SK284043B6

SK284043B6 - Spôsob výroby azacyklohexapeptidov a medziprodukty

Info

Publication number: SK284043B6
Application number: SK1694-98A
Authority: SK
Inventors: William Leonard; Kevin M. Belyk
Original assignee: Merck & Co., Inc.
Priority date: 1996-06-14
Filing date: 1997-06-10
Publication date: 2004-08-03
Also published as: SI0912603T1; EA199900027A1; JPH11514665A; EP0912603A1; AU712857B2; BR9709691A; EA002049B1; CN1122672C; YU56098A; WO1997047645A1; JP3089037B2; CZ287742B6; CA2256620C; HRP970318B1; HU227427B1; PT912603E; AR017997A3; UA54433C2; HRP970318A2; TW450975B

Abstract

Je opísaný stereoselektívny spôsob výroby azacyklohexapeptidov všeobecného vzorca (I). Podstatu riešenia tvoria aj nové medziprodukty na uskutočňovanie spôsobu podľa vynálezu. Opísané zlúčeniny je možné využiť najmä na liečenie hubových infekcií.ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka spôsobu výroby azacyklohexapeptidov, ktorým je možné získať uvedené látky ľahšie a vo vyššom výťažku.

Doterajší stav techniky

Vynález sa týka zlepšeného spôsobu výroby cyklohexapeptidov typu, opísaného v US patentovom spise č. 5 378 804 z 3. januára 1995. Spôsob, pôvodne navrhovaný na výrobu týchto látok, vyžadoval uskutočnenie v piatich stupňoch, nebol dostatočne stereoselektívny a nebolo možné dosiahnuť vyššie výťažky. Známe spôsoby na redukciu primárnych amidov, ako sú hydrogenácia, pôsobenie hydridu kovu a elektrochemická redukcia vyžadujú podmienky, ktoré sú inkompatibilné s ďalšími funkčnými skupinami uvedených látok, najmä zlúčenín typu pneumokandínu. Tieto typy redukcie nie sú selektívne pre rôzne substituované amidy. Zlepšený postup, uskutočňovaný v troch stupňoch, bol opísaný v súčasne prejednávanej patentovej prihláške č. 08/386 618, maximálny výťažok pri tomto postupe je však 23 až 25 %. Je teda potrebné získať výhodnejšie spôsoby prípravy uvedených zlúčenín.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvorí spôsob výroby azacyklohexapeptidov všeobecného vzorca (I)

kde

R¹ znamená CH₂CH₂NH₂,

R¹ znamená alkyl s 9 až 21 atómami uhlíka, alkenyl s 9 až 21 atómami uhlíka, alkoxyfenyl s 1 až 10 atómami uhlíka, alkoxynaftyl s 1 až 10 atómami uhlíka alebo alkoxyterfenyl s 1 až 10 atómami uhlíka v alkoxylovej časti,

R¹¹ znamená atóm vodíka, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 4 atómami uhlíka alebo (CH₂)₂.₄NR^IVR^V·

R¹¹¹ znamená vodík, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 4 atómami uhlíka, (CH₂)₂.₄NR^IVR^V alebo

R¹¹ a R¹¹¹ spoločne tvoria (CH₂)₄, (CH₂)₅ alebo (CH₂)₂NH(CH₂)₂,

R^IV znamená vodík alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka,

R^v znamená vodík alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka,

Q znamená atóm dusíka, ako aj farmaceutický prijateľné adičné soli týchto látok s kyselinami.

Zlúčeniny, ktoré je možné pripraviť spôsobom podľa vynálezu, je možné využiť na liečenie hubových infekcií, najmä infekcií, vyvolaných Candída, Aspergillus, Histoplasma, Coccidioides a Blastomyces. Tie isté látky je možné použiť aj na liečenie a prevenciu infekcií, vyvolaných Pneumocystis carinii, ktoré je možné často pozorovať u chorých s poruchami imunitného systému, napríklad u chorých, trpiacich AIDS.

Súčasť podstaty vynálezu tvoria tiež nové medziprodukty na výrobu uvedených látok.

Spôsob podľa vynálezu je stereoselektívny a pri jeho použití je možné dosiahnuť vysoké výťažky.

V priebehu opisu prihlášky a nárokov zahrnuje určitý chemický vzorec alebo názov zlúčeniny všetky optické izoméry, stereoizoméry a ich racemické zmesi v prípade, že takéto izoméry môžu existovať.

Pod pojem alkyl patria uhľovodíkové zvyšky s priamym, rozvetveným alebo cyklickým reťazcom, napríklad metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cyklohexylmetyl a podobne.

Cykloalkyl môže obsahovať 3 až 15 atómov uhlíka, pričom neobsahuje alternatívne alebo rezonujúce dvojité väzby medzi atómami uhlíka.

Alkenyl znamená uhľovodíkové zvyšky s obsahom dvojitej väzby, napríklad vinyl, l-propen-2-yl, l-buten-4-yl, 3-buten-4-yl, l-penten-5-yl a podobne.

Alkoxyskupina môže maž tiež priamy alebo rozvetvený reťazec, ako príklad je možné uviesť metoxy-, etoxy-, butoxy-, heptoxy- a dodecyloxyskupina a podobne.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa zvyčajne získajú ako zmes stereoizomémych foriem, v ktorých jedna z týchto foriem prevažuje. Podmienky reakcie je možné upraviť bežným spôsobom tak, aby bol získaný prevažne požadovaný izomér. Zlúčeniny s výhodnou stereoizomémou formou, ktorá bude ďalej označovaná ako „normálna forma“ sú tie látky, v ktorých skupina v polohe „C-5-om“ sa nachádza pod rovinou. Označenie „epi“ sa používa pre tie látky, v ktorých sa táto skupina nachádza nad rovinou. Poloha „C-5-orn“ je definovaná ako uhlíkový atóm v polohe 5 na 4-hydroxyomitínovej časti molekuly.

Zlúčeniny, získané spôsobom podľa vynálezu, je možné použiť vo forme ich farmaceutický prijateľných solí. Tento pojem zahrnuje všetky prijateľné soli. Ako príklady adičných solí s kyselinami je možné uviesť soli s kyselinou chlorovodíkovou, dusičnou, sírovou, fosforečnou, mravčou, octovou, trifluóroctovou, propiónovou, maleínovou, jantárovou, jablčnou, metánsulfónovou a podobne, tieto soli je možné použiť v liekových formách a podobne, tieto soli je možné použiť v liekových formách na modifikáciu rozpustnosti alebo na uľahčenie hydrolýzy alebo je možné tieto soli použiť na spomalenie uvoľnenia látok alebo na tvorbu prekurzorov. V závislosti od funkčných skupín, obsiahnutých v uvedených látkach je možné medzi farmaceutický prijateľné soli zahrnúť aj soli, vytvorené s katiónmi, napríklad soli sodné, draselné, hlinité, vápenaté, litne, horečnaté, zinočnaté a soli s bázami, napríklad soli amónne, soli s etyléndiamínom, N-metylglutammom, lyzínom, argininom, omitínom, cholínom, N,N‘-dibenzyl-etyléndiamínom, chlórprokaínom, dietanolamínom, prokaínom, N-benzylfenetyl-amínom, dietylamínom, piperazínom, tris-(hydroxymetyl)amino-metánom a tetrametylamóniumhydroxidom. Tieto soli je možné pripraviť bežnými spôsobmi, napríklad reakciou voľnej kyseliny s vhodnou organickou alebo anorganickou bázou alebo naopak reakciou voľnej bázy s vhodnou organickou alebo anorganickou kyselinou.

V prípade prítomnosti karboxylovej skupiny -COOH alebo alkoholovej skupiny, môžu byť vytvorené aj farmaceutický prijateľné estery, napríklad metylester, etylester, butylester, acetát, maleát, pivaloyloxymetylester a podobne, najmä také estery, ktoré sú bežne používané na modifikáciu rozpustnosti alebo správania pri hydrolýze, tieto estery je možné použiť v prostriedkoch s predĺženým uvoľňovaním účinnej látky alebo na tvorbu prekurzorov účinných látok.

Vo výhodnom uskutočnení sa spôsob podľa vynálezu uskutočňuje tak, že sa na zlúčeninu vzorca (II) ktorá sa stereoselektívne premení na zlúčeninu vzorca (I) cez zlúčeninu všeobecného vzorca (V)

(H),

odstránením fenyltioskupiny, pričom R¹ má vo vzorcoch (II), (III), (IV) a (V) významy uvedené pre vzorec (I).

V ďalšom možnom uskutočnení sa postupuje tak, že sa na zlúčeninu všeobecného vzorca (II) pôsobí kyselinou fenylboritou za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (III)

(III),

pôsobí tiofenolom za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (VI) kde R* znamená fenyl, p-metoxyfenyl alebo metyl, ktorá sa redukuje na amín a potom sa hydrolyzuje za získania zlúčeniny všeobecného vzorca (IV)

(VI), a sa na zlúčeninu všeobecného vzorca (VI) pôsobí kyselinou fenylboritou, čim sa získa zlúčenina všeobecného vzorca (Illa)

SK 284043 Β6

(la) , kde R* znamená fenyl, p-metoxyfenyl alebo metyl, ktorá sa potom redukuje na amín a hydrolyzuje, čím sa získa zlúčenina všeobecného vzorca (V)

Spôsob podľa vynálezu je možné ilustrovať na nasledujúcich reakčných schémach, v ktorých boli použité výhodné reakčné zložky, aby bolo možné spôsob podľa vynálezu lepšie vyjadriť. V nasledujúcich reakčných schémach znamená R^r dimetyltridecylovú skupinu.

Reakčná schéma I

ktorá sa potom premení na zlúčeninu vzorca (I) odstránením fenyltioskupiny, pričom R¹ má vo vzorcoch (II), (III), (IV) a (V) významy uvedené pre vzorec (I).

Zlúčenina všeobecného vzorca (II), v ktorom R¹ znamená dimetyltridecyl, bola opísaná v US č. 5 202 309. Zlúčeninu všeobecného vzorca (II) je možné získať pestovaním Zalerion arboricola ATCC 20868 v živnom prostredí, obohatenom manitolom ako primárnym zdrojom uhlíka, potup bol opísaný v US patentovom spise č. 5 021 341.

Výhodnou zlúčeninou, ktorú je možné pripraviť spôsobom podľa vynálezu je zlúčenina všeobecného vzorca (la).

Ďalšou výhodnou zlúčeninou, ktorú je možné týmto spôsobom pripraviť, je zlúčenina všeobecného vzorca (Ib).

podmienok je po extrakcii tuhej fázy možné dosiahnuť výťažok 65 až 70 %.

V druhej časti stupňa 3 sa odstráni fenyltioskupina. Fenylsulfid sa nechá reagovať v čistom etyléndiamíne (1:3) pri teplote miestnosti, čím sa získa zlúčenina vzorca (la) vo výťažku 95 %. Reakciu je možné uskutočniť pri teplote 10 až 40 °C a trvá 0,5 až 6 hodín. Výhodne sa reakcia uskutočňuje pri teplote miestnosti počas 1,5 hodiny. Reakciu je možné uskutočniť aj použitím etyléndiamínu, rozpusteného vo vhodnom rozpúšťadle, ako je voda, metanol, etanol, izopropanol, tetrahydrofúrán, trifluóretanol, dichlóretán alebo acetonitril.

Reakčná schéma II

Ako je uvedené skôr, v stupni 1 sa tvorí bis-fenyl-boritanová zlúčenina všeobecného vzorca (III) reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (II) a bezvodého THF s kyselinou fenylboritou, p-metoxyfenylboritou alebo metánboritou. Pri reakcii je možné použiť 1 až 10 molárnych ekvivalentov kyseliny, výhodne 1 až 3 moláme ekvivalenty.

V stupni 2 sa zlúčenina všeobecného vzorca (III) redukuje na amín všeobecného vzorca (IV) pri použití boranového komplexu, napríklad boranu s tetrahydrofuránom THF, dimetylsulfidom, difenylsulfidom, dibenylsulfidom, 1,4-oxatiánom alebo pri použití BH₂C1 s dimetylsulfidom alebo hydroborátom kovu, je napríklad možné použiť zmes ZrCl₄/NaBH₄ alebo TiCl₄/NaBH₄ v THF alebo inom vhodnom rozpúšťadle. Redukciu je možné uskutočniť aj pri použití komplexu boranu s amoniakom, dimetyylamínom, pyridínom alebo piperazínom. Výhodnými redukčnými činidlami sú komplexy boranu s tetrahydrofuránom, dimetylsulfidom, difenylsulfidom, dibenzylsulfidom alebo 1,4-oxatiánom alebo BH₂C1 s dimetyl-sulfidom, alebo hydroborát, napríklad ZrCl₄/NaBH₄ alebo TiCl₄/NaBH₄ v THF alebo v inom vhodnom rozpúšťadle. Akékoľvek zvyšky amidov, ktoré neboli premenené pri tejto redukcii sa potom oddelia pri použití chromatografie v reverznej fáze. Po ukončení redukcie zahrnuje stupeň 2 tiež odstránenie fenylboritanových skupín v priebehu spracovania reakčnej zmesi pôsobením vodného roztoku kyseliny.

Stupeň 3 má dve časti. Najskôr sa uskutočni reakcia zlúčeniny všeobecného vzorca (IV) s tiofenolom v acetonitrile a kyseline trifluóroctovej TFA, čím vznikne medziprodukt, obsahujúci fenylsulfid. Pôsobením akejkoľvek stredne silnej kyseliny je možné takýto medziprodukt získať v dobrom výťažku. Ako príklad vhodnej stredne silnej kyseliny je možné uviesť napríklad kyselinu trifluóroctovú, fosforečnú alebo trichlóroctovú. Je možné použiť aj iné sulfidy, ako je 4-metoxytiofenol, 2-merkapto-1-metylimidazol a 2-merkaptobenzimidazol. Zlúčenina vzorca (III) sa extrahuje tak, že sa zriedený reakčný roztok nanesie na stĺpec C-18 v reverznej fáze a elúcia sa uskutočňuje pri použití metanolu.

Množstvo použitej TFA má zásadný význam pre rýchlosť reakcie a tiež pre následnú tvorbu nežiaduceho sulfidu v homotyrozínovej časti cyklického peptidu. Bolo dokázané, že použitím 5 až 25 % TFA v acetonitrile je možné dosiahnuť najlepšie výťažky. Výhodné rozmedzie TFA je 7 až 15 %.

Množstvo tiofenolu použitého v tomto stupni je taktiež kritické pre výťažok výsledného produktu. Najvýhodnejšie výťažky je možné dosiahnuť použitím 3 až 5 ekvivalentov tiofenolu.

Bolo dokázané, že ako najvýhodnejšie podmienky na tvorbu sulfidu je možné uviesť použitie 5 ekvivalentov tiofenolu v 10 % TFA v acetonitrile pri teplote 0 °C. Za týchto

HSPIVTFA/MeCN {SEQ ID No. 1)

Stupeň 1

SK 284043 Β6

Ako je zrejmé zo schémy II, stupeň 1 zahrnuje reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (II) s tiofenolom v acetonitrile a kyseline trifluóroctovej TFA, čím vznikne medziprodukt, obsahujúci fenylsulfidovú skupinu. Tento medziprodukt sa v dobrom výťažku získa použitím akejkoľvek stredne silnej kyseliny. Ako príklad stredne silných kyselín je možné uviesť kyselinu trifluóroctovú, fosforečnú a trichlóroctovú. Je tiež možné použiť aj iné sulfidy, ako napríklad 4-metoxytiofenol, 2-merkapto-l-metylimidazol a 2-merkaptobenzimidazol. Zlúčenina všeobecného vzorca (VI) sa vyzráža pridaním vody a oddelí filtráciou.

Použité množstvo TFA má zásadný význam pre rýchlosť reakcie aj pre následnú tvorbu nežiaduceho sulfidu v homotyrozínovej časti cyklického peptidu. Bolo dokázané, že najlepší výťažok je možné dosiahnuť použitím 5 až 25 % TFA v acetonitrile, výhodne použitím 7 až 15 % THF.

Množstvo tiofenolu, použitého v tomto stupni je taktiež kritické pre výťažok výsledného produktu. Najlepší výťažok jc možné dosiahnuť použitím 3 až 5 ekvivalentov tiofenolu.

Výhodnými podmienkami na tvorbu sulfidov je použitie 5 ekvivalentov tiofenolu v 10 % TFA v acetonitrile pri teplote 0 °C. Za týchto podmienok je po extrakcii tuhej fázy možné dosiahnuť výťažok 65 až 70 %.

V stupni 2 sa uskutočňuje derivatizácia medziproduktu s obsahom fenylsulfídovej skupiny tak, že sa tento medziprodukt nechá reagovať s kyselinou fenylboritou, p-metoxyfenylboritou alebo metánboritou v THF. Zvyčajne sa použijú 1 až 10, výhodne 1 až 3 moláme ekvivalenty niektorej z uvedených kyselín.

V stupni 3 sa uskutočňuje redukcia zlúčeniny vzorca (Hla) na amín všeobecného vzorca (V) použitím boranového komplexu, napríklad boranu s tetrahydrofuránom THF, dimetylsulfidom, difenylsulfidom, dibenzylsulfidom, 1,4-oxatiánom alebo použitím BH₂C1 s dimetylsulfidom alebo použitím hydroborátu kovu, ako je ZeCl₄/NaBH₄ alebo TiCl₄/NaBH₄ v THF alebo inom vhodnom rozpúšťadle. Redukciu je možné uskutočniť aj použitím boranových komplexov s amoniakom, dimetylamínom, pyridínom alebo piperazínom. Výhodné redukčné činidlá zahrnujú boranové komplexy s tetrahydrofuránom THF, dimetylsulfidom, difenylsulfidom, dibenzylsulfidom, 1,4-oxatiánom alebo BH,CI s dimetylsulfidom alebo hydroborát kovu, napríklad ZrCl₄/NaBH₄ alebo TiCl₄/NaBH₄ v THF alebo v inom vhodnom rozpúšťadle. Akýkoľvek zvyšok amidu, ktorý pri tejto redukcii nebol premenený sa oddelí použitím chromatografie v reverznej fáze.

Stupeň 3 zahrnuje aj odstránenie fenylboritanovej skupiny v priebehu spracovania pôsobením vodného roztoku kyseliny.

Stupeň 4 zahrnuje odstránenie fenyltioskupiny. Postupuje sa tak, že sa fenylsulfid nechá reagovať v čistom ety léndiamíne 1 : 3 pri teplote miestnosti, čím sa získa zlúčenina vzorca (la) vo výťažku 95 %. Reakciu je možné uskutočňovať pri teplote v rozmedzí 10 až 40 °C počas 0,5 až 6 hodín. Výhodne sa reakcia uskutočňuje pri teplote miestnosti počas 1,5 hodiny. Reakciu je možné uskutočniť použitím etyléndiamínu, rozpusteného vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad vo vode, metanole, etanole, izopropanole, tetrahydrofuráne, trifluóretanole, dichlóretáne alebo acetonitrile.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (III), (Hla), (V) a (VI) sú nové medziprodukty na použitie pri uskutočňovaní spôsobu podľa vynálezu.

Praktické uskutočnenie vynálezu bude podrobnejšie vysvetlené v nasledujúcich príkladoch, ktoré však neobmedzujú rozsah vynálezu. V príkladovej časti sú všetky diely, pomery a percentuálne množstvá uvedené ako hmotnostné, ak nie je vyslovene uvedené inak. V použitých medziproduktoch znamená R¹ dimetyltridecyl.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

a) Syntéza zlúčeniny vzorca (IV) zo zlúčeniny vzorca (II) cez zlúčeninu vzorca (III) g surovej zlúčeniny II (52,6 g podľa HPLC, 49,4 mmol) sa pridá k 1480 ml bezvodého THF. K vzniknutej suspenzii sa pridá 14,56 g, 119 mmol PhB(OH)₂. Potom sa suspenzia nechá stáť pri teplote miestnosti, potom sa zahreje na teplotu varu pod spätným chladičom. V priebehu státia a varu pod spätným chladičom sa reakčný roztok stane homogénnym. Výsledný kondenzát sa nechá prejsť molekulovým sitom 3Ä v prístroji na extrakciu tuhej látky kvapalinou tak, že roztok obsahuje menej ako 25 % molárnych vody. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti a zriedi sa 490 ml bezvodého THF. Pripravený roztok bisfenylboritanu sa ochladí na teplotu približne -7 °C a pridá sa 33,3 ml 10M roztoku, 6,7 molámych ekvivalentov BH₃.S. Reakčná zmes sa udržuje 6,5 hodín pri teplote -12 až 0 °C a potom sa pomaly pridá 140 ml 2M roztoku, 280 mmol kyseliny chlorovodíkovej. Pomocou HPLC je možné dokázať, že výťažok zlúčeniny všeobecného vzorca (IV) je 61 %.

Podiel uvedeného roztoku sa zriedi vodou na výsledný objemový pomer THF a vody 1 : 5,7. Tento roztok sa potom nanesie na stĺpec C-18 pre strednotlakovú kvapalinovú chromatografiu v reverznej fáze. Po nanesení sa elúcia zlúčeniny vzorca (IV) uskutočňuje zmesou acetonitrilu a vody v objemovom pomere 1:4a neskoršie 1:3.

Frakcie, bohaté na produkt (viac ako 80 % plochy pod krivkou pri HPLC), sa spoja a zriedia vodou na objemový pomer acetonitrilu a vody 1 : 7,3. Potom sa zmes nanesie na opísaný stĺpec, na elúciu sa použije metanol. Frakcie, bohaté na produkt (viac ako 85 % plochy pod krivkou pri HPLC), sa spoja a odparia do sucha, čím sa získa zlúčenina všeobecného vzorca (IV) v typickom výťažku 88 až 92 % pre kombináciu izolácie a chromatografického čistenia.

Podiel uvedeného roztoku sa zriedi vodou na výsledný objemový pomer THF a vody 1 : 5,7. Tento roztok sa potom nanesie na stĺpec C-18 pre strednotlakovú kvapalinovú chromatografiou v reverznej fáze. Po nanesení sa elúcia zlúčeniny vzorca (IV) uskutočňuje zmesou acetonitrilu a vody v objemovom pomere 1 : 4 a neskoršie 1:3.

Frakcie, bohaté na produkt (viac ako 80 % plochy pod krivkou pri HPLC) sa spoja a zriedia vodou na objemový pomer acetonitrilu a vody 1 : 7,3. Potom sa zmes nanesie na opísaný stĺpec, na elúciu sa použije metanol. Frakcie, bohaté na produkt (viac ako 95 % plochy pod krivkou pri HPLC), sa spoja a odparia do sucha, čím sa získa zlúčenina všeobecného vzorca (IV) v typickom výťažku 88 až 92 % pre kombináciu izolácia a chromatografického čistenia.

b) Príprava fenylsulfidu, zlúčeniny V

5,80 g, 0,00533 mol zlúčeniny vzorca (IV) sa zmieša s 0,23 1 bezvodého acetonitrilu, zmes sa ochladí na -5 °C a pri tejto teplote sa pridá 3,10 g, 0,028 mol tiofenolu. Potom sa v priebehu 20 minút pridá 36 g, 24,5 ml, 0,318 ml TFA tak, aby teplota bola udržovaná pod 0 °C. Potom sa reakčná zmes nechá stáť pri teplote -10 až 0 °C tak dlho, až je pomocou HPLC možné dokázať množstvo východiskovej látky menšie ako 3 % plochy pod krivkou, čo trvá približne 3,75 hodín. Po tomto čase sa pomaly v priebehu 1 hodiny pridá 0,56 litrov ochladenej vody a súčasne sa reakčná zmes ochladí tak, aby teplota bola udržovaná na hodnote nižšej ako 5 °C. Výťažok adičného produktu a- a β-fenylsulfidu vo forme trifluóracetátu bol 71 %, celkom bolo získaných 4,82 g produktu.

Roztok bol nanesený na stĺpec, opísaný v stupni a) a stĺpec bol premytý 0,57 1 vody, potom boli adsorbované organické zlúčeniny vymývané 0,50 1 metanolu. Frakcie, bohaté na výsledný produkt, boli odparené na rotačnom odpaľovači za vysokého podtlaku. Týmto spôsobom bolo s čistotou 57 % hmotnostných pri prítomnosti 5,1 % hmotnostných vody získaných 7,20 g surového fenylsulfidtrifluóracetátu ako amorfnej penovitej tuhej látky. Pri ďalšom čistení bolo vo výťažku 61 % získaných 4,10 g fenylsulfidu ako zmes a- a β-diastereomérov v pomere 93 : 7.

c) Premena fenylsulfidu na zlúčeninu la

8,4 g, 0,0037 mol surového fenylsulfidtrifluórmetánsulfonátu s čistotou 57 % hmotnostných bolo pridaných za miešania pri teplote miestnosti k 24 ml etylén-diamínu. Výsledný roztok sa mieša 1,5 hodiny na skončenie reakcie a potom sa pridá 40 ml metanolu a potom ešte 45 ml kyseliny octovej, pričom sa teplota udržuje kúpeľom s vodou a ľadom na hodnote nižšej ako 25 °C. Vytvorí sa hustá suspenzia. Pridá sa 160 ml vody na rozpustenie suspenzie a vodná vrstva sa extrahuje opatrným pretrepávaním so 75 ml hcxánov. Hexánová vrstva sa potom spätne extrahuje 40 ml vody, vodné vrstvy sa spoja, prefiltrujú cez stredne porézny sinter v sklenenom lieviku a potom sa produkt čistí preparatívnou HPLC pri použití stĺpca C-18 s priemerom 50 mm, ako elučné činidlo sa použije zmes 22 % acetonitrilu a 78 % 0,15 % vodného roztoku kyseliny octovej. Frakcie, bohaté na výsledný produkt, sa lyofilizujú, čím sa získa 4,2 g zlúčeniny vzorca (I) s čistotou 85 % hmotnostných vo forme diacetátu, výťažok pre izolačný stupeň je 78 %.

d) Kryštalizácia zlúčeniny la

2,3 g tuhej látky sa rozpustí v 25 ml etanolu a potom sa pridá 2,7 ml vody. Roztok sa nechá prejsť skleneným lievikom so sintrom na odstránenie cudzorodého materiálu. K filtrátu sa pridá 0,14 ml kyseliny octovej a potom sa v priebehu 1,75 hodín pomaly ešte 14 ml etylacetátu. Potom sa roztok naočkuje a nechá sa 1 hodinu stáť. V priebehu 5 hodín sa pridá ešte zvyšné množstvo 32 ml etylacetátu a roztok sa znova nechá 1 hodinu stáť. Potom sa kryštalický tuhý podiel oddelí skleneným lievikom so sintrom a premyje sa zmesou etanolu, etylacetátu a vody, použije sa 6 ml/9 ml/0,5 ml uvedených látok. Vlhký filtračný koláč sa vysuší prúdom dusíka, čím sa vo výťažku 88 % získa 1,91 g diacetátu zlúčeniny vzorca (la), čo zodpovedá 1,75 g čistej látky. Príklad 2

a) Príprava fenylsulfidu, zlúčenina VI

2,48 kg, 2,33 mol zlúčeniny vzorca (II) sa pridá k 78 1 bezvodého acetonitrilu a zmes sa ochladí na -8 °C, potom sa pridá 1,08 kg, 9,8 mol tiofenolu. Potom sa v priebehu 30 minút pridá ešte 12,8 kg, 8,65 1, 112 mol TFA tak, aby teplota reakčnej zmes bola udržovaná pod 0 °C. Potom sa reakčná zmes nechá stáť pri teplote -13 až 0 °C tak dlho, až je pomocou HPLC možné dokázať východiskový materiál v množstve menšom ako zodpovedá 3 % plochy pod krivkou, čo trvá približne 5 hodín. Po tomto čase sa pomaly pridá 35 1 ochladenej vody za chladenia reakčnej zmesi na udržanie ich teploty na hodnote nižšej ako 5 °C. V priebehu pridania vody dôjde k vyzrážaniu produktu vzorca (VI). Potom sa pridá ešte ďalšia voda na úpravu pomeru acetonitrilu a vody na objemový pomer 1 : 3. Tuhý podiel sa odfiltruje a premyje sa zmesou acetonitrilu a vody v objemovom pomere 1 : 3 až do dosiahnutia pH filtrátu vyššieho ako 5. Potom sa tuhý podiel suší v prúde dusíka. Týmto spôsobom sa vo výťažku 76 % získa 2,03 kg trifluóracetátu zlúčeniny vzorca (VI).

b) Syntéza zlúčeniny vzorca (V) zo zlúčeniny vzorca (VI) cez zlúčeninu Hla

922 g, 0,94 mol zlúčeniny vzorca (VI) sa pridá k 44 1 bezvodého THF. K vzniknutej suspenzii sa pridá 119 g, 0,98 mol PhB(OH)₂. Suspenzia sa nechá stáť 12 hodín pri teplote miestnosti a potom sa zahreje na teplotu varu pod spätným chladičom. Kondenzát sa nechá prejsť molekulovým sitom 3Ä v prístroji na extrakciu tuhých látok kvapalinou na vysušenie roztoku na obsah menej ako 25 % molárnych vody, vztiahnuté na množstvo zlúčeniny vzorca (VI). Potom sa reakčná zmes ochladí a pridá sa bezvodý THF na doplnenie zmesi na pôvodný objem. Potom sa zmes ochladí na teplotu nižšiu ako -4 °C. V priebehu 15 minút sa pridá 494 g, 6,51 mol čistého BH₃.SMe₂ a reakčná zmes sa potom udržuje na teplote -4 až 0 °C. Priebeh reakcie sa sleduje pomocou HPLC tak dlho, až množstvo východiskovej látky klesne pod 30 %, čo trvá približne 9 hodín.

Zmes sa ochladí na -10 °C a reakcia sa zastaví pridaním 2,98 1 2N HC1. Týmto spôsobom sa vo výťažku 61 % získa 573 g zlúčeniny všeobecného vzorca (V) vo forme hydrochloridu.

Roztok sa zriedi na objemový pomer THF a vody 1 : 3,76 a nanesie sa na stĺpec pre strednotlakovú chromatografiu, naplnený 16,8 kg RP-C18. Po nanesení materiálu sa stĺpec vymýva zmesou acetonitrilu a vody v objemovom pomere 1 : 2,64 a potom v objemovom pomere 1 : 2,45. Frakcie, bohaté na produkt (viac ako 80 % plochy pod krivkou), sa spoja, čím sa získa zlúčenina vzorca (V) vo výťažku 90 %.

Frakcie, bohaté na produkt, sa spoja a zriedia sa vodou až na objemový pomer acetonitrilu a vody 1 : 2. Zmes sa spojí so zriedenými frakciami ďalšej vsádzky a nanesie na uvedený stĺpec. Zlúčenina všeobecného vzorca (V) sa vymýva metanolom. Frakcie, bohaté na túto látku (viac ako 85 % plochy pod krivkou), sa spoja a odparia v rotačnom odpaľovači, čím sa získa zlúčenina vzorca (V) vo výťažku 98 %.

Zlúčenina všeobecného vzorca (V) sa potom premení na zlúčeninu vzorca (la) spôsobom podľa príkladov lc a ld.

Informácie o sekvencií 1:

vlastnosti sekvencie: A) dĺžka: 6 aminokyselín

B) typ: aminokyselina D) topológia: cirkuláma ide o peptid so sekvenciou č. 1:

Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Spôsob výroby azacyklohexapetidov všeobecného vzorca (I)

HO (Hl), kde R* znamená fenyl, p-metoxyfenyl alebo metyl,

b) táto látka sa redukuje na amín a hydrolyzuje, čím vzniká zlúčenina všeobecného vzorca (IV) kde

R¹ znamená CH₂CH₂NH2,

R¹ znamená alkyl s 9 až 21 atómami uhlíka, alkenyl s 9 až 21 atómami uhlíka, alkoxyfenyl s 1 až 10 atómami uhlíka, alkoxynaftyl s 1 až 10 atómami uhlíka alebo alkoxyterfenyl s 1 až 10 atómami uhlíka v alkoxylovej časti,

R¹¹ znamená atóm vodíka, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 4 atómami uhlíka alebo (CH₂)₂.₄NR^IVR^V·

R¹ znamená vodík, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 4 atómami uhlíka, (CH₂)₂.₄NR^rvR^v alebo

R¹¹ a R¹¹¹ spoločne tvoria (CH₂)₄, (CH₂)₅ alebo (CH₂)₂NH(CH₂)₂,

R^IV znamená vodík alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka,

R^v znamená vodík alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka,

Q znamená atóm dusíka, ako aj farmaceutický prijateľné adičné soli týchto látok s kyselinami, vyznačujúci sa tým, že sa a) na zlúčeninu všeobecného vzorca (II)

HO

c) na túto látku sa pôsobí tiofenolom vo vhodnom rozpúšťadle, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (V)

M, (H), pôsobí kyselinou fenylboritou, p-metoxyfenylboritou alebo metánboritou za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (III) a táto látka sa stereoselektívne premení na zlúčeninu vzorca (I) odštiepením fenyltioskupiny s čistým etyléndiamínom alebo etyléndiamínom rozpustenom vo vhodnom rozpúšťadle pri teplote 10 až 40 °C, pričom R¹ má vo vzorcoch (Π), (III), (IV) a (V) významy uvedené pre vzorec (I).
2. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa t ý m , že sa redukcia v stupni b) uskutoční použitím boranového komplexu alebo hydroborátu kovu.
3. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa t ý m , že sa ako hydroborát kovu použije ZrCl₄/NaBH₄ alebo TiCl₄/NaBH₄ a ako boranový komplex sa použije komplex boranu s dimetylsulfidom, dibenzylsulfidom, difenylsulfidom, THF alebo 1,4-oxatiánom alebo BH₂C1 s dimetylsulfidom.
4. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa t ý m , že sa ako rozpúšťadlo v stupni c) použije acetonitril.
5. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že sa použije rozpúšťadlo zo skupiny voda, metanol, etanol, tetrahydrofurán, izopropanol, trifluóretanol, acetonitril alebo dichlórmetán.
6. Spôsob výroby azacyklohexapeptidov všeobecného vzorca (I) kde

R¹ znamená CH₂CH₂NH₂,

R¹ znamená alkyl s 9 až 21 atómami uhlíka, alkenyl s 9 až 21 atómami uhlíka, alkoxyfenyl s 1 až 10 atómami uhlíka, alkoxynaftyl s 1 až 10 atómami uhlíka alebo alkoxyterfenyl s 1 až 10 atómami uhlíka v alkoxylovej častú

Rⁿ znamená atóm vodíka, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 4 atómami uhlíka alebo (CH₂)₂₄NR^IVR^V,

R¹¹¹ znamená vodík, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 4 atómami uhlíka, (CH₂)₂.₄NR^ivR^v alebo

R¹¹ a R^ln spoločne tvoria (CH₂)₄, (CH₂)₅ alebo (CHj)₂NH(CH₂)₂,

R^IV znamená vodík alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, R^v znamená vodík alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, ako aj farmaceutický prijateľné adičné soli týchto látok s kyselinami, vyznačujúci sa tým, že sa a) na zlúčeninu všeobecného vzorca (II) pôsobí tiofenolom za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (VI) (VI) _r

b) na zlúčeninu všeobecného vzorca (VI) sa pôsobí kyselinou fenylboritou, p-metoxyfenylboritou alebo metánboritou za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (Illa) (Hla) , kde R* znamená fenyl, p-metoxyfenyl alebo metyl,

c) zlúčenina vzorca (Illa) sa redukuje na amín a hydrolyzuje, čím vzniká zlúčenina všeobecného vzorca (V)

d) táto zlúčenina sa odštiepením fenyltioskupiny s čistým etyléndiamínom alebo etyléndiamínom rozpusteným vo vhodnom rozpúšťadle pri teplote 10 až 40 °C stereosclcktívne premení na zlúčeninu vzorca (I), pričom R¹ má vo vzorcoch (II), (III), (IV) a (V) významy uvedené pre vzorec (I).
7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa t ý m , že sa redukcia v stupni c) uskutoční použitím boranového komplexu alebo hydroborátu kovu.
8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa t ý m , že sa ako hydroborát kovu použije ZrCl₄/NaBH₄ a9

SK 284043 Β6 lebo TiCU/NaBFL a ako boranový komplex sa použije komplex boranu s dimetylsulfidom, dibenzylsulfídom, difenylsulfidom, THF alebo 1,4-oxatiánom alebo BH₂CI s dimetylsulfídom.
9. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa t ý m , že sa zlúčenina všeobecného vzorca (II) premení na fenylsulfid reakciou s tiofenolom vo vhodnom rozpúšťadle.
10. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa t ý m , že sa reakcia uskutočňuje v acetonitrile.
11. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa t ý m , že sa použije rozpúšťadlo zo skupiny voda, metanol, etanol, tetrahydrofurán, izopropanol, trifluór-etanol, acetonitril alebo dichlórmetán.
12. Spôsob výroby azacyklohexapeptidov všeobecného vzorca (la) podľa nároku 1

b) táto látka sa redukuje na amín a hydrolyzuje, čím vzniká zlúčenina všeobecného vzorca (IV)

HO

c) na túto látku sa pôsobí tiofenolom vo vhodnom rozpúšťadle, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (V) alebo ich farmaceutický prijateľných adičných solí s kyselinami, vyznačujúci sa tým, že sa

a) na zlúčeninu všeobecného vzorca (II) a táto látka sa stereoselektívne premení na zlúčeninu vzorca (la) odštiepením fenyltioskupiny s čistým etyléndiamínom alebo etyléndiamínom rozpustenom vo vhodnom rozpúšťadle pri teplote 10 až 40 °C.
13. Spôsob výroby azacyklohexapeptidov všeobecného vzorca (la) podľa nároku 6 pôsobí kyselinou fenylboritou, p-metoxyfenylboritou alebo metánboritou za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (III) (la).

alebo ich farmaceutický prijateľných adičných solí s kyselinami, vyznačujúci sa tým, že sa

a) na zlúčeninu všeobecného vzorca (II) kde R* znamená fenyl, p-metoxyfenyl alebo metyl,

SK 284043 Β6

d) táto zlúčenina sa odštiepením fenyltioskupiny s čistým etyléndiamínom alebo etyléndiamínom rozpusteným vo vhodnom rozpúšťadle pri teplote 10 až 40 °C stereoselektívne premení na zlúčeninu vzorca (la).
14. Medziprodukt všeobecného vzorca (III) na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 pôsobí tiofenolom za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (VI) (III), kde R* znamená fenyl, p-metoxyfenyl alebo metyl a R¹ má význam, uvedený v nároku 1.
15. Medziprodukt všeobecného vzorca (VI) na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa nároku 6

b) na zlúčeninu všeobecného vzorca (VI) sa pôsobí kyselinou fenylboritou, p-metoxyfenylboritou alebo metánboritou za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (Illa)

HO (VI), kde R¹ má význam, uvedený v nároku 1.
16. Medziprodukt všeobecného vzorca (Illa) na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa nároku 6 kde R* znamená fenyl, p-metoxyfenyl alebo metyl, c) zlúčenina vzorca (Hla) sa redukuje na amín a hydrolyzuje, čím vzniká zlúčenina všeobecného vzorca (V)

HO (Hla) , kde R* znamená fenyl, p-metoxyfenyl alebo metyl a R¹ má význam, uvedený v nároku 1.
17. Medziprodukt všeobecného vzorca (V) na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa nároku 6 kde R¹ má význam, uvedený v nároku 1.