álcool auto-administrado, bem como modelos de dor inflamatória e neuropática.

De Paulis et al., J. Med. Chem. (2006), 49, 3332-3344, descreve um estudo dos efeitos do efeito de substituição das N-(1,3-difenil-lH-pirazol-5-il)benzamidas na modulação alostérica positiva do receptor mGluRs nos astrocitos corticais do rato. A EUA 2006/0194807 revela uma série de compostos pirazole di-arilo substituídos que são descritos como moduladores de mGluRs.

Os compostos do presente invento são antagonistas selectivos dos receptores metabotrópicos do Grupo I, particularmente o receptor mGluRs (mGluRs) , especialmente com respeito ao mGluR2, mGluRs e mGluRs e podem ser selectivos com respeito ao mGluRi. Como tal acredita-se que sejam úteis para o tratamento de estados associados com aqueles receptores matabotrópicos do glutamato, tal como a ansiedade incluindo perturbação de ansiedade generalizada, depressão incluindo perturbações depressivas majores, bem como ansiedade co-mórbida com depressão (perturbação mista 3 ΡΕ2276759 de ansiedade e depressão) incluindo perturbação de ansiedade generalizada co-mórbida com perturbação depressiva major.

Assim, o presente invento providencia novos compostos que são antagonistas do mGluRs e, como tal, pensa-se que são úteis no tratamento de perturbações discutidas acima. Tais novos compostos podem dirigir-se à necessidade de tratamentos seguros e eficazes de estados associados com os receptores acima sem atender aos efeitos secundários. 0 presente invento providencia um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste,

em que R1 é H ou Ci-C3alquilo; R2 é H, Ci-C3alquilo, C3-C5-cicloalquilo, C3-C3fluorolalquilo, NR4R5, Ci-C3alcoxilo ou Ci-C3alcoximetilo; R3 é H ou metilo; e R4 e R5 são independentemente H ou Ci-C3alquilo. 4 ΡΕ2276759

Além disso, o presente invento providencia uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável .

Além disso, o presente invento providencia um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste para usar em terapia.

Além disso, o presente invento providencia o uso de um composto de fórmula I, ou um sal f armaceuticamente aceitável deste, para a manufactura de um medicamento para tratar a ansiedade.

Além disso, o presente invento providencia um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para usar no tratamento de ansiedade. 0 termo "Ci-Csfluoroalquilo" refere-se a uma cadeia alquílica linear ou ramificada tendo desde um a três átomos de carbono substituídos com um a três átomos de fluor e inclui fluorometilo, difluorometilo e 1-fluoro-l- metil-etilo.

Um composto particular de fórmula I é um em que R1 é Ci-C3alquilo. Um composto particular de fórmula I é um em que R2 é Ci-C3alquilo. 5 ΡΕ2276759

Um composto particular de fórmula I é um em que R1 é Ci-C3alquilo; R2 é Ci-C3alquilo, C3-CsCÍcloalquilo ou Ci-C3fluoroalquilo; e R3 é metilo.

Um composto particular de fórmula I é um em R1 é Ci-C3alquilo; R2 é Ci-C3alquilo; e R3 é metilo.

Um composto particular de fórmula I é um em que R1 é metilo ou etilo; R2 é H, metilo, etilo, propilo, isopropilo, ci-clopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, fluorometilo, diflu-orometilo, 1-fluoro-l-metil-etilo, metilamino, dimetilami-no, metoxilo ou metoximetilo; e R3 é H ou metilo.

Um composto mais particular de fórmula I é aquele em que R1 é metilo.

Um composto mais particular de fórmula I é aquele em que R2 é etilo.

Um composto mais particular de fórmula I é aquele em que R2 é isopropilo.

Um composto mais particular de fórmula I é aquele é metilo. em que R3 6 ΡΕ2276759

Um composto preferido de fórmula I é a [ 4 — (6 — etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il]amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico ou um sal farma-ceuticamente aceitável desta.

Um composto preferido de fórmula I é o cloridrato da [4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)- isotiazol-5-il]amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxí lico .

Um composto mais preferido de fórmula I é a [4-(6-isopropil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-iso-tiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropano-carboxílico ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Um composto ainda mais preferido de fórmula I é a [ 4-(6-isopropil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropa-nocarboxílico.

Um modelo de realização adicional do presente invento inclui um processo para preparar um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste compreendendo A) para um composto de fórmula I em que R1 é Ci- C3alquilo, 7 ΡΕ2276759 \ f N=\ o 'r3 N-S >-<] H I, R1 é Ci-C3alquilo o acoplamento de um composto de fórmula II em que R1 é Ci Csalquilo com uma 2-Q'-piridilo em que Q' é tri-n butilestanilo ou trimetilestanilo; R-n^Y o -r3 w_e ^—<A ^ Br II, R1 é Ci-C3alquilo Q’ VI 2-Q'-piridilo onde Q' é tri-n-butilestanilo ou trimetil estanilo; ou B) para um composto de fórmula I em que R1 é H,

r1"n^Y N=\ O 5* _ 8-¾ f^N L JL

I, R1 é H desproteger um composto de fórmula IV em que P é t butiloxicarbonilo; 8 ΡΕ2276759

IV, P é t-butiloxicarbonilo após o que, quando é pretendido um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula I, ele é obtido por reacção de um composto básico de fórmula I com um ácido fisiologicamente aceitável ou por qualquer outro procedimento convencional.

Um modelo de realização adicional do presente invento providencia compostos intermediários úteis para a preparação de um composto de fórmula I. Mais especifi-camente, o presente invento providencia um composto de fórmula II

em que R1 é H ou Ci-C3alquilo; e R3 é H ou metilo.

Um composto particular de fórmula II é um em que R1 é metilo. 9 ΡΕ2276759

Um composto particular de fórmula II é um em que R3 é metilo.

Um composto preferido de fórmula II é [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxilico. É compreendido que os compostos do presente invento podem existir como estereoisómeros. Enquanto todos os enantiómeros, diastereómeros, e misturas destes, estão contemplados no presente invento, modelos de realização preferidos são diastereómeros únicos, e modelos de realização mais preferidos são enantiómeros únicos. E compreendido para compostos do presente invento onde R3 é Η, o grupo amida do ácido ciclopropanocarboxílico ligado na posição 5 do isotiazole é aquiral.

Um enantiómero particular de compostos do presente invento é um onde o grupo ligado na posição 5 do isotiazole é uma amida do ácido (IR, 2R)-2-metil-ciclo-propanocarboxílico. É compreendido que compostos do presente invento podem existir como formas tautoméricas. Quando as formas tautoméricas existem, cada forma e misturas destas, estão contempladas no presente invento. Por exemplo, quando o grupo R1 é hidrogénio, um composto de fórmula I pode existir nas formas tautoméricas I e II. Como tal, é compreendido que qualquer referência a um composto de 10 ΡΕ2276759 fórmula I onde o grupo R1 é hidrogénio como forma tauto-mérica I engloba a forma tautomérica II bem como misturas das formas I e II.

O termo "sal farmaceuticamente aceitável" inclui sais de adição ácida que existam em conjunção com a porção básica do composto de fórmula I. Tais sais incluem os sais farmaceuticamente aceitáveis listados no HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, P.H. Stahl e C. G. Wermuth (Eds.), Wiley-VCH, Nova Iorque, 2002 que são conhecidos dos especialistas.

Além dos sais farmaceuticamente aceitáveis, são incluídos outros sais no invento. Eles podem servir como intermediários na purificação de compostos ou na preparação de outros sais farmaceuticamente aceitáveis, ou serem úteis para identificação, caracterização ou purificação. É esperado que um composto do invento seja útil sempre que é indicado antagonismo do receptor mGluRs. Em particular, é esperado que um composto do invento seja útil no tratamento de ansiedade incluindo perturbação de ansiedade generalizada, depressão incluindo perturbação 11 ΡΕ2276759 depressiva major bem como ansiedade co-mórbida com depressão (ansiedade e depressão misturadas). De acordo com isto, um aspecto particular do invento é um composto de fórmula I para usar no tratamento de perturbação mista de ansiedade e depressão incluindo perturbação generalizada de ansiedade co-mórbida com perturbação depressiva major.

Como usado aqui, o termo "doente" refere-se a um animal de sangue quente tal como um mamífero e inclui um humano. É também reconhecido que um especialista na técnica pode ter influência na perturbação de ansiedade tratando um doente apresentando correntemente os sintomas, com uma quantidade eficaz do composto de fórmula I. Assim, os termos "tratamento" e "tratar" pretendem referir todos os processos em que pode haver um abrandamento, interrupção, suspensão, controlo, ou paragem da progressão da perturbação e/ou sintomas desta, mas não indica necessariamente a eliminação total de todos os sintomas. É também reconhecido que um especialista na técnica pode ter influência numa perturbação de ansiedade tratando um doente em risco de futuros sintomas com uma quantidade eficaz do composto de fórmula I e pretende-se incluir o tratamento profiláctico de tal.

Como usado aqui, o termo "quantidade eficaz" de um composto de fórmula I refere-se a uma quantidade, que é, 12 ΡΕ2276759 a dosagem que é eficaz no tratamento de uma perturbação de ansiedade descrita aqui. 0 médico assistente, como especialista na técnica, pode prontamente determinar uma quantidade eficaz pelo uso de técnicas convencionais e observando os resultados obtidos em circunstâncias análogas. Na determinação de uma quantidade eficaz, a dose de um composto de fórmula I, são considerados um número de factores pelo médico assistente, incluindo, mas não limitados ao composto de fórmula I a ser administrado; à co-administração de outros agentes, se usados; às espécies de mamífero; ao seu tamanho, idade, e estado geral; ao grau de envolvimento ou a severidade da ansiedade; à resposta do doente individual; ao modo de administração; às características de biodisponibilidade da preparação administrada; ao regime de dosagem seleccionado; o uso de outra medicação concomitante; e a outras circunstâncias relevantes . E esperado que uma quantidade eficaz de um composto de fórmula I varie desde cerca de 0,01 miligramas por quilograma de peso corporal por dia (mg/kg/dia) até cerca de 5 mg/kg/dia. Quantidades preferidas podem ser determinadas por um especialista na técnica.

Os compostos do presente invento podem ser administrados sozinhos ou na forma de composição farmacêutica, que é, combinada com veículos ou excipientes farmaceu- 13 ΡΕ2276759 ticamente aceitáveis, a proporção e natureza dos quais é determinada pela solubilidade e propriedades químicas, incluindo estabilidade, do composto seleccionado, a via de administração escolhida, e a prática farmacêutica padrão. Os compostos do presente invento, enquanto eles próprios eficazes, podem ser formulados e administrados na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis, por conveniência de cristalização, solubilidade aumentada, e semelhantes.

Assim, o presente invento providencia composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula I e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável .

Um especialista na técnica de preparação de formulações pode prontamente seleccionar a forma adequada e o modo de administração dependendo das características particulares do composto seleccionado, da perturbação ou estado a ser tratado, do estádio da perturbação ou estado, e doutras circunstâncias relevantes (REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, 19 a Edição, Mack Publishing Co. (1995)) .

Exemplo A

Actividade funcional in vitro dos receptores humanos de mGluRs e mGluRi

A activaçao dos receptores acoplados à proteína-G 14 ΡΕ2276759 (GPCRs) que são acoplados à proteína-GTP de ligação alfa q (proteínas Gq) resulta numa alteração na concentração intracelular de cálcio. Esta resposta funcional pode ser medida num ensaio cinético usando corantes sensíveis ao cálcio e uma placa de leitura de imagem fluorescente usando uma técnica padrão conhecida como FLIPR (MDS Analytical Technologies, Sunnyvale, CA) . A preparação de linhas de células estáveis e técnicas de ensaio são adaptadas a partir de Kingston, A. E., et al. (1995) Neuropharmacology 34: 887-894.

Resumidamente, as linhas de células clonais expressando os receptores recombinantes humanos mGluRsa e mGluRia são transferidas em células AV-12 (American Type Culture Collection, Manassas, VA) contendo o transportador glutamato EAAT1 do rato. As células são crescidas em meio Eagle modificado por Dulbecco suplementado com 5% de soro fetal bovino, L-glutamina 1 mM, piruvato de sódio lmM, HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazina-etanosulfónico) 10 mM, 0,75 mg/ml de geneticina, e 0,3 mg/ml de higromicina B a 37°C numa incubadora com humidade relativa de 95% e 5% de CO2. Culturas confluentes são passadas duas vezes por semana.

Para os ensaios funcionais, as células são semeadas em meio de crescimento que carece de antibióticos de selecção numa densidade de 65K por poço em microplacas revestidas com poli-D-lisina, de 96 poços, fundo ne-gro/claro e incubadas durante 18-20 horas antes da 15 ΡΕ2276759 experiência. Após remover o meio, as células são carregadas com corante com Fluo-3 8μΜ em tampão de ensaio consistindo de solução de salina equilibrada de Hanks suplementada com HEPES 20 mM durante 1,5 h a 25°C. Os compostos são diluídos em série em DMSO e depois diluídos uma vez no tampão de ensaio; a concentração final de DMSO no ensaio é de 0,625%. Um ensaio FLIPR de adição única gerando uma curva de dose-resposta de 11 pontos para o agonista de glutamato é conduzido antes de cada experiência para estimar a quantidade de agonista necessária para induzir uma resposta EC90. Os efeitos antagonistas de compostos são quantificados no instrumento FLIPR em curvas-dose de 10 pontos comparando as respostas do pico fluorescente ao agonista glutamato na presença e ausência de composto. Especifi-camente, o efeito do composto é medido como alturas máximas menos alturas mínimas do pico em unidades relativas de fluorescência corrigidos para a fluorescência base como medido na ausência de glutamato. Os dados de actividade nos receptores humanos mGluR5 e mGluRi são calculados como valores relativos de IC50 usando um programa de ajuste a uma curva logística de quatro parâmetros (ActivityBase® V5.3.1.22).

No ensaio acima, os compostos exemplificados aqui apresentam um IC50 de menos do que 75 nM no mGluR5. Por exemplo, o composto do Exemplo 2 tem um IC50 de 9,5 nM medido no mGluRs. Isto demonstra que compostos do presente invento são antagonistas potentes do mGluR5. 16 ΡΕ2276759

Exemplo B

Atenuação de hipertermia induzida pelo stress em ratos

Hipertermia, uma elevação da temperatura corporal central, é um fenómeno geral que foi demonstrado de forma segura em muitos mamíferos, incluindo humanos, em resposta ao stress. Em muitas perturbações de ansiedade, a hipertermia ocorre como parte da patologia e é considerada um sintoma da doença. Acredita-se que os compostos que atenuam a hipertermia induzida pelo stress em animais são úteis no tratamento de perturbações de ansiedade em humanos. 0 método convencional e minimamente invasivo para analisar a hipertermia induzida pelo stress é pela medida da temperatura corporal, e a elevação induzida pelo stress na temperatura corporal, via termómetro rectal. Ratos machos Fischer F-344 (Harlan, Indianapolis, IN, EUA) pesando entre 275-350 g são testados. Todos os animais são alojados individualmente com alimento e água automática disponível ad libitum, e mantidos num ciclo de 12 h luz/escuridão (luzes ligadas às 6:00). Os animais são mantidos em jejum durante aproximadamente 12-18 horas antes da experiência, que é conduzida durante a fase de luz. Os ratos são doseados p.o. num volume de dose de 1 mL/kg com compostos teste no intervalo de 0,3, 1,3, e 10 mg/kg (suspenso em 1% de carboximetilcelulose, 0,25% de polissorbato 80, 0,05% de anti-espuma). 0 antagonista MTEP (3-[(2-metil-l,3-tiazol-4-il)etinil]piridina), do mGluR5, que demonstrou actividade robusta como ansiolítico em 17 ΡΕ2276759 modelos pré-clínicos, é usado como um controlo positivo (10 mg/kg, p.o., dissolvido em água). Imediatamente a seguir à dosagem, os ratos são repostos nas suas gaiolas, e o experimentador desliga as luzes e deixa a sala. A sala de dosagem é escurecida para o que resta dos 6 0 minutos de período de pré-tratamento.

Após o período de pré-tratamento, os ratos são levados individualmente para uma sala adjacente bem iluminada onde as temperaturas corporais de referência são determinadas por inserção de uma sonda rectal lubrificada com óleo mineral. A temperatura corporal é avaliada usando um termómetro de microsonda PHYSITEMP BAT-12® com uma sonda rectal para ratos PHYSITEMP RET-2® (Physitemp Instruments Inc., Clifton, NJ, EUA). A sonda é inserida aproximadamente 2 cm no recto, para medir a temperatura corporal central (esta é a temperatura corporal de referência, Tl, em graus Celsius). Dez minutos mais tarde é registada uma segunda medição de temperatura corporal (T2). A diferença nas temperaturas corporais (T2-T1) é definida como a resposta hipertérmica induzida pelo stress. A dose à qual um composto produz uma redução de 35% na resposta hipertérmica induzida pelo stress, relativa à resposta ao veículo, é definida como a dose T35. No ensaio acima, o composto do Exemplo 2 produz uma redução na hipertermia induzida pelo stress com uma dose T35=3,0 mg/kg. Isto demonstra que os compostos do presente invento são úteis num modelo in vivo de ansiedade.

Um composto de fórmula I pode ser preparado por 18 ΡΕ2276759 processos que incluem processos conhecidos na técnica da química para a produção de compostos estruturalmente análogos ou por um novo processo descrito aqui. Um novo processo descrito aqui providencia outro aspecto do invento. Um processo para a preparação de um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e novos intermediários para a manufactura de um composto de fórmula I providenciam aspectos adicionais do invento e são ilustrados pelos procedimentos seguintes nos quais o significado dos radicais genéricos é como definido acima, salvo especificação em contrário.

Geralmente, um composto de fórmula I pode ser preparado a partir de um composto de fórmula III (Esquema 1). Mais especificamente, um composto de fórmula II onde R1 é Ci-3alquilo é acoplado com um 2-Q'-piridilo onde Q' representa um grupo de acoplamento adequado na presença de um catalisador de acoplamento para produzir um composto de fórmula I onde R1 é Ci_3alquilo. A adequabilidade do grupo de acoplamento Q' é guiada pelas condições de reacção utilizadas. Para reacções utilizando condições Suzuki, os valores de Q' incluem derivados de éster e ácido borónico enquanto se se utilizarem as condições de Stille, os valores de Q' incluem derivados de trialquilestanilo. Reacções de acoplamento adicionais incluem aquelas utilizando condições Negishi onde os valores de Q' incluem halogenetos de zinco tal como brometo de zinco. Catalisadores de acoplamento incluem agentes de metais de transição tais como derivados de paládio. 19 ΡΕ2276759

Um composto de fórmula II pode ser preparado a partir de um composto de fórmula III. Mais especificamente, um composto de fórmula III é acoplado com um 5-Q' indazolilo onde R1 é Ci-3alquilo e Q' ' representa um grupo de acoplamento adequado na presença de um catalisador de acoplamento para providenciar um composto de fórmula II onde R1 é Ci_3alquilo. A adequabilidade do grupo de acoplamento Q * * é guiada pelas condições de reacção utilizadas. Para reacções utilizando condições de Suzuki, os valores de Q'' incluem derivados de éster e ácidos boró-nicos; enquanto utilizando condições de Stille, os valores de Q' ' incluem derivados de trialquilestanilo. Catalisadores de acoplamento incluem agentes de metais de transição tais como derivados de paládio.

Esquema 1

ilí 20 ΡΕ2276759

Geralmente, um composto de fórmula I onde R1 é H pode ser preparado a partir de um composto de fórmula III (Esquema 2). Mais especificamente, um composto de fórmula IV onde P é um grupo protector de amino adequado tal como t-butoxicarbonilo é posto a reagir com um ácido tal como ácido clorídrico para providenciar um composto de fórmula I onde R1 é H. um composto de fórmula IV onde P é um grupo protector de amino pode ser preparado a partir de um composto de fórmula V. Mais especificamente, um composto de fórmula V é acoplado com um 2-Q'-piridilo onde Q' representa um grupo de acoplamento adequado na presença de um catalisador de acoplamento para providenciar um composto de fórmula IV onde P é um grupo protector de amino. A ade-quabilidade do grupo de acoplamento Q' é guiada pelas condições de reacção utilizadas. Para reacções utilizando condições de Suzuki, os valores de Q' incluem derivados de éster e ácidos borónicos; enquanto utilizando condições de Stille, os valores de Q'' incluem derivados de trial-quilestanilo. Catalisadores de acoplamento incluem agentes de metais de transição tais como derivados de paládio. Um composto de fórmula V pode ser preparado por acoplamento de um composto de fórmula III com um 5-Q''-indazolilo onde P é um grupo protector de amino e Q * ' representa um grupo de acoplamento adequado na presença de um catalisador de acoplamento para providenciar um composto de fórmula V onde P é um grupo protector de amino. A adequabilidade do grupo de acoplamento Q'' é guiada pelas condições de reacção. Para reacções utilizando condições de Suzuki, os valores de 21 ΡΕ2276759 Q'' incluem derivados de éster e ácidos borónicos; enquanto utilizando condições de Stille, os valores de Q' ' incluem derivados de trialquilestanilo. Catalisadores de acoplamento incluem agentes de metais de transição tais como derivados de paládio.

Esquema 2

Nas preparações e exemplos ilustrativos seguintes, são usados em toda a parte os seguintes significados e abreviaturas: DMSO, dimetilsulfóxido (perdeuterado [—d6 ] se for para RMN); EM, espectro de massa; EtOAc, acetato de etilo; THF, tetra-hidrofurano; min, minutos; HPLC cromato-grafia líquida de alta pressão; LC-MS, HPLC-espectrometria de massa; GC, cromatografia de gás; MeOH, metanol; MTBE, éter metil-t-butílico; SCX-2, resina de troca iónica; pf, ponto de fusão; e RMN, espectroscopia ou espectro de 22 ΡΕ2276759 ressonância magnética nuclear. Os reagentes foram obtidos a partir de uma variedade de fontes comerciais. Os solventes são geralmente removidos a pressão reduzida (evaporados). Nalgumas preparações os rendimentos indicados são rendimentos brutos representativos para produtos que são isolados por evaporação ou filtração e usados directamente sem purificação adicional.

Preparação 1

Sintese de 5-bromo-2-metil-2H-indazole

Adicionar à temperatura ambiente sob azoto, porções de tetrafluoroborato de trimetiloxónio (229,34 g, 1,52 mol) de forma prudente, a uma mistura de 5-bromo-lH-indazole (199,6 g, 1,01 mol) em acetato de etilo (3,04 L, 31,06 mol), agitar 2,5 h e filtrar para dar um sólido branco. Lavar o sólido recuperado duas vezes com acetato de etilo (500 mL) e depois adicionar prudentemente às porções a uma solução aquosa arrefecida de hidróxido de sódio 2M (3,80 L, 7,60 mol) num banho de gelo. Agitar a mistura durante 1 h, sonicar durante 15 min., filtrar e lavar duas vezes o sólido recuperado com água (200 mL). Secar o sólido durante a noite sob vácuo, suspender em diclorometano (1 L) e filtrar. Concentrar o filtrado e purificar por cromatografia em silica gel eluindo com diclorometano para dar o composto do titulo como um sólido amarelo (149,77 g, 70%). EM (m/z): 211, 213 (M+l). 23 ΡΕ2276759 0 composto seguinte é preparado essencialmente como descrito na Preparação 1.

Preparação Nome Dados 2 5-bromo-2-etil-2H-indazole EM (m/z): 225, 227 (M+l)

Preparação 3

Sintese de 2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2H-indazole

Adicionar acetato de potássio (207,16 g, 2,11 mol) numa porção a uma solução em agitação de 5-bromo-2-metil-2H-indazole (148,5 g, 0,703 mol) e bis(pinacolato)-diboro (196,54 g, 0,77 mol) em 1,4-dioxano (1,62 L) . Borbulhar azoto através da suspensão durante 20 min, adicionar cloreto de (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)paládio (II): diclorometano (17,24 g, 21,11 mmol) numa porção e aquecer a 100°C durante 1,5 h. Arrefecer, filtrar através de Celite® usando acetato de etilo (1 L) e concentrar. Purificar o resíduo por cromatografia em sílica gel, eluindo com um gradiente de 50:50 a 20:80 usando n-hexano: éter metil-t-butílico para dar o composto do título como um sólido amarelo (124, 79 g, 64%) o qual é usado sem purificação adicional. Concentrar as fracções impuras e triturar o sólido recuperado com n-heptano para dar quantidades adicionais do composto do título como um sólido branco (32,36 g, 12%). 1H-RMN (DMS0-d&) : δ 1,30 (s, 12H) , 4,17 (s, 3H) , 7,43 (dd, 1H), 7,53 (dd, 1H), 8,14 (t, 1H), 8,39 (s, 1H). - 24 - ΡΕ2276759

Preparação 4 Síntese do 2-metil-5-trimetilestanil-2H-indazole

Adicionar tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0,26 g, 0,22 mmol) a uma mistura de 5-bromo-2-metil-2H-indazole (0,94 g, 4,43 mmol) e hexametil-di-estanho (1,02 mL, 4,88 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL). Purgar com azoto e aquecer num micro-ondas a 110°C durante 15 min. Prepare de forma similar dois outros lotes a partir de respectivamente tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0,29 g, 0,25 mmol), 5-bromo-2-metil-2H-indazozlo (1,07 g, 5,07 mmol), hexametil-di-estanho (1,16 mL, 5,58 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0,25 g, 0,22 mmol), 5-bromo-2-metil-2H-indazole (0,92 g, 4,36 mmol), hexametil-di-estanho (1,00 mL, 4,80 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) . Combinar os três lotes e purificar por cromatografia de gradiente em sílica gel eluindo desde 15:85 a 80:20 usando acetato de etilo:iso-hexano, e depois purificar ainda com uma segunda cromatografia em sílica gel, eluição de gradiente desde 15:85 a 30:70 usando acetato de etilo:iso-hexano para dar o composto do título como um óleo que cristaliza se deixar repousar (1,68 g, 41%). EM (m/z): 293-301 cluster (M+l).

Preparação Nome Dados 5 2-etil-5-trimetilesta- nil-2H-indazole EM (m/z) : 307-315 cluster (M+l). 25 ΡΕ2276759 0 composto seguinte é preparado essencialmente como descrito na Preparação 4.

Preparação 6 Síntese de éster t-butílico do ácido 5-bromo-indazole-l- carboxílico

Adicionar sequencialmente trietialmina (7,1 mL, 50,75 mmol), dicarbonato de di-t-butilo (17,12 g, 76,13 mmol) e dimetilaminopiridina (0,62 g, 5,08 mmol) a uma solução de 5-bromo-lH-indazole (10 g, 50,75 mmol) em acetoni-trilo (170 mL) e agitar 3 horas. Concentrar e purificar por cromatografia em sílica gel, eluição por gradiente desde 10:90 a 20:80 usando acetato de etilo:hexanos, para dar o composto do título (14,93 g, 99%). EM (m/z): 243 (M+l, tBu) .

Preparação 7 Síntese do éster t-butílico do ácido 5-trimetilestanil- indazole-l-carboxílico

Dissolver éster t-butílico do ácido 5-bromo-indazole-l-carboxílico (6,5 g, 21,87 mmol) em tolueno (43,7 mmol) e adicionar hexametil-di-estanho (10 g, 30,6 mmol) sob uma camada de azoto. Adicionar tetraquis(trifenil-fosfina)paládio (1,26 g, 1,09 mmol), aquecer a 80°C durante 26 ΡΕ2276759 18 horas, concentrar e purificar o residuo por croma-tografia em silica gel, eluição por gradiente desde 10:90 a 20 : 80 usando acetato de etilo:hexanos, para dar o composto do título (9,33 g, 94%). EM (m/z): 327 (M+l-tBu).

Preparação 8 Síntese da 2-ciano-3-oxo-tiobutiramida A uma solução em agitação de 2-ciano-tioace-tamida, (1016 g, 9,84 mmol) em piridina (2,60 L) , arrefecida a 0°C, adicionar cloreto de acetilo ao longo de 2 horas (785 mL, 11,03 mol) mantendo a temperatura de reacção abaixo 20°C. Aquecer à temperatura ambiente durante 1 hora, adicionar água (4 L) e agitar até dissolução de todos os sólidos. Adicionar uma solução aquosa 12 M de ácido clorídrico (HC1, 250 mL) até se tornar ácido (pH=l) para dar um precipitado vermelho acastanhado. Agitar durante 1 hora a 0°C, filtrar, secar o sólido recolhido sob vácuo para dar o composto do título como um sólido laranja (926 g, 66%) . Uma segunda colheita pode ser recolhida a partir de águas mãe adicionando solução aquosa 12M (500 mL) para dar o composto do título (353 g, 25%) .

Preparação 9 Síntese de 1-(5-amino-3-bromo-isotiazol-4-il)-etanona

Adicionar bromo (195 mL, 3,81 mol) durante 10 min 27 ΡΕ2276759 a uma solução aquecida de 2-ciano-3-oxo-tiobutiramida (550 g, 3,86 mol) em ácido acético glacial (5,80 L) a 40°C e agitar à temperatura ambiente durante 15 h. Filtrar a mistura de reacção, lavar o sólido recolhido com água e secar durante a noite sob vácuo para dar um sólido vermelho escuro (1151 g). Suspender o sólido com agitação numa solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (8L) durante 30 min e filtrar. Lavar o sólido recolhido com água e secar durante a noite sob vácuo para dar um sólido vermelho escuro (1022 g) . Suspender o sólido com agitação em éter metil-t-butilico (5,90 L) ao longo de 1 hora, filtrar e reter o filtrado. Repetir o processo de extracção acima com éter metil-t-butilico duas vezes no sólido recuperado retendo o filtrado após cada extracção. Combinar os filtrados e concentrar para dar o composto do titulo como um sólido amarelo que é utilizado sem purificação adicional (598 g, 72%). EM (m/z): 221, 223 (M+l).

Preparação 10

Sintese do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

O

Adicionar éter metil-t-butilico (13,2 L) a uma suspensão de ácido (IR,2R)-2-metil-cicloproanocarboxílico, sal diciclohexilamónio (1,65 kg, 5,86 mol), preparado como 28 ΡΕ2276759 descrito em Organic Process Research & Development (2007) 11, 689-692, em água (6,60 L) e agitar vigorosamente durante 5 min para dar uma solução bifásica. Adicionar ácido sulfúrico (200 mL) gota à gota ao longo de 10 min, agitar vigorosamente durante 15 min e separar as fases. Extrair a fase aquosa com éter metil-t-butílico. Combinar as fases orgânicas, secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar para dar o composto do titulo como um óleo amarelo pálido (560 g, 95%) que é usado sem purificação adicional. RMN de *Η (CDC13) δ 0,77-0,73 (m, 1H), 1,12 (d, 3H), 1,25-1,21 (m, 1H) , 1,34-1,30 (m, 1H) , 1,49-1,43 (m, 1H).

Preparação 11 Síntese do cloreto de (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Adicionar cloreto de oxalilo (490,23 mL, 5,54 mol) gota à gota ao longo de 20 min a uma solução arrefecida de ácido (IR, 2R) -2-metil-ciclopropanocarboxílico (560 g, 5,59 mol) em diclorometano (2,80 L) e dimetil- formamida (2,16 mL, 28,0 mmol) a 0°C. Aquecer à temperatura ambiente ao longo de 30 min, aquecer a 40°C durante 30 min e arrefecer à temperatura ambiente para dar uma solução cor-de-laranja clara que é usada directamente no próximo passo sintético. 29 ΡΕ2276759

Preparaçao 12 Síntese da (4-acetil-3-bromoisotiazol-5-il)-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopranocarboxílico

Adicionar uma solução, preparada na altura, de cloreto de (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarbonilo 1,93 M (5,52 mol) em diclorometano ao longo de 15 min a uma suspensão de 1-(5-amino-3-bromo-isotiazol-4-il)-etanona (1,17 kg, 4,93 mol) e trietialmina (859 mL, 6,16 mol) em diclorometano (5,86 L) à temperatura ambiente e agitar durante 4 horas. Bloquear a reacção com água (1 L) e separar as fases. Secar a fase orgânica sobre sulfato de magnésio, filtrar, concentrar e purificar o resíduo por cromatografia em sílica gel em coluna curta (3500 g de SÍO2) eluição por gradiente desde 100:0 a 40:60 usando n-hexano e acetato de etilo para dar o composto do título como um sólido branco (1230 g, 82%) . EM (m/z) : 303, 305 (M+l).

Preparação 13 Síntese de (4-acetil-3-bromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido ciclopropanocarboxílico

Adicionar trietilamina (234,5 mL, 1,68 mol) a uma suspensão arrefecida de 1-(5-amino-3-bromo-isotiazol-4-il)-etanona (310 g, 1,40 mol) em diclorometano (2,79 L, 43,53 mol) a 0°C sob azoto e depois adicionar lentamente uma 30 ΡΕ2276759 solução de cloreto de ciclopranocarbonilo (137,5 mL, 1,47 mol) em diclorometano (310 mL, 4,84 mol) a 0°C ao longo de 1 hora. Aquecer a 16°C ao longo de 2 horas e depois arrefecer a 10°C, adicionar água (1 L) e separar as fases. Extrair a fase aquosa uma vez com diclorometano (500 mL) . Combinar as fases orgânicas, concentrar e purificar por cromatografia em silica gel eluindo com n-hexano:diclorometano 30:70. Triturar o sólido recuperado com hexanos para dar o composto do titulo como um sólido branco (256,1 g, 60%). EM (m/z): 289, 291 (M+l)

Preparação 14 Síntese da (3,4-dibromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Adicionar bromo (114 mL, 2,2 mol) gota à gota durante 45 min a uma solução aquosa arrefecida de hidróxido de sódio (4,6 M, 3,84 L, 17,8 mol) a -10°C e agitar durante 0,5 hora para dar uma solução amarela. Adicionar esta solução gota à gota a uma solução pré-arrefecida a -5°C de (4-acetil-3-bromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico (150 g, 495 mmol) em 1,4-dioxano (2 L) e agitar 45 min a 5-10°C. Manter o arrefecimento a 10°C enquanto adiciona uma solução aquosa a 40% (w/w) de bissulfito de sódio (47,5 mL) ao longo de 5 min, agitar 5 min e adicionar lentamente ácido clorídrico 12 M (aproximadamente 500 mL) ao longo de 15 mim até se tornar ácida (pH=2) . Diluir com acetato de etilo (2 L) e separar 31 ΡΕ2276759 as fases. Extrair a fase aquosa duas vezes com acetato de etilo (1 L). Combinar as fases orgânicas, secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar. Dissolver o resíduo em diclorometano (600 mL) , diluir com n-hexano (3 L), e arrefecer a 5°C durante a noite. Filtrar e lavar o sólido recuperado com quatro porções de n-hexano (125 mL) para dar o composto do título como sólido branco (92,6 g, 55%). Se desejável pode ser recolhida uma segunda colheita do composto do título a partir das águas-mãe (50,97 g, 30%). EM (m/z): 339, 341, 343 (M+l).

Preparação 15 Síntese da (3,4-dibromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido ciclopropanocarboxílico

Adicionar bromo (118,3 mL, 2,30 mol) ao longo de 1 hora a uma solução aquosa arrefecida de hidróxido de sódio (3,77 M, 2,44 L, 9,21 mol) a 0°C e agitar 15 min. A esta solução, adicionar uma solução de (4-acetil-3-bromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido ciclopropanocarboxílico (155,7 g, 0,51 mol) em 1,4 dioxano (856,3 mL, 10,03 mol) ao longo de 100 min mantendo a temperatura abaixo de 5°C. Agitar durante 1,5 h mantendo a temperatura abaixo de 10°C. Adicionar uma solução aquosa de bissulfito de sódio (77,8 mL, 0,377 mol), agitar durante 5 min e adicionar ácido clorídrico 12 M (390,1 mL, 4,60 mol) ao longo de 15 minutos mantendo a temperatura abaixo de 25°C. Manter a mistura sem agitação durante 10 min depois remover o sobrenadante, 32 ΡΕ2276759 filtrar a suspensão restante, lavar o sólido recuperado duas vezes com água (200 mL) e secar sob vácuo para dar o composto do titulo como um sólido amarelo (91,21 g, 55%). EM (m/z): 325, 327, 329 (M+l).

Preparação 16 Síntese da [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Adicionar uma solução aquosa 2M de carbonato de sódio (606,3 mL, 1,21 mol) a uma mistura em agitação de (3,4-dibromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido (lR,2R)-2- metil-ciclopropanocarboxílico (148,1 g, 0,404 mol) e 2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il) -2H-indazole (123,40 g, 0,444 mol) em 1,2-dimetoxietano de pureza para HPLC (1,21 L) e desgaseificar usando vácuo e azoto. Adicionar dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) (56,77 g, 80,84 mmol) numa porção, aquecer a 83°C durante 10 h, arrefecer à temperatura ambiente e filtrar através de um bloco de Celite® usando acetato de etilo para dar uma solução bifásica. Separar as fases e extrair a fase aquosa três vezes com diclorometano (200 mL). Combinar todas as fases orgânicas, lavar com água e sal (200 mL) e concentrar ao volume de aproximadamente 400 mL. Separar em duas porções e purificar cada uma por cromatograf ia em sílica gel com um gradiente de 50:50 a 10:90 eluindo com n-hexano:acetato de etilo para dar o composto do título como 33 ΡΕ2276759 um sólido castanho claro (107, 32 g, 51%) . EM (m/z) : 391, 393 (M+l). Método alternativo para a síntese de [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Carregar um frasco de fundo redondo com (3,4— dibromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxí lico (2,55 g, 7,49 mmol), 2-metil-5-trimetilestanil-2ff-indazole (2,21 g, 7,49 mmol) e cloreto de lítio (0,95 g, 22,48 mmol) em 1,4-dioxano (19,2 mL) . Purgar com azoto durante 20 min, adicionar tetraquis(tri-fenilfosfina)paládio (1,31 g, 1,12 mmol) e aquecer a 105°C durante 48 h. Deitar directamente a mistura de reacção numa coluna de sílica gel e purifique por eluição com gradiente desde 0:100 a 100:0 acetato de etilo:iso-hexano para dar o composto do título (1,25 g, 43%). EM (m/z): 391, 393 (M+l). O composto seguinte é preparado essencialmente como descrito no método alternativo da Preparação 16 usando 2-etil-5-trimetilestanil-2H-indazole.

Preparação Nome Dados 17 [4-bromo-3-(2-etil-2H-indazol-5-il)- EM (m/z): isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)- 405, 407 2-metil-ciclopropanocarboxílico (M+l) 34 ΡΕ2276759

Preparaçao 18 Síntese do éster t-butílico do ácido 5-{4-bromo-5-[((IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarbonil)-amino]-isotiazol-3- il}-indazole-l-carboxílico

Dissolver (3,4-dibromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico (3,0 g, 8,82 mmol) em 1,4-dioxano anidro (88 mL) e adicionar éster t- butílico do ácido 5-trimetilestanil-indazole-l-carboxílico (4,11 g, 9,70 mmol) . Sob uma camada de azoto, adicionar cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) (0,62 g, 0,88 mmol) e aquecer a 85°C durante 4 dias. Concentrar e purificar por cromatografia em sílica gel, eluição por gra diente de 20:80 a a 40:60 acetato de etilo:hexanos para dar o composto do título (1,04 g, 70% de pureza w/w, 17%) que é utilizado sem purificação adicional. EM (m/z): 477, 479 (M+l).

Preparaçao 19 Síntese de [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido ciclopropanocarboxílico

Desgaseificar borbulhando azoto durante 10 min através de uma mistura de (3,4-dibromo-isotiazol-5-il)-amida do ácido ciclopropanocarboxílico (1,04 g, 3,19 mmol) e 2-meti1-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2H-indazole (1,29 g, 3,51 mmol) em 1,4-dioxano (16 mL) e uma 35 ΡΕ2276759 solução aquosa de carbonato de sódio 2M (7,98 mL) . Adicionar cloreto de bis (trifenilfosfina)paládio (II) (448 mg, 0,64 mmol) e aquecer a 80°C durante 12 h. Arrefecer, diluir com água e sal e acetato de etilo e separar as fases. Extrair a fase aquosa duas vezes com acetato de etilo. Secar as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio, filtrar, concentrar e purificar por cromatografia em silica gel, eluição por gradiente de 40:60 a 100:0 usando acetato de etilo:hexanos, para dar o composto do titulo como um sólido (0,6 g, 1,59 mmol, 50%). EM (m/z): 377, 379 (M+l).

Preparação 20 Síntese de 2-bromo-6-ciclopentil-piridina

Borbulhar azoto através de uma solução de iodeto de cobre (I) (1,48 g, 7,77 mmol), 2,6-dibromopiridina (8g, 33,77 mmol) e cloreto de (1,1'-bis(difenilfosfino)ferro-ceno)paládio (II) (2,90 g, 3,55 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (40 mL) durante 5 min. Adicionar uma solução 0,5 M de brometo de ciclopentilzinco em tetra-hidrofurano (79,70 mL, 39,85 mmol) numa porção e agitar durante a noite. Diluir com hexanos (800 mL) e filtrar através de um bloco de silica gel usando uma solução de acetato de etilo:he-xanos (10:90), para dar uma solução límpida. Concentrar, purificar por cromatografia de fase reversa usando um gradiente de água (w/1% de ácido trifluoroacético) : ace-tonitrilo, e combinar as fracções contendo o produto puro. 36 ΡΕ2276759

Adicionar uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio às fracções combinadas até estarem básicas e extrair com seis porções de hexanos (150 mL) . Secar as fases de hexano sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar para dar o composto do titulo como um liquido límpido (3,75 g, 49%). EM (m/z): 226, 228 (M+l).

Os compostos seguintes foram preparados essencialmente como descrito na Preparação 20 usando brometo de ciclobutilzinco ou brometo de ciclopropilzinco, respec- tivamente.

Preparaçao Nome Dados 21 2-bromo-6-ciclo- EM (m/z): 212,214 (M+l) butil-piridina 22 2-bromo-6-ciclo- RMN de 1H (CDC13) δ 1,01 (m, 4H) , butil-piridina 1,98 (m,lH), 7,04 (d, 1H) , 7,19 (d,1H), 7,35 (t,1H)

Preparação 23 Síntese de 2-bromo-6-etil-piridina

Adicionar sob azoto uma solução de n-butil-lítio 2,5 M em hexanos (186,74 mL, 0,467 mol) ao longo de 41 min a uma solução de di-isopropilamina (68,7 mL, 0,488 mol) em tetra-hidrofurano (745 mL, 9,16 mol) a -78°C (banho de gelo seco/acetona). Agitar durante 15 min e adicionar 2-bromo-6-metilpiridina (49,3 mL, 0,424 mol) gota à gota ao longo de 37 ΡΕ2276759 22 min. Agitar 15 min, adicionar iodeto de metilo (52,87 mL, 0,848 mol) gota à gota durante 1 hora e depois aquecer à temperatura ambiente durante 1,5 h. Adicionar água (250 mL) enquanto se arrefece com um banho de gelo seco/acetona e separar as fases. Extrair a fase aquosa duas vezes com acetato de etilo (300 mL) . Combinar as fases orgânicas, concentrar e purificar por cromatografia em sílica gel, eluição por gradiente de 100 : 0 a 80:20 usando hexanos: acetato de etilo, para dar o composto do título como um óleo amarelo (59, 74 g, 75%) . RMN de 1H (CDC13) δ 1,28 (t, 3H), 2,80 (q, 2H) , 7,11 (d, 1H) , 7,27 (d, 1H) , 7, 45 (t, 1H) .

Os compostos seguintes foram preparados essencialmente como descrito na Preparação 23

Preparaçao Nome Dados 24 2-bromo-6-iso- EM (m/z): 200, 202 (M+l). propilpiridina 25 2-bromo-6-pro- RMN de (CDCI3) δ 0,96 (t,3H), pil-piridina 1,74 (m,2H), 2,73 (t,2H), 7,09 (d,1H), 7,29 (d, 1H), 7,44 (t,lH)

Preparação 26 Síntese de 2-bromo-6-metoximetil-piridina

Adicionar gota à gota uma solução de (6-bromo-piridin-2-il)-metanol (9,6 g, 51 mmol) em tetra-hidrofurano 38 ΡΕ2276759 anidro (29 mL) a uma suspensão em agitação de hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo, 2,45 g, 61 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (96 mL) arrefecida a 0-5°C sob azoto. Após cessar a libertação de gás, adicionar gota à gota iodeto de metilo (10,9 mL, 77 mmol) e aquecer à temperatura ambiente ao longo de 1 hora. Adicionar água gelada (100 mL), diluir com água e sal (100 mL) e acetato de etilo (100 mL). Separar as fases. Extrair a fase orgânica uma vez com água e sal (100 mL), secar sobre sulfato de sódio e decantar o liquido. Concentrar até um óleo amarelo pálido (11,1 g) e destilar usando uma montagem de Kugelrohr para dar o produto do titulo como um liquido incolor (10,1 g, p.e.=140-150°C a 2,4 mbar, 93%). EM (m/z): 202, 204 (M+l).

Preparação 27 Síntese de (6-bromo-piridin-2-il)-dimetil-amina

Aquecer uma mistura agitada de 2,6-dibromopi-ridina (15 g, 63 mmol) e dimetialmina (solução aquosa a 40%, 21,4 mL, 190 mmol, 3 equiv) em etanol (75 mL) durante 3 dias a 70°C. Evaporar a solução amarela a um volume reduzido e diluir com acetato de etilo (100 mL). Lavar com água (40 mL) , água e sal (40 mL) e secar sobre sulfato de sódio. Decantar o líquido e evaporar para dar um óleo amarelo pálido (12,4 g, p.e.=100-140°C a 0,1 mbar). EM (m/z): 201, 203 (M+l). 39 ΡΕ2276759

Preparação 28 Síntese da (6-bromo-piridin-2-il)-metil-amina

Adicionar uma solução 2M de metilamina em tetra-hidrofurano (33,6 mL, 67,12 mmol) a 2,6-dibromopiridina (5,3 g, 22,37 mmol) e aquecer durante a noite a 110°C num tubo selado. Concentrar e purificar por cromatografia em silica gel, eluição por gradiente de 0:100 a 20:80 acetato de etilo:isohexano para dar o composto do título (0,345 g, 8%) como um óleo amarelo pálido que cristaliza se deixado em repouso. EM (m/z): 185, 187 (M+l).

Preparação 29 Síntese de 2-bromo-6-difluorometil-piridina

Adicionar trifluoreto de dietilamino-enxofre (31,5 mL, 0,238 mol) gota à gota ao longo de 20 min a uma solução arrefecida e com agitação de 6-bromo-piridina-2-carbaldeído (30,40 g, 0,158 mol) em diclorometano (600 mL) a 0°C e aquecer durante a noite. Dividir a mistura de reacção em dois lotes de igual volume para facilitar a finalização da reacção. Adicionar lentamente, usando cuidado extremo, uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio ao longo de 30 min. Lavar a fase aquosa uma vez com diclorometano. Secar as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio, filtrar, e concentrar. Purificar o material bruto resultante por cromatografia em sílica gel, 40 ΡΕ2276759 eluição por gradiente desde 1:99 a 10:90 usando acetato de etilo:isohexano, para dar o composto do título (22,60 g, 68%) e uma segunda fracção (9,4 g, 90% w/w de pureza, 26%) que são usadas sem purificação adicional. RMN de ΧΗ (CDCls δ 6,59 (t, 1H), 7,61 (m, 2H), 7,73 (t, 1H). O composto seguinte é preparado essencialmente como descrito na Preparação 29.

Preparaçao Nome Dados 30 2-bromo-6-fluorometil-piridina GC-MS: 189, 191 (M+)

Preparaçao 31 Síntese de 2-(6-bromo-piridin-2-il)-propan-2-ol

Adicionar uma solução de brometo de metilmagnésio (3,0 M, 9,7 mL, 29, 09 mmol) em tetra-hidrof urano gota à gota ao longo de 20 min a uma solução arrefecida de l-(6-bromo-piridin-2-il)-etanona (5 g, 24,25 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (48,5 mL) a 0°C. Ao completar-se a reacção, adicionar água (exotérmica), diluir com acetato de etilo (50 mL) e separar as fases. Extrair a fase aquosa uma vez com acetato de etilo (50 mL). Secar as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar para dar o composto do titulo como um líquido amarelo pálido (5,69 g, 98%) que é usado sem purificação adicional. 41 ΡΕ2276759 RMN de XH (CDC13) δ 1,55 (s, 6H) , 4,07 (s, 1H) , 6,59 (t, 1H), 7,37 (t, 2H), 7,55 (t, 1H).

Preparação 32 Síntese de 2-bromo-6-(1-fluoro-l-metil-etil)-piridina

Adicionar trifluoreto de (bis(2-metoxietil)ami-no)enxofre (2,05 mL, 11,11 mmol) gota à gota a uma solução arrefecida de 2-(6-bromo-piridin-2-il)-propan-2-ol (2 g, 9,26 mmol) em diclorometano (46,3 mL) a -78°C. Finalizada a adição, aquecer à temperatura ambiente e agitar durante a noite. Adicionar uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e agitar até terminar a libertação de gás. Filtrar através de um IST Phase Separator Frit® hidrofóbico de 50 mL, concentrar e purificar por cromatografia em sílica gel, eluição por gradiente desde 3:97 a 5: 95 e depois a 10:90 usando diclorometano:iso-hexano para dar 0 composto do título como um líquido incolor (5, 13 g. 71%) . RMN de XH (CDCI3) δ 1,66 (s, 3H), 1,73 (s, 3H ) , 7,37 (dd, 2H), 7,53 (m, 2H) . RMN de 19F (CDCI3) δ 143, 37 (s, 1F)

Preparaçao 33 Síntese de 2-etil-6-tributilestanil-piridina

Adicionar sob azoto uma solução de t-butil-lítio em pentano (1,5 M, 80,3 mL, 120,5 mmol) gota à gota ao 42 ΡΕ2276759 longo de 1 hora a uma solução arrefecida de 2-bromo-6-etil-piridina (10,19 g, 54,77 mmol) em éter etílico anidro (101,9 mL) a -78°C a uma velocidade tal que a temperatura da reacção não exceda -75°C. Agitar 15 min e adicionar cloreto de tri-n-butilestanho (16,25 mL, 57,51 mmol) gota à gota a uma velocidade tal que a temperatura de reacção não exceda os -70°C. Aquecer à temperatura ambiente, adicionar água e separar as fases. Extrair a fase aquosa uma vez com éter etilico. Secar as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar para dar o composto do titulo como um liquido amarelo pálido (24,05 g, 94%) que é subsequentemente usado sem purificação adicional. RMN de XH (CDC13) δ 0,88 (t, 9H), 1,09 (m, 6H), 1,32 (m, 9H), 1,56 (m, 6H), 1,57 (m, 6H), 2,80 (q, 2H), 6,95 (m, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,38 (t, 1H).

Os compostos seguintes são preparados essencialmente como descrito na Preparação 33 usando 2-bromo-6-isopropil-piridina e 2-bromo-6-difluorometil-piridina.

Preparaçao Nome Dados 34 2-isopropil-6- tributilestanil- piridina EM (m/z): 408-417 cluster (M+l). 35 2-difluorometil- RMN de (CDC13) δ 0,88 (t,9H), 6-tributilesta- 1,12 (m,6H), 1,33 (m,6H), 1,56 nil-piridina (m,6H), 6,63 (t,lH), 7,47 (m,2H), 7,61 (t, 1H) 43 ΡΕ2276759

Preparação 36 Síntese de dimetil-(6-tributilestanil-piridin-2-il)-amina

Adicionar gota à gota uma solução de (6-bromo-piridin-2-il)-dimetilamina (8g, 39,8 mmol) em tetra-hidro- furano anidro (10 mL) a uma solução arrefecida em agitação de n-butil-lítio em hexanos (2,5 M, 19,1 mL, 47,7 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (160 mL) sob azoto a -75°C a uma velocidade tal que a temperatura de reacção não exceda os -70°C. Após lha -75°C, adicionar gota à gota cloreto de tri-n-butilestanho (13 g, 39,8 mmol), agitar durante 30 min e aquecer a 0°C. Adicionar água (200 mL) e depois diluir com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) e éter etílico (200 mL) e separar as fases. Extrair a fase orgânica uma vez com água e sal (200 mL), secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar para dar um líquido (25,4 g). Purificar por cromatografia em sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 90:9:1, para dar o produto do título como um líquido incolor (8,16 g, 50%). EM (m/z): 409-414 cluster (M+l).

Exemplo 1 Síntese da [4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico 44 ΡΕ2276759

Dissolver [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropa-nocarboxílico (288 g, 0,736 moles) em THF (2,9 L) , adicionar 2-etil-6-(tributilestanil)piridina (498,8 g, 1,10 moles), e aspergir com um caudal de azoto à superfície durante 10 min. Adicionar cloreto de bis(trifenilfosfina)-paládio (II) (26,4 g, 36,8 mmol) e continuar a aspersão durante 5 min. Trocar a aspersão por uma purga de azoto e aquecer a mistura em refluxo. Após 56,5 horas, arrefecer o conteúdo do balão à temperatura ambiente e concentrar a solução a pressão reduzida. Dissolver a suspensão resultante em tolueno (6 L) e HC1 IN (3 L). Filtrar a mistura bifásica através de papel Whatman® GFF e transferir o filtrado para um frasco com saída no fundo. Separar as fases e tornar a extrair os orgânicos com HC1 IN (3 L) . Combinar as fases aquosas e lavar com tolueno (6 L). À fase aquosa, adicionar NaOH 5N até pH 9. Separar as fases e lavar os orgânicos com água e sal (3 L) . Secar os orgânicos sobre MgSC>4, filtrar através de papel Whatman® GFF e concentrar a pressão reduzida para dar um resíduo. Purificar o resíduo usando croma-tografia em sílica gel, eluindo com acetonitrilo:hepta-no:cloreto de metileno (20:30:50). Combinar as fracções apropriadas e concentrar a pressão reduzida para produzir o 45 ΡΕ2276759 composto do título como uma espuma amorfa. RMN de XH (CDC13, 400,0 Hz) : δ 0,85 (m, 1H), 1,19 (d, 3H), 1,33 (m, 3H), 1,45 (t, 3H), 2, 96 (q, 2H) , 4,24 (s, 1H) , 6,19 (d, 1H, J=8Hz), 7,01 (d, 1H, J=8Hz), 7,28 (dd, 1H, J=12Hz), 7 ,33 (t, 1H, J=8Hz ), 7,66 (d, 1H, J=12Hz), 7,89 (s, 1H), 7 ,94 (s, 1H), 13,0 (s, 1H)

Cristalização de [ 4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Dissolver a [ 4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-met il-ciclopropanocarboxí lico (113 mg, 270,6 μιτι) em acetato de etilo (226 μμ) com agitação e aquecimento suave. Adicionar hexanos (339 μμ) à solução morna e deixar a mistura resultante em repouso até atingir a temperatura ambiente. Filtrar os cristais resultantes e lavar com hexanos (0,5 mL) . Secar o produto em vácuo a 35°C para produzir o composto do título como um sólido cristalino branco. RMN de ΧΗ (CDC13, 400,0 MHz): δ 0,85 (m, 1H), 1,19 (d, 3H), 1,33 (m, 3H), 1,45 (t, 3H), 2,96 (q, 2H) , 4,24 (s, 1H) , 6,19 (d, . 1H, J=8Hz), 7,01 (d, 1H, J= 8Hz) , 7,28 (dd, 1H, J=12Hz), 7,33 (t, 1H, J=8Hz), 7,66 (d, 1H, J=12Hz), 7, 89 (s, 1H), 7, 94 (S, 1H), 13,0 (s, 1H) . Método alternativo para a síntese de [4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico 46 ΡΕ2276759

Purgar sob azoto uma solução de [ 4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR, 2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico (6,04 g, 13,28 mmol) e 2-etil-6-tributilestanil-piridina (9,28 g, 19,91 mmol) em 1,2-dimetoxietano anidro (52 mL) durante 30 min e adicionar bis(tri-t-butilfosfina)paládio (0) (0,35 g, 0,66 mmol) e aquecer a 100°C sob azoto durante 4 dias. Concentrar, dissolver o resíduo em acetato de etilo e filtrar através de um bloco húmido de Celite® usando acetato de etilo. Concentrar e purificar por cromatografia em sílica gel, com eluição por gradiente desde 60:40 a 70:30 e depois 90:10 com acetato de etilo:isso-hexano e depois acetato de etilo. Concentrar, dissolver em acetato de etilo (50 mL) e filtrar. Adicionar uma solução 2M de cloreto de hidrogénio em éter etílico (6 mL) gota à gota sob azoto ao filtrado e agitar durante 30 min. Filtrar, lavar o sólido recuperado com acetato de etilo (10 mL) e secar durante a noite. Dissolver em metanol (100 mL) , dividir em 3 fracções de igual volume e deitar cada fracção numa coluna Isolute® SCX-2 (20 g, Biotage AB) pré-lavada com metanol. Lavar com metanol (3 volumes de coluna), eluir com uma solução 2M de amónia em metanol (1 volume de coluna), combinar e concentrar. Purificar ainda por SFC [coluna de 2-etilpiridina (Princeton Chromatography Inc.), 60A, tamanho de partícula 7 μ, fase móvel 15% de metanol (w/0,2% de dietilmetil-amina) :85% de dióxido de carbono, pressão à saída de 100 bar] usando metanol como solvente de injecção [18 mL, volume de injecção numa escala de 1,5 mL/injecção (230 mg 47 ΡΕ2276759 de material para injecção), injectando todos os 4 min para obter um débito de 3,5 g/h] para dar o composto do titulo (1,77 g, 32%). EM (m/z): 418 (M+l).

Quantidades vestigiais de metais pesados podem ser removidos a partir do composto do titulo purificado usando o protocolo seguinte. Adicionar resina CR20 Diaion® (28,86 g, Resindion-Mitsubichi Chemical) a uma solução do composto do titulo (14,62 g, 34,56 mmol) em tolueno (577,2 mL) com agitação e aquecer a 60°C durante 15 h. arrefecer à temperatura ambiente, filtrar e lavar a resina recuperada com tolueno. Adicionar resina CR20 Diaion® nova (28,86 g) ao filtrado e agitar a 60°C durante 7 horas. Arrefecer à temperatura ambiente, filtrar, lavar a resina recuperada com tolueno e concentrar para dar um sólido amarelo (14,7 g) . Dissolver o sólido em éter metil-t-butílico (735 mL) , lavar duas vezes com uma solução aquosa saturada de fluoreto de potássio (solução a 43% w/w) durante 10 min, secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar. Triturar o resíduo duas vezes com hexanos (294 mL) com filtração e secagem em vácuo para dar o composto do título como um sólido branco. EM (m/z): 418 (M+l).

Exemplo 2 Síntese do cloridrato da [ 4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico 48 ΡΕ2276759

Adicionar lentamente via seringa uma solução 1M de cloreto de hidrogénio em éter etílico (25,92 mL, 25,92 mmol) a uma solução agitada de [4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico (11 g. 25,92 mmol) em acetato de etilo (135,30 mL) à temperatura ambiente para dar uma suspensão. Após 10 min, concentrar e secar em vácuo durante 3 dias para dar o composto do título como um sólido brnaco (11, 92 g, 99%: ) . EM (m/z) : 418 (M-HC1+1). RMN de XH (DMS0-d5) δ o, 86 (m, 1H), 1,10 (d, 3H) , . 1,17 (m, 1H), 1 ,27 (t, 3H) , 1, 39 (m, 1H) , 1,91 (m, 1H) , 3, 02 (q, 2H) , 7,16 (d, 1H), 7, 81 (s, 1H ) , 7 ,51 (d, 3H), 8,31 (s, 2H), 12, 20 (s, 1H) .

Exemplo 3 Síntese do cloridrato da [4-(6-isopropil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

49 ΡΕ2276759

Purgar sob azoto uma solução de [ 4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR, 2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico (6,31 g, 12,26 mmol) e 2-isopropil-6-tributilestanil-piridina (15,08 g, 18,38 mmol) em 1,2-dimetoxietano anidro (50 mL) durante 60 min e adicionar bis(tri-t-butilfosfina)paládio (0) (0,32 g, 0,61 mmol). Agitar a 100°C sob azoto durante 3 dias, concentrar para um volume reduzido e diluir com acetato de etilo (50 mL) . Filtrar através de um bloco de Celite®, concentrar para um óleo castanho escuro e purificar por cromatografia em sílica gel, com eluição por gradiente desde 60:40 a 90:10 com acetato de etilo: iso-hexano para dar um óleo castanho claro (7,3 g) . Dissolver em acetato de etilo (40 mL) e adicionar uma solução 2M de cloreto de hidrogénio em éter etílico (4,5 mL, 9 mmol) para dar um precipitado. Filtrar para dar um sólido de cor creme (4,14 g). Dissolver em metanol (15 mL) , dividir em três porções e deitar cada porção numa coluna Isolute® SCX-2 (20 g, Biotage AB). Lavar com metanol (120 mL por coluna) e eluir da coluna usando uma solução 2M de amónia em metanol (100 mL por coluna) . Concentrar para uma espuma amarela e purificar por croma-tografia em sílica gel, com eluição por gradiente desde 70:30 até 80:20 usando acetato de etilo:iso-hexano para dar a base livre do produto do título como um óleo amarelo. Dissolver em acetato de etilo (40 mL) , e adicionar uma solução 2M de cloreto de hidrogénio em éter etílico (4,5 mL, 9 mmol) para dar um precipitado imediato. Deixar 50 ΡΕ2276759 repousar durante 1 hora e depois filtrar para dar o composto do titulo como um sólido em pó branco (3,85 g, 65%). EM (m/z): 432 (M-HC1+1). O composto seguinte é preparado essencialmente como descrito no Exemplo 3.

Exemplo Nome Dados 4 Cloridrato da [ 4-(6-difluorometil-piridin- EM (m/Z): 2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-iso- 440 (M- tiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2- HC1+1) metil-ciclopropanocarboxílico

Exemplo 5 Síntese do cloridrato da [3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-piridin-2-il-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Desgaseifique, borbulhando azoto durante 10 min através de uma mistura de tributil-2-piridina-estanho (244 \iLr 0,70 mmol) e [ 4-bromo-3-( 2-met il-2H-indazol-5-il)-iso- 51 ΡΕ2276759 tiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropano-carboxílico (0,25 g, 0,64 mmol) em 1,2-dimetoxietano anidro (5,00 mL) , adicionar bis(tri-t-butilfosfina)paládio (0) (0,02 g, 31,95 μπιοί) e agitar a 100°C sob azoto durante a noite. Arrefecer a mistura de reacção à temperatura ambiente, adicionar uma solução aquosa a 10% de fluoreto de potássio (3 mL) , agitar 10 min e extrair com acetato de etilo. Lavar as fases orgânicas com água e sal, secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar à secura. Purificar o resíduo por cromatografia em sílica gel, com eluição por gradiente desde 0:100 a 100:0 usando acetato de etilo:iso-hexano, e depois purificar ainda por HPLC de fase reversa (água w/bicarbonato de amónio (pH=9)/acetonitrilo) para dar a base livre como um óleo incolor. Dissolver em acetato de etilo (1 mL), adicionar uma solução 1M de cloreto de hidrogénio em éter etílico (250 μL) e concentrar em vácuo para dar o composto do título como um sólido branco (111 mg). EM (m/z): 390 (M-HC1+1).

Os compostos seguintes são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 5 usando (6-bromo-piridin-2-il)-dimetilamina e ou [4-bromo-3-(2-etil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropa-nocarboxilico ou [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-iso-tiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropano-carboxílico. O exemplo 7 é preparado como a base livre omitindo o tratamento com cloreto de hidrogénio. 52 ΡΕ2276759

Exemplo Nome Dados 6 [4-(6-dimetilamino-piridin-2-il)-3-(2-etil-2H- EM (m/z): indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido 447 (M- (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico HC1+1) 7 [4-(6-dimetilamino-piridin-2-il)-3-(2-metil- EM (m/z): 2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do áci- 440 (M+l) do (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Exemplo 8 Síntese do cloridrato da [3-(lH-indazol-5-il)-4-(6-isopropil-piridin-2-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Adicionar bis(tri-t-butilfosfina)paládio (0) (7,4 mg, 0,01 mmol) a uma solução agitada do éster t-butílico do ácido 5-{4-bromo-5-[((IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarbonil)-amino-isotiazol-3-il}-indazole-l-carboxílico (0,33 g, 0,48 mmol) e 2-isopropil-6-tributilestanil-piridina (0,308 g, 0,64 mmol) em 1,2-dimetoxietano anidro (2,4 mL) sob azoto e aquecer a 80°C durante 18 horas. Purificar a solução da reacção directamente por cromatografia em sílica gel, com eluição por gradiente desde 20:80 a 60:40 usando acetato de etilo:hexanos para dar a base livre do composto do título 53 ΡΕ2276759 (78 mg, 34%) e éster t-butílico do ácido 5-{4-(6-isopropil-piridin-2-il)-5-[((lR,2R)-2-metil-ciclopropanocarbonil)-amino-isotiazol-3-il}-indazole-l-carboxílico (85 mg, 29%). EM (m/z): 518 (M+l).

Dissolver o éster t-butilico do ácido 5-(4-(6-isopropil-piridin-2-il)-5-[((IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarbonil ) -amino-isotiazol-3-il}-indazole-1-carboxilico (83 mg, 0,16 mmol) em diclorometano (2 mL) , adicionar ácido trifluoroacético (2 mL) e agitar durante 2 horas. Concentrar e purificar por cromatografia em silica gel com eluição por gradiente desde 20:80 a 30:70 usando acetato de etilo:(diclorometano/hexanos 50:50) para dar a base livre do composto do titulo (47 mg). EM (m/z): 418 (M+l).

Combinar os dois lotes da base livre do composto do titulo (125 mg, 0,3 mmol), suspender em éter etílico (4 mL) e adicionar metanol para dissolver. Adicionar uma solução IN de cloreto de hidrogénio em éter etílico (0,3 mL, 0,3 mmol) e concentrar. Secar em vácuo para dar o composto do título (92 mg, 42% ao longo dos dois passos). EM (m/z): 418 (M-HC1+1).

Exemplo 9 Síntese do cloridrato de [ 4-(6-ciclobutil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico 54 ΡΕ2276759

Adicionar a um recipiente para micro-ondas 2-bromo-6-ciclobutil-piridina (0,18 g, 0,84 mmol), hexametil-di-estanho (0,18 mL, 0,84 mmol), cloreto de lítio (97,5 mg, 2,30 mmol) e 1,4-dioxano anidro (2,5 mL) e desgaseifique borbulhando azoto. Adicionar tetraquis(trifenilfosfina)paládio (44,3 mg, 38,33 μπιοί) e aquecer num micro-ondas com agitação a 110°C durante 5 min para dar uma solução de 2-ciclobutil-6-tributilestanil-piridina.

Adicionar sequencialmente à solução acima uma solução desgaseifiçada de [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclo-propanocarboxilico (0,30 g, 0,77 mmol) em 1,2-dimetoxietano anidro (2,5 mL) e bis(tri-t-butilfosfina)paládio (0) (0,05 g, 0,98 mmol). Aquecer num micro-ondas a 100°C com agitação durante 2 horas. Purificar a mistura de reacção directa-mente por cromatograf ia em sílica gel, com eluição por gradiente desde 60:40 a 100:0 usando acetato de etilo:iso-hexano e depois purificar por uma segunda cromatografia em sílica gel, com eluição por gradiente desde 100:0 a 97:3 usando diclorometano:metanol para dar a base livre do composto do título. Dissolver na quantidade mínima de diclorometano, adicionar uma solução 2M de cloreto de hidrogénio (0,11 mL, 0,22 mmol) em éter etílico e con- 55 ΡΕ2276759 centrar à secura para dar o composto do título (88,80 mg, 24%) como um sólido branco. EM (m/z): 444 (M+HC1+1).

Os compostos seguintes são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 9 a partir de [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR, 2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico e a amida 2-bromo-piri-dina substituída na posição 6 correspondente.

Exemplo Nome Dados 10 Cloridrato de [4-(6-ciclopropil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxí lico EM (m/z): 430 (M+HC1+1) 11 Cloridrato de [4-(6-(1-fluoro-l-metil-etil)-piridin-2-il]-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico EM (m/z): 450 (M+HC1+1) 12 Cloridrato de [4-(6-metil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxí lico EM (m/z): 404 (M+HC1+1) 13 Cloridrato de [4-(6-metilamino-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxí lico EM (m/z): 419 (M+HC1+1)

Os compostos seguintes são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 9 a partir de [4-bromo-3-(2- 56 ΡΕ2276759 metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR, 2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico e a amida 2-bromo-piri-dina substituída na posição 6 correspondente e isolados como bases livres.

Exemplo Nome Dados 14 [3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-(6-propil-piridin-2-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico EM (m/z): 432 (M+l) 15 [4-(6-(ciclopentil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico EM (m/z): 458 (M+l) 16 [4-(6-(fluorometil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico EM (m/z): 422 (M+l) 17 [4-(6-(metoximetil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico EM (m/z): 434 (M+l)

Exemplo 18 Síntese do cloridrato de [4-(6-(dimetilamino-piridin-2-il) -3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido ciclopropanocarboxílico

57 ΡΕ2276759

Desgaseificar borbulhando azoto através de uma mistura de dimetil-(6-tributilestanil-piridin-2-il)-amina (0,34 g, 0,84 ,mmol) e [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido ciclopropanocarboxílico (0,24 g, 0,64 mmol) em 1,2-dimetoxietano (3 mL) durante 10 min, adicionar bis(tri-t-butilfosfina)paládio (0) (0,02 g, 32,21 μιηοΐ) e agitar a 100°C sob azoto durante a noite. Arrefecer à temperatura ambiente, adicionar uma solução aquosa a 10% de fluoreto de potássio (3 mL), agitar 40 min e extrair com acetato de etilo. Lavar a fase orgânica com água e sal, secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar. Purificar por cromatografia de troca iónica numa coluna Isolute SCX-2® (10 g, Biotage AB) como essencialmente descrito no Exemplo 3, e depois purificar ainda por cromatograf ia em sílica gel com eluição por gradiente desde 0:100 a 80:20 usando acetato de etilo:iso-hexano e purificar ainda por HPLC de fase reversa (água w/bicarbonato de amónio (pH=9)/acetonitrilo) para dar a base livre do composto do título. Dissolver em metanol, adicionar uma solução 1M de cloreto de hidrogénio em éter etílico (240 μΕ, 0,24 mmol) e concentrar a vácuo para dar o composto do título como um sólido amarelo pálido (0,11 g, 0,24 mmol). EM (m/z): 419 (M+l).

Exemplo 19 Síntese do cloridrato da [4-(6-(etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido ciclopropanocarboxílico 58 ΡΕ2276759

Desgaseificar borbulhando azoto durante 10 min através de uma mistura de [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido ciclopropanocarboxílico (0,3 g, 0,79 mmol) e 2-etil-6-tributilestanil-piridina (2,0 g, 5,05 mmol) em 1,2-dimetoxietano anidro (4 mL). Adicionar bis(tri-t-butilfosfina)paládio (0) (41 mg, 0,79 mmol), aquecer a 80°C e agitar durante 20h. Deixar arrefecer à temperatura ambiente e purificar directamente por cromato-grafia em silica gel, com eluição por gradiente desde 50:50 a 100:0 usando hexanos:acetato de etilo e depois purificar ainda por HPLC de fase reversa (Kromasil® KR100-10C18-250P2, 50,8mm x 25 cm, caudal 60 mL/min) , com eluição por gradiente desde 15:85 a 80:20 usando água (w/0,1% de ácido trifluoroacético/acetonitrilo (w/0,1% de ácido trifluoro-acético) ao longo de 60 min. Combinar fracções, tornar básico com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, extrair com diclorometano duas vezes, secar sobre sulfato de sódio anidro anidro, filtrar, e concentrar para dar um sólido (0,132 g, 0,33 mmol). Dissolver em diclorometano (1,6 mL) , arrefecer a 0°C e adicionar uma solução 1M de cloreto de hidrogénio em éter etílico (0,327 mL, 0,33 mmol) com agitação. Após 10 min, concentrar em vácuo, triturar o resíduo duas vezes com éter etílico e secar em vácuo para dar o composto do título como um sólido (0,111 g, 0,25 mmol). EM (m/z): 404 (M+HC1+1). 59 ΡΕ2276759

Exemplo Nome Dados 20 Cloridrato da [4-(6-(isopropil-piridin-2- EM (m/z): il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5- 418 il]-amida do ácido ciclopropanocarboxílico (M+HC1+1)

Exemplo 21 Síntese da [4-(6-(metoxi-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Adicionar a uma solução 0,5 M de 6-metoxi-2-piridilzinco em tetra-hidrofurano (6,13 g, 3,07 mmol) a uma solução de [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarbo-xílico (0,24 g, 0,61 mmol) em 1,2-dimetoxietano anidro (3,1 mL) e desgaseificar borbulhando com azoto durante 20 min. Adicionar bis(tri-t-butilfosfina)paládio (0) (0,01 g, 12,27 μιηοΐ) , agitar à temperatura ambiente sob azoto durante a noite e depois aquecer a 55°C durante 48 h. Diluir com água e sal e extrair com acetato de etilo. Secar as fases de acetato de etilo sobre sulfato de magnésio, filtrar e 60 ΡΕ2276759 concentrar. Purificar por cromatografia em silica gel, cm eluição por gradiente desde 0:100 a 30:70 usando acetato de etilo:clorofórmio e depois purificar ainda por HPLC de fase reversa (água w/bicarbonato de amónio (pH=9)/acetonitrilo) para dar o composto do título (29,6 mg). RMN de 1H (CD30D) δ 0, 85 (m, 1H) , ι,ιε ! (d, 3H) , 1,35 (m, 1H) , 1,44 (m, 1H) , 1,62 (m, 1H), 4, 11 (s, 3H) , 4,24 (s, 3H) , 6,57 (d, 1H) , 6,62 (d, 1H), 7, 27 (m, 1H) , 7,34 (t, 1H) , 7, 65 (d, 1H) , 7, 91 (d, 2H), 12, 17 (ls, 1H) .

Exemplo 22

Cristalização da [ 4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (lR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Dissolver [4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (lR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico (185 g, 0,44 mmol) em acetato de etilo (555 mL) com agitação. Adicionar cristais de sementeira do Exemplo 1 (200 mg) seguido por hexanos (800 mL) . Agitar a mistura resultante à temperatura ambiente durante 30 minutos. Filtrar os cristais resultantes e lavar com hexanos (50 mL). Secar os sólidos num forno de vácuo a 35°C para produzir o composto do título como um sólido cristalino branco. EM (m/z): 418 (M+l); DSC (limiar) p. e . =159,4°C. 61 ΡΕ2276759

Exemplo 23 Síntese da [ 4-(6-isopropil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico

Equipar um balão de fundo redondo de 3L e 3 tubuladuras com agitação de topo, termopar, condensador, manta de aquecimento, e entrada de azoto. Deitar no balão [4-bromo-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico (96g, 0,25 moles) e THF (1L). Adicionar 2-isopropil-6-(tributil-estanil)piridina (182g, 0,44 moles) e agitar. Aspergir com azoto sob a superfície durante 20 minutos. Adicionar cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) (8,62g, 0,012 moles) e continuar a aspersão de azoto durante 5 minutos. Mudar de aspersão para purga e aquecer o conteúdo do balão em refluxo.

Agitar a mistura de reacção durante 3 dias em refluxo (restam ca. 37% de material de partida por LCMS). Arrefecer a mistura de reacção a 35°C, desgaseificar durante 15 min, e adicionar mais catalisador de paládio (1 mol%) . Agitar a reacção durante 2 dias em refluxo (restam 22% de material de partida por LCMS). Arrefecer a mistura de reacção durante 2 dias em refluxo (restam 13% de material de partida por LCMS). Arrefecer a mistura de reacção a 35°C, desgaseificar durante 15 min, e adicionar 62 ΡΕ2276759 mais catalisador de paládio (5 mol%). Agitar a reacção durante 4,5 horas em refluxo (restam 11% de material de partida por LCMS). Arrefecer a mistura de reacção a 35°C desgaseificar durante 15 min, e adiciona mais catalisador de paládio (5 mol%) . Agitar mais uma vez durante 15 horas em refluxo (restam 6% de material de partida por LC/MS).

Concentrar a solução em vácuo para remover o solvente.

Tratar a suspensão resultante com tolueno (2L) e HC1 IN (1L). Filtrar a mistura bifásica através de Celite®. Separar as fases e extrair a fase aquosa com HC1 IN (1L x 3) . Combinar as fases aquosas e extrair com tolueno (1L) . Subsequentemente, tratar a fase aquosa com tolueno (2L) e NaOH 5N até pH=ll. Separar as fases e extrair a fase aquosa com tolueno (1 L x 2). Lavar as fases orgânicas combinadas com água e sal (700 mL) , secar sobre sulfato de sódio, e filtrar. Evaporar o filtrado em vácuo para produzir o produto bruto como um óleo amarelo (78 g, pureza 63%) . Purificar o material bruto por cromatografia flash (sílica gel, acetato de etilo/hexanos) para providenciar o produto do título. Purificar ainda por cristalização a partir de acetato de etilo e hexanos. Combinar os lotes e tratar com tolueno (500 mL) e HC1 IN (250 mL) . Separar as fases e tornar a extrair com HC1 IN (3X250 mL) . Combinar as fases aquosas e extrair com tolueno (300 mL) . Tratar a fase aquosa com tolueno (500 mL) e NaOH 5N até pH=ll. Separar as fases e extrair a fase aquosa com tolueno (2 x 500 mL) . Lavar as fases orgânicas combinadas com água e sal (200 63 ΡΕ2276759 mL), secar sobre sulfato de sódio, e filtrar. Concentrar o filtrado em vácuo. Cristalizar o resíduo resultante a partir de acetato de etilo e hexanos para providenciar 40 g do composto do titulo como um sólido branco. P.f.=142-14 4°C. EM (ESI), m/z 432 (M+l).

Lisboa, 29 de Novembro de 2011

Claims (4)

1. ΡΕ2276759 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula, ou um sal farma-ceuticamente aceitável deste,

   em que R1 é H ou Ci-C3alquilo; R2 é H, Ci-C3alquilo, C3-CsCÍcloalquilo, Ci-C3flu- 4 5 orolalquilo, NR R , Ci-C3alcoxilo ou Ci-C3alcoximetílo; R3 é H ou metilo; e R4 e R5 sao independentemente H ou Ci-C3alquilo. 2. 0 composto da reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste em que R1 é Ci-C3alquilo; R2 é Ci-C3alquilo, C3-C5cicloalquilo ou Ci-C3flu- orolalquilo; e R3 metilo; 2 ΡΕ2276759 3. 0 composto da reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste em que R1 é Ci-C3alquilo. 4. 0 composto da reivindicação 1 ou 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste em que R e Ci-Csalquilo. 5. 0 composto da reivindicação 1,3 ou 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes, em que R e metilo 6. 0 composto da reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que R1 é metilo ou etilo; R2 é H, metilo, etilo, propilo, isopropilo, ci-clopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, fluorometilo, di-fluorometilo, 1-fluoro-l-metil-etilo, metilamino, dime- tilamino, metoxilo ou mmetoximetilo; e R3 é H ou metilo. 7. 0 composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 que é [ 4-(6-etil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-isotiazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico ou um sal farmaceu-ticamente aceitável deste. 3 ΡΕ2276759 8. 0 composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 que é [ 4-(6-isopropil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il]-amida do ácido (IR,2R)-2-metil-ciclopropanocarboxílico ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. 9. 0 composto como reivindicado na reivindicação 8 que é [4-(6-isopropil-piridin-2-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il]amida do ácido (IR, 2R)-2-meti1-ciclopropanocarboxilico.
2. 10. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um sal f armaceuticamente aceitável deste, e um veiculo, diluente ou excipiente farmaceu-ticamente aceitável.
3. 11. Um composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para usar em terapia.
4. 12. Um composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para usar no tratamento de ansiedade. Lisboa, 29 de Novembro de 2011