CN104540832B - 丙型肝炎病毒的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了式I的化合物以及其药学上可接受的盐

Description

丙型肝炎病毒的抑制剂
相关申请的交叉引用
本申请根据美国法典第35条第119(e)款要求2012年7月3日提交的美国临时申请序列号61/667806和2013年3月15日提交的美国临时申请序列号61/798524的权益。通过引用将这两个申请的全部内容并入本文中。
技术领域
本发明公开了病毒复制的新小分子抑制剂、含有这些化合物的组合物以及包含这些化合物给药的治疗方法。
背景技术
丙型肝炎病毒(HCV)是黄病毒科家族内肝炎病毒属的成员，它是造成全世界慢性肝病的主要原因(Boyer、N.等人，J Hepatol.2000，32，98-112)。因此，目前抗病毒研究的一个重要焦点是针对治疗人慢性HCV感染的改进方法的开发(Ciesek、S.，von Hahn T.和Manns、MP.，Clin.Liver Dis.，2011，15，597-609；Soriano、V.等人，J.Antimicrob.Chemother.，2011，66，1573-1686；Brody、H.，Nature Outlook，2011，474，S1-S7；Gordon、C.P.等人，J.Med.Chem.2005，48，1-20；Maradpour、D.等人，Nat.Rev.Micro.2007，5，453-463)。
慢性HCV感染患者的病毒学治愈难以达到，这是因为在慢性感染患者中每日病毒生产量巨大并且HCV病毒具有很高的自发突变性(Neumann等人，Science 1998，282，103-7；Fukimoto等人，Hepatology，1996，24，1351-4；Domingo等人，Gene 1985，40，1-8；Martell等人，J.Virol.1992，66，3225-9)。由于HCV具有遗传多样性并且它可表达为数个不同的基因型和多种亚型，使得HCV治疗更为复杂。例如，目前HCV分为六种主要基因型(命名为1-6)，多种亚型(命名为a、b、c等等)，以及大约100个不同的病毒株(编号为1、2、3等等)。
HCV的基因型1、2和3在世界范围内分布，并主要分布在美国、欧洲、澳大利亚和东亚(日本、台湾、泰国和中国)。基因型4主要发现于中东、埃及和非洲中部，而基因型5和6分别主要发现于南非和东南亚(Simmonds、P.等人，J Virol.84：4597-4610，2010)。
核苷类似物利巴韦林与干扰素-α(IFN)联用可用于治疗人类的多个基因型慢性HCV感染。但是，在患者中观察到的不同临床反应以及这种治疗方案的毒性限制了它的应用。在利巴韦林和IFN治疗方案中加入HCV蛋白酶抑制剂(特拉匹韦或波普瑞韦)可大幅度改善12周治疗后的病毒学应答(SVR12)率。但是，这一治疗方案目前仅批准用于基因型1的患者，并且毒性和其他副作用还不清楚。
由于抗病毒药物对不同基因型的活性不同，已证明使用直接作用性抗病毒药物治疗多种基因型的HCV感染具有挑战性。HCV蛋白酶抑制剂对HCV基因型2和3的体外活性通常不如对基因型1的效果好(参见，例如Summa、V.等人，Antimicrobial Agents andChemotherapy，2012，56，4161-4167，表1；Gottwein、J.等人，Gastroenterology，2011，141，1067-1079)。因此，对于HCV不同基因型的临床疗效经证明也有很大差异。例如，对HCV基因型1和2极为有效的疗法可能对基因型3的疗效有限或是没有临床疗效。(Moreno、C.等人，Poster 895，61st AASLD Meeting，Boston，MA，USA，Oct.29-Nov.2、2010；Graham、F.等人，Gastroenterology，2011，141，881-889；Foster，G.R.等人，EASL 45th Annual Meeting，April 14-18，2010，Vienna，Austria)。在一些情况下，抗病毒药物对基因型1具有良好的临床疗效，但对基因型2和3疗效较弱且差异更大。(Reiser、M.等人，Hepatology，2005，41，832-835)。为了克服在基因型3患者中降低的疗效，可能需要使用大幅度升高的抗病毒药物剂量以达到病毒载量大量下降(Fraser、IP等人，Abstract#48，HEP DART 2011，Koloa，HI，December 2011)。
还需要受病毒耐受性影响较小的抗病毒药物。例如，在HCV蛋白酶的155和168位点上的耐受性突变通常会导致HCV蛋白酶抑制剂的抗病毒效力大幅度下降(Mani、N.AnnForum Collab HIV Res.，2012，14，-8；Romano、KP等人，PNAS，2010，107，20986-20991；LenzO，Antimicrobial agents and chemotherapy，2010，54，1878-1887)。
鉴于当前HCV疗法的局限性，需要开发更为有效的抗HCV疗法。提供可有效治疗多种HCV基因型和亚型的疗法也是十分有用的。
发明内容
本发明公开了抑制丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白酶的新化合物。在某些实施方案中，公开的化合物可抑制丙型肝炎病毒的多种基因型。这些化合物可有效治疗HCV感染及相关症状。
在一个实施方案中，提供了式(IV)的化合物或其立体异构体、或立体异构体混合物、或药学上可接受的盐：
其中：
J是C1-C4烷基或C3-C6碳环基，其中C1-C4烷基或C3-C6碳环基被卤素、-OH、芳基或氰基可选取代；
是通过两个相邻的碳与L和所述化合物的其余部分相连的C3-C5亚碳环基(carbocyclylene)，其中所述C3-C6亚碳环基被C1-C4烷基、C1-C3卤代烷基、卤素、-OH或氰基可选取代，或是是通过两个相邻的碳与L和所述化合物的其余部分相连的C5-C8双环亚碳环基；
L是C3-C6亚烷基、C3-C6亚烯基或-(CH2)3-环丙基-，被1-4个卤素、-OH或氰基可选取代；
Q是C2-C4烷基或C3-C6碳环基，被C1-C3烷基、卤素、-OH或氰基可选取代；
E是C1-C3烷基或C2-C3烯基，被C1-C3烷基、卤素、-OH或氰基可选取代；
W是H、-OH、-O(C1-C3)烷基、-O(C1-C3)卤代烷基、卤素或氰基；和
Z2a是H或C1-C3烷基、卤素、-OH或氰基。
在式(IV)的另一个实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式IV的化合物的其余部分相连的C3-C6亚碳环基，其中所述C3-C6亚碳环基(carbocyclene)被C1-C4烷基或C1-C3卤代烷基可选取代。
在式(IV)的另一个实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式IV的化合物的其余部分相连的C3-C6亚碳环基，其中所述C3-C6亚碳环基被甲基、乙基或三氟甲基可选取代。
在式(IV)的另一个实施方案中，是环丙烯。
在式(IV)的另一个实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式IV的化合物的其余部分相连的C6-C8桥接双环亚碳环基或C6-C8稠合双环亚碳环基。
在式(IV)的另一个实施方案中，L是被1-4个卤素取代的C3-C6亚烷基。在式(IV)的另一个实施方案中，L是被两个卤素取代的C5亚烷基。在一些实施方案中，所述卤素各自是氟。
在式(IV)的另一个实施方案中，L是C3-C6亚烷基。
在式(IV)的另一个实施方案中，L是C5亚烷基。
在式(IV)的另一个实施方案中，Q是叔丁基或C5-C6碳环基。
在式(IV)的另一个实施方案中，Q是叔丁基。
在式(IV)的另一个实施方案中，E是被1-3个卤素原子可选取代的C1-C3烷基。
在式(IV)的另一个实施方案中，E是二氟甲基。
在式(IV)的另一个实施方案中，W是氢、-O(C1-C3)烷基、卤素或氰基。
在式(IV)的另一个实施方案中，W是甲氧基。
在式(IV)的另一个实施方案中，Z2a是氢或甲基。
在式(IV)的另一个实施方案中，Z2a是甲基。
在一个实施方案中，提供了式(I)的化合物或其立体异构体、或立体异构体混合物、或药学上可接受的盐：
其中：
J是J1、J2、J3、J4、J5、J6、J7、J8或J9；
是T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7、T8、T9、T10、T11、T12、T13或T14；
L是L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9或L10；
X是-O-、-CH2-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)-、-SO2-、-S(O)-、-N(R16)-、-S-、＝N-O-或键；
A是-C(O)-、-S(O)2-、6-10元亚芳基、5-10元亚杂芳基或4-10元亚杂环基，其中任意所述亚芳基、亚杂环基、或亚杂芳基被1-4个Z1基团可选取代；
M是键、C1-C6亚烷基、-O-、或-N(R16)-；
R1是H或F；
R3、R4和R5各自独立地选自H或Z1；
Q是Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、Q6或Q7；
E是E1、E2、E3、E4、E5或E6；
G是-CO2H、-CONHSO2Z2、四唑基、-CONHP(O)(R16)2、-P(O)(OH)(R16)和-P(O)(R16)2；
是U1、U2、U3、U4、U5、U6或U7；
J1是卤素；
J2是-OH且R1是H；
J3是-NR17R18且R1是H；
J4是C1-C8烷基；
J5是被1-4个Z3基团取代的C1-C8烷基；
J6是被1-4个Z3基团可选取代的C3-C8碳环基；
J7是被1-4个Z3基团可选取代的C6-C10芳基、5-10元杂芳基或4-10元杂环基；
J8是被1-4个Z3基团可选取代的C1-C8烷氧基且R1是H；
J9是被1-4个Z3基团可选取代的C3-C8碳环氧基且R1是H；
T1是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基；
T2是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个C1-C8烷基基团取代；
T3是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个卤素原子取代且所述亚碳环基被1-4个C1-C6烷基基团可选取代；
T4是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被C1-C8烷基基团可选取代，其中所述烷基基团被1-4个Z3基团可选取代；
T5是通过两个相邻的碳与L和M相连的4-10元亚杂环基；
T6是通过碳原子与L相连且通过N原子与M相连的4-10元亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T7是通过碳原子与M相连且通过N原子与L相连的4-10元亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T8是通过两个相邻的碳与L和M相连的4-10元亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T9是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12螺双环亚碳环基，其中所述螺双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T10是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12稠合双环亚碳环基，其中所述稠合双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T11是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12桥接双环亚碳环基，其中所述桥接双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T12是通过两个不相邻的碳与L和M相连的C4-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T13是通过两个相邻的原子与L和M相连的5-8元稠合、桥接或螺双环亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T14是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个Z4基团可选取代；
L1是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基；
L2是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中所述C1-C8亚烷基被1-4个卤素取代或所述C2-C8亚烯基被1-4个卤素取代；
L3是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中所述C1-C8亚烷基被1-4个Z4基团取代或所述C2-C8亚烯基被1-4个Z4基团取代，并且其中每个基团被1-4个卤素可选取代；
L4是被两个一起存在以形成螺C3-C8碳环基的偕C1-C4烷基基团取代的C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中L4被1-4个Z1基团可选取代；
L5是通过O、S或N原子与相连的2-8元杂亚烷基或4-8元杂亚烯基，所述杂亚烷基或杂亚烯基被1-4个Z3基团可选取代；
L6是通过碳原子与相连的2-8元杂亚烷基或5-8元杂亚烯基，所述杂亚烷基或杂亚烯基被1-4个卤素取代且被1-4个Z4基团可选取代；
L7是通过碳原子与相连的2-8元杂亚烷基或4-8元杂亚烯基，所述杂亚烷基或杂亚烯基被1-4个Z4基团可选取代；
L8是L8A-L8B-L8C，其中L8A和L8C各自独立地选自C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基或键，且L8B是3-至6-元含有0至3个选自N、O或S的杂原子的饱和或不饱和环，其中L8A和L8C在两个不同的环原子上与L8B相连且L8B被1-4个Z1基团可选取代；
L9是被1-4个Z1基团可选取代的C2-C8亚炔基；
L10是被两个一起存在以形成螺4-8元杂环基的偕Z1基团取代的C1-C8亚烷基或C3-C8亚烯基，其中L10被1-4个Z1基团可选取代；
U1是被1-4个W基团可选取代的C6-C14元亚芳基；
U2是被1-4个W基团可选取代的C3-C8元亚碳环基；
U3是被1-4个位于选自C或N的一个或多个环原子上的W基团可选取代的4-14元亚杂环基；
U4是含有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的5或6元单环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于选自C或N的一个或多个环原子上的W基团可选取代；
U5是含有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子环原子的8、9或10元稠合双环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于选自C或N的一个或多个环原子上的W基团可选取代；
U6是含有1、2、3或4个独立地选自N、O或S的杂原子环原子的11-14元稠合三环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于选自C或N的一个或多个环原子上的W基团可选取代；
U7是含有4个独立地选自N、O或S的杂原子环原子的8-10元稠合双环亚杂芳基，其中所述杂芳基被1-2个位于选自C或N的一个或多个环原子上的W基团可选取代；
W独立地是W1、W2、W3、W4、W5、W6或W7；
W1是氧、卤素、-OR6、C1-C6烷基、-CN、-CF3、-SR6、-(O)2R6、-C(O)N(R6)2、-C(O)R6、-N(R6)C(O)R6、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、C3-C8碳环基、C3-C8环烷氧基、C1-C6卤代烷基、-N(R6)2、-NR6(C1-C6烷基)O(C1-C6烷基)、卤代(C1-C6烷氧基)、-NR6SO2R6、-SO2N(R6)2、-NHCOOR6、-NHCONHR6、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基或-O(4-10元杂环基)，其中所述W1烷基、碳环基、环烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个R6独立地选自H、C6-C10芳基或C1-C6烷基，其中所述芳基或烷基被1至4个取代基可选取代，所述取代基独立地选自卤素原子、C1-C6烷基、C6-C10芳基、C3-C8碳环基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、卤代(C1-C6烷氧基)、-OH、-O(C1-C6烷基)、-SH、-S(C1-C6烷基)、-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(O)(C1-C6烷基)、-SO2N(C1-C6烷基)2、-NHCOO(C1-C6烷基)、-NHCO(C1-C6烷基)、-NHCONH(C1-C6烷基)、-CO2(C1-C6烷基)或-C(O)N(C1-C6烷基)2；
W2是被5-14元杂芳基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷氧基；其中所述杂芳基或芳基被1-4个Z1基团取代；
W3是被C6-C10芳基、C3-C8碳环基、C1-C8烷基、C1-C6卤代烷基、4-10元杂环基或5-14元杂芳基取代的C2-C6炔基；其中所述芳基、碳环基、烷基、卤代烷基、杂环基或杂芳基被1-4个Z1基团可选取代；
W4是-SF5；
W5是-O(C2-C6烷基)OR22，其中R22是被1-4个Z1基团可选取代的C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基；
W6是-O(C2-C6烷基)NR16R22，其中R22是被1-4个Z1基团可选取代的C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基；
W7是-O(5-14元杂芳基)；其中所述-O(5-14元杂芳基)被1-4个Z1基团可选取代；
E1是C2-C6烯基；
E2是C1-C6烷基；
E3是C1-C6卤代烷基；
E4是C2-C6卤代烯基；
E5是C3-C6碳环基；
E6是被-OCH3、-OCD3、-OCF3或-OCF2H取代的C1-C6烷基；
Q1是H、C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其中当Q1不是H时，所述Q1被1-3个取代基可选取代，所述取代基独立地选自卤素、-OR6、-SR6、-N(R6)2、C6-C10芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、-CN、-CF3、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、-NR6SO2Z2、-SO2NR17R18、-NHCOOR16、-NHCOZ2、-NHCONHR16、-CO2R6、-C(O)R6或-CON(R6)2；
Q2是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10螺双环碳环基；
Q3是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10稠合双环碳环基；
Q4是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10桥接双环碳环基；
Q5是具有选自N、O或S的杂原子的4-元杂环基，其中Q5被1-4个Z3基团可选取代；
Q6是C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其中Q6被1个氧基取代且被0至3个独立地选自卤素、-OR6、-SR6、-N(R6)2、C6-C10芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、-NO2、-CN、-CF3、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、-NR6SO2Z2、-SO2NR17R18、-NHCOOR16、-NHCOZ2、-NHCONHR16、-CO2R6、-C(O)R6或-CON(R6)2的取代基取代；
Q7是C3-C8碳环基，其中Q7被4-8个F原子取代并且Q7的每个碳被0-2个F原子取代；
每个Z1独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)R16、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)R16、-NR16C(O)NR17R18、-NR16S(O)2R16、-NR16S(O)2NR17R18、-NR16S(O)2OR16、-OR16、-OC(O)R16、-OC(O)NR17R18、-SR16、-S(O)R16、-S(O)2R16或-S(O)2NR17R18，其中Z1的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1a基团可选取代；
每个Z1a独立地是氧基、卤素、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)R16、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)R16、-NR16C(O)OR16、-NR16C(O)NR17R18、-NR16S(O)2R16、-NR16S(O)2NR17R18、-NR16S(O)2OR16、-OR16、-OC(O)R16、-OC(O)NR17R18、-SR16、-S(O)R16、-S(O)2R16或-S(O)2NR17R18，其中Z1a的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个R16独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基，其中R16的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个Z1c独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)(C1-C8烷基)、-C(O)O(C1-C8烷基)、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NHC(O)O(C1-C8烷基)、-NHC(O)(C1-C8烷基)、-NHC(O)NH(C1-C8烷基)、-OH、-O(C1-C8烷基)、C3-C8环烷氧基、C5-C10双环碳环氧基(carbocyclyloxy)、-S(C1-C8烷基)或-S(O)2N(C1-C8烷基)2，其中Z1c的任意烷基、碳环基、芳基、杂芳基、杂环基或环烷氧基部分被1-4个卤素原子或C1-C6烷氧基可选取代；
R17和R18各自独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、-C(O)R16、-C(O)OR16、C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基，其中R17或R18的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代，或R17和R18与和它们相连的氮一起形成了4-7元杂环基，其中所述4-7元杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个Z2独立地是C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-NR17R18或-OR16，其中Z2的任意烷基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个Z2a基团可选取代；
每个Z2a独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-(C2-C8炔基)芳基、-(C2-C8炔基)杂芳基、-CN、-C(O)(C1-C6烷基)、-C(O)O(C1-C6烷基)、-C(O)N(C1-C6烷基)2、-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-NHC(O)O(C1-C6烷基)、-NHC(O)(C1-C6烷基)、-NHC(O)NH(C1-C6烷基)、-OH、-O(C1-C6烷基)、卤代(C1-C6烷氧基)、C3-C8环烷氧基、-S(C1-C6烷基)或-SO2N(C1-C6烷基)2；其中Z2a的任意烷基、炔基、碳环基、环烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素原子或C1-C6烷氧基可选取代；
每个Z3独立地是氧基、卤素、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)NR17R18、-OR16、-SR16或-SO2R16；其中Z3的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素可选取代；和
每个Z4独立地是氧基、卤素、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)NR17R18、-OR16、-SR16或-SO2R16，其中Z4的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素可选取代。
在另一个实施方案中，提供了式(II)的化合物或其立体异构体、或立体异构体混合物、或药学上可接受的盐：
其中：
M是-O-；
J是J1、J2、J3、J4、J5、J6、J7、J8或J9；
是T1、T2、T3、T4、T5、T7、T8、T9、T10、T11、T12、T13或T14；
L是L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9或L10；
R1是H或F；
Q是Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、Q6或Q7；
E是E1、E2、E3、E4、E5或E6；
是U1、U2、U3、U4、U5、U6或U7；
J1是卤素；
J2是-OH且R1是H；
J3是-NR17R18且R1是H；
J4是C1-C8烷基；
J5是被1-4个Z3基团可选取代的C1-C8烷基；
J6是被1-4个Z3基团可选取代的C3-C8碳环基；
J7是C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基，这些基团中的任一个被1-4个Z3基团可选取代；
J8是被1-4个Z3基团可选取代的C1-C8烷氧基且R1是H；
J9是被1-4个Z3基团可选取代的C3-C8碳环氧基且R1是H；
T1是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基；
T2是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个C1-C8烷基可选取代；
T3是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个卤素原子可选取代且所述亚碳环基被1-4个C1-C6烷基可选取代；
T4是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被C1-C8烷基可选取代，其中所述烷基被1-4个Z3基团可选取代；
T5是通过两个相邻的碳与L和M相连的4-10元亚杂环基；
T7是通过碳原子与M相连且通过N原子与L相连的4-10元亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T8是通过两个相邻的碳与L和M相连的4-10元亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T9是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12螺双环亚碳环基，其中所述螺双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T10是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12稠合双环亚碳环基，其中所述稠合双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T11是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12桥接双环亚碳环基，其中所述桥接双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T12是通过两个不相邻的碳与L和M相连的C4-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T13是通过两个相邻的原子与L和M相连的5-8元稠合、桥接或螺双环亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T14是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个Z4基团可选取代；
L1是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基；
L2是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中所述C1-C8亚烷基被1-4个卤素取代或是所述C2-C8亚烯基是被1-4个卤素取代；
L3是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中所述C1-C8亚烷基被1-4个Z4基团取代或是所述C2-C8亚烯基被1-4个Z4基团取代，并且其中每个基团被1-4个卤素可选取代；
L4是被两个一起存在以形成螺C3-C8碳环基的偕C1-C4烷基取代的C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中L4是被1-4个Z1基团可选取代；
L5是通过O、S或N原子与相连的2-8元杂亚烷基(杂亚烷基)或4-8元杂亚烯基(杂亚烯基)，所述杂亚烷基或杂亚烯基被1-4个Z3基团可选取代；
L6是通过碳原子与相连的2-8元杂亚烷基或5-8元杂亚烯基，所述杂亚烷基或杂亚烯基被1-4个卤素原子取代且被1-4个Z4基团可选取代；
L7是通过碳原子与相连的2-8元杂亚烷基或4-8元杂亚烯基，所述杂亚烷基或杂亚烯基被1-4个Z4基团可选取代；
L8是L8A-L8B-L8C，其中L8A和L8C各自独立地选自C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基或键，且L8B是含有0至3个选自N、O或S的杂原子的3-至6-元饱和或不饱和环，其中L8A和L8C以两个不同的环原子与L8B相连且L8B被1-4个Z1基团可选取代；
L9是被1-4个Z1基团可选取代的C2-C8亚烷基；
L10是被两个一起存在以形成螺4-8元杂环基的偕Z1基团取代的C1-C8亚烷基或C3-C8亚烯基，其中L10是被1-4个Z1基团可选取代；
U1是被1-4个W基团可选取代的C6-C14元亚芳基；
每个U2是被1-4个W基团可选取代的C3-C8元亚碳环基；
每个U3是被1-4个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代的4-14元亚杂环基；
U4是含有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的5或6元单环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代；
U5是含有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子环原子的8、9或10元稠合双环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代；
U6是含有1、2、3或4个独立地选自N、O或S的杂原子环原子的11-14元稠合三环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代；
U7是含有4个独立地选自N、O或S的杂原子环原子的8-10元稠合双环亚杂芳基，其中所述杂芳基是被1-2个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代；
每个W独立地是W1、W2、W3、W4、W5、W6或W7；
每个W1是氧基、卤素、-OR6、C1-C6烷基、-CN、-CF3、-SR6、-C(O)2R6、-C(O)N(R6)2、-C(O)R6、-N(R6)C(O)R6、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、C3-C8碳环基、C3-C8环烷氧基、C1-C6卤代烷基、-N(R6)2、-NR6(C1-C6烷基)O(C1-C6烷基)、卤代(C1-C6烷氧基)、-NR6SO2R6、-SO2N(R6)2、-NHCOOR6、-NHCONHR6、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基或-O(4-10元杂环基)，其中所述W1烷基、碳环基、环烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个R6独立地选自H、C6-C10芳基或C1-C6烷基，其中所述芳基或烷基被1至4个取代基可选取代，所述取代基独立地选自卤素原子、C1-C6烷基、C6-C10芳基、C3-C8碳环基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、卤代(C1-C6烷氧基)、-OH、-O(C1-C6烷基)、-SH、-S(C1-C6烷基)、-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(O)(C1-C6烷基)、-SO2N(C1-C6烷基)2、-NHCOO(C1-C6烷基)、-NHCO(C1-C6烷基)、-NHCONH(C1-C6烷基)、-CO2(C1-C6烷基)或-C(O)N(C1-C6烷基)2；
每个W2是被5-14元杂芳基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷氧基；其中所述杂芳基或芳基被1-4个Z1c基团取代；
每个W3是被C6-C10芳基、C3-C8碳环基、C1-C8烷基、C1-C6卤代烷基、4-10元杂环基或5-14元杂芳基取代的C2-C6炔基；其中所述芳基、碳环基、烷基、卤代烷基、杂环基或杂芳基；
每个W4是-SF5；
每个W5是-O(C2-C6烷基)OR22，其中R22是被1-4个Z1基团可选取代的C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基；
每个W6是-O(C2-C6烷基)NR16R22，其中R22是被1-4个Z1基团可选取代的C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基；
每个W7是-O(5-14元杂芳基)；其中所述-O(5-14元杂芳基)被1-4个Z1基团可选取代且所述-O(5-14元杂芳基)的2个相连取代基可一起形成含有0至3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-至6-元环；
E1是C2-C6烯基；
E2是C1-C6烷基；
E3是C1-C6卤代烷基；
E4是C2-C6卤代烯基；
E5是C3-C6碳环基；
E6是被-OCH3、-OCD3、-OCF3或-OCF2H可选取代的C1-C6烷基；
Q1选自H、C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其中当Q1不是H时，所述Q1被1-4个独立地选自卤素、-OR6、-SR6、-N(R6)2、C6-C10芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、-NO2、-CN、-CF3、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、-NR6SO2Z2、-SO2NR17R18、-NHCOOR16、-NHCOZ2、-NHCONHR16、-CO2R6、-C(O)R6和-CON(R6)2的取代基可选取代；
Q2是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10螺双环碳环基；
Q3是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10稠合双环碳环基；
Q4是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10桥接双环碳环基；
Q5是具有1个选自N、O或S的杂原子的4-元杂环基，其中Q5被1-4个Z3基团可选取代；
Q6是C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其中Q6被1个氧基取代且被0至3个独立地选自卤素、-OR6、-SR6、-N(R6)2、C6-C10芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、-NO2、-CN、-CF3、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、-NR6SO2Z2、-SO2NR17R18、-NHCOOR16、-NHCOZ2、-NHCONHR16、-CO2R6、-C(O)R6或-CON(R6)2的取代基取代；
Q7是C3-C8碳环基，其中Q7被4-8个F原子取代且Q7的每个碳被0-2个F原子取代；
每个Z1独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)R16、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)R16、-NR16C(O)NR17R18、-NR16S(O)2R16、-NR16S(O)2NR17R18、-NR16S(O)2OR16、-OR16、-OC(O)R16、-OC(O)NR17R18、-SR16、-S(O)R16、-S(O)2R16或-S(O)2NR17R18，其中Z1的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1a基团可选取代；
每个Z1a独立地是氧基、卤素、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)R16、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)R16、-NR16C(O)OR16、-NR16C(O)NR17R18、-NR16S(O)2R16、-NR16S(O)2NR17R18、-NR16S(O)2OR16、-OR16、-OC(O)R16、-OC(O)NR17R18、-SR16、-S(O)R16、-S(O)2R16或-S(O)2NR17R18，其中Z1a的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个R16独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基，其中R16的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个Z1c独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)(C1-C8烷基)、-C(O)O(C1-C8烷基)、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NHC(O)O(C1-C8烷基)、-NHC(O)(C1-C8烷基)、-NHC(O)NH(C1-C8烷基)、-OH、-O(C1-C8烷基)、C3-C8环烷氧基、C5-C10双环碳环氧基、-S(C1-C8烷基)或-S(O)2N(C1-C8烷基)2，其中Z1c的任意烷基、碳环基、芳基、杂芳基、杂环基或环烷氧基部分被1-4个卤素原子或C1-C6烷氧基可选取代；
R17和R18各自独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、-C(O)R16、-C(O)OR16、C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基，其中R17或R18的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代，或是R17和R18与和它们相连的氮一起形成4-7元杂环基，其中所述4-7元杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个Z2独立地是C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-NR17R18或-OR16，其中Z2的任意烷基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个Z2a基团可选取代；
每个Z2a独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-(C2-C8炔基)芳基、-(C2-C8炔基)杂芳基、-CN、-C(O)(C1-C6烷基)、-C(O)O(C1-C6烷基)、-C(O)N(C1-C6烷基)2、-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-NHC(O)O(C1-C6烷基)、-NHC(O)(C1-C6烷基)、-NHC(O)NH(C1-C6烷基)、-OH、-O(C1-C6烷基)、卤代(C1-C6烷氧基)、C3-C8环烷氧基、-S(C1-C6烷基)、或-SO2N(C1-C6烷基)2；其中Z2a的任意烷基、炔基、碳环基、环烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素或C1-C6烷氧基可选取代；
每个Z3独立地是氧基、卤素、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)NR17R18、-OR16、-SR16或-SO2R16；其中Z3的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素可选取代；和
每个Z4独立地是氧基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)NR17R18、-OR16、-SR16或-SO2R16其中Z4的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素可选取代。
在另一个实施方案中，提供了式(III)的化合物或其立体异构体、或立体异构体混合物、或药学上可接受的盐：
其中：
M是-O-；
J是J1、J2、J3、J4、J5、J6、J7、J8或J9；
是T1、T2、T3、T4、T5、T7、T8、T9、T10、T11、T12、T13或T14；
L是L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9或L10；
Q是Q1、Q2、Q3、Q4、Q5或Q7；
E是E1、E2、E3或E4；
选自U1、U3、U4、U5、U6或U7；
J1是卤素；
J2是-OH；
J3是-NR17R18；
J4是C1-C8烷基；
J5是被1-4个Z3基团取代的C1-C8烷基；
J6是被1-4个Z3基团可选取代的C3-C8碳环基；
J7是C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基，其中这些基团的任一个被1-4个Z3基团可选取代；
J8是被1-4个Z3基团可选取代的C1-C8烷氧基；
J9是被1-4个Z3基团可选取代的C3-C8碳环氧基；
T1是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基；
T2是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个C1-C8烷基取代；
T3是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个卤素原子取代且所述亚碳环基被1-4个C1-C6烷基可选取代；
T4是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被C1-C8烷基取代，其中所述烷基被1-4个Z3基团取代；
T5是通过两个相邻的碳与L和M相连的4-10元亚杂环基；
T7是通过碳原子与M相连且通过N原子与L相连的4-10元亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T8是通过两个相邻的碳与L和M相连的4-10元亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团取代；
T9是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12螺双环亚碳环基，其中所述螺双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T10是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12稠合双环亚碳环基，其中所述稠合双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T11是通过两个相邻的碳与L和M相连的C5-C12桥接双环亚碳环基，其中所述桥接双环亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T12是通过两个不相邻的碳与L和M相连的C4-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个Z1基团可选取代；
T13是通过两个相邻的原子与L和M相连的5-8元稠合、桥接或螺双环亚杂环基，其中所述亚杂环基被1-4个Z1基团可选取代；
T14是通过两个相邻的碳与L和M相连的C3-C8亚碳环基，其中所述亚碳环基被1-4个Z4基团取代；
L1是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基；
L2是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中所述C1-C8亚烷基或所述C2-C8亚烯基被1-4个卤素取代；
L3是C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中所述C1-C8亚烷基或所述C2-C8亚烯基和其中所述C1-C8亚烷基或所述C2-C8亚烯基被1-4个卤素可选取代；
L4是被两个一起存在以形成螺C3-C8碳环基的偕C1-C4烷基取代的C1-C8亚烷基或C2-C8亚烯基，其中L4被1-4个Z1基团可选取代；
L5是通过O、S或N原子与相连的2-8元杂亚烷基或4-8元杂亚烯基，所述杂亚烷基或杂亚烯基被1-4个Z3基团可选取代；
L6是通过碳原子与相连的2-8元杂亚烷基或5-8元杂亚烯基，所述杂亚烷基或杂亚烯基是被1-4个卤素取代且被1-4个Z4基团可选取代；
L7是通过碳原子与相连的2-8元杂亚烷基或4-8元杂亚烯基，所述杂亚烷基或杂亚烯基被1-4个Z4基团可选取代；
L8是L8A-L8B-L8C，其中L8A和L8C各自独立地是C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基或键，且L8B是含有0至3个选自N、O或S的杂原子的3-至6-元饱和或不饱和环，其中L8A和L8C在两个不同的环原子上与L8B相连且L8B被1-4个Z1基团可选取代；
L9是被1-4个Z1基团可选取代的C2-C8亚炔基；
L10是被两个一起存在以形成螺4-8元杂环基的偕Z1基团取代的C1-C8亚烷基或C3-C8亚烯基，其中L10被1-4个Z1基团可选取代；
U1是被1-4个W基团可选取代的C6-C14元亚芳基；
U3是被1-4个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代的4-14元亚杂环基；
U4是含有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的5或6元单环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代；
U5是含有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的8、9或10元稠合双环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代；
U6是含有1、2、3或4个独立地选自N、O或S的杂原子的11-14元稠合三环亚杂芳基，其中所述亚杂芳基被1-4个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代；
U7是含有4个独立地选自N、O或S的杂原子的8-10元稠合双环亚杂芳基，其中所述杂芳基被1-2个位于一个或多个选自C或N的环原子上的W基团可选取代；
每个W独立地是W1、W2、W3、W4、W5、W6或W7；
每个W1独立地是氧基、卤素、-OR6、C1-C6烷基、-CN、-CF3、-SR6、-C(O)2R6、-C(O)N(R6)2、-C(O)R6、-N(R6)C(O)R6、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、C3-C8碳环基、C3-C8环烷氧基、C1-C6卤代烷基、-N(R6)2、-NR6(C1-C6烷基)O(C1-C6烷基)、卤代(C1-C6烷氧基)、-NR6SO2R6、-SO2N(R6)2、-NHCOOR6、-NHCONHR6、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基或-O(4-10元杂环基)，其中所述W1烷基、碳环基、环烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个R6独立地是H、C6-C10芳基或C1-C6烷基，其中所述芳基或烷基被1至4个独立地选自卤素原子、C1-C6烷基、C6-C10芳基、C3-C8碳环基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、卤代(C1-C6烷氧基)、-OH、-O(C1-C6烷基)、-SH、-S(C1-C6烷基)、-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(O)(C1-C6烷基)、-SO2N(C1-C6烷基)2、-NHCOO(C1-C6烷基)、-NHCO(C1-C6烷基)、-NHCONH(C1-C6烷基)、-CO2(C1-C6烷基)或-C(O)N(C1-C6烷基)2的取代基可选取代；
每个W2是被5-14元杂芳基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷氧基；其中所述杂芳基或芳基被1-4个Z1基团取代；
每个W3是被C6-C10芳基、C3-C8碳环基、C1-C8烷基、C1-C6卤代烷基、4-10元杂环基或5-14元杂芳基取代的C2-C6炔基；其中所述芳基、碳环基、烷基、卤代烷基、杂环基或杂芳基被1-4个Z1基团可选取代；
每个W4是-SF5；
每个W5是-O(C2-C6烷基)OR22，其中R22是被1-4个Z1基团可选取代的C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基；
每个W6是-O(C2-C6烷基)NR16R22，其中R22是被1-4个Z1基团可选取代的芳基、杂芳基或杂环基；
每个W7是-O(5-14元杂芳基)；其中所述-O(5-14元杂芳基)被1-4个Z1基团可选取代，并且所述-O(5-14元杂芳基)的2个相邻取代基可一起形成具有0至3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-至6-元环；
E1是
E2是
E3是
E4是
Q1是H、C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其中当Q1不是H时，所述Q1被1-4个独立地选自卤素、-OR6、-SR6、-N(R6)2、C6-C10芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、-CN、-CF3、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、-NR6SO2Z2、-SO2NR17R18、-NHCOOR16、-NHCOZ2、-NHCONHR16、-CO2R6、-C(O)R6或-CON(R6)2的取代基可选取代；
Q2是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10螺双环碳环基；
Q3是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10稠合双环碳环基；
Q4是被1-4个Z1基团可选取代的C5-C10桥接双环碳环基；
Q5是具有1个选自N、O或S的杂原子的4-元杂环基，其中Q5被1-4个Z3基团可选取代；
Q7是被4-8个F原子取代的C3-C8碳环基并且每个Q7的碳被0-2个F原子取代；
每个Z1独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)R16、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)R16、-NR16C(O)NR17R18、-NR16S(O)2R16、-NR16S(O)2NR17R18、-NR16S(O)2OR16、-OR16、-OC(O)R16、-OC(O)NR17R18、-SR16、-S(O)R16、-S(O)2R16或-S(O)2NR17R18，其中Z1的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1a基团可选取代；
每个Z1a独立地是氧基、卤素、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)R16、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)R16、-NR16C(O)OR16、-NR16C(O)NR17R18、-NR16S(O)2R16、-NR16S(O)2NR17R18、-NR16S(O)2OR16、-OR16、-OC(O)R16、-OC(O)NR17R18、-SR16、-S(O)R16、-S(O)2R16或-S(O)2NR17R18，其中Z1a的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个R16独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基，其中R16的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个Z1c独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)(C1-C8烷基)、-C(O)O(C1-C8烷基)、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NHC(O)O(C1-C8烷基)、-NHC(O)(C1-C8烷基)、-NHC(O)NH(C1-C8烷基)、-OH、-O(C1-C8烷基)、C3-C8环烷氧基、C5-C10双环碳环氧基、-S(C1-C8烷基)或-S(O)2N(C1-C8烷基)2，其中Z1c的任意烷基、碳环基、芳基、杂芳基、杂环基或环烷氧基部分被1-4个卤素原子或C1-C6烷氧基可选取代；
R17和R18各自独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、-C(O)R16、-C(O)OR16、C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基，其中R17或R18的任意烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代，或是R17和R18与和它们相连的氮一起形成4-7元杂环基，其中所述4-7元杂环基被1-4个Z1c基团可选取代；
每个Z2独立地是C1-C8烷基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-NR17R18或-OR16，其中Z2的任意烷基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个Z2a基团可选取代；
每个Z2a独立地是氧基、卤素、C1-C8烷基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-(C2-C8炔基)芳基、-(C2-C8炔基)杂芳基、-CN、-C(O)(C1-C6烷基)、-C(O)O(C1-C6烷基)、-C(O)N(C1-C6烷基)2、-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-NHC(O)O(C1-C6烷基)、-NHC(O)(C1-C6烷基)、-NHC(O)NH(C1-C6烷基)、-OH、-O(C1-C6烷基)、卤代(C1-C6烷氧基)、C3-C8环烷氧基、-S(C1-C6烷基)或-SO2N(C1-C6烷基)2；其中Z2a的任意烷基、炔基、碳环基、环烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素或C1-C6烷氧基可选取代；
每个Z3独立地是氧基、卤素、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)NR17R18、-OR16、-SR16或-SO2R16；其中Z3的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素可选取代；和
每个Z4独立地是氧基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8碳环基、C5-C10双环碳环基、C1-C8卤代烷基、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、-CN、-C(O)OR16、-C(O)NR17R18、-NR17R18、-NR16C(O)NR17R18、-OR16、-SR16或-SO2R16，其中Z4的任意烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基部分被1-4个卤素可选取代。
一个实施方案提供了包含式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体的药学组合物。
一个实施方案提供了一种用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的黄病毒科病毒感染(例如HCV病毒感染)的方法。该方法包括向患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物或立体异构体或立体异构体混合物，或其药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了一种用于抑制有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV病毒增殖、治疗HCV或延迟HCV症状发作的方法。该方法包括向患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物或其立体异构体或立体异构体混合物或药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，用于药物治疗(例如，用于治疗黄病毒科病毒感染，如HCV病毒感染，或是用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV病毒增殖或延迟HCV症状的发作)。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物或，其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，用于制造治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的黄病毒科病毒感染(例如HCV病毒感染)或HCV病毒增殖或是延迟HCV症状发作的药物。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物或，其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，用于预防或治疗黄病毒科病毒、HCV病毒的增殖，或是用于延迟HCV症状发作的治疗。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物或，其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，用于预防或治疗黄病毒科病毒感染(例如HCV病毒感染)。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐的用途，用于制造治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的黄病毒科病毒感染(例如HCV病毒感染)的药物。
一个实施方案提供了本发明公开的工艺和中间体，其可用于制备式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物或其立体异构体或立体异构体混合物，或盐。
其他实施方案、目的、特征和优点将在随后的实施例中详细描述，部分将是显而易见的描述，或是可通过实践而获知所要求保护的发明。这些目的和优点可以通过说明书和权利要求书中特别指出的方法和组合物来实现和达到。以上进行了概述，应理解其是本文公开的一些实施方案的总体概述和摘要，仅出于方便读者的目的而提供，并不打算以任何方式限制所附权利要求中具有法律权利的同等物的领域和范围。
具体实施方式
虽然本发明能够以多种形式呈现，但以下进行了数个实施方案的描述，应理解本公开被认为是所要求保护主题的范例，并不打算将所附权利要求限制为举例的具体实施方案。本公开中所用的标题仅出于便利的目的而提供，并不被解释为以任何方式限制该权利要求。在任何标题下举例说明的实施方案可以与任何其他标题下举例说明的实施方案进行组合。
缩略语
以下缩略语在说明书中使用，且具有以下意义：
℃＝摄氏度
＝埃
Ac＝乙酰基
AcOH＝乙酸
aq＝含水的
Ar＝氩气
atm＝大气
BEP＝2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸盐
双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)
Bn＝苄基
Boc＝叔丁氧羰基
Boc2O＝二碳酸二叔丁酯
bp＝沸点
Bs＝4-溴苯磺酰基
Bu＝丁基
calcd＝计算的
CBS＝科里-巴克什-柴田
CBZ＝Cbz＝苄氧羰基
CDI＝1,1’-羰基二咪唑
cm＝厘米
COMU＝(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉-碳鎓六氟磷酸盐
DABCO＝1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷
DBU＝1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯
DCE＝1,2-二氯乙烷
DCM＝二氯甲烷
DDQ＝2,3-二氯-5,6-二氰基苯醌
DIAD＝偶氮二羧酸二异丙酯
dioxane＝1,4-二氧六环
DIPEA＝N,N-二异丙基-N-乙胺
DMF＝N,N-二甲基甲酰胺
DMAP＝4-二甲基氨基吡啶
DMPU＝1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2(1H)-嘧啶酮
DMSO＝二甲亚砜
dppf＝1,1’-双(二苯基膦)二茂铁
DSC＝N,N’-二琥珀酰亚胺基碳酸酯
EA＝EtOAc＝乙酸乙酯
EC50＝半数最大有效浓度
EDC＝1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
Et＝乙基
Et2O＝乙醚
EtOAc＝乙酸乙酯
EtOH＝乙醇
equiv＝当量
F-NMR＝氟核磁共振光谱
g＝克
h＝hr＝小时
HATU＝O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯
HCV＝丙型肝炎病毒
HEPES＝羟乙基哌嗪乙磺酸
Hex＝hex＝己烷
HMDS＝六甲基二硅氮烷(叠氮化合物)
HMPA＝六甲基磷酰三胺
1H-NMR＝质子核磁共振光谱
HOAc＝乙酸
HOBT＝羟基苯并三唑
HPLC＝高压液相色谱
Hz＝赫兹
IPA＝异丙醇
i＝异
J＝耦合常数
KHMDS＝双(三甲基硅烷基)氨基钾
L＝升
LCMS-ESI+＝液相色谱质谱仪(电喷雾电离)
LiHMDS＝双(三甲基硅烷基)氨基锂
M＝摩尔浓度(mol/L)
mCPBA＝间氯过氧苯甲酸
Me＝甲基
MeCN＝ACN＝乙腈
MeOH＝甲醇
MeTHF＝2-甲基四氢呋喃
mg＝毫克
MHz＝兆赫兹
mL＝毫升
mmol＝毫摩尔
min＝分钟
MTBE＝甲基叔丁基醚
Ms＝甲磺酰基
MsCl＝甲磺酰氯
MS＝分子筛
MSA＝甲磺酸
n＝正
N＝标准浓度
NCS＝N-氯代丁二酰亚胺
NMM＝N-甲基吗啉
NMO＝N-甲基吗啉-N-氧化物
NMP＝N-甲基吡咯烷酮
o/n＝过夜
PCR＝聚合酶链反应
Pf＝9-苯基-9H-芴-9-基
PG＝保护基
PE＝石油醚
Ph＝苯基
PhMe＝甲苯
pM＝皮摩尔
PMB＝4-甲氧基苄基
Pr＝丙基
Pd(dppf)Cl2＝PdCl2(dppf)＝PdCl2dppf＝(1,1'-双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)
PPh3＝三苯基膦
RetTime＝保留时间
rt＝室温
sat＝sat。＝饱和
sec＝仲
SN1＝单分子亲核取代
SN2＝双分子亲核取代
SNAr＝芳香亲核取代
t＝tert＝叔
TBAF＝四正丁基氟化铵
TBS＝TBDMS＝叔丁基二甲基硅烷基
TBTU＝O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯
TEA＝三乙胺
temp＝温度
TEMPO＝(2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧基
Tf＝三氟甲磺酰基
TFA＝三氟乙酸
THF＝四氢呋喃
TIPS＝三异丙基硅烷基
TLC＝薄层色谱
TMS＝三甲基硅烷基
TMSOTf＝三氟甲磺酸三甲基硅酯
TPAP＝四丙基过钌酸铵
Tr＝三苯基甲基
Ts＝对甲苯磺酰基
wt＝重量
w/w＝重量/重量比
定义
除非另有说明，否则如本文所用的以下术语和短语将具有以下含义：
当环状基团(例如环烷基、碳环基、双环碳环基、杂芳基、杂环基)被数字或数字范围限制时，该数字或数字范围是指组成环状基团的原子数，包括任何杂原子。因此，例如4-8元杂环基含有4、5、6、7或8个环原子。
“烯基”是指具有至少一个不饱和位点的直链或支链烃基，例如一个(sp2)碳-(sp2)碳双键。例如，烯基可含有2至8个碳原子(即C2-C8烯基)，或是2至6个碳原子(即C2-C6烯基)。合适的烯基实例包括但不限于乙烯或乙烯基(-CH＝CH2)和烯丙基(-CH2CH＝CH2)。
“亚烯基”是指具有自母体烯烃的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心的烯烃。亚烯基的范例包括但不限于1,2-亚乙烯基(-CH＝CH-)或1-丙烯基(-CH2CH＝CH-)。
“烷氧基”是RO-，其中R是如本文定义的烷基。烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基和丙氧基。
“烷基”是指饱和的直链或支链烃基。例如，烷基可含有1至8个碳原子(即(C1-C8)烷基)或1至6个碳原子(即(C1-C6)烷基)或1至4个碳原子。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。
“亚烷基”是指具有自母体烷烃的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心的烷基。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)和亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)。
“炔基”是指具有至少一个不饱和位点的直链或支链烃，例如(sp)碳-(sp)碳三键。例如，一个炔基可含有2至8个碳原子(C2-C8炔烃)或2至6个碳原子(C2-C6炔基)。炔基的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)和丙炔基(-CH2C≡CH)。
“亚炔基”是指具有自母体炔烃的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心的炔基。典型的亚炔基包括但不限于亚乙炔基(-C≡C-)、亚丙炔基(-CH2C≡C-)和1-亚戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
“芳基”是指全碳单芳香环或全碳多环稠合芳香系统(例如稠合的多环系统)，其中至少一个环是芳香环。例如，芳香基团可含有6至20个碳原子、6至14个碳原子或是6至12个碳原子。应当理解如上所述的多环稠合的环系统的连接点可以是该环系统的任意位置，包括该环的芳香部分或碳环基部分。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基和茚满基。
“亚芳基”是指如本文定义的芳基，其具有自母体芳基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。典型的亚芳基包括但不限于亚苯基如和亚萘基如
“双环碳环基”是指5-14元饱和或部分不饱和、通过环碳连接的稠合、桥接或螺双环烃。在螺双环碳环基中，两个环共用一个普通碳原子。在一个稠合双环碳环基中，两个环共用两个普通且相邻的碳原子。在一个桥接双环碳环基中，两个环共用三个或更多普通的不相邻碳原子。双环碳环基的实例包括但不限于螺双环碳环基其中两个碳环基的环共用一个普通原子稠合双环碳环基其中两个碳环基的环共用两个普通原子以及桥接双环碳环基其中两个碳环基的环通用三个或更多(例如3、4、5或6个)普通原子
“双环亚碳环基”是指如上所述的双环碳环基，其具有自母体双环碳环基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。双环亚碳环基的实例包括但不限于螺双环亚碳环基其中两个碳环基的环共用普通原子稠合双环亚碳环基其中两个碳环基的环共用两个普通原子以及桥接双环亚碳环基其中两个碳环基的环共用三个或更多(例如3、4、5或6个)普通原子
“碳环氧基”是RO-，其中R是如上所述的碳环基。
“双环碳环氧基”是RO-，其中R是如上所述的双环碳环基。
“碳环基”和“碳环”是指含有饱和或部分不饱和环结构、通过环碳连接的烃基。在多个实施方案中，碳环基是指饱和或部分不饱和的C3-C12环部分，其实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。
“亚碳环基”(又称为“亚碳环基”)是指如本文定义的碳环基，其具有自母体碳环基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。亚碳环基的实例包括但不限于亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基和亚环己基。
“碳环基烷基”是指含有与烷基相连的饱和或部分不饱和环结构的烃基，其中连接点是环碳或烷基碳。在多个实施方案中，碳环基烷基是指饱和或部分不饱和的Cr-C12碳环基烷基部分，其实例包括环丙基烷基、环丁基烷基、环丙基乙基和环丙基丙基。
“亚碳环基烷基”是指如本文定义的碳环基烷基，其具有自母体碳环基烷基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。亚环烷基的实例包括但不限于亚环丙基甲基和亚环丙基甲基。
“环烷基”是指含有饱和环结构、通过一个环碳相连的烃基。在多个实施方案中，环烷基是指饱和的C3-C12环部分，其实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
“环烷氧基”是RO-，其中R是如本文定义的环烷基。
“直接键”是指两个原子之间的共价键。
“卤代”或“卤素”是指氯(-Cl)、溴(-Br)、氟(-F)或碘(-I)。
“卤代烯基”是指如本文定义的烯基，被一个或多个卤素原子取代。
“卤代烷氧基”是指如本文定义的烷氧基，被一个或多个卤素原子取代。
“卤代烷基”是指一个烷基，其中该烷基的一个或多个氢原子被卤素原子取代。卤代烷基的实例包括但不限于-CF3、-CHF2、-CFH2和-CH2CF3。
“卤代亚烷基”是指如本文定义的亚烷基，被一个或多个卤素原子取代。
“杂烷基”是指如本文定义的烷基，其中一个或多个碳原子被氧、硫或氮原子取代。
“杂亚烷基”是指如本文定义的亚烷基，其中一个或多个碳原子被氧、硫或氮原子取代。
“杂烯基”是指如本文定义的烯基，其中一个或多个碳原子被氧、硫或氮原子取代。
“杂亚烯基”是指如本文定义的杂烯基，其具有自母体杂烯基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。
“杂芳基”是指环上除碳之外还具有至少一个原子的单芳香环，其中该原子选自由氧、氮和硫组成的组；此术语还包括含有至少一个这种芳香环的稠合多环系统。例如，杂芳基包括每个环上含有多达6个原子的单环、双环或三环，其中至少一个环是芳香环且环上含有1至4个选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子。稠合多环系统的环可在满足化合价要求时通过稠合、螺和桥接键相互连接。杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、噻吩基、呋喃基、嘧啶基、咪唑基、吡喃基、吡唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、恶唑基、异恶唑基、吡咯基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、苯并咪唑基、异吲哚基、苯并三唑基、嘌呤基、硫茚基和吡嗪基。杂芳基可通过芳香环进行连接，或是如果杂芳基是双环或三环且其中一个环不是芳香环或不含有杂原子，则通过非芳香环或未含有杂原子的环进行连接。“杂芳基”还应理解为包括任意含氮杂芳基的N氧化物衍生物。
“亚杂芳基”是指如上所述的杂芳基，其具有自母体杂芳基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子或是自碳原子上去除氢原子且自氮原子上去除一个氢原子而得到的两个单价基团中心。亚杂芳基的非限制性实例是：
“杂环基”是指饱和或部分不饱和的单环、双环或三环基团，含有2至14个环碳原子，并且除环碳原子外还有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子。双环或三环杂环基可能具有稠合、桥接或螺环连接。在多个实施方案中，杂环基通过碳或杂原子与另一部分相连。杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、恶唑啉基、异恶唑啉基、氧杂环丁基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢异喹啉基、1,4-二恶烷基、吡咯烷及、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并恶唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异恶唑基、二氢异噻唑基、二氢恶二唑基、二氢恶唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲二氧苯甲酰基、苯并二氢吡喃基、二氢吡喃喹喔啉基、四氢喹喔啉基、四氢喹啉基、二氢吡喃喹啉基和四氢噻吩基及它们的N-氧化物。螺双环杂环基是指双环杂环基，其中该双环杂环基的两个环共用一个普通原子。稠合双环杂环基是指双环杂环基，其中该双环杂环基的两个环共用两个普通原子。桥接双环杂环基是指双环杂环基，其中该双环杂环基的两个环共用三个或更多(例如3、4、5或6个)普通原子。
“亚杂环基”是指如本文定义的杂环基，其具有自母体杂环基的相同碳原子或两个不同碳原子、一个碳原子和一个杂原子、或是两个杂原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。
“前药”是指向生物系统给药时，作为自发化学反应、酶催化化学反应、光解和/或代谢化学反应的结果，可生成原料药基活性成分的任何化合物。因此，前药是具有治疗活性的化合物的共价修饰类似物或潜在形式。前药的非限制性实例包括酯分子、季铵分子、乙二醇分子等等。
术语“可选取代”是指一个部分(moiety)，其中所有取代基为氢或其中该部分的一个或多个氢被非氢取代基取代；也就是说被可选取代的该部分既可以被取代也可以未被取代。
“离去基团”(LG)是指在化合物在化学反应中具有位移或取代活性的部分。其中例如发生位移或取代的实例包括但相比于双分子亲核取代(SN2)、单分子亲核取代(SN1)、芳香族亲核取代(SNAr)以及过渡金属催化的交叉偶联反应。离去基团的实例包括但不限于卤素原子(如-Cl、-Br、-I)和磺酸酯(如甲磺酸酯(-OMs)、甲苯磺酸酯(-OTs)或三氟甲磺酸酯(-OTf))。本领域技术人员将了解多种化学离去基团和活化策略，并将鉴别可作为离去基团的合适部分，其根据是特殊的化学反应、该基团所连的功能基以及用来影响位移和取代反应的化学试剂。在某些情况下，作为非限制性实例，卤素原子(例如-Cl、-Br或-I)可用作过渡金属与另一个试剂例如碱催化的反应(例如Pd催化的芳基卤化物与芳基硼酸之间的Suzuki偶联反应)中的离去基团。
立体异构体
本文所用的立体化学定义和惯例总体符合S。P。Parker、Ed.、McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company、New York；以及Eliel、E。and Wilen、S.、Stereochemistry of Organic Compounds(1994)John Wiley&Sons、Inc.、New York。
术语“手性”是指具有镜像伙伴不重叠性质的分子，而术语“非手性”是指其镜像伙伴互相可重叠的分子
“异构体”是具有相同分子式的不同化合物。异构体包括立体异构体、对映体和非对映体。
“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子、但不互为镜像的立体异构体。
“对映异构体”是一对互为不可重叠的镜像的立体异构体。一对对映体的1:1化合物是“外消旋”混合物。术语“(±)”用于在适当情况下指明外消旋混合物。
术语“立体异构体”是指具有相同化学组成但原子或基团的空间排列不同的化合物。
本发明公开的化合物可含有手性中心，例如手性碳原子。因此这些化合物包括所有立体异构体的外消旋混合物，包括对映体、非对映体和阻转异构体。此外，本发明公开的化合物包括在任何或所有不对称手性原子位置的富集或拆分光学异构体。换句话说，提供了根据描述明显的手性中心的手性异构体或外消旋混合物。分离或合成的外消旋和非对映体以及各个光学异构体基本不含它们的对映体或非对映体伙伴，均在本发明的范围之内。外消旋混合物可通过已知技术分离为基本光学纯的各个异构体，例如分离与光学活性助剂如酸或碱形成的非对映体盐，随后转换回光学活性物质。预计的光学异构体还可通过立体定向反应进行合成，使用预计起始原料的合适立体异构体作为起点。
应当理解对于本发明公开的化合物来说，当以非立体化学的方式(例如平面)引入键时，该键相连的原子包括所有的立体化学可能性。还应理解当以立体化学的方式(例如粗体、楔形粗体、虚线或楔形虚线)引入键时，除非另外指出否则该立体化学键相连的原子具有所示立体化学。因此，在一个实施方案中，本发明公开的化合物超过50％是单对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物至少80％是单对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物至少90％是单对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物至少98％是单对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物至少99％是单对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物超过50％是单非对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物至少80％是单非对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物至少90％是单非对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物至少98％是单非对映体。在另一个实施方案中，本发明公开的化合物至少99％是单非对映体。
互变异构体
本发明公开的化合物在某些情况下还可存在互变异构体。尽管可能只描述了非定域的共振结构，但所有这些形式均在本发明范围之内。例如，嘌呤、嘧啶、咪唑、胍、脒和四唑体系可存在烯胺互变异构体并且它们所有的可能互变异构形式均在本发明的范围之内。
同位素
本领域技术人员应当理解本发明还包括任何请求保护的化合物，其可以以具有一个或多个同位素例如但不限于氘(2H或D)的上述天然存在的同位素比例的任意原子或所有原子富集。作为非限制性实例，-CH3基团被-CD3可选取代。
以下列出的基团、取代基和范围的具体值仅用于说明；它们并不排除基团和取代基的其他规定值或其他规定范围内的值。
保护基
在某些实施方案中，保护基包括前药部分和化学保护基。保护基可以用缩写“PG”表示。
“保护基”(“PG”)是指化合物中遮蔽或改变功能基性质或是化合物整体性质的部分。化学保护基和保护/脱保护策略在本领域是公知的。参见例如Peter G。M。Wuts andTheodora W。Greene、Protective Groups in Organic Synthesis、4th edition；JohnWiley&Sons、Inc.:New Jersey、2007。还可参见Kocienski、P.J。Protecting Groups、3rdedition；Georg Thieme Verlag Stuttgart:New York、2005，特别是Chapter 1、Protecting Groups:An Overview、pages 1-48、Chapter 2、Carbonyl ProtectingGroups、pages 49-118、Chapter 3、Diol Protecting Groups、pages 119-186、Chapter 4、Hydroxyl Protecting Groups、pages 187-364、Chapter 5、Thiol Protecting Groups、pages 365-392。保护基通常用于遮蔽某些功能基的反应活性，以促进预期化学反应的效率，例如以一种有序和计划的方式连接和断开化学键。
除了所保护的功能基的反应活性之外，化合物的功能基团保护还可改变其他物理性质，例如极性、亲脂性(疏水性)和其他可通过常用分析工具测量的性质。化学保护的中间体自身可能具有生物活性也可能没有生物活性。
在某些实施方案中，可选使用保护基以避免在合成过程中发生与所保护基团的副反应。当这样做时，保护的适合基团的选择以及化学保护基“PG”的性质取决于保护所针对的反应的化学过程(例如酸性、碱性、氧化、还原或其他条件)以及合成的预计方向。当化合物被多个PG取代时，PGs不需要相同，通常也确实是不相同的。总体而言，PG将用于保护功能基例如羧基、羟基、巯基或氨基，从而避免副反应或反而促进合成效率。脱保护以得到游离脱保护的基团的顺序取决于合成的预计方向以及将面对的反应条件，可以按照技术人员决定的任何顺序进行。
盐和水合物
本发明公开的化合物的药学上可接受的盐的实例包括自适当的碱衍生的盐，例如碱金属(如钠)、碱土金属(如镁)、铵和NX4 +(其中X是C1-C4烷基)。氮原子或氨基的药学上可接受的盐包括例如有机羧酸，如乙酸、苯甲酸、乳酸、富马酸、酒石酸、马来酸、丙二酸、苹果酸、羟乙磺酸、乳糖酸和琥珀酸的盐；有机磺酸，如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸的盐；和无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和氨基磺酸的盐。羟基化合物的药学上可接受的盐包括所述化合物的阴离子与合适的阳离子例如Na+和NX4 +(其中每个X各自独立地选自H或C1-C4烷基)的组合。
出于治疗目的，本发明公开的化合物的活性成分的盐通常是药学上可接受的，即它们是生理上可接受的酸或碱衍生得到的盐。但是，非药学上可接受的酸或碱的盐也可能有用，例如在制备或纯化式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物或立体异构体、或立体异构体混合物或本发明公开的另一个化合物时有用。无论是否来自于生理上可接受的酸或碱，所有盐均在本发明的范围之内。
金属盐通常是通过将金属氢氧化物与本发明公开的化合物进行反应来得到的。以这种方式制备的金属盐的实例是含有Li+、Na+和K+的盐。水溶性较差的金属盐可通过加入适合的金属化合物自水溶性较好的溶液中沉淀得到。
此外，可通过向碱性中心例如胺中加入某些有机酸或无机酸例如HCl、HBr、H2SO4、H3PO4或有机磺酸来形成盐。最后，应当理解本文中的组合物包含本发明公开的化合物的非离子形式以及两性离子形式，和与化学计量的水组合形成的水合物。
实施方案
在某些实施方案中，A是-C(O)-、6-10元亚芳基或5-6元亚杂芳基，其中所述亚芳基或亚杂芳基被1-4个卤素或卤代烷基可选取代。在一些实施方案中，A是-C(O)-。
在某些实施方案中，M是-O-或键。在一些实施方案中，M是-O-。
在某些实施方案中，G是-CO2H或-CONHSO2Z2。在一些实施方案中，G是-CONHSO2Z2。在一些实施方案中，G是-CONHSO2Z2且Z2是被甲基可选取代的环丙基。
在某些实施方案中，G是：
在一些实施方案中，G是：
在某些实施方案中，Z2是：
在某些实施方案中，Z2是：
在某些实施方案中，Z2a是氢、卤素或甲基。在一些实施方案中，Z2a是：
在其他实施方案中，Z2a是或(即氢或甲基)。
在其他实施方案中，Z2a是
在更多实施方案中，Z2a是(即甲基)。
在某些实施方案中，R3、R4和R5中的一个是Z1而另两个是H。在一些实施方案中，R3、R4和R5分别是H.
在某些实施方案中，X是-OC(O)-、-O-或直接键(direct bond)。在一些实施方案中，X是-O-。
在某些实施方案中，X是-OC(O)-、-O-或直接键。在某些其他实施方案中，X是-O-。
在某些实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物的其余部分相连的C3-C6亚碳环基，其中所述C3-C5亚碳环基被C1-C4烷基或C1-C3卤代烷基可选取代。
在某些实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物的其余部分相连的C3-C6亚碳环基，其中C3-C5亚碳环基被甲基、乙基或三氟甲基可选取代。在一些实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物的其余部分相连的C3-C6亚碳环基。
在某些实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物的其余部分相连的C3-C6环烷基，其中C3-C5环烷基被甲基、乙基或三氟甲基可选取代。在一些实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物的其余部分相连的C3-C6环烷基。
在某些实施方案中，是被甲基或三氟甲基可选取代的环丙基。
在某些实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物的其余部分相连的C6-C8桥接双环亚碳环基或C6-C8桥接稠合亚碳环基。
在某些实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物的其余部分相连的C6-C8桥接双环环烷基或C6-C8桥接稠合环烷基。
在一些实施方案中，是T1、T2、T3、T4、T5、T8、T9、T10、T11或T12。在某些实施方案中，是T1、T2、T3、T4、T9、T10、T11或T14。在一些实施方案中，是被1-4个可以相同也可以不同的Z1基团可选取代的T1、T2或T3。
在一些实施方案中，T1是
在一些实施方案中，T2是
在一些实施方案中，T3是
在一些实施方案中，T4是
在一些实施方案中，T5是
在一些实施方案中，T8是
在一些实施方案中，T9是
在一些实施方案中，T10是
在一些实施方案中，T11是
在一些实施方案中，T12是
在其他实施方案中，是
在某些实施方案中，T1是：
在某些实施方案中，T2是
在某些实施方案中，T3是：
在某些实施方案中，是被1-4个相同或不同的Z1基团可选取代的T2。
在某些实施方案中，T2是
在某些实施方案中，是
在其他实施方案中，是。
在其他实施方案中，是
在其他实施方案中，是
在某些实施方案中，T2是：
在某些实施方案中，T2是：
在某些实施方案中，T2是：(双环[3.1.0]亚己烷基(hexanylene)的立体异构体)。
在某些实施方案中，J是J1、J4、J5或J8。在其他实施方案中，J是J4。在某些实施方案中，J是J5。
在其他实施方案中，J4是
在其他实施方案中，J是
在其他实施方案中，J是
在其他实施方案中，J5是
在某些实施方案中，J是C1-C3烷基。在某些实施方案中，J是甲基或乙基。在其他实施方案中，J是-CH2-CH3。
在一些实施方案中，L是L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8或L9。在一个实施方案中，L是L1、L2、L3、L4、L5或L6。在某些实施方案中，L是L1或L2。
在一些实施方案中，L是被1-4个卤素取代的C3-C6亚烷基。
在一些实施方案中，L是被两个卤素取代的C5亚烷基。在一些实施方案中，L的卤素各自是氟。
在某些实施方案中，L是：
在某些其他实施方案中，L是
在一些实施方案中，L1是：
在一些实施方案中，L2是：
在一些实施方案中，L3是
在一些实施方案中，L4是
在一些实施方案中，L5是
在一些实施方案中，L6是
在一些实施方案中，L7是
在一些实施方案中，L8是
在一些实施方案中，L9是
在其他实施方案中，L是
在其他实施方案中，L是
在其他实施方案中，L是
在更多实施方案中，L是
在其他实施方案中，L是
在一些实施方案中，Q是Q1、Q2、Q3、Q4、Q5或Q7。
在一些实施方案中，Q1是
在一些实施方案中，Q2是
在一些实施方案中，Q3是
在一些实施方案中，Q4是
在一些实施方案中，Q5是
在一些实施方案中，Q7是
在其他实施方案中，Q是
在某些实施方案中，Q是Q1。在某些其他实施方案中，Q是C1-C4烷基或C3-C6碳环基。在其他实施方案中，Q是(即叔丁基)。在一些实施方案中，Q是叔丁基或C5-C6环烷基。
在某些实施方案中，E是E1、E2、E3或E4。在某些实施方案中，E是E3。
在某些实施方案中，E是被1-3个卤素原子可选取代的C1-C3烷基。在某些实施方案中，E是二氟甲基。
在某些其他实施方案中，E是
在一些实施方案中，E是
在其他实施方案中，E是
在其他实施方案中，E是
在其他实施方案中，E是
在某些实施方案中，是被1-4个相同或不同的W基团可选取代的双环杂芳基。
在某些其他实施方案中，是被1-4个相同或不同的W基团可选取代的
在某些实施方案中，被W基团取代。
在一些实施方案中，是U1、U3、U4、U5或U6，其中U1、U3、U4、U5或U6分别被1-3个W在任意可取代的位置可选取代，并且每个W独立地是W1、W2、W3、W4、W5、W6或W7。
在某些实施方案中，W1是氧、卤素、-OR6、C1-C6烷基、-CN、-CF3、-SR6、-C(O)2R6、-C(O)N(R6)2、-C(O)R6、-N(R6)C(O)R6、-SO2(C1-C6烷基)、-S(O)(C1-C6烷基)、C3-C8碳环基、C3-C8环烷氧基、C1-C6卤代烷基、-N(R6)2、-NR6(C1-C6烷基)O(C1-C6烷基)、卤代(C1-C6烷氧基)、-NR6SO2R6、-SO2N(R6)2、-NHCOOR6、-NHCONHR6、C6-C10芳基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基或-O(4-10元杂环基)，其中所述W1烷基、碳环基、环烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基被1-4个Z1c基团可选取代。
在某些实施方案中，每个R6独立地是H、C6-C10芳基或C1-C6烷基，其中所述芳基或烷基被1至4个独立地选自卤素原子、C1-C6烷基、C6-C10芳基、C3-C8碳环基、5-14元杂芳基、4-10元杂环基、卤代(C1-C6烷氧基)、-OH、-O(C1-C6烷基)、-SH、-S(C1-C6烷基)、-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(O)(C1-C6烷基)、-SO2N(C1-C6烷基)2、-NHCOO(C1-C6烷基)、-NHCO(C1-C6烷基)、-NHCONH(C1-C6烷基)、-CO2(C1-C6烷基)或-C(O)N(C1-C6烷基)2的取代基可选取代。
在某些实施方案中，W2是被5-14元杂芳基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷氧基；其中所述杂芳基或芳基被1-4个Z1c基团取代。
在某些实施方案中，W3是被C6-C10芳基、C3-C8碳环基、C1-C8烷基、C1-C6卤代烷基、4-10元杂环基或5-14元杂芳基取代的C2-C8炔基；其中所述芳基、碳环基、烷基、卤代烷基、杂环基或杂芳基被1-4个Z1c基团可选取代。
在一些实施方案中，W4是-SF5。
在一些实施方案中，W5是-O(C2-C6烷基)OR22，其中R22是被1-4个Z1c基团可选取代的C6-C10芳基、5-14元杂芳基或4-10元杂环基。
在某些实施方案中，W是氢、-O(C1-C3)烷基、卤素或氰基。
在某些实施方案中，W是甲氧基。
在一些实施方案中，U1是
其中每个U1被1-2个Z1基团可选取代。
在一些实施方案中，U3是
其中每个U3被1-2个Z1基团可选取代。
在一些实施方案中，U4是
其中每个U4被1-2个Z1基团可选取代。
在一些实施方案中，U5是
其中每个U5被1-2个Z1基团可选取代。
在一些实施方案中，U6是
其中每个U6被1-2个Z1基团可选取代。
在一些实施方案中，U7是
其中每个U7被1-2个Z1基团可选取代。
在其他实施方案中，被一或两个W在任意可取代的位置可选取代，且每个W独立地是W1、W2、W3、W4、W5、W6或W7，其中是
在其他实施方案中，被一个W在任意可取代的位置可选取代，且每个W独立地是W1、W2、W3、W4、W5、W6或W7，其中是
在其他实施方案中，每个W独立地是W1、W2、W3、W4、W5、W6或W7。
在一些实施方案中，W1是
在一些实施方案中，W2是
在一些实施方案中，W3是
在一些实施方案中，W5是
在一些实施方案中，W6是
在一些实施方案中，W7是
在其他实施方案中，W是
在某些实施方案中，每个W独立地是卤素或C1-C4烷氧基。
在一个具体的实施方案中，J是甲基或乙基；E被1-2个卤素原子取代；L被1-2个卤素原子取代，且T未被取代。
在另一个实施方案中，J是甲基或乙基；E是C1-C3卤代烷基；L是C5-烷基或C5-烯基。
在另一个实施方案中，提供了式(IV)化合物，或其立体异构体、或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐：
其中：
J是C1-C4烷基或C3-C6碳环基，其中C1-C4烷基或C3-C6碳环基被卤素、-OH、芳基或氰基可选取代；
是通过两个相邻的碳与L和该化合物的其余部分相连的C3-C5亚碳环基，其中所述C3-C5亚碳环基被C1-C4烷基、C1-C3卤代烷基、卤素、-OH或氰基可选取代，或是通过两个相邻的碳与L和该化合物的其余部分相连的C5-C8双环亚碳环基，或是通过两个相邻的碳与L和式IV的化合物的其余部分相连的C3-C6亚碳环基，其中所述C3-C6亚碳环基被C1-C4烷基或C1-C3卤代烷基可选取代；
L是C3-C6亚烷基、C3-C6亚烯基或-(CH2)3-亚环丙基-，其被1-4个卤素、-OH或氰基可选取代；
Q是被C1-C3烷基、卤素、-OH或氰基可选取代的C2-C4烷基或C3-C6碳环基；
E是C1-C3烷基或C2-C3烯基，其被C1-C3烷基、卤素、-OH或氰基可选取代；
W是H、-OH、-O(C1-C3)烷基、-O(C1-C3)卤代烷基、卤素或氰基；和
Z2a是H或C1-C3烷基、卤素、-OH或氰基。
在式(IV)的另一个实施方案中，J是C1-C3烷基。
在式(IV)的另一个实施方案中，J是甲基或乙基。
在式(IV)的另一个实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式IV的化合物的其余部分相连的C3-C6亚碳环基，其中所述C3-C6亚碳环基被C1-C4烷基或C1-C3卤代烷基可选取代。
在式(IV)的另一个实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式IV的化合物的其余部分相连的C3-C6亚碳环基，其中C3-C6亚碳环基被甲基、乙基或三氟甲基可选取代。
在式(IV)的另一个实施方案中，是亚环丙基。
在式(IV)的另一个实施方案中，是通过两个相邻的碳与L和式IV的化合物的其余部分相连的C6-C8桥接双环亚碳环基或C6-C8稠合双环亚碳环基。
在式(IV)的另一个实施方案中，L是被1-4个卤素取代的C3-C6亚烷基。在式(IV)的另一个实施方案中，L是被两个卤素取代的C5亚烷基。在一些实施方案中，所述卤素各自是氟。
在式(IV)的另一个实施方案中，L是C3-C6亚烷基。
在式(IV)的另一个实施方案中，L是C5亚烷基。
在式(IV)的另一个实施方案中，Q是叔丁基或C5-C6碳环基.
在式(IV)的另一个实施方案中，Q是叔丁基。
在式(IV)的另一个实施方案中，E是被1-3个卤素原子可选取代的C1-C3烷基。在式(IV)的另一个实施方案中，E是二氟甲基。
在式(IV)的另一个实施方案中，W是氢、-O(C1-C3)烷基、卤素或氰基。
在式(IV)的另一个实施方案中，W是甲氧基。
在式(IV)的另一个实施方案中，Z2a是氢或甲基。
在式(IV)的另一个实施方案中，Z2a是甲基。
还提供了选自由以下组成的组的化合物：
在一个实施方案中，提供了式IVa的化合物，或其药学上可接受的盐：
在一个实施方案中，提供了式IVb的化合物，或其药学上可接受的盐：
在一个实施方案中，提供了式IVc的化合物，或其药学上可接受的盐：
在一个实施方案中，提供了式IVd的化合物，或其药学上可接受的盐：
在一个实施方案中，提供了式IVe的化合物，或其药学上可接受的盐：
在一个实施方案中，提供了式IVf的化合物，或其药学上可接受的盐：
在一个实施方案中，提供了式IVg的化合物，或其药学上可接受的盐：
在一个实施方案中，提供了式IVh的化合物，或其药学上可接受的盐：
在一个实施方案中，提供了式IVa、IVb、IVc、IVd、IVe、IVf、IVg或IVh的任意一个化合物或立体异构体或立体异构体混合物，或其药学上可接受的的盐。
治疗方法
一个实施方案提供了一种用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的黄病毒科病毒感染(例如HCV病毒感染)的方法。该方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了一种用于抑制有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV病毒增殖、治疗HCV感染或延迟HCV症状发作的方法。该方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，用于药物治疗(例如，用于治疗黄病毒科病毒感染(如HCV病毒感染)或是用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV病毒增殖或延迟HCV症状的发作)。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，用于制造治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的黄病毒科病毒感染(例如HCV病毒感染)或HCV病毒增殖或是延迟HCV症状发作的药物。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，用于预防或治疗黄病毒科病毒、HCV病毒的增殖，或是用于延迟HCV症状发作的治疗。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，用于预防或治疗黄病毒科病毒感染(例如HCV病毒感染)。
一个实施方案提供了式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)化合物或立体异构体或立体异构体混合物，或其药学上可接受的盐的用途，用于制造治疗哺乳动物(例如人)中黄病毒科病毒感染(例如HCV病毒感染)的药物。
在某些实施方案中，提供了一种用于治疗慢性丙型肝炎病毒感染的方法。此方法包括向有其需求的患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，提供了一种用于治疗初治患者的丙型肝炎病毒感染的方法。所述方法包括向初治患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，提供了一种用于有治疗的患者的丙型肝炎病毒感染的方法。所述方法包括向有治疗经历的患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，提供了用于治疗干扰素不适用或干扰素不耐受的患者的丙型肝炎病毒感染的方法。所述方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明所述的治疗方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐，持续固定的一段时间。在一些实施方案中，这段固定的时间是4周、6周、8周、10周或12周。在其他实施方案中，这段固定的时间不超过12周。
在一些实施方案中，所述化合物施用大约12周。在其他实施方案中，所述化合物施用大约12周或更短、大约10周或更短、大约8周或更短、大约6周或更短或是大约4周或更短。
所述化合物的使用频率可能为每日一次、每日两次、每两日一次、一周两次、一周三次、一周四次或一周五次。
在某些实施方案中，本发明所述的治疗方法包括向感染HCV 1、2、3、4、5或6基因型(GT)的患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐(即一种用于治疗GT 1、2、3、4、5或6HCV感染的方法)。
一个实施方案提供了一种用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV感染的方法，其中所述患者患有HCV基因型1的感染。该方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了一种用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV感染的方法，其中所述患者患有HCV基因型2的感染。该方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了一种用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV感染的方法，其中所述患者患有HCV基因型3的感染。该方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了一种用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV感染的方法，其中所述患者患有HCV基因型4的感染。该方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了一种用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV感染的方法，其中所述患者患有HCV基因型5的感染。该方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
一个实施方案提供了一种用于治疗有其需求的患者(例如哺乳动物如人)的HCV感染的方法，其中所述患者患有HCV基因型6的感染。该方法包括向所述患者施用式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
在本发明描述的治疗方法中，给药步骤包括向有治疗需求的患者施用治疗有效量的式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，提供了抑制HCV活性的方法。这些方法包括施用本发明公开的化合物或组合物治疗疑似患有HCV的样本的步骤。
在一个实施方案中，本发明公开的化合物用作HCV的抑制剂，这种抑制剂的中间体或是具有如下所述的其他用途。
在某些实施方案中，在肝脏中结合的化合物可能以不同程度的可逆性结合。
在一个实施方案中，一种用于治疗HCV的方法，其包括向样本中加入本发明公开的化合物。其他步骤包含任何如上所述的给药方法。
如有需要可通过任意方法包括直接或间接的检测HCV活性的方法来观察所述化合物给药后HCV的活性。测定HCV活性的定量、定性和半定量方法均在预期内。通常可使用以上所述的筛选方法之一，但是，任何其他方法也可使用例如观察活有机体的生理性质。
许多有机体内含有HCV。本发明的化合物用于治疗或预防动物或人体内HCV活化相关的疾病。
药物制剂
“药学上可接受”是指适合用于药物制剂，通常认为对这种用途是安全的，国家或州政府的管理机构官方批准此用途，或是在美国药典或其他普遍认可的药典中列出在动物特别是人中使用。
“药物学上可接受的载体”是指药物学上可接受的并且与本发明的化合物一起给药的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体，或其他成分。
本发明化合物与按照常规实践选择的常用载体(例如无活性成分或辅料物质)一起配制。片剂将含有辅料包括助流剂、填充剂、粘合剂等等。含水制剂制备为无菌形式，当预计以其他口服给药之外的方式给药时通常为等渗的。所有制剂可选含有辅料例如药物辅料手册(1986)中规定的辅料。辅料包括抗坏血酸和其他抗氧化剂、螯合剂例如EDTA、糖类例如葡聚糖、羟烷基纤维素、羟烷基甲基纤维素、硬脂酸等等。一个实施方案提供了固体剂型的制剂包括固体口服剂型。这些制剂的pH范围是大约3至大约11，但通常为大约7至10。
虽然活性成分可以单独给药，但优选将其制成药物制剂(组合物)。本发明的制剂，无论是兽用还是人用，均包括至少一个如上定义的活性成分与一个或多个可接受的载体，和可选的其他治疗成分。载体必须是“可接受的”，意思是与该制剂的其他成分是相容的并且对接受者来说是生理无害的。
这些制剂包括适用于前述给药途径的制剂。这些制剂可方便地制成单位剂型并可由药学领域众所周知的任意方法制备。技术和制剂基本可参见雷明顿制药科学(MackPublishing Co.,Easton,PA)。这些方法包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的无活性成分(例如载体、药物辅料等等)混合在一起的步骤。总而言之，这些制剂是通过将活性成分与液体载体或精细分开的固体载体或两者均匀和紧密地混合在一起，然后在需要时将产物加工成型而制成的。
在某些实施方案中，适合于口服给药的制剂呈现为独立的单位例如胶囊、扁囊剂或片剂，其中每个单位含有预定量的活性成分。
在某些实施方案中，药物制剂包括一个或多个本发明化合物与一个或多个药学上可接受的载体或辅料和可选的附加治疗药物。含有活性成分的药物制剂可以是任何适合于预期给药方法的形式。例如当用于口服时，可制成片剂、含片(troches)、锭剂、水性或油性混悬液、可分散粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、糖浆剂或酏剂。预计用于口服的组合物可根据药学组合物生产领域已知的任意方法进行制备，这种组合物可包含一种或多种物质，包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以提供适口的制剂。含有与无毒的药学上可接受的辅料混合的活性成分的片剂是可接受的，其中这些辅料适合用于片剂的生产。这些辅料可以是例如惰性稀释剂，例如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、乳糖一水合物、交联羧甲基纤维素钠、聚维酮、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如纤维素、微晶纤维素、淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是无包衣的的，或是可通过已知技术进行包衣，包括微胶囊技术以延迟崩解和胃肠道吸收，从而提供较长时间的缓释作用。例如，可单独使用一种时间延迟材料例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或是与蜡一起使用。
与无活性成分组合使用以生产剂型的活性成分的量可根据治疗的宿主和特殊的给药模式而有所差异。例如在一些实施方案中，口服给药于人的剂型含有大约1至1000mg的活性物质，并与适合且适当数量的载体物质(例如无活性成分或辅料物质)一起配制。在某些实施方案中，载体物质自总体组合物的大约5％至大约95％(重量:重量)不等。在一些实施方案中，本发明描述的药物组合物含有大约1mg至800mg、1mg至600mg、1mg至400mg、1mg至200mg、1mg至100mg或1mg至50mg的式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明描述的药学组合物含有不超过大约400mg的式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明描述的药学组合物含有大约100mg式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)的化合物，或其立体异构体或立体异构体混合物，或药学上可接受的盐。
应当理解的是除了以上特别提及的成分之外，本发明公开的制剂可包括与所考虑制剂类型相关的其他本领域常用物质，例如口服给药适用的制剂可包括调味剂。
还提供了兽用组合物，包含至少一个如上规定的活性成分与兽用载体。
兽用载体是可用于该组合物给药目的的物质，可以是固体、液体或气体物质，它们可以是惰性的或是兽用领域可接受的，并且与活性成分是相容的。这些兽用组合物可口服、肠道外给药，或是通过任意其他预期途径给药。
活性成分的有效剂量至少取决于所治疗疾病的性质、毒性、化合物是否用于预防目的(低剂量)、给药方法和药物制剂，并将由医生使用常规剂量递增研究来确定。
给药途径
将一个或多个式I、II、III或IV(例如Iva-IVh任意之一)的化合物(本文是指活性成分)或其药学上可接受的盐通过任意适用于所治疗疾病的途径进行给药。适合的途径包括口服、直肠、鼻、局部(包括口腔和舌下)、阴道和非肠道(包括皮下、肌肉、静脉、皮内、囊内和硬膜外)等等。应当理解优选途径可能根据如接受者的疾病而不同。本发明化合物的一个优点是它们是口服可生物利用的并且可口服给药。因此，在一个实施方案中，本发明描述的药学组合物是口服剂型。在某些实施方案中，本发明描述的药学组合物是固体口服剂型。
本领域技术人员可认识到应对本发明通式化合物的取代基和其他部分进行选择以提供足够稳定的化合物为药学上有效的化合物，从而可制成具有可接受的稳定性的药学组合物。具有足够稳定性的化合物预计在本发明的范围之内。本领域技术人员应当理解上述任何定义和取代基的组合不应导致不可操作的种类或化合物。
联合治疗
在另一个实施方案中，本申请公开了包含式I、II、III或IV(例如Iva-IVh任意之一)的化合物或其药学上可接受的盐与至少一种附加治疗药物(即活性成分)以及药学上可接受的载体或辅料联用的药学组合物。在某些实施方案中，附加治疗药物包括其他抗病毒药物。
与本发明描述的化合物联用的附加治疗药物包括但不限于在与本发明化合物联用时具有治疗作用的任何药物。这些组合是根据待治疗的疾病、成分的交叉反应性和组合的药理性质选择的。例如，在某些实施方案中，与式I、II、III或IV(例如Iva-IVh任意之一)化合物联用的治疗药物包括但不限于一种或多种以下药物：干扰素、利巴韦林类似物、NS3蛋白酶抑制剂、NS5a抑制剂、NS5b抑制剂、α-葡萄糖苷酶1抑制剂、保肝药、HCV非核苷抑制剂、核苷类似物和其他治疗HCV感染的药物。在一些实施方案中，附加治疗药物包括但不限于NS3蛋白酶抑制剂、NS5a抑制剂和/或NS5b抑制剂。在一些实施方案中，提供了包括式I、II、III或IV(例如Iva-IVh任意之一)的化合物或其药学上可接受的盐和一个或多个NS3蛋白酶抑制剂、NS5a抑制剂和/或NS5b抑制剂的药学组合物。在一些实施方案中，提供了包括式I、II、III或IV(例如Iva-IVh任意之一)的化合物或其药学上可接受的盐和一个或多个NS5a抑制剂和/或NS5b抑制剂的药学组合物。在某些实施方案中，提供了包括式I、II、III或IV(例如Iva-IVh任意之一)的化合物和一个或多个其他抗病毒药物的药学组合物，其中其他抗病毒药物不是干扰素、利巴韦林或利巴韦林类似物。在其他实施方案中，提供了包括式I、II、III或IV(例如Iva-IVh任意之一)的化合物或立体异构体或立体异构体混合物，以及一个或多个其他抗病毒药物的药学组合物，其中其他抗病毒药物不是利巴韦林或利巴韦林类似物。
在某些实施方案中，本发明公开的化合物与一个或多个其他活性成分(例如一个或多个其他抗病毒药物)以单一剂型联用以同时或顺序向患者进行给药。联合治疗可按照同时或顺序治疗方案进行给药。当顺序给药时，组合给药两次或更多次。在某些实施方案中，活性成分是：(1)在联用的药学组合物中共同配制和给药或同时递送；(2)作为单独的药学组合物交替或平行递送；或(3)根据一些其他治疗方案递送。当以交替疗法递送时，活性成分按顺序给药或递送，例如以单独的片剂、丸剂或胶囊，或是通过单独注射器的不同注射递送。总而言之，在交替疗法期间，按顺序即连续进行每个活性成分的有效剂量的给药，而在联用疗法中，两个或多个活性成分的有效剂量是一起给药的。
示例性干扰素包括但不限于聚乙二醇化rIFN-α2b(PEG-Intron)、聚乙二醇化rIFN-α2a(Pegasys)、rIFN-α2b(Intron A)、rIFN-α2a(Roferon-A)、干扰素α(MOR-22、OPC-18、Alfaferone、Alfanative、Multiferon、subalin)、干扰素alfacon-1(Infergen)、干扰素α-n1(Wellferon)、干扰素α-n3(Alferon)、干扰素-β(Avonex、DL-8234)、干扰素-ω(ωDUROS、Biomed 510)、albinterferonα-2b(Albuferon)、IFNαXL、BLX-883(Locteron)、DA-3021、糖基化干扰素α-2b(AVI-005)、PEG-Infergen、PEG化干扰素λ(PEG化IL-29)或belerofon、IFNα-2b XL、rIFN-α2a、consensus IFNα、干复津、利比、聚乙二醇化IFN-β、口服干扰素α、feron、reaferon、intermixα、r-IFN-β和干复津+actimmune。
示例性利巴韦林类似物包括但不限于利巴韦林(Rebetol、Copegus)、左旋韦林VX-497和塔利韦林(Viramidine)。
示例性NS5A抑制剂包括但不限于ledipasvir(GS-5885)、GS-5816、JNJ-47910382、daclatasvir(BMS-790052)、ABT-267、MK-8742、EDP-239、IDX-719、PPI-668、GSK-2336805、ACH-3102、A-831、A-689、AZD-2836(A-831)、AZD-7295(A-689)和BMS-790052。
示例性NS5B抑制剂包括但不限于聚合酶抑制剂，索菲布韦(GS-7977)、tegobuvir(GS-9190)、GS-9669、TMC647055、ABT-333、ABT-072、setrobuvir(ANA-598)、非力布韦(PF-868554)、VX-222、IDX-375、IDX-184、IDX-102、BI-207127、伐洛他滨(valopicitabine)(NM-283)、R1626、PSI-6130(R1656)、PSI-7851、BCX-4678、nesbuvir(HCV-796)、BILB 1941、MK-0608、NM-107、R7128、VCH-759、GSK625433、XTL-2125、VCH-916、JTK-652、MK-3281、VBY-708、A848837、GL59728、A-63890、A-48773、A-48547、BC-2329、BMS-791325和BILB-1941。
示例性NS3蛋白酶抑制剂包括但不限于GS-9451、GS-9256、西咪匹韦(TMC-435)、ABT-450、波普瑞韦(SCH-503034)、narlaprevir(SCH-900518)、vaniprevir(MK-7009)、MK-5172、danoprevir(ITMN-191)、sovaprevir(ACH-1625)、neceprevir(ACH-2684)、特拉匹韦(VX-950)、VX-813、VX-500、faldaprevir(BI-201335)、asunaprevir(BMS-650032)、BMS-605339、VBY-376、PHX-1766、YH5531、BILN-2065和BILN-2061.
示例性α-葡萄糖苷酶1抑制剂包括但不限于西戈斯韦(MX-3253)、米格列醇和UT-231B.
示例性保肝药包括但不限于IDN-6556、ME 3738、MitoQ和LB-84451。
示例性HCV非核苷抑制剂包括但不限于苯并咪唑衍生物、苯并-1,2,4-噻二嗪衍生物和苯基丙氨酸衍生物。
示例性核苷类似物包括但不限于利巴韦林、塔利韦林、左旋韦林、L-核苷或艾沙托立宾且所述干扰素是α-干扰素或聚乙二醇化干扰素。
示例性治疗HCV感染的其他药物包括但不限于咪喹莫特、852A、GS-9524、ANA-773、ANA-975、AZD-8848(DSP-3025)、PF-04878691和SM-360320、亲环蛋白抑制剂(例如DEBIO-025、SCY-635或NIM811)或HCV IRES抑制剂(例如MCI-067)；emericasan(IDN-6556)、ME-3738、GS-9450(LB-84451)、silibilin或MitoQ、BAS-100、SPI-452、PF-4194477、TMC-41629、GS-9350、GS-9585和罗红霉素。
其他示例性治疗HCV感染的其他药物包括但不限于日达仙、硝唑尼特(alinea)、BIVN-401(virostat)、DEBIO-025、VGX-410C、EMZ-702、AVI 4065、巴维昔单抗、oglufanide、PYN-17、KPE02003002、actilon(CPG-10101)、KRN-7000、civacir、GI-5005、ANA-975(艾沙托立宾)、XTL-6865、ANA 971、NOV-205、tarvacin、EHC-18和NIM811.
另外的其他示例性治疗HCV感染的其他药物包括但不限于胸腺素α1(日达仙)、硝唑尼特(Alinea、NTZ)、BIVN-401(virostat)、PYN-17(altirex)、KPE02003002、actilon(CPG-10101)、GS-9525、KRN-7000、civacir、GI-5005、XTL-6865、BIT225、PTX-111、ITX2865、TT-033i、ANA 971、NOV-205、tarvacin、EHC-18、VGX-410C、EMZ-702、AVI4065、BMS-650032、巴维昔单抗、MDX-1106(ONO-4538)、Oglufanide、FK-788、VX-497(merimepodib)、DEBIO-025、ANA-975(艾沙托立宾)、XTL-6865或NIM811。
一般合成方法
本发明提供的方案、方法和实例描述了本发明公开的化合物以及用于制备这些化合物的中间体的合成。应当理解可以将本发明描述的各个步骤组合使用。还应理解可以将化合物的不同批次合并然后用于下一个合成步骤。
以下方案描述了可用于制备本发明公开的化合物的方法。
LF是“连接臂片段”(也就是说，L的前体)，其中在远离的LF部分的不饱和碳-碳键(例如烯烃或炔烃)，作为非限制性实例，有助于使得LF与U相连从而形成L基团的金属催化反应。生成这种连接的金属催化反应的非限制性实例包括Ru催化的环闭合复分解反应或Pd催化的交叉偶联反应(例如Negishi、Heck或Sonagashira偶联)。
所有的1H核磁共振(NMR)谱均符合预期的结构。以四甲基硅烷低场百万分率的形式给出特征性化学位移(δ)，使用常规缩写来指明主要峰：例如s，单峰；d，双峰，t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰。使用以下缩写表示核磁共振试验中使用的常见溶剂：CDCl3，氘代氯仿；CD3OD，氘代甲醇；CD3CN，氘代乙腈；d6-DMSO，氘代二甲基亚砜。使用配有电喷雾离子源(ESI)的Thermo Scientific或Agilent Technologies质谱仪获取质谱图。质量报告为质荷比(m/z)，例如化合物的离子(以[M]+表示)，化合物与另一个离子如氢离子(以[M+H]+表示)、钠离子(以[M+Na]+表示)一起形成的离子，化合物失去
离子形成的离子，例如去质子化的化合物(以[M-H]-表示)等等。在AgilentTechnologies Series 1100HPLC上使用Phenomenex Kinetex C18，2.6um4.6x100mm色谱柱进行分析HPLC测定，洗脱程序为2％溶剂B持续0.55分钟，以8分钟达到98％溶剂B的梯度，维持98％溶剂B 0.40分钟，随后以0.02分钟时间回到2％溶剂B，在2％溶剂B维持2.03分钟，流速为1.5mL/min(溶剂A＝MiliQ过滤的H2O+0.1％TFA，溶剂B＝MeCN+0.1％TFA)。术语“薄层层析(TLC)”是指使用硅胶60F254板进行的硅胶色谱分析。化合物的保留因子(“Rf”)是TLC板上化合物迁移的距离除以溶剂前沿迁移的距离。术语例如“早洗脱”和“晚洗脱”是指根据色谱分析方法(例如正相硅胶色谱或反相高压液相色谱(HPLC))化合物自固体固定相/液体溶剂流动相中洗脱或是回收的顺序。
方案1
方案1说明了至S1-3的一般路线，其中J、R1、R、M、L、T、U、W和Q如本发明的定义，Z2a如式IV或III中的定义或是H，或Z2a如式I或II中的定义。在方案1中，当R是C1-C3烷基(例如甲基)时，用碱例如氢氧化锂对酯中间体S1-1进行水解，或是当R是叔丁基时，用酸如三氟乙酸进行水解。然后通过一个偶联反应(例如使用肽偶联剂如HATU和碱如DIPEA)将酯水解的产物与中间体S1-2偶联，以生成通用结构S1-3的化合物。
方案2
方案2显示了中间体S2-6的一般合成，其中U、W、R1、J和Q如本发明的定义。在方案2中，适当取代和保护的脯氨酸类S2-2进行了醚化反应，例如SNAr(例如用Cs2CO3和S2-1处理，其中R2是H且LG2是卤素)、SN2(例如将S2-2预转化为对溴苯磺酸盐(R2是Bs)，随后用LG2是-OH的S2-1和碱如DABCO处理)、Mitsunobu反应(例如用DIAD和三苯基膦处理S2-2，随后用LG2是-OH的S2-1处理)或是金属催化的交叉偶联反应(LG2是卤素，R2是H)以生成中间体S2-3。将中间体S2-3去保护(例如当PG是Boc时用4NHCl的二氧六环溶液)以形成中间体S2-4。在S2-4处理之前，通过使用肽偶联剂或其他羧酸活化方法的活化S2-5的羧酸从而形成酰胺键，得到中间体S2-6。
方案3
方案3显示了中间体S3-6的一种通用合成方法，其中LF-CH2-CH2是L，且U、W、R1、J、Q、M、T和L如本文中的定义。在方案3中，通过酰胺键形成反应将中间体S3-1与中间体S3-2偶联以得到中间体S3-3。通过金属催化的交叉偶联反应(例如使用乙烯基三氟硼酸钾、Et3N、Pd(dppf)Cl2)得到S3-4，随后通过关环复分解反应(例如Zhan 1B)得到S3-5，随后通过双键的还原反应(例如H2、10％Pd/C)得到中间体S3-6。
方案4
方案4显示了中间体S4-5的一种通用合成方法，其中LF-CH2-CH2是L，且U、W、R1、J、Q、Q和L如本文中的定义。在方案4中，中间体S4-1由保护基例如Boc进行保护。S4-1与中间体S4-2进行了过渡金属催化的交叉偶联(例如Sonogashira偶联)得到了中间体S4-3。中间体S4-3的三键通过氢化反应(例如H2、催化剂10％Pd/C)还原为单键以得到中间体S4-4。对Boc-胺去保护，随后在碱性条件(例如三乙胺)下偶联以得到中间体S4-5。
方案5
方案5显示了中间体S5-9的一种通用合成方法，其中LF-CH2-CH2是L，且U、W、R1、J、Q、T和L如本文中的定义。在方案5中，中间体S5-1与中间体S5-2进行了过渡金属催化的交叉偶联(例如Sonogashira反应)得到了中间体S5-3。中间体S5-3的三键在适当的条件下例如通过氢化反应(例如在催化剂10％Pd/C上使用H2)还原为单键以得到中间体S5-4。对该醇去保护以得到S5-5，随后活化(例如在碱性条件如三乙胺下的DSC)以得到中间体S5-6。将S5-6与S5-7在碱性条件下偶联以得到S5-8。对脯氨酸的氮去保护(例如当PG＝Boc时使用HCl的二氧六环溶液)，随后进行大环内酰胺化反应(例如在碱性条件下的偶联试剂如HATU)以得到中间体S5-9。
方案6
方案6显示了中间体S6-6和S6-7的一种通用合成方法，其中U、R1、J、Q、M、T和L如本文中的定义。在方案6中，中间体S6-1的W是OPG，其中PG是保护基。S6-1首先去保护以得到中间体S6-2。Alkylation of中间体S6-2与适合的亲电试剂例如S6-4进行烷基化反应以得到中间体S6-6。S6-2与三氟甲磺酸酐进行反应得到S6-3，随后与适合的亲核偶联伙伴例如S6-5进行金属催化的交叉偶联反应(例如Sonagashira或Suzuki反应)以得到中间体S6-7。
方案7
方案7显示了中间体S7-13的一种通用合成方法，其中LF-CH2-CH2-CF2是L，且W、R1、J、Q、M和T如本文中的定义。在S7-13中L是C1-C3烷基，在方案7中，中间体S7-1首先进行锂卤交换，然后用中间体S7-2处理以生成中间体S7-3，随后将其与中间体S7-4缩合以得到喹喔啉中间体S7-5。S7-5的卤化反应(例如POCl3)提供了中间体S7-6。中间体S7-6与中间体S7-7通过SNAr反应(例如Cs2CO3)以醚形成相连，从而生成中间体S7-8。对中间体S7-8的N-PG去保护以得到S7-10。中间体S7-9和中间体S7-10的酰胺键偶联反应(例如EDC和HOBT，或是HATU，NMM，DIPEA)生成了中间体S7-11。S7-11的关环复分解反应生成了中间体S7-12。双键的还原反应(例如在钯碳上进行的加氢反应)生成了中间体S7-13。
方案8
方案8显示了中间体S8-5的一种通用合成方法，其中一个适当保护的4-氧代脯氨酸S8-1与布雷德奈克(Bredereck)试剂反应以生成烯胺酮S8-2。加入一种有机金属物质以获得烯酮S8-3，通过立体选择性的方法(例如Luche还原反应或CBS还原反应)将其还原为羟基中间体S8-4。随后进行烯烃还原以获得3-取代羟基脯氨酸中间体S8-5。
方案9
方案9显示了中间体S9-3的一种通用合成方法，其中乙烯基三氟甲磺酸酯S9-1(例如通过Kamenecka，T.M.等人，Tetrahedron Letters，2001，8571中的方法制备)通过金属催化的交叉偶联反应(例如Negishi偶联反应)生成中间体S9-2。中间体S9-2通过硼氢化反应和随后的氧化反应生成中间体S9-3。
方案10
方案10显示了取代的磺酰胺中间体S10-3的一种通用合成方法。叔丁基环丙基磺酰氨基甲酸酯S10-1经去质子化(例如n-BuLi)并与亲电试剂(例如烷基卤化物)反应而得到受保护的取代磺酰胺中间体S10-2，随后去保护(例如4N HCl的二氧六环溶液)以得到中间体S10-3。
方案11
方案11显示了中间体S11-3的一种通用合成方法，其中E如本文中的定义。在方案11中，使用一个偶联试剂例如CDI和一个碱例如DBU将磺酰胺S11-1与一个受保护的氨基酸S11-2偶联。
方案12
方案12显示了中间体S12-10和S12-17的一种通用合成方法，其中LF是C1-C3亚烷基。在方案12中，两个合成均开始于单保护中间体S12-1以生成S12-2，随后氧化(例如Swern氧化反应)获得中间体S12-3。对映选择性α氯化(例如有机催化剂S12-4和NCS)生成氯醛S12-5。S12-5与一个二-锌甲烷衍生物(例如纳斯特试剂)反应生成环丙烷中间体S12-6。对中间体S12-6进行正交保护以得到中间体S12-7。去保护S12-7的-OPG生成中间体S12-8，随后脱水(例如Grieco试剂)为中间体S12-9，最终去除O-PG2以得到中间体S12-10。或者可活化中间体S12-6(例如DSC和一个碱例如吡啶)生成中间体S12-11，将其与中间体S12-12偶联得到氨基甲酸酯中间体S12-13。中间体S12-13经去保护得到中间体S12-14，随后氧化(例如Swern氧化反应)生成醛中间体S12-15。中间体S12-15烯化(例如Wittig反应)得到中间体S12-16。酯水解(例如当R是甲基时使用LiOH，当R＝叔丁基时使用TFA)生成中间体S12-17。
方案13
方案13显示了中间体S13-5的一种通用合成方法，其中Q和T如本文中的定义且LF是C1-C3亚烷基。活化中间体S13-1(例如DSC)随后中间体S13-2和氨基酸酯中间体S13-3在碱性条件下形成氨基甲酸酯以得到中间体S13-4。酯水解(例如当R＝甲基时使用LiOH或当R＝叔丁基时使用TFA)得到中间体S13-5。
方案14
方案14显示了中间体S14-7的一种通用合成方法，其中Q如本文中的定义且LF是C1-C3亚烷基。中间体S14-1氧化(例如戴斯-马丁高碘烷)形成酮S14-2。在适合试剂(例如CsF)存在下用S14-3(例如R2是-CF3)处理S14-2以得到中间体S14-4。S14-4去保护(例如TBAF)以生成S14-5，随后将其加入至异氰酸酯S14-6中以得到中间体S14-7。
方案15
方案15显示了中间体(±)-S15-3的一种通用合成方法，即根据Kulinkovich，O.G.和Kananovich，D.G.，Eur.J.Org.Chem，2007，2007，2121中描述的标准方法由格氏试剂S15-1和酯S15-2通过Kulinkovich反应生成此中间体。
方案16
方案16显示了中间体S16-4的一种通用合成方法，其中Q、M和T如本文中的定义且LF是C1-C3亚烷基。在方案16中，烯烃S16-1经氧化裂解(例如OsO4，NaIO4)形成醛S16-2，随后还原为醇S16-3(例如NaBH4)，最后脱水(例如Greico消除反应)形成中间体S16-4。
方案17
方案17显示了生成中间体S17-3的两种通用合成策略，其中J如本文中的定义。在方案17中，一个适当保护的4-氧代脯氨酸S17-1被去质子化和烷基化(例如LiHMDS，随后是J-LG)。根据一个描述的实验计划(Blanco，M-J.等人，J.Org.Chem，1999，64，8786)在低温下用碱进行第二次去质子化，随后进行重新质子化以生成具有立体化学性质的中间体S17-2。以立体选择性的方法(例如CBS还原反应)对该酮进行还原以得到醇S17-3。当J是甲基时，方案17显示了另一种通用合成方法，其中中间体S17-4经加氢形成S17-5和S17-6的混合物。以立体选择性的方法(例如CBS还原反应)对S17-5进行酮还原，得到中间体S17-3，其中J是甲基。
方案18
方案18显示了中间体S18-4和S18-5的一种通用合成方法，其中一个适当保护的4-氧代脯氨酸S18-1通过一种立体选择性方法(例如MoOPh)进行羟基化，形成中间体S18-2，随后与一个烷基化试剂(三甲基氧鎓四氟硼酸盐)进行反应以生成中间体S18-3。酮还原(例如BH3·SMe2络合物)形成中间体S18-4和S18-5。
方案19
方案19显示了中间体S19-7的一种通用合成方法，其中Q如本文中的定义且LF是C1-C3亚烷基。在方案19中，一个环氧化物中间体S19-1被转化为(±)-反式-中间体S19-3。活化醇中间体(±)-S19-3(例如DSC)生成碳酸盐(±)-S19-4，用中间体S19-5对其进行处理以得到氨基甲酸酯中间体S19-6。随后中间体S19-6经酯水解(例如当R＝甲基时使用LiOH或当R＝叔丁基时使用TFA)生成中间体S19-7。
方案20
方案20显示了中间体S20-3的一种通用合成方法，其中LF-O是F，且U、W、R1、J、Q、M、T和L如本文中的定义。在方案20中，中间体S20-1首先进行了烯烃的氧化裂解(例如OsO4，NaIO4)，随后所得醛进行了还原(例如NaBH4)，生成中间体S20-2。经过渡金属催化的交叉偶联反应得到中间体S20-3。
方案21
方案21显示了中间体S21-7的一种通用合成方法，其中Q和T如本文中的定义。在方案21中，对单保护的二醇S21-1进行活化(例如DSC)，随后与氨基酯中间体S21-3偶联生成氨基甲酸酯中间体S21-4。然后将中间体S21-4去保护，以显示醇官能基(中间体S21-5)，随后烯丙基化得到中间体S21-6。中间体S21-6经酯水解(例如当R＝甲基时使用LiOH或当R＝叔丁基时使用TFA)生成中间体S21-7。
方案22
方案22显示了中间体S22-3的一种通用合成方法，其中U、W、R1、J和Q如本文中的定义。在方案22中，将中间体S22-1完全去保护以得到氨基酸中间体S22-2。随后将中间体S22-2的酸官能基转化为不稳定碱的羧酸酯(例如甲酯)中间体S22-3。
选择中间体的制备
中间体A1的制备
第1-3步。中间体A1的制备：使用国际专利公开号WO 2008/064066(在下文中表述为“WO’066”)(第75-76页)实施例2.12取代的中详述的方法制备中间体A1，以(1R,2S)-甲基-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷-羧酸甲酯(根据Beaulieu，P.L.等人，J.Org.Chem，2005，70，5869制备)代替(1R,2S)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷-羧酸乙酯。
中间体A2的制备
中间体A2的制备与中间体A1类似，以1-甲基环丙烷-1-磺酰胺(根据WO’066的实施例1.2，第47页制备)代替环丙磺酰胺。
中间体A3的制备
第1步。A3-1的制备：使用国际专利公开号WO 2009/005677(在下文中表述为“WO’677”)(第176页)的实施例26中详述的方法通过(1R,2S)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷羧酸甲酯(根据Beaulieu，P.L.等人，J.Org.Chem，2005，70，5869制备)制备环丙酯A3-1。
第2-4步。中间体A3的制备：中间体A3的制备与WO’066中实施例2.12(第75-76页)的(1R,2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺盐酸盐类似，以A3-1代替(1R,2S)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷-羧酸乙酯。
中间体的制备A4.
中间体A4的制备与中间体A3类似，以1-甲基环丙烷-1-磺酰胺(根据WO’066的实施例1.2，第47页制备)代替环丙烷磺酰胺。
中间体A5的制备
第1-3步。中间体A5的制备：中间体A5的制备与WO’066中实施例2.12(第75-76页)的(1R,2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷-甲酰胺盐酸盐类似，以A5-1(根据WO’677的实施例104，第265页制备)代替(1R,2S)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷-羧酸乙酯。
中间体A6的制备
中间体A6的制备与中间体A5类似，以1-甲基环丙烷-1-磺酰胺(根据WO’066的实施例1.2，第47页制备)代替环丙烷磺酰胺。
中间体A7的制备
中间体A7根据美国专利公开号2009/274652(在下文中表述为“US’652”)的实施例97.1.6，第72-73页制备。
中间体A8的制备
第1-2步。中间体A8的制备：中间体A8的制备与WO’066实施例2.12(第75-76页)中的(1R,2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷-甲酰胺盐酸盐类似，以A8-1(根据US’652的实施例97.1.4，第72-73页中详述的方法制备)代替(1R,2S)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷羧酸并以1-甲基环丙烷-1-磺酰胺(根据WO’066的实施例1.2，第47页制备)代替环丙烷磺酰胺。A8-11H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.22(br s，1H)，6.05-5.75(m，1H)，5.38(br s，1H)，2.04(m，2H)，1.68(m，2H)，1.61(m，3H)，1.52(m，9H)，1.42(m，1H)，1.28(m，1H)，0.85(m，2H)。
中间体A9的制备
第1-2步。中间体A9的制备：中间体A9的制备与WO’066中实施例2.12(第75-76页)的(1R,2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷-甲酰胺盐酸盐类似，以A9-1(根据国际专利公开号WO 2009/134987的实施例1，第1L-1O步，第75-77页制备)代替(1R,2S)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷羧酸。
中间体A10的制备
中间体A10的制备与中间体A9类似，以1-甲基环丙烷-1-磺酰胺(根据WO’066的实施例1.2，第47页制备)代替环丙烷磺酰胺。
中间体A11的制备
第1步。A11-1的制备：在室温下向NaOH(46.2g，50％w/w水溶液)溶液中加入BnEt3NCl(10.5g，46mmol)、丙二酸二叔丁酯(10g，46mmol)和1,2-二溴丙烷(14g，69.3mmol)。在室温下搅拌此混合物过夜，并用DCM(3×100mL)萃取。用水(80mL)和盐水(50mL)冲洗有机层，无水Na2SO4干燥。真空浓缩得到A11-1，无需进一步纯化即可随后使用。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.83-1.62(m，1H)；1.42(s，9H)；1.40(s，9H)；1.24-1.05(m，2H)；1.03-1.02(d，3H)。
第2步。A11-2的制备：在0℃下向t-BuOK(175g，1.56mol)的乙醚(1.2L)混合物中加入水(3.4mL)，随后加入二酯A11-1(91g，0.35mol)。混合物在室温下搅拌三天，随后用冰-水淬灭。用乙醚(2×400mL)萃取水层，用柠檬酸酸化，随后用EA(3×400mL)萃取。用水(2×100mL)、盐水(200mL)冲洗合并的乙酸乙酯提取物，无水Na2SO4干燥，真空浓缩以得到A11-2，无需进一步纯化即可随后使用。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.60(s，1H)；1.70-1.64(s，1H)；1.37(s，9H)；1.19-1.13(m，1H)；1.03-1.00(m，4H)。
第3步。A11-3的制备：在0℃下向A11-2(33.5g，0.17mol)和三乙胺(70mL)的THF(200mL)混合物中加入氯甲酸乙酯(22mL)。混合物在0℃下搅拌1小时。在0℃下向混合物中加入叠氮化钠(54g，0.83mol，4.9eq)水溶液(100mL)，搅拌此混合物40分钟。用EA(2×400mL)萃取此混合物，用水(100mL)、盐水(100mL)冲洗，无水Na2SO4干燥并真空浓缩以得到残余物，将其溶解于甲苯(100mL)中并用苯甲醇(50mL)处理。随后将混合物在70℃下加热2小时，冷却至室温，用碳酸氢钠调整至pH 8，随后用乙醚(3×200mL)萃取。用1N HCl将水层调整至pH 5，用EA(2×300mL)萃取。用水(100mL)、盐水(80mL)冲洗合并的乙酸乙酯提取物，无水Na2SO4干燥，真空浓缩以得到CBZ保护的胺A11-3(16g)，无需进一步纯化即可随后使用。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85(s，1H)；7.28-7.15(m，5H)；4.97-5.03(m，2H)；1.33(s，9H)；1.33-1.17(m，2H)；1.10(d，J＝6.8Hz，3H)；0.90-1.00(m，1H)。
第4和5步。A11-4的制备：在室温下向Cbz保护的胺A11-3(16g，52mmol)的DCM(250mL)溶液中滴加TFA(250mL，3.24mol)，此混合物在室温下搅拌过夜。真空浓缩混合物，用碳酸钠水溶液调整至pH 8～9并用乙醚(3×80mL)冲洗。随后用1N HCl将水相调整至pH5～6，用EA(2×300mL)萃取。用水(80mL)、盐水(80mL)冲洗合并的乙酸乙酯相，无水Na2SO4干燥并浓缩以得到13g微黄色油状物，无需进一步纯化即可随后使用。此物质(8.0g，32mmol)在甲醇(200mL)中溶解，用亚硫酰氯(15mL)在0℃下处理，随后在室温下搅拌过夜。真空浓缩所得混合物并通过硅胶快速色谱法(洗脱液PE/EA 10:1-5:1)进行纯化，得到甲酯A11-4(6g)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.97(s，1H)；7.37-7.26(m，5H)；4.99(s，2H)；3.61(s，3H)；1.48-1.45(m，1H)；1.17-1.08(m，2H)；1.06-1.04(d，3H)。
第6步。A11-5的制备：在H2下于甲醇中合并Cbz甲酰胺A11-4(36g，0.15mol)、Boc2O(40g，0.18mol)和Pd/C(3.6g，10％w/w)，并在32℃下搅拌过夜。过滤反应混合物以去除催化剂，再次加入Boc2O(40g，0.18mol)和Pd/C(3.6g，10％w/w)，在H2气氛下放置反应物并在室温下持续搅拌一个周末。过滤反应混合物以去除催化剂，真空浓缩并通过硅胶快速色谱法(洗脱液PE/EA 20:1-10:1)进行纯化，得到Boc保护的胺A11-5。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.48(s，1H)，3.59(s，3H)，1.43-1.41(m，1H)，1.34(s，9H)，1.21-1.18(m，1H)，1.07-1.01(m，4H)。
第7步。A11-6的制备：在40℃下向NaH2PO4(1.9g)水溶液(160mL)中加入Alcalase碱性蛋白酶(2.4U/g，16mL)。用50％氢氧化钠水溶液将混合物调整至pH 8。以30分钟时间将A11-5(2.80g)的DMSO溶液(32mL)滴加至缓冲液中。在40℃下搅拌此混合物，加入50％NaOH以维持在pH 8，持续19小时。将混合物冷却至室温，用乙醚(3x100mL)萃取并用饱和NaHCO3(2x40mL)、水(2x40mL)、盐水(40mL)冲洗有机相，无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩以得到A11-6。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.18(br s，1H)；3.71(s，3H)；1.43-1.18(m，2H)；1.34(s，9H)；1.07-1.01(m，4H)。使用chromegaChiral CC3色谱柱(0.46cm I.D.X 25cm L，3L进样，80/20己烷/IPA，1mL/min，34℃，220nM UV检测)对产物进行分析，测得对映体过量为99.4％(预期产物RT＝5.238min，预期外产物RT＝6.745min)。
第8和9步。A11-7的制备：将固体LiOH·H2O(19.1g，455mmol)在室温下溶于50mLMeOH/50mL水中。当所有LiOH溶解时，将甲酯A11-6(10.4g，45.5mmol)溶于100mL THF，加入至反应混合物并剧烈搅拌过夜。用水(150mL)稀释所得溶液，用12M HCl调整至pH～3并用EtOAc萃取。用盐水冲洗合并的有机层，无水MgSO4干燥并真空浓缩以得到白色精细粉末(9.2g)。将此物质(1.5g，7mmol)溶于THF(30mL)并用CDI(1.47g，9.1mmol)处理。将所得溶液加热至65℃，持续2小时，冷却至室温，用DBU(2.1mL，13.9mmol)和1-甲基环丙烷-1-磺酰胺(1.4g，10.5mmol)处理。所得溶液在室温下搅拌过夜。另外使用1M HCl调整至pH～1，随后真空去除大部分THF。用EtOAc萃取所得悬浮液，用盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥并真空浓缩以得到2.29g酰基磺酰胺A11-7。LCMS-ESI+(m/z)：C14H24N2NaO5S的[M+Na]+分析计算值：355.41；实测值：355.84。
第10步。中间体A11的制备。在室温下用HCl(4M二氧六环溶液，2.8mL，11.2mmol)处理酰基磺酰胺A11-7(0.25g，0.75mmol)的二氧六环溶液(1mL)。4小时后，真空浓缩反应物以得到0.20g中间体A-11，无需进一步纯化即可随后使用。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.87-1.84(m，0.5H)；1.77-1.65(m，1.5H)；1.58-1.46(m，2H)；1.54(d，J＝8Hz，3H)；1.34-1.26(m，3+1H)；1.02-0.92(m，1H)；0.83-0.77(m，1H)。
中间体A12的制备
第1步。A12-1的制备：用CDI(0.84g，5.2mmol)处理含有羧酸A9-1(1g，4mmol)的THF溶液(15mL)的容器，密封并加热至75℃，持续2小时。将澄清的褐色溶液分为两半，无需进一步纯化即可随后用于中间体A12的制备的第1步其余部分以及如下所述中间体A13的制备中。用1-氟代环丙烷-1-磺酰胺(0.42g，3mmol；根据国际专利公开号WO 2009/14730的实施例7中第1、4和9步，第107-110页制备)和DBU(0.6mL，4mmol)处理此溶液，在室温下搅拌过夜。用1M HCl将溶液酸化至pH～1，真空浓缩以去除大部分THF。用EtOAc萃取水层，用盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥并真空浓缩至干以得到0.73g A12-1，无需进一步纯化即可使用。
第2步。中间体A12的制备：将酰基磺酰胺A12-1(0.25g，0.67mmol)溶于1mL二氧六环并用HCl(4M二氧六环溶液，2.5mL，11mmol)处理。反应物在室温下搅拌2小时，真空浓缩至干以得到定量收率的中间体A12。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ6.04(td，JH-F＝55.6Hz，J＝5.2Hz，1H)；2.25-2.14(m，1H)；1.78-1.62(m，2H)；1.52-1.38(m，4H)。
中间体A13的制备
中间体A13的制备与中间体A12类似，以1-氯代环丙烷-1-磺酰胺(根据Li，J等人，Synlett，2006，5，第725-728页制备)代替第1步中的1-氯代环丙烷-1-磺酰胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ6.03(td，JH-F＝54.8Hz，J＝6Hz，1H)；2.32-2.18(m，1H)；2.06-1.92(m，2H)；1.80-1.68(m，2+1H)；1.56-1.44(m，1H)；1.44-1.37(m，1H)。
中间体B1的制备
第1和2步。中间体B1的制备：将烯胺酮B1-1(4.0g，11.8mmol，根据Camplo，M.等人，Tetrahedron 2005，61，3725制备)在丙酮(120mL)中溶解，用Ar吹扫反应容器。一次性加入Pd/C(10wt.％Pd，820mg)，用H2吹扫反应容器两次。在室温于1atm H2下搅拌反应物15小时，随后使用丙酮通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液并通过硅胶塞以30％EtOAc己烷溶液过滤，得到酮B1-2和B1-3～2:1的混合物(3.48g)，为白色固体。将此混合物(3.37g，11.3mmol)在Ar下溶于THF(100mL)。一次性加入1M(R)-(+)-2-甲基-CBS-恶唑硼烷的甲苯溶液(11.3mL，11.3mmol)，将所得溶液冷却至-78℃。锁喉以5分钟时间滴加1M BH3·SMe2的CH2Cl2溶液(11.3mL)。所得溶液搅拌20分钟，自冷浴中取出。另15分钟后，在室温下将反应物置于水浴中。另7分钟后，滴加MeOH(20mL)以淬灭反应。继续搅拌2.5小时后，浓缩反应混合物，溶于EtOAc(300mL)，用0.2M HCl(200mL)冲洗。分离两相，用EtOAc(100mL)萃取水相。过滤合并的有机相以去除固体，Na2SO4干燥，过滤，浓缩。将残余物粗品溶解于CH2Cl2，浓缩至20g硅胶上。通过硅胶色谱法(25至40％EtOAc己烷溶液)进行纯化，使得中间体B1与其他非对映体产物部分分离。合并混合组分并浓缩至9g硅胶上。通过硅胶色谱法进行纯化，得到被少量非对映体组分污染的中间体B1，为白色固体(1.96g)。1H NMR(400MHz，CDCl3，观察到旋光异构体)δ4.25-4.15(m，1H)，4.13-4.04(m，1H)，3.91-3.79(m，1H)，3.28-3.09(m，1H)，2.41-2.23(m，1H)，2.04(bs，1H)，1.51-1.39(m，18H)，1.09-1.01(m，3H)。
中间体B2的制备
第1和2步。B2-1的制备：将反式-3-羟基-L-脯氨酸(571mg，4.35mmol，Chem-ImpexInternational,Inc.)悬于MeOH并冷却至0℃。以5分钟时间加入亚硫酰氯(1.6mL，22mmol)，将此溶液加热至室温。搅拌24小时后，在减压下浓缩反应混合物以得到甲酯，无需进一步纯化即可使用。将此酯粗品悬于DCM(22mL)，用TEA(1.3mL，9.57mmol)处理。将搅拌的混合物冷却至0℃，加入三苯甲基氯(1.21g，4.35mmol)。反应混合物逐渐恢复至室温过夜，然后倒入至饱和的NaHCO3水溶液中。用DCM萃取水层三次。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法(25％至50％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品，得到醇B2-1(1.27g)。
第3步。B2-2的制备：将醇B2-1(1.23g，3.18mmol)和2gMS悬于DCM(16mL)并用NMO(560mg，4.78mmol)和TPAP(76mg，0.218mmol)处理。搅拌30分钟后，混合物通过短硅胶垫过滤并用50％EtOAc/Hex洗脱。浓缩滤液，通过硅胶色谱法(10％to 30％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品，得到酮B2-2(0.99g)。
第4步。B2-3的制备：将LiHMDS(1.0M THF溶液，5.8mL，5.8mmol)加入至THF(22mL)中，冷却搅拌的溶液至-78℃。以5分钟时间通过套管滴加酮B2-2(2.14g，5.55mmol)的THF室温溶液(6mL)。随后用THF(4mL)润洗曾含有B2-2的烧瓶，通过套管将润洗液滴加至反应混合物中。35分钟后，以5分钟时间通过注射器将N-(5-氯-2-吡啶基)双(三氟甲基磺酰亚胺)(2.40g，6.11mmol)的THF溶液(6mL)滴加至反应混合物中。另1小时后，将反应混合物加热至室温。继续30分钟后，加入20mL H2O淬灭反应并用Et2O稀释。用10％NaOH冲洗有机溶液，K2CO3干燥，过滤并减压浓缩。将残余物粗品上样至一根已用1％TEA/Hex预平衡的硅胶柱。通过硅胶色谱法(掺有1％TEA的0％至15％EtOAc/Hex)纯化此物质，得到烯醇二氟甲磺酸酯B2-3(1.89g)。
第5步。B2-4的制备：将烯醇二氟甲磺酸酯B2-3(957mg，1.85mmol)溶于THF(9mL)并用Pd(PPh3)4(107mg，0.0925mmol)和二甲基锌(2.0M in PhMe，1.9mL，3.7mmol)处理。反应混合物在室温下搅拌5小时，随后加入更多二甲基锌(2.0M PhMe溶液，1.9mL，3.7mmol)，将反应物加热至50℃，持续15分钟。冷却至室温后，用Et2O稀释混合物。用10％NaOH冲洗有机溶液两次，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。B2-4残余物粗品无需进一步纯化即可使用。
第6和7步。B2-5的制备：将化合物B2-4(理论值1.85mmol)溶于1:1MeOH/DCM(20mL)并用HCl(4.0M二氧六环溶液，2mL，8.0mmol)处理。在室温下搅拌2小时后，浓缩反应混合物，粗产品无需进一步纯化即可使用。用Boc2O(2.02g，9.25mmol)、DCM(18mL)、MeOH(1.8mL)和TEA(0.52mL，3.7mmol)处理胺盐酸盐粗产品。在室温下搅拌2小时后，用EtOAc稀释反应混合物并用10％HCl、饱和NaHCO3水溶液和盐水冲洗。用MgSO4干燥有机溶液，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法(15％至40％EtOAc/Hex)纯化残余物，得到氨基甲酸酯B2-5(331mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C12H20NO4的[M+H]+分析计算值：242.14；实测值：243.26。
第8步。中间体B2的制备：将氨基甲酸酯B2-5(345mg，1.43mmol)溶于THF(7mL并冷却至0℃。滴加BH3·SMe2络合物(2.0M THF溶液，0.79mL，1.58mmol)，反应混合物逐渐恢复至室温。15小时后，滴加H2O(加至不再冒泡)以淬灭反应，随后冷却至0℃。迅速连续加入过氧化氢(30％w/w H2O溶液，0.73mL，7.2mmol)和NaOH(2.0M H2O溶液，0.86mL，1.72mmol)，将搅拌的混合物加热至50℃，持续35分钟。随后用Et2O稀释混合物，依次用H2O、饱和NaHCO3水溶液和盐水冲洗，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。中间体B2无需进一步纯化即可用于后续反应。LCMS-ESI+(m/z)：C12H22NO5的[M+H]+分析计算值：260.15；实测值：259.99。
中间体B3的制备
第1步。B3-1的制备：将烯醇二氟甲磺酸酯B2-3(91mg，0.176mmol)溶于THF(1.7mL)并用环丙基溴化锌(0.5M THF溶液，1.7mL，0.85mmol)和Pd(PPh3)4(20mg，0.018mmol)处理。将搅拌的反应混合物加热至50℃，持续2小时，随后冷却至室温并用EtOAc稀释。用饱和NaHCO3水溶液和盐水依次冲洗有机溶液，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物粗品(0％至20％EtOAc/Hex)，得到环丙烷B3-1(43mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C9H14NO2的[M-Tr+H]+分析计算值：168.10；实测值：168.04。
第2和3步。B3-2的制备：将乙烯基环丙烷B3-1(43mg，0.11mmol)溶于1:1MeOH/DCM(10mL)并用HCl(4.0M二氧六环溶液，1mL，4.0mmol)处理。在室温下搅拌1.5小时后，浓缩反应混合物，粗产品无需进一步纯化即可使用。用Boc2O(229mg，1.05mmol)、DMAP(13mg，0.105mmol)、DCM(5mL)和TEA(0.293mL，2.10mmol)处理第2步的粗产品。在室温下搅拌5小时后，用EtOAc稀释反应混合物并用10％HCl、饱和NaHCO3水溶液两次和盐水冲洗。用MgSO4干燥有机溶液，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法(10％至30％EtOAc/Hex)纯化残余物，得到氨基甲酸酯B3-2(20mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C10H14NO4的[M-(t-Bu)+H]+分析计算值：212.09；实测值：211.91。
第4步。中间体B3的制备：将氨基甲酸酯B3-2(152mg，0.569mmol)溶于THF(5.7mL)并冷却至0℃。滴加BH3·SMe2络合物(2.0M THF溶液，0.31mL，0.63mmol)，反应混合物逐渐恢复至室温。20小时后，滴加H2O(加至不再冒泡)以淬灭反应，随后冷却至0℃。迅速连续加入过氧化氢(30％w/w H2O溶液，0.29mL，2.85mmol)和NaOH(2.0M in H2O，0.43mL，0.86mmol)，将搅拌的混合物加热至50℃，持续30分钟。随后用Et2O稀释混合物，用H2O、饱和NaHCO3水溶液和盐水依次冲洗，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。中间体B3无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C10H16NO5的[M-(t-Bu)+H]+分析计算值：230.10；实测值：230.03。
中间体B4的制备
中间体B4((2S,3S,4R)-3-乙基-4-羟基吡咯烷-1,2-二羧酸二叔丁酯)根据Camplo,M.等人，Tetrahedron 2005，61，3725制备。
中间体B5的制备
第1步。烯酮B5-2的制备：在-78℃于氩气气氛下通过注射器向B1-1的四氢呋喃溶液(7.35mL)中加入乙基溴化镁(3M乙醚溶液，1.47mL 4.41mmol)。2.5小时后，反应混合物以30分钟时间加热至室温，此时用饱和氯化铵水溶液(20mL)稀释反应混合物。用乙酸乙酯(20mL两次)萃取所得混合物，用无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的中间体B5-1(308.8mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C17H28NO5的[M+H]+分析计算值：326.2；实测值：326.2。
第2步。B5-2的制备：在室温于氩气气氛下向烯酮B5-1(308mg，0.95mmol)的甲醇溶液(4.7mL)中加入氯化铈(III)七水混合物(566mg，1.52mmol)。将所得混合物冷却至-78℃，加入固体硼氢化钠(57.7mg，1.52mmol)。1小时后，将反应混合物加热至0℃并加入饱和氯化铵水溶液(20mL)。用乙酸乙酯(20mL两次)萃取所得混合物，无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，真空浓缩，得到为无色油状物的烯丙醇B5-2(319.3mg)，无需纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C17H29NO5的[M+H]+分析计算值：328.2；实测值：328.2。
第3步。B5中间体的制备：在室温于氩气气氛下向醇B5-2(319mg，0.98mmol)的乙醇溶液(4.9mL)中加入Pd/C(10％，103.9mg，0.097mmol)。用氢气取代空气，在室温下剧烈搅拌反应混合物。16小时后，用乙酸乙酯(25mL)稀释反应混合物，通过硅藻土垫用乙酸乙酯洗涤液(10mL三次)进行过滤。真空浓缩滤液以得到中间体B5(188mg)，无需纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C17H32NO5的[M+H]+分析计算值：330.2；实测值：330.3。
中间体B6的制备
第1步。B6-1的制备：在-78℃于氩气下将异丙基溴化镁溶液(2.9M MeTHF溶液，3.2mL，9.3mmol)滴加至冷却的B1-1(1.02g，3.00mmol)60mL乙醚溶液中。将反应混合物加热至室温并搅拌3小时。用NH4Cl饱和水溶液淬灭反应混合物并用乙醚萃取三次。用NaHCO3饱和水溶液和盐水冲洗合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所得残余物以得到为淡黄色油状物的B6-1(743mg)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.60(dd，J＝10.8，2.4Hz，1H)，5.14和5.06(旋转异构体，d，J＝2.4Hz，1H)，3.96(m，2H)，2.91(m，1H)，1.46(s，9H)，1.27(s，9H)，1.04(d，J＝8.8Hz，6H)。
第2步。B6-2和B6-3的制备：在室温于氩气下向B6-1(740mg，2.18mmol)的47mL甲醇溶液中加入CeCl3·7H2O(1.32g，3.50mmol)。冷却至-78℃后，分次缓慢加入硼氢化钠(127mg，3.34mmol)。两小时后，将反应混合物加热至0℃。十五分钟后，用NH4Cl饱和水溶液淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取三次。用盐水冲洗合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩以得到B6-2(主要)和B6-3(次要)～3:1的混合物，为无色薄膜(738mg)，无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.68-5.48(m，1H)，4.90-4.31(m，2H)，4.05-3.15(m，2H)，2.90-2.61(m，1H)，1.50-1.39(brs，18H)，1.02(d，J＝9.2Hz，6H)。
第3步。中间体B6的制备：将B6-2和B6-3～3:1的混合物(341mg，1.00mmol)溶于28mL乙酸乙酯。随后加入钯碳(10wt％，109mg，0.11mmol)，在氢气气氛下将混合物氢化十九小时。随后通过硅藻土过滤混合物，用乙酸乙酯冲洗，减压浓缩滤液。所得残余物通过硅胶色谱法进行纯化(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)以得到为无色油状物的中间体B6(141mg)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ4.31-4.17(m，2H)，3.97-3.85(m，1H)，3.21-3.07(m，1H)，2.35-2.18(m，1H)，1.92-1.78(m，1H)，1.47-1.37(m，18H)，1.35-1.19(m，2H)，0.94(d，J＝8.8Hz，6H)。
中间体B7的制备
第1步。B7-2的制备：在室温于氩气气氛下向醇B7-1(500mg，1.33mmol；根据Barreling,P.等人，Tetrahedron 1995，51，4195制备)的DCM溶液(6.65mL)中加入戴斯-马丁高碘烷(564mg，1.33mmol)。2小时后，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)直接纯化反应混合物，得到为无色油状物的酮B7-2(431mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C21H30NO5的[M+H]+分析计算值：376.2；实测值：376.2。
第2步。中间体B7的制备：在-78℃于氩气气氛下向中间体B7-2(410mg，1.09mmol)和(R)-(+)-2-甲基-CBS-恶唑硼烷(Aldrich，1M甲苯溶液，1.09mL，1.09mmol)的THF溶液(5.45mL)中加入BH3·THF(1M甲苯溶液，2.18mL，2.18mmol)。1小时后，用饱和氯化铵水溶液(15mL)淬灭反应混合物，将所得混合物加热至室温。分离两相用DCM萃取水相两次(20mL)。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的中间体B7(390.9mg，4:1非对映混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C21H32NO5的[M+H]+分析计算值：378.2；实测值：378.5。
中间体B8的制备
第1步。B8-1的制备。将n-BuLi(0.44mL，1.1mmol，2.5M己烷溶液)加入至(S)-4-氧-1-(9-苯基-9H-芴-9-基)吡咯烷-2-羧酸甲酯(383mg，1mmol，按照Sardina,F.J.，Blanco,M.-J，J.Org.Chem，1996，61，4748中的描述制备)的THF/HMPA(3.8mL/0.4mL)冷(-78℃)溶液中。所得溶液在-78℃下搅拌至-50℃，持续1.5小时，随后加入溴乙腈(0.2mL，3mmol)。搅拌反应混合物，同时温度达到-10℃(4小时)。向反应混合物中加入NH4Cl饱和水溶液(1mL)和EtOAc(15mL)。分离有机层，用EtOAc(10mL)萃取水层。合并有机层，用H2O和盐水冲洗，Na2SO4干燥。浓缩有机层并通过硅胶色谱法纯化，得到为无色油状物的非对映混合物B8-1(170mg)。
第2步。B8-2的制备。将KHMDS(0.4mL，0.4mmol，1M THF溶液)加入至B8-1(140mg，0.33mmol)的THF/DMPU(1.5mL/0.75mL)冷(-78℃)溶液中。所得溶液在-78℃下搅拌1.5小时。随后加入HOAc(0.1mL)。向反应混合物中加入NH4Cl饱和水溶液(1mL)和EtOAc(15mL)。分离有机层，用EtOAc(10mL)萃取水层。合并有机层，用H2O和盐水冲洗，Na2SO4干燥。浓缩有机层并通过硅胶色谱法纯化，得到为无色油状物的酮B8-2(120mg)。
第3步。中间体B8的制备。在烘箱干燥、氮气吹扫的烧瓶中加入BH3·THF(0.28mL，0.28mmol)，随后加入(R)-(+)-2-甲基-CBS-恶唑硼烷(0.012mL，0.03mmol，1.0M甲苯溶液)。滴加B8-2(120mg，0.28mmol)的THF溶液(0.5mL)。反应混合物在室温下搅拌60分钟，随后通过加入1.0M HCl水溶液(0.2mL)进行淬灭。加入EtOAc(20mL)且用NaHCO3饱和水溶液和盐水冲洗有机相，Na2SO4干燥。浓缩有机层并通过硅胶色谱法纯化，得到为无色油状物的中间体B8(100mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C27H24N2O3的[M]+分析计算值：424.49；实测值：424.77。
中间体C1的制备
根据国际专利公开号WO 2010/11566(在下文中表述为“WO’566”)中间体B1的第3步，第14页制备3-甲基-N-(氧代亚甲基)-L-缬氨酸甲酯(中间体C1)。
中间体C2的制备
中间体C2(3-甲基-N-(氧代亚甲基)-L-缬氨酸叔丁酯)的制备方法中间体C1类似，以3-甲基-L-缬氨酸叔丁酯(Bachem AG)代替WO’566，第14页中间体B1的第3步的3-甲基-L-缬氨酸甲酯。
中间体D1的制备
第1和2步。反式-环丙醇混合物D1-2和D1-3的制备：在含有Mg(32.2g，1.34mol)的三颈圆底烧瓶中加入THF(1000mL)。将7-溴-1-庚烯(216g，1.22mol)的THF溶液(600mL)加入至加料漏斗中。将碘晶体和20mL7-溴-1-庚烯溶液加入至反应物中。此溶液加热回流，滴加其余的7-溴-1-庚烯溶液。加完后，混合物继续回流2小时，随后冷却至室温以得到格氏试剂D1-1的溶液，随后在室温下滴加至甲酸乙酯(30g，0.41mol)和Ti(Oi-Pr)4(115.2g，0.41mol)的THF溶液(1200mL)中。搅拌过夜后，将混合物倒入至1600mL 10％H2SO4水溶液中，用MTBE(1500mL三次)萃取。用盐水冲洗合并的有机层，MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到31.0g为黄色油状物的反式-环丙醇D1-2和D1-3的混合物。1HNMR：(400MHz，CDCl3)：δ5.77-5.70(m，1H)，4.96-4.86(m，2H)，3.15-3.12(m，1H)，2.03-1.98(m，2H)，1.75(br s，1H)，1.45-1.37(m，2H)，1.20-1.15(m，1H)，1.06-1.01(m，1H)，0.89-0.82(m，1H)，0.63-0.59(m，1H)，0.24(q，J＝6.0Hz，1H)。
第3步。乙酸环丙酯D1-4和D1-5混合物的制备：在1000mL圆底中加入反式-环丙醇D1-2和D1-3化合物(60.3g，0.48mol)、700mL DCM和TEA(62.9g，0.62mol)，随后在乙腈/冰浴中冷却此溶液至内部温度<5℃。以30分钟时间向此溶液中滴加乙酰氯(41.3g，0.53mol)，同时维持内部温度<10℃。将所得悬浮液加热至室温并搅拌2小时。用350mL水稀释反应混合物。将此两相混合物转移至分液漏斗中并去除水层。用480mL 2N HCl水溶液和500mLNaHCO3饱和水溶液冲洗有机层，随后MgSO4干燥。真空去除溶剂。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到为黄色油状物的D1-4和D1-5混合物(56.3g)。TLC信息(PE/EtOAc＝5/1)Rf(起始原料)＝0.4；Rf(产物)＝0.8.
第4步。D1-3的制备：在1000mL圆底烧瓶中加入D1-4和D1-5混合物的溶液(39g，0.23mol)，其中含680mL用0.1M pH 7磷酸盐水缓冲液饱和的MTBE。在整个水解反应过程中将此烧瓶置于冰浴中以维持大约10℃的内部温度，加入3.0g Novozyme 435以开始水解反应。反应在10℃下持续大约6小时，直至转化达到大约40％。过滤反应混合物，用200mL MTBE冲洗固体固定化酶三次。真空浓缩所得MTBE溶液。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到为黄色油状物的D1-3(11.3g)。1H NMR:(400MHz，CDCl3)δ5.80-5.75(m，1H)，5.02-4.91(m，2H)，3.20-3.17(m，1H)，2.09-2.03(m，3H)，1.50-1.43(m，2H)，1.26-1.22(m，1H)，1.17-1.08(m，1H)，1.07-0.89(m，1H)，0.70-0.65(m，1H)，0.32-0.27(m，1H)。
第5步。D1-6的制备：在0℃下将环丙醇D1-3(17.7g，0.140mol)溶于300mL MeCN。向此溶液中加入DSC(72.0g，0.280mol)和TEA(42.42g，0.420mol)。将反应混合物加热至40℃并搅拌过夜，真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到为黄色固体的D1-6(25.8g)。1HNMR:(400MHz，CDCl3)δ5.84-5.77(m，1H)，5.05-4.96(m，2H)，4.09-4.03(d，J＝24Hz，1H)，2.86(s，4H)，2.12-2.06(m，2H)，1.58-1.51(m，2H)，1.33-1.27(m，3H)，1.09(m，1H)，0.68-0.62(m，1H)。
第6步。D1-7的制备：向D1-6(10g，0.0374mol)的THF溶液(374mL)中加入L-叔亮氨酸甲酯盐酸盐(10.2g，0.056mol)和TEA(11.3g，0.112mol)。此溶液在40℃下搅拌过夜。将混合物真空浓缩。残余物用EtOAc稀释并用水和盐水冲洗，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到为黄色油状物的D1-7(10.2g)。LCMS-ESI+(m/z)：C16H28NO4的[M+H]+分析计算值：298.2；实测值：298.0。
第7步。中间体D1的制备：用LiOH·H2O(11.3g，0.269mol)处理D1-7(20g，0.067mol)的MeOH/H2O(447mL/223mL)2:1混合物溶液，随后在60℃下加热4小时。冷却反应混合物，浓缩至一半体积并用MTBE萃取。用1N HCl水溶液(400mL)酸化此水溶液并用EtOAc(400mL×3)萃取，用盐水冲洗合并的有机层，Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到中间体D1(18g)。1H NMR:(400MHz，CDCl3)δ10.5-9.4(br，1H)，5.82-5.71(m，1H)，5.20-5.17(m，1H)，4.99-4.91(m，2H)，4.19-4.16(m，1H)，3.86-3.68(m，1H)，2.09-2.03(m，2H)，1.53-1.32(m，2H)，1.30-1.20(m，2H)，1.18-1.13(m，1H)，1.11-0.99(s，9H)，0.80-0.75(m，1H)，0.49-0.47(m，1H)。
中间体D2的制备
第1步。中间体D2的制备：向D1-6(600mg，2.25mmol)和(S)-2-氨基-2-环戊基乙酸盐酸盐(386mg，2.7mmol，Betapharma Inc.)的THF混悬液(20mL)中加入蒸馏水(6mL)和三乙胺(0.94mL，6.74mmol)。此均匀溶液搅拌～18小时。蒸干THF并用水(20mL)稀释水性残余物。用1N NaOH(pH>10)碱化此混合物，随后用乙酸乙酯冲洗两次(20mL)。用1N HCl(pH<2)酸化水相并用乙酸乙酯萃取所得溶液两次(20mL)。无水MgSO4干燥合并的有机相，浓缩得到为棕色油状物的中间体D2(500mg)。它无需纯化即可用于后续步骤。LCMS-ESI+(m/z)：C16H26NO4的[M+H]+分析计算值：296.2；实测值：296.3。
中间体D3的制备
第1步。中间体D3的制备：向D1-6(800mg，3mmol)和(S)-2-氨基-2-环己基乙酸(519mg，3.3mmol；Alfa Aesar)的水混悬液(15mL)中加入K3PO4(1.27g，6mmol)。此均匀溶液在室温下搅拌5小时。向反应混合物中加入水(15mL)和EtOAc(15mL)。分离有机层，用EtOAc(10mL)萃取水层。合并有机层，用1N HCl、H2O和盐水冲洗，Na2SO4干燥。浓缩有机溶液以得到为油状物的中间体D3(850mg)，无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C17H28NO4的[M+H]+分析计算值：310.4；实测值：310.3。
中间体D4的制备
第1步。D4-2的制备：将双环醇D4-1(2.9g，29.5mmol，根据美国专利号8178491B2(在下文中表述为“US’491”)节A，中间体1，第192页制备)溶于DCM(60mL)中并加入TEA(8.2mL，59mmol)。将搅拌的溶液冷却至0℃并加入MsCl(3.4mL，44mmol)。将反应混合物逐渐加热至室温。18小时后，将反应混合物倒入H2O中。用DCM萃取水层2次，用MgSO4干燥合并的有机相，过滤并减压浓缩。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化(20％至50％EtOAc/Hex)以得到D4-2(3.73g)。
第2步。D4-3的制备：将NaH(1.69g，42.3mmol)悬于100mL THF中并将混合物冷却至0℃。以4分钟时间滴加丙二酸二乙酯(6.4mL，47mmol)，将搅拌的混合物加热至室温。继续一小时后，加入甲磺酸酯D4-2(3.73g，21.2mmol)的20mL THF溶液，反应混合物加热回流15小时。然后，将反应混合物冷却至室温并倒入NaHCO3饱和水溶液中。用EtOAc萃取水层2次。用MgSO4干燥有机相，过滤并减压浓缩。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化(0％至15％EtOAc/Hex)以得到D4-3(4.64g)。
第3步。D4-4的制备：将丙二酸酯D4-3(4.64g，19.3mmol)溶于20mL DMSO中，随后加入(1.24g，21.2mmol)和水(0.694mL，38.6mmol)。将搅拌的混合物加热至170℃，持续48小时，随后冷却至室温并用Et2O稀释。用H2O、盐水冲洗有机溶液两次，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化(5％至15％EtOAc/Hex)以得到D4-4(2.83g)。
第4和5步。D4-5的制备：在室温下过夜搅拌乙酯D4-4(2.83g，16.8mmol)和LiOH(1MH2O溶液，34mL，34mmol)的EtOH溶液(68mL)，随后减压浓缩以去除EtOH。剩余物质用H2O稀释并用DCM冲洗两次。用10％HCl将水相酸化至pH 1-2，随后用DCM萃取三次。用MgSO4干燥此DCM溶液，过滤并减压浓缩。将所得羧酸粗产品溶于DCM(100mL)并用DMF(5滴)处理。小心加入草酰氯(2.2mL，25mmol)。搅拌过夜后，减压浓缩反应混合物以得到D4-5，它无需进一步纯化即可使用。
第6步。D4-6的制备：将(S)-4-苄基-2-恶唑烷酮(3.57g，20.2mmol)溶于THF(80mL)并冷却至-78℃。以7分钟时间滴加n-BuLi(1.6M己烷溶液，12.6mL，20.2mmol)，反应混合物在-78℃下搅拌30分钟。随后通过套管以6分钟时间将含有锂化恶唑烷酮的此溶液加入至酰基氯D4-5(16.8mmol)的THF(80mL)-78℃溶液中。在-78℃下继续搅拌30分钟后，加入1MNaHSO4水溶液以淬灭反应混合物。用EtOAc萃取水相，MgSO4干燥有机层，过滤并减压浓缩。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化(10％至40％EtOAc/Hex)以得到D4-6(4.32g)。LCMS-ESI+(m/z)：C18H22NO3的[M+H]+分析计算值：300.16；实测值：300.14。
第7步。D4-7的制备：将KHMDS(0.5M PhMe溶液，3.4mL，1.7mmol)的THF溶液(5mL)冷却至-78℃，通过套管滴加单独的恶唑烷酮D4-6(465mg，1.55mmol)的THF(5mL)-78℃溶液。30分钟后，通过套管加入三异丙基苯磺酰叠氮化物(576mg，1.86mmol)的THF(5mL)-78℃溶液。三分钟后，加入AcOH(0.41mL，7.13mmol)以淬灭反应，将反应混合物加热至30℃，持续2小时。冷却后，将混合物倒入盐水中。用DCM萃取水层三次。干燥合并的有机相，过滤并减压浓缩。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化(4％至25％EtOAc/Hex)以得到叠氮化物D4-7(367mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C18H21N4O3的[M+H]+分析计算值：341.16；实测值：341.10。
第8步。D4-8的制备：将叠氮化物D4-7(367mg，1.08mmol)和二碳酸二叔丁酯(471mg，2.16mmol)溶解于EtOAc(20mL)。加入10％Pd/C(197mg)并用H2代替空气。在1atm H2下搅拌混悬液20小时，通过硅藻土过滤，减压浓缩。通过硅胶色谱法(15％至30％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品以得到D4-8(376mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C19H23N2O5的[M-(t-Bu)+H]+分析计算值：359.16；实测值：359.43。
第9和10步。D4-9的制备：将氨基甲酸酯D4-8(376mg，0.907mmol)溶于THF(9mL)并冷却至0℃。加入H2O2(30％H2O溶液，0.463mL，4.54mmol)和LiOH(1MH2O溶液，2.7mL，2.7mmol)。反应物在0℃下再搅拌2小时，随后减压浓缩。将所得浓缩液倒入H2O中并用Et2O冲洗水溶液两次，随后酸化至pH 1-2，用DCM萃取三次。MgSO4干燥合并的提取物，过滤并减压浓缩。将所得粗产品溶于DCM(8mL)和MeOH(1mL)，用三甲基硅烷化重氮甲烷(2M己烷溶液，0.9mL，1.8mmol)处理。在室温下搅拌40分钟后，加入10％AcOH/MeOH淬灭反应，减压浓缩。通过硅胶色谱法(4％至25％EtOAc/Hex)纯化残余物以得到D4-9(167mg)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.98(d，J＝7.8Hz，1H)，4.22(t，J＝7.0Hz，1H)，3.70(s，3H)，1.89(m，1H)，1.77-1.46(m，4H)，1.42(s，9H)，1.22(m，2H)，0.28(dd，J＝7.2Hz，13.3Hz，1H)，0.13(d，J＝3.7Hz，1H)。
第11步。D4-10的制备：将氨基甲酸酯D4-9(223mg，0.828mmol)溶于DCM(4mL)并用HCl(4.0M二氧六环溶液，1mL，4.0mmol)处理。在室温下搅拌17小时后，减压浓缩反应混合物以得到胺盐酸盐D4-10，它无需纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C9H16NO2的[M+H]+分析计算值：170.12；实测值：170.04。
第12和13步。中间体D4的制备：用新鲜制备的D1-6(1.35mmol)DMF溶液(1.4mL)处理胺盐酸盐D4-10(0.828mmol，理论值)的H2O溶液(1.4mL)。加入K3PO4(703mg，3.31mmol)，在室温下搅拌反应混合物2小时。用EtOAc稀释后，用10％HCl水溶液和盐水冲洗有机层，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法(0％至25％EtOAc/Hex)纯化残余物以得到预计的氨基甲酸酯(239mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C18H28NO4的[M+H]+分析计算值：322.20；实测值：323.00。将此物质(239mg，0.744mmol)溶于MeOH并用LiOH(1.0M in H2O，5.0mL，5.0mmol)处理。在室温下搅拌1小时后，减压去除MeOH。用10％HCl水溶液将此水溶液酸化至pH 1-2，用DCM萃取三次。MgSO4干燥合并的有机相，过滤并减压浓缩以得到中间体D4(229mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C17H26NO4的[M+H]+分析计算值：308.2；实测值：307.9。
中间体D5的制备
中间体D5根据Li,H.等人，Synlett 2011，10，1454中描述的方法进行制备。
中间体D6混合物的制备
第1步。氨基甲酸酯D6-1非对映混合物的制备：将中间体C2(1.34g，6.31mmol)、(±)-反式-1-甲基-2-(4-戊烯基)环丙醇(590mg，4.208mmol；根据中间体C3，WO2011014487，第36页的方法制备)、DMAP(514mg，4.21mmol)和DIPEA(2.93mL，16.83mmol)在甲苯(14mL)中合并。反应物在90℃下加热18小时。用Et2O(25mL)和1N HCl水溶液(75mL)稀释反应物，充分搅拌，去除有机相。用乙醚(50mL)萃取水层三次，合并有机相，用盐水冲洗，MgSO4干燥，过滤，浓缩得到油状物粗品，通过硅胶色谱法对其进行纯化，得到为透明油状物的D6-11:1非对映混合物(820mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C20H35NNaO4的[M+Na]+分析计算值：376.3；实测值：376.2。
第2步：中间体D6非对映混合物的制备。在室温下将D6-1非对映混合物溶于DCM(2mL)并用TFA(2mL)处理。1.5小时后，真空浓缩反应物，反复与氯仿共蒸发以去除残留TFA，通过硅胶色谱法纯化以得到为棕色油状物的中间体D6的1:1非对映混合物(536mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C16H27NNaO4的[M+Na]+分析计算值：320.2；实测值：320.1。
中间体D7的制备
第1步。D7-1的制备：用DIPEA(0.91mL，5.252mmol)和DMAP(160.4mg，1.313mmol)的甲苯溶液(4.4mL)处理(1R,2R)-1-甲基-2-(4-戊烯基)环戊醇(220.9mg，1.313mmol；根据国际专利公开号WO 2008/057209(在下文中表述为“WO’209”)，中间体B26，第45页的方法制备)和中间体C1(337.1mg，1.969mmol)。混合物在85℃下加热21小时。用乙醚(80mL)稀释此溶液。用1N HCl水溶液(30mL)和盐水(30mL)依次冲洗此溶液。Na2SO4干燥所获有机层。通过过滤去除干燥剂后，减压去除溶剂。通过硅胶色谱法(13％乙酸乙酯己烷溶液)纯化残余物，得到为无色油状物的D7-1(249.5mg，0.735mmol)。1HNMR(300MHz，CDCl3，旋转异构体表示为总H值x存在的分数)δ5.76-5.92(m，1H)，5.12(d，J＝9.6Hz，1H)，5.02(d，J＝16.8Hz，1H)，4.96(d，J＝9.6Hz，1H)，4.13(d，J＝9.6Hz，1H)，3.81(s，3x4/10H)，3.73(s，3x6/10H)，1.80-2.15(m，7H)，1.04-1.74(m，6H)，1.36(s，3H)，1.04(s，9x4/10H)，0.97(s，9x6/10H)。
第2步。中间体D7的制备：在室温下于中MeOH/THF(4mL/4mL)用2M LiOH水溶液(2mL，4.0mmol)处理酯D7-1(249.5mg，0.735mmol)，持续25小时。用1N HCl水溶液(5mL)和盐水(25mL)处理反应混合物以轻微酸化。用CH2Cl2(30mL)萃取混合物三次。用盐水(30mL)冲洗有机层。Na2SO4干燥所获有机层。通过过滤去除干燥剂后，减压去除溶剂以得到为无色油状物的中间体D7(191.2mg，0.587mmol)，其无需进一步纯化即可随后使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.00(br s，1H)，5.72-5.90(m，1H)，5.12(d，J＝9.6Hz，1H)，5.00(d，J＝16.8Hz，1H)，4.94(d，J＝9.6Hz，1H)，4.13(d，J＝9.6Hz，1H)，1.80-2.16(m，7H)，1.04-1.74(m，6H)，1.35(s，3H)，1.02(s，9H)。
中间体D8混合物的制备
第1步。D8-2的制备：在室温于氩气气氛下向中间体D8-1(500mg，3.24mmol，根据WO’209，第36页制备)的DCM溶液(6.65mL)中加入戴斯-马丁高碘烷(1.37g，3.24mmol)。6小时后，通过硅藻土垫过滤反应混合物并通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)直接纯化，得到为无色油状物的酮D8-2(252mg)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.81(ddt，J＝16.9，10.2，6.6Hz，1H)，5.05-4.92(m，2H)，2.38-1.93(m，7H)，1.87-1.68(m，2H)，1.60-1.37(m，3H)，1.35-1.20(m，1H)。
第2步。D8-3非对映混合物的制备：在室温于氩气气氛下向酮D8-2(385mg，2.53mmol)和TMSCF3(749μL，5.07mmol)的THF溶液(2.3mL)中加入CsF(7.0mg，46μmol)。2.5小时后，用水(10mL)稀释反应混合物，用DCM(10mL)萃取所得混合物两次。无水硫酸钠干燥合并的有机层，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的硅醚D8-3(714mg，1:1非对映混合物)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.67(ddt，J＝13.3，10.1，6.7Hz，1H)，4.91-4.76(m，2H)，2.02-1.00(m，13H)，0.00(s，9H)。
第3步。D8-4非对映混合物的制备：在室温于氩气气氛下向D8-3(700mg，2.38mmol)的THF溶液(11.9mL)中加入TBAF(1M THF溶液，2.38mL，2.38mmol)。30分钟后，用二氯甲烷(100mL)稀释反应混合物。用碳酸氢钠饱和水溶液(75mL)冲洗所得混合物，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的醇D8-4(418mg，1:1非对映混合物)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.81(dt，J＝16.8，6.6Hz，1H)，5.09-4.88(m，2H)，2.20-1.91(m，4H)，1.86-1.08(m，10H)。
第4步。D8-5非对映混合物的制备：在氩气气氛下将D8-4(380mg，1.72mmol)、中间体C1(295.7mg，1.72mmol)、DIPEA(1.20mL，6.88mmol)和DMAP(210mg，1.72mmol)的甲苯溶液(8.6mL)加热至85℃。20小时后，将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(100mL)稀释。用1NHCl溶液(50mL)、碳酸氢钠饱和水溶液(50mL)和盐水(50mL)冲洗所得混合物。无水硫酸钠干燥有机层，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的氨基甲酸酯D8-5(550mg，1:1非对映混合物)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.81(ddt，J＝16.7，9.8，6.6Hz，1H)，5.37(d，J＝9.4Hz，1H)，5.06-4.89(m，2H)，4.16-4.07(m，1H)，3.75(s，3H)，2.84-2.29(m，2H)，2.27-1.89(m，3H)，1.85-1.12(m，8H)，0.98(s，9H)。
第5步。中间体D8非对映混合物的制备：在室温于氩气气氛下向氨基甲酸酯D8-5(500mg，1.27mmol)的DCE溶液(6.4mL)中加入三甲基氢氧化锡(2.30g，12.7mmol)，将所得混合物加热至65℃。21小时后，反应混合物冷却至室温并用1N HCl溶液(50mL)稀释。用乙酸乙酯(2×50mL)萃取所得混合物。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，真空浓缩，得到为无色油状物的中间体D8(575mg，1:1非对映混合物)，其无需进一步纯化即可随后使用。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.90-5.71(m，1H)，5.32(d，J＝9.3Hz，1H)，5.07-4.89(m，2H)，4.16(d，J＝9.8Hz，1H)，2.83-2.30(m，2H)，2.27-1.87(m，3H)，1.83-1.12(m，8H)，1.04(s，9H)。
中间体D9和D10混合物的制备
第1和2步：外消旋体D9-1的制备：将金属镁(1.32g，54.3mmol)加入至装有回流冷凝管的2-颈烧瓶中，用Ar吹扫该容器。加入THF(42mL)，随后加入碘(大约5mg)。将搅拌的混悬液加热至45℃，一次性加入5-溴-1-戊烯(1.2g，8.1mmol)。搅拌几分钟后，以足以维持温和回流的速度继续加入5-溴-1-戊烯(5.5g，37mmol)。所得混合物在50℃下搅拌15分钟，随后冷却至室温并在下一步中立即使用。CuI(630mg，3.3mmol)的THF(24mL)混悬液于氩气下冷却至-5℃。以5分钟时间加入第1步中制备的小份4-戊烯基溴化镁(大约0.95M，20mL，19mmol)，将所得混合物继续搅拌15分钟。反应混合物随后冷却至-20℃，以1分钟时间加入(±)-外-2,3-环氧降莰烷(1.5g，14mmol)的THF溶液(5mL)。使用另两部分THF(各2.5mL)以保证完全转移，所得混合物搅拌20分钟。随后自冷浴中取出反应物并加热至室温。继续搅拌1.75小时后，用NH4Cl饱和水溶液(5mL)淬灭反应，使用EtOAc(100mL)和H2O(100mL)通过硅藻土进行过滤。分离两相，Na2SO4干燥有机相，过滤，浓缩以得到为无色残余物的(±)-D9-1(813mg)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.90-5.67(m，1H)，5.04-4.86(m，2H)，3.12(s，1H)，2.20-1.92(m，5H)，1.69-1.57(m，1H)，1.55-1.12(m，9H)，1.03-0.84(m，1H)。
第3步。中间体D9和D10非对映混合物的制备：将醇混合物(±)-D9-1(813mg，4.51mmol)溶于DMF(4.5mL)。加入吡啶(370μL，4.5mmol)，随后加入DSC(1.5g，5.8mmol)。将反应混合物加热至45℃并搅拌4小时。反应混合物随后冷却至0℃，以2分钟时间滴加水(4.5mL)。搅拌反应混合物5分钟并自冷浴中取出。继续5分钟后，反应混合物冷却至0℃，加入L-叔亮氨酸(835mg，6.37mmol)和K3PO4(2.70g，12.7mmol)。搅拌混合物10分钟并自冷浴中取出。继续搅拌24小时后，用EtOAc(30mL)稀释混合物，用1M HCl水溶液(15mL)酸化，并用0.2M HCl水溶液(15mL)稀释。分离两相，用0.2M HCl水溶液(2x20mL)冲洗有机相，Na2SO4干燥，过滤，浓缩以得到中间体D9和D10非对映混合物(1.64g)。LCMS-ESI-(m/z)：C19H30NO4的[M-H]-分析计算值：336.2；实测值：336.0。
中间体D11的制备
第1步。D11-1的制备：向D1(1.0g，3.53mmol)、高碘酸钠(2.26g，10.59mmol)的24mLTHF和12mL水混合物中加入Os EnCatTM40(0.25mmol/g负载，282mg，0.071mmol，Sigma-Aldrich)。搅拌混合物3天。加入水(50mL)并过滤混合物。用水(总体积400mL)和乙酸乙酯(总体积600mL)冲洗滤饼。分离滤液层。硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩以得到D11-1(1.56g)，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C14H24NO5的[M+H]+分析计算值：286.2实测值：286.1。
第2步。D11-2的制备：在0℃下向D11-1(3.05g，10.7mmol)的MeOH溶液(50mL)中分次加入硼氢化钠(809mg，21.4mmol)。反应混合物在室温下搅拌6小时。用50mL乙酸乙酯和50mL盐水稀释混合物，分离两层。用两份25mL乙酸乙酯萃取有机相。硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并浓缩。粗产品混合物通过硅胶色谱法(EtOAc的己烷溶液：10％至100％)进行纯化以得到D11-2(380mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C14H26NO5的[M+H]+分析计算值：288.2；实测值：288.1。
第3步。中间体D11的制备：在0℃下向D11-2(283mg，0.98mmol)的THF溶液(2.8mL)中加入1-硝基-2-硒氰酸苯(336mg，1.47mmol)和三丁基膦(363μL，1.47mmol)。去除冷却浴，在室温下搅拌混合物25分钟。再次将反应物冷却至0℃，用30％过氧化氢溶液(0.665mL，5.85mmol)处理并在室温下搅拌1小时，随后在60℃下加热1小时。用EtOAc稀释反应物，将预期产物萃取至碳酸氢钠水溶液中。用2N HCl酸化此碳酸氢盐提取物并用乙酸乙酯萃取。硫酸钠干燥有机相，浓缩以得到中间体D11(136mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C14H24NO4的[M+H]+分析计算值：270.2；实测值：270.1。
中间体混合物D12和D13的制备
第1步：D12-1的制备：在室温下向K2Cr2O7(121g，0.41mol)的H2O溶液(1.5L)中滴加H2SO4(143g，1.46mol)，混合物搅拌1小时。随后将混合物冷却至0℃，滴加D4-1(80g，0.814mol；根据US’491的节A，中间体1，第192页制备)的MTBE溶液(1.5L)。反应混合物在室温下搅拌2小时。用MTBE(3x500mL)萃取水相，MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。通过蒸馏(20mmHg，bp：60-62℃)纯化粗产品，得到为浅黄色液体的D12-1(60g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.57-2.63(m，2H)，2.14-2.19(d，J＝20Hz，2H)，1.52-1.57(m，2H)，0.89-0.94(m，1H)，-0.05--0.02(m，1H)。
第2步：(±)-D12-2的制备：在Ar下，将THF(4.4mL)和HMPA(1.8mL)的混合物冷却至-78℃。加入1M LiHMDS的THF溶液(2.2mL，2.2mmol)。以1分钟时间加入酮D12-1(202mg，2.10mmol)的THF溶液(2mL)，继续用THF(2x1mL)冲洗以确保完全转移。25分钟后，以30秒时间通过注射器加入5-碘-1-戊烯(根据Jin,J等人，J.Org.Chem，2007，72，5098-5103制备)(880mg，4.5mmol)。10分钟后，将反应物置于-45℃的冷浴中，以1.5小时加热至-30℃。用NH4Cl饱和水溶液(15mL)淬灭反应，用EtOAc(30mL)和H2O(15mL)稀释。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩得到残余物粗品，通过硅胶色谱法(0％至15％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到为无色油状物的(+/-)-D12-2(162mg)。1HNMR(400MHz，CDCl3)5.82-5.67(m，1H)，5.03-4.87(m，2H)，2.61-2.51(m，1H)，2.11(d，J＝19.1Hz，1H)，2.08-1.99(m，3H)，1.61-1.40(m，5H)，1.36-1.28(m，1H)，0.92-0.81(m，1H)，-0.03--0.11(m，1H)。
第3步：(±)-D12-3和(±)-D12-4的制备：将(±)-D12-2(142mg，0.865mmol)的THF溶液(4mL)冷却至-78℃。以30秒时间滴加1M LiBHEt3的THF溶液(1.3mL，1.3mmol)。反应物搅拌15分钟并自冷浴中取出。加热至室温后(15分钟)，用NH4Cl饱和水溶液(1mL)淬灭反应。用Et2O(20mL)和H2O(20mL)稀释所得混合物。分离两相，用Et2O(20mL)萃取水相。MgSO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩得到残余物粗品。通过硅胶色谱法(0％至10％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到133mg(±)-D12-3和(±)-D12-4的非对映体混合物。通过硅胶色谱法(0％至15％EtOAc己烷溶液)进一步纯化两个实验合并的物质(253mg)，得到为无色油状物的(±)-D12-3(150mg)和(±)-D12-4(58mg)。(±)-D12-3的1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.91-5.69(m，1H)，5.07-4.88(m，2H)，3.97(d，J＝6.7Hz，1H)，2.19-1.99(m，3H)，1.84-1.73(m，1H)，1.62(d，J＝14.1Hz，1H)，1.54-1.40(m，2H)，1.32-1.17(m，3H)，1.16-1.06(m，1H)，0.60-0.43(m，2H)。(±)-D12-4的1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.95-5.73(m，1H)，5.09-4.88(m，2H)，4.05-3.86(m，1H)，2.17-1.84(m，4H)，1.72-1.34(m，5H)，1.28-1.08(m，3H)，0.49-0.36(m，1H)，0.21-0.11(m，1H)。
第4步：中间体D12和D13非对映混合物的制备：将(±)-D12-3混合物(150mg，0.90mmol)溶于DMF(1.0mL)。加入吡啶(75μL，0.92mmol)和DSC(302mg，1.18mmol)，反应物在45℃下搅拌21.5小时。随后将反应物置于冰水浴中，以1分钟时间通过注射器滴加H2O(1.0mL)。自冷浴中取出混合物，搅拌5分钟。在冰水浴中再次冷却混合物，加入L-叔亮氨酸(154mg，1.17mmol)，随后加入K3PO4(502mg，2.36mmol)。自冷浴中取出反应混合物，在室温下搅拌24小时。随后用EtOAc(40mL)和1M HCl水溶液(20mL)稀释混合物。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。用0.2M HCl水溶液(2x20mL)冲洗合并的有机相，MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到为无色油状物的中间体D12和D13的非对映混合物(300mg)。LCMS-ESI-(m/z)：C18H28NO4的[M-H]-分析计算值：322.2；实测值：322.0)。
中间体D12的制备
第1步：D12-5的制备：在0℃于氩气气氛下通过注射器向(1S,4R)-顺式-4-乙酰氧基-2-环戊-1-醇(Aldrich，10g，70.4mmol)、三乙胺(48.8mL，350mmol)和DMAP(4.29g，35.2mmol)的二氯甲烷溶液(352mL)中滴加特戊酰氯(10.8mL，87.75mmol)。2小时后，用碳酸氢钠饱和水溶液(500mL)稀释反应混合物，用二氯甲烷(2×500mL)萃取。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，真空浓缩以得到为无色油状物的D12-5(15.0g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.08(br s，2H)，5.54(td，J＝8.0，4.1Hz，2H)，2.88(dt，J＝14.9，7.5Hz，1H)，2.07(s，3H)，1.69(dt，J＝14.7，4.1Hz，1H)，1.20(s，9H)。
第2步：D12-6的制备：在室温于氩气气氛下向D12-5(15.0g，70.4mmol)的甲醇溶液(352mL)中加入碳酸钾(9.73g，70.4mmol)。5小时后，过滤反应混合物并真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(500mL)，用水(500mL)和盐水(500mL)冲洗所得混合物，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物粗品以得到为无色油状物的D12-6(12.0g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.11(br d，J＝5.5Hz，1H)，5.97(br d，J＝5.6Hz，1H)，5.48(br s，1H)，4.73(br s，1H)，2.82(dt，J＝14.6，7.3Hz，1H)，1.67(s，1H)，1.61(dt，J＝14.5，4.0Hz，1H)，1.20(s，J＝3.8Hz，9H)。
第3步：D12-7的制备：在0℃于氩气气氛下通过套管以30秒时间向氰化铜(I)(5.10g，57.0mmol)的乙醚溶液(95mL)中滴加4-戊烯基溴化镁(Novel ChemicalSolutions，0.5M THF溶液，114mL，57.0mmol)。10分钟后，通过套管缓慢加入D12-6(3.50g，19.0mmol)的乙醚溶液(10mL)。反应混合物随后缓慢加热至室温。16小时后，用氯化铵饱和水溶液(400mL)淬灭所得混合物，将所得混合物萃取至乙酸乙酯(2×400mL)。用盐水(400mL)冲洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物粗品以得到为无色油状物的D12-7(2.4g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.80(ddt，J＝16.9，10.2，6.7Hz，1H)，5.69(dd，J＝5.8，1.7Hz，1H)，5.65(d，J＝7.2Hz，1H)，5.00(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，4.94(d，J＝10.2Hz，1H)，4.12-4.05(m，1H)，2.69(ddd，J＝17.2，6.4，1.5Hz，1H)，2.54-2.45(m，1H)，2.24(d，J＝17.2Hz，1H)，1.69(br s，1H)，1.52-1.19(m，6H)。
第4步：(1S,2R,3R,5S)-D12-3的制备：在室温于氩气气氛下向D12-7(20mg，0.13mmol)和二乙基锌(1M己烷溶液，132μL，0.132mmol)的乙醚溶液(0.66mL)中加入二碘甲烷(21μL，0.26mmol)。2小时后，用1N HCl水溶液(0.66mL)淬灭反应混合物。5分钟后，用碳酸氢钠饱和水溶液(5mL)稀释所得黄色混合物，用二氯甲烷(3×5mL)萃取所得混合物。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的(1S,2R,3R,5S)-D12-3(10mg)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.83(ddt，J＝16.9，10.2，6.7Hz，1H)，5.02(d，J＝17.2Hz，1H)，4.96(d，J＝11.3Hz，1H)，4.00(d，J＝6.7Hz，1H)，2.19-2.02(m，3H)，1.82(t，J＝7.2Hz，1H)，1.64(d，J＝14.2Hz，1H)，1.55-1.42(m，2H)，1.38-1.20(m，4H)，1.19-1.08(m，1H)，0.62-0.47(m，2H)。
第5步：中间体D12的制备：将醇(1S,2R,3R,5S)-D12-3(0.450g，2.7mmol)溶于DMF(2.7mL)，随后用DSC(0.92g，3.52mmol)和吡啶(0.22mL，2.8mmol)进行处理。将混合物加热至50℃过夜。随后将反应物冷却至0℃，以1分钟时间滴加水(5.5mL)。所得不透明混悬液在室温下搅拌10分钟，然后在此次冷却至0℃。用L-叔亮氨酸(0.462g，3.5mmol)和K3PO4(1.5g，7.0mmol)处理反应物，加热至室温过夜同时剧烈搅拌。用EtOAc和1M HCl水溶液稀释所得不透明混悬液。滴加更多HCl(12M)以调整为pH～3。用EtOAc萃取水层，用盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥。真空浓缩后，得到为无色粘稠油状物的中间体D12(1.72g)，其中有少量DMF和EtOAc污染。该物质无需进一步纯化即可用于后续反应。LCMS-ESI+(m/z)：C18H30NO4的[M+H]+分析计算值：324.2；实测值：324.7。
中间体D14的制备
第1步。中间体D14的制备。用(S)-2-氨基-2-(1-甲基环戊基)乙酸盐酸盐(750mg，3.87mmol；根据Robl,J.A.等人，J.Med.Chem.，2004，47，2587制备)、THF(28mL)、H2O(8.4mL)和TEA(1.4mL，9.7mmol)处理碳酸酯D1-6(862mg，3.23mmol)。反应混合物搅拌16小时，真空去除THF。剩余物质用H2O稀释，加入10％NaOH水溶液将pH调整至～10-12。用EtOAc冲洗水相两次，随后用10％HCl水溶液酸化至pH～1-2。用EtOAc萃取此酸性溶液3次。无水MgSO4干燥合并的提取物，过滤并真空浓缩。用10％HCl水溶液冲洗(碱性水溶液的)初始EtOAc洗涤液，MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法(50％至100％EtOAc/Hex)纯化合并的浓缩液，得到中间体D14(980mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C17H28NO4的[M+H]+分析计算值：310.2；实测值：310.0。
中间体D15混合物的制备
第1步。(±)-D15-1的制备：在室温于氩气气氛下通过注射器向钛(IV)酸异丙酯(11.3g，40.0mmol)的THF溶液(160mL)中滴加甲基溴化镁(3M Et2O溶液，20mL，60.0mmol)。10分钟后，将反应混合物冷却至0℃，通过注射器缓慢加入丙酸甲酯(3.80mL，40.0mmol)的THF溶液(10mL)。5分钟后，以1小时时间通过加液漏斗滴加6-庚烯基溴化镁(NovelChemical Solutions，0.5M THF溶液，160mL，80mmol)。2.5小时后，用10％硫酸水溶液(100mL)淬灭反应混合物，用乙醚(2×200mL)萃取所得混合物。无水硫酸钠干燥有机相，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的(±)-D15-1(3.03g，50％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.77(ddt，J＝16.9，10.2，6.7Hz，1H)，5.03-4.86(m，2H)，2.04(q，J＝6.1Hz，2H)，1.75-1.14(m，6H)，1.04(t，J＝7.4Hz，3H)，1.01-0.91(m，1H)，0.89-0.71(m，2H)，0.02(t，J＝5.5Hz，1H)。
第2步。中间体非对映混合物D15的制备：将外消旋的醇混合物(±)-D15-1(2.00g，13.0mmol)溶于DMF(13.0mL)。加入吡啶(1.05mL，13.0mmol)，随后加入DSC(4.00g，15.6mmol)。反应混合物加热至50℃并搅拌20小时。随后将反应混合物冷却至室温，以2分钟时间滴加水(13mL)。加入L-叔亮氨酸(2.17g，13.0mmol)和K3PO4(8.28g，39.0mmol)，将反应混合物加热至50℃。5小时后，将反应混合物冷却至室温并用水(500mL)稀释。用二氯甲烷(100mL)冲洗所得混合物。随后用2N HCl水溶液将水相酸化至pH 2，用DCM(2×400mL)萃取。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，减压浓缩，得到为淡橙色油状物的中间体非对映混合物D15(4.5g)，其无需进一步纯化即可随后使用。
中间体D16的制备：
中间体D16的制备方法与中间体D12的制备类似，在第3步中以3-丁烯基溴化镁代替4-戊烯基溴化镁。LCMS-ESI+(m/z)：C17H28NO4的[M+H]+分析计算值：310.2；实测值：310.8。
中间体D17的制备：
第1步。中间体混合物D17的制备。根据国际专利公开号WO 2012/40040(在下文中表述为“WO‘040”)，中间体B2，第38页的方法制备的(±)-反式-1-甲基-2-(3-丁烯基)环丙醇(900mg，.13mmol)在DMF(6mL)中溶解。加入吡啶(577μL，7.13mmol)，随后加入DSC(2.37g，9.27mmol)。反应混合物加热至40℃并搅拌18小时。反应混合物随后冷却至0℃，以5分钟时间滴加水(6mL)。反应混合物搅拌5分钟并自冷浴中取出。继续5分钟后，反应混合物冷却至0℃，加入L-叔亮氨酸(1.21g，9.27mmol)和K3PO4(4.69g，22.1mmol)。混合物搅拌10分钟并自冷浴中取出。继续搅拌6小时后，用EtOAc(30mL)稀释混合物，用1M HCl水溶液(25mL)酸化，并用0.2M HCl水溶液(25mL)稀释。分离两相，用0.2M HCl水溶液(2x20mL)冲洗有机相，Na2SO4干燥，过滤，浓缩以得到氨基甲酸酯D17的非对映混合物(2.10g)。LCMS-ESI+(m/z)：C15H25NNaO4的[M+Na]+分析计算值：306.2；实测值：306.1。
中间体D18的制备：
第1步。D18-1的制备：(根据WO2011013141制备)向(S)-4-氨基-2-羟基丁酸(15g，126mmol)的甲醇溶液(95mL)中加入浓硫酸(8mL)，将反应物加热至回流。18小时后，所得混合物冷却至室温，真空浓缩。用乙酸乙酯(95mL)混悬残余物，通过真空过滤收集D18-1。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.69(br s，1H)，4.31(ddd，J＝9.2，8.1，2.2Hz，1H)，3.49(d，J＝5.6Hz，1H)，3.41(tt，J＝9.2，1.7Hz，1H)，3.33(td，J＝9.4，6.5Hz，1H)，2.81(br s，1H)，2.59-2.48(m，1H)，2.09(dq，J＝12.9，9.1Hz，1H)。
第2步。D18-2的制备：在23℃于氩气气氛下通过注射器向D18-1(4.5g，44mmol)、4-硝基苯甲酸(8.19g，49mmol)和三苯基膦(22.4g，132mmol)的四氢呋喃溶液(220mL)中滴加偶氮二甲酸二异丙酯(12.1mL，61.6mmol)。20小时后，真空浓缩所得浑浊橙色反应混合物，加入甲醇(200mL)，随后加入碳酸钾(15g，109mmol)，在23℃下搅拌反应物。继续5小时后，用氯仿(200mL)稀释所得混合物并过滤。真空浓缩滤液，将残余物粗品溶解于水(150mL)和1N盐酸水溶液(50mL)中。用乙酸乙酯(3×200mL)冲洗水层以去除有机副产物，真空浓缩为粗产品，得到可直接用于下一步的D18-2。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.28(t，J＝8.4Hz，1H)，3.43-3.20(m，1H)，2.56-2.39(m，1H)，1.96(dq，J＝12.7，8.7Hz，1H)。
第3步。D18-3的制备：在0℃于氩气气氛下向粗产品D18-2(5g，49.5mmol)和咪唑(3.4g，49.5mmol)的DMF溶液(247mL)中加入TBSCl(7.5g，49.5mmol)。所得混合物加热至23℃。7小时后，按顺序再次加入咪唑(7g，102mmol)和TBSCl(16g，106mmol)。继续16小时后，用1N盐酸水溶液(1L)稀释所得混合物并用乙酸乙酯(1L)萃取。分离有机层并用盐水(1L)冲洗，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度纯化残余物粗品)以得到D18-3。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.99(s，1H)，4.26(t，J＝7.7Hz，1H)，3.44-3.33(m，1H)，3.30-3.19(m，1H)，2.45-2.29(m，1H)，2.11-1.95(m，1H)，0.91(s，9H)，0.02(s，3H)，0.00(s，3H)。
第4步。D18-4的制备：在23℃于氩气气氛下向D18-3(1.00g，4.65mmol)、DMAP(57.8mg，0.465mmol)和三乙胺(1.29mL，9.3mmol)的二氯甲烷溶液(23.3mL)中加入二碳酸二叔丁酯(1.5g，6.97mmol)。20小时后，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)直接纯化反应混合物以得到D18-4。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.31(dd，J＝9.4，7.9Hz，1H)，3.79(ddd，J＝11.0，8.9，2.2Hz，1H)，3.53-3.41(m，1H)，2.34-2.21(m，1H)，1.92(dq，J＝12.2，9.2Hz，1H)，1.53(s，9H)，0.91(s，9H)，0.17(s，3H)，0.13(s，3H)。
第5步。D18-5的制备：在-78℃于氩气气氛下通过注射器向D18-4(700mg，2.22mmol)的四氢呋喃溶液(11.1mL)中滴加4-戊烯基溴化镁(Novel Chemical Solutions，0.5M2-MeTHF溶液，4.89mL，2.44mmol)。1小时后，反应混合物用氯化铵饱和水溶液(50mL)淬灭，加热至室温。所得混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，用盐水(100mL)冲洗合并的有机提取物，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品以得到D18-5。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.77-5.62(m，1H)，4.95(d，J＝15.8Hz，1H)，4.92(d，J＝10.2Hz，1H)，4.26(app t，J＝8.4Hz，1H)，3.77-3.69(m，1H)，3.41(td，J＝10.4，6.7Hz，1H)，2.48(t，J＝7.4Hz，2H)，2.28-2.17(m，1H)，1.91-1.78(m，2H)，1.77-1.65(m，1H)，1.60(五重峰，J＝7.3Hz，2H)，1.47(s，9H)，0.85(s，9H)，0.11(s，3H)，0.07(s，3H)。
第6步。D18-6的制备：在-78℃于氩气气氛下通过注射器向D18-5(740mg，1.92mmol)和三乙基硅烷(6.10mL，38.4mmol)的二氯甲烷溶液(9.6mL)中滴加三氟化硼乙醚(308μL，2.50mmol)。1小时后，将反应混合物加热至室温。继续4小时后，用氯化铵饱和水溶液(10mL)淬灭反应，用碳酸氢钠饱和溶液(50mL)稀释。用乙酸乙酯(50mL)萃取所得混合物，无水硫酸钠干燥有机层，真空浓缩以得到游离胺粗品，其可直接用于下一步。在室温于氩气气氛下向游离胺粗品和三乙胺(535μL，3.84mmol)的四氢呋喃溶液(9.6mL)中加入乙酸酐(146.5μL，1.55mmol)。1小时后，真空浓缩所得混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品以得到D18-6(2:1非对映混合物，偏向于想要的1-((2S,3R)-3-(叔丁基二甲基硅氧基)-2-(4-戊烯基)吡咯烷-1-基)乙酮非对映体)。1H NMR(400MHz，CDCl3，次要非对映体用*标记)δ5.80-5.64(m，1H，1H*)，5.01-4.82(m，2H，2H*)，4.10(d，J＝4.2Hz，1H*)，4.04(d，J＝3.7Hz，1H)，3.82(dd，J＝10.3，4.0Hz，1H)，3.66-3.56(m，1H*)，3.55-3.29(m，2H，1H*)，3.24-3.16(m，1H*)，2.37-2.25(m，1H*)，2.08-1.88(m，2H，1H*)，2.03(s，3H*)，2.00(s，3H)，1.81-1.61(m，2H，2H*)，1.50-1.01(m，4H，4H*)，0.85(s，9H*)，0.80(s，9H)，0.10(s，3H*)，0.09(s，3H*)，0.00(br s，6H)。
第7步。D18-7的制备：在0℃于氩气气氛下向D18-6(338mg，1.08mmol)的四氢呋喃溶液(21mL)中加入TBAF(1M四氢呋喃溶液，21mL，21mmol)。17小时后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)直接纯化以得到D18-7(102mg，2:1非对映混合物，偏向于预期的11-((2S,3R)-3-羟基-2-(4-戊烯基)吡咯烷-1-基)乙酮非对映体)。1HNMR(400MHz，CDCl3，次要非对映体用*标记)δ5.84-5.70(m，1H，1H*)，5.06-4.91(m，2H，2H*)，4.25(d，J＝3.7Hz，1H*)，4.20(d，J＝3.7Hz，1H)，3.98(dd，J＝9.2，4.2Hz，1H)，3.76-3.68(m，1H*)，3.67-3.59(m，1H，1H*)，3.55-3.46(m，1H，2H*)，3.02-2.94(m，1H)，2.22-1.85(m，2H，2H*)，2.10(s，3H*)，2.07(s，3H)，1.82-1.59(m，2H，2H*)，1.55-1.13(m，4H，4H*)。
第8步。D18-8的制备：在室温下向D18-7(102mg，0.518mmol)和吡啶(8μL，0.104mmol)溶液中加入DSC(159.2mg，0.621mmol)，将所得混合物加热至45℃。16小时后，反应混合物冷却至室温，按顺序加入水(518μL)、L-叔亮氨酸(86.5mg，0.518mmol)和K3PO4(330mg，1.55mmol)，将所得混合物加热至50℃。6小时后，反应混合物冷却至室温，用1N盐酸水溶液(10mL)稀释。用二氯甲烷(2×10mL)萃取所得混合物，无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，真空浓缩以得到D18-8(2:1非对映混合物，偏向于预期的(S)-2-(((2S,3R)-1-乙酰基-2-(4-戊烯基)吡咯烷-3-基氧基)羰基氨基)-3,3-二甲基丁酸)。1H NMR(400MHz，CDCl3，次要非对映体用*标记)δ5.85-5.65(m，1H，1H*)，5.39(d，J＝9.3Hz，1H*)，5.34(d，J＝9.2Hz，1H)，5.07-4.87(m，3H，3H*)，4.16-4.03(m，1H，1H*)，3.83-3.45(m，3H，3H*)，2.30-1.95(m，8H)，2.30-1.95(m，2H，3H*)，1.82-1.65(m，2H，1H*)，2.11(s，3H)，2.09(s，3H*)，1.58-1.13(m，4H，4H*)，1.01(br s，9H，9H*)。
中间体混合物D19的制备
第1和2步：D19-1的制备：在Ar下用THF(10mL)稀释KHMDS(10mL，10mmol)的1.0MTHF溶液，在CO2:丙酮浴中将所得溶液冷却至-78℃。以2分钟时间加入双环[3.1.1]庚-2-酮(1.0g，9.1mmol，参见：Yin等人，J.Org.Chem，1985，50，531)的THF溶液(5mL)，用更多THF(2x2.5mL)冲洗以确保完全转移。所得混合物搅拌30分钟，以2分钟加入N-(5-氯-2-吡啶基)双(三氟甲基磺酰亚胺)(3.8g，9.7mmol)的THF溶液(10mL)，用更多THF(2x2.5mL)冲洗。所得混合物搅拌5分钟，自冷浴中取出。继续搅拌30分钟后，用Et2O(70mL)和1M HCl水溶液(50mL)稀释反应物。分离两相，用1M NaOH水溶液(2x30mL)冲洗有机相。合并的有机相，MgSO4干燥，过滤并浓缩以得到残余物粗品。以30％EtOAc己烷溶液通过硅胶塞进行过滤以得到残余物粗品(1.24g)，其可直接用于下一步。
第2步：在Ar下以3分钟时间向在冰水浴中冷却的3-丁烯醛二乙基缩醛溶液(1.4mL，8.3mmol)中加入9-硼双环[3.3.1]壬烷的0.5M THF溶液(15.9mL，7.95mmol)。反应物搅拌20小时，冷水浴可过夜消失。随后加入3M NaOH水溶液(2.9mL，8.7mmol)，搅拌20分钟后，将所得溶液全部转移至含有第1步产物(大约5.16mmol)和PdCl2(dppf)·CH2Cl2(420mg，0.51mmol)的烧瓶中。所得混合物加热至60℃。搅拌14小时后，用Et2O(50mL)和H2O(50mL)稀释反应混合物。分离两相，MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法(0％至10％EtOAc己烷溶液，先用1％Et3N的EtOAc溶液预平衡)进行纯化，得到中间体D19-1。1H NMR(300MHz，CDCl3)5.36-5.28(m，1H)，4.59(t，J＝5.6Hz，1H)，3.73-3.58(m，2H)，3.54-3.39(m，2H)，2.72-2.60(m，1H)，2.45-2.34(m，3H)，2.23-2.08(m，4H)，1.89-1.76(m，2H)，1.67(dt，J＝16.1，6.9Hz，2H)，1.58-1.47(m，2H)，1.23(t，J＝7.0Hz，6H)。
第3步：D19-2的制备：在冰水浴中冷却烯烃D19-1(660mg，2.77mmol)的THF溶液(25mL)。随后以1分钟加入1M BH3·Me2S的CH2Cl2溶液(2.9mL，2.9mmol)。所得溶液在冰水浴中搅拌2小时，加热至室温。继续搅拌3小时后，在冰水浴中再次冷却反应混合物，用2M NaOH水溶液(7mL)和30％H2O2水溶液(7mL)稀释。所得混合物继续搅拌16小时，冷浴可逐渐消失。混合物在Et2O(100mL)和H2O(50mL)之间分配，分离两相，用0.5M NaOH水溶液(50mL)冲洗有机相。MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品，通过硅胶色谱法(15％至40％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到570mg中间体D19-2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.60(t，J＝5.6Hz，1H)，3.76-3.60(m，3H)，3.58-3.42(m，2H)，2.39-2.05(m，4H)，1.91-1.48(m，9H)，1.43-1.35(m，1H)，1.25(t，J＝7.0Hz，6H)，1.06-0.98(m，1H)。
第4和5步：D19-3的制备：将乙缩醛D19-2(360mg，1.4mmol)溶于THF(8mL和H2O(2mL)。加入对甲苯磺酸一水合物(40mg，0.2mmol)，所得溶液在室温下搅拌16小时。用Et2O(50mL)和H2O(30mL)稀释反应物，分离两相。用Et2O(30mL)萃取水相，用NaHCO3饱和水溶液(15mL)冲洗合并的有机相。MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品，其在下一步中立即使用。第5步：在Ar下将甲基三苯基溴化膦(1.66g，4.6mmol)悬于THF(40mL)并通过CO2/丙酮浴冷却至-78℃。滴加1M NaHMDS的THF溶液(4.2mL，4.2mmol)，所得黄色混悬液搅拌5分钟。自冷浴中取出混合物，继续搅拌30分钟。将混合物再次冷却至-78℃，以5分钟时间加入前一步得到的残余物粗品(大约1.4mmol)的THF溶液(5mL)，用更多THF(2x2.5mL)冲洗以确保完全转移。所得混合物搅拌5分钟，随后将其置于冰水浴中，继续搅拌1小时。用NH4Cl饱和水溶液(20mL)淬灭反应，并用Et2O(30mL)和H2O(20mL)稀释。分离两相，MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩至5g硅胶。通过硅胶色谱法(10％至30％EtOAc己烷溶液)进行纯化以得到D19-3。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ6.01-5.81(m，1H)，5.22-5.05(m，2H)，3.79-3.66(m，1H)，2.43-2.25(m，2H)，2.24-2.04(m，4H)，1.83-1.16(m，10H)。
第6步：将中间体D19-3(270mg，1.5mmol)溶于DMF(2.0mL)。加入吡啶(125μL，1.5mmol)和DSC(500mg，1.9mmol)，反应物在45℃下搅拌15小时。随后将反应物置于冰水浴中并以30秒时间滴加H2O(2.0mL)。自冷浴中取出混合物，搅拌10分钟。在冰水浴中再次冷却混合物，加入L-叔亮氨酸(259mg，1.97mmol)，随后加入K3PO4(835mg，3.93mmol)。自冷浴中取出反应混合物，在室温下搅拌5.25小时。随后用EtOAc(40mL)、1M HCl水溶液(20mL)和H2O(15mL)稀释混合物。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。用0.2M HCl水溶液(2x25mL)冲洗合并的有机相，Na2SO4干燥，过滤，浓缩以得到为无色油状物的D19(505mg)非对映体混合物。LCMS-ESI+(m/z)：C19H32NO4的[M+H]+分析计算值：338.2；实测值：337.8。
中间体E1的制备
中间体E1(2-氯-6-甲氧基-3-(甲磺酰基)喹喔啉)是根据Mahata,P.K.等人，Org.Lett.2005，7，2169制备的。
中间体E2的制备
第1步。E2-1的制备：在圆底烧瓶中，3-(苄氧基)苯胺(4.025g，20.20mmol)和1,1-双(甲巯基)-2-硝基乙烯(3.338g，20.20mmol)的乙醇溶液(40mL)在恒定搅拌下回流24小时。随后在冰浴中冷却反应混合物并用乙醚(150mL)稀释。过滤混合物，用乙醚冲洗以得到为黄色固体的E2-1(3.32g)，其可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C16H17N2O3S的[M+H]+分析计算值：317.1；实测值：317.1。
第2步。E2-2的制备：在恒定搅拌下向E2-1(3.32g，10.49mmol)的25mL MeCN混悬液中以15分钟滴加POCl3(2.93mL，31.5mmol)。反应混合物加热至80℃并搅拌5稀释。随后将反应物冷却至室温，用冰预冷的NaHCO3饱和水溶液中和，用CH2Cl2(100mL)萃取三次，用水、盐水冲洗，无水Na2SO4干燥。减压去除溶剂。通过硅胶塞以CH2Cl2洗脱粗产品。减压去除溶剂，用MeCN冲洗固体，得到为灰白色固体的E2-2(1.56g)。LCMS-ESI+(m/z)：C16H14ClN2OS的[M+H]+分析计算值：317.1；实测值：317.3。
第3步。中间体E2的制备。在0℃下以30分钟时间将mCPBA(1.87g，10.83mmol)的CH2Cl2溶液(40mL)滴加至搅拌的E2-2(1.56g，4.92mmol)CH2Cl2溶液(40mL)中。反应混合物在室温下继续搅拌5小时。随后将其倒入冰预冷的NaHCO3饱和水溶液中并用CH2Cl2分配。用水、盐水冲洗有机层，无水Na2SO4干燥。减压去除溶剂，通过正相色谱法以CH2Cl2纯化粗产品，得到为浅黄色固体的标题化合物中间体E2。LCMS-ESI+(m/z)：C16H14ClN2O3S的[M+H]+分析计算值：349.0；实测值：349.0。
中间体E3的制备
第1步。E3-1的制备：在-100℃下以30分钟时间向3-溴-3,3-二氟-1-丙烯(25.0g，159mmol)和草酸二乙酯(21.6mL，159mmol)的THF(380mL)、乙醚(90mL)和正戊烷(90mL)溶液中滴加正丁基锂(2.5M己烷溶液，67mL，167.6mmol)。反应混合物在-95℃下搅拌1小时，在-78℃下搅拌2小时，用NH4Cl水溶液(11g于150mL水中)淬灭。用乙醚萃取混合物(三次)。用1NHCl水溶液、盐水冲洗有机层，Na2SO4干燥，浓缩以得到残余物粗品，通过硅胶色谱法(EtOAc己烷溶液：0％至40％)对其进行纯化以得到E3-1(7.0g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.98-6.18(m，1H)，5.78(dd，J＝0.9Hz，13Hz，1H)，5.60(dd，J＝0.9Hz，11Hz，1H)，4.38(q，J＝6.9Hz，2H)，1.37(t，J＝7.2Hz，3H)。
第2步。E3-2和E3-3的制备：在室温下向E3-1(14.0g，78.6mmol)和4-甲氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐(15.08g，71.4mmol)的EtOH溶液(360mL)中加入三乙胺(19.9mL，142.8mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩混合物。将其悬于二氯甲烷(30mL)并过滤以得到区域异构体与E3-2的一些分离，其中E3-2是沉淀物质。(过滤和随后的色谱分析总收率为16.5g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.940(br s，1H)，7.850(d，J＝9Hz，1H)，6.985(dd，J＝3Hz，9Hz，1H)，6.754(d，J＝2Hz，1H)，6.625-6.498(m，1H)，5.907(dt，J＝17，2Hz，1H)，5.601(d，J＝11Hz，1H)，3.938(s，3H)。将混合物悬浮，过滤，再次浓缩，随后通过硅胶色谱法(EtOAc己烷溶液：5％至34％)进行纯化，得到作为首先洗脱组分的E3-3(2.07g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ12.05(br s，1H)，7.850(d，J＝9Hz，1H)，6.986(dd，J＝3Hz，9Hz，1H)，6.761(d，J＝3Hz，1H)，6.597-6.526(m，1H)，5.91(dt，J＝17，2Hz，1H)，5.601(d，J＝11Hz，1H)，3.939(s，3H)。
第3步。中间体E3的制备：用POCl3(0.8mL)处理E3-3溶液(2.07g，8.2mmol于1mLDMF中)并在65℃下加入2.5小时。用EtOAc稀释反应物，将其倒入冰水中以进行淬灭。用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水冲洗有机相，硫酸钠干燥，浓缩以得到2.1g中间体E3。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.028(d，J＝10Hz，1H)，7.46(dd，J＝3Hz，9Hz，1H)，7.32(d，J＝3Hz，1H)，6.549-6.478(m，1H)，5.86(dt，J＝17，2Hz，1H)，5.67(d，J＝11Hz，1H)，3.981(s，3H)。
中间体E4的制备
中间体E4(2-氯-3-(1,1-二氟烯丙基)喹喔啉)的制备方法与中间体E3类似，以1,2-苯二胺代替第2步中的4-甲氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐。
中间体E5的制备
中间体E5(2,6-二氯-3-(甲磺酰基)喹喔啉)是根据Mahata,P.K.等人，Org.Lett.2005，7，2169制备的。
中间体E6的制备
第1步。E6-1的制备：在1-L 3颈圆底烧瓶中加入3-溴-3,3-二氟-1-丙烯(25g，159.3mmol)的DMF溶液(360mL)和水(90mL)。用乙醛酸乙酯(33mL,1M甲苯溶液)和In(25g)处理所得溶液。反应混合物在室温下搅拌过夜，随后用3x300mL乙醚萃取。合并有机层，用1x100mL NH4Cl饱和水溶液和1x100mL盐水冲洗，无水Na2SO4干燥，真空浓缩以得到E6-1，其无需进一步纯化即可随后使用。
第2步。E6-2的制备。在装有顶置搅拌和内部温度探头的2L 3颈烧瓶中向羟基酯E6-1(58.1g，323mmol)中加入DCM(700mL)。随后在20℃下按顺序向烧瓶中加入TEMPO(5.4g，35mmol)、缓冲液(通过在每100mL水中溶解4.2g NaHCO3和0.53g Na2CO3制备，700mL，7v)和NaOCl(次氯酸钠6.15％wt，422mL，395mmol)。2小时后分离有机层，用乙酸乙酯(2×300mL)萃取水相。无水Na2SO4干燥合并的有机层，真空浓缩以得到E6-2。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.98-6.18(m，1H)，5.78(dd，J＝0.9Hz，13Hz，1H)，5.60(dd，J＝0.9Hz，11Hz，1H)，4.38(q，J＝6.9Hz，2H)，1.37(t，J＝7.2Hz，3H)。
第3步。E6-3的制备。在20℃下向3,3-二氟-2,2-二羟基-4-戊烯酸乙酯E6-2(57.4g，292mmol)的THF(725mL)和水(131mL)溶液中加入LiOH·H2O(22g，529mmol)。2.5小时后，真空浓缩反应混合物。将固体残余物悬于水(300mL)中，所得混合物用浓盐酸水溶液酸化至pH＝1。搅拌所得混合物直至所有固体均溶解(～1.5h)，随后加入氯化钠直至溶液饱和。用MTBE(2×500mL)和乙酸乙酯(2×500mL)萃取所得溶液，无水Na2SO4干燥合并的有机层，真空浓缩。将橙色固体残余物粗品悬于DCM(100mL)，搅拌直至固体精细分布，随后通过加液漏斗缓慢加入己烷(75mL)。通过使用中等烧结漏斗进行的真空过滤收集所得固体，用1:1二氯甲烷/己烷(2×10mL)冲洗以得到预期产物。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.17(bs，1H)，6.18-6.01(m，1H)，5.64-5.52(m，2H)。
第4步。E6-4和E6-5的制备：用3,4-二氨基苯甲腈(0.47g，3.5mmol)处理E6-3(0.5g，3.3mmol)的EtOH溶液(12mL)。反应混合物在80℃下加热1小时，真空浓缩。用硅胶吸附所得残余物，通过柱色谱法进行纯化以得到作为首先洗脱组分的E6-4(0.5g)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.01(d，1H)，7.65(dd，2H)，6.49(m，1H)，5.80(dt，1H)，5.60(d，1H)。E6-5(0.2g)作为其次洗脱的组分回收。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.25(d，1H)，7.87(dd，1H)，7.41(d，1H)，6.49(m，1H)，5.80(dt，1H)，5.59(d，1H)。
第5步。中间体E6的制备：用POCl3(3mL)处理E6-4溶液(0.5g，2mmol于4.5mLDMF中)并在65℃下加入3小时。用EtOAc稀释反应物，并通过倒入至冰水中进行淬灭。随后用NaHCO3饱和水溶液和盐水冲洗有机相，无水Na2SO4干燥，真空浓缩以得到0.48g中间体E6(3-氯-2-(1,1-二氟烯丙基)喹喔啉-6-甲腈)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.52(s，1H)，8.30(d，1H)，8.13(dd，1H)，6.55(m，1H)，5.84(dt,1H)，5.72(d，1H)。
中间体E7的制备
第1步。E7-1的制备：在室温下向E3-1(1.84g，10.93mmol)和4-(二氟甲氧基)苯-1,2-二胺(1.90g，10.93mmol，根据参考文献WO2003035065的实施例30y，第511页制备)的DMF溶液(40mL)中加入DIPEA(9.5mL，54.65mmol)和HATU(6.23g，16.4mmol)。反应混合物在室温下搅拌24小时，用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(100mL)和盐水(50mL)冲洗。真空浓缩混合物。通过硅胶色谱法(EtOAc己烷溶液：20％至60％)纯化，得到具有相似质谱的两个组分中较后洗脱的E7-1(800mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C12H9F4N2O的[M+H]+分析计算值：289.2；实测值：289.0。
第2步：中间体的制备E7：在室温下合并羟基喹喔啉E7-1(800mg，2.8mmol)、POCl3(1.65mL，3.0mmol)和DMF(10mL)，随后在65℃下加热2.5小时，加入更多POCl3(0.2mL，0.36mmol)。反应物在65℃下继续加热3小时，随后冷却至室温。加入冷水(30mL)以淬灭反应，将其溶于乙酸乙酯(50mL)，用Na2CO3饱和水溶液(100mL)和盐水(50mL)冲洗，无水MgSO4干燥。真空浓缩所得溶液以得到中间体E7(859mg)，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C12H8ClF4N2O的[M+H]+分析计算值：307.0；实测值：307.0。
中间体E8的制备
中间体E8(2-氯-6-氟-3-(甲磺酰基)喹喔啉)是根据Mahata,P.K.等人，Org.Lett.2005，7，2169制备的。
中间体E9的制备
2,7-二氯-3-(2-丙烯-1-基)喹唑啉-4(3H)-酮(中间体E9)是根据WO‘040第53-4页中间体D5的第3步制备的。
实施例的制备
实施例1.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。1-1的制备：含有中间体B4(2.03g，6.44mmol)、中间体E1(1.6g，5.85mmol)和碳酸铯(3.15g，9.66mmol)的MeCN(40mL)混合物在室温于Ar气氛下下剧烈搅拌16小时。随后通过硅藻土垫过滤反应物，真空浓缩滤液。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化，得到为白色固体的1-1(2.5g)。LCMS-ESI+(m/z)：C20H27ClN3O4的[M-Boc+2H]+分析计算值：408.9；实测值：408.6。
第2步。1-2的制备：向1-1(2.5g，4.92mmol)的二氧六环溶于(10mL)中加入盐酸的二氧六环溶液(4M，25mL，98.4mmol)，反应物在室温下搅拌5小时。真空浓缩反应物粗品，得到为白色固体的1-2(2.49g)，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C20H26ClN3O4的[M]+分析计算值：407.9；实测值：407.9。
第3步。1-3的制备：向1-2(2.49g，5.61mmol)、中间体D1(1.75mg，6.17mmol)和DIPEA(3.9mL，22.44mmol)的DMF(35mL)溶液中加入COMU(3.12g，7.29mmol)，反应物在室温下搅拌3小时。用5％柠檬酸水溶液淬灭反应，用EtOAc萃取，随后用盐水冲洗，无水MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到为橙色泡沫的1-3(2.31g)，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C35H49ClN4O7的[M]+分析计算值：673.3；实测值：673.7。
第4步。1-4的制备：向1-3(2.31g，3.43mmol)、TEA(0.72mL，5.15mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(0.69mg，5.15mmol)的EtOH溶液(35mL)中加入PdCl2(dppf)(0.25g，0.34mmol，Frontier Scientific)。反应物用氩气鼓泡15分钟并加热至80℃，持续2小时。直接在硅胶上吸附反应物，使用硅胶色谱法进行纯化，得到为黄色油状物的1-4(1.95g)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H53N4O7的[M+H]+分析计算值：665.4；实测值：665.3。
第5步。1-5的制备：向1-4(1.95g，2.93mmol)的DCE溶液(585mL)中加入Zhan1B催化剂(0.215g，0.29mmol，Strem)，反应物用Ar鼓泡15分钟。将反应物加热至80℃，持续1.5小时，冷却至室温，浓缩。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化，得到为黄色油状物的1-5(1.47g；LCMS-ESI+(m/z)：C35H49N4O7的[M+H]+分析计算值：637.4；实测值：637.3)。
第6步。1-6的制备：用Pd/C(10wt％Pd，0.162g)处理1-5(0.97g，1.52mmol)的EtOH溶液(15mL)。用氢气代替空气，在室温下搅拌2小时。通过硅藻土过滤反应物，用EtOAc冲洗硅藻土垫，浓缩，得到为褐色泡沫状固体的1-6(0.803g)，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C35H51N4O7的[M+H]+分析计算值：639.4；实测值：639.3。
第7步。1-7的制备：向1-6(0.803g，1.26mmol)的DCM溶液(10mL)中加入TFA(5mL)并在室温下搅拌3参数。再次加入2mL TFA，继续搅拌反应物1.5小时。将反应物浓缩为溶于EtOAc(35mL)的褐色油状物。用水冲洗有机溶液。分离两层后，在搅拌下加入NaHCO3饱和水溶液，直至水层达到pH～7-8。再次分离两层，用EtOAc萃取水层两次。用1M柠檬酸水溶液、盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到为褐色泡沫状固体的1-6(0.719g)，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C31H43N4O7的[M+H]+分析计算值：583.3；实测值：583.4。
第8步。实施例1的制备：向1-7(0.200g，0.343mmol)、中间体A10(0.157g，0.515mmol)、DMAP(0.063g，0.51mmol)和DIPEA(0.3mL，1.72mmol)的DMF溶液(3mL)中加入HATU(0.235g，0.617mmol)，反应物在室温下搅拌过夜。用MeCN稀释反应物，通过反相HPLC(Gemini，30-100％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接进行纯化，冻干，得到为固体TFA盐的实施例1(118.6mg)。分析HPLC保留时间：8.63min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：833.4；实测值：833.5。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.19(s，1H)；7.80(d，J＝8.8Hz，1H)；7.23(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)；7.15(d，J＝2.4Hz，1H)；5.89(d，J＝3.6Hz，1H)；5.83(td，JH-F＝55.6Hz，J＝6.4Hz，1H)；4.56(d，J＝7.2Hz，1H)；4.40(s，1H)4.38(ap d，J＝7.2Hz，1H)；4.16(dd，J＝12，4Hz，1H)；3.93(s，3H)；3.75(dt，J＝7.2，4Hz，1H)；3.00-2.91(m，1H)；2.81(td，J＝12，4.4Hz，1H)；2.63-2.54(m，1H)；2.01(br s，2H)；1.88-1.64(m，3H)；1.66-1.33(m，11H)1.52(s，3H)；1.24(t，J＝7.2Hz，3H)；1.10(s，9H)；1.02-0.96(m，2H)；0.96-0.88(m，2H)；0.78-0.68(m，1H)；0.55-0.46(m，1H)。
实施例2.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例2的制备方法与实施例1类似，以中间体A9代替第8步的中间体A10。实施例2以大约85％的纯度分离得到TFA盐(37.9mg)。分析HPLC保留时间：8.54min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H53F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：819.35；实测值：819.51。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.26(s，1H)；7.90(d，J＝9.2Hz，1H)；7.26(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)；7.10(d，J＝2.4Hz，1H)；6.68(br s，1H)；6.01(td，JH-F＝55.6Hz，J＝6.8Hz，1H)；5.87(d，J＝3.6Hz，1H)；5.38,(d，J＝10Hz，1H)；4.50-4.40(m，3H)；4.10(dd，J＝12，3.6Hz，1H)；3.95(s，3H)；3.79-3.72(m，1H)；2.96-2.82(m，3H)；2.63-2.56(m，1H)；2.14(t，J＝6.8Hz，1H)；1.98-1.86(m，1H)；1.84-1.28(m，13H)；1.23(t，J＝7.2Hz，3H)；1.16-0.92(m，3H)；1.09(s，9H)；0.74-0.64(m，1H)；0.48(q，J＝6.4Hz，1H)。
实施例3.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-{(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-乙基环丙基}-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例3的制备方法与实施例1类似，以中间体A3代替第8步的中间体A10。实施例3以大约88％的纯度分离得到TFA盐(0.035g)。分析HPLC保留时间：8.63min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H57N6O9S的[M+H]+分析计算值：797.4；实测值：797.5。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.98(s，1H)；7.80(d，J＝9.2Hz，1H)；7.23(d，J＝9.2，2.8Hz，1H)；7.15(d，J＝2.8Hz，1H)；5.89(d，J＝3.6Hz，1H)；4.58(d，J＝7.6Hz，1H)；4.41-4.32(m，2H)；4.16(dd，J＝12.4Hz，3.6Hz，1H)；3.93(s，3H)；3.74(dt，J＝6.8，2.8Hz，1H)；3.20-2.91(m，2H)；2.86-2.76(m，1H)；2.61-2.53(m，1H)；1.88-1.68(m，4H)；1.66-1.34(m，9H)；1.34-1.20(m，5H)；1.18-1.04(m，3H)；1.10(s，9H)；1.00-0.92(m，7H)；0.79-0.69(m，1H)；0.50(br d，J＝7.2Hz，1H)。
实施例4.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-9-乙基-N-[(1R,2R)-2-乙基-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
实施例4的制备方法与实施例1类似，以中间体A4代替第8步的中间体A10。实施例4以大约88％的纯度分离得到TFA盐(0.018g)。分析HPLC保留时间：8.75。LCMS-ESI+(m/z)：C41H59N6O9S的[M+H]+分析计算值：811.4；实测值：811.6。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.91(s，1H)；7.80(d，J＝9.2Hz，1H)；7.23(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)；7.16(d，J＝2.8Hz，1H)；5.90(d，J＝3.6Hz，1H)；4.59(d，J＝6.8Hz，1H)；4.38(s，1H)；4.37(d，J＝11.6Hz，1H)，4.16(dd，J＝11.6，6.8Hz，1H)，3.93(s，3H)；3.74(dt，J＝6.8，3.6Hz，1H)；3.10-2.91(m，1H)；2.90-2.7(m，1H)；2.63-2.55(m，1H)；1.86-1.69(m，3H)；1.65-1.36(m，13H)，1.52(s，3H)；1.24(t，J＝7.2Hz，3H)；1.16-1.06(m，2H)；1.10(s，9H)；1.02-0.85(m，7H)；0.79-0.68(m，1H)；0.50(brd，J＝6.8Hz，1H)。
实施例5.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备。
第1步。5-1的制备：于氩气下向1-2(533mg，1.20mmol)和中间体D5(414mg，1.33mmol)的12mL DMF混合物中加入HATU(555mg，1.46mmol，Oakwood)和DIPEA(1.10mL，6.35mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次。用水和盐水冲洗合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-35％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为白色固体的5-1(713mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H54ClN4O7的[M+H]+分析计算值：701.36；实测值：701.58。
第2步。5-2的制备：在室温下将Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(94mg，0.115mmol，Strem)加入至5-1(710mg，1.01mmol)、乙酰基三氟硼酸钾(213mg，1.59mmol)和三乙胺(0.210mL，1.52mmol)的11mL EtOH去氧混合物中。反应混合物在78℃于氩气下加热一小时。冷却至室温后，将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次。用水和盐水冲洗合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩，得到5-2(699mg)，无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C39H57N4O7的[M+H]+分析计算值：693.41；实测值：693.47。
第3步。5-3的制备：将5-2(699mg，1.01mmol)和Zhan 1B催化剂(81mg，0.111mmol，Strem)的200mL DCE混合物于氩气下去氧25分钟。随后在95℃下加热混合物45分钟。反应混合物在95℃下继续加热10分钟，冷却至室温，减压浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为浅褐色固体的5-3(336mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H53N4O7的[M+H]+分析计算值：665.38；实测值：665.53。
第4步。5-4的制备：向5-3(330mg，0.497mmol)的8mL乙醇和3.5mL乙酸乙酯溶液中加入钯碳(10wt。％Pd，102mg，0.096mmol)。混合物在氢气气氛下搅拌100分钟，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯冲洗。减压浓缩滤液，得到为淡黄-褐色固体膜的5-4(64mg)，无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C37H55N4O7的[M+H]+分析计算值：667.40；实测值：667.52。
第5步。5-5的制备：在室温于氩气下向5-4(329mg，0.494mmol)的10mL二氯甲烷溶液中滴加TMSOTf(0.53mL，2.91mmol)。一小时后，再次加入0.3mL TMSOTf。继续一小时后，减压浓缩反应混合物。将所获薄膜溶于12mL甲苯，减压浓缩。重复一次此过程，以得到5-5(301mg)，无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C33H47N4O7的[M+H]+分析计算值：611.34；实测值：611.46。
第6步。实施例5的制备：于氩气下向5-5(134mg，0.22mmol)和中间体A9(95mg，0.328mmol)的6.6mL MeCN混合物中加入HATU(129mg，0.339mmol)和DIPEA(0.22mL，1.27mmol)。搅拌5小时后，将反应混合物倒入至水中，用乙酸乙酯萃取三次。用水和盐水冲洗合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。所得残余物通过反相制备HPLC(15-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化，冻干后得到为淡黄色固体的实施例5的三氟乙酸盐(43mg)。分析HPLC保留时间：9.11min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.38；实测值：847.62。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.31(s，1H)，7.80(d，J＝9.2Hz，1H)，7.23(dd，J＝15.4，2.8Hz，1H)，7.19(d，J＝2.8Hz，1H)，5.87(td，JH-F＝56Hz，J＝6Hz，1H)，5.87-5.83(m，1H)，4.59(d，J＝7.6Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.23-4.14(m，2H)，3.93(s，3H)，3.06-2.94(m，2H)，2.77-2.67(m，1H)，2.65-2.58(m，1H)，2.07-2.01(m，2H)，1.98-1.74(m，4H)，1.72-1.52(m，4H)，1.50-1.20(m，12H)，1.18-1.02(m，8H)，1.06(s，9H)。
实施例6.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备
实施例6的制备方法与实施例5类似，以中间体A10代替第6步的中间体A9。分离得到为白色固体的实施例6(29mg)。分析HPLC保留时间：9.26min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H59F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：861.40；实测值：861.20。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.91(s，1H)，7.82(d，J＝12Hz，1H)，7.18(d，J＝12Hz 1H)，7.13-7.06(m，1H)，6.48(s，1H)，5.95(td，JH-F＝56Hz，J＝6Hz，1H)，5.82(d，J＝4.4Hz，1H)，5.33(d，J＝10Hz，1H)，4.95-4.91(m，1H)，4.38-4.31(m，2H)，4.10-3.88(m，2H)，3.98(s，3H)，2.98-2.89(m，1H)，2.67-2.59(m，1H)，2.05-1.65(m，4H)，1.64-1.21(m，12H)，1.40(s，3H)，1.17-0.80(m，12H)，1.09(s，9H)。
实施例7.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-1a-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。1-2(游离碱)的制备：将氨基甲酸酯1-1(350mg，0.689mmol)加入至一个含有乙酸叔丁酯:DCM 4:1混合物(3.5mL)的烧瓶中。随后向此溶液中加入甲磺酸(447μL，6.89mmol)。反应混合物在室温下搅拌20分钟，用二氯甲烷(20mL)和碳酸氢钠饱和水溶液(20mL)稀释。搅拌溶液直至停止放出气体，去除有机相，用二氯甲烷(20mL)萃取水层两次。用盐水冲洗合并的有机相，Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。所得白色固体1-2(游离碱，280mg)无需进一步纯化即可用于下一步反应。LCMS-ESI+(m/z)：C20H27ClN3O4的[M+H]+分析计算值：408.2；实测值：408.1。
第2步。混合物7-1的制备：将胺1-2(281mg，0.689mmol)与中间体D6的非对映混合物(266mg，0.895mmol)、DIPEA(600μL，3.45mmol)和DMF(2mL)合并。随后向反应混合物中加入HATU(340mg，0.895mmol)，在40℃下搅拌5稀释。用水(10mL)稀释反应混合物，将其溶于二氯甲烷(10mL)。分离有机相，用二氯甲烷(10mL)萃取水层一次。用盐水冲洗合并的有机相，MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物粗品通过硅胶色谱法进行纯化，得到为1:1非对映混合物的7-1(280mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H52ClN4O7的[M+H]+分析计算值：687.4；实测值：687.3。
第3步。7-2的制备：在室温下将Pd(dppf)Cl2(29mg，0.0407mmol)加入至7-1(280mg，0.407mmol)、乙酰基三氟硼酸钾(55mg，0.733mmol)和三乙胺(91μL，0.651mmol)的2mL乙醇脱气混合物中。反应混合物在80℃于N2下加热一小时。冷却至室温后，用甲苯(10mL)稀释反应混合物，真空浓缩至溶剂体积很少，在甲苯(1mL)中重新稀释。将混合物直接上样至硅胶柱，通过硅胶色谱法进行纯化以得到为1:1非对映混合物的7-2，其不需完全浓缩至干即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C38H55N4O7的[M+H]+分析计算值：679.4；实测值：679.4。
第4步。7-3和7-4的制备：将非对映混合物7-2(276mg，0.407mmol)和Zhan 1B催化剂(32mg，0.0407mmol，Strem)溶解于80mL DCE，在N2下脱气25分钟。混合物加热至100℃，持续1小时。反应物随后冷却至室温，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱柱(0％至30％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为淡褐色残余物的单个非对映体7-3(20mg，早洗脱组分)和7-4(25mg，晚洗脱组分)。早洗脱组分：LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.4；实测值：651.3。晚洗脱组分：LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.4；实测值：651.3。
第5步。7-5的制备：向7-3(20mg，0.0307mmol)的乙酸乙酯和二氧六环1:1混合物溶液(2mL)中加入钯碳(10％w/w，25mg)。混合物在氢气气氛下搅拌30分钟，通过硅藻土塞过滤，用乙酸乙酯冲洗。减压浓缩滤液，得到为淡褐色薄膜的7-5(16mg)，无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C36H53N4O7的[M+H]+分析计算值：653.4；实测值：653.4。
第6步。7-6的制备：将中间体7-5(16mg，0.023mmol)溶于2M HCl二氧六环溶液(2mL)，通过微波反应器在80℃下加热1.5小时。真空浓缩反应混合物，得到为褐色残余物的7-6(15mg)，无需进一步纯化即可用于后续步骤。LCMS-ESI+(m/z)：C32H44N4O7的[M+H]+分析计算值：597.3；实测值：597.3。
第7步。实施例7的制备：向of 7-6(15mg，0.025mmol)和A10(11.5mg，0.0377mmol)的1mL DMF混合物中加入HATU(11.9mg，0.031mmol)和DIPEA(22μL，0.126mmol)。室温搅拌过夜后，将反应混合物倒入至水中，用1N HCl水溶液酸化至pH 1，用二氯甲烷(15mL)萃取三次。用水、盐水冲洗合并的有机相，MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物通过反相制备HPLC(5-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)随后通过硅胶色谱法进行纯化，得到为白色固体薄膜的实施例7(4.3mg)。分析HPLC保留时间：9.07min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.4；实测值：847.4。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.88(s，1H)，7.83(d，J＝9.1Hz，1H)，7.20(dd，J＝9.1Hz，2.8Hz，1H)，7.07(d，J＝2.7Hz，1H)，6.56(s，1H)，5.98(td，JH-F＝55.7，J＝6.7Hz，1H)，5.95(d，J＝9.6，1H)，5.32(d，J＝9.6Hz，1H)，4.45(dd，J＝13.0Hz，9.6Hz，2H)，4.32(d，J＝9.7Hz，1H)，4.13(dd，J＝15.5Hz，8.8Hz，1H)，3.93(s，3H)，2.99-2.84(m，1H)，2.82-2.68(m，1H)，2.62-2.47(m 1H)，2.16-2.02(m，1H)2.00-1.85(m，1H)1.84-1.69(m，1H)，1.70-1.15(m，11H)，1.52(s，3H)，1.50(s，3H)，1.20(t，J＝7.3Hz，3H)，1.14-0.77(m，5H)1.09(s，9H)，0.11(m，1H)。
实施例8.(1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-1a-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例8的制备方法与实施例7类似，以第5步中晚洗脱的7-4代替早洗脱的7-3。分离得到为白色固体的实施例7(2.9mg)。分析HPLC保留时间：9.09min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.4；实测值：847.4。
实施例9和10.(7S,10S,11S,12R)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-5,8-二氧-3aR-(三氟甲基)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺和(7S,10S,11S,12R)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-5,8-二氧-3aS-(三氟甲基)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备。
第1步。9-1的制备：在室温于氩气气氛下向中间体D8(322mg，0.85mmol)和1-2(316mg，0.78mmol)的MeCN溶液(3.9mL)中加入HATU(323mg，0.85mmol)和DIPEA(678μL，3.90mmol)。2小时后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的酰胺9-1(476mg，1:1非对映混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C38H53ClF3N4O7的[M+H]+分析计算值：769.4；实测值：769.5。
第2步。9-2的制备：向9-1(470mg，612μmol)、TEA(128μL，918μmol)和乙酰基三氟硼酸钾(123mg，918μmol)的EtOH溶液(3.06mL)中加入PdCl2(dppf)(50mg，61μmol)。反应混合物用氩气去氧气10分钟并加热至78℃。1小时后，反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为黄色油状物的乙烯基喹喔啉9-2(329mg，1:1非对映混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C40H56F3N4O7呃[M+H]+分析计算值：761.4；实测值：761.6。
第3步。9-3的制备：向9-2(329mg，485μmol)的DCE溶液(97mL)中加入Zhan1B催化剂(35mg，49μmol，Strem)，反应混合物用氩气去氧气10分钟。反应混合物，随后加热至100℃。30分钟后，反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为淡黄色油状物的大环9-3(301mg，7:4非对映混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C38H52F3N4O7的[M+H]+分析计算值：733.4；实测值：733.5。
第4步。9-4的制备：在室温于氩气气氛下向9-3(300mg，410μmol)的乙醇溶液(2.00mL)中加入Pd/C(10wt％Pd，43mg，41μmol)。用氢气代替反应的空气，反应混合物在室温下剧烈搅拌。30分钟后，用乙酸乙酯(10mL)稀释反应混合物，通过硅藻土垫过滤，以乙酸乙酯冲洗(3×5mL)。真空浓缩滤液，得到大环9-4(295mg，7:4非对映混合物)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C38H54F3N4O7的[M+H]+分析计算值：735.4；实测值：735.5。
第5步。9-5的制备：在室温于氩气气氛下向9-4(295mg，401μmol)的DCM溶液(2mL)中加入TMSOTf(72.6μL，401mmol)。1.5小时后，再次加入TMSOTf(362.9μL，2.00mmol)。1小时后，再次加入TMSOTf(362.9μL，2.00mmol)。2小时后，反应混合物中缓慢加入0.25N NaOH水溶液(预冷至0℃，3mL)。用1N HCl水溶液(5mL)稀释所得混合物，用DCM(3×5mL)萃取。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，浓缩以得到为棕褐色固体的羧酸9-5(353mg，7:4非对映混合物)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C34H45F3N4O7的[M+H]+分析计算值：679.3；实测值：679.5。
第6步。实施例9和实施例10的制备：在室温于氩气气氛下向酸9-5(150mg，220μmol)和中间体A10(101mg，330μmol)的MeCN溶液(1.1mL)中加入HATU(127mg，330μmol)和DIPEA(191μL，1.10mmol)。1小时后，真空浓缩反应混合物，和通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品。合并含有预期产物的组分，通过硅胶色谱法(0-50％丙酮/己烷梯度)重新纯化以得到第一个洗脱物。
为白色粉末的实施例9(40mg)和为白色粉末的第二个洗脱物实施例10(70mg)。第一个洗脱物实施例9：分析HPLC保留时间：9.42min。LCMS-ESI+(m/z)：C43H58F5N6O9S的[M+H]+分析计算值：929.4；实测值：929.5。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.83(s，1H)，7.92(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.0，2.6Hz，1H)，7.13(d，J＝2.6Hz，1H)，5.99(br s，1H)，5.96(td，JH- F55.5，J＝6.6Hz，1H)，5.70(d，J＝10.0Hz，1H)，4.63(d，J＝6.6Hz，1H)，4.38(d，J＝10.0Hz，1H)，4.22-4.04(m，2H)，3.96(s，3H)，3.12-2.89(m，1H)，2.71-2.51(m，2H)，2.17(s，3H)，2.15-1.82(m，4H)，1.83-1.34(m，8H)，1.36-0.98(m，12H)，1.26(s，9H)，0.92-0.79(m，4H)。第二个洗脱物实施例10：分析HPLC保留时间：9.55min。LCMS-ESI+(m/z)：C43H58F5N6O9S的[M+H]+分析计算值：929.4；实测值：929.5。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.61(s，1H)，7.91(d，J＝9.1Hz，1H)，7.23(dd，J＝9.0，3.0Hz，1H)，7.18(d，J＝2.7Hz，1H)，5.98-5.91(m，1H)，5.83(td，JH-F55.5，J＝6.6Hz，1H)，5.33(d，J＝9.8Hz，1H)，4.72-4.63(m，1H)，4.46-4.38(m，1H)，4.32(d，J＝10.0Hz，1H)，4.25-4.14(m，1H)，3.97(s，3H)，3.73(br d，J＝7.6Hz，1H)，3.23-3.07(m，1H)，2.86-2.37(m，2H)，2.14-1.79(m，2H)，1.78-1.38(m，8H)，1.51(s，3H)，1.35-1.08(m，8H)，1.25(s，9H)，1.05(br s，3H)，0.93-0.68(m，6H)。
实施例11和12.(7S,10S,11S,12R)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-5,8-二氧-3aR-(三氟甲基)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺和(7S,10S,11S,12R)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-5,8-二氧-3aS-(三氟甲基)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备
实施例11和实施例12的制备：在室温于氩气气氛下向酸9-5(150mg，220μmol)和中间体A9(96mg，330μmol)的MeCN溶液(1.1mL)中加入HATU(127mg，330μmol)和DIPEA(191μL，1.10mmol)。1小时后，真空浓缩反应混合物，通过(0-50％丙酮/己烷梯度)硅胶色谱法纯化残余物粗品。合并含有预期产物的组分，通过硅胶色谱法(0-50％丙酮/己烷梯度)重新纯化，得到为白色粉末的第一个洗脱物实施例11(29mg)和为白色粉末的第二个洗脱物实施例12(60.2mg)。第一个洗脱物实施例11：分析HPLC保留时间：9.44min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H56F5N6O9S的[M+H]+分析计算值：915.4；实测值：915.6。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.17(brs，1H)，7.83(d，J＝9.1Hz，1H)，7.21(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.17-7.07(m，1H)，5.99(br s，1H)，5.97(td，JH-F55.5，J＝6.6Hz，1H)，5.82(d，J＝9.8Hz，1H)，4.55(d，J＝7.2Hz，1H)，4.39(d，J＝10.0Hz，1H)，4.20-4.03(m，2H)，3.95(s，J＝5.9Hz，3H)，2.97-2.82(m，2H)，2.79-2.49(m，3H)，2.24-1.81(m，8H)，1.80-1.11(m，12H)，1.10-0.98(m，4H)，1.07(s，9H)，0.95-0.81(m，3H)。第二个洗脱物实施例12：分析HPLC保留时间：9.48min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H56F5N6O9S的[M+H]+分析计算值：915.4；实测值：915.6。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.07(s，1H)，7.93(d，J＝9.6Hz，1H)，7.28-7.20(m，1H)，7.16(s，1H)，6.17-5.68(m，3H)，4.67-4.55(m，1H)，4.37-4.23(m，2H)，4.17-4.05(m，1H)，3.97(s，3H)，3.75-3.66(m，1H)，3.22-3.04(m，1H)，3.02-2.31(m，6H)，2.30-1.83(m，10H)，1.85-1.13(m，13H)，1.06(s，9H)，0.95-0.79(m，1H)。
实施例13.(1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-12-乙基-17-甲氧基-6,9-二氧-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-十六氢-1H,11H-1,4:10,13-二甲烷喹喔啉[2,3-k][1,10,3,6]苯并二氧杂二氮杂十九环-11-甲酰胺的制备。
第1步。非对映体混合物13-1和13-2的制备：向1-2(354mg，0.87mmol)、中间体混合物D9和D10(323mg，0.96mmol)和BEP(263mg，0.96mmol；TCI America)的溶液中加入DIPEA(0.45mL，2.61mmol)，反应物在50℃下搅拌2小时。用NaHCO3饱和水溶液淬灭反应，用EtOAc萃取，用盐水冲洗有机相，硫酸镁干燥，浓缩。粗产品通过硅胶色谱法(0-30％EtOAc/己烷)进行纯化，得到不可分离的非对映体混合物13-1和13-2(338mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C39H56ClN4O7的[M+H]+分析计算值：727.38；实测值：727.46。
第2步。非对映体混合物13-3和13-4的制备：向13-1和13-2(338mg，0.46mmol)、TEA(0.10mL，0.69mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(93mg，0.69mmol)的EtOH(30mL)溶液混合物中加入PdCl2(dppf)(38mg，0.046mmol，Strem Chemicals)。反应物用N2去氧10分钟，加热至80℃，持续1小时。用NaHCO3饱和水溶液淬灭反应，用EtOAc萃取，随后用盐水冲洗，硫酸镁干燥，浓缩。残余物使用硅胶色谱法进行纯化，得到不可分离的非对映体混合物13-3和13-4(285mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C41H59N4O7的[M+H]+分析计算值：719.44；实测值：719.70。
第3和4步。13-5的制备：向非对映混合物13-3和13-4(285mg，0.40mmol)的DCE溶液(100mL)中加入Zhan 1B催化剂(30mg，0.04mmol，Strem)，反应物用N2去氧30分钟。反应物加热至100℃，持续45分钟，冷却至室温，浓缩。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化，得到溶于EtOH(6mL)并用Pd/C(10％，120mg)处理的大环烯烃产品(125mg；LCMS-ESI+(m/z)：C39H55N4O7的[M+H]+分析计算值：691.41；实测值：691.58)。用氢气代替空气，在室温下搅拌1.5小时。反应物通过硅藻土过滤，用EtOAc冲洗，浓缩以得到为油状物的13-5(125mg)，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C39H57N4O7的[M+H]+分析计算值：693.42；实测值：693.46。
第5步。13-6的制备：向溶液13-5(50mg，0.072mmol)in DCM(4mL)中加入TFA(1mL)在室温下搅拌6h。反应物用稀释EtOAc，用冲洗H2O，aqueous pH 7buffer，干燥硫酸镁，浓缩to give 13-6as a residue，无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+分析计算值C35H49N4O7：637.36；实测值：637.40。
第6步。实施例13的制备：向13-6(46mg，0.072mmol)、中间体A9(28mg，0.11mmol)、TBTU(34mg，0.10mmol)和DMAP(13mg，0.11mmol)的DCM溶液(5mL)中加入DIPEA(0.038mL，0.22mmol)，反应物在室温下搅拌16小时。用水淬灭反应，用EtOAc稀释，用NaHCO3饱和水溶液、盐水冲洗，硫酸镁干燥，浓缩。粗产品通过反相HPLC(Gemini，30-85％MeCN/H2O+0.1％TFA)进行纯化，冻干以得到为TFA盐的实施例13(14.5mg)。分析HPLC保留时间：9.39min。LCMS-ESI+(m/z)：C43H59F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：873.40；实测值：873.42。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.28(s，1H)，7.82(d，J＝9.2Hz，1H)，7.26(dd，J＝6.4，2.8Hz，1H)，7.19(d，J＝2.8Hz，1H)，6.04-5.74(m，2H)，5.50(s，1H)，4.55(d，J＝7.6Hz，1H)，4.47(s，1H)，4.26-4.16(m，2H)，3.94(s，3H)，3.03-2.95(m，2H)，2.78-2.66(m，2H)，2.17(br，2H)，2.05(s，3H)，1.90-1.85(m，1H)，1.76-1.74(m，2H)，1.61-1.21(m，20H)，1.15-1.11(m，2H)，1.08(s，9H)，0.93-0.90(m，1H)。
实施例14.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-环戊基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。14-1的制备：在室温下向1-2(223mg，0.50mmol)和中间体D2(221mg，0.75mmol)的乙腈溶液(5mL)中加入HATU(306mg，0.80mmol)和DIPEA(0.43mL，2.5mmol)。19小时后，减压去除溶剂，所得残余物用乙酸乙酯(15mL)稀释。用1M HCl水溶液(10mL)冲洗所得溶液。用乙酸乙酯(2×10mL)萃取水层，用盐水(15mL)冲洗合并的有机层，无水硫酸镁干燥，浓缩。所得残余物粗品通过硅胶色谱柱(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)进行纯化以得到为无色油状物的14-1(173mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H50ClN4O7的[M+H]+分析计算值：685.33；实测值：685.49。
第2步。14-2的制备：按顺序向14-1(173mg，0.25mmol)的EtOH溶液(3mL)中加入乙酰基三氟硼酸钾(51mg，0.38mmol)、PdCl2(dppf)(21mg，0.025mmol)和TEA(0.053mL，0.38mmol)，将所得混合物加热至80℃。1小时后，再次加入乙酰基三氟硼酸钾(17mg，0.12mmol)中加入，继续在80℃下搅拌。2.5小时后，再次加入乙酰基三氟硼酸钾(8mg，0.06mmol)，继续在80℃下搅拌反应物0分钟。将反应物冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL)稀释，用盐水(20mL)冲洗。用乙酸乙酯(10mL)萃取水层，无水硫酸镁干燥合并的有机层，浓缩以得到为残余物的14-2，其在下一步中无需纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C38H53N4O7的[M+H]+分析计算值：677.38；实测值：677.50。
第3步。14-3的制备：向14-2的去氧DCE溶液(0.006M)中加入Zhan 1B催化剂(18mg，0.025mmol，Strem)，反应物用Ar继续去氧10分钟。将反应物加热至100℃。1.5小时后，加入Zhan 1B催化剂(9mg，0.012mmol)，继续搅拌反应物30分钟。将反应混合物冷却至室温，浓缩至4-5mL体积。通过硅胶色谱法直接对其进行纯化，得到为褐色油状物的14-3(70mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H49N4O7的[M+H]+分析计算值：649.35；实测值：649.50。
第4步。14-4的制备：于氩气下向14-3(70mg，0.11mmol)的EtOH溶液(5mL)中加入Pd/C(10wt％Pd，12mg)。用氢气代替空气，反应物在室温下搅拌16小时。通过硅藻土过滤反应物，用EtOH冲洗，浓缩以得到为褐色油状物的14-4，无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.37；实测值：651.60。
第5步。14-5的制备：向14-4(70mg，0.11mmol)的DCM溶液(3mL)中加入TMSOTf(0.103mL，0.53mmol)，在室温下搅拌反应物1小时。浓缩反应物以得到14-5，其无需纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C32H43N4O7的[M+H]+分析计算值：595.31；实测值：595.43。
第6步。实施例14的制备：在室温下向14-5(36.8mg，0.06mmol)和中间体A10(28mg，0.09mmol)的乙腈溶液(1.5mL)中加入HATU(38mg，0.1mmol)和DIPEA(0.065mL，0.37mmol)。20分钟后，通过反相HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，15-100％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化反应混合物，冻干以得到为黄色固体的实施例14的TFA盐(24mg)。分析HPLC保留时间：9.03min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：845.4；实测值：845.6。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.31(s，1H)，7.80(d，J＝9.1Hz，1H)，7.23(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.16(d，J＝2.7Hz，1H)，6.03-5.66(m，2H)，4.53(dd，J＝13.2，9.6Hz，2H)，4.18(dd，J＝17.2，7.1Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.68(dt，J＝6.8，2.8Hz，1H)，3.13(quin，J＝1.7Hz，1H)，3.02-2.92(m，1H)，2.85-2.78(m，1H)，2.62-2.55(m，1H)，2.30-2.17(m，1H)，2.02(s，2H)，1.97-1.86(m，3H)，1.86-1.79(m，1H)，1.80-1.41(m，17H)，1.40-1.28(m，3H)，1.22(t，J＝7.4Hz，3H)，1.03-0.87(m，4H)，0.76-0.68(m，1H)，0.51-0.44(m，1H)。
实施例15.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-环戊基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。实施例15的制备。在室温下向14-5(27mg，0.045mmol)和中间体A9(20mg，0.067mmol)的乙腈溶液(1.3mL)中加入HATU(27mg，0.072mmol)和DIPEA(0.047mL，0.27mmol)。20分钟后，反应混合物通过反相HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，15-100％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接进行纯化，冻干以得到为黄色固体的实施例15的TFA盐(18.6mg)。分析HPLC保留时间：8.89min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H53F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：831.4；实测值：831.6。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.32(s，1H)，7.79(d，J＝9.1Hz，1H)，7.23(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.16(d，J＝2.8Hz，1H)，6.03-5.66(m，2H)，4.53(t，J＝10.0Hz，2H)，4.22-4.14(m，2H)，3.92(s，3H)，3.67(dt，J＝6.5，2.9Hz，1H)，3.13(quin，1.6Hz，1H)，3.04-2.92(m，3H)，2.85-2.77(m，1H)，2.63-2.55(m，1H)，2.26-2.19(m，1H)，2.05-2.02(m，2H)，1.99-1.86(m，3H)，1.84-1.42(m，12H)，1.41-1.25(m，4H)，1.22(t，J＝7.2Hz，3H)，1.15-1.03(m，3H)，1.01-0.90(m，2H)，0.76-0.68(m，1H)，0.49-0.45(m，1H)。
实施例16.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-环己基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。16-1的制备：在室温下向中间体D3(190mg，0.60mmol)和1-2(264mg，0.60mmol)的DMF溶液(5mL)中加入DIPEA(0.31mL，1.8mmol)和COMU(257mg，0.60mmol)。2小时后，减压去除溶剂，所得残余物用乙酸乙酯(15mL)稀释。用10％柠檬酸水溶液冲洗所得溶液。用乙酸乙酯(2×10mL)萃取水层，用盐水(15mL)冲洗合并的有机层，无水硫酸镁干燥，浓缩。通过硅胶色谱法纯化所得残余物粗品，得到为无色油状物的16-1(260mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H51ClN4O7的[M+H]+分析计算值：700.28；实测值：700.03。
第2步。16-2的制备：按顺序向16-1(260mg，0.37mmol)的EtOH溶液(5mL)中加入乙酰基三氟硼酸钾(75mg，0.56mmol)、PdCl2(dppf)(30mg，0.037mmol)混合TEA(0.079mL，0.56mmol)。反应物用Ar脱氧12分钟，加热至78℃，持续2小时。将反应物冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL)稀释，用盐水(20mL)冲洗。用乙酸乙酯(10mL)萃取水层，无水硫酸镁干燥合并的有机层，浓缩以得到残余物粗品。通过硅胶色谱法纯化所得残余物粗品，得到为黄色油状物的16-2(250mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C39H54N4O7的[M+H]+分析计算值：691.87；实测值：691.54。
第3步。16-3的制备：向16-2(250mg，0.36mmol)的去氧DCE溶液(0.005M)中加入Zhan 1B催化剂(26mg，0.036mmol，Strem)，反应物用Ar继续去氧10分钟。将反应物加热至70℃，持续2小时。反应混合物冷却至室温，浓缩。通过硅胶色谱法直接纯化所得残余物，得到为黄色油状物的16-3(250mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H50N4O7的[M+H]+分析计算值：663.82；实测值：663.42。
第4步。16-4的制备：于氩气下向16-3(200mg，0.3mmol)的EtOAc溶液(10mL)中加入Pd/C(10wt％Pd，100mg)。用氢气代替空气，反应物在室温下搅拌1.5小时。通过硅藻土过滤反应物，用EtOH冲洗，浓缩以得到为油状物的16-4(180mg)，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C37H52N4O7的[M+H]+分析计算值：665.83；实测值：665.36。
第5步。16-5的制备：向16-4(165mg，0.25mmol)的DCM溶液(5mL)中加入TFA(2mL)，反应物在室温下搅拌4小时。减压去除溶剂，反应物用乙酸乙酯(15mL)稀释。用NaHCO3饱和水溶液冲洗所得溶液，浓缩以得到16-5，无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C33H44N4O7的[M+H]+分析计算值：609.73；实测值：609.47。
第6步。实施例16的制备：向16-5(70mg，0.12mmol)和中间体A10(65mg，0.21mmol)的DCM溶液(1mL)中加入DIPEA(0.08mL，0.46mmol)和HATU(88mg，0.23mmol)。反应物在室温下搅拌3小时。反应物用EtOAc稀释，用NH4Cl水溶液和盐水冲洗。粗产品通过反相HPLC(Gemini色谱柱，58-98％MeCN/H2O+0.1％TFA)进行纯化，冻干以得到实施例16的TFA盐(40mg)。分析HPLC保留时间：9.21min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H56F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：859.99；实测值：859.60。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.28(s，1H)，7.76(d，J＝9.2Hz，1H)，7.18(d，J＝9.2Hz，1H)，7.10(s，1H)，5.97-5.82(m，2H)，4.88(m，2H)，4.51-4.46(m，3H)，4.19-4.11(m，3H)，3.90(s，3H)，3.70-3.29(m，6H)，2.97-2.52(m，3H)，2.06-1.41(m，20H)，1.39-1.17(m，4H)，1.09-0.89(m，4H)，0.65(m，1H)，0.46-0.44(m，1H)。
实施例17.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1和2步。17-2的制备：中间体B4(273mg，0.865mmol)、中间体E3(234mg，0.865mmol)和碳酸铯(310mg，0.952mmol)的MeCN(2.5mL)混合物在85℃下加热36小时。在另一个工艺中，使用DMF作为溶剂。加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取混合物。硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩，得到17-1，其无需进一步纯化即可随后使用或在色谱法纯化后使用。用35当量的4N HCl二氧六环溶液在室温下处理残余物2.5小时。加入乙醚后，17-2的盐酸盐沉淀。通过真空过滤收集该盐并减压干燥(375mg)。在另一个工艺中，在MSA的tBuOAc和DCM溶液存在下进行去保护。LCMS-ESI+(m/z)：C23H30F2N3O4的[M+H]+分析计算值：450.2；实测值：450.1。
第3步。17-3的制备：17-2(370mg，0.761mmol)、中间体D11(205mg，0.761mmol)、HATU(347mg，0.914mmol)和DIPEA(0.795mL，4.57mmol)的DMF(3mL)混合物在室温下搅拌过夜。用100mL水稀释此混合物，用二氯甲烷萃取。硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。粗产品混合物通过硅胶色谱法(EtOAc己烷溶液：30％)进行纯化以得到17-3(236mg)。在另一个工艺中，在NMM的DMF溶液存在下将17-2和中间体D11与EDC和HOBT混合以得到17-3。LCMS-ESI+(m/z)：C37H51F2N4O7的[M+H]+分析计算值：701.4；实测值：701.3。
第4步。17-4的制备：将17-3(236mg，0.34mmol)的DCE溶液(67mL)用氩气去氧气40分钟。加入Zhan 1B催化剂(25mg，0.034mmol，Strem)中，在一个100℃油浴中加热反应物40分钟。减压去除溶剂，通过硅胶色谱法(EtOAc己烷溶液：5％至65％)纯化残余物以得到17-4(229mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C35H46FN4O7的[M-F]+分析计算值：653.3；实测值：653.2。
第5步。17-5的制备：在1atm氢气下于220mg 10％wt Pd/C(润湿)上使17-4(229mg，0.34mmol)的50mL乙醇溶液氢化2.5小时。通过硅藻土过滤，减压浓缩，得到残余物粗品of17-5(184mg)。在另一个工艺中，17-4在氢气中于Rh存在下进行氢化。LCMS-ESI+(m/z)：C35H49F2N4O7的[M+H]+分析计算值：675.4；实测值：675.3。
第6步。17-6的制备：用1mL TFA处理酯17-5(184mg，0.27mmol)的2mL DCM溶液，在室温下搅拌3小时。浓缩反应混合物，在水和乙酸乙酯之间分配。用水冲洗有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到17-6(153mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C31H41F2N4O7的[M+H]+分析计算值：619.3；实测值：619.2。
第7步。实施例17的制备：将羧酸17-6(153mg，0.247mmol)、中间体A10(90mg，0.297mmol)、HATU(113mg，0.297mmol)、DMAP(45mg，0.37mmol)和DIPEA(0.215mL，1.24mmol)的DMF(1.5mL)混合物在室温下搅拌40分钟。用2N HCl水溶液(2mL)稀释混合物，用二氯甲烷萃取。硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。粗产品混合物通过硅胶色谱法(EtOAc己烷溶液：30％-95％)进行纯化，得到实施例17(95mg)。分析HPLC保留时间：8.79min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H53F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：869.3；实测值：869.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.948(br s，1H)，7.99(d，J＝9.2Hz，1H)，7.29(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.09(d，J＝2.8Hz，1H)，6.57(br s，1H)，5.97(td，JH-F＝52Hz，J＝6.8Hz，1H)，5.92(d，J＝3.6Hz，1H)，5.322(d，J＝9.6Hz，1H)，4.42(ap d，J＝7.2Hz，1H)，4.40(ap s，1H)，4.34(ap d，J＝10Hz，1H)，4.08(dd，J＝12.0，3.6Hz，1H)，3.99-3.94(m，1H)，3.96(s，3H)，3.67(m，1H)，2.52(m，2H)，2.06(m，1H)，1.93(m，2H)，1.77(m，2H)，1.63(m，3H)，1.50(s，3H)，1.56-1.42(m，4H)，1.25(m，1H)，1.19(t，J＝7.2Hz，3H)，1.09(s，9H)，1.10-0.93(m，2H)，0.85(m，2H)，0.69(m，1H)，0.49(m，1H)。
实施例18.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。18-1的制备：在Ar下将中间体B1(1.94g，6.44mmol)溶于MeCN(30mL)。加入中间体E1(2.02g，7.4mmol)和Cs2CO3(7.5mmol)，在室温下搅拌所得混合物8小时。再次加入中间体E1(200mg，0.73mmol)和Cs2CO3(245mg，0.75mmol)，继续搅拌反应混合物15小时。通过硅藻土以EtOAc过滤反应混合物，浓缩。将所得残余物粗品溶于CH2Cl2，浓缩至12g硅胶上，通过硅胶色谱法(5％至20％EtOAc己烷溶液)进行纯化，得到为白色泡沫的18-1(2.63g)。LCMS-ESI+(m/z)：C24H33ClN3O6的[M+H]+分析计算值：494.2；实测值：494.1。
第2步。18-2的制备：将取代的喹喔啉18-1(905mg，1.84mmol)溶于乙酸叔丁酯(7mL)和CH2Cl2(1.75mL)。以45秒时间滴加MeSO3H(600μL，9.2mmol)，所得黄色溶液在室温下搅拌50分钟。再次滴加MeSO3H(100μL，1.5mmol)，反应物搅拌继续搅拌10分钟。将反应混合物转移至搅拌的EtOAc(20mL)和NaHCO3饱和水溶液(30mL)混合物中。分离两相，用EtOAc(20mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到为无色残余物的胺8-2(680mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C19H25ClN3O4的[M+H]+分析计算值：394.2；实测值：394.2。
第3步。18-3的制备：将胺18-2(680mg，1.73mmol)和中间体D1(600mg，2.1mmol)溶解于DMF(10mL)。加入DIPEA(925μL，5.30mmol)和HATU(880mg，2.3mmol)。反应物在室温下110分钟，用NaHCO3饱和水溶液(30mL)和EtOAc(30mL)稀释。分离两相，用半饱和盐水(2x40mL)冲洗有机相，无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩为残余物粗品。通过硅胶色谱法(10％至20％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到为无色残余物的18-3(703mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C34H48ClN4O7的[M+H]+分析计算值：659.3；实测值：659.4。
第4步。18-4的制备：用氩气对18-3(703mg，1.07mmol)、PdCl2(dppf)·CH2Cl2(48mg，0.059mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(290mg，2.16mmol)在EtOH(11mL)中搅拌的均匀混合物鼓泡15分钟。加入三乙胺(320μL，2.3mmol)，将混合物加热至75℃，持续70分钟。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(40mL)和半饱和盐水(30mL)稀释。分离两相，Na2SO4干燥有机相，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法(10％至20％至30％EtOAc己烷溶液)进行纯化，得到为黄色残余物的18-4(490mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.4；实测值：651.3。
第5步。18-5的制备：将18-4(490mg，0.179mmol)溶于DCE(250mL)，用Ar向此溶液鼓泡15分钟。加入Zhan 1B催化剂(66mg，0.090mmol，Strem)的DCE溶液(5mL)，所得溶液在85℃于Ar下搅拌105分钟。反应混合物冷却至室温，并吸附在硅胶(7.5g)上。通过硅胶色谱法(10％至30％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到为无定形残余物的18-5(290mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C34H47N4O7的[M+H]+分析计算值：623.3；实测值：623.3。
第6步：18-6的制备：将烯烃18-5(290mg，0.072mmol)溶于EtOAc(5.5mL)和EtOH(5.5mL)，用Ar吹扫反应容器。一次性加入Pd/C(10wt％Pd，92mg)，用H2吹扫反应容器两次。反应物在室温于1atm H2下搅拌1.5小时，通过硅藻土垫过滤，浓缩以得到为18-6的残余物粗品，其无需进一步纯化即可使用(LCMS-ESI+(m/z)：C34H49N4O7的[M+H]+分析计算值：625.4；实测值：625.0。
第7步。18-7的制备：在Ar下将18-6(0.466mmol)溶于CH2Cl2(4.3mL)。以30秒时间滴加TMSOTf(210μL，1.16mmol)。反应物搅拌65分钟，再次加入部分TMSOTf(50μL，0.28mmol)。反应物继续搅拌100分钟，继续加入部分TMSOTf(100μL，0.55mmol)。反应物继续搅拌105分钟，真空浓缩。将所得残余物粗品溶于CH2Cl2(20mL)，加入0.2M NaOH水溶液(10mL)。混合物搅拌5分钟，用1M HCl水溶液(20mL)酸化。分离两相，用CH2Cl2(2x20mL)萃取水相。MgSO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到为褐色固体的18-7(273mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C30H41N4O7的[M+H]+分析计算值：569.3；实测值：568.9。
第8步。实施例18的制备：向酸18-7(28mg，0.049mmol)和中间体A10(26.5mg，0.087mmol)的MeCN(1.3mL)混悬液中加入DIPEA(55μL，0.31mmol)。向所得溶液中加入HATU(30.5mg，0.080mmol)。反应物在室温下搅拌1小时，再次加入部分中间体A10(3mg，0.01mmol)。继续15分钟后，用EtOAc(30mL)和1M HCl水溶液(20mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。通过硅胶色谱法(10％至40％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，得到由水和MeCN冻干而来的无定形残余物，获得为白色无定形固体的实施例18(26.4mg)。分析HPLC保留时间：8.42min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H53F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：819.4；实测值：819.1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.68(s，1H)，7.82(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.08(d，J＝2.6Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.14-5.70(m，1H)，5.65(d，J＝9.9Hz，1H)，5.56-5.50(m，1H)，4.53-4.40(m，3H)，4.12(dd，J＝11.9，4.3Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.81-3.74(m，1H)，3.06-2.64(m，4H)，2.10-1.35(m，13H)，1.13(d，J＝7.5Hz，3H)，1.09(s，9H)，1.04-0.65(m，6H)，0.52-0.41(m，1H)。
实施例19.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
第1步。实施例19的制备：向酸18-7(8.8mg，0.015mmol)和中间体A9(7.4mg，0.025mmol)的MeCN(0.5mL)混悬液中加入DIPEA(14μL，0.08mmol)。向所得溶液中加入HATU(9.1mg，0.024mmol)。反应物在室温下搅拌1小时，再次加入部分中间体A9(5mg，0.02mmol)和HATU(5mg，0.01mmol)。继续1.5小时后，用EtOAc(30mL)/0.2M HCl水溶液(10mL)和盐水(10mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。通过硅胶色谱法(10％至40％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，自水和MeCN中冻干得到残余物，获得为白色无定形固体的实施例19(8.5mg)。分析HPLC保留时间：8.69min。LCMS-ESI+(m/z)：C38H51F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：805.3；实测值：805.2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.12(s，1H)，7.83(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.09(d，J＝2.7Hz，1H)，6.77(s，1H)，6.25-5.76(m，1H)，5.57(d，J＝3.7Hz，1H)，5.51(d，J＝9.9Hz，1H)，4.49-4.37(m，3H)，4.13(dd，J＝12.2，4.3Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.79-3.72(m，1H)，3.01-2.69(m，4H)，2.13-2.06(m，1H)，2.01-1.22(m，9H)，1.14(d，J＝7.2Hz，3H)，1.09(s，9H)，1.06-0.82(m，6H)，0.76-0.62(m，1H)，0.54-0.41(m，1H)。
实施例20.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-{(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-乙基环丙基}-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
第1步。实施例20的制备：向酸18-7(10mg，0.018mmol)和中间体A3(6.3mg，0.023mmol)的MeCN(0.5mL)混悬液中加入DIPEA(15μL，0.086mmol)。向所得溶液中加入HATU(9.0mg，0.024mmol)。反应物在室温下搅拌2.5小时，再次加入部分中间体A3(6.5mg，0.024mmol)。继续45分钟后，用EtOAc(2mL)和1M HCl水溶液(1.5mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(4x1.5mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。通过硅胶色谱法(20％至25％至30％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，自水和MeCN中冻干得到残余物，获得为白色无定形固体的实施例20(8.0mg)。分析HPLC保留时间：8.40min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H55N6O9S的[M+H]+分析计算值：783.4；实测值：783.2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.98(s，1H)，7.83(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.09(d，J＝2.7Hz，1H)，6.42(s，1H)，5.57(d，J＝3.8Hz，1H)，5.36(d，J＝9.9Hz，1H)，4.48-4.34(m，3H)，4.11(dd，J＝11.8，4.1Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.79-3.72(m，1H)，2.98-2.68(m，4H)，1.95-0.80(m，33H)，0.76-0.61(m，1H)，0.53-0.41(m，1H)。
实施例21.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-乙基-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
第1步。实施例21的制备：向酸18-7(94.9mg，0.167mmol)和中间体A4(74.5mg，0.263mmol)的MeCN(2.5mL)混悬液中加入DIPEA(180μL，1.0mmol)。向所得溶液中加入HATU(9.0mg，0.024mmol)。反应物在室温下搅拌110分钟，再次加入部分中间体A4(31mg，0.11mmol)和DIPEA(50μL，0.29mmol)。继续40分钟后，用EtOAc(30mL)、0.2M HCl水溶液(20mL)和盐水(10mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(20mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。通过硅胶色谱法(10％至40％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，自水和MeCN中冻干得到残余物，获得为白色无定形固体的实施例21(102.1mg)。分析HPLC保留时间：8.83min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H57N6O9S的[M+H]+分析计算值：797.4；实测值：797.5。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.76(s，1H)，7.80(d，J＝9.1Hz，1H)，7.17(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.07(d，J＝2.7Hz，1H)，6.92(s，1H)，5.58-5.42(m，2H)，4.48-4.36(m，3H)，4.09(dd，J＝11.8，4.2Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.79-3.74(m，1H)，2.97-2.66(m，4H)，1.80-0.88(m，33H)，0.84-0.77(m，1H)，0.77-0.61(m，2H)，0.52-0.40(m，1H)。
实施例22.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2S)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(2-氟乙基)环丙基]-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。实施例22的制备：向酸18-7(30.1mg，0.0529mmol)和中间体A5(35mg，0.12mmol)的MeCN(0.5mL)混悬液中加入DIPEA(85μL，0.49mmol)。向所得溶液中加入HATU(34.5mg，0.0907mmol)。反应物在室温下搅拌90分钟，用EtOAc(30mL)、0.2M HCl水溶液(20mL)和盐水(10mL)稀释。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品，将其溶于CH2Cl2并吸附至2g硅胶上。通过硅胶色谱法(15％至55％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，自水和MeCN中冻干得到残余物，获得为白色无定形固体的实施例22(35.5mg)。分析HPLC保留时间：8.54min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H54FN6O9S的[M+H]+分析计算值：801.4；实测值：801.3。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.95(s，1H)，7.82(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.08(d，J＝2.7Hz，1H)，6.68(s，1H)，5.56(d，J＝3.9Hz，1H)，5.43(d，J＝9.9Hz，1H)，4.57-4.29(m，5H)，4.12(dd，J＝11.8，4.1Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.78-3.71(m，1H)，2.97-2.67(m，4H)，2.12-1.25(m，14H)，1.15(d，J＝7.4Hz，3H)，1.10(s，9H)，1.06-0.89(m，4H)，0.76-0.62(m，1H)，0.53-0.42(m，1H)。
实施例23.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2S)-2-(2-氟乙基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。实施例23的制备：向酸18-7(30.5mg，0.0536mmol)和中间体A6(24.8mg，0.0824mmol)的MeCN(0.5mL)混悬液中加入DIPEA(60μL，0.34mmol)。向所得溶液中加入HATU(32.3mg，0.0850mmol)。反应物在室温下搅拌75分钟，再次加入部分中间体A6(9mg，0.03mmol)。继续75分钟后，用EtOAc稀释(30mL)、0.2M HCl水溶液(20mL)和盐水(10mL)反应物。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。合并的有机相，Na2SO4干燥，过滤，浓缩以得到残余物粗品，将其溶于CH2Cl2并吸附至2g硅胶上。通过硅胶色谱法(15％至55％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，自水和MeCN中冻干得到残余物，获得为白色无定形固体的实施例23(37.1mg)。分析HPLC保留时间：8.64min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H56FN6O9S的[M+H]+分析计算值：815.4；实测值：815.6。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.63(s，1H)，7.83(d，J＝9.1Hz，1H)，7.20(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.10(d，J＝2.7Hz，1H)，6.75(s，1H)，5.56(d，J＝3.9Hz，1H)，5.50(d，J＝10.0Hz，1H)，4.56-4.34(m，5H)，4.13(dd，J＝11.8，4.2Hz，1H)，3.95(s，3H)，3.82-3.75(m，1H)，2.98-2.70(m，4H)，2.07-2.00(m，1H)，2.00-1.93(m，1H)，1.88-1.44(m，12H)，1.32-1.26(m，1H)，1.17(d，J＝7.4Hz，3H)，1.12(d，J＝10.6Hz，9H)，1.07-0.83(m，4H)，0.81-0.65(m，2H)，0.52-0.44(m，1H)。
实施例24.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2S)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(2,2-二氟乙基)环丙基]-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。实施例24的制备：向酸18-7(30.2mg，0.0531mmol)好中间体A7(25.9mg，0.0850mmol)的MeCN(0.5mL)混悬液中加入DIPEA(60μL，0.34mmol)。向所得溶液中加入HATU(32mg，0.084mmol)。反应物在室温下搅拌75分钟，再次加入部分中间体A7(3.0mg，0.0098mmol)。继续30分钟后，用EtOAc(30mL)、0.2M HCl水溶液(20mL)和盐水(10mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品，将其溶于CH2Cl2并吸附至2g硅胶上。通过硅胶色谱法(15％至55％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，自水和MeCN中冻干得到残余物，获得为白色无定形固体的实施例24(35.5mg)。分析HPLC保留时间：8.62min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H53F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：819.4；实测值：819.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.99(s，1H)，7.82(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.08(d，J＝2.7Hz，1H)，6.69(s，1H)，5.99-5.64(m，1H)，5.56(d，J＝3.9Hz，1H)，5.40(d，J＝10.0Hz，1H)，4.47-4.39(m，3H)，4.14-4.08(m，1H)，3.93(s，3H)，3.78-3.72(m，1H)，2.96-2.67(m，4H)，2.29-2.16(m，2H)，1.83-1.24(m，12H)，1.15(d，J＝7.4Hz，3H)，1.09(s，9H)，1.05-0.82(m，4H)，0.74-0.63(m，1H)，0.53-0.42(m，1H)。
实施例25.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2S)-2-(2,2-二氟乙基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。实施例25的制备：向酸18-7(30.3mg，0.0532mmol)和中间体A8(28.3mg，0.0887mmol)的MeCN(0.5mL)混悬液中加入DIPEA(60μL，0.34mmol)。向所得溶液中加入HATU(32.4mg，0.0852mmol)。反应物在室温下搅拌2.5小时，用EtOAc(30mL)、0.2M HCl水溶液(20mL)和盐水(10mL)稀释。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品，将其溶于CH2Cl2并吸附至2g硅胶上。通过硅胶色谱法(15％至55％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，自水和MeCN中冻干得到残余物，获得为白色无定形固体的实施例25(33.9mg)。分析HPLC保留时间：8.66min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：833.4；实测值：833.4。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.62(s，1H)，7.82(d，J＝9.1Hz，1H)，7.18(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.08(d，J＝2.7Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.04-5.66(m，1H)，5.54(d，J＝4.0Hz，1H)，5.47(d，J＝10.0Hz，1H)，4.50-4.38(m，3H)，4.11(dd，J＝11.8，4.2Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.82-3.71(m，1H)，2.98-2.68(m，4H)，2.27-2.11(m，2H)，1.96-1.41(m，12H)，1.32(dd，J＝9.6，5.4Hz，1H)，1.15(d，J＝7.4Hz，3H)，1.10(s，9H)，1.05-0.64(m，6H)，0.51-0.42(m，1H)。
实施例26.(1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-17-甲氧基-12-甲基-6,9-二氧-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-十六氢-1H,11H-1,4:10,13-二甲烷喹喔啉[2,3-k][1,10,3,6]苯并二氧杂二氮杂十九环-11-甲酰胺的制备。
第1步。26-2的制备：向26-1(311mg，0.710mmol；与实施例18中18-1的制备类似，以中间体B2代替第1步中的中间体B1)的二氧六环溶液(1.8mL)中加入4M HCl二氧六环溶液(1.8mL，7.2mmol)。反应物在室温下搅拌15.5小时，减压浓缩，得到为白色无定形固体的26-2，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C16H19ClN3O4的[M+H]+分析计算值：352.1；实测值：352.2。
第2和3步。非对映混合物26-3和26-4的制备：将胺盐酸盐26-2(0.710mmol)与中间体混合物D9和D10的1:1混合物(266mg，0.788mmol)和DIPEA(600μL，3.4mmol)在DMF(4.5mL)中一起溶解。一次性加入HATU(360mg，0.95mmol)。反应物搅拌在室温下1.75小时，用NaHCO3饱和水溶液(20mL)、水(10mL)和EtOAc(30mL)稀释。分离两相，用水(30mL)和盐水(5mL)混合物冲洗有机相两次。无水Na2SO4干燥有机相，过滤并浓缩为残余物粗品，通过硅胶色谱法(10％至30％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到无色残余物(380mg；LCMS-ESI+(m/z)：C35H48ClN4O7的[M+H]+分析计算值：671.3；实测值：671.6)。将此残余物、PdCl2(dppf)·CH2Cl2(35mg，0.043mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(156mg，1.16mmol)在EtOH(7mL)中搅拌的均匀混合物用氩气鼓泡几分钟。加入三乙胺(170μL，1.2mmol)，混合物加热至70℃，持续55分钟。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(40mL)稀释，用水(30mL)冲洗。无水Na2SO4干燥有机相，过滤并浓缩，得到残余物，将其通过硅胶色谱法(15％至30％EtOAc己烷溶液)进行纯化，得到为黄色残余物的非对映混合物26-3和26-4(277mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H51N4O7的[M+H]+分析计算值：663.4；实测值：663.3。
第4步。26-5的制备：非对映混合物26-3和26-4(277mg，0.419mmol)溶于DCE(140mL)，将此溶液用Ar鼓泡15分钟。加入Zhan 1B催化剂(37mg，0.050mmol，Strem)，所得溶液在85℃于Ar下搅拌1.5小时。随后浓缩反应混合物并通过硅胶色谱法(20％至50％EtOAc己烷溶液)进行纯化，得到为无定形残余物的26-5(105mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C35H47N4O7的[M+H]+分析计算值：635.3；实测值：635.3。
第5和6步。26-6的制备：向26-5(105mg，0.165mmol)的1:1EtOAc:EtOH(4mL)溶液中加入Pd/C(10wt％Pd，43mg)。反应容器用H2吹扫两次，在室温于1atm H2下搅拌1小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物，浓缩以得到残余物粗品(106mg；LCMS-ESI+(m/z)：C35H49N4O7的[M+H]+分析计算值：637.4；实测值：637.3)。然后将此残余物溶于THF(0.8mL)。加入MeOH(0.4mL)、水(0.4mL)和LiOH·H2O(67mg，1.6mmol)，混合物在45℃下搅拌14.5小时。滴加1NHCl水溶液(1.3mL)以淬灭反应，用CH2Cl2(30mL)和1N HCl水溶液(20mL)稀释。分离两相，用CH2Cl2(30mL)萃取水相。MgSO4干燥合并的有机相，过滤并浓缩以得到为残余物的26-6(93.8mg)，其可直接用于第7步。LCMS-ESI+(m/z)：C34H47N4O7呃[M+H]+分析计算值：623.3；实测值：623.3。
第7步。实施例26的制备：向酸26-6(93.8mg，0.151mmol)和中间体A9(58mg，0.20mmol)的MeCN混悬液中加入DIPEA(120μL，0.69mmol)。向所得溶液中加入HATU(73.5mg，0.193mmol)。反应物在室温下搅拌100分钟，再次加入部分中间体A9(6mg，0.02mmol)。继续30分钟后，再次加入中间体A9(9mg，0.03mmol)、HATU(9mg，0.02mmol)和DIPEA(10μL，0.06mmol)。反应物继续搅拌50分钟，用EtOAc(25mL)、0.2M HCl水溶液(20mL)和盐水(10mL)稀释。分离两相，用EtOAc(25mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。通过硅胶色谱法(25％至40％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，得到无定形残余物，自水和MeCN中冻干以获得为白色无定形固体的实施例26(113mg)。分析HPLC保留时间：9.19min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：859.4；实测值：859.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.02(s，1H)，7.80(d，J＝9.1Hz，1H)，7.21-7.15(m，2H)，7.07(d，J＝2.7Hz，1H)，6.13-5.79(m，1H)，5.63(d，J＝10.1Hz，1H)，5.50-5.45(m，1H)，4.51(d，J＝10.1Hz，1H)，4.44(d，J＝7.4Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.18-4.12(m，2H)，3.93(s，3H)，3.02-2.77(m，3H)，2.66-2.57(m，1H)，2.18-0.90(m，36H)。
实施例27.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-16-甲氧基-11-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备。
第1步。27-1的制备：用BEP(207mg，0.756mmol)、中间体D5(283mg，0.909mmol)、EtOAc(9mL)、NMP(1mL)和DIPEA(0.44mL，2.5mmol)处理胺盐酸盐26-2(217mg，0.504mmol)，随后加热至50℃。1.5小时后，用EtOAc稀释反应混合物。依次用NaHCO3饱和水溶液和盐水冲洗有机溶液，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法(9％至40％EtOAc/Hex)纯化残余物以得到酰胺27-1(235mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H52ClN4O7的[M+H]+分析计算值：687.35；实测值：688.13。
第2步。27-2的制备：用乙酰基三氟硼酸钾(69mg，0.513mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(28mg，0.0342mmol)、EtOH(3.4mL)和TEA(0.072mL，0.513mmol)处理酰胺27-1(235mg，0.342mmol)，随后加热回流。50分钟后，用EtOAc稀释反应混合物，用H2O和盐水冲洗。MgSO4干燥有机相，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法(9％至40％EtOAc/Hex)纯化残余物，得到乙烯基喹喔啉27-2(219mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C38H55N4O7的[M+H]+分析计算值：679.41；实测值：679.49。
第3和4步。27-3的制备：将乙烯基喹喔啉27-2(219mg，0.323mmol)悬于DCE(65mL)，用Zhan 1B催化剂(41mg，0.065mmol，Strem)处理。用鼓泡N2对混悬液去氧17分钟，随后加热回流90分钟。通过硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩。通过硅胶色谱法(15％至50％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品，以得到预期的大环(165mg；LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.38；实测值：651.40)。将第3步的大环产物溶于EtOH(10mL)和EtOAc(2mL)，并用10wt％Pd/C(95mg)处理。使用来自于气球的氢气对此混悬液鼓泡1分钟，在H2(1atm)下继续搅拌混合物1.5小时。通过硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩，以得到预期的大环27-3，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C36H53N4O7的[M+H]+分析计算值：653.39；实测值：653.32。
第5步。27-4的制备：将第4步的粗产品溶于DCM并用TMSOTf(0.23mL，1.3mmol)处理。在室温下搅拌1小时15分钟后，减压浓缩反应混合物。将残余物重新溶解于DCM，通过移液管加入至一个含有1M NaOH水溶液的分液漏斗中。混合物搅拌1分钟，用10％HCl水溶液酸化至pH 1～2。用DCM萃取水层三次，MgSO4干燥合并的有机相，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗产品以得到羧酸27-4(119mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C32H45N4O7的[M+H]+分析计算值：597.33；实测值：597.40。
第6步。实施例27的制备：用TBTU(68mg，0.212mmol)、DMAP(26mg，0.212mmol)，DCM(1.8mL)和DIPEA(0.31mL，1.8mmol)处理羧酸27-4(105mg，0.177mmol)和中间体A10(65mg，0.212mmol)。反应混合物在室温下搅拌30分钟，随后加入更多胺A10(40mg，0.131mmol)，将反应混合物加热回流。继续1.25小时后，减压浓缩混合物。通过HPLC纯化残余物粗品，以得到大约为90％纯度的实施例27的TFA盐(80mg)。分析HPLC保留时间：9.06min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.39；实测值：847.69。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.23(s，1H)，7.87-7.72(m，1H)，7.31-7.14(m，2H)，5.84(td，J＝55.6，6.5Hz，1H)，5.58(d，J＝22.6Hz，1H)，4.94-4.81(m，1H)，4.37(d，J＝15.8Hz，1H)，4.29-4.10(m，2H)，3.94(s，3H)，3.01(ddd，J＝15.1，9.9，5.3Hz，1H)，2.84(p，J＝7.4Hz，1H)，2.75(ddd，J＝13.3，10.2，6.0Hz，1H)，2.03(d，J＝9.0Hz，2H)，1.97-1.74(m，4H)，1.73-1.55(m，6H)，1.53(s，3H)，1.48-1.21(m，8H)，1.19-1.02(m，14H)，0.99-0.80(m，2H)。
实施例28.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-16-甲氧基-11-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备。
第1步。用TBTU(22mg，0.067mmol)、DMAP(8mg，0.07mmol)、DCM(1mL)和DIPEA(0.117mL，0.674mmol)处理羧酸27-4(20mg，0.034mmol)和中间体A9(35mg，0.12mmol)。反应混合物在室温下搅拌15小时，减压浓缩。通过HPLC纯化残余物粗品，以得到大约为90％纯度的实施例28的TFA盐(22mg)。分析HPLC保留时间：8.90min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：833.37；实测值：833.61。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.23(s，1H)，7.79(d，J＝8.8Hz，1H)，7.34-7.10(m，2H)，5.86(td，J＝55.8，6.5Hz，1H)，5.61(s，1H)，4.54(t，J＝9.7Hz，1H)，4.36(d，J＝16.5Hz，1H)，4.28-4.07(m，2H)，3.95(d，J＝17.8Hz，3H)，3.08-2.91(m，2H)，2.90-2.79(m，1H)，2.73(ddd，J＝13.3，10.3，6.0Hz，1H)，2.04(s，2H)，1.97-1.74(m，4H)，1.64(ddd，J＝18.7，11.6，4.0Hz，4H)，1.49-1.19(m，11H)，1.18-0.94(m，14H)，0.94-0.80(m，1H)。
实施例29.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-3,6-二氧-9-丙基-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。29-1的制备：在室温于氩气气氛下向中间体B5(188mg，0.57mmol)和中间体E1(233mg，0.86mmol)的MeCN溶液(2.85mL)中加入碳酸铯(280mg，9.18mmol)。19小时后，通过硅藻土垫过滤反应混合物，真空浓缩滤液。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，以得到为无色油状物的取代喹喔啉29-1(240mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C26H37ClN3O6的[M+H]+分析计算值：522.2；实测值：522.3。
第2步。29-2的制备：向29-1(240mg，0.46mmol)的二氧六环溶液(1mL)中加入4M盐酸二氧六环溶液(4mL，1mmol)，在室温下搅拌反应物。15小时后，真空浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的胺盐酸盐29-2(200mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C21H29ClN3O4的[M+H]+分析计算值：422.2；实测值：422.2。
第3步。29-3的制备：在室温于氩气气氛下向29-2(200mg，0.46mmol)和中间体D1(170mg，0.51mmol)的MeCN溶液(2.3mL)中加入HATU(192mg，0.51mmol)和DIPEA(400μL，2.30mmol)。1.5小时后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的酰胺29-3(67mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H52ClN4O7的[M+H]+分析计算值：687.3；实测值：687.5。
第4步。29-4的制备：向29-3(67mg，98μmol)、TEA(20μL，150μmol)和乙酰基三氟硼酸钾(19.7mg，150μmol)的EtOH溶液(500μL)中加入PdCl2(dppf)(8mg，9.8μmol)。反应混合物用氩气去氧气10分钟并加热至78℃。40分钟后，将反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的乙烯基喹喔啉29-4(40.2mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C38H55N4O7的[M+H]+分析计算值：679.4；实测值：679.6。
第5步。29-5的制备：向29-4(40mg，59μmol)的DCE溶液(11.8mL)中加入Zhan1B催化剂(4mg，6μmol，Strem)，反应混合物用氩气脱气10分钟。随后将反应混合物加热至100℃。1小时后，反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为淡黄色油状物的大环29-5(31mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.4；实测值：651.5。
第6步。29-6的制备：在室温于氩气气氛下向大环29-5(31mg，47μmol)的乙醇溶液(500μL)中加入Pd/C(10wt％，5mg，5μmol)。将反应容器抽真空并重新充入1atm氢气(3×)，在室温下剧烈搅拌反应混合物。1小时后，用乙酸乙酯(10mL)稀释反应混合物，通过硅藻土垫用乙酸乙酯洗涤液(3×5mL)进行过滤。真空浓缩滤液以得到大环29-6(31mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C36H53N4O7的[M+H]+分析计算值：653.4；实测值：653.5。
第7步。29-7的制备：在室温于氩气气氛下向29-6(31mg，47μmol的DCM溶液(0.5mL)中加入TMSOTf(44μL，0.25mmol)25分钟后，真空浓缩反应混合物，与甲苯(2×2mL)共沸干燥，得到为黄色油状物的羧酸29-7(35mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C32H45N4O7的[M+H]+分析计算值：597.3；实测值：597.4。
第8步。实施例29的制备：在室温于氩气气氛下向29-7(35mg，49μmol)和中间体A10(22mg，74μmol)的MeCN溶液(245μL)中加入HATU(28mg，74μmol)和DIPEA(43μL，250μmol)。3小时后，真空浓缩反应混合物，通过制备HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，5-100％MeCN/H2O，0.1％三氟乙酸改性剂)进行纯化，冻干得到为白色粉末的实施例29的TFA盐(22.3mg)。分析HPLC保留时间：8.81min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H56F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.4；实测值：847.5。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.83(d，J＝9.4Hz，1H)，7.93(d，J＝9.1Hz，1H)，7.36(d，J＝9.1Hz，1H)，7.21(d，J＝11.0Hz，1H)，7.14(s，1H)，5.97(td，JH-F＝55Hz，J＝7.2Hz，1H)，5.84(br s，1H)，5.41(d，J＝9.4Hz，1H)，4.66-4.34(m，3H)，4.13(app d，J＝11.8Hz，1H)，4.08(s，1H)，3.97(s，3H)，3.78-3.71(m，1H)，3.09-2.65(m，5H)，2.14-2.04(m，1H)，1.87-1.34(m，8H)，1.52(s，3H)，1.12(s，9H)，1.08-0.84(m，10H)，0.76-0.62(m，1H)，0.50(dd，J＝12.6，6.6Hz，1H)。
实施例30.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-9-(2-甲基丙基)-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。30-1的制备：中间体B6(139mg，0.405mmol)、中间体E1(170mg，0.625mmol)和碳酸铯(203mg，0.623mmol)的3.3mL乙腈混合物在室温于氩气下搅拌过夜。通过硅藻土过滤反应混合物，以乙酸乙酯冲洗，减压浓缩滤液。所得残余物通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为透明薄膜的30-1(170mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C27H39ClN3O6的[M+H]+分析计算值：536.24；实测值：536.31。
第2步。30-2的制备：在室温下向30-1(168mg，0.314mmol)的3.3mL二氧六环溶液中加入盐酸二氧六环溶液(4.0M，0.16mL，0.64mmol)。三十分钟后，继续加入4当量HCl并搅拌过夜。随后继续加入25当量HCl。三十分钟后，再次加入19当量HCl。一小时后，继续加入29当量HCl。。三十分钟后，减压浓缩反应混合物以得到30-2(148mg，85％纯度)，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C22H31ClN3O4的[M+H]+分析计算值：436.19；实测值：436.25。
第3步。30-3的制备：在氩气下向30-2(148mg，0.315mmol)和中间体D1(99mg，0.348mmol)的3.5mL DMF混合物中加入HATU(144mg，0.379mmol，Oakwood)和DIPEA(0.28mL，1.58mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物倒至水中，用乙酸乙酯(3x)萃取。用水和盐水冲洗合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为白色固体的30-3(136mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H54ClN4O7的[M+H]+分析计算值：701.36；实测值：701.47。
第4步。30-4的制备：在室温下向30-3(135mg，0.193mmol)、乙酰基三氟硼酸钾(41mg，0.306mmol)和三乙胺(0.040mL，0.289mmol)的2.1mL乙醇脱气混合物中加入Pd(dppf)2Cl2·CH2Cl2(35mg，0.043mmol)。反应混合物在78℃于氩气下加热45分钟。冷却至室温后，将反应混合物倒至水中，用乙酸乙酯萃取(三次)。用水和盐水冲洗合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩以得到30-4(133mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C39H57N4O7的[M+H]+分析计算值：693.41；实测值：693.48。
第5步。30-5的制备：30-4(133mg，0.192mmol)和Zhan 1B催化剂(16mg，0.022mmol，Strem)的38mL DCE混合物在氩气下去氧25分钟。随后混合物在95℃下加热50分钟。冷却至室温后，减压浓缩反应混合物。所得残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为淡黄色薄膜的30-5(70mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H53N4O7的[M+H]+分析计算值：665.38；实测值：665.50。
第6步。30-6的制备：向溶液30-5(69mg，0.104mmol)的3mL乙醇中加入钯碳(10wt％Pd，22mg，0.0208mmol)。混合物随后在氢气气氛下搅拌1小时，通过硅藻土过滤，以乙酸乙酯冲洗。减压浓缩滤液，得到为淡黄褐色固体薄膜的30-6(64mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C37H55N4O7的[M+H]+分析计算值：667.40；实测值：667.43。
第7步。30-7的制备：在室温于氩气下向30-6(30mg，0.045mmol)的1.2mL二氯甲烷溶液滴加TMSOTf(0.050mL，0.274mmol)。45分钟后，减压浓缩反应混合物。将所得薄膜溶于5mL甲苯，减压浓缩。重复一次此过程，得到30-7(27mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C33H47N4O7的[M+H]+分析计算值：611.34；实测值：611.41。
第8步。实施例30的制备：在氩气下向30-7(27mg，0.045mmol)和中间体A10(22mg，0.072mmol)的2.2mL乙腈混合物中加入HATU(28mg，0.074mmol，Oakwood)和DIPEA(0.050mL，0.281mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物倒至水中，用乙酸乙酯(3x)萃取。用水和盐水冲洗合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)和反相制备HPLC(15-100％乙腈水溶液，含0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化，冻干后得到为淡黄色固体的实施例30的三氟乙酸盐(18mg)。分析HPLC保留时间：8.96min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H59F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：861.40；实测值：861.30。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.17(s，1H)，7.80(d，J＝8.8Hz，1H)，7.23(dd，J＝8.8，2.8Hz，1H)，7.14(d，J＝2.8Hz，1H)，5.81(td，JH-F＝56Hz，J＝7.6Hz，1H)；5.77(d，J＝3.2Hz，1H)，4.55(d，J＝7.2Hz，1H)，4.39(t，J＝5.6Hz，2H)，4.16(dd，J＝11.8，4Hz，1H)，3.91(s，3H)，3.79-3.71(m，1H)，2.98-2.90(m，1H)，2.84(dd，J＝12.6，4.8Hz，1H)，2.79-2.72(m，1H)，2.06-1.91(m，3H)，1.77(m，3H)，1.64-1.44(m，6H)，1.51(s，3H)，1.44-1.32(m，3H)，1.15-1.07(m，1H)，1.10(s，9H)，1.06-0.96(m，3H)，1.04-1.01(m，6H)，0.93-0.89(m，2H)，0.79-0.68(m，1H)，0.52-0.47(m，1H)。
实施例31.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-9-环丙基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。31-1的制备：用中间体E1(217mg，0.797mmol)、MeCN(5.7mL)和Cs2CO3(371mg，1.14mmol)处理中间体B3的未纯化样品。在室温下搅拌17小时后，通过硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩。通过硅胶色谱法(20％至40％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品以得到喹喔啉31-1(143mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C18H21ClN3O4的[M-Boc+2H]+分析计算值：378.12；实测值：378.59。
第2步。31-2的制备：将喹喔啉31-1(143mg，0.299mmol)溶于DCM(10mL)并用HCl(4.0M二氧六环溶液，5mL，20.0mmol)处理。在室温下搅拌2小时后，浓缩反应混合物，粗产品31-2无需进一步纯化即可使用。
第3步。31-3的制备：用BEP(115mg，0.419mmol)、中间体D1(120mg，0.423mmol)、EtOAc(9mL)、NMP(1mL)和DIPEA(0.37mL，2.1mmol)处理粗产品胺盐酸盐31-2，随后加热至50℃。1.5小时后，用Et2O稀释反应混合物。用NaHCO3饱和水溶液和盐水依次冲洗有机溶液，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法(15％至30％EtOAc/Hex)纯化残余物以得到酰胺31-3(166mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C33H44ClN4O7的[M+H]+分析计算值：643.29；实测值：643.48。
第4步。31-4的制备：用乙酰基三氟硼酸钾(52mg，0.387mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(21mg，0.0258mmol)、EtOH(2.6mL)和TEA(0.054mL)处理酰胺31-3(166mg，0.258mmol)，加热回流。50分钟后，用EtOAc稀释反应混合物，用H2O和盐水冲洗。MgSO4干燥有机相，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法(15％至40％EtOAc/Hex)纯化残余物以得到乙烯基喹喔啉31-4(145mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C35H47N4O7的[M+H]+分析计算值：635.34；实测值：635.58。
第5和6步。31-5的制备：将乙烯基喹喔啉31-4(145mg，0.228mmol)悬于DCE(46mL)中并用Zhan 1B催化剂(33mg，0.0456mmol，Strem)处理。用鼓泡N2对混悬液去氧22分钟，随后加热回流50分钟。通过硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩。通过硅胶色谱法(25％至35％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品以得到预期的大环(54mg；LCMS-ESI+(m/z)：C33H43N4O7的[M+H]+分析计算值：607.31；实测值：607.67)。将第5步的大环产物溶于EtOH(10mL)并用10％Pd/C(45mg)处理。使用来自于气球的氢气对此混悬液鼓泡1分钟，继续进行氢化(1atm)1.5小时。通过硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩以得到预期的大环31-5，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C33H45N4O7的[M+H]+分析计算值：609.33；实测值：609.95。
第7步。31-6的制备：将粗产品31-5溶于THF并用LiOH(1.0M H2O溶液，5mL，5mmol)处理。在室温下搅拌3天后，反应混合物加热回流20小时。随后将混合物倒至H2O中，用10％HCl酸化至pH～1-2。用DCM萃取水层三次。MgSO4干燥合并的有机相，过滤并减压浓缩。粗产品通过硅胶色谱法(80％至100％EtOAc/Hex)进行纯化，得到羧酸31-6(24mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C32H43N4O7的[M+H]+分析计算值：595.31；实测值：595.12。
第8步。实施例31的制备：用TBTU(23mg，0.081mmol)、DMAP(10mg，0.081mmol)、DCM(2mL)和DIPEA(0.070mL，0.40mmol)处理羧酸31-6(24mg，0.040mmol)和中间体A10(25mg，0.081mmol)。反应混合物在室温下搅拌15小时，减压浓缩。通过HPLC纯化残余物粗品以得到大约为90％纯度的实施例31的TFA盐(13mg，34％)。分析HPLC保留时间：8.92min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：845.37；实测值：845.67。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.13(s，1H)，7.79(d，J＝9.1Hz，1H)，7.23(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.13(d，J＝2.7Hz，1H)，6.05-5.65(m，2H)，4.55(d，J＝7.0Hz，1H)，4.47(d，J＝11.7Hz，2H)，4.27(dd，J＝12.0，3.7Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.78(dd，J＝6.8，2.8Hz，1H)，2.99-2.86(m，1H)，2.80(td，J＝13.2，4.1Hz，1H)，1.98(d，J＝28.8Hz，2H)，1.92-1.67(m，4H)，1.65-1.41(m，10H)，1.33(d，J＝27.7Hz，3H)，1.20-1.06(m，9H)，1.04-0.84(m，6H)，0.82-0.62(m，3H)，0.61-0.41(m，2H)，0.06(dd，J＝9.2，4.9Hz，1H)。
实施例32.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-9-苄基-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。32-1的制备：在室温于氩气气氛下向中间体B7(390mg，1.00mmol)和中间体E1(272mg，1.00mmol)的MeCN溶液(5mL)中加入碳酸铯(390mg，1.00mmol)。24小时后，用乙酸乙酯(50mL)稀释反应混合物。用碳酸氢钠饱和水溶液(50mL)和盐水(50mL)冲洗所得混合物，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的喹喔啉32-1(550mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C30H37ClN3O6的[M+H]+分析计算值：570.2；实测值：570.2。
第2步。32-2的制备：向32-1(549mg，0.96mmol)的二氧六环溶液(2mL)中加入4M盐酸二氧六环溶液(2mL，1mmol)，在室温下搅拌反应物。24小时后，真空浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的胺盐酸盐32-2(461mg)，无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C25H29ClN3O4的[M+H]+分析计算值：470.2；实测值：470.2。
第3步。32-3的制备：在室温于氩气气氛下向32-2(461mg，0.96mmol)和中间体D1(369mg，1.10mmol)的MeCN溶液(5mL)中加入HATU(418mg，1.10mmol)和DIPEA(869μL，5.00mmol)。24小时后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的32-3(202.6mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C40H52ClN4O7的[M+H]+分析计算值：735.3；实测值：735.4。
第4步。32-4的制备：向32-3(202mg，276μmol)、TEA(56μL，414μmol)和乙酰基三氟硼酸钾(56mg，414μmol)的EtOH溶液(2.76mL)中加入PdCl2(dppf)(22.5mg，27.6μmol)。反应混合物用氩气脱气10分钟，加热至78℃。1小时后，将反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为黄色油状物的32-4(163mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C42H55N4O7的[M+H]+分析计算值：727.4；实测值：727.5。
第5步。32-5的制备：向32-4(163mg，220μmol)的DCE溶液(44mL)中加入Zhan 1B催化剂(16mg，22μmol，Strem)，反应混合物用氩气脱气10分钟。随后将反应混合物加热至100℃。45分钟后，反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品，得到为淡黄色油状物的32-5(125mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C40H51N4O7的[M+H]+分析计算值：699.4；实测值：699.4。
第6步。32-6的制备：在室温于氩气气氛下向大环32-5(124mg，178μmol)的乙醇溶液(890μL)中加入Pd/C(10wt％Pd，19mg，18μmol)。将反应容器抽真空并重新充入氢气(3×)，反应混合物在室温于1atm H2下剧烈搅拌。2.5小时后，用乙酸乙酯(5mL)稀释反应混合物，使用乙酸乙酯洗涤液(3×5mL)通过硅藻土垫过滤。真空浓缩滤液以得到32-6(139mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C40H53N4O7的[M+H]+分析计算值：701.4；实测值：701.5。
第7和8步。实施例32的制备：在室温于氩气气氛下向32-6(124mg，178μmol)的DCM溶液(3mL)中加入TFA(2mL)。3小时后，真空浓缩反应混合物，与甲苯(2×2mL)共沸干燥，得到为黄色油状物的预期羧酸，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。(126mg；LCMS-ESI+(m/z)：C36H45N4O7的[M+H]+分析计算值：645.3；实测值：645.4)。在室温于氩气气氛下向此羧酸(120mg，178μmol)和中间体A10(119mg，392μmol)的MeCN溶液(1mL)中加入HATU(151mg，392μmol)和DIPEA(155μL，890μmol)。30分钟后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品。合并含有预期产物的组分，通过制备HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，5-100％MeCN/H2O，0.1％三氟乙酸改性剂)再次纯化，冻干以得到为白色粉末的实施例32的TFA盐(23mg)。分析HPLC保留时间：8.81min。LCMS-ESI+(m/z)：C45H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：895.4；实测值：895.6。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.24(s，1H)，7.73(d，J＝9.1Hz，1H)，7.47-7.27(m，4H)，7.21-7.12(m，1H)，6.65(d，J＝2.9Hz，1H)，5.83(td，JH-F＝55Hz，J＝7.2Hz，1H)，5.77(br s，1H)，4.63(d，J＝6.9Hz，2H)，4.50-4.28(m，3H)，3.93(s，2H)，3.79-3.71(m，1H)，3.11-2.99(m，1H)，2.97-2.85(m，1H)，2.82-2.61(m，3H)，1.92(br s，2H)，1.82-1.70(m，2H)，1.63-1.44(m，4H)，1.52(s，3H)，1.15(s，9H)，1.04(br s，2H)，1.02-0.96(m，2H)，0.95-0.88(m，4H)，0.78-0.66(m，1H)，0.56-0.46(m，1H)。
实施例33.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1S,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-15-甲氧基-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
第1和2步。非对映混合物33-1和33-2的制备：将喹喔啉18-2(220mg，0.56mmol)与中间体D12和D13(208mg，0.643mmol)1:1非对映体的MeCN混合物(5mL)一起溶解。加入DIPEA(280μL，1.6mmol)和HATU(360mg，0.95mmol)，反应物在室温下搅拌1.25小时。用EtOAc(30mL)、NaHCO3饱和水溶液(15mL)、H2O(10mL)和盐水(10mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。无水Na2SO4干燥有机相，过滤并浓缩为残余物粗品，将其溶于CH2Cl2并吸附至硅胶(5g)上。通过硅胶色谱法(10％至30％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到白色泡沫(352mg；LCMS-ESI+(m/z)：C37H52ClN4O7的[M+H]+分析计算值：699.4；实测值：699.1)。将搅拌的此残余物、PdCl2(dppf)·CH2Cl2(30.7mg，0.0376mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(135mg，1.01mmol)的EtOH(5mL)均匀混合物用氩气吹扫几分钟。加入三乙胺(160μL，1.1mmol)，混合物加热至75℃，持续1小时。反应混合物冷却至室温，用EtOAc(30mL)、H2O(15mL)和盐水(15mL)稀释。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。无水Na2SO4干燥有机相，过滤并浓缩以得到残余物粗品，将其溶于CH2Cl2并吸附至硅胶(3g)上。通过硅胶色谱法(10％至40％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到为黄色残余物的33-1和33-2的不可分离混合物(258mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C39H55N4O7的[M+H]+分析计算值：691.4；实测值：691.7。
第3步：33-3的制备：将非对映混合物33-1和33-2(258mg，0.373mmol)溶于DCE(125mL)，用Ar吹扫此溶液10分钟。加入Zhan 1B催化剂(41mg，0.056mmol，Strem)的DCE溶液(3.3mL)，所得溶液在85℃于Ar下搅拌105分钟。反应混合物浓缩至5g硅胶上，通过硅胶色谱法(0％至25％EtOAc己烷溶液)对其进行纯化，得到为无定形残余物的大环33-3(81.9mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H51N4O7的[M+H]+分析计算值：663.4；实测值：663.3。
第4和5步：33-4的制备：向33-3(81.9mg，0.124mmol)的1:1EtOAc:EtOH溶液(4mL)中加入Pd/C(10wt％Pd，19mg)。反应容器用H2吹扫两次，在室温于1atm H2下搅拌2.5小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物，浓缩以得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2(1.2mL)，加入TMSOTf(90μL，0.50mmol)。混合物在室温下搅拌4.5小时。真空浓缩此反应物，将其溶于CH2Cl2(5mL)。加入0.2M NaOH水溶液(5mL)，此两相混合物在室温下搅拌5分钟。用1M HCl水溶液(20mL)酸化此混合物，用CH2Cl2(20mL)稀释。分离两相，用CH2Cl2(2x20mL)萃取水相。MgSO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到为残余物粗品的33-4(76.1mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C33H45N4O7的[M+H]+分析计算值：609.3；实测值：608.9。
第6步：实施例33的制备：向酸33-4(43mg，0.072mmol)和中间体A9(40.9mg，0.14mmol)的MeCN混悬液(800μL)中加入DIPEA(100μL，0.57mmol)。向所获溶液中加入HATU(37mg，0.097mmol)，反应物在室温下搅拌15小时。用EtOAc(20mL)、0.2M HCl水溶液(10mL)和盐水(10mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(20mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2并浓缩至2g硅胶上。通过硅胶色谱法(15％至55％丙酮己烷溶液)对其进行纯化，自水和MeCN冻干得到无定形残余物，获得为白色无定形固体的实施例33(29.6mg)。分析HPLC保留时间：9.07min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：845.4；实测值：845.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.21(s，1H)，7.82(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.09(d，J＝2.7Hz，1H)，6.79(s，1H)，6.21-5.76(m，1H)，5.65(d，J＝3.9Hz，1H)，5.29(d，J＝9.7Hz，1H)，4.99(d，J＝7.5Hz，1H)，4.47-4.29(m，4H)，4.16-4.09(m，1H)，3.93(s，3H)，2.99-2.85(m，2H)，2.80-2.64(m，2H)，2.24-2.16(m，1H)，2.13-2.05(m，1H)，2.01-0.95(m，29H)，0.56-0.45(m，1H)，0.45-0.35(m，1H)。
实施例34.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-{(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-乙基环丙基}-9-乙基-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例34的制备方法与实施例17类似，以中间体A3代替第7步中的中间体A10。以大约95％的纯度分离得到实施例34(5.7mg)。分析HPLC保留时间：8.81min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：833.4；实测值：833.25。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.027(br s，1H)，7.98(d，J＝8.8Hz，1H)，7.29(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.09(d，J＝2.8Hz，1H)，6.32(br s，1H)，5.92(d，J＝3.6Hz，1H)，5.30(d，J＝10.0Hz，1H)，4.42-4.33(m，3H)，4.08(dd，J＝11.6，4.0Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.65(m，1H)，2.93(m，1H)，2.51(m，2H)，2.02(m，1H)，1.86-1.40(m，11H)1.34-1.14(m，7H)，1.09(s，9H)，1.10-0.82(m，6H)，0.72(m，1H)，0.48(m，1H)。
实施例35.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2S)-2-(2,2-二氟乙基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例35的制备方法与实施例17类似，以中间体A8代替第7步的中间体A10。以大约90％的纯度分离得到实施例35(12.8mg)。分析HPLC保留时间：8.78min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：883.4；实测值：883.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.69(brs，1H)，7.98(d，J＝9.2Hz，1H)，7.29(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.09(d，J＝2.8Hz，1H)，6.53(br s，1H)，5.91(d，J＝4.0Hz，1H)，5.84(tt，JH-F＝56Hz，J＝3.6Hz，1H)，5.33(d，J＝6.4Hz，1H)，4.43(m，2H)，4.34(ap d，J＝9.6Hz，1H)，4.08(dd，J＝11.6，4.0Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.99-3.94(m，1H)，3.68(m，1H)，2.58-2.52(m，3H)，2.20(m，2H)，1.82-1.58(m，7H)1.54-1.40(m，5H)，1.36-1.18(m，6H)，1.09(s，9H)，1.10-1.00(m，1H)，0.85(m，2H)，0.69(m，1H)，0.49(m，1H)。
实施例36.(1aR,5S,8S,9S,10R,21aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1a,3,4,5,6,9,10,17b,18,18a,19,20,21,21a-十四氢-1H,8H-7,10-甲烷二环丙烷[13,14:18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。36-1的制备：向三甲基碘化亚砜(72mg，0.32mmol)的DMSO/THF(1:1，2mL)溶液中加入氢化钠(60％，12mg，0.32mmol)并在室温下搅拌2小时。滴加大环1-5(103mg，0.16mmol)的THF溶液(3mL)。混合物加热至65℃，搅拌16小时。冷却至室温后，用EtOAc/H2O稀释混合物，用EtOAc萃取，无水MgSO4干燥，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-25％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到为残余物的36-1(27mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.38；实测值：651.52。
第2步。36-2的制备：向36-1(26mg，0.04mmol)的DCM溶液(1mL)中加入TMSOTf(0.036mL，0.2mmol)并在室温下搅拌2小时。用移液管将反应物吸取至搅拌的1N NaOH(2mL)中。10分钟后，用DCM稀释混合物，用1N HCl水溶液酸化至pH 3。用DCM萃取水层后，无水MgSO4干燥合并的有机相，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-10％EtOAc/MeOH)纯化残余物，得到为残余物的36-2(24mg)，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C32H43N4O7的[M+H]+分析计算值：595.31；实测值：595.43。
第3步。实施例36的制备：向36-2(24mg，0.041mmol)、中间体A10(16mg，0.053mmol)、TBTU(19mg，0.06mmol)和DMAP(8mg，0.06mmol)的DCM溶液(2mL)中加入DIPEA(0.021mL，0.12mmol)，反应物在室温下搅拌16小时。再次加入中间体A10(16mg，0.053mmol)、TBTU(19mg，0.06mmol)、DMAP(8mg，0.06mmol)和DIPEA(0.021mL，0.12mmol)，反应物在室温下搅拌4小时。用水淬灭反应，用EtOAc稀释，用NaHCO3饱和水溶液、盐水冲洗，无水MgSO4干燥，真空浓缩。粗产品通过反相HPLC(Gemini，45-85％MeCN/H2O+0.1％TFA)进行纯化，冻干以得到为TFA盐的实施例36(3mg)。分析HPLC保留时间：9.06min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：845.37；实测值：845.43。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.31(s，1H)，7.72(d，J＝10Hz，1H)，7.20-7.17(m，2H)，5.60-5.82(m，2H)，5.51(s，1H)，4.72(d，J＝7.2Hz，1H)，4.43(d，J＝11.6Hz，1H)，4.31(s，1H)，4.26-4.22(dd，J＝11.6，4Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.78(m，1H)、2.60(m，1H)，2.27(m，1H)，2.04(s，3H)，1.68(m，3H)，1.59(m，2H)，1.54-1.15(m，11H)，1.09(s，9H)，0.95-0.86(m，8H)，0.47(m，1H)。
实施例37.(1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-12-乙基-17-甲氧基-6,9-二氧-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-十六氢-1H,11H-1,4:10,13-二甲烷喹喔啉[2,3-k][1,10,3,6]苯并二氧杂二氮杂十九环-11-甲酰胺的制备。
第1步。实施例37的制备：向13-6(76mg，0.12mmol)、中间体A10(44mg，0.14mmol)、HATU(55mg，0.14mmol)和DMAP(21mg，0.18mmol)的DMF溶液(2mL)中加入DIPEA(0.11mL，0.6mmol)，反应物在室温下搅拌16小时。再次加入中间体A10(44mg，0.14mmol)、HATU(55mg，0.14mmol)、DMAP(21mg，0.18mmol)和DIPEA(0.11mL，0.6mmol)，反应物在40℃下搅拌50小时。用水淬灭反应，用EtOAc稀释，用NaHCO3饱和水溶液、盐水冲洗，无水MgSO4干燥，真空浓缩。粗产品通过反相HPLC(Gemini，45-85％MeCN/H2O+0.1％TFA)进行纯化，冻干以得到为TFA盐的实施例37(30mg)。分析HPLC保留时间：9.44min。LCMS-ESI+(m/z)：C44H61F2N6O9S呃[M+H]+分析计算值：887.42；实测值：887.50。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.24(s，1H)，7.76(d，J＝9.2Hz，1H)，7.20(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.12(m，1H)，5.95-5.66(m，2H)，5.43(s，1H)，4.51(d，J＝7.6Hz，1H)，4.41(s，1H)，4.20-4.10(m，2H)，3.88(s，3H)，2.94-2.88(m，1H)，2.73-2.63(m，2H)，2.11(br，2H)，2.02-0.83(m，41H)。
实施例38.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-9-甲基-5-(1-甲基环戊基)-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。38-1的制备：用BEP(246mg，0.898mmol)、中间体D14(278mg，0.898mmol)、EtOAc(9mL)、NMP(1mL)和DIPEA(0.42mL，2.4mmol)处理胺18-2(192mg，0.487mmol)，随后加热至50℃。1小时后，用EtOAc稀释反应混合物。用NaHCO3饱和水溶液和盐水依次冲洗有机溶液，MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法(15％至35％EtOAc/Hex)纯化残余物，得到酰胺38-1(264mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H50ClN4O7的[M+H]+分析计算值：685.34；实测值：685.82。
第2步。38-2的制备：用乙酰基三氟硼酸钾(82mg，0.615mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(33mg，0.041mmol)、EtOH(4.0mL)和TEA(0.086mL，0.62mmol)处理酰胺38-1(264mg，0.385mmol)，加热回流。55分钟后，用EtOAc稀释反应混合物，用H2O和盐水冲洗。无水MgSO4干燥有机相，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法(15％至30％EtOAc/Hex)纯化残余物，得到乙烯基喹喔啉38-2(168mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C38H53N4O7的[M+H]+分析计算值：677.39；实测值：677.38。
第3和4步。38-3的制备：将乙烯基喹喔啉38-2(225mg，0.332mmol)悬于DCE(66mL)，用Zhan 1B催化剂(42mg，0.067mmol，Strem)处理。混悬液用鼓泡N2脱气28分钟，加热回流90分钟。随后通过硅藻土过滤反应混合物，真空浓缩。通过硅胶色谱法(15％至30％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品，得到预期的大环(168mg；LCMS-ESI+(m/z)：C36H49N4O7的[M+H]+分析计算值：649.36；实测值：649.33)。将此大环溶于EtOH(25mL)和EtOAc(5mL)并用Pd/C(10wt％Pd，95mg)处理。使用来自于气球的氢气对此混悬液鼓泡1分钟，反应物在H2气氛下继续搅拌1.5小时。结束后通过硅藻土过滤反应混合物，真空浓缩以得到预期的大环38-3，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.38；实测值：651.42。
第5步。38-4的制备：将前一步未纯化的38-3溶于DCM(10mL)并用TMSOTf(0.23mL，1.3mmol)处理。在室温下搅拌1小时15分钟后，真空浓缩反应混合物。将残余物再次溶解于DCM中，用移液管吸至1M NaOH水溶液中。混合物搅拌1分钟，用10％HCl水溶液酸化至pH～1-2。用DCM萃取水层三次，无水MgSO4干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩。粗产品通过硅胶色谱法(0％至20％MeOH/EtOAc)进行纯化，得到羧酸38-4(131mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C32H43N4O7的[M+H]+分析计算值：595.31；实测值：595.29。
第6步。实施例38的制备：用TBTU(85mg，0.264mmol)、DMAP(32mg，0.264mmol)、DCM(2.6mL)和DIPEA(0.38mL，2.2mmol)处理羧酸38-4(131mg，0.220mmol)和中间体A10(81mg，0.264mmol)。反应混合物在室温下搅拌14小时，减压浓缩。残余物粗品通过HPLC纯化，得到大约为90％纯度的实施例38的TFA盐(74mg)。分析HPLC保留时间：8.93min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：845.37；实测值：845.57。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.12(s，1H)，7.77(d，J＝9.2Hz，1H)，7.20(dd，J＝9.0Hz，2.7Hz，1H)，7.16(d，J＝2.8Hz，1H)，5.81(td，J＝55.9，6.6Hz，1H)，5.59(d，J＝3.5Hz，1H)，4.52(d，J＝6.8Hz，1H)，4.50(s，1H)，4.40(d，J＝12.0Hz，1H)，4.18(dd，J＝11.9Hz，3.9Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.74(m，1H)，2.97-2.90(m，1H)，2.85-2.75(m，2H)，2.01(m，2H)，1.85-1.41(m，21H)，1.12(s，3H)，1.08(d，J＝7.4Hz，3H)，0.96(m，2H)，0.91(t，J＝4.3Hz，2H)，0.70(m，1H)，0.48(m，1H)。
实施例39.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-3a-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备。
第1步。39-1的制备：将喹喔啉醚1-1(588.7mg，1.159mmol)溶于TFA(5mL)。此溶液在室温下搅拌3小时。真空去除TFA，得到为无色粉末的39-1的TFA盐(631.2mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C16H19ClN3O4的[M+H]+分析计算值：352.1；实测值：352.1。
第2步。39-2的制备：将39-1的TFA盐(631.2mg，1.159mmol)溶于CH2Cl2/MeOH(3mL/3mL)。在室温下向此溶液中加入TMSCHN2溶液(2M己烷溶液，3mL，5.177mmol)。搅拌此溶液30分钟以得到混悬液，将其通过一个烧结玻璃漏斗进行过滤以去除固体。真空浓缩滤液以得到残余物，通过硅胶色谱法(100％乙酸乙酯)对其进行纯化，得到为无色晶体的甲酯39-2(213.0mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C17H21ClN3O4的[M+H]+分析计算值：366.1；实测值：366.1。
第3步。39-3的制备：用HATU(860.0mg，2.264mmol)和DIPEA(0.59mL，3.396mmol)的DMF溶液(8mL)在室温下处理中间体D7(191.2mg，0.587mmol)和甲酯39-2(414.1mg，1.132mmol)4小时。用H2O(50mL)淬灭反应，用EtOAc(50mL三次)萃取。用盐水(50mL)冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥。通过过滤去除干燥剂后，真空去除溶剂。通过硅胶色谱法(20％乙酸乙酯己烷溶液)纯化残余物，得到为无色油状物的预期酰胺39-3(573.9mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C33H49ClN4NaO7的[M+Na]+分析计算值：695.3；实测值：695.3。
第4步。39-4的制备：在氮气气氛下用Et3N(0.18mL，1.279mmol)的EtOH溶液(8mL)处理酰胺39-3(573.9mg，0.8524mmol)、乙烯三氟硼酸钾(171.3mg，1.279mmol)和PdCl2dppf·CH2Cl2(62.4mg，0.085mmol)并温和回流30分钟。用PhMe(30mL)稀释反应物，真空去除溶剂。通过硅胶色谱法(20％乙酸乙酯己烷溶液)纯化残余物，得到为你橙色泡沫的预期乙烯基喹喔啉39-4(542.0mg，0.8152mmol)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H52N4NaO7的[M+H]+分析计算值：687.4；实测值：687.3。
第5步。39-5的制备：用Zhan 1b催化剂(59.8mg，0.08mmol，Strem)的DCE溶液(41mL)处理乙烯基喹喔啉39-4(542.0mg，0.8152mmol)。混合物在80℃下加热1小时。再次加入Zhan 1b催化剂(59.8mg，0.08mmol，Strem)，混合物在80℃下继续加热30分钟。真空去除溶剂，通过硅胶色谱法(20％乙酸乙酯己烷溶液)纯化残余物，得到为橙色油状物的大环39-5(401.0mg，0.6297mmol)。LCMS-ESI+(m/z)：C35H49N4O7的[M+H]+分析计算值：637.4；实测值：637.3。
第6步。39-6的制备：将大环39-5(401.0mg，0.6297mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)并在氢气气氛和搅拌下用Pd/C(10％wt Pd，200.0mg)和MgO(200.0mg)处理。混合物在室温下搅拌1小时。使用EtOAc(80mL)通过硅藻土(5g)过滤反应混合物。真空去除溶剂，得到淡橙色油状物的大环39-6(425.3mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C35H51N4O7的[M+H]+分析计算值：639.4；实测值：639.3。
第7步。39-7的制备：用2M LiOH水溶液(1.6mL，3.15mmol)的MeOH/THF(4mL/4mL)溶液在室温下处理大环39-6(74.8mg，0.110mmol)8小时，50℃下2小时随后在60℃下3小时。使用冰水浴将混合物冷却至0℃。向混合物中加入盐水(30mL)。用CH2Cl2(30mL three times)萃取全部混合物。用盐水(30mL)冲洗有机层，无水Na2SO4干燥。通过过滤去除干燥剂后，真空去除溶剂，得到为无色油状物的羧酸39-7(370.6mg，0.5932mmol)。LCMS-ESI+(m/z)：C34H49N4O7的[M+H]+分析计算值：625.4；实测值：625.3。
第8步。实施例39的制备：用HATU(91.3mg，0.2401mmol)和DIPEA(0.14mL，0.8005mmol)的DMF溶液(3mL)在室温下处理羧酸39-7(100.0mg，0.1601mmol)和中间体A10(73.2mg，0.2401mmol)5小时。用H2O(30mL)淬灭反应，用EtOAc(30mL三次)萃取。用盐水(30mL)冲洗有机层，无水Na2SO4干燥。通过过滤去除干燥剂后，真空去除溶剂。通过硅胶色谱法(25至100％乙酸乙酯己烷溶液)纯化残余物。真空浓缩含有预期产物的组分，通过超临界流体柱色谱法(DAICEL Chiralpak IC 10x250mm，18.9mL/min，35％MeOH，15atm，40℃)进一步纯化残余物，得到为无色粉末的实施例39(80.5mg，0.0920mmol，57％)。分析HPLC保留时间：9.35min。LCMS-ESI+(m/z)：C43H61F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：875.4；实测值：875.4。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ7.81(d，J＝9.6Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.24(d，J＝9.6Hz，1H)，6.68(d，J＝9.6Hz，1H)，5.74-6.30(m，3H)，4.73(d，J＝7.2Hz，1H)，4.73(d，J＝7.2Hz，1H)，4.40-4.60(m，1H)，4.22(d，J＝9.6Hz，1H)，3.95(s，3H)，3.61(q，J＝7.2Hz，2H)，3.16-3.30(m，1H)，2.50-2.77(m，2H)，2.20-0.60(m，21H)，1.35(s，3H)1.12(t，J＝7.2Hz，3H)，1.18(s，3H)，1.02(s，9H)。
实施例40.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-3a-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备
实施例40的制备方法与实施例39类似，以中间体A9代替第8步中的中间体A10。以大约92％的纯度分离得到实施例40(70.9mg)。分析HPLC保留时间：9.24min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H59F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：861.4；实测值：861.4。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.80(d，J＝9.6Hz，1H)，7.25(s，1H)，7.23(d，J＝9.6Hz，1H)，6.70(d，J＝9.6Hz，1H)，5.60-6.10(m，3H)，4.69(d，J＝7.2Hz，1H)，4.39(dd，J＝12.0，6.0Hz，1H)，4.2(d，J＝9.6Hz，1H)，4.03-4.10(m，1H)，3.94(s，3H)，3.12-3.28(m，1H)，2.89-3.05(m，1H)，2.50-2.76(m，2H)，2.30-0.80(m，19H)，1.36(s，3H)1.25(t，J＝7.2Hz，3H)，1.10(s，3H)，1.04(s，9H)。
实施例41.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-N-[(1R,2S)-2-(2,2-二氟乙基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-11-乙基-16-甲氧基-3a-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备。
实施例41的制备方法与实施例39类似，以中间体A8代替第8步中的中间体A10。以大约92％的纯度分离得到实施例41(4.3mg)。分析HPLC保留时间：9.36min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H59F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：889.4；实测值：889.5。1H NMR(300MHz，CD3COCD3)δ7.83(d，J＝7.83Hz，1H)，7.19-7.30(m，1H)，5.74-6.30(m，3H)，4.70(d，J＝7.2Hz，1H)，4.19(dd，J＝12.0，6.0Hz，1H)，4.24(d，J＝9.6Hz，1H)，4.12(d，J＝12.0，9.6Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.10-3.26(m，1H)，2.56-2.80(m，2H)，2.30-0.80(m，25H)，1.54(s，3H)，1.42(s，3H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)，1.06(s，9H)。
实施例42和实施例43.(1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-1a-乙基-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺和(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-1a-乙基-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺
第1步。43-1的制备：在室温于氩气气氛下向中间体混合物D15(281mg，0.81mmol)和中间体18-2(290mg，0.74mmol)的MeCN溶液(3.7mL)中加入HATU(308mg，0.81mmol)和DIPEA(640μL，3.68mmol)。17小时后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物粗品，得到为无色油状物的43-1(121mg，1:1非对映混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H52ClN4O7的[M+H]+分析计算值：687.3；实测值：687.5。
第2步。43-2的制备：向非对映混合物43-1(121mg，176μmol)、TEA(38μL，264μmol)和乙酰基三氟硼酸钾(35.4mg，264μmol)的EtOH溶液(0.88mL)中加入PdCl2(dppf)(14.4mg，17.6μmol)。反应混合物用氩气脱气10分钟并加热至78℃。25分钟后，反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物粗品，得为黄色油状物的到43-2(105mg，1:1非对映混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C38H55N4O7的[M+H]+分析计算值：679.4；实测值：679.5。
第3步。43-3的制备：向非对映混合物43-2(105mg，155μmol)的DCE溶液(31mL)中加入Zhan 1B催化剂(11.3mg，15.5μmol，Strem)，反应混合物用氩气脱气10分钟。随后将反应混合物加热至100℃。15分钟后，反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物粗品，得到为淡黄色油状物的43-3(52.3mg，1:1非对映混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.4；实测值：651.5。
第4步。43-4的制备：在室温于氩气气氛下向非对映混合物43-3(52mg，80μmol)的乙醇溶液(0.4mL)中加入Pd/C(10wt％Pd，9mg，8μmol)。用氢气代替空气，反应混合物在室温下剧烈搅拌。45分钟后，用乙酸乙酯(1mL)稀释反应混合物。使用乙酸乙酯洗涤液(3×1mL)通过硅藻土垫过滤。真空浓缩滤液，得到43-4(49mg，1:1非对映混合物)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C36H52N4O7的[M+H]+分析计算值：653.4；实测值：653.6。
第5步。43-5的制备：在室温于氩气气氛下向非对映混合物43-4(49mg，67μmol)的DCM溶液(0.5mL)中加入TMSOTf(60μL，0.34mmol)。3小时后，将反应混合物缓慢加入至0.25NNaOH水溶液(预冷至0℃，1mL)中。用1N HCl水溶液(5mL)稀释所得混合物，用DCM(3×5mL)萃取。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，浓缩，得到为褐色固体的43-5(71mg，1:1非对映混合物)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C32H45N4O7的[M+H]+分析计算值：597.3；实测值：597.5。
第6步。实施例42和43的制备：在室温于氩气气氛下向非对映混合物43-5(71mg，～67μmol)和中间体A10(54mg，178μmol)的MeCN溶液(1.00mL)中加入HATU(69mg，178μmol)和DIPEA(155μL，0.89mmol)。1小时后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物粗品。合并含有预期产物的组分，通过制备HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，50-100％MeCN/H2O，0.1％三氟乙酸改性剂)再次纯化，冻干以得到为灰白色粉末的实施例42(10mg)和实施例43(10mg)。实施例42：分析HPLC保留时间：9.04min。C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.4；实测值：847.6。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.98(s，1H)，7.73(d，J＝8.4Hz，2H)，7.20-7.13(m，2H)，5.70(td，J＝55.8，6.4Hz，1H)，5.65(d，J＝3.7Hz，1H)，5.44(br s，1H)，4.55-4.42(m，1H)，4.20-4.03(m，1H)，3.87(s，3H)，3.17-3.08(m，1H)，2.85-2.72(m，1H)，2.71-2.59(m，1H)，2.18-2.06(m，1H)，2.03-1.83(m，4H)，1.80-1.53(m，5H)，1.50(br s，3H)，1.46(s，3H)，1.40-1.31(m，1H)，1.33-1.09(m，5H)，1.06(s，9H)，1.05-0.95(m，6H)，0.92-0.73(m，3H)。实施例43：分析HPLC保留时间：9.17min。C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.4；实测值：847.6。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.03(s，1H)，7.68(d，J＝9.5Hz，1H)，7.14-7.09(m，2H)，5.68(td，JH-F＝55.5，6.7Hz，1H)，5.59(d，J＝3.7Hz，1H)，4.45(d，J＝6.8Hz，1H)，4.29(d，J＝12.1Hz，1H)，4.12(s，1H)，4.08(dd，J＝12.1，4.3Hz，1H)，3.82(s，3H)，2.90-2.79(m，1H)，2.79-2.70(m，1H)，2.66-2.56(m，1H)，2.43-2.31(m，1H)，1.95-1.85(m，2H)，1.75-1.62(m，1H)，1.61-1.42(m，5H)，1.44(br s，3H)1.40(s，3H)，1.34-1.02(m，8H)，1.00(s，9H)，0.99-0.89(m，5H)，0.85-0.74(m，3H)。
实施例44.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-1a,9-二甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。44-1的制备：在氩气下向18-2(429mg，1.09mmol)和中间体混合物D6(395mg，1.33mmol)的12mL乙腈混合物中加入HATU(544mg，1.43mmol，Oakwood)和DIPEA(0.83mL，4.76mmol)。搅拌过夜后，减压浓缩反应混合物，所得残余物通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为白色固体的44-1(545mg；1:1非对映体混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C35H50ClN4O7的[M+H]+分析计算值：673.33；实测值：673.47。
第2步。44-2的制备：在室温下向44-1(542mg，0.805mmol)、乙酰基三氟硼酸钾(168mg，1.25mmol)和三乙胺(0.170mL，1.21mmol)的9mL EtOH去氧混合物中加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(74mg，0.091mmol，Strem)。反应混合物在78℃于氩气下加热75分钟。冷却至室温后，加入6mL甲苯，真空浓缩反应混合物。所得残余物通过硅胶色谱法(0-35％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为黄色薄膜的44-2(438mg；1:1非对映体混合物)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H53N4O7的[M+H]+分析计算值：665.38；实测值：665.55。
第3步。44-3和44-4的制备：非对映混合物44-2(437mg，0.658mmol)和Zhan 1B催化剂(81mg，0.072mmol，Strem)的131mL DCE溶液在氩气下去氧25分钟。混合物在95℃下加热50分钟。再次加入7mg Zhan 1B催化剂，反应混合物在95℃下加热10分钟。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。所得残余物通过硅胶色谱法(0-40％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为淡黄色薄膜的单个非对映体44-3(143mg，早洗脱成分)和为淡黄色固体的44-4(118mg，晚洗脱成分)。早洗脱物44-3：LCMS-ESI+(m/z)：C35H49N4O7的[M+H]+分析计算值：637.35；实测值：637.45。晚洗脱物44-4：LCMS-ESI+(m/z)：C35H49N4O7的[M+H]+分析计算值：637.35；实测值：637.59。
第4步。44-5的制备：向44-3(143mg，0.225mmol)的6mL乙醇溶液中加入钯碳(10wt％Pd，48mg，0.045mmol)。用氢气代替空气，反应物搅拌90分钟。通过硅藻土过滤反应混合物，用乙酸乙酯冲洗。真空浓缩滤液，得到为褐色固体薄膜的44-5(130mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C35H51N4O7的[M+H]+分析计算值：639.37；实测值：639.53。
第5步。44-6的制备：在室温于氩气下向44-5(130mg，1.27mmol)的3.8mL二氯甲烷溶液中滴加TMSOTf(0.53mL，2.91mmol)。一小时后，再次加入0.22mL TMSOTf。继续一小时后，加入0.20mL TMSOTf。40分钟后，加入0.25mL TMSOTf。一小时后，将反应混合物溶于10mL二氯甲烷，在搅拌下加入20mL 1N HCl水溶液以淬灭。分离两层，用二氯甲烷(3x30mL)萃取水层。用盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到为灰白色固体的44-6(113mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C31H43N4O7的[M+H]+分析计算值：583.31；实测值：583.45。
第6步。实施例44的制备：在氩气下向44-6(51mg，0.088mmol)和中间体A10(49mg，0.161mmol)的1.5mL MeCN混合物中加入HATU(53mg，0.139mmol)和DIPEA(0.080mL，0.459mmol)。搅拌过夜后，再次加入13mg中间体A10。一小时后，将反应混合物溶于15mL乙酸乙酯并倒入至20mL 1N HCl水溶液中。分离两层，用乙酸乙酯萃取水相三次。用水和盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-40％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为灰白色固体的实施例44(41mg)。分析HPLC保留时间：8.86min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：833.36；实测值：833.51。1HNMR(400MHz，CD3OD)：7.79(d，J＝10Hz，1H)，7.28-7.21(m，2H)，6.77(d，J＝8.4Hz，1H)，5.81(td，JH-F＝56Hz，J＝6.4Hz，1H)，5.73-5.70(m，1H)，4.56(d，J＝7.2Hz，1H)，4.40(d，J＝11.6Hz，1H)，4.26-4.16(m，2H)，3.93(s，3H)，3.05-2.91(m，1H)，2.90-2.82(m，1H)，2.77-2.68(m，1H)，2.06-1.94(m，2H)，1.88-1.74(m，1H)，1.72-1.58(m，3H)，1.58-1.44(m，4H)，1.53(s，3H)，1.51(s，3H)，1.43-1.36(m，1H)，1.12-1.02(m，2H)，1.09(s，9H)，1.07(d，J＝4Hz，3H)，1.00-0.94(m，2H)，0.92-0.84(m，3H)，0.16-0.11(m，1H)。
实施例45.(1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-1a,9-二甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例45的制备方法与实施例44类似，以晚洗脱物44-4代替第4步中的早洗脱物44-3。分离得到为灰白色固体的实施例45(23mg)。分析HPLC保留时间：8.92min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H55F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：833.36；实测值：833.54。1H NMR(400MHz，CD3OD)：7.79(d，J＝9.2Hz，1H)，7.25-7.19(m，2H)，6.55(d，J＝5.2Hz，1H)，5.78(td，JH-F＝61Hz，J＝6Hz，1H)，5.52-5.48(m，1H)，4.58(d，J＝6.4Hz，1H)，4.52(d，J＝12Hz，1H)，4.17-4.10(m，1H)，4.04(d，J＝6.4Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.22-3.14(m，1H)，2.88-2.80(m，1H)，2.78-2.66(m，1H)，2.08-1.90(m，2H)，1.76-1.64(m，1H)，1.63-1.50(m，7H)，1.51(s，3H)，1.47-1.36(m，2H)，1.46(s，3H)，1.18-1.06(m，1H)，1.12(s，9H)，1.07(m，3H)，1.00-0.80(m，4H)，0.10-0.04(m，1H)。
实施例46和47.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-18,18-二氟-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺和(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-18-氟-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。46-1的制备：中间体B1(627mg，2.08mmol)、中间体E3(548mg，1.91mmol)和碳酸铯(744mg，2.28mmol)的7mL DMF混合物在85℃于氩气下搅拌36小时。将反应混合物冷却至室温并倒入至30mL水中，用乙酸乙酯(3x30mL)萃取水相。用水、盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为白色固体的46-1(891mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C27H36F2N3O6的[M+H]+分析计算值：536.25；实测值：536.35。
第2步。46-2的制备：在室温下将喹喔啉醚46-1(478mg，0.893mmol)溶于4.2mL乙酸叔丁酯和1.1mL二氯甲烷中。滴加MeSO3H(0.30mL，4.67mmol)，在室温下搅拌反应混合物2小时。将反应混合物转移至搅拌的EtOAc(20mL)和NaHCO3饱和水溶液(30mL)混合物中。分离两相，用EtOAc(2x20mL)萃取水相。无水Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到为黄色固体薄膜的胺46-2(346mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C22H28F2N3O4的[M+H]+分析计算值：436.20；实测值：436.29。
第3步。46-3的制备：在氩气下向46-2(345mg，0.793mmol)和中间体D11(260mg，0.965mmol)的9mL乙腈混合物中加入HATU(396mg，1.04mmol，Oakwood)和DIPEA(0.57mL，3.29mmol)。搅拌过夜后，减压浓缩反应混合物，所得残余物通过硅胶色谱法(0-40％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为透明固体薄膜的46-3(545mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C36H49F2N4O7的[M+H]+分析计算值：687.35；实测值：687.57。
第4步。46-4的制备：46-3(480mg，0.699mmol)和Zhan 1B催化剂(61mg，0.083mmol，Strem)的140mL DCE混合物用氩气去氧气18分钟。混合物在95℃下加热70分钟。继续加入20mg Zhan 1B催化剂，混合物在95℃下搅拌一小时。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。所得残余物通过硅胶色谱法(0-35％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到为灰白色固体的46-4(主要)与大约15％的47-1(次要；总计233mg)的不可分离混合物。主要成分46-4：LCMS-ESI+(m/z)：C34H45F2N4O7的[M+H]+分析计算值：665.38；实测值：665.50。次要成分47-1：LCMS-ESI+(m/z)：C34H44FN4O7的[M+H]+分析计算值：639.31；实测值：639.49。
第5步。46-5和47-2混合物的制备：向来自于前一步的46-4和47-1混合物(232mg，0.353mmol)的9mL乙醇溶液中加入钯碳(10wt％Pd，70mg，0.066mmol)。用氢气代替空气，搅拌7小时。通过硅藻土过滤反应物，用乙醇冲洗。真空浓缩滤液，得到为灰白色固体的46-5(主要)和47-2(次要；总计216mg)混合物，其无需进一步纯化即可用于下一步。主要成分46-5：LCMS-ESI+(m/z)：C34H47F2N4O7的[M+H]+分析计算值：661.33；实测值：661.52。次要成分47-2：LCMS-ESI+(m/z)：C34H48FN4O7的[M+H]+分析计算值：643.34；实测值：643.57。
第6步。46-6和47-3混合物的制备：在室温于氩气下向来自于前一步的46-5和47-2混合物(215mg，0.326mmol)的6.5mL二氯甲烷溶液中滴加TMSOTf(0.35mL，1.90mmol)。1小时后，继续加入0.18mL TMSOTf。继续一小时后，加入0.30mL TMSOTf。2小时后，加入0.18mLTMSOTf。1小时后，继续加入0.18mL TMSOTf。45分钟后，将反应混合物溶于25mL二氯甲烷，在搅拌下加入30mL 1N HCl水溶液以淬灭。用二氯甲烷(3x40mL)萃取水层。用盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到46-6(主要)和47-3(次要；总计187mg)的不可分离混合物，其无需进一步纯化即可用于下一步。主要成分46-6：LCMS-ESI+(m/z)：C30H39F2N4O7的[M+H]+分析计算值：605.27；实测值：605.44。次要成分47-3：LCMS-ESI+(m/z)：C30H39FN4O7的[M+H]+分析计算值：587.28；实测值：587.38，
第7步。实施例46和实施例47的制备：在氩气下向来自于前一步的46-6和47-3混合物(150mg，0.248mmol)以及中间体A10(150mg，0.496mmol)的6.5mL乙腈溶液中加入HATU(160mg，0.421mmol，Oakwood)和DIPEA(0.25mL，1.44mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物溶于30mL乙酸乙酯并倒入至30mL 1N HCl水溶液。用乙酸乙酯萃取水层三次。用水和盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)和反相制备HPLC(50-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化，得到为淡黄色固体的实施例46的三氟乙酸盐(107mg)以及为淡黄色固体的实施例47的1:1非对映体混合物的三氟乙酸盐(12mg)。实施例46：分析HPLC保留时间：8.60min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H51F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：855.33；实测值：855.63。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.23(s，1H)，7.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.31(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.28(d，J＝2.8Hz，1H)，5.78(td，JH-F＝66Hz，J＝6.8Hz，1H)，5.68-5.66(m，1H)，4.57(d，J＝6.4Hz，1H)，4.41(d，J＝12Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.22-4.16(dd，J＝12，4Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.72-3.66(m，1H)，2.86-2.76(m，1H)，2.64-2.48(m，1H)，2.11-1.94(m，3H)，1.86-1.74(m，3H)，1.73-1.62(m，1H)，1.58-1.54(m，2H)，1.50(s，3H)，1.49-1.44(m，1H)，1.42-1.38(m，1H)，1.11-1.04(m，4H)，1.09(s，9H)，1.02-0.94(m，2H)，0.93-0.86(m，2H)，0.78-0.66(m，1H)，0.54-0.46(m，1H)。实施例47(1:1非对映体混合物)：分析HPLC保留时间：8.45min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H52F3N6O9S的[M+H]+分析计算值：837.34；实测值：837.63。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.13(s，1H)，7.89(d，J＝8.8Hz，1H)，7.27(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.24(d，J＝2.8Hz，1H)，5.99-5.43(m，1H)，5.79(td，JH-F＝55Hz，J＝6.8Hz，1H)，5.53-5.50(m，1H)，4.57-4.44(m，2H)，4.11(s，1H)，4.35(s，1H)，4.22-4.13(dd，J＝12.4，4Hz，1H)，3.95(s，3H)，3.83-3.79(m，1H)，2.94-2.80(m，2H)，2.28-2.14(m，1H)，2.06-1.96(m，2H)，1.88-1.69(m，4H)，1.58-1.54(m，2H)，1.51(s，3H)，1.44-1.36(m，1H)，1.32-1.26(m，1H)，1.14-1.04(m，4H)，1.10(s，9H)，1.02-0.86(m，4H)，0.74-0.64(m，1H)，0.58-0.48(m，1H)。
实施例48.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-{(1R,2S)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-乙烯基环丙基}-14-甲氧基-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步：实施例48的制备：向酸18-7(9.7mg，0.017mmol)和中间体A1(13mg，0.049mmol)的MeCN混悬液(0.4mL)中加入DIPEA(40μL，0.23mmol)。向所得溶液中加入HATU(12.5mg，0.033mmol)。反应物在室温下搅拌1小时，用EtOAc(2mL)、0.2M HCl水溶液(1mL)和盐水(1mL)稀释。分离两相，用EtOAc(3x2mL)萃取水相。无水Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品，将其溶于CH2Cl2并吸附至1g硅胶上。通过硅胶色谱法(10％至50％丙酮己烷溶液)进行纯化，自水和MeCN中冻干得到残余物，获得为白色无定形固体的实施例48(8.4mg)。分析HPLC保留时间：8.52min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H53N6O9S的[M+H]+分析计算值：781.4；实测值：781.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.91(s，1H)，7.83(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.10(d，J＝2.7Hz，1H)，6.73(s，1H)，5.86-5.72(m，1H)，5.57(d，J＝3.8Hz，1H)，5.48(d，J＝9.9Hz，1H)，5.27-5.15(m，1H)，5.15-5.07(m，1H)，4.48-4.35(m，3H)，4.12(dd，J＝11.8，4.1Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.81-3.71(m，1H)，2.98-2.75(m，4H)，2.16-2.09(m，1H)，1.94(dd，J＝8.2，5.8Hz，1H)，1.87-1.24(m，9H)，1.17(d，J＝7.4Hz，3H)，1.09(s，9H)，1.04-0.91(m，5H)，0.75-0.65(m，1H)，0.52-0.42(m，J＝6.0Hz，1H)。
实施例49.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-15-甲氧基-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
第1步：实施例49的制备：向酸33-4(30mg，0.049mmol)和中间体A10(31mg，0.10mmol)的MeCN混悬液(700μL)中加入DIPEA(70μL，0.40mmol)。向所得溶液中加入HATU(32mg，0.084mmol)，反应物在室温下搅拌1.5小时。随后再加入一部分中间体A10(6mg，0.02mmol)。反应物继续搅拌30分钟，用EtOAc(30mL)、0.2M HCl水溶液(15mL)和盐水(15mL)稀释。分离两相，用EtOAc(30mL)萃取水相。无水Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2并吸附至2g硅胶上。通过硅胶色谱法(10％至50％丙酮己烷溶液)进行纯化，自水和MeCN冻干得到无定形残余物，获得为白色无定形固体的实施例49(30.5mg)。分析HPLC保留时间：9.15min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：859.4；实测值：859.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.86(s，1H)，7.82(d，J＝9.1Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.18(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.08(d，J＝2.7Hz，1H)，6.14-5.71(m，1H)，5.61(d，J＝3.7Hz，1H)，5.28(d，J＝9.8Hz，1H)，5.00(d，J＝7.4Hz，1H)，4.49(d，J＝7.0Hz，1H)，4.42-4.31(m，2H)，4.12(dd，J＝11.6，4.0Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.00-2.63(m，4H)，2.25-2.16(m，1H)，2.09-1.90(m，4H)，1.81-0.95(m，26H)，0.92-0.75(m，3H)，0.57-0.45(m，1H)，0.44-0.36(m，1H)。
实施例50.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-9-(氰甲基)-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例50的制备方法与实施例1类似，以中间体B8代替第1步中的中间体B4。实施例50通过反相HPLC(Gemini色谱柱，58-98％ACN/H2O+0.1％TFA)进行纯化，冻干以得到为TFA盐的固体(5mg)。分析HPLC保留时间：8.29min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H51F2N7O9S的[M+H]+分析计算值：844.94；实测值：844.58。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.71(s，1H)，7.79(d，J＝8.8Hz，1H)，7.22(m，2H)，6.25(m，1H)，6.08-5.80(m，1H)，4.39(m，1H)，4.29(m，2H)，4.13(m，1H)，3.92(s，3H)，3.65(m，1H)，3.06-2.83(m，4H)，2.55(m，1H)，2.14-1.47(m，17H)，1.03(s，9H)，0.92(m，4H)，0.65(m，1H)，0.45-0.43(m，1H)。
实施例51.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-N-{(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-乙基环丙基}-11-乙基-16-甲氧基-3a-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备。
实施例51的制备方法与实施例39类似，以中间体A3代替第8步中的中间体A10。以大约96.5％的纯度分离得到实施例51(12.3mg)。分析HPLC保留时间：9.38min。LCMS-ESI+(m/z)：C43H63N6O9S的[M+H]+分析计算值：839.4；实测值：839.5。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，6.98-7.08(m，2H)，6.53(d，J＝9.6Hz，1H)，5.57-5.83(m，2H)，4.52(d，J＝8.4Hz，2H)，4.24(dd，J＝10.8，6.0Hz，1H)，4.02(d，J＝9.6Hz，1H)，3.82(dd，J＝10.8，2.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，2.93-3.10(m，1H)，2.80-2.90(m，2H)，2.30-2.58(m，2H)，0.60-2.10(m，32H)，0.84(s，9H)。
实施例52.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-11-乙基-N-[(1R,2S)-2-(2-氟乙基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-16-甲氧基-3a-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备。
实施例52的制备方法与实施例39类似，以中间体A6代替第8步中的中间体A10。以大约96.5％的纯度分离得到实施例52(12.3mg)。分析HPLC保留时间：8.60min。分析HPLC保留时间：9.31min。LCMS-ESI+(m/z)：C44H64FN6O9S的[M+H]+分析计算值：871.4；实测值：871.5。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.20-7.30(m，2H)，6.73(d，J＝9.6Hz，1H)，5.75-6.02(m，2H)，4.74(d，J＝8.4Hz，2H)，4.54(t，J＝6.0Hz，2H)，4.36-4.49(m，1H)，4.23(d，J＝9.6Hz，1H)，4.04(dd，J＝12.0，2.4Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.28-3.16(m，1H)，2.50-2.70(m，2H)，2.30-0.80(m，35H)，1.04(s，9H)。
实施例53.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例53的制备与实施例17类似，以中间体E4代替第1步中的中间体E3且以中间体A9代替第7步中的中间体A10。分离得到为白色固体的实施例53(8.8mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C38H48F4N6O8S的[M+H]+分析计算值：825.32；实测值：825.75。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.13(s，1H)，8.15(d，J＝8.2Hz，1H)，7.91-7.74(m，2H)，7.69(t，J＝7.6Hz，1H)，6.92(s，1H)，5.47(d，J＝9.6Hz，1H)，4.48(t，J＝10.3Hz，2H)，4.36(d，J＝9.4Hz，1H)，4.12(dd，J＝12.1，3.6Hz，1H)，3.70-3.59(m，1H)，3.08-2.75(m，1H)，2.58-2.38(m，1H)，2.14(t，J＝6.8Hz，1H)，1.95-1.67(m，4H)，1.47(tt，J＝13.9，7.1Hz，4H)，1.35(s，2H)，1.20(t，J＝7.3Hz，3H)，1.15-0.64(m，19H)，0.51(q，J＝6.4Hz，1H)。
实施例54.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-{(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-乙基环丙基}-9-乙基-18,18-二氟-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例54的制备与实施例53类似，以中间体A3代替中间体A9。分离得到为白色固体的实施例54(10.0mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C39H52F2N6O8S的[M+H]+分析计算值：803.35；实测值：803.79。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.88(s，1H)，8.12(d，J＝8.2Hz，1H)，7.88-7.69(m，2H)，7.66(t，J＝7.6Hz，1H)，6.68(s，1H)，5.95(d，J＝3.4Hz，1H)，5.46(d，J＝9.4Hz，1H)，4.45(dd，J＝13.8，9.7Hz，2H)，4.09(dd，J＝12.0，3.6Hz，2H)，3.71-3.57(m，1H)，2.53(dd，J＝21.4，14.6Hz，1H)，1.85-1.39(m，10H)，1.38-0.96(m，20H)，1.01(dd，J＝17.2，9.5Hz，3H)，1.04-0.78(m，6H)，0.70(s，1H)，0.49(dd，J＝12.7，6.3Hz，1H)。
实施例55.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-3,6-二氧-14-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
按照实施例1的第1步至第6步制备中间体55-1，以中间体E2代替第1步中的中间体E1。LCMS-ESI+(m/z)：C34H49N4O7的[M+H]+分析计算值：625.36；实测值：625.25。
第1步。55-2的制备。将喹喔啉55-1(24mg，0.038mmol)悬于DMF(2mL)中并用Cs2CO3(63mg，0.19mmol)和三氟甲烷磺酸-2,2,2-三氟乙酯(0.055mL，0.38mmol)处理。反应混合物在室温下搅拌5小时，用稀释EtOAc。用H2O和盐水冲洗有机层，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩以得到55-2，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C36H50F3N4O7的[M+H]+分析计算值：707.36；实测值：707.38。
第2步。55-3的制备。在室温下用DCM(4mL)和TMSOTf(0.14mL，0.77mmol)处理三氟乙基醚55-2(0.038mmol理论值)。1小时后，加入1M NaOH(2mL)以淬灭反应。剧烈搅拌5分钟后，将混合物倒入分液漏斗中，随后加入10％HCl(20mL)。用DCM萃取水层三次。MgSO4干燥合并的有机相，过滤并减压浓缩以得到55-3，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C32H42F3N4O7的[M+H]+分析计算值：651.30；实测值：651.18。
第3步。实施例55的制备。用中间体A10(23mg，0.077mmol)、TBTU(25mg，0.077mmol)、DMAP(9mg，0.077mmol)、DCM(1mL)和DIPEA(0.134mL，0.768mmol)处理羧酸55-3(0.038mmol理论值)。反应混合物在室温下搅拌20小时，减压浓缩，通过反相HPLC进行纯化以得到为TFA盐的实施例55(7mg，3步的收率为18％)。LCMS-ESI+(m/z)：C41H54F5N6O9S的[M+H]+分析计算值：901.36；实测值：902.08。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.18(s，1H)，7.86(d，J＝9.1Hz，1H)，7.32(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.25(d，J＝2.7Hz，1H)，6.02-5.63(m，2H)，4.76-4.62(m，2H)，4.56(d，J＝7.1Hz，1H)，4.39(t，J＝6.0Hz，2H)，4.15(dt，J＝17.2，8.6Hz，1H)，3.74(dd，J＝6.7，2.8Hz，1H)，3.05-2.89(m，1H)，2.82(td，J＝13.2，4.2Hz，1H)，2.65-2.50(m，1H)，2.02(d，J＝10.4Hz，2H)，1.78(dt，J＝23.5，10.7Hz，3H)，1.68-1.26(m，14H)，1.22(t，J＝7.3Hz，3H)，1.10(s，9H)，0.97(d，J＝2.5Hz，2H)，0.95-0.84(m，2H)，0.71(s，1H)，0.51(t，J＝9.8Hz，1H)。
实施例56.(3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-叔丁基-11-乙基-N-[(1R,2R)-2-乙基-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-16-甲氧基-3a-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷环戊烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备
实施例56的制备方法与实施例39类似，以中间体A9代替第8步中的中间体A3。分离得到实施例56(8.8mg，0.0103mmol，53.7％)。分析HPLC保留时间：9.56min。LCMS-ESI+(m/z)：C44H65N6O9S的[M+H]+分析计算值：853.45；实测值：853.5。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.81(d，J＝9.6Hz，1H)，7.20-7.30(m，2H)，6.73(d，J＝9.6Hz，1H)，5.76-6.01(m，2H)，4.75(d，J＝8.4Hz，1H)，4.46(dd，J＝12.0，6.0Hz，1H)，4.23(d，J＝9.6Hz，1H)，4.00-4.08(m，1H)，3.95(s，3H)，2.50-2.78(m，3H)，0.80-2.30(m，30H)，1.54(s，3H)，1.35(s，3H)，1.05(s，9H)。
实施例57.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2S)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(2,2-二氟乙基)环丙基]-15-甲氧基-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
第1步。实施例57的制备。向酸33-4(14.9mg，0.0245mmol)和胺盐酸盐A-7(16.3mg，0.0535mmol)的MeCN混悬液(500μL)中加入DIPEA(40μL，0.23mmol)。向所得溶液中加入HATU(15.5mg，0.0408mmol)，反应物在室温下搅拌17小时。用EtOAc(2mL)、0.2M HCl水溶液(1.5mL)和盐水(1.5mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(4x1.5mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2并浓缩至1.5g硅胶上。通过硅胶色谱法(10％至40％丙酮己烷溶液)进行纯化，自水和MeCN冻干得到无定形残余物，获得实施例57。LCMS-ESI+(m/z)：C42H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：859.4；实测值：859.0。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.00(s，1H)，7.82(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.09(d，J＝2.6Hz，1H)，6.75(s，1H)，6.07-5.57(m，2H)，5.26(d，J＝9.8Hz，1H)，5.01(d，J＝7.4Hz，1H)，4.50-4.29(m，3H)，4.12(dd，J＝11.7，3.9Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.00-2.62(m，4H)，2.34-0.96(m，33H)，0.95-0.78(m，1H)，0.51(dd，J＝13.0，7.9Hz，1H)，0.39(d，J＝4.2Hz，1H)。
实施例58.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2S)-2-(2,2-二氟乙基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-15-甲氧基-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备
第1步。实施例58的制备。向酸33-4(14.5mg，0.0238mmol)和胺盐酸盐A-8(16.0mg，0.0502mmol)的MeCN混悬液(500μL)中加入DIPEA(40μL，0.23mmol)。向所得溶液中加入HATU(15.5mg，0.0408mmol)，反应物在室温下搅拌17小时。用EtOAc(2mL)、0.2M HCl水溶液(1.5mL)和盐水(1.5mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(4x1.5mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2并浓缩至1.5g硅胶上。通过硅胶色谱法(10％至40％丙酮己烷溶液)进行纯化，自水和MeCN冻干得到无定形残余物，获得实施例58。LCMS-ESI+(m/z)：C43H59F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：873.4；实测值：873.3。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.72(s，1H)，7.82(d，J＝9.1Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.09(d，J＝2.7Hz，1H)，6.82(s，1H)，6.12-5.54(m，2H)，5.25(d，J＝9.8Hz，1H)，5.01(d，J＝7.2Hz，1H)，4.50-4.30(m，3H)，4.13(dd，J＝11.7，4.2Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.03-2.65(m，4H)，2.34-0.97(m，33H)，0.94-0.76(m，3H)，0.60-0.45(m，1H)，0.45-0.34(m，1H)。
实施例59.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-10-乙基-19,19-二氟-15-甲氧基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
第1步。59-1的制备。随后用COMU(0.80g，1.9mmol)、DIPEA(1.2mL，6.7mmol)和中间体17-2(0.65g，1.3mmol)处理中间体D16(0.50g，1.6mmol)的DMF溶液(7mL)并在室温下搅拌过夜。用1M柠檬酸溶液(5mL)淬灭反应，用EA萃取。用盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(15-100％EA/hex)进行纯化以得到59-1。LCMS-ESI+(m/z)：C40H55F2N4O7的[M+H]+分析计算值：741.88；实测值：741.51。
第2步。59-2的制备。用氩气吹扫59-1(0.51g，0.69mmol)的DCE溶液(140mL)30分钟，随后加入Zhan 1B催化剂(0.051g，0.07mmol)。反应物加热至85℃，持续45分钟，加入另一部分Zhan 1B催化剂。继续30分钟后，将反应物冷却至室温，真空浓缩，通过硅胶色谱法(5-100％EA/hex)纯化以得到59-2。LCMS-ESI+(m/z)：C38H51F2N4O7的[M+H]+分析计算值：713.83；实测值：713.54.。
第3步。59-3的制备。将59-2溶液溶于EtOH(8mL)。加入Pd/C(0.072g，10％w/w)并用H2代替空气。1小时后，加入更多催化剂。4小时后，加入EA和更多催化剂。继续3小时后，过滤反应物，真空浓缩，将残余物溶于EtOH(8mL)，用0.5g Pd/C(10％w/w)处理并用H2代替空气。反应物搅拌过夜，按照前述过程再次处理以得到59-3，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C38H53F2N4O7的[M+H]+分析计算值：715.85；实测值：715.52。
第4步。59-4的制备。在室温下用2.5mL TFA处理59-3(0.40g，0.56mmol)的DCM溶液(1.5mL)。1.5小时后，真空浓缩反应物。将残余物溶于EA，用NaHCO3饱和水溶液、盐水冲洗，无水MgSO4干燥。真空浓缩以得到59-4，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C34H45F2N4O7的[M+H]+分析计算值：659.74；实测值：659.56。
第5步。实施例59的制备：随后用HATU(0.21g，0.55mmol)、DIPEA(0.27mL，1.5mmol)、DMAP(0.056g，0.46mmol)和中间体A9(0.13g，0.46mmol)处理59-4(0.20g，0.30mmol)的DMF溶液(2mL)并在室温下搅拌5小时。通过制备HPLC纯化反应混合物，以得到实施例59的TFA盐。分析HPLC保留时间：9.20min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H55F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：895.98；实测值：895.60。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.31(s，1H)；7.94(d，J＝9.2Hz，1H)；7.32(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)；7.21(d，J＝2.4Hz，1H)；5.98(br s，1H)；5.85(td，JH-F＝55.2Hz，J＝6Hz，1H)；4.94(d，J＝7.6Hz，1H)；4.58(d，J＝7.2Hz，1H)；4.35(d，J＝7.2Hz，1H)；4.33(br s，1H)；4.18(dd，J＝12，3.6Hz，1H)；3.97(br s，3H)；2.98(m，1H)；2.64-2.41(m，2H)；2.22(m，1H)；2.15-1.92(m，4H)；1.84-1.22(m，14H)；1.18(t，J＝7.2Hz，3H)；1.14-0.98(m，2H)；1.08(s，9H)；0.60-0.48(m，2H)。
实施例60.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-9-丙基-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。60-1的制备：在室温于氩气气氛下向中间体B5(160mg，0.590mmol)和中间体E3(194mg，0.590mmol)的MeCN溶液(2.95mL)中加入碳酸铯(192mg，0.590mmol)。24小时后，通过硅藻土垫过滤反应混合物，真空浓缩滤液。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品以得到取代喹喔啉60-1。LCMS-ESI+(m/z)：C29H40F2N3O6的[M+H]+分析计算值：564.28；实测值：564.44。
第2步。60-2的制备：向60-1(193mg，0.343mmol)的乙酸叔丁酯(1.36mL)溶液中加入甲磺酸(111μL，1.72mmol)的二氯甲烷溶液(0.34mL)，反应物在室温下搅拌。2小时后，用碳酸氢钠饱和溶液(20mL)稀释反应混合物，所得混合物用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。无水硫酸钠干燥合并的有机相，真空浓缩以得到胺盐酸盐60-2，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C24H32F2N3O4的[M+H]+分析计算值：464.23；实测值：464.35。
第3步。60-3的制备：在室温于氩气气氛下向60-2(133mg，0.289mmol)和中间体D11(133mg，0.412mmol)的MeCN溶液(1.7mL)中加入HATU(157mg，0.412mmol)和DIPEA(298μL，1.72mmol)。1小时后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品以得到酰胺60-3。LCMS-ESI+(m/z)：C38H53F2N4O7的[M+H]+分析计算值：715.38；实测值：715.55。
第4步。60-4的制备：向60-3(188mg，264μmol)的DCE溶液(52.8mL)中加入Zhan 1B催化剂(19.4mg，26.4μmol)，反应混合物用氩气脱气10分钟。随后将反应混合物加热至100℃。1小时后，反应混合物冷却至室温，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化残余物粗品以得到大环60-4。LCMS-ESI+(m/z)：C36H49F2N4O7的[M+H]+分析计算值：687.35；实测值：687.54。
第5步。60-5的制备：在室温于氩气气氛下向大环60-4(119mg，173μmol)的乙醇溶液(1.0mL)中加入Pd/C(10wt％，18.4mg，17.3μmol)。将反应容器抽真空并重新充入1atm氢气(3×)，在室温下剧烈搅拌反应混合物。1小时后，使用乙酸乙酯洗涤液(3×2mL)通过硅藻土垫过滤反应混合物。真空浓缩滤液以得到大环60-5，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51F2N4O7的[M+H]+分析计算值：689.36；实测值：689.56。
第6步。60-6的制备：在室温于氩气气氛下向60-5(150mg，218μmol)的DCM溶液(1.1mL)中加入TMSOTf(197μL，1.09mmol)。2小时后，将反应混合物转移至预冷至0℃的0.5NNaOH溶液(5mL)中。用1N HCl溶液将所得混合物酸化至pH＝2，用二氯甲烷(3×5mL)萃取。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，真空浓缩以得到羧酸60-6，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C32H43F2N4O7的[M+H]+分析计算值：633.30；实测值：633.49，
第7步。实施例60的制备：在室温于氩气气氛下向60-6(100mg，158μmol)和中间体A9(69.0mg，237μmol)的MeCN溶液(790μL)中加入HATU(91.5mg，237μmol)和DIPEA(137μL，790μmol)。3小时后，真空浓缩反应混合物，通过制备HPLC(Gemini5u C18色谱柱，5-100％MeCN/H2O，0.1％三氟乙酸改性剂)进行纯化，冻干以得到为TFA盐的实施例60。分析HPLC保留时间：8.89min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H53F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：869.35；实测值：859.66。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.29(brs，1H)，7.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.31(d，J＝9.2Hz，1H)，7.19(br s，1H)，5.87(brs，1H)，5.84(td，JH-F＝55.8Hz，J＝5.4Hz，1H)，4.56(d，J＝6.9Hz，1H)，4.40(d，J＝12.6Hz，1H)，4.36(s，1H)，4.17(dd，J＝11.9，3.4Hz，1H)，3.96(br s，4H)，3.68(br s，1H)，3.01-2.91(m，1H)，2.71-2.61(m，1H)，2.61-2.43(m，1H)，2.02(brs，4H)，1.88-1.59(m，4H)，1.59-1.35(m，4H)，1.33-1.20(m，3H)，1.09(s，9H)，1.04-0.95(app t，J＝7.0Hz，5H)，0.79-0.65(m，1H)，0.49(d，J＝6.5Hz，1H)。
实施例61.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-10-乙基-19,19-二氟-15-甲氧基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
实施例61的制备与实施例59类似，以中间体A10代替第5步中的中间体A9。分离得到实施例61的TFA盐。分析HPLC保留时间：9.28min。LCMS-ESI+(m/z)：C43H57F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：909.38；实测值：909.59。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.28(s，1H)；7.95(d，J＝9.2Hz，1H)；7.33(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)；7.23(d，J＝2.4Hz，1H)；6.0(br s，1H)；5.83(brs，1H)；5.83(td，JH-F＝55Hz，J＝6Hz，1H)；4.94(d，J＝7.6Hz，1H)；4.61(d，J＝7.6Hz，1H)；4.34(d，J＝7.6Hz，1H)；4.32(br s，1H)；4.18(m，1H)；3.97(s，3H)；2.63-2.47(m，2H)；2.28-2.17(m，1H)；2.12-1.96(m，4H)；1.83-1.26(m，14H)；1.53(s，3H)；1.19(t，J＝7.2Hz，3H)；1.08(s，9H)；0.94-0.88(m，2H)；0.62-0.48(m，2H)。
实施例62.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-19,19-二氟-15-甲氧基-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备
第1步。实施例62-1的制备：在氩气下向46-2(186mg，0.428mmol)和中间体D16(157mg，0.508mmol)的10mL乙腈混合物中加入HATU(214mg，0.563mmol，Oakwood)和DIPEA(0.30mL，1.72mmol)。搅拌过夜后，减压浓缩反应混合物，所得残余物通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化以得到中间体62-1。LCMS-ESI+(m/z)：C39H53F2N4O7的[M+H]+分析计算值：727.38；实测值：727.51。
第2步。62-2的制备：62-1(275mg，0.378mmol)和Zhan 1B催化剂(34mg，0.046mmol，Strem)的75mL DCE混合物用氩气去氧气17分钟。混合物在回流下加热80分钟。继续加入8mgZhan 1B催化剂，混合物在回流下搅拌二十分钟。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。所得残余物通过硅胶色谱法(0-25％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化以得到中间体62-2。LCMS-ESI+(m/z)：C37H49F2N4O7的[M+H]+分析计算值：699.35；实测值：669.50。
第3步。62-3混合物的制备：向62-2(207mg，0.297mmol)的乙醇溶液中加入钯碳(10wt％Pd，60mg，0.057mmol)。用氢气代替空气，混合物搅拌过夜。通过硅藻土过滤反应物，用乙醇冲洗。真空浓缩滤液以得到中间体62-3，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C37H51F2N4O7的[M+H]+分析计算值：701.36；实测值：701.65。
第4步。62-4的制备：向62-3(202mg，0.289mmol)的4.5mL二氯甲烷溶液中缓慢加入TFA(1.6mL，20.9mmol)。3.5小时后，减压浓缩混合物至近干。将所得残余物溶于30mL乙酸乙酯，用20mL水、20mL饱和NaHCO3(水溶液)，冲洗，分离两相。用乙酸乙酯(3x20mL)萃取水层。用30mL盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥，过滤，真空浓缩以得到中间体62-4，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C33H43F2N4O7的[M+H]+分析计算值：645.30；实测值：645.53。
第5步。实施例62的制备：在氩气下向62-4(120mg，0.186mmol)和中间体A9(110mg，0.379mmol)的6mL乙腈混合物中加入HATU(113mg，0.297mmol，Oakwood)和DIPEA(0.17mL，0.978mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物溶于30mL乙酸乙酯，用20mL 1N HCl水溶液冲洗。用乙酸乙酯萃取水层三次。用50％盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)和反相制备HPLC(50-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化，得到实施例62的三氟乙酸盐。分析HPLC保留时间：9.03min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H53F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：881.35；实测值：881.57。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.27(s，1H)，7.94(d，J＝8.8Hz，1H)，7.33(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.27(d，J＝2.8Hz，1H)，5.84(td，JH-F＝56Hz，J＝6.8Hz，1H)，5.75(d，J＝3.6Hz，1H)，4.94(d，J＝7.2Hz，1H)，4.55(d，J＝7.2Hz，1H)，4.35(d，J＝12Hz，1H)，4.32(s，1H)，4.22-4.16(dd，J＝12，4Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.01-2.94(m，1H)，2.81-2.72(m，1H)，2.66-2.40(m，1H)，2.36-2.28(m，1H)，2.10-1.94(m，4H)，1.82-1.72(m，2H)，1.70-1.22(m，10H)，1.14-1.02(m，7H)，1.10(s，9H)，0.61-0.49(m，2H)。
实施例63.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-14-甲氧基-1a-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
第1步。63-1的制备：将胺盐酸盐17-2(500mg，1.03mmol)与中间体混合物D17(378.5mg，1.34mmol)、DIPEA(1.8mL，10.3mmol)和DMF(3mL)合并。随后向反应物混合物中加入HATU(587.1mg，1.55mmol)，在室温下搅拌18小时。用水(20mL)和1N HCl(10.5mL)稀释反应混合物，将其溶于二氯甲烷(20mL)。分离有机相，用二氯甲烷(10mL)萃取水层三次。用盐水冲洗合并的有机相，MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物粗品，得到为1:1非对映混合物的63-1。LCMS-ESI+(m/z)：C38H53F2N4O7的[M+H]+分析计算值：715.4；实测值：715.4。
第2步。63-2和63-3的制备：将非对映混合物63-1(496mg，0.695mmol)和Zhan 1B催化剂(53.8mg，0.0695mmol，Strem)溶于140mL无水DCE并用N2吹扫30分钟。混合物随后加热至100℃，持续90分钟，继续加入部分Zhan 1B催化剂(54mg，0.695mmol，Strem)。反应物随后冷却至室温，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱柱(0％至40％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到单个非对映体63-2(早洗脱组分)和63-3(晚洗脱组分)。早洗脱组分：LCMS-ESI+(m/z)：C36H49F2N4O7的[M+H]+分析计算值：687.4；实测值：687.2。晚洗脱组分：LCMS-ESI+(m/z)：C36H49F2N4O7的[M+H]+分析计算值：687.4；实测值：687.3。
第3步。63-4的制备：向63-2(155mg，0.226mmol)的乙醇溶液(3mL)中加入钯碳(10％w/w，155mg)。混合物在氢气气氛下搅拌1小时，随后通过硅藻土塞过滤，用乙酸乙酯冲洗。减压浓缩滤液，得到63-4，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51F2N4O7的[M+H]+分析计算值：689.4；实测值：689.3。
第6步。63-5的制备：将中间体63-4(153.5mg，0.222mmol)溶于1:1的TFA:DCM混合物(6mL)中并在室温下搅拌3小时。真空浓缩反应混合物以得到63-5，其无需进一步纯化即可用于后续步骤。LCMS-ESI+(m/z)：C32H44N4O7的[M+H]+分析计算值：633.3；实测值：633.2。
第7步。实施例63的制备：向63-5(140.5mg，0.222mmol)和A10(100mg，0.316mmol)的1mL DMF混合物中加入HATU(99.2mg，0.261mmol)和DIPEA(271μL，2.1mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物倒至水中，用1N HCl水溶液酸化至pH1，用二氯甲烷(15mL)萃取三次。用水、盐水冲洗合并的有机相，MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物通过反相制备HPLC(5-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化以得到实施例63。分析HPLC保留时间：8.951min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：883.4；实测值：883.2。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.96(d，J＝9.2Hz，1H)，7.33(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.23(d，J＝2.7Hz，1H)，6.03(d，J＝3.9Hz，1H)，5.80(td，J＝55.8，6.7Hz，1H)，4.61(d，J＝6.9Hz，1H)，4.46(d，J＝12.2Hz，1H)，4.26-4.14(m，2H)，4.01-3.91(m，3H)，2.65-2.47(m，2H)，2.11-1.85(m，5H)，1.84-1.61(m，3H)，1.61-1.46(m，10H)，1.46-1.32(m，3H)，1.33-1.17(m，4H)，1.09(d，J＝15.9Hz，10H)，1.04-0.95(m，1H)，0.94-0.84(m，2H)，0.21-0.12(m，1H)。
实施例64.(1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-14-甲氧基-1a-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
实施例64的制备方法与实施例63类似，以晚洗脱物63-3代替第3步中的早洗脱物63-2。随后分离得到实施例64。分析HPLC保留时间：8.535min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：883.4；实测值：883.3。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.97(d，J＝8.9Hz，1H)，7.45-7.16(m，2H)，5.97-5.52(m，2H)，4.74(d，J＝7.6Hz，1H)，4.50-4.16(m，1H)，4.06-3.86(m，5H)，2.77-2.57(m，1H)，2.51-2.18(m，2H)，2.16-1.86(m，5H)，1.75-1.32(m，16H)，1.33-1.03(m，14H)，1.02-0.76(m，2H)，0.42--0.09(m，1H)。
实施例65.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-9-丙基-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
第1步。实施例65的制备：在室温于氩气气氛下向60-6(52mg，82μmol)和中间体A10(37.5mg，123μmol)的MeCN溶液(411μL)中加入HATU(47.5mg，123μmol)和DIPEA(73μL，411μmol)。20小时后，真空浓缩反应混合物，通过制备HPLC(Gemini5u C18色谱柱，5-100％MeCN/H2O，0.1％三氟乙酸改性剂)进行纯化，冻干以得到为TFA盐的实施例65。分析HPLC保留时间：8.99min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：883.36；实测值：883.60。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.26(s，1H)，7.95(d，J＝9.1Hz，1H)，7.33(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.22(d，J＝2.8Hz，1H)，5.89(d，J＝3.2Hz，1H)，5.81(td，JH-F＝55.5Hz，J＝6.5Hz，1H)，4.59(d，J＝7.0Hz，1H)，4.40(d，J＝12.5Hz，1H)，4.36(s，1H)，4.17(dd，J＝12.2，3.8Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.73-3.66(m，1H)，2.73-2.64(m，1H)，2.63-2.45(m，1H)，2.01(br s，3H)，1.85-1.62(m，4H)，1.62-1.53(m，3H)，1.51(s，3H)，1.48-1.22(m，5H)，1.08(s，9H)，1.01(app t，J＝7.3Hz，4H)，0.94-0.87(m，2H)，0.80-0.69(m，1H)，0.50(d，J＝7.1Hz，1H)。
实施例66.(4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-12-乙基-17-甲氧基-6,9-二氧-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-十六氢-1H,11H-10,13-甲烷喹喔啉[2,3-k][1,10,3,6]苯并二氧杂二氮杂十九环-11-甲酰胺的制备。
第1步。66-1和66-2的制备。向中间体70-3(283mg，0.42mmol)的CH2Cl2溶液(5mL)中加入TMSOTf(380μL，2.1mmol)。搅拌2小时后，将反应混合物倒入至搅拌的1N NaOH(12mL)中。将混合物转移至分液漏斗中，用1N HCl酸化至pH 3，用CH2Cl2萃取，硫酸镁干燥，浓缩。通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/EtOAc)纯化残余物粗品，得到66-1和66-2的混合物。LCMS-ESI+(m/z)：C34H47N4O7的[M+H]+分析计算值：623.34；实测值：623.66。
第2步。66-3和66-4的制备。向66-1和66-2(58mg，0.09mmol)、中间体A9(32mg，0.11mmol)、TBTU(42mg，0.13mmol)和DMAP(16mg，0.14mmol)的DMF溶液(3mL)中加入DIPEA(47μL，0.27mmol)，在室温下搅拌反应物23小时。用水淬灭反应，用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3、盐水冲洗，硫酸镁干燥，浓缩。粗产品通过反相HPLC(Gemini，30-85％ACN/H2O+0.1％TFA)进行纯化，冻干以得到中间体66-3和66-4混合物的TFA盐。LCMS-ESI+(m/z)：C42H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：859.39；实测值：859.65。
第3步。实施例66的制备：用Pd/C(10％，5mg)处理溶于EtOH(2mL)的66-3和66-4(5mg，0.005mmol)。用氢气代替空气，在室温下搅拌2.5小时。通过硅藻土过滤反应物，用EtOAc冲洗，浓缩。通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/EtOAc)纯化残余物，冻干以得到母体化合物。分析HPLC保留时间：9.15min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H59F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：862.01；实测值：862.37。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.94-7.73(m，1H)，7.25(m，1H)，6.87(d，J＝9.8Hz，1H)，6.05(m，2H)，4.83-4.74(m，1H)，4.70(d，J＝7.6Hz，1H)，4.52-4.28(m，2H)，4.16(m，2H)，4.05-3.86(m，4H)，3.86-3.45(m，4H)，3.22-3.00(m，1H)，2.89(s，1H)，2.77-2.55(m，1H)，2.25(t，J＝7.3Hz，1H)，2.09-0.81(m，35H)。
实施例67.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2S)-2-(2,2-二氟乙基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例67的制备实施例1与类似，以中间体A8代替第8步中的中间体A10。分离得到实施例67的TFA盐。分析HPLC保留时间：8.85min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.99；实测值：847.64。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.00(s，1H)；7.79(d，J＝9.2Hz，1H)；7.23(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)；7.15(d，J＝2.4Hz，1H)；5.89(tt，JH-F＝54Hz，J＝4.4Hz，1H)；5.89(br s，1H)；4.61(d，J＝7.2Hz，1H)；4.39(br s，1H)；4.37(d，J＝9.2Hz，1H)；4.16(dd，J＝9.2Hz，7.2Hz，1H)；3.92(s，3H)；3.78-3.72(m，1H)；3.10-2.88(m，1H)；2.86-2.74(td，J＝12，4.4Hz，1H)；2.62-2.53(m，1H)；2.18-2.04(m，1H)；1.88-1.46(m，14H)；1.53(s，3H)；1.28-1.20(m，4H)；1.10(s，9H)；1.02-0.96(m，2H)；0.96-0.86(m，2H)；0.78-0.67(m，1H)；0.54-0.47(m，1H)。
实施例68.(4aR,8S,11S,12S,13R,25aS)-8-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-21,21-二氟-17-甲氧基-12-甲基-6,9-二氧-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-十六氢-1H,11H-10,13-甲烷喹喔啉[2,3-k][1,10,3,6]苯并二氧杂二氮杂十九环-11-甲酰胺的制备
第1步。68-1和68-2(混合物)的制备：在室温下向中间体62-3(424mg，0.606mmol)的7mL二氯甲烷溶液中加入TMSOTf(0.6mL，3.3mmol)。1小时后，继续加入0.2mLTMSOTf。总共三个小时后，浓缩反应混合物，得到68-1和68-2异构体的混合物，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C33H43F2N4O7的[M+H]+分析计算值：645.30；实测值：645.49。
第2步。68-3和68-4(混合物)的制备：在氩气下向来自于前一步的68-1和68-2混合物(176mg，0.273mmol)和中间体A9(161mg，0.555mmol)的4mL乙腈和2mL DMF溶液中加入HATU(209mg，0.550mmol，Oakwood)和DIPEA(0.25mL，1.43mmol)。一小时后，继续加入100mg中间体A9。两个小时后，将反应混合物溶于30mL乙酸乙酯中，用20mL 1N HCl水溶液冲洗。用乙酸乙酯萃取水层三次。用50％盐水冲洗合并的有机相，Na2SO4干燥无水，过滤，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)和反相制备HPLC(50-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化，得到68-3和68-4混合物的三氟乙酸盐。LCMS-ESI+(m/z)：C41H53F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：881.35；实测值：881.50。
第3步。实施例68的制备：向来自于前一步的68-3和68-4混合物(4.5mg，0.0045mmol)的1mL乙醇溶液中加入钯碳(10wt％Pd，2mg，0.0019mmol)。用氢气代替空气，搅拌混合物两个小时。通过硅藻土过滤反应物，用乙醇冲洗。真空浓缩滤液，得到实施例68。分析HPLC保留时间：8.81min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H55F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：883.36；实测值：883.64。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.94(d，J＝10.4Hz，1H)，7.34-7.30(m，2H)，6.13(td，JH-F＝57Hz，J＝6.8Hz，1H)，5.88-5.84(m，1H)，4.62(d，J＝7.6Hz，1H)，4.38-4.30(m，2H)，4.20-4.05(m，2H)，3.98(s，3H)，2.87-2.76(m，2H)，2.34-2.16(m，2H)，1.92-1.54(m，6H)，1.46-1.36(m，3H)，1.34-1.12(m，8H)，1.20(d，J＝7.6Hz，3H)，1.08-0.96(m，4H)，1.04(s，9H)，0.93-0.78(m，4H)。
实施例69.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-14-乙氧基-9-乙基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
第1步。69-2的制备。将喹喔啉55-1(54mg，0.086mmol)悬于ACN(2mL)并用Cs2CO3(84mg，0.259mmol)和溴乙烷(0.032mL，0.432mmol)处理。反应混合物在室温下搅拌16小时。过滤反应物，通过快速柱色谱法纯化粗产品以得到69-2。LCMS-ESI+(m/z)：C36H52N4O7的[M+H]+分析计算值：652.38；实测值：653.41。
第2步。69-3的制备。在室温下用DCM(10mL)和TMSOTf(1.0mL)处理中间体69-2(0.086mmol理论值)。1小时后，通过LCMS完整检测反应物。减压浓缩反应物以得到69-3，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C32H44N4O7的[M+H]+分析计算值：596.32；实测值：597.38。
第3步。实施例69的制备。用中间体A10(40mg，0.130mmol)、TBTU(47mg，0.147mmol)、DMAP(18mg，0.147mmol)、DCM(3mL)和DIPEA(0.075mL，0.432mmol)处理羧酸69-3(0.0.086mmol理论值)。反应混合物在室温下搅拌20小时，减压浓缩并通过反相HPLC纯化，得到为TFA盐的实施例69。LCMS-ESI+(m/z)：C41H56F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：846.38；实测值：847.75。
实施例70.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-10-乙基-15-甲氧基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备
第1步。70-1的制备：向1-2(575mg，1.41mmol)、D12(410mg，1.26mmol)和HATU(696mg，1.80mmol)的DMF溶液(12mL)中加入DIPEA(1.0mL，5.64mmol)，反应物在室温下搅拌。搅拌2小时后，加入向反应物中加入更多HATU(350mg，0.92mmol)和DIPEA(0.5mL，2.8mmol)，混合物搅拌14小时。用NaHCO3饱和溶液淬灭反应，用EtOAc萃取，随后用盐水冲洗，硫酸镁干燥，浓缩。粗产品通过硅胶色谱法(10-30％EtOAc/己烷)进行纯化，得到中间体70-1。LCMS-ESI+(m/z)：C38H54ClN4O7的[M+H]+分析计算值：713.37；实测值：713.95。
第2步。70-2的制备：向70-1(542mg，0.76mmol)、TEA(0.16mL，1.14mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(153mg，1.14mmol)的EtOH溶液(10mL)中加入PdCl2(dppf)(62mg，0.08mmol)。反应物用N2脱气10分钟，加热至80℃，持续1小时。用NaHCO3饱和溶液淬灭反应，用EtOAc萃取，随后用盐水冲洗，硫酸镁干燥，浓缩。使用硅胶色谱法(0-20％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到中间体70-2。LCMS-ESI+(m/z)：C40H57N4O7的[M+H]+分析计算值：705.42；实测值：705.05。
第3和4步。70-3的制备：向70-2(470mg，0.66mmol)的DCE溶液(100mL)中加入Zhan1B催化剂(49mg，0.07mmol)，反应物用N2脱气30分钟。将反应物加热至100℃，持续1小时，冷却至室温，浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗产品以得到产物(358mg；LCMS-ESI+(m/z)：C38H53N4O7的[M+H]+分析计算值：677.39；实测值：677.52)，将其溶于EtOH(6mL)和EtOAc(2mL)并用Pd/C(10％，350mg)处理。用氢气代替空气，在室温下搅拌1.5小时。反应物通过硅藻土进行过滤，用EtOAc冲洗，浓缩(358mg中间体70-3)，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C38H55N4O7的[M+H]+分析计算值：679.41；实测值：679.44。
第5步。70-4的制备：向70-3(100mg，0.15mmol)的DCM溶液(1mL)中加入TFA(1mL)并在室温下搅拌2小时。用EtOAc稀释反应物，用H2O冲洗，用NaHCO3饱和溶液碱化至pH 7，硫酸镁干燥，浓缩得到中间体70-4的残余物，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C34H47N4O7的[M+H]+分析计算值：623.34；实测值：623.44。
第6步。实施例70的制备：向70-4(94mg，0.15mmol)、中间体A9(65mg，0.22mmol)、TBTU(87mg，0.27mmol)和DMAP(27mg，0.22mmol)的DCM溶液(3mL)中加入DIPEA(0.13mL，0.75mmol)，反应物在室温下搅拌2小时。用水淬灭反应，用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3、盐水冲洗，硫酸镁干燥，浓缩。粗产品通过反相HPLC(Gemini，30-85％ACN/H2O+0.1％TFA)进行纯化，冻干以得到为TFA盐的实施例70(23mg)。
分析HPLC保留时间：9.32min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：859.39；实测值：859.54。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.31(s，1H)，7.83(d，J＝9.1Hz，1H)，7.26(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.20(d，J＝2.7Hz，1H)，6.09-5.68(m，2H)，5.51(s，1H)，5.07-4.97(m，1H)，4.70-4.55(m，1H)，4.42-4.29(m，2H)，4.22(dd，J＝12.0，4.1Hz，1H)，3.96(s，2H)，3.75(t，J＝6.7Hz，2H)，3.02(m，2H)，2.93-2.67(m，1H)，2.56(m，1H)，2.13-1.04(m，30H)，1.00(d，J＝6.6Hz，1H)，0.90(m，3H)，0.65-0.46(m，2H)。
实施例71.(4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-17-甲氧基-12-甲基-6,9-二氧-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-十六氢-1H,11H-1,3:10,13-二甲烷喹喔啉[2,3-k][1,10,3,6]苯并二氧杂二氮杂十九环-11-甲酰胺的制备
第1步：向胺18-2(315mg，0.80mmol)、DIPEA(350μL，2.0mmol)和酸D191:1混合物(270mg，0.80mmol)的MeCN溶液(8mL)中加入HATU(400mg，1.05mmol)。所得溶液在室温下搅拌2.5小时，用EtOAc(50mL)和0.2N HCl水溶液(30mL)稀释。分离两相，MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。通过硅胶色谱法(10％至30％EtOAc己烷溶液)进行纯化，得到474mg无色油状物，其可直接用于下一步。
第2步：将第1步的产物(474mg，大约0.65mmol)、PdCl2(dppf)·CH2Cl2(40mg，0.049mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(189mg，1.41mmol)的EtOH混悬液(8mL)用Ar吹扫几分钟，加入Et3N(200μL，1.4mmol)。所得混合物在Ar下通过油浴加热至75℃。搅拌2.25小时后，将反应混合物冷却至室温。用EtOAc(35mL)和半饱和盐水(20mL)稀释。分离两相，Na2SO4干燥有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。通过硅胶色谱法进行纯化，得到黄色油状物，其可直接用于下一步。
第3步：第3步产物(395mg，0.56mmol)的1,2-DCE溶液(180mL)用Ar吹扫10分钟。随后加入Zhan 1B复分解催化剂(61mg，0.083mmol)的DCE溶液(4mL)，将所得溶液加热至85℃。搅拌1.75小时后，将反应混合物冷却至室温，浓缩至硅胶(5g)上，通过硅胶色谱法(10至15至25％EtOAc己烷溶液)纯化，得到116mg快洗脱产物和84mg慢洗脱产物。
第4-5步(快洗脱非对映体)：将第3步的快洗脱产物溶于1:1EtOAc:EtOH(4mL)。加入Pd/C(10wt.％Pd，45mg)，反应容器用1atm H2吹扫两次。反应混合物在1atm H2下搅拌2.5小时，用EtOAc通过硅藻土过滤，得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2(1mL)并用TFA(2mL)处理。搅拌2小时后，真空浓缩反应混合物，在EtOAc(15mL)和15％NaHCO3饱和水溶液(10mL)之间分配。分离两相，用盐水(10mL)冲洗有机相，Na2SO4干燥，过滤得到71-1。LCMS-ESI+(m/z)：C34H47N4O7的[M+H]+分析计算值：623.3；实测值：623.2。
第4-5步(慢洗脱非对映体)：将第3步的慢洗脱产物溶于EtOAc(1mL)和EtOH(7mL)中。加入Pd/C(10wt.％Pd，85mg)，反应容器用1atm H2吹扫两次。反应混合物在1atm H2下搅拌3小时，用EtOAc通过硅藻土过滤，得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2(1mL)并用TFA(2mL)处理。搅拌2小时后，真空浓缩反应混合物，在EtOAc(15mL)和15％NaHCO3饱和水溶液(10mL)之间分配。分离两相，用盐水(10mL)冲洗有机相，Na2SO4干燥，过滤得到71-2。LCMS-ESI+(m/z)：C34H47N4O7的[M+H]+分析计算值：623.3；实测值：623.2。
第6步：实施例71的制备：向酸71-1(49mg，0.079mmol)和胺盐酸盐A9(41mg，0.14mmol)的MeCN混悬液(1mL)中加入DIPEA(100μL，0.57mmol)。向所得溶液中加入HATU(45mg，0.12mmol)，反应物在室温下搅拌14.5小时。用EtOAc(20mL)、0.2M HCl水溶液(10mL)和盐水(10mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(20mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2并浓缩至2g硅胶上。通过硅胶色谱法(4％至45％丙酮己烷溶液)进行纯化，自水和MeCN冻干得到无定形残余物，获得实施例71。LCMS-ESI+(m/z)：C42H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：859.4；实测值：859.1。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.13(s，1H)，7.81(d，J＝9.1Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.19(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.09(d，J＝2.7Hz，1H)，5.97(td，J＝55.5，6.9Hz，1H)，5.59-5.45(m，2H)，4.96(dd，J＝14.4，6.2Hz，1H)，4.51(d，J＝7.2Hz，1H)，4.42(d，J＝9.8Hz，1H)，4.13(dt，J＝12.0，7.7Hz，2H)，3.93(s，3H)，2.99-2.63(m，4H)，2.40-2.23(m，2H)，2.15-0.83(m，34H)。
实施例72.(4aS,8S,11S,12S,13R,25aS)-8-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-17-甲氧基-12-甲基-6,9-二氧-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-十六氢-1H,11H-1,3:10,13-二甲烷喹喔啉[2,3-k][1,10,3,6]苯并二氧杂二氮杂十九环-11-甲酰胺的制备。
第1步：实施例72的制备：向酸71-2(49mg，0.079mmol)和胺盐酸盐A9(38mg，0.13mmol)的MeCN混悬液(1mL)中加入DIPEA(100μL，0.57mmol)。向所获溶液中加入HATU(41mg，0.11mmol)，反应物在室温下搅拌14.5小时。用EtOAc(20mL)、0.2M HCl水溶液(10mL)和盐水(10mL)稀释反应物。分离两相，用EtOAc(20mL)萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩以得到残余物粗品。将此残余物溶于CH2Cl2并浓缩至2g硅胶上。通过硅胶色谱法(4％至45％丙酮己烷溶液)进行纯化，用水和MeCN冻干得到无定形残余物，获得实施例72。LCMS-ESI+(m/z)：C42H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：859.4；实测值：859.0。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.72(s，1H)，9.36(s，1H)，7.86(d，J＝9.1Hz，1H)，7.28(d，J＝2.7Hz，1H)，7.25-7.17(m，2H)，5.98-5.88(m，1H)，5.69(td，J＝55.4，6.9Hz，1H)，4.81-4.69(m，1H)，4.68-4.56(m，2H)，4.33(d，J＝10.1Hz，1H)，3.99(s，3H)，3.35(dd，J＝9.7，7.0Hz，1H)，3.24-3.13(m，1H)，2.97-2.87(m，1H)，2.87-2.72(m，2H)，2.57-2.45(m，1H)，2.38-2.28(m，1H)，2.17-0.71(m，34H)。
实施例73.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-9-乙基-14-甲氧基-N-[(1R,2R)-2-甲基-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例73的制备与实施例1类似，以中间体A11代替第8步中的中间体A10。分离得到实施例73的TFA盐。分析HPLC保留时间：8.72min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H57N6O9S的[M+H]+分析计算值：797.98；实测值：797.54。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.84(s，1H)；7.79(d，J＝9.2Hz，1H)；7.22(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)；7.13(d，J＝2.4Hz，1H)；5.87(d，J＝3.2Hz，1H)；4.57(d，J＝7.2Hz，1H)；4.39(br s，1H)；4.37(br d，J＝10Hz，1H)；4.15(dd，J＝12，4Hz，1H)；3.92(s，3H)；3.74(m，1H)；3.10-2.88(m，1H)；2.80(td，J＝12.4，4Hz，1H)；2.58(m，1H)；1.89-1.66(m，3H)；1.66-1.38(m，11H)；1.52(s，3H)；1.23(t，J＝7.2Hz，3H)；1.16(d，J＝6Hz，3H)；1.10(s，9H)；1.02-0.84(m，4H)；0.78-0.66(m，1H)；0.55-0.20(m，1H)。
实施例74.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-氟代环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例74的制备与实施例1类似，以中间体A12代替第8步中的中间体A10。分离得到实施例74的TFA盐。分析HPLC保留时间：8.81min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H52F3N6O9S的[M+H]+分析计算值：837.35；实测值：837.54。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.26(s，1H)；7.79(d，J＝9.2Hz，1H)；7.22(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)；7.14(d，J＝2.4Hz，1H)；5.89(d，J＝3.6Hz，1H)；5.82(td，JH-F＝56Hz，J＝6.4Hz，1H)；4.56,(d，J＝7.2Hz，1H)；4.39(s，1H)；4.38(d，J＝12Hz，1H)；4.16(dd，J＝12，7.2Hz，1H)；3.92(s，3H)；3.78-3.72(m，1H)；3.10-2.89(m，1H)；2.80(td，J＝12，4Hz，1H)；2.63-2.54(m，1H)；2.02(m，2H)；1.95-1.66(m，3H)；1.66-1.36(m，9H)；1.22(t，J＝7.2Hz，3H)；1.14-1.04(m，2H)；1.09(s，9H)；1.04-0.92(m，2H)；0.78-0.68(m，1H)；0.57-0.46(m，1H)。
实施例75.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-1-{[(1-氯代环丙基)磺酰基]氨基甲酰}-2-(二氟甲基)环丙基]-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例75的制备与实施例1类似，以中间体A13代替第8步中的中间体A10。分离得到实施例75的TFA盐。分析HPLC保留时间：8.89min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H52ClF2N6O9S的[M+H]+分析计算值：853.32；实测值：853.94。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.24(s，1H)；7.79(d，J＝9.2Hz，1H)；7.22(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)；7.13(d，J＝2.4Hz，1H)；5.88(d，J＝3.2Hz，1H)；5.84(td，JH-F＝55.6Hz，J＝6.8Hz，1H)；4.57(d，J＝7.2Hz，1H)；4.39(br s，1H)；4.38(d，J＝12Hz，1H)；4.16(dd，J＝12，7.2Hz，1H)；3.92(s，3H)；3.77-3.73(m，1H)；3.00-2.88(m,1H)；2.86-2.75(m，1H)；2.64-2.54(m，1H)；2.10-1.90(m，4H)；1.90-1.37(m，12H)；1.23(t，J＝7.2Hz，3H)；1.10(s，9H)；1.02-0.96(m，2H)；0.78-0.64(m，1H)；0.56-0.45(m，1H)。
实施例76.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-18,18-二氟-14-甲氧基-1a,9-二甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。76-1的制备：在氩气下向46-2(434mg，0.998mmol)和中间体D17(350mg，1.24mmol)的16mL乙腈混合物中加入HATU(502mg，1.32mmol，Oakwood)和DIPEA(0.70mL，4.02mmol)。搅拌过夜后，减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-25％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所得残余物，得到76-1。LCMS-ESI+(m/z)：C37H51F2N4O7的[M+H]+分析计算值：701.36；实测值：701.57。
第2步。76-2和76-3的制备：非对映混合物76-1(550mg，0.786mmol)和Zhan 1B催化剂(69mg，0.094mmol，Strem)的157mL DCE溶液于氩气下去氧25分钟。混合物随后在回流下加热90分钟。继续加入35mg Zhan 1B催化剂，反应混合物在回流下加热45分钟。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。通过硅胶色谱法(0-35％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所得残余物，得到为白色固体薄膜的单个非对映体76-2(早洗脱成分)和为褐色固体薄膜的单个非对映体76-3(晚洗脱成分)。早洗脱物76-2：LCMS-ESI+(m/z)：C35H47F2N4O7的[M+H]+分析计算值：673.33；实测值：673.45。晚洗脱物76-3：LCMS-ESI+(m/z)：C35H47F2N4O7的[M+H]+分析计算值：673.33；实测值：673.47。
第3步。76-4的制备：向76-2(175mg，0.260mmol)的9mL乙醇溶液中加入钯碳(10wt％Pd，51mg，0.048mmol)。用氢气代替空气，反应物搅拌过夜。通过硅藻土过滤反应混合物，用乙醇冲洗。真空浓缩滤液，得到76-4，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C35H49F2N4O7的[M+H]+分析计算值：675.35；实测值：675.53。
第4步。76-5的制备：向76-4(155mg，0.230mmol)的3.4mL二氯甲烷溶液中缓慢加入TFA(1.2mL，15.6mmol)。4小时后，减压浓缩混合物至近干。将所得残余物溶于25mL乙酸乙酯，用15mL水、15mL饱和NaHCO3(水溶液)冲洗，分离两相。用乙酸乙酯(3x20mL)萃取水层。用30mL盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到76-5，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C31H41F2N4O7的[M+H]+分析计算值：619.29；实测值：619.44。
第5步。实施例76的制备：在氩气下向76-5(140mg，0.226mmol)和中间体A10(139mg，0.457mmol)的7.5mL MeCN混合物中加入HATU(160mg，0.421mmol)和DIPEA(0.20mL，1.15mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物溶于30mL乙酸乙酯，用20mL1N HCl水溶液冲洗。分离两层，用乙酸乙酯萃取水相三次。用盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-45％乙酸乙酯己烷溶液)和反相制备HPLC(50-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)纯化所得残余物，得到实施例76的三氟乙酸盐(分析HPLC保留时间：8.80min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H53F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：869.35；实测值：869.59。1H NMR(400MHz，CD3OD)：9.19(s，1H)，7.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.32(dd，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.27(d，J＝2.8Hz，1H)，5.78(td，JH-F＝56Hz，J＝7.2Hz，1H)，5.76-5.74(m，1H)，4.56(d，J＝6.4Hz，1H)，4.48(d，J＝12Hz，1H)，4.27-4.19(m，1H)，4.22(s，1H)，3.97(s，3H)，2.76-2.70(m，1H)，2.62-2.43(m，1H)，2.14-1.94(m，3H)，1.90-1.80(m，1H)，1.80-1.62(m，3H)，1.56-1.52(m，2H)，1.51(s，3H)，1.49(s，3H)，1.41-1.36(m，1H)，1.27-1.18(m，1H)，1.11(s，9H)，1.09-1.04(m，5H)，1.03-0.94(m，2H)，0.87-0.81(m，3H)，0.17-0.12(m，1H)。
实施例77.(1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-18,18-二氟-14-甲氧基-1a,9-二甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例77的制备方法与实施例76类似，以晚洗脱物76-3代替第3步中的早洗脱物76-2。随后分离得到实施例76。分析HPLC保留时间：8.46min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H53F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：869.35；实测值：869.53。1H NMR(400MHz，CD3OD)：7.95(d，J＝8.8Hz，1H)，7.32(d，J＝8.8Hz，1H)，7.28(s，1H)，6.58-6.54(m，1H)，5.75(td，JH-F＝55Hz，J＝6.8Hz，1H)，5.54-5.50(m，1H)，4.65(d，J＝6.8Hz，1H)，4.46(d，J＝12.8Hz，1H)，4.26-4.18(m，1H)，3.97(s，3H)，2.92-2.71(m，1H)，2.50-1.94(m，6H)，1.68-1.57(m，2H)，1.56-1.52(m，2H)，1.51(s，3H)，1,50-1.47(m，1H)，1.46-1.38(m，3H)，1.44(s，3H)，1.27-1.18(m，2H)，1.17-1.01(m，3H)，1.09(s，9H)，0.94-0.82(m，4H)，0.17-0.12(m，1H)。
实施例78.(1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-叔丁基-14-氰基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,17,17a,18,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1-4步。中间体78-4的制备与中间体17-4类似，使用E6代替E3。
第5步：向78-4(90mg，0.135mmol)的EtOH溶液(0.7mL)中加入NaBH4(21mg，0.54mmol)。反应混合物在室温下搅拌1小时。随后通过硅藻土垫过滤反应混合物，浓缩得到中间体78-5，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C35H45F2N5O6的[M+H]+分析计算值：669.76；实测值：669.73。
第6和7步：实施例78的制备：向78-5(35mg，0.31mmol)的DCM溶液(0.4mL)中加入TFA(0.2mL)，混合物在20℃下搅拌3小时。真空去除溶剂，得到无需进一步纯化即可随后使用的残余物。在室温下向此残余物(33mg，0.05mmol)和中间体A10(27mg，0.1mmol)的DCM混悬液(0.3mL)中加入TBTU(26mg，0.08mmol)和DIPEA(35μL，0.2mmol)。1小时后，通过反相HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，50-100％ACN/H2O+0.1％TFA)直接纯化此溶液，冻干得到实施例78的TFA盐。分析HPLC保留时间：7.994min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H49F4N7O8S的[M+H]+分析计算值：863.92；实测值：864.20。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.35(s，1H)，7.29(d,1H)，7.18(dd,1H)，6.64(d，1H)，6.01-5.82(m，2H)，5.41(m，2H)，4.57-4.07(m，5H)，3.52(m，1H)，2.55-2.28(m，2H)，2.06-1.98(m，2H)，1.85(m，1H)，1.69-1.37(m，9H)，1.33(m，2H)，1.06-0.87(m，16H)，0.70(m，2H)，0.49(m，1H)。
实施例79.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-15-氯-N-[(1R,2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
第1步。79-1的制备。将磺酰基喹喔啉E5(920mg，3.32mmol)悬于MeCN(17mL)中，随后用中间体B1(1.00g，3.32mmol)和Cs2CO3处理。17小时后，通过硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(10％至30％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品，得到醚79-1。LCMS-ESI+(m/z)：C18H22Cl2N3O3的[M-Boc+2H]+分析计算值：398.10；实测值：398.12。
第2步。79-2的制备。将氨基甲酸叔丁酯79-1(513mg，1.03mmol)溶于DCM(10mL)中并用HCl(4.0mL二氧六环溶液，5mL，20mmol)处理。反应混合物在室温下搅拌1.5小时，减压浓缩以得到胺盐酸盐79-2，它无需纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C18H22Cl2N3O3的[M+H]+分析计算值：398.10；实测值：398.16。
第3步。79-3的制备。合并胺盐酸盐79-2(1.03mmol理论值)和中间体D12(336mg，1.04mmol)，并用BEP(285mg，1.04mmol)、EtOAc(9mL)、NMP(1mL)和DIPEA(0.90mL，5.2mmol)处理。反应混合物在50℃下搅拌3小时，随后冷却至室温。继续15小时后，用EtOAc稀释反应混合物。用NaHCO3饱和水溶液和盐水冲洗有机溶液，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(10％至25％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品，得到酰胺79-3。LCMS-ESI+(m/z)：C36H49Cl2N4O6的[M+H]+分析计算值：703.30；实测值：703.91。
第4步。79-4的制备。用乙酰基三氟硼酸钾(154mg，1.15mmol)、Pd(dppf)Cl2二氯甲烷加合物(63mg，0.077mmol)、EtOH(8mL)和三乙胺(0.16mL，1.15mmol)处理氯代喹喔啉79-3(541mg，0.769mmol)。将搅拌的混合物加热至回流，持续1小时，随后冷却至室温，用EtOAc稀释。用NaHCO3饱和水溶液和盐水冲洗有机溶液，MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(10％至30％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品，得到乙烯基喹喔啉79-4。LCMS-ESI+(m/z)：C38H52ClN4O6的[M+H]+分析计算值：695.36；实测值：695.10。
第5步。79-5的制备。用DCE(112mL)和Zhan-B催化剂(38mg，0.0561mmol)处理乙烯基喹喔啉79-4(390mg，0.561mmol)。搅拌的混合物用鼓泡N2脱气25分钟，在Ar气氛下加热回流。1.5小时后，将混合物冷却至室温，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(10％至30％EtOAc/Hex)纯化残余物粗品，得到大环79-5。LCMS-ESI+(m/z)：C36H48ClN4O6的[M+H]+分析计算值：667.33；实测值：667.86。
第6步。79-6的制备。用EtOAc(100mL)和5％Rh/氧化铝(100mg)处理大环79-5(198mg，0.297mmol)。在室温于H2气氛下搅拌反应混合物。45分钟后，加入更多5％Rh/氧化铝(200mg)。再次用H2气鼓泡此溶液1分钟，在室温于H2气氛下搅拌反应混合物。持续1小时后，通过硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩。所得物质(79-6)无需纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C36H50ClN4O6的[M+H]+分析计算值：669.34；实测值：669.63。
第7步。79-7的制备。用DCM(10mL)和TFA(10mL)处理大环79-6(0.297mmol理论值)。反应混合物在室温下搅拌14小时，减压浓缩。将残余物粗品溶于EtOAc中，用NaHCO3饱和水溶液和1M柠檬酸冲洗有机溶液。柠檬酸洗涤后加入盐水以打破形成的乳化液。MgSO4干燥有机层，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(100％EtOAc)纯化残余物粗品，得到不纯的79-7，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C32H42ClN4O6的[M+H]+分析计算值：613.28；实测值：613.22。
第8步。实施例79的制备。用中间体A9(156mg，0.537mmol)、TBTU(170mg，0.528mmol)、DMAP(65mg，0.528mmol)、DCM(2mL)和DIPEA(0.23mL，1.3mmol)处理羧酸79-7(0.264mmol理论值)。反应混合物在室温下搅拌19小时，减压浓缩。通过反相HPLC纯化残余物粗品，得到为TFA盐的实施例79。LCMS-ESI+(m/z)：C40H52ClF2N6O8S的[M+H]+分析计算值：849.32；实测值：849.16。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.17(s，1H)，7.86(t，J＝8.1Hz，1H)，7.77(t，J＝3.5Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，5.84(td，J＝55.7，6.7Hz，1H)，5.62(d，J＝3.5Hz，1H)，4.98(t，J＝10.6Hz，1H)，4.53(t，J＝9.3Hz，1H)，4.42-4.26(m，2H)，4.19(dd，J＝12.0，3.9Hz，1H)，3.34(d，J＝7.6Hz，1H)，2.99(tt，J＝8.2，4.8Hz，2H)，2.78(ddt，J＝21.6，14.2，5.7Hz，2H)，2.28-2.12(m，1H)，2.08-1.16(m，19H)，1.16-0.96(m，17H)，0.58(dd，J＝8.3，4.1Hz，1H)，0.55-0.44(m，1H)。
实施例80.(3aR,7S,10S,11S,12R)-1-乙酰基-7-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-16-甲氧基-11-甲基-5,8-二氧-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-十六氢-10H-9,12-甲烷吡咯[2',3':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-10-甲酰胺的制备
第1步。80-1的制备：将胺18-2(195mg，0.495mmol)和中间体D18(192.8mg，0.544mmol)溶于DMF(10mL)。在室温下加入DIPEA(430μL，2.48mmol)和HATU(207mg，0.544mmol)。1.5小时后，真空浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)直接纯化残余物粗品，得到80-1(2:1非对映体比例，偏向于预期产物)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H53ClN5O8的[M+H]+分析计算值：730.3；实测值：730.48。
第2步。80-2的制备：搅拌的80-1(314mg，0.431mmol)、PdCl2(dppf)·CH2Cl2(35.2mg，0.043mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(86.6mg，0.646mmol)的EtOH均匀混合物(2.2mL)用氩气吹扫15分钟。加入三乙胺(320μL，2.3mmol)，将混合物加热至80℃。40分钟后，反应混合物冷却至室温，用甲苯(5mL)稀释。浓缩所得混合物，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)直接纯化残余物粗品，得到80-2(2:1非对映体比例，偏向于预期产物)。LCMS-ESI+(m/z)：C39H56N5O8的[M+H]+分析计算值：722.4；实测值：722.54。
第3步。80-3的制备：将80-2(228mg，0.320mmol)溶于DCE(64mL)，用Ar吹扫此溶液15分钟。加入Zhan 1B催化剂(23mg，0.032mmol)，所得溶液在100℃于Ar下搅拌。45分钟后，将反应混合物冷却至室温，真空浓缩，通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)直接纯化，得到80-3(5:2非对映体比例，偏向于预期产物)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H52N5O8的[M+H]+分析计算值：694.37；实测值：694.53。
第4步：80-4的制备：将烯烃80-3(164mg，0.237mmol)溶于乙醇(1.19mL)，用Ar吹扫反应容器。一次性加入Pd/C(10wt％Pd，25mg)，用H2吹扫反应容器三次。反应物在室温于1atm H2下搅拌2小时，用乙酸乙酯(10mL)稀释。通过硅藻土垫过滤所得混合物，浓缩以得到80-4的残余物粗品(5:2非对映体比例，偏向于预期产物)，其无需进一步纯化即可使用(LCMS-ESI+(m/z)：C37H54N5O8的[M+H]+分析计算值：696.39；实测值：696.56。
第5步。80-5的制备：在室温下向80-4(164mg，240μmol)的DCM溶液(1.2mL)中加入TFA(0.45mL)。7小时后，用乙酸乙酯(50mL)稀释反应混合物，所得混合物用1N氢氧化钠水溶液(40mL)萃取。随后用浓盐酸将水层缓慢酸化至pH＝3，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，真空浓缩。残余物与甲苯(3×5mL)共沸干燥以，得到80-5(5:2非对映体比例，偏向于预期产物)，其无需进一步纯化即可使用。LCMS-ESI+(m/z)：C33H46N5O8的[M+H]+分析计算值：640.33；实测值：640.48。
第6步。实施例80的制备：向在室温于氩气气氛下80-5(140mg，219μmol)和中间体A10(133mg，438μmol)的MeCN溶液(1.1mL)中加入HATU(169mg，438μmol)和DIPEA(190μL，1.09mmol)。15小时后，真空浓缩反应混合物，通过制备HPLC(Gemini5u C18色谱柱，5-100％MeCN/H2O，0.1％三氟乙酸改性剂)纯化，冻干得到为淡黄色固体TFA盐的实施例80(5:2非对映体比例，偏向于预期产物)。分析HPLC保留时间：7.91min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H58F2N7O10S的[M+H]+分析计算值：890.39；实测值：890.64。1H NMR(400MHz，CD3OD，次要非对映体用*标记)δ9.18(s，1H)，9.14(s，1H*)，7.78(br d，J＝9.0Hz，1H，1H*)，7.21(br d，J＝9.0Hz，1H，1H*)，7.18(br s，1H，1H*)，5.80(br td，JH-F＝55.8Hz，J＝6.8Hz，1H，1H*)，5.64(br s，1H，1H*)，5.23(d，J＝4.7Hz，1H*)，5.15(d，J＝4.7Hz，1H)，4.56(d，J＝6.7Hz，1H，1H*)，4.46(d，J＝12.1Hz，1H*)，4.41(d，J＝12.0Hz，1H)，4.30-4.22(m，1H，1H*)，4.22-4.07(m，1H，1H*)，4.02-3.79(m，1H，1H*)3.92(br s，3H，3H*)，3.73-3.52(m，2H，2H*)，3.05-2.68(m，3H，3H*)，2.40-2.21(m，1H，1H*)，2.13-1.94(m，4H，4H*)，1.83(s，2H，2H*)，1.75-1.20(m，12H，12H*)，1.12(s，9H*)，1.10(s，9H)，1.06(br d，J＝7.3Hz，3H，3H*)，0.92-0.85(m，4H，4H*)。
实施例81.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-19,19-二氟-15-甲氧基-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
实施例81的制备方法与实施例62类似，以中间体A10代替第5步中的中间体A9。分离得到实施例81。分析HPLC保留时间：9.36min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H55F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：895.36；实测值：895.59。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.23(s，1H)，7.93(d，J＝8.8Hz，1H)，7.31(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.26(d，J＝2.4Hz，1H)，5.80(td，JH-F＝56Hz，J＝6.8Hz，1H)，5.73(d，J＝3.2Hz，1H)，4.94(d，J＝7.2Hz，1H)，4.56(d，J＝6.8Hz，1H)，4.36(d，J＝6.8Hz，1H)，4.32(s，1H)，4.22-4.16(dd，J＝12，4Hz，1H)，3.97(s，3H)，2.79-2.71(m，1H)，2.61-2.52(m，1H)，2.26-2.16(m，1H)，2.08-1.92(m，4H)，1.82-1.64(m，3H)，1.60-1.54(m，3H)，1.53-1.46(m，1H)，1.52(s，3H)，1.44-1.26(m，5H)，1.08(s，9H)，1.07-0.98(m，4H)，0.94-0.84(m，3H)，0.60-0.48(m，2H)。
实施例82.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-19,19-二氟-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备
中间体82-1的制备方法与中间体46-2类似，以中间体E3代替第1步中的E4。LCMS-ESI+(m/z)：C26H34F2N3O5的[M+H]+分析计算值：506.25；实测值：506.59。
实施例82的制备方法与实施例62类似，以中间体82-1代替第1步中的中间体46-2。分离得到实施例82。LCMS-ESI+(m/z)：C41H52F4N6O8S的[M+H]+分析计算值：864.35；实测值：865.43。1H NMR(400MHz，cdcl3)δ9.82(s，1H)，7.89-7.72(m，2H)，7.67(t，J＝7.6Hz，1H)，6.93(s，1H)，6.12-5.65(m，2H)，5.34(d，J＝8.6Hz，1H)，4.90(d，J＝7.4Hz，1H)，4.45(t，J＝9.3Hz，2H)，4.27(d，J＝7.9Hz，1H)，4.13(dd，J＝11.9，3.9Hz，1H)，2.77-2.64(m，2H)，2.27-2.12(m，1H)，2.13-1.86(m，4H)，1.82-1.19(m，15H)，1.18-0.98(m，13H)，0.89-0.77(m，2H)，0.53(dd，J＝13.3，8.1Hz，1H)，0.43(d，J＝4.2Hz，1H)。
实施例83.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-3,6-二氧-14-(三氟甲氧基)-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。83-1的制备：向3,3-二氟-2氧-4-戊烯酸(1.03g，6.86mmol)的10mL DMF溶液中缓慢加入HATU(3.06g，8.05mmol)。随后加入4-(三氟甲氧基)苯-1,2-二胺(1.29g，6.71mmol)和DIPEA(1.4mL，8.05mmol)的12mL DMF混合物。搅拌过夜后，将反应混合物倒至175mL水中，用乙酸乙酯(4x100mL)萃取。用50％盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-25％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所获固体，得到晚洗脱产物中间体83-1。LCMS-ESI+(m/z)：C12H8F5N2O2的[M+H]+分析计算值：307.04；实测值：307.29。
第2步。83-2的制备：用POCl3(0.56mL，6.04mmol)处理83-1(924mg，3.01mmol)的2mL DMF溶液，在80℃下加热2.5小时。冷却至室温后，用25mL EtOAc稀释反应混合物，在剧烈搅拌下将其缓慢加入至20mL水中。分离两层，用乙酸乙酯萃取水相。随后用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水冲洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到中间体83-2。LCMS-ESI+(m/z)：C12H7ClF5N2O的[M+H]+分析计算值：324.01；实测值：324.13。
第3步。83-3的制备：在室温下向中间体83-2(460mg，1.54mmol)和中间体B4(564mg，1.79mmol)的12mL DMF混合物中加入Cs2CO3(606mg，1.86mmol)。反应混合物在85℃下加热过夜。冷却至室温后，将混合物倒至50mL水中，用乙酸乙酯(4x40mL)萃取。用90mL50％盐水冲洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所获固体，得到83-3。LCMS-ESI+(m/z)：C28H35F5N3O6的[M+H]+分析计算值：604.24；实测值：604.20。
第4步。83-4的制备：在室温下将喹喔啉醚83-3(290mg，0.647mmol)溶于4.1mL乙酸叔丁酯和1.1mL二氯甲烷中。滴加MeSO3H(0.25mL，3.88mmol)，反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物转移至搅拌的EtOAc(20mL)和NaHCO3饱和水溶液(30mL)混合物中。分离两相，用EtOAc(2x20mL)萃取水相。无水Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到胺83-4。LCMS-ESI+(m/z)：C23H27F5N3O4的[M+H]+分析计算值：504.18；实测值：504.31。
第5步。83-5的制备：在氩气下向83-4(258mg，0.512mmol)和中间体D11(177mg，0.657mmol)的7mL乙腈混合物中加入HATU(260mg，0.684mmol，Oakwood)和DIPEA(0.40mL，2.30mmol)。搅拌过夜后，减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(0-20％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所得残余物，得到83-5。LCMS-ESI+(m/z)：C37H48F5N4O7的[M+H]+分析计算值：755.34；实测值：755.49。
第6步。83-6的制备：83-5(215mg，0.285mmol)和Zhan 1B催化剂(29mg，0.040mmol，Strem)的60mL DCE混合物用氩气去氧气15分钟。混合物在回流下加热90分钟。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。通过硅胶色谱法(0-40％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所得残余物，得到83-6。LCMS-ESI+(m/z)：C35H44F5N4O7的[M+H]+分析计算值：727.31；实测值：727.43。
第7步。83-7的制备：向83-6(129mg，0.178mmol)的9mL乙醇溶液中加入钯碳(10wt％Pd，40mg，0.038mmol)。用氢气代替空气，反应物搅拌过夜。通过硅藻土过滤反应混合物，用乙醇冲洗。真空浓缩滤液，得到残余物，通过硅胶柱色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)对其进行纯化，得到83-7。LCMS-ESI+(m/z)：C35H46F5N4O7的[M+H]+分析计算值：729.32；实测值：729.45。
第8步。83-8的制备：向83-7(79mg，0.109mmol)的1.8mL二氯甲烷溶液中缓慢加入TFA(0.62mL，8.09mmol)。4小时后，减压浓缩混合物至近干。将所得残余物溶于10mL乙酸乙酯，用8mL水、8mL饱和NaHCO3(水溶液)冲洗，分离两相。用乙酸乙酯(3x10mL)萃取水层。用10mL盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩得到83-8，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C31H38F5N4O7的[M+H]+分析计算值：673.26；实测值：673.10。
第9步。实施例83的制备：在氩气下向83-8(72mg，0.107mmol)和中间体A10(66mg，0.217mmol)的4mL乙腈混合物中加入HATU(84mg，0.221mmol，Oakwood)和DIPEA(0.095mL，0.547mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物溶于20mL乙酸乙酯中，用10mL 1N HCl水溶液冲洗。用乙酸乙酯萃取水层三次。用50％盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)和反相制备HPLC(50-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化，得到实施例83的三氟乙酸盐。分析HPLC保留时间：9.12min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H50F7N6O9S的[M+H]+分析计算值：923.32；实测值：923.10。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.26(s，1H)，8.01-7.91(m，2H)，7.78-7.63(m，1H)，5.95(d，J＝3.6Hz，1H)，5.83(td，JH-F＝61Hz，J＝6.0Hz，1H)，4.59(d，J＝7.2Hz，1H)，4.42(d，J＝12.4Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.22-4.11(m，1H)，3.72-3.66(m，1H)，2.71-2.49(m，2H)，2.18-1.94(m，3H)，1.90-1.75(m，3H)，1.74-1.62(m，2H)，1.60-1.48(m，3H)，1.51(s，3H)，1.50-1.24(m，4H)，1.22-1.18(m，2H)，1.08(s，9H)，1.07-0.84(m，5H)，0.81-0.64(m，1H)，0.54-0.44(m，1H)。
实施例84.(1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-叔丁基-14-氰基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-十二氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步：实施例84的制备。将实施例78粗产品(8.7mg，0.01mmol)重新溶解于ACN(0.3mL)并用DDQ(3.4mg，0.015mmol)处理。10分钟后通过反相HPLC(Gemini5u C18色谱柱，50-100％ACN/H2O+0.1％TFA)直接纯化此溶液，冻干得到实施例84的TFA盐。分析HPLC保留时间：8.385min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H47F4N7O8S的[M+H]+分析计算值：861.90；实测值：862.89。1H NMR(400MHz，CD3OD)1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.21(s，1H)，8.25(d,1H)，8.20(d,1H)，.7.91(dd，1H)、6.32(m，2H)，5.97-5.61(m，2H)，4.82(m，1H)，4.58-4.13(m，4H)，3.71-3.49(m，3H)，2.61(m，2H)，2.23(m，1H)，2.00-1.80(m，3H)，1.56-1.20(m，10H)，1.20(m，3H)，1.07(m，8H)，0.98-0.82(m，3H)，0.55(m，1H)。
实施例85.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-14-(二氟甲氧基)-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例85的制备与实施例83类似，使用中间体E7代替第3步中的83-2。分析HPLC保留时间：8.725min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H50F6N6O9S的[M+H]+分析计算值：904.92；实测值：905.16。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.23(s，1H)，7.88(d,1H)，7.76(d,1H)，7.62(dd，1H)，7.03(dd，1H)，5.94-5.65(m，3H)，4.57-4.14(m，4H)，3.66(m，1H)，2.57(m，2H)，2.01-1.97(m，3H)，1.82-1.77(m，3H)，1.64(m，1H)，1.57-1.33(m，10H)，1.20(m，3H)，1.06-0.87(m，12H)，0.87(m，2H)，0.48(m，1H)。
实施例86.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-15-氟-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
第1步。86-1的制备：向E8(1.5g，5.75mmol)和B1(1.9g，6.34mmol)的MeCN溶液(50mL)中加入Cs2CO3(3.09g，9.49mmol)。在室温下搅拌60小时后，通过硅藻土过滤反应混合物，浓缩。通过硅胶色谱法(5-35％EtOAc/己烷)纯化残余物粗品，得到产物86-1。LCMS-ESI+(m/z)：C23H30ClFN3O5-Boc的[M+H]+分析计算值：482.13；实测值：382.04。
第2步。86-2的制备：向86-1(747mg，1.55mmol)的CH2Cl2溶液(5mL)中加入HCl(5mL，4M二氧六环溶液)，搅拌3小时。浓缩反应混合物以得到残余物，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C18H23Cl2FN3O3-HCl的[M+H]+分析计算值：382.13；实测值：382.08.
第3步。86-3的制备：向86-2(397mg，0.95mmol)、D12(308mg，0.95mmol)和BEP(312mg，1.14mmol)的EtOAc(9mL)和NMP(1mL)溶液中加入DIPEA(0.7mL，3.8mmol)，反应物在50℃下搅拌过夜。用NaHCO3饱和溶液淬灭反应，用EtOAc萃取，随后用盐水冲洗，硫酸镁干燥，浓缩。粗产品通过硅胶进行纯化，得到86-3。LCMS-ESI+(m/z)：C36H49ClFN4O6的[M+H]+分析计算值：687.33；实测值：687.44。
第4步。86-4的制备：向86-3(266mg，0.39mmol)、TEA(0.08mL，0.58mmol)和乙酰基三氟硼酸钾(78mg，0.58mmol)的EtOH溶液(8mL)中加入PdCl2(dppf)(32mg，0.04mmol)。反应物用N2脱气10分钟并加热至75℃，持续1小时。用NaHCO3饱和溶液淬灭反应，用EtOAc萃取，随后用盐水冲洗，硫酸镁干燥，浓缩。残余物使用硅胶色谱法(0-25％EtOAc/己烷)进行纯化，得到86-4。LCMS-ESI+(m/z)：C38H52FN4O6的[M+H]+分析计算值：679.39；实测值：679.52。
第5和6步。86-5的制备：向86-4(262mg，0.38mmol)的DCE溶液(50mL)中加入Zhan1B催化剂(28mg，0.04mmol)，反应物用N2脱气25分钟。将反应物加热至100℃，持续1小时，冷却至室温，浓缩。粗产品通过硅胶色谱法进行纯化(0-30％EtOAc/己烷)，得到烯烃产物(182mg；LCMS-ESI+(m/z)：C36H48FN4O6的[M+H]+分析计算值：651.36；实测值：651.38)，将其溶于EtOH(5mL)和EtOAc(1mL)并用Pd/C(10％，55mg)处理。用氢气代替空气，在室温下搅拌1.25小时。通过硅藻土过滤反应物，用EtOAc冲洗，浓缩得到86-5，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C36H50FN4O6的[M+H]+分析计算值：653.37；实测值：653.46。
第7步。86-6的制备：向86-5(182mg，0.28mmol)的DCM溶液(3mL)中加入TFA(3mL)，在在室温下搅拌18小时。用EtOAc稀释反应物，用H2O冲洗，用NaHCO3饱和溶液碱化至pH 7，用1M柠檬酸溶液冲洗，硫酸镁干燥，浓缩得到残余物86-6，其无需进一步纯化即可随后使用。LCMS-ESI+(m/z)：C32H42FN4O6的[M+H]+分析计算值：597.31；实测值：597.15。
第8步。实施例86的制备：向86-6(24mg，0.04mmol)、中间体A10(18mg，0.06mmol)、TBTU(23mg，0.07mmol)和DMAP(7mg，0.06mmol)的DMF溶液(3mL)中加入DIPEA(35μL，0.20mmol)，反应物在室温下搅拌3小时。继续加入中间体A10(18mg，0.06mmol)、TBTU(23mg，0.07mmol)、DMAP(7mg，0.06mmol)和DIPEA(35μL，0.20mmol)中加入，反应物在室温下搅拌16小时。粗产品通过反相HPLC(Gemini，30-85％ACN/H2O+0.1％TFA)进行纯化，冻干以得到为TFA盐的实施例86。分析HPLC保留时间：9.25min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H54F3N6O8S的[M+H]+分析计算值：847.37；实测值：847.18。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.18(s，1H)，8.13-7.84(m，2H)，7.59-7.21(m，2H)，6.07-5.58(m，2H)，5.00(d，J＝7.4Hz，1H)，4.57(d，J＝7.0Hz，1H)，4.45-4.27(m，2H)，4.20(dd，J＝12.0，4.0Hz，1H)，3.11-2.94(m，3H)，2.92-2.70(m，4H)，2.32-2.14(m，1H)，2.10-1.94(m，2H)，1.86(m，1H)，1.77(d，J＝14.5Hz，1H)，1.74-1.21(m，15H)，1.21-1.01(m，10H)，1.00-0.84(m，2H)，0.60(m，1H)，0.53(m，1H)。
实施例87.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-14-氰基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1和2步。实施例87的制备。向实施例84(100mg，0.11mmol)的EtOAc溶液(3mL)中加入Pd/C(10wt％Pd，30mg)。反应容器用H2吹扫两次，在室温于1atm H2下搅拌6小时。随后通过硅藻土垫过滤反应混合物，浓缩。反应物还原喹喔啉环。将粗产品重新溶解于ACN(5mL)中并用DDQ(34mg，0.15mmol)处理。1小时后，此溶液通过反相HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，50-100％ACN/H2O+0.1％TFA)直接进行纯化，冻干得到实施例87的TFA盐。分析HPLC保留时间：8.463min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H49F4N7O8S的[M+H]+分析计算值：863.92；实测值：864.18。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.24(s，1H)，8.27(d,1H)，8.20(d,1H)，.7.91(dd，1H)，5.93-5.82(m，3H)，4.88(m，1H)，4.58-4.13(m，5H)，3.71-3.49(m，3H)，2.59(m，2H)，2.03-1.96(m，3H)，1.82-1.77(m，3H)，1.65-1.35(m，11H)，1.20(m，3H)，1.06-0.87(m，8H)，0.71(m，2H)，0.48(m，1H)。
实施例88.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-14-氯-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-18,18-二氟-9-甲基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备
第1步。88-1的制备：向3,3-二氟-2-氧-4-戊烯酸(1.52g，10.1mmol)的14mL DMF溶液中缓慢加入HATU(4.56g，12mmol)。随后加入4-氯苯-1,2-二胺(1.43g，10mmol)和DIPEA(2.1mL，12mmol)的20mL DMF混合物。搅拌过夜后，将反应混合物倒至30mL 1N HCl水溶液中，用乙酸乙酯(5x40mL)萃取。无水Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-45％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所获固体，得到为晚洗脱产物的中间体88-1。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ12.1(s，1H)，7.99(m，1H)，7.61-7.58(m，1H)，7.33-7.31(m，1H)，6.61-6.48(m，1H)，5.96-5.90(m，1H)，5.67-5.63(m，1H)。
第2步。88-2的制备：用POCl3(0.49mL，5.26mmol)处理中间体88-1(648mg，2.53mmol)的2mL DMF溶液并在80℃下加热3小时。冷却至室温后，用20mL EtOAc稀释反应混合物，在剧烈搅拌下缓慢加入至15mL水中。分离两层，用乙酸乙酯萃取水相。随后用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水冲洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩以得到中间体88-2。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.184(d，J＝1.6Hz，1H)，8.01(d，J＝8.8Hz，1H)，7.82(dd，J＝9.4，2Hz，1H)，6.56-6.43(m，1H)，5.88(m，1H)，5.70(d，J＝10.8Hz，1H)。
第3步。88-3的制备：在室温下向中间体88-2(425mg，1.54mmol)和中间体B1(570mg，1.89mmol)的9mL DMF混合物中加入Cs2CO3(660mg，2.03mmol)。反应混合物在85℃下加热过夜。冷却至室温后，将混合物倒至40mL水中，用乙酸乙酯(4x30mL)萃取。用75mL 50％盐水冲洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-20％乙酸乙酯己烷溶液)纯化所获固体，得到88-3。LCMS-ESI+(m/z)：C26H33ClF2N3O5的[M+H]+分析计算值：540.20；实测值：540.12。
第4步。88-4的制备：在室温下将喹喔啉醚88-3(458mg，0.848mmol)溶于4.2mL乙酸叔丁酯和1.2mL二氯甲烷中。滴加MeSO3H(0.30mL，4.67mmol)，反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物转移至搅拌的EtOAc(20mL)和NaHCO3饱和水溶液(30mL)混合物中。分离两相，用EtOAc(2x20mL)萃取水相。无水Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到为黄色固体薄膜的胺88-4。LCMS-ESI+(m/z)：C21H25ClF2N3O3的[M+H]+分析计算值：440.15；实测值：440.29。
第5步。88-5的制备：在氩气下向88-4(320mg，0.727mmol)和中间体D11(237mg，0.880mmol)的10mL乙腈混合物中加入HATU(360mg，0.947mmol，Oakwood)和DIPEA(0.51mL，2.91mmol)。搅拌过夜后，减压浓缩反应混合物，所得残余物通过硅胶色谱法(0-20％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到88-5。LCMS-ESI+(m/z)：C35H46ClF2N4O6的[M+H]+分析计算值：691.30；实测值：691.50。
第6步。88-6的制备：88-5(390mg，0.564mmol)和Zhan 1B催化剂(55mg，0.075mmol，Strem)的100mL DCE混合物用氩气去氧气15分钟。混合物随后在回流下加热110分钟。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。所得残余物通过硅胶色谱法(0-25％乙酸乙酯己烷溶液)进行纯化，得到88-6。LCMS-ESI+(m/z)：C33H42ClF2N4O6的[M+H]+分析计算值：663.27；实测值：663.33。
第7步。88-7混合物的制备：向88-6(90mg，0.136mmol)的9mL乙醇溶液中加入氧化铝铑(5wt％Rh，31mg，0.015mmol)。用氢气代替空气，混合物搅拌过夜。通过硅藻土过滤反应物，用乙醇冲洗。LC/MS分析表明剩余了大约60％的起始原料。使用25mg氧化铝铑(5wt％Rh)将残余物的8mL乙醇溶液重新进行氢化。反应物过滤通过硅藻土，用乙醇冲洗。真空浓缩滤液，得到残余物，通过硅胶柱色谱法(0-30％乙酸乙酯己烷溶液)对其进行纯化，得到88-7。LCMS-ESI+(m/z)：C33H44ClF2N4O6的[M+H]+分析计算值：665.28；实测值：665.48。
第8步。88-8的制备：向88-7(52mg，0.078mmol)的2mL二氯甲烷溶液中缓慢加入TFA(0.45mL，5.86mmol)。3小时后，减压浓缩混合物至近干。将所得残余物溶于10mL乙酸乙酯，用8mL水、8mL饱和NaHCO3(水溶液)冲洗，分离两相。用乙酸乙酯(3x10mL)萃取水层。用10mL盐水冲洗合并的有机相，无水MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到88-8，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS-ESI+(m/z)：C29H36ClF2N4O6的[M+H]+分析计算值：609.22；实测值：609.42。
第9步。实施例88的制备：在氩气下向88-8(45mg，0.074mmol)和中间体A10(49mg，0.161mmol)的2.5mL乙腈混合物中加入HATU(58mg，0.153mmol，Oakwood)和DIPEA(0.065mL，0.374mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物溶于15mL乙酸乙酯，用10mL 1N HCl水溶液冲洗。用乙酸乙酯萃取水层三次。用50％盐水冲洗合并的有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯己烷溶液)和反相制备HPLC(50-100％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化，得到实施例88的三氟乙酸盐。分析HPLC保留时间：8.92min。LCMS-ESI+(m/z)：C38H48ClF4N6O8S的[M+H]+分析计算值：859.28；实测值：859.42。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.23(s，1H)，8.10(s，1H)，7.90(d，J＝8.8Hz，1H)，7.81(d，J＝8.8Hz，1H)，5.81(td，JH-F＝56Hz，J＝6.0Hz，1H)，5.69-5.66(m，1H)，4.56(d，J＝7.2Hz，1H)，4.43(d，J＝12Hz，1H)，4.34(s，1H)，4.22-4.16(dd，J＝12，4Hz，1H)，3.71-3.66(m，1H)，2.83-2.76(m，1H)，2.61-2.48(m，1H)，2.11-1.94(m，4H)，1.88-1.72(m，4H)，1.71-1.62(m，1H)，1.58-1.54(m，2H)，1.51(s，3H)，1.50-1.36(m，2H)，1.09(s，9H)，1.08-1.01(m，3H)，1.01-0.94(m，2H)，0.93-0.86(m，2H)，0.80-0.68(m，1H)，0.52-0.46(m，1H)。
实施例89.(1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-十二氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
第1步。89-1的制备：用0.4mL TFA处理17-4(95mg，0.14mmol)的0.4mL DCM溶液，在室温下搅拌2小时。用5mL DCM稀释反应混合物，随后用水和饱和碳酸氢钠处理至pH 6.5。分离两层，再用水冲洗有机相一次，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到89-1。LCMS-ESI+(m/z)：C31H39F2N4O7的[M+H]+分析计算值：617.3；实测值：616.7。
第2步。实施例89的制备：在室温下将来自于第1步的89-1(41mg，0.066mmol)、中间体A10(24mg，0.079mmol)、HATU(30mg，0.079mmol)和DIPEA(0.057mL，0.33mmol)的DMF混合物(0.4mL)搅拌过夜。用2N HCl(1mL)稀释混合物，用二氯甲烷萃取。硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。粗产品混合物通过反相制备HPLC(10-99％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进行纯化，得到实施例89。分析HPLC保留时间：8.65min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H51F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：867.3；实测值：866.9。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.890(s，1H)，7.98(d，J＝9.2Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.06(d，J＝2.8Hz，1H)，6.75(br s，1H)，6.30-5.93(m，2H)，5.92(td，JH-F＝52Hz，J＝6.8Hz，1H)，5.47(d，J＝10Hz，1H)，4.53(d，J＝12Hz，1H)，4.48(d，J＝10.4Hz，1H)，4.42(d，J＝6.8Hz，1H)，4.07(dd，J＝11.6，3.2Hz，1H)，3.98-3.94(m，1H)，3.95(s，3H)，3.57(m，1H)，2.60-2.48(m，2H)，2.20(m，1H)，2.06(m，1H)，1.90(m，1H)，1.80(m，1H)，1.63(m，2H)，1.50(s，3H)，1.56-1.36(m，2H)，1.26(m，1H)，1.19(t，J＝7.2Hz，3H)，1.09(s，9H)，1.03-0.93(m，2H)，0.85(m，2H)，0.76(m，1H)，0.53(m，1H)。
实施例90.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-9-乙基-18-氟-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
通过反相制备HPLC(60-88％乙腈水溶液，含有0.1％三氟乙酸缓冲液)进一步纯化合成的化合物17，从而分离得到为次要副产物的实施例93。分析HPLC保留时间：8.64min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H54F3N6O9S的[M+H]+分析计算值：851.4；实测值：851.4。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.93(br s，1H)，7.88(d，J＝9.1Hz，1H)，7.22(d，J＝2.4Hz，1H)，7.06(d，J＝2.4Hz，1H)，6.55(s，1H)，5.91(td，JH-F＝136Hz，J＝8Hz，1H)，5.81(td，JH-F＝52Hz，J＝8Hz，1H)，5.30(d，J＝9.7Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，4.38(d，J＝6.7Hz，1H)，4.32(d，J＝9.8Hz，1H)，4.07(m，1H)，3.93(s，3H)，3.72(m，1H)，2.59(m，1H)，2.35(m，1H)，2.06(m，4H)，1.88(m，1H)，1.78(m，1H)，1.71-1.52(m，4H)，1.48(s，3H)，1.48-1.41(m，2H)，1.23(m，2H)1.21(t，J＝8.0Hz，3H)，1.08(s，9H)，1.05-0.90(m，2H)，0.84(m，2H)，0.66(m，1H)，0.48(m，1H)。
实施例91.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-{(1R,2S)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-乙烯基环丙基}-9-乙基-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例91的制备与实施例1类似，以中间体A1代替第8步中的中间体A10。分离得到实施例91的TFA盐。分析HPLC保留时间：8.72min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H55N6O9S的[M+H]+分析计算值：795.96；实测值：795.94。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.03(s，1H)；7.80(d，J＝9.2Hz，1H)；7.24(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)；7.16(d，J＝2.4Hz，1H)；5.90(d，J＝3.6Hz，1H)；5.68(m，1H)；5.25(d，J＝17.2Hz，1.6Hz，1H)；5.10(d，J＝11.2，1.6Hz，1H)；4.57(d，J＝6.8Hz，1H)；4.39(br s，1H)；4.37(d，J＝9.2Hz，1H)；4.16(dd，J＝12.8，4.4Hz，1H)；3.93(s，3H)；3.77-3.72(m，1H)；3.02-2.88(m，1H)：2.86-2.75(m，1H)；2.64-2.54(m，1H)；2.18(q，J＝8.8Hz，1H)：1.90-1.66(m，4H)；1.66-1.40(m，6H)；1.38-1.32(m，1H)；1.30-1.20(m，5H)；1.10(s，9H)；1.14-1.02(m，2H)；0.77-0.68(m，1H)；0.54-0.45(m，1H)。
实施例92.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-{(1R,2S)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-乙烯基环丙基}-9-乙基-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例92的制备方法与实施例17类似，以中间体A1代替第7步中的中间体A10。分离得到实施例92。分析HPLC保留时间：8.75min。LCMS-ESI+(m/z)：C40H53F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：831.36；实测值：831.25。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ9.98(s，1H)，7.96(d，J＝9.2Hz，1H)，7.40-7.19(m，1H)，7.08(s，1H)，6.56(s，1H)，5.91(d，J＝3.8Hz，1H)，5.86-5.64(m，1H)，5.34(d，J＝9.7Hz，1H)，5.21(d，J＝17.2Hz，1H)，5.10(d，J＝10.3Hz，1H)，4.53-4.26(m，2H)，4.15-4.02(m，1H)，3.95(s，3H)，3.73-3.57(m，1H)，2.97-2.81(m，1H)，2.64-2.37(m，2H)，2.21-2.06(m，1H)，2.06-1.88(m，2H)，1.88-1.55(m，4H)，1.55-1.12(m，10H)，1.07(s，9H)，1.02-0.78(m，5H)，0.78-0.61(m，1H)，0.47(q，J＝7.3，6.2Hz，1H)。
实施例93.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-9-乙基-N-[(2R)-2-乙基-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例93的制备方法与实施例17类似，以中间体A4代替第7步中的中间体A10。分离得到实施例93。分析HPLC保留时间：8.03min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H57F2N6O9S的[M+H]+分析计算值：847.39；实测值：846.99。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝8.9Hz，1H)，7.27(m，1H)，7.08(s，1H)，6.65(s，1H)，5.91(s，1H)，5.41(d，J＝9.0Hz，1H)，4.82(m，2H)，4.47(d，J＝6.2Hz，1H)，4.35(dd，J＝35.7，10.7Hz，2H)，4.07(m，1H)，3.94(s，3H)，3.63(m，1H)，2.50(m，2H)，1.95(m，2H)，1.94(m，2H)，1.78(m，3H)，1.64(m，4H)，1.48(m，6H)，1.19(m，4H)，1.07(s，9H)，1.05-0.88(m，4H)，0.88-0.75(m，1H)，0.67(m，1H)，0.47(m，1H)。
实施例94.(1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-叔丁基-N-[(2R)-1-[(环丙基磺酰基)氨基甲酰]-2-(二氟甲基)环丙基]-9-乙基-18,18-二氟-14-甲氧基-3,6-二氧-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-十四氢-8H-7,10-甲烷环丙烷[18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-8-甲酰胺的制备。
实施例94的制备方法与类似实施例17，以中间体A9代替第7步中的中间体A10。分离得到实施例94。分析HPLC保留时间：8.71min。LCMS-ESI+(m/z)：C39H51F4N6O9S的[M+H]+分析计算值：855.34；实测值：855.26。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.22(s，1H)，8.02(d，J＝9.2Hz，1H)，7.33(d，J＝12Hz，1H)，7.12(s，1H)，5.95(td，JHF＝52Hz，J＝8Hz，1H)，5.50(d，J＝9.7Hz，1H)，4.53(d，J＝6.4Hz，1H)，4.46(dd，J＝26.4，10.7Hz，2H)，4.13(d，J＝11.5Hz，1H)，4.00(s，3H)，3.68(m，1H)，2.91(m，1H)，2.57(m，3H)，2.13(m，2H)，1.94(m，2H)，1.73(m，3H)，1.50(m，3H)，1.33(m，3H)，1.22(t，J＝7.2Hz，3H)，1.13(s，9H)，1.00-0.95(m，4H)，0.95-0.85(m，1H)，0.69(m，1H)，0.51(m，1H)。
实施例95.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-15-氰基-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-19,19-二氟-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11，19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
中间体95-1的制备方法与中间体46-2类似，以E6代替第1步中的中间体E3。LCMS-ESI+(m/z)：C27H33F2N4O5的[M+H]+分析计算值：531.24；实测值：531.2。
实施例95的制备方法与实施例62类似，以中间体95-1代替第1步中的中间体46-2，并以中间体A10代替第5步中的中间体A9。分离得到实施例95。分析HPLC保留时间：8.86min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H52F4N7O8S的[M+H]+分析计算值：890.35；实测值：889.94。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.34(s，1H)，7.80(m，2H)，7.42(d，J＝8.6Hz，1H)，6.85(s，1H)，6.69(s，1H)，5.38(m，1H)，5.29(m，3H)，5.02(d，J＝8.8Hz，1H)，4.46(d，J＝7.4Hz，1H)，4.10-3.97(m，2H)，3.84(d，J＝7.9Hz，1H)，3.74(d，J＝8.6Hz，1H)，2.42-2.29(m，1H)，2.10(s，1H)，1.87-1.72(m，1H)，1.69-1.48(m，4H)，1.38(d，J＝14.8Hz，2H)，1.30-1.08(m，4H)，0.99(s，5H)，0.89(m，3H)，0.69(s，10H)，0.64(m，1H)，0.43(s，1H)，0.11(m，1H)，0.01(m，1H)。
实施例96.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,21E,24aR,24bS)-6-叔丁基-15-氯-N-[(1R,2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-10-甲基-4,7,18-三氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,20,23，24,24a,24b-十四氢-1H,9H,18H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6,12]二氧杂三氮杂十九环[11,12-b]喹唑啉-9-甲酰胺的制备。
实施例96的制备方法与实施例89类似，以中间体96-1代替第1步中的中间体17-4。中间体96-1的制备方法与实施例17的中间体17-4类似，以E9代替第1步中的E3，以B1代替第1步中的B4，并以中间体D16代替第3步中的中间体D11。分离得到实施例96。分析HPLC保留时间：9.18min。LCMS-ESI+(m/z)：C41H52ClF2N6O9S的[M+H]+分析计算值：877.32；实测值：877.61。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ9.76(s，1H)，8.03(d，J＝8.6Hz，1H)，7.39(m，1H)，7.27(m，1H)，6.80(s，1H)，5.92(m，1H)，5.87-5.73(m，1H)，5.68(m，1H)，5.64-5.51(m，1H)，5.21(m，1H)，4.93(m，2H)，4.52-4.32(m，3H)，4.15-3.94(m，2H)，2.86-2.71(m，1H)，2.26(m，1H)，2.15(m，2H)，2.10-2.02(m，1H)，2.02-1.84(m，2H)，1.77(m，2H)，1.61(s，3H)，1.50(m，4H)，1.42-1.17(m，6H)，1.17-0.92(m，10H)，0.92-0.78(m，2H)，0.51-0.37(m，1H)。
实施例97.(1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-叔丁基-15-氰基-N-[(2R)-2-(二氟甲基)-1-{[(1-甲基环丙基)磺酰基]氨基甲酰}环丙基]-10-甲基-4,7-二氧-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-十六氢-1H,9H-8,11-甲烷环丙烷[4',5']环戊烷[1',2':18,19][1,10,3,6]二氧杂二氮杂十九环[11,12-b]喹喔啉-9-甲酰胺的制备。
中间体97-1的制备方法与中间体79-5类似，以E2代替第1步中的E5。LCMS-ESI+(m/z)：C43H55N4O7的[M+H]+分析计算值：739.41；实测值：739.31。
第1步。97-2的制备。将大环烯烃97-1(0.84g，1.14mmol)溶于114mL乙醇和114mL乙酸乙酯。用氩气脱气后，加入0.84g 5％Degussa型Pd/C，混合物在1atm下氢化4小时。通过硅藻土过滤，浓缩，通过硅胶色谱法(40％-60％乙酸乙酯己烷溶液梯度)得到中间体97-2。LCMS-ESI+(m/z)：C36H51N4O7的[M+H]+分析计算值：651.38；实测值：651.32。
第2步。97-3的制备。滴加三氟甲磺酸酐的1M二氯甲烷溶液(0.18ml，1.09mmol)以处理大环苯酚97-2(0.47g，0.73mmol)和三乙胺(0.81ml，5.81mmol)的3mL DCM冰预冷溶液。搅拌2小时后，用水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取。用水和盐水冲洗有机层，Na2SO4干燥，过滤并浓缩。使用5％-50％乙酸乙酯己烷溶液梯度通过硅胶色谱法得到为第一个洗脱物峰的97-3(55mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C37H50F3N4O9S的[M+H]+分析计算值：783.33；实测值：782.96。
第3步。97-4的制备。将大环三氟甲磺酸酯97-3(408mg，0.52mmol)、四(三苯基膦)钯(30.11mg，0.03mmol)、98％氰化锌(61.21mg，0.52mmol)的2.6mL DMF混合物脱气10分钟。反应物在80℃下加热1小时。再次加入60mg四(三苯基膦)钯和120mg氰化锌，继续加热30分钟。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯萃取。分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用5％-70％乙酸乙酯己烷溶液梯度通过硅胶色谱法纯化粗产品，得到中间体97-4。LCMS-ESI+(m/z)：C37H50N5O6的[M+H]+分析计算值：660.38；实测值：660.10。
第4步。97-5的制备。用0.5mL TFA处理97-4(290mg，0.44mmol)的1mL DCM溶液，搅拌过夜。加入水，用乙酸乙酯萃取混合物。分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用10％-70％乙酸乙酯己烷溶液梯度通过硅胶色谱法纯化粗产品，得到为白色固体的中间体97-5(216mg)。LCMS-ESI+(m/z)：C33H42N5O6的[M+H]+分析计算值：604.31；实测值：604.00。
第5步。实施例97的制备。将97-5(50mg，0.08mmol)、HATU(37.79mg，0.1mmol)的0.3mL DMF混合物搅拌5分钟，随后加入A10(50mg，0.08mmol)和DIPEA(0.06ml，0.33mmol)。在室温下45分钟后，反应不完全(LCMS)。继续加入20mg A10并搅拌2小时。加入2mL 1N HCl，用DCM萃取混合物。使用30％-65％乙酸乙酯己烷溶液梯度通过硅胶色谱法纯化粗产品。将含有残余DMF的产物组分合并。加入水，生成沉淀(14mg)。用乙酸乙酯萃取滤液，将提取物与沉淀合并。所得溶液用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并减压干燥，得到实施例97。分析HPLC保留时间：9.06min。LCMS-ESI+(m/z)：C42H54F2N7O8S的[M+H]+分析计算值：854.98；实测值：853.88。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.77(br s，1H)，8.05(m，1H)，7.93(m，1H)，7.62(m，1H)，7.20(m，1H)，7.08(m，1H)，6-5.65(m，1H)，5.56(m，1H)，5.17(m，1H)，4.90(m，1H)，4.38(m，2H)，4.22(m，1H)，4.06(m，1H)，3.57(m，1H)，2.88(m，1H)，2.70(m，5H)，2.28-2.08(m，1H)，2.04-1.30(m，12H)，1.29-1.09(m，9H)，1.08-0.96(m，4H)，0.85-0.67(m，3H)，0.43(m，1H)，0.34(m，1H)，0.19-0.03(m，1H)。
以下化合物可使用本说明书的合成方法或是通过本领域众所周知的方法获得：
其中V是下式结构：
并且其中E和G如上定义。
生物活性
基因型1a、2a和3 NS3蛋白酶的表达和纯化
NS3蛋白酶表达质粒的生成
基因型1b(con-1株)HCV NS3蛋白酶结构域的编码序列由编码I389luc-ubi-neo/NS3-3'/ET复制子的质粒(Reblikon，Mainz，德国)通过PCR进行扩增。设计5’-PCR引物以编码N末端K3六聚组氨酸标签并将框内重组烟草蚀文病毒(rTEV)蛋白酶切割位点插入至NS3编码序列。将所获DNA片段克隆至pET28蛋白表达载体(Invitrogen，Carlsbad，CA)中产生p28-N6H-Tev-NS3(181)1b。
使用Titan One Tube RT-PCR试剂盒(Roche，Indianapolis，IN)通过RT-PCR扩增基因型3HCV蛋白酶结构域的编码序列并使用QIAmp UltraSens病毒试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)扩增提取自HCV阳性人血清的RNA(BBI Diagnostics，MA)。5’PCR引物设计为编码N末端六聚组氨酸标签并将框内rTEV蛋白酶切割位点插入至NS3蛋白酶编码序列。将所获DNA片段克隆至pET28以分别得到表达载体p28-N6H-Tev-NS3(181)1a和p28-N6H-Tev-NS3(181)3。
NS3蛋白酶的蛋白表达
使用基因型1b或3NS3表达载体转化BL21AI细菌(Invitrogen，Carlsbad，CA)并用其接种20L发酵容器(Sartorius BBI System Inc.，Bethlehem，PA)，该容器内含有18L添加50μg/mL卡那霉素的新鲜2YT培养基。当细胞密度达到OD600为1时，将培养物的温度自37℃降低至28℃，并加入30μM ZnSO4、14mM L-阿拉伯糖和终浓度1mM的异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)立即开始诱导。诱导四小时后离心收获细胞，进行NS3蛋白纯化之前以冷冻沉淀的形式在-80℃下保存。
NS3蛋白酶的纯化
基因型1b NS3蛋白酶的纯化
解冻细胞沉淀并以10mL/g细胞的浓度重悬于含有50mM tris pH 7.6、300mMNaCl、0.1％3-[(3-胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸内盐(CHAPS)、5％甘油和2mMβ-巯基乙醇的裂解缓冲液中。然后对细胞混悬液进行超声处理、粗棉布过滤并以18000磅/in2通过三次微流化器。将所得裂解液在15500rpm下离心45分钟，取上清液上样至用五体积Ni缓冲液A(50mM tris pH 7.6、300mM NaCl、0.1％CHAPS、5％甘油、2mMβ-巯基乙醇、50mM咪唑-HCl)预平衡的HisTrap HP柱(GE Lifesciences)。以加有500mM咪唑-HCl的Ni缓冲液A 0-100％梯度洗脱蛋白，收集组分并合并。用SP-A缓冲液(50mM tris pH 7.0、10％甘油、2mM二硫苏糖醇(DTT))1:10稀释HisTrap合并物，上样至以SP-A缓冲液平衡的HiTrap SP-HP柱(GELifesciences)。用0-100％的SP-B缓冲液(SP-A缓冲液加1M NaCl)梯度洗脱NS3蛋白酶。合并并浓缩含有NS3的SP组分，将此浓缩合并物分为小份，在液氮中速冻并于-80℃下保存。
基因型3 NS3蛋白酶的纯化
将收集自基因型3HCV NS3蛋白酶表达的细菌沉淀在裂解缓冲液(25mM tris pH7.5缓冲液，含有150mM NaCl和1mM苯甲基磺酰氯(PMSF))中均质化，以18000磅/in2通过微流化器。在4℃下以30000×g将均质化的细胞裂解物离心30分钟。用洗涤缓冲液I(含有1％CHAPS的25mM tris，pH 7.5)冲洗所获P1沉淀，随后以10000×g在4℃下离心30分钟。用洗涤缓冲液II(含有2M NaCl和2M尿素的50mM CAPS缓冲液，pH 10.8)冲洗所获P2沉淀，随后以30000×g在4℃下离心数分钟。将所获P3沉淀重悬于溶解缓冲液(20ml含有150mM NaCl和8M尿素的25mM tris，pH 7.5)并在4℃下孵育1小时。将溶解的蛋白通过0.45微米滤器。检测蛋白浓度并将该溶液调整为40mM DTT，在4℃下孵育30分钟，随后在搅拌下快速稀释至复性缓冲液(25mM tris，pH 8.5，0.8M盐酸胍，0.4M L-精氨酸，10mM ZnSO4)。蛋白溶液在4℃下孵育过夜以进行复性。复性的蛋白酶以30000×g离心10分钟从而去除残余沉淀。随后检测最终的蛋白浓度，将NS3蛋白酶分为小份，在液氮中速冻并于-80℃下保存。
基因型1b和3a NS3蛋白酶的Ki测定。
如上述生产纯化的基因型1b和3a病毒的NS3蛋白酶结构域(氨基酸1-181)。自Anaspec,Inc.(San Jose，CA)获得内部淬灭的荧光缩酚酸肽底物Ac-DED(Edans)-EEAbuΨ[COO]ASK(Dabcyl)-NH2和含有NS4A蛋白辅因子的疏水性内核残基的合成多肽(KKGSVVIVGRIILSGRKK；NS4A多肽)。其他化学品和生化试剂均为试剂级或更高级，购自标准供应商。
在室温下于包括50mM HEPES、40％甘油、0.05％Triton X-100、10mM DTT和10％DMSO的缓冲液中进行反应。最终分析溶液含有50pM NS3基因型1b蛋白酶或200pM基因型3a蛋白酶、20μM NS4A多肽以及4μM底物(基因型1b)或2μM底物(基因型3a)。抑制剂浓度自100nM至5pM，3倍稀释，还包括无抑制剂对照。
用DMSO制成20×终浓度的化合物稀释液。在96孔分析板中制备反应混合物。将溶于分析缓冲液的酶和NS4A肽溶液(两个4×终浓度的试剂，25μL体积)与45μL分析缓冲液和5μL抑制剂或DMSO混合，并在室温下预孵育1小时。加入4×终浓度的25μL底物溶液以开始反应。剧烈混合平板5-10秒，反应进行90分钟。在90至120分钟反应时间之中使用TecanInfiniTe M1000或PerkinElmer Envision多模式读板仪每30秒检测一次荧光，激发光波长为340nm，发射光波长为490nm。
根据加入底物后90-120分钟时间框内稳态时的前进曲线计算速率。为了测定Ki，以抑制剂浓度和速度作图，使用GraphPad Prism 5用方程1(Morrison,J.F.，Biochimicaet Biophysica Acta 1969，185，269-286)拟合数据以计算Ki app。使用已知有效抑制剂滴定活性位点从而确定酶的活性分数。根据Ki app/(1+[[S]/Km])计算Ki。表1中报告了代表性化合物对于基因型1b和3a的结果(分别为Ki 1B和Ki 3A)。
v v 0 = [ E ] t - [ I ] t - K i app - ( [ E ] t - [ I ] t - K i app ) 2 + 4 [ E ] t K i app 2 [ E ] t - - - ( 1 )
基于细胞的抗HCV活性评价：
在稳定的亚基因组HCV复制子细胞系和瞬时转染CHV复制子的细胞中测定抗病毒能力(EC50)。术语半数最大有效浓度(EC50)是指一个药物在以下规定的暴露时间后诱导基线与最大值之间一半反应的浓度。
根据Lohmann等人(Lohmann V，Korner F，Koch J等人，Replication ofsubgenomic hepatitis C virus RNAs in a hepatoma cell line.Science 1999；285:119-3)的描述在Huh-7来源的细胞中建立了基因型1a、1b、2a、3a和4a的稳定亚基因组HCV复制子。每个稳定的细胞系含有双顺反HCV复制子，该复制子编码人源化海肾荧光素酶(hRLuc)报告基因并融合有选择性新霉素抗性基因，后接EMCV IRES和HCV NS3-NS5B编码区域。在选择抗生素新霉素(G418)的存在下完成了结构性表达HCV复制子的细胞的选择。检测荧光素酶活性作为细胞内HCV复制水平的标志物。
基因型1a稳定复制子来源于H77HCV株，含有适应性突变P1496L和S2204I。基因型1b稳定复制子来源于Con1HCV株，含有适应性突变E1202G、T1280I和K1846T。基因型2a稳定复制子来源于JFH-1HCV株，不需要适应性突变。基因型3a稳定复制子来源于S52HCV株，含有适应性突变P1121L、A1198T和S2210I(相当于基因型1中的S2204I)。基因型4a稳定复制子来源于ED43HCV株，含有适应性突变Q1691R和S2204I。所有复制子细胞系均繁殖至Huh-7来源的细胞中并在添加10％胎牛血清(FBS)和0.5mg/mL G418的达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)中保持。
建立了基因型1a、1b、3a以及基因型1b的NS3/4a蛋白酶抑制剂耐受变异体D168A或是基因型1a的NS3/4a蛋白酶抑制剂耐受变异体R155K瞬时转染的HCV复制子。瞬时转染的HCV复制子还是双顺反亚基因组复制子，但不含稳定复制子中存在的新霉素选择标志物。这些复制子编码脊髓灰质炎病毒IERS，随后是hRLuc报告基因、EMCV IRES和最后的HCV NS3-NS5B编码区域。基因型1a(H77)和1b(Con1)野生型复制子来源于相同菌株并含有如上所述的相同适应性突变。基因型3a瞬时复制子如上所述来源于S52HCV株，但含有轻微改变的适应性突变P1112L、K1615E和S2210I。具体来说，稳定基因型3a复制子的蛋白酶结构域中的二级适应性突变A1198T(A166T)被NS3解旋酶中的K1615E(K583E)代替，但对复制效率没有影响。位于蛋白酶结构域的A166T的去除最小化了此变异体对以蛋白酶结构域为靶的抑制剂的影响，并且显示了与基因型3a野生型更为接近的蛋白酶结构域。通过定点诱变在1b或1a野生型NS3基因中引入编码NS3/4蛋白酶抑制剂突变的抗性复制子。通过电穿孔转染法将自所有瞬时复制子体外转录的RNAs转染至天然Huh-7来源细胞系。检测荧光素酶活性作为细胞内HCV复制水平的标志物。
为了进行EC50分析，将每个HCV复制子的细胞分液至384孔板。在DMSO中溶解化合物，浓度为10mM，使用自动移液机以以DMSO稀释。使用自动化机器将三倍系列稀释的化合物直接加入至细胞中。以DMSO为阴性(溶剂；没有抑制)对照，以三种HCV抑制剂的组合物作为阳性对照(100％抑制)，其中包括蛋白酶抑制剂；NS5A抑制剂和核苷抑制剂，使用浓度为>100xEC50。72小时后，裂解细胞并按照生产商(Promega-Madison，WI)的建议定量检测海肾荧光素酶活性。进行非线性回归以计算EC50值。
结果参见表1和表2：
表1：稳定亚基因组HCV复制子细胞系的生物活性值
nt-未检测的
*RULC：海肾荧光素酶
表2：瞬时转染HCV复制子细胞系的生物活性值
nt：未检测
*WT＝野生型
基因型1a中的NS3/4a蛋白酶抑制剂抗性变异体R155K
基因型1b中的NS3/4a蛋白酶抑制剂抗性变异体D168A
表1和表2中的数据显示了每个化合物在各个检测中随时间的平均值。对于某些化合物，在项目周期中已进行了多种检测。因此，表1和表2中报告的数据包括优先权文件中报告的数据以及在中间阶段获得的数据。
药学组合物
以下举例说明了含有式I、II、III或IV(例如IVa-IVh任意之一)(“化合物X”)的化合物的代表性药物剂型，用于人类中的治疗或预防性用途。
以上制剂可通过药学领域众所周知的常规方法获得
所有参考文献包括出版物、专利文件通过引入并入本文中，如同通过引用单独并入。本发明描述了多个具体和优选的实施方案和技术。但是，应当理解可进行许多变更和修改同时仍保留在本发明的精神和范围之内。
术语“一个”和“一个”和“该”以及类似引用在本说明书的上下文(特别是以下权利要求的上下文)中的使用应解释为包括单数和复数，除非在文中另外指出或与上下文背景明显矛盾。本文中描述的所有方法可以任意适合的顺序进行，除非在文中另外指出或与上下文背景明显矛盾。本文提供的任意或所有实例或范例性语言(例如，例如，优选，优选地)的使用仅用来进一步说明本发明的内容而不对权利要求的范围作出限制。说明书中的任何语言不应解释为要求任何未要求保护的元素作为本发明实践的基础。
本文中描述了要求保护公开的替代实施方案，包括发明者已知实践此要求保护的发明的最佳方式。其中，公开的实施方案的变动对阅读此前说明书的本领域普通技术人员十分明显。发明者希望技术人员在需要时使用这些变动(例如，改变或组合特征或实施方案)，发明者希望发明按照本文中明确描述以外的方式实践。
因此，本发明包括适用法律允许的所附权利要求中列举主题的所有改动和同等物。此外，除非文中另外说明或是与上下文明显矛盾，否则任何上述元素以所有可能变动形成的组合也包括在本发明中。
单独数值的使用表示为近似值，就好像该数值前缀有词语“大约”或“大致”。同样，本发明中指明的不同范围中的数值，除非另由明确说明，否则表示为近似值，就好像所述范围内的最小值和最大值前均缀有词语“大约”或“大致”。以这种方式，也可使用高于或低于所述范围的变动来基本达到与范围内值相同的结果。如本文所用的术语“大约”或“大致”，当是指数值时，对于与讨论的范围或元素最为密切相关或领域相关的所公开主题领域普通技术人员来说，应具有它们的普通或常规含义。由绝对数值范围放宽的量取决于多种因素，例如，一些可能考虑的因素包括元素和/或给定量的变动对所要求主题性能的影响的关键程度，以及其他本领域技术人员已知的考虑因素。如本文所用，对不同数值使用不同位数的有效数字并不意味着限制词语“大约”或“大致”是如何放宽一个特定数值或范围的。因此，一般来说，“大约”或“大致”放宽数值。此外，公开的范围是指一个包括最小值和最大值之间每个值的连续范围，以及使用术语“大约”或“大致”提供的放宽的范围。因此，除非文中另外指明，否则本文中数值范围的列举仅用作单独提及范围内每个单独值的速记方法，并且将每个单独值并入范围之内就好像在文中单独列举一样。
应当理解本文公开的任何数据形成或作为来源的任何范围、比例和比例范围代表了本发明的更多实施例，并且作为本发明的一部分被包括在内，就好像它们被明确指出。这包括了具有或不具有明确上限和/或下限所形成的范围。因此，与特定范围、比例或比例范围最为密切相关的本领域普通技术人员应理解这些数值是明确来源于本文所列的数据的。

Claims (16)

1.式IVa的化合物：
或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是：
或其药学上可接受的盐。
3.式IVc的化合物：
或其药学上可接受的盐。
4.如权利要求3所述的化合物，其中所述化合物是：
或其药学上可接受的盐。
5.式IVe的化合物：
或其药学上可接受的盐。
6.如权利要求5所述的化合物，其中所述化合物是：
或其药学上可接受的盐。
7.式IVg的化合物：
或其药学上可接受的盐。
8.如权利要求7所述的化合物，其中所述化合物是：
或其药学上可接受的盐。
9.一种化合物，其中所述化合物是：
10.一种包括如权利要求9所述的化合物和药学上可接受的载体的组合物。
11.一种化合物，其中所述化合物是：
12.一种包括如权利要求11所述的化合物和药学上可接受的载体的组合物。
13.一种化合物，其中所述化合物是：
14.一种包括如权利要求13所述的化合物和药学上可接受的载体的组合物。
15.一种化合物，其中所述化合物是：
16.一种包括如权利要求15所述的化合物和药学上可接受的载体的组合物。
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