EA021580B1 - Применение антитела, специфичного к рецептору fgf-r4 - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к применению антитела, специфичного к рецептору FGF-R4, для лечения заболеваний, связанных с патологическим ангиогенезом, а также для ингибирования роста опухоли одновременно с ингибированием ангиогенеза.

Description

Настоящее изобретение относится к специфическим антагонистам рецептора 4 РСР (РСР-К4), позволяющим ингибировать активность этого рецептора. Такие антагонисты представляют собой, в частности, антитела, специфически направленные к рецептору 4 РСР (РСР-К4).

Настоящее изобретение относится также к терапевтическому применению таких антагонистов предпочтительно в области ангиогенеза и в лечении некоторых видов рака.

РСР (факторы роста фибробластов) считаются первыми соединениями, описанными как соединения, способные стимулировать пролиферацию, миграцию и дифференцировку клеток сосудов ίη νίίτο и ίη νίνο. Во многих научных статьях описана индукция ангиогенеза и образования кровеносных капилляров ίη νίίτο и ίη νίνο, обуславливаемая РСР. РСР также участвуют в ангиогенезе опухолей, способствуя образованию кровеносных сосудов, питающих опухоли.

Семейство РСР человека включает в себя по меньшей мере 23 члена, имеющих консервативный центральный домен из 120 аминокислот. Они проявляют свою биологическую активность, взаимодействуя со своими рецепторами, обладающими высоким сродством типа тирозинкиназы (РСР-К) и гепарансульфатов протеогликанов, представляющих собой соединения, содержащиеся на поверхности большей части клеток и внеклеточных матриц (сайты связывания с низким сродством), с образованием тройного комплекса. Некоторые РСР обладают высоким сродством к нескольким РСР-К, тогда как другие факторы специфически активируют один рецептор или одну изоформу рецептора.

Специфический лиганд РСР-К4 был идентифицирован Χίο е! а1. (СуЮктс. 1999, 11:729-35). Этот лиганд, называемый РСР19, представляет собой лиганд, который обладает исключительно высоким сродством к РСР-К4 и связь которого с рецептором зависит от гепарина или гепарансульфатов. РСР19 был идентифицирован у взрослого животного только на уровне гепатоцитов и тонкого кишечника, где он регулирует синтез желчной кислоты печенью. Он может представлять собой фактор роста, действующий во время эмбрионального развития, и может участвовать в развитии зародышевого головного мозга рыб, зебры и человека.

Другие лиганды РСР-К4 описаны как РСР1 или РСР2. Эти лиганды сильно активируют РСР-К4, но не являются специфическими по отношению к РСР-К4: они с связываются также с другими РСР-К (Огπίίζ е! а1., I. Бю1. СЬет., 1996, 271:15292-7).

Активация рецептора РСР-К4 ведет к нескольким типам клеточной сигнализации. Среди таких типов наиболее традиционная форма соответствует осуществлению пути сигнализации по каскаду фосфорилирования в продолжение стимуляции РСР-К4 посредством РСР. Такая индукция ведет к аутофосфорилированию домена тирозинкиназы РСР-К4 и служит инициации пути внутриклеточной сигнализации, зависящей от фосфорилирования других белков сигнализации, таких как АКТ, р44/42, 1ΝΚ и т.д. Такая сигнализация фосфорилированием варьирует в зависимости от типа клеток и корецепторов или адгезионно связанных молекул, присутствующих на поверхности данных клеток (СауаПаго е! а1., Να! Се11 Βίο1. 3/7, 650-657 (2001); 81аб1ег е! а1., Се11 81§ла1. 18/6, 783-794 (2006); Ьш е! а1., I. Βίο1. СЬет., 2007, 14:2727784 (2007)). Другим вариантом сигнализации, представляющимся важным для РСР-К, является вариант, в котором РСР-К4 представляет собой объект интернализации рецептора после активации в сочетании с его лигандом. Данный механизм зависит не от активности тирозинкиназы рецептора, а от короткой последовательности в С-концевом домене РСР-К4 (КЬпдепЬегд е! а1., 1. Се11 δοί., 113/Р!10:1827-1838 (2000)).

В литературе описаны четыре различные формы РСР-К4: полноразмерная форма с 2 полиморфными вариантами в положении 388, а именно РСР-К4 С1у388, представляющая собой нормальную форму рецептора, и форма Аг§388, описанная в отношении нескольких опухолей (Вапде е! а1., Сапсег Кек. 62/3, 840-847 (2002); δρίηοΗ е! а1., I. СЬп. Οηεο1. 23, 7307-7311 (2005); 8!аб1ег е! а1., Се11 81§па1. 18/6, 783-794 (2006)). Также была обнаружена растворимая форма, экспрессируемая в опухолевых клетках молочных желез (Така1кй е! а1., ВюсЬет. Βίορίτνκ. Кек. Ссттип., 2000, 267:658-62). Четвертая форма, усеченная во внеклеточной части, была описана в случае некоторых гипофизарных аденом (Εζζа! е! а1., 1. СЬп. ПкекЕ 2002, 109:69-78).

РСР-К4 экспрессируется главным образом в тканях, представляющих собой производные эндодермы, таких как желудочно-кишечный тракт, поджелудочная железа, печень, мышцы и надпочечник.

Из литературных источников РСР-К4 известен как рецептор, играющий в клетках несколько ролей, из числа которых три главные роли описаны ниже.

Во-первых, этот рецептор участвует в регуляции различных процессов дифференцировки клеток ίη νίίτο и ίη νίνο, таких как дифференцировка и регенерация скелетных мышц, дифференцировка мезенхиматозных тканей, остеогенез, а также в формировании альвеол в ходе постнатального развития печени.

Во-вторых, описана причастность РСР-К4 к регуляции гомеостаза желчной кислоты и холестерина и участие в регуляции ожирения. Кроме того, равновесие между продуцированием желчной кислоты и холестерина регулируется РСР-К4 ίη νί!το и ίη νίνο.

В-третьих, РСР-К4 участвует в некоторых опухолевых феноменах, таких как развитие гепатоцеллюлярных карцином или раковых опухолей толстой кишки, в пролиферации клеток фиброаденом молочных желез, эпителиальных клеток раковых опухолей молочных желез, в подвижности клеток карцином молочных желез или колоректальных карцином. Причастность РСР-К4 к опухолям преимуществен- 1 021580 но связана с явлением полиморфизма (О1у388Агд), коррелирующего с прогрессированием развития опухолей молочных желез и колоректальных опухолей (Вайде е! а1., Сапсег Кек. 62/3, 840-847, 2002), опухолей предстательной железы (Аапд е! а1., СЬп. Сапсег Кек. 10/18, 6169-6178, 2004) или опухолей печени (ЫюНо1ек е! а1., Ат. 1. Ра!Но1. 160/6, 2295-307, 2002). Данный полиморфизм связан также с плохим прогнозом в случае сарком (МоптоЮ е! а1., Сапсег, 98/10, 2245-2250, 2003), аденокарцином легкого (8ршо1а е! а1., 1. СЬп. Опсо1. 23, 7307-7311, 2005) или сквамозных сарком (ба Сок!а Апбтабе е! а1., Ехр. Мо1. Ра!Ьо1.

82, 53-7, 2007). Сверхэкспрессия РСР-К4 описана также в случае некоторых линий раковых опухолей поджелудочной железы (8НаН е! а1., Опсодепе, 21/54, 8251-61, 2002) и коррелируется со злокачественностью астроцитом (Уатаба е! а1., Ыеиго1. Кек. 24/3, 244-8, 2002). Кроме того, использование моноклонального антитела анти-РСР19 в моделях ш νί\Ό ксенотрансплантатов опухолей толстой кишки или в моделях гепатоцеллюлярных карцином, показывает, что инактивация РСР19 и, таким образом, блокирование активации РСР-К4 может быть благоприятным в лечении рака толстой кишки или печени.

В литературных источниках допускают, что пары РСР/РСР-К1 и РСР/РСР-К2 принимают участие в образовании новых кровеносных сосудов в контексте нормы или патологии. Однако потенциальная причастность РОР-К4 к регуляции этого клеточного феномена до настоящего времени не была исследована. На практике, до настоящего времени предполагалось, что активация ангиогенеза опосредована через РОР-К1 и/или РОР-К2 (Ргек!а е! а1., Су!окше ОтоМН Рас!от Кеу., 2005, 16:159-78).

Примеры антагонистов РОР-К4 описаны в литературе, в частности, малые молекулы, не нацеленные специально на РОР-К4, но также вызывающие нежелательные эффекты. Так, например, малые химические молекулы, являющиеся ингибиторами домена тирозинкиназы и ингибирующие некоторые рецепторы РОР-К, а также другие рецепторы тирозинкиназы были описаны ТНотркоп е! а1., (ТНотркоп е! а1., 1. Меб. СНет.. 2000, 43:4200-11). Малые химические молекулы, ингибирующие РОР-К за счет ассоциации с их внеклеточной частью, также были описаны в АО 2007/080325.

Были исследованы также антитела, такие как антитела анти-РОРК1 и/или анти-РОРК4, описанные в международных заявках АО 2005/066211 и АО 2008052796 или СНеп е! а1., (НуЪпбота, 24/3, 152-159, 2005). В АО 2005/037235 описаны антитела-антагонисты РОР-К для лечения ожирения и диабета. С другой стороны, антитела-агонисты анти-РОР-К4 описаны в АО 03/063893.

Объектом настоящего изобретения является антагонист рецептора РОР-К4, отличающийся тем, что он специфически связывается с этим рецептором.

Указанный антагонист предпочтительно представляет собой специфическое антитело к рецептору РОР-К4.

В одном из вариантов осуществления антагонист, являющийся объектом настоящего изобретения, связывается с доменом Ό2-Ό3 рецептора РОР-К4. В предпочтительном варианте осуществления антагонист, являющийся объектом настоящего изобретения, связывается с доменом Ό2 рецептора РОР-К4. В более предпочтительном варианте осуществления антагонист связывается с последовательностью 8ЕО ГО ЫО:70.

Специфический антагонист рецептора РОР-К4 в отношении рецептора РОР-К4 предпочтительно имеет значение К_с, определенное по методике В1асоте, меньше 10Е^-8 М, меньше 5х10Е^-9М, меньше 2х 10Е^-9 М или меньше 1х 10Е^-9 М.

В предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист рецептора РОР-К4 одновременно является активным против РОР-К4 человека и РОР-К4 мыши.

В другом предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист рецептора РОР-К4 одновременно является активным против РОР-К4 человека, РОР-К4 мыши и РОР-К4 крысы.

В предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РОР-К4, содержит по меньшей мере один СЭК, представляющий собой последовательность, идентичную последовательности 8ЕО ГО ЫО: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 73, 74, 75, 78, 79, 80, 83, 84, 85, 88, 89, 90, 93, 94, 95, 98, 99, 100, 103, 104, 105, 108, 109 или 110, или по меньшей мере один СЭК, последовательность которого отличается одной или двумя аминокислотами по сравнению с последовательностями 8ЕО ГО ЫО: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 73, 74, 75, 78, 79, 80, 83, 84, 85, 88, 89, 90, 93, 94, 95, 98, 99, 100, 103, 104, 105, 108, 109 или 110, при том, что антитело сохраняет свою специфичность связывания.

В особо предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом РОР-К4, содержит СЭР последовательности 8ЕО ГО ЫО: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 73, 74, 75, 78, 79, 80,

83, 84, 85, 88, 89, 90, 93, 94, 95, 98, 99, 100, 103, 104, 105, 108, 109 или 110, или СЭК, последовательности которых отличаются одной или двумя аминокислотами по сравнению соответственно с указанными последовательностями, если только это обстоятельство не изменяет специфичность связывания антитела с рецептором РОР-К4.

В предпочтительном варианте осуществления антитела по настоящему изобретению содержат по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, причем тяжелая цепь содержит три последовательности СЭК, имеющие последовательности аминокислот, выбранные из группы, в которую входят 8ЕО ГО ЫО: 9, 10 и 11, или 73, 74 и 75, 83, 84 и 85, или 93, 94 и 95, или 103, 104 и 105, причем указанная легкая цепь содержит три последовательности СЭК, имеющие последовательности ами- 2 021580 нокислот, выбранные из группы, в которую входят 8ЕЦ ГО N0: 12, 13 и 14, или 78, 79 и 80, или 88, 89 и 90, или 98, 99 и 100, или 108, 109 и 110.

В предпочтительном варианте осуществления вариабельные части тяжелой цепи антитела, являющегося специфическим антагонистом Р0Р-К.4, содержат последовательность, идентичную по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 6, 77, 87, 97 или 107.

В предпочтительном варианте осуществления вариабельные части легкой цепи антитела, являющегося специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4, содержат последовательность, идентичную по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 8, 72, 82, 92 или 102.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и имеющему тяжелую цепь, содержащую вариабельную часть, кодируемую нуклеотидной последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 5, 76, 86, 96 или 106.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и имеющему легкую цепь, содержащую вариабельную часть, кодируемую нуклеотидной последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 7, 71, 81, 91 или 101.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и имеющему тяжелую цепь, содержащую вариабельную часть полипептидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 6, 77, 87, 97 или 107.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и имеющему легкую цепь, содержащую вариабельную часть полипептидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 8, 72, 82, 92 или 102.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и содержащему последовательности, кодируемые нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 5 и 7, или 71 и 76, или 81 и 86, или 91 и 96, или 101 и 106.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и содержащему полипептидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 6 и 8, или 72 и 77, или 82 и 87, или 92 и 97, или 102 и 107.

В предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4, содержит последовательности, идентичные по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательностям 8ЕЦ ГО N0: 2 и/или 8ЕЦ ГО N0: 4, или 8ЕЦ ГО N0: 72 и/или 8ЕЦ ГО N0: 77, или 8ЕЦ ГО N0: 82 и/или 8ЕЦ ГО N0: 87, или 8ЕЦ ГО N0: 92 и/или 8ЕЦ ГО N0: 97, или 8ЕЦ ГО N0: 102 и/или 8ЕЦ ГО N0: 107.

В особо предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4, содержит тяжелую цепь, кодируемую нуклеотидной последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 1.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и содержащему тяжелую цепь полипептидной последовательности, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и содержащему легкую цепь, кодируемую нуклеотидной последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 3.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и содержащему легкую цепь полипептидной последовательности, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 4.

Настоящее изобретение относится также антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и содержащему последовательности, кодируемые нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 1 и 3.

В более предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4, содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность 8ЕЦ ГО N0: 2, и легкую цепь, содержащую последовательность 8ЕЦ ГО N0: 4.

Антитело, состоящее из тяжелой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2 и легкой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 4, в дальнейшем описании обозначается как 40-12.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения специфические антитела к Р0Р-К.4 активны одновременно в отношении Р0Р-К.4 человека, Р0Р-К.4 мыши и Р0Р-К.4 крысы.

В предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист рецептора Р0Р-К.4 индуцирует ингибирование клеточных путей АКТ/р38.

В предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист рецептора Р0Р-К.4 индуцирует ингибирование клеточных путей Егк1/2.

В предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист рецептора Р0Р-К.4 индуцирует ингибирование путей клеточной сигнализации, регулируемых Р0Р-К.4.

В другом предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист рецептора Р0Р-К.4

- 3 021580 индуцирует ингибирование клеточной пролиферации опухолей.

В другом предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист рецептора РСР-К4 индуцирует ингибирование ангиогенеза.

В другом особо предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист рецептора РОР-К.4 имеет сродство к РСР-К4, в 10 раз превышающее его сродство к другим рецепторам РСР.

В особо предпочтительном варианте осуществления антитело по настоящему изобретению представляет собой гуманизированное антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСРК4.

В одном из вариантов осуществления гуманизированное антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, содержит легкую цепь, вариабельная часть которой кодируется нуклеотидной последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 29 или последовательности 8ЕЦ ГО N0: 31.

В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, содержит легкую цепь, вариабельная часть которой идентична по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 30 или последовательности 8ЕЦ ГО N0: 32.

В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, содержит легкую цепь, вариабельная часть которой кодируется последовательностью, идентичной нуклеотидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 29 или последовательности 8ЕЦ ГО N0: 31.

Настоящее изобретение относится также к гуманизированному антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4 и содержащему тяжелую цепь, вариабельная часть которой кодируется последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 33, последовательности 8ЕЦ ГО N0: 35 или последовательности 8ЕЦ ГО N0: 37.

Настоящее изобретение относится также к гуманизированному антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4 и содержащему тяжелую цепь, вариабельная часть которой идентична по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 34, последовательности 8ЕЦ ГО N0: 36 или последовательности 8ЕЦ ГО N0: 38.

Настоящее изобретение относится также к гуманизированному антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4 и содержащему тяжелую цепь, кодируемую нуклеотидной последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 33 и/или 8ЕЦ ГО N0: 35 и/или 8ЕЦ ГО N0: 37.

Настоящее изобретение относится также к гуманизированному антителу, которое является специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, и последовательности которого, гуманизированы последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 30 или 32, используют в комбинации с последовательностями, гуманизированными последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 34, 36 или 38.

В другом варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, содержит 0ΌΚ последовательности 8ЕЦ ГО N0: 73, 74, 75, 78, 79 и 80, или 0ΌΚ, последовательности которых отличаются одной или двумя аминокислотами, по сравнению соответственно с указанными последовательностями, если только это обстоятельство не изменяет специфичность связывания антитела с рецептором РСР-К4.

В другом варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, содержит 0ΌΚ последовательности 8ЕЦ ГО N0: 83, 84, 85, 88, 89 и 90, или 0ΌΚ, последовательности которых отличаются одной или двумя аминокислотами, по сравнению соответственно с указанными последовательностями, если только это обстоятельство не изменяет специфичность связывания антитела с рецептором РСР-К4.

В другом варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, содержит 0ΌΚ последовательности 8ЕЦ ГО N0: 93, 94, 95, 98, 99 и 100, или 0ΌΚ, последовательности которых отличаются одной или двумя аминокислотами по сравнению соответственно с указанными последовательностями, если только это обстоятельство не изменяет специфичность связывания антитела с рецептором РСР-К4.

В другом варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, содержит 0ΌΚ последовательности 8ЕЦ ГО N0: 103, 104, 105, 108, 109 и 110, или 0ΌΚ, последовательности которых отличаются одной или двумя аминокислотами, по сравнению соответственно с указанными последовательностями, если только это обстоятельство не изменяет специфичность связывания антитела с рецептором РСР-К4.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, содержит 0ΌΚ последовательности 8ЕЦ ГО N0: 83, 84, 85, 88, 89 и 90.

В предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РСР-К4, представляет собой антитело человека, в котором вариабельные части тяжелой цепи содержат нуклеотидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 76, 86, 96 или 106.

В предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом

- 4 021580 рецептора РОР-К.4, представляет собой антитело человека, в котором вариабельные части легкой цепи содержат нуклеотидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 71, 81, 91 или 101.

Настоящее изобретение относится также к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4 и имеющему тяжелую цепь, содержащую вариабельную часть, кодируемую белковой последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 77, 87, 97 или 107.

Настоящее изобретение относится также к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4 и имеющему легкую цепь, содержащую вариабельную часть, кодируемую белковой последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 72, 82, 92 или 102.

Настоящее изобретение относится также к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4 и содержащему последовательности, кодируемые нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 71 и 76 или нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 81 и 86, или нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 91 и 96, или нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 101 и 106.

Настоящее изобретение относится также к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4 и содержащему полипептидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 72 и 77 или полипетидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 82 и 87, или полипетидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 92 и 97, или полипетидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 102 и 107.

В предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4, содержит последовательности, идентичные по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательностям 8ЕЦ ГО N0: 72 и/или 8ЕЦ ГО N0: 77.

В другом предпочтительном варианте осуществления антитело человека, являющееся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4, содержит последовательности, идентичные по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательностям 8ЕЦ ГО N0: 82 и/или 8ЕЦ ГО N0: 87.

В другом предпочтительном варианте осуществления антитело человека, являющееся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4, содержит последовательности, идентичные по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательностям 8ЕЦ ГО N0: 92 и/или 8ЕЦ ГО N0: 97.

В другом предпочтительном варианте осуществления антитело человека, являющееся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4, содержит последовательности, идентичные по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательностям 8ЕЦ ГО N0: 102 и/или 8ЕЦ ГО N0: 107.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4 и содержащему легкую цепь, кодируемую нуклеотидной последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 82, и легкую цепь полипептидной последовательности, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности 8ЕЦ ГО N0: 87.

Более предпочтительно настоящее изобретение относится к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4 и содержащему последовательности, кодируемые нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 82 и 87.

Антитело, состоящее из тяжелой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 77 илегкой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 72, в дальнейшем описании обозначается как клон 8.

Антитело, состоящее из тяжелой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 87 илегкой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 82, в дальнейшем описании обозначается как клон 31.

Антитело, состоящее из тяжелой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 97 и легкой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 92, в дальнейшем описании обозначается как клон 33.

Антитело, состоящее из тяжелой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 107 илегкой цепи последовательности 8ЕЦ ГО N0: 102, в дальнейшем описании обозначается как клон 36.

Объем охраны настоящего изобретения не ограничивается антителами, содержащими эти последовательности. На практике любые антитела, которые специфически связываются с РОР-К.4, оказывая антагонистическое действие на этот рецептор, входят в объем охраны настоящего изобретения.

Настоящее изобретение относится также к антителу, являющемуся специфическим антагонистом рецептора РОР-К.4 и конъюгированному с цитотоксическим агентом.

Настоящее изобретение относится к применению специфического антагониста рецептора РОР-К.4 в лечении заболеваний, связанных с ангиогенезом.

Настоящее изобретение относится к применению специфического антагониста рецептора РОР-К.4 в лечении рака.

Настоящее изобретение относится к применению специфического антагониста рецептора РОР-К.4 в лечении гепатокарцином или любых других видов рака печени.

Настоящее изобретение относится к применению специфического антагониста рецептора РОР-К.4 в лечении рака поджелудочной железы.

Настоящее изобретение относится к специфическому антителу к рецептору РОР-К.4, который может

- 5 021580 быть использован одновременно в лечении заболеваний, связанных с ангиогенезом, и в лечении гепатокарцином или любых других видов рака печени.

Настоящее изобретение относится к специфическому антителу к рецептору РОР-К4, который может быть использован одновременно в лечении заболеваний, связанных с ангиогенезом, в лечении гепатокарцином или любых других видов рака печени, в лечении рака поджелудочной железы, органов желудочно-кишечного тракта или любых других органов, экспрессирующих РОР-К.4.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к применению антитела, специфически направленного к РОР-К4 (без перекрестной реакции с РОР-К1, К2 или К3), для ингибирования ангиогенеза и роста опухолей.

Неожиданным образом авторами было обнаружено, что РОР-К4 играет активную и специфическую роль в регуляции ангиогенеза.

Такая функция РОР-К4 ранее не была обнаружена или предложена. Таким образом, этот рецептор может быть использован в качестве мишени для лечения патологий, при которых имеет место ангиогенная дисфункция. Лиганды РОР-К4, способные модулировать его активность, представляют собой, таким образом, потенциальные вещества терапевтического действия в случае многих патологий, связанных с ангиогенезом.

Таким образом, настоящее изобретение может быть использовано в лечении любых патологий, вызывающих нарушение регуляции ангиогенеза и требующих его ингибирования. Релевантные патологии могут представлять собой рак, требующий применения антагонистов по настоящему изобретению в качестве ингибиторов ангиогенеза опухолей, или патологии, при которых нарушение регуляции ангиогенеза описывается как возрастная дегенерация желтого пятна или ΌΜΕΆ, воспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит, остеоартрит, колиты, язвы или любые воспалительные заболевания кишечника, атеросклероз или ожирение. Применение таких антител также пояснено в случае ингибирования роста опухолей. Таким образом, антагонисты по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения некоторых раковых заболеваний, вызывающих нарушение регуляции РОР-К4, и более предпочтительно раковых заболеваний печени, толстой кишки, молочной железы,легкого, предстательной железы, поджелудочной железы, кожи или пищевода.

Одним из наибольших преимуществ антагонистов по настоящему изобретению является выбор в качестве специфической мишени рецептора РОР, в данном случае РОР-К4. Такая специфичность позволяет ограничить нежелательные эффекты, которые могут вызывать малые химические молекулы, являющиеся ингибиторами домена тирозинкиназы. Кроме того, поскольку РОР-К4 экспрессируется не повсеместно, а экспрессируется, в частности, на эндотелиальных клетках, таких как клетки печени, желчного пузыря, молочных желез, предстательной железы, яичника, поджелудочной железы, почек, это обстоятельство предоставляет в распоряжение способ лечения заболеваний, связанных с нарушением регуляции активности РОР-К4, с ограничением вторичных явлений.

Под антагонистом понимают любой лиганд, способный уменьшить или полностью ингибировать активность РОР-К4. Такое соединение-антагонист также называют ингибитором РОР-К4.

Такой антагонист может представлять собой любой лиганд РОР-К4, такой как химическая молекула, рекомбинантный белок, олигосахарид, полисахарид, олигонуклеотид или антитело, способные специфически связываться с рецептором РОР-К4, исключая любые другие РОРК.

Таким образом, объектом настоящего изобретения является специфический антагонист РОР-К4. Согласно настоящему изобретению под антагонистом, специфически связывающимся с РОР-К4, понимают лиганд, который не связывается с другими рецепторами РОР, а именно с РОР-К1, РОР-К2 или РОРК3. В частности, специфическое антитело к РОР-К4 представляет собой антитело, которое не вступает в перекрестную реакцию с РОР-К1, РОР-К2 или РОР-К3.

Под специфической связью понимают по меньшей мере 10-кратное различие между силой связи с одним рецептором по сравнению с другим, в данном случае между связью с РОР-К4 и возможными связями с РОР-К1, РОР-К2 или РОР-К3.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения лиганд РОР-К4 представляет собой антитело.

Под антителом понимают антитела или производные молекулы любого типа, такие как поликлональные и моноклональные антитела. В число производных молекул моноклональных антител входят гуманизированные антитела, антитела человека, мультиспецифические антитела, химерные антитела, фрагменты антител, нанотела.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения специфический антагонист РОР-К4 представляет собой поликлональное антитело.

Поликлональное антитело представляет собой антитело, полученное в смеси антител, происходящих от нескольких клонов лимфоцитов В и распознающих серию различных эпитопов.

В предпочтительном варианте осуществления специфический антагонист РОР-К4 представляет собой моноклональное антитело.

Моноклональное антитело представляет собой антитело, полученное исходя из популяции, по существу, однородных антител, происходящей от одного типа лимфоцитов В и амплифицированной

- 6 021580 клонированием. Антитела, образующие такую популяцию, являются идентичными, за исключением возможных естественных мутаций, которые могут содержаться в очень малом количестве. Такие антитела направлены против одного эпитопа и, таким образом, являются высокоспецифическими.

Под эпитопом понимают сайт антигена, с которым связывается антитело. Если антиген представляет собой полимер, такой как белок или полисахарид, то эпитоп может быть образован смежными или несмежными остатками.

В предпочтительном варианте осуществления по настоящему изобретению антитело-антагонист анти-РОР-К4 связывается с эпитопом, принадлежащим домену Ό2-Ό3 рецептора РОР-К4.

В более предпочтительном варианте антитело связывается с эпитопом, входящим в домен, содержащий аминокислоты 144-365 рецептора РОР-К4.

В наиболее предпочтительном варианте антитело связывается с эпитопом, входящим в домен Ό2 рецептора РОР-К4, причем этот эпитоп соответствует аминокислотам 145-242, описанным в последовательности 8ΕΟ ГО N0:70.

Антитело, называемое также иммуноглобулиновым, состоит из двух одинаковых тяжелых цепей (УН) и двух одинаковых легких цепей (УЪ), связанных дисульфидным мостиком. Каждая цепь содержит константную и вариабельную области. Каждая вариабельная область содержит три сегмента, называемых областями, определяющими комплементарность (СОК) или гипервариабельными областями, которые являются принципиально ответственными за связь антигена с эпитопом.

Термин УН относится к вариабельным областям тяжелой цепи иммуноглобулина антитела, включающего в себя тяжелые цепи фрагментов Εν, 8сРу, άδΡν, РаЪ, РаЪ' или Р(аЪ)'.

Термин УЪ относится к вариабельным областям легкой цепи иммуноглобулина антитела, включающего в себя легкие цепи фрагментов Εν, δсРν, άδΕν, РаЪ, РаЪ' или Р(аЪ)'.

Под фрагментом антитела понимают любую его часть: РаЪ (антигенсвязывающий фрагмент), Εν, δсРν (одиночная цепь Р^, Рс (кристаллизуемый фрагмент). Данные функциональные фрагменты предпочтительно представляют собой фрагменты типа Рν, δсРν, РаЪ, Р(аЪ')₂, РаЪ', δсРν-Рс или димерные тела, имеющие, в общем случае, такую же специфичность связывания, что и моноклональное, химерное или гуманизированное антитело, от которого они происходят. Согласно настоящему изобретению фрагменты антител по настоящему изобретению могут быть получены исходя из моноклональных, химерных или гуманизированных антител такими способами, как гидролиз ферментами, такими как пепсин или папаин, и/или расщеплением дисульфидных мостиков химическим восстановлением.

Под областью или областями СОК понимают гипервариабельные области тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов, такие как области, определенные КаЪа! е! а1. (КаЪа! е! а1., δαμιοικοδ οί ргоЮпъ οί 1ттиио1одюа1 ίηΙΟΓΟδΙ. 51 Ей., И8 ОсраПтсШ οί НеаИЪ апй Нитап δθτνκθδ, ΝΙΗ, 1991, и последующие издания). Существуют 3 СОК тяжелой цепи и 3 СОК легкой цепи. Термин область или области СОК используется в настоящем описании для обозначения в соответствующих случаях одной или нескольких из таких областей или совокупности таких областей, содержащих большинство остатков аминокислот, ответственных за аффинную связь антитела с антигеном или эпитопом, распознаваемым им. Наиболее консервативные области вариабельных доменов называют областями или последовательностями РК (Ггате\уогк (каркас)), или каркасными областями.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения специфический антагонист Р0Р-К4 представляет собой химерное антитело.

Под химерным антителом понимают антитело, в котором константная область или ее часть изменена, заменена или замещена, так что вариабельная область оказывается связанной с константной областью, которая отличается видом или принадлежит к другому классу или подклассу антител.

Под химерным антителом понимают также антитело, в котором вариабельная область или ее часть изменена, заменена или замещена так, что константная область оказывается связанной с вариабельной областью, которая отличается видом или принадлежит к другому классу или подклассу антител.

Способы получения химерных антител известны специалистам в данной области техники, см., например, Μοττίδοη, 1985, §аепсе, 229:1202; 0ί е! а1., 1986, Βίο ТесНшс-Цв^ 4:214; Οί1^δ е! а1., 1989, I. 1ттипо1. ΜеΐЪοйδ, 125:191-202; патенты И8 5807715, И8 4816567 и И8 4816397.

Такие химерные версии антител могут представлять собой слияние вариабельных частей УЪ и УН с константными частями Скарра и СН (Ι§Ο1) человеческой природы для получения моноклонального химерного антитела.

Часть СН (Ι§Ο1) также может быть модифицирована точечными мутациями для повышения сродства фрагмента Рс к рецептору РсуКШа и, тем самым, повышения эффекторных функций антитела (Ъа/аг е! а1., 2006, Ргос. №·ιΐΕ Асай. 8ск И8А, 103: 4005-4010; 5>1ауепЪадеп е! а1., 2007, Сапсег ^δ. 67: 8882-8890).

Настоящее изобретение относится к гуманизированным версиям антител.

Под гуманизированным антителом понимают антитело, которое содержит, главным образом, иммуноглобулиновые последовательности человека. Этот термин в общем случае относится к отличному от человеческого иммуноглобулину, модифицированному введением последовательностей человека или остатков, содержащихся в последовательностях человека.

В общем случае гуманизированные антитела содержат один или, как правило, два вариабельных

- 7 021580 домена, в которых все или часть областей СЭР соответствуют исходным частям родственной последовательности, отличной от последовательности человека, и в которых все или часть областей РК представляют собой области, происходящие от иммуноглобулиновой последовательности человека. При этом гуманизированное антитело может содержать по меньшей мере часть константного участка иммуноглобулина (Рс), в частности константного участка выбранного референтного иммуноглобулина человека.

Таким образом, пытаются получить антитело, которое является наименее иммуногенным в отношении человека. Также можно заменять одну или две аминокислоты одного или нескольких СИК аминокислотами, являющимися менее иммуногенными в отношении человека, существенно не уменьшая специфичность связывания антитела с РСР-К4. Остатки каркасных областей также могут не представлять собой человеческие, и их можно не модифицировать, если они не способствуют иммуногенному потенциалу антитела.

Существует несколько известных специалистам в данной области техники способов гуманизации для модификации родственного антитела, отличающегося от антитела человека, до антитела, являющегося менее иммуногенным в отношении человека. Г лобальная идентичность последовательностей антителам человека не является обязательно необходимой. На практике глобальная идентичность последовательности необязательно является предсказуемым индикатором пониженной иммуногенности, а модификация ограниченного числа остатков может приводить к гуманизированным антителам, обладающим иммуногенным потенциалом, являющимся сильно ослабленным в отношении человека (Мо1еси1аг 1ттипо1оду (2007) 44, 1986-1998).

К различным способам относятся, например, внедрение СИК (трансплантация) (ЕРО 0239400, \УО 91/09967, И8 5530101 и ИЗ 5585089), ресурфейсинг (ЕРО 0592106, ЕРО 0519596; Рак1ап, 1991, Мо1ес. 1тт. 28 (4/5): 489-498; З!иктска е! а1., 1994, Рго!. Епд. 7 (6): 805-814; Кодикка е! а1., 1994, ΡΝΆδ 91:969973) или также смешивание цепей (ИЗ 5565332).

Настоящее изобретение предпочтительно относится к гуманизированным антителам, вариабельные части которых модифицированы согласно описанным ниже технологиям.

Легкие и тяжелые цепи, являющиеся наиболее сходными с соответствующими цепями антитела мыши анти-РОР-К4 40-12, идентифицируют сравнением с базой Рго!ет Иа1а Вапк (Н.М. Вегтап, 1. \Уе81Ьгоок, Ζ. Репд, О. ОШкапк, Τ.Ν. ВНа1. Н. ^е1881д, Ι.Ν. ЗЫпкуа1оу, Р.Е. Войте. №с1ею Ашк8 Кекеагск, 2000, 28:235-242). Выравнивание последовательностей осуществляют, используя алгоритм ВЬАЗТ (1. Мо1. Вю1. 1990, Ос!. 215:403-410). Речь идет о трехмерных структурах, соответствующих кодам РИВ 1ΝΏΜ & 1ΕΤΖ и соответственно используемых для конструирования моделей по гомологии легких и тяжелых цепей вариабельных доменов. Такие трехмерные модели затем уточняют, минимизируя их потенциальную энергию по стандартной методике, реализованной в программе МОЕ (Мо1еси1аг Орегакпд Епу1гоптеп!, СНет1са1 Сотрикпд Огоир, Квебек, Канада). Затем посредством программы АтЬег осуществляют молекулярно-динамическое моделирование (ИМ), исходя из таких минимизированных трехмерных моделей антител (И.А. Саке, Т.Е. Скеа!кат, III, Т. Иагкеп, Н. ОоЫке, К. Ьио, К.М. Мег/, 1г., А. Опийтеу, С. ЗштегИпд, В. \Уапд апк К. \Уоок8. 1. Сотри!а!. Скет. 2005, 26:1668-1688). Такое моделирование осуществляют с гармоническими напряжениями, приложенными к атомам белкового каркаса, при температуре 500 К в течение 1,1 нс в модели неявного растворителя, такого как растворитель, реализованный в обобщенном способе Борна (ОаШссПо & Ьеуу, 1. Сотри!. Скет. 2004, 25:479-499). Таким образом, таким первичным моделированием получают десять различных конформаций из расчета одной трехмерной конформаций на каждые сто пикосекунд в течение последней наносекунды моделирования. Затем с каждой из полученных десяти различных конформаций осуществляют молекулярно-динамическое моделирование без приложения напряжений к белковому каркасу при температуре 27°С в течение 2,3 нс в модели неявного растворителя, такого как растворитель, реализованный в обобщенном способе Борна. К связям, вовлекающим атомы водорода, прикладывают напряжения по алгоритму ЗНАКЕ (Ваг1к е! а1., 1. Сотр. Скет., 1995, 16:1192-1209), один шаг длится 1 фемтосекунду, и моделирование осуществляют согласно уравнению Ланжевена при постоянном объеме и температуре 27°С. Затем в каждой из десяти молекулярно-динамических моделей последние две тысячи конформаций, полученных с частотой в одну пикосекунду, используют для количественного определения смещения положений атомов для каждой аминокислоты гуманизируемого антитела по сравнению со средней конформацией (называемой медоидом) аминокислоты. Совокупность анализа, описанного ниже, осуществляют на скриптовом языке Заепкйс Уес!ог Ьапдиаде (ЗУБ) программы МОЕ. Конформация-медоид аминокислоты представляет собой исходную молекулярно-динамическую конформацию, являющуюся наиболее близкой к средней конформаций, рассчитанной, исходя из положений атомов всех конформаций аминокислоты. Расстояние, используемое для детектирования конформации-медоида, равно среднеквадратичному отклонению скалярных расстояний между атомами двух конформаций аминокислоты. Аналогичным образом, смещение положений атомов конформаций аминокислоты по сравнению с конформацией-медоидом количественно определяют, рассчитывая среднеквадратичное отклонение скалярных расстояний между атомами аминокислоты смоделированной конформаций и теми же атомами конформации-медоида. Далее сравнивая среднеквадратичное отклонение положений атомов аминокислоты (ί), являющейся средней в совокупности десяти молекулярно-динамических моделей (Ρί), со среднеквадратичным отклонением положений

- 8 021580 всех аминокислот антитела, являющегося средним для совокупности десяти молекулярно-динамических моделей (Рт), принимают решение, является ли аминокислота достаточно гибкой, чтобы рассматривать ее в качестве кислоты, которая может потенциально взаимодействовать с рецепторами Т-клеток и провоцировать активацию иммунной системы. Аминокислоту (ί) рассматривают в качестве гибкой, если ее показатель гибкости Ζί превышает 0,15 при расчете по формуле: 21=(Р1-Рт)/Рт. Таким образом, были идентифицированы как гибкие 45 аминокислот в вариабельном домене антитела, за исключением участка, определяющего комплементарность к антигену (К/ОС), и его непосредственного окружения. Непосредственное окружение КОС определяют как любую аминокислоту, в которой атом углерода в αположении располагается на расстоянии 5 А или меньше от атома углерода в α-положении КОС.

Затем перемещения 60 наиболее гибких аминокислот антитела в течение 20 нс (10x2 нс) моделирования сравнивают с перемещениями аминокислот, соответствующих 49 моделям по гомологии терминальных последовательностей антитела человека, для каждой из которых были реализованы десять молекулярно-динамических моделей (10x2 нс) по той же методике. 60 наиболее гибких аминокислот не входят в область, определяющую комплементарность к антигену (КОС), и ее непосредственное окружение. 49 моделей терминальных последовательностей антитела человека были построены систематическим комбинированием 7 наиболее часто встречающихся легких цепей человека (ук1, ук2, ук3, ук4, у1атЬба1, у1атЬба2, у1атЬба3) и 7 наиболее часто встречающихся тяжелых цепей человека (уЫа, ук1Ь, ν1ι2, ук3, ν1ι4, ук5, ν1ι6) (Иис1е1с Ас1Йз Кезеагск, 2005, Уо1. 33, ОашЬазе 1ззие Ό593-Ό597).

Сходство гуманизируемого антитела с 49 моделями терминальных последовательностей человека количественно определяют, калибруя положения некоторых атомов 60 гибких аминокислот антитела, в ходе десяти вариантов молекулярно-динамического моделирования посредством одной и той же трехмерной кубической решетки с разрешением 1 А. В данном случае, имеется в виду четырехмерное сходство. Используемая трехмерная решетка содержит 445740 точек, и ее инициализируют, исходя из трехмерной структуры антитела человека, соответствующего коду ΡΌΒ 8РАВ. Структуру 8РАВ используют также для позиционирования всех конформаций антитела, калибруемых в трехмерной решетке. С этой целью молекулярно-динамическую конформацию-медоид антитела накладывают на структуру 8РАВ. Такое наложение представляет собой выравнивание моментов инерции двух конформаций с последующей оптимизацией скалярных расстояний между атомами углерода в α-положении обеих конформаций. Все другие молекулярно-динамические конформаций антитела накладывают на конформацию-медоид таким же способом. Осуществляют два типа калибровки с получением двух вариантов сходства (электростатическое сходство и сходство по липофильности) для пары сравниваемых антител, которые суммируют для получения тотального сходства. При первой, электростатической, калибровке рассматривают все атомы боковой цепи аминокислоты. Значение в точке х решетки рассчитывают, используя в отношении атомов боковой цепи аминокислоты трехмерную функцию Гаусса £(х), которую уравновешивают с электростатическим зарядом атома, согласно описанию в силовом поле АтЬег99 (С1ер1ак 1. е! а1., 1. Сотр. Скет. 2001, 22: 1048-1057). Функция £(х) ориентирована по 3 осям декартовых координат и соответствует формуле /(*) = (ул/2к )³ х ехр( )

2У где х и и представляют собой декартовы координаты точки х решетки и эталонного атома соответственно, 5=г/1,6 (г означает ковалентный радиус атома). Калибровку повторяют для всех конформаций аминокислоты и полученные результаты усредняют по всем точкам х трехмерной решетки. При второй калибровке по лиофильности рассматривают только липофильные атомы боковой цепи аминокислоты. Значение в точке х решетки рассчитывают с помощью такой же функции Гаусса £(х) без уравновешивания. Таким образом, оба множества молекулярно-динамических конформаций обоих сравниваемых антител калибруют по одной и той же трехмерной решетке. Электростатическое сходство (з1т-е1ес) 2 антител а и Ь рассчитывают по формуле

Сходство по липофильности рассчитывают по такой же формуле по конечным данным калибровки по липофильности, описанной выше.

Таким образом, модель терминальных последовательностей человека у1атЬба2-уЬ2 показывает наиболее сильное четырехмерное сходство (тотальное сходство составляет 58%) 60 гибких аминокислот по сравнению с гибкими аминокислотами антитела мыши 40-12. Таким образом, для гуманизации гуманизируемого антитела была использована модель терминальной последовательности человека у1атЬба2уЬ2 с фокусированием на 45 гибких аминокислотах. Для определения мутаций, подлежащих исполне- 9 021580 нию, трехмерную структуру модели антитела мыши 40-12 накладывают на модель, полученную для терминальных последовательностей, имеющих наиболее сильное сходство, оптимизируя положения атомов углерода в α-положении аминокислот. Аминокислоты, идентифицированные как гибкие, заменяют соответствующими аминокислотами в модельной последовательности, имеющей наиболее сильное сходство.

К рассмотренным нежелательным мотивам последовательностей относятся: аспартат-пролин (пептидная связь, являющаяся неустойчивой в кислой среде), аспарагин-Х-серин/треонин (сайт гликозилирования, X означает любую аминокислоту, за исключением пролина), аспартат-глицин/серин/треонин (потенциальное образование звена сукцинимид/изоаспартат в гибких зонах), аспарагин-глицин/гистидин/серин/аланин/цистеин (сайты, подверженные деамидированию), метионин (окисление в экспонируемых зонах). Полученные таким образом гуманизированные последовательности в итоге сравнивают по алгоритму ВЬЛЗТ сравнения последовательностей с последовательностями базы данных ΙΕΌΒ (1Шр://\у\у\\лттипеерПоре.ог8/ ТНе 1ттиие ерНоре йаШЬахе апй апа1у818 гсхоигсс: йгот νίδίοη 1о Ыиергтй РЬоЗ Вю1. 2005, Маг., 3(3):е91) для проверки того, что последовательности не содержат известные эпитопы, обеспечивающие распознавание клетками лимфоцитов В и Т. Если последовательность содержит остатки, которые представляют собой нежелательные последовательности, то их также модифицируют. Если комбинированная последовательность содержит известный эпитоп, описанный в ΙΕΌΒ, то в качестве модели используют другую референтную терминальную структуру, обладающую сильным сходством.

Более предпочтительно антитело по настоящему изобретению содержит последовательности, идентичные по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности ЗЕЦ ГО N0: 30 или ЗЕЦ ГО N0: 32, в комбинации с последовательностями, идентичными по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности ЗЕЦ ГО N0: 34, последовательности ЗЕЦ ГО N0: 36 или последовательности ЗЕЦ ГО N0: 38.

В одном из вариантов осуществления антитело по настоящему изобретению содержит вариабельные легкие цепи последовательности ЗЕЦ ГО N0: 30 и вариабельные тяжелые цепи последовательности ЗЕО ГО N0: 34.

В другом варианте осуществления антитело по настоящему изобретению содержит вариабельные легкие цепи последовательности ЗЕО ГО N0: 32 и вариабельные тяжелые цепи последовательности ЗЕЦ ГО N0: 38.

В другом варианте осуществления антитело по настоящему изобретению содержит вариабельные легкие цепи последовательности ЗЕО ГО N0: 30 и вариабельные тяжелые цепи последовательности ЗЕЦ ГО N0: 36.

В другом варианте осуществления антитело по настоящему изобретению содержит вариабельные легкие цепи последовательности ЗЕО ГО N0: 32 и вариабельные тяжелые цепи последовательности ЗЕЦ ГО N0: 34.

В другом варианте осуществления антитело по настоящему изобретению содержит вариабельные легкие цепи последовательности ЗЕО ГО N0: 32 и вариабельные тяжелые цепи последовательности ЗЕЦ ГО N0: 36.

В другом варианте осуществления антитело по настоящему изобретению содержит вариабельные легкие цепи последовательности ЗЕО ГО N0: 30 и вариабельные тяжелые цепи последовательности ЗЕЦ ГО N0: 38.

Настоящее изобретение относится также к антителам человека, являющимся специфическими антагонистами Р0Р-К4. Такие антитела могут быть получены способами фагового отображения, известными специалистам в данной области техники (МсСайеПу 1. е! а1., 1990; НоодеиЬоот Н.К е! а1., 2005). Могут быть использованы другие технологии получения антител человека, такие как технология ХеиоМоизе, описанная в ИЗ 5939598.

В предпочтительном варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4, представляет собой антитело человека, в котором вариабельные части тяжелой цепи содержат последовательность, идентичную по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности ЗЕО ГО N0: 76, 86, 96 или 106.

В другом варианте осуществления антитело, являющееся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4, представляет собой антитело человека, в котором вариабельные части легкой цепи содержат последовательность, идентичную по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности ЗЕО ГО N0: 71, 81, 91 или 101.

Настоящее изобретение относится также к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К4 и имеющему тяжелую цепь, содержащую вариабельную часть, кодируемую нуклеотидной последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности ЗЕО ГО N0: 77, 87, 97 или 107.

Настоящее изобретение относится также к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и имеющему легкую цепь, содержащую вариабельную часть, кодируемую нуклеотидной последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 90, 95 или 99% последовательности ЗЕО ГО N0: 72, 82, 92 или 102.

Настоящее изобретение относится также антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и содержащему последовательности, кодируемые нуклеотидными последова- 10 021580 тельностями 8ЕЦ ГО N0: 71 и 76 или нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 81 и 86 или нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 91 и 96, или нуклеотидными последовательностями 8ЕЦ ГО N0: 101 и 106.

Настоящее изобретение относится также к антителу человека, являющемуся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4 и содержащему полипептидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 72 и 77 или полипетидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 82 и 87, или полипетидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 92 и 97, или полипетидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 102 и 107.

Более предпочтительно антитело человека, являющееся специфическим антагонистом рецептора Р0Р-К.4, содержит полипептидные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 82 и 87.

Модифицированные таким образом последовательности аминокислот могут быть модифицированы также посредством посттрансляционных изменений в ходе продуцирования в клетке млекопитающего. В частности, использование неполных стабильных линий в биосинтезе фукозы может обеспечивать получение моноклональных антител, в которых ^гликан Рс (положение № 297) частично или полностью не содержит фукозу и обеспечивает усиление действия эффектора АЭСС (Каийа е! а1., 2006, Вю1сс1то1. Βίοеид. 94:680-688 и Шрка е! а1., 1986, АгсЬ. ВюсЬет. Βίορίΐ. 249: 533-545).

В другом варианте осуществления настоящего изобретения специфический антагонист Р0Р-К.4 представляет собой конъюгированное антитело.

Антитела могут быть конъюгированы с цитотоксическим агентом. Термин цитотоксический агент, в данном случае, означает вещество, которое затрудняет или блокирует функционирование или рост клеток или вызывает разрушение клеток.

В одном из вариантов осуществления антитело или его связывающий фрагмент может быть конъюгировано с лекарственным средством, таким как маитансиноид, для образования пролекарства, обладающего цитотоксичностью по отношению к клеткам, экспрессирующим антиген.

Цитотоксический агент по настоящему изобретению может представлять собой любое соединение, следствием действия которого является гибель клетки, или которое индуцирует гибель клетки, или которое различными способами снижает жизнеспособность клеток. В число предпочтительных цитотоксических агентов входят, например, маитансиноиды и аналоги маитансиноидов, таксоиды, СС-1065 и аналоги СС-1065, доластатин и аналоги доластатина, определенные выше. Такие цитотоксические агенты конъюгированы с антителами, фрагментами антител, функциональными эквивалентами, улучшенными антителами и их аналогами, как описано в настоящем описании.

Конъюгированные антитела могут быть получены способами ίη νίΐτο. Для связывания лекарственного средства или пролекарства с антителом используют связующую группу. Подходящие связующие группы хорошо известны специалистам в данной области техники и включают, в частности, дисульфидные группы, тиоэфирные группы, лабильные кислотные группы, фотонестабильные группы, лабильные пептидазные группы и лабильные эстеразные группы.Предпочтительные связующие группы представляют собой дисульфидные и тиоэфирные группы. Например, конъюгированное соединение может быть получено по реакции дисульфидного обмена или за счет образования тиоэфирного мостика между антителом и лекарственным средством или пролекарством.

Такие соединения, как метотраксетат, даунорубицин, винкристин, винбластин, мелфалан, митомицин С, хлорамбуцил, калихеамицин, тубулизин и аналоги тубулизина, дуокармицин и аналоги дуокармицина, доластатин и аналоги доластатина, являются также подходящими для получения конъюгированных соединений по настоящему изобретению. Молекулы также могут быть связаны с молекулами антитела посредством промежуточной молекулы, такой как сывороточный альбумин. Доксорубицин и соединения доксорубицина, как описано, например, в И8 09/740991, также могут представлять собой подходящие цитотоксические агенты.

Антитела, представляющие собой объект настоящего изобретения, могут быть связаны с цитотоксической молекулой или соединением. Они также могут быть связаны с антиангиогенным соединением, действующим на другие пути ангиогенеза.

Под клетками, экспрессирующими Р0Р-К.4 понимают любую эукариотную клетку, в частности, млекопитающих и предпочтительно человека, которая экспрессирует рецептор Р0Р-К.4 в его нативной или мутантной форме. Р0Р-К.4 также может находиться в своей полноразмерной или усеченной форме, содержащей, например, внеклеточный домен Р0К.-К.4, в частности домены Ό2-Ό3. Р0Р-К.4 также может быть рекомбинирован в химерную форму.

Соединения по настоящему изобретению могут быть введены в фармацевтические композиции для введения топическим, пероральным, парентеральным, интраназальным, внутривенным, внутримышечным, подкожным, интраокулярным и т.д. путями. Фармацевтические композиции предпочтительно содержат фармацевтически приемлемые носители для состава, предназначенного для инъекций. Речь может идти, в частности, о солевых растворах (мононатрийфосфат, динатрийфосфат, хлориды натрия, калия, кальция или магния и т.д. или смеси таких солей), стерильных растворах, изотонических растворах или сухих композициях, в частности лиофилизованных композициях, которые при соответствующем добавлении стерилизованной воды или физиологического раствора дают возможность получения растворов для инъекций.

- 11 021580

Релевантные патологии могут представлять собой любые заболевания, связанные с ангиогенезом опухолевой или неопухолевой природы.

Релевантные патологии могут представлять собой рак (требующий использования антагонистов по настоящему изобретению в качестве ингибиторов ангиогенеза опухолей), в частности рак печени, толстой кишки, молочной железы или легкого, предстательной железы, поджелудочной железы или кожи, или такие патологии, при которых нарушение регуляции ангиогенеза описывается как возрастная дегенерация желтого пятна или ИМЕЛ, воспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит, остеоартрит, колиты, язвы или любые воспалительные заболевания кишечника, атеросклероз или ожирение.

Антитела анти-РОР-К4 также могут быть использованы для лечения рака, в частности гепатокарциномы и других раковых заболеваний печени, и рака поджелудочной железы в качестве ингибитора, оказывающего действие непосредственно на рост опухоли.

Настоящее изобретение поясняется приведенными далее примерами без ограничения объема охраны. Описание фигур

Фиг. 1А и 1В. Эндотелиальные клетки человека типа НИУЕС способны ίη νΐίτο (фиг. 1А) образовывать сеть псевдотубул, называемую ангиогенной. Эту сеть стимулируют добавлением 1 нг/мл РСР2. Такая индукция может быть получена также добавлением 10 нг/мл РСР19, представляющего собой специфический лиганд РОР-К.4, тогда как добавление 10 нг/мл РОР4 (неактивирующий лиганд РОР-К.4) не способно стимулировать ангиогенез. Аналогично ίη νίνο (фиг. 1В), на мышиной модели индукции ангиогенеза в имплантате губки на спине мыши, РОР2 способен индуцировать увеличение числа новых сосудов, являющихся функциональными по отношению к губке, что характеризуется увеличением уровня гемоглобина в таких губках, по сравнению с контролем. РОР19 также способен индуцировать такой ангиогенез в губке.

Фиг. 2А. Карта плазмиды рХЬ4 614, обеспечивающей экспрессию ЬРОРК4-Н181ад (8ЕО ГО N0: 40).

Фиг. 2В. Карта плазмиды рХЬ4 613, обеспечивающей экспрессию №ОРК4-§1тер1ад (8Е0 ГО N0: 69).

Фиг. 3. Карта плазмиды рХЬ4615, обеспечивающей экспрессию ЬРОРК4(И2,И3)-Н181ад (8Е0 ГО N0: 42).

Фиг. 4. Карта плазмиды рХЬ4621, обеспечивающей экспрессию шРОРК4-Н181ад (8Е0 ГО N0: 44).

Фиг. 5. Карта плазмиды рХЬ4328, обеспечивающей экспрессию №ОРК1-Рс (8Е0 ГО N0: 46).

Фиг. 6. Карта плазмиды рХЬ4327, обеспечивающей экспрессию №ОРК2-Ре (последовательность 5ЕС ГО N0: 48).

Фиг. 7. Пластины ЕЬ1§А, покрытые 4 рецепторами человека РОР. Способность антител антиРОРК4 40-12 и 64-12 распознавать различные РОР-К определяют анализом ЕЬ18А. Клон 40-12 (гистограмма черного цвета) является специфическим к РОР-К4. Кроме того, клон 64-12 (гистограмма серого цвета) распознает в очень малой степени РОР-К3.

Фиг. 8А и 8В. Активное антитело-антагонист 40-12 и его инактивный контроль 64-12 не оказывают собственного действия на базальный ангиогенез. Напротив, при дозе 30 мкг/мл (приблизительно 200 нМ) моноклональное антитело анти-РОРК4 40-12 способно ингибировать ангиогенез клеток НИУЕС, индуцированный РОР2, тогда как контрольное антитело 64-12 не способно на такое действие (фиг. 8А). РОР2, меченный реактивом А1ехаР1ио г® 488 нм, способен связываться с РОР-К4, экспрессируемым клетками 300-19 (гистограмма белого цвета). Это взаимодействие может быть разрушено немеченым РОР2 (гистограммы черного цвета) или антителом анти-РОРК4 40-12 (гистограммы темно-серого цвета), тогда как антитело-свидетель 64-12 не способно на такое действие (гистограммы светло-серого цвета) (фиг. 8В).

Фиг. 8С и 8И. Действие антител анти-РОРК4, происходящих от клонов 8, 31, 33 и 36, при 10 мкг/мл на ангиогенез ίη νΐίτο, индуцированный 3 нг/мл РОР-2. Клоны 8 (фиг. 8С) и 31, 33 и 36 (фиг. 80) ингибируют ангиогенез клеток НИУЕС, индуцированный РОР-2.

Фиг. 9А и 9В. Клетки гепатокарциномы человека Нер3Ь стимулируют посредством РОР19 при 30 нг/мл. Такая стимуляция индуцирует специфическую клеточную сигнализацию РОР-К4, приводящую к синтезу белков еРо8 и 1ипВ и к фосфорилированию Егк1/2, наблюдаемому способом вестерн-блоттинга (фиг. 9А). При этом для каждой полосы осуществляют количественное определение. Такое количественное определение представлено в виде гистограммы (фиг. 9В). Антитело 40-12 при 100 мкг/мл полностью ингибирует индукцию специфической клеточной сигнализации посредством РОР-К4, тогда как контрольное антитело не оказывает какого-либо действия. На практике антитело 40-12 полностью блокирует синтез 1ипВ и еРо8, а также фосфорилирование Егк1/2, индуцированное посредством РОР19 после стимуляции в течение 3 ч.

Фиг. 9С. Ингибирующее действие антитела анти-РОРК4 40-12 на фосфорилирование Егк1/2, индуцированное в клетках Нер3Ь посредством РОР-19 (30 нг/мл), подтверждено по методике ЕЬТЗА с антифосфоЕКк1/2. Антитело 40-12 также способно ингибировать фосфорилирование Егк1/2 в клетках Нер3Ь, стимулированное посредством РОР-2 (1 нг/мл) или 10%-й сывороткой (8УР).

Фиг. 9И. Процентная степень ингибирования фосфорилирования Егк1/2, индуцированного посредством РОР-19 (30 нг/мл), по методике ЕЬТЗА в клетках Нер3Ь с использованием антител, происходящих от клонов 8, 31, 33 и 36.

- 12 021580

Фиг. 10А и 10В. Пролиферация клеток НерЗЬ может быть стимулирована добавлением сыворотки (фиг. 10А) или РОР19 (фиг. 10В). Индукция сывороткой частично ингибирована антителом 40-12 при 100 мкг/мл, тогда как контрольное антитело не оказывает такого действия (фиг. 10А). Пролиферация, индуцированная посредством РОР19, полностью блокирована антителом анти-РОРК4 40-12 при 10 мкг/мл, тогда как контрольное антитело при такой же дозе не способно на такое действие (фиг. 10В).

Фиг. 11А-11Э. Антитело анти-РОРК.4 40-12 способно уменьшить развитие опухолей поджелудочной железы на мышиной модели КрТад, ингибируя ангиогенез опухоли. Модель К1р1-Тад2 представляет собой мышиную модель, в которой трансгенные мыши экспрессируют антиген Т §У40 в β-клетках островков поджелудочной железы, продуцирующих инсулин (НапаЬап Ό. Ыа1иге, 1985, 9-15:115-22.). Такой антиген Т экспрессируется в ходе эмбрионального развития поджелудочной железы до 4-5 недель жизни без очевидного действия. При этом часть островков поджелудочной железы, экспрессирующих антиген Т, прогрессирует в течение следующих 5 недель с образованием ангиогенных островков, связанных с активацией сосудистой сети, и затем с развитием небольших опухолей типа аденомы. Спустя несколько недель некоторые аденомы развиваются с образованием инвазивных карцином (фиг. 11А). Мышам Κίρ1Тад2 подкожно вводили один раз в неделю в промежутке от 10 до 13 недель дозы 25 мг/кг антитела 40-12 или контрольного антитела. Через 13 недель мышей умерщвляли. Определяли объем опухолей, а также число опухолей поджелудочной железы и численную плотность сосудов. Обработка антителом антиРОРК4 40-12 позволяет значительно уменьшить объем опухолей на 55%, тогда как антитело-свидетель не оказывает какого-либо действия (фиг. 11В). Антитело 40-12 позволяет также уменьшить на 34% число опухолей поджелудочной железы по сравнению со свидетелем (фиг. 11С). Такое уменьшение объема опухолей сопровождается уменьшением численной плотности сосудов как в отношении числа мелких сосудов, так и числа средних или крупных сосудов (фиг. 11Ό).

Фиг. 12. Способность антител 40-12 и 64-12 распознавать полноразмерный внеклеточный домен РОР-К4 человека или мыши, а также внеклеточный домен РОР-К4, усеченный в области Ό1, определяют по методике ЕЬ18Л. Клон 40-12 способен также хорошо связываться с 3 конструкциями РОР-К4, тогда как клон 64-12 плохо распознает мышиную форму РОР-К4.

Фиг. 13А-13С. Антагонистическое действие антитела анти-РОРК4 клона 40-12 на связь РОР2/РОРК4 определяют в сравнительных испытаниях на связывание с РОР2, меченным реактивом Л1ехаР1иот® 488 нм. Клон 40-12 способен блокировать связывание с РОР2 человека (фиг. 13А), мыши (фиг. 13В) и крысы (фиг. 13С) на клетках 300-19 мыши, трансфицированных посредством кДНК, кодирующей человеческие, мышиные или крысиные формы рецептора РОР-К4, причем с одинаковой эффективностью (3500, 4110 и 3940 нг/мл или 23, 27 и 26 нМ для комплексов человека, мыши или крысы соответственно).

Фиг. 14А. Карта плазмиды рХЬ4794, обеспечивающей экспрессию ЬРОРК4_И1:Рс.

Фиг. 14В. Последовательность аминокислот белка НРОРК4_Э1:Рс. секретируемого линией НЕК293, трансфицированной плазмидой рХЬ4794.

Фиг. 15А. Карта плазмиды рХЬ4796, обеспечивающей экспрессию НРОРК4_Э2:Рс.

Фиг. 15В. Последовательность аминокислот белка НРОРК4_Э2:Рс. секретируемого линией НЕК293, трансфицированной плазмидой рХЬ4796.

Фиг. 16А. Карта плазмиды рХЬ4799, обеспечивающей экспрессию НРОРК4_Э3:Рс.

Фиг. 16В. Последовательность аминокислот белка НРОРК4_Э3:Рс. секретируемого линией НЕК293, трансфицированной плазмидой рХЬ4799.

Примеры

Пример 1. Выяснение роли РОР-К4 в регуляции ангиогенеза.

Для демонстрации роли РОР-К4 в регуляции ангиогенеза проводили испытания по ангиогенезу ίη νίίτο с эндотелиальными клетками человека типа НИУЕС, стимулированными некоторыми РОР. РОР2 представляет собой лиганд, активирующий значительную часть рецепторов РОР. РОР19 представляет собой специфический лиганд, активирующий РОР-К4, и РОР4 представляет собой лиганд, не активирующий РОР-К4.

С этой целью получали гели, внося в каждую из лунок слайд-камеры (коллаген Вюсоа! Се11етаге, тип I, 8-луночные слайд-камеры для культивирования: ВесЮп Эюкпъоп 354630), 160 мкл матригеля, разведенного в соотношении 1/6 (матригель без фактора роста: ВесЮп Эюкпъоп 356230) в коллагене (коллаген из хвоста крысы, тип I: ВесЮп Июкшкоп 354236). Гель выдерживали в течение 1 ч при 37°С для обеспечения его полимеризации. Затем клетки венозного эндотелия человека (НИУЕС, номер по каталогу: С-12200 - Рготосе11) высевали из расчета 15х10³ клетка/лунка в 400 мкл среды ЕВМ (С1опе11с8 С3121)+2% РВ§+ЬЕОР, 10 мкг/мл. Данная методика может быть адаптирована к 96-луночным планшетам: 60 мкл на лунку 96-луночных планшетов (планшеты Вюсоа! со11адеп сеИетате, ВесЮп Эюкпъоп 354407). Матрицу готовили, смешивая 1/3 матригеля, коллаген до конечной концентрации 1 мг/мл, ИаОН (0,026 х коллагена в мкл), РВ§ 1х, затем объем смеси доводили водой.

Эндотелиальные клетки стимулируют посредством 1 нг/мл РОР2 (Ρ.&Ό, 133-РВ-025), или 10 нг/мл РОР4 (К&И, 235-Р4-025), или РОР19 (К&И, 969-РО-025) в течение 24 ч при 37°С в атмосфере с 5% СО₂. Через 24 ч измеряют длину сети образовавшихся микротубул посредством компьютерной системы ана- 13 021580 лиза изображений (1тадета Вюсот, Куртабеф, Франция) и определяют общую длину псевдотубул в каждой из лунок. Среднее значение общей длины сети микрокапилляров рассчитывают в мкм для каждого режима, что соответствует среднему из 6 повторов.

Стимуляция посредством РОР2 или РСР19 обеспечивает индукцию образования новых тубул, тогда как РСР4 не оказывает такого действия (фиг. 1А). Полученные результаты показывают, что специфическая активация РОР-К4 обеспечивает индукцию формирования новых сосудов, и, таким образом, позволяют сделать вывод, что РОР-К4 регулирует ангиогенез ίη νίίτο.

Корреляция данных ίη νίνο с данными ίη νίίτο была получена посредством модели индукции ангиогенеза ίη νίνο в имплантатах целлюлозы на мышах. Данная модель представляет собой адаптацию модели, описанной Аабгабе еί а1. (М1сгоуакси1аг КекеагсЬ, 1997, 54, 253-61).

Животных, близкородственных белых мышей ВАЬВ/сф анестезировали введением внутрибрюшинно смеси ксилазин (Кοтρиη®, 10 мг/кг)/кетамин (1та1деае 1000, 100 мг/кг). Спину животного брили и дезинфицировали средством Нехотебше®. На спине мыши создавали воздушный мешок инъекцией подкожно 5 мл стерильного воздуха. На спине животного выполняли разрез приблизительно 2 см длиной для введения имплантата из стерильной целлюлозы (диск диаметром 1 см, толщиной 2 мм, СеЬкрοη®, номер по каталогу: 0501), пропитанной 50 мкл стерильного раствора, содержащего белок или испытуемое вещество. Затем разрез зашивали и дезинфицировали средством Нехотебше®. В последующие после внедрения имплантата дни мышам вводили в имплантат белок или испытуемое вещество инъекцией чрескожно (50 мкл/имплантат/день) после ингаляционной анестезии (5%-й изофлюран (Аеггане®. Вах1ет)). Через семь дней после внедрения губки мышей умерщвляли введением внутрибрюшинно летальной дозы пентобарбитала натрия (СЕУА каШе ашта1е). Затем кожу разрезали на расстоянии приблизительно 1 см вокруг губки, избегая шва, для изъятия кожи и губки. Затем губку разрезали на несколько кусков и помещали в пробирки К1Ьо1укет®, содержащие 1 мл лизирующего буферного раствора (Се11 Эеаб! ^еίесί^οη ЕЬ1ЗА, КосЬе). Пробирки перемешивали последовательно 4 раза в течение 20 с в режиме 4 на измельчителе клеток (РакШтер® РР 120). Затем пробирки центрифугировали в течение 10 мин при 2000 д и 20°С и супернатанты замораживали при -20°С до проведения количественного определения гемоглобина.

В день анализа после размораживания пробирки снова центрифугировали и определяли концентрацию гемоглобина с реактивом Драбкина (З1дта, об./об.) на спектрофотометре при 405 нм по сравнению с эталонной серией бычьего гемоглобина (З1дта). Концентрацию гемоглобина в каждом образце выражали в мг/мл в соответствии с полиномиальной регрессией, полученной исходя из эталонной серии. Результаты выражали как среднее значение (±СКО) для каждой группы. Различия между группами проверяли методом ΑΝΟνΑ по критерию Даннетта относительно квадратного корня значений.

В данной модели РСР19 в количестве 50 нг на одно место при 5 повторных инъекциях способен индуцировать значительную колонизацию губки зрелыми сосудами, вновь образованными с такой же эффективностью, как и в случае РСР2, в количестве 5 нг на одно место. Наличие функциональных кровеносных сосудов в губке было выявлено по присутствию гемоглобина (фиг. 1В). Полученные результаты показывают, что специфическая активация РСР-К4 обеспечивает увеличение числа функциональных кровеносных сосудов, указывающее на то, что РСР-К4 регулирует ангиогенез также ίη νί\Ό.

Пример 2. Описание белков РОРК, использованных в качестве иммуногенов и антигенов.

Рецепторы факторов роста РОРК и, в частности, их внеклеточные домены РОР-К1, РОР-К2, РОРК3, РОР-К4 соединяли с меткой (Н1к1ад) или с доменом Рс иммуноглобулина.

кДНК, кодирующая внеклеточный домен РОР-К4 человека, представляет собой белок, описанный в З\\аккРго1 РОР-К4_НиМАЫ, положения 1-365 с мутацией Ь136Р. Ее клонировали в экспрессионном эукариотическом векторе рХЬ4 614, показанном на фиг. 2, для экспрессии белка, содержащего Н|к1ад в Сконцевом положении во внеклеточном домене.

Белки, называемые ЬРОРК4-Шйад, последовательности ЗЕО ГО ΝΟ: 40 получали транзиторной трансфекцией в линии НЕК293 ЕВNΑ (Iην^ί^οдеη) посредством плазмиды рХЬ4614 и вспомогательных плазмид рХЬ4544 и рХЬ4551, обеспечивающих экспрессию двух ферментов гликозилирования Νгликанов, т.е. а-2,3-сиалилтрансферазы и в-1,4-галактозилтрансферазы, как описано в АО 2008/065543.

Белок ЬРОРК4-Н1к1ад, экспрессированный в супернатант культуры клеток НЕК293 ЕВNΑ, очищали хроматографией на колонке с Νί-хелатирующей сефарозой (АтегкЬат В^οкс^еηсек. номер по каталогу: 17-0575-01) при элюировании буферным раствором имидазола и затем смешивали с буферным раствором РВЗ (Iην^ί^οдеη, номер по каталогу: 14190-094). Анализ композиции моносахаридов и количественное определение сиаловых кислот Ν-гликанов, как описано Заббю еί а1. (2002, Мебюбк Мо1. Вю1. 194:2336) и Апити1а еί а1. (1998, О1усоЬю1оду, 8:685-694), позволили показать, что белок был в значительной степени сиалилирован (91%). Следовательно, белок имел все характеристики для того, чтобы обладать достаточными фармакокинетическими свойствами.

Для сравнения белок ЬЕОБВ4-З1гер1ад (ЗЕО ГО ΝΟ: 69) очищали хроматографией на колонке З1герΤасЬη ЗирегПо\у (1ВА, номер по каталогу: 2-0575-01) при элюировании буферным раствором дезтиобиотина и затем смешивали с буферным раствором РВЗ.

- 14 021580

Белок №ΟΡΚ4(Ό2,Ό3)-ΗίδίΗ§ соответствует последовательности 8Еф ΙΌ N0: 42. кДНК клонировали в экспрессионной эукариотической плазмиде рХЬ4615, показанной на фиг. 3, и белок получали и очищали в условиях, сравнимых с условиями получения белка ЬРСРК4-Н181ад.

кДНК, кодирующую белок тРСРК4-Н181ад (8Еф ГО N0: 43), клонировали в экспрессионной эукариотической плазмиде рХЬ4621, показанной на фиг. 4, и белок получали и очищали в условиях, сравнимых с условиями получения белка ЬЕОРК4-Н181ад.

Белок ЬРСРК1-Рс (8Еф ГО N0: 46) содержит внеклеточный домен РСР-К1 111с человека, присоединенный С-концевым участком к домену Рс 1дС1 человека. кДНК клонировали в экспрессионной эукариотической плазмиде рХЬ4728, показанной на фиг. 5, и белок получали в условиях, сравнимых с условиями получения белка №ОРК4-Н181ад, затем очищали аффинной хроматографией на колонке с протеинС-сефарозой (Лтег8Йат Вю8шепсе8) при элюировании буферным раствором 100 мМ глицин/НС1, рН 2,7 и затем смешивали с буферным раствором РВ8.

Белок №СРК2-Рс последовательности 8Еф ГО N0: 48 содержит внеклеточный домен РСР-К2 111с человека, присоединенный С-концевым участком к домену Рс 1дС1 человека. кДНК клонировали в экспрессионной эукариотической плазмиде рХЬ4327, показанной на фиг. 6, и белок получали и затем очищали в условиях, сравнимых с условиями получения белка №СРК1-Рс.

Белок №СРК3-Рс, представляющий собой белок, присоединяющий внеклеточный домен РСР-К3 111с человека к домену Рс 1дС1 человека, получали в системе К&И (номер по каталогу: 760-РК).

Белок №СРК4-Рс, представляющий собой белок, присоединяющий внеклеточный домен РСР-К4 человека к домену Рс 1дС1 человека, получали в системе К&И (номер по каталогу: 685-РК).

Различные субдомены внеклеточной части белка №СРК4 присоединяли к домену Рс 1дС1 человека. Субдомен Ό1 содержится в конструкции 8АВУА4794 (8Еф ГО N0: 112, фиг. 14А и 14В). Субдомен Ό2 содержится в конструкции 8АВУА4796 (8Еф ГО N0: 114, фиг. 15А и 15В). Субдомен Ό3 содержится в конструкции 8АВУА4799 (8Еф ГО N0: 116, фиг. 16А и 16В). Указанные три субдомена распространяются соответственно на положения 1-179 для 8АВУА4794, 1-32 и 145-242 для 8АВУА4796 и 1-32 и 228-360 для 8АВУА4799 (положения, описанные в 8\У188Рго1 РСР-К4 НИМАЩ.

Данные белки получали исходя из плазмиды рХЬ4794 (кодирующая последовательность 8Еф ГО N0: 111), рХЬ4796 (кодирующая последовательность 8Еф ГО N0: 113) и рХЬ4799 (кодирующая последовательность 8Еф ГО N0: 115) в условиях, сравнимых с условиями получения белка РСРК1-Рс.

Пример 3. Генерирование и посев моноклональных антител анти-РСР-К4.

А - антитела, полученные иммунизацией.

Моноклональные антитела получали иммунизацией иммуногеном №СРК4-Н181ад пяти мышей ВАЬВ/с1 (Сйаг1е8 Ктуег) в возрасте от 6 до 8 недель, каждая из которых была иммунизирована общей дозой 24 мкг №СРК4-Н181ад способом К1ММ8, описанным Кйрайтск е1 а1. (1997, НуЪпйота, 16:381389), и по методике слияния, описанной в наборе С1опаСе11™-НУ НуЪпбота С1отп§ (81етС’е11 ТесЬпо1офе8, номер по каталогу: 03800).

Через два дня после последней инъекции мышей умерщвляли и лимфатические узлы смешивали с клетками миеломы Р3Х63-АС8.653 (АТСС, СКЬ-1580) в соотношении 5:1 в присутствии полиэтиленгликоля (С1оиаСе11™-НУ, номер по каталогу: 03806). Суспензию клеток распределяли в стерильных условиях по чашкам Петри, инкубируемых при 37°С в атмосфере с 5% СО₂. Колонии, появившиеся через 12 дней инкубирования, выделяли и культивировали в среде Е (С1опаСе11™-НУ, номер по каталогу: 03805) в 96-луночных планшетах.

Первичный посев моноклональных антител, полученных иммунизацией посредством №СРК4Н181ад, осуществляли методом ЕЬ18А, используя в качестве антигена-ловушки ЬЕСРК4-81гер1ад. Антиген-ловушку фиксировали на чашках 1тти1оп-4 с иммобилизованным ферментом (УАК 8шепййс 1пс. 8\уебе8Ъого. N1). Затем добавляли супернатанты культуры гибридом и детектировали с помощью антимышиного антитела кролика 1дС, конъюгированного с пероксидазой (81дта, номер по каталогу: А9044 разведение 1:50000). Обнаружение осуществляли с субстратом ТМВ-Н₂О₂ (ГОегсЫт, номер по каталогу: ИР664780) и измерения проводили с помощью микропланшетного фотометра при 450 нм. Из 444 испытуемых гибридом 129 были позитивными при анализе ЕЬ18А в случае антигена ЬРСРК4-81гер1ад, причем из этого числа 120 гибридом были позитивными также в случае димерного белка ЬРСРК4-Рс.

Вторичный посев осуществляли для селекции только антител, являющихся специфическими по отношению к РСР-К4, методом ЕЬ18А, используя в качестве антигена-ловушки белок ЬЕСРК4-81гер1ад, затем белки ЬРСРК1-Рс, №СРК2-Рс и №СРК3-Рс, описанные в примере 2. Антиген-ловушку фиксировали на чашках 1тти1оп-4 с иммобилизованным ферментом (УАК 8с1епййс 1пс. 8теебе8Ъого, N1). Затем добавляли супернатанты культуры гибридом и детектировали с помощью антимышиного антитела кролика 1дС, конъюгированного с пероксидазой (8щт;т номер по каталогу: А9044 - разведение 1:50000). Обнаружение осуществляли с субстратом ТМВ-Н₂0₂ (йИегскич номер по каталогу: ИР664780) и измерения проводили с помощью микропланшетного фотометра при 450 нм.

Из 129 испытуемых гибридом, бывших позитивными при анализе ЕЬ18А в случае антигена, 84 гибридомы были позитивными в случае ЬЕСРК4-81гер1ад и не имели сродства ни к №СРК1-Рс, ни к

- 15 021580

ЬРОРК2-Рс, ни к ЬРОРК3-Рс. В зависимости от способности к росту и морфологии 39 гибридом были законсервированы. Их изотип определяли с помощью набора 8ЕК0ТЕС (номер по каталогу: ММТ1); 95% относились к 1дО1.

Третичный посев осуществляли в испытании на пролиферацию модифицированных клеток Ва£/3, индуцируемую РОР2, для характеризована ингибирования антителами анти-РОРК4.

Гибридомы мыши, экспрессирующие антитела-антагонисты анти-РОРК4, клонировали предельным разведением. Исходя из культивированных клеток гибридом в фазе экспоненциального роста, кодирующую последовательность (кДНК) определяли после экстракции мРНК посредством набора 0Пуо(е'\ (Οίадеп, номер по каталогу: 72022); получение и амплификация кДНК способом КАСЕ-КТ с набором Оепе Касег, обратная транскриптаза 8ирег§спр1 III (1пу11го§еп, номер по каталогу: Е1500) и инициаторы (праймеры) описаны в табл. 2, приведенной ниже; амплификация фрагментов кДНК посредством полимеразы РЕизюп (Τίηη/утез. номер по каталогу: Р-5308), инициаторы (праймеры) и условия температуры описаны в табл. 2. Амплифицированные фрагменты, содержащие части, кодирующие УН (вариабельную часть тяжелой цепи НС) или УР (вариабельную часть легкой цепи РС), клонировали в векторе рОЕМ-Т Еа§у компании Рготеда, номер по каталогу: А137А, вставки полученных плазмид секвенировали так, чтобы кодирующая последовательность каждого вариабельного домена была исследована в направлении 5'-3' и 3'-5' по меньшей мере для 6 плазмид, соответствующих антителам анти-РОРК440-12 и анти-РОРК4 6412. Анализ последовательностей, смежностей и выравниваний осуществляли посредством программы, доступной в Уес!ог ΝΤΙ (1пу11го§еп).

Плазмиды, содержащие консенсусные последовательности, кодирующие вариабельные части антител анти-РОРК4, консервировали. Плазмида рХР4691 содержит последовательность, кодирующую УН последовательности 8НС) П) N0: 5 антитела анти-РОРК4 40-12, и плазмида рХР4693 содержит последовательность, кодирующую УН последовательности 8ЕР П) N0: 19 антитела анти-РОРК4 64-12, соответственно, представленные в приведенной ниже табл. 2.

Плазмида рХР4690 содержит нуклеотидную последовательность 8НС) II) N0: 7, кодирующую УР последовательности 8НС) П) N0: 8 антитела анти-РОРК4 40-12, и плазмида рХР4692 содержит нуклеотидную последовательность 8ΙΤ) П) N0: 21, кодирующую УР последовательности 8ЕР П) N0: 22 антитела анти-РОРК4 64-12, соответственно, представленные в приведенной ниже табл. 2.

Таблица 2

Рабочие условия и анализ реакций обратной транскриптазы и РСК-идентификация плазмид рХР4 690-рХР4693

Анти-ЕСГК4	40-12	64-12
Реакция КТ Температура Праймеры	55°С ЗЕО Ю N0:64 (НС) ЗЕО Ю N0:65 (ЬС)	55°С 5Е<2 Ю N0:64 (НС) ЗЕО Ю N0:66 и ЗЕО Ю N0:67 (ЬС)
Праймер 5'СепеКасег (ЗЕ£> Ю N0:63)	5'-ССАСТССАССАССАССАСАСТСА-3'

- 16 021580

5'СТСАТТССТСТТСААССТСТ

ТСАС-3'

Праймер 3'помещенный в шарнир мыши (ЗЕО ΙΡ N0:64)_

Праймер 3'помещенный в Ск мыши (ЗЕО Ю _N0:65)_

Праймер 3'помещенный в СА мыши (ЗЕО Ю N0:66 и ЗЕО Ю N0:67)

РСК НС:

Температура

Праймеры

Последовательность клонированных продуктов РСК (УН)

Плазмида, содержащая УН РСК ЪС: Температура Праймеры

Последовательность клонированных продуктов РСК (УЪ)

Плазмида, содержащая УЪ

5'-ТАТССААСССТТАСААССАСА-3'

55°С

ЗЕО Ю N0:63 - ЗЕО _ΙΡ N0:64_ клонов обладают одинаковой последовательностью УН и последовательностью СН1, идентичной последовательности _тСН1_ рХЪ4691

55°С

ЗЕО ΙΡ N0:63 - ЗЕО _ΙΡ N0:65_ клонов обладают одинаковой последовательностью УЪ и последовательностью Ск, идентичной последовательности шСк рХЪ4690

АСАСТСАССАССССАСАААС ТСТТСТС-3'

5'АСАСТСТССАССАСАСАСАС ТСТТТТС-3'

55°С

ЗЕО Ю N0:63 - ЗЕО _ΙΡ N0:64_ клонов обладают одинаковой последовательностью УН и последовательностью СН1, идентичной последовательности _тСН1_ рХЪ4693

55°С

ЗЕО ΙΡ N0:63 - ЗЕО ΙΡ N0:66 и 67 6 клонов обладают одинаковой последовательностью УЪ и последовательностью СА, идентичной последовательности шСА рХЪ4692

Последовательности аминокислот соответственно легких и тяжелых вариабельных частей антител анти-РОРК4 64-12 и анти-РОРК4 40-12 различны. Номера использованных, полученных и расшифрованных последовательностей указаны в табл. 7.

Антитела 40-12 и 64-12 получали во флаконах Т500. Супернатант культуры отбирали через 7 дней. Антитела анти-РОРК4 очищали по сродству на белке О и затем диализом против фильтровального стерильного ΡΒ8 и хранили при 4°С.

Очищенные антитела-антагонисты имели значения К_о, равные 6,5х10^-9 М (анти-РОРК4 40-12) и 5,75х10^-8 М (анти-РОРК4 64-12).

В - антитела, отобранные способом фагового дисплея.

Первичный посев моноклональных антител, полученных способом фагового дисплея с кРОРК4Нгз1ад, осуществляли методом ЕЫ8А, используя в качестве антигена-ловушки ЬРОРК4-Нгз1ад. Антигенловушку фиксировали на чашках 1тти1оп-2 с иммобилизованным ферментом (УУК Зшепккс 1пс. 8\\ес1езЬого, N1). Затем добавляли супернатанты культуры Е. соЕ, инфицированной фагами, и далее детектировали с помощью антитела мыши антиМ13, конъюгированного с пероксидазой (ОЕ Неа14ксаге, номер по каталогу: 27-9421-01, разведение 1:5000). Обнаружение осуществляли с субстратом ТМВ-Н₂О₂ (1п1егсЫш, номер по каталогу: ϋΡ664780), и измерения проводили по оптической плотности (Ο.Ώ.) при

450 нм.

Вторичный посев осуществляли для селекции только антител, являющихся специфическими по отношению к РОР-К4, методом ЕЕ18А, используя в качестве антигена-ловушки белок кРОРК4-Шз1ад, затем белки кРОРК1-Рс, кРОРК2-Рс и кРОРК3-Рс, описанные в примере 2. Антиген-ловушку фиксировали на чашках 1шши1оп-2 с иммобилизованным ферментом (ΥΆΚ Зшепккс 1пс. 8\\ес1езЬото, N3). Затем добавляли супернатанты культуры Е. сок, инфицированной фагами, и далее детектировали с помощью антитела мыши антиМ13, конъюгированного с пероксидазой (ОЕ Неакксаге, номер по каталогу: 27-9421- 17 021580

01, разведение 1:5000). Обнаружение осуществляли с субстратом ТМВ-Н₂О₂ (1Щегс1йт, номер по каталогу: ИР664780) и измерения проводили по оптической плотности (0.Ό.) при 450 нм.

Отобранные клоны, являющиеся специфическими по отношению к РСР-К4, секвенировали и реклонировали в экспрессионном векторе для транзиторной трансфекции клеток НЕК293.

С этой целью на первой стадии области, кодирующие РаЬ, то есть легкую цепь антитела, сайт связывания бактериальной рибосомы и вариабельную область тяжелой цепи антитела, извлекали из фагмиды рестрикцией и вставляли в плазмиду экспрессии 1дС клеток млекопитающих в выходной части сигнальной последовательности эукариотического антитела и во входной части константной области тяжелой цепи 1дС1 человека. На второй стадии область, содержащую сайт связывания бактериальной рибосомы и бактериальный сигнальный пептид тяжелой цепи, заменяли последовательностью 1КЕ8 и эукариотической сигнальной последовательностью. 1дС экспрессировали транзиторной трансфекцией клеток НЕК293. Этот процесс подробно описан Т. 1о51оск с1 а1., 1оигиа1 оГ 1ттипо1о£юа1 МеИойз, 289 (2004), 65-80.

Пример последовательности константной области 1дС1 человека, которая может быть использована в настоящем изобретении, представляет собой последовательность 8ЕЦ ГО N0: 117.

Третичный посев осуществляли в испытании на пролиферацию модифицированных клеток Ва£/3, индуцируемую РСР2 и описанную в примере 4, для характеризования ингибирования антителами антиРСРК4, используя супернатанты культур клеток НЕК293, транзиторно трансфицированных экспрессионными векторами антител. Данный посев позволил идентифицировать антитела клонов 8, 31, 33 и 36. Соответствующие последовательности описаны в табл. 7.

Пример 4. Получение клоновой линии мышиных клеток ВаР/3 РСР-К4-ЬМр1 и методика клеточной пролиферации.

Внеклеточную и трансмембранную часть РСР-К4 клонировали транслирующим слиянием с внутриклеточным доменом ЬМр1 в мутантном векторе рЕР6/У5-Н15 А для получения в положении 5' метки НА перед химерным рецептором РСР-К4-ЬМр1.

Конструкция мутантного рЕР6А.

Вектор рЕР6/У5-Н15 А (1пуЬгодеп, номер по каталогу: У961-20) улучшали для интеграции полилинкера МС8 (сайт множественного клонирования), связанного с меткой НА, размещенной в сигнальном пептиде 1дСк рЭ|5р1ау (1пуЬгодеп, номер по каталогу: У660-20). С этой целью МС8, связанные с меткой НА и ее сигнальным пептидом, амплифицировали посредством РСК между прямым праймером последовательности 8ЕЦ ГО N0: 51 и обратным праймером последовательности 8ЕЦ ГО N0: 52, что позволяет вставлять сайты рестрикции Крп1 в положение 5' и ХЬа1 в положение 3'. Фрагмент РСК гидролизовали ферментами Крп1 и ХЬа1 и затем клонировали в векторе рЕР6/У5-Н15 А, раскрытом теми же ферментами. Наконец, первый сайт ВатН1 МС8 заменяли сайтом ВзгС1, гидролизуя вновь образованный вектор ферментами Крп1 и 8ре1 и вставляя между данными сайтами праймеры последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 53 и 8ЕЦ ГО N0: 54, гибридизованные между собой и содержащие ферментативный сайт ВзгСЕ Полученный вектор был назван рЕР6ти1-НА.

Конструкция вектора рЕР6ти1-НА-РСР-К4-ЬМр1.

Внутриклеточный домен Мр1 амплифицировали в векторе рЕР6/У5-Н15 Т0Р0 (1пуЬгодеп, номер по каталогу: К9610-20) между прямым праймером последовательности 8ЕЦ ГО N0: 55, позволяющим встраивать гидролизующий сайт 8ас1, и обратным праймером последовательности 8ЕЦ ГО N0: 56, называемой традиционно геуВСН. Затем полученные фрагменты РСК гидролизовали ферментами 8ас1 и ШН.

Внеклеточный и трансмембранный домен РСР-К4 амплифицировали посредством пары праймеров (прямой праймер: последовательность 8ЕЦ ГО N0: 57; обратный праймер: последовательность 8ЕЦ ГО N0: 58). Данные праймеры обеспечивают вставку ферментативных сайтов ВатН1 в положение 5' и 8ас1 в положение 3'. Затем полученный фрагмент РСК гидролизовали ферментами ВатН1 и 8ас1.

Затем амплификации ДНК, кодирующей ЬМр1 и РСР-К4, клонировали одновременно в векторе рЕР6ти1-НА, раскрытом ВатШ-ЛоЙ. Полученная в результате конструкция была названа рЕР6ти1-НАРСР-К4а111с-ЬМр12. Затем эту конструкцию улучшали направленным мутагенезом для замены трансмембранного домена РСР-К4 (белковая последовательность 8ЕЦ ГО N0: 59) последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 60. С этой целью использовали набор ОшскСЬапде® 8Ье-Фгес!ей ти1адепе51з (С1оп1есЬ, номер по каталогу: 200518) с прямым праймером последовательности 8ЕЦ ГО N0: 61 и обратным праймером последовательности 8ЕЦ ГО N0: 62.

Полученная новая химерная конструкция была названа рЕР6ти1-НА-РСР-К4а111сти1-ЬМр12.

Создание стабильной линии трансфекцией линии мышиных клеток ВаР/3 посредством конструкции РСР-К4а111сти1-ЬМр12.

Конструкцию рЕР6ти1-НА-РСР-К4а111сти1-ЬМр12 стабильно вставляли электропорацией в геном мышиных клеток ВаР/3. Полученную линию отбирали в присутствии РСР2 при 20 нг/мл (К&Э, номер по каталогу: 234-Р8Е-025) и гепарина при 100 нг/мл (81дта, номер по каталогу: Н3149). При этом трансфицированная и отобранная линия имеет клональный тип.

Методика клеточной пролиферации клеток линии ВаР/3-РСРК4-ЬМр1.

Клетки ВаР/3-РСРК4-ЬМр1 культивировали и сохраняли в полной среде КРМ1 1640 (ТиуЬгодеи, но- 18 021580 мер по каталогу: 32404-014) (10% 8УР (НусЬпе, номер по каталогу: 8Н30070.03), глутамин, 2 мМ, МЕМ Νοπ Еккепйа1 Αηιίπο Ас-ίά 1х (заменяемая аминокислота, СЬс^, номер по каталогу: 11 140-035), МЕМ 8οά^ит Р\ти\Ще 1х (пируват натрия, 6Λοο, номер по каталогу: 11360-039)), дополненной РСР2, 20 нг/мл (К&Э 8ук!ет, номер по каталогу: 234-Р8Е), и гепарином, 3 нг/мл (81§та, номер по каталогу: Н3149). В конце дня клетки высевали в количестве 0,4х10^б клетка/мл в полную среду КРМ1 1640, дополненную РСР2, 20 нг/мл, и гепарином, 3 нг/мл. На следующий день по 50 мкл суспензии клеток ВаР/3-РСРК4ЬМр1 в полной среде КРМ1 1640, дополненной РСР2, 20 нг/мл, и гепарином, 3 нг/мл, с концентрацией 0,2 х10⁶ клетка/мл вносили в лунки 96-луночного планшета (Ρογχ^η, номер по каталогу: 214006) с последующим добавлением 50 мкл супернатанта гибридомы, содержащего испытуемое антитело. Затем планшеты инкубировали при 37°С в атмосфере с 5% СО₂ в течение от 24 до 30 ч. Для определения уровня клеточной пролиферации содержание АТФ количественно определяли, добавляя 100 мкл реактива Се11 Тпег 6ι1ο Ьиттекеп! Се11 УЪЬПпу Аккау (Рготеща номер по каталогу: С7571) и измеряя люминесценцию люминометром.

Учитывали клоны, давшие в данном испытании сигнал на 50% меньше сигнала в полной среде КРМ1 1640, содержащей добавки РСР2, 20 нг/мл, и гепарина, 3 нг/мл.

В случае, когда антитела анти-РСРК4, являющиеся специфическими по отношению к РСР-К4, инкубировали с клетками Ва£/3-РСРК4-ЬМр1 с последующим добавлением РСР2, 20 нг/мл, и гепарина, 3 нг/мл, было замечено антагонистическое действие на клеточную пролиферацию. Из 39 испытуемых гибридом 14 способно ингибировать клеточную пролиферацию, индуцируемую РСР, клеток Ва£/3-РСРК4ЬМр1 в присутствии РСР2.

Анализом ЕЫ8А (фиг. 12) было доказано, что антитела-антагонисты анти-РСРК4 40-12 и 64-12 имеют сродство к белкам тРСРК4 мыши и ЬРСРК4(О2,П3) человека.

В заключение осуществляли последний посев по методике 8иг£асе Р1азтсп Ке^папсе (ВЕАсте 2000) для определения констант сродства антител анти-РСРК4. Взаимодействие между белком РСР-К4 и антителом анти-РСРК4, происходящее в супернатанте культуры гибридомы, исследовали после фиксации антитела анти-РСРК4 антителом анти-Рс, в свою очередь, зафиксированного на чипах СМ. Измерения кинетики осуществляли по методике Са^1аш е! а1., 2004. Апа1. ВюсЬет. 325: 301-307.

Были выбраны два антитела из числа антител, имеющих константы сродства от 10^-8 до 10^-9 М и константы скорости диссоциации от 10^-3 до 10^-5 с^-1. Характеристики данных антител представлены в табл. 1, приведенной ниже.

В качестве стандартного способа для определения К_о была использована методика 8иг£асе Р1азтсп Ке^папсе (ВЕЛгаге).

Таблица 1А

Константы сродства и ассоциации/диссоциации очищенных антител-антагонистов анти-РСРК4 40-12 и 64-12

Анти-ЕСЕЕ4	коп (М 1-с-1)	ко£т (с-1)	Ко (М)
40-12	1,94Е+05	1,26Е-03	6,50Е-09
64-12	1,05Е+04	6,02Е-04	5,75Е-08

Таблица 1В

Кинетические параметры связывания антител анти-РСРК4 клонов 8, 31, 33 и 36, измеренные по методике 8иг£асе Р1а5тсп Кезспапсе (ВЕАсрге 3000)

	й-ЕСЕЕ4-Н1зкад	т-ЕСЕК4-Н1зЕад
	Κοη (Μ’Ή’1)	Ко££ (с’1)	Ко (М)	Κοη (М^с-1)	Ко££ (с'1)	Ко (М)
Клон 8	8,93Е+05	2,92Е-04	3,27Е-10	1,20Е+06	1,36Е-04	1,15Е-10
Клон 31	6,4 8Е+05	9,80Е-04	1,52Е-09	9,14Е+05	1,80Е-03	1,97Е-09
Клон 33	8, 05Е+05	6,17Е-04	7,71Е-Ю	1,01Е+06	7,04Е-04	6,92Е-10
Клон 36	2,44Е+05	6,31Е-04	2,62Е-09	3, 30Е+05	7,52Е-04	2,28Е-09

Пример 5. Специфичность антител анти-РСРК4.

А - специфичность антитела анти-РСРК440-12 по отношению к РСР-К4.

Специфичность каждого антитела определяли способом ЕЫ8А по методике, описанной в примере 4. С этой целью исследовали способность каждого антитела связываться с каждым из РСР-К.

Данный эксперимент ясно показывает, что антитело 40-12 распознает только РСР-К4 и, следовательно, является специфическим по отношению к РСР-К4. Антитело 64-12 способно связываться, главным образом, с РСР-К4, а также слабо связываться с РСР-К3 (фиг. 7).

В - специфичность антител анти-РСРК4 клонов 8, 31, 33 и 36 по отношению к РСР-К4.

Специфичность каждого антитела определяли способом ЕЫ8А по описанной ниже методике. Суспензии фагов, имеющих на своей поверхности антитела формата РаЬ, получали инфицированием бактерий Е. 0·ο1ί. Антигены-ловушки фиксировали на чашках Хтти^п^ с иммобилизованным ферментом (УУК 8с1епййс 1пс. 8^еάекЬο^ο, N1). Затем добавляли суспензии фагов и далее детектировали с помо- 19 021580 щью антифагового антитела мыши М13, конъюгированного с пероксидазой (СЕ Неа11Ьсате, номер по каталогу: 27-9421-01, разведение 1:5000). Обнаружение осуществляли с субстратом ТМВ-Н₂0₂ (1п1етсЫш, номер по каталогу: ϋΡ664780), и измерения проводили по оптической плотности (0.Ώ.) при 450 нм. В табл. 2 кратко представлены полученные результаты.

С этой целью исследовали способность каждого антитела связываться с каждым из РСР-К. Данный эксперимент ясно показывает, что антитела клонов 8, 31, 33, 36 распознают только РСР-К4 и, следовательно, являются специфическими по отношению к РСР-К4.

Таблица 2

Специфичность антител анти-РСР-К4, происходящих от клонов 8, 31, 33 и 36, при определении по способу ЕЫ8Л (сигнале=0.Р. при 450 нм)

	Н-ЕСЕК4(ϋ2,Ό3)ЫзРад	Ь-ЕСЕК1-Ес	Н-ЕСЕК2-Ес	Н-ЕСЕКЗ-Ес
Клон 8	2,55	0, 05	0, 00	0, 00
Клон 31	2,52	0, 00	0, 00	0, 01
Клон 33	2,73	0,00	0, 00	-0,01
Клон 36	1,87	-0,01	-0, 01	-0,02

Пример 6. Антагонистическое действие антитела 40-12 и антител, происходящих от клонов 8, 31, 33, 36, на ангиогенез (ίη νίίτο).

Для определения биологической активности моноклонального антитела 40-12 анти-РСРК4 в ходе ангиогенеза эндотелиальных клеток человека проводили испытания по ангиогенезу ίη νίίτο с клетками НИУЕС, стимулированными посредством РСР2, в присутствии антитела 40-12 или антитела-свидетеля в дозах, увеличивающихся от 1 до 30 мкг/мл (фиг. 8А и 8В).

В итоге показано, что активное моноклональное антитело-антагонист анти-РСРК4 40-12 способно ингибировать ангиогенез клеток НИУЕС, индуцируемый РСР2, причем при дозе 30 мкг/мл или 200 нМ, тогда как антитело-свидетель 64-12 не оказывает какого-либо действия. Кроме того, антитело 40-12 не оказывает какого-либо собственного действия на базальный ангиогенез.

Полученные результаты указывают на то, что антитело, являющееся специфическим антагонистом РСР-К4, способно ингибировать ангиогенез.

Как и в случае антитела 40-12, антитела анти-РСРК4 клонов 8, 31, 33 и 36, полученных способом фагового дисплея, оценивали относительно их способности ингибировать ангиогенез эндотелиальных клеток человека типа НИУЕС, индуцируемый РСР-2. Эти 4 антитела блокируют стимуляцию ангиогенеза ίη νίίτο, вызванную посредством РСР-2, причем при дозе 10 мкг/мл (фиг. 8С и 8Ώ) .

Пример 7. Антагонистическое действие антитела 40-12 и антител, происходящих от клонов 8, 31, 33, 36, на клетки гепатокарциномы человека (ίη νίίτο).

Для определения противоопухолевого действия моноклонального антитела-антагониста антиРСРК4 40-12 проводили испытания на клетках гепатокарциномы человека Нер3Ь, в случае которой пролиферация и приводящие к ней пути сигнализации зависят от пары лиганд-рецептор РИР19/РИР-К4.

Во-первых, исследование путей сигнализации, зависящих от РСР-К4 и приводящих к пролиферации клеток Нер3Ь, осуществляли способом вестерн-блоттинга. Такая клеточная сигнализация происходит посредством неосинтеза белков сΡοз и .ΙιιηΒ, а также фосфорилирования Егк1/2 (Είη еί а1., I. ΒίοΙ. СЬет., 2007, 14:27277-84). С этой целью 5х10⁵ клеток высевали в чашку диаметром 35 мм в 2 мл полной среды (ИМЕМ, 10% 8УР, 2 мМ глутамина). Через 24 ч клетки помещали в условия дефицита питания на 24 ч в 1,8 мл бессывороточной среды. Затем клетки стимулировали в течение 3 ч посредством 200 мкл РСР19, сконцентрированного в 10 раз, в отсутствие или в присутствии контрольного антитела антиРСРК4 или антитела 40-12. Далее среду удаляли, клетки промывали один раз холодным ΡΒ8 и лизировали в чашке в течение 30 мин при 4°С посредством 75 мкл буферного раствора ΚΕΡΆ, дополненного ингибитором протеазы. Затем общий белковый экстракт центрифугировали в течение 10 мин при 4°С и 13000 об/мин и супернатант анализировали способом вестерн-блоттинга. Далее мембраны инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре в смеси ТВ8, 0,05% твин, 5% молока и затем добавляли первичное антитело анти-сΡοз (Се11 8ιπηπ1ιηπ ТесЬ^^у, номер по каталогу: 2250), анти-.ΙιιηΒ (Се11 8ιπηπ1ιηπ ТесЬηοίο^, номер по каталогу: 3746) и анти-фосфоЕгк1/2 (Се11 8ιπηπ1ιηπ ТесЬ^Ьду, номер по каталогу: 4377) с соотношением 1/1000 и инкубировали в течение ночи при 4°С и медленном перемешивании. Мембрану промывали три раза смесью ТВ8 и 0,05% Твин и вторичное антитело, конъюгированное с НКР, инкубировали в течение 4 ч при 4°С при соотношении 1/2000 в смеси ТВ8, 0,05% Твин, 5% молока. Затем результаты вестерн-блоттинга выражали количественно посредством программы СЬет1дешиз (8^ββηβ). Интенсивность полос, полученных с различными антителами, сравнивали с интенсивностью полос, полученных с антиактиновым антителом, непосредственно связанным с НКР и используемым при соотношении 1/3000 (8ан1а Οήζ Β^οίесЬηο1οду, номер по каталогу: 8с-8432-НКР).

РСР19 при 30 нг/мл индуцирует синтез белков .ΙιιηΒ и сΡοз, а также фосфорилирование Егк1/2 в клетках Нер3Ь. Неосинтез белка и фосфорилирование Егк полностью ингибируется антителом антиРСРК4 40-12 при 100 мкг/мл, тогда как контрольное антитело не оказывает какого-либо ингибирующего

- 20 021580 действия. Эффекты, проявившиеся на мембранах вестерн-блоттинга (фиг. 9А), выражали количественно и интенсивность полос каждой мембраны отображали графически (фиг. 9В).

Во-вторых, проводили испытания в отношении собственно клеточной пролиферации. 5000 клеток высевали в лунки 96-луночного планшета в 100 мкл среды ЭМЕМ, 10% ЗУР, 2 мМ глутамина. Через 24 ч клетки помещали в условия дефицита питания на 24 ч в культуральную бессывороточную среду. Затем клетки Нер3Ъ стимулировали в течение 72 ч посредством 100 мкл бессывороточной среды, дополненной РОР19, 10 нг/мл (продукция для собственных нужд Запой-Ауепйк К&Э), или 10% сыворотки, в отсутствие или в присутствии антитела-свидетеля или моноклонального антитела-антагониста анти-РОРК4 4012. Через 3 дня клеточную пролиферацию количественно определяли с помощью набора СеПТйет О1о (Рготеда, Франция).

Из данных испытаний следует, что сыворотка, а также РОР19 способны стимулировать пролиферацию Нер3Ъ. Антитело-антагонист анти-РОРК4 40-12 ингибирует частично при 100 мкг/мл такую пролиферацию, индуцированную сывороткой, тогда как антитело-свидетель не проявляет ингибирующей активности (фиг. 10А). Кроме того, антитело 40-12 при 10 мкг/мл полностью блокирует пролиферацию, индуцированную РОР19 (фиг. 10В). Антитело-свидетель не оказывает такого действия.

Эти обстоятельства доказывают, что антагонист анти-РОРК4, представляющий собой объект настоящего изобретения, может быть использован в качестве противоопухолевого терапевтического средства в случае опухолей, зависящих от РОР19 или РОР-К4, и это антитело может быть особенно эффективным в лечении гепатокарцином.

Для упрощения исследования действия антител анти-РОРК4 на клетки Нер3Ъ способ ЕЫЗА был доработан для детектирования фосфорилирования Егк1/2 с последующей стимуляцией этих клеток посредством РОР-19 (в корреляции с испытаниями, описанными в примере 8), РОР-2 или фетальной телячьей сыворотки.

С этой целью 50000 клеток Нер3Ъ высевали в лунки 96-луночного планшета с черным прозрачным дном (СОЗТАК, номер по каталогу: 3603) в 100 мкл среды ЭМЕМ, 10% ЗУР, 2 мМ глутамина. Через 24 ч клетки помещали в условия дефицита питания на 24 ч в среду ЭМЕМ, 10% ЗУР, 2 мМ глутамина. Затем среду удаляли аспирацией и заменяли 100 мкл предварительно кондиционированной при 37°С дефицитной среды, содержащей РОР или ЗУР, а также испытуемые антитела в различных дозах. Клетки инкубировали в течение 3 ч при 37°С в атмосфере с 5% СО₂. Затем стимулирующую среду удаляли аспирацией, лунки промывали РВЗ при 4°С и клетки фиксировали добавлением 200 мкл 4%-го раствора РРА (параформальдегид) в РВЗ в течение 15 мин при комнатной температуре. РРА удаляли и клетки промывали РВЗ три раза по 200 мкл. Мечение антителами для детектирования фосфо-Егк1/2 непосредственно на клетках Нер3Ъ начинали насыщением неспецифических сайтов 100 мкл насыщающего буферного раствора (21,25 мл РВЗ, 1,25 мл 10%-й неиммунной козьей сыворотки (2утеб, номер по каталогу: 50-062Ζ) , 75 мкл тритона Х100) в течение 2 ч. Насыщающий буферный раствор заменяли 50 мкл первичного антитела анти-фосфо-Егк1/2 (Се11 З1дпайпд ТесНпо1оду, номер по каталогу: 4377), разведенного при соотношении 1/100 в смеси буферного раствора РВЗ, 1% ВЗА, 0,3% тритона Х100. Первичное антитело инкубировали с клетками в течение ночи при 4°С. Затем промывали 3 порциями по 200 мкл РВЗ и обнаруживали с помощью вторичного антикроличьего антитела, конъюгированного с реактивом А1ехаР1иог 488 (Мо1еси1аг РгоЪек, номер по каталогу: А11008), разведенного при соотношении 1/5000 в смеси буферного раствора РВЗ, 1% ВЗА, 0,3% тритона Х100, в течение 4 ч. Затем вторичное антитело промывали 3 порциями по 200 мкл РВЗ и далее в каждую лунку добавляли по 100 мкл РВЗ. Флюоресценцию измеряли в положении сверху микропланшетным фотометром типа Епуйюп 2103 Ми1!йаЪе1 Кеабег (Регк1п Е1тег), используя фильтр Р1ТС.

Такая методика позволяет подтвердить, что РОР-19 при 30 нг/мл индуцирует фосфорилирование Егк1/2 в клетках Нер3Ъ, и антитело 40-12 способно блокировать эту стимуляцию при дозе 3 мкг/мл (фиг. 9С). Как РОР-2, так и сыворотка также способны индуцировать систему. В случае 2 последних веществ антитело 40-12 ингибирует эффект РОР-2 и сыворотки при дозах более высоких (30-100 мкг/мл; фиг. 9С).

Детектирование фосфо-Егк1/2 способом ЕЫЗА также позволило показать, что активные антитела анти-РОРК4 на модели ангиогенеза ш уйго также способны на 70-95% блокировать фосфорилирование Егк1/2, индуцируемое РОР-19 с дозой 3 мкг/мл (фиг. 9Ό).

Антитела по настоящему изобретению предпочтительно обладают антагонистическим действием одновременно в отношении патологического ангиогенеза, связанного с развитием опухоли, и в отношении собственно роста опухоли печени, в частности, на модели гепатокарциномы.

Пример 8. Антагонистическое действие антитела 40-12 на мышиной модели рака поджелудочной железы.

В данной фармакологической модели использовали самок мышей Кр1-Тад2 (СНаг1ек Кует ЬаЪота!огу, Франция) генетического фонда С57В1/6Р Животным, начиная с 9-й недели после рождения, давали для питья воду, содержащую 5% сахарозы. Мышей обрабатывали в период с 10-й недели до 12,5 недель согласно методике вмешательства, выполняя один раз в неделю подкожно инъекцию антитела антиРОРК4 40-12 или контрольного антитела с дозой 25 мг/кг (фиг. 14А). Данная методика утверждена Комитетом по экспериментам на животных (Атта1 Саге апб Ике Соттй!ее) подразделения Запой-Ауепйк

- 21 021580

КесЬегсЬе. Зоотехнический комплекс авторов, уход за животными, а также методики обработки соответствуют обязательным принципам Европейской конвенции по защите позвоночных животных и эвтаназии после периода обработки или в случае тяжести опухолей и/или вторичных явлений, обязывающих исключать животных из исследования. По мере тяжести опухолей животных подвергали эвтаназии в конце эксперимента, и опухоли микротомировали, используя поджелудочную железу непосредственно после удаления. Объем опухоли в мм³ определяли с помощью штангенциркуля по формуле [объем=0,52 х (ширина)² х (длина)] для сопоставления с объемом сфероида. Тяжесть опухолей мышей рассчитывали по совокупности объемов опухолей каждой из мышей.

Для гистохимического анализа численной плотности сосудов животных анестезировали, отбирали поджелудочную железу, фиксировали в течение ночи в средстве асси81аш® (§1§та) и затем покрывали парафином. Для каждого образца готовили срезы толщиной 5 мкм. Эндотелиальные клетки детектировали, выдерживая срезы с трипсином (Ζνιικύ. номер по каталогу: 00-3003) при 37°С в течение 10 мин, затем с антителом мыши анти-СО31, полученным от крысы и разведенным при соотношении 1/50 (ΒΌ РЬагтшдеп). Для обнаружения областей, меченных антителом, срезы выдерживали с антикрысиным антителом, конъюгированным с биотином, в течение 30 мин, затем со стрептавидином, конъюгированным с НРР, в течение также 30 мин (Уес1а81аш® АВС кй УесЮг) и, наконец, с ΌΑΒ в течение 5 мин (УесЮг, номер по каталогу: 8К4100). Затем срезы метили гематоксилином, разведенным при соотношении 1/10 (Эако, 8-3309). Снимки делали с помощью камеры, установленной на микроскоп (№коп, Е-800) с 200кратным общим увеличением. Изображения анализировали с помощью компьютерной программы (У18Ю1аЬ, Βίο^ιη). Число кровеносных сосудов в опухоли подсчитывали и классифицировали в зависимости от их площади поверхности: мелкие сосуды - от 5 до 20 мкм², средние сосуды - от 21 до 100 мкм² и крупные сосуды - более 101 мкм². Два препарата поджелудочной железы канализовали для определения численной плотности сосудов, соответствующей общему числу меченых элементов в поле зрения.

В данной модели введение подкожно антитела анти-РОРК4 40-12 с дозой 25 мг/кг один раз в неделю в промежутке от десятой по двенадцатую неделю позволяет уменьшить тяжесть опухолей на 55%, т.е. значительным образом (фиг. 11В), и с тенденцией уменьшения на 34% числа опухолей поджелудочной железы (фиг. 11С), тогда как контрольная обработка не оказывает какого-либо действия. Ингибирование развития опухолей с помощью антитела анти-РОРК4 40-12 сопровождается значительным уменьшением на 31% общей численной плотности сосудов (фиг. 11Ό), соответствующим наблюдаемому уменьшению числа кровеносных сосудов в совокупности групп по размерам сосудов, меченных антителом анти-СЭ31 (фиг. 11Ό).

Полученные результаты ίη νΐνο ясно показывают, что антитело-антагонист анти-РОРК4 способно ингибировать увеличение числа и образование кровеносных сосудов в опухоли. Такое ингибирование васкуляризации опухолей сопровождается уменьшением числа опухолей поджелудочной железы и общего объема опухолей.

Антитела по настоящему изобретению предпочтительно обладают антагонистическим действием одновременно в отношении патологического ангиогенеза и в отношении роста опухоли печени (на модели гепатокарциномы) и поджелудочной железы.

Пример 9. Перекрестная реактивность антитела по отношению к Р0Р-К4 человека, мыши и крысы.

На первой стадии проводили сравнительные испытания на связывание. С этой целью, РОР2 метили на уровне 2 свободных цистеиновых остатков реактивом А1е.\аРйюг®® 488 нм, С-5 малеинимид (МЫеси1аг РгоЬез, А10254) , согласно рекомендациям поставщика. Полученный РОР2-АР488 при 10 нг/мл способен связываться с Р0Р-К4 человека, экспрессируемым на поверхности трансфицированных клеток 30019 (фиг. 8). Такое связывание является специфическим, так как добавление избытка немеченого РОР2 позволяет заместить взаимодействие РОР2/РОР-К4 (фиг. 8А). Такое же испытание проводили, добавляя увеличивающиеся дозы антитела 40-12 или антитела-свидетеля 64-12. Только антитело-антагонист 40-12 способно заменять связь РОР2-АР488/РОР-К4, причем с 1С₅₀, равной 3500 нг/мл или 23 нМ, свидетельствуя, что антагонистическое действие этого антитела, возможно, обязано его способности заменять связь РОР/РОР-К4.

На второй стадии для определения приемлемости клона 40-12 для блокирования связи Р0Р/Р0Р-К4 у других видов, отличающихся от человека, проводили испытания на диссоциацию связей РОР2/РОР-К4 мыши и крысы по сравнению с человеком. С этой целью РОР2 мыши (Κ&Ό, номер по каталогу: 3139-ΡΒ025) или крысы (Κ&Ό, номер по каталогу: 3339-ΡΒ-025) метили аналогично РОР2 человека реактивом А1е.\аРйюг 488. Испытания на диссоциацию осуществляли, используя линии 300-19, трансфицированные рецепторами Р0Р-К4 мыши или крысы. Результаты показывают, что антитело-антагонист анти-РОРК4 40-12 способно вызывать диссоциацию связи РОР2/РОР-К4 в системе мыши или крысы с такой же эффективностью, что и в системе человека. На практике 1С₅₀ равно 3500, 4110 и 3940 нг/мл или 23, 27 и 26 нМ для комплексов РОР2/РОР-К4 человека, мыши или крысы соответственно (фиг. 13А, 13В и 13С соответственно). Такая способность связываться с РОР-К4 грызунов была проверена способом ЕЬ18А. Антитело 40-12 связывается также хорошо с РОР-К4 человека и мыши (фиг. 12).

Полученные результаты указывают на то, что антитело анти-РОРК440-12 может быть использовано

- 22 021580 в фармакологических моделях с грызунами (по меньшей мере, в случае мышей и крыс), и полученные результаты, возможно, должны предсказывать эффективность в отношении человека.

Исследования, проведенные с антителами, происходящими от клонов 8, 31, 33 и 36, также показывают, что данные антитела распознают одновременно РОР-К4 человека и РОР-К4 мыши (см. табл. 4).

Таблица 4

Кинетические параметры связывания антител анти-РОРК4 клонов 8, 31, 33 и 36, измеренные по методике ЗшТасе Р1а§топ Кеюпапсе (В1Асоге 3000)

	Н-ЕСЕК4-НгзОад	т-ЕСЕК4-Н15-Ьад
	Коп цЫс’1)	Ко££ (с'1)	Ко (М)	коп (м’У'1)	Ко££ (с4)	Ко (М)
Клон 8	8,93Е+05	2,92Е-04	3,27Е-10	1,20Е+06	1,36Е-04	1,15Е-10
Клон 31	6,48Е+05	9,80Е-04	1,52Е-09	9, 14Е + 05	1,80Е-03	1,97Е-09
Клон 33	8,05Е+05	6,17Е-04	7,71Е-10	1,01Е+06	7,04Е-04	6,92Е-10
Клон 36	2,44Е+05	6,31Е-04	2,62Е-09	3,30Е+05	7,52Е-04	2,28Е-09

Пример 10. Определение эпитопа, распознаваемого антителами анти-РОРК4.

А - определение эпитопа, распознаваемого антителом анти-РОРК4 40-12.

Посев осуществляли способом ЕЫЗА для определения специфического домена РОРК4, распознаваемого антителом 40-12. Благодаря использованию в способе ЕЫЗА делетированной формы домена Ό1 РОР-К4, было установлено, что антитело 40-12 взаимодействовало на уровне доменов Ό2-Ό3 РОР-К4 (фиг. 12).

Второй посев осуществляли способом ЕЫЗА, используя в качестве антигена-ловушки конструкты, содержащие домен Ό1 (ЗАВУА4794), или домен Ό2 (ЗАВУА4796), или домен Ό3 (ЗАВУА4799) белка ЙРОРК4, как описано в примере 2. Антиген-ловушку фиксировали на чашках 1тти1оп-4 с иммобилизованным ферментом (У^К Зщепййс 1пс. З^ейезЬого, N1). Затем добавляли гибридому 40-12 и далее детектировали с помощью антимышиного антитела кролика 1§О, конъюгированного с пероксидазой (З1дта, номер по каталогу: А9044 - разведение 1:50000). Обнаружение осуществляли с субстратом ТМВН₂О₂ (1п1егсЫт, номер по каталогу: ЦР664780) и измерения проводили по оптической плотности (0.Ό.) при 450 нм. В табл. 5 кратко представлены полученные результаты.

Таблица 5

Определение связывания антитела 40-12 с различными субдоменами РОР-К4

Исследуемый домен	т 5АВУА4794	02 ЗАВУА4796	ОЗ ЗАВУА4799	ϋ1-ϋ3 ЕСГВ4-ЕС
Сигнал (О.О. при 450 нм)	0, 185	3,000	0,105	3,000

Таким образом, антитело анти-РОРК4 распознает домен Ό2 внеклеточной части белка РОРК4.

С другой стороны, белок РОРК4-РС, денатурированный посредством ЗИЗ, не распознается антителом 40-12 при анализе способом вестерн-блоттинга, что указывает на то, что эпитоп, выбранный в качестве мишени для антитела 40-12 в домене Ό2 РОРК4, имеет конформационный тип.

В - определение эпитопа, распознаваемого антителами анти-РОРК4 клонов 8, 31, 33, 36.

Посев осуществляли способом ЕЫЗА для определения специфического домена РОРК4, распознаваемого антителами клонов 8, 31, 33, 36, используя в качестве антигена-ловушки конструкты, содержащие как домены Ό2 и Ό3 (ЗЕр ΙΌ N0: 42), так и белок ЬРОРК4-Н1§1а§ (ЗАВУА4614, ЗЕр ΙΌ N0: 40). Антиген-ловушку фиксировали на чашках 1тти1оп-4 с иммобилизованным ферментом (У^К Зщепййс 1пс. Змебе^Ього. N1). Затем добавляли супернатанты культур НЕК293, транзиторно трансфицированных плазмидами, обеспечивающими секрецию антител клонов 8, 31, 33, 36, и далее детектировали с помощью античеловеческого антитела кролика Ι§Θ, конъюгированного с пероксидазой (ИакоСу1отайоп, номер по каталогу: Р0214 - разведение 1:5000). Обнаружение осуществляли с субстратом ТМВ-Н₂0₂ (1п1егсЫт, номер по каталогу: ЦР664780), и измерения проводили по оптической плотности (0.Ό.) при 450 нм. В приведенной ниже табл. 6 кратко представлены полученные результаты.

Таблица 6

Связывание антител, происходящих от клонов 8, 31, 33 и 36, с целым РОР-К4 или субдоменом Ό2-Ό3 (сигнал 0.Ό. при 450 нм)

	ЬЕСЕВ4-Н1з0ад	НГСГВ4 (02,03) -ШзКад
Клон 8	3,898	3,860
Клон 31	3,859	3,741
Клон 33	3,752	3, 621
Клон 36	3,751	3, 616

Таким образом, антитела клонов 8, 31, 33 и 36 распознают домен Ό2-Ό3 внеклеточной части белка

РОРК4.

- 23 021580

Таблица 7

Использованные, полученные и расшифрованные последовательности

	Нуклеотидные последовательности	Белковые последовательности
Антитело 40-12
УН+СН	ЗЕО Ю N0:1	ЗЕО Ю N0:2
УН+СЪ	ЗЕО Ю N0:3	ЗЕО Ю N0:4
УН	ЗЕО Ю N0:5	ЗЕО Ю N0:6
УЬ	ЗЕО Ю N0:7	ЗЕО Ю N0:8
СОН УН		ЗЕО Ю N0:9, 10, 11
СОН УЬ		ЗЕО Ю N0:12, 13, 14
Антитело 64-12
УН+СН	ЗЕО Ю N0:15	ЗЕО Ю N0:16
УЬ+СЬ	ЗЕО Ю N0:17	ЗЕО Ю N0:18
УН	ЗЕО Ю N0:19	ЗЕО Ю N0:20
УЬ	ЗЕО Ю N0:21	ЗЕО Ю N0:22
СОН УН		ЗЕО Ю N0:23, 24, 25
СОН УЬ		ЗЕО Ю N0:26, 27, 28
Гуманизированные последовательности
Легкая цепь 1	ЗЕО Ю N0:29	ЗЕО Ю N0:30
Легкая цепь 2	ЗЕО Ю N0:31	ЗЕО Ю N0:32
Тяжелая цепь 1	ЗЕО Ю N0:33	ЗЕО Ю N0:34
Тяжелая цепь 2	ЗЕО Ю N0:35	ЗЕО Ю N0:36
Тяжелая цепь 3	ЗЕО Ю N0:37	ЗЕО Ю N0:38
Конструкции
ЦЕСЕН4-Н1зЬад	ЗЕО Ю N0:39	ЗЕО Ю N0:40
НЕСЕН4-ЗЬгерЬад	ЗЕО Ю N0:68	ЗЕО Ю N0:69
НЕСЕН4(02,03)НгзЬад	ЗЕО Ю N0:41	ЗЕО Ю N0:42
тГСГН4-Н1зСад	ЗЕО 10 N0:43	ЗЕО Ю N0:44
НЕСЕН1-Ес	ЗЕО Ю N0:45	ЗЕО Ю N0:46
НЕСЕН2-ЕС	ЗЕО Ю N0:47	ЗЕО Ю N0:48
ГЕСЕН4	ЗЕО Ю N0:49	ЗЕО Ю N0:50
Последовательности -праймеры для получения клоновой линии (пример 4)	ЗЕО Ю N0:51, 52, 53, 54, 55, 56, 58 ЗЕО Ю N0:61, 62
Трансмембранный домен Е6ЕН4		ЗЕО Ю N0:59, 60
Олигонуклеотидыпраймеры таблица 1	ЗЕО Ю N0:63, 64, 65, 66, 67
Эпитоп в домене ϋ2		ЗЕО Ю N0:70
Антитело клона 8
Целая легкая цепь Легкая цепь СОН	ЗЕО Ю N0:71	ЗЕО Ю N0:72 ЗЕО Ю N0:73, 74, 75
Целая тяжелая цепь Тяжелая цепь СОН	ЗЕО Ю N0:76	ЗЕО Ю N0:77 ЗЕО Ю N0:78, 79, 80

Антитело клона 31
Целая легкая цепь Легкая цепь СОН	ЗЕО Ю N0:81	ЗЕО Ю N0:82 ЗЕО Ю N0:83, 84, 85
Целая тяжелая цепь Тяжелая цепь СОН	ЗЕО Ю N0:86	ЗЕО Ю N0:87 ЗЕО 10 N0:88, 89, 90
Антитело клона 33
Целая легкая цепь Легкая цепь СОН	ЗЕО Ю N0:91	ЗЕО Ю N0:92 ЗЕО Ю N0:93, 94, 95
Целая тяжелая цепь Тяжелая цепь СОН	ЗЕО Ю N0:96	ЗЕО Ю N0:97 ЗЕО Ю N0:98, 99, 100
Антитело клона 36
Целая легкая цепь Легкая цепь СОН	ЗЕО Ю N0:101	ЗЕО Ю N0:102 ЗЕО Ю N0:103, 104, 105
Целая тяжелая цепь Тяжелая цепь СОН	ЗЕО Ю N0:106	ЗЕО Ю N0:107 ЗЕО Ю N0:108, 109, 110
Субдомены внеклеточной части белка НЕСЕН4, присоединенные к домену Ес 1дС1
ССЕСН4 01::Рс	ЗЕО Ю N0:111	ЗЕО Ю N0:112
ССЕСН4 02::Гс	ЗЕО Ю N0:113	ЗЕО Ю N0:114
ЬСЕСН4 03::Ес	ЗЕО Ю N0:115	ЗЕО Ю N0:116
Последовательность константного участка 1дС1 человека		ЗЕО Ю N0:117

- 24 021580

Список последовательностей <110> 5ΑΝΟΡΙ-ΑνΕΝΤΙ3 <120> Специфические антагонисты рецептора РСР-К4 <130> РК2008-072 РСТ <160> 117 <170> Ра/епЫп уегзгоп 3.3 <210> 1 <211> 1389 <212> ДНК <213> Миз зр.

<220>

<221> СОЗ <222> (1)..(1389) <400> 1 ард аас адд сРР асР Рсс Рса РРд сРд сРд сРд аРР дрс ссР дса РаЪ 48

Мер Азп Агд Ьеи ТЬг Зег Зег Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Не Уа1 Рго А1а Туг

10 15 дрс сРд Рсс сад дРР асР сРд ааа дад РсР ддс ссР ддд аРа РРд сад 96

Уа1 Ьеи Зег С1п Уа1 ТЬг Ьеи Ьуз 61и Зег 61у Рго 61у Не Ьеи С1п

25 30 ссс Рсс сад асс сРс адр сРд асР РдР РсР РРс РсР ддд РРР Рса сРд 144

Рго Зег С1п ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег РЬе Зег С1у РЬе Зег Ьеи

40 45 аде асР РсР ддР ард ддр дРд аде Рдд аРР сдр сад ссР Рса дда аад 192

Зег ТЬг Зег С1у МеР С1у Уа1 Зег Тгр Не Агд С1п Рго Зег С1у Ьуз

55 60 ддр сРд дад Рдд сРд дса сас аРР Рас Рдд дар дар дас аад сдс РаР 240

С1у Ьеи С1и Тгр Ьеи А1а Н1з Не Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг

70 75 80 аас сса Рсс сРд аад аде едд сРс аса аРс Рсс аад дар асс Рсс аде 288

Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТЬг Не Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Зег

90 95 аас сад дРа РРс сРс аад аРс асс адр дРд дас асР дса дар асР дсс 336

Азп С1п Уа1 РЬе Ьеи Ьуз Не ТЬг Зег Уа1 Азр ТЬг А1а Азр ТЬг А1а

100 105 110 аса Рас Рас РдР дсР еда даР Рас Рас дер адр аде РРР дас Рас Рдд 384

ТЬг Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг Туг А1а Зег Зег РЬе Азр Туг Тгр

115 120 125 ддс саа ддс асс асР сРс аса дрс Рсс Рса дсс ааа асд аса ссс сса 432

С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго

130 135 140

РсР дРс РаР сса сРд дсс ссР дда РсР дсР дсс саа асР аас Рсс аРд 480

Зег Уа1 Туг Рго Ьеи А1а Рго С1у Зег А1а А1а С1п ТЬг Азп Зег МеР

145 150 155 160 дРд асс сРд дда Рдс сРд дрс аад ддс РаР РРс ссР дад сса дРд аса 528

Уа1 ТЬг Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у Туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг

165 170 175 дРд асс Рдд аас РсР дда Рсс сРд Рсс аде ддр дРд сас асс РРс сса 576

Уа1 ТЬг Тгр Азп Зег С1у Зег Ьеи Зег Зег С1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго

180 185 190 дсР дрс сРд сад РсР дас сРс Рас асР сРд аде аде Рса дРд асР дрс 624

А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Азр Ьеи Туг ТЬг Ьеи Зег Зег Зег Уа1 ТЬг Уа1

195 200 205 ссс Рсс аде асс Рдд ссс аде дад асс дРс асс Рдс аас дРР дсс сас 672

Рго Зег Зег ТЬг Тгр Рго Зег 61и ТЬг Уа1 ТЬг Суз Азп Уа1 А1а Шз

210 215 220 ссд дсс аде аде асс аад дРд дас аад ааа аРР дРд ссс адд дар РдР 720

Рго А1а Зег Зег ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Не Уа1 Рго Агд Азр Суз

225 230 235 240 ддр РдР аад ссР Рдс аРа РдР аса дРс сса даа дРа Рса РсР дрс РРс 768

С1у Суз Ьуз Рго Суз Не Суз ТЬг Уа1 Рго С1и Уа1 Зег Зег Уа1 РЬе

245 250 255 аРс РРс ссс сса аад ссс аад дар дРд сРс асс аРР асР сРд асР ссР 816

Не РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 Ьеи ТЬг Не ТЬг Ьеи ТЬг Рго

260 265 270 аад дрс асд РдР дРР дРд дРа дас аРс аде аад дар дар ссс дад дрс 864

Ьуз Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Ча1 Азр Не Зег Ьуз Азр Азр Рго С1и Уа1

275 280 285 сад РРс аде Рдд РРР дРа даР даР дРд дад дРд сас аса дсР сад асд 912

С1п РЬе Зег Тгр РЬе Уа1 Азр Азр Уа1 С1и Уа1 Н1з ТЬг А1а С1п ТЬг

290 295 300 саа ссс едд дад дад сад РРс аас аде асР РРс сдс Рса дРс адр даа 960

61п Рго Агд С1и 61и С1п РЬе Азп Зег ТЬг РЬе Агд Зег Уа1 Зег С1и

305 310 315 320 сРР ссс аРс аРд сас сад дас Рдд сРс ааР ддс аад дад РРс ааа Рдс 1008

Ьеи Рго Не Мер Шз Θΐη Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и РЬе Ьуз Суз

325 330 335 адд дрс аас адр дса дсР РРс ссР дсс ссс аРс дад ааа асс аРс Рсс 1056

Агд Уа1 Азп Зег А1а А1а РЬе Рго А1а Рго Не <31и Ьуз ТЬг Не Зег

340 345 350 ааа асс ааа ддс ада ссд аад дсР сса сад дРд Рас асс аРР сса ссР 1104

Ьуз ТЬг Ьуз С1у Агд Рго Ьуз А1а Рго 61п Уа1 Туг ТЬг Не Рго Рго

355 360 365 ссс аад дад сад ард дсс аад даР ааа дрс адр сРд асс Рдс ард аРа 1152

Рго Ьуз С1и С1п Мер А1а Ьуз Азр Ьуз Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Мер Не

370 375 380 аса дас РРс РРс ссР даа дас аРР асР дРд дад Рдд сад Рдд ааР ддд 1200

ТЬг Азр РЬе РЬе Рго С1и Азр Не ТЬг Уа1 С1и Тгр С1п Тгр Азп С1у

385 390 395 400 сад сса дед дад аас Рас аад аас асР сад ссс аРс ард дас аса даР 1248

С1п Рго А1а С1и Азп Туг Ьуз Азп ТЬг С1п Рго Не Мер Азр ТЬг Азр

405 410 415 ддс РсР Рас РРс дрс Рас аде аад сРс ааР дРд сад аад аде аас Рдд 1296

С1у Зег Туг РЬе Уа1 Туг Зег Ьуз Ьеи Азп Уа1 С1п Ьуз Зег Азп Тгр

420 425 430 дад дса дда ааЕ асЕ ЕЕс асе Еде ЕсЕ дЕд ЕЕа саЕ дад ддс сЕд сас 1344

С1и А1а (Ну Азп ТНг РНе ТНг Суз Зег Уа1 Ьеи ΗΪ5 С1и С1у Ьеи Нгз

435 440 445 аас сас саС асЕ дад аад аде сЕс Есс сас ЕсЕ ссЕ ддЕ аад Еда 1389

Азп ΗΪ3 ΗΪ3 ТНг (Ни Ьуз Зег Ьеи Зег Ητ3 Зег Рго С1у Ьуз

450 455 460 <210> 2 <211> 462 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 2

МеЕ Азп Агд Ьеи ТНг Зег Зег Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Не Уа1 Рго А1а Туг 15 10 15

Уа1 Ьеи Зег (Нп Уа1 ТНг Ьеи Ьуз (Ни Зег С1у Рго С1у Не Ьеи 61η 20 25 30

Рго Зег (Нп ТНг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз Зег РНе Зег (Ну РНе Зег Ьеи 35 40 45

Зег ТНг Зег б1у МеЕ (Ну Уа1 Зег Тгр Не Агд С1п Рго Зег (Ну Ьуз 50 55 60

С1у Ьеи С1и Тгр Ьеи А1а ΗΪ3 Не Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг 65 70 75 80

Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТНг Не Зег Ьуз Азр ТНг Зег Зег 85 90 95

Азп (Нп Уа1 РНе Ьеи Ьуз Не ТНг Зег Уа1 Азр ТНг А1а Азр ТНг А1а 100 105 110

ТНг Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг Туг А1а Зег Зег РНе Азр Туг Тгр 115 120 125

С1у (Нп (Ну ТНг ТНг Ьеи ТНг Уа1 Зег Зег А1а Ьуз ТНг ТНг Рго Рго 130 135 140

Зег Уа1 Туг Рго Ьеи А1а Рго С1у Зег А1а А1а (Нп ТНг Азп Зег МеЕ 145 150 155 160

Уа1 ТНг Ьеи (Ну Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у Туг РНе Рго (Ни Рго Уа1 ТНг 165 170 175

Уа1 ТНг Тгр Азп Зег (Ну Зег Ьеи Зег Зег 61у Уа1 ΗΪ3 ТНг РНе Рго 180 185 190

А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Азр Ьеи Туг ТНг Ьеи Зег Зег Зег Уа1 ТНг Уа1 195 200 205

Рго Зег Зег ТНг Тгр Рго Зег (Ни ТЬг Уа1 ТНг Суз Азп Уа1 А1а ΗΪ3 210 215 220

Рго А1а Зег Зег ТНг Ьуз \7а1 Азр Ьуз Ьуз Не Уа1 Рго Агд Азр Суз 225 230 235 240 (Ну Суз Ьуз Рго Суз Не Суз ТНг Уа1 Рго СЯи Уа1 Зег Зег Уа1 РНе 245 250 255

Не РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр \7а1 Ьеи ТНг 11е ТНг Ьеи ТНг Рго 260 265 270

Ьуз Уа1 ТНг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Не Зег Ьуз Азр Азр Рго С1и Уа1 275 280 285

СЯп РНе Зег Тгр РНе Уа1 Азр Азр Уа1 61и Уа1 Ηίβ ТНг А1а (Нп ТНг 290 295 300

СЯп Рго Агд (Ни (Ни С1п РНе Азп Зег ТНг РНе Агд Зег Уа1 Зег (Ни 305 310 315 320

Ьеи Рго Не МеЕ ΗΪ5 (Нп Азр Тгр Ьеи Азп (Яу Ьуз (Ни РНе Ьуз Суз 325 330 335

Агд Уа1 Азп Зег А1а А1а РНе Рго А1а Рго Не (Ни Ьуз ТНг Не Зег 340 345 350

Ьуз ТНг Ьуз (Ну Агд Рго Ьуз А1а Рго С1п \7а1 Туг ТНг Не Рго Рго 355 360 365

Рго Ьуз (Ни (Нп МеЕ А1а Ьуз Азр Ьуз Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз МеЕ Не 370 375 380

ТНг Азр РНе РНе Рго (Ни Азр 11е ТНг Уа1 (Ни Тгр (Нп Тгр Азп (Ну 385 390 395 400 (Нп Рго А1а (Ни Азп Туг Ьуз Азп ТНг С1п Рго Не МеЕ Азр ТЬг Азр 405 410 415 (Ну Зег Туг РЬе Уа1 Туг Зег Ьуз Ьеи Азп Уа1 (Нп Ьуз Зег Азп Тгр 420 425 430 (Ни А1а (Ну Азп ТНг РНе ТЬг Суз Зег Уа1 Ьеи ΗΪ3 б1и С1у Ьеи ΗΪ3 435 440 445

- 26 021580

- 27 021580

Азп С1у Ча1 Ьеи Азп Зег Тгр ТНг Азр С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТНг 180 185 190

Туг Зег МеН Зег Зег ТНг Ьеи ТНг Ьеи ТНг Ьуз Азр С1и Туг С1и Агд 195 200 205

Шз Азп Зег Туг ТНг Суз С1и А1а ТНг Шз Ьуз ТНг Зег ТНг Зег Рго 210 215 220

Не Ча1 Ьуз Зег РНе Азп Агд Азп С1и Суз 225 230 <210> 5 <211> 442 <212> ДНК <213> Миз зр.

<220>

<221> СЬЗ <222> (29)..(442) <400> 5

НдааддадНа даааасНадН дНдсадаН аНд аас адд сНН асН Нсс Нса ННд 52

МеН Азп Агд Ьеи ТНг Зег Зег Ьеи 1 5 сНд сНд сНд аНН дНс ссН дса НаН дНс сНд Нсс сад дНН асН сНд ааа 100

Ьеи Ьеи Ьеи Не Ча! Рго А1а Туг Ча1 Ьеи Зег С1п Ча1 ТНг Ьеи Ьуз

15 20 дад НсН ддс ссН ддд аНа Ид сад ссс Нсс сад асе сНс адН сНд асН 148

С1и Зег С1у Рго С1у Не Ьеи С1п Рго Зег С1п ТНг Ьеи Зег Ьеи ТНг

30 35 40

НдН НсН ННс НсН ддд ННН На сНд аде асН НсН ддН аНд ддН дНд аде 196

Суз Зег РНе Зег С1у РНе Зег Ьеи Зег ТНг Зег С1у МеН С1у Ча1 Зег

50 55

Ндд аНН сдН сад ссН На дда аад ддН сНд дад Ндд сНд дса сас аНН 244

Тгр Не Агд С1п Рго Зег С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Ьеи А1а ΗΪ3 Не

65 70

Нас Ндд даН дан дас аад сдс НаН аас сса Нсс сНд аад аде едд сНс 292

Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи

80 85 аса аНс Нсс аад даН асе Нсс аде аас сад дНа ННс сНс аад аНс асе 340

ТНг Не Зег Ьуз Азр ТНг Зег Зег Азп С1п Ча1 РНе Ьеи Ьуз Не ТНг

95 100 адН дНд дас асН дса даН асН дсс аса Нас Нас НдН дсН еда даН Нас 388

Зег Ча1 Азр ТНг А1а Азр ТНг А1а ТНг Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг

105 110 115 120

Нас дсН адН аде ННН дас Нас Ндд ддс саа ддс асе асН сНс аса дНс 436

Туг А1а Зег Зег РНе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг ТНг Ьеи ТНг Ча1

125 130 135

Нсс Нса 442

Зег Зег <210> 6 <211> 138 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 6

МеН Азп Агд Ьеи ТНг Зег Зег Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Не Ча1 Рго А1а Туг 15 10 15

Ча1 Ьеи Зег С1п Ча1 ТНг Ьеи Ьуз 61и Зег 61у Рго 61у Не Ьеи 61п 20 25 30

Рго Зег С1п ТНг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз Зег РНе Зег С1у РНе Зег Ьеи 35 40 45

Зег ТНг Зег С1у МеН С1у Ча1 Зег Тгр Не Агд С1п Рго Зег С1у Ьуз 50 55 60

С1у Ьеи С1и Тгр Ьеи А1а Шз Не Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг 65 70 75 80

Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТНг Не Зег Ьуз Азр ТНг Зег Зег 85 90 95

Азп С1п Ча1 РНе Ьеи Ьуз Не ТНг Зег Ча1 Азр ТНг А1а Азр ТНг А1а 100 105 110

ТНг Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг Туг А1а Зег Зег РНе Азр Туг Тгр 115 120 125

С1у С1п С1у ТНг ТНг Ьеи ТНг Ча1 Зег Зег 130 135 <210> 7 <211> 401 <212> ДНК <213> Миз зр.

<220>

<221> СЬЗ <222> (18)..(401) <400> 7

Нсадддааад сНсдаад аНд дНН ННс аса ссН сад аНН сНН дда сНН аНд 50

МеН Ча1 РНе ТНг Рго С1п Не Ьеи С1у Ьеи МеЬ 15 10 сНН ННс Ндд аНН Нса дсс Нсс ада ддН даН аНН дНд сНа асН сад НсН 98

- 28 021580

Ьеи РНе Тгр Не Зег А1а Зег Агд С1у Азр 11е Уа1 Ьеи ТНг С1п Зег 15 20 25 сса дсс асе скд кек дкд аск сса дда дак ада дке адк екк ксс кде

Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Х/а1 ТНг Рго С1у Азр Агд Уа1 Зег Ьеи Зег Суз

35 40 адд дсс адк саа адк акк аде аас Нас ска сас кдд как саа саа ааа

Агд А1а Зег С1п Зег Не Зег Азп Туг Ьеи Ηίδ Тгр Туг С1п С1п Ьуз

50 55 кса сак дад кек сса адд екк скс акс аад как дек ксс сад ксс акс

Зег Ηίδ С1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи Не Ьуз Туг А1а Зег С1п Зег Не

65 70 75 кек ддд акс ссс ксс адд ккс адк ддс адк дда кса ддд аса дак ккс

Зег С1у Не Рго Зег Агд РНе Зег С1у Зег С1у Зег 61у ТНг Азр РНе

85 90 акк скс адк ккс аас адк дкд дад аск даа дак ккк дда акд как ккс

Не Ьеи Зег РНе Азп Зег Х7а1 С1и ТНг С1и Азр РНе С1у Мек Туг РНе

100 105 кдк саа сад адк аас аде кдд сск ккс асд ккс ддс кед ддд аса ааа

Суз С1п С1п Зег Азп Зег Тгр Рго РНе ТНг РНе С1у Зег С1у ТНг Ьуз

110 115 120 ккд даа ака ааа едд

Ьеи С1и Не Ьуз Агд

125

146

194

242

290

338

386

401 <210> 8 <211> 128 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 8

Мек Х/а1 РНе ТНг Рго С1п Не Ьеи С1у Ьеи Мек Ьеи РНе Тгр Не Зег 15 10 15

А1а Зег Агд С1у Азр 11е Уа1 Ьеи ТНг С1п Зег Рго А1а ТНг Ьеи Зег 20 25 30

Х/а1 ТНг Рго С1у Азр Агд Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег 35 40 45

Не Зег Азп Туг Ьеи Ηίδ Тгр Туг С1п С1п Ьуз Зег Низ С1и Зег Рго 50 55 60

Агд Ьеи Ьеи Не Ьуз Туг А1а Зег С1п Зег Не Зег С1у Не Рго Зег 65 70 75 80

Агд РНе Зег С1у Зег С1у Зег С1у ТНг Азр РНе Не Ьеи Зег РНе Азп 85 90 95

Зег Уа1 С1и ТНг С1и Азр РНе С1у Мек Туг РНе Суз С1п С1п Зег Азп

100 105 110

Зег Тгр Рго РНе ТНг РНе С1у Зег б1у ТНг Ьуз Ьеи С1и Не Ьуз Агд 115 120 125 <210> 9 <211> 7 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 9

ТНг Зег С1у Мек С1у Уа1 Зег 1 5 <210> 10 <211> 16 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 10

ΗΪ3 Не Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Зег 15 10 15 <210> 11 <211> 9 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 11

Азр Туг Туг А1а Зег Зег РНе Азр Туг 1 5 <210> 12 <211> 11 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 12

Агд А1а Зег С1п Зег Не Зег Азп Туг Ьеи Нйз 15 10 <210> 13 <211> 7 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 13

Туг А1а Зег С1п Зег Не Зег 1 5 <210> 14 <211> 9

- 29 021580 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 14

С1п С1п Зег Азп Зег Тгр Рго РЬе ТНг 1 5 <210> 15 <211> 1395 <212> ДНК <213> Миз зр <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(1395) <400> 15 аНд дас Нсс адд сНс ааН ННа дНН ННс сНН дНс сНН аНН ННа ааа ддН 48

МеН Азр Зег Агд Ьеи Азп Ьеи Уа1 РНе Ьеи Уа1 Ьеи Не Ьеи Ьуз С1у 15 10 15 дНс сад НдН даН дНд сад сНд дНд дад НсН ддд дда ддс ННа дНд сад 96

Уа1 С1п Суз Азр Уа1 О1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п

25 30 ссН дда ддд Нсс сдд ааа сНс Нсс НдН дса дсс НсН дда ННс асН ННс 144

Рго С1у СЯу Зег Агд Ьуз Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РНе ТНг РНе

40 45 адН аас НЕС дда аНд сас Ндд дНН сдН сад дсН сса дад аад дда сНд 192

Зег Азп РНе С1у МеН ΗΪ5 Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1и Ьуз С1у Ьеи

55 60 дад Ндд дНс дса Нас аНН адН адН ддс адН адН асс аНс Нас НаН дса 240

С1и Тгр \7а1 А1а Туг Не Зег Зег С1у Зег Зег ТНг Не Туг Туг А1а

70 75 80 дас аса дНд аад ддс еда ННс асс аНс Нсс ада дас ааН ссс аад аас 288

Азр ТНг Уа1 Ьуз О1у Агд РНе ТНг Не Зег Агд Азр Азп Рго Ьуз Азп

90 95 асс сНд ННс сНд саа аНд асс адН сНа адд НсН дад дас асд дсс аНд 336

ТНг Ьеи РНе Ьеи О1п МеН ТНг Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТНг А1а МеН

100 105 110

НаН Нас НдН дса ада НаН даН Нас дас даН даН Нас НаН дсН аНд даа 384

Туг Туг Суз А1а Агд Туг Азр Туг Азр Азр Азр Туг Туг А1а МеН С1и

115 120 125

Нас Ндд ддН саа дда асс Нса дНс асс дНс Нсс Нса дсс ааа асд аса 432

Туг Тгр С1у С1п СЯу ТНг Зег \7а1 ТНг Уа1 Зег Зег А1а Ьуз ТНг ТНг

130 135 140 ссс сса НсН дНс НаН сса сНд дсс ссН дда НсН дсН дсс саа асН аас 480

Рго Рго Зег Уа1 Туг Рго Ьеи А1а Рго СЯу Зег А1а А1а С1п ТНг Азп

145 150 155 160

Нсс аНд дНд асс сНд дда Ндс сНд дНс аад ддс НаН ННс ссН дад сса 528

Зег МеН Уа1 ТНг Ьеи СЯу Суз Ьеи Уа1 Ьуз 61у Туг РНе Рго С1и Рго

165 170 175 дНд аса дНд асс Ндд аас НсН дда Нсс сНд Нсс аде ддН дНд сас асс 576

Уа1 ТНг Уа1 ТНг Тгр Азп Зег С1у Зег Ьеи Зег Зег С1у Уа1 Н1з ТНг

180 185 190

ННс сса дсН дНс сНд сад НсН дас сНс Нас асН сНд аде аде Нса дНд 624

РНе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Азр Ьеи Туг ТНг Ьеи Зег Зег Зег Уа1

195 200 205 асН дНс ссс Нсс аде асс Ндд ссс аде дад асс дНс асс Ндс аас дНН 672

ТНг Уа1 Рго Зег Зег ТНг Тгр Рго Зег С1и ТНг Уа1 ТНг Суз Азп Уа1

210 215 220 дсс сас ссд дсс аде аде асс аад дНд дас аад ааа аНН дНд ссс адд 720

А1а ΗΪ3 Рго А1а Зег Зег ТНг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Не Уа1 Рго Агд

225 230 235 240 даН НдН ддН НдН аад ссН Ндс аНа НдН аса дНс сса даа дНа Нса НсН 768

Азр Суз СЯу Суз Ьуз Рго Суз Не Суз ТНг Уа1 Рго С1и Уа1 Зег Зег

245 250 255 дНс ННс аНс ННс ссс сса аад ссс аад даН дНд сНс асс аНН асН сНд 816

Уа1 РНе Не РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 Ьеи ТНг Не ТНг Ьеи

260 265 270 асН ссН аад дНс асд НдН дНН дНд дНа дас аНс аде аад даН даН ссс 864

ТНг Рго Ьуз Уа1 ТНг Суз Уа1 Уа1 \7а1 Азр Не Зег Ьуз Азр Азр Рго

275 280 285 дад дНс сад ННс аде Ндд ННН дНа даН даН дНд дад дНд сас аса дсН 912

С1и Уа1 СЯп РНе Зег Тгр РНе Уа1 Азр Азр Уа1 С1и Уа1 ΗΪ3 ТНг А1а

290 295 300 сад асд саа ссс сдд дад дад сад ННс аас аде асН ННс сдс Нса дНс 960

61п ТНг СЯп Рго Агд С1и С1и С1п РНе Азп Зег ТНг РНе Агд Зег Уа1

305 310 315 320 адН даа сНН ссс аНс аНд сас сад дас Ндд сНс ааН ддс аад дад ННс 1008

Зег С1и Ьеи Рго Не МеН Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп 61у Ьуз С1и РНе

325 330 335 ааа Ндс адд дНс аас адН дса дсН ННс ссН дсс ссс аНс дад ааа асс 1056

Ьуз Суз Агд Уа1 Азп Зег А1а А1а РНе Рго А1а Рго Не С1и Ьуз ТНг

340 345 350 аНс Нсс ааа асс ааа ддс ада ссд аад дсН сса сад дНд Нас асс аНН 1104

Не Зег Ьуз ТНг Ьуз С1у Агд Рго Ьуз А1а Рго С1п Уа1 Туг ТНг Не

355 360 365 сса ссН ссс аад дад сад аНд дсс аад даН ааа дНс адН сНд асс Ндс 1152

Рго Рго Рго Ьуз СЯи С1п МеН А1а Ьуз Азр Ьуз Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз

370 375 380 аНд аНа аса дас ННс ННс ссН даа дас аНН асН дНд дад Ндд сад Ндд 1200

МеН Не ТНг Азр РНе РНе Рго С1и Азр Не ТНг Уа1 С1и Тгр СЯп Тгр

385 390 395 400 ааН ддд сад сса дед дад аас Нас аад аас асН сад ссс аНс аНд дас 1248

Азп СЯу СЯп Рго А1а СЯи Азп Туг Ьуз Азп ТНг С1п Рго Не МеН Азр

405 410 415 аса даН ддс НсН Нас ННс дНс Нас аде аад сНс ааН дНд сад аад аде 1296

ТНг Азр С1у Зег Туг РНе Уа1 Туг Зег Ьуз Ьеи Азп Уа1 С1п Ьуз Зег

420 425 430

- 31 021580

Ьеи Нхз

Азп Нхз

Нхз ТЬг С1и 455

Ьуз Зег Ьеи Зег

Нхз Зег 460

Рго С1у Ьуз

450

<210> 17

<211> 705

<212

!> ДНК

<212

!> Миз зр.

<220>

<221> СЬЗ

<222>

(1) ..

. (705)

<400> 17

аЬд

дсс

Ьдд

аЬЬ

Ьса

сЬЬ

аЬа

сЬс

ЬсЬ

сЬс

сЬд

дсЬ

сЬс

аде

Ьса

ддд

48

МеЬ

А1а

Тгр

Не

Зег

Ьеи

Не

Ьеи

Зег

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьеи

Зег

Зег

С1у

1

5

10

15

дсс

аЬЬ

Ьсс

сад

дсЬ

дЬЬ

дьд

асЬ

сад

даа

ЬсЬ

дса

сЬс

асе

аса

Ьса

96

А1а

Не

Зег

С1п

А1а

νθΐ

Уа1

ТЬг

С1п

С1и

Зег

А1а

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Зег

20

25

30

ссЬ

ддЬ

даа

аса

дьс

аса

сЬс

асЬ

ЬдЬ

сдс

Ьса

адЬ

асЬ

ддд

дсЬ

дЬЬ

144

Рго

61у

С1и

ТЬг

Уа1

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Суз

Агд

Зег

Зег

ТЬг

С1у

А1а

Уа1

35

40

45

аса

асЬ

адЬ

аас

ЬаЬ

дсс

аас

ьдд

дЬс

саа

даа

ааа

сса

даЬ

саЬ

ЬЬа

192

ТЬг

ТЬг

Зег

Азп

Туг

А1а

Тгр

Уа1

С1п

С1и

Ьуз

Рго

Азр

Нхз

Ьеи

50

55

60

ЬЬе

асЬ

ддь

сЬа

аЬа

ддЬ

ддь

асе

аас

аас

еда

дсЬ

сса

ддЬ

дЬЬ

ссЬ

240

РЬе

ТЬг

С1у

Ьеи

11е

С1у

61у

ТЬг

Азп

Азп

Агд

А1а

Рго

С1у

Уа1

Рго

65

70

75

80

дсс

ада

ЬЬе

Ьса

ддс

Ьсс

сЬд

аЬЬ

дда

дас

аад

дсЬ

дсс

сЬс

асе

аЬс

288

А1а

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

Ьеи

Не

О1у

Азр

Ьуз

А1а

А1а

Ьеи

ТЬг

Не

85

90

95

аса

ддд

дса

сад

асЬ

дад

даЬ

дад

дса

аЬа

ЬаЬ

ЬЬе

ЬдЬ

дсЬ

сЬа

Ьдд

336

ТЬг

С1у

А1а

С1п

ТЬг

61и

Азр

С1и

А1а

11е

Туг

РЬе

Суз

А1а

Ьеи

Тгр

100

105

но

Ьас

аде

аас

саЬ

Ьдд

дьд

ЬЬе

ддЬ

дда

дда

асе

ааа

сЬд

асЬ

дЬс

сЬа

384

Туг

Зег

Азп

Нхз

Тгр

57а 1

РЬе

С1у

С1у

С1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа1

Ьеи

115

120

125

ддс

сад

ссс

аад

ЬсЬ

Ьсд

сса

Ьса

дЬс

асе

сЬд

ЬЬЬ

сса

ссЬ

Ьсс

ЬсЬ

432

С1у

61п

Рго

Ьуз

Зег

Зег

Рго

Зег

Уа1

ТЬг

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

Зег

Зег

130

135

140

даа

дад

сЬс

дад

асЬ

аас

аад

дсс

аса

сЬд

дЬд

ЬдЬ

асд

аЬс

асЬ

даЬ

480

С1и

61и

Ьеи

С1и

ТЬг

Азп

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

Уа1

Суз

ТЬг

11е

ТЬг

Азр

145

150

155

160

ЬЬе

Рас

сса

ддь

дЬд

дЬд

аса

дьд

дас

Ьдд

аад

дЬа

даЬ

ддь

асе

ссЬ

528

РЬе

Туг

Рго

С1у

νβΐ

Уа1

ТЬг

Уа1

Азр

Тгр

Ьуз

Уа1

Азр

С1у

ТЬг

Рго

165

170

175

дЬс

асЬ

сад

ддь

аЬд

дад

аса

асе

сад

ссЬ

Ьсс

ааа

сад

аде

аас

аас

576

Уа1

ТЬг

С1п

С1у

МеЬ

С1и

ТЬг

ТЬг

С1п

Рго

Зег

Ьуз

С1п

Зег

Азп

Азп

180

185

190

аад Ьас аЬд дсЬ аде аде Ьас сЬд асе сед аса дса ада дса Ьдд даа 624

Ьуз Туг МеЬ А1а 5ег Зег Туг Ьеи ТЬг Ьеи ТЬг А1а Агд А1а Тгр С1и

195 200 205 адд саЬ аде адЬ Ьас аде еде сад дес асе сае даа ддЬ сас асе дед 672

Агд Нхз Зег Зег Туг Зег Суз С1п Уа1 ТЬг Нхз С1и С1у Нхз ТЬг Уа1

210 215 220 дад аад аде еед есс еде дсе дас еде есс еад 705

С1и Ьуз Зег Ьеи Зег Агд А1а Азр Суз Зег 225 230 <210> 18 <211> 234 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 18

МеЬ А1а Тгр Не Зег Ьеи Не Ьеи Зег Ьеи Ьеи А1а Ьеи Зег Зег С1у 15 10 15

А1а Не Зег С1п А1а Уа1 Уа1 ТЬг С1п С1и Зег А1а Ьеи ТЬг ТЬг Зег 20 25 30

Рго С1у С1и ТЬг Уа1 ТЬг Ьеи ТЬг Суз Агд Зег Зег ТЬг С1у А1а Уа1 35 40 45

ТЬг ТЬг Зег Азп Туг А1а Азп Тгр Уа1 С1п С1и Ьуз Рго Азр Риз Ьеи 50 55 60

РЬе ТЬг С1у Ьеи Не С1у С1у ТЬг Азп Азп Агд А1а Рго С1у Уа1 Рго 65 70 75 80

А1а Агд РЬе Зег С1у Зег Ьеи Не С1у Азр Ьуз А1а А1а Ьеи ТЬг Не 85 90 95

ТЬг С1у А1а С1п ТЬг С1и Азр С1и А1а Не Туг РЬе Суз А1а Ьеи Тгр 100 105 110

Туг Зег Азп Нхз Тгр Уа1 РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 115 120 125

С1у С1п Рго Ьуз Зег Зег Рго Зег \7а1 ТЬг Ьеи РЬе Рго Рго Зег Зег 130 135 140

С1и С1и Ьеи С1и ТЬг Азп Ьуз А1а ТЬг Ьеи Уа1 Суз ТЬг Не ТЬг Азр 145 150 155 160

РЬе Туг Рго С1у Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Азр Тгр Ьуз \7а1 Азр С1у ТЬг Рго 165 170 175

Уа1 ТЬг С1п С1у МеЬ С1и ТЬг ТЬг С1п Рго Зег Ьуз Θΐη Зег Азп Азп 180 185 190

Ьуз Туг МеЬ А1а Зег Зег Туг Ьеи ТЬг Ьеи ТЬг А1а Агд А1а Тгр С1и 195 200 205

Агд ΗΪ3 Зег Зег Туг Зег Суз С1п Уа1 ТЬг ΗΪ3 С1и С1у Нхз ТЬг Уа1 210 215 220

С1и Ьуз Зег Ьеи Зег Агд А1а Азр Суз Зег 225 230 <210> 19 <211> 420 <212> ДНК <213> Миз зр.

<220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(420) <400> 19 аЬд дас Ьсс адд сЬс ааЬ ЬЬа дЬЬ ЬЬс сЬЬ дЬс сЬЬ аЬЬ ЬЬа ааа ддЬ 48

МеЬ Азр Зег Агд Ьеи Азп Ьеи Уа1 РЬе Ьеи Уа1 Ьеи Не Ьеи Ьуз С1у 15 10 15 дЬс сад ЬдЬ даЬ дЬд сад сЬд дЬд дад ЬсЬ ддд дда ддс ЬЬа дЬд сад 96

Уа1 С1п Суз Азр Уа1 О1п Ьеи Уа1 С1и Зег О1у С1у С1у Ьеи 7а1 С1п

25 30 ссЬ дда ддд Ьсс сдд ааа сЬс Ьсс ЬдЬ дса дсс ЬсЬ дда ЬЬс асЬ ЬЬс 144

Рго 61у С1у Зег Агд Ьуз Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе

40 45 адЬ аас ЬЬЬ дда аЬд сас Ьдд дЬЬ сдЬ сад дсЬ сса дад аад дда сЬд 192

Зег Азп РЬе С1у МеЬ Нхз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1и Ьуз С1у Ьеи

55 60 дад Ьдд дЬс дса Ьас аЬЬ адЬ адЬ ддс адЬ адЬ асе аЬс Ьас ЬаЬ дса 240

С1и Тгр Уа1 А1а Туг Не Зег Зег С1у Зег Зег ТЬг Не Туг Туг А1а

70 75 80 дас аса дЬд аад ддс еда ЬЬс асе аЬс Ьсс ада дас ааЬ ссс аад аас 288

Азр ТЬг Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Рго Ьуз Азп

90 95 асе сЬд ЬЬс сЬд саа аЬд асе адЬ сЬа адд ЬсЬ дад дас асд дсс аЬд 336

ТЬг Ьеи РЬе Ьеи С1п МеЬ ТЬг Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а МеЬ

100 105 110

ЬаЬ Дас ДдД дса ада ДаД даД Дас дас даД даД Дас ДаД дсД аДд даа 384

Туг Туг Суз А1а Агд Туг Азр Туг Азр Азр Азр Туг Туг А1а МеД С1и

115 120 125

Дас Ддд ддД саа дда асе Дса дДс асе дДс Дсс Дса 420

Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Зег Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег

130 135 140 <210> 20 <211> 140 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 20

МеД Азр Зег Агд Ьеи Азп Ьеи \7а1 РЬе Ьеи Уа1 Ьеи Не Ьеи Ьуз С1у 15 10 15

Уа1 01п Суз Азр Уа1 61п Ьеи А/а1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи 1/а1 С1п 20 25 30

Рго С1у С1у Зег Агд Ьуз Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе 35 40 45

Зег Азп РЬе С1у МеД НЬз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1и Ьуз С1у Ьеи 50 55 60

С1и Тгр Уа1 А1а Туг Не Зег Зег С1у Зег Зег ТЬг Не Туг Туг А1а 65 70 75 80

Азр ТЬг Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Рго Ьуз Азп 85 90 95

ТЬг Ьеи РЬе Ьеи С1п МеД ТЬг Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а МеД 100 105 110

Туг Туг Суз А1а Агд Туг Азр Туг Азр Азр Азр Туг Туг А1а МеД С1и 115 120 125

Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Зег 5/а1 ТЬг Уа1 Зег Зег 130 135 140 <210> 21 <211> 412 <212> ДНК <213> Миз зр <220>

<221> СЬЗ <222> (29)..(412) <400> 21

ДдаааадааД адассДддДД ДдДдааДД аДд дсс Ддд аДД Дса сДД аДа сДс 52

МеД А1а Тгр Не Зег Ьеи Не Ьеи 1 5

ДсД сДс сДд дсД сДс аде Дса ддд дсс аДД Дсс сад дсД дДД дДд асД 100

Зег Ьеи Ьеи А1а Ьеи Зег Зег С1у А1а Не Зег С1п А1а Уа! 17а1 ТЬг

15 20 сад даа ДсД дса сДс асе аса Дса ссД ддД даа аса дДс аса сДс асД 148

- 34 021580 <212> РКТ <213> Миз зр.

<400> 28

А1а Ьеи Тгр Туг Зег Азп ΗΪ3 Тгр Уа1 1 5 <210> 29 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Последовательность человека <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(321) <400> 29 сад НсН дсс сНд асН сад Нсс сса дса асН сНс НсН дНд НсН ссс ддс 48

С1п Зег А1а Ьеи ТНг С1п Зег Рго А1а ТНг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго С1у 15 10 15 саа НсН дНд аде сНд Нсс НдН едд дса аде сад НсН аНН Нсс ааН НаН 96

С1п Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег 11е Зег Азп Туг

25 30 сНд сас Ндд НаН сад саа сас сса ддс дад аде сса едд сНс сНд аНс 144

Ьеи Низ Тгр Туг С1п С1п Ηίδ Рго С1у С1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи 11е

40 45 ааа Рас дсс НсН саа Нсс аНН НсН ддс Нсс аас ада сдс ННс НсН ддс 192

Ьуз Туг А1а Зег С1п Зег Не Зег С1у Зег Азп Агд Агд РНе Зег С1у

55 60 аде ддс Нсс ддс асе даН ННс аНН сНс аде ННН ааН аде дНН сад дса 240

Зег С1у Зег С1у ТНг Азр РНе 11е Ьеи Зег РНе Азп Зег Уа1 С1п А1а

70 75 80 дад даН НОН ддд аНд Нас ННс НдН саа сад аде аас НсН Ндд ссН ННН 288

С1и Азр РНе С1у МеН Туг РНе Суз Θΐη С1п Зег Азп Зег Тгр Рго РНе

90 95 асе ННс дда аде ддд асН ааа сНд асе дНН сНд 321

ТНг РНе С1у Зег С1у ТНг Ьуз Ьеи ТНг Уа1 Ьеи

100 105 <210> 30 <211> 107 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Синтетическая конструкция <400> 30

С1п Зег А1а Ьеи ТНг С1п Зег Рго А1а ТНг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго С1у 15 10 15

С1п Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег Не Зег Азп Туг 20 25 30

Ьеи Низ Тгр Туг С1п С1п Шз Рго 61у С1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Ьуз Туг А1а Зег 61п Зег 11е Зег С1у Зег Азп Агд Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег О1у Зег С1у ТНг Азр РНе Не Ьеи Зег РНе Азп Зег Уа1 С1п А1а 65 70 75 80

С1и Азр РНе С1у МеН Туг РНе Суз С1п С1п Зег Азп Зег Тгр Рго РНе 85 90 95

ТНг РНе С1у Зег Θίγ ТНг Ьуз Ьеи ТНг Уа1 Ьеи 100 105 <210> 31 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Последовательность человека <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(321) <400> 31 саа НсН дса сНд асН саа НсН сса дса аса сНд Нсс дНН НсН ссН дда 48

С1п Зег А1а Ьеи ТНг С1п Зег Рго А1а ТНг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго С1у 15 10 15 саа Нсс дНд аде сНс аде НдН адд дса Нес сад Нсс аНН аде аас НаН 96

С1п Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег Не Зег Азп Туг

25 30 сНс сас Ндд Нас сад сад сас сса дда даа аде ссН сдс сНд сНд аНа 144

Ьеи Низ Тгр Туг С1п С1п Низ Рго С1у С1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи Не

40 45 ааа Нас дса аде сад НсН аНН аде ддс аде аас едд сдс ННс аде ддд 192

Ьуз Туг А1а Зег С1п Зег Не Зег С1у Зег Азп Агд Агд РНе Зег С1у

55 60

Нес ддс Нсс ддд аса дас ННН аНс сНд НсН ННН аде аде дНд саа дсс 240

Зег С1у Зег 61у ТНг Азр РЬе Не Ьеи Зег РНе Зег Зег Уа1 С1п А1а

70 75 80 даа дас ННН ддс аНд Нас ННс Ндс сад сад НсН аас ааН Ндд сса ННс 288

С1и Азр РНе С1у МеН Туг РНе Суз С1п С1п Зег Азп Азп Тгр Рго РНе

90 95 асе ЬЬе дда Ьсс ддс аса аад сЬд асе дЬд сЬд ТЬг РЬе С1у Зег С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи

100 105 <210> 32 <211> 107 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Синтетическая конструкция

61п Зег А1а Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго С1у

61η Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег Не Зег Азп Туг

Ьеи ΗΪ3 Тгр Туг С1п С1п Ηϊβ Рго С1у б1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи Не

Ьуз Туг А1а Зег С1п Зег Не Зег С1у Зег Азп Агд Агд РЬе Зег С1у

Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе Не Ьеи Зег РЬе Зег Зег Уа1 С1п А1а

С1и Азр РЬе С1у МеЬ Туг РЬе Суз С1п О1п Зег Азп Азп Тгр Рго РЬе <210> 33 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(342) <400> 33 сад дЬЬ асЬ сЬд ааа даа ЬсЬ ддс сса асЬ сЬд дЬЬ аад ссЬ аса сад С1п Уа1 ТЬг Ьеи Ьуз С1и Зег С1у Рго ТЬг Ьеи Уа1 Ьуз Рго ТЬг С1п асе сЬд Ьсс сЬс асе ЬдЬ ЬсЬ ЬЬе Ьсс ддс ЬЬЬ аде сЬд аде аса аде ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег РЬе Зег С1у РЬе Зег Ьеи Зег ТЬг Зег дда аЬд ддс дЬс аде Ьдд аЬс ада саа сса ссс ддс аад ддс сЬд дад С1у МеЬ С1у Уа1 Зег Тгр Не Агд <31п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и

Ьдд сЬд дсс сас аЬс ЬаЬ Ьдд даЬ даЬ даЬ аад адд ЬаЬ аас ссЬ Ьсс 192

Тгр Ьеи А1а Нгз Не Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг Азп Рго Зег сЬд ааа Ьсс ада сЬс аса аЬЬ Ьсс аад дас асе Ьсс аде аас сад дЬс Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТЬг Не Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Зег Азп С1п Уа1

ЬЬе сЬд аад аЬа асе ЬсЬ дЬЬ даЬ сса дЬд дас асе дса асЬ Ьас Ьас РЬе Ьеи Ьуз Не ТЬг Зег Уа1 Азр Рго Уа1 Азр ТЬг А1а ТЬг Туг Туг

Ьдс дсс сдс дас Ьас ЬаЬ дсс аде ЬсЬ ЬЬЬ дас Ьас Ьдд ддд сад ддс Суз А1а Агд Азр Туг Туг А1а Зег Зег РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у

100 105 110 <210> 34 <211> 114 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Синтетическая конструкция <400> 34

О1п Уа1 ТЬг Ьеи Ьуз С1и Зег С1у Рго ТЬг Ьеи А/а1 Ьуз Рго ТЬг С1п

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег РЬе Зег С1у РЬе Зег Ьеи Зег ТЬг Зег

С1у МеЬ С1у Уа1 Зег Тгр Не Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и

Тгр Ьеи А1а Нгз Не Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг Азп Рго Зег

Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТЬг Не Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Зег Азп С1п Уа1

РЬе Ьеи Ьуз Не ТЬг Зег Уа1 Азр Рго Уа1 Азр ТЬг А1а ТЬг Туг Туг

- 36 021580 <210> 35 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Последовательность человека <220>

<221> СОЗ <222> (1)..(342) <400> 35 сад дСд асС сЬс ааа даа ЬсС ддс ссЬ аса сСд дйд ааа ссс асС сад С1п Уа1 ТЬг Ьеи Ьув С1и Зег С1у Рго ТЬг Ьеи Уа1 Ьуз Рго ТЬг С1п дда сЬс дда дЬд аде Едд аЕЕ сдс саа ссЕ ссЕ ддд ааа ддс сЕд дад С1у Ьеи С1у Уа1 Зег Тгр Не Агд 61п Рго Рго О1у Ьуз С1у Ьеи С1и сЕд аад Есс ада сЕс аса аЕс Есс ааа даЕ аса Есс аде ааЕ сад дЕд Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТЬг Не Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Зег Азп С1п Уа1

ЕдЕ дсЕ сдс даЕ Еас ЕаЕ дсс аде Есс ЕЕс дас Рас Едд дда сад дда Суз А1а Агд Азр Туг Туг А1а Зег Зег РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у

100 105 110 <210> 36 <211> 114 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Синтетическая конструкция <400> 36

С1п Уа1 ТЬг Ьеи Ьуз С1и Зег О1у Рго ТЬг Ьеи Уа1 Ьуз Рго ТЬг С1п

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег РЬе Зег С1у РЬе Зег Ьеи Зег ТЬг Зег

61у Ьеи С1у Уа1 Зег Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи 61и

Тгр Ьеи А1а Нхз Не Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг Азп Рго Зег

Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТЬг Не Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Зег Азп С1п Уа1

РЬе Ьеи Ьуз 11е ТЬг Зег Уа1 Азр Рго Уа1 Азр ТЬг А1а ТЬг Туг Туг

Суз А1а Агд Азр Туг Туг А1а Зег Зег РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у 100 105 110 <210> 37 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223>

Последовательность человека <220>

<221> СОЗ <222> (1)..(342) <400> 37 сад дЕс аса сЕс ааа даа ЕсЕ дда сса аса сЕс дЕЕ ааа сса асЕ саа С1п Уа1 ТЬг Ьеи Ьуз 61и Зег С1у Рго ТЬг Ьеи Уа1 Ьуз Рго ТЬг С1п аса сЕс аде сЕд асЕ Еде аде ЕЕЕ ЕсЕ ддс ЬЬе аде сЕс Есс асЕ аде ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег РЬе Зег С1у РЬе Зег Ьеи Зег ТЬг Зег ддс сЕс ддс дЕд Есс Едд аЕс едд сад ссс ссЕ дда ааа ддс сЬд дад С1у Ьеи С1у Уа1 Зег Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и

Ьдд сЬд дсс сас аЕс ЕаЕ Едд дас даЕ дас аад едд Пае ааЕ сса аде Тгр Ьеи А1а Нхз Не Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг Азп Рго Зег сЕд ааа ЕсЕ едд сЕд асе аЕа ЕсЕ аад даЕ асЕ ЕсЕ Есс ааЕ сад дЕд Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТЬг Не Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Зег Азп С1п Уа1

ЕЕс сЕд аад аЕс аса ЕсЕ дЕд дсЕ ссЕ дЕс дас асЕ дсс асЕ ЬаЬ ЕаЕ

- 37 021580

336

342 <210> 38 <211> 114 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Синтетическая конструкция <400> 38

С1п Уа1 Ткг Ьеи Ьуз С1и Зег С1у Рго Ткг Ьеи Уа1 Ьуз Рго Ткг С1п 15 10 15

Ткг Ьеи Зег Ьеи Ткг Суз Зег Рке Зег С1у Рке Зег Ьеи Зег Ткг Зег 20 25 30

С1у Ьеи С1у 7а1 Зег Тгр Не Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и 35 40 45

Тгр Ьеи А1а Шз 11е Туг Тгр Азр Азр Азр Ьуз Агд Туг Азп Рго Зег 50 55 60

Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи Ткг Не Зег Ьуз Азр Ткг Зег Зег Азп С1п Уа1 65 70 75 80

Рке Ьеи Ьуз Не Ткг Зег Уа1 А1а Рго Уа1 Азр Ткг А1а Ткг Туг Туг 85 90 95

Суз А1а Агд Азр Туг Туг А1а Зег Зег Рке Азр Туг Тгр С1у С1п С1у 100 105 НО

Ткг Ьеи <210> 39 <211> 1059 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(1059) <400> 39 скд дад дсс кек дад даа дкд дад скк дад ссс кде скд дек ссс аде 48

Ьеи С1и А1а Зег С1и С1и Уа1 С1и Ьеи С1и Рго Суз Ьеи А1а Рго Зег

10 15 скд дад сад саа дад сад дад скд аса дка дсс скк ддд сад сск дкд 96

Ьеи С1и С1п С1п С1и С1п С1и Ьеи Ткг Уа1 А1а Ьеи С1у С1п Рго Уа1

25 30 едд скд кде кдк ддд едд дек дад едк ддк ддс сас кдд кас аад дад 144

Агд Ьеи Суз Суз С1у Агд А1а С1и Агд С1у С1у ΗΪ5 Тгр Туг Ьуз С1и

40 45 ддс адк сдс скд дса сск дек ддс едк дка едд ддс кдд адд ддс сдс 192

С1у Зег Агд Ьеи А1а Рго А1а С1у Агд Уа1 Агд С1у Тгр Агд С1у Агд

55 60 ска дад акк дсс аде ккс ска сск дад дак дек ддс сдс кас скс кде 240

Ьеи С1и Не А1а Зег Рке Ьеи Рго С1и Азр А1а С1у Агд Туг Ьеи Суз

70 75 80 скд дса еда ддс ксс акд акс дке скд сад аак скс асе ккд акк аса 288

Ьеи А1а Агд С1у Зег Мек Не Уа1 Ьеи С1п Азп Ьеи Ткг Ьеи Не Ткг

90 95 ддк дас ксс ккд асе ксс аде аас дак дак дад дас ссс аад ксс сак 336

С1у Азр Зег Ьеи Ткг Зег Зег Азп Азр Азр С1и Азр Рго Ьуз Зег Шз

100 105 110 адд дас скс кед аак адд сас адк кас ссс сад саа дса ссс кас кдд 384

Агд Азр Ьеи Зег Азп Агд Шз Зег Туг Рго Θΐη <31п А1а Рго Туг Тгр

115 120 125 аса сас ссс сад сдс акд дад аад ааа скд сак дса дка сск дед ддд 432

Ткг Шз Рго С1п Агд Мек С1и Ьуз Ьуз Ьеи Шз А1а Ца1 Рго А1а С1у

130 135 140 аас асе дке аад ккс сдс кдк сса дек дса ддс аас ссс асд ссс асе 480

Азп Ткг Уа1 Ьуз Рке Агд Суз Рго А1а А1а С1у Азп Рго Ткг Рго Ткг

145 150 155 160 акс сдс кдд екк аад дак дда сад дсс ккк сак ддд дад аас сдс акк 528

Не Агд Тгр Ьеи Ьуз Азр С1у СЬп А1а Рке Шз С1у С1и Азп Агд Не

165 170 175 дда ддс акк едд скд сдс сак сад сас кдд адк скс дкд акд дад аде 576

С1у С1у Не Агд Ьеи Агд Шз С1п Шз Тгр Зег Ьеи Уа1 Мек С1и Зег

180 185 190 дкд дкд ссс кед дас сдс ддс аса кас асе кде скд дка дад аас дек 624 \7а1 \7а1 Рго Зег Азр Агд С1у Ткг Туг Ткг Суз Ьеи Уа1 С1и Азп А1а

195 200 205 дкд ддс аде акс едк как аас кас скд ска дак дкд скд дад едд ксс 672

Уа1 С1у Зег Не Агд Туг Азп Туг Ьеи Ьеи Азр Уа1 Ьеи С1и Агд Зег

210 215 220 ссд сас едд ссс акс скд сад дсс ддд скс ссд дсс аас асе аса дсс 720

Рго Шз Агд Рго Не Ьеи С1п А1а С1у Ьеи Рго А1а Азп Ткг Ткг А1а

225 230 235 240 дкд дкд ддс аде дас дкд дад скд скд кде аад дкд кас аде дак дсс 768

Уа1 \/а1 С1у Зег Азр Уа1 С1и Ьеи Ьеи Суз Ьуз Уа1 Туг Зег Азр А1а

245 250 255

- 39 021580 <220>

<221> СОЗ <222> (1)..(726) <400> 41 сРд дад дсс ЬсС дад даа дСд дад сСЬ дад ссс Еде саа дса ссс Ьас Ьеи СЬи АЬа Зег СЬи СЬи УаЬ СЬи Ьеи СЬи Рго Суз СЬп АЬа Рго Туг

Ьдд аса сас ссс сад сдс аЬд дад аад ааа сЬд саЬ дса дЬа ссЬ дед Тгр ТЬг ΗΪ3 Рго СЬп Агд МеЬ СЬи Ьуз Ьуз Ьеи НЬз АЬа УаЬ Рго АЬа ддд аас асс дЬс аад ЬЬе сдс ЬдЬ сса дсЬ дса ддс аас ссс асд ссс СЬу Азп ТЬг УаЬ Ьуз РЬе Агд Суз Рго АЬа АЬа СЬу Азп Рго ТЬг Рго асс аЬс сдс Ьдд сЬЬ аад даЬ дда сад дсс ЬЬЬ саЬ ддд дад аас сдс ТЬг Не Агд Тгр Ьеи Ьуз Азр С1у С1п АЬа РЬе Ηίδ СЬу СЬи Азп Агд аЬЬ дда ддс аЬЬ едд сЬд сдс саЬ сад сас Ьдд адЬ сЬс дЬд аЬд дад 11е СЬу СЬу 11е Агд Ьеи Агд ΗΪ5 СЬп ΗΪ3 Тгр Зег Ьеи УаЬ МеЬ С1и дсЬ дЬд ддс аде аЬс сдЬ ЬаЬ аас Ьас сЬд сЬа даЬ дЬд сЬд дад едд АЬа УаЬ С1у Зег Не Агд Туг Азп Туг Ьеи Ьеи Азр УаЬ Ьеи СЬи Агд

100 105 110

Ьсс ссд сас едд ссс аЬс сЬд сад дсс ддд сЬс ссд дсс аас асс аса

Зег Рго НЬз Агд Рго Не Ьеи СЬп АЬа СЬу Ьеи Рго АЬа Азп ТЬг ТЬг

115 120 125 дсс дЬд дЬд ддс аде дас дЬд дад сЬд сЬд Ьдс аад дЬд Ьас аде даЬ

АЬа λ/аЬ ЧаЬ СЬу Зег Азр УаЬ СЬи Ьеи Ьеи Суз Ьуз \7а1 Туг Зег Азр

130 135 140 дсс сад ссс сас аЬс сад Ьдд сЬд аад сас аЬс дЬс аЬс аас ддс аде

АЬа СЬп Рго Ηίδ Не СЬп Тгр Ьеи Ьуз Ηϊδ Не \7а1 Не Азп СЬу Зег

145 150 155 160 аде ЬЬе дда дсс дас ддЬ ЬЬе ссс ЬаЬ дЬд саа дЬс сЬа аад асЬ дса

Зег РЬе СЬу АЬа Азр СЬу РЬе Рго Туг УаЬ СЬп УаЬ Ьеи Ьуз ТЬг АЬа

165 170 175 дас аЬс ааЬ аде Ьса дад дЬд дад дЬс сЬд Ьас сЬд едд аас дЬд Ьса

Азр Не Азп Зег Зег СЬи УаЬ СЬи УаЬ Ьеи Туг Ьеи Агд Азп УаЬ Зег

180 185 190 дсс дад дас дса ддс дад Ьас асс Ьдс сЬс дса ддс ааЬ Ьсс аЬс ддс

АЬа С1и Азр АЬа СЬу СЬи Туг ТЬг Суз Ьеи АЬа СЬу Азп Зег Не СЬу

195 200 205 сЬс Ьсс Ьас сад ЬсЬ дсс Ьдд сЬс асд дЬд сЬд сса дад дад дас ссс

Ьеи Зег Туг СЬп Зег АЬа Тгр Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи Рго СЬи СЬи Азр Рго

210 215 220 аса Ьдд асс дса дса дед ссс дад дсс дсЬ аде саЬ сас саЬ саЬ саЬ ТЬг Тгр ТЬг АЬа А1а АЬа Рго СЬи АЬа АЬа Зег ΗΪ3 Ηίδ НЬз Ηίδ Ηίβ

<210> 42 <2Ы> 241 <212> РКТ <213> Ногтю зарЬепз <400> 42

Ьеи СЬи АЬа Зег СЬи СЬи УаЬ СЬи Ьеи СЬи Рго Суз СЬп АЬа Рго Туг 15 10 15

Тгр ТЬг ΗΪ3 Рго СЬп Агд МеЬ СЬи Ьуз Ьуз Ьеи ΗΪ3 АЬа Уа1 Рго А1а 20 25 30

СЬу Азп ТЬг УаЬ Ьуз РЬе Агд Суз Рго АЬа АЬа СЬу Азп Рго ТЬг Рго 35 40 45

ТЬг Ые Агд Тгр Ьеи Ьуз Азр С1у СЬп АЬа РЬе ΗΪ3 С1у СЬи Азп Агд 50 55 60

Ые СЬу СЬу Ые Агд Ьеи Агд Н1з СЬп ΗΪ3 Тгр Зег Ьеи Уа1 МеЬ СЬи 65 70 75 80

Зег УаЬ УаЬ Рго Зег Азр Агд СЬу ТЬг Туг ТЬг Суз Ьеи УаЬ СЬи Азп 85 90 95

АЬа УаЬ СЬу Зег 11е Агд Туг Азп Туг Ьеи Ьеи Азр λ/аЬ Ьеи СЬи Агд 100 105 110

Зег Рго НЬз Агд Рго Ые Ьеи С1п АЬа СЬу Ьеи Рго А1а Азп ТЬг ТЬг 115 120 125

А1а УаЬ УаЬ СЬу Зег Азр УаЬ С1и Ьеи Ьеи Суз Ьуз 17а1 Туг Зег Азр 130 135 140

АЬа СЬп Рго НЬз ЬЬе СЬп Тгр Ьеи Ьуз НЬз ЬЬе УаЬ ЬЬе Азп СЬу Зег 145 150 155 160

Зег РЬе СЬу АЬа Азр СЬу РЬе Рго Туг 17а1 СЬп \7а1 Ьеи Ьуз ТЬг АЬа 165 170 175

Азр Ые Азп Зег Зег СЬи УаЬ СЬи УаЬ Ьеи Туг Ьеи Агд Азп УаЬ Зег 180 185 190

АЬа СЬи Азр АЬа СЬу СЬи Туг ТЬг Суз Ьеи АЬа СЬу Азп Зег Ые СЬу 195 200 205

- 40 021580

Ьеи Зег 210

Туг СЯп Зег А1а Тгр Ьеи ТНг Уа1 Ьеи Рго С1и С1и Азр Рго

ТНг

215

220

ΗΪ5

Шз ΗΪ3 240

ТНг 225 Ηΐδ

Тгр

А1а

А1а А1а 230

Рго С1и

А1а А1а

Зег 235

ΗΪ3

ΗΪ3

<210>

43

<211>

1059

<212> ,

цнк

<213> ]

Миз :

зр.

<220>

<221> ί

СЬЗ

<222>

(1) .

.(1059)

<400>

43

сЕЕ

дад

дсс

ЕсЕ

дад

даа

аЕд

дад

сад

дад

ссс

Еде

сЕа

дсс

сса

аЕс

48

Ьеи

С1и

А1а

Зег

С1и

СЯи

МеЕ

С1и

61п

С1и

Рго

Суз

Ьеи

А1а

Рго

11е

1

5

10

15

сЕд

дад

сад

саа

дад

сад

дЕд

ид

асд

д£д

дсс

сЕд

ддд

сад

ссЕ

дЕд

96

Ьеи

С1и

С1п

СЯп

СЯи

С1п

Уа1

Ьеи

ТНг

Уа1

А1а

Ьеи

(Яу

(Яп

Рго

Уа1

20

25

30

адд

сЕд

Еде

ЕдЕ

ддд

сдс

асе

дад

сдЕ

дд£

сдЕ

сас

ьдд

Еас

ааа

дад

144

Агд

Ьеи

Суз

Суз

СЯу

Агд

ТНг

С1и

Агд

СЯу

Агд

Шз

Тгр

Туг

Ьуз

(Яи

35

40

45

ддс

аде

сдс

сЕа

дса

ЕсЕ

дсЕ

ддд

еда

дЕа

едд

ддЕ

Едд

ада

ддс

сдс

192

С1у

Зег

Агд

Ьеи

А1а

Зег

А1а

СЯу

Агд

Уа1

Агд

(Яу

Тгр

Агд

С1у

Агд

50

55

60

сЕд

дад

аЕс

дсс

аде

ЕЕс

сЕЕ

ссЕ

дад

даЕ

дсЕ

ддс

еда

Еас

сЕс

Еде

240

Ьеи

С1и

Пе

А1а

Зег

РНе

Ьеи

Рго

С1и

Азр

А1а

С1у

Агд

Туг

Ьеи

Суз

65

70

75

80

сЕд

дсс

сдЕ

ддс

Есс

аЕд

асе

дЕс

дЕа

сас

ааЕ

сЕЕ

асд

ЕЕд

сЕЕ

аЕд

288

Ьеи

А1а

Агд

С1у

Зег

МеЕ

ТНг

Уа1

Уа1

ΗΪ3

Азп

Ьеи

ТНг

Ьеи

Ьеи

МеЕ

85

90

95

даЕ

дас

Есс

ЕЕа

асе

Есс

аЕс

адЕ

ааЕ

даЕ

даа

дас

ссс

аад

аса

сЕс

336

Азр

Азр

Зег

Ьеи

ТНг

Зег

Пе

Зег

Азп

Азр

(Яи

Азр

Рго

Ьуз

ТНг

Ьеи

100

105

110

аде

аде

Есс

Есд

адЕ

дд£

саЕ

дЕс

Еас

сса

сад

саа

дса

ссс

Еас

Едд

384

Зег

Зег

Зег

Зег

Зег

С1у

ΗΪ3

Уа1

Туг

Рго

(Яп

(Яп

А1а

Рго

Туг

Тгр

115

120

125

аса

сас

ссс

саа

сдс

аЕд

дад

аад

ааа

сЕд

саЕ

дса

дЕд

ссЕ

дсс

ддд

432

ТНг

ΗΪ3

Рго

С1п

Агд

МеЕ

С1и

Ьуз

Ьуз

Ьеи

Шз

А1а

Уа1

Рго

А1а

СЯу

130

135

140

ааЕ

асЕ

дЕс

ааа

ЕЕс

сдс

ЕдЕ

сса

дсЕ

дса

ддд

аас

ссс

аЕд

ссЕ

асе

480

Азп

ТНг

Уа1

Ьуз

РНе

Агд

Суз

Рго

А1а

А1а

61у

Азп

Рго

МеЕ

Рго

ТНг

145

150

155

160

аЕс

сас

Едд

сЕс

аад

даЕ

дда

сад

дсс

ЕЕс

сас

ддд

дад

ааЕ

сдЕ

аЕЕ

528

11е

ΗΪ3

Тгр

Ьеи

Ьуз

Азр

С1у

61п

А1а

РНе

ΗΪ3

СЯу

СЯи

Азп

Агд

Пе

165

170

175

дда

ддс

аЕЕ

едд

сЕд

сдс

сас

саа

сас

£дд

аде

сЕд

дЕд

аЕд

даа

адЕ

576

С1у

С1у

11е

Агд

Ьеи

Агд

Шз

СЯп

Шз

Тгр

Зег

Ьеи

Уа1

МеЕ

(Ли

Зег

180

185

190

д£д

дЕа

ссс

Есд

дас

сдЕ

ддс

аса

Еас

аса

Еде

сЕЕ

дЕд

дад

аас

ЕсЕ

624

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Азр

Агд

СЯу

ТНг

Туг

ТНг

Суз

Ьеи

Уа1

С1и

Азп

Зег

195

200

205

сЕд

ддЕ

аде

аЕЕ

сдс

Еас

аде

ЕаЕ

сЕс

сЕд

даЕ

дйд

сЕд

дад

едд

Есс

672

Ьеи

СЯу

Зег

11е

Агд

Туг

Зег

Туг

Ьеи

Ьеи

Азр

Уа1

Ьеи

(Ли

Агд

Зег

210

215

220

ссд

сас

едд

ссс

аЕс

сЕд

сад

дед

ддд

сЕс

сса

дсс

аас

асе

аса

дсЕ

720

Рго

ΗΪ3

Агд

Рго

11е

Ьеи

С1п

А1а

СЯу

Ьеи

Рго

А1а

Азп

ТНг

ТНг

А1а

225

230

235

240

дЕд

дЕд

ддс

аде

дас

дЕд

дад

сЕа

сЕс

Еде

аад

дЕд

Еас

аде

дас

дсс

768

Уа1

Уа1

61у

Зег

Азр

Уа1

С1и

Ьеи

Ьеи

Суз

Ьуз

Уа1

Туг

Зег

Азр

А1а

245

250

255

сад

ССС

сас

аСа

сад

ьдд

сЕд

ааа

сас

дЕс

дЕс

аЕс

аас

ддс

аде

аде

816

61п

Рго

ΗΪ3

Пе

С1п

Тгр

Ьеи

Ьуз

ΗΪ3

Уа1

Уа1

Пе

Азп

(Яу

Зег

Зег

260

265

270

ЕЕс

ддс

дсс

дас

ддн

ЕЕс

ссс

Еас

дЕа

саа

дЕс

сЕд

аад

аса

аса

дас

864

РНе

СЯу

А1а

Азр

С1у

РНе

Рго

Туг

Уа1

(Яп

Уа1

Ьеи

Ьуз

ТНг

ТНг

Азр

275

280

285

аЕс

ааЕ

аде

Есд

дад

дЕа

дад

дЕс

ЕЕд

ЕаЕ

сЕд

адд

аас

д£д

Есс

дсЕ

912

Пе

Азп

Зег

Зег

С1и

Уа1

СЯи

Уа1

Ьеи

Туг

Ьеи

Агд

Азп

Уа1

Зег

А1а

290

295

300

дад

даЕ

дса

дда

дад

ЕаЕ

асе

ЕдЕ

сЕд

дед

ддс

аас

Есс

аЕс

ддс

сЕЕ

960

С1и

Азр

А1а

С1у

С1и

Туг

ТНг

Суз

Ьеи

А1а

С1у

Азп

Зег

Пе

СЯу

Ьеи

305

310

315

320

Есс

Еас

сад

Еса

дед

кдд

сЕс

асд

д£д

сЕд

сса

дад

даа

дас

сЕс

асд

1008

Зег

Туг

С1п

Зег

А1а

Тгр

Ьеи

ТНг

Уа1

Ьеи

Рго

(Яи

С1и

Азр

Ьеи

ТНг

325

330

335

Едд

аса

аса

дса

асе

ссЕ

дад

дсс

дсЕ

аде

саЕ

сас

саЕ

саЕ

саЕ

сас

1056

Тгр

ТНг

ТНг

А1а

ТНг

Рго

С1и

А1а

А1а

Зег

ΗΪ3

Шз

ΗΪ3

ΗΪ3

ΗΪ3

Шз

340

345

350

Еда

1059

<210> 44

<211

.> 352

<212

> ркт

<213

> Миз зр.

<400

!> 4

[4

Ьеи

СЯи

А1а

Зег

С1и

С1и

МеЕ

СЯи

С1п

СЯи

Рго

Суз

Ьеи

А1а

Рго

11е

1

5

10

15

Ьеи

О1и

СЯп

С1п

С1и

С1п

Уа1

Ьеи

ТНг

Уа1

А1а

Ьеи

С1у

СЯп

Рго

Уа1

25 30

Агд Ьеи Суз Суз С1у Агд ТНг С1и Агд С1у Агд Низ Тгр Туг Ьуз 61и 35 40 45

61у Зег Агд Ьеи А1а Зег А1а С1у Агд Уа1 Агд С1у Тгр Агд С1у Агд 50 55 60

Ьеи С1и Не А1а Зег РНе Ьеи Рго С1и Азр А1а С1у Агд Туг Ьеи Суз 65 70 75 80

Ьеи А1а Агд С1у Зег МеН ТНг Уа1 Уа1 Шз Азп Ьеи ТНг Ьеи Ьеи Мер 85 90 95

Азр Азр Зег Ьеи ТНг Зег 11е Зег Азп Азр С1и Азр Рго Ьуз ТНг Ьеи 100 105 110

Зег Зег Зег Зег Зег С1у Ηίδ Уа1 Туг Рго С1п С1п А1а Рго Туг Тгр 115 120 125

ТНг Шз Рго С1п Агд Мер С1и Ьуз Ьуз Ьеи Низ А1а Уа1 Рго А1а С1у 130 135 140

Азп ТНг Уа1 Ьуз РНе Агд Суз Рго А1а А1а С1у Азп Рго Мер Рго ТНг 145 150 155 160

Не Шз Тгр Ьеи Ьуз Азр С1у С1п А1а РНе ΗΪ3 С1у С1и Азп Агд Не 165 170 175

С1у С1у Не Агд Ьеи Агд Шз С1п Низ Тгр Зег Ьеи Уа1 Мер С1и Зег 180 185 190

Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Агд С1у ТНг Туг ТНг Суз Ьеи Уа1 С1и Азп Зег 195 200 205

Ьеи С1у Зег Не Агд Туг Зег Туг Ьеи Ьеи Азр Уа1 Ьеи С1и Агд Зег 210 215 220

Рго Низ Агд Рго Не Ьеи С1п А1а С1у Ьеи Рго А1а Азп ТНг ТНг А1а 225 230 235 240

Уа1 Уа1 С1у Зег Азр Уа1 С1и Ьеи Ьеи Суз Ьуз Уа1 Туг Зег Азр А1а 245 250 255

С1п Рго Низ Не С1п Тгр Ьеи Ьуз Низ Уа1 Уа1 Не Азп С1у Зег Зег 260 265 270

РНе С1у А1а Азр С1у РНе Рго Туг Уа1 С1п Уа1 Ьеи Ьуз ТНг ТНг Азр

275 280 285

11е

Азп

Зег

Зег

С1и

Уа1

61и

Уа1

Ьеи

Туг

Ьеи

Агд

Азп

Уа1

Зег

А1а

290

295

300

С1и

Азр

А1а

С1у

С1и

Туг

ТНг

Суз

Ьеи

А1а

61у

Азп

Зег

Не

С1у

Ьеи

305

310

315

320

Зег

Туг

С1п

Зег

А1а

Тгр

Ьеи

ТНг

Уа1

Ьеи

Рго

С1и

С1и

Азр

Ьеи

ТНг

325

330

335

Тгр

ТНг

ТНг

А1а

ТНг

Рго

61и

А1а

А1а

Зег

Низ

Низ

Н13

Низ

Низ

Низ

340

345

350

<21С

)>

45

<211

.>

1773

<212

Днк

<213

Ношо

зариепз

<220>

<221> СЬЗ

<222

(1) ..

.(1773)

<400> ‘

15

адд

ссд

Рсс

ссд

асе

РРд

ссР

даа

саа

дсс

сад

ссс

рдд

дда

дсс

ссР

48

Агд

Рго

Зег

Рго

ТНг

Ьеи

Рго

С1и

С1п

А1а

С1п

Рго

Тгр

<31у

А1а

Рго

1

5

10

15

дрд

даа

дрд

дад

Рсс

РРс

сРд

дРс

сас

ссс

ддр

дас

сРд

сРд

сад

сРР

96

Уа1

С1и

Уа1

С1и

Зег

РЬе

Ьеи

Уа1

Низ

Рго

С1у

Азр

Ьеи

Ьеи

С1п

Ьеи

20

25

30

сдс

рдр

едд

сРд

едд

дас

даР

дрд

сад

аде

аРс

аас

рдд

сРд

едд

дас

144

Агд

Суз

Агд

Ьеи

Агд

Азр

Азр

Уа1

С1п

Зег

Не

Азп

Тгр

Ьеи

Агд

Азр

35

40

45

ддд

дрд

сад

сРд

дед

даа

аде

аас

сдс

асе

сдс

анс

аса

ддд

дад

дад

192

С1у

Уа1

С1п

Ьеи

А1а

С1и

Зег

Азп

Агд

ТНг

Агд

11е

ТНг

С1у

С1и

С1и

50

55

60

дрд

дад

дрд

сад

да с

Рсс

дрд

ссс

дса

дас

Рсс

ддс

сРс

РаР

дсР

Рдс

240

Уа1

61и

Уа1

С1п

Азр

Зег

Уа1

Рго

А1а

Азр

Зег

С1у

Ьеи

Туг

А1а

Суз

65

70

75

80

дна

асе

аде

аде

ссс

Рсд

ддс

адР

дас

асе

асе

Рас

РРс

Рсс

дРс

ааР

288

Уа1

ТНг

Зег

Зег

Рго

Зег

С1у

Зег

Азр

ТНг

ТНг

Туг

РНе

Зег

Уа1

Азп

85

90

95

дрр

Рса

даР

дсР

сРс

ссс

Рсс

Рсд

дад

даР

даР

даР

даР

даР

даР

дас

336

17а1

Зег

Азр

А1а

Ьеи

Рго

Зег

Зег

С1и

Азр

Азр

Азр

Азр

Азр

Азр

Азр

100

105

110

Рсс

РсР

Рса

дад

дад

ааа

даа

аса

даР

аас

асе

ааа

сса

аас

сдР

аРд

384

Зег

Зег

Зег

С1и

С1и

Ьуз

С1и

ТНг

Азр

Азп

ТНг

Ьуз

Рго

Азп

Агд

Мер

115

120

125

ссс

дРа

дсР

сса

РаР

рдд

аса

Рсс

сса

даа

аад

аРд

даа

аад

ааа

РРд

432

Рго

Уа1

А1а

Рго

Туг

Тгр

ТНг

Зег

Рго

С1и

Ьуз

Мер

С1и

Ьуз

Ьуз

Ьеи

130 135 140 сае дса дед ссд дсе дсс аад аса дед аад еес ааа еде ссе есс аде 480

Низ А1а Уа1 Рго А1а А1а Ьуз ТЬг Ή1 Ьуз РЬе Ьуз Суз Рго Зег Зег

145 150 155 160 ддд асе сса аас ссс аса сед сдс едд еед ааа аае ддс ааа даа еес 528

Е1у ТЬг Рго Азп Рго ТЬг Ьеи Агд Тгр Ьеи Ьуз Азп С1у Ьуз С1и РЬе

165 170 175 ааа ссе дас сас ада аее дда ддс еас аад дес еде еае дсс асе едд 576

Ьуз Рго Азр Шз Агд Пе Е1у С1у Туг Ьуз 7а1 Агд Туг А1а ТЬг Тгр

180 185 190 аде аес аСа аед дас есе дед дед ссс есе дас аад ддс аас еас асе 624

Зег Не 11е Мее Азр Зег Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Ьуз С1у Азп Туг ТЬг

195 200 205 еде аее дед дад аае дад еас ддс аде аес аас сас аса еас сад сед 672

Суз 11е Уа1 Е1и Азп Е1и Туг Е1у Зег 11е Азп Шз ТЬг Туг С1п Ьеи

210 215 220 да! дес дед дад едд есс ссе сас едд ссс аес сед саа дса ддд еед 720

Азр Уа1 \7а1 С1и Агд Зег Рго Шз Агд Рго 11е Ьеи С1п А1а С1у Ьеи

225 230 235 240 ссс дсс аас ааа аса дед дсс сед дде аде аас дед дад еес аед еде 768

Рго А1а Азп Ьуз ТЬг 17а1 А1а Ьеи С1у Зег Азп Уа1 Е1и РЬе Мее Суз

245 250 255 аад дед еас аде дас ссд сад ссд сас аес сад едд сеа аад сас аес 816

Ьуз Уа1 Туг Зег Азр Рго 61п Рго Шз Не О1п Тгр Ьеи Ьуз Ηίδ Не

260 265 270 дад дед аае ддд аде аад аее ддс сса дас аас сед ссе еае дес сад 864

С1и Уа1 Азп Е1у Зег Ьуз Не Е1у Рго Азр Азп Ьеи Рго Туг Уа1 С1п

275 280 285 аес еед аад асе дсе дда дее аае асе асе дас ааа дад аед дад дед 912

Не Ьеи Ьуз ТЬг А1а Е1у 7а1 Азп ТЬг ТЬг Азр Ьуз Е1и Мее Е1и 7а1

290 295 300 сее сас ееа ада аае дес есс еее дад дас дса ддд дад еае асд еде 960

Ьеи НЬз Ьеи Агд Азп Уа1 Зег РЬе 61и Азр А1а Е1у Е1и Туг ТЬг Суз

305 310 315 320 еед дед дде аас есе аес дда сес есс сае сас есе дса едд еед асе 1008

Ьеи А1а С1у Азп Зег Не Е1у Ьеи Зег Нёз Низ Зег А1а Тгр Ьеи ТЬг

325 330 335 дее сед даа дсс сед даа дад адд ссд дса дед аед асе еед ссс сед 1056

Уа1 Ьеи С1и А1а Ьеи Е1и Е1и Агд Рго А1а Уа1 Мее ТЬг Зег Рго Ьеи

340 345 350

Ьао сед дад аеа дед сеа дад ссс ааа есе еде дас ааа асе сас аса 1104

Туг Ьеи С1и Не А1а Ьеи Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Низ ТЬг

355 360 365 еде сса ссд еде сса дса ссе даа сес сед ддд дда ссд Оса дес еес 1152

Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи О1у Е1у Рго Зег Уа1 РЬе

370 375 380 сЬс еес ссс сса ааа ссс аад дас асе сЪс аед аес есс едд асе ссе 1200

Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мее Не Зег Агд ТЬг Рго

385 390 395 400 дад дес аса еде дед дед дед дас дед аде сас даа дас ссе дад дес 1248

С1и Уа1 ТЬг Суз \7а1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ Е1и Азр Рго С1и \7а1

405 410 415 аад еес аас едд еас дед дас ддс дед дад дед сае аае дсс аад аса 1296

Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у \7а1 Е1и Уа1 Низ Азп А1а Ьуз ТЬг

420 425 430 аад ссд едд дад дад сад еас аас аде асд еас еде дед дес аде дес 1344

Ьуз Рго Агд Е1и Е1и Е1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1

435 440 445 сЬс асе дес сед сас сад дас едд сед аае ддс аад дад еас аад еде 1392

Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Низ Е1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз

450 455 460 аад дес есс аас ааа дсс сес сса дсс ссс аес дад ааа асе аес есс 1440

Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не Е1и Ьуз ТЬг Не Зег

465 470 475 480 ааа дсс ааа ддд сад ссс еда даа сса сад дед еас асе сед ссс сса 1488

Ьуз А1а Ьуз Е1у С1п Рго Агд Е1и Рго Е1п 17а1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго

485 490 495 есс едд дае дад сед асе аад аас сад дес аде сед асе еде сед дес 1536

Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п \7а1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1

500 505 510 ааа ддс еес еае ссс аде дас аес дсс дед дад едд дад аде аае ддд 1584

Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а \7а1 Е1и Тгр С1и Зег Азп Е1у

515 520 525 сад ссд дад аас аас еас аад асе асд ссе ссс дед сед дас есс дас 1632

Е1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр

530 535 540 ддс есс еес еес сес еас аде аад сес асе дед дас аад аде адд едд 1680

Е1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр

545 550 555 560 сад сад ддд аас дес еес еса еде есс дед аед сае дад дсе сед сас 1728

Е1п Е1п Е1у Азп \7а1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мее Низ Е1и А1а Ьеи Ηίβ

565 570 575 аас сас еас асд сад аад аде сес есс сед есе ссд дде ааа еда 1773

Азп Низ Туг ТЬг Е1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго Е1у Ьуз

580 585 590 <210> 46 <211> 590 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 46

Агд Рго Зег Рго ТЬг Ьеи Рго Е1и 61п А1а С1п Рго Тгр Е1у А1а Рго 15 10 15 \7а1 Е1и Уа1 Е1и Зег РЬе Ьеи \7а1 Низ Рго Е1у Азр Ьеи Ьеи С1п Ьеи 20 25 30

Агд

С1у \7а1

Уа1

Уа1

Зег

Рго

ΗΪ3

145

61у

Ьуз

Зег

Суз

Азр

225

Рго

Ьуз

С1и

Азп Тгр Ьеи Агд Азр 45

11е ТНг С1у С1и 61и 60

С1у Ьеи Туг А1а Суз 80

Туг РНе Зег \7а1 Азп 95

Азр Азр Азр Азр Азр 110

Ьуз Рго Азп Агд Мек 125

Мек б1и Ьуз Ьуз Ьеи 140

Ьуз Суз Рго Зег Зег 160

Азп 61у Ьуз 61и РНе 175

Агд Туг А1а ТНг Тгр 190

Ьуз С1у Азп Туг ТНг 205

ΗΪ3 ТНг Туг С1п Ьеи 220

Ьеи С1п А1а С1у Ьеи 240

Уа1 С1и РНе Мек Суз 255

Тгр Ьеи Ьуз ΗΪ3 Не 270

Ьеи Рго Туг Уа1 С1п 285

Ьуз С1и Мек С1и Уа1 300

61у С1и Туг ТНг Суз 320

Зег А1а Тгр Ьеи ТНг 335

Мек ТНг Зег Рго Ьеи 350

Азр Ьуз ТНг ΗΪ3 ТНг 365

С1у Рго Зег Уа1 РНе 380

Не Зег Агд ТНг Рго 400

О1и Азр Рго С1и Уа1 415

ΗΪ3 Азп А1а Ьуз ТНг 430

Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 445

Ьуз С1и Туг Ьуз Суз 460

С1и Ьуз ТНг 11е Зег 480

Туг ТНг Ьеи Рго Рго 495

Ьеи ТНг Суз Ьеи Уа1 510

Тгр С1и Зег Азп С1у 525

Уа1 Ьеи Азр Зег Азр 540 <210> 47 <211> 1773 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(1773) <400> 47 сдд ссс Рсс РРс адр РРа дРР дад даР асе аса РРа дад сса даа дад Агд Рго Зег РЬе Зег Ьеи Уа1 С1и Азр ТЬг ТЬг Ьеи С1и Рго С1и С1и сса сса асе ааа Рас саа аРс РсР саа сса даа дрд Рас дрд дсР дса Рго Рго ТЬг Ьуз Туг С1п Не Зег С1п Рго С1и Уа1 Туг Уа1 А1а А1а сса ддд дад Рсд сРа дад дрд сдс Рдс сРд РРд ааа дар дсс дсс дрд Рго С1у С1и Зег Ьеи С1и Уа1 Агд Суз Ьеи Ьеи Ьуз Азр А1а А1а Уа1

144 аРс адр Рдд асР аад дар ддд дрд сас РРд ддд ссс аас аар адд аса Не Зег Тгр ТЬг Ьуз Азр С1у Уа1 Нхз Ьеи О1у Рго Азп Азп Агд ТЬг

192 дрд сРР аРР ддд дад Рас РРд сад аРа аад ддс дсс асд ссР ада дас Уа1 Ьеи Не С1у С1и Туг Ьеи С1п Не Ьуз С1у А1а ТЬг Рго Агд Азр

240

Рсс ддс сРс РаР дсР РдР асР дсс адр адд асР дРа дас адр даа асР Зег С1у Ьеи Туг А1а Суз ТЬг А1а Зег Агд ТЬг Уа1 Азр Зег С1и ТЬг

288

Рдд Рас РРс аРд дрд ааР дРс аса дар дсс аРс Рса Рсс дда дар дар Тгр Туг РЬе Мер Уа1 Азп Уа1 ТЬг Азр А1а Не Зег Зег С1у Азр Азр

100 105 110 дад дар дас асе даР ддР дед даа дар РРР дРс адр дад аас адр аас

С1и Азр Азр ТЬг Азр С1у А1а С1и Азр РЬе Уа1 Зег С1и Азп Зег Азп

115 120 125 аас аад ада дса сса Рас Рдд асе аас аса даа аад аРд даа аад сдд

Азп Ьуз Агд А1а Рго Туг Тгр ТЬг Азп ТЬг С1и Ьуз Мер С1и Ьуз Агд

130 135 140

336

384

432 сРс саР дсР дрд ссР дед дсс аас асР дРс аад РРР сдс Рдс сса дсс Ьеи ΗΪ3 А1а Уа1 Рго А1а А1а Азп ТЬг Уа1 Ьуз РЬе Агд Суз Рго А1а 145 150 155 160

480 ддд <?д<3 ^{аас сса} аРд сса асе аРд сдд Рдд сРд ааа аас ддд аад дад 528

С1у С1у Азп Рго Мер Рго ТЬг Мер Агд Тгр Ьеи Ьуз Азп С1у Ьуз С1и

165 170 175

РРР аад сад дад саР сдс аРР дда ддс Рас аад дРа еда аас сад сас 576

РЬе Ьуз С1п С1и Нхз Агд Не С1у С1у Туг Ьуз Уа1 Агд Азп С1п Нхз

180 185 190

Рдд аде сРс аРР аРд даа адр дрд дРс сса РсР дас аад дда аар РаР 624

Тгр Зег Ьеи Не Мер С1и Зег Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Ьуз С1у Азп Туг

195 200 205 асе РдР дрд дрд дад ааР даа Рас ддд Рсс аРс ааР сас асд Рас сас 672

ТЬг Суз Уа1 Уа1 С1и Азп С1и Туг С1у Зег Не Азп Нхз ТЬг Туг Нхз

210 215 220 сРд даР дРР дрд дад еда Рсд ссР сас сдд ссс аРс сРс саа дсс дда 720

Ьеи Азр \7а1 νβΐ С1и Агд Зег Рго Нхз Агд Рго Не Ьеи С1п А1а С1у

225 230 235 240 сРд ссд дса аар дсс Рсс аса дрд дРс дда дда дас дРа дад РРР дРс 768

Ьеи Рго А1а Азп А1а Зег ТЬг Уа1 Уа1 С1у С1у Азр Уа1 С1и РЬе Уа1

245 250 255

Рдс аад дРР Рас адр дар дсс сад ссс сас аРс сад Рдд аРс аад сас 816

Суз Ьуз Уа1 Туг Зег Азр А1а С1п Рго Нхз Не С1п Тгр Не Ьуз Нхз

260 265 270 дрд даа аад аас ддс адр ааа Рас ддд ссс дас ддд сРд ссс Рас сРс 864

Уа1 С1и Ьуз Азп С1у Зег Ьуз Туг С1у Рго Азр С1у Ьеи Рго Туг Ьеи

275 280 285 аад дРР сРс аад дсс дсс ддР дРР аас асе асд дас ааа дад аРР дад 912

Ьуз Уа1 Ьеи Ьуз А1а А1а С1у Уа1 Азп ТЬг ТЬг Азр Ьуз С1и Не О1и

290 295 300 дРР сРс РаР аРР сдд ааР дРа асР РРР дад дас дсР ддд даа РаР асд 960

Уа1 Ьеи Туг Не Агд Азп Ча1 ТЬг РЬе С1и Азр А1а С1у С1и Туг ТЬг

305 310 315 320

Рдс РРд дед ддР ааР РсР аРР ддд аРа Рсс РРР сас РсР дса Рдд РРд 1008

Суз Ьеи А1а С1у Азп Зег Не С1у Не Зег РЬе Нхз Зег А1а Тгр Ьеи

325 330 335 аса дРР сРд сса дед ссР дда ада даа аад дад аРР аса дсР Рсс сса 1056

ТЬг Да1 Ьеи Рго А1а Рго С1у Агд С1и Ьуз С1и Не ТЬг А1а Зег Рго

340 345 350 дас Рас сРд Рса дед сРа дад ссс ааа РсР РдР дас ааа асР сас аса 1104

Азр Туг Ьеи Зег А1а Ьеи С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Нхз ТЬг

355 360 365

Рдс сса ссд Рдс сса дса ссР даа сРс сРд ддд дда ссд Рса дРс РРс 1152

Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Ча1 РЬе

370 375 380 сРс РРс ссс сса ааа ссс аад дас асе сРс аРд аРс Рсс сдд асе ссР 1200

Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер Не Зег Агд ТЬг Рго

385 390 395 400 дад дРс аса Рдс дрд дрд дрд дас дрд аде сас даа дас ссР дад дРс 1248

С1и \М1 ТЬг Суз Уа1 Х7а1 Уа1 Азр \7а1 Зег Нхз 61и Азр Рго (31и Уа1

405 410 415 аад РРс аас Рдд Рас дРд дас ддс дРд дад дРд саР ааР дсс аад аса 1296

Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг

420 425 430 аад ссд едд дад дад сад Рас аас аде асд Рас сдр дРд дрс аде дРс 1344

Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1

435 440 445 сРс асс дрс сРд сас сад дас Рдд сРд ааР ддс аад дад Рас аад Рдс 1392

Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз

450 455 460 аад дрс Рсс аас ааа дсс сРс сса дсс ссс аРс дад ааа асс аРс Рсс 1440

Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не С1и Ьуз ТЬг Не Зег

465 470 475 480 ааа дсс ааа ддд сад ссс еда даа сса сад дРд Рас асс сРд ссс сса 1488

Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго

485 490 495

Рсс едд даР дад сРд асс аад аас сад дрс аде сРд асс Рдс сРд дрс 1536

Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи νΑΐ

500 505 510 ааа ддс РРс РаР ссс аде дас аРс дсс дРд дад Рдд дад аде ааР ддд 1584

Ьуз б1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 61и Тгр С1и Зег Азп С1у

515 520 525 сад ссд дад аас аас Рас аад асс асд ссР ссс дРд сРд дас Рсс дас 1632

С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго А/а1 Ьеи Азр Зег Азр

530 535 540 ддс Рсс РРс РРс сРс Рас аде аад сРс асс дРд дас аад аде адд Рдд 1680

С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр

545 550 555 560 сад сад ддд аас дРс РРс Рса Рдс Рсс дРд ард саР дад дсР сРд сас 1728

С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мер Шз С1и А1а Ьеи Шз

565 570 575 аас сас Рас асд сад аад аде сРс Рсс сРд РсР ссд ддр ааа Рда 1773

Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз

580 585 590 <210> 48 <211> 590 <212> РКТ <213> Ното заргепз <400> 48

Агд Рго Зег РЬе Зег Ьеи Уа1 С1и Азр ТЬг ТЬг Ьеи С1и Рго С1и С1и 15 10 15

Рго Рго ТЬг Ьуз Туг С1п Не Зег С1п Рго С1и Уа1 Туг Уа1 А1а А1а 20 25 30

Рго С1у С1и Зег Ьеи С1и Уа1 Агд Суз Ьеи Ьеи Ьуз Азр А1а А1а \7а1 35 40 45

11е Зег Тгр ТЬг Ьуз Азр С1у \7а1 ΗΪ3 Ьеи С1у Рго Азп Азп Агд ТЬг 50 55 60

Уа1 Ьеи 11е 61у 61и Туг Ьеи С1п Не Ьуз 61у А1а ТЬг Рго Агд Азр 65 70 75 80

Зег С1у Ьеи Туг А1а Суз ТЬг А1а Зег Агд ТЬг Уа1 Азр Зег С1и ТЬг 85 90 95

Тгр Туг РЬе Мер Уа1 Азп \7а1 ТЬг Азр А1а 11е Зег Зег С1у Азр Азр 100 105 110

С1и Азр Азр ТЬг Азр С1у А1а С1и Азр РЬе Уа1 Зег С1и Азп Зег Азп 115 120 125

Азп Ьуз Агд А1а Рго Туг Тгр ТЬг Азп ТЬг С1и Ьуз МеР С1и Ьуз Агд 130 135 140

Ьеи Шз А1а Уа1 Рго А1а А1а Азп ТЬг Уа1 Ьуз РЬе Агд Суз Рго А1а 145 150 155 160

С1у С1у Азп Рго МеР Рго ТЬг МеР Агд Тгр Ьеи Ьуз Азп С1у Ьуз С1и 165 170 175

РЬе Ьуз 61η. С1и Ηϊξ Агд Не С1у С1у Туг Ьуз Уа1 Агд Азп С1п ΗΪ3 180 185 190

Тгр Зег Ьеи 11е МеР С1и Зег Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Ьуз С1у Азп Туг 195 200 205

ТЬг Суз Уа1 Уа1 С1и Азп С1и Туг С1у Зег Не Азп Низ ТЬг Туг ΗΪ3 210 215 220

Ьеи Азр Уа1 Уа1 С1и Агд Зег Рго Шз Агд Рго Не Ьеи <31п А1а С1у 225 230 235 240

Ьеи Рго А1а Азп А1а Зег ТЬг Уа1 Уа1 С1у С1у Азр Уа1 С1и РЬе Уа1 245 250 255

Суз Ьуз Уа1 Туг Зег Азр А1а С1п Рго Нйз Не С1п Тгр Не Ьуз ΗΪ8 260 265 270

Уа1 С1и Ьуз Азп С1у Зег Ьуз Туг С1у Рго Азр С1у Ьеи Рго Туг Ьеи 275 280 285

Ьуз Л7а1 Ьеи Ьуз А1а А1а С1у Уа1 Азп ТЬг ТЬг Азр Ьуз С1и Не С1и 290 295 300

Ча1 Ьеи Туг Не Агд Азп Ча1 ТНг РНе С1и Азр А1а С1у С1и Туг ТНг 305 310 315 320

Суз Ьеи А1а С1у Азп Зег Не С1у Не Зег РНе Шз Зег А1а Тгр Ьеи

325 330 335

ТНг Ча1 Ьеи Рго А1а Рго С1у Агд С1и Ьуз С1и Не ТНг А1а Зег Рго 340 345 350

Азр Туг Ьеи Зег А1а Ьеи С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТНг Шз ТНг 355 360 365

Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Ча1 РНе

370 375 380

Ьеи РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТНг Ьеи МеН Не Зег Агд ТНг Рго 385 390 395 400

С1и Ча1 ТНг Суз Ча1 Ча1 Ча1 Азр Ча1 Зег Шз С1и Азр Рго С1и Ча1

405 410 415

Ьуз РНе Азп Тгр Туг Ча1 Азр С1у Ча1 С1и Ча1 Шз Азп А1а Ьуз ТНг 420 425 430

Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТНг Туг Агд Ча1 Ча1 Зег Ча1

435 440 445

Ьеи ТНг Ча1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз

450 455 460

Ьуз Ча1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не С1и Ьуз ТНг Не Зег 465 470 475 480

Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Ча1 Туг ТНг Ьеи Рго Рго

485 490 495

Зег Агд Азр 01и Ьеи ТНг Ьуз Азп С1п Ча1 Зег Ьеи ТНг Суз Ьеи Ча1

500 505 510

Ьуз СЯу РНе Туг Рго Зег Азр Не А1а Ча1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у 515 520 525

С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго Ча1 Ьеи Азр Зег Азр

530 535 540

СЯу Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТНг Ча1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр 545 550 555 560

С1п С1п С1у Азп Ча1 РНе Зег Суз Зег Ча1 МеН Шз С1и А1а Ьеи Шз 565 570 575

Азп Шз Туг ТНг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз

580 585 590 <210> 49 <211> 2403 <212> ДНК <213> КаННиз зр, <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(2403) <400> 49 аНд Ндд сНд сНд ННд дсН ННд ННд аде аНс ННН сад дад аса сса дсс 48

МеН Тгр Ьеи Ьеи Ьеи А1а Ьеи Ьеи Зег Не РНе С1п С1и ТНг Рго А1а

10 15

ННс Нсс сНН дад дсс НсН дад даа аНд даа сад дад ссс Ндс сса дсс 96

РНе Зег Ьеи С1и А1а Зег С1и С1и МеН С1и С1п С1и Рго Суз Рго А1а

25 30 сса аНс Нед дад сад саа дад сад дНд ННд асН дНд дсс сНН ддд сад 144

Рго 11е Зег С1и С1п С1п С1и С1п Уа1 Ьеи ТНг Ча1 А1а Ьеи С1у С1п

40 45 ссН дНд едд сНа Ндс НдН ддс сдс асН дад сдН ддН сдН саН Ндд Нас 192

Рго Ча1 Агд Ьеи Суз Суз С1у Агд ТНг С1и Агд С1у Агд Шз Тгр Туг

55 60 аад дад ддс аде сдН ННа дса НсН дсН ддд ада дНа едд ддс Ндд ада 240

Ьуз С1и С1у Зег Агд Ьеи А1а Зег А1а С1у Агд Ча1 Агд С1у Тгр Агд

70 75 80 ддс сдс сНд дад аНс дсс аде ННс сНН ссН дад даН дсН ддс едд Нас 288

С1у Агд Ьеи 61и Не А1а Зег РНе Ьеи Рго С1и Азр А1а С1у Агд Туг

90 95 сНс Ндс сНд дсс сдН ддс Нсс аНд асН дНс дНа сас ааН сНН асН ННд 336

Ьеи Суз Ьеи А1а Агд О1у Зег МеН ТНг Ча1 Ча1 Шз Азп Ьеи ТНг Ьеи

100 105 110 аНН аНд даН дас Нсс ННа ссс Нсс аНс ааН аас дад дас ссс аад асе 384

Не МеН Азр Азр Зег Ьеи Рго Зег Не Азп Азп О1и Азр Рго Ьуз ТНг

115 120 125 сНс аде аде Нсс Нед адН ддд сас Нсс Нас сНд сад саа дса ссН Нас 432

Ьеи Зег Зег Зег Зег Зег С1у Шз Зег Туг Ьеи С1п С1п А1а Рго Туг

130 135 140

Ндд аса сас ссс саа сдс аНд дад аад ааа сНд сас дед дНа ссН дсс 480

Тгр ТНг Шз Рго С1п Агд МеН С1и Ьуз Ьуз Ьеи Шз А1а Ча1 Рго А1а

145 150 155 160 ддд аас асН дНс ааа ННс сдс НдН сса дсН дса ддд аас ссс аНд ссс 528

СЯу Азп ТНг Ча1 Ьуз РНе Агд Суз Рго А1а А1а СЯу Азп Рго МеН Рго

165 170 175

- 47 021580 асе аЬс сас Ьдд сЬс аад аас дда сад дсс ЬЬе сас дда дад ааЬ едь ТЬг Не Ηίε Тгр Ьеи Ьуз Азп С1у С1п А1а РЬе Нхз С1у С1и Азп Агд

576 аЬс дда ддс аЫ

Не С1у С1у Н< 195 едд сЬд сдЬ сас саа сас Ьдд аде сЬс дЬд аЬд дад Агд Ьеи Агд Нхз С1п Нхз Тгр Зег Ьеи Уа1 МеЬ С1и 200 205

624 аде дЬд дЬд ссс Ьса дас сдЬ ддс асд Ьас асд ЬдЬ сЬЬ дЬд дад аас

Зег Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Агд 61у ТЬг Туг ТЬг Суз Ьеи Уа1 С1и Азп

210 215 220

ЬсЬ сЬд ддЬ аде аЬЬ сдс Ьас аде ЬаЬ сЬд сЬд даЬ дЬд сЬд дад едд

Зег Ьеи С1у Зег 11е Агд Туг Зег Туг Ьеи Ьеи Азр Уа1 Ьеи С1и Агд

225 230 235 240

Ьсс ссд сас едд ссс аЬс сЬд сад дед дда сЬс сса дсс аас асе асд

Зег Рго Нхз Агд Рго Не Ьеи С1п А1а С1у Ьеи Рго А1а Азп ТЬг ТЬг

245 250 255 дсЬ дЬд дЬЬ ддс аде аас дЬд дад сЬд сЬд Ьдс аад дЬд Ьас адЬ дас

А1а Уа1 Уа1 С1у Зег Азп Уа1 С1и Ьеи Ьеи Суз Ьуз Уа1 Туг Зег Азр

260 265 270 дсс сад ссд сас аЬс сад Ьдд сЬд аад сас аЬс дЬЬ аЬс аас ддс аде

А1а С1п Рго Нхз Не С1п Тгр Ьеи Ьуз Нхз Не Уа1 Не Азп С1у Зег

275 280 285 адЬ ЬЬе ддс дсЬ даЬ ддЬ ЬЬе ссс Ьас дЬа саа дЬс сЬд аад аса аса

Зег РЬе С1у А1а Азр С1у РЬе Рго Туг Уа1 61п Уа1 Ьеи Ьуз ТЬг ТЬг

290 295 300 дас аЬс ааЬ аде Ьса дад дЬд дад дЬд сЬд ЬаЬ сЬд адд аас дЬд Ьсд

Азр Не Азп Зег Зег С1и Уа1 61и Уа1 Ьеи Туг Ьеи Агд Азп Уа1 Зег

305 310 315 320 дсЬ дад даЬ дса ддд дад Ьас асе Ьдс сЬд дед ддс аас Ьсс аЬс ддс

А1а 61и Азр А1а С1у С1и Туг ТЬг Суз Ьеи А1а С1у Азп Зег Не С1у

325 330 335 сЬс Ьсс Ьас сад Ьса дед Ьдд сЬс аса дЬд сЬа ссс дса дад даа даа

Ьеи Зег Туг С1п Зег А1а Тгр Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Рго А1а 61и С1и С1и

340 345 350 дас сЬс дед Ьдд аса аса дса аса Ьсд дад дсс ада ЬаЬ аса даЬ аЬЬ

Азр Ьеи А1а Тгр ТЬг ТЬг А1а ТЬг Зег С1и А1а Агд Туг ТЬг Азр Не

355 360 365 аЬс сЬа ЬаЬ дЬа ЬсЬ ддс Ьса сЬд дсЬ ЬЬд дЬЬ ЬЬд сЬс сЬд сЬд сЬд

Не Ьеи Туг Уа1 Зег С1у Зег Ьеи А1а Ьеи Уа1 Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи

370 375 380

672

720

768

816

864

912

960

1008

1056

1104

1152 дсс ддд дЬд ЬаЬ сас еда саа дса аЬс < А1а С1у Уа1 Туг Нхз Агд С1п А1а Не I 385 390 : ддс сас сас ЬсЬ еда сад ; С1у Нхз Нхз Зег Агд С1п

395 400

1200 ссЬ дЬс асЬ дЬа сад аад сЬд Ьсс едд ЬЬе ссЬ ЬЬд дсс едд сад ЬЬе

Рго Уа1 ТЬг Уа1 С1п Ьуз Ьеи Зег Агд РЬе Рго Ьеи А1а Агд С1п РЬе

405 410 415

Ьсс ЬЬд дад Ьсд адд Ьсс ЬсЬ ддс аад Ьса адЬ ЬЬд Ьсс сЬд дЬд еда

Зег Ьеи С1и Зег Агд Зег Зег С1у Ьуз Зег Зег Ьеи Зег Ьеи Уа1 Агд

420 425 430

1248

1296 ддЬ дЬс едд сЬс Ьсс Ьсс адЬ ддс ссд ссс ЬЬд сЬс асд ддс сЬЬ дЬд 61у Уа1 Агд Ьеи Зег Зег Зег С1у Рго Рго Ьеи Ьеи ТЬг С1у Ьеи Уа1

435 440 445

1344 адЬ сЬа дас сЬа ссЬ сЬс даЬ сса сЬЬ Ьдд дад ЬЬе ссс Зег Ьеи Азр Ьеи Рго Ьеи Азр Рго Ьеи Тгр С1и РЬе Рго 450 455 460 едд дас адд Агд Азр Агд

1392 сЬд дЬд сЬс дда аад ссс сЬд ддЬ дад ддс Ьдс ЬЬЬ ддд саа дЬд дЬЬ

Ьеи Уа1 Ьеи С1у Ьуз Рго Ьеи С1у С1и С1у Суз РЬе (31у С1п Уа1 Уа1

465 470 475 480 сдЬ дса даа дсс сЬЬ ддс аЬд даЬ Ьсс Ьсс едд сса дас саа асе аде

Агд А1а С1и А1а Ьеи С1у МеЬ Азр Зег Зег Агд Рго Азр б1п ТЬг Зег

485 490 495 асе дЬд дсЬ дЬд аад аЬд сЬд ааа дас ааЬ дсс Ьсс дас аад даЬ ЬЬд

ТЬг Уа1 А1а 5/а1 Ьуз МеЬ Ьеи Ьуз Азр Азп А1а Зег Азр Ьуз Азр Ьеи

500 505 510 дса дас сЬд аЬс ЬсЬ дад аЬд дад аЬд аЬд аад сЬа аЬс дда ада сас

А1а Азр Ьеи Не Зег С1и МеЬ С1и МеЬ МеЬ Ьуз Ьеи Не С1у Агд Нхз

515 520 525 аад аас аЬс аЬЬ аас сЬд сЬд ддЬ дЬс Ьдс асЬ сад даа ддд ссс сЬд

Ьуз Азп Не Не Азп Ьеи Ьеи С1у Уа1 Суз ТЬг С1п С1и С1у Рго Ьеи

530 535 540

ЬаЬ дЬд аЬЬ дЬд даа ЬаЬ дед дсс аад дда аас сЬЬ едд даа ЬЬе сЬс

Туг Уа1 Не Уа1 С1и Туг А1а А1а Ьуз О1у Азп Ьеи Агд 61и РЬе Ьеи

545 550 555 560 сдЬ дсс едд сдЬ ссс сса ддс ссЬ даЬ сЬс аде ссЬ даЬ ддд ссЬ едд

Агд А1а Агд Агд Рго Рго С1у Рго Азр Ьеи Зег Рго Азр С1у Рго Агд

565 570 575 аде аде даа дда ссд сЬс Ьсс ЬЬе ссд дсс сЬд дЬс Ьсс ЬдЬ дсс Ьас

Зег Зег С1и С1у Рго Ьеи Зег РЬе Рго А1а Ьеи \7а1 Зег Суз А1а Туг

580 585 590 сад дЬд дсс еда ддс аЬд сад ЬаЬ сЬд дад ЬсЬ едд аад Ьдс аЬс сас

С1п Уа1 АЬа Агд С1у МеЬ С1п Туг Ьеи С1и Зег Агд Ьуз Суз Не Нхз

595 600 605 едд дас сЬд дсЬ дсс еда аас дЬд сЬд дЬд асе дад даЬ дас дЬд аЬд

Агд Азр Ьеи А1а А1а Агд Азп Уа1 Ьеи Уа1 ТЬг С1и Азр Азр Уа1 МеЬ

610 615 620 аад аЬс дсЬ дас ЬЬЬ ддЬ сЬд дсс сдЬ ддЬ дЬс сас сас аЬс дас Ьас

Ьуз Не А1а Азр РЬе С1у Ьеи А1а Агд С1у \7а1 Нхз Нхз Не Азр Туг

625 630 635 640

ЬаЬ аад ааа асе аде ааЬ ддс сдс сЬд сса дЬс аад Ьдд аЬд дсЬ ссЬ

Туг Ьуз Ьуз ТЬг Зег Азп С1у Агд Ьеи Рго Уа1 Ьуз Тгр МеЬ А1а Рго

645 650 655 дад дед ЬЬд ЬЬЬ дас сдЬ дЬа Ьас аса сас сад адЬ дас дЬд Ьдд Ьсс

С1и А1а Ьеи РЬе Азр Агд Уа1 Туг ТЬг Нхз О1п Зег Азр 17а1 Тгр Зег

660 665 670

1440

1488

1536

1584

1632

1680

1728

1776

1824

1872

1920

1968

2016

ЬЬе ддд аЬс сЬд сЬд Ьдд даа аЬс ЬЬе асе сЬс ддд ддс Ьсс сса Ьас РЬе С1у Не Ьеи Ьеи Тгр С1и Не РЬе ТЬг Ьеи С1у С1у Зег Рго Туг

675 680 685

2064

- 48 021580 ссс ддс аНс сса дНд дад дад сНд ННс Нса сНд сНд еда Рго С1у Не Рго Уа1 С1и С1и Ьеи РНе Зег Ьеи Ьеи Агд 690 695 700 адд аНд дад сдд ссс сса аас Ндс ссс Нса дад сНд НаН Агд МеН С1и Агд Рго Рго Азп Суз Рго Зег С1и Ьеи Туг 705 710 715 адд дад НдН Ндд сас дса дсН ссН НсН сад адд ссд асН Агд С1и Суз Тгр Шз А1а А1а Рго Зег С1п Агд Рго ТНг

725 730 сНд дНд даа дсН сНд дас аад дНс сНд сНд дсН дНс НсН Ьеи Уа1 С1и А1а Ьеи Азр Ьуз Уа1 Ьеи Ьеи А1а Уа1 Зег

740 745 сНН дас сНс сдс сНд асс ННН дда ссс НаН Нсс ссс аас Ьеи Азр Ьеи Агд Ьеи ТНг РНе С1у Рго Туг Зег Рго Азп

755 760 765 дсс аде аде асд Ндс Нсс Нсс аде дас Нед дНН ННс аде А1а Зег Зег ТНг Суз Зег Зег Зег Азр Зег Уа1 РНе Зег 770 775 780

ННд ссс сНс дад сса аде ссс ННс сса ННН ссН дад дед Ьеи Рго Ьеи С1и Рго Зег Рго РНе Рго РНе Рго С1и А1а 785 790 795 дад ддд сас 2112

С1и С1у ΗΪ3 ддд сНа аНд С1у Ьеи МеН

720

ННН аад сад РНе Ьуз СЯп 735 даа дад Нас СЯи С1и Туг 750 ааН ддд даН Азп С1у Азр сас дас ссН 2352

Шз Азр Рго сад асс аса СЯп ТНг ТНг

800 <210> 50 <211> 800 <212> РКТ <213> КаННиз зр.

<400> 50

МеН Тгр Ьеи Ьеи Ьеи А1а Ьеи Ьеи Зег Не РНе С1п С1и ТНг Рго А1а 15 10 15

РНе Зег Ьеи С1и А1а Зег С1и С1и МеН 61и С1п С1и Рго Суз Рго А1а 20 25 30

Рго 11е Зег С1и С1п С1п С1и С1п Уа1 Ьеи ТНг Уа1 А1а Ьеи С1у С1п 35 40 45

Рго Уа1 Агд Ьеи Суз Суз С1у Агд ТНг С1и Агд С1у Агд Шз Тгр Туг 50 55 60

Ьуз СЯи СЯу Зег Агд Ьеи А1а Зег А1а С1у Агд Уа1 Агд СЯу Тгр Агд

70 75 80

СЯу Агд Ьеи СЯи 11е А1а Зег РНе Ьеи Рго С1и Азр А1а С1у Агд Туг

Ьеи Суз Ьеи А1а Агд С1у Зег МеН ТНг Уа1 Уа1 Шз Азп 100 105

Ьеи ТНг Ьеи 110

Не МеН Азр Азр Зег Ьеи Рго Зег Не Азп Азп СЯи ) 115 120

Ьеи Зег Зег Зег Зег Зег С1у Нгз Зег Туг Ьеи СЯп С1п А1а Рго Туг 130 135 140

Тгр ТНг Шз Рго С1п Агд МеН С1и Ьуз Ьуз Ьеи Шз 145 150 155

С1у Азп ТНг Уа1 Ьуз РНе Агд Суз Рго А1а А1а СЯу 165 170

ТНг Не Шз Тгр Ьеи Ьуз Азп С1у С1п А1а РНе Шз 180 185

Не СЯу СЯу Не Агд Ьеи Агд Шз С1п Шз Тгр Зег 195 200

А1а Уа1 Рго А1а 160

Азп Рго МеН Рго 175

С1у С1и Азп Агд 190

Ьеи А7а1 МеН С1и 205

Зег Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Агд С1у ТНг Туг ТНг Суз Ьеи Уа1 С1и Азп 210 215 220

Зег Ьеи С1у Зег Не Агд Туг Зег Туг Ьеи Ьеи Азр 225 230 235

Зег Рго Шз Агд Рго Не Ьеи С1п А1а С1у Ьеи Рго 245 250

А1а С1п Рго Шз Не СЯп Тгр Ьеи Ьуз Шз Не Уа1 275 280

Уа1 Ьеи С1и Агд 240

А1а Азп ТНг ТНг 255

Не Азп СЯу Зег 285

Зег РНе С1у А1а Азр С1у РНе Рго Туг Уа1 61п Уа1 Ьеи Ьуз ТНг ТНг 290 295 300

Азр Не Азп Зег Зег С1и Уа1 61и Уа1 Ьеи Туг Ьеи 305 310 315

А1а СЯи Азр А1а 61у С1и Туг ТНг Суз Ьеи А1а С1у 325 330

Ьеи Зег Туг С1п Зег А1а Тгр Ьеи ТНг Уа1 Ьеи Рго 340 345

Азр Ьеи А1а Тгр ТНг ТНг А1а ТНг Зег СЯи А1а Агд 355 360

Агд Азп λ/а! Зег 320

Азп Зег Не С1у 335

А1а СЯи СЯи СЯи 350

Туг ТНг Азр Не 365

- 49 021580

- 50 021580

- 51 021580 <213> Миз зр.

<400> 66 асасЕсадса сдддасааас ЕсЕЕсЕс 27 <210> 67 <211> 27 <212> ДНК <213> Миз зр.

<400> 67 асасЕсЕдса ддадасадас ЕсЕЕЕЕс 27 <210> 68 <211> 1062 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> СОЗ <222> (1)..(1062) <400> 68 сЕд дад дсс ЕсЕ дад даа дЕд дад сЕЕ дад ссс Еде сЕд дсЕ ссс аде 48

Ьеи С1и А1а Зег С1и С1и Уа1 С1и Ьеи С1и Рго Суз Ьеи А1а Рго Зег

10 15 сЕд дад сад саа дад сад дад сЕд аса дЕа дсс сЕЕ ддд сад ссЕ дЕд 96

Ьеи С1и С1п С1п С1и С1п С1и Ьеи ТНг Уа1 А1а Ьеи С1у С1п Рго Уа1

25 30 едд сЕд Еде ЕдЕ ддд едд дсЕ дад сдЕ ддЕ ддс сас Едд Еас аад дад 144

Агд Ьеи Суз Суз С1у Агд А1а С1и Агд С1у С1у Нхз Тгр Туг Ьуз С1и

40 45 ддс адЕ сдс сЕд дса ссЕ дсЕ ддс сдЕ дЕа едд ддс Едд адд ддс сдс 192

С1у Зег Агд Ьеи А1а Рго А1а С1у Агд Уа1 Агд С1у Тгр Агд О1у Агд

55 60 сЕа дад аЕЕ дсс аде ЕЕс сЕа ссЕ дад даЕ дсЕ ддс сдс Еас сЕс Еде 240

Ьеи С1и 11е А1а Зег РЬе Ьеи Рго О1и Азр А1а С1у Агд Туг Ьеи Суз

70 75 80 сЕд дса еда ддс Есс аЕд аЕс дЕс сЕд сад ааЕ сЕс асе ЕЕд аЕЕ аса 288

Ьеи А1а Агд С1у Зег МеЕ 11е Уа1 Ьеи С1п Азп Ьеи ТНг Ьеи IIе ТНг

90 95 ддЕ дас Есс ЕЕд асе Есс аде аас даЕ даЕ дад дас ссс аад Есс саЕ 336

С1у Азр Зег Ьеи ТНг Зег Зег Азп Азр Азр С1и Азр Рго Ьуз Зег Нхз

100 105 110 адд дас сЕс Есд ааЕ адд сас адЕ Еас ссс сад саа дса ссс Еас Едд 384

Агд Азр Ьеи Зег Азп Агд Нхз Зег Туг Рго 61п С1п А1а Рго Туг Тгр

115 120 125 аса сас ссс сад сдс аЕд дад аад ааа сЕд саЕ дса дЕа ссЕ дед ддд 432

ТНг Нхз Рго С1п Агд МеЕ С1и Ьуз Ьуз Ьеи Нхз А1а Уа1 Рго А1а О1у

130 135 140 аас асе дЕс аад ЕЕс сдс ЕдЕ сса дсЕ дса ддс аас ссс асд ссс асе 480

Азп ТНг Уа1 Ьуз РНе Агд Суз Рго А1а А1а С1у Азп Рго ТНг Рго ТНг

145 150 155 160 аЕс сдс Едд сЕЕ аад даЕ дда сад дсс ЕЕЕ саЕ ддд дад аас сдс аЕЕ 528

11е Агд Тгр Ьеи Ьуз Азр С1у С1п А1а РНе Нхз С1у С1и Азп Агд 11е

165 170 175 дда ддс аЕЕ едд сЕд сдс саЕ сад сас Едд адЕ сЕс дЕд аЕд дад аде 576

С1у С1у 11е Агд Ьеи Агд Нхз С1п Нхз Тгр Зег Ьеи \7а1 МеЕ С1и Зег

180 185 190 дЕд дЕд ссс Есд дас сдс ддс аса Еас асе Еде сЕд дЕа дад аас дсЕ 624

Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Агд С1у ТНг Туг ТНг Суз Ьеи Уа1 С1и Азп А1а

195 200 205 дЕд ддс аде аЕс сдЕ ЕаЕ аас Еас сЕд сЕа даЕ дЕд сЕд дад едд Есс 672

Уа1 С1у Зег 11е Агд Туг Азп Туг Ьеи Ьеи Азр Уа1 Ьеи С1и Агд Зег

210 215 220 ссд сас едд ссс аЕс сЕд сад дсс ддд сЕс ссд дсс аас асе аса дсс 720

Рго Нхз Агд Рго Не Ьеи С1п А1а С1у Ьеи Рго А1а Азп ТНг ТНг А1а

225 230 235 240 дЕд дЕд ддс аде дас дЕд дад сЕд сЕд Еде аад дЕд Еас аде даЕ дсс 7 68

Уа1 Уа1 С1у Зег Азр Уа1 <31и Ьеи Ьеи Суз Ьуз Уа1 Туг Зег Азр А1а

245 250 255 сад ссс сас аЕс сад Едд сЕд аад сас аЕс дЕс аЕс аас ддс аде аде 816

С1п Рго Нхз 11е С1п Тгр Ьеи Ьуз Нхз 11е Уа1 11е Азп С1у Зег Зег

260 265 270

ЕЕс дда дсс дас ддЕ ЕЕс ссс ЕаЕ дЕд саа дЕс сЕа аад асЕ дса дас 864

РНе С1у А1а Азр С1у РНе Рго Туг Уа1 С1п Уа1 Ьеи Ьуз ТНг А1а Азр

275 280 285 аЕс ааЕ аде Еса дад дЕд дад дЕс сЕд Еас сЕд едд аас дЕд Еса дсс 912

Не Азп Зег Зег С1и Уа1 С1и Уа1 Ьеи Туг Ьеи Агд Азп Уа1 Зег А1а

290 295 300 дад дас дса ддс дад Еас асе Еде сЕс дса ддс ааЕ Есс аЕс ддс сЕс 960

С1и Азр А1а С1у С1и Туг ТНг Суз Ьеи А1а С1у Азп Зег 11е С1у Ьеи

305 310 315 320

Есс Еас сад ЕсЕ дсс Едд сЕс асд дЕд сса дад дад дас ссс аса Едд 1008

Зег Туг С1п Зег А1а Тгр Ьеи ТНг Уа1 Рго С1и С1и Азр Рго ТНг Тгр

325 330 335 асе дса дса дед ссс дад дсс дсЕ аде Едд аде сас ссд сад ЕЕс даа 1056

ТНг А1а А1а А1а Рго С1и А1а А1а Зег Тгр Зег Нхз Рго С1п РНе С1и

340 345 350 ааа Еда 1062

Ьуз <210> 69 <211> 353 <212> РКТ <213> Ното зархепз <400> 69

Ьеи О1и А1а Зег С1и С1и Уа1 С1и Ьеи С1и Рго Суз Ьеи А1а Рго Зег 15 10 15

Ьеи С1и С1п С1п С1и Θΐη С1и Ьеи Ткг Уа1 А1а Ьеи С1у С1п Рго Уа1 20 25 30

Агд Ьеи Суз Суз С1у Агд А1а С1и Агд С1у О1у Низ Тгр Туг Ьуз С1и 35 40 45

С1у Зег Агд Ьеи А1а Рго А1а С1у Агд Уа1 Агд С1у Тгр Агд С1у Агд 50 55 60

Ьеи С1и Не А1а Зег Рке Ьеи Рго С1и Азр А1а С1у Агд Туг Ьеи Суз 65 70 75 80

Ьеи А1а Агд С1у Зег Мек Не Уа1 Ьеи С1п Азп Ьеи Ткг Ьеи Не Ткг 85 90 95

С1у Азр Зег Ьеи Ткг Зег Зег Азп Азр Азр С1и Азр Рго Ьуз Зег Низ 100 105 110

Агд Азр Ьеи Зег Азп Агд Низ Зег Туг Рго С1п С1п А1а Рго Туг Тгр 115 120 125

Ткг Низ Рго С1п Агд Мек С1и Ьуз Ьуз Ьеи Низ А1а Уа1 Рго А1а С1у 130 135 140

Азп Ткг Уа1 Ьуз Рке Агд Суз Рго А1а А1а С1у Азп Рго Ткг Рго Ткг 145 150 155 160

Не Агд Тгр Ьеи Ьуз Азр С1у С1п А1а Рке Низ С1у С1и Азп Агд 11е 165 170 175

С1у С1у Не Агд Ьеи Агд Низ С1п Низ Тгр Зег Ьеи Уа1 Мек С1и Зег 180 185 190

Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Агд С1у Ткг Туг Ткг Суз Ьеи Уа1 С1и Азп А1а 195 200 205

Уа1 СЯу Зег Не Агд Туг Азп Туг Ьеи Ьеи Азр Уа1 Ьеи С1и Агд Зег 210 215 220

Рго Низ Агд Рго Не Ьеи С1п А1а С1у Ьеи Рго А1а Азп Ткг Ткг А1а 225 230 235 240

Уа1 Уа1 С1у Зег Азр Уа1 С1и Ьеи Ьеи Суз Ьуз Уа1 Туг Зег Азр А1а 245 250 255

С1п Рго Низ Не С1п Тгр Ьеи Ьуз Низ Не Уа1 Не Азп С1у Зег Зег 260 265 270

Рке С1у А1а Азр С1у Рке Рго Туг Уа1 С1п Уа1 Ьеи Ьуз Ткг А1а Азр 275 280 285

Не Азп Зег Зег С1и Уа1 С1и Уа1 Ьеи Туг Ьеи Агд Азп Уа1 Зег А1а 290 295 300 б1и Азр А1а С1у С1и Туг Ткг Суз Ьеи А1а С1у Азп Зег Не С1у Ьеи 305 310 315 320

Зег Туг 61η Зег А1а Тгр Ьеи Ткг Уа1 Рго С1и С1и Азр Рго Ткг Тгр 325 330 335

Ткг А1а А1а А1а Рго С1и А1а А1а Зег Тгр Зег Низ Рго С1п Рке С1и 340 345 350

Ьуз <210> 70 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 70

С1п А1а Рго Туг Тгр Ткг Низ Рго С1п Агд Мек С1и Ьуз Ьуз Ьеи Низ 15 10 15

А1а Уа1 Рго А1а С1у Азп Ткг Уа1 Ьуз Рке Агд Суз Рго А1а А1а С1у 20 25 30

Азп Рго Ткг Рго Ткг Не Агд Тгр Ьеи Ьуз Азр С1у С1п А1а Рке Низ 35 40 45

С1у С1и Азп Агд Не С1у С1у Не Агд Ьеи Агд Низ С1п Низ Тгр Зег 50 55 60

Ьеи Уа1 Мек С1и Зег Уа1 Уа1 Рго Зег Азр Агд 61у Ткг Туг Ткг Суз 65 70 75 80

Ьеи Уа1 С1и Азп А1а Уа1 С1у Зег Не Агд Туг Азп Туг Ьеи Ьеи Азр 85 90 95

Уа1 Ьеи <210> 71 <211> 648 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> СОЗ <222> (1)..(648) <400> 71 сад аде даа ДДд асД сад сса ссс Дса дед ДсД ддд асе ссс ддд сад 48

С1п Зег С1и Ьеи ТЬг Θΐη Рго Рго Зег А1а Зег С1у ТЬг Рго 61у С1п

10 15 адд дДс асе аДс ДсД ДдД ДсД дда ддс Дас Дсс аас аДд дда аде ааД 96

Агд Уа1 ТЬг Не Зег Суз Зег б1у С1у Туг Зег Азп МеД С1у Зег Азп

25 30

ДаД дса сас Ддд Дас сад сад сДс сса дда асд дсс ссс ааа сДс сДс 144

Туг А1а Нхз Тгр Туг 61п С1п Ьеи Рго С1у ТЬг А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи

40 45 аДс ДаД аас ааД ааД сад сдд ссс Дса ддд дДс ссД дас еда ДДс ДсД 192

Не Туг Азп Азп Азп С1п Агд Рго Зег С1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе Зег

55 60 ддс Дсс аад ДсД ддс асе Дса дсс Дсс еДд дсс аДс адД ддд сДс сдд 240

61у Зег Ьуз Зег С1у ТЬг Зег А1а Зег Ьеи А1а Не Зег С1у Ьеи Агд

70 75 80

Дсс дад даД дад дсД даД ДаД Дас ДдД дса дса Ддд даД дас аде сДд 288

Зег С1и Азр <31и А1а Азр Туг Туг Суз А1а А1а Тгр Азр Азр Зег Ьеи

90 95 адД ддД ссд дДд ДДс ддс дда ддд асе аад еДд асе дДс сДа ддД сад 336

Зег С1у Рго Уа1 РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи С1у С1п

100 105 110 ссс аад дсД дсс ссс Дед дДс асД еДд ДДс ссд ссс Дсс ДсД дад дад 384

Рго Ьуз А1а А1а Рго Зег Уа1 ТЬг Ьеи РЬе Рго Рго Зег Зег С1и С1и

115 120 125 сДД саа дсс аас аад дсс аса еДд дДд ДдД еДд аДс адД дас ДДс Дас 432

Ьеи С1п А1а Азп Ьуз А1а ТЬг Ьеи Уа1 Суз Ьеи Не Зег Азр РЬе Туг

130 135 140 ссд дда дсД дДд аса дДд дсс Ддд аад дса даД ддс аде ссс дДс аад 480

Рго С1у А1а Уа1 ТЬг Уа1 А1а Тгр Ьуз А1а Азр С1у Зег Рго Уа1 Ьуз

145 150 155 160 дед дда дДд дад асе асе аса ссс Дсс ааа саа аде аас аас аад Дас 528

А1а С1у Уа1 С1и ТЬг ТЬг ТЬг Рго Зег Ьуз С1п Зег Азп Азп Ьуз Туг

165 170 175 дед дсс аде аде ДаД еДд аде еДд асд ссД дад сад Ддд аад Дсс сас 576

А1а А1а Зег Зег Туг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Рго С1и С1п Тгр Ьуз Зег Нхз

180 185 190 ада аде Дас аде Ддс сад дДс асд саД даа ддд аде асе дДд дад аад 624

Агд Зег Туг Зег Суз С1п Уа1 ТЬг Нхз С1и С1у Зег ТЬг Уа1 С1и Ьуз

195 200 205 аса дДд дсс ссД аса даа ДдД Дса 648

ТЬг Уа1 А1а Рго ТЬг С1и Суз Зег

210 215 <210> 72 <211> 216 <212> РКТ <213> Ното заргепз <400> 72

С1п Зег С1и Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег А1а Зег С1у ТЬг Рго С1у С1п 15 10 15

Агд 17а1 ТЬг Не Зег Суз Зег С1у С1у Туг Зег Азп МеД С1у Зег Азп 20 25 30

Туг А1а Нхз Тгр Туг С1п С1п Ьеи Рго С1у ТЬг А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 35 40 45

Не Туг Азп Азп Азп С1п Агд Рго Зег С1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе Зег 50 55 60

С1у Зег Ьуз Зег С1у ТЬг Зег А1а Зег Ьеи А1а Не Зег С1у Ьеи Агд 65 70 75 80

Зег С1и Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз А1а А1а Тгр Азр Азр Зег Ьеи 85 90 95

Зег О1у Рго Уа1 РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг 17а1 Ьеи С1у С1п 100 105 НО

Рго Ьуз А1а А1а Рго Зег Уа1 ТЬг Ьеи РЬе Рго Рго Зег Зег С1и С1и 115 120 125

Ьеи С1п А1а Азп Ьуз А1а ТЬг Ьеи Уа1 Суз Ьеи Не Зег Азр РЬе Туг 130 135 140

Рго С1у А1а А7а1 ТЬг Уа1 А1а Тгр Ьуз А1а Азр С1у Зег Рго 17а1 Ьуз 145 150 155 160

А1а С1у Уа1 С1и ТЬг ТЬг ТЬг Рго Зег Ьуз С1п Зег Азп Азп Ьуз Туг 165 170 175

А1а А1а Зег Зег Туг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Рго С1и С1п Тгр Ьуз Зег ΗΪ3 180 185 190

Агд Зег Туг Зег Суз С1п 17а1 ТЬг Нхз С1и С1у Зег ТЬг Уа1 С1и Ьуз 195 200 205

ТЬг 17а1 А1а Рго ТЬг С1и Суз Зег 210 215

- 54 021580 <210> 73 <211> 9 <212> РКТ <213> Ното зараепз <400> 73

Зег Азп Мек С1у Зег Азп Туг А1а ΗΪ3 1 5 <210> 74 <211> 5 <212> РКТ <213> Ното зараепз <400> 74

Туг Азп Азп Азп С1п 1 5 <210> 75 <211> 8 <212> РКТ <213> Ното зархепз <400> 75

А1а Тгр Азр Азр Зег Ьеи Зег С1у 1 5 <210> 76 <211> 411 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(411) <400> 76 даа дкк саа ккд кка дад кек ддк ддс ддк екк дкк сад сск ддк ддк 48

С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у О1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15 кек кка едк екк кек кде дек дек ксс дда ккс аск ккс кек сск кас 96

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РНе ТНг РНе Зег Рго Туг

25 30 кдд акд ддк кдд дкк сдс саа дек сск ддк ааа ддк ккд дад кдд дкк 144

Тгр Мек С1у Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1

40 45 кек дкк акс кдд сск кек ддк ддс аск аск дак как дек дас ксс дкк 192

Зег Уа1 Не Тгр Рго Зег С1у С1у ТНг ТНг Азр Туг А1а Азр Зег Х/а1

55 60 ааа ддк сдс ккс аск акс кек ада дас аас кек аад аак аск скс кас 240

Ьуз С1у Агд РНе ТНг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Ьеи Туг

70 75 80 ккд сад акд аас аде кка адд дек дад дас асд дсс дкд как кас кдк 288

Ьеи С1п Мек Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТНг А1а \7а1 Туг Туг Суз

90 95 дед ада дке сак сса дек ддс сас аас дас сас кдд ддс сад дда асе 336

А1а Агд Х/а1 Наз Рго А1а С1у ΗΪ3 Азп Азр ΗΪ3 Тгр С1у Θΐη 61у ТНг

100 105 110 скд дке асе дке кса аде дсс ксс асе аад ддс сса кед дке ккс сед 384

Ьеи \7а1 ТНг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТНг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РНе Рго

115 120 125 ска дса ссс ксс ксс аад аде асе кек 411

Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТНг Зег

130 135 <210> 77 <211> 137 <212> РКТ <213> Ното зараепз <400> 77

61и Уа1 С1п Ьеи Ьеи б1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РНе ТНг РНе Зег Рго Туг 20 25 30

Тгр Мек С1у Тгр 5/а1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр \7а1 35 40 45

Зег Уа1 Не Тгр Рго Зег С1у С1у ТНг ТНг Азр Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РНе ТНг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Ьеи Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п Мек Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТНг А1а \7а1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Уа1 Низ Рго А1а С1у Наз Азп Азр Наз Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110

Ьеи Ча1 ТНг Ча1 Зег Зег А1а Зег ТНг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РНе Рго 115 120 125

Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТНг Зег 130 135 <210> 78 <211> 9 <212> РКТ <213> Ното зараепз <400> 78

РЬе ТЬг РЬе Зег Рго Туг Тгр МеЬ СЬу 1 5 <210> 79 <211> 10 <212> РКТ <213> Ното зарЬепз <400> 79

УаЬ 11е Тгр Рго Зег СЬу СЬу ТЬг ТЬг Азр 15 10 <210> 80 <211> 10 <212> РКТ <213> Ното зарЬепз <400> 80

Агд УаЬ НЬз Рго АЬа СЬу НЬз Азп Азр НЬз 15 10 <210> 81 <211> 645 <212> ДНК <213> Ното зарЬепз <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(645) <400> 81 саа дас аЬс сад аЬд асс сад ЬсЬ сса Ьсс Ьсс сЬд ЬсЬ ЬЬд ЬсЬ сса 48

СЬп Азр Не СЬп МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго

10 15 ддд даа ада дсс асс сЬс Ьсс Ьдс адд дсс адЬ сад адЬ аЬЬ аас ада 96

СЬу СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Не Азп Агд

25 30 аас ЬЬа ддс Ьдд Ьас сад сад аад ссЬ ддс сад дсЬ ссс адд сЬс сЬс 144

Азп Ьеи СЬу Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи

40 45 аЬс ЬаЬ ддЬ дед Ьсс асс адд дсс асЬ ддЬ аЬс сса дсс адд ЬЬе асЬ 192

Не Туг СЬу АЬа Зег ТЬг Агд АЬа ТЬг СЬу Не Рго АЬа Агд РЬе ТЬг

55 60 ддс адЬ ддд ЬсЬ ддд аса дад ЬЬе ЬсЬ сЬс асс аЬс аде аде сЬд сад 240

СЬу Зег СЬу Зег СЬу ТЬг СЬи РЬе Зег Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи СЬп

70 75 80

ЬсЬ даа даЬ ЬаЬ дса аЬЬ ЬаЬ ЬаЬ ЬдЬ сад сад ЬаЬ даЬ аас Ьдд ссд 288

Зег СЬи Азр Туг АЬа Не Туг Туг Суз СЬп СЬп Туг Азр Азп Тгр Рго

90 95 аЬс аЬс ЬЬе ддс саа ддд аса еда сЬд дад аЬЬ ааа дда асЬ дЬд дсЬ 336

Не Не РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Агд Ьеи СЬи Не Ьуз СЬу ТЬг УаЬ АЬа

100 105 110 дса сса ЬсЬ дЬс ЬЬе аЬс ЬЬе ссд сса ЬсЬ даЬ дад сад ЬЬд ааа ЬсЬ 384

АЬа Рго Зег УаЬ РЬе Ые РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег

115 120 125 дда асЬ дсс ЬсЬ дЬЬ дЬд Ьдс сЬд сЬд ааЬ аас ЬЬе ЬаЬ ссс ада дад 432

ОЬу ТЬг АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи

130 135 140 дсс ааа дЬа сад Ьдд аад дЬд даЬ аас дсс сЬс саа Ьсд ддЬ аас Ьсс 480

АЬа Ьуз УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег

145 150 155 160 сад дад адЬ дЬс аса дад сад дас аде аад дас аде асс Ьас аде сЬс 528

СЬп СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи

165 170 175 аде аде асс сЬд асд сЬд аде ааа дса дас Ьас дад ааа сас ааа дЬс 576

Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ

180 185 190

Ьас дсс Ьдс даа дЬс асс саЬ сад ддс сЬд аде Ьсд ссс дЬс аса аад 624

Туг АЬа Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз СЬп СЬу Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз

195 200 205 аде ЬЬе аас адд дда дад ЬдЬ 645

Зег РЬе Азп Агд СЬу СЬи Суз

210 215 <210> 82 <211> 215 <212> РКТ <213> Ното зарЬепз <400> 82

СЬп Азр Не СЬп МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 15 10 15

С1у СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Не Азп Агд 20 25 30

Азп Ьеи СЬу Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 35 40 45

Не Туг СЬу АЬа Зег ТЬг Агд АЬа ТЬг СЬу Не Рго АЬа Агд РЬе ТЬг 50 55 60

СЬу Зег СЬу Зег СЬу ТЬг СЬи РЬе Зег Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи СЬп 65 70 75 80

Зег СЬи Азр Туг АЬа Не Туг Туг Суз СЬп СЬп Туг Азр Азп Тгр Рго 85 90 95

- 56 021580

- 57 021580

<213> Ното зариепз <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(651) <400> 91 сад аде дНе ННд асН сад сса ссс Нса дед НсН ддд асе ссс ддс сад С1п Зег Уа1 Ьеи ТНг С1п Рго Рго Зег А1а Зег С1у ТНг Рго С1у С1п ддд дНе асе аНс НсН НдН НсН дда аде аде Нсс аас аНс дда адН ааН С1у Уа1 ТНг Не Зег Суз Зег С1у Зег Зег Зег Азп Не 61у Зег Азп адН дНН аас Ндд Нас сад сад сНс сса дда дед дсс ссс ааа сНс сНс Зег λ/а! Азп Тгр Туг С1п С1п Ьеи Рго С1у А1а А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи аНс НаН адН аас ааН сНд едд ссс Нса ддд дНе ссН дсс еда ННс НсН Не Туг Зег Азп Азп Ьеи Агд Рго Зег С1у Уа1 Рго А1а Агд РНе Зег ддс Нсс аад НсН ддс асе Нса дсс Нсс сНд дсс аНс адН ддс сНс едд С1у Зег Ьуз Зег С1у ТНг Зег А1а Зег Ьеи А1а Не Зег С1у Ьеи Агд

НсН дад даН дад дсН даН НаН Нас НдН дса дсс Ндд даН дас ддс сНд Зег С1и Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз А1а А1а Тгр Азр Азр С1у Ьеи даН дсс НаН дНд дНд ННс ддс дда ддд асе ааа сНд асе дНе сНд ддН Азр А1а Туг Уа1 Уа1 РНе 61у С1у С1у ТНг Ьуз Ьеи ТНг Уа1 Ьеи С1у

100 105 110 сад ссс аад дсс аас ссс асН дНе асН сНд ННс сед ссс Нсс НсН дад

С1п Рго Ьуз А1а Азп Рго ТНг Уа1 ТНг Ьеи РНе Рго Рго Зег Зег С1и

115 120 125 дад сНс саа дсс аас аад дсс аса сНа дНд НдН сНд аНс адН дас ННс

С1и Ьеи С1п А1а Азп Ьуз А1а ТНг Ьеи Уа1 Суз Ьеи Не Зег Азр РНе

130 135 140

Нас сед дда дсН дНд аса дНд дсс Ндд аад дса даН ддс аде ссс дНе

Туг Рго С1у А1а \7а1 ТНг Уа1 А1а Тгр Ьуз А1а Азр С1у Зег Рго Уа1

145 150 155 160 аад дед дда дНд дад асе асе ааа ссс Нсс ааа сад аде аас аас аад

Ьуз А1а С1у Уа1 С1и ТНг ТНг Ьуз Рго Зег Ьуз С1п Зег Азп Азп Ьуз

165 170 175

Нас дед дсс аде аде Нас сНд аде сНд асд ссс дад сад Ндд аад Нсс

Туг А1а А1а Зег Зег Туг Ьеи Зег Ьеи ТНг Рго С1и С1п Тгр Ьуз Зег

180 185 190 сас ада аде Нас аде Ндс сад дНе асд саН даа ддд аде асе дНд дад

Низ Агд Зег Туг Зег Суз С1п Уа1 ТНг Низ С1и С1у Зег ТНг Уа1 С1и

195 200 205 аад аса дНд дсс ссН дса даа Ндс НсН Ьуз ТНг Уа1 А1а Рго А1а <31и Суз Зег

210 215

- 58 021580 <210> 92 <211> 217 <212> ΡΚΤ

<213> Ното <400> 92

еартепз

С1п

Зег

Ча1

Ьеи

ТАг

С1п

Рго

Рго

Зег

А1а

Зег

С1у

ТАг

Рго

С1у

С1п

1

5

10

15

С1у

Ча1

ТАг

11е

Зег

Суз

Зег

61у

Зег

Зег

Зег

Азп

11е

С1у

Зег

Азп

20

25

30

Зег

Ча1

Азп

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьеи

Рго

С1у

А1а

А1а

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

35

40

45

Не

Туг

Зег

Азп

Азп

Ьеи

Агд

Рго

Зег

С1у

Ча1

Рго

А1а

Агд

РАе

Зег

50

55

60

С1у

Зег

Ьуз

Зег

С1у

ТАг

Зег

А1а

Зег

Ьеи

А1а

Не

Зег

С1у

Ьеи

Агд

65

70

75

80

Зег

С1и

Азр

С1и

А1а

Азр

Туг

Туг

Суз

А1а

А1а

Тгр

Азр

Азр

С1у

Ьеи

85

90

95

Азр

А1а

Туг

Ча1

Ча1

РАе

С1у

С1у

С1у

ТАг

Ьуз

Ьеи

ТАг

Ча1

Ьеи

С1у

100

105

110

С1п

Рго

Ьуз

А1а

Азп

Рго

ТАг

Ча1

ТАг

Ьеи

РАе

Рго

Рго

Зег

Зег

С1и

115

120

125

С1и

Ьеи

С1п

А1а

Азп

Ьуз

А1а

ТАг

Ьеи

Ча1

Суз

Ьеи

Не

Зег

Азр

РАе

130

135

140

Туг

Рго

С1у

А1а

Ча1

ТАг

Ча1

А1а

Тгр

Ьуз

А1а

Азр

С1у

Зег

Рго

Ча1

145

150

155

160

Ьуз

А1а

С1у

Ча1

61и

ТАг

ТАг

Ьуз

Рго

Зег

Ьуз

61п

Зег

Азп

Азп

Ьуз

165

170

175

Туг

А1а

А1а

Зег

Зег

Туг

Ьеи

Зег

Ьеи

ТАг

Рго

С1и

С1п

Тгр

Ьуз

Зег

180

185

190

ΗΪ3

Агд

Зег

Туг

Зег

Суз

С1п

Ча1

ТАг

ΗΪ5

С1и

С1у

Зег

ТАг

Ча1

С1и

195

200

205

Ьуз

ТАг

Ча1

А1а

Рго

А1а

С1и

Суз

Зег

210 215 <210> 93 <211> 9 <212> ΡΚΤ <213> Ното зартепз <400> 93

Зег Азп 11е С1у Зег Азп Зег Уа1 Азп 1 5 <210> 94 <211> 5 <212> РКТ <213> Ното зархепз <400> 94

Туг Зег Азп Азп Ьеи 1 5 <210> 95 <211> 9 <212> РКТ <213> Ното зархепз <400> 95

А1а Тгр Азр Азр 61у Ьеи Азр А1а Туг 1 5 <210> 96 <211> 414 <212> ДНК <213> Ното зарДепз <220>

<221> СЭЗ <222> (1)..(414) <400> 96 даа дНН саа ННд ННа дад НсН ддН ддс ддН сНН дНН сад ссН ддН ддН 48

С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у

10 15

НсН ННа сдН сНН НсН Ндс дсН дсН Нсс дда ННс асН ННс НсН асН Нас 96

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РАе ТАг РАе Зег ТАг Туг

25 30

Ндд аНд дсН Ндд дНН сдс саа дсН ссН ддН ааа ддН ННд дад Ндд дНН 144

Тгр МеН А1а Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1

40 45

НсН дНН аНс ддН ссН НсН ддН ддс аНд асН дНН НаН дсН дас Нсс дНН 192

Зег Уа1 Не С1у Рго Зег 61у 61у МеН ТАг Уа1 Туг А1а Азр Зег Уа1

55 60 ааа ддН сдс ННс асН аНс НсН ада дас аас НсН аад ааН асН сНс Нас 240

Ьуз О1у Агд РАе ТАг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТАг Ьеи Туг

70 75 80

ЬЕд сад аед аас аде ееа адд дсе дад дас асд Ьеи СЬп Мее Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг дсс дед еае еас еде 288

АЬа УаЬ Туг Туг Суз дса едд аее аае аде ддд аде есс сас еее дас АЬа Агд Не Азп Зег СЬу Зег Зег Низ РЬе Азр

100 105 еас едд ддс сад дда Туг Тгр СЬу СЬп СЬу 110 асе сед дес асе дес еса аде дсс есс асе аад ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз

115 120 ддс сса еед дес еес СЬу Рго Зег УаЬ РЬе

125 ссд сеа дса ссс есс есс аад аде асе есе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег

130 135 <210> 97 <211> 138 <212> РКТ <213> Ното зартепз <400> 97

СЬи УаЬ СЬп Ьеи Ьеи С1и Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег ТЬг Туг 20 25 30

Тгр Мее АЬа Тгр УаЬ Агд СЬп А1а Рго С1у Ьуз О1у Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

Зег УаЬ 11е СЬу Рго Зег СЬу СЬу Мее ТЬг УаЬ Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг

70 75 80

Ьеи С1п Мее Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз

ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз 115 120

СЬу Рго Зег УаЬ РЬе 125 <210> 98 <211> 9 <212> РКТ <213> Ното зартепз <400> 98

РЬе ТЬг РЬе Зег ТЬг Туг Тгр Мее АЬа 1 5 <210> 99 <211> 10 <2Ь2> РКТ <213> Ното зартепз <400> 99

УаЬ 11е СЬу Рго Зег СЬу СЬу Мее ТЬг УаЬ <210> 100 <211> 11 <212> РКТ <213> Ното зартепз <400>

100

Агд 11е Азп Зег СЬу Зег Зег Нтз РЬе Азр Туг <210>

<211>

<212>

<213>

101

651

ДНК

Ното зартепз <220>

<221>

<222>

СОЗ (1) - - (651) <400> 101 сад еас даа ЬЬд асе сад сса ссс еса дед есе ддд асе ссс ддд сад СЬп Туг СЬи Ьеи ТЬг СЬп Рго Рго Зег АЬа Зег СЬу ТЬг Рго СЬу СЬп адд дес асе аес есе еде есе дда аде аде есс аас аес дда аде аае Агд УаЬ ТЬг 11е Зег Суз Зег СЬу Зег Зег Зег Азп Не СЬу Зег Азп аее деа сас едд еас сад сад сес сса дда асд дсс ссс ааа сес сес 11е УаЬ Нтз Тгр Туг СЬп СЬп Ьеи Рго СЬу ТЬг А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи аеа еае дде аае аае сад едд ссс еса ддд дес ссе дас еда еес есе 11е Туг СЬу Азп Азп СЬп Агд Рго Зег СЬу УаЬ Рго Азр Агд РЬе Зег дес есс аад есС ддс есс еса дсс есс сед дсс аес аде ддд сес сад УаЬ Зег Ьуз Зег СЬу Зег Зег АЬа Зег Ьеи АЬа 1Ье Зег СЬу Ьеи СЬп есе дад дае дад дсе дае еае еас еде дса еса едд дае дас аде сед Зег СЬи Азр СЬи АЬа Азр Туг Туг Суз АЬа Зег Тгр Азр Азр Зег Ьеи

- 60 021580

- 61 021580 <210> 106 <211> 420 <212> ЦНК <213> Ното зархепз <220>

<221> СТЗ <222> (1)..(420) <400> 106 даа дРР саа РРд РРа дад РсР ддР ддс ддР сРР дРР сад ссР ддР ддР 48

61и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у СЬу Ьеи Уа1 СЬп Рго С1у С1у

10 15

РсР РРа сдр сРР РсР Рдс дсР дсР Рсс дда РРс асР РРс РсР саР Рас 96

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Нхз Туг

25 30

Рдд аРд ддР Рдд дРР сдс саа дсР ссР ддР ааа ддР РРд дад Рдд дРР 144

Тгр Мер 61у Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз СЬу Ьеи 61и Тгр Уа1

40 45

РсР дРР аРс РсР ссР РсР ддР ддс сРР асР аРР РаР дсР дас Рсс дРР 192

Зег Уа1 Не Зег Рго Зег СЬу С1у Ьеи ТЬг 11е Туг А1а Азр Зег Уа1

55 60 ааа ддР сдс РРс асР аРс РсР ада дас аас РсР аад аар асР сРс Рас 240

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг

70 75 80

РРд сад аРд аас аде РРа адд дсР дад дас асд дсс дрд РаР Рас РдР 288

Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Агд А1а СЬи Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз

90 95 дса сдд аде адр ддс Рдд дсР сРд даР дсР РРР даР аРс Рдд ддс саа 336

А1а Агд Зег Зег С1у Тгр А1а Ьеи Азр А1а РЬе Азр Не Тгр С1у С1п

100 105 110 ддд аса аРд дРс асе дРс Рса аде дсс Рсс асе аад ддс сса Рсд дРс 384

СЬу ТЬг Мер Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег Уа1

115 120 125

РРс ссд сРа дса ссс Рсс Рсс аад аде асе РсР ддд 420

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Бег Ьуз Бег ТЬг Зег С1у

130 135 140 <210> 107 <211> 140 <212> РКТ <213> Ното зархепз <400> 107

СЬи Уа1 СЬп Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 СЬп Рго С1у О1у 15 10 15

Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег С1у РЬе ТЬг РЬе Бег Нхз Туг 20 25 30

Тгр Мер

СЬу

Тгр УаЬ

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

35

40

45

Зег УаЬ

Не

Зег Рго

Зег

СЬу

СЬу

Ьеи

ТЬг

Не

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз СЬу

Агд

РЬе ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи СЬп

Мер

Азп Зег

Ьеи

Агд

АЬа

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

АЬа Агд

Зег

Зег СЬу

Тгр

АЬа

Ьеи

Азр

АЬа

РЬе

Азр

Не

Тгр

СЬу

СЬп

100

105

110

СЬу ТЬг

Мер

УаЬ ТЬг

УаЬ

Зег

Зег

АЬа

Зег

ТЬг

Ьуз

СЬу

Рго

Зег

УаЬ

115

120

125

РЬе Рго

Ьеи

АЬа Рго

Зег

Зег

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

СЬу

130

135

140

<210>

108

<211>

9

<212>

РРТ

<213>

Ното

зарЬепз

<400>

108

РЬе ТЬг

РЬе

Зег Нхз

Туг

Тгр

Мер

СЬу

1

5

<210>

109

<211>

10

<212>

РРТ

<213>

Ното

зархепз

<400>

109

УаЬ Не

Зег

Рго Зег

СЬу

СЬу

Ьеи

ТЬг

Не

1

5

10

<210>

110

<211>

12

<212>

РРТ

<213>

Ното

зархепз

<400>

110

Агд Зег

Зег

СЬу Тгр

АЬа

Ьеи

Азр

АЬа

РЬе

Азр

11е

1

5

10

<210> 111 <211> 1215 <212> ДНК <213> Ното зарйепз <220>

<221> СЬЗ <222> (1)..(1215) <400> 111 аЬд едд сед сед сед дсс сед еед ддд дес сед сед аде дед ссе ддд 48

Мее Агд Ьеи Ьеи Ьеи А1а Ьеи Ьеи С1у Уа1 Ьеи Ьеи Зег Уа1 Рго С1у 15 10 15 ссе сса дес еед есс сед дад дсс есе дад даа дед дад сее дад ссс 96

Рго Рго Ή1 Ьеи Зег Ьеи О1и А1а Зег С1и С1и Уа1 С1и Ьеи О1и Рго

25 30 еде сед дсе ссс аде сед дад сад саа дад сад дад сед аса деа дсс 144

Суз Ьеи А1а Рго Зег Ьеи С1и С1п С1п С1и С1п С1и Ьеи ТЬг '.'а1 А1а

40 45 сее ддд сад ссе дед едд сед еде еде ддд едд дсе дад еде дде ддс 192

Ьеи С1у С1п Рго Уа1 Агд Ьеи Суз Суз С1у Агд А1а С1и Агд С1у С1у

55 60 сас едд еас аад дад ддс аде сдс сед дса ссе дсе ддс еде деа едд 240

Ηίδ Тгр Туг Ьуз СГи С1у Зег Агд Ьеи А1а Рго А1а С1у Агд Уа1 Агд

70 75 80 ддс едд адд ддс сдс сеа дад аее дсс аде еес сеа ссе дад дае дсе 288

С1у Тгр Агд 01у Агд Ьеи С1и Не А1а Зег РЬе Ьеи Рго С1и Азр А1а

90 95 ддс сдс еас сес еде сед дса еда ддс есс аед аес дес сед сад аае 336

С1у Агд Туг Ьеи Суз Ьеи А1а Агд С1у Зег Мее Не Уа1 Ьеи С1п Азп

100 105 110 сес асс еед аее аса дде дас есс еед асс есс аде аас дае дае дад 384

Ьеи ТЬг Ьеи Не ТЬг 61у Азр Зег Ьеи ТЬг Зег Зег Азп Азр Азр С1и

115 120 125 дас ссс аад Ьсс саЬ адд дас сес Ьсд аае адд сас аде Сас ссс сад 432

Азр Рго Ьуз Зег Н1з Агд Азр Ьеи Зег Азп Агд Ηί3 Зег Туг Рго С1п

130 135 140 саа дса ссс еас едд аса сас ссс сад сдс аед дад аад ааа сед сае 480

01п А1а Рго Туг Тгр ТЬг Ηίδ Рго 61п Агд МеЪ С1и Ьув Ьуз Ьеи Ηίδ

145 150 155 160 дса деа ссе дед ддд аас асс дес аад еес сдс Сде сса дсе дса ддс 528

А1а ναΐ Рго А1а С1у Азп ТЬг Ή Ьуз РЬе Агд Суз Рго А1а А1а С1у

165 170 175 аас ссс асд ааа асе сас аса еде сса ссд еде сса дса ссе даа сес 576

Азп Рго ТЬг Ьуз ТЬг Ηίδ ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго <31и Ьеи

180 185 190 сед ддд дда ссд еса дес еес сес еес ссс сса ааа ссс аад дас асс 624

Ьеи <31у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг

195 200 205 сес аед аес есс едд асс ссе дад дес аса еде дед дед дед дас дед 672

Ьеи Мее Не Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1

210 215 220 аде сас даа дас ссе дад дЬс аад еес аас едд еас дед дас ддс дед 720

Зег Ηί3 61и Азр Рго 61и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1

225 230 235 240 дад дед сае аае дсс аад аса аад ссд едд дад дад сад еас аас аде 768

61и Ча1 Н±з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и 61п Туг Азп Зег

245 250 255 асд Ьас сде дед дес аде дес сес асс дес сед сас сад дас едд сед 816

ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег νβΐ Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Ηίδ С1п Азр Тгр Ьеи

260 265 270 аае ддс аад дад еас аад еде аад дес есс аас ааа дсс сес сса дсс 864

Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а

275 280 285 ссс аес дад ааа асс аес есс ааа дсс ааа ддд сад ссс еда даа сса 912

Рго Не С1и Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго

290 295 300 сад дед еас асс сед ссс сса есс едд дае дад сед асс аад аас сад 960

61п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п

305 310 315 320 дес аде сед асс еде сед дес ааа ддс еес еае ссс аде дас аес дсс 1008

Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а

325 330 335 дед дад едд дад аде аае ддд сад ссд дад аас аас еас аад асс асд 1056

Ή.1 С1и Тгр С1и Зег Азп 61у С1п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг

340 345 350 ссе ссс дед сед дас есс дас ддс есс еес еес сес еас аде аад сес 1104

Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи

355 360 365 асс дед дас аад аде адд едд сад сад ддд аас дес еес еса еде есс 1152

ТЬг \7а1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п 61п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег

370 375 380 дед аед сае дад дсе сед сас аас сас еас асд сад аад аде сес есс 1200

7а1 Мее Ηίδ С1и А1а Ьеи Ηίδ Азп Ηίδ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег

385 390 395 400 сед есе ссд дде еда 1215

Ьеи Зег Рго С1у <210> 112 ‘ <211> 404 <212> РКТ <213> Ното зар1епз <400> 112

Мее Агд Ьеи Ьеи Ьеи А1а Ьеи Ьеи С1у Уа1 Ьеи Ьеи Зег 7а1 Рго С1у 15 10 15

Рго Рго Уа1 Ьеи Зег Ьеи С1и А1а Зег С1и С1и Ή1 С1и Ьеи С1и Рго 20 25 30

- 63 021580

Суз Ьеи А1а Рго Зег Ьеи 35

С1и С1п С1п С1и 40

СЯп СЯи Ьеи ТЬг Уа1 45

Ьеи С1у С1п Рго νβΐ Агд 50

Ьеи Суз Суз С1у 55

Агд А1а С1и Агд (Ну 60

Шз Тгр Туг Ьуз (Ни С1у 65 70

Зег Агд Ьеи А1а

Рго А1а (Ну Агд Уа1 75

С1у Тгр Агд СЯу Агд Ьеи 85

СЯи Не А1а Зег 90

РЬе Ьеи Рго (Ни Азр 95

СЯу Агд Туг Ьеи Суз Ьеи 100

А1а Агд 61у Зег 105

МеН 11е Уа1 Ьеи СЯп 110

Ьеи ТЬг Ьеи 11е ТЬг С1у 115

Азр Зег Ьеи ТЬг 120

Зег Зег Азп Азр Азр 125

Азр Рго Ьуз Зег ΗΪ3 Агд 130

Азр Ьеи Зег Азп 135

Агд Шз Зег Туг Рго 140

С1п А1а Рго Туг Тгр ТЬг 145 150

Шз Рго С1п Агд

МеН СЯи Ьуз Ьуз Ьеи

155

А1а Уа1 Рго А1а С1у Азп 165

ТЬг Уа1 Ьуз РЬе 170

Агд Суз Рго А1а А1а 175

Азп Рго ТЬг Ьуз ТЬг Шз 180

ТЬг Суз Рго Рго 185

Суз Рго А1а Рго С1и 190

Ьеи С1у (Ну Рго Зег Уа1

195

РЬе Ьеи РЬе Рго 200

Рго Ьуз Рго Ьуз Азр 205

Ьеи МеН Не Зег Агд ТЬг

210

Рго СЯи \/а1 ТЬг 215

Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр 220

Зег Шз С1и Азр Рго С1и 225 230

Уа1 Ьуз РЬе Азп

Тгр Туг \7а1 Азр С1у 235

С1и А/а1 Шз Азп А1а Ьуз 245

ТЬг Ьуз Рго Агд 250

61и С1и СЯп Туг Азп 255

ТЬг Туг Агд Уа1 б/а1 Зег 260

Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 265

Ьеи Шз СЯп Азр Тгр 270

Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз 275

Суз Ьуз Уа1 Зег 280

Азп Ьуз А1а Ьеи Рго 285

А1а

СЯу

Агд

А1а

Азп

СЯи

СЯп

Шз

160 (Ну

Ьеи

ТЬг

Уа1 \7а1

240

Зег

Ьеи

А1а

Рго 11е С1и Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго 290 295 300

С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЯп 305 310 315 320

Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз (Ну РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а 325 330 335

Уа1 (Ни Тгр С1и Зег Азп (Ну 61п Рго (Ни Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг 340 345 350

Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи 355 360 365

ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр 61п СЯп С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег 370 375 380

Уа1 МеН Шз С1и А1а Ьеи Нхз Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег 385 390 395 400

Ьеи Зег Рго С1у <210> 113 <211> 1068 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>

<221> СРЗ <222> (1)..(1068) <400> 113 аНд сдд сНд сНд сНд дсс сНд ННд ддд дНс сНд сНд адН дНд ссН ддд 48

МеН Агд Ьеи Ьеи Ьеи А1а Ьеи Ьеи С1у Уа1 Ьеи Ьеи Зег Уа1 Рго С1у

10 15 ссН сса дНс ННд Нсс сНд дад дсс НсН дад даа дНд дад сНН дад ссс 96

Рго Рго Уа1 Ьеи Зег Ьеи (Ни А1а Зег СЯи (Ни Уа1 (Ни Ьеи (Ни Рго

25 30 саа дса ссс Нас Ндд аса сас ссс сад сдс аНд дад аад ааа сНд саН 144

С1п А1а Рго Туг Тгр ТЬг Н1з Рго С1п Агд МеН (Ни Ьуз Ьуз Ьеи Ηίε

40 45 дса дНа ссН дед ддд аас асс дНс аад ННс сдс НдН сса дсН дса ддс 192

А1а Уа1 Рго А1а (Ну Азп ТЬг Уа1 Ьуз РЬе Агд Суз Рго А1а А1а (Ну

55 60 аас ссс асд ссс асс аНс сдс Ндд сНН аад даН дда сад дсс ННН саН 240

Азп Рго ТЬг Рго ТЬг Не Агд Тгр Ьеи Ьуз Азр (Ну С1п А1а РЬе ΗΪ3

70 75 80 ддд дад аас сдс аНН дда ддс аНН сдд сНд сдс саН сад сас Ндд адН 288

СЬу СЬи Азп

Агд Не СЬу СЬу Не Агд Ьеи Агд НЬз СЬп НЬз Тгр Зег

85

90

95

сЪс

дьд

аСд

дад

аде

дСд

дСд

ссс

Ссд

дас

сдс

ддс

аса

Ьас

асс

Ьдс

336

Ьеи

УаЬ

МеС

СЬи

Зег

УаЬ

УаЬ

Рго

Зег

Азр

Агд

СЬу

ТЬг

Туг

ТЬг

Суз

100

105

110

сЬд

дСа

дад

аас

дсС

дСд

ддс

аде

аСс

сдС

СаС

аас

Ьас

сЬд

сЬа

даЬ

384

Ьеи

УаЬ

СЬи

Азп

АЬа

ЧаЬ

СЬу

Зег

Не

Агд

Туг

Азп

Туг

Ьеи

Ьеи

Азр

115

120

125

дкд

сСд

ааа

асС

сас

аса

Сдс

сса

ссд

Сдс

сса

дса

ссЬ

даа

сЬс

сЬд

432

УаЬ

Ьеи

Ьуз

ТЬг

НЬз

ТЬг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

АЬа

Рго

СЬи

Ьеи

Ьеи

130

135

140

ддд

дда

ссд

Сса

дСс

ССс

сСс

ССс

ссс

сса

ааа

ссс

аад

дас

асс

сЬс

480

СЬу

СЬу

Рго

Зег

УаЬ

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

145

150

155

160

аЬд

аСс

Ссс

сдд

асс

ссС

дад

дСс

аса

Сдс

дьд

дСд

д£д

дас

дьд

аде

528

Мер

Не

Зег

Агд

ТЬг

Рго

СЬи

УаЬ

ТЬг

Суз

УаЬ

УаЬ

УаЬ

Азр

УаЬ

Зег

165

170

175

сас

даа

дас

ссС

дад

дСс

аад

ССс

аас

Ьдд

Сас

дЬд

дас

ддс

дьд

дад

576

НЬз

СЬи

Азр

Рго

СЬи

УаЬ

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

Туг

УаЬ

Азр

СЬу

УаЬ

СЬи

180

185

190

дСд

сас

ааС

дсс

аад

аса

аад

ссд

сдд

дад

дад

сад

Ьас

аас

аде

асд

624

УаЬ

НЬз

Азп

АЬа

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

СЬи

СЬи

СЬп

Туг

Азп

Зег

ТЬг

195

200

205

Сас

сдС

дСд

дСс

аде

дсс

сСс

асс

дСс

сСд

сас

сад

дас

ьдд

сЬд

ааЬ

672

Туг

Агд

УаЬ

УаЬ

Зег

УаЬ

Ьеи

ТЬг

УаЬ

Ьеи

НЬз

СЬп

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

210

215

220

ддс

аад

дад

Сас

аад

Сдс

аад

дСс

Ссс

аас

ааа

дсс

сЬс

сса

дсс

ссс

720

СЬу

Ьуз

СЬи

Туг

Ьуз

Суз

Ьуз

УаЬ

Зег

Азп

Ьуз

АЬа

Ьеи

Рго

АЬа

Рго

225

230

235

240

аСс

дад

ааа

асс

аСс

Ссс

ааа

дсс

ааа

ддд

сад

ссс

сда

даа

сса

сад

768

11е

СЬи

Ьуз

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

АЬа

Ьуз

СЬу

СЬп

Рго

Агд

СЬи

Рго

СЬп

245

250

255

дьд

Сас

асс

сСд

ссс

сса

Ссс

сдд

дас

дад

сСд

асс

аад

аас

сад

дЬс

816

УаЬ

Туг

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Агд

Азр

СЬи

Ьеи

ТЬг

Ьуз

Азп

СЬп

УаЬ

260

265

270

аде

ссд

асс

Ьдс

сСд

дСс

ааа

ддс

ССс

СаС

ССС

аде

дас

аЬс

дсс

дЬд

864

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи

УаЬ

Ьуз

СЬу

РЬе

Туг

Рго

Зег

Азр

Не

АЬа

УаЬ

275

280

285

дад

Сдд

дад

аде

ааС

ддд

сад

ссд

дад

аас

аас

Ьас

аад

асс

асд

ссЬ

912

СЬи

Тгр

СЬи

Зег

Азп

СЬу

СЬп

Рго

СЬи

Азп

Туг

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Рго

290

295

300

ссс

дЬд

сСд

дас

Ссс

дас

ддс

Ссс

ССс

ССс

сСс

Ьас

аде

аад

сЬс

асс

960

Рго

УаЬ

Ьеи

Азр

Зег

Азр

СЬу

Зег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

305

310

315

320

дСд

дас

аад

аде

адд

Сдд

сад

сад

ддд

аас

дСс

ЬЬе

Ьса

Ьдс

Ьсс

дьд

1008

УаЬ

Азр

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

СЬп

СЬп

СЬу

Азп

УаЬ

РЬе

Зег

Суз

Зег

УаЬ

325

330

335

асе

саС

дад

дсС

ссд

сас

аас

сас

Сас

асд

сад

аад

аде

сЬс

Ьсс

сид

1056

МеС

НЬз

СЬи

АЬа

ьеи

НЬз

Азп

НЬз

Туг

ТЬг

СЬп

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

340

345

350

СсС

ссд

ддь

Сда

1068

Зег

Рго

СЬу

355 <210> 114 <211> 355 <212> РКТ

<213> Ното

зар:

1епз

<400> 114

МеЬ

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьеи

АЬа

Ьеи

Ьеи

СЬу

УаЬ

Ьеи

Ьеи

Зег

УаЬ

Рго

СЬу

1

5

10

15

Рго

Рго

УаЬ

Ьеи

Зег

Ьеи

СЬи

АЬа

Зег

СЬи

СЬи

УаЬ

СЬи

Ьеи

СЬи

Рго

20

25

30

СЬп

АЬа

Рго

Туг

Тгр

ТЬг

ΗΪ3

Рго

СЬп

Агд

МеЬ

СЬи

Ьуз

Ьуз

Ьеи

НЬз

35

40

45

АЬа

УаЬ

Рго

АЬа

СЬу

Азп

ТЬг

УаЬ

Ьуз

РЬе

Агд

Суз

Рго

АЬа

АЬа

СЬу

50

55

60

Азп

Рго

ТЬг

Рго

ТЬг

Не

Агд

Тгр

Ьеи

Ьуз

Азр

СЬу

СЬп

АЬа

РЬе

НЬз

65

70

75

80

СЬу

СЬи

Азп

Агд

Не

СЬу

СЬу

Не

Агд

Ьеи

Агд

НЬз

СЬп

НЬз

Тгр

Зег

85

90

95

Ьеи

УаЬ

МеЬ

СЬи

Зег

УаЬ

УаЬ

Рго

Зег

Азр

Агд

СЬу

ТЬг

Туг

ТЬг

Суз

100

105

110

Ьеи

УаЬ

СЬи

Азп

АЬа

УаЬ

СЬу

Зег

Не

Агд

Туг

Азп

Туг

Ьеи

Ьеи

Азр

115

120

125

УаЬ

Ьеи

Ьуз

ТЬг

НЬз

ТЬг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

АЬа

Рго

СЬи

Ьеи

Ьеи

130

135

140

СЬу

СЬу

Рго

Зег

УаЬ

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

145

150

155

160

МеЬ

Не

Зег

Агд

ТЬг

РГО

СЬи

Уа1

ТЬг

Суз

УаЬ

УаЬ

УаЬ

Азр

УаЬ

Зег

165

170

175

НЬз

СЬи

Азр

Рго

СЬи

УаЬ

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

Туг

УаЬ

Азр

СЬу

1/аЬ

СЬи

180

185

190

УаЬ

НЬз

Азп

АЬа

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

СЬи

СЬи

СЬп

Туг

Азп

Зег

ТЬг

195 200 205

Туг

Агд

УаЬ

УаЬ

Зег

УаЬ

Ьеи

ТЬг

УаЬ

Ьеи

Нхз

СЬп

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

210

215

220

СЬу

Ьуз

СЬи

Туг

Ьуз

Суз

Ьуз

УаЬ

Зег

Азп

Ьуз

АЬа

Ьеи

Рго

АЬа

Рго

225

230

235

240

Не

СЬи

Ьуз

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

АЬа

Ьуз

СЬу

С1п

Рго

Агд

СЬи

Рго

СЬп

245

250

255

УаЬ

Туг

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Агд

Азр

СЬи

Ьеи

ТЬг

Ьуз

Азп

СЬп

УаЬ

260

265

270

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи

УаЬ

Ьуз

СЬу

РЬе

Туг

Рго

Зег

Азр

Не

АЬа

УаЬ

275

280

285

СЬи

Тгр

СЬи

Зег

Азп

СЬу

СЬп

Рго

СЬи

Азп

Азп

Туг

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Рго

290

295

300

Рго

УаЬ

Ьеи

Азр

Зег

Азр

СЬу

Зег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

305

310

315

320

УаЬ

Азр

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

СЬп

СЬп

СЬу

Азп

УаЬ

РЬе

Зег

Суз

Зег

УаЬ

325

330

335

МеЬ

Нхз

СЬи

АЬа

Ьеи

Нхз

Азп

Нхз

Туг

ТЬг

СЬп

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

340

345

350

Зег

Рго

СЬу

355

<2Ю> :

115

<2Н> :

1188

<212> ДНК

<213> Ното

заргепз

<220>

<221> <222>

СОЗ (1).

.(1188)

<400>

115

аЬд

едд

сЬд

сЬд

сЬд

дсс

сЬд

ЬЬд

ддд

дес

сЬд

сЬд

адЬ

дед

ссЬ

ддд

48

МеЬ

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьеи

АЬа

Ьеи

Ьеи

СЬу

УаЬ

Ьеи

Ьеи

Зег

УаЬ

Рго

СЬу

1

5

10

15

ссЬ

сса

дЬс

ЬЬд

Ьсс

сед

дад

дсс

ЬсЬ

дад

даа

дед

дад

сеь

дад

ссс

96

Рго

Рго

УаЬ

Ьеи

Зег

Ьеи

СЬи

АЬа

Зег

СЬи

СЬи

УаЬ

СЬи

Ьеи

СЬи

Рго

20

25

30

аас

дсЬ

дед

ддс

аде

аЬс

сдЬ

ЬаЬ

аас

Ьас

сЬд

сеа

даЬ

дед

сЬд

дад

144

Азп

АЬа

УаЬ

СЬу

Зег

Не

Агд

Туг

Азп

Туг

Ьеи

Ьеи

Азр

УаЬ

Ьеи

СЬи

35

40

45

едд

Ьсс

ссд

сас

едд

ссс

аЬс

сЬд

сад

дсс

ддд

сЬс

ссд

дсс

аас

асе

192

Агд

Зег

Рго

Нхз

Агд

Рго

Пе

Ьеи

СЬп

АЬа

СЬу

Ьеи

Рго

АЬа

Азп

ТЬг

50

55

60

аса

дсс

дЬд

дед

ддс

аде

дас

дед

дад

сЬд

сЬд

еде

аад

дед

Ьас

аде

240

ТЬг

А1а

УаЬ

УаЬ

СЬу

Зег

Азр

УаЬ

СЬи

Ьеи

Ьеи

Суз

Ьуз

УаЬ

Туг

Зег

65

70

75

80

даЬ

дсс

сад

ссс

сас

аЬс

сад

едд

сЬд

аад

сас

аЬс

дьс

аЬс

аас

ддс

288

Азр

АЬа

СЬп

Рго

ΗΪ3

Пе

СЬп

тгр

Ьеи

Ьуз

НЬз

Не

УаЬ

Не

Азп

СЬу

85

90

95

аде

аде

ЬЬе

дда

дсс

дас

дде

ЬЬе

ссс

ЬаЬ

дед

саа

дЬс

сЬа

аад

асЬ

336

Зег

Зег

РЬе

СЬу

АЬа

Азр

СЬу

РЬе

Рго

Туг

УаЬ

СЬп

УаЬ

Ьеи

Ьуз

ТЬг

100

105

110

дса

дас

аЬс

ааЬ

аде

Ьса

дад

дед

дад

дЬс

сЬд

Ьас

сЬд

едд

аас

дед

384

АЬа

Азр

Не

Азп

Зег

Зег

СЬи

УаЬ

СЬи

УаЬ

Ьеи

Туг

Ьеи

Агд

Азп

УаЬ

115

120

125

Ьса

дсс

дад

дас

дса

ддс

дад

Ьас

асе

Ьдс

СЬС

дса

ддс

ааЬ

Ьсс

аЬс

432

Зег

АЬа

СЬи

Азр

АЬа

СЬу

СЬи

Туг

ТЬг

Суз

Ьеи

АЬа

СЬу

Азп

Зег

Не

130

135

140

ддс

сЬс

Ьсс

еас

сад

ЬсЬ

дсс

едд

сЬс

асд

дьд

сЬд

сса

дад

дад

дас

480

СЬу

Ьеи

Зег

Туг

СЬп

Зег

А1а

Тгр

Ьеи

ТЬг

УаЬ

Ьеи

Рго

СЬи

СЬи

Азр

145

150

155

160

ссс

аса

едд

асе

дса

дса

дед

ссс

дад

дсс

ааа

асЬ

сас

аса

Ьдс

сса

528

Рго

ТЬг

Тгр

ТЬг

А1а

АЬа

АЬа

Рго

СЬи

АЬа

Ьуз

ТЬг

НЬз

ТЬг

Суз

Рго

165

170

175

ссд

Ьдс

сса

дса

ссЬ

даа

сЬс

сЬд

ддд

дда

ссд

Ьса

дЬс

ЬЬе

сЬс

ЬЬе

576

Рго

Суз

Рго

АЬа

Рго

СЬи

Ьеи

Ьеи

СЬу

СЬу

Рго

Зег

УаЬ

РЬе

Ьеи

РЬе

180

185

190

ссс

сса

ааа

ссс

аад

дас

асе

сЬс

аЬд

аЬс

Ьсс

едд

асе

ссЬ

дад

дес

624

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

МеЬ

Не

Зег

Агд

ТЬг

Рго

СЬи

УаЬ

195

200

205

аса

Ьдс

дед

дед

дед

дас

дед

аде

сас

даа

дас

ссЬ

дад

дес

аад

ЬЬе

672

ТЬг

Суз

УаЬ

УаЬ

УаЬ

Азр

УаЬ

Зег

НЬз

СЬи

Азр

Рго

СЬи

УаЬ

Ьуз

РЬе

210

215

220

аас

Ьдд

Ьас

дед

дас

ддс

дед

дад

дед

саЬ

ааЬ

дсс

аад

аса

аад

ссд

720

Азп

Тгр

Туг

УаЬ

Азр

СЬу

УаЬ

СЬи

УаЬ

Нхз

Азп

АЬа

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

225

230

235

240

едд

дад

дад

сад

еас

аас

аде

асд

Ьас

сдЬ

дед

дЬс

аде

дес

сЬс

асе

768

Агд

СЬи

СЬи

СЬп

Туг

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

УаЬ

УаЬ

Зег

УаЬ

Ьеи

ТЬг

245

250

255

дЬс

сЬд

сас

сад

дас

едд

сЬд

ааЬ

ддс

аад

дад

Ьас

аад

еде

аад

дЬс

816

УаЬ

Ьеи

ΗΪ8

СЯп

Азр

тгр

Ьеи

Азп

СЬу

Ьуз

СЬи

Туг

Ьуз

Суз

Ьуз

УаЬ

260

265

270

Ьсс

аас

ааа

дсс

сЬс

сса

дсс

ссс

аЬс

дад

ааа

асе

аЬс

Ьсс

ааа

дсс

864

Зег

Азп

Ьуз

АЬа

Ьеи

Рго

АЬа

Рго

Не

СЬи

Ьуз

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

АЬа

275

280

285

ааа

ддд

сад

ссс

еда

даа

сса

сад

дед

Ьас

асе

сЬд

ссс

сса

Ьсс

едд

912

Ьуз

СЬу

СЬп

Рго

Агд

СЬи

Рго

СЬп

УаЬ

Туг

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Агд

290 295 300 дак дад скд асе аад аас сад дке аде скд асе кде скд дке ааа ддс 960

Азр С1и Ьеи Ткг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Ткг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у

305 310 315 320 ккс как ссс аде дас акс дсс дкд дад кдд дад аде аак ддд сад ссд 1008

Рке Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго

325 330 335 дад аас аас кас аад асе асд сск ссс дкд скд дас ксс дас ддс ксс 1056

С1и Азп Азп Туг Ьуз Ткг Ткг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег

340 345 350 ккс ккс скс кас аде аад скс асе дкд дас аад аде адд кдд сад сад 1104

Рке Рке Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи Ткг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр 61п О1п

355 360 365 ддд аас дке ккс кса кде ксс дкд акд сак дад дек скд сас аас сас 1152

С1у Азп Уа1 Рке Зег Суз Зег Уа1 Мек Низ С1и А1а Ьеи Шз Азп Шз

370 375 380 кас асд сад аад аде скс ксс скд кек ссд ддк кда 1188

Туг Ткг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЯу 385 390 395 <210> 116 <211> 395 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 116

Мек Агд Ьеи Ьеи Ьеи А1а Ьеи Ьеи С1у Уа1 Ьеи Ьеи Зег Уа1 Рго С1у 15 10 15

Рго Рго Уа1 Ьеи Зег Ьеи С1и А1а Зег С1и С1и Уа1 С1и Ьеи С1и Рго 20 25 30

Азп А1а Уа1 С1у Зег 11е Агд Туг Азп Туг Ьеи Ьеи Азр Уа1 Ьеи С1и 35 40 45

Агд Зег Рго Низ Агд Рго Не Ьеи С1п А1а <31у Ьеи Рго А1а Азп Ткг 50 55 60

Ткг А1а Уа1 Уа1 61у Зег Азр Уа1 С1и Ьеи Ьеи Суз Ьуз Уа1 Туг Зег 65 70 75 80

Азр А1а СЯп Рго Низ Не С1п Тгр Ьеи Ьуз Низ Не Уа1 Не Азп О1у 85 90 95

Зег Зег Рке С1у А1а Азр С1у Рке Рго Туг Уа1 С1п Уа1 Ьеи Ьуз Ткг 100 105 110

А1а Азр Не Азп Зег Зег С1и Уа1 С1и Уа1 Ьеи Туг Ьеи Агд Азп Уа1 115 120 125

Зег А1а СЯи Азр А1а С1у С1и Туг Ткг Суз Ьеи А1а С1у Азп Зег Не 130 135 140

СЯу Ьеи Зег Туг 61п Зег А1а Тгр Ьеи Ткг Уа1 Ьеи Рго С1и СЯи Азр 145 150 155 160

Рго Ткг Тгр Ткг А1а А1а А1а Рго С1и А1а Ьуз Ткг Низ Ткг Суз Рго 165 170 175

Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи СЯу СЯу Рго Зег Уа1 Рке Ьеи Рке 180 185 190

Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр Ткг Ьеи Мек Не Зег Агд Ткг Рго СЯи Уа1 195 200 205

Ткг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ С1и Азр Рго СЯи Уа1 Ьуз Рке 210 215 220

Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Низ Азп А1а Ьуз Ткг Ьуз Рго 225 230 235 240

Агд СЯи С1и Θΐη Туг Азп Зег Ткг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи Ткг 245 250 255

Уа1 Ьеи Низ С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз СЯи Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 260 265 270

Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не С1и Ьуз Ткг Не Зег Ьуз А1а 275 280 285

Ьуз С1у СЯп Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг Ткг Ьеи Рго Рго Зег Агд 290 295 300

Азр СЯи Ьеи Ткг Ьуз Азп СЯп Уа1 Зег Ьеи Ткг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у 305 310 315 320

Рке Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго 325 330 335

СЯи Азп Азп Туг Ьуз Ткг Ткг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр СЯу Зег

340 345 350

Рке Рке Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи Ткг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п 355 360 365

С1у Азп 7а1 Рке Зег Суз Зег Уа1 Мек Низ С1и А1а Ьеи Низ Азп Низ 370 375 380

Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у 385 390 395 <210> 117 <211> 330 <212> РКТ <213> Ното зархепз <400> 117

А1а Зег ТЬг Ьуэ С1у Рго Зег Ча1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз 15 10 15

Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Ча1 Ьуз Азр Туг 20 25 30

РЬе Рго С1и Рго Ча1 ТЬг Ча1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег 35 40 45

С1у Ча1 ΗΪ3 ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег 50 55 60

Ьеи Зег Зег Ча1 Ча1 ТЬг Ча1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг С1п ТЬг 65 70 75 80

Туг Не Суз Азп Ча1 Азп Нхз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Ча1 Азр Ьуз 85 90 95

Агд Ча1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Нхз ТЬг Суз Рго Рго Суз 100 105 110

Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Ча1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 115 120 125

Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Не Зег Агд ТЬг Рго С1и Ча1 ТЬг Суз 130 135 140

Ча1 Ча1 Ча1 Азр Ча1 Зег Нхз С1и Азр Рго С1и Ча1 Ьуз РЬе Азп Тгр 145 150 155 160

Туг Ча1 Азр С1у Ча1 С1и Ча1 Нхз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и 165 170 175

С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд \7а1 Ча1 Зег Ча1 Ьеи ТЬг Ча1 Ьеи 180 185 190

Нхз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Ча1 Зег Азп

195	200	205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не	С1и Ьуз ТЬг Не	Зег Ьуз А1а Ьуз О1у
210 215		220
С1п Рго Агд С1и Рго С1п Ча1	Туг ТЬг Ьеи Рго	Рго Зег Агд С1и С1и
225 230	235	240
МеЬ ТЬг Ьуз Азп С1п Ча1 Зег	Ьеи ТЬг Суз Ьеи	Ча1 Ьуз С1у РЬе Туг
245	250	255
Рго Зег Азр Не А1а Ча1 С1и	Тгр 01и Зег Азп	С1у С1п Рго С1и Азп
260	265	270
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго	Ча1 Ьеи Азр Зег	Азр О1у Зег РЬе РЬе
275	280	285
Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Ча1	Азр Ьуз Зег Агд	Тгр О1п С1п О1у Азп
290 295		300
Ча1 РЬе Зег Суз Зег Ча1 МеЬ	Нхз С1и А1а Ьеи	ΗΪ3 Азп ΗΪ3 Туг ТЬг
305 310	315	320
<31п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег	Рго О1у Ьуз
325	330
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение антитела, специфичного к рецептору РОР-К4, для лечения заболеваний, связанных с

Claims (11)

1. Применение антитела, специфичного к рецептору РОР-К4, для лечения заболеваний, связанных с патологическим ангиогенезом.

2. Применение антитела, специфичного к рецептору РОР-К4, для ингибирования роста опухоли одновременно с ингибированием ангиогенеза.

3. Применение по любому из пп.1 и 2 для лечения гепатокарцином или любых других видов рака печени.

4. Применение по любому из пп.1 и 2 для лечения рака поджелудочной железы.

5. Применение по любому из пп.1-4, в котором антитело, специфичное к рецептору РОР-К4, содержит СЭК последовательности БЕР ГО N0: 9, 10, 11, 12, 13 и 14; или 73, 74, 75, 78, 79 и 80; или 83, 84, 85, 88, 89 и 90; или 93, 94, 95, 98, 99 и 100; или 103, 104, 105, 108, 109 и 110, где по меньшей мере один из

- 68 021580

СЭК может отличаться одной или двумя аминокислотами по сравнению по меньшей мере с одной из указанных выше последовательностей, при том, что антитело сохраняет свою специфичность связывания.

6. Применение по п.5, в котором вариабельная часть тяжелой цепи специфичного антитела содержит нуклеотидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% последовательности 8Ер ΙΌ N0: 5, 76, 86, 96 или 106, и в котором вариабельная часть его легкой цепи содержит нуклеотидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% последовательности 8Ер ΙΌ N0: 7, 71, 81, 91 или 101, при том, что антитело сохраняет свою специфичность связывания.

7. Применение по п.5, в котором последовательность антитела, специфичного к рецептору РСР-К4, содержит полипептидные последовательности 8Ер ΙΌ N0: 2 и 4, или 6 и 8, или 72 и 77, или 82 и 87, или 92 и 97, или 102 и 107, или последовательности, соответствующие таким последовательностям и идентичные им по меньшей мере на 80%, при том, что антитело сохраняет свою специфичность связывания.

8. Применение по любому из пп.1-7, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой гуманизированное антитело.

9. Применение по п.8, отличающееся тем, что указанное антитело содержит легкую цепь, вариабельная область которой идентична по меньшей мере на 80% одной из полипептидных последовательностей 8Ер ΙΌ N0: 30 или 32, и тяжелую цепь, вариабельная область которой идентична по меньшей мере на 80% последовательности 8Ер ΙΌ N0: 34, 36 или 38.

10. Применение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.

11. Применение по любому из пп.1-10, в котором указанное антитело кодируется полинуклеотидом, по меньшей мере на 80% идентичным одной из последовательностей 8Ер ΙΌ N0: 1, 3, 5, 7, 29, 31, 33, 35 или 37, 71, 76, 81, 86, 91, 96, 101 или 106, при том, что кодируемый им полипептид сохраняет свою специфичность связывания с рецептором РСР-К4.