KR20110028536A - Ｆｇｆ-ｒ４ 수용체-특이적 길항제 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 FGF-R4 수용체의 활성을 억제할 수 있는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 분자에 관한 것이다. 상기 길항제는 특히 상기 수용체의 활성을 억제할 수 있는 FGF-R4-특이적 항체이다. 또한, 본 발명은 특히 혈관신생 분야에서 및 특정 유형의 암의 치료에서 상기 항체의 치료 용도에 관한 것이다.

Description

ＦＧＦ-Ｒ４ 수용체-특이적 길항제{FGF-R4 RECEPTOR-SPECIFIC ANTAGONISTS}
본 발명의 대상은 FGF 수용체 4 (FGF-R4) 수용체의 활성을 억제할 수 있는, FGF 수용체 4에 특이적인 길항제이다. 이들 길항제는 특히 FGF 수용체 4 (FGF-R4)에 대해 특이적으로 작용하는 항체이다.
본 발명의 대상은 또한 특히 혈관신생 분야에서 및 특정 유형의 암의 치료에서 이들 길항제의 치료 용도이다.
FGF (섬유모세포 성장 인자)는 시험관 내에서 및 생체 내에서 혈관 세포 증식, 이동 및 분화를 자극할 수 있는 것으로 설명된 첫 번째 분자 중의 하나이다. 많은 문헌에서 FGF에 의한 시험관 내 및 생체 내에서 혈관신생의 유도 및 모세혈관의 형성을 설명하고 있다. FGF는 또한 종양에 의해 동원된 혈관의 형성을 촉진함으로써 종양 혈관신생에 관여한다.
인간 FGF 패밀리는 모두 120개 아미노산의 보존된 중앙 도메인을 갖는 적어도 23가지의 구성원으로 구성된다. 이들은 3원 복합체를 형성하도록 대부분의 세포 표면 및 세포외 매트릭스 (저-친화도 결합 부위) 상에 존재하는 성분인 그들의 티로신-키나제 타입의 고친화도 수용체 (FGF-R) 및 헤파란 술페이트 프로테오글리칸과 상호작용함으로써 생물학적 활성을 발휘한다. 일부 FGF는 몇몇 FGF-R에 대해 높은 친화도를 갖는 반면, 다른 일부는 하나의 수용체 또는 수용체의 하나의 이소형을 특이적으로 활성화시킨다.
FGF-R4-특이적 리간드는 문헌 [Xie et al., Cytokine, 1999, 11:729-35]에 의해 확인되었다. FGF19로 불리는 상기 리간드는 독점적으로 FGF-R4에 대해서만 고친화도를 갖고, 수용체에 대한 그의 결합이 헤파린-의존성 또는 헤파란 술페이트-의존성인 리간드이다. FGF19는 성체 동물에서 간세포 및 소장에서만 확인되었고, 여기서 간에 의한 담즙산의 합성을 조절한다. 이것은 배 발생 동안 관여하는 성장 인자인 것으로 나타나고, 제브라 피시 (zebra fish) 및 인간에서 태아 뇌 발생에 관여하는 것으로 나타난다.
FGF1 또는 FGF2와 같은 다른 FGF-R4 리간드가 설명되었다. 이들 리간드는 FGF-R4를 강하게 활성화시키지만, FGF-R4에 특이적이지 않고: 다른 FGF-R에도 결합한다 (Ornitz et al., J. Biol. Chem., 1996, 271:15292-7).
FGF-R4 수용체의 활성화는 몇몇 유형의 세포 신호전달을 일으킨다. 이들 중에서, 가장 통상적인 형태는 FGF에 의한 FGF-R4의 자극에 후속적인 인산화 케스케이드-매개된 신호전달 경로의 설정 (setting up)에 상응한다. 상기 유도는 FGF-R4의 티로신 키나제 도메인의 자동인산화를 일으키고, 다른 신호전달 단백질, 예를 들어 AKT, p44/42, JNK 등의 인산화에 의존성인 세포내 신호전달 경로를 개시하는 역할을 한다. 상기 인산화-매개된 신호전달은 세포 유형에 따라 및 이들 세포의 표면에 존재하는 공동수용체 또는 부착 분자에 따라 변한다 ([Cavallaro et al., Nat . Cell Biol. 3/7, 650-657 (2001)]; [Stadler et al., Cell . Signal. 18/6, 783-794 (2006)]; [Lin et al., J Biol Chem ., 2007, 14:27277-84 (2007)]). FGF-R4를 포함하는 FGF-R에 중요한 또다른 신호전달 방법은 그의 리간드와 조합되어 활성화된 후에 수용체의 내재화이다. 상기 메카니즘은 수용체의 티로신 키나제 활성에 의존성이 아니라, FGF-R4의 짧은 C-말단 서열에 의존성이다 (Klingenberg et al., J. Cell Sci ., 113/Pt10:1827-1838 (2000)).
4가지 구별되는 형태의 FGF-R4가 문헌에 기재되어 있다. 전장 형태는 위치 388에서 2개의 다형성 변이체; 즉 정상 형태의 수용체인 FGF-R4 Gly388, 및 몇 가지 종양의 맥락에서 설명되는 Arg388 형태를 갖는다 ([Bange et al., Cancer Res. 62/3, 840-847　(2002)]; [Spinola et al., J Clin Oncol 23, 7307-7311(2005)]; [Stadler et al., Cell . Signal. 18/6, 783-794 (2006)]). 유방 종양 세포에서 발현되는 가용형 형태가 또한 발견되었다 (Takaishi et al., Biochem Biophys Res Commun., 2000, 267:658-62). 세포외 부분에서 말단절단된 네 번째 형태는 특정 뇌하수체 선종에서 설명되었다 (Ezzat et al., J Clin Invest., 2002, 109:69-78). FGF-R4는 내배엽으로부터 유래된 조직, 예를 들어 위장관, 췌장, 간, 근육 및 부신에서 주로 발현된다.
FGF-R4는 몇몇 세포성 역할을 갖는 것으로 문헌에 공지되어 있고, 그 중 주요한 3가지를 아래에서 설명한다:
첫째로, 상기 수용체는 골격근 분화 및 재생, 중간엽 조직 분화, 또는 골생성과 같은 시험관 내에서 및 생체 내에서 다양한 세포 분화 과정의 제어에, 또는 출생후 간 발생 동안 꽈리 (alveoli)의 형성에서 관여한다.
둘째로, FGF-R4는 담즙산 및 콜레스테롤 항상성의 제어에서 설명되었고, 지방증의 제어에 관여하는 것으로 생각된다. 또한, 담즙산 생산 및 콜레스테롤 생산 사이의 균형이 시험관 내에서 및 생체 내에서 FGF-R4에 의해 제어된다.
셋째로, FGF-R4는 특정 종양 현상, 예를 들어 간세포 암종 또는 결장암의 발생에, 또는 유방 섬유선종 세포 또는 유방암 상피 세포의 증식, 예를 들어 유방 또는 결장직장 암종 세포 이동성에 관여한다. FGF-R4의 종양 관련성은 유방 및 결장직장 종양 (Bange et al., Cancer Res. 62/3, 840-847, 2002), 전립선 종양 (Wang et al., Clin . Cancer Res .10/18, 6169-6178, 2004) 또는 간 종양 (Nicholes et al., Am . J. Pathol.160/6, 2295-307, 2002)에서 종양 진행의 가속화와 상호관련된 다형성 (polymorphism) (Gly388Arg)의 발현과 대부분 연관된다. 상기 다형성은 육종 (Morimoto et al., Cancer 98/10, 2245-2250, 2003), 폐 선암종 (Spinola et al., J Clin Oncol 23, 7307-7311, 2005) 또는 편평세포 육종 (da Costa Andrade et al., Exp Mol Pathol 82, 53-7, 2007)의 경우에 불량한 예후와 또한 연관된다. FGF-R4의 과다발현은 특정 췌장암 주에서 또한 설명되고 (Shah et al., Oncogene 21/54, 8251-61, 2002), 별아교세포종 악성종양과 상호관련된다 (Yamada et al., Neurol . Res. 24/3, 244-8, 2002). 추가로, 결장 종양 이종이식편의 생체내 모델 또는 간세포 암종 모델에서 항-FGF19 모노클로날 항체의 사용은 FGF19의 불활성화 및 따라서 FGF-R4 활성화의 차단이 결장암 또는 간암의 치료에 유익할 수 있음을 보여준다.
문헌에서, FGF/FGF-R1 및 FGF/FGF-R2 쌍은 정상 또는 병리학적 상황에서 새로운 혈관의 형성에 참여하는 것으로 인정된다. 그러나, 상기 세포 현상의 제어에서 FGF-R4의 잠재적인 관련성은 전혀 연구되지 않았다. 실제로, 지금까지 혈관신생의 활성화는 FGF-R1 및/또는 FGF-R2에 의해 매개되는 것으로 제안되었다 (Presta et al., Cytokine Growth Factor Rev., 2005, 16:159-78).
FGF-R4 길항제의 예, 특히, 소분자가 문헌에 기재되어 있지만, 이들은 FGF-R4를 특이적으로 표적화하지 않고, 따라서 이상 반응을 일으킨다. 따라서, 몇몇 FGF-R 및 또한 다른 수용체 티로신 키나제를 억제하는 티로신-키나제 도메인-억제성의 작은 화학적 분자는 문헌 [Thompson et al., J Med Chem . , 2000, 43:4200-11]에 설명되었다. 그들의 세포외 부분과의 회합에 의해 FGF-R을 억제하는 작은 화학적 분자가 국제 특허 출원 WO2007/080325에 또한 설명되었다.
항체가 또한 연구되었고, 예를 들어 항-FGFR1 및/또는 항-FGFR4 항체는 국제 특허 출원 WO2005/066211 및 WO2008052796 또는 문헌 [Chen et al., Hybridoma 24/3, 152-159, 2005]에 기재되어 있다. 국제 특허 출원 WO2005/037235에서는 비만 및 당뇨의 치료를 위한 FGF-R 길항제인 항체를 설명하고 있다. 추가로, 효능제인 항-FGF-R4 항체는 국제 특허 출원 WO03/063893에 기재되어 있다.
본 발명의 대상은 FGF-R4 수용체에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 FGF-R4 수용체 길항제이다. 유리하게는, 상기 길항제는 FGF-R4 수용체에 특이적인 항체이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 대상인 길항제는 FGF-R4 수용체의 D2-D3 도메인에 결합한다. 한 유리한 실시양태에서, 본 발명의 대상인 길항제는 FGF-R4 수용체의 D2 도메인에 결합한다. 훨씬 더 유리한 실시양태에서, 길항제는 서열 70의 서열에 결합한다.
유리하게는, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 비아코어 (Biacore) 기술에 의해 결정되는 FGF-R4 수용체에 대한 KD가 10-8 M 미만, 5 X 10-9 M 미만, 2 X 10-9 M 미만 또는 1 X 10-9 M 미만이다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 인간 FGF-R4 및 쥐 FGF-R4 둘 다에 대해 활성이다.
다른 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 인간 FGF-R4, 쥐 FGF-R4 및 래트 FGF-R4에 대해 동시에 활성이다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 9, 10, 11, 12, 13, 14, 73, 74, 75, 78, 79, 80, 83, 84, 85, 88, 89, 90, 93, 94, 95, 98, 99, 100, 103, 104, 105, 108, 109 또는 110에 동일한 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR, 또는 항체가 그의 결합 특이성을 유지한다면 그 서열이 서열 9, 10, 11, 12, 13, 14, 73, 74, 75, 78, 79, 80, 83, 84, 85, 88, 89, 90, 93, 94, 95, 98, 99, 100, 103, 104, 105, 108, 109 또는 110의 서열과 비교하여 1 또는 2개의 아미노산이 상이한 적어도 하나의 CDR을 포함한다.
특히 유리한 한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 9, 10, 11, 12, 13, 14, 73, 74, 75, 78, 79, 80, 83, 84, 85, 88, 89, 90, 93, 94, 95, 98, 99, 100, 103, 104, 105, 108, 109 또는 110의 서열의 CDR, 또는 항체의 FGF-R4 수용체-결합 특이성을 변경하지 않는다면 그 서열이 각각 상기 서열과 비교하여 1 또는 2개의 아미노산이 상이한 CDR을 포함한다.
한 유리한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 적어도 하나의 중쇄 및 적어도 하나의 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열 9, 10 및 11, 또는 서열 73, 74 및 75, 서열 83, 84 및 85, 또는 서열 93, 94 및 95, 또는 서열 103, 104 및 105로 구성되는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 12, 13 및 14, 또는 서열 78, 79 및 80, 또는 서열 88, 89 및 90, 또는 서열 98, 99 및 100, 또는 서열 108, 109 및 110으로 구성되는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR 서열을 포함한다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체의 중쇄 가변 영역은 서열 6, 77, 87, 97 또는 107의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체의 경쇄 가변 영역은 서열 8, 72, 82, 92 또는 102의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 5, 76, 86, 96 또는 106의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 7, 71, 81, 91 또는 101의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 폴리펩티드 서열 6, 77, 87, 97 또는 107의 폴리펩티드 서열의 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 8, 72, 82, 92 또는 102의 폴리펩티드 서열의 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 5 및 7, 또는 서열 71 및 76, 또는 서열 81 및 86, 또는 서열 91 및 96, 또는 서열 101 및 106의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 서열을 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 6 및 8, 또는 서열 72 및 77, 또는 서열 82 및 87, 또는 서열 92 및 97, 또는 서열 102 및 107의 폴리펩티드 서열을 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 2 및/또는 서열 4; 또는 서열 72 및/또는 서열 77; 또는 서열 82 및/또는 서열 87; 또는 서열 92 및/또는 서열 97; 또는 서열 102 및/또는 서열 107과 적어도80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
특히 유리한 한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 1의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 중쇄를 포함한다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 2의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열의 중쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 3의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 경쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 4의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열의 경쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 1 및 3의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 서열을 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
훨씬 더 유리한 한 실시양태에서, FGF-R4-특이적 길항제 항체는 서열 2의 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 4의 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
서열 2의 중쇄 서열 및 서열 4의 경쇄 서열로 구성된 항체는 본원의 나머지 부분에서 40-12로 언급될 것이다.
본 발명의 한 실시양태에서, FGF-R4-특이적 항체는 인간 FGF-R4, 쥐 FGF-R4 및 래트 FGF-R4에 대해 동시에 활성이다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 AKT/p38 세포 경로의 억제를 유도한다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 Erk1/2 세포 경로의 억제를 유도한다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 FGF-R4-제어된 세포 신호전달 경로의 억제를 유도한다.
또다른 유리한 한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 종양 세포 증식의 억제를 유도한다.
또다른 유리한 한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 혈관신생의 억제를 유도한다.
또다른 특히 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제는 FGF-R4에 대한 그의 친화도가 다른 FGF 수용체에 대한 그의 친화도보다 10배 더 크다.
특히 유리한 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체는 FGF-R4 수용체-특이적 인간화 길항제 항체이다.
한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 인간화 길항제 항체는 가변 영역이 서열 29의 서열 또는 서열 31의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 경쇄를 포함한다.
또다른 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 인간화 길항제 항체는 가변 영역이 서열 30의 서열 또는 서열 32의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 경쇄를 포함한다.
또다른 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 인간화 길항제 항체는 가변 영역이 서열 29의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 31의 서열에 동일한 서열에 의해 코딩되는 경쇄를 포함한다.
또한, 본 발명의 대상은 가변 영역이 서열 33의 서열, 서열 35의 서열 또는 서열 37의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열에 의해 코딩되는 중쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간화 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 가변 영역이 서열 34의 서열, 서열 36의 서열 또는 서열 38의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 중쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간화 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 33 및/또는 서열 35 및/또는 서열 37의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 중쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간화 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 30 또는 32의 서열의 인간화된 서열이 서열 34, 36 또는 38의 서열의 인간화된 서열과 조합되어 사용되는 FGF-R4 수용체-특이적 인간화 길항제 항체이다.
또다른 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 73, 74, 75, 78, 79 및 80의 서열의 CDR, 또는 항체의 FGF-R4 수용체-결합 특이성을 변경하지 않는다면 그 서열이 각각 상기 서열과 비교하여 1 또는 2개의 아미노산이 상이한 CDR을 포함한다.
또다른 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 83, 84, 85, 88, 89 및 90의 서열의 CDR, 또는 항체의 FGF-R4 수용체-결합 특이성을 변경하지 않는다면 그 서열이 각각 상기 서열과 비교하여 1 또는 2개의 아미노산이 상이한 CDR을 포함한다.
또다른 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 93, 94, 95, 98, 99 및 100의 서열의 CDR, 또는 항체의 FGF-R4 수용체-결합 특이성을 변경하지 않는다면 그 서열이 각각 상기 서열과 비교하여 1 또는 2개의 아미노산이 상이한 CDR을 포함한다.
또다른 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 103, 104, 105, 108, 109 및 110의 서열의 CDR, 또는 항체의 FGF-R4 수용체-결합 특이성을 변경하지 않는다면 그 서열이 각각 상기 서열과 비교하여 1 또는 2개의 아미노산이 상이한 CDR을 포함한다.
본 발명의 한 바람직한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 83, 84, 85, 88, 89 및 90의 서열의 CDR을 포함한다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 그의 중쇄 가변 영역이 서열 76, 86, 96 또는 106의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 인간 항체이다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 그의 경쇄 가변 영역이 서열 71, 81, 91 또는 101의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 인간 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 77, 87, 97 또는 107의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 단백질 서열에 의해 코딩되는 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 72, 82, 92 또는 102의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 단백질 서열에 의해 코딩되는 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 71 및 76의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 81 및 86의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 91 및 96의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 101 및 106의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 서열을 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 72 및 77의 폴리펩티드 서열 또는 서열 82 및 87의 폴리펩티드 서열 또는 서열 92 및 97의 폴리펩티드 서열 또는 서열 102 및 107의 폴리펩티드 서열을 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체이다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 서열 72 및/또는 서열 77과 적어도80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
또다른 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체는 서열 82 및/또는 서열 87과 적어도80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
또다른 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체는 서열 92 및/또는 서열 97과 적어도80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
또다른 유리한 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체는 서열 102 및/또는 서열 107과 적어도80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
한 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 대상은 서열 82의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 경쇄를 포함하고 서열 87의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열의 경쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체이다.
훨씬 더 바람직하게는, 본 발명의 대상은 서열 82 및 87의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 서열을 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체이다.
서열 77의 서열의 중쇄 및 서열 72의 서열의 경쇄로 구성된 항체는 본원의 나머지 부분에서 클론 8로 언급될 것이다.
서열 87의 서열의 중쇄 및 서열 82의 서열의 경쇄로 구성된 항체는 본원의 나머지 부분에서 클론 31로 언급될 것이다.
서열 97의 서열의 중쇄 및 서열 92의 서열의 경쇄로 구성된 항체는 본원의 나머지 부분에서 클론 33으로 언급될 것이다.
서열 107의 서열의 중쇄 및 서열 102의 서열의 경쇄로 구성된 항체는 본원의 나머지 부분에서 클론 36으로 언급될 것이다.
본 발명의 분야는 상기 서열을 포함하는 항체로 제한되지 않는다. 사실상, 상기 수용체에 대한 길항 작용을 갖는, FGF-R4에 특이적으로 결합하는 모든 항체가 본 발명의 분야의 일부이다.
또한, 본 발명의 대상은 세포독성제에 접합된 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
본 발명의 대상은 혈관신생와 연관된 질환의 치료에서 FGF-R4 수용체-특이적 길항제의 용도이다.
본 발명의 대상은 암의 치료에서 FGF-R4 수용체-특이적 길항제의 용도이다.
본 발명의 대상은 간암종 또는 임의의 다른 유형의 간암의 치료에서 FGF-R4 수용체-특이적 길항제의 용도이다.
본 발명의 대상은 췌장암의 치료에서 FGF-R4 수용체-특이적 길항제의 용도이다.
본 발명의 대상은 혈관신생과 연관된 질환의 치료 및 간암종 또는 임의의 다른 유형의 간암의 치료 모두에 유용한 FGF-R4 수용체-특이적 항체이다.
본 발명의 대상은 혈관신생과 연관된 질환의 치료, 간암종 또는 임의의 다른 유형의 간암의 치료, 및 췌장암 또는 위장관의 장기 또는 FGF-R4를 발현하는 임의의 다른 장기의 암의 치료에 동시에 유용한 FGF-R4 수용체-특이적 항체이다.
본 발명의 대상은 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 및 부형제를 포함하는 제약 조성물이다.
본 발명의 대상은 환자에게 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체를 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 방법이다.
본 발명의 대상은 환자에게 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체를 투여하는 것을 포함하는, 혈관신생의 병리 증가와 연관된 질환의 치료 방법이다.
본 발명의 대상은
a. 마우스를 면역화하고,
b. 마우스로부터 림프절을 채취하고,
c. 하이브리도마 상등액을 스크리닝하는 단계
를 포함하는, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 모노클로날 항체의 선택 방법이다.
본 발명의 대상은 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체를 생산하는 세포주이다.
본 발명의 대상은 FGF-R4 수용체 길항제 항체를 생산하는 세포주를 배양하는 것을 포함하는, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체의 생산 방법이다.
본 발명의 대상은 FGF-R4 수용체-특이적 길항제를 포함하는 약물이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 2, 4, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 30, 32, 34, 36, 38, 72, 73, 74, 75, 77, 78, 79, 80, 82, 83, 84, 85, 87, 88, 89, 90, 92, 93, 94, 95, 97, 98, 99, 100, 102, 103, 104, 105, 107, 108, 109 및 110으로 구성되는 군 중에서 선택되는 폴리펩티드 및 상기 서열들 중 하나와 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다.
본 발명의 대상은 상기한 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 상기한 폴리펩티드를 코딩하는 재조합 벡터이다.
본 발명의 대상인 FGF-R4 수용체 길항제 항체의 중쇄 및/또는 경쇄가 발현되도록 하기 위해, 상기 사슬을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 발현 벡터 내로 삽입된다. 이들 발현 벡터는 플라스미드, YAC, 코스미드, 레트로바이러스, EBV-유래된 에피좀, 및 상기 사슬의 발현에 적합한 것으로 간주할 수 있는 임의의 벡터일 수 있다.
본 발명의 대상은 상기한 재조합 벡터를 포함하는 숙주 세포이다.
본 발명의 상세한 설명
본 발명의 대상은 혈관신생 및 종양 성장을 억제하기 위한 FGF-R4 (FGF-R1, R2 또는 R3과의 교차-반응 없이)에 대해 특이적으로 작용하는 항체의 용도이다.
예상치 않게, 본 발명자들은 FGF-R4가 혈관신생의 제어에서 능동적이고 특이적인 역할을 함을 보여주었다.
FGF-R4의 상기 기능은 이전에는 결코 보여지거나 제안되지 않았다. 결론적으로, 상기 수용체는 혈관신생성 기능이상을 보이는 병리를 치료하기 위한 표적으로서 사용될 수 있다. 따라서, 상기 수용체의 활성을 조정할 수 있는 FGF-R4 리간드는 많은 혈관신생-관련 병리에 대한 잠재적인 치료제이다.
따라서, 본 발명은 혈관신생의 조절곤란을 수반하고 그의 억제를 필요로 하는 모든 병리의 치료에 사용될 수 있다. 포함되는 병리는 종양 혈관신생 억제제로서 본 발명에 따른 길항제의 용도과 함께 암, 또는 그에 대해 혈관신생의 조절곤란이 설명되는 병리, 예를 들어 노인성 황반 변성 또는 ARMD, 염증성 질환, 예를 들어 류마티스성 관절염, 골관절염, 결장염, 창자의 궤양 또는 임의의 염증성 질환, 죽상경화증, 또는 달리 비만일 수 있다.
상기 항체의 용도는 또한 종양 성장의 억제에서 설명된다. 따라서, 본 발명에 따른 길항제는 FGF-R4의 조절곤란을 수반한 특정 암, 및 보다 특히, 간암, 결장암, 유방암, 폐암, 전립선암, 췌장암, 피부암 또는 식도암의 치료를 위해 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 길항제의 주요 잇점 중 하나는 당해 FGF-R4의 경우에 FGF 수용체를 특이적으로 표적화하는 것이다. 상기 특이성으로 인해 티로신 키나제 도메인을 억제하는 작은 화학적 분자가 가질 수 있는 이상 반응을 제한하는 것이 가능하다. 추가로, FGF-R4는 도처에서 발현되지 않고 대신에 특히 내피세포, 예를 들어 간세포, 담낭 세포, 유방 세포, 전립선 세포, 난소 세포, 췌장 세포 또는 신장 세포 상에서 발현되므로, 본 발명은 부작용을 제한하는, FGF-R4 활성의 조절곤란에 관련된 질환의 치료 방법을 제공한다.
용어 "길항제"는 FGF-R4의 활성을 감소시키거나 완전히 억제할 수 있는 임의의 리간드를 의미한다. 따라서, 상기 길항제 화합물은 FGF-R4 억제제로서도 언급된다.
상기 길항제는 임의의 다른 FGFR를 제외한, FGF-R4 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 FGF-R4 리간드, 예를 들어 화학물질 분자, 재조합 단백질, 올리고사카라이드, 폴리사카라이드, 올리고뉴클레오티드 또는 항체일 수 있다.
따라서, 본 발명의 대상은 FGF-R4-특이적 길항제이다. 본 발명에 따르면, FGF-R4에 특이적으로 결합하는 길항제는 다른 FGF 수용체, 즉 FGF-R1, FGF-R2 또는 FGF-R3에 결합하지 않는 리간드를 의미한다. 특히, FGF-R4-특이적 항체는 FGF-R1, FGF-R2 또는 FGF-R3과 임의의 교차반응을 보이지 않는 항체이다.
"특이적 결합"은 하나의 수용체에 대한 결합과 다른 수용체에 대한 결합의 강도 사이에, 본 발명의 경우에는 FGF-R4에 대한 결합과 FGF-R1, FGF-R2 또는 FGF-R3에 대한 가능한 결합 사이에 적어도 10의 지수만큼의 차이를 의미한다.
본 발명의 한 실시양태에서, FGF-R4 리간드는 올리고사카라이드 또는 폴리사카라이드이다.
"올리고사카라이드"는 3 내지 10개 단위의 단일 당을 함유하는 임의의 사카라이드 중합체를 의미한다. 천연 올리고사카라이드, 예를 들어 프럭토-올리고사카라이드 (FOS), 및 합성 올리고사카라이드, 예를 들어 헤파린-유사 항혈전제가 존재한다.
용어 "폴리사카라이드"는 글리코시드 연결에 의해 서로에 연결된 10개 초과의 모노사카라이드로 구성된 임의의 중합체를 의미한다. 천연 폴리사카라이드, 예를 들어, 뮤코폴리사카라이드 (mucopolysaccharide), 푸코이드 (fucoid), 카라기난 또는 세균 세포외 폴리사카라이드 (exopolysaccharide)가 존재하고, 합성 폴리사카라이드로 존재한다. 따라서, 저분자량 푸코이단 또는 고도로 황산화된 세포외 폴리사카라이드는 혈관신생-유발 활성을 나타냈다 ([Chabut et al., Mol Pharmacol., 2003, 64:696-702]; [Matou et al., Biochem Pharmacol., 2005, 69:751-9]). 이와 반대로, 헤파린-유래된 약하게 황산화된 올리고사카라이드 또는 포스포만노펜토스 술페이트는 항-혈관신생 특성을 가질 수 있다 ([Parish et al., 1999, 15:3433-41]; [Casu et al., J Med Chem., 2004, 12:838-48]).
본 발명의 한 실시양태에서, FGF-R4 리간드는 항체이다.
용어 "항체"는 임의의 유형의 항체 또는 유래된 분자, 예를 들어 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 의미한다. 모노클로날 항체로부터 유래된 분자에는 인간화 항체, 인간 항체, 다중특이적 항체, 키메라 (chimeric) 항체, 항체 단편, 나노바디 (nanobody) 등이 포함된다.
본 발명의 한 실시양태에서, FGF-R4-특이적 길항제는 폴리클로날 항체이다.
"폴리클로날 항체"는 몇몇 B 림프구 클론으로부터 기원하는 항체들의 혼합물로부터 생산되고 일련의 상이한 에피토프들을 인식하는 항체이다.
한 유리한 실시양태에서, FGF-R4-특이적 길항제는 모노클로날 항체이다.
"모노클로날 항체"는 클로날 방식으로 증폭된, 단일 유형의 B 림프구로부터 유래된 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 얻은 항체이다. 상기 집단을 구성하는 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 이들 항체는 단일 에피토프에 대해 작용하고, 따라서 고도로 특이적이다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원의 부위를 의미한다. 항원이 중합체, 예를 들어 단백질 또는 폴리사카라이드이면, 에피토프는 인접한 또는 비인접한 잔기로 구성될 수 있다.
본 발명의 한 유리한 실시양태에서, 항-FGF-R4 길항제 항체는 FGF-R4 수용체의 D2-D3 도메인에 속하는 에피토프에 결합한다.
훨씬 더 유리한 실시양태에서, 항체는 FGF-R4 수용체의 아미노산 144 내지 365를 포함하는 도메인에 포함되는 에피토프에 결합한다.
훨씬 더 유리한 실시양태에서, 항체는 FGF-R4 수용체의 D2 도메인에 포함되는 에피토프에 결합하고, 상기 에피토프는 서열 70의 서열에 제시된 아미노산 145 내지 242에 대응한다.
면역글로불린으로도 알려진 항체는 디술피드 다리에 의해 연결되는 2개의 동일한 중쇄 ("VH") 및 2개의 동일한 경쇄 ("VL")로 구성된다. 각각의 사슬을 불변 영역 및 가변 영역을 함유한다. 각각의 가변 영역은 항원의 에피토프에 대한 결합을 주로 담당하는 "상보성 결정 영역(CDR)" 또는 "초가변 영역"으로 불리는 3개의 세그먼트를 포함한다.
용어 "VH"는 Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' 또는 F(ab)' 단편의 중쇄를 포함한, 항체의 면역글로불린 중쇄의 가변 영역을 의미한다.
용어 "VL"은 Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' 또는 F(ab)' 단편의 경쇄를 포함한, 항체의 면역글로불린 경쇄의 가변 영역을 의미한다.
용어 "항체 단편"은 상기 항체의 임의의 부분; 즉 Fab (항원 결합 단편), Fv, scFv (단일쇄 Fv), Fc (결정화 가능 단편)를 의미한다. 바람직하게는, 이들 기능성 단편은 유형 Fv, scFv, Fab, F(ab')2, Fab', scFv-Fc 또는 디아바디 (diabody)의 단편일 것이고, 이들은 일반적으로 그들이 유래하는 키메라 또는 인간화, 모노클로날 항체와 동일한 결합 특이성을 갖는다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 항체 단편은 효소, 예를 들어 펩신 또는 파파인을 사용한 소화와 같은 방법, 및/또는 화학적 환원에 의한 디술피드 다리의 절단에 의해 키메라 또는 인간화, 모노클로날 항체로부터 얻을 수 있다.
용어 "CDR 영역 또는 CDR"은 문헌 ([Kabat et al., Sequences of proteins of immunological interest, 5th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, NIH, 1991] 및 후속 개정판)에 규정된 바와 같은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 초가변 영역을 나타내도록 의도된다. 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR이 존재한다. 용어 CDR 또는 CDR들은 본원에서 적절하게, 그가 인식하는 항원 또는 에피토프에 대한 항체의 친화도 결합을 담당하는 대다수의 아미노산 잔기를 함유하는 하나 이상의 상기 영역 또는 심지어 모든 상기 영역을 나타내도록 사용된다. 가변 도메인의 가장 보존된 영역은 FR ("프레임워크") 영역 또는 서열로 불린다.
본 발명의 또다른 실시양태에서, FGF-R4-특이적 길항제는 키메라 항체이다.
용어 "키메라 항체"는 가변 영역이 상이한 종의 불변 영역에 연결되거나, 다른 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하도록 불변 영역 또는 그의 일부가 변경되거나 교체되거나 교환되는 항체를 의미한다.
용어 "키메라 항체"는 또한 불변 영역이 상이한 종의 가변 영역에 연결되거나, 다른 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하도록 가변 영역 또는 그의 일부가 변경되거나 교체되거나 교환되는 항체를 의미한다.
키메라 항체의 생산 방법은 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 문헌 [Morrison, 1985, Science, 229:1202]; [Oi et al., 1986, Bio Techniques, 4:214]; [Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods , 125:191-202]; 미국 특허 5,807,715; 4,816,567; 및 4,816,397을 참조한다.
이들 키메라 버전의 항체는 키메라 모노클로날 항체를 생성시키기 위해서 인간 기원의 C카파 및 CH (IgG1) 불변 도메인에 대한 VL 및 VH 가변 영역의 융합을 포함할 수 있다.
또한, CH (IgG1) 도메인은 FcγIIIa 수용체에 대한 Fc 단편의 친화도를 증가시켜 항체의 효과기 기능을 증가시키기 위해서 점 돌연변이에 의해 변형될 수 있다 ([Lazar et al., 2006, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 103: 4005-4010]; [Stavenhagen et al., 2007, Cancer Res. 67: 8882-8890]).
본 발명은 항체의 인간화 버전을 포함한다.
용어 "인간화 항체"는 주로 인간 면역글로불린 서열을 포함하는 항체를 의미한다. 상기 용어는 일반적으로 인간 서열 또는 인간 서열에서 발견되는 잔기의 통합에 의해 변형된 비-인간 면역글로불린을 의미한다.
일반적으로, 인간화 항체는 CDR 영역의 전부 또는 일부가 비-인간 모 서열로부터 유래된 부분에 대응하고 FR 영역의 전부 또는 일부가 인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는, 하나 또는 일반적으로 2개의 가변 도메인을 포함한다. 이어서, 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 하나의 일부, 특히 선택된 인간 면역글로불린 주형의 것을 포함할 수 있다.
따라서, 목표는 인간에 최소 면역원성인 항체를 갖는 것이다. 따라서, 하나 이상의 CDR 내의 1 또는 2개의 아미노산이 FGF-R4에 대한 항체의 특이적 결합 기능을 실질적으로 감소시키지 않으면서 인간 숙주에 덜 면역원성인 것으로 변형될 수 있음이 가능하다. 유사하게, 프레임워크 영역의 잔기는 인간의 것이 아닐 수 있고, 이들은 항체의 면역원성 가능성에 기여하지 않으므로 변형되지 않는 것이 가능하다.
인간에 덜 면역원성인 항체를 제공하도록 비-인간 모 항체를 변형시키기 위한 당업자에게 공지된 몇몇 인간화 방법이 존재한다. 인간 항체와의 전체 서열 동일성은 반드시 요구되지는 않는다. 이것은 전체 서열 동일성이 반드시 감소된 면역원성의 예측 표지자 (predictive indicator)는 아니기 때문이고, 제한된 수의 잔기의 변형은 인간에 대한 면역원성 가능성이 크게 감소된 인간화 항체를 생성할 수 있다 (Molecular Immunology (2007) 44, 1986-1998).
다양한 방법은 예를 들어, CDR 그래프팅 (grafting) (EPO 0 239 400; WO 91/09967; 및 미국 특허 5,530,101 및 5,585,089), 재표면화 (resurfacing) (EPO　0　592　106; EPO　0　519　596; [Padlan, 1991, Molec Imm 28(4/5):489-498]; [Studnicka et al., 1994, Prot Eng 7(6):805-814]; 및 [Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973]) 또는 사슬 셔플링 (shuffling) (미국 특허 5,565,332)이다.
본 발명은 특히 그의 가변 부분이 다음 기술에 따라 변형된 인간화 항체에 관한 것이다:
항-FGF-R4 쥐 항체 40-12의 대응하는 사슬에 가장 유사한 경쇄 및 중쇄는 단백질 데이타 뱅크 (Protein Data Bank)와의 비교에 의해 확인된다 (H.M. Berman, J. Westbrook, Z. Feng, G. Gilliland, T.N. Bhat, H. Weissig, I.N. Shindyalov, P.E. Bourne. Nucleic Acids Research, 2000, 28:235-242). 서열 정렬에는 BLAST 알고리즘을 이용한다 (J Mol Biol. 1990 Oct 215:403-410). 이들은 가변 도메인 경쇄 및 중쇄의 상동성 모델을 구축하기 위해 각각 사용된 PDB 코드 1NDM & 1ETZ에 대응하는 3차원 구조이다. 이들 3차원 모델은 후속적으로 MOE 소프트웨어 (몰레큘라 오퍼레이팅 인바이런먼트 (Molecular Operating Environment), 케미칼 컴퓨팅 그룹 (Chemical Computing Group, 캐나다 퀘벡))에서 실행되는 표준 절차를 이용하여 에너지가 최소화된다. 이어서, 항체의 상기 최소화된 3차원 모델의 분자 동역학 (MD) 시뮬레이션을 Amber 소프트웨어를 이용하여 수행한다 (D.A. Case, T.E. Cheatham, III, T. Darden, H. Gohlke, R. Luo, K.M. Merz, Jr., A. Onufriev, C. Simmerling, B. Wang and R. Woods. J. Computat. Chem. 2005, 26:1668-1688). 상기 시뮬레이션은 일반화 보른 (Born) 함축 (implicit) 용매 내에서 500　K의 온도에서 1.1 나노초 동안 단백질 백본 (backbone) 원자에 적용된 조화적 제약 (harmonic constraint)을 이용하여 이루어진다 (Gallicchio & Levy, J Comput Chem 2004, 25:479-499). 마지막 나노초의 시뮬레이션 동안 100 피코초당 1개의 3차원 입체형태씩 10개의 다양한 입체형태를 상기 제1 시뮬레이션으로부터 추출한다. 이어서, 상기 10개의 다양한 입체형태를 각각 일반화 보른 함축 용매 내에서 27℃의 온도에서 2.3 나노초 동안 단백질 백본에 대한 제약 없이 분자 동역학 시뮬레이션으로 처리한다. 수소 원자를 포함한 결합은 SHAKE 알고리즘을 이용하여 제약되고 (Barth. et al., J Comp Chem, 1995, 16:1192-1209), 타임 스텝 (time step)은 1 펨토초 (femtosecond)이고, 시뮬레이션은 일정 부피 및 27℃의 일정 온도에서 랑제방 (Langevin) 방정식을 기초로 하여 실행하였다. 각각의 10회의 분자 동역학 시뮬레이션에 대해, 피코초당 1의 빈도로 추출된 마지막 2000 입체형태를 사용하여 인간화되는 각각의 아미노산에 대해 아미노산의 평균 또는 메도이드 (medoid) 입체형태에 대한 원자 위치의 편차를 정량한다. MOE 소프트웨어의 사이언티픽 벡터 랭귀지 (Scientific Vector Language) (SVL)은 아래 설명된 모든 분석을 코드화하기 위해 사용된다. 아미노산의 메도이드 입체형태는 아미노산의 모든 입체형태의 원자의 위치로부터 계산된 평균 입체형태에 가장 가까운 분자 동역학으로부터 유도된 입체형태이다. 메도이드 입체형태를 검출하기 위해 사용된 거리는 아미노산의 2개의 입체형태의 원자 사이의 스칼라 (scalar) 거리의 제곱 평균 평방근 (RMSD)이다. 이와 유사하게, 메도이드 입체형태와 비교할 때 아미노산의 한 입체형태의 원자 위치의 편차는 시뮬레이션의 한 입체형태의 아미노산의 원자와 메도이드 입체형태의 동일한 원자 사이의 스칼라 거리의 RMSD를 계산함으로써 정량된다. 후속적으로, 모든 10회의 분자 동역학 시뮬레이션 (Fi)에 대해 평균을 구한, 제시된 아미노산의 원자의 위치의 RMSD (i)를, 모든 10회의 분자 동역학 시뮬레이션에 대해 평균을 구한, 항체의 모든 아미노산의 위치의 RMSD (Fm)와 비교함으로써, 아미노산이 잠재적으로 T-세포 수용체와 상호작용하고 면역계의 활성화를 촉발할 수 있다고 간주할 정도로 충분히 가요성인지가 결정된다. 아미노산 i는 Zi=(Fi-Fm)/Fm으로 규정된 그의 가요성 스코어 Zi가 0.15 이상이면 가요성으로 간주된다. 이와 같은 방식으로, 45개의 아미노산이 항체의 가변 도메인에서 가요성인 것으로 확인되고, 항원 상보성 결정 영역 (CDR) 및 그의 바로 인접한 부위는 제외된다. CDR의 바로 인접한 부위는 알파 탄소가 CDR의 알파 탄소에 5 옹스트롬 (Å) 이하의 거리에 존재하는 임의의 아미노산으로 규정된다.
이어서, 20　나노초 (10x2ns)의 시뮬레이션 동안 항체의 60개의 가장 가요성인 아미노산을 인간 항체 생식 계열 (germ line)의 49개의 상동성 모델의 대응하는 아미노산의 이동과 비교하였고, 그 각각에 대해 10회의 분자 동역학 시뮬레이션 (10x2 ns)은 동일한 프로토콜을 이용하여 실행되었다. 60개의 가장 가요성인 아미노산은 항원 상보성 결정 영역 (CDR) 및 그의 바로 인접 부위를 제외한다. 49개의 인간 항체 생식계열 모델은 7개의　최빈도 (most frequent) 인간 경쇄 (vk1, vk2, vk3, vk4, v람다1, v람다2, v람다3) 및 7개의 최빈도 인간 중쇄 (vh1a, vh1b, vh2, vh3, vh4, vh5, vh6)를 체계적으로 조합함으로써 구축되었다 (Nucleic Acids Research, 2005, Vol. 33, Database issue D593-D597).
인간화되는 항체의 49개의 인간 생식계열 모델에 대한 유사성은 해상도가 1Å인 특유한 3차원 입방형 그리드 (cubic grid)에 의해 10회의 분자 동역학 시뮬레이션 과정에 걸쳐서 항체의 60개의 가요성 아미노산의 특정 원자의 위치를 샘플링함으로써 정량된다. 이것은 4차원 (quadridimensional) 유사성으로 언급된다. 사용되는 3차원 그리드는 445740개의 점으로 이루어지고, PDB 코드 8FAB에 대응하는 인간 항체의 3차원 구조를 사용하여 초기화된다. 또한, 8FAB 구조는 3차원 그리드에서 샘플링되는 항체의 모든 입체형태의 위치를 정하기 위해 사용된다. 이를 위해, 항체의 분자 동역학의 메도이드 입체형태는 8FAB 구조 상에 중첩된다. 상기 중첩은 두 입체형태의 관성 모멘트의 정렬 및 두 입체형태의 알파 탄소 원자 사이의 스칼라 거리의 최적화로 구성된다. 항체의 분자 동역학의 모든 나머지 입체형태는 동일한 방법을 사용하여 메도이드 입체형태 상에 중첩된다.
비교되는 한 쌍의 항체에 대해 두 유형의 샘플링을 수행하고, 2가지의 유사성 (정전기 (electrostatic) 유사성 및 친지성 유사성)을 얻었다. 이어서, 상기 2가지 유사성을 총 유사성을 얻기 위해 더한다. 제1 샘플링, 즉 정전기 샘플링은 아미노산 측쇄의 모든 원자를 고려한다. 그리드의 한 지점 x에서의 값은 아미노산 측쇄의 원자에 문헌 [Amber99 force field (Cieplak, J., et al., J. Comp. Chem. 2001, 22:1048-1057)]에서 설명된 원자 부분 전하로 가중치가 부여된 3차원 가우스 (Gaussian) 함수 f(x)를 적용함으로써 얻는다. f(x) 함수는 3개의 데카르트 좌표축 상에 적용되고, 다음 식에 대응한다:
Figure pct00001
여기서, x 및 u는 각각 그리드 지점 x 및 샘플링된 원자의 데카르트 좌표이고, s는 r/1.6 (r = 원자의 공유 반경)이다. 샘플링은 아미노산의 모든 입체형태에 대해 반복하고, 얻은 결과를 3차원 그리드의 모든 지점 x에서 평균한다. 제2 샘플링, 즉 친지성 샘플링은 아미노산 측쇄의 친지성 원자만을 고려한다. 그리드의 한 지점 x에서의 값은 가중치를 부여하지 않으면서 동일한 가우스 함수 f(x)를 사용하여 계산한다. 그 결과, 비교되는 두 항체의 분자 동역학 시뮬레이션으로부터의 두 입체형태 전체가 동일한 3차원 그리드에 의해 샘플링된다. 항체 a와 항체 b 사이의 정전기 유사성 (sim-elec)은 다음 식에 의해 계산된다:
Figure pct00002
친지성 유사성은 상기 설명된 친지성 샘플링에 의해 생성된 데이타에 적용된 바와 동일한 식에 의해 계산된다.
인간 생식계열 모델 v람다2-vh2는 쥐 항체 40-12의 가요성 아미노산에 대한 상기 60개의 가요성 아미노산의 가장 높은 4차원 유사성 (총 유사성 = 58%)을 보인다. 따라서, 45개의 가요성 아미노산에 촛점을 맞추면서 인간화되는 항체를 인간화하기 위해 인간 생식계열 모델 v람다2-vh2를 사용하였다. 형성되는 돌연변이를 결정하기 위해서, 쥐 항체 40-12의 모델의 3차원 구조를 가장 높은 유사성을 보이는 생식계열로부터 유도된 모델의 것과 중첩시키고, 이때 아미노산의 알파 탄소의 위치는 최적화된다. 가요성으로 확인된 아미노산은 가장 높은 유사성을 보이는 모델의 서열 내의 대응하는 아미노산으로 돌연변이된다.
고려되는 원치 않는 서열 모티프는 다음과 같다: 아스파르테이트-프롤린 (산성 매질에서 불안정성인 펩티드 결합), 아스파라긴-X-세린/트레오닌 (글리코실화 부위, X = 프롤린을 제외한 임의의 아미노산), 아스파르테이트-글라이신/세린/트레오닌 (가요성 대역 내의 숙신이미드/이소아스파르테이트의 잠재적인 형성), 아스파라긴-글라이신/히스티딘/세린/알라닌/시스테인 (노출된 탈아미드화 부위), 메티오닌 (노출된 대역 내의 산화). 이와 같이 얻은 인간화된 서열은 서열이 B 및 T 림프구에 의해 이식되는 것으로 알려진 임의의 에피토프를 포함하지 않음을 확실하게 하기 위해, 마지막으로 BLAST 서열 비교 알고리즘에 의해 IEDB 데이타베이스 (http://www.immuneepitope.org/The immune epitope database and analysis resource: from vision to blueprint. PLoS Biol. 2005 Mar;3(3):e91)의 서열과 비교된다. 서열이 원치 않는 서열을 갖는 잔기를 함유할 경우, 서열이 또한 변형된다. 복합 서열이 IEDB에 나열된 공지의 에피토프를 포함할 경우, 높은 유사성을 보이는 또다른 생식계열 구조 주형이 모델로 사용된다.
보다 유리하게는, 본 발명에 따른 항체는 서열 34의 서열, 서열 36의 서열 또는 서열 38의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 서열과 조합되어 사용되는, 서열 30의 서열 또는 서열 32의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체는 서열 30의 서열의 가변 경쇄 및 서열 34의 서열의 가변 중쇄를 포함한다.
또다른 실시양태에서, 항체는 서열 32의 서열의 가변 경쇄 및 서열 38의 서열의 가변 중쇄를 포함한다.
또다른 실시양태에서, 항체는 서열 30의 서열의 가변 경쇄 및 서열 36의 서열의 가변 중쇄를 포함한다.
또다른 실시양태에서, 항체는 서열 32의 서열의 가변 경쇄 및 서열 34의 서열의 가변 중쇄를 포함한다.
또다른 실시양태에서, 항체는 서열 32의 서열의 가변 경쇄 및 서열 36의 서열의 가변 중쇄를 포함한다.
또다른 실시양태에서, 항체는 서열 30의 서열의 가변 경쇄 및 서열 38의 서열의 가변 중쇄를 포함한다.
또한, 본 발명의 대상은 FGF-R4-특이적 인간 길항제 항체이다. 상기 항체는 당업자에게 공지된 방법에 따라 파지 디스플레이에 의해 얻을 수 있다 ([McCafferty J. et al., 1990]; [Hoogenboom, HR et al., 2005]). 다른 기술, 예를 들어 US 특허 5,939,598에 기재된 XenoMouse 기술이 인간 항체의 제조를 위해 이용가능하다.
하나의 특정 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 그의 중쇄 가변 영역이 서열 76, 86, 96 또는 106의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 인간 항체이다.
또다른 실시양태에서, FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체는 그의 경쇄 가변 영역이 서열 71, 81, 91 또는 101의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 인간 항체이다
또한, 본 발명의 대상은 서열 77, 87, 97 또는 107의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 72, 82, 92 또는 102의 서열과 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 71 및 76의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 81 및 86의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 91 및 96의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 101 및 106의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 서열을 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체이다.
또한, 본 발명의 대상은 서열 72 및 77의 폴리펩티드 서열 또는 서열 82 및 87의 폴리펩티드 서열 또는 서열 92 및 97의 폴리펩티드 서열 또는 서열 102 및 107의 폴리펩티드 서열을 포함하는 FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체이다.
특히 바람직하게는, FGF-R4 수용체-특이적 인간 길항제 항체는 서열 82 및 87의 폴리펩티드 서열을 포함한다.
또한, 이와 같이 변형된 아미노산 서열은 포유동물 세포 내에서 생산되는 동안 번역 후 변형에 의해 변형될 수 있다. 특히, 푸코스 생합성이 결여된 안정한 세포주를 사용함으로써 Fc의 N-글리칸 (위치 N297)에 푸코스가 부분적으로 또는 완전히 결여된 모노클로날 항체를 생산할 수 있고, ADCC 효과기 효과를 증가시킬 수 있다 ([Kanda et al., 2006, Biotechnol . Bioeng . 94:680-688] 및 [Ripka et al., 1986 Arch Biochem Bioph　249: 533-545]).
본 발명의 또다른 실시양태에서, FGF-R4-특이적 길항제는 접합된 항체이다.
항체는 세포독성제에 접합될 수 있다. 용어 "세포독성제"는 본원에서 세포의 기능 또는 성장을 감소시키거나 차단하거나, 또는 세포를 파괴하는 물질을 나타낸다.
한 실시양태에서, 항체 또는 그의 결합 단편은 항원을 발현하는 세포에 대한 세포독성을 갖는 "전구약물"을 형성하기 위해 약물, 예를 들어 메이탄시노이드에 접합될 수 있다.
본 발명의 세포독성제는 다양한 방식으로 세포의 사멸을 야기하거나, 세포의 사멸을 유도하거나, 또는 세포 생활력을 감소시키는 임의의 화합물일 수 있다. 바람직한 세포독성제는 예를 들어 상기 규정된 메이탄시노이드 및 메이탄시노이드 유사체, 탁소이드 (taxoid), CC-1065 및 CC-1065 유사체, 돌라스타틴 및 돌라스타틴 유사체를 포함한다. 이들 세포독성제는 본원에서 설명되는 항체, 항체 단편, 기능성 균등물, 개선된 항체 및 그의 유사체에 접합된다.
접합된 항체는 시험관 내 방법에 의해 제조될 수 있다. 링커기가 약물 또는 전구약물을 항체에 연결하기 위해 사용된다. 적합한 링커기는 당업자에게 알려져 있고, 특히, 디술피드기, 티오에테르기, 불안정성 산성기, 광불안정성 기, 불안정성 펩티다제기 및 불안정성 에스테라제기를 포함한다. 바람직한 링커기는 디술피드기 및 티오에테르기이다. 예를 들어, 접합체는 디술피드 교환 반응을 사용하여 또는 항체와 약물 또는 전구약물 사이에 티오에테르 다리를 형성함으로써 제조할 수 있다.
또한, 메토트렉세이트, 다우노루비신, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 칼리케아미신, 튜불리신 및 튜불리신 유사체, 듀오카르마이신 및 듀오카르마이신 유사체, 돌라스타틴 및 돌라스타틴 유사체와 같은 화합물도 본 발명의 접합체 제조에 적합하다. 또한, 분자는 중간체 분자, 예를 들어 혈청 알부민을 통해 항체 분자에 연결될 수 있다. 예를 들어, 특허 출원 US 09/740991에 기재된 독소루비신 및 독소루비신 화합물도 유용한 세포독성제일 수 있다.
본 발명의 대상인 항체는 세포독성 분자 또는 화합물과 조합될 수 있다. 또한, 항체는 다른 혈관신생 경로에 대해 작용하는 항-혈관신생 화합물과 조합될 수 있다.
표현 "FGF-R4를 발현하는 세포"는 FGF-R4 수용체를 그의 천연 형태로 또는 돌연변이된 형태로 발현하는 임의의 진핵 세포, 특히 포유동물 세포, 특히 인간 세포를 의미한다. 또한, FGF-R4는 그의 전체 형태 또는 예를 들어 FGR-R4의 세포외 도메인, 특히 D2-D3 도메인을 포함하는 말단절단된 형태일 수 있다. 또한, FGF-R4는 키메라 형태로 재조합될 수 있다.
본 발명의 화합물은 국소, 경구, 비경구, 비내, 정맥내, 근내, 피하, 안내 등의 투여를 위해 제약 조성물 내에 제형화될 수 있다. 바람직하게는, 제약 조성물은 주사가능 제형을 위한 제약상 허용되는 담체를 함유한다. 이들은 특히 멸균, 등장성 염수 용액 (인산일나트륨, 인산이나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 또는 염화마그네슘 등, 또는 상기 염의 혼합물), 또는 적절한 경우 멸균된 물 또는 생리학적 염수의 첨가에 의해 주사가능 용질을 형성할 수 있는, 건조, 특히 동결건조된 조성물일 수 있다.
표적 병리는 종양 또는 비-종양 관계없이 혈관신생에 관련된 모든 질환일 수 있다.
표적 병리는 암 (종양 혈관신생의 억제제로서 본 발명을 사용함), 특히 간암, 결장암, 유방암, 폐암, 전립선암, 췌장암 또는 피부암, 또는 그에 대해 혈관신생의 조절곤란이 설명되는 다른 병리, 예를 들어 노인성 황반 변성 또는 ARMD, 염증성 질환, 예를 들어 류마티스성 관절염, 골관절염, 결장염, 창자의 궤양 또는 임의의 염증성 질환, 죽상경화증 또는 비만의 치료일 수 있다.
또한, 항-FGF-R4 항체는 종양 성장에 대해 직접 작용하는 억제제로서 암, 특히 간암종 및 다른 간암, 및 췌장암 치료에 사용될 수 있다.
본 발명은 아래의 실시예에 의해 예시되지만, 그에 의해 제한되지는 않는다.
도 1a 및 1b: 시험관 내에서 (도 1a), HUVEC 유형의 인간 내피세포는 혈관신생으로 공지된, 슈도튜뷸 (pseudotubule)의 네트워크 (network)를 형성할 수 있다. 상기 네트워크는 1 ng/ml의 FGF2의 첨가에 의해 자극된다. 상기 유도는 또한 FGF-R4에 특이적인 리간드인 10 ng/ml의 FGF19를 첨가함으로써 얻을 수 있는 반면에, 10　ng/ml의 FGF4 (FGF-R4를 활성화시키지 않는 리간드)는 혈관신생을 자극할 수 없다. 동일한 방식으로, 마우스의 등 상의 스폰지 임플란트 (implant)에서의 혈관신생 유도의 쥐 모델에서 생체 내에서 (도 1b), FGF2는 대조군에 비해 상기 스폰지의 헤모글로빈 함량의 증가를 특징으로 하는, 스폰지에 대한 기능성 신생혈관의 동원을 유도할 수 있다. 또한, FGF19도 스폰지에서 상기 혈관신생을 유도할 수 있다.
도 2a: hFGFR4-Histag (서열 40)의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4614의 지도.
도 2b: hFGFR4-Streptag (서열 69)의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4613의 지도.
도 3: hFGFR4(D2,D3)-Histag (서열 42)의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4615의 지도.
도 4: mFGFR4-Histag (서열 44)의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4621의 지도.
도 5: hFGFR1-Fc (서열 46의 서열의)의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4328의 지도.
도 6: hFGFR2-Fc (서열 48의 서열의)의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4327의 지도.
도 7: ELISA 플레이트는 4개의 인간 FGF 수용체로 코팅된다. 이들 다양한 FGF-R을 인식하는 항-FGFR4 항체 40-12 및 64-12의 능력은 ELISA 분석에 의해 측정된다. 클론 40-12 (검정 막대그래프)는 FGF-R4에 특이적이다. 클론 64-12 (회색 막대그래프)는 추가로 FGF-R3을 매우 약하게 인식한다.
도 8a 및 8b: 활성 길항제 항체 40-12 및 그의 불활성 대조군 64-12는 기저 혈관신생에 대한 효과를 갖지 않는다. 다른 한편으로, 30　㎍/ml (약 200 nM)의 용량에서, 항-FGFR4 모노클로날 항체 40-12는 HUVEC 세포의 FGF2-유도된 혈관신생을 억제할 수 있는 반면에, 대조군 항체 64-12는 억제할 수 없다 (도 8a).
AlexaFluor® 488 nm로 표지된 FGF2는 300-19 세포에 의해 발현되는 FGF-R4에 결합할 수 있다 (백색 막대그래프). 상기 상호작용은 비표지된 FGF2 (검정 막대그래프)에 의해 또는 항-FGFR4 항체 40-12 (짙은 회색 막대그래프)에 의해 해리될 수 있는 반면에, 대조군 항체 64-12는 그럴 수 없다 (옅은 회색 막대그래프) (도 8b).
도 8c 및 8d: 3 ng/ml의 FGF-2에 의해 유도되는 시험관 내 혈관신생에 대한 10 ㎍/ml의 클론 8, 31, 33 및 36으로부터 유래된 항-FGFR4 항체의 효과. 클론 8 (도 8c) 및 31, 33 및 36 (도 8d)은 HUVEC 세포의 FGF-2-유도된 혈관신생을 억제한다.
도 9a 및 9b: Hep3b 인간 간암종 세포는 30 ng/ml의 FGF19로 자극된다. 상기 자극은 FGF-R4-특이적 세포 신호전달을 유도하여, 웨스턴 블로팅 (Western blotting)에 의해 관찰되는 cFos 및 JunB 단백질의 합성 및 Erk1/2의 인산화를 야기한다 (도 9a). 이어서, 각각의 밴드를 정량한다. 상기 정량을 막대그래프 형태로 제시한다 (도 9b). 100 ㎍/ml의 항체 40-12는 FGF-R4-특이적 세포 신호전달의 유도를 완전히 억제하는 반면, 대조군 항체는 효과가 없다. 구체적으로, 항체 40-12는 3　h의 자극 후에 FGF19에 의해 유도되는 JunB 및 cFos의 합성 및 Erk1/2의 인산화를 완전히 차단한다.
도 9c: FGF-19 (30 ng/ml)에 의해 Hep3b 세포에서 유도되는 Erk1/2의 인산화에 대한 항-FGFR4 항체 40-12의 억제 효과는 항-포스포ERk1/2 ELISA에 의해 확인한다. 항체 40-12는 또한 FGF-2 (1 ng/ml) 또는 혈청 (FCS)으로 10%에서 자극된 Hep3b 세포에서 Erk1/2의 인산화를 억제할 수 있다.
도 9d: 클론 8, 31, 33 및 36으로부터 유래된 항체를 사용하여 Hep3b 세포에 대해 ELISA에 의해 얻은, FGF-19 (30　ng/ml)에 의해 유도된 Erk1/2 인산화의 억제 비율.
도 10a 및 10b: Hep3b 세포의 증식은 혈청 (도 10a) 또는 FGF19 (도 10b)를 첨가함으로써 자극할 수 있다. 혈청을 사용한 유도는 100 ㎍/ml의 항체 40-12에 의해 부분적으로 억제되는 반면, 대조군 항체는 효과를 갖지 않는다 (도 10a). FGF19에 의해 유도된 증식은 10 ㎍/ml의 항-FGFR4 항체 40-12로 완전히 차단되고, 동일한 용량에서, 대조군 항체는 그렇게 할 수 없다 (도 10b).
도 11a 내지 11d: 항-FGFR4 항체 40-12는 종양 혈관신생을 억제함으로써 RipTag 쥐 모델에서 췌장 종양의 발달을 감소시킬 수 있다: Rip1-Tag2 모델은 트랜스제닉 (transgenic) 마우스가 췌장 섬세포 (islet)의 인슐린-생산 β 세포에서 SV40 T 항원을 발현하는 쥐 모델이다 (Hanahan D. Nature, 1985, 9-15:115-22). 상기 T 항원은 명백한 효과를 보이지 않으면서 4 내지 5주 이하의 췌장의 배 발생 동안 발현된다. 이어서, T 항원을 발현하는 일부 췌장 섬세포는 다음 5주 동안 혈관계의 활성화와 연관된 혈관신생 섬세포의 형성의 형성으로 진행되고, 이어서 선종 유형의 작은 종양의 발달로 진행된다. 수 주 후에, 일부 선종이 발달하여 침습성 암종을 형성한다 (도 11a).
상기 Rip1-Tag2 마우스를 25 mg/kg의 용량의 항체 40-12 또는 대조군 항체로 10주차 내지 13주차 사이에 매주 1회 피하 처리한다. 13주 후에, 마우스를 희생시킨다. 종양 부피 및 췌장당 종양의 수 및 혈관 밀도를 결정한다. 항-FGFR4 항체 40-12로 처리하면 종양 부피를 유의하게 55% 감소시킬 수 있는 반면에, 대조군 항체는 효과를 보이지 않았다 (도 11b). 또한, 항체 40-12는 대조군에 비해 췌장당 종양의 수를 34% 감소시킬 수 있다 (도 11c). 이러한 종양 부피의 감소에는 작은, 중간 또는 큰 혈관의 수의 측면에서 혈관 밀도의 감소가 수반된다 (도 11d).
도 12: 인간 또는 쥐 FGF-R4의 완전 세포외 도메인 및 또한 그의 D1 도메인이 결실된 FGF-R4의 세포외 도메인을 인식하는 항체 40-12 및 64-12의 능력은 ELISA로 측정된다. 클론 40-12는 3개의 FGF-R4 구성체에 동등하게 결합할 수 있는 반면에, 클론 64-12는 FGF-R4의 쥐 형태를 보다 작은 정도로 인식한다.
도 13a 내지 13c: FGF2/FGF-R4 결합에 대한 항-FGFR4 항체 클론 40-12의 길항 효과는 AlexaFluor® 488 nm로 표지된 FGF2를 사용한 경쟁 결합 실험에 의해 측정된다. 클론 40-12는 FGF-R4 수용체의 인간, 쥐 또는 래트 형태를 코딩하는 cDNA로 형질감염된 쥐 300-19 세포에 대한 인간 (도 13a), 쥐 (도 13b) 및 래트 (도 13c) FGF2의 결합을 동일한 유효성 (각각 인간, 쥐 또는 래트 복합체에 대해 3500, 4110 및 3940 ng/ml, 즉 23, 27 및 26 nM)으로 차단할 수 있다.
도 14a: hFGFR4 D1:Fc의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4794의 지도.
도 14b: 플라스미드 pXL4794로 형질감염된 HEK293 세포주에서 분비된 hFGFR4 D1:Fc 단백질의 아미노산 서열.
도 15a: hFGFR4 D2:Fc의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4796의 지도.
도 15b: 플라스미드 pXL4796으로 형질감염된 HEK293 세포주에서 분비된 hFGFR4 D2:Fc 단백질의 아미노산 서열.
도 16a: hFGFR4 D3:Fc의 발현이 가능한 플라스미드 pXL4799의 지도.
도 16b: 플라스미드 pXL4799로 형질감염된 HEK293 세포주에서 분비된 hFGFR4 D3:Fc 단백질의 아미노산 서열.
실시예 :
실시예 1: 혈관신생의 제어에서 FGF - R4 의 역할 입증
혈관신생의 제어에서 FGF-R4의 역할을 입증하기 위해, 몇몇 FGF, 즉 FGF2 (대부분의 FGF 수용체를 활성화시키는 리간드); FGF19 (FGF-R4를 특이적으로 활성화시키는 리간드); 및 FGF4 (FGF-R4를 활성화시키지 않는 리간드)로 자극시킨 HUVEC 유형의 인간 내피세포를 사용하여 시험관 내 혈관신생 실험을 수행하였다.
이를 실행하기 위해, 챔버슬라이드 (chamberslide) (바이오코트 셀웨어 (Biocoat Cellware) 콜라겐, 타입 I, 8-웰 배양 슬라이드: 벡톤 디킨슨 (Becton dickinson) 354630)의 각각의 웰 내로, 콜라겐 (래트 꼬리 콜라겐, 타입 I: 벡톤 디킨슨 354236) 내에 1/6로 희석시킨 160　㎕의 마트리겔 (matrigel) (성장 인자 감소형 마트리겔: 벡톤 디킨슨 356230)을 분포시킴으로써 겔을 제조하였다. 중합반응하도록 허용하기 위해 겔을 37℃에서 1시간 동안 유지하였다. 이어서, 인간 정맥 내피세포 (HUVEC ref: C-12200 - 프로모셀 (Promocell))를 15x103　세포/웰로 400 ㎕의 EBM 배지 (클로네틱스 (Clonetics) C3121) + 2% FBS + 10　㎍/ml의 hEGF 내에 접종하였다. 상기 프로토콜은 96-웰 플레이트에 적용될 수 있다: 96-웰 플레이트 (바이오코트 콜라겐I 셀웨어, 벡톤 디킨슨 354407)의 웰 당 60 ㎕. 매트릭스는 1/3의 마트리겔, 1 mg/ml 최종 농도의 콜라겐, NaOH (0.026x 콜라겐의 부피 (㎕)), 1x PBS를 혼합하고, 이후 부피를 물로 조정함으로써 제조하였다. 내피세포를 1　ng/ml의 FGF2 (알앤디 (R&D), 133-FB-025) 또는 10 ng/ml의 FGF4 (알앤디, 235-F4-025) 또는 FGF19 (알앤디, 969-FG-025)로 24 h 동안 37℃에서 5% CO2의 존재 하에 자극하였다. 24시간 후에, 형성된 미세소관의 네트워크의 길이를 컴퓨터-보조 영상 분석 시스템 (이매지니아 바이오콤 (Imagenia Biocom, 프랑스 코르타뵈))을 이용하여 측정하고, 각각의 웰 내의 슈도튜뷸의 총 길이를 결정하였다. 6개의 복제물의 평균에 상응하는 각각의 조건에 대한 미세모세관 네트워크의 총 길이의 평균을 ㎛ 단위로 계산하였다.
FGF2 또는 FGF19를 사용한 자극은 새로운 세관 형성을 유도할 수 있는 반면, FGF4는 효과가 없었다 (도 1a). 이들 결과는 FGF-R4의 특이적 활성화가 신생혈관 형성을 유도할 수 있고, 따라서 FGF-R4는 시험관 내에서 혈관신생을 제어한다고 결론지을 수 있음을 보여준다.
마우스에서 셀룰로스 임플란트 내에서 생체 내에서의 혈관신생 유도 모델을 이용하여 시험관 내 데이타와 생체 내 상관관계를 얻었다. 상기 모델은 문헌 [Andrade et al., Microvascular Research , 1997, 54, 253-61]에 기재된 모델의 적응물이다.
동물, 즉, 동종교배시킨 백색 BALB/c J 마우스를 복강내 제공된 자일라진 (롬푼 (Rompun®, 10 mg/kg)/케타민 (이말겐 (Imalgene) 1000, 100 mg/kg) 혼합물로 마취시켰다. 동물의 등을 면도하고, 헥소메딘 (Hexomedine)®으로 소독하였다. 5 ml의 멸균 공기를 주사하여 마우스 등에 피하에 공기 포켓을 생성시켰다. 시험할 제품 또는 단백질을 함유하는 멸균 용액 50 ㎕을 함침시킨 멸균 셀룰로스 임플란트 (직경 1 cm, 두께 2 mm의 디스크 (disc), 셀스폰 (Cellspon)® ref 0501)를 도입하기 위해 동물의 상부 등에 약 2 cm의 절개를 만들었다. 이어서, 절개를 봉합하고, 헥소메딘®으로 소독하였다. 임플란트 이식 후 수일 동안, 마우스는 기체 마취 (5% 이소플루란 (에어레인 (Aerrane)®, 박스터 (Baxter)) 하에 피부를 통한 주사에 의해 임플란트 내에서 단백질 또는 제품을 투여받았다 (50　㎕/임플란트/일).
스폰지 이식 7일 후에, 복강내 투여한 치사 용량의 나트륨 펜토바르비탈 (세바 상트 아니말 (CEVA sante animale))에 의해 마우스를 희생시켰다. 이어서, 피부 및 스폰지를 자유롭게 하기 위해 피부를 흉터를 피해 스폰지 둘레 약 1 cm에서 절단하였다. 이어서, 스폰지를 몇몇 조각으로 절단하고, 1 ml의 용해 버퍼 (세포 사멸 검출 ELISA, 로슈 (Roche))를 담은 리볼라이저 (Ribolyser)® 튜브에 넣었다. 튜브를 20　sec 동안 포스 (force) 4로 세포 균질화기 (FastPrep® FP 120) 내에서 4회 연속으로 진탕시켰다. 이어서, 튜브를 10 min 동안 2000 g에서 20℃에서 원심분리하고, 헤모글로빈 분석에 대기하는 동안 상등액을 -20℃에서 동결시켰다.
분석일에, 튜브를 해동시킨 후 다시 원심분리하고, 헤모글로빈 농도는 표준 범위의 소 헤모글로빈 (시그마 (Sigma))에 대하여 분광광도계 상에서 405 nm에서 판독함으로써 드랩킨 (Drabkin) 시약 (시그마, 부피 대 부피)을 사용하여 측정하였다. 각각의 샘플 내의 헤모글로빈 농도는 표준 범위에 기초하여 수행된 다항식 회귀 (polynomial regression)에 따라 mg/ml 단위로 표현한다. 결과를 각각의 군에 대한 평균값 (±sem)으로 표현한다. 군들 사이의 차이는 값의 제곱근에 대한 ANOVA에 이은 던넷 (Dunnett) 검정에 의해 시험한다.
상기 모델에서, 부위당 50 ng의 FGF19 및 5회의 재-주사는 부위당 5 ng의 FGF2와 동일한 유효성으로 새로 형성된 성숙한 혈관에 의한 스폰지의 콜로니화를 유의하게 유도할 수 있었다. 스폰지 내의 기능성 혈관의 존재는 헤모글로빈의 존재에 의해 입증된다 (도 1b). 이들 결과는 FGF-R4의 특이적 활성화가 기능성 혈관의 동원을 가능하게 함을 보여주고, 이것은 FGF-R4가 또한 생체 내에서 혈관신생을 제어함을 나타낸다.
실시예 2: 면역원 및 항원으로서 사용된 FGFR 단백질의 설명
FGFR 성장 인자 수용체, 및 특히 FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3, FGF-R4의 세포외 도메인은 태그 (Histag) 또는 면역글로불린 Fc 도메인에 융합된다.
인간 FGF-R4의 세포외 도메인을 코딩하는 cDNA는 L136P 돌연변이를 갖는 SwissProt FGF-R4_HUMAN 위치 1-365에 기재된 단백질에 대응한다. 이것을 세포외 도메인 내의 C-말단 위치에서 Histag를 함유하는 단백질을 발현시키기 위해서 도 2에 제시된 진핵 발현 벡터 pXL4614 내로 클로닝하였다.
서열 40의 서열의 hFGFR4-Histag로 불리는 단백질은 국제 특허 출원 WO2008/065543에 기재된 바와 같이, 플라스미드 pXL4614 및 2개의 N-글리칸 글리코실화 효소, 즉, α-2,3-시알릴트랜스퍼라제 및 β-1,4-갈락토실트랜스퍼라제의 발현이 가능한 헬퍼 플라스미드 pXL4544 및 pXL4551을 사용하는 HEK293 EBNA 세포주 (인비트로겐 (Invitrogen)) 내에서 일시적인 형질감염에 의해 생산하였다.
HEK293 EBNA 세포 배양 상등액에서 발현된 hFGFR4-Histag 단백질을 Ni-킬레이팅 세파로스 컬럼 (아머샴 바이오사이언시스 (Amersham Biosciences); ref. 17-0575-01) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였고, 여기서 용출을 이미다졸 버퍼 내에서 수행한 후, PBS 버퍼 (인비트로겐; ref. 14190-094) 내에 제형화하였다. 문헌 ([Saddic et al., 2002., Methods Mol. Biol. 194:23-36] 및 [Anumula et al., 1998. Glycobiology 8:685-694)]에 기재된 바와 같이, 모노사카라이드 조성의 분석 및 N-글리칸의 시알산의 정량으로 단백질이 매우 고도로 (91%) 시알릴화되었음을 입증하는 것이 가능하다. 결론적으로, 단백질은 충분한 약물운동 특성을 갖기 위한 모든 특징을 가졌다.
유사한 방식으로, hFGFR4-Streptag 단백질 (서열 69)을 Strep-Tactin Superflow 컬럼 (IBA; ref. 2-1206) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였고, 여기서 용출을 데스티오비오틴 버퍼 내에서 수행한 후, PBS 버퍼 내에 제형화하였다.
hFGFR4(D2,D3)-Histag 단백질은 서열 42의 서열에 대응한다. cDNA를 도 3에 제시된 진핵 발현 플라스미드 pXL4615 내로 클로닝하고, 단백질을 hFGFR4-Histag 단백질에 유사한 조건 하에 제조하고 정제하였다.
mFGFR4-Histag 단백질을 코딩하는 cDNA (서열 43)을 도 4에 제시된 진핵 발현 플라스미드 pXL4621 내로 클로닝하고, 단백질을 hFGFR4-Histag 단백질에 유사한 조건 하에 제조하고 정제하였다.
hFGFR1-Fc 단백질 (서열 46)은 C-말단 위치에서, 인간 IgG1의 Fc 도메인에 융합된 인간 FGF-R1 IIIc의 세포외 도메인을 함유한다. cDNA를 도 5에 제시된 진핵 발현 플라스미드 pXL4728 내로 클로닝하고, 단백질을 hFGFR4-Histag 단백질에 유사한 조건 하에 제조한 후, 단백질 G 세파로스 친화도 컬럼 (아머샴 바이오사이언시스) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였고, 여기서 용출을 100 mM 글라이신/HCl 버퍼 (pH 2.7) 내에서 수행한 후, PBS 버퍼 내에 제형화하였다.
서열 48의 서열의 hFGFR2-Fc 단백질은 C-말단 위치에서, 인간 IgG1의 Fc 도메인에 융합된 인간 FGF-R2 IIIc의 세포외 도메인을 함유한다. cDNA를 도 6에 제시된 진핵 발현 플라스미드 pXL4327 내로 클로닝하고, 단백질을 hFGFR1-Fc 단백질에 유사한 조건 하에 제조한 후 정제하였다.
hFGFR3-Fc 단백질은 인간 FGF-R3 IIIc의 세포외 도메인을 인간 IgG1의 Fc 도메인에 융합시킨 단백질이고, 알앤디 시스템즈 (R&D Systems) (ref: 760-FR)로부터 입수하였다.
hFGFR4-Fc 단백질은 인간 FGF-R4의 세포외 도메인을 인간 IgG1의 Fc 도메인에 융합시킨 단백질이고, 알앤디 시스템즈 (ref: 685-FR)로부터 입수하였다.
hFGFR4 단백질의 세포외 부분의 다양한 서브도메인은 인간 IgG1의 Fc 도메인에 융합되었다. D1 서브도메인은 구성체 SABVA4794 (서열 112 및 도 14a 및 14b) 내에 함유된다. D2 서브도메인은 구성체 SABVA4796 (서열 114 및 도 15a 및 15b) 내에 함유된다. D3 서브도메인은 구성체 SABVA4799 (서열 116 및 도 16a 및 16b) 내에 함유된다. 이들 3개의 서브도메인은 각각 SABVA4794에 대해 위치 1에서 179, SABVA4796에 대해 1에서 32 + 145에서 242, 및 SABVA4799에 대해 1에서 32 + 228에서 360 (SwissProt FGF-R4_HUMAN에 기재된 위치)으로 연장한다. 이들은 플라스미드 pXL4794 (서열 111의 서열의 코딩 서열), pXL4796 (서열 113의 코딩 서열) 및 pXL4799 (서열 115의 코딩 서열)를 사용하여 FGFR1-Fc 단백질에 유사한 조건 하에 제조하였다.
실시예 3: 항- FGF - R4 모노클로날 항체의 생성 및 스크리닝
A - 면역화에 의해 얻어진 항체
문헌 [Kilpatrick et al., 1997. Hybridoma 16: 381389]에 기재된 RIMMS 방법과 ClonaCell™-HY 하이브리도마 클로닝 키트 (스템셀 테크놀로지스 (StemCell Technologies); ref 03800)에 기재된 융합 프로토콜에 의해 각각 총 24 ㎍의 hFGFR4-Histag로 면역화시킨, 5마리의 BALB/cJ 마우스 (찰스 리버 (Charles River), 6 내지 8주령)에서 hFGFR4-Histag 면역원을 사용한 면역화에 의해 모노클로날 항체를 얻었다.
최종 주사 2일 후에, 마우스를 희생시키고, 림프절을 폴리에틸렌 글리콜의 존재 하에 P3X63-AG8.653 골수종 세포 (ATCC, CRL-1580)와 5:1 비로 융합시켰다 (ClonaCell™-HY ref. 03806). 세포 현탁액을 37℃에서 5% CO2의 존재 하에 인큐베이팅한 페트리 (Petri) 접시 내로 무균 방식으로 분포시켰다. 12일의 인큐베이션 후에 나타난 콜로니를 단리하고, 배지 E (ClonaCell™-HY; ref. 03805) 내에서 96-웰 플레이트에서 배양하였다.
hFGFR4-Histag를 사용한 면역화에 의해 얻어진 모노클로날 항체의 1차 스크리닝을 포획 항원으로서 hFGFR4-Streptag를 사용하는 ELISA 분석에 의해 수행하였다. 포획 항원을 Immulon-4 효소-연결 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크. (VWR Scientific Inc. 미국 뉴저지주 스웨데스보로))에 결합시켰다. 하이브리도마 배양 상등액을 후속적으로 첨가한 후, 퍼옥시다제-접합된 항-마우스 IgG 토끼 항체 (시그마; ref. A9044-1:50　000 희석액)를 사용하여 검출을 수행하였다. 규명 (revealing)은 TMB-H2O2 기질 (인터킴 (Interchim); ref UP664780)을 사용하여 수행하고, 측정은 450 nm에서 플레이트 판독기를 사용하여 수행하였다. 시험한 444개의 하이브리도마 중에서, 129개가 hFGFR4-Streptag 항원을 사용한 ELISA 분석에 의해 양성이고, 이들 하이브리도마 중 120개가 또한 hFGFR4-Fc 이량체 단백질을 사용할 때 양성이었다.
FGF-R4-특이적 항체만을 선택하기 위해서, 포획 항원으로서 hFGFR4-Streptag 단백질, 이어서 실시예 2에 기재된 hFGFR1-Fc, hFGFR2-Fc 및 hFGFR3-Fc 단백질을 사용하여 ELISA 분석에 의해 2차 스크린을 수행하였다. 포획 항원을 Immulon-4 효소-연결 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크. (미국 뉴저지주 스웨데스보로))에 결합시켰다. 하이브리도마 배양 상등액을 후속적으로 첨가한 후, 퍼옥시다제-접합된 항-마우스 IgG 토끼 항체 (시그마; ref. A9044-1:50　000로 희석)를 사용하여 검출을 수행하였다. 규명은 TMB-H2O2 기질 (인터킴; ref UP664780)을 사용하여 수행하고, 측정은 450 nm에서 플레이트 판독기를 사용하여 수행하였다. 항원을 사용한 ELISA 분석에 의해 양성으로 시험된 129개의 하이브리도마 중에서, 84개의　하이브리도마가 hFGFR4-Streptag를 사용할 때 양성이고, hFGFR1-Fc, hFGFR2-Fc 또는 hFGFR3-Fc에 대해 친화도를 갖지 않았다. 39개의 하이브리도마는 그들의 성장 및 형태학의 함수로서 보존되었다. 그들의 이소형은 SEROTEC 키트 (ref. MMT1)를 사용하여 결정하였고; 95%가 IgG1이었다.
항-FGFR4 항체에 의한 억제를 특성 결정하기 위해서, Baf/3 변형된 세포의 FGF2-유도 증식에 대한 시험에서 3차 스크린을 수행하였다.
항-FGFR4 길항제 항체를 발현하는 쥐 하이브리도마를 제한 희석에 의해 클로닝하였다. 지수기로 배양된 하이브리도마 세포를 사용하여, Oligotex 키트 (퀴아젠 (Qiagen); ref 72022)를 사용한 mRNA의 추출; Gene Racer 키트, SuperScript III 역전사효소 (인비트로겐; ref L1500) 및 아래 표 2에 기재된 프라이머를 사용하는 RACE-RT 방법에 의한 cDNA의 생산 및 증폭; Phusion 중합효소 (핀자임즈 (Finnzymes); ref. F-530S), 표 2에 기재된 프라이머 및 온도 조건을 사용하는 cDNA 단편의 증폭 후에 코딩 서열 (cDNA)을 결정하였다. VH (중쇄 HC의 가변 영역) 또는 VL (경쇄 LC의 가변 영역)에 대한 코딩 영역을 함유하는 증폭된 단편을 pGEM-T Easy 벡터 (프로메가 (Promega); ref A137A) 내로 클로닝하고, 얻어진 플라스미드의 삽입물을 서열 결정하여, 각각의 가변 도메인의 코딩 서열이 항-FGFR4 항체 40-12 및 항-FGFR4 항체 64-12에 상응하는 적어도 6개의 플라스미드 상에서 5'-3' 및 3'-5' 방향으로 분석되도록 하였다. 서열, 콘티그 (contig) 및 정렬의 분석은 벡터 NTI (인비트로겐) 상에서 이용가능한 소프트웨어를 이용하여 수행하였다.
항-FGFR4 항체의 가변 영역을 코딩하는 컨센서스 (consensus) 서열을 함유하는 플라스미드는 보존되었다. 아래 표 2에 제시된 바와 같이, 플라스미드 pXL4691은 항-FGFR4 항체 40-12의 서열 5의 서열의 VH를 코딩하는 서열을 함유하고, 플라스미드 pXL4693은 항-FGFR4 항체 64-12의 서열 19의 서열의 VH를 코딩하는 서열을 함유한다.
아래 표 2에 제시된 바와 같이, 플라스미드 pXL4690은 항-FGFR4 항체 40-12의 서열 8의 서열의 VL을 코딩하는 서열 7의 뉴클레오티드 서열을 함유하고, 플라스미드 pXL4692는 항-FGFR4 항체 64-12의 서열 22의 서열의 VL를 코딩하는 서열 21의 뉴클레오티드 서열을 함유한다.
[표 2]
Figure pct00003
각각 항-FGFR4 항체 64-12 및 항-FGFR4 항체 40-12의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 상이하다. 사용된, 얻어진 및 추정된 서열의 수를 표 7에 나타낸다.
항체 40-12 및 64-12를 T500 플라스크 내에서 제조하였다. 배양 상등액을 7일 후에 수거하였다. 항-FGFR4 항체를 단백질 G 상에서 친화도-정제한 후, PBS에 대해 투석하고, 멸균 여과하고, 4℃에서 저장하였다.
정제된 길항제 항체는 KD가 6.5 X 10-9 M (항-FGFR4 40-12) 및 5.75 X 10-8 M (항-FGFR4 64-12)이다.
B - 파지 디스플레이 방법을 이용하여 선택된 항체
hFGFR4-Histag를 사용하는 파지 디스플레이에 의해 얻어진 모노클로날 항체의 1차 스크리닝을 포획 항원으로서 hFGFR4-Histag를 사용하여 ELISA 분석에 의해 수행하였다. 포획 항원을 Immulon-2 효소-연결 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크. (미국 뉴저지주 스웨데스보로))에 결합시켰다. 파지로 감염된 이. 콜라이 (E. coli)로부터의 배양 상등액을 후속적으로 첨가한 후, 퍼옥시다제-접합된 항-M13 마우스 항체 (지이 헬쓰케어 (GE Healthcare); ref. 27-9421-01, 1:5000로 희석)를 사용하여 검출을 수행하였다. 규명은 TMB-H2O2 기질 (인터킴; ref UP664780)을 사용하여 수행하고, 광학 밀도 (O.D.) 측정은 450 nm에서 수행하였다.
FGF-R4-특이적 항체만을 선택하기 위해서, 포획 항원으로서 hFGFR4-Histag 단백질을 사용한 후, 실시예 2에 기재된 hFGFR1-Fc, hFGFR2-Fc 및 hFGFR3-Fc 단백질을 사용하여 ELISA 분석에 의해 2차 스크린을 수행하였다. 포획 항원을 Immulon-2 효소-연결 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크. (미국 뉴저지주 스웨데스보로))에 결합시켰다. 파지로 감염된 이. 콜라이로부터의 배양 상등액을 후속적으로 첨가한 후, 퍼옥시다제-접합된 항-M13 마우스 항체 (지이 헬쓰케어; ref. 27-9421-01, 1:5000으로 희석)를 사용하여 검출을 수행하였다. 규명은 TMB-H2O2 기질 (인터킴; ref UP664780)을 사용하여 수행하고, 광학 밀도 (O.D.) 측정은 450　nm에서 수행하였다.
선택된 FGF-R4-특이적 클론을 서열 결정하고, HEK293 세포의 일시적인 형질감염을 위해 발현 벡터 내로 재클로닝하였다.
이를 위해, 제1 단계에서, Fab, 즉 항체의 경쇄, 세균 리보좀 결합 부위, 및 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 영역을 파지미드로부터 제한 소화에 의해 추출하고, 포유동물 세포를 위한 IgG 발현 플라스미드 내로, 진핵 항체 신호 서열의 하류 및 인간 IgG1 중쇄의 불변 영역의 상류에 삽입하였다. 제2 단계에서, 세균 리보좀 결합 부위 및 중쇄에 대한 세균 신호 펩티드를 함유하는 영역을 IRES 서열 및 진핵 신호 서열에 교체하였다. IgG를 HEK293 세포의 일시적인 형질감염에 의해 발현시켰다. 상기 과정은 문헌 [T. Jostock et al., Journal of Immunological Methods 289 (2004) 65-80]에 상세하게 기재되어 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 인간 IgG1 불변 영역 서열의 예는 서열 117의 서열이다.
항-FGFR4 항체에 의한 억제의 특성을 결정하기 위해서, 항체 발현 벡터로 일시적으로 형질감염시킨 HEK293 세포로부터의 배양 상등액을 사용하여 실시예 4에 기재된 변형된 Baf/3 세포의 FGF2-유도 증식에 대한 시험에 대해 3차 스크린을 수행하였다. 상기 스크린은 클론 8, 31, 33 및 36의 항체를 확인하는 것을 가능하게 한다. 상응하는 서열을 표 7에 기재한다.
실시예 4: BaF /3 FGF - R4 - hMpI 쥐 클로날 주 및 세포 증식 프로토콜의 확립
키메라 FGF-R4-hMpI 수용체의 앞에 5' 위치에서 HA 태그의 존재를 얻기 위해, FGF-R4의 세포외 및 막횡단 (transmembrane) 도메인을 hMpI의 세포내 도메인과의 번역 융합체로서 돌연변이된 pEF6/V5-His　A 벡터 내로 클로닝하였다.
돌연변이된 pEF6A 의 제작
pDisplay (인비트로겐, reference V660-20)의 IgGk의 신호 펩티드 하에 놓인 HA 태그와 회합된 MCS (다중 클로닝 부위: multi cloning site)를 통합시키기 위해서, pEF6/V5-His A 벡터 (인비트로겐, reference V961-20)를 개선시켰다. 이를 실행하기 위해, HA 태그 및 그의 신호 펩티드와 회합된 MCS를 서열 51의 서열의 센스 프라이머와 서열 52의 서열의 역 프라이머 사이에서 PCR에 의해 증폭시켜, 5' 위치에서 KpnI 제한 부위를, 3' 위치에서 XbaI 제한 부위를 삽입하는 것을 가능하게 하였다. PCR 단편을 KpnI 및 XbaI 효소로 소화시킨 후, 동일한 효소로 소화시킨 pEF6/V5-His A 벡터 내로 클로닝하였다. 마지막으로, 새로 형성된 벡터를 KpnI 및 SpeI 효소로 소화시키고, 이들 부위들 사이에, 서로 혼성화되고 BsrGI 효소 부위를 함유하는 서열 53 및 서열 54의 서열의 프라이머를 삽입함으로써, MCS의 제1 BamHI 부위를 BsrGI 부위로 교체하였다. 얻어진 벡터를 pEF6mut-HA로 칭한다.
pEF6mut - HA - FGF - R4 - hMpI 벡터의 제작
MpI의 세포내 도메인을 벡터 pEF6/V5-His TOPO (인비트로겐, reference K9610-20) 내에서, SacI 소화 부위의 삽입을 허용하는 서열 55의 서열의 센서 프라이머와 일반적으로 revBGH로 불리는 서열 56의 서열의 역 프라이머 사이에서 증폭시켰다. 이어서, 생성된 PCR 단편을 SacI 및 NotI 효소로 소화시켰다.
프라이머의 쌍 (센스: 서열 57의 서열; 역: 서열 58의 서열)을 사용하여, FGF-R4의 세포외 및 막횡단 도메인을 증폭시켰다. 이들 프라이머는 5' 위치에서 BamHI 효소 부위 및 3' 위치에서 SacI 효소 부위의 삽입을 가능하게 한다. 이어서, 얻어진 PCR 단편을 BamHI 및 SacI 효소로 소화시켰다.
이어서, hMpI를 코딩하는 및 FGF-R4를 코딩하는 DNA의 증폭을 BamHI-NotI로 소화시킨 pEF6mut-HA 벡터 내로 동시에 클로닝하였다. 생성되는 구성체는 "pEF6mut-HA FGF-R4αIIIc-hMpI2"로 불린다. 이어서, FGF-R4의 막횡단 도메인 (서열 59의 단백질 서열)을 서열 60의 서열로 교환하기 위해서, 상기 구성체를 부위-지정 돌연변이 유발에 의해 개선시켰다. 이를 실행하기 위해, "QuickChange® 부위-지정 돌연변이 유발 키트" (클론테크 (Clontech), reference 200518)를 서열 61의 서열의 센스 프라이머 및 서열 62의 서열의 역 프라이머와 함께 사용하였다. 얻어진 새로운 키메라 구성체를 pEF6mut-HA FGF-R4αIIIcmut-hMpI2로 칭한다.
BaF /3 쥐 세포주의 FGF - R4 α IIIcmut - hMpI2 구성체를 사용한 형질감염에 의한 안정한 세포주의 생성:
"pEF6mut-HA FGF-R4αIIIcmut-hMpI2" 구성체를 전기천공에 의해 BaF/3 쥐 세포의 게놈 내로 안정하게 도입시켰다. 얻어진 세포주를 20 ng/ml의 FGF2 (알앤디, reference 234-FSE-025) 및 100 ng/ml의 헤파린 (시그마, reference H3149)의 존재 하에 선택하였다. 따라서, 형질감염되고 선택된 세포주는 클로날 유형이다.
BaF /3 FGFR4 - hMpI 세포주를 사용한 세포 증식 프로토콜:
BaF/3 FGFR4-hMpI 세포를 배양하고, 20　ng/ml의 FGF2 (알앤디 시스템즈, ref 234-FSE) 및 3　ng/ml의 헤파린 (시그마, ref H3149)을 보충한 완전 RPMI 1640 배지 (인비트로겐; ref. 32404-014) (10% FCS (하이클론 (Hyclone); ref. SH30070.03), 2 mM 글루타민, 1x MEM 비-필수 아미노산 (깁코 (Gibco), ref 11140-035), 1x MEM 나트륨 피루베이트 (깁코, ref 11360-039)) 내에 유지하였다. 제1 일에, 세포를 20 ng/ml의 FGF2 및 3 ng/ml의 헤파린을 보충한 완전 RPMI 1640 배지 내에 0.4x106 세포/ml로 접종하였다. 다음날, 20 ng/ml의 FGF2 및 3 ng/ml의 헤파린을 보충한 완전 RPMI 1640 배지 내의 0.2x106 세포/ml의 BaF/3 FGFR4-hMpI 세포 현탁액 50 ㎕을 96-웰 플레이트 (포르베어 (Porvair), ref 214006) 내로 분배한 후, 시험할 항체를 함유하는 하이브리도마 상등액 50 ㎕을 분배하였다. 이어서, 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 24 내지 30 h 동안 놓았다. 세포 증식을 판독하기 위해, 100 ㎕의 Cell Titer Glo 발광 세포 생활력 분석 (프로메가, ref G7571)을 첨가함으로써 ATP의 양을 정량하고, 발광기 (luminometer)를 사용하여 발광을 판독하였다.
상기 시험에서, 첨가제 20 ng/ml의 FGF2 및 3　ng/ml의 헤파린을 함유하는 완전 RPMI 1640 배지보다 50% 더 약한 신호를 보이는 클론을 선택하였다.
FGF-R4에 특이적인 항-FGFR4 항체를 Baf/3-FGFR4-hMpI 세포와 함께, 및 첨가제로서 20 ng/ml의 FGF2 및 3　ng/ml의 헤파린과 함께 인큐베이팅할 때, 세포 증식에 대해 길항제 효과가 관찰되었다. 시험된 39개의　하이브리도마 중에서, 14개가 FGF2의 존재 하에 Baf/3-FGFR4-hMpI 세포의 FGF-유도된 세포 증식을 억제할 수 있다.
ELISA에 의해 (도 12), 항-FGFR4 길항제 항체 40-12 및 64-12가 쥐 단백질 mFGFR4 및 인간 단백질 hFGFR4 (D2, D3)에 대한 친화도를 갖는 것으로 나타났다.
마지막으로, 항-FGFR4 항체의 친화도 상수를 결정하기 위해서, 표면 플라스몬 공명 (BIAcore 2000)에 의해 마지막 스크린을 수행하였다. FGF-R4 단백질 및 하이브리도마 배양 상등액 내에 존재하는 항-FGFR4 항체 사이의 상호작용을, 자체가 CM 칩에 결합된 항-Fc 항체에 항-FGFR4 항체를 결합시킨 후 분석하였다. 운동학은 문헌 [Canziani et al., 2004. Anal. Biochem. 325:301-307]의 프로토콜에 따라 측정한다.
10-8 내지 10-9 M의 친화도 상수 및 10-3 내지 10-5 s-1의 해리율을 갖는 것 중에서 2개의 항체를 선택하였다. 이들 항체의 특성을 아래 표 1에 제시한다.
KD를 결정하기 위해 사용된 참조 방법은 표면 플라스몬 공명 (BIAcore)이다.
[표 1A]
Figure pct00004
[표 1B]
Figure pct00005
실시예 5: 항- FGFR4 항체의 특이성
A - FGF - R4 에 대한 항- FGFR4 항체 40-12의 특이성
각각의 항체의 특이성은 실시예 4에 기재된 프로토콜에 따라 ELISA에 의해 확립하였다. 본 방식에서, 각각의 FGF-R에 결합하는 각각의 항체의 능력이 관찰된다. 본 실험은 항체 40-12가 FGF-R4만을 인식하고, 따라서 FGF-R4에 특이적임을 명백하게 보여준다. 항체 64-12는 FGF-R4에 주로 결합할 수 있지만, 또한 FGF-R3에 약하게 결합한다 (도　7).
B - FGF - R4 에 대한 항- FGFR4 항체 8, 31, 33 및 36의 특이성
각각의 항체의 특이성은 다음 프로토콜에 따라 ELISA에 의해 확립하였다: 그들의 표면 상에 Fab 형식으로 항체를 나타내는 파지의 현탁액을 이. 콜라이 세균의 감염에 의해 생성하였다. 포획 항원을 Immulon-2 효소-연결 접시 (브이더블유알 사이언티픽 인크. (미국 뉴저지주 스웨데스보로))에 결합시켰다. 파지 현탁액을 후속적으로 첨가한 후, 퍼옥시다제-접합된 항-M13 파지 마우스 항체 (지이 헬쓰케어, ref. 27-9421-01, 1:5000로 희석)를 사용하여 검출을 수행하였다. 규명은 TMB-H2O2 기질 (인터킴; ref UP664780)을 사용하여 수행하고, 광학 밀도 (OD) 측정은 450 nm에서 수행하였다. 표 2는 얻어진 결과를 요약한다:
본 방식에서, 각각의 FGF-R에 결합하는 각각의 항체의 능력이 관찰된다. 상기 실험은 항체 8, 31, 33, 36이 FGF-R4만을 인식하고, 따라서 FGF-R4에 특이적임을 명백하게 보여준다.
[표 2]
Figure pct00006
실시예 6: 혈관신생 (시험관 내에서)에 대한 항체 40-12 및 클론 8, 31, 33, 36으로부터 유래된 항체의 길항 효과
인간 내피세포 혈관신생의 과정에 걸쳐 항-FGFR4 모노클로날 항체 40-12의 생물학적 활성을 결정하기 위해서, 1 내지 30　㎍/ml의 증가하는 용량으로 항체 40-12 또는 대조군 항체의 존재 하에 FGF2로 자극된 HUVEC 세포를 사용하여 시험관 내 혈관신생 실험을 수행하였다 (도 8a 및 8b).
본 문맥에서, 활성 항-FGFR4 길항제 모노클로날 항체 40-12는 30　㎍/ml 또는 200　nM의 용량에서 HUVEC 세포의 FGF2-유도된 혈관신생을 억제할 수 있는 반면, 대조군 항체 64-12는 효과가 없다. 또한, 항체 40-12는 그 자체로는 기저 혈관신생에 대한 효과가 없다.
이들 결과는 FGF-R4-특이적 길항제 항체가 혈관신생을 억제할 수 있음을 나타낸다.
항체 40-12에 대해, 파지 디스플레이로부터 유래된 클론 8, 31, 33 및 36의 항-FGFR4 항체를 HUVEC 유형의 인간 내피세포의 FGF-2-유도된 혈관신생을 억제하는 그들의 능력에 대해 평가하였다. 이들 4가지 항체는 FGF-2를 사용하여 얻어진 혈관신생의 시험관 내 자극을 차단하였고, 상기 항체는 10 ㎍/ml의 용량이었다 (도 8c 및 8d).
실시예 7: 인간 간암종 세포에 대한 항체 40-12 및 클론 8, 31, 33 및 36으로부터 유래된 항체의 길항 효과 (시험관 내)
항-FGFR4 길항제 모노클로날 항체 40-12의 항종양 효과를 결정하기 위해서, 증식 및 여기서 생성되는 신호전달 경로가 리간드-수용체 쌍: FGF19/FGF-R4에 의존적인 Hep3b 인간 간암종 세포에 대해 실험을 수행하였다.
첫째로, Hep3b 세포의 증식을 일으키는 FGF-R4-의존적 신호전달 경로의 연구는 웨스턴 블로팅에 의해 이루어졌다. 상기 세포 신호전달은 cFos 및 JunB 단백질의 신생합성 (neosynthesis) 및 또한 Erk1/2의 인산화를 수반한다 (Lin et al., J Biol Chem., 2007, 14:27277-84). 이를 실행하기 위해, 5x105 세포를 직경 35 mm의 접시 내에서 2 ml의 완전 배지 (DMEM, 10% FCS, 2 mM 글루타민) 내에 접종하였다. 24 h 후에, 세포를 24 h 동안 1.8 ml의 혈청 미함유 배지 내에서 결핍 조건으로 처리하였다. 이어서, 세포를 대조 항-FGFR4 항체 또는 항-FGFR4 항체 40-12의 부재 또는 존재 하에 3　h 동안 200　㎕의 10배 농축된 FGF19로 자극하였다. 이어서, 배지를 제거하고, 세포를 냉 PBS로 1회 세척하고, 프로테아제 억제제를 보충한 RIPA 버퍼 75 ㎕를 사용하여 접시 상에서 30 min 동안 4℃에서 용해시켰다. 이어서, 총 단백질 추출물을 10 min 동안 4℃에서 13　000 rpm에서 원심분리하고, 상등액을 웨스턴 블로팅 기술에 의해 분석하였다. 이어서, 멤브레인을 TBS, 0.05% tween, 5% 우유 내에서 주변 온도에서 2　h 동안 인큐베이팅한 후, 항-cFos (셀 시그널링 테크놀로지 (Cell Signaling Technology), ref 2250), 항-JunB (셀 시그널링 테크놀로지, ref 3746) 및 항-포스포Erk1/2 (셀 시그널링 테크놀로지, ref 4377) 1차 항체를 1/1000로 첨가하고, 느리게 진탕하면서 4℃에서 철야 인큐베이팅하였다. 멤브레인을 TBS, 0.05% tween으로 3회 세정하고, HRP에 결합된 2차 항체를 4 h 동안 4℃에서 인큐베이팅하고, TBS, 0.05% tween, 5% 우유 내에 1/2000로 희석하였다. 이어서, 웨스턴 블로팅 결과를 케미제니어스 (Chemigenius) 기기 (신젠 (Syngene))를 사용하여 정량하였다. 다양한 항체를 사용하여 얻어진 밴드의 강도는 HRP에 직접 결합되고 1/3000th로 사용된 항-악틴 항체 (산타 크루즈 바이오테크놀로지 (Santa Cruz Biotechnology), ref Sc-8432-HRP)를 사용하여 얻어진 밴드의 강도를 이용하여 칭량하였다.
FGF19는 30 ng/ml에서 Hep3b 세포에서 JunB 및 cFos 단백질의 합성 및 또한 Erk1/2의 인산화를 유도한다. 이러한 단백질의 신생합성 및 Erk의 인산화는 100 ㎍/ml에서 항-FGFR4 항체 40-12에 의해 완전히 억제되는 반면, 대조군 항체는 억제 효과가 없었다. 웨스턴 블로팅 멤브레인 상에서 관찰된 이들 효과 (도 9a)를 정량하고, 각각의 멤브레인의 밴드의 강도를 그래프 형태로 제시한다 (도 9b).
둘째로, 세포 증식 실험 자체를 수행하였다. 5000개의 세포를 96-웰 플레이트 내로 10% FCS 및 2　mM 글루타민을 함유하는 100 ㎕의 DMEM 배지 내에 접종하였다. 24 h 후에, 세포를 혈청 미함유 배양 배지 내에서 24 h 동안 혈청 결핍시켰다. 이어서, Hep3b 세포를 72 h 동안 대조군 항체 또는 항-FGFR4 길항제 모노클로날 항체 40-12의 부재 또는 존재 하에, 10 ng/ml의 FGF19 (사노피-아벤티스 (Sanofi-Aventis) 알앤디의 내부 생산품) 또는 10% 혈청을 보충한 혈청 미함유 배지 100 ㎕로 자극하였다. 3일 후에, CellTiter Glo 키트 (프로메가, 프랑스)를 사용하여 세포 증식을 정량하였다.
상기 실험으로부터, 혈청 및 FGF19가 Hep3b 증식을 자극할 수 있는 것으로 나타난다. 항-FGFR4 길항제 항체 40-12는 100 ㎍/ml에서 상기 혈청-유도된 증식을 부분적으로 억제하는 반면, 대조군 항체는 임의의 억제 활성을 나타내지 않는다 (도 10a). 추가로, 항체 40-12는 10 ㎍/ml에서 FGF19에 의해 유도된 증식을 완전히 차단한다 (도 10b). 대조군 항체는 효과가 없다.
이것은 본 발명의 대상인 항-FGFR4 길항제 항체가 FGF19-의존성 또는 FGF-R4-의존성 종양의 환경에서 항종양 치료제로서 사용될 수 있고, 상기 항체가 간암종의 치료에 특히 효과적일 것임을 입증한다.
Hep3b 세포에 대한 항-FGFR4 항체의 효과 연구를 단순화하기 위해, FGF-19 (실시예 8에 기재된 실험과 상호관련하여), FGF-2 또는 태소 혈청을 사용한 이들 세포의 자극 후에 Erk1/2의 인산화를 검출하기 위한 ELISA 분석을 개발하였다.
이를 실행하기 위해, 50,000개의 Hep3b 세포를 96-웰 흑색 투명 바닥 플레이트 (코스타 (COSTAR), ref 3603) 내로 10% FCS 및 2　mM 글루타민을 함유하는 100 ㎕의 DMEM 배지 내에 접종하였다. 24 h 후에, 세포를 24 h 동안 2 mM 글루타민을 함유하는 FCS 미함유 DMEM 배지 내에서 결핍 조건으로 처리하였다. 이어서, 배지를 제거하고, FGF 또는 FCS, 및 또한 평가된 항체를 다양한 용량으로 함유하는 37℃에서 예비평형화시킨 결핍 배지 100 ㎕로 교체하였다. 세포를 3 h 동안 37℃ 및 5% CO2에서 인큐베이팅하였다. 이어서, 자극 배지를 제거하고, 웰을 PBS로 4℃에서 세정하고, 15 min 동안 주변 온도에서 PBS 중의 4% PFA (파라포름알데히드) 200 ㎕을 첨가함으로써 세포를 고정시켰다. PFA를 제거하고, 세포를 200 ㎕의 PBS로 3회 세척하였다. Hep3b 세포 상에서 직접 포스포-Erk1/2를 검출하기 위한 항체 표지를, 비특이적 부위를 100　㎕의 포화 버퍼 (21.25 ml의 PBS, 1.25 ml의 10% 비-면역 염소 혈청 (자이메드 (Zymed), ref 50-062Z), 75 ㎕의 triton X100)로 2　h 동안 포화시킴으로써 시작하였다. 포화 버퍼를 1% BSA 및 0.3% triton X100을 함유하는 PBS 버퍼 내에 1/100로 희석시킨 항-포스포Erk1/2 1차 항체 (셀 시그널링 테크놀로지, ref 4377) 50　㎕로 교체하였다. 1차 항체를 세포와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이팅하였다. 이어서, 이를 200　㎕의 PBS로 3회 세정하고, 4　h 동안 1% BSA 및 0.3% triton X100을 함유하는 PBS 버퍼 내에 1/5000로 희석시킨 AlexaFluor 488 (몰레큘라 프로브스 (Molecular Probes), ref A11008)에 결합된 항-토끼 2차 항체를 사용하여 규명하였다. 이어서, 2차 항체를 200　㎕의 PBS로 3회 세척한 후, 100 ㎕의 PBS를 각각의 웰에 첨가하였다. 형광을 FITC 필터를 사용하여 EnVision 2103 멀티라벨 판독기 (퍼킨 엘머 (Perkin Elmer))로 판독하였다.
상기 기술에 의해 FGF-19가 30 ng/ml에서 Hep3b 세포에서 Erk1/2의 인산화를 유도하고, 40-12는 3 ㎍/ml의 용량에서 상기 자극을 차단할 수 있음을 확인할 수 있다 (도 9c). FGF-2 및 혈청은 또한 시스템을 유도할 수 있다. 후자의 2가지 경우에, 항체 40-12는 보다 고 용량에서 FGF-2 및 혈청의 효과를 억제한다 (30-100　㎍/ml; 도 9c).
ELISA에 의한 포스포-Erk1/2의 검출에 의해, 또한 시험관 내 혈관신생 모델에서 활성인 항-FGFR4 항체가 또한 3 ㎍/ml의 용량에서 FGF-19에 의해 유도된 Erk1/2의 인산화의 70% 내지 95%를 차단할 수 있음을 보여줄 수 있다 (도 9d).
유리하게는, 본 발명의 항체는 종양 발달과 연관된 병리학적 혈관신생에 대해 및 간 종양 성장 자체, 특히 간암종의 모델 모두에 대해 길항 효과를 갖는다.
실시예 8: 췌장암의 쥐 모델에서 항체 40-12의 길항 효과
본 약물학 모델을 위해, C57Bl/6J 유전자 배경을 갖는 암컷 Rip1-Tag2 마우스 (찰스 리버 래보래토리 (Charles River Laboratory, 프랑스))를 사용하였다. 생후 9주에 시작하여, 동물에게 5% 수크로스를 보충한 음용수를 먹였다. 마우스를 제10주에서 제12.5주까지 중재 치료 프로토콜로, 매주 1회 항-FGFR4 항체 40-12 또는 대조군 항체를 25 mg/kg의 용량으로 피하 주사하여 치료하였다 (도 14a). 상기 프로토콜은 사노피-아벤티스 연구소 (Sanofi-Aventis Recherche)의 "Comite experimentation Animale (동물 실험 윤리 위원회)"에서 승인되었다. 본 발명자들의 동물사육 설비, 동물에 제공되는 주의 및 또한 처리 프로토콜은 처리 기간 후에 또는 종양 적하중량 (burden) 및/또는 부작용으로 인해 연구에서 철수시킬 때 희생시키는 척추동물의 보호에 관한 유럽 협약 (European Convention)에서 규정된 원칙에 따른다.
종양 적하중량을 측정하기 위해, 실험의 끝에 동물을 안락사에 의해 희생시키고, 종양을 새로 절제한 췌장으로부터 미세해부한다. 종양 부피 (mm3)는 캘리퍼스 자 (calliper rule)를 사용하고, 구형의 부피에 근접하기 위해 식 [부피 = 0.52 x (폭)2 x (길이)]를 적용함으로써 측정한다. 마우스당 종양 적하중량은 각각의 마우스의 종양의 부피의 축적에 의해 계산한다.
혈관 밀도의 조직화학 분석을 위해, 동물을 마취시키고, 췌장을 수집하고, 어큐스테인 (accustain)® (시그마) 내에 밤새 고정시킨 후 파라핀 내에 포매한다. 각각의 샘플에 대해 5 ㎛ 두께의 절편을 제조하였다. 절편을 트립신 (자이메드, ref 00-3003)과 함께 37℃에서 10 min 동안, 이어서 1/50로 희석시킨 래트에서 생산된 항-마우스 CD31 항체 (비디 파밍겐 (BD Pharmingen))와 함께 인큐베이팅함으로써, 내피세포를 검출한다. 항체로 표지된 영역을 규명하기 위해, 절편을 30　min 동안 비오틴-커플링된 항-래트 항체와 함께, 이어서 또한 30　min 동안 HRP-커플링된 스트렙타비딘과 함께 (벡타스테인 (Vectastain)® ABC 키트, 벡터 (Vector)), 마지막으로 5 min 동안 DAB와 함께 (벡터, ref SK4100) 인큐베이팅한다. 이어서, 절편을 1/10로 희석한 헤마톡실린 (다코 (Dako), S-3309)으로 염색한다. x200의 총 배율에서 현미경에 탑재된 사진기 (니콘 (Nikon), E-800)으로 사진을 찍는다. 영상을 소프트웨어 (비지오랩 (Visiolab), 바이오컴 (Biocom))를 이용하여 분석한다. 종양 내의 혈관을 계수하고, 그들의 표면적에 따라 분류한다: 작은 혈관 5 내지 20 ㎛2, 중간 혈관 21 내지 100 ㎛2, 및 큰 혈관 101 ㎛2 이상. 필드 (field)당 표지된 요소의 총수에 상응하는 혈관 밀도를 결정하기 위해 췌장 당 2개의 슬라이드를 분석하였다.
본 모델에서, 제10주 및 제12주 사이에 매주 1회 25　mg/kg의 항-FGFR4 항체 40-12를 사용한 피하 처리는 종양 적하중량을 55% 유의하게 감소시킬 수 있고 (도 11b), 췌장당 종양의 수를 34% 감소시키는 경향이 있는 반면 (도 11c), 대조군 처리는 효과가 없다. 항-FGFR4 항체 40-12에 의한 종양 발달의 상기 억제에는 항-CD31 항체로 표지된 모든 혈관-크기 군의 혈관에서 혈관 수의 관찰된 감소 (도 11d)에 상응하는 총 혈관 밀도의 31%의 유의한 감소가 동반된다 (도 11d).
이들 생체내 결과는 항-FGFR4 길항제 항체가 종양에서 혈관의 동원 및 형성을 억제할 수 있음을 명백하게 보여준다. 종양 혈관형성의 상기 억제에는 췌장당 종양 수 및 총 종양 부피의 감소가 동반된다.
유리하게는, 본 발명의 항체는 병리학적 혈관신생 및 간 종양 성장 (간암종의 모델에서) 및 췌장 종양 성장 모두에 대해 길항 효과가 있다.
실시예 9: 인간, 쥐 및 래트 FGF - R4 와 항체의 교차-반응성
첫째로, 경쟁 결합 실험을 수행하였다. 이를 실행하기 위해, FGF2를 2개의 유리 시스테인 상에서 공급자의 권장사항에 따라 AlexaFluor® 488 nm C-5 말레이미드 (몰레큘라 프로브스, A10254)를 사용하여 표지하였다. 상기 FGF2-AF488은 10 ng/ml에서 형질감염된 300-19 세포의 표면에서 발현된 인간 FGF-R4에 결합할 수 있다 (도 8). 과잉의 비표지된 FGF2의 첨가가 FGF2/FGF-R4 상호작용을 교체할 수 있으므로, 상기 결합은 특이적이다 (도 8a). 증가하는 용량의 항체 40-12 또는 대조군 항체 64-12를 첨가하면서 동일한 실험을 수행하였다. 길항제 항체 40-12는 3500 ng/ml, 즉 23 nM의 IC50으로 FGF2-AF488/FGF-R4 결합을 교체할 수 있고, 이것은 상기 항체의 길항 효과가 FGF/FGF-R4 결합을 교체하는 그의 능력으로 인한 것임을 보여준다.
둘째로, 인간 이외의 종에서 FGF/FGF-R4 결합을 차단하는 클론 40-12의 능력을 결정하기 위한 목적으로, 상기 마우스, 래트 및 인간 FGF2/FGF-R4 쌍을 사용하여 해리 실험을 수행하였다. 이를 수행하기 위해, 쥐 FGF2 (알앤디, ref 3139-FB-025) 또는 래트 FGF2 (알앤디, ref 3339-FB-025)를 인간 FGF2와 동일한 방식으로 AlexaFluor 488로 표지하였다. 마우스 또는 래트 FGF-R4 수용체로 형질감염된 300-19 세포주를 사용하여 해리 실험을 수행하였다. 결과는 항-FGFR4 길항제 항체 40-12가 마우스 또는 래트 시스템에서 FGF2/FGF-R4 결합을, 인간 시스템에서와 동일한 유효성으로 해리시킬 수 있음을 보여준다. 실제로, IC50 값은 인간, 쥐 또는 래트 FGF2/FGF-R4 복합체에 대해 각각 3500, 4110 및 3940　ng/ml, 즉 23, 27 및 26 nM이다 (각각 도 13a, 13b 및 13c). 설치류 FGF-R4에 결합하는 상기 능력을 ELISA에 의해 입증하였다. 항체 40-12는 인간 FGF-R4 및 쥐 FGF-R4 둘 다에 결합한다 (도　12).
이들 결과는 항-FGFR4 항체 40-12가 설치류 (적어도 마우스 및 래트)에 대한 약물학 모델에서 사용될 수 있고, 얻어진 결과가 인간에서의 유효성을 예측할 것임을 나타낸다.
유사하게, 클론 8, 31, 33 및 36으로부터 유래된 항체에 대해 수행된 연구는 이들 항체가 인간 FGF-R4 및 쥐 FGF-R4를 둘 다 인식함을 보여준다 (하기 표 4).
[표 4]
Figure pct00007
실시예 10: 항- FGF - R4 항체에 의해 인식되는 에피토프의 결정
A - 항- FGFR4 항체 40-12에 의해 인식되는 에피토프의 결정
ELISA 분석에 의해, 항체 40-12에 의해 인식되는 FGFR4의 특이적 도메인을 결정하기 위해서 스크린을 수행하였다. ELISA에서 FGF-R4의 D1 도메인의 결실된 형태를 사용함으로써, 항체 40-12가 FGF-R4의 D2-D3 도메인과 상호작용함을 확립하였다 (도 12).
포획 항원으로서, 실시예 2에 기재된 바와 같이, hFGFR4 단백질의 D1 도메인 (SABVA4794) 또는 D2 도메인 (SABVA4796) 또는 D3 도메인 (SABVA4799)을 함유하는 구성체를 사용하여 ELISA 분석에 의해 제2 스크린을 수행하였다. 포획 항원을 Immulon-4 효소-연결 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크. (미국 뉴저지주 스웨데스보로))에 결합시켰다. 하이브리도마 40-12를 후속적으로 첨가한 후, 퍼옥시다제-접합된 항-마우스 IgG 토끼 항체 (시그마; ref. A9044-1:50　000로 희석)를 사용하여 검출을 수행하였다. 규명은 TMB-H2O2 기질 (인터킴; ref UP664780)을 사용하여 수행하고, 광학 밀도 (OD) 측정은 450 nm에서 수행하였다. 표 5는 얻어진 결과를 요약한다:
[표 5]
Figure pct00008
따라서, 항-FGFR4 항체는 FGFR4 단백질의 세포외 부분의 D2 도메인을 인식한다.
또한, FCS로 변성된 FGFR4-Fc 단백질은 웨스턴 블로팅 분석에서 항체 40-12에 의해 인식되지 않고, 그에 의해 FGFR4의 D2 도메인 상에서 40-12에 의해 표적화되는 에피토프가 입체형태적 유형임을 나타낸다
B - 항- FGFR4 항체 8, 31, 33, 36에 의해 인식되는 에피토프의 결정.
항체 8, 31, 33 및 36에 의해 인식된 FGFR4의 특이적 도메인을 결정하기 위해서, 포획 항원으로서, D2 및 D3 도메인 (서열 42) 또는 hFGFR4-Histag 단백질 (SABVA4614, 서열 40)을 함유하는 구성체를 사용하여 ELISA 분석에 의해 스크린을 수행하였다. 포획 항원을 Immulon-4 효소-연결 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크. (미국 뉴저지주 스웨데스보로))에 결합시켰다. 항체 8, 31, 33 및 36을 분비시킬 수 있는 플라스미드로 일시적으로 형질감염시킨 HEK293 세포로부터 배양 상등액을 후속적으로 첨가한 후, 퍼옥시다제-접합된 항-인간 IgG 토끼 항체 (다코사이토메이션 (DakoCytomation), ref. P0214-1:5000로 희석)를 사용하여 검출을 수행하였다. 규명은 TMB-H2O2 기질 (인터킴; ref UP664780)을 사용하여 수행하고, 광학 밀도 (OD) 측정은 450 nm에서 수행하였다. 아래 표 6은 얻어진 결과를 요약한다:
[표 6]
Figure pct00009
따라서, 항체 8, 31, 33 및 36은 FGFR4 단백질의 세포외 부분의 D2-D3 도메인을 인식한다.
[표 7]
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
SEQUENCE LISTING <110> SANOFI-AVENTIS <120> FGF-R4 receptor-specific antagonists <130> FR2008-072 PCT <160> 117 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 1389 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(1389) <400> 1 atg aac agg ctt act tcc tca ttg ctg ctg ctg att gtc cct gca tat 48 Met Asn Arg Leu Thr Ser Ser Leu Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr 1 5 10 15 gtc ctg tcc cag gtt act ctg aaa gag tct ggc cct ggg ata ttg cag 96 Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln 20 25 30 ccc tcc cag acc ctc agt ctg act tgt tct ttc tct ggg ttt tca ctg 144 Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45 agc act tct ggt atg ggt gtg agc tgg att cgt cag cct tca gga aag 192 Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys 50 55 60 ggt ctg gag tgg ctg gca cac att tac tgg gat gat gac aag cgc tat 240 Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr 65 70 75 80 aac cca tcc ctg aag agc cgg ctc aca atc tcc aag gat acc tcc agc 288 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agc aag ctc aat gtg cag aag agc aac tgg 1296 Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp 420 425 430 gag gca gga aat act ttc acc tgc tct gtg tta cat gag ggc ctg cac 1344 Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His 435 440 445 aac cac cat act gag aag agc ctc tcc cac tct cct ggt aag tga 1389 Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 2 <211> 462 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 2 Met Asn Arg Leu Thr Ser Ser Leu Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr 1 5 10 15 Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln 20 25 30 Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45 Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr 65 70 75 80 Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser 85 90 95 Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala 100 105 110 Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro 130 135 140 Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met 145 150 155 160 Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val 195 200 205 Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His 210 215 220 Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys 225 230 235 240 Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe 245 250 255 Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro 260 265 270 Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val 275 280 285 Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr 290 295 300 Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu 305 310 315 320 Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys 325 330 335 Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 340 345 350 Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro 355 360 365 Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile 370 375 380 Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly 385 390 395 400 Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp 405 410 415 Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp 420 425 430 Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His 435 440 445 Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 3 <211> 705 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(705) <400> 3 atg gtt ttc aca cct cag att ctt gga ctt atg ctt ttc tgg att tca 48 Met Val Phe Thr Pro Gln Ile Leu Gly Leu Met Leu Phe Trp Ile Ser 1 5 10 15 gcc tcc aga ggt gat att gtg cta act cag tct cca gcc acc ctg tct 96 Ala Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 gtg act cca gga gat aga gtc agt ctt tcc tgc agg gcc agt caa agt 144 Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser 35 40 45 att agc aac tac cta cac tgg tat caa caa aaa tca cat gag tct cca 192 Ile Ser Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro 50 55 60 agg ctt ctc atc aag tat gct tcc cag tcc atc tct ggg atc ccc tcc 240 Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser 65 70 75 80 agg ttc agt ggc agt gga tca ggg aca gat ttc att ctc agt ttc aac 288 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Phe Asn 85 90 95 agt gtg gag act gaa gat ttt gga atg tat ttc tgt caa cag agt aac 336 Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn 100 105 110 agc tgg cct ttc acg ttc ggc tcg ggg aca aaa ttg gaa ata aaa cgg 384 Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 115 120 125 gct gat gct gca cca act gta tcc atc ttc cca cca tcc agt gag cag 432 Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 130 135 140 tta aca tct gga ggt gcc tca gtc gtg tgc ttc ttg aac aac ttc tac 480 Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 ccc aaa gac atc aat gtc aag tgg aag att gat ggc agt gaa cga caa 528 Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln 165 170 175 aat ggc gtc ctg aac agt tgg act gat cag gac agc aaa gac agc acc 576 Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 tac agc atg agc agc acc ctc acg ttg acc aag gac gag tat gaa cga 624 Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 195 200 205 cat aac agc tat acc tgt gag gcc act cac aag aca tca act tca ccc 672 His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 210 215 220 att gtc aag agc ttc aac agg aat gag tgt taa 705 Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 <210> 4 <211> 234 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 4 Met Val Phe Thr Pro Gln Ile Leu Gly Leu Met Leu Phe Trp Ile Ser 1 5 10 15 Ala Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser 35 40 45 Ile Ser Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Phe Asn 85 90 95 Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn 100 105 110 Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 130 135 140 Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln 165 170 175 Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 195 200 205 His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 210 215 220 Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 <210> 5 <211> 442 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (29)..(442) <400> 5 tgaaggagta gaaaactagt gtgcagat atg aac agg ctt act tcc tca ttg 52 Met Asn Arg Leu Thr Ser Ser Leu 1 5 ctg ctg ctg att gtc cct gca tat gtc ctg tcc cag gtt act ctg aaa 100 Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys 10 15 20 gag tct ggc cct ggg ata ttg cag ccc tcc cag acc ctc agt ctg act 148 Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr 25 30 35 40 tgt tct ttc tct ggg ttt tca ctg agc act tct ggt atg ggt gtg agc 196 Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser 45 50 55 tgg att cgt cag cct tca gga aag ggt ctg gag tgg ctg gca cac att 244 Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile 60 65 70 tac tgg gat gat gac aag cgc tat aac cca tcc ctg aag agc cgg ctc 292 Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu 75 80 85 aca atc tcc aag gat acc tcc agc aac cag gta ttc ctc aag atc acc 340 Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Thr 90 95 100 agt gtg gac act gca gat act gcc aca tac tac tgt gct cga gat tac 388 Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr 105 110 115 120 tac gct agt agc ttt gac tac tgg ggc caa ggc acc act ctc aca gtc 436 Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val 125 130 135 tcc tca 442 Ser Ser <210> 6 <211> 138 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 6 Met Asn Arg Leu Thr Ser Ser Leu Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr 1 5 10 15 Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln 20 25 30 Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45 Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr 65 70 75 80 Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser 85 90 95 Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala 100 105 110 Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 7 <211> 401 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (18)..(401) <400> 7 tcagggaaag ctcgaag atg gtt ttc aca cct cag att ctt gga ctt atg 50 Met Val Phe Thr Pro Gln Ile Leu Gly Leu Met 1 5 10 ctt ttc tgg att tca gcc tcc aga ggt gat att gtg cta act cag tct 98 Leu Phe Trp Ile Ser Ala Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser 15 20 25 cca gcc acc ctg tct gtg act cca gga gat aga gtc agt ctt tcc tgc 146 Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys 30 35 40 agg gcc agt caa agt att agc aac tac cta cac tgg tat caa caa aaa 194 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys 45 50 55 tca cat gag tct cca agg ctt ctc atc aag tat gct tcc cag tcc atc 242 Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile 60 65 70 75 tct ggg atc ccc tcc agg ttc agt ggc agt gga tca ggg aca gat ttc 290 Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 80 85 90 att ctc agt ttc aac agt gtg gag act gaa gat ttt gga atg tat ttc 338 Ile Leu Ser Phe Asn Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe 95 100 105 tgt caa cag agt aac agc tgg cct ttc acg ttc ggc tcg ggg aca aaa 386 Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys 110 115 120 ttg gaa ata aaa cgg 401 Leu Glu Ile Lys Arg 125 <210> 8 <211> 128 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 8 Met Val Phe Thr Pro Gln Ile Leu Gly Leu Met Leu Phe Trp Ile Ser 1 5 10 15 Ala Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser 35 40 45 Ile Ser Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Phe Asn 85 90 95 Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn 100 105 110 Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 115 120 125 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 9 Thr Ser Gly Met Gly Val Ser 1 5 <210> 10 <211> 16 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 10 His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 11 Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr 1 5 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 12 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu His 1 5 10 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 13 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 14 Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Phe Thr 1 5 <210> 15 <211> 1395 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(1395) <400> 15 atg gac tcc agg ctc aat tta gtt ttc ctt gtc ctt att tta aaa ggt 48 Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 gtc cag tgt gat gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc tta gtg cag 96 Val Gln Cys Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 cct gga ggg tcc cgg aaa ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc act ttc 144 Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 agt aac ttt gga atg cac tgg gtt cgt cag gct cca gag aag gga ctg 192 Ser Asn Phe Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtc gca tac att agt agt ggc agt agt acc atc tac tat gca 240 Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 gac aca gtg aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat ccc aag aac 288 Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn 85 90 95 acc ctg ttc ctg caa atg acc agt cta agg tct gag gac acg gcc atg 336 Thr Leu Phe Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met 100 105 110 tat tac tgt gca aga tat gat tac gac gat gat tac tat gct atg gaa 384 Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu 115 120 125 tac tgg ggt caa gga acc tca gtc acc gtc tcc tca gcc aaa acg aca 432 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 130 135 140 ccc cca tct gtc tat cca ctg gcc cct gga tct gct gcc caa act aac 480 Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn 145 150 155 160 tcc atg gtg acc ctg gga tgc ctg gtc aag ggc tat ttc cct gag cca 528 Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175 gtg aca gtg acc tgg aac tct gga tcc ctg tcc agc ggt gtg cac acc 576 Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr 180 185 190 ttc cca gct gtc ctg cag tct gac ctc tac act ctg agc agc tca gtg 624 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val 195 200 205 act gtc ccc tcc agc acc tgg ccc agc gag acc gtc acc tgc aac gtt 672 Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val 210 215 220 gcc cac ccg gcc agc agc acc aag gtg gac aag aaa att gtg ccc agg 720 Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg 225 230 235 240 gat tgt ggt tgt aag cct tgc ata tgt aca gtc cca gaa gta tca tct 768 Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser 245 250 255 gtc ttc atc ttc ccc cca aag ccc aag gat gtg ctc acc att act ctg 816 Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu 260 265 270 act cct aag gtc acg tgt gtt gtg gta gac atc agc aag gat gat ccc 864 Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro 275 280 285 gag gtc cag ttc agc tgg ttt gta gat gat gtg gag gtg cac aca gct 912 Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala 290 295 300 cag acg caa ccc cgg gag gag cag ttc aac agc act ttc cgc tca gtc 960 Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val 305 310 315 320 agt gaa ctt ccc atc atg cac cag gac tgg ctc aat ggc aag gag ttc 1008 Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe 325 330 335 aaa tgc agg gtc aac agt gca gct ttc cct gcc ccc atc gag aaa acc 1056 Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 340 345 350 atc tcc aaa acc aaa ggc aga ccg aag gct cca cag gtg tac acc att 1104 Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile 355 360 365 cca cct ccc aag gag cag atg gcc aag gat aaa gtc agt ctg acc tgc 1152 Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys 370 375 380 atg ata aca gac ttc ttc cct gaa gac att act gtg gag tgg cag tgg 1200 Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp 385 390 395 400 aat ggg cag cca gcg gag aac tac aag aac act cag ccc atc atg gac 1248 Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp 405 410 415 aca gat ggc tct tac ttc gtc tac agc aag ctc aat gtg cag aag agc 1296 Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser 420 425 430 aac tgg gag gca gga aat act ttc acc tgc tct gtg tta cat gag ggc 1344 Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly 435 440 445 ctg cac aac cac cat act gag aag agc ctc tcc cac tct cct ggt aag 1392 Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 450 455 460 tga 1395 <210> 16 <211> 464 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 16 Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asn Phe Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Phe Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu 115 120 125 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 130 135 140 Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn 145 150 155 160 Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175 Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr 180 185 190 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val 210 215 220 Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg 225 230 235 240 Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser 245 250 255 Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu 260 265 270 Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro 275 280 285 Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala 290 295 300 Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val 305 310 315 320 Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe 325 330 335 Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 340 345 350 Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile 355 360 365 Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys 370 375 380 Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp 385 390 395 400 Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp 405 410 415 Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser 420 425 430 Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly 435 440 445 Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 17 <211> 705 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(705) <400> 17 atg gcc tgg att tca ctt ata ctc tct ctc ctg gct ctc agc tca ggg 48 Met Ala Trp Ile Ser Leu Ile Leu Ser Leu Leu Ala Leu Ser Ser Gly 1 5 10 15 gcc att tcc cag gct gtt gtg act cag gaa tct gca ctc acc aca tca 96 Ala Ile Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser 20 25 30 cct ggt gaa aca gtc aca ctc act tgt cgc tca agt act ggg gct gtt 144 Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val 35 40 45 aca act agt aac tat gcc aac tgg gtc caa gaa aaa cca gat cat tta 192 Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu 50 55 60 ttc act ggt cta ata ggt ggt acc aac aac cga gct cca ggt gtt cct 240 Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro 65 70 75 80 gcc aga ttc tca ggc tcc ctg att gga gac aag gct gcc ctc acc atc 288 Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile 85 90 95 aca ggg gca cag act gag gat gag gca ata tat ttc tgt gct cta tgg 336 Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp 100 105 110 tac agc aac cat tgg gtg ttc ggt gga gga acc aaa ctg act gtc cta 384 Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 115 120 125 ggc cag ccc aag tct tcg cca tca gtc acc ctg ttt cca cct tcc tct 432 Gly Gln Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 gaa gag ctc gag act aac aag gcc aca ctg gtg tgt acg atc act gat 480 Glu Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp 145 150 155 160 ttc tac cca ggt gtg gtg aca gtg gac tgg aag gta gat ggt acc cct 528 Phe Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro 165 170 175 gtc act cag ggt atg gag aca acc cag cct tcc aaa cag agc aac aac 576 Val Thr Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 180 185 190 aag tac atg gct agc agc tac ctg acc ctg aca gca aga gca tgg gaa 624 Lys Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu 195 200 205 agg cat agc agt tac agc tgc cag gtc act cat gaa ggt cac act gtg 672 Arg His Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val 210 215 220 gag aag agt ttg tcc cgt gct gac tgt tcc tag 705 Glu Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser 225 230 <210> 18 <211> 234 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 18 Met Ala Trp Ile Ser Leu Ile Leu Ser Leu Leu Ala Leu Ser Ser Gly 1 5 10 15 Ala Ile Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser 20 25 30 Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val 35 40 45 Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu 50 55 60 Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro 65 70 75 80 Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile 85 90 95 Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp 100 105 110 Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 115 120 125 Gly Gln Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 Glu Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro 165 170 175 Val Thr Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 180 185 190 Lys Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu 195 200 205 Arg His Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val 210 215 220 Glu Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser 225 230 <210> 19 <211> 420 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(420) <400> 19 atg gac tcc agg ctc aat tta gtt ttc ctt gtc ctt att tta aaa ggt 48 Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 gtc cag tgt gat gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc tta gtg cag 96 Val Gln Cys Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 cct gga ggg tcc cgg aaa ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc act ttc 144 Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 agt aac ttt gga atg cac tgg gtt cgt cag gct cca gag aag gga ctg 192 Ser Asn Phe Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtc gca tac att agt agt ggc agt agt acc atc tac tat gca 240 Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 gac aca gtg aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat ccc aag aac 288 Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn 85 90 95 acc ctg ttc ctg caa atg acc agt cta agg tct gag gac acg gcc atg 336 Thr Leu Phe Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met 100 105 110 tat tac tgt gca aga tat gat tac gac gat gat tac tat gct atg gaa 384 Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu 115 120 125 tac tgg ggt caa gga acc tca gtc acc gtc tcc tca 420 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 <210> 20 <211> 140 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 20 Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asn Phe Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Phe Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu 115 120 125 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 <210> 21 <211> 412 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (29)..(412) <400> 21 tgaaaagaat agacctggtt tgtgaatt atg gcc tgg att tca ctt ata ctc 52 Met Ala Trp Ile Ser Leu Ile Leu 1 5 tct ctc ctg gct ctc agc tca ggg gcc att tcc cag gct gtt gtg act 100 Ser Leu Leu Ala Leu Ser Ser Gly Ala Ile Ser Gln Ala Val Val Thr 10 15 20 cag gaa tct gca ctc acc aca tca cct ggt gaa aca gtc aca ctc act 148 Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr 25 30 35 40 tgt cgc tca agt act ggg gct gtt aca act agt aac tat gcc aac tgg 196 Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 45 50 55 gtc caa gaa aaa cca gat cat tta ttc act ggt cta ata ggt ggt acc 244 Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly Thr 60 65 70 aac aac cga gct cca ggt gtt cct gcc aga ttc tca ggc tcc ctg att 292 Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile 75 80 85 gga gac aag gct gcc ctc acc atc aca ggg gca cag act gag gat gag 340 Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu 90 95 100 gca ata tat ttc tgt gct cta tgg tac agc aac cat tgg gtg ttc ggt 388 Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly 105 110 115 120 gga gga acc aaa ctg act gtc cta 412 Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 125 <210> 22 <211> 128 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 22 Met Ala Trp Ile Ser Leu Ile Leu Ser Leu Leu Ala Leu Ser Ser Gly 1 5 10 15 Ala Ile Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser 20 25 30 Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val 35 40 45 Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu 50 55 60 Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro 65 70 75 80 Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile 85 90 95 Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp 100 105 110 Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 115 120 125 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 23 Asn Phe Gly Met His 1 5 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 24 Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 12 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 25 Tyr Asp Tyr Asp Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Glu Tyr 1 5 10 <210> 26 <211> 14 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 26 Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 27 Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 28 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val 1 5 <210> 29 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Humanized sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(321) <400> 29 cag tct gcc ctg act cag tcc cca gca act ctc tct gtg tct ccc ggc 48 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 caa tct gtg agc ctg tcc tgt cgg gca agc cag tct att tcc aat tat 96 Gln Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 ctg cac tgg tat cag caa cac cca ggc gag agc cca cgg ctc ctg atc 144 Leu His Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 aaa tac gcc tct caa tcc att tct ggc tcc aac aga cgc ttc tct ggc 192 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ser Asn Arg Arg Phe Ser Gly 50 55 60 agc ggc tcc ggc acc gat ttc att ctc agc ttt aat agc gtt cag gca 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Phe Asn Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 gag gat ttt ggg atg tac ttc tgt caa cag agc aac tct tgg cct ttt 288 Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Phe 85 90 95 acc ttc gga agc ggg act aaa ctg acc gtt ctg 321 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 30 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 30 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ser Asn Arg Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Phe Asn Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 31 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Humanized sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(321) <400> 31 caa tct gca ctg act caa tct cca gca aca ctg tcc gtt tct cct gga 48 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 caa tcc gtg agc ctc agc tgt agg gca tcc cag tcc att agc aac tat 96 Gln Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 ctc cac tgg tac cag cag cac cca gga gaa agc cct cgc ctg ctg ata 144 Leu His Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 aaa tac gca agc cag tct att agc ggc agc aac cgg cgc ttc agc ggg 192 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ser Asn Arg Arg Phe Ser Gly 50 55 60 tcc ggc tcc ggg aca gac ttt atc ctg tct ttt agc agc gtg caa gcc 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Phe Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 gaa gac ttt ggc atg tac ttc tgc cag cag tct aac aat tgg cca ttc 288 Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Phe 85 90 95 acc ttc gga tcc ggc aca aag ctg acc gtg ctg 321 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 32 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 32 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ser Asn Arg Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Phe Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 33 <211> 342 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Humanized sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(342) <400> 33 cag gtt act ctg aaa gaa tct ggc cca act ctg gtt aag cct aca cag 48 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 acc ctg tcc ctc acc tgt tct ttc tcc ggc ttt agc ctg agc aca agc 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 gga atg ggc gtc agc tgg atc aga caa cca ccc ggc aag ggc ctg gag 144 Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 tgg ctg gcc cac atc tat tgg gat gat gat aag agg tat aac cct tcc 192 Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 ctg aaa tcc aga ctc aca att tcc aag gac acc tcc agc aac cag gtc 240 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val 65 70 75 80 ttc ctg aag ata acc tct gtt gat cca gtg gac acc gca act tac tac 288 Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 tgc gcc cgc gac tac tat gcc agc tct ttt gac tac tgg ggg cag ggc 336 Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 aca ctc 342 Thr Leu <210> 34 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 34 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val 65 70 75 80 Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu <210> 35 <211> 342 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Humanized sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(342) <400> 35 cag gtg act ctc aaa gaa tct ggc cct aca ctg gtg aaa ccc act cag 48 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 aca ctc agc ctg acc tgc tcc ttc agc ggc ttc tct ctg agc act tcc 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 gga ctc gga gtg agc tgg att cgc caa cct cct ggg aaa ggc ctg gag 144 Gly Leu Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 tgg ctg gca cac ata tac tgg gat gac gac aaa cgc tat aac cct agc 192 Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 ctg aag tcc aga ctc aca atc tcc aaa gat aca tcc agc aat cag gtg 240 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val 65 70 75 80 ttt ctg aag atc acc tcc gtc gat cca gtc gac acc gcc act tac tat 288 Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 tgt gct cgc gat tac tat gcc agc tcc ttc gac tac tgg gga cag gga 336 Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 aca ctg 342 Thr Leu <210> 36 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 36 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Leu Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val 65 70 75 80 Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu <210> 37 <211> 342 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Humanized sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(342) <400> 37 cag gtc aca ctc aaa gaa tct gga cca aca ctc gtt aaa cca act caa 48 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 aca ctc agc ctg act tgc agc ttt tct ggc ttc agc ctc tcc act agc 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 ggc ctc ggc gtg tcc tgg atc cgg cag ccc cct gga aaa ggc ctg gag 144 Gly Leu Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 tgg ctg gcc cac atc tat tgg gac gat gac aag cgg tac aat cca agc 192 Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 ctg aaa tct cgg ctg acc ata tct aag gat act tct tcc aat cag gtg 240 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val 65 70 75 80 ttc ctg aag atc aca tct gtg gct cct gtc gac act gcc act tat tat 288 Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Ala Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 tgc gca agg gat tac tac gca tcc tcc ttc gat tac tgg ggc cag gga 336 Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 act ctg 342 Thr Leu <210> 38 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 38 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Leu Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val 65 70 75 80 Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Ala Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu <210> 39 <211> 1059 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1059) <400> 39 ctg gag gcc tct gag gaa gtg gag ctt gag ccc tgc ctg gct ccc agc 48 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ser 1 5 10 15 ctg gag cag caa gag cag gag ctg aca gta gcc ctt ggg cag cct gtg 96 Leu Glu Gln Gln Glu Gln Glu Leu Thr Val Ala Leu Gly Gln Pro Val 20 25 30 cgg ctg tgc tgt ggg cgg gct gag cgt ggt ggc cac tgg tac aag gag 144 Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45 ggc agt cgc ctg gca cct gct ggc cgt gta cgg ggc tgg agg ggc cgc 192 Gly Ser Arg Leu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg Gly Arg 50 55 60 cta gag att gcc agc ttc cta cct gag gat gct ggc cgc tac ctc tgc 240 Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys 65 70 75 80 ctg gca cga ggc tcc atg atc gtc ctg cag aat ctc acc ttg att aca 288 Leu Ala Arg Gly Ser Met Ile Val Leu Gln Asn Leu Thr Leu Ile Thr 85 90 95 ggt gac tcc ttg acc tcc agc aac gat gat gag gac ccc aag tcc cat 336 Gly Asp Ser Leu Thr Ser Ser Asn Asp Asp Glu Asp Pro Lys Ser His 100 105 110 agg gac ctc tcg aat agg cac agt tac ccc cag caa gca ccc tac tgg 384 Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gln Gln Ala Pro Tyr Trp 115 120 125 aca cac ccc cag cgc atg gag aag aaa ctg cat gca gta cct gcg ggg 432 Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly 130 135 140 aac acc gtc aag ttc cgc tgt cca gct gca ggc aac ccc acg ccc acc 480 Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Thr 145 150 155 160 atc cgc tgg ctt aag gat gga cag gcc ttt cat ggg gag aac cgc att 528 Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg Ile 165 170 175 gga ggc att cgg ctg cgc cat cag cac tgg agt ctc gtg atg gag agc 576 Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu Ser 180 185 190 gtg gtg ccc tcg gac cgc ggc aca tac acc tgc ctg gta gag aac gct 624 Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn Ala 195 200 205 gtg ggc agc atc cgt tat aac tac ctg cta gat gtg ctg gag cgg tcc 672 Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220 ccg cac cgg ccc atc ctg cag gcc ggg ctc ccg gcc aac acc aca gcc 720 Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240 gtg gtg ggc agc gac gtg gag ctg ctg tgc aag gtg tac agc gat gcc 768 Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255 cag ccc cac atc cag tgg ctg aag cac atc gtc atc aac ggc agc agc 816 Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly Ser Ser 260 265 270 ttc gga gcc gac ggt ttc ccc tat gtg caa gtc cta aag act gca gac 864 Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Ala Asp 275 280 285 atc aat agc tca gag gtg gag gtc ctg tac ctg cgg aac gtg tca gcc 912 Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 295 300 gag gac gca ggc gag tac acc tgc ctc gca ggc aat tcc atc ggc ctc 960 Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu 305 310 315 320 tcc tac cag tct gcc tgg ctc acg gtg ctg cca gag gag gac ccc aca 1008 Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Glu Glu Asp Pro Thr 325 330 335 tgg acc gca gca gcg ccc gag gcc gct agc cat cac cat cat cat cac 1056 Trp Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Ala Ser His His His His His His 340 345 350 tga 1059 <210> 40 <211> 352 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ser 1 5 10 15 Leu Glu Gln Gln Glu Gln Glu Leu Thr Val Ala Leu Gly Gln Pro Val 20 25 30 Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45 Gly Ser Arg Leu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg Gly Arg 50 55 60 Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys 65 70 75 80 Leu Ala Arg Gly Ser Met Ile Val Leu Gln Asn Leu Thr Leu Ile Thr 85 90 95 Gly Asp Ser Leu Thr Ser Ser Asn Asp Asp Glu Asp Pro Lys Ser His 100 105 110 Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gln Gln Ala Pro Tyr Trp 115 120 125 Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly 130 135 140 Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Thr 145 150 155 160 Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg Ile 165 170 175 Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu Ser 180 185 190 Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn Ala 195 200 205 Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220 Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240 Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255 Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly Ser Ser 260 265 270 Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Ala Asp 275 280 285 Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 295 300 Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu 305 310 315 320 Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Glu Glu Asp Pro Thr 325 330 335 Trp Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Ala Ser His His His His His His 340 345 350 <210> 41 <211> 726 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(726) <400> 41 ctg gag gcc tct gag gaa gtg gag ctt gag ccc tgc caa gca ccc tac 48 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Gln Ala Pro Tyr 1 5 10 15 tgg aca cac ccc cag cgc atg gag aag aaa ctg cat gca gta cct gcg 96 Trp Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala 20 25 30 ggg aac acc gtc aag ttc cgc tgt cca gct gca ggc aac ccc acg ccc 144 Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro 35 40 45 acc atc cgc tgg ctt aag gat gga cag gcc ttt cat ggg gag aac cgc 192 Thr Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg 50 55 60 att gga ggc att cgg ctg cgc cat cag cac tgg agt ctc gtg atg gag 240 Ile Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu 65 70 75 80 agc gtg gtg ccc tcg gac cgc ggc aca tac acc tgc ctg gta gag aac 288 Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn 85 90 95 gct gtg ggc agc atc cgt tat aac tac ctg cta gat gtg ctg gag cgg 336 Ala Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg 100 105 110 tcc ccg cac cgg ccc atc ctg cag gcc ggg ctc ccg gcc aac acc aca 384 Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr 115 120 125 gcc gtg gtg ggc agc gac gtg gag ctg ctg tgc aag gtg tac agc gat 432 Ala Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp 130 135 140 gcc cag ccc cac atc cag tgg ctg aag cac atc gtc atc aac ggc agc 480 Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly Ser 145 150 155 160 agc ttc gga gcc gac ggt ttc ccc tat gtg caa gtc cta aag act gca 528 Ser Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Ala 165 170 175 gac atc aat agc tca gag gtg gag gtc ctg tac ctg cgg aac gtg tca 576 Asp Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser 180 185 190 gcc gag gac gca ggc gag tac acc tgc ctc gca ggc aat tcc atc ggc 624 Ala Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly 195 200 205 ctc tcc tac cag tct gcc tgg ctc acg gtg ctg cca gag gag gac ccc 672 Leu Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Glu Glu Asp Pro 210 215 220 aca tgg acc gca gca gcg ccc gag gcc gct agc cat cac cat cat cat 720 Thr Trp Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Ala Ser His His His His His 225 230 235 240 cac tga 726 His <210> 42 <211> 241 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Gln Ala Pro Tyr 1 5 10 15 Trp Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala 20 25 30 Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro 35 40 45 Thr Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg 50 55 60 Ile Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu 65 70 75 80 Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn 85 90 95 Ala Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg 100 105 110 Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr 115 120 125 Ala Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp 130 135 140 Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly Ser 145 150 155 160 Ser Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Ala 165 170 175 Asp Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser 180 185 190 Ala Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly 195 200 205 Leu Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Glu Glu Asp Pro 210 215 220 Thr Trp Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Ala Ser His His His His His 225 230 235 240 His <210> 43 <211> 1059 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(1059) <400> 43 ctt gag gcc tct gag gaa atg gag cag gag ccc tgc cta gcc cca atc 48 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Met Glu Gln Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ile 1 5 10 15 ctg gag cag caa gag cag gtg ttg acg gtg gcc ctg ggg cag cct gtg 96 Leu Glu Gln Gln Glu Gln Val Leu Thr Val Ala Leu Gly Gln Pro Val 20 25 30 agg ctg tgc tgt ggg cgc acc gag cgt ggt cgt cac tgg tac aaa gag 144 Arg Leu Cys Cys Gly Arg Thr Glu Arg Gly Arg His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45 ggc agc cgc cta gca tct gct ggg cga gta cgg ggt tgg aga ggc cgc 192 Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg Gly Arg 50 55 60 ctg gag atc gcc agc ttc ctt cct gag gat gct ggc cga tac ctc tgc 240 Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys 65 70 75 80 ctg gcc cgt ggc tcc atg acc gtc gta cac aat ctt acg ttg ctt atg 288 Leu Ala Arg Gly Ser Met Thr Val Val His Asn Leu Thr Leu Leu Met 85 90 95 gat gac tcc tta acc tcc atc agt aat gat gaa gac ccc aag aca ctc 336 Asp Asp Ser Leu Thr Ser Ile Ser Asn Asp Glu Asp Pro Lys Thr Leu 100 105 110 agc agc tcc tcg agt ggt cat gtc tac cca cag caa gca ccc tac tgg 384 Ser Ser Ser Ser Ser Gly His Val Tyr Pro Gln Gln Ala Pro Tyr Trp 115 120 125 aca cac ccc caa cgc atg gag aag aaa ctg cat gca gtg cct gcc ggg 432 Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly 130 135 140 aat act gtc aaa ttc cgc tgt cca gct gca ggg aac ccc atg cct acc 480 Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Met Pro Thr 145 150 155 160 atc cac tgg ctc aag gat gga cag gcc ttc cac ggg gag aat cgt att 528 Ile His Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg Ile 165 170 175 gga ggc att cgg ctg cgc cac caa cac tgg agc ctg gtg atg gaa agt 576 Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu Ser 180 185 190 gtg gta ccc tcg gac cgt ggc aca tac aca tgc ctt gtg gag aac tct 624 Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn Ser 195 200 205 ctg ggt agc att cgc tac agc tat ctc ctg gat gtg ctg gag cgg tcc 672 Leu Gly Ser Ile Arg Tyr Ser Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220 ccg cac cgg ccc atc ctg cag gcg ggg ctc cca gcc aac acc aca gct 720 Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240 gtg gtg ggc agc gac gtg gag cta ctc tgc aag gtg tac agc gac gcc 768 Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255 cag ccc cac ata cag tgg ctg aaa cac gtc gtc atc aac ggc agc agc 816 Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Val Val Ile Asn Gly Ser Ser 260 265 270 ttc ggc gcc gac ggt ttc ccc tac gta caa gtc ctg aag aca aca gac 864 Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Thr Asp 275 280 285 atc aat agc tcg gag gta gag gtc ttg tat ctg agg aac gtg tcc gct 912 Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 295 300 gag gat gca gga gag tat acc tgt ctg gcg ggc aac tcc atc ggc ctt 960 Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu 305 310 315 320 tcc tac cag tca gcg tgg ctc acg gtg ctg cca gag gaa gac ctc acg 1008 Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Glu Glu Asp Leu Thr 325 330 335 tgg aca aca gca acc cct gag gcc gct agc cat cac cat cat cat cac 1056 Trp Thr Thr Ala Thr Pro Glu Ala Ala Ser His His His His His His 340 345 350 tga 1059 <210> 44 <211> 352 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 44 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Met Glu Gln Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ile 1 5 10 15 Leu Glu Gln Gln Glu Gln Val Leu Thr Val Ala Leu Gly Gln Pro Val 20 25 30 Arg Leu Cys Cys Gly Arg Thr Glu Arg Gly Arg His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45 Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg Gly Arg 50 55 60 Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys 65 70 75 80 Leu Ala Arg Gly Ser Met Thr Val Val His Asn Leu Thr Leu Leu Met 85 90 95 Asp Asp Ser Leu Thr Ser Ile Ser Asn Asp Glu Asp Pro Lys Thr Leu 100 105 110 Ser Ser Ser Ser Ser Gly His Val Tyr Pro Gln Gln Ala Pro Tyr Trp 115 120 125 Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly 130 135 140 Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Met Pro Thr 145 150 155 160 Ile His Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg Ile 165 170 175 Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu Ser 180 185 190 Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn Ser 195 200 205 Leu Gly Ser Ile Arg Tyr Ser Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220 Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240 Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255 Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Val Val Ile Asn Gly Ser Ser 260 265 270 Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Thr Asp 275 280 285 Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 295 300 Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu 305 310 315 320 Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Glu Glu Asp Leu Thr 325 330 335 Trp Thr Thr Ala Thr Pro Glu Ala Ala Ser His His His His His His 340 345 350 <210> 45 <211> 1773 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1773) <400> 45 agg ccg tcc ccg acc ttg cct gaa caa gcc cag ccc tgg gga gcc cct 48 Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro 1 5 10 15 gtg gaa gtg gag tcc ttc ctg gtc cac ccc ggt gac ctg ctg cag ctt 96 Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu 20 25 30 cgc tgt cgg ctg cgg gac gat gtg cag agc atc aac tgg ctg cgg gac 144 Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp 35 40 45 ggg gtg cag ctg gcg gaa agc aac cgc acc cgc atc aca ggg gag gag 192 Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu 50 55 60 gtg gag gtg cag gac tcc gtg ccc gca gac tcc ggc ctc tat gct tgc 240 Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80 gta acc agc agc ccc tcg ggc agt gac acc acc tac ttc tcc gtc aat 288 Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn 85 90 95 gtt tca gat gct ctc ccc tcc tcg gag gat gat gat gat gat gat gac 336 Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 100 105 110 tcc tct tca gag gag aaa gaa aca gat aac acc aaa cca aac cgt atg 384 Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Arg Met 115 120 125 ccc gta gct cca tat tgg aca tcc cca gaa aag atg gaa aag aaa ttg 432 Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu 130 135 140 cat gca gtg ccg gct gcc aag aca gtg aag ttc aaa tgc cct tcc agt 480 His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser 145 150 155 160 ggg acc cca aac ccc aca ctg cgc tgg ttg aaa aat ggc aaa gaa ttc 528 Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe 165 170 175 aaa cct gac cac aga att gga ggc tac aag gtc cgt tat gcc acc tgg 576 Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp 180 185 190 agc atc ata atg gac tct gtg gtg ccc tct gac aag ggc aac tac acc 624 Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr 195 200 205 tgc att gtg gag aat gag tac ggc agc atc aac cac aca tac cag ctg 672 Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu 210 215 220 gat gtc gtg gag cgg tcc cct cac cgg ccc atc ctg caa gca ggg ttg 720 Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu 225 230 235 240 ccc gcc aac aaa aca gtg gcc ctg ggt agc aac gtg gag ttc atg tgt 768 Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys 245 250 255 aag gtg tac agt gac ccg cag ccg cac atc cag tgg cta aag cac atc 816 Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile 260 265 270 gag gtg aat ggg agc aag att ggc cca gac aac ctg cct tat gtc cag 864 Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln 275 280 285 atc ttg aag act gct gga gtt aat acc acc gac aaa gag atg gag gtg 912 Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val 290 295 300 ctt cac tta aga aat gtc tcc ttt gag gac gca ggg gag tat acg tgc 960 Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys 305 310 315 320 ttg gcg ggt aac tct atc gga ctc tcc cat cac tct gca tgg ttg acc 1008 Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr 325 330 335 gtt ctg gaa gcc ctg gaa gag agg ccg gca gtg atg acc tcg ccc ctg 1056 Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val Met Thr Ser Pro Leu 340 345 350 tac ctg gag ata gcg cta gag ccc aaa tct tgt gac aaa act cac aca 1104 Tyr Leu Glu Ile Ala Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 355 360 365 tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc 1152 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 370 375 380 ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct 1200 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 385 390 395 400 gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc 1248 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 405 410 415 aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca 1296 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 420 425 430 aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc 1344 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 435 440 445 ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc 1392 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 450 455 460 aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc 1440 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 465 470 475 480 aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca 1488 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 485 490 495 tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc 1536 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 500 505 510 aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg 1584 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 515 520 525 cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac 1632 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 530 535 540 ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg 1680 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 545 550 555 560 cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac 1728 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 565 570 575 aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1773 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 580 585 590 <210> 46 <211> 590 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro 1 5 10 15 Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu 20 25 30 Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp 35 40 45 Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu 50 55 60 Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80 Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn 85 90 95 Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 100 105 110 Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Arg Met 115 120 125 Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu 130 135 140 His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser 145 150 155 160 Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe 165 170 175 Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp 180 185 190 Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr 195 200 205 Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu 210 215 220 Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu 225 230 235 240 Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys 245 250 255 Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile 260 265 270 Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln 275 280 285 Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val 290 295 300 Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys 305 310 315 320 Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr 325 330 335 Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala 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Asp Lys Ser Arg Trp 545 550 555 560 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 565 570 575 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 580 585 590 <210> 47 <211> 1773 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1773) <400> 47 cgg ccc tcc ttc agt tta gtt gag gat acc aca tta gag cca gaa gag 48 Arg Pro Ser Phe Ser Leu Val Glu Asp Thr Thr Leu Glu Pro Glu Glu 1 5 10 15 cca cca acc aaa tac caa atc tct caa cca gaa gtg tac gtg gct gca 96 Pro Pro Thr Lys Tyr Gln Ile Ser Gln Pro Glu Val Tyr Val Ala Ala 20 25 30 cca ggg gag tcg cta gag gtg cgc tgc ctg ttg aaa gat gcc gcc gtg 144 Pro Gly Glu Ser Leu Glu Val Arg Cys Leu Leu Lys Asp Ala Ala Val 35 40 45 atc agt tgg act aag gat ggg gtg cac ttg ggg ccc aac aat agg aca 192 Ile Ser Trp Thr Lys Asp Gly Val His Leu Gly Pro Asn Asn Arg Thr 50 55 60 gtg ctt att ggg gag tac ttg cag ata aag ggc gcc acg cct aga gac 240 Val Leu Ile Gly Glu Tyr Leu Gln Ile Lys Gly Ala Thr Pro Arg Asp 65 70 75 80 tcc ggc ctc tat gct tgt act gcc agt agg act gta gac agt gaa act 288 Ser Gly Leu Tyr Ala Cys Thr Ala Ser Arg Thr Val Asp Ser Glu Thr 85 90 95 tgg tac ttc atg gtg aat gtc aca gat gcc atc tca tcc gga gat gat 336 Trp Tyr Phe Met Val Asn Val Thr Asp Ala Ile Ser Ser Gly Asp Asp 100 105 110 gag gat gac acc gat ggt gcg gaa gat ttt gtc agt gag aac agt aac 384 Glu Asp Asp Thr Asp Gly Ala Glu Asp Phe Val Ser Glu Asn Ser Asn 115 120 125 aac aag aga gca cca tac tgg acc aac aca gaa aag atg gaa aag cgg 432 Asn Lys Arg Ala Pro Tyr Trp Thr Asn Thr Glu Lys Met Glu Lys Arg 130 135 140 ctc cat gct gtg cct gcg gcc aac act gtc aag ttt cgc tgc cca gcc 480 Leu His Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala 145 150 155 160 ggg ggg aac cca atg cca acc atg cgg tgg ctg aaa aac ggg aag gag 528 Gly Gly Asn Pro Met Pro Thr Met Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu 165 170 175 ttt aag cag gag cat cgc att gga ggc tac aag gta cga aac cag cac 576 Phe Lys Gln Glu His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Asn Gln His 180 185 190 tgg agc ctc att atg gaa agt gtg gtc cca tct gac aag gga aat tat 624 Trp Ser Leu Ile Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr 195 200 205 acc tgt gtg gtg gag aat gaa tac ggg tcc atc aat cac acg tac cac 672 Thr Cys Val Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr His 210 215 220 ctg gat gtt gtg gag cga tcg cct cac cgg ccc atc ctc caa gcc gga 720 Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly 225 230 235 240 ctg ccg gca aat gcc tcc aca gtg gtc gga gga gac gta gag ttt gtc 768 Leu Pro Ala Asn Ala Ser Thr Val Val Gly Gly Asp Val Glu Phe Val 245 250 255 tgc aag gtt tac agt gat gcc cag ccc cac atc cag tgg atc aag cac 816 Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Ile Lys His 260 265 270 gtg gaa aag aac ggc agt aaa tac ggg ccc gac ggg ctg ccc tac ctc 864 Val Glu Lys Asn Gly Ser Lys Tyr Gly Pro Asp Gly Leu Pro Tyr Leu 275 280 285 aag gtt ctc aag gcc gcc ggt gtt aac acc acg gac aaa gag att gag 912 Lys Val Leu Lys Ala Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Ile Glu 290 295 300 gtt ctc tat att cgg aat gta act ttt gag gac gct ggg gaa tat acg 960 Val Leu Tyr Ile Arg Asn Val Thr Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr 305 310 315 320 tgc ttg gcg ggt aat tct att ggg ata tcc ttt cac tct gca tgg ttg 1008 Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Ile Ser Phe His Ser Ala Trp Leu 325 330 335 aca gtt ctg cca gcg cct gga aga gaa aag gag att aca gct tcc cca 1056 Thr Val Leu Pro Ala Pro Gly Arg Glu Lys Glu Ile Thr Ala Ser Pro 340 345 350 gac tac ctg tca gcg cta gag ccc aaa tct tgt gac aaa act cac aca 1104 Asp Tyr Leu Ser Ala Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 355 360 365 tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc 1152 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 370 375 380 ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct 1200 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 385 390 395 400 gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc 1248 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 405 410 415 aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca 1296 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 420 425 430 aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc 1344 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 435 440 445 ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc 1392 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 450 455 460 aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc 1440 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 465 470 475 480 aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca 1488 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 485 490 495 tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc 1536 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 500 505 510 aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg 1584 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 515 520 525 cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac 1632 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 530 535 540 ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg 1680 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 545 550 555 560 cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac 1728 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 565 570 575 aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1773 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 580 585 590 <210> 48 <211> 590 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Arg Pro Ser Phe Ser Leu Val Glu Asp Thr Thr Leu Glu Pro Glu Glu 1 5 10 15 Pro Pro Thr Lys Tyr Gln Ile Ser Gln Pro Glu Val Tyr Val Ala Ala 20 25 30 Pro Gly Glu Ser Leu Glu Val Arg Cys Leu Leu Lys Asp Ala Ala Val 35 40 45 Ile Ser Trp Thr Lys Asp Gly Val His Leu Gly Pro Asn Asn Arg Thr 50 55 60 Val Leu Ile Gly Glu Tyr Leu Gln Ile Lys Gly Ala Thr Pro Arg Asp 65 70 75 80 Ser Gly Leu Tyr Ala Cys Thr Ala Ser Arg Thr Val Asp Ser Glu Thr 85 90 95 Trp Tyr Phe Met Val Asn Val Thr Asp Ala Ile Ser Ser Gly Asp Asp 100 105 110 Glu Asp Asp Thr Asp Gly Ala Glu Asp Phe Val Ser Glu Asn Ser Asn 115 120 125 Asn Lys Arg Ala Pro Tyr Trp Thr Asn Thr Glu Lys Met Glu Lys Arg 130 135 140 Leu His Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala 145 150 155 160 Gly Gly Asn Pro Met Pro Thr Met Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu 165 170 175 Phe Lys Gln Glu His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Asn Gln His 180 185 190 Trp Ser Leu Ile Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr 195 200 205 Thr Cys Val Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr His 210 215 220 Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly 225 230 235 240 Leu Pro Ala Asn Ala Ser Thr Val Val Gly Gly Asp Val Glu Phe Val 245 250 255 Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Ile Lys His 260 265 270 Val Glu Lys Asn Gly Ser Lys Tyr Gly Pro Asp Gly Leu Pro Tyr Leu 275 280 285 Lys Val Leu Lys Ala Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Ile Glu 290 295 300 Val Leu Tyr Ile Arg Asn Val Thr Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr 305 310 315 320 Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Ile Ser Phe His Ser Ala Trp Leu 325 330 335 Thr Val Leu Pro Ala Pro Gly Arg Glu Lys Glu Ile Thr Ala Ser Pro 340 345 350 Asp Tyr Leu Ser Ala Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 355 360 365 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 370 375 380 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 385 390 395 400 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 405 410 415 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 420 425 430 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 435 440 445 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 450 455 460 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 465 470 475 480 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 485 490 495 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 500 505 510 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 515 520 525 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 530 535 540 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 545 550 555 560 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 565 570 575 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 580 585 590 <210> 49 <211> 2403 <212> DNA <213> Rattus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(2403) <400> 49 atg tgg ctg ctg ttg gct ttg ttg agc atc ttt cag gag aca cca gcc 48 Met Trp Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ser Ile Phe Gln Glu Thr Pro Ala 1 5 10 15 ttc tcc ctt gag gcc tct gag gaa atg gaa cag gag ccc tgc cca gcc 96 Phe Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Met Glu Gln Glu Pro Cys Pro Ala 20 25 30 cca atc tcg gag cag caa gag cag gtg ttg act gtg gcc ctt ggg cag 144 Pro Ile Ser Glu Gln Gln Glu Gln Val Leu Thr Val Ala Leu Gly Gln 35 40 45 cct gtg cgg cta tgc tgt ggc cgc act gag cgt ggt cgt cat tgg tac 192 Pro Val Arg Leu Cys Cys Gly Arg Thr Glu Arg Gly Arg His Trp Tyr 50 55 60 aag gag ggc agc cgt tta gca tct gct ggg aga gta cgg ggc tgg aga 240 Lys Glu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg 65 70 75 80 ggc cgc ctg gag atc gcc agc ttc ctt cct gag gat gct ggc cgg tac 288 Gly Arg Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr 85 90 95 ctc tgc ctg gcc cgt ggc tcc atg act gtc gta cac aat ctt act ttg 336 Leu Cys Leu Ala Arg Gly Ser Met Thr Val Val His Asn Leu Thr Leu 100 105 110 att atg gat gac tcc tta ccc tcc atc aat aac gag gac ccc aag acc 384 Ile Met Asp Asp Ser Leu Pro Ser Ile Asn Asn Glu Asp Pro Lys Thr 115 120 125 ctc agc agc tcc tcg agt ggg cac tcc tac ctg cag caa gca cct tac 432 Leu Ser Ser Ser Ser Ser Gly His Ser Tyr Leu Gln Gln Ala Pro Tyr 130 135 140 tgg aca cac ccc caa cgc atg gag aag aaa ctg cac gcg gta cct gcc 480 Trp Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala 145 150 155 160 ggg aac act gtc aaa ttc cgc tgt cca gct gca ggg aac ccc atg ccc 528 Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Met Pro 165 170 175 acc atc cac tgg ctc aag aac gga cag gcc ttc cac gga gag aat cgt 576 Thr Ile His Trp Leu Lys Asn Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg 180 185 190 atc gga ggc att cgg ctg cgt cac caa cac tgg agc ctc gtg atg gag 624 Ile Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu 195 200 205 agc gtg gtg ccc tca gac cgt ggc acg tac acg tgt ctt gtg gag aac 672 Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn 210 215 220 tct ctg ggt agc att cgc tac agc tat ctg ctg gat gtg ctg gag cgg 720 Ser Leu Gly Ser Ile Arg Tyr Ser Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg 225 230 235 240 tcc ccg cac cgg ccc atc ctg cag gcg gga ctc cca gcc aac acc acg 768 Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr 245 250 255 gct gtg gtt ggc agc aac gtg gag ctg ctg tgc aag gtg tac agt gac 816 Ala Val Val Gly Ser Asn Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp 260 265 270 gcc cag ccg cac atc cag tgg ctg aag cac atc gtt atc aac ggc agc 864 Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly Ser 275 280 285 agt ttc ggc gct gat ggt ttc ccc tac gta caa gtc ctg aag aca aca 912 Ser Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Thr 290 295 300 gac atc aat agc tca gag gtg gag gtg ctg tat ctg agg aac gtg tcg 960 Asp Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser 305 310 315 320 gct gag gat gca ggg gag tac acc tgc ctg gcg ggc aac tcc atc ggc 1008 Ala Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly 325 330 335 ctc tcc tac cag tca gcg tgg ctc aca gtg cta ccc gca gag gaa gaa 1056 Leu Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Ala Glu Glu Glu 340 345 350 gac ctc gcg tgg aca aca gca aca tcg gag gcc aga tat aca gat att 1104 Asp Leu Ala Trp Thr Thr Ala Thr Ser Glu Ala Arg Tyr Thr Asp Ile 355 360 365 atc cta tat gta tct ggc tca ctg gct ttg gtt ttg ctc ctg ctg ctg 1152 Ile Leu Tyr Val Ser Gly Ser Leu Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Leu 370 375 380 gcc ggg gtg tat cac cga caa gca atc cac ggc cac cac tct cga cag 1200 Ala Gly Val Tyr His Arg Gln Ala Ile His Gly His His Ser Arg Gln 385 390 395 400 cct gtc act gta cag aag ctg tcc cgg ttc cct ttg gcc cgg cag ttc 1248 Pro Val Thr Val Gln Lys Leu Ser Arg Phe Pro Leu Ala Arg Gln Phe 405 410 415 tcc ttg gag tcg agg tcc tct ggc aag tca agt ttg tcc ctg gtg cga 1296 Ser Leu Glu Ser Arg Ser Ser Gly Lys Ser Ser Leu Ser Leu Val Arg 420 425 430 ggt gtc cgg ctc tcc tcc agt ggc ccg ccc ttg ctc acg ggc ctt gtg 1344 Gly Val Arg Leu Ser Ser Ser Gly Pro Pro Leu Leu Thr Gly Leu Val 435 440 445 agt cta gac cta cct ctc gat cca ctt tgg gag ttc ccc cgg gac agg 1392 Ser Leu Asp Leu Pro Leu Asp Pro Leu Trp Glu Phe Pro Arg Asp Arg 450 455 460 ctg gtg ctc gga aag ccc ctg ggt gag ggc tgc ttt ggg caa gtg gtt 1440 Leu Val Leu Gly Lys Pro Leu Gly Glu Gly Cys Phe Gly Gln Val Val 465 470 475 480 cgt gca gaa gcc ctt ggc atg gat tcc tcc cgg cca gac caa acc agc 1488 Arg Ala Glu Ala Leu Gly Met Asp Ser Ser Arg Pro Asp Gln Thr Ser 485 490 495 acc gtg gct gtg aag atg ctg aaa gac aat gcc tcc gac aag gat ttg 1536 Thr Val Ala Val Lys Met Leu Lys Asp Asn Ala Ser Asp Lys Asp Leu 500 505 510 gca gac ctg atc tct gag atg gag atg atg aag cta atc gga aga cac 1584 Ala Asp Leu Ile Ser Glu Met Glu Met Met Lys Leu Ile Gly Arg His 515 520 525 aag aac atc att aac ctg ctg ggt gtc tgc act cag gaa ggg ccc ctg 1632 Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Val Cys Thr Gln Glu Gly Pro Leu 530 535 540 tat gtg att gtg gaa tat gcg gcc aag gga aac ctt cgg gaa ttc ctc 1680 Tyr Val Ile Val Glu Tyr Ala Ala Lys Gly Asn Leu Arg Glu Phe Leu 545 550 555 560 cgt gcc cgg cgt ccc cca ggc cct gat ctc agc cct gat ggg cct cgg 1728 Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly Pro Asp Leu Ser Pro Asp Gly Pro Arg 565 570 575 agc agc gaa gga ccg ctc tcc ttc ccg gcc ctg gtc tcc tgt gcc tac 1776 Ser Ser Glu Gly Pro Leu Ser Phe Pro Ala Leu Val Ser Cys Ala Tyr 580 585 590 cag gtg gcc cga ggc atg cag tat ctg gag tct cgg aag tgc atc cac 1824 Gln Val Ala Arg Gly Met Gln Tyr Leu Glu Ser Arg Lys Cys Ile His 595 600 605 cgg gac ctg gct gcc cga aac gtg ctg gtg acc gag gat gac gtg atg 1872 Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Thr Glu Asp Asp Val Met 610 615 620 aag atc gct gac ttt ggt ctg gcc cgt ggt gtc cac cac atc gac tac 1920 Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Gly Val His His Ile Asp Tyr 625 630 635 640 tat aag aaa acc agc aat ggc cgc ctg cca gtc aag tgg atg gct cct 1968 Tyr Lys Lys Thr Ser Asn Gly Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro 645 650 655 gag gcg ttg ttt gac cgt gta tac aca cac cag agt gac gtg tgg tcc 2016 Glu Ala Leu Phe Asp Arg Val Tyr Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser 660 665 670 ttc ggg atc ctg ctg tgg gaa atc ttc acc ctc ggg ggc tcc cca tac 2064 Phe Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr 675 680 685 ccc ggc atc cca gtg gag gag ctg ttc tca ctg ctg cga gag ggg cac 2112 Pro Gly Ile Pro Val Glu Glu Leu Phe Ser Leu Leu Arg Glu Gly His 690 695 700 agg atg gag cgg ccc cca aac tgc ccc tca gag ctg tat ggg cta atg 2160 Arg Met Glu Arg Pro Pro Asn Cys Pro Ser Glu Leu Tyr Gly Leu Met 705 710 715 720 agg gag tgt tgg cac gca gct cct tct cag agg ccg act ttt aag cag 2208 Arg Glu Cys Trp His Ala Ala Pro Ser Gln Arg Pro Thr Phe Lys Gln 725 730 735 ctg gtg gaa gct ctg gac aag gtc ctg ctg gct gtc tct gaa gag tac 2256 Leu Val Glu Ala Leu Asp Lys Val Leu Leu Ala Val Ser Glu Glu Tyr 740 745 750 ctt gac ctc cgc ctg acc ttt gga ccc tat tcc ccc aac aat ggg gat 2304 Leu Asp Leu Arg Leu Thr Phe Gly Pro Tyr Ser Pro Asn Asn Gly Asp 755 760 765 gcc agc agc acg tgc tcc tcc agc gac tcg gtt ttc agc cac gac cct 2352 Ala Ser Ser Thr Cys Ser Ser Ser Asp Ser Val Phe Ser His Asp Pro 770 775 780 ttg ccc ctc gag cca agc ccc ttc cca ttt cct gag gcg cag acc aca 2400 Leu Pro Leu Glu Pro Ser Pro Phe Pro Phe Pro Glu Ala Gln Thr Thr 785 790 795 800 tga 2403 <210> 50 <211> 800 <212> PRT <213> Rattus sp. <400> 50 Met Trp Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ser Ile Phe Gln Glu Thr Pro Ala 1 5 10 15 Phe Ser Leu Glu Ala Ser Glu 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<213> Mus sp. <400> 54 ctagttgtac agagctcggt ac 22 <210> 55 <211> 32 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 55 gcgccgtcct ggagctcctg ctgctgaggt gg 32 <210> 56 <211> 24 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 56 ggcaactaga aggcacagtc gagg 24 <210> 57 <211> 27 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 57 gtccctggga tcctcgagga agtggag 27 <210> 58 <211> 31 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 58 gcgcctgccc gagctccagc ccggccagca g 31 <210> 59 <211> 19 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 59 Leu Ala Leu Ala Val Leu Leu Leu Ala Gly Leu Glu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Arg Trp Gln <210> 60 <211> 12 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 60 Leu Ala Leu Ala Val Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln 1 5 10 <210> 61 <211> 52 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 61 ggccttggct gtgctcctgc tgctgaggtg gcagtttcct gcacactaca gg 52 <210> 62 <211> 52 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 62 cctgtagtgt gcaggaaact gccacctcag cagcaggagc acagccaagg cc 52 <210> 63 <211> 23 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 63 cgactggagc acgaggacac tga 23 <210> 64 <211> 21 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 64 tatgcaaggc ttacaaccac a 21 <210> 65 <211> 24 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 65 ctcattcctg ttgaagctct tgac 24 <210> 66 <211> 27 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 66 acactcagca cgggacaaac tcttctc 27 <210> 67 <211> 27 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 67 acactctgca ggagacagac tcttttc 27 <210> 68 <211> 1062 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1062) <400> 68 ctg gag gcc tct gag gaa gtg gag ctt gag ccc tgc ctg gct ccc agc 48 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ser 1 5 10 15 ctg gag cag caa gag cag gag ctg aca gta gcc ctt ggg cag cct gtg 96 Leu Glu Gln Gln Glu Gln Glu Leu Thr Val Ala Leu Gly Gln Pro Val 20 25 30 cgg ctg tgc tgt ggg cgg gct gag cgt ggt ggc cac tgg tac aag gag 144 Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45 ggc agt cgc ctg gca cct gct ggc cgt gta cgg ggc tgg agg ggc cgc 192 Gly Ser Arg Leu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg Gly Arg 50 55 60 cta gag att gcc agc ttc cta cct gag gat gct ggc cgc tac ctc tgc 240 Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys 65 70 75 80 ctg gca cga ggc tcc atg atc gtc ctg cag aat ctc acc ttg att aca 288 Leu Ala Arg Gly Ser Met Ile Val Leu Gln Asn Leu Thr Leu Ile Thr 85 90 95 ggt gac tcc ttg acc tcc agc aac gat gat gag gac ccc aag tcc cat 336 Gly Asp Ser Leu Thr Ser Ser Asn Asp Asp Glu Asp Pro Lys Ser His 100 105 110 agg gac ctc tcg aat agg cac agt tac ccc cag caa gca ccc tac tgg 384 Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gln Gln Ala Pro Tyr Trp 115 120 125 aca cac ccc cag cgc atg gag aag aaa ctg cat gca gta cct gcg ggg 432 Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly 130 135 140 aac acc gtc aag ttc cgc tgt cca gct gca ggc aac ccc acg ccc acc 480 Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Thr 145 150 155 160 atc cgc tgg ctt aag gat gga cag gcc ttt cat ggg gag aac cgc att 528 Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg Ile 165 170 175 gga ggc att cgg ctg cgc cat cag cac tgg agt ctc gtg atg gag agc 576 Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu Ser 180 185 190 gtg gtg ccc tcg gac cgc ggc aca tac acc tgc ctg gta gag aac gct 624 Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn Ala 195 200 205 gtg ggc agc atc cgt tat aac tac ctg cta gat gtg ctg gag cgg tcc 672 Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220 ccg cac cgg ccc atc ctg cag gcc ggg ctc ccg gcc aac acc aca gcc 720 Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240 gtg gtg ggc agc gac gtg gag ctg ctg tgc aag gtg tac agc gat gcc 768 Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255 cag ccc cac atc cag tgg ctg aag cac atc gtc atc aac ggc agc agc 816 Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly Ser Ser 260 265 270 ttc gga gcc gac ggt ttc ccc tat gtg caa gtc cta aag act gca gac 864 Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Ala Asp 275 280 285 atc aat agc tca gag gtg gag gtc ctg tac ctg cgg aac gtg tca gcc 912 Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 295 300 gag gac gca ggc gag tac acc tgc ctc gca ggc aat tcc atc ggc ctc 960 Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu 305 310 315 320 tcc tac cag tct gcc tgg ctc acg gtg cca gag gag gac ccc aca tgg 1008 Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Pro Glu Glu Asp Pro Thr Trp 325 330 335 acc gca gca gcg ccc gag gcc gct agc tgg agc cac ccg cag ttc gaa 1056 Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Ala Ser Trp Ser His Pro Gln Phe Glu 340 345 350 aaa tga 1062 Lys <210> 69 <211> 353 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ser 1 5 10 15 Leu Glu Gln Gln Glu Gln Glu Leu Thr Val Ala Leu Gly Gln Pro Val 20 25 30 Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly His Trp Tyr Lys Glu 35 40 45 Gly Ser Arg Leu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg Gly Trp Arg Gly Arg 50 55 60 Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys 65 70 75 80 Leu Ala Arg Gly Ser Met Ile Val Leu Gln Asn Leu Thr Leu Ile Thr 85 90 95 Gly Asp Ser Leu Thr Ser Ser Asn Asp Asp Glu Asp Pro Lys Ser His 100 105 110 Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gln Gln Ala Pro Tyr Trp 115 120 125 Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Gly 130 135 140 Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Thr 145 150 155 160 Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His Gly Glu Asn Arg Ile 165 170 175 Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser Leu Val Met Glu Ser 180 185 190 Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys Leu Val Glu Asn Ala 195 200 205 Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser 210 215 220 Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Ala 225 230 235 240 Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala 245 250 255 Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly Ser Ser 260 265 270 Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr Ala Asp 275 280 285 Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val Ser Ala 290 295 300 Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu 305 310 315 320 Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Pro Glu Glu Asp Pro Thr Trp 325 330 335 Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Ala Ser Trp Ser His Pro Gln Phe Glu 340 345 350 Lys <210> 70 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Gln Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His 1 5 10 15 Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 20 25 30 Asn Pro Thr Pro Thr Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His 35 40 45 Gly Glu Asn Arg Ile Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser 50 55 60 Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys 65 70 75 80 Leu Val Glu Asn Ala Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp 85 90 95 Val Leu <210> 71 <211> 648 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(648) <400> 71 cag agc gaa ttg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc atc tct tgt tct gga ggc tac tcc aac atg gga agc aat 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Tyr Ser Asn Met Gly Ser Asn 20 25 30 tat gca cac tgg tac cag cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144 Tyr Ala His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 atc tat aac aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192 Ile Tyr Asn Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cgg 240 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 tcc gag gat gag gct gat tat tac tgt gca gca tgg gat gac agc ctg 288 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 agt ggt ccg gtg ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt cag 336 Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 ccc aag gct gcc ccc tcg gtc act ctg ttc ccg ccc tcc tct gag gag 384 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 ctt caa gcc aac aag gcc aca ctg gtg tgt ctg atc agt gac ttc tac 432 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 ccg gga gct gtg aca gtg gcc tgg aag gca gat ggc agc ccc gtc aag 480 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 gcg gga gtg gag acc acc aca ccc tcc aaa caa agc aac aac aag tac 528 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 gcg gcc agc agc tat ctg agc ctg acg cct gag cag tgg aag tcc cac 576 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 aga agc tac agc tgc cag gtc acg cat gaa ggg agc acc gtg gag aag 624 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 aca gtg gcc cct aca gaa tgt tca 648 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 72 <211> 216 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Gln Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Tyr Ser Asn Met Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Ala His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asn Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Ser Asn Met Gly Ser Asn Tyr Ala His 1 5 <210> 74 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Tyr Asn Asn Asn Gln 1 5 <210> 75 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly 1 5 <210> 76 <211> 411 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(411) <400> 76 gaa gtt caa ttg tta gag tct ggt ggc ggt ctt gtt cag cct ggt ggt 48 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tct tta cgt ctt tct tgc gct gct tcc gga ttc act ttc tct cct tac 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr 20 25 30 tgg atg ggt tgg gtt cgc caa gct cct ggt aaa ggt ttg gag tgg gtt 144 Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tct gtt atc tgg cct tct ggt ggc act act gat tat gct gac tcc gtt 192 Ser Val Ile Trp Pro Ser Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aaa ggt cgc ttc act atc tct aga gac aac tct aag aat act ctc tac 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ttg cag atg aac agc tta agg gct gag gac acg gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga gtc cat cca gct ggc cac aac gac cac tgg ggc cag gga acc 336 Ala Arg Val His Pro Ala Gly His Asn Asp His Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 ctg gtc acc gtc tca agc gcc tcc acc aag ggc cca tcg gtc ttc ccg 384 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 cta gca ccc tcc tcc aag agc acc tct 411 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 77 <211> 137 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr 20 25 30 Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Trp Pro Ser Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val His Pro Ala Gly His Asn Asp His Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 78 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Phe Thr Phe Ser Pro Tyr Trp Met Gly 1 5 <210> 79 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Val Ile Trp Pro Ser Gly Gly Thr Thr Asp 1 5 10 <210> 80 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Arg Val His Pro Ala Gly His Asn Asp His 1 5 10 <210> 81 <211> 645 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(645) <400> 81 caa gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tcc ctg tct ttg tct cca 48 Gln Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Leu Ser Pro 1 5 10 15 ggg gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt att aac aga 96 Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Arg 20 25 30 aac tta ggc tgg tac cag cag aag cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc 144 Asn Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 atc tat ggt gcg tcc acc agg gcc act ggt atc cca gcc agg ttc act 192 Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Thr 50 55 60 ggc agt ggg tct ggg aca gag ttc tct ctc acc atc agc agc ctg cag 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 tct gaa gat tat gca att tat tat tgt cag cag tat gat aac tgg ccg 288 Ser Glu Asp Tyr Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Trp Pro 85 90 95 atc atc ttc ggc caa ggg aca cga ctg gag att aaa gga act gtg gct 336 Ile Ile Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Gly Thr Val Ala 100 105 110 gca cca tct gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat gag cag ttg aaa tct 384 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 gga act gcc tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag 432 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 gcc aaa gta cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac tcc 480 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 cag gag agt gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc 528 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 agc agc acc ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc 576 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 tac gcc tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca aag 624 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 agc ttc aac agg gga gag tgt 645 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 82 <211> 215 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Gln Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Leu Ser Pro 1 5 10 15 Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Arg 20 25 30 Asn Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Thr 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Tyr Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Trp Pro 85 90 95 Ile Ile Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Gly Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 83 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83 Ser Ile Asn Arg Asn Leu Gly 1 5 <210> 84 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Tyr Gly Ala Ser Thr 1 5 <210> 85 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Gln Tyr Asp Asn Trp Pro 1 5 <210> 86 <211> 411 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(411) <400> 86 gaa gtt caa ttg tta gag tct ggt ggc ggt ctt gtt cag cct ggt ggt 48 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tct tta cgt ctt tct tgc gct gct tcc gga ttc act ttc tct cgt tac 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 ttt atg aag tgg gtt cgc caa gct cct ggt aaa ggt ttg gag tgg gtt 144 Phe Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tct tgg atc tct cct tct ggt ggc ctt act gag tat gct gac tcc gtt 192 Ser Trp Ile Ser Pro Ser Gly Gly Leu Thr Glu Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aaa ggt cgc ttc act atc tct aga gac aac tct aag aat act ctc tac 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ttg cag atg aac agc tta agg gct gag gac acg gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcc aga gcc tca tac ggt gcc tgg ctg gac tac tgg ggc cag ggc acc 336 Ala Arg Ala Ser Tyr Gly Ala Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 ctg gtc acc gtc tca agc gcc tcc acc aag ggc cca tcg gtc ttc ccg 384 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 cta gca ccc tcc tcc aag agc acc tct 411 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 87 <211> 137 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Phe Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Ser Pro Ser Gly Gly Leu Thr Glu Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Ser Tyr Gly Ala Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 88 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Phe Met Lys 1 5 <210> 89 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Trp Ile Ser Pro Ser Gly Gly Leu Thr Glu 1 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Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Gly Leu 85 90 95 gat gcc tat gtg gtg ttc ggc gga ggg acc aaa ctg acc gtc ctg ggt 336 Asp Ala Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 cag ccc aag gcc aac ccc act gtc act ctg ttc ccg ccc tcc tct gag 384 Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 gag ctc caa gcc aac aag gcc aca cta gtg tgt ctg atc agt gac ttc 432 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 130 135 140 tac ccg gga gct gtg aca gtg gcc tgg aag gca gat ggc agc ccc gtc 480 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val 145 150 155 160 aag gcg gga gtg gag acc acc aaa ccc tcc aaa cag agc aac aac aag 528 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 165 170 175 tac gcg gcc agc agc tac ctg agc ctg acg ccc gag cag tgg aag tcc 576 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 180 185 190 cac aga agc tac agc tgc cag gtc acg cat gaa ggg agc acc gtg gag 624 His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 195 200 205 aag aca gtg gcc cct gca gaa tgc tct 651 Lys Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 210 215 <210> 92 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Gly Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Gly Leu 85 90 95 Asp Ala Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 130 135 140 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val 145 150 155 160 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 165 170 175 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 180 185 190 His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 195 200 205 Lys Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 210 215 <210> 93 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ser Val Asn 1 5 <210> 94 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94 Tyr Ser Asn Asn Leu 1 5 <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Ala Trp Asp Asp Gly Leu Asp Ala Tyr 1 5 <210> 96 <211> 414 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(414) <400> 96 gaa gtt caa ttg tta gag tct ggt ggc ggt ctt gtt cag cct ggt ggt 48 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tct tta cgt ctt tct tgc gct gct tcc gga ttc act ttc tct act tac 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 tgg atg gct tgg gtt cgc caa gct cct ggt aaa ggt ttg gag tgg gtt 144 Trp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tct gtt atc ggt cct tct ggt ggc atg act gtt tat gct gac tcc gtt 192 Ser Val Ile Gly Pro Ser Gly Gly Met Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aaa ggt cgc ttc act atc tct aga gac aac tct aag aat act ctc tac 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ttg cag atg aac agc tta agg gct gag gac acg gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gca cgg att aat agt ggg agc tcc cac ttt gac tac tgg ggc cag gga 336 Ala Arg Ile Asn Ser Gly Ser Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 acc ctg gtc acc gtc tca agc gcc tcc acc aag ggc cca tcg gtc ttc 384 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 ccg cta gca ccc tcc tcc aag agc acc tct 414 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 97 <211> 138 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Gly Pro Ser Gly Gly Met Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ile Asn Ser Gly Ser Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 98 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Trp Met Ala 1 5 <210> 99 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Val Ile Gly Pro Ser Gly Gly Met Thr Val 1 5 10 <210> 100 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Arg Ile Asn Ser Gly Ser Ser His Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 101 <211> 651 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(651) <400> 101 cag tac gaa ttg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc atc tct tgt tct gga agc agc tcc aac atc gga agc aat 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 att gta cac tgg tac cag cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144 Ile Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 ata tat ggt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192 Ile Tyr Gly Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 gtc tcc aag tct ggc tcc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag 240 Val Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gca tca tgg gat gac agc ctg 288 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 aaa gcc ttt tat gtc ttc gga act ggg acc aag gtc acc gtc cta ggt 336 Lys Ala Phe Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly 100 105 110 cag ccc aag gcc aac ccc act gtc act ctg ttc ccg ccc tcc tct gag 384 Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 gag ctc caa gcc aac aag gcc aca cta gtg tgt ctg atc agt gac ttc 432 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 130 135 140 tac ccg gga gct gtg aca gtg gcc tgg aag gca gat ggc agc ccc gtc 480 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val 145 150 155 160 aag gcg gga gtg gag acc acc aaa ccc tcc aaa cag agc aac aac aag 528 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 165 170 175 tac gcg gcc agc agc tac ctg agc ctg acg ccc gag cag tgg aag tcc 576 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 180 185 190 cac aga agc tac agc tgc cag gtc acg cat gaa ggg agc acc gtg gag 624 His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 195 200 205 aag aca gtg gcc cct aca gaa tgt tca 651 Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 102 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Gln Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser 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ttg cag atg aac agc tta agg gct gag gac acg gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gca cgg agc agt ggc tgg gct ctg gat gct ttt gat atc tgg ggc caa 336 Ala Arg Ser Ser Gly Trp Ala Leu Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 ggg aca atg gtc acc gtc tca agc gcc tcc acc aag ggc cca tcg gtc 384 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 ttc ccg cta gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggg 420 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 <210> 107 <211> 140 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 20 25 30 Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Pro Ser Gly Gly Leu Thr Ile Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala 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gta gcc 144 Cys Leu Ala Pro Ser Leu Glu Gln Gln Glu Gln Glu Leu Thr Val Ala 35 40 45 ctt ggg cag cct gtg cgg ctg tgc tgt ggg cgg gct gag cgt ggt ggc 192 Leu Gly Gln Pro Val Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly 50 55 60 cac tgg tac aag gag ggc agt cgc ctg gca cct gct ggc cgt gta cgg 240 His Trp Tyr Lys Glu Gly Ser Arg Leu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg 65 70 75 80 ggc tgg agg ggc cgc cta gag att gcc agc ttc cta cct gag gat gct 288 Gly Trp Arg Gly Arg Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala 85 90 95 ggc cgc tac ctc tgc ctg gca cga ggc tcc atg atc gtc ctg cag aat 336 Gly Arg Tyr Leu Cys Leu Ala Arg Gly Ser Met Ile Val Leu Gln Asn 100 105 110 ctc acc ttg att aca ggt gac tcc ttg acc tcc agc aac gat gat gag 384 Leu Thr Leu Ile Thr Gly Asp Ser Leu Thr Ser Ser Asn Asp Asp Glu 115 120 125 gac ccc aag tcc cat agg gac ctc tcg aat agg cac agt tac ccc cag 432 Asp Pro Lys Ser His Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gln 130 135 140 caa gca ccc tac tgg aca cac ccc cag cgc atg gag aag aaa ctg cat 480 Gln Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His 145 150 155 160 gca gta cct gcg ggg aac acc gtc aag ttc cgc tgt cca gct gca ggc 528 Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 165 170 175 aac ccc acg aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa ctc 576 Asn Pro Thr Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 180 185 190 ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc 624 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 195 200 205 ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg 672 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 210 215 220 agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg 720 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 225 230 235 240 gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc 768 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 245 250 255 acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg 816 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 260 265 270 aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc 864 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 275 280 285 ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca 912 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 290 295 300 cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag 960 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 305 310 315 320 gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc 1008 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 325 330 335 gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg 1056 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 340 345 350 cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc 1104 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 355 360 365 acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc 1152 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 370 375 380 gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc 1200 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 385 390 395 400 ctg tct ccg ggt tga 1215 Leu Ser Pro Gly <210> 112 <211> 404 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 112 Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro Gly 1 5 10 15 Pro Pro Val Leu Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30 Cys Leu Ala Pro Ser Leu Glu Gln Gln Glu Gln Glu Leu Thr Val Ala 35 40 45 Leu Gly Gln Pro Val Arg Leu Cys Cys Gly Arg Ala Glu Arg Gly Gly 50 55 60 His Trp Tyr Lys Glu Gly Ser Arg Leu Ala Pro Ala Gly Arg Val Arg 65 70 75 80 Gly Trp Arg Gly Arg Leu Glu Ile Ala Ser Phe Leu Pro Glu Asp Ala 85 90 95 Gly Arg Tyr Leu Cys Leu Ala Arg Gly Ser Met Ile Val Leu Gln Asn 100 105 110 Leu Thr Leu Ile Thr Gly Asp Ser Leu Thr Ser Ser Asn Asp Asp Glu 115 120 125 Asp Pro Lys Ser His Arg Asp Leu Ser Asn Arg His Ser Tyr Pro Gln 130 135 140 Gln Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His 145 150 155 160 Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 165 170 175 Asn Pro Thr Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 180 185 190 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 195 200 205 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 210 215 220 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 225 230 235 240 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 245 250 255 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 260 265 270 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 275 280 285 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 290 295 300 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 305 310 315 320 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 325 330 335 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 340 345 350 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 355 360 365 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 370 375 380 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 385 390 395 400 Leu Ser Pro Gly <210> 113 <211> 1068 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1068) <400> 113 atg cgg ctg ctg ctg gcc ctg ttg ggg gtc ctg ctg agt gtg cct ggg 48 Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro Gly 1 5 10 15 cct cca gtc ttg tcc ctg gag gcc tct gag gaa gtg gag ctt gag ccc 96 Pro Pro Val Leu Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30 caa gca ccc tac tgg aca cac ccc cag cgc atg gag aag aaa ctg cat 144 Gln Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His 35 40 45 gca gta cct gcg ggg aac acc gtc aag ttc cgc tgt cca gct gca ggc 192 Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 50 55 60 aac ccc acg ccc acc atc cgc tgg ctt aag gat gga cag gcc ttt cat 240 Asn Pro Thr Pro Thr Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His 65 70 75 80 ggg gag aac cgc att gga ggc att cgg ctg cgc cat cag cac tgg agt 288 Gly Glu Asn Arg Ile Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser 85 90 95 ctc gtg atg gag agc gtg gtg ccc tcg gac cgc ggc aca tac acc tgc 336 Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys 100 105 110 ctg gta gag aac gct gtg ggc agc atc cgt tat aac tac ctg cta gat 384 Leu Val Glu Asn Ala Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp 115 120 125 gtg ctg aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg 432 Val Leu Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 130 135 140 ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc 480 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 145 150 155 160 atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc 528 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 165 170 175 cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag 576 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 180 185 190 gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg 624 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 195 200 205 tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat 672 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 210 215 220 ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc 720 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 225 230 235 240 atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag 768 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 245 250 255 gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc 816 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 260 265 270 agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg 864 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 275 280 285 gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct 912 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 290 295 300 ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc 960 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 305 310 315 320 gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg 1008 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 325 330 335 atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg 1056 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 340 345 350 tct ccg ggt tga 1068 Ser Pro Gly 355 <210> 114 <211> 355 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114 Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro Gly 1 5 10 15 Pro Pro Val Leu Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30 Gln Ala Pro Tyr Trp Thr His Pro Gln Arg Met Glu Lys Lys Leu His 35 40 45 Ala Val Pro Ala Gly Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly 50 55 60 Asn Pro Thr Pro Thr Ile Arg Trp Leu Lys Asp Gly Gln Ala Phe His 65 70 75 80 Gly Glu Asn Arg Ile Gly Gly Ile Arg Leu Arg His Gln His Trp Ser 85 90 95 Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Thr Cys 100 105 110 Leu Val Glu Asn Ala Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp 115 120 125 Val Leu Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 130 135 140 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 145 150 155 160 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 165 170 175 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 180 185 190 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 195 200 205 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 210 215 220 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 225 230 235 240 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 245 250 255 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 260 265 270 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 275 280 285 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 290 295 300 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 305 310 315 320 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 325 330 335 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 340 345 350 Ser Pro Gly 355 <210> 115 <211> 1188 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1188) <400> 115 atg cgg ctg ctg ctg gcc ctg ttg ggg gtc ctg ctg agt gtg cct ggg 48 Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro Gly 1 5 10 15 cct cca gtc ttg tcc ctg gag gcc tct gag gaa gtg gag ctt gag ccc 96 Pro Pro Val Leu Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30 aac gct gtg ggc agc atc cgt tat aac tac ctg cta gat gtg ctg gag 144 Asn Ala Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu 35 40 45 cgg tcc ccg cac cgg ccc atc ctg cag gcc ggg ctc ccg gcc aac acc 192 Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr 50 55 60 aca gcc gtg gtg ggc agc gac gtg gag ctg ctg tgc aag gtg tac agc 240 Thr Ala Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser 65 70 75 80 gat gcc cag ccc cac atc cag tgg ctg aag cac atc gtc atc aac ggc 288 Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly 85 90 95 agc agc ttc gga gcc gac ggt ttc ccc tat gtg caa gtc cta aag act 336 Ser Ser Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr 100 105 110 gca gac atc aat agc tca gag gtg gag gtc ctg tac ctg cgg aac gtg 384 Ala Asp Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val 115 120 125 tca gcc gag gac gca ggc gag tac acc tgc ctc gca ggc aat tcc atc 432 Ser Ala Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile 130 135 140 ggc ctc tcc tac cag tct gcc tgg ctc acg gtg ctg cca gag gag gac 480 Gly Leu Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Glu Glu Asp 145 150 155 160 ccc aca tgg acc gca gca gcg ccc gag gcc aaa act cac aca tgc cca 528 Pro Thr Trp Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Lys Thr His Thr Cys Pro 165 170 175 ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc 576 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 180 185 190 ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc 624 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 195 200 205 aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc 672 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 210 215 220 aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg 720 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 225 230 235 240 cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc 768 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 245 250 255 gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc 816 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 260 265 270 tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc 864 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 275 280 285 aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg 912 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 290 295 300 gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc 960 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 305 310 315 320 ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg 1008 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 325 330 335 gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc 1056 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 340 345 350 ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag 1104 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 355 360 365 ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac 1152 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 370 375 380 tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt tga 1188 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 385 390 395 <210> 116 <211> 395 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 116 Met Arg Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val Leu Leu Ser Val Pro Gly 1 5 10 15 Pro Pro Val Leu Ser Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro 20 25 30 Asn Ala Val Gly Ser Ile Arg Tyr Asn Tyr Leu Leu Asp Val Leu Glu 35 40 45 Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Thr 50 55 60 Thr Ala Val Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Leu Cys Lys Val Tyr Ser 65 70 75 80 Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Val Ile Asn Gly 85 90 95 Ser Ser Phe Gly Ala Asp Gly Phe Pro Tyr Val Gln Val Leu Lys Thr 100 105 110 Ala Asp Ile Asn Ser Ser Glu Val Glu Val Leu Tyr Leu Arg Asn Val 115 120 125 Ser Ala Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile 130 135 140 Gly Leu Ser Tyr Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Glu Glu Asp 145 150 155 160 Pro Thr Trp Thr Ala Ala Ala Pro Glu Ala Lys Thr His Thr Cys Pro 165 170 175 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 180 185 190 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 195 200 205 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 210 215 220 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 225 230 235 240 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 245 250 255 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 260 265 270 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 275 280 285 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 290 295 300 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 305 310 315 320 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 325 330 335 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 340 345 350 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 355 360 365 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 370 375 380 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 385 390 395 <210> 117 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330

Claims (32)

  1. FGF-R4에 특이적으로 결합하는 항체인 것을 특징으로 하는 FGF-R4 수용체 길항제.
  2. 제1항에 있어서, FGF-R4 수용체의 D2-D3 도메인에 결합하는 것을 특징으로 하는 길항제.
  3. 제1항 또는 2항에 있어서, FGF-R4 수용체의 D2 도메인에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
  4. 제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 표면 플라스몬 공명 (비아코어) 기술에 의해 결정되는 FGF-R4 수용체에 대한 KD가 10-8 M 미만인 것을 특징으로 하는 길항제.
  5. 제1항 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 FGF-R4 및 쥐 FGF-R4 둘 다에 대해 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 길항제.
  6. 제1항 내지 5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체이고, 서열 9, 10, 11, 12, 13, 14, 73, 74, 75, 78, 79, 80, 83, 84, 85, 88, 89, 90, 93, 94, 95, 98, 99, 100, 103, 104, 105, 108, 109 또는 110의 서열 중 하나와 동일한 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 것을 특징으로 하는 길항제.
  7. 제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체이고, 서열 9, 10, 11, 12, 13 및 14; 또는 73, 74, 75, 78, 79 및 80; 또는 83, 84, 85, 88, 89 및 90; 또는 93, 94, 95, 98, 99 및 100; 또는 103, 104, 105, 108, 109 및 110의 서열의 CDR을 포함하고, 여기서 CDR 중 하나는 항체가 그의 결합 특이성을 유지한다면 상기한 서열 중 적어도 하나와 비교하여 1 또는 2개의 아미노산이 상이할 수 있는 것임을 특징으로 하는 길항제.
  8. 제1항 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서, 그의 중쇄의 가변 영역이 서열 5, 76, 86, 96 또는 106의 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 항체인 것을 특징으로 하는 길항제.
  9. 제1항 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 그의 경쇄의 가변 영역이 서열 7, 71, 81, 91 또는 101의 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 항체인 것을 특징으로 하는 길항제.
  10. 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체이고, 그의 서열이 서열 2 및 4; 또는 6 및 8; 또는 72 및 77; 또는 82 및 87; 또는 92 및 97; 또는 102 및 107의 폴리펩티드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 길항제.
  11. 제1항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-R4에 의해 제어되는 세포 신호전달 경로의 억제를 유도하는 것을 특징으로 하는 길항제.
  12. 제1항 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, 혈관신생의 억제를 유도하는 것을 특징으로 하는 길항제.
  13. 제1항 내지 12항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 세포 증식의 억제를 유도하는 것을 특징으로 하는 길항제.
  14. 제1항 내지 13항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-R4에 대한 그의 친화도가 다른 FGF 수용체에 대한 그의 친화도보다 10배 더 큰 것을 특징으로 하는 길항제.
  15. 제1항 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화 항체인 것을 특징으로 하는 길항제.
  16. 제1항 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 항체인 것을 특징으로 하는 길항제.
  17. 제15항에 있어서, 서열 30 또는 32의 폴리펩티드 서열 중 하나와 적어도 80%의 동일성을 갖는 가변 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 길항제.
  18. 제15항에 있어서, 서열 34, 36 또는 38의 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 가변 중쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 길항제.
  19. 제1항 내지 18항 중 어느 한 항에 있어서, 항체이고, 세포독성제에 접합되는 것을 특징으로 하는 길항제.
  20. 병리학적 혈관신생과 연관된 질환의 치료에서의 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 길항제의 용도.
  21. 간암종 또는 임의의 다른 유형의 간암의 치료에서의 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 길항제의 용도.
  22. 췌장암의 치료에서의 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 길항제의 용도.
  23. 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 길항제 및 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  24. 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는, 병리학적 혈관신생에 관련된 질환의 치료 방법.
  25. 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는, 암의 치료 방법.
  26. 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 항체를 생산하는 세포주.
  27. 제26항에 따른 세포주를 배양하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 항체의 생산 방법.
  28. 제1항 내지 19항 중 어느 한 항에 따른 길항제를 포함하는 약물.
  29. 서열 2, 4, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 30, 32, 34, 36, 38, 72, 73, 74, 75, 77, 78, 79, 80, 82, 83, 84, 85, 87, 88, 89, 90, 92, 93, 94, 95, 97, 98, 99, 100, 103, 104, 105, 107, 108, 109 또는 110의 서열 중 하나와 적어도 80%의 동일성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  30. 서열 1, 3, 5, 7, 29, 31, 33, 35, 또는 37, 71, 76, 81, 86, 91, 96, 101 또는 106의 서열 중 하나와 적어도 80%의 동일성을 갖는 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
  31. 제29항 또는 30항에 따른 핵산을 포함하는 재조합 벡터.
  32. 제31항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
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