NL8501829A

NL8501829A - Glutaminezuur- respectievelijk asparaginezuurderivaten, werkwijze voor de bereiding ervan alsmede de toepassing ervan in preparaten.

Info

Publication number: NL8501829A
Application number: NL8501829A
Authority: NL
Original assignee: Rotta Research Lab
Priority date: 1984-06-25
Filing date: 1985-06-25
Publication date: 1986-01-16
Also published as: IE851502L; NZ212436A; DE3522506A1; GB2160869B; CH674203A5; SE8503097L; AU4410985A; DK285685D0; BE902726A; US4791215A; GB8515555D0; SE503111C2; FR2566397A1; SE8503097D0; ES544462A0; DE3522506C2; AT390949B; IE57892B1; ATA186985A; DK285685A

Description

N.0. 33292

It ------- 1 ί ~ · Glutaminezuur- respectievelijk asparaginezuurderivaten, werkwijze voor de bereiding ervan alsmede de toepassing ervan in preparaten._

De uitvinding heeft betrekking op nieuwe derivaten van D,L-glu-taminezuur en D,L-asparaginezuur, die voorgesteld kunnen worden door de algemene formules 1 en 2, waarin η 1 of 2 betekent, Rj een fenylgroep voorstelt, die enkel-, twee- of drievoudig is gesubstitueerd met rechte 5 of vertakte alkylgroepen met 1-4 C-atomen, die gelijk of verschillend kunnen zijn, of met halogeenatomen, met een cyaangroep of een trifluor-methylgroep, en waarin R2 wordt gekozen uit de groep bestaande uit morfolino, piperidino en amino met 1 of 2 rechte, vertakte of cyclische alkyl groepen met 1-8 C-atomen als substituenten, die gelijk of ver-10 schillend kunnen zijn.

De verbindingen volgens de onderhavige uitvinding blijken interessante farmacologische eigenschappen ten opzichte van zoogdieren te bezitten. Een van deze eigenschappen is een vermogen de analgetische werking van morfine en andere analgetische geneesmiddelen te versterken.

15 Deze eigenschappen kunnen tenminste gedeeltelijk worden geïnterpreteerd als zijnde te danken aan een krachtige antagonistische activiteit ten opzichte van cholecystokinine (CCK) of andere bioregulerende peptiden, welke activiteit door vele van de onderhavige verbindingen wordt vertoond.

20 De verbindingen volgens de uitvinding kunnen derhalve met voordeel worden gebruikt voor de behandeling van diverse ziekten bij de mens, zoals aandoeningen van het spijsverteringssysteem, bijvoorbeeld bij de behandeling van colitis en dyskinesie met betrekking tot de gal; of ze kunnen worden gebruikt voor de behandeling van pijn van elke oorzaak en 25 Intensiteit. ·

Op basis van de farmacologische eigenschappen kan men ook de toepassing ervan bij de behandeling van psychische stoornissen voorspellen, welke kunnen worden toegeschreven aan gebrek aan evenwicht in de fysiologische neuron-niveaus van CCK of andere biologisch actieve poly-30 peptiden, en ook bij de behandeling van anorexia, het bevorderen van de gewichtstoename bij dieren op de boerderij of voor de behandeling van aandoeningen, waarbij een pathologische celgroei optreedt, waarbij biologisch actieve peptiden een rol spelen (zoals waarschijnlijk bij tumoren).

35 Zoals reeds is vermeld bezitten de verbindingen volgens de uitvinding een krachtige anti-CCK activiteit in diverse experimentele modellen, zowel in vitro als in vivo. Zo verminderen ze zowel in vitro als ' - <-· U V-/ \ïf / ' ........ ..........- ·—-·*, - * 2 ’ in vivo door CCK in de galblaas van marmotten geïnduceerde contrac-' ties; ze remmen geïnduceerde contracties van het colon bij konijnen en ze vergroten de gal afscheiding bij ratten.

Van belang is ook het versterkende effect op de analgetische acti-5 viteit van analgetisch-narcotische en niet-narcotische geneesmiddelen.

Deze versterking maakt in feite in de eerste plaats mogelijk, dat de posologie van de opiaten aanzienlijk kan worden verminderd, waardoor het grote aantal algemeen bekende, ongewenste bijwerkingen wordt beperkt zonder dat daarbij de therapeutische index aanzienlijk wordt ver-10 minderd. Deze verbindingen kunnen ook worden gebruikt voor het opnieuw instellen van de analgetische activiteit van opiaat-geneesmiddelen, wanneer het farmacologische effect ervan is gedaald tengevolge van het algemeen bekende verschijnsel van de tolerantie, zonder dat het nodig is de therapeutische dosis te vergroten. Deze gunstige therapeutische 15 eigenschappen kunnen derhalve ook dienen om een graduele detoxificatie van personen mogelijk te maken, die verslaafd zijn geworden door het langdurige gebruik van opiaat-geneesmiddelen.

In het geval van niet-narcotische anal getica gaat de gunstige werking ervan verder dan het toenemen van de analgetische activiteit, het-20 geen op zichzelf nuttig is, doordat ze ook het maagslijmvlies beschermen, dat normaliter door dergelijke produkten beschadigd wordt.

Deze versterking van de activiteit van analgetische geneesmiddelen is onder andere gecorreleerd aan het vermogen van de verbindingen volgens de uitvinding de hydrolytische afbraak te blokkeren van encefali-25 nen, endogene fysiologische peptiden met krachtige analgetische activiteiten. Dit zou de encefalinen zelf een grotere halfwaardetijd geven en per definitie een grotere activiteit.

Farmaceutische vormen van de verbindingen volgens de uitvinding kunnen volgens gebruikelijke methoden worden bereid, bijvoorbeeld in de 30 vorm van tabletten, capsules, suspensies, oplossingen en suppositoria, en kunnen oraal, parenteraal of via het rectum worden toegediend.

Het werkzame bestanddeel wordt met name in hoeveelheden van 0,1-10 mg/kg lichaamsgewicht per dosis aan de patiënt toegediend.

Voor parenterale toediening verdient het de voorkeur een in water 35 oplosbaar zout te gebruiken van de verbindingen in kwestie, zoals het natriumzout of andere niet-toxische, farmaceutisch aanvaardbare zouten. Stoffen, die in de farmaceutische industrie gewóonlijk worden toegepast als excipiëntia, bindmiddelen, smaakstoffen, dispergeermiddelen, kleurstoffen, bevochtigingsmiddelen en dergelijke, kunnen als niet-00 werkzame bestanddelen worden toegepast.

éf' ·? » ..·% Λ Λ $ 4 I O £4 k « 3 r ' De werkwijze voor de bereiding van de glutaminezuur- en asparagi- nezuurderivaten volgens de uitvinding wordt gekenmerkt, doordat deze de volgende stap omvat: a) omzetting van een inwendig anhydride met de formule 3, waarin n 5 en Rx de boven aangegeven betekenis bezitten, met een amine met de formule R£H, waarin Rg de boven aangegeven betekenis bezit, in een molverhouding van 1 tot 5 bij een temperatuur van -20°C tot +30°C, waarbij de verbindingen met de formules 1 en 2 uit de reactiemassa worden gewonnen en de verbindingen met de formules 1 en 2 worden geschei- 10 den.

De reactietemperatuur bedraagt bij voorkeur -10°C tot +10eC.

De inwendige anhydriden met de formule 3 zijn nieuwe produkten, die tot dusver nog niet zijn bereid.

De inwendige anhydriden met de formule 3 worden bereid volgens de 15 volgende trappen: b) omzetting van glutaminezuur of asparaginezuur onder omstandigheden volgens Schotten-Bauman met een equimolaire hoeveelheid van een acylchloride met de formule Rx-CO-Cl, waarin Rx de boven aangegeven betekenis bezit, bij een temperatuur van -20°C tot +30°C, waarbij de 20 N-geacyleerde verbinding met de formule 4 wordt verkregen, en c) dehydratatie van de verbinding met de formule 4 door omzetting bij aanwezigheid van azijnzuuranhydride in een molverhouding van 1 tot 10, als zodanig of bij aanwezigheid van een daarmee mengbaar inert oplosmiddel, bij een temperatuur van -10°C tot de terugvloeitemperatuur.

25 De reeks stappen van de werkwijze volgens de uitvinding wordt in zijn geheel geïllustreerd in het reactieschema volgens de figuur.

De acyleringstrap b) wordt bij voorkeur uitgevoerd bij een temperatuur van 0°C tot 15°C gedurende een periode van 1 tot 24 uren, waarbij een temperatuur van ongeveer 5°C en een reactieduur van 12 uren 30 wordt aanbevolen.

In stap c) is de reactietijd met name ongeveer 30 minuten tot 12 uren, bij voorkeur ongeveer 3 uren, en is de hoeveelheid azijnzuuranhydride bij voorkeur ongeveer 3 mol per mol van de verbinding met de formule 4.

35 In de amideringsstap a) wordt het amine met de formule R£H bij voorkeur toegevoegd in een molverhouding van 2,5 tot 1 ten opzichte van het inwendige anhydride met de formule 3 en wordt de omzetting uitgevoerd gedurende een periode van ongeveer 30 minuten tot 12 uren, bij voorkeur ongeveer 3 uren.

40 De relatieve percentages van de verbindingen met de formules 1 en

5 A 4 O 9 Q

/u? O v * j - 5 _______________________ 4 * $ 2 zijn afhankelijk van het type van de gebruikte substituenten Rj en R2·

De isomeren met de formules 1 en 2 kunnen door gefractioneerde kristallisatie (met de In de tabellen C en D aangegeven oplosmiddelen) 5 of door extractie in een basisch milieu worden gescheiden, waarbij de verbindingen met de formule 2 gemiddeld zuurder zijn.

In de volgende voorbeelden wordt de uitvinding nader toegelicht. Voorbeeld I

Bereiding van 3.4-dichloor-N-benzoylglutaminezuur 10 (Verbinding A-4)

Aan een oplossing, die 14,7 g (0,1 mol) L-glutaminezuur in 200 ml IN soda bevat en is gekoeld op 5°C, worden onder roeren en koelen in verloop van een periode van ongeveer 30 minuten 100 ml IN soda en 21 g (0,1 mol) 3,4-chloorbenzoylchloride tegelijkertijd toegevoegd.

15; Men laat het mengsel gedurende 12 uren reageren. Het wordt aangezuurd met geconcentreerd zoutzuur tot de reactie van Congo-rood en het gevormde precipitaat wordt afgefiltreerd. Het residu wordt herkristal-liseerd uit HgO.

Smeltpunt: 141-145°C TLC (zie de noot in de tabel) 20 Rf: 0,46 24,5 g verkregen. Opbrengst 76,4%.

Alle verbindingen met de formule 4 worden volgens dezelfde methode bereid (het boven aangegeven schema). De aldus verkregen verbindingen zijn tezamen met diverse eigenschappen, aan de hand waarvan de verbin-25 dingen worden geïdentificeerd, de verkregen opbrengsten en de voor de kristallisatie gebruikte oplosmiddelen aangegeven in tabel A.

/ · ·?ν ί» λ 4 n *. ( ti ¾ V ^ * ï) iv w

H

i’ I.

: . 5 ί 4 Λ ν ' " " ιλ» ν/^ ΙΟ V» (ο «λ Ο Ο Ο Ο V» _y» *λ _νη ooozscSË at ο ** 2 2 2 2 α, 2 5 2 J" -Γ ^ ί £ 1 I wm °μ υ- υ- u- °ο u “V. α~ =ο ~μ F χ“ *- ζΓ =“ *“ *" *“ s°* χ*“ χ" χ*“ χ" χ” χ” ο *eg Μ Μ Μ Μ Μ Μ -«««*· — 2 α" u" υ~ υ~ ο" υ“ υ“ υ" ο*" u“ «-Γ" <_»“ u~" 4-» «Λ c ^„c^-a'-.uirvovntn-.noesiio ei *» ^ « λ % * ^ ^ # ^ ^ j_ OO-Q’OOaoinoO'Jl^^irvOp (~> ,>s o 03 flo fik tn oo oo e- oo o> ao O' p» O. fcft 1_ O >>—' 3 _____________.

3 -- 1 "' '-'

N

<U

c "σ> e^O’^onoPOOnor·'· — «·ϊ «Ό o> *Λ

re 5 OOOOO OOOOOOOOO

Q.

Ui ra e - --- 4) ï- · _ 3 CJ — »*3 3 t- ·· ” IM +> —« t'· 0 re I-- _j h

c « ^ O Q

re -- 2- ΩΟΟΟΟΟ R o O O 8 O O

+J « ε °cm Γ4 03 M es CM £ Ml Μ Μ X Μ M

= £ g Ï r I E = X Cjg = xx^axx

D» t- I— o O

i~ a. en M

c ü β χ X

re ________ > ___ — --......

c ω

"re re· o O

τ 2 ? «®Γτ7Τ'ττ^^:??ντ® oj 3 * w Λ^ιίι«Νΐηηοοη®ί*®Ν|5 *og % o ω c — - om- E = re ι/o o.

1 ai Z T3 ___ __—-- -i -£ o e h » ?»

·· G

< ιΗ Η H © H

_. >» >» b V b 7ί

s s § § s 8 I

g g Ι?°§·§ο&ο||&| * ?ïU333||i55S|g gg 15551585111¾

Η Η H-Ö'Ö'Öiri'ÖiS'Ö O OOO

i— f r! i I I — | r-l I Η H JJ u •g-o

N A ^ m k*\ cvi ia ia 5 kn m -re-cviM

c «enciMMMM*-M«r*c, — ,>4 I ---1-- c 1-0 O — M O or S5^i t*? ?? - · ί · Π J3I< > -Q Öi| <<<<<<<<<<:<<^- '8501829

- - -----* -T

i> V

6

fc V

in

ui o m ui κι Q

® 0 2 0 0 0 ιλ in in in in in in in tn u*> in g = fi H,2NzN2Ni § ê § § § i i § i § hn E non cm m m r- r~ p» σ» “r* o w r- t- n U r— r— t— r— τ"ΐ- r”T— t— t— r— γ-t— (NP^T- 0 s a as te .sc cc a to s * se a= a »„ a a a: u. {M fNjfnpjmmrO'T'T'^'in^Lnin'övon r- t— Γ·Γ"Γ“Γ·τ"ΐ*Γ·^^Γ·Γ·ί“τ“Γ·Γ·

UÜOÜOUOÜUUÜUO.UUOO

M

ΙΛ cn oootNinoooomcooiomcotnoo C *»·»·*·*·*% *k****^ 01 -~· ^PrWrOl/linninNfflNOrOiü i-ϊθ tocecoapcopocoer-fflcouiicpr' .c *«—’ o. _____________ __ 0 r^ncMpjr^n-fl'CO'T-oofncoT-r-pnoo rrtncj»— ΓΝηηη^τη'ΐτη'τητΓτΓη *+- ooooooooooooooooo cc , for- m m m n po ^ oi r*· »- r- r- r* r* ° £ r-t .-4 rl ιΗ «H r-S H ^

«3 r- o O O O O O O JL

ΙΛ O) r~ (- Γ £ JÜ £ ü CO

••”2 t5 P O O OOpoopoOO.OO ^ - 1 5 5 aTaT1 ' aPs1* 4} 5 5 Λ tFt? ' sPe" 5 | ^as o ? 3 °ν°λ°λ « 6 g· K SB S X S S X 1

--I

in ö . ® o co cm in -o „? T T T ΐ?ΤΤΤΤΤ7ΐ Η *3 131 T, ΐ: T-orointHr*c4*-focao*rcoc\i-<coro cfl 'rSS ι^οοΡΜΡ-·ΗΜθΡθΐησιΡ~ιηο·ν·Ητ-ιη >(ΛΟ. *— t- r- T- r- Q r- r- , I 5 I |

** £ >1 £ M H M O

_j C β0β|Η£» ΗΗ g UJ <x> Ofl)©rt£»CHr>»£? 9

CO «Η Η H *H *H *H r>S B ,® ^ β Λ 'O

< 3 Η >»>»ΙΙΙΛΗ®Μβ®·Η -g ΗΟβ>»>»®®>»>»ί,>®βΙ,Γ1ήί*Ρ, .» . >,·<-9©β 0ΜΜΛΛΛΘ®Η>?ΙΗΗ .

r; ·η Sh © © 1 I 45 +1 4s ·Η ·Μ f1» Ρι Η ^*2 m “ φ^ΙΜΜΗΠΟ)©©^ I ft Ο -Jf 2 ,2 3 I §33££Tijj I b P1 5 „ Ji 2 ΟΙΛίβώώ-Ρ-Ρ'β'ΰ'ΟνΟΛΡίΟ^ΙΟΗ Tj 0 - ?>> s s © © I I « ~ 43 i ® I “ ft o.

1 «I I ii I » - - - ι I i_L_L_L n 43

c NNNrWNNNNNNNNNNNN

----- g • fix c <j) . Ί1 ιηνοΓ^οοσ*θτ-ρΜΓθ·β·»ηνοΓ«ίθ^ο^ üj £ 2 er rrrrrNNNNNNNNNNOn II II iiiiiiAiiiiiiiiii:

Hi q : / 8501829 *» 4 7 r

* ’ Voorbeeld II

Bereiding van 3,4-dichloor-benzoylqlutaminezuuranhydride (Verbinding B-4 in tabel B) 30,6 g (0,3 mol) azijnzuuranhydride en 60 ml diisopropylether wor-5 den toegevoegd aan 32,0 g (0,1 mol) 3,4-dichloorbenzoylglutaminezuur.

De massa wordt gedurende 2 uren onder terugvloeikoeling verwarmd (73-77°C). Het materiaal wordt gekoeld, gefiltreerd, gewassen met een kleine hoeveelheid ether ter verwijdering van achtergebleven azijnzuur-anhydride en gedroogd. Zo worden 27,0 g verkregen. Opbrengst 89,3%.

10 Smeltpunt: 188-190eC.

Alle verbindingen met de formule 3 worden volgens dezelfde werkwijze bereid (zie het schema). Talrijke voorbeelden van deze verbindingen worden bij wijze van voorbeeld tezamen met diverse eigenschappen, aan de hand waarvan de verbindingen kunnen worden geïdentificeerd, 15 alsmede de verkregen opbrengsten aangegeven in tabel B.

* t" a ~ i --¾ < a *")

Z~ JK — * / O-J

jr V ·*» .. V./ ^ / ____________________ «i l 8 * ^ co <u r— s ε t-

«S

•8 +» i

c--—----—--“I

(V

X3 T-

i* ω cT7 o7 o* o7 o"7 O* O* Ό* -3- ** o* O- -T *T

£ Ί; ssjezzzz2:5500??S2 Ê 1 ί 5 Π h" -*rl -T -T £ fr* έ és | 5 1 § 2 2 2 ^ us. UC Ho H 2 o. 2 2 “» 2 g =„ =„ =v, x« =0. =2 x2 x: =2 =2 2 “2 = 2

•5, u" w" JjT U*“ u" u" 0“ w"“ ü"* </“ u"* U o 5J

ra O.

tn ra -p (Λ g 51 'tr>OOOOCOfvMCOrt — WWCi'-·'© . F ©Nror^o-r-a-co-.cs.-.eN'O'^-io j[_ Λ'-' (νίβΟΟΟΟΓν^Ο'Ο'Ο.Ο'Γ»*^·®*^· a Cl 3 O —'

N

0) ........ ..........

c ·** ε co 3 e co ^5 _« 0 o >0 o o o ? I- 7 ί ? ! t ί ° i 7 ί ? ? t t ïï ssssïSoïïISIs: {J EO — 04---- or — — ra in ^ z C --.—-———————————————— ro > r- r-f s j?

}« rt iH H © iH

> >s >s >ï H

1— β β β fH β ró fc. ® © © O © β V HHH*hVi<hO*H ©

O >s>s>»HJ4 f4rtHr-l©4iHHiH

βββΟΟΟ.βθ}>»β>?£>£>Η ©©©ΟΟΟΟΟβ O fi β β >>

” ChCw'HpHiHH-HiH © β © ®®C

60 . β β β Λ Λ Λ βΛ«βΗ«β*β<β© , Γ2 oooooo+>onQnEBS5y rrj ooo-h-HmH i-ho-h 000¾

S HHHtj'ti'Öirk'dpi'dOOOO

g ΛΛΛ1Ϊ I ~ 1 1-i I Ö Ei y O

|_ O Ü ΐΛ^ιόβΌ

| | I » · * * » | » I III

CM ΙΛ’ίΙΛΙΛΡΙίηΐΛ'ίΙΑΜ 't W W

C p|.NNNNNN->NNNN**N

C C

•p (p ja σ» o — cm co -r w c —ΜΓο*9·*Λθίναοο‘ΤΤ’ί'ΓΤ

©·«- « 1 t II I · · •JLJLJLJLJL

> -a aaaaa-aaaaa a a a a f501329 ^ i 9 Μ ^ *3· *3* Q Q Ο 'a· ο «q· Q ^ ^s· .jo· ^ ** *τ _^· 2 « ^ΟΗ’ίζ'ί^) η %\ Rn %> %* Rn %* %» %* *5 ^ ‘ r- CO «— CO τ— r- τ- r-r— τ— r— r- ! =Μ *<μ “in ^ “h ft<n “in “5, “3* =0, “W “in “in “to “ίο “h £ cT cT υ” cT cT ο” d“ d" d“ cT cT cT u~ d“ d“ d" d~ ocqp»>o\coo«tnop4eoo^rinOooo u? omafeDw'f('ioi<-cocoN^,nNO> S> 0300Ρ»03Γ''·Γ''Ρ··0340^ΡΓηΓ>»Γ»»νθΓ·»Γ»Γ'* c ttl s_ J3 —» a. s%.............—-—- o *—---- ë ΤΤΤ?ΐ®?ΤΤ?ΤΤΐιιΤΤι' 5 r-ιΠτ— {'ΠΓ-^ΟΟτ—ΐΛΐηΟ^τσΊΡηΓΜΟ'ιΓ'' cL θ^Γ*»Ρ*“θθ^ΓθονοΐΛ«ηνοΓ»ιηιη^·Γ·»ιη jj CNJCM*- T— τ— τ— r— r— *—r-T-T— r-*— *— ^-*—

*03 O

M t, __

iH

Η rj

>s S

er> h C ,® r— I—« iH I—I Φ ^-1

o c >» >» >s <H , «Η I

J- V» ® Φ Φ r-i J>»CH>?b ® I Η ιΗ «Η 4w *H S B ,® ^ a Λ > -d r-l r-i H >s >s I I I t-C Φ C 03 -if .. J>,OÖÖÖ®©£?£»£>®filH«Hilg ra Βτ5ΦΦΦίΗ«ΗΛΛΛβ©Η>»Ιι-Ιβ -4 ο ·η <h <n «μ i i-p-p^-h«hsp<h>*o «J CC «Mf4llliHH©®©HlftpS-P3 UJ 1+3 £ Ö C r>a r>i H S Ö +5 r-l O f-l -if 2 eg *ö I § eS § Λ Λ ·Η *H I i? Ö ^ 3 ίϊ

*£ ο ΙΛ (S © ce-P-P'd'ti'd'XIri ft O >© O *H

£> ·*ί- ο ο o a a ^ ^ ^ ^ ® ö -η s ·* *? I *1 I l I I » » « » I I I I 1 t ^ΙΛΚΝΙΛ^ΙΛ'ίΚΝΙΑΜ CM <- ^3- 'd' ^ ^ 'C' C ΝΝΝ^Ν(ΜΜΝ(ΜΝ[Μ(ΊΝΝΜΝΝ ' _. mvor^coehOT-CMcn^· m jp £» ®o £} ® ΓΓ = g ϊ?ί ϊγΗΗΗΗΊΉ? £? èamee®®»®*11®®®®®101® φ τ- > *o 3 5 j13 2 9

*- V

10

Voorbeeld III

Bereiding van D,L-4-(3,.4-dichloorbenzoylamino)-5-(di-n-butylamino)-5- oxopentaanzuur (Verbinding C-6 in tabel C) 5 30,2 g (0,1 mol) 3,4-dichloorbenzoylglutaminezuuranhydride worden in een reactor gebracht en gesuspendeerd in 100 ml water. De massa wordt gekoeld tot ongeveer 5°C en 32,2 g (0,25 mol) di-n-butylamine worden in verloop van een periode van ongeveer 15 minuten druppelsgewijs toegevoegd.

10 Men laat het mengsel gedurende 3 uren bij deze temperatuur roeren en zuurt aan met ijsazijn. Het mengsel wordt gefiltreerd, gewassen met water totdat het waswater neutraal.reageert en gedroogd.

Zo worden 16,4 g verkregen. Opbrengst 38¾. Smeltpunt: 81-83°C (gekristalliseerd uit diisopropyl ether). TLC. Rf: 0,92.

15 Alle verbindingen met de formules 1 en 2 worden volgens dezelfde methode bereid (zie het voorafgaande schema). Een groot aantal van deze verbindingen worden bij wijze van voorbeeld aangegeven in de volgende tabellen C en D tezamen met diverse eigenschappen, aan de hand waarvan de verbindingen worden geïdentificeerd, en de verkregen opbrengsten.

^ * Q O Q

ί Λ 11 +* σ> tri ο ο cu ο ο co ^ cvj r^ oi CM C’O 'o o μ Μ A A A A ww ww ej»«nNO<-cocoHHni— γορ'*)»—^^oo^cqp**:^· i.SioHinNNnncyiwiflN^'HtflNCNrtNn jo O.

O

*, S§O»fflSS5»0>0lfflC0C0C0OC0C0C0N

rv i—i o O O O O O O O O O O O O O O O O O O

I r-.'-i "«- CSJ *3- *-· r-- »-H «-* 1) .... L t t · · ·· ······ " •r- PO »H φ010Ι.-<»-4.ρΗ*-*ϊη«-Ι «-< +j +j +ij=j=£ ££££_£ 353 liBillIIiiiilBJJil :ï! ίί 5 SSSiΐίίίί 5 8 8 8i 8 ^öcec+J+J'aooo+J+J-t-J+J-^+JOictaro+Jfa 2 oti— o» «i— s- £- s- <u ei <u <u üj<Ur— ai.— .iS.S.c’luoo.e’ooooooooo.e.c'i^.co^ £ o « S£,£,tu4242 42-£,xi= = = = «t»t5tusl« § iflco<ops2no}SN»fi^ifl(OMrt^coHiriii) «üMW^J-eÓHtócow^evincvievjwnwgwo

iocoSooocooovocNJMCvjpoco^cj^SSS

E

UI

0 o o o o o ooooooooo

CCCECOCOOOOECCCCCCCC

e es er s e: *f— s »«— ·τ— ·τ· «r* S£SSbk = bb iii««EiEEEE<o««nJ«e«oww ,— r- t— i— r— Uil— «e « «3 Ό'Γ'Γ'Γ'^.'^Ι'^.Τ.ΤΙ^Ι s. v s. >. p· pw» (m r“ >)>)>» o ^ 2“> 22£^2>»·Ρ>>>^>>>»2Ξο-α-ο.ο.α-ο-α.

OOOEO-?CX4->-P-PpppppppOO

o. o. o. o. o. .o o. j= .o ja -o o.o.o.Q.o-o.Q-o.0.

1 1 -1 ,1 J- — _ _ — .—..—»^-.^-.^.»-«*-1— (K1 ^^^otso-o-otsxjoooooo*0"0'0·0'0 I» o* <r • p* i— p· ^ f·- f· Qi ^ ^ Ë’cË’ECct >> 01

ΦΦ O) QJ Φ Φ &> O C JI

_ _ f. ü„ (la Uk Q Φ TJ

I o è § gS ϊξϋΙττ °| E dl 01 01 Cf O O O © O O O C O C C C >i >» *? 5ï *T <U E dJ 01 01 o C-r- 01 « ïtlï5iïi«fiitctlï€€iï <11 η Λ η ο.-..·^·^1»*1^ I OfOOO'g^.ig .2 “^.-p.-nTJ-n'O'OOin =5 Ό O O p p O m « Ό ΞΞΞΞΐΙΙΙ»» «r- I S- i- £ O O « ï-0 fl» prf I | | | #*λλλ***Ι * I I * J 1 * g flj .NM^f^WWCOCnnftliniMW^NNO'Wrt c

ü> C NCylNNCVlNftlNNNNNNNNHNCVIftlN

«3 >

T C

o ai o cn .. .Ξ Oi—iCMco^LnOr^-cocrio

O *5 ^tPJCO^S-UIVOr^COC^T-ir-irHp-IrMp-lr-t^-ir-lr-iCM

£ óóoooüüóóóóóoooocjooc-) ai ja .o t- <o ai i— > 3 si i Ö d. & 12 +j (/) U) ^ΟΡ^ΟΟΟ^ΟΟΟΟΟΟ^“^"*ΛΓ^<ηθί^ΙΛνοθ

P /m, MAAA4tA«AAAflAAA<*A«MMM

(I^COOO'iNO'OlHtOVdOCTWCOCOfffl'Sin j_«— NwoiuiNNnnNfl-Mifincn'incMnio A Q.

o * innoiNPJ'tfHOiiinoiiiaiicwHOiintes

.__ NlOIOC0OlSC0«03t003C0»Q3C0fflSC8S(O

fa. »«···«·»»»»·»«·«*»»» cc oooooooooooooooooooo n ih n CM H ......

·» ·· r» co n

I 1—1 W H CM CO

φ ♦· ·· ·· ·· L to to f- p-1 (OHO rl i- $- OJ 01 01 +j +i -c +* +» <u+i φ +* 4J +*

nj r— f— <T3 r— r— +> (O f— (O +» <D +J O O O

inoioreooojreore re re <022? •r- Ό C 4J C C i— 4-> c 4-> S +> S ^ N, ^ r— oreaireretoeoreai -v. ai v ·- >- <- r— »— -C O -C -C CLCJ-C O r— o ^ 2 2 Ξ 'Z ^ reE+->re-P4JO«-t->re = = ores s occcoo

4-3 tn 0) r— S) β) k i” U r— C p— C re re <0 C C

cooto to'totoQ.to'toto re to re r £ r io 5 •r-Γ- O-COO O -C O J= J=£= £ ti f, f, ‘ΐ I» Q CM +J N N 1/1 CM +J, £> -M +» S S S ti tï on: ω z: :r τ- α ι οι οι οι αι ε Ε ε oj ο 4J Ο

c CM CM «—I ΙΟ «—I «—I

3 CMLnOlCnCMinOCOOi«5i"*00>OOCOO>«—I » f CM N

D. —» | I I I I I I I I I I I I I I I I « · » +JO©*3-cor'*ocovocMr'.CM«i-f,».coa>r^f*coi'*cn«-i p» o ««iCOCMNCOCOfOnit'NlONH'CCMfnHCl 0) « t—< p-4 rH p-4 p-i t—I i-Hflr-lt-lr-l r-lr-lr-Ir-tr-Ιι—I »H r-l £ o o c o o o o e f- a e c c ε *T~ ·*·· ·** ·*” ε s o re ε ε ε ε re c

Ci— rerere^rer— ·Ε •i- to I— Ο i— >> ε EO-tototoCtoO· * re O x x> +j t- +j O = = = = - = - - - - - i— .— &.0Ι 33Ό3 1- >»

>, Ü. £ £ £ f £ o. -C

+j t o i i s- « i +* CCr-CCOJCC 9 £5 I υ I I o. I · 1 CM |t— >n·!— f— 21 ο£ε·σο·ο·οθ-ΌΌ Ό 3; i E cu r— r— r- r— CU i— >» to to to **- «— *— to C CCCi— .— to ·— to c ai ai οι ai to tocr—to-cai <+- ,— ι— «*-<+- (*- x: ccutoc+j**- p- p-. p~ P~ i~ >»>)>— ·— I— +Jr-<u«f-c a>gf— to to to to to O Γ" C C to to to ω >1 Ί- r- J) 1- E to c c c cco to s- tf- ο. o to +-> 3 v

ccccEOM-totoEEE+J.— OU+J3.-E

rererereo-^*O^J=‘»”**-’r‘,to4-o-3-QS-2: re re re re ο *σ o+j+joo-ocox: cl o .q ο·τ"·σ totototoS-'OK^1 1 1 * '-Μ I «Λ I «Λ Ï- « u ο ο ο X! «3" •'-ί E e re· ιλ re* re- ai c t- c i- +» re- «—l I I I I I «III · « · « I I I I I I * cc cocococo«t*core,core,cocoeMeM»3-«ej-re-re-'3-'ii-co

C CMrlr-iCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCM

15 >

L. C

<υ 0) > Oi -..I- c

«- rtNn^iniDNCooigHNnsmgsocjO

-a CMCMCMCMCMCMCMCMCMCOCOPOCOCOCOCOCOCOCO^

C I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I

p— OUOUOOOUUUOOUOOOUUOU

01 XI

•a s- i!2 > 2 s η 1 g ? δ ^ v » y 4 ^ 13 " i * +> σι re-*a-ooN©®M«>oocop«»tnin C ^ ***ΛΛ*Λ**·* * * _ , * * «iiiiHNHOCONjcomonNno ^CylNHNrteMHN^WHrtif Λ

CL

O

*" (nOOCOeiflnCONNONg^N

w· (OClONNCOINl^COnfflCOCOOlOl

II. ««**·«**** * * * * _T

5 000000000000000 f—(

1—I C*1 ·· Η Η H

I «-I i-l «-I

•S· t ci f- t· 5* T] SS +4 0 «u <u re,— +j +j 4¾ it 1— ·— S£ ΙκϋΖΐβ

«ΛφΐσίβΙΛΙΟΟ-Γ- S « 2 T S

n-x>ïïooci- "* -= * : * _i *rj *>. *N» re +4 r— r— r— +4 ·“ +4 JZ 2 i— r— r- I— CL 1- O O O <U r— o r- ·£ 1—

«EOOOOOCCC-C>OCOCO

jj u)CCCCL0<Cefl^C5^0C

„. _ r- r— r- r~ O ei+4+4+4+4.C+4.C (Uf f n ·» 4j jj jj tft U CJ Cl Cl (C +4 0+4 0 +* :£οωοϊα4-}αΕΕΕϊαιΕο<σ<υ c 04 O *-«

3 IflNO^NCOCVINH^lflfl-INiOH

S’oCOlirlptlfl'ÓÓoONNNCVIIflW n PD LD ro re* Lf3LDr-<CriOinre-^»a^OO <u HrlHHHHMHNHHH H

6

H

o CU

o O o

c c ·= “L

go gel 8 ï i o '•g = i” i «is, s ie β I ί ™ % 5 $ -Ë

s s;” S = = ’ϊί?!» I

5 2 §· 2 -S 5 οΠ ί § ?,a Q.Jc'ü EUQ.I I «g

« 3 c eco -oio-O -o O

*3

JZ

%* *», *>> *r Έ> Έ Ί· =*= “

. C · IW c C C ^ C C C C C

>, o >,00« ο ω ,(i> o )P·^· p

+:½½½½½½½%½½½¾½½ I

oEr— οεεε^^*εεε>>εΕ ^ 0.^^0.333^0-0-0-0+4-0-0 · · 1 I jj ||||+>MIII<UII ΓΓ c < « c <· >t ® 7 f 'ί, >ë fl — g I n n k I I · Λ · | * ·· w o; ^n^innm^^nnnnnn ε Q.

*0 C CVJCVJNMMCMNCMCMNNNtMMM O

3 *“ > +4 S. C 2 <U O i »0 3 « 1 tnh??n‘ï^ - « _ 5 cjÓcjcjcjoÓoooocjooo o

O -O ^-S

.o l. * re o i, I- >- 3501829 14 ** ut cn HonciNU)con«eoi«incocoin co C *·*«**·«*··*··* *

ΦίίΟΝΟΛΛΟΟΗφΝΜΝΝηοΟΗ O

i.^nH'iricMiC'fNwnnw(ninw<f «a· J3 o.

o *T COCMUDO©Lnm«-»COCOCMt''COOC'*'0· "ί

*—» COVOCOlf)U'>COCOin'0'CMCMCM^«S-«0"»0· CO

O. «μ**·»****·»****** λ cc oooooooooooooooo o »*4 I r-< r-H f">* f*- «—* *ί" ·* I—

ΛΙ «« «· ·· &· ·· ·· ·· ·· CVJ *P

T- co »-< »-i qj coco i-f co +j t- v .c +4 +> 2 o +4 10 P· r» pp I* 4J <0 i" r— (0 p“ p· 10 W ^ f* ΜφΟΟΟΦ<βΟΟ<ΟΟΟΌ sc c o

n- -OCCCp-+JCC+»CC+J ''-O C

f—Ό re (0*0 >, QJ (0(0 QJ «3 (O QJ f— i— <— <— +j <-· <0 ^ T- jz jz jz α υ £ £ v -c zz o o o o o gj ·· o.

<öE4->4->4-,o<a+J+J<04->4-><oc:cc:c o cm o xj (Λ CU a) tu S- i— QJ QJ r- QJ QJ I— (0 <0 (0 40 40 t· (Λ 0'sS'sa>)NV.>)VN>)£r££V D.

·- p— o o o oj=oox:oox:4J+->-P4->o o i_ Q N N N It) 4J CM CM +4'. CMCM+4QJQJQJQJCM «/) u: o x x x τ- ω x x cj = x oj e e E ex ·»- C CM O o «-· 3 ifla^NCOOiieunotHvc^^ND «o·

o. «—. I | I I I I I I I I I I I I · 1 I

XJ(_)00'^r-l«Q-Lnl£>CMCMr-IP'-.lO'!3'r'-'C0C0f''· CM

p-0 ^-OCOOt-tCOCOr-40C«*OOCOCOr-4CO ΙΛ QJ w I—li—i ι-4 i—4 «—4»-4f-4»«4«—4«-4i-4CM«-4f-<»H»-4 «—4 ε to Η • ·

CM

ο · · 0 e £.

C 1- Ο Ο Ο ^ ν- E ο C C C _ C ffi C ρρ -ρ- *ρ< ρ· ο « ρ- -ρ- ε ε ο ε ο ο ο so ω cm

P->,ER3<nC>Ci0CCCp— ο. C X

>,4-5 ro I— I— C ·<— I— !—·!-»·!- >, Ρ ι— 2“

-Ε=5 r- >, >> t- Τ5 >, Ό Τ3 Ό Χ r— r— S- T3 I

+JJ >j4)+)^i-+)>f-r^4J >i>)aa *7*

0J|.?33Ot-SS-*-(-QJ4->4->IO t. C

EC3ja-Q**-aJ43QjQj<uE33E:s- gj o 1 I _Q I I J~ CL I CL CL CL ι -Ω -Q I CL Cl. 44

«ι— ι *f> ·*— O f *t“ t· ι· I 4 t· t t* CU

Q£ "DXJ ΕΧ5Ό E CL Ό ClQ-O-O C C T3 c: Q. U

10 o .e • i— r" r~ »"* ® w c* c* c* Ê - Λ1 0) OJ QJ QJ ® I— <4- M- <4- «4- rr 3 t. t.Up-r*r-i-r- ti-ι-ι- ·“ T £> e ooo>»>»>>>>>>o >»>»>> >»>> r— ε E OOOCCCCCOCC^ -C £= ΪΟ 2

o r-ι— I— OJOJOJOJOJ»— QJaJ-4-> 4-5 4-> CL O

lx £££ΐ4·4-4·4-^£*Ι-ν QJ r— QJ QJ Ο *Λ OOüECEECUCC:Er->,EE J- ’Το; ι-·»-·»- O <0 Ο O (Of- 10 <0t- >» Q. τ- τ- O.

Ό Ό ΊΟ Ό O <0 Ο O (0 Ό <0 40 Ό .C ΟΌΌ O ·· I I Ι^>»^ί->»Ι>»5θ·*»5-ΙΙ «η r—

44 U £2-Q U«i- O U *3- ai Q-«0"*t· t- OJ

ej H »<»»11111 »11*· I*· · 2 E cc nnncn^-’ifvfn'e’no'fcnn «a· tj e ε 5 2· c CMCMt-4CMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCM cm o <0 ° > ^ X c +? OJ QJ ·* <= j? -g .. O«-4CMC0^-L0C0P^S- o Ό Η N M f ΙΛ (Ο Γ*«· COCTlt^r—<»—lr*Hi—lp—<«—< H ·£>

c ιιιιι«·ιι«ΐΐ'·ΐ »ι I QJ

ρ· ρ- ααΩοαοοοααοοοαοα a cu OJ £3 __ .a l. ip

•O QJ JV

»—5» w

ρ £ n * Q ? Q

^ y» 3 u L· *3 15 ί

De door de verbindingen volgens de uitvinding vertoonde anal geti-sche activiteit zal thans worden toegelicht aan de hand van een reeks farmacologische proeven, die zijn uitgevoerd voor het aantonen van zowel de versterking van de anal getische activiteit van opiaten als het 5 mechanisme volgens welk deze versterking wordt bereikt.

Voorbeeld IV

Proef nr. 1: Toename van de analgesie van analgetisch-narcotische geneesmiddelen bij ratten bij de Tail Flick Test

De toegepaste methode wordt beschreven door Harris c.s. (J.

10 Pharmacol. Exp. Ther. 143 (1964) 141-148).

.Er worden mannelijke ratten met een gewicht van ongeveer 150-200 g gebruikt, welke ratten niet gevast hebben. Er wordt een punt op de staart gekozen en bestraald met een warmtebron (75°C) en de tijd, gedurende welke het dier zijn staart niet beweegt, wordt gemeten (in secon-15 den).

Er wordt een maximale tijdsduur van 8 seconden onder de warmtebron gekozen, na welke tijd het dier in elk geval wordt verwijderd om beschadiging van het weefsel te voorkomen. Deze meting wordt uitgevoerd voor (controle) en na behandeling met de geneesmiddelen.

20 De toediening van de stoffen volgens de uitvinding wordt intrape-ritoneaal (10 mg/kg) 10 minuten en onmiddellijk voor de toediening van : morfine (2 mg/kg) uitgevoerd. Het percentage van de variatie wordt voor elk dier afzonderlijk berekend aan de hand van de volgende formule: 25 „ _ ti.id na de behandelinq (sec) - controletijd (sec) .. ,ftrt % variatie - -8"- Tontroïetljd (sec)- x 100

De metingen worden 10, 20, 30, 45, 60 en 90 minuten na de behande-30 ling met de analgetica uitgevoerd.

De verkregen resultaten worden weergeven in tabel E, waarin de behandelde groepen en de toegediende doses, het gemiddelde percentage variaties (berekend voor groepen van 5 dieren) van de latentie van de pijnsensatie, de gemiddelde waarden, berekend voor de periode van 1-90 35 minuten (±S»E.) en de potentieverhouding van het morfine, dat als zodanig of tezamen met de verbindingen volgens de uitvinding is toegediend, aangegeven.

Uit de gegevens van tabel E blijkt duidelijk, dat bij de onderzochte dosis (10 mg/kg i.p.) de produkten de activiteit van morfine in 40 het geval van de meest actieve produkten versterken tot een activiteit die ongeveer 3 keer zo groot is dan die van het morfine alleen.

8501829 *. i a 16 4» φ χο o δο ·2 ö ________ ±2 β ·*Η φ -.«λγχΟΙ'χΟΟ^οχ^ο-. ^<o>ntn — «οο>·ηη. .row wiBiVri : φ 3 © . P Η «..•.rv^x^-sx-. _______ t» > > a o m __jS_-- ---- w

«I

•o oeeNnoe«e«io eeoooom«i«ooo <* · n*f*»ono>oio—'fl ^ N « o <f j β> λ n — o> m O M — «· β Λ ·· _ · ·· N M |M ·· N · N N ··

e» *1 «I ♦! *1 ·Ι *1 ·Ι *1 ·| ·I ·Ι ·Ι ·| ·1 ·| ·| ·Ι ·Ι ♦! *| ♦ι ·| ♦! ·I

Φ ·

ιρ Ο γ>* αιχβοι-Ν^η,αΛα _i/io-KO<n~aic>«N

§*— >» »βιΛ»ί>ο·>»Λ9ΐβ»»Λβη^κιη·ηββί» — Μ <β Λ β ιΛ «η ·» IS 1Λ> «Ο η ιΛ ιΛ Ν is 4 η Λ X Κ ,η κ ► ,1C______ fi .

Φ «η οοο··βιβθηθ4θο - ν — woooooo» .

>? ** ·%Λ^»»Λ·0»«,^*·>·\·>·»···*·Ν»·«·ν^» Η · e<n«N^na»>M*n0^ion<rio*Na*otf φ ·· (Μ ·· Ν _ Ν χ e — — — · •Ρ · ·Ι ·Ι ·Ι *1 ·Ι *1 ·| *1 ·Ι ·| «I ♦< *1 ·| ·| *1 *1 *1 *1 ♦! *| *| ♦! *| {Q Ο p · « <ηηβΝ··<ΜΙΟΧ'»·(ΧΛβΜΟ>ΛΝΝ·#β»'(0>· φ ·> -00000Μ- k * eotrsinxoofvaana — 7 — — — r — 1 niiAxxxnKe^ajaainninNnunintfitt

-P

Φ______________________ , Λ — ΟβΟ*·ο<ηο**β>βηΟβηηκιηβοο°β« • ««««.%#*· · *· ^ ^ Φ Ό ι* ’ ν ν « ν is er><*NN_>nf>>r>>»N_ooaato>a <β — — — — — — — ^ ^ — — “ “ " Ν “ “* ♦I *1 ♦! *1 ♦( *1 ♦! ·Ι *1 *| *» *1 *1 ·| *1 ♦! *1 ♦! ♦! *| *| ·| ♦! *| 6ο ρ e μ ο·^·οηβ>βο__Νβ(χηηιΛ_ηιη_Νθιο . 90 · _ ·* ^ *Ν Λ ·\ ·* m _ β «·Β·τηβιηβΐΝΜΝΐβιη·ηΝθΝ>οο<ηιχ··«η ρ mm οβ^Λΐηβί.οιβΛιοη ιοιοσιαΝηπιηοιβοι •Η > _______ ..... · 4» •Η «η οοο>ηρ|Ν«»Α^θιηθθιΑ·χιη·οβοοο J3 *. — — — a»·** — ·»··— m% βΜΝ««<ηββ,,οββ·ββ)οα··ιχθα··)η »

φ mm — — WCV — — — — — ΡΧ — CX — mm mm Pm mm mm O

<Ö mm - · ♦ ♦«*!♦! *1 *1 ♦! *1 ♦« *| *| *1 *1 *1 *1 *1 ♦! ♦! *1 ♦! ♦!.♦! ♦! ♦! D <n p « k ΚΝΝ<τ·τΝ«·βο>·····τβι<οο>ι·ηο······<οη S ** ·ν*·ν·ν ι. •>Mtf<eo<rN>r^a>0<rnaKeN»eiioe,«fi,t *y P I ·# * o <# «e . «e « «o estn^metnNOxx m β n a O m___‘ > Φ-- 1 & n ooo»e**°eo><n«oeoein«ooooen P ·. ·.···« — Φ ,¾ · ·>αΟ'>«<ι·θβΝχ>ιβ··αιηοηιΑββι···θ)9ΐ 600 *<X — «« — — ** — —·— — —— — — — — mm N — c H ♦! »1 ♦! *1 *1 *1 ♦! *1 *» ♦ ! +1 *1 *1 ♦! ♦! ♦! *1 ♦! *» ♦» *1 *1 ♦! ♦! •rt 1*1 * rrt &. α <r enmenmiea os>oiotemnn«e->^oa<r π *y - — — «.x.»·. — *.*·»*·» — /j . <0 oor.t»eotnw o-«xo_moic-»'ino«>Nrfe 5 Π ar a«erxeiner>er>r>in«ixKKiA««inoiv>· 14¾ oen —:--—-- φ Φ <d mm oeen#orxeee«ooiAK*oeeeooo >Ö » x V K « K · » r · * ^ ^ \ |n « »χιηιηβρ»'θ«^1ηθ-·οο>βΝο<θΝ^οιθιχ·< O Ή — — ex — — — — — rx rx — — — — — — rx — — — — 2*° e ♦» »| ♦! *! *| ♦! »| *| *1 *| ♦ ! *| ♦! *| ♦! *1 ·! ♦! *1 ♦! *1 ίΛ Ci W * o' m * «χ*χβκιη^ηιΛ_β<ιοηοθΝί*ο<ιιβ'χ<β !T jS *x — — X.»·.*.

u ’J, 0 a r> η. η ν _ · <r ia w o eoea*r»««»’r·*· _ ® mm 00««eN0r>rta«r»ixNK««ne^ene

Φ «H

•Ö Pi _______—- ..

§ d «» θοοηη·τΓ*ηΛθ·βχ»<οβοοο·»ο·τ -p · mm « f« « M m fg mm o ® - *1 ♦! ♦! ♦! ♦! ♦! ♦» *1 *1 *| ♦« *1 «I *1 ♦! *1 ♦! ♦! ♦! ·Ι ♦} ♦! *1 *1 π] ® * ^ φ mm m «B<na»<#«oiAMe>^<eot«x>rtf>n«r>xOie«<o*oa>r^ ^ (O e? O «η iT 4 x 01 n r« χΓ 0<τ<τα0ΐΊ«·ηη*0 xH Η _ -βΝίχηϊββιβίιχΛΝηΛΧ-χ

Og------— ö / _ Μ φ / ^ H >b / — _ TS·/ ο-Νη«<ηβχ·0β·ιχ

K r1 /. m _NnxmexB9-x______x>NNN

η 1 / Φ P C uuuuuuuuuouuuuuuuuuuuu

?5 / <Ö h -H

& / S» ε ^......................

/ rjc ,9 i*«****e»e***e****ce***·:*·*

ΦΗ ° Z

pq h 8501829 8 17 * , -Ρ Φ Ο

—c.ca·8 tf-i— , —— — I

2 £ oo«-o'iiMftm<-'-0"TO'inoin<o(?wo(Mon c^n οοονΊ

ή Γ· I «4 & ,2 ' ec®^v0^T-oinNmos<-*"0\ns(D'-0'N0\ oint. ϊη£- σϊ I

ί> ί> !> Η Η ώ ·"·“·“ cn«-c\i«-c\J«-ru«-c\JCvi{\i*-«- — ο cu «-«-«- cu «- cj c\j «-cy λι I

-— 7 2* ” ----1 .*? I »i η η o ««/< λ·«— ο'» — οβοβ— ιη*ο — β^β <M α o· <rm i

1 I α η μ μ — — Γ4 — rx fx n— r»f» — r· — — — — *» ·»* — — m — — — ·* I

2 I ·! *1 ·Ι *1 ♦! *| ·| *1 ·1 *1 ·I *1 *1 *1 ·Ι ·Ι *1 *1 *1 ·Ι *.Ι *1 *1 ·Ι ·| «ι ♦l+j^ j

* I «μ .·<<ιηβ*ο^ιοο·«ΐο<βη»»θ(Μ'»'»βο«--<» «o «r * *^*o I

w I «h «s Λ# ·» ^ fV Λ ^ β | " I «r eia.nNO«f«re^e^«a^N0On«rMKn^ o * I ·

I mm ΜΛΛβ»ΛβΠΐ0^·ηΝ·βΠίΟ^ί>ί·ηΐ0«Λ· «# Ki · **m 2 I

I η o «Λ oe»faMrt — »ftn^ o «r βθ μ η e · « » · ^ ·β e «e *J»« n 1 _ I " ♦!♦!·» *1 ♦! *1 ♦! ♦! ♦! *1 ♦! ·1 ·| *1 ♦! ♦! ♦! *1 ♦! ♦! ♦« ♦! ♦« ♦! +| ♦! «tl +ι |

o Ι «i _ I

2Z Ι *Λβο«ηΝιβ — erf*-e Λ./ rfinerfMnoie r» «n *» em N I

« »α.αα«α.«*λ«.α·*«ααα·.Αα ' » * " * «v«s ·» «Ά ft I

I a ma«Ooinioo<onn — — — a — ΝθΐθΝβι·#ιη · m rvo M I

I o» ι m o«n4mNn»me «o^ te « rt · ····» * β οι ·» » —«o e | I a j

I Ml A »*,«0 I

I rvonetpnMQeclMOtAAirOANpaANO * (/> r> «O « 1

_ j*i — — A· - - N η N (V ·*ΝΝ«--«Οβ I

• 2 I «* +f ♦! *1 *1 *1 ♦! ♦! ♦* *1 *1 ♦! *1 *1 ♦! ♦! *1 ♦» *Γ *1 *1 *j t| ♦! *·** ♦* I

I « m n <r «r a ηβι*ΝβιήΛΐη·“Α*'·ΜΑ·Ί β _ιβ 1 I · «V ·» A o A «, « *·>ααα·*ααα·>α***Αααα*α01

ι — η«ΑθΑβ·Α>·ΐ9η··«ΐιβ··ηΑΐΑΑθηη0 nM a *”σ* “ I

I Α«··ΐΑΑ<ΤΙΒ<βΟΙΝβΙβΑ··η·Τ(1Α » A < Β N lp «Β *Q " |

* I <A I

I A M · I

I η «ΑβΙβΝΜβΙβΑΟβΜββηΟΑβΙΑΟΝβ t ^ ^ o N » _ I

I — ·· Μ μ N — — — —» — · ANN- «Ni *M — O - - - «ΝΙ0 β I

Z* I *i ♦» +1 ♦! ♦« *1 ♦« ♦« ♦· ♦* *1 ♦! ♦! ♦! ♦! *1 *1 ♦! ♦! ♦! *1 ♦» ♦« *« ♦ ! ·| -*1 J

rj * I A ’ Α«ΟβββΑ·ΤΝθ«Μ·Τ<βΑ··βΟΙΑΝ«<*ΐη Μ β* |

C I A ΑΑΑ·.Α.Α·.·Ν«*«Α· »»ΑΑ«Α*»ΑΑΑ.ΑβΛ· n” 0 I

Γ 1« >·βο··βο>··«»ηο··β·τιη<βηιαιβηιηο«βι «β m «ο _ _ I

5J I I ^•OfN.attoee^rN.teatAetetw^tnnMettnetAet^Ma a? “ I

Q I · 9 ” I

> ___—--4

w I · I

H

p I * mom «ΝθΜθ«ηβ«^η^9βθ·τΐΑΝ·«Μ o»o ^ JJ tf% |

jg * I O ·· M N -* ^ W mm mm ° . J

3 ê -♦! *1 ♦» *1 *i *1 ♦! ♦! *1 *1 ♦! ♦! *1 ♦! ♦! ♦! ♦! ♦! ♦! ♦Γ*! ♦! *1 ♦« *| ♦! ♦! *'♦> +| I

*”* J «* onenAMAinAoi o‘ οηοοβ*βΐΑθη«β <M m «» *1_ I

1 A Αα αα·*α*ααααααα*ααΑ·ναααα...««1. Ο % I

• J to «seninrfnetnneinwne<ooeyine«OA ο ο «β “ ° « I

1 * ^βΑοιιηβηβ — οιιηοΐΒ-τ^βηΝβΝΐηιη» ο ο· οι. οι I

1 «η I

I aba " _ I

I — — ο μ a · a n *ioe«A<rnio ·»««>« ο β N η β — .a I

I — «ON·· «no···· « N N N 0«··· «· Oi — .— I

A I

« I » ♦!♦{♦! *1 ♦! ♦! ♦! *1 t| ♦! *i ♦! ♦! ♦! *| +| *1 ♦! ♦! ♦! *1 *1 ♦! ♦( *| ♦! ti*l +1 J

O I I

n I *| Νβ«οΝ·ο ηοβΑθ«ο·#θΑθιηιηο ne * a**in

I · ·\ « % A · fcfc«fc«AB»l|A**»*·» »^AbI

I «ο «οιηοηβοβΐΝθιηΜθβιθ·η«Αβιοηβιθ βΝ κ» ο*1 β

j a ««A ο^ιηηΜΟΟ^οοιβ β,ο * « * β β m ο « β ο β I

I η ι

I a .«οοοΑΜΝηΜηη«ιη«·«Α«οβι«·τβι η· « *]ο * I

I · ·« Ν « ·· «Ν«««Ν — — «η««« » A « « «· “* "* I

« I ·Ι «(♦!♦! *1 ♦! *1 *1 *1 *1 ♦! *1 *I *| ♦! *| ♦! ♦! »1 ♦! *1 ♦! *1 ♦! ♦! *| ♦! ♦·♦! *· I

ο I Ι

«· I Ν OAA«IOlO«IOOIOlOOOe — 0 — lONAtfl — — Π Α ο Ν ο Λ I

I A « ΑΑΑΑΟΑΙΙΑΒ AA·!* A AAA «« « A A A I

I β ο«ηηο,«·_οο·ο··Β·-·Α^«·«Ν.α»·Ρ — A-^^racw ^ m e* — a. » j IT - - * « «Ν ι “ " n m * * n * , " AifAN. a I

β /1 I

Φ / I I

t) · / I

T3 / I I

sj / -. I

É* / ο ^ Ι .

ƒ ji I 5 <κ£ΐ5ΐΐ!-£!1<β'>>αβ|β«Νη««ιιβΑβοι o · ν η* « J

ƒ *w I Ο Φ in to m in m> m I

/CIO C^lllllllllliiiiiiiiiiii ι t Iflll j g J ,Jj uuuuuuuuu uuuuuuuuuuauu U o u u u u ι J J3 Cl ^ φ^φφφφΙ / WH §**:*****:*·:*«:**»:ο:Μ:**·:·ε*:*;*:*:**«:*Ι £_j_a ___ a s ft 1 a 9 q ___ » ajbn»^Se'H*'“*-'-*f^,ee',^'n'er*e,w · 1

. i . . ^ 0 4* ,^¢^lβfc»"·“0'‘,,*»ιn,Λ'*',* ' I

fj β I A nd - Λ--ΝΝΟΝΛΑ.---Λ-Ν J

p § 8 .2¾

ψ >. ,>-g-5j-^--------———--J

I w | Oou^eMnNn.Cinyofiin I

I ·" { I

I · I I ·* ·· · «,p> o. M<ee>»«n-«e»N I

I o I —— — ·-> — — w ” ** ** I

I Tl *1 ·Ι Μ ·« ·Ι «I ·Ι *1 *1 *1 ·| ·Ι ·Ι ·| ·| ♦! I

I ο I Keoioc ·τΝ·η^ιηο^ι«·«· I

I ™ I I

I ·- ( «mn^e^nae^aartHiinoei I

I I ·ηβιΛιηι»·ο>ιβ·ω·«Μ·τ·«<ηιβ I

ic I

I I ooooooeooooooooo I

I I I

I I Ν.ιβαη·ι«θιο··οιο>ΝΝ··η J

I * J ·» ·| *1 *| ·| ·| ·Ι *1 *| *| *1 ·Ι *1 ·Ι ·Ι *1 I

I ΟΙ I

ο* I κη<*ο>ηο<Α«η<ηΜ·ι I

I I I

] I βιηθιτθ··κΝ^<ιηβΝ·βι·ηκ |

I j ιΑ κ ν ιηιΐιβη^κΝη NKnrk I

I I οοοοοοοοοαοοοοοο I

I I h v · ^ ^ « «I ..· « ·) ·, <^ · ·> ·< I

j I eop»K^one«)..rf — I

I “ I *1 *1 *1 *1 *1 ·! *1 ·! ♦! *f *1 *1 *1 ♦! *1 ♦! j

I I I

I <a j ββθΝηβ·η«^ιηη#αΐΜβΝ I

I j Ν·τβΐΜβθιηηκ«τιη·Ν·τ<<>ιβ I

I I r>r«<rneee>n«fk««in««« |

I I OOOOOOOOOOOOOQOO I

I I I

j oO(vmo<fnnc>r>rnoininp· j

^ j *1 *1 · ·| ·| ·| ·1 ·| ·| *! ·| ·| ·| ·| *| ·Ι I

tiü I «η Ι η ο σ aoi<ru<oinomp>isor«a I

I—t I ·» I »V ^ ^ v v ^ J

Q I I βΟ<·Μ·^<θ·Οβ«Α«0^ρν·»^^ΜΜ I

^ I j to OviNnaotmeoi^NinNae I

2 1 j ο ο o ooo oooooooooo j

I I ·**«*·\··«***^·»·*·%ανν·** I

w Ι I KnnMf^o*rO«rtnOtnrsétors«> I

p I J *1 ♦! ♦! ♦! M *! ♦ ! *! *1 *\ ♦! ♦! . j £3 I o I tv σι to k rsü ‘ o oionnfsinvrotac 1

pqj a ι •«^•ν·*·^*,·**^^^***»* I

<j I I «tO«»«pOOaOtetAOO««OOt«# I

9 Ι «AQiaatcieoiooiettfii^tOKtfift» I

I j οοοοοοοοοαοοοοοο I

I j lAanoaONnni^atottioao I

j Ξ I ·ι *1 *1 *1 *1 ·Ι ·Ι ·Ι ·Ι *» ·Ι ·Ι *1 *1 ·ι ·ι Ι

I Μ I I

I I o»Noa«ro«oi«tf)eeoi «ο « a I

I I ι I I ^ν^σ»ο«·ο·9»ΜΝ<Αβο·»·« ι I I ·#β«τ«βοσκσισι·τ·τιη^·ηβ 1 Ι Ι ο « ο e οοοοοοοοοοοο Ι

I I »«ιΛ^«β*»ΛΛΛΜβ»Λβ»·Ν I

I ° I I

I — Ι ·Ι ·Ι ·Ι ·Ι ·Ι ♦! ·| ♦· ·| ·| ·| ·| ·Ι ·Ι ♦< *1 I

I I «·ηΝ>ηοοβ«ΜΝβθιηοη ]

I I - - - . I

I I neoiONinirtnNi«m»eie»in I

1/1 π # m β *. ο — ι

1117/1 I I f ι · I t I I I I » · « t I I

g / , I uu'uuuoooooooocioo Ι I / >ti j ♦♦·♦♦*·♦·.♦♦♦♦·· ι j / g 1 tCKXKXKCKKXKKSCKC j / Λ Si

I © fH I

I PQ HI

850 1 8 29 ___ ' _ __ 19 -ö eS'.Se—---- £ is £ g 3 *> - - - --v ί> > > B θ ώ <w. «- οι «- — <*> .___ u •Λ. ο Ο ^ « Μ <Α *1 Ν Μ - « ^ — ο ·Ι ·! «| ·| *1 »1 mm * η ·>«·* <*> ο « » « \ * — . Μ · « Ν »» ι* η ι% «ι f» ^- I * .....

Μ « β « Ο Ο Ν ·· Ν Ν Ν •I ·Ι ·Ι ·Ι *1 *1 * Ο «· οι η <η η ΟΙ « ^ * fc * ο β ΙΟ ο ο π η Ο μ η « ο ν « ιΛ Μ * «β Ο* β «Ο Ν 01 ·« Ν • · ♦I ♦! *1 ♦! +1 *1 ο β Μ η ·· Μ π « κ ^ ^ * ο • · οι C π Ο t« ·τ β μ η μ 60 ο* — #»«*»«· ο Η Ν »· W ·» > - *1 ♦! ♦! ♦! *1 ♦! ÏJ Ά «Ο Γ» «- ·** * <U *r · ^ ^ £ ** Ο - — ΟΛΟ ^ β η λ · οι β J3 __________ W β η ΙΑ οι Ν FP Λ « » « w ο <{ * . * Ε* * ♦! *1 *1 *1 ♦! *1 β Μ · « «Ο Λ « % ^ «k.

«r «Ν β ν ο ο β φ # κ « ο * — " μι ^ m m *+ mm mm mm ^ - Γ *1 *1 ♦! ♦! ♦! *1 Ο ο< οι ^ ο. · « ·». ·«·!»·» η ν η · Ν ν « η οι « « * • · ΟΙ · « « -.ΚΙ W ·*·*»« _ ·| *| ·| ·| ♦! ♦! β οι · Ν Α Μ οι · “ · * «. H ο » Α Ν Ο· ΟΙ « Ν + Ο Ο Ν · β / α> / •d / TJ / Ν ΟΙ Ο A « I*

il / Τ *7 *Τ "7 *7 I

/ I β ο ο ο ο β / ο / ιΰ *♦♦♦♦♦ / §60 ****** /•Ί Ι'*- *? η A fx / m ^ ^ .;: y : ύ Jl ίί J ,m in_________

1 V

« 20

Voorbeeld V

Proef nr. 2: Hot-plate test

Deze methode is beschreven door Eddy c.s. (J. Pharmac. Exp. Ther» 107. 385 (1953)).

5 Er worden groepen van vijf mannelijke ratten met een gewicht van ongeveer 150 g, die niet hebben gevast, gebruikt.

De dieren worden op een metalen plaat op de bodem van een transparante cilinder geplaatst, welke plaat wordt verwarmd tot 55±1°C door een azeotroop kokend mengsel (aceton-ethylformiaat 1:1).

10 De reactietijd wordt gedefinieerd als het interval, dat ligt tussen het moment, waarop het dier op de warme plaat wordt geplaatst en het moment, waarop het ofwel zijn poten begint te likken ofwel uit de cilinder tracht te springen. De controle-reactietijd wordt 10 en 5 minuten voor de toediening van de geneesmiddelen en 10, 20, 30, 45, 60 en 15 90 minuten daarna gemeten. De dieren worden gedurende een maximale periode van 30 seconden op de plaat gelaten.

De respons op de toediening van het produkt wordt positief beschouwd indien tenminste een verdubbeling van de normale reactietijd wordt waargenomen. De verkregen resultaten worden aangegeven in de ta-20 bellen F en G, waarin de behandelde groepen, de toegediende doses en de verblijftijden op de plaat, uitgedrukt als het aantal positieve responses ten opzichte van het behandelde aantal, vermeld worden.

8 S3 0 1 0 2 9 21 s

Tabel F

Vermogen van diverse verbindingen volgens de uitvinding tot het versterken van de activiteit van anal getische geneesmiddelen bij de hot-plate test.

Behandeling Dosering 10' 20* 30' 45' 60' 90' Totaal rag/kg i.p. aantal posi tieven _x/30

Propoxyfeen (Pr.) 15 2/5 2/5 3/5 3/5 1/5 3/5 12

Pr + verb. 0-20 15+1 (C-20) 2/5 2/5 3/5 3/5 3/5 3/5 16 + " 15+3 3/5 5/5 4/5 5/5 4/5 4/5 25 - + - * 15+10 " 4/5 5/5 5/5 5/5 5/5 3/5 27

Oxyfenyl butazon(Oxy) 50 2/5 1/5 2/5 2/5 0/5 0/5 7

Oxy + verb. D-2 50+3 (D-2) 2/5 1/5 2/5 3/5 3/5 1/5 12 H + " 50+10 * 1/5 1/5 3/5 3/5 2/5 2/5 12 " + * * 50+30 · 3/5 4/5 4/5 4/5 4/5 4/5 23

Acetylsalicylzuur (ASA) 100 1/5 2/5 2/5 2/5 0/5 1/5 8

Asa + verb. C-20 100+5 (C-20) 2/5 2/5 2/5 3/5 3/5 0/5 12 " + " * 100+20 1/5 3/5 3/5 3/5 4/5 3/5 17 " + " 100+50 M 3/5 2/5 5/5 5/5 4/5 3/5 22

Uit de in de*tabel aangegeven resultaten blijkt dat zelfs bij doses van 3 mg/kg i.p. de verbinding C-20 de analgetische activiteit van propoxyfeen kan verdubbelen. In de praktijk is er een maximaal effect bij een dosering van 10 mg/kg i.p.

Q >·> ?; ·· v «1

'S*' ** '* V

V

22

I OJ

C *i—

«β +> O

β w s co h e\ in 03 cm σι «t c*·- 1—i cm 0 co 0 0

r- OX ι-H ι-H CM I—< CM i—I i—I CM t-4r-ICMI

(O Q.

CO ·

4-> r— C

O CO 01 (- +> > - in m m in m m in 10 in in in in in in in in

Ο Μ V Μ Μ Μ V Μ Μ. Μ V --- Μ. V Μ \ M

σι Ο O CM CO ι-I ι-H i—I CM O CM CM CO Η H (O CJ

- m in in to in in in in in in m in in in in in Ο Μ V Μ M — X Μ Μ Μ Μ, V. Μ V V. N, M.

CD Η (Μ Μ ι-I i—I CO in O CM CO -3" O i—I CO *3- - m m in in in m in. in in in in in in in in in

in Μ, V Μ M "x X» X* Μ M v. Μ Μ \ Μ M

«3· N co 3 in cm co co «3- cm cm co «3- cm cm co «3- - in in in in in to id in in in in in in in in in

O s N, s Μ Μ Μ Μ. Μ. Μ Μ Μ Μ. Μ Μ. Μ. M

co c\i co «3- in η n <t co cm co cm «3- cm co cm «3- - in in in in in in in in in in in in in m in in

ο μ Μ. V Μ V V V V — Μ Μ Μ, Μ V Μ V

cm μ h 3· in cm cm in in 1—< 1—1 cm co cm cm cm co 0 r— 0) si - in in m in to in in in to to to to to to to to

(Ο Ο Μ X Μ V X X — X X x x x x* 'x *X

(--1-1 1—I CM CO CO 1—1 CM CO to CM *-l «Ή CM i—IrHi—ICO

^-s —s 1—. to to to

OOO «“>* ^ , « Λ CO CO CO

CO CO CO 10 to to OOO III

. III CO COCO co coco OOO

a. 000 iii iii "— '— '— cn -— —- — 000 υ υ υ

.JÏ to WWW WWW OOO

1-0) · CO OO rH CO rp OJ ο H (O * CO I—I CO + + +

ΙΛ X + + + Ο H CO + + + OOOO

ο o> OOOO + + + OOOO 0000 OE 1—I 1—1 1—1 i—i 1-1 1—< 1—i 1—g in in in in *-1 1—i »—1 1—1 co —. ΙΛ >> < X ^

e Ο O

a n to —- _

0 15= co _ o 5S

$_ O —x I S a C CO =5 CO

Q_ · 0 015” NISSS

w · +J NO 1— O

.p 0) · Ό >1 o ck ε n +>· cj · C Cl Φ = = w i. 3-0 **- -3 •r- 01 > 01 = = -OS- I— S- - +. c> 1— οι = = coaisss OJ >» + + + O >>> «Λ> "c δ· *§ + + §+ + + Ίχ + + + +

Its Cl CL -C · +- ±> _ JZ OO +>+» >»>> 01 IB _ _ <S k k ~ ~ sss= ooss < < = " " 85 0 18 üb 23 :

Uit de in tabel G aangegeven resultaten blijkt, dat zelfs doses van X mg/kg i.p. van de onderhavige verbindingen in staat zijn de anal-getische activiteit van propoxyfeen en methadon tenminste te verdubbelen.

5 Om de anal getische activiteit van niet-narcotische geneesmiddelen te doen toenemen zijn hogere doses van de geneesmiddelen volgens de uitvinding noodzakelijk en is de significantie in het algemeen bij de hogere doseringen vergelijkbaar.

Voorbeeld VI

IQ Proef nr. 2: Invloed van diverse verbindingen volgens de uitvinding op de analgetische activiteiten van endogene opiaten, die zijn vrijgekomen door transcutane shock bi.i ratten en gemeten volgens de Tail Flick Test

De methode wordt beschreven door Lewis c.s. J. Neurose. 1., 358 15 (1961). Er worden mannelijke ratten, die niet hebben gevast, met een gewicht van ongeveer 200 g gebruikt.

De dieren worden onder spanning gebracht door gedurende 20 minuten elke 5 seconden een stroomstoot van 60 Hz/2,5 mA met een duur van 1 seconde toe te passen op de voorpoot.

20 Dit spanningsregime brengt het vrijkomen van endogene opiaten teweeg. Onmiddellijk na de elektrische stimulering worden de dieren onderworpen aan de Tail Flick Test bij de in tabel H aangegeven tijden.

De verbindingen worden onmiddellijk voor de elektrische shock in de in tabel H aangegeven doseringen i.v. toegediend.

8501329 * - 24 I—· σ> o> vo csj i—I cvi m

Ik · <1 * ο ο ° Τ' ° * *

In -H +« -H w +» *—' ^ co © o r*» cocvo oo cm r^> i—i o co n cvj cvoio

« « It AAA AAA

esj on i—i co cvi cm «3- si- 4-> in 0)

H- JC CO

ο © © vo *-c .* -c cvi cm <3· ^ Τ' Τ' ο Ο Λ Λ * f f •r- (Λ CO Ο Ο. -r* Ο * Ο * * r* LU ♦ ^ ^ * U_ CU Ο +ί +1 w +iw «Hww

wmm *n ^ <J" 00 «3" CVi 00 N

•v^tnc o σι ω co csj vo csj c-*

(Q ·(_ (11 Al A A AAA AAA

i- co CO CVJ in *3· CM VO OV 00

4-> V

ω ^ -t-Ό Ο Ό κι u in c OJ V c Ο) Ό fl

*3 « > H CO Λ CVI

> E C f-l cvi —^ co * *—» vo —* φ · ·* · * * * ♦ λ -D — CL O Oje O * * °ff <3 φ O VO +t -H ^ *H ^ ^ +|Vw- r·· flJ V- CO _ ¢) a 3 d co vo *3* h w Sit

o ni cr CO rH C·»* 10*0 CO O

(O _Q mm L * λ * * rU * * * * f- EO cvi m co s η <o co co c

•two I

^ > o c CU CU c cn ts cu Ό Ό C T- i- ·»— 4-> *0 w to

<u S

φ Ό 1- C Φ 4-5 ·»- Ό n / > Π3 -SZ Ό l—/i-

U ·»“ / I I ·"* CO

cn E V'<n O’ CU V- 0) /t- j* ό ω cn / cn ^

I— > W / Ο O

cu / ο ε Ό O.

Ό O

Ü 05 to c •f” c c

CO

o.

cn

£_ Ο O

cu CVI CVi

Ό I I

CO o o 05 05 05 05 cn cn c c c c 05 00)4-5 ΙΞΈ — T:

c i— I— .c *oc Ό C

T- o o CJ *C C C < m CC<CQ

I* ^ $_ CO *1— <0 *1— CO

cu 4-> 4-3 U. - Λ Ο. · · -Ω Cl · · Έ c e jO > u cn > > P cn > > C o O CU CU 0) <0 O 0054-5 > + 4·» 4-> > + +>+>

-C

Q) ·· ·· ·* **

OS C CD. O Q

8-3 0 1 8 ϊ y Τ· 25 5 S ^ λ «η ^ °Τγ ® Γ Γ ® £ r ΙΟ Η'-''— ^ +JW*— <_' co φ μ CO Ν Ν ® Ο ΝΙΟΝ 0 0>U «Ο ’“i «° ιλ η n ιο co co «· tn cm to co 2 CO «Λ »"'» ^ ^

® f f f ï F °FF

0 -H w w +JWW

N Cl C O Φ O J N

Λ» lA ^ ^ VO H

_a evj »5 «o * < evj ^ « |Z cn r^< «s o» h eo rococo •o / ï? I > *”/**" ·—I CO ·“· /co σ » / i- Ji '

/ « V

/ o σ * Ω E

o CSJ «M <7 Q O «-> o» o> o» o> 2 2? cc C c ^ ^ 1 11 < c|<co || < « _ m e <r «o 2 λ ^ . λ cl * * &· * * -o cui> u«n>>

Ü > + +» » + +> -P > + 4J+J

| ω £ Ö ,Λ * -¾ <3 *< ,¾ 4¾

$·****- :-ΐ r -J

ê 26 co *o cm ι>« h po «I ^ ^ «I * o * * O 0 Τ' "Σ" - * * ^ * in -H «— *— +1 cm m in «r «a- co cm io o m ic «a- cm «i cn cn co

A A « AAA AAA

ΙΟ «3- «a- O CM H CO CM CM

, o t-i in »-« ΙΟ x—« <—* CM CO Λ • * * * *** * * ' 0 * * Q * «·"» o * * - * * * * * * O +Jww +) —-w

*”* ID CM «3- O CM CO CM VO

01 CM H O CO 00 ΙΟ σι CM

A A * A η A «ΑΑ i'-. r~» id A3- «a- cm m m a3 "o? f* o > Φ a3 a^ m co

> lO *--- CO —A CO —A

» * * « * * * A—* O + +: O + O + * a:- w* * , + + in -η a— +1«-- + '-a —-

·— CO

0) looco o in ίο ίο *—I in

Π ·3- «CM A3 O r~. Ifl Η V

|Q A Ο * AAA Λ A Λ i— σ η ιο ιο ν ο ιο ν co t Ρ D / ·? / > CO «—I C0 /<η σ / Τ- 0>ί / ο οι ' ο ε Ο «ί »3·

CO CO CO

ι ι ι ο ο ο οι σ ο σ ο> οι

C C C C C C

ο» t— τ- τ- *r- τ~ ι—

C Ό C Ό C "Ο C

τ- c c < co c c < co c.c<eo r— *f «Ο *r— fO *^.<0

Qi J3Q.·· _Q O. · · JO Q- · · *σ t.tn>> i_ i/> > > i_cn>>

cv 0) OJ

CO > + 4J +j > + +J +J > + +J+J

JZ

rti ·« ·· #· CO x *-> -1

Λ ίϊ A Λ, Τ «V A

Ö 5 y ί Ü £ * . 27

in JO

m vo ·—· ~ co * * * “ O —> O * * O'T' ,1.1. « 11 « i,

*"* (O CM CO 00 O CO 2SS

is οι Φ cvj η ή o co co « « « · » · * * * *3- cm cm σ*σ»σν cm cm «μ co co _ . * * - * * * * ° t t ° i£ o +1WW -H '— — +* w

*“* CM CO <ί* «3" CM CO

U) [s n rHCOr-* CO S η *·» * ·> · * * * to to to oo ov co cn m «cf o> *o > aJ «ί· p*» .. _ .> N.r- *- r r !«r = - ° * « °i i ° 1

*3 «* cm o vo r~! <P

Ja OVCOCO cm N to ^ «^ ***, (ΙΞ « ίο η σι n in vo co cm 5 /» *- / ^ _ CO - /« σ /1-^

/MV

/ © 5 * ο ε vo vo £; co co co 1 1 ·

O co CO

ci ci o> cn 2* 2* c c c c *= © 5? 5 Έ ό c *5 c ^ e e < m c c < ca = = «C m

,_ T— (O f- «β ΤΓ S

flj .Q Ω. · · J3Q.·· Λ & · · •o i- w > > i-«n>> fc.cn>> C Λ1 φ Φ « > + +j +j > + +»+» > + +j*» a ·· ·· “ ms: 2= 0 530 1829· 28 in co ιο m σ> o *"**-» o * * o ' - * * * * * * m -H ^ -H '— *— ^ co H N 1—< 10 9> co co σι o m r-t n r-i o cm σι « « « « « « «A* in co n in co 10 co cm

.-t lO O

a*"* 1*·» CO A *» *““* m 4c · -—> -—> · * * o * * o * * o * * - * * . * * ** o -H ‘— «— +) ^ ·— *H w *""* co in co cm o cn co cm «3- O) Ifl t O CTl CO OOr-t

HA* Μ Λ « «MM

in to «t r*. «a- co σι t*» m cn r™

O

> ai m in in <*s > io co ιλ * —* w « 4c «—« « »—> * * * O** O* O * * a: * * * — * in +<>—“— •H'- -H ^ ^ *05 *finco rass co σι cm „q m o O" ri οι ή· o*m CO AMU AAA Λ O *

β ^ H Cl H lO

o / "Ό / i— / > I— / T-

/CO t-H «O

/(fl CT / 1- JC

/ C/> >s.

/ o ex 7 O E Λ

Λ W

in i—t o o o o «* « O O O

VVV

CL O. Q.

en r»- ·—· *'*» -—- CO rH rH * * * i i · ^ * * o o o *— ♦ O) Q) Q) O) Cft O) cc cc es p) T- *r— *r“ t» **"

C T5C “O C Ό C

e e < ca e e < co e . e < ea e

A_ «r>(0 v· IQ *r IO CU

<u J3 O. i a J3Q.A# JOO.A· P

-O i_ en > > L. en > > S- tn > > o e cu + p p > + p p > + P p +» JO ω o5 a. O' o: > 85 0 '1 8 2 9 29

Uit de gegevens van de tabel blijkt dat zelfs bij doses van 1 mg/kg de verbindingen volgens de uitvinding de analgetische activiteit van endogene encefalinen 1n het algemeen in zeer significante mate kunnen doen toenemen: deze toename is afhankelijk van de dosis, waarbij 5 het effect in feite zowel de intensiteit als de duur afhankelijk van de dosering doet toenemen.

Voorbeeld VII

Proef nr. 4: Versterking van de analgetische activiteiten van encefalinen. teweeggebracht door enige van de verbindingen volgens de uit-10 vinding

Om een van de mogelijke mechanismen van de werking van de verbindingen volgens de uitvinding, dat wil zeggen hun mogelijke inhibitie van de enzymatische afbraak van endogene encefalinen, te onderzoeken, werd de volgende proef uitgevoerd: een canule werd in de rechter ven-15 triculus lateralis van mannelijke ratten met een gewicht van 150-200 g (er werden groepen van vijf dieren gebruikt) geïmplanteerd teneinde de intracerebroventriculaire (i.c.v.) toediening mogelijk te maken van geneesmiddelen volgens de methode van Noble c.s. (Life Science j>, (1970), 281-291).

20 De dieren werden vervolgens behandeld (i.c.v.) met 3 /ug D-ala-. methionine-encefalinamide (DALA), onmiddellijk na een injectie (i.c.v.) van de verbindingen in kwestie met de in tabel I gegeven doses. 0e analgesie werd op de in de tabel aangegeven tijden beproef met behulp van de reeds beschreven Tail Flick Test.

25 Uit de aangegeven waarden blijkt duidelijk de versterkende werking van de onderzochte componenten op het analgetische effect van het ence-falinamide (DALA), zowel wat betreft intensiteit als duur.

Deze activiteit, die zeer significant is, zelfs bij doses van 0,01 /ug/kg, is waarschijnlijk gerelateerd aan een remmende activiteit op 30 een enzym (of enzymen) dat verantwoordelijk is voor het metabolisme van de encefalinen.

-j " ~ -3 ¢5 9 Q

t O v ^ * . * 30 * · 4» ... - CQ nj· ^ ·· ·· ·# ·· ·· ·· ·* 4t ·♦ · i * <*« <* β· <* <o <*cn* w c · .** * * * * *

Cm > · · *

*t- JÏÏ j*. > O > <N · · 1-4 ·ΙΛ·ΙΓ> · ON · VD

J3 ^ O cm p* > ο > re· > on > o > in > ®

* 4s « · » » «. » * * V

> m m re o mcN mm ® m £ "2 3 ® +1 +1 +1 +1 +_ +1 OJ o tH r^tn 00 r*rv in in® "Ο ιφ » «I» m ·« ·* * Λ .

th cm cm coo re· <n »-* <—> ** ο ® «Λ a I r-l PM*H re· fV d «-* re·

Cm Φ to CJI Ill- —" -I—..— ' '— — ' 1 "" *o +1+1 +| «H +1 > . ho or* +1® fn ® on»-* π o _ O · «** •Λ·' ·>* ·"> » *·* <5 o> r-*in in in tv m id in vo id m

Ο) I t* Η Η N H

c *Τ“" 1 ' ” “ ————— , 4= +i +i +i +i +i +1 ja - o m η»-* in r*· m co incv i^on S. o » «* . A i » ► « » fc “ «.

Φ ® m m r*r*· ret** m o cn on d ®

- > I (V ·ν CV CV d rH

--------- ω +| +! +1 -H +1 ts +| o cv i-*m re· ••a· m*r in re t" . η o · · ·.· · <* * ·> » — jj; m » ·» no on o on in o t— m co ® u sr re in tv γη m re· i-h nh d i—i £ · ω-------- > s- +! +| +1 +1 +1 +1 o - on in tvco m »-icv in no vdo 0 O * ·» * «» · * ** ** * » (T) ore ® ® cm re re tv inr-i tv®

j A CM .—I m rH ® tv *3" CM d rH

UJ s- co Φ-------- ·“ g +| +1 +1 +1 +1 +1 -o - rn cm on cm ® ® in r* or* r~ co C O ··* · » v » »s ·· *> “r tv o in in® rein tvco ^ ® tn on

η! rH »r h ® r-i In cv in H

< +| +| +1 +1 +1 +1 -Jc · m® ®o r* *J* in n* ,® <—i tv m <QJq »*« Ψ Λ V ·» ·» *« ·» * * **

“ tj rH Π ^ Γ-* O in*» ® «0* *3· 'S' co CO

ere 1 CM CV rH M(V tn*H

re i- > --j——......... —.................. .....

If *5 /—* * n m

oJ G /> O ^ o »H

M +J “ / (J O O O O

> £ !?/ ü o o o o 'XI “ 2/ on I o + + + +

u / w λ ^ ·-· XT XT

re υ /φ\ Q Q O Q

_, ·*“ ƒ W Ο» - w X

1 = /S^ S Ξ S s W r- ƒ ♦f· *f— I ^._____ <0 “ ' » .......' ....... — ^ *" to to to to 2 ω c tones

CTO-H®^· fi Ή *H tH

*® rH rH Q *H »ti »0 .*0 ^£0 lH fitv *H -fV -H tv ^ ™

C ^ « c 3 3·?! J w 1 JHI

ΙΟ ο Λ λ ,λ· ιΐ® *ί® »ί® > > ,¾ δ ο ο^ο ο > ο ο > ο α> a ω ό__________ ε »— re re ρ< ere® cu Cl o ου μ ö O u Q M fa 8501829 31 Λ3 ® < <* CQ* <* «* <* α* <* ®* C , * β* .* * * * * * t JS *>co > m > ο · vo · o «cm· in · *5 ? S .. .. > ·. > - > *>n > r- >n 5* Χ,-ΙΟ r-lr-l 00 *· * ·* & ^ ^ S e-< ^ r* in m - ---—--- ——— ————— , ^ 4.1 +1 +1 +1 +! ιβ cn m +H ^ 2 i-i in P- •ti vo o r-i m mr^ μ «Λ * •ri · - in » * * * * *-Γ in r> 5 mra «cu σι η η ·*Γ COO inr* § 01 ^ m τ* r-r-4 m -> *« ttf) _‘______ +1 .ill .« +i ^a* σ> Nin . ΗΙΛ +» TL. ^j. m vo m o cn cv! tnco cs-t hin * « 0 „V on •η-* «nvo JQvo oo .1 J.1 +1 +1 + l . X1-. .i 4.(,-1 nm o o ö SS SS SU «U »® =“ 10 „V »« ow «<o g« o 2 ------ . ' o • I .1 co +1 ° S*e +1 +1 ®S 2 o οΛ « «σ «o «·«· T*. «‘*1 5 ^ ^ βΓΗ S® n^ λ rH - — — ------ 1 1 1 ''- | . SU SU +i +1 +¾ S's r , - " -V .·« p. ·· SS ss 1 rH ____ lP , J.1 Θ +1 +1 .. . . 4.1 on 5| o SS NO CON COO VOO vn«» N *- »V oV ^vo S|Q o» VOr-l VO f-i mr-t g -—"— "" " +1 n

+ 1 .,,-.1 4.1 4-1 «MO O

SS S'S +U iU SU -· V

- oV. -= S3 53 ST ft "Ti = » S 5 : ®/ovi o + + i z.

S /S< S a £ £ S/gjp ο Ξ O o / Q ·“· ^ I ®

ƒ___ O

5? to a to 5P o'

:5 . _ fi -H C S V

Zj o *H «d · Ή 'Τλ ® o ® +^o +«o . +5® •g 2 + S M ^.-5m I c 5 5*8 1 § ® 1 S*S · g g ‘ I 5 g g£o Q _ ____*

Pt ® ..

? c m . -

6 1 < a 1 O |« M I J

z ö & U s Ï> £· 5? 32

Voorbeeld VIII

Proef nr. 5: Antagonisme van diverse produkten volgens de uitvinding ten opzichte van de ontwikkeling van tolerantie» geïnduceerd bi.i ratten door herhaalde toediening van morfine.HC1 5 Diverse verbindingen volgens de uitvinding werden onderzocht voor het vaststellen van hun mogelijke vermogen de ontwikkeling van door morfine geïnduceerde tolerantie tegen te gaan. Er werden groepen van zes mannelijke ratten met een gewicht van ongeveer 200-250 g gebruikt.

• Met tussenpozen van 24 uren vanaf de eerste behandeling (tijdstip 10 0) ontving elk dier (behalve de fysiologisch behandelde controlegroep) 5 mg/kg morfine.hydrochloride i.p. tezamen met 10 mg/kg i.p. van de aangegeven verbindingen (met uitzondering van de alleen met morfine behandelde groep).

De bepaling van de pijndrempel werd 15, 30, 45 en 60 minuten na de 15 behandeling uitgevoerd met behulp van de Tail Flick Test.

De in tabel J aangegeven waarden hebben betrekking op gemiddelde waarden van deze vier bepalingen en geven het percentage van de variaties van de latentietijd (het optreden van pijn) voor en na behandeling met de geneesmiddelen aan.

20 De tabel geeft ook de waarden van Student's t, bepaald op diverse tijden voor de groepen, die zijn behandeld met de geneesmiddelen, in vergelijking met de controlegroep en de met morfine behandelde groep.

8 5 0 1 § 2 9 33 m ω S —— ;——8—;— π-- η « .ct^coiAr-jjr"* in in $ ss ^ ëJ I -- ^ - r- 2 2* 0 3,- o - j « « « 5 " a ** tnjj 1 Γ Γ c--2«- * I- Γ - t * > Γ-S (N 8 g * g g* ** S1 N oU1 R pT| « r, · ^ 5 - Z S3 S- It *1Ί ii J 2*1 « J „ ^ « £ 4 ~ fi 1 --ri -r— sr I ss a s ° -js ft co oj in g o ! g o £ ° § ° 8 SS ^ “ϊ Η * S « 1 5 « 5* 1 rT 1 * ë" Ü P Ü ’ Ü ” ~ ** I ί _ _

g> ---I- D

£ „f i!= i'g * K s I IT « ~ J s a 5 II -S T3 IS 8 I p E "a c c Γ». ·.·«·* H ·* J* _.

^ -5 S £ί ^ ^ ί 2 h in m 10 d I I _____1 8_ _ _

"ϊί §g ί'ρ^ί'κ^ΓΓβ e *. s I

c m <-3 I « ml, I in *n eo « gj +

Uj *g + g N T- + I ΓΊ ^ ^ _j. 40 ^ ο» aj 8 + ___, ^ f I--r j—ί ·= 8—1 i1—! ·=. 1 51 „ s' , si s' o' si j -n ® <> s p c IH._c toooBOesfnjjio ^ *n *n oj S> -D rj^ O ^ nT oil o' 8 n’ 2 S ° 5 = =--II8- U |j- ’ “ " -1 , « *> * * OJ ^ O 4JB in* ol 4J H m *J I m f1 ^ ·Η > -8 a *1 -J 88 °- % 8 I w- 8 - s 2 £ -rjo O'trU-mQO^'Jwjj r- Jtj'K Sj ? !m = *r pj · ih# in r w « v iw i> g -So ^ « «δ 63 8 63 1 M .. w- ® ^--I S j 'W+* St U I (n S' 5* i. +» o 8 ^ η ^ J?

Si 2| * jti |S 1¾ if 5 S g f__j m * 8^-+ _p—z_±

ίϊ Ϊ A I i I I I I I

WS -ho ιβ «5 R 5

Is ^ S Ss I ^«0 p tco |«.N

11 «I 8¾ I! S5£ S3i 85 Ϊ- « = a 8 3 s .» >oj o CO rC Sm II m ·· ·· < °· 1 a I < Sa ! ü_La-!!_e-1 83Ö13 2 9 34 ---!--g-- FI 3Γ"|| 1— CO fl CM r- 00 II r- fi) &tt

t*· O β ιΠ II 03 o 0% II

« « * *»v « II « « ·* * H

S o r- | oj m *-ji r· s w ^ fi i! i= i +ij +i | +i jj !S * * 1

Ij |e ji

co t~ ji r* g* N I

rjj v o *- tl m n *-| on o on «· I

t- co 8 po η «- j} to o «a* «! * + + I "*_

- J I « I i i I

o r* co fl in on in » rr 1- co on i 'diN >» in S «ï ό vjj cm *- *“ ^*| •H + *- Tl» ** Si nC S0' 10 ^ * +|l +| | +i _ | i | 71 i ** || Π * * j vo t*- ü on in r-tiin m 2 'dot eno*r-o on π to «- cm no j •rs te « ji « « « ji te·. « * ;

g + " T,| ° ^ 'j 8¾ ’ ~ I

~ I r! ί 1 _ <N ON O I ΙΟ Π CO « Λ . NO *1 "T^ r» o en ü on o r-fl m n co n qO Ό % «s fl 9» «n ^ ij ^ * ] h r5 + r- t-.P on r» tniir-in m n

O -H + »- Ü *T r- I

£ & Ί +1 I +1 S__I 8___ - Λ 8 * ! « *» £ 3 5S28Son S I 5 m A vo >3 + inr.ltvoin n i om * ·*

I a +l| ~ ¢1 I “> Tl " "I

*·--s--S i * 1

Xi I * « 5 e j rH *ej* VO *rj* ON ON 9 PO ® j

Sn co O I O <M CM [l lilt- vo OM

tetett**· r * «.te « «I

ej + O r.« CM ON tej>BVOlO CO CVI

e’ 4-1 r-, tl VO t- I

ü »1 » *I| I I

--... —j--5ΓΤ * -«

i 8 $ S

m tf ΓΟ U) B f· N r> I

rö r* r- B © cm os a in co wj •r-s * tv n * «i » q f * ^ m ί g° ? Ti S J *| ? * 5 "| —--!-~] t-i 1 j a , i < ' I g . I | g I .

SS1 I " + ! "_*___I

—S3---«-Hj 5 : TJj +>

c Λ .1 ® ^ i · I

l! 0I 5 “S fiw w L ® ü!t) *i « o ή +> -ü! 1 6 i. 1 s s ? tf s j „ i I ö S ·Ββ6 uj ï< {* m) g Hm | cn > h &« +,tn> w>t ^ Π 3 · / '4 t%v 'ü-· = w ί-t» 35 ———μ—π * JL 1 «d r* r; p* 2 !

t-3 jz «« o V

<H o ·> ·* ·* _T I

b Φ f' O ^ j - - *i.__1

i i I

« * i , jz o tn r~ Jg i

*0 q: m «- o\ co I

3 2 vd rT <o

* + " +1 I

--' I π •ö jS SS δ t2 “ο η m *“ 2* £ o w m &- + M +i — tl | tn to co σ>

"'— "' _ μ ΟΙ N W O

X z **·>·» * j o o o o 3 « f5 ^ « 11 » " g 8 * « jg ° € € £ t

^+^., Λ OJOJOJCJ

^ » i **— *t— *r «f pi o o o ü r— — — ' " ·τ— 1— f“ -f— O Jt * I «H +. 4. **- S- X X SU SO) Λ} SO) β) * _ o o o o

£ Si S £ 5 K V ¥ V V

Csj ·* ^ ,,Γ I ÖJ <υ φ +> S ?

_J +1 ΓλΓ _ O IB B β ID cn N

Lul__ OOO r- P- f- ·-* * * co -- - αι cu ω ω ο o < ^ o o o S-J-I-S-

H- i * WV/V S- S- S- S- II H

; f Cm CM CM o o o o , , _, JL * I Ü. Ü C. ϋϋϋ«ί-ί- »d *- n S -w w w >—- ---- — jL i- m O co co

•h c5 ·*·* * (T ****** η o rs n co S

pj rr P- «β> 00 <*1 «+ Ο Ο «+ Ρ> O

^ + VO i“\ ·>·****

+ 1 ^ CO lO N IO O JO

^ c « ID IO > o ---7" r * * + + + + + + * ^.w—- S_ S_ £_ S_ I- S- * -I 333333 P* 00 £ 333333 nd JZ CM to P“ ·Ί

T5B· ·* J* * * X x X X X X

—4 CN P~ σι P0 PI. ..

Ξ+ VO ·, . pH |v CO Ο I*· B· IO

^ +1 5 CM *-* PJ LO <-l «t

® η Η η N « N

M C #V Λ Λ Λ ·» Λ __ _►—----—— ^ 1-9000000 ft *Η

* 2 Η I I I I I I

+ i2 φ P* «" S'H ·Η II II II II H » ti in pi » 1 m , T9 **· r* *“ m +> +J 4J -p -p +9 «ri O . *T ^ ΙΛ ^ m *r- »r" *r· *r- |i 5 7, ®Φ<ϋωαωα) +1 K+».p+)+>+>;jj ---— ® > > > > > > O. J Η *p *p *ι— τ“ *r* τ* rl "O' +J +J +J +J 4-> ® u u a υ o u m O' O' 2 4> e ο o b ® ® W I « Ο II « II M “ «.

gg*®+ ^ o Ü o UI (9

" ——— — i O. CL O. Q. O. CL

mi +> +· oaiojaioigg

2*Am "DOOOOOO

Sg«o5i u «ooocststs

! I? Ï s 1 J

fl U S *2 ·< ·§ ® oj Λ ·· 5 · 4J · 60 a ü + « > W > « ____jj

a ^ {) p J/ Q

«I y « -» t/ . , 36

Uit de in tabel J aangegeven waarden en uit de berekende rechte regressie!ijnen kan worden afgeleid dat vanaf de derde behandeling tot het eind van het experiment de groepen C-G wezenlijk actiever waren dan de alleen met morfine behandelde groep B· 5 Verder was de morfinegroep na de vijfde behandeling niet wezenlijk anders dan de controlegroep, terwijl de groepen C-G een significante activiteit behielden in vergelijking met de controles tot de laatste behandeling na 168 uren.

Uit de berekening van de rechte regressie!ijnen kan ook worden af-10 geleid·, dat hoewel de activiteit van de morfinegroep daalde tot 0 op de zesde dag van de behandeling, de groepen C-G het niveau van inactiviteit tussen de negende en de zestiende dag bereikten.

De anti-CCK activiteit, de anti-spastische activiteit en de chole-retische activiteit van de verbindingen volgens de uitvinding wordt in 15 het onderstaande nader toegelicht.

Voorbeeld IX

Anti-CCK activiteit met betrekking tot de galblaas van cavia's in vitro

Een strook van de galblaas van een cavia in lengterichting werd in een bad voor geïsoleerde delen geplaatst bij aanwezigheid van Krebs 20 bij een temperatuur van 32°C met continue oxygenatie met een zuurstof-CO2 mengsel (volurneverhouding 95:5).

De isometrische contracties werden bepaald met behulp van een kracht-overdrachtinrichting en geregistreerd.

Men liet de galblaas samentrekken door toepassing van CCK-8 in een 25 concentratie van 10 ng/ml; de antagonistische activiteit van de verbindingen volgens de uitvinding op het samentrekkende effect van het CCK werd bepaald met toepassing van verschillende concentraties en de ED 50 waarde, dat wil zeggen de concentratie in /ug/ml van een verbinding, die 50¾ van het samentrekkende effect van het CCK zou tegenwerpen, werd 30 bepaald.

De verkregen resultaten worden weergegeven in tabel K, waarin de onderzochte verbindingen en de ED 50 waarden worden vermeld, die werden berekend volgens de regressiemethode uit een reeks van tenminste drie experimenten voor elke onderzochte verbinding.

8501829 * . 37

Tabel K

In vitro anti-CCK-8 activiteit van de verbindingen volgens de uitvinding (gebruikte concentratie 10 ng/ml) op galblazen van cavia's, uitgedrukt als de ED 50 waarde 1n /ug/ml.

Verbindingen Activiteit Verbindingen Activiteit _ED50 (/ug/ml)_ED50 (/uq/mll

Verbinding C-l >200 Verbinding C-20 >200 C-2 >200 M C-21 >200 " C-3 34,4 " C-22 >200 " C-4 1,1 " C-23 >200 " C-5 4,2 * C-24 >200 " C-6 0,33 " C-25 30,3 " C-7 0,06 M C-26 146,5 M C-8 0,93 M C-27 10,2 C-9 7,20 " D-l >200 " C-10 43,7 " D-2 >200 " C-ll 0,85 D-3 >200 " C-12 64,7 " D-4 >200 " C-13 >200 · D-5 >200 C-14 118,4 - D-6 >200 H C—15 >200 D-7 >200 M C-16 >200 D-8 >200 • C-17 >200 D-9 >200 " C-18 60,3 - D-10 >200 • C-19 >200 D-ll >200 C-28 * >300 C-36 13,4 " C-29 262 C-42 50,1 " C-30 33,5 * C-47 35,1 • C-31 22,9 “ C-48 119,1 - C-32 > 300 - D-12 >300 C-33 131,7 D-15 245,0 “ C-34 40,1 D-17 >300 " C-35 367,1 " C-54 1,2 C-55 0,5 ft S Λ i 9 V o S? V 'V * v — v 38

Uit de in tabel K gegeven waarden blijkt dat de verbindingen volgens de uitvinding 50¾ van de activiteit van CCK-8 antagoniseren bij een concentratie die, voor de relatief meer actieve verbindingen (zoals bijvoorbeeld de verbinding C-7) slechts ongeveer 10 maal groter is dan 5 die van de specifieke antagonist, waaruit dus een buitengewoon specifieke werking blijkt.

Voorbeeld X

Om het bewijsmateriaal van de in vitro uitgevoerde onderzoekingen te bevestigen werden verscheidene van de relatief meer interessante 10 verbindingen in situ en in vivo onderzocht bij galblazen van cavia's.

De toegepaste methode wordt beschreven door Ljungberg (Svensk. Farm. Tidskr. 68, 351-354, 1964).

Er werden cavia's met een gewicht van ongeveer 400 g gebruikt, die waren geanesthetiseerd met urethaan; de te onderzoeken stoffen werden 15. intraveneus in de vena jugularis toegediend.

De responses van de galblazen werden gemeten met behulp van een kracht-overdrachtinrichting en geregistreerd met behulp van een micro-dynamometer. Als optimale samentrekkende dosis werd 10 ng/kg CCK-8 gekozen. De onderzochte antagonist-verbindingen werden in toenemende do-20 ses toegediend teneinde de berekening van een ED 50 waarde mogelijk te maken, dat wil zeggen de dosis (in mg/kg, i.v.) die 50% van het contract ie-eff eet van 10 ng/kg i.v. CCK-8 kan tegengaan.

De verkregen resultaten worden weergegeven in tabel L, waarin de gebruikte doses en de verkregen effecten, uitgedrukt als een percentage 25 inhibitie van het contractie-effeet van CCK-8 alsmede de gevonden ED 50 waarden, zijn aangegeven.

850 1 8 2 δ * 39 > *—

ra- ω E * je X

— « * ^ ^ * 5 Ιο ο ο ο ® λ jg >s. r— r n e» t o σ> o o σ * ra gj ij. · · · * * * * * *5

= 1_ «♦- O O W O O σι OOrH

-- j_ a« o o ·· n ·· * ;· * o ü O S- 4-3 t-+i t· *» o> W w’ ra- O ·· Ό LU i.

C 9 ra- 4-> > ra-

4-> CO

9 C

O «i C

-e | ra o ® Ow σ vo o cu r-ra

ω> I η -Η o —I I OJ o CM I I o w » S

o> ra ® 'T?1? 'TT'? ^ 7 ^ ? ^ O & III III lil· 0 > x

> C · LU

(O ra- c > οι σι σ> c j* c ai ^ ra— N 03 •a m ε c »- _ +£

ra— Λ C C

£ *5 ” i ra ra- «s N CO CO co i ra- ίο Έβνι i σι ra ra I cn Lf> CM i i co 03 -l>C3c 0» c S S ^3· UO ra «V"6?

r— β) O Q & III III III

<U C LU X

O <0 —. LU

ra Ό σι σ

f— ra- 4* “O

01 ^ £ O) n u c »— co ra

L. O

+£

> ^ C

c ® S i PraCOrH «500 COrHlfï 5 ra ω T t—i ivora-cvj · ' £ o i g £ £ σι ω n < σι ps.030 7 f 7 j_> ^ ,μ Q- III I ' ^ lli ra- C ra- X *

0) φ 3 LU

4-3 U

ra- C

> O

ra- O

+» U 01 ra 4-3 —ra -x * CO ra- > I 3 « „

H_e **” cOOOO-tCnOOOO-JMO

ö® o> o S ra o o o ra ra o ooo —

ral»S ra-^ra. OOOraOOOO —( O O O O

4J 1/3 03

C O E

C O ra-*· «4- CO Is" = ώ ώ ώ 8 CC c c v lil I 1 ι ι i i i ® ai ai > > w s s ii * * $ o

V U * ~LM

* . 40 > *-> • I +)

1- OJ C

T- » σ> +» Ί- '— —* ^ fO O CO »“* COO «—I *-4 I— ·»- · σι *co * ο» O» « 4- CO * «O* U>

E i- 4- >—< O *HO O

-—- L- 3D

Q Q ·· ·· ·· ο υ o s- t- J- ΙΛ »— — o ..

UJ im *» c Φ E co f*»

ip. * M

L II llll'OOOO

ω csj i^ o Q. ·“·

X

ω

—s C

> S_ CO (OrlfflNHCONOCO I

i_ ω <*)ΝΝ«ΐΛη<ί·β α> ο.

> χ

'— LU

I— +4 ω c .ω <u m E co in ifl n η o I» A * · A · *

S_ CM OOCMOOCVIunCsIr-t I

0) cm en σ* <—I ·—I i**» a.

X

tu X» c aj E r^iot-ft-^vor-icooco

•f— A A « **« AAA

i- .-4 M5-ti-CMVO'3-eM«3-0*3· I

OJ rt H O0 H H ¢0 Ο β a x

LU

/ · > O»

U ^ COOOCOOOt-lfOOO

1- ***. t-H CO H CO r—I CO

«Λ D) £ i

O «—I VO

CO CO CO

I I I

e ο ο o ai _ ο» οι οι el c e c c -r- ·»- *r- ·«— •a "Ο Ό Ό c c c c -r- -r- ·.— 4—

.Q JO Λ -O

i. i- t- ία» > > > 8501829 ' . 41

De verkregen resultaten bevestigen in deze wat eerder was opgemerkt bij de in vitro experimenten, dat wil zeggen dat verscheidene verbindingen volgens de uitvinding buitengewoon krachtige CCK-antago-nisten zijn, die zelfs bij doses van slechts 0,1 mg/kg in het geval van 5 de verbindingen C-6 en C-7, door CCK-8 geïnduceerde galblaascontracties kunnen blokkeren, zelfs bij concentraties die zeker hoger zijn dan de fysiologische concentraties.

Voorbeeld XI

De anti-spastische activiteit, die de onderhavige verbindingen 10 uitoefenen op het gehele spijsverteringssysteem, is eveneens opmerkelijk. Deze activiteit werd gemeten bij muizen met behulp van de plantaardige kooltest (doorgangssnelheid door de maag en de ingewanden) en de resultaten worden weergegeven in tabel M.

Tabel M

Voorbeelden van anti-spastische activiteit van verbindingen volgens de uitvinding, die intraperitoneaal bij muizen zijn toegediend. De waarden zijn uitgedrukt als de ED 50 in mg/kg, dat wil zeggen de doses, die de doorgang van koolstof door de ingewanden met 50% vermindert.

Verbinding Anti-spastische activiteit: _ED 50 mg/kg fi.p.)_ verbinding C-28 91,8 verbinding C-30 77,7 verbinding C-34 65,5 verbinding C-35 180,9 verbinding C-36 208 verbinding C-37 160,1 verbinding C-41 182,4 verbinding C-46 66,9 veréinding C-4 38,8 verbinding C-6 29,5 verbinding C-7 16,8 verbinding C-20 77,5 verbinding C-27 40,3 verbinding D-2 50,7 verbinding D-5 74,9 8501329 ♦ . 42

Voorbeeld XII

Een meer specifieke anti-spastische activiteit, die veel meer gerelateerd is aan een fysiologische situatie, wordt door de volgende proef geïllustreerd.

5 De buik van een geanesthetiseerd konijn werd opengesneden en het transverse colon werd blootgelegd. Een kleine met water gevulde ballon werd op het vastgestelde punt ingebracht en met behulp van een met water gevulde canule van polyetheen verbonden met een drukoverbrengin-richting.

10 De optimale gevoeligheid werd vastgesteld in relatie met de fysiologische omstandigheden en de produkten werden door de vena femoral is toegediend. Contracties werden geïnduceerd door toediening van 100 ng/kg CCK.

De activiteit van het produkt volgens de uitvinding wordt geïl-15 lustreerd in tabel N.

Tabel N

Anti-spastische activiteit in het colon van konijnen, gestimuleerd door CCK-8

Verbin- Doses Experiment Experiment Experiment ED 50 (mg/kg iv) dingen (mg/kg 1 2 3 r: (correlatie- _i.v.)_coefficient) C-6 0,1 0 - - ED50 = 1,53 0,3 -24,1 -14,9 -8,5 r = 0,943 1 -57,9 -45,0 -41,8 t = 8,05*** _3_-91.7 -77,5 -81.6_ C-7 0,1 0 - -10,7 ED50 = 1,11 0,3 -19,1 -36,8 -21,8 r = 0,919 1 -42,6 -74,2 -64,5 t = 6,58*** _3 -ïoo.o -loo.o_:_ (***) P < 0,01)

De vermelde gegevens duiden erop, dat verscheidene van de onderzochte verbindingen volgens de uitvinding ook een antagonistische werking hebben (zoals reeds is aangetoond voor de galblaas) met betrekking tot contracties van de Ingewanden, die zijn geïnduceerd door CCK, dat 20 in hoge doseringen is toegediend (100 ng/kg).

De anti-spastische activiteit wordt bij zeer lage doses van 1-3

v ;; η 1 $ 9 O

* . 43 mg/kg aangetoond voor de beste van de gebruikte verbindingen.

Een andere interessante eigenschap van de verbindingen volgens de uitvinding is, dat ze de galstroom aanzienlijk doen toenemen.

Voorbeeld XIII

5 Het volgende experiment werd uitgevoerd: een canule werd in de galleider van een met urethaan geanesthetiseerde rat gebracht tezamen met een smalle naald, die was verbonden met een buis van polyetheen, en zo werd de gal vloeistof verzameld. Dit verzamelen werd gedurende 1 uur uitgevoerd voor de intraveneuze toediening van de te onderzoeken ver-10 bindingen en nog gedurende een verdere periode van 2 uren na de toedieningen, waarbij de monsters, die met tussenpozen van 30 minuten werden verzameld, werden gewogen.

Teneinde een mogelijke dehydratatie van de dieren te voorkomen werd 0,5 ml fysiologische oplossing met tussenpozen van 30 minuten toe-15 gediend tot een totale hoeveelheid van 3 ml.

De voor verscheidene van de verbindingen volgens de uitvinding verkregen resultaten worden in tabel 0 aangegeven en uitgedrukt als de ED 50, dat wil zeggen de hoeveelheid stof in mg/kg i.v·, die in staat is een toename van 50% te veroorzaken van de galstroom na de behande-20 ling met de geneesmiddelen (gemiddelde waarde, bepaald gedurende de periode van 2 uren) 1n vergelijking met controlewaarden (gemiddelde waarde, bepaald tijdens een periode van 1 uur verzamelen voor de behandeling met de geneesmiddelen).

Uit de gegevens kan worden afgeleid, dat de onderhavige verbindin-25 gen een krachtige choleretische activiteit bezitten; de ED 50 waarde voor de onderzochte verbindingen was gemiddeld 5-25 mg/kg i.v. en er was een opmerkelijke overeenkomst tussen de dosis en de farmacologische respons (de correlatiecoëfficienten waren in alle gevallen in feite groter dan 0,90).

85*3 18 29 44

Tabel O

Percentage van de variatie van de gal stroom bij ratten, geïnduceerd door verscheidene verbindingen volgens de uitvinding

Verbindingen Dosis Effect {% toename ED 50 (mg/kg i.v.) (mg/kg met betrekking tot r= (correlatie-_ i.v.) controles)_coefficient)

Verbinding C-6 3 + 40,4 4,2 10 + 69,8 (r= 0,93) 30 + 88,7

Verbinding C-20 12,5 * 48,5 19,4 25.0 + 63,9 (r= 0,98) 50.0 +108,0

Verbinding D-ll 12,5 + 33,7 18,5 25.0 + 80,0 {r= 0,98) 50.0 +118,8

Verbinding C-30 12,5 + 33,7 18,5 25 + 60,2 (r= 0,99) 50 +121,2 100 +197,8

Verbinding C-35 12,5 + 9,6 29,5 25.0 + 51,9 (r= 0,98) 50.0 + 91,9 100 +159,7

Verbinding C-36 12,5 + 15,5 26,75 25.0 + 48,5 (r= 0,99) 100,0 +215,8 8501iib * 45

Voorbeeld XIV

Om de hypothese na te gaan, dat de anti-CCK activiteit, die door de meeste van de onderhavige verbindingen wordt vertoond, met voordeel kan worden gebruikt bij de behandeling van anorexia bij de mens of als 5 een eetlust stimulerend middel voor dieren op de boerderij, werd de volgende proef uitgevoerd;

Er werden mannelijke ratten met een gewicht van ongeveer 160 g, verdeeld in groepen van 10 dieren, gebruikt. Het geneesmiddel werd dagelijks gedurende 3 weken in de aangegeven doses aan elke groep gege-10 ven.

Het geneesmiddel werd in de vorm van het natriumzout opgelost in water en toegediend in een volume van 10 ml HgO/kg, terwijl de controlegroep een gelijk volume van alleen het oplosmiddel ontving.

De volgende tabellen P en Q geven de gemiddelde waarden van de 15 voederconsumptie en het gemiddelde gewicht van elke groep dieren, berekend per week, alsmede de Student's t waarde, berekend uit de diverse behandelde groepen en de groep van controledieren.

Uit de in de tabellen P en Q aangegeven waarden blijkt, dat dagelijkse doses van 0,3 mg/mg van de verbinding C-7 een toename van onge-20 veer 15¾ van de voederconsumptie, in vergelijking met de controles, teweegbracht; deze toename was ongeveer 30¾ voor de andere onderzochte doses en was steeds zeer significant.

De gewichtstoename van de behandelde dieren, in vergelijking met de gewichtstoename van de controledieren, had een soortgelijk verloop; 25 alle met C-7 behandelde groepen gaven een beduidend grotere gewichtstoename dan de controledieren bij alle onderzochte tijden.

Sr; λ (j i-,

V i V £. V

46 *3· cm * σι * cm * cr» r«« * »3- * co * - · t * * * * n po cm n cm co cm cm

CO ΙΟ CO

·* Ή +) « -Η · Ή " βι Γ*» CO *·Γ

(U Ο CM CO ΙΟ t—I

*ί « « Λ " ο ιο σ> σ* 00 Η *™i Μ cm η co co σν «ο * ο νο * co * νο * • * * * ~ * * e CM CM CO CM VO CM + ai cm σ» co O. Μ -Η « Ή , " "Π *

OJ 4) CO lO <—I

o a; co to ίο σ> ·-· I» 3 « * . * »

CO CO ·. t*** O

co ιο vo σ>

o CM CM CM CM

eft t- ω > f- c *o ω __ ΙΛ j, •o co to *

Cfj co ^ σι * vo* (Ο 1- «* · · * **

> 4J < CO CM 00 t-VVO «-Hf—I

CO O *“· a) Μ Ή « +1* -H * CD -D Φ _ o «tj- _ »"

c HI CO CD

cm 2 * * * * •P JZ i— rH «3-

O. w> r— σ> o ·—f CM

t- f—I CM CM CM

I— +J x:

Φ £ U

Λ O eft Λ) *r t. l·· ï J) Ο) > σ> co vo co

Crt ο. ιο *3- vo r-« g= O * * * «—t * (Ο O CM 00 «—I CM «“· «o c r-» o *-v ft) Ό +» + · +< * +» * U +-> ·τ> ο - O ° f- ai f- t-v «-< o vo __=!_· « * * · S lO CM vo vo ij O) CO vo vo vo

CD

c 13 «λ Q. o 0J vn

CQ -I" B CO

eft ΛΛ I * ’-v O o _ 'T*

O O '—' *-H

= t-H O

3 o o «I « o o

V V

Q- O.

< < «C - ' r·» e/ι ift I*·* «» I > I > I > „ u o o * * 4-» 4-> 4-» * * en σ> ο» * c c/ι c en c en fl) · is +j *a +j Ό +> ·· o cc CC CC ·Ρ C l_ T- 0) f- OJ ·*- a> o ai +> .a -o jo Ό λ -ο o Q. C k. 3 fc. 3 1-3 c a> o -p o o >So >to >CO 0) j. ·· *· ·· ·· o CD < CO o Q > 8501829 « 47 r « * * * * ιο oj «β· «ö ιο * * co * }g

^OJlOgjVOt'^O'O

-Π -H -* ^ Ξ^ΐ "Π S

5 5 co 2 ** S +* ® +* en ^ ^ * * * * o §ï * m ir CM « . · «5 · co · o n cvi oj vo^ oj u> ^ j^+l-HUi+f«+fJf2 QJ ·—< ^ _.

0 «o o* „ ’“J. _ · eg σ> σ* ü ,.

ïï o +4 co +» £2 ** oo < "β* ^ * ' * * r- Ui | u> * oi * « «cvi » * * f.

g*H4,co'Hor^«o _ £ ®. « *t « 2 « ra CO O co ^ -Ξ* O CO +> 00 +» £: 0 oo co oo n » * ^ jf

1 ° °- ί · s · I

0.-r-'~S'n“r'§ Λ£ Ή M “ +» * +* „* r- Qi CO Ui ajajcicvj oi ''·· S 3E · · * * " " " S co O OJ Ui 1 _ ιν.,-ι+ίοο+ί;^’··* «M 00 OO 00

^ « «. W. r* M

of'CO^Ci^f'^u: -a-H+i " +· * “ ^7 i= e. « *. - 2

S 2 -M £ +» JO -M

N N OJ OJ

V»

O

1 § · w 2 ° _ — o g rH o

E O O

» * O o V V o. a.

e o < o < . j.

7 7 £ *? > ί ^ ^ « *, ° +, e en c « c ƒ» “ g g.22S2J|f | t3QJ>C/i>U)>Ui > Λ S λ a - f* *Ί i 3 ; Λ» - t ^ '·£*? *J i O i. c? 48 κο ρ*. * »3· co * o * CM * CO * « * * « * * * CO CM «3· CM *3- * <* po p^. cm co *£ -H Ή · -η « Ή*

(U VO Ή N

01 ps CO *3- ι-H O H

2 · · * *

CO CD «-1 CO

O CO CO CO

CM CM CM CM

« CO *« CT> * 0\ * c cr> * o* o# CU · « f · ♦ » ♦

II CM H <c U) CO Ol CO N

gi S O CO

0 L·* -Η -Η « Ή * +· "

t» <U CO CO __ CM

o» 0) CO CO co 00 *-» *g n ·> « » (ü N. CO O «£ e o» »H ' CO *1"

X T—I CM CM CM

β) T3

C

(O

j= c ft) <u Λ TJ ΡΉ o 00* co* -1-5 00 Ps 00* CO* « If· « Λ Λ Λ * Q) +t ft ·—S CO* coco co Cv 5λ ιο co ς,βί^ί -Η Ή · +· « +· *

(U ·Π Si CM N N

> C <U «—! <3" CO

*p~ <U 2 * * " __"

g co co 0\ CO

oi i— vo p*» σ> o» 01 T· ι—l r—I «—I <r~* i- Ό r V u -Q C ΙΛ (O <0 u

I— > 0J

> .* CL· CJ o a> 30 -o O» IQ -

IQ

C Q.

•r· <U w J0 0) Crt

•r* O

4-> V) o. ·*— σ co _ g in i * ·*-· co a o o ui o er

C E

O w

O

fc.

αι T3 ω o > Λ

co F-I O O O O

A A «t

O O O

vvv CL· O. CL.

«C < < -' —' •o-' IS. to IS V) N ΙΛ I > » > I > „ „ ^ O O CJ * * * 4-> +J _ 4-> * * σ> σι σ> *

C I/) C CO CM

Q) f- - t— - *«— - "O +J Ό *-> Ό 4-> ··

O CC CC C C <M

c t_ T- ai ·*- 0) τ-α>ο

qj jj .O Ό JO Ό -Q "Ό O

Q. C U 3 i- 3 i- 3 C

0) O 0) +J o o > oo >co >co a;

M ·· «« ·* O

o < CQ O CD >

35 0 18 2 S

49 * oo co * σ * co * N co * σ * o * « « + ·» * *> irt

(O (O N CO^· CO

04 CO CO

.* -Η -H CO -H CO +1

QJ · · «-H

a> po o *β· co o ui i—( 2 » · « » O ^ M «3- * Cf i 00 O CO «3- «-H CM 4-> CM -M CM 44 <A * «3- o co * σ> * PO cf Z O * i-H * * * * ♦ * w

PO «- CO P- CO CO IO CO

po rs. co j* -Η Ή CM -H CO -H ·

<u * » O

QJ «-Hf-1 IO 00 : O H

2 * * * *

co r^B *f- H r» B

r*. co co «3- t-H r—I 44 CM 44 CM 44 . i-H CO «-H * CM * di oio* co * σ * _ ·> »* ** * « * o CM IO «d" cv co co > co r- o

C .* +1 41 «f 41 CM -H CO

Λ1 flj * Λ · > aj «o cm co cor>« σ> co - - ~y «i A m * σ CO B *3- H JM. μ o O CO CO co CM CM 44 CM 44 N +> O»

-O

«3 H- fM. co CM * CO * O IO * CO * Ό" * » * * *> * · *

f-H CO COCO CO CM CO CM

CM «-H CO

ji£ +j +)«-· +) o +f σ QJ » » » ai co r». co coco r>*« r·» 2 «» *» ·» *

CO N σ M COB

σ «-η co t-H «H 4J CM +J CM 44 m m o 4-» « * O w (A *ï“ •f O **” cn i co o o _ t; o «—* co c q σ j* e» -3 o o V) * * O O 44 v ^ ω

O. CL C

o < o < 2*? * * ,A

co en co co cow * * 1 > « > I > · * * · o o o . * ao +» *4 +» σ σ σ c en c en c en ·· (U t— — -1— ” Ί— ” +f

c ·— T>+i T3 +J S

<u o cc cc cc o

1-1 (. «f— CJ QJ f* QJ C

CJ 44 .Q Ό _Q ~G .O Ό 44

O C CO t. 3 J-=J O

i_ O «44 QJ 44 QJ 44 O

CS O > CO 5» 00 > CO > J '« - I * * Λ» '1 Λ ί · : η ' '-·.! sJ ·* * ·**<·* ir' v - _ 50

Voorbeeld XV

Remmende werking op de groei van een pancreas-adenocarcinoom. geïnduceerd door CCK-8

Het anti-cholecystokinine-effect van de meest krachtige verbindin-5 gen volgens de uitvinding, dat wil zeggen de verbinding C-7, op de tro-fische activiteit van CCK op normale pancreascellen en op die van een pancreas-adenocarcinoom werd onderzocht.

Mannelijke hamsters werden in de wangzakken geTnoculeerd met een suspensie van lxlO5 tumorale cellen van een pancreas-adenocarcinoom.

10 Vijf dagen na de inoculatie werden de dieren willekeurig in vier groepen van elk 10 dieren verdeeld, dat wil zeggen een controlegroep, een groep dieren, die driemaal per dag'werd behandeld met 10 /ug/kg CCK-δ, een groep dieren, die driemaal per dag werd behandeld met 5 mg/kg i.p. van de verbinding C-7, en een vierde groep, die tegelijker-15 tijd met de verbinding C-7 en CCK-8 op de boven beschreven wijze werd behandeld.

Na deze behandeling gedurende 15 dagen te hebben uitgevoerd, werden de dieren afgemaakt en werden de normale pancreas en de geïnocu-1 eerde pancreas-tumoren in de wangzakken verzameld en gewogen. Het DNA 20 werd geëxtraheerd en volgens gebruikelijke technieken gemeten.

De aldus verkregen resultaten worden weergegeven in tabel R en uitgedrukt als gemiddelde waarden (± S.E.).

De in de tabel aangegeven waarden laten zien, dat het cholecysto-kinine-hormoon (waarvan CCK-8 de biologisch actieve component is), die 25 een trofische werking op normale pancreascellen heeft, ook de groei van een pancreas-adenocarcinoom stimuleert. De verbinding C-7, een krachtige specifieke CCK antagonist, antagoniseert deze beide werkingen van CCK-8 op een zeer significante wijze.

.¾ η 1 α 9 Q

W "J J O i.

9J.

r j *i # * .

s „ w« ® . -o ·** I r- f*» < o to ' ; a ·> · μ «η »

^ C4 O > > N

? ** .

_ CV «si ia n o o CO _ o — » ·»

O —· » Λ O O

ii£ h3 β> O. O, +1 f| 5"3 S'— -r r* -r . ·* o o o o e k · · S" "® i j» "* « * O t w. O w fc. · ^ n» «o «r OJ -o ** I — » ·· ·· « g 2 ; o 5 5 ; g --I-.H. ^ --2-2- S S r» ? *_ f> © © -

O) G S

°> -g 8 2 .. S 1 « • ·§ S 5 rT 2 *?| E ·Η CU O +1 +1 +1 w * ? G. — es o 2 ZZ © © cJ — — — e eJ cs«ö o ·, to : :=====5==-1-=====^^================:=========== IO X> « m m O) e * “1 * o *S j. *"”Vj rj — — O 3*“ I i*.o “ " C ^ c e * (O «e — 1» «» «·> CL > > ω α

w t 2 3 2L S

i- CO "1 ~ ^ O < ^ e O +1 o E ü « σ +1 +1 «2 + 1 3 g *e»no» o +* * _ o — e — «c o C ®* · ‘ fi£ φ : :s======^!=====s=s=s======ss=ss=3s:==3s _j φ «* — * ω " ~ *. 2 i co « ^ i “ i, < E =jj is 00 O in

t— i- ·β** I r» — " ·· O

0 = fL JJ, n — M M ·« c n * » C 1

IO

Ï || ® ** 8 ~ i · *

Dl 4=0—» e» .» cm w

i a B CM. ΙΟ «M CM

01 ί§ * £« <£' ώ' i' ° 3* e* SSS.S te

O. m m G

o ü-5 · 3 “ λ s e § ? i a ·«7 & C CQ 5, „ CJ o 'm ·*- 7j /2. —· ω •o <rt —01 i° e o i ra Ct ν' οι sc

= ° < » £$ ^ *S O

S

> d g — · U? ! |S 2 2 2’ if <ό.__ _· ? % -. s OJ ° Jj o - o c S tC 60 ‘ ® ° ° °Λ ra δο G C „ -°°°

g C *H*Hi 5 V V V

De boven aangeduide experimentele data blijken een indicatie te verschaffen voor de veronderstelling, dat de toepassing van de verbinding C-7 of andere anti-cholecystokinine-verbindingen, die het onderwerp van de uitvinding zijn, bijzonder gunstige resultaten zullen heb-, 5 ben bij de behandeling van tumoren, waarbij endogene bio-actieve poly-peptiden een rol spelen (in het bijzonder CCK), zoals gastro-intestina-le en pancreas-tumoren.

De boven aangegeven experimentele waarden blijken ook een duidelijke indicatie te geven, dat de toepassing van de geneesmiddelen vol-10 gens de uitvinding in combinatie met morfine of andere analgetische geneesmiddelen (al dan niet narcotisch) een aanzienlijke therapeutische innovatie betekent, waardoor voor de arts verbindingen van buitengewoon belang voor de behandeling van pijn van elke etiologie beschikbaar kunnen worden gemaakt. Deze behandeling blijkt in het bijzonder geschikt 15 te zijn in het geval van langdurige toedieningen van opiaten, waarbij er een zeer grote behoefte aan bestaat dat het geneesmiddel geen gewenning veroorzaakt, of dat deze tenminste binnen aanvaardbare grenzen wordt gehouden. Verder lijkt de mogelijke toepassing ervan bij de de-toxicatie van patiënten, die afhankelijk zijn geworden van de langdu-20 rige toepassing van opiaten, van enorm therapeutisch en sociaal belang te zijn.

De boven aangegeven experimentele data tonen ook het nut van de verbindingen bij de behandeling van diverse pathologische aandoeningen betreffende het gastro-intestinale systeem, bijvoorbeeld bij spastische 25 syndromen en bij het verlichten van pijn in het algemeen en in het bijzonder bij de behandeling van diskynesie met betrekking tot gal en de behandeling van een irritabele colon.

Men dient ook de krachtige anti-CCK activiteit in gedachten te houden, die door vele van de onderhavige verbindingen wordt vertoond, 30 een gunstige therapeutische toepassing bij de behandeling van anorexia of bij enige pathologische toestanden van het SNC, die zijn verbonden met verschijnselen betreffende een gebrek aan evenwicht in de fysiologische neuron-niveaus van het CCK of andere biologisch actieve peptiden. ^

Pf 1^ <·* ö* y i 8 &. ö?

Claims

1. Farmaceutisch actieve derivaten van D,L-glutaminezuur en D,L-asparaginezuur, gekenmerkt door de formules 1 en 2, waarin η 1 of 2 betekent, Ri een fenylgroep voorstelt, die enkel-, twee- of drievoudig 5 1s gesubstitueerd door rechte of vertakte alkyl groepen met 1-4 C-ato-men, die gelijk of verschillend kunnen zijn, of met halogeenatomen, met een cyaan- of trifluormethylgroep, en waarin R2 wordt gekozen uit de groep bestaande uit morfolino, piperidino en amino met 1 of 2 rechte, vertakte of cyclische alkylsubstituenten met 1-8 C-atomen, die gelijk 10 of verschillend kunnen zijn, en farmaceutisch aanvaardbare zouten ervan.

2. Van glutaminezuur afgeleide verbinding volgens conclusie 1, gekenmerkt door de formule 1, waarin n 2 betekent, Ri 3,4-dimethylfenyl of 3,4-dichloorfenyl voorstelt en R£ een aminogroep voorstelt, die 15 tweevoudig gesubstitueerd is met rechte alkyl groepen met 4 of 5 koolstof atomen, en farmaceutisch aanvaardbare zouten ervan.

3. Van glutaminezuur afgeleide verbinding volgens conclusie 1. gekenmerkt door de formule 2, waarin n 2 betekent, R^ een 4-cyaanfenyl-groep voorstelt en R£ een aminogroep voorstelt, die tweevoudig is ge- 20 substitueerd door rechte alkyl groepen met 4 of 5 C-atomen, en farmaceutisch aanvaardbare zouten ervan.

4. Farmaceutisch preparaat, gekenmerkt door een gehalte aan een verbinding volgens conclusie 1-3 of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan als werkzaam bestanddeel.

5. Preparaat volgens conclusie 4 voor de behandeling van patholo gische verschijnselen van het SNC, die zijn verbonden met verschijnselen van het gebrek aan evenwicht in de fysiologische neuron-niveaus van biologisch actieve peptiden, in het bijzonder cholecystokinine.

6. Preparaat volgens conclusie 4 voor toepassing bij behandelingen 30 wegens de anti-spastische activiteit ervan.

7. Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 4 voor de toepassing bij behandelingen wegens de choleretische activiteit ervan.

8. Preparaat volgens conclusie 4 voor de behandeling van anorexia.

9. Preparaat volgens conclusie 4, voor de behandeling van tumorale aandoeningen, waarbij biologisch actieve polypeptiden, zoals cholecystokinine en soortgelijke mechanismen, een rol spelen.

10. Preparaat volgens conclusie 4 voor de toepassing als pijnstiller voor de mens, welk preparaat tevens een analgetisch geneesmiddel in 40 combinatie met een verbinding volgens conclusie 1-3 bevat. 'ij SP t ** • * · ' 54

11. Preparaat voor zoölogisch-technische toepassing als eetlust stimulerend middel voor dieren op de boerderij voor het doen toenemen van de snelheid van de gewichtstoename, gekenmerkt doordat dit tenminste een verbinding volgens conclusie 1-3 als werkzaam bestanddeel be- 5 vat.

12. Werkwijze voor het bereiden van een derivaat van D,L-glutami-nezuur en D,L-asparaginezuur, met het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1 of 2, waarin de symbolen n, Rx en Rg de in conclusie 1 gegeven betekenis bezitten, respectievelijk een farmaceutisch 10 aanvaardbaar zout ervan, bereidt volgens een methode, die de volgende stap omvat: a) omzetting van een inwendig anhydride met de formule 3, waarin n en Rx de in conclusie 1 genoemde betekenis bezitten, met een amine met de formule RgH, waarin R2 de in conclusie 1 genoemde betekenis be- 15" zit, in een mol verhouding van 1 tot 5 bij een temperatuur van -20°C tot +30°C, waarbij de verbindingen met de formules 1 en 2 uit de reactie-massa worden gewonnen en de verbindingen met de formules 1 en 2 worden gescheiden.

13. Werkwijze volgens conclusie 12, met het kenmerk, dat men het 20 inwendige anhydride met de formule 3 verkrijgt volgens de volgende stappen: b) omzetting van glutaminezuur of asparaginezuur onder omstandigheden volgens Schotten-Bauman met een equimolaire hoeveelheid van een acyl-chloride met de formule Rx-CO-Cl, waarin Rx de in conclusie 1 ge- 25 noemde betekenis bezit, bij een temperatuur van -20eC tot +30°C, waarbij een N-geacyleerde verbinding met de formule 4 wordt verkregen, en c) dehydratatie van de verbinding met de formule 4 door omzetting bij aanwezigheid van azijnzuuranhydride in een mol verhouding van 1 tot 10, als zodanig of bij aanwezigheid van een daarmee mengbaar, inert oplos- 30 middel bij een temperatuur van -10°C tot de terugvloeitemperatuur.

14. Tussenprodukten ten gebruike bij de bereiding van de verbindingen met de formules 1 en 2, gekenmerkt door de formule 3 of 4, waarin n en Rx de in conclusie 1 genoemde betekenis bezitten. +++++++ 6501328