RU2018132844A

RU2018132844A - Способ ферментативного получения l-аминокислот

Info

Publication number: RU2018132844A
Application number: RU2018132844A
Authority: RU
Inventors: Георг ТИРБАХ; Томас БЕКЕЛЬ; Корнелия ВОС
Original assignee: Эвоник Оперейшенс ГмбХ
Priority date: 2017-09-18
Filing date: 2018-09-17
Publication date: 2020-03-17
Also published as: EP3456833A1; CN109517751A; EP3456834A1; US10683511B2; CN109517771A; US20190085340A1; EP3456834B1; BR102018068936A2

Claims

1. Бактерия рода Corynebacterium, обладающая способностью экскретировать L-аминокислоту, выбранную из протеиногенных L-аминокислот и L-орнитина, где в хромосоме указанной бактерии полинуклеотид, кодирующий полипептид, который по меньшей мере на 90% идентичный аминокислотной последовательности под SEQ ID NO:8, и который придает Escherichia coli устойчивость к по меньшей мере одному антибиотику, выбранному из эритромицина, тетрациклина, пуромицина и блеомицина, модифицирован путем удаления по меньшей мере части нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный полипептид, которая соответствует аминокислотам в положениях 149-251, 41-344 или 14-435 аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO:8, или путем удаления по меньшей мере полной нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный полипептид.

2. Бактерия по п. 1, где полинуклеотид модифицирован путем удаления по меньшей мере полной нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный полипептид, и прилегающего стоп-кодона.

3. Бактерия по любому из п. 1 или 2, где модификация указанного полинуклеотида в хромосоме указанной бактерии приводит в результате к вставке сайта распознавания для рестрикционного фермента EcoRV.

4. Бактерия по любому из пп. 1–3, где указанная бактерия относится к виду Corynebacterium glutamicum.

5. Бактерия по любому из пп. 1–4, где указанная L-аминокислота выбрана из протеиногенных L-аминокислот: L-лизина, L-валина, L-треонина, L-изолейцина, L-гистидина и L-пролина.

6. Бактерия по п. 5, где указанная L-аминокислота представляет собой L-лизин.

7. Бактерия по любому из пп. 1–6, где аминокислотная последовательность полипептида содержит 459 аминокислот до модификации полинуклеотида.

8. Бактерия по п. 7, где полипептид содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:8, или SEQ ID NO:10, или SEQ ID NO:12 до модификации полинуклеотида.

9. Бактерия по п. 8, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:8 до модификации полинуклеотида.

10. Бактерия по п. 9, где до модификации полинуклеотида нуклеотидная последовательность, кодирующая указанный полипептид, содержит положения 1001-2377 нуклеотидной последовательности под SEQ ID NO:7 или положения 1001-2377 под SEQ ID NO:7, где в положении 2341 цитозин (c) заменен тимином (t).

11. Способ ферментативного получения L-аминокислоты, выбранной из протеиногенных L-аминокислот и L-орнитина, предусматривающий стадии:

a) культивирования бактерии по любому из пп. 1-10 в подходящей среде в подходящих условиях,

b) накопления указанной L-аминокислоты в среде с образованием ферментационного бульона, содержащего L-аминокислоту.

12. Способ по п. 11, где указанная L-аминокислота выбрана из протеиногенных L-аминокислот: L-лизина, L-валина, L-треонина, L-изолейцина, L-гистидина и L-пролина.

13. Способ по п. 12, где указанная L-аминокислота представляет собой L-лизин.

14. Способ по любому из пп. 11–13, дополнительно предусматривающий концентрирование ферментационного бульона, содержащего L-аминокислоту.

15. Способ по любому из пп. 11–14, дополнительно предусматривающий стадию высушивания ферментационного бульона, содержащего L-аминокислоту.

16. Способ по любому из пп. 11–14, дополнительно предусматривающий стадию выделения L-аминокислоты из указанного ферментационного бульона, содержащего L-аминокислоту.