SE503111C2 - Farmaceutiskt aktiva derivat av D,L-glutaminsyra och D,L- asparaginsyra samt förfarande för dess framställning - Google Patents

Description

15 20 25 30 35 40 503111 2 Föreningarna enligt uppfinningen har, såsom redan nämnts ovan, en kraftig anti-CCK-aktivitet på olika försöksmodeller, både in vitro och in vivg. Således minskar de kontraktioner, som induceras av CCK i gallblåsan hos marsvin både in vitro och in yizo, hämmar inducerade kontraktioner av tjocktarmen hos kaniner, och ökar den biliära sekretionen hos råttor.

Den potentierande effekten på den analgetiska aktiviteten hos analgetiska-narkotiska preparat och icke-narkotiska preparat är även av intresse.

Denna potentiering medför i själva verket, för det första, att den för administrering avsedda mängden av opiaterna väsent- ligt minskas, vilket således begränsar deras många välkända, oönskvärda biverkningar, utan att därigenom väsentligt minska deras terapeutiska index. Dessa föreningar kan även användas för att återupprätta den analgetiska aktiviteten hos opiater då deras farmakologiska verkan avtagit som en följd av det välkända tole- rans-fenomenet utan behovet att öka denterapeutiskadosen. Dessa gynnsamma terapeutiska egenskaper skulle således kunna tjäna till att medge den succesiva avgiftningen av individer, som blivit missbrukare p g a den utsträckta användningen av opiater.

I fall av icke-narkotiska analgetika överskrider deras fördelaktiga verkan verkan att öka den analgetiska aktiviteten, som i sig är användbar, eftersom de även skyddar magslemhinnan, som normalt skadas av sådana produkter.

Denna potentiering av aktiviteten av analgetika står bl a i växelförhållande med förmågan hos föreningarna enligt uppfin- ningen att blockera den hydrolytiska nedbrytningen av enkefaliner, dvs endogena fysiologiska peptider med kraftiga analgetiska ak- tiviteter. Detta skulle ge enkefalinerna själva en längre livs- längd och följaktligen en större aktivitet.

Farmaceutiska former av föreningarna enligt uppfinningen kan framställas medelst konventionella metoder, såsom exempelvis tabletter, kapslar, suspensioner, lösningar och suppositorier, och kan administreras oralt, parenteralt eller via rektum, Den aktiva beståndsdelen administreras på patienten typiskt i mängder av 0,1-10 mg/kg kroppsvikt per dos.

För parenteral administrering är det att föredra att använda ett vattenlösligt salt av föreningarna i fråga, såsom natrium- saltet eller något annat ogiftigt, farmaceutiskt godtagbart salt.

Substanser,som allmänt används inom den farmaceutiska industrin 10 15 20 25 30 35 3 5(J3 1 11 som excipienter, bindemedel, smakmedel, dispergermedel, färgmedel, fuktighetsavgivande medel, etc kan användas som inaktiva bestånds- delar.

Förfarandet för framställningen av glutaminsyra- och aspa- raginsyraderivaten enligt uppfinningen kännetecknas av att a) en inre anhydrid med formeln: co (cH ) T HšNg-co-R ° (n) 1 ('20 där n och R1 har ovan angivna betydelser, bringas att reagera med en amin med formeln RZH, där R2 har ovan angiven betydelse, i De inre anhydriderna med formeln II är nya föreningar, som icke framställts förrän nu.

De inre anhydriderna II framställes genom att b) glutaminsyra eller asparaginsyra bringas att reagera under Schotten-Bauman-betingelser med enekvimolekylärnängd av en acyl- klorid med formeln R]-CO-Cl, där R1 har betydelsen ovan, vid en temperatur av från -20°C till 30°C för erhållande av den N-acy- lerade föreningen med formeln: ?OOH (?H2)n çfl-NH-CO-R1 COOH (III) och c) föreningen med formeln III dehydratiseras genom reaktion i närvaro av ättiksyraanhydrid i ett molförhållande av från 1 till 10, antingen ensam eller i närvaro av ett inert lösningsmedel, som är blandbart därmed, vid en temperatur av från -10°C till återflödestemperaturen.

Serien av steg i förfarandet enligt uppfinningen belyses i sin helhet i nedan angivna reaktionsschema: 10 15 20 25 30 35 40 503111 4 coon coon ffWn aeaaääans, <.°”2'~ clzn-Nnz R1-co-c1 cn-Nn-co-n1 un) I coon (steg b) coon nßnmßuïsß GCO -fl--IQIKEH ) JJ 2)n isorrerIA 2 n Aléšâêßšllê ' _00. (steg c) åH_NH_C0_R 0 > ë+NH R1 | 1 (steg a) 004 co - (II) | 2 (en ).

I 2 n ismærïß Fa-bm-oo-ln coon Acyleringssteget b genomföres företrädesvis vid en tempera- tur av O-15°C under en period av 1-24 h, varvid en temperatur av ungefär 5°C och en reaktionstid av 12 h rekommenderas.

I steg c är reaktionstiden typiskt från ungefär 30 min till 12 h, företrädesvis ungefär 3 h, och mängden ättiksyraanhydrid är företrädesvis 3 mol per mol av föreningen III.

I amideringssteget a införes aminen med formeln RZH före- trädesvis i ett molförhållande av 2,5:1 med avseende på den inre anhydriden II och reaktionen genomföres under från ungefär 30 min' till 12 h, företrädesvis 3 h.

De relativa halterna uttryckta i procent av föreningarna med formlerna IA och IB är en funktion av den typ av R1 och R2- substituenter, som används.

Isomererna IA och IB kan separeras antingen genom fraktio- nell kristallisation (med de i tabellerna C och D angivna lös- ningsmedlen) eller genom extrahering i ett basiskt medium, var- vid föreningarna med formeln IB iwgenomsnitt är mera sura.

Nedanstående exempel återges för att bättre belysa uppfin- ningen, EXEMPEL 1 Framställning av 3,4-diklor-N-bensoylglutaminsyra (förening A-4).

Till en lösning innehållande 14,7 g (0,1 mol) L-glutamin- syra i 200 ml 1 N soda kyld till 5°C sättes samtidigt 100 ml 1 N soda och 21 g (0,1 mol) 3,4-klorbensoylklorid under omröring och 10 503111 kylning under ungefär 30 min.

Blandningen får stå under 12 h för att reagera. Den göres sur till kongorött med koncentrerad HCl och den bildade fäll- ningen frånfiltreras. Aterstoden omkristalliseras ur H20.

Smältpunkt: 141-145°C tunnskiktskromatografi (se anmärk- ning i tabell) Rf: 0,46 24,5 g erhållet, utbyte 76,4%.

Samtliga föreningar med formeln III framställes medelst samma förfarande (se schema ovan). De så erhållna föreningarna återfinns i tabell A nedan tillsammans med ett flertal data,som identifierar dessa, varvid tabellen även upptar erhållna utbyten och de lösningsmedel, som används för kristallisationen. 505 111 NoNzo .=N J N _ NN N. _ N oN.. NNTN.. .NFNNQENNNTN . N .å NoNzN . :N J N _ .N NN _ o oN.. NNTNN. ïêwwocmæuå N N .å NozNNo.mN.u .<5 NNS t. NoåovâfioNm 2:12.. .NcfinofiNfiiïïN N få NøzNNJNJ NJN 2.5 Nä .oåošfloNm NNTK. .Éfiøofiè N N.å NozNNJNIV Ná. NN... oN.. NNTNN. NÉENPTN N ...å Nøzumo J. J N _ å N. _ o oN.. STS. NNäusoflTN . N .å Nozumfimüu NJ... 35 Nä .onošïoNm NNTNE .Ncmüeounïv N N.å NozåN . mN J ._ NN NN _ o øN.. NNTNN. .Ncfiaounå N ...å NQzNNINNJ. NJ... En.. oN... .NIÉ NNcwfioøfläïNxN N ...å NozNNJNfu ._12 NNÅ. | 313 ._EwNN_Q3N¿ N Nå ...ozNNu Nmïu .ïå NNä oNm S73. .Éfiuodšïvå . Nå NozNNQOJNJ. ïNN 2.5 .i NonoxdflšvNm NNTNE NNÉfioÜINHTNJIN N Nå NozNNUImNJ QNN Nï.. oNm NNTNN. 1sßuoüšv..._N N Nå NozN.u..=NJ ...ä 26 øNm NNTN... ïcfiuoïäïmïN N Nå mozNflvïmNJ _12 35 oNm NNTS. NNENNNQÉSYÉN N Tå NozÜN.mN.u .JN 36 oN.. NQTNQ. NNäwuoüTv N Nå NozSNJNr. NáN 2.5 oNm NNTNN. üEwÉøüTN N Nå NošuNJNf. m6.. NNå oN.. BYN.. NNcwNNøNNIN N .å .weäå S. L.. coNußflNNßflë u? 60. .uäsm .m ._ m5.. wflfiå .wømñmqëßfl Låwsw 196.... zoou .N|ou|=z|=w =_N=_u.

EOOW .muæmcflmmummmm :oo muæmcfifimusfim >m uflåuwwfnumuztuå. ud Aflmmáfi 503111 ....TN|... oN.. 191.933... 1 ...uowouofix Ämuwäwmcflumsfim .i oz .N m2.. ...NN ..N... oN.. NNTNN. ...â.u...flmfißüfiä|.. N .Nå Nozšmïu ...NN 3... oN.. NNTN: ...cfififiønofi-N N ..N|< Nozšmï.. m... NN... | FN... ...=wfi.fi3..=|.. N NN-..

Nozïmfiu ...om NN... oN.. NN-N.. ...=wfi....o~mo3.... N NNå Nøzflmm... N.N.. 2.... ON.. QTN... üímfiNmoumLï.. N NNè ...ozïmïu ...å NN... Nä .oisâfloNm NNTÉ. ...=@fi.n6|.. N .Nå Nozïmmzu ...NN 2.... Nä .onovâfioNm .....|..t....öfi.fima.fiè....N N NN-.. mozïmwpu N23 mm... N... NonoxHm\oNm moTæm Écwwïfiwefiuuwå.. w än...

Nozïmïu ...NN S... N... ÉnQSQoN.. NNTNN. ..8$..G.@_5..|N.N N NNL.

Nozïmïu ...NN NN... Nä .ozoåfloNm NNÉN. ...=Q.~J.S@É.O|...N N NN-..

Nozfimüu ...NN å... oN.. NOTN... fiâfilßmei. N .Nå Nozfimfiu ...ON NN... øN.. NNTNN. ...ESHNÜEIN N ..N|< NøNzïmN... ...Ä NN... »i .N30 fiäfioeflnï.. N NT... .i šfiñfififlmflb. ...B .uo. ...så m5...

Nmeuo... minä.. u.. .wwmämnäå Läem f. = här. 10 505 111 s” EXEMPEL 2 Framställning av 3,4vdiklorbensoylglutaminsyraanhydrid (förening B-4 i tabell B). 30,6 g (0,3 mol) ättiksyraanhydrid och 60 ml isopropyleter tillsättes 32,0 g (0,1 mol) 3,4-diklorbensoylglutaminsyra. Bland- ningen upphettaszunder âterflöde (73-77°C) under 2 h. Den kyles, filtreras, tvättas med en liten mängd eter för att avlägsna kvar- varande ättiksyraanhydrid och torkas. På detta sätt erhålles 27,0 g. Utbyte 89,3%.

Smältpunkt: 188-190°C.

Samtliga föreningar med formeln II framställes medelst samma förfarande (se schema). Ett flertal exempel på dessa föreningar återges i tabell B nedan tillsammans med ett flertal data, som identifierar dessa, jämte erhållna utbyten. 5(J3 11 1 ß.wß mßwvpßw fiæcmuocmæonm ~ ß-nm «ozNHæmN_u N.m@ mNN|mNN N>=wNwofiN~»|m.«.N N w_|m «ozH°_mN_u °.wN ~°N|_°N N>=@N@ofi|« N m_|m «øzH°_=N_u w.mN °@_ Nm. N»=@Nuofi|N N N_|m «oz~mwm._u _.«@ <@_|_@_ N>=m«e°Nn|N _ N_|m voz~mo_mN.u N_@N ~°N|°°N N>=w«eoun|« N NP|m «oz»m°_mNPu æ_NN N«_|N«_ N>=wNeo~n|N N _.|m «ozNmNæN_u N__N N°N|wN_ N>=@-o=N~Nu|m.N N °_|m «ozm°_zN_u __NN NN_|_N_ N>=w«»o=NN-« N m|m «ozNNuNm__u «._N NN_|mN_ N>=@N~oN«N@|«.N _ m|m «ozNNuæ=N.u N.~N °_N|@°N N>=@N~oNxNu»|m.«.N N N|m NozNNuNmN~u N.«N Nm_|mm_ N>=mN~oNxN@|«.N N @|m @ozNNuN=NPu N.«N w_N|«.N N»=wN»oNxN@|m_N N m|m «ozNNuNmNPu N.N@ °N_|@@_ N>=@-oN«N@|N_N N «-m «ozNu°_mN_u @.N@ °N_|N@_ N>=w«~oNx»« N N|m «@zNu°_mNPu @.~N @w_|Nm_ N>=«w~oNxLN N NLm «ozNu°_mN_u m.NN _N_|NN_ N>=w«»oNx|N N _|m AN. Auo. mcflc Nmeuom w»>n»= »x=øm»Nwew Pm e. |w~mm _ ß m|ou|=z|mu o = N _ _ _ fo. ou uwufluwæscmmuæwcflmmuwmmm zoo umuæmcflämusfiwufiæom ucflmëuou umë |z >m um>Numa Nm AQWQQB 10 5()3 1 11 ozNm°_mN_u o.NN mm_|NmP N»=wNN>»ws»o=NNN~»|« N _m|m «øzNPm@.u w.NN m«.|NN_ N>=wNN>»=nom«|« N °N|m «øzN_m@_u °.~N ««_|N«_ H>=w«N>»=n|=|« N NN|m vozN_mmFu m.«w mm_|Nm_ H>=wNH>mo~momN|« N NN|m «ozN_mm~u «_NN _@_|Nm_ N>=mNN>mø~m|=|« N NN|m =wNH>»@|« N @N-m «øzN_=m.u N.NN mw_|°@_ H>=@~HN»@sN~»-@_«.N N mN|m «ozm_m«Pu N.F« @N_|mN_ N>=w«N>umefi@|«.N N «N|m «ozm_m«.u °.N@ Nm_|mm- N>=w«N>»weNø|m.N N NN|m =wNN>»@eNn|«_N N NN|m «ozN.mN.u N_«N °N_-N@P H>=wNN»»we|« N PN|m «ozN_mN.u °.«N NQ.|~«N H>=w«N>»@s|N N °N|m «oNz°_mN_u N.NN mN_|.wf N>=w«o=~>u|« N NP|m «ø«zNmN_u m_.N NN_|NN»“ ~>=wNo=~>u|N P N_|m .@. .uov mcfic H«e~om w»>n»= uxcsmflfiwew .N = |m~@m muu0w .m qqmmca 10 15 1, 503 11? EXEMPEL 3 Framställning av D,L-4-(3,4-diklorbensoylamino)-5-(di-n-butyl- amino)-5-oxo-pentansyra (förening C-6 i tabell C). 30,2 g (0,1 mol) 3,4-diklorbensoylglutaminsyraanhydrid satsas i ett reaktorkärl och suspenderas i 100 ml vatten. Bland- ningen kyles till ungefär SOC och 32,2 g (0,25 mol) di-n-butyl- amin tillsättes droppvis under en tidsperiod av ungefär 15 min.

Blandningen får reagera under 3 h vid denna temperatur och surgöres med isättika. Den filtreras, tvättas med vatten tills den är neutral och torkas.

Pâ detta sätt erhålles 16,4 g. Utbyte 38%. Smältpunkt: 81- 830 (kristalliserad ur isopropyleter). Tunnskiktskromatografi.

Rf: 0,92.

Samtliga föreningar med formeln IA och IB framställes medelst samma förfarande (se schema ovan). Flera exempel på dessa före- med ett flertal data, som identifierar dessa, jämte erhållna ut- byten. 12 5(]3 1 11 N.N_ Nw.° »m»@umNN»w ___|«°. o=Na~NNmo~m|=|N@ N>=wNuofi|< N N_|u N.mN w@.° »~»wu~NN»w N«v@«_ o=Na«N>moNm|=|N@ N>=@Nwofi|N N N_|u N_°« Nw_° »~«wu~N>»@ NNTNNP o=Ns~N>mo»@»=|Nø NN=wNsoNn|N F @_|u ß.oN mæ.o umumomflæum Pm-|m~P ocflämflæmoumucnflø Hæcmwëounnv N mpno N.«m mN.° _”_ No=~»w\oN= NN?NN_ ø=Ns«N>mo~m|=|Nw N>=øNeo»n|N N v_|u «._. NN.o NHN No=m»w\oN= @N_|N~_ o=Na~N~>mo»m|=|Nw N>=@N~o=NNN@«m_N N N_|u m.N« mw_° _"_ No=~»@\oN= WNTNNP e=Ns~N>mo»@|=|Nv N>=@«~o=NN»« N N_|u N_NN wm.° N". No=~»w\oN= NNTNNP ø=NsmN>»=n|=|Nw N>=wN»oNxN»»|m.v.N N P.|u w.Nm NN.o Nu- Nocm»m\oN= @NT+N_ o=NemN>u:n|=|Nø N>nmNuoNxNu|«.N N o_|u <.Nm mm.° vn- Noc~»w\oNm N@Tø@P ocNa~N>»=n|=|Nw N>=wN»oNxNw|m_~ N N|u w._N NN_° HwuwN>moHmomN °PTæ°, o=Ne~N»xm=|=|Nw N>=wN~oNxN@|«_N N N|u N.~N mN.o ~w»wN>mo~@owN Noïøofi o=Ns~NN»=w@|=|Nw N>=w~»oNxNu|«.N N N10 o.NN NN.o »w»wN>@oumomN Næ|_w o:NemN>»øn|=|Nn N>=wNNoNxNø|«.~ N @|u °.wN NN.° »@»wu~N>»w ozwwo. o=Ne@N>mo~m|=|Nw H>=@N~oNxNu|«.N N m|u N.«N «N.° _"P Nocm»w\oNm N°T+oP o=Na~N>»=wm|=|Nw N>=w«~oNx|« N «|u °.Qm NN.@ Nnm N0=~»m\oN= N°_|Po_ oaNa~N>moN@|=|NN. N>=«N~oNx N N N|u o . 2 om _ o coumum æNTwNP ocflëmflæmoumnnlfifl Hæcmuuofixnm N ~|U m.Nm @N.° »m»wo~N>»w mmfæm, o=NemN>mo»@|=|Nø NN=wNHoNx|N N ,|u S. SNUQwNNNBmNQ Bo. Nää m5: wflfiua .Lz »nu Nwwmemmnëmfi ufiwaw Nm .m c .öuæm Nmow _m|ou|=z|mw =.Nmw. moou 23 mEuow owe umfinumo "U .HQWÉB 503111 13 «.oo No.o ....mfium> . hä... NNTNN. s ~ OCH-:flääuwfl o.mo .o o .oofiw NoTå. ....Nemi w... HNäNfâoumLïo N :Tu ”få ....o Hooßw .N.|o.. ooflsfiäoum m .om N ....=$f.»ws.ø|o¿ N oTu _ . | | _.. ßånvym mm o mš .öuumNåHocmuflo Sååm. ocHäßHæmoum c Hu H wwHåHHuwsuosHuHuunv N annu N u | I ...om o. o ...H 5395838 oNToN. ooëåäoum _. ä N .wwNÉänowTv N om-..

N - I I.

Tow .o o m.. oßuššßßë STS. .ENENHÉQHQ o ... ... cwfiñšniï.. N NT.. Ä I I 'n Næ o ... cwuumššocmuw mil... o... .H H cmuHæmoumomHuv N omøu Ümw ow~o umumumHæum .Ü HENH moumncuHw HæcwuHæmoumncn.. N mm u nmN. o.. En .E m | m~mm mw~O ußßwüm .w H OH ICIHU Häflfl h Häßw I NH ...-Giv N v I ...om væ.o oo. om. ocflfimHæmoumucnfiv HæcwuHæuflnHnu . _ m U v. umumomHæuw mNTßNN ocHëmHoHmoum c HH. .H :o v N N mmno s i I I- ozwN oo o N.N=w#.~>\Ho=3w ......ai ofisfiäoum o S. Hooßflfiwsflo-...N N N70 5 Ir ' mo.. No o fißwußofiw .....-NS ofisßïmoum o ä .Näwšäeäïmä N .Tu n II ul o..N oo o omfiåmfifiw STS. NEÉNHNQOH.. = :o N äwffiwsflïos. N oNó § | | .iom oo o .mäufläfiw NNTNN. ofisåäoum _. 2. Éäwïuwsè N oNö .INN .o o N". HošflïoN.. NToo oofiâfifio.. ._ ä. .Nawfifiweà N oNö s | | oêN imo »fiwumïum moræo. :Huflmmfim N .Nnßooofv N .Nå No o um »m H cwuuo | _ æJm . uwH oumomH NNToN. onHämHæusnucnH HxHv v m N oN|u Næ o _... Hocmuw\ONm mNTšN. Ho HæcwwäouoTv N mNnu Too mo... Num HocÜwÉNm NmToo. ocHemHæusnncnHø Hæcwwocmæunm N vN|u o.oN mo.o umøwum .a ocfiämHæxmzoHxæu Hæcwuocmhoum _ H nu 3.43.. ocHämHoHmoum c . mNau v æN mNKo F.. HOCmßw\ N | IHO Hhnwwøcmaulm o. _ o m Noïom. o=.smH>»o = . NN|u om f. o umuwumHæ w nu Hæcwwocmæolm w _ NN om _ . NN. mNToN. ocHëmHæmoumncøHn .H N .N10 o ... .ocfiwšo ._ ...oTNo. ÉNENHNNQN.. = Hu N H :wwoåñïo N oNö .No oo | | H cwNooHN~»|m.o.N N .omflzßflfi a. eoå ..-o w»Nn»o o um ußu Hmflflzwmâå |uHmEm Nm - mcHc m c .ömma muuow _ u ....mås 14 503111 A-“N"m. ONm|:oumum|Hozoxfimfiæëmomfl ufiwnwëmmcfiumnfim .«.

N _ QQ NN _ Q E äueššoaßw STQQ. ocdälucwmucåu NÉwfiNQwENuN _N N Nwfiu m _ MP Pm _ o AHHßflCOUÜON m0 wImOw OflflšflfihßflflIfilflfl .Häfiflmfiäflüäflfllv N m N vmIU _. _ N. QQ _ Q t. âfimšfiåßm NN -NN ofiswfinuännfflu üäufiñöeå N N .Tu Q _ NN NQ _ Q Nocfiøs I TNï .åuflmšm NNQwNNNfiWENNTQ _ N N NN|u Q_Q__ QQ_Q Nocfiw QNTNï :Iofioa ÉÉNÉUEENNVLIN N .Tu Q _Q N NN _ Q .ä Nåfifiâuu? S.. TNN. ocfiåïuwsflu Écwušuwsfimïv _ N N Q._.|u w_æF Næ_Q ~"vNüufiE<~Qhßm: NPN|æoN ocflämfiæxmzofixæu Næcmwfiæmoumomflnv N øv|u N _ -N NN _ Q Noafime NN TQÉ ofiefiNxwzoNvïu Écwfiæuwå N Q Tu Q _ NQ NN _ Q Nocfiwe N _ N..Q . N ofiemünxwnoüäu fiäflïuuafluè _ N N N Tu Q _? NQ _ Q Nflfinouwum NN TQE öšsmlxwf: É=Pfi>uws2u|v _ N N QTu N_oN wN_o Hocmmoumomw ßmfiammp ocfiëmfiæmoumnc fl>cwuH>uwENfl|v_m N menu Q _ I QN _ Q »NN ïëßw 3 7:; Bäewäunnë NNQENNNQNNIQ|Q N ïïu w_ßN æw_o wmm Hocmum mm-|Nm~ ocflëøfiæusnnc HæcwwH>um4v N mvuu v_-N æw_o N“N~mDfiu:n|c N»cmwH>umENw|v_N N Nvuu S. .i äfiåfiflfiflë 60. fisá N55 Såå um ...uu Nmumämâcš Låmsm Nm .m Q àåm muHOm _U Aåümdfi N 4! fiwumumv o m|co»mom:HozoxHmH>Emowfl nfimwmëmmffiumsflm ^«. 41 _ 4: N\o« NN.Q Nøc0¥NNH>@o~@0mN vmP-Nm_ cflwfluwmflß ~>=@~N>mo~momNLN N N_-Q WA m.fiv wv.o ^ÉmVHfluWfiäñoo@A%m mw_|ßm_ oc«EmH>møum|c H>:wwH>umEHUav.m m wpao :J æ_æN NN.o SUN, o mffiocmpwe _N_|N._ 0=NE«~>@o~m|=|Nu N>:wwN>»wsN 1 _" | w_mm ov~o Hocmuwfi ov_|æm~ ocflsmflxusnnc H>cwwfi>mwu%|@ W ¶%|W m.ßm æv.o fiocmuwe mmwußmfi ocfismfiæusnnc fiæcwwfiæuwnv ~ mvno w_ßm ßN.o Høcmumë wowøwow ocfismflxuwëflu ~>cuwH>umEH®av_m N mvxo m_wm NN.ø umumumflæum o~_|moP cflwfluwmfim Hæcmwocmæonm m frun @_Nm æN_o v"m Hocmuw\oNm mß_aßN_ cflvfluwmflm H>cwwocm>o|v N oP|o @.NN w@_@ _“_ Ho=N~@\øN= N@_|.O_ cflwfluwmflß N>=wN»oHxN@-v_N N N-@ N__N _m_o »N»@uNNN»w @_,-N__ 0=NENH>»=QN@ H>=@No=NN0|v N æ-@ w m_o« mN.o :N"N Nø:N»@\øN= mN_|NNP cfiwflgmmflß H>=@New»n|v N N-m m_Nm mN.O Nam Ho=@»w\oN= @@,-@æ_ cflfiowhoe H>=wNe0Hn|v N @-@ N_NN om_o »N»@oNN>»@ wP_|mP~ o=NsmH>u=nN@ H>=@«o=«>u1N N m|Q QNQP om_o nwvwflæmoumomfl Nopumofi ocflEmH>»snNø Hæcmweounuw N v|o N_Nv @N_o _“F N0=N»@\oNm vN_|_N_ o=Ne@H>~=Q-= H>=wN~oNxNw|N.N P N10 o_ßF Nm_o PHP Ho:muw\oNm woP|@o_ ocflemfiæpsnncnflu HæcwwuoHxflU|v_m N w|o FNQM wm_o ßum Ho:mum\o~m ~m_|wv~ ocflemflxpmeflw ~>cmwuofixflw|v_m N fxo Awv ^«v cOflummH~HmumHux AUOV uxcflm mCH«~ @»>nu= Nm ~@NH@u2a@::aQN -ßfimew Nm Pm = |@»@@ IOOU _ Fmfloulzzuzw H =.N=», _ NMIO_U Ucflmëuow wøe uø>Huwo "Q qqmmmm 10 15 20 25 30 35 503 111 16 Den analgetiska aktiviteten för föreningarna enligt upp- finningen kommer nu att belysas medelst en serie farmakologiska försök, som utförts för att visa både deras potentiering av den analgetiska aktiviteten för opiater och den mekanism, medelst vilken denna potentiering uppnås. §§r§§k_numm§r_1: Ökning i analgesi för analgetiska-narkotiska läkemedel hos råttor medelst svanssnärttestet (Tail Flick Test).

Den använda metoden är den, som beskrivits av Harris et al (J Pharmacol Exp Ther, 143 (1964) 141-148).

Råttor av hankön används med en vikt av ungefär 150-200 g, vilka icke fastat. En punkt på svansen utväljes och bestrålas med en värmekälla (75°C) och den tid (uttryckt i sekunder) under vilken djuret kvarblir utan att röra sin svans bestämmes.

En maximal tidsperiod av 8 sek under värmekällan utväljes, efter vilken djuret i varje fall avlägsnas för att undvika väv- nadsskada. Bestämningen genomföres före (kontroll) och efter be- handling med läkemedlen.

Administreringen av läkemedlen enligt uppfmnningen genom- föres intraperitonealt“ (10 mg/kg) 10 min och omedelbart före administrering av morfin (2 mg/kg). Variationen i procent beräknas för varje enskilt djur medelst följande formelz» ' tmefiabæmumgæa)-mmmnuaeak % variation = ' ~x 100 8-kamuolhfid üæk) Bestämningarna genomfördes 10, 20, 30, 45, 60 och 90 min efter behandling med de analgetiska medlen.

De erhållna resultaten återges i tabell 1, som upptar de behandlade grupperna och de administrerade doserna, medelvaria- tionerna i procent (beräknade för grupper om fem djur) av laten- sen för smärtupplevelsen, medelvärden framräknade för perioden 1- 90 min (I S.E.) och potensförhållandet för morfin, som administ- rerats enbart eller tillsammans med föreningarna enligt uppfin- ningen.

Utgående från i tabell 1 angivna resultat framgår, att vid den testade dosen (10 mg/kg intra-peritionealt) potentierar pro- dukterna aktiviteten för morfin upp till, för de flesta aktiva produkter, en aktivitet av ungefär tre gånger aktiviteten för en- bart morfin. 1: .___ ..__« ___. .___« _... ___ n __.. __._« ..._ _.. n .___ ..._ u _.._ _.. q .___ _.-. . _ 1: ..._ __. u .___ ____« .___ .___ q .___ ___. q ___. ..._« _... .___ u ___. __.. u __.. __-. . _ «|. .___ ..__« __.. .___n ___. __. q _... ___ Q _... .__ n ___. ..._ « .___ _... w _... __-. . _ zu ___. ____~ ..._ __._« _... ..._ q ..._ ___. n ..._ .___« .___ __.. « ___. .___ «._.. ..._ . _ nu _... _.._« ___. ..__« .___ ..._ u __._ ..._ u __.. _.. n ..._ ..._ u .___ ___. q .___ __-. . _ ___ .___ __. n .___ .___« ___. ..._ « __.. _... q .___ ____« .___ ___. « .___ .___ n .___ __.. . _ _... ._._« .___ _.__~ ___. .___ w .___ _... u .___ ___ n _.__ .___ n .___ .___ u _... __-. . _ .___ ___." __.. .___fl _.__ .___ q ___. ___ « ..._ _.._« .___ __. q _... ___. q ..._ __.. . _ ..._ _.__~ _... _.__~ .___ ___ Q ___. ___ q .___ ___." ..._ .___ « .___ ___. « ___. .._-_ . _ _... _.__« .___ ____~ _.._ ..._ n .___ __.. q _.__ ..__n ___. ___. u ..._ .__ n ___. ..._ . _ __.. .___« .___ ___.. ___. .___ w _.__ ..._ u ..._ ..__n _.__ ..._ w ___. .___ u _... __-. . _ _ .___ ..__@ .___ ..m__« .___ .__ « ___. _.. u .___ _.__« ..._ .___ N ___. .__ u ___. ..-_ . _ _ __”. _m. H .Û__ ____m ..._ .___ m ____ .___ m .___ _.__m .___ ..._ u .___ .___ m .___ __-. . _ _ ._ _ _ __. _ ._ _ __. __.. ._~_ . .___ ..._ . ..._ __... .___ .___ « ..._ .___ . _.__ .-_ . _ .___ ___.. .___ __._« ..._ .___ q ..._ .___ n .___ .___« ..._ .___ n .___ _.._ q ..._ _-. . _ nu ___. _.. w ___. __. q ___. ___ « .__. __.. « ___. ..._« _... ___. « ___. .___ q ..._ ..-_ . _ ._m. _.._» .___ __... _... .___ q _... ___. n .___ ...__ _... ___ ~ ___. ___ u _... _-. . _ .___ ___.. .___ ._._~ ___. ___. « .___ ___. u .___ ____« _.._ ___. n .___ ..._ N _... _-. . _ _. _ _.__~ ___. ___." ___. ..._ « ..._ .___ n _... .___« .___ ..._ fl._.__ .__ u _... _-. . _ ...__ _.__~ .___ _.__fl __.. ..._ n _... ____.« .___ ...__ _... .___ u .___ .___ « ___. _-. . _ ___. ___.. .___ __..« _.__ ___. « ..._ .___ q ___. ..__« _.._ .___ _ _... ..._ « .___ _-. . _ .___ ___ m ___. _.__« ..._ .___ « ..._ ..._ q .___ ..__« .___ .___ « ..._ .___ « .___ _-. . _ _ ___.. ..._ _.__« ___- .___ 1 .___ .___ u .___ _.__u ___. ..._ « _.__ _... « ..._ ___ nflwuoz nflwwmm ___ w _... .__ w ..._ _.. u ___. _... . ___- ___ u ___. _.. n _... _.. n ___.. Hfiouucox .ëo wa gflvmh I . ÜCHH U o I . m _m åfiw __ ___. .___ _.. ...___ _. cd.. ___ nä.. __ ___... __. __.É____~ cd.. ___ m2. .|m=ø»øm _ F .HAHQÉB 18 503111 ___~ __ N ..._ __ « _._. _ _ __ _ _ ___ ..._ ..._ __ _ __.. ._ _ ___. __-. ._ www ä. w__.._... .___ ._ “H3 .___ m....__.. ._._. .w __.._._. _» __ _.__w___ __ Sv.. .___ .w H _._. o_.~ ._ H _._. _ u _._. _ fl..__ __ q _._.. . q _._. _ n .___ __ « .___ __-.. _ ___~ __ n ..._ .__ q _... __ »_._. ._ q ..._ __ n _._. __ u .___ __ « ____ __-.. _ __._ __ H .._. _ « _.._ __ «_.__ ._ « _._. __ ~._q_. _ .N .___ __ n .___ __-.. _ m@_~ ._ u _._. ___ n _._. . _.. «_._. _._ u _._. _ u _._. _ n _____ _ u _._. ..-.. _ m... ._ m _.__ . ._ m _... __ m_._. ._ u ..._ __ _ _._. _ q ___. ._ « _._. _.-_. _ ___. __ . _._. ._ . _._. __.._.__ __.« _._. __ u _.__ ._ w ___. ._ « ..._ _.-.. _ o___ __ u ..__ __ n _.__ __ «_.__ __ n _.__ _ .M _.__ ._ u ___.. _ «._.._ ..-_. _ ~w_~ __ u _... _ q ..._ __ fl_.__ _ u _._. . u _._. ___ u ___. ._ u _._. _.-_. _ .___ __ w _.__ _ w ..._ __ «_.__ _ ._ u ..._ __ n ..._ _ « .___ __ « ___ - ..-.. _ .___ __ m _._. __ u _.__ __.«_._. __ u ..._ __ n ..._ __ n ._.. __ n ..._ _.-_. _ .___ __ n _.._ .__ n ..._ __ «_.__ __ n _... ._ «._.__ ._ w .___ __ n _... _.-_. _ o___ __ . .___ .__ « .._ . ._ «_.__ __ _ _._. __ n _._. __ n ___@ ._ _ .___ _.-_. _ ___~ ._ m _... ._ w _._. __ «_.._ _ u _._. __ « _._. ._ q ___. __ n ___. _.-_. _ .___ __ . _._. __ u _._. _ fl_.__ _ u ..._ _ n _._. _ .u _.___ __ w _... ._-_. _ ..._ __ m ..._ ._ _ _._. _ __... _. n _._. _ « _._. __ n ___. __ _ .___ ._-_. _ _~__ __ H ..._ __ n .___ . __|...__ __ Q _.__ __ u _._. __ n _._. __ q .___ __-.. _ ___~ __ U _._. __ « _._. _ n_._. __ N _._. _ q _... _ n _.___ __ « _.. ._-_. _ __._ __ . _... __ « ..._ __ "_._. __ u ___. ._ «._.__ __ « ___. __ « .___ ._-_. _ _o_~ __ m _._. __ w _.__ __ u _. __ u ._._. __ u _._. __ « __ __ « ..._ ._-_. _ ___. ._ U ..._ __ u _._.. __ "_._. ._ « ___. __ H _... ._ n .___ .__ q _._ - __-.. _ .___ __ U _... __ _ _._. __ «..__ _. _ »_.___ _ __ _ ___. __ n ..._ _ _ .___ __-.. _ _._. __ H ..._ __ n _... __ «..__ __ w ___. _ __ u _... __ n ___. __ q ..._ __-.. _ .___ __/H _._. . _ « _.___ _ « ___ _ u ___. __. « _._. _ _ _.___ ._ _ ..._ ._-_. _ ___. __ . .___ ._ « ___ __ «___. ._ « _.__ __ « .___. _.__ _ .___ __ « _._. __-.. _ _æ__ __ m ____ __ m .___ __ «__._ __ u .___ __ _ __.. __ « __.. __ « .___ ._-_. _ =_wuma __ . ..._ . __ . ___- __ . __. ._ . _._. __ . ___. __. . __.. _ . .___ __. :_w~0z ~mw@W_._. u __.. __. u ..._ ___ n ___. .___ w __.- __. w .___ __. u .___ __. H ____. __oH»:om UQS . .m flfi___.___..___ _ _ GE.. Se _. S... _. 5... __ :_.___ å.. __ . muuow _ _. AAMQÉH o _ ~ ' 'E gg _§å2 *~ -I - on 1: ro 1: 1: ru r- oo oo ou 1: ao g ag IB f~ oo en oo - 1: o~ oo fn en oo ø~ ø~ fo mm -.'H-' _' O» _ _ _ _ _ _ _ _ _ __ o. .- Ü J: L5' 9* - -_ ru oo 11 ru av fw - - - oo - to ß .mg âw .i , uu <9 1: _- on - vn oo fn J 1: U: «w 1: ro vn VI Ir N _ _ O 1 o o o o o - o o o o °| -I - os -.v~ 0 on oo en - o~ fw -o on - ru _ _ o- _ IH _ _ N. _ _ N _ _ N O O' o' o| o' o' o' o' o' o' o. o| o| o| o| o| o| o| G3 - 1: on 1: < -0 wo uw on en 1: ao r~ - 1: - _ fi _ _ o o o - o o o o o o o o _ O In _ -ø O u' O _ O .y _ N O In O oo UI CD UH UH H- Ib oß u: I G: -0 oß -r n- 1% o: It O O O O O O O O O O O O O _, _ _ o o o o o o o o o n o o'o N -r O O H _ O O O _ I» av N N _ O Go _ (N _ _ _ _ _ _ _ G, 'I °I 'I *I 'I 'I *I *I 'I °l °l *I °l 'I *I °| O N O e Ia PI O .n Ia O .n N o fi O -r oi _ O g o o o o o o o o o o I o o O In O -r O _ N N .n m O N O o: In N_ .n N N n J! O O _: N N v. N N O N G3 CD G3 G3 G3 G3 GI G3 GD-G3 GD Gå GD G3 GI <3 5 N _ ä o o o o o o o o o o o o O O N N vn O O O O _ u _ o: N -n -r _ _ N _ _ _ IQ _ N _ _ _ 1: °l 'I *I *I °l 'I °I 'I 'I °I *I *I 'I *I 'I 'I G O O O N H O In O In O H O en nn O N 3 _ _ _ o o o o o o o o o o o o N -r en N O O In O N -r In O N ~r N O N N -r O O O en n O N -r O In O -r O _ GD GI GD G3 GD GB <5 GI G3 GI GD GI GB GD GB O _ _ O _ O I o 0 O I O I l I 0 O O N In O -o O O O o: -t PI O In In N IV _ _ _ _ _ N _ _ _ _ *I *I 0 *l °l *l *I OI °I OI °l OI OI *I OI °| I IH G1 1: av oo 1: ~r oo 1: 01 1: om fu r~ 1: o~ oo o' _ _ _ _ o. o o o o o o o o o o o O O _ _ .n O O O In O .r n N n N N O O III N O O O In O av o: N on N O O _ TABELL 1, fOrtS GD G) GB GD GB GD GD ID G5 G3 G3 G3 G3 GD <3 GI _ L I _ l O O _ I I O C I I O Q ä PI Fl _ O Ö of Ö of UI Ö lfl N G IN I _ _ _ IM _ N _ _ _ Q] o| 0] o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| GD oo en on ø~ oo '1: 1» 1: få ra oo on -r on I: oo PI _ _ _ _ o. _ _ _ _ _ o o o o o o O 6 o- G O Ö Û O Q lfl 3 O _ Ö G of G1 GI lo ID oh Gh on 13 ch th M5 fl~ oo I~ u! fx -o - 20 G, G5 CB GD CI G) C' G5 GB GI GB GD CI GB GB G3 _§_N_O__________ UIIHPQÖIHÖINFIFIISFIOQOOÖ ___fq_ _ N-o __fio o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| o| Q CN Ö Fl o! Ö _ 3 I I! I Û Gi-Ö O Fl L O _ O O Ä O _ ON Q N O O O O 3 '_ CI Ö III O G O! of! h! of! G G o' Ö O or IB -r ID I: GD GH ro ch ch -I of ofi Fo U1 .- l0min <3 q, gg 1: 1: 1: en 1: 1: ca 1: 1: 1: 1: 1: 1: _-._O___O__or____ ÜÛÛÉIN 'o| o| o| o| o| o| og o' og o| og o| o| o| o; o| _FDNOII"IÖI'IOÖNP¥OÖIHOIH OOOÉLLOOOOO 05 ID II GI fo dä U! 01 fu fu -_ o- Gb ID o- oä P1 o: uw ufi oo ro oo o: r~ f~ FI P1 oo oo ~I to Tid Behandling' IH J oh O N O _ IN IN N N N _ N F! J Ifl O N O O» _ _- I I I I I I I I I I I I I I I I ha oø' tå LJ L) C: G: GD GJ G3 Cl CI G3 CJ då G3 O O O O O O 0 O O O O O O O O O I K I I I I I I B I I I I Z I I o _ O __ 20 SIDI5 1 1 1 o... ._ u t.. . u .___ __ ._ _... _. ..., ... __ u __.. _ ... ._.. ._ ... .... __-. . __ ...... ._ . _... __. n ...... ... q __... ._ ...... 2.3... ._ n .... _.. n _... ..-__ . ._ S.. __ H ...å .. ......I ._ m. t.. 2 ...... 3.3... ._ ... _... ._ u ...... ..-__ . ._ ...J ._ H __... ... ... ...._ .. . . _... ._ ...._ ._ ä... _... ...... ._ ... __... ..-__ . ._ ___... _: u. ...... ._ w ...... ._ . ...._ __. ......... 2 ...... ._ q 2 . ... _.. ..-__ . ._ ......N 3 . . _. _. . _... ._ . ..._ _. _. ... ._ a ... ._ ... ...2 2 ... t.. ..-._ . ._ 5.3... . . . _... m2. wmj .mcflfiwcmzmj . musa. n . åmnumw ......... __ 5.... 5... ... ......... ......... 5.... 5... ._ »mäuofl | . . . ......_ muuOM .P AQWm 10 15 20 25 30 35 40 21 sus 111 §§r§§k_§umm§§_2: Test med varm platta.

Den använda metoden är den, som beskrives av Eddyetal (J Pharmac EXp Ther, 107, 385 (1953)).

Grupper om fem råttor av hankön används med en vikt av ungefär 150 g, vilka icke fastat.

Djuren placeras på en metallplatta på botten av en trans- parent cylinder, som upphettas till 55°C I 1°C medelst en azeot- ropt kokande blandning (aceton-etylformat 1:1).

Reaktionstiden definieras som det intervall, somgmsserar mellan det ögonblick, vid vilket djuret placeras på den varma plattan och det ögonblick, vid vilket djuret antingen slickar sina fötter eller försöker hoppa ut från cylindern. Kontrollreak- tionstiden bestämmes 10 och 5 min före administrering av läke- medlen och 10, 20, 30, 45, 60 och 90 min efteråt. Djuren kvar- hålles på plattan under en maximal tidsperiod av 30 sek.

Responsen på administreringen produkten anses positiv om åtminstone en dubblering av den normala reaktionstiden uppmärk- sammas. De erhållna resultaten återfinns i tabellerna 2a och 2b, som upptar de behandlade grupperna, de administrerade doserna och uppehållstiderna på plattan uttryckta som antalet positiva res- pons jämfört med det behandlade antalet.

TABELL 2a Förmåga hos åtskilliga föreningar enligt uppfinningen att poten- tiera aktiviteten för analgetika medelst testet med varm platta.

Behandling oss 10 -zo so 45 so so ”halt P°' sitnnare- mg/kg i.p. min min min min min min spons x/30 Propoxifen (Pr.) 15 2/5 2/5 3/5 3/5 1/5 3/5 12 Pr + förening C-20 15+1(C-20) 2/5 2/5 3/5 3/5 3/5 3/5 16 Pr + förening C-20 15+3 " 3/5 5/5 4/5 5/5 4/5 4/5 25 Pr + förening C-20 15+10 " 4/5 5/5 5/5 5/5 5/5 3/5 27 Oxifenylbutazon (oxi) 50 2/5 1/5 2/5 2/5 0/5 0/5 7 50+3(D-2) 2/5 1/5 2/5 3/5 3/5 1/5 12 50+10(D-2) 1/5 1/5 3/5 3/5 2/5 2/5 12 50+30 " 3/5 4/5 4/5 4/5 4/5 4/5 23 Oxi + förening D-2 Oxi + förening D-2 Oxi + förening D-2 Aoetylsalicylsyra (ASA) 100 1/5 2/5 2/5 2/5 0/5 1/5 8 Asa + förening C-20 100+5(C-20) 2/5 2/5 2/5 3/5 3/5 0/5 12 100+20(CP20)1/5 3/5 3/5 3/5 4/5 3/5 17 100+50 " 3/5 2/5 5/5 5/5 4/5 3/5 22 Asa + förening C-20 Asa + förening C-20 10 15 20 25 30 35 40 503111 22 Utgående från resultaten i tabellen framgår, att även vid doser av 3 mg/kg i.p. kan föreningen C-20 dubblera den analgetiska aktiviteten för propoxifen. Det föreligger i praktiken en maxi- mal effekt vid en dos av 10 mg/kg i.p.

TABELL 2b Behandling Dos 1o zo 3o 45 so 90 ä; mg/kg i.p. min min min min min min gxxs x/30 Propoxifen (Prop) 10 1/5 2/5 2/5 2/5 1/5 0/5 8 Prop + förening C-30 10+0,3(C-3012/5 1/5 3/5 3/5 2/5 0/5 11 Prop + förening C-30 10+1 (C-30) 3/5 4/5 4/5 4/5 2/5 2/5 19 Prop + förening C-30 10+3 " 3/5 5/5 5/5 5/5 4/5 3/5 25 Metadon (Met) 1 1/5 2/5 1/5 2/5 1/5 1/5 8 Met + förening C-36 1+0,3 (C-36) 2/5 2/5 3/5 3/5 1/5 1/5 2 Met + förening C-36 1+1 (C-36) 3/5 5/5 4/5 3/5 3/5 1/5 19 Met + förening C-36 1+3 " 5/5 5/5 3/5 4/5 5/5 2/5 24 Oxifenylbutazon (oxi) 50 2/5 1/5 2/5 2/5 O/5 0/5 7 Oxi + förening C-30 50+3 (C-30) 1/5 1/5 3/5 2/5 2/5 2/5 11 Oxi + förening C-30 50+10 " 1/5 2/5 2/5 3/5 3/5 2/5 12 Oxi + förening C-30 50+30 " 2/5 3/5 4/5 4/5 4/5 3/5 20 Aoeqflsaln3dsyra'GSA) Asa + förening C-36 100 1/5 2/5 2/5 2/5 0/5 1/5 8 ASa + förening C-36 100+10(C-36)1/5 2/5 3/5 2/5 1/5 1/5 10 Asa + förening C-36 100+30 " 1/5 2/5 2/5 3/5 3/5 3/5 14 Asa + förening C-36 100H00 K>36)3/5 3/5 4/5 4/5 4/5 2/5 20 Av resultaten i tabell 2b framgår, att av 1 mg/kg i.p. av föreningarna i fråga är i dubblera den analgetiska aktiviteten för propoxifen och metadon. till och med doser stånd till att minst För att öka den analgetiska aktiviteten för icke-narkotiska läkemedel är högre doser av läkemedlen enligt uppfinningen nöd- vändiga och signifikansen är allmänt jämförbar vid de högre do- Seffla. §§§§§k_ggmmg§_§¿ Inverkan av åtskilliga av föreningarna enligt uppfinningen på de analgetiska aktiviteterna för endogena opiater åstadkomna medelst transkutanchock på råttor och bestämda medelst svanssnärttestet.

Den använda metoden är den, som beskrives av Lewis et al, J Neurosc, 1, 358 (1961). Råttor av hankön används, som icke fas- 23 503 111 tat och som har en vikt av ungefär 200 g.

Djuren stressas genom anbringande av en 60 Hz-2,5 mA ström på frambenen i pulser med en duration av 1 sek var femte sekund under 20 min.

Denna stressbehandling inducerar frigörandet av endogena opiater. Omedelbart efter den elektriska stimuleringen underkas- tas djuren svanssnärttestet vid tidpunkter, som visas i tabellen. 10 15 20 25 30 35 Föreningarna administreras intravenöst (i.v.) omedelbart före den elektriska chocken i doser, TABELL 3 som anges i tabell 3.

Medellatens (i sek) bestämd medelst svanssnärttestet vid olika tidpunkter (min) från den elektriska chocken (medelvärden för grupper om fem djur I ES).

Behandling Tid Dos mg/kg iv 5 min 10 min 15 min A: xenrreil - -2,sa:0,11 3,o4:o,29 2,7o:o,27 s: xenrmu stressade - s,1eio,23 ,3,9sIo,2o3 3,1o:o,19 r v. A 8,74 (***) 2,54 (*) 1,073 C: Förening C-20 + stress 1 7,sIo,3 s,34Io,46 3,aa=o,29 r v. A 11,18 (***) 4,21 (**) 2,79 (*) r v. B 6,03 (***),2,s7 2,20 D: Förening C-20 . ' å + stress 3 8,4aIo,62 É6,42io,21 4,98:o,36 c v. A 8,81 (***)É9,23 (***) 4,92 (**) r v. B 4,97 (**) *s,77 (***) 3 4,0 (**) E: Förening D-2 É + stress 1 9,2io,s3 §7,o:o,s6 J s,zaIo,64 r v.A 1o,5o (***);4,42 (**) ' 3,59 (**) 6,94 (***)[3,49 (**) 3,22 (*) F: Förening D-2 + stress 3 9,sIo,46 ;7,24io,ss s,os:o,s2 t v. A 12,42 (***)fe,3a (***) 3,97 (**) c v. B 8,47 (**) {s,29 (**) i 3,57 (**) Anm; (*) P < o,os (**) P < 0,01 (***) P < 0,001 10 15 20 25 30 35 5()3 1 11 24 TABELL 3 forts, Behandling Dos 5 min 10 min 15 min mg/kg iv G: Förening C-30 + stress 1 7,26 I 0,52 6,10 I 0,49 4,68 I 0,5 t v. A 8,11*** 5,34** 3,10** t v. B 3,64** 3,97** 2,67* H: Förening C-30 + stress 3 9,46 1 0,64 7,96 I 0,61 6,82 t 0,78 t v. A 10,06*** 7,22*** 4,95** t v. B 6,28*** 6,14*** 4,65** I: Förening C-34 + stress 1 5,40 1 0,35 4,9 i 0,25 _3,4 i 0,16 t v, A 7,05*** 4,80** 2.24 t v. B 0,76 2,82* 1,44 L: Förening C-34 + stress 3 6,56 5 0,33 5,58 + 0,31 3,98 + 0,32 t v. A 7,11*** 5,92*** 2,92* t v. 8 3,4s** 4,26** 2,36* M: Förening C-36 + stress 1 6,9 I 0.74 6,5 I 0,42 4,66 I 0,55 t v. A 5,34*** 6,72*** 2,92* t v. 8 3,31** 5,36*** 2,48* N: Förening C-36 + stress 3 9,22 I 0,67 8,1 § 0,43 9,28 I 0,64 t v. A 7,70*** 9,84*** 9,30*** t v. 8 5,66*** 8,74*** 9,18*** O: Förening C-39 + stress 1 6,3 I 0,4 5,8 I 0,38 4,04 i 0,36 t v. A 8,21*** 5,72*** 2,85* t v. B 2,46 4,18* 2,30 P: Förening C-39 + stress 3 7,54 i 0,65 5,98 I 0,41 5,08 : 0,6 t v. A 5,o5*** 5,55*** 3,51** t v.1ß 4,43** 4,43** 3,12* Q: Förening D-17 + stress 1 6,18 I 0,65 7,02 I 0.76 5,31 r 0,55 t v. A 4,97** 4,90** 4,16** t v. B 1,47 3,89** 3,79** 10 15 20 25 30 35 25 503 111 TABELL 3, forts Behandling bas 5 min 10 min 15 min mg/kg iv R: Förening D-17 + stress 3 9,08 I 0,55 9,08 3 0:80 ,6,08 I 0,98 t v. A 1o,96*** 7,02*** 3,28* t v. B e,s2*** 6,14*** 2,99* Anm: I*): (P > 0,05) (**)= (P > 0,01) (***)= (P > 0,001) Av tabellen framgår, att även vid doser av 1 mg/kg kan före- ningarna enligt uppfinningen öka den analgetiska aktiviteten för endogena enkefaliner vanligtvis i en väsentligt markant utsträck- ning: denna ökning är dosberoende, varvid effekten faktiskt ökar i både intensitet och varaktighet i beroende av dosen. §§r§§k_ggmm§r_g¿ Potentiering av de analgetiska aktiviteterna för enkefaliner inducerad av vissa av föreningarna enligt uppfinningen.

För att kontrollera en av de möjliga mekanismerna för ver- kan av föreningarna enligt uppfinningen, dvs deras eventuella hämning av den enzymatiska nedbrytningen av endogena enkefaliner genomfördes följande försök: en kanyl implanterades i den högra laterala ventrikeln hos råttor av hankön med en vikt av 150-200 g (grupper av fem djur användes) för att medge den intracerebro- ventrikulära (i.c.v.) administreringen av läkemedel i enlighet med metoden enligt Noble et al (Life Science 6, (1970) 281-191).

Djuren behandlades därefter (i.c.v.) med 3 pg D-ala-metio- ninenkefalinamid (DALA) omedelbart efter en injektion (i.c.v.) av föreningarna i fråga i doser, som anges i tabell 4. Analgesi testades medelst det redan ovan beskriva svanssnärttestet vid de tidpunkter, som anges i tabellen.

Utgående från uppgifterna i tabellen kan man iaktta den po- tentierande verkan för de testade komponenterna avseende den anal- getiska effekten av enkefalinamid (DALA) både i intensitet och varaktighet.

Denna aktivitet, som är ytterst signifikant även i doser av 0,01 ug/kg, beror troligtvis på en hämmande verkan på ett enzym (eller enzymer), som är ansvarigt eller ansvariga för enke- falinernas metabolism. 26 5[)3 1 11 _ @w.m ~ - Q um. .> æ.m o.m~ @.@H <.mH |°.w~ |@.m~ n.@~ mcflcwunm 1..« mm.m Hm.°« fl~.w~ H~.mm +m.m~ +@.~m +~.~m +~.@~ H°.°+.n.°H + "< .> m°_~ N 1 Q nm .> m.«H |H.@ |~.m |«.mH |@.H~ |~_w~ |~.«~ m=«=w»nm ... mm_m +v.m~ +m_~ +m.m« +°_«m +m.«m ~°°.°+.Q.°~ + "< .> _ ~«.~ ON | u um. .> |~.H~ |@_m |@_o~ |«.@~ |~.- |ß.@~ |~.« mcflcwumm ... o_m +~.H« +~.wH +~_m« +«.m« +H.«@ +m.~@ +m.wH H°_°+.o.°~ + "< .> ~>.o ON 1 U um .> |@“- Mum |~_ß |~.m | qfi |@.m. |«.« m=fl=@»@m «« o~.« +H «~ + Nß +m.«~ +H.°~ +m.- +w.«« +~.m ~o°.°+.Q,oH + n .> ... ~°.m 10.» |ß~m |-> |~.m~ |@_@H |~.m~ |°.o~ "< .> +~.wH +°.m +~.> +°.w~ +~_w~ +m.m~ +m.- ofi _Q. |-~ |o.m |m.m 1°.m |m_« |~.m |m.< - +°.~- +H.H| +°.~| +~_«| +m.o +~.° +~.~| | Hfiouuqom < ~wHw> qfle cfle cfie cfla =«a cfie ^>uH.mx\w:\ PL«wwQhå5w% mflmwwz om om mv cm om .od IIfL%fiI|||@@ï| mcflflflcmnmw mmøuw >N .uouuwu mon umumwuuum:mm:m>m umflmwwñ wëmummn cmmcflccflumms umflficm ummcficmunu mmflfififixmuw umuwosflcfi mama Hmm cwumufl>fiuxm mxmfiuwmflmcm :mv fl mcflcxn v Aåflmflë 5()3 1 11 27 -oo.o v m ^«««.

Fo.o v N ^««v m°.° V Q .«. “e=< _ mm - Q “«««.» m 1 ß-@ |mm.m |o@_~H |mm.mH |~w.- |~«.@H |m@.~ wcflcwumm ..« m~.m +mm.m« +~@.°~ +°°.@~ +~_.m~ +~H-m +@m.°~ +~@_mm ~°.°+_n,°H + “< .> W ._41 mN-ß ~ mm. I O nm .> | H OH mm_@H mm~mH -.«H H@.mH °_m~ ~.«H mcfinøußm ... ~_@ +mH.@~ H««.m~ fl~@.~m H@@.m~ Hm.@~ fl@.mm H~.~« ~=.°+^Q.QH + “Q .> .«. o.HH om - U Nm .> ||m.«~ |~.@~ w«.@ |«.@ m.@ °.wH |~.m_ wcflqwumm .«« @.HH +w~.m> +H_mm +~.~@ +~.~@ +°_@@ +@.~@ +H.mm H°_°+.Qv°H + "m .> *«. w.oH om I U um .> | ~.HH |~.HH |m.@~ |@.~H |~_@H |~.«H |~.m~ m=fi=w~@@ .«. m.H~ +m~.mm +°.m« +@.@« +«.@@ +°.~> +@.°w + mm H°.°+.Q.oH + um .> . æ°.m w~.~ |>@.m |Q@.~ |m@.H |~m.~ 1 °.« m@.w "< .> +Hm.~_ +@m.oH +°~.@ +m~.@ +mH.m +«~.w +H.« OH An. |m°.~ |m~.~ |H<.« |°m.~ |~«.« |m@.@ |m«.m | +~@.~ +fim.« +H~.« +@w_« +m«.~ +«w.m +æw.o - fifiouunox << w@~m> =«e =fls nfie cfie afls =«e ^>uHv@x\@e mom U mvcwwuuw -fimuwz cm ow mq om ON OH øfia maflfiunßnmm mmfluø muHOw _v flqmmáñ 10 15 20 503 111 za §§r§§k_nummgr_§¿ Antagonism hos åtskilliga produkter enligt upp- finningen mot utvecklingen av tolerans inducerad på råttor genom upprepad administrering av morfin-HCI. Åtskilliga av föreningarna enligt uppfinningen undersöktes för att bestämma deras eventuella förmåga att verka antagonis- tiskt mot utvecklingen av tolerans inducerad av morfin. Grupper om sex råttor av hankön med en vikt av ungefär 200-250 g anvätks.

I intervaller om 24 h från den första behandlingen (tid O) erhöll varje djur (utom kontrollgruppen, som behandlades fysio- logiskt) 5 mg/kg morfinväteklorid intra-peritonealt tillsammans med 10 mg/kg intraperitonealt av de angivna föreningarna (med undantag av den grupp, som endast behandlades med morfin).

Bestämningen av smärttröskeln genomfördes 15 min, 30 min, 45 min och 60 min från behandlingen medelst svanssnärttestet.

De resultat, som anges i tabell 5, hänför sig till medel- värden av dessa fyra bestämningar och visar variationerna i % i latenstiden (uppträdande av smärta) före och efter behandling med läkemedlen.

Tabellen ger även värden på "Student's t" bestämda vid olika tidpunkter för de grupper, somkæhandlatsmæd läkemedlen i jämförelse med kontrollgruppen och gruppen behandlad med morfin. 503111 29 få... u u . ä... u ä 2.8 + ._ . ä... u u 318.» .:.+ msn mïâ 9.8 3.2 3.2 3.3 9.:... 2.2 ...E ..._\wš.w=.=uäf. ä tia... u u. 33. u b ä... + ._ så... u u fiäfiu A2. + owuu min. h ä. . S... .F 3.3 S. m :f 2.2 3.8 SJ. mv_\w_s.w._fiöu_n.. ä Huuuumwuwmuflufiwflwwuauufiufiluuufiuuflflwwwmfluwumuflwfiummw.uuuuuuuuuufiruuu .:~+ men 2.9 RÅ 8.2 26... T 2.3 3.2 8.9.1. ä... 9_\Fs._.fizwuümf. ö uL uuuuuruuuuufi -luuuä uüfläuunuuuunuuuunu uuuuuuuuvu fuä... u u . ä... u .c 2.9. + n .Små u u .ëufiu Så ...m ä... ä.. 8.. 2.5 å... CMA.-- š. + H~2~ Hmm... nä.. Hmßá. +21... Hxïä HSJ.. Hmošm mi? m fifio... ä 82 E... u u. ._ ...o u ä ma... + _. áqooá.. u. .qmwwwww 8.. N... Q... 8.. ä.. w... å.. o...

Nä? flä.. (S: Mä; +21. H21... nä... ammo.- u ...o..n.=o... ë å.. å! šN. å. å. å.. ä... o m. mi? ...Eufim :BB ED E» 3. En. 3» BB 3.... m8 .HUm|:«uuoE >m cmmcflumuumflcfläum wvmmwu 'IIIIIII m AAWQQB 30 505111 lä l|||l| fifilfllfifllflnllflflflfl L! IIIINHNIIHÜ mås 12.... ...RJ .SJ ä; 8.... 8.~ SJ .. m .> » ...Lâwnw ...Så tå... ...S6 IQ... 28:.. ...SJ tim... ...N23 1 < .> p wbänfim OJNH xïSH :å H ñüH ñflH Qm-H .ÉH ...m H .å + .züuoe + SJ» 8.3 åxå mïâ mms... S6... 2.8 5.3 vån.. S - Sö onum%m.m ä: I. ...in E: ...S6 ...mä 23:. .Imfim | _... .> » mbâußw S» H EJH $áH S... H 8:. H ñflH QSH ~.ZH E. + NIN ä; mi.. 2.2 3.2 3.3 8.2 .sä EE m 538.5.

H MHN _ h fififl Iliflnulflüfl uNHNUflUNNUUN. 8; H ä; H wmJH .ÉH RJH EJH 8:H .JH w E... | 8: S: å; S: S; å... 2.? | .Hohfiäx 2 å... .i _ m w E» n E+» ämm» ._ www? säu? nav? ...vwwu vf fi Mmm Sdëßnwm muuow .m qqmmæs 503111. 31 muu0m xm AAWNQB QCNflOfiNNQOÅwCOfiUMHQHHOM u NU .Eko u .d 2.3 + z x mål? »wïšfiñ u u mmfiw Små u .d 212. + a x ïmåu »wïåfiï u m mmsxø âwé u nu. 3.3 + n x _26.. »wfišfixm u m mmsxo .QS u xu. 2.3 + n x 02.0: »mfiåfiä u n mmsuo STC u xu. 2.2 + z x 2,51 »wfiåuxm u u mmxñw Små u xu. S13 + n x .Småu 333%? u m mmxüo "uowcflflmcofimwmumwu mxmu mflmcxmuwm APoo_o v mv »^«««.

~Po.o v mv ~^««~ S06 v u: lt "så uwmufimuw... .muuluuuui Hälñfimuwuimumï u. u. - u u, »_ mhäušm uuâ... .zurmš :zwïw .zlvïfi ...SJ :zæïü ..._35 .. < .> u Pëwwsm Såfl QJH Sto-H mmšfl ...SH mån üâfl E. + .äwuos + 2.2 3.5 3.3 8.3 5.8 Rim. Nää 39. 2 :Tu väöumx ö nä: 53+ :SI .æï ä? š~+ Q å nå? mñäxafiwm 3» øfl EB 3» -ES EB BB won 10 15 20 25 30 503 111 32 Utgående från i tabell 5 angivna uppgifter och från de framräknade raka regressionslinjerna framgår, att från den tredje behandlingen fram till försökets slut var grupperna C-G markant mer aktiva än gruppen B, som behandlats endast med morfin.

Vidare, efter den femte behandlingen, skilde sig morfin- gruppen icke markant från kontrollgruppen, medan grupperna C-G bibehöll markant aktivitet fiämfört med kontrollgruppen fram till den slutliga behandlingen efter 168 h.

Från beräkningen av de raka regressionslinjerna framgår även att medan aktiviteten för morfingruppen minskade till noll på den sjätte behandlingsdagen uppnådde behandlingsgrupperna C- G nivån för inaktivitet mellan den nionde och sextonde dagen.

Anti-CCK-aktiviteten, den antispastiska aktiviteten, och den choleretiska aktiviteten för föreningarna enligt uppfinningen, kommer nu att åskådliggöras.

Anti-CCK-aktivitet på gallblåsor från marsvin in vitro En längsgående remsa av gallblåsa från marsvin placerades i bad för isolerade organ i närvaro av Krebs vid en temperatur av 32°C med kontinuerlig syrsättning med en blandning av syre och C02 (95-5V/V).

De isometriska sammandragningarna detekterades medelst en krafttransduktor och upptecknades.

Gallblåsan bragtes att sammandra 10 ng/ml koncentration av CCK-8; den antagonistiska aktiviteten hos föreningarna enligt uppfinningen på den sammandragande effek-_ ten av CCK bestämdes med användning av olika koncentrationer och ED50-värdet, dvs koncentrationen i pg/ml av en förening, som kunde motverka50% av den sammandragande effekten av CCK, bestämdes.

De erhållna resultaten återfinns i nedanstående tabell, sig med användning av en som upptar de testade föreningarna och ED50-värdena, som fram- räknades medelst regressionsmetoden från ett test av minst tre försök för varje undersökt förening.

TABELL 6 lg yitrg anti-CCK-8-aktivitet för föreningarna enligt uppfin- ningen (använd koncentration - 10 ng/ml) på gallblåsor från mar- svin, uttryckt søm EDSO i yg/ml.

Förening Aktivitet Förening Aktivitet ED50 C449/ml) EDen~(ßßq/ml) Förening c-1 >200 Förening c-20 >200 " c-2 >2oo " c-21 >2oo " c-3 34,4 " c-22 >2oo " C-4 1,1 " c-23 >2oo - " c-s 4,2 " c-24 >200 " c-6 0,33 " c-25 30,3 “ c-7 0,06 " c-26 146,5 " c-s 0,93 " c-27 10,2 " c-9 7,40 " 0-1 >2oo " c-10 43,7 " 0-2 >2oo " c-11 0,85 " D-3 >200 " c-12 64,7 " 0-4 >2oo “ c-13 >200 " 0-5 2200 “ c-14 110,4 " 0-6 >200 " c-15 >200 " 0-7 >200 " c-16 >200 “ 0-8 >2oo " c-17 >2oo " D-9 >e00 " C-18 60,3 " 0-10 7200 " c-19 >2oo " 0-11 >200 " c-28 >30o " c-36 13,4 “ c-29 262 " c-42 50,1 " c-30 33,5 " c-47 35,1 " c-31 22,9 " c-48 119,1 " c-32 >3oo " 'D-12 >3oo " c-33 131,7 " 0-15 245,0 " c-34 40,1 " D-17 >300 " c-35 367,1 " c-54 1,2 " c-ss 0,5 10 15 20 25 505 111 34 Av tabellen framgår, att föreningarna enligt uppfinningen motverkar 50% av aktiviteten för CCK-8 i en koncentration, vilken, för de mera aktiva föreningarna (såsom exempelvis föreningen C- 7), är endast ungefär tio gånger större än koncentrationen för den specifika antagonisten, vilket således visar en utomordentlig verkansspecificitet.

För att bekräfta resultaten från studierna in vitro testa- des åtskilliga av de mera intressanta föreningarna in yiyg på gallblåsa från marsvin in situ.

Den metod, som användes, är den, som beskrives av Ljungberg (Svensk Farm Tidskr, 68, 351-354, 1964).

Marsvin användes, som vägde ungefär 400 g och som anesti- serats; testsubstanserna administrerades intravenöst i jugular- venen.

Responsen hos gallblåsorna för testsubstanserna detektera- des medelst en krafttransduktor och upptecknades medelst en mikro- dynamometer. Den optimala sammandragande dosen valdes till 10 ng/ kg CCK-8. De testade antagonistföreningarna administrerades i ökande doser för att medge beräkningen av ett ED50-värde, dvs den dos (i mg/kg i.v.), som kan hämma 50% av den sammandragande effekten av 10 ng/kg i.v. CCK-8.

De erhållna resultaten återfinns i tabell 7 nedan, vari anges de använda doserna och de erhållna effekterna uttryckta som en hämning (%) av den sammandragande effekten av CCK-8 jämte det erhållna ED50-värdet. 10 15 20 25 30 35 TABELL 7 Anti-CCK-8 in situ uttryckt som ED -aktivitet för åtskilli finningen (koncentration - 10 ng/ 35 50-värdet i mg/kg i.v. 503111 ga av föreningarna enligt upp- kg) på gallblåsa från marsvin Förening Dos Försök Försök Försök EDSU ümykg rn ng/kgiiv. 1 2 3 r 0,03 - - -11,8 0,30 0,10 -36,7 -49,3 -40,0 (r: 0,90) C-4 0,30 -44,6 -68,4 -51,7 _________ _l1.99______-_..:2š1.l____:§§iâ__--__:-_-__-_--_-E_š-å.f.$§.ffI_ 0,01 - - -12,9 0,03 - -49,7 -40,0 0,05 C-6 0,10 -72,6 -55,8 -62,9 (r: 0,96) 0,30 -97,0 -82,8 - t = 9,07*** _________ -lLQQ___-_--_-IlQQLQ_____I_-____-_Z_--_---__-_-____-____-__ 0,003 - - -10,6 0,01 -36,8 -28,2 -25,9 0,02 C-7 0,03 -62,1 -57,0 -59,2 (r: 0,98) _________ -Qrl9-________:ZZrâ---_:§ârê-___:2árZ_________E_i_lâ1.2ïIi-- (***) P < 0,001 r = korrelationskoefficient TABELL 7, forts Förening Dos Försök Försök Försök Försök EDÉO mg/kg i.v. 1 2 3 4 Ong/kg i.v.) Fönaung 3 16,7 0 6,0 - 13,8 (F30 10 14,6 20,8 31,1 - 30 82,1 92,5 79,5 (r): 0,91 Förening 3 16,7 0 22,8 - 16,3 C-31 10 14,6 0 31,7 - 30 82,1 92,5 58,7 - (r): 0,80 Förening 1 4,3 15,7 32,7 - 5,1 C-36 3 30,0 12,1 40,0 20,3 10 64,8 71,6 63,3 78,7 (r): 0,91 30 - - - 100 10 15 20 25 30 35 40 505111 36 De erhållna resultaten bekräftar huvudsakligen vad som förut framkommit vid försöken in vitro, dvs att åtskilliga av föreningarna enligt uppfinningen är utomordentligt verksamma CCK-antagonister, vilka, även i så låga doser, som 0,1 mg/kg i fall av föreningarna C-6 och C-7, kan blockera av CCK-8 induce- rade sammandragningar i gallblåsan även i koncentrationer, som är avgjort högre än fysiologiska koncentrationer.

Den antispastiska aktivitet, som föreningarna enligt upp- finningen utövar på hela matsmältningssystemet är även noterbar.

Bestämd på möss medelst det vegetabiliska koltestet (passerings- hastighet genom magen och tarmarna) åskådliggöres denna aktivi- tet i följande tabell.

TABELL 8 Exempel på antispastisk aktivitet för föreningarna enligt upp- finningen administrerade intraperitonealt på möss. Värdena är uttryckta som EDSO i mg/kg, dvs den dos, som reducerar passagen av kol genom tarmarna med 50%.

Förening Antispastisk aktivitet: ED” Ing/kg (i-p-) C-28 91:š C-30 77,7 C-34 65,5 C-35 180,9 C-36 208 'C-37 160,1 C-41 182,4 C-46 66,9 C- 4 38,8 C- 6 29,5 C- 7 16,8 C-20 77,5 C-27 40,3 D- 2 50,7 D- 5 74,9 En mycket mer specifik antispastisk aktivitet, dvs en akti- vitet, som mera närmar sig en fysiologisk situation, åskådlig- göres medelst följande försök.

Buken hos en anestiserad kanin skars upp för att blotta den tvärgående tjocktarmen. En liten ballong fylld med vatten inför- des på det âstadkomna stället och anslöts till en trycktransduktor 10 15 20 25 30 35 40 37 503111 medelst Den optimala sensitiviteten fixerades i relation till de fysiologiska betingelserna och produkterna administrerades genom lårvenen. Sammandragningar inducerades genom administrering av 100 ng/kg CCK. , Aktiviteten för produkten enligt uppfinningen åskådliggöres i tabell 9.

TABELL 9 Antispastisk aktivitet i tjocktarmen hos kaniner stimulerad medelst CCK-8. en kanyl av polyeten fylld med vatten.

Förening Dos Försök Försök Försök ED50 ümykgiv) mg/kg iv 1 2 3 r: 0,1 0 - - ED5o=1,S3 0,3 -24,1 -14,9 -8,5 r = 0,943 C-6 1 -57,9 -45,0 -41,8 t = 8,05(***) 3 -91,7 -77,5 -81,6 0,1 O - -10,7 0,3 -19,1 -36,8 -21,8 ED50=1,11 C-7 1 -42,6 -74,2 -64,5 r = 0,919 3 -100,0 -100,0 - t = 6,58(**?) (***) P < 0,01 De angivna värdena indikerar, att åtskilliga av de testade föreningarna enligt uppfinningen även är antagonistiska, såsom redan visats för gallblåsan, mot intestinala sammandragningar inducerade av CCK, som administrerats i höga doser (100 ng/kg).

Den antispastiska aktiviteten visas i mycket låga doser av 1-3 mg/kg för de bästa av de använda föreningarna.

Ytterligare en intressant egenskap hos dessa föreningar är att de ökar det biliära flödet väsentligt.

Följande försök genomfördes: en kanyl infördes i gallgången hos en råtta, som anestiserats med uretan, tillsammans med en liten nål ansluten till ett polyetenrör, och gallvätskan uppsam- lades på detta sätt. Vätskeuppsamlingen genomfördes under en tim- me före den intravenösa administreringen av testföreningarna och under ytterligare två timmar efter administrering, varvid de prov, som uppsamlades i intervaller om 30 min vägdes.

För att förhindra eventuell uttorkning av djuren administ- rerades 0,5 ml fysiologisk lösning i intervaller om 30 min upp till totalt 3 ml.

De resultat, som erhållits för åtskilliga av föreningarna 10 15 20 25 30 35 40 so: 111 38 enligt uppfinningen, återfinns i följande tabell uttryckta som ED50, dvs den mängd substans i mg/kg i.v., som kan orsaka en 50%-ig ökning i gallflödet efter behandlingen med läkemedlen (medel- värde bestämt under 2 h) med avseende på kontrollvärden (medel- värde bestämt under den en timme långa uppsamlingen före behand- lingen med läkemedlen).

Av erhållna uppgifter inses, att föreningarna i fråga har en kraftig choleretisk aktivitet; i medeltal var ED50 för_ test- föreningarna 5-25 mg/kg i.v. och det förelåg en anmärkningsvärd motsvarighet mellan dosen och den farmakologiska responsen (kor- relationskoefficienterna var faktiskt större än 0,90 i samtliga fall).

TABELL 10 Variation i % i det biliära flödet hos råttor inducera medelst åtskilliga föreningar enligt uppfinningen.

Förening Dos Effekt (% ökning med EDSO (mg/kg i.v.) (mg/kg i.v.) avseendejå kontroll) r = korrel. koeff.

Förening C-6 3 + 40,4 4,2 10 + 69,8 (r = 0,93) 30 + 88,7 Förening C-20 12,5 + 48,5 19,4 25,0 + 63,9 (r = 0,98) 50,0 + 108,0 Förening D-11 12,5 + 33,7 18,5 25,0 + 80,0 (r = 0,98) 50,0 + 118,8 Förening C-30 12,5 + 33,7 18,5 25 + 60,2 (r = 0,99) 50 + 121,2 100 + 197,8 Förening C-35 12,5 + 9,6 29,5 25,0 + 51,9 (r = 0,98) 50,0 + 91,9 100 + 159,7 Förening c-as 12,5 ' + 15,5 26,75 25,0 + 48,5 (r = 0,99) 100,0 + 215,8 För att kontrollera hypotesen att anti-CCK-aktiviteten, som visats för de flesta av föreningarna i fråga kan användas med fördel vid behandlingen av anorexi hos människa eller som ett 10 15 20 505111 39 aptitstimulerande medel för uppfödningsdjur genomfördes följande försök: Råttor av hankön användes med en vikt av ungefär 160 g och uppdelade i grupper om 10 djur. Varje grupp erhöll läkemedlet dagligen i de angivna doserna under tre veckor.

Läkemedlet, i form av natriumsalt, upplöstes i vatten och administrerades i en volym av 10 ml H20/kg medan kontrollgruppen mottog samma volym av endast lösningsmedlet.

I följande tabeller anges medelvärdena för foderförbruk- ningen och medelvikten för varje grupp av djur beräknad varje vecka jämte studentfis t-värde beräknat utgående från de olika be- handlade grupperna och gruppen av kontrolldjur.

Av värdena i tabellerna 11 och 12 framgår att dagliga doser av 0,3 mg/kg av föreningen C-7 inducerade en ökning av ungefär 15% i foderförbrukningen jämfört med kontrolldjuren; denna ökning var ungefär 30% för de övriga testade doserna och var vid samtliga tillfällen mycket signifikant.

Viktsökningen för de behandlade djuren i jämförelse med viktsökningen för kontrolldjuren utvecklades på liknande sätt; samtliga grupper behandlade med C-7 gav en markant större vikts- ökning än kontrolldjuren för samtliga studerade tillfällen. 40 503111 APoo.o v mv ««« ^~o_o v mv ax "E24 «««Nm_v~ «««m_~w «««PP.ß P.O .md> w m.uG®UDum ~æ.~ H m.mvm w.~ H m.om~ _ mw.P H m_ß- mß.P H m.ww- m ßno mcflcmumm å IiïlflflmwqflIllilfiflwwqwlli-lalflwmqwl-n ||||| 43.51. |||||||||| - wmwmfláflwmwwmmwl- SIN H wâå w YN H QSN RJ. H TïN å; H ïwf _ Tu wcÉwäë M 5 ||||| .innHWN....|J.:i|.innwmqm||a|||uf||flmwqm||i..|..fl|....m~ä|lil111.-fiwlwnmmwwmwwln Nïw H ïmä Éâ H ...JmN ï~ .+. MQQN 2ï~ H ÉNE _ må Tu mficmšm _ U a :Ilwwflmflßmqmmmjåwmälmdqmmmlïlmqwim-wq~wfl||wqw|máqwwfl||. ||||| -ull |||| -flmmwwmwfil _ _ ä .8 wšms m mxow> N mxow> _. mxum> o väv mon mmøuw .cwfifimuflflflu mxflflo ufl> øëwummn ummmsuw mxflflo >m Am. cwuxÜ/mmmoux >m mcflcëmumwm -P AQWNGB 503111 41 r A_oo~o v mv :aa Awouo v m. fx "EEG wwïm: n u Iiëím. n u uïwïw n u unwoïm n u SN.. n u u Pucuusuw ...wflïæï ïmflušfl. mëflïïh .ïfiïmä ïfiméå om CTU wficuuum unnäïü n u riåwd. n u .iàím n u rišmfi n u SJ; n u <2, u Pucwwnum méflmåå mëflímfl méflwrnám ïmflmåmm mäflïuä 3 STU mcüöuufu .äiäâ n u iíwïmu n u Iåäå n u Iïå n u 3.... n u u Punmwsum mmfimämu ääïäâ. mëflmïomm Sšflïoš umáflmïoä m omnu mcfiöuum wflïmmm Éåfluämm .ïfiïwom Nošflmåßw Éšflïïä n Zouunom .m2 måna. w mu9u> m S63, ~ S69, _ muuuš o m3 non mmñö muHOm _: nämnda.

A~oo~o v mv *ax _Po.o v wv «« _25 v m. .. 252 42 503111 «««ww.- «««ßæ.- «««~æ.ß u m.ucmwsuw wæ.w H æ_wwN mo.m H w.wvN mm_m H v_mmP m ß|U Uflflflwußh ä «««~._F «««mm.æ «««æß.ß u m.ucmnsum wN.v |+ v.wwN mo.m H m~omN æw~m H w.mm~ F ßlU mfififiwußh Ö «««Nß.w ««m>.m «m.~ 49,» m;ucww:um S; H mäå EJ H QEN oïm H v62 m... Tu mcflcwußm “m w-.N N >.æo~ wm.P H m.ßm_ ßæ.- H P.wwP | Hflouucoz å. .mo mx\mE. m mxuw> N mxum> P mxom> mon mmsuø .cmflfimwfififlu mxflfiø ©H> flëmumwn mcuwmmsum mumfløcmnmn mxflfio mv Hmm .mxum>\m. mcHcxsunuæmuwuom NF AAWNÉB 5(]3 11 1 43 Aucmxflwwcmfim mxufl. .m.z ~Poo~o V my acc .Po.o v m. «« ”End «««mmm.P~ n u wo.«Hm_««~ c««Næm.o- n U m-_mHo~ßvN «««ßom~æ u u Nm_wHm~ßmN «««Nmm~ß n u mv~mflß_mmN Éw> U W.UCUÜSHW om °m|u mcficwunm «««vææ.m u U «««mßæ~w u U «««mßN~ß u u «««NPo_w n M U m.ucwU5um mm.mHm.vmN mo~mHm~vmN Fm.mHm.vmN Nm.mHæ.mFN op cmlø mcflcwunh «««ß~m.v u u w.Zßmm~P u u ««Næv.m u v æaæw-m n ß u m.ucmfiDum 5 mm mHo.voN Ov~æHP~ßwP wm~vHN.mmN wm~mHß~mmP M OMIO mfiflflwhßm æß_mHm.oæP vm.vHv.mßP Po.mHm.moN ßo_mHm.vß~ I fiH0HuC0M .wo.mx>w. v mxum>4 m mxom> N mxum> P mxow> mon mmsuø mfiow _ 2 .Emmæa 10 15 20 503111 44 Hämmande verkan på tillväxten av ett pankreatiskt adenokarcinom inducerat av CCK-8 Anti-cholecystokinineffekten för den mest verksamma av före- ningarna enligt uppfinningen, dvs föreningen C-7, på den trofiska aktiviteten av CCK på normala pankreatiska celler och på celler av ett pankreatiskt adenokarcinom skall studeras, Hamstrar av hankön ympades i kindpàsarna med en suspension av 1 x 10 tumörceller av ett pankreatiskt adenokarcinom. Fem dagar efter ympningen uppdelades djuren slumpmässigt i 4 grupper med 10 djur i varje grupp, nämligen en kontrollgrupp, en grupp av djur behandlade med 10 pg/kg CCK-8 tre gånger dagligen, en grupp av djur behandlade med 5 mg/kg i.p. av föreningen C-7 tre gånger dagligen, och en fjärde grupp behandlad samtidigt med före- ningen C-7 och CCK-8 på det ovan beskrivna sättet.

Efter 15 dagar av denna behandling dödades djuren och de normala pankreascellerna och de ympade pankreatiska tumörerna i kindpâsarna uppsamlades och vägdes. DNA extraherades och bestämdes medelst konventionell teknik.

De så erhållna resultaten återfinns i tabell 13, där medel- värden (t S.E.) anges. 503111 Poo.o v m n _«««.

Po.o v m N Aaæv mo... v m n .i cmmcflflncmswn wmvs: mon Manu w>u Ao. .så å: S; 3:. ^:*"m«> nwfiav .=«> ~:w. .@«> fimuu. ~n«> . _ . . 1 . 1 u., os! äafl __... .få ä! ïßufiâ. 22.22 Sam... 2.97.. 1211” TU 9:... m 1 m .S 1 . _18 Stas. 2 Tu mcflcwuwm s . 1- .aåwä .så Saflä... :a mix: S: Sena... 2: 0.232 .Hmm m.. air... 2 Tu wcflcmumm a 1 11111111 11 111111111 , 1151111111 1. 1 . , .Éfiflmflflmßw 1. 11-111... 111.1 1111111111. .- 2» nïøwïc å... .Näää 2:. zaflm: . 2.." .šflez mmm Ü 33.2 _. Éš s TL :EL :IL _ TIL TL _ 1 âaflï.. 1 3.3: 1 Saw-_.. 1 ...ansa 1 2 Éouucox z . Q. Q 3..Eoa«ouøx Ü _@¿ _ Ü Amë. namn íæfiäïfim A . 3232:. INUUHÄQZW~%M Lfivfi» 420 w. »Eššu "Ufiflxv mmwuv-Cmm mOQ Hmflïäw. mflfiflflfimzwm __ __ Q šeê 33 xwflâëâa. . .æ|MoU wmë nmuwoswcfi Hwflflwo mxmflumuuxcmm mfimuoësu :oo mfimëuoc >m cmuxw>H~fiu mm ßuu mcflcmunu >m cmxum> mflcmäëwm mp QANQQB 10 15 20 25 30 35 503111 46 I tabellen angivna data visar att cholecystokininhormonet (där CCK-8 är den biologiskt aktiva komponenten), som har en trofisk verkan på normala pankreas-celler, även stimulerar till- växten av ett pankreatiskt adenokarcinom. Föreningen C-7, en mycket verksam CCK-antagonist, motverkar båda dessa effekter av CCK-8 på ett högst markant sätt.

Ovan angivna försöksdata visar sig ge en indikation på att användningen av föreningen C-7 eller andra anti-cholecystokinin- föreningar enligt uppfinningen troligtvis ger särskilt gynnsamma resultat vid behandlingen av tumörer, som upprätthålles av endo- gena bioaktiva polypeptider (särskilt CCK), såsom gastrointesti- nala tumörer och pankreatiska tumörer.

Ovan angivna försöksdata visar sig även ge en omfattande indikation på att användningen av läkemedlen enligt uppfinningen tillsammans med morfin eller andra analgetika (vare sig dessa är narkotiska eller icke) är en väsentlig terapeutisk innovation, som ger läkare tillgång till föreningar av överlägset intresse för behandlingen av smärta av godtyckligt ursprung. Denna behand- ling visar sig särskilt indikerad i fall av administrering under lång tid av opiater, där det föreligger ett mycket stort behov av att läkemedlet icke orsakar vanebildning, eller åtminstone att läkemedlets dosering bibehålles inom godtagbara gränser.

Vidare synes deras eventuella användning vid avgiftning av patien- ter, som blivit beroende av opiater som en följd av utsträckt an- vändning, vara av enormt terapeutiskt och socialt intresse.

Ovan angivna försöksdata visar även användningen av dessa föreningar vid behandlingen av olika patologiska tillstånd av- seende det gastrointestinala systemet, exempelvis vid spastiska syndrom och vid smärtlindring i allmänhet och i synnerhet vid behandlingen av biliär diskinesi och irriterbar tjocktarm.

Man skall även hålla i minnet den kraftiga anti-CCK-akti- viteten, som många av föreningarna enligt uppfinningen uppvisar, en gynnsam terapeutisk användning vid behandlingen av anorexi eller vid vissa patologiska tillstånd i CNS i samband med obalans i de fysiologiska koncentrationerna av CCK eller andra biologiskt aktiva peptider i neuronen.

Claims (9)

” 503 111 PATENTKEAV

1. Parmaceutiskt aktiva derivat av D,L-glutaminsyra och D,L-asparaginsyra med formlerna çOOH (CH2)n ÉH-NH-CO-R1 (IA) èO-R2 90-R2 (CH2)n ÉH-NH-CO-R1 (IB) ¿OOH i vilka n är 1 eller 2, R1 är en fenylgrupp, som är mono-, di- eller trisubstituerad med linjära eller grenade C1-C4-alkyl- grupper, som kan vara lika eller olika, eller med halogener, med en cyanogrupp eller en trifluormetylgrupp, och i vilka R2 betecknar morfolino, piperidino eller amino med en eller tva linjära, grenade eller cykliska alkylgruppsubstituenter inne- hållande 1-8 kolatomer, som kan vara lika eller olika, jämte farmaceutiskt godtagbara salter därav.

2. Förening härledd fran glutaminsyra enligt krav 1, med formeln IA, i vilken n är 2, R1 betecknar 3,4-dimetylfenyl eller 3,4-diklorfenyl, och R2 är en aminogrupp, som är bisub- stituerad med linjära C4-C5-alkylgrupper, jämte farmaceutiskt godtagbara salter därav.

3. Förening härledd från glutaminsyra enligt krav 1, med formeln IB, i vilken nr är 2, R1 är en 4-cyanofenylgrupp och R2 är en aminogrupp, som är bisubstituerad med linjära C4-C5_ -alkylgrupper, jämte farmaceutiskt godtagbara salter därav.

4. Parmaceutiskt preparat innefattande en förening en- ligt krav 1 eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav som en aktiv beståndsdel.

5. Farmaceutiskt preparat enligt krav 4, för behandling av patologiska tillstànd i CNS förknippade med obalanser i de fysiologiska koncentrationerna av biologiskt aktiva polypepti- der, särskilt cholecystokinin, i neuronerna, eller för använd- 503 111 92 ning vid behandlingar beroende pà dess antispastiska aktivi- tet, eller för användning vid behandlingar beroende på dess choleretiska aktivitet, eller för behandling av anorexi, eller för behandling av tumörsjukdomar, där biologiskt aktiva poly- peptider, såsom cholecystokinin och liknande, är involverade.

6. Farmaceutisk komposition enligt krav 4, för använd- ning som smärtstillande medel hos människa och även innefat- tande ett analgetikum i kombination med nämnda föreningar.

7. Veterinarmedicinskt preparat för användning som ett aptitstimulerande medel för uppfödningsdjur för att öka vikt- ökningshastigheten och innehållande minst en av föreningarna enligt krav 1 som den aktiva bestandsdelen. B.

8. Förfarande för framställning av ett derivat av D,L- -glutaminsyra och D,L-asparaginsyra med formlerna IA och IB: ç0OH I (?H2)n CH-NH-CO-R1 (IA) O-R2 çO-R2 n CH-NH-CO-R1 (IB) AOOH i vilka n är 1 eller 2, R1 är en fenylgrupp,,som är mono-, di- eller trisubstituerad med linjära eller grenade C1-C4-alkyl- grupper, som kan vara lika eller olika, eller med halogener, med en cyanogrupp eller en trifluometylgrupp, och i vilka R2 betecknar morfolino, piperidino eller amino med en eller tva linjära, grenade eller cykliska alkylsubstituenter innehållan- de 1-6 kolatomer, jämte farmaceutiskt godtagbara salter därav, k ä n n e t e c k n a t av att a) en inre anhydrid med formeln II: ?O_--__--_*_¶ (qH2)n 0 cH-NH-co-R, l (11) 60- 1/9 503 111 där n och R1 har samma betydelser som ovan, bringae att reage- ra med en amin med formeln R2H, där R2 har ovan angiven bety- delse, i ett molförhàllande av 1-5 vid en temperatur av fran -20°C till 30°C, varvid föreningarna med formlerna IA och IB utvinnee från reaktioneblandningen och föreningarna IA och IB eeparerae.

9. Förfarande enligt krav 8, k ä n n e t e c k n a t av att den inre anhydriden med formeln II erhålles genom att b) bringa glutamineyra eller asparaginsyra under Schotten- -Bauman-betingelser att reagera med en ekvimolär mängd av en acylklorid med formeln R1-CO-Cl, där R1 har den i krav 8 an- givna betydelsen, vid en temperatur av från -20°C till 30°C för erhållande av den N-acylerade föreningen med formeln: çO0H (çH2)n CH-NH-CO-R1 (III) COOH och att c) föreningen med formeln II dehydratieeras genom reaktion i närvaro av ättiksyraanhydrid i ett molförhàllande av 1-10, antingen ensam eller i närvaro av ett inert, därmed blandbart lösningsmedel vid en temperatur av från -10°C till aterflödee- temperaturen.