SK11395A3

SK11395A3 - Method of production of pharmaceutical agent contents of mifostine and crystalline amifostinetrihydrate

Info

Publication number: SK11395A3
Application number: SK113-95A
Authority: SK
Inventors: Paul E Kennedy; Roger A Rajewski; John M Baldoni
Original assignee: Us Bioscience
Priority date: 1992-07-31
Filing date: 1993-07-30
Publication date: 1995-07-11
Also published as: DE69333453D1; NO20005775D0; RU2125880C1; PL307298A1; NO950343L; JPH08500104A; PT655917E; NO5775A; MX9304627A; EP0655917A1; CA2120133C; HU227122B1; CZ23095A3; IS1843B; ATE261729T1; CA2120133A1; IS4060A; HK1010692A1; NZ255182A; IL106540A0

Description

Kryštalický amifostin má zvýšenú stálosť pri teplote 4 °C až teplote miestnosti počas aspoň dvoch rokov, čo je podstatné zvýšenie v porovnaní so známymi prostriedkami s obsahom amorfného amifostinu, sušeného vo vákuu. Rekonštituovaný prostriedok podľa vynálezu je vhodný ako látka, chrániaca proti účinkom žiarenia alebo chemických látok. Týka sa to aj kryštalického amifostintrihydrátu ako účinnej látky v prostriedku podľa vynálezu.

ľ ľ 41$ - 1 Spôsob výroby farmaceutického prostriedku s obsahom amifostínu a kryštalický amifostíntrihydrát

Oblasť techniky

Vynález sa týka spôsobu výroby farmaceutického prostriedku s obsahom amifostinu, S-2-(3-aminopropylamino)etyldihydrogénfosfortioátu so zvýšenou stálosťou, vynález sa taktiež týka kryštalického amifostíntrihydrátu.

Doterajší stav techniky

Účinná látka S-2-(3-aminopropylamino)etyldihydrogénfosfortioát, ktorá je známa aj ako amifostín, etiofos, Etyol^, NSC 296961 a VR-2721 a ďalej bude v priebehu prihlášky uvádzaná ako amifosfín a aj ďalšie látky tohto typu boli opísané v US patentovom spise č. 3 892 824 (Piper a ďalší). Uvedený patentový spis opisuje tiež známe postupy na výrobu kryštalickej formy amifostinu. Tieto kryštalické formy amifostinu sú pomerne stále pri teplote miestnosti po dobu niekoľkých rokov a pri teplote 50 “C niekoľko mesiacov. Uvedené látky boli pôvodne vyvinuté ako ochranné látky proti žiareniu, zvlášť proti rtg-žiareniu alebo jadrovému žiareniu, najmä pokiaľ môže k zasiahnutiu takýmto žiarením dôjsť v priebehu vojnových konfliktov.

Okrem svojho použitia proti účinkom žiarenia má amifostín podľa výsledkov vykonaných skúšok aj dobré použitie ako ochranná látka nie len proti žiareniu, ale aj proti chemickým Látkam pri mierovom využití, napríklad ako ochrana proti nežiaducim účinkom, ktoré môžu vzniknúť v priebehu liečenia zhubných nádorov ožiarením a pri použití rôznych chemoterapeutických látok, napríklad alkylačných činidiel, ako cyklofosfamid, cisplatín karboplatín, doxorubicín a derivátov týchto látok a tiež mitomycínu a jeho derivátov. Podobne bolo tiež opísané, že amifostín už bol použitý klinicky na ochranu chorých, infikovaných HIV (AIDS) pred nepriaznivými vedľajšími účinkami pri liečbe 3’-azido-3’-deoxytymidínom,

AZT. Amifostín a jeho deriváty majú požadovaný ochranný účinok, bez toho aby v podstatnej miere došlo k ovplyvneniu priaznivých účinkov podávaných liečebných látok. Tento účinok je aspoň z časti spôsobený selektívnym príjmom tiolovej skupiny, ktorá je ochrannou skupinou, do normálneho neporušeného tkaniva.

Pod pojmom amifostín na liečebné účely sa rozumie látka, vopred vysušená vo vákuu, dodávaná aj vo forme trihydrátu. Bežne dodávané sterilné prostriedky s obsahom amifostínu budú ďalej uvádzané ako amorfný amifostín, zatiaľ čo forma, ktorá je podstatou vynálezu, bude uvádzaná ako kryštalický amifostín, aby bolo možné obe tieto formy od seba slovne odlíšiť. Pokiaľ nie je výslovne uvedené inak, sú uvádzané množstvá tejto látky prepočítané na bezvodú bázu.

Hoci má amifostín celý rad výhodných vlastností, vznikajú značné problémy pri pokusoch spracovať túto látku na stály sterilný prostriedok, ktorý by bolo možné vhodným spôsobom podávať.

Súčasný spôsob výroby a balenie amifostínu spočíva v tom, že sa táto látka plní do vopred sterilizovaných nádobiek vo forme sterilizovaného vodného roztoku s obsahom amifostínu vo vopred stanovenom objeme, nádobky aj s obsahom sa ochladia a potom sa rozpúšťadlo odstráni lyofilizáciou, čím vznikne v každej nádobke vopred stanovené množstvo suchého amifostínu, ako bolo opísané v publikácii L. Lachman a ďalší, The Theory and Practice of Industrial Pharmacy, str. 62 až 63, 1986. Pri tomto postupe sú vyriešené podstatné praktické problémy, týkajúce sa balenia tuhého amifostínu za sucha vo forme zhlukov alebo vo forme voľne sypného prášku. Takéto plnenie je spojené s ťažkosťami pri manipulácii s práškovým materiálom vzhľadom na to, že práškový materiál je nutné mlieť na prijateľnú veľkosť častíc a dostatočnú sypnosť za aseptických podmienok, ďalšou ťažkosťou je naplnenie presnej dávky tuhého amifostínu do každej nádoby.

Avšak bežne dodávaný farmaceutický prostriedok s obsahom amifostínu zvyčajne obsahuje amorfnú formu, získanú lyofilizáciou, táto forma však nie je stála za rôznych tepel ných podmienok, najmä pri vyššej teplote. V dôsledku toho je nutné udržovať lyofilizovaný materiál na teplote -20 ’C a tiež ho prepravovať pri teplote -70 nedošlo k rozkladu farmaceutického udržiavania nízkych teplôt v priebehu

C až -20 °C tak, aby prostriedku. Nutnosť skladovania a dopravy je veľkou nevýhodou bežne dodávaných, vo vákuu sušených foriem amifostínu. Pri skladovaní a preprave týchto farma ceutických prostriedkov vznikajú zvláštne náklady na balenie a chladenie. Okrem toho nie je možné zásobovať týmito pro striedkami zdravotnícke zariadenia, ktoré nie sú vybavené mraziacim zariadením na skladovanie a tieto zariadenia teda nemôžu používať amifostín pre svojich chorých, ide najmä o zdravotnícke zariadenia vo vývojových krajinách. Avšak vzhľadom na to, že zatiaľ nebol k dispozícii žiadny iný farmaceutický prostriedok, boli klinické pokusy vykonávané za použitia uvedeného prostriedku.

Je zrejmé, že by bolo potrebné vyvinúť liekovú formu s dostatočnou stálosťou pri teplote miestnosti za menej silného ochladenia tak, ako tomu je v prípade iných farmaceutických prostriedkov.

Vynález si kladie za úlohu navrhnúť nový postup, ktorým by bolo možné získať tuhý farmaceutický prostriedok s obsahom amifostínu, sušeného vo vákuu, prípadne s farmaceutickými pomocnými látkami, ako je manitol a so zlepšenou stálosťou v porovnaní so známym farmaceutickým prostriedkom.

Podstata vvnálezu

Podstatu vynálezu tvorí spôsob výroby farmaceutických prostriedkov s obsahom kryštalického amifostínu, tento postup spočíva v tom, že sa

a) pripraví prostriedok s obsahom aminoalkyIdihydrogénfosfortioátu všeobecného vzorca RHN(CH2)_nNH(CH2)_mSPO3H₂alebo hydrátov tejto látky alebo solí s alkalickým kovom, kde R znamená vodík alebo alkyl s 1 až 7 atómami uhlíka a n a m sú nezávislé celé čísla 2 až 6, alkoho lu a vodného rozpúšťadla, v ktorom relatívny pomer účinnej látky, alkoholu a vody je taký, že vzniká roztok, zbavený častíc pri teplote miestnosti až teplote 10 °C, po ochladení na teplotu nižšiu ako 0 °C však vzniká kryštalická zrazenina aminoalkyldihydrogénfosfortioátu,

b) prostriedok sa ochladí na teplotu nižšiu ako 0 'C po dobu, dostatočnú na vyzrážanie kryštalického aminoalkyldihydrogénf osf ortioátu , potom sa

c) výsledná zmes suší vo vákuu za vzniku tuhého kryštalického prostriedku so zvýšenou tepelnou stálosťou.

V ďalšom prípadnom stupni podľa vynálezu je možné plniť farmaceutický prostriedok v prítomnosti sterilného inertného plynu, ako argónu, dusíka alebo hélia. Teplota, pri ktorej sa prostriedok chladí na vyzrážanie kryštalickej účinnej Látky je v oblasti eutektického bodu prostriedku. Prostriedok môže s výhodou obsahovať pomocné látky, napríklad manitol.

Aminoalkyldihydrofosfortioáty, vhodné na použitie pri vykonávaní spôsobu podľa vynálezu zahrňujú napríklad nasledujúce zlúčeniny:

S-2-(3-aminopropylamino)etyldihydrogénfosfortioát (amifostin), S-2-(3-metylaminopropylamino)etyldihydrogénfosfortioát (VR-3689), S-2-(3-etylaminopropylamino)etyldihydrogénfosfortioát, S-2-(3-aminopropylamino)-2-metylpropyldihydrogénfosfortioát, S-2-(2-aminoetylamino)-2-etyldihydrogénfosfortioát,

S-2-(4-aminobutylamino)-2-etyldihydrogénfosfortioát, S-2-(5ami nopenty Lamino)-2-e tyldihydrogénfosforti oát, S-2-(6-amino hexylamino) - 2-ety.Ld ihydrogénf osf ortioát, e ty lamino) - 2-etyld.ihydrogénf osf ortioát, propylamino)- 2-etyld ihydrogénfosfortioát

S-2-(2-metylaminoS-2-(3-metylaminoa S-3-(3-metylaminopropylamino) -3-propyldihydrogénfosfortioát (VR-151327). Vo výhodnom uskutočnení je aminoalkyldihydrogénfosfortioátom amifostín, VR-3689, VR-151327, najvýhodnejší je amifostín. Alkoholy, vhodné na použitie pri kryštalickom zrážaní účinnej látky v priebehu vykonávania spôsobu podľa vynálezu môžu byť napríklad alkylalkoholy s 1 až 5 arómami uhlíka, ako metanol, etanol, propanol, izopropanol, n-butanol, sek.butanol, terc.butanol, n-pentanol, 2-pentanol a podobne, výhodný je zvlášť etanol.

Vo zvláštnom vykonaní spôsobu podľa vynálezu sa teplota zmesi, získanej v stupni b) zvýši na teplotu v rozmedzí 1 °C až 20 C nad eutektickú teplotu prostriedku s následným ochladením z tejto teploty späť na eutektickú teplotu alebo nižšiu skôr, než sa uskutoční v stupni c) sušenie farmaceutického prostriedku vo vákuu. V špecifických prípadoch sa môže eutektická teplota farmaceutického prostriedku pohybovať približne v rozmedzí -80 ^eC až 0 “C, takže teplota, na ktorú je potrebné zmes zohriať pred opätovným ochladením na eutektickú teplotu sa môže pohybovať v rozmedzí -30 “C až 10 ^eC.

Spôsobom podľa vynálezu sa získa prostriedok, ktorý obsahuje 50 až 400 mg účinnej látky na ml prostriedku, približne 1 až 35 % objemových alkoholu a približne 65 až 99 % objemových vody. S výhodou obsahuje prostriedok približne 125 až 250 mg účinnej látky na ml, približne 5 až 20 % objemových alkoholu a približne 80 až 95 % objemových vody. Vo zvlášť výhodnom uskutočnení obsahuje prostriedok približne 100 mg účinnej látky na ml, približne 10 % objemových alkoholu a približne 90 % objemových vody.

Teplota v rôznych stupňoch, pri ktorých sa vykonáva chladenie a sušenie vo vákuu, sa môže meniť v širokom rozmedzí v závislosti na špecifických pomeroch aminoalkyldihydrogénfosfortiáotu k alkoholu a k vode. Avšak zvyčajne sa teplota v stupňoch b) a c) pohybuje v rozmedzí -40 až -5 °C, s výhodou je približne -20 °C.

V špecifickom uskutočnení spôsobu podľa vynálezu postup zahrňuje aj sterilizačný stupeň. Túto sterilizáciu je možné uskutočniť celým radom postupov, ktoré sú v danej oblasti techniky známe, napríklad zohrievaním zmesi v autokláve, ožiarením prostriedku pomocou gama-žiarenia, prekryštalizovaním za aseptických podmienok alebo sterilizáciou roztoku pomocou filtrácie, napríklad použitím filtra s priemerom otvorov 0,2 mikrometre. Ďalej je nutné uviesť, že kryštalický aminoalkyldihydrogénfosfortioát môže byť bezvodý alebo môže obsahovať kryštalizačné rozpúšťadlo. Napríklad kryštalický amifostín môže byť s výhodou bezvodý alebo môže mať formu solvátu alebo hydrátu, napríklad monohydrátu alebo trihydrátu. Hydráty zvyčajne obsahujú 1 až 5, s výhodou 1 až 3 móly kryštalizačnej vody.

V ďalšom uskutočnení spôsobu výroby farmaceutického prostriedku je možné rozpustiť aminoalkyldihydrogénfosfortioát, napríklad amifostín spolu s akýmkoľvek požadovaným pomocným prostriedkom vo vode na injekčné použitie podľa US liekopisu a výsledný roztok je potom možné sterilizovať pomocou filtrácie.

Potom sa pridá požadované množstvo sterilného alkoholu, napríklad sterilného etanolu, ktorý zodpovedá požiadavkám US liekopisu, čím sa získa prostriedok, ktorý je potom možné ochladiť alebo zohriať vyššie uvedeným spôsobom.

Farmaceutické prostriedky, získané spôsobom podľa vynálezu môžu ďalej obsahovať pomocné látky, prijateľné z farmaceutického hľadiska. Vhodné pomocné látky zahrňujú napríklad chlorid sodný, propylénglykol, sacharózu, dextrózu, sorbitol, inositol, manitol, glycín, arginín alebo iné aminokyseliny, s výhodou manitol a najvýhodnejšie manitol RF.

Podstatu vynálezu teda tvorí spôsob výroby farmaceutického prostriedku s obsahom kryštalického amifostínu, tento postup spočíva v tom, že sa

a) pripraví prostriedok, obsahujúci 50 až 300 mg amifostínu na 1 ml, približne 3 až 30 % objemových etanolu, približne 70 až 97 % objemových vody a prípadne približne 5 až 300 mg farmaceutický prijateľného pomocného prostriedku na 1 ml za vzniku roztoku, zbaveného tuhých častíc pri teplote miestnosti až teplote približne 10 °C, avšak po ochladení pod 0 °C v prostriedku vznikne kryštalická zrazenina amifostínu,

b) zmes sa ochladí na teplotu v rozmedzí približne -40 až

-5 °C na dobu, dostatočnú na vyzrážanie kryštalického amifostínu a

c) výsledná zmes sa suší vo vákuu za vzniku tuhého prostriedku s obsahom kryštalického amifostínu pri zvýšenej tepelnej stálosti.

Všeobecne sa postupy, vykonávané stupňom c) uskutočnia v priebehu s výhodou v vykonávajú v vého obdobia hodín. Okrem pri hodnotách 1,33 po stupni a) a pred približne pol až 72 hodín, 24 hodín. Tie postupy, ktoré sa sú vykonávané v priebehu časos výhodou v priebehu 10 až 20 vo vákuu v stupni c) vykonáva s výhodou 19,8 Pa.

Podstatu vynálezu tvorí aj spôsob výroby sterilného farmaceutického prostriedku so zvýšenou tepelnou stálosťou, v ktorom účinná zložka, to znamená kryštalický aminoalkyldihydrogénfosfortioát, napríklad amifostín, aspoň 2 roky pri teplote približne 4 C. S kryštalický aminoalkyldihydrogénfosfortioát, fostín stály pri teplote miestnosti najmenej mená, že sa získava sterilný prostriedok so nou stálosťou s obsahom kryštalického priebehu 2 až rámci až toho stupňa c), hodín, sušenie 133 Pa, tvorí sa v az zostáva stály výhodou zostáva napríklad ami2 roky. To znazvýšenou tepelamifostínu, tento prostriedok môže byť rekonštituovaný pridaním nosného prostriedku, prijateľného z farmaceutického hľadiska za vzniku injekčného prostriedku, zbaveného tuhých častíc. S výhodou sa sterilný prostriedok vyrába ako prostriedok, rozdelený na jednotlivé sterilné dávky so zvýšenou tepelnou stálosťou, ktoré obsahujú približne 10 až 10 000 mg kryštalického amifostínu a prípadne približne ešte 10 až 10 000 mg pomocného prostriedku, prijateľného z farmaceutického hľadiska, takto získaný prostriedok je možné rekonštituovať pridaním nosného prostredia, prijateľného z farmaceutického hľadiska na pro dukt, zbavený tuhých častíc a vhodný na injekčné podanie. Vo zvlášť výhodnom uskutočnení obsahuje takto získaný prostriedok, rozdelený na sterilné jednotlivé dávky približne 100 až

1000 mg kryštalického amifostínu a približne 100 až 1000 mg pomocného prostriedku. V najvýhodnejšom uskutočnení obsahuje sterilný prostriedok, rozdelený na jednotlivé dávky približne 500 mg kryštalického amifostinu a približne 500 mg manitolu. Nosné prostredie je možné voliť zo širokej škály nosných prostredí, prijateľných z farmaceutického hľadiska a môže teda ísť napríklad o vodu pre injekčné podanie podľa US liekopisu, o fyziologicky roztok chloridu sodného podľa US liekopisu, o 5% dextrózu vo vode podľa US liekopisu alebo o vodné pufre.

Takto spracované farmaceutické prostriedky, získané spôsobom podľa vynálezu je možné použiť na ochranu proti rádioaktívnemu žiareniu alebo proti pôsobeniu chemických látok, v týchto prípadoch sa podáva účinné množstvo farmaceutického prostriedku, obsahujúceho kryštalický aminoalkyldihydrogénfosfortioát, obsahujúci kryštalický aminoalkyldihydrogénfosfortioát vyššie uvedeného všeobecného vzorca, napríklad amifostín po rekonštitúcii kryštalického prostriedku v nosnom prostredí, prijateľného z farmaceutického hľadiska. Takto rekonštituovaný farmaceutický prostriedok je možné podávať parenterálne. V prípade potreby je rekonštituovaný farmaceutický prostriedok možné podávať vnútrožilovo, vnútrosvalovo, podkožné, do telesných dutín alebo intratekálne.

Podrobný opis výhodných uskutočnení

Až dosiaľ dostupný farmaceutický prostriedok s obsahom n amifostinu, Etyol , je tepelne nestály. Vzhľadom na nestálosť tohto prostriedku je nevyhnutné ho skladovať a prepravovať pri veľmi nízkych teplotách, aby nedošlo k degradácii účinnej látky v produkte.

Vynález prvýkrát uvádza stály, vo vákuu vysušený farmaceutický prostriedok s obsahom amifostinu, ktorý je možné bežne prepravovať a skladovať pri teplote 4 C až teplote miestnosti po dlhé časové obdobie bez podstatnejšej degradácie produktu, ide teda o roztok, ktorého potreba bola dlho zrejmá. Prostriedok je možné prepravovať a skladovať v nemocniciach po celom svete aj v prípade, že tieto nemocnice nie sú vybavené skladovacím mraziacim zariadením, tak ako to bolo až dosiaľ nutné v prípade známeho prostriedku.

Neočakávane bolo zistené, že sterilný a stály produkt s obsahom kryštalického amifostínu, prípadne s obsahom pomocnej látky alebo látok, napríklad manitolu je možné pripraviť tak, že sa vo vákuu suší amifostín z roztoku v zmesi vody a etanolu s obsahom etanolu približne 1 až 35 % objemových .

Po počiatočných skúškach bola najprv stanovená

1) rozpustnosť amifostínu v mg/ml v zmesiach a rôznym pomerom vody a etanolu,

2) rozpustnosť amifostínu v zmesi vody a etanolu pri rôznych teplotách,

3) vhodná teplota v lyofilizačnom zariadení, nutná pre vyzrážanie amifostínu pred sušením vo vákuu a

4) koncentrácia etanolu, ktorá je potrebná na vytvorenie presýteného roztoku, v ktorom po ochladení na požadovanú teplotu v lyofilizačnom zariadení dôjde k vyzrážaniu amifostínu v kryštalickej forme.

Z vyššie uvedených skúšok, ktoré budú podrobnejšie rozvedené v príkladovej časti prihlášky, bolo zistené, že výhodná koncentrácia bezvodého amifostínu bola 100 mg/ml v približne 10% vodnom etanole. Ďalej bolo zistené, že k vyzrážaniu amifostínu dochádza s výhodou pri teplote približne -20 °C.

Aby bolo možné získať dobre spracovateľný filtračný koláč, je potrebné, aby sa podiel etanolu v zmesi etanolu a vody pohyboval v rozmedzí 1 až 35 % objemových etanolu, ide napríklad o pomer etanolu a vody 1:99 alebo 35:65. Teplota v lyofilizačnom zariadení sa môže pohybovať v rozmedzí -40 až -10 °C, výhodná teplota je približne -20 “C. Výsledky predbežných skúšok sa stáli dôležitým podkladom na úpravu koncentrácie etanolu a teploty pre rôzne kombinácie objemu zásobníka a veľkosti náplne.

Zvyčajne sa postupuje tak, že sa lyofilizačné zariadenie predchladi na teplotu -30 °C až -15 C, s výhodou -20 °C. Nádobky sa naplnia a teplota sa znovu upraví na tú istú hodnotu a potom sa nádobky s obsahom na tejto teplote udržujú po dobu približne 20 hodín. V závislosti na koncentrácii etanolu a amifostínu alebo amifostínu a pomocnej látky v roztokoch a v závislosti na koncentrácii etanolu sa bude meniť aj teplota, ktorá je potrebná na vyzrážanie účinnej látky. Potom sa vyzráža kryštalický amifostín a nato sa prostriedok zmrazí.

Hneď ako dôjde k zmrazeniu prostriedku, je možné prostriedok sušiť na odstránenie hlavného podielu vody a etanolu. Zvyčajne sa tlak zníži na približne 19,8 Pa. Primárny cyklus sušenia je ukončený približne po viac než 2 hodinách pri teplote približne -20 ± 2 °C. V priebehu sekundárneho sušenia sa prostriedok udržuje na teplote približne -20 °C až 10 °C, s výhodou na teplote vyššej než v priebehu primárneho sušenia po dobu približne 40 až 50 hodín na uľahčenie sekundárneho stupňa sušenia, to znamená odstránenie zvyškov vody a etanolu. Hneď ako parciálny tlak vody a etanolu dosiahnu stálu úroveň, považuje sa sušenie za ukončené. Týmto spôsobom je možné získať produkty, sušené vo vákuu s obsahom kryštalického amifostínu so zvýšenou stálosťou v porovnaní so známym prostriedkom s obsahom amorfného amifostínu. Nádobky s obsahom tohto prostriedku je možné skladovať a prepravovať pri teplote 4 C až teplote miestnosti, bez toho aby došlo k podstatnejšej degradácii produktu.

K prostriedku je možné pridávať pomocné prostriedky, najmä na zvýšenie množstva tuhého podielu v prostriedku. Z pomocných látok, vhodných na toto použitie jednotlivo alebo v zmesi je možné uviesť fosforečnan sodný alebo draselný, chLorid sodný, kyselinu citrónovú, kyselinu vinnú, želatínu a rôzne uhľohydráty, ako sú dextróza, sacharóza, sorbitol, inositol, manitol a dextrán. Okrem toho je možné použiť ešte iné látky, bežne používané na tieto účely.

Tuhé prostriedky s obsahom kryštalického amifostínu, sušeného vo vákuu môžu byť uložené do nádobiek s obsahom jednotlivej dávky aseptickým plnením vhodných nádobiek sterilným roztokom, vopred sušeným vo vákuu na požadovaný obsah amifostínu, potom sa pripraví tuhý prostriedok a nádobka s obsahom jednej dávky sa hermeticky uzavrie. Tieto nádobky dovoľujú rýchle rozpustenie tuhého prostriedku pri rekonštitúcii vhodným sterilným riedidlom in situ za vzniku sterilného roztoku s koncentráciou amifostínu, vhodnou na okamžité podanie. Pojem vhodná nádobka, tak ako je v priebehu prihlášky používaný, znamená nádobku, vhodnú na uloženie sterilného materiálu, napríklad fľaštičku, do ktorej je možné uložiť produkt, sušený vo vákuu a potom ju hermeticky uzavrieť zátkou. Nádobka musí mať vhodnú veľkosť v závislosti na objeme roztoku po rekonštitúcii produktu, sušeného vo vákuu a musí byť vyrobená z vhodného materiálu, zvyčajne ide o sklo typu I. Zátka je tvorená napríklad sterilnou gumou alebo ekvivalentným materiálom tak, aby bolo možné zátkou vstreknúť príslušné riedidlo, napríklad sterilnú vodu na injekčné podanie podľa US liekopisu, fyziologický roztok chloridu sodného podľa US liekopisu alebo 5% roztok dextrózy vo vode podľa US liekopisu na rekonštitúciu amifostínu na požadovaný roztok. Požiadavky na vhodnosť veľkosti a materiálu nádobiek na farmaceutické produkty sú v danej oblasti techniky známe.

Tuhým prostriedkom podľa vynálezu boli zlepšené fyzikálne vlastností produktu, avšak neočakávane bolo dokázané, že získaný ľahko rozpustný produkt má aj zlepšenú tepelnú stálosť v porovnaní s dosiaľ známymi bežne používanými prostriedkami. Pri sledovaní zlepšenia chemickej stálosti pri sušení vo vákuu sa porovnáva stálosť tuhého materiálu po sušení vo vákuu so stálosťou roztoku farmaceutického prostriedku. Prostriedok podľa vynálezu však má vyššiu stálosť než tuhé produkty s obsahom tej istej účinnej látky, získanej odlišným spôsobom, ako bude ďalej opísané v príkladovej časti.

Farmaceutické prostriedky, získané spôsobom podľa vynálezu sú vhodné pre parenterálne podanie, napríklad vnútrožilové, vnútrosvalové, intratekálne a podkožné podanie alebo na podanie do telesných dutín.

Praktické uskutočnenie vynálezu bude vysvetlené nasledujúcimi príkladmi, ktoré však nemajú slúžiť na obmedzenie rozsahu vynálezu.

Vynález bude ďalej opísaný podrobnejšie najskôr v súvislosti s priloženými výkresmi.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Na obr. 1 je graficky znázornená rozpustnosť pre amifostín VR-2721 v roztokoch s obsahom vody a etanolu za rôznych tepelných podmienok, na osi y je uvedená teplota v stupňoch Celzia, na osi x množstvo trihydrátu amifostínu v mg/ml.

Na obr. 2 je znázornená grafická závislosť rozpustnosti amifostínu na koncentrácii etanolu, na osi y je znázornené množstvo etanolu v % objemových, na osi x množstvo trihydrátu amifostínu v mg/ml.

Na obr. 3 sú znázornené výsledky TGA pre kryštalický amifostín v 10% etanole vo vode.

Na obr. 4 je znázornený priebeh TGA pre čistý amifostín.

Na obr. 5 je znázornená diferenciálna kalorimetria DSC pre kryštalický amifostín použitím 10% etanolu vo vode.

Na obr. 6 je znázornená diferenciálna kalorimetria pre čistý amifostín.

Na obr. 7 je znázornený priebeh FTIR pre kryštalický amifostín za použitia 10% etanolu vo vode.

Na obr. 8 je znázornený priebeh FTIR za použitia kryštalického amifostínu.

Na obr. 9 je znázornená difrakcia rtg-lúčov za použitia kryštalického amifostínu v zmesi 10% etanolu vo vode.

Na obr. 10 je znázornená difrakcia rtg-žiarenia použitím čistého amifostínu.

Na obr. 11 je znázornený priebeh TGA pre kryštalický amifostín, ktorý bol spracovaný spoločne s manitolom za pou13 žitia 10% etanolu vo vode.

Na obr. 12 je znázornený priebeh diferenciálnej kalorimetrie pre kryštalický amifostín, ktorý bol spracovaný spolu s manitolom za použitia 10% etanolu vo vode.

Na obr. 13 je znázornená molekulová a kryštalická štruktúra amifostínu, sušeného vo vákuu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Predbežné pokusy

V tomto príklade sa opisujú výsledky pokusov, pri ktorých boli vyhodnotené rôzne parametre, napríklad koncentrácia amifostínu, koncentrácia etanolu a teplota tak, aby bolo možné získať sterilný, vo vákuu sušený kryštalický amifostín ako taký alebo v zmesi s farmaceutickými pomocnými látkami pri sušení roztoku účinnej látky v zmesi vody a etanolu.

A. Príprava roztoku

Do skúmaviek, opatrených skrutkovacími uzávermi boli uložené nasledujúce kvapaliny:

a)	5000	mikrolitrov	vody
b)	4750	mikrolitrov	vody	a	250	mikrolitrov	etanolu
c)	4500	mikrolitrov	vody	a	500	mikrolitrov	etanolu
d)	4250	mikrolitrov	vody	a	750	mikro Li trov	etanolu
e)	4000	mikrolitrov	vody	a	1000	1 mikrolitrov	’ etanolu

Do každej skúmavky sa pridáva amifostín tak dlho, až sa tuhá látka prestane rozpúšťať a zostane nerozpustený podiel. Potom sa roztok spracováva 30 sekúnd ultrazvukom. V prípade, že sa všetok amifostín rozpustí, pridáva sa ďalšie množstvo tejto látky opäť tak dlho, až zostane nerozpustený podiel. Potom sa skúmavky 30 minút energicky pretrepávajú pri tepLo te 25 °C.

B. Príprava štandardných roztokov

Pripraví sa 10 ml nasledujúcich roztokov účinnej látky vo vode:

a) 0,05 mg/ml

b) 0,1 mg/ml

c) 0,3 mg/ml

d) 0,5 mg/ml

Použitím UV spektrometra sa každý roztok zmerá proti vode pri 190 až 290 nm. Absorbancia sa zaznamenáva pri 200 nm alebo 210 nm. Potom sa vykoná lineárna analýza regresie štandardných údajov pri 200 nm alebo 210 nm, čím sa získa zodpovedajúci grafický vzťah.

C. Analýza vzoriek roztoku

Odoberie sa približne 0,5 ml každého roztoku a roztok sa odstredí na usadenie tuhého podielu. Potom sa každá vzorka prefiltruje použitím filtra s priemerom otvorov 0,45 mikrometrov na odstránenie prebytočných častíc v prípade potreby. Každá vzorka sa zriedi vodou na koncentráciu 0,3 až 0,4 mg/ml. Na UV spektrofotometri sa každá vzorka sleduje v rozmedzí 190 až 290 nm. Hodnoty pre každú vzorku sa odpočítajú pri 200 aLebo 210 nm. Podľa štandardnej krivky a riedenia sa vypočíta koncentrácia účinnej látky v každom roztoku. Potom sa roztok ochladí vždy na nasledujúcu nižšiu teplotu a pri tejto teplote sa udržuje 1 hodinu, potom sa meranie opakuje. V nasledujúcej tabuľke 1 sú uvedené výsledky rozpustnosti amifostínu v zmesi etanolu a vody pri rôznych teplotách. Tie isté vzťahy sú vyhodnotené graficky na obr. 1 a 2.

Tabuľka 1

Priemerná rozpustnosť amifostíntrihydrátov v zmesi etanolu a vody v mg/ml

	25 ’C	10 ’C	5 ’C	0 ’C	-5 ’C	-10 ’C
voda	425,7	264,0	251,2	204,7	199,8	ND
1% etanol	396,0	256,3	238,7	195,1	184,2	ND
2% etanol	370,9	241,7	226,6	189,6	177,2	186,1
3% etanol	389,0	220,4	204,7	162,4	154,1	ND
4% etanol	308,8	172,4	161,9	131,1	123,3	117,4
5% etanol	302,9	152,7	144,7	115,0	111,7	101,7
10% etanol	188,0	84,5	76,2	57,6	55,3	52,5
15% etanol	106,3	36,6	34,7	26,6	25,7	22,5
20% etanol	68,8	19,5	23,4	13,4	12,2	11,5
ND = nebolo v	ykonané
Výsledky	pokusov	v tomto	príklade	dokazujú, že	rozpust

nosť amifostínu je silne závislá tak na množstve etanolu, pomocného rozpúšťadla, ako aj na teplote. Zvyčajne sa stupeň presýtenia, ku ktorému dochádza pri poklese teploty daného roztoku amifostínu, znižuje so zvyšujúcim sa množstvom etanolu. Táto závislosť je využitá v nasledujúcich príkladoch 2 a 3 tak, aby bol získaný kryštalický amifostin.

Príkl ad 2

Príprava kryštalického amifostínu bez manitolu

K 130 ml vody sa pri teplote 25 C za miešania pridá 21,25 g amifostíntrihydrátu, čo je množstvo, ekvivalentné 17,0 g bezvodého amifostínu. Po úplnom rozpustení amifostínu sa k roztoku za miešania pridá 17 ml absolútneho etanolu podľa US liekopisu. Potom sa roztok doplní vodou na objem 170 ml. Výsledný roztok sa sterilizuje cez filter s priemerom ôk 0,22 mikrometrov. Do každej z 33 fľaštičiek s objemom 10 ml sa uloží vždy 5 ml prefiltrovaného roztoku, takže kaž dá fľaštička obsahuje 500 mg amifostinu, vztiahnuté na bezvodú bázu v zmesi etanolu a vody v pomere 10:90. Fľaštičky sa uzatvoria zátkami a vzorky sa sušia vo vákuu nasledujúcim spôsobom. Fľaštičky sa uložia do lyofilizačného zariadenia, vopred ochladeného na -20 ’C na dobu 17 hodín pri atmosférickom tlaku, potom sa priestor evakuuje a udržuje 28 hodín na teplote -20 ’C. V priebehu tejto doby sú fľaštičky otvorené. Po uplynutí tejto doby sa priestor naplní dusíkom a nádobky sa rýchlo ručne zazátkujú. Týmto spôsobom sa získa tepelne stály lyofilizovaný produkt, uložený vo fľaštičkách, obsahujúci približne 500 mg kryštalického amifostinu.

Príklad 3

Spôsob výroby kryštalického amifostinu

K 150 ml vody sa pri teplote 25 ’C pridá približne 20 g manitolu. K vzniknutému roztoku sa za miešania pridá približne 25 g amifostíntrihydrátu, čo je množstvo, ekvivalentné 20 g bezvodej bázy. Po úplnom rozpustení sa pridá 20 ml bezvodého etanolu podľa US liekopisu za miešania. Potom sa roztok doplní vodou na 200 ml. Výsledný roztok sa sterilizuje filtráciou cez filter s priemerom ôk 0,2 mikrometre a vždy 5 ml roztoku sa uloží do každej zo 40 nádobiek s obsahom 10 ml. Vzorky sa uložia do lyofilizovaného zariadenia pri teplote miestnosti a potom sa teplota znižuje rýchlosťou 2 ’C za minútu až na -25 ’C a na tejto teplote sa udržuje 90 minút na zahájenie kryštalizácie amifostinu. Po tejto dobe sa teplota opäť zvýši nad eutektický bod rýchlosťou 2 ’C za minútu až na -5 ’C a na tejto tepLote sa udržuje celkom 10 hodín. Potom sa teplota opäť zníži na -25 ’C tak, aby teplota produktu bola nižšia než -18 ’C po dobu dlhšiu než 60 minút. Po tejto dobe sa upraví tlak v lyofilizačnom zariadení na približne 19,8 Pa. Teplota sa zvýši na -20 ’C a vzorky stí sušia 14 hodín. Po tejto dobe sa teplota nádoby vyrovná s teplotou celého zariadenia, čo znamená, že primárne sušenie je ukončené. Nádobky sa nechajú pri tlaku 19,8 Pa a tep lote zariadenia -20 ’C v zariadení ešte 13,4 hodín, aby bolo možné zaistiť odstránenie vody, nevytvárajúcej hydrát. Potom sa priestor naplní dusíkom a nádobky sa mechanicky zazátkujú. Týmto spôsobom sa získa tepelne stály, vo vákuu vysušený produkt, uložený v nádobkách, obsahujúcich približne 500 mg amifostínu, vztiahnuté na bezvodú bázu a 500 mg manitolu.

Príklad 4

Skúšky na stálosť kryštalického amifostínu, sušeného vo vákuu

Niekoľko uzavretých, dusíkom naplnených fľaštičiek s obsahom kryštalického amifostínu v zmesi etanolu a vody v pomere 10:90, tak ako boli pripravené v príklade 2 sa zohrieva na teplotu 50 °C až 35 dní na stanovenie tepelnej stálosti kryštalického amifostínu.

Získané výsledky sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke 2. Všetky údaje sú uvádzané v percentách počiatočnej koncentrácie, ktorá sa považuje za 100 %.

Tabuľka 2 pokus doba pri 50 °C (dni) % počiatočnej koncentrácie

100,0

106,3

96.9

100,0

97,2

101,1

93.9

71,1

100,0

103,6

101,8

97,5

86,7

Na porovnanie bol aj bežne dodávaný prostriedok s obsahom amorfného amifostinu podrobený podobným skúškam tak, že bol zohrievaný pri teplote 50 “C po dobu až 28 dní. Výsledky sú zhrnuté v nasledujúcej tabulke 3. Všetky údaje sú opäť uvádzané v percentách počiatočnej koncentrácie, ktorá je považovaná za 100 %.

Tabuľka 3 pokus doba pri 50 °C (dni) % počiatočnej koncentrácie

0	100,0
14	2,8
28	1,5
0	100,0
14	2,0
28	1.4
0	100,0
14	1,7
28	1,4

Z výsledkov týchto skúšok je celkom zrejmé, že aj medzi tuhými prostriedkami je možné dosiahnuť podstatné zvýšenie tepelnej stálosti pre kryštalický produkt, získaný vyššie uvedeným postupom.

Príklad 5

Výhodný spôsob výroby kryštalického amifostinu

Spracovanie amifostinu s manitolom (100 mg každej z týchto látok, vztiahnuté na bezvodý produkt/ml)

3,5 litrov s obsahom vyššie uvedených látok sa získa nasledujúcim spôsobom:

1. 350 g manitolu podľa US liekopisu sa rozpustí za miešania teflónovým magnetickým miešadlom v približne 2300 ml vody Nanopure pri teplote miestnosti v tlakovej nádobe z nerezovej ocele.

2. K vzniknutému roztoku sa pridá 438,3 g amifostíntrihyd- . rátu, rozpustenie sa uľahčí energickým miešaním.

3. Po úplnom rozpustení amifostínu sa k roztoku za energic- • kého miešania pomaly pridá 525 ml bezvodého etanolu podľa US liekopisu. K zrážaniu amifostínu dochádza v mieste pridávania, amifostín sa však opäť rýchlo rozpustí pri riedení etanolom a miešaním.

4. Po ukončenom pridávaní etanolu sa roztok zriedi 350 ml vody Nanopure.

5. Roztok sa prefiltruje cez filter Millipore-40 pod tlakom 0,07 MPa.

6. 5 ml výsledného roztoku sa prenesie vždy do každej zo 660 fľaštičiek s objemom 10 ml (Vheaton E-2910-B47B). Fľaštičky sa čiastočne uzavrú zátkami zo šedej butylovej gumy Tompkins PT23BO857 F2 a potom sa sušia vo vákuu.

Sušenie zmesi amifostínu a manitolu (vždy 100 mg každej z bezvodých látok/ml) vo vákuu

1. Nádobky sa uložia do zariadenia pri teplote 25 °C, aby nedošlo k zahájeniu zrážania amifostínu.

2. Teplota v zariadení sa znižuje rýchlosťou 2 °C za minútu • až na -35 °C. Hneď ako sa dosiahne táto teplota zariadenia, udržuje sa zariadenie na tejto teplote 240 minút na zaistenie zmrazenia roztoku vo všetkých nádobkách. V priebehu tohto stupňa prechádzajú všetky vzorky eutektickým bodom približne -16 °C.

3. Na konci doby 240 minút sa teplota v zariadení zvyšuje rýchlosťou 2 °C za minútu v priebehu 25 minút až na teplotu 0 °C. Hneď ako sa táto teplota dosiahne, udržuje sa zariadenie na tejto teplote 600 minút.

4. Na konci uvedenej doby 600 minút sa teplota v zariadení opäť zníži až na -35 °C rýchlosťou 2 °C za minútu. Hneď ako sa táto teplota dosiahne, udržuje sa zariadenie na tejto teplote 180 minút.

5. Po uplynutí uvedenej doby sa začne zariadenie evakuovať. K evakuácii dochádza pri teplote kondenzačného zariadenia nižšej než -40 °C. Hneď ako tlak v zariadení dosiahne hodnotu nižšiu než 19,8 Pa, zvýši sa teplota v zariadení na -20 °C rýchlosťou 2 °C za minútu a zariadenie sa udržuje pri tlaku 19,8 Pa v prítomnosti dusíka. Produkt sa pri uvedenom tlaku ponechá v zariadení po dobu 12 až 24 hodín tak dlho, až sa teplota produktu vyrovná s teplotou zariadenia. Potom sa zariadenie opäť naplní dusíkom a nádobky sa zazátkujú.

Hermeticky uzavreté, dusíkom naplnené nádobky s objemom 10 ml a s obsahom kryštalického amifostínu, sušeného vo vákuu spôsobom podľa príkladu 5 boli vystavené pôsobeniu teploty 40 C po dobu 4 týždne. Pre kryštalický amifostín, sušený 12 hodín pri teplote -20 °C bolo možné dokázať, že na konci uvedenej doby obsahoval prostriedok ešte 93 % pôvodného obsahu amifostínu. V prípade kryštalického amifostínu, ktorý bol sušený pri teplote -20 °C celkom 24 hodín, bolo na konci uvedenej doby možné dokázať ešte 84 % pôvodného amifostínu.

Príklad 6

Najvýhodnejší spôsob výroby kryštalického amifostínu

Bolo dokázané, že naj stálejší vo vákuu sušený kryštalický amifostín je možné získať tak, že sa vo vákuu suší zmes amifostínu a manitolu v zmesi etanolu a vody s obsahom 15 % objemových etanolu. Spôsob je podobný ako spôsob opísaný v príklade 5 až na to, že sa k spracovávanému roztoku pridáva nižšie množstvo bezvodého etanolu.

Špecifický spôsob sušenia vo vákuu za vzniku veľmi stá leho kryštalického amifostínu bol zistený po rade pokusov, pri ktorých bol vyhodnotený vplyv zmien teploty pri konečnom sušení, vplyv doby konečného sušenia a rýchlosť počiatočného ochladzovania nádobiek s obsahom roztoku až na teplotu -35 C. Bolo dokázané, že všeobecne je stálosť kryštalického amifostínu najvyššia v prípade, že sa použije teplota -20 °C pri konečnom sušení a doba konečného sušenia sa pohybuje v rozmedzí 12 až 24 hodín. Okrem toho je stálosť kryštalického amifostínu vyššia v prípade, že počiatočné ochladenie na -35 ’C trvá dlhšie, 160 minút namiesto pôvodných 45 minút .

V závislosti na uvedených skúškach je možné uviesť nasledujúci postup sušenia produktu vo vákuu ako naj výhodnejš í :

1. Nádobky sa uložia do zariadenia pri teplote 25 ’C, aby nedošlo k predčasnému zrážaniu amifostínu.

2. Teplota v zariadení sa zníži z 25 “C na 0 °C v priebehu 20 minút, z 0 °C na -20 ’C v priebehu 60 minút a potom z -20 ’C na -35 ’C v priebehu 80 minút. Hneď ako sa teplota zariadenia zníži na uvedenú hodnotu, udržuje sa stále na tejto hodnote po dobu 24 minút. V priebehu tohto postupu prechádzajú všetky vzorky eutektickým bodom, ktorý je približne -16 ’C.

3. Na konci uvedenej doby 240 minút sa zvýši v priebehu 25 minút teplota zariadenia na 0 ’C. Po dosiahnutí tejto teploty sa zariadenie udržuje na tejto stálej teplote celkom 600 minút.

4. Na konci uvedenej doby 600 minút sa teplota v zariadení znova zníži v priebehu 15 minút z 0 na -5 ‘C a potom v priebehu 120 minút z teploty -15 ’C na -35 ’C. Hneď ako je uvedená teplota dosiahnutá, udržuje sa zariadenie na tejto teplote ešte 180 minút.

5. Po uplynutí uvedenej doby sa zapne kondenzačné zariadenie. Hneď ako je teplota kondenzačného zariadenia nižšia než -40 ’C, evakuuje sa postupne zariadenie až pod 19,8 Pa a teplota zariadenia sa zvýši z -35 ’C na -20 ’C rýchlosťou 2 °C za minútu, pričom tlak v zariadení sa vyčerpávaním dusíka udržuje na 19,8 °C.

6. Produkt, uložený vo fľaštičkách sa v zariadení udržuje pri tlaku 19,8 Pa ešte 12 až 24 hodín potom, až sa teplota produktu vyrovná s teplotou zariadenia. Potom sa zariadenie znova naplní dusíkom a nádobky sa zazátkujú.

Bez toho, aby bolo nutné sa viazať na akékoľvek teoretické vysvetlenia, tvoria sa zrejmé v priebehu stupňa 2. vyššie uvedeného postupu v zmrazenom roztoku kryštáliky amifostínu, ktoré sú očkovacím materiálom a v stupni 3. rastú a okolo nich sa tvoria ďalšie kryštáliky, čím dochádza k úplnému vykryštalizovaniu amifostínu z čiastočne zmrazeného roztoku.

Kryštalický amifostín bol získaný v priebehu vyššie uvedeného postupu za použitia 12,5% etanolového roztoku, pričom v priebehu jedného pokusu bolo konečné sušenie vykonávané 12 hodín a v druhom pokuse 24 hodín. Obe vzorky boli zohriate na 40 “C na dobu 8 týždňov. Po tejto dobe nebolo možné dokázať žiadny úbytok pre produkt, sušený 12 hodín, pri produkte, sušenom 24 hodín došlo k 2% úbytku produktu.

Príklad 7

Výhodný spôsob testovania stálosti kryštalického amifostínu

Hermeticky uzavreté, dusíkom naplnené fľaštičky s objemom 10 ml s obsahom kryštalického amifostínu, sušeného vo vákuu, získaného spôsobom podľa príkladu 6, boli zohrievané 8 týždňov na teplotu 40 C.

Bolo dokázané, že skôr vykonávané skúšky na stálosť pri tepLote 50 °C spôsobili rozklad kryštalického amifostínu v uzavretých nádobách spôsobom, ktorý nebolo možné ľahko uviesť do korelácie so stálosťou kryštalického amifostínu za typických podmienok na jeho skladovanie, to znamená pri teplote približne 4 °C. Avšak výsledky skúšok na stálosť, vykonaných pri teplote 40 “C a nižších, je možné uviesť do korelácie so stálosťou kryštalického amifostínu za podmienok, typických pre jeho skladovanie. Stálosť jeden mesiac pri teplote 30 C je napríklad v korelácii so stálosťou 18 mesiacov pri teplote 4 °C, stálosť 2 až 3 týždne pri teplote 40 °C je v korelácii so stálosťou 18 mesiacov pri teplote “C a stálosť 8 až 12 týždňov lácii so stálosťou 18 mesiacov diskusia stálosti opísaná Practice predpovede v publikácii of Industrial Pharmacy, pri pri pri teplote 40 ’C je v koreteplote 25 °C, všeobecná určitých teplotách bola

L. Lachman a ďalší, The Theory and str. 766 až 67.

Na konci doby zahrievania bol kryštalický amifostín v nádobkách skúmaný na obsah vody, obsah tiolu a obsah amifostínu. Obsah vody bol stanovený titráciou podľa Karí Fischera. Vzhľadom na to, že pri vyššej teplote môže dôjsť k hydrolýze amifostínu za vzniku 2-[(3-aminopropyl)amino]etántiolu a kyseliny fosforečnej, je stanovenie množstva tiolu ukazovateľom stálosti amifostínu. Analýza tiolu a amifostínu bola vykonávaná nasledujúcim spôsobom:

1. Príprava štandardov a vzoriek

V tomto prípade môže byť nutné upraviť hmotnosť alebo objem tak, aby konečná koncentrácia zostávala rovnaká. Roztoky je nutné okamžite po príprave skladovať v mraziacom zariadení a/alebo v chladiacom zariadení na uchovávanie vzoriek.

1.1 Príprava štandardných roztokov amifostínu, 3 mg/ml, metanol/voda 50:50

Presne sa naváži približne 30,0 mg amifostínu do volumetrických nádobiek s obsahom 10 ml. Pridá sa 5 ml vody a po rozpustení účinnej látky sa objem doplní metanolom. Roztok je možné použiť do 24 hodín pri uchovávaní pri teplote 4 °C.

1.2. Príprava štandardného roztoku 2-[(3-aminopropyl)amino]etántioldihydrochloridu s obsahom 0,012 mg/ml voľnej bázy, metanol/voda 50:50

Presne sa naváži približne 1,85 mg uvedeného dihydrochloridu tiolu do volumetrickej nádobky s objemom 100 ml. Pridá sa 50 ml vody, po rozpustení tiolu sa objem doplní metanolom. Roztok je možné použiť do 24 hodín pri uchovávaní pri teplote 4 C.

1.3. Príprava amifostínu

A. Príprava vzorky 3 mg/ml, metanol/voda 50:50

Presne sa naváži 30,0 mg amifostínu do volumetrickej nádobky s objemom 10 ml. Pridá sa 5 ml vody a po rozpustení sa objem doplní metanolom. Roztok je možné použiť do 24 hodín pri jeho uchovaní pri 4 ^eC.

B. Príbuzné látky, 15 mg/ml, voda

Presne sa naváži približne 150,0 mg amifostínu do volumetrickej nádobky s objemom 10 ml. Po rozpustení sa objem doplní vodou. Roztok je použiteľný 24 hodín pri jeho uchovaní pri 4 “C.

1.4. Príprava amifostínu na injekčné podanie 4,8 mg/ml. metanol/voda 50:50

Obsah jednej fľaštičky s produktom sa rozpustí v približne 9 ml vody. Vzorka sa kvantitatívne prenesie do volumetrickej nádobky s objemom 25 ml a zriedi sa vodou. 6 ml tohto roztoku sa prenesie do volumetrickej nádobky s objemom 50 ml, pridá sa 19 ml vody a objem sa doplní metanolom. Roztok je možné použiť do 24 hodín pri jeho uchovávaní pri 4 °C.

2. Vhodnosť systému

Amifostín (použitie štandardného roztoku zo stupňa 1.1) % RSD pri 6 opakovaných injekciách amifostínus 2 faktor doznievanias 2 teoretická hodnota pre doštičky > 1,000

2-[(3-aminopropyl)amino]etántioldihydrochlorid (VR-1065) použitia štandardného roztoku zo stupňa 1.2 % RSD pri 6 injekciáchs 4 faktor doznievanias 2 teoretická hodnota pre doštičky > 7,000 za

3. Zariadenie a materiály (ako je ďalej uvedené alebo forme ekvivalentov

Zariadenie

HPLC systém s UV detektorom

Materiály

Štandard amifostínu koncentrovaná kyselina fosforečná na účely HPLC metanol (MeOH) pre HPLC čistená voda: 16 mega ohm alebo vyššia hodnota sodná soľ kyseliny 1-oktánsulfónovej (OSA) pre HPLC.

Podmienky pri HPLC

St Lpec:

náplň TosoHaas TSK ODS-80TM s uzáverom (USP Ll) rozmery: 4,6 x 250 mm veľkosť častíc: 5 mikrometrov vo

Mobilná fáza: metanol/vodná kyselina fosforečná s pH 3,0,

3,5 mM OSA (50/50)

1. Rozpustí sa 0,38 g OSA v 500 ml vodnej kyseliny fosforečnej s pH 3,0,

2. roztok sa zriedi metanolom na 1000 ml a

3. mobilná fáza sa prefiltruje a zbaví sa plynov.

Detekcia: 220 nm absorbancia rýchlosť prietoku: 1,0 ml/min vstrekovaný objem: 10 mikrolitrov teplota v stĺpci: teplota miestnosti teplota vzorky: 4 °C úprava: zariadenie sa nastaví tak, aby bolo možné získať vrchol pre amifostín v rozsahu približne 80 % celej stupnice.

4. Vykonanie skúšky

Vstrekne sa vzorka a štandardný roztok a zaznamenáva sa doba retencie pre vrchol amifostínu, táto doba je približne 4 minúty. Doba retencie pre vrchol amifostínu a pre vrchol skúšobnej vzorky by mali byť v súlade v rozmedzí 10 % tak, aby bolo možné potvrdiť identifikáciu amifostínu v skúmanej vzorke.

Výpočty :

(6 ml) (500 mg/nádobka)

U1 n m

Ό

m cs d· m

Γ o N

Výpočet pre VR-1065

d i—í Q d •P >Z '3

CL

N O •i c £2 o '-i >

p u o.

0
XI
P
r-	i—1	o	rH
d	0	o	•
	x	r-i	O
>>	u
	P		x	>N
’Z	>			U
'3				C
-X	U
Z	t .		>	3
	3.		o	O	•
r-j			i—1	>z
p	d	ω	0	>z	0
Q.	r·	Pi	x	>>	P
p	0		0	>	'd
rH	0	rH	M		r—t
Z	rP	O	>	3
	a	x		0	X
p		p	d	r·	P
c	d	1	x	0	'>í
S	c	>	0	0	c
u	>		0	f—.	N
bO	Ή	t)	f—1	3.	3
0	H	d	P.		X
P	d	tx		Z
d	r“i		'd		P
E	p	d	>	>>	3.
0	u	x	0
u		□		P	r-
x	U	0	i-H	'd	o
p	•r*	f—ί	P	r—!	«>>
	U	Q.	0
d	p			d	P
c	>				P
	□	II	m	>z
'P				Ό	>
c	d	*	o
E	z				o
C			1	>
p	3		tí	P
*r^		4	J	>	z
f ,	P	>d		>N
EL	>d		P	0
	t-H			P	C
-		>d	3.	E
>>	'3		X
ΓΊ	C	N	<s	'P
0	N		□		>
r·	3	X)	'P	0
p	n		C
L,	—		P	rH
>	u			3	P
	O.			C	u
d		'd
z	'3		>	P	d
			H	Ό	z
d	>N	r-í
•H	d		j	•p	d
>0			3	Z	N
•3				P	Ό
r—'	p	•o	•H	>d
>!	P		J	>	>
>	P,	•	n	33	33

Príklad 8

Výsledky skúšky na stálosť pre kryštalický amifostín, sušený vo vákuu pri teplote 40 ^eC

V nasledujúcej tabuľke 4 sú uvedené typické výsledky, získané pri zohrievaní kryštalického amifostínu, získaného spôsobom z príkladu 6, skúšky boli vykonané spôsobom, uvedeným v príklade 7.

Tabuľka 4

Výsledky pre stálosť kryštalického amifostínu, sušeného vo vákuu pri teplote 40 °C šarža 812

doba	% vody	% tiolu	% amifostínu
prij ateľné
hodnoty 10-	14 % hmotn.	NMT 2,0 % hmotn.	38-46 % hmotn
na začiatku	12,1	0,5	44,5
po 1 týždni	10,5	0,2	42,6
po 2 týždňoch	10,1	0,2	42,5
po 3 týždňoch	10,4	0,2	42,5
po 4 týždňoch	10,2	0,2	41,2
po 8 týždňoch	11,7	0,3	43,4

NMT = najviac šarža 815

doba	% vody	% tiolu	% amifostinu
	prij ateľné hodnoty 10-	14 % hmotn.	NMT 2,0 % hmotn.	38-46 % hmotn
	na začiatku	12,0	0,3	43,3
	po 1 týždni	11.7	0,2	43,6
	po 2 týždňoch	11,6	0,2	43,4
•	po 4 týždňoch	11,5	0,3	43,0

Získané výsledky jasne ukazujú zvýšenú stálosť kryštalického amifostinu, vyrobeného spôsobom podľa príkladu 6. Zvýšená stálosť je zrejmá z nízkej tvorby tiolu v percentách hmotnostných, nízka tvorba tiolu dokazuje veľmi malý rozklad amifostinu hydrolýzou, pri ktorej vzniká 2-[(3-aminopropyl)aminojetántiol. Okrem toho je tiež veľmi nízka strata vody z amifostinu v priebehu času. Tieto údaje silne kontrastujú s nízkou stálosťou amorfného amifostinu, sušeného vo vákuu, ktorý sa podstatne rozkladá v priebehu 14 dní pri teplote 50 ’C, ako je zrejmé z tabuľky 3 v príklade 4.

Príklad 9

Kryštalická štruktúra amifostinu, sušeného vo vákuu

Bola stanovená molekulová a kryštalická štruktúra kryštalického amifostinu, sušeného vo vákuu. Analýza kryštálov bola vykonaná pri teplote miestnosti za použitia žiarenia z medi.

Štruktúra bola analyzovaná priamo a detailný výpočet bol vykonaný metódou najmenších štvorcov a Fourierovou metódou. Všetky atómy, odlišné od vodíkových atómov boli analyzované anizotropicky. Atómy vodíka, viazané na dusíkové atómy a na kyslíkové atómy vody, boli identifikované podľa

Fourierových diferenčných máp a izotropicky. Poloha zvyšných vodíkových atómov bola vypočítaná za predpokladu ideálnej geometrie. Tieto vodíkové atómy neboli priamo analyzované vzhľadom na nízky odraz v dôsledku pomeru parametrov.

Zlúčenina kryštalizuje vo finálnej priestorovej skupine Ρ2γ2]2·^. Údaje, uvedené v tomto príklade sú odvodené od enantiomérnej štruktúry s nízkymi hodnotami R (R = 0,036 a R_w = 0,042). Druhá enantiomérna štruktúra mala hodnotu R = 0,042 a R_w = 0,051. Grafické znázornenie molekulovej štruktúry a kryštalickej štruktúry pre trihydrátamifostínu, sušený vo vákuu, je uvedené na obr. 13.

Experimentálne uskutočnenie

Získanie údajov

Bezfarebný kryštál Cgl^i^OgPS tvaru plochej ihličky s približnými rozmermi 0,350 x 0,050 x 0,030 mm bol upevnený na sklenené vlákno. Všetky merania boli vykonávané na difraktometri Rigaku AFC5R s grafitovým monochromatickým žiarením Cu Kalia a s rotujúcim anódovým generátorom s 12 kV.

Konštanty a orientácia matrice na získanie údajov podľa metódy najmenších štvorcov za použitia uhlov pre 20 starostlivo do stredu umiestnených odrazov v oblasti 40,45 < 20 < 52,03°, zodpovedajú ortorombickému základnému tvaru s nasledujúcimi rozmermi:

a = b = c = V = Pre Z = 4 a	8,456 (2)	je vypočítaná hustota 1,447 g/cm^
21,553 6,758 1231,6 F. V. = 2í	(2) (2) (5) >8,26
V závislosti	na
hOO:	h 2n
OkO:	k 2n
001 :	1 / 2n

a na úspešnej analýze štruktúry bola priestorová skupina stanovená ako

P2₁2₁2₁ (ý 19)

Údaje bolo zhromaždené pri teplote 23 ± 1 ’C použitím techniky omega-20 do maximálnej hodnoty 2Θ = 120,0°. Hodnoty omega pre niekoľko intenzívnych odrazov, namerané pred odberom všetkých údajov mali priemernú šírku, rovnajúcu sa polovici výšky 0,21° pri uhle 6,0°. Merania (0,89 + 0,14 tan0)° boli vykonávané rýchlosťou 8,0° za minútu (omega). Slabé odrazy s hodnotami I < 15,0 delta(I) boli znova maximálne štyrikrát analyzované a údaje boli zhromaždené tak, aby bolo zaistené dobré štatistické vyhodnotenie. V každom odraze bolo zaznamenané aj pozadie. Pomer vrcholu k pozadiu bol 2:1. Priemer kolimátora bol 0,5 mm a vzdialenosť kryštálu od detektora bola 400 mm.

Úpravy údajov

Celkom bolo zaznamenaných 1120 odrazov. Intenzity troch reprezentatívnych odrazov, ktoré boli namerané vždy po každých 150 odrazoch, zostávali konštantné v priebehu získavania údajov, čo ukazuje na stálosť kryštálov, nebolo nutné použiť žiadnu opravu na ich rozpad.

Lineárny koeficient absorpcie pre Cu Kalfa je 37,1 cm¹. V tomto prípade bola použitá enterická oprava na absorpcii dôsledkom boli faktory na prenos v rozmedzí 0,89 až 1,0. Údaje boli upravené s ohľadom na polarizačné účinky a na účinky podľa Lorentza.

Podrobné výsledky pokusov

A. Údaje o kryštáloch

Empirický vzorec molekulová hmotnosť F.V. farba a tvar kryštálov rozmery kryštálov v mm kryštálový systém ^C5^H21^N2°6^PS

268,26 bezfarebné ploché ihličky

0,350 x 0,050 x 0,030 ortorombický počet odrazov na jednotku stanovenia (oblasť 20) šírka vrcholu omega pri polovici výšky parametre mriežky

20 (40,5 - 52,0’
0,21
a = 9,456	(2)
b = 21,553	(2)
c = 6,758	(2)
V = 1231,6	(5)

priestorová skupina hodnota Z ^vypoc.

^F000 ^(CuKalfa)

P2₁2₁2₁ (= 19)

1,447 g/cm³

576

37,10 cm~l

B. Meranie intenzity difraktometer žiarenie teplota atenuátory uhol odberu otvor detektora

Rigaku AFC5R

CuKalfa (lambda =

1,54178) ’C

Zr (faktory fólie L:

3,8, 13,4 a 47,8)

6,0

6,0 mm horizontálne

6,0 mm vertikálne vzdialenosť detektora od kryštálu 40 cm typ analýzy rýchlosť anaLýzy šírka úseku 2Θ max počet meraných odrazov opravy omega-2Θ

8,0° (omega) vždy 4x (0,89 + 0,14 tan0)^e

120,0’

1120 celkom

Podľa Lorentza a na polarizáciu (faktory

0,89 - 1,00)

C. Analýza štruktúry analýza štruktúry typ výpočtu minimalizovaná funkcia vážené najmenšie štvorce počet pozorovaní (I > 3,00delta(I)) počet variabilných faktorov pomer odrazu/parametru zvyšky: R a Ry hodnota indikátora maximálny pomer posun/chyba v konečnom cykle maximálny vrchol v konečnej diferenčnej mape maximálny vrchol v konečnej diferenčnej mape priamou metódou metóda najmenších štvorcov l\l (|Fo| - |Fc|)²všetky atómy, odlišné od vodíka

856

180

4,76

0,036, 0,042

1,37

0,00

-0,30 c’/³

-0,22 e/³

V nasledujúcej tabuľke budú uvedené ešte polohové parametre a B (eq) pre kryštály výsledného produktu.

Je zrejmé, že by bolo možné navrhnúť ešte rad ďalších uskutočnení, ktoré neboli síce podrobne opísané, aj napriek tomu patria do rozsahu vynálezu. Z tohto dôvodu nie je možné použiť opísané uskutočnenie na obmedzenie rozsahu vynálezu.

nm - π

Claims

1. Spôsob výroby farmaceutického prostriedku s obsahom amifostinu v kryštalickej forme, vyznačujúci sa tým, že sa

a) pripraví prostriedok, obsahujúci amifostín, etanol a vodu s relatívnymi množstvami amifostinu, etanolu • s vody, pri ktorých sa získa pri teplote miestnosti až teplote 10 ’C roztok, zbavený tuhých častíc, avšak <· v ktorom vzniká kryštalická zrazenina amifostinu po ochladení na teplotu nižšiu než 0 ’C,

b) prostriedok sa ochladí na teplotu nižšiu ako 0 ’C po dobu, dostatočnú na vyzrážanie kryštalického amifostínu a

c) výsledná zmes suší vo vákuu za vzniku prostriedku s obsahom tuhého kryštalického amifostinu so zvýšenou stálosťou.

2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa po ukončení sušenia vo vákuu v stupni c) farmaceutický prostriedok prevrství sterilným inertným plynom.

3. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa na prevrstvenie použije plyn zo skupiny argón, dusík a hélium.

• 4. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa prostriedok v stupni b) ochladí na teplotu, * približne zodpovedajúcu eutektickému bodu pre tento prostriedok .

5. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že sa po uskutočnení stupňa b) teplota výslednej zmesi zvýši na približne 1 až 20 ’C nad eutektickú teplotu, potom sa zmes znovu ochladí z tejto teploty späť na eutektickú alebo nižšiu teplotu pred vykonávaním stupňa c).

6. Spôsob podľa nároku 4, že sa eutektická teplota -80 C.

ý m, až približne v y z zmesi n a č u j ú pohybuje v c i sa rozmedzí

7. Spôsob ý m, že sa v t

približne -30 sa pohybuje v rozmedzí podľa nároku 5, priebehu až 10 C, pričom približne c i sa zohrievania zmes zohreje na teplotu eutektická teplota pre zmes 0 až -80 ’C.

8. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že prostriedok obsahuje 50 až 400 mg amifostínu na 1 ml prostriedku, približne 1 až 35 objemových etanolu a približne 65 až 99 % objemových vody.

9. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že prostriedok obsahuje približne 125 až 250 mg amifostínu na 1 ml prostriedku, približne 5 až 20 % objemových etanolu a približne 80 až 95 % objemových vody.

10. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že prostriedok obsahuje približne 100 mg amifostínu na 1 ml prostriedku, približne 10 % objemových etanolu a približne 90 % objemových vody.

11. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa v stupni b) prostriedok ochladí na teplotu v rozmedzí -5 až -40 °C.

12. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa v stupni b) prostriedok ochladí na teplotu približne -20 °C.

13. Spôsob podľa nárokov 1, 4 alebo 5, vyznaču j ú c i sa t ý m, že sa získaný prostriedok ešte sterilizuj e.

14. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že sa sterilizácia prostriedku vykonáva filtráciou prostriedku po uskutočnení stupňa a) pred chladením.

15. Spôsob podlá nárokov 1, 4, 5 alebo 14, vyznačujúci sa tým, že prostriedok ako kryštalický amifostín obsahuje hydrát amifostínu.

16. Spôsob podľa nárokov 1, 4, 5 alebo 14, vyznačujúci sa tým, že prostriedok ako kryštalický amifostín obsahuje trihydrát amifostínu.

17. Spôsob podľa nárokov 1, 4, 5 alebo 14, vyznačujúci sa tým, že kryštalický amifostín, obsiahnutý v prostriedku obsahuje 1 až 3 móly kryštalickej látky.

18. Spôsob podľa nárokov 1, 4, 5 alebo 14, vyznačujúci sa tým, že prostriedok s obsahom amifostínu ďalej obsahuje farmaceutický prijateľné pomocné látky.

19. Spôsob podľa nároku 18, vyznačujúci sa tým, že prostriedok ako pomocnú látku obsahuje zlúčeniny zo skupiny chlorid sodný, glycín, dextróza, sacharóza a manitol.

20. Spôsob podľa nároku 18, vyznačujúci sa tým, že prostriedok ako farmaceutickú pomocnú látku obsahuje manitol.

21. Spôsob výroby farmaceutického prostriedku s obsahom amifostínu v kryštalickej forme, vyznačujúci sa tým, že sa

a) pripraví sa prostriedok s obsahom 50 až 300 mg amifostínu na 1 ml prostriedku, približne 3 až 30 % objemových etanolu, približne 70 až 97 % objemových vody a prípadne 5 až 300 mg farmaceutický prijateľnej pomocnej látky na 1 ml prostriedku, pričom sa pri teplote miestnosti až teplote 10 ’C získa roztok, zbavený tuhých častíc, avšak po ochladení roztoku na teplotu nižšiu než 0 “C vzniká v roztoku zrazenina kryštalického amifostínu,

b) roztok sa ochladí na teplotu v rozmedzí približne -5 ’C až -40 C na dobu, dostatočnú na vznik kryštalickej zrazeniny amifostínu a

c) výsledná zmes sa suší vo vákuu za vzniku prostriedkov s obsahom tuhého kryštalického amifostínu so zvýšenou stálosťou.

22. Spôsob podlá nároku 1, 4, 5 alebo 21, vyznačujúci sa tým, že sa stupeň alebo stupne, vykonávané po stupni a) a pred stupňom c) uskutočnia v priebehu časového obdobia 0,5 až približne 72 hodín.

23. Spôsob podľa nárokov 1, 4, 5 alebo 21, vyznačujúci sa tým, že sa stupeň alebo stupne, vykonávané postupne a) a pred stupňom c) uskutočnia v priebehu časového obdobia približne 2 až 24 hodín.

24. Spôsob podľa nárokov 1, 4, 5 alebo 21, vyznačujúci sa tým, že sa stupeň c) vykonáva v priebehu časového obdobia približne 1 až 72 hodín.

25. Spôsob podľa nárokov 1, 4, 5 alebo 21, vyznačujúci sa tým, že sa stupeň c) vykonáva v priebehu časového obdobia približne 10 až 20 hodín.

26. Spôsob podľa nárokov 1, 4, 5 alebo 21. vyznačujúci sa tým, že sa stupeň c) vykonáva vo vákuu približne v rozmedzí 1,33 až 133 Pa.

27. Spôsob podľa nárokov 1, 4, 5 alebo 21, vyznačujúci sa tým, že sa stupeň c) vykonáva vo vákuu približne pri 19,8 Pa.

28. Prostriedok s obsahom kryštalického amifostínu, so zvýšenou stálosťou, vyznačujúci sa tým, že je pripravený spôsobom podľa nárokov 1, 4, 5, 13, 18 alebo 21.

29. Spôsob liečenia chorých pri ožarovaní alebo podávaní chemických látok, vyznačujúci sa tým, že sa podáva účinné množstvo prostriedkov s obsahom kryštalického amifostínu podľa nároku 28 po rekonštitúcii vo farmaceutický prijateľnom nosnom prostredí.

30. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa tým, že sa rekonštituovaný farmaceutický prostriedok podáva parenterálne.

31. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa tým. že sa rekonštituovaný farmaceutický prostriedok podáva vnútrožilovo, vnútrosvalovo, podkožné, intratekálne alebo do telesných dutín.

32. Sterilný prostriedok so zvýšenou stálosťou, vyznačujúci sa tým, že obsahuje kryštalický amifostín, sušený vo vákuu a môže byť rekonštituovaný pridaním farmaceutický prijateľného nosného prostredia na produkt, zbavený tuhých častíc a vhodný na injekčné podanie.

33. Sterilný prostriedok podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje ešte farmaceutický prijateľnú pomocnú látku.

34. Sterilný prostriedok podľa nároku 33, vyznačujúci sa tým, že obsahuje pomocnú látku zo skupiny chlorid sodný, glycín, dextróza, sacharóza a manitol.

35. Sterilný prostriedok podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že farmaceutickým prostredím, použitým na rekonštitúciu prostriedku je voda na injekčné podanie podľa US liekopisu alebo fyziologický roztok chloridu sodného.

36. Sterilný prostriedok podlá nároku 32, vyznačujúci sa tým, že ako kryštalický amifostín obsahuje hydrát amifostínu.

37. Sterilný prostriedok podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že ako kryštalický amifostín obsahuje trihydrát amifostínu.

38. Sterilný prostriedok podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že ako kryštalický amifostín obsahuje amifostín s 1 až 3 molmi kryštalizačnej vody.

39. Sterilný prostriedok s obsahom jednotlivej dávky kryštalického amifostínu so zvýšenou stálosťou, vyznačujúci sa tým, že obsahuje 10 až 10 000 mg kryštalického amifostínu, sušeného vo vákuu a prípadne 10 až 10 000 mg farmaceutický prijateľnej pomocnej látky a je možné ho rekonštituovať pridaním farmaceutický prijateľného nosného prostredia na produkt, zbavený tuhých častíc a vhodný na injekčné podanie.

40. Sterilný prostriedok podľa nároku 39, vyznačujúci sa t ý m, že obsahuje približne 100 až 1000 mg kryštalického amifostínu, sušeného vo vákuu a približne 100 až 1000 mg manitolu.

41. Sterilný prostriedok podľa nároku 39, vyznačujúci sa tým, že obsahuje približne 500 mg kryštalického amifostínu, sušeného vo vákuu a približne 500 mg manitolu.

42. Spôsob liečenia chorých, ktorí sú ožarovaní alebo je nutné ich chrániť proti účinkom chemických látok, vyznačujúci sa tým, že sa podáva účinné množstvo rekonštituovaného sterilného prostriedku podľa nárokov 32 alebo 33.

43. Spôsob liečenia chorých, ktorí sú ožarovaní alebo je nutné ich chrániť proti účinkom chemických látok, vyznačujúci sa tým, že sa chorým podáva účinné množstvo rekonštituovaného sterilného prostriedku s obsahom jednotlivej dávky podľa nárokov 39 alebo 40.

44. Amifostín so zvýšenou stálosťou, sušený vo vákuu.

45. Amifostín, sušený vo vákuu podľa nároku 44 vo forme trihydrátu. 46. Amifostín, sušený vo vákuu podľa nároku 44 v kryš- talickej forme. 47. Amifostín, sušený vo vákuu podľa nároku 46 vo f orme

trihydrátu.

48. Kryštalický amifostíntrihydrát s kryštalickou štruktúrou podľa príkladu 9.

49. Spôsob výroby prostriedku s obsahom kryštalického amifostínu, vyznačujúci sa tým, že sa

a) pripraví prostriedok, obsahujúci približne 100 mg ami- fostínu na 1 ml prostriedku, približne 100 mg farmaceutický prijateľnej pomocnej látky na 1 ml prostriedku a roztok etanolu vo vode s koncentráciou etanolu približne 12,5 % objemových za vzniku roztoku, ktorý je pri teplote miestnosti zbavený tuhých častíc,

b) prostriedok sa ochladí z teploty miestnosti v priebehu 160 minút na teplotu približne -35 °C,

c) na teplote -35 ’C sa prostriedok udržuje približne 240 minút za vzniku očkovacích kryštálikov amifostínu,

d) prostriedok sa zohreje v priebehu približne 25 minút na teplotu približne 0 °C,

e) na teplote 0 ’C sa prostriedok udržuje približne 600 minút kvôli zohriatiu očkovacích kryštálikov a vyzrážaniu kryštalického amifostínu.

f) prostriedok sa v priebehu približne 15 minút ochladí na teplotu v rozmedzí približne 0 až -15 ^eC,

g) prostriedok sa ochladí v priebehu približne 120 minút na teplotu približne -15 až -35 ’C,

h) prostriedok sa udržuje po dobu približne 180 minút na teplote približne -35 ’C,

i) vzduch, obklopujúci prostriedok sa vyčerpá až na tlak nižší než približne 19,8 Pa,

j) prostriedok sa v priebehu približne 54 hodín zohreje na teplotu približne -35 až -20 ’C,

k) prostriedok sa udržuje ešte približne ďalších 12 hodín až 24 hodín na teplote približne -20 ’C za vzniku prostriedku s obsahom kryštalického amifostínu so zvýšenou stálosťou.

1/13 [WR-2721] (mg TRIHYDRAT. ./ml) teplota (°C)

Obr. 1

2/13 amifostín, mg trihydrcátu/ml.

Obr. 2 a

3/13

Ρ!/ ΡΡΙ - rr

S tn

C_5 un CM cn

Obr

4/13 ť V f 72 -'VS'

O LD m CM

S m

m

5/13 r v -w i

Obr.

6/13