FI58566C - Foerbaettrat foerfarande att framstaella indikatorsystem foer bestaemning av antigen-antikroppsreaktioner med hjaelp av hemolys i gel - Google Patents
Foerbaettrat foerfarande att framstaella indikatorsystem foer bestaemning av antigen-antikroppsreaktioner med hjaelp av hemolys i gel Download PDFInfo
- Publication number
- FI58566C FI58566C FI790598A FI790598A FI58566C FI 58566 C FI58566 C FI 58566C FI 790598 A FI790598 A FI 790598A FI 790598 A FI790598 A FI 790598A FI 58566 C FI58566 C FI 58566C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- gel
- antigen
- complement
- indikatorsystem
- hemolys
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
- G01N33/555—Red blood cell
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
fSHr^l M d,»uwLufu.,uliu.su cac** '1Ί' UTLÄGGNINQSSKRIFT 58566
RoS c w :o JC ’n ^ (51) Kf.rn.Vci.3 G 01 H 33/5* SUOMI—FINLAND (21) 790598 (22) HakemltpClvI—An*6kitlnp4«g 22.02.79 (23) Afloipllvt—GIMcMtadag 22.02.79 (41) Tullut ivIklMkii — BlMt offamtfg 23 08 80 ^»tantti. )ft r.kift«rlh»llltu* (44) NiMMUulpanon Jt kuuLfulkalMn pvm. — rtmtt- oeh raflftarttyralaan AmMcm iittagd och utUkrMtm pubiiearatf 31.10.80 (32)(33)(31) Ρ)Τ»4·**Τ «uolkiit—Buglrd prtorktt (71) Orion-yhtymä Oy, Nilsiänkatu 10-lU, 00510 Helsinki 51, Suami-Finland(FI) (72) Pertti Ilkka Väänänen, Helsinki, Suomi-Finland(Fl) (7^) Fermion Oy, patenttiosasto (5^4) Parannettu menetelmä valmistaa indikaattorijärjestelmä antigeeni-vasta-ainereaktioiden määrittämiseksi geelissä tapahtuvan hemolyysin avulla -Förbättrat förfarande att framställa indikatorsystem för bestämning av antigen-antikroppsreaktioner med hjälp av hemolys i gel
Keksinnön tarkoituksena on esittää parannettu menetelmä valmistaa indikaattorijärjestelmä antigeeni-vasta-ainereaktioiden määrittämi-seksi geelissä tapahtuvan hemolyysin avulla.
Hemolyysiä geelissä eli HIG-menetelmää käytetään sairaaloissa ja laboratorioissa osoittamaan, että jokin henkilö sairastaa tai on sairastanut tiettyä tautia. HIG-menetelmällä osoitetaan tällöin, että henkilön veressä tai seerumissa on kyseisen taudinaiheuttajan eli antigeenin vasta-ainetta. Tätä HIG-menetelmää voidaan myös käyttää tietyn antigeenin identifioimiseen tunnetulla vasta-aineella.
HIG-menetelmissä käytetään tietyssä puskurimi1jöössä valmistettua agaroosilevyä eli -geeliä, joka sisältää erytrosyyttejä, joihin on sidottu antigeenejä tai vasta-aineita. Erytrosyyttien ja antigeenien tai vasta-aineiden välinen sidos voidaan vielä vahvistaa kemiallisilla aineilla kuten kromitrikloridilla. Geeli sisältää myös komplementtia.
2 56566
Tutkittava näyte, esimerkiksi seerumi, lisätään agaroosigeelissä olevaan kuoppaan ja inkuboidaan. Levyllä tapahtuva hemolyysi kuopan ympärillä osoittaa, että tutkittava näyte sisältää määritettävää antigeeniä tai vasta-ainetta. Hemolyysi perustuu seuraavaan mekanismiin. Tutkittavassa näytteessä oleva vasta-aine tai antigeeni reagoi agarlevyssä olevan antigeenin tai vasta-aineen kanssa ja herkistää komplementin, jolloin erytrosyytit hajoavat eli tapahtuu hemolyysiä.
HIG-menetelmään perustuvia indikaattorijärjestelmiä on kuvattu esimerkiksi saman hakijan aikaisemmassa ruotsalaisessa patenttihakemuksessa SE 7608297, Wellcome Foundation’in patenttijulkaisussa DE 2532283 sekä julkaisussa Schildt et ai. Intern. Symp. on Immunity to Infections of Respiratory Systems in Man and Animals. Develop. Biol. Standard, voi. 28 ss. 253-272. Edellä mainituissa julkaisuissa kuvatuissa indikaattorijärjestelmissä komplementti on mukana geelissä. Tällöin agarlevyn säilyvyys on rajattu eli korkeintaan 3-4 viikkoa. Jos komplementti jätetään pois ja lisätään vasta kuten esillä olevassa keksinnössä levyä käytettäessä, indikaattorijärjestelmän säilyvyyttä voidaan lisätä 3-4 kuukauteen.
Skaug et ai. Acta Path. Microbiol. Scand. Sect. B voi. 83, ss. 36.7-372 ja Strannegärd et ai. J. Clin. Microbiol, voi. 1_ (6), ss. 491-494 ovat esittäneet menetelmän, jossa komp1ementti1iuos kaadetaan levyn päälle. Skaug’in menetelmää käytettäessä lisätään ensin tutkittava näyte ja inkuboidaan muutama tunti. Tämän jälkeen kaadetaan komplementti1iuosta levylle ja inkuboidaan jälleen 20 tuntia. Strannegärdin menetelmässä inkubointiajat ovat vastaavasti 7-24 tuntia seerumin ja noin kaksi tuntia komplementin kanssa. Kun komplementtia lisätään liuoksena, sen tasainen levittäminen geelille, joka usein on reunoilta koholla, on hankalaa ja hemolyysirenkaat voivat tämän johdosta olla epätasaisia, mikä vuorostaan vaikeuttaa hemolyysirenkaiden läpimitan mittaamista. Tämän lisäksi kaksi eri inkubointia pitkittää tulosten saantia.
Yllä mainittujen haittojen poistamiseksi on kehitetty keksinnön mukainen, nopea, luotettava ja pitemmän säilyvyyden omaava indikaattori j ä rj es te lmä ja menetelmä tämän indikaattorijärjestelmän valmistamiseksi.
3 58566
Keksinnön mukaisessa järjestelmässä valmistetaan tietyssä puskuri-miljöössä agaroosilevy, joka sisältää pelkästään erytrosyyttejä ja näihin kiinnitettyjä antigeenejä tai vasta-aineita, mikä sidos voidaan vielä vahvistaa kemiallisella aineella kuten kromi tri k lori di 1la. IndikaattorijärjesteImään kuuluva komplementti imeytetään kastamalla sopivan huokoskoon 0.5-5 /um, edullisimmin 1.2 /um, omaava kalvo komplementti liuokseen ja kuivaamalla kalvo. Kalvomateriaalina voidaan käyttää erilaisia selluloosaesteriseoksia tai selluloosatriasetaat-tia. Imeytetty kalvo kylmäkuivataan ja säilytetään +4°-6°C:ssa ja käytetään tarvittaessa.
Vaihtoehtoisesti komplementti voidaan imeyttää imupaperilevyyn. Kal-vomateriaali on kuitenkin helpommin vakioitavissa ja komplementti leviää siitä tasaisemmin kuin imupaperista.
Keksinnön mukaista järjestelmää käytettäessä tutkittava näyte lisätään levylle ja inkuboidaan tunti. Tämän jälkeen asetetaan komplementtia sisältävä kalvo levylle ja inkuboidaan. Hemolyysirenkaat ovat tasaiset ja niitä on helppo mitata valkoista kalvoa vastaan.
Keksinnön mukaista järjestelmää on helppo käyttää. Ei tarvita erikoiskoulutettua henkilökuntaa eikä erikoislaboratorioita. Järjestelmää voidaan käyttää siellä missä sitä tarvitaan kuten sairaaloissa ja terveyskeskuksissa. Testin suoritus on nopeaa ja tulosten lukeminen yksinkertaista ja selvää.
Indikaattorijärjestelmän säilyvyyden parantuminen merkitsee sitä, että levyjä voidaan valmistaa suuremmissa erissä ja varastoida.
Tämä helpottaa järjestelmän teollista valmistusta ja jakelua. Jos säilyvyys on huono, levyt on valmistettava juuri ennen käyttöä ja lisäksi on järjestettävä erikoiskuljetuksia. Parempi säilyvyys takaa myös sen, että käyttäjät, jotka harvemmin tarvitsevat järjestelmää, voivat hyödyntää sitä. Yllä mainitut seikat osoittavat, että tällaisella paremman säilyvyyden omaavalla indikaattorijärjes-telmällä on suuri teknillinen ja taloudellinen merkitys.
Keksintöä valoitetaan seuraavilla influenssaa, sikotautia ja vihurirokkoa koskevilla suoritusesimerkeillä: 58566
Esimerkki 1 HIG-levyn valmistaminen influenssavirusantigeenei1la a) Levyn valmistaminen
Sekoitetaan koeputkessa 0.5 ml kukon punasoluja, 0.5 ml influenssa-viruspitoista allantoisnestettä, jonka hemagglutinaatiotiitteri on 640 HAU/ml sekä 0.5 ml 0.1 % CrCl3'6H20 0.15 M NaCl:ssä.
Viiden minuutin kuluttua lisätään 30 ml 0.05 ΙΊ fosfaattipuskuria pH 7.2, jossa on 0.15 M NaCl, 0.003 M CaCl2 ja 0.001 H MgC12 sekä 0.2 % naudan albumiinia.
Sentrifugoidaan ja solut pestään vielä kerran samalla puskurilla. Tämän jälkeen sentrifugoidaan ja solupakka suspensoidaan 10 %:ksi edellä mainittuun puskuriin ilman naudan albumiinia.
Sekoitetaan 0.6 g agaroosia 39 ml:aan 0.05 M fosfaattipuskuriin pH 7.2, jossa on 0.15 M NaCl ja kuumennetaan vesihauteella, kunnes agaroosi on sulanut. Jäähdytetään agaroosi 43°C:een ja lisätään siihen edellä valmistettu 10 %:nen soluerä (5 ml). Välittömösti valetaan agaroosipunasoluseoksesta esim. 7.5 ml muovilevylle, jossa on 1.5 mm syvä ja 6 x Θ cm:n kokoinen syvennys. Kun agaroosi on jähmettynyt, stanssataan siihen 0 2 mm:n reikiä seeruminäytteitä varten.
b) Komplementtikalvon valmistaminen
Komplementti (marsun seerumi) laimennetaan 1:3 0.05 M fosfaattipuskurilla pH 7.2, jossa on 0.15 M NaCl.
1.2 /jm:n huokoskoolla varustetusta membraanisuodatinkalvosta, joka on valmistettu selluloosaesteriseoksesta, leikataan 6x6 cm:n kokoisia paloja, jotka asetetaan vuorollaan kellumaan komplementti-liuoksen päälle. Imettyään komplementin (n. 0.7 ml/pala) kalvo asetetaan teräsalustalle, jolla se siirretään kylmäkuivuriin. Kylmäkuivatut kalvot voidaan säilyttää esim. kuumasaumatussa muovipussissa jääkaapissa.
5 58566 c) Käyttö HIG-levyn kuoppaan tiputetaan seerumia 5 yul ja annetaan diffundoi-tua 1 tunti. Sen jälkeen asetetaan komplementtikalvo agaroosin pinnalle ja suljetaan levyn kansi jälleen. Inkuboidaan 1B tuntia 37°C lämpökaapissa, jonka jälkeen mitataan kuopan ympärille muodostunut hemolyysirengas, joka erottuu helposti levyn takaa valkoista kalvoa vasten. Hemolyysirenkaan läpimitta on suhteessa näytteen vasta-ainepitoisuuteen.
Esimerkki 2 HIG-levy vihurirokko vasta-ainemääritykseen
Levyt valmistetaan kuten esimerkissä 1 a), mutta influenssa-antigeenin tilalla on rubellaviruskasvatusnestettä, jonka hemagglutinaatio-tiitteri on 512 HAU/ml.
Komplementtikalvon valmistamiseen voidaan käyttää myös 1.2 /um huokoskoon omaavaa selluloosatriasetaattikalvoa, joka käsitellään kuten esimerkissä 1. Tämä kalvo ottaa itseensä noin 0.Θ5 ml komplementtiä.
Käytetään esimerkissä 1 c) kuvatulla tavalla.
Esimerkki 3 HIG-levy sikotautivasta-ainemääritykseen HIG-levy valmistetaan esimerkin 1 a] mukaisesti, mutta influenssa-antigeenin tilalla on sikotautivirusta sisältävää allantoisnestettä. jonka hemagglutinaatiotiitteri on 640 HAU/ml.
Komplementtikalvona voi myös käyttää 0.8 /jm:n huokoskoolla olevaa selluloosaesteriseoksesta valmistettua membraanisuodatuskalvoa.
Tämä kalvo imee itseensä komplementtia noin 0.65 ml.
Käytetään esimerkissä 1 c) kuvatulla tavalla.
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI790598A FI58566C (fi) | 1979-02-22 | 1979-02-22 | Foerbaettrat foerfarande att framstaella indikatorsystem foer bestaemning av antigen-antikroppsreaktioner med hjaelp av hemolys i gel |
| DE19792951248 DE2951248A1 (de) | 1979-02-22 | 1979-12-19 | Verfahren zur herstellung eines indikatorsystems zur bestimmung von antigen-antikoerper-reaktionen |
| SE8000236A SE8000236L (sv) | 1979-02-22 | 1980-01-11 | Forbettrat forfarande att framstella indikatorsystem for bestemning av reaktioner mellan antinger och antikroppar med hjelp av hemolys i gel |
| FR8000695A FR2449894A1 (fr) | 1979-02-22 | 1980-01-14 | Procede perfectionne de preparation d'un systeme indicateur pour la determination de reactions antigenes-anticorps |
| GB8005893A GB2045432B (en) | 1979-02-22 | 1980-02-21 | Indicator system and method for determination of antibody presence by means of an antigen-antibody reaction |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI790598 | 1979-02-22 | ||
| FI790598A FI58566C (fi) | 1979-02-22 | 1979-02-22 | Foerbaettrat foerfarande att framstaella indikatorsystem foer bestaemning av antigen-antikroppsreaktioner med hjaelp av hemolys i gel |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI58566B FI58566B (fi) | 1980-10-31 |
| FI58566C true FI58566C (fi) | 1981-02-10 |
Family
ID=8512415
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI790598A FI58566C (fi) | 1979-02-22 | 1979-02-22 | Foerbaettrat foerfarande att framstaella indikatorsystem foer bestaemning av antigen-antikroppsreaktioner med hjaelp av hemolys i gel |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE2951248A1 (fi) |
| FI (1) | FI58566C (fi) |
| FR (1) | FR2449894A1 (fi) |
| GB (1) | GB2045432B (fi) |
| SE (1) | SE8000236L (fi) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4522923A (en) * | 1983-10-03 | 1985-06-11 | Genetic Diagnostics Corporation | Self-contained assay method and kit |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1508132A (en) * | 1974-05-20 | 1978-04-19 | Technicon Instr | Analysis of biological fluids |
| GB2036307B (en) * | 1977-07-14 | 1982-07-21 | Elwing H | Method for the determination of biological substances by diffusion in a porous matrix or by electrophoriesis |
-
1979
- 1979-02-22 FI FI790598A patent/FI58566C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-12-19 DE DE19792951248 patent/DE2951248A1/de not_active Withdrawn
-
1980
- 1980-01-11 SE SE8000236A patent/SE8000236L/ not_active Application Discontinuation
- 1980-01-14 FR FR8000695A patent/FR2449894A1/fr active Granted
- 1980-02-21 GB GB8005893A patent/GB2045432B/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2449894B1 (fi) | 1983-10-28 |
| GB2045432A (en) | 1980-10-29 |
| FR2449894A1 (fr) | 1980-09-19 |
| SE8000236L (sv) | 1980-08-23 |
| DE2951248A1 (de) | 1980-10-30 |
| GB2045432B (en) | 1983-08-17 |
| FI58566B (fi) | 1980-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI79614B (fi) | Testfoerpackning och foerfarande foer bestaemning av streptococcus a | |
| US4356164A (en) | Detection of non-A, non-B hepatitis associated antigen | |
| Le Bouvier | The D→ C change in poliovirus particles | |
| JPH10300750A (ja) | 酵素免疫測定方法及び試験片 | |
| US4403037A (en) | Erythrocyte preparations and use thereof in hemagglutination tests | |
| US10883985B2 (en) | Immunochromatographic test piece and immunochromatography method using same | |
| JPS58501733A (ja) | ウイルス試験法 | |
| AU606290B2 (en) | Process and reagent for the determination of the ionic strength or of the specific weight of aqueous liquids | |
| CN102608321B (zh) | 多房棘球绦虫循环抗原斑点金免疫渗滤试剂盒及制备方法 | |
| JPS5916668B2 (ja) | 血清学的検査試験法 | |
| FI63493B (fi) | Paovisande av hepatitis b ytantigen genom latex-agglutination | |
| Rosenthal et al. | The incorporation of lipid and Na+-K+-ATPase into the membranes of semipermeable microcapsules | |
| WO2003098215A1 (en) | Rapid vaccinia antibody detection device, method and test kit | |
| US3843777A (en) | Hemolytic assay system | |
| FI96801B (fi) | Materiaalipakkaus ja menetelmä analyytin määrittämiseksi | |
| FI58566C (fi) | Foerbaettrat foerfarande att framstaella indikatorsystem foer bestaemning av antigen-antikroppsreaktioner med hjaelp av hemolys i gel | |
| CA1334825C (en) | Solid phase indicator red blood cells and method | |
| US4176174A (en) | Viral antibody diagnostic test system | |
| Sze et al. | Permeability of human erythrocyte membrane vesicles to alkali cations | |
| EP0477302B1 (en) | Apparatus for inactivating infectious agents in and resisting coagulation of biological fluids | |
| Stone et al. | Naturally occurring isoantibodies of the S blood group system in cattle | |
| CH624772A5 (fi) | ||
| EP0154392A2 (en) | Processes for the detection of non-A, non-B hepatitis and a kit for use in the same | |
| US6344335B1 (en) | Liposome immunoassay | |
| Wesslén | Hemolysis-in-gel (HIG) test for antibodies to influenza A, measles and mumps using liquid nitrogen freezed erythrocytes coupled with the respective viral antigen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ORION-YHTYMAE OY |