SI9500265A1 - Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration - Google Patents

Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration Download PDF

Info

Publication number
SI9500265A1
SI9500265A1 SI9500265A SI9500265A SI9500265A1 SI 9500265 A1 SI9500265 A1 SI 9500265A1 SI 9500265 A SI9500265 A SI 9500265A SI 9500265 A SI9500265 A SI 9500265A SI 9500265 A1 SI9500265 A1 SI 9500265A1
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
clavulanic acid
ultrafiltration
purification
filtrate
aqueous
Prior art date
Application number
SI9500265A
Other languages
English (en)
Inventor
Egidij Capuder
Original Assignee
Lek Tovarna Farmacevtskih
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lek Tovarna Farmacevtskih filed Critical Lek Tovarna Farmacevtskih
Priority to SI9500265A priority Critical patent/SI9500265A1/sl
Priority to CN96196471A priority patent/CN1101396C/zh
Priority to PCT/GB1996/002083 priority patent/WO1997008175A1/en
Priority to RO98-00301A priority patent/RO116813B1/ro
Priority to JP09509986A priority patent/JP2000512125A/ja
Priority to CZ98318A priority patent/CZ31898A3/cs
Priority to AU68297/96A priority patent/AU714892B2/en
Priority to RU98104924/04A priority patent/RU2169151C2/ru
Priority to UA98020991A priority patent/UA59343C2/uk
Priority to CA002226683A priority patent/CA2226683C/en
Priority to PL96324855A priority patent/PL324855A1/xx
Priority to NZ316136A priority patent/NZ316136A/en
Priority to SK103-98A priority patent/SK10398A3/sk
Priority to KR1019980700627A priority patent/KR19990035966A/ko
Priority to EP96928571A priority patent/EP0859780A1/en
Priority to HU9802532A priority patent/HU221353B1/hu
Priority to EE9800060A priority patent/EE03567B1/xx
Priority to US09/000,375 priority patent/US6127358A/en
Priority to ZA9607273A priority patent/ZA967273B/xx
Publication of SI9500265A1 publication Critical patent/SI9500265A1/sl
Priority to BG102253A priority patent/BG63086B1/bg
Priority to US09/638,473 priority patent/US6274575B1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D503/00—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C07D503/10—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
    • C07D503/12—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 unsubstituted in position 6
    • C07D503/14—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 unsubstituted in position 6 with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, other than a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, attached in position 3
    • C07D503/16—Radicals substituted by hetero atoms or by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical
    • C07D503/18—Radicals substituted by hetero atoms or by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)

Description

LEK, tovarna farmacevtskih in kemičnih izdelkov, d.d.
Postopek za čiščenje filtrata vodne fermentacijske juhe Streptomyces sp.P 6621 FERM P 2804 z ultrafiltracijo
Področje tehnike, v katero spada izum (MPK C 12 P 17/18, C 07 D 498/04 )
Predloženi izum predstavlja dopolnilno patentno prijavo k temeljni patentni prijavi P-9400107 in se nanaša na nov postopek za čiščenje klavulansko kislino vsebujočega filtrata (permeata) vodne fermentacijske juhe Streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804, z ultrafiltracijo. Filtrat (permeat) fermentacijske juhe smo v skladu s postopkom iz temeljne patentne prijave pripravili tako, da smo iz fermentacijske juhe odstranili micejij, večino proteinov (vsaj 80% prisotnih v fermentacijski juhi) in druge suspendirane delce, z metodo mikrofiltracije.
Tehnični problem
Po čiščenju klavulansko kislino vsebujoče fermentacijske juhe Streptomyces sp.P 6621 FERM P 2804 z mikrofiltracijo v skladu s postopkom, opisanim v temeljni patentni prijavi P-9400107, preostane v prečiščenemu vodnemu filtratu (permeatu), dobljenem iz fermentacijske juhe med 10% do največ 20% proteinov, ki lahko v danem primeru motijo pri nadaljnem postopku izolacije in čiščenju klavulanske kisline. Zato obstaja stalna potreba po novemu in nadaljnjemu čiščenju vodnega filtrata, dobljenega z metodo mikrofiltracije prečiščene klavulansko kislino vsebujoče fermentacijske juhe Streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804, s smotrom iz vodnega filtrata odstraniti večino v vodnem filtratu še prisotnih preostalih proteinov.
2Stanje tehnike
Klavulanska kislina je generični naziv za (2R,5R,Z)-3-(2- hidroksietiliden)-7okso-4-oksa-1-azabiciklo /3.2.0/ heptan-2- karboksilno kislino s sledečo formulo:
Njene alkalijske soli in estri delujejo kot inhibitorji β- laktamaz, ki jih proizvajajo nekateri gram pozitivni in gram negativni mikroorganizmi. Klavulanska kislina in njene alkalijske soli imajo poleg aktivnosti inhibicije Blaktamaz še sinergistični učinek v kombinaciji z β-laktamskimi antibiotiki penicilinske in cefalosporinske vrste, zato se klavulanska kislina in njene soli uporabljajo v galenskih pripravkih, da preprečijo deaktivacijo Blaktamskih antibiotikov. Komercialni preparati vsebujejo stabilnejšo kalijevo sol klavulanske kisline (sama kislina je precej nestabilna) v kombinaciji z amoksicilin trihidratom.
Klavulansko kislino pripravijo s fermentacijo mikroorganizma, ki proizvaja klavulansko kislino, kot so razni mikroorganizmi, ki pripadajo raznim sevom Streptomyces, kot so S.clavuligerus NRRL 3585, S.jumoninensis NRRL 5741, S.katsurahamanus IFO 13716 in Streptomyces sp.P 6621 FERM P 2804. Slednji sev je bil opisan v japonski patentni prijavi JP Kokai 80-162993.
Po fermentaciji nastalo vodno gojilno juho očistijo in koncentrirajo po običajnih postopkih, ki obsegajo npr.filtracijo in kromatografska čiščenja, kot je ponazorjeno v patentu GB št. 1 508 977, pred ekstrakcijo vodne raztopine z organskim topilom, da dobijo raztopino nečiste klavulanske kisline v organskem topilu.
GB patent št.1 508 977 prikazuje med drugim, da soli klavulanske kisline lahko dobe z adsorpcijo klavulanatnega aniona v filtrirani juhi na anionsko izmenjevalni smoli, pri čemer se iz nje eluirajo z elektrolitom, razsolijo nastalo raztopino in zatem odstranijo topilo. Ta postopek lahko uporabijo, da dobijo sprejemljive dobitke želene snovi, vendar postopek temelji na zahtevnih čiščenjih s kromatografskimi metodami, uporaba smolnih kolon pa terja znatne investicije, kar omejuje proizvodnjo v velikem merilu.
V patentu GB št. 1 543 563 je opisan modificiran fermentativni postopek z uporabo seva S.clavuligerus NRRL 3585, pri katerem vzdržujejo vrednost pH medija v območju med 6,3 in 6,7 , s čemer zvišajo dobitek želene spojine. Soli klavulanske kisline, kot kalijev klavulanat, pa pripravijo s presoljenjem iz litijevega klavulanata, s čemer želeno spojino tudi očistijo.
EP-A-0 026 044 prikazuje uporabo terciarne butilaminske soli klavulanske kisline kot koristnega intermediata pri pripravi klavulanske kisline. Sol je poznana iz belgijskega patenta BE št.862 211, vendar samo kot sestavina za farmacevtske formulacije.
Evropatent EP-B-0 182 522 opisuje metodo priprave klavulanske kisline s fermentacijo mikroorganizma S.clavuligeris NRRL 3585, pri Čemer so dosegli pomembno izboljšanje znanega postopka tako, da so vir ogljika, kot glicerol, dodajali v fermentacijski medij v teku samega procesa, bodisi kontinuirno, bodisi v presledkih, pri čemer je zelo pomembno, da vzdržujejo nivo ogljika v dovolj nizki koncentraciji, in sicer pod 0,5% (w/v), nikakor pa ne sme nivo ogljika narasti preko 2%. Primeri ponazarjajo, da je bistvena izboljšava v zvišanem dobitku klavulanske kisline opažena, ko se je vir ogljika dodajal med fermentacijo. Navajajo, da je koncentracija klavulanske kisline v fermentacijski juhi po 160 urah znašala okoli 1400 pg/ml, kar je opazno izboljšanje glede na znane postopke.
Nadaljno izboljšavo predstavlja tudi nov postopek čiščenja klavulanske kisline iz raztopine v obliki njene litijeve soli. Vendar pa za dosego višje čistote litijevega klavulanata dodajajo koncentrirano raztopino druge litijeve soli, kot litijev klorid. Dobljen rekristaliziran litijev klavulanat lahko še nadalje čistijo in nato po želji presnove v druge soli, kot v kalijev klavulanat, na poznan način, znan iz zgoraj navedene literature.
Micelij, proteine in druge trdne snovi odstranijo z znanimi metodami, kot s centrifugiranjem ali filtracijo, oziroma še preje fermentacijsko juho obdelujejo z izbranim agregacijskim sredstvom, da micelij skepijo, kar omogoča lažjo filtracijo. Filtrirano fermentacijsko juho še nadalje obdelujejo z ionsko izmenjevalnimi smolami ali z obarjanjem s topilom, kot acetonom, da odstranijo proteine, pri čemer precipitat ločijo s ponovnim centrifugiranjem in filtracijo. To ločevanje micelija, proteinov in drugih spremljajočih delcev v suspenziji, prvotno pristanih v fermentacijski juhi, je zamudno in zahteva več stopenj.
Tem zamudnim načinom odstranjevanja micelija, proteinov in drugih suspendiranih delcev ter kasnejši izolaciji iz dobljene transparentne fermentacijske juhe in pripravi čiste klavulanske kisline in njenih soli so se izognili na način, kot je opisan v objavljenih evropskih patentnih prijavah EP-A-0 385 552 in EP-A-0 387 178.
Celoten postopek obsega tri stopnje, in sicer čiščenje fermentacijske juhe od micelija, proteinov in drugih trdnih delcev, sledi čiščenje klavulanske kisline, ki se v nečisti obliki nahaja v juhi očiščenega filtrata Streptomyces clavuligerus ob uporabi enega izmed primarnih, sekundarnih ali terciarnih aminov, ki tvorijo stabilne intermediarne soli klavulanske kisline, s čemer se odloči večina spremljajočih nečistot v klavulanski kislini, ter v zadnji stopnji presnova intermediarnih aminskih soli klavulanske kisline v želeno alkalijsko sol, kot kalijev klavulanat.
Prva stopnja je še detaljneje opisana v EP-A-0 385 552, po katerem iz vodne gojilne juhe, dobljene s fermentacijo mikroorganizma Streptomyces clavuligeris NRRL 3585, s pomočjo fizikalno- kemičnega postopka koagulacija-flokulacija (skepljanje- izkosmičenje) odstranijo micelij, proteine in druge trdne delce. Kosmiči, ki pri tem postopku nastanejo, so dovolj veliki in kompaktni, da je omogočena lahka sedimentacija in separacija, kar dosežejo najbolje z uporabo vibracijskih sit. Tako dobijo transparentno juho, ki jo lahko v danem primeru koncentrirajo z reverzno ozmozo.
Na ta način dobijo očiščeno fermentacijsko juho, s čemer se izognejo konvencionalnim metodam čiščenja, kot so centrifugiranje, adsorpcija na aktivnem oglju, filtracija s koadjuvanti in druge.
Pri vseh znanih metodah je še potrebno, za razliko od opisane metode izkosmičenja, da očiščeno juho kulture obdelujejo z različnimi postopki deproteinizacije in ionske izmenjave, kar povzroča znatne izgube v končnem dobitku želene snovi. Za razliko od znanih metod znašajo celotni dobitki pri metodi izkosmičenja med 85 do 90%.
Opisana metoda skepljanje-izkosmičenje iz fermentacijske juhe Streptomyces clavuligeris temelji na dodajanju anorganskega elektrolita v kulturo juhe, da se zviša delovanje koagulanta, sledečem dodajanju anorganskega koagulanta kot iniciatorja koagulacijskega procesa, ob mešanju in vrednosti pH medija med 6 do 8, dodajanju organskega elektrolita, ko se prične izkosmičenje, in nato ločevanju nastalih kosmičev iz fermentacijske juhe, z uporabo vibracijski sit ali filtracije ter v danem primeru, kadar izkosmičenje poteka v prisotnosti z vodo nemešljivega topila, dekantiranju faz, ločevanju kosmičev in po potrebi koncentriranju tekočine z reverzno ozmozo ali odparevanjem.
EP-A-0 562 583 opisuje uporabo soli klavulanske kisline z organskimi diamini, kot Ν,Ν’-diizopropiletilendiamonijevega diklavulanata, kot koristnih intermediatov za izolacijo in pripravo čiste klavulanske kisline oziroma njenih alkalijski soli, kot kalijevega klavulanata, iz etilacetatnega ekstrakta, dobljenega po solventni ekstrakciji po fermentaciji dobljene vodne gojilne juhe, kjer se klavulanska kislina nahaja v nečisti obliki.
Opis rešitve tehničnega problema s primerom
V skladu s smotrom izuma iz temeljne patentne prijave P 9400107 smo klavulansko kislino vsebujočo vodno fermentacijsko juho Streptomyces sp.P 6621 FERM 2804 čistili z metodo mikrofiltracije, s katero smo odstranili micelij, večino proteinov (vsaj 80% prisotnih v juhi) in druge suspendirane delce.
Smoter pričujočega dopolnilnega izuma temelji na nalogi, da vodni filtrat, ki ga dobimo po čiščenju omenjene klavulansko kislino vsebujoče fermentacijske juhe z mikrofiltracijo, dodatno očistimo s postopkom ultrafiltracije, najbolje kontinuirne ultrafiltracije. Namen tega čiščenja je ločiti večji del preostalih proteinskih in drugih spremljajočih primesi z višjo molsko maso od klavulanske kisline. Na ta način uspešno odstranimo nezaželene primesi, ki bi se lahko obarjale pri nadaljni stopnji ekstrakcije vodnega klavulansko kislino vsebujočega filtrata z organskim topilom, nemešljivim z vodo, najbolje z etil acetatom, in s tem hkrati tudi bistveno znižamo obarvanost vodnega filtrata, dobljenega po čiščenju z mikrofiltracijo, kar izboljša nadaljni postopek izolacije in čiščenja klavulanske kisline.
Ultrafiltracija je tlačna membranska separacijska metoda, s katero se ločijo spojine na osnovi različne velikosti molekul. Tlačna razlika preko membrane, impermeabilne za raztopljene makromolekule, povzroči, da topilo in majhni delci prehajajo skozi membrano, medtem ko se makromolekule zadrže na membrani.
Ultrafiltrirne membrane imajo pore velikosti od 1 do 100 nm (10 A do 1000 A) in lahko zadržujejo delce v območju molskih mas od 300 do 500,000 daltonov.
Za ultrafiltracijske membrane je za razliko od mikroporoznih filtrov značilna anizotropna struktura, ki zadržuje delce večinoma na površini in ne znotraj membrane. Ultrafiltrirne membrane so izdelane iz različni polimernih snovi, kot iz polisulfona, pa tudi keramike, zato so ultrafiltrirne membrane obstojne do kemikalij in visoki temperaturi, se lahko čistijo in imajo dolgo uporabnost. Značilni delci, ki jih filtrirna membrana ne prepusti, so različni sladkorji, polimerni materiali, koloidni delci in biomolekule.
Ultrafiltrirne membrane so definirane z velikostjo por, ločljivostjo (molecular mass cut-off) in pretokom permeata (l/hm3) skozi ultramembrano.
Eden izmed pojavov, ki spremlja membranske separacijske procese, kot ultrafiltracijo, ki delujejo s tangencialnim tokom koncentrata (retentata), je gelska (koncentracijska) polarizacija. Zaradi nje lahko pride do tvorbe plasti gela, ki deluje kot dodatna membrana in tako zmanjša pretok permeata oziroma povzroča t.i. fauling. Omenjena plast gela je ob definirani membrani odločilnega pomena za uspešnost tovrstne separacijske metode.
Zaradi specifičnosti biotehnoloških postopkov fermentacije je velikokrat težko zagotoviti enako kvaliteto juhe po končani fermentaciji, to je vstopne (napajalne) vodne raztopine za filtrirno membrano. Zato je za uspešen ultrafiltracijski postopek potrebno ugotoviti lastnosti oziroma parametre fermentacijske juhe in na osnovi tega izbrati najustreznejšo filtrirno membrano in ugotoviti druge pogoje za ugoden potek separacije.
Z ozirom na sestavo permeata in glede na molsko maso klavulanske kisline smo v napravi za ultrafiltracijo uporabili polimerne polisulfonske filtrirne membrane z ločljivostjo med 10 000 do 30 000 Daltonov, najbolje 20 000 Daltonov.
Pri postopku ultrafiltracije v smislu izuma je uporabljeni tlak na membrano znašal med 2 do 10 bara, najbolje med 3 do 6 bara, temperatura med 30° do 40°C in vrednost pH medija med 5,8 do 6,2.
Postopek ultrafiltracije v smislu izuma vodimo lahko diskontinuirno, vendar najbolje kontinuirno zaradi čim krajših zadrževalnih časov in preko dveh serijsko vezanih ultrafiltracijskih naprav, s čemer povečamo selektivnost ločevanja primesi od klavulanske kisline, z dodajanjem čiste izpiralne vode in s protitočnim vodenjem vodne faze, dobljene s postopkom ultrafiltracije, pa znižamo izgube klavulanske kisline v vodni fazi na manj kot 5%. Dobitki oziroma ponovna dobitev klavulanske kisline, v skladu s postopkom v smislu izuma, so visoki in znašajo med 95 do 98%, propustnost svetlobe permeata glede na vodo se v primerjavi z vstopno (napajalno) raztopino poveča za okoli 10 krat, koncentracija proteinov v permeatu se zniža za 5 do 10 krat, zavrnitveni koeficient, kot eden izmed faktorjev, ki definirajo ultrafiltracijo sistema, je za klavulansko kislino pri uporabljeni membrani praktično enak 0.
V skladu z opisanim smotrom dopolnilnega izuma dobljeni klavulansko kislino vsebujoči vodni permeat nato vodimo v napravo za reverzno ozmozo in postopamo dalje v skladu s postopkom iz temeljne patentne prijave P9400107.
Izum prikazuje, vendar v ničemer ne omejuje sledeči primer.
8.
PRIMER
Kontinuirno ultrafiltracijsko čiščenje klavulansko kislino vsebujočega vodnega filtrata (dobljenega po čiščenju vodne fermentacijske juhe Streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804 z mikrofiltracijo v skladu s primerom 1 temeljne patentne prijave P- 9400107)
Vodni filtrat s pretokom 2000 l/h (dobljen po čiščenju vodne fermentacijske juhe Streptomyces sp.P 6621 FERM P 2804 z mikrofiltracijo v skladu s primerom 1 temeljne patentne prijave P- 9400107, vsebnost klavulanske kisline znaša 3500 mg/l, vsebnost proteinov znaša 0,56 g/l, propustnost svetlobe pri 420 nm (1:2 glede na vodo) znaša 27,9%) kontinuirno napajamo v dvostopenjsko napravo za ultrafiltracijo ( tip 2NUF2000 firme IMP Promont, Ljubljana, Slovenija in uporaba ultrafiltracijskih spiralnih modulov tipa GR62-3833/47P firme FILMTEC, ki je podružnica The Dow Chemical Co., z dvema zankama s skupno 194,4 m2 membran, možnostjo preklopa vzporednega in zaporednega delovanja in ločljivostjo 20 000 Daltonov) pri temperaturi 35°C, vrednosti pH medija med 5,8 do 6,2 , pretokom permeata 28 l/hm2, uporabljenim tlakom na membrano 5 bar in tlačni razliki med koncentratom in permeatom Δ, P (vzdolžni) 1,4 bara. Iz prve stopnje nato odvajamo permeat (vodni filtrat po ultrafiltraciji) s pretokom 1600 l/h, koncentrat s pretokom 400 l/h (iz prve stopnje naprave za ultrafiltracijo) pa vodimo v drugo stopnjo naprave, kjer ga izpiramo z demineralizirano vodo s pretokom 800 l/h. Iz druge stopnje naprave za ultrafiltracijo nato vodimo permeat s pretokom 800 l/h, k permeatu, ki ga odvajamo iz prve stopnje, pri čemer preostane koncentrat s pretokom 400 l/h, ki ga zavržemo.
.9.
S ponazorjenim postopkom ultrafiltracije dobljen očiščen in združen klavulansko kislino vsebujoči permeat s pretokom 2400 l/h vsebuje / (po analizi) 0,11 g/l preostalih proteinov, propustnost svetlobe pri 420 nm znaša 45,1%, dobitek 95% (glede na vsebnost klavulanske kisline)/ pri temperaturi 22°C nato vodimo v napravo za reverzno ozmozo ter postopamo dalje v skladu s primerom 1 iz temeljne patentne prijave P9400107.
LEK, tovarna farmacevtskih in kemičnih izdelkov, d.d.

Claims (4)

  1. PATENTNI ZAHTEVKI
    1. Postopek za ultrafiltracijsko čiščenje klavulansko kislino vsebujočega vodnega filtrata, dobljenega po čiščenju vodne fermentacijske juhe Streptomyces sp.P 6621 FERM P 2804 s postopkom mikrofiltracije v skladu s temeljno patentno prijavo P-9400107, označen s tem, da omenjenjenemu vodnemu filtratu odstranimo večji del še prisotnih proteinov in druge spremljajoče primesi z višjo molsko maso od klavulanske kisline pri temperaturi med 30° do 40°C in vrednosti pH medija med 5,8 do 6,2 z uporabo ultrafiltracijske membrane z ločljivostjo med 10 000 do 30 000 Daltonov.
  2. 2. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da uporabimo ultrafiltracijsko membrano z ločljivostjo 20 000 Daltonov.
  3. 3. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da vodni filtrat vodimo kontinuirno preko dvostopenjske naprave za ultrafiltracijo.
  4. 4. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da je ultrafiltracijska membrana polisulfonska membrana.
SI9500265A 1995-08-28 1995-08-28 Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration SI9500265A1 (en)

Priority Applications (21)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SI9500265A SI9500265A1 (en) 1995-08-28 1995-08-28 Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration
CA002226683A CA2226683C (en) 1995-08-28 1996-08-27 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration
SK103-98A SK10398A3 (en) 1995-08-28 1996-08-27 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration
RO98-00301A RO116813B1 (ro) 1995-08-28 1996-08-27 Procedeu de izolare a acidului clavulanic din mediul de fermentaţie
JP09509986A JP2000512125A (ja) 1995-08-28 1996-08-27 発酵培養液から限外濾過によってクラブラン酸を単離する方法
CZ98318A CZ31898A3 (cs) 1995-08-28 1996-08-27 Způsob izolace kyseliny klavulanové z fermentačního prostředí ultrafiltrací
AU68297/96A AU714892B2 (en) 1995-08-28 1996-08-27 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration.
RU98104924/04A RU2169151C2 (ru) 1995-08-28 1996-08-27 Способ получения и/или очистки клавулановой кислоты из ферментационного бульона посредством ультрафильтрации
UA98020991A UA59343C2 (uk) 1995-08-28 1996-08-27 Спосіб отримання та/або очищення клавуланової кислоти або фармацевтично прийнятної солі або її естеру
CN96196471A CN1101396C (zh) 1995-08-28 1996-08-27 用超滤法从发酵液中分离棒酸
PL96324855A PL324855A1 (en) 1995-08-28 1996-08-27 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration
NZ316136A NZ316136A (en) 1995-08-28 1996-08-27 Process for the purification of clavulanic acid or a derivative thereof from a fermentation broth by using microfiltration
PCT/GB1996/002083 WO1997008175A1 (en) 1995-08-28 1996-08-27 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration
KR1019980700627A KR19990035966A (ko) 1995-08-28 1996-08-27 한외여과에 의한 발효즙으로부터 클라불란산의 분리 방법
EP96928571A EP0859780A1 (en) 1995-08-28 1996-08-27 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration
HU9802532A HU221353B1 (en) 1995-08-28 1996-08-27 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration
EE9800060A EE03567B1 (et) 1995-08-28 1996-08-27 Klavulaanhappe eraldamine fermentatsioonilahusest ultrafiltrimisega
US09/000,375 US6127358A (en) 1995-08-28 1996-08-27 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration
ZA9607273A ZA967273B (en) 1995-08-28 1996-08-28 Isolation of clavulanic acid.
BG102253A BG63086B1 (bg) 1995-08-28 1998-02-16 Метод за изолиране на клавуланова киселина от ферментационна хранителна среда чрез ултрафилтруване
US09/638,473 US6274575B1 (en) 1995-08-28 2000-08-14 Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SI9500265A SI9500265A1 (en) 1995-08-28 1995-08-28 Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SI9500265A1 true SI9500265A1 (en) 1997-02-28

Family

ID=20431679

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI9500265A SI9500265A1 (en) 1995-08-28 1995-08-28 Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration

Country Status (20)

Country Link
US (2) US6127358A (sl)
EP (1) EP0859780A1 (sl)
JP (1) JP2000512125A (sl)
KR (1) KR19990035966A (sl)
CN (1) CN1101396C (sl)
AU (1) AU714892B2 (sl)
BG (1) BG63086B1 (sl)
CA (1) CA2226683C (sl)
CZ (1) CZ31898A3 (sl)
EE (1) EE03567B1 (sl)
HU (1) HU221353B1 (sl)
NZ (1) NZ316136A (sl)
PL (1) PL324855A1 (sl)
RO (1) RO116813B1 (sl)
RU (1) RU2169151C2 (sl)
SI (1) SI9500265A1 (sl)
SK (1) SK10398A3 (sl)
UA (1) UA59343C2 (sl)
WO (1) WO1997008175A1 (sl)
ZA (1) ZA967273B (sl)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT400033B (de) 1992-03-10 1995-09-25 Biochemie Gmbh Neues verfahren zur isolierung und reinigung von clavulansäure und zur herstellung von pharmakologisch verträglichen salzen derselben
SI9500074A (en) * 1995-03-10 1996-10-31 Lek Tovarna Farmacevtskih Process for preparation of alkani salts of clavulanic acid.
AT403375B (de) * 1995-11-15 1998-01-26 Biochemie Gmbh Verfahren zur fällung von alkalisalzen der clavulansäure
ES2105988B1 (es) * 1996-03-15 1998-07-01 Antibioticos Sa Procedimiento para purificar 7-sustituido-amino-desacetoxi-cefalosporinas mediante el empleo de membranas de filtracion.
GB0022841D0 (en) 2000-09-18 2000-11-01 Smithkline Beecham Plc Process
JP2004094465A (ja) * 2002-08-30 2004-03-25 Fujitsu Ltd 解析支援装置
CN102933717A (zh) * 2007-04-27 2013-02-13 科学与工业研究委员会 在固态发酵中采用棒状链霉菌mtcc 1142制备棒酸的方法
CN102838624B (zh) * 2012-09-07 2014-10-29 安徽普朗膜技术有限公司 一种从发酵液中纯化克拉维酸的方法

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3873425A (en) * 1971-11-19 1975-03-25 Tatsuyoshi Kobayashi Process for producing itaconic acid
GB1508977A (en) * 1974-04-20 1978-04-26 Beecham Group Ltd Beta-lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus
IE41110B1 (en) * 1974-04-20 1979-10-24 Beecham Group Ltd Esters of clavulanic acid
IE41109B1 (en) * 1974-04-20 1979-10-24 Beecham Group Ltd Novel -lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus
US4140764A (en) * 1974-12-18 1979-02-20 Beecham Group Limited β-Lactamase inhibitors and process for their preparation
US4148880A (en) * 1975-08-13 1979-04-10 Pfizer Inc. Mixture of antibiotics produced by a species of actinoplanes
GB1563103A (en) * 1975-10-13 1980-03-19 Beecham Group Ltd Process for the preparation of clavulanic acid
GB1578739A (en) * 1976-07-23 1980-11-05 Beecham Group Ltd Amine salts of clavulanic acid methods for their preparation and compositions containing them
JPS5791196A (en) * 1980-11-27 1982-06-07 Takeda Chem Ind Ltd Separation of inosine, guanosine or their mixture from cell bodies and high polymeric substances
JPS6070092A (ja) * 1983-09-26 1985-04-20 Ajinomoto Co Inc グルタミン酸発酵液からのグルタミン酸結晶の取得法
MX7417E (es) * 1984-10-27 1988-10-14 Antibioticos Sa Metodo para la preparacion de acido clavulanico y sus derivados
IT1221982B (it) * 1987-07-08 1990-08-31 Mini Ricerca Scient Tecnolog Antibiotici ab 006 e processo per la loro produzione
DE3730868A1 (de) * 1987-09-15 1989-03-23 Henkel Kgaa Verfahren zur abtrennung von biotechnisch hergestellten wertstoffen aus einer fermenterbruehe durch querstrom-mikro- und/oder ultrafiltration
ES2010144A6 (es) * 1989-03-01 1989-10-16 Pharma Mar S A Pharmar Un procedimiento de floculacion-coagulacion de caldos de fermentacion de streptomyces sp. que permite la obtencion directa de liquidos completamente transparentes.
US5024937A (en) * 1989-04-06 1991-06-18 Dow Corning Corporation Method for processing aqueous fermentation broths
DE69013471T2 (de) * 1989-12-05 1995-03-30 Merck & Co Inc Methode zur Stabilisierung von rekombinanten Hepatitis-B-Virus-Oberflächenproteinen aus Hefe.
JPH0475595A (ja) * 1990-07-17 1992-03-10 Kanebo Ltd フェニル配糖体の製造法
US5268283A (en) * 1990-10-05 1993-12-07 Miles Inc. Method for the production of detergent builder formulations utilizing spray granulated citric acid and salts thereof
DE4031854A1 (de) * 1990-10-08 1992-04-09 Basf Ag Mikroorganismus und verfahren zur gewinnung von anthranilsaeure
JP2615272B2 (ja) 1991-03-22 1997-05-28 日本碍子株式会社 蛋白質溶液中の蛋白有価物の回収方法
AT399155B (de) * 1992-03-26 1995-03-27 Lek Tovarna Farmacevtskih Neue alkylendiammonium-diclavulanat-derivate, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung
SI9300296B (sl) 1992-06-11 1998-06-30 Smithkline Beecham P.L.C. Postopek in intermedianti za pripravo klavulanske kisline
RO112113B1 (ro) * 1993-03-26 1997-05-30 Gist Brocades Nv Saruri diaminice ale acidului clavulanic si procedeu pentru prepararea acestora
WO1995011295A1 (en) * 1993-10-22 1995-04-27 Gist-Brocades N.V. An improved process to recover an aqueous fermentation broth
AT400846B (de) * 1994-02-25 1996-03-25 Fermic S A De C V Verfahren zur gewinnung und reinigung von alkalimetallsalzen der clavulansäure
SI9400107A (en) * 1994-03-02 1995-10-31 Lek Tovarna Farmacevtskih New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804.
JP3617091B2 (ja) * 1994-11-30 2005-02-02 味の素株式会社 塩基性アミノ酸の精製方法
SI9500074A (en) * 1995-03-10 1996-10-31 Lek Tovarna Farmacevtskih Process for preparation of alkani salts of clavulanic acid.
SI9500134B (sl) * 1995-04-20 2004-04-30 Lek, Postopek za pripravo čistih alkalijskih soli klavulanske kisline
ES2101658B1 (es) * 1995-11-23 1998-03-01 Antibioticos Sa Nuevo procedimiento de produccion de acido clavulanico y sus sales.

Also Published As

Publication number Publication date
PL324855A1 (en) 1998-06-22
JP2000512125A (ja) 2000-09-19
CN1193975A (zh) 1998-09-23
SK10398A3 (en) 1998-07-08
AU714892B2 (en) 2000-01-13
RO116813B1 (ro) 2001-06-29
HU221353B1 (en) 2002-09-28
HUP9802532A3 (en) 1999-04-28
AU6829796A (en) 1997-03-19
CA2226683A1 (en) 1997-03-06
HUP9802532A2 (hu) 1999-03-29
EE03567B1 (et) 2001-12-17
KR19990035966A (ko) 1999-05-25
CA2226683C (en) 2002-04-30
UA59343C2 (uk) 2003-09-15
EP0859780A1 (en) 1998-08-26
BG63086B1 (bg) 2001-03-30
NZ316136A (en) 1998-09-24
RU2169151C2 (ru) 2001-06-20
CZ31898A3 (cs) 1998-07-15
WO1997008175A1 (en) 1997-03-06
EE9800060A (et) 1998-08-17
CN1101396C (zh) 2003-02-12
ZA967273B (en) 1997-03-04
US6274575B1 (en) 2001-08-14
BG102253A (en) 1998-08-31
US6127358A (en) 2000-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SI9400107A (en) New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804.
SI9500265A1 (en) Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration
US5994534A (en) Process for the preparation of pharmaceutically acceptable salts of clavulanic acid
JPH11505425A (ja) ６−アミノペニシラン酸（６−ａｐａ）を製造するためのかわりの方法
EP0941229B1 (en) Purification of fermented clavulanic acid
Higuchi et al. Rejection of single stranded and double stranded DNA by porous hollow fiber membranes
JPH11215980A (ja) 菌体含有液の処理方法
CN115385970A (zh) 一种吉他霉素的提取方法
US20010029038A1 (en) Purification of fermented clavulanic acid

Legal Events

Date Code Title Description
IF Valid on the event date
KO00 Lapse of patent

Effective date: 20050603