RU2537228C1 - Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии, а также способ его получения - Google Patents
Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии, а также способ его получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2537228C1 RU2537228C1 RU2013119911/15A RU2013119911A RU2537228C1 RU 2537228 C1 RU2537228 C1 RU 2537228C1 RU 2013119911/15 A RU2013119911/15 A RU 2013119911/15A RU 2013119911 A RU2013119911 A RU 2013119911A RU 2537228 C1 RU2537228 C1 RU 2537228C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- conjugate
- phthalocyanine
- therapy
- present
- cancer
- Prior art date
Links
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 88
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 88
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 71
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 71
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 71
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 68
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 67
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 33
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 claims description 52
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 34
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 16
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 claims description 11
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 claims description 11
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 claims description 3
- RWQUWTMOHXGTNN-UHFFFAOYSA-N 9-n,10-n-bis(4-butylphenyl)-9-n,10-n-bis(4-methylphenyl)phenanthrene-9,10-diamine Chemical group C1=CC(CCCC)=CC=C1N(C=1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C=1N(C=1C=CC(C)=CC=1)C=1C=CC(CCCC)=CC=1)C1=CC=C(C)C=C1 RWQUWTMOHXGTNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000610551 Homo sapiens Prominin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102100040120 Prominin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010090931 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000013535 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 97
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 37
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 36
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 14
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 10
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 10
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 8
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 8
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 8
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- -1 polymer Chemical class 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 6
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 6
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 6
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 6
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 6
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- LKKPNUDVOYAOBB-UHFFFAOYSA-N naphthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC4=CC=CC=C4C=C3C(N=C3C4=CC5=CC=CC=C5C=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=C2C(C=CC=C2)=C2)C2=C1N=C1C2=CC3=CC=CC=C3C=C2C4=N1 LKKPNUDVOYAOBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- NTZMSBAAHBICLE-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzene-1,2-dicarbonitrile Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(C#N)C(C#N)=C1 NTZMSBAAHBICLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 3
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 88755TAZ87 Chemical class NCC(=O)CCC(O)=O ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010073306 Exposure to radiation Diseases 0.000 description 2
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- BHPNXACHQYJJJS-UHFFFAOYSA-N bacteriochlorin Chemical compound N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)CC2)=CC=C1C=C1CCC4=N1 BHPNXACHQYJJJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229910052733 gallium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000007578 phototoxic dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000018 phototoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JTGMTYWYUZDRBK-UHFFFAOYSA-N 9,10-dimethylanthracene Chemical compound C1=CC=C2C(C)=C(C=CC=C3)C3=C(C)C2=C1 JTGMTYWYUZDRBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 229920006706 PC-C Polymers 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 1
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000008952 bacterial invasion Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical group 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N iduronic acid Chemical compound O=C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003240 metallophthalocyanine polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000037368 penetrate the skin Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- ZNSSPLQZSUWFJT-UHFFFAOYSA-N pentyl 4-hydroxybenzoate Chemical compound CCCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZNSSPLQZSUWFJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 231100000760 phototoxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 150000004033 porphyrin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000011345 viscous material Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/555—Heterocyclic compounds containing heavy metals, e.g. hemin, hematin, melarsoprol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0036—Porphyrins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0076—PDT with expanded (metallo)porphyrins, i.e. having more than 20 ring atoms, e.g. texaphyrins, sapphyrins, hexaphyrins, pentaphyrins, porphocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0054—Macromolecular compounds, i.e. oligomers, polymers, dendrimers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к конъюгату для фотодинамической диагностики или терапии рака, к способу получения конъюгата и к композиции, предназначенной для диагностики или терпаии рака, содержащей конъюгат. Конъюгат в виде наночастиц с размерами 100-250 нм представляет собой ацетилированный биологически совместимый полисахарид - хондроитин сульфат, связанный сложноэфирной связью с соединением на основе фталоцианина формулы
Конъюгат получают посредством ацетилирования хондроитин сульфата, растворения хондроитин сульфата в органическом растворителе и добавления соединения на основе фталоцианина указанной выше формулы и катализатора к хондроитин сульфату. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 16 ил., 2 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к конъюгату ацетилированного биологически совместимого полисахарида и соединения на основе фталоцианина, предназначенному для фотодинамической диагностики или терапии, а также к способу получения такого конъюгата, а более конкретно к биологически совместимому конъюгату, в котором ацетилированный полисахарид связан с соединением на основе фталоцианина, который может иметь превосходное отношение накопления и таргетное распределение по отношению к раковым клеткам и который характеризуется превосходной стабильностью в клетках, отличных от раковых клеток, а также к способу получения такого конъюгата.
Уровень техники
Фотодинамическая терапия (PDT) представляет собой технологию лечения неизлечимых заболеваний, таких как рак и тому подобные, или лечения таких заболеваний, как акне и тому подобные, без проведения операций с использованием фоточувствительного материала (ниже упоминается как “фотосенсибилизатор”). PDT активно изучают с начала 21-го столетия, и в настоящее время ее используют для повышения иммунитета при диагностике и терапии рака, при аутологичной трансплантации костного мозга, при применении антибиотиков, при терапии СПИДа, при пересадке кожи или при терапии артрита и, таким образом, диапазон применения постепенно расширяется.
В частности, в случае PDT, используемой при терапии рака, когда фотосенсибилизатор, представляющий собой материал, чувствительный к свету, вводится в организм и облучается внешним светом, он под действием внешнего света претерпевает химические реакции со свободным кислородом с образованием синглетного кислорода или свободного радикала, которые индуцируют апоптоз в различных болезненных очагах и раковых клетках, разрушая их.
В настоящее время, в качестве фотосенсибилизаторов, используемых при PDT, известны производные порфирина, хлор, бактериохлорин, фталоцианин, производные 5-амино-левулиновой кислоты и тому подобное. Производные циклических тетрапирролов в качестве фотосенсибилизатора отличаются тем, что они селективно накапливаются в раковых клетках и флуоресцируют или фосфоресцируют, в зависимости от свойств соединения, что позволяет использовать их в качестве реагента для ранней диагностики. В дополнение к этому, поскольку металлопорфирин, в котором внутри циклического тетрапиррола связан металл, характеризуется рядом свойств, зависящих от вида связанного металла, такие металлопорфирины используются в качестве контрастного агента во время исследований методом ядерного магнитного резонанса (MRI) и, как следствие, применяются во время ранней диагностики опухолевых клеток, таких как раковые клетки. Производные 5-амино-левулиновой кислоты, которые являются наиболее широко известными фотосенсибилизаторами, являются простыми в использовании и имеют малую молекулярную массу, что относительно облегчает проникновение через кожу. Кроме того, они имеют малое число побочных эффектов и, таким образом, являются стабильными. В дополнение к этому, сообщалось, что соединение на основе металлофталоцианина с металлом, связанным внутри фталоцианина, в котором пиррольные группы циклического тетрапиррола конъюгированы с бензольными кольцами и соединяются через аза-азот, или внутри нафталоцианина, в котором каждое бензольное кольцо фталоцианина конъюгировано с другим бензольным кольцом, имеет более высокую длину волны поглощения и более высокий молярный коэффициент поглощения, чем обычное соединение на основе порфирина.
PDT позволяет селективно удалять только раковые клетки, сохраняя, в то время, нормальные клетки; устранять риски, связанные с общей анестезией, и даже осуществлять операцию при использовании только лишь местной анестезии.
Однако PDT сложно использовать в случае клеток объемных опухолей, через которые свет не проходит. В частности, PDT имеет недостатки, при которых фотосенсибилизатор медленно метаболизируется in vivo и, таким образом, остается в организме в течение продолжительного промежутка времени, приводя к фототоксичным побочным воздействиям, а также плохо накапливается в опухолевых клетках, приводя к уменьшению концентрации фотосенсибилизатора в опухолевых клетках, что не мешает эффективному терапевтическому воздействию.
Кроме того, период полужизни фотосенсибилизатора является довольно продолжительным, что принуждает пациентов к весьма неудобному нахождению в помещениях без света после лечения, и фотосенсибилизатор с трудом накапливается в опухолевых клетках. В дополнение к этому, лечебные соединения накапливаются в организме в течение продолжительного времени, включая, собственно, время терапии, что вызывает в организме различные побочные эффекты. Кроме того, большинство фотосенсибилизаторов, используемых для PDT, являются гидрофильными продуктами, и не могут легко проникать через кожу, и, таким образом, терапию необходимо осуществлять несколько раз в течение продолжительного периода времени, что делает терапию избыточно долгой.
Поэтому необходимо разработать новые фотодинамические терапевтические агенты, которые имели бы высокое отношение накопления, специфичное для раковых клеток, минимальное побочное действие, превосходное терапевтическое действие и которые эффективно использовали бы биологически совместимые полисахариды.
Описание
Техническая задача
Настоящее изобретение было сделано в попытке найти новый конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии, который позволил бы повысить отношение накопления соединения на основе фталоцианина в качестве фотосенсибилизатора в опухолевых клетках, и характеризовался бы цитотоксичностью, специфичной только для раковых клеток, и при этом имел бы заметно сниженную фототоксичность в клетках, отличных от раковых клеток, благодаря подавлению флуоресценции.
Техническое решение
Настоящее изобретение основано на получении комплексного соединения из фталоцианина, в котором во фталоцианин или нафталоцианин вводят -COOH или бензольное кольцо, замещенное -COOH, и полисахарида, имеющего модифицированные химические свойства, получаемого посредством ацетилирования биологически совместимого нерастворимого в органических растворителях полисахарида. Более конкретно, настоящее изобретение основано на получении конъюгата ацетилированного биологически совместимого полисахарида, который способен повысить отношение накопления фотосенсибилизатора в опухолевых клетках и не является цитотоксичным для клеток, отличных от раковых клеток, благодаря подавлению флуоресценции, даже когда его облучают излучением из ближней инфракрасной области, и фотосенсибилизатора, имеющего более высокий коэффициент поглощения и поглощающую способность в ближней инфракрасной области.
Таким образом, настоящее изобретение относится к конъюгату для фотодинамической диагностики или терапии, в котором ацетилированный биологически совместимый полисахарид связан с фотосенсибилизатором.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата для фотодинамической диагностики или терапии, включающему: ацетилирование биологически совместимого полисахарида; растворение ацетилированного биологически совместимого полисахарида в органическом растворителе и добавление соединения на основе фталоцианина и катализатора к биологически совместимому полисахариду для связывания фотосенсибилизатора с биологически совместимым полимером.
Преимущества
Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению получают посредством связывания ацетилированного биологически совместимого полисахарида и соединения на основе фталоцианина. Он может легко накапливаться в раковых клетках in vivo, в то время как ткани, его не накапливающие, не подвержены цитотоксичности, благодаря подавлению флуоресценции, даже когда их облучают излучением из ближней инфракрасной области. Кроме того, когда конъюгат накапливается в раковых клетках, связь между биологически совместимым полисахаридом и фотосенсибилизатором разрушается под действием ферментов раковой клетки, и тогда, при облучении светом с длиной волны, соответствующей ближней инфракрасной области, конъюгат становится цитотоксичным и, таким образом, максимизирует противораковое действие во время облучения излучением из ближней инфракрасной области, а также демонстрирует флуоресценцию, в следствие которой он может использоваться для получения изображений.
Описание чертежей
Фиг.1 иллюстрирует механизм, согласно которому биологически совместимый конъюгат по настоящему изобретению, в котором соединение на основе фталоцианина связывается с ацетилированным биологически совместимым полисахаридом, демонстрирует цитотоксичность в раковой клетке;
Фиг.2 представляет собой график, показывающий коэффициенты поглощения фотосенсибилизаторов, таких как фталоцианин, нафталоцианин, хлор и бактериохлорин;
Фиг.3 представляет собой график, показывающий результаты анализа Maldi-TOF (ионизация с лазерной десорбцией и с использованием матрицы, времяпролетный режим) для соединения на основе фталоцианина, используемого в примерах по настоящему изобретению;
Фиг.4 представляет собой схему, показывающую структурную формулу конъюгата, Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, в котором соединение на основе фталоцианина связано с сульфатом хондроитина посредством сложноэфирной связи;
Фиг.5 показывает результаты ЯМР анализа Ac-Cs-Zn-Pc-COOH;
Фиг.6 показывает результаты анализа FT-IR (инфракрасной спектроскопии с Фурье-преобразованием) для Ac-Cs-Zn-Pc-COOH;
Фиг.7-11 показывают результаты, полученные с помощью устройства для динамического рассеяния света и электронного микроскопа для конъюгата (нано-микросферы), предназначенного для фотодинамической диагностики или терапии и полученного в соответствии с одним из примеров по настоящему изобретению. В частности, показаны результаты для распределения размеров и формы, когда Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, полученный в Примере 1 настоящего изобретения, находится в форме нано-микросфер;
Фиг.12 представляет собой график, сравнивающий интенсивности флуоресценции для случаев, когда эффект подавления флуоресценции имеет место и когда эффект подавления флуоресценции не показан, для нано-микросфер по настоящему изобретению, полученных в соответствии с одним из примеров настоящего изобретения, то есть для Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, полученного в Примере 1, и показывающий посредством сравнения и наблюдения значения флуоресценции для различных концентраций Ac-Cs-Zn-Pc-COOH в DMSO и деионизованной воде и значения флуоресценции для немодифицированного Zn-Pc-COOH в DMSO и деионизованной воде;
Фиг.13 представляет собой график, показывающий потенциал образования синглетного кислорода при облучении лазером, для нано-микросфер по настоящему изобретению, полученных в соответствии с одним из примеров настоящего изобретения, то есть для Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, полученного в Примере 1, где • - означает потенциал образования кислорода для немодифицированного Zn-Pc-COOH в DMSO; и -○-, -▼- и -□- означают потенциалы образования кислорода для 1 мг, 2 мг и 5 мг нано-микросфер по настоящему изобретению в DMSO, соответственно;
Фиг.14 показывает уровни флуоресценции, демонстрируемые благодаря разложению под действием фермента раковых клеток, когда 10 мкг нано-микросфер по настоящему изобретению, полученных в соответствии с одним из примеров настоящего изобретения, то есть Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, полученного в Примере 1, обрабатывают культурной средой А без раковых клеток и культурной средой В с раковыми клетками, соответственно; и
Фиг.15 и 16 представляют собой сравнительные графики, когда нано-микросферы по настоящему изобретению, полученные в соответствии с одним из примеров настоящего изобретения, то есть Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, полученный в Примере 1, и немодифицированный Zn-Pc-COOH, используемый в качестве контроля, поглощаются в клетках с последующим облучением лазером, после которого с помощью реагента МТТ наблюдается апоптоз. Общее время облучения лазером составляет 8 минут. Фиг.15 показывает сравнение уровня апоптоза для немодифицированного Zn-Pc-COOH для случая, когда лазером не облучают (•-), и для случая облучения лазером (-○-), а Фиг.16 показывает сравнение уровня апоптоза для конъюгата по настоящему изобретению, Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, для случая, когда лазером не облучают (•-), и для случая облучения лазером (-○-).
Наилучший способ осуществления изобретения
Настоящее изобретение относится к конъюгату для фотодинамической диагностики или терапии, в котором соединение на основе фталоцианина в качестве фотосенсибилизатора связано с ацетилированным биологически совместимым полисахаридом.
Конъюгат ацетилированного биологически совместимого полисахарида и соединения на основе фталоцианина для фотодинамической диагностики или терапии в соответствии с настоящим изобретением предназначен для нового способа фотодинамической терапии, который может повысить отношение накопления в раковых тканях или раковых клетках и таргетное распределение в раковых тканях или раковых клетках, а также заметно уменьшить фототоксичность благодаря подавлению флуоресценции в клетках, отличных от раковых тканей или раковых клеток. Таким образом, описывается конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии, в котором соединение на основе фталоцианина в качестве фотосенсибилизатора связано с ацетилированным биологически совместимым полисахаридом.
Как правило, биологически совместимый полисахарид имеет хорошую растворимость в воде, но низкую растворимость в органических растворителях и, таким образом, он плохо растворяется в существующем органическом растворителе, что усложняет его химическое связывание. Однако в соответствии с настоящим изобретением полисахарид ацетилируют для увеличения растворимости в органических растворителях, и делают возможными некоторые химические модификации. В дополнение к этому, существующий фотодинамический терапевтический агент, включающий один лишь фотосенсибилизатор, может вводиться только местным образом, поскольку он имеет высокую гидрофобность и, таким образом, непригоден для инъекций. Кроме того, он имеет низкую эффективность накопления и таргетную эффективность по отношению к раковым клеткам и, таким образом, не позволяет подавить флуоресценцию, что может in vivo привести к воздействию на нормальные клетки. Однако в настоящем изобретении уже сам биологически совместимый полисахарид, даже без отдельного материала, способного нацеливаться на раковые клетки, связывается, в результате ацетилирования, с некоторыми целевыми рецепторами среди тех рецепторов, которые сверх экспрессируются на поверхности раковой клетки. Это позволяет увеличить эффективность накопления в раковых тканях, а позже легко разложить конъюгат под действием ферментативной реакции. Затем эффект подавления флуоресценции ослабляется, и в этой ситуации, когда клетки облучают светом с длиной волны, соответствующей ближней инфракрасной области, раковые клетки будут уничтожаться.
В настоящем изобретении связывание соединения на основе фталоцианина и биологически совместимого полисахарида никак не ограничено, при условии, что связь между соединением на основе фталоцианина и биологически совместимым полисахаридом может расщепляться под действием ферментативной реакции, когда конъюгат накапливается в раковой клетке. Например, связь может представлять собой амидную связь, то есть связь -CO-NH-, или сложноэфирную связь, и предпочтительно представляет собой сложноэфирную связь, образующуюся в результате связывания группы CH2OH биологически совместимого полисахарида и группы -COOH, введенной в соединение на основе фталоцианина. Причина этого заключается в том, что сложноэфирная связь имеет более высокую эффективность разложения in vivo по сравнению с другими видами связей, включая амидную связь, и, таким образом, демонстрирует высокое терапевтическое воздействие при использовании малого количества фотосенсибилизатора.
В дополнение к этому, конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению может иметь форму нано-геля или нано-микросфер, в виде наноразмерной самоорганизующейся системы, которая является стабильной в водной системе, в результате баланса между гидрофильными свойствами биологически совместимого производного ацетилированного полисахарида и гидрофобными свойствами фотосенсибилизатора.
В соответствии со способом получения конъюгата, в котором соединение на основе фталоцианина связано с ацетилированным полисахаридом в соответствии с настоящим изобретением, нерастворимый в органическом растворителе полисахарид ацетилируют, так чтобы конъюгат можно было получить с использованием соединения на основе фталоцианина в качестве фотосенсибилизатора в органическом растворителе, подобном DMSO или формамиду. Ниже способ получения конъюгата для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению будет описан более подробно и постадийно.
Первая стадия: ацетилирование биологически совместимого полисахарида
Для получения конъюгата для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению сначала ацетилируют биологически совместимый полисахарид.
Полисахарид должен иметь превосходную биологическую совместимость и биодеградируемость in vivo, иметь превосходную стабильность in vivo и эффективно накапливаться в раковых тканях.
В качестве полисахарида, пригодного для использования в настоящем изобретении, можно использовать любой полисахарид или производное полисахарида, которое может иметь биологическую совместимость in vivo. Например, можно использовать пуллулан, гиалуроновую кислоту, декстран или хондроитин сульфат, но настоящее изобретение не ограничивается этими вариантами. В одном из примеров настоящего изобретения используют производное сульфата хондроитина.
Среди полисахаридов, пригодных для использования в настоящем изобретении, пуллулан представляет собой материал, полученный посредством выделения и очистки полисахарида, получаемого из Aureobasidium pullulans ((DE BARY) ARN.), и его главный компонент представляет собой нейтральный полисахарид. Пуллулан хорошо растворим в воде, но нерастворим в спиртах и маслах, и имеет более низкую вязкость, чем другие смолы, но является стабильным под действием кислоты, щелочи, тепла и тому подобного. В частности, пуллулан имеет высокую прочность адгезии, а также пленкообразующие свойства, и имеет два типа средних молекулярных масс, 200000 и 100000. В дополнение к этому, пуллулан имеет вязкость 1~2 сантипуаз при комнатной температуре.
<Структурная формула пуллулана>
В дополнение к этому, полисахарид, пригодный для использования в настоящем изобретении - гиалуроновая кислота - известна как важный мукополисахарид, вместе с хондроитином сульфатом и т.п. Гиалуроновая кислота представляет собой соединение, в котором N-ацетилглюкозамин и глюкуроновая кислота связаны в цепь чередующимся образом. Гиалуроновая кислота присутствует в гиалиновом теле глаза или пуповине, имеет большую вязкость и играет важную роль в предотвращении инвазии бактерий или проникновения ядов. Она сходна с пектиновым веществом растений и гидролизуется под действием гиалуронидазы. Гиалуроновая кислота была получена из гиалоидов бычьих глазных яблок в 1934 Мейером (Meyer), и ее название обозначает уроновую кислоту гиалоидов. Для придания амфифильности и увеличения растворимости в органической кислоте пиридин и уксусный ангидрид объединяют друг с другом в формамиде.
<Структурная формула гиалуроновой кислоты>
В дополнение к этому, полисахарид, пригодный для использования в настоящем изобретении - хондроитин сульфат - состоит из N-ацетилгалактозамина, известного в качестве главного компонента хрящей, уроновой кислоты (глюкуроновой кислоты или идуроновой кислоты) и серной кислоты, и также содержится в различных соединительных тканях, таких как кожа, пуповине, массе избыточных грануляций на ране и т.п.
Хондроитин сульфат классифицируют на типы A, B, C, D, E и т.п., в зависимости от вида уроновой кислоты и положения сульфатной группы.
<Структурная формула хондроитина сульфата>
Полимер по настоящему изобретению может быть куплен на рынке или выделен и очищен из природного материала с помощью способов, известных в данной области техники. Предпочтительно примеси, присутствующие в полимерном материале, удаляют, и полимер для увеличения чистоты тщательно очищают.
В дополнение к этому, ацетилирование может осуществляться с помощью растворения полисахарида, то есть полимера, в органическом растворителе, а затем добавления пиридина и уксусного ангидрида к получившемуся раствору. Ацетилирование может осуществляться с помощью растворения хондроитин сульфата в формамидном растворителе, а затем добавления к нему пиридина и уксусного ангидрида, с последующим перемешиванием в течение 10~14 часов при температуре более высокой, чем комнатная температура.
<Ацетилирование хондроитин сульфата>
Вторая стадия: растворение ацетилированного биологически совместимого полисахарида в органическом растворителе
На стадии, на которой ацетилированный полисахарид растворяют в органическом растворителе, предпочтительно используют соответствующее количество органического растворителя, с тем чтобы полисахарид мог в достаточной степени раствориться в органическом растворителе. Если используемое на этой стадии количество органического растворителя является слишком большим, следующий далее процесс его удаления с помощью диализа может доставлять некоторые проблемы, в зависимости от вида растворителя, такого как DMSO или формамид. При этом если используемое количество органического растворителя является слишком малым, полимеры могут застыть.
Примеры органических растворителей, пригодных для использования в настоящем изобретении, представляют собой, но не ограничиваются только этим, DMSO, формамид и DMF, и DMSO или формамид.
Третья стадия: связывание фотосенсибилизатора с ацетилированным биологически совместимым полимером
После того как ацетилированный биологически совместимый полисахарид (то есть полимер) растворяют в органическом растворителе в ходе второй стадии, к нему добавляют соединение на основе фталоцианина и катализатор, связывая таким образом соединение на основе фталоцианина с биологически совместимым полисахаридом.
В ходе связывания соединения на основе фталоцианина и биологически совместимого полисахарида образуется сложноэфирная или амидная связь, и в соответствии с этим связь соединения на основе фталоцианина и биологически совместимого полисахарида может расщепляться под действием фермента, когда конъюгат накапливается в раковой клетке. Сложноэфирная связь может быть сформирована посредством связывания группы -CH2OH биологически совместимого полимера и группы -COOH, вводимой в соединение на основе фталоцианина.
В качестве соединения на основе фталоцианина в настоящем изобретении можно использовать соединение, которое флуоресцирует в присутствии света из ближней инфракрасной области, является гидрофобным и содержит группу -COOH, как карбоксилированное соединение. Конкретный тип его не ограничивается, при условии что это соединение активно в ближней инфракрасной области и представляет собой соединение на основе фталоцианина, имеющего химически активную группу -COOH.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения соединение на основе фталоцианина может представлять собой фталоцианин, его производное, нафталоцианин или его производное, содержащие ион металла в центре структуры. В настоящем изобретении центральный ион металла может представлять собой Zn, Cu, Al, Ga, Co, Fe, Ni, P или Cr.
Более конкретно, соединение на основе фталоцианина по настоящему изобретению может представлять собой соединение химической формулы 1, представленное ниже.
[Химическая формула 1]
Здесь, R1, R2, R3 и R4 каждый могут независимо представлять собой атом водорода, атом галогена, C1-C10 алкил, -COOH, -SO3H или бензольное кольцо, незамещенное или замещенное -COOH или -SO3H, и M может представлять собой Zn, Cu, Al, Ga, Co, Fe, Ni, P или Cr.
В одном из примеров настоящего изобретения можно использовать соединение на основе фталоцианина, представленное химической формулой 1-1 ниже.
[Химическая формула 1-1]
Соединение на основе фталоцианина химической формулы 1-1, используемое в одном из примеров настоящего изобретения, представляет собой материал, пригодный для использования в качестве превосходного фотодинамического терапевтического агента, при этом он имеет более высокий молярный коэффициент поглощения на длинах волн ближней инфракрасной области 600~800 нм, чем существующий фотосенсибилизатор, и, таким образом, имеет большую глубину проникновения внутрь целевого рака, и, что крайне выгодно, благодаря высокому молярному коэффициенту поглощения воздействие достигается даже при введении малого количества этого соединения.
Катализатор в реакции связывания представляет собой материал, который служит для активации группы -COOH соединения на основе фталоцианина и используется посредством растворения в органическом растворителе, таком как DMSO, формамид или что-либо подобное, вместе с соединением на основе фталоцианина. Примеры катализаторов представляют собой 4-гидроксиметилбензойную кислоту (DMAP) или 1,3-дициклогексилкарбодиимид (DCC).
В дополнение к этому, поскольку реакция связывания соединения на основе фталоцианина с биологически совместимым полисахаридом с помощью сложноэфирной связи осуществляется посредством взаимодействия полисахарида, имеющего относительно большую молекулярную массу, с катализатором и соединением на основе фталоцианина, которые имеют относительно малую молекулярную массу, реакцию можно осуществлять, прибавляя смесь соединения на основе фталоцианина в органическом растворителе и катализатора в биологически совместимый полисахарид капля за каплей, так чтобы сложноэфирная связь между полимером и фотосенсибилизатором успевала в достаточной степени образоваться. В дополнение к этому, для хороших результатов синтеза реакцию можно осуществлять при тщательном перемешивании реагентов в окружающей среде без влажности и света в течение примерно 45~50 часов.
Как указано выше, конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению, в котором соединение на основе фталоцианина связано с биологически совместимым полисахаридом, может быть получен с помощью указанной выше схемы реакции.
После этого органический растворитель, используемый в процедуре связывания, может предпочтительно быть удален. Органический растворитель можно удалять посредством фильтрования или диализа, обычно используемого в данной области техники. Предпочтительно органический растворитель может быть удален посредством использования диализной мембраны.
Когда органический растворитель удаляют через диализную мембрану, необходимо следить, чтобы температура окружающей среды не была слишком высокой и чтобы температура во время процедуры диализа поддерживалась на комнатном уровне, поскольку диализная мембрана не выдерживает нагрева. Более конкретно, поскольку диализная мембрана может легко повреждаться под действием тепла, генерируемого когда DMSO или формамид и вода встречаются друг с другом, небольшое количество воды наливают в контейнер после реакции, чтобы тем самым охладить контейнер, перед тем как прореагировавшую жидкость помещают в диализную мембрану. После этого, прореагировавшую жидкость помещают в диализную мембрану, которую затем помещают на водяную баню, и здесь предпочтительно менять дистиллированную воду до тех пор, пока органический растворитель не будет полностью удален.
В дополнение к этому, реакционный раствор, подвергаемый процедуре диализа, может быть высушен замораживанием. Конъюгат, в котором соединение на основе фталоцианина связано с биологически совместимым полисахаридом, может быть легко выделен с помощью процедуры сушки замораживанием. Можно использовать любой способ сушки замораживанием, который известен в данной области техники, и предпочтительно сушку замораживанием можно осуществлять с использованием жидкого азота. Реакционный раствор полностью замораживают в жидком азоте в течение примерно 5-15 минут, а затем влага полностью выпаривается с использованием вакуумной сушки, чтобы тем самым собрать желаемый конъюгат.
После этого конъюгат, полученный с помощью сушки замораживанием, опять растворяют в органическом растворителе, таком как DMSO, формамид или что-либо подобное, а затем растворитель удаляют с помощью диализа и сушки замораживанием для удаления непрореагировавшего материала. Эти стадии выделения конъюгата повторяют, так что чистота собранного конъюгата повышается.
В одном из примеров настоящего изобретения конъюгат биологически совместимого полимера и фотосенсибилизатора для фотодинамической диагностики получают посредством ацетилирования хондроитин сульфата в качестве биологически совместимого полисахарида с помощью добавления к нему пиридина и уксусного ангидрида, а затем связывания соединения на основе фталоцианина в качестве фотосенсибилизатора с ацетилированным полисахаридом. Методика проиллюстрирована на следующей далее схеме.
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата ацетилированного полисахарида и соединения на основе фталоцианина для фотодинамической диагностики или терапии, а более конкретно этот способ может включать: ацетилирование биологически совместимого полисахарида; растворение биологически совместимого полисахарида в органическом растворителе и добавление соединения на основе фталоцианина, растворенного в органическом растворителе, и катализатора к биологически совместимому полисахариду для связывания полисахарида с соединением на основе фталоцианина.
Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению, который получают с помощью указанного выше способа, может находиться в форме наночастиц, то есть нано-геля или нано-микросфер, которые являются стабильными в водной системе, и могут иметь средний размер 100~250 нм.
В соответствии с одним из примеров настоящего изобретения в ходе синтеза
конъюгаты получают с использованием различных концентраций гидрофобного соединения на основе фталоцианина, а размеры и формы соответствующих конъюгатов затем измеряют с использованием устройства для динамического рассеяния света и электронного микроскопа. Результаты показывают, что чем большее количество соединения на основе фталоцианина используют, тем больше увеличивается гидрофобность и, таким образом, повышается прочность когезии, что приводит к уменьшению размеров конъюгата (нано-микросфер).
В то же время, фотосенсибилизатор для фотодинамической диагностики или терапии, используемый в данной области техники, имеет низкое отношение накопления и таргетное распределение по отношению к раковым клеткам и не характеризуется подавлением флуоресценции. Таким образом, он является цитотоксичным для обычных клеток, то есть нормальных клеток in vivo, при облучении их светом, что приводит к уменьшению эффективности терапии и вызывает ряд побочных эффектов.
Напротив, конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению не является цитотоксичным во время циркуляции в крови или при попадании в нормальные клетки, даже когда их облучают излучением из ближней инфракрасной области, поскольку конъюгат селективно нацеливается на раковые ткани или раковые клетки и накапливается и разлагается только в раковых тканях или раковых клетках и, таким образом, генерирует синглетный кислород или свободные радикалы, когда его облучают светом из ближней инфракрасной области для цитотоксичного действия, что приводит к индуцированию апоптоза в раковых тканях. Таким образом, эффективность фотодинамической терапии может быть доведена до максимума.
Кроме того, конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению может дополнительно содержать материал, нацеливающийся на раковые клетки, чтобы селективно нацеливать конъюгат на раковые ткани или раковые клетки. При фотодинамической терапии, когда делают внутривенную инъекцию одного лишь гидрофобного фотосенсибилизатора, он связывается с белком в крови и перемещается в клетку через рецептор, расположенный на поверхности клетки. Этот вариант не является предпочтительным, поскольку специфичность фотосенсибилизатора при выборе клеток определяется только свойствами гидрофобности фотосенсибилизатора, а время его пребывания в клетке или ткани сильно зависит от обстоятельств. В дополнение ко всему этому, это обстоятельство может рассматриваться как фактор, понижающий эффективность фотодинамической терапии и увеличивающий вероятность рецидива после терапии.
Для решения этих проблем, по сути, с помощью метода проб и ошибок проверяют, воздействует ли тот или иной из различных видов фотосенсибилизаторов селективно на конкретные области или нет. Однако когда материал, нацеливаемый на раковые клетки, дополнительно связан с фотосенсибилизатром для эффективного и тканеспецифичного транспорта фотосенсибилизатора, селективность по отношению к раковым клеткам можно улучшить дополнительно. Материал для нацеливания на раковые клетки может эффективно нацеливаться и проникать в раковые клетки, отличающиеся от нормальных клеток, поскольку на поверхности раковой клетки представлено большое количество специфичных рецепторов.
Материал для нацеливания на раковые клетки по настоящему изобретению может связываться со специфичными рецепторами раковой клетки, и примеры материалов для нацеливания на раковые клетки могут представлять собой фолиевую кислоту или моноклональные антитела против CD133, CD44, CD34 или белка Вс1-2.
В дополнение к этому, конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению имеет потенциал образования синглетного кислорода или свободных радикалов, которые могут обеспечивать цитотоксичность во время облучения конъюгата лазером. В соответствии с одним из примеров настоящего изобретения показано, что конъюгат, полученный в настоящем изобретении, то есть нано-микросферы, имеют сходный уровень потенциала образования синглетного кислорода, если сравнивать с соединением на основе фталоцианина, используемым в качестве группы положительного контроля.
В соответствии с другим примером настоящего изобретения осуществляют эксперимент для подтверждения того, является ли конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению, который не накапливается в раковых клетках, цитотоксичным для клетки или нет. Было показано, что конъюгат, находящийся, как предполагают, в форме нано-микросфер для индуцирования подавления флуоресценции, в водной системе в условиях, сходных с условиями в организме, не был химически активен, даже когда его облучали светом с длиной волны, соответствующей ближней инфракрасной области. В то же время, было показано, что когда конъюгат накапливался в раковых клетках, конъюгат оказывался цитотоксичным и, таким образом, приводил к повышенному апоптозу раковых клеток.
По этой причине авторы настоящего изобретения из приведенных выше результатов сделали вывод, что когда конъюгат по настоящему изобретению не накапливается в раковых клетках, он не будет иметь химической активности, даже при облучении его светом и, таким образом, не будет цитотоксичным и, таким образом, будет стабильным in vivo. И только когда конъюгат накапливается в раковых клетках, он является цитотоксичным и, таким образом, оказывает терапевтическое воздействие.
В дополнение к этому, когда конъюгат по настоящему изобретению селективно нацеливается на раковые клетки и проникает в них, сложноэфирная связь расщепляется (разлагается) под действием ферментов раковой клетки, то есть такого фермента, как эстераза, который представляет собой фермент in vivo, так что подавление флуоресценции прекращается, в результате чего имеет место флуоресценция.
По этой причине, в соответствии с настоящим изобретением, когда конъюгат по настоящему изобретению селективно накапливается в раковой ткани или раковых клетках, подавление флуоресценции под действием фермента в раковой клетке может прекращаться, и фотосенсибилизатор на основе фталоцианина может флуоресцировать под действием облучения лазером только лишь в раковой клетке, так что можно осуществлять диагностику рака по присутствию или отсутствию такой флуоресценции.
Кроме того, настоящее изобретение относится к композиции для терапии рака, содержащей конъюгат в качестве эффективного компонента.
Термин 'терапия' в настоящем документе, если не утверждается иного, означает обращение хода, ослабление, подавление развития или предотвращение заболевания, расстройства, или одного или нескольких симптомов заболевания или расстройства, к которому применяется этот термин.
Композиция для терапии рака в соответствии с настоящим изобретением может содержать фармацевтически эффективное количество конъюгата для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению самого по себе, или может дополнительно содержать по меньшей мере одну фармацевтически приемлемую добавку, такую как носитель, связующее вещество, разбавитель или что-либо подобное. Термин фармацевтически эффективное количество означает количество, достаточное для предотвращения, облегчения и лечения симптомов рака.
Фармацевтически эффективное количество конъюгата для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению составляет 0,5~100 мг/день/кг массы тела, а предпочтительно - 0,5~5 мг/день/кг массы тела. Однако фармацевтически эффективное количество может соответствующим образом изменяться в зависимости от тяжести симптомов, возраста, массы, состояния здоровья и пола пациента, способа введения, продолжительности лечения, и тому подобного.
В настоящем изобретении термин фармацевтически приемлемая добавка означает, что такая добавка является физиологически приемлемой и не вызывает желудочно-кишечных расстройств, аллергических реакций, таких как головокружение, или сходных реакций при введении человеку. Примеры носителя, связующего вещества и разбавителя могут представлять собой лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, смолу акации, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло. В дополнение к этому они могут дополнительно содержать наполнитель, антикоагулянт, смазывающее вещество, смачивающий агент, отдушку, эмульгатор и консервант.
В дополнение к этому композиции по настоящему изобретению можно получать с использованием способов, известных в данной области техники, так что активный компонент получают в форме с быстрым высвобождением, распределенным по времени высвобождением, или замедленным высвобождением после введения композиции млекопитающему. Дозированная форма может представлять собой порошок, гранулу, таблетку, эмульсию, сироп, аэрозоль, мягкую или твердую желатиновую капсулу, стерильный раствор для инъекций или стерильный порошок.
Композиция для терапии рака в соответствии с настоящим изобретением может вводиться с помощью нескольких способов, включая пероральный, трансдермальный, подкожный, внутривенный и внутримышечный способы, а дозировка активного компонента может выбираться соответствующим образом в зависимости от ряда факторов, таких как способ введения, возраст, пол, масса и тяжесть симптомов у пациента.
В дополнение к этому в случае, когда конъюгат по настоящему изобретению или композиция, содержащая этот конъюгат, используются для осуществления терапии или диагностики заболеваний, источник света, пригодный для использования в настоящем изобретении, может представлять собой (но не ограничивается только этим) по меньшей мере один источник, выбранный из группы, состоящей из источников света для облучения светом in vitro, включая излучатель с ультразвуковым облучением, светодиод, лазерный диод, лазер на красителях, галогеновую лампу, лампу-вспышку, источник флуоресцентного света с механическим фильтром, лампу накаливания с механическим фильтром, источник света с нитью накаливания, и тому подобные; и источников света для облучения светом in vivo, включая лазерное волокно для фотодинамической терапии и тому подобные. В настоящем изобретении фотосенсибилизатор может быть активен в отношении излучения в ближней инфракрасной области в диапазоне от 600 нм до 700 нм.
В дополнение к этому, поскольку конъюгат по настоящему изобретению содержит гидрофильный полисахарид и гидрофобное соединение на основе фталоцианина, конъюгат, как предполагается, находится в форме нано-микросфер. Нано-микросфера может дополнительно содержать медицинский или биологический агент, имеющий терапевтическую активность, а предпочтительно - содержать противораковый агент. В настоящем изобретении медицинский или биологический агент может находиться внутри нано-микросферы.
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылками на конкретные примеры. Эти примеры предназначены только для пояснения настоящего изобретения, и специалисту в данной области будет очевидно, что рамки настоящего изобретения не ограничиваются данными примерами.
<Пример 1> Получение нано-микросфер для фотодинамической диагностики или терапии
<1-1> Получение соединения на основе фталоцианина
<1-1-1> Синтез предшественника R1
4-метокси-3,6-трет-бутилфенол, 3,66 г (15,6 ммоль), и 4-нитрофталонитрил, 2,70 г (15,6 ммоль), добавляют к 100 мл DMSO и продувают N2, а затем температуру повышают до температуры кипения с обратным холодильником. 2,86 г K2CO3 вводят в эту смесь в течение 4 часов с начала нагрева с обратным холодильником и затем нагрев продолжают в течение 24 часов.
После нагрева с обратным холодильником в течение 24 часов к смеси добавляют 100 мл воды с последующим перемешиванием, а затем добавляют K2CO3 и DMSO удаляют с осаждением в результате белого немного вязкого материала. К смеси добавляют такое количество простого эфира, чтобы его было достаточно для экстракции продукта, который затем сушат с использованием испарителя. При этом получают Продукт 1-1-1 бледно-желтого цвета.
<1-1-2> Синтез COOH-предшественника R2
Пентил-4-гидроксибензоат, 2,405 г (12,37 ммоль), и 4-нитрофталонитрил, 2 г (11,56 ммоль), добавляют к 82,5 мл безводного DMSO и продувают N2. Затем температуру повышают до температуры кипения с обратным холодильником. К смеси каждый час от начала нагрева с обратным холодильником и до 4 часов добавляют 1,054 г K2CO3. Затем нагрев продолжают в течение 29 часов, а после этого методом ТСХ (тонкослойной хроматографии) убеждаются, что 4-нитрофталонитрил в смеси отсутствует.
После нагрева с обратным холодильником в течение 29 часов с помощью испарителя осуществляют сушку с получением темно-коричневого продукта. К продукту добавляют такие количества ЕА (этилацетата) и воды, которых достаточно для растворения всего продукта с последующей его экстракцией. Отделенный водный слой несколько раз экстрагируют с помощью ЕА, и полученный таким образом раствор сушат с использованием испарителя, пока раствор не достигнет объема всего лишь примерно 150 мл. Затем его промывают 200 мл насыщенного водного раствора NaHCO3. После тщательного перемешивания в разделительной воронке получают EA-слой с помощью прохождения через MgSO4, а затем его опять сушат с помощью испарителя с получением темно-коричневого продукта в жидкой фазе, а также примерно 1 г Продукта 1-1-2 в жидкой фазе, очищенной с использованием колонки.
<1-1-3> Синтез производного фталоцианина
Полученный Продукт 1-1-2, бензоатный предшественник, 0,334 г, и Продукт 1-1-1, алкиловый предшественник, 0,837 г, добавляют к 50 мл безводного пентанола, а затем к полученной смеси добавляют ZnCl2, 0,409 г. Затем в смесь вводят в достаточном количестве газообразный Ar. Температуру реакционной жидкости повышают до 150°C с последующим добавлением по каплям 2,25 мл DBU, а затем осуществляют нагрев с обратным холодильником в течение 24 часов. Через 24 часа осуществляют выпаривание с получением темного сине-зеленого продукта. Полученный продукт очищают посредством колоночной хроматографии с помощью MC и MeOH с получением сине-зеленого твердого материала 1-1-3.
Полученный таким образом материал 1-1-3 растворяют в 40 мл THF, а затем смешивают с раствором, в котором LiOH·H2O (1 г, 23,34 ммоль) растворен в метаноле и H2O, 7:3. Температуру повышают до 75°C с последующим нагревом с обратным холодильником в течение 17 часов. После нагрева с обратным холодильником в течение 17 часов раствор выпаривают. Остаток растворяют примерно в 100 мл MC и титруют до pH 2, добавляя по каплям водный раствор 0,1M HCl. Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. После этого осуществляют экстрагирование (прохождение через MgSO4) достаточным количеством воды с последующей колоночной хроматографией с использованием CHCl3 и MeOH. Молекулярную массу готового продукта проверяют с помощью Maldi-TOF. Результаты показаны на Фиг.3.
С помощью указанного выше примера получают соединение, имеющее химическую формулу 1-1, на основе фталоцианина (показано ниже).
[Химическая формула 1-1]
<1-2> Ацетилирование хондроитин сульфата
Хондроитин сульфат (0,5 г) растворяют в 10 мл формамидного растворителя. После этого к раствору добавляют 55 мл пиридина и 55 мл безводного ацетата, а затем реакции дают возможность протекать при тщательном перемешивании в течение примерно 12 часов при 55°C, с учетом того, что эта температура является несколько высоковатой. Полученный таким образом в результате реакции образец выделяют с помощью диализа через диализную мембрану, а затем сушат вымораживанием.
<1-3> Связывание ацетилированного хондроитин сульфата и фотосенсибилизатора
50 мг ацетилированного хондроитин сульфата, который выделяют с помощью сушки вымораживанием в <1-2>, растворяют в 10 мл обезвоженного органического растворителя, DMSO или формамида, соответственно. Тем временем, 1 мг, 2 мг и 5 мг соединения на основе фталоцианина, используемого в качестве фотосенсибилизатора и полученного в <1-1>, в достаточной степени растворяют в 3 мл DMSO или формамида, вместе с DMAP и DCC, соответственно, для активации группы -COOH. 3 мл каждого из растворов фотосенсибилизатора, имеющего активированные группы -COOH, помещают в 10 мл органического растворителя, в котором растворяют ацетилированный хондроитин сульфат, а затем дают возможность реакции сложноэфирного связывания протекать в достаточной степени в течение примерно 48 часов при тщательном перемешивании. Раствор после завершения реакции выделяют с помощью такой же процедуры, как в Примере <1-2>, а затем выдерживают в морозилке, чтобы получить конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии по настоящему изобретению, то есть нано-микросферы. Соответствующие образцы называют Ac-Cs-Zn-Pc-COOH1, Ac-Cs-Zn-Pc-COOH2, Ac-Cs-Zn-Pc-COOH3, соответственно.
Фиг.4 представляет собой схему, показывающую структурную формулу конъюгата, Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, в котором хондроитин сульфат и соединение на основе фталоцианина химической формулы 1-1 связаны друг с другом с помощью сложноэфирной связи. Результаты анализа FT-IR Ac-Cs-Zn-Pc-COOH, как показано на Фиг.6, а также данные для Ac-Cs-Zn-Pc-COOH демонстрируют пик при 1730 см-1, соответствующий сложноэфирной связи, что представляет собой характеристику связывания между биологически совместимым полимером и соединением на основе фталоцианина.
<Пример 2> Анализ характеристик нано-микросфер
<2-1> Измерение размеров и формы нано-микросфер
Три образца биологически совместимого материала, полученного в Примере 1, в котором соединение на основе фталоцианина связано с ацетилированным хондроитин сульфатом, растворяют с концентрацией 1 мг/мл, а затем их размеры измеряют с использованием динамического рассеяния света (DLS), а их форму подтверждают с использованием автоэмиссионного сканирующего электронного микроскопа (FE-SEM). Далее для точного измерения размеров образцы разбавляли 0,1М NaCl. Результаты показаны на фиг.7-11. Было показано, что размеры и формы нано-микросфер, сформированных посредством связывания соединения на основе фталоцианина с хондроитин сульфатом в качестве биологически совместимого полисахарида с помощью сложноэфирной связи, распределены в пределах 100~800 нм и сходятся к максимуму примерно при 230 нм, как показано на фиг.9-11. В дополнение к этому, в 3A, большие частицы представляют собой случай, соответствующий малому количеству фотосенсибилизатора (Ac-Cs-Zn-PC-COOH1), а малые частицы представляют собой случай, соответствующий большому количеству фотосенсибилизатора (Ac-Cs-Zn-PC-СООН2). Соответственно, видно, что чем большее количество фотосенсибилизатора связывается с полисахаридом, тем сильнее повышается гидрофобность конъюгата и, таким образом, увеличивается прочность когезии, приводя к уменьшению размеров нано-микросфер.
<2-2> Подтверждение присутствия или отсутствия эффекта подавления флуоресценции
Несколько образцов полученного в Примере 1 Ac-Cs-Zn-Pc-COOH растворяют с различными концентрациями в DMSO и деионизованной воде, соответственно. Затем флуоресцентные явления в них регистрируют с использованием фотолабораторной станции KODAK и флуоресцентного спектрофотометра (фиг.12). Во время измерения в диапазоне длин волн 650~750 нм интенсивности флуоресценции и получаемые изображения, как было показано, различаются в зависимости от концентрации DMSO, то есть органического растворителя (А), но само подавление флуоресценции имело место для случая деионизованной воды и, таким образом, демонстрируется значительно более низкая флуоресценция по сравнению с DMSO. Считается, что причина этого явления заключается в том, что Ac-Cs-Zn-COOH не образует микросфер в органическом растворителе и, таким образом, не индуцирует подавления флуоресценции, но при этом образует нано-микросферы в деионизованной воде и, таким образом, индуцирует подавление флуоресценции в этой среде. Авторы настоящего изобретения из этих результатов сделали вывод, что при фотодинамической терапии нано-микросферы, которые не накапливаются в раковых клетках, не являются цитотоксичными и, таким образом, могут стабильно использоваться in vivo.
<2-3> Оценка потенциала образования синглетного кислорода для нано-микросфер
Для проверки пригодности конъюгата из Примера 1 (Ac-Cs-Zn-Pc-COOH) для использования в качестве агента для фотодинамической диагностики или терапии измеряют его потенциал образования синглетного кислорода в зависимости от облучениг лазером, проводя сравнение с немодифицированным фотосенсибилизатором на основе фталоцианина, полученным в Примере 1-1. Сначала конъюгат Ac-Cs-Zn-Pc-COOH и немодифицированный фотосенсибилизатор на основе фталоцианина растворяют в 2 мл DMF и PBS, органических растворителях, (фотосенсибилизатор на основе фталоцианина: 1,5 мкг/мл), соответственно, а затем добавляют к нему малое количество 9,10-диметилантрацена, который способен детектировать синглетный кислород, с доведением концентрации до 20 мкг/мл. Облучение лазером осуществляют во временном интервале 40 секунд, используя при этом лазер с длиной волны 670 нм, на которой фотосенсибилизатор на основе фталоцианина, как известно, генерирует синглетный кислород. Затем осуществляют измерение флуоресценции при возбуждении 360 нм и эмиссии 380~550 нм с использованием спектрофлуорофотометра. Указанные выше экспериментальные результаты подтверждают, что конъюгат по настоящему изобретению Ac-Cs-Zn-Pc-COOH способен генерировать синглетный кислород почти на таком же уровне, как немодифицированный Zn-Pc-COOH, как показано на фиг.13. Таким образом, видно, что нано-микросферы по настоящему изобретению способны уничтожать раковые клетки посредством генерирования синглетного кислорода в целевых (раковых) клетках.
<2-4> Эксперимент по регистрации прекращения подавления флуоресценции под действием фермента раковых клеток
Клетки HeLa распределяются в количестве 1×104, а затем инкубируются на 96-луночном планшете. Клетки обрабатывают с помощью 10 мкг нано-микросфер по настоящему изобретению, а затем в них наблюдают флуоресцентные явления с использованием устройства фотолабораторной станции KODAK. При этом культурная среда без клеток HeLa, обработанных нано-микросферами по настоящему изобретению, используется в качестве контрольной группы. В результате наблюдают, что подавление флуоресценции не прекращается для лунок, содержащих обычную культурную среду без клеток HeLa, но подавление флуоресценции исчезает с появлением через некоторое время флуоресценции для лунок, содержащих культурную среду, в которой распределены клетки HeLa, как показано на фиг.14. Таким образом, авторы настоящего изобретения из приведенных выше результатов сделали вывод, что когда нано-микросферы, полученные в соответствии с настоящим изобретением, нацеливаются на раковые клетки и накапливаются в них, подавление флуоресценции под действием фермента раковых клеток прекращается, и затем, когда их облучают излучением из ближней инфракрасной области, фотосенсибилизатор нано-микросфер уничтожает раковую клетку, вследствие чего нано-микросферы по настоящему изобретению могут лечить рак.
<2-5> Эксперимент по оценке цитотоксичности
Исследование цитотоксичности осуществляют для полученных в Примере 1 нано-микросфер по настоящему изобретению. Клетки HeLa в качестве раковых клеток инкубируют в культурной сред RPMI 1640, содержащей 10% FBS и 1% пенициллина, в присутствии 5% CO2 при температуре 37°C. Затем для исследования цитотоксичности инкубируемые клетки HeLa распределяют по 96-луночному планшету с количеством клеток 1×104, а затем их инкубируют в течение 24 часов. На следующий день нано-микросферы (нано-микросферы с добавлением 1,25 мг фотосенсибилизатора) по настоящему изобретению разбавляют до соответствующих концентраций, а затем разбавленные концентрации помещают в каждую лунку в количестве 100 мкл.
После этого клетки дополнительно инкубируют в течение 12 часов, чтобы нано-микросферы имели возможность подействовать на клетки. Затем клетки облучают светом с длиной волны, соответствующей ближней инфракрасной области (670 нм), при интенсивности 1,2 Дж/см2. Здесь в качестве группы контроля используют группу клеток, имеющую такую же концентрацию и время обработки, но не подвергаемую облучению светом по сравнению с соответствующими образцами. После этого клетки инкубируют в инкубаторе в течение одного дня.
Наконец, 20 мкл реагента МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолия бромида) добавляют к клеткам после завершения инкубирования, с последующим инкубированием в течение 3~4 часов. Через 4 часа культурную среду, реагент МТТ и тому подобное, удаляют, а затем к лункам добавляют 150 мл DMSO для растворения нерастворимого формазана, имеющего сине-фиолетовый цвет и образующегося на клетках. После этого анализатор ELIZA используют для измерения коэффициента поглощения на 595 нм и, таким образом, осуществляют сравнение количества образующегося формазана, чтобы подтвердить тем самым выживаемость клеток (%) и цитотоксичность конъюгата (фиг.15 и 16).
В результате можно увидеть, что, как показано на фиг.15 и 16, когда немодифицированный Zn-Pc-COOH и нано-микросферы, полученные в настоящем изобретении, добавляют к соответствующим клеткам, которые затем инкубируют, апоптоза не происходит, если их не облучают излучением из ближней инфракрасной области, и апоптоз происходит пропорционально времени облучения в случае, когда их облучают излучением из ближней инфракрасной области. Таким образом, выживаемость клеток (%) уменьшается. Соответственно, опять было подтверждено, что, как показывают приведенные выше результаты, фотосенсибилизатор генерирует синглетный кислород только тогда, когда его облучают светом, и, таким образом, он уничтожает клетки, а когда к клеткам добавляют нано-микросферы, подавление флуоресценции, осуществляемое с помощью полимера, прекращается под действием фермента, с генерированием синглетного кислорода и уничтожением, таким образом, клеток.
Выше настоящее изобретение описывалось на примере предпочтительных вариантов осуществления.
Специалистам в данной области будет понятно, что могут быть осуществлены различные модификации, изменения и замены настоящего изобретения, не отклоняющиеся от основных признаков настоящего изобретения. Соответственно, варианты осуществления, описанные в настоящем изобретении, и прилагаемые чертежи используются не для ограничения, но лишь для описания духа настоящего изобретения. Рамки настоящего изобретения не ограничиваются только лишь конкретными вариантами осуществления и прилагаемыми чертежами. Границы защиты настоящего изобретения должны анализироваться с использованием прилагаемой формулы изобретения, и следует учитывать, что формула изобретения включает также и все эквиваленты по духу настоящего изобретения.
Промышленное применение
Конъюгат по настоящему изобретению может легко накапливаться в раковых клетках in vivo, и те материалы по настоящему изобретению, которые не накапливаются в них, не будут демонстрировать цитотоксичности из-за подавления флуоресценции, даже если их облучают светом с длиной волны, соответствующей ближней инфракрасной области. Кроме того, когда конъюгат по настоящему изобретению накапливается в раковых клетках, связь между биологически совместимым полисахаридом и фотосенсибилизатором разрывается под действием ферментов раковых клетках, и тогда, если их облучают светом с длиной волны, соответствующей ближней инфракрасной области, конъюгат оказывается цитотоксичным и, таким образом, во время облучения излучением в ближней инфракрасной области доводится до максимума противораковое воздействие, а также имеет место флуоресценция и, как следствие, конъюгат может быть использован для получения соответствующих изображений.
Claims (7)
1. Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии рака, в котором ацетилированный биологически совместимый полисахарид связан с соединением на основе фталоцианина формулы 1-1:
[Химическая формула 1-1]
где биологически совместимый полисахарид представляет собой хондроитин сульфат и
где указанный конъюгат представляет собой наночастицы, имеющие средний размер 100-250 нм, и получен посредством сложноэфирной связи между биологически совместимым полисахаридом и соединением на основе фталоцианина.
[Химическая формула 1-1]
где биологически совместимый полисахарид представляет собой хондроитин сульфат и
где указанный конъюгат представляет собой наночастицы, имеющие средний размер 100-250 нм, и получен посредством сложноэфирной связи между биологически совместимым полисахаридом и соединением на основе фталоцианина.
2. Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии рака по п.1, в котором соединение на основе фталоцианина флуоресцирует под действием света из ближней инфракрасной области.
3. Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии рака по п.1, в котором к биологически совместимому полисахариду дополнительно присоединен материал, нацеленный на раковые клетки.
4. Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии рака по п.3, в котором материал, нацеленный на раковые клетки, представляет собой фолиевую кислоту или моноклональное антитело против CD133, CD44, CD34 или белка Bcl-2.
5. Способ получения конъюгата для фотодинамической диагностики или терапии рака по п.1, включающий стадии:
ацетилирования биологически совместимого полисахарида, растворения ацетилированного биологически совместимого полисахарида в органическом растворителе и добавления соединения на основе фталоцианина формулы 1-1 и катализатора к биологически совместимому полисахариду для связывания фотосенсибилизатора с биологически совместимым полисахаридом:
[Химическая формула 1-1]
где биологически совместимый полисахарид представляет собой хондроитин сульфат и
где указанный конъюгат представляет собой наночастицы, имеющие средний размер 100-250 нм, и получен посредством сложноэфирной связи между биологически совместимым полисахаридом и соединением на основе фталоцианина.
ацетилирования биологически совместимого полисахарида, растворения ацетилированного биологически совместимого полисахарида в органическом растворителе и добавления соединения на основе фталоцианина формулы 1-1 и катализатора к биологически совместимому полисахариду для связывания фотосенсибилизатора с биологически совместимым полисахаридом:
[Химическая формула 1-1]
где биологически совместимый полисахарид представляет собой хондроитин сульфат и
где указанный конъюгат представляет собой наночастицы, имеющие средний размер 100-250 нм, и получен посредством сложноэфирной связи между биологически совместимым полисахаридом и соединением на основе фталоцианина.
6. Способ получения конъюгата для фотодинамической диагностики или терапии рака по п.5, в котором катализатор представляет собой 4-гидроксиметилбензойную кислоту (DMAP) или 1,3-дициклогексилкарбодиимид (DCC).
7. Композиция, предназначенная для диагностики или терапии рака, содержащая конъюгат по любому из пп.1-4.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KRPCT/KR2010/009173 | 2010-12-21 | ||
PCT/KR2010/009173 WO2012086857A1 (ko) | 2010-12-21 | 2010-12-21 | 광역학 진단 또는 치료를 위한 결합체 및 이의 제조방법 |
PCT/KR2011/009967 WO2012087040A2 (ko) | 2010-12-21 | 2011-12-21 | 광역학 진단 또는 치료를 위한 결합체 및 이의 제조방법 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013119911A RU2013119911A (ru) | 2014-12-10 |
RU2537228C1 true RU2537228C1 (ru) | 2014-12-27 |
Family
ID=46314113
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013119911/15A RU2537228C1 (ru) | 2010-12-21 | 2011-12-21 | Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии, а также способ его получения |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8946394B2 (ru) |
EP (1) | EP2656847A4 (ru) |
JP (1) | JP5721853B2 (ru) |
KR (1) | KR101847187B1 (ru) |
CN (1) | CN103260626B (ru) |
RU (1) | RU2537228C1 (ru) |
WO (2) | WO2012086857A1 (ru) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101847748B1 (ko) | 2013-08-22 | 2018-04-10 | 소니 주식회사 | 수용성 형광 또는 유색 염료 및 그의 사용 방법 |
CN104069492B (zh) * | 2014-01-24 | 2019-05-28 | 中国科学院福建物质结构研究所 | 靶向表达尿激酶受体的肿瘤的光敏剂及其制备方法和用途 |
CN105412924B (zh) * | 2014-08-22 | 2018-10-16 | 苏州大学 | 具有血液稳定性及靶向性的含糖光动力学疗法纳米粒子及其制备方法 |
WO2016047947A2 (ko) * | 2014-09-25 | 2016-03-31 | 한양대학교 산학협력단 | 광역학 치료용 테트라피라지노폴피라진 유도체 및 이의 제조방법 |
AU2017240154B2 (en) | 2016-04-01 | 2021-08-12 | Sony Group Corporation | Ultra bright dimeric or polymeric dyes |
US11685835B2 (en) | 2016-05-11 | 2023-06-27 | Sony Corporation | Ultra bright dimeric or polymeric dyes |
US12018159B2 (en) | 2016-07-29 | 2024-06-25 | Sony Group Corporation | Ultra bright dimeric or polymeric dyes and methods for preparation of the same |
WO2018186725A1 (ko) * | 2017-04-07 | 2018-10-11 | 서울대학교 산학협력단 | 암 치료용 약학 조성물 |
US20200222554A1 (en) * | 2017-10-05 | 2020-07-16 | Sony Corporation | Programmable dendritic drugs |
KR20200083605A (ko) | 2017-11-16 | 2020-07-08 | 소니 주식회사 | 프로그램가능한 중합체성 약물 |
CN111565756A (zh) | 2018-01-12 | 2020-08-21 | 索尼公司 | 包含生物活性化合物的具有刚性间隔基团的聚合物 |
CN112041680A (zh) | 2018-03-19 | 2020-12-04 | 索尼公司 | 二价金属用于增强荧光信号的应用 |
US11661433B2 (en) | 2018-05-09 | 2023-05-30 | Virginia Commonwealth University | Near-IR activatable fluorescent small molecules with dual modes of cytotoxicity |
US12006438B2 (en) | 2018-06-27 | 2024-06-11 | Sony Group Corporation | Polymeric dyes with linker groups comprising deoxyribose |
WO2020189641A1 (ja) * | 2019-03-18 | 2020-09-24 | 株式会社日本触媒 | フタロシアニン化合物ならびにこれを用いるリポソーム製剤および癌/腫瘍治療剤 |
EP3972646A4 (en) * | 2019-05-20 | 2023-06-14 | Ohio State Innovation Foundation | APOHEMOGLOBIN-HAPTOGLOBIN COMPLEXES AND METHODS OF USE THEREOF |
JP7239904B2 (ja) | 2019-09-26 | 2023-03-15 | ソニーグループ株式会社 | リンカー基を有するポリマータンデム色素 |
CN111529715B (zh) * | 2020-04-22 | 2021-10-01 | 山东大学 | 一种右旋糖酐-二十二碳六烯酸偶联聚合物及其合成方法和应用 |
CN113484386B (zh) * | 2021-05-21 | 2024-02-13 | 郑州轻工业大学 | 一种金属聚酞菁纳米材料的制备方法及其应用,适配体传感器及其制备方法 |
CN114409663B (zh) * | 2022-01-28 | 2023-05-30 | 福州大学 | 靶向Mcl-1酶的锌酞菁3-氯-6甲基苯并[b]噻吩-2-羧酸轭合物及其制备方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7153841B2 (en) * | 2001-03-21 | 2006-12-26 | L. Molteni & C. Dei Fratelli Alitti Societa Di Esercizio S.P.A. | Metal substituted non-centrosimmetrical phthalocyanine analogues, their preparation and use in photodynamic therapy and in vivo diagnostic |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0018527D0 (en) * | 2000-07-27 | 2000-09-13 | Photocure Asa | Composition |
ITPD20020271A1 (it) * | 2002-10-18 | 2004-04-19 | Fidia Farmaceutici | Composti chimico-farmaceutici costituiti da derivati dei taxani legati covalentemente all'acido ialuronico o ai suoi derivati. |
JP2004262777A (ja) * | 2003-02-27 | 2004-09-24 | Shiseido Co Ltd | アセチル化ヒアルロン酸含有眼用医薬組成物 |
CA2566180A1 (en) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | Robert F. Hofmann | Use of targeted oxidative therapeutic formulation in treatment of cancer |
CN101234203B (zh) * | 2007-01-30 | 2012-07-18 | 中国科学院福建物质结构研究所 | 用于抗肿瘤治疗的医用光敏剂及其制备方法 |
IN2012DN02780A (ru) | 2009-10-06 | 2015-09-18 | Immunogen Inc |
-
2010
- 2010-12-21 WO PCT/KR2010/009173 patent/WO2012086857A1/ko active Application Filing
-
2011
- 2011-12-21 US US13/877,162 patent/US8946394B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-21 CN CN201180051894.1A patent/CN103260626B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-21 JP JP2013543111A patent/JP5721853B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-21 EP EP11851627.7A patent/EP2656847A4/en not_active Withdrawn
- 2011-12-21 KR KR1020137021979A patent/KR101847187B1/ko active IP Right Grant
- 2011-12-21 RU RU2013119911/15A patent/RU2537228C1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-12-21 WO PCT/KR2011/009967 patent/WO2012087040A2/ko active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7153841B2 (en) * | 2001-03-21 | 2006-12-26 | L. Molteni & C. Dei Fratelli Alitti Societa Di Esercizio S.P.A. | Metal substituted non-centrosimmetrical phthalocyanine analogues, their preparation and use in photodynamic therapy and in vivo diagnostic |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
FANGYUAN LI "Acetylated hyaluronic acid/photosensitizer conjugate for the preparation of nanogels with controllable phototoxicity: synthesis, characterization, autophotoquenching properties, and in vitro phototoxicity against HeLa cells" Bioconjugate Chem. 2010, 21, 1312"1320, Published on Web 06/29/2010. * |
ДАЙСОН Г., МЕЙ П. "Химия синтетических лекарственных веществ", пер. с англ. М.:""Мир", 1964, стр.12-19 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103260626B (zh) | 2015-04-01 |
JP5721853B2 (ja) | 2015-05-20 |
RU2013119911A (ru) | 2014-12-10 |
EP2656847A2 (en) | 2013-10-30 |
KR20140027096A (ko) | 2014-03-06 |
WO2012087040A2 (ko) | 2012-06-28 |
JP2014500273A (ja) | 2014-01-09 |
US8946394B2 (en) | 2015-02-03 |
WO2012087040A3 (ko) | 2012-10-04 |
EP2656847A4 (en) | 2016-06-29 |
US20130281679A1 (en) | 2013-10-24 |
CN103260626A (zh) | 2013-08-21 |
WO2012086857A1 (ko) | 2012-06-28 |
KR101847187B1 (ko) | 2018-04-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2537228C1 (ru) | Конъюгат для фотодинамической диагностики или терапии, а также способ его получения | |
Cheng et al. | Renal‐clearable PEGylated porphyrin nanoparticles for image‐guided photodynamic cancer therapy | |
Zhang et al. | Switchable PDT for reducing skin photosensitization by a NIR dye inducing self-assembled and photo-disassembled nanoparticles | |
KR102081666B1 (ko) | 암 치료용 약학 조성물 | |
KR101035269B1 (ko) | 고분자 유도체-광감작제 복합체를 이용한 새로운 광역학치료제 | |
JP6230443B2 (ja) | 近赤外色素結合ヒアルロン酸誘導体およびそれを有する光イメージング用造影剤 | |
KR101183732B1 (ko) | 광역학 진단 또는 치료를 위한 아세틸화된 다당류 및 광감작제가 결합된 결합체 및 이의 제조방법 | |
KR101188979B1 (ko) | 광역학 진단 또는 치료를 위한 생체 적합성 고분자와 광감작제의 결합체 및 이의 제조방법 | |
KR101419254B1 (ko) | 효소 반응성 그라핀 옥사이드/생체 고분자-광감각제 나노복합체 및 이를 포함하는 형광 영상 진단 또는 광역학/광열 치료용 조성물 | |
KR101419124B1 (ko) | 폴리에틸렌옥사이드-폴리프로필렌옥사이드 블록공중합체와 광감작제가 공유 결합된 광역학 치료용 복합체 | |
JP2003515538A (ja) | クロロフィル及びバクテリオクロロフィルのエステル類、その調製及びそれを含む医薬組成物 | |
KR102245552B1 (ko) | 나노약물 복합체, 이의 제조방법 및 이의 용도 | |
KR102280761B1 (ko) | 후코이단 기반의 쎄라그노시스 조성물 | |
Yan et al. | Single-laser excitation synergistic photo-and chemodynamic therapy system based on persistent luminescence nanoparticles | |
CN110354276B (zh) | 一种前药及其制备方法和应用 | |
JP2011518891A (ja) | クロリンe6−葉酸結合化合物およびキトサンを含有する癌治療用薬学的組成物 | |
CN112263566A (zh) | 白蛋白结合型缺氧氧化双响应性复合纳米粒、制备方法及用途 | |
KR102238174B1 (ko) | 후코이단 기반의 쎄라그노시스 조성물 | |
CN118615247A (zh) | 人参皂苷ck-羧甲基壳聚糖前药纳米胶束的制备方法及应用 | |
KR20160053084A (ko) | 수용성 포르피린-플러렌 복합체 광감작제 및 그 제조방법 | |
CN118320119A (zh) | Ros响应自携氧纳米制剂及其应用 | |
KR20180017883A (ko) | 암 치료 및 진단용 광감작제-항체 접합체 | |
Ivanov et al. | Pharmacokinetics of 2, 4-di (alpha-methoxyethyl) deuteroporphyrin-IX (dimehin) and its complex with chitosan in mice with tumors | |
KR20160053082A (ko) | 광활성을 가지는 수용성 클로린 유도체 및 그 제조방법 | |
JPH0780887B2 (ja) | 波長特異的細胞毒性試薬 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20161013 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171222 |