SU1243731A1 - Способ определени иммунных комплексов - Google Patents

Description

«

изобретение относитс  к биологии и может найти применени  в клинической иммунологии, Б ooo6eifflocTH при ;диагностзше шиму.нокомплексных болезней . ,.

Целью изобретени   вл етс  повышение точности определени .Способ по сн етс  следующими примерами .

Пример 1. Приготовление протеина А па носителе..Носителем дл  протеина А могут служить частицы дер матола, латекса, эритроциты барана. Нагрузку протеина А на носитель производ т из расчета 62 мкг белка протеина А на 1 г дерматола, последний используют в виде взвеси в 1 мл бо- ратного буфера рН 8,4. Сьшоротку крови больного хроническим неспецифическим заболеванием легких развод т дистиллированной водой 1:5. При подкис- лении субстрата до рН 4,5-5,0 мономерные иммуноглобулины остаютс  в надосадке, Отделение их от фракции, в которой предполагаетс  наличие иммунных комплексов, производ т центрифугированием в течение 30 мин при 2000 об/мин, и однократном отмы- ,вании осадков дистиллированной водой при рН 7,0. После этого осадок раствор ют в исходном объеме физиологического раствора и готов т р д последовательных разведений, начина  с. 1:2 до 1:256.

Реакцию агглютинации став т при комнатной температуре на стекле, К одной капле 0,05 мл каждого разведени  добавл етс  одна капл  (0505мл) взвеси носител  с протеином А.. Стекло-покачивают на руках 5 мин, после чего производ т учет реакции под микроскопом (объектив 8 окул р 10х) О наличии иммунного комплекса в субстрате свидетельствует агглютинаци  частШд носител  с протеином А. Чувствительность метода - 2 мкг белка .комплекса в 2-мл субстрата. В результате проведенных испытан:ий в сыворотке крови больного хроническим неспецифическим заболеванием легких получена реакци  агглютинации частиц носител  с протеином А, что свидетельствует о наличии в испытуемом субстрате иммунных комплексов.

И р и м е р 2. Сьгооротка крови больного системной красной волчанкой по описанной методике исследовали на наличие иммунных комплексов

437312

с помощью протеин а А на носителе, в этом образце сьгооротки также получены положительные результаты - констатировано наличие агглютированных

5 .стиц протеина А на носителе. В параллельных опытах эти же образцы сывороток бьши исследованы методом фиксации комплемента, вз того в качестве , прототипа. При анализе сыво10 роток этим методом на наличие иммунных комплексов получены отрицатель-. ные результаты.

Таким образом, в о боих примерах обнарЗ( жили иммунные комплексы при

tS помощр предлагаемого способа, при этом используемый дл  сравнени  способ-прототип дал отрицательные результаты ,,

Использование предлагаемого спо- 20 соба позвол ет расширить возможности диагностики заболеваний, св занных с образованием иммунных комплексов , не сорбирующих комплемент.

При таких заболевани х, как хро25 ничеСБ:ие неспецифические заболевани  легких, холера, брюшной тиф, |Колиэнтерит, решающую роль играет иммуноглобулин класса А, не обладающий способностью сорбировать компле30 мент. Заболевани  вирусной этиологии также сопровождаютс  выработкой иммуноглобулина класса А.

достаточно информативным методом дл  из гчени  патогенеза заj ,j . болевани, св занных с наличием им- мунньк комплексов в сьшоротке крови,  вл етс  только метод, позвол ющий определить иммунные комплексы, со-. держающе антитела разных классов,

40 независимо от их величины и способности сорбировать комплемент.

Предлагаемьй способ можно использовать дл  определени  иммунных комп- 45 лексов общеприн тую реакцию агглютиг нации, Ранее в иммунологии эта реакци  использовалась только в цел х определени  антигена или антител.

50 Изобрете.ние позвол ет впервые использовать реакцию агглютинации дл  индикации И1чмунных комплексов. Кроме того, обеспечиваетс  доступность применени  способа в клинических лабора55 тори х с целью диагностики, так как он не требует сложного оборудовани  и основан на использовании отечественных реактивов. При этом есть воз312437314

можность исключить применение дл  св занное с техническими трудност ми определени  иммунных комплексов ра- получени  препарата и небезопасностью диоактивного препарата протеина А, его использовани .

Claims (1)

1. . СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ, включающий сорбирование и связывание их с протеином А стафилококка, о тличающий с я тем, что, с целью повышения точности определения, перед сорбированием из исследуемой крови удаляют мономерные иммуноглобулины,.а сорбирование и связывание осуществляют на стекле, при этом протеин А стафилококка добавляют на нейтральном носителе и · положительной реакции агглютинации определяют наличие иммунного комплекса.