RS58409B1 - Inhibitori virusa hepatitisa c - Google Patents

Inhibitori virusa hepatitisa c

Info

Publication number
RS58409B1
RS58409B1 RS20190303A RSP20190303A RS58409B1 RS 58409 B1 RS58409 B1 RS 58409B1 RS 20190303 A RS20190303 A RS 20190303A RS P20190303 A RSP20190303 A RS P20190303A RS 58409 B1 RS58409 B1 RS 58409B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
mixture
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
stereoisomers
Prior art date
Application number
RS20190303A
Other languages
English (en)
Inventor
Kyla Bjornson
Eda Canales
Jeromy J Cottell
Kapil Kumar Karki
Ashley Anne Katana
Darryl Kato
Tetsuya Kobayashi
John O Link
Ruben Martinez
Barton W Phillips
Hyung-Jung Pyun
Michael Sangi
Adam James Schrier
Dustin Siegel
James G Taylor
Chinh Viet Tran
Martin Teresa Alejandra Trejo
Randall W Vivian
Zheng-Yu Yang
Jeff Zablocki
Sheila Zipfel
Original Assignee
Gilead Sciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=48803614&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS58409(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Gilead Sciences Inc filed Critical Gilead Sciences Inc
Publication of RS58409B1 publication Critical patent/RS58409B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
    • A61K31/10—Sulfides; Sulfoxides; Sulfones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/401—Proline; Derivatives thereof, e.g. captopril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/36—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/16—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

Opis
OBLAST
[0001] Otkriveni su novi mali molekuli inhibitori replikacije virusa, a takođe su otkrivene kompozicije koje sadrže takva jedinjenja i terapeutski postupci koji obuhvataju davanje takvih jedinjenja.
STANJE TEHNIKE
[0002] Virus hepatitisa C (HCV), član roda hepacivirusa u okiru familije Flaviviridae, je vodeći uzrok hronične bolesti jetre širom sveta (Boyer, N. et al. J Hepatol. 2000, 32, 98-112). Prema tome, zanačajan foks trenutih antivirusnih istraživanja je usmeren ka razvoju poboljšanih postupaka za lečenje hroničnih HCV infekcija kod ljudi (Ciesek, S., von Hahn T., and Manns, MP., Clin. Liver Dis., 2011, 15, 597-609; Soriano, V. et al, J. Antimicrob. Chemother., 2011, 66, 1573-1686; Brody, H., Nature Outlook, 2011, 474, S1-S7; Gordon, C. P., et al., J. Med. Chem.2005, 48, 1-20; Maradpour, D., et al., Nat. Rev. Micro.2007, 5, 453-463).
[0003] Virološka lečenja pacijenata sa hroničnim HCV infekcijama je teško postići zbog ogromne količine dnevne proizvodnje virusa kod hronično zaraženih pacijenta i visoke spontane mutabilnosti HCV (Neumann, et al., Science 1998, 282, 103-7; Fukimoto, et al., Hepatology, 1996, 24, 1351-4; Domingo, et al., Gene 1985, 40, 1-8; Martell, et al., J. Virol. 1992, 66, 3225-9). HCV lečenje je dalje komplikovano činjenicom da je HCV genetički raznovrstan i eksprimovan kao nekoliko različitih genotipova i brojnih podtipova . Na primer, HCV je trenutno klasifikovan u šest galvnih genotipova (označenih 1-6), mnogo podtipova (označenih a, b, c, i tako dalje), i oko 100 različitih sojeva (obeleženih 1, 2, 3, i tako dalje).
[0004] HCV je širom sveta raspoređen u okviru genotipova 1, 2, i 3 prethodno određenih u okviru Sjedinjenih Država, Evrope, Australije, i Istočene Azije (Japana, Tajvana, Tajlanda, i Kine). Genotip 4 je široko raspoređen na Srednjem Istoku, Egiptu i centralnoj Africi dok genotip 5 i 6 se predominanto nalaze u Južnoj Africi i Severo-istočnoj Aziji respektivno (Simmonds, P. et al. J Virol. 84: 4597-4610, 2010).
[0005] Kombinacija ribavirina, nukleozidnog analoga, i interferona-alfa (α) (IFN), je korišćena za lečenje višestrukih genotipova hroničnih HCV infekcija kod ljudi. Međutim, varjabilni klinički odgovor primećen kod pacijenata i toksičnost ovog režima ograničava njegovu korisnost. Dodavanje HCV proteaznog inhibitora (telaprevira ili boceprevira) u ribavirin i IFN režim poboljšava značajno stopu viroloških odgovora 12-nedeljnog post-lečenja (SVR12). Međutim, režim je trenutno samo odobren za genotip 1 pacijenata a ostaje toksičnost i ostali sporedni efekti.
[0006] Upotreba antivirusnih lekova za lečenje višestrukih genotipova HCV infekcija se pokazala kao izazov usled varjabilne aktivnosti antivirusnih lekova protiv različitih genotipova. HCV proteazni inhibitori često imaju kompromitovanu in vitro aktivnost protiv HCV genotipova 2 i 3 cu poređenju sa genotipom 1 (videti npr., Tabelu 1 Summa, V. et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2012, 56, 4161-4167; Gottwein, J. et al, Gastroenterology, 2011, 141, 1067-1079). U skladu sa tim, klinička efikasnost se takođe pokazala visoko varjabilna duž HCV genotipova. Na primer, terapije koje su visoko efikasne protiv HCV genotipova 1 i 2 mogu imati ograničenu ili su bez kliničke efikasnosti naspram genotipa 3. (Moreno, C. et al., Poster 895, 61st AASLD Meeting, Boston, MA, USA, Oct.29 -Nov. 2, 2010; Graham, F., et al, Gastroenterology, 2011, 141, 881-889; Foster, G.R. et al., EASL 45th Annual Meeting, April 14-18, 2010, Vienna, Austria.) U nekim slučajevima, antivirusna sredstva imaju dobru kliničku efikasnost naspram genotipa 1, ali nižu i varjabilniju naspram genotipova 2 i 3. (Reiser, M. et al., Hepatology, 2005, 41,832-835.) Da bi se prevazišla smanjena efikasnost kod pacijenata sa genotipom 3, suštinski više doze antivirusnih sredstava mogu biti potrebne da bi se postiglo suštinsko suštinsko smanjenje virausnog oštećenja (Fraser, IP et al., Abstract #48, HEP DART 2011, Koloa, HI, December 2011.)
[0007] Takođe potrebna su antivirusna sredstva koja su manje osetljiva na virusnu otpornost. Na primer, rezistentne mutacije u položajima 155 i 168 u HCV proteazi često izazivaju suštinski pad u antivirusnoj efikasnosti HCV proteaznih inhibitora (Mani, N. Ann Forum Collab HIV Res., 2012, 14, 1-8; Romano, KP et al, PNAS, 2010, 107, 20986-20991; Lenz O, Antimicrobial agents and chemotherapy, 2010, 54,1878-1887.)
[0008] Skreće se takođe pažnja na WO2007/016441A1; Srikanth Venkatraman et al., Expert Opinion on Therapeutic Patents, 2009, vol.19, no.9, p1277-1303; Chen Shu-Hui et al.,Current Medicinal Chemistry, 2005, vol.12, no.20, p2317-2342; i US2010/029666A1.
[0009] Sa pogledom na ograničenje trenutnih HCV terapija, postoji potreba za razvijanjem efikasnijih anti-HCV terapija. Takođe će biti korisno da se obezbede terapije koje su efikasne ptoriv višestrukih HCV genotipova i podtipova.
SUŠTINA
[0010] Opisana su nova jedinjenja koja inhibiraju NS3 proteaze virusa hepatitisa C (HCV). U izvesnim izvođenjima, opisana jedinjanja inhibiraju višestruke genotipe virusa hepatitisa C. Ova jedinejnja su korisna u lečenju HCV infekcije i sličnih simptoma.
[0011] U jednom izvođenju (1), obezbeđeno je jedinjenje formule (IV):
ili njegov stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili farmaceutski prihvatljiva so, gde:
J je C1-C4alkil ili C3-C6karbociklil, gde C1-C4alkil ili C3-C6karbociklil je opciono supstituisan sa 1-4 halogena, -OH, arilom ili cijano;
C3-C5karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenikova atoma, gde pomenuti C3-C5karbociklilen je opciono supstituisan sa C1-C4alkil, C1-C3haloalkil, halogen, -OH, ili cijano, ili je C5-C8biciklični karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenikova atoma, ili C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenikov atoma, gde pomenuti C3-C6karbociklen je opciono supstituisan sa C1-C4alkil ili C1-C3haloalkil;
L je C3-C6alkilen, C3-C6alkenilen ili -(CH2)3-ciklopropilen-, opciono supstituisan sa 1-4 halogena, -OH, ili cijano;
Q je C2-C4alkil ili C3-C6karbociklil opciono supstituisan sa C1-C3alkil, halogenom, -OH, ili cijano;
E je C1-C3alkil ili C2-C3alkenil, opciono supstituisan sa 1-3 halogenom;
W je H, -OH, -O(C1-C3)alkil, -O(C1-C3)haloalkil, halogen ili cijano; i
Z<2a>je H ili C1-C3alkil.
(2) U jednom izvođenju (1), J je C1-C3alkil.
(3) U jednom izvođenju (1), J je metil ili etil.
(4) U jednom izvođenju (1) do (3), je C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenikova atoma, gde pomenuti C3-C6karbociklen je opciono supstituisan sa C1-C4alkil ili C1-C3haloalkil.
(5) U jednom izvođenju (1) do (3), je C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenikova atoma, gde je C3-C6karbociklen opciono supstituisan sa metil, etil ili trifluorometil.
(6) U jednom izvođenju (1) do (3), je ciklopropilen.
(7) U jednom izvođenju (1) do (3), je C6-C8premošćeni biciklični karbociklilen ili C6-C8spojeni biciklični karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenikova atoma.
(8) U jednom izvođenju (1) do (7), L je C3-C6alkilen, supstituisan sa 1-4 halogena.
(9) U jednom izvođenju (1) do (7), L je C5alkilen, supstituisan sa dva halogena.
(10) U jednom izvođenju (1) do (7), L je C3-C6alkilen.
(11) U jednom izvođenju (1) do (7), L je C5alkilen.
(12) U jednom izvođenju (8) ili (9), svaki halogen je fluoro.
(13) U jednom izvođenju (1) do (12), Q je t-butil ili C5-C6karbociklil.
(14) U jednom izvođenju (1) do (12), Q je t-butil.
(15) U jednom izvođenju (1) do (14), E je C1-C3alkil opciono supstituisan sa 1-3 halogena atoma.
(16) U jednom izvođenju (1) do (14), E je difluorometil.
(17) U jednom izvođenju (1) do (16), W je vodonik, -O(C1-C3)alkil, halogen ili cijano.
(18) U jednom izvođenju (1) do (16), W je metoksi.
(19) U jednom izvođenju (1) do (18), Z<2a>je vodonik ili metil.
(20) U jednom izvođenju (1) to (18), Z<2a>je metil.
(21) U još jednom izvođenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija jedinjenja prema bilo kom od izvođenja (1)-(20), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
(22) U jednom izvođenju (21), farmaceutska kompozicija dalje obuhvata bar jedno dodatno terapeutsko sredstvo.
(23) U jednom izvođenju (22), pomenuto dodatno terapeutso sredstvo je interferon, analog ribavirina, NS5a inhibitor, NS4b inhibitor, NS3 proteazni inhibitor, NS5b inhibitor, alfaglulozidazni 1 inhibitor, hepatoprotektant, nenukleozidni inhibitor HCV, ili drugi lek za lečenje virusne infekcije hepatitisa C.
(24) U još jednom izvođenju, obezbeđeno je jedinjenje prema bilo kom od izvođenja (1) do (20) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u medicinskoj terapiji.
(25) U jednom izvođenju (24), obezbeđeno je jedinjenje prema bilo kom od izvođenja (1) do (20) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u profilaktičkom ili terapeutskom lečenju infekcije virus hepatirisa C.
DETALJNI OPIS
[0012] Dok je prikazani pronalazak u stanju da bude izveden u različitim oblicima, donji opis nekoliko izvođenja je napravljen uz razumevanje da prikazani opis treba uzeti u obzir kao primere predmeta za koje je zatražene zaštita, bez namere da ograniče obim patentih zahteva na specifična ilustrovana izvođenja. Naslovi korišćeni u ovom opisu su obezbeđeni samo radi pogodnosi i bez namere da ograniče štentne zahteve na bilo koji način. Prikazana izvođenja pod bilo kojim naslovom mogu biti kombinovana sa prikazanim izvođenjima pod bilo kojim drugim naslovom.
Skraćenice
[0013] Sledeće skraćenice su korišćene kroz opis, i imaju sledeća značenja:
°C = stepeni Celzijusovi
A = Angstrem
Definicije
[0014] Osim ako nije na drugi način navedeno, sledeći izrazi i fraze imaju nameru da imaju sledeća značenja:
Kada ciklična grupa (npr. cikloalkil, karbociklil, biciklic karbociklil, heteroaril, heterociklil) je ograničena sa brojem ili opsegom brojeva, broj ili brojevi se odnose na atome koji čine cikličnu grupu, uključujući bilo koje heteroatome. Prema tome, na primer, 4-8 člana heterociklil grupa ima 4, 5, 6, 7 ili 8 atoma u prstenu.
[0015] "Alkenil" odnosi se na ravnolačani ili razgranati lanac ugljovodonika sa bar jednim mestom nezasićenja, npr., (sp<2>)ugljenik-(sp<2>)ugljenik dvostruka veza. Na primer, alkenil grupa može imati 2 do 8 ugljenikovih atoma (tj., C2-C8alkenil), ili 2 do 6 ugljenikovih atoma (tj., C2-C6alkenil). Primeri pogodnih alkenil grupa uključuju, ali bez ograničenja, etilen ili vinil (-CH=CH2) i alil (-CH2CH=CH2).
[0016] "Alkenilen" odnosi se na alken koji ima dva monovalentna radikalska centra koji potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma sa istog ili dva različita ugljenikova atoma osnovnog alkena. Primeri alkenilen radikala uključuju, ali bez ograničenja, 1,2-etenilen (-CH=CH-) ili prop-1-enilen (-CH2CH=CH-).
[0017] "Alkoksi" je RO-gde R je alkil, kao što je gore definsiano. Neograničavajući primeri alkoksi grupa uključuju metoksi, etoksi i propoksi.
[0018] "Alkil" odnosi se na zasićeni, ravan ili razgranati ugljovodonični radikal. Na primer, alkil grupa može imati 1 do 8 ugljenikovih atoma (tj., (C1-C8) alkil) ili 1 do 6 ugljenikovih atoma (tj., (C1-C6alkil) ili 1 do 4 ugljenikovih atoma. Primeri alkil grupa uključuju ali bez ograničenja samo na njih metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, t-butil, pentil, heksil, heptil, oktil, nonil i decil.
[0019] "Alkilen" odnosi se na alkil koji ima dva a monovalentna radikalska centra koji potiču uklanjanjem dva vodonikova atoma iz istog ili dva različita ugljenikova atoma osnovnog alkana. Primeri alkilen radikala uključuju, ali bez ograničenja, metilen (-CH2-), etilen (-CH2CH2-), propilen (-CH2CH2CH2-) i butilen (-CH2CH2CH2CH2-).
[0020] "Alkinil" odnosi se na ravnolančani ili razgranti lanac ugljenih hidrata sa bar jednim mestom nezasićenja, npr., (sp)ugljenik-(sp)ugljenik trostruka veza. Na primer, alkinil grupa može imati 2 do 8 ugljenikovih atoma (C2-C8alkin) ili 2 do 6 ugljenikovih atoma (C2-C6alkinil). Primeri alkinil grupa uključuju, ali bez ograničenja, acetilenil (-C≡CH) i propargil (-CH2C≡CH) grupe.
[0021] "Alkinilen" se odnosi na alkinil koji ima dva centra monovalentnih radikala koji potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma sa istog ili dva različita ugljenikova atoma osnovnog alkina. Tipični alkinilenski radikali uključuju, ali bez ograničenja, acetilen (-C≡C-), propargilen (-CH2C≡C-), i 1-pentinilen (-CH2CH2CH2C≡C-).
[0022] "Aril" odnosi se na pojedinačni aromatični prsten samo od ugljenika ili višestruki kondenzovani sistem prstenova sav od ugljenika (npr., spojeni multiciklični sistem prstenova) gde je bar jedan od prstenova aromatičan. Na primer, aril grupa može imati 6 do 20 ugljenikovih atoma, 6 do 14 ugljenikovih atoma, ili 6 do 12 ugljenikovih atoma. Razume se da tačka vezivanja višestrukog kondenzovanog sistema prstena, kao što je gore definisano, može biti u bilo kom položaju sistema prstena uključujući aromatični ili karbociklilni deo prstena. Primeri aril grupa uključuju, ali bez ograničenja fenil, naftil, tetrahidronaftil i indanil.
[0023] "Arilen" se odnosi na aril kao što je ovde definisano ima dva monovalentna radikalska centra koji potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma iz dva različita ugljenikova atoma osnovnog arila. Tipični arilenski radikali uključuju, ali bez ograničenja, fenilen, npr.,
i naftilen, npr.,
[0024] "Biciklični karbociklil" odnosi se na zasićeni ili parcijalno nezasićeni biciklični spojene sisteme sa 5-14 članova, premošćene ili spiro prstena ugljovodonika vezanih preko ugljenikovog atoma. U spiro bicikličnom karbociklilu, dva prstena dele jedan zajednički ugljenikov atom. U spojenom bicikličmom karbociklilu, dva prstena dele dva zajednička susedna ugljenikova atoma. U premošćenom bicikličnom karbociklilu, dva prstena dele tri ili više zajedničkih, nesusednih ugljenikovih atoma. Primeri bicikličnih karbociklil grupa uključuje, ali bez ograničenja spiro biciklične karbociklil grupe gde dva karbociklil prstena dele jedan zajednički atom (npr.
), spojene biciklične karbociklil grupe gde dva karbociklil prstena dela dva zajednička atoma (npr
), i premošćene biciklične karbociklil grupe gde dva karbociklil prstena dele tri ili više (kao što je 3, 4, 5 ili 6) zajedničkih atoma (npr.
).
[0025] "Biciklični karbociklilen" odnosi se na biciklični karbociklil, kao što je gore definisano, koji ima dva monovalentna radikalska centra koji potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma sa istog ili dva različita ugljenikova atoma osnovnog bicikličnog karbociklila. Primeri bicikličnih karbociklilen grupa uključuju, ali bez ograničenja, spiro biciklične karbociklilen grupe u kojima dva karbociklil prstena dele jedan zajednički atom (npr.
), spojene biciklične karbociklilen grupe u kojima dva karbociklil prstena dele dva zajednička atoma (npr.
), i premošćene biciklične karbociklilen grupe u kojima dva karbociklil prstena dele tri ili više (kao što je 3, 4, 5 ili 6) zajedničkih atoma (npr.
)
[0026] "Karbocikliloksi" je RO-gde R je karbociklil, kao što je ovde definisano.
[0027] "Biciklični karbocikliloksi" je RO- gde R je biciklični karbociklil, kako je ovde definisano.
[0028] "Karbociklil", i "karbocikl" odnosi se na hidrokarbil grupu koja sadrži jednu zasićenu ili delimično nezasićenu prstenastu strukturu, vezanu preko ugljenikovog atoma. U različitim izvođenjima, karbociklil se odnosi na zasićeni ili delimično nezasićeni C3-C12ciklični deo, čiji primeri uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheksenil, cikloheptil i ciklooktil.
[0029] "Karbociklilen" (kao i "karbociklen") odnosi se na karbociklil, kako je ovde definsiano, koji ima dva monovalentna radikalska centra koji potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma sa istog ili dva različita ugljenikova atoma osnovnog karbociklila. Primeri karbociklena uključuju, ali bez ograničenja, ciklopropilen, ciklobutilen, ciklopentilen i cikloheksilen.
[0030] "Karbociklilalkil" odnosi se na hidrokarbil grupu koju čine jedna zasićena li parcijalno nezasićena prstenasta struktura vezana za ugljenik prstena ili ugljenik alkila. U različitim izvođenjima, karbociklilalkil odnosi se na zasićeni ili parcijalno nezasićeni Cr-C12karbociklilalkil deo, čiji primeri uključuju ciklopropilalkil, ciklobutilalkil, ciklopropiletil, i ciklopropilpropil.
[0031] "Karbociklilalkilen" odnosi se na karbociklilalkil, kako je gore definisano, koji ima dva monovalentna radikalska centra koji potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma sa istog ili dva različita ugljenikova atoma osnovnog cikloalkilalkila. Primeri cikloalkilena uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropilmetilen i ciklopropilmetilen.
[0032] "Cikloalkil" odnosi se na hidrokarbil grupu koja sadrži jednu zasićenu prstenastu strukturu, vezanu preko preko dva susedna ugljenika prstena. U različitim izvođenjima, cikloalkil se odnosi na zasićeni C3-C12ciklični deo, čiji primeri uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil i ciklooktil.
[0033] "Cikloalkoksi" je RO- gde R je cikloalkil, kao što je ovde definisano.
[0034] "Direktna veza" odnosi se na kovalentu vezu između dva atoma.
[0035] "Halo" ili "halogen" odnosi se na hloro (-CI), bromo (-Br), fluoro (-F) ili jodo (-I).
[0036] "Haloalkenil" odnosi se na alkenil grupu, kako je ovde definisano, supstituisanu sa jednim ili više atoma halogena.
[0037] "Haloalkoksi" odnosi se na alkoksi, kako je ovde definisano, supstituisan sa jednim ili više atoma halogena.
[0038] "Haloalkil" odnosi se na alkil grupu, u kojoj jedan ili više vodonikovih atoma alkil grupe je zamenjeno sa atomom halogena. Primeri haloalkil grupa uključuju, ali bez ograničenja , -CF3, -CHF2, -CFH2i -CH2CF3.
[0039] "Haloalkilen" odnosi se na alkilen group, kako je ovde definisano, supstituisanu sa jednim ili više atoma halogena.
[0040] "Heteroalkil" odnosi se na alkil grupu, kako je ovde definisano, u kojoj jedan ili više atoma ugljenika je zamenjeno sa atomom kiseonika, sumpora ili azota.
[0041] "Heteroalkilen" odnosi se na alkilen grupu, kako je ovde definisano, u kojoj jedan ili više ugljenikovih atoma je zamenjeno sa atomom kiseonika, sumpora ili azota.
[0042] "Heteroalkenil" odnosi se na alkenil grupu, kako je ovde definisano, u kojoj jedan ili više ugljenikovih atoma je zamenjeno sa atomom kiseonika, sumpora ili azota.
[0043] "Heteroalkenilen" odnosi se na heteroalkenil grupu, kako je ovde definsiano, koja ima dva monovalentna radikalska centra koja potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma iz istog ili dva različita atoma osnovne heteroalkenil grupe.
[0044] "Heteroaril" se odnosi na pojedinačni aromatični prsten koji ima jedan atom drugačiji od ugljenika u prstenu, gde je atom izabran iz grupe koju čine kiseonik, azot i sumpor; izraz takođe obuhvata višestruke kondenzovane sisteme prstena koji imaju bar jedan takav aromatični prsten. Na primer, heteroaril uključuje monociklični, biciklični ili triciklični prsten koji ima do 6 atoma u svakom prstenu, gde je bar jedan prsten aromatični i sadrži od 1 do 4 heteroatoma u prstenu izabranom iz grupe koju čine kiseonik, azot i sumpor. Prsteni višestruko kondenzovanih sistema prstena mogu biti povezani sa svakim drugim preko spojenih, spiro ili premošćenih veza kada zahtevi valence to dozvoljavaju. Neograničavajući primeri heteroarila uključuju piridil, tienil, furanil, pirimidil, imidazolil, piranil, pirazolil, tiazolil, tiadiazolil, izotiazolil, oksazolil, izoksazolil, pirolil, piridazinil, pirazinil, hinolinil, izohinolinil, hinoksalinil, benzofuranil, dibenzofuranil, dibenzotiofenil, benzotienil, indolil, benzotiazolil, benzooksazolil, benzimidazolil, izoindolil, benzotriazolil, purinil, tianaftenil i pirazinil. Vezivanje heteroarila može se javiti preko aromatičnog prstena, ili, ukoliko je heteroaril biciklični ili triciklični i jedan od prstena nije aromatičan ili ne sadrži heteroatome, preko nearomatičnog prstena ili prstena koji ne sadrži heteroatome ."Heteroaril" se takođe smatra da uključuje derivat N-oksida bilo kog heteroarila koji sadrži azot.
[0045] "Heteroarilen" odnosi se na heteroaril, kako je gore definisan, koji ima dva monovalentna radikalska centra koji potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma od istog ili dva različita ugljenikova atoma ili uklanjanja vodonika od jednog ugljenikovog atoma i uklanjanja vodonikovog atoma sa jednog azotovog atoma osnovne heteroaril grupe. Neograničavajući primeri heteroarilenskih grupa su:
[0046] "Heterociklil" odnosi se na zasićeni ili parcijalno nezasićeni monocikličnu, bicikličnu ili tricikličnu grupu od 2 do 14 ugljenikovih atoma u prstenu i pored ugljenikovih atoma u prstenu, 1 do 4 heteroatoma izabranih između azota, kiseonika i sumpora. Biili triciklične heterociklil grupe mogu biti povezane preko spojenih, premošćenih ili spiro prstena. U različitim izvođenjima heterociklična grupa je vezana preko drugog dela preko ugljenikovog atoma ili preko heteroatom. Primeri heterociklila uključuju bez ograničenja azetidinil, oksazolinil, izoksazolinil, oksetanil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, tetrahidroizohinolinil, 1,4-dioksanil, pirolidinil, morfolinil, tiomorfolinil, dihidrobenzoimidazolil, dihidrobenzofuranil, dihidrobenzotiofenil, dihidrobenzoksazolil, dihidrofuranil, dihidroimidazolil, dihidroindolil, dihidroizooksazolil, dihidroizotiazolil, dihidrooksadiazolil, dihidrooksazolil, dihidropirazinil, dihidropirazolil, dihidropiridinil, dihidropirimidinil, dihidropirolil, dihidrohinolinil, dihidrotetrazolil, dihidrotiadiazolil, dihidrotiazolil, dihidrotienil, dihidrotriazolil, dihidroazetidinil, metilendioksibenzoil, hromanil, dihidropiranohinoksalinil, tetrahidrohinoksalinil, tetrahidrohinolinil, dihidropiranohinolinil i tetrahidrotienil i njihove N-okside. Spiro biciklična heterociklil grupa se odnosi na bicikličnu heterociklil grupu gde dva prstena biciklične heterocilil grupe dele jedan zajednički atom. Spojene biciklične biciklične heterociklil grupe odnose se na bicikličnu heterociklil grupu gde dva prstena biciklične heterociklil grupe dele dva zajednička atoma. Premošćene biciklične heterociklične grupe odnose se na bicikličnu heterociklil grupu u kojoj dva prstena biciklične heterociklil grupe dele tri ili više (kao što je 3, 4, 5 ili 6) zajedničkih atoma.
[0047] "Heterociklen" odnosi se na heterociklil, kako je ovde definisano, koji ima dva monovalentna radikalska centra koji potiču od uklanjanja dva vodonikova atoma sa istog ili dva različita ugljenikova atoma, preko ugljenika i heteroatoma, ili preko dva heteroatoma osnovnog heterocikla.
[0048] "Prolek" odnosi se na bilo koje jedinjenje koje kada je u biološkom sistemu stvori lekovitu supstancu, ili aktivni sastojak, kao rezultat spontane(ih) hemijske(ih) reakcije(a), enzimski katalizovane(ih) hemijske(ih) reakcije(a), fotolize, i/ili metaboličke(ih) hemijske(ih) reakcije(a). Prolek je prema tome kovalentno modifikovan analogni ili latentni oblik terapeutski aktivnog jedinjenja. Neograničavajući primeri proleka uključuju estarske grupe, kvaterarne amonijum grupe, glikolne grupe i slično.
[0049] Izraz "opciono supstituisan" odnosi se na deo u kome svi supstituenti su vodonik ili gde jedan ili više vodonikovih atoma je zamenjeno sa supstituentima koji nisu vodonik; prema tome kada se kaže da je deo opciono susptituisan tada je ili supstituisan ili nesupstituisan.
[0050] "Odlazeća grupa" (LG) odnosi se na deo jedinjenja koji je aktivan naspram premeštanja ili supstitucije u hemijskoj reakciji. Primeri u kojima takvo premeštanje ili susptitucija se javlja uključuju, ali bez ograničenja nukleofilne bimolekuleke supstitucije (SN2), nuklofilne monomolekulske supstitucije (SN1), nukleofilna aromatična supstitucija (SNAr), i unakrno kuplovanje katalizovano prelaznim metalima. Primeri odlazećih grupa uključuju, ali bez ograničenja, atom halogena (npr. -CI, -Br, -I) i sulfonate (npr. mezilat (-OMs), tozilat (-OTs) ili triflat (-OTf)). Stručnjak iz ove oblasti će znati različite hemijske odlazeće grupe i strategije aktivacije i znaće koja odgvoarajuća grupa če biti dobra odlazeća grupa, na osnovu odgovarajuće hemijske reakcije, funkcionalnosti za koju je grupa vezana, i hemijskih reagenasa koji se koriste da utiču na reakciju zamene ili supstitucije. Kao neograničavajući primer, u nekim situacijama, atom halogena (npr. -Cl, -Br, or -I) služi kao odlazeća grupa u reakciji katalizovanoj sa prelaznim metalom (npr. Pd katalizovano Suzukijevo kuplovanje između aril halogenida i aril boronske kiseline ) i drugih reagenasa kao što je baza.
Stereoizomeri
[0051] Stereohemijske definicije i konvencije koje su ovde korišćene generalno slede S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York.
[0052] Izraz "hiralan" odnosi se na molekule koji imaju osobine nepreklapanja sa odgovarajućem slikom u ogledalu, dok izraz "ahiralan" odnosi se na molekule koji se mogu preklopiti sa svojom slikom u ogledalu.
[0053] "Izomeri" su različita jedinjanja koja imaju istu molekulsku formulu. Izomeri uključuju stereoizomere, enantiomere i diastereomere.
[0054] "Diastereoizomeri" su stereoizomeri koji imaju bar dva asimetrična atoma, ali koji nisu slika u ogladalu jedan drugog .
[0055] "Enantiomeri" su par stereoizomera koji su slika u ogledalu jedan drugog koji se ne mogu prekolopiti. Smeša 1:1 para enantiomera je "racemska" smeša. Izraz "( ±)" je korišćen za označavanje racemske smeše kada je to potrebno.
[0056] Izraz "stereoizomeri" se odnosi na jedinjenja koja imaju identičnu hemijsku strukturu, ali su različita u odnosu na rasproed atoma ili grupa u prostoru.
[0057] Ovde opisana jedinjenja mogu imati hiralne centere, npr., hiralne ugljenikove atome. Takva jedinjnja prema tome uključuju racemske smeše svih stereoizomera, uključujući enantiomere, diastereomere, i atropizomere. Pored toga, ovde opisana jedinjanja uključuju obogaćene ili razdvojene optičke izomere u bilo kojoj ili svim asimetrijama, hiralnih atoma. Drugim rečima, hiralni centri očigledni na osnovu opisa su obezbeđeni kao hiralni izomeri ili racemske smeše. Obe racemske i diastereoizomerne smešae, kao i pojedinačni optički izomeri su izolovane ili sintetizovane, suštinski slobodne od njihovih enantiomernih ili diasteroizomenih parova, su sve obuhvaćene obimom pronalaska. Racemske smeša mogu biti odvojene u njihove pojedinačne, suštinski čiste optičke izomere pomoću dobro poznatih tehnika kao što su, na primer, to dvajanje diasteroizomenih soli obrazovanih sa optički aktivnim spojeva, npr., kiselina ili baza praćenim konverzijama nazad do optički aktivnih susptanci. Željeni optički izomer može takođe biti sintetizovan pomoću sterospecifičnih reakcija, polazeći od odgovarajućeg steroizomera željenog polaznog materijala.
[0058] Razume se da za ovde opisana jedinjenja kada je veza prikazana ne nesterohemijski način (npr., prava) atom za koji je vezana veza je obuhvata sve stereohemijske mogućnosti. Takođe se razume da kada je veza prikazana stereohemijski (npr., masno, masno-klinasto, isprekidano ili isprekidano klinasto) atom za koji je stereohemijska veza vezana ima sterohemiju koja je prikazan osim ako drugačije nije navedeno. Prema tome, u jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je veće od 50% pojedinačnog enantiomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenja je bar 80% pojedinačnog enantiomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je bar 90% pojedinačnog enantiomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je bar 98% pojedinačnog enantiomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je bar 99% pojedinačnog enantiomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je veće od 50% pojedinačnog diastereomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je bar 80% pojedinačnog diasteroizomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je bar 90% pojedinačnog diastereomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je bar 98% pojedinačnog diastereomera. U još jednom izvođenju, ovde opisano jedinjenje je bar 99% pojedinačnog diastereomera.
Tautomeri
[0059] Ovde opisana jedinjanja mogu takođe psotojati kao tautomerni izomeri u izvesnim slučajevima. Mada samo jedna delokalizovana rezonantna struktura može biti prikazana, svi takvi oblici su uzeti u obzir u okviru obima ovog pronalaska. Na primer, enaminski tautomeri mogu postojati kao purinski, pirimidinski, imidazolni, gvanidinski, amidinski, i tetrazolni sistemi i svi njegovi mogući tautomerni oblici su u okviru obima pronalaska .
Izotopi
[0060] Stručnjak iz oblasti će razumeti da pronalazak takođe uključuje bilo koje jedinjenje za koje je ovde zatražena zaštita koje može biti obogaćeno sa bilo kojim ili svim gornjim atomima u prirodnom odnosu javljanja njihovih izotopa sa jednim ili više izotopa, kao što je , ali bez ograničenja, deuterijum (<2>H ili D). Kao neograničavajući primer, -CH3grupa može biti zamenjena sa -CD3.
[0061] Specifične vrednosti navedenih radikala, supstituenata i opsega su samo za ilustraciju; oni ne isključuju druge definisane vrednosti ili druge vrednosti u okviru opsega radikala i supstituenata.
Zaštitne grupe
[0062] U izvesnim izvođenjima, zaštitne grupe uključuju delove proleka i hemisjke zaštitne grupe. Zaštitne grupe mogu biti prikazane sa skraćenicom "PG."(engl. protecting group)
[0063] "Zaštitna grupa" ("PG") odnosi se na deo jedinjenja koji maskira ili menja osobine funkcionalnih grupa ili osobine jedinjenja kao celine. Hemijske zaštitne grupe i strategije za zaštitu/skidanje zaštite su dobro pozane u stanju tehnike. Videti npr. Peter G. M. Wuts and Theodora W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 4th edition; John Wiley & Sons, Inc.: New Jersey, 2007. See also Kocienski, P.J. Protecting Groups, 3rd edition; Georg Thieme Verlag Stuttgart: New York, 2005, in particular Chapter 1, Protecting Groups: An Overview, pages 1-48, Chapter 2, Carbonyl Protecting Groups, pages 49-118, Chapter 3, Diol Protecting Groups, pages 119-186, Chapter 4, Hidroksil Protecting Groups, pages 187-364, Chapter 5, Thiol Protecting Groups, pages 365-392. Zaštitne grupe se često koriste da maskiraju reaktivnost izvesnih funkcionanih grupa, da pomognu efikasnost željenih hemijskih reakcija, npr., stvaranje i raskidanje hemijskih veza na pravilan i planiran način.
[0064] Zaštita funkcionalnih grupa jedinjenja menja druge fizičke osobine pored reaktivnost zaštićene funkcionalne grupe, kao što je polarnost, lipofilnost (hidrofobnost), i druge osobine koje mogu biti merene sa običnim analitičkim sredstvima. Hemijski zaštićeni intermedijeri mogu sami biti biološki aktivni ili inaktivni.
[0065] U izvesnim izvođenjima, zaštitne grupe su opciono korišćene da spreče sporedne reakcije sa zaštićenim grupama u toku sistemskih postupaka. Odabir odgovarajućih grupa za zaštitu, kada treba to uraditi, i priroda hemijskih zaštitnih grupa "PG" je zavisna od hemije reakcije protiv koje se štiti (npr., kisele, bazne, oksidne, reduktivne ili drugi uslovi) i nameravanog smera sinteze. PGs ne treba da budu, i generalno nisu, iste ukoliko je jedinjenje supstituisano višestrukim PG. Genralno, PG će biti korišćeno da se zaštite funkcionalne grupe kao što su karboksil, hidroksil, tio, ili amino grupe i da bi se tako sprečile sporedne reakcije ili na drugi način olakšala sintetička efikasnost. Redosled skidanja zaštite da bi se dobile slobodne grupe bez zaštite je zavistan od nameravanog smera sinteze i reakcionih uslova koji se javljaju, i može se obaviti na bilo koji način koji odredi stučnjak iz ove oblasti.
Soli i hidrati
[0066] Primeri naročito ovde opisanih pogodnih farmaceutski prihvatljivih soli jedinjenja uključuju soli koji potiču iz odgovarajućih baza, kao što su alkalni metali (na primer, natrijum), zemnoalkalni metal (na primer, magnezijum), amonijum i NX4<+>(gde X je C1-C4alkil). Farmaceutski prihvatljive soli atoma azota ili amino grupe koji uključuju na primer soli organskih karboksilnih kiselina kao što su sirćetna, benzoeva, mlečna, fumarna, vinska, maleinska, malonska, jabučna, izetionska, laktobionska i ćilibarna kiselina; organske sulfonske kiseline, kao što su metansulfonska, etansulfonska, benzensulfonska i p-toluensulfonska kiselina; i neorganske kiseline, kao što su hidrohlorna, hidrobromna, sumporna, fosforna i sulfamska kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja hidroksilne grupe uključuju anjon pomenutog jedinjenja u kombinaciji sa pogodnim katjonom kao što je Na<+>i NX4<+>(gde takvo X je nezavisno izabrano između H ili C1-C4alkil grupe).
[0067] Za terapeutsku upotrebu, soli aktivnih sastojaka ovde opisanih jedinjenja će tipično biti farmaceutski prihvatljive, tj. to će biti soli koje potiču iz farmaceutski prihvatljivih kiselina ili baza. Međutim, soli kiselina ili baza koje nisu farmaceutski prihvatljive mogu takođe naći upotrebu, na primer, u pripremanju ili prečišćavanju jedinjenja formule I, II, III ili IV, (kao što je bilo koja od IVa-IVh) ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili još jedno ovde opisano jedinjenje. Sve soli, bilo da potiču ili ne potiču od fiziološki prihvatiljivih kiselina ili baza, su u okviru opsega prikazanog pronalaska.
[0068] Metalne soli su tipično pripremljene reagovanjem metalnog hidroksida sa ovde opisanim jedinjenjem. Primeri metalnih soli koje su pripremljene na ovaj način su soli koje sadrže Li<+>, Na<+>, i K<+>. Manje rastvorljiva metalna so može biti staložena iz rastvora rastvorljivije soli dodavanjem pogodnog metalnog jedinjenja.
[0069] Pored toga, soli mogu biti obrazovane dodavanjem kiselina izvesnih organskih i neorganskih kiselina, npr., HCI, HBr, H2SO4, H3PO4ili organskih sumpornih kiselina, u bazne centra, kao što su amini. Na kraju, razume se da kompozicije ovde sadrže ovde opisana jedinjenja u njihovom nejonizovanom, kao i cviterjonskom obliku i kombinacijama sa stehiometrijskim količinama vode kao u hidratima.
Izvođenja
[0070] U jednom izvođenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (IV):
ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde:
J je C1-C4alkil ili C3-C6karbociklil, gde C1-C4alkil ili C3-C6karbociklil je opciono supstituisan sa 1-4 halogena, -OH, aril ili cijano;
je C3-C5karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja preko dva susedna ugljenika, C3-C5karbociklilen je opciono supstituisan sa C1-C4alkil, C1-C3haloalkil, halogen, -OH, ili cijano, ili je C5-C8biciklični karbociklilen koji je vezan za L i ostatak jedinjenja preko dva susedna ugljenika, ili je C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formula IV preko dva susedna ugljenikvoa atoma, gde je pomenuti C3-C6karbociklen opciono supstituisan sa C1-C4alkil ili C1-C3haloalkil;
L je C3-C6alkilen, C3-C6alkenilen ili -(CH2)3-ciklopropilen-, opciono supstituisan sa 1-4 halogena, -OH, ili cijano;
Q je C2-C4alkil ili C3-C6karbociklil opciono supstituisan sa C1-C3alkil, halogen, -OH, ili cijano; E je C1-C3alkil ili C2-C3alkenil, opciono supstituisan sa C1-C3alkil, halogen, -OH, ili cijano; W je H, -OH, -O(C1-C3)alkil, -O(C1-C3)haloalkil, halogen ili cijano; i
Z<2a>je H ili C1-C3alkil.
[0071] U još jednom izvođenju Formule (IV), J je C1-C3alkil.
[0072] U još jednom izvođenju formule (IV), J je metil ili etil.
[0073] U još jednom izvođenju formule (IV), je C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika, gde pomenuti C3-C6karbociklen je opciono supstituisan sa C1-C4alkil ili C1-C3haloalkil.
[0074] U još jednom izvođenju formule (IV), je C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika, gde C3-C6karbociklen je opciono supstituisan sa metil, etil ili trifluorometil.
[0075] U još jednom izvođenju formule (IV), je ciklopropilen.
[0076] U još jednom izvođenju formule (IV), je C6-C8premošćeni bicilični karbociklilen ili C6-C8spojen biciklični karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika.
[0077] U još jednom izvođenju formule (IV), L je C3-C6alkilen, supstituisan sa 1-4 halogena. U još jednom izvođenju formule (IV), L je C5alkilen, supstituisan sa dva halogena. U nekim izvođenjima, svaki halogen je fluoro.
[0078] U još jednom izvođenju formule (IV), L je C3-C6alkilen.
[0079] U još jednom izvođenju formule (IV), L je C5alkilen.
[0080] U još jednom izvođenju formule (IV), Q je t-butil ili C5-C6karbociklil.
[0081] U još jednom izvođenju formule (IV), Q je t-butil.
[0082] U još jednom izvođenju formule (IV), E je C1-C3alkil opciono supstituisan sa 1-3 atoma halogena.
[0083] U još jednom izvođenju formule (IV), E je difluorometil.
[0084] U još jednom izvođenju formule (IV), W je vodonik, -O(C1-C3)alkil, halogen ili cijano.
[0085] U još jednom izvođenju formule (IV), W je metoksi.
[0086] U još jednom izvođenju formule (IV), Z<2a>je vodonik ili metil.
[0087] U još jednom izvođenju formule (IV), Z<2a>je metil.
[0088] Dalje je obezbeđeno jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:
[0089] Jedinjenje prema bilo kojoj od formula IVa, IVb, IVc, IVd, IVe, IVf, IVg, ili IVh, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, je izuzeto:
Postupci lečenja
[0090] Jedno izvođenje obuhvata jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomer, ili smešu stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u medicinskoj terapiji (npr., za upotrebu u lečenju Flaviviridae virusne infekcije (npr., HCV virusne infekcije) ili proliferacije HCV virusa ili odlaganja početka HCV simptoma kod pacijenta (npr., sisara kao što je čovek).
[0091] Jedno izvođenje obuhvata jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh) ili stereoizomer, ili smešu stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u proizvodnji leka za lečenje Flaviviridae virusne infekcije (npr., HCV virusne infekcije) ili proliferacije HCV virusa ili odlaganja početka HCV simptoma kod pacijenta kome je to potrebno (npr., sisara kao što je čovek).
[0092] Jedno izvođenje obuhvata jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomer, ili smešu stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u profilaktičkom ili terapeutskom lečenju proliferacije Flaviviridae virusa, HCV virusa ili za upotrebu u terapeutskom lečenju odlaganja početka HCV simptoma
[0093] Jedno izvođenje obuhvata jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh) ili stereoizomer, ili smešu stereoizomera, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u profilaktičkom ili terapeutskom lečenju Flaviviridae virusne infekcije (npr., HCV virusne infekcije).
[0094] Jedno izvođenje obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za proizvodnju leka za Flaviviridae virusnu infekciju (npr., HCV virusnu infekciju) kod sisara (npr., čoveka).
[0095] U izvesnim izvođenjima, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja hronične infekcije hepatitisa C. Postupak obuhvata davanje pacijentu kome je potrebno, jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0096] U izvesnim izvođenjima, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja infekcije hepatitisa C za pacijente ranije nisu lečeni. Postupak obuhvata davanje pacijentu koji ranije nije lečen, jedinjenja IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0097] U izvesnim izvođenjima, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja infekcije hepatitisa C kod već lečenih pacijenata. Postupak obuhvata davanje već lečenim pacijentima, jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomer, ili smešu stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0098] U izvesnim izvođenjima, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja infekcije hepatitisa C kod pacijenata nepodobnih ili intolerantih za lečenje interferonom. Postupak uključuje davanje, jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0099] U izvesnim izvođenjima, postupci lečenja ovde opisani obuhvataju davanje jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu u fiksnom periodu trajanja. U nekim izvođenjima, fiksni period trajanja je 4 nedelje, 6 nedelja, 8 nedelja, 10 nedelja ili 12 nedelja. U drugim izveođenjima, fiksni period trajanja nije duži od 12 nedelja.
[0100] U nekim izvođenjima, jedinjenje se daje oko 12 nedelja. U drugim izvođenjima, jedinjenje se daje oko 12 nedelja ili manje, u toku oko 10 nedelja ili manje, u toku oko 8 nedelja ili manje, za oko 6 nedelja ili manje, ili za oko 4 nedelja ili manje.
[0101] Jedinjenje može biti davano jednom dnevno, dva puta dnevno, jednom svakog drugog dana, dva puta nedeljno tri puta nedeljno, četri puta nedeljno, ili pet puta nedeljeno.
[0102] U izvesnim izvođenjima, postupci za lečenje koji su ovde opisani obuhvataju davanje jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ko je zaražen sa HCV genotipom (GT) 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 (tj., postupak za lečenje GT 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 HCV infekcije).
[0103] Jedno izvođenje obezbeđuje jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja HCV infekcije kod pacijenta kome je to potrebno (npr., sisara kao što je čovek), gde je pacijent zaražen sa HCV genotipom 1. Postupak obuhvata davanje jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0104] Jedno izvođenje obezbeđuje jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja HCV infekcije kod pacijenta kome je to potrebno (npr., sisara kao što je čovek), gde je pacijent inficiran sa HCV genotipom 2. Postupak obuhvata davanje jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0105] Jedno izvođenje obezbeđuje jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja HCV infekcije kod pacijenta kome je to potrebno (npr., sisara kao što je čovek), gde je pacijent inficiran sa HCV genotipom 3. Postupak obuhvata davanje jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0106] Jedno izvođenje obezbeđuje jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja HCV infekcije kod pacijenta kome je to potrebno (npr., sisara kao štoje čovek), gde je pacijent inficiran sa HCV genotipom 4. Postupak obuhvata davanje jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0107] Jedno izvođenje obezbeđuje jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja HCV infekcije kod pacijenta kome je to potrebno (npr., sisara kao štoje čovek), gde je pacijent inficiran sa HCV genotipom 5. Postupak obuhvata davanje jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomer, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0108] Jedno izvođenje obezbeđuje jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja HCV infekcije kod pacijenta kome je to potrebno (npr., sisara kao što je čovek), gde je pacijent inficiran sa HCV genotipom 6. Postupak obuhvata davanje jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0109] U ovde opisanim postupcima lečenja, korak davanja obuhvata terapeutski efikasnu količinu jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu kome je potrebno lečenje.
[0110] U izvesnim izvođenjima, obezbeđeni su postupci inhibiranja aktivnosti HCV. Takvi postupci obuhvataju korak tretiranja uzorka za koji se sumnja da je bio u kontaktu sa HCV sa ovde opisanim jedinjenjem ili kompozicijom.
[0111] U jednom izvođenju, ovde opisana jedinjenja deluju kao inhibitori HCV, kao intermedijeri takvih inhibitora ili imaju druge upotrebe kao što je dole opisano.
[0112] U izvesnim izvođenjima, jedinjenja se vezuju u jetri mogu se vezati sa različitim stepenima reverzibilnosti.
[0113] U jednom izvođenju, postupak za lečenje HCV uključuje dodavanje ovde opisanog u uzorka. Korak dodavanja obuhvata bilo koji postupak davanja koji je gore opisan.
[0114] Ukoliko je pogodno, aktivnost HCV posle primene jedinjenja može biti praćena bilo kojim postupkom koji obuhvata direktne ili indirektne postupke detektovanja HCV aktivnosti. Razmatrani su kvantitativni, kvalitativni, i semikvantitativni postupci za određivanje HCV aktivnosti. Tipično jedan od postupaka gore opisanih za praćenje je primenjen, međutim, drugi postupak kao što je praćenje fizioloških osobina kod živih organizama je takođe primenjiv.
[0115] Mnogo organizama sadrži HCV. Jedinjenja prema pronalasku su korisna u lečenju ili profilaski stanja u vezi sa HCV aktivnosti kod životinja ili ljudi.
Farmaceutske formulacije
[0116] "Farmaceutski prihvatljiv" označava da je pogodan za upotrebu u farmaceutskim preparatima, generalno se smatra sigurnim za takvu upotrebu, zvanično odobrenim od strane regulatorne agencije ili državne institucije za takvu upotrebu, ili je navedeno u U. S. Farmakopeji ili drugoj opšte poznatoj farmakopeji za upotrebu na životinjama i određenije na ljudima .
[0117] "Farmaceutski prihvatljiv nosač" odnosi se na razblaživač, adjuvat, eksipijens ili nosač, ili drugi sastojak koji je farmaceutski prihvatljiv i sa kojim je jedinjenje prema pronalasku davano.
[0118] Jedinjenja prema ovom pronalasku su formulisana sa konvencionalnim nosačima (npr., neaktivnom sastojku ili materijalu ekscipijensa), koja će biti izabrana prema uobičajenoj praksi. Tablete će sasdržati ekscipijense koji obuhvataju glidante, punioce, vezivna sredstva i slično. Vodene formulacije su pripremljene u sterilnom obliku, i namenjene za davanje koje je drugačije u odnosu na oralno davanje generalno će biti izotonične. Sve formulacije će opciono sadržati ekscipijente kao što su oni dati u Handbook of Pharmaceutical Excipients (1986). Ekscipijneti uključuju askorbinsku kiselinu i druge antioksidanse, sredstva za helatiranje kao što su EDTA, karbohidrati kao što su dekstrin, hidroksialkilceluloza, hidroksialkilmetilceluloza, stearinska kiselina i slično. Jedno izvođenje obezbeđuje formulaciju kao čvrsti dozni oblik. pH formulacionih opsega od oko 3 do oko 11, ali uglavnom oko 7 do 10.
[0119] Kada je moguće da aktivna sredstva da se daju sama može biti poželjno da budu u obliku farmaceutskih formulacija (kompozicija). Formulacije, obe i veterinarske i za humanu upotrebu, pronalaska obuhvataju bar jedan aktivni sastojak, kao što je gore definisano, zajedno sa jednim ili više prihvatljivih njihovih nosača i opciono drugih terapeutskih sastojaka. Nosač(i) mogu biti "prihvatljivi" u smislu da su kompatibilni sa drugim sastojcima formulacije i fiziološki neškodljivi za njegovog primaoca.
[0120] Formulacije obuhvataju one pogodne za sledeće načine davanja. Formulacije mogu konvencionalno biti prisutne u jediničnom doznom obliku i mogu biti pripremljeni sa bilo kojim poznatim postupkom dobro poznatim u oblasti farmacije. Tehnike i formulacije gereralno se nalaze u Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Takvi postupci uključuju korak dovođenja u kontak aktivnog sastojka sa neaktivnim sastojcima (npr., nosač, farmaceutski ekscipijens, itd.) koji čine jedan ili više pomoćnih sastojaka. Generalno formulacije su pripremljene jednoobrazno i dovođenjem u kontak zajedno aktivnog sastojka sa tečnim nosačima ili lepo raspoređenim čvrstim nosačima ili oboje i zatim, ukoliko je neophodno, obrazovanje proizvoda.
[0121] U izvesnim izvođenjima, formulacije pogodne za oralno davanje su prikazane kao diskretne jedinice kao što su kapsule, tablete sa utisnutim znakom ili tablete od kojih svaka sadrži prethodno određenu količinu aktivnog sastojka.
[0122] U izvesnim izvođenjima, farmaceutske formulacije uključuju jedno ili više jedinjenja prema pronalasku zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili ekscipijenata i opciono drugih terapeutskih sredstava. Farmaceutske formulacije koje sadrže aktivni sastojak mogu biti u bilo kom obliku pogodnom za namenjeni postupak davanja. Kada se koriste za oralnu upotrebu na primer, mogu biti pripremljene tablete, pilule, lozenge, vodene ili uljane suspenzije, disperzibilni praškovi ili granule, emulzije, tvrde ili meke kapsule, sirupi i eliksiri. Kompozicije namenjene za oralnu primenu mogu biti pripremljenie prema bilo kom postupku poznatom u ovoj oblasti za proizvodnju farmaceutskih kompozicija i takve kompozicije mogu sadržati jedan ili više sredstava koji obuhvataju zaslađivače, koregense ukusa, sredstva za bojenje i sredstva za održavanje, u cilju obezbeđivanja ukusnih preparata. Prihvatljive su tablete koje sadže aktivni sastojak u smeši sa netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima koji su pogodni za proizvodnju tableta. Ovi ekscipijensi mogu biti, na primer inertni razblaživači, kao što je kalcijum ili natrijum karbonat,. laktoza, laktoze monohidrat, natrijum kroskarameloza, povidon, kalcijum ili natrijum fosfat; sredstva za granulaciju i dezintegraciju, kao što su kukuruzni skrob, ili alginska kiselina; sredstva za vezivanje, kao što je celuloza, mikrokristalna celuloza, skrob, želatin ili akacija; i maziva, kao što su magenzijum stearat, stearinska kiselina i talk. Tablete mogu biti neobložene ili mogu biti oblože poznatim tehnikama uključujući mikroinkapsulaciju da bi se odložila dezintegracija i apsorpcija u gastrointestinalnom traktu i na taj način obezbedilo odloženo dejstvo u produženom vremenskom periodu. Na primer, materijal za vremensko odlaganje kao što je gliceril monostearat ili samo gliceril distearat ili sa vosakom mogu biti korišćeni.
[0123] Količina aktivnog sredstva koja je kombinovana sa neaktivnim sastojcima da bi se dobio dozni oblik će varirati od lečenog domaćina i naročito načina davanja. Na primer, u nekim izvođenjima dozni oblik za oralno davanje ljudima sadrži približno 1 do 1000 mg aktivnog materijala formulisanog sa odgovarjućom i pogodnom količinom materijala nosača (npr., inaktivni sastojak ili materijal ekscipijensa). U izvesnim izvođenjima, materijal nosača varira od oko 5 do oko 95% ukupnih kompozicija (masa: masi). U nekim izvođenjima, farmaceutske kompozicije koje su ovde opisane sadrže oko 1 do 800 mg, 1 do 600 mg, 1 do 400 mg, 1 do 200 mg, 1 do 100 mg ili 1 do 50 mg jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim izvođenjima, ovde opisane farmaceutske kompozicije sadrže ne više od oko 400 mg jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smešu stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim izvođenjima, ovde opisane farmaceutske kompozicije sadrže oko 100 mg jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0124] Razume se da pored sastojaka naročito gore pomenutih, ovde opisane formulacije mogu uključivati druga konvencionalna sredstva u ovoj oblasti u zavisnosti od tipa formulacije koji je u pitanju, na primer ona pogodna za oralno davanje mogu uključiti sredstvo za korekciju ukusa.
[0125] Veterinarske kompozicije koje sadrže bar jedan gore definisansi aktivni sastojak zajedno sa veterinarskim nosačem su dalje obezbeđene.
[0126] Veterinarski nosači su materijali korisni za svrhe davanja kompozicije i mogu biti čvrsti, tečni ili gasni materijali koji su drugačije inertni ili prihvatljivi u oblasti veterine i koji su kompatibilni sa aktivnim sredstvom. Ove veterinarske kompozicije mogu biti davane oralno, parenteralno ili bilo kojim drugim putem.
[0127] Efikasna doza aktivnog sastoja zavisi bar od prirode stanja koje se leči, toksičnosti, da li je jedinjenje bilo korišćeno profilaktički (niže doze), postupka davanja, i farmaceutske formulacije, i biće određeno od strane kliničara pomoću konvencionalnih studija povećavanja doze.
Načini davanja
[0128] Jedno ili više jedinjenja formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh) (na koja se ovde poziva kao na aktivne sastojke), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, je davano bilo kojim odgovarajućim putem za stanje koje se leči. Pogodni načini davanja uključuju oralni, recktalni, nazalni, lokalni (uključujući bukalni i sublingualni), vaginalni i parenteralni (uključujući subkutanozni, intramuskularni, intravenski, intradermalni, intratekalni i epiduralni), i slično. Zna se da poželjni put davanja može varirati sa primerom stanja primaoca. Prednost jedinjenja prema ovom pronalasku je da su oni oralno biodostupni i mogu biti dozirani oralno. Prema tome, u jednom izvođenju, ovde opisane farmaceutske kompozicije su oralni dozni oblici . U izvesnim izvođenjima, ovde opisane farmaceutske kompozicije su oralni dozni oblici.
[0129] Osoba iz struke će znati da supstitueni i drugi delovi jedinjenja prema generičkoj formuli ovde mogu biti izabrana u cilju da se obezbedi jedinjenje koje je dovoljno stabilno da se dobije farmaceutski korisno jedinjenja koje može biti formulisano u prihvatljivo stabilnoj farmaceutskoj kompoziciji. Jedinjenja koja imaju takvu stabilnost se smatra da su obuhvaćeni obimom prikazanog pronalaska. Osoba iz struke zna da bilo koja kombinacija gore opisanih definicija i supstituenata neće dovesti do vrsta ili jedinjenja koje nisu aktivne.
Kombinovana terapija
[0130] U još jednom izvođenju, prikazana prijava opisuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u kombinaciji sa bar jednim dodatnim terapeutskim sredstvom (tj., aktivnim sastojkom), i farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom. U izvesnim izvođenjima, dodatna farmaceutska sredstva uključuju dodatna antivirusna sredstva.
[0131] Dodatno terapeutsko sredstvo korišćeno u kombinaciji sa ovde opisanim jedinjenjama obuhvata, bez ograničenja, bilo koje sredstvo koje ima terapeutski efekat kada se koristi u kombinaciji sa jedinjenjem prema prikazanom pronalasku. Takve kombinacije su izabrane na osnovu uslova koji se leče, unakrsne aktivnosti sastojaka i kombinacije farmakoloških osobina. Na primer, u izvesnim izvođenjima, terapeutsko sredstva korišćeno u kombinaciji sa jedinjenjima formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh) uključuju, bez ograničenja, jedno ili više sledećeg: interferona, analoga ribavirina, inhibitora NS3 proteaza, inhibitora NS5a, inhibitora NS5b, inhibitora alfa-glukozidaze 1, hepatoprotecktanata, nenukleozidnih inhibitora HCV, nukleozni analozi, i drugi lekovi za lečenje HCV infekcija. U nekim izvođenjima, dodatna terapeutska sredstva obuhvataju, bez ograničenja, inhibitore NS3 proteaze, inhibitorae NS5a, i/ili inhibitore NS5b. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozcija ukljujčuje jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jedan ili više inhibitor NS3 proteaze, inhibitor NS5a, i/ili NS5b inhibitor. U nekim izvođenjima, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jednog ili više inhibitora NS5a i/ili NS5b inhibitora. U izvesnim izvođenjima, obezbeđene su farmaceutske kompozicije koje obuhvataju jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh) i jedno ili više dodatnih antivirusnih sredstava, gde dodatno antivirusna sredstvo nije analog interferona, ribavirina, ili ribavirina. U drugim izvođenjima, obezbeđene su farmaceutske kompozcije koje uključuju jedinjenje formule IV (osim bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomer, ili smešu stereoizomera, i jedno ili više dodatnih antivirusnih sredstava, gde dodatno antivirusno sredstvo nije analog ribavirina ili ribavirina .
[0132] U izvesnim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja su kombinovana sa jednim ili više drugih aktivnih sredstava (npr., jednim ili više dodatnih antivirusnih sredstava) u jediničnom doznom obliku za simultano ili skvencionalno davanje pacijentu. Kombinovana terapija može biti davana kao simultani ili skevencionalni režim. Kada se daje sekvencionalno, kombinacija je davana u dva ili više puta. U izvesnim izvođenjima, aktivne susptance su: (1) ko-formulisane i davane ili simultano davane u kombinovanoj farmaceutskoj kompoziciji; (2) davane alternativno ili u paralelnoj odvojenoj farmaceutskoj kompoziciji; ili (3) nekim drugim režimom. Kada se daju alternativnom terapijom, aktivni sastojci se daju ili sekvencionalno daju, npr., u odvojenim tabletama, pilulama ili kapsulama, ili sa različitim injekcijama u odvojenim špricevima. Generalno, u toku alternativne terapije, efikasna doza svakog aktivnog sredstva je davana sekvencionalno, tj. serijski, gde je u kombinovanoj terapiji, efikasne doze dva ili više aktivnih sastojaka je davano zajeno.
[0133] Primeri interferona uključuju, bez ograničenja, pegilovani rIFN-alfa 2b (PEG-Intron), pegilovani rIFN-alfa 2a (Pegasys), rIFN-alfa 2b (Intron A), rIFN-alfa 2a (Roferon-A), interferon alfa (MOR-22, OPC-18, Alfaferone, Alfanative, Multiferon, subalin), interferon alfacon-1 (Infergen), interferon alfa-n1 (Wellferon), interferon alfa-n3 (Alferon), interferon-beta (Avonex, DL-8234), interferon-omega (omega DUROS, Biomed 510), albinterferon alfa-2b (Albuferon), IFN alfa XL, BLX-883 (Locteron), DA-3021, glycosylated interferon alfa-2b (AVI-005), PEG-Infergen, pegilovani interferon lambda (Pegilovani IL-29), ili belerofon, IFN alfa-2b XL, rIFN-alfa 2a, konsezusni IFN alfa, infergen, rebif, pegilovani IFN-beta, oralni interferon alfa, feron, reaferon, intermaks alfa, r-IFN-beta, i infergen aktimun.
[0134] Primeri analoga ribavarina uključuju, bez ograničenja, ribavirin (Rebetol, Copegus), levovirin VX-497, i taribavirin (Viramidine).
[0135] Primeri NS5A inhibitora uključuju, bez ograničenja, ledipasvir (GS-5885), GS-5816, JNJ-47910382, daclatasvir (BMS-790052), ABT-267, MK-8742, EDP-239, IDX-719, PPI-668, GSK-2336805, ACH-3102, A-831, A-689, AZD-2836 (A-831), AZD-7295 (A-689), i BMS-790052.
[0136] Primeri NS5B inhibitora uključuju, bez ograničenja, polimerazni inhibitor je sofosbuvir (GS-7977), tegobuvir (GS-9190), GS-9669, TMC647055, ABT-333, ABT-072, setrobuvir (ANA-598), filibuvir (PF-868554), VX-222, IDX-375, IDX-184, IDX-102, BI-207127, valopicitabin (NM-283), R1626, PSI-6130 (R1656), PSI-7851, BCX-4678, nesbuvir (HCV-796), BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, GSK625433, XTL-2125, VCH-916, JTK-652, MK-3281, VBY-708, A848837, GL59728, A-63890, A-48773, A-48547, BC-2329, BMS-791325, i BILB-1941.
[0137] Primeri inhibitora NS3 proteaze uključuju, bez ograničenja, GS-9451, GS-9256, simeprevir (TMC-435), ABT450, boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), vaniprevir (MK-7009), MK-5172, danoprevir (ITMN-191), sovaprevir (ACH-1625), neceprevir (ACH-2684), Telaprevir (VX-950), VX-813, VX-500, faldaprevir (BI-201335), asunaprevir (BMS-650032), BMS-605339, VBY-376, PHX-1766, YH5531, BILN-2065, i BILN-2061.
[0138] Primeri alfa-glukozdaznog 1 inhibitora uključuju, bez ograničenja, celgosivir (MX-3253), Miglitol, i UT231B.
[0139] Primeri hepatoprotektanta uključuju, bez ograničenja, IDN-6556, ME 3738, MitoQ, i LB-84451.
[0140] Primeri nenukleozidnih inhibitora HCV uključuju, bez ograničenja, benzimidazol derivate, benzo-1,2,4tiadiazin derivate, i derivate fenilalanina.
[0141] Primeri nukleozidnih analoga uključuju, ali bez ograničenja, ribavirin, viramidin, levovirin, L-nukleozid, ili isatoribin i pomenuti interferon je α-interferon ili pegilovani interferon.
[0142] Primeri drugih lekova za lečenje HCV infekcije uključuju, bez ograničenja, imikvimod, 852A, GS-9524, ANA773, ANA-975, AZD-8848 (DSP-3025), PF-04878691, i SM-360320, ciklofillin inhibitore (npr., DEBIO-025, SCY635, or NIM811) ili HCV IRES inhibitore (npr., MCI-067).; emericasan (IDN-6556), ME-3738, GS-9450 (LB-84451), silibilin, ili MitoQ. BAS-100, SPI-452, PF-4194477, TMC-41629, GS-9350, GS-9585, i roksitromicin.
[0143] Dodatni primeri drugih lekova za lečenje HCV infekcija uključuju bez ograničenja, zadaksin, nitazoksanid (alinea), BIVN-401 (virostat), DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, bavituksimab, oglufanid, PYN-17, KPE02003002, aktilon (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975 (izatoribin), XTL-6865, ANA 971, NOV205, tarvacin, EHC-18, i NIM811.
[0144] Ostali primeri drugih lekova za lečenje HCV infekcije uključuju, bez organičenja, timosin alfa 1 (Zadaksin), nitazoksanid (Alinea, NTZ), BIVN-401 (virostat), PYN-17 (altireks), KPE02003002, aktilon (CPG-10101), GS9525, KRN-7000, civacir, GI-5005, XTL-6865, BIT225, PTX-111, ITX2865, TT-033i, ANA 971, NOV-205, tarvacin, EHC18, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, BMS-650032, Bavituksimab, MDX-1106 (ONO-4538), Oglufanid, FK-788, VX-497 (merimepodib), DEBIO-025, ANA-975 (izatoribin), XTL-6865, ili NIM811.
Opšti sintetski postupci
[0145] Šeme, postupci i primeri koji su ovde obezbeđeni opisuju sinteze ovde opisanih jedinjenja kao i njihovih intermedijera korišćenih za dobijanje jedinjenja. Razume se da pojedni ovde opisani koraci mogu biti kombinovani. Takođe se podrazumeva da odvojene partije jedinjenja mogu biti kombinovane i zatim izvedene u sledećem sintetskom koraku.
[0146] Sledeće šeme opisuju postupke koji su korisni za dobijenje ovde opisanih jedinjenja.
[0147] LFje " fragment linker," (takoreći, prekursor za L) gde vezana nezasićena ugljenik-ugljenik veza (npr. alken ili alkin) u delu LFdistalno od olakšava, kao neograničavajući primer, reakciju katalizovanu metalom koja dovodi do vezivanja LFza U da bi se obrazovala L grupa. Neograničavajući primeri reakcija katalizovanih metalima koje dovode do takve veze obuhvataju zatvaranje prstena sa dvostrukom izmenom katalizovano Ru ili unakrsnu reakciju kuplovanja katalizovanu Pd (npr. Negishi, Heck, ili Sonagashira kuplovanja).
[0148] Spektri<1>H nuklearne magenetne rezonance (NMR) su u svim slučajevima konzistenti sa predloženim strukturama. Karakteristični hemijski pomaci (δ) su dati u delovima na milion niz polje od tetrametilsilana korišćenjem konvencionalnih skraćenica za označavanje glavnih signala : npr. s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvadriplet; m, multiplet; br, širok. Sledeće skraćenice su korišćene za uobičajene rastvarače korišćene u ekspreimentima nukelarne magnetene rezonance: CDCl3, deuterohloroform; CD3OD, perdeuterometanol; CD3CN, perdeuteroacetonitril; d6-DMSO, perdeuterodimetilsulfoksid. Maseni spektiri su dobijeni korišćenjem Thermo Scientific ili Agilent Technologies masenih spektrometara snabdevenih sa jonizacijom sa elektrosprejom (ESI). Mase su zabeležene kao odnosi masa prema naelektrisanju (m/z), na primer, jon jedinjenja (predstavljen kao [M]<+>), jon obrazovan iz jedinjenja sa drugim jonom, kao što je jon vodonika (predstavljen kao [M+H]<+>), jon natrijuma (predstavljen kao [M+Na]<+>), jon obrazovan od jedinjenja gubljenjem jona, kao što je deprotonovano jedinjenje (predstavljeno kao [M-H]-), itd. Analitička HPLC merenja su izvedena sa Agilent Technologies Series 1100 HPLC pomoću Phenomenex Kinetex C18, 2.6 um 100 A, 4.6 x 100 mm kolone sa elucionim programom od 2% rastvarača B u toku 0.55 min, gradijentom do 98% rastvarača B u toku 8 min koji je održavan na 98% rastvarača B u toku 0.40 min pre vraćanja na 2% rastvarača B u toku 0.02 min i održavanja na 2% rastvarača B u toku 2.03 min pri brzini protoka od 1.5 mL/min (rastvaračt A = MiliQ proceđen H2O 0.1% TFA, rastvarač B = MeCN 0.1% TFA). Izraz "tankoslojna hromatografija (TLC)" odnosi se na hromatografiju na silikagelu u kojoj su korišćene ploče silikagela 60 F254. Retencioni faktor ("Rf") jedinjenja je razmak pređen od strane jedinjenja podeljenog sa razdaljinom pređenom od strane fronta rastvarača na TLC ploči. Izrazi kao što su "rano eluiranje" i "kasno eluiranje" odnose se na redosled kojim jedinjenje eluira ili je regenerisano sa čvrste faze/ na osnovu hromatografskog postupka sa tečnom mobilnom fazom rastvarača (npr. normalna faza hromatografije na silkagela gelu ili reverzna faza tečne hromatografije pod visokim pritiskom (HPLC)).
Šema 1
[0149] Šema 1 pokazuje opšti put do S1-3, gde J, R<1>, R, M, L, T, U, W i Q su kako je ovde definisano, Z<2a>je definsian kao u formuli IV ili III, ili je H ili Z<2a>kao što je definisano u formuli I ili II. U šemi 1, intermedijer estra S1-1 je hidrolizovan sa bazom kao što je litijum hidroksid kada je R C1-C3alkil (npr., metil), ili sa kiselinom kao što je trifluorosirćetna kiselina kada R je terc-butil. Proizvod hidrolize estra je zatim kuplovan sa intermedijerom S1-2 preko reakcija kuplovanja (npr. pomoću peptidnog kuplovanja kao što je HATU i na osnovu baze kao što je DIPEA) da bi se dobila jedinjenja opšte strukture S1-3.
Šema 2
Gde
R = alkil
R<2>= H ili Bs
sredstvo za kuplovanje PG = zaštitna grupa
npr. HATU LG<1>= odlazeća grupa
baza npr. DIEPA LG<2>=odlazeća grupa ili -OH
[0150] Šema 2 pokazuje opštu sintezu intermedijera S2-6 gde U, W, R<1>, J, i Q su kao što je ovde definisano. U šemi 2, odgovarajuće supstituisani i zaštićene vrste prolina S2-2 podležu reakciji eterifikacije kao što je SNAr (npr. tretmanu sa Cs2CO3i S2-1 gde R<2>je H i LG<2>je halogen), SN2 (npr. prekonverzija S2-2 do brozilata (R<2>je Bs) praćeno tretmanom sa S2-1 gde je LG<2>-OH i baza kao što je DABCO), Mitsunobu reakcija (npr. tretiranje S2-2 sa DIAD i trifenilfosfinom a zatim S2-1 gde LG<2>je -OH) ili unakrnom reakcijom kuplovanja sa metalom kao katalizatorom (LG<2>je halogen, R<2>je H) da bi se dobio intermedijer S2-3. Skinuta je zaštita sa intermedijera S2-3 (npr. 4N HCI u dioksanu kada PG je Boc) da bi se dobio intermedijer S2-4. Obrazovanje amidne veze via aktiviranjem karboksilne grupe S2-5 pomoću sredstva za peptidno kuplovanje ili drugih postupaka aktiviranja karboksilne grup pre tretiranja S2-4 daje intermedijer S2-6.
Šema 3
[0151] Šema 3 prikazuje opštu sintezu intermedijera S3-6 gde LF-CH2-CH2je L, i U, W, R<1>, J, Q, M, T, i L kao što je ovde definisano. U šemi 3, intermedijer S3-1 je kuplovan via u reakciji obrazovanja amidne veze za intermedijer S3-2 da bi se dobio intermedijer S3-3. Unakrsno kuplovanje katalizovano metalom (npr. Suzukijeva reakcija pomoću kalijum viniltrifluoroborata, Et3N, Pd(dppf)Cl2) da bi se dobio S3-4, praćeno zatvaranjem prstena sa dvostrukom zamenom (npr. Zhan 1B) da bi se dobio S3-5, a zatim redukcija dvostruke veze (npr. H2, 10% Pd/C) daje intermedijer S3-6.
Šema 4
kil
alogen ili -OTf
[0152] Šema 4 prikazuje opštu sintezu intermedijera S4-5 gde LF-CH2-CH2je L, i U, W, R<1>, J, Q, Q i L su kao što je ovde definisano. U šemi 4, intermedijer S4-1 je zaštićen sa zaštitnom grupom kao što Boc.
S4-1 podleže unakrsnom kuplovanju katalizovanom sa prelaznim metalom (npr. Sonogashira kuplovanje) za intermedijer S4-2 da bi se dobio intermedijer S4-3. Trostruka veza intermedijera S4-3 je redukvoana do proste veze hidrogenizacijom (npr. H2, katalitički 10% Pd/C) da bi se dobio intermedijer S4-4. Skidanjem zaštite Boc-amina praćeno kuplovanjem pod baznim uslovima (npr. trietilamin) daje intermedijer S4-5.
Šema 5
[0153] Šema 5 pokazuje opštu sintezu intermedijera S5-9 gde LF-CH2-CH2je L, i U, W, R<1>, J, Q, T i L su kao što je ovde definisano. U šemi 5 intermedijer S5-1 podleže unakrsnom kuplovanju katalizovanim metalom (kao što je Sonogashira reakcija) sa intermedijerom S5-2 da bi se dobio intermedijer S5-3.
Trostruka veza intermedijera S5-3 je redukovana do proste veze pod odgovarajućim uslovima kao što je hidrogenizacija (npr. pomoću H2preko katalitičkog 10% Pd/C) da bi se dobio intermedijer S5-4.
Skidanjem zaštite sa alkohola da bi se dobio S5-5, zatim aktivacijom (npr. DSC pod baznim uslovima, npr. trietilamin) daje intermedijer S5-6. Kuplovanjem S5-6 i S5-7 pod baznim uslovima obezbeđuje S5-8. Skidanjem zaštite sa azota prolina (npr. HCl u dioksanu kada PG = Boc) a zatim sa makrolaktamizacijom (npr. sredstvom za kuplovanje kao što je HATU pod baznim uslovima) daje intermedijer S5-9.
Šema 6
[0154] Šema 6 pokazuje opštu sintezu intermedijera S6-6 i S6-7 gde U, R<1>, J, Q, M, T i L su kao što je ovde definisano. U šemi 6 intermedijer S6-1, W je OPG, gde PG je zaštitna grupa. Prvo je skinuta zaštita sa S6-1 da bi se dobio intermedijer S6-2. Alkilacija intermedijera S6-2 sa odgovarajućim elektrofilom kao što je S6-4 daje intermedijer S6-6. Reakcija S6-2 sa triflik anhidridom obezbeđuje S6-3, koji zatim podleže unakrsnom kuplovanju katalizovanom sa metalom sa odgovarajućim nukleofilnim parom za kuplovanje kao što je S6-5 (npr. Sonagashira ili Suzuki reakcija) da bi se dobio intermedijer S6-7.
Šema 7
[0155] Šema 7 pokazuje opštu sintezu intermedijera S7-13 gde LF-CH2-CH2-CF2je L, i W, R<1>, J, Q, M, i T su kao što je ovde definisano. U S7-13, L je C1-C3alkil. U šemi 7, intermedijer S7-1 prvo podleže izmeni litijum halogena i zatim je tretiran sa intermedijerom S7-2 da bi se dobio intermedijer S7-3, koji je kondenzovan sa intermedijerom S7-4 da bi se dobio intermedijer hinoksalina S7-5. Halogenovanje S7-5 (npr. POCl3) daje intermedijer S7-6. Intermedijer S7-6 je vezan pomoću obrazovanja etra sa intermedijerom S7-7 preko SNAr reakcije (npr. Cs2CO3) da bi se dobio intermedijer S7-8. Skidanjem zaštite N-PG sa intermedijera S7-8 dobijen je S7-10. Reakcija kuplovanja amidne veze intermedijera S7-9 i intermedijera S7-10 (npr. EDC i HOBT, ili HATU, NMM, DIPEA) daje intermedijer S7-11.
Zatvaranje prstena sa dvostrukom izmenom S7-11 stvara intermedijer S7-12. Redukcijom dvostruke veze (npr. hidrogenizacijom preko paladijuma na ugljeniku) daje intermedijer S7-13.
Šema 8
Gde:
redukcija ketona redukcija olefina
npr. PG= Boc, Pf, etc.
npr. R = alkil
R<2>=alkil, aril, heteroaril
[0156] Šema 8 prikazuje opštu sintezu intermedijera S8-5 gde odgovarajući zaštićeni 4-okso prolin S8-1 reaguje sa Bredereck-ovim reagansom da bi se stvorio enaminon S8-2. Dodavanje organometalnih vrsta obezbeđuje enon S8-3, koji podleže redukciji hidroksil intermedijera S8-4 na stereoselektivan način (npr. Luche-ova redukcija ili CBS redukcija). Naknadna redukcija olefina daje 3-supstituisani hidroksi prolinski intermedijer S8-5.
Šema 9
unakrsno kuplovanje
vano
npr. Gde:
shi 1) hidroborovanje
PG= zaštitna grupa 2) oksidacija R = alkil
[0157] Šema 9 pokazuje opštu sintezu intermedijera S9-3 gde vinil triflat S9-1 (pripremljen na primer, postupcima iz Kamenecka, T.M., et al. Tetrahedron Letters, 2001, 8571) podleže unakrsnom kuplovanju katalizovanom metalima (npr. Negishi-jevo kuplovanje) da bi se dobio intermedijer S9-2.
Hidroborovanje i naknadna oksidacija intermedijera S9-2 daje intermedijer S9-3.
Šema 10
Gde:
R = alkil, haloalkil, heteroalkil LG= halogen, -OTf, etc
[0158] Šema 10 pokazuje opštu sintezu supstituisanog sulfonamidog intermedijera S10-3. Skinuta je zaštita sa terc-butil ciklopropilsulfonilkarbamata S10-1 (npr. n-BuLi) i reagovao je sa elektrofilom (npr. alkil halogenidom) da bi se dobio zaštitćeni supstituisani sulfonamidni intermedijer S10-2, sa kog je zatim skinuta zaštita (npr.4 N HCl u dioksanu) da bi se dobio intermedijer S10-3.
Šema 11
Gde:
npr. CDI PG= Boc, etc
baza
npr DBU
[0159] Šema 11 pokazuje opštu sintezu intermedijera S11-3 gde je E kako je ovde definisano. U šemi 11, sulfonamid S11-1 je kuplovan za zaštićenu aminokiselinu S11-2 pomoću sredstva za kuplovanje kao što je CDI i baza kao što je DBU.
Šema 12
ija
skidanje zaštiteoksidacijaolefinacija
npr. hidrogenizacija npr. Svern npr. Vitigova
kada PG=Bn reakcija
hidroliza Gde:
PG= zaštitna grupa
npr. LiOH PG<2>= zaštitna grupa
gde R= metil ortogonalno sa PG
R = alkil
[0160] Šema 12 pokazuje opštu sintezu intermedijera S12-10 i S12-17, gde LFje C1-C3alkilen. U šemi 12, obe sinteze počinju monozaštitom intermedijera S12-1 da bi se dobio S12-2, a zatim oksidacijom (npr. Swern-ova oksidacija) da bi se dobio intermedijer S12-3. Enantioselektivno alfa hlorovanje (npr. organokatalizator S12-4 i NCS) daje hloroaldehid S12-5. Reakcija S12-5 sa bis-cinkiometan derivatom (npr. Nysted-ov reagens) daje ciklopropanski intermedijer S12-6. Intermedijer S12-6 je ortogonalno zaštićen da bi se dobio intermedijer S12-7. Skidanjem zaštite -OPG sa S12-7 daje intermedijer S12-8, koji zatim dehidratisan (npr. Grieco-ov reagans) do intermedijera S12-9 i na kraju je uklonjena O-PG<2>da bi se dobio intermedijer S12-10. Intermedijer S12-6 je alternativno aktiviran (npr. DSC i baza kao što je piridin) da bi se dobio intermedijer S12-11 koji je kuplovan za intermedijer S12-12 da bi se dobio karbamatni intermedijer S12-13. Skinuta je zaštita sa intermedijera S12-13 da bi se dobio intermedijer S12-14, koji je zatim oksidovan (npr. Swernova oksidacija) da bi se dobio aldehidni intermedijer S12-15. Olefinacija (npr. Wittig-ova reakcija) intermedijera S12-15 daje intermedijer S12-16. Hidroliza estera (npr. LiOH kada R je metil, TFA tada R = terc-butil) daje intermedijer S12-17.
Šema 13
[0161] Šema 13 pokazuje opštu sintezu intermedijera S13-5 gde Q i T su kako je ovde definisano i LFje C1-C3alkilen. Aktivacijom intermedijera S13-1 (npr. DSC) praćenom sa obrazovanjem karbamata između intermedijera S13-2 estarskog intermedijera aminokiseline S13-3 pod baznim uslovima dobijen je esterski intermedijer S13-4. Hidroliza estera (npr. LiOH kada R = metil ili TFA tada R = tercbutil) daje intermedijer S13-5.
Šema 14
[0162] Šema 14 pokazuje opštu sintezu intermedijera S14-7 gde Q je kako je ovde definisano i LFje C1-C3alkilen. Oksidacija intermedijera S14-1 (npr. Dess-Martin-ov perjodinan) daje keton S14-2.
Tretiranje S14-2 sa S14-3 (npr. R<2>je -CF3) u prisustvu pogodnog reagensa (kao što je CsF) daje intermedijer S14-4. Skidanjem zaštite sa S14-4 (npr. TBAF) dobijen je S14-5, koji je zatim dodat u izocijanat S14-6 da bi se dobio intermedijer S14-7.
Šema 15
[0163] Šema 15 pokazuje opštu sintezu intermedijera (6)-S15-3, dobiejnog iz Kulinkovich-ove reakcije Grinjarovog reagensa S15-1 i estra S15-2, prema standardnim postupcima kao što je opisano u Kulinkovich, O.G. and Kananovich, D.G., Eur. J. Org. Chem.2007, 2007, 2121.
Šema 16
[0164] Šema 16 pokazuje opštu sintezu intermedijera S16-4 gde Q, M, i T su kako je ovde definisano i LFje C1-C3alkilen. U šemi 16, olefin S16-1 podleže oksidativnom cepanju (npr. OsO4, NaIO4) do aldehida S16-2, koji je zatim redukvoan do alkohola S16-3 (npr. NaBH4) i na kraju je dehidratisan (npr. Greico eliminacija) da bi se dobio intermedijer S16-4.
Šema 17
1) baza npr. LiHMDS
J-LG npr. J-I, J-OTf, itd. dehidratacija
2) baza npr. KHMDS npr. CBS redu
izvor protona
npr. HOAc, MeOH, pufer
ija
[0165] Šema 17 pokazuje dve opšte sintetske strategije za proizvodnju intermedijera S17-3 gde J je kako je ovde definisano. U šemi 17, odgovarajući zaštićeni 4-okso prolin S17-1 je deprotonovan i alkilovan (npr. LiHMDS a zatim J-LG). Druga deprotonacija sa bazom praćena reprotonacijom na niskoj temepraturi je dala stereo-obogaćeni intermedijer S17-2, na osnovu opisanog protokola (Blanco, M-J. et. al. J. Org. Chem. 1999, 64, 8786). Redukcija ketona na stereoselektivni način (npr. CBS redukcija) obezbeđuje alkohol S17-3. Gde je J metil, Šema 17 omogućava alternativnu opštu sintezu u kojoj je intermedijer S17-4 hidrogenovana da se dobije smeša S17-5 i S17-6. Redukcija ketona S17-5 na stereoselektivan način (npr. CBS redukcija) daje intermedijer S17-3, gde J je metil.
Šema 18
[0166] Šema 18 pokazuje opštu sintezu intermedijera S18-4 i S18-5, gde odgovarajući zaštićeni 4-okso prolin S18-1 je hidroksilovan na steroselektivan način (npr. MoOPh) da bi se dobio intermedijer S18-2, koji je zatim reagovao sa alkilacionim reagensom (npr. trimetiloksonijum tetrafluoroborat) da bi se dobio intermedijer S18-3. Redukcija ketona (npr. BH3•SMe2kompleks) daje intermedijere S18-4 i S18-5.
Šema 19
[0167] Šema 19 pokazuje opštu sintezu intermedijera S19-7 gde Q je kako je ovde definisano i LFje C1-C3alkilen. U šemi 19, epoksidni intermedijer S19-1 je pretvoren u (6)-trans-intermedijer S19-3.
Aktivacija alkoholnog intermedijera (6)-S19-3 (npr. DSC) daje karbonat (6)-S19-4, koji je tretiran sa intermedijerom S19-5 da bi se dobio karbamatni intermedijer S19-6. Intermedijer S19-6 zatim podleže hidrolizi estera (npr. LiOH kada je R = metil ili TFA kada je R = terc-butil) da bi se dobio intermedijer S19-7.
Šema 20
[0168] Šema 20 pokazuje opštu sintezu intermedijera S20-3 gde LF-O je F, i U, W, R<1>, J, Q, M, T i L su kao što je ovde definisano. U šemi 20, intermedijer S20-1 prvi podeleže oksidativnom cepanju olefina (npr. OsO4, NaIO4) i zatim redukciji dobijenog aldehida (npr. NaBH4) da bi se dobio intermedijer S20-2.
Unakrsno kuplovanja katalizovano prelaznim metalima daje intermedijer S20-3.
Šema 21
Gde:
R = alkil
PG = zaštitna grupa
[0169] Šema 21 pokazuje opštu sintezu intermedijera S21-7 gde Q i T su kako je ovde definisano. U šemi 21, aktivacija monozaštićenog diola S21-1 (npr. DSC) praćena kuplovanjem sa amino esterskim intermedijerom S21-3 daje karbamatni intermedijer S21-4. Skinuta je zaštita sa Intermedijera S21-4 da se odmaskira alkoholna funkcionalna grupa (intermedijer S21-5) koja je zatim alilovana da bi se dobio intermedijer S21-6. Intermedijer S21-6 zatim podleže hidrolizi estra (npr. LiOH when R = metil ili TFA kada je R = terc-butil) da bi se dobio intermedijer S21-7.
Šema 22
= a
PG = zaštitna grupa
[0170] Šema 22 pokazuje opštu sintezu intermedijera S22-3 gde U, W, R<1>, J, i Q su kao što je ovde definisano. U šemi 22, globalno je skinuta zaštita sa intermedijera S22-1 da bi se dobio aminokiselinski intermedijer S22-2. Kiselinska funkcionalna grupa intermedijera S22-2 je zatim pretvorena u karboksikiselinski estar nestabilan u baznim uslovma (npr. metil ester), intermedijer S22-3.
Dobijanje odabranih intermedijera
Dobijanje intermedijera A1.
[0171]
butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilat
[0172] Koraci 1-3. Dobijanje intermedijera A1: Intermedijer A1 je dobijen korišćenjem postupka detaljno opisanog u primeru 2.12 međunarnodne objave patentne prijave br. WO 2008/064066 (nadalje "WO ’066") (p. 75-76) zamenom (1R,2S)-metil 1-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropan-karboksilata (pripremljenog prema Beaulieu, P.L., et al., J. Org. Chem. 2005, 70, 5869) za (1R,2S)-etil 1-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropan-karboksilat.
Dobijanje intermedijera A2.
[0173]
[0174] Intermedijer A2 je dobijen slično intermedijeru A1, zamenom 1-metilciklopropan-1-sulfonamida (dobijenom prema primeru 1.2 iz WO ’066, str.47) za ciklopropansulfonamid.
Dobijanje intermedijera A3.
[0175]
(1R, 2S)-metil 1-(terc-
butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilat
[0176] Korak 1. Dobijanje A3-1: Ciklopropan estar A3-1 je dobijen iz (1R,2S)-metil 1-(tercbutoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilata (dobijenog prema Beaulieu, P.L., et al., J. Org. Chem. 2005, 70, 5869) korišćenjem postupka detaljno opisanog u primeru 26 međunarodne objave patentne prijave br. WO 2009/005677 (nadalje "WO ’677") (str.176).
[0177] Koraci 2-4. Dobijanje intermedijeraa A3: Intermedijer A3 je dobijen slično kao (1R,2S)-1-amino-N-(ciklopropilsulfonil)-2-vinilciklopropankarboksamid hidrohlorid iz primera 2.12 iz WO ’066 (str. 75-76) zamenom A3-1 za (1R,2S)-etil 1-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilat.
Dobijanje intermedijera A4.
[0178]
[0179] Intermedijer A4 je dobijen slično intermedijeru A3, zamenom 1-metilciklopropan-1-sulfonamida (dobijenom prema primeru 1.2 iz WO ’066, p.47) za ciklopropansulfonamid.
Dobijanje intermedijera A5.
[0180]
[0181] Koraci 1-3. Dobijanje intermedijera A5: Intermedijer A5 je dobijen slično (1R,2S)-1-amino-N-(ciklopropilsulfonil)-2-vinilciklopropan-karboksamid hidrohloridu iz primera 2.12 iz WO ’066 (str. 75-76) zamenom A5-1 (dobijenog prema primeru 104 iz WO ’677, p. 265) za (1R,2S)-etil 1-(tercbutoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilat.
Dobijanje intermedijera A6.
[0182]
[0183] Intermedijer A6 je pripremljen slično intermedijeru A5, zamenom 1-metilciklopropan-1-sulfonamida (dobijenog prema primeru 1.2 iz WO ’066, p.47) za ciklopropansulfonamid.
Dobijanje intermedijera A7.
[0184]
[0185] Intermedijer A7 je dobijen prema primeru 97.1.6 iz U.S. objave patentne prijave.2009/274652 (nadaljer "US ’652"), str.72-73.
Dobijanje intermedijera A8.
[0186]
[0187] Koraci 1-2. Dobijanje intermedijera A8: Intermedijer A8 je pripremljen slično (1R,2S)-1-amino-N-(ciklopropilsulfonil)-2-vinilciklopropan-karboksamid hidrohloridu iz primera 2.12 iz WO ’066 (str.
75-76) zamenom A8-1 (dobijenog prema postupku detaljno opisanom u primeru 97.1.4 iz US ’652, str. 72-3) za (1R,2S)-1-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklo-propankarboksilnu kiselinu i zamenom 1-metilciklopropan-1-sulfonamida (dobijenog prema primeru 1.2 iz WO ’066, p. 47) za ciklopropansulfonamid. A8-1<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.22 (br s, 1H), 6.05 -5.75 (m, 1H), 5.38 (br s, 1H), 2.04 (m, 2H), 1.68 (m, 2H), 1.61 (m, 3H), 1.52 (m, 9H), 1.42 (m, 1H), 1.28 (m, 1H), 0.85 (m, 2H).
Dobijanje intermedijera A9.
[0188]
[0189] Korak 1-2. Dobijanje intermedijera A9: Intermedijer A9 je pripremljen slično (1R,2S)-1-amino-N-(ciklopropilsulfonil)-2-vinilciklopropan-karboksamid hidrohloridu iz primera 2.12 iz WO ’066 (str.
75-76) zamenom A9-1 (dobijenog prema primeru 1, Koraci 1L-1O iz objave međunarodne prijave patenta br. WO 2009/134987, str. 75-77) za (1R,2S)-1-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilnu kiselinu.
Dobijanje intermedijera A10.
[0190]
[0191] Intermedijer A10 je pripremljen slično intermedijeru A9, zamenom 1-metilciklopropan-1-sulfonamida (dobijenog prema primeru 1.2 iz WO ’066, str..47) za ciklopropansulfonamid.
Dobijanje intermedijera A11.
[0192]
korak 3
, -
korak 7 koraci 8 korak 10
i 9
[0193] Korak 1. Dobijanje A11-1: U rastvor NaOH (46.2 g, 50% mas/mas u vodi) na st dodat je BnEt3NCl (10.5 g, 46 mmol), di-terc-butil malonat (10 g, 46 mmol) i 1,2-dibromopropan (14 g, 69.3 mmol). Smeša je mešana na st u toku noći i ekstrahovana je sa DCM (3x100 mL). Organski slojevi su isprani sa vodom (80 mL) i rastvorom soli (50 mL), osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4. koncentrovani in vacuo dajući A11-1 koji je zatim korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.83-1.62 (m, 1H); 1.42 (s, 9H); 1.40 (s, 9H); 1.24-1.05 (m, 2H); 1.03-1.02 (d, 3H).
[0194] Korak 2. Dobijanje A11-2: U smešu t-BuOK (175 g, 1.56 mol) u etru (1.2 L) na 0 °C dodata je voda (3.4 mL) a zatim diester A11-1 (91 g, 0.35 mol). Smeša je mešana na st u toku tri dana, zatim zaustavljena sa ledom i vodom. (2x400 mL), zakišeljena limunskom kiseliom i zatim ekstrahovana sa EA (3x400 mL). Spojeni etil acetatni ekstrati su isprani sa vodom (2x100 mL), rastvorom soli (200 mL), osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovani in vacuo da bi se dobio A11-2 koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.60 (s, 1H); 1.70-1.64 (s, 1H); 1.37 (s, 9H); 1.19-1.13 (m, 1H); 1.03-1.00 (m, 4H). Korak 3. Dobijanje A11-3: U smešu A11-2 (33.5 g, 0.17 mol) i trietilamina (70 mL) u THF (200 mL) na 0 °C dodat je etil hloroformijat (22 mL). Smeša je mešana na 0 °C u toku 1 h. U smešu na 0 °C dodat je natrijum azid (54 g, 0.83 mol, 4.9 eq) u vodi (100 mL), smeša je mešana u toku 40 min. Smeša je ekstrahovana sa EA (2x400 mL), isprana sa vodom (100 mL), rastvorom soli (100 mL), osušena iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovana in vacuo da bi se dobio ostatak koji je sakupljen sa toluenom (100 mL) i tretiran sa benzil alkoholom (50 mL). Smeša je zatim zagrejana na 70 °C u toku 2 h, ohlađena na st, podešena na pH 8 sa natrijum bikarbonatom, i zatim ekstrahovana sa etrom (3x200 mL). Vodeni sloj je podešen na pH 5 sa 1 N HCI i ekstrahovan sa EA (2x300 mL). Spojeni ekstrakti etil acetata su isprani sa vodom (100 mL), rastvorom soli (80 mL), osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovani in vacuo da bi se dobio CBZ zaštićeni amin A11-3 (16 g) koji je korišćen zatim bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (s, 1H); 7.28-7.15 (m, 5H); 4.97-5.03 (m, 2H); 1.33 (s, 9H); 1.33-1.17 (m, 2H); 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 3H); 0.90-1.00 (m, 1H).
[0195] Koraci 4 i 5. Dobijanje A11-4: U rastvor Cbz zaštićenog amina A11-3 (16 g, 52 mmol) u DCM (250 mL) dodat je u kapima TFA (250 mL, 3.24 mol) na st i smeša je mešana na st u toku noći. Smeša je koncentrovana in vacuo, podešena na pH 8-9 pomoću vodenig natrijum karbonata i isprana sa etrom (3x80 mL). Vodena faza je zatim podešena na pH 5-6 pomoću 1 N HCI i ekstrahovana sa EA (2x300 mL). Spojene etil acetatne faze su isprane sa vodom (80 mL), rastvorom soli (80 mL), osušene iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani da bi se dobilo 13 g blago žutog ulja koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Materijal (8.0 g, 32 mmol) je skupljen u metanolu (200 mL), tretiran sa tionil hloridom (15 mL) na 0 °C, zatim mešan na st u toku noći. Dobijena smeša je koncentrovana in vacuo i prečišćena sa fleš hromatografijom na silikagelu (eluent PE/EA 10:1-5:1) da bi se dobio metil ester A11-4 (6 g).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.97 (s, 1H); 7.37-7.26 (m, 5H); 4.99 (s, 2H); 3.61 (s, 3H); 1.48-1.45 (m, 1H); 1.17-1.08 (m, 2H); 1.06-1.04 (d, 3H).
[0196] Korak 6. Dobijanje A11-5: Cbz karboksamid A11-4 (36 g, 0.15 mol), Boc2O (40 g, 0.18 mol), i Pd/C (3.6 g, 10% m/m) su sakupljeni u metanolu pod H2i mešani na 32 °C u toku noći. Reakciona smeša je proceđena da bi se uklonio katalizator, dodatni Boc2O (40 g, 0.18 mol) i Pd/C (3.6 g, 10% m/m) su dodati i reakcija je smeštena u atmosferu H2uz mešanje na st u toku vikenda. Reakciona smeša je proceđena da bi se uklonio katlizator, koncentrovana in vacuo i prečišćena fleš hromatografijom na silicijumdioksidu (eluent PE/EA 20:1-10:1) da bi se dobio Boc zaštićeni amin A11-5.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.48 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 1.43-1.41 (m, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.21-1.18 (m, 1H), 1.07-1.01 (m, 4H).
[0197] Korak 7. Dobijanje A11-6: U rastvor NaH2PO4(1.9 g) u vodi (160 mL) na 40 °C dodata je alkalaza (2.4 U/g, 16 mL). Smeša je podešena sa 50% vodenog natrijum hidroksida na pH 8. A11-5 (2.80 g) u DMSO (32 mL) dodat je u pufer u kapima u toku 30 min. Smeša je mešana na 40 °C i održavana na pH 8 uz dodavanje 50% NaOH u toku 19 h. Smeša je ohlađena na st, sa etrom (3 x 100 mL) i organska faza je isprana sa zas. NaHCO3(2 x 40 mL), vodom (2 x 40 mL), rastvorom soli (40 mL), osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena i koncentrovana in vacuo da bi se dobio A11-6.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 5.18 (br s, 1H); 3.71 (s, 3H); 1.43-1.18 (m, 2H); 1.34 (s, 9H); 1.07-1.01 (m, 4H). Analizom proizvoda pomoću chromegaChiral CC3 kolone (0.46 cm I.D. X 25 cm L, 3 μL injekcija, 80/20 heksan/IPA, 1 mL/min, 34 °C, 220 nM UV detekcija) određen enantiomerni višak je bio 99.4% (poželjna RT = 5.238 min, nepoželjna RT = 6.745 min).
[0198] Koraci 8 i 9. Dobijanje A11-7: Čvrsta supstanca LiOH•H2O (19.1 g, 455 mmol) je sakupljena u 50 mL MeOH/50 mL vode na st. Kada je sav LiOH ratvoren, metil ester A11-6 (10.4 g, 45.5 mmol) je sakupljen u 100 mL THF i dodat u reakcionu smešu i mešan intenzivno u toku noći. Dobijeni rastvor je razblažen sa vodom (150 mL), podešen na pH ∼ 3 sa 12 M HCI i ekstrahovan sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovani in vacuo da bi se dobio fini beli prah (9.2 g). Ovaj materijal (1.5 g, 7 mmol) je sakupljen u THF (30 mL) i tretiran sa CDI (1.47 g, 9.1 mmol). Dobijeni rastvor je zagrejan na 65 °C u toku 2 h, ohlađen na st i tretiran sa DBU (2.1 mL, 13.9 mmol) i 1-metilciklopropan-1-sulfonamidom (1.4 g, 10.5 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na st u toku noći. Dodavanje 1 M HCI je korišćeno da se pH podesi na ∼ 1 pre uklanjanja većine THF in vacuo. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc i spojene organska supstanca je isprana sa rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana in vacuo da bi se dobilo 2.29 g acil sulfonamida A11-7. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+Na]<+>izrač. za C14H24N2NaO5S: 355.41; nađeno: 355.84.
[0199] Korak 10. Dobijanje intermedijera A11. Acil sulfonamida A11-7 (0.25 g, 0.75 mmol) u dioksanu (1 mL) je tretirano sa HCI (4 M u dioksanu, 2.8 mL, 11.2 mmol) na st. Posle 4 h, reakcija je koncentrovana in vacuo da bi se dobio 0.20 g intermedijera A-11 koji je korišćen naknadno bez dodatnog prečišćavnja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.87-1.84 (m, 0.5 H); 1.77-1.65 (m, 1.5H); 1.58-1.46 (m, 2H); 1.54 (d, J = 8 Hz, 3H); 1.34-1.26 (m, 3+1H); 1.02-0.92 (m, 1H); 0.83-0.77 (m, 1H).
Dobijanje intermedijera A12.
[0200]
1-fluorociklopropan-1-
sulfonamid
[0201] Korak 1. Dobijanje A12-1: Sud koji sadrži rastvor karboksilne kiseline A9-1 (1 g, 4 mmol) u THF (15 mL) je tretiran sa CDI (0.84 g, 5.2 mmol), zatopljen i zagrevan na 75 °C u toku 2 h. Bistar žuto-mrk rastvor je podeljen na pola i korišćen zatim bez daljeg prečišćavanja u ostatku koraka 1 u dobijanju intermedijera A12 kao i za dobijanje intermedijera A13 kao što je do detalja opisano dole. Ovaj rastvor je tretiran sa 1-fluorociklopropan1-sulfonamidom (0.42 g, 3 mmol; dobijenog prema koracima 1, 4, i 9 primera 7 objave međunarodne prijave patenta br.. WO 2009/14730, str.107-110) i DBU (0.6 mL, 4 mmol) i omogućenoje da se meša u toku noći na st. Rastvor je zakišeljen do pH ∼1 sa 1 M HCl i koncentrovan in vacuo da bi se uklonila većina THF. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc i spojena organska materija je isprana sa rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovani in vacuo do suvog da bi se dobilo 0.73 g A12-1 koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
[0202] Korak 2. Dobijanje intermedijera A12: Acil sulfonamid A12-1 (0.25 g, 0.67 mmol) je sakupljen sa 1 mL dioksana i tretiran sa HCI (4 M u dioksanu, 2.5 mL, 11 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 2 h i koncentrovana in vacuo do suvog da bi se dobio kvantitativni prinos intermedijera A12.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 6.04 (td, JH-F= 55.6 Hz, J = 5.2 Hz, 1H); 2.25-2.14 (m, 1H); 1.78-1.62 (m, 2H);1.52-1.38 (m, 4H).
Dobijanje intermedijera A13.
[0203]
[0204] Intermedijer A13 je pripremljen slično intermedijeru A12, zamenom 1-hlorociklopropan-1-sulfonamida (dobijenog prema Li, J, et al. Synlett, 2006, 5, pp. 725-728) za 1-hlorociklopropan-1-sulfonamid u koraku 1.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 6.03 (td, JH-F= 54.8 Hz, J = 6 Hz, 1H); 2.32-2.18 (m, 1H); 2.06-1.92 (m, 2H);1.80-1.68 (m, 2+1H); 1.56-1.44 (m, 1H); 1.44-1.37 (m, 1H).
Dobijanje intermedijera B1.
[0205]
[0206] Koraci 1 i 2. Dobijanje intermedijera B1: Enaminon B1-1 (4.0 g, 11.8 mmol, dobijenog prema Camplo, M., et al. Tetrahedron 2005, 61, 3725) je rastvoren u acetonu (120 mL) i reakcioni sud je pročišćen sa Ar. Pd/C (10 mas. % Pd, 820 mg) dodat je u jednoj porciji i reakcioni sud je dva puta pročišćen sa H2. Reakcija je mešana pod 1 atm H2na st u toku 15 h i zatim je proceđena kroz soj Celite sa acetonom. Filtrat je koncentrovan i proceđen kroz sloj silikagela sa 30% EtOAc u heksanima da se dobije smeša ∼2:1 ketona B1-2 i B1-3 (3.48 g) kao bela čvrsta supstanca. Ova smeša (3.37 g, 11.3 mmol) je rastvorena u THF (100 mL) pod Ar. 1 M rastvor (R)-(+)-2-metil-CBS-oksazaborolidina u toluenu (11.3 mL, 11.3 mmol) je dodat u jednoj porciji i dobijeni rastvor je ohlađen na -78 °C. 1 M rastvor BH3•SMe2u CH2Cl2(11.3 mL) je zatim dodat u kapima u toku 5 min. Dobijeni rastvor je mešan u toku 20 min i uklonjen sa hladnog kupatila. Posle dodatnih 15 min, reakcija je smeštena u vodeno kupatilo na sobnoj temperaturi. Posle dodatnih 7 min, reakcija je zaustavljena dodavanjem u kapima MeOH (20 mL). Posle mešanja u toku dodatnih 2.5 h, reakciona smeša je koncentrovana, rastvorena u EtOAc (300 mL), i isprana sa 0.2 M HCI (200 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (100 mL). Spojena organska faza je proceđena da bi se uklonile čvrste supstance, osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana. Sirovi ostatak je rastvoren u CH2Cl2i bio je koncentrovan na 20 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografihjom na silikagelu (25 do 40% EtOAc u heksanima) dobijen je parcijalno odvojeni intermedijer B1 od drugih diastereomernih proizvoda. Pomešane frakcije su sakupljene i koncentrovane na 9 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu dobijen je Intermedijer B1 kontaminiran sa manjom količinom siasteroizomernih komponenti kao bele čvrste supstance (1.96 g).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, primećeni rotameri) δ 4.25 -4.15 (m, 1H), 4.13 -4.04 (m, 1H), 3.91 -3.79 (m, 1H), 3.28 -3.09 (m, 1H), 2.41 -2.23 (m, 1H), 2.04 (bs, 1H), 1.51 -1.39 (m, 18H), 1.09 -1.01 (m, 3H).
Dobijanje intermedijera B2.
[0207]
trans-3-hidroksi-L-prolin
[0208] Koraci 1 i 2. Dobijanje B2-1: trans-3-Hidroksi-L-prolin (571 mg, 4.35 mmol, Chem-Impex International, Inc.) je suspendovan u MeOH i ohlađen na 0 °C. Tionil hlorid (1.6 mL, 22 mmol) dodat je u toku 5 min i rastvor je zagrejan na st. Posle mešanja u toku 24 h, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio metil ester, koji je dalje korišćen bez daljeg prečišćavanja. Sirovi ester je suspendovan DCM (22 mL) i tretiran sa TEA (1.3 mL, 9.57 mmol). Mešana smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je tritil hlorid (1.21 g, 4.35 mmol). Omogućeno je da reakciona smeša polako dođe na st p/n, i zatim je sipana u zasićeni vodeni NaHCO3. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa DCM. Spojene organse supstance su osušene iznad Na2SO4, proceđene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečšćen hromatografijom na silikagelu (25% do 50% EtOAc/Heks da bi se dobio alkohol B2-1 (1.27 g).
[0209] Korak 3. Dobijanje B2-2: Alkohol B2-1 (1.23 g, 3.18 mmol) i 2 g 4 A MS je suspendovano u DCM (16 mL) i tretirano sa NMO (560 mg, 4.78 mmol) i TPAP (76 mg, 0.218 mmol). Posle mešanja u toku 30 min, smeša je proceđena iznad kratkog sloja silicijumdioksida i eluiranja sa 50% EtOAc/Heks. Filtrat je koncentrovan i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (10% do 30% EtOAc/Heks da bi se dobio keton B2-2 (0.99 g).
[0210] Korak 4. Dobijanje B2-3: LiHMDS (1.0 M u THF, 5.8 mL, 5.8 mmol) dodat je u THF (22 mL) i rastvor koji se meša je ohlađen na -78 °C. Rastvor ketona B2-2 (2.14 g, 5.55 mmol) na st u THF (6 mL) dodat je pomoću cevčice u toku 5 min. Balon koji je sadržao B2-2 je zatim ispran sa THF (4 mL) isprani deo je dodat u kapima pomoću cevčice u reakcionu smešu. Posle 35 min, N-(5-hloro-2-piridil)bis(trifluorometansulfonimid) (2.40 g, 6.11 mmol) u THF (6 mL) dodat je u reakcinu smešu u kapima pomoću šprica u toku 5 min. Posle još 1 h, reakciona smeša je zagrejana na st. Posle dodatnih 30 min, reakcija je zaustavljena dodavanjem 20 mL H2O i razblažena sa Et2O. Organski rastvor je ispran sa 10% NaOH osušen iznad K2CO3, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je nanet na kolonu od silicijum dioksida koja je prethodno uravnotežena sa 1% TEA/Heks. Materijal je prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu (0% do 15% EtOAc/Heks dopiran sa 1% TEA) da bi se dobio enol triflat B2-3 (1.89 g).
[0211] Korak 5. Dobijanje B2-4: Enol triflat B2-3 (957 mg, 1.85 mmol) je rastvoren u THF (9 mL) i tretiran sa Pd(PPh3)4(107 mg, 0.0925 mmol) i dimetil cinkom (2.0 M u PhMe, 1.9 mL, 3.7 mmol). Reakciona smeša je mešana na st u toku 5 h, zatim je dodato još dimetil zinka (2.0 M u PhMe, 1.9 mL, 3.7 mmol) i reakcija je zagrejana na 50 °C u toku 15 min. Posle hlađenja na st, smeša je razblažena sa Et2O. Organski rastvor je ispran sa 10% NaOH dva puta, zatim osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi B2-4 ostatak je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Koraci 6 i 7. Dobijanje B2-5: jedinjenje B2-4 (1.85 mmol teoriski) je rastvoreno u 1:1 MeOH/DCM (20 mL) i tretirano sa HCI (4.0 M u dioksanu, 2 mL, 8.0 mmol). Posle mešanja u toku 2 h na st, reakciona smeša je koncentrovana i sirovi materijal je dalje korišćen bez prečišćavanja. Sirovi proizvod amin hidrohlorid je tretiran sa Boc2O (2.02 g, 9.25 mmol), DCM (18 mL), MeOH (1.8 mL) i TEA (0.52 mL, 3.7 mmol). Posle mešanja u toku 2 h na st, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa 10% HCI, zasićenim rastvorom NaHCO3i rastvorom soli. Organski rastvor je osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 40% EtOAc/Heks) da bi se dobio karbamat B2-5 (331 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C12H20NO4: 242.14; nađeno: 243.26.
[0212] Korak 8. Dobijanje intermedijera B2: Karbamat B2-5 (345 mg, 1.43 mmol) je rastvoren u THF (7 mL) i ohlađen na 0 °C. BH3•SMe2kompleks (2.0 M u THF, 0.79 mL, 1.58 mmol) dodat je u kapima i omogućeno je da reakciona smeša dođe polako na st. Posle 15 h, reakcija je zaustavljena dodavanjem u kapima H2O (dodavano do prestanka razvijanja mehurića), i zatim ohlađena na 0 °C. Vodonik peroksid (30% m/m u H2O, 0.73 mL, 7.2 mmol) i NaOH (2.0 M u H2O, 0.86 mL, 1.72 mmol) su dodati brzo uzastopno i mešana smeša je zagrejana na 50 °C u toku 35 min. Smeša je razblažena sa Et2O i isprana sukcesivno sa H2O, zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, zatim osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Intermedijer B2 je korišćen u sledećim reakcijama bez daljeg prečišćavanja . LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C12H22NO5: 260.15; nađeno: 259.99.
Dobijanje intermedijera B3.
[0213]
[0214] Korak 1. Dobijanje B3-1: Enol triflat B2-3 (91 mg, 0.176 mmol) je rastvoren u THF (1.7 mL) i tretiran sa ciklopropil zink bromidom (0.5 M u THF, 1.7 mL, 0.85 mmol) i Pd(PPh3)4(20 mg, 0.018 mmol). Mešana reakciona smeša je zagrejana na 50 °C u toku 2 h zatim ohlađena na st i razblažena sa EtOAc. Organski rastvor je ispran sukcesivno sa zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, zatim osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0% to 20% EtOAc/Heks) da bi se dobio ciklopropan B3-1 (43 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M-Tr+H]<+>izrač. za C9H14NO2: 168.10; nađeno: 168.04.
[0215] Koraci 2 i 3. Dobijanje B3-2: Vinil ciklopropan B3-1 (43 mg, 0.11 mmol) je rastvoren u 1:1 Me-OH/DCM (10 mL) i tretiran sa HCI (4.0 M u dioksanu, 1 mL, 4.0 mmol). Posle mešanja u toku 1.5 h na st, reakciona smeša je koncentrovana i sirovi materijal je korišćen dalje bez prečišćavanja. Sirovi proizvod iz koraka 2 je tretiran sa Boc2O (229 mg, 1.05 mmol), DMAP (13 mg, 0.105 mmol), DCM (5 mL) i TEA (0.293 mL, 2.10 mmol). Posle mešanja u toku 5 h na st, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa 10% HCI, zasićenim vodenim NaHCO3dva puta i zasićenim rastvorom soli. Organski rastvor je osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (10% to 30% EtOAc/Heks) da bi se dobio karbamat B3-2 (20 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M-(t-Bu)+H]<+>izrač. za C10H14NO4: 212.09; nađeno: 211.91.
[0216] Korak 4. Dobijanje intermedijera B3: Karbamat B3-2 (152 mg, 0.569 mmol) je rastvoren u THF (5.7 mL) i ohlađen na 0 °C. BH3•SMe2kompleks (2.0 M u THF, 0.31 mL, 0.63 mmol) dodat je u kapima i omogućeno je da reakciona smeša dođe polako na st. Posle 20 h, reakcija je zaustavljena dodavanjem u kapima H2O (do prestanka razvijanja mehurića), zatim ohlađen na 0 °C. Hidrogen peroksid (30% m/m u H2O, 0.29 mL, 2.85 mmol) i NaOH (2.0 M in H2O, 0.43 mL, 0.86 mmol) su dodati u brzom nizu i mešana smeša je zagrejana na 50 °C u toku 30 min. Smeša je zatim razblažena sa Et2O i isprana uzastopno sa H2O, zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, zatim osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Intermedijer B3 je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M-(t-Bu)+H]<+>izrač. za C10H16NO5: 230.10; nađeno: 230.03.
Dobijanje intermedijera B4.
[0217]
(2S,3S,4R)-di-tec-butil-3-etil-4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilat
[0218] Intermedijer B4 ((2S,3S,4R)-di-terc-butil3-etil-4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilat) je dobijen prema Camplo, M., et al. Tetrahedron 2005, 61, 3725.
Dobijanje intermedijera B5.
[0219]
[0220] Korak 1. Dobijanje enona B5-2: U rastvor B1-1 u tetrahidrofuranu (7.35 mL) dodat je etilmagnezijum bromid (3 M u dietil etru, 1.47 mL 4.41 mmol) pomoću šrica na -78 °C u atmosferi argona. Posle 2.5 h, omogućeno je da se reakciona smeša zagreje do st u toku 30 min u kojoj tački je reakciona smeša razblažena sa zasićenim vodenim rastvora amonijum hlorida (20 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (20 mL dva puta), i spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksani) da bi se dobio intermedijer B5-1 (308.8 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C17H28NO5: 326.2; nađeno: 326.2.
[0221] Korak 2. Dobijanje B5-2: U rastvor enona B5-1 (308 mg, 0.95 mmol) u metanolu (4.7 mL) dodat je cerijum(III) hlorid heptahidrat (566 mg, 1.52 mmol) na st u atmosferi argona. Dobijena smeša je ohlađena na o -78 °C, i dodat je natrijum borohidrid (57.7 mg, 1.52 mmol) kao čvrsta supstanca. Posle 1 h, Reakciona smeša je zagrejana na 0 °C i dodat je zasićeni vodeni amonijum hlorid (20 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (20 mL dva puta), i spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su in vacuo da bi se dobio alilini alkohol B5-2 (319.3 mg) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C17H29NO5: 328.2; nađeno: 328.2.
[0222] Korak 3. Dobijanje intermedijera B5: U rastvor alkohola B5-2 (319 mg, 0.98 mmol) u etanolu (4.9 mL) dodat je Pd/C (10%, 103.9 mg, 0.097 mmol) na st u atmosferi argona. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i reakciona smeša je mešana intenzivno na st. Posle 16 h, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (25 mL) i proceđena je kroz sloj Celite ispiran sa etil acetatom (10 mL tri puta). Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio intermedijerB5 (188 mg), koji je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C17H32NO5: 330.2; nađeno: 330.3.
Dobijanje intermedijera B6.
[0223]
[0224] Korak 1. Dobijanje B6-1: Rastvor izopropilmagnezijum bromida (2.9 M u MeTHF, 3.2 mL, 9.3 mmol) dodat je u kapima u hlađen rastvor B1-1 (1.02 g, 3.00 mmol) u 60 mL etra na -78 °C pod argonom. Reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 3 sata. Reakciona smeša je zaustavljena sa zas. vodenim NH4Cl i ekstrahovana tri puta sa etrom. Spojena organska supstanca je isprana sa zas. vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, osušena (MgSO4), proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-30% etil acetat u heksanima ) da bi se dobio B6-1 (743 mg) kao svetlo žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.60 (dd, J = 10.8, 2.4 Hz, 1H), 5.14 and 5.06 (rotamers, d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.96 (m, 2H), 2.91 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.27 (s, 9H), 1.04 (d, J = 8.8 Hz, 6H). Korak 2. Dobijanje B6-2 i B6-3: CeCl3•7H2O (1.32 g, 3.50 mmol) dodat je u rastvor B6-1 (740 mg, 2.18 mmol) u 47 mL metanola na sobnoj temperaturi pod argonom. Posle hlađenja na -78 °C, dodat je natrijum borohidrid (127 mg, 3.34 mmol) polako u porcijama. Posle dva sata, reakciona smeša je zagrejana na 0 °C. Posle petnaest minuta, reakciona smeša je zaustavljena sa zas. vodenim NH4Cl i ekstrahovana tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana sa rastvorom soli, osušena (MgSO4), proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila ∼3:1 smeša B6-2 (glavnog) i B6-3 (sporednog) kao bezbojnog filma (738 mg), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.68-5.48 (m, 1H), 4.90-4.31 (m, 2H), 4.05-3.15 (m, 2H), 2.90-2.61 (m, 1H), 1.50-1.39 (br s, 18H), 1.02 (d, J = 9.2 Hz, 6H).
[0225] Korak 3. Dobijanje intermedijera B6: Smeša ∼3:1 B6-2 i B6-3 (341 mg, 1.00 mmol) je rastvorena u 28 mL etil acetata. Zatim je dodat paladijum na ugljeniku (10 mas %, 109 mg, 0.11 mmol) u smešu i koja hidrogenizirana je u atmosferi vodonika u toku devetnaest sati. Smeša je zatim proceđena preko Celitea , isprana sa etil acetatom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetat u heksanima) da bi se dobio Intermedijer B6 (141 mg) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.31-4.17 (m, 2H), 3.97-3.85 (m, 1H), 3.21-3.07 (m, 1H), 2.35-2.18 (m, 1H), 1.92-1.78 (m, 1H), 1.47-1.37 (m, 18H), 1.35-1.19 (m, 2H), 0.94 (d, J = 8.8 Hz, 6H).
Dobijanje intermedijera B7.
[0226]
[0227] Korak 1. Dobijanje B7-2: U rastvor alkohola B7-1 (500 mg, 1.33 mmol; dobijenog prema Barreling, P., et al. Tetrahedron 1995, 51, 4195) u DCM (6.65 mL) dodat je Dess-Martinov perjodinan (564 mg, 1.33 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 2 h, reakciona smeša je prečišćena direktno hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksani gradijent) da bi se dobio keton B7-2 (431 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C21H30NO5: 376.2; nađeno: 376.2.
[0228] Korak 2. Dobijanje intermedijera B7: U rastvor intermedijera B7-2 (410 mg, 1.09 mmol) i (R)-(+)2-metil-CBS-oksazaborolidina (Aldrich, 1 M u toluenu, 1.09 mL, 1.09 mmol) u THF (5.45 mL) dodat je BH3•THF (1 M u toluenu, 2.18 mL, 2.18 mmol) na -78 °C u atmosferi argona. Posle 1 h, reakciona smeša je zaustavljena sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (15 mL) i dobijena smeša je omogućeno da se zagreje do st. Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana dva puta (20 mL) sa DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovani su in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksanski gradijent) da bi se dobio Intermedijer B7 (390.9 mg, 4:1 diastereomerna smeša) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]<+>izrač. za C21H32NO5: 378.2; nađeno: 378.5.
Dobijanje intermedijera B8.
[0229]
(S)-metil 4-okso-1-(9-fenil-9H-
fluoren-9-il)pirolidin-2-karboksilat
[0230] Korak 1. Dobijanje B8-1. n-BuLi (0.44 mL, 1.1 mmol, 2.5 M u heksanu) dodat je u hladni (-78 °C) rastvor (S)-metil 4-okso-1-(9-fenil-9H-fluoren-9-il)pirolidin-2-karboksilata (383 mg, 1 mmol, pripremljenog kao što je opisano u Sardina, F.J., Blanco, M.-J. J. Org. Chem. 1996, 61, 4748) u THF/HMPA (3.8 mL/ 0.4 mL). Dobijeni rastvor je mešan na -78 °C do -50 °C u toku 1.5 h, i zatim je dodat bromoacetonitril (0.2 mL, 3 mmol). Reakciona smeša je mešana dok je omogućeno da temperatura dostigne -10 °C (4 h). Reakciona smeša je napunjena sa zasićenim vodenim NH4Cl (1 mL) i EtOAc (15 mL). Organski slojevi su odvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (10 mL). Spojena su dva organska sloja, isprana sa H2O i zasićenim rastvorom soli, i osušena iznad Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen hromatografjom na silikagelu da bi se dobila diastereomerna smeša B8-1 (170 mg) kao bezbojno ulje. Korak 2. Dobijanje B8-2. KHMDS (0.4 mL, 0.4 mmol, 1 M in THF) dodato je u hladni (-78 °C) rastvor B8-1 (140 mg, 0.33 mmol) u THF/DMPU (1.5 mL/0.75 mL). Dobijeni rastvor je mešana na -78 °C u toku 1.5 h. Zatim je dodat HOAc (0.1 mL). Reakciona smeša je napunejnja sa zasićenim vodenim NH4Cl (1 mL) i EtOAc (15 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (10 mL). Oba organska sloja su sakupljena, isprana sa H2O i zasićenim rastvorom soli, i osušena iznad Na2SO4. Organski sloj je koncentrovana i prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu da bi se dobio keton B8-2 (120 mg) kao bezbojno ulje.
[0231] Korak 3. Dobijanje intermedijera B8. U osušen, azotom ispran balon dodat je BH3•THF (0.28 mL, 0.28 mmol,) a zatim (R)-(+)-2-metil-CBS-oksazaborolidin (0.012 mL, 0.03 mmol, 1.0 M u toluenu). Rastvor B8-2 (120 mg, 0.28 mmol) u THF (0.5 mL) dodat je u kapima. Reakciona smeša je mešana na st u toku 60 min, i zatim je zaustavljena dodavanjem 1.0 M vodenog HCl (0.2 mL). EtOAc (20 mL) dodat je i organska faza je isprana sa zas. vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, i osušena iznad Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu da bi se dobio Intermedijer B8 (100 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M]<+>izrač. za C27H24N2O3: 424.49; nađeno: 424.77.
Dobijanje intermedijera C1.
[0232]
metil 3-metil-N-(oksometilen)-L-valinat
[0233] Metil 3-metil-N-(oksometilen)-L-valinat (Intermedijer C1) je dobijen prema Koraku 3 Intermedijera B1 iz objave međunarodne prijave patenta br. WO 2010/11566 (nadalje "WO’566"), str. 14.
Dobijanje intermedijera C2.
[0234]
terc-butil 3-metil-N-(oksometilen)-L-valinat
[0235] Intermedijer C2 (terc-butil 3-metil-N-(oksometilen)-L-valinat) je pripremljen na sličan način kao Intermedijer C1, zamenom terc-butil 3-metil-L-valinata (Bachem AG) za metil 3-metil-L-valinat u Koraku 3 intermedijera B1 WO’566, str 14.
Dobijanje intermedijera D1.
[0237] Koraci 1 i 2. Dobijanje trans-ciklopropanolne smeše D1-2 i D1-3: THF (1000 mL) je unet u trogrli balon sa okruglim dnom koji sadrži Mg (32.2 g, 1.34 mol). Rastvor 7-bromohept-1-ena (216 g, 1.22 mol) u THF (600 mL) je unet u kapalicu. Jedan kristal joda i 20 mL 7-bromohept-1-enskog rastvora je dodat u reakciju. Rastvor je zagrejan do refluksa, i ostatak 7-bromohept-1-enskog rastvora je dodat u kapima. Pošto je dodavanje bilo završeno, smeša je refluktovana u toku dodatna 2 h i zatim je omogućeno da se ohladi na st da bi se dobio rastvor Grinjarovog reagensa D1-1, koji je zatim dodat u kapima u rastvor etil formijata (30 g, 0.41 mol) i Ti(Oi-Pr)4(115.2 g, 0.41 mol) u THF (1200 mL) na st. Posle mešanja u toku noći, smeša je sipana u 1600 mL 10% vodenog H2SO4i ekstrahovana sa MTBE (1500 mL tri puta). Spojeni organski spojevi su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, proceđeni i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio 31.0 g smeše trans-ciklopropil alkohola D1-2 i D1-3 kao žutog ulja.<1>H NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 5.77-5.70 (m, 1H), 4.96-4.86 (m, 2H), 3.15-3.12 (m, 1H), 2.03-1.98 (m, 2H), 1.75 (br s, 1H), 1.45-1.37 (m, 2H), 1.20-1.15 (m, 1H), 1.06-1.01 (m, 1H), 0.89-0.82 (m, 1H), 0.63-0.59 (m, 1H), 0.24 (q, J = 6.0 Hz, 1H). Korak 3. Dobijanje ciklopropil acetatne smeše D1-4 i D1-5: U balon sa okruglim dnom od 1000 mL dodata je smeša trans-ciklopropila i alkohola D1-2 i D1-3 (60.3 g, 0.48 mol), 700 mL DCM i TEA (62.9 g, 0.62 mol) pre hlađenja rastvora u acetonu/ledenom kupatilu na unutrašnjoj temperaturi od < 5 °C. Acetil hlorid (41.3 g, 0.53 mol) je dodat u kapima u rastvor u toku perioda od 30 min dok je održavana unutrašnja temperatura < 10 °C. Dobijena suspenzija je zatim zagrejana na st i mešana u toku 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa 350 mL vode. Bifazana smeša je premeštena u levak za odvajanje i vodeni sloj je uklonjen. Organski sloj je ispran sa 480 mL 2 N vodeni HCl i zatim sa 500 mL zas. vodeni NaHCO3pre sušenja iznad MgSO4. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobila smeša D1-4 i D1-5 (56.3 g) kao žutog ulja. TLC Informacija (PE/EtOAc =5/1) Rf(polazni materijal) = 0.4; Rf(proizvod) = 0.8.
[0238] Korak 4. Dobijanje D1-3: U balon sa okruglim dnom od 1000 mL dodat je rastvor smeše D1-4 i D1-5 (39 g, 0.23 mol) u 680 mL MTBE zasićen sa vodenim 0.1 M pH 7 fosfatnim puferom. Balon je smešten u ledeno kupatilo da bi se održala unutrašnja temepratura na približno 10 °C preko reakcije hidrolize koja je inicirana dodavanjem 3.0 g Novozima 435. Reakcija je sazrela na 10 °C u toku približno 6 h do pretvaranje nije dostiglo oko 40%. Reakciona smeša je proceđena, i čvrsta supstanca je čvrst imobilizovani enzim je ispran tri puta sa 200 mL MTBE. Dobijeni MTBE rastvor je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio D1-3 (11.3 g) kao žuto ulje.<1>H NMR: (400 MHz, CDCl3) δ 5.80-5.75 (m, 1H), 5.02-4.91 (m, 2H), 3.20-3.17 (m, 1H), 2.09-2.03 (m, 3H), 1.50-1.43 (m, 2H), 1.26-1.22 (m, 1H), 1.17-1.08 (m, 1H), 1.07-0.89 (m, 1H), 0.70-0.65 (m, 1H), 0.32-0.27 (m, 1H).
[0239] Korak 5. Dobijanje D1-6: Ciklopropanol D1-3 (17.7 g, 0.140 mol) je rastvoren u 300 mL MeCN na 0 °C. U rastvor je dodat DSC (72.0 g, 0.280 mol) i TEA (42.42 g, 0.420 mol). Reakciona smeša je zagrejana na 40 °C i mešana u toku noći i zatim koncentrovana in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio D1-6 (25.8 g) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR: (400 MHz, CDCl3) δ 5.84-5.77 (m, 1H), 5.05-4.96 (m, 2H), 4.09-4.03 (d, J = 24 Hz, 1H), 2.86 (s, 4H), 2.12-2.06 (m, 2H), 1.58-1.51 (m, 2H), 1.33-1.27 (m, 3H), 1.09 (m, 1H), 0.68-0.62 (m, 1H).
[0240] Korak 6. Dobijanje D1-7: U rastvor D1-6 (10 g, 0.0374 mol) u THF (374 mL) dodat je L-tercleucin metil ester hidrohlorid (10.2 g , 0.056 mol) i TEA (11.3 g, 0.112 mol). Rastvor je mešan u toku noći na 40 °C. Smeša je koncentrovana in vacuo. Ostatak je razblažen sa EtOAc i ispran sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđen i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio D1-7 (10.2 g) kao žuto ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C16H28NO4: 298.2; nađeno: 298.0.
[0241] Korak 7. Dobijanje intermedijera D1: Rastvor D1-7 (20 g, 0.067 mol) u smeši 2:1 MeOH/H2O (447 mL/223 mL) je tretiran sa LiOH•H2O (11.3 g, 0.269 mol) i zatim je zagrejan na 60 °C u toku 4 h. Reakciona smeša je ohlađena, koncentrovana na polovinu zapremine i ekstrahovana sa MTBE. Zatim je vodeni rastvor zakišeljen sa vodenim 1 N HCl (400 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (400 mL x 3), spojeni organski slojevi su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad Na2SO4, proceđeni i koncentrovani da bi se dobio Intermedijer D1 (18 g).<1>H NMR: (400 MHz, CDCl3) δ 10.5-9.4 (br, 1H), 5.82-5.71 (m, 1H), 5.20-5.17 (m, 1H), 4.99-4.91 (m, 2H), 4.19-4.16 (m, 1H), 3.86-3.68 (m, 1H), 2.09-2.03 (m, 2H), 1.53-1.32 (m, 2H), 1.30-1.20 (m, 2H), 1.18-1.13 (m, 1H), 1.11-0.99 (s, 9H), 0.80-0.75 (m, 1H), 0.49-0.47 (m, 1H).
Dobijanje intermedijera D2.
[0242]
hidrohlorid (S)-2-amino-2-ciklopentilsirćetna kiselina
[0243] Korak 1. Dobijanje intermedijera D2: U suspenziju D1-6 (600 mg, 2.25 mmol) i hidrohloridne soli (S)-2-amino-2ciklopentilsirćetne kiseline (386 mg, 2.7 mmol, Betapharma Inc.) u THF (20 mL) dodati su destilovana voda (6 mL) i trietilamin (0.94 mL, 6.74 mmol). Homogeni rastvor je omogućeno da se meša u toku ∼ 18 h. THF je uparen i vodeni ostatak je razblažen sa vodom (20 mL). Smeša je zabažena sa 1 N NaOH (pH > 10) i zatim isprana dva puta (20 mL) sa etil acetatom. Vodeni sloj je zatim zakišeljen sa 1 N HCl (pH < 2) i dobijeni rastvor je ekstrahvoan dva puta (20 mL) sa etil acetatom. Spojena organska faza osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana da bi se dobio Intermedijer D2 (500 mg) kao braon ulje. Ono je korišćeno bez prečišćavanja u sledećem koraku. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C16H26NO4: 296.2; nađeno: 296.3.
Dobijanje intermedijera D3.
[0244]
(S)-2-amino-2-cikloheksilsirćetna
kiselina
[0245] Korak 1. Dobijanje intermedijera D3: U suspenziju D1-6 (800 mg, 3 mmol) i (S)-2-amino-2-cikloheksilsirćetne kiseline (519 mg,3.3 mmol; Alfa Aesar) u vodi (15 mL) dodat je K3PO4(1.27 g, 6 mmol). Omogućeno je da se meša homogeni rastvor na st u toku 5 h. U reakcionu smešu je sipana voda (15 mL) i EtOAc (15 mL). Organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (10 mL). Organski slojevi su spojeni, isprani sa 1 N HCl, H2O i zasićenim rastvorom soli, i osušeni iznad Na2SO4Koncentrovanjem organskog rastvora dobijen je Intermedijer D3 (850 mg) kao ulje koje je dalje korišćeno bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C17H28NO4: 310.4; nađeno: 310.3.
Dobijanje intermedijera D4.
[0246]
- -
Korak 1. Dobijanje D4-2: Biciklični alkohol D4-1 (2.9 g, 29.5 mmol, dobijen prema Odeljku A, Intermedijera 1 iz U.S. Patenta br.8,178,491 B2 (nadalje "US ’491"), p 192.) je rastvoren u DCM (60 mL) i dodat je TEA (8.2 mL, 59 mmol). Rastvor koji se meša je ohlađen na 0 °C i dodat je MsCl (3.4 mL, 44 mmol). Omogućeno je da reakciona smeša zagreje polako do st. Posle 18 h, reakciona smeša je sipana na H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan 2 x sa DCM zatim je spojena organska supstanca osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu (20% to 50% EtOAc/Heks) da bi se dobio D4-2 (3.73 g).
[0247] Korak 2. Dobijanje D4-3: NaH (1.69 g, 42.3 mmol) je suspendovan 100 mL THF i smeša je ohlađena na 0 °C. Dietil malonat (6.4 mL, 47 mmol) je dodat u kapima u toku 4 min i smeša koja se meša je zagrejana na st. Posle još jednog sata, dodat je mezilat D4-2 (3.73 g, 21.2 mmol) u 20 mL THF i reakciona smeša je zagrejana do refluksa u toku 15 h. Posle ovog perioda, reakciona smeša je ohlađena na st i sipana u zasićeni vodeni NaHCO3. Vodeni sloj je ekstrahovan 2 x sa EtOAc. Zatim, organska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0% to 15% EtOAc/Heks) da bi se dobio D4-3 (4.64 g).
[0248] Korak 3. Dobijanje D4-4: Malonat D4-3 (4.64 g, 19.3 mmol) je rastvoren u 20 mL DMSO, zatim su dodati NaCl (1.24 g, 21.2 mmol) i voda (0.694 mL, 38.6 mmol). Mešana smeša je zagrejana na 170 °C u toku 48 h zatim ohlađena na st i razblažena sa Et2O. Organski rastvor je ispran sa H2O dva puta, zatim zasićenim rastvorom soli, osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu (5% to 15% EtOAc/Heks) da bi se dobio D4-4 (2.83 g).
[0249] Koraci 4 i 5. Dobijanje D4-5: Rastvor etil ester D4-4 (2.83 g, 16.8 mmol) i LiOH (1 M in H2O, 34 mL, 34 mmol) u EtOH (68 mL) je mešan na st p/n zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio EtOH. Preostali materijal je razblažen sa H2O i ispran dva puta sa DCM. Vodena faza je zakišeljena do pH 1-2 sa 10% HCl i zatim ekstrahovana tri puta sa DCM. Ovaj DCM rastvor je osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena sirova karboksilna kiselina je rastvorena u DCM (100 mL) i tretirana sa DMF (5 kapi). Pažljivo je dodat je oksalil hlorid (2.2 mL, 25 mmol). Posle mešanja p/n, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio D4-5, koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja.
[0250] Korak 6. Dobijanje D4-6: (S)-4-Benzil-2-oksazolidinon (3.57 g, 20.2 mmol) je rastvoren u THF (80 mL) i ohlađen na -78 °C. n-BuLi (1.6 M u heksanu, 12.6 mL, 20.2 mmol) je dodat u kapima u toku 7 min i omogućeno je da se reakciona smeša meša na -78 °C u toku 30 min. Ovaj rastvor, koji sadrži litilovani oksazolidinon je zatim dodat pomoću cevčice u rastvor na -78 °C kiselinskog hlorida D4-5 (16.8 mmol) u THF (80 mL) u toku 6 min. Posle mešanja na -78 °C u toku dodatnih 30 min, reakciona smeša je zaustavljena dodavanjem 1 M vodenog NaHSO4. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc i organski sloj je osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu (10% do 40% EtOAc/Heks) da bi se dobio D4-6 (4.32 g). LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C18H22NO3: 300.16; nađeno: 300.14.
[0251] Korak 7. Dobijanje D4-7: Rastvor KHMDS (0.5 M in PhMe, 3.4 mL, 1.7 mmol) u THF (5 mL) je ohlađen na -78 °C i odvojeni rastvor oksazolidinona D4-6 (465 mg, 1.55 mmol) na -78 °C u THF (5 mL) dodat je u kapima pomoću cevčice. Posle 30 min, rastvor trizil azida na -78 °C (576 mg, 1.86 mmol) u THF (5 mL) dodat je pomoću cevčice. Tri minuta kasnije, reakcija je zaustavljena dodavanjem AcOH (0.41 mL, 7.13 mmol) i reakciona smeša je zagrejana na 30 °C u toku 2 h. Posle hlađenja, smeša je sipana u koncentrovani rastvor soli. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa DCM. Spojena organska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu (4% do 25% EtOAc/Heks) da bi se dobio azid D4-7 (367 mg). LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C18H21N4O3: 341.16; nađeno: 341.10.
[0252] Korak 8. Dobijanje D4-8: Azid D4-7 (367 mg, 1.08 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (471 mg, 2.16 mmol) su rastvoreni u EtOAc (20 mL).10% Pd/C (197 mg) je dodat i atmosfera je zamenjena sa H2. Suspenzija je mešana pod 1 atm H2u toku 20 h, zatim proceđena preko Celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 30% EtOAc/Heks) da bi se dobio D4-8 (376 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M-(t-Bu)+H]<+>izrač. za C19H23N2O5: 359.16; nađeno: 359.43.
[0253] Koraci 9 i 10. Dobijanje D4-9: Karbamat D4-8 (376 mg, 0.907 mmol) je rastvoren u THF (9 mL) i ohlađen na 0 °C. H2O2(30% u H2O, 0.463 mL, 4.54 mmol) i LiOH (1 M in H2O, 2.7 mL, 2.7 mmol) su dodati. Omogućeno je da se reakcija meša na 2 h i zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni koncentrat je sipan u H2O i vodeni rastvor je ispran dva puta sa Et2O, zakišeljen do pH 1-2 i ekstrahovan tri puta sa DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, proceđeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijen sirovi ostatak je rastvoren u DCM (8 mL) i MeOH (1 mL) i tretiran sa trimetilsilildiazometana (2 M u heksanu, 0.9 mL, 1.8 mmol). Posle mešanja u toku 40 min na st, reakcija je zaustavljena sa dodavanjem 10% AcOH/MeOH i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (4% do 25% EtOAc/Heks) da bi se dobio D4-9 (167 mg).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.98 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 1.89 (m, 1H), 1.77-1.46 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.22 (m, 2H), 0.28 (dd, J = 7.2 Hz, 13.3 Hz, 1H), 0.13 (d, J = 3.7 Hz, 1H).
[0254] Korak 11. Dobijanje D4-10: Karbamat D4-9 (223 mg, 0.828 mmol) je rastvoren u DCM (4 mL) i tretiran sa HCl (4.0 M u dioksanu, 1 mL, 4.0 mmol). Posle mešanja na st u toku 17 h, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio amin hidrohloridna so D4-10, koja je dalje korišćena bez prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C9H16NO2: 170.12; nađeno: 170.04.
[0255] Koraci 12 i 13. Dobijanje intermedijera D4: Amin hidrohloridna so D4-10 (0.828 mmol, teorijskil) u H2O (1.4 mL) je tretirana sa sveže pripremljenim rastvorom D1-6 (1.35 mmol) u DMF (1.4 mL). Dodat je K3PO4(703 mg, 3.31 mmol) i reakciona smeša je mešana u toku 2 h na st. Posle razblaživanja sa EtOAc, organski sloj je ispran sa 10% vodenom HCl i zasićenim rastvorom soli, zatim osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0% do 25% EtOAc/Heks) da bi se dobio očekivani karbamat (239 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C18H28NO4: 322.20; nađeno: 323.00. Ovaj materijal (239 mg, 0.744 mmol) je rastvoren u MeOH i tretiran sa LiOH (1.0 M u H2O, 5.0 mL, 5.0 mmol). Posle mešanja na st u toku 1 h, MeOH je uklonjen pod sniženim pritiskom. Vodeni rastvor je zakišeljen do pH 1-2 sa 10% vodenim HCl i ekstrahovan tri puta sa DCM. Spojena organska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio Intermedijer D4 (229 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C17H26NO4: 308.2; nađeno: 307.9.
Dobijanje intermedijera D5.
[0256]
[0257] Intermedijer D5 je dobijen prema postupku detaljno opisanom u Li, H., et al. Synlett 2011, 10, 1454.
Dobijanje smeše intermedijera D6.
[0258]
enil)ciklopropanol
[0259] Korak 1. Dobijanje diastereomerne karbamatne smeše D6-1: Intermedijer C2 (1.34 g, 6.31 mmol), (6)-trans1-metil-2-(pent-4-enil)ciklopropanol (590 mg, 4.208 mmol; dobijen prema postupku za Intermedijer C3, WO2011014487, p. 36), DMAP (514 mg, 4.21 mmol), i DIPEA (2.93 mL, 16.83 mmol) su spojeni u toluen (14 mL). Reakcija je zagrejana na 90 °C u toku 18 h. Reakcija je razblažena sa Et2O (25 mL) i 1 N vodenim HCl (75 mL), dobro mešana, i organska supstanca je uklonjena. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etrom (50 mL), organski slojevi su sakupljeni, isprani sa zasićenim rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, proceđeni, i koncentrovani da bi se dobilo sirovo ulje, koje je prečišćeno pomoću hromatografije na silikagelu da bi se dobila diateroizomerna smeša D6-1 kao bistro ulje (820 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+Na]<+>izrač. za C20H35NNaO4: 376.3; nađeno: 376.2.
[0260] Korak 2: Dobijanje diastereomernog smeše intermedijera D6. Diasteroizomerna smeša D6-1 je sakupljena sa DCM (2 mL) i tretirana sa TFA (2 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 1.5 h, reakcija je koncentrovana in vacuo i zajedno uparena sa hloroformom u više navrata da bi se uklonila zaostala TFA i prečistila pomoću hromatografije na silikagelu da bi se dobila diasteroizomerana smeša 1:1 Intermedijera D6 kao braon ulja, (536 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+Na]<+>izrač. za C16H27NNaO4: 320.2; nađeno: 320.1.
Dobijanje intermedijera D7.
[0261]
(1
enil)ciklopentanol
[0262] Korak 1. Dobijanje D7-1: (1R,2R)-1-metil-2-(pent-4-enil)ciklopentanol (220.9 mg, 1.313 mmol; dobijen prema postupaku za Intermedijer B26, iz međunarodne objava patenta br. WO 2008/057209 (nadalje "WO ’209"), str.45) i intermedijer C1 (337.1 mg, 1.969 mmol) su tretirani sa DIPEA (0.91 mL, 5.252 mmol) i DMAP (160.4 mg, 1.313 mmol) u toluenu (4.4 mL). Smeša je zagrejana na 85 °C u toku 21 h. Rastvor je razblažen sa etrom (80 mL). Rastvor je ispran sa 1 N vodenim HCl (30 mL) i zasićenim rastvorom soli (30 mL) uzastopno. Dobijeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4. Posle uklanjanja sredstva za sušenje ceđenjem, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (13% etil acetat u heksanima) da bi se dobio D7-1 (249.5 mg, 0.735 mmol) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, rotameri izraženi kao ukupna H vrednost x prisutna frakcija) δ 5.76-5.92 (m, 1H), 5.12 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.02 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.13 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.81 (s, 3 x 4/10H), 3.73 (s, 3 x 6/10H), 1.80-2.15 (m, 7H), 1.04-1.74 (m, 6H), 1.36 (s, 3H), 1.04 (s, 9 x 4/10H), 0.97 (s, 9 x 6/10H). Korak 2. Dobijanje intermedijera D7:
Estar D7-1 (249.5 mg, 0.735 mmol) je tretiran sa 2 M vodenim rastvoom LiOH (2 mL, 4.0 mmol) u MeOH/THF (4 mL / 4 mL) na st u toku 25 h. Reakciona smeša je zatim tretirana sa 1 N vodenim HCl (5 mL) i zasićenim vodenim rastvorom soli (25 mL) da se blago zakiseli. Smeša je ekstrahovana tri puta sa CH2Cl2(30 mL). Organski sloj je ispran sa vodenim rastvorom soli (30 mL). Dobijeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4. Posle uklanjanja sredstva za sušenje ceđenjem, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio intermedijer D7 (191.2 mg, 0.587 mmol) kao bezbojno ulje koje je korišćeno zatim bez daljeg prečišćavanja .<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.00 (br s, 1H), 5.72-5.90 (m, 1H), 5.12 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.13 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.80-2.16 (m, 7H), 1.04-1.74 (m, 6H), 1.35 (s, 3H), 1.02 (s, 9H).
Dobijanje smeše D8 intermedijera.
[0263]
korak 4 korak 5
[0264] Korak 1. Dobijanje D8-2: U rastvor intermedijera D8-1 (500 mg, 3.24 mmol, dobijenog prema WO ’209, p. 36) u DCM (6.65 mL) dodat je Dess-Martinov perjodinan (1.37 g, 3.24 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 6 h, reakciona smeša je proceđena kroz sloj Celita i direktno je prečišćena pomoću hromatografije na silikagelu (0-100% gradijentom etil acetat/heksani) da bi se dobio keton D8-2 (252 mg) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.81 (ddt, J = 16.9, 10.2, 6.6 Hz, 1H), 5.05 -4.92 (m, 2H), 2.38 -1.93 (m, 7H), 1.87 -1.68 (m, 2H), 1.60 -1.37 (m, 3H), 1.35 -1.20 (m, 1H).
[0265] Korak 2. Dobijanje diastereomerne smeše D8-3: U rastvor ketona D8-2 (385 mg, 2.53 mmol) i TMSCF3(749 μL, 5.07 mmol) u THF (2.3 mL) dodat je CsF (7.0 mg, 46 μmol) na st u atmosferi argona. Posle 2.5 h, reakciona smeša je razblažena sa vodom (10 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana dva puta sa DCM (10 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i zatim koncentrovani in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent etil acetat/heksani) da bi se dobio silil etar D8-3 (714 mg, 1:1 diastereomerna smeša) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.67 (ddt, J = 13.3, 10.1, 6.7 Hz, 1H), 4.91 -4.76 (m, 2H), 2.02 -1.00 (m, 13H), 0.00 (s, 9H).
[0266] Korak 3. Dobijanje diastereomerne smeše D8-4: U rastvor D8-3 (700 mg, 2.38 mmol) u THF (11.9 mL) dodat je TBAF (1M u THF, 2.38 mL, 2.38 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 30 min, reakciona smeša je razblažena sa dihlorometanom (100 mL). Dobijena smeša isprana sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (75 mL), osušena je iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i bila je koncentrovana in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil gradijent acetat/heksani) da bi se dobio alkohol D8-4 (418 mg, 1:1 dijastereomerna smeša) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.81 (dt, J = 16.8, 6.6 Hz, 1H), 5.094.88 (m, 2H), 2.20 -1.91 (m, 4H), 1.86 -1.08 (m, 10H).
[0267] Korak 4. Dobijanje diastereomerne smeše D8-5: Rastvor D8-4 (380 mg, 1.72 mmol), Intermedijera C1 (295.7 mg, 1.72 mmol), DIPEA (1.20 mL, 6.88 mmol), i DMAP (210 mg, 1.72 mmol) u toluenu (8.6 mL) je zagrejan na 85 °C u atmosferi argona. Posle 20 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i razblažena je sa etil acetatom (100 mL). Dobijena smeša je isprana sa 1 N HCl rastvorom (50 mL), zasićenim vodenim natrijum bikarbonatnim rastvorom (50 mL), i zasićenim rastvorom soli (50 mL). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil gradijent acetat/heksani) da bi se dobio karbamat D8-5 (550 mg, 1:1 diastereomerna smeša) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.81 (ddt, J = 16.7, 9.8, 6.6 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.06 -4.89 (m, 2H), 4.16 -4.07 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.84 -2.29 (m, 2H), 2.27 -1.89 (m, 3H), 1.85 -1.12 (m, 8H), 0.98 (s, 9H).
[0268] Korak 5. Dobijanje diastereomerne smeše intermedijera D8: U rastvor karbamata D8-5 (500 mg, 1.27 mmol) u DCE (6.4 mL) dodat je trimetiltin hidroksid (2.30 g, 12.7 mmol) na st u atmosferi argona, i dobijena smeša je zagrejana na 65 °C. Posle 21 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i razblaži sa 1 N HCl rastvorom (50 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 50 mL). Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani in vacuo da bi se dobio Intermedijer D8 (575 mg, 1:1 diastereomerna smeša) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno naknadno bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.90 -5.71 (m, 1H), 5.32 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.07 -4.89 (m, 2H), 4.16 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 2.83 -2.30 (m, 2H), 2.27 -1.87 (m, 3H), 1.83 -1.12 (m, 8H), 1.04 (s, 9H).
Dobijanje smeše intermedijera D9 i D10.
[0269]
[0270] Koraci 1 i 2: Dobijanje racemata D9-1: Metalni magnezijum (1.32 g, 54.3 mmol) dodat je u dvogrli balon snabdeven sa refluksnim kondenzatorom i sud je prečišćen sa Ar. THF (42 mL) dodat je a zatim i jod (ca.5 mg). Mešana suspenzija je zagrejana na 45 °C i 5-bromopent-1-en je dodat (1.2 g, 8.1 mmol) u jednoj porciji. Posle mešanja nekoliko minuta, dodatni 5-bromopent-1-en (5.5 g, 37 mmol) je dodat dovoljnom brzinom da se održava blagi refluks. Dobijena smeša je mešana na 50 °C u toku 15 min i zatim je ohlađena na temepraturu okoline i korišćena trenutno u sledećem koraku. Suspenzija CuI (630 mg, 3.3 mmol) u THF (24 mL) pod Argonom je ohlađena na -5 °C. Alikvot pent-4-enilmagnezijum bromida (ca.0.95 M, 20 mL, 19 mmol) pripremljen u koraku 1 dodat je u toku 5 min, i dobijena smeša je mešana u toku dodatnih 15 min. Reakciona smeša je zatim ohlađena na -20 °C, i (6)-egzo-2,3-epoksinorbornan (1.5 g, 14 mmol) je dodat kao rastvor u THF (5 mL) u toku 1 min. Dve dodatne porcije THF (2.5 mL svaka) su korišćene da se osigura potpuni transfer, i dobijena smeša je mešana u toku 20 min. Reakcija je zatim uklonjena iz hladnog kupatila i zagrejana do st. Posle mešanja dodatnih 1.75 h, reakcija je zaustavljena sa zasićenim vodenim NH4Cl (5 mL) i proceđena sa EtOAc (100 mL) i H2O (100 mL) kroz Celit. Faze su odvojene, i organska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio (6)-D9-1 kao bezbojni ostatak (813 mg).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.90 -5.67 (m, 1H), 5.04 -4.86 (m, 2H), 3.12 (s, 1H), 2.20 -1.92 (m, 5H), 1.69 -1.57 (m, 1H), 1.55 -1.12 (m, 9H), 1.03 -0.84 (m, 1H). Korak 3. Dobijanje diastereomerne smeše Intermedijera D9 i D10: Alkoholna smeša (6)-D9-1 (813 mg, 4.51 mmol) je rastvorena u DMF (4.5 mL). Piridin (370 μL, 4.5 mmol) je dodat a zatim i DSC (1.5 g, 5.8 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 45 °C i mešana u toku 4 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0 °C i dodata je voda (4.5 mL) u kapima u toku 2 min. Reakciona smeša je mešana u toku 5 min i uklonjena sa hladnog kupatila. Posle dodatnih 5 min, reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodati su L-terc-leucin (835 mg, 6.37 mmol) i K3PO4(2.70 g, 12.7 mmol). Smeša je mešana u toku 10 min i uklonjena sa hladnog kupatila. Posle mešanja dodatnih 24 h, smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL), zakišeljena sa 1 M vodenim HCl (15 mL), i razblažena sa 0.2 M vodenim HCl (15 mL). Faze su odvojene i organska faza je isprana sa 0.2 M vodenom HCl (2 x 20 mL), osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio diastereomerna smeša intermedijera D9 i D10 (1.64 g). LCMS-ESI-(m/z): [M-H]izrač. za C19H30NO4: 336.2; nađeno: 336.0.
Dobijanje intermedijera D11.
[0271]
[0272] Korak 1. Dobijanje D11-1: U smešu D1 (1.0 g, 3.53 mmol), natrijum perjodata (2.26 g, 10.59 mmol) u 24 mL THF i 12 mL vode dodat je Os EnCat™ 40 (0.25 mmol/g punjenje, 282 mg, 0.071 mmol, Sigma-Aldrich). Smeša je mešana u toku 3 dana. Voda (50 mL) je dodata i smeša je proceđena. Filter kolač je ispran sa vodom (ukupna zapremina 400 mL) i etil acetatom (ukupna zapremina 600 mL). Odvojeni su slojevi filtrata. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana da bi se dobio D11-1 (1.56 g) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C14H24NO5: 286.2 nađeno: 286.1.
[0273] Korak 2. Dobijanje D11-2: U rastvor D11-1 (3.05 g, 10.7 mmol) u MeOH (50 mL) na 0 °C dodat je natrijum borohidrid u porcijama (809 mg, 21.4 mmol). Reakciona smeša je mešana na st u toku 6 h. Smeša je razblažena sa 50 mL etil acetata i 50 mL rastvora soli i slojevi su odvojeni. Organska faza je ekstrahovana sa dve porcije od 25 mL etil acetata. Spojena organaska faza je osušena iznad natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana. Smeša sirovog proizvoda je prečišćena hromatografijom na silikagelu (EtOAc u heksanima: 10% do 100%) da bi se dobio D11-2 (380 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C14H26NO5: 288.2; nađeno: 288.1.
[0274] Korak 3. Dobijanje intermedijera D11: U rastvor D11-2 (283 mg, 0.98 mmol) u THF (2.8 mL) na 0 °C dodat je 1-nitro-2-selenocijanatobenzen (336 mg, 1.47 mmol) i tributilfosfin (363 μL, 1.47 mmol). Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i smeša je mešana u toku 25 minuta na st. Reakcija je ponovo ohlađena na 0 °C i tretirana je sa 30% rastvorom vodonik peroksida (0.665 mL, 5.85 mmol) i mešana u toku 1 h na st i zatim zagrejana na 60 °C u toku 1 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i željeni proizvod je ekstrahovan u vodenim natrijum bikarbonatom. Ekstrakt bikarbonata je zakišeljen sa 2 N HCl i ekstrahovan sa etil acetatom. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio intermedijer D11 (136 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C14H24NO4: 270.2; nađeno: 270.1.
Dobijanje smeše intermedijera D12 i D13.
[0275]
[0276] Korak 1: Dobijanje D12-1: U rastvor K2Cr2O7(121 g, 0.41 mol) u H2O (1.5 L) dodat je u kapima H2SO4(143 g, 1.46 mol) na st i smeša je mešana u toku 1 h. Smeša je zatim ohlađena na 0 °C i D4-1 (80 g, 0.814 mol; dobijen prema odeljku A, Intermedijera 1 iz US ’491, p 192.) u MTBE (1.5 L) dodat je u kapima. Reakciona smeša je mešana na st u toku 2 h. Vodena faza je ekstrahovana sa MTBE (3 x 500 mL), osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen destilovanjem (20 mmHg, bp: 60 -62 °C) da bi se dobio D12-1 kao bledo žuta tečnost (60 g).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.57 -2.63 (m, 2H), 2.14 -2.19 (d, J = 20 Hz, 2H), 1.52 -1.57 (m, 2H), 0.89 -0.94 (m, 1H), -0.05 --0.02 (m, 1H).
[0277] Korak 2: Dobijanje (6)-D12-2: Pod Ar, smeša THF (4.4 mL) i HMPA (1.8 mL) je ohlađena na -78 °C. Dodat je 1 M rastvor LiHMDS u THF (2.2 mL, 2.2 mmol). Keton D12-1 (202 mg, 2.10 mmol) je dodat kao rastvor u THF (2 mL) u toku 1 min, ispran sa dodatnim THF (2 x 1 mL) da bi se osigurao potpuni transfer. Posle 25 min, 5-jodopent-1-en (dobijen prema Jin, J. et. al. J. Org. Chem.2007, 72, 5098-5103) (880 mg, 4.5 mmol) dodat je u toku 30 sa špricom. Posle 10 min, reakcija je smeštena u hladno kupatilo na -45 °C i bila je zagrejana na -30 °C u toku 1.5 h. Reakcija je zaustavljena sa zasićenim vodenim NH4Cl (15 mL) i razblažena sa EtOAc (30 mL) i H2O (15 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organska supstanca je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak koji prečišćen hromatografijom na silikagelu (0% do 15% EtOAc u heksanima) da bi se dobio (+/-) -D12-2 kao bezbojno ulje (162 mg).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 5.82 -5.67 (m, 1H), 5.03 -4.87 (m, 2H), 2.61 -2.51 (m, 1H), 2.11 (d, J = 19.1 Hz, 1H), 2.08 -1.99 (m, 3H), 1.61 -1.40 (m, 5H), 1.36 -1.28 (m, 1H), 0.92 -0.81 (m, 1H), -0.03 --0.11 (m, 1H).
[0278] Korak 3: Dobijanje (6)-D12-3 i (6)-D12-4: Rastvor (6)-D12-2 (142 mg, 0.865 mmol) u THF (4 mL) je ohlađen na -78 °C. Dodat je 1 M THF rastvor LiBHEt3(1.3 mL, 1.3 mmol) u kapima u toku 30 s. Reakcija je mešana 15 min i uklonjena sa hladnog kupatila. Posle zagrevanja do st (15 min), reakcija je zaustavljena sa zasićenim vodenim NH4Cl (1 mL). Dobijena smeša je razblažena sa Et2O (20 mL) i H2O (20 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa Et2O (20 mL). Spojena organska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana do sirovog ostatka. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (0% do 10% EtOAc u heksanima) dobijeno je 133 mg smeše diastereomera (6)-D12-3 i (6)-D12-4. Spojeni materijal iz dva eksperimenta (253 mg) je dalje prečišćen hromatografijom na silikagelu (0% do 15% EtOAc u heksanima) da bi se dobio (6)-D12-3 (150 mg) i (6)-D12-4 (58 mg) kao bezbojna ulja.<1>H NMR za (6)-D12-3 (300 MHz, CDCl3) δ 5.91 -5.69 (m, 1H), 5.07 -4.88 (m, 2H), 3.97 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 2.19 -1.99 (m, 3H), 1.84 -1.73 (m, 1H), 1.62 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 1.54 -1.40 (m, 2H), 1.32 -1.17 (m, 3H), 1.16 -1.06 (m, 1H), 0.60 -0.43 (m, 2H).<1>H NMR for (6)-D12-4 (300 MHz, CDCl3) δ 5.95 -5.73 (m, 1H), 5.09 -4.88 (m, 2H), 4.05 -3.86 (m, 1H), 2.17 -1.84 (m, 4H), 1.72 -1.34 (m, 5H), 1.281.08 (m, 3H), 0.49 -0.36 (m, 1H), 0.21 -0.11 (m, 1H).
[0279] Korak 4: Dobijanje smeše diastereomernih intermedijera D12 i D13: Smeša (6)-D12-3 (150 mg, 0.90 mmol) je rastvorena u DMF (1.0 mL). Piridin (75 μL, 0.92 mmol) i DSC (302 mg, 1.18 mmol) su dodati, i reakcija je mešana na 45 °C u toku 21.5 h. Reakcija je zatim smeštena u kupatilo leda- voda i dodata je H2O (1.0 mL) u kapima pomoću šprica u toku 1 min. Smeša je uklonjena iz hladnog kupatila i omogućeno je da se meša 5 min. Smeša je ponovo ohlađena u kupatilu sa ledom i vodom i dodat je L-terc-leucin (154 mg, 1.17 mmol) a zatim K3PO4(502 mg, 2.36 mmol). Reakciona smeša je uklonjena iz hladnog kupatila i omogućeno je mešanje na st u toku 24 h. Smeša je zatim razblažena sa EtOAc (40 mL) i 1 M vodenim HCl (20 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organaska faza je isprana sa 0.2 M vodenim HCl (2 x 20 mL), osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobila smeša diastereomernih intermedijera D12 i D13 (300 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI-(m/z): [M-H]-izrač. za C18H28NO4: 322.2; nađeno: 322.0).
Dobijanje intermedijera D12.
[0280]
(1S, 4R)-cis-4-acetoksi-2-
ciklopent-1-ol
korak 5
korak 4
[0281] Korak 1: Dobijanje D12-5: U rastvor (1S,4R)-cis-4-acetoksi-2-ciklopent-1-ol (Aldrich, 10 g, 70.4 mmol), trietilamina (48.8 mL, 350 mmol), id DMAP (4.29 g, 35.2 mmol) u dihlorometanu (352 mL) dodat je pivaloil hlorid (10.8 mL, 87.75 mmol) u kapima pomoću šrica na 0 °C u atmosferi argona. Posle 2 h, reakciona smeša je razblažena sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (500 mL), i ekstrahovana sa dihlorometanom (2 x 500 mL). Spojeni organski esktrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani in vacuo da bi se dobio D12-5 (15.0 g) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.08 (br s, 2H), 5.54 (td, J = 8.0, 4.1 Hz, 2H), 2.88 (dt, J = 14.9, 7.5 Hz, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.69 (dt, J = 14.7, 4.1 Hz, 1H), 1.20 (s, 9H).
[0282] Korak 2: Dobijanje D12-6: U rastvor D12-5 (15.0 g, 70.4 mmol) u metanolu (352 mL) dodat je kalijum karbonat (9.73 g, 70.4 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 5 h, reakciona smeša je proceđena i koncentrovana je in vacuo. Ostatak je rastvoren u etil acetatu (500 mL) i dobijena smeša je isprana sa vodom (500 mL) i zasićenim rastvorom soli (500 mL), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovana in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetate/heksani) da bi se dobio D12-6 (12.0 g) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.11 (br d, J = 5.5 Hz, 1H), 5.97 (br d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.48 (br s, 1H), 4.73 (br s, 1H), 2.82 (dt, J = 14.6, 7.3 Hz, 1H), 1.67 (s, 1H), 1.61 (dt, J = 14.5, 4.0 Hz, 1H), 1.20 (s, J = 3.8 Hz, 9H).
[0283] Korak 3: Dobijanje D12-7: U rastvor bakar(I) cijanida (5.10 g, 57.0 mmol) u dietiletru (95 mL) dodat je pent-4-enilmagnezijum bromid (Novel Chemical Solutions, 0.5 M u THF, 114 mL, 57.0 mmol) u kapima pomoću cevčice u toku perioda od 30 min na 0 °C u atmosferi argona. Posle 10 min, rastvor D12-6 (3.50 g, 19.0 mmol) u dietiletru (10 mL) dodat je polako pomoću cevčice. Reakciona smeša je zatim omogućeno da se polako zagreje na st. Posle 16 h, dobijena smeša je zaustavljena sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (400 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana u etil acetat (2 x 400 mL). Spojene organaske faze su isprane sa koncentrovanim rastvorom soli (400 mL), osušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovane in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksani) da bi se dobio D12-7 (2.4 g) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.80 (ddt, J = 16.9, 10.2, 6.7 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 5.8, 1.7 Hz, 1H), 5.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.00 (dd, J = 17.1, 1.3 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.12 -4.05 (m, 1H), 2.69 (ddd, J = 17.2, 6.4, 1.5 Hz, 1H), 2.54 -2.45 (m, 1H), 2.24 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 1.69 (br s, 1H), 1.52 -1.19 (m, 6H).
[0284] Korak 4: Dobijanje (1S,2R,3R,5S)-D12-3: U rastvor D12-7 (20 mg, 0.13 mmol), i dietil cinka (1 M u heksanima, 132 μL, 0.132 mmol) u dietiletru (0.66 mL) dodat je dijodometan (21 μL, 0.26 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 2 h, reakciona smeša je zaustavljena sa 1 N vodenim rastvorom HCl (0.66 mL). Posle 5 min, dobijena žuta smeša je razblažena sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (5 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (335 mL). Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata rastvora, i koncentrovani su in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksani) da bi se dobio (1S,2R,3R,5S)-D12-3 (10 mg) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.83 (ddt, J = 16.9, 10.2, 6.7 Hz, 1H), 5.02 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.00 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 2.19 -2.02 (m, 3H), 1.82 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 1.64 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 1.55 -1.42 (m, 2H), 1.38 -1.20 (m, 4H), 1.19 -1.08 (m, 1H), 0.62 -0.47 (m, 2H).
[0285] Korak 5: Dobijanje intermedijera D12: Alkohol (1S,2R,3R,5S)-D12-3 (0.450 g, 2.7 mmol) je sakupljen sa DMF (2.7 mL) i zatim tretiran sa DSC (0.92 g, 3.52 mmol) i piridinom (0.22 mL, 2.8 mmol). Reakcija je zatim zagrejana na 50 °C p/n. Reakcija je zatim ohlađena na 0 °C i dodata je voda (5.5 mL) u kapima u toku 1 min. Dobijena mutna suspenzija je mešana na st u toku 10 min pre pnovnog hlađenja na 0 °C. Reakcija je zatim tretirana naknadno sa L-terc-leucinom (0.462 g, 3.5 mmol) i K3PO4(1.5 g, 7.0 mmol) i omogućeno je da se zagreje na st u toku noći uz intenzivno mešanje. Dobijena mutna suspenzija je razblažena sa EtOAc i 1 M vodenom HCl. Dodat je dodatni HCl (12 M) u kapima da se podesi pH ∼ 3. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc i spojena organska supstanca je isprana sa koncentrovanim rastvorom soli i osušena iznad anhidrovanog MgSO4. Posle konventrovanja in vacuo, dobijen je intermedijer D12 (1.72 g) kao viskozno, bezbojno ulje koje je kontaminirano sa malim količinama DMF i EtOAc. Materijal je korišćen u sledećim reakcijama bez daljeg prečišćavanja . LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C18H30NO4: 324.2; nađeno 324.7.
Dobijanje intermedijera D14.
[0286]
korak 1
hidrohlorid (S)-2-amino-2-(1-
metilciklopentil)sirćetne kiseline
[0287] Korak 1. Dobijanje intermedijera D14. Karbonat D1-6 (862 mg, 3.23 mmol) je tretiran sa hidrohloridom (S)-2-amino2-(1-metilciklopentil)sirćetne kiseline (750 mg, 3.87 mmol; dobijen prema Robl, J.A., et al. J. Med. Chem., 2004, 47, 2587), THF (28 mL), H2O (8.4 mL) i TEA (1.4 mL, 9.7 mmol). Reakciona smeša je mešana u toku 16 h i THF je uklonjen in vacuo. Preostali materijal je razblažen sa H2O i pH podešen na ∼10-12 dodavanjem 10% vodenog NaOH. Vodena faza je isprana dva puta sa EtOAc i zatim zakišeljena do pH ∼ 1-2 sa 10% vodenom HCl. Kiseli rastvor je ekstrahovan 3x sa EtOAc.
Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog MgSO4, proceđeni i koncentrovani in vacuo. Početni EtOAc filtrati (baznog vodenog rastvora) su ispirani sa 10% vodenom HCl, osušeni iznad MgSO4, proceđeni i koncentrovani in vacuo. Spojeni koncentrati su prečišćeni hromatografijom na silikagelu (50% do 100% EtOAc/Heks) da bi se dobio Intermedijer D14 (980 mg). LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C17H28NO4: 310.2; nađeno 310.0.
Dobijanje smeše intermedijera D15.
[0288]
[0289] Korak 1. Dobijanje ( ±)-D15-1: U rastvor titanijum(IV) izopropoksida (11.3 g, 40.0 mmol) u THF (160 mL) dodat je metil magnezijum bromid (3 M u Et2O, 20 mL, 60.0 mmol) u kapima pomoću šprica na st u atmosferi argona. Posle 10 min, reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i rastvor metil propionata (3.80 mL, 40.0 mmol) u THF (10 mL) je dodat polako pomoću šrica. Posle 5 min, hept-6-enilmagnezijum bromid (Novel Chemical Solutions, 0.5 M u THF, 160 mL, 80 mmol) dodat je u kapima pomoću kapalice u toku 1 h. Posle 2.5 h, reakciona smeša je zaustavljena sa 10% vodenom sumpornom kiselinom (100 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana sa dietil etrom (2 x 200 mL). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksani) da bi se dobio (6)-D15-1 (3.03 g, 50%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.77 (ddt, J = 16.9, 10.2, 6.7 Hz, 1H), 5.03 -4.86 (m, 2H), 2.04 (q, J = 6.1 Hz, 2H), 1.75 -1.14 (m, 6H), 1.04 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 1.01 -0.91 (m, 1H), 0.89 -0.71 (m, 2H), 0.02 (t, J = 5.5 Hz, 1H).
[0290] Korak 2. Dobijanje smeše diastereomernih intermedijera D15: Racemska smeša alkohola (6)-D15-1 (2.00 g, 13.0 mmol) je rastvorena u DMF (13.0 mL). Dodat je piridin (1.05 mL, 13.0 mmol) a zatim DSC (4.00 g, 15.6 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 50 °C i mešana je u toku 20 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena na st i dodata je voda (13 mL) u kapima u toku 2 min. L-tercleucin (2.17 g, 13.0 mmol) i K3PO4(8.28 g, 39.0 mmol) su zatim dodati i reakciona smeša je zagrejana na 50 °C. Posle 5 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i razblažena je sa vodom (500 mL). Dobijena smeša je isprana sa dihlorometanom (100 mL). Vodena faza je zatim zakišeljena na pH 2 sa 2 N vodenim rastvorom HCl, i ekstrahovana je sa DCM (2 x 400 mL). Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su pod sniženim pritiskom da bi se dobila smeša diastereomernih intermedijera D15 (4.5 g) kao bledog narandžastog ulja, koje je zatim korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
Dobijanje intermedijera D16:
[0291]
[0292] Intermedijer D16 je pripremljen na sličan način kao za dobijanje intermedijera D12, zamenom but-3enilmagnezijum bromida za pent-4-enilmagnezijum bromid u Koraku 3. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C17H28NO4: 310.2; nađeno 310.8.
Dobijanje intermedijera D17:
[0293]
( ±)-trans-1-metil-2-(but-3-
enil)ciklopropanol
[0294] Korak 1. Dobijanje smeše intermedijera D17. (6)-trans-1-metil-2-(but-3-enil)ciklopropanol (900 mg, .13 mmol), dobijen prema postupku za intermedijer B2, iz objave međunarodne patentne prijave br. WO 2012/40040 (nadalje "WO ’040"), str.38, je rastvoren u DMF (6 mL). Piridin (577 μL, 7.13 mmol) je dodat a zatim DSC (2.37 g, 9.27 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 40 °C i mešana je u toku 18 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0 °C i dodata je voda (6 mL) u kapima u toku 5 min. Reakciona smeša je mešana u toku 5 min i uklonjena sa hladnog kupatila. Posle dodatnih 5 min, reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodati su L-terc-leucin (1.21 g, 9.27 mmol) i K3PO4(4.69 g, 22.1 mmol). Smeša je mešana u toku 10 min i uklonjena sa hladnog kupatila. Posle mešanja dodatnih 6 h, smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL), zakišeljena sa 1 M vodenim HCl (25 mL), i razblažena sa 0.2 M vodenim HCl (25 mL). Faze su odvojene, i organska faza je ispran sa 0.2 M vodenim HCl (2 x 20 mL), osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobila smeša diastereomerinih karbamata D17 (2.10 g). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+Na]<+>izrač. za C15H25NNaO4: 306.2; nađeno: 306.1.
Dobijanje intermedijera D18:
[0295]
korak 3 korak 5
(S)-4-amino-2-
hidroksibutanska
kiselina
[0296] Korak 1. Dobijanje D18-1: (Dobijen prema WO2011013141) U rastvor (S)-4-amino-2-hidroksibutanske kiseline (15 g, 126 mmol) u metanolu (95 mL) dodata je koncentrovana sumporna kiselina (8 mL), i reakcija je zagrejana do refluksa. Posle 18 h, omogućeno je da se dobijena smeša ohladi na sobnu temperaturu i koncentrovana je in vacuo. Ostatak je suspendovan sa etil acetatom (95 mL) i D18-1 je sakupljen vakuum filtracijom.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.69 (br s, 1H), 4.31 (ddd, J = 9.2, 8.1, 2.2 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.41 (tt, J = 9.2, 1.7 Hz, 1H), 3.33 (td, J = 9.4, 6.5 Hz, 1H), 2.81 (br s, 1H), 2.59 -2.48 (m, 1H), 2.09 (dq, J = 12.9, 9.1 Hz, 1H).
[0297] Korak 2. Dobijanje D18-2: U rastvor D18-1 (4.5 g, 44 mmol), 4-nitrobenzojeve kiseline (8.19 g, 49 mmol), i trifenilfosfina (22.4 g, 132 mmol) u tetrahidrofuranu (220 mL) dodat je diizopropil azodikarboksilat (12.1 mL, 61.6 mmol) u kapima pomoću šprica na 23 °C u atmosferi argona. Posle 20 h, dobijena mutna narandžasta reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i dodat je metanol (200 mL) a zatim kalijum karbonat (15 g, 109 mmol) i reakcija je mešana na 23 °C. Posle dodatnih 5 h, Dobijena smeša je razblažena sa hloroform (200 mL) i proceđena je. Filtrat je koncentrovan in vacuo i sirovi ostatak je sakupljen sa vodom (150 mL) i 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL). Vodeni sloj je ispran sa etil acetatom (33200 mL) da bi se uklonilo organski sporeni proizvodi, i koncentrovan je in vacuo do sirove supstance D18-2 koja je direktno krišćena u sledećem koraku.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 4.28 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.43 -3.20 (m, 1H), 2.56 -2.39 (m, 1H), 1.96 (dq, J = 12.7, 8.7 Hz, 1H).
[0298] Korak 3. Dobijanje D18-3: U rastvor sirovog D18-2 (5 g, 49.5 mmol) i imidazola (3.4 g, 49.5 mmol) u DMF (247 mL) dodat je TBSCI (7.5 g, 49.5 mmol) na 0 °C u atmosferi argona. Dobijena smeša je omogućeno da se zagreje na 23 °C. Posle 7 h, dodatni imidazol (7 g, 102 mmol) i TBSCI (16 g, 106 mmol) su sekvencionalno dodati. Posle dodatnih 16 h, dobijena smeša je razblažena sa 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (1 L) i ekstrahovana je sa etil acetatom (1 L). Organski sloj je podeljen i ispran sa zasićenim rastvorom soli (1 L), osušen sa anhidrovanim natrijum sulfatom, i koncentrovan je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent etil acetat/heksani) da bi se dobio D18-3.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.99 (s, 1H), 4.26 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 3.44 -3.33 (m, 1H), 3.30 -3.19 (m, 1H), 2.45 -2.29 (m, 1H), 2.11 -1.95 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.02 (s, 3H), 0.00 (s, 3H).
[0299] Korak 4. Dobijanje D18-4: U rastvor D18-3 (1.00 g, 4.65 mmol), DMAP (57.8 mg, 0.465 mmol), i trietilamin (1.29 mL, 9.3 mmol) u dihlorometanu (23.3 mL) dodat je di-terc-butil dikarbonat (1.5 g, 6.97 mmol) na 23 °C u atmosferi argona. Posle 20 h, reakciona smeša je prečišćena direktno hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent etil acetat/heksani) da bi se dobio D18-4.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.31 (dd, J = 9.4, 7.9 Hz, 1H), 3.79 (ddd, J = 11.0, 8.9, 2.2 Hz, 1H), 3.53 -3.41 (m, 1H), 2.34 -2.21 (m, 1H), 1.92 (dq, J = 12.2, 9.2 Hz, 1H), 1.53 (s, 9H), 0.91 (s, 9H), 0.17 (s, 3H), 0.13 (s, 3H).
[0300] Korak 5. Dobijanje D18-5: U rastvor D18-4 (700 mg, 2.22 mmol) u tetrahidrofuranu (11.1 mL) dodat je pent-4-enilmagnezijum bromid (Novel Chemical Solutions, 0.5 M in 2-MeTHF, 4.89 mL, 2.44 mmol) na -78 °C u kapima pomoću šprica u atmosferi argona. Posle 1 h, reakciona smeša je zaustavljena sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (50 mL) i omogućeno je da se zagreje na sobnu temperaturu. Dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 100 mL), i spojeni organski ekstrakti su isprani sa koncentrovanim vodenim rastvorom soli (100 mL), osušeni su iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio D18-5.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.77 -5.62 (m, 1H), 4.95 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.26 (app t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.77 -3.69 (m, 1H), 3.41 (td, J = 10.4, 6.7 Hz, 1H), 2.48 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.28 -2.17 (m, 1H), 1.91 -1.78 (m, 2H), 1.77 -1.65 (m, 1H), 1.60 (quin, J = 7.3 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.85 (s, 9H), 0.11 (s, 3H), 0.07 (s, 3H).
[0301] Korak 6. Dobijanje D18-6: U rastvor D18-5 (740 mg, 1.92 mmol) i trietilsilana (6.10 mL, 38.4 mmol) u dihlorometanu (9.6 mL) dodat je bor trifluoride dietil eterat (308 μL, 2.50 mmol) na -78 °C u kapima pomoću šprica u atmosferi argona. Posle 1 h, omogućeno je da reakciona smeša zagreje na sobnu temperaturu. Posle dodatna 4 h, reakcija je zaustavljena sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (10 mL), i razblažena je sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mL), i organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan je in vacuo da bi se dobio sirovi slobodan amin koji je korišćen direktno u sledećem koraku. U rastvor sirovog slobodnog amina, i trietilamina (535 μL, 3.84 mmol) u tetrahidrofuranu (9.6 mL) dodat je acetanhidrid (146.5 μL, 1.55 mmol) na sobnoj temperaturi u atmosferi argona. Posle 1 h, dobijena smeša je koncentrovana in vacuo i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio D18-6 (2:1 diastereomerna smeša sa preferecijalnim poželjnim diastereomerom 1-((2S,3R)-3-(tercbutildimetilsililoksi)-2-(pent-4-enil)pirolidin-1-il)etanonom).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, diastereomer u manjoj količini označen kao *) δ 5.80 -5.64 (m, 1H, 1H*), 5.01 -4.82 (m, 2H, 2H*), 4.10 (d, J = 4.2 Hz, 1H*), 4.04 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 10.3, 4.0 Hz, 1H), 3.66 -3.56 (m, 1H*), 3.55 -3.29 (m, 2H, 1H*), 3.24 -3.16 (m, 1H*), 2.37 -2.25 (m, 1H*), 2.08 -1.88 (m, 2H, 1H*), 2.03 (s, 3H*), 2.00 (s, 3H), 1.81 -1.61 (m, 2H, 2H*), 1.50 -1.01 (m, 4H, 4H*), 0.85 (s, 9H*), 0.80 (s, 9H), 0.10 (s, 3H*), 0.09 (s, 3H*), 0.00 (br s, 6H).
[0302] Korak 7. Dobijanje D18-7: U rastvor D18-6 (338 mg, 1.08 mmol) u tetrahidrofuranu (21 mL) dodat je TBAF (1M u tetrahidrofuranu, 21 mL, 21 mmol) na 0 °C u atmosferi argona. Posle 17 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i direktno je prečišćena hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio D18-7 (102 mg, 2:1 diastereomerna smeša sa preferencijalnim poželjnim diastereomerom 1 1-((2S,3R)-3-hidroksi-2-(pent-4-enil)pirolidin-1-il)etanonom).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3diastereomer u manjoj količini označen kao *) δ 5.84 -5.70 (m, 1H, 1H*), 5.06 -4.91 (m, 2H, 2H*), 4.25 (d, J = 3.7 Hz, 1H*), 4.20 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 3.98 (dd, J = 9.2, 4.2 Hz, 1H), 3.763.68 (m, 1H*), 3.67 -3.59 (m, 1H, 1H*), 3.55 -3.46 (m, 1H, 2H*), 3.02 -2.94 (m, 1H), 2.22 -1.85 (m, 2H, 2H*), 2.10 (s, 3H*), 2.07 (s, 3H), 1.82 -1.59 (m, 2H, 2H*), 1.55 -1.13 (m, 4H, 4H*).
[0303] Korak 8. Dobijanje D18-8: U rastvor D18-7 (102 mg, 0.518 mmol) i piridina (8 μL, 0.104 mmol) dodat je DSC (159.2 mg, 0.621 mmol) na sobnoj temperaturi, i dobijena smeša je zagrejana na 45 °C. Posle 16 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na sobnoj temperaturi i sekvencionalno su dodati voda (518 μL), L-terc-leucin (86.5 mg, 0.518 mmol), i K3PO4(330 mg, 1.55 mmol) i dobijena smeša je zagrejana na 50 °C. Posle 6 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na sobnu temperaturu i razblažena je sa 1N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (10 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (2310 mL), i spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su in vacuo da bi se dobio D18-8 (2:1 diastereomerna smeša u korist poželjnog (S)-2-(((2S,3R)-1-acetil-2-(pent-4-enil)pirolidin-3-iloksi)karbonilamino)-3,3-dimetilbutanska kiselinad).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, Diastereomer u manjoj količini označen kao *) δ 5.85 -5.65 (m, 1H, 1H*), 5.39 (d, J = 9.3 Hz, 1H*), 5.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.07 -4.87 (m, 3H, 3H*), 4.16 -4.03 (m, 1H, 1H*), 3.83 -3.45 (m, 3H, 3H*), 2.301.95 (m, 8H), 2.30 -1.95 (m, 2H, 3H*), 1.82 -1.65 (m, 2H, 1H*), 2.11 (s, 3H), 2.09 (s, 3H*), 1.58 -1.13 (m, 4H, 4H*), 1.01 (br s, 9H, 9H*).
Dobijanje smeše intermedijera D19.
[0304]
koraci 1 i 2
korak 3 raci 4 i 5
biciklo [3.1.1 ]
heptan-2-on
[0305] Koraci 1 i 2: Dobijanje D19-1: 1.0 M THF rastvor KHMDS (10 mL, 10 mmol) je razblažen sa THF (10 mL) pod Ar i dobijeni rastvor je ohlađen na -78 °C u kupatilu CO2:aceton. Biciklo[3.1.1]heptan-2-on (1.0 g, 9.1 mmol, videti: Yin, et. al. J. Org. Chem.1985, 50, 531) dodat je kao rastvor u THF (5 mL) u toku 2 min, ispiran sa dodatnim THF (2 x 2.5 mL) da bi se osigurao kompletan transfer. Dobijena smeša je mešana u toku 30 min, i N-(5-Hloro-2-piridil)bis(trifluorometansulfonimid) (3.8 g, 9.7 mmol) je dodat kao rastvor u THF (10 mL) u toku 2 min, ispiranjem sa dodatnim THF (2 x 2.5 mL). Dobijena smeša je mešana u toku 5 min i uklonjena iz hladnog kupatila . Posle mešanja dodatnih 30 min, reakcija je razblažena sa Et2O (70 mL) i 1 M vodenom HCl (50 mL). Faze su odvojene, i organska faza je isprana sa 1 M vodenim NaOH (2 x 30 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. On je proceđen kroz sloj silicijumdioksid sa 30% EtOAc u heksanima da bi se dobio sirov ostatak (1.24 g) koji je korišćen direktno u sledećem koraku. Korak 2: U rastvor 3-butenal dietil acetala (1.4 mL, 8.3 mmol) pod Ar ohlađenom u kupatilu led voda dodat je 0.5 M THF rastvor 9-borabiciklo[3.3.1]nonan (15.9 mL, 7.95 mmol) u toku 3 min.
Reakcija je mešana toku 20 h, u hladnom kupatilu koje je omogućeno da presuši u toku noći. 3 M vodeni rastvor NaOH (2.9 mL, 8.7 mmol) je zatim dodat, i, posle mešanja 20 min, dobijeni rastvor je premešten potpuno u balon koji sadrži proizvod iz Koraka 1 (ca.5.16 mmol) i PdCl2(dppf)·CH2Cl2(420 mg, 0.51 mmol). Dobijena smeša je zagrejana na 60 °C. Posle mešanja 14 h, reakciona smeša je razblažena sa Et2O (50 mL) i H2O (50 mL). Faze su odvojene, i organska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (0% d 10% EtOAc u heksanima pračena uravnoteživanjem sa 1% Et3N u EtOAc) dobijen je intermedijer D19-1.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) 5.36 -5.28 (m, 1H), 4.59 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.73 -3.58 (m, 2H), 3.54 -3.39 (m, 2H), 2.72 -2.60 (m, 1H), 2.45 -2.34 (m, 3H), 2.23 -2.08 (m, 4H), 1.89 -1.76 (m, 2H), 1.67 (dt, J = 16.1, 6.9 Hz, 2H), 1.58 -1.47 (m, 2H), 1.23 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
[0306] Korak 3: Dobijanje D19-2: Rastvor olefina D19-1 (660 mg, 2.77 mmol) u THF (25 mL) je ohlađen u kupatilu led-voda . BH3·Me2S je zatim dodat kao 1 M rastvor u CH2Cl2(2.9 mL, 2.9 mmol) u toku 1 min. Dobijeni rastvor je mešan u toku 2 h u kupatilu led-voda i zatim je omogućeno da se zagreje na s.t. Posle mešanja dodatna 3 h, reakciona smeša je ponovo ohlađena u kupatilu led-voda i razblažena je sa 2 M vodenim NaOH (7 mL) a zatim sa 30 % vodenim H2O2(7 mL). Dobijena smeša je mešana dodanih 16 h pri čemu je omogućeno da kupatilo postepeno isprani. Smeša je razdeljena između Et2O (100 mL) i H2O (50 mL), faze su odvojene, i organska faza je isprana sa 0.5 M vodenim NaOH (50 mL). Organska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 40% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 570 mg intermedijera D19-2.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 4.60 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.76 -3.60 (m, 3H), 3.58 -3.42 (m, 2H), 2.39 -2.05 (m, 4H), 1.91 -1.48 (m, 9H), 1.43 -1.35 (m, 1H), 1.25 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.06 -0.98 (m, 1H).
[0307] Koraci 4 i 5: Dobijanje D19-3: Acetal D19-2 (360 mg, 1.4 mmol) je rastvoren u THF (8 mL) i H2O (2 mL). Monohidrat para-Toluensulfonske kiseline (40 mg, 0.2 mmol) dodat je and dobijeni rastvor je mešan 16 h na s.t. Reakcija je razblažena sa Et2O (50 mL) i H2O (30 mL) i faze su odvojene. Vodena faza je ekstrahovana sa Et2O (30 mL) i spojena organaska faza je isprana sa zasićenim vodenim NaHCO3(15 mL). Organska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak koji je odmah korišen u sledećem koraku. Korak 5: Metil trifenilfosfhonijum bromid (1.66 g, 4.6 mmol) je suspendovan u THF (40 mL) pod Ar i ohlađen je preko kupatila CO2/aceton na -78 °C.1 M rastvor NaHMDS u THF (4.2 mL, 4.2 mmol) dodat je u kapima i dobijena žuta suspenzija je mešana u toku 5 min. Smeša je uklonjena sa hladnog kupatila i mešanje je nastavljeno dodatnih 30 min. Smeša je zatim ponovo ohlađena na -78 °C i sirovi ostatak iz ranijeg koraka (ca.1.4 mmol) dodat je kao rastvor u THF (5 mL) u toku 5 min, ispiranjem sa dodatnim THF (2 x 2.5 mL) da bi se osigurao potpuni transfer. Dobijena smeša je mešana u toku 5 min i zatim je smešetna u kupatilo led-voda i mešana u toku dodatnih 1 h. Reakcija je zaustavljena sa zasićenim vodenim NH4Cl (20 mL) i razblažena je sa Et2O (30 mL) i H2O (20 mL). Faze su odvojene i organska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana na 5 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 30% EtOAc u heksanima) dobijeno je D19-3.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.01 -5.81 (m, 1H), 5.22 -5.05 (m, 2H), 3.79 -3.66 (m, 1H), 2.43 -2.25 (m, 2H), 2.24 -2.04 (m, 4H), 1.83 -1.16 (m, 10H).
[0308] Korak 6: Intermedijer D19-3 (270 mg, 1.5 mmol) je rastvoren u DMF (2.0 mL). Piridin (125 μL, 1.5 mmol) i DSC (500 mg, 1.9 mmol) su dodati, i reakcija je mešana na 45 °C u toku 15 h. Reakcija je zatim smeštena u kupatlio led-voda i dodata je H2O (2.0 mL) u kapima u toku 30 s. Smeša je uklonjena iz hladnog kupatila omogućeno je da se meša 10 min. Smeša je ponovo ohlađena u kupatilu led-voda i dodat je L-terc-leucin (259 mg, 1.97 mmol) a zatim K3PO4(835 mg, 3.93 mmol). Reakciona smeša je uklonjena iz hladnog kupatila i omogućeno je da se meša na s.t. u toku 5.25 h. Smeša je zatim razblažena sa EtOAc (40 mL), 1 M vodenim HCl (20 mL), i H2O (15 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organaska faza je ispran sa 0.2 M vodenom HCl (2 x 25 mL), osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobila smeša diastereoizomera D19 (505 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C19H32NO4: 338.2; nađeno: 337.8.
Dobijanje intermedijera E1.
[0309]
2-hloro-6-metoksi-3-(metilsulfonil)hinoksalin
[0310] Intermedijer E1 (2-hloro-6-metoksi-3-(metilsulfonil)hinoksalin) je dobijen prema Mahata, P.K., et al. Org. Lett.2005, 7, 2169.
Dobijanje intermedijera E2.
[0311]
[0312] Korak 1. Dobijanje E2-1: U balon sa okruglim dnom, 3-(benziloksi)anilin (4.025 g, 20.20 mmol) i 1,1bis(metiltio)-2-nitroetilen (3.338 g, 20.20 mmol) u etanolu (40 mL) je refluktovan u toku 24 h uz konstantno mešanje. Reakciona smeša je zatim ohlađna na ledenom kupatilu i razblažena sa etrom (150 mL). Smeša je proceđena i isprana sa etrom da bi se dobio E2-1 (3.32 g) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C16H17N2O3S: 317.1; nađeno: 317.1.
[0313] Korak 2. Dobijanje E2-2: U suspenziju E2-1 (3.32 g, 10.49 mmol) u 25 mL MeCN, POCl3(2.93 mL, 31.5 mmol) dodat je u kapima u toku 15 min uz konstanto mešanja. Reakciona smeša je zagrejana na 80 °C i mešana u toku 5 h. Reakcija je zatim ohlađena na temperaturi okoline i neutralizovana sa ledeno hladnim zasićenim vodenim NaHCO3rastvorom, ekstrahovana tri puta sa CH2Cl2(100 mL), isprana sa vodom, rastvorom soli i osušena iznad anhidrovanog Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je eluiran kroz sloj silicijumdioksida sa CH2Cl2. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i čvrsta supstanca je isprana sa MeCN da bi se dobio E2-2 (1.56 g) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C16H14ClN2OS: 317.1; nađeno: 317.3.
[0314] Korak 3. Dobijanje intermedijera E2. Rastvor mCPBA (1.87 g, 10.83 mmol) u CH2Cl2(40 mL) dodat je u kapima u rastvor koji se meša E2-2 (1.56 g, 4.92 mmol) u CH2Cl2(40 mL) na 0 °C u toku perioda od 30 min. Reakciona smeša je dalje mešana na temepraturi okoline u toku 5 h. Zatim je sipana na ledeno hladni zasićenim vodeni NaHCO3i razdeljena sa CH2Cl2. Organski sloj je zatim naknadno ispran sa vodom, koncentrovanim rastvorom soli i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i sirovi materijal je prečišćen hromatografijom sa normalnom fazom sa CH2Cl2da bi se dobilo naslovno jedinjenje kao intermedijer E2 kao beledo žuta čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C16H14ClN2O3S: 349.0; nađeno: 349.0.
Dobijanje intermedijera E3.
[0315]
3-bromo-3,3- dietil oksalat
difluoroprop-1-en 4-metoksibenzen-1,2-diamin dihidrohlorid
[0316] Korak 1. Dobijanje E3-1: U rastvor 3-bromo-3,3-difluoroprop-1-ena (25.0 g, 159 mmol) i dietil oksalata (21.6 mL, 159 mmol) u THF (380 mL), dietil etra (90 mL) i n-pentana (90 mL) na -100 °C dodat je u kapima n-butillitijum (2.5 M u heksanu, 67 mL, 167.6 mmol) u toku 30 min. Reakciona smeša je mešana na -95 °C u toku 1 h i -78 °C u toku 2 h, i zaustavljena sa vod. NH4Cl (11 g u 150 mL vode). Smeša je ekstrahovana sa etrom (tri puta). Organski slojevi su isprani sa 1 N vodenim HCl, rastvorom soli, i osušeni iznad Na2SO4, i koncentrovani da bi se dobio sirov ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na silikagelu (EtOAc u heksanima: 0% to 40%) da bi se dobio E3-1 (7.0 g).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.98-6.18 (m, 1H), 5.78 (dd, J = 0.9 Hz, 13 Hz, 1H), 5.60 (dd, J = 0.9 Hz, 11 Hz, 1H), 4.38 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
[0317] Korak 2. Dobijanje E3-2 i E3-3: U rastvor E3-1 (14.0 g, 78.6 mmol) i 4-metoksibenzen-1,2-diamin dihidrohlorida (15.08 g, 71.4 mmol) u EtOH (360 mL) na st dodat je trietilamin (19.9 mL, 142.8 mmol). Reakciona smeša je mešana na st u toku noći. Smeša je koncentrovana. Suspenovanjem u dihlorometanu (30 mL) i ceđenje je dovelo do nekog odvajanja regioizomera sa E3-2 kao vrstama za taloženje. (16.5 g ukupan prinos ceđenja i naknadne hromatografije).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.940 (br s, 1H), 7.850 (d, J = 9 Hz, 1H), 6.985 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1H), 6.754 (d, J = 2 Hz, 1H), 6.625-6.498 (m, 1H), 5.907 (dt, J = 17, 2 Hz, 1H), 5.601 (d, J = 11 Hz, 1H), 3.938 (s, 3H). Smeša je uspendovana, proceđena, i koncentrovana još jednom, zatim je prečišćena hromatografijom na silikagelu (EtOAc u heksanima: 5% do 34%) da bi se dobio E3-3 (2.07 g) kao prva eluirana komponenta.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.05 (br s, 1H), 7.850 (d, J = 9 Hz, 1H), 6.986 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1H), 6.761 (d, J = 3 Hz, 1H), 6.597-6.526 (m, 1H), 5.91 (dt, J = 17, 2 Hz, 1H), 5.601 (d, J = 11 Hz, 1H), 3.939 (s, 3H).
[0318] Korak 3. Dobijanje intermedijera E3: Rastvor E3-3 (2.07 g, 8.2 mmol u 1 mL DMF je tretiran sa POCl3(0.8 mL) i zagrevan na 65 °C u toku 2.5 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i zaustavljena sipanjem na ledenu vodu. Organska faza je isprana zatim sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i zasićenim rastvorom soli, osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana da bi dobili 2.1 g intermedijera E3.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.028 (d, J = 10 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1H), 7.32(d, J = 3 Hz, 1H), 6.549-6.478 (m, 1H), 5.86 (dt, J = 17, 2 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 11 Hz, 1H), 3.981 (s, 3H).
Dobijanje intermedijera E4.
[0319]
[0320] Intermedijer E4 (2-hloro-3-(1,1-difluoroalil)hinoksalin) je pripremljen na sličan način kao intermedijer E3, zamenom 1,2-diaminobenzena za 4-metoksibenzen-1,2-diamin dihidrohlorid u koraku 2.
Dobijanje intermedijera E5.
[0321]
[0322] Intermedijer E5 (2,6-dihloro-3-(metilsulfonil)hinoksalin) je dobijen prema Mahata, P.K., et al. Org. Lett.2005, 7, 2169.
Dobijanje intermedijera E6.
[0323]
korak 1
3-bromo-3,3- etil
difluoroprop-1-en glioksalat
korak 5
[0324] Korak 1. Dobijanje E6-1: Trogrli balon od 1-L je napunjen sa rastvor 3-bromo-3,3difluoroprop-1-ena (25 g, 159.3 mmol) u DMF (360 mL) i vodi (90 mL). Dobijeni rastvor je tretiran sa etil 2-oksoacetatom (33 mL,1 M u toluenu), i In (25 g). Reakciona smeša je mešana u toku noći na st i zatim ekstrahovana sa 3x300 mL etra. Organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x100 mL zasićenim vodenim NH4Cl i 1x100 mL koncentrovanog rastvora soli, osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani in vacuo da bi se dobio E6-1 koji je korišćen naknadno sa dodatnim prečišćavanjem.
[0325] Korak 2. Dobijanje E6-2. U hidroksiestar E6-1 (58.1 g, 323 mmol) dodat je DCM (700 mL) u trogrli balon od 2 snabdeven sa mešalicom i unutrašnjom sondom za temperaturu. Zatim TEMPO (5.4 g, 35 mmol), rastvor pufera (pripremljen rastvaranjem 4.2 g NaHCO3i 0.53 g Na2CO3po 100 mL vode, 700 mL, 7v), i NaOCl (Clorox 6.15% mas, 422 mL, 395 mmol) su naknadno dodati u balon na 20 °C. Posle 2 h organski sloj je odvojen i vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (23300 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani in vacuo da bi se dobio E6-2.
<1>H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.98-6.18 (m, 1H), 5.78 (dd, J = 0.9 Hz, 13 Hz, 1H), 5.60 (dd, J = 0.9 Hz, 11 Hz, 1H), 4.38 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
[0326] Korak 3. Dobijanje E6-3. U rastvor etil 3,3-difluoro-2,2-dihidroksipent-4-enoata E6-2 (57.4 g, 292 mmol) u THF (725 mL) i vodi (131 mL) dodat je LiOH•H2O (22 g, 529 mmol) na 20 °C. Posle 2.5 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Čvrsti ostatak je suspendovan u vodi (300 mL) i dobijena smeša je zakišeljena do pH = 1 sa koncentrovanim vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline. Dobijena smeša je mešana do rastvaranja celokupne čvrste supstance (∼1.5 h), i zatim je dodat natrijum hlorid do zasićenog rastvora. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa MTBE (2 3500 mL) i etil acetatom (2 x 500 mL), i spojeni organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani su in vacuo. Sirova čvrsta narandžasta supstanca je suspendovan u DCM (100 mL) i mešana je dok čvrsta supstanca nije fino raspoređena pre laganog dodavanja heksana (75 mL) pomoću kaplice. Dobijena čvrsta susptanca je sakupljena vakuum ceđenjem preko srednje sinterovanog levka i isprana sa 1:1 dihlorometan/ heksani (2 x 10 mL) da bi se dobio željeni proizvod.
<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.17 (bs, 1H), 6.18-6.01 (m, 1H), 5.64-5.52 (m, 2H).
[0327] Korak 4. Dobijanje E6-4 i E6-5: Rastvor E6-3 (0.5 g, 3.3 mmol) u EtOH (12 mL) je tretiran sa 3,4-diaminobenzonitrila (0.47 g, 3.5 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 80 °C u toku 1 h, zatim koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je apsorbovan na silikagelu, zatim je prečišćen hromatografjom na koloni da bi se E6-4 (0.5 g) kao prve eluirane komponente.<1>H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.01 (d, 1H), 7.65 (dd, 2H), 6.49 (m, 1H), 5.80 (dt, 1H), 5.60 (d, 1H). E6-5 (0.2 g) je regenerisan kao druga eluirana komponenta.<1>H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.25 (d, 1H), 7.87 (dd, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.49 (m, 1H), 5.80 (dt, 1H), 5.59 (d, 1H).
[0328] Korak 5. Dobijanje intermedijera E6: Rastvor E6-4 (0.5 g, 2 mmol u 4.5 mL DMF je tretiran sa POCl3(3 mL) i zagrevan na 65 °C u toku 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i zaustavljena sipanjem na ledenu vodu. Organska faza je isprana naknadno sa zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovana in vacuo da bi se dobio 0.48 g intermedijer E6 (3-hloro-2-(1,1-difluoroalil)hinoksalin-6-karbonitril).<1>HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.52 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.13 (dd, 1H), 6.55 (m, 1H), 5.84 (dt,1H), 5.72 (d, 1H).
Dobijanje intermedijera E7
[0329]
- - z - , -
diamin
[0330] Korak 1. Dobijanje E7-1: U rastvor E3-1 (1.84 g, 10.93 mmol) i 4-(difluorometoksi)benzen-1,2-diamina (1.90 g, 10.93 mmol, dobijenog prema referentnom primeru 30y iz WO2003035065, str.
511.) u DMF (40 mL) na st dodat je DIPEA (9.5 mL, 54.65 mmol) i HATU (6.23 g, 16.4 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 24 h, razblažena sa etil acetatom (100 mL), isprana sa vodom (100 mL) i zasićenim rastvorom soli (50 mL). Smeša je koncentrovana in vacuo. Prečišćavanjem pomoću hromatografije na silikagelu (EtOAc u heksanima: 20% do 60%) dobijen je E7-1 (800 mg) kao kasnija eluirajuća frakcije od dve sličnog masenog spektra. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C12H9F4N2O: 289.2; nađeno: 289.0.
[0331] Korak 2: Dobijanje intermedijera E7: Hidroksihinoksalin E7-1 (800 mg, 2.8 mmol), POCl3(1.65 mL, 3.0 mmol) i DMF (10 mL) su sakupljeni na st i zatim zagrejani do 65 °C u toku 2.5 h tokom čega je dodat dodatni POCl3(0.2 mL, 0.36 mmol). Reakcija je zagrevana dodatnih 3 h na 65 °C zatim ohlađena na st. Reakcija je zaustavljena uz dodavanje hladne vode (30 mL), i zatim je sakupljena sa etil acetatom (50 mL), isprana sa zasićenim vodenim Na2CO3(100 mL) i zatim sa zasićenim vodenim rastvorom soli (50 mL), i osušena iznad anhidrovanog MgSO4. Dobijeni rastvor je koncentrovana in vacuo da bi se dobio intermedijer E7 (859 mg) koji je korišćen zatim bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C12H8ClF4N2O: 307.0; nađeno: 307.0.
Dobijanje intermedijera E8.
[0332]
[0333] Intermedijer E8 (2-hloro-6-fluoro-3-(metilsulfonil)hinoksalin) je dobijen prema Mahata, P.K., et al. Org. Lett.2005, 7, 2169.
Dobijanje intermedijera E9.
[0334]
[0335] 2,7-dihloro-3-(prop-2-en-1-il)hinoazolin-4(3H)-on (Intermedijer E9) je dobijen prema koraku 3 Intermedijera D5 iz WO ’040 p 53-4.
Primeri dobijanja
[0336] Jedinjenja formule IV osim jedinjenja IVa-IVh su prema pronalasku. Sva ostala jedinjenja su referentni primeri.
[0337] Primer 1. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0338] Korak 1. Dobijanje 1-1: Smeša koja sadrži intermedijer B4 (2.03 g, 6.44 mmol), intermedijer E1 (1.6 g, 5.85 mmol), i cezijum karbonat (3.15 g, 9.66 mmol) u MeCN (40 mL) je mešana intenzivno na st u atmosferi Ar u toku 16 h. Reakcija je zatim proceđena kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu da se dobije 1-1 kao bela čvrsta supstanca (2.5 g). LCMS-ESI<+>(m/z): [M-Boc+2H]<+>izrač. za C20H27ClN3O4: 408.9; nađeno: 408.6.
[0339] Korak 2. Dobijanje 1-2: U rastvor 1-1 (2.5 g, 4.92 mmol) u dioksanu (10 mL) dodata je hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M, 25 mL, 98.4 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 5 h.
Sirova reakcija je koncentrovana in vacuo da bi se dobio 1-2 kao bela čvrsta supstanca (2.49 g) koja je korišćena naknadno bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M]<+>izrač. za C20H26ClN3O4: 407.9; nađeno: 407.9.
[0340] Korak 3. Dobijanje 1-3: U DMF (35 mL) rastvor 1-2 (2.49 g, 5.61 mmol), intermedijer D1 (1.75 mg, 6.17 mmol) i DIPEA (3.9 mL, 22.44 mmol) dodat je COMU (3.12 g, 7.29 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 3 h. Reakcija je zaustavljena sa 5% vodenim rastvorom limunske kiseline i esktrahovana sa EtOAc, ispran naknadno sa rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog MgSO4, proceđen i koncentrovani da bi se dobio 1-3 kao narandžasta pena (2.31 g) koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M]<+>izrač. za C35H49ClN4O7: 673.3; nađeno: 673.7.
[0341] Korak 4. Dobijanje 1-4: U rastvor 1-3 (2.31 g, 3.43 mmol), TEA (0.72 mL, 5.15 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (0.69 mg, 5.15 mmol) u EtOH (35 mL) dodat je PdCl2(dppf) (0.25 g, 0.34 mmol, Frontier Scientific). Reakcija je poprskana sa argonom u toku 15 min i zagrejana na 80 °C u toku 2 h. Reakcija je adsorbovana direktno na silikagel i prečišćena pomoću hromatografije na silikagelu da bi se dobilo 1-4 kao žutog ulja (1.95 g). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H53N4O7: 665.4; nađeno: 665.3.
[0342] Korak 5. Dobijanje 1-5: U rastvor 1-4 (1.95 g, 2.93 mmol) u DCE (585 mL) dodat je Zhan-ov 1B katalizator (0.215 g, 0.29 mmol, Strem) i reakcija je poprskana sa Ar u toku 15 min. Reakcija je zagrejan na 80 °C u toku 1.5 h, omogućeno je da se ohladi na st i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio 1-5 kao žuto ulje (1.47 g; LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C35H49N4O7: 637.4; nađeno: 637.3).
[0343] Korak 6. Dobijanje 1-6: Rastvor 1-5 (0.97 g, 1.52 mmol) u EtOH (15 mL) je tretiran sa Pd/C (10 mas. % Pd, 0.162 g). Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i mešana na st u toku 2 h. Reakcija je proceđena kroz Celit, sloj je ispran sa EtOAc i koncentrovan da bi se dobio 1-6 kao braon penasta čvrsta supstanca (0.803 g) koja je dalje korišćena bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C35H51N4O7: 639.4; nađeno: 639.3.
[0344] Korak 7. Dobijanje 1-7: U rastvor 1-6 (0.803 g, 1.26 mmol) u DCM (10 mL) dodat je TFA (5 mL) i mešan na st u toku 3 h. Dodatna 2 mL TFA je dodato i reakcija je mešana u toku dodatnih 1.5 h. Reakcija je koncentrovana do braon ulja koje je sakupljeno sa EtOAc (35 mL). Organski rastvor je ispran sa vodom. Posle odvajanja slojeva, zas. vodeni NaHCO3dodat je uz mešanje dok vodeni sloj nije dostigo pH ∼ 7-8. Slojevi su odvojeni ponovo i vodeni ekstrahovan sa EtOAc dva puta. Spojena organska supstanca je isprana sa 1 M vodenom limunskom kiselonom, rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4, proceđena i koncentrovana da bi se dobio 1-6 kao braon penasta čvrsta supstanca (0.719 g) koja je dalje korišćena bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C31H43N4O7: 583.3; nađeno: 583.4.
[0345] Korak 8. Dobijanje primera 1: U rastvor 1-7 (0.200 g, 0.343 mmol), intermedijera A10 (0.157 g, 0.515 mmol), DMAP (0.063 g, 0.51 mmol) i DIPEA (0.3 mL, 1.72 mmol) u DMF (3 mL) dodat je HATU (0.235 g, 0.617 mmol) i reakcija je mešana na st p/n. Reakcija je razblažena sa MeCN i prečišćena direktno sa reverznom fazom HPLC (Gemini, 30-100% MeCN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovana da bi se dobio primer 1 (118.6 mg) kao čvrsta TFA so. Analitička HPLC RetVreme: 8.63 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C40H55F2N6O9S: 833.4; nađeno: 833.5.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.19 (s, 1H); 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 7.23 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H); 7.15 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 5.89 (d, J = 3.6 Hz, 1H); 5.83 (td, JH-F= 55.6 Hz, J = 6.4 Hz, 1H); 4.56 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.40 (s, 1H) 4.38 (ap d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H); 3.93 (s, 3H); 3.75 (dt, J = 7.2, 4 Hz, 1H); 3.00-2.91 (m, 1H); 2.81 (td, J = 12, 4.4 Hz, 1H); 2.63-2.54 (m, 1H); 2.01 (br s, 2H); 1.88-1.64 (m, 3H); 1.66-1.33 (m, 11H) 1.52 (s, 3H); 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.96 (m, 2H); 0.96-0.88 (m, 2H); 0.78-0.68 (m, 1H); 0.55-0.46 (m, 1H).
[0346] Primer 2. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 2
[0347] Primer 2 je pripremljen na sličan način kao primer 1, zamenom intermedijera A9 za intermedijer A10 u koraku 8. Primer 2 je izolovan (37.9 mg) u čistoći od priližno 85% kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.54 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H53F2N6O9S: 819.35; nađeno: 819.51.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.26 (s, 1H); 7.90 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.26 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H); 7.10 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 6.68 (br s, 1H); 6.01 (td, JH-F= 55.6 Hz, J = 6.8 Hz, 1H); 5.87 (d, J = 3.6 Hz, 1H); 5.38, (d, J = 10 Hz, 1H); 4.50-4.40 (m, 3H); 4.10 (dd, J = 12, 3.6 Hz, 1H); 3.95 (s, 3H); 3.79-3.72 (m, 1H); 2.96-2.82 (m, 3H); 2.63-2.56 (m, 1H); 2.14 (t, J = 6.8 Hz, 1H); 1.98-1.86 (m, 1H); 1.84-1.28 (m, 13H); 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.16-0.92 (m, 3H); 1.09 (s, 9H); 0.74-0.64 (m, 1H); 0.48 (q, J = 6.4 Hz, 1H).
[0348] Primer 3. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 3
[0349] Primer 3 je pripremljen na sličan način kao primer 1, zamenom intermedijer A3 za intermedijer A10 u koraku 8. Primer 3 je izolovan (0.035 g) u čistoći približno 88% kao TFA so.
Analitički HPLC RetVreme: 8.63 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H57N6O9S: 797.4; nađeno: 797.5.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.98 (s, 1H); 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.23 (d, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H); 7.15 (d, J = 2.8 Hz, 1H); 5.89 (d, J = 3.6 Hz, 1H); 4.58 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 4.41-4.32 (m, 2H); 4.16 (dd, J = 12.4 Hz, 3.6 Hz, 1H); 3.93 (s, 3H); 3.74 (dt, J = 6.8, 2.8 Hz, 1H); 3.20-2.91 (m, 2H); 2.86-2.76 (m, 1H); 2.61-2.53 (m, 1H); 1.88-1.68 (m, 4H); 1.66-1.34 (m, 9H); 1.34-1.20 (m, 5H); 1.18-1.04 (m, 3H); 1.10 (s, 9H); 1.00-0.92 (m, 7H); 0.79-0.69 (m, 1H); 0.50 (br d, J = 7.2 Hz, 1H).
[0350] Primer 4. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-N-[(1R,2R)-2-etil-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 4
[0351] Primer 4 je pripremljen na sličan način kao Primer 1, zamenom intermedijera A4 za intermedijer A10 u koraku 8. Primer 4 je izolovan (0.018 g) čistoće približno 88% kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.75. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H59N6O9S: 811.4; nađeno: 811.6.
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 (s, 1H); 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.23 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H); 7.16 (d, J = 2.8 Hz, 1H); 5.90 (d, J = 3.6 Hz, 1H); 4.59 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 4.38 (s, 1H); 4.37 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 11.6, 6.8 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H); 3.74 (dt, J = 6.8, 3.6 Hz, 1H); 3.10-2.91 (m, 1H); 2.90-2.7 (m, 1H); 2.63-2.55 (m, 1H); 1.86-1.69 (m, 3H); 1.65-1.36 (m, 13H), 1.52 (s, 3H); 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.16-1.06 (m, 2H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.85 (m, 7H); 0.79-0.68 (m, 1H); 0.50 (br d, J = 6.8 Hz, 1H).
[0352] Primer 5. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0353] Korak 1. Dobijanje 5-1: HATU (555 mg, 1.46 mmol, Oakwood) i DIPEA (1.10 mL, 6.35 mmol) su dodati u smešu 1-2 (533 mg, 1.20 mmol) i intermedijera D5 (414 mg, 1.33 mmol) u 12 mL DMF pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana tri puta sa etil acetatom. Spojene organske supstance su isprane sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušene (MgSO4), proceđene, i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-35% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 5-1 (713 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H54ClN4O7: 701.36; nađeno: 701.58.
[0354] Korak 2. Dobijanje 5-2: Pd(dppf)Cl2•CH2Cl2(94 mg, 0.115 mmol, Strem) dodat je u deoksigeniranu smešu 5-1 (710 mg, 1.01 mmol), kalijum viniltrifluoroborata (213 mg, 1.59 mmol), i trietilamina (0.210 mL, 1.52 mmol) u 11 mL EtOH na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrejana na 78 °C pod argonom u toku jednog sata. Posle hlađenja na sobnoj temperaraturi, reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana tri puta sa etil acetatom. Spojene organske supstance su isprana sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušene (MgSO4), proceđene, i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio 5-2 (699 mg), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H57N4O7: 693.41; nađeno: 693.47.
[0355] Korak 3. Dobijanje 5-3: Smeša 5-2 (699 mg, 1.01 mmol) i Zhan-ovog 1B katalizatora (81 mg, 0.111 mmol, Strem) u 200 mL DCE je bila deoksigenirana pod argonom u toku 25 minuta. Smeša je zatim zagrejana na 95 °C u toku 45 minuta. Reakciona smeša je zagrejana na 95 °C u toku dodatnih 10 minuta, ohlađena je na sobnu temperaturu, i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-30% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 5-3 (336 mg) kao svetlo braon čvrsta supstanca kao svetlo braon čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C37H53N4O7: 665.38; nađeno: 665.53.
[0356] Korak 4. Dobijanje 5-4: Paladijum na ugljeniku (10 mas. % Pd, 102 mg, 0.096 mmol) dodat je u rastvor 5-3 (330 mg, 0.497 mmol) u 8 mL etanola i 3.5 mL etil acetata. Smeša je mešana u atmosferi vodonika u toku 100 minuta i zatim je proceđena preko Celita, ispirana sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 5-4 (64 mg) kao svetlo žuto-braon filma čvrste supstance, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H55N4O7: 667.40; nađeno: 667.52.
[0357] Korak 5. Dobijanje 5-5: TMSOTf (0.53 mL, 2.91 mmol) dodat je u kapima u rastvor 5-4 (329 mg, 0.494 mmol) u 10 mL dihlorometana pod argonom na sobnoj temperaturi. Posle jednog sata, dodato je dodatnih 0.3 mL TMSOTf. Posle dodatnog sata, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni film je sakupljen sa 12 mL toluena i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ovaj postupak je ponovljen drugi put da bi se dobilo 5-5 (301 mg), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H47N4O7: 611.34; nađeno: 611.46.
[0358] Korak 6. Dobijanje primera 5: HATU (129 mg, 0.339 mmol) i DIPEA (0.22 mL, 1.27 mmol) su dodati u smešu 5-5 (134 mg, 0.22 mmol) i intermedijer A9 (95 mg, 0.328 mmol) u 6.6 mL MeCN pod argonom. Posle mešanja u toku 5 h, reakciona smeša je sipana u vodu i esktrahovana tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušena (MgSO4), proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparatvinom HPLC sa reverznom fazom (15-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobio primer 5 (43 mg) kao svetlo žuta čvrsta supstanca, so trifluorosirćetne kiseline, posle liofilizacije. Analitička HPLC RetVreme: 9.11 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 847.38; nađeno: 847.62.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.31 (s, 1H), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 15.4, 2.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.87 (td, JH-F= 56 Hz, J = 6 Hz, 1H), 5.87-5.83 (m, 1H), 4.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.23-4.14 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.06-2.94 (m, 2H), 2.77-2.67 (m, 1H), 2.65-2.58 (m, 1H), 2.07-2.01 (m, 2H), 1.98-1.74 (m, 4H), 1.72-1.52 (m, 4H), 1.50-1.20 (m, 12H), 1.18-1.02 (m, 8H), 1.06 (s, 9H).
[0359] Primer 6. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S, 12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Primer 6
[0360] Primer 6 je pripremljen na sličan način kao primer 5, zamenom intermedijera A10 za intermedijer A9 u koraku 6. Primer 6 je izolovan (29 mg) kao bela čvrsta supstanca. Analitički HPLC RetVreme: 9.26 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H59F2N6O9S: 861.40; nađeno: 861.20.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.91 (s, 1H), 7.82 (d, J = 12Hz, 1H), 7.18 (d, J = 12 Hz 1H), 7.13-7.06 (m, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.95 (td, JH-F= 56 Hz, J = 6 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 10 Hz, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 4.38-4.31 (m, 2H), 4.10-3.88 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 2.98-2.89 (m, 1H), 2.67-2.59 (m, 1H), 2.05-1.65 (m, 4H), 1.64-1.21 (m, 12H), 1.40 (s, 3H), 1.17-0.80 (m, 12H), 1.09 (s, 9H).
[0361] Primer 7. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-1a-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
(ranije eluiran) (kasnije eluiran)
[0362] Korak 1. Dobijanje 1-2 (slobodne baze): Karbamat 1-1 (350 mg, 0.689 mmol) je dodat u balon koji sadrži smešu 4:1 t-butil acetat:DCM (3.5 mL). U ovaj rastvor je zatim dodata metansulfonska kiselina (447 μL, 6.89 mmol). Omogućeno je da se reakciona smeša meša u toku 20 min na st, zatim je razblažena sa metilen hloridom (20 mL) i zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (20 mL). Rastvor je omogućeno da se meša do prestanka razvijanja gasa, zatim je organska supstanca uklonjena i vodeni sloj je ekstrahovan dva puta sa metilen hloridom (20 mL). Spojena organska supstanca je zatim isprana sa rastvorom soli, osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijena bela čvrsta supstanca 1-2 (slobodna baza, 280 mg) je korišćena u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C20H27ClN3O4: 408.2; nađeno: 408.1
[0363] Korak 2. Dobijanje smeše 7-1: Amin 1-2 (281 mg, 0.689 mmol) je spojen sa diastereomerom smešom intermedijera D6 (266 mg, 0.895 mmol), DIPEA (600 μL, 3.45 mmol) i DMF (2 mL). HATU (340 mg, 0.895 mmol) je zatim dodat u reakcionu smešu, koja je mešana na 40 °C u toku 5 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa vodom (10 mL) i zatim sakupljena sa metilen hloridom (10 mL). Organske susptance su odvojene i vodeni sloj je ekstrahovan jedom sa metilen hloridom (10 mL). Spojene organske supstance su zatim isprane sa rastvorom soli, osušene iznad MgSO4, proceđene, i koncentrovane in vacuo. Sirovi ostatak je zatim prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu da bi se dobilo 7-1 kao diasteromerne smeše 1:1 (280 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H52ClN4O7: 687.4; nađeno: 687.3.
[0364] Korak 3. Dobijanje 7-2: Pd(dppf)Cl2(29 mg, 0.0407 mmol) dodat je u degasiranu smešu 7-1 (280 mg, 0.407 mmol), kalijum viniltrifluoroborata (55 mg, 0.733 mmol), i trietilamina (91 μL, 0.651 mmol) u 2 mL etanola na sobnoj temepraturi . Reakciona smeša je zagrejana na 80 °C pod N2za jedan sat. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je razblažena sa toluenom (10 mL), koncentrovana in vacuo na malu zapreminu rastvarača i ponovo rastvorena u toluenu (1 mL). Smeša je zatim naneta direkno na kolonu od silicijum dioksida i prečišćena hromatografijom na silikagelu da bi se dobio 7-2 kao diasteromerna smeša 1:1 koja je korišena u sledećem koraku bez potpunog koncentrovanja do suvog. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H55N4O7: 679.4; nađeno: 679.4.
[0365] Korak 4. Dobijanje 7-3 i 7-4: Diastereomerna smeša 7-2 (276 mg, 0.407 mmol) i Zhan-ov 1B katalizator (32 mg, 0.0407 mmol, Strem) su rastoreni u 80 mL DCE i degasirani pod N2u toku 25 minuta. Smeša je zatim zagrejana na 100 °C u toku 1 h. Reakcija je zatim ohlađena na sobnoj temepraturi i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu (0% do 30% etil acetat u heksanima) da bi se dobili pojedinačni diastereomeri 7-3 (20 mg, rano eluirana frakcija) i 7-4 (25 mg, kasno eluirana frakcija) kao svetlo braon ostaci. Rano eluirana frakcija: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.4; nađeno: 651.3. Kasnije eluirana frakcija: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.4; nađeno: 651.3.
[0366] Korak 5. Dobijanje 7-5: Paladijum na ugljeniku (10% m/m, 25 mg) dodat je u rastvor 7-3 (20 mg, 0.0307 mmol) u smeši 1:1 etil acetata i dioksana (2 mL). Smeša je mešana u atmosferi vodonika u toku 30 min i zatim je proceđena kroz sloj Celita, i isprana sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 7-5 (16 mg) kao svetlo braon film, koji je korišećn u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H53N4O7: 653.4; nađeno: 653.4.
[0367] Korak 6. Dobijanje 7-6: Intermedijer 7-5 (16 mg, 0.023 mmol) je rastvoren u 2 M HCl u dioksanu (2 mL) i zagrevan na 80 °C u toku 1.5 h pomoću mikrotalasnog reaktora. Reakciona smeša je zatim koncentrovana in vacuo da bi se dobilo 7-6 (15 mg) kao braon čvrstog ostatka, koji je korišćen u naknadnom koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H44N4O7: 597.3; nađeno: 597.3.
[0368] Korak 7. Dobijanje primera 7: HATU (11.9 mg, 0.031 mmol) i DIPEA (22 μL, 0.126 mmol) su dodati u smešu 7-6 (15 mg, 0.025 mmol) i A10 (11.5 mg, 0.0377 mmol) u 1 mL DMF. Posle mešanja u toku noći na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je sipana u vodu, zakišeljena do pH 1 sa 1 N vodenim HCl, i ekstrahovana tri puta sa metilen hloridom (15 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa vodom, koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen prep HPLC sa referentom fazom (5-100% acetonitrila u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) praćenim sa hromatografijom na silikagelu da bi se dobio primer 7 (4.3 mg) kao beli čvrsti film. Analitička HPLC RetVreme: 9.07 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 847.4; nađeno: 847.4.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.88 (s, 1H), 7.83 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 9.1Hz, 2.8 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.98 (td, JH-F= 55.7, J = 6.7 Hz, 1H), 5.95 (d, J = 9.6, 1H), 5.32 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.45 (dd, J = 13.0 Hz, 9.6 Hz, 2H), 4.32 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 15.5 Hz, 8.8 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.99-2.84 (m, 1H), 2.82 -2.68 (m, 1H), 2.62 -2.47 (m 1H), 2.16 -2.02 (m, 1H) 2.00-1.85 (m, 1H) 1.84-1.69 (m, 1H), 1.70 -1.15 (m, 11H), 1.52 (s, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.20 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.14 -0.77 (m, 5H) 1.09 (s, 9H), 0.11 (m, 1H).
[0369] Primer 8. Dobijanje (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-1a-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 8
[0370] Primer 8 je pripremljen na sličan način kao primer 7, zamenom kasnije eluiranog 7-4 za ranije eluirani 7-3 u koraku 5. Primer 7 je izolovan (2.9 mg) kao bela čvrsta susptanca. Analitički HPLC RetVreme: 9.09 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 847.4; nađeno: 847.4.
[0371] Primeri 9 i 10. Dobijanje (7S,10S,11S,12R)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-5,8-diokso-3aR-(trifluorometil)-1,2,3,3a,5,6,7, 8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19] [1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida i (7S,10S,11S,12R)-7-tercbutil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-5,8-diokso-3aS-(trifluorometil)1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Primer 9 Primer 10
(prvi eluira) (drugi eluira)
[0372] Korak 1. Dobijanje 9-1: U rastvor intermedijera D8 (322 mg, 0.85 mmol) i 1-2 (316 mg, 0.78 mmol) u MeCN (3.9 mL) dodat je HATU (323 mg, 0.85 mmol) a zatim DIPEA (678 μL, 3.90 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 2 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio amid 9-1 (476 mg, 1:1 diasteromerna smeša) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H63ClF3N4O7: 769.4; nađeno: 769.5.
[0373] Korak 2. Dobijanje 9-2: U rastvor 9-1 (470 mg, 612 μmol), TEA (128 μL, 918 μmol), i kalijum viniltrifluoroborata (123 mg, 918 μmol) u EtOH (3.06 mL) dodat je PdCl2(dppf) (50 mg, 61 μmol). Reakciona smeša je deoksigenirana sa argonom u toku 10 min i zagrejana je na 78 °C. Posle 1 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio vinil hinoksalin 9-2 (329 mg, 1:1 diasteromerna smeša) kao žuto ulje. LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H56F3N4O7: 761.4; nađeno: 761.6.
[0374] Korak 3. Dobijanje 9-3: U rastvor 9-2 (329 mg, 485 μmol) u DCE (97 mL) dodat je Zhan-ov 1B katalizator (35 mg, 49 μmol, Strem) i reakciona smeša je deoksigenirana u toku 10 minuta sa argonom. Reakciona smeša je zatim zagrejana na 100 °C. Posle 30 min, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio makrocikl 9-3 (301 mg, 7:4 diasteromerna smešas) kao svetlo žuto ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H52F3N4O7: 733.4; nađeno: 733.5.
[0375] Korak 4. Dobijanje 9-4: U rastvor 9-3 (300 mg, 410 μmol) u etanolu (2.00 mL) dodat je Pd/C (10 wt % Pd,43 mg, 41 μmol) na st u atmosferi argona. Atmosfera reakcije je zamenjena sa vodonikovim gasom i reakciona smeša je intenzivno mešana na st. Posle 30 min, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (10 mL) i proceđena kroz sloj Celita uz ispiranje etil acetatom (3 x 5 mL). Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio makrocikl 9-4 (295 mg, 7:4 diasteromerna smeša), koji je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H54F3N4O7: 735.4; nađeno: 735.5.
[0376] Korak 5. Dobijanje 9-5: U rastvor 9-4 (295 mg, 401 μmol) u DCM (2 mL) dodat je TMSOTf (72.6 μL, 401 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 1.5 h, dodatni TMSOTf (362.9 µL, 2.00 mmol) dodat je. Posle 1 h, dodat je dodatni TMSOTf (362.9 μL, 2.00 mmol). Posle 2 h, reakciona smeša dodat je polako na 0.25 N vodeni NaOH rastvor (prethodno ohlađena na 0 °C, 3 mL). Dobijena smeša je razblažena sa 1 N vodenim HCl rastvorom (5 mL), i ekstrahovana je sa DCM (3 x 5 mL). Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su da bi se dobio karboksilna kiselina 9-5 (353 mg, 7:4 diasteromerna smeša) kao tamna čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja . LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H45F3N4O7: 679.3; nađeno: 679.5.
[0377] Korak 6. Dobijanje primera 9 i primera 10: U rastvor kiseline 9-5 (150 mg, 220 µmol) i intermedijera A10 (101 mg, 330 µmol) u MeCN (1.1 mL) dodat je HATU (127 mg, 330 µmol) praćen sa DIPEA (191 μL, 1.10 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 1 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i ponovo prečišćene hromatografijom na silikagelu (0-50% gradijent aceton/heksani) da bi se dobio prvi eluirani
[0378] Primer 9 (40 mg) kao beli prah i drugi eluirani Primer 10 (70 mg) kao beli prah. Prvi eluirani primer 9: Analitički HPLC RetVreme: 9.42 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C43H58F5N6O9S: 929.4; nađeno: 929.5.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.83 (s, 1H), 7.92 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.99 (br s, 1H), 5.96 (td, JH-F55.5, J = 6.6 Hz, 1H), 5.70 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.22 -4.04 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.12 -2.89 (m, 1H), 2.71 -2.51 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.15 -1.82 (m, 4H), 1.83 -1.34 (m, 8H), 1.36 -0.98 (m, 12H), 1.26 (s, 9H), 0.92 -0.79 (m, 4H). Drugi eluriani primer 10: Analitički HPLC RetVreme: 9.55 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C43H58F5N6O9S: 929.4; nađeno: 929.5.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.61 (s, 1H), 7.91 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 9.0, 3.0 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 5.98 -5.91 (m, 1H), 5.83 (td, JH-F55.5, J = 6.6 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.72 -4.63 (m, 1H), 4.46 -4.38 (m, 1H), 4.32 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.25 -4.14 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.73 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.23 -3.07 (m, 1H), 2.86 -2.37 (m, 2H), 2.14 -1.79 (m, 2H), 1.78 -1.38 (m, 8H), 1.51 (s, 3H), 1.35 -1.08 (m, 8H), 1.25 (s, 9H), 1.05 (br s, 3H), 0.93 -0.68 (m, 6H).
[0379] Primeri 11 i 12. Dobijanje (7S,10S,11S,12R)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-5,8-diokso-3aR-(trifluorometil)1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida i (7S,10S,11S,12R)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-5,8-diokso-3aS-(trifluorometil)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Primer 11 Primer 12
(prvi eluira) (drugi eluira)
[0380] Dobijanje primera 11 i primer 12: U rastvor kiseline 9-5 (150 mg, 220 μmol) i intermedijera A9 (96 mg, 330 μmol) u MeCN (1.1 mL) dodat je HATU (127 mg, 330 μmol) praćen sa DIPEA (191 μL, 1.10 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 1 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% gradijent aceton/heksani). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su spojene i ponovo prečišćene hromatografijom na silikagelu (0-50% gradijent aceton/heksani) da bi se dobio prvi elurani primer 11 (29 mg) kao beli prah i drugi eluirani primer 12 (60.2 mg) kao beli prah. Prvi eluirani primer 11: Analitički HPLC RetVreme: 9.44 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. C42H56F5N6O9S: 915.4; nađeno: 915.6.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.17 (br s, 1H), 7.83 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 9.1, 2.7 Hz, 1H), 7.17 -7.07 (m, 1H), 5.99 (br s, 1H), 5.97 (td, JH-F55.5, J = 6.6 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.20 -4.03 (m, 2H), 3.95 (s, J = 5.9 Hz, 3H), 2.97 -2.82 (m, 2H), 2.79 -2.49 (m, 3H), 2.24 -1.81 (m, 8H), 1.80 -1.11 (m, 12H), 1.10-0.98 (m, 4H), 1.07 (s, 9H), 0.95-0.81 (m, 3H). Drugi eluirani primer 12: Analitički HPLC RetVreme: 9.48 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. C42H56F5N6O9S: 915.4; nađeno: 915.6.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.07 (s, 1H), 7.93 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.28-7.20 (m, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.17 -5.68 (m, 3H), 4.67 -4.55 (m, 1H), 4.37 -4.23 (m, 2H), 4.17 -4.05 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.75 -3.66 (m, 1H), 3.22 -3.04 (m, 1H), 3.02 -2.31 (m, 6H), 2.30 -1.83 (m, 10H), 1.85 -1.13 (m, 13H), 1.06 (s, 9H), 0.95 -0.79 (m, 1H).
[0381] Primer 13. Dobijanje (1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-12-etil-17 -metoksi-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-1H,11H-1,4:10,13-dimetanohinoksalino[2,3k][1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11-karboksamida.
[0382] Korak 1. Dobijanje smeše diastereomera 13-1 i 13-2: U rastvor 1-2 (354 mg, 0.87 mmol), smeše intermedijera D9 i D10 (323 mg, 0.96 mmol) i BEP (263 mg, 0.96 mmol; TCI America) dodat je DIPEA (0.45 mL, 2.61 mmol) i reakcija je mešana na 50 °C u toku 2 h. Reakcija je zaustavljena sa zas. vodeni NaHCO3rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc, organska faza je isprana sa koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-30% EtOAc/heksani) da bi se dobila nerazdvojina smeša diasteromera 13-1 i 13-2 (338 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H56ClN4O7: 727.38; nađeno: 727.46.
[0383] Korak 2. Dobijanje smeše diasteromera 13-3 i 13-4: U rastvor smeše 13-1 i 13-2 (338 mg, 0.46 mmol), TEA (0.10 mL, 0.69 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (93 mg, 0.69 mmol) u EtOH (30 mL) dodat je PdCl2(dppf) (38 mg, 0.046 mmol, Strem Chemicals). Reakcija je deoksigenirana sa N2u toku 10 min i zagrejana na 80 °C u toku 1 h. Reakcija je zaustavljena sa zas. vodenim NaHCO3rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc, isprana naknadno sa koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu da bi se dobila nerastvorljiva smeša diastereomera 13-3 i 13-4 (285 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ izrač. za C41H59N4O7: 719.44; nađeno: 719.70.
[0384] Korak 3 i 4. Dobijanje 13-5: U rastvor diasteromerna smeša 13-3 i 13-4 (285 mg, 0.40 mmol) u DCE (100 mL) dodat je Zhan-ov 1B katalizator (30 mg, 0.04 mmol, Strem) i reakcija je deoksigenirana u toku 30 minuta sa N2. Reakcija je zagrejana na 100 °C u toku 45 min, omogućena da se ohladi do st i koncentruje. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio makrociklični olefinski proizvod (125 mg; LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H55N4O7: 691.41; nađeno: 691.58) koji je sakupljen sa EtOH (6 mL) i tretiran sa Pd/C (10%, 120 mg). Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i mešana na st u toku 1.5 h. Reakcija je proceđena preko Celita, isprana sa EtOAc i koncentrovana da bi se dobio 13-5 kao ulje (125 mg) koji je dalje korišćeno bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H57N4O7: 693.42; nađeno: 693.46.
[0385] Korak 5. Dobijanje 13-6: U rastvor 13-5 (50 mg, 0.072 mmol) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL) i mešan na st u toku 6 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc, isprana sa H2O, vodenim puferom sa pH 7 r, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana da bi se dobio 13-6 kao ostatak koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H49N4O7: 637.36; nađeno: 637.40.
[0386] Korak 6. Dobijanje primera 13: U rastvor 13-6 (46 mg, 0.072 mmol), intermedijera A9 (28 mg, 0.11 mmol), TBTU (34 mg, 0.10 mmol) i DMAP (13 mg, 0.11 mmol) u DCM (5 mL) dodat je DIPEA (0.038 mL, 0.22 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 16 h. Reakcija je zaustavljena sa vodom, razblažena sa EtOAc, isprana sa zas. vodenim NaHCO3, koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana. Sirovi materijali su prečišćeni sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini, 30-85% MeCN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovani da bi se dobio primer 13 (14.5 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 9.39 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C43H59F2N6O9S: 873.40; nađeno: 873.42.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.28 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 6.4, 2.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.04 -5.74 (m, 2H), 5.50 (s, 1H), 4.55 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.47 (s, 1H), 4.26 -4.16 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.03 -2.95 (m, 2H), 2.78 -2.66 (m, 2H), 2.17 (br, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.90 -1.85 (m, 1H), 1.76 -1.74 (m, 2H), 1.61 -1.21 (m, 20H), 1.15 -1.11 (m, 2H), 1.08 (s, 9H), 0.93 -0.90 (m, 1H).
[0387] Primer 14. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-ciklopentil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
korak 3 korak 4
[0388] Korak 1. Dobijanje 14-1: U rastvor 1-2 (223 mg, 0.50 mmol) i intermedijera D2 (221 mg, 0.75 mmol) u acetonitrilu (5 mL) dodat je HATU (306 mg, 0.80 mmol) a zatim DIPEA (0.43 mL, 2.5 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 19 h, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je razblažen sa etil acetatom (15 mL). Dobijeni rastvor je ispran sa 1 M vodenim HCl (10 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 3 10 mL) i spojeni organski sloj je ispran sa koncentrovanim rastvorom soli (15 mL), osušen iznad anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovan. Dobijeni sirovi ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio 14-1 (173 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H50ClN4O7: 685.33; nađeno: 685.49.
[0389] Korak 2. Dobijanje 14-2: U rastvor 14-1 (173 mg, 0.25 mmol) u EtOH (3 mL) dodat je kalijum viniltrifluoroborat (51 mg, 0.38 mmol), PdCl2(dppf) (21 mg, 0.025 mmol) i TEA (0.053 mL, 0.38 mmol) sekvencionalno i dobijena smeša je zagrejana na 80 °C. Posle 1 h, dodatni kalijum viniltrifluoroborat (17 mg, 0.12 mmol) dodat je i nastavljeno je mešanje na 80 °C. Posle 2.5 h, dodatni kalijum viniltrifluoroborat (8 mg, 0.06 mmol) dodat je i reakcija je mešana u toku dodatnih 10 minuta na 80 °C. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena sa etil acetatom (20 mL), i isprana sa koncentrovanim rastvorom soli (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (10 mL), spojeni organski sloj je osušen iznad anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio 14-2 kao ostatka koji je korišćen bez prečišćavanja u sledećem koraku. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H53N4O7: 677.38; nađeno: 677.50.
[0390] Korak 3. Dobijanje 14-3: U rastvor 14-2 u deoksigeniranom DCE (0.006 M) dodat je Zhan-ov 1B katalizator (18 mg, 0.025 mmol, Strem) i reakcija je deoksigenirana još dodatnih 10 minuta sa Ar. Reakcija je zagrejana na 100 °C. Posle 1.5 h, Zhan-ov 1B katalizator (9 mg, 0.012 mmol) dodat je i reakcija je mešana u toku još 30 min. Omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i koncentruje do zapremine od 4-5 mL. Ovo je direktno prečišćavano hromatografijom na silikagelu da bi se dobio 14-3 kao braon ulje (70 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H49N4O7: 649.35; nađeno: 649.50.
[0391] Korak 4. Dobijanje 14-4: U rastvor 14-3 (70 mg, 0.11 mmol) u EtOH (5 mL) dodat je Pd/C (10 mas % Pd, 12 mg) pod argonom. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i reakcija je mešana na st u toku 16 h. Reakcija je proceđena preko Celita, isprana sa EtOH i koncentrovana da bi se dobilo 14-4 braon ulja koje je dalje korišćeno bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.37; nađeno: 651.60.
[0392] Korak 5. Dobijanje 14-5: U rastvor 14-4 (70 mg, 0.11 mmol) u DCM (3 mL) dodat je TMSOTf (0.103 mL, 0.53 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 1 h. Reakcija je koncentrovana da bi se dobio 14-5 koji je korišen u sledećem kroaku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H43N4O7: 595.31; nađeno: 595.43.
[0393] Korak 6. Dobijanje primera 14: U rastvor 14-5 (36.8 mg, 0.06 mmol) i intermedijera A10 (28 mg, 0.09 mmol) u acetonitrilu (1.5 mL) dodat je HATU (38 mg, 0.1 mmol) a zatim DIPEA (0.065 mL, 0.37 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 20 minuta, reakciona smeša je direktno prečišćena pomoću HPLC sa reverznom fazom (Gemini 5u C18 110A kolona, 15-100% MeCN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovana da bi se dobio primer 14 kao žuta čvrsta supstanca (24 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 9.03 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H55F2N6O9S: 845.4; nađeno: 845.6.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.31 (s, 1H), 7.80 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.03 -5.66 (m, 2H), 4.53 (dd, J = 13.2, 9.6 Hz, 2H), 4.18 (dd, J = 17.2, 7.1 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.68 (dt, J = 6.8, 2.8 Hz, 1H), 3.13 (quin, J = 1.7 Hz, 1H), 3.02 -2.92 (m, 1H), 2.85 -2.78 (m, 1H), 2.62 -2.55 (m, 1H), 2.30 -2.17 (m, 1H), 2.02 (s, 2H), 1.97 -1.86 (m, 3H), 1.86 -1.79 (m, 1H), 1.80 -1.41 (m, 17H), 1.40 -1.28 (m, 3H), 1.22 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 1.03 -0.87 (m, 4H), 0.76 -0.68 (m, 1H), 0.51 -0.44 (m, 1H).
[0394] Primer 15. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-ciklopentil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0395] Korak 1. Dobijanje primera 15. U rastvor 14-5 (27 mg, 0.045 mmol) i intermedijera A9 (20 mg, 0.067 mmol) u acetonitrilu (1.3 mL) dodat je HATU (27 mg, 0.072 mmol) a zatim DIPEA (0.047 mL, 0.27 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 20 minuta, reakciona smeša je direktno prečišćena sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini 5u C18110A kolona, 15-100% MeCN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovana da bi se dobio primer 15 kao žuta čvrsta supstanca (18.6 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.89 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H53F2N6O9S: 831.4; nađeno: 831.6.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.32 (s, 1H), 7.79 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.03 -5.66 (m, 2H), 4.53 (t, J = 10.0 Hz, 2H), 4.22 -4.14 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.67 (dt, J = 6.5, 2.9 Hz, 1H), 3.13 (quin, 1.6 Hz, 1H), 3.04 -2.92 (m, 3H), 2.85 -2.77 (m, 1H), 2.63 -2.55 (m, 1H), 2.26 -2.19 (m, 1H), 2.052.02 (m, 2H), 1.99 -1.86 (m, 3H), 1.84 -1.42 (m, 12H), 1.41 -1.25 (m, 4H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.15 -1.03 (m, 3H), 1.01 -0.90 (m, 2H), 0.76 -0.68 (m, 1H), 0.49 -0.45 (m, 1H).
[0396] Primer 16. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-cikloheksil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0397] Korak 1. Dobijanje 16-1: U rastvor intermedijera D3 (190 mg, 0.60 mmol) i 1-2 (264 mg, 0.60 mmol) u DMF (5 mL) dodat je DIPEA (0.31 mL, 1.8 mmol) a zatim COMU (257 mg, 0.60 mmol) na st. Posle 2 h, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je razblažen sa etil acetatom (15 mL). Dobijeni rastvor je ispran sa 10% vodenim rastvorom limunske kiseline. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 10 mL) i spojeni organski sloj je ispran sa koncentrovanim rastvorom soli (15 mL), osušen iznad anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovan. Dobijen sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio 16-1 (260 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H51ClN4O7: 700.28; nađeno: 700.03.
[0398] Korak 2. Dobijanje 16-2: U rastvor 16-1 (260 mg, 0.37 mmol) u EtOH (5 mL) dodat je kalijum viniltrifluoroborat (75 mg, 0.56 mmol), PdCl2(dppf) (30 mg, 0.037 mmol) i TEA (0.079 mL, 0.56 mmol) sekvencionalno. Reakcija je deoksigenirana sa Ar u toku 12 min i zagrejana je na 78 °C u toku 2 h.
Reakcija je ohlađena na st, razblažena sa etil acetatom (20 mL), i isprana sa rastvorom soli (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (10 mL), i spojeni organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio sirovi ostatak. Dobijeni sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio 16-2 kao žuto ulje (250 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H54N4O7: 691.87; nađeno: 691.54.
[0399] Korak 3. Dobijanje 16-3: U rastvor 16-2 (250 mg, 0.36 mmol) u deoksigenovanom DCE (0.005 M) dodat je Zhan-ov 1B katalizator (26 mg, 0.036 mmol, Strem) i reakcija je deoksigenirana u toku dodanih 10 minuta sa Ar. Reakcija je zagrejana na 70 °C u toku 2 h. Omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i koncentruje. Dobijeni ostatak je direktno prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio 16-3 kao žuto ulje (250 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H50N4O7: 663.82; nađeno: 663.42.
[0400] Korak 4. Dobijanje 16-4: U rastvor 16-3 (200 mg, 0.3 mmol) u EtOAc (10 mL) dodat je Pd/C (10 mas % Pd, 100 mg) pod aronom. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i reakcija je mešana na st u toku 1.5 h. Reakcija je proceđena preko Celita, isprana sa EtOH i koncentrovana da bi se dobio 16-4 kao ulje (180 mg) koje je dalje korišćeno bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H52N4O7: 665.83; nađeno: 665.36.
[0401] Korak 5. Dobijanje 16-5: U rastvor 16-4 (165 mg, 0.25 mmol) u DCM (5 mL) dodat je TFA (2 mL) i reakcija je mešana na st u toku 4 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom reakcija je razblažena sa etil acetatom (15 mL). Dobijeni rastvor je ispran sa zas. vodenim NaHCO3i koncentrovan da bi se dobio 16-5 koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H44N4O7: 609.73; nađeno: 609.47
[0402] Korak 6. Dobijanje primera 16: U rastvor 16-5 (70 mg, 0.12 mmol) i intermedijera A10 (65 mg, 0.21 mmol) u DCM (1 mL) dodat je DIPEA (0.08 mL, 0.46 mmol) a zatim HATU (88 mg, 0.23 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u toku 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana sa vodenim NH4Cl i zasićenim rastvorom soli. Sirovi materijal je prečićen pomoću HPLC sa reverznm fazom (Gemini kolona, 58-98 % MeCN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovan da bi se dobio primer 16 (40 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 9.21 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H56F2N6O9S: 859.99; nađeno: 859.60.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.28 (s, 1H), 7.76 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 5.97 -5.82 (m, 2H), 4.88 (m, 2H), 4.51-4.46 (m, 3H), 4.19-4.11 (m, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.70-3.29 (m, 6H), 2.97-2.52 (m, 3H), 2.06 -1.41 (m, 20H), 1.39 -1.17 (m, 4H), 1.09 -0.89 (m, 4H), 0.65 (m, 1H), 0.46 -0.44 (m, 1H).
[0403] Primer 17. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0404] Koraci 1 i 2. Dobijanje 17-2: Smeša intermedijera B4 (273 mg, 0.865 mmol), intermedijera E3 (234 mg, 0.865 mmol), i cezijum karbonata (310 mg, 0.952 mmol) u MeCN (2.5 mL) je zagrejana na 85 °C u toku 36 sata. U alternativnom postupku, DMF je korišćen kao rastvarač. Dodata je voda (10 mL) i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana da bi se dobio 17-1, koji je korišćena naknadno bez daljeg pečišćavanja ili posle hromatografskog prečišćavanja. Ostatak je tretiran sa 35 ekv.4 N HCl u dioksanu na st u toku 2.5 sati.
Posle dodavanja dietil etra, hidrohloridna so 17-2 je staložena. So je sakupljena vakum ceđenjem i osušena pod sniženim pritiskom (375 mg). U alternativnom psotupku, skidanje zaštite je izvedeno u prisustvu MSA u tBuOAc i DCM. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C23H30F2N3O4: 450.2; nađeno: 450.1.
[0405] Korak 3. Dobijanje 17-3: Smeša 17-2 (370 mg, 0.761 mmol), intermedijera D11 (205 mg, 0.761 mmol), HATU (347 mg, 0.914 mmol) i DIPEA (0.795 mL, 4.57 mmol) u DMF (3 mL) je mešana na st u toku noći. Smeša je razblažena sa 100 mL vode i ekstrahovana sa dihlorometanom. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana. Smeša sirovog proizvoda je prečišćena hromatografijom na silikagelu (EtOAc u heksanima: 30%) da bi se dobilo 17-3 (236 mg). U alternativnom postupku, 17-2 i intermedijer D11 su pomešani sa EDC i HOBT u prisustvu NMM u DMF da bi se dobilo 17-3. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H51F2N4O7: 701.4; nađeno: 701.3.
[0406] Korak 4. Dobijanje 17-4: Rastvor 17-3 (236 mg, 0.34 mmol) u DCE (67 mL) je deoksigeniran sa argonom u toku 40 minuta. Dodat je Zhan-ov 1B katalizator (25 mg, 0.034 mmol, Strem) i reakcija je zagrejana na 100 °C uljanim kupatilom u toku 40 minuta. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (EtOAc u heksanima: 5% do 65%) da bi se dobio 17-4 (229 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M-F]<+>izrač. za C35H46FN4O7: 653.3; nađeno: 653.2.
[0407] Korak 5. Dobijanje 17-5: Rastvor 17-4 (229 mg, 0.34 mmol) u 50 mL etanola je hidrogenizovan sa 1 atm gasovitog vodonika preko 220 mg 10% mas Pd/C (vlažan) u toku 2.5 sati. Ceđenjem preko Celita i koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi ostatak 17-5 (184 mg). U alternativnom postupku , 17-4 je hidrogenizovan sa gasovitim vodonikom u prisustvu Rh. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H49F2N4O7: 675.4; nađeno: 675.3.
[0408] Korak 6. Dobijanje 17-6: Estar 17-5 (184 mg, 0.27 mmol) u 2 mL DCM je tretiran sa 1 mL TFA i mešan na st u toku 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana i zatim razdeljna između vode i etil acetata. Organska faza je isprana sa vodom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana da bi se dobio 17-6 (153 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C31H41F2N4O7: 619.3; nađeno: 619.2.
[0409] Korak 7. Dobijanje primera 17: Smeša karboksilne kiseline 17-6 (153 mg, 0.247 mmol), intermedijera A10 (90 mg, 0.297 mmol), HATU (113 mg, 0.297 mmol), DMAP (45 mg, 0.37 mmol) i DIPEA (0.215 mL, 1.24 mmol) u DMF (1.5 mL) je mešana na st u toku 40 minuta. Smeša je razblažena sa 2 N vodenim HCl (2 mL) i ekstrahovana sa dihlorometanom. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana. Smeša sirovog proizvoda je prečišćena hromatografijom na silikagelu (EtOAc u heksanima: 30% -95%) da bi se dobio primer 17 (95 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.79 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H53F4N6O9S: 869.3; nađeno: 869.2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.948 (br s, 1H), 7.99 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.57 (br s, 1H), 5.97 (td, JH-F= 52 Hz, J = 6.8 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.322 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.42 (ap d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.40 (ap s, 1H), 4.34 (ap d, J = 10 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 12.0, 3.6 Hz, 1H), 3.99 -3.94 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.67 (m, 1H), 2.52 (m, 2H), 2.06 (m, 1H), 1.93 (m, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.63 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.56 -1.42 (m, 4H), 1.25 (m, 1H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.10-0.93 (m, 2H), 0.85 (m, 2H), 0.69 (m, 1H), 0.49 (m, 1H).
[0410] Primer 18. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 18
[0411] Korak 1. Dobijanje 18-1: Intermedijer B1 (1.94 g, 6.44 mmol) je rastvoren u MeCN (30 mL) pod Ar. Intermedijer E1 (2.02 g, 7.4 mmol) i Cs2CO3(7.5 mmol) su dodati, i dobijena smeša je mešana u toku 8 h na st. Dodatni intermedijer E1 (200 mg, 0.73 mmol) i Cs2CO3(245 mg, 0.75 mmol) su dodati i reakciona smeša je mešana dodatnih 15 h. Reakciona smeša je proceđena preko Celita sa EtOAc i koncentrovani. Dobijeni sirov ostatak je rastvoren u CH2Cl2, koncentrovan na 12 g silika gela, i prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu (5% do 20% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 18-1 kao bela pena (2.63 g). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C24H33ClN3O6: 494.2; nađeno: 494.1.
[0412] Korak 2. Dobijanje 18-2: Supstituisani hinoksalin 18-1 (905 mg, 1.84 mmol) je rastvoren u tercbutil acetatu (7 mL) i CH2Cl2(1.75 mL). MeSO3H (600 μL, 9.2 mmol) dodat je u kapima u toku 45 s, i dobijeni žuti rastvor je mešan na st u toku 50 min. Dodatni MeSO3H (100 μL, 1.5 mmol) je dodat u kapima i reakcija je mešana dodatnih 10 min. Reakciona smeša je premešćena u smešu koja se meša EtOAc (20 mL) i zasićenog vodenog NaHCO3(30 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio amin 18-2 kao bezbojni ostatak (680 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C19H25ClN3O4: 394.2; nađeno: 394.2.
[0413] Korak 3. Dobijanje 18-3: Amin 18-2 (680 mg, 1.73 mmol) i intermedijer D1 (600 mg, 2.1 mmol) su rastvoreni u DMF (10 mL). DIPEA (925 μL, 5.30 mmol) je dodat, a zatim HATU (880 mg, 2.3 mmol). Reakcija je mešana 110 min na st i razblažena je sa zasićenim vodenim NaHCO3(30 mL) i EtOAc (30 mL). Faze su odvojene i organska faza je isprana sa poluzasićenim rastvorom soli (2 x 40 mL), osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena i koncentrovana do sirovog ostatka. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% to 20% EtOAc u heksanima) dobijen je 18-3 kao bezbojni ostatak (703 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H48ClN4O7: 659.3; nađeno: 659.4.
[0414] Korak 4. Dobijanje 18-4: Mešana heterogena smeša 18-3 (703 mg, 1.07 mmol), PdCl2(dppf)•CH2Cl2(48 mg, 0.059 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (290 mg, 2.16 mmol) u EtOH (11 mL) je poprskana sa argonom u toku 15 min. Trietilamin (320 μL, 2.3 mmol) je dodat i smeša je zagrejana na 75 °C u toku 70 min. Reakciona smeša je ohlađena na temperaturi okoline i razblažena je sa EtOAc (40 mL) i poluzasićenim rastvorom soli (30 mL). Faze su odvojene i organska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 20% do 30% EtOAc u heksanima) dobijen je 18-4 kao žuti ostatak (490 mg). LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.4; nađeno: 651.3.
[0415] Korak 5. Dobijanje 18-5: 18-4 (490 mg, 0.179 mmol) je rastvoreno u DCE (250 mL) i rastvor je poprskan sa Ar u toku 15 min. Dodat je Zhan 1B katalizator (66 mg, 0.090 mmol, Strem) kao rastvor u DCE (5 mL) i dobijeni rastvor je mešan na 85 °C pod Ar u toku 105 min. Reakciona smeša je ohlađena na st i apsorbovana je na silikagelu (7.5 g). Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 30% EtOAc u heksanima) dobijen je 18-5 kao amorfni ostatak (290 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H47N4O7: 623.3; nađeno: 623.3.
[0416] Korak 6: Dobijanje 18-6: Olefin 18-5 (290 mg, 0.072 mmol) je rastvoren u EtOAc (5.5 mL) i EtOH (5.5 mL) i reakcijioni sud je prečišćen sa Ar. Dodat je Pd/C (10 mas % Pd, 92 mg) u jednoj porciji i reakcioni sud je prečišćavan dva puta sa H2. Reakcija je mešana na st pod 1 atm H2u toku 1.5 h i proceđena kroz sloj Celita i koncentrovan da bi se dobio sirovi ostatak 18-6 koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja (LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H49N4O7: 625.4; nađeno: 625.0.
[0417] Korak 7. Dobijanje 18-7: 18-6 (0.466 mmol) je rastvoren u CH2Cl2(4.3 mL) pod Ar. TMSOTf (210 μL, 1.16 mmol) dodat je u kapima u toku 30 s. Reakcija je mešana 65 min i dodata je dodatna porcija TMSOTf (50 μL, 0.28 mmol). Reakcija je mešana dodatnih 100 min i dodata je dodatna porcija TMSOTf (100 μL, 0.55 mmol). Reakcija je mešana dodatni 105 min i koncentrovana je in vacuo. Dobijeni sirovi ostatak je rastvoren u CH2Cl2(20 mL) i dodat je 0.2 M vodeni NaOH (10 mL). Smeša je mešana u toku 5 min i zakišeljena sa 1 M vodenim HCl (20 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa CH2Cl2(2 x 20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio 18-7 kao braon čvrste supstance (273 mg). LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C30H41N4O7: 569.3; nađeno: 568.9.
[0418] Korak 8. Dobijanje primera 18: U suspenziju kiseline 18-7 (28 mg, 0.049 mmol) i intermedijera A10 (26.5 mg, 0.087 mmol) u MeCN (1.3 mL) dodat je DIPEA (55 μL, 0.31 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (30.5 mg, 0.080 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 1 h i dodata je dodatna porcija intermedijera A10 (3 mg, 0.01 mmol). Posle dodatnih 15 min, reakcija je razblažena sa EtOAc (30 mL) i 1 M vodenim HCl (20 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 40% acetona u heksanima) dobijen je amorfni ostatak koji je liofilizaovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 18 kao bela amorfna čvrsta supstanca (26.4 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.42 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H53F2N6O9S: 819.4 ; nađeno: 819.1.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.68 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.14 -5.70 (m, 1H), 5.65 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.56 -5.50 (m, 1H), 4.53 -4.40 (m, 3H), 4.12 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.81 -3.74 (m, 1H), 3.06 -2.64 (m, 4H), 2.10 -1.35 (m, 13H), 1.13 (d, J = 7.5 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.04 -0.65 (m, 6H), 0.52 -0.41 (m, 1H).
[0419] Primer 19. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0420] Korak 1. Dobijanje primera 19: U suspenziju kiseline 18-7 (8.8 mg, 0.015 mmol) i intermedijera A9 (7.4 mg, 0.025 mmol) u MeCN (0.5 mL) dodat je DIPEA (14 μL, 0.08 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (9.1 mg, 0.024 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 1 h i dodate su dodatne porcije Intermedijera A9 (5 mg, 0.02 mmol) i HATU (5 mg, 0.01 mmol). Posle dodatnih 1.5 h, reakcija je razblažena sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim HCl (10 mL), i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 40% aceton u heksanima) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio Primer 19 kao bela amorfna čvrsta supstanca (8.5 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.69 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H51F2N6O9S: 805.3 ; nađeno: 805.2.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10.12 (s, 1H), 7.83 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.25 -5.76 (m, 1H), 5.57 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 5.51 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 4.49 -4.37 (m, 3H), 4.13 (dd, J = 12.2, 4.3 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.79 -3.72 (m, 1H), 3.01 -2.69 (m, 4H), 2.13 -2.06 (m, 1H), 2.01 -1.22 (m, 9H), 1.14 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.06 -0.82 (m, 6H), 0.76 -0.62 (m, 1H), 0.54 -0.41 (m, 1H).
[0421] Primer 20. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0422] Korak 1. Dobijanje primera 20: U suspenziju kiseline 18-7 (10 mg, 0.018 mmol) i intermedijera A3 (6.3 mg, 0.023 mmol) u MeCN (0.5 mL) dodat je DIPEA (15 μL, 0.086 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (9.0 mg, 0.024 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 2.5 h i dodata je dodatna porcija intermedijera A3 (6.5 mg, 0.024 mmol). Posle dodatnih 45 min, reakcija je razblažena sa EtOAc (2 mL) i 1 M vodenim HCl (1.5 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 1.5 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (20% do 25% do 30% acetona u heksanima) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 20 kao bela amorfna čvrsta supstanca (8.0 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.40 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H55N6O9S: 783.4; nađeno: 783.2.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.98 (s, 1H), 7.83 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.57 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 5.36 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 4.48 -4.34 (m, 3H), 4.11 (dd, J = 11.8, 4.1 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.79 -3.72 (m, 1H), 2.98 -2.68 (m, 4H), 1.95 -0.80 (m, 33H), 0.76 -0.61 (m, 1H), 0.53 -0.41 (m, 1H).
[0423] Primer 21. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-etil-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0424] Korak 1. Dobijanje primera 21: U suspenziju kiseline 18-7 (94.9 mg, 0.167 mmol) i intermedijera A4 (74.5 mg, 0.263 mmol) u MeCN (2.5 mL) dodat je DIPEA (180 μL, 1.0 mmol). U dobijeni rastvor je dodat HATU (9.0 mg, 0.024 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 110 min dodate su dodatne porcije intermedijera A4 (31 mg, 0.11 mmol) i DIPEA (50 μL, 0.29 mmol). Posle dodatnih 40 min, reakcija je razblažena sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim HCl (20 mL), i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Spojena organska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 40% acetona u heksanima) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 21 kao bela amorfna čvrsta supstanca (102.1 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.83 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H57N6O9S: 797.4; nađeno: 797.5.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.76 (s, 1H), 7.80 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.92(s, 1H), 5.58 -5.42 (m, 2H), 4.48 -4.36 (m, 3H), 4.09 (dd, J = 11.8, 4.2 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.79 -3.74 (m, 1H), 2.97 -2.66 (m, 4H), 1.80 -0.88 (m, 33H), 0.84 -0.77 (m, 1H), 0.77 -0.61 (m, 2H), 0.52 -0.40 (m, 1H).
[0425] Primer 22. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(2-fluoroetil)ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0426] Korak 1. Dobijanje primera 22: U suspenziju kiseline 18-7 (30.1 mg, 0.0529 mmol) i intermedijera A5 (35 mg, 0.12 mmol) u MeCN (0.5 mL) dodat je DIPEA (85 μL, 0.49 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (34.5 mg, 0.0907 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 90 min i razblažena je sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim HCl (20 mL), i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2Cl2i apsorbovan na 2 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (15% do 55% acetona u heksanima) obezbeđen je ostatak koji je liofilzovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 22 kao bela amorfna čvrsta supstanca (35.5 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.54 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H54FN6O9S: 801.4; nađeno: 801.3.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.95 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.56 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.43 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 4.57 -4.29 (m, 5H), 4.12 (dd, J = 11.8, 4.1 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.78 -3.71 (m, 1H), 2.97 -2.67 (m, 4H), 2.12 -1.25 (m, 14H), 1.15 (d, J = 7.4 Hz, 3H), 1.10 (s, 9H), 1.06 -0.89 (m, 4H), 0.76 -0.62 (m, 1H), 0.53 -0.42 (m, 1H).
[0427] Primer 23. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2-fluoroetil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0428] Korak 1. Dobijanje primera 23: U suspenziju kiseline 18-7 (30.5 mg, 0.0536 mmol) i Intermedijer A6 (24.8 mg, 0.0824 mmol) in MeCN (0.5 mL) dodat je DIPEA (60 μL, 0.34 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (32.3 mg, 0.0850 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 75 min i dodata je dodatna porcija intermedijera A6 (9 mg, 0.03 mmol). Posle dodatnih 75 min reakcija je razblažena sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim HCl (20 mL), i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2Cl2i adsorbovan na 2 g silkagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (15% do 55% acetona u heksanima) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 23 kao bela amorfna čvrsta supstanca (37.1 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.64 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H56FN6O9S: 815.4; nađeno: 815.6.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.63 (s, 1H), 7.83 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.56 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.56 -4.34 (m, 5H), 4.13 (dd, J = 11.8, 4.2 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.82 -3.75 (m, 1H), 2.98 -2.70 (m, 4H), 2.07 -2.00 (m, 1H), 2.00 -1.93 (m, 1H), 1.88 -1.44 (m, 12H), 1.32-1.26 (m, 1H), 1.17 (d, J = 7.4 Hz, 3H), 1.12 (d, J = 10.6 Hz, 9H), 1.07 -0.83 (m, 4H), 0.81 -0.65 (m, 2H), 0.52 -0.44 (m, 1H).
[0429] Primer 24. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(2,2-difluoroetil)ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0430] Korak 1. Dobijanje primera 24: U suspenziju kiselina 18-7 (30.2 mg, 0.0531 mmol) i intermedijera A7 (25.9 mg, 0.0850 mmol) u MeCN (0.5 mL) dodat je DIPEA (60 μL, 0.34 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (32 mg, 0.084 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 75 min i dodata je dodatna porcija intermedijera A7 (3.0 mg, 0.0098 mmol). Posle dodatnih 30 min reakcija je razblažena sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim HCl (20 mL), i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2Cl2i adsorbovan na 2 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (15% do 55% acetona u heksanima) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 24 kao bela amorfna čvrsta supstanca (35.5 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.62 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H53F2N6O9S: 819.4; nađeno: 819.2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.99 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.69 (s, 1H), 5.99 -5.64 (m, 1H), 5.56 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.40 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.47 -4.39 (m, 3H), 4.14 -4.08 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.78 -3.72 (m, 1H), 2.96 -2.67 (m, 4H), 2.29-2.16 (m, 2H), 1.83-1.24 (m, 12H), 1.15 (d, J = 7.4 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.05 -0.82 (m, 4H), 0.74 -0.63 (m, 1H), 0.53 -0.42 (m, 1H).
[0431] Primer 25. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0432] Korak 1. Dobijanje primera 25: U suspenziju kiseline 18-7 (30.3 mg, 0.0532 mmol) i intermedijera A8 (28.3 mg, 0.0887 mmol) u MeCN (0.5 mL) dodat je DIPEA (60 μL, 0.34 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (32.4 mg, 0.0852 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 2.5 h i razblažena je sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim HCl (20 mL), i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2Cl2i adsorbovan na 2 g silika gel. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (15% do 55% aceton u heksanima) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 25 kao bela amorfna čvrsta supstanca (33.9 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.66 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C46H55F2N6O9S: 833.4; nađeno: 833.4.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.62 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.04 -5.66 (m, 1H), 5.54 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.50 -4.38 (m, 3H), 4.11 (dd, J = 11.8, 4.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.82 -3.71 (m, 1H), 2.98 -2.68 (m, 4H), 2.27 -2.11 (m, 2H), 1.96 -1.41 (m, 12H), 1.32 (dd, J = 9.6, 5.4 Hz, 1H), 1.15 (d, J = 7.4 Hz, 3H), 1.10 (s, 9H), 1.05 -0.64 (m, 6H), 0.51 -0.42 (m, 1H).
[0433] Primer 26. Dobijanje (1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-17-metoksi-12-metil-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-1H,11H-1,4:10,13-dimetanohinoksalino[2,3k][1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11-karboksamida.
Primer 26
[0434] Korak 1. Dobijanje 26-2: U rastvor 26-1 (311 mg, 0.710 mmol; pripremljenog slično 18-1 iz primer 18 zamenom intermedijera B2 za intermedijer B1 u koraku 1) u dioksanu (1.8 mL) dodat je 4 M HCl u dioksanu (1.8 mL, 7.2 mmol). Reakcija je mešana u toku 15.5 h na st i zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 26-2 kao bela amorfna čvrsta supstanca koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja u sledećem koraku. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C16H19ClN3O4: 352.1; nađeno: 352.2.
[0435] Koraci 2 i 3. Dobijanje diasteromerne smeše 26-3 i 26-4: Amin hidrohlorid 26-2 (0.710 mmol) je rastvoren zajedno sa smešom 1:1 smeše intermedijera D9 i D10 (266 mg, 0.788 mmol) i DIPEA (600 μL, 3.4 mmol) u DMF (4.5 mL). HATU (360 mg, 0.95 mmol) je dodat u jednoj prociji. Reakcija je mešana 1.75 h na st i razblažena je sa zasićenim vodenim NaHCO3(20 mL), vodom (10 mL) i EtOAc (30 mL). Faze su odvojene i organska faza je isprana dva puta sa smešom vode (30 mL) i zasićenog rastvora soli (5 mL). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena i koncentrovana do sirovog ostatka koji je prečišćen hromatografijom na silikagelu (10% do 30%EtOAc u heksanima) da bi se dobio bezbojni ostatak (380 mg; LCMS-ESI<+>(m/z):[M+H]<+>izrač. za C35H48ClN4O7: 671.3; nađeno: 671.6). Mešana heterogena smeša ovog ostatka, PdCl2(dppf)•CH2Cl2(35 mg, 0.043 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (156 mg, 1.16 mmol) u EtOH (7 mL) je poprskana sa argonom u toku nekoliko minuta. Trietilamin (170 μL, 1.2 mmol) je dodat i smeša je zagrejana na 70 °C u toku 55 min. Reakciona smeša je ohlađena na temperaturu okolin, razblažena sa EtOAc (40 mL), i isprana sa vodom (30 mL). Organske supsance su osušene iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđene i koncentrovana da bi se dobio ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 30% EtOAc u heksanima) da bi se dobila diasteromerna smeša 26-3 i 26-4 kao žuti ostatak (277 mg). LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H51N4O7: 663.4; nađeno: 663.3.
[0436] Korak 4. Dobijanje 26-5: Diasteromerna smeša 26-3 i 26-4 (277 mg, 0.419 mmol) je rastvorena u DCE (140 mL) i rastvor je poprskan sa Ar u toku 15 min. Zhan 1B katalizator (37 mg, 0.050 mmol, Strem) je dodat i dobijeni rastvor je mešan na 85 °C pod Ar u toku 1.5 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i prečišćena hromatografijom na silikagelu (20% do 50% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 26-5 kao amorfni ostatak (105 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H47N4O7: 635.3; nađeno: 635.3.
[0437] Koraci 5 i 6. Dobijanje 26-6: U rastvor 26-5 (105 mg, 0.165 mmol) u 1:1 EtOAc:EtOH (4 mL) dodat je Pd/C (10 mas % Pd, 43 mg). Reakcioni sud prečišćen dva puta sa H2i mešan je na st pod 1 atm H2u toku 1 h. Reakciona smeša je proceđena kroz sloj Celita i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak (106 mg; LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H49N4O7: 637.4; nađeno: 637.3). Ovaj ostatak je zatim rastvoren uTHF (0.8 mL). MeOH (0.4 mL), voda (0.4 mL) i LiOH•H2O (67 mg, 1.6 mmol) su dodati i smeša je mešana na 45 °C u toku 14.5 h. Reakcija je zaustavljena u kapima sa 1 N vodenim HCl (1.3 mL) i razblažena je sa CH2Cl2(30 mL) i 1 N vodenim HCl (20 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa CH2Cl2(30 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana da bi se dobio 26-6 kao ostatak (93.8 mg) koji je korišćen direktno u koraku 7. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H47N4O7: 623.3; nađeno: 623.3.
[0438] Korak 7. Dobijanje primera 26: U suspenziju kiseline 26-6 (93.8 mg, 0.151 mmol) i intermedijera A9 (58 mg, 0.20 mmol) u MeCN dodat je DIPEA (120 μL, 0.69 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (73.5 mg, 0.193 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 100 min i dodata je dodatna porcija intermedijera A9 (6 mg, 0.02 mmol). Posle dodatnih 30 min, dodati su dodatni intermedijer A9 (9 mg, 0.03 mmol), HATU (9 mg, 0.02 mmol) i DIPEA (10 μL, 0.06 mmol). Reakcija je mešana u toku dodatnih 50 min i razblažena je sa EtOAc (25 mL), 0.2 M vodenim HCl (20 mL) i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (25 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (25% do 40% acetona u heksanima) dobijen je amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 26 kao bela amorfna čvrsta supstanca (113 mg). Analitički HPLC RetVreme: 9.19 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H57F2N6O9S: 859.4; nađeno: 859.2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.02 (s, 1H), 7.80 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.21 -7.15 (m, 2H), 7.07 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.13 -5.79 (m, 1H), 5.63 (d, J=10.1 Hz, 1H), 5.50 -5.45 (m, 1H), 4.51 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.18-4.12 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.02 -2.77 (m, 3H), 2.66 -2.57 (m, 1H), 2.18 -0.90 (m, 36H).
[0439] Primer 27. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-16-metoksi-11-metil-5,8-diokso1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0440] Korak 1. Dobijanje 27-1: Amin hidrohlorid 26-2 (217 mg, 0.504 mmol), je tretiran sa BEP (207 mg, 0.756 mmol), Intermedijerom D5 (283 mg, 0.909 mmol), EtOAc (9 mL), NMP (1 mL) i DIPEA (0.44 mL, 2.5 mmol), zatim zagrejan do 50 °C. Posle 1.5 h, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc. Organski rastvor je ispran sukcesivno sa zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, zatim osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (9% to 40% EtOAc/Heks) da bi se dobio amid 27-1 (235 mg). LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H52ClN4O7: 687.35; nađeno: 688.13.
[0441] Korak 2. Dobijanje 27-2: Amid 27-1 (235 mg, 0.342 mmol) je tretiran sa kalijum viniltrifluoroboratom (69 mg, 0.513 mmol), Pd(dppf)Cl2•DCM (28 mg, 0.0342 mmol), EtOH (3.4 mL) i TEA (0.072 mL, 0.513 mmol), zatim zagrejan do refluksa. Posle 50 min, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa H2O i zasićenim rastvorom soli. Organska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (9% do 40% EtOAc/Heks) da bi se dobio vinil hinoksalin 27-2 (219 mg). LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C38H55N4O7: 679.41; nađeno: 679.49.
[0442] Koraci 3 i 4. Dobijanje 27-3: Vinil hinoksalin 27-2 (219 mg, 0.323 mmol) je suspendovan DCE (65 mL) i tretiran sa Zhan 1B katalizatorom (41 mg, 0.065 mmol, Strem). Suspenzija je deoksigenirna uvođenjem u mehurovima N2u toku 17 min, zatim zagrejana do refluksa u toku 90 min. Reakciona smeša je zatim proceđena preko Celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 50% EtOAc/Heks) da bi se dobio željeni makrocikl (165 mg; LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.38; nađeno: 651.40). Makrocilični proizvod iz koraka 3 je rastvoren u EtOH (10 mL) i EtOAc (2 mL) i tretiran sa 10 mas % Pd/C (95 mg). Vodonik iz balona je u mehurovima uvođen u suspenziju u toku 1 min i smeša je mešana pod H2(1 atm) u toku dodatna 1.5 h. Reakciona smeša je proceđena preko Celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni makrocikl 27-3 koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H53N4O7: 653.39; nađeno: 653.32.
[0443] Korak 5. Dobijanje 27-4: Sirovi proizvod iz koraka 4 je rastvoren u DCM i tretiran sa TMSOTf (0.23 mL, 1.3 mmol). Posle mešanja na st u toku 1 h 15 min, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u DCM i dodat pipetom u levak za odvajanje koji sadrži 1 M vodenog NaOH. Smeša je mućkana u toku 1 min, zatim zakišeljena do pH 1∼2 sa 10% vodenog HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa DCM i spojena organaska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobila karboksilna kiselina 27-4 (119 mg). LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C32H45N4O7: 597.33; nađeno: 597.40.
[0444] Korak 6. Dobijanje primera 27: Karboksilna kiselina 27-4 (105 mg, 0.177 mmol) i intermedijer A10 (65 mg, 0.212 mmol) su tretirani sa TBTU (68 mg, 0.212 mmol), DMAP (26 mg, 0.212 mmol), DCM (1.8 mL) i DIPEA (0.31 mL, 1.8 mmol). Reakciona smeša je mešana na st u toku 30 min, zatim je dodato još amina A10 (40 mg, 0.131 mmol) i reakciona smeša je zagrejana do refluksa. Posle dodatnih 1.25 h, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobio primer 27 (80 mg) u približno 90% čistoće kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 9.06 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 847.39; nađeno: 847.69.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.23 (s, 1H), 7.87 -7.72 (m, 1H), 7.31 -7.14 (m, 2H), 5.84 (td, J = 55.6, 6.5 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 22.6 Hz, 1H), 4.94 -4.81 (m, 1H), 4.37 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 4.29 -4.10 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.01 (ddd, J = 15.1, 9.9, 5.3 Hz, 1H), 2.84 (p, J = 7.4 Hz, 1H), 2.75 (ddd, J = 13.3, 10.2, 6.0 Hz, 1H), 2.03 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 1.97 -1.74 (m, 4H), 1.73 -1.55 (m, 6H), 1.53 (s, 3H), 1.48 -1.21 (m, 8H), 1.19 -1.02 (m, 14H), 0.99 -0.80 (m, 2H).
[0445] Primer 28. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-16-metoksi-11-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24aheksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10karboksamida.
[0446] Korak 1. Karboksilna kiselina 27-4 (20 mg, 0.034 mmol) i intermedijer A9 (35 mg, 0.12 mmol) su tretirani sa TBTU (22 mg, 0.067 mmol), DMAP (8 mg, 0.07 mmol), DCM (1 mL) i DIPEA (0.117 mL, 0.674 mmol). Reakciona smeša je mešana na st u toku 15 h, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobio primer 28 (22 mg) čistoće približno 90% kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.90 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H55F2N6O9S: 833.37; nađeno: 833.61.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.23 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 -7.10 (m, 2H), 5.86 (td, J = 55.8, 6.5 Hz, 1H), 5.61 (s, 1H), 4.54 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 4.36 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 4.28 -4.07 (m, 2H), 3.95 (d, J = 17.8 Hz, 3H), 3.08 -2.91 (m, 2H), 2.90 -2.79 (m, 1H), 2.73 (ddd, J = 13.3, 10.3, 6.0 Hz, 1H), 2.04 (s, 2H), 1.97 -1.74 (m, 4H), 1.64 (ddd, J = 18.7, 11.6, 4.0 Hz, 4H), 1.49 -1.19 (m, 11H), 1.180.94 (m, 14H), 0.94 -0.80 (m, 1H).
[0447] Primer 29. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-3,6-diokso-9-propil-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0448] Korak 1. Dobijanje 29-1: U rastvor intermedijera B5 (188 mg, 0.57 mmol) i intermedijera E1 (233 mg, 0.86 mmol) u MeCN (2.85 mL) dodat je cezijum karbonat (280 mg, 9.18 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 19 h, reakciona smeša je zatim proceđena kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovan in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio supstituisani hinoksalin 29-1 (240 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C26H37ClN3O6: 522.2; nađeno: 522.3.
[0449] Korak 2. Dobijanje 29-2: U rastvor 29-1 (240 mg, 0.46 mmol) u dioksanu (1 mL) dodata je 4 M hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 mL, 1 mmol) i reakcija je mešana na st. Posle 15 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo da bi se dobio amin hidrohlorid 29-2 (200 mg) kao beličasta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C21H29ClN3O4: 422.2; nađeno: 422.2.
[0450] Korak 3. Dobijanje 29-3: U rastvor 29-2 (200 mg, 0.46 mmol) i intermedijera D1 (170 mg, 0.51 mmol) u MeCN (2.3 mL) dodat je HATU (192 mg, 0.51 mmol) a zatim DIPEA (400 μL, 2.30 mmol) na st pod i u atmosferi argona. Posle 1.5 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio amid 29-3 (67 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H52ClN4O7: 687.3; nađeno: 687.5.
[0451] Korak 4. Dobijanje 29-4: U rastvor 29-3 (67 mg, 98 μmol), TEA (20 μL, 150 μmol) i kalijum viniltrifluoroborat (19.7 mg, 150 μmol) u EtOH (500 μL) dodat je PdCl2(dppf) (8 mg, 9.8 μmol). Reakciona smeša je deoksigenirana sa argonom u toku 10 min i zagrejana je na 78 °C. Posle 40 min, omogućeno je da reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio vinil hinoksalin 29-4 (40.2 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H55N4O7: 679.4; nađeno: 679.6.
[0452] Korak 5. Dobijanje 29-5: U rastvor 29-4 (40 mg, 59 μmol) u DCE (11.8 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (4 mg, 6 μmol, Strem) i reakciona smeša je degasirana u toku 10 minuta sa argonom. Reakciona smeša je zatim zagrejana do 100 °C. Posle 1 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio makrocikl 29-5 (31 mg) kao svetlo žuto ulje. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.4; nađeno: 651.5.
[0453] Korak 6. Dobijanje 29-6: U rastvor makrocikla 29-5 (31 mg, 47 μmol) u etanolu (500 μL) dodat je Pd/C (10 mas. %, 5 μg, 5 μmol) na st u atmosferi argona. Iz reakcionog suda je izvađen vazduh i ponovo je napunjen sa gasovitim vodonikom pri 1 atm (3 x) i reakciona smeša je intenzivno mešana na st. Posle 1 h, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (10 mL) i proceđena je kroz sloj Celita ispiranjem sa etil acetatom (3 x 5 mL). Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio makrocikl 29-6 (31 mg), koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C36H53N4O7: 653.4; nađeno: 653.5.
[0454] Korak 7. Dobijanje 29-7: U rastvor 29-6 (31 mg, 47 μmol) u DCM (0.5 mL) dodat je TMSOTf (44 μL, 0.25 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 25 min, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i azeotropski je osušena iz toluena (2 x 2 mL) da bi se dobila karboksilna kiselina 29-7 (35 mg) kao žuto ulje, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H45N4O7: 597.3; nađeno: 597.4.
[0455] Korak 8. Dobijanje primera 29: U rastvor 29-7 (35 mg, 49 μmol) i intermedijera A10 (22 mg, 74 μmol) u MeCN (245 μL) dodat je HATU (28 mg, 74 μmol) a zatim DIPEA (43 μL, 250 μmol) na st u atmosferi argona. Posle 3 h, reakciona smeša koncentrovana in vacuo, je prečišćena sa preparativnom HPLC (Gemini 5u C18 110A kolona, 5-100% MeCN/H2O, modifikator 0.1% trifluorosirćetna kiselina) i liofilizirana da bi se dobio primer 29 (22.3 mg) kao beli prah TFA soli. Analitički HPLC RetVreme: 8.81 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H56F2N6O9S: 847.4; nađeno: 847.5.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.83 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.97 (td, JH-F= 55 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 5.84 (br s, 1H), 5.41 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.66 -4.34 (m, 3H), 4.13 (app d, J = 11.8 Hz, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.78 -3.71 (m, 1H), 3.09 -2.65 (m, 5H), 2.14 -2.04 (m, 1H), 1.87 -1.34 (m, 8H), 1.52 (s, 3H), 1.12 (s, 9H), 1.08 -0.84 (m, 10H), 0.76 -0.62 (m, 1H), 0.50 (dd, J = 12.6, 6.6 Hz, 1H).
[0456] Primer 30. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-9-(2-metilpropil)-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0457] Korak 1. Dobijanje 30-1: Smeša intermedijera B6 (139 mg, 0.405 mmol), intermedijera E1 (170 mg, 0.625 mmol), i cezijum karbonata (203 mg, 0.623 mmol) u 3.3 mL acetonitrila je mešana na sobnoj temperaturi pod argonom u toku noći. Reakciona smeša je proceđena preko Celita, isprana sa etil acetatom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-30% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 30-1 (170 mg) kao bisti film. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C27H39ClN3O6: 536.24; nađeno: 536.31.
[0458] Korak 2. Dobijanje 30-2: Rastvor hidrogen hlorida u dioksanu (4.0 M, 0.16 mL, 0.64 mmol) dodat je u rastvor 30-1 (168 mg, 0.314 mmol) u 3.3 mL dioksana na sobnoj temperaturi. Posle trideset minuta, dodatna 4 ekvivalenta HCl dodato je i smeša je mešana u toku noći. Zatim su dodati dodatna 25 ekvivalenata HCl. Posle trideset minuta, dodatnih 19 ekvivalenata HCl je dodato. Posle jednog sata, dodatnih 29 ekvivalenata HCl je dodato. Posle trideset minuta, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 30-2 (148 mg, 85% čistoće), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C22H31ClN3O4: 436.19; nađeno: 436.25.
[0459] Korak 3. Dobijanje 30-3: HATU (144 mg, 0.379 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.28 mL, 1.58 mmol) su dodati u smešu 30-2 (148 mg, 0.315 mmol) i intermedijer D1 (99 mg, 0.348 mmol) u 3.5 mL DMF pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa etil acetatom (3 x). Spojena organska supstanca je isprana sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušena (MgSO4), proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 30-3 (136 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H54ClN4O7: 701.36; nađeno: 701.47.
[0460] Korak 4. Dobijanje 30-4: Pd(dppf)2Cl2•CH2Cl2(35 mg, 0.043 mmol) dodat je u degasiranu smešu 30-3 (135 mg, 0.193 mmol), kalijum viniltrifluoroborata (41 mg, 0.306 mmol), i trietilamina (0.040 mL, 0.289 mmol) u 2.1 mL etanola na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrejana na 78 °C pod argonom u toku 45 minuta. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa etil acetate (tri puta). Spojena organska supstanca je isprana sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušena (MgSO4), proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 30-4 (133 mg), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C39H57N4O7: 693.41; nađeno: 693.48.
[0461] Korak 5. Dobijanje 30-5: Smeša 30-4 (133 mg, 0.192 mmol) i Zhan 1B katalizatora (16 mg, 0.022 mmol, Strem) u 38 mL DCE je deoksigenirana pod argonom u toku 25 minuta. Smeša je zatim zagrejana na 95 °C u toku 50 minuta. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetate u heksanima) da bi se dobio 30-5 (70 mg) svetlo žuti film. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H53N4O7: 665.38; nađeno: 665.50.
[0462] Korak 6. Dobijanje 30-6: Paladijum na ugljeniku (10 mas % Pd, 22 mg, 0.0208 mmol) je dodat u rastvor 30-5 (69 mg, 0.104 mmol) u 3 mL etanol. Smeša je zatim mešana u atmosferi vodonika u toku 1 sata i zatim je proceđena iznad Celita, ispiranjem sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 30-6 (64 mg) kao svetlo braon čvrsti film, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H55N4O7: 667.40; nađeno: 667.43.
[0463] Korak 7. Dobijanje 30-7: TMSOTf (0.050 mL, 0.274 mmol) dodat je u kapima u rastvor 30-6 (30 mg, 0.045 mmol) u 1.2 mL dihlorometana pod argonom na sobnoj temperaturi. Posle 45 minuta, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni film je sakupljen sa 5 mL toluena i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ovaj postupak je ponovljen i drugi put da bi se dobio 30-7 (27 mg), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H47N4O7: 611.34; nađeno: 611.41.
[0464] Korak 8. Dobijanje primera 30: HATU (28 mg, 0.074 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.050 mL, 0.281 mmol) su dodati u smešu 30-7 (27 mg, 0.045 mmol) i intermedijera A10 (22 mg, 0.072 mmol) u 2.2 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa etil acetate (3 x). Spojena organska supstanca je isprana sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušena (MgSO4), proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetat u heksanima) i HPLC sa reverznom fazom (15-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobila so trifluorosirćetne kiseline iz primera 30 (18 mg) kao svetlo žuta čvrsta supstanca, posle liofilzacije. Analitički HPLC RetVreme: 8.96 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H59F2N6O9S: 861.40; nađeno: 861.30.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.17 (s, 1H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.81 (td, JH-F= 56 Hz, J = 7.6 Hz, 1H); 5.77 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.39 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.16 (dd, J = 11.8, 4 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.79-3.71 (m, 1H), 2.98-2.90 (m, 1H), 2.84 (dd, J = 12.6, 4.8 Hz, 1H), 2.79-2.72 (m, 1H), 2.06-1.91 (m, 3H), 1.77 (m, 3H), 1.64-1.44 (m, 6H), 1.51 (s, 3H), 1.44-1.32 (m, 3H), 1.15-1.07 (m, 1H), 1.10 (s, 9H), 1.06-0.96 (m, 3H), 1.04-1.01 (m, 6H), 0.93-0.89 (m, 2H), 0.79-0.68 (m, 1H), 0.52-0.47 (m, 1H).
[0465] Primer 31. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-ciklopropil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 31
[0466] Korak 1. Dobijanje 31-1: Neprečišćeni uzorak intermedijera B3 je tretiran sa intermedijerom E1 (217 mg, 0.797 mmol), MeCN (5.7 mL) i Cs2CO3(371 mg, 1.14 mmol). Posle mešanja na st u toku 17 h, reakciona smeša je proceđena preko Celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (20% do 40% EtOAc/Heks) da bi se dobio hinoksalin 31-1 (143 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M-Boc+2H]<+>izrač. za C18H21ClN3O4: 378.12; nađeno: 378.59.
[0467] Korak 2. Dobijanje 31-2: Hinoksalin 31-1 (143 mg, 0.299 mmol) je rastvoren u DCM (10 mL) i tretiran sa HCl (4.0 M u dioksanu, 5 mL, 20.0 mmol). Posle mešanja u toku 2 h na st, reakciona smeša je koncentrovana i sirovi 31-2 je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja.
[0468] Korak 3. Dobijanje 31-3: Sirovi amin hidrohlorid 31-2 je tretiran sa BEP (115 mg, 0.419 mmol), intermedijerom D1 (120 mg, 0.423 mmol), EtOAc (9 mL), NMP (1 mL) i DIPEA (0.37 mL, 2.1 mmol), zatim zagrejan do 50 °C. Posle 1.5 h, reakciona smeša je razblažena sa Et2O. Organski rastvor je ispran sukcesivno sa zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, zatim osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 30% EtOAc/Heks) da bi se dobio amid 31-3 (166 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H44ClN4O7: 643.29; nađeno: 643.48.
[0469] Korak 4. Dobijanje 31-4: Amid 31-3 (166 mg, 0.258 mmol) je tretiran sa kalijum viniltrifluoroboratom (52 mg, 0.387 mmol), Pd(dppf)Cl2•DCM (21 mg, 0.0258 mmol), EtOH (2.6 mL) i TEA (0.054 mL), zatim zagrejan do refluksa. Posle 50 min, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa H2O i zasićenim rastvorom soli. Organska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 40% EtOAc/Heks) da bi se dobio vinil hinoksalin 31-4 (145 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H47N4O7: 635.34; nađeno: 635.58.
[0470] Koraci 5 i 6. Dobijanje 31-5: Vinil hinoksalin 31-4 (145 mg, 0.228 mmol) je suspendovan DCE (46 mL) i tretiran sa Zhan 1B katalizatorom (33 mg, 0.0456 mmol, Strem). Suspenzija je deoksigenizovana uvođenjem u mehurovima N2u toku 22 min, zatim zagrejana do refluksa u toku 50 min. Reakciona smeša je zatim proceđena preko Celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (25% do 35% EtOAc/Heks) da bi se dobio željeni makrocikl (54 mg; LCMS-ESI<+>(m/z): [M H]<+>izrač. za C33H43N4O7: 607.31; nađeno: 607.67). Makrociklični proizvod koraka 5 je rastvoren u EtOH (10 mL) i tretiran sa 10% Pd/C (45 mg). Vodonk iz balona je uvođen u mehurovima u suspenziju u toku 1 min i hidrogenizacija (1 atm) je nastavljena u toku dodatnih 1.5 h. Reakciona smeša je proceđena preko Celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni makrocikl 31-5 koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H45N4O7: 609.33; nađeno: 609.95.
[0471] Korak 7. Dobijanje 31-6: Sirovi proizvod 31-5 je rastvoren u THF i tretiran sa LiOH (1.0 M u H2O, 5 mL, 5 mmol). Posle mešanja na st u toku 3 d, reakciona smeša je zagrejana na refluku u toku 20 h. Smeša je zatim sipana u H2O i zakišeljena do pH ∼1-2 sa 10% HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa DCM. Spojena organska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu (80% do 100% EtOAc/Heks) da bi se dobio karboksilna kiselina 31-6 (24 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M H]<+>izrač. za C32H43N4O7: 595.31; nađeno: 595.12.
[0472] Korak 8. Dobijanje primera 31: Karboksilna kiselina 31-6 (24 mg, 0.040 mmol) i intermedijer A10 (25 mg, 0.081 mmol) su tretirani sa TBTU (23 mg, 0.081 mmol), DMAP (10 mg, 0.081 mmol), DCM (2 mL) i DIPEA (0.070 mL, 0.40 mmol). Reakciona smeša je mešana na st u toku 15 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobio primer 31 (13 mg, 34%) čistoće približno 90% kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.92 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H55F2N6O9S: 845.37; nađeno: 845.67.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.13 (s, 1H), 7.79 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 9.1, 2.7 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.055.65 (m, 2H), 4.55 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 4.27 (dd, J = 12.0, 3.7 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.78 (dd, J = 6.8, 2.8 Hz, 1H), 2.99 -2.86 (m, 1H), 2.80 (td, J = 13.2, 4.1 Hz, 1H), 1.98 (d, J = 28.8 Hz, 2H), 1.92 -1.67 (m, 4H), 1.65 -1.41 (m, 10H), 1.33 (d, J = 27.7 Hz, 3H), 1.20 -1.06 (m, 9H), 1.04 -0.84 (m, 6H), 0.82 -0.62 (m, 3H), 0.61 -0.41 (m, 2H), 0.06 (dd, J = 9.2, 4.9 Hz, 1H).
[0473] Primer 32. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-9-benzil-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0474] Korak 1. Dobijanje 32-1: U rastvor intermedijera B7 (390 mg, 1.00 mmol) i intermedijera E1 (272 mg, 1.00 mmol) u MeCN (5 mL) dodat je cezijum karbonat (390 mg, 1.00 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 24 h, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (50 mL). Dobijena smeša je isprana sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušena je iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovana in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio hinoksalin 32-1 (550 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C30H37ClN3O6: 570.2; nađeno: 570.2.
[0475] Korak 2. Dobijanje 32-2: U rastvor 32-1 (549 mg, 0.96 mmol) u dioksanu (2 mL) dodat je 4 M hlorovodonična kiselina u dioksanu (2 mL, 1 mmol) i reakcija je mešana na st. Posle 24 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo da bi se dobio amin hidrohlorid 32-2 (461 mg) kao beličasta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C25H29ClN3O4: 470.2; nađeno: 470.2.
[0476] Korak 3. Dobijanje 32-3: U rastvor 32-2 (461 mg, 0.96 mmol) i intermedijera D1 (369 mg, 1.10 mmol) u MeCN (5 mL) dodat je HATU (418 mg, 1.10 mmol) a zatim DIPEA (869 μL, 5.00 mmol) na st pod i u atmosferi argona. Posle 24 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio 32-3 (202.6 mg) kao bezbojno ulje. LCMSESI+ (m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H52ClN4O7: 735.3; nađeno: 735.4.
[0477] Korak 4. Dobijanje 32-4: U rastvor 32-3 (202 mg, 276 μmol), TEA (56 μL, 414 μmol) i kalijum viniltrifluoroborata (56 mg, 414 μmol) u EtOH (2.76 mL) dodat je PdCl2(dppf) (22.5 mg, 27.6 μmol). Reakciona smeša je degasirana sa argonom u toku 10 min i zagrejana je na 78 °C. Posle 1 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio 32-4 (163 mg) kao žuto ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H55N4O7: 727.4; nađeno: 727.5.
[0478] Korak 5. Dobijanje 32-5: U rastvor 32-4 (163 mg, 220 μmol) u DCE (44 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (16 mg, 22 μmol, Strem) i reakciona smeša je degasirana u toku 10 minuta sa argonom. Reakciona smeša je zatim zagrejana na 100 °C. Posle 45 min, omogućeno je da reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio 32-5 (125 mg) kao svetlo žuto ulje. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C40H51N4O7: 699.4; nađeno: 699.4.
[0479] Korak 6. Dobijanje 32-6: U rastvor makrocikla 32-5 (124 mg, 178 μmol) u etanolu (890 μL) dodat je Pd/C (10 mas % Pd, 19 mg, 18 μmol) na st u atmosferi argona. Iz reakcionog suda je uklonjen vazduh i ponovo je napunjen sa gasovitim vodonikom (3 x) i reakciona smeša je intenzivno mešana na st pod 1 atm H2. Posle 2.5 h, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (5 mL) i proceđena je kroz sloj Celita uz ispiranje etil acetatom (3 x 5 mL). Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio 32-6 (139 mg), koji je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C40H53N4O7: 701.4; nađeno: 701.5.
[0480] Koraci 7 i 8. Dobijanje primera 32: U rastvor 32-6 (124 mg, 178 μmol) u DCM (3 mL) dodat je TFA (2 mL) na st u atmosferi argona. Posle 3 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i azeotropski je osušena iz toluena (2 x 2 mL) da bi se dobila željena karboksilna kiselina kao žuto ulje, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. (126 mg; LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C36H45N4O7: 645.3; nađeno: 645.4). U rastvor ove karboksilne kiseline (120 mg, 178 μmol) i intermedijera A10 (119 mg, 392 μmol) u MeCN (1 mL) dodat je HATU (151 mg, 392 μmol) a zatim DIPEA (155 μL, 890 μmol) na st u atmosferi argona. Posle 30 min, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene, ponovo prečišćene sa preparativnom HPLC (Gemini 5u C18 110Å kolona, 5-100% MeCN/H2O, modifikator 0.1% trifluorosirćetna kiselina) i liofilizovane su da bi se dobila TFA so primera 32 (23 mg) kao beli prah. Analitički HPLC RetVreme: 8.81 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C45H57F2N6O9S: 895.4; nađeno: 895.6.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.24 (s, 1H), 7.73 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.47 -7.27 (m, 4H), 7.21 -7.12 (m, 1H), 6.65 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 5.83 (td, JH-F= 55 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 5.77 (br s, 1H), 4.63 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 4.50 -4.28 (m, 3H), 3.93 (s, 2H), 3.79 -3.71 (m, 1H), 3.112.99 (m, 1H), 2.97 -2.85 (m, 1H), 2.82 2.61 (m, 3H), 1.92 (br s, 2H), 1.82 -1.70 (m, 2H), 1.63 -1.44 (m, 4H), 1.52 (s, 3H), 1.15 (s, 9H), 1.04 (br s, 2H), 1.02 -0.96 (m, 2H), 0.95 -0.88 (m, 4H), 0.78 -0.66 (m, 1H), 0.56 -0.46 (m, 1H).
[0481] Primer 33. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1S,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononad cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0482] Koraci 1 i 2. Dobijanje diasteromerne smeše 33-1 i 33-2: Hinoksalin 18-2 (220 mg, 0.56 mmol) je rastvoren zajedno sa smešom 1:1 diastereomernih intermedijera D12 i D13 (208 mg, 0.643 mmol) u MeCN (5 mL). DIPEA (280 μL, 1.6 mmol) i HATU (360 mg, 0.95 mmol) su dodati, i reakcija je mešana u toku 1.25 h na st. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (30 mL), zasićenim vodenim NaHCO3(15 mL), H2O (10 mL), i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena i koncentrovana do sirovog ostatka koji je rastvoren u CH2Cl2i adsorbovan na silikagelu (5 g). Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 30% EtOAc u heksanima) dobijena je bela pena (352 mg; LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H52ClN4O7: 699.4; nađeno: 699.1). Mešana heterogena smeša ostatka, PdCl2(dppf)•CH2Cl2(30.7 mg, 0.0376 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (135 mg, 1.01 mmol) u EtOH (5 mL) je poprskana sa argonom u toku nekoliko minuta. Trietilamin (160 μL, 1.1 mmol) je dodat i smeša je zagrejana na 75 °C u toku 1 h. Reakciona smeša je ohlađena na temperaturu okloline i razblažena je sa EtOAc (30 mL), H2O (15 mL) i zasićenim rastvorom soli (15 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Organske susptance su osušene iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđene i koncentrovane da bi se dobio sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2Cl2i adsorbovan na silikagelu (3 g). Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 40% EtOAc u heksanima) dobijena je nerazdvojiva smeša 33-1 i 33-2 kao žuti ostatak (258 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H55N4O7: 691.4; nađeno: 691.7.
[0483] Korak 3: Dobijanje 33-3: Diasteromerna smeša 33-1 i 33-2 (258 mg, 0.373 mmol) je rastvorena u DCE (125 mL) i rastvor je poprskan sa Ar u toku 10 min. Zhan 1B katalizator (41 mg, 0.056 mmol, Strem) dodat je kao rastvor u DCE (3.3 mL) i dobijeni rastvor je mešan na 85 °C pod Ar u toku 105 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana u 5 g silikagela i prečišćena je hromatografijom na silikagelu (0% do 25% EtOAc u heksanima) da bi se dobio makrocikl 33-3 kao amorfni ostatak (81.9 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H51N4O7: 663.4; nađeno: 663.3.
[0484] Koraci 4 i 5: Dobijanje 33-4: U rastvor 33-3 (81.9 mg, 0.124 mmol) u 1:1 EtOAc:EtOH (4 mL) dodat je Pd/C (10 mas % Pd, 19 mg). Reakcioni sud je pročišćen dva puta sa H2i mešan je na st pod 1 atm H2u toku 2.5 h. Reakciona smeša je proceđena kroz sloj Celita i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2(1.2 mL) i dodat je TMSOTf (90 μL, 0.50 mmol). Smeša je mešana na st u toku 4.5 h. Reakcija je zatim koncentrovana in vacuo i rastvorena u CH2Cl2(5 mL).0.2 M vodeni NaOH (5 mL) dodat je i bifazana smeša je mešana na st u toku 5 min. Smeša je zatim zakišeljena sa 1 M vodenim HCl (20 mL) i razblažena je sa CH2Cl2(20 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa CH2Cl2(2 x 20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio 33-4 kao sirovi ostatak (76.1 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H45N4O7: 609.3; nađeno: 608.9.
[0485] Korak 6: Dobijanje primera 33: U suspenziju kiseline 33-4 (43 mg, 0.072 mmol) i intermedijera A9 (40.9 mg, 0.14 mmol) u MeCN (800 μL) dodat je DIPEA (100 μL, 0.57 mmol). HATU (37 mg, 0.097 mmol) je dodat u dobijeni rastvor, i reakcija je mešana na st u toku 15 h. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (20 mL), 0.2 M vodenim HCl (10 mL) i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2i koncentrovana je na 2 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (15% do 55% acetona u heksanima) dalo je amorfan ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 33 kao bela amorfna čvrsta supstanca (29.6 mg). Analitički HPLC RetVreme: 9.07 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H55F2N6O9S: 845.4; nađeno: 845.2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.21 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.21 -5.76 (m, 1H), 5.65 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.29 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 4.99 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.47 -4.29 (m, 4H), 4.16 -4.09 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.99 -2.85 (m, 2H), 2.80 -2.64 (m, 2H), 2.24 -2.16 (m, 1H), 2.13 -2.05 (m, 1H), 2.01 -0.95 (m, 29H), 0.56 -0.45 (m, 1H), 0.45 -0.35 (m, 1H).
[0486] Primer 34. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 34
[0487] Primer 34 je pripremljen na sličan način kao Primer 17, zamenom intermedijera A3 za intermedijer A10 u Koraku 7. Primer 34 je izolovan (5.7 mg) u približne čistoće 95%. Analitički HPLC RetVreme: 8.81 min. LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H55F2N6O9S: 833.4; nađeno: 833.25.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.027 (br s, 1H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.32 (br s, 1H), 5.92 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.42 -4.33 (m, 3H), 4.08 (dd, J = 11.6, 4.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.65 (m, 1H), 2.93 (m, 1H), 2.51 (m, 2H), 2.02 (m, 1H), 1.86 -1.40 (m, 11H) 1.34 -1.14 (m, 7H), 1.09 (s, 9H), 1.10 -0.82 (m, 6H), 0.72 (m, 1H), 0.48 (m, 1H).
[0488] Primer 35. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 35
[0489] Primer 35 je pripremljen na sličan način kao Primer 17, zamenom intermedijera A8 za intermedijer A10 u koraku 7. Primer 35 je izolovan (12.8 mg) u približnoj čistoći od 90%. Analitički HPLC RetVreme: 8.78 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H55F4N6O9S: 883.4; nađeno: 883.2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.69 (br s, 1H), 7.98 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.53 (br s, 1H), 5.91 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.84 (tt, JH-F= 56 Hz, J = 3.6 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.43 (m, 2H), 4.34 (ap d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 11.6, 4.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.99 3.94 (m, 1H), 3.68 (m, 1H), 2.58 -2.52 (m, 3H), 2.20 (m, 2H), 1.82 -1.58 (m, 7H) 1.54 -1.40 (m, 5H), 1.36 -1.18 (m, 6H), 1.09 (s, 9H), 1.10 -1.00 (m, 1H), 0.85 (m, 2H), 0.69 (m, 1H), 0.49 (m, 1H).
[0490] Primer 36. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,21aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1a,3,4,5,6,9,10,17b,18,18a,19,20,21,21atetradekahidro-1H,8H-7,10-metanodiciklopropa[13,14:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 36
[0491] Korak 1. Dobijanje 36-1: U rastvor trimetilsulfoksonium jodida (72 mg, 0.32 mmol) u DMSO/THF (1:1, 2 mL) dodat je natrijum hidrid (60%, 12 mg, 0.32 mmol) i mešan ja na st u toku 2 h. Makrocikl 1-5 (103 mg, 0.16 mmol) je dodat u kapima u THF (3 mL). Smeša je zagrejana na 65 °C i mešana u toku 16 h. Posle hlađenja na st, smeša je razblažena sa EtOAc/H2O, ekstrahovana EtOAc, osušena iznad anhidrovanog MgSO4, i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-25% EtOAc/heksanes) da bi se dobio 36-1 (27 mg) kao ostatak. LCMSESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.38; nađeno: 651.52.
[0492] Korak 2. Dobijanje 36-2: U rastvor 36-1 (26 mg, 0.04 mmol) u DCM (1 mL) dodat je TMSOTf (0.036 mL, 0.2 mmol) i mešan na st u toku 2 h. Reakcija je pipetirana u mešani 1 N NaOH (2 mL). Posle 10 min, smeša je razblažena sa DCM i zakišeljena do pH 3 sa 1 N vodenim HCl. Sledela je ekstrakcija vodenog sloja sa DCM, spojena organska supstanca je osušeni iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-10% EtOAc/MeOH) da bi se dobio 36-2 (24 mg) kao ostatak koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C32H43N4O7: 595.31; nađeno: 595.43.
[0493] Korak 3. Dobijanje primera 36: U rastvor 36-2 (24 mg, 0.041 mmol), intermedijera A10 (16 mg, 0.053 mmol), TBTU (19 mg, 0.06 mmol) i DMAP (8 mg, 0.06 mmol) u DCM (2 mL) dodat je DIPEA (0.021 mL, 0.12 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 16 h. Dodati su dodatni intermedijer A10 (16 mg, 0.053 mmol), TBTU (19 mg, 0.06 mmol), DMAP (8 mg, 0.06 mmol), i DIPEA (0.021 mL, 0.12 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 4 h. Reakcija je zaustavljena sa vodom, razblažena sa EtOAc, isprana sa zas. vodenim NaHCO3, rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini, 45-85% MeCN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovana da bi se dobio primer 36 (3 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 9.06 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H55F2N6O9S: 845.37; nađeno: 845.43.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.31 (s, 1H), 7.72 (d, J = 10 Hz, 1H), 7.20 -7.17 (m, 2H), 5.60 -5.82 (m, 2H), 5.51 (s, 1H), 4.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.31 (s, 1H), 4.26 -4.22 (dd, J = 11.6, 4 Hz , 1H), 3.94 (s, 3H), 3.78 (m, 1H),2.60 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.68 (m, 3H), 1.59 (m, 2H), 1.54 -1.15 (m, 11H), 1.09 (s, 9H), 0.95 -0.86 (m, 8H), 0.47 (m, 1H).
[0494] Primer 37. Dobijanje (1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-12-etil-17-metoksi-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-1H,11H-1,4:10,13-dimetanohinoksalino[2,3k][1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11-karboksamida.
[0495] Korak 1. Dobijanje primera 37: U rastvor 13-6 (76 mg, 0.12 mmol), intermedijer A10 (44 mg, 0.14 mmol), HATU (55 mg, 0.14 mmol) i DMAP (21 mg, 0.18 mmol) u DMF (2 mL) dodat je DIPEA (0.11 mL, 0.6 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 16 h. Dodatni intermedijer A10 (44 mg, 0.14 mmol), HATU (55 mg, 0.14 mmol), DMAP (21 mg, 0.18 mmol), praćen sa DIPEA (0.11 mL, 0.6 mmol) je dodat i reakcija je mešana na 40 °C u toku 50 h. Reakcija je zaustavljena sa vodom, razblažena sa EtOAc, isprana sa zas. vodenim NaHCO3, koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini, 45-85% MeCN/H2O 0.1% TFA) i lofilizovan da bi se dobio primer 37 (30 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 9.44 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C44H61F2N6O9S: 887.42; nađeno: 887.50.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.24 (s, 1H), 7.76 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.12 (m, 1H), 5.95 -5.66 (m, 2H), 5.43 (s, 1H), 4.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.20 -4.10 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.94 -2.88 (m, 1H), 2.73 -2.63 (m, 2H), 2.11 (br, 2H), 2.02 -0.83 (m, 41H).
[0496] Primer 38. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-5-(1-metilciklopentil)-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida
Primer 38
[0497] Korak 1. Dobijanje 38-1: Amin 18-2 (192 mg, 0.487 mmol) je tretiran sa BEP (246 mg, 0.898 mmol), intermedijerom D14 (278 mg, 0.898 mmol), EtOAc (9 mL), NMP (1 mL) i DIPEA (0.42 mL, 2.4 mmol), zatim zagrejan do 50 °C. Posle 1 h, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc. Organski rastvor je ispran uzastopno sa zas. vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, zatim osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 35% EtOAc/Heks) da bi se dobio amid 38-1 (264 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H50ClN4O7: 685.34; nađeno: 685.82.
[0498] Korak 2. Dobijanje 38-2: Amid 38-1 (264 mg, 0.385 mmol) je tretiran sa kalijum viniltrifluoroboratom (82 mg, 0.615 mmol), Pd(dppf)Cl2•DCM (33 mg, 0.041 mmol), EtOH (4.0 mL) i TEA (0.086 mL, 0.62 mmol), zatim je zagrejan do refluksa. Posle 55 min, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa H2O i zasićenim rastvorom soli. Organske supstance su osušene iznad anhidrovanog MgSO4, proceđene i koncentrovane in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 30% EtOAc/Heks) da bi se dobio vinil hinoksalin 38-2 (168 mg). LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C38H53N4O7: 677.39; nađeno: 677.38.
[0499] Koraci 3 i 4. Dobijanje 38-3: Vinil hinoksalin 38-2 (225 mg, 0.332 mmol) je suspendovan DCE (66 mL) i tretiran sa Zhan 1B katalizatorom (42 mg, 0.067 mmol, Strem). Suspenzija je degasirana uvođenjem mehurova N2u toku 28 min, zatim zagrejana do refluksa u toku 90 min. Reakciona smeša je zatim proceđena preko Celita i koncentrovana in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15% do 30% EtOAc/Heks) da bi se dobio željeni makrocikl (168 mg; LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H49N4O7: 649.36; nađeno: 649.33). Makrocikl je rastvoren u EtOH (25 mL) i EtOAc (5 mL) i tretiran sa Pd/C (10 mas% Pd, 95 mg). Vodonik iz balona je uvođen u mehurićima u suspenziju u toku 1 min reakcija je mešana u atmosferi H2u toku dodatnih 1.5 h. Pošto je završeno, reakciona smeša je proceđena preko Celita i koncentrovana in vacuo da bi se dobio željeni makrocikl 38-3 koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.38; nađeno: 651.42.
[0500] Korak 5. Dobijanje 38-4: Neprečišćeni 38-3 iz ranijeg koraka je rastvoren u DCM (10 mL) i tretiran sa TMSOTf (0.23 mL, 1.3 mmol). Posle mešanja na st u toku 1 h 15 min, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Ostatak je rastvoren u DCM i pipetiran u 1 M vodeni NaOH. Smeša je mućkana u toku 1 min, zatim zakišeljena do pH ∼ 1-2 sa 10% vodenim HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa DCM i spojena organska susptanca je osušena iznad anhidrovanog MgSO4, proceđena i koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0% do 20% MeOH/EtOAc) da bi se dobila karboksilna kiselina 38-4 (131 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H43N4O7: 595.31; nađeno: 595.29.
[0501] Korak 6. Dobijanje primera 38: Karboksilna kiselina 38-4 (131 mg, 0.220 mmol) i intermedijer A10 (81 mg, 0.264 mmol) su tretirani sa TBTU (85 mg, 0.264 mmol), DMAP (32 mg, 0.264 mmol), DCM (2.6 mL) i DIPEA (0.38 mL, 2.2 mmol). Reakciona smeša je mešana na st u toku 14 h, zatim koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen sa HPLC da bi se dobio primer 38 (74 mg) približno čistoće 90% kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.93 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C41H55F2N6O9S: 845.37; nađeno: 845.57.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.12 (s, 1H), 7.77 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 9.0 Hz, 2.7 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.81 (td, J = 55.9, 6.6 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.40 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 11.9 Hz, 3.9 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.74 (m, 1H), 2.97-2.90 (m, 1H), 2.85-2.75 (m, 2H), 2.01 (m, 2H), 1.85-1.41 (m, 21H), 1.12 (s, 3H), 1.08 (d, J = 7.4 Hz, 3H), 0.96 (m, 2H), 0.91 (t, J = 4.3 Hz, 2H), 0.70 (m, 1H), 0.48 (m, 1H).
[0502] Primer 39. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0503] Korak 1. Dobijanje 39-1: Hinoksalin etar 1-1 (588.7 mg, 1.159 mmol) je rastvoren u TFA (5 mL). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 h. TFA je uklonjen in vacuo da bi se dobila TFA so 39-1 (631.2 mg) kao bezbojni prah. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C16H19ClN3O4: 352.1; nađeno: 352.1.
[0504] Korak 2. Dobijanje 39-2: TFA so 39-1 (631.2 mg, 1.159 mmol) je rastvorena u CH2Cl2/MeOH (3 mL/3 mL). U rastvor je dodat rastvor TMSCHN2(2 M heksan, 3 mL, 5.177 mmol) na st. Rastvor je mešan u toku 30 min da bi se dobila suspenzija koja je proceđena kroz levak od sinterovnog stakla da bi se uklonila čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silikagelu (100% etil acetat) da bi se dobio metil ester 39-2 (213.0 mg) kao bezbojni kristali. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C17H21ClN3O4: 366.1; nađeno: 366.1.
[0505] Korak 3. Dobijanje 39-3: Intermedijer D7 (191.2 mg, 0.587 mmol) i metil ester 39-2 (414.1 mg, 1.132 mmol) su tretirani sa HATU (860.0 mg, 2.264 mmol) i DIPEA (0.59 mL, 3.396 mmol) u DMF (8 mL) na st u toku 4 h. Reakcija je zaustavljena sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (50 mL tri puta).
Spojena organska supstanca je isprana sa rastvorom soli (50 mL) i osušena iznad anhidrovanog Na2SO4. Posle uklanjanja sredstva za sušenje ceđenjem, rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (20% etil acetat u heksanima) da bi se dobio željeni amid 39-3 (573.9 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+Na]<+>izrač. za C33H49ClN4NaO7: 695.3; nađeno: 695.3.
[0506] Korak 4. Dobijanje 39-4: Amid 39-3 (573.9 mg, 0.8524 mmol), kalijum trifluorovinilborat (171.3 mg, 1.279 mmol) i PdCl2dppf•CH2Cl2(62.4 mg, 0.085 mmol) su tretirani sa Et3N (0.18 mL, 1.279 mmol) u EtOH (8 mL) u atmosferi azota i blago refluksovani u toku 30 min. Reakcija je razblažena sa PhMe (30 mL) i rastvarač je zatim uklonjen in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (20% etil acetat u heksanima) da bi se dobio željeni vinil hinoksalin 39-4 (542.0 mg, 0.8152 mmol) kao narandžasta pena. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H52N4NaO7: 687.4; nađeno: 687.3.
[0507] Korak 5. Dobijanje 39-5: Vinil hinoksalin 39-4 (542.0 mg, 0.8152 mmol) je tretiran sa Zhan 1b katalizatorom (59.8 mg, 0.08 mmol, Strem) u DCE (41 mL). Smeša je zagrejana na 80 °C u toku 1 h. Dodat je dodatni Zhan 1b katalizator (59.8 mg, 0.08 mmol, Strem) i smeša je zagrejana na 80 °C u toku dodatnih 30 min. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (20% etil acetat u heksanima) da bi se dobio makrocikla 39-5 (401.0 mg, 0.6297 mmol) kao narandzasta smeša. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H49N4O7: 637.4; nađeno: 637.3.
[0508] Korak 6. Dobijanje 39-6: Makrocikla 39-5 (401.0 mg, 0.6297 mmol) je sakupljen sa 1,4-dioksan (15 mL) i tretiran sa Pd/C (10% mas Pd, 200.0 mg) i MgO (200.0 mg) mešan u atmosferi vodonika. Smeša je mešana na st u toku 1 h. Reakciona smeša je proceđena kroz Celit (5 g) pomoću EtOAc (80 mL). Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobio makrocikl 39-6 (425.3 mg) kao bledo narandžasto ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H51N4O7: 639.4; nađeno: 639.3.
[0509] Korak 7. Dobijanje 39-7: Makrocikl 39-6 (74.8 mg, 0.110 mmol) je tretiran sa 2 M vodenim rastvorom LiOH (1.6 mL, 3.15 mmol) u MeOH/THF (4 mL /4 mL) na st u toku 8 h, 50 °C u toku 2 h i zatim 60 °C u toku 3 h. Smeša je ohlađena na 0 °C pomoću lededno hladnog kupatila. U smešu dodat je koncentrovani rastvor soli (30 mL). Cela je ekstrahovana sa CH2Cl2(30 mL tri puta). Organski sloj je ispran sa koncentrovanim rastvorom soli (30 mL) i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4. Posle uklanjanja sredstva za sušenje ceđenjem, rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobila karboksilna kiselina 39-7 (370.6 mg, 0.5932 mmol) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H49N4O7: 625.4; nađeno: 625.3.
[0510] Korak 8. Dobijanje primera 39: Karboksilna kiselina 39-7 (100.0 mg, 0.1601 mmol) i intermedijer A10 (73.2 mg, 0.2401 mmol) su tretirani sa HATU (91.3 mg, 0.2401 mmol) i DIPEA (0.14 mL, 0.8005 mmol) u DMF (3 mL) na st u toku 5 h. Reakcija je zaustavljena sa H2O (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL tri puta). Organski sloj je ispran sa koncentrovanim rastvorom soli (30 mL) i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4. Posle uklanjanja sredstva za sušenje ceđenjem, rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (25 do 100% etil acetata u heksanima). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su koncentrovane in vacuo i ostatak je dalje prečišćen pomoću hromatografije na koloni sa superkritičnim fluidima (DAICEL Chiralpak IC 10x250 mm, 18.9 mL/min, 35% MeOH, 15 atm, 40 °C) da bi se dobio primer 39 (80.5 mg, 0.0920 mmol, 57%) kao bezbojni prah. Analitički HPLC RetVreme: 9.35 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C43H61F2N6O9S: 875.4; nađeno: 875.4.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.81 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.24 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.74-6.30 (m, 3H), 4.73 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.73 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.40-4.60 (m, 1H), 4.22 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.61 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.16-3.30 (m, 1H), 2.50-2.77 (m, 2H), 2.20-0.60 (m, 21H), 1.35 (s, 3H) 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.02 (s, 9H).
[0511] Primer 40. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida
Primer 40
[0512] Primer 40 je pripremljen na sličan način kao primer 39, zamenom intermedijera A9 za intermedijer A10 u koraku 8. Primer 40 je izolovan (70.9 mg) u približnoj čistoći 92%. Analitički HPLC RetVreme: 9.24 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H59F2N6O9S: 861.4; nađeno: 861.4.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.80 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.23 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.60-6.10 (m, 3H), 4.69 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 12.0, 6.0 Hz, 1H), 4.2 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.03-4.10 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.12-3.28 (m, 1H), 2.89-3.05 (m, 1H), 2.50-2.76 (m, 2H), 2.30-0.80 (m, 19H), 1.36 (s, 3H) 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.04 (s, 9H).
[0513] Primer 41. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-11-etil-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Primer 41
[0514] Primer 41 je pripremljen na sličan način kao primer 39, zamenom intermedijera A8 za intermedijer A10 u koraku 8. Primer 41 je izolovan (4.3 mg) u približnoj čistoći od 92%. Analitički HPLC RetVreme: 9.36 min. LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H59F2N6O9S: 889.4; nađeno: 889.5.<1>H NMR (300 MHz, CD3COCD3) δ 7.83 (d, J = 7.83 Hz, 1H), 7.19-7.30 (m, 1H), 5.74-6.30 (m, 3H), 4.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.19 (dd, J = 12.0, 6.0 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 12.0, 9.6 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.10-3.26 (m, 1H), 2.56-2.80 (m, 2H), 2.30-0.80 (m, 25H), 1.54 (s, 3H), 1.42 (s, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.06 (s, 9H).
[0515] Primer 42 i Primer 43. Dobijanje (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-1a-etil-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida i (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-1a-etil-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida
Primer 42Primer 43
[0516] Korak 1. Dobijanje 43-1: U rastvor intermedijera smeše D15 (281 mg, 0.81 mmol) i intermedijera 18-2 (290 mg, 0.74 mmol) u MeCN (3.7 mL) dodat je HATU (308 mg, 0.81 mmol) a zatim DIPEA (640 μL, 3.68 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 17 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksani) da bi se dobio 43-1 (121 mg, 1:1 diasteromerna smeša) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H52ClN4O7: 687.3; nađeno: 687.5.
[0517] Korak 2. Dobijanje 43-2: U rastvor diasteromerne smeša 43-1 (121 mg, 176 μmol), TEA (38 μL, 264 μmol) i kalijum viniltrifluoroborata (35.4 mg, 264 μmol) u EtOH (0.88 mL) dodat je PdCl2(dppf) (14.4 mg, 17.6 μmol). Reakciona smeša je degasirana sa argonom u toku 10 min i zagrejana na 78 °C. Posle 25 min, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksani) da bi se dobila 43-2 (105 mg, 1:1 diasteromerna smeša) kao žuto ulje. LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H55N4O7: 679.4; nađeno: 679.5.
[0518] Korak 3. Dobijanje 43-3: U rastvor diasteromerne smeše 43-2 (105 mg, 155 μmol) u DCE (31 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (11.3 mg, 15.5 μmol, Strem) i reakciona smeša je degasirana u toku 10 minuta sa argonom. Reakciona smeša je zatim zagrejana 100 °C. Posle 15 min, omogućeno je da reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksani) da bi se dobio 43-3 (52.3 mg, 1:1 diasteromerna smeša) kao svetlo žuto ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.4; nađeno: 651.5.
[0519] Korak 4. Dobijanje 43-4: U rastvor diasteromerne smeše 43-3 (52 mg, 80 μmol) u etanolu (0.4 mL) dodat je Pd/C (10 mast % Pd, 9 mg, 8 μmol) na st u atmosferi argona. Atmosfera je zamenjena vodonikom i reakciona smeša je intenzivno mešana na st. Posle 45 min, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (1 mL) i proceđena je kroz sloj Celita uz ispiranje etilacetatom (3 x 1 mL). Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio 43-4 (49 mg, 1:1 diasteromerna smeša), koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H52N4O7: 653.4; nađeno: 653.6.
[0520] Korak 5. Dobijanje 43-5: U rastvor diasteromerne smeše 43-4 (49 mg, 67 μmol) u DCM (0.5 mL) dodat je TMSOTf (60 μL, 0.34 μmol) na st u atmosferi argona. Posle 3 h, reakciona smeša je dodata polako u 0.25 N vodeni NaOH rastvor (prethodno ohlađen na 0 °C, 1 mL). Dobijena smeša je razblažena sa 1 N aqueous HCl rastvorom (5 mL), i ekstrahovana je sa DCM (3 3 5 mL). Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su da bi se dobio 43-5 (71 mg, 1:1 diasteromerna smeša) kao smeđa čvrsta supstnaca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H45N4O7: 597.3; nađeno: 597.5.
[0521] Korak 6. Dobijanje primera 42 i 43: U rastvor diasteromerne smeše 43-5 (71 mg, ∼67 μmol) i intermedijera A10 (54 mg, 178 μmol) u MeCN (1.00 mL) dodat je HATU (69 mg, 178 μmol) a zatim DIPEA (155 μL, 0.89 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 1 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat/heksani). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su spojene i ponovo pročišćene preparativnom HPLC (Gemini 5u C18110A kolona, 50-100% MeCN/H2O, modifikator 0.1% trifluorosirćetna kiselina) i liofilizovane da bi se dobio Primer 42 (10 mg) i primer 43 (10 mg) kao beličasti prah. Primer 42: Analitički HPLC RetVreme: 9.04 min. [M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 847.4; nađeno: 847.6.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.98 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.20 -7.13 (m, 2H), 5.70 (td, J = 55.8, 6.4 Hz, 1H), 5.65 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 5.44 (br s, 1H), 4.55 -4.42 (m, 1H), 4.20 -4.03 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.17 -3.08 (m, 1H), 2.85 -2.72 (m, 1H), 2.71 -2.59 (m, 1H), 2.18 -2.06 (m, 1H), 2.03 -1.83 (m, 4H), 1.80 -1.53 (m, 5H), 1.50 (br s, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.40 -1.31 (m, 1H), 1.33 -1.09 (m, 5H), 1.06 (s, 9H), 1.05 -0.95 (m, 6H), 0.92 -0.73 (m, 3H). Primer 43: Analitički HPLC RetVreme: 9.17 min. [M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 847.4; nađeno: 847.6.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.03 (s, 1H), 7.68 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.14 -7.09 (m, 2H), 5.68 (td, JH-F= 55.5, 6.7 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.12 (s, 1H), 4.08 (dd, J = 12.1, 4.3 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.90 -2.79 (m, 1H), 2.79 -2.70 (m, 1H), 2.66 -2.56 (m, 1H), 2.43 -2.31 (m, 1H), 1.95 -1.85 (m, 2H), 1.75 -1.62 (m, 1H), 1.61 -1.42 (m, 5H), 1.44 (br s, 3H) 1.40 (s, 3H), 1.34 -1.02 (m, 8H), 1.00 (s, 9H), 0.99 -0.89 (m, 5H), 0.850.74 (m, 3H).
[0522] Primer 44. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-1a,9-dimetil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0523] Korak 1. Dobijanje 44-1: HATU (544 mg, 1.43 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.83 mL, 4.76 mmol) su dodati u smešu 18-2 (429 mg, 1.09 mmol) i smeša intermedijera D6 (395 mg, 1.33 mmol) u 12 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-30% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 44-1 (545 mg; 1:1 smeša diastereoizomera) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H50ClN4O7: 673.33; nađeno: 673.47.
[0524] Korak 2. Dobijanje 44-2: Pd(dppf)Cl2•CH2Cl2(74 mg, 0.091 mmol, Strem) dodat je u deoksigeniranu smešu 44-1 (542 mg, 0.805 mmol), kalijum viniltrifluoroborata (168 mg, 1.25 mmol), i trietilamina (0.170 mL, 1.21 mmol) u 9 mL EtOH na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrejana na 78 °C pod argonom u toku 75 minuta. Posle hlađenja na st, 6 mL toluena dodata je i reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-35% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 44-2 (438 mg; 1:1 smeša diasteromera) kao žutog filma. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H53N4O7: 665.38; nađeno: 665.55.
[0525] Korak 3. Dobijanje 44-3 i 44-4: Diasteromerna smeša 44-2 (437 mg, 0.658 mmol) i Zhan 1B katalizatoror (81 mg, 0.072 mmol, Strem) u 131 mL DCE su deoksigenirani pod argonom u toku 25 minuta. Smeša je zatim zagrejana na 95 °C u toku 50 minutas. Dodatnih 7 mg Zhan 1B katalizatora je dodato i reakciona smeša je zagrejana na 95 °C u toku 10 minuta. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-40% etil acetata u heksanima) da bi se dobili pojedinačni diastereomeri 44-3 (143 mg, rano eluirajuća komponenta) kao žuti film i 44-4 (118 mg, kasnije eluirajuća komponenta) kao žuta čvrsta supstanca. Ranije eluiraući 44-3: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H49N4O7: 637.35; nađeno: 637.45. Kasnije eluirajući 44-4: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H49N4O7: 637.35; nađeno: 637.59.
[0526] Korak 4. Dobijanje 44-5: Paladijum na ugljeniku (10 mas % Pd, 48 mg, 0.045 mmol) je dodat u rastvor 44-3 (143 mg, 0.225 mmol) u 6 mL etanola. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i reakcija je mešana u toku 90 minuta. Reakciona smeša je proceđena preko Celita i isprana sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovana in vacuo da bi se dobio 44-5 (130 mg) kao film braon čvrste supstance, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H51N4O7: 639.37; nađeno: 639.53.
[0527] Korak 5. Dobijanje 44-6: TMSOTf (0.53 mL, 2.91 mmol) dodat je u kapima u rastvor 44-5 (130 mg, 1.27 mmol) u 3.8 mL dihlorometana pod argonom na sobnoj temperaturi . Posle jednog sata, dodat je dodatni 0.22 mL TMSOTf. Posle dodatnog sata, dodato je 0.20 mL TMSOTf. Posle 40 minuta, dodato je 25 mL TMSOTf. Posle jednog sata, reakciona smeša je sakupljena sa 10 mL dihlorometana i zasustavljena je dodavanjem 20 mL 1 N vodenog HCl uz mešanje. Slojevi su odvojeni i vodeni deo je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 30 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobio 44-6 (113 mg) kao beličaste čvrste supstance, koja je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C31H43N4O7: 583.31; nađeno: 583.45.
[0528] Korak 6. Dobijanje primera 44: HATU (53 mg, 0.139 mmol) i DIPEA (0.080 mL, 0.459 mmol) su dodati u smešu 44-6 (51 mg, 0.088 mmol) i intermedijera A10 (49 mg, 0.161 mmol) u 1.5 mL MeCN pod argonom. Posle mešanja u toku u toku noći, dodato je dodatnih 13 mg intermedijera A10. Posle jednog sata, reakciona smeša je sakupljena sa 15 mL etil acetata i sipana u 20 mL 1 N vodeni HCl. Slojevi su odvojeni i vodeni deo je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-40% etil acetat in heksani) da bi se dobio Primer 44 (41 mg) kao beličasta čvrsta supstanca. Analitički HPLC RetVreme: 8.86 min. LCMSESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C46H55F2N6O9S: 833.36; nađeno: 833.51.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): 7.79 (d, J = 10 Hz, 1H), 7.28-7.21 (m, 2H), 6.77 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.81 (td, JH-F= 56 Hz, J = 6.4 Hz, 1H), 5.73-5.70 (m, 1H), 4.56 (d, J =7.2 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.26-4.16 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.05-2.91 (m, 1H), 2.90-2.82 (m, 1H), 2.77-2.68 (m, 1H), 2.06-1.94 (m, 2H), 1.88-1.74 (m, 1H), 1.72-1.58 (m, 3H), 1.58-1.44 (m, 4H), 1.53 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.43-1.36 (m, 1H), 1.12-1.02 (m, 2H), 1.09 (s, 9H), 1.07 (d, J = 4 Hz, 3H), 1.00-0.94 (m, 2H), 0.92-0.84 (m, 3H), 0.16-0.11 (m, 1H).
[0529] Primer 45. Dobijanje (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-1a,9-dimetil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 45
[0530] Primer 45 je pripremljen na sličan način kao Primer 44, zamenom kasnije eluirajućeg 44-4 za rano eluirajući 44-3 u koraku 4. Primer 45 je izolovan (23 mg) kao beličasta čvrsta supstanca. Analitički HPLC RetVreme: 8.92 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C46H55F2N6O9S: 833.36; nađeno: 833.54.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.25-7.19 (m, 2H), 6.55 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.78 (td, JH-F= 61 Hz, J = 6Hz, 1H), 5.52-5.48 (m, 1H), 4.58 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.17-4.10 (m, 1H), 4.04 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.22-3.14 (m, 1H), 2.88-2.80 (m, 1H), 2.78-2.66 (m, 1H), 2.08-1.90 (m, 2H), 1.76-1.64 (m, 1H), 1.63-1.50 (m, 7H), 1.51 (s, 3H), 1.47-1.36 (m, 2H), 1.46 (s, 3H), 1.18-1.06 (m, 1H), 1.12 (s, 9H), 1.07 (m, 3H), 1.00-0.80 (m, 4H), 0.10-0.04 (m, 1H).
[0531] Primer 46 i 47. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida i (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18-fluoro-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
<(glavni)>(sporedni)
(glavni) (sporedni)
[0532] Korak 1. Dobijanje 46-1: Smeša intermedijera B1 (627 mg, 2.08 mmol), intermedijera E3 (548 mg, 1.91 mmol) i cezijum karbonata (744 mg, 2.28 mmol) u 7 mL DMF je mešana na 85 °C pod argonom u toku 36 sati. Reakciona smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi i sipana u 30 mL vode i voda je ekstrahovana sa etil acetatom (3 x 30 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa vodom, koncentrovanim rastvorom solo, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-30% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 46-1 (891 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C27H36F2N3O6: 536.25; nađeno: 536.35.
[0533] Korak 2. Dobijanje 46-2: Hinoksalin etar 46-1 (478 mg, 0.893 mmol) je rastvoren u 4.2 mL tercbutil acetata i 1.1 mL dihlorometana na sobnoj temperaturi . MeSO3H (0.30 mL, 4.67 mmol) je dodat u kapima i reakciona smeša je mešana na st u toku 2 h. Reakciona smeša je premeštena u smešu koja se meša EtOAc (20 mL) i zasićenog vodenog NaHCO3(30 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobio amin 46-2 kao žuti čvrsti film (346 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C22H28F2N3O4: 436.20; nađeno: 436.29.
[0534] Korak 3. Dobijanje 46-3: HATU (396 mg, 1.04 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.57 mL, 3.29 mmol) su dodati u smešu 46-2 (345 mg, 0.793 mmol) i intermedijer D11 (260 mg, 0.965 mmol) u 9 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-40% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 46-3 (545 mg) kao bistri čvrsti film. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H49F2N4O7: 687.35; nađeno: 687.57.
[0535] Korak 4. Dobijanje 46-4: Smeša 46-3 (480 mg, 0.699 mmol) i Zhan 1B katalizatora (61 mg, 0.083 mmol, Strem) u 140 mL DCE je doeksigenirana sa argonom u toku 18 minuta. Smeša je zatim zagrejana na 95 °C u toku 70 minuta. Dodato je dodatnih 20 mg Zhan 1B katalizatora i smeša je mešana na 95 °C u toku jednog sata. Posle hlađenja na sobnu temperauru, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-35% etil acetata u heksanima) da bi se dobila neodvojiva smeša 46-4 (glavnog), i približno 15% 47-1 (sporednog; 233 mg ukupno) kao beličasta čvrsta supstanca. Glavna komponenta 46-4: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H45F2N4O7: 665.38; nađeno: 665.50. Blaža komponenta 47-1: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H44FN4O7: 639.31; nađeno: 639.49.
[0536] Korak 5. Dobijanje smeše 46-5 i 47-2: Paladijum na ugljeniku (10 mas % Pd, 70 mg, 0.066 mmol) dodat je u rastvor smeše 46-4 i 47-1 (232 mg, 0.353 mmol) iz ranijeg koraka u 9 mL etanolu. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i mešana u toku 7 h. Reakcija je proceđena preko Celita, ispirana sa etonolom. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobila smeša 46-5 (glavni) i 47-2 (sporedni; 216 mg ukupna) kao beličasta čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Glavna komponeta 46-5: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za 661.33; nađeno: 661.52. Sporedna komponenta 47-2: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za<C>34<H>47<F>2<N>4<O>7<:>C34H48FN4O7: 643.34; nađeno: 643.57.
[0537] Korak 6. Dobijanje smeše 46-6 i 47-3: TMSOTf (0.35 mL, 1.90 mmol) dodat je u kapima u rastvor smeša 46-5 i 47-2 (215 mg, 0.326 mmol) iz ranijeg koraka u 6.5 mL dihlorometana pod argonom na st. Posle 1 h, dodato je dodatnih 0.18 mL TMSOTf. Posle dodatnog sata, dodat je 0.30 mL TMSOTf. Posle 2 h, dodato je 0.18 mL TMSOTf. Posle 1 h, dodat je dodatnih 0.18 mL TMSOTf. Posle 45 minuta, reakciona smeša je sakupljena sa 25 mL dihlorometana i zaustavljena dodavanjem 30 mL 1 N vodenog HCl uz mešanje. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 40 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobila neodvojiva smeša 46-6 (glavni) i 47-3 (sporedni; 187 mg ukupno), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Glavna komponenta 46-6: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C30H39F2N4O7: 605.27; nađeno: 605.44. Sporedna komponenta 47-3: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C30H39FN4O7: 587.28; nađeno: 587.38.
[0538] Korak 7. Dobijanje primera 46 i primera 47: HATU (160 mg, 0.421 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.25 mL, 1.44 mmol) su dodati u smešu 46-6 i 47-3 (150 mg, 0.248 mmol) iz ranijeg koraka i intermedijer A10 (150 mg, 0.496 mmol) u 6.5 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku u toku noći, reakciona smeša je sakupljena sa 30 mL etil acetata i sipana u 30 mL 1 N vodenog HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetatom u heksanima) i prep HPLC sa reverznom fazom (50-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobila so trifluorosirćetne kiseline iz primera 46 (107 mg) kao svetlo žuta čvrsta supstanca i so trifluorosirćetne kiseline smeše 1:1 diastereomera primera 47 (12 mg) kao svetlo žute čvrste supstance. Primer 46: Analitički HPLC RetVreme: 8.60 min. LCMSESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C39H51F4N6O9S: 855.33; nađeno: 855.63.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.23 (s, 1H), 7.94 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.78 (td, JH-F= 66 Hz, J = 6.8 Hz, 1H), 5.68-5.66 (m, 1H), 4.57 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 4.22-4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.72-3.66 (m, 1H), 2.86-2.76 (m, 1H), 2.64-2.48 (m, 1H), 2.11-1.94 (m, 3H), 1.86-1.74 (m, 3H), 1.73-1.62 (m, 1H), 1.58-1.54 (m, 2H), 1.50 (s, 3H), 1.49-1.44 (m, 1H), 1.42-1.38 (m, 1H), 1.11-1.04 (m, 4H), 1.09 (s, 9H), 1.02-0.94 (m, 2H), 0.93-0.86 (m, 2H), 0.78-0.66 (m, 1H), 0.54-0.46 (m, 1H). Primer 47 (1:1 smeša diasteromera): Analitički HPLC RetVreme: 8.45 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H52F3N6O9S: 837.34; nađeno: 837.63.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.13 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.99-5.43 (m, 1H), 5.79 (td, JH-F= 55 Hz, J = 6.8 Hz, 1H), 5.53-5.50 (m, 1H), 4.57-4.44 (m, 2H), 4.11 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 4.22-4.13 (dd, J = 12.4, 4 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.83-3.79 (m, 1H), 2.94-2.80 (m, 2H), 2.28-2.14 (m, 1H), 2.06-1.96 (m, 2H), 1.88-1.69 (m, 4H), 1.58-1.54 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 1.44-1.36 (m, 1H), 1.32-1.26 (m, 1H), 1.14-1.04 (m, 4H), 1.10 (s, 9H), 1.02-0.86 (m, 4H), 0.74-0.64 (m, 1H), 0.58-0.48 (m, 1H).
[0539] Primer 48. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2S)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etenilciklopropil}-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0540] Korak 1: Dobijanje primera 48: U suspenziju kiseline 18-7 (9.7 mg, 0.017 mmol) i intermedijera A1 (13 mg, 0.049 mmol) u MeCN (0.4 mL) dodat je DIPEA (40 μL, 0.23 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (12.5 mg, 0.033 mmol). Reakcija je mešana na st u toku 1 h i razblažena je sa EtOAc (2 mL), 0.2 M vodenim HCl (1 mL), i zasićenim rastvorom soli (1 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 2 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2Cl2i adsorbovan na 1 g silica gel. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 50% acetona u heksanima) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 48 kao bela amorfna čvrsta supstanca (8.4 mg). Analitički HPLC RetVreme: 8.52 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H53N6O9S: 781.4; nađeno: 781.2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.91 (s, 1H), 7.83 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.7 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.86 -5.72 (m, 1H), 5.57 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 5.48 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.27 -5.15 (m, 1H), 5.15 -5.07 (m, 1H), 4.48 -4.35 (m, 3H), 4.12 (dd, J = 11.8, 4.1 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.81 -3.71 (m, 1H), 2.98 -2.75 (m, 4H), 2.16 -2.09 (m, 1H), 1.94 (dd, J = 8.2, 5.8 Hz, 1H), 1.87 -1.24 (m, 9H), 1.17 (d, J = 7.4 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.04 -0.91 (m, 5H), 0.75 -0.65 (m, 1H), 0.52 -0.42 (m, J = 6.0 Hz, 1H).
[0541] Primer 49. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0542] Korak 1: Dobijanje primera 49: U suspenziju kiseline 33-4 (30 mg, 0.049 mmol) i intermedijera A10 (31 mg, 0.10 mmol) u MeCN (700 μL) dodat je DIPEA (70 μL, 0.40 mmol). HATU (32 mg, 0.084 mmol) dodat je u dobijeni rastvor, i reakcija je mešana na st u toku 1.5 h. Dodatna porcija intermedijera A10 (6 mg, 0.02 mmol) je zatim dodata. Reakcija je mešana dodatnih 30 min i zatim je razblažena sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim HCl (15 mL) i zasićenim rastvorom soli (15 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2i adsorbovan na 2 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 50% acetona u heksanima) dobijen je amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 49 kao bela amorfna čvrsta supstanca (30.5 mg). Analitički HPLC RetVreme: 9.15 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H57F2N6O9S: 859.4; nađeno: 859.2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.86 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.18 (dd, J = 9.1, 2.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.14 -5.71 (m, 1H), 5.61 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.42 -4.31 (m, 2H), 4.12 (dd, J = 11.6, 4.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.00 -2.63 (m, 4H), 2.25 -2.16 (m, 1H), 2.09 -1.90 (m, 4H), 1.81 -0.95 (m, 26H), 0.92 -0.75 (m, 3H), 0.570.45 (m, 1H), 0.44 -0.36 (m, 1H).
[0543] Primer 50. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-9-(cijanometil)-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 50
[0544] Primer 50 je pripremljen na sličan način kao Primer 1, zamenom intermedijera B8 za intermedijer B4 u koraku 1. Primer 50 je prečišćan sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini kolona, 58-98 % ACN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovan da bi se dobila čvrsta supstanca (5 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.29 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H51F2N7O9S: 844.94; nađeno: 844.58.
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.71 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.22 (m, 2H), 6.25 (m, 1H), 6.08 -5.80 (m, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.29 (m, 2H), 4.13 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.65 (m, 1H), 3.06 -2.83 (m, 4H), 2.55 (m, 1H), 2.14 -1.47 (m, 17H), 1.03(s, 9H), 0.92 (m, 4H), 0.65 (m, 1H), 0.45 -0.43 (m, 1H).
[0545] Primer 51. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-11-etil-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Primer 51
[0546] Primer 51 je pripremljen na sličan način kao primer 39, zamenom intermedijera A3 za intermedijer A10 u koraku 8. Primer 51 je izolovan (12.3 mg) u približnoj čistoći 96.5%. Analitički HPLC RetVreme: 9.38 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C43H63N6O9S: 839.4; nađeno: 839.5.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.98-7.08 (m, 2H), 6.53 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.57-5.83 (m, 2H), 4.52 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.24 (dd, J = 10.8, 6.0 Hz, 1H), 4.02 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 10.8, 2.4 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.93-3.10 (m, 1H), 2.80-2.90 (m, 2H), 2.30-2.58 (m, 2H), 0.60-2.10 (m, 32H), 0.84 (s, 9H).
[0547] Primer 52. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-11-etil-N-[(1R,2S)-2-(2-fluoroetil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Primer 52
[0548] Primer 52 je pripremljen na sličan način kao primer 39, zamenom intermedijera A6 za intermedijer A10 u koraku 8. Primer 52 je izolovan (12.3 mg) u približnoj čistoći 96.5% . Analitički HPLC RetVreme: 8.60 min. Analitički HPLC RetVreme: 9.31 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C44H64FN6O9S: 871.4; nađeno: 871.5.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.20-7.30 (m, 2H), 6.73 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.75-6.02 (m, 2H), 4.74 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.36-4.49 (m, 1H), 4.23 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.04 (dd, J = 12.0, 2.4 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.28-3.16 (m, 1H), 2.50-2.70 (m, 2H), 2.30-0.80 (m, 35H), 1.04 (s, 9H).
[0549] Primer 53. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 53
[0550] Primer 53 je pripremljen slično primeru 17 zamenom intermedijera E4 za intermedijer E3 u koraku 1 i intermedijer A9 za intermedijer A10 u koraku 7. Primer 53 je izolovan (8.8 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H48F4N6O8S: 825.32; nađeno: 825.75.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.13 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.91 -7.74 (m, 2H), 7.69 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.47 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 10.3 Hz, 2H), 4.36 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 12.1, 3.6 Hz, 1H), 3.70 -3.59 (m, 1H), 3.08 -2.75 (m, 1H), 2.58 -2.38 (m, 1H), 2.14 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 1.95 -1.67 (m, 4H), 1.47 (tt, J = 13.9, 7.1 Hz, 4H), 1.35 (s, 2H), 1.20 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.15 -0.64 (m, 19H), 0.51 (q, J = 6.4 Hz, 1H).
[0551] Primer 54. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 54
[0552] Primer 54 je pripremljen slično Primer 53 zamenom intermedijera A9 sa intermedijerom A3.
Primer 54 je izolovan (10.0 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H52F2N6O8S: 803.35; nađeno: 803.79.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.88 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.88 -7.69 (m, 2H), 7.66 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.95 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 5.46 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.45 (dd, J = 13.8, 9.7 Hz, 2H), 4.09 (dd, J = 12.0, 3.6 Hz, 2H), 3.71 -3.57 (m, 1H), 2.53 (dd, J = 21.4, 14.6 Hz, 1H), 1.85 -1.39 (m, 10H), 1.38 -0.96 (m, 20H), 1.01 (dd, J = 17.2, 9.5 Hz, 3H), 1.04 -0.78 (m, 6H), 0.70 (s, 1H), 0.49 (dd, J = 12.7, 6.3 Hz, 1H).
[0553] Primer 55. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-3,6-diokso-14-(2,2,2-trifluoroetoksi)-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 55
[0554] Intermedijer 55-1 je pripremljen prema koracima 1 do 6 primera 1, zamenom intermedijera E2 za intermedijer E1 u koraku 1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H49N4O7: 625.36; nađeno: 625.25.
[0555] Korak 1. Dobijanje 55-2. Hinoksalinol 55-1 (24 mg, 0.038 mmol) je suspendovan DMF (2 mL) i tretiran sa Cs2CO3(63 mg, 0.19 mmol) i 2,2,2-trifluoroetil trifluorometansulfonatom (0.055 mL, 0.38 mmol). Reakciona smeša je mešana na RT u toku 5 h, zatim razblažena sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa H2O i zasićenim rastvorom soli, osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 55-2, koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H50F3N4O7: 707.36; nađeno: 707.38.
[0556] Korak 2. Dobijanje 55-3. Trifluoroetil etra 55-2 (0.038 mmol teorijski) je tretiran sa DCM (4 mL) i TMSOTf (0.14 mL, 0.77 mmol) na st. Posle 1 h, reakcija je zaustavljena sa dodatnim 1M NaOH (2 mL). Posle mešanja intenzivno u toku 5 min, smeša je sipana u levak za odvajanje sa 10% HCl (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan 3x sa DCM. Spojena organska supstanca je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 55-3, koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H42F3N4O7: 651.30; nađeno: 651.18.
[0557] Korak 3. Dobijanje primera 55. Karboksilna kiselina 55-3 (0.038 mmol teorijski) je tretiran sa intermedijerom A10 (23 mg, 0.077 mmol), TBTU (25 mg, 0.077 mmol), DMAP (9 mg, 0.077 mmol), DCM (1 mL) i DIPEA (0.134 mL, 0.768 mmol). Reakciona smeša je mešana na ST u toku 20 h, zatim je koncentrovan pod sniženim pritiskom i prečišćena sa HPLC fazaom da bi se dobio primer 55 kao TFA so (7 mg, 18% u odnosu 3 koraka). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H54F5N6O9S: 901.36; nađeno: 902.08.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.18 (s, 1H), 7.86 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.02 -5.63 (m, 2H), 4.76 -4.62 (m, 2H), 4.56 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.39 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.15 (dt, J = 17.2, 8.6 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 6.7, 2.8 Hz, 1H), 3.05 -2.89 (m, 1H), 2.82 (td, J = 13.2, 4.2 Hz, 1H), 2.65 -2.50 (m, 1H), 2.02 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 1.78 (dt, J = 23.5, 10.7 Hz, 3H), 1.68 -1.26 (m, 14H), 1.22 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.10 (s, 9H), 0.97 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 0.95 -0.84 (m, 2H), 0.71 (s, 1H), 0.51 (t, J = 9.8 Hz, 1H).
[0558] Primer 56. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-11-etil-N-[(1R,2R)-2-etil-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida
Primer 56
[0559] Primer 56 je pripremljen na sličan način kao primer 39, zamenom intermedijera A9 za intermedijer A3 u koraku 8. Primer 56 je izolovan (8.8 mg, 0.0103 mmol, 53.7%). Analitički HPLC RetVreme: 9.56 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C44H65N6O9S: 853.45; nađeno: 853.5.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.81 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.20-7.30 (m, 2H), 6.73 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.76-6.01 (m, 2H), 4.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 12.0, 6.0 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.00-4.08 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.50-2.78 (m, 3H), 0.80-2.30 (m, 30H), 1.54 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.05 (s, 9H).
[0560] Primer 57. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2S)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(2,2-difluoroetil)ciklopropil]-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0561] Korak 1. Dobijanje primera 57. U suspenziju kiseline 33-4 (14.9 mg, 0.0245 mmol) i amina hidrohlorida A-7 (16.3 mg, 0.0535 mmol) u MeCN (500 μL) dodat je DIPEA (40 μL, 0.23 mmol). HATU (15.5 mg, 0.0408 mmol) dodat je u dobijeni rastvor, i reakcija je mešana na st u toku 17 h. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (2 mL), 0.2 M vodenim HCl (1.5 mL) i zasićenim rastvorom soli (1.5 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 1.5 mL). Spojena organaska faza je osušen iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2Cl2i koncentrovana je na 1.5 g silikagel. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 40% aceton u heksani) obezbeđeni amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 57. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H57F2N6O9S: 859.4; nađeno: 859.0.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10.00 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.07 -5.57 (m, 2H), 5.26 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.50 -4.29 (m, 3H), 4.12 (dd, J = 11.7, 3.9 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.00 -2.62 (m, 4H), 2.34 -0.96 (m, 33H), 0.95 -0.78 (m, 1H), 0.51 (dd, J = 13.0, 7.9 Hz, 1H), 0.39 (d, J = 4.2 Hz, 1H).
[0562] Primer 58. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida
[0563] Korak 1. Dobijanje primera 58. U suspenziju kiseline 33-4 (14.5 mg, 0.0238 mmol) i amina hidrohlorida A-8 (16.0 mg, 0.0502 mmol) u MeCN (500 μL) dodat je DIPEA (40 μL, 0.23 mmol). HATU (15.5 mg, 0.0408 mmol) dodat je u dobijeni rastvor, i reakcija je mešana na st u toku 17 h. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (2 mL), 0.2 M vodenim HCl (1.5 mL) i zasićenim rastvorom soli (1.5 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 1.5 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2Cl2i koncentrovana je na 1.5 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 40% acetona u heksanima) obezbeđen je amorfni ostatak koji je liofilizovan sa vodom i MeCN da bi se dobio primer 58. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C43H59F2N6O9S: 873.4; nađeno: 873.3.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.72 (s, 1H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.12 -5.54 (m, 2H), 5.25 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.50 -4.30 (m, 3H), 4.13 (dd, J = 11.7, 4.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.03 -2.65 (m, 4H), 2.34 -0.97 (m, 33H), 0.94 -0.76 (m, 3H), 0.60 -0.45 (m, 1H), 0.45 -0.34 (m, 1H).
[0564] Primer 59. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-10-etil-19,19-difluoro-15-metoksi-4,7-diokso1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0565] Korak 1. Dobijanje 59-1. Rastvor Intermedijera D16 (0.50 g, 1.6 mmol) u DMF (7 mL) je zatim tretiran sa COMU (0.80 g, 1.9 mmol), DIPEA (1.2 mL, 6.7 mmol) i intermedijerom 17-2 (0.65 g, 1.3 mmol) i mešan u toku noći na st. Reakcija je zaustavljena sa 1 M rastvoru limunske kiseline (5 mL) i ekstrahovana sa EA. Spojena organska supstanca je isprana sa rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (15-100% EA/heks) da bi se dobio 59-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H55F2N4O7: 741.88; nađeno: 741.51.
[0566] Korak 2. Dobijanje 59-2. Rastvor 59-1 (0.51 g, 0.69 mmol) u DCE (140 mL) je poprskan sa argonom u toku 30 min pre dodavanja Zhan 1B katalizatora (0.051 g, 0.07 mmol). Reakcija je zagrejana na 85 °C u toku 45 min, i dodata je još jedna porcija Zhan 1B katalizatora. Posle dodatnih 30 min, reakcija je ohlađena na st, koncentrovana in vacuo i prečišćena hromatografijom na silikagelu (5-100% EA/heks) da bi se dobio 59-2. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H51F2N4O7: 713.83; nađeno: 713.54.
[0567] Korak 3. Dobijanje 59-3. Rastvor 59-2 je sakupljen sa EtOH (8 mL). Dodat je Pd/C (0.072 g, 10% m/m) i atmosfera zamenjena sa H2. Posle 1 h, dodat je dodatni katalizator. Posle 4 h, dodat je EA i dodatni katalizator. Posle dodatni 3 h, reakcija je proceđena, koncentrovana in vacuo, i ostatak je sakupljen sa EtOH (8 mL) i tretiran sa 0.5 g Pd/C (10% m/m) i atmosfera je zamenjena sa H2. Reakcija je mešana u toku noći, i zatim prečišćena ponovo kako je ranije opisano da bi se dobio 59-3 koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H53F2N4O7: 715.85; nađeno: 715.52.
[0568] Korak 4. Dobijanje 59-4. Rastvor 59-3 (0.40 g, 0.56 mmol) u DCM (1.5 mL) je tretiran sa 2.5 mL TFA na st. Posle 1.5 h, reakcija je koncentrovana in vacuo. Ostatak je sakupljen sa EA, ispran sa zasićenim vodenim NaHCO3, rastvorom soli i zatim osušen iznad anhidrovanog MgSO4. Koncentrovanjem in vacuo dobijen je 59-4 koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H45F2N4O7: 659.74; nađeno: 659.56.
[0569] Korak 5. Dobijanje primera 59: Rastvor 59-4 (0.20 g, 0.30 mmol) u DMF (2 mL) je naknadno tretiran sa HATU (0.21 g, 0.55 mmol), DIPEA (0.27 mL, 1.5 mmol), DMAP (0.056 g, 0.46 mmol), i intermedijerom A9 (0.13 g, 0.46 mmol) i mešan u toku 5 h na st. Reakciona smeša je prečišćena sa preparativnim HPLC da bi se dobio the TFA so primera 59. Analitički HPLC RetVreme: 9.20 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H55F4N6O9S: 895.98; nađeno: 895.60.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.31 (s, 1H); 7.94 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.32 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H); 7.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 5.98 (br s, 1H); 5.85 (td, JH-F= 55.2 Hz, J = 6 Hz, 1H); 4.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 4.58 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.35 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.33 (br s, 1H); 4.18 (dd, J = 12, 3.6 Hz, 1H); 3.97 (br s, 3H); 2.98 (m, 1H); 2.64-2.41 (m, 2H); 2.22 (m, 1H); 2.15-1.92 (m, 4H); 1.84-1.22 (m, 14H); 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.14-0.98 (m, 2H); 1.08 (s, 9H); 0.60-0.48 (m, 2H).
[0570] Primer 60. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-9-propil1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0571] Korak 1. Dobijanje 60-1: U rastvor intermedijera B5 (160 mg, 0.590 mmol) i intermedijera E3 (194 mg, 0.590 mmol) u MeCN (2.95 mL) dodat je cezijum karbonat (192 mg, 0.590 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 24 h, reakciona smeša je zatim proceđena kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovan in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio supstituisani hinoksalin 60-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C29H40F2N3O6: 564.28; nađeno: 564.44.
[0572] Korak 2. Dobijanje 60-2: U rastvor 60-1 (193 mg, 0.343 mmol) u terc-butil acetatu (1.36 mL) dodat je rastvor metansulfonske kiseline (111 μL, 1.72 mmol) u dihlorometanu (0.34 mL) i reakcija je mešana na st. Posle 2 h, reakciona smeša je razblažena sa zasićenim natrijum bikarbonatnim rastvorom (20 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 20 mL). Spojene organska supstanca je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana in vacuo da bi se dobio amin hidrohlorid 60-2, koji je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C24H32F2N3O4: 464.23; nađeno: 464.35.
[0573] Korak 3. Dobijanje 60-3: U rastvor 60-2 (133 mg, 0.289 mmol) i intermedijera D11 (133 mg, 0.412 mmol) u MeCN (1.7 mL) dodat je HATU (157 mg, 0.412 mmol) praćen sa DIPEA (298 μL, 1.72 mmol) na st pod i u atmosferi argona. Posle 1 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio amid 60-3. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H53F2N4O7: 715.38; nađeno: 715.55.
[0574] Korak 4. Dobijanje 60-4: U rastvor 60-3 (188 mg, 264 μmol) u DCE (52.8 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (19.4 mg, 26.4 μmol) i reakciona smeša je degasirana u toku 10 minuta sa argonom. Reakciona smeša je zatim zagrejana na 100 °C. Posle 1 h, omogućeno je da se reakciona smeša ohladi na st i koncentrovana je in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio makrocikl 60-4. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H49F2N4O7: 687.35; nađeno: 687.54.
[0575] Korak 5. Dobijanje 60-5: U rastvor makrocikla 60-4 (119 mg, 173 μmol) u etanolu (1.0 mL) dodat je Pd/C (10 mas %, 18.4 mg, 17.3 μmol) na st u atmosferi argona. Uklonjen je vazduh iz reakcionog suda i ponovo je napunjen sa vodonikovim gasom pod 1 atm (3 x) i reakciona smeša je intenzivno mešana na st. Posle 1 h, reakciona smeša je proceđena kroz sloj Celita uz ispiranje etil acetatom (3 x 2 mL). Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio makrocikl 60-5, koja je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H51F2N4O7: 689.36; nađeno: 689.56.
[0576] Korak 6. Dobijanje 60-6: U rastvor 60-5 (150 mg, 218 μmol) u DCM (1.1 mL) dodat je TMSOTf (197 μL, 1.09 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 2 h, reakciona smeša je premeštena u rastvor 0.5 N NaOH rastvor (5 mL) prethodno ohlađen na 0 °C. Dobijena smeša zakišeljena sa 1N HCl rastvorom do pH = 2 i ekstrahovana je sa dihlorometanom (3 x 5 mL). Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su in vacuo da bi se dobio karboksilna kiselina 60-6, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H43F2N4O7: 633.30; nađeno: 633.49.
[0577] Korak 7. Dobijanje primera 60: U rastvor 60-6 (100 mg, 158 μmol) i intermedijera A9 (69.0 mg, 237 μmol) u MeCN (790 μL) dodat je HATU (91.5 mg, 237 μmol) praćen sa DIPEA (137 μL, 790 μmol) na st u atmosferi argona. Posle 3 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, je prečišćena sa preparativno HPLC (Gemini 5u C18 110Å kolona, 5-100% MeCN/H2O, modifikator 0.1% trifluorosirćetna kiselina) i liofilizovana je da bi se dobio Primer 60 kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.89 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H53F4N6O9S: 869.35; nađeno: 859.66.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.29 (br s, 1H), 7.94 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.19 (br s, 1H), 5.87 (br s, 1H), 5.84 (td, JH-F= 55.8 Hz, J = 5.4 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 4.17 (dd, J = 11.9, 3.4 Hz, 1H), 3.96 (br s, 4H), 3.68 (br s, 1H), 3.01 -2.91 (m, 1H), 2.71 -2.61 (m, 1H), 2.61 -2.43 (m, 1H), 2.02 (br s, 4H), 1.88 -1.59 (m, 4H), 1.59 -1.35 (m, 4H), 1.33 -1.20 (m, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.04 -0.95 (app t, J = 7.0 Hz, 5H), 0.79 -0.65 (m, 1H), 0.49 (d, J = 6.5 Hz, 1H).
[0578] Primer 61. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-10-etil-19,19-difluoro-15-metoksi-4,7-diokso1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
Primer 61
[0579] Primer 61 je pripremljen slično primeru 59 zamenom intermedijera A10 za intermedijer A9 u koraku 5. TFA so primera 61 je izolovana. Analitički HPLC RetVreme: 9.28 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C43H57F4N6O9S: 909.38; nađeno: 909.59.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.28 (s, 1H); 7.95 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.33 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H); 7.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 6.0 (br s, 1H); 5.83 (br s, 1H); 5.83 (td, JH-F= 55 Hz, J = 6 Hz, 1H); 4.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 4.61 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 4.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 4.32 (br s, 1H); 4.18 (m, 1H); 3.97 (s, 3H); 2.63-2.47 (m, 2H); 2.28-2.17 (m, 1H); 2.12-1.96 (m, 4H); 1.83-1.26 (m, 14H); 1.53 (s, 3H); 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.08 (s, 9H); 0.94-0.88 (m, 2H); 0.62-0.48 (m, 2H).
[0580] Primer 62. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-19,19-difluoro-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida
Primer 62
[0581] Korak 1. Dobijanje primera 62-1: HATU (214 mg, 0.563 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.30 mL, 1.72 mmol) su dodati u smešu of 46-2 (186 mg, 0.428 mmol) i intermedijer D16 (157 mg, 0.508 mmol) u 10 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-30% etil acetat u heksanu) da bi se dobio Intermedijer 62-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H53F2N4O7: 727.38; nađeno: 727.51.
[0582] Korak 2. Dobijanje 62-2: Smeša 62-1 (275 mg, 0.378 mmol) i Zhan 1B katalizator (34 mg, 0.046 mmol, Strem) u 75 mL DCE je deoksigenirano sa argonom u toku 17 minuta. Smeša je zatim zagrejana na refluksu u toku 80 minuta. Dodatnih 8 mg Zhan 1B katalizatora je dodato i smeša je mešana na refluksu u toku dvadeset minuta. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-25% etil acetat u heksanima) da bi se dobio intermedijer 62-2. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H49F2N4O7: 699.35; nađeno: 669.50.
[0583] Korak 3. Dobijanje smeše 62-3: Paladijum na ugljeniku (10 mas % Pd, 60 mg, 0.057 mmol) dodat je u rastvor 62-2 (207 mg, 0.297 mmol) u 7 mL etanolu. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i smeša je mešana u toku noći. Reakcija je proceđena preko Celita, isprana sa etanolom. Filtrat je koncentrovana in vacuo da bi se dobio intermedijer 62-3, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H51F2N4O7: 701.36; nađeno: 701.65.
[0584] Korak 4. Dobijanje 62-4: TFA (1.6 mL, 20.9 mmol) dodat je polako u rastvor 62-3 (202 mg, 0.289 mmol) u 4.5 mL dihlorometana. Posle 3.5 sati, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom blizu suvog. Dobijeni ostatak je sakupljen sa 30 mL etil acetata, ispran sa 20 mL vode, 20 mL zas. NaHCO3(aq), i odvojen. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa etil acetatom (3 x 20 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa 30 mL koncentrovanog rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobio intermedijer 62-4, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H43F2N4O7: 645.30; nađeno: 645.53.
[0585] Korak 5. Dobijanje primera 62: HATU (113 mg, 0.297 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.17 mL, 0.978 mmol) su dodati u smešu 62-4 (120 mg, 0.186 mmol) i intermedijer A9 (110 mg, 0.379 mmol) u 6 mL acetonitril pod argonom. Posle mešanja u toku, reakciona smeša je sakupljena sa 30 mL etil acetata i isprana sa 20 mL 1 N vodenog HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana sa 50% koncentrovanog rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetat u heksanima) prep. HPLC sa reverznom fazom (50-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobila so trifluorosirćetne kiseline primera 62. Analitički HPLC RetVreme: 9.03 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H53F4N6O9S: 881.35; nađeno: 881.57.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.27 (s, 1H), 7.94 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.84 (td, JH-F= 56 Hz, J = 6.8 Hz, 1H), 5.75 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.22-4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.01-2.94 (m, 1H), 2.81-2.72 (m, 1H), 2.66-2.40 (m, 1H), 2.36-2.28 (m, 1H), 2.10-1.94 (m, 4H), 1.82-1.72 (m, 2H), 1.70-1.22 (m, 10H), 1.14-1.02 (m, 7H), 1.10 (s, 9H), 0.61-0.49 (m, 2H).
[0586] Primer 63. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-1a-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida
[0587] Korak 1. Dobijanje 63-1: Amin hidrohlorid 17-2 (500 mg, 1.03 mmol) je spojen sa smešom intermedijera D17 (378.5 mg, 1.34 mmol), DIPEA (1.8 mL, 10.3 mmol) i DMF (3 mL). HATU (587.1 mg, 1.55 mmol) je zatim dodat u reakcionu smešu, koja je mešana na sobnoj temperaturi u toku 18 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa vodom (20 mL) i 1N HCl (10.5 mL) i sakupljena sa metilen hloridom (20 mL). Organske supstance su odvojene i vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa metilen hloridom (10 mL). Spojena organska supstanca je je zatim isprana sa koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Sirovi ostatak je zatim prečišćen pomoću hromatogarafije na silikagelu da bi se dobio 63-1 kao 1:1 diasteromerna smeša. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C38H53F2N4O7: 715.4; nađeno: 715.4.
[0588] Korak 2. Dobijanje 63-2 i 63-3: Diasteromerna smeša 63-1 (496 mg, 0.695 mmol) i Zhan 1B katalizatora (53.8 mg, 0.0695 mmol, Strem) su rastvoreni u 140 mL anhidrovanog DCE i prskana je N2u toku 30 minuta. Smeša je zatim zagrejana 100 °C u toku 90 minuta, i dodata je dodatna porcija Zhan 1B katalizatora (54 mg, 0.695 mmol, Strem). Reakcija je zatim ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu (0% do 40% etil acetata u heksanima) da bi se dobili pojedinačni diastereomeri 63-2 (ranije eluirana frakcija) i 63-3 (kasnije eluirana frakcija). Ranije eluirana frakcija: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H49F2N4O7: 687.4; nađeno: 687.2. Kasnije eluirana frakcija: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H49F2N4O7: 687.4; nađeno: 687.3.
[0589] Korak 3. Dobijanje 63-4: Paladijum na ugljeniku (10% m/m, 155 mg) dodat je u rastvor 63-2 (155 mg, 0.226 mmol) u etanolu (3 mL). Smeša je mešana u atmosferi vodonika u toku 1 hr i zatim je proceđena kroz sloj Celita, i isprana sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 63-4, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C36H51F2N4O7: 689.4; nađeno: 689.3.
[0590] Korak 6. Dobijanje 63-5: Intermedijer 63-4 (153.5 mg, 0.222 mmol) je rastvoren u smeši 1:1 TFA:DCM (6 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana in vacuo da bi se dobio 63-5, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H44N4O7: 633.3; nađeno: 633.2.
[0591] Korak 7. Dobijanje primera 63: HATU (99.2 mg, 0.261 mmol) i DIPEA (271 μL, 2.1 mmol) su dodati u smešu 63-5 (140.5 mg, 0.222 mmol) i A10 (100 mg, 0.316 mmol) u 1 mL DMF. Posle mešanja u toku noći na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je sipana u vodu, zakišeljena do pH 1 sa 1 N vodenim HCl, i ekstrahovana tri puta sa metilen hloridom (15 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa vodom, koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen sa prep HPLC sa reverznom fazom (5-100% acetonitrila u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobio primer 63. Analitički HPLC RetVreme: 8.951 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H55F4N6O9S: 883.4; nađeno: 883.2.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.96 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.80 (td, J = 55.8, 6.7 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.26 -4.14 (m, 2H), 4.01 -3.91 (m, 3H), 2.65 -2.47 (m, 2H), 2.11 -1.85 (m, 5H), 1.84 -1.61 (m, 3H), 1.61 -1.46 (m, 10H), 1.46 -1.32 (m, 3H), 1.33 -1.17 (m, 4H), 1.09 (d, J = 15.9 Hz, 10H), 1.04 -0.95 (m, 1H), 0.94 -0.84 (m, 2H), 0.21 -0.12 (m, 1H).
[0592] Primer 64. Dobijanje (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-1a-metil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida
Primer 64
[0593] Primer 64 je pripremljen na sličan način kao Primer 63, zamenom kasnije eluiranog 63-3 za rano eluirani 63-2 u koraku 3. Primer 64 je zatim izolovan. Analitički HPLC RetVreme: 8.535 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 883.4; nađeno: 883.3.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.97 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.45 -7.16 (m, 2H), 5.97 -5.52 (m, 2H), 4.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.50 -4.16 (m, 1H), 4.06 -3.86 (m, 5H), 2.77 -2.57 (m, 1H), 2.51 -2.18 (m, 2H), 2.16 -1.86 (m, 5H), 1.75 -1.32 (m, 16H), 1.33 -1.03 (m, 14H), 1.02 -0.76 (m, 2H), 0.42 --0.09 (m, 1H).
[0594] Primer 65. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-9-propil-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida
[0595] Korak 1. Dobijanje primera 65: U rastvor 60-6 (52 mg, 82 μmol) i intermedijera A10 (37.5 mg, 123 μmol) u MeCN (411 μL) dodat je HATU (47.5 mg, 123 μmol) a zatim DIPEA (73 μL, 411 μmol) na st u atmosferi argona. Posle 20 h, reakciona smeša koncentrovana in vacuo, je prečišćena sa preparativnom HPLC (Gemini 5u C18 110A kolona, 5-100% MeCN/H2O, modifikator 0.1% trifluorosirćetna kiselina) i liofilizovana je da bi se dobio primer 65 kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 8.99 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H55F4N6O9S: 883.36; nađeno: 883.60.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.26 (s, 1H), 7.95 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.81 (td, JH-F= 55.5 Hz, J = 6.5 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 4.17 (dd, J = 12.2, 3.8 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.73 -3.66 (m, 1H), 2.73 -2.64 (m, 1H), 2.63 -2.45 (m, 1H), 2.01 (br s, 3H), 1.85 -1.62 (m, 4H), 1.62 -1.53 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.48 -1.22 (m, 5H), 1.08 (s, 9H), 1.01 (app t, J = 7.3 Hz, 4H), 0.94 -0.87 (m, 2H), 0.80 -0.69 (m, 1H), 0.50 (d, J = 7.1 Hz, 1H).
[0596] Primer 66. Dobijanje (4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-12-etil-17-metoksi-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-1H,11H-10,13-metanohinoksalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11-karboksamida.
Primer 66
[0597] Korak 1. Dobijanje 66-1 i 66-2. U rastvor intermedijera 70-3 (283 mg, 0.42 mmol) u CH2Cl2(5 mL) dodat je TMSOTf (380 μL, 2.1 mmol). Posle mešanja u toku 2 h, reakciona smeša je sipana u 1 N NaOH (12 mL) koji se meša. Smeša je premeštena u levak za odvajanje, zakišeljena do pH 3 sa 1N HCl, ekstrahovana sa CH2Cl2, osušena iznad magenzijum sulfata, i koncentrovana. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-10% Me-OH/EtOAc) da bi se dobila smeša 66-1 i 66-2.
LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H47N4O7: 623.34; nađeno: 623.66.
[0598] Korak 2. Dobijanje 66-3 i 66-4. U rastvor 66-1 i 66-2 (58 mg, 0.09 mmol), intermedijer A9 (32 mg, 0.11 mmol), TBTU (42 mg, 0.13 mmol) i DMAP (16 mg, 0.14 mmol) u DMF (3 mL) dodat je DIPEA (47 μL, 0.27 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 23 h. Reakcija je zaustavljena sa vodom, razblažena sa EtOAc, isprana sa zas. NaHCO3, koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana. Sirovi materijal je prečićen sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini, 30-85% ACN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovan da bi se dobila smeša TFA soli intermedijera 66-3 i 66-4. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H57F2N6O9S: 859.39; nađeno: 859.65.
[0599] Korak 3. Dobijanje primera 66: U 66-3 i 66-4 (5 mg, 0.005 mmol) koji je sakupljen sa EtOH (2 mL) i tretiran sa Pd/C (10%, 5 mg). Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i mešana na st u toku 2.5 h. Reakcija je proceđena preko Celita, isprana sa EtOAc i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-10% MeOH/EtOAc) i liofilizovan da bi se dobilo osnovno jedinjenje. Analitički HPLC RetVreme: 9.15 min.LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H59F2N6O9S: 862.01; nađeno: 862.37.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.94 -7.73 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 6.87 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 6.05 (m, 2H), 4.83 -4.74 (m, 1H), 4.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.52 -4.28 (m, 2H), 4.16 (m, 2H), 4.05 -3.86 (m, 4H), 3.86 -3.45 (m, 4H), 3.22 -3.00 (m, 1H), 2.89 (s, 1H), 2.77 -2.55 (m, 1H), 2.25 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.09 -0.81 (m, 35H).
[0600] Primer 67. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 67
[0601] Primer 67 je pripremljen slično primeru 1 zamenom intermedijera A8 za intermedijer A10 u koraku 8. TFA so primera 67 je izolovana. Analitički HPLC RetVreme: 8.85 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 847.99; nađeno: 847.64.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.00 (s, 1H); 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.23 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H); 7.15 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 5.89 (tt, JH-F= 54 Hz, J = 4.4 Hz, 1H); 5.89 (br s, 1H); 4.61 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.39 (br s, 1H); 4.37 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 4.16 (dd, J = 9.2 Hz, 7.2 Hz, 1H); 3.92 (s, 3H); 3.78-3.72 (m, 1H); 3.10-2.88 (m, 1H); 2.86-2.74 (td, J = 12, 4.4 Hz, 1H); 2.62-2.53 (m, 1H); 2.18-2.04 (m, 1H); 1.88-1.46 (m, 14H); 1.53 (s, 3H); 1.28-1.20 (m, 4H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.96 (m, 2H); 0.96-0.86 (m, 2H); 0.78-0.67 (m, 1H); 0.54-0.47 (m, 1H).
[0602] Primer 68. Dobijanje (4aR,8S,11S,12S,13R,25aS)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-21,21-difluoro-17-metoksi-12-metil-6,9-diokso2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-1H,11H-10,13-metanohinoksalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11-karboksamida
Primer 68
[0603] Korak 1. Dobijanje 68-1 i 68-2 (smeše): TMSOTf (0.6 mL, 3.3 mmol) dodat je u rastvor intermedijera 62-3 (424 mg, 0.606 mmol) u 7 mL dihlorometana na sobnoj temperaturi. Posle 1 sata, dodat je dodatni 0.2 mL TMSOTf. Posle ukupno tri sata, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio smeša 68-1 i 68-2 izomera, koja je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H43F2N4O7: 645.30; nađeno: 645.49.
[0604] Korak 2. Dobijanje 68-3 i 68-4 (smeša): HATU (209 mg, 0.550 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.25 mL, 1.43 mmol) je dodata u smešu 68-1 i 68-2 iz ranijeg koraka (176 mg, 0.273 mmol) i intermedijer A9 (161 mg, 0.555 mmol) u 4 mL acetonitrila i 2 mL DMF pod argonom. Posle jednog sata, dodat je dodatnih 100 mg intermedijera A9. Posle dva sata, reakciona smeša je sakupljena sa 30 mL etil acetata i isprana sa 20 mL 1 N vodenog HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana 50% koncentrovanog rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetat u heksanima) i prep HPLC sa revernom fazom (50100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobile soli trifluorosirćetne kiseline smeše 68-3 i 68-4. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H53F4N6O9S: 881.35; nađeno: 881.50.
[0605] Korak 3. Dobijanje primera 68: Paladijum na ugljeniku (10 mas % Pd, 2 mg, 0.0019 mmol) dodat je u rastvor smeše 68-3 i 68-4 iz prethodnog koraka (4.5 mg, 0.0045 mmol) u 1 mL etanola. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i smeša je mešana u toku sva sata. Reakcija je proceđena preko Celita, ispiranjem sa etanolom. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio primer 68.
Analitički HPLC RetVreme: 8.81 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H55F4N6O9S: 883.36; nađeno: 883.64.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.94 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.34-7.30 (m, 2H), 6.13 (td, JH-F= 57 Hz, J = 6.8 Hz, 1H), 5.88-5.84 (m, 1H), 4.62 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.38-4.30 (m, 2H), 4.20-4.05 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 2.87-2.76 (m, 2H), 2.34-2.16 (m, 2H), 1.92-1.54 (m, 6H), 1.46-1.36 (m, 3H), 1.34-1.12 (m, 8H), 1.20 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 1.08-0.96 (m, 4H), 1.04 (s, 9H), 0.93-0.78 (m, 4H).
[0606] Primer 69. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-etoksi-9-etil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida
Primer 69
[0607] Korak 1. Dobijanje 69-2. Hinoksalinol 55-1 (54 mg, 0.086 mmol) je suspendovan u ACN (2 mL) i tretiran sa Cs2CO3(84 mg, 0.259 mmol) i bromoetanu (0.032 mL, 0.432 mmol). Reakciona smeša je mešana na ST u toku 16 h. Reakcija je proceđena i sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na fleš kolononi da bi se dobio 69-2. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H52N4O7: 652.38; nađeno: 653.41.
[0608] Korak 2. Dobijanje 69-3. Intermedijer 69-2 (0.086 mmol teorijskil) je tretiran sa DCM (10 mL) i TMSOTf (1.0 mL) na st. Posle 1 h, reakcija je završena što je određeno sa LCMS. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 69-3, koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H44N4O7: 596.32; nađeno: 597.38.
[0609] Korak 3. Dobijanje primera 69. Karboksilna kiselina 69-3 (0.0.086 mmol teorijski) je tretirana sa intermedijerom A10 (40 mg, 0.130 mmol), TBTU (47 mg, 0.147 mmol), DMAP (18 mg, 0.147 mmol), DCM (3 mL) i DIPEA (0.075 mL, 0.432 mmol). Reakciona smeša je mešana na ST u toku 20 h, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa HPLC sa reverznom fazom da bi se dobio Primer 69 kao TFA so. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H56F2N6O9S: 846.38; nađeno: 847.75.
[0610] Primer 70. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-10-etil-15-metoksi-4,7-diokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida
[0611] Korak 1. Dobijanje 70-1: U rastvor 1-2 (575 mg, 1.41 mmol), D12 (410 mg, 1.26 mmol) i HATU (696 mg, 1.80 mmol) u DMF (12 mL) dodat je DIPEA (1.0 mL, 5.64 mmol) i reakcija je mešana na st. Posle mešanja u toku 2 h, dodati su dodatni HATU (350 mg, 0.92 mmol) i DIPEA (0.5 mL, 2.8 mmol) u reakciju, i smeša je mešana u toku 14 h. Reakcija je zaustavljena sa zas. NaHCO3rastvorom i ekstrahovana je sa EtOAc, isprani sekvencionalno sa rastvorom soli, osušeni iznad magenizijum sulfata i koncentrovani. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (10-30% EtOAc/heksanes) da bi se dobio intermedijer 70-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H54ClN4O7: 713.37; nađeno: 713.95.
[0612] Korak 2. Dobijanje 70-2: U rastvor 70-1 (542 mg, 0.76 mmol), TEA (0.16 mL, 1.14 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (153 mg, 1.14 mmol) u EtOH (10 mL) dodat je PdCl2(dppf) (62 mg, 0.08 mmol). Reakcija je degasirana sa N2u toku 10 min i zagrejana na 80 °C u toku 1 h. Reakcija je zaustavljena sa zas. NaHCO3rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc, isprana naknadno sa koncentrovnaim rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silikagelu (0-20% EtOAc/heksani) da bi se dobio intermedijer 70-2. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H57N4O7: 705.42; nađeno: 705.05.
[0613] Korak 3 i 4. Dobijanje 70-3: U rastvor 70-2 (470 mg, 0.66 mmol) u DCE (100 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (49 mg, 0.07 mmol) i reakcija je degasirana u toku 30 minuta sa N2. Reakcija je zagrejana na 100 °C u toku 1 h, omogućeno je da se ohladi na st i koncentruje. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silikagelu da bi se dobio proizvod (358 mg; LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H53N4O7: 677.39; nađeno: 677.52) koji je sakupljen sa EtOH (6 mL) i EtOAc (2 mL) i tretiran sa Pd/C (10%, 350 mg). Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i mešana na st u toku 1.5 h. Reakcija je proceđena preko Celite, isprana sa EtOAc i koncentrovana (358 mg intermedijera 70-3) koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H55N4O7: 679.41; nađeno: 679.44.
[0614] Korak 5. Dobijanje 70-4: U rastvor 70-3 (100 mg, 0.15 mmol) u DCM (1 mL) dodat je TFA (1 mL) i mešan je na st u toku 2 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc, isprana sa H2O, zabažena na pH 7 sa zas. NaHCO3rastvorom, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana da bi se dobio ostatak intermedijera 70-4 koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H47N4O7: 623.34; nađeno: 623.44.
[0615] Korak 6. Dobijanje primera 70: U rastvor 70-4 (94 mg, 0.15 mmol), intermedijear A9 (65 mg, 0.22 mmol), TBTU (87 mg, 0.27 mmol) i DMAP (27 mg, 0.22 mmol) u DCM (3 mL) dodat je DIPEA (0.13 mL, 0.75 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 2 h. Reakcija je zaustavljena sa vodom, razblažena sa EtOAc, isprana sa zas. NaHCO3, rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini, 30-85% ACN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovan da bi se dobio primer 70 (23 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 9.32 min.LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H57F2N6O9S: 859.39; nađeno: 859.54.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.31 (s, 1H), 7.83 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.09 -5.68 (m, 2H), 5.51 (s, 1H), 5.07 -4.97 (m, 1H), 4.70 -4.55 (m, 1H), 4.42 -4.29 (m, 2H), 4.22 (dd, J = 12.0, 4.1 Hz, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.75 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.02 (m, 2H), 2.93 -2.67 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 2.13 -1.04 (m, 30H), 1.00 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 0.90 (m, 3H), 0.65 -0.46 (m, 2H).
[0616] Primer 71. Dobijanje (4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-17-metoksi-12-metil-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25aheksadekahidro-1H,11H-1,3:10,13-dimetanohinoksalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11-karboksamida i
Primer 71
[0617] Korak 1: U rastvor amina 18-2 (315 mg, 0.80 mmol), DIPEA (350 μL, 2.0 mmol) i 1:1 smeše kiselina D19 (270 mg, 0.80 mmol) u MeCN (8 mL) dodat je HATU (400 mg, 1.05 mmol). Dobijeni rastvor je mešan u toku 2.5 h na st., za koje vreme je razblažen sa EtOAc (50 mL) i 0.2 N vodenim HCl (30 mL). Faze su odvojene, i organska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (10% do 30% EtOAc u heksanima) dobijeno je 474 mg kao bezbojno ulje koje je direktno korišeno u sledećem koraku .
[0618] Korak 2: Suspenzija proizvoda iz koraka 1 (474 mg, ca.0.65 mmol), PdCl2(dppf)•CH2Cl2(40 mg, 0.049 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (189 mg, 1.41 mmol) u EtOH (8 mL) je poprskana sa Ar u toku nekoliko minuta i dodat je Et3N (200 μL, 1.4 mmol). Dobijena smeša je zagrejana pod Ar do 75 °C pomoću uljanog kupatila. Posle mešanja 2.25 h, reakciona smeša je ohlađena na st. i razblažena je sa EtOAc (35 mL) i poluzasićenim rastvorom soli (20 mL). Faze su odvojene, i organska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu dobijeno je žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku.
[0619] Korak 3: Rastvor proizvoda iz koraka 3 (395 mg, 0.56 mmol) u 1,2-DCE (180 mL) je poprskan sa Ar u toku 10 min. Zhan 1B katalizator za izmenu (61 mg, 0.083 mmol) je zatim dodat kao rastvor u DCE (4 mL), i dobijeni rastvor je zagrejan na 85 °C. Posle mešanja 1.75 h, reakciona smeša je ohlađena na temperaturu okoline, koncentrovana na silikagelu (5 g), i prečišćena hromatografijom na silikagelu (10 do 15 do 25% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 116 mg brzo eluirajući proizvoda i 84 mg sporo eluirajući proizvod.
[0620] Korak 4-5 (brzo eluirajući diastereomer): Brzo eluirajući proizvod iz koraka 3 je rastvoren u 1:1 EtOAc:EtOH (4 mL). Dodat je Pd/C (10 mas. % Pd, 45 mg), i reakcioni sud je prečišćen dva puta sa 1 atm H2. Reakciona smeša je mešana u toku 2.5 h pod 1 atm H2i zatim je proceđena kroz celit sa EtOAc da bi se dobio sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2Cl2(1 mL) i tretiran je sa TFA (2 mL). Posle mešanja 2 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i razdeljena je između EtOAc (15 mL) i 15% zasićenim vodenim NaHCO3(10 mL). Faze su odvojene, i organska faza je isprana sa koncentrovanim rastvorom soli (10 mL), osušena iznad Na2SO4, i proceđena da bi se dobio 71-1.
LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C34H47N4O7: 623.3; nađeno: 623.2.
[0621] Korak 4-5 (sporo eluirajući diastereomer): Sporo eluirajući proizvod iz koraka 3 je rastvoren u EtOAc (1 mL) i EtOH (7 mL). Dodat je Pd/C (10 mas. % Pd, 85 mg), i reakcioni sud je prečišćen dva puta sa 1 atm H2. Reakciona smeša je mešana u toku 3 h pod 1 atm H2i zatim je proceđena preko celita sa EtOAc da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2(1 mL) i tretiran je sa TFA (2 mL). Posle mešanja 2 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i razdeljena je između EtOAc (15 mL) i 15% zasićenim vodenim NaHCO3(10 mL). Faze su odvojene, i organska faza je isprana sa rastvorom soli (10 mL), osušena iznad Na2SO4, i proceđena da bi se dobilo 71-2. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C34H47N4O7: 623.3; nađeno: 623.2.
[0622] Korak 6: Dobijanje primera 71: U suspenziju kiseline 71-1 (49 mg, 0.079 mmol) i amin hidrohlorida A9 (41 mg, 0.14 mmol) u MeCN (1 mL) dodat je DIPEA (100 μL, 0.57 mmol). HATU (45 mg, 0.12 mmol) dodat je u dobijeni rastvor, i reakcija je mešana na st u toku 14.5 h. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (20 mL), 0.2 M vodenim HCl (10 mL) i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2Cl2i koncentrovan je na 2 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (4% do 45% acetona u heksanima) obezbeđen je amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 71. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H57F2N6O9S: 859.4; nađeno: 859.1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.13 (s, 1H), 7.81 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 5.97 (td, J = 55.5, 6.9 Hz, 1H), 5.59 -5.45 (m, 2H), 4.96 (dd, J = 14.4, 6.2 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.13 (dt, J = 12.0, 7.7 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.99 -2.63 (m, 4H), 2.40 -2.23 (m, 2H), 2.15 -0.83 (m, 34H).
[0623] Primer 72. Dobijanje (4aS,8S,11S,12S,13R,25aS)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-17-metoksi-12-metil-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25aheksadekahidro-1H,11H-1,3:10,13-dimetanohinoksalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11-karboksamida.
Primer 72
[0624] Korak 1: Dobijanje primera 72: U suspenziju kiseline 71-2 (49 mg, 0.079 mmol) i amin hidrohlorida A9 (38 mg, 0.13 mmol) u MeCN (1 mL) dodat je DIPEA (100 μL, 0.57 mmol). HATU (41 mg, 0.11 mmol) dodat je u dobijeni rastvor, i reakcija je mešana na st u toku 14.5 h. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (20 mL), 0.2 M vodenim HCl (10 mL) i zasićenim rastvorom soli (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad Na2SO4, proceđena, i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2i koncentrovan je na 2 g silikagela. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (4% do 45% acetona u heksanima) dobijen je amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio primer 72.
LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H57F2N6O9S: 859.4; nađeno: 859.0.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.72 (s, 1H), 9.36 (s, 1H), 7.86 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.25 -7.17 (m, 2H), 5.98 -5.88 (m, 1H), 5.69 (td, J = 55.4, 6.9 Hz, 1H), 4.81 -4.69 (m, 1H), 4.68 -4.56 (m, 2H), 4.33 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.35 (dd, J = 9.7, 7.0 Hz, 1H), 3.24 -3.13 (m, 1H), 2.97 -2.87 (m, 1H), 2.87 -2.72 (m, 2H), 2.57 -2.45 (m, 1H), 2.38 -2.28 (m, 1H), 2.17 -0.71 (m, 34H).
[0625] Primer 73. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-14-metoksi-N-[(1R,2R)-2-metil1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 73
[0626] Primer 73 je pripremljen slično primeru 1 zamenom intermedijera A11 za intermedijer A10 u koraku 8. TFA so primera 73 je izolovana. Analitički HPLC RetVreme: 8.72 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C40H57N6O9S: 797.98; nađeno: 797.54.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.84 (s, 1H); 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.22 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H); 7.13 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 5.87 (d, J = 3.2 Hz, 1H); 4.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.39 (br s, 1H); 4.37 (br d, J = 10 Hz, 1H); 4.15 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H); 3.92 (s, 3H); 3.74 (m, 1H); 3.10-2.88 (m, 1H); 2.80 (td, J =12.4, 4 Hz, 1H); 2.58 (m, 1H); 1.89-1.66 (m, 3H); 1.66-1.38 (m, 11H); 1.52 (s, 3H); 1.23 (t, J =7.2 Hz, 3H); 1.16 (d, J = 6 Hz, 3H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.84 (m, 4H); 0.78-0.66 (m, 1H); 0.55-0.20 (m, 1H).
[0627] Primer 74. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-fluorociklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 74
[0628] Primer 74 je pripremljen slično primeru 1 zamenom intermedijera A12 za intermedijer A10 u koraku 8. TFA so primera 74 je izolovana. Analitički HPLC RetVreme: 8.81 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C39H52F3N6O9S: 837.35; nađeno: 837.54.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.26 (s, 1H); 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.22 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H); 7.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 5.89 (d, J = 3.6 Hz, 1H); 5.82 (td, JH-F= 56 Hz, J = 6.4 Hz, 1H); 4.56, (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.39 (s, 1H); 4.38 (d, J = 12 Hz, 1H); 4.16 (dd, J = 12, 7.2 Hz, 1H); 3.92 (s, 3H); 3.78-3.72 (m, 1H); 3.10-2.89 (m, 1H); 2.80 (td, J = 12, 4 Hz, 1H); 2.63-2.54 (m, 1H); 2.02 (m, 2H); 1.95-1.66 (m, 3H); 1.66-1.36 (m, 9H); 1.22 (t, J =7.2 Hz, 3H); 1.14-1.04 (m, 2H); 1.09 (s, 9H); 1.04-0.92 (m, 2H); 0.78-0.68 (m, 1H); 0.57-0.46 (m, 1H).
[0629] Primer 75. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-{[(1-hlorociklopropil)sulfonil]karbamoil}-2-(difluorometil)ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 75
[0630] Primer 75 je pripremljen slično primeru 1 zamenom intermedijera A13 za intermedijer A10 u koraku 8. TFA so iz primera 75 je izolovan. Analitički HPLC RetVreme: 8.89 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C39H52ClF2N6O9S: 853.32; nađeno: 853.94.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.24 (s, 1H); 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 7.22 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H); 7.13 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 5.88 (d, J = 3.2 Hz, 1H); 5.84 (td, JH-F= 55.6 Hz, J = 6.8 Hz, 1H); 4.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.39 (brs, 1H); 4.38 (d, J = 12 Hz, 1H); 4.16 (dd, J = 12, 7.2 Hz, 1H); 3.92 (s, 3H); 3.77-3.73 (m, 1H); 3.00-2.88 (m, 1H); 2.86-2.75 (m, 1H); 2.64-2.54 (m, 1H); 2.10-1.90 (m, 4H); 1.90-1.37 (m, 12H); 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.96 (m, 2H); 0.78-0.64 (m, 1H); 0.56-0.45 (m, 1H).
[0631] Primer 76. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-1a,9-dimetil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0632] Korak 1. Dobijanje 76-1: HATU (502 mg, 1.32 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.70 mL, 4.02 mmol) su dodati u smešu 46-2 (434 mg, 0.998 mmol) i intermedijera D17 (350 mg, 1.24 mmol) u 16 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-25% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 76-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H51F2N4O7: 701.36; nađeno: 701.57.
[0633] Korak 2. Dobijanje 76-2 and 76-3: Diasteromerna smeša 76-1 (550 mg, 0.786 mmol) i Zhan 1B katalizator (69 mg, 0.094 mmol, Strem) u 157 mL DCE su deoksigenirani pod argonom u toku 25 minuta. Smeša je zatim zagrejana na refluksu u toku 90 minuta. Dodatnih 35 mg Zhan 1B katalizatora je dodato i reakciona smeša je zagrejana do refluksa u toku 45 minuta. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-35% etil acetat u heksanima) da bi se dobili pojedinačni diastereomeri 76-2 (rano eluirajuća komponenta) kao film bele čvrste supstance i 76-3 (kasnije eluirajuća komponenta) kao film braon čvrste supstance. Rano eluirajući 76-2: LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C35H47F2N4O7: 673.33; nađeno: 673.45. Kasno eluirajući 76-3: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H47F2N4O7: 673.33; nađeno: 673.47.
[0634] Korak 3. Dobijanje 76-4: Paladijum na ugljeniku (10 mas % Pd, 51 mg, 0.048 mmol) dodat je u rastvor 76-2 (175 mg, 0.260 mmol) u 9 mL etanola. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i reakcija je mešana u toku noći. Reakciona smeša je proceđena preko Celita i isprana sa etanolom. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio 76-4, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H49F2N4O7: 675.35; nađeno: 675.53.
[0635] Korak 4. Dobijanje 76-5: TFA (1.2 mL, 15.6 mmol) dodat je polako u rastvor 76-4 (155 mg, 0.230 mmol) u 3.4 mL dihlorometana. Posle 4 sata, smešaje koncentrovan pod sniženim pritiskom do bizu suvog. Dobijen ostatak je sakupljen sa 25 mL etil acetata, ispranim sa 15 mL vode, 15 mL zas. NaHCO3(aq), i odvojen. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa etil acetatom (3 x 20 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa 30 mL rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobio 76-5, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C31H41F2N4O7: 619.29; nađeno: 619.44.
[0636] Korak 5. Dobijanje primera 76: HATU (160 mg, 0.421 mmol) i DIPEA (0.20 mL, 1.15 mmol) su dodati u smešu 76-5 (140 mg, 0.226 mmol) i intermedijer A10 (139 mg, 0.457 mmol) u 7.5 mL MeCN pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je sakupljena sa 30 mL etil acetata i isprana sa 20 mL 1 N vodenog HCl. Slojevi su odvojeni i vodeni deo ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana sa koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-45% etil acetat u heksanima) i prep HPLC sa reverznom fazom (50-100% acetonitril u vodi, sa puferom 0.1% trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobila so trifluorosirćetne kiseline primera 76 (Analitički HPLC RetVreme: 8.80 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H53F4N6O9S: 869.35; nađeno: 869.59.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): 9.19 (s, 1H), 7.94 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.78 (td, JH-F= 56 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 5.76-5.74 (m, 1H), 4.56 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.27-4.19 (m, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.76-2.70 (m, 1H), 2.62-2.43 (m, 1H), 2.14-1.94 (m, 3H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.80-1.62 (m, 3H), 1.56-1.52 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.41-1.36 (m, 1H), 1.27-1.18 (m, 1H), 1.11 (s, 9H), 1.09-1.04 (m, 5H), 1.03-0.94 (m, 2H), 0.87-0.81 (m, 3H), 0.17-0.12 (m, 1H).
[0637] Primer 77. Dobijanje (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18, 18-difluoro-14-metoksi-1a,9-dimetil-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 77
[0638] Primer 77 je pripremljen na sličan način kao Primer 76, zamenom kasnije eluirajućeg 76-3 za rano eluirajući 76-2 u koraku 3. Primer 76 je zatim izolovan. Analitički HPLC RetVreme: 8.46 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H53F4N6O9S: 869.35; nađeno: 869.53.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): 7.95 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.58-6.54 (m, 1H), 5.75 (td, JH-F= 55 Hz, J = 6.8 Hz, 1H), 5.54-5.50 (m, 1H), 4.65 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.26-4.18 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.92-2.71 (m, 1H), 2.50-1.94 (m, 6H), 1.68-1.57 (m, 2H), 1.56-1.52 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 1,50-1.47 (m, 1H), 1.46-1.38 (m, 3H), 1.44 (s, 3H), 1.27-1.18 (m, 2H), 1.17-1.01 (m, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.94-0.82 (m, 4H), 0.17-0.12 (m, 1H).
[0639] Primer 78. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-14-cijano-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,17,17a, 18,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0640] Koraci 1-4. Intermedijer 78-4 je pripremljen slično Intermedijeru 17-4, pomoću E6 umesto E3.
[0641] Korak 5: U rastvor 78-4 (90 mg, 0.135 mmol) u EtOH (0.7 mL) dodat je NaBH4(21 mg, 0.54 mmol). Reakciona smeša je mešana na st u toku 1 h. Posle kojeg vremena reakciona smeša je proceđena kroz sloj Celita i koncentrovana da bi se dobio intermedijer 78-5, koji je zatim korišen bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H45F2N5O6 : 669.76; nađeno: 669.73.
[0642] Koraci 6 i 7: Dobijanje primera 78: U rastvor 78-5 (35 mg, 0.31 mmol) u DCM (0.4 mL), dodat je TFA (0.2 mL) i smeša je mešana na 20 °C u toku 3 h. Rastvarači su uklonjeni in vacuo da bi se dobio ostatak koji je zatim korišćen bez daljeg prečišćavanja. U suspenziju ovog ostatka (33 mg, 0.05 mmol) i intermedijer A10 (27 mg, 0.1 mmol) u DCM (0.3 mL) dodat je TBTU (26 mg, 0.08 mmol) i DIPEA (35 μL, 0.2 mmol) na st. Posle 1h, rastvor je direktno prečišćen sa reverznom fazom HPLC (Gemini 5u C18 110A kolona, 50-100% ACN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovan da bi se dobila TFA so Primera 78. Analitički HPLC RetVreme: 7.994 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H49F4N7O8S: 863.92; nađeno: 864.20..<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.35 (s, 1H), 7.29 (d,1H), 7.18 (dd,1H), 6.64 (d, 1H), 6.01-5.82 (m, 2H), 5.41 (m, 2H), 4.57 -4.07 (m, 5H), 3.52 (m, 1H), 2.55-2.28 (m, 2H), 2.06 -1.98 (m, 2H), 1.85 (m, 1H), 1.69 -1.37 (m, 9H), 1.33 (m, 2H), 1.06-0.87 (m, 16H), 0.70 (m, 2H)., 0.49 (m, 1H).
[0643] Primer 79. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-hloro-N-[(1R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-10-metil-4,7-diokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0644] Korak 1. Dobijanje 79-1. Sulfonil hinoksalin E5 (920 mg, 3.32 mmol) je suspendovan u MeCN (17 mL), zatim tretiran sa intermedijerom B1 (1.00 g, 3.32 mmol) i Cs2CO3. Posle 17 h, reakciona smeša je proceđena preko celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen sa hromatografskom kolonom od silikagela (10% do 30% EtOAc/Heks) da bi se dobio etar 79-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M-Boc+2H]<+>izrač. za C18H22Cl2N3O3: 398.10; nađeno: 398.12.
[0645] Korak 2. Dobijanje 79-2. terc-Butil karbamata 79-1 (513 mg, 1.03 mmol) je rastvoren u DCM (10 mL) i tretiran sa HCl (4.0 mL u dioksanu, 5 mL, 20 mmol). Reakciona smeša je mešana na ST u toku 1.5 h, zatim konncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio amin hidrohlorid 79-2, koji je dalje korišćen bez prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C18H22Cl2N3O3: 398.10; nađeno: 398.16.
[0646] Korak 3. Dobijanje 79-3. Amin hidrohlorid 79-2 (1.03 mmol teorijski) i intermedijer D12 (336 mg, 1.04 mmol) su sakupljeni i tretirani sa BEP (285 mg, 1.04 mmol), EtOAc (9 mL), NMP (1 mL) i DIPEA (0.90 mL, 5.2 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50 °C u toku 3 h, zatim ohlađena na ST. Posle dodatnih 15 h, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc. Organski rastvor je ispran sa zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, zatim osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen na hromatografskoj koloni od silikagela (10% do 25% EtOAc/Heks) da bi se dobio amid 79-3. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H49Cl2N4O6: 703.30; nađeno: 703.91.
[0647] Korak 4. Dobijanje 79-4. Hloro hinoksalin 79-3 (541 mg, 0.769 mmol) je tretiran sa kalijum viniltrifluoroboratom (154 mg, 1.15 mmol), aduktom Pd(dppf)Cl2dihlorometana (63 mg, 0.077 mmol), EtOH (8 mL) i trietilaminom (0.16 mL, 1.15 mmol). Mešana smeša je zagrejana na refluks u toku 1 h, zatim ohlađena na ST i razblažena sa EtOAc. Organski rastvor je ispran sa zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim rastvorom soli, zatim osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni od silicijum dioksida (10% do 30% EtOAc/Heks) da bi se dobio vinil hinoksalin 79-4. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H52ClN4O6: 695.36; nađeno: 695.10.
[0648] Korak 5. Dobijanje 79-5. Vinil hinoksalin 79-4 (390 mg, 0.561 mmol) je tretiran sa DCE (112 mL) i Zhan-B katalizator (38 mg, 0.0561 mmol). Mešana smeša je degasirana uvođenjem N2u toku 25 min, zatim zagrejana do refluksa pod Ar atmosfere. Posle 1.5 h, smeša je ohlađena na ST i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen sa hromatografskom kolonom od silicijumdioksida (10% do 30% EtOAc/Heks) da bi se dobio makrocikl 79-5 . LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H48ClN4O6: 667.33; nađeno: 667.86.
[0649] Korak 6. Dobijanje 79-6. Makrocikl 79-5 (198 mg, 0.297 mmol) je tretiran sa EtOAc (100 mL) i 5% Rh/aluminijum dioksidom (100 mg). H2gas je uveden rastvor u toku 1 min i reakciona smeša je mešana na ST u atmosferi H2. Posle 45 min, dodat je još 5% Rh/aluminijumoksid (200 mg). Ponovo, je uveden gasoviti H2u rastvor u toku 1 min i reakciona smeša je mešana na ST u atmosferi H2. Posle još 1 h, reakciona smeša je proceđena preko celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Materijal (79-6) je izveden bez prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H50ClN4O6: 669.34; nađeno: 669.63.
[0650] Korak 7. Dobijanje 79-7. Makrocikl 79-6 (0.297 mmol terijski) je tretiran sa DCM (10 mL) i TFA (10 mL). Reakciona smeša je mešana na ST u toku 14 h, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u EtOAc i organski rastvor je ispran sa zasićenim vodenim NaHCO3i 1 M limunskom kiselinom. Koncentrovani rastvor soli je dodat posle ispiranja limunske ksieline da bi se razbila obrazovana emulzija. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, proceđen i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni od silikagela (100% EtOAc) da bi se dobio nečisti 79-7 koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H42ClN4O6: 613.28; nađeno: 613.22.
[0651] Korak 8. Dobijanje primera 79. Karboksilna kiselina 79-7 (0.264 mmol teorijski) je tretirana sa intermedijerom A9 (156 mg, 0.537 mmol), TBTU (170 mg, 0.528 mmol), DMAP (65 mg, 0.528 mmol), DCM (2 mL) i DIPEA (0.23 mL, 1.3 mmol). Reakciona smeša je mešana na ST u toku 19 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen sa HPLC sa reverznom fazom da bi se dobio primer 79 kao TFA so. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H52ClF2N6O8S: 849.32; nađeno: 849.16.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.17 (s, 1H), 7.86 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.77 (t, J = 3.5 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 5.84 (td, J = 55.7, 6.7 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.98 (t, J = 10.6 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 4.42 -4.26 (m, 2H), 4.19 (dd, J = 12.0, 3.9 Hz, 1H), 3.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 2.99 (tt, J = 8.2, 4.8 Hz, 2H), 2.78 (ddt, J = 21.6, 14.2, 5.7 Hz, 2H), 2.28-2.12 (m, 1H), 2.08-1.16 (m, 19H), 1.16-0.96 (m, 17H), 0.58 (dd, J = 8.3, 4.1 Hz, 1H), 0.55 -0.44 (m, 1H).
[0652] Primer 80. Dobijanje (3aR,7S,10S,11S,12R)-1-acetyl-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-16-metoksi-11-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanopyrrolo[2’,3’:18, 19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida
rmer
[0653] Korak 1. Dobijanje 80-1: Amin 18-2 (195 mg, 0.495 mmol) i intermedijer D18 (192.8 mg, 0.544 mmol) su rastvoreni u DMF (10 mL). DIPEA (430 μL, 2.48 mmol) je dodat a zatim HATU (207 mg, 0.544 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 1.5 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i sirovi ostatak je direktno prečišćen hormatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio 80-1 (2:1 odnos diastereoizomera u korist poželjnog). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H53ClN5O8: 730.3; nađeno: 730.48.
[0654] Korak 2. Dobijanje 80-2: Mešana heterogena smeša 80-1 (314 mg, 0.431 mmol), PdCl2(dppf)•CH2Cl2(35.2 mg, 0.043 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (86.6 mg, 0.646 mmol) u EtOH (2.2 mL) je poprskana sa argonom u toku 15 min. Trietilamin (320 μL, 2.3 mmol) je dodat i smeša je zagrejana na 80 °C. Posle 40 min, reakciona smeša je ohlađena na temperaturu okloline i razblažena je sa toluenom (5 mL). Dobijena smeša je koncentrovana i sirovi ostatak je direktno prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio 80-2 (2:1 odnos diastereoizomera u korist poželjnog). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H56N5O8: 722.4; nađeno: 722.54.
[0655] Korak 3. Dobijanje 80-3: 80-2 (228 mg, 0.320 mmol) je rastvoren u DCE (64 mL) i rastvor je poprskan sa Ar u toku 15 min. Zhan 1B katalizator (23 mg, 0.032 mmol) je dodat i dobijeni rastvor je mešan na 100 °C pod Ar. Posle 45 min, reakciona smeša je ohlađena na st, koncentrovana je in vacuo i direktno je prečišćena hromatografijom na silkagelu (0-100% gradijent acetat/heksani) da bi se dobio 80-3 (5:2 odnos diastereoizomera u korist poželjnog). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H52N5O8: 694.37; nađeno: 694.53.
[0656] Korak 4: Dobijanje 80-4: Olefin 80-3 (164 mg, 0.237 mmol) je rastvoren u etanolu (1.19 mL) i reakcioni sud je prečišćen sa Ar. Dodat je Pd/C (10 mas % Pd, 25 mg) u jednoj porciji i reakcioni sud je prečišćen tri puta sa H2. Reakcija je mešana na st pod 1 atm H2u toku 2h i razblažena je sa etil acetatom (10 mL). Dobijena smeša je proceđena kroz sloj Celita i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak 80-4 (5:2 odnos diastereoizomera u korist poželjnog) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja (LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H64N6O8: 696.39; nađeno: 696.56.
[0657] Korak 5. Dobijanje 80-5: U rastvor 80-4 (164 mg, 240 μmol) u DCM (1.2 mL) dodat je TFA (0.45 mL) na st. Posle 7 h, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (50 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana sa 1N vodenim rastvorom natrijum hidroksida (40 mL). Vodeni sloj je polako zakišeljen do pH=3 sa koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan je sa etil acetatom (2 x 50 mL). Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata ikoncentrovani su in vacuo. Ostatak je azeotropno osušen sa toluenom (3 x 5 mL) da bi se dobio 80-5 (5:2 odnos diastereoizomera u korist poželjnog) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C33H46N6O8: 640.33; nađeno: 640.48.
[0658] Korak 6. Dobijanje primera 80: U rastvor 80-5 (140 mg, 219 μmol) i intermedijera A10 (133 mg, 438 μmol) u MeCN (1.1 mL) dodat je HATU (169 mg, 438 μmol) a zatim DIPEA (190 μL, 1.09 mmol) na st u atmosferi argona. Posle 15 h, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, je prečišćena preparativnim HPLC (Gemini 5u C18110A kolona, 5-100% MeCN/H2O, modifikator 0.1% trifluorosirćetna kiselina) i liofilizovana je da bi se dobio primer 80 (5:2 odnos diastereoizomera u korist poželjnog) kao svetlo žuta čvrsta TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 7.91 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C42H58F2N7O10S: 890.39; nađeno: 890.64.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, Diastereomer u manjoj količini označen kao *) δ 9.18 (s, 1H), 9.14 (s, 1H*), 7.78 (br d, J = 9.0 Hz, 1H, 1H*), 7.21 (br d, J = 9.0 Hz, 1H, 1H*), 7.18 (br s, 1H, 1H*), 5.80 (br td, JH-F= 55.8 Hz, J = 6.8 Hz, 1H, 1H*), 5.64 (br s, 1H, 1H*), 5.23 (d, J = 4.7 Hz, 1H*), 5.15 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 6.7 Hz, 1H, 1H*), 4.46 (d, J = 12.1 Hz, 1H*), 4.41 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.30 -4.22 (m, 1H, 1H*), 4.22 -4.07 (m, 1H, 1H*), 4.02 -3.79 (m, 1H, 1H*) 3.92 (br s, 3H, 3H*), 3.73 -3.52 (m, 2H, 2H*), 3.05 -2.68 (m, 3H, 3H*), 2.40 -2.21 (m, 1H, 1H*), 2.13 -1.94 (m, 4H, 4H*), 1.83 (s, 2H, 2H*), 1.75 -1.20 (m, 12H, 12H*), 1.12 (s, 9H*),1.10 (s, 9H), 1.06 (br d, J = 7.3 Hz, 3H, 3H*), 0.92-0.85 (m, 4H, 4H*).
[0659] Primer 81. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-19,19-difluoro-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
Primer 81
[0660] Primer 81 je pripremljen na sličan način kao Primer 62, zamenom Intermedijera A10 za intermedijer A9 u koraku 5. Primer 81 je izolvan. Analitički HPLC RetVreme: 9.36 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H55F4N6O9S: 895.36; nađeno: 895.59.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.23 (s, 1H), 7.93 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.80 (td, JH-F= 56 Hz, J = 6.8 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.36 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.22-4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.79-2.71 (m, 1H), 2.61-2.52 (m, 1H), 2.26-2.16 (m, 1H), 2.08-1.92 (m, 4H), 1.82-1.64 (m, 3H), 1.60-1.54 (m, 3H), 1.53-1.46 (m, 1H), 1.52 (s, 3H), 1.44-1.26 (m, 5H), 1.08 (s, 9H), 1.07-0.98 (m, 4H), 0.94-0.84 (m, 3H), 0.60-0.48 (m, 2H).
[0661] Primer 82. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-19,19-difluoro-10-metil-4,7-diokso1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida
Primer 82
[0662] Intermedijer 82-1 je pripremljen na sličan način kao intermedijer 46-2, zamenom intermedijera E3 sa E4 u koraku 1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C26H34F2N3O6: 506.25; nađeno: 506.59.
[0663] Primer 82 je pripremljen na sličan način kao primer 62, zamenom intermedijera 82-1 za intermedijer 46-2 u koraku 1. Primer 82 je izolovan. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H52F4N6O8S: 864.35; nađeno: 865.43.<1>H NMR (400 MHz, cdcl3) δ 9.82 (s, 1H), 7.89 -7.72 (m, 2H), 7.67 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.12 -5.65 (m, 2H),
5.34 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.45 (t, J = 9.3 Hz, 2H), 4.27 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 11.9, 3.9 Hz, 1H), 2.77 -2.64 (m, 2H), 2.27 -2.12 (m, 1H), 2.13 -1.86 (m, 4H), 1.82 -1.19 (m, 15H), 1.18 -0.98 (m, 13H), 0.89 -0.77 (m, 2H), 0.53 (dd, J = 13.3, 8.1 Hz, 1H), 0.43 (d, J = 4.2 Hz, 1H).
[0664] Primer 83. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-14-(trifluorometoksi)-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
(kasnije eluiran)
[0665] Korak 1. Dobijanje 83-1: HATU (3.06 g, 8.05 mmol) dodat je brzo u rastvor 3,3-difluoro-2-oksopent4-enske kiseline (1.03 g, 6.86 mmol) u 10 mL DMF. Zatim je dodata smeša 4-(trifluorometoksi)benzen-1,2-diamins (1.29 g, 6.71 mmol) i DIPEA (1.4 mL, 8.05 mmol) u 12 mL DMF. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je sipana u 175 mL vode i ekstahovana sa etil acetatom (4 x 100 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa 50% rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni čvrsti rastvor je prečišćen hromatogarfijom na koloni od silikagela (0-25% etil acetat u heksanima) da bi se dobio intermedijer 83-1, kasniji eluirajući proizvod. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C12H8F5N2O2: 307.04; nađeno: 307.29.
[0666] Korak 2. Dobijanje 83-2: Rastvor 83-1 (924 mg, 3.01 mmol) u 2 mL DMF je tretiran sa POCl3(0.56 mL, 6.04 mmol) i zagrejan na 80 °C u toku 2.5 sati. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je razblažena sa 25 mL EtOAc i polako je dodata u 20 mL vode uz intenzivno mešanje. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana uzastopno sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonata i zasićenim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio intermedijer 83-2. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C12H7ClF5N2O: 324.01; nađeno: 324.13.
[0667] Korak 3. Dobijanje 83-3: Cs2CO3(606 mg, 1.86 mmol) dodat je u smešu intermedijera 83-2 (460 mg, 1.54 mmol) i intermedijera B4 (564 mg, 1.79 mmol) u 12 mL DMF na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrejana na 85 °C u toku noći. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi, smeša je sipana u 50 mL vode i ekstrahovana sa etil acetatom (4 x 40 mL). Spojena organska supstanca je ispana sa 90 mL 50% rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je prečišćena na hromatografskoj koloni od silikagela (0-30% etil acetat u heksanima) da bi se dobilo 83-3. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C28H35F5N3O6: 604.24; nađeno: 604.20.
[0668] Korak 4. Dobijanje 83-4: Hinoksalin etar 83-3 (290 mg, 0.647 mmol) je rastvoren u 4.1 mL tercbutil acetata i 1.1 mL dihlorometana na sobnoj temperaturi. MeSO3H (0.25 mL, 3.88 mmol) dodat je u kapima i reakciona smeša mešana na st u toku 2 h. Reakciona smeša je premeštena u smešu koja se meša EtOAc (20 mL) i zasićenog vodenog NaHCO3(30 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobio amin 83-4. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C23H27F5N3O4: 504.18; nađeno: 504.31.
[0669] Korak 5. Dobijanje 83-5: HATU (260 mg, 0.684 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.40 mL, 2.30 mmol) su dodati u smešu 83-4 (258 mg, 0.512 mmol) i intermedijera D11 (177 mg, 0.657 mmol) u 7 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-20% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 83-5. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H48F5N4O7: 755.34; nađeno: 755.49.
[0670] Korak 6. Dobijanje 83-6: Smeša 83-5 (215 mg, 0.285 mmol) i Zhan 1B katalizator (29 mg, 0.040 mmol, Strem) u 60 mL DCE je deoksigeniran sa argonom u toku 15 minuta. Smeša je zatim zagrejana do refluksa u toku 90 minuta. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-40% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 83-6. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H44F5N4O7: 727.31; nađeno: 727.43.
[0671] Korak 7. Dobijanje 83-7: Paladijum na ugljeniku (10 mas % Pd, 40 mg, 0.038 mmol) dodat je u rastvor 83-6 (129 mg, 0.178 mmol) u 9 mL etanola. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i reakcija mešana u toku noći. Reakciona smeša je proceđena preko Celita i isprana sa etanolom. Filtrat je koncentrovana in vacuo da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen pomoću hromatografske kolone na silikagelu (0-30% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 83-7. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H46F5N4O7: 729.32; nađeno: 729.45.
[0672] Korak 8. Dobijanje 83-8: TFA (0.62 mL, 8.09 mmol) dodat je polako u rastvor 83-7 (79 mg, 0.109 mmol) u 1.8 mL dihlorometana. Posle 4 sata, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom blizu suvog. Dobijeni ostatak je sakupljen sa 10 mL etil acetata, ispran sa 8 mL vode, 8 mL zas. NaHCO3(aq), i odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (3 x 10 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa 10 mL koncentrovanog rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobio 83-8, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C31H38F5N4O7: 673.26; nađeno: 673.10.
[0673] Korak 9. Dobijanje primera 83: HATU (84 mg, 0.221 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.095 mL, 0.547 mmol) su dodati u smešu 83-8 (72 mg, 0.107 mmol) i intermedijera A10 (66 mg, 0.217 mmol) u 4 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku u toku noći, reakciona smeša je sakupljena sa 20 mL etil acetata i isprana sa 10 mL 1 N vodenog HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana sa 50% rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetat u heksanima) i prep HPLC sa reverznom fazom (50-100% acetonitril u vodi, sa puferom 0.1% trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobila so trifluorosirćetne kiseline iz primers 83.
Analitički HPLC RetVreme: 9.12 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H50F7N6O9S: 923.32; nađeno: 923.10.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.26 (s, 1H), 8.01-7.91 (m, 2H), 7.78-7.63 (m, 1H), 5.95 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.83 (td, JH-F= 61 Hz, J = 6.0 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 4.22-4.11 (m, 1H), 3.72-3.66 (m, 1H), 2.71-2.49 (m, 2H), 2.18-1.94 (m, 3H), 1.90-1.75 (m, 3H), 1.74-1.62 (m, 2H), 1.60-1.48 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.50-1.24 (m, 4H), 1.22-1.18 (m, 2H), 1.08 (s, 9H), 1.07-0.84 (m, 5H), 0.81-0.64 (m, 1H), 0.54-0.44 (m, 1H).
[0674] Primer 84. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-14-cijano-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-dodekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 78
Primer 84
[0675] Korak 1: Dobijanje primera 84. Sirovi primer 78 (8.7 mg, 0.01 mmol) je ponovo rastvoren u ACN (0.3 mL) i tretiran sa DDQ (3.4 mg, 0.015 mmol). Posle 10 min, rastvor je direktno prečišćen sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini 5u C18110Å kolona, 50-100% ACN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovan da bi se dobila TFA so primera 84. Analitički HPLC RetVreme: 8.385 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H47F4N7O8S: 861.90; nađeno: 862.89.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD)<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.21 (s, 1H), 8.25 (d,1H), 8.20 (d,1H), .7.91 (dd, 1H),6.32 (m, 2H), 5.97-5.61 (m, 2H), 4.82 (m, 1H), 4.58 -4.13 (m, 4H), 3.71-3.49 (m, 3H), 2.61 (m, 2H), 2.23 (m, 1H), 2.00 -1.80 (m, 3H), 1.56 -1.20 (m, 10H), 1.20 (m, 3H), 1.07 (m, 8H), 0.98-0.82 (m, 3H)., 0.55 (m, 1H).
[0676] Primer 85. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-14-(difluorometoksi)-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 85
[0677] Primer 85 je pripremljen slično primeru 83, korišćenjem intermedijera E7 umesto 83-2 u koraku 3. Analitički HPLC RetVreme: 8.725 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H50F6N6O9S: 904.92; nađeno: 905.16.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.23 (s, 1H), 7.88 (d,1H), 7.76 (d,1H), .7.62 (dd, 1H), 7.03 (dd, 1H), 5.94-5.65 (m, 3H), 4.57 -4.14 (m, 4H), 3.66 (m, 1H), 2.57 (m, 2H), 2.01 -1.97 (m, 3H), 1.82 -1.77 (m, 3H), 1.64 (m, 1H), 1.57 -1.33 (m, 10H), 1.20 (m, 3H), 1.06-0.87 (m, 12H), 0.87 (m, 2H)., 0.48 (m, 1H).
[0678] Primer 86. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-15-fluoro-10-metil-4,7-diokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononade cino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0679] Korak 1. Dobijanje 86-1: U rastvor E8 (1.5 g, 5.75 mmol) i B1 (1.9 g, 6.34 mmol) u MeCN (50 mL) dodat je Cs2CO3(3.09 g, 9.49 mmol). Posle mešanja na st u toku 60 h, reakciona smeša je proceđena preko celita i koncentrovana. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (5-35% EtOAc/heksani) da bi se dobio proizvod 86-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C23H30ClFN3O5-Boc: 482.13; nađeno: 382.04.
[0680] Korak 2. Dobijanje 86-2: U rastvor 86-1 (747 mg, 1.55 mmol) u CH2Cl2(5 mL) dodat je HCl (5 mL, 4 M u dioksanu) i omogućeno je da se meša u toku 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C18H23Cl2FN3O3-HCl: 382.13; nađeno: 382.08.
[0681] Korak 3. Dobijanje 86-3: U rastvor 86-2 (397 mg, 0.95 mmol), D12 (308 mg, 0.95 mmol) i BEP (312 mg, 1.14 mmol) u EtOAc (9 mL) i NMP (1 mL) dodat je DIPEA (0.7 mL, 3.8 mmol) i reakcija je mešana na 50 °C u toku noći. Reakcija je zaustavljena sa zas. NaHCO3rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc, isprana naknadno sa koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen na silikagelu da bi se dobio 86-3. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C36H49ClFN4O6: 687.33; nađeno: 687.44.
[0682] Korak 4. Dobijanje 86-4: U rastvor 86-3 (266 mg, 0.39 mmol), TEA (0.08 mL, 0.58 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (78 mg, 0.58 mmol) u EtOH (8 mL) dodat je PdCb(dppf) (32 mg, 0.04 mmol). Reakcija je degasirana sa N2u toku 10 min i zagrejana na 75 °C u toku 1 h. Reakcija je zaustavljena sa zas. NaHCO3rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc, isprana zatim sa koncentrovanim rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćena pomoću hromatografije na silikagelu (0-25% EtOAc/heksani) da bi se dobilo 86-4. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C38H62FN4O6: 679.39; nađeno: 679.52.
[0683] Korak 5 i 6. Dobijanje 86-5: U rastvor 86-4 (262 mg, 0.38 mmol) u DCE (50 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (28 mg, 0.04 mmol) i reakcija je degasirana u toku 25 minuta sa N2. Reakcija je zagrejana na 100 °C u toku 1 h, omogućeno da se ohladi na st i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-30% EtOAc/heksani) da bi se dobio olefinski proizvod (182 mg; LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H48FN4O6: 651.36; nađeno: 651.38) koji je sakupljen sa EtOH (5 mL) i EtOAc (1 mL) i tretiran sa Pd/C (10%, 55 mg). Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i mešana na st u toku 1.25 h. Reakcija je proceđena preko Celita, isprana sa EtOAc i koncentrovana da se dobije 86-5 koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H50FN4O6: 653.37; nađeno: 653.46.
[0684] Korak 7. Dobijanje 86-6: U rastvor 86-5 (182 mg, 0.28 mmol) u DCM (3 mL) dodat je TFA (3 mL) i mešan na st u toku 18 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc, isprana sa H2O, zabažena do pH 7 sa zas. NaHCO3rastvorom, isprana sa 1M rastvorom limunske kiseline, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana da se dobije ostatak 86-6 koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C32H42FN4O6: 597.31; nađeno: 597.15.
[0685] Korak 8. Dobijanje primera 86: U rastvor 86-6 (24 mg, 0.04 mmol), intermedijera A10 (18 mg, 0.06 mmol), TBTU (23 mg, 0.07 mmol) i DMAP (7 mg, 0.06 mmol) u DMF (3 mL) dodat je DIPEA (35 μL, 0.20 mmol) i reakcija je mešana na st u toku 3 h. Dodatni intermedijer A10 (18 mg, 0.06 mmol), TBTU (23 mg, 0.07 mmol), DMAP (7 mg, 0.06 mmol), i DIPEA (35 μL, 0.20 mmol) dodat je i reakcija je mešana na st u toku 16 h. Sirovi materijal je prečišćen sa HPLC sa reverznom fazom (Gemini, 30-85% ACN/H2O 0.1% TFA) i liofilizovan da se dobije primer 86 kao TFA so. Analitički HPLC RetVreme: 9.25 min.LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H54F3N6O8S: 847.37; nađeno: 847.18.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.18 (s, 1H), 8.13 -7.84 (m, 2H), 7.59 -7.21 (m, 2H), 6.07 -5.58 (m, 2H), 5.00 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.45 -4.27 (m, 2H), 4.20 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 3.112.94 (m, 3H), 2.92 -2.70 (m, 4H), 2.32 -2.14 (m, 1H), 2.10 -1.94 (m, 2H), 1.86 (m, 1H), 1.77 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 1.74 -1.21 (m, 15H), 1.21 -1.01 (m, 10H), 1.00 -0.84 (m, 2H), 0.60 (m, 1H), 0.53 (m, 1H).
[0686] Primer 87. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-cijano-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 84 Primer 87
[0687] Koraci 1 i 2. Dobijanje primera 87. U rastvor primera 84 (100 mg, 0.11 mmol) u EtOAc (3 mL) dodat je Pd/C (10 mas % Pd, 30 mg). Reakcioni sud prečišćavan dva puta sa H2i mešan je na st pod 1 atm H2u toku 6h. Posle tog vremena reakciona smeša je proceđena kroz sloj Celita i koncentrovana. Reakcija je redukovala hinoksalinski prsten. Sirovi materijal je ponovo rastvoren u ACN (5 mL) i tretiran sa DDQ (34 mg, 0.15 mmol). Posle 1h, rastvor je direktno prečišćen HPLC sa reverznom fazom (Gemini 5u C18 110Å kolona, 50-100% ACN/H2O 0.1% TFA) i liofilizocan da bi se dobila TFA so primera 87. Analitički HPLC RetVreme: 8.463 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H49F4N7O8S: 863.92; nađeno: 864.18.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.27 (d,1H), 8.20 (d,1H), .7.91 (dd, 1H), 5.93-5.82 (m, 3H), 4.88 (m, 1H), 4.58 -4.13 (m, 5H), 3.71-3.49 (m, 3H), 2.59 (m, 2H), 2.03 -1.96 (m, 3H), 1.82 -1.77 (m, 3H), 1.65 -1.35 (m, 11H), 1.20 (m, 3H), 1.06-0.87 (m, 8H), 0.71 (m, 2H)., 0.48 (m, 1H).
[0688] Primer 88. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-hloro-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18,18-difluoro-9-metil-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida
(kasnije eluiran)
korak 6 korak 7 korak
Primer 88
[0689] Korak 1. Dobijanje 88-1: HATU (4.56 g, 12 mmol) dodat je polako u rastvor 3,3-difluoro-2-oksopent4-enska kiselina (1.52 g, 10.1 mmol) u 14 mL DMF. Zatim je dodata smeša 4-hlorobenzen-1,2-diamina (1.43 g, 10 mmol) i DIPEA (2.1 mL, 12 mmol) u 20 mL DMF. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je sipana u 30 mL 1 N vodenog HCl i ekstrahovana sa etil acetatom (5 x 40 mL). Spojena organska supstanca je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je prečišćena pomoću hromatografske kolone od silikagela (0-45% etil acetata u heksanima) da bi se dobio intermedijer 88-1 kao kasno eluirajući proizvod.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.1 (s, 1H), 7.99 (m, 1H), 7.61-7.58 (m, 1H), 7.33-7.31 (m, 1H), 6.61-6.48 (m, 1H), 5.96 -5.90 (m, 1H), 5.67-5.63 (m, 1H).
[0690] Korak 2. Dobijanje 88-2: Rastvor intermedijera 88-1 (648 mg, 2.53 mmol) u 2 mL DMF je tretiran sa POCl3(0.49 mL, 5.26 mmol) i tretiran na 80 °C u toku 3 sata. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je razblažena sa 20 mL EtOAc i polako je dodato 15 mL vode uz intenzivno mešanje. Slojevi su odvojeni i voda je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana zatim sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i zasićenim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio intermedijer 88-2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.184 (d, J = 1.6Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 9.4, 2 Hz, 1H), 6.56-6.43 (m, 1H), 5.88 (m, 1H), 5.70 (d, J = 10.8 Hz, 1H).
[0691] Korak 3. Dobijanje 88-3: Cs2CO3(660 mg, 2.03 mmol) dodat je u smešu intermedijera 88-2 (425 mg, 1.54 mmol) i intermedijera B1 (570 mg, 1.89 mmol) u 9 mL DMF na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrejana na 85 °C u toku noći. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je sipana u 40 mL vode i ekstrahovana sa etil acetatom (4 x 30 mL). Spojena organska supstanca je ispana sa 75 mL 50% rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je prečišćena na hromatografskoj koloni od silikagela (0-20% etil acetata u heksanima) da se dobije 88-3. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C26H33ClF2N3O6: 540.20; nađeno: 540.12.
[0692] Korak 4. Dobijanje 88-4: Hinoksalin etar 88-3 (458 mg, 0.848 mmol) je rastvoren u 4.2 mL tercbutil acetata i 1.2 mL dihlorometana na sobnoj temperaturi. MeSO3H (0.30 mL, 4.67 mmol) dodat je u kapima i reakciona smeša mešana na st u toku 2 h. Reakciona smeša je preneta u smešu koja se meša EtOAc (20 mL) i zasićenog vodenog NaHCO3(30 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 20 mL). Spojena organaska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobio amin 88-4 kao film žute čvrste supstance LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C21H25ClF2N3O3: 440.15; nađeno: 440.29.
[0693] Korak 5. Dobijanje 88-5: HATU (360 mg, 0.947 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.51 mL, 2.91 mmol) su dodati u smešu 88-4 (320 mg, 0.727 mmol) i intermedijera D11 (237 mg, 0.880 mmol) u 10 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-20% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 88-5. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C35H46ClF2N4O6: 691.30; nađeno: 691.50.
[0694] Korak 6. Dobijanje 88-6: Smeša 88-5 (390 mg, 0.564 mmol) i Zhan 1B katalizator (55 mg, 0.075 mmol, Strem) u 100 mL DCE je deoskigeniran sa argonom u toku 15 minuta. Smeša je zatim zagrejana na refluksu u toku 110 minuta. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-25% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 88-6. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H42ClF2N4O6: 663.27; nađeno: 663.33.
[0695] Korak 7. Dobijanje smeše 88-7: Rodijum na aluminijum oksidu (5 mas % Rh, 31 mg, 0.015 mmol) dodat je u rastvor 88-6 (90 mg, 0.136 mmol) u 9 mL etanola. Atmosfera je zamenjena sa vodonikom i smeša je mešana u toku noći. Reakcija je proceđena preko Celita, ispiranjem sa etanolom. LC/MS analizom pokazano je da je preostalo oko 60% polaznog materijala. Rastvor ostatka u 8 mL etanola je ponovo podvrgnut uslovima hidrogenizacije pomoću 25 mg rodijuma na aluminijum oksidu (5 mas % Rh) u toku noći. Reakcija je proceđena preko Celita, isprana sa etanolom. Filtrat je koncentrovana in vacuo da bi se dobio kao ostatak, koji je prečišćen pomoću hromatografije na koloni od silika gela (0-30% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 88-7. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H44ClF2N4O6: 665.28; nađeno: 665.48.
[0696] Korak 8. Dobijanje 88-8: TFA (0.45 mL, 5.86 mmol) dodat je polako u rastvor 88-7 (52 mg, 0.078 mmol) u 2 mL dihlorometana. Posle 3 sata, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom skoro do suvog. Dobijeni ostatak je sakupljen sa 10 mL etil acetata, ispran sa 8 mL vode, 8 mL zas. NaHCO3(aq), i odvojena. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa etil acetatom (3 x 10 mL). Spojena organska supstanca je isprana sa 10 mL koncentrovanog rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog MgSO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo da bi se dobio 88-8, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C29H36ClF2N4O6: 609.22; nađeno: 609.42.
[0697] Korak 9. Dobijanje primera 88: HATU (58 mg, 0.153 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.065 mL, 0.374 mmol) su dodati u smešu 88-8 (45 mg, 0.074 mmol) i intermedijera A10 (49 mg, 0.161 mmol) u 2.5 mL acetonitrila pod argonom. Posle mešanja u toku u toku noći, reakciona smeša je sakupljena sa 15 mL etil acetata i isprana sa 10 mL 1 N vodenog HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Spojena organska supstanca je isprana sa 50% rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-50% etil acetat u heksanima) i prep. HPLC sa reverznom fazom (50-100% acetonitrila u vodi, sa puferom 0.1% trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobila so trifluorosirćetnae kiseline iz primera 88. Analitički HPLC RetVreme: 8.92 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C38H48ClF4N6O8S: 859.28; nađeno: 859.42.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.23 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.81 (td, JH-F= 56 Hz, J = 6.0 Hz, 1H), 5.69-5.66 (m, 1H), 4.56 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.34 (s, 1H), 4.22-4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 3.71-3.66 (m, 1H), 2.83-2.76 (m, 1H), 2.61-2.48 (m, 1H), 2.11-1.94 (m, 4H), 1.88-1.72 (m, 4H), 1.71-1.62 (m, 1H), 1.58-1.54 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 1.50-1.36 (m, 2H), 1.09 (s, 9H), 1.08-1.01 (m, 3H), 1.01-0.94 (m, 2H), 0.93-0.86 (m, 2H), 0.80-0.68 (m, 1H), 0.52-0.46 (m, 1H).
[0698] Primer 89. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-dodekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 89
[0699] Korak 1. Dobijanje 89-1: 17-4 (95 mg, 0.14 mmol) u 0.4 mL DCM je tretiran sa 0.4 mL TFA i mešan na st u toku 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa 5 mL DCM i zatim tretirana sa vodom i zasićenim natrijum bikarbonatom do pH 6.5. Slojevi su odvojeni i organska faza je isprana još jednom sa vodom, zatim osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana da se dobije 89-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C31H39F2N4O7: 617.3; nađeno: 616.7.
[0700] Korak 2. Dobijanje primera 89: Smeša 89-1 iz koraka 1 (41 mg, 0.066 mmol), intermedijera A10 (24 mg, 0.079 mmol), HATU (30 mg, 0.079 mmol), i DIPEA (0.057 mL, 0.33 mmol) u DMF (0.4 mL) je mešana na st u toku noći. Smeša je razblažena sa 2 N HCl (1 mL) i ekstrahovana sa dihlorometanom. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana. Smeša sirovog proizoda je prečišćena sa prep HPLC sa reverznom fazom (10-99% acetonitril u vodi, sa puferom 0.1% trifluorosirćetne kiseline) da bi se dobio primer 89. Analitički HPLC RetVreme: 8.65 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H51F4N6O9S: 867.3; nađeno: 866.9.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.890 (s, 1H), 7.98 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.75 (br s, 1H), 6.30 -5.93 (m, 2H), 5.92 (td, JH-F= 52 Hz, J = 6.8 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 10 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.07 (dd, J = 11.6, 3.2 Hz, 1H), 3.98 -3.94 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.57 (m, 1H), 2.60 -2.48 (m, 2H), 2.20 (m, 1H), 2.06 (m, 1H), 1.90 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.63 (m, 2H), 1.50 (s, 3H), 1.56 -1.36 (m, 2H), 1.26 (m, 1H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.03-0.93 (m, 2H), 0.85 (m, 2H), 0.76 (m, 1H), 0.53 (m, 1H).
[0701] Primer 90. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18-fluoro-14-metoksi-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 90
[0702] Daljim prečišćavanjem sinteze jedinjenja 17 sa prep HPLC sa reverznom fazom (60-88% acetonitrila u vodi, sa puferom 0.1% trifluorosirćetne kiseline) omogućilo je izolovanje primera 93 kao manjinskog proizvoda. Analitički HPLC RetVreme: 8.64 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H54F3N6O9S: 851.4; nađeno: 851.4.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.93 (br s, 1H), 7.88 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.91 (td, JH-F= 136 Hz, J = 8 Hz, 1H), 5.81 (td, JH-F= 52 Hz, J = 8 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.07 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.72 (m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.35 (m, 1H), 2.06 (m, 4H), 1.88 (m, 1H), 1.78 (m, 1H), 1.71 -1.52 (m, 4H), 1.48 (s, 3H), 1.48 -1.41 (m, 2H), 1.23 (m, 2H) 1.21 (t, J = 8.0 Hz, 3H), 1.08 (s, 9H), 1.05 -0.90 (m, 2H), 0.84 (m, 2H), 0.66 (m, 1H), 0.48 (m, 1H).
[0703] Primer 91. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2S)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etenilciklopropil}-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 91
[0704] Primer 91 je pripremljen slično primeru 1 zamenom intermedijera A1 za intermedijer A10 u koraku 8. TFA so primera 91 je izolovana. Analitički HPLC RetVreme: 8.72 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C40H55N6O9S: 795.96; nađeno: 795.94.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.03 (s, 1H); 7.80 (d, J =9.2 Hz, 1H); 7.24 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H); 7.16 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 5.90 (d, J = 3.6 Hz, 1H); 5.68 (m, 1H); 5.25 (d, J = 17.2 Hz, 1.6 Hz, 1H); 5.10 (d, J = 11.2, 1.6 Hz, 1H); 4.57 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 4.39 (br s, 1H); 4.37 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 4.16 (dd, J =12.8, 4.4 Hz, 1H); 3.93 (s, 3H); 3.77-3.72 (m, 1H); 3.02-2.88 (m, 1H): 2.86-2.75 (m, 1H); 2.64-2.54 (m, 1H); 2.18 (q, J = 8.8 Hz, 1H): 1.90-1.66 (m, 4H); 1.66-1.40 (m, 6H); 1.38-1.32 (m, 1H); 1.30-1.20 (m, 5H); 1.10 (s, 9H); 1.14-1.02 (m, 2H); 0.77-0.68 (m, 1H); 0.54-0.45 (m, 1H).’
[0705] Primer 92. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2S)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etenilciklopropil}-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 92
[0706] Primer 92 je pripremljen na sličan način kao primer 17, zamenom intermedijera A1 za intermedijer A10 u koraku 7. Primer 92 je izolovan . Analitički HPLC RetVreme: 8.75 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C40H53F2N6O9S: 831.36; nađeno: 831.25.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 9.98 (s, 1H), 7.96 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.40 -7.19 (m, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.91 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 5.86 -5.64 (m, 1H), 5.34 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.21 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.10 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.53-4.26 (m, 2H), 4.15-4.02 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.73 -3.57 (m, 1H), 2.97 -2.81 (m, 1H), 2.64 -2.37 (m, 2H), 2.21 -2.06 (m, 1H), 2.06 -1.88 (m, 2H), 1.88 -1.55 (m, 4H), 1.55 -1.12 (m, 10H), 1.07 (s, 9H), 1.02 -0.78 (m, 5H), 0.78 -0.61 (m, 1H), 0.47 (q, J = 7.3, 6.2 Hz, 1H).
[0707] Primer 93. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-N-[(2R)-2-etil-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 93
[0708] Primer 93 je pripremljen na sličan način kao primer 17, zamenom intermedijera A4 za intermedijer A10 u koraku 7. Primer 93 je izolovan . Analitički HPLC RetVreme: 8.03 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C41H57F2N6O9S: 847.39; nađeno: 846.99.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.95 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.27 (m, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.41 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.82 (m, 2H), 4.47 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.35 (dd, J = 35.7, 10.7 Hz, 2H), 4.07 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.63 (m, 1H), 2.50 (m, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.78 (m, 3H), 1.64 (m, 4H), 1.48 (m, 6H), 1.19 (m, 4H), 1.07 (s, 9H), 1.05 -0.88 (m, 4H), 0.88 -0.75 (m, 1H), 0.67 (m, 1H), 0.47 (m, 1H).
[0709] Primer 94. Dobijanje (1aR,5S,8S,9S, 10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradec ahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Primer 94
[0710] Primer 94 je pripremljen na sličan način kao primer 17, zamenom intermedijera A9 za intermedijer A10 u koraku 7. Primer 94 je izolovan . Analitički HPLC RetVreme: 8.71 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C39H51F4N6O9S: 855.34; nađeno: 855.26.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.22 (s, 1H), 8.02 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 12 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 5.95 (td, JHF= 52 Hz, J = 8 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 26.4, 10.7 Hz, 2H), 4.13 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.68 (m, 1H), 2.91 (m, 1H), 2.57 (m, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.73 (m, 3H), 1.50 (m, 3H), 1.33 (m, 3H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.13 (s, 9H), 1.00 -0.95 (m, 4H), 0.95 -0.85 (m, 1H), 0.69 (m, 1H), 0.51 (m, 1H).
[0711] Primer 95. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-cijano-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-19,19-difluoro-10-metil-4,7-diokso1a,2,2a,4,5,6,7,10,11, 19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
Primer 95
[0712] Intermedijer 95-1 je pripremljen na sličan način kao Intermedijer 46-2, zamenom E6 za intermedijer E3 u koraku 1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C27H33F2N4O5: 531.24; nađeno: 531.2.
[0713] Primer 95 je pripremljen na sličan način kao primer 62, zamenom intermedijera 95-1 za intermedijer 46-2 u koraku 1 i zamenom intermedijera A10 za Intermedijer A9 u koraku 5. Primer 95 je izolovan . Analitički HPLC RetVreme: 8.86 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C42H52F4N7O8S: 890.35; nađeno: 889.94.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.34 (s, 1H), 7.80 (m, 2H), 7.42 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 5.38 (m, 1H), 5.29 (m, 3H), 5.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.10 -3.97 (m, 2H), 3.84 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 3.74 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 2.42 -2.29 (m, 1H), 2.10 (s, 1H), 1.87 -1.72 (m, 1H), 1.69 -1.48 (m, 4H), 1.38 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 1.30 -1.08 (m, 4H), 0.99 (s, 5H), 0.89 (m, 3H), 0.69 (s, 10H), 0.64 (m, 1H), 0.43 (s, 1H), 0.11 (m, 1H), 0.01 (m, 1H).
[0714] Primer 96. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,21E,24aR,24bS)-6-terc-butil-15-hloro-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-10-metil-4,7,18-triokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,20,23, 24,24a,24b-tetradekahidro-1H,9H,18H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6,12]dioksatriazaciklononadecino[11,12-b]hinoazolin-9-karboksamida.
[0715] Primer 96 je pripremljen na sličan način kao primer 89, zamenom intermedijera 96-1 za intermedijer 17-4 u koraku 1. Intermedijer 96-1 je pripremljen na sličan način kao intermedijer 17-4 primera 17, zamenom E9 za E3 i B1 za B4 u koraku 1, i zamenom intermedijera D16 za intermedijer D11 u koraku 3. Primer 96 je izolovan. Analitički HPLC RetVreme: 9.18 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C41H52ClF2N6O9S: 877.32; nađeno: 877.61.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 9.76 (s, 1H), 8.03 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.27 (m, 1H), 6.80 (s, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.87 -5.73 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.64 -5.51 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 4.93 (m, 2H), 4.52 -4.32 (m, 3H), 4.153.94 (m, 2H), 2.86 -2.71 (m, 1H), 2.26 (m, 1H), 2.15 (m, 2H), 2.10 -2.02 (m, 1H), 2.02 -1.84 (m, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.50 (m, 4H), 1.42 -1.17 (m, 6H), 1.17 -0.92 (m, 10H), 0.92 -0.78 (m, 2H), 0.51 -0.37 (m, 1H).
[0716] Primer 97. Dobijanje (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-cijano-N-[(2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-10-metil-4,7-diokso-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a ,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11-metanociklopropa[4’,5’]ciklopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0717] Intermedijer 97-1 je pripremljen na sličan način kao intermedijer 79-5, zamenom E2 za E5 u koraku 1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C43H55N4O7: 739.41; nađeno: 739.31.
[0718] Korak 1. Dobijanje 97-2. Makrocilični olefin 97-1 (0.84 g, 1.14 mmol) je rastvoren u 114 mL etanola i 114 mL etil acetata. Posle degasiranja sa argonom, dodato je 0.84 g 5% Pd/C Degus-tipa i smeša je hidrogenizovana u toku 4 sata na 1 atm. Ceđenjem preko celita, koncentrovanjem, i hromatografijom na silikagelu (gradijent 40% -60% etil acetata u heksanima) dobijen je intermedijer 97-2. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C36H51N4O7: 651.38; nađeno: 651.32.
[0719] Korak 2. Dobijanje 97-3. Ledeno hladni rastvor makrocikličnog fenola 97-2 (0.47 g, 0.73 mmol) i trietilamina (0.81 ml, 5.81 mmol) u 3 mL DCM je tretiran sa rastvorom anhidrida trifluorometansulfonske kiseline, 1 M u metilen hloridu (0.18 ml, 1.09 mmol) u kapima. Posle mešanja u toku 2 sata, reakcija je zaustavljena sa vodom i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je ispran sa vodom i zasićenim rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4, proceđen i koncentrovan. Hromatografijaom na silikagelu pomoću gradijenta 5% -50% etil acetata u heksanima dobijen je 97-3 kao prva eluirana frakcija (55 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H50F3N4O9S: 783.33; nađeno: 782.96.
[0720] Korak 3. Dobijanje 97-4. Degasirana smeša makrocikličnog triflata 97-3 (408 mg, 0.52 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (30.11 mg, 0.03 mmol), cink cijanid, 98% (61.21 mg, 0.52 mmol) u 2.6 mL DMF za 10 minuta. Reakcija je zagrejana na 80 °C u toku 1 sata. Dodatnih 60 mg tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma i 120 mg cink cijanida je dodato i zagrevanje je nastavljeno u toku 30 minuta. Reakcija je zaustavljena sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida i esktrahovana sa etil acetatom. Organska faza je odvojena, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silikagelu pomoću gradijenta 5% -70% etil acetata u heksanima da bi se dobio intermedijer 97-4. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C37H50N5O6: 660.38; nađeno: 660.10.
[0721] Korak 4. Dobijanje 97-5. Rastvor 97-4 (290 mg, 0.44 mmol) in 1mL DCM je tretiran sa 0.5 mL of TFA i mešan u toku noći. Voda je dodata i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je odvojena, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silikagelu pomoću gradijenta 10% -70% etil acetata u heksanima da bi se dobio intermedijer 97-5 (216 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izrač. za C33H42N5O6: 604.31; nađeno: 604.00.
[0722] Korak 5. Dobijanje primera 97. Smeša 97-5 (50 mg, 0.08 mmol), HATU (37.79 mg, 0.1 mmol), u 0.3 mL DMF je mešana u toku 5 min, zatim su dodati A10 (50 mg, 0.08 mmol) i DIPEA (0.06 ml, 0.33 mmol). Posle 45 min na st, reakcija nije završena (LCMS). Dodato je još 20 mg A10 i mešano u toku 2 sata. Dodato je 2 mL 1 N HCl, i smeša je ekstrahovana sa DCM. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silikagelu pomoću gradijenta 30% -65% etil acetata u heksanima. Frakcije spojenog proizvoda su sadržele nešto zaostalog DMF. Dodata je voda, koja je dovela do stavaranja taloga (14 mg). Filtrat je ekstrahovan sa etil acetatom, i ekstrakti su spojeni sa talogom. Dobijeni rastvor je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđen, koncentrovan i osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio primer 97. Analitički HPLC RetVreme: 9.06 min. LCMS-ESI<+>(m/z):
[M+H]<+>izrač. za C42H54F2N7O8S: 854.98; nađeno: 853.88.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.77 (br s, 1H), 8.05 (m, 1H), 7.93 (m, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.08 (m, 1H), 6 -5.65 (m, 1H), 5.56 (m, 1H), 5.17 (m, 1H), 4.90 (m, 1H), 4.38 (m, 2H), 4.22 (m, 1H), 4.06 (m, 1H), 3.57 (m, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.70 (m, 5H), 2.28 -2.08 (m, 1H), 2.04 -1.30 (m, 12H), 1.29 -1.09 (m, 9H), 1.08 -0.96 (m, 4H), 0.85 -0.67 (m, 3H), 0.43 (m, 1H), 0.34 (m, 1H), 0.19 -0.03 (m, 1H).
[0723] Sledeća jedinjanja mogu biti napravljena sintentičkim postupcima prema ovom opisu, ili na generalno poznate načine u stanju tehnike:
Ċ
gde V je struktura formule:
i gde E i G su kao što je gore definisano.
Biološka aktivnost
Ekspresija i prečišćavanje proteazne generacije genotipa 1a, 2a, i 3 NS3 NS3 proteaznih ekspersionih plazmida
[0724] Kodirajuća sekvenca 1b (con-1 soj) HCV NS3 proteaznog domena je PCR amplificirana iz plazmida koji kodira I389luc-ubi-neo/NS3-3’/ET replikon (Reblikon, Mainz, Germany).5’-PCR prajmer je označeno da kodira N-terminalni K3heksahistidinski obeleživač i insertuje se u okvir mesta cepanja rekombinantne Tobacco Etch virusne (rTEV) proteaze u kodirajućoj sekvenci NS3. Dobijeni DNK fragment je kloniran u pET28 proteinski ekspresioni vektor (Invitrogen, Carlsbad, CA) dajući p28-N6H-Tev-NS3(181)1b.
[0725] Kodirajuće sekvecne genotipa 3 HCV proteaznog domena su pojačane sa RT-PCR pomoću Titan One Tube RT-PCR Kita (Roche, Indianapolis, IN) i RNK je ekstrahovan iz HCV-pozitivnog humanog seruma (BBI Diagnostics, MA) pomoću QIAmp UltraSens Virus Kita (Qiagen, Valencia, CA).
5’ PCR prajmeri su označeni da kodiraju N-terminal heksahistidinske obeleživače i umeću se u okvir mesta cepanja rTEV proteaza u NS3 proteaznu kodirajuću sekvencu. Dobijeni DNK fragmenti su klonirani u pET28 dajući ekspresione vektore p28-N6H-Tev-NS3(181)1a i p28-N6H-TevNS3(181)3, respektivno.
Ekspresija NS3 proteaznih proteina
[0726] BL21AI bakterija (Invitrogen, Carlsbad, CA) je transformisana sa ekspresionim vektorima genotipa 1b ili 3 NS3 i korišćena je da se inokulira sud za fermentaciju od 20 L (Sartorius BBI System Inc., Bethlehem, PA), koji sadrži 18 L 2YT svežeg medijuma obogaćenog sa 50 μg/mL kanamicina. Kada je gustina ćelija dostigla OD6001, temperatura kultura je smanjena od 37 °C do 28 °C i indukcija je trenutno inicira dodavanjem 30 μM ZnSO4, 14 mM L-arabinoze i 1 mM Izopropil β-D -tiogalaktozida (IPTG) u krajnjim koncentracijama. Ćelije su sakupljene centrifugiranjem četiri sata posle izazivanja i sačuvane su kao zamrznute pelete na -80 °C pre NS3 proteinskog prečišćavanja.
Prečišćavanje NS3 Proteaze
Prečišćavanje proteaza genotipa 1b NS3
[0727] Ćelijske pelete su otopljene i resuspendovane pri 10 mL/g ćelija u puferu za lizu koji sadrži 50 mM tris pH 7.6, 300 mM NaCl, 0.1% 3-[(3-holamidopropil)dimetilamonio]-1-propansulfona (CHAPS), 5% glicerola, i 2 mM β-merkaptoetanola. Ćelijske suspenzije su zatim podvrgnute ultrazvuku, proceđene kroz gazu, i propuštene tri puta kroz mikrofluidizer pri 18,000 funti/in<2>. Dobijeni lizati su centrifugirani na 15500 oum u toku 45 minuta i supernatanti su naneti na HisTrap HP kolonu (GE Lifesciences) prethodo uravnoteženu sa pet zapremina Ni pufera A (50 mM tris pH 7.6, 300 mM NaCl, 0.1% CHAPS, 5% glicerola, 2 mM β-merkaptoetanola, 50 mM imidazol-HCI). Proteini su eluirani sa 0-100% gradijentom Ni pufera A plus 500 mM imidazol-HCI i frakcije su spojene i sakupljene. HisTrap pul je razblažen sa 1:10 sa SP-A puferom (50 mM tris pH 7.0, 10% glicerol, 2 mM ditiotreitol (DTT)) i nanet na HiTrap SP-HP kolonu (GE Lifesciences) uravnoteženu sa SP-A puferom. NS3 proteaza je eluirana sa 0-100% SP-B puferom (SP-A pufer plus 1 M NaCl) gradijent. Koncentrovani pulovi NS3-koji sadrže SP frakcije su razdeljeni u alikvote, brzo zamrznuti u tečnom azotu i čuvani na -80° C.
Prečišćavanjem proteaze genotipa 3 NS3
[0728] Bakterijske pelete sakupljene iz genotipa 3 HCV NS3 proteaza su homogenizovane u puferu za lizu (25 mM tris, pH 7.5 pufer sadrži 150 mM NaCl i 1 mM fenilmetansulfonil fluorid (PMSF)) i propuštene su kroz mikrofluidizer na 18,000 funti/in<2>. Homogenizovani ćelijski lizati su centrifugirani na 30,000 x g u toku 30 minuta na 4° C. Dobijene P1 pelete su isprane sa puferom za ispiranje I (25 mM tris, pH 7.5 koji sadrži 1% CHAPS) a zatim centrifugirane na 10,000 x g u toku 30 minuta na 4° C. Dobijene P2 pelete su isprane sa puferom za ispiranje II (50 mM CAPS pufer, pH 10.8, koji sadrži 2 M NaCl i 2 M urea) a zatim centrifugirane 30,000 x g u toku minuta na 4° C. Dobijene P3 pelete su resuspendovane u puferu za rastvaranje (20 ml 25 mM tris, pH 7.5 koji sadrži 150 mM NaCl i 8 M uree) i inkubirane na 4° C u toku jednog sata. Rastvoreni proteini su propušteni kroz 0.45 mikronski filter. Koncentracije proteina su merene i rastvori su prilagođeni na 40 mM DTT, inkubirani u toku 30 minuta na 4° C i zatim brzo razblaženi u puferu za ponovno savijanje (25 mM tris, pH 8.5, 0.8 M gvanidin-HCl, 0.4 M L-Arginin, 10 mM ZnSO4) uz mešanje. Proteinski rastvori su inkubirani na 4° C u toku noći da bi se omogućilo ponovno savijanje. Ponovo savijene proteaze su centrifugirane na 30,000 x g u toku 10 minuta da bi se uklonili talozi. Krajnje proteinske koncentracije su zatim merene i NS3 proteaze su razdeljene u alikvote, brzo zamrznute u tečnom azotu i čuvane na -80° C.
Određivanje Ki za proteaze genotipova 1b i 3a NS3.
[0729] Prečišćeni NS3 proteazni domen (aminokiseline 1-181) virusa genotopova 1b i 3a su stvoreni kao gore. Interno razblaženi fluorogenski depsipeptidni supstrat Ac-DED(Edans)-EEAbuΨ[COO]ASK(Dabcyl)-NH2i sintetički peptid koji sadrže hidrofobne ostatke jezgra NS4A proteinskog kofaktora (KKGSWIVGRIILSGRKK; NS4A peptide) su dobijeni iz Anaspec, Inc. (San Jose, CA). Druge hemikalije i biohemikalije su bili čistoće regaenasa ili više i nabavljeni su od standarnih snabdevača.
[0730] Reakcije su izvedene na soboj temperaturi u puferu koji se sastoji od 50 mM HEPES, 40% glicerola, 0.05% Triton X100, 10 mM DTT, i 10% DMSO. Krajnji rastvori za testiranje su sadržali 50 pM NS3 genotipa 1b proteaza ili 200 pM genotipa 3a proteaze, 20 μM NS4A peptida, i 4 μM supstrata (genotip 1b) ili 2 μM supstrata (genotip 3a). Uključene su inhibitorne koncentracije koje variraju od 100 nM do 5 pM u 3-strukom razblaženju, i bez inhibotorne kontrole.
[0731] Razblaženja jedinjenja su napravljena u DMSO na 20 x krajnja koncentracija. Reakcione smeše su dobijene na pločama za testiranje sa 96bunarčića. Rastvor enzima i NS4A peptida u puferu za tesiranje (25 μL zapremine sa oba reagensa pri 4 x krajnja koncentracija) je pomešan sa 45 μL pufera za testiranje i 5 μL ili inhibitora ili DMSO, i prethodno su inkubirani na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakcija je počela dodavanjem 25 μL rastvora supstrata pri 4 x krajnje koncentracije. Ploče su intenzivno mešane u toku 5-10 sekundi i reakcije su nastavljene u toku 90 minuta. Fluorescencija je merena svakih 30 s između 90 i 120 minuta reakcionog vremena pomoću Tecan InfiniTe M1000 ili PerkinElmer Envision multimodnog čitača ploča sa ekscitacionom talasnom dužinom od 340 nm i emisionom talasnom dužnom 490 nm.
[0732] Brzine su izračunate iz procesnih krivi pri ravnotežnom stanju, u vremenskom okviru od 90-120 minuta posle dodavanja supstrata. Da bi se odredile Ki, brzine su grafički prikazane kao funkcija inibitorne koncentracije i podaci su uklapani u jednačinu 1 (Morrison, J. F., Biochimica et Biophysica Acta 1969, 185, 269-286) da bi se izračunali Ki<app>pomoću GraphPad Prism 5. Aktivna frakcija enzima je određena titracijom aktivnog mesta sa poznatim jakim inhibitorom. Kije izračunato između Ki<app>/(1 [[S]/Km]). Kirezultati za reprezentaivna jedinjenja za genotip 1b i 3a (Ki 1B i Ki 3A, respektivno) su zabeleženi u Tabli 1.
Procena anti-HCV aktivnosti zasnovane na ćelijama:
[0733] Antivirusna jačina (EC50) je određena u obe stabilne subgenomske c HCV replikacione ćelijske linije i prolazno–transfektovane HCV replikacione ćelije. Izraz polovina maksimalne efikasne koncentracije (EC50) odnosi se na koncentraciju leka koji izaziva odgovor na polovini između osnovne linije i maksimuma posle vremena izlaganja dole navedenog.
[0734] Stabilni subgenomski HCV replikoni za genotipove 1a, 1b, 2a, 3a, i 4a su ustanovljeni u ćelijama koje potiču iz Huh-7- kao što je opisano u Lohmann et al (Lohmann V, Korner F, Koch J, et al Replication of subgenomic hepatitis C virus RNAs in a hepatoma cell line.Science 1999; 285:119-3). Svaka stabilna ćelijska linija sadrži bicistronski HCV replikon koji kodira reporter gen humanizovane Renilla luciferaze (hRLuc) spojen za selektabilni gen rezistence na neomicin, praćen sa EMCV IRES i NS3-NS5B koji kodiraju region HCV. Selekcija za ćelije koje konstitutivno eksprimiraju HCV replikon je postignuta u prisustvu odabranog antibiotika, neomicina (G418). Aktivnost luciferaze je merena kao marker za intracelularne HCV replikacione nivoe.
[0735] Stabilni replikon genotipa 1a potiče iz H77 HCV soja i sadrži adaptivne mutacije P1496L i S2204I. Stabilni replikom genotipa 1b je izveden iz Con1 HCV soja i sadrži adaptivne mutacije E1202G, T1280I, i K1846T. Stabilni replon genotipa 2a izveden iz JFH-1 HCV soja i ne zahteva adaptivne mutacije. Stabilni replikon tipa 3a izveden iz S52 HCV soja i sadrži adaptivne mutacije P1121L, A1198T i S2210I (ekvivalentne S2204I u genotipu 1). Stabilni replikon genotipa 4a izveden iz ED43 HCV soja i sadrži adaptivne mutacije Q1691R i S2204I. Svi replikoni svih ćelijskih linija su propagirani u Huh-7-izvedenim ćelijama i odražvani u Dulbekovim modifikovanim Eagle medijumu (DMEM) obodaćenom sa 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) i 0.5 mg/mL G418.
[0736] Prolazno transfekovani HCV replikoni su ustanovljeni za proteaznih inhibitore genotipova 1a, 1b, 3a i NS3/4a rezistentne varijante D168A u genotipu 1b ili R155K u genotipu 1a. Trenutno transfektovani replikoni su takođe biscistronski subgenomski replikoni ali ne sadrže selektivni marker neomicina prisutan u stabilnim replikonima. Ovi replikoni kodiraju polivirusni IRES praćen sa hRLuc reporter genom, EMCV IRES i na kraju NS3-NS5B kodirajući region HCV. Genotip 1a (H77) i 1b (Con1) replikona divljeg tipa su izvedeni iz istog soja i sadrže iste adaptibilne mutacije kao što je gore navedeno. Prolazni replikon genotipa 3a je izveden iz S52 HCV soja kao gore, ali je sadržao blago različite adaptivne mutacije P1112L, K1615E i S2210I. Specifično, sekundarna adaptivna mutacija A1198T (A166T) u proteaznom domenu stabilnog replikovanog genotipa 3a je zamenjena sa K1615E (K583E) u NS3 helikaze, bez efekata na efikasnost replikacije. Uklanjanja A166T lociranog na proteaznom domenu minimizira uticaj ove varijante na inhibitor koji cilja proteazni domen i predstavlja protazni domen bliži prirodnom tipu genotipa 3a. Rezistentni replikoni koji kodiraju mutacije inhibitora NS3/4 proteaze su uneti u gen 1b ili 1a priodnog NS3 sa mutagenezom usmerenom na mesto. In vitro transkribovani RNKs iz svih prolaznih replikona su transfektovani u prirodne Huh-7-izvedene ćelijske linije elektropolacijom. Luciferazna aktivnost je merena kao marker za intracelularne nivoe replikacije HCV
[0737] Da bi se izveli EC50testovi, ćelije iz svakog HCV replikona su raspoređene na ploče sa 384 bunarčića. Jedinjenja su rastvorena u DMSO pri koncentracijama od 10 mM i razblažene u DMSO pomoću automatizovanog instrumenta za pipetiranje. Trostruka serijska razblaženja jedinjenja su direktno dodata u ćelije pomoću automatizovanog instrumenta. DMSO je korišćen kao negativna (rastvarač; bez inhibicije) kontrola, i kombincija tri HCV inhibitora uključujući proteazni inhibitor; NS5A inhibitor i nukleozidni inhibitor su korišćeni u koncentracijama > 100 x EC50kao pozitivna kontrola (100% inhibicija). Sedamdeset i dva časa kasnije, ćelije su lizirane i aktivnost Renilla luciferaze je kvantifikovana kao što preporučuje proizvođač (Promega-Madison, WI). Nelinearna regresija je izvedena za izračunavanje EC50vrednosti. Rezultati su prikazani na tabelama 1 i 2:
Tabela 1: Vrednosti biološke aktivnosti za stabilne subgenonske HCV replikone ćelijskih linija
Tabela2: Vrednosti biološke aktivnosti prolazno-transfektovanih HCV replikona ćelijskih linija
[0738] Podaci u tabelama 1 i 2 predstavljaju srednju vrednost u toku vremena svakog testa za svako jedinjenje. Za izvesna jedinjenja, izvođeni su višestruki testovi u toku trajanja projekta. Prema tome, podaci koji su zabeleženi u tabelama 1 i 2 uključuju podatke zabeležene u prioritetnom dokumentu, kao i podatke dobijene u međuvremenu.
Farmaceutske kompozicije
[0739] Sledeće ilustrujacije predstavljaju farmaceutske dozne oblike, koji sadrže jedinjenje formule IV (osim bilo kog od IVa-IVh) (’jedinjenje X’), za terapeutsku ili profilaktičku upotrebu kod ljudi.
[0740] Gornje formulacije mogu biti dobijene konvencionalnim postupcima dobro poznatim u oblasti farmaceutike.
[0741] Upotreba određenih i neodređenih oblika i sličnih referenci u kontekstu ovog opisa (naročito u kontekstu patentih zahteva) se tumači tako da obuhvata i jedninu i množinu, osim ako nije drugačije navedeno ili je jasan suprotni smisao. Svi ovde opisani postupci mogu biti izvedeni bilo kojim pogodanim redom osim ukoliko nije drugačije navedeno ili je jasan suprotani smisao.
[0742] Upotreba pojedinačni numeričkih vrednosti je navedena kao aproksimacija jer vrednostima prethode reči "oko" ili "približno." Slično, numeričke vrednosti u različitim opsezima su navedene u ovoj prijavi, osim ukoliko nije eksplicitno drugačke navedeno, navedene su kao aproksimacija mada minimalnim i maksimalnim vrednostima u okviru navedenih opsega prethode reči "oko" ili "približno." Na ovaj način, varijacije iznad i isprod pomenutih opsega mogu biti korišćene da bi se postigli u suštini isti rezultati kao i sa vrednostima u okviru opsega. Kako je ovde korišćeno, izrazi "oko" i "približno" kada se odnose na numeričku vrednost treba da imaju svoja jasna i uobičajena značanja za prosečnu osobu iz struke na koju se najbliže opisani predmet odnosi ili stanje tehnike relevanto za opseg ili element koji je u pitanju. Veličina prevazilaženja u odnosu na striktne numeričke granice zavisi od mnogo faktora. Na primer, neki od faktora koji mogu biti uzeti u obzir uključuju kritičnost elementa i/ili efekat datog opsega varijacija koji će imati na izvođenje predmeta za koji je zatražena zaštita, kao i dalja razmatranja stručnjaka iz ove oblasti. Kako je ovde korišćeno, upotreba različitih količina značajnih brojeva za različite numeričke vrednosti nemaju nameru da ograniče kako se koriste reči "oko" ili "približno" će služiti da prošire određenu numeričku vrednost ili opseg. Prema toga, kao generalna stvar, "oko" ili "približno" proširuju numerički opseg. Takođe, otkrivanje opsega treba da je kontinualni opseg uključujući svaku vrednost između minimalne i maksimalne vrednosti plus proširivanja opsega dozvoljenog upotrebom izraza "oko" ili "približno." Prema tome, ponovno citiranje opsega vrednosti ima nameru da posluži kao skraćeni postupak pojedinačnog pozivanja na svaku odvojenu vrednost koja spada u opseg, osim ukoliko nije drugačine navedeno, i gde svaka odgovjena vrednost je obuhvaćena ovom specifikacijom kao da je pojedinačno u njoj navedena.

Claims (25)

  1. Patenti zahtevi 1. Jedinjenje formule (IV):
    ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde: J je C1-C4alkil ili C3-C6karbociklil, gde C1-C4alkil ili C3-C6karbociklil je opciono supstituisan sa 1-4 halogena, -OH, aril ili cijano; je C3-C5karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika, gde pomenuti C3-C5karbociklilen je opciono supstituisan C1-C4alkil, C1-C3haloalkil, halogen, -OH, ili cijano, ili je C5-C8biciklični karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika, ili C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika, gde pomenuti C3-C6karbociklen je opciono supstituisan sa C1-C4alkil ili C1-C3haloalkil; L je C3-C6alkilen, C3-C6alkenilen ili -(CH2)3-ciklopropilen-, opciono supstituisan sa 1-4 halogena, -OH, ili cijano; Q je C2-C4alkil ili C3-C6karbociklil opciono supstituisan sa C1-C3alkil, halogen, -OH, ili cijano; E je C1-C3alkil ili C2-C3alkenil, opciono supstituisan sa 1-3 halogena; W je H, -OH, -O(C1C3)alkil, -O(C1-C3)haloalkil, halogen ili cijano; i Z<2a>je H ili C1-C3alkil.
  2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde J je C1-C3alkil.
  3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde J je metil ili etil.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 3, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde je C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika, gde pomenuti C3-C6karbociklen je opciono supstituisan sa C1-C4alkil ili C1-C3haloalkil.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 3, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde je C3-C6karbociklilen koji je vezan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika, gde C3-C6karbociklen je opciono supstituisan sa metil, etil ili trifluorometil.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 3, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde je ciklopropilen.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 3, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde je C6-C8premošćeni biciklični karbociklilen ili C6-C8spojeni biciklični karbociklilen koji je vazan za L i za ostatak jedinjenja formule IV preko dva susedna ugljenika.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde L je C3-C6alkilen, supstituisan sa 1-4 halogena.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde L je C5alkilen, supstituisan sa dva halogena.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde L je C3-C6alkilen.
  11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde L je C5alkilen.
  12. 12. Jedinjenje prema zahtevu 8 ili zahtevu 9, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde su halogeni vezani za svaki fluoro.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 12, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde Q je t-butil ili C5-C6karbociklil.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 12, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde Q je t-butil.
  15. 15. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 14, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde E je C1-C3alkil opciono supstituisan sa 1-3 halogenih atoma.
  16. 16. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 14, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde E je difluorometil.
  17. 17. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 16, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde W je vodonik, -O(C1-C3)alkil, halogen ili cijano.
  18. 18. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 16, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde W je metoksi.
  19. 19. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 18, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde Z<2a>je vodonik ili metil.
  20. 20. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 18, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde Z<2a>je metil.
  21. 21. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-20, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
  22. 22. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 21, dalje sadrži bar jedno dodatno terapeutsko sredstvo.
  23. 23. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 22, gde pomenuto dodatno terapeutsko sredstvo je interferon, ribavirin analog, NS5a inhibitor, NS4b inhibitor, NS3 proteazni inhibitor, NS5b inhibitor, alfa-glukozidazni 1 inhibitor, hepatoprotektant, ne-nukleozidni inhibitor HCV, ili bilo koji drugi lek za lečenje infekcije hepatitisa C virusa.
  24. 24. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 20 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u medicinskoj terapiji.
  25. 25. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 20 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u profilaktičkom ili terapeutskom lečenju infekcije virusa hepatitisa C. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20190303A 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitori virusa hepatitisa c RS58409B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261667806P 2012-07-03 2012-07-03
US201361798524P 2013-03-15 2013-03-15
EP16190694.6A EP3159345B1 (en) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitors of hepatitis c virus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58409B1 true RS58409B1 (sr) 2019-04-30

Family

ID=48803614

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190303A RS58409B1 (sr) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitori virusa hepatitisa c
RS20161182A RS55494B1 (sr) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitori hepatitis c virusa

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20161182A RS55494B1 (sr) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitori hepatitis c virusa

Country Status (40)

Country Link
US (7) US9296782B2 (sr)
EP (4) EP3159345B1 (sr)
JP (4) JP6025977B2 (sr)
KR (3) KR101610575B1 (sr)
CN (2) CN104540832B (sr)
AP (1) AP3903A (sr)
AR (1) AR091661A1 (sr)
AU (6) AU2013286729B2 (sr)
BR (2) BR112014033080B1 (sr)
CA (1) CA2877005C (sr)
CL (1) CL2014003634A1 (sr)
CO (1) CO7160104A2 (sr)
CR (1) CR20150045A (sr)
CY (2) CY1118379T1 (sr)
DK (2) DK3159345T3 (sr)
EA (2) EA027390B1 (sr)
EC (1) ECSP15002066A (sr)
ES (3) ES2716138T3 (sr)
HR (2) HRP20161379T1 (sr)
HU (2) HUE032404T2 (sr)
IL (4) IL236500B (sr)
IN (1) IN2014MN02598A (sr)
LT (2) LT2870160T (sr)
MD (2) MD20180040A2 (sr)
ME (2) ME02547B (sr)
MX (2) MX360597B (sr)
MY (1) MY173342A (sr)
NZ (2) NZ739248A (sr)
PE (1) PE20150204A1 (sr)
PH (3) PH12014502862A1 (sr)
PL (2) PL2870160T3 (sr)
PT (2) PT2870160T (sr)
RS (2) RS58409B1 (sr)
SG (3) SG11201408739VA (sr)
SI (2) SI2870160T1 (sr)
SM (3) SMT201600470T1 (sr)
TW (1) TWI602822B (sr)
UA (1) UA119315C2 (sr)
UY (1) UY34888A (sr)
WO (1) WO2014008285A1 (sr)

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI568722B (zh) 2012-06-15 2017-02-01 葛蘭馬克製藥公司 作爲ｍＰＧＥＳ－１抑制劑之三唑酮化合物
UA119315C2 (uk) 2012-07-03 2019-06-10 Гіліад Фармассет Елелсі Інгібітори вірусу гепатиту с
BR112015007879A2 (pt) 2012-10-19 2017-07-04 Bristol Myers Squibb Co inibidores do vírus da hepatite c
US9334279B2 (en) 2012-11-02 2016-05-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2914613B1 (en) 2012-11-02 2017-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US9409943B2 (en) 2012-11-05 2016-08-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
MY172166A (en) 2013-01-31 2019-11-15 Gilead Pharmasset Llc Combination formulation of two antiviral compounds
EP2964664B1 (en) 2013-03-07 2017-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
CN105073758B (zh) * 2013-03-15 2017-08-11 吉利德科学公司 丙型肝炎病毒抑制剂
EP3650014B1 (en) 2013-08-27 2021-10-06 Gilead Pharmasset LLC Combination formulation of two antiviral compounds
WO2015100144A1 (en) * 2013-12-23 2015-07-02 Gilead Sciences, Inc. Crystalline forms of a macrocyclic hcv ns3 inhibiting tripeptide
TR201906413T4 (tr) * 2013-12-23 2019-05-21 Gilead Sciences Inc Bir makrosiklik hcv ns3 inhibe edici tripeptidin sentezi.
US10059969B1 (en) 2014-10-03 2018-08-28 Abbvie Inc. Process for the preparation of (S)-2-amino-non-8-enoic acid
SG10202105371YA (en) 2014-12-26 2021-07-29 Univ Emory N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
US20180050976A1 (en) * 2015-02-16 2018-02-22 Central Glass Company, Limited Practical Processes for Producing Fluorinated alpha-Ketocarboxylic Esters and Analogues Thereof
WO2017184670A2 (en) 2016-04-22 2017-10-26 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating zika virus infections
ES2989988T3 (es) 2016-05-10 2024-11-28 C4 Therapeutics Inc Degronímeros heterorocíclicos para la degradación de proteínas diana
WO2017197046A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. C3-carbon linked glutarimide degronimers for target protein degradation
WO2017197051A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. Amine-linked c3-glutarimide degronimers for target protein degradation
CN109562113A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的螺环降解决定子体
ES2969239T3 (es) 2016-05-27 2024-05-17 Gilead Sciences Inc Combinación de ledipasvir y sofosbuvir para su uso en el tratamiento de infecciones por el virus de la hepatitis B en humanos
JOP20170127A1 (ar) * 2016-06-02 2017-12-02 Gilead Pharmasset Llc صيغة مشتركة مكونة من ثلاث مركبات مضادة للفيروسات
JOP20190052A1 (ar) 2016-09-22 2019-03-21 Astrazeneca Ab 5-[2-(بيريدين-2-يلامينو )-3،1 ثيازول-5-يال]-3،2 – ثنائي هيدرو- 1h- إيزوإندول 1--مشتق واحد واستخدامها كمثبطات مزدوجة للدلتا وغاما فوسفاتيديلينوسيتول 3-كيناز
TWI693286B (zh) * 2017-02-01 2020-05-11 美商艾伯維有限公司 (±)-2-(二氟甲基)-1-(烷氧羰基)-環丙烷甲酸及(±)-2-(乙烯基)-1-(烷氧羰基)-環丙烷甲酸之酶催化製法
CN110769822A (zh) 2017-06-20 2020-02-07 C4医药公司 用于蛋白降解的n/o-连接的降解决定子和降解决定子体
FI3706762T3 (fi) 2017-12-07 2024-12-13 Univ Emory N4-hydroksisytidiini ja johdannaisia sekä niihin liittyviä virusten vastaisia käyttötapoja
CN111018795B (zh) * 2019-12-25 2023-03-28 上海彩迩文生化科技有限公司 一种碱性条件下合成喹喔啉-3-酮的方法
US20230218644A1 (en) 2020-04-16 2023-07-13 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus
US12083099B2 (en) 2020-10-28 2024-09-10 Accencio LLC Methods of treating symptoms of coronavirus infection with viral protease inhibitors
EP4382529A1 (en) 2022-12-07 2024-06-12 Bayer Consumer Care AG A process for preparing pure (3s)-pyrrolidin-3-ol and pure (3s)-pyrrolidin-3-ol hydrochloride

Family Cites Families (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1301994C (zh) 2000-12-12 2007-02-28 先灵公司 作为c型肝炎病毒ns3－丝氨酸蛋白酶抑制剂的二芳基肽
MXPA04003954A (es) 2001-10-26 2004-11-29 Aventis Pharma Inc Bencimidazoles.
US6867185B2 (en) 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
PL213029B1 (pl) 2002-05-20 2012-12-31 Bristol Myers Squibb Co Podstawiona pochodna cykloalkilowa, zawierajaca ja kompozycja oraz ich zastosowanie
EP1506172B1 (en) 2002-05-20 2011-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
DE60334205D1 (en) 2002-05-20 2010-10-28 Bristol Myers Squibb Co Heterocyclische sulfonamid-hepatitis-c-virus-hemmer
MY140680A (en) 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
EP1629000B1 (en) 2003-04-16 2009-02-18 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic isoquinoline peptide inhibitors of hepatitis c virus
AU2004231987C1 (en) 2003-04-18 2010-09-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US7176208B2 (en) 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
CA2522577C (en) 2003-05-21 2011-04-26 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor compounds
US7135462B2 (en) 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
PT1778702E (pt) 2004-07-16 2011-10-18 Gilead Sciences Inc Compostos antivirais
WO2007001406A2 (en) 2004-10-05 2007-01-04 Chiron Corporation Aryl-containing macrocyclic compounds
AU2006242475B2 (en) 2005-05-02 2011-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
TWI387603B (zh) * 2005-07-20 2013-03-01 Merck Sharp & Dohme Ｈｃｖ ｎｓ３蛋白酶抑制劑
KR101294467B1 (ko) 2005-07-25 2013-09-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 거대고리형 억제제
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
CN101233148A (zh) * 2005-08-01 2008-07-30 默克公司 作为hcv ns3蛋白酶抑制剂的大环肽
EP1913016B1 (en) 2005-08-01 2013-01-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Macrocyclic peptides as hcv ns3 protease inhibitors
BRPI0617274A2 (pt) 2005-10-11 2011-07-19 Intermune Inc compostos e métodos para a inibição de replicação viral de hepatite c
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
GB0609492D0 (en) 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
GB0612423D0 (en) 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
RU2008152171A (ru) 2006-07-05 2010-08-10 Интермьюн, Инк. (Us) Новые ингибиторы вирусной репликации гепатита с
CN101583372A (zh) 2006-10-24 2009-11-18 默克公司 Hcv ns3蛋白酶抑制剂
WO2008051475A2 (en) 2006-10-24 2008-05-02 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
AU2007309546A1 (en) 2006-10-24 2008-05-02 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. HCV NS3 protease inhibitors
US8377874B2 (en) 2006-10-27 2013-02-19 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
MY164469A (en) 2006-10-27 2017-12-15 Msd Italia Srl Hcv ns3 protease inhibitors
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20080287449A1 (en) 2007-04-26 2008-11-20 Deqiang Niu Aza-tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors
SG174809A1 (en) 2007-05-03 2011-10-28 Intermune Inc Macrocyclic compounds useful as inhibitors of hepatitis c virus
AU2008251425A1 (en) 2007-05-10 2008-11-20 Array Biopharma, Inc. Novel peptide inhibitors of hepatitis C virus replication
US20090005387A1 (en) 2007-06-26 2009-01-01 Deqiang Niu Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis c virus serine protease inhibitors
TWI395746B (zh) 2007-06-29 2013-05-11 Gilead Sciences Inc 抗病毒性化合物
CA2692145C (en) 2007-06-29 2015-03-03 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
WO2009010804A1 (en) 2007-07-19 2009-01-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic compounds as antiviral agents
WO2009014730A1 (en) 2007-07-26 2009-01-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors
WO2009042668A2 (en) 2007-09-24 2009-04-02 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Urea-containing peptides as inhibitors of viral replication
EP2215076A4 (en) 2007-10-24 2012-05-02 Virobay Inc COMPOUNDS INHIBITING THE PROTEASE CATHEPSIN S AND HCV REPLICATION
WO2009055335A2 (en) 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
CL2008003384A1 (es) 2007-11-14 2009-12-11 Enanta Pharm Inc Compuestos derivados de quinoxalina macrocíclica, inhibidores de serina proteasa; composicion farmaceutica que los comprende; y su uso en el tratamiento de la hepatitis c.
US8030307B2 (en) 2007-11-29 2011-10-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic, C5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis C virus NS3 protease
US8263549B2 (en) 2007-11-29 2012-09-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
CA2708042A1 (en) 2007-12-05 2009-06-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl derivatives
US8273709B2 (en) 2007-12-14 2012-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Triazole-containing macrocyclic HCV serine protease inhibitors
TW200932255A (en) 2007-12-21 2009-08-01 Avila Therapeutics Inc HCV protease inhibitors and uses thereof
US8309685B2 (en) 2007-12-21 2012-11-13 Celgene Avilomics Research, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
US8293705B2 (en) 2007-12-21 2012-10-23 Avila Therapeutics, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
JP2011510927A (ja) 2008-01-24 2011-04-07 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｈｃｖセリンプロテアーゼ阻害剤としての二フッ素化トリペプチド
AR070413A1 (es) 2008-02-04 2010-04-07 Idenix Pharmaceuticals Inc Inhibidores macrociclicos de proteasa de serina
WO2009108507A1 (en) 2008-02-25 2009-09-03 Merck & Co., Inc. Therapeutic compounds
WO2009114633A1 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Virobay, Inc. Process for the preparation of (3s)-3-amino-n-cyclopropyl-2-hydroxyalkanamide derivatives
CA2719008A1 (en) 2008-03-20 2009-09-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Fluorinated macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
MX2010011306A (es) 2008-04-15 2010-11-09 Intermune Inc Nuevos inhibidores macrociclicos de la replicacion del virus de la hepatitis c.
US8163921B2 (en) 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2720850A1 (en) 2008-04-28 2009-11-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
WO2009134987A1 (en) 2008-04-30 2009-11-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluoromethyl-containing macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
SI2540350T1 (sl) * 2008-07-22 2015-01-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Kombinacije makrocikliäśnih kinoksalinske spojine, ki je hcv ns3 proteazni inhibitor z drugimi hcv uäśinkovinami
CN102112442B (zh) 2008-08-07 2014-12-10 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 制备大环的方法
EP2334680A2 (en) 2008-08-20 2011-06-22 Sequoia Pharmaceuticals, Inc. Hcv protease inhibitors
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
DK2331538T3 (da) 2008-09-16 2014-06-02 Boehringer Ingelheim Int Krystallinske former af en 2-thiazolyl-4-quinolinyl-oxy-derivat, en potent HCV-inhibitor
WO2010033466A1 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Phenomix Corporation Macrocyclic inhibitors of hepatitis c protease
US20100080770A1 (en) 2008-09-29 2010-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN102216321A (zh) 2008-10-15 2011-10-12 因特蒙公司 治疗性抗病毒肽
EP2364159A4 (en) 2008-10-23 2012-06-13 Concert Pharmaceuticals Inc DETERIORIC MACROCYCLIC INHIBITORS OF NS3 VIRAL PROTEASE
NZ592110A (en) 2008-11-20 2012-06-29 Achillion Pharmaceuticals Inc Cyclic carboxamide compounds and analogues thereof as of hepatitis c virus
KR20110087297A (ko) 2008-11-21 2011-08-02 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 경구 투여용의 강력한 ｈｃｖ 억제제의 약제학적 조성물
US20100272674A1 (en) 2008-12-04 2010-10-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
NZ592705A (en) 2008-12-10 2013-02-22 Achillion Pharmaceuticals Inc 4-amino-4-oxobutanoyl peptide cyclic analogues, inhibitors of viral replication
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
UY32325A (es) 2008-12-19 2010-07-30 Gilead Sciences Inc Inhibidores de ns3 proteasa del vhc
ES2429013T3 (es) 2008-12-23 2013-11-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Procedimientos e intermedios para la preparación de un inhibidor macrocíclico de la proteasa de VHC
MX2011012155A (es) 2009-05-13 2012-02-28 Enanta Pharm Inc Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c.
WO2010135748A1 (en) 2009-05-22 2010-11-25 Sequoia Pharmaceuticals Inc. Bimacrocyclic hcv ns3 protease inhibitors
EP2459582B1 (en) 2009-07-30 2015-05-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Hepatitis c virus ns3 protease inhibitors
EA201270217A1 (ru) 2009-07-31 2012-09-28 Кадила Хелзкэр Лимитед Замещенные бензамидные производные в качестве активаторов глюкокиназы (гк)
CN102470158A (zh) 2009-08-27 2012-05-23 默沙东公司 制备丙型肝炎病毒的蛋白酶抑制剂的工艺方法
CN105001302A (zh) 2009-09-28 2015-10-28 英特穆恩公司 C型肝炎病毒复制的环肽抑制剂
WO2011041551A1 (en) 2009-10-01 2011-04-07 Intermune, Inc. Therapeutic antiviral peptides
WO2011049908A2 (en) 2009-10-19 2011-04-28 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bismacrokyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
AU2011224558B2 (en) 2010-03-10 2014-02-27 Abbvie Ireland Unlimited Company Solid compositions
US8530497B2 (en) 2010-03-11 2013-09-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Crystalline salts of a potent HCV inhibitor
EP2576564A4 (en) 2010-06-07 2014-01-22 Abbvie Inc MACROCYCLIC HEPATITIS C SERIN PROTEASE INHIBITORS
WO2012019299A1 (en) 2010-08-11 2012-02-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor compounds
US20120094897A1 (en) 2010-09-15 2012-04-19 Intermune, Inc. Novel inhibitors of hepatitis c virus replication
WO2012040040A1 (en) 2010-09-21 2012-03-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
BR112013006693B1 (pt) 2010-09-21 2022-07-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc Compostos inibidores da serino protease hcv derivada de prolina macrocíclica
WO2012040242A1 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Intermune, Inc. Substituted proline inhibitors of hepatitis c virus replication
WO2012047764A1 (en) 2010-10-04 2012-04-12 Intermune, Inc. Therapeutic antiviral peptides
WO2012054874A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
CN103328466B (zh) 2010-11-01 2016-08-03 Rfs制药公司 Hcv ns3蛋白酶抑制剂
WO2012082672A2 (en) 2010-12-14 2012-06-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Process and intermediates for preparing macrolactams
US8951964B2 (en) 2010-12-30 2015-02-10 Abbvie Inc. Phenanthridine macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
CA2822556A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc Macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
JP6110846B2 (ja) 2011-05-27 2017-04-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤としての重水素が導入されたトリペプチド
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
AU2012269643A1 (en) 2011-06-16 2014-02-06 AB Pharma Ltd. Macrocyclic heterocyclic compound for inhibiting hepatitis C virus and preparation and use thereof
WO2012176149A1 (en) 2011-06-23 2012-12-27 Panmed Ltd. Treatment of hepatitis c virus
AU2012299218A1 (en) 2011-08-19 2014-02-20 Merck Sharp & Dohme Corp. Crystal forms of a HCV protease inhibitor
RU2014122154A (ru) 2011-10-31 2015-12-10 Мерк Шарп И Доум Корп. Композиции, пригодные для лечения вирусных заболеваний
US9328138B2 (en) 2011-11-15 2016-05-03 Msd Italia S.R.L. HCV NS3 protease inhibitors
EP2802313A1 (en) 2012-01-12 2014-11-19 Boehringer Ingelheim International GmbH Stabilized pharmaceutical formulations of a potent hcv inhibitor
UA119315C2 (uk) 2012-07-03 2019-06-10 Гіліад Фармассет Елелсі Інгібітори вірусу гепатиту с
CN105073758B (zh) 2013-03-15 2017-08-11 吉利德科学公司 丙型肝炎病毒抑制剂

Also Published As

Publication number Publication date
PL3159345T3 (pl) 2019-09-30
IL261581B (en) 2019-10-31
CY1118379T1 (el) 2017-06-28
EP3159345B1 (en) 2019-01-09
IL252446A0 (en) 2017-07-31
AP3903A (en) 2016-11-17
EP2870160A1 (en) 2015-05-13
TWI602822B (zh) 2017-10-21
ES2827300T3 (es) 2021-05-20
AU2017203984B2 (en) 2019-06-06
AR091661A1 (es) 2015-02-18
US10603318B2 (en) 2020-03-31
KR20160040743A (ko) 2016-04-14
US20160130300A1 (en) 2016-05-12
AU2017203984A1 (en) 2017-07-06
AU2013286729A1 (en) 2015-01-22
CA2877005C (en) 2016-12-13
SI2870160T1 (sl) 2016-11-30
BR112014033080B1 (pt) 2022-03-29
JP6025977B2 (ja) 2016-11-16
NZ703064A (en) 2016-12-23
IL236500B (en) 2018-02-28
UY34888A (es) 2014-01-31
CY1121418T1 (el) 2020-05-29
EP3825312A1 (en) 2021-05-26
HRP20190578T1 (hr) 2019-05-17
SG11201408739VA (en) 2015-01-29
RS55494B1 (sr) 2017-04-28
SMT201600470T1 (it) 2017-03-08
JP2018154651A (ja) 2018-10-04
LT3159345T (lt) 2019-03-12
LT2870160T (lt) 2016-12-12
SI3159345T1 (sl) 2019-03-29
BR122021012378B1 (pt) 2022-05-10
TW201414740A (zh) 2014-04-16
US20150175655A1 (en) 2015-06-25
SMT201600470B (it) 2017-03-08
PH12016502040A1 (en) 2019-02-27
KR101610575B1 (ko) 2016-04-07
AU2016200201A1 (en) 2016-02-04
JP2015523365A (ja) 2015-08-13
IN2014MN02598A (sr) 2015-07-24
PT2870160T (pt) 2016-12-12
CO7160104A2 (es) 2015-01-15
AU2016200670A1 (en) 2016-02-25
MX2014015846A (es) 2015-08-14
EP2870160B1 (en) 2016-09-28
EA201492214A1 (ru) 2015-10-30
PL2870160T3 (pl) 2017-05-31
US20140017198A1 (en) 2014-01-16
AU2019222909B2 (en) 2021-03-25
US9655944B2 (en) 2017-05-23
PE20150204A1 (es) 2015-02-12
KR20150034698A (ko) 2015-04-03
EA201790661A2 (ru) 2017-08-31
PT3159345T (pt) 2019-04-15
US20190365748A1 (en) 2019-12-05
US20170290827A1 (en) 2017-10-12
SMT201900167T1 (it) 2019-05-10
ES2716138T3 (es) 2019-06-10
ES2605383T3 (es) 2017-03-14
UA119315C2 (uk) 2019-06-10
AU2021204238A1 (en) 2021-07-22
IL236500A0 (en) 2015-02-26
EA027390B1 (ru) 2017-07-31
ME02547B (me) 2017-02-20
SG10201912269YA (en) 2020-02-27
CN106117309A (zh) 2016-11-16
PH12014502862B1 (en) 2015-02-23
KR20190124346A (ko) 2019-11-04
MX2018013668A (es) 2019-01-28
US9296782B2 (en) 2016-03-29
MX360597B (es) 2018-11-09
HK1210151A1 (en) 2016-04-15
HUE042345T2 (hu) 2019-06-28
PH12014502862A1 (en) 2015-02-23
ECSP15002066A (es) 2015-11-30
PH12020550552A1 (en) 2021-07-26
MY173342A (en) 2020-01-17
CN106117309B (zh) 2019-08-30
AU2013286729B2 (en) 2015-11-12
JP2020143107A (ja) 2020-09-10
SG10201702950TA (en) 2017-06-29
ME03362B (me) 2019-10-20
BR112014033080A2 (pt) 2017-06-27
US20190008858A1 (en) 2019-01-10
US10335409B2 (en) 2019-07-02
MD20180040A2 (ro) 2018-11-30
MD4602B1 (ro) 2018-11-30
DK3159345T3 (en) 2019-03-25
MD20140136A2 (ro) 2015-05-31
EA201790661A3 (ru) 2017-10-31
CL2014003634A1 (es) 2015-11-06
CR20150045A (es) 2015-05-13
EA033961B1 (ru) 2019-12-13
WO2014008285A1 (en) 2014-01-09
EP3492464A1 (en) 2019-06-05
KR102040023B1 (ko) 2019-11-05
HK1209416A1 (en) 2016-04-01
CN104540832B (zh) 2016-08-24
HRP20161379T1 (hr) 2016-12-02
DK2870160T3 (en) 2017-01-23
CN104540832A (zh) 2015-04-22
EP3159345A1 (en) 2017-04-26
IL261581A (en) 2018-10-31
IL269662A (en) 2019-11-28
HUE032404T2 (en) 2017-09-28
US20160361375A1 (en) 2016-12-15
JP2016041743A (ja) 2016-03-31
AP2014008166A0 (en) 2014-12-31
CA2877005A1 (en) 2014-01-09
EP3492464B1 (en) 2020-08-19
NZ739248A (en) 2019-05-31
AU2019222909A1 (en) 2019-09-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10603318B2 (en) Inhibitors of hepatitis C virus
HK1236517A (en) Inhibitors of hepatitis c virus
HK1236517B (en) Inhibitors of hepatitis c virus
HK1236517A1 (en) Inhibitors of hepatitis c virus
HK1210151B (en) Inhibitors of hepatitis c virus