RU2455026C2 - Антагонисты рецепторов для лечения метастатического рака - Google Patents
Антагонисты рецепторов для лечения метастатического рака Download PDFInfo
- Publication number
- RU2455026C2 RU2455026C2 RU2009115363/15A RU2009115363A RU2455026C2 RU 2455026 C2 RU2455026 C2 RU 2455026C2 RU 2009115363/15 A RU2009115363/15 A RU 2009115363/15A RU 2009115363 A RU2009115363 A RU 2009115363A RU 2455026 C2 RU2455026 C2 RU 2455026C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- pdgfrα
- igf
- seq
- cells
- Prior art date
Links
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 title description 5
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 title description 5
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 title 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 title 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 142
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 39
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 22
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 13
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108010068588 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Proteins 0.000 claims description 134
- 102000001393 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Human genes 0.000 claims description 133
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 65
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 53
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 31
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 16
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 94
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 39
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 27
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 154
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 description 94
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 description 93
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 73
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 73
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 54
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 51
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 51
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 51
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 48
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 48
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 42
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 42
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 40
- 108010017843 platelet-derived growth factor A Proteins 0.000 description 34
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 31
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 description 30
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 29
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 29
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 27
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 27
- 229950006647 cixutumumab Drugs 0.000 description 25
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 20
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 20
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 20
- 229950008516 olaratumab Drugs 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 18
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 17
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 16
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 16
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 15
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 14
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 13
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 12
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 12
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 12
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 12
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 12
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 11
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 11
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 11
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 11
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 11
- 230000004044 response Effects 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 10
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 10
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 10
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 9
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 9
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 9
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 9
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 9
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 description 9
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 9
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 9
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 7
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 7
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- 229940122558 EGFR antagonist Drugs 0.000 description 6
- 101001126417 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 5
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 5
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 5
- BJHCYTJNPVGSBZ-YXSASFKJSA-N 1-[4-[6-amino-5-[(Z)-methoxyiminomethyl]pyrimidin-4-yl]oxy-2-chlorophenyl]-3-ethylurea Chemical compound CCNC(=O)Nc1ccc(Oc2ncnc(N)c2\C=N/OC)cc1Cl BJHCYTJNPVGSBZ-YXSASFKJSA-N 0.000 description 4
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 4
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 4
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 4
- 102000000763 Survivin Human genes 0.000 description 4
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 description 4
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 4
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 4
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 4
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 4
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 108010000685 platelet-derived growth factor AB Proteins 0.000 description 4
- 108010017992 platelet-derived growth factor C Proteins 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 102100035359 Cerebellar degeneration-related protein 2-like Human genes 0.000 description 3
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 3
- 101000737792 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2-like Proteins 0.000 description 3
- 101001044927 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 3 Proteins 0.000 description 3
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 3
- 102100022708 Insulin-like growth factor-binding protein 3 Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 3
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 3
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000006909 anti-apoptosis Effects 0.000 description 3
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 3
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 3
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- GTTBEUCJPZQMDZ-UHFFFAOYSA-N erlotinib hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 GTTBEUCJPZQMDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- YLMAHDNUQAMNNX-UHFFFAOYSA-N imatinib methanesulfonate Chemical compound CS(O)(=O)=O.C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 YLMAHDNUQAMNNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 230000008747 mitogenic response Effects 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 3
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 3
- JWVCLYRUEFBMGU-UHFFFAOYSA-N quinazoline Chemical compound N1=CN=CC2=CC=CC=C21 JWVCLYRUEFBMGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000033300 receptor internalization Effects 0.000 description 3
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 3
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 3
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- KDOPAZIWBAHVJB-UHFFFAOYSA-N 5h-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine Chemical compound C1=NC=C2NC=CC2=N1 KDOPAZIWBAHVJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023995 Beta-nerve growth factor Human genes 0.000 description 2
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 2
- 206010061728 Bone lesion Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N D-Mannose-6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 102100033215 DNA nucleotidylexotransferase Human genes 0.000 description 2
- 229940123780 DNA topoisomerase I inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 229940124087 DNA topoisomerase II inhibitor Drugs 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710201824 Insulin receptor substrate 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100025087 Insulin receptor substrate 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 description 2
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 2
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 2
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 108010027206 Nucleopolyhedrovirus inhibitor of apoptosis Proteins 0.000 description 2
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 102000004584 Somatomedin Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010017622 Somatomedin Receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000000365 Topoisomerase I Inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000000317 Topoisomerase II Inhibitor Substances 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 2
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 2
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L calcium carbonate Substances [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 2
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000010228 ex vivo assay Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical group C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 2
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 230000006510 metastatic growth Effects 0.000 description 2
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- LBWFXVZLPYTWQI-IPOVEDGCSA-N n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(z)-(5-fluoro-2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C LBWFXVZLPYTWQI-IPOVEDGCSA-N 0.000 description 2
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000027405 negative regulation of phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000010 osteolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 210000005267 prostate cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229940120982 tarceva Drugs 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 description 2
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N (3e)-3-(1h-imidazol-5-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2\C1=C/C1=CN=CN1 VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- XRYJULCDUUATMC-CYBMUJFWSA-N 4-[4-[[(1r)-1-phenylethyl]amino]-7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-6-yl]phenol Chemical compound N([C@H](C)C=1C=CC=CC=1)C(C=1C=2)=NC=NC=1NC=2C1=CC=C(O)C=C1 XRYJULCDUUATMC-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- RONQPWQYDRPRGG-UHFFFAOYSA-N 5,6-bis(4-fluoroanilino)isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC(F)=CC=C1NC(C(=C1)NC=2C=CC(F)=CC=2)=CC2=C1C(=O)NC2=O RONQPWQYDRPRGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHIDNBAQOFJWCA-UAKXSSHOSA-N 5-fluorouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(F)=C1 FHIDNBAQOFJWCA-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUXVKZWTXQUGMW-FQEVSTJZSA-N 9-Aminocamptothecin Chemical compound C1=CC(N)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 FUXVKZWTXQUGMW-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010033760 Amphiregulin Proteins 0.000 description 1
- 102000007299 Amphiregulin Human genes 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091007065 BIRCs Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 1
- 102000043139 CK2 family Human genes 0.000 description 1
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100027047 Cell division control protein 6 homolog Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N Cyanamide Chemical compound NC#N XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025191 Cyclin-A2 Human genes 0.000 description 1
- 102100038250 Cyclin-G2 Human genes 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N Deoxyuridine 5'-triphosphate Chemical compound O1[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 1
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 208000001258 Hemangiosarcoma Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCAHMSDENAOJFZ-UHFFFAOYSA-N Herbimycin A Natural products N1C(=O)C(C)=CC=CC(OC)C(OC(N)=O)C(C)=CC(C)C(OC)C(OC)CC(C)C(OC)C2=CC(=O)C=C1C2=O MCAHMSDENAOJFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000914465 Homo sapiens Cell division control protein 6 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000934320 Homo sapiens Cyclin-A2 Proteins 0.000 description 1
- 101000884216 Homo sapiens Cyclin-G2 Proteins 0.000 description 1
- 101000868333 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000909198 Homo sapiens DNA polymerase delta catalytic subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- 101000624631 Homo sapiens M-phase inducer phosphatase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000593405 Homo sapiens Myb-related protein B Proteins 0.000 description 1
- 101000692455 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 101000838456 Homo sapiens Tubulin alpha-1B chain Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 1
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 description 1
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 1
- UIARLYUEJFELEN-LROUJFHJSA-N LSM-1231 Chemical compound C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3C(=O)NCC3=C2C2=CC=CC=C2N1[C@]1(C)[C@](CO)(O)C[C@H]4O1 UIARLYUEJFELEN-LROUJFHJSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102100023325 M-phase inducer phosphatase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025354 Macrophage mannose receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100034670 Myb-related protein B Human genes 0.000 description 1
- BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N N-acetylcarnosine Chemical compound CC(=O)NCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000003076 Osteolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 102000016979 Other receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 102400001093 PAK-2p27 Human genes 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 101150012394 PHO5 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010082093 Placenta Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 1
- 102100037596 Platelet-derived growth factor subunit A Human genes 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100372762 Rattus norvegicus Flt1 gene Proteins 0.000 description 1
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N Risedronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CC1=CC=CN=C1 IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241000011102 Thera Species 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 108700038377 Tob1 Proteins 0.000 description 1
- 101150041680 Tob1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 102100028969 Tubulin alpha-1B chain Human genes 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 125000002490 anilino group Chemical group [H]N(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000009949 anti-apoptotic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000001621 anti-mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 210000002403 aortic endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011717 athymic nude mouse Methods 0.000 description 1
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 238000007469 bone scintigraphy Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000002725 brachytherapy Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- OMZCMEYTWSXEPZ-UHFFFAOYSA-N canertinib Chemical compound C1=C(Cl)C(F)=CC=C1NC1=NC=NC2=CC(OCCCN3CCOCC3)=C(NC(=O)C=C)C=C12 OMZCMEYTWSXEPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000012820 cell cycle checkpoint Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- VVIPLSCLYCWUQT-XMMPIXPASA-N chembl1094164 Chemical compound C1([C@H](O)CNC2=C(C(NC=C2)=O)C=2NC=3C=C(C=C(C=3N=2)C)N2CCN(CCC#N)CC2)=CC=CC(Cl)=C1 VVIPLSCLYCWUQT-XMMPIXPASA-N 0.000 description 1
- USVCWSAJUAARAL-MEMLXQNLSA-N chembl551064 Chemical compound C1=2C(N)=NC=NC=2N([C@@H]2C[C@H](C2)N2CCC2)C=C1C(C=1)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 USVCWSAJUAARAL-MEMLXQNLSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- ACSIXWWBWUQEHA-UHFFFAOYSA-N clodronic acid Chemical compound OP(O)(=O)C(Cl)(Cl)P(O)(O)=O ACSIXWWBWUQEHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002286 clodronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000021953 cytokinesis Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- BFHULMZYMXQSQW-IFZCHKFJSA-N daunorubicin and paclitaxel Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)C1CC(N)C(O)C(C)O1.O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3(C21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 BFHULMZYMXQSQW-IFZCHKFJSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000009274 differential gene expression Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 229940082789 erbitux Drugs 0.000 description 1
- SIHZWGODIRRSRA-ONEGZZNKSA-N erbstatin Chemical compound OC1=CC=C(O)C(\C=C\NC=O)=C1 SIHZWGODIRRSRA-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229950009429 exatecan Drugs 0.000 description 1
- ZVYVPGLRVWUPMP-FYSMJZIKSA-N exatecan Chemical compound C1C[C@H](N)C2=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC3=CC(F)=C(C)C1=C32 ZVYVPGLRVWUPMP-FYSMJZIKSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000011347 external beam therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001752 female genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229940045109 genistein Drugs 0.000 description 1
- 235000006539 genistein Nutrition 0.000 description 1
- TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N genistein Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N genistein 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940080856 gleevec Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- -1 glucose or lactose) Chemical class 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- MCAHMSDENAOJFZ-BVXDHVRPSA-N herbimycin Chemical compound N1C(=O)\C(C)=C\C=C/[C@H](OC)[C@@H](OC(N)=O)\C(C)=C\[C@H](C)[C@@H](OC)[C@@H](OC)C[C@H](C)[C@@H](OC)C2=CC(=O)C=C1C2=O MCAHMSDENAOJFZ-BVXDHVRPSA-N 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002411 imatinib Drugs 0.000 description 1
- 229960003685 imatinib mesylate Drugs 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 102000027411 intracellular receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008582 intracellular receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229940084651 iressa Drugs 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 208000029791 lytic metastatic bone lesion Diseases 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000011160 magnesium carbonates Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 208000010658 metastatic prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000011234 negative regulation of signal transduction Effects 0.000 description 1
- QZGIWPZCWHMVQL-UIYAJPBUSA-N neocarzinostatin chromophore Chemical compound O1[C@H](C)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](NC)[C@H]1O[C@@H]1C/2=C/C#C[C@H]3O[C@@]3([C@@H]3OC(=O)OC3)C#CC\2=C[C@H]1OC(=O)C1=C(O)C=CC2=C(C)C=C(OC)C=C12 QZGIWPZCWHMVQL-UIYAJPBUSA-N 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- WVUNYSQLFKLYNI-AATRIKPKSA-N pelitinib Chemical compound C=12C=C(NC(=O)\C=C\CN(C)C)C(OCC)=CC2=NC=C(C#N)C=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 WVUNYSQLFKLYNI-AATRIKPKSA-N 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000003566 phosphorylation assay Methods 0.000 description 1
- DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N phosphotyrosine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000035409 positive regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000007542 postnatal development Effects 0.000 description 1
- 230000009596 postnatal growth Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000002025 prostate sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- BWESROVQGZSBRX-UHFFFAOYSA-N pyrido[3,2-d]pyrimidine Chemical compound C1=NC=NC2=CC=CN=C21 BWESROVQGZSBRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 1
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 1
- 150000003246 quinazolines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003252 quinoxalines Chemical class 0.000 description 1
- 230000030541 receptor transactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000025915 regulation of apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000022983 regulation of cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229940089617 risedronate Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000013391 scatchard analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000011182 sodium carbonates Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 1
- 229960002812 sunitinib malate Drugs 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004654 survival pathway Effects 0.000 description 1
- 229940034785 sutent Drugs 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 108010002164 tyrosine receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 238000012447 xenograft mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229950009268 zinostatin Drugs 0.000 description 1
- XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N zoledronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CN1C=CN=C1 XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004276 zoledronic acid Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Abstract
Представлена группа изобретений, которые относятся к медицине, а именно к онкологии. Группа изобретений включает в себя выделенное антитело или фрагмент антитела человека, специфическое в отношении PDGFRα, выделенный полинуклеотид, вектор экспрессии, рекомбинантную клетку, антитело или фрагмент антитела, продуцируемое при культивировании рекомбинантной клетки, а также применение этих антител или их фрагментов для ингибирования роста опухоли, относящейся к лейомиосаркоме и глиобластоме. С помощью изобретения успешно лечат лейомиосаркому и глиобластому за счет использования антител или их фрагментов, которые связываются с PDGFRα человека и нейтрализуют активацию рецепторов, вовлеченных в рост или ангиогенез опухоли. 5 н. и 5 з.п. ф-лы, 20 ил., 8 табл., 3 пр.
Description
Данная заявка претендует на приоритет предварительной заявки на патент США № 60/691920.
Область изобретения
Изобретение относится к способам лечения рака костей, в частности метастатического рака костей, путем введения антагониста IGF-IR и/или PDGFRα. Изобретение также относится к антителам, которые связываются с PDGFRα человека и нейтрализуют активацию рецептора. Дополнительно изобретение относится к способам нейтрализации активации PDGFRα и к способам лечения млекопитающего с неопластическими заболеваниями с использованием антител по отдельности или в сочетании с другими агентами.
Предпосылки создания изобретения
Рак предстательной железы представляет собой наиболее распространенный вид рака среди мужчин, при этом ежегодно в Соединенных Штатах Америки появляется около 220000 новых случаев заболевания и 29000 смертей. Существенная часть мужчин, у которых диагностирован рак предстательной железы, имеет метастатическое заболевание. В дальнейшем метастазы, в конечном счете, развиваются у множества других пациентов с раком предстательной железы несмотря на хирургическое лечение и лучевую терапию. Кости являются наиболее обычным местом появления метастазов при раке предстательной железы, а также часто местом метастазов при раке молочной железы и раке легких. Большинство метастазов при раке предстательной железы является андроген-зависимыми, так что имеется быстрая ответная реакция на хирургическую или медицинскую кастрацию, но фактически у всех пациентов опухоль в конечном счете становится андроген-независимой, приводя к значительной заболеваемости и смертности. При появлении метастазов в костях доступная в настоящее время терапия имеет ограниченное действие. Наиболее эффективная одобренная терапия, описанная для метастатического рака предстательной железы (введение доцетаксела), увеличивает среднее время жизни приблизительно на три месяца (Petrylak et al., 2004, N.Engl. J.Med. 351:1513; Tannock et al., 2004, N.Engl. J.Med. 351: 1502). Соответственно срочно требуется новая терапия для метастатического рака костей.
Рецептор инсулиноподобного фактора роста (IGF-IR) представляет собой повсеместный трансмембранный рецептор тирозинкиназы, который является неотъемлемым для нормального эмбрионального и постнатального роста и развития. IGF-IR располагается на поверхности клетки большинства клеточных типов и служит в качестве сигнальной молекулы для факторов роста IGF-I и IGF-II (обобщенно называемые далее IGFs). IGF-IR может стимулировать пролиферацию клеток, дифференциацию клеток, изменения размера клеток и защищать клетки от апоптоза. Также рассматривалось, что он является квазиобязательным для трансформации клетки (обзор Adamd et al., Cell. Moll.Life. Sci. 57:1050-93 (2000); Baserga Oncogene 19: 5574-81 (2000)). Сообщалось о высоких уровнях экспрессии IGF-IR в образцах тканей в костных метастазах при раке предстательной железы. Кости содержат наиболее большой запас IGFs в организме.
IGF-IR представляет собой предварительно сформированный гетеротетрамер, содержащий две альфа- и две бета-цепи, связанные дисульфидными связями. Субъединицы рецептора синтезируются как часть единой полипептидной цепи в 180 кДа, которая затем протеолитически перерабатывается в альфа- (130 кДа) и бета- (95 кДа) субъединицы. Полная альфа-цепь является внеклеточной и содержит сайт для лигандного связывания. Бета-цепь содержит тренсмембранный домен, домен тирозинкиназы и С-концевое удлинение, которое необходимо для дифференциации и трансформации клеток, но несущественно для митогенной передачи сигнала и защиты от апоптоза.
IGF-IR чрезвычайно схож с рецептором инсулина (IR), в частности, в рамках последовательности бета-цепи (70% гомологичность). Вследствие такой гомологии недавние исследования продемонстрировали, что данные рецепторы могут образовывать гибриды, содержащие один димер IR и один димер IGF-IR (Pandini et al., Clin.Canc.Res. 5:1935-19 (1999)). Образование гибридов происходит как в нормальных, так и в трансформированных клетках, и содержание гибрида зависит от концентрации двух гомодимерных рецепторов (IR и IGF-IR) внутри клетки. Хотя гибридные рецепторы состоят из пар IR и IGF-IR, гибриды связываются селективно с IGF с аффинностью, подобной аффиности для IGF-IR, и лишь слабо связывают инсулин (Siddle and Sons, The IGF System. Humana Press, pp. 199-225, 1999). Следовательно, данные гибриды могут связывать IGF и преобразовывать сигналы как в нормальных, так и в трансформированных клетках.
Второй рецептор IGF, IGF-IIR, или манноза-6-фосфатный (М6Р) рецептор, также связывает лиганд IGF-II с высокой аффинностью, но не имеет тирозинкиназной активности. Поскольку он приводит к деградации IGF-II, то рассматривается как агент, ослабляющий IGF-II, антагонизируя действие данного лиганда, промотирующее рост. Потеря IGF-II в опухолевых клетках может усиливать потенциал роста за счет высвобождения его антагонизирующего действия на связывание IGF-II с IGF-IR (Byrd et al., J.Biol.Chem. 274:24408-16 (1999)).
Альфа- и бета-рецепторы тромбоцитарного фактора роста (PDGFRα и PDGFRβ) представляют собой рецепторы тирозинкиназ типа III. PDGFRα является решающим для развития и осуществления важных функций в период полового созревания. Например, мыши, гомозиготные в отношении нулевой мутации, умирают в процессе эмбриогенеза. На более поздних стадиях развития PDGFRα экспрессируется во многих мезинхимальных структурах, где смежные эпителиальные клетки продуцируют тромбоцитарные факторы роста (PDGFRs). Образцы тканей нормальной и гиперплазированной предстательной железы дают отрицательный тест в отношении PDGFRα, тогда как первичные опухоли предстательной железы и скелетная масса от подходящих субъектов экспрессируют PDGFRα. Кроме того, для линий клеток предстательной железы, полученных из разных мест метастазов, PDGFRα обнаруживается в полученных из костных метастазов клетках РС3, но не в клеточных линиях, полученных из метастазов в лимфатические узлы (LNCaP) и мозг (DU-145).
Семейство тромбоцитарных факторов роста состоит из пяти различных дисульфидно-связанных димеров PDGF-AA, -BB, -AB, -CC и -DD, которые действуют посредством PDGFRα и PDGFRβ. Данные факторы роста представляют собой димерные молекулы, состоящие из дисульфидно-связанных полипептидных цепей, которые связываются с двумя рецепторными белками одновременно и индуцируют димеризацию рецептора, автофосфорилирование и внутриклеточную передачу сигнала. PDGFRα и PDGFRβ являются структурно подобными и могут образовывать гетеродимеры, а также гомодимеры. Поскольку PDGFRβ не связывает с высокой аффинностью цепь PDGF-A, PDGF-AA активирует только αα димеры рецепторов, тогда как PDGF-AB и PDGF-СС активирует гетеродимеры рецепторов αα и αβ.
Краткое изложение сущности изобретения
Данное изобретение относится к лечению первичных и метастатических костных опухолей, включая опухоли, происходящие от предстательной железы, молочной железы или легких, экспрессирующих рецептор инсулиноподобного фактора роста-I (IGF-IR) и/или альфа-рецептор тромбоцитарного фактора роста (PDGFRα).
Опухоли, предназначенные для лечения, могут представлять собой гормон/андроген зависимые или гормон/андроген независимые, которые могут иметь происхождение, например, из предстательной железы, молочной железы или легкого.
Изобретение относится к способам лечения субъекта, имеющего костную опухоль, и к способам ингибирования роста костной опухоли. Способы включают введение эффективного количества антагониста IGF-IR или эффективного количества антагониста PDGFRα. Антагонисты рецепторов включают антитела и фрагменты антител, а также внутриклеточные ингибиторы, представляющие собой небольшие молекулы.
Изобретение относится к антителам против IGF-IR или против PDGFRα, которые связываются с рецептором-мишенью и ингибируют связывание лиганда. Изобретение также относится к антителам и другим антагонистам, которые нейтрализуют активацию IGF-IR или PDGFRα. Кроме того, некоторые антитела промотируют понижающее регулирование их рецепторов-мишеней, например, путем интернализации и/или деградации. Соответственно антитела и антагонисты, представляющие собой небольшие молекулы, функционируют для ингибирования активации сигнальных молекул в прямом направлении, таких как Akt, p42/p44 и MAPK.
Способы включают применение антагонистов IGF-IR или PDGFRα по отдельности, в сочетании друг с другом или в сочетании с другими лекарственными средствами против рака, такими как химиотерапия и лучевая терапия.
Изобретение также относится к антителам и фрагментам антител, которые связываются с PDGFRα, а также нуклеотидам и клетке-хозяину для продуцирования данных антител. Антитела блокируют связывание лиганда и нейтрализуют активацию рецептора. Изобретение также относится к применению антител по отдельности, в сочетании с другими антагонистами рецептора или противоопухолевыми агентами или в виде конъюгатов для лечения новообразования. Антитела против PDGFRα используют для лечения, например, опухолей яичников, опухолей молочной железы, опухолей легких, гепатоклеточных опухолей, опухолей стромальных клеток желудочно-кишечного тракта, меланом, почечно-клеточных карцином, опухолей предстательной железы и саркомы мягких тканей.
Описание фигур
На фиг.1 показан рост подкожных ксенотрансплантатов опухолей LuCaP 35V у кастрированных мышей SCID во время периода лечения, начатого, когда опухоли достигали 150-200 мм3. Полоса А: необработанный контроль; полоса В: животные получали в течение четырех недель только доцетаксел (или 10 мг/кг, или 20 мг/кг) сам по себе или в сочетании с антителами против IGF-IR (40 мг/кг IMC-A12); полоса С: уровни PSA в сыворотке крови у не получавших и получавших лечение мышей SCID, имеющих подкожные ксенотрансплантированные опухоли LuCaP 35V. Мыши, получавшие лечение, получали только доцетаксел (20 мг/кг) или доцетаксел (или 10 мг/кг, или 20 мг/кг) в сочетании с антителами против IGF-IR (40 мг/кг IMC-A12). Лечение начинали, когда опухоли достигали 150-200 мм3, и прекращали через четыре недели.
На фиг.2 показаны суспензии отдельных клеток ксенотрансплантатов опухолей LuCaP 35V, обработанных только доцетакселом (10 мг/кг) (полоса А) или в сочетании с антителами против IGF-IR (40 мг/кг IMC-A12) (полоса В). Поле, помеченное R1, соответствует апоптическим клеткам с фрагментированной ДНК (повышенное введение метки FITC).
На фиг.3 показан синтез ДНК (поглощение BrDu) в ксенотрансплантатах опухолей после окончания лечения доцетакселом (10 мг/кг или 20 мг/кг) по отдельности или в сочетании с антителами против IGF-IR (40 мг/кг IMC-A12).
На фиг.4 показана дифференциальная экспрессия генов, связанных с агрессивностью опухоли предстательной железы (TUBB), устойчивостью к антиандрогенной терапии (BIRC 5) и индукцией апоптоза (IGFBP3) в опухолевых клетках предстательной железы в качестве ответной реакции на лечение доцетакселом и А12 и только доцетакселом.
На фиг.5 показаны уровни А12 в сыворотке крови после прекращения лечения.
На фиг.6 показана масса тела (мера общей цитотоксичности) не болевших животных, которые получали постоянно доцетаксел (или 10 мг/кг, или 20 мг/кг) по отдельности или в сочетании с антителами против IGF-IR (40 мг/кг IMC-A12).
На фиг.7 показан эффект лечения с использованием антитела против IGF-IR (IMC-A12) на ксенотрансплантат-продуцированном PSA у мышей SCID, которым были привиты клетки LuCaP 23.1.
На фиг.8 показана серия рентгеновских снимков мышей SCID, которым были привиты клетки LuCaP 23.1. Мыши А-12 получали 40 мг/кг IMC-A12 внутрибрюшинно три раза в неделю в течение шести недель. Рентгеновские снимки были сделаны в момент смерти.
На фиг.9 показаны уровни PSA (а) и иллюстративные рентгеновские снимки (b) мышей SCID с ксенотрансплантатами клеток LuCaP 23.1 предстательной железы человека внутри большой берцовой кости.
На фиг.10 показано действие жидкости, выделенной из костного мозга человека, на активность Akt в клетках рака предстательной железы. Лизаты клеток подвергали SDS-PAGE. Для вестерн-блот анализа мембраны блотировали антителами, нацеленными на фосфо-Akt (Ser-473, cell signaling Technology), PDGFRα (R&D Systems) и актином (Sigma). Первичное связывание антитела обнаруживали с использованием HRP-конъюгированного белка А или белка G (Sigma).
На фиг.11 показана индукция и ингибирование АКТ-фосфорилирования в клетках PC3-ML. Полоса А показывает ингибирование посредством AG-1296 доза-зависимым образом фосфорилирования Akt в клетках, подвергнутых действию PDFG-BB. Полоса В показывает фосфорилирование Akt с помощью костного аспирата и ингибирование с использованием 20 мкМ AG-1296. Полоса С показывает эффективность аспирата костного мозга в отношении индуцирования фосфорилирования Akt по сравнению с эффективностью комбинации 100 пг/мл PDGF-AA и 100 пг/мл PDGF-ВВ. На полосе D проведено сравнение по величине фосфорилирования Akt аспиратом костного мозга, ингибирование индуцированного костным мозгом фосфорилирования Akt с помощью AG-1296 и фосфорилирования Akt, индуцированного посредством PDGF-AA+ PDGF-ВВ.
На фиг.12 показано ингибирование фосфорилирования Akt в клетках PC3-ML посредством антагонистов PDGFRα. Полоса А показывает доза-зависимое действие моноклонального антитела IMC-3G3 на фосфорилирование Akt, индуцированное 30 нг/мл PDGF-ВВ. Полосы В и С дают возможность сравнения действия IMC-3G3 и AG-1296 на индуцированное костным мозгом фосфорилирование Akt. Полоса D показывает, что ингибирование фосфорилирования Akt зависит от времени предварительной инкубации IMC-3G3.
На фиг.13 показано связывание антитела с PDGFRα. А: непосредственное связывание антитела против PDGFRα с иммобилизованным внеклеточным доменом PDGFRα. В: ингибирование связывания [125I]PDGF-AA с иммобилизованным PDGFRα.
На фиг.14 показано специфическое ингибирование фосфорилирования PDGFRα и эффекторных молекул в прямом направлении.
На фиг.15 показано ингибирование посредством mAbs стимулированного PDGF-AA внедрения [3Н]тимидина в клетки РАЕ Rα.
На фиг.16 показано ингибирование индуцированной PDGF-AA активации эффекторных молекул в прямом направлении в клетках SKLMS-1 (A) и U118(B).
На фиг.17 показано ингибирование посредством mAbs стимулированного PDGF-AA внедрения [3Н]тимидина в клетки U118 (А) и SKLMS-1 (В). Ингибирование стимулированного PDGF-ВВ внедрения [3Н]тимидина также показано для клеток SKLMS-1 (С) и U118 (D).
На фиг.18 показано доза-зависимое действие при обработке развитых ксенотрансплантатов опухолей U118 (глиобластома, полоса А) и SKLMS-1 (лейомиосаркома, полоса В) у бестимусных мышей.
На фиг.19 показано уменьшение фосфорилирования PDGFRα in vivo в опухолях U118, обработанных антителом против PDGFRα, по сравнению с обработкой неспецифическим IgG человека.
На фиг.20 показаны векторы экспрессии GS, использованные для клонирования полученных из гибридомы генов вариабельных областей VH и VK человека и экспрессии полных тяжелых (IgG1) и легких цепей белков. Два вектора были рекомбинированы, как объяснено в примерах, и объединенный вектор был трансфектирован в клетки NS20.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к лечению костных опухолей с использованием антител или фрагментов антител, которые связываются с рецептором инсулиноподобного фактора роста (IGF-IR). Эндокринная экспрессия IGF-I в первую очередь регулируется гормоном роста, и он продуцируется в печени, но другие типы тканей также способны экспрессировать IGF-I, включая кости, которые содержат большой запас факторов роста. В зависимости от типа опухолевых клеток, IGF-I вовлекается в эндокринное, паракринное и/или аутокринное регулирование (Yu, H. and Rohan, J., J.natl. Cancer Inst., 92: 1472-89 (2000)).
Установлено, что антитела, которые связывают IGF-IR, полезны при терапии для лечения костных опухолей, которые экспрессируют IGF-IR. Антитела можно использовать сами по себе или в сочетании с другими видами лечения рака, в частности с химиотерапией. Анти-IGF-IR терапия, сама по себе или в сочетании с терапией с использованием одного или более противораковых агентов (таких, например, как химиотерапия или лучевая терапия), имеет значительную терапевтическую эффективность. Подавление роста опухоли часто сопровождается увеличением апоптоза и сохраняется после прерывания всего лечения, а опухоли у животных, которых лечили только с использованием химиотерапии, опять начинают расти.
Также было установлено, что PDGFRα играет важную роль в росте костных опухолей. Например, некоторые опухолевые клеточные линии, которые экспрессируют PDGFRα, предпочтительно метастазируют в кость. Такие клеточные линии проявляют повышенную активацию PDGFRα и фосфорилирование сигнальных молекул в прямом направлении в ответ на растворимые факторы, присутствующие в костном мозге. Активация PDGFRα костного мозга уменьшается или полностью ингибируется антагонистами PDGFRα, и фосфорилирование сигнальных молекул в прямом направлении, которые обычно активируются посредством передачи сигнала через PDGFRα и другие рецепторные системы тирозинкиназы, снижается в значительной степени. Некоторые данные позволяют предположить, что путь выживаемости PI3K/Akt активируется путем передачи сигнала с помощью PDGFRα не только за счет лигандов, которые непосредственно активируют PDGFRα, но также и факторов, присутствующих в костном мозге, которые вызывают трансактивацию рецептора.
Первичные костные опухоли, предназначенные для лечения согласно изобретению, включают, но не ограничиваются указанным, остеосаркомы, хондросаркомы, фибросаркомы и гемангиосаркомы. Примечательно, что злокачественные вторичные (метастатические) опухоли являются намного более обычными, чем первичные костные опухоли. Метастатические костные опухоли, предназначенные для лечения согласно изобретению, могут возникать из множества источников, наиболее обычными из которых являются раковые заболевания предстательной железы, молочной железы или легких. Источник метастатического рака костей обычно будет очевиден из истории болезни пациента. Опухоли могут быть остеобластными или остеолитическими. Опухоли в момент появления могут быть зависимыми от стимуляции IGF-IR, или они могут переходить в IGF-IR-зависимые. Например, раковые заболевания предстательной железы или метастазы раковых заболеваний предстательной железы, которые первоначально являются гормон/андроген-зависимыми и с которыми можно бороться физическими или химическими методами лечения, которые подавляют продуцирование андрогена или гормона, могут стать гормон/анроген независимыми благодаря повышенной чувствительности к стимуляции посредством IGF-IR. Более того, в дополнение к разработке лечения для гормон/андроген-независимых опухолей, данное изобретение можно использовать для лечения гормон/андроген-зависимых костных опухолей без уверенности на подавление продуцирования андрогена или гормона, например, путем совместного применения антител против IGF-IR вместе с противоопухолевыми агентами. Такие опухоли могли бы включать метастатические костные опухоли, которые стимулируются IGF-IR в IGF-обогащенной окружающей среде кости, которые могут быть чувствительными к гормональной стимуляции, но недостаточно чувствительными для роста без вовлечения IGF. Удаление гормонов может не требоваться для таких опухолей.
Костные опухоли, которые являются PDGF-зависимыми, также можно лечить в соответствии с изобретением, а также опухоли, которые являются зависимыми от «костного мозга». Зависимые от костного мозга опухоли проявляют активацию PDGFRα в качестве ответной реакции на растворимые факторы, присутствующие в костном мозге. Например, как проиллюстрировано в данном изобретении, метастатическая экспрессирующая PDGFRα раковая клеточная линия человека претерпевает активацию PDGFRα и фосфорилирование Akt+ при воздействии аспирата костного мозга. Антитело против PDGFRα, а также небольшие молекулы, являющиеся антагонистами PDGFRα, ингибируют активацию PDGFRα и фосфорилирование Akt+ для данной клеточной линии. Растворимые факторы костного мозга, которые активируют PDGFRα, включают, но не ограничиваются указанным, PDGF-АА и -ВВ.
Хотя такая зависимость от костного мозга включает передачу сигнала через PDGFRα, она может не включать только связывание PDGFRα лигандом PDGFRα. Например, как проиллюстрировано в данном описании, отмечено, что активация PDGFRα определенными лигандами (PDGF-АА или -ВВ) слабее, чем активация аспиратом костного мозга. Более того, наблюдается, что в присутствии аспирата костного мозга фосфорилирование Akt+ уменьшается при увеличении времени инкубации. Совместно данные результаты позволяют предположить, что помимо ответной реакции на связывание PDGF, PDGFRα может трансактивироваться (фосфорилироваться) другими элементами сигнальной трансдукции (например, другими тирозинкиназами рецепторов), чувствительными к другим компонентам костного мозга. В любом случае, в клеточной линии, подходящей для метастатического роста в кости (т.е. клеточная линия, которая предпочтительно метастазирует в кости), наблюдается зависимая от костного мозга активация PDGFRα, которая ингибируется антагонистами PDGFRα. Помимо этого, лечение с использованием антагониста PDGFRα ингибирует индуцированную костным мозгом стимуляцию противоапоптического пути PI3K/Akt и митоген-активированную протеинкиназу (МАРK).
Костные опухоли, предназначенные для лечения с использованием антагониста PDGFRα, могут возникать в качестве метастазов раковых клеток предстательной железы и, как и выше, могут быть гормонально/андроген зависимыми или перейти в гормонально/андроген независимые. Такие опухоли могут также возникать в качестве метастазов на рак, отличный от рака предстательной железы. Специалист в данной области будет способен легко диагностировать такие состояния и нарушения с использованием известных обычных исследований.
Термин «лечение» означает любое лечение заболевания у животного и включает (1) профилактику возникновения заболевания у млекопитающего, которое может быть предрасположенным к заболеванию, но у которого еще не наблюдается заболевания или не проявляются симптомы заболевания; например предотвращение начала клинических симптомов; (2) ингибирование заболевания, например остановку его развития; или (3) оказание помощи при заболевании, например вызов регрессии симптомов заболевания. Ингибирование роста опухоли включает замедление или остановку роста, а также регрессию опухоли. Выражение «эффективное количество для лечения заболевания» означает то количество, которое при введении нуждающемуся в этом млекопитающему является достаточным для лечения данного заболевания, как определено выше. Антагонист IGF-IR и антагонист PDGFRα по данному изобретению можно вводить по отдельности, в сочетании друг с другом или в сочетании с одним или несколькими противоопухолевыми агентами, такими как, например, химиотерапевтический агент или радиологический агент.
В одном из вариантов осуществления изобретения может оказаться желательным определение уровня экспрессии IGF-IR и/или PDGFRα в опухоли, предназначенной для лечения. В таких случаях берут биопсийную пробу опухоли и анализируют ее методами, хорошо известными в данной области. В другом варианте осуществления изобретения антагонист IGF-IR или антагонист PDGFRα применяют на основании того, что соответствующий рецептор обычно экспрессируется или активируется в определенном типе опухоли или без исключений начинает экспрессироваться или активироваться по мере прогрессирования заболевания.
Антагонист IGF-IR может представлять собой внеклеточный антагонист или внутриклеточный антагонист, и можно использовать более одного антагониста. Внеклеточные антагонисты включают, но не ограничиваются указанным, белки или другие биологические молекулы, которые связываются с IGF-IR или одним или несколькими его лигандами (например, IGF-I и IGF-II являются природными лигандами IGF-IR). В варианте осуществления изобретения внеклеточный антагонист ингибирует связывание IGF-IR с его лигандами. В одном варианте осуществления антагонист представляет собой антитело против IGF-IR, такое как, например, IMC-A12. В другом варианте осуществления антагонист представляет собой растворимый лиганд-связывающий фрагмент IGF-IR. Внутриклеточные антагонисты IGF-IR могут представлять собой биологические молекулы, но обычно представляют собой небольшие молекулы. Примеры включают, но не ограничиваются указанным, ингибитор тирозинкиназы AG1024 (Calbiochem), ингибитор киназы рецептора инсулиноподобного фактора роста-I NVP-AEW541 (Novartis), ингибитор рецептора инсулиноподобного фактора роста-I/инсулина BMS-554417 (Bristol Myers Squibb). Следует понимать, что используемые небольшие молекулы для применения в данном изобретении представляют собой ингибиторы IGF-IR, но они не должны быть полностью специфичными в отношении IGF-IR.
Антитела против IGF-IR для использования в соответствии с настоящим изобретением проявляют одно или несколько из следующих свойств:
1) антитела связываются с внешним доменом IGF-IR и ингибируют связывание IGF-I или IGF-II с IGF-IR. Ингибирование может быть определено, например, путем анализа непосредственного связывания с использованием очищенных или мембранно-связанных рецепторов. В данном варианте осуществления антитела по настоящему изобретению или их фрагменты предпочтительно связывают IGF-IR по меньшей мере также сильно, как и природные лиганды IGF-IR (IGF-I и IGF-II).
2) Антитела нейтрализуют IGF-IR. Связывание лиганда, например IGF-I и IGF-II, с внешним, внеклеточным доменом IGF-IR стимулирует автофосфорилирование бета-субъединицы и сигнальных молекул, включая МАРK, Akt и IRS-1, в прямом направлении.
Нейтрализация IGF-IR включает ингибирование, снижение, дезактивацию и/или нарушение одной или нескольких данных видов активности, обычно связанных с сигнальной трансдукцией. Нейтрализация может быть определена in vivo, ex vivo или in vitro с использованием, например, тканей, культивированных клеток или очищенных клеточных компонентов. Нейтрализация включает ингибирование гетеродимеров IGF-IR/IR, а также гомодимеров IGF-IR. Таким образом, нейтрализация IGF-IR имеет множество действий, включая ингибирование, снижение, дезактивацию и/или нарушение роста (пролиферации и дифференциации), ангиогенез (восстановление кровеносных сосудов, инвазия и метастазы) и подвижность клеток и метастазы (адгезия и инвазивность клеток).
Одной мерой нейтрализации IGF-IR является ингибирование тирозинкиназной активности рецептора. Ингибирование тирозинкиназы может быть определено с использованием хорошо известных способов, например путем измерения уровня автофосфорилирования рекомбинантного рецептора киназы и/или фосфорилирования природных или синтетических субстратов. Таким образом, анализы фосфорилирования могут использоваться для определения нейтрализующих антител в контексте настоящего изобретения. Фосфорилирование может быть обнаружено, например, с использованием антитела, специфического в отношении фосфотирозина в анализе ELISA или вестерн-блоте. Некоторые анализы активности тирозинкиназы описаны в Panek et al., J.Pharmacol. Exp.Thera. 283:1433-44 (1997), и Batley et al., Life Sci., 62:143-50 (1998). Антитела по изобретению вызывают уменьшение фосфорилирования тирозина IGF-IR по крайней мере примерно на 75%, предпочтительно по крайней мере примерно на 85% и более предпочтительно по крайней мере примерно на 90% в клетках, которые дают ответную реакцию на лиганд.
Другой мерой нейтрализации IGF-IR является ингибирование фосфорилирования субстратов IGF-IR в прямом направлении. Соответственно может быть измерен уровень фосфорилирования МАРK, Akt или IRS-1. Фосфорилирование снижается по крайней мере примерно на 40% и может снижаться по крайней мере примерно на 60% или по крайней мере примерно на 80%.
Кроме того, способы обнаружения экспрессии белка можно использовать для определения нейтрализации IGF-IR, при которых измеряемые белки регулируются путем тирозинкиназной активности IGF-IR. Данные способы включают иммуногистохимический (IHC) для обнаружения экспрессии белка, флуоресцентный in situ гибридизации (FISH) для обнаружения амплификации гена, анализы конкурентного связывания радиоактивных лигандов, методы блоттинга на твердых матрицах, такие как нозерн- и саузерн-блоты, полимеразно-цепная реакция обратной транскриптазы (PCR) и ELISA. См., например, Grandis et al., Cancer, 78:1284-92 (1996); Shimizu et al., Japan J. Cancer Res., 85:567-71 (1994); Sauter et al., Am. J. Path., 148:1047-53 (1996); Collins, Glia 15:289-96 (1995); Radinsky et al., Clin. Cancer Res. 1:19-31 (1995); Petrides et al., Cancer Res. 50:3934-39 (1990); Hoffinann et al., Anticancer Res. 17:4419-26 (1997); Wikstrand et al., Cancer Res. 55:3140-48 (1995).
Анализы ex vivo также можно использовать для определения нейтрализации IGF-IR. Например, ингибирование тирозинкиназы рецептора можно наблюдать путем митогенных анализов с использованием клеточных линий, стимулированных с помощью лиганда рецептора в присутствии и в отсутствие ингибитора. Линия MCF7 рака молочной железы (Американская коллекция типовых культур (АТСС), Rockville, MD) представляет собой такую клеточную линию, которая экспрессирует IGF-IR и стимулируется посредством IGF-I или IGF-II. Другой способ включает тестирование в отношении ингибирования роста экспрессирующих IGF-IR опухолевых клеток или клеток, трансфектированных для того, чтобы экспрессировать IGF-IR. Ингибирование также можно наблюдать с использованием опухолевых моделей, например клеток опухолей человека, введенных мыши.
Антитела по настоящему изобретению не ограничены каким-либо конкретным механизмом нейтрализации IGF-IR. Антитела против IGF-IR по настоящему изобретению могут связываться с внешней стороны с поверхностным клеточным рецептором IGF-IR, блокировать связывание лиганда (например, IGF-I или IGF-II) и последующую сигнальную трансдукцию, опосредованную через связанную с рецептором тирозинкиназу, и предотвращать фосфорилирование IGF-IR или других белков в прямом направлении в каскаде сигнальной трансдукции.
3) Антитела оказывают отрицательную негативную модуляцию IGF-IR. Количество IGF-IR, присутствующее на поверхности клетки, зависит от продуцирования, интернализации и разложения рецепторного белка. Количество IGF-IR, присутствующее на поверхности клетки, может быть измерено косвенно путем обнаружения интернализации рецептора или молекулы, связанной с рецептором. Например, интернализация рецептора может быть измерена путем контактирования клеток, которые экспрессируют IGF-IR, с меченым антителом. Мембранно-связанное антитело затем отделяют, собирают и считывают радиоактивность. Интернализованное антитело определяют посредством лизирования клеток и обнаружения метки в лизатах.
Другой способ заключается в прямом измерении количества рецептора, присутствующего на клетках после обработки с помощью антитела против IGF-IR или другого вещества, например с помощью анализа клеток, окрашенных в отношении поверхностной экспрессии IGF-IR, с использованием клеточного сортинга с возбуждением флуоресценции. Окрашенные клетки инкубируют при 37°С и измеряют интенсивность флуоресценции во времени. В качестве контроля часть окрашенных клеток можно инкубировать при 4°С (условия, при которых прекращается интернализация рецептора).
IGF-IR на клеточной поверхности может быть обнаружен и измерен с использованием другого антитела, которое является специфическим по отношению к IGF-IR и которое не блокирует или не конкурирует в связывании с тестируемым антителом (Burtrum et al. Cancer Res. 63: 8912-21 (2003)). Обработка клетки, экспрессирующей IGF-IR, антителом по изобретению приводит к снижению IGF-IR на клеточной поверхности. В предпочтительном варианте осуществления снижение в качестве ответной реакции на обработку антителом по изобретению составляет по крайней мере примерно 70%, более предпочтительно по крайней мере примерно 80% и еще более предпочтительно по крайней мере примерно 90%. Значительное снижение может наблюдаться по меньшей мере в течение четырех часов.
Другой мерой снижения модулирования является уменьшение общего рецепторного белка, присутствующего в клетке, и она отражает разрушение внутренних рецепторов. Соответственно обработка клеток (в особенности раковых клеток) антителами по изобретению приводит к снижению общего клеточного IGF-IR. В предпочтительном варианте осуществления снижение составляет по крайней мере примерно 70%, более предпочтительно по крайней мере примерно 80% и еще более предпочтительно по крайней мере примерно 90%.
Для лечения людей антитела согласно данному изобретению предпочтительно являются антителами человека. Альтернативно, антитела могут быть антителами приматов, не являющихся людьми, или других млекопитающих или представлять собой гуманизованные или химерные антитела. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело против IGF-IR включает один, два, три, четыре, пять и/или шесть гипервариабельных участка (CDR), выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47 и SEQ ID NO:49 (CDR1H, CDR2H, CDR3H, CDR1L, CDR2L, CDRL3 соответственно). В другом варианте осуществления антитело против IGF-IR включает один, два, три, четыре, пять и/или шесть гипервариабельных участка (CDR), выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57 и SEQ ID NO:59 (CDR1H, CDR2H, CDR3H, CDR1L, CDR2L, CDRL3 соответственно). Предпочтительно антитела (или их фрагменты) по настоящему изобретению имеют тяжелые цепи CDR, включающие SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37 и SEQ ID NO:39. Альтернативно и также предпочтительно, настоящие антитела, включая их фрагменты, имеют легкие цепи CDR, включающие SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47 и SEQ ID NO:49 или SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57 и SEQ ID NO:59. Одно такое антитело против IGF-IR представляет собой антитело IMC-A12 (WO 2005016970) IgG1 человека, имеющее вариабельный домен тяжелой цепи, представленный SEQ ID NO:41, и вариабельный домен легкой цепи, представленный SEQ ID NO:51. Другое предпочтительное антитело человека представляет собой IMC-2F8 (WO 2005016970), имеющее вариабельный домен тяжелой цепи идентично IMC-A12 и вариабельный домен легкой цепи, представленный SEQ ID NO:61. Полезные антитела дополнительно включают антитела против IGF-IR, которые конкурируют с IMC-A12 или IMC-2F8 за связывание с IGF-IR, а также антитела, которые связываются с другими эпитопами (т.е. антитела, которые связываются с другими эпитопами и проявляют свойства, как описано ранее, такие как блокирование лиганда, интерналиция рецептора и т.д., но не конкурируют с IMC-A12 или IMC-2F8).
В соответствии с изобретением антагонисты PDGFRα также можно использовать для лечения. Антагонист PDGFRα может представлять собой внеклеточный антагонист, или внутриклеточный антагонист, и можно использовать более одного антагониста. Внеклеточные антагонисты включают, но не ограничиваются указанным, белки или другие биологические молекулы, которые связываются с PDGFRα или одним или несколькими его лигандами (например, PDGF-АА, -АВ, -ВВ, -СС). В одном из вариантов осуществления данного изобретения внеклеточный антагонист ингибирует связывание PDGFRα с его лигандами. В одном варианте осуществления антагонист представляет собой антитело против PDGFRα, такое как, например, IMC-3G3. В другом варианте осуществления связывающий белок представляет собой растворимый лиганд, связывающий фрагмент PDGFRα. Внутриклеточные антагонисты PDGFRα могут представлять собой биологические молекулы, но обычно представляют собой небольшие молекулы. В одном варианте осуществления внутриклеточный антагонист PDGFRα представляет собой AG1296. AG1296 (Calbiochem) представляет собой ингибитор PDGFα, PDGFβ и с-KIT и также реагирует с Flt3. Другие небольшие молекулы, мишенью которых являются PDGFR, включают STI-571 (иматиниб мезилат, Gleevec®, Novartis) и SU11248 (сунитиниб малат, SUTENT®, Pfizer).
В одном из вариантов осуществления изобретения антитело против PDGFRα включает один, два, три, четыре, пять и/или шесть гипервариабельных участка (CDR), выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:14 (CDR1H, CDR2H, CDR3H, CDR1L, CDR2L, CDRL3 соответственно). Предпочтительно антитела (или их фрагменты) по настоящему изобретению имеют участки CDR, включающие SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4 и SEQ ID NO:6. Альтернативно и также предпочтительно, настоящие антитела или их фрагменты имеют участки CDR, включающие SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:14. Последовательности аминокислот в CDR указаны ниже в таблице 1.
Таблица 1 Участки CDR в IMC-3G3 |
||
Тяжелая цепь | ||
CDR1 | SSSYY | SEQ ID NO:2 |
CDR2 | SFFYTGSTYYNPSLRS | SEQ ID NO:4 |
CDR3 | QSTYYYGSGNYYGWFDR | SEQ ID NO:6 |
Легкая цепь | ||
CDR1 | RASQSVSSYLA | SEQ ID NO:10 |
CDR2 | DASNRAT | SEQ ID NO:12 |
CDR3 | QQRSNWPPA | SEQ ID NO:14 |
В другом варианте осуществления антитело против PDGFRα или его фрагмент имеет вариабельную область тяжелой цепи человека, представленную SEQ ID NO:8, и/или вариабельную область легкой цепи человека, представленную SEQ ID NO:16. IMC-3G3 представляет собой такое антитело, и оно проиллюстрировано в настоящем изобретении.
Предпочтительно антитела или и фрагменты по настоящему изобретению нейтрализуют PDGFRα. Связывание лиганда, например PDGF-АА, PDGF-АВ, PDGF-ВВ или PDGF-СС, с внеклеточным доменом PDGFRα стимулирует димеризацию рецептора, автофосфорилирование, активацию внутреннего, цитоплазматического тирозинкиназного домена и инициирование множества сигналов трансдукции, путем трансактивации вовлеченных в регулирование синтеза ДНК (активация гена), и продвижение или деление клеточного цикла. Антитела против PDGFRα обычно блокируют связывание лиганда и/или димеризацию рецептора и ингибируют одно или несколько из фосфорилирования, активации активности тирозинкиназы и сигнальной трансдукции. Антитела против PDGFRα по настоящему изобретению могут быть специфическими по отношению к внеклеточной лиганд-связывающей области PDGFRα и предотвращают связывание лиганда PDGFRα. Предпочтительно такие антитела против PDGFRα или их фрагменты связывают PDGFRα по крайней мере также прочно, как и природные лиганды PDGFRα. Альтернативно или дополнительно антитела могут быть специфическими в отношении области мономера рецептора, который в противном случае образует границу раздела димера рецептора. Такие антитела блокируют образование димера посредством связывания лиганда, ходя связывание лиганда с мономером рецептора может или не может блокироваться.
Как описано выше в отношении антител против IGF-IR, нейтрализация рецептора может быть определена множеством способов in vivo, in vitro и ex vivo. В одном варианте осуществления изобретения антитела против PDGFRα уменьшают фосфорилирование PDGFRα по крайней мере примерно на 75%. В других вариантах осуществления фосфорилирование снижается по крайней мере примерно на 85% или по крайней мере примерно на 90%. В одном из вариантов осуществления в результате ингибирования сигнальной трансдукции PDGFRα фосфорилирование или компонент пути сигнальной трансдукции в прямом направлении (например, Akt, p42/p44 и т.д.) снижается по крайней мере примерно на 40%, по крайней мере примерно на 60% или по крайней мере примерно на 80%. Нейтрализация рецептора может быть определена с использованием определенных лигандов (например, PDGF-АА, -АВ, -ВВ, -СС), смесей таких лигандов или препаратов, таких как аспираты костного мозга, которые включают разные PDGF наряду с другими стимулирующими факторами роста.
Нейтрализация PDGFRα включает ингибирование, снижение, дезактивацию и/или нарушение одной или нескольких данных видов активности, обычно связанных с сигнальной трансдукцией. Таким образом, нейтрализация PDGFRα имеет множество действий, включая ингибирование, снижение, дезактивацию и/или нарушение роста (пролиферации и дифференциации), ангиогенез (восстановление кровеносных сосудов, инвазия и метастазы) и подвижность клеток и метастазы (адгезия и инвазивность клеток).
Анализы ex vivo, как описано выше, также можно использовать для определения нейтрализации PDGFRα. Например клетки лейомиосаркомы человека SKLMS-1 (Американская коллекция типовых культур (АТСС), Rockville, MD; ATCC HTB-88TM) или клетки глиобластомы U118 (ATCC HTB-15TM), стимулированные PDGF-АА, можно использовать для анализа ингибирования PDGFRα. Ингибирование роста может быть оценено с использованием опухолевых клеток человека, экспрессирующих PDGFRα, инъецированных мышам SCID.
Настоящее изобретение не ограничено каким-либо конкретным механизмом нейтрализации PDGFRα. Антитела против PDGFRα по настоящему изобретению связываются на поверхности с клеточным поверхностным рецептором PDGFRα, блокируют связывание лиганда (например, PDGF-АА, PDGF-АВ, PDGF-ВВ, PDGF-СС), ингибируют фосфорилирование PDGFRα, ингибируют сигнальную трансдукцию, опосредованную рецептор-связанной тирозинкиназой и модулируют активность компонентов сигнальной трансдукции в прямом направлении. Комплекс рецептор-антитело также может быть интернализирован и разрушен, приводя к отрицательной негативной модуляции клеточного поверхностного рецептора. Матриксные металлопротеазы, которые действуют при инвазии и метастазах опухолевых клеток, также могут быть подавлены с помощью антител по настоящему изобретению. Более того, антитела по настоящему изобретению могут оказывать ингибирующее действие на продуцирование фактора роста и ангиогенез.
Как описано выше, антагонисты PDGFRα по изобретению можно использовать для лечения костных опухолей, включая метастатические костные опухоли. Другие типы опухолей, которые экспрессируют PDGFRα и могут подвергаться лечению согласно изобретению, включают, но не ограничиваются указанным, опухоли яичников, опухоли молочной железы, опухоли легких, гепатоклеточные опухоли, опухоли стромальных клеток желудочно-кишечного тракта, меланому, почечно-клеточную карциному, опухоли предстательной железы и саркому мягких тканей. Саркома мягких тканей возникает в таких тканях, как жир, мышцы, нервы, сухожилия и кровеносные и лимфатические сосуды. Обычно, опухолевые клетки сверхэкспрессируют PDGFRα. Экспрессия PDGFRα может быть определена, например, гистохимически или анализом РНК. Например, анализ по методу Скэтчарда (Scatchard) связывания радиоактивно меченного IMC-3G3 с клетками U118 и опухолевыми клетками SKLMS-1 показывает, что число молекул PDGFRα на клетках составляет примерно 500 и 2500 соответственно.
Антагонисты PDGFRα функционируют путем ингибирования сигнальной трансдукции посредством PDGFRα, экспрессируемого на самих опухолевых клетках, или путем ингибирования PDGFRα, экспрессированного на окружающих стромальных клетках, которые в противном случае подвергаются паракринной стимуляции посредством PDGFRα, экспрессированного из опухолевых клеток. Таким образом, такие антитела, как IMC-3G3 и другие антагонисты PDGFRα, могут использоваться для лечения опухолей, для которых характерна аутокринная и/или паракринная стимуляция PDGFRα.
Фрагменты антител согласно изобретению можно продуцировать путем расщепления целого антитела или путем экспрессии ДНК, кодирующей данный фрагмент. Фрагменты антител могут быть получены способами, описанными Lamoyi et al., J. Immunol. Methods, 56: 235-243 (1983), and Parham, J. Immunol. 131: 2895-2902 (1983). Такие фрагменты могут содержать один или оба фрагмента Fab или фрагмент F(ab')2. Такие фрагменты также могут содержать одноцепочечные фрагменты вариабельных областей антител, т.е. scFv, диатела или другие фрагменты антител. Способы продуцирования таких функциональных эквивалентов описаны в заявке РСТ WO 93/21319; заявке на европейский патент No. EP 239400; заявке PCT WO 89/09622; заявке на европейский патент EP 338745 и заявке на европейский патент EP 332424.
Предпочтительные клетки-хозяева для трансформации векторов и экспрессии антител по настоящему изобретению представляют собой клетки млекопитающих, например клетки COS-7, клетки яичника китайского хомячка (СНО) и клеточные линии лимфоидного происхождения, такие как лимфома, миелома (например, NS0) или клетки гибридомы. Альтернативно можно использовать другие эукариотические хозяева, такие как дрожжи.
Когда генную конструкцию желательно экспрессировать в дрожжах, подходящим селекционным геном для использования в дрожжах является ген trp1, присутствующий в плазмиде Yrp7 дрожжей. Stinchcomb et al., Nature, 282: 39 (1979); Kingsman et al., Gene, 7: 141 (1979). Ген trp1 обеспечивает селекционный маркер для мутантного штамма дрожжей, не обладающего способностью к росту в присутствии триптофана, например АТСС № 44076 или РЕР4-1. Jones, Genetics, 85: 12 (1977). Присутствие повреждения trp1 в геноме дрожжевой клетки-хозяина затем обеспечивает эффективное окружение для обнаружения трансформации по росту в отсутствие триптофана. Аналогично, Leu2-дефицитные штаммы дрожжей (АТСС 20622 или 38626) дополняют известными плазмидами, содержащими ген Leu2.
Трансформированные клетки-хозяева культивируют способами, известными в данной области, в жидкой среде, содержащей усвояемые источники углерода (углеводы, такие как глюкоза или лактоза), азота (аминокислоты, пептиды, белки и продукты их разложения, такие как пептоны, соли аммония или тому подобные) и неорганические соли (сульфаты, фосфаты и/или карбонаты натрия, калия, магния и кальция). Среда, кроме того, содержит, например, промотирующие рост вещества, такие как микроэлементы, например железо, цинк, марганец и тому подобные.
Высокоаффинные антитела против PDGFRα и IGF-IR согласно настоящему изобретению могут быть выделены из библиотеки фагового дисплея, сконструированной из генов вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи человека. Например, вариабельный домен по изобретению может быть получен из лимфоцита периферической крови, который содержит перестроенный ген вариабельной области. Альтернативно, части вариабельного домена, такие как области CDR и FW, могут быть получены из различных источников и рекомбинированы. Дополнительно, части вариабельных доменов (например, области FW) могут представлять собой синтетические консенсусные последовательности.
Антитела и фрагменты антител по настоящему изобретению могут быть получены, например, из природных антител или библиотек фаговых дисплеев Fab scFv. Понятно, что при получении отдельного домена антитела из антитела, включающего домен VH и VL, могут быть желательны некоторые замещения аминокислот вне CDR для усиления связывания, экспрессии или растворимости. Например, может оказаться желательной модификация аминокислотных остатков, которые в противном случае будут скрыты в области стыка VH-VL.
Кроме того, антитела и фрагменты антител по изобретению могут быть получены с помощью стандартных гибридомных методов (Harlow & Lane, ed., Antibodies: A Laboratory manual, Cold Spring Harbor, 211-213 (1998), который включен в данное описание в качестве ссылки) с использованием трансгенных мышей (например, мышей КМ от Medarex, San Jose, Calif.), которые продуцируют тяжелые гамма- и легкие каппа-цепи иммуноглобулина человека. В предпочтительном варианте осуществления существенная часть генома, продуцирующего антитело человека, вводится в геном мыши, и он становится дефицитным в продуцировании эндогенных мышиных антител. Можно провести иммунизацию таких мышей подкожно (s.c.) с использованием PDGFRα (обычно в полном адъюванте Фрейнда) при необходимости с повторной иммунизацией. Методы иммунизации хорошо известны в данной области.
Белок, используемый для идентификации связывающих IGF-IR антител по изобретению, предпочтительно представляет собой IGF-IR и более предпочтительно внеклеточный домен IGF-IR. Белок, используемый для идентификации связывающих PDGFRα антител по изобретению, предпочтительно представляет собой PDGFRα и более предпочтительно внеклеточный домен PDGFRα. Такие внеклеточные домены могут быть в свободном виде или конъюгированными с другими молекулами.
Настоящее изобретение также относится к выделенным полинуклеотидам, кодирующим описанные выше антитела или их фрагменты. Подробности, касающиеся антитела IMC-А12 против IGF-IR, описаны в WO 2005016970. В таблице 2 указаны последовательности нуклеиновых кислот для IMC-3G3.
Таблица 2 Последовательности нуклеотидов, кодирующие участки CDR в IMC-3G3 |
||
Тяжелая цепь | ||
CDR1 | agtagtagtt actac | SEQ ID NO:1 |
CDR2 | agtttctttt atactgggag cacctactac aacccgtccc tcaggagt | SEQ ID NO:3 |
CDR3 | cagtccacgtattactatgg ttcggggaat tattatggct ggttcgaccg c | SEQ ID NO:5 |
Легкая цепь | ||
CDR1 | agggccagtc agagtgttag cagctactta gcc | SEQ ID NO:9 |
CDR2 | gatgcatcca acagggccac t | SEQ ID NO:11 |
CDR3 | cagcagcgta gcaactggcc tccggcg | SEQ ID NO:13 |
ДНК, кодирующие антитела человека, могут быть получены путем рекомбинации ДНК, кодирующей постоянные области и вариабельные области человека, отличающиеся от CDR, полученные главным образом или исключительно из соответствующих областей антитела человека, и ДНК, кодирующей CDR, полученные из человека (SEQ ID NOS:1, 3 и 5 для вариабельного домена тяжелой цепи CDR и SEQ ID NOS:9, 11 и 13 для вариабельного домена легкой цепи CDR)
Подходящие источники ДНК, которые кодируют фрагменты антител, включают любую клетку, такую как гибридомы и клетки селезенки, которые экспрессируют антитело полной длины. Фрагменты можно использовать сами по себе в качестве эквивалентов антител или их можно рекомбинировать в эквиваленты, как описано выше. Делеции ДНК и рекомбинации, описанные в данном разделе, можно проводить известными способами, например, такими как описанные в перечисленных выше публикациях относительно эквивалентов антител, и/или другими стандартными методами рекомбинантных ДНК, такими как описаны ниже. Другим источником ДНК являются одноцепочечные антитела, получаемые из библиотеки фагового дисплея, как известно в данной области.
Дополнительно настоящее изобретение относится к векторам экспрессии, содержащим ранее описанные последовательности полинуклеотидов, функционально связанные с последовательностью экспрессии, промотор и последовательность-энхансер. Разработано множество векторов экспрессии для эффективного синтеза полипетида антител в прокариотических, таких как бактерии, и эукариотических системах, включая, но не ограничиваясь указанным, системы клеточных культур дрожжей и млекопитающих. Векторы по настоящему изобретению могут включать сегменты хромосомных, нехромосомных и синтетических последовательностей ДНК.
Можно использовать любой подходящий вектор экспрессии. Например, прокариотические векторы клонирования включают плазмиды E.coli, такие как colE1, pCR1, pBR322, pMB9, pUC, pKSM и RP4. Прокариотические векторы также включают производные фаговой ДНК, такие как М13 и другие нитевидные фаги с одноцепочечной ДНК. Примером вектора, используемого для дрожжей, является плазмида 2µ. Подходящие векторы для экспрессии в клетках млекопитающих включают хорошо известные производные SV40, аденовируса, последовательности ДНК, полученные из ретровируса и «челночные» векторы, полученные из комбинации функциональных векторов млекопитающих, таких как описанные выше, и функциональных плазмид и ДНК фагов.
Дополнительные эукариотические векторы экспрессии известны в данной области (например, P.J.Southern and P. Berg, J. Mol. Appl. Genet., 1, 327-341 (1982); Subramani et al., Mol. Cell. Biol., 1: 854-864 (1981); Kaufmann and Sharp, "Amplification And Expression of Sequences Cotransfected with a Modular Dihydrofolate Reductase Complementary DNA Gene", J. Mol. Biol. 159, 601-621 (1982); Kaufmann and Sharp, Mol. Cell. Biol. 159, 601-664 (1982); Scahill et al., "Expression And Characterization Of The Product Of A Human Immune Interferon DNA Gene In Chinese Hamster Ovary Cells," Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 80, 4654-4659 (1983); Urlaub and Chasin, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77, 4216-4220 (1980)).
Векторы экспрессии, используемые в настоящем изобретении, содержат по крайней мере одну контрольную последовательность экспрессии, которая функционально связана с последовательностью ДНК или фрагментом, который должен экспрессироваться. Контрольную последовательность вставляют в вектор для контроля и регулирования экспрессии клонированной последовательности ДНК. Примерами полезных контрольных последовательностей экспрессии являются система lac, система trp, система tac, система trc, основная операторная и промоторная области фага лямбда, контрольная область fd белка оболочки вируса, гликолитические промоторы дрожжей, например промотор для 3-фосфоглицераткиназы, промоторы кислой фосфатазы дрожжей, например Pho5, промоторы альфа-сопряженных факторов дрожжей и промоторы, полученные из полиомы, аденовируса, ретровируса и обезьяньего вируса, например ранние и поздние промоторы или SV40, и другие последовательности, известные для контроля экспрессии генов прокариотических или эукариотических клеток и их вирусов или их сочетаний.
Настоящее изобретение также относится к рекомбинантным клеткам-хозяевам, содержащим ранее описанные векторы экспрессии. Антитела по настоящему изобретению могут экспрессироваться в клеточных линиях, отличных от гибридом. Нуклеиновые кислоты, которые включают последовательность, кодирующую полипептид согласно изобретению, можно использовать для трансформации подходящей клетки-хозяина млекопитающего.
Клеточные линии, имеющие особое предпочтение, отбирают на основе высокого уровня экспрессии, значительной экспрессии представляющего интерес белка и минимального загрязнения белками хозяина. Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области и включают многие иммортализованные клеточные линии, такие как, но не ограничиваясь указанным, клетки NS0, клетки яичника китайского хомяка (СНО), клетки почек детенышей хомячка (ВНК) и многие другие. Подходящие дополнительные эукариотические клетки включают дрожжи и другие грибы. Полезные прокариотические хозяева включают, например, E. coli, такие как E. coli SG-936, E. coli HB 101, E. coli W3110, E. coli X1776, E. coli X2282, E. coli DEI и E. coli MRC1, Pseudomonas, Bacillus, такие как Bacillus subtilis, и Streptomyces.
Настоящие рекомбинантные клетки-хозяев можно использовать для продуцирования антитела или его фрагмента путем культивирования клеток в условиях, допускающих экспрессию антитела или его фрагмента, и очистки антитела или его фрагмента, от клеток-хозяев или среды, окружающей клетку-хозяина. Нацеливание экспрессируемого антитела или его фрагмента для выделения в рекомбинантных клетках-хозяевах может быть облегчено путем вставки сигнальной или секреторной лидерной последовательности, кодирующей пептид (см. Shokri et al., Appl Microbiol Biotechnol. 60(6):654-64 (2003), Nielsen et al., Prot. Eng. 10:1-6 (1997), и von Heinje et al., Nucl. Acids Res. 14:4683-4690 (1986)) на 5' конце рассматриваемого гена, кодирующего антитело. Такие секреторные лидерные пептидные элементы могут быть получены или из прокариотических, или из эукариотических последовательностей. Соответственно, является подходящим, чтобы используемые секреторные лидерные пептиды представляли собой аминокислоты, присоединенные к N-концу полипептида для непосредственного движения полипептида из цитозоля клетки-хозяина и секреции в среду.
Антитела по данному изобретению могут быть связаны с дополнительными аминокислотными остатками. Такие аминокислотные остатки могут представлять собой пептидную метку, возможно, для облегчения выделения. Также подразумеваются другие аминокислотные остатки для хоминга антител к определенным органам или тканям.
В другом варианте осуществления антитело по настоящему изобретению получают путем экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело в трансгенном животном, так что такое антитело экспрессируется и может быть выделено. Например, антитело может экспрессироваться в ткани специфическим образом, что облегчает выделение и очистку. В одном таком варианте осуществления антитело по изобретению экспрессируется в железе млекопитающего для секреции в период лактации. Трансгенные животные включают, но не ограничиваются указанным, мышей, козу и кролика.
Антитела, которые можно использовать согласно изобретению, включают полные иммуноглобулины, антигенсвязывающие фрагменты иммуноглобулинов, а также антигенсвязывающие белки, которые включают антигенсвязывающие домены иммуноглобулинов. Антигенсвязывающие фрагменты иммуноглобулинов включают, например, Fab, Fab' и F(ab')2. Разработаны другие форматы антитела, которые сохраняют специфичность связывания, но обладают другими характеристиками, которые могут оказаться желательными, включая, например, биспецифичность, мультивалентность (более двух сайтов связывания), компактный размер (например, только связывающий домен).
Одноцепочечные антитела не имеют части или всех постоянных доменов целых антител, из которых они получены. Следовательно, они могут преодолевать некоторые проблемы, связанные с применением целых антител. Например, одноцепочечные антитела имеют тенденцию не проявлять некоторые нежелательные взаимодействия между постоянными областями тяжелой цепи и другими биологическими молекулами. Дополнительно, одноцепочечные антитела существенно меньше, чем целые антитела, и могут обладать большей проницаемостью, чем целые антитела, что дает одноцепочечным антителам возможность более эффективной локализации и связывания с целевыми антиген-связывающими сайтами. Кроме того, относительно небольшой размер одноцепочечных антител приводит к тому, что они с меньшей вероятностью вызывают у реципиента нежелательную иммунную ответную реакцию.
Множество одноцепочечных антител, где каждая цепь содержит один домен VH и один домен VL, ковалентно связанные первым пептидным линкером, может быть ковалентно связано с помощью по крайней мере одного или нескольких пептидных линкеров с образованием мультивалентных одноцепочечных антител, которые могут быть моноспецифическими или мультиспецифическими. Каждая цепь мультивалентного одноцепочечного антитела включает вариабельный фрагмент легкой цепи и вариабельный фрагмент тяжелой цепи, и она связана с помощью пептидного линкера с по крайней мере одной другой цепью. Пептидный линкер состоит по крайней мере из пятнадцати остатков аминокислот. Максимальное число остатков аминокислот составляет примерно сто.
Два одноцепочечных антитела могут быть объединены, образуя диатело, также известное как двухвалентный димер. Диатела имеют две цепи и два сайта связывания и также могут быть моноспецифическими или биспецифическими. Каждая цепь диатела включает домен VH, связанный с доменом VL. Домены соединены линкерами, которые являются достаточно короткими для предотвращения образования пар между доменами одной и той же цепи, таким образом управляя образованием пар между комплементарными доменами различных цепей для создания заново двух антиген-связывающих сайтов.
Три одноцепочечных антитела могут быть объединены, образуя триатела, также известные как трехвалентные тримеры. Триатела конструируют с участием аминокислотного конца домена VL или VH, непосредственно связанного с карбоксильным концом домена VL или VH, т.е. без какой-либо линкерной последовательности. Триатело имеет три «головы» Fv с полипептидами, расположенными циклическим образом по типу голова-к-хвосту. Возможная конформация триатела является планарной с тремя сайтами связывания, расположенными на плоскости под углом в 120 градусов между друг другом. Триатела могут быть моноспецифическими, биспецифическими или триспецифическими.
Таким образом, антитела по изобретению и их фрагменты включают, но не ограничиваются указанным, природные антитела, двухвалентные фрагменты, такие как (Fab')2, одновалентные фрагменты, такие как Fab, одноцепочечные антитела, одноцепочечные Fv (scFv), однодоменные антитела, мультивалентные одноцепочечные антитела, диатела, триатела и тому подобные, которые специфическим образом связываются с антигенами.
Антитела против IGF-IR и PDGFRα или фрагменты антитела, которые могут быть интернализованы при связывании с клетками, несущими IGF-IR (WO 2005016970) или PDGFRα, могут быть химически или биосинтетическим связанными с противораковыми агентами. Противораковые агенты, связанные с таким антителом, включают любые агенты, которые разрушают или повреждают опухоль, с которой антитело было связано, или окружение клетки, с которой антитело было связано. Например, противораковый агент представляет собой токсический агент, такой как химиотерапевтический агент или радиоактивный изотоп. Походящие химиотерапевтические агенты известны специалистам в данной области и включают антрациклины (например, дауномицин и доксорубицин), метотрексат, виндезин, неокарциностатин, цисплатин, хлорамбуцил, цитозинарабинозид, 5-фторуридин, мелфалан, рицин и калихеамицин. Химиотерапевтические агенты связывают с антителом с помощью обычных способов (см., например, Hermentin and Seiler, Behring Inst. Mitt. 82: 197-215 (1988)).
Подходящие радиоактивные изотопы для применения в качестве противораковых агентов также известны специалистам в данной области. Например, используют 131I и 211At. Данные изотопы присоединяют к антителу с помощью обычных способов (см., например, Pedley et al., Br.J.Cancer 68, 69-73 (1993)).
Альтернативно, противораковый агент, который присоединен к антителу, представляет собой фермент, который активирует пролекарство. В таком случае применяют пролекарство, которое остается в его неактивной форме до момента достижения сайта-мишени, где оно превращается в цитотоксичную форму. На практике, конъюгат антитело-фермент вводят пациенту и дают ему возможность локализоваться в области, где ткань подвергают лечению. Затем пациенту вводят пролекарство, так что конверсия в цитотоксичное лекарство происходит в области той ткани, которая подвергается лечению.
Другие противоопухолевые агенты включают цитокины, такие как интерлейкин-2 (IL-2), интерлейкин-4 (IL-4) или альфа-фактор некроза опухоли (TNF-α). Антитело направляет цитокин к опухоли так, что происходит опосредованное цитокином повреждение или разрушение опухоли, не затрагивающее другие ткани. Цитокин может быть связан с антителом на ДНК-уровне с использованием обычных методов рекомбинантных ДНК.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела анти-IGF-IR или анти-PDGFRα вводят в сочетании с одним или несколькими противоопухолевыми агентами. Примеры комбинированной терапии приведены, например, в патенте США № 6217866 (Schlessinger et al.) (Антитела против EGFR в сочетании с противоопухолевыми агентами); WO 99/60023 (Waksal et al.) (Антитела против EGFR в сочетании с облучением). Можно использовать любой подходящий противоопухолевый агент, такой как химиотерапевтический агент, облучение или их комбинация. Противоопухолевый агент может представлять собой алкилирующий агент или антиметаболит. Примеры алкилирующих агентов включают, но не ограничиваются указанным, цисплатин, циклофосфамид, мелфалан и дакарбазид. Примеры антиметаболитов включают, но не ограничиваются указанным, доксорубицин, даунорубицин и паклитаксел, гемцитабин.
Полезные противоопухолевые агенты также включают митотические ингибиторы, такие как таксаны доцетаксел и паклитаксел. Ингибиторы топоизомеразы представляют собой другой класс противоопухолевых агентов, которые можно использовать в сочетании с антителами по изобретению. Они включают ингибиторы топоизомеразы I или топоизомеразы II. Ингибиторы топоизомеразы I включают иринотекан (СРТ-11), аимнокамптотецин, камптотецин, DX-8951f, топотекан. Ингибиторы топоизомеразы II включают этопозид (VP-16) и тенипозид (VM-26). В настоящее время другие вещества проходят оценку ингибирующей активности в отношении топоизомеразы и эффективности в качестве противоопухолевых агентов. В предпочтительном варианте осуществления ингибитор топоизомеразы представляет собой иринотекан (СРТ-11).
В конкретном варианте осуществления данного изобретения антитело против IGF-IR вводят в сочетании с доцетакселом. В другом варианте осуществления данного изобретения антитело против PDGFRα вводят в сочетании с доксорубицином.
В том случае, если противоопухолевым агентом является облучение, источник облучения может быть либо внешним (внешняя лучевая терапия - EBRT), либо внутренним (брахитерапия - ВТ) относительно пациента, подвергаемого лечению. Доза применяемого противоопухолевого агента зависит от множества факторов, включая, например, тип агента, тип и тяжесть опухоли, подвергаемой лечению, и путь применения. Однако следует подчеркнуть, что настоящее изобретение не ограничено какой-либо конкретной дозой.
Лечение с использованием антитела (анти-IGF-IR или анти-PDGFRα) и антитела плюс противоопухолевый агент можно использовать для пациентов, которые получают адъювантную гормональную терапию (например, при раке молочной железы) или андроген-подавляющую терапию (например, при раке предстательной железы).
Антагонисты против IGF-IR и PDGFRα по изобретению можно применять совместно или вводить вместе с антагонистами рецепторов, которые нейтрализуют другие рецепторы, вовлеченные в рост или ангиогенез опухоли. Например, в одном из вариантов осуществления данного изобретения антитело против IGF-IR и антитело против PDGFRα вводят совместно. В одном варианте осуществления, где опухолевая клетка-мишень экспрессирует как IGF-IR, так и PDGFRα, элементы обычной сигнальной трансдукции активируются путем сигнальной трансдукции через каждый из рецепторов. Хотя ингибирование одного рецептора обычно будет приводить к понижению активации обычных компонентов в прямом направлении, ингибирование обоих рецепторов будет дополнительно понижать активацию. В другом варианте осуществления определенные клетки опухоли или окружающей ткани экспрессируют значительные количества одного рецептора, а другие клетки экспрессируют значительные количества второго рецептора. Совместное применение антагонистов снижает рост опухолевых клеток и паракринную стимуляцию окружающих клеток.
Биспецифическое антитело может быть создано в качестве альтернативы совместному применению. Существует множество биспецифических антител, которые сконструированы для введения различных желаемых характеристик. Например, биспецифические диатела имеют минимальный размер. Биспецифические антитела с четырьмя антигенными сайтами связывания (два для каждой специфичности связывания) имеют склонность связывания, аналогичную таковой для соответствующих природных антител. Определенные биспецифические антитела включают области Fc, таким образом сохраняя эффекторные функции (например, комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC) и антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC)) природных антител. В WO 01/90192 описываются IgG-подобные тетравалентные антитела. В WO 2006/020258 описывается тетравалентное антитело, которое включает два диатела и сохраняет эффекторные функции.
В другом варианте осуществления антитело против IGF-IR, или антитело против PDGFRα, или другой антагонист используют в сочетании с антагонистом рецептора, который специфически связывается с рецептором эпидермального фактора роста (например, EGFR, Her2/erB2, erbB3, erbB4). Особенно предпочтительными являются антиген-связывающие белки, которые связываются с внеклеточным доменом EGFR и блокируют связывание одного или нескольких его лигандов и/или нейтрализуют индуцированную лигандом активацию EGFR. Антагонисты EGFR также включают антитела, которые связываются с лигандом EGFR и ингибируют связывание EGFR с его лигандом. Лиганды EGFR включают, например, EGF, TNFα, амфирегулин, гепарин-связывающий EGF (НВ-EGF) и бетацеллюлин. Предполагают, что EGF и TNFα являются основными эндогенными лигандами, которые вызывают EGFR-опосредованную стимуляцию, хотя было показано, что TNFα является более эффективным в промотировании ангиогенеза. Антагонисты EGFR также включают вещества, которые ингибируют димеризацию EGFR с другими субъединицами рецептора EGFR (т.е. гомодимеры EGFR) или гетеродимеризацию с другими рецепторами фактора роста (например, HER2). Антагонисты EGFR дополнительно включают биологические молекулы и небольшие молекулы, такие как синтетические ингибиторы киназы, которые воздействуют непосредственно на цитоплазматический домен EGFR, ингибируя EGFR-опосредованную сигнальную трансдукцию. Erbitux® (цетуксимаб) является примером антагониста EGFR, который связывается с EGFR и блокирует связывание с лигандом. Одним из примеров небольших молекул, являющихся антагонистами EGFR, является IRESSATM (ZD1939), который представляет собой производное хиноксалина, которое функционирует в качестве АТФ-миметика для ингибирования EGFR. См. патент США № 5616582 (Zeneca Limited), WO 96/33980 (Zeneca Limited) на стр.4; также см. Rowinsky et al., тезисы 5, представленные на 37 ежегодном симпозиуме ASCO, Сан-Франциско, СА, 12-15 мая 2001 г.; Anido et al., тезисы 1712, представленные на 37 ежегодном симпозиуме ASCO, Сан-Франциско, СА, 12-15 мая 2001 г. Другим примером небольшой молекулы - антагониста EGFR, является Tarceva® (OSI-774), который представляет собой производное 4-(замещенный фениламино)хинозалина [гидрохлорид 6,7-бис(2-метоксиэтокси)хиназолин-4-ил]-(3-этинилфенил)амина], ингибирующее EGFR. См. WO 96/30347 (Pfizer Inc.), например, начиная со стр.2, строка 12, по стр.4, строка 34, и стр.19, строки 14-17. Также см. Moyer et al., Cancer Res., 57: 4838-48 (1997); Pollack et al., J.Pharmacol., 291: 739-48 (1999). Tarceva® может действовать путем ингибирования фосфорилирования EGFR и его расположенных в прямом направлении (5'-3') PI3/Akt и МАР (митоген активированный протеин)киназный путей сигнальной трансдукции, приводя к р27-опосредованной остановке клеточного цикла. См., Hidalgo et al., тезисы 281, представленные на 37 ежегодном симпозиуме ASCO, Сан-Франциско, СА, 12-15 мая 2001 г.
Также сообщалось, что другие небольшие молекулы также ингибируют EGFR, многие из которых, как предполагается, являются специфическими в отношении домена тирозинкиназы в EGFR. Некоторые примеры таких небольших молекул-антагонистов EGFR, описаны в WO 91/116051, WO 96/30347, WO 96/33980, WO 97/27199 (Zeneca Limited), WO 97/30034 (Zeneca Limited), WO 97/42187 (Zeneca Limited), WO 97/49688 (Pfizer Inc.), WO 98/33798 (Warner Lambert Company), WO 00/18761 (American Cyanamid Company) и WO 00/31048 (Warner Lambert Company). Примеры конкретных небольших молекул-антагонистов EGFR включают Cl-1033 (Pfizer), который представляет собой хинозалиновый (N-[4-(3-хлор-4-фтор-фениламино)-7-(3-морфолин-4-ил-пропокси)хиназолин-6-ил]акриламид) ингибитор тирозинкиназ, в частности EGFR, и описан в WO 00/31048 на стр.8, строки 22-6; PKI166 (Novartis), который представляет собой пирролопиримидиновый ингибитор EGFR и описан в WO 97/27199 на страницах 10-12; GW2016 (GlaxoSmithKline), который представляет собой ингибитор EGFR и HER-2; EKB569 (Wyeth), который, как сообщается, ингибирует рост опухолевых клеток, которые сверхэкспрессируют EGFR или HER-2 in vitro и in vivo; AG-1478 (Трифостин), который представляет собой небольшую молекулу хиназолина, которая ингибирует сигналы как от EGFR, так и erbB-2; AG-1478 (Sugen), который представляет собой бисубстратный ингибитор, который также ингибирует протеинкиназу CK2; PD 153035 (Parke-Davis), который, как сообщалось, ингибирует активность EGFR-киназы и рост опухоли, индуцирует апоптоз клеток в культуре и усиливает цитотоксичность цитотоксичных химиотерапевтических агентов; SPM-924 (Schwarz Pharma), который представляет собой ингибитор тирозинкианзы, направленный на лечение рака предстательной железы; СР-546б989 (OSI Pharmaceuticals), который по сообщению является ингибитором ангиогенеза для лечения плотных опухолей; ADL-681, который представляет собой ингибитор EGFR-киназы, предназначенный для лечения рака; PD 158780, который представляет собой пиридопиримидин, который, как сообщается, ингибирует скорость роста ксенотрансплантированных опухолей А4431 у мышей; СР-358б774, который представляет собой хиназолин, который, как сообщалось, ингибирует автофосфорилирование в ксенотрансплантатах HN5 у мышей; ZD1839, который представляет собой хиназолин, который, как сообщалось, обладает противоопухолевый активностью на мышиной модели ксенотрансплантатов, включая рак наружных женских половых органов, NSCLC, предстательной железы, яичников и колоректальный рак; CGP 59326A, который представляет собой пирролопиримидин, который, как сообщалось, ингибирует рост EGFR-положительных ксенотрансплантатов у мышей; PD 165557 (Pfizer); CGP54211 и CGP53353 (Novartis), которые представляют собой дианилинофталимиды. Ингибиторы тирозинкиназы EGFR природного происхождения включают генистеин, гербимицин А, кверцетин и эрбстатин.
Дополнительные небольшие молекулы, которые, как сообщалось, ингибируют EGFR и, следовательно, входят в объем настоящего изобретения, представляют собой трициклические соединения, такие как соединения, описанные в патенте США № 5679683; производные хиназолина, такие как производные, описанные в патенте США № 5616582, и соединения индола, такие как соединения, описанные в патенте США № 5196446.
Другой рецептор, который может представлять собой мишень наряду с IGF-IR и PDGFRα, представляет собой рецептор сосудистого эпителиального фактора роста (VEGFR). В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения антитело против IGF-IR и антитело против PDGFRα используют в сочетании с антагонистом VEGFR. В одном варианте осуществления используемые антагонисты специфически связываются с рецептором VEGFR-1/Flt-1. В другом варианте осуществления антагонист VEGFR специфически связывается с рецептором VEGFR-2/KDR. Особенно предпочтительными являются антиген-связывающие белки, которые связываются с внеклеточным доменом VEGFR-1 или VEGFR-2 и блокируют связывание посредством их лигандов (VEGFR-2 стимулируется более сильно посредством VEGF; VEGFR-1 стимулируется более сильно посредством PlGF, но также и VEGF) и/или нейтрализуют индуцированную лигандом активацию. Например, IMC-1121 представляет собой антитело человека, которое связывается с VEGFR-2 и нейтрализует его (WO 03/075840; Zhu). Другим примером является MAb 6.12, которое связывается с растворимым и экспрессируемым на поверхности клетки VEGFR-1. ScFv 6.12 включает VL и VH домены мышиного моноклонального антитела Mab 6.12. Гибридомная клеточная линия, продуцирующая MAb 6.12, депонирована в АТСС под номером РТА-3344 по условиям Будапештского соглашения о депонировании микроорганизмов в целях патентования и его положении (Budapest Treaty). В другом варианте осуществления антагонист VEGFR связывается с лигандом VEGFR и блокирует активацию VEGFR с помощью данного лиганда. Например, Avastin® (бевацизумаб) представляет собой антитело, которое связывает VEGF.
Другие примеры факторов роста, вовлеченных в генез опухолей, представляют собой фактор роста нервов (NGFR) и фактор роста фибробластов (FGFG).
В дополнительном альтернативном варианте осуществления антитела против IGF-IR и PDGFRα можно применять в сочетании с одним или несколькими подходящими адъювантами, такими как, например, цитокины (например, IL-10 и IL-13) или другими иммунными стимуляторами, такими как, но не ограничиваясь указанным, хемокин, связанные с опухолями антигены и пептиды. См., например, Larrivee et al. выше. Однако следует принимать во внимание, что применение только антитела против IGF-IR или против PDGFRα является достаточным для предотвращения, ингибирования или уменьшения прогрессирования опухоли терапевтически эффективным образом.
При комбинированной терапии антитело против IGF-IR или против PDGFRα вводят до, во время или после лечения с использованием другого агента, а также любой их комбинации, т.е. перед и во время, перед и после, во время и после или до, во время и после начала терапии с использованием противоопухолевого агента. Например, антитело можно вводить между 1 и 30 днями, предпочтительно 3 и 20 днями, более предпочтительно между 5 и 12 днями до начала лучевой терапии. В предпочтительном варианте осуществления данного изобретения химиотерапию проводят одновременно, более предпочтительно после терапии с использованием антитела.
В настоящем изобретении для введения антител по изобретению можно использовать любой подходящий способ, и необязательно совместно вводить противоопухолевые агенты и/или антагонисты других рецепторов. Режимы применения противоопухолевого агента, используемые согласно изобретению, включают любой режим, который, как предполагается, является оптимально пригодным для лечения пациента с опухолевым заболеванием. Различные злокачественные новообразования могут потребовать применения специфических противораковых антител и специфических противоопухолевых агентов, которые будут определяться с позиций конкретного пациента. Пути введения включают, например, пероральное, внутривенное, внутрибрюшинное, подкожное или внутримышечное введение. Доза вводимого антагониста зависит от множества факторов, включая, например, тип антагониста, тип и тяжесть опухоли, подвергаемой лечению, и путь введения антагонистов. Однако следует подчеркнуть, что настоящее изобретение не ограничено каким-либо конкретным способом или путем введения.
Специалисту в данной области будет понятно, что дозировки и частота лечения зависят от переносимости его индивидуальным пациентом и от фармакологических и фармакокинетических свойств используемого блокирующего или ингибирующего агента. Идеально, желательно достигать насыщенной фармакокинетики для агента. Доза нагрузки как для антитела против IGF-IR, так и антитела против PDGFRα может колебаться, например, от примерно 10 до примерно 1000 мг/м2, предпочтительно от примерно 200 до примерно 400 мг/м2. Это можно осуществлять с применением нескольких дополнительных суточных или недельных дозировок, колеблющихся, например, от примерно 200 до примерно 400 мг/м2. Проводят контроль побочных эффектов, проявляющихся у пациента, и лечение останавливают, когда такие побочные действия становятся тяжелыми.
Специалисту в данной области также известно, каким образом следует контролировать ход лечения для определения эффективной дозы. Для костных метастазов, являющихся результатом рака предстательной железы, одним из таких способов является контроль уровней PSA. Другие способы контролирования костных метастазов включают сканирование костей скелета и MRI.
Для пациентов, для которых существует риск или проблематичность индуцированной лечением рака потери костной массы (CTIBL) (например, пациенты, которые получают адъювантную гормональную терапию при раке молочной железы или андроген-подавляющую терапию при раке предстательной железы), любое вышеуказанное лечение может быть дополнено введением агентов для предотвращения CTIBL, таких как бисфосфонаты. Бисфосфонаты включают, например, клодронат, ризедронат и золедроновую кислоту.
В тексте данной заявки были приведены ссылки на различные публикации, процитированные тексты, руководства, технические справочники, патенты и патентные заявки. Указания и описания данных публикаций, патентов, патентных заявок и других документов во всей своей полноте включены в данное описание в качестве ссылки с целью более полного описания состояния данной области, к которой относится настоящее изобретение.
Следует понимать и ожидать того, что специалист в данной области может осуществить вариации принципов раскрытого здесь изобретения, и предполагается, что такие модификации должны быть включены в объем настоящего изобретения.
Следующие примеры дополнительно иллюстрируют изобретение, но их не следует рассматривать как ограничивающие каким-либо образом объем изобретения. Подробное описание обычных способов, таких как те, которые используются при конструировании векторов и плазмид и экспрессии антител и фрагментов антител, может быть получено из многочисленных публикаций, включая Sambrook, J. et al., (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2na ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press; Coligan, J. et al. (1994) Current Protocols in Immunology, Wiley & Sons, Incorporated; Enna, S.J. et al. (1991) Current Protocols in Pharmacology, Wiley & Sons, Bonifacino, J.S. et al. (1999) Current Protocols in Cell Biology, Wiley & Sons. Все отмеченные здесь ссылки включены в данное описание во всей своей полноте.
Примеры
Пример 1
Влияние IMC-A12 и доцетаксела на рост опухоли. Частицы опухолей (от 20 до 30 мм3) андроген-независимых (AI) клеток LuCaP 35V имплантировали подкожно (s.c.) кастрированным мышам SCID возрастом 32 недели соответственно, как описано ранее (4). Когда имплантированные опухоли достигали объема 150-200 мм3, животных случайным образом делили на четыре группы для исследования метода лечения. Животные в группе 1 получали лечение в виде доцетаксела в дозе 20 мг/кг. Животные в группе 2 получали доцетаксел в дозе 10 мг/кг. Животные в группе 3 получали комбинированное лечение, состоявшее из 10 мг/кг доцетаксела и 40 мг/кг A12. Животные в группе 4 получали комбинированное лечение, состоявшее из 20 мг/кг доцетаксела и 40 мг/кг A12. Всю обработку животных проводили внутрибрюшинно (i.p.). Доцетаксел вводили один раз в неделю. А12 вводили три раза в неделю. Все животные получали обработку в течение четырех недель, и за ними наблюдали дополнительно в течение четырех недель перед эвтаназией. Опухоли измеряли дважды в неделю и объем опухоли оценивали по формуле: объем = LxW2/2. В соответствии с одобренным протоколом IACUC по работе с животными Университета Вашингтона некоторых животных подвергали эвтаназии в более раннее время, когда опухоль достигала объема 1000 мм3 или когда потеря веса у животных превышала 20% от первоначальной массы тела. Животных взвешивали дважды в неделю. Образцы крови отбирали из глазной пазухи еженедельно. Отделяли сыворотку крови и определяли уровень PSA с использованием общего анализа PSA Imx (Abott Laboratories, Abott Park, IL). BrdU вводили в опухоли за 1 час перед эвтаназией животных для оценки in vivo скорости пролиферации опухолевых клеток.
После эвтаназии опухоли собирали и делили на две равные части. Одну часть опухоли фиксировали в 10% нейтральном буферном формалине (NFB) и заливали парафином. Для иммуногистохимического окрашивания (IHC) делали пятимикронные срезы. Оставшуюся часть опухолей механически разделяли на отдельные клетки, разрубая на мелкие кусочки и фильтруя через нейлоновые сита 70 мкм.
Как показано на фиг.1, ксенотрансплантат LuCaP 35V агрессивно рос в мышах при средней скорости роста 362,0±72,0 мм3/неделю в отсутствие какого-либо лечения. Всех животных в группе без обработки пришлось убить в течение трех недель после начала лечения в экспериментальных группах, поскольку объем опухоли превышал 1000 мм3. Когда животные получали только 40 мкг/кг А12, скорость роста опухоли снижалась до 192,7±35,6 мм3/неделю во время лечения. Когда животным давали доцетаксел в дозе 10 мг/кг, скорость роста опухоли LuCaP 35V снижалась до среднего значения 29,6 ± 6,1 мм3/неделю. Когда доцетаксел давали в сочетании с обработкой А12, скорость роста опухоли LuCaP 35V дополнительно снижалась до среднего значения 7,9 ± 1,0 мм3/неделю (фиг.1,b). Ингибирующее действие доцетаксела в сочетании с А12 сохранялось в течение четырех недель после прекращения обработки. Когда животные получали более высокую дозу доцетаксела (10 мг/кг) в независимости от комбинирования с А12 или без него, объем опухоли не увеличивался во время четырехнедельного периода обработки; напротив, наблюдалась тенденция снижения объема опухолей. Однако в течение четырех недель после окончания обработки снижение объема опухолей продолжалось в группе животных, получавших доцетаксел в сочетании с А12. Напротив, объем опухолей увеличивался со средней скоростью 27,0 ± 16,1 мм3/неделю в группе животных, получавших только доцетаксел. Данные результаты позволили предположить, что при данной дозе доцетаксела комбинированное лечение вместе с А12 может увеличить ингибирующее действие доцетаксела на рост опухоли во время лечения и после прекращения лечения.
PSA представляет собой клинический параметр, обычно используемый для оценки роста опухоли простаты. Уровни PSA в сыворотке крови измеряли у животных во время и после обработки. Как показано на фиг.1,с, у животных, обработанных А2 и доцетакселом или только доцетакселом в дозе 20 мг/кг, не наблюдалось значительных изменений в уровне PSA в сыворотке крови в течение четырехнедельного периода обработки, что согласуется с подавлением роста опухоли. После прекращения обработки было показано, что уровень PSA в сыворотке крови повышается у животных, получавших только доцетаксел, и, напротив, соответствует или даже снижается у животных, обработанных доцетакселом в сочетании с А12. Эти данные соответствуют продолжающемуся ингибированию роста опухоли после лечения у животных, получавших доцетаксел и А12.
Индуцирование апоптоза с помощью доцетаксела в сочетании с антителом против IGF-IR. Комбинированное действие in vivo обработки доцетакселом и А12 на клеточный цикл и выживаемость клеток в конечный момент эксперимента измеряли путем анализа деоксинуклеотидилтрансфераза-опосредованного введения концевой метки (TUNEL) и окрашивания пропидием (PI) с использованием набора Apop-Direct (BD, BioScience), как описано ранее. Кратко, 1х106 клеток из суспензии отдельных клеток фиксировали в 10% нейтральном буферном формалине с последующей обработкой 70% этиловым спиртом при 20°С в течение 30 минут. После нескольких промывок у клеток нарушали проницаемость мембран с использованием 0,1% Triton X-100 и инкубировали с FITC-конъюгированным dUTP и ферментом концевой деоксинуклеотидилтрансферазы (TdT) при 37°С в течение 1 часа с последующим инкубированием с буфером PI/RNase (100 мкг/мл PI, 50 мкг/мл RNase) при комнатной температуре в течение 60 минут. Образцы анализировали методом проточной цитометрии с использованием BD FACscan. Данные анализировали с использованием программного обеспечения CellQuestPRO.
Через четыре недели после прекращения обработки апоптоз обнаруживали для значительного процента опухолей у животных, которые получали доцетаксел (66,7% в группе, получавшей доцетаксел в дозе 10 мг/кг, и 77,8% в группе, получавшей доцетаксел в дозе 20 мг/кг) в сочетании с А12 (фиг.2,b и таблица 1) вне зависимости от использованной дозировки доцетаксела. Среднее число апоптических случаев для данных опухолей происходило в части 15,0±4,3%. Апоптоза в опухолях не обнаруживалось у животных, которые получали только доцетаксел. Вместо этого, большинство (88% в группе, получавшей доцетаксел в дозе 10 мг/кг, и 100% в группе, получавшей доцетаксел в дозе 20 мг/кг) опухолей возобновляло нормальный клеточный цикл (фиг.2, а и таблица 3).
Таблица 3 Цикл опухолевых клеток и активность выживания на момент умерщвления |
||||
Обработка | Апоптоз (%) | G1 остановка (%) | G2 остановка (%) | Нормальный цикл |
Нет | 0 | 0 | 0 | 100 |
Доц (20) | 0 | 0 | 0 | 100 |
Доц (20) + А12 | 66,7 | 33,3 | 0 | 0 |
Доц (10) | 0 | 0 | 12 | 88 |
Доц (10) + А12 | 77,8 | 0 | 0 | 12,2 |
Для дальнейшей оценки способности опухолевых клеток к пролиферации после окончания различных видов обработки парафиновые срезы окрашивали антителом против BrDu. Образцы опухолей фиксировали в 10% NBF, заливали парафином и нарезали на 5 мкм срезы на предметном стекле микроскопа. После депарафинизации и восстановления влагосодержания антигены восстанавливали с использованием 0,01 М лимонной кислоты (рН 6,0) при 95°С в течение 2х5 мин. Предметные стекла оставляли охлаждаться в течение 30 мин, после чего промывали PBS. Эндогенную пероксидазную активность гасили путем инкубирования с 0,3% Н2О2 в метаноле в течение 15 минут. После блокирования 1,5% нормальной козьей сывороткой в PBS, содержащем 0,05% Tween 20 (PBST), в течение 1 часа стекла инкубировали с мышиным антителом против BrDu (1 мкг/мл) в течение 1 часа с последующим последовательным инкубированием с биотинилированным козьим антимышиным IgG в течение 30 минут, меченным пероксидазой авидином в течение 30 минут (Santa Cruz Biotechnology) и диаминобензидином (DAB)/хромогенным субстратом пероксида водорода (Vector Laboratories, Burlingame, CA) в течение 5-10 минут. Все стадии инкубирования проводили при комнатной температуре. Стекла подвергали контрастному окрашиванию с использованием гематоксилина (Sigma) и покрывали пермаунтом (Fisher Scientific, Fair Lawn, New Jersey). Для отрицательного контроля мышиный IgG (Vector Laboratories) использовали вместо первичного антитела против BrDu. Стекла исследовали под микроскопом Zeiss и получали цифровые изображения. Число меченных BrDu ядер и общее число ядер подсчитывали по 10 случайным обзорам для каждого среза. Рассчитывали индекс пролиферации по числу положительных в отношении BrDu ядер, деленному на общее число ядер. Для каждого стекла подсчитывали 10 областей. Окрашивание H&E проводили с использованием гематоксилина и эозина (Richard Allen, Kalamazoo, MI).
У животных, которые получали доцетаксел и А12, поглощение BrDu было существенно ниже, чем у животных, получавших только ту же самую дозу доцетаксела (фиг.3). Эти данные по внедрению BrDu согласуются с вышеуказанными наблюдениями для клеточного цикла и апоптоза, позволяя предположить, что А12 существенно усиливает цитотоксичность доцетаксела.
Дифференциальное регулирование экспрессии гена в опухолях, обработанных доцетакселом в сочетании с антителом против IGF-IR относительно самого доцетаксела. Для определения потенциальных механизмов для существенно усиленного посредством А12 действия доцетаксела исследовали экспрессию IGF-IR во всех собранных опухолях анализом методом иммуногистохимии и проточной цитометрии. Между всеми группами обработки не было различия в поверхностной экспрессии IGF-IR по сравнению с контрольной группой (данные не показаны). Ген экспрессии после обработки исследовали с использованием анализов микрорасположения кДНК в опухолях, полученных от животных, которые получали 20 мг/кг доцетаксела и 20 мг/кг доцетаксела в сочетании с А12. На основании анализов SAM (молекулы, прилипающие к субстрату) было идентифицировано 49 генов в качестве дифференциально экспрессированных в опухолях, где животные получали комбинированное лечение доцетакселом и А12, по сравнению с опухолями, из группы обработки только доцетакселом, при более чем 2-кратном изменении и менее чем 10% уровне ложного обнаружения (FDR) (данные не показаны). Тринадцать генов были идентифицированы в качестве потенциально вовлеченных в регуляцию апоптоза или клеточного цикла (таблица 4). Все 13 генов по крайней мере на 2 порядка различаются между двумя группами обработки и имеют FDR менее 0,02%. Девять генов были отрицательно модулирующими, и четыре гена были положительно регулирующими в опухолях, подвергавшихся лечению доцетакселом и А12, по сравнению с опухолями, подвергавшимися лечению только доцетакселом.
Таблица 4 Дифференциальная экспрессия гена в опухолях, обработанных доцетакселом+А12, по сравнению с опухолями, обработанными только доцетакселом |
||||
HUGO | Название | Функция GO | Кратность изменения | FDR |
Гены отрицательной негативной модуляции | ||||
CDC2 | Цикл 2 деления клетки | Цитокинез; митоз | 3,0 | ≤0,02% |
CDC6 | Цикл CDC6 деления клетки, 6 гомолог | Отрицательная регуляция пролиферации клеток | 2,2 | ≤0,02% |
CCNA2 | Циклин А2 V-myb миелобластоз |
Регуляция активности CDK Антиапоптоз; развитие |
2,1 | ≤0,02% |
MYBL2 | Вирусный онкогенный гомолог (авиан)оподобный-2 | Регуляция клеточного цикла | 3,2 | ≤0,02% |
TUBB | Полипептид тубулин-бета | Движение на основе микротрубочек Таксан-резистентный |
2,3 | ≤0,02% |
K-ALPHA-1 | Тубулин-альфа убиквитин | Движение на основе микротрубочек Таксан-резистентный |
2,5 | ≤0,02% |
BIRC5 | Бакуловирусный IAP повтор-содержащий 5 (сурвивин) | Антиапоптоз | 2,5 | ≤0,02% |
CDC25B | Цикл 25В деления клетки V-myc миелоцитоматоз |
Положительная регуляция пролиферации клеток | 2,0 | ≤0,02% |
MYC | Вирусный онкогенный гомолог (авиан) | Остановка клеточного цикла | 2,5 | ≤0,02% |
Гены положительной модуляции | ||||
TOB1 | Трансдуктор ERBB21 | Отрицательная регуляция пролиферации клеток | 2,2 | ≤0,02% |
CCNG2 | Циклин G2 | Контрольная точка клеточного цикла | 2,1 | ≤0,02% |
IGFBP3 | Связывающий белок 3 инсулиноподобного фактора роста | Регуляция роста клеток, проапоптический | 2,0 | ≤0,02% |
BJRC3 | Бакуловирусный IAP повтор-содержащий 3 | Антиапоптоз; связанная с клеточным поверхностным рецептором сигнальная трансдукция | 2,2 | ≤0,02% |
Для выбранных генов результаты были подтверждены ПЦР в реальном времени RT-ПЦР. Стандартный ПЦР фрагмент целевой кДНК очищали. Для образования стандартных кривых использовали серийные разведения стандартов от 10 нг/мкл до 10-3 пг/мкл. Один мкг общей РНК из каждой группы собранных опухолей использовали для синтеза первой цепи кДНК с использованием системы синтеза Superscript First Strand Synthesis System (Invitrogen). ПЦР в реальном времени RT-ПЦР осуществляли в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 1 мкл первой цепи кДНК, специфический набор праймеров и Lightcycler FastSTrand DNA Master Plus SYBR Green c использованием Roche Lightcycler в соответствии с протоколом производителя (Roche, Nutley, NJ). Для продуктов RT-ПЦР проводили анализ кривых плавления с помощью программного обеспечения Lightcycler, версия 3.5. Размеры ампликона были подтверждены методом электрофореза на агарозном геле. Каждый образец анализировали в двухкратной повторности. Результаты показаны на фиг.4.
Было показано, что среди генов отрицательной негативной модуляции TUBB приводит к резистенции к доцетакселу (Tanaka et al., 2004, Int.J. Cancer, 111, 617-26), и было показано, что повышенная экспрессия BIRC5 (сурвивин) связана с агрессивным раком предстательной железы и устойчивостью к антиандрогенной терапии (de Angelis et al., 2004, Int. J.Oncol., 24, 1279-88; Zhang et al., 2005, Oncogene, 24, 2474-82). Кроме того, TUBB представляет собой IGF-IR-регулируемый ген, который вовлечен в IGF-IR опосредованную трансформацию (Loughran et al., 2005, Oncogene, 24, 6185-93). Было показано, что из четырех генов положительной модуляции IGFBP3 ингибирует IGF-лиганд передачу сигнала, а также индуцирует апоптоз в опухолевых клетках предстательной железы лиганд-зависимым образом (Grimberg et al., 2000, J.Cell. Physiol., 183, 1-9).
Уровни А12 в сыворотке крови после лечения. У животных, которые получали доцетаксел в сочетании с А12, измеряли уровни А12 в сыворотке крови. Уровни А12 в сыворотке крови в течение двух недель после прекращения лечения снижались в 100 раз и обнаруживались на очень низком уровне через четыре недели после прекращения лечения (фиг.5).
Общая цитотоксичность. Была исследована цитотоксичность при совместном применении доцетаксела и IMC-A12. Хотя А-12 имеет более чем 95% кросс-реактивность с мышиным IGF-IR у животных, получавших при обработке комбинированные реагенты или только доцетаксел, не наблюдалось аномальной дневной активности или изменений в поведении по сравнению с контрольной группой животных, имеющих опухоли. Не наблюдалось существенного влияния на клетки почек ни в какой из групп обработки как при анализе клеточного цикла, так и при анализе апоптоза (данные не показаны). Не наблюдалось существенных изменений в массе тела для групп обработки (фиг.6).
Терапия антителом против IGF-IR. Эффективность лечения с использованием антител против IGF-IR на метастатический рост раковых клеток предстательной железы в костях оценивали с использованием непосредственной инъекции раковых клеток предстательной железы в большую берцовую кость мышей SCID. При таком способе метастазные опухоли развиваются непосредственно вне зависимости от зависимого от хемотаксиса проникновения из круга кровообращения. Для развития метастазов в костях доступно множество опухолевых линий. Они включают клетки РС-3, LuCaP35 LnCaP, которые вызывают остеолитические поражения, и клетки LuCaP 23.1, которые вызывают остеобластные поражения.
Клетки LuCaP 23.1, которые экспрессируют IGF-IR, имеют степень поглощения окружением кости ~80% и приводят к остеобластным реакциям. В предварительных экспериментах образцы LuCaP 23.1 проявляли существенное разрастание в объеме кости относительно объема ткани (%BV/TV) в опухолях относительно контрольной большой берцовой кости (254-503% от контроля, р=0,024). Все опухоли LuCaP 23.1 в большой берцовой кости проявляли новые костные трабекулы, которые не присутствовали в нормальных образцах, и высокое число опухолевых центров, которые заменяли обычный костный мозг. В некоторых образцах рост опухоли и кости простирался снаружи первоначальной кости. Повышенный % BV/TV для образцов LuCaP 23.1 также наблюдался после кастрации; % BV/TV больших берцовых костей с привитой опухолью составлял 212-354% по сравнению с большими берцовыми костями без опухоли (р=0,024). Результаты, наблюдавшиеся для ксенотрансплантатов LuCaP 23.1 внутри больших берцовых костей, указывают на стимулированное опухолевыми клетками образование кости de novo. Кроме того, опухоли проявляют большое подобие с остеобластными метастазами в костях человека, включая большое число опухолевых центров и повышенное количество минерализованной костной массы.
Для оценки эффективности лечения с использованием IMC-A12 ксенотрансплантаты опухолей LuCaP 23.1 приживляли мышам SCID и дважды в неделю измеряли уровни PSA в сыворотке крови для оценки роста опухолей. Все животные были кастрированы за две недели перед приживлением ксенотрансплантата. Введение IMC-A12 тестируемым мышам начинали, когда уровни PSA в сыворотке крови достигали 5-10 нг/мл (что указывает на развившуюся опухоль). 40 мг/кг IMC-A12 вводили в виде внутрибрюшинной инъекции три раза в неделю в течение шести недель.
Методом двойной рентгеновской абсорбциометрии (PIXOmus Lunar денситометр) была измерена минеральная плотность костей (МПК) пораженной опухолью большой берцовой кости и противоположной большой берцовой кости без опухоли, проведенная на площади 2,5 мм ×2,5 мм в месте инъекции опухолевых клеток, или на соответствующем месте противоположной большой берцовой кости в момент приживления трансплантата. Оценку поражения дважды в неделю проводили путем измерения PSA в сыворотке крови. Всех животных умерщвляли, когда поражения костей в контрольной группе рецидивировали после кастрации на основании уровней PSA в сыворотке крови (LuCaP 35>60 нг/мл, нг/мл, LuCaP 23.1> 500 нг/мл), рентгеновского появления поражений костей или когда у животных появлялись нарушения. За один час перед умерщвлением животным делали инъекцию BrdU для контроля пролиферации опухолевых клеток. Рентгеновские снимки делали перед умерщвлением (Faxitron X-ray MX-20) и МПК обоих больших берцовых костей измеряли в момент умерщвления.
Таблица 5 Минеральная плотность костей (МПК) |
||||
Обработка | А12 | Контроль | ||
Нога с опухолью | Нога без опухоли | Нога с опухолью | Нога без опухоли | |
Среднее значение | 0,060 | 0,045 | 0,098 | 0,053 |
Значение р по сравнению с контрольной опухолью | 0,0057 | |||
Значение р по сравнению с ногой без опухоли | 0,0004 | 0,0049 |
Уровни PSA в сыворотке крови были существенно ниже у мышей, обработанных IMC-A12 (Фиг.7), и повышение МПК, связанное с ростом остеобластных метастатических опухолей, также существенно понижалось (таблица 5). Измерения МПК для ног, не имевший опухолей, указывало на то, что обработка IMC-A12 не вызывала потери плотности костей (остеопороз). Рентгеновские снимки мышей, получавших и не получавших IMC-A12, показали, что прогрессирование опухоли значительно уменьшалось или предотвращалось у обработанных мышей.
Комбинирование антитела против IGF-IR и доцетаксела для костных метастазов. Мышей SCID кастрировали за 2 недели перед инъекцией опухолей в большую берцовую кость. Костные метастазы генерировали непосредственной инъекцией клеток рака предстательной железы LuCaP 23.1 в большие берцовые кости мышей, что приводило к остеобластным поражениям. Ксенотрансплантаты экспрессировали IGF-IR. Для оценки роста опухоли уровни PSA в сыворотке крови измеряли дважды в неделю. Когда уровни PSA в сыворотке крови достигали 5-10 нг/мл, указывая на развившуюся опухоль, животных случайным образом делили на четыре группы.
В двух группах 40 мг/кг IMC-A12 вводили в виде внутрибрюшинной инъекции три раза в неделю в течение шести недель, одна группа получала IMC-A12+ доцетаксел 20 мг/кг внутрибрюшинно один раз в неделю в течение 6 недель, а вторая группа - IMC-A12+ доцетаксел 10 мг/кг внутрибрюшинно один раз в неделю в течение 6 недель. Контрольные группы получали 10 или 20 мг доцетаксела внутрибрюшинно без IMC-A12.
Животных контролировали путем еженедельного измерения PSA. После окончания обработки продолжали контроль за животными путем измерения PSA до тех пор, пока опухоли в группах, получавших только доцетаксел, не начинали повторно расти. Поскольку величины PSA повышались в группах, получавших только доцетаксел (хотя и с меньшей скоростью, чем для необработанных животных), уровни PSA у мышей, получавших IMC-A12+доцетаксел, выравнивались, а у некоторых животных начинали снижаться. Снижение уровней PSA продолжало наблюдаться даже после прекращения обработки в течение шести недель.
Как указано выше, измерения МПК проводили в момент приживления трансплантата и в момент умерщвления, и рентгеновские снимки получены как раз перед умерщвлением. В группах, получавших IMC-A12+ доцетаксел, наблюдалось незначительное увеличение МПК, или его не наблюдалось, и на рентгеновских снимках видны незначительные или не видны признаки остеобластной активности.
Комбинация антитела против IGF-IR и доцетаксела для костных метастазов. Кусочки опухоли предстательной железы человека LuCaP 23.1 (от 20 до 30 мм3) механически разрушали. 2-5×105 жизнеспособных клеток LuCaP 23.1 вводили в большую берцовую кость мышей SCID возрастом 6-8 недель. 21 мышь случайным образом распределяли на три группы для использования в данном исследовании. После инъекции опухолей еженедельно контролировали уровень PSA в сыворотке крови. Лечение начинали, когда уровни PSA в сыворотке крови достигали 5-10 нг/мл как индикатор роста опухоли. Группа 1 получала контрольный забуференный физиологический раствор. Группа 2 получала 20 мг/кг доцетаксела внутрибрюшинно один раз в неделю в течение 4 недель. Группа 3 получала 20 мг/кг доцетаксела один раз в неделю и 40 мг/кг А12 внутрибрюшинно три раза в неделю в течение 4 недель. Для определения того, является ли ответная реакция на лечение остеобластной или остеолитической, МПК измеряли Dexa-сканированием и рентгеновским исследованием животных в конечный момент лечения.
Доцетаксел сам по себе или доцетаксел в сочетании с А12 существенно ингибировали рост опухоли LuCaP 23.1, что отражается в подавлении уровней PSA в сыворотке крови (фиг.9,а) без существенной разницы между двумя обработками. Однако после прекращения обработки уровень PSA в сыворотке крови начинал повышаться у животных, которые получали только доцетаксел, указывая на повторный рост опухоли; тогда как у животных, получавших комбинированное лечение, продолжало наблюдаться подавление уровней PSA в сыворотке крови, указывая на продолжительный период неподвижности опухоли после лечения. Было показано, что уровни PSA коррелируют с плотностью костей (МПК) и размерами костных опухолей на рентгеновских снимках (фиг.9,b). На пятой неделе средняя плотность костей составляла для контрольных животных, получавших доцетаксел 20 и доцетаксел 20 в сочетании с А12, 0,112±0,01, 0,09±0,02 и 0,05±0,009 (среднее значение ± стандартная ошибка среднего), соответственно. Имелась очевидная тенденция уменьшения плотности костей при лечении.
Пример 2
Фосфорилирование Akt, индуцированное аспиратом костного мозга. Образцы костного мозга от обычных мужчин-доноров (возраст 18-45 лет) получали от Camrex (PoieticsTM Donor Program). Образцы центрифугировали при 1500 об/мин для отделения растворимой и клеточной фаз. Супернатант фильтровали с использованием последовательно фильтров 0,8 мкм и 0,22 мкм. 50 мкл аспирата костного мозга вводили в клетки в 1 мл среды (конечное разведение 1:20).
Для экспериментов, проводившихся в присутствии сыворотки крови, клетки культивировали в среде DMEM, дополненной 10% FBS и 50 мкг/мл гентамицина, в течение 24 часов перед воздействием костного мозга. Для эксперимента в отсутствие сыворотки крови (клетки в безсывороточной среде) клетки промывали дважды PBS, среду для роста заменяли на не содержащую сыворотки среду DMEM и клетки инкубировали в течение 4 часов перед воздействием препаратов костного мозга. Когда использовали, AG-1296, специфический ингибитор рецепторов PDGF (Rice et al., 1999, Amer. J.Path, 213-21), добавляли к культурам за 30 минут перед воздействием аспирата костного мозга. Антитела IMC-3G3 вводили, как описано во время предварительной обработки, как указано далее.
Активацию костным мозгом Akt обнаруживали в клетках РС3-ML, которые экспрессируют PDGFRα, но не в клетках DU-145, которые не содержат рецептор. В одном эксперименте для сведения к минимуму эффекта компонентов сыворотки на активацию Akt клетки предварительно инкубировали в течение 4 часов в не содержащей сыворотки среде. Добавление экстрактов костного мозга приводило к сильному фосфорилированию Akt в клетках РС3-ML, но не в клетках DU-145 (фиг.10,А). Для оценки значимости ответной реакции второй эксперимент проводили с использованием сыворотки. Сильная стимуляция фосфорилирования Akt в клетках РС3-ML аспиратом костного мозга также наблюдалась в присутствии сыворотки (фиг.10,В). Только незначительная ответная реакция проявлялась в клетках DU-145.
Опосредованное PDGFRα фосфорилирование Akt. Предполагается, что остеобласты и остеокласты, которые секретируют как PDGF-АА, так и PDGF-ВВ, обеспечивают свои факторы роста в среду костного мозга. Для определения того, что способность к реагированию на экстракты костного мозга клеток РС3-ML относится к сигнальной трансдукции посредством PDGFRα, клетки РС3-ML подвергали действию аспирата костного мозга в отсутствие и в присутствии 20 мкМ AG-1296. Такая концентрация AG-1296 полностью ингибирует индуцированную PDGF-ВВ активацию Akt (фиг.11,А). AG-1296 ингибировал индуцированную аспиратом костного мозга активацию Akt более чем на 40% (фиг.11,В и D). Это показывает, что передача сигнала PDGFRα отвечает за значительную часть индуцированной костным мозгом активации Akt.
Также был оценен непосредственный вклад PDGF-АА и -ВВ в передачу сигнала посредством PDGFRα относительно других компонентов аспиратов костного мозга. Было определено, что концентрации PDGF-АА и -ВВ в аспиратах костного мозга, полученных от трех разных доноров, колеблются от 400 пг/мл до 2 нг/мл. При используемом 20-кратном разведении аспиратов костного мозга, тестируемые клетки действительно подвергали действию концентраций PDGF-АА и -ВВ в диапазоне между 20 и 100 пг/мл. Соответственно, проводили обработку клеток РС3-ML 100 пг/мл каждого из PDGF-АА и -ВВ. Фосфорилирование Akt составляло менее 10% по сравнению с результатом, полученным для аспиратов костного мозга (фиг.11). Следовательно, оказывается, что активация пути Akt посредством передачи сигнала с помощью PDGFRα может включать лиганды, отличные от PDGF-АА и -ВВ, и/или другой механизм, отличающийся от активации PDGFRα за счет непосредственно связывания лиганда.
Ингибирование фосфорилирования Akt антителом против PDGFRα. Также проводили исследование способности нейтрализующего антитела IMC-3G3, которое является специфическим в отношении PDGFRα человека, ингибировать фосфорилирование Akt в клетках РС3-ML. Время предварительной инкубации 30 минут и концентрация 20 мкг/мл нейтрализовали стимулирующее действие 30 нг/мл PDGF-ВВ (фиг.12,А). Обработка антителом также приводила примерно к 40%-ному ингибированию индуцированного костным мозгом фосфорилирования Akt (фиг.12,В и С). Также наблюдалось, что ингибирующее действие IMC-3G3 на фосфорилирование Akt зависело от продолжительности предварительной инкубации, при этом время инкубации, равное 120 минутам, было существенно более эффективным (фиг.12,D), чем время инкубации, составляющее 30 минут (фиг.12,В и С). Одно из возможных объяснений заключается в том, что IMC-3G3 индуцирует интернализацию PDGFRα и что его ингибирующее действие связано не только с блокированием связывания лиганда, но также с удалением рецептора из плазматической мембраны.
Пример 3
Выделение антител против PDGFRα человека. Моноклональные антитела против PDGFRα человека генерировали стандартными гибридомными методами (Harlow & Lane, ed., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, 211-213 (1998), который включен в данное описание в качестве ссылки) с использованием трансгенных мышей (Medarex Inc., Sunnyvale, CA), которые экспрессируют тяжелые гамма- и легкие каппа-цепи иммуноглобулина человека. Внеклеточный домен (ECD) PDGFRα человека получали от R&D Systems (Minneapolis, MN). Проводили иммунизацию мышей КМ подкожно (s.c.) 3×107 эндотелиальными клетками аорты свиней, стабильно экспрессирующими PDGFRα. Через 4 недели проводили повторную иммунизацию мышей s.c. 50 мкг ECD PDGFRα в полном адъюванте Фрейнда плюс 3×107 клеток РАЕ Rα, вводимых внутрибрюшинно. Повторную иммунизацию мышей проводили еще два раза с разрывом в 3 недели с использованием 25 мкг ECD PDGFRα в полном адъюванте Фрейнда.
Выделяли спленоциты мышей с высоким связыванием сыворотки и титрами блокирования и сливали их с клетками миеломы. Гибридомные культуры, проявляющие блокирующую активность, субклонировали и антитела, полученные от данных гибридом, очищали хроматографией с использованием белка-G.
Проводили оценку связывания IgG с PDGFRα с использованием анализа непосредственного связывания. ECD PDGFRα в PBS был иммобилизован в 96-луночных планшетах (100 нг/лунку). Затем планшеты промывали PBST (PBS+0,05% Tween 20) и блокировали PBSM (3% молока в PBS, 200 мкл/лунку) в течение 2 часов при 25°С. IgG, разведенный в PBSM, инкубировали с иммобилизованным ECD PDGFRα в течение 1 часа при 25°С и планшеты промывали PBST. Добавляли вторичное антитело (конъюгат козий F(ab')2 против IgG человека-пероксидаза хрена; BioSource International, Camarillo, CA), разведенное 1:5000 в PBSM, на 1 час при 25°С. После этого планшеты промывали PBST, добавляли ТМВ-пероксидазный субстрат (KPK, Gaithersburg, MD) и реакцию останавливали, добавляя 100 мкл 1 моль/л H2SO4. Планшеты считывали при А450 нм с использованием ридера для микропланшетов (Molecular Devices, Sunnyvale, CA).
Блокирование PDGF оценивали с использованием твердофазного анализа блокирования PDGF (см. Duan et al., 1991, J.Biol. Chem., 266: 413-8, включено в данное описание в качестве ссылки). ECD PDGFRα разводили в PBS и наносили на лунку 96-луночных планшетов для микротитрования (Immulon 2HB, плоскодонные 1×12 полоски Removawell облученного связанного с белком полистирола; Dynex Technologies, Chantilly, VA). На каждую лунку наносили 60 нг PDGFRα в течение 3 часов при 25°С в общем объеме 100 мкл. Затем планшеты дважды промывали и блокировали в течение ночи при 4°С с использованием 25 ммоль/л HEPES (pH 7,45), 0,5% желатина, 100 ммоль/л NaCl и 0,1% Tween 20. Затем планшеты нагревали до 25°С в течение 20 минут и промывали один раз связывающим буфером (25 ммоль/л HEPES (pH 7,45), 0,3% желатина, 100 ммоль/л NaCl, 0,01% Tween 20). В каждую лунку добавляли 50 микролитров IgG и инкубировали при 25°С в течение 30 минут. Йодированный PDGF разводили в связывающем буфере и добавляли (50 мкл раствора с концентрацией 1 нмоль/л) в каждую лунку. Планшеты инкубировали в течение 2 часов при 25°С и затем промывали пять раз связывающим буфером. Каждую лунку считывали с помощью счетчика гамма-излучения. Анализ блокирования на основе клеток был проведен как описано Heldin et al., 1988, EMBO J., 7, 1387-93.
Кинетику связывания антитела с PDGFRα измеряли с использованием прибора BIAcore 3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ). ECD PDGFRα иммобилизовали на сенсорном чипе и вводили антитело в различных концентрациях. Получали сенсограммы для каждой концентрации и проводили оценку с использованием программы BIA Evaluation 2.0 для определения констант скорости. Константу аффинности, Kd, оценивали из соотношения констант скоростей Koff/Kon.
На фиг.13 показано доза-зависимое связывание моноклонального антитела IMC-3G3 человека с иммобилизованным PDGFRα ECD в анализе ELISA. Концентрация антитела, необходимая для 50% максимального связывания с PDGFRα ECD, составляла 0,06 нмоль/л (таблица 6). Величина ED50 согласуется с Kd для антитела, определенной методом поверхностного плазмонного резонанса на приборе BIAcore (таблица 1). Моноклональное антитело также блокирует связывание [125I]PDGF-BB с иммобилизованным рецептором при IC50, равном 0,43 нмоль/л. Сайты связывания для PDGF-АА и PDGF-ВВ на PDGFRα структурно не совпадают. Эти данные позволяют предположить, что эпитоп 3G3 пространственно перекрывает оба сайта связывания фактора роста.
Таблица 6 Характеристики связывания антитела против PDGFRα |
|||||
Связывание PDGFRα | Блокирование PDGF | Кинетика связывания | |||
(ED50, нмоль/л) | Твердая фаза (IC50, нмоль/л) | Клеточная основа (IC50, нмоль/л) | Kon (105 моль/л-1 с-1) |
Koff (104 с-1) |
Kd (109 моль/л) |
0,06 | 0,24 | 0,58 | 11,50 | 0,47 | 0,04 |
Ингибирование фосфорилирования рецептора и активации эффекторных молекул в прямом (5'-3') направлении. Действие индуцированной PDGF внутриклеточной передачи сигнала с помощью IMC-3G3 определяли с использованием клеток РАЕ Rα. Клетки высевали в шестилуночные планшеты Фалькона для культур тканей (250000 клеток на лунку) и давали возможность расти в течение ночи. Лунки затем споласкивали и инкубировали в не содержащей сыворотки крови среде. После инкубирования в течение ночи для придания клеткам статического состояния клетки обрабатывали антителами в течение 30 минут при 37°С с последующим добавлением PDGF-АА или PDGF-ВВ и инкубировали дополнительно в течение 10 минут при 37°С. Затем клетки разъединяли и лизировали в 200 мкл лизисного буфера (50 ммоль/л Tris-HCl (pH 8,0), 1% Triton-X-100, 150 ммоль/л NaCl, 1 ммоль/л EDTA, 0,1% SDS, 1 ммоль/л ортованадата натрия и ингибиторы протеазы (Complete Mini, Roche, Manheim, Германия)). Лизаты клеток анализировали методами SDS-PAGE и вестерн-блоттинга с использованием реагентов, усиливающих хемолюминисценцию, и Hiperfilm (Amersham Bioscience).
Была протестирована способность антитела ингибировать индуцированное лигандом фосфорилирование тирозина рецептора. PDGF-АА и PDGF-ВВ увеличивают фосфорилирование тирозина PDGFRα примерно в 5 раз при концентрациях 1 и 3 нмоль/л соответственно. Более высокие концентрации лиганда (10 нмоль/л) приводят к меньшему фосфорилированию рецептора, вероятно, благодаря индуцированному лигандом разрушению. Антитело ингибировало индуцированный PDGF-ВВ рецептор к уровню, близкому к фоновому (фиг.14,А, верхний ряд). Аналогичные данные были получены с использованием PDGF-АА для индуцирования фосфорилирования рецептора.
PDGF преобразует митогенные сигналы и вызывает антиапоптическое действие на экспрессирующие рецепторы клетки посредством эффекторного белка в прямом направлении. Соответственно была протестирована способность моноклонального антитела ингибировать активацию МАРK p44/p42 и Akt (вовлеченные в рост клеток и антиапоптические пути соответственно). Антитело против PDGFRα ингибировало фосфорилирование как МАРK, так и Akt в качестве ответной реакции на PDGF-ВВ (фиг.2,А) и PDGF-АА (не показано). Ингибирование фосфорилирования PDGFRα было доза-зависимым при этом 50%-ное ингибирование достигалось при 0,25 нмоль/л.
Антимитогенная активность. Проводили тестирование способности моноклонального антитела против PDGFRα блокировать индуцированный PDGF-АА митогенез клеток РАЕ Rα. Клетки высевали в 96-лучночные планшеты для культивирования тканевых культур (1×104 клеток на лунку) и выращивали в течение ночи в 100 мкл среды на лунку. Лунки затем ополаскивали не содержащей сыворотки средой и клетки оставляли в отсутствие сыворотки в течение ночи с 75 мкл не содержащей сыворотки среды, добавленной в каждую лунку. Добавляли IgG (25 мкл/лунку) и планшеты инкубировали в течение 30 минут при 37°С. Затем добавляли PDGF-АА или PDGF-ВВ (25 мкл/лунку) и планшеты инкубировали в течение 18-20 часов при 37°С. Планшеты инкубировали дополнительно в течение 4 часов после добавления в каждую лунку 0,25 мкКи [3H] тимидина (25 мкл/лунку). Антитело, PDGF и [3H] тимидин разводили в не содержащей сыворотки среде. Затем клетки промывали PBS плюс 1% бычьего сывороточного альбумина и отсоединяли обработкой трипсином (100 мкл/лунку). Клетки собирали на фильтре и промывали три раза дважды дистиллированной водой с использованием харвестера для клеток МАСН III (Tomtec, Inc., Hamden, CT). После обработки на фильтре вошедшую в ДНК радиоактивность определяли с использованием сцинтилляционного счетчика (Wallac Microbeta, модель 1450).
Когда к клеткам РАЕ Rα в отсутствие сыворотки добавляли IMC-3G3, специфически ингибировалось индуцированное PDGF-АА внедрение тимидина (фиг.15) при ЕС50, равном 8,3 нмоль/л. Антитело также ингибировало индуцированный 3 нмоль/л PDGF-ВВ митогенез клеток РАЕ Rα при ЕС50, составляющем 1,25 нмоль/л (данные не показаны).
Ингибирование роста опухолевых клеточных линий человека, экспрессирующих PDGFRα. Клеточные опухолевые линии человека, экспрессирующие PDGFRα, тестировали для определения воздействия антитела против PDGFRα человека на рост злокачественных новообразований в системах in vitro и in vivo. Две такие клеточные линии, которые экспрессировали PDGFRα, как было определено методом проточной цитометрии, представляют собой SKLMS-1 (лейомиосаркома) и U118 (глиобластома). Данные клеточные линии также дают ответную реакцию на лиганд в митогенных анализах и образуют опухоли у мышей. SKLMS-1 обладает потенциалом не только для паракринной, но и для аутокринной стимуляции. Было показано, что SKLMS-1 экспрессируют белок PDGF-АА, когда растут в культуре с использованием метода количественного сэндвичевого ферментативного иммуноанализа (R&D Systems).
Как можно видеть на фиг.16,А, IMC-3G3 ингибировал фосфорилирование как Akt, так и МАРK в ответ на PDGF-АА стимуляцию клеток SKLMS-1. Ингибирование фосфорилирования Akt составляло 100%, а для МАРK составляло примерно 80%. Антитело также оказалось эффективным ингибитором фосфорилирования клеток U118 (фиг.16,В). Лиганд-индуцированный митогенез опухолевых клеток также блокировался. Когда антитело против PDGFRα добавляли к клеткам U118 в отсутствие сыворотки крови, PDGF-АА индуцированное внедрение тимидина специфически ингибировалось (фиг.17,А) при ЕС50 3,4 нмоль/л. Антитело также ингибировало индуцированный PDGF-АА митогенный ответ клеток SKLMS-1 при ЕС50, составлявшем 5 нмоль/л (фиг.17,В), а также стимулированный PDGF-ВВ митогенный ответ (фиг.17,С). Только частичное ингибирование (40% при 66 нмоль/л; фиг.17,D) стимулированного PDGF-ВВ митогенного ответа наблюдалось для клеток U118. Это можно объяснить экспрессией как PDGFRα, так и PDGFRβ в этих клетках (данные не показаны).
Ингибирование роста ксенотрансплантата опухоли. IMC-3G3 был протестирован in vivo на подкожных моделях ксенотрансплантатов глиобластомы (U118) и лейомиосаркомы (SKLMS-1) у бестимусных «голых» мышей. Подкожные ксенотрансплантаты опухолей получали путем инъекции 10×106 клеток SKLMS-1 или U118, смешанных в Matrigel (Collaborative Research Biochemicals, Bedford, MA) самкам бестимусных «голых» мышей (Crl:NU/NU-nuBR, Charles River Laboratories, Wilmington, MA). Опухолям давали возможность достичь среднего объема опухоли (π/6 × наибольшая длина × перпендикулярная ширина2) примерно в 400 мм3. Мышей случайным образом распределяли на пять групп (n=12), и на продолжении исследования дважды в неделю они получали внутрибрюшинную инъекцию. Мыши в группе 1 получали носитель в качестве контроля (0,9% NaCl, USP для орошения B/Braun). Мышей в группах со 2 по 4 обрабатывали 6, 20 и 60 мг/кг настоящего антитела против PDGFRα. Мышей в группе 5 обрабатывали 60 мг/кг IgG человека (Sigma). Группы, обрабатываемые 6, 20 и 60 мг/кг антитела против PDGFRα или IgG человека, получали нагружаемые дозы в 21,4, 71,4 и 214 мг/кг соответственно. Нагружаемые дозы рассчитывали для достижения устойчивого состояния концентрации в плазме крови от первой дозы (период полувыведения, 7 дней) с использованием режима дозировки дважды в неделю. Объемы опухолей оценивали дважды в неделю и рост опухоли в группе обработки сравнивали с использованием повторных измерений ANOVA.
Как видно на фиг.18,А, IgG человека не оказывает действия на рост глиобластомы по сравнению с мышами, получавшими физиологический раствор (Р=0,74), тогда как антитело против PDGFRα существенно ингибирует рост опухоли в дозах 6 (Р=0,06), 20 (Р=0,03) и 60 (Р=0,004) мг/кг. В конце исследования U118 значения %Т/С [(средний объем опухоли для обработанной 3G3 группы при завершении исследования/средний объем опухоли в начале лечения)/(средний объем опухоли для контрольной группы при завершении исследования/средний объем опухоли в начале лечения)×100] составляли 67%, 63% и 35% для групп, получавших дозировку 3G3, составлявшую 6, 20 и 60 мг/кг соответственно. Более того, регрессия опухоли наблюдалась 4 из 12, 5 из 11 и 10 из 12 животных, в группах обработки 6, 20 и 60 мг/кг. Ни в одной из контрольных групп регрессии не было.
На фиг.18,В показано, что рост лейомиосаркомы также существенно ингибировался при обработке при дозе 6 (Р=0,02), 20 (Р=0,003) и 60 (Р<0,0001) мг/кг. Конечные значения %Т/С составляли 66%, 57% и 31% для групп получавших 6, 20 и 60 мг/кг соответственно в отсутствие регрессии опухолей.
Гистологическое исследование ксенотрансплантатов в конце обработки показало заметное различие в опухолях животных подвергавшихся лечению, по сравнению с опухолями животных, получавших только контрольную терапию. Иссеченные опухоли были зафиксированы в фиксативе QDL при 4°С в течение 24 часов. После герметизации в парафине и получения срезов по 4 мкм зафиксированные в парафине срезы были окрашены с использованием Mayer's H&E (Richard Allen, Kalamazoo, MI).
В группе U118, обработанной наиболее высокой дозой (60 мг/кг), было обнаружено меньше жизнеспособных опухолевых клеток, и было по существу больше областей разбросанных клеток по сравнению с контрольной группой физиологического раствора (фиг.18). Обработанные ксенотрансплантаты SKLMS-1 на 25-й день также показывали снижение количества жизнеспособных опухолевых клеток и клеточную упаковку, сравнимую с группой физиологического раствора (фиг.18).
In vivo ингибирование опосредованной PDGFRα стимуляции линии глиобластомы. Через неделю после обработки антителом против PDGFRα или IgGt человека оценивали уровень рецептора фосфотирозина в опухолях U118. Мышей с развитыми опухолями U118 (500 мм3) обрабатывали при дозированной нагрузке 214 мг/кг в последующие 72 часа при поддерживающей дозе антитела 60 мг/кг. Опухоли получали у мышей через одну неделю (168 часов) после первой инъекции антитела (в момент времени, когда в среднем наблюдалась регрессия опухоли; см. фиг.18,А) и гомогенизировали в лизисном буфере для анализа фосфорилирования (см. выше). Лизаты дважды центрифугировали при 14000 об/мин и определяли концентрацию белка для собранного супернатанта (анализ белка Bio-Rad, Bio-Rad, Hercules, CA). Лизат (4 мг) из каждого образца подвергали иммуноосаждению с использованием антитела против PDGFRα. Иммуноосажденный PDGFRα человека затем иммуноблотировали с использованием или антитела против PDGFR, или антитела против фосфотирозина. На фиг.19 показано, что применение антитела против PDGFRα приводит к снижению уровня PDGFRα-фосфотирозина в данных опухолях относительно IgG человека в качестве контроля.
Конструирование клеточной линии. Во-первых, гены, кодирующие вариабельные домены тяжелой и легкой цепей антитела против PDGFRα человека, были клонированы и секвенированы. Получена серия праймеров от MEDAREX, которая аннелирует к 5' и 3'фланкирующим последовательностям вариабельной области иммуноглобулина человека последовательности в рамках MEDAREX-полученных гибридом. Вариабельную область тяжелой цепи амплифицировали с парой праймеров АВ88 (прямой) и АВ90 (обратный) (таблица 7). Продукты легкой цепи амплифицировали с парой праймеров, содержащей прямой праймер АВ182 и обратный праймер АВ16 (таблица 7). Продукты данных реакций в 0,4 тысячи пар оснований клонировали в вектор ZeroBlunt (Invitrogen) для получения АВ88-1 (VH) и АВ182-3 (VK) и вставки секвенировали с использованием универсальных праймеров Т7 и M13R.
Таблица 7 Праймеры для гибридом MEDAREX |
|||
Олиго | Размер | Последовательность ДНК (5'-3') | SEQ ID NO |
AB88 | 21 | ATGAAACACCTGTGGTTCTTC | 20 |
AB90 | 21 | TGCCAGGGGGAAGACCGATGG | 21 |
AB182 | 24 | ATGGAA(G/A)CCCCAGCGCAGCTTCTC | 22 |
AB16 | 20 | CGGGAAGATGAAGACAGATG | 23 |
Для генерирования векторов плазмиды для экспрессирования полного антитела IgG1, клонированные вариабельные области амплифицированы с помощью ПЦР и лигированы в две стадии в векторы экспрессии, содержащие гены константных областей. Первоначально при ПЦР-амплификации тяжелой цепи использовали 25 нг плазмиды АВ88-1 в качестве матрицы для праймеров IPHF5 (прямой) и IPHR5 (обратный). Во-вторых, в ПЦР-амплификации тяжелой цепи использовали 5 мкл первичной реакционной смеси в качестве матрицы и праймеры OPSIF и IPHR5. Комбинация двух прямых праймеров добавляет последовательность из 57 пар оснований к концу 5' генов иммуноглобулина, кодирующую сигнальную последовательность гена тяжелой цепи мыши из 19 аминокислот (MGWSCIILFLVATATGVHS; SEQ ID NO:24) для эффективного процессинга и секреции иммуноглобулина. Кроме того, прямой праймер OPSIF добавляет консенсусную последовательность Козака (J.Mol.Biol. 196: 947) для эффективной инициации трансляции данных генов в клетки млекопитающих и эндонуклеазный сайт рестрикции 5' HindIII для клонирования амплифицированного продукта в подходящий вектор экспрессии. Обратный праймер тяжелой цепи содержит внутрирамочный сайт Nhel для клонирования в вектор константной области.
ПЦР проводили в две стадии с использованием набора Expand PCR (Boehringer Mannheim Inc.) в соответствии со спецификацией производителя и применением буферной системы Expand в 50 мкл реакциях при следующих условиях циклов:
1 цикл | 94°, 2 минуты |
5 циклов | 94°, 20 секунд |
48°, 60 секунд | |
68°, 2 минуты | |
20 циклов | 94°, 20 секунд |
65°, 60 секунд | |
68°, 2 минуты | |
1 цикл | 68°, 5 минут |
После двух кругов ПЦР продукт очищали электрофорезом на агарозном геле и клонировали в качестве отщепленного фрагмента HINdIII-Nhel в вектор pDFc (фиг.8), который содержит постоянную область гамма 1 человека.
В первичной ПЦР амплификации легкой цепи использовали 25 нг плазмиды рАВ182-3 и в качестве темплатных праймеров IPLF4 (прямой) и IPLR2 (обратный). Во вторичной ПЦР амплификации легкой цепи использовали 5 мкл первичной реакционной смеси в качестве матрицы и праймеры OPSIF и IPLR2. Как и в случае тяжелой цепи, два прямых праймера обеспечивали сигнальную последовательность секреции. Обратный праймер легкой цепи содержит сайт BsiWI в рамке считывания для клонирования в вектор pLck постоянной области каппа (фиг.8). Реакции ПЦР проводили, как и в случае тяжелой цепи, описанном выше. После двух кругов ПЦР продукт очищали электрофорезом на агарозном геле и клонировали в pLck, который содержит постоянную область каппа легкой цепи человека.
Таблица 8 Праймеры для векторов экспрессии VH VK |
|||
Олиго | Размер | Последовательность ДНК (5'-3') | SEQ ID NO |
OPSIF | 53 | GAGAAGCTTGCCGCCACCATGGGATGGTCATGTATCAT CCTTTTTCTAGTAGC |
25 |
IPHF5 | 58 | TCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTGGAGTACATTCA CAGCTGCAGCTGCAGGAGTC |
26 |
IPHR5 | 37 | CGCGCTAGCTGAGGAGACGGTGACCAGGGTTCCCTGG | 27 |
IPLF4 | 58 | TCCTTTTTCTAAGTAGCAACTGCAACTGGAGTACATTCAG AAATTGTGTTGACACAGTC |
28 |
IPLR2 | 37 | GCGCGTACGTTTGATTTCCACCTTGGTCCCTTGGCCG | 29 |
Для образования вектора унифицированной плазмиды для стабильной трансфекции, кассету экспрессии тяжелой цепи, содержащую промотор CMV, кодирующую область тяжелой цепи и элемент polyA, клонировали в вектор легкой цепи в качестве фрагмента Notl-Sall (фиг.20).
Данная конструкция затем была использована для создания стабильной продуцирующей линии в клетках клеточной линии миеломы NS0. Клетки NS0 были трансфицированы плазмидой экспрессии путем электропорации с использованием BioRad Gene Pulser II. Перед трансфекцией плазмиду ДНК линеаризовали с использованием PvuI, осаждали этанолом и повторно суспендировали при концентрации 0,4 мг/мл (40 мкг в 100 мкл Н2О). Клетки подвергали электропорации вместе с 40 мкг ДНК в конечном объеме 800 мкл при одном импульсе в 250 вольт, 400 мкФ. Клетки после электропорации диспергировали в 50 мкл аликвотах в среде DMEM (JRH Biosciences Inc), содержащей 10% диализованной фетальной телячьей сыворотки (dFCS) (Hyclone, Lot #: AHA 7675) и 2 мМ глутамина (Invitrogen/Life Technologies) в лунках приблизительно восемнадцати 96-луночных планшетов при плотности 5000-10000 клеток на лунку. Отбор для положительных в отношении глутаминсинтетазы (GS) трансфектантов инициировали через 24 часа после добавления не содержащей глутамина DMEM, содержащей 10% dFCS и дополненной дополнителем 1х GS (JRH Biosciences Inc). Клетки культивировали в течение 2-4 недель при 37°С, 5% СО2, предоставляя им возможность роста и развития колоний. Проводили скрининг среди более 300 колоний с использованием анализа ELISA Fc (гамма) против человека (детектирование пероксидазы хрена при А450 нм). Клоны, экспрессирующие антитело (58%), развивали и повторно тестировали на продуктивность после культивации в течение 3-5 дней. Для адаптации клеток к не содержащей сыворотки среде положительные клеточные линии развивали путем добавления равного объема не содержащей сыворотки крови культивационной среды GS-0S при каждом пассаже. Сильно положительные, продуцирующие 25 мкг/мл или более в 3 дня субконфлюенты 24 луночных культур развивали для дальнейшего анализа для завершения адаптации к не содержащей сыворотки среде.
Следует понимать и ожидать того, что специалист в данной области может осуществить вариации принципов раскрытого здесь изобретения, и предполагается, что такие модификации должны быть включены в объем настоящего изобретения.
Claims (10)
1. Выделенное антитело или фрагмент антитела человека, специфическое в отношении PDGFRα, включающее последовательности
SSSYY (SEQ ID NO:2) при CDRH1;
SFFYTGSTYYNPSLRS (SEQ ID NO:4) при CDRH2;
QSTYYYGSGNYYGWFDR (SEQ ID NO:6) при CDRH3;
RASQSVSSYLA (SEQ ID NO:10) при CDRL1;
DASNRAT (SEQ ID NO:12) при CDRL2 и
QQRSNWPPA (SEQ ID NO:14) при CDRL3.
SSSYY (SEQ ID NO:2) при CDRH1;
SFFYTGSTYYNPSLRS (SEQ ID NO:4) при CDRH2;
QSTYYYGSGNYYGWFDR (SEQ ID NO:6) при CDRH3;
RASQSVSSYLA (SEQ ID NO:10) при CDRL1;
DASNRAT (SEQ ID NO:12) при CDRL2 и
QQRSNWPPA (SEQ ID NO:14) при CDRL3.
2. Антитело или фрагмент антитела по п.1, которое включает вариабельную область тяжелой цепи, имеющую последовательность
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSSSYYWGWLRQSPGK GLEWIGSFFYTGSTYYNPSLRSRLTISVDTSKNQFSLMLSSVTAADTAVY YCARQSTYYYGSGNYYGWFDRWDQGTLVTVSS (SEQ ID NO:8), или
вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательность
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRL LIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPA FGQGTKVEIK (SEQ ID NO:16).
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSSSYYWGWLRQSPGK GLEWIGSFFYTGSTYYNPSLRSRLTISVDTSKNQFSLMLSSVTAADTAVY YCARQSTYYYGSGNYYGWFDRWDQGTLVTVSS (SEQ ID NO:8), или
вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательность
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRL LIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPA FGQGTKVEIK (SEQ ID NO:16).
3. Антитело или фрагмент антитела по п.1, которое включает вариабельную область тяжелой цепи, имеющую последовательность
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSSSYYWGWLRQSPGK GLEWIGSFFYTGSTYYNPSLRSRLTISVDTSKNQFSLMLSSVTAADTAVY YCARQSTYYYGSGNYYGWFDRWDQGTLVTVSS (SEQ ID NO:8), и
вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательность
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRL LIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPA
FGQGTKVEIK (SEQ ID NO:16).
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSSSYYWGWLRQSPGK GLEWIGSFFYTGSTYYNPSLRSRLTISVDTSKNQFSLMLSSVTAADTAVY YCARQSTYYYGSGNYYGWFDRWDQGTLVTVSS (SEQ ID NO:8), и
вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательность
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRL LIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPA
FGQGTKVEIK (SEQ ID NO:16).
4. Антитело или фрагмент антитела по п.1, которое включает тяжелую цепь, имеющую последовательность
MGWSCIILFLVATATGVHSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG SINSSSYYWGWLRQSPGKGLEWIGSFFYTGSTYYNPSLRSRLTISVDTSK NQFSLMLSSVTAADTAVYYCARQSTYYYGSGNYYGWFDRWDQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKR VEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:31), и
легкую цепь, имеющую последовательность
MGWSCIILFLVATATGVHSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSY LAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDF AVYYCQQRSNWPPAFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASV VCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:33).
MGWSCIILFLVATATGVHSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG SINSSSYYWGWLRQSPGKGLEWIGSFFYTGSTYYNPSLRSRLTISVDTSK NQFSLMLSSVTAADTAVYYCARQSTYYYGSGNYYGWFDRWDQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKR VEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:31), и
легкую цепь, имеющую последовательность
MGWSCIILFLVATATGVHSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSY LAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDF AVYYCQQRSNWPPAFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASV VCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:33).
5. Антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1-4, которое ингибирует связывание PDGFRα с лигандом PDGFRα или которое нейтрализует PDGFRα.
6. Выделенный полинуклеотид, который содержит нуклеотидную последовательность, кодирующее антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1-5.
7. Вектор экспрессии, включающий полинуклеотид по п.6, операбельно связанный с элементами контроля экспрессии, для того чтобы могли экспрессироваться кодируемое антитело или его фрагмент.
8. Рекомбинантная клетка, включающая вектор экспрессии по п.7, где рекомбинантная клетка способна продуцировать антитело или его фрагмент по любому из пп.1-5.
9. Антитело или фрагмент антитела, продуцируемое при культивировании рекомбинантной клетки по п.8, где антитело или его фрагмент продуцируется и выделяется из культуры.
10. Применение антитела или его фрагмента по любому из пп.1-5 для ингибирования роста опухоли, где опухоль выбрана из группы, состоящей из лейомиосаркомы и глиобластомы.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US69192005P | 2005-06-17 | 2005-06-17 | |
US60/691,920 | 2005-06-17 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008101772/14A Division RU2008101772A (ru) | 2005-06-17 | 2006-06-19 | Антагонисты рецепторов для лечения метастатического рака |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009115363A RU2009115363A (ru) | 2010-10-27 |
RU2455026C2 true RU2455026C2 (ru) | 2012-07-10 |
RU2455026C3 RU2455026C3 (ru) | 2020-04-08 |
Family
ID=37571297
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008101772/14A RU2008101772A (ru) | 2005-06-17 | 2006-06-19 | Антагонисты рецепторов для лечения метастатического рака |
RU2009115364/15A RU2502523C2 (ru) | 2005-06-17 | 2006-06-19 | АНТИТЕЛА ПРОТИВ PDGFRα ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВТОРИЧНОЙ ОПУХОЛИ КОСТИ |
RU2009115363A RU2455026C3 (ru) | 2005-06-17 | 2009-04-22 | Антагонисты рецепторов для лечения метастатического рака |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008101772/14A RU2008101772A (ru) | 2005-06-17 | 2006-06-19 | Антагонисты рецепторов для лечения метастатического рака |
RU2009115364/15A RU2502523C2 (ru) | 2005-06-17 | 2006-06-19 | АНТИТЕЛА ПРОТИВ PDGFRα ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВТОРИЧНОЙ ОПУХОЛИ КОСТИ |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8128929B2 (ru) |
EP (4) | EP2100614B8 (ru) |
JP (4) | JP2009501141A (ru) |
KR (3) | KR101246504B1 (ru) |
CN (3) | CN101500597A (ru) |
BR (2) | BRPI0622073A8 (ru) |
CA (3) | CA2612449A1 (ru) |
CY (3) | CY1114603T1 (ru) |
DK (2) | DK2100614T3 (ru) |
ES (2) | ES2435727T3 (ru) |
HK (1) | HK1135917A1 (ru) |
HU (1) | HUS1700015I1 (ru) |
IL (3) | IL188151A0 (ru) |
LT (1) | LTC2100614I2 (ru) |
LU (1) | LUC00012I2 (ru) |
NL (1) | NL300869I2 (ru) |
PL (2) | PL2100618T3 (ru) |
PT (2) | PT2100618E (ru) |
RU (3) | RU2008101772A (ru) |
SI (2) | SI2100618T1 (ru) |
WO (1) | WO2006138729A2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2496787C2 (ru) * | 2008-06-10 | 2013-10-27 | Онкотерапи Сайенс, Инк. | Пептиды эпитопов mybl2 и содержащие их вакцины |
Families Citing this family (110)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SI2100618T1 (sl) * | 2005-06-17 | 2014-03-31 | Imclone Llc | Antagonisti receptorja za zdravljenje metastaznega kostnega raka |
CN101484587B (zh) * | 2006-02-03 | 2014-02-12 | 英克隆有限责任公司 | Igf-ir拮抗剂作为辅药用于前列腺癌的治疗 |
CL2007002225A1 (es) | 2006-08-03 | 2008-04-18 | Astrazeneca Ab | Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un |
CL2008001071A1 (es) * | 2007-04-17 | 2009-05-22 | Smithkline Beecham Corp | Metodo para obtener anticuerpo penta-especifico contra il-8/cxcl8, gro-alfa/cxcl1, gro-beta/cxcl2), gro-gama/cxcl3 y ena-78/cxcl5 humanas; anticuerpo penta-especifico; proceso de produccion del mismo; vector, hbridoma o celela que lo comprende; composicion farmceutica; uso para tratar copd, otras enfermedades. |
US8435510B2 (en) * | 2007-08-08 | 2013-05-07 | Sutter West Bay Hospitals | Platelet derived growth factor receptor supports cytomegalovirus infectivity |
AU2008304111B2 (en) | 2007-09-27 | 2014-04-24 | Amgen Inc. | Pharmaceutical formulations |
ES2962777T3 (es) | 2007-11-15 | 2024-03-21 | Amgen Inc | Formulación acuosa de anticuerpos estabilizada por antioxidantes para la administración parenteral |
US20090280112A1 (en) * | 2008-05-05 | 2009-11-12 | The Regents Of The University Of California | Inhibitory effects of nordihydroguaiaretic acid (ndga) on the igf-1 receptor and androgen dependent growth of lapc-4 prostate cancer cells |
WO2011050333A1 (en) | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Amgen Inc. | Vial adapter and system |
US9061097B2 (en) | 2010-06-07 | 2015-06-23 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
JP2013177317A (ja) * | 2010-06-24 | 2013-09-09 | Meneki Seibutsu Kenkyusho:Kk | 抗pdgf受容体抗体 |
SG186421A1 (en) | 2010-07-02 | 2013-01-30 | Medimmune Llc | Antibody formulations |
JP2014510265A (ja) | 2011-02-02 | 2014-04-24 | アムジェン インコーポレイテッド | Igf−1rの阻害に関する方法および組成物 |
MX341790B (es) | 2011-03-31 | 2016-09-02 | Amgen Inc | Adaptador de viales y sistema. |
CA2833748C (en) | 2011-04-20 | 2019-07-16 | Amgen Inc. | Autoinjector apparatus |
EP2748197A2 (en) | 2011-08-26 | 2014-07-02 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Tandem fc bispecific antibodies |
ES2729993T3 (es) | 2011-10-14 | 2019-11-07 | Amgen Inc | Inyector y procedimiento de ensamblaje |
CA2852127C (en) | 2011-11-11 | 2020-10-27 | Duke University | Combination drug therapy for the treatment of solid tumors |
US8980259B2 (en) | 2012-07-20 | 2015-03-17 | Novartis Ag | Combination therapy |
EP2922590B1 (en) | 2012-11-21 | 2020-02-05 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
WO2014134202A1 (en) | 2013-02-26 | 2014-09-04 | Triact Therapeutics, Inc. | Cancer therapy |
SG11201506451UA (en) | 2013-03-06 | 2015-09-29 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | Anti-c-met tandem fc bispecific antibodies |
TWI580451B (zh) | 2013-03-15 | 2017-05-01 | 安美基公司 | 用於注射器之匣盒及使用具有自動注射器及匣盒之自動注射器設備之方法 |
EP3593839A1 (en) | 2013-03-15 | 2020-01-15 | Amgen Inc. | Drug cassette |
LT2976117T (lt) | 2013-03-22 | 2021-02-25 | Amgen Inc. | Purkštuvas ir surinkimo būdas |
US9381246B2 (en) | 2013-09-09 | 2016-07-05 | Triact Therapeutics, Inc. | Cancer therapy |
AU2014340171B2 (en) | 2013-10-24 | 2019-05-30 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
WO2015061389A1 (en) | 2013-10-24 | 2015-04-30 | Amgen Inc. | Drug delivery system with temperature-sensitive control |
CN106029150B (zh) * | 2013-12-20 | 2020-01-14 | 波士顿科学国际有限公司 | 集成导管系统 |
WO2015119906A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | Amgen Inc. | Drug delivery system with electromagnetic field generator |
CA3193070A1 (en) | 2014-05-07 | 2015-11-12 | Amgen Inc. | Autoinjector with shock reducing elements |
JP6817074B2 (ja) | 2014-06-03 | 2021-01-20 | アムジエン・インコーポレーテツド | 制御可能な薬物送達システム及び使用方法 |
EP3164416A1 (en) * | 2014-07-03 | 2017-05-10 | Imclone, LLC | Therapy for gist |
AP2016009649A0 (en) * | 2014-07-03 | 2016-12-31 | Imclone Llc | Combination therapy |
MX2021014323A (es) | 2014-10-14 | 2023-02-02 | Amgen Inc | Dispositivo de inyección de fármaco con indicadores visuales y audibles. |
GB201419094D0 (en) | 2014-10-27 | 2014-12-10 | Agency Science Tech & Res | Anti-TIM-3-antibodies |
GB201419084D0 (en) | 2014-10-27 | 2014-12-10 | Agency Science Tech & Res | Anti-PD-1 antibodies |
US10259874B2 (en) | 2014-10-27 | 2019-04-16 | Agency For Science, Technology And Research | Anti-TIM-3 antibodies |
EP3233163B1 (en) | 2014-12-19 | 2021-10-13 | Amgen Inc. | Drug delivery device with proximity sensor |
US11357916B2 (en) | 2014-12-19 | 2022-06-14 | Amgen Inc. | Drug delivery device with live button or user interface field |
CA3069716C (en) | 2015-02-17 | 2021-11-09 | Amgen Inc. | Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback |
EP3981450A1 (en) | 2015-02-27 | 2022-04-13 | Amgen, Inc | Drug delivery device having a needle guard mechanism with a tunable threshold of resistance to needle guard movement |
WO2017039786A1 (en) | 2015-09-02 | 2017-03-09 | Amgen Inc. | Syringe assembly adapter for a syringe |
JP7082568B2 (ja) | 2015-12-09 | 2022-06-08 | アムジエン・インコーポレーテツド | 信号伝達キャップ付き自動注射器 |
AU2016369557B2 (en) | 2015-12-16 | 2022-10-20 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods of manufacturing protein microparticles |
WO2017120178A1 (en) | 2016-01-06 | 2017-07-13 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling electronics |
EP3721922B1 (en) | 2016-03-15 | 2022-05-04 | Amgen Inc. | Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices |
US11541168B2 (en) | 2016-04-29 | 2023-01-03 | Amgen Inc. | Drug delivery device with messaging label |
US11389588B2 (en) | 2016-05-02 | 2022-07-19 | Amgen Inc. | Syringe adapter and guide for filling an on-body injector |
CA3018426A1 (en) | 2016-05-13 | 2017-11-16 | Amgen Inc. | Vial sleeve assembly |
WO2017200989A1 (en) | 2016-05-16 | 2017-11-23 | Amgen Inc. | Data encryption in medical devices with limited computational capability |
EP3465124A1 (en) | 2016-06-03 | 2019-04-10 | Amgen Inc. | Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices |
MA45493A (fr) | 2016-06-27 | 2019-05-01 | Aicuris Anti Infective Cures Gmbh | Inhibiteurs d'entrée de hcmv. |
EP3478342A1 (en) | 2016-07-01 | 2019-05-08 | Amgen Inc. | Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events |
NZ749159A (en) * | 2016-07-28 | 2020-07-31 | Elanco Us Inc | Anti-canine platelet derived growth factor receptor alpha antibody |
WO2018034784A1 (en) | 2016-08-17 | 2018-02-22 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement detection |
US20200261643A1 (en) | 2016-10-25 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | On-body injector |
AU2018210301A1 (en) | 2017-01-17 | 2019-08-01 | Amgen Inc. | Injection devices and related methods of use and assembly |
EP3582829A1 (en) | 2017-02-17 | 2019-12-25 | Amgen Inc. | Insertion mechanism for drug delivery device |
MX2019009625A (es) | 2017-02-17 | 2019-10-09 | Amgen Inc | Dispositivo de administracion de farmacos con trayectoria de flujo de fluido esteril y metodo relacionado de ensamblaje. |
CA3050927A1 (en) | 2017-03-06 | 2018-09-13 | Brian Stonecipher | Drug delivery device with activation prevention feature |
CA3052482A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-13 | Amgen Inc. | Needle insertion by overpressure |
IL303449B1 (en) | 2017-03-09 | 2024-04-01 | Amgen Inc | Insertion mechanism for a drug delivery device |
EP3595717A1 (en) | 2017-03-17 | 2020-01-22 | Imclone, LLC | Combination therapy for pancreatic cancer |
CN114588404A (zh) | 2017-03-28 | 2022-06-07 | 美国安进公司 | 柱塞杆和注射器组件系统以及方法 |
AU2018282077B2 (en) | 2017-06-08 | 2023-11-23 | Amgen Inc. | Torque driven drug delivery device |
AU2018280054B2 (en) | 2017-06-08 | 2023-07-13 | Amgen Inc. | Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly |
AU2018288604B2 (en) | 2017-06-22 | 2023-12-21 | Amgen Inc. | Device activation impact/shock reduction |
MX2019015479A (es) | 2017-06-23 | 2020-02-20 | Amgen Inc | Dispositivo electronico de administracion de farmacos con tapa accionada por un conjunto de conmutador. |
WO2019014014A1 (en) | 2017-07-14 | 2019-01-17 | Amgen Inc. | NEEDLE INSERTION-RETRACTING SYSTEM HAVING DOUBLE TORSION SPRING SYSTEM |
JP2020527376A (ja) | 2017-07-21 | 2020-09-10 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬物容器のためのガス透過性シーリング部材及び組立方法 |
EP3658203B1 (en) | 2017-07-25 | 2022-08-31 | Amgen Inc. | Drug delivery device with gear module and related method of assembly |
JP7242562B2 (ja) | 2017-07-25 | 2023-03-20 | アムジエン・インコーポレーテツド | 容器アクセスシステムを有する薬物送達デバイス及び関連する組立方法 |
MA49838A (fr) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Amgen Inc | Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre |
US11077246B2 (en) | 2017-08-18 | 2021-08-03 | Amgen Inc. | Wearable injector with sterile adhesive patch |
US11103636B2 (en) | 2017-08-22 | 2021-08-31 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
WO2019070497A1 (en) | 2017-10-04 | 2019-04-11 | Imclone Llc | POLY THERAPY AGAINST CANCER |
US11759565B2 (en) | 2017-10-04 | 2023-09-19 | Amgen Inc. | Flow adapter for drug delivery device |
EP4257164A3 (en) | 2017-10-06 | 2024-01-17 | Amgen Inc. | Drug delivery device with interlock assembly and related method of assembly |
US11464903B2 (en) | 2017-10-09 | 2022-10-11 | Amgen Inc. | Drug delivery device with drive assembly and related method of assembly |
WO2019090086A1 (en) | 2017-11-03 | 2019-05-09 | Amgen Inc. | Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device |
MA50553A (fr) | 2017-11-06 | 2020-09-16 | Amgen Inc | Dispositif d'administration de médicament avec détection de positionnement et de débit |
MA50569A (fr) | 2017-11-06 | 2020-09-16 | Amgen Inc | Ensembles de remplissage-finition et procédés associés |
JP7247174B2 (ja) | 2017-11-10 | 2023-03-28 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬物送達デバイスのプランジャ |
MA50903A (fr) | 2017-11-16 | 2021-05-12 | Amgen Inc | Auto-injecteur avec détection de décrochage et de point d'extrémité |
AU2018368340B2 (en) | 2017-11-16 | 2024-03-07 | Amgen Inc. | Door latch mechanism for drug delivery device |
US10835685B2 (en) | 2018-05-30 | 2020-11-17 | Amgen Inc. | Thermal spring release mechanism for a drug delivery device |
WO2019231803A1 (en) | 2018-05-31 | 2019-12-05 | Imclone Llc | Combination therapy for soft tissue sarcoma |
US11083840B2 (en) | 2018-06-01 | 2021-08-10 | Amgen Inc. | Modular fluid path assemblies for drug delivery devices |
US20210228815A1 (en) | 2018-07-24 | 2021-07-29 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with grip portion |
WO2020023220A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation |
MA53375A (fr) | 2018-07-24 | 2021-06-02 | Amgen Inc | Dispositifs d'administration pour l'administration de médicaments |
CA3103681A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Delivery devices for administering drugs |
MA53320A (fr) | 2018-07-31 | 2021-11-03 | Amgen Inc | Ensemble de trajet de fluide pour dispositif d'administration de médicament |
US20210346601A1 (en) | 2018-09-24 | 2021-11-11 | Amgen Inc. | Interventional dosing systems and methods |
WO2020068476A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Amgen Inc. | Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device |
AR116679A1 (es) | 2018-10-02 | 2021-06-02 | Amgen Inc | Sistemas de inyección para la administración de fármacos con transmisión de fuerza interna |
US20210338936A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-11-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device having dose indicator |
CA3109988A1 (en) | 2018-10-15 | 2020-04-23 | Amgen Inc. | Platform assembly process for drug delivery device |
EP3866890A1 (en) | 2018-10-15 | 2021-08-25 | Amgen Inc. | Drug delivery device having damping mechanism |
WO2020091981A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
WO2020091956A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
EP3873567A1 (en) | 2018-11-01 | 2021-09-08 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial needle retraction |
CN113056288A (zh) | 2018-11-20 | 2021-06-29 | 康奈尔大学 | 放射性核素的大环配合物及其在癌症的放射治疗中的应用 |
CN109134655B (zh) * | 2018-11-28 | 2019-02-26 | 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 | 一种抗PDGFRα的单克隆抗体及其制备方法和应用 |
MX2021012557A (es) | 2019-04-24 | 2021-11-12 | Amgen Inc | Conjuntos y metodos de verificacion de esterilizacion de jeringuillas. |
US20220273887A1 (en) | 2019-08-23 | 2022-09-01 | Amgen Inc. | Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods |
WO2021076620A1 (en) | 2019-10-15 | 2021-04-22 | Eli Lilly And Company | Recombinantly engineered, lipase/esterase-deficient mammalian cell lines |
CA3217207A1 (en) | 2021-05-21 | 2022-11-24 | Amgen Inc. | Method of optimizing a filling recipe for a drug container |
WO2023081923A1 (en) | 2021-11-08 | 2023-05-11 | Frequency Therapeutics, Inc. | Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2183461C2 (ru) * | 2000-05-29 | 2002-06-20 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ | Способ лечения сарком мягких тканей |
RU2241452C1 (ru) * | 2003-06-11 | 2004-12-10 | Московский областной научно-исследовательский клинический институт | Способ лечения метастазов в кости |
Family Cites Families (106)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5585344A (en) | 1984-03-19 | 1996-12-17 | The Rockefeller University | Liver-derived receptors for advanced glycosylation endproducts and uses thereof |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
US4774321A (en) | 1986-12-01 | 1988-09-27 | Massachusetts Institute Of Technology | DP100 EGF and insulin-binding protein from Drosophila cells |
EP0308500B1 (en) | 1987-04-06 | 1993-06-16 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Human somatomedin carrier protein subunits and process for producing them |
US5200509A (en) | 1987-04-06 | 1993-04-06 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Human somatomedin carrier protein subunits and process for producing them; recombinant DNA molecules, hosts, processes and human somatomedin carrier protein-like polypeptides |
JP3040121B2 (ja) | 1988-01-12 | 2000-05-08 | ジェネンテク,インコーポレイテッド | 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法 |
IL89489A0 (en) | 1988-03-09 | 1989-09-10 | Hybritech Inc | Chimeric antibodies directed against human carcinoembryonic antigen |
AU631545B2 (en) | 1988-04-15 | 1992-12-03 | Protein Design Labs, Inc. | Il-2 receptor-specific chimeric antibodies |
AU627183B2 (en) | 1988-04-16 | 1992-08-20 | Celltech Limited | Method for producing recombinant dna proteins |
AU4128089A (en) | 1988-09-15 | 1990-03-22 | Rorer International (Overseas) Inc. | Monoclonal antibodies specific to human epidermal growth factor receptor and therapeutic methods employing same |
GB8826451D0 (en) | 1988-11-11 | 1988-12-14 | Sandoz Ltd | Improvements in/relating to organic compounds |
IL92816A0 (en) | 1988-12-22 | 1990-09-17 | Biogrowth Inc | Recombinant dna molecules,hosts,processes and human somatomedin carrier protein-like polypeptides |
US5571714A (en) | 1988-12-22 | 1996-11-05 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Monoclonal antibodies which bind both transforming growth factors β1 and β2 and methods of use |
US7252929B2 (en) | 1989-02-09 | 2007-08-07 | United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept Of Health & Human Services | Methods for identifying alpha PDGFR agonists and antagonists |
US5468468A (en) | 1989-02-09 | 1995-11-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services | Method for making a monoclonal antibody, monoclonal antibodies to α PD |
WO1990010013A1 (en) | 1989-02-09 | 1990-09-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce | TYPE oc PLATELET-DERIVED GROWTH FACTOR RECEPTOR GENE |
US6228600B1 (en) | 1992-07-20 | 2001-05-08 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Immunoassays for the alpha platelet-derived growth factor receptor |
US5705157A (en) | 1989-07-27 | 1998-01-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of treating cancerous cells with anti-receptor antibodies |
US5977307A (en) | 1989-09-07 | 1999-11-02 | Alkermes, Inc. | Transferrin receptor specific ligand-neuropharmaceutical agent fusion proteins |
EP0525109A4 (en) | 1990-04-16 | 1993-06-30 | Rhone-Poulenc Rorer International (Holdings) Inc. | Styryl-substituted monocyclic and bicyclic heteroaryl compounds which inhibit egf receptor tyrosine kinase |
US5196446A (en) | 1990-04-16 | 1993-03-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase |
CA2090703A1 (en) | 1990-08-28 | 1992-03-01 | Michael C. Kiefer | Insulin-like growth factor binding protein (igfbp-4) |
JPH06507543A (ja) | 1991-01-31 | 1994-09-01 | コア セラピューティクス,インコーポレイティド | ヒト血小板由来成長因子レセプターポリペプチドの細胞外領域ドメイン |
AU661533B2 (en) | 1992-01-20 | 1995-07-27 | Astrazeneca Ab | Quinazoline derivatives |
US5262308A (en) | 1992-01-28 | 1993-11-16 | Thomas Jefferson University | Cell lines which constitutively express IGF-1 and IGF-1 R |
AU4025193A (en) | 1992-04-08 | 1993-11-18 | Cetus Oncology Corporation | Humanized C-erbB-2 specific antibodies |
US5597563A (en) | 1992-09-04 | 1997-01-28 | Beschorner; William E. | Method induction of antigen-specific immune tolerance |
US5869337A (en) | 1993-02-12 | 1999-02-09 | President And Fellows Of Harvard College | Regulated transcription of targeted genes and other biological events |
WO1994019016A1 (en) | 1993-02-25 | 1994-09-01 | Zymogenetics, Inc. | Inhibition of intimal hyperplasia using antibodies to pdgf receptors |
US5620687A (en) | 1993-02-25 | 1997-04-15 | Zymogenetics, Inc. | Inhibition of intimal hyperplasia using antibodies to PDGF beta receptors |
US5976534A (en) | 1993-02-25 | 1999-11-02 | Zymogenetics, Inc. | Inhibition of intimal hyperplasia using antibodies to PDGF receptors and heparin |
JPH08508409A (ja) | 1993-04-06 | 1996-09-10 | シーダーズ − サイナイ メディカル センター | 変異インスリン様増殖因子▲i▼受容体サブユニットおよびそれらの使用方法 |
EP0739488A1 (en) | 1994-01-14 | 1996-10-30 | Genentech, Inc. | Antagonists to insulin receptor tyrosine kinase inhibitor |
US5679683A (en) | 1994-01-25 | 1997-10-21 | Warner-Lambert Company | Tricyclic compounds capable of inhibiting tyrosine kinases of the epidermal growth factor receptor family |
US5532159A (en) | 1994-04-01 | 1996-07-02 | The Ohio State University | Monoclonal antibody to canine placental oncofetal protein for detecting cancer |
US5597700A (en) | 1994-04-28 | 1997-01-28 | California Research, Llc | Method for detecting free insulin-like growth-factor-binding protein 1 and a test device for detecting the ruptures of fetal membranes using the above method |
JPH10505819A (ja) | 1994-06-24 | 1998-06-09 | ヴラディミール ピー. トーチリン | 腫瘍の治療及び予防のための自己抗体の使用方法 |
US5939269A (en) | 1994-12-28 | 1999-08-17 | The Regents Of The University Of California | Antagonists to insulin receptor tyrosine kinase inhibitor |
WO1996030347A1 (en) | 1995-03-30 | 1996-10-03 | Pfizer Inc. | Quinazoline derivatives |
GB9508538D0 (en) | 1995-04-27 | 1995-06-14 | Zeneca Ltd | Quinazoline derivatives |
EP0861267A4 (en) | 1995-11-14 | 2000-02-02 | Univ Jefferson | INDUCTION AND RESISTANCE TO TUMOR GROWTH BY MEANS OF SOLUBLE IGF-1 |
EP0888349B1 (en) | 1996-01-23 | 2002-05-22 | Novartis AG | Pyrrolopyrimidines and processes for their preparation |
GB9603095D0 (en) | 1996-02-14 | 1996-04-10 | Zeneca Ltd | Quinazoline derivatives |
GB9707800D0 (en) | 1996-05-06 | 1997-06-04 | Zeneca Ltd | Chemical compounds |
AUPN999096A0 (en) | 1996-05-22 | 1996-06-13 | Northstar Biologicals Pty Ltd | Peptides, antibodies, vaccines & uses thereof |
BR9709959A (pt) | 1996-06-24 | 2000-05-09 | Pfizer | Derivados tricìclicos de fenilamino substituìdo para o tratamento de doenças hiperproliferativas |
US5798266A (en) | 1996-08-27 | 1998-08-25 | K-Quay Enterprises, Llc | Methods and kits for obtaining and assaying mammary fluid samples for breast diseases, including cancer |
US6071891A (en) | 1996-11-22 | 2000-06-06 | Regents Of The University Of Minnesota | Insulin-like growth factor 1 receptors (IGF-1R) antisense oligonucleotide cells composition |
WO1998033798A2 (en) | 1997-02-05 | 1998-08-06 | Warner Lambert Company | Pyrido[2,3-d]pyrimidines and 4-amino-pyrimidines as inhibitors of cell proliferation |
JP2002515511A (ja) | 1998-05-15 | 2002-05-28 | イムクローン システムズ インコーポレイティド | 放射線及び成長因子レセプター・チロシン・キナーゼのインヒビターを使用するヒト腫瘍の治療 |
ZA200007412B (en) | 1998-05-15 | 2002-03-12 | Imclone Systems Inc | Treatment of human tumors with radiation and inhibitors of growth factor receptor tyrosine kinases. |
US6875741B2 (en) | 1998-09-02 | 2005-04-05 | Renuka Pillutla | Insulin and IGF-1 receptor agonists and antagonists |
EA004436B1 (ru) | 1998-09-29 | 2004-04-29 | Уайт Холдингз Корпорейшн | Замещенные 3-цианохинолины в качестве ингибиторов протеинтирозинкиназ |
CA2345817C (en) | 1998-10-05 | 2013-02-12 | M&E Biotech A/S | Novel methods for therapeutic vaccination |
GEP20032997B (en) | 1998-11-19 | 2003-06-25 | Warner Lambert Co | N-[4-(3-Chloro-4-Fluoro-Phenylamino)-7-(3-Morpholin-4-Yl-Propoxy)-Quinazolin-6-Yl]-crylamide, as an Irreversible Inhibitor of Tyrosine Kinases |
EP1006184A1 (en) | 1998-12-03 | 2000-06-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | IGF-1 receptor interacting proteins (IIPs) genes coding therefor and uses thereof |
US6316462B1 (en) | 1999-04-09 | 2001-11-13 | Schering Corporation | Methods of inducing cancer cell death and tumor regression |
BR0012728A (pt) | 1999-07-27 | 2002-04-02 | Michael Miravet Sorribes | Dispositivo para corrigir de forma não-invasiva o formato da orelha externa humana |
JP2004511430A (ja) | 2000-05-24 | 2004-04-15 | イムクローン システムズ インコーポレイティド | 二重特異性免疫グロブリン様抗原結合蛋白および製造方法 |
US20030165502A1 (en) | 2000-06-13 | 2003-09-04 | City Of Hope | Single-chain antibodies against human insulin-like growth factor I receptor: expression, purification, and effect on tumor growth |
US7329745B2 (en) | 2000-06-13 | 2008-02-12 | City Of Hope | Single-chain antibodies against human insulin-like growth factor I receptor: expression, purification, and effect on tumor growth |
US7071160B2 (en) | 2000-06-15 | 2006-07-04 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Insulin-like growth factor-binding protein |
US8153121B2 (en) | 2000-10-06 | 2012-04-10 | Los Angeles Biomedical Research Institute at Harbor—UCLA Medical Center | Diagnosis and therapy of antibody-mediated inflammatory autoimmune disorders |
ME00502B (me) * | 2001-01-05 | 2011-10-10 | Amgen Fremont Inc | Antitjela za insulinu sličan receptor faktora i rasta |
US7071300B2 (en) | 2001-03-14 | 2006-07-04 | Genentech, Inc. | IGF antagonist peptides |
WO2002087618A1 (fr) | 2001-04-27 | 2002-11-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Methode de prevention et de traitement du cancer |
US7135174B2 (en) * | 2002-01-07 | 2006-11-14 | Amgen Fremont, Inc. | Antibodies directed to PDGFD and uses thereof |
US7241444B2 (en) | 2002-01-18 | 2007-07-10 | Pierre Fabre Medicament | Anti-IGF-IR antibodies and uses thereof |
US7553485B2 (en) | 2002-01-18 | 2009-06-30 | Pierre Fabre Medicament | Anti-IGF-IR and/or anti-insulin/IGF-I hybrid receptors antibodies and uses thereof |
DE60312639T2 (de) | 2002-01-18 | 2007-11-29 | Pierre Fabre Médicament | Antikörper gegen igf-ir und ihre verwendungen |
EP1916001B1 (en) | 2002-03-04 | 2011-05-25 | Imclone LLC | Human antibodies specific to KDR and uses thereof |
NZ554740A (en) * | 2002-05-24 | 2009-01-31 | Schering Corp | Neutralizing human anti-IGFR antibody |
US7538195B2 (en) | 2002-06-14 | 2009-05-26 | Immunogen Inc. | Anti-IGF-I receptor antibody |
US8034904B2 (en) | 2002-06-14 | 2011-10-11 | Immunogen Inc. | Anti-IGF-I receptor antibody |
PT1517921E (pt) | 2002-06-28 | 2006-09-29 | Domantis Ltd | Ligandos duplamente especificos com semi-vida no soro aumentada |
KR101115797B1 (ko) | 2002-08-01 | 2012-07-27 | 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 | 알파 태아 단백질 Immu31 항체 및 융합단백질, 및이들의 이용 방법 |
US20040102360A1 (en) | 2002-10-30 | 2004-05-27 | Barnett Stanley F. | Combination therapy |
CN101164616A (zh) | 2003-02-13 | 2008-04-23 | 辉瑞产品公司 | 抗-胰岛素样生长因子i受体抗体的用途 |
CA2518980A1 (en) | 2003-03-14 | 2004-09-30 | Pharmacia Corporation | Antibodies to igf-i receptor for the treatment of cancers |
ES2383014T3 (es) | 2003-04-02 | 2012-06-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos contra el factor I de crecimiento similar a insulina y usos de los mismos |
EP1622942B1 (en) | 2003-05-01 | 2014-11-19 | ImClone LLC | Fully human antibodies directed against the human insulin-like growth factor-1 receptor |
AR046071A1 (es) | 2003-07-10 | 2005-11-23 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos contra el receptor i del factor de crecimiento de tipo insulinico y los usos de los mismos |
EP1651663B1 (en) | 2003-08-08 | 2017-05-17 | Immunomedics, Inc. | Bispecific antibodies for inducing apoptosis of tumor and diseased cells |
EP1656391B1 (en) * | 2003-08-13 | 2010-10-13 | Pfizer Products Inc. | Modified human igf-1r antibodies |
WO2005018671A1 (ja) | 2003-08-21 | 2005-03-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 癌転移阻害剤 |
CA2540133A1 (en) | 2003-09-24 | 2005-03-31 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Drugs for treating cancer |
AR046639A1 (es) | 2003-11-21 | 2005-12-14 | Schering Corp | Combinaciones terapeuticas de anticuerpo anti- igfr1 |
JP2007523956A (ja) | 2004-02-25 | 2007-08-23 | ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート インク. | 腫瘍細胞増殖を阻害するための方法 |
AU2005222384A1 (en) * | 2004-03-05 | 2005-09-22 | Vegenics Limited | Growth factor binding constructs materials and methods |
JP4493485B2 (ja) | 2004-04-28 | 2010-06-30 | シャープ株式会社 | 太陽電池モジュール用配線部材、それを用いた太陽電池モジュールおよび太陽電池モジュール用配線部材の製造方法 |
KR20070036130A (ko) | 2004-07-16 | 2007-04-02 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 항-아이지에프-1알 항체를 사용하는 비-혈액학적악성종양에 대한 조합 치료 |
WO2006020258A2 (en) | 2004-07-17 | 2006-02-23 | Imclone Systems Incorporated | Novel tetravalent bispecific antibody |
FR2873699B1 (fr) | 2004-07-29 | 2009-08-21 | Pierre Fabre Medicament Sa | Nouveaux anticorps anti igf ir rt leurs utilisations |
ES2356830T3 (es) | 2004-12-03 | 2011-04-13 | Schering Corporation | Biomarcadores para preselección de pacientes para terapia de anti-igf-1r. |
WO2006068829A1 (en) | 2004-12-21 | 2006-06-29 | Alcon, Inc. | Agents which regulate, inhibit, or modulate the activity and/or expression of lysyl oxidase (lox) and lox-like proteases as a unique means to both lower intraocular pressure and treat glaucomatous retinopathies/optic neuropathies |
MY146381A (en) | 2004-12-22 | 2012-08-15 | Amgen Inc | Compositions and methods relating relating to anti-igf-1 receptor antibodies |
BRPI0608175A2 (pt) | 2005-04-15 | 2009-11-10 | Immunogen Inc | método de eliminação de população de células heterogêneas ou mistas em tumores, assim como compostos maitansinóides |
SI2100618T1 (sl) * | 2005-06-17 | 2014-03-31 | Imclone Llc | Antagonisti receptorja za zdravljenje metastaznega kostnega raka |
WO2007000328A1 (en) | 2005-06-27 | 2007-01-04 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P Angeletti Spa | Antibodies that bind to an epitope on insulin-like growth factor 1 receptor and uses thereof |
US20070009970A1 (en) | 2005-07-08 | 2007-01-11 | Predicant Biosciences, Inc. | Biological patterns for diagnosis and treatment of cancer |
FR2888850B1 (fr) | 2005-07-22 | 2013-01-11 | Pf Medicament | Nouveaux anticorps anti-igf-ir et leurs applications |
BRPI0615397B1 (pt) | 2005-08-26 | 2023-10-03 | Roche Glycart Ag | Anticorpo anti-cd20, composição farmacêutica que o contém e uso do mesmo |
RS52357B (en) | 2005-12-13 | 2012-12-31 | Medimmune Limited | BINDING PROTEINS SPECIFIC TO INSULIN SIMILAR GROWTH FACTORS AND THEIR USE |
WO2010000008A1 (en) | 2008-06-30 | 2010-01-07 | Desi Raymond Richardson | Thiosemicarbazone compounds and use thereof |
KR101358532B1 (ko) | 2008-07-18 | 2014-02-05 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 신규한 페닐이미다조피라진 |
DK200900548A (en) | 2008-07-18 | 2010-01-19 | Univ Koebenhavn | Processes for manufacture of products from plants |
-
2006
- 2006-06-19 SI SI200631744T patent/SI2100618T1/sl unknown
- 2006-06-19 CN CNA2006800284670A patent/CN101500597A/zh active Pending
- 2006-06-19 BR BRPI0622073A patent/BRPI0622073A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2006-06-19 PT PT90751025T patent/PT2100618E/pt unknown
- 2006-06-19 DK DK09075103.3T patent/DK2100614T3/da active
- 2006-06-19 CN CN200910126431.1A patent/CN101613409B/zh active Active
- 2006-06-19 ES ES09075103T patent/ES2435727T3/es active Active
- 2006-06-19 EP EP09075103.3A patent/EP2100614B8/en active Active
- 2006-06-19 CN CN2009101264326A patent/CN101612399B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-19 RU RU2008101772/14A patent/RU2008101772A/ru not_active Application Discontinuation
- 2006-06-19 CA CA002612449A patent/CA2612449A1/en not_active Abandoned
- 2006-06-19 BR BRPI0611984-0A patent/BRPI0611984A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-06-19 EP EP06785127A patent/EP1909819A4/en not_active Withdrawn
- 2006-06-19 ES ES09075102.5T patent/ES2452115T3/es active Active
- 2006-06-19 DK DK09075102.5T patent/DK2100618T3/en active
- 2006-06-19 EP EP09075102.5A patent/EP2100618B1/en active Active
- 2006-06-19 RU RU2009115364/15A patent/RU2502523C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-06-19 US US11/917,890 patent/US8128929B2/en active Active
- 2006-06-19 EP EP12162951A patent/EP2505205A1/en not_active Withdrawn
- 2006-06-19 PL PL09075102T patent/PL2100618T3/pl unknown
- 2006-06-19 JP JP2008517219A patent/JP2009501141A/ja active Pending
- 2006-06-19 CA CA2680945A patent/CA2680945C/en active Active
- 2006-06-19 KR KR1020097003171A patent/KR101246504B1/ko active Protection Beyond IP Right Term
- 2006-06-19 PL PL09075103T patent/PL2100614T3/pl unknown
- 2006-06-19 PT PT90751033T patent/PT2100614E/pt unknown
- 2006-06-19 WO PCT/US2006/023856 patent/WO2006138729A2/en active Application Filing
- 2006-06-19 CA CA2678008A patent/CA2678008C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-19 SI SI200631722T patent/SI2100614T1/sl unknown
- 2006-06-19 KR KR1020087001415A patent/KR20080047529A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-06-19 KR KR1020097003170A patent/KR101246428B1/ko active IP Right Grant
-
2007
- 2007-12-16 IL IL188151A patent/IL188151A0/en unknown
-
2008
- 2008-07-28 HK HK10102590.8A patent/HK1135917A1/xx unknown
-
2009
- 2009-02-17 JP JP2009033512A patent/JP5154470B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-02-17 JP JP2009033517A patent/JP5436883B2/ja active Active
- 2009-04-22 RU RU2009115363A patent/RU2455026C3/ru active Protection Beyond IP Right Term
- 2009-05-21 IL IL198870A patent/IL198870A/en active Protection Beyond IP Right Term
- 2009-05-21 IL IL198869A patent/IL198869A/en not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-10-19 US US13/276,358 patent/US8425911B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-10-19 US US13/276,353 patent/US8574578B2/en active Active
-
2012
- 2012-06-13 JP JP2012134040A patent/JP2012179060A/ja active Pending
-
2013
- 2013-11-14 CY CY20131101013T patent/CY1114603T1/el unknown
-
2014
- 2014-04-04 CY CY20141100261T patent/CY1115076T1/el unknown
-
2017
- 2017-04-05 CY CY2017013C patent/CY2017013I1/el unknown
- 2017-04-05 LU LU00012C patent/LUC00012I2/fr unknown
- 2017-04-14 NL NL300869C patent/NL300869I2/nl unknown
- 2017-04-18 LT LTPA2017011C patent/LTC2100614I2/lt unknown
- 2017-04-18 HU HUS1700015C patent/HUS1700015I1/hu unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2183461C2 (ru) * | 2000-05-29 | 2002-06-20 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ | Способ лечения сарком мягких тканей |
RU2241452C1 (ru) * | 2003-06-11 | 2004-12-10 | Московский областной научно-исследовательский клинический институт | Способ лечения метастазов в кости |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ПОДДУБНАЯ И.В. Лекарственная терапия злокачественных опухолей (современное состояние и перспективы) // Рус.мед.журн., 1998, т.6, №10, с.621-627 он лайн [найдено в Интернет на (http://www.rmj. ru/articles_2145.htm)]. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2496787C2 (ru) * | 2008-06-10 | 2013-10-27 | Онкотерапи Сайенс, Инк. | Пептиды эпитопов mybl2 и содержащие их вакцины |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2455026C2 (ru) | Антагонисты рецепторов для лечения метастатического рака | |
US20230340122A1 (en) | Combined inhibition of pd-1, tgfb and tigit for the treatment of cancer | |
WO2008095015A2 (en) | Method of treating recurrent tumors | |
MX2007016228A (en) | Receptor antagonists for treatment of metastatic bone cancer | |
BRPI0622074B1 (pt) | Anticorpo ou fragmento de anticorpo humano isolado específico para pdgfr-alfa, polinucleotídeo e vetor de expressão |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ND4A | Extension of patent duration |
Effective date: 20200408 |