SE443660B - Forfarande och reagens for immunanalys med rf eller clq adsorberat till fast berare - Google Patents

Forfarande och reagens for immunanalys med rf eller clq adsorberat till fast berare

Info

Publication number
SE443660B
SE443660B SE7807275A SE7807275A SE443660B SE 443660 B SE443660 B SE 443660B SE 7807275 A SE7807275 A SE 7807275A SE 7807275 A SE7807275 A SE 7807275A SE 443660 B SE443660 B SE 443660B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
antibody
antigen
complex
labeled
reagent
Prior art date
Application number
SE7807275A
Other languages
English (en)
Other versions
SE7807275L (sv
Inventor
P L Masson
J F Heremans
Original Assignee
Technicon Instr
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Technicon Instr filed Critical Technicon Instr
Publication of SE7807275L publication Critical patent/SE7807275L/sv
Publication of SE443660B publication Critical patent/SE443660B/sv

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • G01N33/545—Synthetic resin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/966—Chemistry: molecular biology and microbiology involving an enzyme system with high turnover rate or complement magnified assay, e.g. multi-enzyme systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/819—Multifunctional antigen or antibody
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/821—Chemistry: analytical and immunological testing involving complement factors or complement systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/823—Immunogenic carrier or carrier per se
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/826—Additives, e.g. buffers, diluents, preservatives

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Rehabilitation Therapy (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Description

15 20 25 30 35 7807275-8 2 RF är ett känt material, och metoder för framställning och isolering därav är kända. Det finns eller kan framkallas i blodet hos ett antal djurarter, inklusive människan. Man får den normalt från getter eller kaniner genom intradermal injek- tion av deras egna renade immunoglobuliner, sedan dessa har aggregerats genom att värmas vid ca 63°C under ca 10 min. Man isolerar sedan RF ur det från djuren erhållna serumet genom att leda detta genom en kolonn av aggregerade immunoglobuliner, varpå den kvarhålls. RF kan elueras från kolonnen medelst en lösning med lämpligt pH eller lämplig saltkoncentration som elueringsmedel.
C1q är ett naturligt cirkulerande protein, och metoder för dess separering och rening är kända. Man erhåller det van- ligen ur människo-, kanin- eller nötserum genom "euglobulin- fällning“, en metod som beskrivs exempelvis i J. Immunol.,106, 304 - 413 (1971).
Uppfinningen avser användning av RF och C1q i insolubi- liserad form som analytiska reagens. Med "insolubiliserad" av- ses att RF eller C1q är kovalent bunden vid en fast bärare, som är olöslig i vattenhaltiga vätskor, eller är adsorberad på en syntetisk fast bärare, som är olöslig i vattenhaltigavätskon Ett exempel på en sådan syntetisk fast bärare är latex.
Uppfinningen avser ett förfarande för bestämning av närvaro och/eller mängd av en antikr0PP: ett antigen eller ett antikropps-antigenkomplex i ett vätskeprov vari antikroppen, antigenet eller komplexet kan föreligga i låg koncentration, eventuellt med användning av ett märkt antigen, en märkt anti- kropp_eller ett märkt komplex. Detta förfarande kännetecknas av att man a) för bestämning av en antikropp eller ett antigen försätter provet med ett antigen eller en antikropp, som är immunospecifik(t) för den antikropp eller det antigen som skall bestämmas, så att ett antikropps-antigenkomplex bildas, b) sammanför blandningen från steg a eller det anti- kropps-antigenkomplex som skall bestämmas innehållande provet med ett reagens bestående av oagglutinerade partiklar av en reaktiva grupper innehållande syntetisk fast bärare med adsorbe- rad RF eller C1q, vilka är olösliga i vattenhaltiga vätskor och 10 15 20' 25 30 35 7807275-8 3 suspenderade i en vätska i form av en latex, varvid RF eller C1q reagerar med och binds vid antikropps-antigenkomplexet i blandningen, C) avskiljer reagenset med det därpå bundna komplexet från blandningen; och d) mäter en komponent i de avskilda partiklarna eller i den kvarvarande blandningen för bestämning av närvaro och/ eller mängd av antikroppen, antigenet eller antikropps-antigen- komplexet, varvid man eventuellt i steg a tillsätter märkt immunospecifik(t) antikropp eller antigen eller i steg b, när provet innehåller en antikropps-antigenkomplex, tillsätter ett märkt antikropps-antigenkomplex och i steg d mäter graden av märkning i de avskilda partiklarna eller i reaktionsblandnángen.
Uppfinningen avser även ett reagens för användning vid bestämning av närvaro och/eller mängd av en antikropp, att antigen eller ett antikropps-antigenkomplex i ett vätskeprov, vilket reagens utgöres av reaktiva grupper innehållande synte- tisk fast bärare med adsorberad RF eller C1q, vilka är olösliga i vattenhaltiga vätskor och suspenderade i en vätska i form av en latex.
Insolubilisering av RF och C1q kan ernås genom kovalent bindning av RF eller C1q direkt eller indirekt vid en fast fas.
De allmänna metoder, som brukar användas för kovalent koppling av proteiner vid olösliga bärare, kan användas för insolubíli- sering av RF och C1q. Den fasta bäraren måste innehålla en eller flera reaktiva grupper, såsom amino- eller karboxylgrupper, för kopplingsreaktionen. Lämpliga fasta bärare är naturligt förekommande material, såsom aggregerade immunoglobuliner, och syntetiska material, såsom aminerad agaros.
I vissa fall kan RF eller C1q direkt bindas kovalent eller absorberas på den fasta fasen, t.ex. när denna är nylon, agaros; cellulosa, akrylamid- eller akrylsyrapolymer, polyayren eller diverse glaspreparat. I allmänhet är det emellertid lämp- ligt att binda RF eller C1q vid den fasta fasen med hjälp av en bryggsubstans, såsom glutaraldehyd. Ett föredraget reagens enligt uppfinningen utgöres av RF eller C1q kovalent bunden vid aminerad agaros över en glutaraldehydbrygga. 10 15 20 25 30 35 7807275-8 4 För att insolubilisera RF eller C1q genom adsorption på en syntetisk fast bärare kan man exempelvis bringa en lös- ning av RF eller C1q i kontakt med den fasta fasen.
Det är i allmänhet lämpligast, att reagensen enligt uppfinningen är i partikel- eller granulform, t.ex. i form av pärlor av aminerad agaros med.en beläggning av RF eller C1q.
För vissa syften, t.ex. kontinuerlig analys, är det emellertid fördelaktigt att utforma reagenset som en beläggning på åtmin- stone en del av insidan av ett rör eller en slang, så att där- igenom strömmande ämnen kommer i kontakt med reagensbeläggningen.
Det är känt att isolera RF från serum genom att leda detta genom en kolonn av aggregerade immunoglobuliner, varpå RF kvarhâlls. I en sådan kolonn blir RF temporärt adsorberad på de aggregerade immunoglobulinerna, men blir inte kovalent bunden därvid. Det inses, att aggregerade immunoglobuliner inte är syntetiska material.
De insolubiliserade RF- och C1q-reagensen enligt upp- finningen har många användningar i biologiska analyser. I prin- cip bygger alla dessa användningar på reagensens förmåga att bindas vid Ak:Ag-komplex, men inte vid fri Ak eller fritt Ag, vilken gör det möjligt att använda reagensen för att avskilja Ak:Ag-komplex från blandningar därav med fri Ak eller frittAg.
Reagensen är i synnerhet användbara vid kontinuerlig analys av biologiska vätskeprov, och uppfinningen innefattar sådan användning.
Olika provningsmetoder med användning av reagens enligt uppfinningen beskrivs nedan. 1. Separering Förfarandet för avskiljning av Ak:Ag-komplex från bio- logiska (eller andra) vätskor består i att bringa vätskan 1 kontakt med insolubiliserad RF eller C1q. Komplexen i vätskan bindsflvid RF eller C1q, medan andra närvarande material, såsom Ak eller Ag, inte binds (eller binds endast i betydelselös om- fattning). Genom att separera den insolubiliserade RF eller C1q från blandningen kan man alltså avskilja Ak:Ag bundet vid RF eller C1q. Det kan sedan skiljas från RF eller C1q genom tvätt- ning med en lämplig buffert av passande saltkoncentration och pH. På så sätt kan man få en retativt koncentrerad lösning av komplexet (eller komplexen). 10 15 20 25 30 35 _komplex frigörs sedan från RF eller C1q och bestäms exempelvis 7807275-8 5 Detta förfarande kan bekvämt genomföras med hjälp av en kolonn innehållande insolubiliserad RF eller C1q. Serum eller annat prov innehållande ett Ak:Ag-komplex leds genom kolonnen, och komplexet kvarhâlls däri bundet vid RF eller C1q.
Komplexet kan sedan elueras. I ett typiskt förfarande använder man en mikrokolonn innehållande pärlor av aminerad agaros, varpå RF eller C1q har kopplats medelst glutaraldehyd. Serumet leds genom kolonnen, och de kvarhållna Ak:Ag-komplexen elueras sedan, exempelvis med ammoniumtiocyanat i ökande koncentration (1M till 3M).
Alternativt kan man helt enkelt blanda insolubiliserad RF eller C1q, exempelvis i en kolv, med provvätskan och sedan avskilja den genom centrifugering eller filtrering.
Separationsförfarandena enligt uppfinningen är använd- bara inte bara för Ak:Ag-komplex, utan indirekt även för avskilj- ning av en särskild Ak eller ett särskilt Ag ur lösningar. Om man exempelvis vill avskilja ett antingen Ag' från en lösning, kan man tillsätta den specifika antikroppen Ak' i överskott för bildning av komplexet Ak“:Ag' vilket man sedan kan avskilja med hjälp av ett reagens enligt uppfinningen. Om utgångslös- ningen även innehåller ett Ak:Ag-komplex, måste man först av- skilja detta genom en förbehandling, innan man tillsätter den specifika antikroppen Ak'.
Ett särdrag hos dessa separationsmetoder enligt uppfin- ningen är att de är mycket effektiva och möjliggör uppsamling och koncentrering av Ak:Ag-komplex ur mycket utspädda lösningar.
Detta är en stor fördel, ty komplexen finns ofta i mycket låga koncentrationer i sera och andra biologiska vätskor och det är 1 ytterst besvärligt att avskilja dessa komplex med kända metoder. ï 2. Separativ kvalitativ eller kvantitativ bestämning Ä (a) Denna provningsmetod innebär selektivt avskiljande av Ak;Ag-komplex från en biologisk vätska genom att vätskan bringas i kontakt med insolubiliserad RF eller C1q (enligtovan) ä och komplexen sedan påvisas. Exempelvis behandlar man ett prov 5 av serum för att avskilja eventuella Ak:Ag-komplex däri genom ä att binda dem vid insolubiliserad RF.eller C1q. Sålunda bundna š med hjälp av löslig RF eller C1q. Om röda blodkroppar (eller 10 15 20 25 30 35 7807275-8 6 partiklar belagda med immunoglobuliner) kommer i kontakt med löslig RF eller C1q, börjar agglutinering, men om det i lös- ningen ocksâ finns ett Ak:Ag-komplex, reagerar detta snabbare med RF och C1q, varför RF eller C1q binds vid Ak:Ag-komplexet i lösningen, så att ingen agglutinering av de belagda partik- larna (eller röda blodkropparna) uppträder. Sålunda kan man påvisa förekomst av Ak:Ag-komplex i en vätska, exempelvis serum, genom att bringa vätskan i kontakt med (löslig) RF eller C1q och med immunoglobulinbelagda partiklar. Om aggluti- nering iakttas, innehåller serumet inga Ak:Ag-komplex. Denna nya metod beskrivs utförligare i patentansökan 75 05734-9. (b) Denna provningsmetod kan också tillämpas för under- sökning av förekomst av ett speciellt Ag eller en speciell Ak i ett prov. Vid provning på ett speciellt antigen Ag' kan man exempelvis försätta serumet med den passande specifika anti- kroppen Ak' och sedan bringa blandningen i kontakt med ett reagens enligt uppfinningen för att avskilja eventuella konçflex.
Närvaro av sådana komplex kan sedan påvisas enligt a) ovan. Om serumprovet från början innehåller andra Ak:Ag-komplex, måste man först bortskaffa dessa, innan man tillsätter Ak'. (c) En annan provningsmetod innebär konkurrens mellan tvâ Ak:Ag-komplex om en begränsad mängd RF eller C1q. Om exem- pelvis ett märkt Ak:Ag-komplex sättes i överskott till en be- gränsad mängd insolubiliserad RF eller C1q, binds all RF eller C1q vid komplexet. Om man sedan utöver det märkta komplexet tillsätter ett serumprov innehållande omärkta Ak:Ag-komplex konkurrerar det märkta och det omärkta komplexet molärt om den begränsade mängden RF eller C1q. Om man, sedan jämvikt har nåtts, avskiljer RF eller C1q tillsammans med därvid bundna komplex, visar närvaro av (eller närvaro av en viss minimimängd) märkt komplex i den återstående lösningen, att serumprovet inne- höll ett Ak:Ag-komplex. Denna metod kan man tillämpa kvantita- tivt för att mäta mängden komplex i serumprovet. Man kan också använda den generellt för att påvisa närvaro av en speciell Ak eller ett speciellt Ag. (d) En annan provningsmetod (som kan utföras kvantita- tivt, i synnerhet på en speciell Ak eller ett speciellt Ag) är följande. Om man vill fastställa huruvida exempelvis ett 10 15 20 25 30 35 7807275-8 7 serumprov innehåller ett särskilt antigen Ag', framställer man den specifika antikroppen Ak' och märker den exempelvis med ett enzym. Den märkta Ak' blandas med insolubiliserad RF eller C1q, och serumprovet tillsätts. Den insolubiliserade RF eller C1q (med vidhäftande Ak':Ag'-komplex) avskiljs och den.kvar- varande vätskan provas på närvaro (eller mängd) av märkt Ak'.
Om mängden därav är mindre än den ursprungligen tillsatta mäng- den mâste det specifika antigenet Ag' ha funnits i serumprovet.
Exempelvis kan man bestämma närvaro (eller frånvaro) av ett specifikt Ag, t.ex. IgE, i serum på följande sätt. Katalas- märkt antikropp för IgE (anti-IgE) sätts till insolubiliserad RF eller C1q (t.ex. agarospärlor) i överskott över vad som er- fordras för komplexbindning med IgE i det prov som skall under- sökas. Serumprovet tillsätts, och blandningen inkuberas. Efter avskiljning av insolubiliserad RF eller C1q (medförande even- tuell bildade IgE:anti-IgE-komplex kan man mäta den kvarvarande vätskans resterande enzymatiska aktivitet. Om det finns IgE i serumprovet, är denna resterande enzymatiska aktivitet mindre än den ursprungliga aktiviteten hos de tillsatta IgE-anti- kropparna, eftersom nâgra av dessa har komplexbundits med IgE i serumet och avskilts tillsammans med den insolubiliserade RF eller C1q. Denna metod kan tillämpas kvantitativt för bestäm- ning av mängden IgE i serumet.
Ett annat exempel på detta förfarande är påvisande av antigenet morfin. I denna tillämpning märks morfin med ett enzym, t.ex. amylas. Specifika morfinantikroppar Ak" framställs.
Ett prov av exempelvis urin eller serum, som skall provas pâ morfin, blandas med Ak". Närvarande morfin bildar ett komplex med Ak". Sedan tillsätts det enzymmärkta morfinet. Detta kan bilda komplex med Ak" endast i proportion till koncentrationen av morfin i serumet eller urinen. Insolubiliserad RF eller C1q tillsätts för att absorbera de Ak:Ag-komplex, som har bildats mellan å ena sidan Ak", å andra sidan det eventuella morfinet i serumet och det märkta morfinet. Den insolubiliserade RF eller C1q (tillsammans med dessa komplex) avskiljs från lös- ningen. I lösningen finns märkt morfin kvar, och genom att mäta dess enzymatiska aktivitet kan man bestämma huruvida det ursprungliga serumprovet innehöll morfin och i så fall hur mycket morfin det innehöll. 10 15 20 25 30 35 7807275-8 8 Samma procedur kan tillämpas för bestämning av andra antigener och mutatis mutandis antikroppar. Märkningen be- höver inte vara enzymatisk. (e) Reagensen enligt uppfinningen är också användbara i nefelometriska immunoanalyser, i synnerhet för förbättring av dessa analysers känslighet. I synnerhet har användningen av insolubiliserad RF och C1q starkt förenklat genomförandet av nefelometriska inhibitionsimmunoanalyser, vari restaktivitet av Ak mäts efter absorption med det Ag som skall bestämmas. Vid bestämning av exempelvis u-fetoprotein blandas serum med anti- serum för aï-fetoprotein. De bildade Ak:Ag-komplexen har för låg koncentration för att de skall kunna avskiljas genom centri- fugering, och man använder insolubiliserad RF eller C1q för att binda dessa komplex och skilja dom från lösningen. Kvar- varande fri Ak i lösningen blandas med a1-fetoprotein, och lösningens partikeltäthet, som beror av den återstående kon- centrationen av Ak, mäts genom nefelometri. 3. Karakterisering_ Många av de ovan angivna metoder, där insolubiliserad RF eller C1q används, är värdefulla förberedelser för karak- terisering av Ak, Ag eller Ak:Ag-komplex. Några av metoderna leder direkt till identifiering av ifrågavarande Ak eller Ag, exempelvis de metoder, där förekomst av en speciell antikropp misstänks och sedan bekräftas genom att ett specifikt Ag till- sätts och närvaro av Ak:Ag-komplexet påvisas. Reagensen en- ligt uppfinningen är mycket användbara för karakterisering av Ak, Ag och Ak:Ag-komplex, såsom framgår av det föregående.
Identifiering (d.v.s. karakterisering) av ett antigen sker med olika metoder, t.ex. spektrofotometri för bestämning av närvaro av nukleinsyror, elektronmikroskopi för identifi- ering av virus eller immunofluorescens med specifika antisera riktade mot virus- eller vävnadsantigener. Den sistnämnda me- toden kan tillämpas med insolubiliserat RF eller C1q (t.ex. agarospärlor) med därvid bundna Ak:Ag-komplex, d.v.s. kom- plexet behöver inte först avskiljas. I , För vissa syften kan det vara lämpligt att märka Ä insolubiliserad RF eller C1q. Detta kan ske exempelvis med : I125 eller genom fluorescens- eller koenzymmärkning (t.ex. med _ NADH) . g 10 15 20 25 30 35 7807275-8 - ß 9 Insolubiliserad RF och C1q binds inte endast vid Ak:Ag-komplex, utan också vid aggregerade immunoglobuliner.
Härtill bör man naturligtvis ta hänsyn till genomförande av de beskrivna metoderna, såsom inses av sakkunniga. Aggre- gerade immunoglobuliner kan märkas, t.ex. med radioaktiv jod eller en fluorokrom, och kan som sådana användas i stället för märkta Ak:Ag-komplex i de'ovan beskrivna analy- tyska metoderna.
Uppfinningen âskâdliggöres av följande exempel.
Exempel 1 Koppling av RF eller C1q vid en fast fas 1 ml 25-procentig vattenlösning av glutaraldehyd sat- tes till 5 ml aminerad agaros (AH-Sepharos), som först hade svällts med saltlösning, i 5 ml karbonatbuffert vid pH 8,5.
Blandningen omrördes 15 min vid rumstemperatur och tvät- tades sedan med 100 ml karbonatbuffert. Blandningen centrifuge- rades, överskiktet dekanterades, och ytterligare 5 ml karbonat- buffert sattes till det fasta materialet. Under ständig skak- ning tillsattes 1,25 mg renad RF (eller C1q) och till- räckligt med glycin för att göra den slutliga lösningen 0,2-molar på glycin. Skakningen fortsattes 10 - 12 h, och den fasta fasen avskildes genom centrifugering och tvättades med fysiologisk saltlösning.
Exempel 2 Framställning av märkt RF eller C1q 200 ml 50 mM fosfatbuffert med pH 7ö4 sattes till 100 ug RF (eller C1q). Blandningen delades i 20 pl alikvoter, øch 10 uc 1125 följd av so ng kloramin 'r sattes till varje alivkot. Oxidationen fick fortgå under 30 s, och reaktionen avbröts därpå genom tillsats av 50 ul vattenlösning innehål- lande 50 ug natriummetabisulfit. Märkt RF (eller C1q) av- skildes fråm I125 genom att blandningen leddes genom en pelare av “Sephadex G25" och det önskade märkta materialet eluerades med ovannämnda fosfatbuffert. Eluatfraktionerna undersöktes på Y-aktivitet, och fraktionerna med högsta aktivitet slogs ihop, inneslöts i ett förvaringskärl och frystes tills de skulle användas. 10 15 20 25 30 35 780727548 10 Exempel 3 Separering av Ak:Ag-komplex 100 ul insolubiliserad RF framställd enligt exempel 1 sattes till 100 ul prov innehållande ett naturligt uppträ- dande Ak:Ag-komplex i serum. Blandningen skakades 0,5 h vid rumstemperatur och centrifugerades sedan med 3 000 G under 5 min. Det befanns, att Ak:Ag-komplexet hade avskilts från vätskefasen och bundits vid den fasta fasen.
Exempel'4 Bestämning av tetanusanotoxin och IgG Kaninantikroppar för tetanusanotoxin märktes med peroxidas enligt den metod som anges av Miles och Hales, Nature 219, 186 (1968). Till 100 ul serum, som misstänktes innehålla tetanusanotoxin-Ak:Ag-komplex sattes tillräckligt mycket av den märkta Ak-lösningen för att innehålla 10 mg IgG.
Blandningen skakades över natten vid 4°C. 100 ul insolubilise- rad RF framställd enligt exempel 1 sattes till lösningen, blandningen skakades 0,5 h vid rumstemperatur och centrifuge- rades med 3 000 G under 5 min. Överskiktet avdrogs med Pasteur- pipett och infördes i ett särskilt provrör innehållande 1 ml av en vattenlösning med 100 mg fenol, 30 mg 4-aminofanzon och 300 ul 30-procentig väteperoxid per 100 ml. De blandade lös- ningarna inkuberades vid 37°C under 10 min. Den vid 520 nm utvecklade färgen bestämdes kolorimetriskt. Koncentrationen av tetanusanotoxin befanns vara omvänt proportionell mot peroxidas- aktiviteten och kunde beräknas på grundval av en kalibre- ringskurva, som tidigare hade uppgjorts med lösningar av märkt antikropp.
Exempel 5 Användning av insolubiliserad RF i automatisk analys- apparat av genomströmningstyp f -- 4,0 mg RF adsorberades på 200 mg 0,8 um latexpartiklar i en karbonatbuffertlösning med pH 8,4. Partiklarna tvättades med 0,1 % nötalbuminlösning för blockering av fortsatt adsorp- tion. I en automatisk analysapparat av genomströmningstyp insögs ett prov, som skulle undersökas, med 0,1 ml/min och samman- fördes med en 0,4 ml/min ström av kaninantiserum mot HPL 10 7807275-8 1 i 11 (utspädning 1:2000). Blandströmmen sammanfördes med en 0,4 ml/min ström innehållande I125HPL. Blandströmmen leddes genom en blandarslinga, som hölls vid 37OC, med 10 min uppehållstid, och sammanfördes sedan med en 0,3 ml/min ström av det enligt 'ovan framställda RF-latexmaterialet innehållande 100 000 par- tiklar per milliliter. Blandströmmen värmdes ånyo vid 37°C under 10 min. Efter utträdet från värmebadet skildes latexpartiklarna från strömmen och leddes bort under användning av ett lämpligt tillvägagångssätt, t.ex. det som tillämpas i automatiska blod- gruppsbestämningsapparater. Strömmen leddes sedan genom en gammaräknare och det räknade värdet upptecknades. Räknevärdet var omvänt proportionellt mot koncentrationen av HPL.

Claims (5)

10 15 20 25 30 35 7807275-8 12 PATENTKRAV
1. Förfarande för bestämning av närvaro och/eller mängd av en antikropp, ett antigen eller ett antikropps-antigen- komplex i ett vätskeprov vari antikroppen, antigenet eller komplexet kan föreligga i låg koncentration, eventuellt med användning av ett märkt antigen, en märkt antikropp eller ett märkt komplex, k ä n n e t e c_k n a t av att man a) för bestämning av en antikropp eller ett antigen försätter provet med ett antigen eller en antikropp, som är immunospecifik(t) för den antikropp eller det antigen som skall bestämmas, så att ett antikropps-antigenkomplex bildas, b) sammanför blandningen från steg a eller det anti- kropps-antigenkomplex som skall bestämmas innehållande provet med ett reagens bestående av oagglutinerade partiklar av en reaktiva grupper innehållande syntetisk fast bärare med adsorbe- rad RF eller C1q, vilka är olösliga i vattenhaltiga vätskor och suspenderade i en vätska i form av en latex, varvid RF eller C1q reagerar med och binds vid antikropps~antigen- komplexet i-blandningen, c) avskiljer reagenset med det därpå bundna kom- plexet från blandningen, och d) mäter en komponent i de avskilda partiklarna eller i den kvarvarande blandningen för bestämning av närvaro och/eller mängd av antikroppen, antigenet eller antikropps- antigenkomplexet, I varvid man eventuellt i steg a tillsätter märkt im- munospecifik(t) antikropp eller antigen eller i steg b, när provet innehåller en antikropps-antigenkomplex, till- sätter ett märkt antikropps-antigenkomplex och i steg d mäter graden av märkning i de avskilda partiklarna eller i reak- tionsblandningen.
2. Y - Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k- n a t av att det genomförs under kontinuerlig strömming.
3. Förfarande enligt patentkravet 1 eller 2, k ä n n e- t e c k n.a t av att märkningen är en radioaktiv atom eller ett enzym eller koenzym. 10 7807275-8 aj 13
4. Reagens för användning vid bestämning av närvaro och/eller mängd av en antikropp, ett antigen eller ett anti- kropps-antigenkomplex i ett vätskeprov, k ä n n e t e c k n a t av att det utgöres av en reaktiva grupper innehållande syn- tetisk fast bärare med adsorberad RF eller C1q, vilka är olösliga i vattenhaltiga vätskor och suspenderade i en vätska i form av en latex. *
5. Reagens enligt patentkravet 4, k ä n n e t e c k n a t av att RF eller C1q är kemiskt märkt med en radioaktiv atom eller ett radioaktivt märkt enzym eller koenzym.
SE7807275A 1974-05-20 1978-06-27 Forfarande och reagens for immunanalys med rf eller clq adsorberat till fast berare SE443660B (sv)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB22377/74A GB1508132A (en) 1974-05-20 1974-05-20 Analysis of biological fluids

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SE7807275L SE7807275L (sv) 1978-06-27
SE443660B true SE443660B (sv) 1986-03-03

Family

ID=10178404

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE7505735A SE435325B (sv) 1974-05-20 1975-05-20 Forfarande och reagens for immunanalys med rf eller c1q kovalent bunden till fast berare
SE7505734A SE435425B (sv) 1974-05-20 1975-05-20 Forfarande for immunanalys
SE7807275A SE443660B (sv) 1974-05-20 1978-06-27 Forfarande och reagens for immunanalys med rf eller clq adsorberat till fast berare
SE7808314A SE447606B (sv) 1974-05-20 1978-08-01 Kvantitativ immunoanalys av immunkomplex medelst clq

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE7505735A SE435325B (sv) 1974-05-20 1975-05-20 Forfarande och reagens for immunanalys med rf eller c1q kovalent bunden till fast berare
SE7505734A SE435425B (sv) 1974-05-20 1975-05-20 Forfarande for immunanalys

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE7808314A SE447606B (sv) 1974-05-20 1978-08-01 Kvantitativ immunoanalys av immunkomplex medelst clq

Country Status (11)

Country Link
US (2) US4143124A (sv)
JP (4) JPS5949545B2 (sv)
AU (2) AU498364B2 (sv)
BE (2) BE829277A (sv)
CH (4) CH627281A5 (sv)
DE (3) DE2522087A1 (sv)
FR (2) FR2272102B1 (sv)
GB (1) GB1508132A (sv)
IT (1) IT1038305B (sv)
NL (2) NL182175C (sv)
SE (4) SE435325B (sv)

Families Citing this family (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4283383A (en) * 1974-05-20 1981-08-11 Technicon Instruments Corporation Analysis of biological fluids
GB1508132A (en) * 1974-05-20 1978-04-19 Technicon Instr Analysis of biological fluids
SE441042B (sv) * 1976-09-08 1985-09-02 Pharmacia Diagnostics Ab Sett att pavisa rheumatoida faktorer
SE441041B (sv) * 1976-09-08 1985-09-02 Pharmacia Diagnostics Ab Sett vid pavisning av rheumatoida faktorer
JPS5339265U (sv) * 1976-09-09 1978-04-05
GB1590524A (en) * 1976-11-24 1981-06-03 Nat Res Dev Assay of immune complexes
GB1603406A (en) * 1977-08-31 1981-11-25 Nat Res Dev Assay of immune complexes
GB1592450A (en) * 1976-12-10 1981-07-08 Technicon Instr Biological analysis
JPS5387877U (sv) * 1976-12-21 1978-07-19
JPS5387876U (sv) * 1976-12-21 1978-07-19
JPS53115946A (en) * 1977-03-18 1978-10-09 Matsushita Electric Ind Co Ltd High frequency heating apparatus
JPS53119441A (en) * 1977-03-28 1978-10-18 Matsushita Electric Ind Co Ltd High-frequency heater
JPS53128781A (en) * 1977-04-15 1978-11-10 Matsushita Electric Ind Co Ltd Touch switch and method of producing same
DE2731992A1 (de) * 1977-07-15 1979-02-01 Behringwerke Ag Verfahren zur bestimmung von immunologisch veraendertem immunglobulin
ES471585A1 (es) * 1977-07-15 1979-01-16 Behringwerke Ag Procedimiento para la determinacion de reactivos fc
JPS5423977A (en) * 1977-07-22 1979-02-22 Sato Shinichi Contacttswitch circuit
US4210622A (en) * 1977-09-07 1980-07-01 National Research Development Corporation Kit for assay of immune complexes
US4231750A (en) * 1977-12-13 1980-11-04 Diagnostic Reagents, Inc. Methods for performing chemical assays using fluorescence and photon counting
JPS54113064U (sv) * 1978-01-30 1979-08-08
DE2836046A1 (de) * 1978-08-17 1980-02-28 Behringwerke Ag Immunologisches bestimmungsverfahren
US4307190A (en) * 1978-10-30 1981-12-22 Technicon Instruments Corporation Immunoassay using ascitic fluid
DE2853453A1 (de) * 1978-12-11 1980-06-19 Behringwerke Ag Mittel zur therapie von immunkomplexerkrankungen
FI58566C (fi) * 1979-02-22 1981-02-10 Orion Yhtymae Oy Foerbaettrat foerfarande att framstaella indikatorsystem foer bestaemning av antigen-antikroppsreaktioner med hjaelp av hemolys i gel
GB2045431B (en) * 1979-02-26 1983-04-20 Technicon Instr Immunoassay utilising two particulate reagents
US4282002A (en) * 1979-09-06 1981-08-04 Akzona Incorporated Sensitized sheep stroma immunoassay for rheumatoid factor
US4399229A (en) * 1980-04-14 1983-08-16 Immutron, Inc. Rapid radioimmunoassay product and method of making and using same
JPS5742854A (en) * 1980-08-27 1982-03-10 Seikagaku Kogyo Co Ltd Latex sensitized with complement 1q
GB2109932B (en) * 1980-10-24 1984-08-01 David Parratt A method of diagnosis
US4427781A (en) * 1981-03-16 1984-01-24 International Institute Of Cellular And Molecular Pathology Particle agglutination immunoassay with agglutinator for determining haptens; PACIA
WO1983001118A1 (en) * 1981-09-18 1983-03-31 Univ Georgetown Monoclonal antibody detection system
US4434227A (en) * 1982-02-08 1984-02-28 Abbott Laboratories Immunoassay for class specific immunoglobulin antibodies
JPS59501123A (ja) * 1982-03-31 1984-06-28 バイオスタ−・メディカル・プロダクツ・インコ−ポレ−テッド 免疫分析法、それに使用する装置及びかかる装置の製法
US4450231A (en) * 1982-03-31 1984-05-22 Biostar Medical Products, Inc. Immunoassay for determination of immune complexes with polymer-coated plastic base
IE820942L (en) * 1982-04-21 1983-10-21 Bartos Patent Dev Holding Determining in-viro effectiveness of cytostatic agents
US4420461A (en) * 1982-05-26 1983-12-13 Ortho Diagnostic Systems Inc. Agglutination-inhibition test kit for detecting immune complexes
US4427779A (en) 1982-05-26 1984-01-24 Ortho Diagnostic Systems Inc. Agglutination-inhibition test method for detecting immune complexes
US4459361A (en) * 1982-06-04 1984-07-10 Angenics, Inc. Ligand assay with one or two particulate reagents and filter
US4547466A (en) * 1983-06-01 1985-10-15 Allied Corporation Detecting rheumatoid factor with synthetic particles having immune complexes thereon
US4551435A (en) * 1983-08-24 1985-11-05 Immunicon, Inc. Selective removal of immunospecifically recognizable substances from solution
US4595654A (en) * 1983-11-07 1986-06-17 Immunomedics Inc. Method for detecting immune complexes in serum
JPS60256057A (ja) * 1984-06-01 1985-12-17 Dai Ichi Pure Chem Co Ltd 免疫学的測定法
DK445585A (da) * 1984-10-02 1986-04-03 Calpis Food Ind Co Ltd Stof-konjugeret komplementkomponent clq
JPS6178041U (sv) * 1984-10-29 1986-05-24
FR2585367B1 (fr) * 1985-07-26 1987-10-02 Lyonnaise Eaux Procede de dosage immunologique en continu de composes organiques dans un fluide en circulation, et dispositif de mise en oeuvre
DE3603085C1 (en) * 1986-02-01 1987-04-23 Medac Klinische Spezialpraep Immunological method for detecting antigen-specific antibodies and test kit for carrying out the method
US5223441A (en) 1986-10-09 1993-06-29 Syntex (U.S.A.) Inc. Receptors for immune complexes
DE3839869C2 (de) * 1987-12-10 1993-12-09 Wild Gmbh & Co Kg Rudolf Süßungsmittel
JP2670498B2 (ja) * 1988-03-04 1997-10-29 株式会社エスアールエル西日本 免疫複合体の測定法
AU658823B2 (en) * 1990-04-06 1995-05-04 University Of Florida Liquid-phase immunodiagnostic assay utilizing immune complex recognition
US5843794A (en) * 1992-03-26 1998-12-01 Montefiore Medical Center Technique for the prevention of false positive reactions in immunological testing due to C1 and C1q components of the complement and method for screening for rheumatic factor
JPH07500190A (ja) * 1992-03-26 1995-01-05 マントティフィオーレ、メディカル、センター 免疫試験中の誤反応を防止する技術
US5270169A (en) * 1992-06-23 1993-12-14 Sangstat Medical Corporation Detection of HLA antigen-containing immune complexes
WO1994017410A1 (en) * 1993-01-22 1994-08-04 Imre Corporation Improved immune complex assay
US5561049A (en) * 1994-09-21 1996-10-01 Behringwerke Ag Method for detecting antibodies
US6303325B1 (en) 1998-05-29 2001-10-16 Dade Behring Inc. Method for detecting analytes
AT409801B (de) * 2000-05-31 2002-11-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Verfahren zum screenen und isolieren von mikroorganismen, insbesondere prokaryontischer und eukaryontischer zellen, die ein antigen präsentieren
JP4896347B2 (ja) * 2000-06-30 2012-03-14 協和メデックス株式会社 不溶性担体粒子比濁免疫測定用試薬
US9575070B2 (en) * 2001-12-04 2017-02-21 Wayne State University Neoepitope detection of disease using protein arrays
JPWO2004061452A1 (ja) * 2003-01-07 2006-05-18 株式会社医学生物学研究所 抗体の測定方法
US7799556B2 (en) * 2004-06-17 2010-09-21 George Dacai Liu System and method for antigen structure-independent detection of antigens captured on antibody arrays
DE102004052729A1 (de) * 2004-10-30 2006-05-04 Roche Diagnostics Gmbh Immunkomplex-spezifsicher Antikörper zur Reduktion des Nullwerts beim Nachweis von Antigen-spezifisch gebundenen Antikörpern einer bestimmten Immunglobulinklasse in Array-Testformaten
CN103109190B (zh) 2010-08-19 2015-07-22 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于测量结合治疗性单克隆抗体的抗体的测定法
JP5467365B2 (ja) * 2010-12-09 2014-04-09 パナソニック株式会社 抗原抗体複合体を分離する方法
CN107976535B (zh) * 2017-11-03 2020-03-20 科美诊断技术股份有限公司 一种检测样本中目标IgM抗体的均相免疫检测试剂盒及其使用方法和应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL125235C (sv) * 1965-04-15
GB1179435A (en) * 1966-06-17 1970-01-28 Ortho Pharma Corp Stable Reagent for the Detection of Rheumatoid Arthritis
SE337223B (sv) * 1967-05-23 1971-08-02 Pharmacia Ab
AT279804B (de) * 1967-08-22 1970-03-25 Barbara Dr Polheim Verfahren zur Isolierung von Antigenen und Antikörpern
US3639558A (en) * 1968-02-19 1972-02-01 Louis Csizmas Immunological reagent particles having proteinaceous materials covalently bonded thereto
US3654090A (en) * 1968-09-24 1972-04-04 Organon Method for the determination of antigens and antibodies
NL154599B (nl) * 1970-12-28 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking.
US3852157A (en) * 1971-05-14 1974-12-03 Syva Corp Compounds for enzyme amplification assay
GB1508132A (en) * 1974-05-20 1978-04-19 Technicon Instr Analysis of biological fluids
US3992517A (en) * 1975-02-19 1976-11-16 Pfizer Inc. Detection of hepatitis B surface antigen by latex agglutination

Also Published As

Publication number Publication date
SE7505734L (sv) 1975-11-21
FR2272102A1 (sv) 1975-12-19
JPS6112224B2 (sv) 1986-04-07
SE447606B (sv) 1986-11-24
AU498364B2 (en) 1979-03-08
JPS5949545B2 (ja) 1984-12-03
CH631015A5 (de) 1982-07-15
DE2560554C2 (de) 1985-04-18
JPS5126221A (sv) 1976-03-04
FR2272398A1 (sv) 1975-12-19
US4143124A (en) 1979-03-06
FR2272102B1 (sv) 1979-05-04
NL182175C (nl) 1988-01-18
NL7505868A (nl) 1975-11-24
AU496821B2 (en) 1978-11-02
JPS598779B2 (ja) 1984-02-27
GB1508132A (en) 1978-04-19
SE7807275L (sv) 1978-06-27
DE2522086C2 (de) 1985-04-18
BE829277A (fr) 1975-11-20
BE829278A (fr) 1975-11-20
DE2522087A1 (de) 1975-12-11
CH627281A5 (sv) 1981-12-31
JPS6110776B2 (sv) 1986-03-31
JPS6022662A (ja) 1985-02-05
US4062935A (en) 1977-12-13
CH637770A5 (de) 1983-08-15
SE7505735L (sv) 1975-11-21
DE2522086A1 (de) 1975-12-11
SE435425B (sv) 1984-09-24
SE435325B (sv) 1984-09-17
AU8133275A (en) 1976-11-25
CH630465A5 (de) 1982-06-15
IT1038305B (it) 1979-11-20
AU8133375A (en) 1976-11-25
DE2522087C2 (sv) 1987-03-26
NL7505867A (nl) 1975-11-24
SE7808314L (sv) 1978-08-02
FR2272398B1 (sv) 1981-08-21
JPS5126220A (sv) 1976-03-04
JPS5915860A (ja) 1984-01-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE443660B (sv) Forfarande och reagens for immunanalys med rf eller clq adsorberat till fast berare
US4279617A (en) Iummunoassay involving agglutination
EP0615129B1 (en) Methods for selectively detecting perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody of ulcerative colitis or primary sclerosing cholangitis
US4138213A (en) Agglutination immunoassay of immune complex with RF or Clq
CA1195925A (en) Method for assaying antigen-antibody reactions and reagent therefor
US4283383A (en) Analysis of biological fluids
JP2636331B2 (ja) 抗原特異的な抗体の一段階測定法およびそれに適する試薬
JP2000510581A (ja) 血小板顆粒蛋白質を用いた血小板数アッセイ
EP0746767A1 (en) Analyzer cuvette, method and diagnostic test kit for determination of analytes in whole blood samples
US4162895A (en) Mouse serum
US4307190A (en) Immunoassay using ascitic fluid
US4251360A (en) Method and apparatus for the detection of a specific binding protein
JP2553852B2 (ja) サンプル中の生物学的物質の免疫学的測定法
JPH02257063A (ja) 免疫測定試薬および免疫測定法
EP0080108B1 (en) Diagnostic reagent and use thereof
GB2217335A (en) Compositions for isolation and immobilisation of C-reactive protein in body liquids
JP3618797B2 (ja) 免疫測定法
JPS6281566A (ja) 微粒子の螢光強度測定による定量方法
JPH0456258B2 (sv)
KR100193267B1 (ko) 면역 멤브레인 스트립 및 그의 제조방법
Monnet et al. Automatized hemagglutination kinetics
JPH03118472A (ja) インスリン定量方法及び定量試薬
CA1046936A (en) Analysis of biological fluids
SU1243731A1 (ru) Способ определени иммунных комплексов
JPS60364A (ja) 新規な抗原定量法

Legal Events

Date Code Title Description
NUG Patent has lapsed

Ref document number: 7807275-8

Effective date: 19941210

Format of ref document f/p: F

NUG Patent has lapsed

Ref document number: 7807275-8

Format of ref document f/p: F