TW201130503A - Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists - Google Patents

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201130503 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 與本申請案同時提交且標識為如下之電腦可讀取核苷酸/ 胺基酸序列表以全文引用之方式併入本文中：一份122 KB ACII(正文）檔案’命名為r 45〇98—ST25 txt」，於2〇〇9年12 月1 8日創建。 【先前技術】 則升糖素原為15 8個胺基酸之前驅多肽，其在不同組織 中加工形成多種不同升糖素原衍生肽，包括升糖素、類升 糖素肽-l(GLP-l)、類升糖素肽_2(GLp_2)及調酸素 (oxyntomodulin，OXM)，該等升糖素原衍生肽參與多種生 理功能’包括葡萄糖怪定、胰島素分泌、胃排空及腸道生 長，以及食物攝入調節。升糖素為29_胺基酸肽，其對應 於前升糖素原之胺基酸33至61，而GUM產生為37_胺基酸 肽，其對應於前升糖素原之胺基酸72至1〇8。gLP_1('36) 醯胺或gum(7-37)酸為gum之生物有效形式其對GLp_ 1受體顯示基本上等效之活性。 在低血糖期間，當血糖含量降至低於正常含量時，升〗 素向肝臟發出信號以分解肝糖且釋放葡萄糖，促使血糖' 量升至正常含量。在由於糖尿病而具有高血糖（血糖含， 升南）之患者中’低血糖為騰島素療法之常見副作用。f :作節*之最公認作用在於抵消騰島^ 其作用包括刺 GLP-1與升糖素相比具有不同生物活性 ]52868.doc 201130503 激胰島素合成及分泌，抑制升糖素分泌，及抑制食物攝 入。GLP-1已展示降低糖尿病患者之高血糖。與GLp]共 有約50%胺基酸一致性之來自蜥蜴毒液之肽腸促胰島素類 似物-4(Exendin-4)活化GLPq受體且同樣已展示降低糖尿 病患者之高血糖。 亦有s登據表明GLP-1及腸促騰島素類似物可減少食物 攝入且促進體重減輕，該作用不僅有益於糖尿病患者，而 • 且亦有益於罹患肥胖症之患者。患有肥胖症之患者具有較 高的糖尿病、高血壓、高脂質血症、心血管疾病及肌肉骨 路疾病之風險。 【發明内容】 本文中提供天然人類升糖素（SEQ ID NO: 2)之升糖素類 似物’其對升糖素受體展現活性，對GLP-1受體展現活 性’或對升糖素受體及GLP_1受體之每一者展現活性。 本文中所述之升糖素類似物包含基於天然人類升糖素之 φ 胺基酸序列（SEQ ID NO: 2)的胺基酸序列。在一些態樣 中，本文中所述之升糖素類似物包含SEQ ID NO: 2之經修 飾胺基酸序列，其包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13 ' 14、15個及在一些情況下包含16個或16 個以上胺基酸修飾，如本文中進一步描述。 在一態樣中，升糖素類似物包含SEQ ID NO: 2之經修飾 胺基酸序列，其包含以下胺基酸修飾：（i)醯化或烷基化胺 基酸殘基（例如，共價鍵聯至C4至C30醯基或烷基之胺基 酸），較佳在位置10 ; (ii)在SEQ ID NO: 2之位置16之促α螺 152868.doc 201130503 旋胺基酸；（iii)位置17及/或18之脂族胺基酸（例如，小型 脂族胺基酸）；及（iv)位置27之C端之一或多個帶電荷胺基 酸（例如，一或多個帶負電殘基）。 如本文中所用’術§吾「酿化胺基酸」係指包含天然存在 胺基酸中非天然之醯基之胺基酸’與其產生方式無關。如 本文中所用’術語「烧基化胺基酸」係指包含天然存在胺 基酸中非天然之烧基之胺基酸’與其產生方式無關。因 此’本發明之醯化胺基酸及烷基化胺基酸為非編碼胺基 酸。如本文中所用，「非編碼」係指不為任何以下2〇種胺 基酸之L-異構體的胺基酸：Ala、Cys、ASp、Glu、Phe、

Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、

Ser、Thr、Va卜Trp、Tyr。如本文中所用，「編碼」係指 為任何以下20種胺基酸之L-異構體的胺基酸：Ala、Cys、

Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、

Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Va卜 Trp、Tyr。如本文中所 用，術語「帶電荷胺基酸」或「帶電荷殘基」係指包含在 水溶液中在生理pH值下帶負電（亦即，去質子化）或帶正電 (亦即，質子化）之側鏈的胺基酸。舉例而言，帶負電胺基 酸包括天冬胺酸、麩胺酸、氧化半胱胺酸、高氧化半胱胺 酸及高麩胺酸，而帶正電胺基酸包括精胺酸、離胺酸及組 胺酸。帶電何胺基酸包括20種編碼胺基酸中之帶電荷胺基 酸’以及非典型或非天然存在或非編碼胺基酸。 在些貫施例中’升糖素類似物包含（例如，至多1 〇個） 不破壞升糖素受體活性或GLP-1受體活性之額外胺基酸修 152868.doc -6 - 201130503 飾（例如，允許類似物對任一或兩種受體維持EC5〇<l mM 之修飾）。在例示性實施例中，如本文中進一步所述之任 何胺基酸修飾可包括於升糖素類似物中。 在第二態樣中，升糖素類似物包含SEQ ID NO: 2之經修 飾胺基酸序列’其中在SEQ ID NO: 2之位置12至29中任何 位置已藉由插入或取代添加了至少三個額外促α螺旋胺基 酸。在一些特定實施例中，升糖素類似物包含SEQ ID Ν〇: 鲁 2之經修飾胺基酸序列，其中位於SEq iD Ν〇: 2之位置 16、17、20及21處之三個或所有胺基酸經促α螺旋胺基酸 取代。在一些例示性實施例中，升糖素類似物包含兩個非 共價分子内橋鍵。在其他例示性實施例中，升糖素類似物 包含至少一個分子内橋鍵（例如，非共價分子内橋鍵，諸 如鹽橋鍵）及α，α一取代胺基酸（例如，ΑΙΒ)。在一些特定態 樣中’升糖素類似物包含（例如，至多1 〇個）不破壞升糖素 受體活性或GLP-1受體活性之額外胺基酸修飾（例如，允許 φ 類似物對任一或兩種受體維持EC50<1 mM之修飾）。在例 示性實施例中，如本文中進一步描述之任何胺基酸修飾可 包括於升糖素類似物中。 在第三態樣中，升糖素類似物包含SEq ID NO: 2之經修 飾胺基酸序列’其中至少三個（例如，四個、五個、六 個、七個、八個或所有）位於SEQ ID NO: 2之位置16至24 中任何位置之胺基酸經腸促騰島素類似物_4(SEQ ID NO: 8)之相應位置之胺基酸或其保守胺基酸取代來取代。就此 而言，在一些實施例中，升糖素類似物包含SEq ID N〇: 2 152868.doc 201130503 之經修飾胺基酸序列’其中位置16之胺基酸（Ser)經腸促胰 島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置16之胺基酸（Glu或其 保守胺基酸取代）取代，位置17之胺基酸（Arg)經腸促腺島 素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置17之胺基酸（Glu或其保 守胺基酸取代）取代，位置1 8之胺基酸（Arg)經腸促胰島素 類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置18之胺基酸（Ala或其保守 胺基酸取代）取代’位置19之胺基酸（Ala)經腸促胰島素類 似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置19之胺基酸（Val或其保守胺 基酸取代）取代’位置20之胺基酸（Gin)經腸促胰島素類似 物-4(SEQ ID NO: 8)之位置20之胺基酸（Arg或其保守胺基 酸取代）取代，位置21之胺基酸（Asp)經腸促胰島素類似物_ 4(SEQ ID NO: 8)之位置21之胺基酸（Leu或其保守胺基酸取 代）取代，位置23之胺基酸（Val)經腸促胰島素類似物_ 4(SEQ ID NO: 8)之位置23之胺基酸（lie或其保守胺基酸取 代）取代，位置24之胺基酸（Gin)經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置24之胺基酸（Glu或其保守胺基酸取 代）取代，或其組合。在一些實施例中，升糖素類似物包 含胺基酸序列AVRLFIX(SEQ ID NO: 11)作為類似物之位置 1 8至24 ’其中X為Cys(包括例如共價鍵聯至親水性部分（例 如PEG)之Cys)或Glu。因此，在一些態樣中，升糖素類似 物包含SEQ ID NO: 2之經修飾胺基酸序列，其包含位置18 之小型脂族胺基酸、位置19之脂族胺基酸、位置2〇之帶正 電胺基酸、位置21之電荷中性胺基酸、位置23之大型脂族 胺基酸、位置24之酸性胺基酸或Cys。 152868.doc 201130503 如本文中所用，術語「酸性胺基酸」係指除胺基酸之& 羧酸酯基以外亦包含第二酸性部分（包括例如羧酸或磺酸 基）之胺基酸。在一些特定態樣中，升糖素類似物包含（例 如，至多10個）不破壞升糖素受體活性或GLpq受體活性之 額外胺基酸修飾（例如’允許類似物對任一或兩種受體維 持EC50<1 mM之修飾）。在例示性實施例中’如本文中進 一步所述之任何胺基酸修飾可包括於升糖素類似物中。 • 根據任何上述態樣，在一些實施例中，升糖素類似物展 現至少約1%升糖素效能及至少約1% GLP-1效能。在一些 實施例中，升糖素類似物展現至少約丨〇%升糖素效能及/或 至少約10% GLP-1效能。在一些實施例中，升糖素類似物 展現至少約50%升糖素效能及/或至少約5〇% 效能。 在一些實施例中，例如當升糖素類似物呈非聚乙二醇化形 式時’升糖素類似物展現至少約100%升糖素效能及/或至 少約100% GLP-1效能，或較佳兩者。在一些實施例中，升 • 糖素類似物展現至少200%升糖素效能及至少500% GLpj 效能。在一些實施例中’升糖素類似物對於glp_〖受體相 較於升糖素受體展現兩倍至五倍選擇性（例如，對升糖素 受體之EC50為對GLP-1受體之EC50之兩倍至五倍）^在其 他實施例中，升糖素類似物對於升糖素受體相較於GLpq 觉體展現兩倍至五倍選擇性（例如，對Glp_i受體之ec5〇 為對升糖素受體之EC50之兩倍至五倍）。在一些實施例 中’類似物展現GLP效能在升糖素效能之約丨〇倍以内β涵 蓋任何前述特徵之組合，例如，至少1〇〇%升糖素效能及 152868.doc 201130503 對於GLP-1受體之至少3倍選擇性。在一些實施例中，結合 至親水性部分可降低效能而不顯著影響選擇性。 本發明進一步提供包含任何本文所述升糖素類似物結合 至異源部分的結合物。在一些實施例中，結合物為融合肽 或嵌合肽。在一些實施例中，異源部分為聚合物，例如聚 乙一醇。本發明此外^供本文所述升糖素類似物之二聚體 及多聚體。 此外，本發明提供包含任何本文所述升糖素類似物及醫 藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。本發明此外提供一種 治療或預防患者之疾病或醫學病狀（例如，代謝症候群、 糖尿病、肥胖症、肝脂肪變性、神經退化性疾病、低血糖 症）的方法，其包含技與該患者包含任何本文所述升糖素 類似物之醫藥組合物。 【實施方式】 本發明提供升糖素類似物，其對(31^_1受體展現活性， 對升糖素受體展現活性，或對GLPq受體與升糖素受體兩 者皆展現活性。就此而言，本發明提供GLpq受體促效劑 肽、升糖素受體促效齊m及GUM/升糖素受體共促效劑 肽。在一些實施例中，升糖素類似物對GLP“受體相較於 天然人類升糖素（SEQ m N0: 2)展現更大效能。在一些實 施例中’升糖素類似物對gum受體相較於天然人類 1(SEQ ID N0: 3)或一種其活性形式（seq id N〇: 6 及 ID NO: 7)展現更大效能。在—些實施例中，升糖素類似物 對升糖素受體相較於天然人類GL1M展現更大效能。在一 152868.doc •10- 201130503 些實施例中，升糖素類似物對升糖素受體相較於天缺人類 升糖素展現更大效能。在-些實施例中，類似物展現其他 性質改良，諸如更大穩定性、更大溶解性、在循環中半衰 期延長、作用起始延遲、作用持續時間延長、衰減之峰值 (例如，相對降低之平均峰血毁濃度），及蛋白酶（諸如Dpp_ iv)抗性改良。 定義 • 如本文中所用，術語「約」意謂比所述值或值範圍大或 小10%，但不意欲將任何值或值範圍指定為僅此較寬定 義。前面有術語「約」之各值或值範圍亦意欲涵蓋所述絕 對值或值範圍之實施例。 如本文中所用，術語「醫藥學上可接受之載劑」包括任 何標準醫藥載劑，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液 (諸如油/水或水/油乳液），及各種類型之濕潤劑。該術語 亦涵蓋經美國聯邦政府管理機構（regulatory agency of the • US Federal g〇Vernment)批准或美國藥典（US Pharmacopeia) 中列出供動物（包括人類）使用之任何試劑。 如本文中所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指保留 母化合物生物活性之化合物之鹽，且其並非在生物學上或 在其他方面不合需要。許多本文所揭示化合物能夠因存在 胺基及/或叛基或其類似基團而形成酸式鹽及/或驗式鹽。 醫藥學上可接受之驗加成鹽可由無機鹼及有機鹼製備。 衍生自無機鹼之鹽包括（僅舉例而言）鈉鹽、钟鹽、鋰鹽、 錢鹽、弼鹽及鎮鹽。衍生自有機驗之鹽包括（但不限於）一 152868.doc 201130503 級胺、二級胺及三級胺之鹽。醫藥學上可接受之酸加成鹽 可由無機酸及有機酸製備。衍生自無機酸之鹽包括鹽酸、 氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似物。衍生自有機酸之 鹽包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、顏果酸、丙 二酸、丁二酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬 酸、苯曱酸、肉桂酸、杏仁酸、曱烷磺酸、乙烷磺酸、對 甲苯磺酸、水揚酸及其類似物。 如本文中所用’術語「治療」包括預防特定病症或病 狀’或減輕與特定病症或病狀相關之症狀，及/或預防或 消除該等症狀。舉例而言，如本文中所用，術語「治療糖 尿病J 叙係指朝正常含量方向改變金糖含量且可包括視 既定情形而定增加或降低血糖含量。 如本文中所用，升糖素肽之「有效」量或「治療有效 量」係指提供所需作用之無毒但足夠量之肽。舉例而言， 一所需作用將為預防或治療低血糖症，如例如藉由血糠含 量s加所里测。本發明升糖素肽之替代所需作用將包括治 療rj血糖症，例如如藉由血糖含量更接近正常含量之改變 所量測，或誘導體重減輕/預防體重增加，例如如藉由體 減私所則；或預防或減少體重增加；或使體脂肪分佈 正常化

不同個體之間「有效」量將有所改變，取決於個 體之年_ B 7 般狀況、投藥模式及其類似因素。因此，並 非總有可能扣+ ^ r 3疋確切「有效量」。然而’在任何個別情況 下適當之「古& 負政」量可由一般技術者使用常規實驗方法來 確定。 152868.doc 201130503 術語「非經腸」意謂不經由消化道而藉由一些其他途 控，例如，皮下、肌肉内、脊髓内或靜脈内。 如本文中所用，術語「經分離」意謂已自其天然環境中 移除。在一些實施例中，類似物係經由重組方法製得且類 似物係自宿主細胞分離。 如本文中所用，術語「經純化」涉及分子或化合物以實 質上不含在天然或自然環境中通常與該分子或化合物有關 • 之污染物之形式分離且意謂由於與原始組合物中之其他組 分分離而使純度增加。術語「經純化多肽」在本文中用於 描述已與包括（但不限於）核酸分子、脂質及碳水化合物之 其他化合物分離之多肽。 如本文中所用，術語「肽」涵蓋具有3個或3個以上胺基 酸且通常小於50個胺基酸之序列，其中該等胺基酸為天然 存在或編碼或非天然存在或非編碼胺基酸。非天然存在胺 基酸係指不天然存在於活體内但可併入本文中所述之狀結 • 構中的胺基酸。 如本文中所用，術語「多肽」及「蛋白f」為可互換地 用於指胺基酸之聚合物而不考慮該聚合物之長度的術語。 通常’多肽及蛋白質具有大於「肽」之長度的聚合物長 度。 在整個本申請案中，利用數字對特定胺基酸位置（例 位置28)之所有提及係指在天然升糖素（seq①N〇: 2) 中之該位置或其任何類似物中之相應胺基酸位置的胺基 酸。舉例而言，本文中提及「位置28」將意謂seqidn〇: 152868.doc 201130503 2之第一胺基酸已缺失之升糖素類似物的相應位置27。類 似地，本文中提及「位置28」將意謂在SEQ ID NO: 2之N 端前已添加一胺基酸之升糖素類似物的相應位置29。如本 文中所用，「胺基酸修飾」係指（i) SEQ ID NO: 2之胺基酸 經不同胺基酸（天然存在或編碼或非編碼或非天然存在胺 基酸）取代或置換，（Π)向SEQ ID NO: 2添加胺基酸（天然存 在或編碼或非編碼或非天然存在胺基酸），或（iii) SEQ ID NO: 2之一或多個胺基酸缺失。如本文中所用，「非編碼」 係指不為任何以下20種胺基酸Ala、Cys、Asp、Glu、 Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、 Arg、Ser、Thr、Va卜Trp、Tyr之L-異構體的胺基酸。 在一些實施例中’胺基酸取代或置換為保守胺基酸取 代，例如’ 一或多個位置2、5、7、10、11、12、13、 14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29之胺基酸 之保守取代。如本文中所用，術語「保守胺基酸取代」為 一胺基酸經另一具有類似性質（例如，尺寸、電荷、疏水 性、親水性及/或芳香性）之胺基酸置換，且包括以下五組 之一内之交換： I. 小型脂族、非極性或微極性殘基：

Ala、Ser、Thr、Pro、Gly ; II. 極性、帶負電殘基及其醯胺及酯：

Asp、Asn、Glu、Gin、氧化半胱胺酸及高氧化半胱 胺酸； III. 極性、帶正電殘基： 152868.doc •14· 201130503

His、Arg、Lys ;鳥胺酸（〇rn) IV.大型脂族、非極性殘基：

Met、Leu、Ile、Va^ Cys、正白胺酸（Nle)、高半胱 胺酸 V.大型芳族殘基：

Phe、Tyr、Trp、乙醯基笨丙胺酸

在一些實施例中，胺基酸取代不為保守胺基酸取代，例 如’為非保守胺基酸取代。 如本文中所用’術語「帶電荷胺基酸」係指包含在水溶 液中在生理PH值下帶負電(亦即，子化)或帶正電(亦 即，質子化）之側鏈的胺基酸。舉例而言，帶負電胺基酸 包=天冬胺酸、麵胺酸、氧化半胱胺酸、高氧化半胱胺酸 及高麵胺酸’而帶正電胺基酸包括精胺酸、離胺酸及組胺 酸。帶電荷胺基酸包括2G種編碼胺基酸巾之帶電荷胺基 酉文，以及非典型或非天然存在或非編碼胺基酸。 如本文中所用’術語「酸性胺基酸」係指包含包括例如 竣酸或績酸基之第二酸性部分（除胺基酸讀酸以外）之胺 基酸。 如本文_所用，術δ吾分子對第一受體相對於第二受體》 「選擇性」係指以下比率：分子對第二受體之ec灣以； 子對第-受體之EC50。舉例而[對第—受體具有】心 之EC50且對第二受體具有100 ηΜ之EC50之分子對於第一 受體相對於第二受體具有1〇〇倍選擇性。 如本文中所用，術語「天然升糖素」係指由SEQ ID NO·· l52B68.doc -J5· 201130503 2之序列組成之肽且術語「天然GLP-l」為表示GLP-1(7-36)醯胺、GLP-l(7-37)酸或該兩種化合物之混合物的通用 術語。 如本文中所用，分子之「升糖素效能」或「相較於天然 升糖素之效能」係指分子對升糖素受體之EC50除以天然升 糖素對升糖素受體之EC50的比率。 如本文中所用，分子之「GLP-1效能」或「相較於天然 GLP-1之效能」係指分子對GLP-1受體之EC50除以天然 GLP-1對GLP-1受體之EC50的比率。 升糖素類似物之活性 對升糖素受體之促效劑活性 在一些實施例中，升糖素類似物對於升糖素受體活化展 現約1000 μΜ或1000 μΜ以下（例如，約75 0 μΜ或750 μΜ以 下、約500 μΜ或500 μΜ以下、約250 μΜ或250 μΜ以下、 約100 μΜ或100 μΜ以下、約75 μΜ或75 μΜ以下、約50 μΜ或50 μΜ以下、約25 μΜ或25 μΜ以下、約10 μΜ或10 μΜ以下、約7.5 μΜ或7.5 μΜ以下、約6 μΜ或6 μΜ以下、 約5 μΜ或5 μΜ以下、約4 μΜ或4 μΜ以下、約3 μΜ或3 μΜ 以下、約2 μΜ或2 μΜ以下或約1 μΜ或1 μΜ以下）之 EC50。在一些實施例中，升糖素類似物對於升糖素受體活 化展現約1000 ηΜ或1000 ηΜ以下（例如，約750 ηΜ或750 ηΜ以下、約500 ηΜ或500 ηΜ以下、約250 ηΜ或250 ηΜ以 下、約100 ηΜ或100 ηΜ以下、約75 ηΜ或75 ηΜ以下、約 50 ηΜ或50 ηΜ以下、約25 ηΜ或25 ηΜ以下、約10 ηΜ或10 152868.doc -16- 201130503 nM以下、約7·5 nM或7·5 nM以下、約6 nM或6 nM以下、 約5 nM或5 nM以下、約4 nM或4 nM以下、約3 πΜ或3 nM 以下、約2 nM或2 nM以下或約1 nM或1 nM以下）之EC50。 在一些實施例中’升糖素類似物對升糖素受體具有在皮莫 耳濃度範圍内之EC50。因此’在一些實施例中，升糖素類 似物對於升糖素受體活化展現約丨〇〇〇 pM或1 〇〇〇 以下 (例如，約750 pM或750 pM以下、約500 pM或500 pM以 下、約250 PM或250 pM以下、約1〇〇 pM或100 pM以下、 約75 pM或75 pM以下、約50 pM或50 pM以下、約25 pM或 25 pM以下 '約1〇 p]y[或10 PM以下、約7.5 pM或7.5 pM以 下、約6 pM或6 pM以下、約5 pM或5pM以下、約4pM或4 pM以下、約3 pM或3 pM以下、約2 pM或2 pM以下或約1 pM或1 pM以下）之EC50。 在一些實施例中’本文中所述之升糖素類似物對升糖素 受體展現約0.001 pM或0.001 pM以上、約0.01 pM或0.01 pM以上、或約〇·ι pM或〇·ι pM以上之EC50。可藉由量測 過度表現升糖素受體之HEK293細胞中cAMP誘導之活體外 檢定來量測升糖素受體活化（升糖素受體活性），例如，檢 定如實例2中所述經編碼升糖素受體之DNA及鍵聯至cAMP 反應元件之螢光素酶基因共轉染之HEK293細胞。 在一些實施例中，升糖素類似物對升糖素受體相對於天 然升糖素（升糖素效能）展現約0.001%或〇·〇〇〗％以上、約 0.01%或0_01%以上、約以上、約〇 5%或〇 5% 以上、約1%或1%以上、約5%或5%以上、約1〇%或10%以 152868.doc 17 201130503 上、約20%或20%以上、約30%或30%以上、約40°/。或40% 以上、約50%或50%以上、約60%或60%以上、約75%或 75%以上、約100°/。或100%以上、約125%或125°/。以上、約 150°/。或 150%以上、約 175%或 175%以上、約 200%或 200% 以上、約250%或250%以上、約300°/。或300°/。以上、約 350°/。或 350%以上、約 400%或 400%以上、約 450%或 450% 以上、或約500%或500%以上之活性。在一些實施例中， 本文中所述之升糖素類似物對升糖素受體相對於天然升糖 素展現約5000%或5000%以下或約10,000%或1〇,〇〇〇%以下 之活性。以升糖素類似物相對天然配位體之EC50之反比計 算升糖素類似物對受體相對於受體之天然配位體的活性。 在一些實施例中，升糖素類似物僅對升糖素受體展現實 質活性（效能）且對GLP-1受體展現極小活性至無活性。在 一些實施例中’升糖素類似物被視為「純升糖素受體促效 劑」或不被視為「升糖素/GLP-1受體共促效劑」。在一些 實施例中，此等升糖素類似物對本文中所述之升糖素受體 展現任何程度之活性或效能，但對GLP-1受體具有實質上 較小活性（效能）。在一些實施例中，升糖素類似物展現對 GLP-1受體之EC50為其對升糖素受體之EC50的1〇〇倍或][〇〇 倍以上。 對GLP-1受髏之促效劑活性 在一些實施例中，升糖素類似物對於GLP-1受體活化展 現約1000 μΜ或1000 μΜ以下（例如，約750 μΜ或750 μΜ以 下、約500 μΜ或500 μΜ以下、約250 μΜ或250 μΜ以下、 152868.doc • 18· 201130503

約100 μΜ或100 μΜ以下、約75 μΜ或75 μΜ以下、约50 μΜ或50 μΜ以下、約25 μΜ或25 μΜ以下、約10 μΜ或10 μΜ以下、約7.5 μΜ或7.5 μΜ以下、約6 μΜ或6 μΜ以下、 約5 μΜ或5 μΜ以下、約4 μΜ或4 μΜ以下、約3 μΜ或3 μΜ 以下、約2 μΜ或2 μΜ以下或約1 μΜ或1 μΜ以下）之 EC50。在一些實施例中，升糖素類似物對於GLP-1受體活 化展現約1000 ηΜ或1000 ηΜ以下（例如，約750 ηΜ或750 ηΜ以下、約500 ηΜ或500 ηΜ以下、約250 ηΜ或250 ηΜ以 下、約100 ηΜ或100 ηΜ以下、約75 ηΜ或75 ηΜ以下、約 50 ηΜ或50 ηΜ以下、約25 ηΜ或25 ηΜ以下、約10 ηΜ或10 ηΜ以下、約7.5 ηΜ或7.5 ηΜ以下、約6 ηΜ或6 ηΜ以下、 約5 ηΜ或5 ηΜ以下、約4 ηΜ或4 ηΜ以下、約3 ηΜ或3 ηΜ 以下、約2 ηΜ或2 ηΜ以下或約1 ηΜ或1 ηΜ以下）之EC50。 在一些實施例中，升糖素類似物對GLP-1受體具有在皮莫 耳濃度範圍内之EC50。因此，在一些實施例中，升糖素類 似物對於GLP-1受體活化展現約1000 ρΜ或1000 ρΜ以下 (例如，約750 ρΜ或750 ρΜ以下、約500 ρΜ或500 ρΜ以 下、約250 ρΜ或250 ρΜ以下、約100 ρΜ或100 ρΜ以下、 約75 ρΜ或75 ρΜ以下、約50 ρΜ或50 ρΜ以下、約25 ρΜ或 25 ρΜ以下、約10 ρΜ或10 ρΜ以下、約7.5 ρΜ或7.5 ρΜ以 下、約6 ρΜ或6 ρΜ以下、約5 ρΜ或5 ρΜ以下、約4 ρΜ或4 ρΜ以下、約3 ρΜ或3 ρΜ以下、約2 ρΜ或2 ρΜ以下或約1 ΡΜ或1 ρΜ以下）之EC50。 在一些實施例中，本文中所述之升糖素類似物對GLP-1 152868.doc •19- 201130503 受體展現約0.001 pM或0.001 pM以上、約0.01 pM或0.01 pM以上、或約0.1 pM或0.1 pM以上之EC50。可藉由量測 過度表現GLP-1受體之HEK293細胞中cAMP誘導之活體外 檢定來量測GLP-1受體活化（GLP-1受體活性），例如，檢定 如實例2中所述之經編碼GLP-1受體之DNA及鍵聯至cAMP 反應元件之螢光素酶基因共轉染之HEK293細胞。 在一些實施例中，升糖素類似物對GLP-1受體相對於天 然GLP-1(GLP-1效能）展現約0.001%或0.001%以上、約 0.01%或 0.01°/。以上、約0.1% 或 0.1%以上、約0.5%或 0.5% 以上、約1%或1%以上、約5%或5%以上、約10%或10%以 上、約20%或20°/。以上、約30%或30%以上、約40%或40% 以上、約50%或50%以上、約60%或60%以上、約75%或 75%以上、約100%或100°/。以上、約125%或125°/。以上、約 150% 或 150°/。以上、約 175% 或175%以上、約 200% 或 200% 以上、約250%或250%以上、約300%或300%以上、約 350%或350%以上、約400%或400%以上、約450%或450% 以上、或約500%或500%以上之活性。在一些實施例中， 本文中所述之升糖素類似物對GLP-1受體相對於天然GLP-1(GLP-1效能）展現約5000%或5000%以下或約1〇,〇〇〇%或 10,000%以下之活性。 在一些實施例中，升糖素類似物僅對GLP-1受體展現實 質活性（效能）且對升糖素受體展現極小活性至無活性《在 一些實施例中，升糖素類似物被視為「純GLP-1受體促效 劑」或不被視為「升糖素/GLP-1受體共促效劑」。在一些 152868.doc •20· 201130503 貫施例中’此等升糖素類似物對本文中所述之GLp_ 1受體 展現任何程度之活性或效能，但對升糖素受體具有實質上 較小活性（效能）。在一些實施例中’升糖素類似物展現對 升糖素受體之EC50為其對GLP-1受體之EC50的100倍或100 倍以上。 對GLP-1受體及升糖素受體之促效劑活性 在一些實施例中，升糖素類似物對GLP-1受體與升糖素 φ 受體兩者皆展現活性（「升糖素/GLP-1受體共促效劑」）。 在一些實施例中，升糖素類似物對升糖素受體之活性（例 如’ EC50或相對活性或效能）與其對GUM受體之活性（例 如，EC50或相對活性或效能）之差別（更高或更低）在約5〇 倍、約40倍、約30倍、約20倍、約1〇倍或約5倍以内。在 些貫施例中，升糖素類似物之升糖素效能與其GLp_〖效 月b之差別（更咼或更低）在約2 5倍、約2 〇倍、約1 5倍、約1 〇 倍或約5倍以内。 • 在一些實施例中，升糖素類似物對升糖素受體之相對活 性或EC50或效能除以升糖素類似物對GLp_丨受體之相對活 性或EC50或效能之比率小於X或為約χ，其中X係選自 100、75、60、50、40、30、20、15、10或5。在—些實施 例中，升糖素類似物對升糖素受體之EC5〇或效能或相對活 性除以升糖素類似物對GLP-1受體之EC5〇或效能或相對活 性之比率為約小於5(例如，約4、約3、約2、約丨）。在一些 實施例中，升糖素類似物之升糖素效能相較於升糖素類似 物之GLIM效能之比率小於丫或為約γ，其中γ係選自1〇〇、 152868.doc -21 · 201130503 75、60、50、40、30、20、15、10及5。在一些實施例 中，升糖素類似物之升糖素效能相較於升糖素類似物之 GLP-1效能之比率小於5(例如，約4、約3、約2、約丨）。在 一些實把例中，升糖素類似物對升糖素受體之EC5〇為其對 GLP-1受體之EC50的2倍至10倍（例如，2倍、3倍、4倍、5 倍、6倍、7倍' 8倍、9倍、10倍）》 在一些實施例中，升糖素類似物對GLP4受體之相對活 性或效1或E C 5 0除以升糖素類似物對升糖素受體之相對活 性或效能或E C 5 0之比率小於V或為約v，其中v係選自 100、75、60、50、40、30、20、15、10或5。在一些實施 例中，升糖素類似物對GLP-1受體之EC5〇或效能或相對活 性除以升糖素類似物對升糖素受體之£(：5〇或效能或相對活 性之比率小於5(例如，約4、約3、約2、約〖）。在一些實施 例中’升糖素類似物之GLP-1效能相較於升糖素類似物之 升糖素效能之比率小於W或為約W，其中w係選自1〇〇、 75、60、50、40、30、2〇、15、1〇及5。在一些實施例 中，升糖素類似物之GLP-丨效能相較於升糖素類似物之升 糖素效能之比率小於5(例如，約4、約3、約2、約”。在一 些實施例中，升糖素類似物對GLP-1受體之ec5〇為其對升 糖素受體之EC50的約2倍至約10倍（例如，2倍、/倍、* 倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、1〇倍）。 在-些實施例中’升糖素類似物展現至少〇1%(例如， 約0.5%或0.5%以上、約1%或1%以±、約5%或5%以上約 ㈣或祕以上、或更大）之天然⑽巧對⑽心受體之活 152868.doc •22· 201130503 性（GLP-1效能），且展現至少0.1 %(例如，約〇.5%或〇.5◦/〇以 上、約1 %或1 %以上、約5%或5%以上、約1 〇%或丨〇%以 上 '或更大）之天然升糖素對升糖素受體之活性（升糖素效 能）。 升糖素類似物對於升糖素受體相對GLP-1受體之選擇性 可描述為升糖素/GLP-1活性之相對比率（類似物對升糖素 文體相對於天然升糖素之活性，除以類似物對GLp_丨受體 φ 相對於天然GLP-1之活性）。舉例而言，展現6〇%天然升糖 素對升糖素受體之活性及60%天然GLpj對glP-i受體之活 性的升糖素類似物具有比率為1:1之升糖素/GLp_l活性。 升糖素/GLP-1活性之例示性比率包括約1:i、1 5:1、2:1、 3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1或1〇:1，或約 1:1〇、 19、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2或 1:1.5。舉例而 。10.1之升糖素/GLP -1活性比率指示對於升糖素受體相 對GLP-1爻體之1〇倍選擇性。類似地，丨〇:1之〇1^·"升糖 籲素/舌性指示對於GLP-1受體相對升糖素受體之10倍選擇 性。 結合物之活性 在一些實施例中，本文中所述之升糖素類似物如上所述 展現對升糖素受體之活性或效能及/或對GLP-1受體之活 ^升糖素類似物為結合物（例如，結合至異源部 77 :例如親水性部分，例如聚乙二醇）之一部分時，升糖 ”類似物展現比當類似物不為結合物之一部分時低之活性 (亦P k低政$或較高EC5Q)。在—些態樣中，升糖素類似 152868.doc -23- 201130503 物在不為結合物之一 部分時展現對升糖素受體及/或GLP· j

物在結合時之效能的約10倍、約15倍、約2〇倍、約乃 倍、約30倍、約35倍、 約40倍、約45倍、 約50倍、約1〇〇 倍或甚至100倍以上。 升糖素類似物之結構 本文中所述之升糖素類似物包含基於天然人類升糖素之 胺基酸序列（SEQ ID NO: 2)的胺基酸序列。在一些態樣 中，本文中所述之升糖素類似物包含SEQ ID N〇: 2之經修 飾胺基酸序列，其包含！、2、3、4、5、0、7、8、9、 10、11、12、13、14、15個及在一些情況下16個或16個以 上（例如 ’ 17、18、19、20、21、22、23、24、25 等）胺基 酸修飾。在一些實施例中，相對於天然人類升糖素序列 (SEQ ID NO: 2) ’升糖素類似物包含總共丨個、至多2個、 至多3個、至多4個、至多5個、至多6個、至多7個、至多8 個、至多9個或至多1 〇個胺基酸修飾。在一些實施例中， 修飾為任何本文中所述之修飾，例如，醯化、烷基化、聚 乙二醇化、C端截短、對位置1、2' 3、7、10、12、15、 16、17、18、19、20、21、23、24、27、28及29中一或多 個位置之胺基酸進行取代。 一致性百分比 在一些實施例中，本文中所述之升糠素類似物包含與天 152868.doc • 24· 201130503

然人類升糖素之胺基酸序列（SEQ ID NO: 2)具有至少25% 序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，升糖素類似 物包含與SEQ ID NO: 2具有至少30%、至少40%、至少 50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少 90%或大於90%序列一致性之胺基酸序列》在一些實施例 中’具有上文提及序列一致性百分比之升糖素類似物之胺 基酸序列為升糖素類似物之全長胺基酸序列。在一些實施 例中’具有上文提及序列一致性百分比之升糖素類似物之 胺基酸序列僅為升糖素類似物之胺基酸序列的一部分。在 一些實施例中，升糖素類似物包含與SEQ ID NO: 2之至少 5個連續胺基酸（例如，至少6個、至少7個、至少8個、至 少9個、至少10個胺基酸）之參考胺基酸序列具有約a%或 更大序列一致性的胺基酸序列，其中該參考胺基酸序列始 於SEQ ID NO: 2位置C之胺基酸且終於SEQ ID NO: 2位置D 之胺基酸，其中 A 為 25、30、35、40、45、50、55、60、 65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、 97 、 98 、 99 ; C為1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、 24、25、26、27 或 28 ;且 D 為 5、6、7、8、9、10、11、 12 13、14、15、16、17、18、19 ' 20、21、22、23、 25 26、27、28或29❶預期前述參數之任何及所有可 月b之、.且0，包括（但不限於）例如其中a為如❶且c與〇為！與 27、或6與27、或8與27、或W與27、或12與27、或16與 152S68.doc 25· 201130503 狀長度 本文中所述之升糖素類似物可包含具有任何數目之胺基 酸之肽主鏈，亦即可為任何肽長度。在一些實施例中，本 文中所述之升糖素類似物與SEq ID NO: 2具有相同長度， 亦即長度為29個胺基酸。在一些實施例中，升糖素類似物 之長度長於29個胺基酸，例如，升糖素類似物包含丨_2 j個 胺基酸之C端延長’如本文中進一步描述。因此，在一些 實施例中，升糖素類似物之長度為3〇、3 i、32、33、34、 35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、 47、48、49或50個胺基酸。在一些實施例中，升糖素類似 物之長度由於與另一肽融合而長於29個胺基酸（例如，長 度大於50個胺基酸（例如，至少6〇個、至少7〇個、至少 個、至少90個、至少1〇〇個、至少15〇個、至少2〇〇個至 少250個、至少300個、至少35〇個、至少4〇〇個、至少45〇 個、至少500個胺基酸））。在其他實施例中，升糖素類似物 之長度少於29個胺基酸’例如，28、27、26、25、24、23 個胺基酸。 醢化 根據一些實施例，升糖素類似物包含醯化胺基酸（例 如，非編碼醯化胺基酸（例如，包含天然存在胺基酸中非 天然之醯基之胺基酸））。在一些實施例中，醯化胺基酸使 得升糖素類似物具有一或多種以下性質：⑴循環中之半衰 期延長；（ii)作用起始延遲；（iii)作用持續時間延長；（^) 蛋白酶（諸如DPP-IV)抗性改良；及受體及升糖 152868.doc •26- 201130503 素受體中一或兩者之效能增加。如本文中所示，醯化升糖 素類似物與相應未.酿化升糖素類似物相比並不展現對升糖 素受體及GLP-1受體之活性降低。相反，在一些情況下， 醯化升糖素類似物實際上展現對GLP—i受體及升糖素受體 之活性增加。因此，醯化升糖素類似物之效能與升糖素類 似物之未醯化形式相當（若未增強）。 根據一實施例，出於延長循環中之半衰期及/或延遲作 • 用起始及/或延長作用持續時間及/或改良蛋白酶（諸如Dpp· IV)抗性之目的，升糖素類似物包含醯基，其係經由酯、 硫酯或醯胺鍵連接至升糖素類似物。 醯化可在升糖素類似物内之任何位置進行，包括位置i _ 29中之任何位置、第29個胺基酸之c端位置（例如，位置 3〇 、 31 、 32 、 33 、 34 、 35 、 36 、 37 、 38 、 39 、 40 ' 41 、 42、43、44、45、粍、47等處、C端延長内之位置處或€ 端處之胺基酸）’其限制條件為升糖素及/或glp_i活性得 # 以保留（若未增強）。非限制性實例包括位置5、7、10、 Η 12 13 、 14 、 16 、 17 、 18 、 19 、 20 、 21 、 24 、 27 、 28 或29。在特定實施例中，醯化發生在升糖素類似物之位置 1 〇處，且升糖素類似物缺乏分子内橋鍵，例如共價分子内 橋鍵（例如’内醯胺橋鍵該等缺乏分子内橋鍵之醯化升 糖素類似物顯示與缺乏共價分子内橋鍵之相應非醯化類似 物相比及與在除位置10以外之位置處醯化之缺乏分子内橋 鍵的相應類似物相比對GLP-1受體及升糖素受體之活性增 強°如本文中所示，位置1〇處之醯化甚至可使對升糠素受 152868.doc •27· 201130503 體具有極小活性之升糖素類似物轉化成對升糖素受體與 GLP-1受體兩者皆具有活性之升糖素類似物。因此，發生 醯化之位置可改變升糖素類似物之總體活性概況。 在一些實施例中，升糖素類似物在鍵聯親水性部分之相 同胺基酸位置處或在不同胺基酸位置處經醯化。非限制性 實例包括在位置10處醯化及在升糖素類似物之C端部分中 之一或多個位置（例如，位置24、μ或29)處、C端延長内 之一或多個位置處或C端處（例如，經由添加c端Cys)聚乙 二醇化。 酿基可直接共價鍵聯至升糖素類似物之胺基酸，或經由 間隔基間接共價鍵聯至升糖素類似物之胺基酸，其中該間 隔基位於升糖素類似物之胺基酸與醯基之間。 在特定態樣中，藉由對升糖素類似物之胺基酸側鏈之 胺、經基或硫醇進行直接酿化使升糖素類似物經修飾以包 含酿基。在一些實施例中’醯化在升糖素類似物之位置 10、20、24或29處。就此而言，醯化升糖素類似物可包含 SEQ ID NO: 2之胺基酸序列，或包含一或多個本文所述胺 基酸修飾之其經修飾胺基酸序列，其中類似物之位置丨〇、 20、24及29處之至少一個胺基酸經修飾成包含側鏈胺、羥 基或硫醇的任何胺基酸。在一些特定實施例中，經由位置 1 〇處胺基酸之側鏈胺、羥基或硫醇對升糖素類似物進行直 接醯化。 在一些實施例中’包含側鏈胺之胺基酸為式〗胺基酸： 152868.doc -28- 201130503 Η Η2Ν——C——COOH CH2)n

I νη2 其中η=1至4 [式I] 在一些例示性實施例中’式I胺基酸為其中η為4(Lys)或n 為3(Orn)之胺基酸。 在其他實施例中’包含側鏈羥基之胺基酸為式π胺基 酸： Η

Η2ν-C-COOH CH2)n

I

OH 其中n=l至4 [式Π]

在—些例示性實施例中，式„胺基酸為其中11為1(以1>)之 胺基酸。 在其他實施例中’包含側鏈硫醇之胺基酸為式III胺基 酸：

H2N-C-COOH CH2)n

I

SH 其中n=l至4 [式 in] 152868.doc -29- 201130503 在一些例示性實施例中’式III胺基酸為其中11為1(以〇 之胺基酸。 在其他實施例中，包含側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸為 包含式I、式II或式III之相同結構之二取代胺基酸，其中例 外為鍵結至式I、式II或式III之胺基酸之α碳的氫經第二側 鏈置換。 在一些實施例中，醯化升糖素包含介於類似物與醯基之 間的間隔基。在一些實施例中，升糖素類似物共價結合至 間隔基，該間隔基共價結合至醯基。 在一些實施例中，間隔基為包含側鏈胺、羥基或硫醇之 胺基酸’或包含包括側鍵胺、經基或硫醇之胺基酸之二狀 或二肽。間隔基所連接之胺基酸可為包含允許鍵聯至間隔 基之部分的任何胺基酸（例如，單或雙心取代胺基酸）。舉 例而言，包含側鍵ΝΗ2、-ΟΗ或-COOH之胺基酸（例如， Lys、Orn、Ser、Asp或Glu)為適合的。在此方面，醯化升 糖素類似物可包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列，或包含一 或多個本文所述胺基酸修飾之其經修飾胺基酸序列，其中 至少一個位置10、20、24及29之胺基酸經修飾成包含側鏈 胺、羥基或羧酸酯基之任何胺基酸。 在一些實施例中，間隔基為包含側鏈胺、羥基或硫醇之 胺基酸，或包含包括側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸之二肽 或三狀。 當經由間隔基之胺基發生醯化時，可經由胺基酸之α胺 或側鏈胺發生醯化。在α胺經醯化之情況下，間隔基之胺 152868.doc -30- 201130503 基酸可為任何胺基酸。舉例而言，間隔基之胺基酸可為疏 水性胺基酸’例如 Gly、Ala、Va卜 Leu、ne、Trp、Met、 Phe、Tyr、6-胺基己酸、5_胺基戊酸、'胺基庚酸及8胺 基辛酸。或者’間隔基之胺基酸可為酸性殘基，例如

Asp、Glu、高麩胺酸、高氧化半胱胺酸、氧化半胱胺酸、 γ-麵胺酸。 在間隔基之胺基酸之側鏈胺經醯化之情況下，該間隔基 φ 之該胺基酸為包含側鏈胺之胺基酸，例如，式I胺基酸（例 如，Lys或Orn)。在此情況下，間隔基之胺基酸之α胺與側 鏈胺可旎皆經醯化，因此升糖素類似物經二酿化。本發明 之實施例包括該等二醯化分子。 當經由間隔基之羥基發生醯化時，胺基酸或二肽或三肽 之胺基酸之一可為式Π胺基酸。在一特定例示性實施例 中，胺基酸為Ser。 當經由間隔基之硫醇基發生醯化時，胺基酸或二肽或三 • 肽之胺基酸之一可為式ΙΠ胺基酸。在一特定例示性實施例 中，胺基酸為Cys。 在一些實施例中，間隔基為親水性雙官能間隔基。在某 些實施例中’親水性雙官能間隔基包含兩個或兩個以上反 應性基團，例如’胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。 在某些實施例中’親水性雙官能間隔基包含羥基及羧酸酯 基。在其他實施例中，親水性雙官能間隔基包含胺基及羧 酸酯基。在其他實施例中，親水性雙官能間隔基包含硫醇 基及羧酸酯基。在一特定實施例中，間隔基包含胺基聚 I52868.doc -31- 201130503 (烧氧基）叛酸酯基。就此而言，間隔基可包含例如 NH2(CH2CH2〇)n(CH2)mCO〇H，其中m為1至6之任何整數且 η為2至12之任何整數，諸如，8_胺基·3,6_二氧雜辛酸，其 係購自 Peptides International, Inc.(Louisville，ΚΥ) 〇 在一些實施例中，間隔基為疏水性雙官能間隔基。疏水 性雙官能間隔基在此項技術中已知。參見例如 Bioconjugate Techniques, G. T. Hermanson (Academic Press，San Diego, CA，1996)，其係以全文引用之方式併 入。在某些實施例中’疏水性雙官能間隔基包含兩個或兩 個以上反應性基團，例如，胺、羥基、硫醇及羧基或其任 何組合。在某些實施例中’疏水性雙官能間隔基包含羥基 及缓酸醋基。在其他實施例中，疏水性雙官能間隔基包含 胺基及叛酸醋基。在其他實施例中，疏水性雙官能間隔基 包含硫醇基及羧酸酯基。包含羧酸酯基及羥基或硫醇基之 適合疏水性雙官能間隔基在此項技術中已知且包括例如8_ 經基辛酸及8-巯基辛酸。 在一些實施例中’雙官能間隔基不為在羧酸酯基之間包 含1-7個碳原子之未分支亞曱基之二羧酸。在一些實施例 中’雙官能間隔基為在羧酸酯基之間包含1·7個碳原子之 未分支亞曱基之二羧酸。 在特定實施例中，間隔基（例如，胺基酸、二肽、三 狀親水性雙官能間隔基或疏水性雙官能間隔基）長度為3 至1 〇個原子（例如’ 6至10個原子（例如，6、7、8、9或1 〇個 原子））。在更特定實施例中，間隔基長度為約3至丨〇個原子 152868.doc 201130503 (例如，6至l〇個原子）且醯基為cu至C18脂肪醯基，例如 C14脂肪醯基、Cl6脂肪醯基，因此間隔基與醯基之總長 度為14至28個原子，例如，約14、15、16、17、i8、19、 20 ' 21、22、23、24、25、26、27或 28個原子。在一些實 靶例中，間隔基與醯基之長度為17至28(例如，^至％、 19至21)個原子。 根據某些前述實施例，雙官能間隔基可為包含長度為3 • 至10個原子之胺基酸主鏈之合成或天然存在胺基酸（包括 (但不限於）本文中所述之任何彼等胺基酸）（例如，6_胺基 己酸、5-胺基戊酸、7_胺基庚酸及8_胺基辛酸）。或者，間 隔基可為具有長度為3至10個原子（例如，6至1〇個原子）之 肽主鏈的二肽或三肽間隔基。二肽或三肽間隔基之各胺基 酸可與二肽或三肽之其他胺基酸相同或不同且可獨立地選 自由以下組成之群：天然存在或編碼及/或非編碼或非天 然存在胺基酸，包括例如天然存在胺基酸（Ala、Cys、 • Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、 Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr)之任何 L 異構 體，或選自由以下組成之群之非天然存在或非編碼胺基酸 之任何D或L異構體：β-丙胺酸（p_Aia)、Ν_α_甲基_丙胺酸 (Me-Ala)、胺基丁酸（Abu)、γ-胺基丁酸（γ-Abu)、胺基己 酸（ε-Ahx)、胺基異丁酸（Aib) '胺基曱基吡咯曱酸、胺基 哌啶甲酸、胺基絲胺酸（Ams)、胺基四氫哌喃甲酸、精 胺酸N-曱氧基-N-甲基醯胺、β_天冬胺酸（(3_Asp)、氮雜環 丁烷甲酸、3-(2-苯并噻唑基）丙胺酸、α•第三丁基甘胺 152868.doc •33- 201130503 酸、2-胺基-5-脲基-正戊酸（瓜胺酸、Cit)、β-環己基丙胺 酸（Cha)、乙醯胺基甲基-半胱胺酸、二胺基丁酸（Dab)、二 胺基丙酸（Dpr)、二羥基苯丙胺酸（DOPA)、二甲基噻唑啶 (DMTA)、γ-麩胺酸（γ-Glu)、高絲胺酸（Hse)、羥基脯胺酸 (Hyp)、異白胺酸N-甲氧基-N-甲基醯胺、甲基-異白胺酸 (Melle)、異派。定曱酸（Isn)、甲基-白胺酸（MeLeu)、甲基-離胺酸、二曱基-離胺酸、三甲基-離胺酸、甲醯基脯胺 酸、甲硫胺酸-亞砜（Met(O))、甲硫胺酸-颯（Met(02))、正 白胺酸（Nle)、甲基-正白胺酸（Me-Nle)、正纈胺酸（Nva)、 鳥胺酸（Orn)、對胺基苯曱酸（PAB A)、青黴胺（Pen)、曱基 苯丙胺酸（MePhe)、4-氣苯丙胺酸（Phe(4-Cl))、4-氟苯丙胺 酸（Phe(4-F))、4-硝基苯丙胺酸（Phe(4-N02))、4-氰基苯丙 胺酸（（Phe(4-CN))、苯基甘胺酸（Phg)、哌啶基丙胺酸、哌 啶基甘胺酸、3,4-去氫脯胺酸、吡咯啶基丙胺酸、肌胺酸 (Sar)、硒代半胱胺酸（Sec)、0-苄基-磷酸絲胺酸、4-胺基-3-羥基-6·曱基庚酸（Sta)、4-胺基-5-環己基-3-羥基戊酸 (ACHPA)、4-胺基-3-羥基-5-苯基戊酸（AHPPA)、1，2,3,4，-四氫-異喹啉-3-羧酸（Tic)、四氫哌喃甘胺酸、噻吩基丙胺 酸（Thi)、0·苄基-磷酸酪胺酸、0-磷酸酪胺酸、甲氧基酪 胺酸、乙氧基酪胺酸、0-(雙-二甲基胺基-膦酸基）-酪胺 酸、硫酸酪胺酸四丁基胺、曱基-纈胺酸（MeVal)及烷基化 3·酼基丙酸。 在一些實施例中，間隔基包含總負電荷，例如，包含一 個或兩個帶負電胺基酸。在一些實施例中，二肽不為一般 152868.doc •34· 201130503 結構A-B之任何二肽，其中a係選自由〇以、Gin、au、 Arg ' Asp、Asn、lie、Leu、Val、Phe及 Pro 組成之群，其 中B係選自由Lys、His、Trp組成之群。在一些實施例十， 二肽間隔基係選自由 Ala-Ala、p-Ala-p-Ala、Leu-Leu、 Pro-Pro、γ-胺基丁酸个胺基丁酸、Glu_Gh^Y_Glu个Glu 組成之群。 在一些例示性實施例中，藉由間隔基之胺、羥基或硫醇 φ 之醯化來修飾升糖素類似物，以包含醯基，該間隔基係連 接至升糖素類似物之位置10、20' 24或29胺基酸或c端胺 基酸之側鏈。 在更多特定實施例中’醯基係連接至升糖素類似物之位 置10之胺基酸，且間隔基與醯基之長度為丨4至28個原子。 在一些態樣中’位置10之胺基酸為式Ϊ胺基酸，例如Lys或 與式I相關之二取代胺基酸^在更多特定實施例中，升糖 素類似物缺乏分子内橋鍵，例如，共價分子内橋鍵。升糖 # 素類似物例如可為包含一或多個用於穩定類似物之α螺旋 之α，α·二取代胺基酸（例如ΑΙΒ)的升糖素類似物。 經由胺、羥基及硫醇對肽進行醯化之適合方法在此項技 術中已知。參見例如實例19(關於經由胺進行醯化之方 法）；Miller，218: 377-382 (1996) ; Shimohigashi及 Stammer，//ίί Pepi Proiezw 及es 19: 54-62 (1982);及 Previero 等人，仍oc/n.w 5ζ·ορ/ζγ dcia 263: 7-13 (1972)(關於經由羥基進行醯化之方法）；及san 及 Silvius, J Pept Res 66: 169-180 (2005)(關於經由硫醇 152868.doc -35- 201130503 進行醯化之方法）；Bioconjugate Chem· 「Chemical Modifications of Proteins: History and Applications」第 1、 2-12 頁（1990) ； Hashimoto 等人，Pharmacuetical Res. 「Synthesis of Palmitoyl Derivatives of Insulin and their Biological Activity」第 6卷，第 2期，第 171 -176 頁（1989) » 醯化胺基酸之醯基可為任何尺寸（例如，任何長度碳 鏈），且可為直鏈或分支鍵。在一些特定實施例中，醯基 為C4至C30脂肪酸。舉例而言，醯基可為C4脂肪酸、C6脂 肪酸、C8脂肪酸、C10脂肪酸、C12脂肪酸、C14脂肪酸、 C16脂肪酸、C18脂肪酸、C20脂肪酸、C22脂肪酸、C24脂 肪酸、C26脂肪酸、C28脂肪酸或C30脂肪酸中任一者❶在 一些實施例中，醯基為C8至C20脂肪酸，例如，C14脂肪 酸或C16脂肪酸。 在另一實施例中’醯基為膽汁酸（bile acid)。膽汁酸可 為任何適合之膽汁酸，包括（但不限於）膽酸（ch〇Hc aCid)、 鶴去氧膽酸、去氧膽酸、石膽酸、牛膽酸、甘膽酸及膽固 醇酸。 在一些貫施例中’藉由升糖素類似物對長鍵烧烴之醯化 而使升糖素類似物包含醯化胺基酸。在特定態樣中，長鏈 烧烴包含胺、羥基或硫醇基（例如，十八烷基胺、十四醇 及十六烧硫醇）’其與升糖素類似物之羧基或其活化形式 反應。升糖素類似物之羧基或其活化形式可為升糖素類似 物之胺基酸（例如，麩胺酸、天冬胺酸）之側鏈的一部分或 可為類似物主鏈之一部分。 152868.doc •36· 201130503 在某些實施例中’藉由連接至升糖素類似物之間隔基對 長鏈烧烴之醯化而使升糖素類似物經修飾以包含醯基。在 特定態樣中，長鏈烷烴包含胺、羥基或硫醇基，其與間隔 基之羧基或其活化形式反應。包含羧基或其活化形式之適 合間隔基於本文中描述且包括例如雙官能間隔基，例如， 胺基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔基及疏水性雙官 能間隔基。 如本文中所用，術語「羧基之活化形式」係指具有一般 式R(c-〇)x之叛基’其中X為離去基且r為升糖素類似物或 間隔基。舉例而言，羧基之活化形式可包括（但不限於）醯 基氣化物、酐及酯。在一些實施例中，活化羧基為具有N_ 羥基丁二醯亞胺酯（NHS)離去基之酯。 關於長鏈烷烴由升糖素類似物或間隔基醯化之該等態 樣，長鏈烧烴可具有任何尺寸且可包含任何長度之碳鏈。 長鏈烷烴可為直鏈或分支鏈。在某些態樣中，長鏈烷烴為 C4至C30烷烴。舉例而言，長鏈烷烴可為C4烷烴、C6烷 烴、C8烷烴、C10烷烴、C12烷烴、C14烷烴、C16烷烴、 C18烷烴、C20烷烴、C22烷烴、C24烷烴、C26烷烴、C28 烧烴或C30烧烴中任一者。在一些實施例中，長鏈烧烴包 含C8至C20烷烴，例如，C14烷烴、C16烷烴或C18烷烴。 此外’在一些實施例中，升糖素類似物之胺、羥基或硫 醇基經膽固醇酸醯化。在一特定實施例中，升糖素類似物 經由烷基化去胺基Cys間隔基（亦即，烷基化3-酼基丙酸間 隔基）鍵聯至膽固醇酸。烷基化去胺基Cys間隔基可為例如 152868.doc -37- 201130503 包含+ _ — 一乙二醇部分之去胺基_Cys間隔基。在一實施例 中，升糖素類似物包含以下結構：

本文中所述之醯化升糖素類似物可進一步經修飾以包含 親水性部分。在一些特定實施例中，親水性部分可包含聚 乙一醇（PEG)鏈。可以任何適合方式（諸如本文中所述之任 何方法）來貫現親水性部分之併入。就此而言，醯化升糖 素類似物可包含包括任何本文中所述之修飾的SEQ ID N〇: 2 ’其中類似物之至少一個位置10、20、24及29之胺基酸 包含醯基且至少一個位置16、17、21、24或29之胺基酸、 C端延長内之位置或C端胺基酸經修飾為Cys、Lys、Orn、 高Cys或Ac-Phe，且胺基酸之側鏈經共價鍵結至親水性部 分（例如，PEG)。在一些實施例中，醯基視情況經由包含 Cys、Lys、Orn、高Cys或Ac-Phe之間隔基連接至位置1〇， 且親水性部分係在位置24之Cys殘基處併入。 或者，醯化升糖素類似物可包含間隔基，其中該間隔基 經醯化且經修飾以包含親水性部分。適合之間隔基之非限 制性實例包括包含一或多個選自由Cys、Lys、Orn、高Cys 及Ac-Phe組成之群之胺基酸的間隔基。 152868.doc -38- 201130503 烧基化 根據一些實施例，升糖素類似物包含烷基化胺基酸（例 如，非編碼烷基化胺基酸（例如，包含天然存在胺基酸中 非天然之烷基之胺基酸^不受限於任何特定理論咸信 升糖素類似物之烷基化達到與升糖素類似物之醯化類似 (若非相同)之作用，例如，在循環中半衰期延長作用起 始延遲、作用持續時間延長、蛋白酶（諸如Dpp_iv)抗性改 _ 良，及對GLP-1受體及升糖素受體之效能增加。 烷基化可在升糖素類似物内之任何位置進行，包括本文 中描述為醯化位點之任何位置，包括（但不限於）胺基酸位 置1 -29中之任何位置、第29個殘基之c端胺基酸位置（例 如，30 、 31 、 32 、 33 、 34 、 35 、 36 、 37 、 38 、 39 、 40 、 41、42、43、44、45、46、47等、C端延長内之位置處或 C端處）’其限制條件為升糖素活性或glp_ 1活性得以保 留。非限制‘!生實例包括位置5、7、10、11、12、13 ' 14、 籲 16、17、18、19、20、21、24、27、28或29。烷基可直接 地共價鍵聯至升糖素類似物之胺基酸，或經由間隔基間接 地共價鍵聯至升糖素類似物之胺基酸，其中該間隔基位於 升糖素類似物之胺基酸與烷基之間。升糖素類似物可在鍵 聯親水性部分之相同胺基酸位置處或在不同胺基酸位置處 經院基化。非限制性實例包括在位置10處烷基化及在升糖 素類似物之C端部分中之一或多個位置（例如，位置24、28 或29)處、C端延長内之一或多個位置處或c端處（例如，經 由添加C端Cys)聚乙二醇化。 152868.doc -39- 201130503 在特定態樣中，藉由升糖素類似物之胺基酸側鏈之胺、 羥基或硫醇的直接烷基化使升糖素類似物經修飾以包含烷 基。在一些實施例中，烷基化在升糖素類似物之位置1 0、 20、24或29處。就此而言，烷基化升糖素類似物可包含 SEQ ID NO: 2之胺基酸序列，或包含一或多個本文所述胺 基酸修飾之其經修飾胺基酸序列，其中位置10、20、24及 29處之至少一個胺基酸經修飾成包含側鏈胺、羥基或硫醇 之任何胺基酸。在一些特定實施例中，經由位置1 〇處胺基 酸之側鏈胺、羥基或硫醇發生升糖素類似物之直接烷基 化。 在一些實施例中，包含側鏈胺之胺基酸為式I胺基酸。 在一些例示性實施例中，式I胺基酸為其中n為4(Lys)或η為 3(Orn)之胺基酸。 在其他實施例中，包含側键經基之胺基酸為式Η胺基 酸。在一些例示性實施例中，式π胺基酸為其中11為1(Ser) 之胺基酸。 在其他實施例中，包含側鏈硫醇之胺基酸為式III胺基 酸。在一些例示性實施例中，式ΠΙ胺基酸為其中η為 l(Cys)之胺基酸。 在其他實施例中’包含側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸為 包含式1、式11或式ΠΙ之相同結構之二取代胺基酸，其中例 外為鍵結至式1、式II或式ΠΙ之胺基酸之α碳的氫經第二側 鍵置換^ 在些實施例中’烧基化升糖素包含介於類似物與烧基 152868.doc 201130503 之間的間隔基。在一些實施例中’升糖素類似物共價結合 至間隔基’該間隔基共價結合至烧基。在一些例示性實施 例中，藉由間隔基之胺、羥基或硫醇之烷基化使升糖素類 似物包含烷基，該間隔基係連接至升糖素類似物之位置 10、20、24或29之胺基酸的側鏈。間隔基所連接之胺基酸 可為包含允許鍵聯至間隔基之部分的任何胺基酸。舉例而 言’包含側鏈NH2、-OH或-COOH之胺基酸（例如，Lys、 Orn、Ser、Asp或Glu)為適合的。在此方面，烷基化升糖 素類似物可包含SEQ ID NO: 2之經修飾胺基酸序列，其包 含一或多個本文中所述之胺基酸修飾，其中至少一個位置 1 〇、20、24及29之胺基酸經修飾成包含側鏈胺、羥基或羧 酸酯基之任何胺基酸。 在一些實施例中，間隔基為包含側鏈胺、羥基或硫醇之 胺基酸’或包含包括侧鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸之二肽 或三肽。 當經由間隔基之胺基發生烧基化時，可經由胺基酸之α 胺或側鏈胺發生烷基化。在α胺經烷基化之情況下，間隔 基之胺基酸可為任何胺基酸。舉例而言，間隔基之胺基酸 可為疏水性胺基酸，例如Gly、Ala、Val、Leu、lie、 Trp、Met、Phe、Tyr、6-胺基己酸、5-胺基戊酸、7-胺基 庚酸及8-胺基辛酸。或者，間隔基之胺基酸可為酸性殘 基，例如Asp及Glu，其限制條件為烷基化發生在酸性殘基 之α胺上。在間隔基之胺基酸之側鏈胺經烷基化之情況 下，該間隔基之該胺基酸為包含側鍵胺之胺基酸，例如， 152868.doc • 41 · 201130503 式I胺基酸（例如’ Lys或〇rn)。在此情況下，間隔基之胺基 酸之α胺與側鏈胺可能皆經烷基化，因此升糖素類似物經 一烧基化。本發明之實施例包括該等二烧基化分子。 當經由間隔基之羥基發生烷基化時，胺基酸或二肽或三 肽之胺基酸之一可為式II胺基酸。在一特定例示性實施例 中，胺基酸為Ser。 當經由間隔基之硫醇基發生烷基化時，胺基酸或二肽或 二肽之胺基酸之一可為式111胺基酸。在一特定例示性實施 例中，胺基酸為Cys ^ 在一些實施例t，間隔基為親水性雙官能間隔基。在某 些實施例中’親水性雙官能間隔基包含兩個或兩個以上反 應性基團，例如，胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。 在某些實施例中’親水性雙官能間隔基包含羥基及羧酸酯 基。在其他實施例中，親水性雙官能間隔基包含胺基及羧 酸8旨基。在其他實施例中’親水性雙官能間隔基包含疏醇 基及羧酸酯基。在一特定實施例中，間隔基包含胺基聚 (烷氧基）羧酸酯基。就此而言，間隔基可包含例如 NH2(CH2CH2〇)n(CH2)mCOOH，其中m為1至6之任何整數且 η為2至12之任何整數，諸如，8-胺基_3,6_二氧雜辛酸，其 係購自 Peptides International, Inc.(Louisville，ΚΥ)。 在一些實施例中，間隔基為疏水性雙官能間隔基。在某 些實施例中’疏水性雙官能間隔基包含兩個或兩個以上反 應性基團，例如，胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。 在某些實施例中，疏水性雙官能間隔基包含羥基及缓酸醋 152868.doc •42· 201130503 基°在其他實施例中，疏水性雙官能間隔基包含胺基及羧 酸醋基°在其他實施例中，疏水性雙官能間隔基包含硫醇 基及m酸酯基。包含羧酸酯基及羥基或硫醇基之適合疏水 性雙官能間隔基在此項技術中已知且包括例如8_羥基辛酸 及8-巯基辛酸。 在特定實施例中，間隔基（例如，胺基酸、二肽、三 狀、親水性雙官能間隔基或疏水性雙官能間隔基）長度為3 至10個原子（例如’ 6至10個原子（例如，6、7、8、9或10個 原子））。在更特定實施例中，間隔基長度為約3至1〇個原子 (例如6至10個原子）且烧基為C12至C18烧基，例如C14烧 基、C16烷基，因此間隔基與烷基之總長度為^至。個原 子，例如，約 14、15、16、17、18、19、20、21、22、 23、24、25、26、27或28個原子。在一些實施例中，間隔 基與烷基之長度為17至28(例如，19至26、19至21)個原 子。 、 根據某些前述實施例，雙官能間隔基可為包含長度為3 至1〇個原子之胺基酸主鏈的合成或非天然存在或非：碼胺 基酸（例如，6_胺基己酸、5_胺基戊酸、7_胺基庚酸及8_胺 基辛酸)。或者’間隔基可為具有長度為3至1〇個原子(例 如，6至H)個原子）之肽主鍵的二狀或三狀間隔基。二狀或 三肽間隔基可由天然存在或編碼及/或非編碼或非天然存 在胺基酸(包括例如本文中教示之任何胺基酸)組成。在一 些實施例中，賴基包含總負電荷’例如，包含 個帶負電胺基酸。在一些實施例中，.二 3 狀間隔基係選自由 152868.doc 43- 201130503

Ala-Ala、p-Ala-p-Ala、Leu-Leu、Pro-Pro、γ-胺基丁酸-γ-胺基丁酸及Y-Glu-y-Glu組成之群。 經由胺、羥基及疏醇對肽進行烷基化之適合方法在此項 技術中已知。舉例而言’威廉森（Williamson)醚合成可用 於在升糖素類似物之羥基與烷基之間形成醚鍵。此外，肽 與烷基iS化物之親核取代反應可產生任何醚、硫醚或胺基 鍵聯。 烷基化升糖素類似物之烷基可為任何尺寸（例如，任何 長度碳鍵），且可為直鍵或分支鏈。在一些實施例中，垸 基為C4至C30烷基。舉例而言，烷基可為C4烷基、C6烷 基、C8烷基、C10烷基、C12烷基、C14烷基、C16烷基、 C18烷基、C20烷基、C22烷基、C24烷基、C26烷基、C28 烷基或C30烷基中任一者《在一些實施例中，烷基為C8至 C20烷基，例如，C14烷基或C16烷基》 在一些特定實施例中，烷基包含膽汁酸（例如，膽酸、 鵝去氧膽酸、去氧膽酸、石膽酸、牛膽酸、甘膽酸及膽固 醇酸）之類固醇部分。 在本發明之一些實施例中，藉由使親核之長鏈烷烴與升 糖素類似物反應而使升糖素類似物包含烷基化胺基酸，其 中升糖素類似物包含適於親核取代之離去基。在特定態樣 中，長鏈烷烴之親核基團包含胺、羥基或硫醇基（例如， 十八烧基胺、十四醇及十六炫硫醇）。升糖素類似物之離 去基可為胺基酸側鏈之一部分或可為肽主鍵之一部分。適 合之離去基包括例如N-羥基丁二醯亞胺、鹵素及磺酸酯。 152868.doc • 44· 201130503 在某些實施例中，藉由使親核之長鏈烷烴與連接至升糖 素類似物之間隔基反應使升糖素類似物經修飾以包含烷 基，其中間隔基包含離去基。在特定態樣中，長鏈烷烴包 含胺、羥基或硫醇基❶在某些實施例中，包含離去基之間 隔基可為本文中所討論之任何間隔基，例如，進一步包含 適合離去基之胺基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔基 及疏水性雙官能間隔基。 關於長鏈烷烴由升糖素類似物或間隔基烷基化之本發明 之該等態樣’長鏈烷烴可具有任何尺寸且可包含任何長度 之碳鍵。長鍵烷烴可為直鏈或分支鏈。在某些態樣中，長 鏈烷烴為C4至C30烷烴。舉例而言，長鏈烷烴可為以烷 煙、C6院烴、C8院煙、C10炫烴、C12烧烴、C14烧烴、 C16烧烴、C18烷烴、C20烷烴、C22烷烴、C24烧煙、C26 烷烴、C28烷烴或C30烷烴中任一者。在一些實施例中， 長鏈烧紐包含C8至C20院煙，例如，C14烧烴、C16院烴或 C18烷烴。 此外’在一些實施例中，烷基化可發生在升糖素類似物 與膽固醇部分之間。舉例而言，膽固醇之經基可置換長鍵 烧煙上之離去基以形成膽固醇·升糖素類似物產物。 本文中所述之院基化升糖素類似物可進一步經修飾以包 含親水性部分。在一些特定實施例中，親水性部分可包含 聚乙二醇（PEG)鏈。可以任何適合方式（諸如本文中所述之 任何方法）來實現親水性部分之併入。就此而言，烷基化 升糖素類似物可包含包括一或多個本文中所述之胺基酸修 I52868.doc -45- 201130503 飾的經修飾SEQ ID NO: 2，其中至少一個位置ι〇、20、24 及29之胺基酸包含烷基且至少一個位置16、17 21、以及 29之胺基酸、C端延長内之位置或c端胺基酸經修飾為 Cys、Lys、Orn、尚Cys或Ac-Phe ’且胺基酸之側鏈經共價 鍵結至親水性部分（例如，pEG)。在一些實施例中，烷基 視情況經由包含Cys、Lys、Orn、高Cys或Ac-Phe之間隔基 連接至位置10 ’且親水性部分係在位置242Cys殘基處併 入。 或者’烧基化升糖素類似物可包含間隔基，其中該間隔 基經烧基化且經修飾以包含親水性部分。適合之間隔基之 非限制性實例包括包含一或多個選自由Cys、Lys、Orn、 咼Cys及Ac-Phe組成之群之胺基酸的間隔基。 a螺旋之穩定化及促a螺旋胺基睃 不受任何特定理論限制，本文中所述之升糖素類似物包 含螺旋結構，例如，α螺旋。在一些實施例中，升糖素類 似物包含穩定α螺旋結構之胺基酸。因此，在一些態樣 中’升糖素類似物包含一或多個促α螺旋胺基酸。如本文 中所用’術語「促α螺旋胺基酸」係指使升糖素類似物之α 螺旋之穩定性增加且作為升糖素類似物之一部分的胺基 酸。促α螺旋胺基酸在此項技術中已知。參見例如Lyu等 A, Proc Natl Acad Sci U.S.A. 88: 5317-5320 (1991)； Branden^. Tooze, Introduction to Protein Structure, Garland Publishing，New York，NY, 1991 ； Fasman, Prediction of Protein Structure and the Principles of Protein 152868.doc -46· 201130503

Fasman編，Plenum, ΝΥ，1989。適於本文目 的之促α螺旋胺基酸包括（但不限於）：丙胺酸、正纈胺 酸、正白胺酸、α胺基丁酸、α_胺基異丁酸、白胺酸、異 白胺酸、纈胺酸及其類似物。在一些實施例中，促α螺旋 胺基酸為作為天然存在蛋白質中存在之α螺旋之一部分的 任何胺基酸，例如，Leu、Phe、Ala、Met、Gly、lie、 Ser、Asn、Glu、Asp、Lys、Arg o 在一些實施例中，促α螺旋胺基酸與甘胺避或丙胺酸相 比向α螺旋提供更大穩定性。在一些實施例中，促α螺旋胺 基酸為a，a二取代胺基酸。 α螺旋：促α螺旋胺基酸之位置 在一些實施例中，升糖素類似物包含類似於天然升糖素 (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列且升糖素類似物包含至少一 個促α螺旋胺基酸。在一些實施例中，促a螺旋胺基酸位於 位置12至29(根據天然升糖素（SEQ ID NO: 2)之編號）中任 —位置。在一些實施例中，升糖素類似物包含SEQ ID NO: 2之經修飾胺基酸序列’且例如在位置12、13、14、15、 ' 17 > 18 ' 19 ' 20 ' 21 > 22 > 23 ' 24 ' 25 ' 26 ' 27 ' 28、29中一或多個位置處包含至少一個促α螺旋胺基酸。 在一些實施例中’升糖素類似物在位置16、17、2 0及21中 一個、兩個、三個或所有位置處包含促α螺旋胺基酸。 °·螺旋：a，a二取代胺基酸 在一些實施例中’促α螺旋胺基酸為α，α二取代胺基酸。 在特定實施例中，a，a二取代胺基酸包含R1及R2，其各自 152868.doc -47- 201130503 鍵結至α碳，其中R〗及r2各獨立地選自由視情況經羥基、 醯胺、硫醇、鹵基取代之C1-C4院基組成之群，或R1及R2 與其所連接之α碳一起形成環（例如，C3-C8環）。在一些實 施例中，R1及R2各自選自由甲基、乙基、丙基及正丁基組 成之群’或R1及R2—起形成環辛烧或環庚烧（例如，胺基 環辛烧-1 -曱酸）。在一些實施例中，R1與R2相同。在一些 實施例中’ R1與R2不同。在某些態樣中，Rl及R2各為Cl_ C4烷基。在一些態樣中，R^R2各為C1或C2烷基。在一 些實施例中，W及R2各為甲基，因此α，α二取代胺基酸為卜 胺基異丁酸（ΑΙΒ)。 在一些態樣中’本文中所述之升糖素類似物包含一或多 個α，α 一取代胺基酸且升糖素類似物特定地缺乏共價分子 内橋鍵（例如，内醯胺），因為α，α二取代胺基酸能夠在不存 在共價橋鍵之情況下穩定α螺旋。在一些態樣中，升糖素 類似物在C端（位置12-29周圍）包含一或多個α，α二取代胺基 酸°在一些實施例中，升糖素類似物之位置丨6、17、18、 19、20、2 1、24或29中一個、兩個、三個、四個或四個以 上位置經α，α-二取代胺基酸（例如，胺基異丁酸（AIB)、經 選自曱基、乙基、丙基及正丁基之相同或不同基團或經環 辛烷或環庚烷（例如，1-胺基環辛烷_丨_甲酸）二取代之胺基 酉文）取代。舉例而s，在不存在分子内橋鍵（例如，非共價 分子内橋鍵（例如，鹽橋鍵）或共價分子内橋鍵（例如，内醢 胺））之情況下，位置16經AIB取代增強GLP-1活性。在一些 實施例中’位置16、20、21或24中一個、兩個、三個或三 152868.doc •48· 201130503 個以上位置經AIB取代。在特定實施例中，天然人類升糖 素（SEQ ID NO: 2)之對應於位置2、16之一個或兩個胺基酸 經諸如AIB之α，α二取代胺基酸取代。 根據一些實施例’缺乏分子内橋鍵之升糖素類似物包含 在胺基酸位置12-29内用α，α-二取代胺基酸進行之_或多個 取代及共價連接至升糖素類似物之位置1 〇之胺基酸側鍵的 醯基或烷基。在特定實施例中，醢基或烷基並非天然存在 φ 於胺基酸上。在某些態樣中’醯基或烷基對於位置1〇之胺 基酸為非天然的。缺乏分子内橋鍵之該等醯化或烷基化升 糖素肽與非醯化對應肽相比對GLP-1受體及升糖素受體展 現增強之活性。缺乏分子内橋鍵之醯化升糖素肽可藉由在 醯基或烷基與類似物之位置10之胺基酸側鏈之間併入間隔 基來實現對GLP-1受體及升糖素受體之活性的進一步增 強。本文中進一步描述併有或未併有間隔基之醯化及烷基 化。 φ a螺旋：分子内橋鍵 在一些實施例中，促α螺旋胺基酸為經由分子内橋鍵鍵 聯至升糖素類似物之另一胺基酸之胺基酸。在該等實施例 中，經由分子内橋鍵鍵聯之此兩種胺基酸各自視為促α螺 旋胺基酸。在一些實施例中，升糖素類似物包含一或兩個 分子内橋鍵。在一些特定實施例中，升糖素類似物包含一 個分子内橋鍵以及至少一個其他促α螺旋胺基酸（例如， α，α-二取代胺基酸）。 在一些實施例中，分子内橋鍵為經由非共價鍵（包括例 152868.doc • 49· 201130503 如凡得瓦爾（van der Waals)相互作用、氫鍵、離子鍵、疏 水相互作用、偶極·偶極相互作用及其類似作用）連接升糖 素類似物之兩個部分的橋鍵。就此而言，在某些態樣中， 升糖素類似物包含非共價分子内橋鍵。在一些實施例中， 非共價分子内橋鍵為鹽橋鍵。 在一些實施例中，分子内橋鍵為經由共價鍵連接類似物 之兩個部分的橋鍵。就此而言，在某些態樣中，升糖素類 似物包含共價分子内橋鍵。 在一些貫施例中，在間隔3個胺基酸之兩個胺基酸（例 如’位置i及i + 4之胺基酸，其中i為介於12與25之間的任何 整數（例如，12、13、14、15、16、17、18、19、20、 21、22、23、24及25))之間形成分子内橋鍵（例如，非共價 分子内橋鍵、共價分子内橋鍵）。更特定言之，胺基酸對 12與 16、16與 20、20與 24 或 24與 28(i=12、16、20 或 24之胺 基酸對）之側鏈彼此鍵聯且因此穩定升糖素α螺旋。或者，i 可為1 7。在一些特定實施例中，升糖素類似物在胺基酸丄7 與21之間包含分子内橋鍵，在一些特定實施例中，升糖素 類似物在位置16與20或12與16之胺基酸之間包含分子内橋 鍵，且在位置17與21之胺基酸之間包含第二分子内橋鍵。 本文中涵蓋包含一或多個分子内橋鍵之升糖素類似物。在 位置1及H4之胺基酸係藉由分子内橋鍵接合之特定實施例 中，連接子之尺寸為約8個原子，或約7_9個原子。 在其他實施例中，在間隔2個胺基酸之兩個胺基酸（例 如，位置j及j+3之胺基酸，其中j為介於12與26之間的任何 152868.doc -50- 201130503 整數（例如 ’ 12、13、14、15、16、17、ι8、19、2〇、 21、22、23、24、25及26))之間形成分子内橋鍵。在一些 特定實施例中，j為17。在位置j及j + 3之胺基酸係藉由分子 内橋鍵接合之特定實施例中，連接子之尺寸為約6個原 子，或約5至7個原子。 在其他實施例中’在間隔6個胺基酸之兩個胺基酸（例 如，位置k及k+7之胺基酸，其中k為介於12與22之間的任 何整數（例如，12、13、14、15、16、17、18、19、20、 21及22))之間形成分子内橋鍵。在一些特定實施例中，k為 12、13或1 7。在一例示性實施例中，k為1 7。 a螺旋：分子内橋鍵中所涉及之胺基後 能夠鍵結（共價地或非共價地）形成六原子鍵聯橋鍵之胺 基酸配對之實例包括Orn與Asp、Glu與式I胺基酸（其中η為 2)’及高麵胺酸與式I胺基酸（其中η為1)，其中式I為： Η η2ν—c—cooh CH2)n

I nh2 其中n=l至4 [式I] 能夠鍵結形成七原子鍵聯橋鍵之胺基酸配對之實例包括 Orn-Glu(内醯胺環）；Lys-Asp(内醯胺）；或高ser-高glu(内 画旨）。可形成八原子連接子之胺基酸配對之實例包括Lys-Glu(内醯胺）；高lys-Asp(内醯胺）；〇rn-高glu(内醯胺）；4- 152868.doc -51 - 201130503 胺基Phe-Asp(内醯胺）；或Tyr-Asp(内S旨）。可形成九原子 連接子之胺基酸配對之實例包括高lys-Glu(内醯胺）；Lys_ 高glu(内醯胺）；4-胺基Phe-Glu(内醯胺）；或Tyr-Glu(内 酯）。此等胺基酸上之任何側鏈可另外經其他化學基團取 代，只要不破壞α-螺旋之三維結構即可。一般技術者可預 期將產生類似尺寸之穩定化結構及所需作用之替代配對或 替代胺基酸類似物，包括化學修飾衍生物。舉例而言，高 半胱胺酸-高半胱胺酸二硫橋鍵長度為6個原子且可進一步 經修飾以提供所需作用。 即使無共價鍵，上述胺基酸配對（或一般技術者可預期 之類似配對）亦可經由非共價鍵（例如，經由形成鹽橋鍵或 氫鍵相互作用）對α-螺旋提供額外穩定性。因此，可在以 下配對之間形成鹽橋鍵：〇rn與Glu ; Lys與Asp ;高絲胺酸 與南麵胺酸；Lys與Glu ; Asp與Arg ;高Lys與Asp ; Orn與 高麩胺酸；4-胺基Phe與Asp ; Tyr與Asp ;高Lys與Glu ; Lys與高Glu ; 4-胺基Phe與Glu ;或Tyr與Glu。在一些實施 例中，類似物在任何以下胺基酸對之間包含鹽橋鍵：0rn 與 Glu ; Lys與 Asp ; Lys與 Glu ; Asp與 Arg ;高 Lys與 Asp ; Orn與高麩胺酸；高Lys與Glu ;及Lys與高Glu。可在其他 對帶相反電荷之側鏈之間形成鹽橋鍵。參見例如 KaWenbaxh 等尺，Role of the Peptide Bond in Protein Structure and Folding, The Amide Linkage: Structural Significance in Chemistry, Biochemistry, and Materials Science，John Wiley & Sons，Inc· (2000)。 152868.doc -52- 201130503 在一些實施例中，非共價分子内橋鍵為疏水性橋鍵。根 據一實施例，經由在位置j及j+3或丨及丨+4處併入疏水性胺 基酸使類似物之(X螺旋穩定化。舉例而言，i可為Tyr且i + 4 可為Val或Leu ; i可為Phe且i+4可為Met ;或i可為Phe且i+4 可為lie ^應瞭解，對於本文之目的，上述胺基酸配對可顛 倒’因此位置i之所示胺基酸或者可位於丨+4，而丨+4胺基酸 可位於i位置。亦應瞭解，對於」·及j+3可形成適合之胺基酸 ^ 配對。 〇螺旋：共價分子内橋鍵 在一些貫施例中，共價分子内橋鍵為内醯胺環或内醯胺 橋鍵。内醯胺環之尺寸可視胺基酸側鏈之長度而改變，且 在一實施例中，藉由將鳥胺酸之側鏈鍵聯至天冬胺酸側鏈 而形成内酿胺。内醯胺橋鍵及其製備方法在此項技術中已 知。參見例如 Houston, Jr.等人，e Scz· 1: 274-282 (2004)，及本文中之實例丨。在一些實施例中，類似物包含 φ SEQ ID Ν0: 2之經修飾序列及介於i與i+4(其中i係如上文 所疋義）之間的内醯胺橋鍵。在一些實施例中，升糖素類 似物包含兩個内酿胺橋鍵：一個介於位置16與2〇之胺基酸 之間且另一個介於位置17與21之胺基酸之間。在一些實施 例中’升糖素類似物包含一内醯胺橋鍵及一鹽橋鍵。本文 中在標題為「實例」之部分中描述其他例示性實施例。其 他例示性實施例包括以下配對與視情況内醯胺橋鍵：位置 12之Glu與位置16之Lys ;位置12之天然Lys與位置16之 Glu，位置16之Glu與位置20之Lys ;位置16之Lys與位置20 152868.doc •53 - 201130503 之G1U;位置20之Glu與位置24之卜8;位置2〇之43與位置 24之Glu ;之與之；位置24之Glu與位置28之^^ ;位置μ 之Lys與位置28之Glu。 在二貫施例中，共價分子内橋鍵為内酯《製備内酯橋 鍵之適合方法在此項技術中已知。參見例如等人， •/dm CTzem 95: 875-879 (1973)。 在些態樣中，使用全烴交聯系統利用稀烴複分解來交 聯類似物之α螺旋之一個或兩個轉角。在此情況下升糖素 類似物包含帶有不同長度之烯烴側鏈且在』與』+3或丨與i+4 位置經組態為R或S立體化學之α_甲基化胺基酸。在一些實 施例中，烯烴側鏈包含（CH2)n ’其中η為介於1至6之間的 任何整數。在一些實施例中，對於8個原子之交聯長度，η 為3 °在一些實施例中’對於6個原子之交聯長度，η為2。 本文中將包含烯烴交聯之例示性升糖素類似物描述為SEq ID NO: 1 7。此項技術中描述形成該等分子内橋鍵之適合 方法。參見例如 Schafmeister等人，《/. dm. C/jem. 122: 5891-5892 (2000)及 Walensky 等人，305: 1466-1470 (2004)。在替代實施例中，類似物包含位於相鄰螺旋轉角 上之Ο-烯丙基Ser殘基，該等殘基經由釕催化之閉環複分 解橋接在一起。該等交聯程序描述於例如Blackwell等人， Jwgew, C/iew., //7ί·37: 3281-3284 (1998)中。 在特定態樣中，使用非天然硫代-二丙胺酸胺基酸（羊毛 硫胺酸（lanthionine)，其已廣泛用作胱胺酸之肽模擬物）用 於交聯α螺旋之一轉角。基於羊毛硫胺酸之環化之適合方 152868.doc •54· 201130503 法在此項技術中已知。參見例如Matteucci等人， Letters 45: 1399-1401 (2004) ; Mayer等人，乂 Λα. 51: 432-436 (1998) ; Polinsky 等人，乂 Mei C/ϊ亂 35: 4185-4194 (1992); Osapay等人’乂从乂以隱 40: 2241-2251 (1997); Fukase等人，5w//. C/2em· Soc. 65: 2227-2240 (1992) ； Harpp# A, J. Org. Chem. 36: 73-80 (1971) ’ Goodman及 Shao，Pwre C/zew. 68: 1303-1308 (1996) ;及 Osapay 及 Goodman，/. C/zem. «Soc. C/zew.

Cowmww. 1599-1600 (1993) 〇 在一些實施例中’使用位置i及i+7之兩個Glu殘基之間的 α，ω-二胺基烷烴繫栓（例如，i，4_二胺基丙烷及I%二胺基 戊炫）來穩定類似物之α蟫旋。視二胺基烧烴繫栓之長度而 定，該等繫栓導致形成長度為9個原子或9個原子以上之橋 鍵。此項技術中描述用該等繫栓交聯之肽之適合製備方 法。參見例如 Phelan 等人，j. Am. Chem. Soc. 119: 455-460 (1997) 。 在其他實施例中，使用二硫橋鍵來交聯類似物之α螺旋 之一或兩個轉角。或者，使用經修飾二硫橋鍵（其中一或 兩個硫原子經亞曱基置換，導致等排大環化）來穩定類似 物之α螺旋。用二硫橋鍵或基於硫之環化來修飾肽之適合 方法描述於例如Jackson等人，乂 ^ 心c. 113: 9391- 9392 (1991)及 Rudinger 及 Jost, 20: 570-571 (1964)中。 在其他實施例中，經由金屬原子由位於〗與j + 3或丨與丨+4 152868.doc •55· 201130503 之兩個His殘基或His與Cys對結合來穩定類似物之α螺旋。 該金屬原子可為例如Ru(III)、Cu(II)、Ζη(ΙΙ)或Cd(II)。該 等基於金屬結合之α螺旋穩定化方法在此項技術中已知。 參見例如 Andrews 及 Tabor, Tetrahedron 55: 11711-11743 (1999) ; Ghadiri 等人，《/. dwi. C/ze;w. <SW. 112: 1630-1632 (1990);及 Ghadiri等人，《/. d/n. C/zew. «Soc. 119: 9063-9064 (1997)。 類似物之α螺旋或者可經由其他方式之肽環化來穩定， 該等方式評述於Davies，J. Peptide. Sci. 9: 471-501 (2003) 中。可經由形成醯胺橋鍵、硫醚橋鍵、硫酯橋鍵、脲橋 鍵、胺基甲酸酯橋鍵、磺醯胺橋鍵及其類似物來穩定α螺 旋。舉例而言，可在C端與Cys殘基之側鏈之間形成硫酯橋 鍵。或者’可經由具有硫醇之胺基酸（Cys)之側鏈及具有 羧酸之胺基酸（例如，Asp、Glu)之側鏈形成硫酯。在另一 方法中’諸如二羧酸（例如，辛二酸（suberic acnd/octanedioic acid)等）之交聯劑可在胺基酸側鏈之兩個 官能基（諸如游離胺基、羥基、硫醇基及其組合）之間引入 鍵聯。 DPP-IV抗性肽 在些實施例中，升糖素類似物包含在位置丨或2或在兩 個位置1與2處之胺基酸取代，《中天然人類升糖素（seq ID NO. 2)之此位置之胺基酸經一胺基酸置換，該胺基酸達 成升糖素類似物對二肽基肽g|IV(Dpp IV)裂解之抗性。在 一貫施例中，升糖素類似物包含經修飾SEQ ID NO: 2， 132868.doc •56- 201130503 其中SEQ ID NO: 2之位置1之胺基酸（His)經D-組胺酸、去 胺基組胺酸、經基-組胺酸、乙醯基-組胺酸、高碳組胺 酸、N-甲基組胺酸、α_甲基組胺酸、咪唑乙酸或α，α_二甲 基咪唑乙酸（DMIA)置換。在一些實施例中，升糖素類似 物包含經修飾SEQ ID NO: 2,其中位置2之Ser經D-絲胺 酸、D-丙胺酸、纈胺酸、甘胺酸、N_曱基絲胺酸、N_甲基 丙胺酸或α胺基異丁酸置換。在一些實施例中，升糖素類 φ 似物在位置2處包含達成升糖素類似物對DPP IV之抗性之 胺基酸且達成升糖素類似物對DPP IV之抗性之胺基酸不為 D -絲胺酸。 在一些態樣中’包含達成升糖素類似物對Dpp IV之抗性 之胺基酸的升糖素類似物進一步包含例如經由位置「i」 與「i+4」（例如，12與16、16與20、或20與24)之胺基酸之 間的共價鍵穩定升糖素之C端部分中存在ia螺旋的胺基酸 修飾。在一些實施例中，此共價鍵為位置16之麩胺酸與位 Φ 置20之離胺酸之間的内醯胺橋鍵。在一些實施例中，此共 價鍵為除内醯胺橋鍵以外之分子内橋鍵。舉例而言，適合 之共彳貝鍵結方法包括烯烴複分解、基於羊毛硫胺酸之環 化、二硫橋鍵或經修飾含硫橋鍵形成、使用〜.二胺基烷 烴繫栓、形成金屬原子橋鍵及其他方式之肽環化中任何一 或多種。 位置1之修掷 在一些特定貫施例中，升糖素類似物包含（a)位置丨之His 經大型芳族胺基酸進行胺基酸取代及（b)穩定分子之C端部 152868.doc •57- 201130503 分（例如’位置12-29周圍）中之α-螺旋的分子内橋鍵。在特 定實施例中’位置1之胺基酸係經Tyr、Phe、Trp、胺基_ Phe、硝基-Phe、氣-Phe、磺基-Phe、4-吡啶基-Ala、甲基· Tyr或3-胺基Tyr置換《在一些實施例中，分子内橋鍵為任 何本文中所述之分子内橋鍵。在一些態樣中，分子内橋鍵 ;1於由二個插入胺基酸隔開之兩個胺基酸之側键之間，亦 即’介於胺基酸i與i + 4之側鏈之間。在一些實施例中，分 子内橋鍵為内醯胺橋鍵β在一些實施;例中，升糖素類似物 包含位置1之大型芳族胺基酸及介於類似物之位置16與2〇 之胺基酸之間的内醯胺橋鍵。在一些態樣中，該升糖素類 似物進一步包含一或多個（例如，兩個、三個、四個、五 個或五個以上）本文中所述之其他修飾。舉例而言，升糖 素類似物可包含醯胺以替代C端羧酸酯基。此外，在一些 實施例中’該等升糖素類似物進一步包含位置丨7之大型脂 族胺基酸 '位置18之含咪。坐胺基酸及位置19之帶正電胺基 酸中一或多者。在一些實施例中，包含位置1處之修飾及 分子内橋鍵之升糖素類似物進一步包含位置17-19之胺基 酸序列Ile-His-Gln。可做出該等修飾而不破壞升糖素類似 物對GLP-1受體及升糖素受體之活性。在一些實施例中， 升糖素類似物另外包含醯化或烷基化胺基酸殘基。 位置3之修铘 在一些實施例中，SEQ ID NO: 2之第三胺基酸（Gln3)經 酸性、鹼性或疏水性胺基酸殘基取代且該修飾使得升糖素 受體活性降低。在一些實施例中，酸性、鹼性或疏水性胺 152868.doc -58 - 201130503 基酸為麩胺酸、鳥胺酸、正白胺酸。在一些態樣中，經此 等殘基之一修飾以使得升糖素類似物展現實質上降低或破 壞之升糖素受體活性。在一些態樣中，經例如麵胺酸、鳥 胺酸或正白胺酸取代之升糖素類似物具有約1〇%或1〇%以 下之天然升糖素對升糖素受體之活性，例如，約M〇%， 或約0.1-10%，或大於約0 但小於約10% ’同時展現至 少20%之GLP-1對GLP-1受體之活性。在一些實施例中，升 糖素類似物展現約0.5%、約1%或約7%之天然升糖素活 性’同時展現至少20%之GLP-1對GLP-1受體之活性。 在一些實施例中，升糖素類似物之SEQ ID NO: 2之位置 3的麩醯胺酸經麩醯胺酸類似物取代而無對升糖素受體之 活性的實質損失，且在一些情況下，升糖素受體活性増 強。在一些實施例中，麵醯胺酸類似物為天然存在或非天 然存在或非編碼胺基酸，其包含結構I、II或ΙΠ之側鍵： 〇 卜 F^-CHz-X-^R2

結構I

i_Y |-R1—CH； 結構Π 0 |-R1—CH2—S-CH2—R4 結構ΠΙ •3统基 其中R1為c〇.3烧基或c〇-3雜烷基；R2為仙…或匚丨 152868.doc -59- 201130503 R3為C丨·3烷基；R4為11或（：1.3院基；x為NH、〇或s ;且Y為 NHR4、SR3或OR3。在一些實施例中，χ為ΝΗ或γ為 NHR4。在一些實施例中’ r^c0_2烷基或C]雜烷基。在一 些實施例中’ R為NHR4或C!烧基。在一些實施例中，r4 為Η或C1烷基。在例示性實施例中，提供包含結構〗之側鏈 的胺基酸’其中R1為CH2-S，X為ΝΗ，且R2為CH3(乙醯胺 基甲基-半胱胺酸’ C(Acm)) ; R丨為CH2，X為NH，且R2為 CH3(乙醯基二胺基丁酸’ Dab(Ac)) ; R1為C〇烷基，X為 NH，R2為NHR4 ’且R4為η(胺甲醯基二胺基丙酸， Dap(脲））；或R1為CH2-CH2，χ為ΝΗ，且R2為CH3(乙醯基 鳥胺酸’ Orn(Ac))。在例示性實施例中，提供包含結構π 之側鏈之胺基酸’其中R1為CH2，Υ為NHR4，且R4為 CHd甲基麩醯胺酸’ Q(Me));在例示性實施例中，提供包 含結構III之側鏈之胺基酸’其中R〗為CH2且R4為H(曱硫胺 酸-亞颯’ M(O));在特定實施例中，位置3之胺基酸經 Dab(Ac)取代。舉例而言，升糖素促效劑可包含2009年6月 16曰申請之國際專利申請案第pct/US 2009/047438號（其 係以全文引用之方式併入）之序列表的SEQ ID NO: 595、 SEQ ID NO: 601、SEQ ID NO: 603、SEQ ID NO: 604、 SEQ ID NO: 605及SEQ ID NO: 606之經修飾胺基酸序列， 其中此等胺基酸序列係如本文中進一步所述經修飾，例 如’經修飾以包含至少三個促α螺旋胺基酸，經修飾以包 含⑴位置10之醯化或烷基化胺基酸，（Π)位置16之促α螺旋 胺基酸，（iii)位置17及/或18之脂族胺基酸，及（iv)位於位 152868.doc •60- 201130503 置27之C端之至少一個帶電荷胺基酸，及視情況其他修 飾；經修飾以在升糖素類似物之相應位置包含腸促胰島素 類似物-4(SEQ ID NO: 8)之胺基酸18-24中之至少三個胺基 酸。 位置Ί之修掷 在一些實施例中，升糖素類似物包含在位置7有胺基酸 修飾之經修飾SEQ ID NO: 2。在一些態樣中，SEq ID no: φ 2之位置7之胺基酸（Thr)係經大型脂族胺基酸（例如，ne、

Leu、Ala及其類似物）取代。咸信該等修飾急劇地降低對 升糖素類似物之GLP-1受體的活性。 位置15之修掷 在一些實施例令，升糖素類似物包含在位置〗5有胺基酸 修飾（其改良穩定性）之經修飾SEQ ID NO: 2。在一些態 樣中，SEQ ID NO: 2之位置15之胺基酸缺失或經麩胺酸、 高麵胺酸、氧化半胱胺酸或高氧化半胱胺酸取代。該等修 鲁錢時間降低類似物之降解或裂解，尤其在酸性或驗性緩 衝液（例如，PH值在5.5至8之範圍内之緩衝液）中。在一些 貫靶例中，包含此修飾之升糖素類似物在25乞下Μ小時後 保留至少 75〇/〇、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99% 之原始類似物。 位置16之修飾 根據一實施例’提供具有增強之效能及視情況改良之溶 解!生及穩疋性之升糖素類似物。在一實施例中，藉由在天 然升糖素（SEQ ID NO: 2)之位置16處之胺基酸修飾提供增 152868.doc • 61 - 201130503 強之升糖素及GLP-1效能。作為非限制性實例，可藉由用 麩胺酸或用具有4個原子長度之側鏈之另一帶負電胺基酸 或者用麩醯胺酸'高麩胺酸或高氧化半胱胺酸中任一者、 或具有含至少一個雜原子（例如，N、〇、s、p)之側鏈且側 鏈長度為約4(或3-5)個原子之帶電荷胺基酸取代位置16之 天然存在絲胺酸來提供該增強之效能。在一些實施例中， 升糖素類似物包含經修飾SEq ID NO: 2，其包含位置16之 Ser經選自由麩胺酸、麵醯胺酸、高麩胺酸 '高氧化半胱 胺酸、蘇胺酸或甘胺酸組成之群之胺基酸取代。在一些態 樣中’位置16之絲胺酸殘基係經選自由麩胺酸、麩醯胺 酸、高麩胺酸及高氧化半胱胺酸組成之群之胺基酸取代。 在一些特定態樣十，位置16之絲胺酸殘基係經麩胺酸或其 保守取代（例如腸促姨島素類似物_4胺基酸）取代。 在替代實施例中，升糖素類似物包含SEq ID NO: 2之經 修飾序列，其係藉由位置丨6之Ser經Thr或AIB或如上文所 述之另一促α螺旋胺基酸取代而經修飾。在一些實施例 中’促α螺旋胺基酸與j + 3或i+4之胺基酸形成非共價分子 内橋鍵。 位置17-1H之修飾 在一些實施例中’升糖素類似物包含經修飾SEQ ID NO: 2’其中位置17及18處之雙驗性Arg-Arg位點經消除。不受 任何特定理論限制，咸信在一些實施例中雙鹼性位點之消 除改良升糖素類似物之活體内功效。在一些態樣中，就此 而言升糖素類似物係藉由用非鹼性胺基酸（例如，用脂族 152868.doc -62· 201130503 胺基酸）取代SEQ ID NO·· 2之位置17及18之胺基酸中一或 兩者而經修飾。在一些實施例中，位置17或18之胺基酸之 一缺失或胺基酸插入位置17與18之間。在一些實施例中， 位置17之Arg係經如本文中所述之另一胺基酸（例如，包含 親水性部分之胺基酸、促α螺旋胺基酸）取代。在一些實施 例中’促α螺旋胺基酸與j + 3或丨+4之胺基酸形成非共價分 子内橋鍵。在一些實施例中，位置18之Arg係經如本文中 所述之另一胺基酸取代。在一些態樣中，位置18之胺基酸 為小型脂族胺基酸，例如Ala。在一些特定態樣中，位置 18之胺基酸為小型脂族胺基酸，例如Ala ’且位置17之八!^ 保持未經修飾。 在一些實施例中，位置17及/或18係藉由用來自腸促胰 島素類似物-4之相應胺基酸（例如位置17之麩胺酸（視情況 與位置21之帶正電胺基酸配對）或其保守取代及/或位置18 之丙胺酸或其保守取代）取代而經修飾。 位置2Q之修掷 亦藉由位置20之胺基酸修飾來提供對glP-Ι受體之活性 增強。在一些實施例中，位置2〇之麩醯胺酸係經例如如上 文所述之促α螺旋胺基酸置換。在一些實施例中，促α螺旋 胺基酸與j-3或i-4之胺基酸形成非共價分子内橋鍵。在一 些特定實施例中’胺基酸為具有如下側鏈之親水性胺基 酸：該側鏈帶電荷或具有氫鍵能力且長度為至少約5(或約 4-6)個原子’例如離胺酸、瓜胺酸、精胺酸或鳥胺酸，且 視情況與位置1 6之另一促α螺旋胺基酸（例如，帶負電胺基 152868.doc -63· 201130503 酸）形成鹽橋鍵。在一些特定態樣中，該等修飾減少經由 Gin脫醯胺而發生之降解，且在一些實施例中，增強升糖 素類似物對GLP-1受體之活性。 位置21-24之修饰 在一些實施例中，位置21係藉由經促α螺旋胺基酸取代 而經修飾。在一些實施例中，促α螺旋胺基酸與j-3或i_4之 胺基酸形成非共價分子内橋鍵。 在一些實施例中，位置21及/或23及/或24係藉由用來自 腸促胰島素類似物-4之相應胺基酸取代而經修飾，例如， 位置21之胺基酸（Asp)係經腸促胰島素類似物_4(SEQ ID NO: 8)之位置21之胺基酸（Leu或其保守胺基酸取代）取代， 位置23之胺基酸（Val)係經腸促胰島素類似物_4(SEQ ID NO: 8)之位置23之胺基酸（lie或其保守胺基酸取代）取代， 位置24之胺基酸（Gin)係經腸促胰島素類似物_4(SEQ ID NO: 8)之位置24之胺基酸（Glu或其保守胺基酸取代）取代， 或其組合。 帶電荷C端 在一些實施例中，升糖素類似物係藉由胺基酸取代及/ 或將帶電荷胺基酸引入類似物之C端部分中之添加而經修 飾。在一些實施例中，該等修飾增強穩定性及溶解性。如 本文中所用，術語「帶電荷胺基酸」或「帶電荷殘基」係 指包含在水溶液中在生理pH值下帶負電（亦即，去質子化） 或帶正電（亦即，質子化）之側鏈的胺基酸。在一些態樣 中，此等胺基酸取代及/或引入帶電荷胺基酸修飾之添加 152868.doc • 64- 201130503 係在SEQ ID N0: 2之位置27之C端位置。在一些實施例 中’-個、兩個或三個(且在一些情況下，i個以上)帶電 荷胺基酸經引入C端部分（例如，位置27iC端位置）中。根 據-些實施例’位置28及/或29之天然胺基酸係經帶電荷 —至三個帶電荷胺 胺基酸取代，及/或在另一實施例中 基酸亦添加至類似物之C端。在例示性實施例中，一個、 兩個或所有帶電荷胺基酸為帶負電。在一些實施例中，帶

負電胺基酸為天冬胺酸、麵胺酸、氧化半脫胺酸、高氧化 半胱胺酸或高麩胺酸。在一些態樣中，此等等修飾增加溶 解性，例如，當在2代下24小時後量測時，在介於約5 5 與8之間的既定pH值（例如pH 7)下提供相對於天然升糖素 至少2倍、5倍、10倍、15倍、25倍、3〇倍或％倍以上之溶 解性。 根據-些實施例’本文中所揭示之升糖素類似物係藉由 用一或兩個胺基酸殘基截短c端而經修飾。如本文令所 示該等經修飾升糖素肽保留類似的對升糖素受體及GLP· 1受體之活性及效能。就此而言’升糖素肽可包含天然升 糖素類似物（SEQ ID N0: 2)之胺基酸^或^，視情況 具有任何本文令所述之其他修飾。 電荷中性C端 在二實細例中，升糖素類似物包含經修飾SEQ ID NO: I其令C端胺基酸之幾酸係經電荷中性基團（諸如酿胺或 3曰）置換。不$任何特定理論限制’在某些態樣中，該等 152868.doc -65- 201130503 修飾增加升糖素類似物對GLP-1受體之活性《因此，在一 些實施例中’升糖素類似物為醯胺化肽，以使得C端殘基 包含醯胺以替代胺基酸之α羧酸酯基。如本文中所用，一 般提及肽或類似物意欲涵蓋具有經修飾胺基末端、羧基末 端或胺基與羧基末端兩者之肽。舉例而言，包括醯胺基以 替代末端羧酸之胺基酸鏈意欲由表示標準胺基酸之胺基酸 序列所涵蓋。 其他修飾 在一些實施例中，升糖素類似物或者或另外包含以下胺 基酸修飾： (i) 位置2之Ser經Ala取代； (Π)位置10之Tyr經Val或Phe或Trp取代； (iii) 位置12之Lys經Arg取代； (iv) 位置17之Arg經Gin或小型脂族胺基酸（例如Ala)或 大型脂族胺基酸（例如lie)取代； (v) 位置18之Arg經小型脂族胺基酸（例如Ala)或含咪唑 胺基酸（例如His)取代； (vi) 位置19之Ala經帶正電胺基酸（例如Gln)取代； (vii) 位置23之Val經lie取代，及 (viii) 位置29之Thr經Gly或Gin取代。 在一些實施例中，藉由例如用白胺酸或正白胺酸取代修 飾位置27之曱硫胺酸來增加升糖素類似物之穩定性。該等 修飾可減少氧化性降解。亦可藉由例如用AU、Ser、Thr 或AIB取代修飾位置2〇或24或28之Gin來增加穩定性。該等 152868.doc • 66 * 201130503 修飾可減少經由Gln脫醯胺而發生之降解。可藉由例如用 另一酸性殘基（例如Glu)取代修飾位置2丨之Asp來增加穩定 性。该等修飾可減少經由Asp脫水以形成環狀丁二醯亞胺 中間物、接著異構化為異天冬胺酸而發生之降解。 在一些實施例中，本文中所述之升糖素類似物經由例如 二硫橋鍵經糖基化、醯胺化、羧酸化、磷酸化、酯化、N_ 酿化、環化’或轉化成鹽（例如，酸加成鹽、鹼加成鹽）， φ 及7或視情況經二聚、多聚、或聚合、或結合。 本文中所述之任何修飾（包括例如增加或降低升糖素受 體活性及增加GLP-1受體活性之修飾）可個別地或組合應 用。增加GLP-1受體活性之修飾之組合可提供比任何該等 修飾單獨作用更高之GLP-1活性。 例示性實施例 具有至少一個促认螺旋胺基酸及位置17-1&處之修飾的升糖 素類似物 在一些實施例中，升糖素類似物包含天然人類升糖素 (SEQ ID NO: 2)之經修飾胺基酸序列，其包含以下胺基酸 修飾：⑴視情況，SEQ ID NO: 2之位置10之胺基酸經醯化 或烷基化胺基酸殘基（例如，包含醯基或烷基（例如，C4至 C30醯基或烷基）之非編碼胺基酸）取代；（ii) SEQ ID NO: 2 之位置16之胺基酸經促α螺旋胺基酸取代；（iii) SEQ ID NO: 2之位置17及/或18處之胺基酸修飾；及（iv)位置27之C 端之一或多個帶電荷胺基酸（例如，帶負電殘基）》 在一些實施例中，位置17及18之Arg殘基中至少一者係

S 152868.doc •67- 201130503 經脂族胺基酸（例如，小型脂族胺基酸）取代^.在一些實施 例中，位置〗7及18之Arg殘基中僅一者經取代為除Arg外之 殘基。在-些態樣中，位置18iArg係經小型脂族胺基酸 取代。在-些態樣中，小型脂族殘基在一些態樣中為包含 至多4個碳原子之直鏈、未分支鏈之胺基酸。在一些特定 態樣中，小型脂族胺基酸為Gly或Ala。在特定實施例中， 位置18之Arg係經Ala取代。 可藉由用帶電荷胺基酸取代位置28或29或在位置28、29 後或在c端處添加帶電荷胺基酸來實現向位置27之胺基酸 之C端併入一或多個帶電荷胺基酸。在一些實施例中，匸 端之帶電荷胺基酸為本文中在例如铲雹端所列之任何 帶電荷胺基酸。在某些態樣中，帶電荷胺基酸為帶負電胺 基酸。在一些態樣中，帶負電胺基酸為酸性胺基酸殘基， 例如，Asp或GIu、氧化半胱胺酸、高麩胺酸、高氧化半胱 胺酸。在一些態樣中’帶負電胺基酸位於升糖素類似物之 位置28、29、30或3 1，或此等位置之組合。在一些特定實 施例中’升糖素類似物包含位置28之Asp^在一些特定實 施例中，升糖素類似物不具有位置3 〇之LyS。 位置16之促α螺旋胺基酸可為本文中所述之任何促α螺旋 胺基酸。在一些情況下，促α螺旋胺基酸為α，α二取代胺基 酸。舉例而言’在一些實施例中，促α螺旋胺基酸為包含 R1及R2(其各自鍵結至〇^炭）之α，α二取代胺基酸，其中Ri及 R2各獨立地選自由視情況經羥基、醯胺、硫醇、鹵基取代 之C1-C4烷基組成之群’或Ri&r2與其所連接之α碳一起形 152868.doc •68· 201130503 成環。在一些實施例中’ α，α二取代胺基酸為AIB。 在替代實施例中，位置16之促α螺旋胺基酸為與升糖素 類似物之另一胺基酸形成分子内橋鍵的促α螺旋胺基酸。 在某些實施例中，位置16之促α螺旋胺基酸與位置12或20 之胺基酸形成分子内橋鍵。在一些實施例中，分子内橋鍵 為共價分子内橋鍵（例如内醯胺），且在一些實施例中為非 共價分子内橋鍵（例如鹽橋鍵）。在某些實施例中，分子内 橋鍵連接Glu與Lys之間的側鏈且位置16與12或20之胺基酸 之一為Glu且另一胺基酸為Lys。 在一些實施例中，升糖素類似物在升糖素類似物之位置 27處包含大型脂族胺基酸。大型脂族胺基酸在特定態樣中 為Leu或正白胺酸。 在一些貫施例中，升糖素類似物包含其他胺基酸修飾， 諸如本文中所述之任何胺基酸修飾。在一些態樣中，升糖 素類似物包含達成DPP-IV抗性之胺基酸，如本文中進一步 描述。在一些實施例中，升糖素類似物包含位置3之胺基 酸取代，例如，Gln3GlU。在特定態樣中’升糖素類似物 包含位置15之胺基酸取代，例如，Aspl5G丨u。在一些態樣 中，升糖素類似物進一步包含以下一或多者：位置16之促 α螺旋胺基酸（例如，AIB、Ghl)、位置17之此、位置似 Ala位置2〇之促α螺旋胺基酸（例如，Lys)、位置2i之 Glu、位置23之lie，及位置24之施或Cys。在_些態樣 中’升糖素類似物包含所有此等修飾。在一些態樣中，位 置24之胺基酸為Cys且該Cys包含親水性部》，例如， I52868.doc •69· 201130503 PEG °在特定態樣申，位置24之胺基酸為Ala或天然升糖 素及升糖素類似物之此位置之天然胺基酸不包含親水性部 分°在一些態樣中，升糖素類似物包含醯化或烷基化胺基 酸’且在特定態樣中，醯化或烷基化胺基酸在位置1〇處。 在特定態樣中’醯化或烷基化胺基酸包含連接醯基或烷基 與升糖素類似物（例如’經由升糖素類似物之胺基酸之側 鏈）之間隔基。在一些態樣中，間隔基為胺基酸或二肽， 例如’包含一或兩個酸性胺基酸殘基之間隔基。在一些實 施例中’升糖素類似物包含i _2 i個胺基酸殘基之C端延 長’如本文中進一步描述。在一些實施例中，C端延長包 含Glu或Gly中一或多者。在一些態樣中，c端延長係選自 由Gly-Glu、Gly、Gly-Gly、Cys組成之群，其中CyS視情 況結合至異源部分，例如，親水性部分（例如，peg)。在 一些實施例中’升糖素類似物之C端胺基酸包含醯胺以替 代α幾酸S旨基。在其他實施例中’升糖素類似物之c端殘基 包含α羧酸酯基。在一些實施例中，升糖素類似物不由 SEQ ID NO: 9或10之胺基酸序列組成。 具有至少3個促a螺旋胺基酸之升糖素類似物 在一些實施例中，升糖素類似物包含天然人類升糖素 (SEQ ID NO: 2)之經修飾胺基酸序列，其_至少三個位於 SEQ ID NO: 2之位置12至29中任何位置之胺基酸經促以螺 旋胺基酸取代。在一些實施例中，促α螺旋胺基酸為任幻_ 本文中所述之促α螺旋胺基酸。在一些實施例中，促α螺旋 胺基酸為α，α二取代胺基酸，例如，ΑΙΒ。在一此實施例 152868.doc •70· 201130503 二，促:螺旋胺基酸為參與形成分子内橋鍵之胺基酸。在 一特疋l樣中，升糖素類似物包含四個參與形成兩個分 子内橋鍵之促α螺旋胺基酸。在一些特定態樣中，升糖素 類似物包3二個促α螺旋胺基酸，其中兩個促—旋胺基酸 參與形成分子内橋鍵且—促α螺旋胺基酸為α，α二取代胺基 酉夂例如，ΑΙΒ。此等實施例之分子内橋鍵可為此項技術 申已知之任何为子内橋鍵，包括（例如）本文中所述之任何 共價分子内橋鍵及非共價分子内橋鍵。在一些實施例中， 分子内橋鍵為鹽橋鍵。在_些實施例巾，分子内橋鍵為内 酿胺橋鍵。在某些實施例中，分子内橋鍵連接間隔三個胺 基酸（例如，1與04)之升糖素類似物之兩個胺基酸的側 鏈。在特定態樣中’丨為12、16或17。在一些態樣中，升 糖素類似物例如在胺基酸Lys與Glu之間包含鹽橋鍵。 在些特疋貫施例中，升糖素類似物包含SEQ ID NO: 2 之經修飾胺基酸序列’其中位於Seq id NO: 2之位置16、 17、20及21之胺基酸中三個或全部經促α螺旋胺基酸取 代。在一些實施例中’升糖素類似物包含分子内橋鍵，其 鍵聯位置17與21之胺基酸之側鏈。在某些態樣中，位置17 及21之胺基酸之一為LyS且另一胺基酸為Gw。在一些實施 例中，升糖素類似物進一步包含一或多個促α螺旋胺基 酸，例如，一或多個α，α二取代胺基酸，諸如本文中所述 之任何α，α一取代胺基酸。在一些態樣中，α，α二取代胺基 酸包含R1及R2 ’其各自鍵結至(!碳，其中Ri及R2各獨立地 選自由視情況經經基、酿胺、硫醇、鹵基取代之C1 _匸4烧 152868.doc -71· 201130503 基組成之群，或Ri&R2與其所連接之α碳一起形成環。在 特定態樣中， 中，α，α二取4 傢1Ρ，α’α二取代胺基酸為ΑΙΒ。在一些特定態樣 α二取代胺基酸位於位置16或20，或位於兩個位置 16與2 0 °在替代實施例中，升糖素類似物包含分子間橋鍵 (例如非共價橋鍵，諸如鹽橋鍵，其鍵聯位置16與20之胺 基酸）及另一分子内橋鍵（例如非共價橋鍵，諸如鹽橋鍵， 其鍵聯位置1 7與21之胺基酸）。 在一些實施例中，升糖素類似物包含如下文所述之其他 6飾舉例而s，在特定態樣中，包含至少三個促α螺旋 胺基酸之升糖素類似物包含達成升糖素類似物之DPP-IV抗 性之胺基酸，如本文中進一步描述。在一些態樣中，升糖 素類似物包含醯化或烷基化胺基酸，且在特定態樣中，醯 化或烷基化胺基酸在位置1〇處。在特定態樣中酿化或烷 基化胺基酸包含連接醯基或烷基與升糖素類似物（例如， 經由升糖素類似物之胺基酸之側鏈）之間隔基。在一些態 樣中，間隔基為胺基酸或二肽，例如，包含—或兩個酸性 胺基酸殘基之間隔基。在一些態樣中，升糖素類似物不包

152868.doc -72· 201130503 態樣中，升糖素類似物在位置27之C端包含一或多個帶電 荷胺基酸（例如，帶負電殘基（例如，Asp、Glu))。在特定 實施例中’升糖素類似物包含位置28之Asp。在特定態樣 中，升糖素類似物並未結合至親水性部分。在一些態樣 中’位置24之胺基酸為Cys且該Cys包含親水性部分，例如 PEG。在特定態樣中，位置24之胺基酸為Aia或天然升糖 素及升糖素類似物之此位置之天然胺基酸不包含親水性部 分。在一些實施例中’升糖素類似物包含丨_21個胺基酸殘 基之C端延長，如本文中進一步描述。在一些實施例中， C端延長包含SEQ ID NO: 13-16之胺基酸序列，且在一些 態樣中’位置29之胺基酸為Gly。在一些實施例中，升糖 素類似物之C端胺基酸包含醯胺以替代α羧酸酯基。在其他 實施例中’升糖素類似物之C端殘基包含α羧酸酯基。 升糖素/腸促胰島素類似物-4嵌合體 在一些實施例中，升糖素類似物包含SEQ ID NO: 2之經 修飾胺基酸序列’其中至少三個（例如，四個、五個、六 個、七個、八個或所有）位於SEQ ID NO: 2之位置16至24 中任何位置之胺基酸係經腸促胰島素類似物_4(SEq ID NO: 8)之相應位置之胺基酸或其保守胺基酸取代來取代。 就此而言，在一些實施例中’升糖素類似物包含SEQ id NO: 2之經修飾胺基酸序列，其中位置16之胺基酸（Ser)係 經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置16之胺基酸 (Glu或其保守胺基酸取代）取代’位置17之胺基酸（Arg)係 經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置17之胺基酸 152868.doc •73· 201130503 (Glu或其保守胺基酸取代）取代’位置18之胺基酸（Arg)係 經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID N0: 8)之位置18之胺基酸 (Ala或其保守胺基酸取代）取代’位置19之胺基酸（Ala)係 經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置19之胺基酸 (Val或其保守胺基酸取代）取代’位置20之胺基酸（Gin)係 經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置2〇之胺基酸 (Arg或其保守胺基酸取代）取代’位置21之胺基酸（Asp)係 經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置21之胺基酸 (Leu或其保守胺基酸取代）取代’位置23之胺基酸（Val)係 經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置23之胺基酸 (lie或其保守胺基酸取代）取代，位置24之胺基酸（Gin)係經 腸促騰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之位置24之胺基酸 (Glu或其保守胺基酸取代）取代，或其組合。 在一些實施例中，升糖素類似物包含胺基酸序列 AVRLFIX(SEQ ID NO: 11)作為類似物之位置18至24，或包 含其保守胺基酸修飾之SEQ ID NO: 11之經修飾胺基酸序 列。因此’在一些態樣中，升糖素類似物包含SEq ID NO: 2之經修飾胺基酸序列，其包含位置丨8之小型脂族胺基 酸、位置19之脂族胺基酸、位置2〇之帶正電胺基酸、位置 21之電荷中性胺基酸、位置23之大型脂族胺基酸 '位置24 之酸性胺基酸或Cys。 在一些態樣中’升糖素類似物進一步包含在位置16及17 各處之帶電荷胺基酸。在特定態樣中，升糖素類似物包含 位置16及17各處之酸性胺基酸或位置丨6之酸性胺基酸及位 152868.doc •74. 201130503 置17之帶正電胺基酸。因此，在一些態樣申，升糖素類似 物包含ΕΧ丨AVRLFIX2(SEQIDNO: 12)之胺基酸序列，其中 Χι為E、K或Q且X2為E或C。關於此等升糖素類似物，在一 些態樣中’升糖素類似物不包含胺基酸序列 KRNRNNIA(SEQ ID NO: 13)。 在一些實施例中’升糖素類似物包含如下文所述之其他 修飾。舉例而言，在特定態樣中，至少三個（例如，四 φ 個、五個、六個、七個、八個或所有）位於SEQ ID NO: 2 之位置16至24中任何位置之胺基酸經腸促胰島素類似物_ 4(SEQ ID NO: 8)之相應位置之胺基酸或其保守胺基酸取代 來取代之升糖素類似物包含達成升糖素類似物之DPp_IV抗 性的胺基酸，如本文中進一步描述。在一些態樣中，升糖 素類似物包含酿化或燒基化胺基酸，且在特定態樣中，醯 化或烷基化胺基酸在位置10處。在特定態樣中，醯化或烷 基化胺基酸包含連接醯基或烷基與升糖素類似物（例如， φ 經由升糖素類似物之胺基酸之側鏈）之間隔基。在一些態 樣中，間隔基為胺基酸或二肽，例如，包含一或兩個酸性 胺基酸殘基之間隔基。在一些態樣中，升糖素類似物不包 含醯化或烷基化胺基酸》在特定態樣中，升糖素類似物係 結合至親水性部分，例如’聚乙二醇，如本文中進一步描 述。在特定態樣中，異源部分係結合至位置24之胺基酸 (例如’位置24之Cys)之側鏈。在一些態樣中，升糖素類 似物不包含異源部分，例如’親水性部分。在一此雜樣 中，升糖素類似物之位置27之胺基酸係經除Met以外之胺 152868.doc -75- 201130503 基酸（例如’大型脂族胺基酸，例如，Leu、正白胺酸）取 代。在特定態樣中’升糖素類似物在位置27之C端包含一 或多個帶電荷胺基酸（例如，帶負電殘基（例如，Asp、 Glu))。在特定實施例中，升糖素類似物包含位置28之 Asp。在特定態樣中，升糖素類似物並未結合至親水性部 分。在一些態樣中，位置24之胺基酸為Cys且該Cys包含親 水性部分，例如PEG。在特定態樣中，位置24之胺基酸為 Ala或天然升糖素及升糖素類似物之此位置之天然胺基酸 不包含親水性部分。在一些實施例中，升糖素類似物包含 1-21個胺基酸殘基之c端延長，如本文中進一步描述。在 一些實施例中，C端延長包含SEQ ID NO: 13-16之胺基酸 序列，且在一些態樣中，位置29之胺基酸為Gly。在一些 實施例中，升糖素類似物之c端胺基酸包含醯胺以替代 酸醋基。在其他實施例中’升糖素類似物之C端殘基包含α 羧酸酯基。 以下描述適用於：⑴本文中所述之具有至少一個促α螺 旋胺基酸及位置17-18之修飾的升糖素類似物；（Η)本文中 所述之具有至少三個促旋胺基酸之升糖素類似物；及 (iii)包含至少三個位於位置丨6至24中任何位置之胺基酸經 腸促膜島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之相應位置之胺基酸 或其保守取代來取代的升糖素類似物。 在一些特定態樣中’升糖素類似物包含SEq ID NO: 2之 經修飾胺基酸序列’其包含其他胺基酸修飾（例如，至多7 個、至多8個、至多9個、至多10個例如保守取代或非 152868.doc • 76 * 201130503 保守取代，其不破壞并糖素或GLP1活性。可併入本發明 之任何胺基酸修飾，包括使升糖素類似物具有其他所需性 質（例如，在循環中半衰期延長、作用起始延遲、作用持 續時間延長、蛋白酶（諸如DPP-IV)抗性改良、對GLP-1受 體及升糖素受體中一或兩者之效能增加、穩定性改良、溶 解性增強及其類似性質）之胺基酸修飾。 在一些態樣中，任何此三種例示性實施例之升糖素類似 φ 物包含醯化或烷基化胺基酸，例如，根據本文之揭示内 容。參見例如潑允及犮差允下之教示。舉例而言，在一些 態樣中，醯化或烷基化胺基酸位於位置1〇處。在一些實施 例中，醯化或烷基化胺基酸包含介於位置1〇之胺基酸與醯 基或烷基之間的間隔基。在一些實施例中，間隔基為胺基 酸或二肽間隔基，例如，包含一或多個酸性殘基之間隔 基。 在一些特定態樣中，本文中所述之升糖素類似物係結合 鲁至異源部分，如本文中進一步描述。參見例如结合勿潜 合物：Fc融合、結合物：親水性部分、結合物：rpE<3及 潜合#.·多衮邀下之教示。因此，在特定態樣中，升糖素 類似物包含親水性部分，例如，包含胺基酸共價鍵聯至例 如聚乙二醇（例如，40 kDa PEG)之親水性部分。在特定態 樣中’包含親水性部分之胺基酸位於位置24或（：端。 在特定態樣中，升糖素類似物包含達成Dpp_IV蛋白質裂 解抗性之胺基酸，如本文中進一步描述。參見例如D户 犮尨版下之教示。因此，在一些態樣中’升糖素類似物包 152868.doc •77· 201130503 含位置1及/或2處之胺基酸修飾，其中該位置之8£(^ ID NO: 2之胺基酸係經達成升糖素類似物對DPP-ΐν裂解之抗 性之胺基酸取代。舉例而言，在一些實施例中，位置2之 Ser係經選自由D-絲胺酸、D-丙胺酸、顯胺酸、甘胺酸、 N-曱基絲胺酸、N-甲基丙胺酸或胺基異丁酸組成之群之胺 基酸取代。在一些實施例中，位置1之His係經D-組胺酸、 去胺基組胺酸、羥基-組胺酸、乙醯基-組胺酸、高碳組胺 酸、N-曱基組胺酸、α-曱基組胺酸、咪唑乙酸或α，α_二甲 基咪唑乙酸（DMIA)之一取代。 在一些特定態樣中，根據本文之揭示内容，升糖素類似 物包含C端醯胺以替代C端α羧酸酯基及/或可包含c端延 如電荷中性C端反融合狀、嵌合體Κ2端延長 下之教示。 或者或另外，在一些實施例中’升糖素類似物包含一或 多個以下胺基酸修飾：⑴位置1之His經根據本文中企f 7 之磬#下之教示之胺基酸取代；例如，HislTyr ; (ii)位置3 之Gin經根據本文中位之參鐵下之教示之胺基酸置換， 例如，經麵醯胺酸類似物或Glu取代；（iii)位置7之Thr經大 型脂族胺基酸（例如，lie、Leu、Ala)置換；（iv)位置1〇之 Tyr經根據本文中真必發綠下之教示之胺基酸置換，例 如’ TyrlO經Val或Phe或Trp置換；（v)位置12之！^經根據 本文中真尨疹#下之教示之胺基酸置換，例如，Lys 12經 Arg置換；（Vi)位置15之Asp經根據本文中也之發#下 之教示之胺基酸置換’例如，Aspl5Glu ; (vii)位置17及/ 152868.doc -78 - 201130503 或18之Arg根據本文中位f ;7_js之疹部下之教示經修飾， 例如’ Argl8Ala; (Viii)位置2〇及/或24之Gln經根據本文中 位置20之/多#及其他疹錚下之教示之胺基酸置換；例如，

Gln20及 / 或 Gln24 經 Ala、Ser、Thr 或 AIB 置換；（viii)位置 27之Met經根據本文中其他疹#下之教示之胺基酸置換， 例如’ Met27經Leu或正白胺酸置換；（ix)位置28之八沾經 根據夢霞彦C蹲下之教示之帶負電胺基酸置換，例如， • Asn28AsP ;或⑻位置29之Thr經根據本文中夢CyfC聪及 真必滲#下之教示之胺基酸置換，例如，Thr29Gly或 Thr29經帶負電胺基酸置換。 在一些特定實施例中’升糖素類似物或者或另外包含一 或多個本文中所述之其他修飾，包括（但不限於）醯化、烷 基化、聚乙二醇化、C端之1-2個胺基酸缺失、C端處添加 帶電荷胺基酸及/或經帶電荷胺基酸取代、C端羧酸酯基經 醯胺置換、添加C端延長，及保守及/或非保守胺基酸取 φ 代’諸如位置27之Met經Leu或Nle取代、位置1 5之Asp經 Glu(或類似胺基酸）取代、位置或2處經達成Dppqv蛋 白抗性之胺基酸取代、位置2之S er經A1 a取代、位置1 〇 之Tyr經Val或Phe取代、位置12之Lys經Arg取代、位置16 之Ser經Thr或AIB之取代、位置20及/或24之Gin經Asp、 Glu或AIB取代、位置16之Ser經Glu或Thr取代、位置18之 Arg經Ala取代、位置20之Gin經Lys取代、位置21之Asp經 Glu取代’及位置24之Gin經Asn或Cys取代。在一些實施例 中’前述升糖素肽包含位置29之Gin或Gly或添加C端延 152868.doc -79- 201130503 長，例如，位置28之胺基酸之C端的GGPSSGAPPPS(SEQ ID NO: 15)。在一特定態樣中，升糖素肽包含一或多個酿 胺基以替代C端幾酸醋基、醯基（例如，c 16脂肪酸），及親 水性部分（例如，聚乙二醇（PEG))。 上述升糖素類似物對升糖素受體、對GLP-1受體或對升 糖素受體與GLP-1受體兩者展現活性。在一些實施例中， 升糖素類似物展現至少或約3%(例如，至少或約5%、至少 或約10%、至少或約15%、至少或約2〇%、至少或約30%、 至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約 70°/。、至少或約80%、至少或約90%或至少或約1〇〇%或 100%以上）之天然GLP-1對GLP-1受體之活性。在一些實施 例申，升糖素類似物展現至少或約3%(例如，至少或約 5 /〇、至少或約1〇%、至少或約15%、至少或約2〇%、至少 或’力3 0 /〇、至少或約40%、至少或約5〇%、至少或約、 至少或約70%、至少或約80%、至少或約9〇%或至少或約 100%或100%以上）之天然升糖素對升糖素受體之活性。在 特定實施例中，升糖素類似物展現至少1〇〇%之天然升糖 素對升糖素受體之活性，展現至少1〇〇%之天然⑽韻 GLP-1受體之活性，或兩者皆有。 在些實施例中，升糖素類似物對GLP-丨受體之£(：5〇為 其對升糠素受體之EC5Q的約5G倍或5()倍以下（例如，約4〇 倍或40倍以下、約3G倍或3()倍以下、約倍或υ倍以下、 勺倍或20倍以下、約15倍或15倍以下約ι〇倍或⑺倍以 下、約5倍或5倍以下、約3倍或3倍以下、約2倍或2倍以 152868.doc 201130503 下）。在一些實施例中，升糖素類似物對GLP-1受體之 EC50為其對升糖素受體之EC50之兩倍至十倍。 排除在外之情況 在一些實施例中，任一種以下肽係排除在本文中所述之 升糖素類似物之外，不過包含一或多個如本文中所述之其 他修飾且展現所需GLP-1或共促效劑活性之任何以下肽， 使用該等化合物之醫藥組合物、套組及治療方法可包括於 本發明中：具有[Arg 12]取代且具有C端醯胺之SEQ ID NO: 2之肽；具有[Argl2，Lys20]取代且具有C端醯胺之SEQ ID NO: 2之肽；具有[Argl2,Lys24]取代且具有C端醯胺之SEQ ID NO: 2之肽；具有[Argl2，Lys29]取代且具有C端醯胺之 SEQ ID NO: 2 之肽；具有[Glu9]取代之 SEQ ID NO: 2 之 肽；失去Hisl、具有[Glu9，Glul6，Lys29]取代及C端醯胺之 SEQ ID NO: 2之肽；具有[Glu9，Glul6,Lys29]取代且具有 C 端醯胺之SEQ ID NO: 2之肽；具有經由内醯胺橋鍵鍵聯之 [Lysl3，Glul7]取代且具有C端醯胺之SEQ ID NO: 2之肽； 具有經由内醯胺橋鍵鍵聯之[Lysl7，Glu21]取代且具有C端 醯胺之SEQ ID NO: 2之肽；失去Hisl、具有經由内醯胺橋 鍵鍵聯之[Glu20,Lys24]取代的SEQ ID NO: 2之肽。在一些 實施例中，升糖素類似物不為2009年2月19日申請之國際 專利申請案第PCT/US 2009/034448號；2009年6月16曰申 請之國際專利申請案第PCT/US 2009/047438號；及2008年 2 月 13 日申請之 PCT/US 2008/053857(WO 2008/101017)之 任一者中所揭示之任何肽；該等申請案各自係以全文引用 152868.doc -81 - 201130503 之方式併入本文中。在一些實施例中，升糖素類似物不包 括在位置29後鍵聯至C端之序列KRNRNNIA之全部或一部 分，例如ICRNR。 製備狀之方法 可藉由此項技術中已知之方法獲得本發明之升糖素類似 物。重新合成肽之適合方法描述於例如Chan等人，Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2005 ； Peptide and Protein Drug Analysis，Reid，R.編，Marcel Dekker，Inc., 2000 ; Epitope Mapping, Westwood 等人編，Oxford University Press， Oxford，United Kingdom, 2000 ;及美國專利第 5,449,752號 中。 此外，在本發明之類似物不包含任何非編碼或非天然胺 基酸之情況下，可使用標準重組方法，使用編碼類似物之 胺基酸序列之核酸重組製備升糖素類似物。參見例如 Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 第 3版，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor, NY 2001 ;及 Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons，NY, 1994。 在一些實施例中，本發明之升糖素類似物經分離。在一 些實施例中’本發明之升糖素類似物經純化。咸了解， 「純度」為相對術語’且不一定視為絕對純度或絕對富集 度或絕對選擇度。在一些態樣中’純度為至少或約50%、 152868.doc -82- 201130503 至少或約60%、至少或約7〇%、至少或約8〇%、或至少或 約90%(例如，立少或約91%、至少或約92%、至少或約 93〇/。、至少或約94°/。、至少或約95%、至少或約96°〆❶、至少 或約97%、至少或約98%、至少或約"％)或為約1〇〇%。 在一些實施例中，本文中所述之肽係由諸如Synpep (Dublin CA) ' Peptide Technologies Corp. (Gaithersburg, MD)及 Multiple Peptide Systems(San Diego，CA)之公司商 業合成。在此方面肽可為合成、重組、經分離及/或經 純化之肽。 結合物 本發明進一步提供包含一或多個本文中所述之升糖素類 似物結合至異源部分之結合物。如本文tj?所用，術語「異 源部分」與術語「結合物部分」同義，且指與本文中所述 之升糖素類似物不同之任何分子（化學或生物化學、天然 存在或非編碼）。可鍵聯至本文中所述之任何類似物之例 示性結合物部分包括（但*限於）異源肽或多肽（包括例如血 聚蛋白）、乾向劑、免疫球蛋白或其部分（例如，可變區、 區）、診斷標記（諸如放射性同位素、螢光團或酶 不0己）、聚合物（包括水溶性聚人 劑 以口物），或其他治療或診斷 劑在一些貫施例中， 白之蛀人 七、匕3本發明之類似物及血漿蛋 白、也纖維蛋係選自由白蛋白、轉鐵蛋 結合物之血襞蛋成之群。在-些實施例中， 例中，結合物包含或轉鐵蛋白。在一些實施 5夕固本文中所述之升糖素類似物及 152868.doc •83· 201130503 以下一或多者：肽（其不同於本文中所述之升糖素及/或 GLP-1受體活性升糖素類似物）、多肽、核酸分子、抗體或 其片段、聚合物、量子點、小分子、毒素、診斷劑、碳水 化合物、胺基酸。 在一些實施例中’異源部分為不同於本文中所述之升糖 素及/或GLP-1受體活性類似物之肽且結合物為融合肽或嵌 合肽。在一些實施例中，異源部分為1 _21個胺基酸之肽延 長。在特定實施例中，延長係連接至升糖素類似物之C 端，例如，連接至位置29之胺基酸。 在一些特定態樣中，延長為單一胺基酸或二肽。在特定 實施例中，延長包含選自由以下組成之群之胺基酸：帶電 荷胺基酸（例如，帶負電胺基酸（例如Glu)、帶正電胺基 酸）、包含親水性部分之胺基酸。在一些態樣中，延長為 Gly、Glu、Cys、Gly-Gly、Gly-Glu。 在一些實施例中，延長包含SEQ ID NO: 14 (GPSSGAPPPS) ' SEQ ID NO: 15(GGPSSGAPPPS)、SEQ ID NO: 13(KRNRNNIA)或 SEQ ID NO: 16(KRNR)之胺基酸 序列。在特定態樣中，胺基酸序列係經由升糖素類似物之 C端胺基酸（例如，位置29之胺基酸）連接。在一些實施例 中，SEQ ID NO: 13-16之胺基酸序列係經由肽鍵結合至升 糖素類似物之胺基酸29 »在一些特定實施例中，升糖素類 似物之位置29之胺基酸為Gly且該Gly係融合至SEQ ID NO: 13-16之胺基酸序列之一。 在一些實施例中，異源部分為聚合物。在一些實施例 152868.doc • 84· 201130503 中’聚合物係選自由以下组成之群：聚醯胺；聚碳酸酯； 聚伸烷基及其衍生物，包括聚伸烷二醇、聚烷醚、聚對苯 二甲酸伸烷酯；丙烯酸酯及甲基丙烯酸酯之聚合物，包括 聚（甲基丙烯酸曱酯）、聚（曱基丙烯酸乙酯）、聚（曱基丙烯 酸丁酯）、聚（甲基丙烯酸異丁酯）、聚（曱基丙烯酸己酯）、 聚（甲基丙稀酸異癸酯）、聚（甲基丙烯酸月桂酯）、聚（甲基 丙烯酸苯酯）、聚（丙烯酸甲酯）、聚（丙烯酸異丙酯）、聚（丙 烯酸異丁酯）及聚（丙烯酸十八烷酯）；聚乙烯基聚合物，包 括聚乙稀醇、聚乙稀鍵、聚乙稀醋、聚画乙稀、聚（乙酸 乙烯酯）及聚乙烯吡咯啶酮；聚乙交酯；聚矽氧烷；聚胺 基甲酸酯及其共聚物；纖維素’包括烷基纖維素、羥基烷 基纖維素、纖維素醚、纖維素酯、硝基纖維素、甲基纖維 素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥基-丙基曱基纖維 素、羥基丁基曱基纖維素、乙酸纖維素、丙酸纖維素、乙 酸丁酸纖維素、乙酸鄰苯二曱酸纖維素、羧乙基纖維素、 三乙酸纖維素及硫酸纖維素鈉鹽；聚丙烯；聚乙烯，包括 聚（乙二醇）、聚（氧化乙烯）及聚（對苯二曱酸伸乙酯）；及聚 苯乙烯。 在一些態樣中，聚合物為生物可降解聚合物，包括合成 生物可降解聚合物（例如，乳酸與乙醇酸之聚合物、聚酸 酐、聚（原）酸酯、聚胺基甲酸酯、聚（丁酸）、聚（戊酸）及聚 (丙交酯-共-己内酯）），及天然生物可降解聚合物（例如，海 藻酸鹽及其他多醣（包括聚葡萄糖及纖維素）、膠原蛋白、 其化學衍生物（取代、添加例如烷基、伸烷基之化學基 152868.doc -85- 201130503 團、羥基化、氧化及熟習此項技術者通常進行之其他修 飾）、白蛋白及其他親水性蛋白質（例如，玉米蛋白（zein)及 其他醇溶穀蛋白（prolamine)及疏水性蛋白質）），·以及其任 何共聚物或混合物。一般而言，此等材料在活體内藉由酶 促水解或暴露於水、藉由表面或本體侵蝕而降解。 在一些態樣中’聚合物為生物黏附聚合物，諸如生物可 侵姑性水凝膠（由 H. S. Sawhney，C. P. Pathak 及 J. A. Hubbell於Macromolecules，1993, 26, 581-587 中描述，該文 獻之教示内容係併入本文中）、聚玻尿酸、酪蛋白、明 膠、明膠蛋白、聚酸酐、聚丙烯酸、海藻酸鹽、聚葡萄胺 糖、聚（曱基丙烯酸甲酯）、聚（甲基丙稀酸乙酯）、聚（曱基 丙烯酸丁酯）、聚（曱基丙烯酸異丁酯）、聚（曱基丙烯酸己 酯）、聚（曱基丙烯酸異癸酯）、聚（甲基丙烯酸月桂酯）、聚 (曱基丙烯酸苯酯）、聚（丙烯酸曱酯）、聚（丙烯酸異丙酯）、 聚（丙烯酸異丁酯）及聚（丙烯酸十八烷酯）。 在一些實施例中’聚合物為水溶性聚合物或親水性聚合 物。本文中在「親水性部分」下進一步描述親水性聚合 物。適合水溶性聚合物在此項技術中已知且包括（例如）聚 乙烯°比咯啶酮、羥丙基纖維素（HPC ; Klucel)、羥丙基甲 基纖維素（HPMC ; Methocel)、硝基纖維素、經丙基乙基纖 維素、羥丙基丁基纖維素、羥丙基戊基纖維素、甲基纖維 素、乙基纖維素（Ethocel)、羥乙基纖維素、各種烷基纖維 素及羥基烷基纖維素、各種纖維素醚、乙酸纖維素、緩甲 基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素飼、乙酸乙稀 152868.doc -86 · 201130503

酯/丁烯酸共聚物、聚甲基丙烯酸羥基烷酯、曱基丙烯酸 羥基曱酯、甲基丙烯酸共聚物、聚甲基丙烯酸、聚曱基丙 烯酸曱酯、順丁烯二酸酐/曱基乙烯醚共聚物、聚乙烯 醇、聚丙烯酸鈉及聚丙烯酸鈣、聚丙烯酸、酸性鲮基聚合 物、羧基聚亞甲基、羧基乙烯基聚合物、聚氧乙烯聚氧丙 烯共聚物、聚甲基乙烯醚·共-順丁烯二酸酐、羧甲基醯 胺、曱基丙烯酸鉀二乙烯基苯共聚物、聚氧基乙二醇、聚 氧化乙烯’及其衍生物、其鹽及其組合。 在特定實施例中，聚合物為聚伸烷二醇，包括例如聚乙 二醇（PEG)。 在一些實施例中’異源部分為碳水化合物。在—些實施 例中，碳水化合物為單醣（例如，葡萄糖、半乳糖、果 糖）、雙醣（例如，蔗糖、乳糖、麥芽糖）、寡醣（例如，棉 子糖、水蘇糖）、多醣（澱粉、澱粉酶、支鏈澱粉、纖維 素甲忒素、癒創聚葡糖（callose)、昆布糠（laminadn)、 木聚糖甘露聚糖、褐藻糖膠（fuc〇idan)、半乳甘露聚 ' 六研、部，刀、两脂負。隹一些實施例中 脂質為脂肪酸、類廿烧酸（士。_。叫、前列腺素、白 稀血权素、N_醯基乙醇胺、甘油脂質（例如，單取代 取代甘油、二取代甘油）、甘油磷脂（例如， 膽驗、鱗脂醯肌酿 # 碟月日 醇、碟脂酿乙醇胺、填脂酿絲脸 脂（例如，神經鞘胶p ^ 、牧暇）、 醇' 膽固醇）、里n Μ例如，類 "戍烯醇脂質（pren〇l lipid)、醣脂質、戍 152868.doc •87· 201130503 酮化合物（P〇iyketide)、油、蠟、膽固醇、固醇、脂溶性維 生素、單酸甘油酯、二酸甘油酯、三酸甘油酯、磷脂。 在-些實施例中’異源部分係經由非共價或共價鍵連接 至本發明之類似物。在某些態樣中，異源部分係經由連接 子連接至本發明之類似物。可藉由共價化學鍵、物理力 (諸如靜電相互作用、氫鍵相互作用、離子相互作用、凡 得瓦爾（van der Waa丨s)相互作用或疏水性或親水性相互作 用）來實現鍵聯。可使用多種非共價偶合系統，包括生物 素-抗生物素蛋白、配位體/受體、酶/受質、核酸/核酸結 合蛋白、脂質/脂質結合蛋白、細胞黏著分子搭配物；或 彼此具有親和力之任何結合搭配物或其片段。 在一些實施例中，藉由使類似物之目標胺基酸殘基與能 夠與此等目標胺基酸之所選側鏈或N端或c端殘基反應之 有機衍生劑反應而經由直接共價鍵將升糖素類似物鍵聯至 結合物部分。類似物或結合物部分上之反應性基團包括 (例如）醛、胺基、酯、硫醇、α_ _乙醯基、順丁烯二醯亞 胺基或肼基。衍生劑包括（例如）順丁烯二醯亞胺基苯甲醯 基磺基丁二醯亞胺酯（經由半胱胺酸殘基結合）、Ν_羥基丁 二醯亞胺（經由離胺酸殘基）、戊二醛、丁二酸酐或此項技 術中已知之其他試劑。或者，結合物部分可經由諸如多醣 或多肽載體之中間載體間接鍵聯至類似物。多醣載體之實 例包括胺基聚葡萄糖。適合多肽載體之實例包括聚離胺 酸、聚麩胺酸、聚天冬胺酸、其共聚物，及此等胺基酸與. 其他胺基酸（例如絲胺酸）之混合聚合物，以使所得經負載 152868.doc • 88 · 201130503 載體具有所需溶解性質。 最通常使半胱胺醯基殘基與α_函基乙酸酯（及相應胺諸 如氣乙酸、氣乙醯胺）反應以得到羧甲基或羧醯胺基曱基 衍生物。半胱胺醯基殘基亦藉由與漠三I丙鲷、α_漠 (5-咪唑基）丙酸、氯乙醯磷酸、Ν_烷基順丁烯二醯亞胺、 3-硝基-2-吡啶基二硫化物、曱基2·吡啶基二硫化物、對氣 汞基苯甲酸酯、2-氣汞基-4-硝基苯酚或氯_7_硝基苯并_2_ 氧雜-1，3-二唑反應而衍生化。 組胺醯基殘基係藉由在ρΗ 5 5_7 〇下與焦碳酸二乙酯反 應而何生化，因為此試劑對組胺酿基側鏈具相對特異性。 對漠苯曱醯甲基演亦為適用；反應較佳在ρΗ6〇之 甲胂酸鋼中進行， 離月女醯基及胺基末端殘基係與丁二酸酐或其他㈣軒反 應。用此等wm行衍生化具有逆轉離㈣基殘基之電荷 的作用。用㈣生化含α•胺基之殘基之其他適合試劑包括 醯亞胺醋(諸如吡啶甲醯亞胺酸甲醋）、磷酸吡嗓醛、吡。多 醛、氯硼氫化物、三确基苯磺酸、〇-甲基異脲、24-戊二 酮，及與乙醛酸酯之轉胺酶催化反應。 精胺醯基殘基係藉由與一種或若干 世诠， 口、m、丹〒$ 盤、2,3-丁二酮、W環己二鲷及節滿三_)幻 而進行修飾。由於胍官能基具有高目此精胺酸… 應在驗性條件下進行。此外，此等_ ”離胺酸之基團以及精胺酸ε•胺基反庠。 可對路胺絲殘基進行Μ修飾，其中尤其關注藉㈣ 152868.doc -89. 201130503 芳族重氮化合物或四硝基曱烷反應而將光譜標記引入酪胺 醯基殘基中。最通常分別使用N-乙醯基咪唑及四硝基曱烷 來形成0-乙醯基酪胺醯基物質及3-硝基衍生物。 羧基側基（天冬胺醯基或麩胺醯基）藉由與碳化二亞胺（R-N=C=N-R，）反應而選擇性地修飾，其中R及R，為不同烷基， 諸如1 -環己基-3 - (2 -嗎淋基-4 -乙基）碳化二亞胺或1 ·乙基-3 _ (4-氮鏽-4,4-二甲基戊基）碳化二亞胺。此外，天冬胺醯基 及麩胺醯基殘基藉由與銨離子反應而轉化成天冬醯胺醯基 及麩醯胺醯基殘基。 其他修飾包括：脯胺酸及離胺酸之羥基化；絲胺醯基或 蘇胺醯基殘基之羥基之磷酸化；離胺酸、精胺酸及組胺酸 側鍵之α-胺基的曱基化（Τ· E. Creighton，Proteins: Structureand Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco，第79-86頁（1983));天冬醯胺或麵醯胺酸之 去醯胺化；N端胺之乙醯化；及/或C端羧酸基之醯胺化或 酯化。 另一類型之共價修飾涉及使醣苷化學或酶促偶合至類似 物。糖可連接至：（a)精胺酸及組胺酸；（b)游離羧基；（c) 游離硫氫基，諸如半胱胺酸之游離硫氫基；（d)游離羥基， 諸如絲胺酸、蘇胺酸或羥基脯胺酸之游離羥基；（e)芳族殘 基，諸如酪胺酸或色胺酸之芳族殘基；或（f)麩醯胺酸之醯 胺基。此等方法描述於1987年9月11日公開之w〇 87/05330 ;及 Aplin及 Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem·， 第 259-306頁（1981)中。 152868.doc -90· 201130503 在一些實施例中，升糖素類似物係經由升糖素類似物之 胺基酸之側鏈與異源部分之間的共價鍵結合至異源部分。 在一些實施例中，升糖素類似物係經由位置丨6、17、2 j、 24或29之胺基酸之側鏈、C端延長内之位置、或c端胺基 酸、或此等位置之組合結合至異源部分。在一些態樣中， 共價鍵聯至異源部分之胺基酸（例如，包含異源部分之胺 基酸）為Cys、Lys、〇rn、高CydAc-Phe，且胺基酸之側 φ 鏈係共價鍵結至異源部分。 在一些實施例中，結合物包含將升糖素類似物接合至異 源部分之連接子。在一些態樣中，連接子包含長度為工至 約60個原子、或1至30個原子或3〇個原子以上、2至5個原 子、2至10個原子、5至10個原子、或1〇至2〇個原子之鏈。 在一些實施例中，鏈原子均為碳原子.在一些實施例中， 連接子之主鏈中之鏈原子係選自由c、〇、s組成之 群。可根據預期溶解性（親水性）選擇鏈原子及連接子以提 鲁供更可溶之結合物。在一些實施例中，連接子提供由於酶 或其他催化劑或目標組織或器官或細胞中存在之水解條件 而進行裂解之官能基。在一些實施例中，連接子之長度足 夠長以降低位阻之電位，若連接子為共價鍵或肽鍵且結合 物為多狀’則整個結合物可為融合蛋白。肖等狀基連接子 可為任何長度《例示性連接子長度為約丨至“個胺基酸， ^度為5至50、3至5、5至1〇、5至15或1〇至3〇個胺基酸。 或者可藉由一般技術者已知之重組基因工程法製備該等融 合蛋白。 152868.doc -91 - 201130503 結合物：F c融合 如上文所述，在一些實施例中，類似物係結合（例如融 合）至免疫球蛋白或其部分（例如，可變區、CDR或Fc區）。 已知類型之免疫球蛋白（Ig)包括IgG、IgA、IgE、IgD或 IgM «Fc區為Ig重鏈之c端區，其負責與進行諸如再循環 (其導致半衰期延長）之活動之Fc受體結合、抗體依賴性細 胞介導細胞毒性（ADCC)及補體依賴性細胞毒性（CDC)。 舉例而言，根據一些定義，人類IgG重鏈Fc區自Cys226 伸展至重鏈之C端。人類IgGl之「鉸鏈區」一般自Glu216 延伸至Pro230(藉由比對半胱胺酸鍵結中所涉及之半胱胺 酸可將其他IgG同型物之鉸鏈區與IgGl序列進行比對）。 IgG之Fc區包括兩個恆定域CH2及CH3。人類IgG Fc區之 CH2域通常自胺基酸231延伸至胺基酸341。人類IgG Fc區 之CH3域通常自胺基酸342延伸至胺基酸447。提及免疫球 蛋白或免疫球蛋白片段或區域之胺基酸編號均係基於 Kabat等人，1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest，U.S. Department of Public Health，Bethesda，Md。 在一相關貫施例中，F c區可包含一或多個來自免疫球蛋白 重鏈之天然或經修飾恆定區（除CH1以外），例如，IgG及 IgA之CH2及CH3區，或IgE之CH3及CH4區。 適合之結合物部分包括包含FcRn結合位點之免疫球蛋白 序列之部分。FcRn(救助受體）負責使免疫球蛋白再循環且 使其回至血液循環中。已基於X射線結晶學（Burmeister等 人，1994，Nature 372:379)描述與FcRn受體結合之IgG之Fc 152868.doc 92· 201130503 部分的區域。Fc與FcRn之主要接觸面接近CH2域與CH3域 之接面。Fc-FcRn接觸點均在單一 Ig重鏈内。主要接觸位 點包括CH2域之胺基酸殘基248、250-257、272、285、 288、290-291、308-31 1及314，及CH3域之胺基酸殘基 385-387 、 428及433-436 ° 一些結合物部分可能或可能不包括FcyR結合位點。FcyR 負責ADCC及CDC。與FcyR直接接觸之Fc區内位置之實例 為胺基酸234-239(下端鉸鏈區）、胺基酸265-269(B/C環）、 胺基酸297-299(C'/E環）及胺基酸327-332(F/G)環 (Sondermann等人，Nature 406: 267-273, 2000) ° IgE之下端 鉸鏈區亦已涉及FcRI結合（Henry等人，Biochemistry 36, 15568-15578，1997)。涉及IgA受體結合之殘基描述於 Lewis 等人（J Immunol. 175:6694-701，2005)中。涉及 IgE 受 體結合之胺基酸殘基描述於Sayers等人（J Biol Chem. 279(34):35320-5, 2004)中。 可對免疫球蛋白之Fc區進行胺基酸修飾。該等可變Fc區 包含在Fc區之CH3域（殘基342-447)中之至少一個胺基酸修 飾及/或在Fc區之CH2域（殘基23 1-341)中之至少一個胺基酸 修飾。咸信賦予FcRn以增加之親和力的突變包括T256A、 T307A、E380A 及 N434A(Shields 等人，2001，J. Biol. Chem. 276:6591)。其他突變可減少Fc區與FcyRI、FcyRIIA、 FcyRIIB及/或FcyRIIIA之結合而不顯著降低對FcRn之親和 力。舉例而言，Fc區之位置297之Asn經Ala或另一胺基酸 取代移除高保守性N-糖基化位點且可導致免疫原性降低同 152868.doc -93· 201130503 時伴隨著Fc區之半衰期延長’以及與FcyR之結合減少 (Routledge等人，1995，Transplantation 60:847 ; Friend等 人，1999，Transplantation 68:1632; Shields等人，1995，J. Biol. Chem. 276:6591)。已對 IgGl 之位置 233-236 之胺基酸 進行修飾，其減少與FcyR之結合（Ward及Ghetie，1995, Therapeutic Immunology 2:77及 Armour 等人，1999, Eur. J. Immunol. 29:2613)。一些例示性胺基酸取代描述於美國專 利7,355,008及7,3 81，408中，該等專利各自以全文引用之方 式併入本文中。 結合物：親水性部分 本文中所述之升糖素類似物可進一步經修飾以改良其在 水溶液十在生理pH值下之溶解性及穩定性，同時保持相對 於天然升糖素之高生物活性。可在用於使蛋白質與活化聚 合物分子反應之任何適合條件下將諸如PEG基團之親水性 部分連接至類似物。可使用此項技術中已知之任何方式， 包括經由醯化、還原性烷基化、麥可加成（Michaei addition)、硫醇烷基化或其他化學選擇性結合/連接方法經 PEG部分上之反應性基團（例如，醛、胺基、酯、硫醇、心 鹵乙醯基、順丁烯二醯亞胺基或肼基）至目標化合物上之 反應性基團（例如，醛、胺基、酯、硫醇、α_齒乙醯基、 順丁烯二醯亞胺基或肼基）。可用於將水溶性聚合物鍵聯 至一或多種蛋白質之活化基團包括（不限於）砜、順丁烯二 醯亞胺、錢基、硫醇、三氟甲磺酸酯基、三氟乙磺酸酯 基、氮丙啶、環氧乙烷、5_吡啶基及α_函化醯基（例如，& 152868.doc •94· 201130503 碘乙酸、α-溴乙酸、α-氯乙酸）。若藉由還原性烷基化連接 至類似物，則所選聚合物應具有單一反應性醛以便控制聚 合度。參見例如Kinstler等人，di/v. Drwg. 54: 477-485 (2002) ; Roberts等人，j<iv. De/iver_y i?ev. 54: 459-476 (2002);及 Zalipsky 等人，dc/v. Z)rwg £)e//ver_y Λβν· 16: 157-182 (1995)。

在特定態樣中，具有硫醇之類似物之胺基酸殘基係經諸 如PEG之親水性部分修飾。在一些實施例中，硫醇係在麥 可加成反應中經順丁烯二醯亞胺活化之PEG修飾以產生包 含下文所示之硫醚鍵之聚乙二醇化類似物：

在/些實施例中，硫醇係在親核取代反應中經函乙醯基 活化之PEG修飾以產生包含下文所示之硫醚鍵之聚乙二醇 化類似物： 肽 適合之親水性部分包括聚乙二酵 ^ 并（PEG)、聚丙二醇、聚

氧乙基化多元醇（例如P0G)、聚氡乙A 乳 ％乙基化山梨糖醇、聚氧 乙基化葡萄糖、聚氧乙基化甘油(P〇G)、聚環氧烷、聚乙 二醇兩搭、乙二醇/丙二醇之共聚物、單甲氧基·聚乙二 醇、單-(C1-C10)烧氧基-聚乙二醇今瞿…， ^ 4早-(〇1-(：1〇)芳氧基-聚 乙二酵、羧曱基纖維素、聚縮醛、φ^ 1乙烯醇（PVA)、聚乙 152868.doc -95- 201130503 烯吡咯啶酮、聚-1，3_二氧雜環戊烷、聚·H6·三噁烷、乙 稀/順丁烯二酸酐共聚物、聚（β-胺基酸）（均聚物或無規共 聚物）、聚（Ν-乙烯吨咯啶酮）聚乙二醇、丙二醇均聚物 (PPG)及其他聚氧化烯、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、結 腸酸（colonic acid)或其他多醣聚合物、Fic〇u或聚葡萄糖 及其混合物。聚葡萄糖為主要由α1 _6鍵鍵聯之葡萄糖次單 元之多膽聚合物。聚葡萄糖可以多種分子量範圍獲得，例 如’約1 kD至約1〇〇 kD，或約5、10、15或20 kD至約20、 30、40、50、60、70、80或90 kD。涵蓋線性或分枝聚合 物。所得結合物製劑基本上可為單分散或多分散’且每個 類似物可具有約0.5、〇.7、1、1.2、1.5或2個聚合物部分。 在一些實施例中’升糖素類似物係經由升糖素類似物之 胺基酸之側鏈與親水性部分之間的共價鍵結合至該親水性 部为。在一些貫施例中’升糖素類似物係經由位置16、 17、21、24或29之胺基酸之側鍵、c端延長内之位置、或 C端胺基酸、或此等位置之組合結合至親水性部分。在一 些態樣中，共價鍵聯至親水性部分（例如，包含親水性部 分之胺基酸）之胺基酸為Cys、Lys、〇rn、高Cys或Ac·

Phe，且胺基酸之側鏈係共價鍵結至親水性部分（例如， PEG)。

結合物：rPEG 在一些實施例中，本發明之結合物包含與辅助類似物融 合之具有升糖素及/或GLP-1促效劑活性之類似物，其能夠 形成與化學PEG類似之延長構形（例如，重組ρΕ〇(ΓρΕ〇)分 152868.doc -96· 201130503 子），諸如國際專利申請公開案第WO 2009/023270號及美 國專利申請公開案第US 20080286808號中所述。在一些態 樣中，rPEG分子為包含一或多個甘胺酸、絲胺酸、麵胺 酸、天冬胺酸、丙胺酸或脯胺酸之多肽。在一些態樣中， rPEG為均聚物，例如，聚甘胺酸、聚絲胺酸、聚麵胺酸、 聚天冬胺酸、聚丙胺酸或聚脯胺酸。在其他實施例中， rPEG包含兩種類型之重複胺基酸，例如，聚（Gly-Ser)、聚 (Gly-Glu)、聚（Gly-Ala)、聚（Gly-Asp)、聚（Gly-Pro)、聚 (Ser-Glu)等。在一些態樣中，rPEG包含三種不同類型之胺 基酸，例如，聚（Gly-Ser-Glu)。在特定態樣中，rPEG增加 升糖素及/或GLP-1促效劑類似物之半衰期。在一些態樣 中，rPEG包含淨正電荷或淨負電荷。在一些態樣中， rPEG缺乏二級結構。在一些實施例中，rPEG之長度大於 或等於10個胺基酸且在一些實施例中長度為約40至約50個 胺基酸。在一些態樣中，輔助肽係經由肽鍵或蛋白酶裂解 位點與本發明類似物之N端或C端融合，或插入本發明類 似物之環中。在一些態樣中，rPEG包含親和力標籤或與大 於5 kDa之PEG鍵聯。在一些實施例中，rPEG賦予本發明 類似物以增加之流體動力學半徑、血清半衰期、蛋白酶抗 性或溶解性且在一些態樣中賦予類似物以降低之免疫原 性。 結合物：多聚體 本發明進一步提供本文所揭示類似物之多聚體或二聚 體，包括均-或雜-多聚體或均-或雜-二聚體。兩種或兩種 152868.doc -97- 201130503 以上類似物可使用熟習此項技術者已知之標準鍵聯劑及程 序鍵聯在一起。舉例而言’可經由使用雙官能硫醇交聯劑 及雙官能胺交聯劑在兩個肽之間形成二聚體，尤其對於已 經半胱胺酸、離胺酸、鳥胺酸、高半胱胺酸或乙醯基苯丙 胺酸殘基取代之類似物。二聚體可為均二聚體或者可為雜 一聚體。在某些實施例中，連接兩個（或兩個以上）類似物 之連接子為PEG ’例如，5 kDa PEG、20 kDa PEG。在一 些實施例中’連接子為二硫鍵。舉例而言，二聚體之各單 體可包含Cys殘基（例如，末端或内部位置之Cys)且各Cys 殘基之硫原子參與形成二硫鍵。在一些態樣中，單體係經 由末端胺基酸（例如，N端或C端），經由内部胺基酸，或經 由至少一個單體之末端胺基酸及至少另一單體之内部胺基 酸連接。在特定態樣中’單體並非經由N端胺基酸連接。 在一些態樣_，多聚體之單體係以各單體之C端胺基酸連 接在一起之「尾-尾」定向連接在一起。 醫藥組合物、用途及套組 Μ 在一些實施例中，升糖素類似物呈鹽形式，例如，醫藥 學上可接受之鹽。如本文中所用，術語「醫藥學上可接受 之鹽」係指保持母化合物之生物活性且並非在生物學上或 其他方面不合需要之化合物的鹽。該等鹽可藉由在類似物 之最終分離及純化期間就地製備，或藉由使游離鹼官能基 與適合之酸反應而分離製備。許多本文中所揭示之化合物 由於存在胺基及/或羧基或與其類似之基團而能夠形成酸 132868.doc -98· 201130503 式鹽及/或鹼式鹽。

醫藥學上可接受之酸加成鹽可由無機酸及有機酸製備。 代表性酸加成鹽包括（但不限於）乙酸鹽、己二酸鹽、海藻 酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯曱酸鹽、苯磺酸鹽、硫 酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、 甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、反丁烯二酸 鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2_羥基乙烷磺酸鹽（羥 乙基磺酸鹽）、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、曱烷磺酸鹽、於 鹼酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過 氧硫酸鹽、3-笨基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽 '丙酸 鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、麩胺酸 鹽、碳酸氫鹽、對曱苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。衍生自無機 酸之鹽包括鹽酸' 氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似 酸。衍生自有機酸之鹽包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙_ 酸、草酸、頻果酸、丙二酸、丁二酸、順丁烯二酸、反丁 烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲 院磺酸、乙烷磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及其類似酸。可 用於形成醫藥學上可接受之酸加成鹽之酸的實例包括（例 如）無機酸，例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸；及有機 酸，例如’草酸、順丁烯二酸、丁二酸及檸檬酸。 亦可在水楊酸源之最終分離及純化期間就地製備，或藉 由使含羧酸部分與適合之鹼（諸如醫藥學上可接受之金屬 陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽）或與氨或有機一 級、二級或三級胺反應來製備鹼加成鹽。醫藥學上可接受 152868.doc •99· 201130503 之鹽包括（但不限於）基於鹼金屬或鹼土金屬之陽離子，諸 如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及鋁鹽’及其類似鹽； 及無毒四級氨及胺陽離子，尤其包括銨、四甲基銨、四乙 基銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、三乙基銨、二乙基 銨及乙基銨。適於形成鹼加成鹽之其他代表性有機胺包括 (例如）乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪及其類似 胺。衍生自有機鹼之鹽包括（但不限於）一級、二級及三級 胺之鹽。 此外，鹼性含氮基團可經本發明之類似物四級銨化如 低碳烷基函化物，諸如甲基、乙基、丙基及丁基氣化物、 溴化物及碘化物；長鏈自化物，諸如癸基、月桂基十四 烷基及十八烷醯基氣化物、溴化物及碘化物；芳基烷基鹵 化物，如苄基及苯乙基溴化物及其他。藉此獲得水溶性或 油溶性或分散性產物。 調配物 根據一些實施例，提供一種醫藥組合物，其中該組合物 包含本發明之升糖素類似物或其醫藥學上可接受之鹽，及 醫藥學上可接受之載劑。醫藥組合物可包含任何醫藥學上 可接受之成分’包括例如酸化劑、添加劑、吸附劑、氣霧 劑推進劑（aerosol propellant)、空氣置換劑、烷基化劑、 防結塊劑、抗凝劑、抗微生物防腐劑、抗氧化劑、抗菌劑 (antiseptic)、基質、黏合劑、緩衝劑、螯合劑、塗佈劑、 著色劑、乾燥劑、清潔劑、稀釋劑、消毒劑 (disinfectant)、崩解劑、分散劑、溶解增強劑、染料、緩 152868.doc •100- 201130503 J乳化齊丨乳液穩定劑、填充劑、成膜劑、香味增強 劑、調味劑、流動增強劑、膠凝劑、成粒劑、保濕劑、潤 滑劑、黏膜黏著劑'軟膏基質、軟膏、油性媒劑、有機基 貝片刎基質、顏料、增塑劑、拋光劑、防腐劑、錯隔 劑、皮膚滲透劑、增溶劑、溶劑、穩定劑'栓劑基質、表 面活性劑、界面活性劑、懸浮劑、甜味劑、治療劑、增稠 劑、張力劑、毒性劑、增黏劑、吸水劑、水可混溶性共溶 劑、水軟化劑或濕潤劑。 在一些實施例中’醫藥組合物包含以下組分之任一者或 組合：阿拉伯膠、乙醯磺胺酸鉀、檸檬酸乙醯基三丁酯、 棒檬酸乙醯基三乙酯、瓊脂、白蛋白、酒精、脫水酒精、 •菱性酒精、稀釋酒精、油桐酸（aleuritic acid)、海蒸酸、 脂族聚酯、氧化鋁、氫氧化鋁、硬脂酸鋁、支鏈澱粉、α_ 直鏈澱粉、抗壞血酸、棕櫚酸抗壞血酸酯、阿斯巴甜糖 (aspartame)、抑菌注射用水、膨潤土、膨潤土岩漿、氣化 苯甲烴銨、苄索氣銨、苯曱酸、苄醇、笨曱酸苄酯、溴硝 丙二醇（bronopol)、丁基化經基甲氧苯、丁基化經基曱 苯、對羥基苯曱酸丁酯、對羥基苯曱酸丁酯鈉、海藻酸 鈣、抗壞血酸鈣、碳酸鈣、環己胺基磺酸鈣、無水磷酸氫 約、脫水填酸氫#5、鱗酸三妈、丙酸妈、石夕酸約、山梨酸 鈣、硬脂酸鈣、硫酸鈣、半水合硫酸鈣、芥花油、卡波姆 (carbomer)、二氧化碳、敌甲基纖維素約、竣甲基纖維素 納、β -胡蘿蔔素、角叉菜膠、蓖麻油、氫化蓖麻油、陽離 子型乳化蠟、乙酸纖維素、乙酸鄰苯二甲酸纖維素、乙基 152868.doc -101 - 201130503 纖維素、微晶纖維素、粉末狀纖維素、矽酸化微晶纖維 素、羧曱基纖維素鈉' 十六醇硬脂醇、溴棕三甲銨 (cetrimide)、十六醇、洗必泰（chlorhexidine)、氣丁醇、氣 曱酚、膽固醇、乙酸洗必泰、葡糖酸洗必泰、鹽酸洗必 泰、氣二氟乙烷（HCFC)、氣二氟曱烷、氯氟碳化物（CFC) 氯苯氧基乙醇、氣二甲苯酚、玉米糖漿固體、無水檸檬 酸、單水合檸檬酸、可可脂、著色劑、玉米油、棉籽油、 曱酚、間曱酚、鄰曱酚、對甲酚、交聯羧甲纖維素鈉、交 聯聚維酮、環己胺基磺酸、環糊精、葡萄糖結合劑、糊 精、右旋糖、無水右旋糖、二唑啶基脲、鄰苯二曱酸二丁 酯、癸二酸二丁醋、二乙醇胺、鄰苯二甲酸二乙酯、二氣 乙烧（HFC)、一甲基-β-環糊精、環糊精型化合物（諸如 Captisol®)、二甲醚、鄰苯二甲酸二甲酯、乙二胺四乙酸 二鉀、乙二胺四乙酸二鈉、磷酸氫二鈉、多庫酯鈣、多庫 酯鉀、多庫酯鈉、沒食子酸十二烷酯、溴化十二烷基三甲 知：、乙一胺四乙酸弼二鈉、依地酸（edtic acid)、葡甲胺 (eglumine)、乙醇、乙基纖維素、沒食子酸乙酯、月桂酸 乙酯、乙基麥芽酚、油酸乙酯、對羥基苯曱酸乙酯、對羥 基苯曱酸乙酯鉀、對羥基苯甲酸乙酯鈉、乙基香草精、果 糖、液體果糖、經研磨果糖、無熱原質果糖、粉末狀果 糖、反丁烯二酸、明膠、葡萄糖、液體葡萄糖、飽和植物 脂肪酸之甘油酯混合物、甘油、山蝓酸甘油酯、單油酸甘 油醋、單硬脂酸甘油冑、自乳化單硬脂酸甘油自旨、棕櫊基 硬脂酸甘油、甘胺酸、二醇、氫咬喃聚乙二醇驗 152868.doc -102- 201130503 (glycofurol)、瓜爾膠（guar gum)、七氟丙烷（Hfc)、溴化六 癸基三甲銨、高果糖糖漿、人類血清白蛋白、烴（Hc)、稀 鹽酸、II型氫化植物油、羥乙基纖維素、2_羥乙基環糊 精、羥丙基纖維素、低取代羥丙基纖維素、2_羥丙基·β_環 糊精、羥丙基曱基纖維素、鄰苯二曱酸羥丙基甲基纖維 素、咪唾啶基脲、靛卡紅（indigo carmine)、離子交換劑、 鐵氧化物、異丙醇、十四烷酸異丙酯、棕櫚酸異丙醋、等 φ 滲鹽水、高嶺土、乳酸、乳糖醇、乳糖、羊毛脂、羊毛脂 醇、無水羊毛脂、卵磷脂、矽酸鎂鋁、碳酸鎂、正碳酸 鎮、無水碳酸鎂、碳酸鎂氫氧化物、氫氧化鎂、月桂基硫 酸鎂、氧化鎂、矽酸鎂、硬脂酸鎂、三矽酸鎂、無水三石夕 酸鎮、蘋果酸、麥芽、麥芽糖醇、麥芽糖醇溶液、麥芽糊 精、麥芽酚、麥芽糖、甘露糠醇、中鏈三酸甘油酯、葡甲 胺、薄荷醇、甲基纖維素、甲基丙烯酸甲酯、油酸甲醋、 對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯曱酸曱酯鉀、對羥基苯〒酸 φ 甲酯鈉、微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉、礦物油、輕質礦 物油、礦物油及羊毛脂醇、油、橄欖油、單乙醇胺、蒙脫 石、沒食子酸辛酯、油酸、棕櫊酸、石蠟、花生油、石躐 油、石蠛油及羊毛脂醇、藥轴（pharmaceutical glaze)、 酚、液化酚、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯乙醇、乙酸笨 汞、蝴酸苯汞、罐酸苯采、泊拉可林（polacrilin)、泊拉可 林鉀、泊洛沙姆（poloxamer)、聚右旋糖、聚乙二醇 '聚氧 化乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚 甲基丙烯酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生 152868.doc -103- 201130503 物聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚 乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、海藻酸鉀、苯甲酸鉀、碳酸氫 鉀亞硫鲛氫鉀、氣化鉀、檸檬酸鉀、無水檸檬酸鉀、碌 酸氫鉀、偏亞硫酸氫鉀、磷酸二氫鉀、丙酸鉀、山梨酸 鉀、聚維酮、丙醇、丙酸、碳酸伸丙酯、丙二醇、海藻酸 丙二醇酯、沒食子酸丙酯、對羥基苯曱酸丙酯、對羥基苯 甲ι丙酯鉀、對羥基苯曱綾丙酯鈉、硫酸魚精蛋白、菜籽 油、林格氏溶液（Ringer，s s〇hti〇n)、糖精、糖精銨、糖精 鈣糖精鈉、紅花油、皂石 '血清蛋白、芝麻油、膠態二 氧化矽（colloidal silica/colloidal siHc〇n di〇xide)、海藻酸 鈉、抗壞血酸鈉、苯甲酸鈉、碳酸氫鈉、亞硫酸氫鈉、氯 化鈉、無水檸檬酸鈉、脫水檸檬酸鈉、氣化鈉、環己胺基 磺酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、十二烷基硫酸鈉、月桂基硫酸 鈉、偏亞硫酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸三 鈉、無水丙酸鈉、丙酸鈉、山梨酸鈉、乙醇酸澱粉鈉、硬 脂醯反丁烯二酸鈉、亞硫酸鈉、山梨酸、脫水山梨糖醇酯 (脫水山梨糖醇脂肪酸酯）、山梨糖醇、7〇%山梨糖醇溶 液、大豆油、錄躐、殿粉、玉米澱粉、馬鈴薯殿粉、預膠 凝化澱粉、可滅菌玉米澱粉、硬脂酸、純化硬脂酸、.硬脂 醇、蔗糖、糖、可壓性糖、糖粉（c〇nfecti〇ner，s sugar)、糠 球、轉化糖、SwgariW、日落黃（Sunset Yellow)FCF、合成 石蠛、滑石、酒石酸、酒石黃（tartrazine)、四氟乙烧 (HFC)、可可豆油、硫柳采（thimer〇sai)、二氧化鈦、α生育 酚、乙酸生育酚、α 丁二酸生育酚酯、β_生育酚、δ_生育 152868.doc •104- 201130503 酚γ-生育盼、黃蓍、三乙酸甘油醋、檸樣酸三丁醋、三 乙醇胺、摔檬酸三乙醋、三曱基環糊精、漠化三甲基四 癸基銨、參緩衝液（tris buffer)、乙二胺四乙酸三鈉、香草 精、I型風化植物油、水、軟水、硬水、無二氧化碳之 K 熱原貝水、注射用纟、無菌吸入用水、無菌注射用 水、無菌灌洗用水、：it、陰離子型乳化躐、巴西標摘蝶 (carnauba wax)、陽離子型乳化蠟、十六烷基酯蠟、微晶 • 蠟、非離子型乳化蠟、栓劑蠟、白蠟、黃蠟、白石蠟油、 羊毛脂、三仙膠、木糖醇、玉米蛋白、丙酸鋅、鋅鹽、硬 海敗铸，氙 Handbo〇k 〇f pharmaceuHcal Excipie奶第 3 版，A. H. Kibbe (Pharmaceutical Press, London，UK， 2000)(其係以全文引用之方式併入）中之任何賦形劑。

Remington’s Pharmaceutical Sciences， ％ \β 版，它· ％

Martin (Mack Publishing Co·，Easton, Pa·，1980)(其係以全 文引用之方式併入）揭示調配醫藥學上可接受之組合物中 # 所用之各種組分及其已知製備技術。涵蓋任何習知試劑在 醫藥組合物中之使用，但如不可與醫藥組合物相容之任何 習知試劑則屬於例外。補充活性成分亦可併入組合物中。 在一些實施例中，前述組分可以任何濃度存在於醫藥組 合物中，諸如至少A，其中A為0.0001〇/〇 w/v、〇 〇〇1〇/() w/v、0.01% w/v、0.1% w/v、1% w/v、2% w/v、5% w/v、 10% w/v、20% w/v、30% w/v、40% w/v、50% w/v、60% w/v、70% w/v、80% w/v 或 90% w/v。在一些實施例中，前 述組分可以任何濃度存在於醫藥組合物中，諸如至多B , 152868.doc -105- 201130503 其中 B為 90% w/v、8〇〇/。w/v、70% w/v、60% w/v、50% w/v 40w/v ' 30% w/v、20% w/v、10% w/v、5% w/v、 2% w/v、1% w/v、〇 p/〇 w/v、0.001% w/v或 0.0001%。在 其他實施例中’前述組分可以任何濃度範圍存在於醫藥組 合物中’諸如約A至約B。在一些實施例中，A為0.0001% 且B為90%。 醫藥組合物可經調配以達到生理上相容之1)11值。在一些 實施例中’視調配物及投藥途徑而定，醫藥組合物之pH值 可為至少5、至少5.5、至少6、至少6.5、至少7、至少 7.5、至少8、至少8.5、至少9、至少9.5、至少10或至少 10.5至且包括pH 11。在某些實施例中，醫藥組合物可包含 緩衝劑以達到生理上相容之pH值。緩衝劑可包括能夠在所 需pH值下緩衝之任何化合物，諸如，磷酸鹽緩衝液（例如 PBS)、三乙醇胺、Tris、二羥乙基甘胺酸（bicine)、 TAPS、二羥曱基甘胺酸（tricine)、HEpES、TES、M〇ps、 PIPES、二甲基胂酸鹽（cacodyiate)、MES及其他。在某些 實施例中，緩衝液之濃度為至少〇.5 mM、至少1 mM、至 少5 mM、至少10 mM '至少20 mM、至少30 mM、至少40 mM、至少50 mM、至少60 mM、至少70 mM、至少80 mM、至少90 mM、至少1〇〇 mM、至少12〇 mM、至少150 mM或至少200 mM»在一些實施例中，缓衝液之濃度為不 大於300 mM(例如，至多200 mM、至多1〇〇 mM、至多90 mM、至多80 mM、至多70 mM、至多60 mM、至多50 mM、至多40 mM、至多30 mM、至多20 mM、至多10 152868.doc •106· 201130503 mM、至多5 mM、至多1 mM)。 投藥途徑 以下關於投藥途徑之討論僅經提供以說明例示性實施例 且不應理解為以任何方式限制範疇。 適於經口投與之調配物可包括：（a)液體溶液，諸如有效 量之本發明類似物溶解於諸如水、鹽水或橙汁之稀釋劑 中，（b)膠囊、藥囊、錠劑、口含錠及糖衣錠，各含有預定 φ 量之固體或顆粒形式之活性成分；（c)散劑；（d)於適當液 體中之懸洋液；及（e)適合之乳液。液體調配物可包括諸如 水及酵（例如，乙醇、苄醇及聚乙二醇）之稀釋劑，其中添 加有或未添加醫藥學上可接受之界面活性劑。膠囊形式可 為含有例如界面活性劑、潤滑劑及惰性填充劑（諸如乳 糖、蔗糖、磷酸鈣及玉米澱粉）之普通硬殼或軟殼明膠類 型。錠劑形式可包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇、玉米澱粉、 馬鈴薯澱粉、海藻酸 '微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、瓜 • 爾膠、膠態二氧化矽、交聯羧曱纖維素鈉、滑石、硬脂酸 鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅 '硬脂酸、及其他賦形劑、著色 劑、稀釋劑、緩衝劑、崩解劑、濕潤劑（m〇istening agent)、防腐劑、調味劑及其他藥理學上相容之賦形劑中 之一或多者。除含有如此項技術中已知之該等賦形劑之 外，口含錠形式可包含於通常蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍之調 味劑中之本發明類似物，以及包含於諸如明膠與甘油、哎 蔗糖與阿拉伯膠之惰性基質中之本發明類似物的片劑、乳 液、凝膠及其類似物。 152868.doc -107- 201130503 單獨或組合其他適合組分之本發明類似物可經由肺部投 與傳遞且可製成待經由吸入投與之氣霧劑調配物。此等氣 霧劑調配物可置於諸如二氣二氟曱烷、丙烷、氮及其類似 物之可接受之加壓推進劑中。其亦可經調配成非加壓製劑 之醫藥劑’諸如於喷霧器或霧化器中。該等喷霧調配物亦 可用於喷霧黏膜。在一些實施例中，類似物經調配成粉末 摻合物或微粒或奈米粒子。此項技術中已知適合之肺部調 配物 ° 參見例如 Qian等人，Int J Pharm 366: 218-220 (2009) ’ Adjei 及 Garren，Pharmaceutical Research，7(6): 565-569 (1990) ; Kawashima等人，J Controlled Release 62(1 2). 279-287 (1999) ; Liu等人，Pharm Res 10(2): 228_ 232 (1993);國際專利申請公開案第w〇 2〇〇7/133747號及 第 WO 2007/141411 號。 適於非經腸投與之調配物包括水性及非水性等張無菌注 射+液，其可含有抗氧化劑 '緩衝劑、抑菌劑及使調配物 與預期接受者之血液等張之溶f;及水性及非水性無菌懸 洋液，其可包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑及防腐 齊J術π非經腸」意謂不經由消化道而藉由諸如皮下、 肌肉内、脊椎内或靜脈内之一些其他途徑。本發明之類似 物：：醫藥載劑中與生理學上可接受之稀釋劑一起投與， 該醫藥載劑諸如無菌液體或液體混合物，包括水、鹽水、 右旋糖水,谷液及相關糖溶液、醇（諸如乙醇或十六醇）、二 醇（諸如丙—醇或聚乙二醇）、二甲亞颯、甘油、縮嗣（諸如 2’2·—甲基-153-二氧雜環戊烷·4_甲醇）、醚、聚乙二醇 152868.doc 201130503 :〇、:由、脂肪駿、脂肪酸酷或甘油醋、或乙酿化脂肪酸 制？0 ’其中添加有或未添加醫藥學上可接受之界面活性 諸如4或清潔劑）' 懸浮劑（諸如果膠）、卡波姆、甲基 纖維素1丙基甲基纖維素賴甲基纖維素、或乳化劑及 其他醫藥佐劑。 可用於非經腸調配物中之油包括石油、動物油、植物油 或合成油。油之特定實例包括花生油、大豆油、芝麻油、 棉籽油玉米/由、橄欖油、石蠟油及礦物油。適用於非經 腸調配物中之脂肪酸包括油酸、硬脂酸及異硬脂酸：油酸 乙醋及十四烷酸異丙醋為適合之脂肪酸醋之實例。 適用於非經腸調配物中之皂包括脂肪驗金屬、敍及四乙 醇胺瓜’且適合之清潔劑包括：⑷陽離子型清潔劑，諸 如，_化二甲基二烷基銨及齒化烷基吡錠；（b)陰離子型清 冰，諸如，烷基、芳基及烯烴磺酸鹽、烷基、烯烴、醚 及單甘油酯硫酸鹽及磺基丁二酸鹽；（c)非離子型清潔劑， 諸如，舳肪胺氧化物、脂肪酸烷醇醯胺，及聚氧乙烯/聚 丙烯共聚物；⑷兩性清潔劑，諸如，烷基·卜胺基丙酸 鹽，及2-烷基-咪唑啉四級銨鹽；及（e)其混合物。 非經腸調配物通常將含有約〇 5重量％至約25重量％之溶 液形式之本發明類似物。可使用防腐劑及緩衝劑。為了最 小化或消除注射部位之刺激，該等組合物可含有一或多種 非離子型界面活性劑，其具有約12至約17之親水_親脂平 衡（HLB)。δ亥專调配物中界面活性劑之量通常將在約$重量 %至約15重量％之範圍内。適合之界面活性劑包括聚乙二 152868.doc -109· 201130503 醇脫水山梨糖醇脂肪酸酯（諸如脫水山梨糖醇單油酸醋）及 環氧乙烷與藉由環氧丙烷與丙二醇縮合形成之疏水性基質 的高分子量加合物。非經腸調配物可呈現於單位劑量戍多 劑量密封容器（諸如安瓶及小觀）中’且可儲存於冷康乾燥 (/東乾）條件下’僅需要在即將使用之前添加例如注射用水 之無菌液體賦形劑。可自先前所述種類之無菌散劑、顆粒 及錠劑製備臨時注射溶液及懸浮液。 可注射調配物係根據本發明。一般技術者熟知用於可注 射組合物之有效醫藥載劑之要求（參見例如 and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Company, Philadelphia, PA，Banker 及 Chalmers 編，第 238-250 頁 (\9名2)，反 ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toisse\ 第 4版，第 622-630頁（1986))» ’ 另外，本發明之類似物可藉由與諸如乳化基質或水溶性 基質之多種基質混合而製成用於經直腸投與之栓劑。適於 經陰道投與之調配物可以子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊 劑、發泡體或喷霧配方形式呈現，除了含有活性成分以 外’亦含有如此項技術中已知適當之該等載劑。 熟習此項技術者應瞭解，除了上述醫藥組合物以外，本 發明之類似物亦可經調配成包涵複合物，諸如環糊精包涵 複合物，或脂質體。 劑量 咸信本發明之類似物適用於治療升糖素受體促效、 1受體促效或升糖素受體/GLPd受體共促效起作用之疾病 152868.doc •110· 201130503 或醤干病狀之方法中。就本發明 ,v . 乃又目的而言，所投與本發 月類似物之量或劑量應足以在 ,,φ ^ y 砰間範圍内在個體或動 物中實現例如治療或預防反應。 > Λ & 芊例而吕，本發明類似物 I〜才又樂時起在約1至4分鐘、1至4小時或1至4週或 4週以上（例如，5至20週哎20调w u、 ^ 0心上）之時期以以刺激 cAMP自如本文中所述之 ^ ^ ^ ^ Θ 或足以降低哺乳動物 之血糖3里、脂肪含量、食物攝入 體重。在某些實施

例中，時期可能甚至更長。應依據特定本發明類似物之功 =動物(例如，人類）之狀況，以及待治療動物（例如，人 類）之體重來確定劑量。 此項技術中已知用於確定投與劑量之許多衫。就本文 =目^言，可使用—較來確定待投與至哺乳動物之 起始劑里，該檢定包含在向喷乳動物（該哺乳動物所屬之 =組哺礼動物各自經給與不同劑量之類似物）投與既定劑 量之本發明類似物之後比較血糖含量降低之程度。可藉由 此項技術中已知之方法(包括例如本文實例6中所述之 檢定投與特定劑量後血糖含量降低之程度。 亦將藉由投與特定本發明類似物可能伴隨產生之任何不

良副作用的存在、性暂β P Α I Μ在性質及私度來確定本發明類似物之劑 量。通常，主治醫師將考慮到諸如年齡、體重、一般健 康飲艮、性別、待投與之本發明類似物、投藥途徑及待 治療病狀之嚴重程度之多種因素，來決定用於治療各個別 患者之本發明類似物之劑量。作為實例且並不意欲限制本 發明，本發明類似物之劑量可Μ天每公斤待治療個體之 I52868.doc 201130503 體重約0·0001 g至約1 g，每天每公斤體重約o.oooi g至約 0.001 g ’或每天每公斤體重約〇 01 mg至約1 g。 在一些實施例中，醫藥組合物包含適於投與至患者之純 度級之任何本文令揭示之類似物。在一些實施例中，類似 物具有至少約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約 95%、約96%、約97%、約98%或約99%之純度級，及醫藥 學上可接受之稀釋劑、載劑或賦形劑。在一些態樣中，醫 藥組合物包含濃度為至少A之本發明類似物，其中a為約 0.001 mg/ml、約 〇·〇ι mg/ml、0 約 1 mg/ml、約 〇 5 mg/ml、約 1 mg/mi、約 2 mg/mi、約 3 mg/ml、約 4 、 約 5 mg/ml、約 6 mg/ml、約 7 mg/ml、約 8 mg/ml、約 9 mg/ml、約 1〇 mg/ml、約 η mg/ml、約 12 mg/ml、約 13 mg/ml、約 14 mg/ml、約 15 mg/ml、約 16 mg/ml、約 17 mg/ml、約 18 mg/mi、約 mg/ml、約 20 mg/ml、約 21 mg/ml、約 22 mg/ml、約 23 mg/ml、約 24 mg/ml、約 25 mg/ml或25 mg/ml以上。在一些實施例中，醫藥組合物包 含濃度為至多B之類似物，其中b為約30 mg/ml、約25 mg/ml、約 24 mg/ml、約 23、mg/ml、約 22 mg/ml、約 21 mg/ml、約 20 mg/ml、約 19 mg/ml、約 18 mg/ml、約 17 mg/ml、約 16 mg/ml、約 15 mg/ml、約 14 mg/ml、約 13 mg/ml、約 12 mg/ml、約 11 mg/ml、約 1〇 mg/mi、約 9 mg/m卜約 8 mg/ml、約 7 mg/m卜約 6 mg/m卜約 5 mg/ml、 約 4 mg/ml、約 3 mg/ml、約 2 mg/ml、約 1 mg/ml 或約 o.i

mg/ml。在一些實施例中，組合物可含有濃度範圍為八至B 152868.doc 112 201130503 mg/ml(例如，約〇 〇〇1 mg/mi至約3〇 〇 mg/n^)之類似物。 目標形式 一般技術者將容易地瞭解，本發明之類似物可以任何數 目之方式經修飾，以使得本發明類似物之治療或預防功效 經由修飾增加。舉例而言，本發明類似物可直接或間接地 經由連接子結合至目標部分。此項技術中已知將例如本文 中所述之升糖素類似物之化合物結合至目標部分之操作。 •參見例如 Wadhwa等人，7brg扣叹，3, 111-127 (1995) 及美國專利第5,087,616號。如本文中所用，術語「目標部 刀」係指特異性識別且結合至細胞表面受體以使得目標部 刀將本明類似物之傳遞指向表面上存在受體（升糖素受 體 〇 L Ρ 1又體）表現之細胞群體的任何分子或試劑。目標 部分包括（但不限於）結合至細胞表面受體（例如，上皮生長 因子受體（EGFR)、Τ細胞受體（TCr)、β細胞受體（BCR)、 CD28、血小板衍生生長因子受體（pDGF)、菸鹼乙醯基膽 • 鹼受體（nAChR)等）之抗體或其片段、肽、激素、生長因 子、細胞因子，及任何其他天然或非天然配位體。如本文 中所用，「連接子」為將兩個獨立實體彼此結合在一起之 鍵、分子或分子之基團《連接子可向兩個實體提供最佳間 隔或可進一步供應允許兩個實體彼此分離之不穩定鍵聯。 不穩定鍵聯包括光可裂解基團、酸不穩定部分、鹼不穩定 部分及酶可裂解基團。在一些實施例中，術語「連接子」 係指橋接本發明類似物與目標部分之任何試劑或分子。一 般技術者認識到本發明類似物上之位點（其對於本發明類 152868.doc 201130503 似物之功能並非必需的）為連接連接子及/或目標部分之理 想位點’其限制條件為連接子及/或目標部分在連接至本 發明類似物之後不會干擾本發明類似物之功能，亦即，刺 激c AMP自細胞中分泌以治療糖尿病或肥胖症之能力。 控制釋放調配物 或者’本文中所述之升糖素類似物可經改質成儲槽形 式’以使得本發明類似物釋放入經投與身體内之方式係關 於在體内之時間及位置受控制（參見例如美國專利第 4,450，150號）。本發明類似物之儲槽形式可為例如包含本 發明類似物及多孔或無孔材料（諸如聚合物）之可植入組合 物’其中本發明類似物係由該材料囊封或在整個材料内擴 散及/或無孔材料之降解。隨後將儲槽植入身體内所需位 置且本發明類似物係以預定速率自植入物中釋放。 在某些態樣中，醫藥組合物係經改質以具有任何類型之 活體内釋放概況。在一些態樣中，醫藥組合物為立即釋 放、控制釋放、持續釋放、延長釋放、延遲釋放或兩相釋 放調配物。此項技術中已知調配肽以進行控制釋放之方 法。參見例如Qian等人，户/zarw 374: 46-52 (2009)及國際 專利申請公開案第WO 2008/130158號；第W〇 2004/033036 號；第 W0 2〇〇〇/〇32218 號；及第 w〇 1999/040942號》 本發明之組合物可進一步包括例如微胞或脂質體，或一 些其他囊封形式，或可以延長釋放形式投與以提供長時期 之儲存及/或傳遞作用。可根據任何方案投與所揭示之醫 152868.doc 114 201130503 藥調配物，包括例如每日（每日1次、每日2次、每日3次、 每曰4次、每曰5次、每曰6次）、每兩曰、每三曰、每四 曰、每五日、每六日、每週、每兩週、每三週、每月或每 兩月。 技合 本文中所述之升糖素類似物可單獨或組合其他治療劑投 與，其旨在治療或預防本文中所述之任何疾病或醫學病 狀。舉例而言，本文中所述之升糖素類似物可與抗糖尿病 或抗肥胖症藥劑（同時或依序）共同投與。此項技術中已知 或正在研究之抗糖尿病藥劑包括胰島素、瘦素（leptin)、肽 YY(PYY)、膜腺肽（PP)、纖維母細胞生長因子 21(FGF21)、Υ2Υ4受體促效劑；磺醯脲，諸如曱苯磺丁脲 (tolbutamide)(山地酶（Orinase))、乙醯苯續醯環己腺 (acetohexamide)(戴美樂（Dymelor))、妥拉確腺 (tolazamide)(曱續氮卓脲（Tolinase))、氯續丙腺 (chlorpropamide)(特泌膜（Diabinese))、格列 °比嗪 (glipizide)(瑞易寧（Glucotrol))、格列本腺（glyburide)(達安 療（Diabeta)、優降糖（Micronase)、格列納斯（Glynase))、 格列美脲（glimepiride)(亞莫利（Amaryl))，或格列齊特 (gliclazide)(達美康（Diamicron));美格列奈（meglitinide)， 諸如諾和隆（repaglinide)(普瑞丁（Prandin))或那格列奈 (nateglinide)(唐力（Starlix));雙胍，諸如二曱雙胍 (metformin)(庫魯化（Glucophage))或苯乙雙胍 (phenformin)； 噻唑咬二酮，諸如羅格列酮 152868.doc •115- 201130503 (rosiglitazone)(梵帝雅（Avandia)) 、 °比格列酮 (pioglitazone)(愛妥糖（Actos))， 或曲格列酮 (troglitazone)(瑞如林（Rezulin))，或其他ΡΡΑΙΙγ抑制劑；抑 制碳水化合物消化之α葡糖苷酶抑制劑，諸如米格列醇 (miglitol)(格利塞（Glyset))、醣祿（acarbose)(普利科斯 (Precose)/格魯科貝（Glucobay));艾塞那肽（exenatide)(百 泌達（Byetta))或普蘭林肽（pramlintide);二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制劑，諸如維格列汀（vildagliptin)或西他列ί丁 (sitagliptin) ; SGLT(鈉依賴性葡萄糖轉運體1)抑制劑；葡 萄糖激酶活化劑（GKA);升糖素受體拮抗劑（GRA);或FBP 酶（果糖1，6-二磷酸酶）抑制劑。 此項技術中已知或正在研究之抗肥胖症藥劑包括食慾抑 制劑，包括苯乙胺型刺激劑、苯丁胺（phentermine)(視情況 與苯氟拉明（fenfluramine)或右芬氟拉明（dexfenfluramine) 一起）、安非拉酮（diethylpropion)(Tenuate®)、苯甲曲嗓 (phendimetrazine)(Prelu-2® 、 Bontril®)、苄非他明 (benzphetamine)(Didrex®) 、諾 美婷 (sibutramine)(Meridia® 、 Reductil®);利莫那班 (rimonabant)(Acomplia®)、其他類大麻紛受體括抗劑；調 酸素；IL西汀鹽酸鹽（fluoxetine hydrochloride)(百憂解 (Prozac)) ; Qnexa(托 °比 S旨（topiramate)及芬特明 (phentermine))、Excalia(丁 胺苯丙 _ (bupropion)& °坐尼沙 胺（zonisamide))或Contrave( 丁胺苯丙酮及納曲酮 (naltrexone));或脂肪酶抑制劑，類似於XENICAL(羅氏鮮 152868.doc -116- 201130503 (Orlistat))或新利司他（Cetilistat)(亦稱 ATL 962)，或阶 389-255 » 在些貫施例中’本文中所述之肽係與用於治療非酒精 性脂肪肝疾病或NASH之藥劑一起共同投與。用於治療非 酒精性脂肪肝疾病之藥劑包括熊去氧膽酸（a k a、阿克替 南（Actigall)、烏爾索（URS0)及熊二醇（Ursodiol))、二甲雙 脈（庫魯化）、羅格列酮（梵帝雅）、氣貝丁酯（cl〇fibrate)、 φ 吉非羅齊（Gemfibrozil)、多黏菌素B(P〇lymixin B)及甜菜 驗（Betaine)。 在一些實施例中，本文令所述之肽係與用於治療神經退 化f生疾病（例如’帕金森氏病（Parkinson’s Disease))之藥劑 一起共同投與《抗帕金森氏病藥劑此外在此項技術中已知 且包括（但不限於）左旋多巴（lev〇d〇pa)、卡比多巴 (carbidopa)、抗膽驗劑（anticholinergics) '溴麥角環狀 (bromocriptine)、普拉克索（pramipex〇ie)及羅匹尼洛 鲁 （ropinirole)、金剛胺（amantadine)，及雷沙吉蘭 (rasagiline)。 繁於前述，本發明進一步提供另外包含一種此等額外治 療劑之醫藥組合物及套組。該額外治療劑可與本發明類似 物同時或依序投與。在一些態樣中，類似物係在額外治療 劑之前投與’而在其他態樣中，類似物係在額外治療劑之 後投與。 用途 基於本文中第一次提供之資訊，涵蓋本文中所述之升糖 152868.doc -117· 201130503 素類似物及相關醫藥組合物可用於治療疾病或醫學病狀， 其中例如缺乏料糖素受體、對glim受體或對兩種受體 14為》亥疾病或醫學病狀之發作及/或進展之因素。因 此、，本發明提供-種治療或預防患者之疾病或醫學病狀之 方法’其中該疾病或醫學病狀為缺乏⑽]受體活化及/或 升糖素受體活化與疾病或醫學病狀之發作及/或進展相關 的疾病或醫學病狀。該方法包含向該患者提供可有效治療 或預防該疾病或醫學病狀之量的根據任何本文中所述的類 似物。 在一些實施例中，疾病或醫學.病狀為代謝症候群。代謝 症候群（亦稱作代謝症候群X、胰島素抗性症候群或雷文氏 症候群（Reaven’s syndrome))為一種影響5千萬以上美國人 之病症。代謝症候群之特徵通常在於群集出現至少三種或 二種以上之以下風險因子：〇)腹部肥胖（腹部中及周圍過 多脂肪組織）；（2)致動脈粥樣硬化血脂異常（包括高三酸甘 油酯、低HDL膽固醇及高LDL膽固醇之血脂異常，其增強 斑塊在動脈壁中之積聚）；（3)高血壓；（4)胰島素抗性或葡 萄糖不耐受；（5)易栓塞狀態（例如，血液中之高血纖維蛋 白原或血纖維蛋白溶酶原活化劑抑制劑_1};及（6)促發炎 狀態（例如，血液中C_反應性蛋白升高）。其他風險因子可 包括老齡化、激素不平衡及遺傳傾向性。 代謝症候群與冠狀動脈心臟病及與血管斑塊積聚相關之 其他病症（諸如中風及周邊血管疾病（稱作動脈粥樣硬化心 血管疾病（ASCVD)))之風險增加有關。患有代謝症候群之 152868.doc 201130503 患者可自早期階段之胰島素抗性狀態進展至發育完全的Η 型糖尿病，ASCVD之風險進一步增加。不意欲受任何特定 理論限制’胰島素抗性、代謝症候群與血管疾病之間的關 係可涉及一或多個並行致病機制’包括胰島素刺激之血管 擴張受損、由於氧化應激增強而致之胰島素抗性相關之 NO可用性降低，及脂肪細胞衍生之激素（諸如脂聯素 (adiponectin))異常（Lteif及 Mather，Can. J. Cardiol. 20 (增 刊 B):66B-76B (2004))。 根據2001年美國國家膽固醇教育計劃成人治療指引 (2001 National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel)(ATP III)，同一個體中出現任何三種以下 特性滿足代謝症候群之準則：（a)腹部肥胖（男性腰圍大於 102 cm且女性腰圍大於88 cm) ; (b)血清三酸甘油酯（15〇 mg/dl或150 mg/dl以上）；（C)HDL膽固醇（男性為40 mg/dl或 40 mg/dl以下且女性為50 mg/dl或50 mg/dl以下）；（d)血壓 (130/85 或 130/85 以上）；及（e)空腹血糖（no mg/dl 或 110 mg/dl以上）。根據世界衛生組織（w〇rld Heahh Organization，WHO)，具有至少兩個以下準則之具有高騰 島素含量（單獨之高空腹血糖或高餐後葡萄糖）之個體滿足 代謝症候群之準則：（a)腹部肥胖（腰臀比大於〇.9，身體質 量指數為至少30 kg/m2，或腰部量測結果大於37吋）；（b) 展示三酸甘油酯含量為至少15〇 mg/dl或HDL膽固醇低於35 mg/dl之膽固醇指引；（c)血壓為丨4〇/9〇或140/90以上，或正 在治療咼血·壓。（Mathur，Ruchi， 「Metabolic Syndrome」， 152868.doc 119 201130503

Shiel，Jr” William C.編，MedicineNet c〇m，2〇〇9 年 5月“ 曰）° 就本文中之目的而言，若個體滿足2〇〇1年美國國家膽固 醇教育計劃成人治療指引或WH〇所提出之準則之任一或兩 個準則，則該個體視作罹患代謝症候群。 不受任何特定理論限制，本文中所述之肽可用於治療代 謝症候群。因此，本發明提供一種預防或治療個體之代謝 症候群或減少個體之一個、兩個、三個或三個以上其風險 因子的方法，其包含向該個體提供可有效預防或治療代謝 症候群或其風險因子之量的本文中所述之類似物。 在二實施例中，該方法治療高血糖醫學病狀。在某些 態樣中，該高血糖醫學病狀為糖尿病、j型糖尿病、π型糖 尿病或妊娠性糖尿病（胰島素依賴性或非胰島素依賴性）。 在一些態樣中，該方法藉由減少糖尿病之一或多個併發症 (包括月病變、視網膜病變及血管疾病）來治療高血糖醫學 病狀》 在一些態樣中，疾病或醫學病狀為肥胖症。在一些態樣 中’肥胖症為藥物誘發性肥胖症。在一些態樣中，該方法 藉由預防或降低患者之體重增力〇或增力〇患者之體重損失來 :療肥胖症。在-些態樣中，該方法藉由降低食您、減少 艮物攝入、降低患者之脂肪含量或降低食物穿過胃腸系統 之移動速率來治療肥胖症。 ,因為肥胖症與其他疾病之發作或進展有關，所以治療肥 胖症之方法進-步適用》減少與肥胖症有關之併發症(包 152868.doc 201130503 括血管疾病（冠狀動脈疾病、中風、周邊血管疾病、缺血 2灌注等）、高血壓、11型糖尿病發作、高脂質血症及肌肉 骨骼疾病）之方法中。本發明因此提供治療或預防與此等 肥胖症有關之併發症之方法。

在一些實施例中，疾病或醫學病狀為非酒精性脂肪肝疾 病（NAFLD)IAFLD係指多種肝臟疾病，其中包括單純脂 肪肝（脂肪變性）、非酒精性脂肝炎（NASH)及肝硬化（肝臟 φ 的不可逆之晚期瘢疤形成）。所有階段之NAFLD共同具有 脂肪（脂肪浸潤）在肝臟細胞（肝細胞）中積聚。單純脂肪肝 為特定類型之脂肪（三酸甘油酯）在肝臟細胞中異常積聚而 無發炎或瘢疤形成。在NASH中，脂肪積聚與肝臟之發炎 (肝炎）及瘢疤形成（纖維化）之不同程度有關。發炎性細胞 可破壞肝臟細胞（肝細胞壞死）。在術語「脂肝炎」及「脂 肪壞死」中’脂肪係指脂肪浸濶，肝炎係指肝臟發炎，且 壞死係指肝臟細胞破壞。NASH最終可導致肝臟瘢疤形成 φ (纖維化）及隨後不可逆之晚期瘢疤形成（肝硬化）。由NASH 造成之肝硬化為NAFLD範圍之最終且最嚴重之階段。 (Mendler, Michel, 「Fatty Liver: Nonalcoholic Fatty Fatty Liver Disease (NAFLD) and Nonalcoholic Steatohepatitis (NASH)」，Schoenfield，Leslie J.編，MedicineNet.com， 2005年8月29曰）。 酒精性肝臟疾病或酒精誘發性肝臟疾病涵蓋與酒精過多 消耗相關或由酒精過多消耗造成之三種病理學不同之肝臟 疾病：脂肪肝（脂肪變性）、慢性或急性肝炎，及肝硬化。 152868.doc • 121 - 201130503 酒精性肝炎可包括：輕度肝炎，其中異常實驗室測試為疾 病之唯一指示；及重度肝臟功能障礙，其具有諸如黃疸 (由膽紅素滯留造成之皮膚發黃）、肝性腦病（由肝臟衰竭造 成之神經學功能障礙）、腹水（腹部中液體積聚）、食管靜脈 曲張出血（食管中靜脈曲張）、異常凝血及昏迷之併發症。 在組織學上’酒精性肝炎具有肝細胞飛速變性、嗜中性白 ▲球發炎及有時麥洛利氏小體（Mallory body)(細胞中間物 絲蛋白之異常聚集）之特徵性外觀。肝硬化在解剖學上之 特徵在於肝臟中廣泛存在之節結以及纖維化。（w〇rman， Howard J., 「Alcoholic Liver Disease」，Columbia University Medical Center網站）。 不受任何特定理論限制，本文中所述之類似物可用於治 療酒精性肝臟疾病、NAFLD或其任何階段，包括例如脂肪 變性、脂肝炎、肝炎、肝臟發炎、NASH、肝硬化，或其 併發症。因此’本發明提供一種預防或治療個體之酒精性 肝臟疾病、NAFLD或其任何階段之方法，其包含向個體提 供可有效預防或治療酒精性肝臟疾病、NAFLD或其任何階 多又之量的本文中所述之類似物。該等治療方法包括降低以 下一者、兩者、三者或三者以上：肝臟脂肪含量、肝硬化 之發病率或進展、肝細胞癌之發病率、發炎之徵兆（例 如’肝酶（例如，天冬胺酸胺基轉移酶AST及/或丙胺酸胺 基轉移酶ALT，或LDH)含量異常、血清鐵蛋白升高、血清 膽紅素升高），及/或纖維化之徵兆（例如，TGF-β含量升 高）。在較佳實施例中，該等肽係用於治療已進展至超過 I52868.doc -122- 201130503 單純脂肪肝（脂肪變性）且展現發炎或肝炎之徵兆的患者。 該等方法可導致例如AST及/或ALT含量降低。 GLP-1及腸促胰島素類似物_4已展示具有一些神經保護 作用。本發明亦提供本文令所述之升糖素類似物在治療神 經退化性疾病中之用途’包括（但不限於）：阿茲海默氏病 (Alzheimer’s disease)、帕金森氏病、多發性硬化、肌萎縮 性側索硬化、其他髓鞘脫失相關病症、老年性癡呆、皮質 φ 下癌呆、動脈硬化性癡呆、AIDS相關性癡呆或其他癡 呆、中枢神經系統癌症、創傷性腦損傷、脊髓損傷、中風 或大腦局部缺血、腦血管炎、癲癇症、亨廷頓氏病 (Huntington’s disease)、妥瑞症候群（T〇ureUe，s syndrome)格-巴一氏症候群（Guillain Barre syndrome)、 威爾遜病（Wilson disease)、皮克氏病（Pick，s disease)、神 經發炎性病症、病毒、真菌或細菌源腦炎、腦脊髓炎或腦 膜炎，或其他中樞神經系統感染、朊病毒疾病、小腦共濟 籲失調、小腦變性、脊髓小腦變性症候群、弗里德賴希共濟 失調（Friedreichs ataxia)、共濟失調毛細管擴張、脊髓性肌 萎縮進行性核上麻痹、肌張力障礙、肌肉痙攣狀態、顫 動、色素性視網膜炎、黑質退化症、線粒體腦肌病、神經 !·生類墩月曰褐質病、肝性腦病、腎性腦病、代謝性腦病、毒 素誘發性腦病，及輻射誘發性腦損傷。 在一些實施例中，疾病或醫學病狀為低血糖症。在一些 實加例中，患者為糖尿病患者且低血糖症係由投與騰島素 誘發。在特定態樣中，該方法包含提供本發明類似物與騰 152868.doc -123- 201130503 島素以便類似物緩衝胰島素之快速投與之低血糖作用。 在一些實施例中’升糖素類似物係結合營養素之非經腸 投與用於醫院環境中之非糖尿病患者，例如，用於接收非 經腸營養或完全非經腸營養之患者。非限制性實例包括手 術患者、昏迷患者、患有消化道疾病或具有非功能性胃腸 道（例如由於手術移除、堵塞或受損吸收能力、克隆氏病 (Crohn、disease)、潰瘍性結腸炎、胃腸道阻塞、胃腸道 瘤、急性姨腺炎、腸缺血、重大胃腸手術、某些先天性胃 腸道異常、長期腹；寫或由手術造成之短腸症候群）之串 者、休克患者，且經歷癒合過程之患者通常接受碳水化合 物以及脂質、電解質、礦物質、維生素及胺基酸之各種組 合的非經腸投與。升糖素類似物及非經腸營養組合物可同 時、在不同時刻、彼此先後地投與，其限制條件為在消化 非經腸營養組合物時升糖素類似物發揮所需生物作用。舉 例而言，非經腸營養可每天1次、2次或3次投與，而升糖 素類似物係每隔一天一次、每週三次、每週兩次、每週一 次、每2週一次、每3週一次或每月一次投與。 如本文中所用，術語「治療」及「預防」以及自其演變 之詞語未必暗示1 〇〇%或完全治療或預防。實際上存在 般技術者5¾為具有潛在益處或治療作用之不同程度之户 療或預防。在此方面’本發明之方法可提供對哺乳動物之 疾病或醫學病狀之任何量之任何程度的治療或預防。此 外，該方法所提供之治療或預防可包括對疾病或醫學病狀 之一或多種病狀或症狀的治療或預防。舉例而言，對於治 152868.doc -124· 201130503 療肥胖症之方法，在一些實施例中，該方法在患者中實現 艮物攝入或脂肪含量之降低。此外’就本文中之目的而 σ 預防」可涵蓋延遲疾病或其症狀或病狀之發作。 對於上述治療方法，患者為任何宿主。在一些實施例 中’佰主為哺乳動物。如本文中所用’術語「哺乳動物」 係私哺乳綱之任何脊椎動物’包括（但不限於）單孔類動 物、有袋動物及有胎盤動物中任一者。在一些實施例中， φ 哺礼動物為嚙齒目（order Rodentia)哺乳動物（諸如小鼠及 倉鼠）及兔形目（order Carnivora)哺乳動物（諸如兔）之一。 在某些實施例中，哺乳動物係來自食肉目（〇rder Carnivora)，包括貓科動物（貓）及犬科動物（犬）。在某些實 施例中，哺乳動物係來自偶蹄目（〇rder Artiodactyla)，包 括牛科動物（牛）及豬科動物（豬）；或屬於奇蹄目（order Perssodactyla) ’包括馬科動物（馬^在一些情況下，哺乳 動物屬於靈長目（order Primate)、新世界猴類（Ceb〇ids)或 • 狐狼類（Simoids)(猴）或屬於類人猿亞目（order Anthropoids)(人類及猿）。在特定實施例中，哺乳動物為人 類。 套組 可根據一實施例提供本發明之升糖素類似物作為套組之 一部分。因此，在一些實施例中，提供用於向有需要之患 者投與升糠素類似物（例如，升糖素促效劑肽）之套組，其 中該套組包含如本文中所述之升糖素類似物。 在一實施例中，套組具有用於向患者投與升糖素組合物 152868.doc •125· 201130503

瓶、單腔或多腔預填充針筒、 、噴射注射器或其他無 一或多種容器，

，視情況含有呈凍乾形式或水溶液形式 1充針筒、濾筒、輸注泵 形裝置及其類似 物。在-些實施例中，套組包含使用說明 例’套組之裝置為 式之升糖素類似 。根據一實施 在氣霧劑裝置内。

且在一實施例中無菌升糖素組合物係預包裝在針筒内。 提供以下實例僅為說明本發明且其不 發明之範疇。 以任何方式限制本 實例 實例1 升糖素之肽片段之合成 材料： 除非另外說明，否則實例中所有本文中所述之肽均經醯 胺化。 MBH A樹脂（在肽合成期間使用4-甲基二苯甲基胺聚苯乙 烯樹脂。MBHA樹脂，100-180目，1% DVB交聯聚笨乙 稀；負載量為0.7-1.0 mmol/g)、經Boc保護之胺基酸及經 Fmoc保護之胺基酸係購自Midwest Biotech。利用Applied Biosystem 430A肽合成器使用經Boc保護之胺基酸進行固 相狀合成。使用Applied Biosystems 433型肽合成器進行經 Fmoc保護之胺基酸合成。 152868.doc -126· 201130503 肽合成（Boc胺基酸/HF裂解）： 利用Applied Biosystem 430A型肽合成器進行此等類似 物之合成。藉由向含有2 mmol經Boc保護之胺基酸之濾筒 中依序添加胺基酸來建構合成肽。特定言之，使用Boc DEPBT活化之單偶合來進行合成。在偶合步驟結束時，用 TFA處理肽基樹脂以移除n端Boc保護基。將其用DMF反覆 洗務且對於所需數目之偶合步驟重複此重複循環。組裝之 後’藉由2〇。/〇派啶處理移除側鏈保護Finoc且使用DIC進行 醯化。在整個合成結束時藉由使用DCM來乾燥肽基樹脂， 且利用無水HF使肽自樹脂裂解。 對於内醯胺化’針對Glu及Lys選擇正交保護基（例如， Glu(Fm)、Lys(Fm〇C))。在移除保護基之後且在HF裂解之 刖’如先則所述進行環化（參見例如國際專利申請公開案 第 WO 2008/101017號）。 肽基樹脂之HF處理 用無水HF處理肽基樹脂，且此舉通常得到約35〇 mg(約 50 乂產率）之粗製經脫除保遵基之狀。特定言之，將狀基樹 脂（30 mg至200 mg)置於氟化氫（HF)反應容器中以進行裂 解。將500 pL對曱酚添加至容器中作為锬離子清除劑。將 該容器連接至HF系統且浸入曱醇/乾冰混合物中。用真空 泵排空容器且將10 ml HF蒸餾至反應容器中。在下將 肽基樹脂與HF之此反應混合物攪拌一小時，其後建立真空 且快速排空HF( 10-15分鐘）。小心地移除容器且填充約35 ml乙醚以使肽沈澱且萃取對曱酚及由HF處理所產生之 152868.doc •127· 201130503 分子有機保護基。利用鐵氟龍（teflon)過濾器過濾此混合物 且重複兩次以移除所有過量曱酚。棄去此濾液。將沈澱之 肽溶解於約20 ml 10%乙酸（水溶液）中。收集含有所需肽之 此濾液且凍乾。 在以下條件[4.6x30 mm Xterra C8，1.50 mL/min，220 nm，A 緩衝液 0.1°/。TFA/10% ACN，B 緩衝液 0.1% TFA/100% ACN，梯度5-95% B(經15分鐘）]下進行粗製溶 解肽之分析型HPLC分析。用水將萃取物稀釋兩倍且裝載 於2.2x25 cm Vydac C4製備型逆相管柱上且利用Waters HPLC系統使用乙腈梯度進行溶離（A緩衝液為0.1% TFA/10% ACN，B緩衝液為 0.1% TFA/10% CAN且梯度為 0-100% B(經120分鐘），流速為15.00 ml/min)。經純化肽之 HPLC分析顯示純度大於95。/〇且使用電喷霧離子化質譜分析 來確認肽之身分。 肽醯化 如下製備醯化肽。使用CS Bio 4886肽合成器或Applied Biosystems 430A肽合成器於固體支撐樹脂上合成肽。如 Schnolzer等人，Int. J. Peptide Protein Res· 40: 180-193 (1992)所述使用現場中和化學。對於醯化肽，待醯化之目 標胺基酸殘基（例如，位置10，相對於SEQ ID NO: 3之胺 基酸位置編號）係經N ε-FMOC離胺酸殘基取代。用含20% 哌啶之DMF處理完全N端BOC保護之肽30分鐘以移除 FMOC/曱醯基。藉由使10倍莫耳過量之經FMOC保護之間 隔基胺基酸（例如FMOC-Glu-OtBu)或醯基鏈（例如 152868.doc •128· 201130503 CH3(CH2)14-COOH)與 PyBOP 或 DEPBT 偶合試劑於 DMF/DIEA中偶合來達成與游離ε-胺基Lys殘基之偶合。隨 後移除間隔基胺基酸之FMOC基團，接著重複與醯基鏈之 偶合。用100% TFA最終處理導致移除任何側鏈保護基及N 端BOC基團。將肽樹月旨用5% DIEA/DMF中和，乾燥，且隨 後在〇°C下使用95:5 HF/對曱酚自支撐物裂解一小時。乙醚 萃取後’使用5% HOAc溶液溶劑化粗製肽。隨後藉由ESI-MS證實溶液樣品含有正確分子量之肽。藉由RP-HPLC使 用 10% CH3CN/0.1% TFA 至含 0.1% TFA 之 100% CH3CN 之線 性梯度純化正確之肽。使用Vydac C18 22 mmx250 mm蛋 白質管柱進行純化。利用20:80之緩衝液比率，醢化肽類 似物一般完全溶離。將各部分彙集在一起且利用分析型 RP-HPLC檢查純度。將純溶離份凍乾，得到白色固體肽。 若肽包含内醯胺橋鍵及待醯化之目標殘基，則在將彼胺 基酸添加至肽主鏈之後如上所述進行醯化》 狀聚乙二醇化 對於肽聚乙二醇化，使用將肽與peg兩者溶解成澄清溶 液所需之最少量之溶劑（對於使用2-3 mg肽之反應，一般 小於2 mL) ’使4〇 kDa甲氧基聚（乙二醇）碘乙醯胺（N0F)與 莫耳當量之肽在7 Μ脲、50 mM Tris-HCl緩衝液中反應。 在室溫下強力攪拌持續4-6小時且藉由分析型RP-HPLC分 析反應。隨著滯留時間減少，聚乙二醇化產物顯得與起始 物質顯著不同。利用Vydac C4管柱在與初始肽純化所用條 件類似之條件下進行純化。在緩衝液比率為50:50附近發 152868.doc •129· 201130503 生溶離。發現純聚乙二醇化肽之溶離份且將其;東乾。產率 高於50°/〇 ’對於每個反應有所不同。· 使用質譜法進行分析 使用具有標準ESI離子源之Sciex API-Ill電喷霧四極質譜 儀獲得質譜。所用離子化條件如下：ESI為正離子模式； 離子喷霧電壓，3.9 kV;孔電位，60 V。所用噴霧及氣簾 氣體為氮氣，流動速率為.9 L/min。在每步0.5 Th及2 msec 停留時間下自600-1 800湯普生（Thompson)記錄質譜。將樣 品（約1 mg/mL)溶解於含1 %乙酸之50°/。乙腈水溶液中且藉 由外部注射泵以5 pL/min之速率引入。 當藉由ESI MS於PBS溶液中分析肽時，根據製造商 (Millipore Corporation, Billerica, ΜΑ，參見全球資訊網 (world wide web)上 Millipore 網站之 millipore.com/ catalogue.nsf/docs/C5737)所提供之說明，首先使用含〇6 μί C4樹脂之ZipTip固相萃取尖端將肽脫鹽。 高效液相層析（HPLC)分析： 使用高效液相層析（HPLC)及MALDI分析，利用此等粗 製肽進行初步分析以得到其在磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)緩衝 液（pH 7.2)中之相對轉化率的近似值。將粗製肽樣品溶解 於PBS緩衝液中至1 mg/ml之濃度。將1 ml所得溶液儲存在 1.5 ml HPLC小瓶中，隨後將該小瓶密封且在37°C下培 育。以各種時間間隔取出100 μΐ等分試樣，冷卻至室溫且 藉由HPLC進行分析。 使用Beckman System Gold層析系統使用UV偵測器在214 132868.doc •130· 201130503 nm下進行HPLC分析。利用1 5 0 mm><4.6 mm C1 8 Vydac管柱 進行HPLC分析。流動速率為1 ml/min。溶劑A為含0.1% TFA之蒸餾水，且溶劑B為含0.1% TFA之90% CH3CN。使 用線性梯度（15分鐘内40%至70% B)。收集資料且使用Peak Simple Chromatography軟體進行分析。

使用初始水解速率來量測各別前藥解離之速率常數。分 別根據其峰面積估算前藥及藥物之濃度。藉由繪製在各種 時間間隔下前藥濃度之對數來測定前藥之第一級解離速率 常數。此曲線之斜率給出速率常數『k』。隨後藉由使用式 tl/2==.693/k來計算各種前藥之降解半衰期。 實例2 在基於螢火蟲螢光素酶之報導體檢定中量測各肽誘導 cAMP之能力。所誘導之cAMP產量與升糖素片段與升糖素 或GLP-1受體之結合成正比。對於該生物檢定，使用分別 用升糖素或GLP-1受體與鍵聯至cAMP反應元件之螢光素酶 基因共轉染之HEK293細胞。 藉由在補充有0.25%牛生長血清（Bovine Growth Serum)(HyClone, Logan, UT)之杜貝卡氏改良最低必需培 養基(Dulbecco-modified Minimum Essential Medium) (Invitrogen, Carlsbad, CA)中培養16小時對細胞進行血清去 除且隨後在37°C、5% C02下於塗有聚-D-離胺酸之96孔 「Biocoat」培養盤（BD Biosciences, San Jose, CA)中與升 糖素片段之連續稀釋液一起培育5小時。在培育結束時， 將 100 μι LucLite發光受質試劑（Perkin Elmer, Wellesley, 152868.doc -131 - 201130503 ΜΑ)添加至各孔中。短暫震盪培養盤，在黑暗中培育1〇分 鐘’且利用MicroBeta-1450液體閃爍計數器（Perkin-Elmer, Wellesley，ΜΑ)量測光輸出。藉由使用Origin軟體 (OriginLab，Northampton, MA)來計算有效 50% 濃度 (EC50)。 實例3 自天然升糖素序列（SEQ ID NO: 2)開始，已經由插入特 定螺旋促成胺基酸取代及肽主鏈構形約束製備出一系列受 體共促效劑。特定言之在此報導中，使用不同位置之共價 内酿胺橋鍵形成及利用不同連接子尺寸對主鏈穩定化進行 研究。在某些肽中，已應用非天然胺基酸（鳥胺酸（0rn)及 二胺基丁酸（Dab))及D-胺基酸異構體來促進結構-功能分 析。 如下製備肽1-19 :使用Boc化學策略於MGHA(或T-PAM) 樹脂上合成各類似物。至於環化（内醯胺橋接）肽，首先在 20%哌啶/DMF存在下脫除側鏈中之Fm〇c保護基持續1小 時。利用偶合試劑PyBOP形成共價内醯胺鍵持續5小時。 在〇°C下使用HF/對曱酚（95:5)使肽自樹脂裂解持續1小時。 移除HF及乙喊沈澱之後’將肽萃取至1% h〇Ac及20% CAN中，且凍乾。利用Waters HPLC系統使用CAN之線性 梯度’使用RP-HPLC以0.1 % TFA純化各肽。彙集含有所需 肽之溶離份且凍乾。藉由分析型HPLC及MS分析來確認各 肽之身分及純度。 肽1-19之結構展示於圖1中。小寫字母表示由該字母表 152868.doc •132· 201130503

示之胺基酸之D-異構體。舉例而言，「k」為離胺酸之D-異 構體。在兩個胺基酸之間繪製之線表示内醯胺橋鍵。左側 數字表示肽編號。舉例而言，「1」為肽1。頂部胺基酸序 列為天然人類升糖素序列（SEQ ID NO: 2)。胺基酸序列亦 根據如表1中所示之SEQ ID NO:提供於本文序列表中。表1 亦展示如藉由基本上如本文實例2中所述之基於螢光素酶 之報導體檢定所測試，肽對升糖素受體及GLP-1受體各自 之活體外EC50。 表1 肽 SEQID NO: 升糖素受體 GLP-1受體 EC50(nM) 標準偏差 EC50(nM) 標準偏差 WT升糖素 2 0.14 0.01 7.12 0.442 WT GLP-1 nd nd 0.023 0.002 肽1 18 0.14 0.02 0.13 0.11 肽2 19 0.12 0.00 0.12 0.10 肽3 20 0.34 0.05 1.15 0.35 肽4 21 1.27 0.12 23.82 0.32 肽5 22 3.51 nd 26.10 nd 肽6 23 0.61 nd 2.38 nd 肽7 24 0.21 nd 0.15 nd 肽8 25 1.76 0.05 nd nd 肽9 26 6.71 0.44 14.64 0.23 肽10 27 6.80 0.38 16.15 0.13 肽11 28 0.90 nd 5.79 nd 肽12 29 85.88 nd 41.73 nd 肽13 30 30.66 nd 14.35 nd 肽14 31 329.14 nd 33.00 nd 肽15 32 19.42 nd 73.42 nd 肽16 33 nd nd 120.51 nd 肽17 34 861.57 nd 147.94 nd 肽18 35 719.31 nd 116.60 nd 肽19 36 78.97 nd 10.05 nd nd=未測定 152868.doc -133- 201130503 此等結果強調内酿胺環位置及尺寸在達成平冑之共促效 作用中的重要性。利用增加α螺旋性之特定突變產生對 、 殳體之效能顯著增加的升糖素類似物。肽之中心區 域為主鏈穩定化之較佳位置，其中16-20及17-21具有類似 特徵（肽2及肽7)。ι7·21線性肽之開放形式同等有效且在其 y、足效作用中平衡（肽1)。在肽之中心區域中經適當穩定化 之升糖素c端醯胺可提供有效之平衡共促效作用。已如此 鑑别出具有低奈莫耳濃度親和力、完全促效作用及對人類 升糖素及GLP-1受體之效能幾乎相等的配位體。 實例4 基本上如實例1中所述製備包含SEQ ID NO: 2之經修飾 胺基酸序列（包含至少三個（額外）κα螺旋胺基酸）的升糖素 類似物。各類似物包含至少一個鹽橋鍵且該鹽橋鍵介於位 置17之Lys與位置21之Glu之間。該等類似物進一步包含介 於位置16與20之胺基酸之間的第二鹽橋鍵，或位置16之 α，α一取代胺基酸。升糖素類似物經DPP-IV保護，程度為 各類似物在位置丄或之包含如本文中所述達成Dpp_IV保護的 胺基酸。升糖素類似物之結構展示於圖2中。「ser」指示絲 胺酸之D-異構體，「Aibj表示α胺基異丁酸，且rDmia」 表示α，α-二甲基咪嗤乙酸。升糖素類似物22包含位置1〇之 酿化Lys，其中C16脂肪醯基經由尸麩胺酸間隔基殘基連接 至Lys之ε胺（參見例如圖7)。包含介於位置16之Glu與位置 20之Lys之間的内醯胺之升糖素類似物23用作陽性對照。 升糖素類似物23至28經由硫醚鍵結合至40 kDa PEG，其中 152868.doc -134· 201130503

Cys殘基位於類似物之位置24。基本上如實例2中所述，測 試升糖素類似物對升糖素受體及GLP-1受體各自之活體外 活性。各肽之結構及對指定受體之EC50提供於表2A中。

表2A 升糖素類 似物編號 SEQID NO: 對升糖素受體之活性 對GLP-1受美 g之活性 EC50(nM)* %相對 活性** EC50(nM)* °/。相對 活性*** 20 37 0.054 nd 0.284 nd 21 38 0.073 nd 0.048 nd 22 39 0.029 nd 0.032 nd 23 40 0.078 45 0.427 10 24 41 0.676 7 1.581 5 25 42 1.066 3 0.097 43 26 43 0.366 10 4.797 0.1 27 44 0.689 5 0.207 20 28 45 0.238 15 1.218 3 101 114 1.00 5.5 0.140 20 23， 40 0.110 50 0.3 9.3 23 40 0.078 45 0.427 10

升糖素類似物23'具有與升糖素類似物23相同之胺基酸序 列。在兩種類似物中，連接PEG之連接子不同。在升糖素 類似物23中，位置24之Cys之硫醇係在如本文中所述之親 核取代反應中經函乙醯基活化之PEG修飾，而在升糖素類 似物23'中，位置24之Cys之硫醇係經如本文中所述經由硫 醚鍵聯至肽之經順丁烯二醯亞胺活化的PEG修飾。 *左欄中所示之類似物之EC50。 **所示類似物相較於天然升糖素對升糖素受體之活性百分 比。 ***所示類似物相較於天然GLP-1對GLP-1受體之活性百分 比。 包括類似物101、23'及23之資料係出於比較目的且未必與 152868.doc -135- 201130503 其他類似物於同一天獲得。 根據實例1及實例2之描述製備及測試其他升糖素類似 物。此等升糖素類似物之結構展示於圖3中且其活體外活 性展示於表2B中。

表2B 升糖素類 似物編號 SEQ ID NO: 對升糖素受體之活性 對GLP-1受體之活性 EC50(nM)* °/。相對 活性1 EC50(nM)* %相對 活性2 60 75 0.006 257 0.196 19 61 76 0.017 88 0.096 39 62 77 0.015 113 0.028 246 63 78 0.011 115 0.020 345 64 79 0.019 79 0.012 308 65 80 0.053 264 0.036 64 66 81 0.140 100 0.130 18 67 82 0.077 93 0.071 47 68 83 0.068 104 0.075 44 *左欄中所示之類似物之EC50。 152868.doc -136- 1 所示類似物相較於天然升糖素對升糖素受體之活性百分 比。 2 所示類似物相較於天然GLP-1對GLP-1受體之活性百分 比。 此表中類似物65-68之資料值並非與其他類似物於同一天 獲得。提供該等資料係出於比較目的。 此實例顯示包含至少三個促α螺旋胺基酸之升糖素類似 物為有效的升糖素/GLP-1受體共促效劑。 實例5 基本上如實例1中所述製備包含位置2之達成DPP-IV抗性 之胺基酸、位置18之小型脂族胺基酸、位置27之C端的帶 201130503 電荷胺基酸及替代α羧酸酯基之C端醯胺的醯化升糖素類似 物（升糖素類似物42-45及48-52)。升糖素類似物45包含此 等相同特徵，其中例外為其缺乏C端醯胺化，且包含位置7 之lie。各升糖素類似物之結構展示於圖4A中。「Aib」係 指α胺基異丁酸，「ser」係指Ser之D-異構體，「醯胺」係指 C端胺基酸上之α羧酸酯基經醯胺置換，「酸」係指包含α羧 酸酯基之C端胺基酸。升糖素類似物42-46及48-52之位置 10之Lys經由單一 γ-麵胺酸間隔基或γ-麵胺酸-γ-麵胺酸二 肽間隔基經C16烷基醯化（參見例如圖7)。 測試升糖素類似物對升糖素受體及GLP-1受體各自之活 體外活性且結果展示於表3 Α中。

表3A 升糖素 類似物 編號 SEQID NO: 對升糖素受體之活性 對GLP-1受體之活性 EC50 [pM]1 %相對 活性2 EC50 [pM]1 %相對 活性3 42 58 3 863 5 500 43 59 6 467 4 575 44 60 6 661 4 524 45 61 52 75 3 759 46 62 1 2800 479 4.9 48 63 3 1194 6 384 49 64 5 511 6 375 50 65 2 1000 5 500 51 66 3.5 314 3.9 949 52 67 2.9 379 2.9 1276

152868.doc •137- 1 左欄中所示之類似物之EC50。 2 所示類似物相較於天然升糖素對升糖素受體之活性百分 比。 3 所示類似物相較於天然GLP-1對GLP-1受體之活性百分 比。 201130503 如表3中所示，利用多種突變產生對GLP-1受體之效能顯 著增加的升糖素類似物，該等突變允許保持或增強活性且 藉由消除與氧化及去醢胺化有關之潛在問題及/或選擇性 地降低GLP-1活性或升糖素活性針對活體内功效及醫藥性 質進行最佳化。 藉由製備及測試升糖素類似物69-73來分析醯化間隔基 以及結合至此類型升糖素類似物上之親水性部分的作用。 此等類似物之結構展示於圖4B中。 測試升糖素類似物對升糖素受體及GLP-1受體各自之活 體外活性且結果展示於表3B中。

表3B 升糖素 類似物 編號 SEQID NO: 對升糖素受體之活性 對GLP-1受體之活性 EC50 [pM]A %相對 活性1 EC50 [pM]2 %相對 活性3 69 84 12 325 5 440 70 85 6 709 4 500 71 86 4 975 2 1222 *左欄中所示之類似物之EC50。 152868.doc -138- 1 * 2 2所示類似物相較於天然GLP-1對GLP-1受體之活性百分 比。 2 2所示類似物相較於天然升糖素對升糖素受體之活性百分 比。 3 基本上如本文中所述製備具有與升糖素類似物52類似之 主鏈結構的升糖素類似物且將其命名為升糖素類似物76-79、82及83。基本上如本文中所述製備具有與升糖素類似 物5 1類似之主鏈結構的升糖素類似物且將其命名為升糖素 201130503 類似物80及81。升糖素類似物78-81經由位置24之Cys之硫 醇結合至40 kDa PEG。此等類似物之結構展示於圖4B中。 基本上如實例2中所述測試對GLP-1受體及升糖素受體之活 體外活性。來自活體外研究之EC50展示於表3C中。

表3C 升糖素 類似物 編號 SEQID NO: 對升糖素受體之活性 對GLP-1受體之活性 EC50 [mM]* %相對 活性** EC50 [nM]* %相對 活性*** 76 89 0.002 1500 0.003 1200 77 90 0.026 127 0.014 286 78 91 0.140 44 0.026 196 79 92 0.240 26 0.125 41 80 93 0.022 86 0.008 450 81 94 0.037 51.4 0.012 300 82 95 0.014 121 0.020 345 83 96 0.028 61 0.024 288

*左攔中所示之類似物之EC50。 **所示類似物相較於天然升糠素對升糖素受體之活性百分 比。 ***所示類似物相較於天然GLP-1對GLP-1受體之活性百分 比0 實例6 測試實例4及5中所述之某些升糖素類似物的活體内作 用。將升糖素類似物每日一次皮下注射至飲食誘發之肥胖 症（DIO)小鼠中（其中一種類似物或僅媒劑），持續1-2週。 每組小鼠含有6-8隻小鼠，初始平均體重為約40-60 g。定 期（例如，每天或每2天）測定體重、身體組成、食物攝入及 血糖含量。 實例7 152868.doc •139- 201130503 藉由製備及測試升糖素類似物29及30(其分別為升糖素 類似物51及52之聚乙二醇化形式）來觀測將升糖素類似物 5 1及52結合至親水性部分對於對升糖素受體及GLP-1受體 各自之活體外活性的影響。升糖素類似物29及30經由位置 24之Cys結合至40 kDa PEG。基本上如實例1及2中所述製 備及測試類似物。活體外活性展示於表4中。 表4 升糖素類似物編 號 SEQ ID NO: 對升糖素受體之 EC50(pM) 對GLP-1受體之 EC50(pM) 51 66 3.5 3.9 29 46 85 84 52 67 2.9 2.9 30 47 82 8 實例8 製備未結合至40 kDa PEG之基於升糖素類似物30之結構 的升糖素類似物。特定言之，製備不同於一種升糖素類似 物30之包含達成DPP-IV抗性之胺基酸的升糖素類似物，產 生升糖素類似物53、54及57。此外，製備包含不同C端殘 基之與升糖素類似物30類似之升糖素類似物，產生升糖素 類似物55及56。所得升糖素類似物之結構展示於圖5中。 基本上如實例1及2中所述製備及測試類似物。活體外活性 展示於表5中。 表5 升糖素類 似物編號 SEQID NO: 對升糖素受 趙之活性 對GLP-1受 趙之活性 EC50 [nM]* %相對 活性** EC50 [nM]* %相對 活性*** 53 68 0.009 411 0.012 708 54 69 0.107 35 0.204 42 55 71 0.550 7 0.516 16 152868.doc -140- 201130503 56 72 0.018 272 0.068 125 57 70 4.804 1 nd nd 23 40 0.073 51 0.350 24 *左攔中所示之類似物之EC50。 **所示類似物相較於天然升糖素對升糖素受體之活性百分 比。 ***所示類似物相較於天然GLP-1對GLP-1受體之活性百分 比。 關於升糖素類似物23之資料係用於比較目的。 • 實例9 製備基於升糖素類似物29之結構之升糖素類似物。特定 言之，製備不同於一種升糖素類似物29之包含達成DPP-IV 抗性之胺基酸的升糖素類似物，產生升糖素類似物58及 59。所得類似物之結構展示於圖6中。基本上如實例1及2 中所述製備及測試類似物。活體外活性展示於表6中。 表6 升糖素類 似物編號 SEQID NO: 對升糖素受 趙之活性 對GLP-1受體之活性 EC50 [nM]1 %相對 活性2 EC50 [nM]1 %相對 活性3 58 73 0.046 80 0.068 125 59 74 0.010 490 0.019 484 51 66 0.004 314 0.004 949 29 46 0.085 40 0.084 43 23 40 0.082 60 0.445 21 *左欄中所示之類似物之EC50。 152868.doc -141 - 1 1所示類似物相較於天然升糖素對升糖素受體之活性百 2 分比。 3 所示類似物相較於天然GLP-1對GLP-1受體之活性百 分比。 201130503 包括肽23之資料係用於比較目的且其未必與其他類似物 於同一天獲得。 實例10 基本上如本文中所述製備包含天然人類升糖素（SEQ ID NO: 2)之經修飾胺基酸序列的升糖素類似物，其中位置16-24之胺基酸經腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO: 8)之胺基 酸1 6-24取代，且視情況具有進一步修飾。 在第一檢定中，製備如上文所述之包含位置16之Glu及 腸促胰島素類似物-4之胺基酸17-24的升糖素類似物（類似 物A)且將其與包含位置16之Glu及GLP-1之胺基酸17-24的 升糖素類似物（類似物B)進行比較。此兩種肽各自藉由在 位置2經AIB進行胺基酸取代進行進一步修飾以獲得DPP-IV抗性。類似物C及D分別對應於類似物A及B之DPP-IV保 護形式。基本上如本文實例2中所述測試該尊肽對升糖素 受體及GLP-1受體各自之活體外活性。該等肽所展現之 EC50展示於表7A中。

表7A 升糖素類似物 SEQ ID NO: 對升糖素受趙之 EC50(nM) 對GLP-1受體之 EC50(nM) A 115 0.061 0.009 B 116 0.072 0.014 C 117 0.170 0.006 D 118 0.850 0.020 基本上如實例1中所述製備包含腸促胰島素類似物-4之 胺基酸16-24或類似序列（例如，SEQ ID NO: 12)之其他升 152868.doc -142- 201130503 糖素類似物。類似物之結構展示於圖8A至圖8C中。在本 文實例7中進一步描述之升糖素類似物29及30以及在本文 實例4中進一步描述之升糖素類似物20及21用作參考點。 包含胺基酸序列EXAVRLFIX(SEQ ID NO: 12)之升糖素類 似物31-36各自經DPP-IV保護，程度為各自在位置1或2包 含達成DPP-IV抗性之胺基酸，且此等類似物均不包含醯化 或烷基化胺基酸殘基。升糖素類似物35及36以與類似物23 類似之方式經由連接位於位置24之類似物之Cys殘基的硫 醚鍵結合至40 kDa PEG。升糖素類似物37-40各自包含醯 化胺基酸，其中升糖素類似物37及38包含將醯基鍵聯至類 似物之胺基酸的間隔基且升糖素類似物39及40不包含間隔 基。 升糖素類似物84、85及87在位置17包含Gin，而升糖素 類似物86在位置17包含Lys。升糖素類似物84包含C端延 長。升糖素類似物85包含位置10之醯化胺基酸且經由位置 24之Cys結合至40 kDa PEG。升糖素類似物86另外包含位 置16之AIB。 測試升糖素類似物對升糖素受體及GLP-1受體各自之活 體外活性且結果展示於表7B中。

表7B 升糖素類似物編號 SEQ ID NO: 對升糖素受體之 EC50(nM) 對GLP-1受遨之 EC50(nM) 29* 47 0.085 (74%) 0.084(16%) 30* 48 0.082 (55%) 0.008 (96%) 31 49 0.118 0.015 32 50 0.220 0.007 33 51 0.138 0.023 152868.doc -143· 201130503 I--~~__ ^ 52 0.404 0.018 --- 35 53 3.882 0.136 -- J6 20, -21， 54 5.328 0.020 __ 37 0.054 0.284 —38 0.073 0.048 54 0.119 0.011 38 55 0.655 0.019 --39 56 2.543 0.033 40 57 48.415 0.024 __84 97 0 132 Π4 4%) 0 006 ί600%1 —H~85~~~~ 98 0.107(16%) 0.013 (284%) 86 ' 99 0.035 (43%) 0.035 (106%) L—_____87_____ 100 0.021 (71%) 0.013 (284%) *參考點 如表7中所示’具有經來自腸促胰島素類似物_4之胺基 馱取代的升糖素類似物展現對GLP-1受體之顯著效能。對 GLP-1受體之效能在醯化（有或無間隔基）後在很大程度上 得到保持《聚乙二醇化增加對升糖素受體之活性。儘管與 天然升糖素配位體相比對升糖素受體之效能較低，但升糖 素類似物對此受體展現明顯活性。 實例11 先前所述之升糖素類似物60-62、64、82、83、86及87 可藉由使位置24之Cys殘基與40 kDa PEG結合而進行修 飾。此等經修飾肽之所得結構展示於圖9中。 此外，製備本文中先前所述但經修飾以在位置16與2〇之 胺基酸之間包含内醯胺的升糖素類似物。此等肽之結構亦 展示於圖9中。 本文_所引用之所有參考文獻（包括公開案、專利申請 案及專利）係以引用的方式併入本文中，該引用的程度就 如同各參考文獻係個別地及特定地以引用的方式併入入 1 152868.doc • 144· 201130503 文闡述於本文中一般。 除非本文中另外指出或明顯與 々爛兴門谷相矛盾，否則在描述 本發明之内容_(尤其在以丁由 …五「 具在以τ申睛專利範圍之内容中）使用 」及省」及類似指示物應理解為涵蓋單數與複 數。除非另外說明，否則術語「包含」、「具有」、「包括」 及「含有」應理解為開放式術語(亦即，意謂「 限於）」）。 • 除非本文中另外指出，否則本文中對值範圍之引述僅意 欲用作個別地提及屬於該範圍内之各個別值及各端點的簡 寫方法，且各個別值及端點係併入本說 本文中個別地引用一般。 $ 牙'非本文中另外指出或另外明顯與内容相矛盾，否則本 中所述之所有方法可以任何適合順序進行。除非另外主 、否則使用任何及所有實例或本文中提供之例示性語言 (1 諸如」）僅意欲更好地闡明本發明且並不對本發明 籲之料施加限制。本說明書中之任何語言均不應理解為指 不貫施本發明所必需之任何未主張要素。 、=文中㈣本發明之較佳實施例，包括本發明人已知用 ;—本&明之最佳模式。在閱讀前述描述之後，彼等較 實施例之變化形式對於—般技術者可變得顯而易知。本 月人預期熟習相關技藝之人士適當地使用該等變化形 :树明人預期本發明以不同於本文中明確描述之方 ，亍實& 0此，本發明包括適用法律所允許之隨附申 請專利範圍中所引述之標的物的所有修改及等效物。此 152868.doc -145- 201130503 外’除非本文中另外指出或另外明顯與内容相矛盾，否則 本發明涵蓋上述要素以其所有可能之變化形式的任何組 合。 【圖式簡單說明】 圖1描繪肽1-19之胺基酸序列。頂部之序列為天然人類 升糖素（SEQ ID NO :2)。「-NH2」指示替代α羧酸酯基之酿 胺；「ΟΗ」表示α羧酸酯基；水平括號表示經括號括在一 起之最外層胺基酸之間的内醯胺橋鍵。「〇」為鳥胺酸。 圖2表示所示升糖素類似物之胺基酸序列。r ser」表示 絲胺酸之D-異構體；「Aib」指示α胺基異丁酸殘基； 厂Κ(γΕ-(：16)」表示離胺酸經由γ-麩胺酸間隔基共價連接 至C16脂肪醯基；「£」表示連接至40 kDa PEG之Cys殘 基；「醯胺」指示C端α羧酸酯基經醯胺置換；「Dmia」為 如本文所教示之DMIA。 圖3表示所示升糖素類似物之胺基酸序列。在圖3中使用 與圖2相同之符號》「Κ(γΕ γΕ-(：16)」表示離胺酸經由γ_麵 胺酸-γ-麩胺酸二肽間隔基共價連接至C16脂肪醯基。 圖4Α及圖4Β表示所示升糖素類似物之胺基酸序列。在 圖4Α及圖4Β中使用與圖2相同之符號。如該等圖式中所用 之「酸」指示C端胺基酸包含α羧酸酯基。「K(C 16)」表示 Lys共價連接至C16脂肪醯基。 圖5表示所示升糖素類似物之胺基酸序列。在圖5中使用 與圖2相同之符號。「desAminoH」表示缺乏α醯胺基之His 殘基。「AcH」表示乙醯基-組胺酸；C(PEG-40K-TE)表示 152868.doc •146· 201130503

Cys殘基經由在硫醇與齒乙醯基反應後產生之硫醚鍵連接 至 40 kDa PEG。 圖6表示所示升糖素類似物之胺基酸序列。在圖6中使用 與圖5相同之符號。 圖7說明醯化Lys殘基，其中8胺連接至γ-麩胺酸間隔基或 γ-麵胺酸-γ-麩胺酸二肽間隔基，該間隔基轉而連接至C16 脂肪醯基。 • 圖8A-8C說明所示升糖素類似物之胺基酸序列。在此等 圖式中使用與先前圖式相同之符號er Κ(Β)」表示離胺酸 經由γ-麩胺酸間隔基共價連接至C16脂肪醯基；「（C)」表 示Cys殘基經由在與函乙酿基反應後產生之硫醚鍵連接至 40 kDa PEG ;「K(D)」表示離胺酸經由直接連接至離胺酸 之ε胺而共價連接至C16脂肪醯基；「Cex」表示升糖素類似 物與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的融合物。 圖9表示所示升糖素類似物之胺基酸序列。在圖9中使用 • 與先前圖式中所用相同或類似之符號。「s」或「ser」表示 絲胺酸之D-異構體；「E16_K2〇内醯胺」指示連接位置16之 Glu與位置20之Lys之間之側鏈的内醯胺橋鍵；「c(TE· 40KPEG)」或「C*(40KTE)」指示與圖8八_8〇之「（〇」相 同K(YEC16)」或「K(rEC16)」表示離胺酸經由γ·麩胺 酸間隔基共價連接至C16脂肪醯基。 涵蓋之其他實施例包括包含任何圖式或序列表中任何序 列之狀|中5亥序列包含任何本文中所述之胺基酸修飾， 包括（但不限於）：賦予Dpp_IV抗性之位置以2處之替代取 152868.doc -147· 201130503 代；醯基或烷基之替代間隔基，例如二肽或單一胺基酸間 隔基。其他實施例亦包括與親水性部分或另一活性劑之結 合，或與相同或不同肽或多肽之融合；及/或多聚合。

152868.doc -148- 201130503 序列表 <11〇> 美商印第安納大學科技研究公司 <120> 升糖素/GUM受體共促效劑 <130> 31135/45098 <140 099144669 <141> 2010-12-17 <150> 61/288,248 <151> 2009-12-18 <160〉 188 <170> Patentln version 3.5 <210〉 1 <211> 158

<212〉 PRT <213〉智人 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉前升糖素原 <220> <221〉 MISC一FEATURE <223〉前升糖素原 <400〉 1

Arg Ser Leu Gin Asp Thr Glu Glu Lys Ser Arg Ser Phe Ser Ala Ser 15 10 15

Gin Ala Asp Pro Leu Ser Asp Pro Asp Gin Met Asn Glu Asp Lys Arg 20 25 30

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 35 40 45

Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 50 55 60 152868-序列表.doc 201130503

Arg Asn Asn lie Ala Lys Arg His Asp Glu Phe Glu Arg His Ala Glu 65 70 75 80

Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gin Ala Ala 85 90 95

Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Arg Arg Asp Phe 100 105 110

Pro Glu Glu Val Ala lie Val Glu Glu Leu Gly Arg Arg His Ala Asp 115 120 125

Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr lie Leu Asp Asn Leu Ala Ala 130 135 140

Arg Asp Phe lie Asn Trp Leu He Gin Thr Lys He Thr Asp 145 150 155 <210> 2 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉智人 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉天然人類升糖素 <400> 2

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 • 2· 152868·序列表.doc 201130503 <210> 3 <211〉 37 <212〉 PRT <213〉智人 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223> GLP-1 <400> 3

His Asp Glu Phe Glu Arg His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val 15 10 15

Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu 20 25 30

Val Lys Gly Arg Gly 35 <210〉 4 <211> 33 <212> PRT <213〉智人

<221〉 MISC一FEATURE <223〉 GLP-2 <400〉 4

His Ala Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr lie Leu Asp Asn 15 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe lie Asn Trp Leu He Gin Thr Lys lie Thr 20 25 30 152868-序列表.doc 201130503

Asp <210〉 5 <211〉 37 <212> PRT 〈213>智人 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉調酸素 <400> 5

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr Lys Arg Asn 20 25 30

Arg Asn Asn lie Ala 35

<210> 6 <211〉 30 <212> PRT <213〉智人 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉GLP1( 7-36 醯胺） <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （30).. (30) <223〉C端醯胺化 <400〉 6 152868-序列表.doc 201130503

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210〉 7 〈211〉 31 <212〉 PRT <213〉智人 <220〉

<221> MISC_FEATURE <223〉GLP_l(7-37 酸） <400〉 7

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210〉 8 <211〉 39 <212> PRT <213〉毒蜥 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223〉腸促胰島素類似物-4 <400〉 8

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gin Met Glu Glu 15 10 15 152868-序列表.doc 201130503

Glu Ala Val Arg Leu Phe He Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210〉 9 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221〉 MISC—FEATURE <223〉C端醯胺化 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223〉Xaa 為 Aib <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 (10).. (10) <223〉經由y-Glu-y-Glu間隔基用C16脂肪醯基醞化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223> Xaa 為 Aib <220〉 <221> MOD一RES <222〉 (29). . (29) <223〉 C端醯胺化 <400〉 9 6·

152868-序列表.doc 201130503

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 10 <211〉 29 <212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 〈221〉 MOD一RES <222〉 （2)·· (2) <223〉Xaa 為 Aib <220> <221〉 M0D_RES 〈222〉 （10).·(10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 Aib <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (29). .(29) <223〉C端醯胺化 <400> 10

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15 152868·序列表.doc 201130503

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 11 <211〉 7 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221〉 MOD一RES <222〉⑺.·（7) <223〉Xaa 為 Glu 或 Cys <400〉 11

Ala Val Arg Leu Phe lie Xaa 1 5 <210〉 12 <211〉 9 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220>

<223〉合成肽 <220〉 <221〉M0D_RES <222〉 （2)·· (2) <223〉Xaa 為 Glu、Lys 或 Gin <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （9)·.(9) <223〉Xaa 為 Glu 或 Cys <400〉 12 152868·序列表.doc 201130503

Glu Xaa Ala Val Arg Leu Phe He Xaa 1 5 <210〉 13 <211> 8 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <400〉 13

Lys Arg Asn Arg Asn Asn He Ala <210〉 14 <211> 10 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <400〉 14

Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

<210〉 15 <211> 11 <212> PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <400> 15

Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 152868-序列表.doc 201130503 1 5 10 <210〉 16 <211> 4 <212〉 PRT <213> 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <400〉 16 Lys Arg Asn Arg 1 <210〉 17 <211〉 29 <212> PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <220>

<221〉 M0D_RES <222> (2)..(2) <223〉Xaa 為 Aib <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （16)..(16) <223〉Xaa為帶有烯烴側鏈之α-甲基化胺基酸 <220>

<221> M0D_RES <222〉 （20)..(20) <223〉Xaa為帶有烯烴側鏈之α-甲基化胺基酸 <400〉 17 10-

152868-序列表.doc 201130503

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Gin Ala Ala Xaa Glu Phe lie Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 18 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220> <221> MISC_FEATURE <223〉肽 1 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29)..(29) 〈223〉C端醯胺化 <400〉 18

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser

Lys Arg Ala Gin Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 19 〈211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 -11 - 152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223〉肽 2 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <222〉（17).. (21) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220> <221> M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 19

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Lys Arg Ala Gin Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 20 <211〉 29 <212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 鲁 <220> <221〉 MISC一FEATURE <223〉肽 3 <220〉 <221> MISC.FEATURE <222〉 (16).. (20) 〈223>介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 12- 152868-序列表.doc 201130503 <400〉 20

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15

Arg Arg Ala Glu Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 21 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列

<220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223〉肽 4 <220> <221〉 MISC—FEATURE <222〉（16).· (20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221> MOD_RES <222〉(20).. (20) <223〉Xaa為鳥胺酸 <400> 21

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 22 •13- 152868-序列表.doc 201130503 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 5 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 (16).. (20)

<223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221〉 MOD_RES <222> (20). . (20) <223〉Xaa為二胺基丁酸 <400〉 22

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25

<210〉 23 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 6 -14- 152868·序列表.doc 201130503 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉（16)·· (20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221> MOD_RES <222〉（20).. (20) <223〉Xaa為鳥胺酸 <400〉 23

Asp Glu 15

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10

Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 24 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 〈220〉 <221> MISC一FEATURE <223〉 肽7 <220〉 <221> MOD—RES <222〉 (20).. (20) 〈223〉 Xaa為鳥胺酸 <220〉 〈221〉 MOD—RES 〈222〉 (29). . (29) 〈223〉 C端醯胺化

•15- 152868-序列表.doc 201130503 <400> 24

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 25 <211> 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 8 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （21)·· (21) 〈223〉Xaa為烏胺酸 <400〉 25

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Asp 15 10 15

Arg Arg Ala Gin Xaa Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 26 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 -16-

152868-序列表.doc 201130503 <223〉 合成肽 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <223〉 肽9 <220> <221> M0D_RES <222〉 (20).. (20) <223〉 Xaa為鳥胺酸 <400〉 26

Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 5 10 15

Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 27 〈211〉 29 <212〉 PRT 〈213> 人工序列 <220> 〈223>合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 10 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <222〉 （17)..(20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（20)·· (20) <223〉Xaa為烏胺酸 17· 152868-序列表.doc 201130503 <400> 27

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Asp Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 28 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 〈223>合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 11 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 （17)·.(20) 〈223>介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（20)·. (20) <223〉Xaa為烏胺酸 <400> 28

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Glu Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 18-

152868-序列表.doc 201130503 〈210〉 29 <211〉 31 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <220〉 <221> MISC一FEATURE <223〉 肽12 <220〉 〈221> M0D_RES <222> ™ <223> (31).. (31) C端醯胺化 <400〉 29

Lys Ala His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 15 10 15

Asp Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210〉 30 <211> 31 • <212> PRT <213〉 人工序列 <220> <223> 合成肽 <220〉 〈221> MISC_FEATURE <223> 肽13 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <222〉 ⑴··⑸ 19- 152868-序列表.doc 201130503 <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220> <221〉 <222〉 <223〉 M0D_RES (31).. (31) C端醯胺化 <400〉 30

Lys Ala His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 15 10 15

Asp Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 31 <211> 30 <212> <213> PRT 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <220〉 <221〉 MISC—FEATURE <223> 肽14 <220> <221〉 <222> <223〉 M0D_RES ⑴..⑴ D-Lys <220〉 <221〉 <222〉 <223〉 MOD一RES ⑸..⑸ D-Glu <220〉 <221〉 <222〉 <223〉 M0D_RES (30).. (30) C端醢胺化 •20· 152868·序列表.doc 201130503 <400> 31

Lys His Ser Gin Glu Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp 15 10 15

Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 32 <211> 30 <212〉 PRT <213〉 人工序列 a <220> • <223〉 合成肽 <220> <221> MISC一FEATURE <223〉 肽15 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (1)..(1) - 〈223〉 D-Lys <220〉 〈221〉 • 〈222〉 〈223〉 MISC一FEATURE ⑴·.⑸ 介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221〉 <222> MOD一RES ⑸..⑸ <223〉 D-Glu <220〉 <221> M0D_RES <222〉 〈223〉 (30) · (30) C端醯胺化 -21 - 152868-序列表.doc 201130503 <400> 32

Lys His Ser Gin Glu Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp 15 10 15

Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210〉 33 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 16 <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222〉 （29).· (29) <223〉C端醯胺化. <400> 33

His Ser Gin Lys Thr Phe Thr Glu Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 34 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 -22-

152868-序列表,doc 201130503 <223> 合成肽 <220〉 <221〉 MISC—FEATURE <223> 肽17 <220> <221〉 <222〉 <223〉 MISC—FEATURE ⑷··⑻ 介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222〉 • <223> (29).. (29) C端醯胺化 <400〉 34

His Ser Gin Lys Thr Phe Thr Glu Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 35 <211> 29 <212〉 PRT ^ <213> 人工序列 <220〉 <223> 合成肽 〈220> <221〉 MISC_FEATURE <223〉 肽18 <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222> 〈223〉 (29).. (29) C端醯胺化 -23- 152868·序列表.doc 201130503 <400〉 35

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Glu Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 36 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 19 <220〉

<221> MISC_FEATURE <222〉 （8).. (12) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 36

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Glu Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 24·

152868-序列表.doc 201130503

<220〉 <221> MISC一FEATURE <223〉 升糖素類似物20 <220〉 <221〉 MOD—RES <222〉 (2).. (2) <223〉 d-Ser <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <222〉 (16)·. (20) <223〉 鹽橋鍵 <220> <221> MISC_FEATURE <222〉 (17)·· (21) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223> C端醯胺化 <400〉 37 <210> 37 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 38 25- 152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <223> 升糖素類似物 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 ⑵··⑵ <223〉 D-Ser <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223〉 Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <222〉 (16)·· (20) <223> 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 MISC.FEATURE <222〉 (17)..(21) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉 C端醯胺化 <400〉 38

<211> 29 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr •26· 152868·序列表.doc 201130503 20 25 <210〉 39 <211> 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物22

<220〉 <221> M0D_RES <222〉 (2).. (2) <223〉 D-Ser <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (10)..(10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> MISC_FEATURE 〈222> (15).·(20) 〈223> 鹽橋鍵 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 (16).. (16)

〈223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> MISC_FEATURE 〈222> (16)·· (21) <223〉鹽橋鍵 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （29).·(29) •11 · 152868-序列表.doc 201130503 <223〉C端醯胺化 <400> 39

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 40 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物23 <220〉

<221> M0D_RES <222> (1).. (1) <223〉Xaa為α，α-二曱基咪唑乙酸 <220〉 <221> MISC.FEATURE <222〉 （24).·(24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <400〉 40

Xaa Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 -28 ·

152868-序列表.doc 201130503 <210〉 41 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物24 <220>

<221〉 M0D_RES 鲁 <222〉 （2)..⑵ <223> d-Ser <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 (16)..(20) <223〉鹽橋鍵 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉（17)·· (21) <223〉鹽橋鍵 <220>

<221> M0D_RES <222〉 （24).. (24) <223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29)·. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 41

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15 -29· 152868-序列表.doc 201130503

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 42 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物25 <220〉 <221〉MOD—RES <222〉（2).· (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> MISC_FEATURE 〈222〉 （16)·. (20) <223〉鹽橋鍵 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 （17)·. (21) <223〉鹽橋鍵 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 42 152868-序列表.doc 30 ·

201130503

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 43 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物26 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223> d-Ser <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB

<220〉 <221〉 MISC—FEATURE 〈222〉 （16)··(20) <223〉鹽橋鍵 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 （17).·(21) <223〉鹽橋鍵 <220〉

<221〉 M0D_RES -31 - 152868-序列表.doc 201130503 <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29).·(29) <223〉C端醯胺化 <400> 43

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 44 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223> 合成肽 <220> <221〉 MISC_FEATURE <223〉 升糖素類似物27 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 ⑵..⑵ <223> Xaa 為 AIB <220> <221〉 M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223〉 Xaa 為 AIB <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 (16). . (20) 152868-序列表.doc •32·

201130503 <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 MISC—FEATURE <222〉 <223〉 (17). . (21) 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 <223> (24). . (24) 共價結合至40kDaPEG <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 • <223> (29). . (29) C端醯胺化 <400> 44

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25

<210〉 45 <211〉 29 <212> PRT • <213〉 人工序列 <220〉 <223> 合成肽 <220〉 <221> MISC—FEATURE <223〉 升糖素類似物28 <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 <223〉 ⑴·.⑴ Xaa 為 DMIA -33- 152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223〉 Xaa 為 AIB <220> <221〉 MISC_FEATURE <222〉 (16).. (20) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <222〉 (17). . (21) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (24). . (24) <223〉 聚乙二醇化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (29).. (29) <223〉 C端醯胺化 <400> 45

Xaa Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 46 <211〉 29 <212> PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 • 34·

152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物29 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2) 〈223> d-Ser <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220>

<221> M0D_RES <222〉 （24)·. (24) <223〉共價結合至40kDa PEG <220> <221〉 MOD_RES <222> (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 46

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 47 <211〉 29 〈212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 -35- 152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物30 <220> <221> M0D_RES <222〉 (2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 MOD—RES <222〉（10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220> <221〉 M0D_RES <222> (29).· (29) <223〉C端醯胺化 <400> 47

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 48 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220> -36-

152868-序列表.doc 201130503 <221〉 MISC_FEATURE 〈223〉 升糖素類似物31 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 ⑵·.⑵ <223> d-Ser <220〉 〈221〉 M0D_RES <222> <223〉 (29).. (29) C端醯胺化 <400〉 48

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 49 <211> 29 〈212〉 PRT 〈213〉 人工序列 <220〉 <223〉 • 合成肽 <220〉 〈221〉 MISC一FEATURE <223〉 升糖素類似物32 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 <223〉 (2)..(2) Xaa 為 Αβ <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) -37- 152868·序列表.doc 201130503 <223〉C端醯胺化 <400〉 49

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 50 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 〈223〉 合成肽 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <223〉 升糖素類似物 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> ⑵..⑵ <223〉 d-Ser <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <222〉 (16).. (20) <223> 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <222〉 (17).. (21) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29). . (29) <223〉 C端醯胺化 152868-序列表.doc •38-

201130503 <400〉 50

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 51 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列

<220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC^FEATURE <223〉升糖素類似物34 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （2)..(2) 〈223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 51

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 39- 152868-序列表.doc 201130503 <210> 52 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物35 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2)·_ (2) <223〉 d-Ser <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 52

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 53 <211〉 29 <212〉 PRT <213> 人工序列 <220〉 -40·

152868-序列表.doc 201130503 <223〉 合成肽 <220〉 〈221〉 MISC_FEATURE <223〉 升糖素類似物36 <220> <221〉 M0D_RES <222> <223〉 (2).. (2) Xaa 為 AIB <220〉 〈221〉 <222〉 • <223〉 M0D_RES (24)·. (24) 共價結合至40kDaPEG <220〉 〈221〉 M0D_RES <222〉 <223〉 (29). . (29) C端醯胺化 <400〉 53

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Gl'u 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Met Asn Thr • 20 25 <210〉 54 <211> 29 <212〉 PRT <213〉 人工序列 〈220〉 <223〉 合成肽 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <223〉 升糖素類似物37 •41 · 152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221> MOD.RES <222〉（10). .(10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221〉 MOD—RES <222> (29). . (29) <223〉C端醯胺化 <400> 54

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 55 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE 〈223>升糖素類似物38 <220> <221> M0D_RES <222〉 （2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222> (10). ·(10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 42-

152868-序列表.doc 201130503 〈220> <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 55

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25

<210〉 56 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物39 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉（10).. (10) <223〉用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 56

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15 -43 - 152868-序列表.doc 201130503

Glu Ala Val Arg Leu Phe He Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 57 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物40 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 （10)..(10) <223〉用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 57

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 58 <211〉 29 • 44·

152868-序列表.doc 201130503

<212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <220〉 <221〉 <223〉 MISC_FEATURE 升糖素類似物42 <220> <221〉 <222〉 <223> M0D_RES ⑵··⑵ Xaa為胺基異丁酸 ^ <220> <221〉 〈222〉 <223〉 M0D_RES (10)..(10) 經由Y-Glu-y-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 <222〉 <223> M0D_RES (16).. (16) Xaa 為 AIB 〈220〉 〈221〉 <222> • <223> M0D_RES (29).. (29) C端醯胺化 <400> 58

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 〈210〉 59 <211> 29 -45 - 152868-序列表.doc 201130503 <'Z12> PKT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物43 <220〉

<221〉 M0D_RES <222> (2).. (2) <223〉Xaa為胺基異丁酸 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （10).· (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (16).. (16) <223〉Xaa為胺基異丁酸 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400〉 59

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr. 20 25

<210> 60 <211〉 29 <212〉 PRT -46- 152868-序列表.doc 201130503 <213〉人工序列 <220> 〈223>合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物44 <220〉 <221〉 M0D—RES <222> (2).. (2) <223> D-Ser

<220〉 <221> M0D_RES <222> (10).. (10) <223〉經由y-G1u-y-G1u間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉

<221〉 M0D—RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 MOD—RES <222〉 （29).. (29) 〈223> C端醯胺化 <400> 60

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 61 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 • 47· 152868-序列表.doc 201130503 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物45 <220〉 <221〉 MOD—RES <222〉 （2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （10).. (10) <223〉經由y-GIu-y-GIu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D.RES <222〉 (16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 61

His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 62 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 •48-

152868·序列表.doc 201130503 <220〉 <223〉 合成肽 <220> <221〉 MISC_FEATURE 〈223〉 升糖素類似物46 <220> 〈221〉 M0D_RES 〈222〉 <223〉 ⑵..⑵ Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 ^ <222〉 琴 <223〉 M0D_RES do)., (ίο) 經由Y-Glu-Y-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 〈223〉 (16).. (16) Xaa 為 AIB <400〉 62

His Xaa Gin Gly Thr Phe lie Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr • 20 25 <210〉 63 <211> 29 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223> 合成肽

<220〉 <221〉 MISC FEATURE 152868-序列表.doc -49- 201130503 <223〉升糖素類似物48 〈220> <221〉 M0D_RES <222〉 （2)..(2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉（10).. (10) <223〉經由y-G1u-y-G1u間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221> M0D_RES <222〉 （16)··(16)

<223〉Xaa 為 AIB <220> <221〉 M0D_RES <222〉 (29)..(29) 〈223> C端醯胺化 <400> 63

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 64 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221〉 MISC一FEATURE <223〉升糖素類似物49 -50·

152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221> MOD_RES <222〉⑵..（2) <223〉Xaa 為 Affi <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（10). . (10) <223〉經由yGlu-Y-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221〉 MOD_RES <222〉 （16).· (16)

<223〉Xaa 為 AIB

<220〉 <221〉 M0D_RES <222> (29).· (29) <223〉C端醯胺化 <400> 64

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 65 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物50 -51 - 152868-序列表.doc 201130503 <220>

<221> M0D_RES <222> (2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（10).· (10) <223〉經由Y-Glu-y-Ghi間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400> 65

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 66 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221〉 MISC—FEATURE <223〉升糖素類似物51 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2)..(2) <223> d-Ser <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（10). · (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 52-

152868-序列表.doc 201130503 <221〉 MOD_RES <222> (29)·· (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 66

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Leu Asp Thr 20 25

<210〉 67 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物52 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223〉Xaa 為 AIB <220〉

<221〉 MOD一RES <222〉 (10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29)..(29) 〈223> C端醯胺化 <400> 67 53- 152868-序列表.doc 201130503

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 〈210〉 68 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 53 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (2).. (2) <223〉 D-Ser <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（10)·. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用CI6脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24)..(24) <223〉聚乙二醇化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 68

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu • 54·

152868·序列表.doc 201130503 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> <211> <212> <213〉 69 29 PRT 人工序列 <220〉 〈223〉 合成肽 鲁 <220〉 <221〉 <223〉 MISC_FEATURE 升糖素類似物54 <220〉 <221〉 <222〉 <223〉 M0D_RES ⑴·.⑴ Xaa 為 DMIA <220〉 <221〉 <222〉 〈223〉 M0D—RES (10).. (10) 經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醢基醯化 • <220〉 <221〉 <222〉 <223〉 M0D_RES (29).. (29) C端醯胺化 <400〉 69

Xaa Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 55- 152868-序列表.doc 201130503 <210〉 70 <211〉 29 <212> PRT 〈213> 人工序列 <220> <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物57 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （1).· (1) <223> Ac-His <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221> M0D_RES <222〉 (29). . (29) <223〉C端醯胺化 <400> 70

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 71 <211> 30 <212> PRT <213〉人工序列 56-

152868·序列表.doc 201130503 <220> <223〉 合成肽 〈220〉 <221〉 MISC—FEATURE <223〉 升糖素類似物55 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 ⑵..⑵ <223〉 d-Ser <220> <221〉 巍 <222> 胃 <223〉 M0D_RES do).. (10) 經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400〉 71

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Gly 20 25 30 <210> 72 <211> 31 • <212> PRT <213> 人工序列 〈220> <223〉 合成肽 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223> 升糖素類似物56 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 ⑵.⑵ 57- 152868-序列表.doc 201130503 <223〉 d-Ser <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400> 72

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 - 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Gly Gly 20 25 30

<210〉 73 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物58 <220〉 <221> M0D_RES <222> (2)..(2)

<223〉Xaa 為 AIB <220> <221> M0D_RES <222〉（10)·. (10) 〈223>經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) 〈223> C端醯胺化 58-

152868-序列表.doc 201130503 <400〉 73

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 74 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列

<220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物59 <220〉

<221> M0D_RES <222> (2).. (2) <223> D-Ala <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉(10). . (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (29)..(29〉 <223〉C端醯胺化 <400〉 74

His Ala Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15 -59· 152868-序列表.doc 201130503

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 75 <211〉 39 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物60 <220〉 <221> M0D_RES <222〉（2)·· (2) <223> D-Ser 〈220〉 <221> M0D_RES <222〉 （16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB 〈220〉 <221> M0D_RES <222〉 （39)·. (39) <223〉C端醯胺化 <400〉 75

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser -60-

152868-序列表.doc 201130503 35 <210〉 〈211〉 76 39 <212〉 <213> PRT 人工序列 <220> <223> 合成肽 <220> 〈221〉 <223〉 MISC—FEATURE 升糖素類似物61 1 <220〉 <221〉 <222〉 〈223〉 M0D_RES ⑵..⑵ D-Ser 〈220〉 <221> <222> <223〉 M0D—RES (39).. (39) C端醯胺化 <400> 76

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 • 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210〉 77 <211〉 29 <212> <213〉 PRT 人工序列 •61 - 152868-序列表.doc 201130503 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC^FEATURE <223〉升糖素類似物62 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2)·.(2) <223〉 D-Ser <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 77

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 78 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 •62-

152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <223〉 合成肽 <220〉 <221〉 <223〉 MISC一FEATURE 升糖素類似物63 <220〉 〈221〉 <222> 〈223〉 M0D_RES ⑵..⑵ D-Ser <220〉 <221〉 赢 <222〉 胃 <223〉 M0D_RES (10)·.(10) 經由Y-GIu-y-G1u間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221〉 <222〉 <223〉 M0D_RES (16).. (16) Xaa 為 AJB <220〉 〈221〉 <222〉 <223> M0D_RES (29). . (29) C端醯胺化 · 〈400〉 78

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 79 <211> <212〉 <213〉 29 PRT 人工序列 <220〉 63· 152868·序列表.doc 201130503 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物64 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29). . (29) <223〉C端醯胺化 <400> 79

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25

<210> 80 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物65 •64- 152868-序列表.doc 201130503 〈220> <221> MISC_FEATURE <222〉 （29). . (29) 〈223> C端醯胺化 <400> 80

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25

<210〉 81 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE 〈223>升糖素類似物66 <220> <221> M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 81

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Lys Arg Ala Gin Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 65- 152868-序列表.doc 201130503 <210〉 82 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物67 <400> 82

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 83 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物68 <400> 83

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Arg Ala Lys Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 -66· 152868·序列表.doc 201130503 <210〉 84 〈211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物69 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （2)_. (2) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （10).·(10) <223〉用C16脂肪醢基醯化 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220> <221> M0D_RES <222〉 （29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400〉 84

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 -67- 152868-序列表.doc 201130503 <210〉 85 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物70 <220〉 <221> MOD^RES <222〉（2).· (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (10).· (10) <223〉經由y-Ghi-Y-Glu間隔基用C14脂肪醯基醯化 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 85

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 68- 152868-序列表.doc 201130503 <210〉 86 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE 〈223>升糖素類似物71 <220>

<221〉 MOD—RES <222〉 （2).·⑵ <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（10). . (10) 〈223>經由Y-GlutGlu間隔基用C18脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 86

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 69- 152868-序列表.doc 201130503 <210> 87 <211> 31 <212> <213〉 PRT 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <220〉 <221〉 <223〉 MISC_FEATURE 升糖素類似物74 <220〉 <221〉 <222〉 <223〉 MOD一RES (2).. (2) D-Ser <220〉 <221> <222〉 〈223〉 M0D_RES (10).. (10) 經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醢基醯化 <220〉 <221〉 <222〉 <223> M0D—RES (31)·· (31) C端醯胺化 <400〉 87

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Gly Glu 20 25 30 <210〉 88 <211> 29 <212〉 <213〉 PRT 人工序列 152868·序列表.doc -70- 201130503 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物75 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （1)..(1) <223〉Xaa為去胺基-His <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉（10)·· (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29).· (29) 〈223> C端醯胺化 <400〉 88

Xaa Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr

<210〉 89 <211〉 29 <212> PRT 〈213>人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC FEATURE •71 - 152868-序列表.doc 201130503 <223〉升糖素類似物76 <220>

<221〉 MOD_RES <222> (2).. (2) <223> D-Ser <220〉 <221> MOD_RES <222〉 (10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400> 89

His Ser Gin Gly Thr

Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu

Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 90 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物77

<220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223> D-Ser <220〉 <221> M0D_RES<222〉 (10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 152868-序列表.doc •72- 201130503 <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222> (24). (24) <223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29)_.(29) <223〉C端醯胺化 <400> 90

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys 1 5 10

Tyr Leu Asp Glu 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp 20 25

Thr <210〉 91 <211〉 31 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽

<220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223〉升糖素類似物78 <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 （2).· (2) <223〉 D-Ser <220> <221> M0D_RES <222〉 （10),·(10) <223〉經由Y_Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 152868·序列表.doc 73- 201130503 <220> <221> M0D_RES <222> (24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <400〉 91

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Gly Gly 20 25 30 <210〉 92 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物79 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (2)·. (2) <223> D-Ser <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222〉 （10)·· (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D—RES <222〉 (24).. (24)

<223〉共價結合至40kDaPEG <400> 92 74·

152868-序列表.doc 201130503

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 93 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223〉升糖素類似物80 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （2)_. (2) <223〉Xaa 為 AIB <220> <221〉 M0D_RES <222〉（10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (24)..(24) <223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221〉 MOD—RES <222〉 (29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400〉 93 75- 152868·序列表.doc 201130503

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 94 <211> 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物81 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉（2).. (2) <223〉 D-Ala <220>

<221> M0D_RES <222〉 (10)..(10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醢化 <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 （24).· (24)

<223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 94

His Ala Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu •76·

152868-序列表.doc 201130503 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> <211〉 <212〉 <213> 95 29 PRT 人工序列 <220> <223〉 合成肽 1 <220〉 <221〉 <223〉 MISC_FEATURE 升糖素類似物82 <220〉 <221〉 <222> <223> MOD一RES ⑵..⑵ D-Ser <220> <221〉 <222〉 <223〉 MOD一RES do)., do) 經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 • <220〉 <221〉 <222〉 <223> M0D_RES (29).. (29) C端醯胺化 <400> 95

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 -77- 152868-序列表.doc 201130503 <210〉 96 <211〉 30 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物83 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉⑵.·（2) <223> D-Ser <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （10)..(10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221> M0D_RES <222〉（30).. (30) <223〉C端醯胺化 <400〉 96

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Glu 20 25 30 78-

152868-序列表.doc 201130503 <210〉 97 <211> 39 <212〉 <213〉 PRT 人工序列 <220〉 <223> 合成肽 <220> <221〉 <223〉 MISC一FEATURE 升糖素類似物84 <220〉 <221〉 <222> 胃 <223〉 M0D_RES ⑵.·⑵ D-Ser <400〉 97

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 • 〈210> <211〉 98 29 <212〉 〈213> PRT 人工序列 <220> 〈223> 合成肽 <220> <221〉 <223〉 MISC_FEATURE 升糖素類似物85 79· 152868-序列表.doc 20 201130503 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2)·. (2) <223〉 D-Ser <220〉 <221〉 MOD-RES <222〉 （10)·. (10) <223〉經由γ-Ghi間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 98

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 25 <210〉 99 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> 〈223>合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物86 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2)_· (2) <223> D-Ser 152868-序列表.doc 80-

201130503 <220〉 <221〉 <222〉 <223> M0D_RES (16).. (16) Xaa 為 AIB <220> <221〉 M0D_RES <222> <223〉 (29).. (29) C端醯胺化 <400> 99

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 100 <211〉 29 <212〉 PRT <213> 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <220〉 • <221> MISC_FEATURE <223> 升糖素類似物87 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 ⑵..⑵ <223〉 D-Ser <220〉 <221> M0D_RES <222〉 <223〉 (29).. (29) C端醯胺化 <400> 100 -81 - 152868-序列表.doc 201130503

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 101 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物88 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223> D-Ser <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉(10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 101

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Glu -82·

152868-序列表.doc 201130503 20 25 <210〉 102 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 〈223>合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物89

<220> <221> M0D_RES <222〉 (2).. (2) <223〉 D-Ser <220> <221〉 MISC_FEATURE <222〉 （16)··(20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 102

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Leu Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25

<210〉 103 <211〉 29 <212> PRT -83 - 152868·序列表.doc 201130503 <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物90 <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222> (2).·(2) <223〉 D-Ser

<220> <221> MISC_FEATURE <222〉(16).. (20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 103

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 104 <211〉 29 <212〉 PRT <213> 人工序列 <220> <223〉 合成肽 84- 152868·序列表.doc 201130503

<220> <221> MISC_FEATURE 〈223> 升糖素類似物91 <220〉<221〉 MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-Ser <220〉 <221> MISC_FEATURE <222> (16)·. (20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24)_·(24) 〈223> 共價結合至40kDaPEG <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（29)·. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 104

His 1

Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Leu Tyr Leu Asp Glu 5 10 15

Arg

Ala Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 105 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 152868-序列表.doc -85- 201130503 <221〉 MISC_FEATURE <223> 升糖素類似物92 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 ⑵..⑵ <223〉 D-Ser <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <222〉 (16).. (20) <223〉 介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (24).. (24) <223〉 共價結合至40kDaPEG <220> <221〉 M0D—RES <222〉 (29).. (29) <223〉 C端醯胺化 <400〉 105

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 106 <211〉 39 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE -86-

152868-序列表.doc 201130503 〈223>升糖素類似物93 <220〉 <221> MOD_RES <222〉 （2).· (2) <223> D-Ser <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221> M0D_RES <222> (39).. (39) <223〉C端醯胺化 <400〉 106

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 〈210〉 107 <211〉 39 <212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 87- 152868-序列表.doc 201130503 <221〉 MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物94 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 (2).. (2) <223> D-Ser <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222〉 （39).· (39) <223〉C端醯胺化 <400> 107

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210〉 108 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物95 <220〉

<221> M0D_RES 152868·序列表.doc 88-

201130503 <222> ⑵..（2) <223〉 D-Ser <220〉

<221> MOD_RES 〈222> (10). . (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> MOD_RES <222〉 （24)·. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220>

<221〉 MOD_RES <222〉 （29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400> 108

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210〉 109 〈211〉 30 〈212〉 PRT <213〉人工序列 <220> 〈223>合成肽 <220> <221〉 MISC一FEATURE <223〉升糖素類似物96 <220〉

<221〉 MOD一RES <222> (2).. (2) 89- 152868·序列表.doc 201130503 <223> D-Ser <220> <221〉 M0D_RES <222〉（10)·. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24)·. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220> 〈221> M0D_RES <222〉(30).. (30) 〈223> C端醯胺化 <400> 109

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Glu 20 25 30 <210> 110 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物97 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉（2).. (2) <223〉 D-Ser 152868·序列表.doc 90·

201130503 <220> <221> MOD_RES <222〉(10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 〈220> <221〉 M0D_RES <222> (16). · (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （24).. (24)

〈223> 共價結合至40kDa PEG

<220〉 〈221> M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉，C端醯胺化 <400> 110

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 111 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE 〈223>升糖素類似物98 •91 - 152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221> M0D_RES <222〉（2)·. (2)

<223〉Xaa 為 AIB ' <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) 〈223〉C端醯胺化 <400> 111

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 112 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物99 <220〉 92- 152868-序列表.doc 201130503 <221> MOD_RES <222〉(2).. (2) <223> D-Ser <220〉 <221〉 MOD—RES <222> (16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 MOD一RES 〈222〉 （24).. (24) <223〉共價結合至40kDa PEG <220〉

<221〉 MOD—RES <222〉（29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 112

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 113 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221〉 MISC—FEATURE <223〉升糖素類似物100 <220>

<221> M0D_RES 93· 152868-序列表.doc 201130503 <222> (2).. (2) <223〉 D-Ser <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24)..(24)

〈223> 共價結合至40kDa PEG <220> <221〉 MOD—RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 113

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 114 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC^FEATURE <223〉升糖素類似物101 <220〉 <221> M0D_RES <222〉（1). _ (1)

〈223〉Xaa 為 DMIA <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (24).. (24) -94· 152868-序列表.doc 201130503 <223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221〉 MOD_RES <222〉 （29).. (29) 〈223〉C端酿胺化 <400> 114

Xaa Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25

<210> 115 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 〈223>合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE <223〉類似物A

<221〉 M0D_RES 〈222> (29).. (29) <223〉C端酿胺化 <400〉 115

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 -95- 152868-序列表.doc 201130503 <210〉 116 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE <223〉類似物B <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29).· (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 116

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 117 <211> 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC.FEATURE <223〉類似物C <220〉

<221> M0D_RES -96- 152868·序列表.doc 201130503 <222> (2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB 〈220> <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 117

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr

<210> 118 <211〉 29 〈212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE 〈223>類似物D

<220〉

〈221〉 M0D_RES <222〉（2).. (2) <223〉Xaa 為 AIB <220> <221> M0D_RES 〈222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 118

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 97· 152868-序列表.doc 201130503 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 119 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物79 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉(2).. (2) <223〉 D-Ser <220〉 <221> M0D_RES <222〉（10).. (10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400〉 119

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 120 <211> 30 <212〉 PRT <213〉人工序列 •98-

152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <223〉 合成肽 <220> <221〉 <223〉 MISC_FEATURE 升糖素類似物83 <220> <221〉 <222> <223> M0D_RES (2).. (2) D-Ser <220〉 <221〉 a <222> • <223〉 M0D_RES (10).. (10) 經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 〈221〉 <222〉 <223〉 MOD—RES (30).. (30) C端醯胺化 <400〉 120

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Glu • 20 25 30 <210> <211〉 121 29 <212〉 <213> PRT 人工序列 <220〉 <223> 合成肽 <220> -99- 152868-序列表.doc 201130503 <221> M0D_RES 〈222> (2).·(2) <223〉Xaa 為 Aib <220〉

<221〉 M0D_RES <222> (10).. (10) <223〉經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221> M0D_RES <222〉 （16). · (16) <223〉Xaa 為 Aib <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 121

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 122 〈211〉 29 <212〉 PRT <213> 人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> M0D_RES <222> (2)·. (2) 〈223〉Xaa 為 Aib 152868·序列表.doc 100-

201130503 <220〉 <221> M0D_RES <222〉(10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (16).. (16) <223〉Xaa 為 Aib <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（29).· (29) <223〉C端醯胺化

<400〉 122

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Kaa 1 5 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 123 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <223〉合成肽 <220> <221〉 MISC—FEATURE <223〉升糖素類似物230 <220> 〈221〉M0D_RES <222〉 (2)..(2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 101 · 152868-序列表.doc 201130503 <221> M0D_RES <222〉 （10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222> (24)·· (24)

〈223> 共價結合至40kDa PEG <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 123

His Xaa G]n Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 124 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物237 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉(10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉

<221〉 M0D_RES 102-

152868·序列表.doc 201130503 <222〉（29)·. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 124

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe He Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 〈210〉 125 <211〉 29

〈212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220> 〈223>合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物238 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2)_ (2) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES _ <222〉（10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29)·. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 125

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu -103- 152868-序列表.doc 201130503 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 126 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物242 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （2)·. (2) <223〉Xaa為胺基異丁酸 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （10)·. (10) <223〉經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29)·. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 126

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa •104- 152868-序列表.doc 201130503 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 127 <211> <212> <213〉 29 PRT 人工序列 <220〉 〈223〉 合成肽 ® <220> <221〉 <223〉 MISC_FEATURE 升糖素類似物243 <220〉 <221〉 <222〉 <223> MOD—RES (2).. (2) Xaa 為 AIB <220> <221〉 <222> <223〉 M0D_RES (10).. (10) 經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 • <220> <221〉 <222〉 <223〉 M0D_RES (16).. (16) Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 <222〉 〈223〉 M0D_RES (29). · (29) C端醯胺化 <400> 127

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15 152868-序列表.doc -105- 201130503

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 〈210〉 128 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物245 <220〉 <221> M0D_RES <222〉（2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 〈221〉 M0D_RES <222〉（10)·· (10) <223〉經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 .<220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223〉 Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (29).. (29) <223〉 C端醯胺化 〈400〉 128

His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15 -106-

152868-序列表.doc 201130503

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 129 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物246 <220〉

<221> M0D_RES <222> (2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （10)._ (10) <223〉經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉

<221〉 M0D_RES <222> (16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <400> 129

His Xaa Gin Gly Thr Phe lie Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 107- 152868-序列表.doc 201130503 <210> 130 <211> 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物248 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （2).·(2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 (10).. (10) <223〉經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 (16)..(16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400> 130

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 108-

152868-序列表.doc 201130503 <210> 131 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223〉升糖素類似物249 <220〉

<221> M0D_RES <222〉(2).. (2) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （10)__ (10) 〈223>經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (16).. (16) <223〉 Xaa 為 Affi <220〉 〈221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉 C端醯胺化 <400〉 131

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 -109- 152868·序列表.doc 201130503 <210〉 132 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物250 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉⑵· .（2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (10)..(10) <223〉經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400〉 132

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 133 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 •110,

152868·序列表.doc 201130503 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223〉 升糖素類似物252 <220> <221〉 M0D_RES <222> <223〉 (2).. (2) Xaa 為 AIB <220> <221〉 M0D_RES <222〉 <223> (10).. (10) 經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 巍 <221> M0D_RES ™ <222> <223> (29).. (29) C端醯胺化 <400〉 133

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Leu Asp Thr 20 25

<210〉 134 • 〈211〉 29 <212〉 PRT 〈213> 人工序列 <220> <223> 合成肽 <220〉 <221> <223> MISC_FEATURE 升糖素類似物254 〈220> <221> MOD RES 111 - 152868-序列表.doc 201130503 <222〉 （1).. (1)

<223〉Xaa 為 DMIA <220〉

<221> M0D_RES <222> (10).· (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222> (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 134

Xaa Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 25

20 <210〉 135 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物257 <220〉 <221〉MOD一 RES <222〉⑴·.（1) <223> Ac-His 〈220〉

<221〉 M0D_RES 〈222〉 （10). · (10) •112- 152868-序列表.doc 201130503 <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉 C端酿胺化 <400〉 135

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25

<210〉 136 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE 〈223>升糖素類似物258 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （2)_. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉

〈221〉 M0D_RES <222〉 （10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221〉 M0D_RES 〈222> (29)·· (29) <223〉C端醯胺化 113- 152868·序列表.doc 201130503 <400> 136

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 137 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物259 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 (2).. (2) <223> D-Ala <220〉

<221〉M0D_RES <222> (10). · (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400〉 137

His Ala Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15 -114·

152868-序列表.doc 201130503

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 〈210〉 138 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220>

<221> MISC_FEATURE 〈223>升糖素類似物270 〈220> <221〉 M0D_RES <222〉⑵…（2) <223〉Xaa 為 AIB <220> <221〉 MOD一RES <222〉 (10)..(10) <223〉經由兩個酸性胺基酸之二肽間.隔基用CI6脂肪醯基醯化 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400> 138

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15 -115- 152868-序列表.doe 201130503

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 139 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <223〉升糖素類似物271 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220> <221〉 M0D_RES <222> (10). · (10) <223〉經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉

<221〉 MOD_RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29)·. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 139

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15 •116-

152868·序列表.doc 201130503

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 140 <211〉 31 <212> PRT 〈213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物274 <220〉 <221> MOD_RES <222〉(2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N·甲基 Ser、a，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 MOD一RES <222> (10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （31)·.(31) <223〉C端醯胺化 <400〉 140

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr Gly Glu 20 25 30 -117- 152868·序列表.doc 201130503 <210〉 141 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物275 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （1).. (1) <223〉Xaa為去胺基-His <220〉 <221> M0D_RES <222> (10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 141

Xaa Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 142 <211〉 29 <212> PRT <213〉 人工序列 <220> •118·

152868-序列表.doc 201130503 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物280 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （2).. (2)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉（10).· (10)

<223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（24).· (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 〈221> M0D_RES <222> (29). . (29) <223〉C端醯胺化 <400> 142

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 143 〈211〉 29 〈212〉 PRT 〈213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 119- 152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物222 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2)·. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N-甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（10)· · (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221> MISC_FEATURE <222〉 （15).· (20) <223〉鹽橋鍵 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 （16).. (21) 〈223> 鹽橋鍵 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 143

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr •120-

152868-序列表.doc 201130503 20 25 <210〉 144 <211〉 29 <212〉 PRT 〈213> 人工序列 <220〉 〈223>合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物229

<221> M0D_RES 〈222> ⑵..（2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α5胺基異丁酸 <220〉 〈221> M0D_RES <222〉 （10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (24).. (24)

<223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 144

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr -121 - 152868-序列表.doc 201130503 20 25 <210> 145 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物244 <220〉 <221> MOD_RES <222〉 （2)..(2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-甲基 Ser 或 α5胺基異丁酸 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（10).· (10) <223〉經由兩個酸性殘基之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醢胺化 <400〉 145

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15 •122· 152868-序列表.doc 201130503

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210〉 146 <211> 29 <212〉 PRT 〈213> 人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物251 <220〉 <221〉 MOD一RES 〈222〉 （2).·(2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Vd、Gly、Ν·曱基 Ser 或 α5胺基異丁酸 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (10〉.·（10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) 〈223> C端醯胺化 <400〉 146

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 '5 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 147 -123- 152868-序列表.doc 201130503 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉肽 253 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala ' Va卜 Gly、Ν·曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 M0D_RES <222> (10).· (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24)..(24) <223〉聚乙二醇化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) 〈223> C端醯胺化 <400> 147

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 148 •124·

152868-序列表.doc 201130503 <211> 30 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 合成肽 <220〉 <221> <223> MISC_FEATURE 升糖素類似物55 <220〉 <221> 〈222〉 • <223〉 MOD—RES (2).. (2) Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220> <221〉 <222> <223〉 MOD—RES (10).. (ίο) 經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400> 148

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr Gly

• 20 25 30 <210〉 149 <211〉 31 <212〉 <213〉 PRT 人工序列 <220〉 <223> 合成肽 <220〉 <221〉 MISC FEATURE -125- 152868-序列表.doc 201130503 〈223>升糖素類似物256 <220>

<221〉 M0D_RES <222> (2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α5胺基異丁酸 <220> <221〉 M0D_RES <222〉(10). . (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400〉 149

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr Gly Gly 20 25 30 <210> 150 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物262 <220〉

<221〉 MOD—RES <222> (2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 a，胺基異丁酸 <220〉

<221> M0D_RES 126· 152868·序列表.doc 201130503 <222〉（10)·. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 MOD_RES <222> (16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29)·. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 150

Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 5 10 15

Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 151 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物263 <220〉

<221> M0D_RES 〈222〉（2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、Ν·曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉

<221〉 MOD一RES 127- 152868·序列表.doc 201130503 <222〉 （10).. (10) 〈223>經由兩個酸性殘基之二肽間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (16)·. (16) <223〉 Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉 C端醯胺化 <400〉 151

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 152 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物276 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、Ν·曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 128·

152868·序列表,doc 201130503 <221〉 MOD_RES <222〉（10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400> 152

His

Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser

Lys Tyr Leu Asp Glu 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 25 20

<210〉 153 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE 〈223〉升糖素類似物277 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （2)..⑵

<223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、Ν·曱基 Ser 或 a胺基異丁酸 <220〉

<221〉 MOD—RES <222〉（10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220> 129- 152868-序列表.doc 201130503 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉 C端醯胺化 <400> 153

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 154

<211> 31 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物278 <220>

<221〉 M0D_RES <222> (2).. (2)

<223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-甲基 Ser 或 a,胺基異丁酸 <220〉 <221> M0D_RES 〈222〉（10)·. (10) 〈223>經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221> M0D_RES <222〉 （24)·.(24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <400> 154 130· 152868-序列表.doc 201130503

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr Gly Gly 20 25 30 <210〉 155 〈211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物279 <220〉

<221> M0D_RES <222> (2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Vd、Gly ' N-曱基 Ser 或 a，胺基異丁酸 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （10).· (10)

<223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醢基醯化 <220> <221〉 M0D—RES <222〉 （24)·. (24) <223〉共價結合至40kDaPEG <400〉 155

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15 • 131 · 152868-序列表,doc 201130503

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 156 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物282 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（2).· (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Vd、Gly、N-甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （10)··(10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉（29)..(29) φ <223〉C端醯胺化 <400〉 156

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 157 -132- 152868·序列表.doc 201130503 <211〉 30 <212> PRT <213〉人工序列 〈220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物283 <220>

<221> M0D_RES <222〉（2).. (2)

<223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220>

<221〉 M0D_RES <222〉 （10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221> M0D_RES <222> (30)..(30) 〈223> C端醯胺化 <400> 157

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Glu 20 25 30 <210> 158 -133- 152868-序列表.doc 201130503 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物285 <220〉 <221> M0D.RES <222〉 （2)·.(2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D.RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 158

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 159 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉 人工序列 〈220〉 •134·

152868·序列表.doc 201130503 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物288 <220〉

<221> MOD_RES <222〉(2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、Ν·甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉

<221> MOD_RES <222> (10)· ·(10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220> <221> M0D_RES <222〉（29)· . (29) <223〉C端醯胺化 <400> 159

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Glu

<210> 160 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE -135- 152868-序列表.doc 201130503 <223〉升糖素類似物295 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （2)._ (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、VaL· Gly、N-甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220>

<221> M0D_RES <222〉 (10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 160

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210〉 161 <211〉 30 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220>

<221> MISC FEATURE -136-

152868-序列表.doc 201130503 <223〉升糖素類似物296 <220〉 <221> MOD_RES <222〉(2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-AIa、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉

<221〉 MOD一RES <222> (10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （24)..(24) <223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（30).· (30) <223〉C端醯胺化 <400〉 161

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Glu 20 25 30 <210〉 162 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220>

<221〉 MISC—FEATURE -137- 152868-序列表.doc 201130503 <223〉升糖素類似物297 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （2)_. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220> <221〉 M0D_RES <222〉(10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （16)·. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220> <221> M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 162

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 163 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 138-

152868-序列表.doc 201130503 <223〉合成肽 <220> <221〉 MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物279 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、Ν·曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉

<221〉MODJRES <222> (10).· (10) 〈223>經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <400> 163

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 164 <211〉 30 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物283 <220〉 <221〉 MOD—RES <222〉 (2).. (2) 139- 152868-序列表.doc 201130503 <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉（10). (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醞基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉(30).. (30) <223〉C端醯胺化 <400> 164

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr Glu 20 25 30 <210> 165 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物220 <220〉 <221〉 MOD—RES <222〉 （2)..(2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 a，胺基異丁酸 <220〉

<221> MISC_FEATURE •140·

152868-序列表.doc 201130503 <222> (16). . (20) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 〈221〉 MISC—FEATURE <222〉 (17). . (21) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222〉 (29).. (29) <223〉 C端醯胺化 <400〉 165

Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 5 10 15

Arg Ala Lys Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 166 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物221 <220〉

<221〉 M0D_RES <222> (2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N-甲基 Ser 或 a，胺基異丁酸 <220>

<221〉 M0D_RES -141 - 152868-序列表.doc 201130503 〈222〉 (16).. (16) <223〉 Xaa 為 AIB <220> <221〉 MISC_FEATURE <222〉 (16). . (20) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <222〉 (17). . (21) <223〉 鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉 C端醢胺化 <400> 166

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 167 <211> 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物224 <220〉 <221> MOD^RES <222> (2)·. (2) 152868-序列表.doc 142-

201130503 <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220> <221> MISC_FEATURE <222〉 (16)..(20) <223〉鹽橋鍵 <220> <221> MISC_FEATURE <222〉（17).· (21) <223〉鹽橋鍵 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （24)._ (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 167

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr

<210〉 168 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> MISC_FEATURE -143- 152868·序列表.doc 201130503 <223〉升糖素類似物226 <220> <221> M0D_RES <222> (2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N·甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (16).. (16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 （16).· (20) <223〉鹽橋鍵 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 （17).. (21) <223〉鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （24).. (24)

<223〉共價結合至40kDaPEG <220〉 <221〉MOD一 RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 168

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 169 •144- 152868·序列表.doc 201130503 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物231 <220> <221> MOD_RES <222〉⑵··（2)

<223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N·甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220> <221〉 MOD_RES <222〉 （29)_· (29) <223〉C端醯胺化 <400> 169 His Xaa Gin 1

Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 5 10 15

Glu Ala Val

Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 170 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221〉 MISC一FEATURE -145- 152868-序列表.doc 201130503 <223〉升糖素類似物233 <220〉 <221> M0D.RES <222〉 （2)·.(2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <222〉 (16)..(20) <223〉鹽橋鍵 <220>

<221> MISC_FEATURE <222〉 （17).·(21) <223〉鹽橋鍵 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 170

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25

<210> 171 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221〉 MISC—FEATURE •146· 152868-序列表.doc 201130503 <223〉升糖素類似物235 <220〉

<221〉 MOD一RES <222〉（2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N-甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 （24).. (24) <223〉共價結合至40kDa PEG <220〉

<221〉 M0D_RES <222> (29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400〉 171

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 172 <211> 39 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220> <221〉MISC一FEATURE <223〉升糖素類似物260 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （2).. (2) 147- 152868-序列表.doc 201130503 <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 (16). . (16) <223〉 Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (39).. (39) <223〉 C端醯胺化 <400> 172

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 〈210〉 173 <211> 39 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221〉 MISC—FEATURE <223〉升糖素類似物261 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 • 148-

152868-序列表.doc 201130503 <220〉 <221> MOD_RES <222〉 （39).. (39) 〈223> C端醯胺化 <400> 173

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 174 <211〉 39 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 〈223>合成肽 <220> <221〉 MISC一FEATURE <223〉升糖素類似物284 <220〉

<221> M0D_RES <222> (2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N·曱基 Ser 或 α5胺基異丁酸 〈400〉 174

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15 -149- 152868-序列表.doc 201130503

Gin Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210〉 175 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物286 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉

<221〉 MOD一RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220> <221> M0D_RES <222〉 (29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400〉 175

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15 •150-

152868-序列表.doc 201130503 Lys Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 176 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽

<220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物287 <220> <221〉 MOD一RES <222> (2)..(2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Vd、Gly、N·曱基 Ser 或 a，胺基異丁酸 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （29)..(29) <223〉C端醯胺化 <400> 176

His 1

Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 5 10 15

Gin

Ala Val Arg Leu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 177 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 152868-序列表.doc -151 - 201130503 <220> <223〉合成肽 <220> <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物289 <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 （2)..(2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221> MISC_FEATURE 〈222> (16).·(20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220> <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 177

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Leu Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 178 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 〈223>合成肽 <220> •152-

152868-序列表.doc 201130503 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物290 <220>

<221> M0D_RES <222〉（2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Vd、Gly、Ν·甲基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 （16)·.(20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 178

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 179 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物291 <220〉

<221〉 MOD RES 153 · 152868-序列表.doc 201130503 <222〉 （2)·· (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉（16).· (20) <223〉介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221> M0D_RES <222〉(24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221> M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 179

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Leu Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 180 <211〉 29 〈212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物292 <220〉

<221〉 M0D_RES 152868-序列表.doc •154-

201130503 <222〉 （2)·_(2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、Ν·曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <222〉 （16)·. (20) 〈223> 介於胺基酸之側鏈之間的内醯胺環 <220〉 <221> M0D_RES <222〉(24).. (24) <223〉共價結合至40kDaPEG <220〉

<221〉 M0D_RES <222〉 (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 180

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 181 <211〉 39 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE 〈223>升糖素類似物293 <220〉

<221> M0D_RES 155- 152868-序列表.doc 201130503 <222〉（2)·. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 (16)..(16)

<223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （24)..(24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （39)· _ (39) <223〉C端醯胺化 <400〉 181

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210〉 182 <211> 39 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221〉 MISC—FEATURE 152868-序列表.doc •156·

201130503 <223〉升糖素類似物294 <220〉 <221〉M0D—RES <222〉（2)_. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉 （39).. (39) <223〉C端醯胺化 <400> 182

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210〉 183 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物299 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser 或 α，胺基異丁酸 -157- 152868-序列表 _doc 201130503 <ζ^υ> <221> MOD_RES <222〉 （16).. (16) <223〉Xaa 為 AIB <220〉 <221〉 MOD—RES <222> (24)..(24) <223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221〉 M0D_RES 〈222〉 （29)·. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 183 His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 15 10 15

Lys Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu

Leu Asp Thr 20 25 <210> 184 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物2100<220> <221> M0D_RES<222> (2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N·曱基 Ser 或 a，胺基異丁酸 152868·序列表.doc 158- 201130503 <220> <221〉 MOD一RES <222〉 （24). · (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220> <221〉 M0D_RES <222> (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400> 184

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Gin Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210〉 185 <211〉 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉 <221> M0D_RES 〈222〉（2)_. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Val、Gly、N-曱基 Ser、a，胺基異丁酸 <220> <221> M0D_RES <222〉（24).. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉

<221〉 MOD—RES 159- 152868-序列表.doc 201130503 <222〉 （29).. (29〉 <223〉C端醯胺化 <400〉 185

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210〉 186 <211> 29 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221> M0D_RES <222〉 （2).. (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Va卜 Gly、N-曱基 Ser、α，胺基異丁酸 <220>

<221> M0D_RES 〈222〉 (10)..(10) <223〉經由γ-Glu間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 186

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15 -160-

152868-序列表.doc 201130503

Glu Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 187 <211> 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成肽 <220〉

<221〉 MOD一RES <222〉 （2).· (2) <223〉Xaa 為 D-Ser、D-Ala、Vd、Gly、Ν·甲基 Ser、α，胺基異丁酸 <220〉 <221〉 MOD—RES <222〉(10).. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221〉 M0D_RES <222〉 （29). · (29) 〈223> C端醯胺化 <400> 187

His Xaa Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe He Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 〈210〉 188 <211〉 29 <212〉 PRT <213〉人工序列 -161 - 15 2868·序列表.doc 201130503 〈220> <223〉合成肽 <220〉 <221> MISC_FEATURE <223〉升糖素類似物281 <220〉 <221> M0D_RES 〈222> (2).· (2) <223> D-Ala <220〉 <221> M0D_RES <222〉（10),. (10) <223〉經由酸性胺基酸間隔基用C16脂肪醯基醯化 <220〉 <221> M0D_RES <222〉 （24)·. (24)

<223〉共價結合至40kDa PEG <220〉 <221> M0D_RES <222> (29).. (29) <223〉C端醯胺化 <400〉 188

His Ala Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 15 10 15

Arg Ala Ala Gin Asp Phe Val Cys Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 162-

152868-序列表.doc

Claims (1)

1. 201130503 七、申請專利範圍： 一種升糖素類似物’其包含天然人類升糖素（Seq ID NO: 2)之經修飾胺基酸序列，該經修飾胺基酸序列包 含：⑴SEQ ID NO: 2之位置1〇之胺基酸經醯化或烷基化 胺基酸取代；（ii) SEQ ID NO: 2之位置16之胺基酸經促α 螺旋胺基酸取代；（iii) SEQ ID NO: 2之位置is之胺基酸 經脂族胺基酸取代；（iv)至少一個帶電荷胺基酸位於位 置27之胺基酸之C端；及至多十個對SEq id N〇: 2之 額外胺基酸修飾，其中該升糖素類似物展現⑴約1〇%或 1 0 /°以上之天然升糖素對升糖素受體之活性，（ii)約1 〇〇/〇 或10%以上之天然GLIM對GLIM受體之活性，或（iii)⑴ 與（ii)兩者^ 2. 3. 如請求項1之升糖素類似物，其中該升糖素類似物不由 SEQ ID NO: 9或10之胺基酸序列組成。

   如請求項1或2之升糖素類似物，其中位置18之該脂族胺 基酸為小型脂族胺基酸。 4. 5. 6. 如請求項3之升糖素類似物，其包含位置18之八丨3。 如吻求項1至4中任一項之升糖素類似物，其中該帶電荷 胺基酸為帶負電胺基酸。 如凊求項5之升糖素類似物，其中該帶負電胺基酸位於 該升糖素類似物之位置28、29、3〇或31，或此等位置之 組合。 7.如：求項6之升糖素類似物，其包含位置28之_。 如月丨述请求項中任一項之升糖素類似物，其中該促α螺 152868.doc 201130503 旋胺基酸為α，α二取代胺基酸。 9. 如請求項8之升糖素類似物，其中該α，α:取代胺基酸包 含R1及R2，其各自鍵結至(^炭，其中Ri及R2各獨立地選 自由視情況經經基、醯胺、硫醇、鹵基取代之c i _C4院 基組成之群’或Ri及R2與其所連接之該α碳一起形成 環。 10. 如請求項9之升糖素類似物，其中該α，α二取代胺基酸為 ΑΙΒ » 11. 如請求項1至7中任一項之升糖素類似物，其中該促α螺 旋胺基酸與位置12或20之胺基酸形成分子内橋鍵。 12. 如請求項丨丨之升糖素類似物，其中該分子内橋鍵為鹽橋 鍵。 13. 如請求項11或12之升糖素類似物，其中位置16及12或2〇 之該等胺基酸之一為Glu且另一胺基酸為Lys。 14. 如前述請求項中任一項之升糖素類似物，其在該升糖素 類似物之位置2 7處包含大型脂族胺基酸。 15. 如請求項11之升糖素類似物，其中該大型脂族胺基酸為 Leu或正白胺酸。 16. 如前述請求項中任一項之升糖素類似物，其進一步包含 以下一或多者：位置17之Gin、位置18之Ala、位置20之 Lys、位置21之Glu、位置23之lie，及位置24之Ala或 Cys 〇 17. —種升糖素類似物’其包含天然人類升糖素（SEQ ID NO: 2)之經修飾胺基酸序列，其中至少三個位於SEq 152868.doc 201130503 NO: 2之位置12至29中任何位置之胺基酸經促〇1螺旋胺基 酸取代，其中該升糖素類似物包含至多十個對SEq ID NO: 2之額外胺基酸修飾，其中該升糖素類似物展現⑴ 約10%或10%以上之天然升糖素對升糖素受體之活性， (ii)約10%或10%以上之天然GLP-1對GLP-1受體之活性， 或與（ii)兩者。 1 8 ·如請求項17之升糖素類似物，其中位置16、1 7、20及2 1 φ 中之三個或所有位置為促α螺旋胺基酸。 19. 如請求項17或18之升糖素類似物，其包含至少一個分子 内橋鍵及至少一個α,α二取代胺基酸。 20. 如請求項19之升糖素類似物’其中該分子内橋鍵為鹽橋 鍵。 21. 如請求項19或20之升糖素類似物，其中該分子内橋鍵鍵 聯位置17與21之胺基酸之側鏈。 22. 如請求項21之升糖素類似物，其中位置I?及21之該等胺 基酸之一為Lys且另一胺基酸為Glu。 23. 如請求項19至23中任一項之升糖素類似物，其中該α，α二 取代胺基酸位於位置16或20’或位於位置16與2〇兩者。 24·如請求項23之升糖素類似物，其中該α，α二取代胺基酸包 含R1及R2，其各自鍵結至α碳，其中尺1及R2各獨立地選 自由視情況經羥基、醯胺、硫醇、鹵基取代之c丨_C4烷 基組成之群，或Ri及R2與其所連接之該α碳一起形成 環。 25.如請求項24之升糖素類似物，其中該α，α二取代胺基酸為 152868.doc 201130503 AIB。 26.如請求項17或18之升糖素類似物，其包含兩個分子内橋 鍵。 27·如請求項26之升糖素類似物，其中該等分子内橋鍵為鹽 橋鍵。 28. 如請求項27之升糖素類似物，其中該等分子内橋鍵各自 形成於位置i之胺基酸與位置i+4之胺基酸之間，其中i為 12 、 16 、 17 ° 29. 如請求項28之升糖素類似物’其中位置i之該等胺基酸之 一為Glu且另一胺基酸為Lys。 30. 如請求項28或29之升糖素類似物，其包含鍵聯位置丨6與 20之s亥專胺基酸的分子間橋鍵及鍵聯位置17與21之該等 胺基酸的另一分子内橋鍵。 3 1 · —種升糖素類似物，其包含天然人類升糖素（SEq ID NO: 2)之經修飾胺基酸序列，該經修飾胺基酸序列包含 位置18之小型脂族胺基酸、位置19之脂族胺基酸、位置 20之帶正電胺基酸、位置21之電荷中性胺基酸、位置23 之大型脂族胺基酸、位置24之酸性胺基酸或Cys，及至 多7個對SEQ ID NO: 2之額外胺基酸修飾，其中該升糖素 類似物展現⑴約1 0%或1 〇%以上之天然升糖素對升糖素 受體之活性’（ii)約10°/。或1 〇%以上之天然GLP-1對GLP-1 受體之活性，或（iii)(i)與（Π)兩者。 32.如請求項21之升糖素類似物’其包含avrlfix(SEq ID NO: 11)之胺基酸序列作為該類似物之位置丨8至24，其中 152868.doc 201130503 X為 Cys 或 Glu。 3 3.如請求項3 1或3 2之升糖素類似物，其包含位置16及1 7每 一處之帶電荷胺基酸。 34. 如請求項33之升糖素類似物，其包含位置16及17每一處 之酸性胺基酸或位置16之酸性胺基酸及位置17之帶正電 胺基酸。 35. 如請求項34之升糖素類似物，其包含EXiAVRLFIX2(SEQ φ ID NO: 12)之胺基酸序列，其中X,為E、K或Q且又2為£或 C。 36. 如請求項3 1至35中任一項之升糖素類似物，其中該類似 物不包含胺基酸序列：KRNRNNIA(SEQ ID NO: 13)。 37. 如請求項17至36中任一項之升糖素類似物，其中該升糖 素類似物包含位置10之醯化或烷基化胺基酸。 38·如凊求項1至16及37中任一項之升糖素類似物，其中位 置10之該醯化或烷基化胺基酸包含C8至C20烷基鏈》 • 39.如請求項38之升糖素類似物，其中位置1〇之該酿化或烷 基化胺基酸包含C12至C18烷基鏈》 40. 如請求項39之升糖素類似物，其中位置1〇之該醯化或烷 基化胺基酸包含C14或C16烷基鏈。 41. 如請求項37至40中任一項之升糖素類似物，其中該醯化 或烧基化胺基酸為醯化或烷基化之式I、式〗〗或式m之胺 基酸。 42. 如請求項41之升糖素類似物，其中該式〗胺基酸為Lys。 43. 如請求項丄至16及37至42中任一項之升糖素類似物，其 152868.doc 201130503 進一步包含介於位置10之該胺基酸與該醯基或烷基之間 的間隔基。 44. 如請求項43之升糖素類似物，其中該間隔基之長度為3 至10個原子。 45. 如請求項43或44之升糖素類似物，其中該間隔基為胺基 酸或二肽。 46. 如請求項45之升糖素類似物，其中該間隔基包含一或兩 個酸性殘基。 47. 如前述請求項中任一項之升糖素類似物，其在位置1、 位置2或位置1及2包含達成DPp_IV蛋白酶抗性之胺基 酸。 48. 如請求項47之升糖素類似物，其中位置i之該胺基酸係 選自由以下組成之群：D-組胺酸、α,α_二甲基咪„坐乙酸 (DMIA)、Ν-甲基組胺酸、α•曱基組胺酸、咪唑乙酸、去 胺基組胺酸、羥基-組胺酸、乙醯基_組胺酸及高碳組胺 酸。 49·如請求項47或48之升糖素類似物，其中位置2之該胺基 酸係選自由以下組成之群：D_絲胺酸、丙胺酸、D_丙胺 酸、纈胺酸、甘胺酸、N_曱基絲胺酸、N_甲基丙胺酸及 α胺基異丁酸（AIB)。 50_如前述請求項中任一項之升糖素類似物，其包含c端醯 胺替代C端α羧酸酯基。 51.如前述請求項中任-項之升糖素類似物，其包含親水性 部分。 132868.doc 201130503 52. 如請求項5 1之升糖素類似物，其中該親水性部分為聚乙 二醇（PEG)。 53. 如請求項5 1或52之升糖素類似物，其中該親水性部分係 連接至位置24之Cys。 54. 如前述請求項中任一項之升糖素類似物，其在位置29之 胺基酸之C端包含1-21個胺基酸之延長段。 55. 如請求項54之類似物’其中該延長段係選自由以下組成 • 之群：Gly、Glu、Cys、Gly-Gly ' Gly-Glu、GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 14)或 GGPSSGAPPPS(SEQ ID NO: 15)。 5 6.如前述請求項中任一項之升糖素類似物，其包含一或多 個以下胺基酸修飾： a·位置3之Gin經麩醯胺酸類似物或Glu置換； b. 位置7之Thr經大型脂族胺基酸置換； c. 位置10之Tyr經Val或Phe置換； d. 位置12之Lys經Arg置換； • e.位置15之Asp經另一酸性胺基酸置換； f.位置18之Arg經例如Ala之小型脂族胺基酸置換； g·位置20及/或24之Gin經Ala、Ser、Thr或AIB置換； h.位置27之Met經Leu或正白胺酸置換； i·位置28之Asn經帶負電胺基酸置換；或 j·位置29之Thr經Gly置換。 57.如前述請求項中任一項之升糖素類似物，其中該升糖素 類似物展現至少3%之天然GLP-1對該GLP-1受體之活 性。 152868.doc 201130503 58.如前述請求項令 類似物展現至少 性0 任一項之升糖素類似物，其中該升糖素 100%之天然GLIM對該GLP-1受體之活 59·如前述4求項^任一項之升糖素類似物，其中該升糖素 類似物展現至少3%之天然升糖素對該升糖素受體之活 性。 60.如別述清求項令任一項之升糖素類似物，其中該升糖素 類似物展現至少j 〇〇%之天然升糖素對該升糖素受體之活 性。 4 #項t任-項之升糖素類似物’其中該升糖素 類似物對該GUM受體之EC5〇為其對該升糖素受體之 EC50的約50倍或5〇倍以下。 62.如前述請求項中任—項之升糖素類似物，其中該升糖辛 =:對該⑽，體之EC5。比其對該升糖素受體： EC50兩兩倍至十倍。 63_ —種結合物，其句冬 y此 、則述M求項中任一項之升糖素類 似物結合至異源部分。 〃頁 64.如請求項63之結合物，其中該異源部分包含以下一或多 者.狀、多肽、核酸分子'抗體或其片段'聚合物、量 子點、小分子、毒素、診斷劑。 A如請求項“之結合物’其中該異源部分為 融合肽或嵌合肽》 物马 66. -種二聚體或多聚體，其包含如前述請求項中任 升糖素類似物。 152868.doc 201130503 67. —種醫藥組合物，其白合如針 丹包3如前迷凊求項申任一項之肽、 如請求項63至65之妹入物、‘上主七、 σ物如h求項66之二聚體或多聚 體、或其組合，及醫藥學上可接受之載劑。 68. -種治療患者之疾病或醫學病狀的方法，其中該疾病或 醫學病狀係選自由以下組成之群：代謝症候群、糖尿 病、肥胖症、肝脂肪變性及神經退化性 硪万法包

   含向該患者投與有效治療該疾病或醫學病狀之量的如& 求項67之醫藥組合物。 < %

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