SA114350400B1 - تركيبات وطرق لتحضير تركيبات مولدة للمناعة لمقترن بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي 5 و 8 من المكورات العنقودية الذهبية - Google Patents

تركيبات وطرق لتحضير تركيبات مولدة للمناعة لمقترن بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي 5 و 8 من المكورات العنقودية الذهبية Download PDF

Info

Publication number
SA114350400B1
SA114350400B1 SA114350400A SA114350400A SA114350400B1 SA 114350400 B1 SA114350400 B1 SA 114350400B1 SA 114350400 A SA114350400 A SA 114350400A SA 114350400 A SA114350400 A SA 114350400A SA 114350400 B1 SA114350400 B1 SA 114350400B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
polysaccharide
serotype
conjugate
kda
immunogenic
Prior art date
Application number
SA114350400A
Other languages
English (en)
Inventor
انديرسون آناليزا
ليا دودج انجريد
كريشنا براساد ايه.
جرين بروس
دي سكوت تراسي
ساين نانرا جاسديب
جون فريسي ستيفن
بافلياك فيليام
يوتي جانسين كاثرين
Original Assignee
ويث ال ال سي
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ويث ال ال سي filed Critical ويث ال ال سي
Publication of SA114350400B1 publication Critical patent/SA114350400B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/085—Staphylococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A61K2039/627—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier characterised by the linker
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/64—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the architecture of the carrier-antigen complex, e.g. repetition of carrier-antigen units

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالى بمقترنات مولدة للمناعة تتضمن بولي سكاريد polysaccharides كبسولية للنمط المصلى 5 و 8 من المكورات العنقودية الذهبية Staphylococcus aureus مقترنة مع بروتينات حاملة وطرق لتحضيرها واستخدامها . تتضمن طرق تصنيع المقترنات المولدة للمناعة للاختراع اقتران تساهمى للبولي سكاريدات polysaccharides الكبسولية مع البروتينات الحاملة باستخدام كيمياء اقتران تتضمن أى من : 1,1-carboyl di 1,2,4 triazole (CDT) او (2-pyridyldithio) propionyl hydrazide (PDPH)3-. شكل 1.

Description

_— \ _ تركيبات وطرق لتحضير تركيبات مولدة للمناعة لمقترن بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي 50 ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Compositions and methods for preparing staphylococcus aureus 5 and 8‏ ‎capsular polysaccharide conjugate immunogenic compositions‏ الوصف الكامل
خلفية الاختراع
ان هذا الطلب عبارة عن طلب جزئي من الطلب رقم ‎١١١٠٠١57١7‏ والذي تم إيداعه في المملكة
العربية السعودية بتاريخ ‎١١‏ / 7 / اه الموافق ‎٠١٠ / 1 / YY‏ م .
يتعلق الاختراع عموماً بتركيبات مولدة للمناعة لمقترن بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ كبسولي
‎ball ©‏ المصلي © ‎Ay‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ وطرق
‏لتحضيرها واستخدامها.
‏يعتبر الآدمين هم المستودع الطبيعي لسلالة المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus‏
‏5 موجبة لجرام. على سبيل المثال؛ يمكن للعنقودية الذهبية أن تكون مستعمرة في الجلد
‎skin‏ » ثقوب الأنف والحنجرة ‎nares and throat‏ سواء بشكل دائم أو مؤقت؛ بدون أن تسبب ‎٠‏ مرض.
‏تتراوح عدوى العتنقودية ‎serotype dual)‏ من عدوى الجلد المعتدلة إلى التهاب بطانة القلب
‏5 التهاب نخاع العظم ‎osteomyelitis‏ ؛ تجرثم الدم والخمج ‎bacteremia and‏
‎sepsis‏ تسبب العنقودية الذهبية أيضاً أغلب العدوى المتعلقة بالمستشفي؛ ويزيد انتشارها في
‏العدوى التي ‎fag‏ عند الاتصال. علاوة على ذلك؛ في ‎٠٠05‏ تم تقدير العنقودية الذهبية المقاومة ‎٠‏ للميتيسيلين ‎methicillin-resistant 5. aureus (MRSA)‏ عند 8١؟‏ لكل ‎٠٠٠٠٠١‏ فردء
‏مشتملة على ‎Ala ١6,156‏ وفاة في الولايات المتحدة في ‎Klevens et al. )2007( ( ٠٠058‏
‎.(J.
Am.
Med.
Assoc. 298:1763-1
‎EAE
ا يحدث المرض بصورة متتالية عندما يصبح الأفراد ضعاف المناعة نتيجة التصدعات في الحواجز المناعية ‎immune barriers‏ ؛ على سبيل المثال أثناء ‎daball‏ وضع ‎Hh‏ مستقرة ‎indwelling catheters‏ أو ‎(gal seal‏ إصابة أو جروح. تنتج المكورات العنقودية الذهبية ‎ae Staphylococcus aureus‏ كبير من انتيجنات ‎antigens ©‏ _الخلوية الخارجية والداخلية؛ مشتملة على توكسينات ‎toxins‏ وانزيمات عديدة. وتكون هناك أهمية خاصة للأنماط المصلية للبولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي من المكورات العنقودية الذهبية ‎Karakawa & Vann, "Capsular kil) Staphylococcus aureus‏ ‎polysaccharides of‏ العنقودية الذهبية ‎Weinstein & Fields, eds.
Seminars‏ بيصا ", ‎in Infectious Disease.
IV.
Bacterial Vaccines. (New York, NY; Thieme‏ ‎(Stratton; 1982. pp. 285-293 ٠‏ بشكل خاص بولي مكاريدات ‎polysaccharides‏ ‏الكبسولية للنمط المصلي 5 و8. أظهرت دراسات طبقة البشرة على عدد كبير من سلالات المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ المعزولة من الأفراد أن 7976 إلى ‎Ihe‏ ‏كان بهم بولي سكاريد ‎hal‏ المصلي إما © أو ‎Arbeit et al. (1984) Diagn. ) A‏ ‎ed (Microbiol.
Infect.
Dis. 2:85-91‏ الحظء تعتبر بولي مكاريدات ‎polysaccharides Yo‏ الكبسولية مولدات للمناعة ضعيفة بنفسها. زادت العدوى والأمراض المتعلقة بالمكورات العنقودية ‎Staphylococcal infections‏ بشكل مفاجئ في أخر عشرين سنة؛ مع استخدام الأجهزة داخل الأوعية والطرق الغزوية (الداخلية). الزيادة في حدوث المرض تكون مقلقة بشكل أكثر بسبب الارتفاع الموازي في مقاومة المضاد الحيوي؛ لذلك تكون هناك حاجة ملحة لتركيبات مولدة للمناعة لمنع العدوى والأمراض المتعلقة ‎٠‏ بالمكورات العنقودية. الوصف العام للاختراع ‎aay‏ الاختراع الحالي لمقترنات مولدة للمناعة تتضمن بولي سكاريد كبسولي ‎hall‏ المصلي © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية مقترن مع بروتين حامل ‎«carrier protein‏ وطرق تحضير تلك المقترنات. قد يتم الحصول على بولي سكاريد للنمط المصلي © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية ‎EAE‏
له الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مباشرة من البكتريا باستخدام طرق العزل المعروفة لهؤلاء الماهرين في المجال؛ قد يتم إنتاجها باستخدام بروتوكلات اصطناعية؛ أو قد يتم إنتاجها بشكل مستنسخ باستخدام طرق هندسة جينية معروفة أيضاً لهثلاء الماهرين في المجال. بالإضافة إلى ذلك؛ يقدم الاختراع الحالي طرق لاستحثاث الاستجابة المناعية ضد بكتريا ‎«Staphylococcus‏ ‏© طرق لمنع مرض ناتج عن بكتريا ‎«Staphylococcus‏ وطرق تقليل ‎saa‏ عرض واحد على الأقل للمرض ناتج عن العدوى ببكتريا في أحد النماذج؛ يتضمن الاختراع مقترن بولي سكاريدات ‎polysaccharides‏ بروتين مولد للمناعة يتضمن بولي سكاريد كبسولي من النمط المصلي © أو ‎A‏ من_المكورات العنقودية الذهبية مقترن مع بروتين حامل ‎carrier protein‏ ؛ ‎Sus‏ بولي سكاريد له وزن جزيئي ما بين ‎٠١‏ ك ‎٠‏ دالتون و١٠٠٠‏ ك دالتون. في بعض ‎pital)‏ المقترن المولد للمناعة له وزن جزيئية ما بين ‎٠٠١‏ ‏ك دالتون و2000 ك دالتون. في أحد النماذج سكاريد للمقترن المولد للمناعة ‎immunogenic‏ ‎conjugate‏ له معدل وزن جزيئي ما بين ‎Ve‏ ك دالتون و 700 ك دالتون. في أحد النماذج المقترن المولد للمناعة له مدى وزن جزيئي من ما بين ‎5٠٠0‏ ك دالتون و ‎Your‏ ك دالتون. في أحد النماذج؛ بولي سكاريد الكبسولي ‎hall‏ المصلي 0 أو ‎A‏ له ‎dap‏ من إضافة -0 ‎acetylation ١٠‏ بين ‎GA ٠٠00١ -٠١‏ أحد النماذج» درجة من إضافة ‎O-acetylation‏ بين ‎٠0-٠‏ 7. في أحد النماذج؛ ‎dap‏ من إضافة ‎O-acetylation‏ بين ‎٠٠١ —vo‏ 7. في أحد النماذج؛ ينتج المقترن المولد للمناعة جسم مضاد وظيفي كما قيس عن طريق قتل البكتريا في أي من ‎deal Ald zie‏ أو عن ‎Goh‏ اختبار _ القتل ‏ بالالتهام الأبسوني ‎.opsonophagocytic‏ ‎٠‏ في أحد النماذج؛ يتضمن البروتين الحامل ‎carrier protein‏ للمقترن المولد للمناعة ‎.CRM197‏ ‏في ‎ial uf‏ يرتبط 080/197 ‎lee Leal‏ بولي سكاريد من خلال رابط كربامات ‎carbamate linkage‏ « رابط اميد ‎amide linkage‏ ؛ أو كلاهما. في أحد النماذج؛ يمكن أن تكون النسبة الجزيئية اللاديسين ‎lysines‏ المقترن إلى 040/1197 حوالي ‎١ :٠١‏ إلى حوالي ‎Yo‏ ‏3 ‎EAE‏
‎Qo _‏ _ في أحد ‎oz lal)‏ يتضمن المقترن رابط تساهمي واحد بين 40/0197 _ و بولي ‎Wea‏ ‎polysaccharide‏ لعلى الأقل كل © إلى ‎٠١‏ وحدات متاكررة من سكاريد للبولي سكاريد. في أحد النماذج؛ يحدث الارتباط بين البروتين الحامل ‎carrier protein‏ و بولي مكاريد مرة واحدة في كل © وحدات متكررة من بولي سكاريد . ‏0 في أحد النماذج؛ يتضمن المقترن المولد للمناعة الذي يتضمن 681/197 ‎٠‏ إلى ‎YY‏ لايسينات ‎lysines‏ أو + إلى ‎Yo‏ لايسينات مرتبط تساهمياً مع بولي سكاريد. في أحد النماذج؛ يتضمن المقترن المولد للمناعة الذي يتضمن 080/197 ‎٠‏ إلى © لايسينات أو 8 إلى ‎١١‏ لايسينات مرتبط تساهمياً مع بولي سكاريد. في أحد ‎or Sail)‏ يتضمن المقترن المولد للمناعة بولي سكاريد النمط © أو ‎A‏ والذي يضاف له -0 ‎.7 ٠٠١ -٠١ ‏بنسبة‎ acetylation ٠ 0- ‏والذي يضاف له‎ A ‏في أحد النماذج؛ يتضمن المقترن المولد للمناعة بولي سكاريد النمط © أو‎ ‏في أحد النماذج؛ يتضمن المقترن المولد للمناعة بولي سكاريد‎ .2 ٠٠١ -5 ١ ‏بنسبة‎ 0
J Ver =Yo ‏بنسبة‎ O-acetylation ‏والذي يضاف له‎ A ‏أو‎ © Lal ‏في بعض النماذج؛ يمكن استخدام التركيب المولد للمناعة لإنتاج أجسام مضادة وظيفية في نموذج‎ . opsonophagocytic ‏الفعالية الحيواني أو اختبار القتل بالالتهام الأبسوني‎ Vo
A ‏في أحد النماذج؛ يتضمن المقترن المولد للمناعة أقل من حوالي 7760 بولي سكاريد النمط © أو‎ .8 ‏الحر مقارنة بالكمية الكلية من بولي سكاريد النمط © أو‎ al ‏بولي سكاريد من النمط‎ 77٠ ‏من حوالي‎ Jil ‏في أحد النماذج؛ يتضمن المقترن المولد للمناعة‎
A ‏مقارنة بالكمية الكلية من بولي سكاريد النمط © أو‎ A ‏أو‎ © ‏للمناعة كما وصف‎ alge ‏في أحد النماذج؛ يتضمن الاختراع تركيب مولد للمناعة يتضمن مقترن‎ ٠ ela ‏هنا وعلى الأقل واحد من مادة إضافية؛ مخفف أو‎
— أ —
يمكن أن تكون ‎sald)‏ الإضافية عبارة عن مادة إضافية معتمدة على ‎aluminum‏ « على سبيل
المثال واحد؛ أو أكثر من ‎aluminum sulfate « aluminum phosphate‏ و ‎aluminum‏
. aluminum phosphate ‏الإضافية‎ sald) ‏في أحد النماذج؛ تتضمن‎ hydroxide
في أحد النماذج؛ يتضمن التركيب المولد للمناعة أقل من حوالي 770 ‎oe‏ بولي مكاريد
‎polysaccharide ©‏ النمط الحر © أو 8 مقارنة بالكمية الكلية من بولي سكاريد النمط © أو ‎A‏
‏في أحد النماذج؛ يتضمن التركيب المولد للمناعة أقل من حوالي ‎77١8‏ من بولي سكاريد النمط
‏الحر © أو ‎A‏ مقارنة بالكمية ‎LIN‏ من بولي سكاريد النمط © أو 8.
‏في أحد النماذج؛ يتضمن الاختراع طريقة استحثاث استجابة مناعية لمقترن بولي سكاريد الكبسولي
‏من النمط المصلي 5 أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ في ‎Ye‏ خاضع للعلاج :
‏تتضمن إعطاء الخاضع للعلاج كمية فعالة ‎belie‏ من تركيب مولد للمناعة ‎immunogenic‏
‎composition‏ كما وصف هنا.
‏في أحد النماذج» يتضمن الاختراع طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد- بروتين مولد للمناعة يتضمن
‏بولي سكاريد كبسولي من النمط المصلي 0 أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية معزول مقترن مع ‎Vo‏ بروتين حامل ‎carrier protein‏ ؛ الطريقة تتضمن خطوات: تفاعل بولي سكاريد الكبسولي من
‏النمط المصلي © أو ‎A‏ المعزول مع ‎1,1-carbonyl-di—(1,2,4-triazole) (CDT)‏ في
‏مذيب عضوي ‎organic solvent‏ لإنتاج بولي سكاريد من النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط؛
‎dela;‏ بولي سكاريد ‎hall‏ المصلي © أو ‎A‏ المنشط مع بروتين ‎dela‏ في مذيب عضوي لإنتاج
‎oe‏ بولي سكاريد من النمط المصلي © أو ‎tA‏ البروتين الحامل. في أحد النماذج؛ تتضمن ‎٠‏ طريقة تنشيط بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية أيضاً
‏تجفيد ‏ بولي سكاريد النمط المصلي © أو 8 المعزول واعادة تعليق بولي سكاريد المجفد في مذيب
‏عضوي. في أحد النماذج؛ يتم تنشيط بولي سكاريد المعاد التعليق ثم تفاعله مباشرة مع البروتين
‎. carrier protein ‏الحامل‎
‎EAE
—y— ‏المعزول المنشط قبل التفاعل مع‎ A ‏بولي سكاريد النمط المصلي © او‎ Jie ‏في أحد النماذج؛ يتم‎ ‏المعزول‎ A ‏بولي سكاريد من النمط المصلي © أو‎ aad ‏البروتين الحامل. في أحد النماذج؛ يتم‎ ‏معزول منشط مجفد قبل تفاعل‎ A ‏المنشط المعزول لإنتاج بولي سكاريد من النمط المصلي © أو‎ ‏بولي سكاريد مع البروتين الحامل.‎ ‏في أحد النماذج؛ تتضمن الطريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد - بروتين حامل معزول خطوة تجفيد‎ 0
البروتين الحامل لإنتاج حامل مجفد قبل تفاعل البروتين الحامل مع بولي سكاريد. في أحد النماذج تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد. بروتين حامل معزول خطوة إعادة تعليق بولي سكاريد النمط المصلي © أو ‎A‏ المعزول المنشط المجفد والبروتين الحامل المجفد في مذيب عضوي ‎organic solvent‏ كجزء من تفاعل بولي سكاريد النمط المصلي © أو ‎A‏ المعزول
‎٠‏ المنشط مع البروتين الحامل. في أحد النماذج تتضمن طريقة مقترن بولي سكاريد كبسولي من النمط © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ المعزول- بروتين حامل خطوة تخفيف خليط التفاعل من بولي سكاريد المنشط والبروتين الحامل والحفاظ على ‎pH‏ حوالي 8,8 إلى حوالي ‎LY‏ ‏لمدة ؛ ساعات على الأقل عند حوالي ‎٠١‏ م إلى 776 م.
‎Vo‏ في ‎af‏ النماذج؛ يتم الحفاظ على خليط التفاعل من بولي سكاريد الكبسولي من النمط © أو 4 من المكورات العنقودية الذهبية المنشط والبروتين الحامل عند ‎pH‏ حوالي ‎9,٠‏ لمدة ؛ ساعات على الأقل عند حوالي ‎YY‏ م. في أحد النماذج تتضمن طريقة إنتاج بولي سكاريد كبسولي من النمط * أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية - البروتين الحامل ‎ide Jie sshd‏ بولي سكاريد من ‎Lad hal‏ © أو ‎A‏ المعزول- البروتين بعد إنتاجه.
‎* ‏في أحد النماذج؛ المذيب العضوي المستخدم في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد كبسولي النمط‎ ٠ polar ‏هو مذيب لا بروتوني قطبي‎ dela ‏أو + من المكورات العنقودية الذهبية معزول- بروتين‎ . aprotic solvent
‎tAE
‎A —‏ — في أحد النماذج؛ يتم اختيار المذيب اللابروتوني القطبي من المجموعة المكونة من سلفوكسيد ثاني ميثيل ‎«dimethyl sulfoxide (DMSO)‏ في احد النماذج؛ في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد معزول- بروتين حامل ‎carrier protein‏ المذيب العضوي هو ‎DMSO‏ ‏في أحد النماذج؛ تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي للنمط © من المكورات © العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ - البروتين الحامل خطوة ضبط تركيز ماء خليط التفاعل الذي يتضمن بولي سكاريد الكبسولي النمط 0 ‎CDT‏ في ‎cul‏ عضوي ‎organic‏ ‎solvent‏ إلى ما بين حوالي ‎١١‏ و0807 7. في أحد النماذج؛ يتم ضبط تركيز ماء خليط التفاعل الذي يتضمن بولي سكاريد الكبسولي النمط و01/ في المذيب العضوي إلى ما بين 70.7 تقريباً. في أحد النماذج؛» تتضمن خطوة تنشيط اللبولي سكاريد الكبسولي من النمط 0 من المكورات العنقودية الذهبية تفاعل بولي سكاريد مع تقريباً كمية من ‎CDT‏ هي ‎<١‏ زيادة جزيئية إلى ‎LS‏ ‏بولي سكاريد الموجودة في خليط التفاعل الذي يتضمن بولي سكاريد الكبسولي النمط 0 ‎CDT,‏ ‏في أحد النماذج؛ تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد كبسولي للنمط ‎A‏ من ‎aureus‏ .5: ‎١‏ البروتين الحامل خطوة تعيين تركيز ماء خليط التفاعل الذي يتضمن بولي سكاريد الكبسولي النمط . في أحد النماذج؛ يتم تقديم كمية ‎CDT‏ المضافة إلى خليط التفاعل لتنشيط ‏ في حوالي كمية ‎CDT‏ التي تكون مكافئة جزيئية لكمية الماء الوجودة في خليط التفعال الذي يتضمن بولي سكاريد الكبسولي النمط ‎CDT A‏ في مذيب عضوي. في أحد النماذج؛ يتم تقديم كمية ‎CDT‏ المضافة إلى خليط التفاعل ‎lawl‏ بولي سكاريد في ‎٠‏ حوالي كمية ‎CDT‏ عند نسبة جزيئية من حوالي ‎١ :٠,5‏ مقارنة بكمية الماء الموجود في خليط التفاعل الذي يتضمن بولي سكاريد الكبسولي النمط ‎CDT A‏ في مذيب عضوي ‎organic‏ ‎solvent‏ . في أحد النماذج؛ يتم تقديم كمية ‎CDT‏ المضافة إلى خليط التفاعل لتنشيط بولي سكاريد في حوالي كمية ‎CDT‏ التي تكون عند نسبة جزيئية ‎١ re, VO‏ مقارنة بكمية الماء الموجود ‎EAE‏
‎q —‏ — في خليط التفاعل الذي يتضمن بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط ‎A‏ و0101 في في أحد النماذج؛ تتضمن الطريقة التي تتضمن خطوة ‎Je‏ بولي سكاريد المنشط خطوة الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ . 0 في أحد النماذج؛ الطريقة التي تتضمن تحضير البروتين الحامل ‎carrier protein‏ ؛ قبل تجفيد البروتين الحامل يتم ترشيحها بالديلزة ضد ‎NaCl‏ ويتم ضبط نسبة و/ و من ‎NaCl‏ البروتين الحامل للبروتين إلى حوالي ‎Uo‏ حوالي ‎No‏ ‏في أحد النماذج؛ تكون نسبة ‎NaCl‏ إلى البروتين الحامل حوالي ‎.١‏ ‏في بعض النماذج؛ البروتين الحامل المستخدم في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد كبسولي النمط ‎١٠ Vs‏ أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ المعزول- بروتين حامل يتضمن ‎.CRM197‏ ‏في أحد النماذج» 0540/1197 المستخدم في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد كبسولي النمط © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية معزول- بروتين حامل يتفاعل مع بولي سكاريد النمط المصلي © أو 8 المنشط عند نسبة بالوزن حوالي ‎.١ :١‏ في أحد النماذج؛ تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي ‎Vo‏ مكاريد كبسولي للنمط © أو ‎A‏ من ‎aureus‏ .5- بروتين حامل خطوة خلط بولي مكاريد الكبسولي النمط © أو 4 مع ‎imidazole‏ أو ‎Jd triazole‏ الخلط مع ‎CDT‏ في مذيب عضوي ‎organic solvent‏ . في أحد النماذج؛ تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد كبسولي ‎hall‏ © أو 4 من ‎S.‏ ‏5 بروتين حامل خطوة تحضير مقترن بولي سكاريد ‎hall‏ المصلي © أو ‎=A‏ البروتين ‎٠‏ الحامل لإزالة مجموعات التنشيط الغير متفاعلة. في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع طريقة لإنتاج مقترن مولد للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ يتضمن بولي ‎alsa‏ كبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية معزول مقترن مع بروتين حامل ؛ الطريقة تتضمن خطوات: تفاعل بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎EAE‏
=« \ — أو ‎A‏ من المكورات العتنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مع ‎3—(2-pyridyldithio)—-propionyl hydrazide (PDPH)‏ و 08150000106 .في مذيب عضوي ‎organic solvent‏ لإنتاج بولي سكاريد مرتبط مع 10011؛ تفاعل بولي سكاريد المرتبط مع ‎PDPH‏ مع عامل اخنزال لإنتاج بولي سكاريد منشط؛ ‎Jie‏ بولي سكاريد النمط المصلي © أو + المنشط ‎zy‏ بولي سكاريد النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط المعزول؛ تقديم بروتين حامل منشط؛ تفاعل بولي سكاريد النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط المعزول مع البروتين الحامل المنشط لإنتاج مقترن بولي سكاريد النمط المصلي © أو ‎=A‏ بروتين ‎dela‏ ؛ وبالتالي يتم إنتاج مقترن مولد للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ يتضمن بولي سكاريد كبسولي من النمط المصلي 2 أو ‎A‏ ‏من المكورات العنقودية الذهبية معزول مقترن مع بروتين حامل. ‎0٠‏ في أحد النماذج؛ يتم عزل البروتين الحامل المنشط قبل تفاعل البروتين الحامل المنشط مع بولي سكاريد المنشط. في أحد النماذج؛» تتضمن ‎Jie sshd‏ البروتين الحامل المنشط تجفيد بولي سكاريد من النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط المعزول لإنتاج بولي سكاريد ‎hall‏ المصلي © او ‎A‏ منشط مجفد. في أحد ‎peg dail)‏ ‏مد ‎N-hydroxysuccinimide ester of bromoacetic acid (BAANS).‏ في أحد النماذج؛ تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط ‎=A‏ البروتين الحامل ‎protein‏ 080183 _والتي تستخدم ‎PDPH‏ استخدام مذيب عضوي ‎organic solvent‏ هو ‎cul‏ لا بروتوني قطبي ‎polar aprotic solvent‏ . في أحد النماذج؛ يتم اختيار المذيب اللابروتوني القطبي من المجموعة المكونة من : ‎dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide, ٠٠
N-methyl-2-pyrrolidone, and hexamethylphosphoramide (HMPA), .dimethyl sulfoxide (DMSO) ‏في أحد النماذج؛ المذيب العضوي هو‎ ‎EAE
— \ \ — في أحد النماذج؛ كاربوايميد ‎carbodiimide‏ المستخدم في طريقة إنتاج مقترن بولي مكاريد الكبسولي من النمط المصلي © أو ‎—A‏ البروتين الحالم والتي تستخدم ‎PDPH‏ هو : .1-Ethyl-3—(3—-dimethylaminopropyl)-carbodiimide (EDAC) في أحد النماذج» تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط © أو ‎=A‏ البروتين © الحامل ‎Ally carrier protein‏ تستخدم ‎EDAC 3 PDPH‏ تتضمن خطوة تفاعل بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ مع ‎EDAC; PDPH‏ في عضوي عند نسبة: ‎PDPH‏ : . :#* :١ ‏بالوزن حوالي‎ EDAC في أحد النماذج؛ عامل الاختزال المستخدم في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط dithiothreitol ‏هر‎ EDAC PDPH ‏تستخدم‎ lly ‏البروتين الحامل‎ —A ‏المصلي © او‎ (DTT) ٠ في أحد النماذج» يتضمن تنشيط البروتين الحامل في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © او ‎=A‏ البروتين الحامل ‎ally‏ تستخدم ‎PDPH‏ ونا تفاعل البروتين . bromoacetic acid ‏الحامل مع‎ في أحد النماذج؛ تتضمن ‎Jie sshd‏ بولي ‎alse‏ النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط في طريقة ‎١‏ إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © او ‎=A‏ البروتين الحامل ‎Ally‏ تستخدم . diafiltration ‏الترشيح بالديلزة‎ EDAC 5 PDPH في أحد النماذج؛ تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو 8- البروتين الحامل ‎lly‏ تستخدم 000011 5 ‎EDAC‏ خطوة التحليل المائي لمقترن ‏ بولي سكاريد النمط المصلي © أو 8- البروتين الحامل لإزالة مجموعات تنشيط غير متفاعلة. في احد النماذج؛ ‎Ye‏ تتضمن خطوة التحليل المائي لمقترن بولي سكاريد ‎Lad hall‏ © او ‎=A‏ البروتين الحامل .cysteamine hydrochloride ‏إضافة‎ carrier protein في أحد النماذج؛ تتضمن طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط المصلي © أو ‎—A‏ البروتين الحامل والتي تستخدم ‎PDPH‏ و0/6ح ‎Jie Lad‏ المقترن المولد
EAE
_ \ \ —_
للمناعة متضمن ‏ بولي مكاريد للنمط المصلي 5 أو ‎A‏ من المكورات_ العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مقترناً بالبروتين الحامل. في أحد النماذج؛ ‎Jie‏ مقترن ‏ بولي سكاريد النمط المصلي © أو 8- البروتين الحامل الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ .
0 في أحد النماذج؛ البروتين الحامل ‎carrier protein‏ المستخدم في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد النمط المصلي © أو ‎=A‏ البروتين الحامل ‎ally‏ تستخدم ‎EDAC 5 PDPH‏ يتضمن ‎.CRM197‏ ‏في أحد النماذج؛ يتم إضافة ‎CRMI97‏ في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © او 8- 680/197 ‎ally‏ تستخدم ‎PDPH‏ و ‎EDAC‏ في نسبة بالوزن من حوالي ‎:١‏
‎sn :CRM197 ١ ١٠‏ بولي سكاريد كبسولي. في أحد النماذج؛ بولي سكاريد الكبسولي للنمط © أو ‎A‏ المنشط المستخدم في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © أو ‎=A‏ البروتين الحامل ‎ally‏ تستخدم ‎PDPH‏ و ‎JEDAC‏ حجم ما بين ‎٠‏ © ك دالتون تقريباً و١٠‏ © ك دالتون تقريباً. في أحد النماذج؛ المقترن المولد للمناعة الناتج في طريقة إنتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي
‎Vo‏ النمط المصلي © أو 8- البروتين الحامل ‎ally‏ تستخدم ‎PDPH‏ و ‎EDAC‏ له حجم ما بين حوالي 8ك دالتون وحوالي ‎Sova‏ دالتون . في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع تركيب ‎al ge‏ للمناعة ‎immunogenic composition‏ يتضمن مقترن بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © او ‎=A‏ البروتين الحامل ناتج بواسطة أي من الطرق الموصوفة هنا.
‎٠‏ في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع تركيب مولد للمناعة يتضمن مقترن بولي سكاريد الكبسولي للنمط أو ‎=A‏ البروتين الحامل الناتج بواسطة أي من الطرق الموصوفة هنا وواحدة على الأقل من ‎sale‏ ‏إضافية؛ مخفف أو ‎dela‏ في أحد النماذج؛ تتضمن التركيبات المولدة للمناعة مادة إضافية
— \ — معتمدة على ‎aluminum‏ يمكن اختيارها من المجموعة المكونة من ‎aluminum phosphate‏ ‎aluminum sulfate «‏ و ‎aluminum hydroxide‏ في احد النماذج؛ تتضمن التركيبات ‎sal gall‏ للمناعة الوصوفة هنا المادة الإضافية من ‎aluminum‏ ‎phosphate‏ . © يمكن أن تتضمن التركيبات المولدة للمناعة الموصوفة هنا أقل من ‎77٠0‏ وأقل من 770 من بولي سكاريد النمط © أو 8 الحر مقارنة بالكمية الكلية من بولي سكاريد © او 8. يمكن تخزين التركيبات الولدة للمناعة الموصوفة هنا في ماء أو محلول منظم متعادل ‎pH‏ منخفض الشدة الايونية ‎ionic strength‏ . في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع طريقة تقليل أو منع عدوى؛ مرض أو حالة متعلقة بالمكورات ‎٠‏ العتقودية ‎Staphylococcal infections‏ مرتبطة ببكتريا ‎Staphylococcus‏ في الخاضع للعلاج؛ الطريقة تتضمن خطوة إعطاء كمية ‎ladle‏ أو وقائيا من التركيب المولد للمناعة كما وصف هنا للخاضع للعلاج. في احد النماذج يتم اختيار العدوى؛ المرض أو الحالة المرضية من المجموعة المكونة من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ ؛ الخمج وحمل العدوى. ‎Vo‏ في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع طريقة لتقليل أو منع عدوى متعلقة بالمكورات العنقودية في ثديي يخضع لعملية جراحية؛ الطريقة تتضمن خطوة إعطاء كمية فعالة وقائياً من التركيب المولد للمناعة كما وصف هنا للخاضع للعلاج قبل العملية الجراحية. في أحد النماذج؛ تتضمن طريقة الاختراع استبدال ‎CDI‏ ل ‎.CDT‏ ‏في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع بولي سكاريد كبسولي النمط © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Yo‏ له وزن جزيئ ما بين ‎٠٠‏ ك دالتون و8050 ك دالتون مرتبط تساهمياً ببروتين حامل ؛ حيث يكون الوزن الجزيئي المندمج للبولي سكاريد المرتبط تساهمياً بالبروتين الحامل ‎carrier protein‏ ما بين حوالي 8ك دالتون و ‎Sou‏ دالتون . ‎EAE‏
— ¢ \ — في أحد النماذج» يتضمن بولي سكاريد المرتبط ‎Lea los‏ ببروتين ‎carrier protein Jala‏ جزء بولي سكاريد له مدى وزن جزيثي ما بين ‎7١‏ ك دالتون و٠٠‏ ك دالتون. في أحد النماذ ‎z‏ بولي سكاريد المرتبط تساهمياً بالبروتين الحامل له مدى وزن جزيئي ما بين ‎٠٠٠‏ ك دالتون و3500 ك دالتون. في أحد النماذج؛ يتضمن جزء البروتين الحامل للبولي سكاريد المرتبط تساهمياً ببروتين © حامل ‎.CRM197‏ في احد النماذج يرتبط ‎CRM197‏ تساهمياً مع بولي سكاريد من خلال رابط الكربامات ‎carbamate linkage‏ ؛ رابط ‎(oud‏ أو كلاهما. في بعض النماذج؛ النسبة الجزيئية ل ‎lysines‏ المقترنة إلى 650/197 هي تقريباً ‎١ :٠١‏ إلى حوالي 75: ‎.١‏ في بعض النماذج؛ يتضمن بولي مكاريد المرتبط تساهمياً ببروتين الحامل رابط تساهمي واحد على الأقل بين 051/197 على الأقل عند كل © إلى ‎٠١‏ وحدات ‎saccharide‏ ‎٠‏ متكررة من بولي سكاريد. في بعض النماذج؛ يتضمن_بولي مكاريد المرتبط تساهمياً ببروتين حامل رابط واحد على الأقل بين 080/197 و بولي سكاريد يظهر عند كل © وحدات ‎saccharide‏ ‏متكررة من بولي سكاريد. في بعض النماذج؛ يتضمن جزء 68/197 للبولي سكاريد المرتبط تساهمياً ب 080/197 © إلى ‎YY‏ لايسينات ‎lysines‏ مرتبط تساهمياً ببولي سكاريد. ‎VO‏ في بعض النماذج؛ يتضمن جزء ‎CRMI97‏ من بولي سكاريد المرتبط تساهمياً ب 081/197 > إلى ‎YY‏ لايسينات ‎lysines‏ مرتبطة تساهمياً ببولي سكاريد. في بعض النماذج؛ يتضمن ‎sia‏ 080/4197 للبولي سكاريد المرتبط تساهمياً ببروتين حامل ‎carrier protein‏ + إلى ‎Yo‏ لايسينات ‎lysines‏ مرتبطة تساهمياً ببولي سكاريد. في بعض النماذج؛ يتضمن جزء 081/197 للبولي سكاريد المرتبط تساهمياً ب 080/197 ‎A‏ إلى ‎١١" Yo‏ لايسينات ‎lysines‏ مرتبط تساهمياً ب بولي سكاريد . في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع تركيب ‎al ge‏ للمناعة ‎immunogenic composition‏ يتضمن بولي سكاريد للنمط © أو 8# من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مرتبط تساهمياً مع بروتين ‎carrier protein Jala‏ كما وصف هنا وعلى الأقل واحدة من مادة إضافية؛ مخفف ‎diluent‏ أو حامل ‎carrier‏ . في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع طريقة لإعطاء تركيب مولد ‎EAE‏
اج \ — للمناعة يتضمن بولي سكاريد النمط © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus‏ 05 مرتبط تساهمياً ببروتين حامل ‎WS carrier protein‏ وصف هنا لحالة لإنتاج استجابة مناعية كما وصف هنا. في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع طريقة ‎Jie‏ بولي سكاريد له وزن جزيئي ما بين ‎٠١‏ ك دالتون و ‎٠١٠‏ م دالتون. في أحد النماذج؛ يقدم الاختراع جسم مضاد ناتج عن طريق بولي سكاريد كبسولي؛ مقترن ‎Age‏ للمناعة ؛ أو تركيب مولد للمناعة للاختراع الحالي. شرح مختصر للرسومات يتم فهم الاختراع الحالي بشكل أفضل وتصبح سماته؛ جوانبه ومميزاته غير تلك الموضحة سابقاً ‎٠‏ واضحة ‎Lae‏ يتم أخذ وصفه التفصيلي التالي في الاعتبار. يشير ذلك الوصف التفصيلي للرسومات التالية؛ حيث: شكل ‎١‏ يوضح تركيب بولي سكاريد متكرر من بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ من
N acetyl mannosaminuronic ) Staphylococcus aureus ‏المكورات العنقودية الذهبية‎ -Dy <L-FucNAc ‏مر‎ N acetyl L fucosamine (Man NAca gs acid .(D-FucNAc ‏مر‎ acetyl -fucosamine N ٠ شكل ‎fv‏ يوضح تحليل الأجزاء من كروماتوجراف تبادل الأيون ‎(Q-Sepharose)‏ للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية (اختبار ‎teichoic 5 ) 0 ACETYL‏ ‎phosphate lial) 0‏ )؛ شكل "ب يوضح تحليل أجزاء من مروماتوجراف تبادل الأيون ‎(Q-Sephrose)‏ للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Yo‏ بواسطة اختبار الانتشار المناعي المضاعف. ‏شكل ؟أ يوضح تأثير ‎pH‏ (5,؛ ؛ أو 0( عند 45 م على انخفاض الوزن الجزيئي للبولي سكاريد ‏الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية في المعالجة الحراية؛ شكل "ب ‏يوضح تأثير درجة ‎a Ve a 00) lal‏ أو 90 م) عند ‎pH‏ 3,5 على انخفاض الوزن الجزيئي ‎EAE
— أ \ — الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ في المعالجة الحرارية. شكل ؛ يوضح الوزن الجزيئي للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية مقارنة ببولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 0 بمرور الوقت أثناء المعالجة الحرارية عند
FEES ‏على الترتيب؛‎ cdo V0 pH 0 شكل © يوضح البقاء على قيد ‎shall‏ الزائد لفثران تلقت مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 8- 040/0197 (الأشكال المعينة) مقارنة بالتحكمات المرجعية المعالجة بواسطة (sy) AIPO4 شكل + يوضح تركيب بولي سكاريد متكرر لذ بولي سكاريد النمط المصلي © من المكورات ‎٠‏ العتقودية الذهبية ‎N-acetyl mannosaminuronic acid)‏ هر ‎N acetyl | (ManNAcA‏ .(D-FucNAcA ‏مر‎ acetyl ~fucosamine N -D 5 ‏حا‎ FucNAc ‏هر‎ fucosamine شكل ‎IV‏ يوضح تحليل أجزاء من كروماتوجراف تبادل أيون ‎(Q-Sephrose)‏ للبولي سكاريد النمط ‎Lad)‏ © من المكورات العنقودية الذهبية (اختبار ‎teichoic acid 5 ) O-ACETYL‏ (اختبار ‎phosphate‏ )؛ شكل اب يوضح تحليل أجزاء من كروماتوجراف تبادل الايون ‎Q-)‏ ‎(Sephrose ١٠‏ للبولي سكاريد من النمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية عن طريق اختبار الانتشار المناعي المضاعف. ‎A Js‏ يوضح تأثير ‎pH‏ (3,5؛ ‎of‏ أو 0( عند 5 م على انخفاض الوزن الجزيئي للبولي ‏سكاريد الكبسولي النمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية في المعالجة الحرارية؛ شكل ‏4ب يوضح تأثير درجة الحرارة )200 ‎Vo‏ م أو 428 م) عند ‎pH‏ 3,5 على انخفاض الوزن ‎Ye‏ الجزيثئي للبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية في المعالجة ‏الحرارية. ‏شكل 9 يوضح التهاب الكلية وحوضها في فثران تلقت مقترن بولي سكاريد من النمط المصلي 0— ‏07 مقارنة بالتحكمات المرجعية بواسطة ‎PBS‏ (المنطقة المظللة في الفثران المعالجة). ‎EAE
شكل ‎Yo‏ يوضح وحد ات تكوين مستعمرة ‎(CFV)‏ مستردة في الكليتين بعد الحقن ‎dad gs‏ 6 من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ في فثران تم تطعيمها بواسطة ‎CP5-CRM‏ عالية الوزن الجزيئي ‎(HMW)‏ ا/ل005-04 منخفض الوزن الجزيئي ‎(LMW)‏ أو التحكم المرجعي ‎PP5-CRM‏
© شكل ‎١١‏ يوضح مقارنة معايرات ‎OPA‏ (متوسط هندسي) من المصل الذي تم الحصول عليه من فثران تم تطعيمها بواسطة صياغات مختلفة من مقترن بولي سكاريد (/005-014) ‎Alle‏ الوزن الجزيئي ‎CP5-CRM (HMW)‏ منخفضة الوزن الجزيثئي (//01/اا). تكونت المجموعات من 0 إلى 4 فثران. الوصف ‎١‏ لتفصيلي:
© ‏يتعلق الاختراع الحالي بمقترنات مولدة للمناعة تتضمن بولي سكاريدات كسبولية للنمط المصلي‎ ٠ ‏من المكورات العنقودية الذهبية مقترنة مع بروتينات حاملة وطرق تحضيرها واستخدامها.‎ A ‏أو‎ ‏تشتمل السمات الجديدة للمقترنات المولدة للمناعة للاختراع على مخططات الوزن الجزيثي للبولي‎ ‏وعحدد لاسينات‎ CRM197 ‏سكاريد والمقترنات الناتجة؛ نسبة الليسيات المقترنة لكل بروتين حامل‎ ‏المرتبطة تساهمياً ببولي سكاريد ؛ عغدد الرابطات التساهمية بين الحامل و بولي سكاريد‎ 5
‎١‏ كدالة على الوحدات المتكررة من بولي سكاريد ؛ ‎Lally‏ النسبية من بولي مكاريد الحرة مقارنة ببولي سكاريد الكلي . المصطلح ‎١‏ بولي سكاريد حر" كما استخدم هنا يعني بولي سكاريد غير مقترن بالبروتين الحامل ‎carrier protein‏ ولكن برغم ذلك يوجد في التركيب المقترن. تتضمن طرق تحضير المقترنات المولدة للمناعة للاختراع اقتران تساهمي لذ بولي ‎Glau‏ ‏الكبسولية مع بروتينات الحامل باستخدام كيمياء اقتران تتضمن :
‎CDI (1,1-carbonyldiimidazole), CDT (1,1-carboyl-di-1,2,4-triazole) or ٠٠
‎PDPH (3-(2-pyridyldithio)-propiony| hydrazide). ‏رابط كربون واحد أو صفر‎ CDT (CDI ‏فقط. ينتج عن استخدام‎ CP8 ‏خاص باقتران‎ CDI ‏؛ بينما ينتج عن استخدام‎ carrier protein ‏كربون بين بولي سكاريد الكبسولي والبروتين الحامل‎ ‏رابطة ثيواثير تساهمية بين بولي سكاريد الكبسولي والبروتين الحامل.‎ PDPH ‏نتائج‎ ‎EAE
“yA تشتمل الرابطات المتداخلة الإضافية لرابطات ‎CP)=SH‏ مضاف له ‎thiol‏ ( إلى ‎NH2‏ - ولكنها غير قاصرة على: ‎sulfo-LC~SMPT; sulfo-LC-SMPT (4-sulfosuccinimidyl-6-methyl-a—(2-‏ ‎pyridyldithio)toluamido]hexanoate)); sulfo-KMUS (N-[k-‏ ه ‎maleimidoundecanoyloxy]sulfosuccinimide ester); sulfo-LC-SPDP‏ ‎(sulfosuccinimidyl 6—(3'-[2-pyridyldithio]-propionamido)hexanoate) which‏ -م]-4 ‎cleaves by thiols; sulfo-SMPB (sulfosuccinimidyl‏ ‎maleimidophenyl]butyrate); sulfo—-SIAB (N-sulfosuccinimidyl[4-‏ ‎iodoacetylJaminobenzoate); sulfo-EMCS (IN-e-‏ ‎maleimidocaproyloxy]sulfosuccinimide ester); EMCA (N-e- 1.‏ ‎maleimidocaproic acid); sulfo-SMCC (sulfosuccinimidyl ~~ 4-[N-‏ ‎maleimidomethyl]cyclohexane~1-carboxylate); sulfo-MBS (m-—‏ ‎maleimidobenzoyl-N-hydroxysulfosuccinimide ester); sulfo-GMBS (N-[g-‏ ‎maleimidobutyryloxy]sulfosuccinimide ester); BMPA (N-B-‏ ‎maleimidopropionic acid); 2-immunothiolane hydrochloride; 3—-(2- ١٠‏ ‎pyridyldithio) propionic acid N-succinimidyl ester; 3—-malemidopropionic‏ ‎acid N-succinimidyl ester; 4-maleimidobutyric acid N-succinimidyl ester;‏ ‎SMPT (4-succinimidyloxycarbonyl-methyl-a—[2-pyridyldithioJtoluene);‏ ‎LC-SMCC (succinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxy-‏ ‎[6-amidocaproate]); KMUA (N-k-maleimidoundecanoic acid); LC-SPDP ٠‏ ‎(succinimidyl 6—(3-[2-pyridyldithio]-propionamido)hexanoate); SMPH‏ ‎(succinimidyl-6-[3-maleimidopropionamido]hexanoate); SMPB‏ ‎(succinimidyl 4-[p—maleimidophenyl]butyrate); SIAB (N-succinimidyl[4-‏ ‎iodoacetylJaminobenzoate); EMCS (IN-e-‏ ‎Maleimidocaproyloxy]succinimide ester); SMCC (succinimidyl 4-[N- +5‏
EAE
-١؟-‎ maleimidomethyl]cyclohexane~1-carboxylate); MBS )00-
Maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester); SBAP (succinimidyl 3- [bromoacetamido]propionate); BMPS (N-[B- maleimidopropyloxy]succinimide ester); AMAS N—-(a-maleimidoacetoxy) succinimide ester); SIA (N-succinimidyl iodoacetate); and N-succinimidyl ‏ه‎ (4-iodoacetyl)-aminobenzoate. ‏تشتمل‎ —OH ‏إلى‎ =SH ‏يمكن أن تتداخل العوامل أيضاً باستخدام رابطات متداخلة لمجموعات‎ .(N-[p-maleimidophenyl]isocyanate ‏تلك الرابطات المتداخلة ولكنها غير قاصرة على‎ ‏تعتبر التركيبات والطرق الموصوفة هنا مفيدة في مختلف التطبيقات. على سبيل المثال يمكن‎
S. ‏استخدام المقترنات في إنتاج تركيبات مولدة للمناعة مقترنة لحماية المستقبيلين من عدوى‎ ٠ ‏بصورة أخرى؛ يمكن استخدام المقترنات المختلفة في إنتاج أجسام مضادة ضد بولي‎ . 5 ‏سكاريد كبسولية بكتيرية؛ والتي يمكن استخدامها بصورةٍ متثالية في البحث والاختبارات المعملية‎ ‏الإكلينيكية؛ على سبيل المثال الكشف والتنميط المصلي. قد تستخدم تلك الأجسام المضادة لتعطي‎ ‏مناعة سلبية للحالة.‎ ‎V0‏ في بعض النماذج؛ الأجسام المضادة الناتجة ضد بولي سكاريد البكتيرية تكون وظيفية إما في نموذج الكفاءة للحيوانات أو في اختبار القتل بالالتهام الأبسونني (الأبسونين هو مادة في المصل لازمة لتحضير البكتريا الملتهمة). ما لم يحدد غير ذلك؛ كل المصطلحات التقنية والعملية المستخدمة هنا لها نفس المعنى كما هو مفهوم بواسطة أحد ذوي المهارة المألوفة في المجال الذي يختص به الاختراع. ‎YL‏ على الرغم من ذلك يمكن استخدام أي طرق ومواد ‎Ailes‏ أو مكافئة لتلك الموصوفة هنا في ‎Gals‏ أو اختبار الاختراع الحالي؛ يتم وصف الطرق والمواد المفضلة هنا.ء في وصف النماذج والمطالبة بحماية الاختراع» تستخدم مصطلحات معينة ‎By‏ للتعريفات الموضحة لاحقاً. كما استخدم هنا تشتمل الأشكال المفردة من ادوات التنكير والتعريف على الإشارة للجمع ما لم يشير السياق بوضوح لغير ذلك. ‎oie‏ على سبيل المثال تشتمل الإشارة إلى "الطريقة” على واحدة أو ‎EAE
ل
أكثر من الطرق و/ أو خطوات النوع الموصوفة هنا و/ أو التي تصبح واضحة لأحد ذوي المهارة
في المجال عند قراءة هذا الوصف وهكذا.
كما استخدم ‎cla‏ يعني "حوالي” داخل المدى ذو معنى احصائياً للقيمة على سبيل المثال مدى
التركيز المحدد؛ الإطار الزمني؛ الوزن الجزيثي» درجة الحرارة ‎PHS‏ يمكن أن يكون ذلك المدى داخل رتبة المقدار؛ بشكل نموذجي داخل ‎AY‏ بشطل نموذجي أكثر داخل أيضاً ‎AV‏ وحتى
بشكل أكثر نموذجية داخل 75 من القيمة أو المدى المعطى. يعتمد الاختلاف المسموح به
المتضمن بواسطة المصطلح "حوالي" على النظام المحدد تحت الدراسة؛ ويمكن إدراكه بسهولة
بواسطة أحد ذوي ‎sled)‏ المألوفة في المجال. في أي وقت يتم فيه تحديد المدى داخل هذا الطلب؛
كل عدد كامل صحيح داخل هذا المدى يكون متوقعاً أيضاً على هيئة نموذج للاختراع.
‎٠‏ ا لوحظ أنه في هذا الوصف؛ المصطلحات على سبيل المثال ‎(gest‏ "'متضمن" 'متضمنا”؛ 'يحتوي على" 'محتوياً على" وما شابه يمكن أن يكون لها المعنى الذي ينسب لها في قانون البراءة للولايات المتحدة؛ على سبيل المثال يمكن أن تعني ‎Cle Jas!‏ 'مشتملاً؛ 'مشتمل" وما شابه. تشير تلك المصطلحات إلى تضمين عناصر محددة أو مجموعة من العناصر بدون استبعاد أي عناصر أخرى. المصطلحات على سبيل ‎JB)‏ 'مكونة بشكل أساسي من" و"تتكون بشكل أساسي
‎NO‏ .من" لها المعنى المنسوب لها في قانون براءة الولايات المتحدة؛ على سبيل المثال تسمح بتضمين عناصر إضافية أو خطوات لا تنتقص (تقلل) من الخصائص الجديدة أو الأساسية للاختراع أي تتبعد عناصر أو خطوات غير مذكورة إضافية تنتقص من الخصائص الجديدة أو الأساسية للاختراع؛ وقد تستبعد عناصر أو خطوات الفن السابق؛ على سبيل المثال الوثائق في الفن المذكورة فيه أو يتم ذكرها على سبيل المرجع ‎cla‏ بشكل خاص على أنها هدف لهذه الوثيقة لتعيين النماذج
‎YS‏ القابلة للحماية؛. على سبيل المثال الجديدة؛ الغير واضحة؛ الإبداعية عن الفن السابق؛ على سبيل المتال عن الوثائق المذكورة في تلك الوثيقة أو المذكورة على سبيل. المرجع هنا. ‎La‏ المصطلحات 'يتكون من" و'مكون من" لها المعنى المنسوب إليها في قانون براءة الولايات المتحدة؛ أي؛ هذه المصطلحات تكون نهائية تماماً. وفقاً لذلك؛ تشير هذه المصطلحات إلى تضمين عنصر محدد أو محموعة من العناصر واستبعاد كل العناصر الأخرى. ‎EAE‏ vy ‏المقترنات المناعية‎ ‏كما وصف مابقاً؛ يتعلق الاختراع الحلاي بمقترنات مولدة للمناعية تتضمن بولي سكاريد كبسولية‎ ‏مقترنة مع‎ Staphylococcus aureus ‏من المكورات العنقودية الذهبية‎ A ‏للنمط المصلي © أو‎ ‏البروتينات الحاملة. يقدم أحد نماذج الاختراع مقترنات مولدة للمناعة تتضمن بولي سكاريد كبسولي‎ ‏من المكورات العنقودية الذهبية مقترن مع جزئ أو بوتين حامل له واحد أو‎ A ‏للنمط المصلي © أو‎ 0 ‏ك دالتون و١٠٠7 ك دالتون؛‎ ٠٠ ‏بولي سكاريد له وزن جزيئي ما بين‎ AE ‏أكثر من السمات‎ ‏ك دالتون؛ ويتضمن‎ 750٠0 ‏دالتون إلى‎ don ‏المقترن المولد للمناعة له سوزن جزيئي ما بين‎ ‏المقترن أقل من حوالي 7760 بولي سكاريد حر بالنسبة للبولي سكاريد الكلي. في بعض النماذج؛‎ ‏ك دالتون و١٠٠٠ ك دالتون. في بعض النماذج؛ المقترن‎ 7١ ‏بولي سكاريد له وزن جزيئي ما بين‎ ‏المقترن‎ (al ‏ك دالتون و0٠00 ك دالتون. في نماذج‎ Yor ‏الملد للمناعة له وزن جزيئي ما بين‎ ٠ ‏او حوالي 75 من بولي‎ ٠١ ‏حوالي 775 حوالي‎ 77١0 ‏يتضمن أقل من حوالي ©77, حوالي‎ ‏سكاريد الحر بالنسبة للبولي سكاريد الكلي.‎ ‏مدى مرغوب من الوزن‎ Bale ‏تتضمن "المقترنات” كما استخدمت هنا بولي سكاريد الكبسولة له‎ ‏؛ حيث يقترن بولي سكاريد الكبسولي مع البروتين‎ carrier protein ‏الجزيئي؛ وبروتين حامل‎ ‏الحامل. قد تحتوي المقترنات أو لا تحتوي على بعض كمية بولي مكاريد الكبسولة الحر. كما‎ ١ ‏استخدم هناء يشير " بولي سكاريد كبسولة حر" إلى بولي سكاريد كبسولة غير مرتبط تساهمياً مع‎ ‏(أي مرتبط بشكل تساهمي مع؛ ممتز على أو متضمن في أو بواسطة _ بولي سكاريد الكبسولة‎ ‏المقترن- بروتين الحامل. قد تستخدم المصطلحات " بولي سكاريد كبسولة حر ” بولي سكاريد‎ ‏حر" و"سكاريد حر" بصورة متبادلة ويقصد بها نقل نفس المعنى. بصرف النظر عن طبيعة جزئ‎ ‏الحاملء فإنه يمكن أن يقترن مع بولي سكاريد الكبسولي غما بشكل مباشر أو عن طريق رابط.‎ ٠ ‏كما استخدم هناء يشير 'للاقتران» 'مقترن وامقترنا” إلى عملية بواستطها يتصل بولي سكاريد‎ ‏الكبسولي البكتيري تساهمياً بالجزئ الحامل. يعزز الاقتران خاصية توليد المناعة للبولي سكاريد‎ ‏للطرق الموصوفة لاحقاً أو بواسطة عمليات اخرى‎ lay ‏الكبسولي البكتيري. يمكن إجراء الاقتران‎ ‏معروفة في المجال. الوزن الجزيئي للبولي سكاريد الكبسولي من المكورات العنقودية الذهبية‎ ‏يكون هاماً للاستخدام في التركيبات المولدة للمناعة. بولي‎ Staphylococcus aureus ٠
ا سكاريدات الكبسولية عالية الوزن الجزيئي لها القدرة على استحثاث بعض الاستجابات المناعية للجسم المضاد نتيجة التكافؤ العالي لل ‎epitope‏ الموجودة على السطح ‎antigen‏ . يكون ‎Je‏ ‎Jf‏ سكاريدات الكبسولية عالية الوزن الجزيئي" متوقعاً للاستخدام في تركيبات وطرق الاختراع الحالي. في أحد النماذج للاختراع» يمكن ‎Jie‏ بولي سكاريد كبسولي ‎hall‏ المصلي © أو ‎Se A‏ 0 الوزن الجزيئي وتنقية متراوحاً من ‎٠١‏ ك دالتون إلى ‎٠٠٠١‏ ك دالتون في الوزن الجزيئي. في أحد نماذج ‎lial)‏ يمكن عزل بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © أو ‎Je A‏ الوزن الجزيئي وتنقيته متراوحاً من ‎5٠‏ ك دالتون إلى 700 ك دالتون في الوزن الجزيئي. في أحد نماذج الاختراع» يمكن عزل وتنقية بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎Je A‏ الوزن الجزيئي وتنقيته متراوحاً من ‎on‏ ك دالتون إلى ‎30٠0‏ ك دالتون في بالوزن الجزيئي. في أحد النماذج؛ يمكن ‎٠‏ عزل بولي سكاريد الكبسولي من النمط المصلي © أو ‎dle A‏ الوزن الجزيئي وتنقيته ليتراوح وزنه ‎all‏ من 70 ك دالتون إلى 00 ك دالتون. في أحد النماذج؛ يمكن ‎Wie Js die‏ كبسولي ‎hall‏ المصلي © او ‎A‏ عالي الوزن الجزيئي وتنقيته ‎pid‏ وزنه الجزيئي من 90 ك دالتون إلى ‎You‏ ك دالتون. في أحد النماذج؛ يمكن ‎Jie‏ بولي سكاريد كبسولي ‎hall‏ المصلي * او ‎Je A‏ الوزن الجزيئي وتنقيته ليتراوح وزنه الجزيئي من ‎٠0‏ ك دالتون إلى ‎١5١‏ ك دالتون. في ‎١‏ أحد النماذج؛ يمكن ‎die‏ بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ عالي الوزن الجزيئي وتنقيته ليتراوح وزنه الجزيئي من 0 ك دالتون إلى ‎١7١‏ ك دالتون. في أحد النماذج» يمكن عزل بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ كبسولي من ‎hall‏ المصلي © أو ‎Je A‏ الوزن الجزيئي وتنقيته ليتراوح وزنه الجزيئي من 80 ك دالتون إلى ‎٠7١‏ ك دالتون. تشتمل المعدلات الأخرى للبولي سكاريد الكبسولي ‎hall ge‏ المصلي © أو ‎A‏ عالي الوزن الجزيئي الذي يمكن عزله وتنقيته ‎Ye‏ بواسطة طرق الاختراع على ‎Ve‏ ك دالتون إلى ‎٠٠١‏ ك دالتون وزن جزيئي؛ ‎١7١‏ ك دالتون إلى ‎٠‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ ‎Ve‏ ك دالتون إلى ‎٠٠١‏ ك دالتون وزن ‎Vee dia‏ دالتون إلى ‎٠‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ ‎Ve‏ ك دالتون إلى ‎٠60‏ ك دالتون وزن ‎Vee da‏ ك دالتون إلى ‎١٠٠‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ ‎Ve‏ ك دالتون إلى ‎٠٠١‏ ك دالتون وزن ‎Ave aia‏ دالتون إلى ‎٠‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ ‎8١0‏ ك دالتون إلى ‎٠٠١‏ ك دالتون وزن ‎Ave aa‏ ك دالتون إلى ‎١١ Yo‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ ‎8٠0‏ ك دالتون إلى ‎٠0‏ ك دالتون وزن ‎Ave da‏ دالتون إلى ‎٠٠‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ ‎8١0‏ ك دالتون إلى ‎٠٠١‏ ك دالتون وزن ‎dee aa‏ دالتون إلى ‎EAE‏
اس ‎٠‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ 0 ك دالتون إلى ‎٠٠١‏ ك دالتون وزن ‎٠0 aa‏ ك دالتون إلى ‎٠‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ 0 ك دالتون إلى ‎٠60‏ ك دالتون وزن ‎dee da‏ دالتون إلى ‎١٠٠‏ ك دالتون وزن جزيئي؛ ‎٠0‏ ك دالتون إلى ‎٠٠١‏ ك دالتون وزن جزيئي؛ ‎٠٠١‏ ك دالتون إلى ‎٠‏ ك دالتون وزن جزيثئي؛ ‎٠٠١‏ ك دالتون إلى ‎٠١١‏ ك دالتون وزن جزيئي؛ ‎٠٠١‏ ك دالتون إلى ‎٠560‏ ك دالتون وزن جزيئي؛ ‎٠٠١‏ ك دالتون إلى ‎١50‏ ك دالتون وزن جزيثي؛ ‎٠٠١‏ ك دالتون إلى ‎٠6١‏ ك دالتون وزن جزيئي؛ ومعدلات وزن جزيئي مرغوبة مماثلة. أي عدد كامل صحيح داخل أي من المعدلات السابقة يكون متوقعاً كنموذج للاختراع. في أحد النماذج؛ المقترن له وزن جزيئي ما بين حوالي ‎٠‏ 5 ك دالتون وحوالي ‎©00٠0‏ ك دالتون وزناً جزيئياً. في أحد النماذج؛ المقترن له وزن جزيئي ما بين حوالي ‎7٠١0‏ ك دالتون وحوالي ‎done‏ دالتون وزناً جزيئياً. في أحد النماذج؛ المقترن له وزن جزيئي ما بين حوالي 5080 ك دالتون وحوالي ‎Youu‏ ك دالتون. في أحد النماذج؛ المقترن له وزن جزيئي ما بين ‎55٠0 Ja‏ ك دالتون وحوالي ‎You‏ ك دالتون. في أحد النماذج؛ المقترن له وزن جزيئي ما بين حوالي ‎760١0‏ ك دالتون وحوالي 78060 ك دالتون. في أحد النماذج؛ المقترن له وزن جزيئي ما بين ‎7٠١0 Ja‏ ك دالتون وحوالي ‎770٠0‏ ك دالتون. في أحد النماذج؛ المقترن له وزن جزيئي ما بين حوالي ‎٠٠٠١‏ ‎glad Yo‏ وحوالي ‎٠٠٠١‏ ك دالتون ‎bgp‏ جزيئياً. ما بين حوالي ‎٠808‏ ك دالتون وحوالي ‎Youu‏ ‏ك دالتون؛ ما بين حوالي ‎٠١٠١‏ ك دالتون وحوالي ‎7٠٠١‏ ك دالتون؛ ما بين حوالي ‎٠9080‏ ك دالتون وحوالي ‎7970٠0‏ ك دالتون؛ ما بين حوالي ‎١٠١٠١‏ ك دالتون وحوالي 46060 ك دالتون؛ ما بين حوالي ‎١١7٠68‏ ك دالتون وحوالي ‎770٠0‏ ك دالتون؛ ما بين حوالي ‎١٠١‏ ك دالتون وحوالي ك دالتون؛ ما بين حوالي ‎٠60١٠‏ ك دالتون وحوالي ‎7008٠0‏ ك دالتون؛ أي عدد كامل ‎٠‏ صحيح داخل أي من المعدلات السابقة يكون متوقعاً كنموذج للاختراع. كما استخدم هناء يعني 'مولد للمناعة" قدرة ‎antigen‏ (أو ‎antigen epitope‏ )؛ على سبيل ‎JG‏ بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي البكتيري أو تركيب مولد للمناعة ‎immunogenic composition‏ مقترن يتضمن ‎antigen‏ ؛ على إظهار استجابة مناعية في عائل على سبيل المثال ثديي؛ إما ناشئة خلطياً أو ‎pla‏ أو كلاهما. وفقاً لذلك؛ 'مقترن مولد ‎Yo‏ المناعة ‎"immunogenic conjugate‏ أو 'مقترن” كما استخدم هنا يعني أي مقترن ‎alge‏ للمناعة ‎EAE‏ ye يحتوي على ‎antigen‏ أو محدد ‎antigen‏ (أي ‎(epitope‏ بولي سكاريد كبسولي بكتيري مقترن بجزئ حامل يمكن استخدامه لإظهار استجابة مناعية. قد يعمل المقترن المولد للمناعة على تنبيه إحساس العائل عن طريق ‎antigen dea‏ مرتبطاً بجزيئات ‎MHC‏ عند سطح الخلية. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن إنتاج خلايا ‎T‏ الخاصة بال ‎antigen‏ أو أجسام مضادة للسماح بالحماية © المستقبلية للعائل الذي تم تطعيمه. يمكن أن تحمي المقترنات المولدة للمناعة بذلك العاثئل من واحد أو أكثر من الأعراض المرتبطة بالعدوى بواسطة البكتريا أو قد تحمي العائل من الوفاة؛ نتيجة العدوى بالبكتريا المرتبطة ب بولي سكاريد الكبسولي . قد تستخدم المقترنات المولدة للمناعة أيضاً لإنتاج أجسام مضادة عديدة النسخ أو أحادية النسخة؛ والتي قد تستخدم لتعطي مناعة سلبية للحالة. قد تستخدم المقترنات المولدة للمناعة أيضاً لإنتاج أجسام مضادة وظيفية كما قيس بواسطة ‎٠‏ قتل البكتريا في أي من نموذج الكفاءة الحيوانية أو عن طريق اختبار القتل بالالتهام الأبسوني . opsonophagocytic
Jie ‏قادر على الارتباط بشكل خاص بمستهدف؛‎ elie ‏يشير "جسم مضاد" إلى جزيء‎ ‏؛ إلخ؛ من خلال موضع تعرف‎ polypeptide 5 ‏والشحم‎ polynucleotide ‏أو‎ carbohydrate ‏بمولد ضد واحد على الأقل موجود في المنطقة المتغيرة من جزيء الجلوبولين المناعي‎ ‏وكما تم استخدامه في هذه الوثيقة؛ وما لم يتم ذكر خلاف ذلك من خلال‎ . immunoglobulin Ye ‏النصء يُقصد من المصطلح أن يشتمل ليس فقط على الأجسام المضادة متعددة النسائل أو الجسم‎ ‏؛ ولكن أيضاً على الأجسام المضادة التي تم‎ monoclonal antibodies ‏المضاد أحادي النسيلة‎ ‏أو‎ bispecific antibodies ‏سبيل المثال؛ الأجسام المضادة الخيمرية‎ le) Lily ‏تعديلها‎ ‏الأجسام المضادة المتوافقة مع البشر و/أو التي تم اشتقاقها لكي تغير من وظائف المرسل المناعي‎ ‏والجسم‎ (Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv ‏والاستقرار وأي أنشطة بيولوجية أخرى) وشظايا منها (مثل‎ ٠ ‏والأجسام المضادة النطاقية بما في‎ (ScFv) monoclonal antibodies ‏المضاد أحادي النسيلة‎ ‏ذلك الأجسام المضادة المأخوذة من القرش والأجسام المضادة المأخوذة من الجمال) وبروتينات‎ ‏الاندماج المشتملة على جزء من الجسم المضاد والأجسام المضادة متعددة التكافؤ والأجسام‎ ‏المضادة متعددة النوعية (على سبيل المثال؛ الأجسام المضادة ثنائية النوعية ما دام أنها تُظهر‎ ‏التي تم وصفها‎ Antibody fragments ‏النشاط البيولوجي المطلوب) وشظايا الجسم المضاد‎ Yo
اج \ — في هذه الوثيقة وأي أشكال معدلة أخرى من جزيء الجلوبولين المناعي ‎immunoglobulin‏ التي تشتمل على موضع التعرف على مولد الضد. يشتمل الجسم المضاد على أي فئة مثتل 106 أو ‎IgM IgA‏ أو الفئة الفرعية ‎(le‏ والجسم المضاد من أي فئة خاصة. وبالاعتماد على الجسم المضاد من متوالية الحمض الأميني من نطاق ثابت من أي سلاسل ‎Ald‏ يمكن تحديد © الجلوبولينات المناعية 100000009105105 من الفئات المختلفة. هناك خمسة فئات أساسية من الجلوبولينات المناعية: ‎IGE 19D 5 IgA‏ و1696 و ‎IgM‏ والعديد من تلك الفئات يمكن أن تنقسم إلى فئات فرعية (أنواع متماثلة)؛ على سبيل ‎(Jbl‏ 961 و962ا و963١‏ 5 ‎19G4‏ ‏و ‎IgAT‏ و1982 في البشر. تكون النطاقات الثابتة ذات السلسلة الخفيفة المناظرة لفئات مختلفة من الجلوبولينات المناعية ‎immunoglobulins‏ يطلق عليها ألفا ودلتا وابسيلون وجاما و ‎mu‏ ‎٠‏ على لترتيب. تكون الهياكل البنائية ‎dae dl‏ والأشكال ثلاثية الأنماط من الفئات المختلفة من الجلوبولينات المناعية معروفة جيداً. تشتمل ‎Lal"‏ الجسم المضاد ‎Antibody fragments‏ " فقط على جزء من الجسم المضاد السليم ‎intact antibody‏ والتي يفضل أن تتعلق بواحد على الأقل ويفضل أكثر كل أو معظمة الوظائف المرتبطة بشكل طبيعي بجزء من الاختراع الحالي في الجسم المضاد السليم ‎intact antibody‏ . ‎Vo‏ يشير المصطلح" 801960 " عموماً إلى جزئ بيولوجي؛ عادة بروتين؛ 060106 ؛ بولي سكاريد أو مقترن في تركيب مولد للمناعة ‎immunogenic composition‏ ؛ أو مادة مولدة للمناعة يمكن أن ‎aw‏ إنتاج الأجسام المضادة أو استجابات الخلية ‎JT‏ كلاهماء في حيوان؛ مشتملة على تركيبات يتم حقنها أو امتصاصها في الحيوان. قد يتم إنتاج الاستجابة المناعية للجزئ الكامل؛ أو لأجزاء مختلفة من الجزئ (على سبيل المثال ‎epitope‏ أو ‎As) hapten‏ المضاد الجزئي)). قد ‎٠‏ يستخدم المصطلح للإشارة إلى جزئ فردي أو لمجموعة متجانسة أو غير متجانسة من جزيئات ‎antigen‏ يتم التعرف على ‎antigen‏ بواسطة الأجسام المضادة؛ مستقبلات خلية آ أو عناصر أخرى للمناعة الخلطية و/ أو الخلوية الخاصة. يشتمل ‎Lay" antigen”‏ على كل ‎epitope‏ ‏07 المرتبطة. ‎(Sa‏ تعيين ‎antigen epitope‏ المعطى باستخدام أي عدد من تقنيات وضع خرائط ‎epitope‏ ؛ المعروفة جيداً في المجال. انظر على سبيل المثال : ‎EAE‏
‎Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66‏ ‎.(Glenn E.
Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, N.J.‏ على سبيل المثال قد يتم تعيين بيبتيد الخطية بواسطة؛ على سبيل ‎JED‏ التخليق المتزامن لأعداد كبيرة من بيبتيدات ‎peptides‏ على الدعامات الصلبة؛ بيبتيدات التي تقابل أجزاء جزئ البروتين؛ ‎Jeli, ©‏ بيبتيدات مع الأجسام المضادة بينما تظل بيبتيدات متصلة بالدعامات. تعتبر تلك التقنيات معروفة في المجال ويتم وصفها في؛ على سبيل ‎(JE‏ طلب براءة الولايات المتحدة رقم ‎CE,V AAYY‏ ‎Geysen et al. (1984) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 81:3998-4002;‏
‎et al. (1986) Molec.
Immunol. 23:709-715‏ 6672560 ؛
‎٠‏ 0 كل منهم مذكور هنا على سبيل المرجع كما لو ثم توضيحه في حد ذاته. بصورة مماثلة؛ قد يتم تعيين ‎Sill epitope‏ عن طريق تعيين الشكل الحيزي للأحماض الأمينية على سبيل المثال عن طريق علم البلورات للأشعة السينية إكس ‎(X)‏ والرنين المغناطيسي النووي ‎SE‏ الأبعاد. انظر على سبيل المثال ‎Epitope Mapping Protocols‏ (بروتوكولات وضع حرائط ‎epitope‏ (« سابقاً. ‎dead‏ لأغراض الاختراع ‎(Keo Jal‏ استخدام أيضاً ‎antigen”‏ للإشارة إلى بروتين
‎١‏ يشتمل على تعديالت؛ على سبيل المثال عمليات حذف؛ إضافة واستبدالات (تحفظية عموماً في الطبيعي؛ ولكنها غير تحفظية)؛ للتابع الأصلي » طالما أن البروتين يحتفظ بالقدرة على إظهار استجابة مناعية. قد يتم تكون هذه التعديلات متعمدة؛ ‎She‏ من خلال التحور الجيني الموجه لموضع محدد؛ أو من خلال طرق تخليق محددة؛ أو من خلال طريقة هندسية وراثية؛ أو قد يكون طارئ» على سبيل ‎JE‏ من خالا تحورات العائل؛ التي تنتج ‎antigen‏ .
‎Yo‏ علاوة على ذلك » يمكن اشتقاق ‎antigen‏ ء الحصول عليه أو عزله من ميكروب؛ على سبيل المثال بكترياء أو يمكن أن يكون كائن كامل. بصورة مماثلة؛ يتم تضمين ‎oligonucleotide‏ أو ‎polynucleotide‏ الذي يمثل ‎antigen‏ ؛ على سبيل المثال في استخدامات إكساب المناعة (التطعيم) للحمض النووي أيضاً في التعريف. تكون ‎antigens‏ المخلقة متضمنة ‎clay‏ على
‎EAE
ل سبيل المثال ‎epitope « polyepitopes‏ مطوقة؛ ‎antigens‏ متنسقة أو مشتقة بشكل اصطناعي أخرى ‎Bergmann et al. (1993) Eur.
J.
Immunol. 23:2777 2781; Bergmann et al.‏ ‎J.
Immunol. 157:3242-3249; Suhrbier (1997) Immunol.
Cell Biol.‏ )1996( ‎Gardner et al. (1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, ٠‏ ;408 75:402 ‎Switzerland, Jun. 28 to Jul. 3, 1998‏ تشير استجابة مناعية "حامية" إلى قدرة التركيب المرلد للمناعة على إظهار استجابة مناعية؛ سواء خلطية او ناشئة عن الخلية؛ أو كلاهماء تعمل على ‎lea‏ الخاضع للعلاج من العدوى. لا تكون الحماية المقدمة مطلقة؛ أي لا يتم منع الحماية أو إزالتها بالضرورة تماماً إذا كان هناك تحسن ‎٠‏ واضح إحصائياً مقارنة بمجموعة التحكم المرجعي للخاضعين للعلاج؛ على سبيل المثال الحيوانات المصابة التي لم تتناول اللقاح أو التركيب المولد للمناعة. قد تكون الحماية محدودة بتخفيف حدة أو سرعة بداية أعراض العدوى. ‎see‏ تشتمل "الاستجابة المناعية الحامية" على استحثاث الزيادة في مستويات الجسم المضاد الخاصة ب ‎antigen‏ محدد في على الأقل ‎75٠‏ من الحالات؛ مشتملة على مستوى محدد من استجابات ‎antigen‏ الوظيفية القابلة للقياس لكل ‎antigen‏ . في ا حالات ‎dame‏ يمكن أن ‎dads‏ "الاستجابة المناعية الحامية” على استحثاث الزيادة مرتين في مستويات الجسم المضاد أو زيادة أربع مرات في مستويات الجسم الخاصة ب ‎antigen‏ محدد في على الأقل ‎75٠‏ من الحالات؛ مشتملة على مستوى معين من استجابات الجسم المضاد الوظيفية القابلة للقياس لكل ‎antigen‏ . في بعض النماذج؛ تتعلق الأجسام المضادة الأبسونية باستجابة مناعية حامية. هكذاء قد يتم اختبار الاستجابة المناعية الحامية بقياس نسبة الانخفاض في العد ‎٠‏ البكتيري في اختبار البلعمة الخلوية الابسونية؛» على سبيل المثال للمثال ذلك الذي تم وصفه فيما يلي. بشكل مفضل؛ يكون هماك انخفاض في العد البكتيري على الأقل ‎٠١0‏ ذ7ت ‎Jon‏ ‏ددا ‎Ae (JAY ve‏ 20 أو 25 أو أكثر. "الكمية المولدة ‎Re lal‏ لمقترن محدد في التركيب يتم تناولها كجرعة عموماً اعتماداً على بولي مكاريد الكلي؛ المقترن والغير مقترن بذلك المقترن. على سبيل المثال؛ مقترن بولي سكاريد الكبسولي من النمط المصلي © أو ‎A‏ الذي به ‎IY Yo‏ بولي سكاريد حر يكون له حوالي ‎Av‏ ميكرو جم من بولي سكاريد المقترن وحوالي ‎٠١‏ ‎EAE‏
م \ _ ميكرو جم من بولي سكاريد الغير مقترن في جرعة ‎٠٠١‏ ميكرو جم. لا يتم توزيع بروتين المقترن عادةً في الاعتبار عند حساب جرعة المقترن. يمكن أن تختلف كمية المقترن اعتماداً على النمط المصلي المتعلق بالمكورات اعنقودية. ‎dese‏ تتضمن كل جرعة ‎١١‏ إلى ‎٠٠١‏ ميكرو جم من بولي سكاريد ؛ تحديداً ‎١١‏ إلى ‎٠١‏ ميكرو جم ؛ وبشكل أكثر تحديداً ‎١‏ إلى ‎٠١‏ ميكرو جم. يشير المصطلح ‎PIN‏ إلى ‎(a‏ طائرء ‎(AS‏ حيوان من الزواحف؛ ‎TIEN‏ أو حيوان أخر. يشتمل المصطلح "حالة' أيضاً على الآدمين. المصطلح "حالة” يشتمل أيضاً على آفات منزلية. تشتمل الأمثلة الغير محدودة من الآفات المنزلية على: الكلاب» القطط؛ الخنازير» الارانب» ‎coal)‏ ‏العضلي (حيوان من فصيلة الفأر)؛ الحيوانات القارضة؛ خنازير غنياء ابن مقرض» الطيور؛ الثعابين» السحالي؛ الأسماك؛ السلاحف والضفادع. يشتمل المصطلح "حالة أيضاً” على الدواب ‎٠‏ (المواش). تشتمل الأمثلة الغير محدودة من الدواب على: ‎ASN‏ البيسون (الثور الأمريكي)؛ الجمل؛ الماشية؛ الغزال؛ الخنازير؛ الجيادء ‎cau‏ البغال»؛ الحمير»؛ الخراف؛ الماعزء ‎chy‏ ‏الرنة؛ الياك؛ الدجاج؛ الإوز والديك الرومي. كما وضح في شكل 6 وشكل ‎١‏ بالترتيب؛ فان بولي سكاريدات ‎polysaccharides‏ الكبسولية للنمط المصلي © ‎Ag‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ لها التركيبات ‎Yo‏ التالية: النمط المصلي © ‎[—4)-p-D-ManNAcA-(1—4)-a-L-FucNAc(3-O-Ac)-(1—3)-p-D-‏ ‎FucNAc—(1—]n.‏ ‏النمط المصلي ‎A‏ ‎[—3)-B-D-ManNAcA-(4-O-Ac)-(1—3)-a-L-FucNAc—(1—-3)- ao -D-‏ ‎FucNAc—-(1—]n ٠‏ انظرء ‎Jones (2005) Carbohydr.
Res. 340:1097-6‏ ‎tAE‏
— \ q — بولي سكاريد ‎ball‏ المصلي ‎A‏ له وحدات متكررة ثلاثية ‎saccharide‏ مماثلة للبولي سكاريد الكبسولي مماثلة للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ©؛ بالرغم من ذلك؛ فإنها تختلف في رابطات السكر وفي مواضع إضافة الاسيتيل- ©؛ والتي ينتج عنها نماذج واضحة مصلياً للتفاعلية المناعية
Infect. Immun. 45:87-93; and Moreau et al. (1990) Carbohydr. Res. o 201:285-297 ‏معقدة نسبياً قابلة‎ carbohydrates ‏لذلك هي‎ 0 3 A Lad ‏بولي سكاريد الكبسولية النمط‎ (Fattom ‏ك دالتون‎ Yo ‏حمضية؛ واعتقد سابقاً أن لها أوزان جزيئية تقريباً‎ file ‏للذوبان في الماء؛‎ .)1990( Infect. Immun. 58, 2367-2374) في بعض النماذج؛ بولي سكاريدات الكبسولية للنمط المصلي © و/ أو 8 للاختراع يضاف لها ‎Ji)‏ عند 0. في بعض النماذج؛ درجة إضافة ‎acetyl‏ عند © للبولي سكاريد الكبسولي أو ‎oligosaccharide‏ النمط ‎o‏ هي = ‎Yee‏ اف ‎Vee‏ اناس ا ال ا ‎A I AA‏ مكح .لال لاح نال لمح لال مكح نال لمم نك ‎AL TE‏ للحي ار ‎AL TEE SO‏ ‎VO‏ في بعض النماذج؛ درجة إضافة ‎acetyl‏ عند -0 للبولي سكاريد أو ‎oligosaccharide‏ هي ‎١ AR = ٠‏ ب ‎١ AR ١ ٠‏ ب - ‎١ AR‏ ب ‎١ AR —-¢ ٠‏ 77 الس ‎١ ve‏ ب ‎A ١ AR = ٠‏ ‎١ AR ١/6‏ ب 6 ‎٠ =A ٠ A + — On 1 AR -9 ٠ vA ٠‏ 9 ب ‎YA 9 ٠ ١/6‏ أو 86- ‎AR‏ ‏في بعض النماذج؛ درجة إضافة ‎acetyl‏ عند - © من بولي سكاريد أو ‎oligosaccharides‏ ‎A ١ ‏سا د‎ 2 ٠ ‏ب‎ ١ AR -Y ٠ ‏ب‎ ١ AR ١ ٠ ‏ب‎ ١ ‏سا د‎ ١ ٠ ‏هي‎ A ‏والنمط‎ o ‏الكبسولية النمط‎ Y ٠ ‏نحل لح لال لاح نكال لني نكال .4ح نال لمح نح‎ 6 1 ‏الح ال للح نح ار لمحي‎ = ‏بواسطة أي طريقة‎ oligosaccharide ‏للبولي سكاريد أو‎ O-acetyl ‏يمكن تعيين درجة إضافة‎ : ‏البروتون‎ NMR ‏معروفة في المجال؛ على سبيل المثال؛ بواسطة‎ ‎EAE
=« اذ
Lemercinier and Jones 1996, Carbohydrate Research 296; 83-96, Jones and Lemercinier 2002, J Pharmaceutical and Biomedical analysis 30; 1233-1247 طلب البراءة الدولية رقم ‎‘YTV EA‏ / © ويبو أو طلب البراءة الدولية رقم ضرا م ‎ve‏ ويبو). © يتم وصف طرق مستخدمة بشكل شائع أخرى بواسطة : .Hestrin (1949) J. Biol. Chem. 180; 249-261 في بعض النماذج؛ تستخدم بولي سكاريد الاختراع الكبسولية للنمط المصلي © و/ أو ‎A‏ لإنتاج أجسام مضادة وظيفية كما قيس بواسطة قتل البكتريا في نموذج الفعالية الحيواني أو اختبار القتل بالالتهام الأبسوني ‎opsonophagocytic‏ الذي أظهر أن الأجسام المضادة تقتل البكتريا. قد لا ‎٠‏ تتضح عملية القتل الوظيفية المكورة باستخدام اختبار يراقب إنتاج الأجسام بصورة مفردة؛ والذي لا يكون دليل على أهمية إضافة ‎acetyl‏ عند -0 في الفعالية. يمكن الحصول على بولي سكاريدات الكبسولية على سبيل المثال النمط المصلي © أو ‎A‏ مباشرة من بكتريا باستخدام طرق ‎Jie‏ معروفة لأحد ذوي المهارة في المجال. انظر على سبيل المثال :
Fournier et al. (1984), supra; Fournier et al. (1987) Ann. Inst.
Pasteur/Microbiol. 138:561-567 ٠ طلب براءة الولايات المتحدة رقم لأ ‎١‏ لحلا 21 وطلب البراءة الدولية رقم ‎Int'l‏ 7 ويبو؛ كل منهم مذكور على سبيل المرجع كما وضح في حد ذاته). بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن إنتاجها باستخدام بروتوكولات مخلقة. علاوة على ذلك؛ يمكن إنتاج بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ بشكل مستنسخ باستخدام طرق الهندسة ‎٠‏ الوراثية المعروفة أيضاً لأحد ذوي المهارة في المجال (انظر )1997( ‎Sau et al.‏ 143:2395-5 لا09ا100510/ا؛ وطلب براءة الولايات المتحدة رقم ‎ET YYAYO‏ المذكور هنا على سبيل المرجع كما وضح في حد ذاته). إحدى سلالات المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ التي يمكن استخدامها للحصول على بولي سكاريد ‎hall‏ المصلي ‎A‏ المعزول عبارة عن ‎R2 PFESA0286‏ من ‎S.‏
EAE
“yy ‏بواسطة عد الخلايا المتدفق مع الأجسام المضادة للبولي سكاريد‎ ADL ‏اختيار هذه‎ 5 .aureus : Staphylococcus aureus ‏بعد زراعة المكورات العنقودية الذهبية‎ A ‏لمضاد النمط المصلي‎
American Type Culture Collection; Manassas, VA; ATCC ) PFESA0286
Modified Frantz Broth ‏في‎ (Accession No. 49525; © لوحظت مجموعتين 81 ‎R23‏ أثناء عد الخلايا المتدفق. تمت تنقية 81 و2» وأعيدت زراعتها. أنتج ‎R2‏ بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي 8. أظهر التحليل الخاص بعد الخلايا المتدفق شدة لصف متجانسة في حد ذاته. اختير ‎R2‏ لإنتاج بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ ‏إحدى سلالات المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ التي يمكن استخدامها
Staphylococcus ‏سكاريد النمط المصلي © هي المكورات العنقودية الذهبية‎ dg ‏للحصول على‎ ٠ alll ‏بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي 0 أثناء‎ ADL ‏تنتج هذه‎ aureus 06 ‏ويصل الإنتاج لأقصى مداه عندما تكون الخلايا في الطور الثابت. يمكن استخدام سلالات النمط‎ ‏الأخرى لتحضير‎ Staphylococcus aureus ‏من المكورات العنقودية الذهبية‎ A ‏أو النمط‎ © ‏بولي سكاريدات محددة يتم الحصول عليها إما من تجميعات مزرعة محددة أو عينات إكلينيكية.‎ ‎Vo‏ مكون اخر للمقترن المولد للمناعة للاختراع هو جزئ أو بروتين حامل ‎carrier protein‏ يقترن معه بولي سكاريد الكبسولي الحويصل. يشير المصطلح "حامل بروتين" أو "'بروتين حامل " إلى أي جزئ بروتين قد يقترن ‎antigen‏ (على سبيل المثال بولي سكاريد كبسولة) والتي ضدها تكون الاستجابة المناعية مرغوبة. يمكن أن يعزز الاقتران بالحامل خاصية تولد المناعة لل ‎antigen‏ . يمكن إجراء الاقتران بواسطة طرق قياسية. حاملات البروتين المفضلة ‎J antigens!‏ هي ‎٠‏ كصلا « ‎toxoids‏ أو أي مادة متفاعلة محورة ‎toxin (CRM)‏ من الكزازء الدفترياء السعال الديكي» ‎Staphylococcus: E. colicPseudomonas‏ و5106010000005 . في أحد النماذج؛ الحامل المفضل يكون ل ‎toxoid‏ 040/197 للدفترياء المشتق من سلالة ‎C.‏ ‎diphtheriae C7‏ (8197)؛ والتي تنتج البروتين ‎LCRMI197‏ هذه السلالة لها رقم دخول ‎748٠ ATCC‏ 07. يتم وصف طريقة إنتاج 040/197 في طلب براءة الولايات المتحدة رقم ‎EAE
دج
5,74 2,11؛ المذكور هنا على سبيل المرجع كما لو تم توضيحه في حد ذاته. بصورة أخرى؛ يمكن استخدام قطعة أو ‎epitope‏ حامل البروتين أو بروتين مولد للمناعة أخر. على سبيل المثال؛ يمكن أن يقترن ‎antigen‏ الهابتيني (لمولد المضاد الجزئي أو لمولدة ضد ناقصة) مع ‎epitope‏ ‏الخلية ‎T‏ ل 10*10 بكتيري» ‎toxin‏ أو ‎LCRM‏ انظر ‎calls‏ براءة الولايات المتحدة رقم ‎Vou TAA‏
© الموذع في ‎١‏ فبراير ‎VAAN‏ بعنوان " ‎Synthetic Peptides Representing a T-Cell‏ ‎Epitope as a Carrier Molecule For Conjugate Vaccines‏ "؛ المذكور هنا على سبيل المرجع كما لو تم توضيحه في حد ذاته. تشتمل بروتينات الحامل المناسبة الأخرى على 07 بكتيرية موقفة النشاط على سبيل المثال ‎toxoid‏ (شبيه سموم) ‎١ cholera toxoid‏ (على سبيل المثال كما وصف في طلب البراءة الدولية رقم 7851/78884 ‎E. coli (sms ٠87‏ ‎exotoxin A 5 E. coli 51-1 ٠‏ (السم الداخلي ‎(A‏ من ‎.Pseudomonas aeruginosa‏ يمكن أيضاً استخدام بروتينات الغشاء الخارجي على سبيل المثال مركب غشاء ‎Cal‏ ‎porins « (OMPC)‏ ؛ بروتينات ربط الترانسفيرين ‎transferrin binding proteins‏ « ‎pneumolysin‏ « بروتين ‎A‏ للسطح المتعلق بالمكورات الرثوية ‎«(PspA)‏ بروتين التصاق المكورات الرثوية ‎pneumococcal adhesion protein (PsaA)‏ أو بروتين 0 ل ‎.Haemophilus influenzae ١٠‏ يمكن أيضاً استخدام بروتينات ‎coal‏ على سبيل المثال اولبيومين البيض» ‎ckeyhole limpet hemocyanin (KLH)‏ البيومين مصل بقري ‎bovine‏
‎serum albumin (BSA)‏ أو مشتق بروتين منقى ‎tuberculin (PPD)‏ كبروتينات حامل. وفقاً لذلك» في أحد ‎oz dll)‏ البروتين ‎Jala carrier protein Jalal)‏ المقترن المولد للمناعة للاختراع هو ‎«CRMI97‏ ويرتبط ‎CRM197‏ تساهمياً مع بولي سكاريد الكبسولي عن ‎Gob‏ ‎٠‏ رابطة ‎carbamate‏ رابط أمين ؛ أو كلاهما . فى بعض النماذج ؛ بروتين الحامل داخل المقترن ‎al gall‏ للمناعة للاختراع هو 040/197 ويرتبط ‎CRM197‏ تساهميا مع بولي سكاريد الكبسولي عن طريق رابطة ‎thioether‏ . يمكن تمييز عدد متبقيات لايسينات فى البروتين الحامل الذي يصبح مقترنا ببولي سكاريد الكبسولي على أنه مدى من لايسينات المقترنة . على سبل المثال ؛ فى تركيب ‎alge‏ للمناعة ‎immunogenic composition‏ معطى ؛ قد يتضمن ‎CRM197‏ © ‎Yo‏ إلى ‎Vo‏ لايسينات من 4؟ مرتبطين تساهميا مع بولي سكاريد الكبسولي . طريقة أخرى لتمثيل هذا
‎EAE py المعيار هي أن 7717 إلى 740860 من لايسينات ‎CRMIOT‏ ترتبط تساهميا ب بولي مكاريد الكبسولي . على سبيل المثال ؛ فى تركيب ‎alge‏ للمناعة ‎immunogenic composition‏ معطى ؛ قد يتضمن 040/197 ‎VA‏ إلى ‎YY‏ لايسينات ‎lysines‏ من 4؟ مرتبطين تساهميا مع بولي سكاريد الكبسولي . طريقة أخرى لتمثيل هذا المعيار هي أنه ‎74٠‏ إلى 77080 من لايسينات ‎CRM197 ©‏ ترتبط تساهميا مع بولي سكاريد الكبسولي . فى بعض النماذج ؛ يتضمن 041/197 © إلى ‎Vo‏ لايسينات من ‎TA‏ مرتبطين تساهميا مع 0658 . طريقة أخرى لتمثيل هذا المعيار هي أن ‎ZY‏ إلى 7460 من لايسينات 080/197 ترتبط تساهميا مع 058 . فى بعض النماذج ؛ يتضمن 0140/0197 ‎YA‏ إلى ‎YY‏ لايسينات ‎lysines‏ من ‎Y4‏ مرتبطين تساهميا مع 005 . طريقة أخرى لتمثيل هذا المعيار هي أن ‎745٠0‏ إلى 700 من لايسينات 0541/1197 ترتبط تساهميا
CPS ‏مع‎ ٠ carrier protein ‏فى البروتين الحامل‎ lysine ‏وضح سابقا ؛ يمكن تمييز عدد متبقيات‎ WS ‏المقترنة ؛ التي قد يتم تمثيلها على‎ lysines ‏المقترن مع بولي سكاريد الكبسولي على هيئة مدى‎ ‏المقترنة إلى‎ lysines ‏هيئة نسبة جزيئية على سبيل المثال ؛ يمكن أن تكون النسبة الجزيئية‎ ‏فى‎ . ١ : 7١ ‏إلى حوالى‎ ١ : ١8 ‏فى التركيب المولد للمناعة 0658 ما بين حوالى‎ 7 ‏المقترنة إلى 051/197 فى المقترن‎ lysines ‏الوزن الجزيئي‎ sae ‏أحد النماذج ؛ يمكن أن يكون‎ ١ ‏فى أحد النماذج ؛ مدى النسبة‎ . ١ : 75 ‏إلى حوالى‎ ١ : ١5 ‏المولد للمناعة ما بين حوالى‎ ‏يمكن أن يكون ما‎ CP8 ‏فى المقترن المولد للمناعة‎ CRM197 ‏المقترنة إلى‎ lysines « ‏الجزيئية‎ ‎١:٠١ ‏؛ حوالى‎ ١٠: 18 ‏إلى حوالى‎ ١ : ١١ ‏؛ حوالى‎ ١: 7١ ‏إلى حوالى‎ ١ : ١4 ‏بين حوالى‎ ‏حوالي‎ AY ‏إلى حوالي‎ ١ :6 dae) VE ‏إلى حوالي‎ ١ A ‏؛ حوالى‎ ١ : ١١ ‏إلى حوالى‎
YA ‏إلى حوالي‎ ١ YY ‏إلى حوالي 1776: ١؛ حوالي‎ ١ :٠١ ‏حوالي‎ ed :٠١ ‏إلى حوالي‎ ١:4 00 ‏إلى حوالي‎ ١ YA ‏حوالي‎ ؛١‎ FY ‏إلى حوالي‎ ١ :776 ‏حوالي‎ ؛١‎ oF ‏إلى حوالي‎ ١ :74 ‏حوالي‎ ‏إلى‎ ١ :* ‏حوالي‎ ؛١‎ :٠١ ‏إلى حوالي‎ ١ :© ‏إلى حوالي 77: ١؛ حوالي‎ ١ oF ‏حوالي‎ ؛١‎ 4 ‏أيضا ؛‎ .١ Fe ‏إلى حوالي‎ ١ :٠١ ‏9؛ أو حوالي‎ :٠١ ‏إلى حوالي‎ ١ :٠١ ‏حوالي‎ ؛١‎ :7١0 ‏حوالي‎ ‏يمكن أن‎ OCP ‏المقترنة إلى 681/197 فى المقترن المولد للمناعة‎ lysines ‏النسبة الجزيئية‎ ‏المقترنة إلى‎ lysines ‏فى أحد النماذج ؛ مدى النسبة الجزيئية‎ . ١ : 9 ‏تكون ما بين حوالى‎ Yo
EAE
RP
7 فى المقترن المولد للمناعة يمكن أن يكون ما بين © : ‎١‏ إلى حوالى ‎١ : ٠١0‏ . فى أحد النماذج ¢ يمكن أن يكون مدى النسبة الجزيئية ‎lysines‏ المقترنة إلى 051/197 فى المقترن المولد للمناعة ‎0CP‏ ما بين حوالى ؛ : ‎١‏ إلى حوالى ‎١ : ٠١٠‏ ؛ حوالى ‎١ : ١‏ إلى حوالى ‎٠١‏ : ‎١‏ ؛ حوالى 7 : ‎١‏ إلى حوالى ‎١ : ٠١‏ ؛ حوالي ‎١ A‏ إلى حوالي ‎:٠١‏ 9؛ حوالي ‎١ :٠١‏ إلى 0 حوالي ‎Ye‏ ١؛‏ حوالي ‎١ :١١‏ إلى حوالي ‎:٠١‏ ١؛‏ حوالي ‎١ YY‏ إلى حوالي ‎4١ :٠١‏ حوالي ‎١ VY‏ إلى حوالي ‎:٠١‏ ١؛‏ حوالي ‎١ VE‏ إلى حوالي ‎ve‏ ١؛‏ حوالي 19: ‎١‏ إلى حوالي ‎Yo‏ ‏١؛‏ حوالي ‎١ YT‏ إلى حوالي ‎:٠١0‏ ١؛‏ حوالي ‎١ IY‏ إلى حوالي ‎:٠١‏ ١؛‏ حوالي ‎١ :٠8‏ إلى حوالي ‎oY‏ ١؛‏ حوالي #: ‎١‏ إلى حوالي ‎١ :7 Jam ؛١ DA‏ إلى حوالي ‎DT‏ ١؛‏ أو حوالي .١ :١ 4 ‏إلى حوالي‎ ٠4 ‏المقترن ببولي‎ carrier protein ‏البروتين الحامل‎ lysine ‏متبقيات‎ se ‏طريقة أخرى لتمثيل‎ ٠ ‏المقترنة . على‎ lysines ‏الكبسولي يمكن ان تكون على هيئة مدى‎ polysaccharides ‏سكاريد‎ ‏قد يتضمن‎ axe CP8 immunogenic conjugate ‏سبيل المثال ؛ فى مقترن مولد للمناعة‎ ‏مرتبطين تساهميا مع بولي سكاريد الكبسولي‎ YA ‏من‎ lysines ‏لايسينات‎ Vo ‏إلى‎ ه٠‎ 7 ‏بطريقة أخرى ؛ يمكن تمثيل هذا المعيار على هيئة نسبة مثوية . على سبيل المثال ؛ فى مقترن‎ ٠ ‏إلى‎ 7٠١ ‏المقترنة ما بين‎ lysines ‏مولد للمناعة 658 معطى ؛ يمكن أن تكون النسبة المثوية‎ Vo . CP8 ‏تساهميا مع‎ lysines ‏إلى +75 من‎ 77٠0 ‏فى بعض النماذج ؛ يمكن أن يرتبط‎ . 058 ‏تساهميا مع‎ lysines CRM197 ‏من‎ 75 ٠ ‏إلى‎ ٠ ‏بطريقة أخرى ؛ أيضا يمكن أن يرتبط‎ 77 ‏؛‎ lysines CRM197 ‏إلى 20 من‎ 2٠١ ‏؛‎ lysines CRM197 ‏إلى 7460 من‎ 2٠٠ ‏؛‎ ‏إلى‎ 77١ ‏؛‎ lysines CRM197 ‏من‎ 74٠6 ‏إلى‎ ZYo ‏؛‎ lysines CRM197 ‏من‎ 745٠6 ‏إلى‎ ‎Ye ‏إلى‎ 7١١ ‏؛‎ lysines CRM197 ‏إلى 20 من‎ 7٠١ ‏؛‎ lysines 040/0197 ‏من‎ 240 Yo ‏من‎ 27١ ‏إلى‎ 77٠ ‏؛‎ lysines 040/0197 ‏من‎ 7٠١ ‏إلى‎ 7١ ‏؛‎ lysines CRM197 ‏من‎ ‏من‎ NY ‏إلى‎ 2٠١ ‏؛ أو‎ lysines 680197 ‏من‎ 21١9 ‏إلى‎ 2٠١ ‏؛‎ lysines CRM197 ‏فى مقترن مولد للمناعة‎ + Lal . CP8 ‏ترتبط تساهميا مع‎ lysines CRM197 ‏لايسينات‎ YY ‏إلى‎ ١١ 140/197 ‏معطى ؛ قد يتضمن‎ CPS immunogenic conjugate ‏الكبسولي . بصورة‎ polysaccharides ‏_من 4؟ مرتبطين تساهميا مع بولي سكاريد‎ lysines Yo
EAE
هم أخرى ؛ يمكن تمثيل هذا المعيار على هيئة نسبى ‎Ruse‏ . على سبيل المثال ؛ فى مقترن مولد للمناعة ‎CPS‏ معطى ؛ يمكن أن تكون النسبة المثوية ‎lysines‏ المقترنة ما بين ‎ATE‏ 71680 . فى بعض النماذج ؛ يمكن أن يرتبط ‎74٠‏ إلى 700 من ‎lysines‏ تساهميا مع 605 . بطريقة أخرى أيضا ؛ يمكن أن يرتبط ‎ZY‏ إلى ‎٠‏ 75 من ‎lysines‏ تساهميا مع 005 ؛ 770 إلى ‎Zev‏ ‏من ‎lysines CRM197‏ ؛ ‎7٠١‏ إلى ‎7١٠‏ من 080/197 ‎lysines‏ ؛ 750 إلى 770 من ‎lysines 7‏ ؛ 275 إلى 215 من ‎lysines CRM197‏ ؛ 270 إلى 21 من ‎lysines CRM197‏ ؛ ‎ZYo‏ إلى ‎Zoo‏ من 040/197 ‎lysines‏ ؛ ‎2٠١‏ إلى ‎Low‏ من ‎lysines 7‏ ؛ ‎2٠١‏ إلى 245 من 0400197 ‎lysines‏ ؛ ‎2٠١‏ إلى 7460 من ‎lysines CRM197‏ ؛ 740 إلى 270 ؛ أو © 7 إلى 77/8 من ‎lysines CRM197‏ يمكن أن ‎٠‏ ترتبط تساهميا مع 005 . تكرار اتصال سلسلة بولي سكاريد الكبسولي ب ‎lysine‏ على الجزئ الحامل هو معيار ‎AT‏ لتمييز مقترنات بولي سكاريدات الكبسولية ‏ . على سبيل المثال ؛ فى أحد النماذج ؛ يحدث ارتباط تساهمي واحد على الأقل بين ‎CRMI97‏ و بولي سكاريد لعلى الأقل كل © إلى ‎٠١‏ وحدات متكررة من ‎saccharide‏ من بولي مكاريد الكبسولي . فى نموذج آخر ؛ يوجد ارتباط تساهمي ‎Vo‏ واحد على الأقل بين 08/197 وبولي سكاريد الكبسولي لكل © إلى ‎٠١‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ؟ إلى ‎١‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ؟ إلى ‎A‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ؛ إلى 9 وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ‎١‏ إلى ‎١١‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ‎١١ AY‏ وحدات متكررة من مكاريد ؛ كل / إلى ‎١١‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل 9 إلى ‎YE‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ‎٠١‏ إلى ‎Yo‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ؟ إلى ‎١‏ وحدات متكررة ‎Ye‏ من مكاريد ؛ كل ؟ إلى ‎١‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ؛ إلى ‎A‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ‎١‏ إلى ‎٠١‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل 7 إلى ‎١١‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل / إلى ‎١١‏ وحدات متكررة من مكاريد ؛ كل 9 إلى ‎VY‏ وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ‎٠١‏ إلى ‎YE‏ ‏وحدات متكررة من سكاريد ؛ كل ‎٠١‏ إلى ‎5١‏ وحدات متكررة من ‎alu‏ ؛ كل * إلى ‎٠١‏ من بولي سكاريد الكبسولي ‏ . فى نموذج ‎AT‏ ؛ يحدث ارتباط تساهمي واحد على الأقل بين ‎Yo‏ 6800197 وبولي سكاريد الكبسولي لكل من 0 400 فت اخم كف نل ‎EAE‏
‎CY NY‏ كال دل حل لا ‎٠14 CVA‏ ء أو ‎٠١‏ وحدة متكررة سكاريد للبولي سكاريد الكبسولي . يقدم أحد نماذج الاختراع تركيب مولد للمناعة يتضمن أى من المقترنات المولد للمناعة متضمنة بولي سكاريد كبسولي النمط المعطى © أو ‎A‏ من ‎S.aureus‏ مقترن بالبروتين الحامل ‎carrier‏ ‏© 01800«م_الموصوف ‎Ble‏ . يتعلق المصطلح " تركيب مولد للمناعة " بأى تركيب صيدلاني يحتوى على ‎antigen‏ على سبيل ‎JE‏ كائن دقيق أو مكون منه ؛ حيث يمكن استخدام ذلك التركيب لإظهار استجابة مناعية فى الثديي . يمكن استخدام التركيبات المولدة للمناعة للاختراع الحالي لحماية أو علاج إنسان عرضة لعدوى ‎S.aUreUs‏ ؛ عن طريق إعطاء التركيبات المولدة للمناعة بواسطة طريقة ‎Alls‏ ؛ عبر الجلد أو عبر الطبقة المخاطية أو الاستخدام لإنتاج ‎٠‏ مستحضر جسم مضاد عديد النسخ أو أحادي النسخة يمكن استخدامه لمنع مناعة سلبية لثذيي ‎Al‏ . يمكن ‏ أن تشتمل هذه التتاولات على الحقن ‎daddy‏ طرق داخل العضلات ‎intramuscularly‏ « داخل البريتون ‎Jala » intraperitoneally‏ الجلد ‎intradermally‏ « أو تحت الجلد ‎subcutaneously‏ ¢ أو عن طريق التناول عبر الطبقة المخاطية للفم / القنوات المعوية ؛ التنفسية او التناسلية البولية . فى أحد النماذج ؛ يستخدم التناول ‎Jada‏ الأنف لمعالجة أو ‎Vo‏ منع النقل الأنف المريئي ل ‎S.aureus‏ ؛ وبالتالى إضعاف العدوى فى مرحلتها المتقدمة . قد تستخدم التركيبات المولدة للمناعة ايضا لإنتاج أجسام مضادة لها وظائف كما قيس بواسطة قتل البكتريا فى أى نموذج فعالية حيواني أو عن طريق ‎Jal jl)‏ بالالتهام الأبسوني ‎opsonophagocytic‏ . يمكن التحقق من الكميات النموذجية لمكونات تركيب مولد للمناعة امحدد عن طريق دراسات ‎Yo‏ قياسية تتضمن ملاحظة الاستجابات المناعية المناسبة فى الحالات . بعد التلقيح الابتدائي ¢ يمكن أن تتلقى الحالات واحد او أكثر من اللقاحات المعززة العديد على فترات متباعدة بصورة كافية . قد تشتمل التركيبات المولدة للمناعة للاختراع الحالي أيضا على واحد أو أكثر من ‎antigens‏ ‏التالية : ‎CIfB.CIfA‏ ,50:6 .5030 « بروتين ‎/SitC /C SdrE Mntly,‏ اللعاب ,1508 ؛ ‎SrtAc 5011. LtaS: HtsA« DItA« Opp3a«lsdA‏ لام ‎SBI‏ و ‎tAE‏
الا ‎alpha—-hemolysin (hla), beta—hemolysin, fibronectin—-binding protein A‏ ‎(fnbA), coagulase, map, Panton-Valentine leukocidin (pvl), gamma-toxin‏ ‎(hlg), ica,‏ و ناقل ‎ABC‏ محدد ‎autolysin « RAP , Le lie‏ « مستقبلات ‎«IsaA/PisA daminin‏ ‎o‏ 8 500 طقوة ‎FnbB.
EFB (FIB). SasH:. SasF.
EbpS:‏ « ‎EBP«Npase‏ « بروتين_الربط ‎Sled‏ للعظام ‎١١‏ ؛ المادة المكونة ‎aureolysin‏ ‎Cna:Sepp1/(AUR)‏ :1551-1 مطمعد ‎GehD: dPNAG:‏ خطماطع .550-2508 ‎SSP-2 1‏ ؛ بروتين ربط ‎vitronectin‏ طول ‎Enterotoxin ¢ A Enterotoxin‏ ‎Enterotoxin C1 + 8‏ « و ‎autolysin‏ جديد . ‎YS‏ فى أحد النماذج ؛ تتضمن التركيبات المولدة للمناعة للاختراع أيضا واحدة على الأقل من ‎sale‏ ‏إضافية ؛ محلول منظم ؛ مادة حامية من البرودة ؛ ملح ‎cation‏ ثنائي التكافؤ ؛ منظف - غير أيوني ؛ مثبط لأكسدة الشق ‎all‏ ؛ مخفف ‎diluent‏ أو حامل . فى أحد النماذج ؛ المادة الإضافية داخل التركيب المولد للمناعة للاختراع فى مادة إضافية معتمدة على ‎aluminum‏ . فى احد النماذج ‎sald)‏ الإضافية هي مادة إضافية معتمدة على ‎aluminum‏ مختارة من ‎١٠‏ المجموعة المكونة من ‎aluminum sulfate « aluminum phosphate‏ و ‎aluminum‏ ‎hydroxide‏ . فى أحد النماذج ؛ المادة الإضافية ‎aluminum phosphate»‏ . ‎sald)‏ الاضافية هي مادة تعزز الاستجابة المناعية عند تناولها معا مع مولد للمناعة أو ‎antigen‏ ‏تم توضيح أن عدد من ‎cytokines‏ أو الليمفوكينات له نشاط تعديل مناعى ؛ وبالتالى قد يكون مفيد بنفس طريقة أو طريقة مماثلة للمواد الاضافية ؛ شمتملة ولكنها غير قاصرة على ؛ ‎Te 6¢ 5¢ 4¢ 2¢ 1-1-0 interleukins ٠‏ 8¢ 10¢ 126 ( انظر على سبيل ‎JB‏ طلب براءة الولايات المتحدة رقم ‎C(O VYY ITY‏ ا 6 د ء 1 ء ‎١7‏ و ‎YA‏ ( وأشكاله المحورة) ؛ الانترفيرون :0 ‎Bc‏ و 7 : عامل تنبيه مستعمرة خلية محببة - خلية ملتهمة كبيرة ( ‎(GM-CSF‏ ( انظر ؛ على سبيل المثال طلب براءة الولايات المتحدة رقم 78557 و ‎ATCC‏ ‏رقم الدخول 799800 ) ؛ عامل تنبيه مستعمرة الخلية الملتهمة ( ‎M-CSF‏ ) ؛ عامل تنبيه ‎EAE‏
م مستعمرة الخلية المحببة ( ‎(G-CSF‏ ؛ وعوامل تنكرز الورم ‎lal‏ وبيتا ‎٠.‏ تشتمل المواد الاضافية الأخرى ايضا المفيدة مع التركيبات المولدة للمناعة الموصوفة هنا على ‎chemokines‏ ؛ مشتملة بدون القصر على ‎MIP-1acMCP-1‏ .110-10 ؛ ‎RANTES;‏ ؛ جزيئات الالتصاق ؛ على سبيل المثال السيليكتين ¢ على سبيل المثال ‎P-selectin and E-selectin‏ ,5616600-ا ,. ؛ © جزيثئات تشبه الميوسين ؛ على سبيل المثال ‎GlyCAM-1(CD34‏ و ‎MadCAM-1‏ ؛ فرد من عائلة ‎integrin‏ على سبيل المثال ‎Mac—1¢ VLA-1(LFA-1‏ و150.95م ؛ فرد من العائلة العليا للجلوبيولين المناعي ‎immunoglobulin‏ على سبيل المثال ‎١01/156‏ ؛ على سبيل المثال؛ ‎CD2¢ ICAM-3 ICAM-2(CAM-1‏ و3<ظا ؛ جزيئات منبهة إضافية على سبيل المثال ‎CD40L, CD40¢ B7-2.B7-1‏ ؛ عوامل نمو مشتملة على عامل نمو وعائي ؛ ‎٠‏ عامل نمو الأعصاب ؛ عامل نمو الخلية الليفية ¢ عامل نمو طبقة البشرئ ‎PDGF‏ ؛ ‎BL=1‏ ¢ وعامل نمو البطانة الوعائية ؛ جزيئات مستقلة مشتملة على ‎Fas‏ ؛ مستقبل ‎TNF‏ ؛ ‎(Fas‏ مستقبل ‎Apo-1¢ FIt:TNF‏ .55م ‎WSL-1¢‏ تا انا ‎LARD: AlIR¢ Apo-3¢ TRAMP.‏ « ‎TRICK2¢ TRAIL-R2¢ KILLER: DR5¢ DR4(NGRF‏ ؛ و ‎DR6‏ ؛ والكازباز ¢ مشتملة على ‎ICE‏ .
‎١‏ .قد تشتمل المواد الاضافية المناسبة المستخدمة لتعزيز استجابة مناعية أيضا ؛ بدون القصر على ‎MPL™‏ ( دهون ‎YA‏ - أحادي فوسفوريل منوع منها ‎acetyl‏ ؛ ‎(Corixa; Hamilton, MT‏ ‎Al‏ يتم وصفها فى طلب براءة الولايات المتحدة رقم 5,917,094 . أيضا المناسب للاستخدام كمواد إضافية هو مماثلات الدهون ‎A‏ المخلقة أو مركبات ‎glucosamine phosphate‏ ‎«compounds (AGP)‏ أو مشتقاته أو مماثلاته ؛ ‎Ally‏ تكون متاحة من ‎Corixa‏ وتلك
‎: ‏الموصوفة فى طلب براءة الولايات المتحدة رقم 1,117,914 . إحدى 860 تلك هي‎ ٠ 2-[(R)-3-Tetradecanoyloxytetradecanoylamino] ethyl 2-Deoxy-4-0-phosphono-3-0-[(R)-3-tetradecanoyoxytetradecanoyl]-2 —[(R)—-3-tetradecanoyloxytetradecanoyl-amino]-b-D-glucopyranoside, ‏والذي يكون معروف أيضا على أنه 529 ( معروف سابقا ب 46225 ) . يتم صياغة هذه المادة‎
‎. (SE) ‏أو على هيئة مستحلب ثابت‎ (AF) ‏الاضافية 529 على هيئة شكل مائي‎ Yo
‎EAE re : ‏تشتمل المواد الاضافية الأخرى أيضا على ببتيدات ميوماريل ؛ على سبيل المثال‎
N-acetyl-muramyl-L-threonyl-D-isoglutamine (thr—-MDP), N-acetyl —hydroxyphos normuramyl-L-alanine-2—(1'-2" dipalmitoyl-sn—glycero—3- phoryloxy)—ethylamine (MTP-PE); ‏طلب براءة_الولايات رقم‎ ( 1/759 JE ‏؛ مستحلبات زيت - فى ماء ¢ على سبيل‎ ©
Span 7 ١ف ‏د و‎ polysorbate 7 ‏م‎ « Squalene 78 ‏يحترى على‎ ( ) 1 64 ‏تحت صياغتها فى جزيئات دون‎ ) MTP-PE ‏يحتوى اختياريا على كميات مختلفة من‎ ( 5 1107 ‏الميكروب باستخدام مسيل دقيقة على سبيل المثال فى المسيل الدقيق النموذج‎ م١1‎ « 50081606 7٠١ ‏(يحتوى على‎ SAF ‏و‎ (Microfluidics, Newton, MA) ‏؛ سواء يتم‎ thr—=MDP ¢ pluronic LD] ‏بوليمر معاق بواسطة‎ 75 ¢ Av polysorbate ٠ sale ‏اسالته دقيقاً فى مستحلب دون الميكرون أو يتم تدويره لانتاج مستحلب له حجم جزئ كبير) ؛‎ : ‏؛ على سبيل المثال‎ (alum) aluminum ‏؛ أملاح‎ (IFA) ‏غير كاملة‎ Freund ‏اضافية‎ ‎aluminum hydroxide, aluminum phosphate, aluminum sulfate; Amphigen;
Avridine; L121 /squalene; D-lactide—polylactide/glycoside; pluronic polyols;
Antigenics, ) Stimulon™ QS-21 ‏سبيل المثال‎ Je saponins ¢ اهلتق ‏تتم‎ 5 ‏الموصوفة فى طلب براءة الولايات المتحدة رقم 8,059,846 ؛‎ (Framingham, MA. ‏الموصوف فى طلب براءة الولايات‎ (CSL Limited, Parkville, Australia) Iscomatrix®
Mycobacterium ‏؛‎ (ISCOMS) ‏المتحدة رقم 9,754,779 ¢ ومركبات تنبيه مناعى‎ ‏مغلقة على سبيل المثال‎ polynucleotides ¢ ‏؛ سكريات متعددة دهنية بكتيرية‎ tuberculosis ‏سبيل المثال طلب براءة الولايات المتحدة رقم‎ Je) GPG ‏تحتوى على حافز‎ 01000001068 | ٠ ‏؛ الموصوف فى طلبات براءة‎ (Intercell AG, Vienna, Austria) 0-31 ¢ )), »: , 17 ‏أو شكل محور منه؛‎ (PT) ‏_السعال الديكى‎ toXin ‏؛‎ ١,777,174 ‏رقم 1,795,717 و‎ Ly ‏سبيل المثال طلب براءة الولايات المتحدة أرقام‎ le) ‏أو شكل محور منه‎ cholera toxin ‏متغير بالحرارة ل‎ toxin ‏ارا 7 ؛ ,ا و 146ر4 م7 ) ؛ أو‎ ¢ V,YAS, YA)
EAE
مو ‎(LT) Ecoli‏ أو شكل محور منه ؛ تحديداً ‎LT-K63‏ ؛ ‎Je) LT-R72‏ سبيل المثال طلبات براءة الولايات ‎said)‏ أرقام £4.49 ‎(VeYAYOAA SYA VTL (Te)‏ يمكن أن يتضمن التركيب المولد للمناعة اختيارياً حامل مقبول صيدلانياً ‎٠‏ يعنى المصطلح " حامل مقبول صيدلانياً ‎dela"‏ مستحسن بواسطة الوكالة الفيدرالية المنظمة ؛ حكومة الولاية ‎٠‏ أو وكالة © منظمة ‎gal‏ ؛ أو مذكور فى فارماكوبيا الولايات المتحدة أو فارماكوبيا معروفة عموماً أخرى للاستخدام فى الحيوانات ؛ مشتملة على الآدميين بالاضافة الى الثدييات الغير آدمية . يشير المصطلح " حامل " الى مخفف ‎diluent‏ ؛ مادة اضافية ؛ سواغ أو ناقل معه يتم تناول التركيب الصيدلانى . يمكن استخدام الماء ؛ محاليل ملحية ؛ ومحاليل دكستروز وجليسرول مائية على هيئة حاملات سائلة ؛ تحديداً للمحاليل القابلة للحقن . يتم وصف أمثلة الحاملات الصيدلانية فى " ‎Remington's Pharmaceutical Sciences ٠‏ " بواسطة ‎WL Martin‏ .ا . يجب أن تكون الصياغة ملائمة لطريقة التناول. يمكن أن تتضمن التركيبات المولدة ‎de lial)‏ للاختراع الحالى أيضاً واحد أو أكثر من ” المعدلات المناعية " الاضافية ؛ والتى هى عوامل تشوش أو تغير الجهاز المناعى ؛ بحيث يتم ملاحظة إما تنظيم تصاعدى أو تنظيم تناولى للمناعة الخلطية و/ أو الناشئة عن الخلية. فى أحد النماذج ؛ يتم ‎VO‏ تقديم تنظيم تصاعدى للأذرع الخلطية و/ أو الناشئة عن الخلية للجهاز المناعى. تشتمل أمثلة بعض المعدلات المناعية على سبيل المثال على ‎sole‏ اضافية أو ‎Iscomatrix® Ji «cytokine‏ ‎(CSL Limited; Parkville, Australia)‏ الموصوف فى طلب براءة الولايات المتحدة رقم 4 ,9 من بين آخرين . تشتمل أمثلة الغير محدودة للمواد الاضافية التى يمكن استخدامها فى التركيب المولد للمناعة للاختراع الحالى على نظام اضافى ا١8اي‏ ( ‎Ribi Inc.; Hamilton,‏ ‎(MT ٠‏ ؛ ‎calum‏ جل معدنى على سبيل المثال ‎aluminum hydroxide gel‏ ؛ مستحلبات زيت فى ماء ؛ مستحلبات ماء - فى زيت على سبيل المثال مثلاً ؛ مواد اضافية ‎ALIS‏ وغير ‎ALIS‏ ‏0 ؛ بوليمر تساهمى كتلى ‎Cambridge ) QS-21¢(CytRx; Atlanta, GA)‏ ‎«(Chiron; Emeryville, CA) SAF-M. (Biotech Inc.; Cambridge, MA‏ مادة اضافية من ‎QuilA ¢ saponin « Amphigen®‏ أو جزء 5800010 آخر ؛ دهون ‎A‏ احادية الفوسفوريل ‎monophosphoryl Yo‏ ؛ ومادة اضافية من الدهون - الأمين الافيريدين . تشتمل الأمثلة الغير ‎EAE‏
-؛١-‎ محدودة لمستحلبات الزيت - فى - ماء المفيدة فى التركيب المولد للمناعة للاختراع على 5-2 معدل وصياغات ‎Y/Y SEAM‏ . 550/62 المعدل هو مستحلب زيت - فى - ماء يحتوى على ‎Zo‏ (ح/ح) ‎7١ « (Sigma) Squalene‏ (ح/ح) منظم ‎Span®85‏ (مواد خافضة للتوتر السطحى ‎(ICI‏ « 70,7 (ح/ح) منظف ‎Av polysorbate Jl‏ (مواد خافضة © للتوتز ‎(ICI alll‏ « 2,5 (ح/ح) ‎Yoo ١ ethanol‏ ميكرو جم / مل م اأنا© ‎٠٠١ ١‏ ميكرو جم / مل كوليسترول؛ و 70,5 (ح/ح) ليسيثين . 11/2/ل55/5 ‎Jad)‏ هو مستحلب زيت -فى -ماء يتضمن 75 (ح/ح) 50081606 « ‎7١‏ (ح/ح) منظف ‎١١ « Span®85‏ 7 (ح/ح) منظف ‎ZY, « Av polysorbate‏ (ح/ح) ؛ ‎٠٠١ «ethanol‏ ميكرو جم / مل ‎QUIlA‏ ؛ و ‎Oo‏ ميكرو جم / مل كوليسترول. تشتمل " المعدلات المناعية " الأخرى التى يمكن أن تكون ‎٠‏ متضمنة فى التركيب المولد للمناعة على سبيل المثال على واحد أو أكثر من ‎interleukins‏ ¢ ‎interferons‏ ¢ أو ‎cytokines‏ أو ‎chemokines‏ معروفة اخرى. فى أحد النماذج ؛ قد تكون ‎sald)‏ الاضافية عبارة عن مشتق ‎cyclodextrin‏ أو بوليمر ‎polyanionic‏ ؛ على سبيل المثال الموصوفة فى طلبات براءة الولايات المتحدة أرقام 1,178,940 و ‎1,110,71٠‏ ؛ على الترتيب. من المفهوم أيضاً أن المعدل المناعى و/ أو المادة الاضافية المستخدم يعتمد على الخاضع للعلاج ‎١‏ الذى له يتم اعطاء التركيب المولد للمناعة ؛ طريقة الحقن وعدد مرات الحقن المعطاة. قد تتضمن التركيبات المولدة للمناعة للاختراع أيضاً واحدة أو أكثر من المواد الحافظة بالاضافة الى مجموعة من مقترنات بولي مكاريد الكبسولي المتعلقة بالمكورات العنقودية ‎Staphylococcal‏ ‎infections‏ البروتين يحتاج ‎FDA‏ لأن تحتوى المنتجات البيولوجية فى الزجاجات متعددة الجرعة ( متعددة الجرعة ) على مادة حافظة ؛ مع فقط سواغات قليلة . تشتمل منتجات اللقاح ‎٠‏ المحتوية على المواد الحافظة على لقاحات تحتوى على ‎benzethonium chloride‏ ‎Polio « Lyme « HepA « D Tap) (anthrax), 2-phenoxyethanol‏ (عن طريق غير معوى ) ؛ ‎phenol‏ (رئوي؛ التيفود ( عن طريق غير معوى ) ¢ جدرى البقر) 5 ‎thimerosal‏ ‎HepB. Td« DT:DTaP)‏ .16ل ؛ ‎JE Influenza‏ « سحائي ‎Mening‏ » رثوي ‎Pneumo‏ « السعار ‎(Rabies‏ . تشتمل المواد الحافظة المستحسنة للاستخدام فى العقاقير القابلة للحقن على : ‏سبيل المثال على‎ Yo
EAE
_— \ _ ‎chlorobutanol, m-—cresol, methylparaben, propylparaben, 2-‏ ‎phenoxyethanol, benzethonium chloride, benzalkonium chloride, benzoic‏ ‎acid, benzyl alcohol, phenol, thimerosal and phenylmercuric nitrate.‏ قد تتضمن صياغات الاختراع أيضاً واحد أو أكثر محلول منظم ¢ ملح ؛ 281000ثنائى التكافؤ ؛ © منظف غير ايونى ؛ مادة حامية من البرودة على سبيل ‎JB‏ سكر ؛ و مضاد اكسدة على سبيل المثال ‎dan sale‏ الشق الحر أو عامل مخلب ؛ أو أى اتحاد متعدد منه. قد يعين اختيار أى مكون واحد ¢ على سبيل المثال مادة مخلبية سواء أكان المكون الآخر (على سبيل المثال ‎sale‏ تنقية أو مادة كاسحة) مرغوباً أو لم يكن يجب أن يكون التركيب النهائى المصاغ للتناول معقم و/ أو خالى من البيروجين. قد يعين الشخص الماهر عن طريق التجارب أى اتحادات من هذه والمكونات ‎٠‏ الاخرى تكون مثالية للتضمين فى مادة حافظة تحتوى على التركيبات المولدة للمناعة للاختراع اعتماداً على مختلف العوامل على سبيل المثال التخزين المحدد وظروف التناول المطلوبة فى بعض النماذج ؛ تتضمن صياغة الاختراع المنسجمة مع التناول الغير معوى واحد أو أكثر من المحاليل المنظمة المقبولة فسيولوجياً المختارة من ولكنها غير قاصرة على :
Tris (trimethamine), phosphate, acetate, borate, citrate, glycine, histidine .and succinate. yo فى بعض النماذج يتم تنظيم الصياغة داخل ‎pH sx‏ حوالى ‎Te‏ الى حوالى ‎٠‏ + يبشكل مفضل من حوالى 1,4 الى حوالى ‎VE‏ فى بعض النماذج » قد يكون من المرغوب ضبط ‎pH‏ التركيب المولد للمناعة او صياغة الاختراع. قد يتم ضبط ‎pH‏ لصياغة الاختراع باستخدام تقنيات قياسية فى المجال. قد يتم ضبط ‎PH‏ ‎٠‏ - للصياغة الى مابين حوالى 7.80 و 8.0 . فى بعض النماذج قد يكون ‎pH‏ للصياغة ؛ أو قد يتم ضبطه الى مابين ‎Y,‏ و ‎Toe s8,0 ce‏ أو 68و + . فى نماذج أخرى + قد يكون ‎pH‏ للصياغة أو قد يتم ضيبطه الى حوالى ‎١‏ حوالى م حوالى ف حوالى م حوالى ‎On‏ ¢ حوالى 6,0 ¢ حوالى برقا حوالى كرا حوالى 1,0 ¢ حوالى ‎١‏ حوالى ‎V,0‏ ¢ أو ‏حوالى ا فى بعض النماذج » قد يكون ‎pH‏ أو قد يتم ضيبطه فى ؛ مدى من 2,5 الى 70 ‎EAE
اسه أو من 5,؛ الى 1,9 » من ‎58,٠‏ الى 8,4 » من 8,4 الى *,8 » من ‎Moo‏ 9,1 ؛ من 0,7 الى ‎8,١‏ » من 8,7 الى 9,8 » من ‎Noh‏ 9,9 » من 9,9 الى 1.6 » من 1.0 الى ‎1,١‏ ؛ من 1 الى 1,7 » من 1,7 الى ‎TF‏ » من 1,7 الى 1,9 » من 1,9 الى ‎٠,١٠‏ » من ‎٠,٠‏ الى ‎Vo‏ ‏؛» أو من 5,/ا الى 8. فى نموذج محدد ؛ ‎pH‏ للصياغة يكون تقريباً 8,8 . فى بعض النماذج ؛ تتضمن صياغة الاختراع المنسجمة مع التناول عن طريق غير معوى واحد أو أكثر من الكاتيونات ثنائية التكافؤ ؛ مشتملة ولكنها غير قاصرة على 109012 « 680612 + و 2 » عند تركيز يتراوح من حوالى ‎١.١‏ مللى ج الى حوالى ‎٠١‏ مللى ج ؛ يفضل 5 مللى ج تقريباً على الأكثر. فى بعض النماذج ؛ تتضمن صياغة الاختراع المنسجمة مع التناول عن طريق غير معوى واحد أو sodium chloride, potassium ‏أكثر من الأملاح ؛ مشتملة ولكنها غير قاصرةٍ على‎ ٠ ‏؛ توجد عند شدة ايونية مقبولة‎ chloride, sodium sulfate, and potassium sulfate ‏فسيولوجياً للحالة عند التناول عن طريق غير معوى ومتضمنة عند تركيز نهائى لانتاج شدة ايونية‎ ‏أو الاسموزية‎ dled) ionic strength ‏مختارة أو اسموزية فى الصياغة النهائية. الشدة الايونية‎ ‏للصياغة يتم تعيينها بواسطة مكونات متعددة ( على سبيل المثال ايونات من مركب منظم وأملاح‎ ‏مللى ج على الأكثر ؛‎ You ‏؛ يوجد من مدى حوالى‎ NaCl ‏غير منظمة اخرى . الملح المفضل ؛‎ VO ‏مع تركيزات ملح مختارة لتكمل المكونات الأخرى (على سبيل المثال سكريات) لذلك تكون‎ ‏الاسموزية الكلية النهائية للصياغة منسجمة مع التناول عن طريق غير معوى (على سبيل المثال‎ ‏وتعزز الثبات‎ ) subcutaneously ‏أو تحت الجلد‎ intramuscularly ‏حقن داخل العضلات‎ ‏طويل المدى للمكونات المولدة للمناعة لصياغة التركيب المولد للمناعة خلال مدى درجة حرارة‎ ‏مختلف . تتحمل الصياغات الخالية من الحمل المعدلات الزائدة من واحدة أو أكثر من المواد‎ - ٠ . ‏الحامية للبرودة للحافظ على مستويات اسموزية نهائية مرغوبة‎ ‏فى بعض النماذج ؛ تتضمن صياغة الاختراع المنسجمة مع التناول عن طريق غير معوى واحد أو‎ ‏أكثر مخن المواد الحامية من البرودة المختارة من ولكنها غير قاصرة على السكريات الثنائية (على‎ polyhydroxy (lactose, maltose, sucrose or trehalose ‏سبيل المثال‎ . (dulcitol, glycerol, mannitol and sorbitol ‏سبيل المثال‎ Je) hydrocarbons Yo
EAE
_ _ فى بعض النماذج ؛ اسموزية الصياغة ‎osmolarity of the formulation‏ تكون فى مدى من حوالى ‎٠٠١‏ مللى ‎fos‏ لتر الى حوالى ‎Ave‏ مللى ‎fos‏ لتر ؛ والمدى المفضل من حوالى ‎Yoo‏ ‏مللى ‎[os‏ لتر الى حوالى 54 مللى ‎[os‏ لتر 3 أو حوالى ‎You‏ الى ‎[os‏ لتر - حوالى 6 مللى 05/لتر. قد تحتوى الصياغة الخالية من الملح؛ على سبيل المثال على من حوالى ‎٠‏ 75 الى © حوالى ‎sucrose [Yo‏ ؛ وبشكل مفضل من حوالى 797 الى حوالى 715 » أو حوالى ‎72٠١‏ الى حوالى ‎sucrose 71١١‏ . بطريقة اخرى ؛ قد تحتوى الصياغة الخالية من الملح على سبيل ‎JEN‏ على من حوالى 77 الى ‎sOrbitol 717 Nea‏ ؛ وبشكل مفضل من حوالى 4 7 الى ‎IV‏ أو حوالى 75 » الى ‎Ma‏ 7756 ‎sorbitol‏ . اذا اضيف ملح على سبيل المثال ‎sodium chloride‏ « عندئذ يقل المدى الفعال ‎٠‏ ا للسكر و/ أو 5015140 نسبياً . تعتبر قيم الاسموزية هذه والقيم الأخرى واعتبارات الاسموزية داخل المهارة فى المجال. فى بعض النماذج ؛ تتضمن صياغة الاختراع المندمجة مع التناول عن طريق غير معوى واحد أو أكثر من مثبطات اكسدة الشق ‎all‏ و/ أو العوامل المخلبية. تعتبر مختلف مواد التنقية (الكاسحات) للشق الحر والعوامل المخلبية معروفة فى المجال وتستخدم للصياغات وطرق ‎Vo‏ الاستخدام الموصوفة هنا . تشتمل الأمثلة ولكنها غير ‎spall‏ على ‎ethanol‏ ؛ ‎EDTA‏ ؛ اتحاد ‎EDTA/ethanol combination, triethanolamine, mannitol, histidine, glycerol,‏ ‎sodium citrate, inositol hexaphosphate, tripolyphosphate, ascorbic‏ ‎acid ascorbate, succinic acid/succinate, malic acid/maleate, desferal,‏ ‎EDDHA and DTPA‏ ‎٠‏ واتحادات مختلفة من اثنين أو اكثر مما سبق . فى بعض النماذج ؛ قد يتم اضافة مادة تنقية شق حر غير مختزلة واحدة على الأقل عند تركيز يعزز بشكل فعال ثبات الصياغة على المدى الطويل . قد يتم ‎ala‏ اضافة واحد أوأكثر من مثبطات اكسدة الشق الحر/ المخلبيات فى اتحادات مختلفة ؛ على سبيل المثال ‎sale‏ تنقية ‎EAE‏
اه و 081100 ثنائى التكافؤو . يعين اختيار المادة المخلبية ما اذا كانت اضافة مادة التنقية ضرورية او فى بعض النماذج ؛ تتضمن صياغة الاختراع المنسجمة مع التناول عن طريق غير معوى واحدة أو أكثر من المواد الخافضة للتوتر السطحى الغير ايونية ؛ مشتملة ولكنها غير قاصرة على : ‎polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, Polysorbate-80 (Tween 80), ©‏ ‎Polysorbate-60 (Tween 60), Polysorbate-40 (Tween 40) and‏ ‎Polysorbate-20 (Tween 20), polyoxyethylene alkyl ethers,‏ مشتملة ولكنها غير قاصرة على 58 ‎Brij 35Brij‏ ؛ بالاضافة الى اخرى على سبيل المثال ‎NP40 « Tritonx—114 ¢ 1100-0‏ « 506085 و سال ‎(Pluronic) pluronic‏ ‎dd ٠‏ خافضة للتوتر السطحى غير ايونية ‎Je)‏ سبيل المثال ‎(Pluoronic]2]‏ ؛ وتفضل مكونات ‎polysorbate‏ - 80 عند تركيز من حوالى 720.001 الى حوالى 77 ( يفضل على الأكثر ‎polysorbate ff )70,75 Ja‏ - 50 عند تركيز من حوالى 70.009 الى ‎7١‏ ( ويفضل تقريباً على ‎(SY)‏ فى بعض النماذج ؛ تتضمن صياغة الاختراع واحد أو أكثر من عوامل التثبيت الاضافية المناسبة للتناول عن طريق غير معوى ؛ على سبيل المثال عامل ‎Jia)‏ ‎VO‏ يتضمن مجموعة ‎70١‏ واحدة على الأقل ‎te) ) - SH)‏ سبيل المثال ‎cysteine, N-acetyl‏ ‎cysteine, reduced glutathione, sodium thioglycollate, thiosulfate,‏ ‎monothioglycerol‏ « أو مخاليطه ) بطريقة اخرى او اختيارياً ؛ قد يتم أيضاً تثبيت صياغات التركيب المولد للمناعة المحتوية على المادة الحافظة للاختراع أيضاً عن طريق ازالة الاكسجين من أوعية التخزين ؛ حماية الصياغة من الضوء (على سبيل المثال باستخدام أوعية زجاجية كهرمانية). ‎٠‏ .قد تتضمن صياغات التركيب المولد للمناعة للاختراع المحتوية على ‎sale‏ حافظة واحد أو أكثر من الحاملات أو السواغات المقبولة صيدلانياً ؛ والتى تشتمل على أى سواغ لا يستحث بنفسه الاستجابة المناعية . تشتمل السواغات المناسبة ولكنها غير قاصرة على جزيئات عينية على سبيل المثال بروتينات ؛ ‎polymeric amino acids « polyglycolic acids « polylactic acids « saccharides‏ ‎EAE‏ pr
Paoletti et al, 2001, Vaccine, ) sucrose « ‏بوليمرات تساهمية للحمض الأمينى‎ « ‏سبيل المثال قطرات الزيت . أو‎ Je) ‏؛ وتجمعات الدهون‎ lactose « trehalose « (19:2118 ‏تعتبر تلك الحاملات معروفة جيداً للشخص الماهر. يتم شرح السواغات المقبولة‎ (liposomes : ‏صيدلانياً على سبيل المثال فى‎
Gennaro, 2000, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ° edition, ISBN:0683306472 ‏قد تكون تركيبات الاختراع مجفدة أو فى شكل مائى أى محاليل أو معلقات . قد يتم تناول‎ ‏الصياغات السائلة بشكل مميز بشكل مباشر من شكلها المعبئ وبالتالى تكون مثالية للحقن بدون‎ ‏الحاجة للذوبان فى وسط مائى كما هو ضرورى غير ذلك لتركيبات الاختراع المجفدة. قد يتم‎ ‏تحقيق النقل المباشر للتركيبات المولدة للمناعة للاختراع الحالى للحالة عن طريق التناول الغير‎ ٠ ‏الجلد‎ Jala ‏؛‎ intraperitoneally ‏؛ داخل البريتون‎ intramuscularly ‏معوى (داخل العضلات‎ ‏أوللفراغ‎ ¢ intravenously ‏داخل الوريد‎ ¢ subcutaneously ‏تحت الجلد‎ » intradermally ‏عن طريق‎ coral ‏عن طريق الفم‎ «rectal ‏الخلالى من النسيج ) ؛ أوالتناول عن طريق المستقيم‎ «intranasal ‏الأنف‎ Jala « transdermal ‏عبر الجلد‎ ¢ topical ‏موضعياً‎ « vaginal ‏المهبل‎ ‏عن طريق الرئة أو تناول عبر الطبقة‎ «aural ‏عن طريق الاذن‎ «ocular ‏عن طريق العين‎ VO ‏فى نموذج مفضل » التناول عن طريق غير معوى يكون عن طريق الحقن داخل‎ . AT ‏المخاطية‎ ‏العضلات؛ على سبيل المثال للفخذ أو الذرات العلوى للحالة . قد يكون الحقن عن طريق ابرة (على‎ ‏؛ ولكن قد يستخدم الحقن الخالى من الابر‎ (subcutaneously ‏سبيل المثال ابرة تحت الجلد‎ ‏مل . قد يتم تحضير‎ ١,5 ‏النموذجية هى‎ intramuscularly ‏بشكل آخر. الجرعة داخل العضلات‎ ‏تركيبات الاختراع فى أشكال مختلفة ؛ على سبيل المثال للحقن إما على هيئة محاليل أو معلقات‎ ٠ ‏سائلة. فى بعض النماذج ؛ قد يتم تحضير التركيبات على هيئة مسحوق أو رش للتناول الرثوى‎ ‏على سبيل المثال فى مستنشق . فى نماذج اخرى ؛ قديتم تحضير التركيب على هيئة قمع أو‎ ‏فرزجة ؛ أو للتناول للأنف ؛ الاذن أو العين ؛ على سبيل المثال على هيئة رش ؛ قطرات ؛ جل‎ . ‏أومسحوق‎ ‎EAE
يتم اختيار كمية المقترن فى كل جرعة تركيب مولد للمناعة ‎immunogenic composition‏ على أنها الكمية التى تستحث الاستجابة الحامية المناعية بدون تأثيرات عكسية واضحة. يمكن أن تختلف تلك الكمية اعتماداً على النمط المصلي للمكورات العنقودية . عموماً ؛ تتضمن كل جرعة ‎١‏ الى ‎٠٠١‏ ميكروجم من بولي سكاريد ؛ تحديداً ‎١.١‏ الى ‎٠١‏ ميكروجم ؛ وبشكل اكثر تحديداً ‎١ ©‏ الى © ميكروجم .
قد يتم التحقق من الكميات النموذجية من المكونات لتركيب مولد للمناعة ‎immunogenic‏ ‎Jase composition‏ بواسطة دراسات قياسية تتضمن ملاحظة الاستجابات المناعية ‎AOD‏ فى الحالات . بعد التطعيم الابتدائى ؛ يمكن أن تتلقى الحالات واحدة أو أكثر من التطعيمات المعززة
العديد على فترات متباعدة بشكل كافى التعبئة وأشكال الجرعة .
‎٠‏ .قد يتم تعبئة التركيبات المولدة للمناعة للاختراع فى شكل ‎deja‏ الوحدة أو شكل جرعة متعددة ‎Je)‏ سبيل المثال جرعتين + جرعات أو أكثر) لأشكال الجرعة المتعددة ؛ تكون الزجاجات نموذجية ولكن غير مفضلة بالضرورة عن المحاقن ‎fed)‏ سابقاً . تشتمل أشكال الجرعة المتعددة المناسبة ولكنها غير قاصرة على ‎A)‏ الى أ جرعات لكل ‎leg‏ ء عند ‎٠,١‏ الى ؟ مل لكل جرعة فى ‎an‏ النماذ ‎Nd‏ الجرعة 0,+ ‎ie Je‏ . انظر على سبيل المثال طلب البراءة الدولية رقم
‎. ‏ويبو ؛ المذكور على سبيل المرجع هنا‎ Yoo 7/1 ‏مت حاحا‎ Yo ‏قد يتم تقديم التركيبات فى زجاجات أو أوعية تخزين مناسبة أخرى ؛ أو قد يتم تقديمها فى أجهزة‎ ‏نقل معبئة سابقاً ¢ على سبيل المثال محاقن مفردة أو متعددة . المكونات ؛ والذى قد يتم الحصول‎ ‏عليها ذات أو بدون ابر.‎ ‏يحتوى المحقن بشكل نموذجى ولكن ليس بالضرورة ؛ على جرعة مفردة من المركب المولد للمناعة‎
‎٠‏ المحتوى على المادة الحافظة للاختراع ؛ برغم أن المحاقن متعددة الجرعات المملوءة سابقاً قد يتم تصورها أيضاً . بشكل محتمل ؛ قد تشتمل الزجاجة على جرعة مفردة ولكنها قد تشتمل بشكل آخر على جرعات متعددة . يمكن تعيين أحجام الجرعة الفعالة بشكل روتينى ؛ ولكن الجرعة النموذجية من التركيب للحقن يكون لها حجم 2 مل .
_ A —_
فى بعض النماذج يتم صياغة الجرعة للاعطاء لحالة أدمية . فى ‎ax‏ النماذج يتم صياغة
الجرعة للاعطاء لحالة آدمية لشخص بالغ ؛ ‎Babe‏ ؛ في سن ‎diab)‏ طفل صغير أو طفل (أى
سنة واحدة على الأكثر) وقد يتم تناولها فى نماذج مفضلة عن طريق الحقن .
تعتبر التركيبات المولدة للمناعة السائلة للاختراع مناسبة أيضاً لاذابة التركيبات المولدة للمناعة
© الأخرى والتى يتم تقديمها فى شكل مجفد. حيثما يستخدم التركيب المولد للمناعة لذلك الذوبان
المرتجل ؛ يقدم الاختراع أداة مع اثنين أو أكثر من الزجاجات ؛ اثنين أو أكثر من المحاقن الجا هزة
للتعبئة ‏ أو واحد أو أكثر من كل منهم ¢ مع محتويات المحقن المستخدمة لاذابة محتويات
الزجاجة قبل الحقن أو العكس بالعكس .
بشكل ‎AT‏ ؛ قد يكون تركيبات الاختراع ‎Mall‏ المولد للمناعة مجفدة ومذابة ؛ على سبيل المثال ‎٠‏ باستخدام واحدة من عدد كبير من طرق التجفيف بالتجميد المعروفة جيداً فى المجال لتكوين
جزيئات جافة ؛ منتظمة الشكل (على سبيل المثال كروية) على سبيل حبيبات دقيقة أو كريات
دقيقة ؛ لها خصائص الجزئ على سبيل المثال متوسط مدى القطر المختار والمتحكم فيه عن
طريق تغيير الطرق الدقيقة المستخدمة لتحضيرها .
قد تتضمن التركيبات المولدة للمناعة أيضاً مادة اضافية قد يتم تحضيرها اختيارياً بواسطة أو تكون ‎VO‏ موجودة فى جزيئات جافة ؛ منتظمة الشكل (مثلاً كروية) منفصلة على سبيل ‎JB‏ حبيبات دقيقة
او كريات دقيقة .
فى تلك النماذج ؛ يقدم الاختراع الحالى أيضاً أداة تركيب مولد للمناعة ‎immunogenic‏
‎composition‏ يتضمن مكون اولى يشتمل على تركيب ‎Age‏ للمناعة جاف تم تثبيته ؛ يتضمن
‏اختيارياً أيضاً واحدة أو اكثر من المواد الحافظة للاختراع؛ ومكون ثانى يتضمن محلول مائى معقم ‎٠‏ ا لاوبان المكون الأولى . فى بعض النماذج ؛ يتضمن المحلول المائى واحدة او اكثر من المواد
‏الحافظة ؛ وقد يتضمن اختيارياً ‎sale‏ اضافية واحدة على الأقل (انظر على سبيل المثال طلب
‏البراءة الدولية رقم .00« ‎sug ٠٠ aN‏ (المذكور هنا على سبيل المرجع) .
‏فى نموذج ‎AT‏ أيضاً ؛ يتم اختيار وعاء شكل الجرعة المتعدد من واحدة أو اكثر من المجموعة
‏المكون من ؛ ولكنها غير قاصرة على النظارات المعملية العامة ؛ القوارير ؛ كؤوس ؛ الاسطوانات
‎EAE
‎q —‏ ¢ — المدرجة أوعية تخمير « المفاعلات الحيوية؛ الانابيب ؛ المواسير » الحقائب ؛ المرطبانات ‘ الزجاجات ؛ سدادات الزجاجة (على سبيل المثال سدادة مطاطية ؛ الملولبة على الغطاء) ؛ امبولات ‎٠‏ محاقن ؛ محاقن مزدوجة أو متعدد الحجرات ؛ سدادات للمحقن ؛ مكبس للمحقن ؛ سدادات مطاطية ؛ سدادات بلاستيكية ؛ سدادات زجاجية ؛ خراطيش و أقلام صالحة للاستعمال وماشابه . © لايكون وعاء الاختراع الحالى محدوداً بمادة التصنيع ويشتمل أيضاً على مواد على سبيل المثال
‏الزجاج ؛ المعادن ‎Je)‏ سبيل المثال الصلب ء ‎sal‏ ؛ ‎«aluminum‏ الخ) وبوليمرات (على سبيل المثال اللد اثن الحرارية ايلاستوميرات ايلاستوميرات لدنة بالحرارة ( فى نموذ ج محدد ؛ وعاء التصميم هو عبارة عن وعاء زجاجى من النوع ‎Schott ١‏ سعته © مل مزودة بسدادة بيوتيل يدرك الشخص الماهر فى المجال أن الشكل الموضح سابقاً لايكون بأية حال قائمة شاملة ؛ ولكن
‎٠‏ يعمل فحسب كارشاد للشخص الماهر فيما يتعلق بمختلف الأشكال المتاحة للاختراع الحالى . قد توجد أشكال اضافية متوقع استخدامها فى الاختراع الحالى فى الكتالوجات المنشورة من بائعى الأجهزة المعملية والصانعين على سبيل المثال : ‎United States Plastic Corp. (Lima, OH), VWR‏ طرق تصنيع المقترنات ‎al gall‏ للمناعة
‎Ve‏ يشتمل الاختراع الحالى ‎Lad‏ على طرق تحضير المقترنات المولدة للمناعة الموصوفة هنا. تتضمن طرق تحضير المقترنات المولدة للمناعة للاختراع الاقتران التساهمى لل بولي سكاريدات 605 الكبسولية مع بروتينات الحامل باستخدام كيمياء اقتران تتضمن ‎CDI (1,1-carbonyldiimidazole), CDT (1,1-carboyl-di-1,2,4~triazole) or‏ ‎PDPH (3-(2-pyridyldithio)—propionyl hydrazide).‏
‎٠‏ وفقاً لذلك ؛ يقدم أحد نماذج الاختراع طريقة معتمدة على ‎CDT‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ يتضمن بولي سكاريد كبسولي ‎ball‏ المصلي © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مقترن ببروتين حامل ‎carrier protein‏ ‎٠‏ الطريقة تتضمن خطوات : أ ) تركيب بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مع ‎imidazole‏ أو ‎triazole‏ لانتاج
‎EAE
مه بولي سكاريد مركب ؛ ب) تفاعل بولي سكاريد 7/5800081106ا00المركب مع ‎CDT‏ فى مذيب عضوى ‎organic solvent‏ وحوالى ‎70.١‏ الى حوالى ‎LY‏ و/ ح من الماء لانتاج بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط ؛ ج) تنقية بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ النمشط لانتاج بولي سكاريد كبسولي ‎hall‏ المصلي © أو ‎A‏ منشط نقى ؛ د ) تفاعل بولي © مكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط المنقى مع بروتين حامل فى مذيب عضوى لانتاج مقترن بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ : بروتين ‎dela‏ ؛ و ه) التحلل المائى لمقترن بولي سكاريد الكبسولي النمو المصلي * أو ‎A‏ : البروتين الحامل لازالة مجموعات التنشيط الغير متفاعلة ؛ والتى بواسطتها يتم انتاج مقترن ‎Ase‏ للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ ‎Ged‏ بولي سكاريد كبسولي ‎hall‏ المصلي 5 أو ‎A‏ من المكورات_ العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus 8016005 | ٠‏ مقترن مع بروتين حامل. فى أحد النماذج ؛ قبل ‎sshd‏ (د) ؛ يتم تركيب بولي سكاريد الكبسولي النمط ‎dad‏ © أو 8 المنشط المنقى مع بروتين حامل ‎carrier protein‏ . فى أحد نماذج الاختراع ؛ يتم تقديم طريقة معتمدة على ‎CDT‏ اخرى لتصنيع مقترن ‎alge‏ للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ تتضمن_بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ من ‎Vo‏ المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مقترن بروتين ‎Jala‏ ؛ الطريقة تتضمن خطوات أ ) تركيب بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © أو ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية مع ‎imidazole‏ أو 6ا1820 الانتاج_بولي سكاريد مركب ؛ _ب) تفاعل بولي مكاريد 06 المركب مع ‎CDT‏ فى مذيب عضوى ‎organic solvent‏ وحوالى ‎70.١‏ الى ‎Ja‏ 75,7 و/ح من الماء لانتاج ‎Jo‏ سكاريد كبسولي ‎had A Jo Lad hall‏ ؛ ج ) ‎٠‏ تفاعل بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط مع بروتين حامل فى مذيب عضوى ‎solvent‏ 0980106 _لانتاج مقترن بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © أو +4 : بروتين حامل ؛ و د) التحلل ‎Sl‏ لمقترن بولي سكاريد الكبسولي النمو المصلي © أو ‎A‏ : البروتين الحامل لازالة مجموعات التنشيط ‎pall‏ متفاعلة ؛ ‎Ally‏ بواسطتها يتم انتاج مقترن مولد للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ يتضمن ‎Je‏ مكاريد كبسولي ‎hall‏ المصلي © او 48 من ‎Yo‏ المكورات العنقودية الذهبية مقترن ببروتين حامل. ‎EAE‏
— \ جم فى أحد النماذج ¢ مذيب عضوى داخل الطرق المعتمدة على ‎CDT‏ لتحضير مقترن ‎alge‏ للمناعة ‎cule immunogenic conjugate‏ لابروتونى قطبى ‎polar aprotic solvent‏ .. فى أحد النماذج ؛ مذيب عضوى ‎solvent‏ 0980106 هو مذيب لابروتونى قطبى مختار من المجموعة المكونة من : ‎dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide, ©‏ ‎N-methyl-2-pyrrolidone, and hexamethylphosphoramide (HMPA).‏ فى أحد النماذج ¢ تتضمن خطوة تفاعل ‎dg‏ سكاريد ‎oS )alipolysaccharide‏ مع ‎CDT‏ داخل الطرق المعتمدة على ‎CDT‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة تقديم زيادة جزيئية مرتين من ‎CDT‏ ‏مقارنة ببولي سكاريد. فى أحد النماذج ؛ تتضمن خطوة تنقية بولي سكاريد الكبسولي النمط ‎٠‏ المصلي © أو ‎A‏ المنشط داخل الطرق المعتمدة على ‎CDT‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ . فى أحد النماذج ¢ البروتين الحامل ‎carrier protein‏ داخل الطرق المعتمدة على ‎CDT‏ لتحضير مقترن مناعى هو 080/197 . فى أحد النماذج ؛ بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي للنمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط داخل طرق تحضير المقترن المولد للمناعة يتفاعل مع ‎CRM197‏ ‎٠5‏ فى نسبة بالوزن حوالى ‎١ :١‏ . فى أحد النماذج ؛ خطوة التحليل المائى ‎otal‏ بولي سكاريد النمط المصلي * أو + : البروتين الحامل ‎carrier protein‏ لازالة مجموعات التنشيط الغير متفاعلة داخل الطرق المعتمدة على ‎CDT‏ لتحضير مقترن ‎alge‏ للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ تتضمن التخفيف فى محلول منظم والحفاظ على ‎pH‏ حوالى ‎AA‏ الى حوالى 4,7 لمدة ؛ ساعات على الأقل عند حوالى ‎٠ 7٠‏ ع الى حوالى كام . فى أحد النماذج ؛ تتضمن خطوة التحلل ‎Ald‏ لمقترن بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي 0 أو ‎tA‏ البروتين الحامل التخفيف فى محلول منظم والحفاظ على ‎PH‏ حوالى ‎٠,٠‏ لمدة ؛ ساعات على الأقل عند حوالى ‎Ca YY‏ ‎EAE‏
— \ جم فى أحد النماذج ؛ يتم تنقية مقترن بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © أو ‎tA‏ البروتين الحامل الناتج وفقاً لطرق معتمدة على 607 لتحضير المقترن المولد للمناعة . فى أحد النماذج ؛ تتضمن تنقية مقترن بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © أو ‎tA‏ البروتين الحامل الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ . ‎oo‏ فى ‎wf‏ النماذج ؛ قبل تفاعل بولي سكاريد المركب مع ‎CDT‏ فى الطرق المعتمدة على ‎CDT‏ ‏لتحضير مقترن مولد للمناعة ‎«immunogenic conjugate‏ يتم تجفيد بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © أو 8: المركب واعادة تعليقه . فى أحد النماذج ؛ يتم تجفيد كل من بولي سكاريد المركب والبروتين ‎carrier protein Jalal)‏ بشكل منفصل واعادة تعليقهما قبل التفاعل للبولي سكاريد المركب مع ‎CDT‏ . فى أحد النماذج ؛ ‎Yo‏ يتم اعادة تعليق بولي سكاريد المركب المجفد و/ أو البروتين الحامل المجفد فى مذيب عضوى ‎organic solvent‏ . فى أحد النماذج ؛ المذيب عضوى هو ‎DMSO‏ . فى أحد النماذج ؛ قبل ‎dels‏ بولي سكاريد الكبسولي النمط 0 أو ‎A‏ المنشط المركب مع بروتين حامل ‎carrier protein‏ فى الطريقة المعتمدة على ‎CDT‏ لتحضير مقترن مناعى ؛ يتم تجفيد بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط المنقى والبروتين الحامل واعادة تعليقهما ‎Vo‏ بشكل منفصل . فى أحد النماذج ؛ البروتين الحامل هو ‎CRM197‏ وقبل تجفيد ‎CRM197‏ يتم ترشيحه بالديلزة ضد ‎NaCl‏ . فى أحد النماذج ؛ قبل تجفيد 141/1197 يتم الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ ضد ‎NaCl‏ ويتم ضبط نسبة و/ و ل ‎[NaCl‏ /ل4ا) الى حوالى ‎Mee‏ حوالى ‎٠*9‏ . يقدم أحد نماذج الاختراع ‎Jal‏ طريقة معتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة ‎immunogenic conjugate | ٠‏ يتضمن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو + من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مقترن ببروتين حامل ‎carrier protein‏ » الطريقة تتضمن خطوات : أ ) تفاعل بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو 48 من المكورات العنقودية الذهبية مع ‎PDPH‏ وكربو ثانى ايميد فى ‎cule‏ عضوى ‎organic solvent‏ لانتاج بولي سكاريد مرتبط مع ‎PDPH‏ ؛ ب) تفاعل بولي سكاريد المرتبط مع ‎PDPH‏ مع عامل ‎EAE‏
-." جم اختزال لانتاج بولي سكاريد منشط ؛ ج) تنقية بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو 8 المنشط لانتاج بولي سكاريد كبسولي ‎hall‏ المصلي © او ‎A‏ المنشط المنقى ؛ د) تفاعل بروتين خامل مع ‎bromoacetic acid‏ فى مذيب عضوى ‎organic solvent‏ لانتاج بروتين حامل ‎carrier protein‏ منشط ؛ ه) تنقية البروتين الحامل المنشط لانتاج بروتين حامل ‎carrier‏ ‎protein ©‏ منشط منقى ؛ و ) تفاعل بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط المنقى مع بروتين ‎Jala‏ منشط منقى لانتاج مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو 8 : بروتين ‎dela‏ ؛ و ز ) تجفيد مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط ‎ad‏ © أو ‎A‏ : بروتين حامل لازالة مجموعات التنشيط الغير متفاعلة ؛ وبالتالى يتم انتاج مقترن ‎alge‏ للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ يتضمن بولي سكاريد كبسولي ‎ball‏ المصلي © أو ‎A‏ من ‎٠‏ المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ مقترن ببروتين حامل. فى أحد النماذج ؛ ‎bromoacetic acid‏ المستخدم فى الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير المقترن المولد للمناعة هو ‎N-hydroxysuccinimide ester of bromoacetic acid‏ ‎(BAANS).‏ فى أحد النماذج ¢ البروتين الحامل المستخدم فى الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ ‏للاختراع هو 040/197 « ويتم اضافة ‎BAANS‏ فى نسبة 040/197 : ‎BAANS‏ بالوزن من ‎Ney : ١ des Vo‏ حوالى ‎ord‏ ‏فى أحد النماذج ؛ مذيب عضوى ‎organic solvent‏ فى الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ هو ‎cule‏ لابروتونى قطبى ‎polar aprotic‏ ‎solvent‏ . فى أحد النماذج ؛ مذيب عضوى ‎organic solvent‏ هو مذيب لابروتونى قطبى ‎polar‏ ‎aprotic solvent ٠‏ مختار من المجموعة المكونة من ‎DMSO, DMF,‏ ‎.dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, and HMPA‏ فى أحد النماذج ¢ مذيب عضوى ‎organic solvent‏ هو ‎.DMSO‏ فى أحد النماذج ؛ 06 المستخدم فى الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ هو : ‎EAE‏
— جم ‎1-Ethyl-3—(3—dimethylaminopropyl)-carbodiimide (EDAC)‏ . فى أحد النماذج ؛ خطوة تفاعل بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ مع ‎PDPH‏ و ‎EDAC‏ فى مذيب عضوى ‎organic solvent‏ تتضمن الحفاظ على نسبة بولي سكاريد : ‎EDAC : PDPH‏ بالوزن حوالى ‎١‏ : 5 : ؟ © فى أحد النماذج ؛ عامل الاختزال المستخدم فى الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير المقترن المولد للمناعة هو ‎dithiothreitol (DTT)‏ فى أحد النماذج ؛ خطوة تنقية بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي * أو ‎A‏ المنشط وتنقية البروتين الحامل داخل الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة كل منها يتضمن الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ . ‎٠‏ فى أحد النماذج ؛ البروتين الحامل ‎carrier protein‏ داخل الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ ‏لتحضير المقترن المولد للمناعة هى ‎CRM197‏ . فى أحد النماذج ؛ ‎deli‏ بولي سكاريد ‎hall‏ المصلي © أو ‎A‏ المنشط داخل طرق تحضير المقترن المولد للمناعة مع 041/197 فى نسبة بالوزن حوالى ‎١ : ١‏ . فى أحد النماذج ؛ خطوة التحلل ‎otal Sl‏ بولي سكاريد ‎hall‏ المصلي © أو 8: البروتين ‎Vo‏ الحامل ‎AY‏ مجموعات التنشيط الغير متفاعلة داخل الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير ¢ مقترن مولد للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ تتضمن اضافة ‎cysteamine‏ ‎hydrochloride‏ . فى أحد النماذج ؛ يتم تنقية مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ : البروتين الحامل الناتج وفقاً لطرق معتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة. فى أحد النماذج ¢ ‎٠‏ تتضمن تنقية مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ : البروتين الحامل الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ . فى أحد النماذج ؛ قبل ‎dels‏ بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © أو ‎A‏ المنشط المنقى مع البروتين الحامل المنشط المنقى فى الطرق المعتمدة على ‎PDPH‏ لتحضير مقترن مولد للمناعة ؛ ‎EAE‏
كل من بولي سكاريد المنشط المنقى والبروتين ‎carrier protein Jalal‏ المنشط المنقى يتم تجفيدها واعادة تعليقهما . فى أحد النماذج ؛ يتم اعادة تعليق بولي سكاريد المنشط المجفد و/ أو البروتين الحامل المنشط © كما استخدم هنا ؛ يعنى " تجفيد " عملية نزع الماء حيث يتم تجميد بولي سكاريد الكبسولي البكتيرى بينما يتم خفض الضغط المحيط فى وجود حرارة كافية للسماح للماء المتجمد بالتسامى مباشرة من الطور الصلب الى الطور الغاز. يمكن استخدام أى طريقة معروفة فى المجال لتجفيد بولي سكاريد . انظر على سبيل المثال : ‎Harris & Angal (1989) "Protein Purification Methods," In: Kennedy &‏ ل ‎Cabral, eds. "Recovery Processes for Biological Materials’ (John Wiley‏ ‎Sons; 1993)‏ طلب براءة الولايات المتحدة رقم ‎49٠747146‏ ؛ وطلب البراءة الدولية رقم ‎INtT Yoo ¥/eATEYY‏ ؛» كل منهم مذكور على سبيل المرجع كما وضح فى حد ذاته. اختيارياً + يمكن تضمين المادة الحامية من البرودة أثناء التجفيد ¢ على سبيل المثال مثلاً : ‎sucrose, glucose, lactose, trehalose, arabinose, xylose, galactose, sorbitol Vo‏ ‎.or mannitol‏ كما استخدم هنا ؛ يعنى " ينشط ” و " تنشيط ” أن بولي سكاريد الكبسولي البكتيرى أو البروتين الحامل ‎carrier protein‏ يتم تعديله بحيث يتم جعله عرضة للاقتران ‎of)‏ يجب جعل شق واحد على الأقل قادر على الارتباط تساهمياً بالجزئ الحامل) . على سبيل المثال ؛ ‎Led‏ يتعلق بطرق ‎Ye‏ الاقتران المعتمدة على ‎CDT‏ للاختراع الحالى ؛ يتم تنشيط بولي سكاريد فى وسط منخفض الرطوبة (على سبيل المثال فى ‎(DMSO‏ لتكوين شقوق ‎ae triazole carbamate‏ شقوق ‎hydroxyls‏ و ‎4atidl acyltriazole‏ مع ‎carboxylic acids‏ . قد تتفاعل بولي سكاريدات المنشطة عندئذ مع ‎carboxylic acids‏ . قد تتفاعل بولي سكاريدات المنشطة عندئذ مع بروتين 7 ؛ مما يؤدى الى استبدال ‎nucleophilic‏ لذ ‎triazole‏ بواسطة متبقيات ‎Jalalysine‏ ‎EAE‏
-1ه- ‎CRM197‏ وتكون رابط ‎hydroxyls) carbamate‏ المنشطة) ورابط اميد ‎carboxylic acids)‏ المنشطة) . على العكس؛ فيما يتعلق بطرق الاقتران المعتمدة على ‎PDPH‏ للاختراع الحالى ؛ يتم تنشيط كل من بروتينات الحامل و بولي سكاريد قبل الاقتران : ‎)١‏ يتضمن تنشيط 081/197 ادخال مجموعات ‎bromoacetyl‏ فى بروتين ‎CRM197‏ عن طريق تفاعل مجموعات ‎amine‏ ‏٠ه ‎with N-hydroxysuccimide ester of bromoacetic acid‏ ؛ و ‎(Y‏ تنشيط بولي سكاريد يتضمن ازدواج ‎carbodiimide‏ - مجموعات ‎carboxylate‏ المنشطة ل ‎N-acetylmannosaminouronic‏ .8610 فى بولي سكاريد لمجموعة ‎hydrazide‏ لرابط ثنائى المجموعة الوظيفية غير متجانس ‎hydrazide‏ المتفاعل مع ‎PDPH sulfhydryl‏ « متبوعاً بالاختزال بواسطة ‎DTT‏ قد تتفاعل بولي سكاريد المنشطة عندئذ مع بروتين ‎carrier Jala‏ ‎protein Ve‏ منشط بحيث تتفاعل ‎thiols‏ بولي سكاريد المضاف لها ‎thiol PDPH‏ مع مجموعات ‎(yi yl) bromoacetyl‏ الحامل ‎carrier protein‏ المنشط مما ينتج عنه رابط ثيواثير تساهمى متكون بواسطة استبدال ‎bromide‏ . وفقاً لطرق الاختراع ؛ قد يتم تنقية بولي سكاريدات الكبسولية ؛ بروتينات الحامل ؛ و/أو مقترنات بولي سكاريد ‎oid‏ يمكن استخدام أى طريقة معروفة فى المجال لتنقية بولي سكاريد أو ‎١5‏ البروتينات ؛ على سبيل المثال التركيز / الترشيح بالديازة ‏ الترسيب/ الترويق + المعالجة بكروماتوجراف عمود ترشيح العمق . انظر على سبيل المثال : ‎Farrés etal. (1996) Biotechnol.
Tech. 10:375-380: 60098765 et al.
In:‏ ‎Communicating Current Research and Educational Topics and Trends in‏ ‎Applied Microbiology (Antonio Mendez Vilas, ed. 1st ed.
Badajoz,‏ ‎Espanha: Formatex; 2007. pp.450-457); Tanizaki et al. (1996) J. ٠٠٠‏ ‎Microbiol.
Methods 27:19-23‏ وطلب براءة_الولايات المتحدة رقم 1147195607؛ وطلب براؤة_الولايات المتحدة رقم ‎YATAYA/Y 00 A‏ ؛ كل منهم مذكور هنا على سبيل المرجع كما لو تم توضيحه فى حد ذاته. ‎EAE‏
لان كما استخدم هنا ؛ يعنى المصطلح " معزول " أو " منقى " أن المادة يتم ازالتها من بيئتها الأصلية (على سبيل المثال البيئة الطبيعية . اذا كانت تنشأ بشكل طبيعى أو من كائنها العائل اذا كانت عبارة عن شكل مستنسخ ؛ أومأخوذة من احدى البيئات لبيئة مختلفة ) على سبيل المثال + بولي سكاريد ؛ الببتيد أو البروتين المعزول يكون خالى فعلياً من ‎sale‏ خلوية أو بروتينات ملوثة اخرى ‎٠5‏ من الخلية أو مصدر النسيج الذى منه اشتق البروتين ؛ أو خالى فعلياً من مواد مكونة كيميائية أو مواد كيميائية أخرى عند التخليق كيميائياً أو غير ذلك الموجودة فى خليط كجزء من تفاعل كيميائى فى الاختراع الحالى ؛ يمكن عزل البروتين أو بولي سكاريد من الخلية البكتيرية أو من بقايا خلوية » لذلك يتم تقديمها فى شكل مفيد فى تصنيع التركيب المولد للمناعة . قد يشتمل المصطلح " معزول ” أو ‎Jie"‏ " على تنقية ؛ أو التنقية ؛ مشتملة على سبيل المثال ‎Vo‏ على طرق تنقية بولي سكاريد الكبسولي ؛ كما وصف هنا. يشتمل التعبير " خالى فعلياً من المادة الخلوية " على مستحضرات بولي سكاريد / بولي ببيتيدات ‎polypeptide‏ / البروتين ‎dus‏ يتم فصل بولي سكاريد / ‎polypeptide‏ / البروتين من مكونات خلوية للخلايا ‎Al‏ منها تم عزله أو انتاجه بشكل مستنسخ. هكذا ¢ يشتمل ‎polypeptide‏ / البروتين © بولي سكاريد؛ أو المقترن الحالى فعلياً من ‎sale‏ خلوية أو مركبات اخرى على مستحضرات ‎polypeptide‏ / البروتين ؛ بولي مكاريد؛ أو مقترن له ‎ARE FIA FIA RIYA SEPIA RIN PONS‏ (بالوزن الجاف) من البروتين الملوث + بولي سكاريدات أو مركبات اخرى. عندما يتم انتاج ‎polypeptide‏ / البروتين بشكل مستنسخ ؛ يفضل أن يكون خالى فعلياً من وسط الزراعة ؛ أى يمثل ربط الزراعة أقل من حوالى ‎101١ » 77١8‏ 75 » 74 77 » 27 أو ‎72١‏ من ‎aaa‏ مستحضر البروتين . عندما يتم انتاج ‎polypeptide‏ / البروتين أو بولي سكاريد بواسطة ‎٠‏ تخليق كيميائى ؛ يفضل أن يكون خالى فعلياً من المواد المكونة الكيميائية أو مواد كيميائية اخرى ؛ أى يتم فصلها من مواد مكونة كيميائية أو مواد كيميائية اخرى تكون متضمنة فى تخليق البروتين أو بولي سكاريد . وفقاً لذلك ؛ تلك المستحضرات من ‎[polypeptide‏ البروتين أو بولي سكاريد لها أقل من حوالى 778 6 6770 ‎cdo XY‏ 724 27 27 أو ‎ZY‏ (بالوزن الجاف) من المواد المكونة الكيميائية أو مركبات غير ‎polypeptide‏ / البروتين أو قطعة بولي سكاريدات © المعنية. ‎EAE‏
—oA- ‏قد يتم تخزين المقترنات المولدة للمناعة الناتجة بواسطة أى من الطرق الموصوفة هنا فى ماء أو‎ ‏أو التجفيد فى مسحوق‎ onic strength ‏متعادل منخفض الشدة الايونية‎ pH ‏محلول منظم‎ ‏جاف.‎ ‏طرق استحتثاث استجابة مناعية والحماية ضد عدوى المكورات العنقودية الذهبية‎ ‏يشتمل الاختراع الحالى أيضاً على طرق استخدام تركيبات مولدة‎ Staphylococcus aureus © ‏للمناعة موصوفة هنا. على سبيل المثال ؛ يقدم أحد نماذج الاختراع طريقة استحثاث استجابة‎ ‏مناعة ضد المكورات العنقودية الذهبية تتضمن اعطاء الخاضع للعلاج كمية مولدة للمناعة من أى‎ ‏من التركيبات المولدة للمناعة الموصوفة هنا. يقدم أحد نماذج الاختراع طريقة حماية الخاضع‎ ‏.5؛ أو طريقة تقليل‎ aureus ye ‏.5؛ أو طريقة منع‎ aureus ‏للعلاج ضد العدوى بواسطة‎ ‏.5؛ الطرق‎ aureus ‏حدة أو تأخير بداية عرض واحد على الأقل مرتبط بالعدوى الناتجة عن‎ ٠ ‏تتضمن اعطاء الخاضع للعلاج كمية مولدة للمناعة من أى من التركيبات المولدة للمناعة‎ ‏الموصوفة هنا . يقدم أحد نماذج الاختراع طريقة لعلاج أو منع عدوى متعلقة بالمكورات العنقودية‎ ‏فى تديى‎ Staphylococcus sp. ‏مرتبطة ب‎ Ala ‏مرض أو‎ Staphylococcal infections ‏من تركيب مولد للمناعة‎ WE, ‏أو‎ ladle ‏الطريقة تتضمن خطوة اعطاء كمية فعالة‎ ٠» ‏موصوف هنا للخاضع للعلاج . فى بعض النماذج ؛‎ immunogenic composition ١٠ ‏تتضمن طريقة علاج أو منع عدوى ؛ مرض او حالة متعلقة بالمكورات العنقودية المعالجة الآدمية‎ ‏مرض أو حالة‎ ٠ ‏البيطرية ؛ الحيوانية أو الزراعية . يقدم نموذج آخر طريقة لعلاج أو منع عدوى‎ » ‏فى خاضع للعلاج ؛ الطريقة‎ Staphylococcus sp. ‏متعلقة بالمكورات العنقودية مرتبط ب‎ ‏تتضمن انتاج مستحضر جسم مضاد عديد النسخ أو احادى النسخ من التركيب المولد للمناعة‎ ‏الموصوف هنا ؛ واستخدام مستحضر الجسم المضاد المذكور ليعطى مناعة سلبية للخاضع‎ Ye ‏يخضع‎ of ‏للعلاج . يقدم أحد نماذج الاختراع طريقة منع عدوى متعلقة بالمكورات العنقودية فى‎ ‏لعملية جراحية ؛ الطريقة تتضمن خطوة اعطاء كمية فعالة وقائياً من التركيب المولد للمناعة‎ ‏الموصوف هنا للخاضع للعلاج قبل العملية الجراحية.‎ ‏أو التركيب المولد للمناعة هي تطوير الحالة للاستجابة المناعية‎ antigen " ‏الاستجابة المناعية‎ " ‏اللقاح المعنى.‎ antigen ‏الخلطية و/ أو الناشئة عن الخلية للجزيئات الموجودة فى تركيب‎ Yo
EAE oh ‏لأغراض الاختراع الحالى ؛ " الاستجابة المناعية الخلفية " هى استجابة مناعية ناشئة عن الجسم‎ ‏المضاد وتتضمن استحثاث وانتاج أجسام مضادة تتعرف على وترتبط مع بعض الميل للربط ب‎ " ‏فى التركيب المولد للمناعة للاختراع ؛ بينما " الاستجابة المناية الناشئة عن الخلية‎ antigen ‏الناشئة عن خلايا آ و/أو خلايا الدم البيضاء الأخرى . تظهر "الاستجابة المناعية الناشئة عن‎ a ‏الأولى أو‎ ١ ‏اتحاداً مع جزيئات المجموعة‎ antigen epitope ‏الخلية " عن طريق تقديم‎ 0
MHC ‏أو مركبات تشبه‎ 601 » (MHC) ‏المجموعة الثانية اا لمركب الانسجام النسيجى الرئيسى‎
Wall ‏أو‎ antigen ‏الخاصة ب‎ CD4+T ‏غير نمطية أاخرى . تنشط هذه الخلايا المساعدة‎ ‏لها تخصص 2019605 _الببتيد التى يتم‎ CTLs .) " 011 "( 0008+ ‏السامة للخلية‎ T ‏الليمفية‎ ‏تقديمها اتحاداً مع البروتينات المشفرة بواسطة 1/1105 النمطية أو اللانمطية والممثلة على أسطح‎ ‏فى استحثاث وتعزيز التدمير داخل الخلايا للميكروبات داخل الخلية ؛ أو‎ CTLs ‏تساعد‎ WAN Vy ‏تحلل الخلايا المصابة بتلك الميكروبات . يتضمن جانب آخر للمناعة الخلوية الاستجابة الخاصة ب‎ ‏بواسطة خلايا 1 المساعدة . تعمل الخلايا المساعدة على المساعدة فى تنبيه وظيفة ؛‎ 007 ‏أخرى اتحاداً‎ antigens ‏تظهر ببتيد أو‎ WIA ‏وتركيز نشاط الخلايا المؤثرة الغير متخصصة ضد‎ " ‏نمطية أولانمطية على سطحها . تشير " استجابة مناعية ناشئة عن الخلية‎ MHC ‏مع جزيئات‎
T ‏؛ الكيموكانيات وتلك الجزيئات الأخرى الناتجة بواسطة خلايا‎ cytokines ‏أيضاً الى انتاج‎ Vo 008+ ‏و‎ CD4+T ‏المنشطة و/ أو خلايا دم بيضاء أخرى ؛ مشتملة على تلك المشتقة من خلايا‎ ‏أو تركيب محدد على تنبيه الاستجابة المناعية الناشئة عن الخلية‎ antigen ‏قد يتم تعيين قدرة‎ ٠ ‏بواسطة عدد من الاختبارات ؛ على سبيل المثال اختبارات التكاثر الليمفى (تنشيط الخلية الليمفية)‎ 801980 ‏الخاصة ب‎ T ‏؛ عن طريق التقييم للخلايا الليمفية‎ CTL ‏اختبارات الخلية السامة للخلية‎ ‏استجابة لاعادة‎ TOA ‏بواسطة‎ cytokine ‏منبهة للاحساس ¢ أو عن طريق قياس انتاج‎ dla ‏فى‎ ٠٠ ‏تعتبر تلك الاختبارات معروفة جيداً فى المجال. انظر على سبيل‎ . antigen ‏التنبيه بواسطة‎ : JE
Erickson et al. (1993) J. Immunol. 151:4189-4199; and Doe et al. (1994) Eur. J. Immunol. 24:2369-2376
EAE
ل كما استخدم هنا ؛ يعنى ‎"dallas"‏ (مشتملة على الأشكال المختلفة منها على سبيل المثال " يعالج " أو " معالج " ) أى واحد أو أكثر ممايلى : ‎)١(‏ منع العدوى أو تكرار ‎pall‏ كما فى اللقاح التجارى » ‎(Y)‏ تقليل حدة ؛ أو ¢ ازالة الأعراض ؛ و(©) الازالة الفعلية أو الكاملة لسبب المرض أو الاضطراب الذى نحن بصدده . هكذا ؛ المعالجة قد تكون وقائياً (قبل العدوى) أو علاجياً (بعد العدوى) . فى الاختراع الحالى ؛ المعالجة الوقائية هى الطريقة المفضلة . وفقاً لنموذج محدد للاختراع الحالى ؛ يتم تقديم تركيبات وطرق تعالج ؛ مشتملة على التطعيم الوقاثئى 0 و/ أو العلاجى لحيوان عائل ضد عدوى ميكروبية (على سبيل المثال بكتريا ‎Sie‏ ‎Staphylococcus‏ ) . تعتبر طرق الاختراع الحالى ‎mid sade‏ المناعة الوقائية و/ أو العلاجية للخاضع للعلاج . يمكن أيضاً تطبيق طرق الاختراع الحالى أيضاً على الخاضعين للمعالجة ‎٠‏ الاستخدامات البحث الطبى الحيوى. كما استخدم هنا ؛ يعنى ” ثديى ” حيوان آدمى أو غير آدمى . بشكل أكثر تحديداً ؛ يشير تديى الى أى حيوان يتم تصنيفه على أنه ثديى ؛ مشتملاً على الآدميين ؛ وحيوانات المزارع ؛ حديقة الحيوان » حيوانات الرياضة والمرافقة الأليفة على سبيل المثال الحيوانات الأليفة المنزلية والحيوانات المستأنسة الأخرى مشتملة ولكنها غير قاصرة على الماشية ؛ الخراف ؛ ابن مقرض الخنازير ؛ ‎١‏ الجياد ؛ الأرانب ؛ الماعز » الكلاب ؛ القطط » وماشابه . الحيوانات المرافقة المفضلة هى الكلاب والقطط . بشكل مفضل ؛ الخاضع للعلاج هو الانسان. تشير " كمية مولدة للمناعة " و" كمية فعالة مناعياً " كل منهما يستخدم بصورة متبادلة الى كمية ‎antigen‏ التركيب المولد للمناعة الكافية لاظهار استجابة مناعية ؛ إما استجابة خلوية (الخلية آ ) أو خلطية (خلية 8 أو جسم مضاد ) ؛ أو كلاهما ؛ كما قيس بواسطة اختبارات قياسية ‎٠‏ معروفة لأحد الماهرين فى المجال. يتم حساب كميات المقترن المحدد فى التركيب عموماً اعتماداً على بولي سكاريدات الكلى ؛ المقترن والغير مقترن بالمقترن. على سبيل المثال مقترن 005 الذى به ‎77٠0‏ بولي سكاريد حر له حوالى ‎Av‏ ميكرو جم من بولي سكاريد ‎CPS‏ المقترن وحوالى ‎٠١‏ ميكرو جم من بولي سكاريد ‎CPS‏ الغير مقترن من ‎٠٠١‏ ميكرو جم من جرعة بولي سكاريد 005. لايتم أخذ توزيع البروتين ‎EAE‏
Cy ‏فى الاعتبار عند حساب جرعة المقترن. يمكن أن تختلف كمية المقترن اعتماداً على‎ sale ‏للمقترن‎ ‏عموماً ¢ تتضمن‎ . Staphylococcal infections ‏النمط المصلي المتعلق بالمكورات العنقودية‎ ‏ميكرو جم ؛ وبشكل‎ ٠١ ‏الى‎ ١١ ‏ميكرو جم من بولي سكاريد ؛ تحديداً‎ ٠٠١ ‏الى‎ ١ ‏كل جرعة‎ ‏ميكرو جم . قد تختلف ” الكمية المولدة للمناعة " لمكونات بولي‎ ٠١ ‏الى‎ ١ ‏أكثر تحديداً‎ ‏مسكاريدات المختلفة فى التركيب المولد للمناعة ؛ وكل منها يتضمن١ ميكرو جم ؛ 7 ميكرو جم ؛‎ © 1 ‏ميكرو جم ؛ ا ميكرو جم ؛ 4 ميكرو جم‎ ١ © ‏جم ؛ © ميكرو جم‎ Set © ‏ميكرو جم‎ T ‏ميكرو جم ؛ 560 ميكرو جم‎ 7١0 ‏ميكرو جم ؛‎ 5١ ‏ميكرو جم ؛‎ ١5 ‏ميكرو جم ؛‎ ٠١ ‏ميكرو جم ؛‎ ‏ميكرو جم ؛ أو حوالي‎ ٠0 ‏ميكرو جم ؛ 60 ميكرو جم ؛‎ ١٠١ ‏ميكرو جم ؛‎ ٠١ ‏ميكرو جم ؛‎ on . ‏ميكرو جم لأى 0 بولي مكاريد محدد‎ ٠ ‏المرض الغزوى ” للعنقودية الذهبية هو عزل البكتريا من موضع معقم بشكل طبيعى ؛ حيث‎ ” ٠ . ‏توجد علامات / أعراض اكلينيكية مرتبطة للمرض‎ ‏؛ الساثل البلورى ؛ السائل التاموري‎ CSF ‏تشتمل مواضع الجسم المعقمة بشكل طبيعى على الدم ؛‎ ‏؛ عظام ؛ موضع الجسم الداخلى (العقدة الليمفية ؛‎ JN) / ‏مفصلى‎ ile ‏السائل البريتونى ؛‎ +» ‏المخ ؛ القلب ؛ الكبد ؛ الطحال ؛ السائل الزجاجى ؛ الكلية ؛ البنكرياس ؛ المبيض ) أو مواضع‎ ‏معقمة بشكل طبيعى اخرى . تشتمل الحالات الاكلينيكية التى تميز الأمراض الغزوية على تجرثم‎ ١ ‏؛ داء‎ osteomyelitis ‏الدم ؛ الالتهاب الرثوى ؛ التهاب النسيج الخلالي ؛ التهاب نخاع العظم‎ . ‏بطانة القلب ؛ الصدمة الخمجية وأكثر‎ ‏كمولد المناعة إما عن طريق اختبارات التكاثر ؛ عن طريق‎ antigen ‏يمكن قياس فاعلية‎ ‏اختبارات تحلل الخلية ؛ على سبيل المثال اختبارات انبعاث الكروم لقياس قدرة الخلية 1 على‎ ‏تتحليل الخلية المستهدفة الخاصة بها ؛ أو عن طريق قياس مستويات نشاط خلية 8 عن طريق‎ ٠ ‏قياس مستويات الأجسام المضادة فى الدورة الدموية الخاصة ب 801960 فى المصل. قد يتم‎ ‏أيضاً الكشف عن الاستجابة المناعية عن طريق قياس مستويات المصل للجسم المضاد الخاص‎ ‏وبشكل خاص أكثر ؛ عن طريق قياس قدرة‎ «antigen ‏المستحث بعد تناول‎ antigen ‏ب‎ ‎opsonophagocytic ‏الأجسام المضادة المستحثة بذلك لتعزيز القدرة على الالتهام الأبسوني‎ ‏الاستجابة المناعية عن‎ lea ‏الخلايا الدم البيضاء المحدة ؛ كما وصف هنا . قد يتم قياس مستوى‎ Yo
ENE ty antigen ‏.تم اعطائه . على سبيل المثال ؛ اذا كان‎ antigen ‏طريق حقن العائل المطعم بواسطة‎ ‏التى تكون الاستجابة المناعية مرغوبة له هو البكتريا ؛ يتم قياس مستوى الحماية المستحث بواسطة‎ shall ad ‏عن طريق الكشف عن النسبة المثوية للبقاء على‎ antigen ‏الكمية المولدة للمناعة لل‎ ‏أو نسبة الوفاة بعد حقن الحيوانات بواسطة الخلايا البكتيرية . فى أحد النماذج ؛ قد يتم قياس كمية‎ ‏الحماية عن طريق قياس عرض واحد على الأقل مرتبط بالعدوى البكتيرية ؛ على سبيل المثال‎ 0 ‏لقاح أو التركيبات المولدة للمناعة‎ 3 antigens ‏حمى مرتبطة بالعدوى . تختلف كمية كل من‎ ‏ويمكن تعيينها‎ GAY) ‏من المكونات‎ JS Gly lad ‏أو متعددة المكونات‎ antigen ‏متعددة‎ ‏بواسطة طرق معروفة للشخص الماهر . تشتمل تلك الطرق على طرق قياس خاصية توليد المناعة‎ 770 ‏فى بعض النماذج ؛ يعنى المصطلح " حوالى ” داخل‎ . all ‏و/ أو الكفاءة داخل الجسم‎
Jo ‏؛ وبشكل أكثر تفضيلاً داخل‎ 7٠١ ‏بشكل مفضل داخل‎ ٠ ‏يوفر الاختراع الحالي أجسام مضادة وتركيبات جسم مضاد ترتبط بشكل محدد وعلى نحو انتقائي‎ ‏من بولي سكاريدات المغلفة أو المترافقات المناعية الخاصة بالاختراع‎ A ‏بالأنواع الصلية © أو‎ ‏الدالي. وفي بعض النماذج» يتم توليد الأجسام المضادة عند إعطاؤها لخاضع للعاج من الأنواع‎ ‏المصلية © أو 8 من بولي سكاريدات أو المترافقات المناعية من الاختراع الحالي. في بعض‎ ‏النماذج؛ يوفر الاختراع أجسام مضادة معزولة تمت تنقيتها يتم توجيهها لمضادة واحد أو أكثر من‎ Ve ‏من بولي سكاريدات المغلفة أو المترافقات المولدة للمناعة الخاصة‎ A ‏الأنواع المصلية © أو‎ ‏بالاختراع الحالي. في بعض النماذج؛ تكون الأجسام المضادة من الاختراع الحالي فعالة كما يتم‎ ‏قياس ذلك من خلال البكتريا القاتلة سواء أكان ذلك في نموذج الفعالية الخاص بالحيوان أو من‎ ‏في بعض النماذج؛ تمنح الأجسام‎ . Opsonophagocytic ‏خلال اختبار القتل بالالتهام الأبسوني‎ ‏المضادة الخاصة بالاختراع مناعة كبيرة للخاضع للعلاج. يوفر الاختراع الحالي أيضاً جزيئات‎ ٠
Jie) ‏بولي نيوكليوتيد تشفر جسم مضاد أو شظية جسم مضاد من الاختراع؛ وخلية وسلالة خلية‎ ‏خلايا الورم الهجين أو أي سلالات خلية أخرى تم تعديلها فيما يتعلق بالإنتاج الخاص بناتج عودة‎ ‏الارتباط من الأجسام المضادة) أو الحيوانات التي تمت معالجتها وراثياً والتي تنتج جسم مضاد أو‎ ‏تركيبة جسم مضاد خاصة بالاختراع باستخدام التقنيات المعروفة في المجال الخاصة بالقتل.‎
اس يمكن استخدام الأجسام المضادة أو تركيبات الجسم المضاد الخاص بالاختراع في طريقة المعالجة أو الوقاية من عدوى المكورة العنقودية أو المرض أو الحالة المرتبطة ب ‎Staphylococcus sp.‏ في خاضع للعلاج؛ تشتمل الطريقة على مستحضر جسم مضاد متعدد النسيلة أو جسم مضاد أحادي النسيلة واستخدام الجسم المضاد أو تركيبة الجسم المضاد لمنح مناعة كبيرة في الخاضع ا للعلاج. يمكن أن تكون الأجشام المضادة الخاصة بالاختراع مفيدة في طرق التشخيص؛ على سبيل المثال؛ اكتشاف وجود أو حساب مستويات 005 أو 008 أو مترافق منها. قد تستخدم نماذج حيوانية عديدة معروفة فى المجال لتقييم كفاءة أى واحد من التركيبات المولدة للمناعة الموصوفة هنا على سبيل المثال. نموذج الخمج ‎Jl)‏ سلبي: يتم تطعيم الفثران بشكل سلبى داخل البريتون ‎intraperitoneally‏ ‎(ipl) ٠‏ بواسطة ‎IgG‏ مناعى أو جسم مضاد احادى النسخة . يتم حقن الفثران بعد ‎YE‏ ساعة بواسطة جرعة مميتة من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ . يتم تناول الحقن البكتيرى داخل الوريد ‎BV.) intravenously‏ أو 1.0 ) مع ضمان أن أى بقاء على ‎ad‏ ‏الحياة يمكن أن يرجع لتفاعل داخل الجسم الحى خاص للجسم المضاد مع البكتيريا ‎٠‏ يتم تعيين جرعة الحقن البكتيرية لتكون هى الجرعة الضرورية لتحقيق الخمج المميت تقريباً ‎77١8‏ من فثران ‎١‏ التحكم المرجعى الغير مطعمة . يمكن اجراء تقييم احصائى لدراسات عديدة بواسطة تحليل ‎Kaplan-Meier‏ . التطعيم النشط ونموذج الحقن : فى هذا النموذج ؛ يتم تطعيم الفئران بشكل نشط تحت الجلد ‎(s.c.) subcutaneously‏ بواسطة ‎antigen‏ مستهدف عند ‎iia‏ ؟ و ‎١‏ أسابيع (أو مخطط مماثل معروفة ‎sed‏ الماهرين_ فى المجال) والحقن بواسطة_المكورات_ العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus ٠‏ عند الاسبوع ‎A‏ (أو مخطط مماثل ‎AT‏ معروف لههثلاء الماهرين فى المجال ) بواسطة طريقة داخل الوريد ‎intravenously‏ أو داخل البريتون. يتم معايرة جرعة الحقن البكتيرية لتحقيق تقريباً 770 بقاء على قيد الحياة فى مجموعة التحكم المرجعى خلال فترة ‎VE‏ يوم . يمكن اجراء تقييم ‎Alaa)‏ لدراسات البقاء على قيد الحياة بواسطة تحليل ‎Kaplan—-Meir‏ . نموذج التهاب بطانة القلب ‎endocarditis‏ المعدي السلبي: استخدم نموذج التطعيم السلبي ‎Yo‏ الالتهاب بطانة القلب ‎endocarditis‏ المعدى ‎(IE)‏ الناتج عن المكورات العنقودية الذهبية ‎EAE‏
‎Staphylococcus aureus‏ ليظهر أن ‎CI1FA‏ يستحث المناعة السلبية . انظر ‎Vernachio‏ ‎etal. (2006) Antmicro.
Agents & Chemo. 50:511-8‏ هذا النموذج ل ‎IE‏ ‏استخدمت أرانب وجرذان لتنبيه العدوى الاكلينيكية التى تشتمل على ‎HE‏ وريدية مركزية ؛ تجرثم الدم ؛ وبدء التكون الدموي المنشاً للأعضاء البعيدة . يتم إعطاء الأرانب أو الجرذان التى تم بها © تركيب القثطرة ‎cli‏ ناميات الصمام الأورطي المعقمة حقن مفرد داخل الوريد ‎intravenously‏ ‏من جسم مضاد احادى النسخة أو عديد النسخ خاص ب ‎antigen‏ المستهدف بعد ‎YE‏ ساعة ؛ تم حقن الحيوانات داخل ‎intravenously all‏ بواسطة ‏ سلالات المكورات العنقودية ‎Staphylococcal infections‏ المختلفة أو سلالة 85/8//ا. عندئذ بعد ‎£A‏ ساعة من الحقن ؛ تم تجميع الناميات القلبية؛ الكلى والدم وزراعتها . يتم عندئذ قياس تكرار عدوى المكورات العنقودية ‎Staphylococcal 1071800005 | ٠‏ فى ناميات الصمام القلبي ؛ الكلى والدم. فى احدى الدراسات ؛ عندما تم حقن الحيوانات بواسطة أى من : ‎MRSE ATCC 35984‏ أو 055580003 ‎(MRSA‏ ظهرت انخفاضات واضحة في معدل العدوى باستخدام أى من مستحضر الجسم المضاد عديد النسخ أو الجسم المضاد أحادي النسخة ل ‎CIfA‏ انظر ‎Vernachio et al.‏ سابقاً . ‎Vo‏ نموذج التهاب بطانة القلب ‎endocarditis‏ المعدي السلبي: تم أيضاً تهيئة نموذج التهاب بطانة القلب ‎endocarditis‏ المعدى لدراسات التطعيم الفعال. يتم تطعيم الأرانب والجرذان ‎(im)‏ ‏بواسطة ‎antigen‏ المستهدف ويتم تطعيمها بواسطة ‎S.aureus‏ بعد اسبوعين عن طريق التناول داخل الوريد. نموذج التهاب الكلى وحوضها : فى نموذج التهاب الكلى وحوضها ؛ يتم تطعيم الفثران فى ‎٠‏ الأسابيع صفر ؛ 7 ¢ + (أو مخطط مماثل معروف لهلاء الماهرين فى المجال) بواسطة المستهدفة . فى الاسبوع ‎cA‏ تم حقن الحيوانات بواسطة على سبيل المثال حقن داخل البريتون ‎intraperitoneally‏ لعلى سبيل المثال ‎٠١ x ١,١7‏ 6108 (وحدة تكوين المستعمرة) من 066 لسلالة ‎S.aureus‏ . بعد 44 ساعة ؛ تم حصاد الكلى و/ أو الأنسجة الأخرى وزراعتها . أخيراً + تم عد وحدات تكوين المستعمرة للبكتريا التى تم حقنها فى الكلى و/أو الأنسجة ‎Yo‏ الأخرى . يقيم هذا النموذج الانتشار الشامل فى الحيوان. ‎EAE‏
هم الأجسام المضادة الوظيفية الخاصة بالمراقبة باستخدام اختبار القتل بالبلعمة الطهائية يمكن استخدام خلايا المرسل العصبي المتمايزة من سلالة الخلية (على سبيل ‎(HL60s «Jal‏ أو الخلايا متعدد الأشكال الظاهرية ‎polymorphonuclear cells (PMNs)‏ المعزولة من الدم البشري باستخدام محلول بولي ‎Cedarlane laboratories limited, ) LYMPHOLYTE®-‏ ‎(Ontario, 080808 ©‏ طبقاً لبروتوكول المُصنع الخاص بالاختبار المذكور. يتم إعادة تعليق خلايا المرسل العصبي في المحلول المنظم الخاص بالاختراع (أوساط ‎all Eagle's‏ .تم تعديلها والمشتملة على ‎7١‏ من ‎Jad) albumin‏ البقري) عند تركيز حوالي ‎٠١ XY‏ 7 خلية/المل والتي يتم وضعها في وسيلة احتضان ‎YY‏ م حتى تكون جاهزة للاستخدام. تنمو سلالة المكورات العنقودية الذهبية ‎(«Staphylococcus aureus‏ 0555/0266 طوال الليل على أطباق .من أجار الصويا المعالجة بالتربسين ‎soy agar plates‏ 17/0116. تم كشط الخلايا البكترية وتم غسلها مرتين وتم ‎sale)‏ تعليقها في المحلول المنظم للاختبار المشتمل على 0 7 ‎glycerol‏ إلى ‎١ =OD600‏ والتي تكون مساوية لتركيز حوالي © ‎٠١ Xx‏ + وحدة تشكيل المزرعة/مل. تم تجميد جزء مساو واحد على الأقل من معلق البكتريا وتم تخزينها عند ‎afm‏ حتى تكون جاهزة للاستخدام. تمت إذابة المعلق البكتيري وتم إعادة ضبطه إلى تركيز يصل إلى ‎٠١‏ 1 وحدة تشكيل ‎١‏ مزرعة/المل في المحلول المنظم ويتم وضعه على الثلج. تم إجراء الاختبار باستخدام أطباق بولي بروبيلين معقمة بها 97 عيناً عميقة. تم تحضير اثنين من التخليفات المتتالية من عينات الجسم المضاد ‎١(‏ 5 ميكرو لتر) ‎Ally‏ تم تحضيرها ويلي ذلك من خلال إضافة ‎Yoo‏ ميكرو لتر من المحلول المنظم الخاص بالاختراع إلى خليط الجسم المضاد. تمت إضافة البكتريا ‎5٠(‏ ميكرو لتر) إلى الأطباق وتم وضعها على وسيلة تقليب دورانية ‎Yo‏ عند 4 م لمدة ‎Th‏ دقيقة. تم إجراء خطوة المعالجة بالبكتريا الطهائية عن طريق إضافة ‎5٠‏ ميكرو لتر من المتمم البشري ‎ZY)‏ من التركيز النهائي). وفي النهاية؛ قد تمت إضافة ‎٠٠‏ ميكرو لتر من خلايا المرسل العصبي (بتركيز ‎٠١‏ 7 خلية/مل) إلى الطبق ويتم خلط المعلق بشكل جيد من خلال التردد المتكرر في الأنبوب. يتم التخفيف المتتالي ل ‎٠‏ © ميكرو لتر من المحلول المساوي لمعلق به ‎٠١‏ مرات تخفيف في محلول ‎saponin‏ ‎EAE‏
-١1- ‏الصويا‎ lal ‏ويتم التدويم لكي يتم تقليل تكتل البكتريا ووضعها على أطباق من‎ oF) ‏معلق‎ ‏في ثنائيات.‎ tryptic soy agar plates jp ill ‏المعالجة‎ ‏ساعة باستخدام الخلط المتتالي باستخدام وسيلة رج‎ sad ‏م‎ TV ‏تمت حضانة طبق الاختبار عند‎ rotisserie ‏من نوع‎ ‏مرات في‎ ٠١ ‏ميكرو لتر من المعلق ثم ثم تخفيفه‎ 5٠ ‏نهاية الحضانة كان الجزء المساوي من‎ deg © ‏ويتم الخلط من خلال التدويم لكي يتم تقليل التكتلات البكتيرية‎ 71 saponin ‏محلول معقم من‎ ‏في‎ tryptic soy agar plates ‏ويتم وضعه في أطباق من أجار الصويا المعالجة بالتربسين‎ ‏ثنائيات. تم حساب النسبة المثوية للقتل عن طريق تحديد نسبة رقم وحدات تشكيل المزرعة المتبقية‎ ‏وتكون الخلايا المتممة وخلايا المرسل‎ LAS ‏دقيقة في العيون مع‎ Te ‏على قيد الحياة بعد‎ ‏العصبي بالنسبة لعدد وحدة تشكيل المزرعة مفتقرة إلى الأجسام المضادة ولكنها مشتملة على‎ ٠ ‏البكتريا والخلايا المتممة وخلايا المرسل العصبي.‎ ‏يتم تضمين عينات المقارنة المشتملة على البكتريا والخلايا المتممة والأمصال لكي يتم تعديلها من‎ ‏أجل أي خفض في وحدات تشكيل المزرعة نتيجة التكتل.‎
Complement adsorption ‏الامتزاز المتمم‎ ‏يمكن استخدام المصل من المانحين من البشر والذي يتم امتزازه في مقابل سلالات المكورات‎ Ve ‏و‎ PFESAQ286 5 PFESAQ266 ‏من‎ Staphylococcus aureus ‏العنقودية الذهبية‎ ‏كمصدر للمتمم في الاختبار. تمت زراعة سلالات المكورات العنقودية الذهبية‎ 0 ‏عند م تم كشط الخلايا من‎ TSA ‏طوال الليل على أطباق‎ Staphylococcus aureus ‏لفة‎ ٠٠٠٠١ ‏معقم . ثم الطرد المركزي للخلايا البكتريرية عند‎ PBS ‏الطبق وثمتث إعادة تعليقها في‎ ‏دقائق عند ؛ م وتمت إعادة تعليق الكريات الخلوية في المصل البشري فيما‎ ٠١ ‏في الدقيقة لمدة‎ ٠ 3.١ ‏يتعلق بالامتزاز. تمت حضان المصل باستخدام البكتريا على وسيلة اهتزازية عند ؛ م لمدة‎ ‏يشتمل على البكتريا وتم تكرار‎ AT ‏دقيقة. تم الطرد المركزي للخلايا وتن نقل المصل إلى أنبوب‎
Graal ‏دقيقة. وفي النهاية تم الطرد المركزي للخلايا وتم تمرير‎ Ve ‏خطوة الامتزازة مرة ثانية لمدة‎
EAE yy . nitrogen ‏ميكرون قبل أن يتم تجميد 2,0 مل من الأجزاء المساوية في‎ +, Y ‏من خلال مرشح‎ ‏سائل.‎ ‎HL-60 ‏باستخدام خلايا‎ ١| - OPA ‏الطريقة‎ ‎5. Romero-Steiner, et al., Clin Diagn Lab J ‏طبقاً‎ HL-60 ‏ثم تمايز خلايا‎ ‏في المحلول‎ HL-60 WIA ‏تمت إعادة تعليق‎ Immunol 4 )4( (1997), pp. 415-422 ٠ ‏المصل‎ albumin ‏من‎ 7١ ‏المشتملة على‎ dma) Eagle's ‏المنظم الخاص بالاختبار (أوساط‎ ‏م حتى تكون‎ TY ‏خلية/المل ويتم وضعها في وسيلة احتضان عند‎ + ٠١ ‏البقري) عند حوالي‎ ‏طوال الليل‎ Staphylococcus aureus ‏جاهزة للاستخدام. تنمو المكورات العنقودية الذهبية‎ ‏على أطباق أجار من الصويا التي تمت معالجتا بالتربسين. تم كشط الخلايا البكترية وتم غسلها‎ ‏إلى‎ glycerol 7 © ‏تعليقها في المحلول المنظم للاختبار المشتمل على‎ sale) ‏مرتين وتم‎ Ve ‏وحدة تشكيل المزرعة/مل. تم‎ A ٠١ 7 © ‏تكون مساوية لتركيز حوالي‎ Alls) = OD600 ‏م حتى تكون جاهزة‎ fom ‏تجميد جزء مساو واحد على الأقل من معلق البكتريا وتم تخزينها عند‎ ‏وحدة تشكيل‎ 1 ٠١ ‏للاستخدام. تمت إذابة المعلق البكتيري وتم إعادة ضبطه إلى تركيز يصل إلى‎ ‏مزرعة/المل في المحلول المنظم ويتم وضعه على الثلج. تم إجراء الاختبار باستخدام أطباق بولي‎ ‏_بروبيلين معقمة بها 976 عيناً عميقة. تم تحضير اثنين من التخليفات المتتالية من عينات الجسم‎ ٠ ‏ميكرو لتر من‎ Vor ‏ميكرو لتر) والتي تم تحضيرها ويلي ذلك من خلال إضافة‎ YO) ‏المضاد‎ ‏ميكرو لتر)‎ YO) ‏المحلول المنظم الخاص بالاختراع إلى معلق الجسم المضاد. تمت إضافة البكتريا‎
Yo ‏دقيقة ويلي ذلك إضافة‎ Vo sad ‏إلى الأطباق وتم وضعها على وسيلة تقليب دورانية عند 4 م‎ ‏ميكرو لتر من خلايا‎ YO ‏وفي النهاية؛ تمت إضافة‎ (I) ‏ميكرو لتر من المتمم (عند تركيز نهائي‎ ‏خلية/المل) من الطبق وتم خلط المعلق بشكل جيد من خلال التردد المتكرر في‎ 7 ٠١( HL-60 ٠ 7١ ‏مرات في محلول 5800010 معقم‎ ٠١ ‏الأنبوب. كان الجزء المساوي من المعلق قد تم تخفيفه‎ ‏ويتم الخلط عن طريق التدويم لكي يتم تقليل التكتل البكتيري ويتم وضعه في طبق على أجار صويا‎ ‏م لمدة ساعة مع الخلط المستمر‎ PY ‏عند‎ Goll) ‏معالج بالتربسين في ثنائيات. تمت حضانة‎
Yo ‏وعند نهاية الاحتضان؛ كان الجزء المساوي من‎ rotisserie ‏باستخدام وسيلة تقليب من نوع‎ ‏ويتم الخلط من‎ 7١ saponin ‏مرات في محلول معقم من‎ ٠١ ‏ميكرو لتر من المعلق تم تم تخفيفه‎ YO
EAE
A tryptic soy agar ‏خلال التدويم ويتم وضعه في أطباق من أجار الصويا المعالجة بالتربسين‎ ‏في ثنائيات.‎ 5 ‏عن طريق تحديد نسبة رقم وحدات تشكيل المزرعة المتبقية على‎ Jul ‏تم حساب النسبة المثوية‎ ‏دقيقة في العيون مع البكترياء وتكون الأجسام المضادة و الخلايا المتممة ل‎ Th ‏قيد الحياة بعد‎ ‏الحياة في الأنابيب مفتقرة إلى‎ ad ‏بالنسبة لعدد وحدة تشكيل المزرعة المتبقية على‎ HL-60 | 5 ‏ل 141-60 . تم تضمين‎ decid) ‏ولكنها تكون مشتملة على البكترياء والخلايا‎ salad) ‏الأجسام‎ ‏لكي يتم ضبط أي تقليل في وحدة تشكيل‎ MAD ‏الخلايا المشتملة على البكتريا والخلايا المتممة و‎ ‏المزرعة نتيجة التكتل.‎ ‏يتم تقديم الأمثلة التالية للتوضيح ؛ وليس على سبيل القصر.‎ ‏الأمثلة‎ ٠ ‏فى هذا المثال ؛‎ . S.aureus ‏من‎ A ‏تحضير بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي‎ : ١ ‏مثال‎ ‏من‎ Ahad) ‏يتم وصف انتاج معدلات حجم مختلفة من بولي مكاريد الكبسولي النمط‎ ‏من‎ A ‏يتم توضيح تركيب وحدة تكرار بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي‎ ٠. 5 ‏الطرق الموصوفة هنا تكون فعالة فى انتاج بولي سكاريد الكبسولي‎ . ١ ‏فى شكل‎ 5 ‏ك دالتون. عن‎ 7٠0٠ ‏ك دالتون الى‎ ٠١ ‏النمط المصلي 8 الذى له اوزان جزيئية تتراوح من حوالى‎ ١
A ‏عزل وتتنقية بولي سكاريدات الكبسولية النمط المصلي‎ (Say ‏طريق الاختيار الملاثم للظروف ؛‎ ‏ك دالتون الى 7060 ك دالتون . للاستخدام‎ 5 ٠ ‏الوزن الجزيئ التى يتراوح وزنها الجزيئى من‎ Alle
A ‏وتنقية بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي‎ Jie ‏فى التركيبات المولدة للمناعة ؛ يمكن‎ ‏ك دالتون ومعدلات مرغوبة كثيرة . اعتماداً على‎ 70٠6 ‏ك دالتون الى‎ 7١ ‏المتراوح وزن الجزيئ من‎ ‏أو‎ PFESA0005 ‏خصائص النمو وكمية الكبسولة الناتجة ¢ استخدمت السلالات‎ Yo ‏لانتاج_بولي مكاريد الكبسولي النمط المصلي . تم توضيح أن الكبسولات‎ 6 ‏بولي‎ zy . ‏.كانت متماثلة‎ PFESA0286 4 072580005 ‏المعزولة من السلالات‎ ‏؛ تم انماء السلالات فى وسط معقد يتكون بشكل أساسى‎ A lad) ‏سكاريدات الكبسولية النمط‎
— ‏أ‎ q —
من مصدر للكربون ‎lactose W)‏ أو ‎٠ ( sucrose‏ دقيق الصويا المحلل مائياً كمصدر
‎«nitrogen‏ وفلزات نادرة. يتم انماء السلالات فى مفاعلات حيوية ‎sad‏ ؟ الى * أيام.
‏قبل وضعها فى الاتوكلاف (المعقام) ؛ ازيلت العينة لاختبار مستوى 10*10 المعوى ‎(SEB) B‏
‎. ‏فى المزرعة‎ Staphylococcal infections ‏المتعلق بالمكورات العنقودية‎ (Enterotoxin B)
‏© فى وجود 70,05 من ‎Av polysorbate i‏ » كان تركيز 588 فى التخمر ‎Yo - ١١‏ نانوجم/
‏مل اظهرت التجارب السابقة أن وضع المزرعة فى الاوتوكلاف لمدة ساعة واحدة يقلل مستوى
‏8 الى أقل من ‎0,١‏ ناوجم / مل والذى هو أقل من حد الكشف لأداة ‎TECRA‏ . تم تحميل
‏بولي سكاريد المرشح بالديلزة» ‎fad)‏ بال ‎ethanol‏ على عمود ‎Sepharose AEC‏ © وروق
‏بواسطة تدريج خطى من ‎NaCl‏ كما وصف مابقاً . تم تحليل الأجزاء بواسطة اختبار 0 - أ ‎acetyl‏ واختبار الانتشار المناعى ‎ae Ladd‏ لوجود بولي سكاريد بولي سكاريد النمط المصلي ‎fo}‏
‏واختبار ‎phosphate‏ لوجود ‎(TA) teichoic acid‏ . تم الكشف عن وجود بولي سكاريد
‏النمط المصلي 8 فى الأجزاء 5 الى 40 (الأشكال ‎IY‏ =( . لتقليل التلوث بواسطة ‎teichoic‏
‏0 ؛ تم تجميع الأجزاء © الى ‎Vo‏ وتم أكسدة اى حمض نيكوتيك متبقى بواسطة ‎sodium‏
‎H20 ‏ضد‎ 3K diafiltration ‏للسماح بازالته عن طريق الترشيح بالديلزة‎ metaperiodate ‏المقطر.‎ ١٠
‏اجريت تنقية بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط المصلي + المستخدم لتحضير
‏المقترنات بواسطة اثنين من الطرق المختلفة التى تعتمد على درجة الحرارة المرتفعة و ‎PH‏ منخفض
‏للعمل على انبعاث الكبسولة من الخلية وتقليل الوزن الجزيئى للبولي سكاريد. اعتمد منخفض
‏للعمل على انبعاث الكبسولة من الخلية وتقليل الوزن الجزيئى للبولي سكاريد. ‎adie)‏ الوزن الجزيئى ‎٠‏ الناتج على الزمن »؛ درجة الحرارة و 011 لخطوة التحلل المائى. اجرى تمييز بولي سكاريد الكبسولي
‏النمط المصلي ‎A‏ باستخدام التقنيات المحددة فى جدول ‎١‏ .
‏جدول ‎١‏ : اختبارات تمييز بولي سكاريدات الكبسولية النمط المصلي ‎A‏ من ‎S.aureus‏
‎EAE
‎١ «=‏ البروتين المتبقي اختبار قياس اللون ‎Lowry‏ ‏الأحماض النووية المتبقية فحص 260 نانوم ‎teichoic acid‏ المتبقي اختبار قياس اللون للفوسفات إضافة ‎acetyl‏ عند - ‎1H-NMR O‏ ينتج عن بولي سكاريد الكبسولة الناتجة بواسطة الطرق الموصوفة لاحقاً بولي سكاريدات مميزة جيداً نقية لها مستويات منخفضة من البروتين ؛ الحمض النووى ‎peptidoglycan‏ وملوثات ‎teichoic acid‏ . فى الطريقة الأولى ؛ بعد انبعاث بولي سكاريد الكبسولي من الخلية وانخفاض الوزن الجزيئى عولج 0 المستحضر بواسطة كوكتيل من الانزيمات (على سبيل المثال : ‎(ribonuclease, deoxyribonuclease, lysozyme and protease‏ لهضم الشوائب . بعد التحضين تم ترسيب الشوائب المتبقية باضافة ‎ethanol‏ (تركيز نهائى حوالى 275 ) . بعد ازالة ‎ethanol‏ المتبقى ثم تحميل محلول يحتوى على بولي سكاريد الكبسولي على عمود تباد ‎Jd‏ ‏الأنيون ‎(Q-Sepharose) anion exchange column‏ وروق بواسطة تدريج ملح خطى. تم ‎٠‏ تجميع الأجزاء المحتوية على بولي مكاريد الكبسولي وعولجت بواسطة | ‎sodium‏ ‎metaperiodate‏ . نتج عن هذه المعالجة التحلل المائى التأكسدى لملوث ‎teichoic acid‏ ‎ENE‏
المتبقى ؛ ‎aly‏ لم يؤثر على بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ اوقف التفاعل ورشح بالديازة ضد ‎dH20‏ لازالة أى كواشف متبقية ومنتجات ثانوية. استخدمت الطريقة الثانية لإنتاج بولي سكاريد الكبسولي بدون استخدام انزيمات لهضم الشوائب المشتقة من الخلية المختلفة . فى هذا النموذج ؛ بعد انبعاث بولي سكاريد الكبسولي من الخلية وانخفاض الوزن الجزيئى ؛ تم ترويق مرق التخمر المحلل ‎Wile‏ بواسطة الترشيح الدقيق متبوعاً بالترشيح الفائق والترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ . عولج المحلول بواسطة كربون منشط ‎AY‏ ‏الشوائب . بعد معالجة الكربون ؛ عولج الحيوان بواسطة ‎sodium metaperiodate‏ الاكسدة ‎teichoic acid‏ المتبقى متبوعاً بالايقاف بواسطة ‎propylene glycol‏ . ركزت المادة ورشحت بالديلزة ضد ‎AY dH20‏ أى كواشف متبقية ومنتجات ثانوية متبقية. ينتج عن المستحضرات ‎٠‏ الناتجة باستخدام أى طريقة بولي سكاريدات كبسولية نقية لها مستويات منخفضة من ملوثات البروتين ¢ الحمض النووى ‎teichoic acid yj‏ يمكن استخدام الطرق الموصوفة لانتاج معدلات محددة من بولي سكاريدات عالية الوزن ‎Sill‏ المرغوبة عن طريق تغيير ظروف التحلل المائى . يتم توضيح أمثلة بولي سكاريد الكبسولي الذى يمكن الحصول عليه بواسطة الطرق الموصوفة هنا فى جدول 7 لاحقاً . تشغيلات بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ المنقى لها نقاء ‎Sle‏ ‎Vo‏ كما اشير عن طريق عدم وجود ‎(TA) teichoic acid‏ ؛ ‎peptidoglycan‏ وبروتين متبقى منخفض. انظر 3 جدول ¥. مدى الأوزان الجزيئية الأقل يمتد من 70,4 ك دالتون الى ‎65,١‏ ك دالتون وكانت بولي سكاريدات المنقاة مضاف له ‎acetyl‏ بدرجة كبيرة عند © ( - ‎(I) er‏ كانت مستويات تلوث الحمض النووى منخفضة 7 1+ — 80 ‎VA‏ ( . ‎Ye‏ جدول ¥ : تمييز مستحضرات ‎Jo‏ سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ ‏إجمالي ‎CP8‏ الوزن 0 العينة المنقى الجزيئي البروتين الحمض النووي | ‎ACETYL‏ ‎EAE‏
مجم (ك دالتون) | ‎(Lowry)‏ | (فحص 260 | ‎NMR‏ ‏: | نانو ‎Js‏ ‎AR TOI FEN‏ ‎A‏ ‏اختيار الوزن الجزيثى لل بولي سكاريدات ‎polysaccharides‏ الكبسولية : اثبت التحليل الحركى أنه يمكن انتاج مدى واسع من الأوزان الجزيئية ل بولي سكاريد الكبسولي بواسطة الطرق الموصوفة هنا . بشكل ابتدائى ؛ تم انتاج بولي سكاريدات أكبر بواسطة الخلايا البكتيرية ¢ وبصورة متتالية ¢ مدى وزن جزيئى مرغوب مختار ثم التنقية عن طريق الحفاظ على ‎pH‏ والظروف © الحرارية لخطوات التسخين والتحلل المائى.
المعالجة الحرارية لمرق تخمر ‎S.aureus‏ هو خطوة العملية بين التخمر واسترداد بولي سكاريد الكبسولي . تستخدم خطوة العملية هذه الحرارة لعلاج المرق مضبوط ‎PH‏ لقتل الخلايا « ‎toxins‏ ‏المعوية الغير نشطة ؛ انبعاث ‏ بولي سكاريدات المرتبط بالخلية وتقليل الوزن الجزيئى للحجم المرغوب. من بين هذه الأهداف ؛ كان تقليل الوزن الجزيئى هو الأبطء من ناحية زمن المعالجة اللازم لهذه الخطوة. لذلك ؛ تم تحقيق الأهداف الأخرى بشكل محتوم داخل زمن المعالجة المأخوذ
فى الاعتبار. المعالجة الحرارية : تم تعيين ظروف ‎PH‏ ودرجة حرارة معدلات الوزن الجزيئى المختلفة المختارة ل بولي سكاريد الكبسولي . استخدم جهاز التخمر ‎Vo Biolafitte‏ لتر لهذه الدراسات . تم نقل مرق
‎Vo‏ الدقيقة ؛ تم ضبط ‎pH‏ للمرق بواسطة ‎sulfuric acid‏ مركز. عندئذ ؛ تم رفع درجة حرارة المرق الى ‎dad‏ محددة. عندما تم بلوغ زمن المعالجة المرغوب ؛ برد المرق لدرجة ‎sha‏ الغرفة . فى العملية تم أخذ العينات لتعيين تركيز ‏ بولي سكاريدات ووزنه ‎EAE‏
١ ".- الجزيئى بواسطة أجهزةة ‎HPLC‏ و ‎SEC-MALLS‏ ؛ على الترتيب . استخدمت بيانات الوزن الجزئى ‎(MW)‏ فى التحليل الحركي . تم تعيين مخططات ‎MW‏ بمرور الوقت عند ‎pH‏ 2,5 ؛ 1 5¢ ,5 انظر شكل ‎fy‏ . أجريت حركيات التحلل ‎SW‏ للحمض المعتدل لذ بولي سكاريدات باستخدام بولي سكاريد 0 الكبسولي النمط ‎A lad)‏ المنقى الذى تم الحصول عليه من العملية . تم ضبط محلول بولي سكاريد المنقى الى ‎pH‏ المرغوب للتجربة بواسطة ‎sulfuric acid‏ . تم نقل حوالى ‎١,5‏ مل من المحلول الى كل من أنابيب الطرد المركزى ‎١١‏ مل. وضعت الأنابيب فى حمام زيت مزود بنظام تحكم فى درجة الحرارة المضبوطة . تم اخراج الانبوبة عند فترة زمنية محددة سابقاً واوقفت فى دلو ثلج. ‎٠‏ عند نهاية التجربة ؛ أضيف ‎sda‏ ١ج‏ محلول منظم تريس ‎(V,0 PH)‏ الى العينة لضبط ‎PH‏ مرة اخرى الى حوالى 7 . تم تحليل العينات بواسطة ‎SEC-MALLS lea‏ . استخدمت بيانات ‎MW‏ ‏فى تحليل الحركية . تم تعيين تأثير درجة الحرارة على مخطط ‎MW‏ ل ‎CP8‏ عند ‎pH‏ 3,5 خلال الوقت . انظر شكل ‎Cf‏ ‏النتائج ‎V0‏ كما وضح في شكل ‎IY‏ كان ‎pH‏ المنخفض أكثر فاعلية في تقليل الوزن الجزيئي للبولي سكاريدات. يمكن إنتاج أوزان جزيئية ما بين ١١٠٠ك‏ دالتون و ‎Tov‏ دالتون باستخدام ‎o pH‏ عند 46 م ما بين ‎١5‏ دقيقة و١١‏ دقيقة. بشكل محتمل؛ يمكن إنتاج أوزان جزيئية ما بين ‎75٠‏ ك دالتون 5 £00 دالتون باستخدام ‎pH‏ 4 عند 40 عم لمدة ما بين ‎١١5‏ دقيقة و١٠١٠‏ دقيقة. ‎PH ‏ك دالتون و١ 45 ك دالتون باستخدام‎ ١7١ ‏علاوة على ذلك؛ يمكن إنتاج أوزان جزيئية ما بين‎ ٠
Shall ‏درجة‎ eV ‏عند 45 م لمدة ما بين 10 دقيقة و١١ دقيقة. كما وضح في شكل‎ © ‏الأعلى تقابل أسرع معدل في التحلل المائي ومدى أوسع من الأوزان الجزيئية للبولي سكاريد الناتج‎ ‏بمرور الوقت.‎
لول
بسبب استخدام درجة حرارة منخفضة؛ 00 م مقابل 40 م عند نفس ‎PH‏ مدى أضيق من الأوزان
الجزيئية للبولي سكاريدات.
علاوة على ذلك؛ يوضح شكل ؟؛ الارتباط بين الوزن الجزيئي ل 668 المنقى مع زمن معالجة
للتحلل المائي للحمض المعتدل ‎pH)‏ 3,5 عند ‎(p40‏ بولي سكاريد المنقى عبارة عن منتج
© نهائي تم الحصول عليه من عملية استرداد تم وصفها سابقاً. أيضاً كما وضح في شكل 4؛ ينتج
عن الزيادة في زمن المعالجة الحرارية لسلالة المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus‏
‎aureus 5‏ عند ‎CP8 ¥,0 pH‏ صغير الوزن الجزيئي؛ بينما أوقات المعالجة
‏الحرارية عند ‎pH‏ 3,5 نتج عنها 058 عالى الوزن الجزيئي.
‏تتراوح حجم بولي مكاريدات الكبسولية ‎A adh hall‏ من حوالي ‎SA‏ دالتون إلى حوالي ‎٠‏ 770 ك دالتون اعتماداً على طول الفترة الزمنية للمعالجة الحرارة عند ‎pH‏ 0,¥
‏تسمح العلاقة بين زمن ‎dalled)‏ الحرارية عند ‎pH‏ منخفض وحجم 608 النقي؛ كما وضح في
‏شكل ؛ بتعيين زمن المعالجة الضروري لإنتاج بولي سكاريد منقى له مدى محدد من الوزن
‏الجزيئي. من المهم أيضاً ملاحظة أنه كما عين سابقاً يمكن الحصول على مدى كامل من الأوزان
‏الجزيئية لل بولي سكاريدات الكبسولية للنمط المصلي ‎A‏ من ‎5١0‏ ك دالتون إلى أكثر من ‎dove‏ ‎١‏ دالتون؛ ويمكن إنتاجها وتنقيتها.
‏قد تستخدم الطرق لذلك لإنتاج مدى محدد من بولي سكاريدات الكبسولية عالية الوزن ‎cal‏
‏الووغوبة على سبيل المثال كما وضح في جدول ‎Jie oF‏ المدى الضيق نسبياً من الوزن الجزيئي
‏لا بولي سكاريدات الناتجة ‎Wis‏ تتراوح الأوزان الجزيئية القصوى من ‎SAY‏ دالتون إلى ‎AVA‏
‏دالتون مدى مميز جيداً من الأوزان الجزيئية التي قد يتم الحصول عليها بواسطة الطرق الموصوفة ‎٠‏ هنا. المدى المميز تحديداً من الأوزان الجزيئية العالية؛ المتراوح من 70 ك دالتون إلى 3060 ك
‏دالتون أو من ‎7١‏ ك دالتون إلى ‎١5١‏ ك دالتون؛ يكون مفيداً في تحضير تركيبات مولدة للمناعة
‏عن طريق اقتران بولي سكاريدات مع جزئ أو بروتين حامل ‎carrier protein‏ (انظر جدول
‎.
‎EAE
م7١‏ الظروف المستخدمة لإنتاج بولي سكاريد الكبسولي 008 له مدى وزن جزيئي من حوالي 80 إلى ‎٠‏ ك دالتون هي كما يلي: 45 م؛ ‎pH‏ 7,0( لمدة ‎Fe‏ دقيقة. جدول ؟: إنتاج مدى محدد من بولي سكاريدات كبسولة للنمط المصلي ‎A‏ عالية الوزن الجزيئي. ‎lo}‏ ‏بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ كبسولي النمط المصلي ‎A‏ ‏التشغيل الوزن الجزئي (ك دالتون) ‎EAE‏
EVE
‏يصف هذا المثال‎ CRMI9T ‏مع‎ A ‏مثال ؟: اقتران بولي سكاريدات الكبسولية للنمط المصلي‎ ‏من‎ A ‏عمليات واختبارات تميز مستخدمة في إنتاج مقترنات بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي‎ ‏تم تطوير كيمياء اقتران‎ .0140//197 - Staphylococcus aureus ‏المكورات العنقودية الذهبية‎ ‏من المكورات العنقودية الذهبية مع هذا‎ A ‏مختلفة لاقتران بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي‎ : ‏على سبيل المثال؛ ينتج عن هذا الاقتران باستخدام‎ . carrier protein ‏البروتين الحامل‎ © ‎PDPH (3—(2-pyridyldithio)-propionyl hydrazide)‏ رابطة ‎thioether‏ تساهمية بين ‎CP‏ والبروتين الحامل ‎carrier protein‏ . بصورة ‎og Al‏ ينتج عن الاقتران باستخدام : ‎CDI/CDT (1,1-carboyldiimidazole/1,1-carboyl-di-1,2,4-triazole)‏ رابط به ذرة كربون واحدة أو ليس به درات كربون بين ‎OP‏ والبروتين الحامل. ‎٠‏ اقترانبولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ مع ‎CRM197‏ بواسطة كيمياء اقتران ‎PDPH‏ [كيمياء اقتران ‎PDPH‏ هي عملية متعددة الخطوات تتضمن تنشيط بولي سكاريدات ؛ إزالة مجموعة حماية ‎thiol‏ تنقية ‏ بولي سكاريد الوسيط المنشط؛ تنشيط وتنقية بروتين 080/197؛ واقتران المكونات المنشطة متبوعاً بالتنقية. بعد إدخال مجموعة ‎thiol‏ تحتوي على رابط لل بولي سكاريدات ومجموعة ال7ا781080©1 مع حامل البروتين 0140/197؛ ارتبط بولي ‎Staphylococcus aureus ‏من المكورات العنقودية الذهبية‎ A ‏مكاريد الكبسولي للنمط المصلي‎ Vo ‏في البروتين‎ bromoacetyl ‏أدخلت مجموعات‎ . thioether ‏البروتين من خلال رابطة‎ dela ‏مع‎ ‏لاا من‎ hydroxysuccimide ester ‏عن طريق تفاعل مجموعات الامين مع‎ 7 carboxylate ‏تزدوج مجموعات‎ « thiol ‏لإنتاج بولي سكاريد مضاف له‎ . bromoacetic acid : ‏من‎ carbodiimide ‏المنشطة بواسطة‎ ‎hydrazide ‏-لا في بولي سكاريدات مع مجموعة‎ acetylmannosaminouronic acid ٠ . sulfhydryl ‏متفاعل مع‎ hydrazide ‏لرابط ثنائي المجموعة الوظيفية غير متجانس من‎ ‎3—(2-pyridyldithio)—propionyl hydrazide (PDPH)‏ « الناتجة عن الاختزال بواسطة ‎DTT‏ والمنقاة باستخدام ‎SEC‏ على عمود ‎(Sephadex G25‏ تفاعلت مع مجموعات ‎bromoacetyl‏ للبروتين المنشط مما ينتج عنه ارتباط ‎thioether‏ تساهمي متكون بواسطة إزاحة ‎EAE‏
١/7 bromoacetyl ‏بولي سكاريدات والبروتين الحامل. تم "تطويق" مجموعات‎ on bromine .(2-aminoethanethiol hydrochloride) ‏الغير متفاعلة بواسطة‎ ‏مقترنة‎ yall bromoacetyl ‏ركز خليط التفاعل عندئذ ورشح بالديلزة. تم تطوير مجموعات‎ ‏متفاعلة‎ bromoacetyl ‏لضمان عدم تبقي مجموعات‎ cysteamine hydrochloride ‏بواسطة‎ ‎acetyl ‏ومجموعة‎ cysteamine thiol ‏بعد الاختزال. كون ذلك رابطة تساهمية بين طرف‎ © . bromine ‏بعد إزاحة‎ lysine ‏على متبقي‎ ‏من المكورات‎ A ‏الكبسولي للنمط المصلي‎ polysaccharides ‏للبولي سكاريد‎ thiol ‏إضافة‎ -١ ‏تم تنشيط بولي سكاريد أولاً‎ :PDPH ‏بواسطة‎ Staphylococcus aureus ‏العنقودية الذهبية‎
PDPH ‏بواسطة 000011. تم خلط بولي سكاريد مع محلول مخزون‎ thiol ‏عن طريق إضافة‎
H20 ‏مجم/ مل في‎ 4+) EDAC ‏محلول مخزون‎ «(DMSO ‏مجم/ مل في‎ You) ‏محضر حديثاً‎ ٠ ‏ج‎ 0١ ‏(5؛ ج؛ ام £40( لتحضير محلول نهائي‎ MES ‏مقطر)؛ ومحلول مخزون منظم‎ : PDPH ‏و و؛ مجم بولي سكاريدات / مل؛ مع الحفاظ على نسبة بولي سكاريدات:‎ «MES ‏للبولي مكاريد الكبسولي للنمط المصلي 8. تم تحضين هذا‎ ٠,75 207 :١ ‏ناعبالوزن‎ 0
H20 ‏حجم‎ X ٠٠0٠١ am ‏الخليط لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ثم تمت ديلزته‎
PDPH ‏م لإزالة‎ As ‏عند ما بين 4 م‎ 3500 MWCO ‏المقطر أربع مرات باستخدام جهاز ديلزة‎ ٠ ‏وتم التحضين عند درجة‎ DTT ‏ج‎ ١,7 PDPH ‏بولي سكاريد المرتبط مع‎ Jas ‏الغير متفاعل. تم‎ ‏الزائد بالإضافة إلى‎ DTT ‏م. تم فصل‎ Ay ‏حرارة الغرفة لمدة ؟ ساعات أو طوال الليل عند ؛ م‎
Sephadex iil) ‏باستخدام‎ SEC ‏المنشط بواسطة‎ saccharide ‏المنتجات الثانوية للتفاعل من‎ ‏لمجموعات‎ DIDP ‏وماء مقطر على هيئة طور متحرك. تم اختبار الأجزاء بواسطة اختبار‎ 5 ‏التي روقت بالقرب من حجم تجويف العمود. اختبرت‎ thiol ‏وتم تجميع الأجزاء الإيجابية‎ thiol ٠ ‏لتعيين درجة التنشيط التي تم‎ O-ACETYL ‏واختبارات‎ PAHBAH ‏مجموعة الأجزاء بواسطة‎ ‏(التركيز‎ thiol ‏تمثيلها على هيئة نسبة جزيئية من الوحدات المتكررة المحتوية على مجموعة‎ - ‏التركيزالجزيئي للوحدات المتكررة). تم تجفيد بولي سكاريد المنشط وخزن عند‎ / thiols ‏الجزيئي‎ ‏لحين الحاجة إليه للاقتران.‎ Yo
EAE
‎A —‏ 7 — يتم توضيح النتائج من إمكانية استعادة نتائج إضافة ‎J) thiol‏ بولي سكاريد للنمط المصلي ‎A‏ ‏بواسطة ‎PDPH‏ في جدول 4. كانت درجة تنشيط ‎dg‏ سكاريد للنمط المصلي ‎AA‏ مدى ‎VY‏ ‏إلى 27176 والذي يقابل تقريباً جزئ رابط واحد متصل لكل ‎٠١‏ وحدات متكررة من بولي سكاريد الكبسولي بجزئ رابط واحد لكل خمس وحدات متكررة. © جدول ؛: تنشيط بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ بواسطة ‎PDPH‏ - دراسة إمكانية استعادة النتائج بولي سكاريد النمط | التنشيط ) الإنتاج المقياس المصلي ‎MSH 7)|- A‏ / مجم ‎(s/s <) = (MRU PDPH‏ "- تنشيط البروتين الحامل ‎carrier protein‏ : بشكل منفصل؛ تم تنشيط البروتين الحامل ‎carrier protein‏ عن طريق إضافة ‎.bromoacetylation‏ تم تخفيف ‎CRM197‏ إلى © ‎٠‏ مجم/ مل بواسطة ‎٠١‏ مجم فوسفات منظم ‎pH NaCl 7.,4 phosphate buffered‏ أ ‎(PBS)‏ ثم تحضير ‎١‏ ج ‎7,٠ pH NaHCO3‏ باستخدام محلول مخزون ‎١‏ ج. أضيف لا ‎hydroxysuccimide ester‏ من ‎(BAANS) bromoacetic acid‏ عند نسبة ‎CRM197‏ : ‎+,Yo :١ BAANS‏ )5/5( باستخدام محلول مخزون ‎٠١ BAANS‏ مجم/ مل ‎.DMSO‏ ‏تم تحضين خليط التفاعل هذا عند ما بين ؛ و“ م لمدة ساعة واحدة. ثم تمت تنقيته باستخدام ‎Yo‏ 550 على 6-25 ‎.Sephadex‏ تم اختبار ‎CRM197‏ المنشط المنقى بواسطة اختبار ‎Lowry‏ ‎EAE‏
‎q —‏ 7 — لتعيين تركيز البروتين ثم التخفيف بواسطة ‎PBS‏ إلى © مجم/ مل. أضيف 50002056 إلى 75 و/ ح كمادة حامية من البرودة وتم تجميد البروتين المنشط وخزن عند -75 م لحين الحاجة إليه للاقتران. كانت عملية إضافة ‎bromoacetyl‏ إلى متبقيات ‎lysine‏ ل ‎CRM197‏ منسقة ‎Jaa‏ مما نتج © عنها تنشيط 4 إلى ‎Yo‏ لايسينات ‎lysines‏ من 1؟ لايسينات ‎lysines‏ متاح (انظر جدول 0( نتج عن التفاعل إنتاجات عالية من البروتين المنشط. جدول ‎to‏ إنتاجات ودرجة إضافة ‎CRM197 1 bromoacetyl‏ ‎ial lysines‏ المقياس الإنتاج ‎(=n)‏ مجم )%¢ 5/5( ‎HE‏ ‏— تفاعل الاقتران: بمجرد تحضير بولي سكاريد الكبسولي والبروتين ‎carrier protein Jalal‏ المنشط؛ اندمج الاثنين في تفاعل اقتران. ‎cud‏ بولي سكاريد المجفد والمضاف له ‎thiol‏ 176 ‎Ve‏ ج يورات ‎Ade pH‏ خلط مع ‎CRM197‏ مضاف له ‎sly lk bromoacetyl‏ مقطر لتحضير محلول نهائي ‎zo ١‏ بورات نسبة ‎١٠ ١‏ و و 1 ‎:CRM197‏ بولي سكاريد 9% ‎١‏ مجم/ مل بولي سكاريد . تم تحضين هذا الخليط عند درحة حرارة الغرفة لمدة ما بين ‎١١‏ و74 ساعة. تم تطويق مجموعات ‎bromoacetyl‏ غير ‎dels‏ في البروتين بإضافة 0751880106 ‎hydrochloride‏ عند نسبة ‎:١ cysteamine :CRM197‏ ¥ (و/ و) باستخدام ‎٠١١‏ مجم/ مل ‎EAE‏
“Am ‏والتحضين لمدة ؛‎ 8,55 pH borate ‏ج‎ ١,١ ‏المذاب في‎ cysteamine ‏محلول مخزون من‎ - ‏الكبسولي‎ polysaccharides ‏ساعات عند درجة حرارة الغرفة. تمت تنقية مقترن بولي سكاريد‎
NaCl 70.9 ‏مرة ضد‎ ٠٠ diafiltration ‏(لمقترن) عن طريق الترشيح بالديلزة‎ 07 .100K polyethersulfone ‏باستخدام مرشح فائق‎ ‏الكبسولي‎ polysaccharides ‏للبولي سكاريد‎ thiol ‏النتائج من إمكانية استعادة دراسات إضافة‎ ©
IVT ‏إلى‎ ١١ ‏تنشيط بولي سكاريد كانت في مدى‎ dap ‏أثبتت أن‎ PDPH ‏مع‎ A ‏للنمط المصلي‎ ‏متكررة مع جزئ‎ polysaccharide ‏وحدات‎ ٠١ ‏والتي تقابل تقريباً جزئ رابط واحد متصل لكل‎ ‏مع‎ A ‏رابط واحد لكل خمس وحدات متكررة. اقتران بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي‎ ‏عملية اقتران وحيدة الخطوة‎ CDT, CDI ‏أعطى‎ CDT ‏بواسطة كيمياء اقتران انان/‎ 07 ‏أو‎ imidazole ‏لتكوين شقوق‎ (DMSO) ‏بولي سكاريد في وسط لا مائي‎ andi ‏حيث تم‎ Ve acyltriazole J acylimidazole i, ‏متاحة‎ hydroxyls ‏مع‎ triazole carbamate nucleophilic ‏إلى إزاحة‎ (DMSO ‏تؤدي إضافة حامل البروتين (في‎ . carboxylic acids ‏مع‎ ‎hydroxyls) carbamate ‏وتكوين رابط‎ lysine ‏أو 06 بواسطة‎ imidazole 1
CDI ‏المنشطة). نتج عن كيمياء الاقتران لكل من‎ carboxylic acids) amide ‏المنشطة) ورابط‎ carrier ‏مرتبط تساهمياً مع البروتين الحامل‎ A ‏بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي‎ CDT, Vo ‏والبروتين في الأجزاء من كروماتوجراف استبعاد‎ saccharide ‏بوجود‎ ad) ‏والذي أشير‎ » 00 ‏أو المطوق‎ glycolaldehyde ‏الحجم؛ وبواسطة تحليل الحمض الاميني للمقترن المطوق بواسطة‎ . cysteamine hydrochloride
PDPH ‏يتم توضيح موجز النتائج من تحضير أجزاء عديدة من المقترنات بواسطة كل من كيمياء‎ ‏على حجم‎ A ‏المصلي‎ hall ‏الكبسولي‎ polysaccharides ‏لأحجام بولي سكاريد‎ CDT ‏وانان/‎ ٠ ‏ك دالتون في جدول 7 لاحقاً. لم يكن هناك اختلافات واضحة‎ 5٠ ‏ك دالتون إلى‎ ٠١ ‏في مدى من‎ ‏في بولي سكاريد الكبسولي الحرء نسبة بولي سكاريد - البروتين إنتاجات المقترنات الناتجة‎ ‏بواسطة طريقتي الاقتران. لم تتغير خاصية تولد المناعة للبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي‎ ‏المقترن عن طريق الاقتران كما وصف بواسطة تطابق الخط المرسب بين المقترنات و بولي‎ A ‏مكاريد الأصلي.‎ Yo
EAE
‎A \ —‏ — جدول 1: تميز بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي - ‎CRM197‏ المحضر ‎dad gs‏ اثنين من كيمياء الاقتران الحجم (الوزن إنتاج | إنتاج سكر | بروتين : : النسبة 5 || الجزيئى أو ‎Kd‏ ‏الكيمياء ‎CP‏ | البروتين حر ‎١ Al‏ . . الخارج . . معدلة )> 0.3 ‎o(%‏ ‏(7) ا(0) (7) ا(0) . سكاريد/بروتين)) ‎[CDI‏ | -اءه -امى -|7"- ‎[ve‏ د إلى ‎[ie‏ ‎١ >‏ حم ‎ov Yo 4 00 17| CDT‏ ‎Yo |— A= WY [-Y¢‏ - لم يتم ‎١١١‏ - ‎LAY — Vt PDPH‏ ‎١ "1 AY |v.‏ أتعينه ‎١٠١١|‏ ‎WS‏ وضح سابقاً؛ قد تستخدم الطرق الموصوفة هنا لإنتاج معدلات محددة من بولي مكاريد 0 الكبسولي عالية الوزن الجزيئي المرغوبة. تكون هناك حاجة لتحضير مقترنات من مدى مختار سابقاً من وزن جزيئي عالي يمكن ترشيحها وتنقيتها للبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ ‏للاستخدام في التركيبات المولدة للمناعة؛ يلخص جدول ‎V‏ تحليل مقترنات بولي سكاريد الكبسولي ‎all‏ المصلي ‎A‏ حيث تراوح الوزن الجزيئي بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ من حوالي ٠ك‏ دالتون إلى ‎١7١‏ ك دالتون واستخدمت كيمياء اقتران ‎imidazole‏ . تراوحت الأوزان ‎٠‏ الجزيئية للمقترنات الناتجة من ‎dodo‏ دالتون إلى ‎١7078‏ ك دالتون. تراوح ‎lysines axe‏ المقترنة لكل 040/197 من عالي إلى منخفض + إلى 7. تراوح بولي سكاريد الكبسولي الحر من قيمة ‎Ade‏ 77 إلى المنخفضة 77. جدول 7: المقترنات التي لها مدى وزن جزيثي مختار للبولي مكاريد ‎polysaccharides‏ ‏الكبسولي ‎Lal‏ المصلي ‎A‏ ‎Vo‏ ‎EAE‏
التشغيل | الوزن إنتاج )7( | سكاريد حر | الوزن الجزيئي | ‎lysines‏ معدلة الجزيئي بولي )0( ‎Ldn‏ ‏سكاريدات ‎SEC-MALLS‏ ‏ك ‎alla‏ ‏(ك دالتون) )9 دالتون) 07 ‎IB‏ ‏ينتج اثنين من كيمياء الاقتران بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي ‎A‏ مرتبط تساهمياً مع بروتين ‎carrier protein Jala‏ . لم تكن هناك اختلافات واضحة في بولي مكاريد الكبسولي الحرء نسبة بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎tA‏ البروتين وانتاجات المقترنات الناتجة بواسطة © مثال ؟: عملية ‎CDT [CDI‏ وحيدة الوعاء مقابل المعقدة كما وصف ‎isle‏ تتضمن طرق تحضير المقترنات المولدة للمناعة للاختراع الاقتران التساهمية لل بولي سكاريدات الكبسولية مع البروتينات الحاملة باستخدام كيمياء الاقتران تتضمن : ‎CDI (1,1-carbonyldiimidazole), CDT (1,1-carboyl-di-1,2,4~triazole) or‏ ‎PDPH (3-(2-pyridyldithio)-propiony| hydrazide).‏ ‎iy)»‏ عن استخدام ‎CDT [CDI‏ رابطة ذرة كربون واحدة أو ليس به ذرات كربون بين بولي مكاريد الكبسولي والبروتين الحامل ‎carrier protein‏ ؛ ‎Win‏ ينتج عن استخدام 00011 رابطة ‎thioether‏ تساهمية بين بولي سكاريد الكبسولي والبروتين الحامل. ‎EAE‏
اسم كانت الطريقة المعتمدة على ‎PDPH‏ هي عملية متعددة الخطوات تضمنت تنشيط بولي سكاريد إزالة مجموعة حماية ‎thiol‏ على بولي سكاريد تنقية المركب الوسيط من بولي سكاريد المنشط؛ تنشيط وتنقية حامل البروتين» واقتران المكونات المنشطة متبوعاً بالتنقية. في هذه الطريقة؛ تقاعلت بولي سكاريدات الكبسولية للنمط المصلي ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus‏ ‏© 801605 مع ‎dcarbodiimide ; PDPH‏ محلول ‎Sk‏ على سبيل المثال )+ ج ‎MES‏ لإنتاج بولي سكاريدات مرتبطة ب 010011. تفاعلت بولي سكاريدات المرتبطة ب ‎PDPH‏ مع عامل اختزال لإنتاج بولي سكاريدات منشطة يتم تنقيتها عندئذ. تفاعلت البروتينات الحاملة مع : ‎bromoacetic acid N-hydroxysuccinimide ester‏ في محلول ‎Sk‏ لإنتاج بروتينات حاملة منشطة يتم تنقيتها عندئذ. تفاعلت عندئذ بولي سكاريد للنمط المصلي ‎A‏ المنشطة المنقاة مع ‎Ve‏ البروتينات الحاملة المنشطة المنقاة لإنتاج مقترنات بولي سكاريدات للنمط المصلي ‎tA‏ البروتين الحامل. على العكس» كانت الطرق المعتمدة على ‎CDT CDI‏ عمليات اقتران وحيدة أو ثنائية الخطوة؛ حيث تم تنشيطبولي سكاريد الكبسولي في وسط ماني (أي ‎(DMSO‏ لتكوين شقوق ‎carbamate‏ ‎imidazole‏ أو ‎acylimidazole (34s ,3alichydroxyls « triazole‏ أو اسيل ثلاثي ازول ‎Vo‏ مع ‎carboxylic acids‏ . تؤدي إضافة حامل البروتين (في ‎(DMSO‏ إلى إزاحة ‎nucleophilic‏ ‏لذ ‎imidazole‏ أو ‎lysine daly triazole‏ وتكوين ‎hydroxyls 1) carbamate lil)‏ المنشطة) ورابط أميد ‎carboxylic acids J)‏ المنشطة). وفقاً لذلك؛ تم تقديم اثنين من الطرق المعتمدةعلى ‎CDI‏ أو 007: عملية أكثر تعقيداً وعملية الإناء الواحد الأبسط. في العملية الأكثر تعقيداً؛ تم تركيب بولي سكاريدات الكبسولية للنمط المصلي ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus ٠‏ مع ‎imidazole‏ أو ‎triazole‏ ؛ جفدت؛ ثم تفاعلت مع ‎CDI‏ أو ‎CDT‏ في مذيب عضوي ‎Je) organic solvent‏ سبيل المثال ‎(DMSO‏ لإنتاج بولي سكاريد النمط المصلي ‎A‏ المنشطة. تمت تنقية بولي سكاريد النمط المصلي ‎A‏ المنشطة ثم تفاعلت مع البروتينات الحاملة في مذيب عضوي لإنتاج ‎life‏ بولي سكاريد النمط ‎=A adh‏ البروتين الحامل. كانت العملية وحيدة الإناء مماثلة للعملية المعقدة باستثناء أن بولي سكاريدات للنمط ‎Yo‏ المصلي ‎A‏ المنشطة لم يتم تنقيتها قبل التفاعل مع البروتينات الحاملة. ‎EAE‏
‎A ¢ —_‏ _ العملية المعقدة ‎CDT /CDI‏ تنشيط بولي سكاريدات: تم خلط بولي سكاريد النمط المصلي ‎A‏ مع ‎٠١‏ مجم من ثلاثي ازول/ جم النمط المصلي ‎A‏ وتم تجفيده. أذيبت الكعكة الناتجة في 010450 عند 7.0 مجم بولي سكاريد ‎[A ad) hall‏ مل. تم © تعيين محتوى الماء. أضيف محلول مخزون محضر حديثاً من ‎CDT‏ عند ‎fone ٠٠١‏ مل في ‎DMSO‏ لتحقيق كمية جزيئية من مكافئ ‎CDT‏ إلى الماء. بطريقة أخرى؛ قد يتم ضبط كمية ‎CDT‏ المضاف لتحقيق درجة عالية أو منخفضة من التنشيط. ترك ذلك لمدة 30 دقيقة عند ‎TY‏ م. تنقية بولي سكاريد النمط المصلي ‎A‏ المنشط: تم صب محلول النمط ‎A Lad‏ المنشط ‎(ACP)‏ ‎Vo‏ في ‎pan Yo‏ من الماء لتدمير الزيادة من ‎.CDT‏ ركز ذلك إلى حجم الأصلي على غشاء ‎PES‏ ‎٠‏ ك دالتون عند تقريباً ‎١‏ مجم/ ‎You‏ ورشح بالديازة ضد الماء ل ‎٠١‏ أحجام على الأقل. تم إتمام هذه الخطوة في أقل من ؛ ساعات. تم خلط ‎sold)‏ المرشحة بالديلزة مع ‎٠١‏ جم ثلاثي ازول/ جم من بولي سكاريدات للنمط ‎A lad)‏ الأصلي وتم تجفيدها. تحضير ‎CRM‏ مجفد: رشح ‎CRM‏ بالديازة ضد 70,4 ‎sucrose 75 [NaCl‏ عند حجم ثابت على غشاء ‎٠١ PES‏ ك دالتون ل ‎٠١‏ أحجام. تم تعيين تركيز الربروتين وأضيف محلول منظم للترشيح بالديازة ‎AIS‏ لجعل تركيز البروتين ‎oJ fan 5,٠‏ وبالتالي أعطت نسبة و/ و من ‎NaCl‏ ‎.+,A =CRM‏ تم تجفيد ‎.CRM‏ ‏الاقتران: أذيب بولي سكاريد النمط المصلي ‎A‏ المنشط» المرشح بالديازة في ‎DMSO‏ عند ‎١‏ مجم/ مل. أضيف محلول البورات عند ‎١٠٠١‏ مجم لتحقيق ‎z lz VA‏ ‎٠‏ أعيد تعليق ‎CRM‏ عند ‎Y‏ مجم/ مل 5« عندما اكتمل الذوبان؛ اندمج مع محلول ‎WA CP8‏ ترك ذلك ليتفاعل عند 77م لمدة ‎Yo‏ ساعة. ثم صب تفاعل المقترن في ‎Y¢‏ حجم من 5 مجم بورات ‎H‏ م ‎Ge‏ وترك ليتقلب عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تم ضبطه عندئذ إلى ‎V,0 pH‏ بواسطة 0,0 ج محلول منظم للفوسفات؛ ‎EAE‏
— A ‏اج‎ ك٠٠١‎ PES ‏رشح ذلك خلال مرشح © ميكرون وركز إلى الحجم الأصلي على غشاء‎ .1,5 pH ‏أحجام من الما ع رشح‎ ١٠ ‏ورشح بالديلزة ضد على الأقل‎ Y ‏مجم/ سم‎ ١ ~ ‏دالتون عند حمل‎ eA ‏م-‎ Y ‏ميكرون وخزن عند‎ +, TY ‏الشكل المركز الناتج خلال مرشح‎
CDT [CDI ‏العملية وحيدة الإناء‎ © تبادل المادة الخلوية ‎:CRM197‏ رشحت ‎CRM197‏ بالديلزة للتبادل من المادة الكتلية لتقريباً ‎٠١‏ ‏مجم فوسفات/ ‎Av‏ مجم ‎sucrose 71١ [NaCl‏ ؛ ‎V pH‏ إلى ‎eo‏ مجم ‎[imidazole‏ لا 7 ‎Yo [NaCl‏ مجم ‎pH « octyl-B-D-glucopyranoside‏ 7._سمح _التبادل بإزالة ‎sucrose 5 phosphate‏ الذي كان ضاراً بالاقتران وحدد محتوى ‎sodium chloride‏ المنقول للاقتران. أضيف ‎octyl-B-D-glucopyranoside‏ لمنع تكون الجزئ بعد الترشيح المعقم. imidazole ‏تتم تبادل مادة 40/197 بواسطة ترشيح التدفق المماسي ضد © مجمزئ من‎ ٠ ‏أجسام مرشحة بالديلزة‎ ٠١ ‏حتى‎ ١ pH octyl-B-D-glucopyranoside ‏مجم‎ ٠ ‏لام‎ ‏عند تركيز محتجز (مركز) تقريباً ؛ مجم/ مل. كان حقن‎ 10K MWCO PES ‏باستخدام أغشية‎ ‏مجم/‎ ١ ‏وتركيز 040/0197 النهائي المستهدف في المادة كان‎ 12 [aha ٠١ ‏الغشاء النموذجي‎ ‏مل. خزنت 68001197 عند مح م.‎ ‎١‏ التنشيط/ الاقتران: تكونت عملية التنشيبط/ الاقتران للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ من الخطوات التالية: ‎)١‏ تبادل المادة الخلوية ل ‎(Y <CRMI9T‏ تركيب بولي سكاريدات ؛ 7( تجميد الغلاف والتجفيد ل 0140/1197 و بولي سكاريدات المركب؛ ¢ ( ذوبان بولي سكاريدات المجفد 197 ‎CRM‏ ؛ °( تنشيط بولي سكاريدات ؛ ‎)١‏ اقتران بولي سكاريدات المنشط مع 040/197؛ ‎)١7‏ تنقية المقترن (التخفيف؛ ‎Ye‏ الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ ؛ الترشيح المعقم). ثم تركيب بولي سكاريدات مع أ جرام من ‎١ a‏ 7 ¢— ثلاثني ازول لكل جرام من بولي سكاريدات. أضيف السواغ على هيئة مسحوق إلى بولي سكاريدات ؛ مع محلول تم الحصول عليه بعد أقل من ‎V0‏ دقيقة من الخلط عند درجة الحرارة المحيطة. ‎EAE
تم تجميد غلاف بولي سكاريدات المركب 5 ‎CRM197‏ بشكل منفصل باستخدام ‎ethanol ala‏ ‎La Von‏ كان الحجم لكل زجاجة ‎١‏ لتر تقريباً 506 مل. [لذوبان بولي سكاريدات ؛ أضيف ‎DMSO‏ إلى زجاجات التجفيد الفردية للبولي مكاريدات للحصول على المعلق ثم نقل إلى وعاء تفاعل تنشيط/ اقتران للتسخين.
0 أضيف ‎DMSO‏ للحصول على تركيز ¥ جم/ لتر. تم الحصول على محلول صافي على هيئة ‎Glee‏ يصل تقريباً إلى £0 م مع الخلط. برد المحلول عندئذ إلى ‎YY‏ م + 7 م. لذوبان ‎(CRM197‏ أضيف ‎DMSO‏ إلى زجاجات التجفيد الفردية المحتوية على ‎CRM197‏ ‏للحصول على معلق ثم نقل إلى وعاء ثاني للخلط. أضيف ‎DMSO‏ للحصول على تركيز ¥ جم/ ل. تم الحصول على محلول صاف في أقل من
‎١٠# ٠‏ دقيقة. تم أخذ عينة من محلول ‎Js‏ سكاريدات / ‎DMSO‏ لتحليل ‎Karl Fischer‏ لتعيين محتوى الرطوبة. تم تحضير ‎CDT‏ على هيئة محلول ‎٠٠١‏ مجم/ مل في 01/50 وأضيف اعتماداً على محتوى الرطوبة المعين. أجريت إضافة مستمرة لمحلول ‎CDT‏ خلال 0 دقائق تقريباً عند ‎TY‏ + م مع الخلط.
‎١‏ ترك التفاعل ليستمر بحد أدنى لمدة 30 دقيقة عند 77 م + 7 م. تم أخذ عينة من التفاعل لتعيين مستوى التنشيط ‎[YY UV)‏ 505 نانو م) ثم أضيف ‎٠٠١‏ مجم ‎pH sodium borate‏ 1 للحصول على 71,5 محلول مائي. قلب محلول اتفاعل عندئذ بحد أدنى لمدة ‎Ve‏ دقيقة عند 7 م ‎BYE‏ ‏لاقتران . بولي سكاريد المنشط مع ‎(CRMI97‏ أضيف ‎DMSO‏ لاستهداف تركيز تفاعل ‎VA‏
‎Yo‏ مجم/ مل. أضيف عندئذ 081/197 المذاب في ‎DMSO‏ إلى محلول بولي سكاريد المنشط مع الخلط. قلب التفاعل لمدة ؛ ساعات بحد أدنى عند 7م + 7م. تم نخفيف محلول التفاعل ‎٠١‏ مرات بإضافته إلى © مجم ‎pH « sodium tetraborate‏ 5 مع الخلط لتحليل مجموعات التنشيط المتبقية مائياً. أمرار المحلول المخفف ‎diluent‏ خلال مرشح 0
‎EAE
‎A 7 _‏ _ ميكرو وركز لاستهداف تركيز محتجز ‎٠١‏ جم/ ل. أجرى ترشيح التدفق المماسي باستخدام أغشية سيليلوز متحددة ‎300K‏ من خلال ‎Yo‏ حجم الترشيح بالديلزة 0181711081100 مع © مجم سكسينات؛ ‎.١7 pH‏ كان حقن الغشاء النموذجي ‎[aha ١‏ 2 أمرار المقترن المنقى من خلال مرشح ‎TY‏ ميكرون وخزن عند ‎Y‏ م- 8 م. © مثال ؛: اقتران بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ باستخدام عملية الاقتران وحيدة الإناء والمعقدة. يوضح هذا المثال أن المدى المختار سابقاً من الأوزان الجزيئية ل بولي سكاريد الكبسولي يمكن استخدامه للاقتران في أي من عملية الإناء الواحد أو المعقدة. يتم إنتاج بولي سكاريد كبيرة بشكل ابتدائي بواسطة الخلايا ‎Ayal‏ ويمكن التحكم في مدى ‎٠‏ الوزن الجزيئي الناتج بواسطة ‎pH‏ وحرارة عملية التحلل المائي في مثال ‎WS) ١‏ وضح في جدول ‎L(Y‏ في هذا المثال؛ اختيرت ثمانية تشغيلات ‎led‏ تراوح الوزن ‎Asad)‏ للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ من حوالي 880 ك دالتون إلى حوالي ‎١١١‏ ك دالتون وأجري الاقتران باستخدام التنتشيط بواسطة ‎1,1-carbonyl-di—(1,2,4-triazole)‏ للبولي سكاريد الكبسولي ‎ball‏ ‏المصلي ‎A‏ انظر جدول ‎A‏ ‏| تراوحت الأوزان الجزيئية للمقترنات الناتجة من 545 ك دالتون إلى ‎١7٠08‏ ك دالتون. تراوح عدد ‎lysines Jf‏ المقترنة لكل ‎CRM‏ من ‎VY‏ بحد أقصى إلى 7 بحد أدنى. تراوح السكر الحر من 7 كحد كبير إلى ‎7١1‏ كحد أصغر. جدول ‎tA‏ مقترنات بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 8 التي تم تحضيرها بواسطة بولي سكاريدات كبسولية ‎SA‏ دالتون إلى ٠ك‏ دالتون ‎Poly‏ ‏إنتاج سكر | الوزن الجزيئي ‎MW‏ ‏العملية | التشغيل ‎saccharide‏ | براسطة ‎lysines | SEC-MALLS‏ (ك ‎JA JA‏ & دالتون ‎A] a‏ )7( | ك دلتقن) ‎tAE‏
‎A A —_‏ _ ‎Poly‏ ‏إنتاج سكر | الوزن الجزيئي ‎MW‏ ‏العملية | التشغيل ‎saccharide‏ | براسطة ‎lysines | SEC-MALLS‏ (ك ‎JA JA‏ & دالتون ‎A] a‏ )7( | ك دلتون) الإناء 0 ‎IB‏ ‎IB‏ ‏مثال 0 تقييم بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ الأصلي والمعالج بالقاعدة المقترن في نموذج تجرثم الدم لفأر تم تقييم أهمية مجموعات ا/0-80©617_الموجودة في بولي سكاريد للنمط المصلي ‎A‏ الأصلي قبل الاقتران لاستحثاث استجابات الجسم المضاد الوظيفية لمقترنات ساريد الكبسولية.
-04- أضيف ‎O-Acetylated‏ إلى بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ تحت ظروف قاعدية معتدلة؛ وأكبر كل من ‎NMR‏ والمعالجة بكروماتوجراف الايون ‎lon Chromatography (IC)‏ ‎de ole‏ إضافة ‎O-Acetylated‏ .في ‎Ju‏ مكاريد الكبسولي للنمط ‎Ahad‏ ‎.de-O-Ac-CRM‏ تم تحضير مقترن ‎CP8 de-O-Ac-CRM‏ عن طريق ‎OE‏ بولي © مكاريدات ‎CP8‏ 0-0-6 مع ‎CRM‏ بواسطة كيمياء 10011 كما وصف في مثال ‎LY‏ أظهر مقترنبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ بشكل غير متوقع عدم وجود مجموعات ‎acetyl‏ ‏قابلة للقياس بواسطة طريقة ‎LIC‏ يمكن أن يرجع ذلك للاختلافات في التركيب؛ مواضع إضافة 0-0 _مقارنة ب بولي مكاريدات الكبسولية ‎ge‏ المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ الأخرىء التي بدورها تسبب إزالة أو تعديل لمجموعات ‎acetyl‏ في ‎٠‏ - بولي سكاريدات الكبسولية للنمط المصلي / أثناء الاقتران. استخدام نموذج تجرثم الدم لفأر لتقييم كفاءة بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ الأصلي والمعالج بقاعدة المقترن مع ‎.CRM197‏ تم تطعيم مجموعات ‎BALB/c (hdl‏ الإناث ‎/١٠(‏ ‏مجموعة) في الاسابيع صفرء ؟ و١‏ بواسطة ‎١‏ ميكرو جم من بولي مكاريد ‎polysaccharides‏ ‏الكبسولي للنمط المصلي ‎de—O-Ac-CRM A‏ أو ‎١‏ ميكرو جم من بولي سكاريد الكبسولي ‎Yo‏ للنمط المصلي ‎A‏ /لل6-04/-0. تمت صياغة اللقاحات بواسطة ‎YY‏ ميكرو جم 1004. تم حقن الحيوانات بواسطة 075/0003 من 8016015 .5؛ وتم عد البكتريا من الدم بعد ثلاث ساعات. أظهرت البيانات أنه كان هناك انخفاض ذو دلالة إحصائية ‎=p)‏ 717,.) في ‎cfu‏ ‏البكتيري المسترد من دم الحيوانات التي تم تطعيمها بواسطة مقترن بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ الأصلي كما عيين بواسطة اختبار- ‎Student t‏ (جدول 1). في الحيوانات التي تم ‎٠‏ تطعيمها بواسطة ‎ok‏ بولي سكاريدات ‎A lad ball‏ المعالج بالقاعدة؛ كان ‎cfu‏ البكتيري المسترد من الدم مماثل لمجموعة التحكم المرجعي للمحلول الملحي. جدول 4: مقترنات بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط المصلي 8- ‎CRM197‏ ‏تقلل تجرثم_الدم ‎Ul‏ عن المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ 3 في ‎odd‏ ‎EAE‏
‎q «=‏ — الدلالة ‎antigen‏ السلالة/ الجرعة | ‎[CFU J‏ الدم ( قيمةم ) ‎PFESA0003 ©‏ ¢0 § ‎x 108| 9870-66-01‏ 1.14 مثال 1: تقييم بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ الأصلي المعالج بقاعدة المقترن في نموذج تجرثم الدم لفأر تم تقييم بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ ‏لقدرته على حماية ‎AN‏ في نموذج التهاب الكلية وحوضها. انخفض العد البكتيري في دم ‎OAH‏ ‏التي تلقت حقن المكورات العنقودية الذهبية ‎Jala Staphylococcus aureus‏ البريتون ‎intraperitoneally ©‏ بشكل واضح مقارنة بالتحكمات المرجعية التي تم تطعيمها بواسطة ‎PBS‏ ‏أجريت دراستين لتقيم كفاءة مقترن ‎—CP8‏ 080/197 في نموذج تجرثم الدم لفأر؛ الموصوف سابقاً بعد الحقن بواسطة المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ 8 (النمط ‎L(A‏ أظهرت الدراسة الأولى (شكل 0( انخفاض واضح في تجرثم ‎pall‏ (م ‎L(+, Fo A =‏ للدراسة؛ تم تطعيم مجموعات فثران ‎Swiss Webster‏ عمرها 7- ‎A‏ اسابيع ( 7 ‎(Ve = Vo‏ بشكل فعال بواسطة حقن تحت الجلد ‎١( subcutaneously‏ ميكرو جم من بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي ‎CRM197 —A‏ ومحلول ملحي كل منهم ثم صيا ‎Furs‏ مع ‎A‏ ميكرو جو من 1004 عند صفرء ‏ £5 أسابيع وتم الحقن في الأسبوع 6 بواسطة طريقة الحقن داخل الوريد ‎intravenously‏ بواسطة 275/0268 من المكورات العنقودية الذهبية (النمط ‎(A‏ قبل الحقن أجريت تجارب لاستمثال جرعة سلالة الحقن في العمر الذي يبلغه الفأر بعد ثلاث عمليات ‎Vo‏ تلقيح. أجري التقييم الأحصائي لدراسات البقاء على قيد ‎shall‏ بواسطة تحليل ‎Kaplan-Meier‏ ‏مثال 7: النشاط الأبسوني للأمصال من فثران تم تطعيمها بواسطة مقترنات بولي سكاريدات كبسولية للنمط المصلي ‎A‏ أصلية ومعدلة كيميائياً تمت مقارنة أمصال فأر مختارة ‎=n)‏ 0( بها معايرات بولي مكاريدات كبسولية للنمط المصلي ‎A‏ من دراسة التطعيم مع النشاط الاوبسوني ‎EAE‏
باستخدام سلالة ‎[PFESA0005‏ توضح نتائج ‎OPA‏ (جدول ‎)٠١‏ أن فقط المقترنات التي تم تحضيرها بواسطة اقتران بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ الأصلي أظهرت أجسام مضادة أبسونية في الفئران. من الجدير بالملاحظة أن مقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ ‏068-06 كان مولد للمناعة في الفثران ولكن الأجسام المضادة التي خرجت لم تكن أوبسونية في © هذا الاختبار. سجلت معايرات ‎OPA‏ على أنها تبادلية للتخفيف الذي عنده لوحظ قتل ‎4٠0‏ 7. جدول ‎:٠‏ النشاط الاوبسوني للبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ‎A‏ الأصلي مقابل بولي سكاريد كبسولي ‎hall‏ المصلي ‎A‏ ©86/-06-0- أمصال فأر تم تطعيمة بواسطة ‎CRM‏ ‎ds‏ سكاريد ‎polysaccharides‏ كبسولي | بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ كبسولي ‎WKO Jad‏ | أمصال 8 | ‎WkS Jad | 0 Jad‏ مثال ‎1A‏ قتل سلالات المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ بواسطة مضادات الأمصال لمقترن النمط المصلي ‎A‏ يمكن تثبيطه بإضافة بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي ‎A‏ ‎٠‏ الأصلي لتأكيد تخصص القتل؛ أجري اختبار الالتهام الأبسوني في وجود بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي ‎A‏ الأصلي أو بولي سكاريدات للمكورات الرئوية الغير مرتبط ‎«(Pn 14 poly)‏ بشكل أساسي كما وصف سابقاً.أظهرت النتائج (جدول ‎)١١‏ أن وجود بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ الأصلي في خليط التفاعل يثبط ‎PFESA0286 Ji‏ من المكورات العنقودية الذهبية (النمط 8). تؤكد هذه النتائج أن القتل بالالتهام الأبسوني بواسطة الأمصال المناعية ينشأ ‎Vo‏ عن الأجسام المضادة الخاصة بالكبسولة. ‎EAE‏
_qy— ‏تثبط قتل المكورات العنقودية الذهبية‎ A ‏إضافة بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي‎ :١١ ‏جدول‎ ‏بالالتهام الأبسوني بواسطة الأمصال المناعية‎
A ‏كبسولي للنمط المصلي‎ polysaccharides ‏سكاريد‎ ds ‏الموجز : أنتجت كل كيمياء الاقتران‎ ‏لم يكن هناك اختلافات‎ .0850/197 carrier protein ‏مرتبط تساهمياً مع البروتين الحامل‎ ‏البروتين وإنتاجات المقترنات‎ A ‏بولي سكاريدات للنمط المصلي‎ Ga ‏؛‎ all ‏واضحة في مكاريد‎ © ‏الناتجة بواسطة هذه الطرق.‎
EAE
سمو مثال 4: تحضير بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ في هذا المثال؛ يتم وصف؛ إنتاج معدلات حجم مختلفة منبولي مكاريد ‎polysaccharides‏ ‏الكبسولي النمط المصلي © من ‎aureus‏ .5. يتم توضيح تركيب وحدة تكراربولي سكاريد © الكبسولي للنمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ في شكل ‎LT‏ تعتبر الطرق الموصوفة هنا فعالة في إنتاج بولي سكاريد كبسولي من النمط المصلي 0 له أوزان جزيئية تتراوح من حوالي ‎٠١‏ ك دالتون إلى ‎Ace‏ ك دالتون. عن طريق الاختيار ‎A‏ ‏للظروف؛ يمكن عزل وتنقية بولي سكاريدات كبسولية من النمط المصلي © عالية الوزن الجزيئي يتراوح وزنها الجزيئي من ‎on‏ ك دالتون إلى ‎Ave‏ ك دالتون. للاستخدام في التركيبات الولدة ‎٠‏ _للمناعة؛ يمكن عزل وتنقية بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © يتراوح وزن الجزيئي من ‎١7١‏ ك دالتون إلى ‎Yoo‏ ك دالتون» من ‎7١‏ ك دالتون إلى ‎١5١‏ ك دالتون ومعدلات مرغوبة أخرى كثيرة. اختيرت السلالة 068580266 لإنتاج بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 0 اعتماداً على خصائص النمو ومقدار الكبسولة الناتجة. لإنتاجبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ©؛ تم إنماء سلالة ‎PFESAQ266‏ في وسط معقد ‎Vo‏ يتكون بشكل أساسي من مصدر الكربون (إما ‎lactose‏ أو ‎sucrose‏ )؛ دقيق صويا محلل مائياً كمصدر ‎nitrogen‏ ؛ وفلزات نادرة. تم إنماء ‎ADL‏ في مفاعلات حيوية ‎sad‏ 7 إلى © أيام. أجريت عملية تخمر سلالة 0755/0266 كما وضح بالتفصيل سابقاً. في وقت الحصاد؛ كانت 0 لمزرعة ‎LY, TA‏ وضعت المزرعة في أوتوكلاف لمدة ساعة واحدة وبعد ‎cal)‏ عولجت المزرعة كما وصف ‎Bile‏ لفصل الخلايا من المادة الطافية. تم استرداد تقريباً ‎١‏ لتر من المادة ‎٠‏ الطافية المرشحة والمركزة والخلايا . قبل وضعها فى الاتوكلاف (المعقام) ؛ ازيلت العينة لاختبار مستوى 10*17 المعوى 5 ‎(SEB)‏ ‎(Enterotoxin B)‏ المتعلق بالمكورات العنقودية ‎Staphylococcal infections‏ فى المزرعة . فى وجود 70.60 من ‎polysorbate‏ 860 ؛ كان تركيز ‎SEB‏ فى التخمر ‎Yo -١١‏ نانوجم/ مل اظهرت التجارب السابقة أن وضع المزرعة فى الاوتوكلاف لمدة ساعة واحدة يقلل مستوى ‎SEB‏ ‎EAE‏
الى أقل من ‎١,١‏ نانوجم / مل والذى هو أقل من حد الكشف لأداة م04 1. تم تحميل بولي سكاريدات المرشح بالديلزة» المجزأ ب ‎Sepharose AEC ase le ethanol‏ © وروق بواسطة تدريج خطى من ‎NaCl‏ كما وصف مابقاً . تم تحليل الأجزاء بواسطة اختبار 0 - ‎acetyl‏ واختبار الانتشار المناعى المضاعف لوجود بولي سكاريد ‎hall‏ المصلي © واختبار ‎phosphate ©‏ لوجود ‎(TA) teichoic acid‏ . تم الكشف عن ‎amy‏ بولي مكاريد ‎ball‏ ‎Lad‏ © فى الأجزاء ‎٠١‏ إلى ‎Veo‏ (الأشكال 7أ- ب). لتقليل التلوث بواسطة ‎teichoic acid‏ ‎٠‏ تم تجميع الأجزاء 70 إلى 85 وتم أكسدة أي ‎teichoic acid‏ متبقي بواسطة -50010107 ‎metaperiodate‏ للسماح بإزالتها بواسطة الترشيح بالديلزة ‎3K diafiltration‏ ضد ‎H20‏
مقطر.
‎٠‏ اجريت تنقيةبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © المستخدم لتحضير المقترنات بواسطة اثنين من الطرق المختلفة التى تعتمد على درجة الحرارة المرتفعة ‎pH;‏ منخفض للعمل على خروج الكبسولة من الخلية وتقليل الوزن الجزيئى بولي سكاريدات. ‎added‏ الوزن الجزيئى الناتج على الزمن » درجة الحرارة و ‎pH‏ لخطوة التحلل المائى . أجري تمييزبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي * باستخدام التقنيات المحددة فى جدول ١؛‏ سابقاً. ينتج عن بولي سكاريد الكبسولي الناتجة بواسطة
‎١‏ الطرق الموصوفة لاحقاً بولي سكاريدات مميزة جيداً نقية لها مستويات منخفضة من البروتين ؛ الحمض النووى » ‎peptidoglycan‏ وملوثات ‎teichoic acid‏ . فى الطريقة الأولى ؛ بعد انبعاث بولي سكاريد الكبسولي من الخلية وانخفاض الوزن الجزيئى عولج المستحضر بواسطة كوكتيل من الانزيمات ‎Je)‏ سبيل المثال ‎ribonuclease, deoxyribonuclease, lysozyme and‏ ‎aagd (protease‏ الشوائب . بعد التحضين ¢ تم ترسيب الشوائب المتبقية بإضافة ‎ethanol‏
‎Ye‏ (ثركيز نهائي حوالى 775 ) . بعد إزالة ‎asd) ethanol‏ تم تحميل محلول يحتوى على بولي سكاريد الكبسولي على عمود تبادل الأنيون ‎(Q-Sepharose) anion exchange column‏ ‎Ga‏ بواسطة تدريج ملح خطى. تم تجميع الأجزاء المحتوية على بولي سكاريد الكبسولي وعولجت بواسطة ‎sodium metaperiodate‏ . نتج عن هذه المعالجة التحلل المائى التأكسدي لملوث ‎teichoic acid‏ المتبقي؛ ولكنه لم ‎fig‏ على بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي
‎EAE
ه40 النمط المصلي ‎A‏ . أوقف التفاعل ورشح بالديازة ضد ماء مقطر ‎(dH20)‏ لإزالة أى كواشف متبقية ومنتجات ثانوية. استخدمت الطريقة الثانية لإنتاج بولي سكاريد الكبسولي بدون استخدام انزيمات لهضم الشوائب المشتقة من الخلية المختلفة . فى هذا النموذج ؛ بعد انبعاث بولي سكاريد الكبسولي من الخلية وانخفاض الوزن الجزيئي ؛ تم ترويق مرق التخمر المحلل ‎Wile‏ بواسطة الترشيح الدقيق متبوعاً بالترشيح الفائق والترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ . عولج المحلول بواسطة كربون منشط ‎AY‏ ‏الشوائب . بعد معالجة الكربون ؛ عولج الحيوان بواسطة ‎sodium metaperiodate‏ الأكسدة ‎teichoic acid‏ المتبقى متبوعاً بالايقاف بواسطة ‎propylene glycol‏ . ركزت المادة ورشحت ‎shally‏ ضد ‎dH20‏ لإزالة أى كواشف متبقية ومنتجات ثانوية متبقية. ينتج عن المستحضرات ‎٠‏ الناتجة باستخدام أى طريقة بولي سكاريدات كبسولية نقية لها مستويات منخفضة من ملوثات البروتين ¢ الحمض النووى ‎teichoic acid yj‏ . يمكن استخدام الطرق الموصوفة لإنتاج معدلات محددة من بولي سكاريدات عالية الوزن الجزيئي المرغوبة عن طريق معالجة ظروف التحلل المائي. يتم توضيح أمثلةبولي سكاريد الكبسولي الذى يمكن الحصول عليه بواسطة الطرق الموصوفة هنا فى جدول ‎VY‏ لاحقاً . تشغيل اتبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © المنقى ‎Yo‏ لها نقاء ‎Sle‏ كما أشير عن طريق عدم وجود ‎peptidoglycan « (TA) teichoic acid‏ وبروتين متبقى منخفض. انظر ؛ الجداول ‎١١‏ و3١‏ . مدى الأوزان الجزيئية يمتد من ‎١١7,١7‏ ك دالتون إلى 800 ك دالتون وكانت بولي سكاريدات المنقاة مضاف له ‎acetyl‏ بدرجة كبيرة عند ‎O‏ ‏» تتراوح من ‎1٠٠-796‏ وكانت مضاف لها ‎N-acetylated‏ بنسبة ‎ZY vv‏ كانت إنتاجات عمليات تنقيةبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © هي 779 إلى ‎ZY‏ واختلف حجمبولي ‎Ye‏ مكاريد الكبسولي النمط المصلي المنقى من ‎Yo‏ ك جالتون إلى 65 ك دالتون (انظر جدول ‎CVF‏ ‏كان مستوى تلوث ‎(TA) teichoic acid‏ مقبولاً وكانت مستويات البروتينات المتبقية والحمض النووي في معدلات مقبولة أيضاً. كانت أطياف ‎NMR‏ لل بولي سكاريد النمط المصلي © مماثلة لتلك المسجلة في المجال. جدول ‎VY‏ تمييز بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 0 ‎EAE‏
_ أ ‎q‏ _ إجمالي الوزن 0 العينة | 008المنقى | الإنتاج | الجزيئي البروتين | الحمض النووي | ‎ACETYL‏ ‎٠6٠١ asd) JA‏ (ك دالتون) نانوم) ‎NMR‏ ‏مجم ‎(=e)‏ |7 (و/و)| 7 واد) 0 جدول ‎VY‏ تمييز إضافي للبولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي النمط ‎ad‏ © الوزن الجزيئي (ك | 005 (مجم/ ‎acetyl -١ال acetyl -0 ١‏ العينة ‎(cst‏ أمل) ‎NMR‏ )7( | هرية ‎NMR | NMR‏ (7) نت سن ‎re‏ ‏اختيار الوزن الجزيئي لل بولي سكاريدات الكبسولية : أثبت التحليل الحركى أنه يمكن انتاج مدى واسع من الأوزان الجزيئية بولي سكاريد الكبسولي بواسطة الطرق الموصوفة هنا . بشكل ابتدائى ؛ تم انتاج بولي سكاريدات أكبر بواسطة الخلايا البكتيرية « وبصورة متتالية» مدى © وزن جزيئى مرغوب مختار ثم التنقية عن طريق الحفاظ على ‎pH‏ والظروف الحرارية لخطوات التسخين والتحلل ‎Sl)‏ المعالجة الحرارية لمرق تخمر ‎S.aureus‏ هي خطوة العملية بين التخمر
_ q 7 _
واسترداد بولي سكاريد الكبسولي . تستخدم خطوة العملية هذه ‎sal)‏ لعلاج المرق مضبوط ‎PH‏
لقتل الخلايا ¢ ‎toxins‏ المعوية الغير نشطة ؛ انبعاث بولي سكاريد المرتبط بالخلية وتقليل الوزن
الجزيئى للحجم المرغوب. من بين هذه الأهداف ؛ كان تقليل الوزن الجزيئى هو الأبطء من ناحية
زمن المعالجة اللازم لهذه الخطوة. لذلك ؛ تم تحقيق الأهداف الأخرى بشكل محتوم داخل زمن
‎oo‏ المعالجة المأخوذ فى الاعتبار.
‏المعالجة الحرارية ‎Heat treatment‏ : تم تعيين ظروف ‎PH‏ ودرجة حرارة معدلات الوزن ‎ad‏
‏المختلفة المختارة بولي سكاريد الكبسولي ‏ . استخدم جهاز التخمر ‎Vo Biolafitte‏ لتر لهذه
‏حوالى ‎٠٠0١0‏ لفة فى الدقيقة ؛ تم ضبط ‎pH‏ للمرق بواسطة ‎sulfuricacid‏ مركز. عندئذ ؛ تم رفع ‎٠‏ درجة حرارة المرق إلى قيمة محددة. عندما تم ‎fsb‏ زمن المعالجة المرغوب ؛ برد المرق لدرجة
‏حرارة الغرفة . في العملية تم أخذ العينات لتعيين تركيز بولي سكاريد ووزنه الجزيئى بواسطة ‎Seal‏
‎SEC-MALLS ; HPLC‏ ؛ على الترتيب . استخدمت بيانات الوزن الجزيئي ‎(MW)‏ فى التحليل
‏الحركي . ثم تعيين مخططات ‎MW‏ بمرور الوقت عند ‎tv 8 pH‏ )و ,5 انظر شكل ‎LIA‏
‏أجريت حركيات التحلل المائى للحمض المعتدل للبولي سكاريدات باستخدام بولي سكاريد الكبسولي ‎١‏ النمط المصلي ‎A‏ المنقى الذى تم الحصول عليه من العملية . تم ضبط محلول بولي مكاريد
‏المنقى إلى ‎pH‏ المرغوب للتجربة بواسطة ‎sulfuric acid‏ . تم نقل حوالى ‎V0‏ مل من المحلول
‏الى كل من أنابيب الطرد المركزى ‎١١‏ مل.
‏وضعت الأنابيب فى حمام زيت مزود بنظام تحكم فى درجة الحرارة المضبوطة . تم إخراج الأنابيب
‏عند فترة زمنية محددة سابقاً وأوقفت فى دلو ثلج. عند نهاية التجربة « أضيف جزء ١ج‏ محلول ‎Yo‏ منظم تريس ‎pH)‏ 7,5) إلى العينة لضبط ‎He pH‏ اخرى إلى حوالى ‎١7‏ . تم تحليل العينات
‏بواسطة جهاز ‎SEC-MALLS‏ . استخدمت بيانات ‎MW‏ فى تحليل الحركية . تم تعيين تأثير
‏درجة الحرارة على مخطط ‎CPS IMW‏ عند ‎pH‏ 0,£ بمرور الوقت . انظر شكل ‎coh‏
‏النتائج
م ‎q‏ _ كما وضح في شكل ‎JA‏ كان 1م المنخفض أكثر فاعلية في تقليل الوزن الجزيئي لل بولي سكاريد. في هذا المثال؛ يمكن إنتاج معدلات أوزان جزيئية ما بين 700 ك دالتون و6060 ك دالتون باستخدام ‎pH‏ © عند © 4م ما بين ‎١١‏ دقيقة و١٠١٠‏ دقيقة. انظر شكل ‎LTA‏ بشكل محتمل يمكن أن ينتج عن اختيار ‎pH‏ 5,؛ عند 56 ثم لمدة ما بين ‎Vo‏ ‏5 دقيقة و ‎YY.‏ دقيقة معدلات وزن جزيني للبولي سكاريدات ما بين ٠ك‏ دالتون و ‎EIN‏ ‏دالتون. بالإضافة إلى ذلك؛ اختيار ‎pH‏ 0,؛ عند 40 م لمدة ما بين ‎١١‏ دقيقة و١١‏ دقيقة يمكن أن يؤدي إلى معدلات وزن جزيئي للبولي سكاريدات ما بين ‎١7١‏ ك دالتون و00 ك دالتون. كما وضح في شكل ‎coh‏ درجة الحرارة الأعلى تقابل أسرع معدل في التحلل المائي وأوزان جزيئية أكثر اتسعاً للبولي سكاريد الناتج بمرور الوقت. بطريقة أخري للتوضيح» استخدام درجة حرارة ‎A‏ منخفضة ٠ه‏ 8 م مقابل ‎o‏ 4 م عند نفس ‎pH‏ بسبب مدى أضيق من الأوزان الجزيئية للبولي سكاريد علاوة على ذلك؛ يوضح شكل § الارتباط بين الوزن الجزيئي للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © المنقى مع زمن معالجة للتحلل المائي للحمض المعتدل ‎PH)‏ 5 عند 90 ‎Ss‏ ‏سكاريد المنقى عبارة عن منتج نهائي تم الحصول عليه من عملية استرداد تم وصفها سابقاً. أيضاً ‎٠‏ كما وضح في شكل ‎of‏ ينتج عن الزيادة في زمن المعالجة الحرارية ‎ADL‏ المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus PFESAQ00S‏ عند ‎pH‏ 0,£ بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © صغير الوزن الجزيئي؛ بينما أوقات المعالجة الحرارية عند ‎pH‏ 5,؛ نتج عنها بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © عالى الوزن الجزيئي. تتراوح حجم بولي سكاريدات الكبسولية ‎hall‏ المصلي © من حوالي ‎9٠0‏ ك دالتون إلى حوالي ‎YL‏ 770 ك دالتون اعتماداً على طول الفترة الزمنية للمعالجة الحرارة عند ‎pH‏ 0,£. تسمح العلاقة بين زمن المعالجة الحرارية عند ‎pH‏ منخفض وحجم بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 2 المنقي » كما وضح في شكل € بتعيين زمن المعالجة الضروري لإنتا ‎z‏ بولي سكاريد منقى له مدى محدد من الوزن الجزيئي.
_ q q —_ كما عين سابقاً؛ المدى الكامل من الأوزان الجزيئية لل بولي سكاريدات الكبسولية النمط المصلي © من ‎7٠0‏ ك دالتون إلى أكثر من 500 ك دالتون يمكن إنتاج؛ الحصول عليه وتنقيته. قد تستخدم الطرق الموصوفة لإنتا ‎z‏ معدلات محددة من بولي سكاريد الكبسولي عالية الوزن ‎ad‏ مرغوبة على سبيل المثال يتم توضيحها في جدول ‎VE‏ المدى الضيق نسبياً من الوزن الجزيئي للبولي © مكاريد الناتج حيثما تتراوح الأوزان الجزيئية القصوى من 7+ ك دالتون إلى ‎VEY‏ دالتون يمثل مدى مميز جيداً من الأوزان الجزيئية التي قد يتم الحصول عليها بواسطة الطرق الموصوفة هنا. المدى المميز تحديداً للبولي سكاريد عالية الوزن الجزيئي؛ المتراوح من ‎7١‏ ك دالتون إلى 060 ك دالتون أو من ‎7١‏ ك دالتون إلى ‎١5٠0‏ ك دالتون؛ يكون مفيد في تحضير تركيبات مولدة للمناعة عن طريق اقتران بولي سكاريد الكبسولي مع جزئ أو بروتين ‎carrier protein Jala‏ . ٠٠١ ‏الظروف المستخدمة لإنتاج بولي سكاريد الكبسولي 605 له مدى وزن جزيئي من حوالي‎ ٠ ‏دقيقة. ينتج عن اتحادات مختلفة‎ ١5 ‏5,5؛ لمدة‎ PH a 45 ‏ك دالتون هي كما يلي:‎ ١6١ ‏إلى‎ ‏لها مدى وزن جزيئي حوالي‎ CPS ‏والزمن. بالرغم من ذلك؛ جزيئات‎ shall ‏درجة‎ pH ‏من‎ ‏ال دالتون.‎ ١٠6 ‏إلى‎ Yeo
Vo cad ‏إنتاج مدى محدد من بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © عالي الوزن‎ :٠ 4 ‏جدول‎ بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي * الوزن الجزيئي (ك دالتون) ‎EAE‏
— \ a= ‏بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي * الوزن الجزيئي (ك دالتون)‎ > ‏لم يتم تعيينه‎ =ND 081/197 ‏اقتران بولي سكاريدات الكبسولية النمط المصلي © مع‎ :٠١ ‏مثال‎ ‏يصف هذا المثال عمليات واختبارات تمييز مستخدمة في إنتاج مقترنات بولي سكاريد الكبسولي‎ .CRM197 - Staphylococcus aureus ‏للنمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية‎ ‏من المكورات‎ © adh ‏تم تطوير كيمياء اقتران مختلفة لاقتران بولي سكاريد كبسولي للنمط‎ © . carrier protein ‏العنقودية الذهبية مع هذا البروتين الحامل‎ : ‏ينتج عن هذا الاقتران باستخدام‎ (JE ‏على سبيل‎ ‏تساهمية بين‎ thioether ‏رابطة‎ PDPH (3—(2-pyridyldithio)—propionyl hydrazide)
CDT )1,1- ‏بينما ينتج عن الاقتران باستخدام‎ ¢ carrier protein ‏والبروتين الحامل‎ CP
CP ‏رابط به ذرةٍ كربون واحدة أو ليس به درات كربون بين‎ carboyl-di-1,2,4-triazole) | ٠ ‏مكاريد الكبسولي للنمط المصلي © مع‎ dg ‏اقتران‎ . carrier protein Jalal ‏والبروتين‎ ‎PDPH ‏كيمياء اقتران‎ dandy 7
EAE
-١١١- ‏هي عملية متعددة الخطوات تتضمن تنشيط بولي مكاريد ؛ إزالة مجموعة‎ PDPH ‏كيمياء اقتران‎ ‏بولي سكاريد الوسيط المنشط؛ تنشيط وتنقية بروتين 0140/1197 واقتران‎ dan ‏؛‎ thiol ‏حماية‎ ‏تحتوي على رابط للبولي سكاريد‎ thiol ‏المكونات المنشطة متبوعاً بالتنقية. بعد إدخال مجموعة‎ ‏ارتبط بولي سكاريد الكبسولي للنمط‎ «CRM197 ‏مع حامل البروتين‎ haloacetyl ‏ومجموعة‎ ‏مع حامل البروتين من‎ Staphylococcus aureus ‏من المكورات العنقودية الذهبية‎ A ‏المصلي‎ © ‏عن طريق‎ CRM197 ‏أدخلت مجموعات ا/ا©5200708©0 في البروتين‎ . thioether ‏خلال رابطة‎ . bromoacetic acid ‏من‎ N hydroxysuccimide ester ‏تفاعل مجموعات الامين مع‎ ‏المنشطة بواسطة‎ carboxylate ‏؛ تزدوج مجموعات‎ thiol ‏سكاريد مضاف له‎ dg ‏لإنتاج‎ ‎: ‏من‎ carbodiimide ‏لرابط‎ hydrazide ‏في بولي سكاريد مع مجموعة‎ N= acetylmannosaminouronic acid AD ‏؛ و‎ . sulfhydryl ‏متفاعل مع‎ hydrazide ‏ثنائي المجموعة الوظيفية غير متجاني‎ ‏الناتجة_ عن الاختزال بواسطة‎ 3—(2-pyridyldithio)—-propionyl hydrazide (PDPH) ‏تفاعلت مع مجموعات‎ (Sephadex G25 ‏على عمود‎ SEC ‏والمنقاة باستخدام‎ DTT ‏تساهمي متكون بواسطة إزاحة‎ thioether ‏للبروتين المنشط مما ينتج عنه ارتباط‎ bromoacetyl ‏تم "تطويق" مجموعات‎ . carrier protein ‏والبروتين الحامل‎ polysaccharide ‏بين‎ bromine Yeo ‏ركز خليط‎ .(2-aminoethanethiol hydrochloride) ‏الغير متفاعلة بواسطة‎ bromoacetyl ‏الغير مقترنة بواسطة‎ bromoacetyl ‏التفاعل عندئذ ورشح بالديلزة. تم تطوير مجموعات‎ ‏متفاعلة بعد‎ bromoacetyl ‏عدم تبقي مجموعات‎ ual cysteamine hydrochloride ‏على متبقي‎ acetyl ‏ومجموعة‎ 516800108 thiol ‏الاختزال. كون ذلك رابطة تساهمية بين طرف‎ . bromine ‏بعد إزاحةٌ‎ lysine ٠ ‏الكبسولي للنمط المصلي © من المكورات‎ polysaccharides ‏للبولي سكاريد‎ thiol ‏إضافة‎ -١ ‏تم تنشيط بولي سكاريد أولاً‎ :PDPH ‏بواسطة‎ Staphylococcus aureus ‏العنقودية الذهبية‎
PDPH ‏بواسطة 000011. تم خلط بولي سكاريد مع محلول مخزون‎ thiol ‏عن طريق إضافة‎
H20 ‏مجم/ مل في‎ 4+) EDAC ‏محلول مخزون‎ «(DMSO ‏مجم/ مل في‎ You) ‏محضر حديثاً‎ ‏ج‎ 0١ ‏ج؛ ام 85,؛) لتحضير محلول نهائي‎ 2,2) MES ‏مقطر)؛ ومحلول مخزون منظم‎ Yo
EAE
‎-١ 7‏ ‎(MES‏ و و؛ مجم بولي سكاريد كبسولي/ مل؛ مع الحفاظ على نسبةبولي سكاريد الكبسولي : ‎EDAC: PDPH‏ بالوزن ‎Vio :١‏ للبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي ©. تم تحضين هذا الخليط لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ثم تمت ديلزته ‎X ٠٠0٠١ am‏ حجم ‎H20‏ ‏المقطر أربع مرات باستخدام جهاز ديلزة ‎MWCO‏ 3500 عند ما بين 4 م ‎As‏ م لإزالة ‎PDPH‏ ‏© الغير متفاعل. ‎Jas‏ بولي سكاريد المرتبط مع ‎١,7 PDPH‏ ج ‎DTT‏ وتم التحضين عند درجة حرارة الغرفة لمدة ¥ ساعات أو طوال الليل عند ؛ ثم ‎As‏ م. تم فصل ‎DTT‏ الزائد بالإضافة إلى المنتجات الثانوية للتفاعل من ‎saccharide‏ المنشط بواسطة ‎SEC‏ باستخدام ‎Sephadex iil)‏ وماء مقطر على هيئة طور متحرك. تم اختبار الأجزاء بواسطة اختبار ‎DIDP‏ لمجموعات ‎thiol‏ والأجزاء الإيجابية ‎thiol‏ التي روقبت ‎٠‏ بالقرب من حجم تجويف العمود تم تجميعها. اختبرت مجموعة الأجزاء بواسطة ‎PAHBAH‏ ‏واختبارات ‎O-ACETYL‏ لتعيين درجة التنشيط التي تم تمثيلها على هيئة نسبة جزيئية من الوحدات المتكررة المحتوية على مجموعة ‎thiol‏ (التركيز الجزيئي ‎[thiols‏ التركيزالجزيئي للوحدات المتكررة). تم ‎aad‏ بولي سكاريد المنشط وخزن عند ‎Yom‏ م لحين الحاجة إليه للاقتران. يتم توضيح النتائج من إمكانية استعادة نتائج إضافة ‎Jl thiol‏ بولي سكاريد ‎ball‏ المصلي 0 ‎Vo‏ بواسطة ‎PDPH‏ في جدول ‎ove‏ كانت درجة تنشيط بولي سكاريد ‎Lad hall‏ © في مدى ‎١‏ إلى 7219 والذي يقابل تقريباً جزئ رابط واحد متصل لكل ‎٠١‏ وحدات متكررة من بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي بجزئ رابط واحد لكل خمس وحدات متكررة. جدول ‎:١5‏ دراسة إمكانية استعادة تنشيط بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي للنمط المصلي © بواسطة ‎PDPH-‏ ‎9٠١‏ ‎EAE‏
‎٠ ".-‏ \ — بولي سكاريد . أ ‎oe‏ ] ‎polysaccharides‏ المقياس إنتاج ‎dss‏ النمط|(ي ‎MSH‏ / : جم (7؛ و/و المصلي 5 ‎(MRU‏ مجم مجم ) ( ‎PDPH‏ ‏"- تنشيط البروتين ‎carrier protein Jalal)‏ : بشكل منفصل؛ تم تنشيط البروتين الحامل عن طريق إضافة ‎.bromoacetylation‏ تم تخفيف 040/197 إلى © مجم/ مل بواسطة ‎٠١‏ مجم فوسفات منظم ‎١ pH NaCl 71 phosphate buffered‏ (085) ثم تحضير ‎0,١‏ ج ‎٠,٠ pH NaHCO3‏ باستخدام محلول مخزون ‎١‏ ج. © أضيف ‎hydroxysuccimide ester‏ لاا من ‎(BAANS) bromoacetic acid‏ عند نسبة ‎+,Yo :١ BAANS : CRM197‏ )5/5( باستخدام محلول مخزون ‎٠١ BAANS‏ مجم/ مل 0. تم تحضين خليط التفاعل هذا عند ما بين ؛ ‎As‏ م لمدة ساعة واحدة. ثم تمت تنقيته باستخدام ‎SEC‏ على 6-25 »*«©560080. تم اختبار ‎CRM197‏ المنشط المنقى بواسطة اختبار ‎Lowry‏ لتعيين تركيز البروتين ثم التخفيف بواسطة ‎PBS‏ إلى © مجم/ مل. أضيف 5001058 ‎٠‏ إلى 25 و/ ح كمادة حامية من البرودة وتم تجميد البروتين المنشط وخزن عند -75 م لحين الحاجة إليه للاقتران. كانت عملية إضافة ‎bromoacetyl‏ إلى متبقيات 5106لا ل ‎CRM197‏ ‏متسقة ‎doa‏ مما نتج عنه تنشيط 4 إلى ‎Yo‏ لايسينات ‎lysines‏ من 4؟ لايسينات ‎lysines‏ ‏متاح (انظر جدول ‎.)١١‏ نتج عن التفاعل إنتاجات عالية من البروتين المنشط. جدول 16: إنتاجات ودرجة إضافة ‎CRM197 1 bromoacetyl‏ ‎EAE‏
‎٠ —‏ \ — ‎ial lysines‏ المقياس الإنتاج ‎(n=)‏ (مجم) )2< 5/5( ‎HE‏ ‎=F‏ تفاعل الاقتران: بمجرد تحضير بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي والبروتين الحامل ‎carrier protein‏ المنشط؛ اندمج الاثنين في تفاعل اقتران. ‎cud‏ بولي سكاريد المجفد والمضاف له ‎thiol‏ في ‎«V1‏ ج يورات ‎pH‏ 8,95؛ خلط مع 080/197 مضاف له ‎bromoacetyl ٠‏ مذاب وماء مقطر لتحضير محلول نهائي ‎١,١‏ ج بورات؛ نسبة ‎:١‏ ١و/و‏ ل 7 : بولي سكاريد ؛ و 7 مجم/ مل بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي ©. تم تحضين هذا الخليط عند درحة حرارة الغرفة لمدة ما بين ‎YE, ١١‏ ساعة. تم تطويق مجموعات ‎bromoacetyl‏ غير متفاعلة في البروتين بإضافة ‎cysteamine hydrochloride‏ عند نسبة ‎Y :١ cysteamine :CRM197‏ (و/_و) باستخدام ‎fone ١١‏ مل محلول مخزون من ‎٠‏ | 0516800106 المذاب في )+ ج يورات ‎pH‏ 8,95 والتحضين لمدة ؛ ساعات عند درجة حرارة الغرفة. تمت 480 مقترن بولي سكاريد الكبسولي - 040/197 (المقترن) عن طريق الترشيح بالديلزة ‎٠ diafiltration‏ © مرة ضد 0,4 7 ‎NaCl‏ باستخدام مرشح فائق ‎polyethersulfone‏ ‎-100K‏ ‎EAE‏
مج \ _ النتائج من إمكانية استعادة نتائج دراسات إضافة ‎thiol‏ للبولي مكاريد ‎polysaccharides‏ ‏الكبسولي ‎ball‏ المصلي © مع ‎PDPH‏ أثبتت أن درجة تنشيط بولي سكاريد كانت في مدى 11 7 إلى ‎ally 7 ٠9‏ تقابل تقريباً جزئ رابط واحد متصل لكل ‎٠١‏ وحدات ‎CP‏ متكررة مع جزئ رابط واحد لكل خمس وحدات متكررة. © اتتران بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © مع 0141/1197 بواسطة كيمياء اقتران ‎CDT‏ ‏أعطى ‎CDT‏ عملية اقتران وحيدة الخطوة حيث تم ‎hadi‏ بولي سكاريد في وسط لا ‎Sle‏ ‎(DMSO)‏ لتكوين شقوق ‎carbamate imidazole‏ أو ‎triazole‏ مع ‎hydroxyls‏ متاحة وشقوق ‎acylimidazole‏ أو ‎acyltriazole‏ مع ‎carboxylic acids‏ . تؤدي إضافة حامل البروتين (في ‎(DMSO‏ إلى إزاحة ‎nucleophilic‏ لذ ‎triazole‏ بواسطة ‎lysine‏ وتكوين رابط ‎hydroxyls) carbamate | ٠‏ المنشطة) ورابط ‎carboxylic acids) amide‏ المنشطة). يتم تخفيف محلول التفاعل ‎٠١‏ مرات في محلول مائي في التحضير للتنقية عن طريق ترشيح التدفق المماسي.نتج عن كيمياء الاقتران ‎CDT‏ بولي سكاريد ‎polysaccharides‏ كبسولي للنمط المصلي © مرتبط تساهمياً مع البروتين الحامل ‎carrier protein‏ « والذي أشير إليه بوجود 6 والبروتين في الأجزاء من كروماتوجراف استبعاد الحجم؛ وبواسطة تحليل الحمض ‎yo‏ الأميني للمقترن المطوق بواسطة ‎glycolaldehyde‏ أو المطوق ‎cysteamine‏ ‎.hydrochloride‏ ‏يتم توضيح موجز النتائج من تحضير أجزاء عديدة من المقترنات بواسطة كل من كيمياء ‎PDPH‏ ‎CDT‏ لأحجام بولي سكاريد الكبسولي ‎hall‏ المصلي © في مدى من ‎٠١‏ ك دالتون إلى ‎dtr‏ ‏دالتون في جدول ‎١7‏ لاحقاً. لم يكن هناك اختلافات واضحة في بولي سكاريد الكبسولي الحرء ‎Ye.‏ نسبة بولي سكاريد - البروتين إنتاجات المقترنات الناتجة ‎dail gs‏ كيميا ‎I‏ الاقتران هذه. لم تتغير خاصية تولد المناعة للبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © المقترن عن طريق الاقتران كما ظهر بواسطة تطابق الخط المرسب بين المقترنات و بولي سكاريد الأصلي. جدول ‎VY‏ تمييز بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي 0-— 97 1 ‎CRM‏ المحضر ‎dad gs‏ اثنين من كيمياء الاقتران ‎EAE‏
‎-١ ٠ -‏ ‎aad‏ (الوزن إنتاج | سكر | بروتين الجزيئي أو ‎Kd‏ ‏¢ ¢ النسبة ‎i lysines‏ الكيميا ء ‎CP‏ البروتين ‎o(% 0.3 >) A A‏ الخارج معدلة ‎saccharide Zyl )7( (%) (%)‏ /البروتين ‎٠.١ 6 - 4‏ - هد = ‎FAL‏ ١د‏ إلى ‎١<« yo CDT‏ ‎vi [va YY 3 As YY‏ ‎١٠١.٠ X 8.9‏ ‎PDP‏ |1 - 6 -|؟؟ - الم_يتم الم يتم 9-6 إلى ‎3.١‏ »“ ‎٠ 1 oY H‏ | تعينه | تعينه ‎٠١‏ ‎:ND‏ لم يتم الكشف ‎aie‏ ‏كما وضح ‎Ble‏ قد تستخدم الطرق الموصوفة هنا لإنتاج معدلات محددة من بولي مكاريد الكبسولي عالية الوزن الجزيئي المرغوبة. تكون هناك حاجة لتحضير مقترنات من مدى مختار © سابقاً من وزن جزيثي ‎Je‏ يمكن ترشيحها وتنقيتها للبولي سكاريد ‎polysaccharides‏ الكبسولي للنمط المصلي © للاستخدام في التركيبات المولدة للمناعة. يلخص جدول ‎YA‏ تحليل مقترنات بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 5 حيث تراوح الوزن ‎Jal‏ لبولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © من حوالي 47 ك دالتون إلى ‎١١9‏ ك دالتون وتم تنشيطه بواسطة ‎triazole‏ ‎.(CDT)‏ تراوحت الأوزان الجزيئية للمقترنات الناتجة من ‎Very‏ ك دالتون إلى 17570 ك دالتون. ‎٠‏ تراوح عدد ‎lysines‏ المقترنة لكل 4/197 من ‎NYY Je‏ منخفض ‎Ve‏ تراوح بولي سكاريد للكبسولة الحر من قيمة عالية ‎١8‏ # إلى المنخفضة ‎١١‏ 7. جدول ‎YA‏ المقترنات التي لها مدى وزن جزيئي مختار سابقاً للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 0 ‎EAE‏
‎٠ 7 —‏ \ — التشغيل ‎Poly‏ إنتاج (7) ‎١‏ سكاريد حر | الوزن الجزيئي | ‎lysines‏ معدلة ‎MW‏ )%( بواسطة دالتون) ‎SEC-MALLS‏ ‏(ك دالتون) ينتج اثنين من كيمياء الاقتران بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © مرتبط تساهمياً مع بروتين ‎carrier protein Jala‏ . لم تكن هناك اختلافات واضحة في بولي مكاريد الكبسولي الحرء نسبة بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي «: البروتين وانتاجات المقترنات الناتجة بواسطة © مثال ‎:١١‏ عمليات ‎CDT‏ المعقدة مقابل وحيدة الإناء كما وصف سابقاً؛ تتضمن طرق تحضير المقترنات المولدة للمناعة للاختراع الاقتران التساهمي لل بولي سكاريدات الكبسولية مع البروتينات الحاملة باستخدام كيمياء اقتران تتضمن : ‎CDT (1,1-carboyl-di-1,2,4-triazole) or PDPH (3—(2-pyridyldithio)-‏ ‎propionyl hydrazide).‏ ينتج عن استخدام ‎ODT‏ رابطة 33 كربون واحدة أو ليس به ذرات كربون بين بولي سكاريد الكبسولي والبروتين الحامل ‎carrier protein‏ ؛ بينما ينتج عن استخدام ‎PDPH‏ رابط من خمس ذرات كربون يحتوي على رابطة ‎thioether‏ تساهمية بين بولي سكاريد الكبسولي والبروتين الحامل ‎carrier protein‏ . ‎EAE‏
حم ‎“VW‏ ‏كانت الطريقة المعتمدة على ‎PDPH‏ هي عملية متعددة الخطوات تضمنت تنشيط بولي سكاريد إزالة مجموعة حماية ‎thiol‏ على بولي سكاريد ؛ تنقية المركب الوسيط من بولي سكاريد المنشط؛ تنشيط وتنقية حامل البروتين» واقتران المكونات المنشطة متبوعاً بالتنقية. في هذه الطريقة؛ تقاعلت بولي سكاريدات الكبسولية للنمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus‏ ‎aureus ©‏ مع ‎PDPH‏ و68+500000106 .في مذيب عضوي ‎organic solvent‏ على سبيل المثال ‎DMSO‏ لإنتاج بولي سكاريد مرتبطة ب ‎PDPH‏ ‏تفاعلت بولي سكاريد المرتبطة ب ‎PDPH‏ مع عامل اختزال لإنتاج بولي سكاريد منشطة يتم تنقيتها عندئذ. تفاعلت البروتينات الحاملة مع ‎bromoacetic acid‏ في مذيب عضوي ‎organic‏ ‏1 لإنتاج بروتينات حاملة منشطة يتم تنقيتها عندئذ. تفاعلت ‎Baie‏ بولي سكاريد ‎ball‏ ‎٠‏ المصلي * المنشطة المنقاة مع البروتينات الحاملة المنشطة المنقاة لإنتاج مقترنات بولي سكاريد للنمط المصلي ‎ro‏ البروتين الحامل ‎carrier protein‏ . على العكس؛ كانت الطرق المعتمدة على ‎CDT‏ عمليات اقتران وحيدة ‎Gua shall‏ تم تنشيط بولي سكاريد الكبسولي في وسط مائي (أي ‎(DMSO‏ لتكوين شقوق ‎triazole carbamate‏ مع ‎hydroxyls‏ متاحة وشقوق ‎acylimidazole‏ أو اسيل ثلاثي ازول مع ‎carboxylic acids‏ . ‎١‏ تؤدي إضافة حامل البروتين (في ‎(DMSO‏ إلى ‎imidazole nucleophilic ial)‏ أو ‎triazole‏ ‏بواسطة 5106لا وتكوين رابط ‎hydroxyls) carbamate‏ المنشطة) ورابط أميد ( ‎carboxylic‏ ‏5 المنشطة)؛ وبالتالي السماح بحدوث الاقتران في "إناء واحد". وفقاً لذلك؛ تم تقديم اثنين من الطرق المعتمدة على 007: عملية أكثر تعقيداً وعملية الإناء الواحد الأبسط. في العملية الأكثر تعقيداً؛ تم تركيب بولي سكاريدات الكبسولية للنمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية مع ‎imidazole ٠٠‏ أو ‎triazole‏ ثم تفاعلت مع ‎CDT‏ في مذيب عضوي ‎organic solvent‏ (على سبيل ‎(DMSO JE‏ وحوالي 0,7 7 5[ ح من الماء لإنتاج بولي سكاريد النمط المصلي 0 المنشط. تمت تنقية بولي سكاريد النمط المصلي © المنشطة ثم تفاعلت مع البروتينات الحاملة في ‎cule‏ عضوي ‎WY organic solvent‏ مقترنات بولي سكاريد النمط المصلي #: البروتين الحامل ‎carrier protein‏ . كانت العملية وحيدة الإناء مماثلة للعملية المعقدة باستثناء أن بولي ‎Yo‏ مكاريد ‎hall‏ المصلي © المنشطة لم يتم تنقيتها قبل التفاعل مع البروتينات الحاملة. ‎EAE‏
‎٠ q —_‏ \ _ العملية المعقدة ‎CDT‏ ‏تنشيط بولي سكاريد الكبسولي ‎Lad) hall‏ #: تم خلط بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © مع ‎٠١‏ مجم من ثلاثي ازول/ جم بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي © وتم تجفيده. أذيبت الكعكة الناتجة في ‎DMSO‏ عند ‎٠,١‏ مجم بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي 0[ مل. تم تعيين © محتوى الماء وتم ضبطه إلى ‎١,7‏ 7. أضيف محلول مخزون محضر حديثاً من ‎CDT‏ عند ‎٠٠١‏ ‏مجم/ مل في ‎DMSO‏ لتحقيق زيادة جزيئية ‎٠١‏ مرةٍ من كمية ‎CDT‏ مقارنة بكمية 005. بطريقة أخرى؛ قد يتم ضبط كمية ‎CDT‏ المضاف لتحقيق درجة عالية أو منخفضة من التنشيط. ترك ذلك لمدة ‎Te‏ دقيقة عند ‎TY‏ م. تنقيةبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © المنشط: تم صب محلول من بولي سكاريد الكبسولي ‎٠‏ النمط ‎Lad)‏ © المنشط (8605) في ‎Yo‏ حجم من الماء لتدمير الزيادة من 0607. ركز ذلك إلى حجم الأصلي على غشاء ‎٠١ PES‏ ك دالتون عند تقريباً ‎١‏ مجم/ ‎You‏ ورشح بالديازة ضد الماء ل ‎٠١‏ أحجام على الأقل. تم إتمام هذه الخطوة في أقل من ؛ ساعات. تم خلط المادة المرشحة بالديلزة مع ‎٠١‏ جم ثلاثي ازول/ جم من بولي سكاريد للنمط المصلي © الأصلي وتم تجفيدها . ‎Vo‏ تحضير ‎CRM‏ مجفد: رشح ‎sally CRM‏ ضد 70,4 ‎sucrose 75 [NaCl‏ عند حجم ثابت على غشاء ‎٠١ PES‏ ك دالتون ل ‎٠١‏ أحجام. تم تعيين تركيز الربروتين وأضيف محلول منظم للترشيح بالديازة ‎AIS‏ لجعل تركيز البروتين ‎oJ fan 5,٠‏ وبالتالي أعطت نسبة و/ و من ‎NaCl‏ ‎.+,A =CRM‏ تم تجفيد ‎CRM‏ ‏الاقتران: أذيب بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © المنشط؛ المرشح بالديلزة في ‎DMSO‏ ‎Yo‏ عند ‎١‏ مجم/ مل. أضيف محلول البورات عند ‎٠٠١‏ مجم لتحقيق ‎z lz VA‏ أعيد تعليق ‎CRM‏ عند ‎Y‏ مجم/ مل 5« عندما اكتمل الذوبان؛ اندمج مع محلول 8005. ترك ذلك ليتفاعل عند ؛ م لمدة ‎٠١‏ ساعة. ثم صب تفاعل المقترن في ‎Y¢‏ حجم من 5 مجم بورات ‎H‏ م ‎Ge‏ وترك ليتقلب عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تم ضبطه عندئذ إلى ‎V,0 pH‏ بواسطة 0,0 ج محلول منظم للفوسفات؛
=« \ \ — ‎pH‏ 17,0 رشح ذلك خلال مرشح © ميكرون وركز إلى الحجم الأصلي على غشاء ‎PES‏ 300 ك دالتون عند حمل ~ ‎١‏ مجم/ سم ‎Y‏ ورشح بالديلزة ضد على الأقل ‎١٠‏ أحجام من الما ع رشح الشكل المركز الناتج خلال مرشح ‎TY‏ ,+ ميكرون وخزن عند ‎Y‏ م- ‎eA‏ ‏العملية وحيدة ‎CDT.
Ly‏ © تبادل المادة الخلوية ‎:CRM197‏ رشحت ‎CRM197‏ بالديلزة للتبادل من المادة الكتلية لتقريباً ‎٠١‏
مجم فوسفات/ ‎Av‏ مجم ‎sucrose 71١ [NaCl‏ ؛ ‎V pH‏ إلى ‎eo‏ مجم ‎[imidazole‏ لا 7 ا880/ ‎Yo‏ مجم اوكتيل- ‎pH (cpu Sila =D =f‏ 7. سمح ‎Jalil‏ بإزالة ‎phosphate‏ ‎sucrose 4‏ الذي كان ضاراً بالاقتران وحدد محتوى ‎sodium chloride‏ المنقول للاقتران. أضيف ‎glucopyranoside‏ نا 8 ‎octyl‏ لمنع تكون الجزئ بعد الترشيح المعقم. تم تبادل مادة
‎٠‏ | 040/0197 بواسطة ترشيح التدفق المماسي ضد © مجمزئ من ‎Vo [14,YY [imidazole‏ مجم اوكتيل -]- ‎=D‏ جلوكوبيدانوسيد ‎١ pH‏ حتى ‎٠١‏ أجسام مرشحة بالديلزة باستخدام أغشية >ا10 ‎MWCO PES‏ عند تركيز محتجز تقريباً ؛ مجم/ مل. كان حقن الغشاء النموذجي ‎Yo‏ جرام/ 2 وتركيز 040/197 النهائي المستهدف في المادة كان ‎١‏ مجم/ مل. خزنت 0140/4197 عند ‎A Te Y‏ م
‎١‏ التنشيط/ الاقتران: تكونت عملية التنشيبط/ الاقتران للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ من الخطوات التالية: ‎)١‏ تركيب بولي سكاريد ¢ ‎(Y‏ تجميد الغلاف والتجفيد 1 ‎CRM197‏ و بولي سكاريد المركب ¢ ‎(Y‏ ذوبان بولي سكاريد المجفد و97 1 ‎CRM‏ «¢ ¢ ( تنشيط بولي سكاريد ¢ ‎Oo‏ ( اقتران بولي سكاريد المنشط مع ‎)١ «CRM197‏ تنقية المقترن (التخفيف؛ الترشيح بالديلزة ‎diafiltration‏ ؛ الترشيح المعقم).
‎Yo‏ ثم تركيب بولي سكاريد مع أ جرام من سوا 2 فا آ7ء %— ثلاثني ازول لكل جرام من بولي سكاريد . أضيف السوا 2 على ‎Lua‏ مسحوق إلى بولي سكاريد ؛ مع محلول ثم الحصول عليه بعد أقل من ‎Vo‏ دقيقة من الخلط عند درجة الحرارة المحيطة. تم تجميد غلاف بولي سكاريد المركب و 7 بشكل منفصل باستخدام حمام ‎La Yoo ethanol‏ كان الحجم لكل زجاجة ‎١‏ لتر تقريباً 5086 مل. لذوبان بولي سكاريد ؛ أضيف ‎DMSO‏ إلى زجاجات التجفيد الفردية للبولي
‎EAE
ARR Es
DMSO ‏ثم نقل إلى وعاء تفاعل تنشيط/ اقتران للتسخين. أضيف‎ Glad) ‏سكاريد للحصول على‎ ‏دقائق من الخلط.‎ ٠١ -5 ‏للحصول على تركيز 7 جم/ لتر. تم الحصول على محلول صافي بعد‎
CRM197 ‏إلى زجاجات التجفيد الفردية المحتوية على‎ DMSO ‏أضيف‎ (CRM197 ‏لذوبان‎ ‏للحصول على تركيز ¥ جم/‎ DMSO ‏للحصول على معلق ثم نقل إلى وعاء ثاني للخلط. أضيف‎ ‏دقيقة.‎ ١5 ‏ل. تم الحصول على محلول صاف في أقل من‎ © تم أخذ عينة من محلول بولي سكاريد / ‎DMSO‏ لتحليل ‎Karl Fischer‏ لتعيين محتوى الرطوبة. تم تحضير 007 على هيئة محلول ‎fone ٠٠١‏ مل في ‎DMSO‏ وأضيف عند زيادة جزيئية ‎Io‏ ‏بولي سكاريد النمط © (الزيادة المركبة استخدمت ‎٠١‏ مكافئ ‎CDT igs‏ بينما عملية الإناء الواحد استخدمت 0 مكافئات ‎:CDT‏ 005). ‎٠‏ أجريت إضافة مستمرة لمحلول ‎CDT‏ خلال 0 دقائق تقريباً عند ‎YY‏ م + 7م مع الخلط. ترك التفاعل ليستمر بحد أدنى لمدة 0© دقيقة عند ‎oY Ea YY‏ تم أخذ عينة من التفاعل لتعيين مستوى التنشيط ‎/77١0 UV)‏ £00 نانوام) ثم أضيف ‎٠٠١‏ مجم ‎pH sodium borate‏ 4 للحصول على ‎7٠,5‏ محلول مائي. قلب محلول اتفاعل عندئذ بحد أدنى لمدة ‎3١‏ دقيقة عند "م + ‎oY‏ ‎1,00 ‏لاستهداف تركيز تفاعل‎ DMSO ‏أضيف‎ (CRMI197 ‏الاقتران بولي سكاريد المنشط مع‎ Vo ‏إلى محلول بولي سكاريد المنشط مع‎ DMSO ‏مجم/ مل. أضيف عندئذ 081/197 المذاب في‎ ‏7م.‎ Ea YY ‏ساعة بحد أدنى عند‎ ١6 ‏الخلط. قلب التفاعل لمدة‎
AT ‏لام‎ « sodium tetraborate ‏مرات بواسطة © مجم‎ ٠١ ‏تم نخفيف محلول التفاعل‎ oY + 5 ‏نهائي‎ diluent ‏مخفف‎ pH ‏للحصول على‎ ‎diluent ‏م + © .م لمدة ؛ ساعات بحد أدنى. أمرار المحلول المخفف‎ YY ‏المحلول عند‎ BY ‏جم/ ل. أجرى ترشيح التدفق المماسي‎ ٠١ ‏خلال مرشح © ميكرو وركز لاستهداف تركيز محتجز‎ ‘ ‏مجم سكسينات‎ fo ‏حجم ترشيح بالديلزة مع‎ Yo. ‏من خلال‎ 300K ‏باستخدام أغشية سيليلوز متحددة‎ ‎EAE
-١١١- ٠,7" ‏المقترن المنقى من خلال مرشح‎ hd .©2 ‏جرام/‎ ١ ‏كان حقن الغشاء النموذجي‎ .7 pH a Ama ١ ‏ميكرون وخزن عند‎ ‏اقتران بولي سكاريد الكبسولي للنمط المصلي © باستخدام عملية الاقتران وحيدة الإناء‎ VY ‏مثال‎ ‏والمعقدة.‎ ‏يوضح هذا المثال أن المدى المختار سابقاً من الأوزان الجزيئية بولي سكاريد الكبسولي يمكن‎ ©
استخدامه للاقتران في أي من عملية الإناء الواحد أو المعقدة. يتم إنتاج بولي سكاريد كبيرة بشكل ابتدائي بواسطة الخلايا البكتيرية؛» ويمكن التحكم في مدى الوزن الجزيئي الناتج بواسطة ‎Shas PH‏ عملية التحلل المائي في ‎A Jie‏ في هذا ‎(Jha‏ اختيرت ثمانية تشغيلات فيها تراوح الوزن الجزيئي للبولي سكاريد الكبسولي النمط
‎٠‏ المصلي ‎geo‏ حوالي 90 ك دالتون إلى حوالي ‎Vee‏ ك دالتون وأجري الاقتران باستخدام التنشيط بواسطة ‎(CDT) triazole‏ في أي من العمليات وحيدة الإناء أو المعقدة الموصوفة سابقاً. انظر جدول ‎.٠9‏ ‏تراوحت الأوزان الجزيئية للمقترنات الناتجة من ‎١١١١‏ ك دالتون إلى 7757 ك دالتون. تراوح عدد المقترنة لكل ‎CRM‏ من ‎YY‏ بحد أقصى إلى ‎١5‏ بحد أدنى. تراوح السكر الحر من
‎Yo‏ 277 كحد كبير إلى ‎71١‏ كحد أصغر. جدول ‎V4‏ مقترناتبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © التي تم تحضيرها بواسطة بولي سكاريدات كبسولية 6ك دالتون إلى 6ك دالتون
‎al ‏سكر الوزن‎ dl ‏إنتا‎ Poly lysines | SEC-MALLS ‏ا حر برواسطة‎ saccharide | py ‏العملية | التشغيل‎ ‏ك دلتون)‎ | (7) GI. tAE
الواحد ْ مثال ‎VY‏ مقترنات ‎dg‏ سكاريد الكبسولي النمط المصلي © تظهر بشكل ‎Gude‏ حماية في نموذج التهاب الكلية وحوضها في الفثران تم تقييم بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي 0 لقدرته على حماية الفثران في نموذج التهاب الكلية وحوضها. انخفض العد البكتيري في دم الفثران التي تلقت حقن المكورات العنقودية الذهبية ‎Jala Staphylococcus aureus ©‏ البريتون لاال101888101100868_بشكل واضح مقارنة بالتحكمات المرجعية التي تم تطعيمها بواسطة ‎PBS‏ ‏كل الست دراسات الفردية أظهرت انخفاض واضح في ‎fofu‏ مل من الكلى في الحيوانات المطعمة (شكل 4( عندما تم تجميع هذه الدراسات لتحليل الميتاء زادت الدلالة الكلية لهذه الدراسات ككل إلى أقل من ‎A‏ ا أظهرت البيانات انخفاض منسجم لتكوين مستعمرات الكلى بعد التطعيمات الفعالة ‎dail gs‏ مقترن بولي سكاريد الكبسولي . ‎EAE‏
-؟١١-‏ مثال ؛١:‏ مقترنات بولي سكاريدات الكبسولية النمط المصلي © التي تم تحضيرها بواسطة كيمياء اقتران مختلفة تحمي الفئران ضد العدوى التجريبية. أجريت دراسات التطعيم النشطة في نموذج التهاب الكلى وحوضها لفأر بواسطة مقترنات بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي * التي تم تحضيرها إما عن طريق كيمياء ‎PDPH‏ أو 0001. يتم وصف طرق اقتران بولي سكاريدات © الكبسولية إلى 080/197 سابقاً. أظهرت النتائج أن كل من المقترنات تقلل تكوين المستعمرة في ‎of il‏ مقارنة بالحيوانات المطعمة الزائفة (جدول ‎.)٠١‏ ‏جدول ‎٠‏ 5: تأثير اقتران ‎PDPH‏ مقابل ‎CDT‏ على الحماية ضد حقن المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ في نموذج التهاب الكلى وحوضها لو ‎/CFU‏ ‏لدراسة # ‎antigens|‏ السلالة/ الجرعة الكلى لدلالة ‎oY.o‏ + لدراسة ‎Jslad ١‏ ملحي + ‎PFESA0266| AIPO4‏ ).+4 1 ميكرو جم ‎CP5-CRM‏ ‎(PDPH)‏ ‎VY‏ + ‎AYN 108 x2 AIPO4 +‏ م > 0.001 1 ميكرو جم ‎CP5-CRM‏ ‎CDT‏ ‏(001) 21 + ‎Pp YY... AIPO4 +‏ > أل ك6 1 + لدراسة 7 أمحلول ملحي + 81004 ‎V1. [PFESA0266s|‏ 1 ميكرو جم ‎uy CP5-CRM‏ + ‎x2.7 (PDPH)‏ 108 ).14 م < ‎evel‏ ‎tAE‏
اج \ \ — 1 ميكرو جم ‎CP5-CRM‏
CDT
+ AV.) ( ) + 04 ام .أ ‎Pp‏ > أل ‎vo‏ ‏مثال ‎:١5‏ التطعيم الفعال لمقترن بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © يحمي الجرذان في نموذج التهاب بطانة القلب ‎endocarditis‏ لجرذ. أجريت أربع دراسات بواسطة مقترن ‎CP5—‏ ‎.CRM197 PDPH‏ مقترنات ‏ بولي سكاريدات الكبسولية النمط المصلي 0 المختزلة بشكل واضح استردت ‎CFU‏ بعد © الحقن بواسطة المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus PFESAQ266‏ في كل من القلب والكلية في ؟" من ؟ ‎lad‏ (جدول ‎(YY)‏ ‏في الدراسة الثالثة. كان معاير مضاد ‎CPS‏ معير الوسط الهندسي ‎(GMT)‏ أقل للثلاث تجارب؛ ولكن كان أقل بشكل طفيف فقط عن التجربة السابقة. جدول ‎١‏ ؟: يقلل تطعيمبولي سكاريد الكبسولي ‎ball‏ المصلي ‎CFU 040/4197 —o‏ في نموذج ‎Ve‏ التهاب بطانة القلب ‎endocarditis‏ لجرذ للمناعة جرعة القلب الكلى القلب الكلى ‎CP‏ ‏1 مك |580026 ا اليم الى ‎١‏ ‏6 ‏جم ‎CP5-‏ + + ‎EAE‏
-١١- ‏للا‎ 5.97 > ‏دام‎ P cfu x2.21 [a ‏[ميكرو‎ ‎+ + 0.05 ++) 108 | PP5-CRM
Va. | YA. ٠١٠2| 4
PFESA026 | ‏1[ميكررو جم‎ [a] ١ ‏ف‎ ٠ ٠ 6١ CP5-CRM
FEY | YY ٠١41 5 cfu x6.5
No No + + ‏محلول ملحى‎ 107 | ~ ‏.ف‎ 7 ‏الل‎ OF
PFESA026 | ‏1[ميكررو جم‎ 1 7 re + + 6 | CP5-CRM
AY.) | 7 > ‏.ات .اه م‎ > P cfu x4.0
LI ٠ 6 + + ‏محلول ملحي‎ ٠ 0 * BN J Y 108 v Wa [TAD ‏في الفئران مقارنة بلقاحات مقترن‎ HMW ‏مثال 21 خاصية توليد المناعة المعززة للقاحات مقترن‎
LMW 665
CP ‏أجريت دراسة التهاب الكلى وحوضها لفأر لتقييم توليد المناعة وفاعلية صياغات مقترن‎ ‏المختلفة. اختبرت اثنين من الصياغات: تكونت الصياغة الأولى من 605 عالي الوزن الجزيئي‎
CP5 ‏احتوت الصياغة الثانية على‎ .CRM197 ‏دالتون) مقترن مع‎ Too ‏(تقريباً‎ (HMW) © ‏اختبرت مستويات‎ LCRMI97 ‏دالتون) مقترن مع‎ Yo ‏(تقريباً‎ (LMW) ‏منخفض الوزن الجزيئي‎ ‏ميكرو‎ ١ ‏عند‎ LMW ‏ميكرو جم). اختبر اللقاح‎ ١09 0.1 ٠( HMW ‏الجرعة الثلاثة للقاح‎
-١١ا/-‎ جم. تم تضمين مجموعة تحكم مرجعي سلبي أيضاً مكونة من لقاح مقترن بولي سكاريد مشتقة من ‎Streptococcus pneumoniae‏ مقترن مع ‎(PPS) CRM197‏ تمت صياغة بولي سكاريد بواسطة. ‎YY‏ ميكرو جم من ‎APO:‏ في الأسابيع صفرء 7 و وتم حقنها بواسطة 6 من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ في الاسبوع ‎A‏ ‏0 تم تجميع الكلى وتم عد المستعمرات البكتيرية بعد ‎EA‏ ساعة من الحقن. كان اللقاحين فاعلين عند إنتاج الاستجابة المناعية ولوحظ انخفاض في ‎CFU‏ من ‎PFESAQ266‏ من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ كلى الفثران التي تم تطعيمها بواسطة ‎١‏ ميكرو جم من كل من اللقاح ‎HMW‏ و/1/1/0ا. كان ذلك معتمد على الجرعة كما أثبت بواسطة فاعلية مختزلة من جرعات اللقاح المنخفضة (شكل ‎.)٠١‏ لم تكن قراءة ‎CFU‏ حساسة بشكل كافي للكشف عن ‎٠‏ الاختلافات في الكفاءة للقاحات ‎LMW 3 HMW‏ اختبرت الأمصال من الفثران لذلك بواسطة ‎OPA‏ تم تعيين معايرات ‎OPA‏ كتخفيف للمصل الضروري لقتل 4 7 من 0725/0266 ‎ADL‏ ‏المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ في اختبار ‎(OPA‏ لوحظت معايرات .)١١ ‏(شكل‎ LMW ‏مقارنة بالصياغة‎ HMW ‏معززة للقاح‎ OPA ‏مقترنات بولي سكاريد للكبسولة تتضمن بولي سكاريدات عالية الوزن الجزيئي تظهر‎ :١١7 ‏مثال‎ ‏المناعة معززة مقارنة بالمقترنات التي تتضمن بولي سكاريدات منخفضة الوزن‎ alg ‏خاصية‎ Vo ‏لتقييم‎ Non human primate (NHP) ‏الجزيئي. أجريت دراسات حيوان رئيسي غير آدمي‎ ‏خاصية تولد المناعة لصياغات مقترن كبسولة مختلفة. اختبرت اثنين من الصياغات عند اثنين من‎
We ‏ميكرو جم). احتوت الصياغة الأولى على بولي‎ ٠١و‎ Y) ‏مستويات الجرعة المنخفضة‎ ‏دالتون) مقترن مع‎ ٠ ‏(تقريباً‎ high molecular weight (HMW) = ‏عالي الوزن الجزيئي‎ low ‏احتوت الصياغة _الثانية على بولي سكاريد منخفض الوزن الجزيئي‎ .CRM197 | ٠ ‏دالتون) مقترن مع 040/197. تم تطعيم مجموعات‎ YO ‏(تقريباً‎ molecular weight (LMW) ‏الحيوانات الرئيسية الخمسة بواسطة جرعة مفردة من أي لقاح وروقبت المعايرات المناعية قبل‎ ‏كتخفيف للمصل الضروري لقتل‎ OPA ‏التطعيم وبعد أسبوعين من التطعيم. تم تعيين معايرات‎
Staphylococcus aureus ‏من سلالة المكورات العنقودية الذهبية‎ PFESAQ266 ‏من‎ ٠ ‏روقبت معايرات الجسم المضاد أيضاً بواسطة /15ا5. لوحظ نشاط معزز‎ (OPA ‏في اختبار‎ Yo
EAE
-١١ A= ‏(جدول 77)؛ مما استدل عليه بواسطة الزيادة عشر مرات‎ LMW ‏مقارنة بصياغة‎ HMW ‏للقاح‎ ‏مقارنة بلقاح /1/0/!-ا. كان المعدل المستجيب ل 00/8 ل‎ HMW ‏في معايرات الجسم المضاد لقاح‎ (Ey ‏تقريباً ب‎ 780( Jef HMW ‏الذي تلقى لقاح‎ NHPs ‏مقارنة‎ HMW ‏جدول 77: يتم ملاحظة خاصية تولد المناعة المعززة للقاحات مقترن بولي سكاريد‎
LMW ‏بلقاح مقترن بولي مكاريد‎ 0 + (%) OPA PD1* ‏الجرعة (ميكرو جم) لكل حيوان ال‎ ‏دالتور‎ ‎~ ‏دالتور‎ ‎ّ ‏بعد أسبوعين من التلقيح مقارنة‎ CPS ‏ل‎ ELISA ‏مرات الزيادة محسوبة من معاير‎ *
OPA ‏بالمعايرات قبل التلقيح. + المعدل المستجيب المحسوب من قرود تنتج زيادة في معاير‎ ‏بعد جرعة مفردة من اللقاح بعد أسبوعين من التلقيح. احتوت كل مجموعة على 0 قرود‎ ‏جرعة)‎ [ox ‏ميكرو‎ Yo. ) AIPO4 dad gs ‏المكاك ريرس وثم صياغة اللقاحات‎ ‏عند © للبولي سكاريد تكون هامة لاستحثاث استجابات جسم مضاد‎ acetyl ‏إضافة‎ (VA ‏مثال‎ ‏للبولي‎ O-acetylation ‏لتقييم أهمية نزع‎ Lo ‏حامي لمقترن بولي سكاريد كبسولي النمط المصلي‎ ‏واقترن‎ (AOAC) © ‏إلى بولي سكاريد الأصلي عند‎ acetyl ‏؛ أضيف‎ O ‏سكاريد الكبسولي عند‎ ‏كما وضح سابقاً. تمت‎ PDPH ‏باستخدام كيمياء اقتران‎ (dOAC-CRM197) CRM197 ‏مع‎ ‏في نموذج‎ CP5-CRM197 ‏إلى جنب مع‎ luis dOACCP-CRMI97 ‏مقارنة كفاءة مقترن‎ ٠ -0 ‏التهاب الكلى وحوضها في الفئران. فشل التطعيم بواسطة المقترنات التي تفتقد مجموعات‎ lil) ‏البكتيرية المستردة في الكلية. تشير هذه‎ CFU ‏في تقليل‎ (dOAc 605-65/( acetyl
-١١4؟-‎
(جدول ‎(YY‏ إلى أن إضافة 18100ا0-80617 تكون هامة لإظهار الأجسام المضادة الوظيفية ضد
.CP5
جدول ‎:YY‏ التطعيم بواسطة مقترنات بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © المنزوع منها -0
007 لا يحمي الفثران من تكوين مستعمرات الكلية
1[ميكرو جم -005 ‎dOAc‏ ‎x7 CRM‏ 108 4 + .كلا يه م < 1ميكرو جم ‎vo.) CP5-CRM‏ =+ ..5 0.008 1[ميكرو جم -005 ‎dOAc‏ ‎CRM‏ 4 108 افلكم + لح يه م < 1[ميكرو جم ‎١٠٠١١ + 07 CP5-CRM‏ 0.02
© مثال ‎V4‏ تأكيد أهمية إضافة ‎epitopes O-acetylation‏ وظيفي للبولي مكاريد
‎Js.) polysaccharides‏ النمط المصلي © بواسطة ‎OPA‏ باستخدام أجسام مضادة أحادية
‏النسخة لها تخصص نعروف.
‏تم تقييم أجسام مضادة أحادية النسخة بولي سكاريد كبسولة النمط المصلي 0 لها تخصص ل
‎OAc+/- (CP5-5-1) «OAc+ )005-7-1(‏ و ‎OAc- (CP5-6-1)‏ لنشاط قتل ‎OP‏ ‎٠‏ ضد سلالة النمط © ‎PFESAQ266‏ (جدول ؛7). استخدمت أجسام مضادة أحادية النسخة
‎EAE
=« \ \ _ للبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © ‎CP8-3H)‏ خاص ب 0/861 ‎(CP‏ كتحكم مرجعي تسبب 6805-7-1 ‎mAb‏ لمضاد 005 الخاص ب ‎OAC‏ في قتل 0785/0266 من المكورات العنقودية الذهبية ‎Staphylococcus aureus‏ (جدول ؛ 7). أيضاً الجسم المضاد أحادي النسخة ه ‎(CP5-1‏ الذي يتعرف على ‎epitope‏ مشاركة بكل من 0050801 ‎OAC—;‏ 005؛ يسبب ‎J‏ سلالة 6 . الجسم المضاد الأحادي النسخة الخاص ‎sasasdl epitope‏ على بولي سكاريد الكبسولي ‎OAC‏ ‏النمط المصلي © لا يسبب قتل سلالة 0755/80266. تشير هذه النتائج إلى أن © ‎epitope‏ ‎acetyl‏ علتبولي سكاريد الكبسولي ‎hall‏ المصلي © يكون ضروري لإظهار النشاط الوظيفي ‎٠‏ ا للأجسام المضادة الخاصة بالنمط ‎lad)‏ ©. يجب أن تكون الأجسام المضادة وظيفية كما قيس ‎JB dda‏ البكتيريا في نموذج الفعالية الحيوانية أو اختبار ‎Jul‏ بالالتهام الأبسوني ‎opsonophagocytic‏ الذي يظهر أن الأجسام المضادة تقتل البكتريا. يمكن أن لا يتم توضيح القتل الوظيفي باستخدام اختبار يراقب إنتاج الأجسام المضادة بصورة أحادية؛ والذي لا يكون دليل على أهمية إضافة © ‎acetyl‏ في الفعالية. ‎Vo‏ جدول ؛ ؟: أجسام مضادة أحادئة النسخة خاصة ببولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي المضاف له © ‎acetyl‏ )+( وبولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي ‎A‏ المضاف له © ‎acetyl‏ والمنزوع من © ‎acetyl‏ (+/-) تكون أبسونية ضد ‎PFESA0266‏ من المكورات العنقودية الذهبية (النمط °(. ‎CP5-7-1 | CP5-6-1 CP5-5-1‏ ‎CP8-3-1 (OAc +) (O-Ac =) | (OAc +/-(‏ (التحكم (ميكرو جم) | (ميكرو ‎(oe‏ | (ميكرو جم) ‎(od)‏ )2% جم) 0 10 5| 20 10 5ا1020 5 1020 5 2.5 2.5 2.5 2.5
-١١١- 0605-7-1 CP5-6-1 CP5-5-1 ‎CP8-3-1 (O-Ac +) (OAc =) | (O-Ac +-(‏ (التحكم ‏(ميكرو جم) | (ميكرو جم) | (ميكرو جم) ‎(ed)‏ (ميكرو جم) ‏20 10 5| 20 10 10205 و5 1020 5 25 ‎2.5 2.5 2.5 ‎-| - ‏|؛‎ ¢| v vv ١ ١ ١ YY ova ١3| ov al 1| ١ ١٠
A \ \ 60 ‏المتبقية بعد‎ CFU ‏للقتل وحسبت بتعيين نسبة عدد‎ 2 ial ‏سجلت البيانات على هيئة النسبة‎
CFU ‏إلى عدد‎ HL-60 Wa, ‏دقيقة في التجاويف مع البكترياء الأجسام المضادة؛ المكمل‎ ‏المتبقية في التجاويف التي تفتقد الأجسام المضادة ولكن تحتوي على البكترياء المكمل وخلايا - اا‎ :٠٠ ‏0دمثال‎ ‏المكونة من بولي سكاريد عالية الوزن‎ CPS ‏المناعة المعززة لمقترنات‎ alg ‏يتم ملاحظة خاصية‎ © ‏الجزيئي مقارنة ببولي سكاريد منخفضة الوزن الجزيئي في حيوانات من الرئيسيات غير آدمية‎ ‏لصياغات‎ de ball ‏لتقييم خاصية تولد‎ (NHP) ‏أجريت دراسات حيوان رئيسي غير آدمي‎ (NHP) ١( ‏مقترن كبسولة مختلفة. اختبرت اثنين من الصياغات عند اثنين من مستويات الجرعة المنخفضة‎ (HMW) ‏ميكرو جم). احتوت الصياغة الأولى على بولي سكاريد عالي الوزن الجزيئي‎ 7١و‎ ‏احتوت الصياغة الثانية على بولي سكاريد منخفض‎ .CRMI9T ‏دالتون) مقترن مع‎ ٠١ Loi) ٠ ‏دالتون) مقترن مع 081/197. تم تطعيم مجموعات‎ Yo ly) (LMW) ‏الوزن الجزيئي‎ ‏الحيوانات الرئيسية الخمسة بواسطة جرعة مفردة من أي لقاح وروقبت المعايرات المناعية قبل‎ ‏كتخفيف للمصل الضروري لقتل‎ OPA ‏التطعيم وبعد أسبوعين من التطعيم . ثم تعيين معايرات‎
Staphylococcus aureus ‏من سلالة المكورات العنقودية الذهبية‎ PFESAQ266 ‏من‎ ٠
OPA ‏في اختبار‎ eo
-؟١-‏ روقبت معايرات الجسم المضاد أيضاً بواسطة ‎(ELISA‏ لوحظ نشاط معزز للقاح ‎HMW‏ مقارنة بصياغة ‎LMW‏ (جدول 75). كانت هناك زيادة ثلاث إلى عشر مرات في معايرات الجسم المضاد لقاح ‎HMW‏ مقارنة بلقاح ‎.LMW‏ كان المعدل المستجيب ل ‎NHPs 1 OPA‏ الذي تلقى لقاح ‎HMW‏ أعلى (780 تقريباً ب ‎(Ee‏ ‏© جدول © ؟: يتم ملاحظة خاصية تولد المناعة المعززة للقاحات مثترن بولي مكاريد ‎HMW‏ مقارنة بلقاح مقترن بولي سكاريد ‎LMW‏ ‏05-7 | الوسط الهندسي ل | المعدل المستجيب مستوى الجرعة ‎OPA PD1* | (mcg)‏ (2) + لكل حيوان دالتو ~ دالتو ~ * مرات الزيادة محسوبة من معاير ‎ELISA‏ ل ‎CP5‏ بعد أسبوعين من التلقيح مقارنة بالمعايرات قبل التلقيح. + المعدل المستجيب المحسوب من قرود تنتج زيادة في معاير ‎OPA‏ ‏بعد جرعة مفردة من اللقاح بعد أسبوعين من التلقيح. احتوت كل مجموعة على 0 قرود المكاك ريرس وثم صياغة اللقاحات ‎Yo. ) AIPO4 dad gs‏ ميكرو ‎[ox‏ جرعة) الموجز : أنتجت اثنين من كيمياء الاقتران» الموصوفة هنا بولي سكاريد الكبسولي النمط المصلي © المرتبط تساهمياً مع البروتين الحامل ‎.CRM197 carrier protein‏ لم تكن هناك اختلافات واضحة في سكاريد الحر ؛ نسبة بولي سكاريد النمط المصلي 10 البروتين وانتاجات المقترنات ‎٠‏ الناتجة بواسطة هاتين الطريقتين. تعتبر كل النشرات وطلبات البراءة المذكورة في الوصف الكتابي دليل على مستوى هؤلاء الماهرين في المجال الذي يختص به هذا الاختراع. يتم ذكر كل النشرات ‎EAE‏
—\ vy ‏وطلبات البراءة على سبيل المرجع لنفس المدى كما لو أشير إلى كل نشرة فردية أو طلب براءة‎ ‏بشكل خاص وفردي ليتم ذكرها على سبيل المرجع.‎ ‏على الرغم من أنه قد تم وصف الاختراع السابق ببعض التفصيل للتوضيح في المثال لأغراض‎ ‏توضيح الفهم؛ فإنه قد يتم تطبيق بعض التغيرات والتعديلات داخل عناصر الحماية الملحقة.‎

Claims (1)

  1. -١74- ‏عناصر الحماية‎ ‏وبروتين مولد للمناعة مشتمل على بولي سكاريدات‎ polysaccharide ‏مترافق بولي سكاريد‎ -١ isolated ‏من المكورات العنقودية الذهبية المعزولة‎ ةيلوسبك‎ polysaccharides ‏؛ حيث يتراوح الوزن‎ carrier protein ‏مترافق مع بروتين حامل‎ Staphylococcus aureus ‏كيلو دالتون و٠٠ كيلو دالتون؛ وحيث‎ 7١ ‏بين‎ polysaccharide ‏الجزيئي ل بولي سكاريد‎ ‏كيلو دالتون؛ وحيث‎ 780٠0 ‏كيلو دالتون وحوالي‎ 10١0 ‏يتراوح الوزن الجزيئي للمترافق بين حوالي‎ 5 ‏يشتمل المترافق على رابط به ذرة كربون واحدة أو ليس به ذرات كربون بين بولي سكاريد‎ . carrier protein ‏والبروتين الحامل‎ polysaccharide ‏وفقاً لعنصر الحماية رقم ١؛ حيث‎ immunogenic conjugate ‏للمناعة‎ A gal ‏المترافق‎ —Y ‏يتراوح الوزن الجزيئي للمترافق المولَّد للمناعة بين 080 كيلو دالتون و7١7١ كيلو دالتون.‎ ٠ dun) ‏وفقاً لعنصر الحماية رقم‎ immunogenic conjugate ‏المترافق الموأد للمناعة‎ —Y ‏كيلو دالتون و١٠5١ كيلو‎ Ve ‏بين‎ polysaccharide ‏يتراوح الوزن الجزيئي ل بولي سكاريد‎ ‏دالتون.‎ ‎Vo ‏وبروتين مولد للمناعة يشتمل على بولي سكاريدات‎ polysaccharide ‏مترافق بولي سكاريد‎ —¢ isolated ‏من المكورات العنقودية الذهبية المعزولة‎ ةيلوسبك‎ polysaccharides ‏؛ حيث يتراوح الوزن‎ 6817167 protein ‏مترافق مع بروتين حامل‎ Staphylococcus aureus cf ‏كيلو دالتون و٠٠" كيلو دالتون؛ وحيث‎ 7١ ‏بين‎ polysaccharide ‏الجزيئي لبولي سكاريد‎ ‏على‎ GHA ‏كيلو دالتون و١٠ 75 كيلو دالتون؛ وحيث يشتمل‎ ٠٠0٠ ‏بين‎ GHA ‏_الوزن الجزيئي‎ ٠ polysaccharide aS ‏به ذرة كربون واحدة أو ليست به ذرات كربون بين بولي‎ La, . carrier protein ‏والبروتين الحامل‎ EAE
    اج \ \ — ‎dud Ed -o‏ للمناعة وفقاً لعنصر ‎Glad‏ رقم ‎٠‏ حيث ‎aly‏ بولي ‎We‏ ‏606 . بدرجة من المعالجة بواسطة ‎O-ACETYLATION‏ تتراوح بين ‎٠١‏ ‏و ‎RV) ١ ٠٠‏ ‎dele did GEE <> 0‏ وفقاً لعنصر الحماية )8 © ‎al Cua‏ بولي مكاريد ‎polysaccharide‏ بدرجة من المعالجة بواسطة ‎O-acetylation‏ تتراوح بين 500 ‎Jo Ver‏ 7"-_المترافق_المولّد للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم 7 حيث ‎aly‏ بولي ‎We‏ ‎polysaccharide‏ بدرجة من المعالجة بواسطة ‎O-acetylation‏ تتراوح بين ‎Po ٠٠٠١و ١728‏ 7" ‎—A‏ المترافق المولد للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم ٠؛‏ حيث يكون البروتين الحامل ‎carrier‏ ‎protein‏ عبارة عن ‎.CRM197‏ ‏- المترافق ‎al pall‏ للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم ‎dua A‏ يرتبط 080/197 ‎Lala‏ ب ‎Vo‏ بولي سكاريد ‎polysaccharide‏ 0( خلال رابطة كربامات ‎carbamate‏ ؛ رابطة اميد ‎amide‏ ‏؛ أو كليهما. ‎-٠‏ المترافق المولّد للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم 9؛ حيث تتراوح النسبة المولارية لمركبات لايسين ‎lysines‏ المترافقة في 0141/0197 إلى ‎CRMIOT7‏ بين حوالي ‎١ :٠١‏ وحوالي ‎Dae‏
    ‎Y.‏ ‎-١١‏ المترافق الموأد للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم 3( حيث تتكون رابطة تساهمية واحدة على الأقل بين 080/197 و بولي سكاريد ‎polysaccharide‏ .كل * إلى ‎٠١‏ وحدات سكريد تكرارية ‎saccharide repeat units‏ على الأقل من بولي مكاريد ‎polysaccharide‏ . ‎EAE‏
    -1؟١-‏ ‎-٠‏ المترافق المولّد للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم ‎OY)‏ حيث تتكون رابطة واحدة على الأقل بين 40/197 5 بولي مكاريد ‎polysaccharide‏ .كل © وحدات سكريد تكرارية ‎saccharide repeat units‏ _من_بولي مكاريد ‎polysaccharide‏ . ‎-VF ©‏ المترافق المولّد للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم 4« حيث يشتمل 080/197 على * إلى
    . polysaccharide Ku ‏مرتبطةٌ تساهمياً ببولي‎ lysines ‏من وحدات اللايسين‎ YY ‏حيث يشتمل 081/197 على * إلى‎ VF ‏المترافق المولّد للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم‎ -٠6 . polysaccharide Ku ‏المرتبطة تساهمياً ببولي‎ lysines ‏من وحدات اللايسين‎ ٠ ye ‏وواحدة‎ ١ ‏للمناعة وفقاً لعنصر الحماية رقم‎ A pall ‏تركيبة مولدة للمناعة تشتمل على المترافق‎ —V 0 carrier ila ‏أو مادة‎ ¢ diluent ‏مخففة‎ sale « adjuvant ‏على الأقل من مادة مساعدة‎ ‏وفقاً لعنصر الحماية رقم ٠؛ حيث‎ immunogenic conjugate ‏للمناعة‎ A gal ‏المترافق‎ -7 ‎Vo‏ يكون بولي مكاريد ‎polysaccharide‏ الكبسولية ‎capsular‏ عبارة عن بولي سكاريد ‎polysaccharide‏ كبسولية ‎capsular‏ من النمط المصلي © أو النمط المصلي ‎cA‏ ‎-١١‏ مترافق بولي سكاريد ‎polysaccharide‏ وبروتين مولد للمناعة مشتمل على بولي سكاريد ‎polysaccharide‏ كبسولية | معزول من المكورات العنقودية الذهبية ‎isolated‏ ‎cad ‏حيث يتراوح الوزن‎ carrier protein ‏مترافق مع بروتين حامل‎ Staphylococcus | ٠٠ ‏كيلو دالتون و0٠ كيلو دالتون؛ وحيث يتراوح الوزن‎ 7١ ‏بين‎ polysaccharide ‏لبولي سكاريد‎ ‏كيلو دالتون» وحيث يشتمل المترافق على رابط‎ Fores ‏كيلو دالتون‎ ١6٠١ ‏الجزيئي للمترافق بين‎ ‏والبروتين‎ polysaccharide ‏به ذرة كربون واحدة أو ليس به ذرات كربون بين بولي سكاريد‎ . carrier protein ‏الحامل‎ ‎Yo ‎EAE
    -لا؟١-‏ ‎٠‏ — المترافق ‎A sal‏ للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ وفقاً لعنصر الحماية رقم ‎AY‏ حيث ‎CRM197 Jai‏ .على ‎VA‏ إلى ‎YY‏ من وحدات اللايسين ‎lysines‏ مرتبطة ببولي سكاريد ‎polysaccharide‏ . ‎١4 oo‏ - المترافق ‎A gal‏ للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ وفقاً لعنصر الحماية رقم ٠؛‏ حيث يترواح الوزن الجزيئي للمترافق بين ‎VOY‏ كيلو دالتون و57 ؟ كيلو دالتون. ‎-٠‏ المترافق ‎A gal‏ للمناعة ‎immunogenic conjugate‏ وفقاً لعنصر الحماية رقم ٠؛‏ حيث يتراوح الوزن الجزيئي للمترافق بين حوالي ‎١١٠١‏ كيلو دالتون وحوالي ‎760٠0‏ كيلو دالتون. 7" ‎-7١‏ التركيبة ‎sal sell‏ للمناعة ‎immunogenic‏ وفقاً لعنصر الحماية رقم ‎٠5‏ حيث يكون بولي سكاريد ‎polysaccharide‏ الكبسولية عبارة عن بولي سكاريدات ‎polysaccharides‏ كبسولية 6 من النمط المصلي * أو النمط المصلي ‎cA‏ ‎Yo‏ 7؟؟- التركيبة المولدة للمناعة ‎immunogenic‏ وفقاً لعنصر الحماية رقم ١7؛‏ حيث تشتمل التركيبة على أقل من ‎Yo‏ 96 من ‎Js‏ سكاريد ‎polysaccharide‏ من ‎hall‏ المصلي © أو النمط المصلي ‎A‏ الحر مقارنة بإجمالي كمية ‏ بولي سكاريد ‎polysaccharide‏ من النمط ‎Lad‏ © أو النمط المصلي ‎A‏
    ‎OY.‏ 7“9- التركيبة المولدة للمناعة ‎immunogenic‏ وفقاً لعنصر الحماية رقم ‎(YY‏ حيث تشتمل التركيبة على أقل من ‎Yo‏ % من بولي سكاريد 0017580008306 _من النمط المصلي © أو النمط المصلي ‎A‏ الحر مقارنة بإجمالي ‎aS‏ بولي سكاريد ‎polysaccharide‏ من النمط ‎Lad‏ © أو النمط المصلي ‎A‏ ‎EAE
    -١١0- on ‏عضا »وق‎ LH 0 ooh ‏الي‎ . x " L-FucNae AT ‏ا معي سير لمفكيط‎ ' i ‏ا‎ RF Pine. arid HOS Wn 8 ' . er BRAS CP ; Raat ‏اخ‎ ! Lc | 7 ‏بي نا‎ : ‏م ب سبح 8 ل حمس‎ 1 ‏اس‎
    ‎| . ‏ديقي‎ eal ‏لجرت امد‎ -FaeN Ae 3h o- I ‏ام لوطع‎ LI ji ES ENE
    ‏ع #2 > > ح>٠>» «[#«>»>٠ء<«<«<<+<+<+<ا<ا<+<»>0+ا+ا«ا««#<«<+<+<«<«<+<+٠+0ا٠56067ا5٠ا٠٠5ااااااااساا ##ق يا‎ ٍ ‏إٍٍََََِ َع #لٍَ‎ Or ‏ف‎ ; ْ 0 ‏اق‎ 8 LEY © ov 444 | Woy ‏ب"‎ ْ ‏ا ل‎ oa, 49 ‏بخ‎ 1 0 0 + & : 0 * 8 & i Fis & § i 4 LR 1 34 1 21 OR ‏ا‎ ; * 333 4 ‏الل‎ 1 AL : ‏جنا ال أ ا ل‎ R i i = * ‏با أ ان ا 3 واج‎ STOW PERE ‏ا علا ا‎ ‏تش‎ Te $e ‏.حك للم 2مك‎ IE CE Os PI ‏مم‎ SUPE ‏.كج‎ EE ‏مم كج‎ # aah ir ‏شكل‎ ‎Ra YRS Yao ¥ EX THE IVE YA TAR 8 RYN 3 ‏ا‎ 3 ‏وب‎ £. Es ‏جه اله‎ tras Ve we 46 As 3# Yen Progr ‏ل بي بابس بإ ص ب‎ pe ‏ا‎ Cl BE ‏تا ات‎ a ‏اللا ل ةل‎ v ww wT TT WT = pea There ‏.كد37 كلجر‎ MES ١854 1%. 5 2 J -
    EAE.
    = Lar
    . Fae اجججدد دحت لجح لح لل لحل لل للحت لح ‎EE‏ جا ON 3 NL £3 1 & Wo Nong Ae B ‏م‎ \ 2 ‏ددهم‎ ay Se Kt - ™ Sn oe RE N—_ ‏ب‎ a & + 34 ‏ا للا حيط لاني‎ % Preise te aly 5 ‏ال ع ات مس ا مس ا ال 0 عب‎ 4 ~~ MSN | Dri A we Bi Yo. oo Nea 1 ia! . 0 ‏ل اح‎ Ba sy x 5 ‏خلج ا‎ Fl ‏جد اص‎ SET EE CU I ‏ةسلو .ء#ة *.ة ءة|‎ BS {3} ‏رحن المعائجة‎ ‏شكل ؟ أ‎ ‏وجا‎ ‎0 ‏عا يي‎ ‏كا ¥ ا‎ ol 5 AN A aes ‏ب الل‎ NT SE oF ST RE i ‏شل‎ 5اا١ا5©7اا#ا[#اد#ا7إاللب©©كبتبتبب‎ Fe “5 ANG SA re ! : Jig: A NN ‏ا‎ Fes
    3.8 oly ‏اللي 4 يحل‎ ٍ 0 1 3 ‏ا لل المت + يسا‎ R 2 ¥ 7 ‏تا‎ 5 Die Fi > RN NO 6 4 a “a ERE bd ‏أت ا‎ Tee hea RR ‏الا الا‎ 3 xk fa =~ gilt {3} ‏نزم‎ ‎ER ‎EAE
    Foes 8 7 8 8 T T 1 1 8 T The - i nd : - i A A + ; ‏ما ااا‎ i a : ted gE 7 1 he : : : ٍّ : + ‏اخ اح‎ age ‏ا‎ ‏ا لش ا ال( ل.#؟‎ = : 4 : : ; : : es ‏تت تت هوي وف تتأ حل الاك اا الى ع اا‎ UU A Ot SE ‏لتتتتت‎ ‎ho, Fon J CoRR : ‏الك‎ : ; 1 : ‏اد رع‎ | AE ‏ب جمحجحما هاه نجوه لت أ ها أ لك‎ FR Sl TE ‏اا‎ RON. "RE « We SEU AN CRS ‏ب‎ ‏بيج ما ص إ به 1 3 نط : الخد‎ 7.8 41 3 VE eds i : yl rnd Bn ‏ججحب ب ةا‎ ‏و اكاب‎ 1 : : : oat : [Se 1 : : 8 x +7} ‏ا‎ : : Lh, i rh : > 1 ‏م‎ : : : ‏جح ل‎ fl STUNT FURR eins. ‏ةا ا‎ SORT SE A, > : THA 0 Er tif PO : ‏لمم‎ i SER ‏المح لاد‎ : 8 : : SUN 96 3 Rosin ‏ب"‎ ‎Fas LE i SAR ; : 0 . : go i= 3 8 ‏اا‎ AF pe : ] pi 1 0 : 1 ‏تا مان و ب"‎ ade wid € Tw FEE A A A ‏ممعم ممم ممعم مع ميك ع‎ ss — Log : : : ْ: ٍ : i ‏ضقن‎ ‏صقر‎ Fe me 3. HfL bea dae Tie Tie TY. Fae PPL The FR, FEEL ‏ا‎ ١ ‏أل‎ 8 Heal {3} Fed 3 ait a 1
    £ . 8 ‏ب‎ ‏ا‎ ‎TAR ‎Ey BP A, ‏الم 5 ماعنا احا نه‎ Fo Bx ‏الجاتس ا م‎ i» Von Sk 5 7 8 ِ ‏ا‎ ERR ae "IR : ‏يج ام اه حت مسي د .م‎ + . N et A EN A vas ‏اد الخ جا‎
    - 0. ‏خخ بخلخا#اللل‎ i “3 RE ‏يب‎ ‎3 ‏اجا‎ NS Cer 7 0 . ay iar RRC 8 ‏جحل حك‎ a اب‎ by Jo BEER Na Na K Fo SE ‏تسر د‎ ‏لا‎ ‎— TT = 3 : a ‏ا‎ ‏سب‎ ‏في‎ Ny - at SIE ETE SA | EN SE SE EE PRE LN ‏جو سد *جو‎ fe ‏عد ا دا كيم‎ wo uty ‏(يوم‎ Aas ‏الزمن بعد‎ ‏اج‎ ‎= ‏شكل‎ ‎ENE
    -١37- 2 ‏يض .م‎ ‏الي‎ } L-FueNae ‏الب‎ ‏ا متها ّ : 3 . ا لق لج و تاس‎ | a i ‏ل‎ ‏مخف مه روي‎ Op MOOG ‏لد‎ feet ag tia 3 ‏ا‎ 3 ad 8 Aly
    ES. ‏ض اس‎ [rd f-D-ManN ‏رمخت )ع العب اه (4 )ضع‎ (1-3)-B-D-FueNae-(1-], + ‏شكل‎
    سه سسسسسسسيسمسسسمسسيسسسسسسسس ة إ ا ع \ 8 ‎i‏ ‎TERN . N‏ ‎RB £5 i‏ م ‎Te‏ ‎EE 3 ¥ i i‏ ‎te R43 $ 1 § 0 1‏ ,3 ‎E k IE 8‏ ‎N‏ 3 ¥ \ أ م ‎HE‏ 3,538 § ‎“agg 4 fo‏ ‎ARK # E? i 1 0‏ + » \ 1 رز 1 8 ‎X N‏ 5 7 م جا ‎ES 1 BN‏ ب "طخ 1 ّ .ا ‎N‏ هي ‎SR WE‏ ‎A RRR EE panna)‏ و ‎Ra‏ ةحسمم حك ‎BEE‏ ااا ‎ove‏ ‏ب" . = ‎a x . a‏ 5 ‎The Ten‏ 0405م( ؟؟ ‎NT 4. Tae‏ قاء؟؟ ‎Fox fx Toe Se Vee‏ حمق ‎Eh‏ ا # شكل ‎Py‏ ‏8 الاي« ديج يج جع مادج" .+ ؟ 15 بمج حاط دج % :0 0 ل ‎TR‏ ‏اح ‎Sa Sa 2 Ea RE a aT‏ 2 ‎SIR IRR RRR‏ الجا الداع ال اا ان ال ا اا ا ‎HE.‏ ‎DDO OS‏ ل ليا لبا ‎Neel‏ ‎VLE vt.
    ATR ONT. yma,‏ مد ‎AR Fr AE‏ لمم ‎WE‏ .ب 1 ا 1 ‎N ia 8 La ol Sy‏ = ‎4a AEE the he VR Re‏ يجحا حم مهرد5:[5ة _ ‎FES‏ ‎i aie‏ ملسيو ‎ARE EEE SE‏ ‎ay oo gon CERES‏ ال اشح الل المت ‎A‏ ال ا 8 ‎AR ORR a‏ ا ا ا ا الا ال كيد حب ال نا لد اند ‎ate I Sh‏ اجاج ادا ا ا الا ا اا ‎Se‏ اي الت اللي اتات لين اي الا ا الاي الا ا ا ل ا ا الا اس سس لاا ‎Ks i‏ 0 شكل ب * ‎EAE‏
    -+3؟1- ‎i ow‏ > : ج34 3 8 ‎Ne‏ عا ‎Me rn -‏ - الا ار © 3+ ب" ‎py & oN‏ ‎ad NN‏ اك ‎hy‏ ‎ag EI‏ ا ‎A Fog‏ الت ا ا ‎BA x Rtn.‏ ‎We fa Rd = Coe he‏ د ‎NE Nong, Bae o‏ . 5 ‎RR IN ig nin RRQ aay BRIG. Rs‏ الا الج ؟ : 1884 ب اد ‎gq Nm‏ ا اي ‎SNE‏ 31 ‎Tae SE So, ER‏
    ‎a. « pHi 2‏ = £1 ‎Ase LF‏ 3 . ‎TORT IEE RL CE‏ ودب مجح جة ‎T-TEST‏ ‏ااال امد ات ! زمن ‎Sadat‏ (ق) ‎ry‏ ل شكل ‎1A‏ ‏اما ‎wy Ao oH £2‏ ‎Ll BREUER BH Ny S ji,‏ ‎i‏ 1 مج اجاج > في ‎ae‏ # الست ‎EN‏ : = ‎i a SNS .‏ م 8 ‎i‏ * ‏ار الحا‎ NG Ce =X SR 4 TR, cn eed ‏ااا اد الت اس‎ AEE ‏ا‎ ‎1 ‏ل با‎ 2 Sa Xe > TI ‏ا‎ : so % = Les Ba ‏اا واج ا ال‎ esses eons 1 ‏الل‎ ‎3 He ‏ال بان‎ Sean 2 ‏مق‎ ‎Amon ‎Eis & Xow ow ‏ماج‎ Tox yd Tyla 8 ‏إل لح‎ ‏زمن المعائجة (ق)‎ ‏نا‎ A ‏شكل‎ ‎3 ‎ENE
    مج ججججججب ججح جججججججم َجَجِجِججججججم جِجججججججب: مج ججججججدم ددج ددجم الخو جِججججججججم ‎nono‏ ب ل : امك ‎nny nin BRIAN [ny BRL [ni‏ 3 3 0 0 ¥ [SERRE EE] [ny ‏اس ا‎ 1 ا 1 ال ‎RR‏ الس ‎IE‏ 7 4 3 1 ‏الس‎ EERE 4 im Finny 3 RS nny SERRA oy SEs oy + sen CL a He a . Ea ERs SIH 0 ‏ا ال‎ REY DEEN [ny bY SRR Lanny] 3 TINNY iy TERRY nny 3 SRR ESR bo SRA] nae Th Ly 8 ‏ا اج سس‎ Lay TERRY ERS 3 ‏ل الس ا«‎ iy SER nny ee Ad 8 ‏ا‎ RRR Ty RE SERRA 0 pt ‏يخ‎ 0 ENE RRR 0 ‏د 7 ؟:‎ 0 Ba ¥ i 1 ‏ا الي امس‎ ¥ Cnn ‏ا ا ب‎ 3 RRR rnin ‏ا‎ [ny ‏سس ا‎ ا ا ]الى ا 3 ‎RRR: nny‏ 3 8 0 03 ‏ا‎ gS) [IEEE SR ‏ات‎ ENN [anny ا * 0 ا ا ‎RRR [rm * EE‏ وي ‎ery‏ ‎DEEN Ry SASS! Ly‏ ا 8 ا ال ا اس ا اس . ل ا 0 ا 3 08 ERR nny] - REE iy Ty Hy Ly N SRR: Ln SERRE 0 *® SRR] 1 0 SRR Lanny] B SERNA 8 Lanny SERRA ‏الم‎ fre 3 ERR nny x BERRY ® TEEN TERRY x ERS < Asap © h 0 ‏ال‎ A BERRI BRERA BNA] » Lay ‏مخ ا‎ BERR nny ¥ BRIAN * Ney SINT ERS 3 ERA ERS BERRY nny ‏اج ا‎ 8 iy FE ARI nny] BERRY nny] SINT ® [anny 3 RRR * nny SRS ERE SEs [ny 1 ا 7 ال ال : ا ‎H‏ 1 ا 7 ال ال 0 8 ال ‎ERR SERRA [RS SRR)‏ 8 1 : اا ‎RE EES‏ اس 0 ‎ERR [ri‏ الا سح ‎ERA ESR SSR ERE‏ الس ‎pm‏ & 3 a * RRMA ERY BERRI Lanny — ENN [Lanny 4 3 RRR: 1 ‏ال‎ [RS SRR] ny 1 #0 pry nny 0 ‏ا سس‎ Ba
    ANE. a ‏سس‎ [ny RUEBEN [iy RRS RT 1A 8 3 RR 0: ERR BERRY 1 ‏ا * 0 ج‎ 3 IRA 3 ‏الس‎ DEEN SE wy ; SERNA] Ra 3 RRR: FNRI ‏تج‎ SRS ny SRR] Ry 3 RR [ny RHEIN ry J SINT RARE 4 SRR ny AR FR ® RRR [nny Alas wd ERR ony SSR pny 3 TINNY nny EE TY BR inns SEER Fy ed SRE 3 ® pi Fy Ry Ty KR REE i FERRE! ny Ry nny ne SRA] nny N ny iy i. ny om RN] 0: 0 RR SRR SEER ERR ‏ال 1 .ا‎ ‎RE Say‏ ا 0 ‎RE ay‏ ا ‎+ ae %d RE REI ERAS 7 ‏ا ا‎ ‏اه‎ 3 aN: Ley SRA 1 ‏الس ا‎ 8 RE 3 SER SRE ny 0 [Ey ‎3 SRR FRR BRR ‏ا ا‎ 0 ‎3 CR *® RY Sy Ay TRE [ny ‎3 NE SEER ISB Any Ba [Ey ‎3 RRR ‏الا ا ال ا‎ RRR . H SE ako Ca ev 1 Ee ey 2 de o® 3 ea 8 ‏و ب‎ : LRERRe A BEML ‏اع ا‎ NRE ‏لمعه ا انم عجر اللا ل و الايد الا‎ 8 ‏ل‎ ‎a= ‏احج‎ p=d oe a= « ‏رجح مجح‎ 3 3 ‏يا ب‎ ¥ Ea tH + ‏تدج‎ ١ << 5 J PEP LE RA 3 3 2 a ‏ا‎ KE EAE
    -؟ ؟- . 3 بق ‎i‏ 1 4 ‎EW‏ ‎Pf ey £‏ ‎i 5‏ ‎x‏ 3 5 ‎hess‏ ‎Sh‏ 8 © ا 0 م > : م ‎oF Sl‏ ‎BD 3b x oD o&‏ شكل ‎oS.
    SHEE A » ٠١١‏ ‎a oo Rea‏ & ص ‎RX‏ ع ب ‎he‏ ‏+ و 4 واج + ‎Cy Ra LO‏ “ امي : الي اه لعي ‎١‏ نب ح<ن لحني © خمى اح ‎a oe 5‏ تي د ‎Ey At 2 a‏ نمي اضى ‏ م اس شكل ‎٠١‏ ب ‎ENE‏
    -\YV- ¥¥ ‏يوا‎ : EIA how ‏ا‎ BHR ] HW y Sk ‏مع‎ FRAY et 3 i Re xox : : Fees SS y Ta PR Jas > ¥ 5 oxox ‏ل‎ ‎ - ‏أضذموادص‎ ١ we ©" ‏ل‎ ‎١ ‏التجرية ؟ التجرية‎ ١١ ‏شكل‎ ‎ENE.
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA114350400A 2009-06-22 2010-06-22 تركيبات وطرق لتحضير تركيبات مولدة للمناعة لمقترن بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي 5 و 8 من المكورات العنقودية الذهبية SA114350400B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21914309P 2009-06-22 2009-06-22
US21915109P 2009-06-22 2009-06-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA114350400B1 true SA114350400B1 (ar) 2016-05-26

Family

ID=43599164

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA114350400A SA114350400B1 (ar) 2009-06-22 2010-06-22 تركيبات وطرق لتحضير تركيبات مولدة للمناعة لمقترن بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي 5 و 8 من المكورات العنقودية الذهبية

Country Status (22)

Country Link
US (2) US9125951B2 (ar)
EP (2) EP2445523B1 (ar)
JP (4) JP2012530785A (ar)
KR (2) KR20140119165A (ar)
CN (1) CN102625713A (ar)
AR (1) AR077190A1 (ar)
AU (1) AU2010301043B2 (ar)
BR (1) BRPI1011753B8 (ar)
CA (1) CA2766418C (ar)
CO (1) CO6480930A2 (ar)
ES (2) ES2729934T3 (ar)
IL (1) IL217085B (ar)
MX (1) MX2012000045A (ar)
MY (1) MY158231A (ar)
NZ (1) NZ597191A (ar)
PE (1) PE20110065A1 (ar)
PH (2) PH12015502508A1 (ar)
RU (1) RU2531234C2 (ar)
SA (1) SA114350400B1 (ar)
SG (2) SG177310A1 (ar)
TW (2) TWI505834B (ar)
WO (1) WO2011041003A2 (ar)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101486122B1 (ko) 2009-06-22 2015-01-23 와이어쓰 엘엘씨 스타필로코커스 아우레우스 항원의 면역원성 조성물
US8974799B2 (en) * 2009-09-30 2015-03-10 Novartis Ag Conjugation of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular polysaccharides
DK2493498T3 (en) 2009-10-30 2017-05-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Purification of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsule saccharides
AR091902A1 (es) 2012-07-25 2015-03-11 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion liquida de un conjugado de insulina de accion prolongada
PE20150464A1 (es) 2012-08-16 2015-04-25 Pfizer Proceso de glucoconjugacion y composiciones
US9580734B2 (en) * 2012-11-21 2017-02-28 Serum Institute Of India Private Ltd. Production of high yields of bacterial polysaccharides
GB201310008D0 (en) 2013-06-05 2013-07-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition for use in therapy
PT3096786T (pt) * 2014-01-21 2021-08-24 Pfizer Polissacáridos capsulares de streptococcus pneumoniae e conjugados dos mesmos
WO2015175565A2 (en) * 2014-05-12 2015-11-19 Purdue Research Foundation Selectin and icam/vcam peptide ligand conjugates
CA2956188A1 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 Glycovaxyn Ag Modified host cells for use in bioconjugate production
MX2017007652A (es) 2014-12-10 2017-10-11 Glaxosmithkline Biologicals Sa Metodo de tratamiento.
AU2016258284C1 (en) * 2015-05-04 2020-09-03 Pfizer Inc. Group B Streptococcus polysaccharide-protein conjugates, methods for producing conjugates, immunogenic compositions comprising conjugates, and uses thereof
WO2017013548A1 (en) * 2015-07-21 2017-01-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
MX2018009048A (es) * 2016-02-15 2019-03-28 Hipra Scient S L U Extracto de streptococcus uberis como agente inmunogenico.
RU2758090C2 (ru) * 2016-03-15 2021-10-26 Мсд Уэлком Траст Хиллеман Лабораторис Пвт. Лтд. Новые конъюгаты полисахарида с белком и способ их получения
KR20190121330A (ko) * 2017-02-24 2019-10-25 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체의 면역원성의 증진
US11400162B2 (en) 2017-02-24 2022-08-02 Merck Sharp & Dohme Llc Processes for the formulation of pneumococcal polysaccharides for conjugation to a carrier protein
EP3678652A4 (en) 2017-09-07 2021-05-19 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTIPNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDES AND THEIR USE IN POLYSACCHARIDE-CARRIER PROTEIN IMMUNOGENIC CONJUGATES
BR112020004410A8 (pt) * 2017-09-07 2023-01-31 Merck Sharp & Dohme Processos para a formulação de polissacarídeos pneumocócicos para conjugação a uma proteína carreadora
KR20200051002A (ko) 2017-09-07 2020-05-12 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 폐렴구균 폴리사카라이드 및 면역원성 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체에서의 그의 용도
JP7397000B2 (ja) * 2018-04-30 2023-12-12 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー 凍結乾燥変異ジフテリア毒素のジメチルスルホキシド中均一溶液を提供する方法
CN112074293A (zh) 2018-04-30 2020-12-11 默沙东公司 生产肺炎链球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
JP7239509B6 (ja) 2019-02-22 2023-03-28 ファイザー・インク 細菌多糖類を精製するための方法
CA3171864A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Pfizer Inc. Purification of saccharides
CN111228478A (zh) * 2020-02-25 2020-06-05 江南大学 三糖重复单元寡糖链在制备金黄色葡萄球菌疫苗中的应用
CA3221075A1 (en) * 2021-05-28 2022-12-01 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof

Family Cites Families (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US150688A (en) 1874-05-12 Improvement in centrifugal machines
US4134214A (en) 1977-08-05 1979-01-16 Merck & Co., Inc. Freeze-drying process for the preparation of meningococcus vaccine without degradation of potency
US4902506A (en) 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
CA1247080A (en) 1983-03-08 1988-12-20 Commonwealth Serum Laboratories Commission Antigenically active amino acid sequences
SE8405493D0 (sv) 1984-11-01 1984-11-01 Bror Morein Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel
NZ214503A (en) * 1984-12-20 1990-02-26 Merck & Co Inc Covalently-modified neutral bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates
IL78775A (en) 1985-05-15 1992-06-21 Biotech Australia Pty Ltd Oral vaccines
US5078996A (en) 1985-08-16 1992-01-07 Immunex Corporation Activation of macrophage tumoricidal activity by granulocyte-macrophage colony stimulating factor
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
CA2017507C (en) 1989-05-25 1996-11-12 Gary Van Nest Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
CA2047031A1 (en) 1990-07-19 1992-01-20 Stephen Marburg Peptide-polysaccharide-protein conjugate vaccines
NZ239643A (en) * 1990-09-17 1996-05-28 North American Vaccine Inc Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group.
DE69233012T2 (de) 1991-11-22 2003-11-06 Univax Biolog Inc Mit staphylococcus epidermidis assoziierte oberflächenantigene des typs i
IT1253009B (it) 1991-12-31 1995-07-10 Sclavo Ricerca S R L Mutanti immunogenici detossificati della tossina colerica e della tossina lt, loro preparazione ed uso per la preparazione di vaccini
DK0616034T3 (da) 1993-03-05 2005-02-21 Wyeth Corp Plasmid til fremstilling af CRM-protein og diphtheria toxin
ATE254475T1 (de) 1993-09-22 2003-12-15 Jackson H M Found Military Med Verfahren zur aktivierung von löslichem kohlenhydraten durch verwendung von neuen cyanylierungsreagenzien, zur herstellung von immunogenischen konstrukten
US5571515A (en) 1994-04-18 1996-11-05 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Compositions and methods for use of IL-12 as an adjuvant
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
WO1996014873A2 (en) * 1994-11-16 1996-05-23 Sri International COVALENTLY BOUND β-GLUCAN CONJUGATES IN TARGETED DELIVERY
BE1008978A5 (fr) 1994-12-27 1996-10-01 Solvay Adjuvants pour vaccins.
JPH11506110A (ja) * 1995-06-07 1999-06-02 アルバータ リサーチ カウンセル 免疫原性および免疫刺激性オリゴサッカライド組成物ならびにそれらの作製法および使用法
GB9622159D0 (en) 1996-10-24 1996-12-18 Solvay Sociutu Anonyme Polyanionic polymers as adjuvants for mucosal immunization
GB9622660D0 (en) 1996-10-31 1997-01-08 Biocine Spa Immunogenic detoxified mutant toxin
US6113918A (en) 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
JP4235262B2 (ja) 1997-06-12 2009-03-11 シンエツ・バイオ，インコーポレイテッド 組換え細菌宿主における非生来細菌性エキソ多糖の産生
EP1000076A1 (en) 1997-07-17 2000-05-17 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES HEXADECASACCHARIDE-PROTEIN CONJUGATE VACCINE FOR $i(SHIGELLA DYSENTERIAE) TYPE 1
AU1537699A (en) 1997-11-26 1999-06-15 Bioresearch Ireland a division of Eolas - The Irish Science and Technology Agency Extracellular matrix-binding proteins from (staphylococcus aureus)
US7252828B2 (en) 1998-07-15 2007-08-07 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Polysaccharide vaccine for staphylococcal infections
US6703025B1 (en) 1998-08-31 2004-03-09 Inhibitex, Inc. Multicomponent vaccines
CA2340304C (en) 1998-08-31 2012-12-04 Inhibitex, Inc. Multicomponent vaccines
US6146902A (en) 1998-12-29 2000-11-14 Aventis Pasteur, Inc. Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions
EP1035137A1 (en) 1999-03-12 2000-09-13 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Method for the reductive amination of polysaccharides
EP1162999B1 (en) 1999-03-19 2006-11-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine against Streptococcus pneumoniae
US6936258B1 (en) 1999-03-19 2005-08-30 Nabi Biopharmaceuticals Staphylococcus antigen and vaccine
US7115730B1 (en) 1999-04-27 2006-10-03 Chiron Srl Immunogenic detoxified mutant E. coli LT-A-toxin
US7384640B1 (en) 1999-09-30 2008-06-10 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant
WO2001070685A2 (en) 2000-03-22 2001-09-27 Solulink, Incorporated Hydrazine-based and carbonyl-based bifunctional crosslinking reagents
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
JP5271471B2 (ja) 2000-06-08 2013-08-21 インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト 免疫促進性オリゴデオキシヌクレオチド
AT410635B (de) 2000-10-18 2003-06-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Vakzin-zusammensetzung
US7105333B2 (en) * 2001-03-27 2006-09-12 Deadreon Corporation Nucleic acid molecules encoding a transmembrane serine protease 9, the encoded polypeptides and methods based thereon
CA2449670A1 (en) 2001-06-07 2002-12-12 Wyeth Holdings Corporation Mutant forms of cholera holotoxin as an adjuvant
CN1977971A (zh) 2001-06-07 2007-06-13 惠氏控股有限公司 作为佐剂的霍乱全毒素的突变体形式
CA2351018A1 (en) 2001-07-09 2003-01-09 Universite De Sherbrooke Dna vaccine against staphylococcus aureus
FR2828404B1 (fr) 2001-08-10 2005-07-15 Neovacs Superimmunogene composite a usage vaccinal bifonctionnel pour le traitement des maladies associees a un desordre tissulaire stromal
US20030113350A1 (en) 2001-09-19 2003-06-19 Fattom Ali I. Glycoconjugate vaccines for use in immune-compromised populations
US20030092062A1 (en) * 2001-10-24 2003-05-15 Reddy M. Parameswara Immobilizing biological molecules
MXPA04009339A (es) * 2002-03-26 2005-01-25 Chiron Srl Sacaridos modificados que tienen estabilidad mejorada en agua.
TW200306314A (en) 2002-04-16 2003-11-16 Tanabe Seiyaku Co Liquid preparation comprising camptothecin derivative and pharmaceutical composition producible by lyophilizing the preparation
GB0220198D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Modified saccharides,conjugates thereof and their manufacture
NZ539153A (en) 2002-11-12 2006-11-30 Brigham & Womens Hospital Polysaccharide vaccine for staphylococcal infections
JP4078417B2 (ja) 2003-03-04 2008-04-23 独立行政法人産業技術総合研究所 好熱菌由来オリゴペプチダーゼ
US9296795B2 (en) * 2003-03-07 2016-03-29 Wyeth Holdings, Llc. Polysaccharide-staphylococcal surface adhesin carrier protein conjugates for immunization against nosocomial infections
EP1603950A2 (en) 2003-03-17 2005-12-14 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
AU2004251602B2 (en) * 2003-05-23 2010-05-13 Nektar Therapeutics PEG derivatives having an amidocarbonate linkage
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
SI1701968T1 (sl) 2003-12-17 2015-08-31 Wyeth Llc Imunogeni konjugati peptidnih nosilcev in postopek izdelave istih
US7537766B2 (en) 2004-08-30 2009-05-26 Wyeth Neisseria meningitidis inner core lipo-oligosaccharide epitopes, multivalent conjugates thereof and immunogenic compositions thereof
EP2305294B1 (en) 2004-09-22 2015-04-01 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic composition for use in vaccination against staphylococcei
US20060134141A1 (en) 2004-12-14 2006-06-22 Nabi Biopharmaceuticals Glycoconjugate vaccines containing peptidoglycan
PE20070163A1 (es) * 2005-06-27 2007-03-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica de conjugados de sacaridos de n. meningitidis
EA015833B1 (ru) * 2006-03-30 2011-12-30 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Иммуногенная композиция
GB0606416D0 (en) * 2006-03-30 2006-05-10 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
AR060187A1 (es) * 2006-03-30 2008-05-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica
FR2899110A1 (fr) * 2006-03-31 2007-10-05 Sanofi Pasteur Sa Polysaccharides capsulaires de type 5 et de type 8 des souches surproductrices de staphylococcus aureus
WO2007127668A2 (en) 2006-04-26 2007-11-08 Wyeth Novel processes for coating container means which inhibit precipitation of polysaccharide-protein conjugate formulations
GB0700562D0 (en) * 2007-01-11 2007-02-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Modified Saccharides
ES2677353T3 (es) 2007-03-23 2018-08-01 Wyeth Llc Procedimiento abreviado de purificación para la producción de polisacáridos capsulares de Streptococcus pneumoniae
CA2716399C (en) 2008-03-05 2020-07-21 Pierre Chouvenc Process for stabilizing an adjuvant containing vaccine composition
KR101486122B1 (ko) * 2009-06-22 2015-01-23 와이어쓰 엘엘씨 스타필로코커스 아우레우스 항원의 면역원성 조성물
GB0913681D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
DK2493498T3 (en) 2009-10-30 2017-05-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Purification of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsule saccharides
HUE033072T2 (hu) 2010-12-22 2017-11-28 Wyeth Llc Staphylococcus aureus antigének immunogén készítményei

Also Published As

Publication number Publication date
PH12015502508A1 (en) 2019-06-03
EP2445523B1 (en) 2019-04-17
AR077190A1 (es) 2011-08-10
RU2531234C2 (ru) 2014-10-20
BRPI1011753A2 (pt) 2016-03-29
CO6480930A2 (es) 2012-07-16
EP3461496B1 (en) 2023-08-23
RU2011152045A (ru) 2013-07-27
KR20120048568A (ko) 2012-05-15
JP2016053051A (ja) 2016-04-14
US20120276137A1 (en) 2012-11-01
KR20140119165A (ko) 2014-10-08
US9623100B2 (en) 2017-04-18
AU2010301043A1 (en) 2012-01-19
IL217085B (en) 2018-10-31
JP2012530785A (ja) 2012-12-06
CA2766418C (en) 2016-03-29
BRPI1011753B1 (pt) 2021-03-02
SG10201406432RA (en) 2014-11-27
EP3461496A1 (en) 2019-04-03
JP2017179378A (ja) 2017-10-05
EP2445523A2 (en) 2012-05-02
AU2010301043B2 (en) 2014-01-09
NZ597191A (en) 2013-11-29
SG177310A1 (en) 2012-02-28
IL217085A0 (en) 2012-02-29
WO2011041003A9 (en) 2011-06-09
JP6153581B2 (ja) 2017-06-28
JP6393804B2 (ja) 2018-09-19
MX2012000045A (es) 2012-01-30
TWI505834B (zh) 2015-11-01
WO2011041003A2 (en) 2011-04-07
JP2013237693A (ja) 2013-11-28
TW201544119A (zh) 2015-12-01
ES2959890T3 (es) 2024-02-28
ES2729934T3 (es) 2019-11-07
KR101774062B1 (ko) 2017-09-01
BRPI1011753B8 (pt) 2021-05-25
TW201110977A (en) 2011-04-01
MY158231A (en) 2016-09-15
CN102625713A (zh) 2012-08-01
CA2766418A1 (en) 2011-04-07
PH12021551159A1 (en) 2022-02-21
US20160022798A1 (en) 2016-01-28
WO2011041003A3 (en) 2011-10-27
PE20110065A1 (es) 2011-01-31
US9125951B2 (en) 2015-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA114350400B1 (ar) تركيبات وطرق لتحضير تركيبات مولدة للمناعة لمقترن بولي سكاريد كبسولي للنمط المصلي 5 و 8 من المكورات العنقودية الذهبية
TWI469789B (zh) 金黃色葡萄球菌抗原之免疫原性組合物
KR101206544B1 (ko) 백신용 담체 단백질
SA515360035B1 (ar) تركيبات وعمليات اقتران سكر