TW201006492A - FGF-R4 receptor-specific antagonists - Google Patents

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TW201006492A TW098123091A TW98123091A TW201006492A TW 201006492 A TW201006492 A TW 201006492A TW 098123091 A TW098123091 A TW 098123091A TW 98123091 A TW98123091 A TW 98123091A TW 201006492 A TW201006492 A TW 201006492A
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Pierre-Francois Berne
Francis Blanche
Francoise Bono
Beatrice Cameron
Tarik Dabdoubi
Corentin Herbert
Vincent Mikol
Elisabeth Remy
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201006492 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明之標的為能抑制F G F受體4活性之專一針對F G F受 體4(FGF-R4)之拮抗劑。此等拮抗劑尤其為專一性針對 FGF受體4(FGF-R4)之抗體。 •本發明之標的亦為此等拮抗劑尤其用於血管生成領域及 治療某些類型癌症之治療性用途。 【先前技術】 • FGF(纖維母細胞生長因子）為描述為能夠活體外及活體 内刺激血管細胞增殖、遷移及分化之第一分子。大量文獻 描述FGF在活體外及活體内誘發血管生成及毛細血管之形 成。FGF因促進由腫瘤所募集之血管之形成而亦涉及腫瘤 血管生成。 人類FGF家族由至少23個皆具有120個胺基酸之保守中 央結構域之成員構成。其藉由與其酪胺酸-激酶型高親和 力受體（FGF-R)及硫酸乙醯肝素蛋白聚糖（其為存在於大多 W 數細胞表面及細胞外基質（低親和力結合位點）上之組份）相
互作用而發揮其生物活性以便形成三元複合物。一些FGF ' 對於若干FGF-R具有高親和力，而其他FGF專一活化一種 • 受體或受體之一種同功異型物。 FGF-R4專一性配體已藉由Xie等人（Cytokine， 1999, 11:729-35)鑑別。稱為FGF19之此配體為僅對於FGF-R4具 有高親和力之配體，且該配體與受體之結合具有肝素依賴 性或硫酸乙醯肝素依賴性。已鑑別成年動物中、僅肝細胞 140834.doc 201006492 及小腸（其中其調節肝臟合成膽汁酸）中的FGF19 °其似乎 為胚胎發育期間所涉及之生長因子，且似乎涉及斑馬魚 (zebra f*ish)及人類之胚腦發育。 諸如FGF1或FGF2之其他FGF-R4配體已有描述。此等配 體強烈活化FGF-R4，但對FGF-R4不專’：其亦結合其他 FGF-R(Ornitz等人，J. Biol. Chem·, 1996, 271:15292-7)。 FGF-R4受體之活化產生多種類型之細胞信號傳導。其 中，最習知形式對應於建立磷酸化級聯介導信號傳導路 徑、隨後為FGF刺激FGF-R4。此誘導引起FGF-R4之酷胺 酸激酶域之自體靖酸化且視諸如AKT、P44/42、JNK等其 他信號傳導蛋白質之磷酸化而定用於引發細胞内信號傳導 路徑。此磷酸化介導信號傳導根據細胞類型且根據此等細 胞之表面所存在之輔助受體或黏附性分子而改變 (Cavallaro 等人，心，.&// 价〇/· 3/7，650-657 (2001);
Stadler 等人，CW/.脚⑽/. 18/6，783-794. (2006) ; Lin 等 人，Ο 隱，2007, 14:27277-84. (2007))。對於 FGF-R(包括FGF-R4)重要之另一種信號傳導方法為受體與其配 體組合活化後之内化。此機制並非視受體之酷'胺酸激無活 性而定，但視FGF-R4之短C-末端序列而定（Klingenberg等 人，·/· CW/ «Scz·.，113/Ptl〇:1827-1838 (2000))。 文獻中描述4種不同形式之FGF-R4。全長形式存在2種 位於位置388之多型性變異體’亦即FGF-R4 Gly388(其為 受體之正常形式）及Arg388形式（其描述於多種腫瘤之情形 下）（Bange 等人 ’ 62/3, 840-847 (2002); 140834.doc 201006492
Spinola等人，J 23，7307-7311 (2005) ; Stadler 等人，Ce//. 蝓《α/. 18/6, 783-794. (2006))。亦已發現表現 於乳腺腫瘤細胞中之可溶形式（Takaishi等人，Biochem Biophys Res Commun·，2000，267:658-62)。第四種形式（細 胞外部分經截短）已描述於某些垂體腺瘤的情形下斤22以等 人，J Clin Invest., 2002, 109:69-78) ° FGF-R4主要表現於内胚層所形成之組織中’諸如胃腸 道、胰腺、肝臟、肌肉及腎上腺。 在文獻中已知FGF-R4具有若干細胞性作用’其中主要 的三種作用描述如下： 第一，此受體涉及控制活體外及活體内各種細胞分化過 程（諸如骨骼肌分化及再生、間葉組織分化或骨生成），或 涉及出生後肝發育期間囊泡之形成。 第二，FGF-R4描述為可控制膽汁酸及膽固醇恆穩狀態 且認為涉及肥胖症之控制。此外，FGF-R4在活體外及活 體内控制膽汁酸產生與膽固醇產生之間的平衡。 第三，FGF-R4涉及某些腫瘤現象，諸如肝細胞癌或結 腸癌之發生，或涉及乳腺纖維腺瘤細胞或乳腺癌上皮細胞 之增殖，諸如乳腺或結腸直腸癌細胞活動性。FGF-R4涉 及腫瘤主要與多型性（Gly388Arg)現象有關，此多型性與 以下腫瘤之腫瘤快速進展相關：乳腺及結腸直腸腫瘤 (Bange等人，Cancer 62/3, 840-847. 2002)、前列腺腫 瘤（Wang等人，C7i«. 10/18，6169-6178，2004) 或肝腫瘤（Nicholes等人，dm. «/·尸αί/ζο/· 160/6, 2295-307, 140834.doc 201006492 2002) 。在肉瘤（Morimoto 等人，Ccmcer 98/10, 2245-2250, 2003) ' 肺部腺癌（Spinola 等人，</ C7M (9«co/ 23，7307- 7311，2005)或鱗狀肉瘤（da Costa Andrade等人，五印 Mo/ ΡαΑοΖ 82, 53-7, 2007)之情況下，此多型性亦與不良預後 有關。FGF-R4之過度表現亦描述於某些胰腺癌細胞株的 情況下（Shah等人 ’ 21/54，8251-61，2002)且與星 形細胞惡性瘤（Yamada 等人，Res. 24/3, 244-8, 2002)有關。此外，在結腸腫瘤異種移植物之活體内模型 中或在肝細胞癌模型中使用抗FGF19單株抗體展示FGF19 失活及因此FGF-R4活化之阻斷可有益於治療結腸癌或肝 癌。 文獻中已認可在正常或病理性情況下，FGF/FGF-R1對 及FGF/FGF-R2對參與新血管之形成。然而，從未研究 FGF-R4潛在涉及此細胞現象之控制。實際上，迄今認為 FGF-R1及/或FGF-R2介導血管生成之活化（Presta等人， Cytokine Growth Factor Rev.，2005，16:159-78) ° FGF-R4拮抗劑（尤其小分子）之實例已描述於文獻中，但 其並非專一乾向FGF-R4，因此導致不良影響。因此，抑 制多種FGF-R以及其他受體酪胺酸激酶的酪胺酸-激酶域抑 制性小化學分子已由Thompson等人（Thompson等人， Mec? C/zem·, 2000，43:4200-11)描述。藉由與其細胞外部分 締合而抑制FGF-R之小化學分子亦描述於申請案WO 2007/080325中。
亦已研究抗體，諸如國際申請案WO 2005/066211及WO 140834.doc 201006492 2008052796 中或 Chen等人（//少办nWowa 24/3，152-159, 2〇〇5) 所述之抗FGFR1及/或抗FGFR4抗體。申請案w〇 2005/037235描述治療肥胖症及糖尿病、作為FGF-R拮抗劑 之抗體。此外，作為促效劑之抗FGF-R4抗體描述於申請 案 WO 03/063893 中。 ’ 【發明内容】 本發明之標的為FGF-R4受體拮抗劑，其特徵在於其專 一地結合至該FGF-R4受體。 有利地，該拮抗劑為專一性針對FGF-R4受體之抗體。 在一個實施例中’作為本發明標的之拮抗劑結合至FGF- R4受體之D2-D3域。在一個有利實施例中，作為本發明標 的之拮抗劑結合至FGF-R4受體之D2域。在一個更有利實 施例中，該拮抗劑結合至序列SEQ ID No. 70。 有利地，藉由Biacore技術所測定，FGF-R4受體專一性 拮抗劑相對於FGF-R4受體具有小於1 〇·8 Μ、小於5 X 10·9 ^ Μ、小於2χ10·9 Μ或小於 lxlO·9 Μ之KD。 響 在一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑具有 抗人類FGF-R4與鼠類FGF-R4之活性。 在另一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑具 • 有同時抗人類FGF-R4、鼠類FGF-R4及大鼠FGF-R4之活 性。 在一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體 包含至少一個具有與SEQ ID No. 9、10、11、12、13、 14 ' 73、74、75、78、79、80 ' 83、84、85、88、89、 140834.doc 201006492 90、93、94、95、98、99、100、103、104、105、108、 109或110—致之序列的CDR或至少一個其中序列與序列 SEQ ID No. 9 ' 10、11、12、13、14、73、74、75、78、 79、80、83、84、85、88、89、90、93、94、95、98、 99、100、103、104、105、108、109 或 110相比有一或兩 個胺基酸不同的CDR，其限制條件為抗體保持其結合專一 性。 在一個尤其有利之實施例中，：FGF-R4受體專一性拮抗 劑抗體包含序列 SEQ ID No. 9、10、11、12、13、14、 73、74、75、78、79、80、83、84、85、88、89、90、 93 、 94 、 95 、 98 、 99 、 100 、 103 、 104 、 105 、 108 、 109或 110之CDR或與上述序列分別相比其中序列有一或兩個胺 基酸不同之CDR，其限制條件為此不改變抗體之FGF-R4受 體結合專一性。 在一個有利實施例中’本發明之抗體包含至少一個重鏈 及至少一個輕鏈’該重鏈包含三個具有選自由Seq id No. 9、1〇 及 11 ;或 73、74 及 75 ; 83、84 及 85 ;或 93、94 及 95’或103、1〇4及105構成之群之胺基酸序列的CDR序 列’該輕鏈包含三個具有選自由SEq ID No. 12、13及14 ; 或78、79及80 ;或88、89及90 ;或98、99及100 ;或 i〇8、 109及11 〇構成之群之胺基酸序列的cdr序列。 在一個有利實施例中’ FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體 之重鍵可變區包含與序列SEQ ID No. 6、77、87、97或107 具有至少80%、90%、95%或99%—致性之序列。 140834.doc -8 - 201006492 在-個有利實施例中，FGF_R4受體專__性拮抗劑抗體 之輕鍵可變區包含與序列SEQ ID No. 8、72、82、92或102 具有至少8G%、9〇%、95%或99%—致性之序列。 本發明之標的亦為包含重鏈之FGF-R4受體專—性拮抗 劑抗體’该重鍵包含藉由與序列SEQ ID No. 5、76、86、 96或106具有至少8〇%、9〇%、95%或99%一致性之核苦酸 序列所編碼之可變區。 本發明之標的亦為包含輕鏈之FGF-R4受體專一性拮抗 劑抗體’該輕鏈包含藉由與序列SEq ID N〇. 7、71、81、 91或1〇1具有至少80%、9〇%、95%或99%一致性之核苷酸 序列所編碼之可變區。 本發明之標的亦為包含重鏈之FGFR4受體專一性拮抗 劑抗體’該重鏈包含多肽序列SEq ID N〇 6、77、87、97 或107之可變區。 本發明之標的亦為包含輕鏈之FGF-R4受體專一性拮抗 劑抗體’該輕鏈包含多肽序列SEq ID N〇. 8、72、82、92 或102之可變區。 本發明之標的亦為包含藉由核苷酸序列SEq ID No. 5及 7;或71及76;或81及86;或91及96;或101及106所編碼 之序列的FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體。 本發明之標的亦為包含多肽序列SEq ID No. 6及8 ;或 72及77;或82及87;或92及97;或1〇2及107之FGF-R4受 體專一性拮抗劑抗體。 在一個有利實施例中’ FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體 140834.doc •9· 201006492 包含與SEQ ID No. 2及 / 或 SEQ ID No. 4 ;或SEQ ID No. 72 及/或 SEQ ID No. 77 ;或 SEQ ID No. 82及/或 SEQ ID No. 87 ;或 SEQ ID No. 92及 /或 SEQ ID No. 97 ;或 SEQ ID No. 102及 /或 SEQ ID No. 107至少 80%、90%、95% 或 99%—致 之序列。 在一個尤其有利之實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗 劑抗體包含藉由與序列SEQ ID No. 1至少80%、90%、95% 或99%—致之核苷酸序列所編碼之重鏈。 本發明之標的亦為包含與序列SEQ ID No. 2至少80%、 90%、95%或99% —致之多肽序列之重鏈的FGF-R4受體拮 抗劑抗體。 本發明之標的亦為包含藉由與序列SEQ ID No. 3至少 8 0 %、9 0 %、9 5 %或9 9 % —致之核苦酸序列所編碼之輕鍵的 F GF - R4受體專一性抬抗劑抗體。 本發明之標的亦為包含與序列SEQ ID No. 4至少80%、 90%、95%或99%—致之多肽序列之輕鏈的FGF-R4受體專 一性括抗劑抗體。 本發明之標的亦為包含藉由核苷酸序列SEQ ID No. 1及 3所編碼之序列的FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體。 在一個更有利實施例中，FGF-R4專一性拮抗劑抗體包 含含序列SEQ ID No. 2之重鏈及含序列SEQ ID No. 4之輕 鍵。 由序列SEQ ID No. 2之重鏈及序列SEQ ID No. 4之輕鏈 構成之抗體在本申請案之其餘部分中稱為40-12。 140834.doc -10- 201006492 在本發明之一實施例中，FGF-R4專一性抗體具有同時 抗人類FGF-R4、鼠類FGF-R4及大鼠FGF-R4之活性。 在一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑誘導 抑制AKT/p3.8細胞路徑。 在一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑誘導 抑制Erkl/2細胞路徑。 在一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑誘導 抑制FGF-R4控制之細胞信號傳導路徑。 在另一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑誘 導抑制腫瘤細胞增殖。 在又一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑誘 導抑制血管生成。 在另一個尤其有利之實施例中，FGF-R4受體專一性拮 抗劑對FGF-R4具有的親和力比其對其他FGF受體之親和力 大10倍。 在一個尤其有利之實施例中，本發明之抗體為FGF-R4 受體專一性人類化拮抗劑抗體。 在一個實施例中，FGF-R4受體專一性人類化拮抗劑抗 體包含其中可變區係藉由與序列SEQ ID No. 29或序列SEQ ID No. 31至少80%、90%、95%或99%—致之核苷酸序列所 編碼之輕鏈。 在另一個實施例中，FGF-R4受體專一性人類化拮抗劑 抗體包含其中可變區與序列SEQ ID No. 30或序列SEQ ID No. 32至少80%、90%、95%或99%—致之輕鏈。 140834.doc -11 - 201006492 在另一個實施例中，FGF-R4受體專一性人類化拮抗劑 抗體包含其中可變區係藉由與核苷酸序列SEQ ID No. 29或 序列SEQ ID No. 3 1 —致之序列所編碼之輕鏈。 本發明之標的亦為包含其中可變區係藉由與序列SEQ ID No. 33、序列 SEQ ID No. 35 或序列 SEQ ID No. 37 至少 80%、90%、95%或99% —致之序列所編碼之重鏈的FGF-R4受體專一性人類化拮抗劑抗體。 本發明之標的亦為包含其中可變區與序列SEQ ID No. 34、序列 SEQ ID No. 36或序列 SEQ ID No. 38至少 80%、 90%、95%或99% —致之重鏈的FGF-R4受體專一性人類化 拮抗劑抗體。 本發明之標的亦為包含藉由核苷酸序列SEQ ID No. 33 及/或SEQ ID No. 35及/或SEQ ID No· 37所編碼之重鏈的 FGF-R4受體專一性人類化拮抗劑抗體。 本發明之標的亦為FGF-R4受體專一性人類化拮抗劑抗 體，其中將序列SEQ ID No. 30或32之人類化序列與序列 SEQ ID No. 34、36或3 8之人類化序列組合使用。 在另一個實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體包 含序列 SEQ ID No. 73、74、75、78、79及 80 之 CDR或與上 述序列分別相比其中序列有一或兩個胺基酸不同之CDR， 其限制條件為此不改變抗體之FGF-R4受體結合專一性。 在另一個實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體包 含序列 SEQ ID No. 83、84、85、88、89及 90之 CDR或與上 述序列分別相比其中序列有一或兩個胺基酸不同之CDR， 140834.doc •12- 201006492 其限制條件為此不改變抗體之FGF-R4受體結合專一性。 在另一個實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體包 含序列 SEQ ID No. 93、94、95、98、99 及 100 之 CDR 或與 上述序列分別相比其中序列有一或兩個胺基酸不同之 CDR，其限制條件為此不改變抗體之FGF-R4受體結合專一 性。 在另一個實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體包 含序列 SEQ ID No. 103、104、105、108、109及 110之 CDR 或與上述序列分別相比其中序列有一或兩個胺基酸不同之 CDR，其限制條件為此不改變抗體之FGF-R4受體結合專一 性。 在本發明之一較佳實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗 劑抗體包含序列SEQ ID No. 83、84、85、88、89及90之 CDR。 在一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體 為其中重鏈可變區包含與序列SEQ ID No. 76、86、96或 106具有至少80%、90%、95%或99%—致性之核苷酸序列 的人類抗體。 在一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體 為其中輕鏈可變區包含與序列SEQ ID No. 71、81、91或 101具有至少80%、90%、95%或99%—致性之核苷酸序列 的人類抗體。 本發明之標的亦為包含重鏈之FGF-R4受體專一性人類 拮抗劑抗體，該重鏈包含藉由與序列SEQ ID No. 77、87、 140834.doc • 13· 201006492 97或107具有至少80%、90%、977%或99%—致性之蛋白質 序列所編碼之可變區。 本發明之標的亦為包含輕鏈之FGF-R4受體專一性人類 拮抗劑抗體，該輕鏈包含藉由與序列SEQ ID No. 72、82、 92或102具有至少80%、90%、95%或99%—致性之蛋白質 序列所編碼之可變區。 本發明之標的亦為包含藉由核苷酸序列SEQ ID No. 71 及76或核苷酸序列SEQ ID No. 81及86或核苷酸序列SEQ ID No. 91及96或核苷酸序列SEQ ID No. 101及106所編碼 之序列的FGF-R4受體專一性人類拮抗劑抗體。 本發明之標的亦為包含多肽序列SEQ ID No. 72及77 ; 或多肽序列SEQ ID No. 82及87 ;或多肽序列SEQ ID No-92 及 97 ; 或多 肽序列 SEQ ID No. 102 及 107 之 FGF-R4 受體 專一性人類拮抗劑抗體。 在一個尤其有利實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑 抗體包含與SEQ ID No. 72及/或SEQ ID No. 77至少80%、 90%、95%或99%—致之序列。 在另一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性人類拮抗 劑抗體包含與SEQ ID No. 82及/或SEQ ID No. 87至少 80%、90%、95%或 99%—致之序列。 在另一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性人類拮抗 劑抗體包含與SEQ ID No. 92及/或SEQ ID No. 97至少 80%、90%、95% 或 99%—致之序列。 在另一個有利實施例中，FGF-R4受體專一性人類拮抗 140834.doc •14- 201006492 劑抗體包含與SEQ ID No. 102及/或SEQ ID No. 107至少 80%、90%、95%或 99%—致之序列。 在一個較佳實施例中，本發明之標的為FGF-R4受體專 一性人類拮抗劑抗體，其包含藉由與序列SEQ ID No. 82至 少80%、90%、95%或99%—致之核苷酸序列所編碼之輕鏈 且包含與序列SEQ ID No. 87至少80%、90%、95%或99% 一致之多肽序列之重鏈。 甚至更佳地，本發明之標的為包含藉由核苷酸序列SEQ ID No. 82及87所編碼之序列的FGF-R4受體專一性人類拮 抗劑抗體。 在本申請案之其餘部分中，由序列SEQ ID No. 77之重 鏈及序列SEQ ID No. 72之輕鏈構成之抗體稱為純系8。 在本申請案之其餘部分中，由序列SEQ ID No. 87之重 鏈及序列SEQ ID No. 82之輕鏈構成之抗體稱為純系31。 在本申請案之其餘部分中，由序列SEQ ID No. 97之重 鏈及序列SEQ ID No. 92之輕鏈構成之抗體稱為純系33。 在本申請案之其餘部分中，由序列SEQ ID No. 107之重 鏈及序列SEQ ID No. 102之輕鏈構成之抗體稱為純系36。 本發明之領域不限於包含此等序列之抗體。實際上，專 一性結合至FGF-R4、對此受體具有拮抗作用的所有抗體 為本發明之領域之一部分。 本發明之標的亦為與細胞毒性劑結合之FGF-R4受體專 一性拮抗劑抗體。 本發明之標的為FGF-R4受體專一性拮抗劑用於治療與 140834.doc 201006492 血管生成有關之疾病的用途。 於治療癌 本發明之標的為FGF_R4受體專一性拮抗劑用 症之用途。 療肝 本發明之標的為FGF_R4受體專一性拮抗劑用於治 癌瘤或任何其他類型肝癌之用途。 本發明之標的為FGF_R4受體專一性拮抗劑用於治療胰 腺癌之用途。 '
本發明之標的為用於治療與血管生成有關之疾病與治療 肝癌瘤或任何其他類型肝癌之FGFR4受體專一性抗體。， 本發明之標的為用於同時治療與血管生成有關之疾病、 =療肝癌瘤或任何其他類型肝癌及治療騰腺癌或胃腸道器 官或表現FGF_R4之任何其他器官之癌症的fgf r4受體專 一性抗體。 本發明之標的為包含FGF_R4受體專一性抬抗劑及賦形 劑之醫藥組合物。 本發明之標的為治療癌症之方法，該方法包含向患者投 與FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體。 本發明之標的為治療與血管生成之病理性增強有關之疾 病的方法，該方法包含向患者投與FGF R4受體專一性拮 抗劑抗體。 本發明之‘的為選擇FGF_R4受體專一性拮抗劑單株抗 體之方法，該方法包含以下步驟： a.使小鼠免疫， b.獲取小鼠之淋巴結，及 140834.doc -16- 201006492 c.筛檢融合瘤上清液。 本發明之標的為產生FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體之 細胞株。 本發明之標的為產生FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體之 方法’該方法包含培養產生FGF-R4受體拮抗劑抗體之細 胞株。 本發明之標的為包含FGF-R4受體專一性括抗劑之藥 物。 本發明之標的亦為編碼選自由以下序列構成之群之多狀 的聚核苷酸：SEQ ID No. 2、4、6、8、9、1〇、u、12、 13、14、30、32、34、36、38、72、73、74、75、77、 78、79、80、82、83、84、85、87、88、89、90、92、 93、94、95、97、98、99、100、1〇2 ' l〇3、1〇4、1〇5、 107、108、109及11〇,及與此等序列中之一者至少8〇%、 90%、95%或99% —致之序列。 本發明之標的為包含如上所述之聚核苷酸或編碼如上所 述之多肽之聚核苷酸的重組載體。 為使作為本發明之標的之FGF-R4受體拮抗劑抗體之重 鍵及/或輕鏈能夠得到表現，將編碼該等鏈之聚核普酸插 入表現載體中。此等表現載體可為質體、YAC、黏質體、 反轉錄病毒、來源於EBV之離合染色小體及熟習此項技術 者可認為適於表現該等鏈之任何載體。 本發明之標的為包含如上所述之重組載體之宿主細胞。 【實施方式】 140834.doc -17· 201006492 本發明之標的為專一性抗FGF-R4之抗體（不與FGF-Rl、 R2或R3交叉反應）用於抑制血管生成及腫瘤生長之用途。 發明者展示FGF-R4在血管生成之控制上意外地具有活 性及專一性作用。 先前從未展示或提出FGF-R4之此功能。因此，此受體 可用作標靶以便治療呈現血管生成功能異常之病變。因 此’能夠調節該受體活性之FGF_R4配體為用於多種血管 生成相關病變之潛在治療劑。 因此，本發明可用於治療涉及血管生成調節異常且需要 抑制其之所有病變。所涵蓋之病變可為癌症（使用本發明 之拮抗劑作為腫瘤血管生成抑制劑），或描述血管生成調 節異常之病變，諸如年齡相關性黃斑變性或ARMD、發炎 性疾病（諸如風濕性關節炎、骨關節炎、結腸炎、潰瘍或 任竹·^炎性腸病）、動脈粥樣硬化或治療肥胖症。 亦說明此等抗體用於抑制腫瘤生長之用途。因此，本發 明之拮抗劑可用於治療涉及FGF_R4之調節異常的某些癌 症，尤其肝癌、結腸癌、乳癌、肺癌、前列腺癌、胰腺 癌、皮膚癌或食道癌。 在所述FGF-R4之情況下，本發明之拮抗劑之主要優點 之一為專一地靶向FGF受體。此專一性能限制抑制酪胺酸 激酶域之小化學分子可具有之不良影響。此外，因為fgf_ R4並非普遍受表現，而是尤其表現於内皮細胞上，例如肝 細胞、膽細胞、乳腺細胞、前列腺細胞、#巢細胞、胰腺 細胞或腎細胞上，所以由此提供治療與FGF_R4活性調節 140834.doc -18- 201006492 異常相關之疾病、限制副作用的方法。 術語「拮抗劑」係指能夠降低或完全抑制FGF-R4活性 之任何配體。因此，此拮抗劑化合物亦稱為FGF-R4抑制 劑。 此拮抗劑可為能夠專一地結合至FGF-R4受體（不包括任 '何其他FGFR)的任何FGF-R4配體，諸如化學分子、重組蛋 -白質、寡醣、多醣、寡聚核苷酸或抗體。
因此，本發明之標的為FGF-R4專一性拮抗劑。根據本 W 發明，專一地結合FGF-R4之拮抗劑係指不結合至其他FGF 受體（亦即FGF-R1、FGF-R2或FGF-R3)之g己體。詳言之， FGF-R4專一性抗體為不呈現與FGF-R1、FGF-R2或FGF-R3 之任何交叉反應之抗體。 「專一性結合」係指結合至一種受體之強度與結合其他 受體之強度之間（在本案中，結合至FGF-R4與可能結合至 FGF-R1、FGF-R2或FGF-R3之間）相差至少10倍。 在本發明之一實施例中，FGF-R4配體為寡糖或多醣。 9 「募糖」係指含有3至10個單元單糖之任何醣類聚合 物。存在諸如果寡醣（FOS)之天然募糖及諸如肝素模擬抗 血栓藥之合成募糖。 • 術語「多醣」係指由10個以上單醣藉由醣苷鍵彼此連接 構成之任何聚合物。存在諸如黏多醣、褐藻、角叉菜膠或 細菌性胞外多糖之天然多醣，同樣存在合成多醣。因此， 低分子量褐藻醣膠或高度硫酸鹽化胞外多糖展示促血管生 >ί· Ί± (Chabut^ A ' Mol Pharmacol., 2003，64:696-702 ; 140834.doc -19- 201006492
Matou等人，P/zarmaco/., 2005，69:751-9)。反 之，來源於肝素之弱硫酸鹽化募糖或磷酸甘露戊醣硫酸鹽 可具有抗血管生成特性（Parish等人，1999，15:3433-41 ;
Casu等人，j Med C7zew.，2004, 12:838-48)。 在本發明之一實施例中，FGF-R4配體為抗體。 術語「抗體」係指任何類型之抗體或所來源之分子，諸 · 如多株及單株抗體。來源於單株抗體之分子包括人類化抗 體、人類抗體、多專一性抗體、嵌合抗體、抗體片段、奈 米抗體等分子。 ❹ 在本發明之一實施例中，FGF-R4專一性拮抗劑為多株 抗體。 「多株抗體」為已由來源於若干個B淋巴細胞純系之抗 體之混合物所產生且識別一系列不同抗原決定基之抗體。 在一個有利實施例中，FGF_R4專一性拮抗劑為單株抗 體。 「單株抗體」為自來源於單一類型8淋巴細胞、經選殖 擴增之大體同源抗趙群所獲得的抗體。構成此群之抗體相 同’例外之處為可少量存在可能天然存在之突變。此等抗 體係針對單一抗原決定基且因此高度專一。 ::「抗原決定基」係指抗體所結合之抗原的位點。若 抗原為聚合物，諸如蛋白質或多 都貝1抗原決定基可由毗 鄰近或非毗鄰殘基組成。 在本發明之-有利實施例中，抗FGf FGF-R4受體之D2_D3域的抗原決定基。 140834.doc •20· 201006492 在一個更有利實施例中，抗體結合至包含FGF_R4受體 之胺基酸144至365之結構域中所包括之抗原決定基。 在一個更有利實施例中’抗體結合至FGF_r4受體之〇2 域中所包括之抗原決定基’此抗原決定基對應於序列seq ID No. 70中所述之胺基酸145至242。 亦稱為免疫球蛋白之抗體由藉由二硫橋連接之兩個相同 重鏈（「VH」）及兩個相同輕鏈（「VL」）構成。每個鏈含有 恆定區及可變區。每個可變區包含三個稱為「互補決定 區」（「CDR」）或「高變區」之區段，該等區段為結合至 抗原之抗原決定基的主要原因。 術語「VH」係指抗體之免疫球蛋白重鏈（包括Fv、 scFv' dsFv、Fab、Fab，或F(ab)·片段之重鏈）之可變區。 術s吾「VL」係指抗體之免疫球蛋白輕鏈（包括π、 scFv、dsFv、Fab、Fab，或F(ab)，片段之輕鏈）之可變區。 術。口抗體片#又」係指該抗體之任何部分：Fab(抗原妹 合片段）、Fv、scFv(單鏈Fv)、Fc(可結晶片段）。較佳地， 此等功能性片段為 Fv、scFv、Fab ' F(ab,)2、Fab，、ScFv_
Fc或雙功能抗體型片段，其與來源於其之嵌合或人類化單 株抗體一般具有相同結合專一性。根據本發明，本發明之 抗體片段可藉由諸如酶（例如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶）消化 法及/或藉由化學還原裂解二硫橋、自嵌合或人類化單株 抗體獲得。 如Kabat等人所定義，術語「CDRg4CDR」意欲表示 免疫球蛋白重鏈及輕鏈高變區（Kabat等人，Sequences 〇f 140834.doc •21 · 201006492 proteins of immunological interest，第 5版，U.S. Department of Health and Human Services, NIH，1991，及後續版本）。存 在3個重鏈CDR及3個輕鏈CDR。術語CDR在本文中用於適 當地表示含有導致抗體親和性結合其所識別之抗原或抗原 決定基之胺基酸殘基之大部分的一或多個此等區或甚至所 有此等區。可變域中之最保守區稱為FR(「構架」）區或序 列。 在本發明之另一實施例中，FGF-R4專一性拮抗劑為嵌 合抗體。 術語「嵌合抗體」係指其中恆定區或其一部分已改變、 置換或交換以使得可變區與不同種類或屬於另一抗體類別 或亞類之恆定區連接的抗體。 術語「嵌合抗體」亦指其中可變區或其一部分已改變、 置換或交換以使得恆定區與不同種類或屬於另一抗體類別 或亞類之可變區連接的抗體。 熟習此項技術者已知產生嵌合抗體之方法。例如參見 Morrison, 1985, 229:1202 ; Oi等人，1986, Βίο
Tlec/mz·分we·?, 4:214 ; Gillies等人，1989, J. Immunol. Methods, 125:191-202 ;美國專利第 5,807,7 15號、第 4,8 16,567號及第 4,816,397 號。 抗體之此等嵌合形式可包含VL及VH可變區與人類來源 之Ckappa及CH(IgGl)恆定域之融合以產生嵌合單株抗體。 CH(IgGl)域亦可藉由點突變修飾以增加Fc片段對 FcyRIIIa受體之親和力且藉此增加抗體之效應功能（Lazar 140834.doc -22- 201006492 等人，2006, TVa". jcW. t/以 l〇3: 4005-4010 ;
Stavenhagen等人，2007，Cancer 67: 8882-8890)。 本發明包括抗體之人類化形式。 術s吾「人類化抗體」係指主要含有人類免疫球蛋白序列 之抗體。此術語通常係指已藉由合併人類序列或存在於人 類序列中之殘基所修飾之非人類免疫球蛋白。 一般而§ ,人類化抗體包含一個或通常兩個可變域，其 籲 中所有或部分CDR區對應於來源於非人類親本序列之部分 且其中所有或部分FR區為來源於人類免疫球蛋白序列之彼 專£。人類化抗體從而可包含免疫球蛋白怪定區之至少一 部分（Fc)，尤其所選人類免疫球蛋白模板之彼部分。 因此目的在於使得抗體對人類免疫原性最低。因此，可 修飾一或多個CDR中之一或兩個胺基酸以使得對人類宿主 具有較低免疫原性而不大幅降低抗體與FGF-R4之專一性 結合功能。類似地’構架區之殘基可非人類的，且因其不 0 形成抗體之免疫原性潛能而不會被修飾。 熟習此項技術者已知多種人類化方法可用於修飾非人類 親本抗體，以便得到對人類具較低免疫原性之抗體。不一 定需要與人類抗體之整個序列一致。此係因為整個序列一 致不一定預示降低之免疫原性，且有限量殘基之修飾可產 生對人類具有大大降低之免疫原性潛能的人類化抗體 (Molecular Immunology (2007) 44，1986-1998)。 各種方法為例如CDR移植（EPO 0 239 400 ; WO 91/09967 ;及美國專利第5,53〇，1〇1號及第5 585,〇89號）、 140834.doc -23- 201006492 表面重塑（EPO 0 592 106 ; EPO 0 519 596 ; Padlan，1991, Molec Imm 28(4/5):489-498 ; Studnicka等人，1994, Prot Eng 7(6):805-814 ;及 Roguska 等人，1994，PNAS 91:969-973)或鏈改組（美國專利第5,565,332號）。 本發明尤其係關於其中可變部分根據以下技術修飾之人 類化抗體： 藉由與蛋白質資料庫比較來鑑別最類似於抗FGF-R4鼠 類抗體40-12之相應鏈的輕鏈及重鏈（H.M. Berman, J_ Westbrook, Z. Feng, G. Gilliland, T.N. Bhat, H. Weissig, I.N. Shindyalov, P.E. Bourne. Nucleic Acids Research, 2000, 28:235-242)。序列比對係使用BLAST演算法（J Mol Biol. 1990 Oct 215:403-410)。此等結構為分別對應於用以 建立可變域輕鏈及重鏈之同源模型之PDB碼1NDM及1ETZ 之三維結構。隨後使用MOE軟體（Molecular Operating Environment, Chemical Computing Group, Quebec, Canada) 中所建構之標準程序使此等三維模型能量最小化。隨後用 Amber軟體執行抗體之此等最小化三維模型之分子動力學 (MD)模擬（D.A. Case，T.E. Cheatham, III，T. Darden，H. Gohlke, R. Luo, K.M. Merz, Jr., A. Onufriev, C. Simmerling, B. Wang and R. Woods. J. Computat. Chem. 2005，26:1668-1688)。在通用化波恩隱性溶劑（generalized Born implicit solvent)中，在500 K溫度下，經由對蛋白質 主鍵原子施加調和約束1.1奈秒（nanosecond)來進行此模擬 (Gallicchio & Levy, J Comput Chem 2004，25:479-499)。因 140834.doc -24- 201006492 此，自此第一次模擬中擷取10個不同構形（在模擬之最後 奈移期間每一百皮秒（picosecond)擷取一個三維構形）。接 著在對蛋白質主鏈無約束下，使此等丨〇個不同構形在 之溫度下、在通用化波恩隱性溶劑中各自經受分子動力學 模擬2.3奈秒。使用SHAKE演算法約束涉及氫原子之鍵 (Barth•等人 ’ J ComP Chem，1995, 16:1192-1209)，時間步 長為1飛秒（femtosecond)，且模擬係在恆定體積及27t之 _ 恆溫下基於朗之萬方程（Langevin equation)進行《對於1〇 個分子動力學模擬中之每一者而言，接著使用以每隔一皮 秒之頻率擷取之最後兩千個構形定量待人類化之抗體之每 個胺基酸之原子位置相對於胺基酸之平均或中心構形之偏 差。使用MOE軟體之科學向量語言（Scientific Vect〇r
Language，SVL)編碼以述所有分析。胺基酸之中心構形為 分子動力學所產生之構形，該構形最接近於由所有胺基酸 構形之原子位置所計算之平均構形。用於偵測中心構形之 φ 距離為胺基酸之兩個構形之原子之間的純量距離之均方根 (RMSD)。類似地，藉由計算一個胺基酸模擬構形之原子 與中〜構形之相同原子之間的純量距離之rmsd來定量一 個胺基酸構形之原子位置與中心構形相比之偏差。隨後， 藉由比較指疋胺基酸⑴之原子位置2RMSD(所有1〇個分子 動力學模擬的平均值）(Fi)與抗體之所有胺基酸之位置之 RMSD(所有10個分子動力學模擬的求平均值）(Fm)，判定 胺基酸之柔曲性是否足以視為能夠潛在地與T細胞受體相 互作用且觸發免疫系統之活化。若胺基酸i以zi=(Fi_ 140834.doc -25- 201006492
Fm)/Fm疋義之柔曲性分值Zi大於〇 15，則胺基酸丨視為具 柔曲性。因此，在抗體之可變域中，45個胺基酸經鑑別具 柔曲性（不包括抗原互補決定區（CDR)及其緊鄰區）。cdr 之緊鄰區定義為其中α碳距離CDR之(1碳5埃（A)或小於5埃 之任何胺基酸。 接著，將抗體之60個最柔曲性之胺基酸在2〇奈秒（丨〇χ2 ns)模擬期間的運動與人類抗體生殖系之49個同源模型之 相應胺基酸之運動比較，使用相同方案對其中每一者進行 10個分子動力學模擬（10x2 ns)。6〇個最柔曲性之胺基酸排 除抗原互補決定區CDR)及其緊鄰區。49個人類抗體生殖 系模型係由7個最常見人類輕鍵（vkl、vk2、vk3、vk4、 νλΐ、νλ2、νλ3)及7個最常見人類重鏈（vhla、vMb、竓2、 vh3、vh4、vh5、vh6)系統地組合建立（Nucleic Acids
Research，2005，第 33卷，Database第 D593-D597期）。 欲人類化之抗體與49個人類生殖系模型之相似度係藉由 具有1A解析度之獨特三維立方栅格（cubic grid)，在1〇個分 子動力學模擬過程中，對抗體之60個柔曲性胺基酸之特定 原子的位置取樣來定量。此相似度稱為四維相似度。所用 之二維柵格係由445740個點組成，且使用與1>]：^碼81?八]3對 應之人類抗體之三維結構初始化。8FAB結構亦用於定位 欲於三維柵格中取樣之抗體之所有構形。為此目的，將抗 體之分子動力學之中心構形疊置於8FAB結構上。此疊置 由以下組成：使兩個構形之慣性矩對準’繼而優化兩個構 开> 之α碳原子間的純量距離。使用相同方法將抗體之分子 140834.doc • 26 · 201006492 動力學之所有剩餘構形疊置於中心構形上β 針對一對比較抗體執行兩種類型取樣，得到兩種相似度 (靜電相似度及親脂相似度）。接著將此兩種相似度相加= 到總相似度。第一種取樣（靜電取樣）考量胺基酸側鏈之所 有原子。如 Amber99力場（Cieplak，J.等人；j. c〇mp Chem 2001，22··1048-1057)中所述，藉由對胺基酸侧鏈之原子應 用一種由原子部分電荷加權之三維高斯函數（Gau-ssian # function)f(x)獲得柵格之一個點X之值。f〇0函數應用於3個 笛卡兒座標軸（Cartesian coordinate axes)且對應於下式· ，其中乂及^^分別為—個栅格點乂及一 個取樣原子之笛卡兒座標，且s = r/1 6 “=該原子之共價半 徑）。對胺基酸之所有構形重複取樣且將三維栅格之所有 點X處之所得結果平均化。第二種取樣（親脂取樣）僅考量胺 基酸側鏈之親脂原子。經由未經加權之相同高斯函數f(x) 計算柵格之一個點x處之值。因此，藉由相同三維柵格對 鲁 所比較之兩種抗體之兩套分子動力學模擬構形取樣。抗體 a與抗體b之間的靜電相似度（sim_elec)係由下式度量： 445740 / • _ Σ
Slm~dec=~^~YL^A—~。親脂相似度係藉由對上述親脂 /=1 ' '丨 取樣所產生之數據應用同一式來計算。 因此人類生瘦系模型νλ2-ν!ι2展示此等60個柔曲性胺 基酸相對於鼠類抗體40_12之柔曲性胺基酸之最高四維相 似度（總相似度=58%)。從而在集中於45個柔曲性胺基酸的 140834.doc •27- 201006492 同時’使用人類生殖系模型νλ2_ν1ι2將待人類化之抗體人 類化。為測定待發生之突變，將鼠類抗體4〇_12之模型之 二維結構疊置於展示最高相似度之生殖系所產生之模型之 三維結構上’其中胺基酸之〇1碳之位置經優化。在展示最 高相似度之模型之序列中，用相應胺基酸使鑑別為具柔曲 性之胺基酸突變。 所考量之不要序列基元如下：天冬胺酸_脯胺酸（在酸性 介質中肽鍵不穩定）、天冬醯胺酸_χ_絲胺酸/蘇胺酸（糖基 化位點除脯胺酸外之任何胺基酸）、天冬胺酸-甘胺酸， 絲胺酸/蘇胺酸（丁二醯亞胺/異天冬胺酸潛在形成於柔性區 中）、天冬醯胺酸-甘胺酸/組胺酸/絲胺酸/丙胺酸/半胱胺酸 (脫醯胺位點曝露）、甲硫胺酸（在曝露區中氧化）。最後藉 BLAST序列比較演算法比較由此獲得之人類化序列與 IEDB 資料庫（http://www.immuneepitope.org/The immune epitope database and analysis resource: from vision to blueprint· PLoS Biol. 2005 年三月；3(3):e91)之序列以確定 該等序列不含已知由B及T淋巴細胞識別之任何抗原決定 基。惫序列含有具有不要序列之殘基，則亦將其修飾。若 複合序列含有一個列於IEDB中之已知抗原決定基，則使 用顯示咼相似度之另一生殖系結構模板作為模型。 更有利地，本發明之抗體包含與序列SEq ID No. 30或 序列 SEQ ID No· 32具有至少 80%、90%、95%或 99%—致 性之序列，以及與序列SEq m No. 34、序列SEQ ID No. 36 或序列 SEQ ID No. 38 具有至少 80%、90%、95 % 或 99% 140834.doc •28- 201006492 一致性之序列。 在一個實施例中’本發明之抗體包含序列SEQ ID No. 30之可變輕鏈及序列SEQ ID No. 34之可變重鏈。 在另一實施例中，抗體包含序列SEQ ID No. 32之可變 輕鍵及序列SEQ ID No. 38之可變重鏈。 在另一實施例中，抗體包含序列SEQ ID No. 30之可變 輕鏈及序列SEQ ID No. 36之可變重鏈。 在另一實施例中，抗體包含序列SEQ ID No. 32之可變 輕鏈及序列SEQ ID No· 34之可變重鏈。 在另一實施例中，抗體包含序列SEQ ID No. 32之可變 輕鍵及序列SEQ ID No. 36之可變重鍵。 在另一實施例中，抗體包含序列SEQ ID No. 30之可變 輕鏈及序列SEQ ID No. 38之可變重鏈。 本發明之標的亦為FGF-R4專一性人類拮抗劑抗體。該 等抗體可根據熟習此項技術者已知之方法、藉由嗟菌體呈
現術來獲得（McCafferty J.等人，1990; Hoogenboom，HR 等人，2005)。可用其他技術製備人類抗體，諸如美國專 利5,939,598中所述之XenoMouse技術。 在一個特定實施例中，FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體 為其中重鏈可變區包含與序列SEQ ID No. 76、86、96或 106具有至少80%、90%、95%或99%—致性之序列的人類 抗體。 在另一個實施例中’ FGF-R4受體專一性拮抗劑抗體為 其中輕鏈可變區包含與序列SEQ ID No· 71、81、91或1(^ 140834.doc -29- 201006492 具有至少80%、90%，95%或99% —致性之序列的人類抗 體。 本發明之標的亦為包含重鏈之FGF-R4受體專一性人類 拮抗劑抗體，該重鏈包含藉由與序列SEQ ID No. 77、87、 97或107具有至少80%、90%、95%或99%—致性之核苦酸 序列所編碼之可變區。 本發明之標的亦為包含輕鏈之FGF-R4受體專一性人類 拮抗劑抗體，該輕鏈包含藉由與序列SEQ ID No. 72、82、 92或102具有至少80%、90%、95%或99%—致性之核苦酸 序列所編碼之可變區。 本發明之標的亦為包含藉由核苷酸序列SEQ ID No. 71 及76或核苷酸序列SEQ ID No. 81及86或核苷酸序列SEq ID No. 91及96或核苷酸序列SEQ ID No. 101及106所編碼 之序列的FGF-R4受體專一性人類拮抗劑抗體。 本發明之標的亦為包含多肽序列SEQ ID No. 72及77或 多肽序列SEQ ID No. 82及87或多肽序列SEQ ID No. 92及 97或多肽序列SEQ ID No. 102及107之FGF-R4受體專一性 人類拮抗劑抗體。 尤其較佳地’ FGF-R4受體專一性人類拮抗劑抗體包含 多肽序列SEQ ID No. 82及87。 由此修飾之胺基酸序列亦可在哺乳動物細胞產生期間藉 助於轉譯後修飾來修飾。詳言之，使用缺乏褐藻糖生物合 成之穩定株可產生其中Fc之N-聚糖（位置N297)部分或完全 缺乏褐藻糖之單株抗體且能夠增加ADCC效應作用（Kanda 140834.doc -30- 201006492 等人，2006, 94:680-688 及 Ripka 等人， 1986 Arch Biochem Bioph 249: 533-545) 〇 在本發明之另一個實施例中，FGF_R4專一性拮抗劑為 經結合抗體〇 " 可使抗體與細胞毒性劑結合。術語r細胞毒性劑」在本 文中表示降低或阻斷細胞之功能或生長或導致細胞破壞之 . 物質。 ^ 在一個實施例中，可使抗體或其結合片段與諸如美登醇 (maytansinoid)之藥物結合以便形成相對於表現抗原之細胞 具有細胞毒性之「前藥」。 本發明之細胞毒性劑可為以各種方式導致細胞死亡或誘 導細胞死亡或降低細胞生存力之任何化合物。以上所定義 之較佳細胞毒性劑包括例如美登醇及美登醇類似物、紫杉 醇（taxoid)、CC-1065及CCM065類似物、海兔毒素 (dolastatin)及海兔毒素類似物。如本申請案所述使此等細 φ 胞毒性劑與抗體、抗體片段、功能等效物、經改良抗體及 其類似物結合。 經結合抗體可藉由活體外方法製備。使用連接基團將藥 物或前藥與抗體連接。合適連接基團$熟習此項技術者所 •熟知且尤其包括二硫基團、硫醚基團、不穩定酸基團、光 不穩基團、不穩定肽酶基團及不穩定醋酶基團。較佳連接 基團為二硫基團及硫醚基圏。舉例而言，可藉由使用二碚 基交換反應或在抗體與藥物或前藥之間形成硫醚橋來構： 結合物。 140834.doc 201006492 諸如甲胺蝶吟（methotrexate)、道諾徽素（daunorubicin)、長 春新驗（vincristine)、長春驗（vinblastine)、美法命 (melphalan)、絲裂黴素 C(mitomycin C)、苯丁 酸氣芥 (chlorambucil)、卡奇徽素（calicheamicin)、妥布來新 (tubulysin)及妥布來新類似物、多卡米新（duocarmycin)及 多卡米新類似物、海兔毒素及海兔毒素類似物之化合物亦 適用於製備本發明之結合物。亦可經由諸如血清白蛋白之 中間分子使該等分子與抗體分子連接。如（例如）專利申請 案US 09/740991中所述之小紅莓（Doxorubicin)及小紅莓化 合物亦可為有用的細胞毒性劑。 作為本發明之標的之抗體可與細胞毒性分子或化合物組 合。其亦可與針對其他血管生成路徑起作用之抗血管生成 化合物組合。 表述「表現FGF-R4之細胞」係指表現天然形式或突變 形式之FGF-R4受體的任何真核細胞，尤其哺乳動物細胞 且尤其人類細胞。FGF-R4亦可呈其完整形式或呈包含（例 如）FGR-R4'之細胞外域且尤其D2-D3域的截頭形式。FGF-R4亦可重組為嵌合形式。 本發明之化合物可調配成醫藥組合物以用於局部、經 口、非經腸、鼻内、靜脈内、肌肉内、皮下、眼内等投藥 目的。較佳地，該醫藥組合物含有醫藥學上可接受之用於 可注射調配物之載劑。該等載劑尤其可為無菌等張性生理 食鹽水溶液（磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氣化鈉、氣化 鉀、氣化鈣或氯化鎂等鹽，或該等鹽之混合物），或可為 140834.doc •32· 201006492 乾燥（尤其冷凍乾燥）組合物，其適當時可藉助於添加無菌 水或生理食鹽水形成可注射溶質。 所靶向之病變可為與血管生成相關之所有疾病，不論該 血管生成為腫瘤的或非腫瘤的。 所靶向之病變可為癌症（使用本發明作為腫瘤血管生成 之抑制劑），尤其肝癌'結腸癌、乳癌、肺癌、前列腺癌 症、胰腺癌或皮膚癌，或描述血管生成調節異常之病變， 諸如年齡相關性黃斑變性或ARMD、發炎性疾病（諸如風濕 性關節炎、骨關節炎、結腸炎、潰瘍或任何發炎性腸 病）、動脈粥樣硬化或用於治療肥胖症。 抗FGF-R4抗體亦可作為直接作用於腫瘤生長之抑制劑 用於治療癌症’尤其肝癌瘤及其他肝癌’及騰腺癌。 以下實例說明而非限制本發明。 實例： 實例1 :證明FGF-R4控制血管生成之作用 為證明FGF-R4控制血管生成之作用，使用經如下多種 FGF刺激之HUVEC型人類内皮細胞進行活體外血管生成實 驗：FGF2’ 一種活化大多數FGF受體之配體；FGF19，一 種專一地活化FGF-R4之配體；及FGF4，一種不活化FGF_ R4之配體。 為此，藉由將160 μΐ於膠原蛋白（大鼠尾膠原蛋白，工 型：Becton dickinson 354236)中稀釋至1/6之基質膠（生長 因子還原基質膠：Becton dickinson 356230)分布至細胞培 養玻片（chamberslide)(Biocoat Cellware collagen，I型 8孔讲 140834.doc •33- 201006492 養玻片：Becton dickinson 354630)之每個孔中來製備凝 膠。將凝膠在37°C下維持1小時以便使其能夠聚合。接 著，將人類靜脈内皮細胞（HUVEC參考編號：C-12200· Promocell)以15 X 103個細胞/孔接種於400 μΐ EBM培養基 (Clonetics C3121)+2% FBS+10 pg/ml hEGF中。此方案可 適合於96孔板：每孔60 μΐ之96孔板（Biocoat collagenl cellware，Becton Dickinson 354407)。基質如下製備：將 1/3之基質膠、1 mg/ml最終濃度之膠原蛋白、NaOH(0.026x 膠原蛋白體積（μΐ))、lxPBS混合，接著用水調整體積。將 内皮細胞在37°C下、在5% C02存在下用1 ng/ml FGF2 (R&D, 133-FB-025)或 10 ng/ml FGF4(R & D，235-F4-025) 或 FGF19(R&D，969-FG-025)刺激 24 h。24 小時之後，使用 電腦輔助影像分析系統（Imagenia Biocom, Courtaboeuf， France)量測所形成之微管網路之長度且測定每個孔中偽管 之總長度。針對每種條件計算微細管網路之平均總長度 (μηι)(對應於6次重複之平均值）。 用FGF2或FGF19刺激能夠誘導新微管形成，而FGF4並 無作用（圖1Α)。此等結果展示FGF-R4之專一性活化能夠誘 導新血管形成且因此能夠推斷FGF-R4控制活體外血管生 成。 使用活體内誘導於小鼠之纖維素植入物中之血管生成模 型獲得活體内與活體外相關性資料。此模型為Andrade等 人（MZcrovascM/ar /iesearc/i，1997, 54，253-61)所述之模型 之改型。 140834.doc -34- 201006492 經由腹膜内給予甲苯°塞唤（xylazine)(Rompun®，10 mg/kg)/氣胺酮（Imalgene 1000，100 mg/kg)混合物將動物 (近交系白色BALB/c J小鼠）麻醉。將該動物之背部剃毛且 用Hexomedine®消毒。藉由注射5 ml無菌空氣使小鼠之背 部皮下產生空氣袋囊。在動物之上背處製造約2 cm之切口 以便將經50 μΐ含有待測試之蛋白質或產物之無菌溶液浸潰 之無菌纖維素植入物（直徑1 cm、厚度2 mm之圓盤， Cellspon®參考編號0501)引入。接著縫合切口且用 Hexomedine®清潔。在植入物植入後數日期間，小鼠在氣 體麻醉（5%異乾院（Aerrane®, Baxter))下藉助於經皮注射 (50微升/植入物/日）接受植入物中之蛋白質或產物。 在海綿體植入之後七日，藉助於腹膜内投與致死量之戊 巴比妥納（sodium pentobarbital)(CEVA sant6 animale)處死 小鼠。接著圍繞海綿、避開傷疤切開約1 cm之皮膚，以釋 放皮膚及海綿體。接著將海綿艎切成數塊且置於含有1 ml 溶解緩衝液（細胞死亡偵測ELISA，Roche)之Ribolyser®管 中。將管在細胞均質機（FastPrep® FP 1 20)中以4級力（force 4)連續震盪4次，歷時20秒。接著將該等管在20°C下以 2000 g離心10 min且將上请液冷凍於-20°C下，同時準備以 待血紅蛋白檢定。 檢定當日，在融化之後將管再離心，且使用都氏試劑 (Drabkin reagent)(Sigma，體積比）、對照牛血紅蛋白 (Sigma)之標準範圍、藉由在405 nm下讀取分光光度計來 量測血紅蛋白濃度。每個樣品中之血紅蛋白濃度係根據基 140834.doc -35- 201006492 於標準範圍所執行之多項式回歸以mg/ml表示。每一組之 結果以平均值（土量測標準誤差（sem))表示。使用ANOVA、 繼而藉由杜奈特氏法檢驗（Dunnett's test)平方根值來檢驗 各組之間的差異。 在此模型中，每個部位50 ng之FGF19及5次再注射能夠 顯著誘導新形成之成熟血管定殖於海綿體中，每個部位5 ng之FGF2同樣有效。血紅蛋白之存在證明海綿體中存在 功能性血管（圖1B)。此等結果展示FGF-R4之專一性活化能 夠募集功能性血管，說明FGF-R4亦控制活體内血管生 成。 實例2:用作免疫原及抗原之FGFR蛋白質之描述 使FGFR生長因子受體且尤其FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3、FGF-R4之細胞外域與標記（Histag)或免疫球蛋白Fc域 融合。 編碼人類FGF-R4之細胞外域之cDNA與具有L136P突變 之SwissProt FGF-R4_HUMAN位置1-365中所述之蛋白質對 應。將其選殖於圖2中所示之真核生物表現載體PXL4614 中，以表現在細胞外域之C-末端位置含有Histag之蛋白 質。 如申請案WO 2008/065543中所述，使用使兩種N-聚糖糠 基化酶（亦即α-2,3-唾液酸轉移酶及β·1,4-半乳糖轉移酶）能夠 得到表現之質體PXL4614及輔助質體PXL4544及pXL4551、 藉由瞬時轉染於ΗΕΚ293 ΕΒΝΑ細胞株（Invitrogen)中來製備 稱為hFGFR4-Histag之序列SEQ ID No. 40之蛋白質。 140834.doc •36· 201006492 在咪唑緩衝液中進行溶離、藉由Ni螯合瓊脂糖管柱 (Amersham Biosciences;參考編號 17-0575-01)層析來純化 HEK293 EBNA細胞培養上清液中所表現之hFGFR4-Histag 蛋白質，且接著調配於PBS緩衝液（Invitrogen;參考編號 14190-094)中。如 Saddic 等人，2002. Methods Mol. Biol. 194:23-36及 Anumula等人，1998. Glycobiology 8:685-694 所述分析單醣組合物及定量N-聚糖之唾液酸能夠證明蛋白 質已極高度唾液酸化（91%)。因此，該蛋白質具有關於具 有足夠藥物動力學特性之所有特徵。 在可比方式中，在去硫生物素緩衝液中進行溶離、藉由 Strep-Tactin超流管柱（IBA ;參考編號2-1206)層析來純化 hFGFR4-Streptag蛋白質（SEQ ID No· 69)，且接著調配於 PBS緩衝液中。 hFGFR4(D2，D3)-Histag蛋白質與序列 SEQ ID No. 42對 應。將cDNA選殖於圖3中所示之真核生物表現質體 PXL4615中，且在類似於hFGFR4-Histag蛋白質之條件下製 備且純化蛋白質。 將編碼 mFGFR4-Histag蛋白質（SEQ ID No. 43)之 cDNA選 殖於圖4中所示之真核生物表現質體pXL4621中，且在類 似於hFGFR4-Histag蛋白質之條件下製備且純化蛋白質。 hFGFRl-Fc蛋白質（SEQ ID No. 46)含有在C-末端位置與 人類IgGl之Fc域融合之人類FGF-R1 IIIc的細胞外域。將 cDNA選殖於圖5中所示之真核生物表現質體pXL4728中， 且在類似於hFGFR4-Histag蛋白質之條件下製備蛋白質且 140834.doc -37- 201006492 接著在100 mM甘胺酸/HC1緩衝液（pH 2.7)中進行溶離、藉 由蛋白質G瓊脂糖親和管柱（Amersham Biosciences)層析純 化，且接著調配於PBS緩衝液中。 序列SEQ ID No. 48之hFGFR2-Fc蛋白質含有在C-末端位 置與人類IgGl之Fc域融合之人類FGF-R2 IIIc的細胞外域。 將cDNA選殖於圖6中所示之真核生物表現質體PXL4327 中，且在類似於hFGFRl -Fc蛋白質之條件下製備且接著純 化蛋白質。 hFGFR3-Fc蛋白質為使人類FGF-R3 IIIc之細胞外域與人 類IgGl之Fc域融合之蛋白質’且自R&D Systems(參考編 號：760-FR)獲得。 hFGFR4-Fc蛋白質為使人類FGF-R4之細胞外域與人類 IgGl之Fc域融合之蛋白質’且自R&D Systems(參考編號： 685-FR)獲得。 使hFGFR4蛋白質之細胞外部分之各種子域與人類IgGl 之Fc域融合。D1子域包含於構築體SABVA4794(SEQ ID No. 112及圖14A及14B)中。D2子域包含於構築體 SABVA4796(SEQ ID No. 114 及圖 15A 及 15B)中。D3 子域包 含於構築體SABVA4799(SEQ ID No. 116及圖 16A及 16B) 中。此等三個子域分別而言：對於SABVA4794係自位置1 延伸至179，對於SABVA4796係自1延伸至32加145延伸至 242，且對於SABVA4799係自1延伸至32加228延伸至 360(SwissProt FGF-R4_HUMAN中所述之位置）。此等蛋白 質係在類似於FGFRl-Fc蛋白質之條件下使用質體 140834.doc -38· 201006492 pXL4794(編碼序列 SEQ ID No. Ill)、pXL4796(編碼序列 SEQ ID No. 113)及 pXL4799(編碼序列 SEQ ID No. 115)製 備。 實例3 :產生及篩檢抗FGF-R4單株抗體 A-藉由免疫獲得抗體 在5個6週齡至8週齡之BALB/cJ小鼠（Charles River)中藉 由hFGFR4-Histag免疫原免疫來獲得單株抗體，每個小鼠 藉由 Kilpatrick 等人（1997. Hybridoma 16: 381389)所述之 RIMMS方法及ClonaCellTM-HY融合瘤選殖套組（StemCell Technologies ;參考編號03800)中所述之融合方案用總計 24 pg hFGFR4-Histag免疫。 在最終注射之後兩日，處死小鼠且淋巴結在聚乙二醇 (ClonaCell™-HY ；參考編號 03806)存在下與 P3X63-AG8.653骨髓瘤細胞（ATCC，CRL-1580)以5:1之比率融合。 將細胞懸浮液無菌分布於在37°C下、在5% C02存在下培育 之皮式培養皿（Petri dish)中。將培育12日之後出現之群落 分離且培養於96孔板中之培養基E(ClonaCell™-HY ;參考 編號03805)中。 使用hFGFR4-Streptag作為捕捉抗原、藉由ELISA檢定對 藉由hFGFR4-Histag免疫所獲之單株抗體進行初級篩檢。 使捕捉抗原與Immulon-4酶連接板（VWR Scientific Inc. Swedesboro, NJ)結合。隨後添加融合瘤培養上清液且接著 使用結合過氧化酶之抗小鼠IgG兔抗體（Sigma ;參考編號 A9044-稀釋至1:50 000)進行偵測。用TMB-H202受質 140834.doc -39- 201006492 (Interchim;參考編號UP664780)進行顯示且使用讀板器、 在450 nm下進行量測。在所測試之444個融合瘤中，藉由 ELISA檢定，129個融合瘤對hFGFR4-Streptag抗原呈陽 性，且此等融合瘤中120個對hFGFR4-Fc二聚體蛋白質亦 呈陽性。 藉由ELISA檢定、使用hFGFR4-Streptag蛋白質作為捕捉 抗原且接著使用實例2中所述之hFGFRl-Fc、hFGFR2-Fc及 hFGFR3-Fc蛋白質進行二次篩檢，以便僅選擇FGF-R4專一 性抗體。使捕捉抗原與Immulon-4酶連接板（VWR Scientific Inc. Swede sboro, NJ)結合。隨後添加融合瘤培養 上清液且接著使用結合過氧化酶之抗小鼠IgG兔抗體 (Sigma ;參考編號A9044-稀釋至1:50 000)進行偵測。用 TMB-H202受質（Interchim ;參考編號UP664780)進行顯示 且使用讀板器、在450 nm下進行量測。 在129個經ELISA檢定測試對抗原呈陽性之融合瘤中， 84個融合瘤對hFGFR4-Streptag呈陽性且對hFGFRl-Fc、 hFGFR2-Fc或hFGFR3-Fc無親和力。39個融合瘤具保守 性，與其生長及其形態有關。使用SEROTEC套組（參考編 號MMT1)測定其同種型；95%為IgGl。 經由檢驗FGF2誘導之Baf/3修飾細胞之增殖來進行第三 次篩檢，以表徵藉由抗FGFR4抗體之抑制作用。 藉由有限稀釋來選殖表現抗FGFR4拮抗劑抗體之鼠類融 合瘤。使用以指數期培養之融合瘤細胞，在使用Oligotex 套組（Qiagen ;參考編號72022)提取mRNA ;藉由RACEc- 140834.doc •40- 201006492 RT方法、使用Gene Racer套組、Superscript III逆轉錄酶 (Invitrogen ;參考編號L1500)及下表2中所述之引子產生並 擴增DNA ;使用Phusion聚合酶（Finnzymes ;參考編號F-53 0S)及表2中所述之引子溫度條件擴增cDNA片段之後測 定編碼序列（cDNA)。將含有VH(重鏈HC之可變區）或 VL(輕鏈LC之可變區）之編碼區之經擴增片段選殖於pGEM-T Easy載體（獲自Promega;參考編號A137A)中，且對所得 質體之插入物測序以便分析與抗FGFR4抗體40-12及抗 卩0?114抗體64-12對應之至少6個質體之每個可變域在5'-3’ 及3'-5·方向上之編碼序列。使用可獲得於Vector NTI (Invitrogen)之軟體進行序列、連續體及比對之分析。 含有編碼抗FGFR4抗體之可變區之一致序列之質體具保 守性。如下表2所示，質體PXL4691含有編碼抗FGFR4抗體 40_12之序列SEQ ID No. 5之VH的序列，且質體pXL4693含 有編碼抗FGFR4抗體64-12之序列SEQ ID No. 19之VH的序 列。 如以下表2所示，質體PXL4690含有編碼抗FGFR4抗體 40-12之序列SEQ ID No· 8之VL的核苷酸序列SEQ ID No. 7，且質體pXL4692含有編碼抗FGFR4抗體64-12之序列 SEQ ID No. 22之VL的核苷酸序列 SEQ ID No. 21。 140834.doc •41 · 201006492 表2-逆轉錄酶及pcr反應之操作條件及分析-質體 pXL4690至 pXL4693之鑑別。 抗 FGFR4 40-12 64-12 RT反應 55〇C 55〇C 溫度 SEQ ID No. 64 (HC) SEQ ID No. 64 (HC) 引子 SEQ ID No. 65 (LC) SEQ ID No. 66及 SEQ ID No. 67 (LC) 5'引子-GeneRacer (SEQ ID No. 63) 5'-CGACTGGAGCACGAGGACACTGA-3， 331子-鼠類鉸鏈内部 (SEQ ID No. 64) 5，-TATGCAAGGCTTACAACCACA-3， 3'引子-鼠類Ck内部(SEQ 5'-CTCATTCCTGTT ID No. 65) GAAGCTCTT GAC-3' 3'引子-鼠類Οι内部 5'-ACACTCAGCACGGG (SEQ ro No. 66及 ACAAACTCTTCTC-3' SEQ ID No. 67) 5'-ACACTCTGCAGGAG ACAGACTCTTTTC-3， HC PCR : 55〇C 55〇C 溫度 SEQ ID No. 63 -SEQ ID No. SEQ ID No. 63 -SEQ ID No. 64 引子 64 經選殖PCR產物之序列 9個純系具有相同VH序列及 6個純系具有相同VH序列及與 (VH) 與mCHl—致之CHI序列 mCHl—致之CH1序列 "^有VH之質體 pXL4691 pXL4693 _ LC PCR ： 55〇C 55〇C 溫度 SEQ ID No. 63 -SEQ ID No. SEQ ID No. 63 -SEQ ID No. 66 引子 65 及67 經選殖PCR產物之序列 11個純系具有相同VL序列 6個純系具有相同VL序列及與 (VL) 及與mCK—致之Ck序列 ιη(：λ—致之(：λ序列 含有VL之質體 pXL4690 pXL4692 ------ 抗FGFR4抗體64-12及抗FGFR4抗體40-12各自之輕鏈可 變區及重鏈可變區之胺基酸序列不同。所使用、所獲得及 所推導之序列之數目指示於表7中。 抗體40-12及64-12製備於T500燒瓶中。7日後收集培養 上清液。經由蛋白質G親和純化抗FGFR4抗體且接著相對 於PBS透析、無菌過渡且在4°c下儲存。 經純化拮抗劑抗體具有6.5xl〇-9 Μ(抗FGFR4 40-12)及 140834.doc -42· 201006492 5·75χ10·8 Μ(抗FGFR4 64-12)之KD。 B-使用噬菌體呈現方法選擇抗體 使用hFGFR4-Histag作為捕捉抗原、藉由ELISA檢定對 藉由噬菌體呈現hFGFR4-Histag所獲得之單株抗體進行初 級篩檢。使捕捉抗原與Immulon-2酶連接板（VWR Scientific Inc· Swedesboro，NJ)結合。隨後添加感染嗟菌體 -之大腸桿菌之培養上清液，且接著使用結合過氧化酶之抗 M13小鼠抗體（GE Healthcare ;參考編號27-9421-01，稀釋 ® 至1:5000)進行偵測。使用TMB-H202受質（Interchim ;參 考編號UP664780)進行顯示且在450 nm下進行光學密度 (O.D.)量測。 藉由ELISA檢定、使用hFGFR4-Histag蛋白質作為捕捉 抗原且接著使用實例2中所述之hFGFRl-Fc、hFGFR2-Fc及 hFGFR3-Fc蛋白質進行二次篩檢，以便僅選擇FGF-R4專一 性抗體。使捕捉抗原與Immulon-2酶連接板（VWR Scientific Inc. Swedesboro, NJ)結合。隨後添加感染嗟菌體之大腸桿菌 之培養上清液，且接著使用結合過氧化酶之抗Ml 3小鼠抗 體（GE Healthcare ;參考編號 27-9421-01，稀釋至 1:5000) 進行偵測。使用TMB-H202受質（Interchim ;參考編號 UP664780)進行顯示且在450 nm下進行光學密度（O.D.)量 測。 將所選FGF-R4專一性純系測序且再選殖於表現載體中 以便瞬時轉染HEK293細胞。 為此，在第一步中，藉由限制性酶切法自噬菌粒提取編 140834.doc -43- 201006492 碼Fab(亦即抗體之輕鏈、細菌核糖體結合位點及抗體之重 鏈可變區）之區且插入哺乳動物細胞之IgG表現質體、真核 生物抗體信號序列之下游及人類IgG 1重鏈之恆定區之上游 中。在第二步中，針對IRES序列及真核生物信號序列將含 有細菌核糖體結合位點之區與重鏈之細菌信號肽交換。藉 由HEK293細胞之瞬時轉染來表現IgG。此方法詳細描述於 T. Jostock 等人，Journal of Immunological Methods 289 (2004) 65-80^ 。 可用於本發明之人類IgGl恆定區序列之實例為序列SEQ ID No. 117。 使用瞬時轉染抗體表現載體之HEK293細胞之培養上清 液、經由檢驗實例4中所述之FGF2誘導之經修飾Baf/3細胞 之增殖來進行第三次篩檢，以便表徵抗FGFR4抗體之抑制 作用。此篩檢能鑑別純系8、31、33及36之抗體。相應序 列描述於表7中。 實例4 : BaF/3 FGF-R4-hMpl鼠類純系之建立及細胞增殖 方案 將FGF-R4之細胞外域及跨膜域以與hMpl之細胞内域之 轉譯融合形式選殖於經突變pEF6/V5-His A載體中’以使 得HA標記存在於嵌合FGF-R4-hMpl受體前之5'位置。 經突變pEF6A之構築 改良 pEF6/V5-His A 載體（Invitrogen，參考編號 V961-20) 以便將與置於pDisplay(Invitrogen ’參考編號V660-20)之 IgGk信號肽下之HA標記結合的MCS(多選殖位點）整合。為 140834.doc 201006492 此，在序列SEQ ID No. 51之有義引子與序列SEQ ID No-52之反置引 子之間 、藉由PCR擴增與 HA標記 及其信號肽結 合的MCS，從而能夠將ΚρηΙ限制酶切位點插入5'位置且將 Xbal限制酶切位點插入3·位置。用ΚρηΙ及Xbal酶消化PCR 片段，且接著選殖於由相同酶打開之pEF6/V5-His A載體 中。最後，藉由ΚρηΙ及Spel酶消化新形成之載體且將彼此 雜交且含有BsrGI酶切位點之序列SEQ ID No· 53及SEQ ID No. 54之引子插入此等位點之間來將MCS之第一個BamHI 位點置換為BsrGI位點。所得載體稱為：pEF6mut-HA。 pEF6mut-HA-FGF-R4-hMpl載體之構築 在容許SacI消化位點插入之序列SEQ ID No. 55之有義引 子與通常稱為revBGH之序列SEQ ID No. 56之反置引子之 間，以載體 pEF6/V5-His TOPO(Invitrogen，參考編號 K9610-20)擴增Mpl之細胞内域。接著用SacI及Notl酶消化 所產生之PCR片段。 使用引子對（有義：序列SEQ ID No. 57 ;反義：序列 SEQ ID No· 58)擴增FGF-R4之細胞外域及跨膜域。此等引 子使得BamHI酶促位點能夠插入5’位置且SacI酶促位點能 夠嵌入3'位置》接著用BamHI及SacI酶消化所得PCR片段。 接著將擴增之編碼hMpl及編碼FGF-R4之DNA同時選殖 於由BamHI-Notl打開之pEF6mut-HA載體中。所得構築體 稱為「pEF6mut-HA FGF-R4aIIIc-hMpl2」。接著藉由定位 突變改良此構築體以便用序列SEQ ID No. 60替換FGF-R4 之跨膜域（蛋白質序列SEQ ID No. 59)。為此，對於序列 140834.doc • 45- 201006492 SEQ ID No. 61之有義引子及序列SEQ ID No. 62之反置引 子使用「QuickChange®定位突變套組」（Clontech，參考 編號200518)。所獲得之新嵌合構築體稱為pEF6mut-HA FGF-R4aIIIcmut-hMpl2。 藉由FGF-R4aIIIcmut-hMp丨2構築體轉染BaF/3鼠類細胞株 來產生穩定細胞株： 藉由電穿孔將「pEF6mut-HA FGF-R4aIIIcmut-hMpl2」 構築體穩定引入BaF/3鼠類細胞之基因組中。在20 ng/ml之 FGF2(R&D，參考編號 234-FSE-025)及 100 ng/ml 之肝素 (Sigma，參考編號H3149)存在下選擇所獲得之細胞株。所 轉染及所選擇之細胞株從而為純系型。
BaF/3 FGFR4-hMpl細胞株之細胞增殖方案： 在補充有 20 ng/ml FGF2 (R&D Systems，參考編號 234-FSE)及3 ng/ml肝素（Sigma，參考編號H3149)之完全RPMI 1640 培養基（Invitrogen ;參考編號 32404-014)(10% FCS (Hyclone ；參考編號 SH30070.03)、2 mM 麩醯胺酸、1 x MEM非必需胺基酸（Gibco，參考編號1114〇-〇35)、lxMEM 丙酮酸鈉（Gibco，參考編號11360-039))中培養且維持 BaF/3 FGFR4-hMpl細胞。第一日，將細胞以〇·4χ106個細 胞/毫升接種於補充有20 ng/ml FGF2及3 ng/ml肝素之完全 RPMI 1640培養基中。次曰，將50 μΐ於補充有20 ng/ml FGF2及3 ng/ml肝素之完全RPMI 1640培養基中之BaF/3 FGFR4-hMpl細胞懸浮液以0.2xl06個細胞/毫升分配於96孔 板（Porvair，參考編號214006)中，隨後分配50 μΐ含有待測 140834.doc -46- 201006492 試抗體之融合瘤上清液。接著將孔板在37°C、5% C02下置 放24 h至30 h。為讀取細胞增殖，藉由添加100 μΐ Cell Titer Glo發光法細胞活力檢定劑（Luminesent Cell Viability As say )(Pr omega，參考編號G75 71)來定量ATP之量且使用 光度計讀取發光。 選擇在此測試中展示與含有添加劑20 ng/ml FGF2及3 ng/ml肝素之完全RPMI 1640培養基相比弱50%之信號的純 系。 當將對FGF-R4專一之抗FGFR4抗體用 Baf/3-FGFR4-hMpl 細胞及以下添加劑20 ng/ml之FGF2及3 ng/ml之肝素培育 時，觀測到針對細胞增殖之拮抗作用。在所測試之39個融 合瘤之中，14個能夠在FGF2存在下抑制FGF誘導之Baf/3-FGFR4-hMpl細胞之細胞增殖。 ELIS A(圖12)展示抗FGFR4拮抗劑抗體40-12及64-12對鼠 類蛋白質mFGFR4及人類蛋白質hFGFR4(D2, D3)具有親和 力。 最後，藉由表面電漿共振（Surface plasmon Resonance) (BIAcore 2000)進行最後篩檢以測定抗FGFR4抗體之親和 常數。在抗FGFR4抗體結合至本身與CM晶片結合之抗Fc 抗體之後，分析融合瘤培養物上清液中所存在之FGF_R4 蛋白質與抗FGFR4抗體之間的相互作用。根據Canziani等 人，2004. Anal, Biochem. 325: 301-307之方案量測動力 學。 選擇其中具有1〇-8 Μ至ΙΟ·9 Μ之親和常數及10·3 S·1至1(Γ5 140834.doc -47- 201006492 s-1之離解速率的兩種抗體。此等抗體之特徵描述於下表1 中〇 用於測定KD之參考方法為表面電漿共振（BIAcore)。 表1A :經純化之抗FGFR4拮抗劑抗體40-12及64-12之親和 力及結合/解離常數 抗-FGFR4 konCM's1) kofKs*1) Kd(M) 40-12 1.94x10s 1.26x10'3 6.5〇χ10'9 64-12 1.05χ104 6.02Χ10*4 5.75χ10·8 表1B:藉由表面電漿共振（BIAcore 3000)所量測之抗 FGFR4抗體8、31、33及36之結合之動力參數： 結合 h-FGFR4-Histag 結合 m-FGFR4-Histag KoniM^S-1) Koffis'1) Kn(M) k〇„(mV) K〇ff(s-') Kd(M) 純系8 8.93xl05 2.92xl0'4 3.27χ1〇·,ϋ 1.20xl06 1.36X10·4 1.15xlOIW 純系31 6.48xl05 9.80x1 O'4 1.52x10 s 9.14xl05 1.80xl0J 1.97xl0*v 純系33 8.05xl05 6.17x 10'4 7.71xlOl0 l.OlxlO6 7.04xl〇·4 6.92χ10'1ϋ 純系36 2.44x105 6.31x1 O'4 2.62x10 s 3.30xl05 7.52xl0'4 2.28x10-9 實例5 :抗FGFR4抗艎之專一性 A-抗FGFR4抗體40_12對FGF-R4之專一性 根據實例4中所述之方案、藉由ELISA確定每種抗體之 專一性。在此方式中，觀測每種抗體結合每種FGF-R之能 力。此實驗清楚地展示抗體40-12僅識別FGF-R4且因此對 FGF-R4具專一性。抗體64-12不僅能主要結合至FGF-R4， 而且能微弱地結合至FGF-R3(圖7)。 B-抗FGFR4抗體8、31、33及36對FGF-R4之專一性 根據以下方案、藉由ELISA確定每種抗體之專一性：藉 140834.doc -48- 201006492 由大腸桿菌細菌感染來產生在表面呈現Fab形式之抗體之 噬菌體的懸浮液。使捕捉抗原與Immulon-2酶連接盤（VWR Scientific Inc. Swedesboro, NJ)結合。隨後添加噬菌體懸浮 液，且接著使用結合過氧化酶之抗M13噬菌體小鼠抗體 (GE Healthcare;參考編號 27-9421-01，稀釋至 1:5000)進 行偵測。使用TMB-H202受質（Interchim ;參考編號 UP664780)進行顯示且在450 nm下進行光學密度（OD)量 測。表2總結所得結果： 在此方式中，觀測每種抗體結合每種FGF-R之能力。此 實驗清楚地展示抗體8、31、33、36僅識別FGF-R4且因此 對FGF-R4具專一性。 表2 :藉由ELISA(信號=OD，450 nm)所確定之來源於純系 8、31、33及3 6之抗FGF-R4抗體的專一性 h-FGFR4(D2，D3)-histag h-FGFRl-Fc h-FGFR2-Fc h-FGFR3-Fc 純系8 2.55 0.05 0.00 0.00 純系31 2.52 0.00 0.00 0.01 純系33 2.73 0.00 0.00 -0.01 純系36 1.87 -0.01 -0.01 -0.02 實例6 :抗體40-12及來源於純系8、31，33、36之抗醴對 血管生成之拮抗作用（活體外） 為測定抗FGFR4單株抗體40-12在人類内皮細胞血管生 成過程中之生物活性，在抗體40-12或對照抗體存在下， 在1至30 pg/ml之遞增劑量下、使用經FGF2刺激之HUVEC 細胞進行活體外血管生成實驗（圖8A及8B)。 在本上下文中，活性抗FGFR4拮抗劑單株抗體40-12在 140834.doc • 49· 201006492 30 pg/ml或200 nM之劑量下能夠抑制FGF2誘導之HUVEC 細胞之血管生成，而對照抗體64-12並無作用。此外，抗 體40-12本身對基底血管生成並無作用。 此等結果指示FGF-R4專一性拮抗劑抗體能夠抑制血管 生成。 如同抗體40-12，對經由噬菌體呈現所產生之純系8、 31、33及36之抗FGFR4抗體評估其抑制FGF-2誘導之 HUVEC型人類内皮細胞之血管生成之能力。此等4種抗體 阻斷由FGF-2所得之對血管生成之活體外刺激，該等抗體 為10 pg/ml之劑量（圖8C及8D)。 實例7 :抗體40-12及來源於純系8、31，33及36之抗體對 人類肝癌瘤細胞之拮抗作用（活體外） 為測定抗FGFR4拮抗劑單株抗體40-12之抗腫瘤作用， 對Hep3b人類肝癌瘤細胞進行實驗，其中所產生之增殖及 信號傳導路徑視配體-受體對：FGF19/FGF-R4而定。 首先，藉由西方墨點法研究導致Hep3b細胞增殖之FGF-R4依賴性信號傳導路徑。此細胞信號傳導涉及cFos及JunB 蛋白質之新合成以及Erkl/2之磷酸化（Lin等人，J C/zem.，2007，14:27277-84)。為此，在2 ml 完全培養基 (DMEM，10% FCS，2 mM麩醯胺酸）中，將5χ105個細胞接 種於直徑為35毫米之盤中。24 h之後，使細胞於1.8 ml無 血清培養基中經受缺乏條件24 h。接著在對照抗FGFR4抗 體或抗FGFR4抗體40-12不存在或存在下，用200 μΐ 10倍濃 縮之FGF 19刺激細胞3 h。接著移除培養基，且用冷PBS洗 140834.doc -50- 201006492 滌細胞一次且在4°C下、在盤上用75 μΐ補充有蛋白酶抑制 劑之RIPA緩衝液溶解30 min。接著將總蛋白質萃取物在 4°C下、以13 000 rpm離心10 min且藉由西方墨點技術分析 上清液。接著將膜在周圍溫度下、在TBS(0.05%吐溫 (tween)、5%牛乳）中培育2 h，且接著以1/1000添加抗cFos (Cell Signaling Technology，參考編號 2250)、抗 JunB(Cell Signaling Technology，參考編號 3746)及抗 phospsoErkl/2 (Cell Signaling Technology，參考編號 4377) —次抗體，且 在4°C下、在緩慢振盪下培育隔夜。將膜用TBS、0.05%吐 溫沖洗三次，且將與HRP偶合之二次抗體在4°C下培育4 h，於TBS(0.05%吐溫、5%牛乳）中稀釋至1/2000。接著使 用Chemigenius機器（Syngene)定量西方墨點法結果。將由 各種抗體所得到之墨帶的強度與由與HRP直接偶合且以 1/3 000使用之抗肌動蛋白抗體（Santa Cruz Biotechnology， 參考編號Sc-8432-HRP)所得到之墨帶的強度加權。 3 0 ng/ml之FGF 19在Hep3b細胞中誘導JunB及cFos蛋白質 之合成以及Erkl/2磷酸化。抗FGFR4抗體40-12在100 pg/ml 下使蛋白質之此新合成及Erk之填酸化受到完全抑制，而 對照抗體並無抑制作用。將對西方墨點法膜所觀測之此等 作用定量（圖9A)且每個膜之墨帶的強度以圖形表示（圖 9B)。 其次，進行本身細胞增殖實驗。在100 μΐ含有10% FCS 及2 mM麩醯胺酸之DMEM培養基中，將5000個細胞接種於 96孔板中。24 h之後，在無血清培養基中使細胞匱乏血清 140834.doc •51 · 201006492 24 h。接著在對照抗體或抗FGFR4拮抗劑單株抗體40-12不 存在或存在下，用100 μ1補充有10 ng/m丨FGF19(在San〇fi-Aventis R&D内部製備）之無血清培養基或10°/°血清刺激 Hep3b細胞72 h。3 日之後，使用 CellTiter Glo套組（Promega, France)定量細胞增殖。 此等實驗顯示血清及FGF19能夠刺激HeP3b增殖。抗 FGFR4# ^ H 40-12^ 100 pg/ml下部分抑制此血清誘 導之增殖，而對照抗體並不展不任何抑制活性（圖1 〇 A)。 此外，抗體40-12在1〇 Kg/ml下完全阻斷FGF19所誘導之增 殖（圖10B)。對照抗體並無作用。 此證明在FGF19依賴性腫瘤或FGF-R4依賴性腫瘤之情況 下可將作為本發明之標的之抗FGFR4拮抗劑抗體用作抗腫 瘤治療劑，且此抗體對於治療肝癌尤其有效。 為使對抗FGFR4抗體對Hep3b細胞之作用的研究簡化， 在用FGF-19(與實例8中所述之實驗有關）、FGF-2或胎牛血 清刺激此等細胞之後，開展ELISA檢定以彳貞測Erk 1/2之填 酸化。 為此，在100 μΐ含有10% FCS及2 mM麩醯胺酸之DMEM 培養基中，將50 000個Hep3b細胞接種於96孔黑色透明底 板（COSTAR，參考編號3603)。24 h之後，使細胞於含有2 mM麩醯胺酸之無FCS DMEM培養基中經受缺乏條件24 h»接著抽出培養基且用1〇〇 μΐ在37°C下預平衡、含有FGF 或FCS以及在不同劑量下所評估之抗體之缺乏培養基置 換。將細胞在37°C、5% C02下培育3 h。接著抽出刺激培 140834.doc •52· 201006492 養基，在4°C下用PBS沖洗各孔且藉由在周圍溫度下添加 200 μΐ於PBS中之4% PFA(三聚曱醛）歷時15 min來固定細 胞。抽出PFA且用200 μΐ PBS洗滌細胞三次。藉由100 μΐ飽 和緩衝液（21.25 ml PBS、1.25 ml 10%非免疫性山羊血清 (Zymed，參考編號 50-062Z)，75 μΐ 曲拉通 X100(triton XI 〇〇))使非專一性位點飽和2 h來開始抗體標記以便直接偵 測Hep3b細胞上之磷酸Erkl/2。用50 μΐ於含有1% BSA及 0.3%曲拉通XI 00之PBS緩衝液中稀釋至1/100之抗磷酸化 Erkl/2 — 次抗體（Cell Signaling Technology，參考編號 4377)置換飽和緩衝液。在4°C下用細胞培育一次抗體隔 夜。接著用200 μΐ PBS洗滌液沖洗3次且使用在含有1% BSA及0.3°/〇曲拉通Χ100之PBS緩衝液中稀釋至1/5000、與 AlexaFluor 488(Molecular Probes，參考編號 Α11008)偶合 之抗兔二次抗體顯示4 h。接著用200 μΐ PBS之洗滌液沖洗 二次抗體3次，且接著將100 μΐ PBS添加至每個孔中。使用 FITC過濾器、經由EnVision 2103 Multilabel讀取器（Perkin Elmer)讀取瑩光。 此技術能證實FGF-19在30 ng/ml下誘導Hep3b細胞中之 Erkl/2之填酸化且40-12在3 pg/ml之劑量下能阻斷此刺激 (圖9C)。FGF-2及血清亦能誘導系統。在後2種情況下，抗 體40-12在較高劑量（30-100 pg/ml;圖9C)下抑制FGF-2及 血清之作用。 藉由ELISA偵測磷酸化Erkl/2亦能展示，在活體外血管 生成模型中具活性之抗FGFR4抗體亦能夠在3 pg/ml之劑量 140834.doc -53- 201006492 下將FGF-19所誘導之Erkl/2磷酸化阻斷70%與95%之間（圖 9D)。 有利地，本發明之抗體對與腫瘤發生有關之病理性血管 生成與肝性腫瘤生長本身、尤其對肝癌瘤模型具有拮抗作 用。 實例8:抗體40-12在鼠類胰腺癌模型中之拮抗作用 對於此藥理學模型而言，使用具有C5 7B1/6J遺傳背景之 雖性 Ripl-Tag2 小鼠（Charles River Laboratory，France) 〇 自出生後第9週開始，讓動物飲用補充有5%蔗糖之水。第 10週至第12.5週，經由皮下注射25 mg/kg之劑量的抗 FGFR4抗體40-12或對照抗體、依介入處理方案每週處理 小鼠一次（圖 14A)。此方案經 Sanofi-Aventis Recherche之 「Comit6exp0rimentation Animale (Animal Care and Use Committee)(實驗動物管理及使用委員會）」批准。畜牧設 施（zootechnical facility)、對動物之照料以及處理方案符 合歐洲脊椎動物保護公約（European Convention on the protection of vertebrate animals)制定之原則，在處理期之 後或當腫瘤負荷及/或副作用使得其須退離研究時處死。 為量測腫瘤負荷，在實驗結束時藉由安樂死術處死動物 且自剛切除之胰腺對腫瘤進行顯微解剖。使用卡尺，應用 式[體積=〇·52χ(寬度）2x(長度）]量測腫瘤體積（mm3)，以接 近球狀體之體積。藉由累計每個小鼠之腫瘤體積來計算每 小鼠之腫瘤負荷。 為對血管密度進行組織化學分析，使動物麻醉，且收集 140834.doc •54· 201006492 胰腺，固定於accus tain® (Sigma)中隔夜且接著包埋於石蠛 中。對於每個樣品製備5 μπι厚之切片。藉由在37°C下用胰 蛋白酶（Zymed，參考編號00-3003)培育切片10 min，且接 著用稀釋至1/50(BD Pharmingen)、大鼠中所產生之抗小鼠 CD3 1抗體培育來偵測内皮細胞。為顯示經抗體標記之區 域，將該等切片用生物素偶合之抗大鼠抗體培育30 min， 且接著亦用HRP偶合之抗生蛋白鏈菌素培育30 min (Vectastain® ABC 套組，Vector)且最終用 DAB 培育 5 min(Vector，參考編號SKUOO)。接著用稀釋至1/10之蘇木 精（hematoxylin)(Dako，S-3309)將切片染色。在200倍之總 放大倍率下用安裝於顯微鏡上之攝影機（Nikon，E-800)攝 影。使用軟體（Visiolab，Biocom)分析影像。對腫瘤中之 血管計數且根據其表面積分類：5 μηι2與20 μιη2之間的小 血管、21 μιη2與100 μιη2之間的中jk管及始於101 μηι2之大 血管。對每個胰腺分析兩個載玻片以測定與所標記之每野 元素總量對應的血管密度。 在此模型中，在第10週與第12週之間每週一次使用25 11^/1^§之抗卩〇?114抗體40-12進行皮下處理能使腫瘤負荷顯 著降低55% (FigllB)且具有使每個胰腺中腫瘤數降低34% 之趨勢（圖11C)，而對照處理並無作用。藉助於抗FGFR4抗 體40-12抑制腫瘤發生的同時，總血管密度顯著降低31%， 此與經抗CD3 1抗體標記之所有血管尺寸組中所觀測之血 管數目之減少對應（圖11D)。 此等活體内結果清楚地展示抗FGFR4拮抗劑抗體能抑制 140834.doc •55· 201006492 腫瘤中血管之募集及形成。此抑制腫瘤血管形成的同時， 每個胰腺中腫瘤數目及總腫瘤體積減少。 有利地，本發明之抗體對與病理性血管生成與肝腫瘤生 長（肝癌瘤模型）及胰腺腫瘤生長具有拮抗作用。 實例9:抗體舆人類、鼠類及大鼠FGF-R4之交叉反應性 首先，進行競爭結合實驗。為此，根據供應商之建議， 用 AlexaFluor® 488 nm C-5 順 丁稀二醯亞胺（Molecular Probes，A10254)在2個游離半胱胺酸上標記FGF2。此 FGF2-AF488在10 ng/ml下能夠結合至在經轉染300-19細胞 之表面上所表現之人類FGF-R4(圖8)。因為添加過量未標 記FGF2能置換FGF2/FGF-R4相互作用，所以此結合具有專 一性（圖8A)。在添加遞增劑量之抗體40-12或對照抗體64-12下進行相同實驗。僅拮抗劑抗體40-12能夠以3500 ng/ml(亦即 23 nM)之 IC5〇 置換 FGF2-AF488/FGF-R4 結合， 說明此抗體之拮抗作用係歸因於其置換FGF/FGF-R4結合 之能力。 其次，為在除人類外之物種中測定純系40-12阻斷 FGF/FGF-R4結合之能力之目的’使用上述小鼠、大鼠及 人類FGF2/FGF-R4對進行解離實驗。為此’以與人類FGF2 同樣的方式用人16乂巴？11!〇1 488標記氣類？0?2(11&0，參考編 號 3139-FB-025)或大鼠 FGF2(R&D，參考編號 3339-FB-025)。使用經小鼠或大鼠FGF-R4受體轉染之300-19細胞株 進行解離實驗。結果展示抗FGFR4括抗劑抗體40-12能夠 使小鼠或大鼠系統中之FGF2/FGF-R4結合解離’與在人類 140834.doc -56- 201006492 系統中同樣有效。實際上，人類、鼠類或大鼠FGF2/FGF-R4複合物之;[c5〇值分別為 3500 ng/ml、4110 ng/ml及 3940 ng/ml(亦即 23 nM、27 nM及 26 nM)(分別為圖 13A、13B及 13C)。藉由ELISA驗證結合至齧齒動物FGF-R4之此能力。 抗體40-12結合至人類FGF-R4與鼠類FGF-R4(圖12)。 此等結果指示抗FGFR4抗體40-12可用於齧齒動物（至少 小鼠及大鼠）之藥理學模型，且所得結果應預示對人類有 效。 類似地，對來源於純系8、3 1、33及36之抗體所進行之 研究展示此等抗體識別人類FGF-R4與鼠類FGF-R4(下表4) 表4:藉由表面電漿共振（BIAcore 3000)所量測之抗FGFR4 抗體8、31、33及3 6之結合之動力參數： 結合 h-FGFR4-Histag 結合 m-FGFR4-Histag KonfM-'s'1) Koffis'1) Κ〇(Μ) KonfM-'s'1) Koffis-1) Κ〇(Μ) 純系8 8.93x10s 2.92χ104 3.27χ10_10 1·20χ106 1.36x1ο·4 1.15χ10Ιϋ 純系31 6·48χ105 9.80Χ10-4 1.52Χ10·9 9.14xl〇5 Ι.δΟχΙΟ'3 1.97χ1〇-9 减系33 8.05χ105 6.17Χ104 7·71χ10_10 Ι.ΟΙχΙΟ6 7.04Χ10·4 6.92χ1010 純系36 2.44χ105 6.31Χ10·4 2.62χ1〇·9 3.30xl〇5 7.52x1ο·4 2.28χ1〇·9 實例10:測定抗FGF-R4抗體所識別之抗原決定基 A-測定抗FGFR4抗體40-12所識別之抗原決定基 藉由ELISA檢定進行篩檢以測定由抗體40-12識別之 FGFR4之專一性結構域。經由在ELISA中使用FGF-R4之D1 域之缺失形式，確認抗體4〇-i2與FGF-R4之D2-D3域相互 作用（圖12)。 如實例2中所述’使用含有hFGFR4蛋白質之D1域 140834.doc -57- 201006492 (SABVA4794)或 D2 域（SABVA4796)或 D3 域（SABVA4799)之 構築體作為捕捉抗原、藉由ELISA檢定進行第二次篩檢。 使捕捉抗原與Immulon-4酶連接板（VWR Scientific Inc. Swedesboro, NJ)結合。隨後添加融合瘤40-12且接著使用 結合過氧化酶之抗小鼠IgG兔抗體（Sigma ;參考編號 A9044-稀釋至1:50 000)進行偵測。用TMB-H202受質 (Interchim;參考編號UP664780)進行顯示且在450 nm下進 行光學密度（OD)量測。表5總結所得結果： 表5:量測抗體40-12與FGF-R4之各種子域之結合 所研究之域 D1 SABVA4794 D2 SABVA4796 D3 SABVA4799 D1-D3 FGFR4 -Fc 信號(O.D.，450nm) 0.185 3.000 0.105 3.000 因此，抗FGFR4抗體識別FGFR4蛋白質之細胞外部分之 D2域。 此外，在西方墨點分析中，抗體40-12不識別經FCS變性 之FGFR4-FC蛋白質，從而說明FGFR4之D2域上之藉由40-12所靶向之抗原決定基為構形類型。 B-測定抗FGFR4抗艟8、31、33、36所識別之抗原決定基 使用含有 D2 及 D3 域（SEQ ID No. 42)或 hFGFR4-Histag 蛋 白質（SABVA4614，SEQ ID No. 40)之構築體作為捕捉抗 原、藉由ELISA檢定進行篩檢以測定抗體8、31、33及36 所識別之FGFR4之專一性域。使捕捉抗原與Immulon-4酶 連接板（VWR Scientific Inc. Swedesboro, NJ)結合。隨後添 加經使得抗體8、31、33及36能夠被分泌之質體瞬間轉染 140834.doc -58 - 201006492 之HEK293細胞之培養上清液，且接著使用結合過軋化酶 之抗人類IgG兔抗體（DakoCytomation，參考編號P0214-稀 釋至1:5000)進行偵測。用TMB-H202受質（Interchim ;參 考編號UP664780)進行顯示且在450 nm下進行光學密度 (OD)量測。下表6總結所得結果： 表6:來源於純系8、31、33及36之抗體與完整？0?-114或 D2-D3子域之結合（45 0 nm下之OD信號） hFGFR4-Histag hFGFR4(D2,D3)-Histag 純系8 3.898 3.860 純系31 3.859 3.741 純系33 3.752 3.621 純系36 3.751 3.616
因此，抗體8、31、33及36識別FGFR4蛋白質之細胞外 部分之D2-D3域。 表7 :所使用、所獲得及所推斷之序列 核苷酸序列 蛋白質序列 抗體40-12 VH+CH SE〇 ID No. 1 SEQ ID No. 2 VL+CL SE〇 ID No. 3 SEQ ID No. 4 VH SE〇 ID No. 5 SEQ ID No. 6 VL SE〇 ID No. 7 SEQ ID No. 8 CDRVH SEQ ID No. 9 ； 10 ； 11 CDRVL SEQIDNo. 12 ； 13 ； 14 抗 *64-12 VH + CH SEQIDNo. 15 SEQIDNo. 16 VL+CL SEOIDNo. 17 SEQIDNo. 18 VH SE〇 ID No. 19 SEQ ID No. 20 VL SE〇 ID No. 21 SEQ ID No. 22 CDRVH SEQ ID No. 23 ； 24 ； 25 CDRVL SEQ ID No. 26 ； 27 ； 28 H0834.doc •59- 201006492 人類化序列 輕鏈1 SEQ ID No. 29 SEQ ID No. 30 輕鏈2 SEQIDNo.31 SEQ ID No. 32 重鏈1 SEQ ID No. 33 SEQ ID No. 34 重鏈2 SEQ ID No. 35 SEQ ID No. 36 重鏈3 SEQ ID No. 37 SEQ ID No. 38 構築體 hFGFR4-Histag SEQ ID No. 39 SEQ ID No. 40 hF GFR4-Streptag SEQ ID No. 68 SEQ ID No. 69 hFGFR4(D2D3)-Histag SEQ ID No. 41 SEQ ID No. 42 mF GFR4-Histag SEQ ID No. 43 SEQ ID No. 44 hFGFRl-Fc SEQ ID No. 45 SEQ ID No. 46 hFGFR2-Fc SEQ ID No. 47 SEQ ID No. 48 rFGFR4 SEQ ID No. 49 SEQ ID No. 50 用於建立純系（實例4)之引子 序列 SEQ ID No. 51 ; 52 ; 53 ; 54 ； 55 ； 56 ； 58 SEQ ID No. 61 ； 62 FGFR4跨膜域 SEQ ID No. 59 ； 60 引子募聚核苷酸 表1 SEQ ID No. 63 ; 64 ; 65 ; 66 ； 67 D2域中之抗原決定基 SEQ ID No. 70 抗體純系8 完整輕鏈 SEQIDNo. 71 SEQ ID No. 72 輕鏈CDR SEQ ID No. 73 ； 74 ； 75 完整重鏈 SEQ ID No. 76 SEQ ID No. 77 重鏈CDR SEQ ID No. 78 ； 79 ； 80 抗體純系31 完整輕鏈 SEQIDNo. 81 SEQ ID No. 82 輕鏈CDR SEQ ID No. 83 ； 84 ； 85 完整重鏈 SEQ ID No. 86 SEQ ID No. 87 重鏈CDR SEQ ID No. 88 ； 89 ； 90 抗體純系33 完整輕鏈 SEQIDNo. 91 SEQ ID No. 92 輕鏈CDR SEQ ID No. 93 ； 94 ； 95 完整重鍵 SEQ ID No. 96 SEQ ID No. 97 重鏈CDR SEQ ID No. 98 ； 99 ； 100 抗體純系36 完整輕鏈 SEQIDNo. 101 SEQIDNo. 102 140834.doc •60- 201006492 輕鏈CDR SEQIDNo. 103 ； 104 ； 105 完整重鏈 重鏈CDR SEQIDNo. 106 SEQIDNo. 107 SEQIDNo. 108 ； 109 ； 110 舆IgGl之Fc域融合之hFGFR4之細胞外部分之子域 fGFGR4 Dl:：Fc SEQIDNo. Ill SEQIDNo. 112 fGFGR4 D2:：Fc SEQIDNo. 113 SEQIDNo. 114 fGFGR4 D3::Fc SEQIDNo. 115 SEQIDNo. 116 人類IgGl恆定區序列 SEQIDNo. 117 【圖式簡單說明】 圖1A及1B :活體外（圖1A) : HUVEC類型之人類内皮細 胞能夠形成偽管網路，稱為血管生成。藉由添加1 ng/ml FGF2刺激此網路。亦可藉由添加10 ng/ml作為FGF-R4專一 性配體之FGF19來獲得此誘導，而10 ng/ml FGF4(不活化 FGF-R4之配體）不能刺激血管生成。同樣地，活體内（圖 1B):在誘導血管生成之鼠類模型中，在小鼠背部之海綿 體植入物中，FGF2能夠誘導功能性新血管募集於海綿體 中，此藉由與對照組相比此等海綿體之血紅蛋白含量增加 表徵。FGF19亦能夠誘導海綿體中之此血管生成。 圖 2A:使 hFGFR4-Histag(SEQ ID No. 40)能夠得到表現 之質體pXL4614之圖譜。 圖 2B:使 hFGFR4-Streptag(SEQ ID No. 69)能夠得到表 現之質體PXL4613之圖譜。 圖 3:使hFGFR4(D2，D3)-Histag(SEQ ID No. 42)能夠得 到表現之質體PXL4615之圖譜。 圖4 :使mFGFR4-Histag(SEQ ID No. 44)能夠得到表現之 質體PXL4621之圖譜。 140834.doc -61 - 201006492 圖5 :使hFGFRl-Fc(序列SEQ ID No. 46)能夠得到表現 之質體pXL4328之圖譜。 圖6 :使hFGFR2-Fc(序列SEQ ID No. 48)能夠得到表現 之質體pXL4327之圖譜。 圈7 :用4種人類FGF受體塗布ELISA板。藉由ELISA檢 定量測抗？〇卩114抗體40-12及64-12識別此等各種？〇?-11之 能力。純系40-12(黑色直方圖）對FGF-R4具專一性。此 外，純系64-12(灰色直方圖）極微弱地識別FGF-R3。 圖8A及8B :活性拮抗劑抗體40-12及其非活性對照物64-12本身對基底血管生成並無作用。另一方面，在30 pg/ml(約200 nM)之劑量下，抗FGFR4單株抗體40-12能夠 抑制FGF2誘導之HUVEC細胞之血管生成，而對照抗體64-12不能實現此抑制（圖8A)。 經AlexaFluor® 488 nm標記之FGF2能夠結合至由300-19 細胞所表現之FGF-R4(白色直方圖）。此相互作用可藉由未 標記FGF2(黑色直方圖）或藉由抗FGFR4抗體40-12(暗灰色 直方圖）解離，而對照抗體64-12不能實現此解離（淡灰色直 方圖）（圖8B)。 圖8C及8D :來源於純系8、31，33及3 6之抗FGFR4抗體 在10 pg/ml下對3 ng/ml FGF-2所誘導之活體外血管生成之 作用。純系8(圖8C)及31、33及36(圖8D)抑制FGF-2誘導之 HUVEC細胞之血管生成。 圈9A及9B:用30 ng/ml之FGF19刺激Hep3b人類肝癌瘤 細胞。此刺激誘導FGF-R4專一性細胞信號傳導，導致藉 140834.doc -62- 201006492 由西方墨點法觀測到之cFos及JunB蛋白質之合成及Erkl/2 之磷酸化（圖9 A)。接著定量每個墨帶。此定量以直方圖形 式表示（圖98)。抗體40-12在10〇4经/1111下完全抑制？0?-114 專一性細胞信號傳導之誘導，而對照抗體並無作用。特定 言之’在刺激3 h之後，抗體40-12完全阻斷FGF19所誘導 之JunB及cFos之合成以及Erkl/2之墻酸化。 圖9C :藉助於抗磷酸化ERkl/2 £!^18八證實抗？0?114抗體 40-12對卩0卩-19(3〇11§/1111)所誘導之£11<:1/2在1^卩313細胞中 之磷酸化之抑制作用。抗體40-12亦能夠抑制Erkl/2在經 FGF-2(1 ng/ml)或經10%血清（FCS)刺激之Hep3b細胞中的 攝酸化。 圖9D :使用來源於純系8、3 1、33及36之抗體、藉由 ELIS A所得之對 FGF-19(30 ng/ml)所誘導之 Erkl/2在 Hep3b 細胞中之磷酸化的抑制百分比。 圖10A及10B :可藉由添加血清（圖10A)或FGF19(圖10B) 刺激Hep3b細胞之增殖。抗體40-12在100 pg/ml下部分地抑 制血清誘導，而對照抗體並無作用（圖10A)。10 pg/ml抗 FGFR4抗體40-12完全阻斷FGF19所誘導之增殖，而在相同 劑量下，對照抗體不能實現完全阻斷（圖10B)。 圖11A至11D :抗FGFR4抗體40-12在RipTag鼠類模型中 能夠藉由抑制腫瘤血管生成來降低胰腺腫瘤之發生： Ripl-Tag2模型為鼠類模型，其中轉殖基因小鼠在胰島之 胰島素產生β細胞中表現SV40 T抗原（Hanahan D. Nature， 1985, 9-45:115-22.)。此T抗原在生命長達4週至5週之胚胎 140834.doc -63- 201006492 胰腺發育期間得以表現，而無表觀效應。在接下來5週期 間，一些表現τ抗原之胰島接著向形成與維管結構活化有 關之血管生成性胰島發展且接著向腺瘤型小腫瘤之發生發 展。數週之後，一些腺瘤發生，以便形成侵入性癌瘤（圖 11A)。 在第10週與第13週之間，用抗體4〇_12或對照抗體以25 mg/kg之劑量每週一次皮下處理此等Ripl_Tag2小鼠。^週 之後，處死該等小鼠。測定腫瘤體積以及每個胰腺之腫瘤 數目及血管密度。用抗FGFR4抗體4〇_12處理能使腫瘤體 積顯著降低55%，而對照抗體展示無作用（圖11B)。與對照 抗體相比，抗體40-12亦使每個胰腺之腫瘤數目降低 34%(圖11C)。腫瘤體積減小的同時，血管密度（不論小血 管、中血管或大血管之數目）降低。 圖12 :藉由ELISA量測抗體4〇_12及64-12識別人類或鼠 類FGF-R4之完全細胞外域以及缺失m域之FGF_R4之細胞 外域之能力。純系40-12能夠與3種FGF_R4構築體均等結 合，而純系64_12識別鼠類形式之fgf-R4欠佳。 圖13A至13C .使用經AiexaFiuor® 488 nm標記之 FGF2、藉助於競爭結合實驗量測抗fgfR4抗體純系40-12 對FGF2/FGF-R4結合之拮抗作用。純系4〇·12能夠在經編碼 人類、紙類或大鼠形式之FGF-R4受體之cDNA轉染的鼠類 300-19細胞上同樣有效地阻斷人類（圖13八）、鼠類（圖13” 及大鼠（圖13C)FGF2之結合（對於人類、鼠類或大鼠複合物 分別為 3500 ng/ml、4110 ng/ml 及 3940 ng/ml，亦即 23 140834.doc 201006492 nM、27 nM及 26 nM) 0 圖14A :使hFGFR4_Dl: Fc能夠得到表現之質體pXL4794 之圖譜。 圖14B :經質體pXL4794轉染之HEK293細胞株中所分泌 之hFGFR4_Dl:Fc蛋白質之胺基酸序列。 圖15A :使hFGFR4_D2: Fc能夠得到表現之質體pXL4796 •之圖譜。 圖15B :經質體pXL4796轉染之HEK293細胞株中所分泌 • 之hFGFR4—D2·· Fc蛋白質之胺基酸序列。 圖10A .使hFGFR4_D3: pc能夠得到表現之質體pXL4799 之圖譜。 圖16B .經質體pXL4799轉染之HEK293細胞株中所分泌 之hFGFR4—D3:FC蛋白質之胺基酸序列。 140834.doc • 65 -
201006492 序列表 <110>法商赛諾菲-安萬特公司 <120> FGF-R4受體專一性拮抗劑
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Met Asn Arg Leu Thr Ser Ser Leu Leu Leu Leu He Val Pro Ala Tyr 1 5 10 15 gtc ctg tcc cag git act ctg aaa gag tet ggc cct ggg ala ttg cag
Val Leu Ser Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly lie Leu Gin 20 25 30 ccc tcc cag acc etc agt cig act tgt tet ttc tet ggg ttt tea ctg
Pro Ser Oln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phc Ser Leu 35 40 45 age act tet ggt atg ggt gtg age tgg att cgt cag cct tea gga aag
Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp He Arg Gin Pro Ser Gly Lys 50 55 60 ggt ct£ gag tgg ctg gca cac att tac tgg gat gat gac aag ege tat
Gly Leu Glu Trp Leu Ala His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr 65 70 75 80 aac cca tcc ctg aag age egg etc aca ate tcc aag gat acc tcc age
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr He Ser Lys Asp Thr Ser Scr 85 90 95 aac cag sta ttc etc aag ate acc agt gtg gac act gca gat act gcc
Asn Gin Val Phe Leu Lys lie Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala 100 105 110 aca lac tac tgt get ega gat tac tac get agt age ttt gac tac tgg
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Gly Gin GTy Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro 130 135 140 tet gtc tat cca ctg gcc cct gga tet £ct gcc caa act aac tcc atg
Ser Val Tyr Pro Leu Ala Fro Gly Ser Ala Ala Gin γΠιγ Asn Ser Met 145 150 155 160 gtg acc ctg gga tgc ctg gtc aag sgc tat Uc cct gag cca gtg aca
Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phc Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 gtg acc tgg aac tet gga tcc ctg tcc age ggt gtg cac acc ttc cca
Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 get gtc ctg cag tet gac etc tac act ctg age age tea gtg act gtc
Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val 195 200 205 140834-序列表.doc 48 96 144 192 240 288 336 384 432 480 528 576 624 201006492 ccc tcc age acc tgg ccc age gag acc gtc acc tgc aac j?tt see cac Pro 扣如 ITir Trp Pro Sg Glu Thr Val Thr Cys Asn fal Ala His 210 215 220 ccg gee age age acc aag gtg gac aag aaa att gtg Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Val 225 230 235 ccc agg gat tgt Pro Arg Asp Cys 240 ggt tgt aag cct tgc ata tgt aca gtc cca gaa gta tea tet gtc ttc Giy Cys Lys Pro Cys lie Cys T^r Val Pro Glu Val Ser Ser 泛al Phe 245 250 255 ?lc itc £cc ^ca aag ccc aa2 Sat gtg etc acc att act ctg act cct lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr Leu Thr Pro 260 265 270 aag gtc aeg tgt gtt gtg gta gac ate age aag gat gat ccc sag gtc Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp He Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val 275 280 285 cag ttc age tgg ttt gta gat gat gtg gag gtg cac aca get cag aeg Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr 290 295 300 caa ccc egg gag gag cag ttc aac age set ttc ege tea gtc agt gaa Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu 305 310 315 320 ett ccc ate atg cac cag gac tgg etc aat ggc aag gag ttc aaa tgc Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys 325 330 335 agg gtc aac agt gca get ttc cct gee ccc ate gag aaa acc ate tec Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He Ser 340 345 350 aaa acc aaa ggc aga ccg aag get cca cag gtg tac acc att cca cct Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Va] Tyr Thr lie Pro Pro 355 360 365 ccc aag gag cag atg gee aag gat aaa gic agt ctg acc tgc atg ata Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met lie 370 375 380 aca gac ttc ttc cct gaa gac att act gtg gag tgg cag tgg aat ggg Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn Gly 385 390 395 400 cag cca geg gag aac tac aag aac act cag ccc ate atg gac aca gat Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp Thr Asp 405 410 415 ggc tet tac ttc gtc tac age aag etc aat gtg cag aag age aac tgg Sly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Va了 Gin Lys Ser Asn Trp 420 425 430 gag gca gga aat act ttc acc tgc tet gtg tta cat gag ggc ctg cac Glu Ala Gly Asn ITir Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His 435 440 445 aac cac cat act gag aag age etc tec cac tet cct ggt aag tga Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Set Pro Gly Lys 450 455 460 672 720 768 816 864 912 960 1008 1056 1104 1152 1200 1248 1296 1344 1389 <210> 2 <211> 462 <212> PRT 小鼠種 <400> 2 Met Asn Arg Leu Thr Ser Ser Leu Leu Leu Leu lie Val Pro Ala Tyr 1 5 10 15 140834-序列表.doc 2 201006492
Val Leu Ser Gin Val Thr Leu Lys GIu Ser Gly Pro Gly lie Leu Gin 20 25 30
Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45
Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Ser Gly Lys 50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Ala His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr 65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Ser 85 90 95
Asn Gin Val Phe Leu Lys He Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala 100 105 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp ❹ 115 120 125
Gly Gin Gly Thr rrhr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro 130 135 140
Ser Vai Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met 145 150 155 160
Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175
Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro 380 185 190
Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val 195 200 205
Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thi Val Thr Cys Asn Val Ala His 210 215 220
Pro Ala Ser Ser Thr Lys Vai Asp Lys Lys lie Val Pro Arg Asp Cys 225 230 235 240
Gly Cys Lys Pro Cys He Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe 245 250 255 lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr Leu Thr Pro 260 265 270
Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val 275 280 285
Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Clu Val His Thr Ala Gin Thr 290 295 300
Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu 305 310 315 320 140834-序列表.doc 201006492
Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys 325 330 335
Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser 340 345 350
Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr lie Pro Pro 355 360 365
Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Scr Leu Thr Cys Met lie 370 375 380
Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn Gly 385 390 395 400
Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro He Met Asp Thr Asp 405 410 415
Gly Ser Tyr Phe Va丨 Tyr Ser Lys Leu Asn Va丨 Gin Lys Ser Asn Trp 420 425 430
Glu Ala G1y Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His 435 440 445
Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Sex His Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 3 <211> 705 <212> DNA <213>小鼠種 <220> <221> CDS <222> (1)..(705) <400> 3 atg gtt ttc aca cct cag att ett gga ett at£ ett ttc tgg att tea
Met Val Phe Thr Pro Gin lie Leu Gly Leu Met Leu Phe Trp lie Ser 15 10 15 gcc tcc aga ggt gat att gtg eta act cag tet cca gcc acc ctg tet
Ala Ser Arg Gly Asp lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 gtg act cca gga gat aga gtc agt ett tcc tgc a£g £cc agi caa agt
Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Scr Cys Arg Ala Ser Gin Scr 35 40 45 att age aac tac eta cac tgg tat caa caa aaa tea cat gag tet cca lie Ser Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Scr Pro 50 55 60 agg ett etc ate aag tat get tcc cag tcc ate tet ggg ate ccc tcc
Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala Ser Gin Scr lie Scr Gly lie Pro Ser 65 70 75 80 agg tic agt ggc agt gga tea ggg aca gat ttc att etc agt ttc aac
Arg Phe Ser Gly Scr Gly Ser Gly Thr Asp Phe lie Leu Ser Phe Asn 85 90 95 agt gtg gag act gaa gat ttt gga atg tat ttc tgt caa cag agt aac
Scr Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn 4- 48 96 144 192 240 288 140834·序列表.doc 336 384 201006492 384 100 105 110 dC1 11° ggc tcS ggS aca aaa ttg gaa ata aaa egg
Ser Trp Phe Thi* Phe Gly Ser Gly Hu Lys Leu Glu lie Lys Arg 115 120 125 警〒t fai a?1 f?a Sca gta tcc ate ttc cca cca tcc agt £ag cag
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Scr He Phe Pro Pro Scr Ser Glu Gin 130 135 140 ι1!» cCt pfa rfl ??c tca gtc tgc ttc ttg aac aac ttc tac
Leu Jhv Scr Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phc Leu Asn Asn Phc Tyr 145 150 155 160 ccc aaa gac ate aat gtc aag tgg aag att gat ggc agt gaa ega caa
Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gin 165 170 175 aat ggc gtc ctg aac agt tgg act gat cag gac age aaa gac age acc
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Scr Lys Asp Ser Thr 180 185 190 tac age atg age age acc etc aeg ttg acc aag gac gag tat gaa ega 205
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 195 200 抓
432 480 528 576 624 672 705 cat aac age tat acc tgt gag gee act cac aag aca tca act tca ccc
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 21〇 215 220 att gtc aag age ttc aac agg aal gag tgt taa
He Val Lys Ser Phc Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 <210> 4 <211> 234 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 4
Met Val Phe Thr Pro Gin lie Leu Gly Leu Met Leu Phe Trp lie Scr 1 5 10 15
Ala Ser Arg Gly Asp lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30
Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Scr Cys Arg Ala Ser Gin Ser 35 40 45 lie Scr Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Ser Pro 50 55 60
Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala Ser Gin Ser lie Ser Gly lie Pro Ser 65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Scr Gly Scr Gly Thr Asp Phc lie lxu Scr Phc Asn 85 90 95
Ser Val Glu Hir Glu Asp Phc Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Scr Asn 100 305 110
Ser Tip Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 115 125
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin 140834·序列表.doc 201006492 130 135 140
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160
Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Gla Arg Gin 165 170 175
Asn Gly Val Lxu Asn Ser Trp Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr
TyrSerMetSerSe^rLeuThrLeu^LysAspGluTKGluA.
HiSAsnSerTyr^CysG1uMaThrHisLys2rSer^ Se, P,o lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 <210> 5 <211> 442 <212> DMA <213>小鼠種 <220> <221> CDS <222> (29)..(442) <400> 5 tgaaggagta gaaaactagt gtgcagat atg aac agg ctt act tcc tea ttg
Met Asn Arg Leu Thr Ser Ser Leu ctg ctg ctg att gtc cct gca tat gtc ctg tcc cag gtt act ctg aaa
Leu Leu Leu lie Val Pro Ala Tyr Val Leu Ser Gin Val Thr Leu Lys 10 15 20 gag tet ggc cct ggg ata ttg cag ccc tcc cag acc etc afit ctg act
Glu Ser Gly Pro Gly lie Leu Gin Pro Ser Gin Thr Leu Ser L&u Thr 25 30 35 40 tgt tet ttc tet ggg ttt tea ctg age act tet ggt atg ggt gtg age
Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Set 45 50 55 igg att cgt cag cct tea gga aag ggt ctg gag tgg ctg gca cac att
Trp lie Arg Gin Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His lie 60 65 70 tac igg gat gat gac aag ege tat aac cca tcc ctg aag age egg etc
Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Scr Leu Lys Ser Arg Leu 75 80 85 aca ate tcc aag gat acc tcc age aac cag gta ttc etc aag ate acc
Thr Uc Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gin Val Phe Leu Lys lie Thr 90 95 loo agt gtg gac act gca gat act gcc aca tac tac tgt get ega gat tac
Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr 105 110 115 120 tac get agt age ttt gac Uc tgg ggc caa ggc acc act etc aca gtc
Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Vai 125 130 135 tcc tea 140834-序列表.doc 52 100 148 196 244 292 340 388 436 442 201006492
Ser Set <210> 6 <211> 138 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 6
Met Asn Arg Leu Thr Ser Ser Leu Leu Leu Leu lie Val Pro Ala Tyr 15 10 15
Val Leu Ser Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly He Leu Gin 20 25 30
Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45
Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Scr Trp lie Arg Gin Pro Ser Gly Lys 50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Ala His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr 65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Ser S5 90 95
Asn Gin Val Phe Leu Lys lie Thr Scr Val Asp Thr Ala Asp Thr ^la 100 105 110 ITur Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp 115 120 125
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 130 ' 135 <210> 7 <211> 401 <212> DNA <213>小鼠種 <22Q> <221> CDS <222> {18)..(401) <4〇〇> 7 tcagggaaag ctcgaag atg gtt ttc aca cct cag att ett gga ett atg Met Val Phe Thr Pro Gin lie Leu Gly Leu Met 1 5 10 ett ttc tgg att tea gcc tcc aga ggt gal att gtg eta act cag tet
Leu Phe Trp lie Scr Ala Ser Arg Gly Asp lie Val Leu Thr Gin Ser 15 20 25 cca gcc acc ctg tet gtg act cca gga gat aga gtc agt ett tcc tgc
Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys 30 35 40 agg gcc agt caa agt att age aac tac eta cac tgg tat caa caa aaa
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys 45 50 55 ica cat gag tet cca agg cu etc ate aag tat get tcc cag tcc ate 7- 140834-序列表.d〇c 290 201006492
Scr His Glu Ser Pro Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala Ser Gin Ser lie 60 65 70 75 tct ggg ate ccc tcc agg ttc agt ggc agt gga tea ggg aca gat ttc
Ser Gly lie Pro Ser Arg Phc Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 80 85 90 338 386 401 att etc agt ttc aac agt gtg gag act gaa gat ttt gga atg tat ttc lie Leu Ser Phe Asn Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe 95 100 105 tgt caa cag agt aac age tgg cct ttc aeg ttc g£C teg ggg aca aaa
Cys Gin Gin Ser Asti Ser Trp Pro Phc Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys 110 115 120 ttg gaa ata aaa egg
Leu Glu lie Lys Arg 125 <210> 8 <211> 128 <232> FRT <213>小鼠種 <400> 8
Met Val Phe Thr Pro Gin lie Leu Gly Leu Met Leu Phe Trp He Ser 15 10 15
Ala Ser Arg Gly Asp lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30
Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser 35 40 45 lie Ser Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Ser Pro 50 55 60
Arg Leu I,eu lie Lys Tyr Ala Ser Gin Ser lie Ser Gly lie Pro Ser 65 70 75 80
Arg Phe Scr Gly Ser Gly Sei Gly Thr Asp Phe lie Leu Ser Phe Asn 85 90 95
Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn 100 〗05 110
Ser 丁rp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 1]5 120 125 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <2]3>小鼠種 <400> 9 l"hr Ser Gly Met Gly Val Ser <210> 10 <211> 16 <2]2> PR丁 <2]3>小鼠種 140834-序列表.doc 201006492 <400> 10
His lie 丁yr Tri) Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 11
Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr <210> 12 <211> 11. <212> PRT <213>小鼠種 <400> 12
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Tyr Leu His
<210> 13 <211> 7 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 13
Tyr Ala Ser Gin Ser lie Ser <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 14 G3n Gin Ser Asn Ser Trp Pro Phe Thr
<210> 15 <211> 1395 <212> DNA <213>小鼠種 <220> <221> CDS <222> (1)..(1395) <400> 15 aig gac tcc agg etc aat tta gt£ ttc ett gtc ett att tta aaa ggt
Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu lie Leu Lys Gly 1 5 10 15 gtc cag tgt gat gtg cag ctg gtg gag tet ggg gga ggc tta gtg cag
Val Gin Cys Asp Val Gin Leu Val Glu Scr Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 cct gga ggg tcc egg aaa etc tcc tgt gca gcc tet gga ttc act ttc
Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 agt aac ttt gga atg cac tgg gtt cgt cag get cca gag aag gga ctg
Ser Asn Phe Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Glu Lys Gly Leu 9- 140834-序列表.doc 201006492 50 55 60 gag tgg gtc gca tac att agt agt ggc agt agt acc ate tac tat gca 240
Glu Trp Val Ala Tyr lie Ser Scr Gly Ser Ser Thr He Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 gac aca gtg aag ggc ega ttc acc ate tee aga gac aat ccc aag aac 288
Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn 85 90 95 acc ctg ttc ctg caa atg acc agt eta agg tet gag gac aeg gee atg 336
Thr Leu Phe Leu Gin Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met 100 105 110 tat tac tgt gca aga tat gat tac gac gat gat tac tat get atg gaa 384
Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu 115 120 125 tac tgg ggt caa gga acc tea gtc acc gtc tee tea gee aaa aeg aca 432
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 130 135 140 ccc cca tet gtc tal cca ctg gee cct £ga tet get gee caa act aac 480
Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn 145 350 155 160 tee atg gtg acc ctg gga tgc ctg gtc aag ggc tat ttc cct gag cca 528
Ser Met VaT Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro 365 170 175 gtg aca gtg acc tgg aac tet £ga tee ctg tee age ggt gtg cac acc 576
Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr 180 185 190 ttc cca get gtc ctg cag tet gac etc tac act ctg age age tea gtg 624
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val 195 200 205 act gtc ccc tee age acc tgg ccc age gag acc gtc acc tgc aac gtt 672
Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val 210 215 220 gee cac ccg gee age age acc aag gtg gac aag aaa att gtg ccc agg 720
Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Val Pro Arg 225 230 235 240 gat tgt ggt tgt aag cct tgc ata tgt aca gtc cca gaa gta tea tet 768
Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser 245 250 255 gtc ttc arc ttc ccc cca aag ccc aag gat gtg etc acc att act ctg 816
Val Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr He Thr Leu 260 265 270 act cct aag gtc aeg tgt gtt gtg gta gac ate age aag gat gat ccc 864
Thr Pro Lys Val Thr Cys Val VaJ Val Asp lie Ser Lys Asp Asp Pro 275 280 285 gag gtc cag ttc age tgg ttt sta gat gat gt£ sag gtg cac aca get 912
Glu Val Gin Phe Scr Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala 290 295 300 cag aeg caa ccc egg gag gag cag ttc aac age act ttc ege tea gtc 960
Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Scr Thr Phe Arg Scr Val 305 310 315 320
agt gaa ett ccc ate atg cac cag gac tgg etc aat ggc aag gag tic 100S
Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe 325 330 335 aaa tgc agg gtc aac agt gca get ttc cct gee ccc ate gag aaa acc 1056
Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 340 345 350 ate tee aaa acc aaa ggc aga ccg aag get cca cag gtg tac acc att 1104 •10· 140834·序列表.doc 1152 201006492 lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr lie 355 360 365 cca cct ccc aag gag cag atg gcc aag gat aaa gtc agt ctg tgc
Pro Pro Pro Lys 5lu Gin Met Aia Lys Asp Lys Ϋ&丨 Ser Leu Thr Cys 370 375 380 atg ata aca gac ttc ttc cct gaa gac att act gtg gag tgg cag tgg
Met lie Thr Asp Phe Phe Fro Glu Asp lie ΊΤιγ Val Glu Trp Gin Trp 385 390 395 400 aat sss cag cca geg gag aac tac aag aac act cag ccc ate atg gac
Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro He Met Asp 405 410 415 aca gat ggc tet tac ttc gtc tac age aag etc aat gtg cag aag age
Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr. Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser 420 425 430
aac tgg gag gca gga aat act ttc acc tgc tet gtg tta cat gag g£C
Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly 435 440 445 ctg cac aac cac cat act gag aag age etc tee cac tet cct ggt aag
Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
1200 1248 1296 1344 1392 1395 450 455 460 tga <210> 16 <2Π> 464 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 16
Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu lie Leu Lys Gly 15 10 15
Val G.n Cys Asp Val Gin Leu Val Glu Ser G,y Gly Gly Leu Val Gin
Pro Gly Gly Ser Ar£ Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ί.Γ Phe
Ser Asn Phe Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60
Gl.TrpVal A,a Tyr He Ser Ser Gly Ser Ser ^ He Tyr Tyr Ala
Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Z5 % 95
Thr Leu Phe Leu Gin Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp.Thr Ala Met 100 105 ]}〇
Tyr 丁yr Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu 115 120 )25
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 130 135 140
Pro Pro Ser Val Tyr Pro i^u Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn 145 150 155 160 • 11 · 140834·序列表.doc 201006492
Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175
Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Scr Ser Gly Val His Thr 180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Scr Ser Ser Val 195 200 205
Thr Val Pro Scr Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val 210 215 220
Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Val Pro Arg 225 230 235 240
Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys He Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser 245 250 255
Val Phe lie Phe Fro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr Leu 260 265 270
Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser Lys Asp Asp Pro 275 280 285
Glu Val Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala 290 295 300
Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Scr Val 305 310 315 320
Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly lys Glu Phe 325 330 335
Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 340 345 350 lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr lie 355 360 365
Pro Fro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Scr Leu Thr Cys 370 375 380
Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gin Trp 385 390 395 400
Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp 405 410 415
Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser 420 425 430
Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly 435 440 445
Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys -12- 140834-序列表.doc
201006492 450 455 460 <210> 17 <211> 705 <212> DNA <213>小鼠種 <220> <221> CDS <222> (1)..(705) <m> 17 tca ata etc tct etc ctg get etc age tea ggg
Met Ala Trp lie Ser Leu He Leu Ser Leu Leu Ala Leu Ser Ser Gly 1 5 30 15 亭？c ?ίι icc gct gU act caS 2aa tct 8ca ctc acc aca tea
Ala He Ser Gin Ala Val Val Thr Gin Glu Ser Ala Uu Thr Thr Ser 20 25 30 $ct ggt gaa aca gtc aca etc act tgt ege tea agt act ggg get gtt
Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val 35 40 45 ica 5Lct ^gt aac tat Scc aac 2tc caa gaa aaa cca gat cat tta
Thr Tlir Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gin Glu Lys Pro Asp His Leu 5〇 55 60 i}c ict S?1 cta ala ^gt ggt acc aac aac ega get cca gst gtt cct
Phe Thr Gly Leu lie Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Va) Pro 65 70 75 g〇 gee aga ttc tea ggc tee ctg att gga gac aag get gee etc acc ate
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu lie Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr He S5 90 95 aca ggg gca cag act gag gat gag gca ata tat ttc tgt get cta tgg
Thr Gly Ala Gin Thr Glu Asp Glu Ala lie Tyr Phe Cys Ala Leu Trp 100 105 110 lac age aac cat tgg gtg ttc ggt gga gga acc aaa ctg act gtc cta Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 115 120 125 ggc cag ccc aag tet teg cca tea gtc acc ctg tu cca cct tee tet Gly Gin Pro Lys Ser Ser Fro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 gaa gag etc gag act aac aag gee aca ctg gtg tgt aeg ate act gat
Glu Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Tlir Leu Val Cys Thr lie Thr Asp 145 150 155 160 ttc tac cca ggt gtg gtg aca gtg gac tgg aag gta gat ggt acc cct Phe Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro 165 170 175 gtc act cag ggt atg gag aca acc cag cct tee aaa cag age aac aac Ϋηΐ Thr Glrv6Ty Met 6lu Thr Tiir Gin Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190 aag tac atg get age age tac ctg acc clg aca gca aga gca tgg gaa
Lys Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu 195 200 205 agg cat age agt tac age tgc cag gtc act cat gaa ggt cac act gtg
Arg His Ser Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly His Thr Val 210 215 220 gag aag agt ttg tee cgt get gac tgt tee tag
Glu Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser 225 230 140834·序列表.doc 48 96 144 192 240 288 336 384 432 480 528 576 624 672 •13· 705 201006492 <210> 18 <211> 234 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 18
Met Ala Trp lie Ser Leu lie Leu Ser Leu Leu Ala Leu Scr Scr Gly 15 10 15
Ala He Ser Gin Ala Val Val Thr Gin Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser 20 25 30
Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val 35 40 45
Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 丁rp Val Gin Glu Lys Pro Asp His Leu 50 55 60
Phe Thr Gly Leu He Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro 65 70 ' 75 80
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu lie Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr lie 85 90 95
Thr Gly Ala Gin Thr Glu Asp Glu Ala lie Tyr Phe Cys Ala Leu Trp 100 105 110
Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly Giy Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 115 120 125
Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140
Glu Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr lie Thr Asp 145 150 255 160
Phe Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro 165 170 175
Val Thr Gin Gly Met Glu Thr Tlir Gin Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190
Lys Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu 195 200 205
Arg His Ser Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu GJy His Thr Val 210 215 220
Glu Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser 225 230 <210> 19 <211> 420 <212> WA <213>小鼠種 <220>
<221> CDS -14· 140834·序列表.doc 48 48
201006492 <222> (1)..(420) <40〇> 19 atg gac tcc agg etc aat tta gtt ttc ctl gtc ett att tta aaa ggt
Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Va] Leu lie Leu Lys Gly 1 5 10 15 gtc cag tgt gat gtg cag ctg gtg gag tet gga ggc tta gtg cag
Val Gin Cys Asp Val Gin Leu Val Glu Scr Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 cct gga ggg tcc egg aaa etc tec tgt gca gee tet gga ttc act ttc Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 agt aac ttt gga atg cac tgg gtt cgt cag get cca gag aag gga ctg Ser Asn Phe Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtc gca tac att agt agt ggc agt agt acc ate tac tat gca Giu Trp Val Ala Tyr lie Ser Ser Gly Scr Ser Thr He Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 gac aca gtg aag ggc ega ttc acc ate tcc aga gac aat ccc aag aac
Asp Hu Vai Lys GTy Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn 85 90 95 acc ctg ttc ctg caa atg acc agt eta agg tet gag gac aeg gee atg
Thr Leu Phe Leu Gin Met Thr Scr Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met 100 105 110 tat tac tgt gca aga tat gat tac gac gat gat tac tat get atg gaa
Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu 115 120 125 tac tgg ggt caa gga acc tea gtc acc gtc tcc tea
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 <210> 20 <211> 140 <212> FRT <213>小鼠種 <400> 20
Met Asp Set Atg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu lie Leu Lys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Asp Val Gin Leu Val Glu Scr Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Sc: Cys Ala Ala Scr Glv Phe Lr Phe
Ser Asn Phe Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60
Giu Trp Val Ala Tyr lie Ser Scr Gly Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Thr Va, Lys Gly Arg Phe Thr I.e Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn
Thr Leu Phe Leu Gin Met rrhr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met 100 105 110 140834-序列表.doc -15- 96 144 192 240 288 336 384 420 201006492
Tyr Tvr CVS Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr A.a Met Glu
Tyr Trp Gly Gin Gly Tbr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 HO <210> 21 <211> 412 <212> DNA <213>小鼠種 <220> <221> CDS <222> (29)..(412) <400> 21 tgaaaagaat agacctggtt tgtgaatt atg gcc tgg att tea ett ata etc
Met Ala Tip He Ser Leu lie Leu tet etc ctg get etc age tea ggg gee att tee cag get gtt gtg act ber Leu Leu Ala Leu Ser Ser Gly Ala He Ser Gin Ala Val Val Thr l〇 15 20 cag gaa tet gca etc acc aca tea cct ggt gaa aca gtc aca etc act
Gin Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr 25 30 35 40 tgt ege tea agt act gES get gtt aca act a£t aac tat gcc aac tg£
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 45 50 55 sic caa gaa aaa cca gat cat tta tic act ggt eta ata 2£t 22t acc
Val Gin Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly Leu lie Gly Gly 60 65 7〇 aac aac ega get cca ggt gtt cct gee aga tie lea gsc tee eta att
Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu He 75 80 85 gga gac aas get gee etc acc ate aca ggg gca cag act gag gat gag 95
Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Thr Glu Asp Glu 100 gca ata tat ttc tgt get eta tgg tac age aac cat tgg gtg ttc ggt
Ala lie Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly 105 110 〗15 120 gga gga acc aaa cts act gtc eta Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 125 <210> 22 <211> 128 <212> PRT ^2】3>小鼠種 <400> 22
Met Ala Trp lie Ser Uu He Uu Ser Leu Leu Ala Leu Ser Ser Gly 1 5 10 15 A.a He Ser Gin Ala Val Val ^ Gln Glu Ser Ma Leu Tgr Br Ser
Pro Gly giu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser TTir Gly Ala Val 35 40 45 16- 140834-序列表.doc 201006492
Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gin Glu Lys Pro Asp His Leu 50 55 60
Phe Thr Gly Leu lie Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro 65 70 75 80
Ala Arg Phe Scr Gly Ser Leu lie Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr lie 85 90 95
Thr Gly Ala Gin Thr Glu Asp Giu Ala lie Tyr Phe Cys Ala Leu Trp 100 105 110
Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 115 120 125
<210> 23 <211> 5 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 23
Asn Phe Gly Met His <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 24
Tyr lie Ser Ser Gly Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys 10 15
Gly
<210> 25 <211> 12 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 25 Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu Tyr 15 30 <210> 26 <211> 14 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 26
Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT 小鼠種 <400> 27 140834·序列表.doc 17- 201006492
Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 28
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val <210> 29 <211> 321 <2】2>腿 <213>人工 <220> <223>人類化序列 <220> <221 > CDS <222> (1)..(321) <400> 29 cag tct gcc ctg act cag tcc cca gca act etc tet gtg tet ccc ggc
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 caa tct gtg age ctg tcc tgt egg gca age cag tct att tcc aat tat
Gin Ser Val SeT Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Tyr 20 25 30 ctg cac igg tat cag caa cac cca ggc gag age cca egg etc ctg ate
Leu His 丁rp tyr Gin Gin His Pro GTy Glu Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45 aaa tac gcc tel caa tcc att tct ggc tcc aac aga ege ttc tct ggc
Lys Tyr Ala Ser Gin Scr lie Ser Gly Ser Asn Arg Arg Phe Ser Gly 50 55 60 age ggc tcc ggc acc gat ttc att etc age ttt aat age gtt cag gca
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phc lie Leu Ser Phe Asn Ser Val Gin Ala 65 70 75 80 gag gat ttt ggg atg tac ttc tgt caa cag age aac tct tgg cct ttt
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Ser Trp Pro Phe 85 90 95 acc ttc gga age ggg act aaa ctg acc gtt ctg
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 7T工 00¾」 31 p (>> > > o 123 <21<21<21<21 <220> <223>合成構築體 <400> 30
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly I 5 , 10 15
Gin Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Tyr 20 25 30 • 18 - 140834·序列表.doc 201006492
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Lys Tyr Ala Ser Gin Ser lie Ser Gly Ser Asn Arg Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe I】e Leu Ser Phe Asn Ser Val G]n Ala 65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Ser Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <21Q> 31 <211> 321 <212> DNA <213>人工 <220> <223>人類化序列 <220> <221> CDS <222> (1)..(321) <400> 31 caa tct gca ctg act caa tct cca gca aca ctg tcc gtt tct cct gga 48
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 caa tcc gtg age etc age tgt agg gca tcc cag tcc att age aac tat 96
Gin Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Tyr 20 25 30 etc cac tgg tac cag cag cac cca gga gaa age cct esc ctg ctg ata 144
Leu His Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Glu Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45 aaa tac gca age cag tct att age ggc age aac egg ege ttc age ggg 192
Lys Tyr Ala Ser Gin Ser He Ser Gly Ser Asn Arg Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ❿ tcc ggc tcc gas aca gac ttt ate ctg tct ttt age age gtg caa gcc 240
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe lie Leu Ser Phe Ser Ser Val Gin Ala 65 70 75 80 gaa gac ttt ggc atg tac ttc tgc cag cag tct aac aat tgg cca ttc 288
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Asn Trp Pro Phe 85 90 95 acc ttc gga tcc ggc aca aag ctg acc gtg ctg 321
Thr Phe 6Ty Ser STy TTu Lys Leu Thr 9aT Leu 100 105 7rr工 32SPR7人 0>1>2>3> 1 11 1* 1i <2<2<2<2 <220> <223>合成構築體 <400> 32
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 19- 140834-序列表.doc 201006492 10 , 15
Gin Ser Val Ser Leu Set Cys Arg Ala Ser Gin Scr lie Scr Asn Tyr 2〇 25 30 Leu His Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Glu Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gin Ser He Ser Gly Ser Asn Arg Arg Phe Ser Gly 50 55 50
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe He Leu Ser Phe Ser Ser Val Gin Ala 65 70 75 80
GlUAspPheGly«etl,rpheCysG.nGlnSerAsnAs„TrpProPhe l,rPheG,ySerGlyl,rLysLeu^Val Leu <210> 33 <211> 342 <212> DNA <213>人工 <220> <223>人類化序列 <220> <221> CDS <222> (1).,(342) <400> 33 ^?s uM ^ ?tg ?aa Saa tct 2gc cca act ctg gtt aag cct aca cag Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gin 1 5 10 15 acc ctg tcc etc acc tgt tet ttc tcc ggc ttt age ctg age aca age Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 gga atg ggc gtc age tgg ate aga caa cca ccc ggc aag ggc ctg gag Gly Met Gly Val Scr Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 tgg ctg gcc cac ate tat tgg gat gat gat aag agg tat aac cct tcc Trp Leu Ala His He Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 ctg aaa tcc aga etc aca att tcc aag gac acc tcc age aac cag gtc Leu Lys Ser Arg Leu Thr He Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gin Val 65 70 75 80 ttc ctg aag ata acc tet gtt gat cca gtg gac acc gca act tac tac Phe Leu Lys lie Thr Val Asp Pro VaT Asp Thr i]a Thr iyr tyr 85 90 95 tgc gcc ege gac tac tat gcc age tet ttt gac tac tgg ggg cag ggc Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 Π0 48 96 144 192 240 288 336 aca etc Tht Leu <210> 34 140834-序列表.doc 20- 342 201006492 <211> 114 <212> PRT c213>人工 <223>合成構築體 <400> 34
Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 35
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Τγτ Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gin Val 65 70 75 80
Phe Uu Lys lie Thr Ser Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 130
Thr Leu 12^工 54^> 330人 > > > > 0123 <21<21<21<21 <220> <223>人類化序列 <220> <221> CDS <222> (1)..(342) <400> 35 cag gtg act etc aaa gaa tet ggc cct aca ctg gtg aaa ccc act cag 48
Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15 aca etc age ctg acc igc tee tie age ggc ttc tet ctg age act tee 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 gga etc gga gtg age tgg att ege caa cct cct ggg aaa ggc ctg gag 144
Gly Leu Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 tgg ctg gca cac ata tac tgg gat gac gac aaa ege tat aac cct age 192
Trp Leu Ala His He Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 ctg aag tee aga etc aca ate lee aaa gal aca tee age aat cag gtg 240
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gin Val 65 70 75 80 •21 140834-序列表 _doc 201006492 ttt ctg aag ate acc tee gtc gat cca gtc gac acc gee act tac tat
Phe Leu Lys lie Thr Ser Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 tgt get ege gat tac tat gee age tee ttc gac tac tgg gga cag gga
Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly G3n Gly 100 105 110 aca ctg Thr Leu <210> 36 <211> 114 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成構築體 <400> 36
Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gin 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser ITir Ser 20 25 30
Gly Leu Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gin Val 65 70 75 80
Phe Leu Lys lie Thr Ser Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu ¾^ 0>1>2>3> )u 1 n <2<2<2<2 人類化序列 <220> <221> CDS <222> (1)..(342) <400> 37 cag gic aca etc aaa gaa tet gga cca aca etc gtt aaa cca act caa
Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15 aca etc age ctg act tgc age ttt tet ggc lie age etc tee act age
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 22- 140834·序列表.doc 144 201006492 25 30 ggc etc ggc gtg tee tgg ate egg cag ccc cct gga aaa ggc ctg gag Gly Leu Gly VaT Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 tgg ctg gee cac ate tat tgg gac gat gac aag egg tac aat cca age Trp yu Ala His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pm Ser 5〇 55 60 ctg aaa tet egg ctg acc ata tet aag gat act tet tee aat cag gtg Leu Lys Ser Arg Uu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gin Val 65 7〇 75 80 ttc ctg aag ate aca tet gtg get cct gtc gac act gee act tat tat Phe Leu Lys He Thr Ser Val Ala Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 f88 fat t3C -rac lcc tcc ttc sat tac tgg ggc cag gga Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Cly Gin Gly 100 105 110 act ctg Thr Leu 192 240 336 342 <210> 38 <211> 114 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成構築體 <400> 38
Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gin 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Uu Ser Thr Ser 20 25 30
Gly Leu Gly Val Ser Trp lle Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 4〇 45
Trp Leu Ala His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Sct 5〇 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gin Val 65 70 75 80
Phe Leu Lys lie Thr. Ser Va丨 Ala Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly !〇〇 i〇5 110
Thr Leu <2<2<2<2
ol 1X 2>3> !§5γλ -23- 140834-序列表.doc 201006492 <220>
<221> CDS <222> (1)..(1059) <400> 39 ctg gag gcc tct gag gaa gtg gag ctt gag ccc tgc ctg get ccc age 48
Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ser 1 5 10 15 cig gag cag caa gag cag gag ctg aca gta gcc ctt ggg cag cct gtg 96
Leu Glu Gin Gin Gla Gin Glu Leu Thr Val Ala Uu Gly Gin Pro Val 20 25 30 egg ctg tgc tgt ggg egg get gag cgt ggt ggc cac tgg lac aag gag 144
Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45 ggc agt ego ctg gca cct get ggc cgt gta egg ggc tgg ags ggc ege 192
Gly Ser Arg Leu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg Gly Arg 50 55 60 eta I弓g att gcc age ttc eta cct gag gat get ggc ege tac etc tgc 240
Leu Glu lie Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys 65 70 75 80 ctg gca ega ggc tee atg ate gtc ctg cag aat etc acc ttg att aca 288
Leu Ala Arg Gly Ser Met lie Val Leu Gin Asn Leu Thr Leu He Thr 85 90 95 ggt gac tee ttg acc tee age aac gat gat gag gac ccc aag tee cat 336
Gly Asp Ser Leu Thr Ser Ser Asn Asp Asp Glu Asp Pro Lys Ser His loo 105 no agg £ac etc teg aat agg cac agt tac ccc cag caa gca ccc tac tgg 384
Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gin Gin Ala Pro Tyr Trp Π5 120 125 aca cac ccc cag ege atg gag aag aaa ctg cat gca gta cct geg ggg 432 ihr His Pro Gin Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly
130 135 HO aac acc gtc aag ttc ege tgt cca get gca ggc aac ccc aeg ccc acc 480
Asp Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Thr 145 150 155 160 ale ege tgg ctt aag gat gga cag gcc tit cat ggg gag aac ege att 528 lie Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gin Ala Phe His Gly Glu Asn Arg lie 165 170 175 g写a g琴c att egg ctg ege cat cag cac tgg agt etc gtg atg gag age 576
Gly Gly lie Arg Leu Arg His Gin His Trp Ser Leu Val Met Glu Ser 180 185 190 gtg gtg ccc teg gac ege ggc aca tac acc Igc ctg gta gag aac get 624
Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Vat Glu Asn Ala 195 200 205 gtg ggc age ate cgt tat aac tac ctg eta gat gtg cig gag egg tee 672
Val Gly Ser lie kxg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 230 215 220 ccg cac egg ccc ate ctg cag gcc ggg etc ccg gcc aac acc aca gcc 720
Pro His Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240 2tg gt2 ggc age gac gtg gag ctg ctg tgc aag gtg tac age gat gcc 768
Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255 cag ccc cac ate cag tgg ctg aag cac ate gtc ate aac ggc age age S16
Gin Pro His lie Gin Trp Leu Lys His lie Val lie Asn Gly Ser Ser 260 265 270 ttc gga gcc gac ggt ttc ccc tat gtg caa gtc eta aag act gca gac 864
Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gin Val Leu Lys Thr Ala Asp •24· 140834·序列表.doc 201006492 275 280 285 ate aat age tea gag gtg gag gtc ctg tac ctg egg aac gtg tea gee
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<400> 40
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Ser 々aT VaT fro Ser Asp Arg §Ty ThT Tyr Thr Cys Leu Val §lu Asn 85 90 95 -26- 140834-序列表.doc 336 336
201006492 get gtg ggc age ate cgt tat aac tac ctg eta gat gtg ctg gag egg
Ala Val Gly Ser lie Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg 100 105 110 tee ccg cac egg ccc ate ctg cag gee ggg etc ccg gee aac acc aca
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Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn 85 90 95
Ala Val Gly He Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg 140834·序列表.doc -27- 384 432 480 528 576 624 672 720 726 201006492
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His <210> 43 <211> 1059 <212> DNA <213>小鼠種 <220> <221> CDS <222> (1)..(1059) <400> 43 ctt gag gcc let gag Leu Glu Ala Ser Glu ctg gag cag caa gag Leu Giu Gin Gin Glu 20 agg ctg t£C tgt ggg Arg Leu Cys Cys Gly 35 ggc age ege eta gca Gly Ser Arg Leu Ala 50 ctg gag ate gcc age Leu Glu lie Ala Ser 65 Ctg gcc Cgt £gc tcc Leu Ala Arg Gly Ser 85 gat gac tcc tta acc Asp Asp Ser Leu Thr gaa atg gag cag gag ccc tgc eta gcc cca ate 48
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Leu Glu Ala Ser Glu Glu Met Glu Gin Glu Pro Cys Leu Ala Pro I]e 15 10 ]5 29· 140834·序列表.doc 201006492
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Leu Ala Arg Gly Ser Met Thr Val Val His Asn Leu rrhr Leu Leu Met 85 90 95
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Leu Gly Ser lie Arg Tyr Ser Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220
Pro His Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240
Val Val Gly Ser Asp Val Glu Uu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255
Gin Pro His lie Gin 丁rp Leu Lys His Val Val l]e Asn Gly Ser Ser 260 265 270
Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gin Val Leu Lys Thr Thr Asp 275 280 285 lie Asn Ser Scr Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 295 300
Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Scr lie Gly Leu 305 310 315 320 -30· 140834-序列表.doc 201006492
Ser Tyr Gin Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro GIu Glu Asp Leu Thr 325 330 335
Trp Thr Thr Ala Thr Pro Glu Ala Ala Ser His His His His His His 340 345 350 <210> 45 <211> 1773 <212> DNA <213>会人 <220> <221> CDS <222> (1),.(1773) <400> 45 agg ccg tcc ccg acc ttg cct gaa caa gcc cag ccc tgg gga gcc cct Arg Pro Scr Pro Thr Leu Pro Glu.Gin Ala Gin Pro Trp Gly Ala Pro 15 10 15 gtg gaa gtg gag tec ttc ctg gtc cac ccc ggt gac ctg ctg cag ett
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Val Glu Val Gin Asp Scr Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80 gta acc age age ccc teg ggc agt gac acc acc tac ttc tec gtc aat
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Asp Val Val Glu Arg Scr Pro His Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu 225 230 235 240 ccc gee aac aaa aca gtg gee ctg ggt age aac gig gag ttc atg tgt 768
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Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gin Pro His lie Gin Trp Leu Lys His lie 260 265 270 gag gtg aat ggg age aag att ggc cca gac aac ctg cct tat gtc cag 864
Glu Val Asn Gly Ser Lys He Gly Pto Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gin 275 280 285 ate ttg aag act get gga gtt aat acc acc gac aaa gag atg gag gtg 912 lie Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val 290 295 300 ett cac tta aga aat gtc tee tti gag gac gca ggg gag lai aeg tgc 960
Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys 305 310 315 320 ttg geg ggt aac let ate gga etc tee cat cac tet gca tgg ttg acc 1008
Leu Ala Gly Asn Ser lie Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr 325 330 335 gtt ctg gaa gee ctg gaa gag agg ccg gca gtg atg acc teg ccc ctg 1056
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie G3u Lys Thr lie Ser 465 470 475 480 aaa gee aaa ggg cag ccc ega gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca 1488
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 485 490 495 tee egg gat gag ctg acc aag aac cag gtc age ctg acc tgc ctg gic 1536
Ser Arg Asp Glu Leu ThT Lys Asn Gin Val Ser Uu Thr Cys Leu Val 500 505 510 aaa ggc ttc tat ccc age eac ate gee gtg gag tgg gag age aat ggg 1584 -32· 140834·序列表.doc 201006492
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glii 丁rp G]u Ser Asn Gly 515 520 525 cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr VaT Asp Lys Ser Arg Trp 545 550 555 560 cag cag ggg aac gtc ttc tea tgc tcc gtg atg cat gag get clg cac
Gin Gin G!y Asn Val Phe Scr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 565 570 575 aac cac tac acg cag aag age etc tcc ctg tet ccg ggt aaa tga
Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 580 585 590 <210> 46 <211> 590 <212> PRT <213>智人
<400> 46
Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gin Ala Gin Pro Trp Gly Ala Pro 15 10 15
Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp l^u Leu Gin Leu 20 25 30
Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gin Ser lie Asn Trp Leu Arg Asp 35 40 45
Gly Val Gin Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg lie Thr Gly Glu Glu 50 55 60
Val Glu Val Gin Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80
Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn 85 90 95
Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp ^sp Asp Asp Asp Asp Asp 100 105 110
Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Arg Met 115 120 125
Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu 130 135 140
His Ala Val Pro Ala Ala Lys Tbr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser 145 150 155 160
Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe 165 170 175
Lys Pro Asp His Arg lie Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp 180 185 190 •33· 1632 1680 1728 1773 140834-序列表.doc 201006492
Ser lie lie Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr 195 200 205
Cys lie Val Glu Asn Clu Tyr Gly Ser He Asn His Thr Tyr Gin Leu 210 215 220
Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu 225 230 235 240
Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys 245 250 255
Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gin Pro His lie Gin Trp Leu Lys His lie 260 265 270
Glu Val Asn Gly Ser Lys lie Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gin 275 280 285 lie Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val 290 295 300
Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys 305 310 315 320
Leu Ala Gly Asn Ser lie Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr 325 330 335
Val Leu G]u Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Va] Met Thr Ser Pro Leu 340 345 350
Tyr Leu Glu He Ala Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 355 360 365
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 370 375 380
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro 385 390 395 400
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 405 410 415
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 420 425 430
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Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 450 455 460
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser 465 470 475 480
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 485 490 495 -34- 140834-序列表.doc
201006492
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser i^eu Thr Cys Leu Val 500 505 510
Lys Gly Phe Tyr Pro Scr Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 515 520 525
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 530 535 540
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 545 550 555 560
Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 565 570 575
Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 580 585 590 <210> 47 <211> 1773 <212> DNA <213>智人 <22Q> <221> CDS <222> (1)..(1773) <400> 47 egg ccc tcc ttc agt tta gtt gag gat acc aca tta gag cca gaa gag
Arg Pro Ser Phe Ser Leu Val Glu Asp Thr Thr Leu Glu Pro Glu Glu 15 10 15 cca cca acc aaa tac caa ate tet caa cca gaa gtg tac gtg get gca
Pro Pro Thr Lys Tyr Gin He Ser Gin Pro Glu Val Tyr Val Ala Ala 20 25 30 cca ggg gag teg eta gag gtg ege tgc ctg ttg aaa gat gcc gcc gtg
Pro Gly Glu Ser Leu Glu Val Arg Cys Leu Leu Lys Asp Ala Ala Val 35 40 45 ate agt tgg act aag gat ggg gtg cac ttg ggg ccc aac aat agg aca lie Ser Trp ΊΤιγ Lys Asp Gly Val His Leu Gly Pro Asn Asn Arg Thr 50 55 60 gtg ett att ggg gag tac ttg cag ata aag ggc gcc aeg cot aga gac
Val Leu lie Gly Glu Tyr Leu Gin lie Lys Gly Ala Thr Pro Arg Asp 65 70 75 80 tcc ggc etc tat get tgt act gcc agt agg act gta gac agt gaa act
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Trp Tyr Phe Met Val Asn Val Thr Asp Ala lie Ser Ser Gly Asp Asp 100 105 110 gag gat gac acc gat ggt geg gaa gat ttt gtc agt gag aac agt aac
Glu Asp Asp Thr Asp Giy Ala Glu Asp Phe Val Scr Glu Asn Ser Asn Π5 120 125 aac aag aga gca cca tac tgg acc aac aca gaa aag atg gaa aag egg
Asn Lys Arg Ala Pro Tyr Trp Thr Asn Thr Glu Lys Met Glu Lys Arg 130 L35 140 etc cat get gtg cct geg gcc aac act gtc aag ttt ege tgc cca gcc
Leu His Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala 145 150 155 360 140834·序列表.doc 48 96 144 192 240 288 336 384 432 -35 480 528 528 tgc aag Cys Lys 201006492 SSg aac cca aig cca acc atg egg tgg ctg aaa aac ggg aa£ gag
Gly Gly Asn Pro Met Pro rIhr Met Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu 165 170 175 ttt aag cag gag cat ege att gga ggc tac aag gta ega aac cag cac
Phe Lys Gin Glu His Arg He Gly 〇ly Tyr Lys Val Arg Asn Gin His 180 185 190 tgg age etc att atg gaa agt gtg gtc cca let gac aag gga aat tat
Trp Ser Leu lie Met Glu Set Val Va) Pro Scr Asp Lys Gly Asn Tyr 195 200 205 acc tgt gtg gtg gag aat gaa lac ggg tee ate aat cac aeg tac cac
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Leu Pro Ma Asn Ala Ser Thr Val Val Gly Gly Asp Val Glu Phe Val 245 250 255 gtt tac agt gat gee cag ccc cac ate cag tgg ale aag cac Val Tyr Ser Asp Ala Gin Pro His lie Gin Trp lie Lys His 260 265 270 gtg gaa aag aac ggc agt aaa tac ggg ccc gac ggg ctg ccc tac etc
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Va] Leu Tyr lie Arg Asn Va! Thr Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr 305 310 315 320 tgc ttg geg ggt aat tet att ggg ata tee ttt cac tet gca tgg ttg
Cys Leu Ala Gly Asn Ser lie Gly lie Ser Phe His Ser Ala Trp Leu 325 330 335 aca gtt ctg cca geg cct gga aga £aa aag gag att aca get tee cca
Thr Val Leu Pro Ala Pro Gly Arg Glu Lys Glu lie Thr Ala Ser Pro 340 345 350 gac tac ctg tea geg eta gag ccc aaa tet tgt gac aaa act cac aca
Asp Tyr Leu Ser Ala Leu Glu Pro Lys Scr Cys Asp Lys Thr His Thr 355 360 365 tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa etc ctg ggg gga ccg tea gtc ttc
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 370 375 380 etc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc etc atg ate tee egg acc cct
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro 385 390 395 400 gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gaa gac cct gag gtc
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Leu Thr Val Lfeu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 140834-序列表.doc 36- 576 624 672 720 768 816 864 912 960 1008 1056 1104 1152 1200 1248 1296 1344 1392 1440 201006492 450 455 460 aag gtc tcc aac aaa gcc etc cca gee ccc ate gag aaa acc ate tee
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lvs Thr lie Scr 465 470 475 480 aaa gcc aaa ggg cag ccc ega gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 485 490 495 tec egg gat gag ctg acc aag aac cag gtc age ctg acc tgc ctg gtc
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Lys Gly Phe Tyr Pro Scr Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Scr Asn Gly 515 520 525 cag ccg gag aac aac tac aag acc aeg ect ccc gtg cig gac tec gac
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Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Uu His 565 570 575 aac cac tac aeg cag aag age etc tec ctg tet ccg ggt aaa iga
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Asn Lys Arg A!a Pro Tyr 丁rp Thr Asn Thr Glu Lys Met Glu Lys Arg 37- 140834·序列表.doc 201006492 130 135 140
Leu His Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala 145 150 155 160
Gly Gly Asn Pro Mel Pro Thr Met Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu 165 170 175
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Lys Val Leu Lys Ala Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu lie Glu 290 295 300
Val Leu Tyr lie Arg Asn Val Thr Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr 305 · 310 315 320
Cys Leu Ala Gly Asn Ser lie Gly He Ser Phe His Ser Ala Trp Leu 325 330 335
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Asp Tyr Leu Ser Ala Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Tlir 355 360 365
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 370 375 380
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro 385 390 395 400
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 405 410 4]5
Lys Phe Asn Trp 丁yr Va] Asp Gly Val Glu Val His Asn Ma Lys Thr 420 425 430 -38· 140834-序列表.doc 201006492
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie Ser 465 470 475 480
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 485 490 495
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 500 505 510
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Scr Asn Gly 515 520 525
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 530 535 540
Gly Ser Phe Phc Leu Tyr Scr Lys Leu Thr Val Asp Lys Scr Arg Trp 545 550 555 560
Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 565 570 575
Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser l^eu Ser Leu Scr Pro Gly Lys 580 585 590 <210> 49 <21 】> 2403 <212> DNA <213>大1種 <220> <221> CDS <222> (1)..(2403) <400> 49 atg tgg ctg ctg ttg get ttg ttg age ate ttt cag gag aca cca gcc
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Phe Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Met Glu Gin Glu Pro Cys Pro Ala 20 25 30 cca ate teg gag cag caa gag cag gtg ttg act gtg gcc ett ggg cag
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Pro Val Arg Leu Cys Cys Gly Arg Thr Glu Arg Gly Arg His Trp Tyr 50 55 60 aag gag ggc age cgt tta gca tet get Egg aga gta egg ggc tgg a£a
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Leu Ser Ser Scr Scr Ser Gly His Scr Tyr Leu Gin Gin Ala Pro Tyr 130 135 140 tgg aca cac ccc caa ege atg gag aag aaa ctg cac geg gta cct gee
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Leu Val Glu Ala Leu Asp Lys Val Leu Leu Ala Val Ser Glu Glu Tyr 740 745 750 ett gac etc ege ctg acc ttt gga ccc tat tee ccc aac aat ggg gat
Leu Asp Leu Ar£ Leu Thr Phe Gly Pro Tyr Ser Pro Asn Asn Gly Asp 755 760 765 gee age age aeg tgc tee tee age gac teg gtt ttc age cac gac cct
Ala Ser Ser Thr Cys Ser Ser Ser Asp Ser Val Phe Ser His Asp Pro 770 775 780 ttg ccc etc gag cca age ccc ttc cca ttt cct gag geg cag acc aca
Leu Pro Leu Glu Pro Ser Pro Phe Pro Phe Pro Glu Ala Gin Thr Thr 785 790 795 800 tga <210> 50 <211> 800 <212> PRT _ <213>大鼠種 <400> 50
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Phe Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Met Glu Gin Glu Pro Cys Pro Ala 20 25 30
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Pro Val Arg Leu Cys Cys Gly Arg Thr Glu Arg Gly Arg His Trp Tyr 50 55 60
Lys Glu Gly Ser Arg Leu A]a Ser Ala G3y Arg Val Arg Gly Trp Arg 65 70 75 80
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Leu Cys Leu Ala Arg Gly Ser Met Thr Val Val His Asn Leu Thr Leu y 300 105 110
He Met Asp Asp Ser Leu Pro Ser lie Asn Asn Glu Asp Pro Lys Thr 135 120 125
Leu Ser Sef Ser Ser Ser Gly His Ser Tyr Leu Gin Gin Ala Pro Tyr 130 135 140
Tm Thr His Pro Gin Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala 145 150 155 160 •42 2160 2208 2256 2304 2352 2400 2403 140834-序列表 201006492
Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Met Pto 165 170 175
Thr lie His Trp Leu Lys Asn Gly Gin Ala Phe His Gly Glu Asn Arg 180 185 190 lie Gly Gly lie Arg Leu Arg His Gin His Trp Ser Leu Val Met Glu 195 200 205
Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn 210 215 220
Ser Leu Gly Ser lie Arg Tyr Ser Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg 225 230 235 240
Ser Pro His Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr 245 250 255
Ala Val Val Gly Ser Asn Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp 260 265 270 A]a Gin Pro His lie Gin Trp Leu Lys His lie Val I]e Asn Gly Ser 275 280 285
Ser Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gin Val Leu Lys Thr Thr 290 295 300
Asp lie Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser 305 310 315 320
Ala Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser lie Gly 325 330 335
Leu Ser Tyr Gin Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Ala Glu Glu Glu 340 345 350
Asp Leu Ala Trp Thr Thr Ala Thr Ser Glu Ala Arg Tyr Thr Asp lie 355 360 365 lie Leu Tyr Val Ser Gly Ser Leu Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Leu 370 375 380
Ala Gly Val Tyr His Arg Gin Ala lie His Gly His His Ser Arg Gin 385 390 395 400
Pro Val Thr Val Gin Lys Leu Ser Arg Phe Pro Leu Ala Arg Gin Phe 405 410 415
Ser Leu Glu Ser Arg Ser Ser Gly Lys Ser Ser Leu Ser Leu Val Arg 420 425 430
Gly Va) Arg Leu Ser Ser Ser Gly Pro Pro Leu Leu Thr Gly Leu Val 435 440 445
Ser Leu Asp Leu Pro Leu Asp Pro Leu Trp Glu Phe Pro Arg Asp Arg 450 455 460 -43- 140834-序列表.doc 201006492
Leu Val Leu Gly Lys Pro Leu Gly Glu Gly Cys Phe Gly Gin Val Val 465 470 475 4S0
Arg Ala Glu Ala Leu Gly Met Asp Ser Ser Arg Pro Asp Gin Thr Ser 485 490 495
Thr Val Ala Val Lys Met Leu Lys Asp Asn Ala Ser Asp Lys Asp Leu 500 505 510
Ala Asp Leu lie Scr Glu Met Glu Met Met Lys Leu lie Gly Arg His 515 520 525
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Ser Ser Glu Gly Pro Leu Ser Phe Pro Ala Leu Val Ser Cys Ala Tyr 580 585 590
Gin Val Ala Arg Gly Met Gin Tyr Leu Glu Ser Arg Lys Cys He His 595 600 605
Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Thr Glu Asp Asp Val Met 610 615 620
Lys lie Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Gly Val His His lie Asp Tyr 625 630 635 640
Tyr Lys Lys Thr Ser Asn Gly Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro 645 650 655
Glu Ala Leu Phe Asp Arg Val Tyr Thr His Gin Ser Asp Val 丁rp Ser 660 665 670
Phe Gly 11c Leu Leu Trp Glu lie Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr 675 680 685
Pro Gly lie Pro Val Glu Glu Leu Phe Ser Leu Leu Arg Glu Gly His 690 695 700
Arg Met Glu Arg Pro Pro Asn Cys Pro Scr Glu Leu Tyr Gly Leu Met 705 710 715 720
Arg Glu Cys Trp His Ala Ala Pro Ser Gin Arg Pro Thr Phe Lys Gin 725 730 735
Leu Val Glu Ala Leu Asp Lys Val Leu Leu Ala Val Ser Glu Glu Tyr 740 745 750
Leu Asp Leu Arg Leu Thr Phe G3y Pro Tyr Scr Pro Asn Asn Gly Asp -44- 140834-序列表.doc 201006492 755 760 765 Ala Ser Ser Thr Cys Ser Ser Ser Asp Ser Val Phe Ser His Asp Pro 770 775 780
Leu Pro Leu GIu Pro Ser Pro Phe Pro Phe Pro Glu Ala Gin Thr Thr 785 790 795 800 <210> 51 <211〉 3] <212> DNA <213>小鼠種 <400> 53 cggccgccag gtacclggaa ttcggcttgg g 31
<210> 52 <21】> 3] <212> mk <213>小鼠種 <400> 52 ctagaaggca ctctagaggc tgatctcgag c 31 <210> 53 <211> 14 <212> DNA <213>小鼠種 <400> 53 cgagclctgt acaa 14 <210> 54 <2Π> 22 <212> DNA <213>小鼠種 <400> 54 ctagttgtac agagctcggt ac 22
<210> 55 <211> 32 <212> DNA <213>小鼠種 <400> 55 gcgccgtcct ggagctcctg ctgctgaggt gg 32 <210> 56 <211> 24 <212> DNA <213>小鼠種 <400> 56 ggcaactaga aggcacagtc ga£g 24 <210> 57 <211> 27 <212> mA <213>小鼠種 <400> 57 gtccctggga tcctcgagga agtggag 27 <210> 58 140834-序列表.doc -45· 201006492 <211> 31 <212> DNA <213>小鼠種 <400> 58 gcgcctgccc gagctccagc ccggccagca g <210> 59 <211> 19 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 59
Leu Ala Leu Ala Val Leu Leu Leu Ala Gly Leu Glu Leu Leu Leu Leu 15 10 15
Arg Trp Gin <210> 60 <211> 12 <212> PRT <213>小鼠種 <400> 60
Leu Ala Leu Ala Val Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gin 1 5 10 <210> 61 <211> 52 <212> DNA <213>小鼠種 <400> 61 ggccttggct gtgctcctgc tEctgaggtg gcagtttcct gcacactaca gg <230> 62 <211> 52 <212> DNA <2〗3>小鼠種 <400> 62 cctgtagtgt gcaggaaact gccacctcag cagcaggagc acagccaagg cc <210> 63 <211> 23 <212> DNA <2】3>小鼠種 <400> 63 cgactggagc acgaggacac tga <210> 64 <21i> 21 <212> m <2〗3>小鼠種 <400> 64 tatgcaaggc ttacaaccac a <210> 65 <211> 24 <212> E^A <2]3>小鼠種 46· 140834-序列表.doc 24201006492 <400> 65 clcattcctg ttgaagctct tgac <210> 66 <211> 27 <212> DNA <213>小鼠種 <400> 66 acactcagca cgggacaaac tcttctc <210> 67 <211> 27 <212> mi <213>小鼠種 <400> 67 acactctgca ggagacagac tcttttc 27 27
<210> 68 <2!1> 1062 <212> ΪΜ <213>晉人 <220> <221> CDS <222> (1)..(1062) <400> 68 ctg gag gcc tct gag gaa gtg gag ctt gag Leu Glu Ala Scr Glu Glu Val Glu Leu Glu 1 5 10 ccc tgc ctg get ccc age Pro Cys Leu Ala Pro Ser 15 ctg gag cag caa gag cag gag ctg Leu Glu Gin Gin Glu Gin Glu Leu 20 aca gta gcc ctt Thr Val Ala Leu 25 afy8 cag cct gtg Gin Pro Val 30 egg ctg tgc tgt ggg egg get gag cgt ggx ggc cac tgg tac aae gag Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45 ggc a£t ege ctg gca cct get ggc cgt gta egg ggc tgg Gly Ser Arg Leu Ala Pro Ala Arg Val Arg STy fro 50 55 60 agg ggc ege Arg Gly Arg
eta gag att gcc age ttc eta cct gag gat get ggc ege tac etc tgc Leu Glu lie Ala Scr Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Are Tvr Leu Cvs 65 70 75 80 ctg gca ega ggc tee atg ate gtc ctg cag aat etc acc ttg att aca Leu Ala Arg Gly Scr Met lie Va) Leu Gin Asn Leu Thr Leu lie Thr S5 90 95 ggt gac tec ttg acc tee age aac gat gat gag gac ccc aag tee cat Gly Asp Ser Leu Thr Ser Scr Asn Asp Asp Glu Asp Pro Lys Scr His 100 105 HO agg gac etc teg aat agg cac agt tac ccc cag caa gca ccc tac tgg Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gin Gin Ala Pro Tyr Trp Π5 120 125 aca cac ccc cag ege atg gag aag aaa ctg cat gca gta cct geg ggg Thr His Pro Gin Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly 130 135 140 aac acc gtc aag ttc ege tgt cca get gca ggc aac ccc aeg ccc acc Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Thr H5 150 155 160 ate ege tfig ctt aag gat gga cag gcc ttt cat ggg gag aac ege att lie Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gin Ala Phe His Gly Glu Asn Arg He 48 96 144 192 240 288 336 384 432 480 140834-序列表.d〇c 47· 528 576 576 c u SA t P5 a S5 SA 2 c Γ Ob c as c r taTy 81 t Λα βν 0» s ay aL c so s y5 tc2 s u ctLe s u CtLe Do u al SG gl t 3 fiv c P5 a s 4 SA 2 c Γ s c as c y β] SG SI t B 2V su ta εν 201006492 165 170 375 gga ggc att egg ctg ege cat cag cac tgg agt etc gtg atg gag age
Gly Gly lie Arg Uu Arg His Gin His Trp Ser Leu Val Met Glu Ser 180 185 gtg gtg ccc teg gac ege ggc aca tac acc tgc ctg gta gag aac act
Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn Ala 195 200 205 gtg ggc age ate cgt tat aac tac ctg eta gat gtg ctg gag egg tee
Val Gly Ser lie Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220 ccg cac egg ccc ate ctg cag gee ggg etc ccg gee aac acc aca gee
Pro His Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240 cag ccc cac ate cag tgg ctg aag cac ate gtc ate aac ggc age age
Gin Pro His lie Gin Trp Leu Lys His He Val lie Asn Gly Ser Scr 260 265 270 ttc gga gee gac ggt ttc ccc tat gtg caa gtc eta aag act gca gac
Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gin Val Leu Lys Thr Ala Asp 275 280 285 ate aat age tea gag gtg gag gtc ctg tac ctg egg aac gtg tea gee lie Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 .295 300 gag gac gca ggc gag tac acc tgc etc gca ggc aat tee ate ggc etc
Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser He Gly Leu 305 310 315 320 tee tac cag tet gee tgg etc aeg gtg cca gag gag gac ccc aca tgg
Ser Tyr Gin Ser Ala Trp Leu Thr Val Pro Glu Glu Asp Pro Thr Trp 325 330 335 acc gca gca geg ccc gag gee get age tgg age cac ccg cag ttc gaa
Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Ala Ser Trp Ser His Pro Gin Phe Glu 340 345 350 aaa tga Lys 624 672 720 768 816 864 912 960 1008 1056 1062 > > > > 0123 <21<21<21<21 69 353PRT智 <400> 69
Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ser 15 10 15
Leu Glu Gin Gin Glu Gin Glu Leu Thr Val Ala Leu Gly Gin Pro Va] 20 25 30
Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45
Gly Set Arg I^eu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg Gly Arg 50 55 60
Leu Glu lie Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys 48- 140834-序列表.doe 201006492 65 70 75 80
Leu Ala Arg Gly Ser Met I]e Val Leu Gin Asn Leu Thr Leu lie Thr 85 90 95
Gly Asp Ser Leu Thr Ser Ser Asn Asp Asp Glu Asp Pro Lys Ser His 100 105 110
Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gin Gin Ala Pro Tyr Trp 115 120 125
Thr His Pro Gin Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly 130 135 140
Asa Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Thr 145 150 155 160 lie Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gin Ala Phe His Gly Glu Asn Arg lie 365 170 175
Gly Gly lie Arg Leu Arg His Gin His Trp Ser Leu Vai Met Glu Ser 180 185 190
Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn Ala 195 200 205
Val Giy Ser lie Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220
Pro His Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240
Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255
Gin Pro His lie Gin Trp Leu Lys His lie Val lie Asn Gly Ser Ser 260 265 270
Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val G]n Val Leu Lys Thr Ala Asp 275 280 285
He Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 295 300
Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser lie Gly Leu 305 310 315 320
Ser Tyr Gin Ser Ala Trp Leu Thr Val Pro Glu Glu Asp Pro Thr Trp 325 330 335
Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Ala Ser Trp Ser His Pro Gin Phe Glu 340 345 350
Lys • 49- 140834·序列表.doc 201006492 7098PRT智70 0>1>2>3>)0> n 11 u 2222 4 < < V < <
Gin Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gin Arg Met Glu Lys Lys Leu His 1 5 10 15
Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 20 25 30
Asn Pro Thr Pro Thr lie Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gin Ala Phc His 35 40 45
Gly Glu Asn Arg lie Gly Gly lie Arg Leu Arg His Gin His Trp Ser 50 55 60
Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys 65 70 75 80
Leu Val Glu Asn Ala Val Gly Scr He Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp 85 90 95
Val Leu <210> 71 <213> 648 <212> DNA <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(648) <400> 71 cag age gaa ttg act cag cca ccc tea gc£ tet ggg acc ccc ggg cag Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 1 5 10 15 agg gtc acc ate tet xgt tot gga ggc tac tcc aac atg gga age aat Cys Ser Gly Gly Tyr Ser Asn Met Gly Ser Asn 48
Arg Val Thr lie Ser 20 25 96 tat gca cac tgg tac cas cag etc cca gga aeg gcc ccc aaa etc etc 144
Tyr Ala His Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 ate tat aac aat aat cag egg ccc tea ggg gtc cct gac ega ttc tet 192 lie Tyr Asn Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Va3 Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc tec aag tet ggc acc tea gcc tec ctg gee ate agt ggg etc egg 240
Gly Scr Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 tec gag gat gag get gat tat tac tgt gca gca tgg gal gac age ctg 288
Scr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 agt ggt ccg gtg ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc eta ggt cag 336
Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 no ccc aag get gee ccc teg gtc act ctg ttc ccg ccc tec tet gag gag 384 50- 140834·序列表.doc 432 201006492
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phc Pro Pro Ser Scr GIu Glu 115 120 125 ctt caa gcc aac aag gcc aca ctg gtg tgt ctg ate agt gac ttc tac
Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Scr Asp Phc Tyr 130 135 140 ccg gga get gtg aca gtg gee tgg aag gca gat ggc age ccc gtc aag
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 geg gga gtg gag acc acc aca ccc tee aaa caa age aac aac aag tac
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Scr Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 geg gcc age age tat ctg age ctg aeg cct gag cag tgg aag tee cac
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 180 185 190 aga age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age acc gtg gag aag
Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Vai Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 aca gtg gcc cct aca gaa tgt tea Ώιι* Val Xia fro Thr 0ys Ser 480 528 576 624 648
<210> 72 <211> 216 <212> PRT <213>智人 <400> 72
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Scr Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
Arg Val Thr lie Scr Cys Scr Gly Gly Tyr Scr Asn Met Gly Ser Asn 20 25 30
Tyr Ala His Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Asn Asn Asn G!n Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Scr 50 55 60
Gly Ser Lys Scr Gly Thr Scr Ala Ser Leu Ala lie Scr Gly Leu Arg 65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Scr Leu 85 90 95
Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 HO
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125
Leu Gin Ala Asn Lys Ala ITir Leu Val Cys Leu IJe Ser Asp Phe Tyr 130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val A!a Trp Lys Ala Asp Gly Scr Pro Val Lys 145 150 155 160 -51 140834-序列表.doe 201006492
Ala Gly Val Glu rfhr Thr Thr Pro Ser Lys G3n Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 380 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Va3 Thr His Glu G)y Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210〉 73 <211> 9 <212> PRT <213>智人 <400> 73
Ser Asn Met Gly Ser Asn Tyr Ala His <210> 74 <211> 5 <212> PRT <213>智人 <400> 74
Tyr Asn Asn Asn Gin <210> 75 <211> 8 <212> PRT <213>智人 <400> 75
Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly ] 5 <230> 76 <2]1> 411 <212> DNA <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(411) <400> 76 gaa gtt caa ttg tta gag tct ggt ggc ggt ctt gtt cag cct ggt ggt
Glu VaJ Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 tct tta cgt ctt tct tgc £〇t get tcc gga ttc act ttc tct cct tac
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xla Ala Ser Gly Phe Hu Phe Ser Pro Tyr 20 25 30 . tgg atg ggt tgg gtt ege caa gel cct ggt aaa ggt tig gag tgg gtt Trp Met 6Ty 丁rp Val Arg Gin Ala Pro Lys 5Ty Leu Glu Trp Val 35 40 45 tct gtt ate tgg cct tct ggt ggc act act gat tat get gac tcc gtt
Ser Val lie Trp Pro Ser Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 52- 48 96 144 140834-序列表.doc 192 201006492 aaa ggt cgc ttc act ate tel aga gac aac tet aas aat act etc tac
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Scr Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 tig cag atg aac age tta agg get gag gac aeg gee gtg tat tac tgt
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 geg aga gtc cat cca get ggc cac aac gac cac tgg ggc cag gga acc
Ala ATg Val His Pro Ala Gly His Asn Asp His Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 ctg gtc acc gtc tea age gee tee acc aag ggc cca teg gtc ttc ccg
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 eta gca ccc tee tee aag age acc tet
Leu Ala Pro Ser Scr Lys Ser Thr Ser 130 135
<230> 77 <211> 137 <212> FRT
<400> 77
Glu Val G!n Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Scr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr Gly Phe Thr Phe Scr Pro Tyr 20 25 30
Trp Met Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser VaMle Trp Pro Ser Gly G]y Thr Thr Asp Tyr AU Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr I3e Ser Arg Asp Asn Ser Ly$ Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 8〇
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val His Pro Ala Gly His Asn Asp His Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 no
Leu Va丨 Thr Va丨 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Giy Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Uu Ala Pro Ser Ser Lys Ser l.r Ser <210> 78 <213> 9 <212> PRT <2]3>智人 <400> 78
Phe Thr Phe Ser Pro Tyr Ttp Met Gly 53- 140834-序列表.doc 201006492 79SPRT智79 ^ > > >^ σ1 2 3ω· 11 1 11 ο <2<2<2<2<4
Val lie Trp Pro Scr Gly Gly Thr Thr Asp 1 5 10 <210> SO <211> 10 <212> PRT <213> %人 <400> 80
Arg Val His Pro Ala Gly His Asn Asp His 1 5 10 <210> 81 <211> 645 <212> DNA <2!3>智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(645) <400> 81 caa gac ate cag atg acc cag tet cca tee tee ctg tet ttg tet cca 48
Gin Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Leu Ser Pro ] 5 l〇 15 ggg gaa aga gee acc etc tee tgc agg gee agt cag agt att aac aga 96
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Asn Arg 20 25 30 aac ita ggc tgg tac cag cag aag cct ggc cag get ccc ag£ etc etc 144
Asn Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Uu Leu 35 40 45 ate tat ggt geg tee acc agg gee act ggt ate cca gee agg ttc act 192 lie Tyr Gly Ala Ser Thr Arg A]a Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Thr 50 55 6〇 ggc agt ggg tet ggg aca gag ltc tet etc acc ate age age ctg cag 240
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Pbe Ser Leu Thr lie Ser Scr Leu Gin 65 70 75 80 let gaa gat tat gca att tat tat tgt cag cag tat gat aac tgg ccg 288
Ser Glu Asp Tyr Ala lie Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro 85 90 95 ate ate ttc ggc caa ggg aca ega ctg gag att aaa gga act gtg get lie lie Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys Gly Thr Val Ala 100 105 1)0 gca cca tet gtc ttc ate ttc ccg cca tet gat gag cag ttg aaa tet
Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125 432 gga act gee tet gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 gee aaa gta cag tgg aag gtg gat aac gee etc.caa teg ggt aac tee
Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Scr 145 150 155 16〇 cag gag agt gtc aca gag cag gac age aag gac age acc tac age etc 54- 140834-序列表.doc 480 201006492
Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 age age acc ctg aeg ctg age aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 tac gcc tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg age teg ccc gtc aca aag
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 age ttc aac agg gga gag tgt Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 82 <211> 215 <212> PRT <213>智人 <400> 82
Gin Asp He Gin Met Thr G]n Ser Pro Ser Ser Leu Ser Leu Ser Pro 15 10 15 蠹
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Asn Arg 20 25 30
Asn Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly G]n Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala rfhr Gly He Pro Ala Arg Phe Thr 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Ser Glu Asp Tyr Ala lie Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro 85 90 95 I)e lie Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys Gly Thr Val Ala 100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140
Ala Lys Val Gin Ττρ Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160
Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Sex Lys ^sp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 370 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 390
Tyr Ala Cys Glu Val "Fhr Kis Gin Gly Leu Set Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 -55- 140834-序列表.doc 201006492 Γ n As eo —Γί lx P2 Γ e s y-r—* C2 RT人 837 0>]>2>3> <21<23<21<23 <400> 83
Ser lie Asn Arg Asn Leu Gly 1 5 <210> 84 <211> 5 <212> PRT <213>智人 <400> 84
Tyr Gly Ala Ser Thr <210> 85 <211> 6 <212> PRT <213>智人 <400> 85
Gin Tyr Asp Asn Trp Pro 1 5 <210> 86 <211> 411 <212> DNA <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1). (411) <400> 86 gaa gtt caa ttg tta gag tet ggt ggc ggt ett gtt cag cct ggt ggt G3u Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 tet tta cgt ett tet tgc get get tee gga tie act tie tet cgt tac Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 lit aig aag tgg gtt ege caa get cct ggt aaa ggt ttg gag tgg gtt Phe Met Lys Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tet tgg ate tet cct tet ggt ggc ett act gag tat get gac tee gtt Ser Trp lie Ser Pro Ser Gly Gly Leu Thr Glu Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aaa ggt ege ttc act ate tet aga gac aac tet aag aat act etc tac Lys Gly Arg Phe Thr I3e Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ttg cag atg aac age tta agg get gag gac aeg gee gtg tat tac tgt Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 48 96 144 192 240 85 90 95 gee aga gee tea tac ggt gee tgg ctg gac tac tgg ggc cag ggc acc Ala Arg Ala Ser Tyr Gly Ala Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 -56- 140834-序列表.doc 336 384 201006492 ctg gtc acc gtc tea age gee tee acc aag ggc cca teg gtc ttc ccg
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 411 eta gca ccc tee tee aag age acc tet
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 87 <211> 137 <212> PRT <213>智人 <400> 87
Glu Val Gin Leu Leu GIu Ser Giy Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30
Phe Met Lys Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
Ser Trp lie Ser Pro Ser Gly Gly Lea Thr Glu Tyr Ala Asp Set Val 50 55 60
Lys Giy Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 SO
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ala Ser Tyr Gly Ala Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135
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Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Phe Mel Lys 1 5 <210> 89 <211> 10 <212> PRT <213〉智人 <400> 89
Trp lie Ser Pto Ser Gly Gly Leu Thr Glu 1 5 10 57· 140834-序列表.doc 201006492 <210> 90 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 90 Arg Ala Ser Tyr Gly Ala Trp Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 91 <211> 651 <212> DNA <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(651) <400> 91 cag age gtc ttg act cag cca ccc tea geg tet ggg acc ccc ggc cag Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly γΠιγ Pro Gly Gin 3 5 】〇 ]5 ggg 2tc acc ate tet tgt tet gsa age age tee aac ate gga agt aat Gly Val Thr He Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ser Asn 20 25 30 agt gtt aac tgg tac cag cag etc cca gga geg gee ccc aaa etc etc Ser Val Asn Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 ate tat agt aac aat ctg egg ccc tea ggg gtc cct gee ega ttc tet lie Tyr Ser Asn Asn Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 ggc tee aag tet ggc acc tea gee tee ctg gee ate agt ggc etc egg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 let gag gat gag get gat tat tac tgt gca gee tgg gat gac ggc ctg Ser ulu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp G)y Leu 85 90 95 gat gee tat gtg gtg uc ggc gga ggg acc aaa ctg acc gtc ctg ggt Asp Ala Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 cag ccc aag gee aac ccc act gtc act ctg tic ccg ccc tee tet gag Gin Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Π5 120 125 S?g ?tc S?a gcc aac aag gee aca eta gtg tgt ctg ate agt gac ttc Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe 130 135 HO tac ccg gga get gig aca gtg gee tgg aag gca gat ggc age ccc gtc Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val H5 150 155 . 160 aag geg gga gtg gag acc acc aaa ccc tee aaa cag age aac aac aag Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys G3n Ser Asn Asn Lys 165 170 175 tac geg gee age age tac ctg age ctg aeg ccc gag cag tgg aag tee Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser 180 185 190 cac aga age tac age tgc cag gic aeg cat gaa ggg age acc gtg gag HiS Ar8 Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Va】Glu 195 200 205 aag aca gtg gee pet gca gaa tgc tet 48 96 144 192 240 288 336 384 432 480 528 576 624 651 140834·序列表.d〇c -58 - 201006492
Lys Thr Val Ala Pro Ala GIu Cys Ser 210 215 <210> 92 <211> 217 <212> PRT <213>智人 <400> 92
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
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Gly Ser Lys Scr Gly Thr Scr Ala Scr Leu Ala lie Ser Gly Leu Arg 65 70 75 SO
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Asp Ala Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 】10
Gin Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Scr Glu 115 120 125
Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe 130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val U5 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Hir Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys 165 170 175
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Tyr Ser Asn Asn Leu <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213>智人 <400> 95
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 97 <211> 138 60- 140834-序列表.doc 201006492 <212> PRT <2Π>智人 <400> 97 GIu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 !5
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Leu Gin Met Asn Scr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg lie Asn Ser Gly Ser Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 98 <211> 9 <212> PRT <213>智人 <400> 98
Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Trp Met Ala <210> 99 <211> 10 <212> PRT <2D>智人 <400> 99
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Arg Ile Asn Ser Gly Ser Ser His Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 101 61- 140834-序列表.doc 48 201006492 <211> 651 <212> DNA <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(651) <400> 101 cag tac gaa ttg act cag cca ccc tea geg tet ggg acc ccc ggg cag
Gin Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15 ass gtc acc ate tet tgt tet gga age age tee aac ate gga age aat
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Gin Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 gag etc caa gee aac aag gee aca eta gtg tgt ctg ate agt gac ttc
Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He Ser Asp Phe 130 135 140 tac ccg gga get gtg aca gtg gee tgg aag gca gat ggc age ccc gtc
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Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser 180 185 190 cac aga age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age acc gtg gag
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 195 200 205 aag aca gtg gee cct aca gaa tgt tea
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 102 <211> 217 <212> PRT <213>智人 <400> 102
Gin Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 140834-序列表.doe 62- 96 144 192 240 288 336 384 432 480 528 576 624 651 201006492 15 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Scr Ser Ser Asn lie Gly Ser Asn 20 25 30 lie Val His 丁rp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
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Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe 130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val 145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys 165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser 180 1S5 190
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Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 103 <211> 9 <212> PRT <213>智人 <400> 103
Ser Asn lie Gly Ser Asn lie Val His 1 5 <210> 104 <211> 5 <212> PRT <213>智人 <400> 104
Tyr Gly Asn Asn Gin -63- 140834-序列表.doc 201006492 <210> 105 <211> 9 <212> PRT <213>智人 <400> 105
Ser Trp Asp Asp Ser Leu Lys Ala Phe <210> 106 <211> 420 <212> mk <213>眷人 <220> <221> CDS <222> (1)..(420) <400> 106 gaa gtt caa ttg tta gag tct ggt ggc ggt ctt gtt cag cct ggt ggt
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val G)n Pro Gly Gly 15 10 15 tct tta cgt ctt tct tgc get get tcc gga ttc act ttc tct cat tac
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Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ttg cag atg aac age tta agg get gag gac aeg gcc gtg tat tac tgt
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala VaT Tyr Tyr Cys S5 90 95 gca egg age agt ggc tgg get ctg gat get ttt gat ate tgg ggc caa
Ala Arg Ser Ser Gly Trp Ala Leu Asp Ala Phe Asp lie Trp Gly Gin 100 105 110 ggg aca atg gtc acc gtc tea age gcc tcc acc aag ggc cca teg gtc
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 ttc ccg eta gca ccc tcc tcc aag age acc tct ggg
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 <210> 107 <211> 140 <212> PRT <213>智人 <400> 107
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 20 25 30 -64- 140834·序列表.doc 201006492
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Ser Gly Trp Ala Leu Asp Ala Phe Asp lie Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Set Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Sex Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 <210> 108 <211> 9 <212> PRT <213> % 人 <400> 108
Phe Thr Phe Ser His Tyr Trp Met Gly <210> 109 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 109
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Arg Ser Scr Gly Trp Ala Leu Asp Ala Phe Asp lie 1 5 10 <210> 111 <2ll> 1215 <212> DNA <213>智人 <220> <22!> CDS <222> (1)..(1215) <400> 111 atg egg ctg ctg ctg gcc ctg ttg ggg gtc ctg ctg agt gtg cct ggg Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro Gly 65- 140834_序列表.doc 96 96 caa gag cag gag ctg aca Gin Glu Gin Glu Leu Thr 45 gta gcc Val Ala 201006492 1 5 10 15 cct cca gtc Ug tec ctg gag gcc ut gag gaa gt£ gag ctt gag ccc
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Gin Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gin Arg Met Glu Lys Lys Leu His 145 150 155 160 gca gta cct geg ggg aac acc glc aag ttc ege tgt cca get gca ggc
Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 165 170 175 aac ccc aeg aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa etc
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Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro 290 295 300 cag gtg tac acc ctg ccc cca tee egg gat gag ctg acc aag aac cag 14083‘序列表.doc 144 192 240 288 336 384 432 480 528 576 624 672 720 768 816 864 912 960 -66· 1008 201006492
Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin 305 310 315 320 gtc age ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc age gac ate gee
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala 325 330 335
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Pro Pro Val Leu Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30
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Leu Gly Gin Pro Val Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly 50 55 60
H,s Trp Tyr Lys Glu Gly Ser-Arg Leu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg
Gly Trp Arg Gly Arg Leu Glu lie Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala 85 90 95
Gly Arg Tyr Leu Cys Leu Ala Arg Gly Ser Met lie Val Leu Gin Asn 100 105 no
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Asp Pro Lys Ser His Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gin 130 135 140
Gin Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gin Arg Met Glu Lys Lys Leu His 145 150 155 160 -67 140834-序列表.doc 201006492
Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 165 170 175
Asti Pro Thr Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu ISO 185 190
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp l"hr 195 200 205
Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Va! Thr Cys Val Val Va] Asp Val 210 215 220
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Leu Ser Pro Gly <210> 113 <211> 1068 <212> DNA <2】3>智人 <220>
<221> CDS <222> (1)..(1068) <400> 113 -68 - 140834-序列表.doc 48 48
201006492 atg egg ctg ctg ctg gee ctg ttg ggg gtc ctg ctg agt gtg cct ggg
Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro G)y 15 10 15 cct cca gtc ttg tcc ctg gag see tet gag gaa gtg gag ett gag ccc
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Gly Glu Asn Arg lie Gly Gly lie Arg Leu Arg His Gin His Trp Ser 85 90 95 etc gtg atg gag age gtg gtg ccc teg sac ege ggc aca tac acc tgc
Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys 100 105 110 ctg gia gag aac get gtg ggc age ate cgt tat aac tac ctg eta gai
Leu Val Glu Asn Ala Val Gly Ser lie Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp 115 120 125 gtg ctg aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa etc ctg Val Leu Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 130 135 140 ggg gga ccg tea gtc ttc etc lie ccc cca aaa ccc aag gac acc etc
Gly Gly Pro Ser Va] Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 145 150 155 160 atg ate tec egg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg age
Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 165 170 175 cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gig gac ggc gtg ga| His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 丁yr Val Asp §Ty 9al 180 185 190 gtg cat aat gee aag aca aag ccg egg gag gag cag tac aac age aeg Va) His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin TyT Asn Ser Thr 195 200 205 tac cgt gtg gtc age gtc etc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 210 215 220 ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tec aac aaa gee etc cca gee ccc Q\y Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 225 230 235# 240 ate gag aaa acc ate tec aaa gee aaa ggg cag ccc ega gaa cca cag
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Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Fro 290 295 300 140834-序列表.doe -69- 96 144 192 240 288 336 384 432 480 528 576 624 672 720 768 816 864 912 960 201006492 ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc tic etc tac age aag etc acc
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Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 325 330 335 atg cat gag get ctg cac aac cac tac aeg cag aag age etc tcc ctg
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thx Gin Lys Ser Leu Ser Leu 340 345 350 tet ccg ggt tga Ser Pro Gly 355 <210> 114 <211> 355 <212> PRT <213>智人 <400> 114
Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro Gly 15 10 15
Pro Pro Val Leu Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30
Gin Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gin Arg Met Glu Lys Lys Leu His 35 40 45
Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 50 55 60
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Val Leu Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 130 135 140
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His Glu Asp Pro Glu Va! Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 180 185 190
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 195 200 205 •70- 1008 1056 1068 140834·序列表.doc 201006492
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 210 215 220
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 225 230 235 240
He Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 245 250 255
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val 260 265 270
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val 275 280 285
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 290 295 300
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Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 325 330 335
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 340 345 350
Ser Pro Gly 355 <210> 115 <211> 1188 <212> DNA <213>会人 <220> <22!> CDS <222> (1)..(1188) <400> 115 48 96 144 192 24〇 atg egg cig ctg ctg gcc ctg ttg ggg gtc ctg ctg agt gtg cct ggg Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Scr Val Pro Gly 15 10 15 cct cca gtc ttg tcc ctg gas gcc tet gag gaa gt£ gag ett gag ccc
Pro Pro Val Leu Scr Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30 aac get gtg ggc age ate cgt tat aac tac ctg eta gat gxg ctg gag
Asn Ala Val Gly Scr lie Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu 35 40 45 egg tcc ccg cac egg ccc ate ctg cag gcc ggg etc ccg gcc aac acc Arg Ser Pro His Arg Pro lie I-^u Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr 50 55 60 aca gcc gtg gtg ggc age gac gtg gag ctg ctg tgc aag gtg tac age
Thr Ala Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Va! Tyr Ser 65 70 75 80 gat gcc cag ccc cac ate cag tgg ctg aag cac ate gtc ate aac ggc Asp Ala Gin Pro His lie Gin Trp Leu Lys His He Val lie Asn Gly 71- 140834-序列表.doe 336 201006492 age age ttc gga gee gac Ser Ser Phe Gly Ala Asp 100 . 85 90 95 ggt ttc ccc tat gtg caa gtc eta aag act Gly Phe Pro Tyr Val Gin Val Leu Lys Thr i〇5 no gca gac gtc aat age tea gag gtg gag gtc ctg lac ctg egg aac gtg
Ala Asp lie Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val 115 120 125 tea £cc gag gac gca ggc gag tac acc tgc etc gca ggc aat tee ate Ser Ala Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser lie 130 135 140 ggc etc lee tac cag let gee 【gg etc aeg gtg c【g cca gag gag gac
Gly Leu Ser Tyr Gin Ser Ala Trp Leu Thr Va] Leu Pro Glu Glu Asp 145 150 155 160 ccc aca tgg acc gca gca geg ccc gag gee aaa act cac aca tgc cca Pro Thr Trp Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Lys Thr His Thr Cys Pro 165 170 175 ccg tgc cca gca cct gaa etc ctg ggg gga ccg tea gtc ttc etc uc
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 180 185 190 ccc cca aaa ccc aag gac acc etc atg ate tee egg acc cct gag gtc
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val 195 200 205 aca t£C gtg gtg gtg gac gtg age cac gaa gac cct gag gtc aag uc Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 210 215 220 aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gee aag aca aag ccg
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 225 230 235 240 egg gag gag cag lac aac age aeg tac cgt gtg gtc age gtc etc acc
Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Va! Ser Val Leu Thr 245 250 255 gtc clg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc
Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 260 265 270 tee aac aaa gee cic cca gee ccc ate gag aaa acc ate tee aaa gee Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He Ser Lys Ala 275 280 285 aaa ggg cag ccc ega gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tee egg
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Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 305 310 315 320 ttc tat ccc age gac ate gee gtg gag tgg gag age aat ggg cag ccg
Phe Tyr Pro Ser Asp lie Aia 9al 8lu Trp §lu Ser Asn Gin Pro 325 330 335 gag aac aac tac aag acc aeg cct ccc gtg ctg gac tee gac ggc tee
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 340 345 350 lie ttc etc tac age aag etc ace gtg gac aag age agg tgg cag cag
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu thr VaT Asp [ys Ser Arg Trp Gin Gin 355 360 365 ggg aac gtc Uc tea tgc tee gtg atg cat gag get cig cac aac cac
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 370 375 380 tac aeg cag aag age etc tee ctg tet ccg ggt tga 140834-序列表.doc 384 432 430 528 576 624 .672 720 768 816 864 932 960 1008 1056 1104 1152 1188 -72- 201006492
Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Scr Leu Ser Pro Gly 385 390 395 <210> 116 <211> 395 <212> PRT <213>智人 <400> 116
Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro Gly 1 5 10 15
Pro Pro Val Leu Ser Leu GIu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30
Asn Ala Val Gly Ser lie Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu 35 40 45
Arg Ser Pro His Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr 50 55 60
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Asp Ala Gin Pro His He Gin Trp Leu Lys His lie Val lie Asn Gly 85 90 95
Ser Ser Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gin Val I^eu Lys Thr 100 105 110
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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val 195 200 205
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Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 225 230 235 240
Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 245 250 255 -73- 140834-序列表.doc 201006492
Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 260 265 270
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala 275 2S0 285
Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 290 295 300
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Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro 325 330 335
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Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Aig Trp Gin Gin 355 360 365
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 370 375 380
Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Giy 385 390 395 <210> 117 <211> 330 <212> PRT <213>智人 <400> 117
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 15 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 I^eu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin ITir 65 70 75 80
Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 -74· 140834-序列表.doc 201006492
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175
Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Va! Ser Val Uu Thr Va】Leu 180 185 190
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Λ 225 230 235 240 鲁
Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255
Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320
Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 Φ -75- 140834-序列表.doc

Claims (1)

  1. 201006492 七、申請專利範園： 1. 一種FGF-R4受體拮抗劑，其特徵在於其為專一地結合 FGF-R4之抗體。 2. 如請求項1之拮抗劑，其特徵在於其結合至該fgf_r4受 體之D2-D3域。 3. 4. • 如請求項1及2中任一項之抗體，其特徵在於其結合至該 FGF-R4受體之D2域。 如請求項1或2之拮抗劑，其特徵在於由表面電漿共振 (Biacore)技術測定，其對於該FGF_R4受體具有小於ι〇·8 Μ之 KD。 5. 如印求項1或2之括抗劑，其特徵在於其具有抗人類 R4與抗鼠類FGF-R4之活性。 6. 如印求項1或2之拮抗劑’其特徵在於其為抗體且包含至 少一個CDR具有與以下序列之一者一致之序列：SEQ ID No. 9 、 10 、 11 、 12 、 13 、 14 、 73 、 74 、 75 、 78 、 79 、 • 80、83、84、85、88、89、90、93、94、95、98、99、 100、103、104、105、108、109或11〇 〇 7. 如請求項1或2之拮抗劑’其特徵在於其為抗體且包含序 列 SEQ ID No. 9、10、11、12、13 及 14 ;或 73、74、 75、78、79及 80 ;或 83、84、85 ' 88、89及 90 ;或 93、 94、95、98、99及 100 ;或 103、104、105、1〇8、1〇9及 110之CDRs，其中該等CDRs之一可與上述該等序列之至 少一者相比有一或兩個胺基酸不同，其限制條件為該抗 體保持其結合專一性。 140834.doc 201006492 8. 如請求項1或2之拮抗劑，其特徵在於其為抗體，其中該 抗體之重鏈之可變區包含與序列SEQ ID No. 5、76、 86、96或106具有至少80%—致性之核苷酸序列。 9. 如請求項1或2之拮抗劑，其特徵在於其為抗體，其中該 抗體之輕鏈之可變區包含與序列SEQ ID No. 7、71、 81、91或101具有至少80% —致性之核普酸序列。 10. 如請求項1或2之拮抗劑，其特徵在於其為抗體且其序列 包含多肽序列SEQ ID No· 2及4 ;或6及8 ;或72及77 ;或 82及 87;或 92及 97;或 102及 107。 11. 如请求項1或2之结抗劑，其特徵在於其誘發FGF_R4所控 制之細胞信號傳導路徑之抑制。 12·如請求項1或2之拮抗劑，其特徵在於其誘發血管生成之 抑制。 13. 如請求項〗*?之拮抗劑，其特徵在於其誘發腫瘤細胞增 殖之抑制。 14. 如請求項！或2之拮抗劑，其特徵在於其對fgf_R4之親和 力比其對其他FGF受體之親和力大1〇倍。 15. 如印求項1或2之拮抗劑，其特徵在於其為人類化抗體。 16. 如請求項丨或2之拮抗劑，其特徵在於其為人類抗體。 17. 如請求項15之拮抗劑，其特徵在於其包含與多肽序列 SEQ ID No· 30或32之一具有至少8〇% 一致性之可變輕 鏈。 18. 如請求項15之拮抗劑，其特徵在於其包含與序列IQ No. 34、36或38具有至少一致性之可變重鍵。 140834.doc 201006492 19·如凊求項之枯抗劑’其特徵在於其為抗體且其與細 胞毒性劑結合（conjugated)。 20. — 種如請求項 _E ^ ( 項之拮抗劑之用途，係用於 製造供治療與病m管生成有關之疾病之藥物。、 21. -種如凊求項n9中任一項之抗體的用途，係用於製 造供治療患者之癌症之藥物。 • 22.如請求項21之用途，係用於治療肝癌瘤或任何其他類型 肝癌。 23. 如請求項21之用途，係用於治療胰腺癌。 24. -種醫藥組合物，其包含如請求項！至19中任一項之拮 抗劑及賦形劑。 25. —種細胞株，其產生如請求項丨至19中任一項之抗體。 26. —種產生如請求項中任一項之抗體的方法其特 徵在於其包含培養如請求項25之細胞株。 27· —種藥物，其包含如請求項丨至19中任一項之拮抗劑。 φ 28.種聚核苷酸，其編碼與以下序列之一具有至少8〇β/0 — 致性之多肽：SEQ ID No. 2、4、6、8、9、10、11、 12 、 13 、 14 、 30 、 32 、 34 、 36 、 38 、 72 、 73 、 74 、 75 、 77、78、79、80、82、83、84、85、87、88、89、90、 92、93、94、95、97、98、99、100、103、104、105、 107、108、109或lio 〇 29. —種聚核苷酸’其特徵在於其具有與序列SEq id No. 1 、 3 、 5 、 7 、 29 、 31 、 33 、 35或37 、 71 、 76 、 81 、 86 、 91、96、101或1〇6之一具有至少80%一致性之序列。 140834.doc 201006492 3 0. —種重組載體，其包含如請求項28及29中任一項之核 酸。 31. —種宿主細胞，其包含如請求項30之載體。 140834.doc
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