RS55464B1 - 2-[4-(3- i 2 fluorbenziloksi) benzilamino] propanamidi visokog stepena čistoće za upotrebu kao lekovi i farmaceutski preparati koji ih sadrže - Google Patents

2-[4-(3- i 2 fluorbenziloksi) benzilamino] propanamidi visokog stepena čistoće za upotrebu kao lekovi i farmaceutski preparati koji ih sadrže

Info

Publication number
RS55464B1
RS55464B1 RS20160965A RSP20160965A RS55464B1 RS 55464 B1 RS55464 B1 RS 55464B1 RS 20160965 A RS20160965 A RS 20160965A RS P20160965 A RSP20160965 A RS P20160965A RS 55464 B1 RS55464 B1 RS 55464B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
fluorobenzyloxy
benzaldehyde
benzylamino
fluorobenzyl
propanamide
Prior art date
Application number
RS20160965A
Other languages
English (en)
Inventor
Elena Barbanti
Carla Caccia
Patricia Salvati
Francesco Velardi
Tiziano Ruffilli
Luigi Bogogna
Original Assignee
Newron Pharm Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37101658&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS55464(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Newron Pharm Spa filed Critical Newron Pharm Spa
Publication of RS55464B1 publication Critical patent/RS55464B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/02—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having nitrogen atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to carbon atoms of unsubstituted hydrocarbon radicals
    • C07C233/08—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having nitrogen atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to carbon atoms of unsubstituted hydrocarbon radicals with carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of a saturated carbon skeleton containing rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
    • C07C231/12—Preparation of carboxylic acid amides by reactions not involving the formation of carboxamide groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/12—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by halogen atoms or by nitro or nitroso groups
    • C07C233/13—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by halogen atoms or by nitro or nitroso groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
    • C07C231/10—Preparation of carboxylic acid amides from compounds not provided for in groups C07C231/02 - C07C231/08
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
    • C07C231/16—Preparation of optical isomers
    • C07C231/18—Preparation of optical isomers by stereospecific synthesis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis pronalaska
Pozadina pronalaska
Predmetni pronalazak se odnosi na (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)-benziIamino]-propanamid, tj. safinamid (Ia) i (S)-2-[4-(2-fluorbenziIoksi)-benzilamino]propanamid, tj. ralfinamid (lb) visokog stepena Čistoće, kao što je definisano u patentnom zahtevu 1, za upotrebu kao lekovi i na farmaceutske preparate koji ih sadrže kao aktivne sastojke.
Safinamid (NW-1015, FCE-26743A, PNU-151774E) je blokator natrijumskih kanala, modulator kalcijumskih kanala, inhibitor monoamino oksidaze B (MAO-B). inhibitor oslobađanja glutamata i modulator metabolizma dopamina.
Safinamid je koristan u lečenju poremećaja centralnog nervnog sistema (CNS-a), posebno epilepsije, Parkinsonove bolesti, Alchajmerove bolesti, depresije, sindroma nemirnih nogu i migrene (WO 90/14334, WO 04/089353, WO 05/ 102300, WO 04/062655).
Ralfinamid (NW-1029, FCE-26742A, PNU-0154339E)je blokator natrijumskih kanala koristan u lečenju bolnih stanja, uključujući hronični bol i neuropatski bol, migrenu, bipolarne poremećaje, depresije, kardiovaskularne, zapaljenske urogenitalne, metaboličke i gastrointestinalne poremećaje (WO 99/35125. WO 03/020273, WO 04/062655. WO 05/018627, WO 05/070405, WO05/l 02300, WO 06/027052).
Sada je otkriveno da proizvodnja preparata safmamida i ralfinamida u velikim količinama, u skladu sa postupcima opisanim u stanju tehnike, sadrži dve nepoželjne nečistoće, redom, (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamid (Tla) i (S)-2-[3-{2-fluorbenzil)-4-(2-fluorobenziloksi)-benzilamino]propanamid (Ilb) i njihove soli, posebno njihove odgovarajuće metansulfonate (Hc) i (Hd)
Ova činjenica je od posebnog značaja usled velike toksičnosti dve navedene nečistoće.
Mnoge supstance koje su kandidati za lekove otpadaju tokom kliničkih studija zbog nepredviđenih dejstava na metabolizam ljudi, ili zbog toksičnosti, usled neželjenih nečistoća te je stoga eliminacija takvih nečistoća u ranoj prekliničkoj fazi važna i izrazito poželjna.
Na prekliničkom nivou, potencijal za prevođenje nekog jeđinjenja u lek može da se proceni primenom veoma dobro poznate grupein vitrotestova, kao što su interakcije sa enzimima koji učestvuju u metabolizmu Jekova, citotoksičnost, metabolička stabilnost i profil, propustljivost kroz membranu, unutrašnji klirens i blokada kanala iz humanog gena povezanog sa etar-cc-go-go (HERG) genom.
Sistem citohrom P450 (CYP 450) je glavni enzimski sistem za metabolizam lipofilnih ksenobiotika, uključujući lekove, karcinogene i zagađivače životne sredine. CYP 450 je multienzimski sistem vezan za membranu koji sadrži hem, a koji je prisutan u mnogim tkivima ali u najvećoj koncentraciji nalazi se u jetri. Procenjuje se da u jetri ljudi postoji 15 do 20 različitih formi CYP 450 za metabolizam ksenobiotika. Do danas je identifikovano više od četrnaest genskih familija za CYP kod sisara. Uprkos postojećoj visokoj homologiji, detaljne studije su otkrile da svaka familija i podfamilija CIP ima tačno određene uloge u metabolizmu ksenobiotika. Tri CYP familije, CYP1, CYP2 i CYP3 čine oko 70% CYP-ova iz mikrozoma humanih hepatocita. pri čemu CYP3 predstavlja približno 30%. Ovi CYP enzimi su najodgovorniji za metabolizam najvećeg broja lekova dostupnih na tržištu.
CYP1 familija sadrži nekoliko članova koji obuhvataju CYP1A1, CYP1A2 i CYP1B1, a koji su uključeni u metabolizam acetaminofena, klomipramina i imipramina.
CPY2 familija sadrži nekoliko podfamilija, uključujući CYP2A. CYP2B, CYP2C, CYP2D i CYP2E. CYP2C podfamilija sadrži najmanje sedam članova. CYP2C9 je odgovoran za metabolizam ibuprofena, diklofenaka, tolbutamida i torsemida. CYP2C19 je glavni izoenzim koji metaboliše dijazepam i omeprazol. Pokazano je daje CYP2D6 odgovoran za metabolizam preko 30% lekova dostupnih na tržištu, uključujući antidepresive, kardiovaskularne lekove i antipsihotike.
U CYP3 porodici, u jetri ljudi identifikovane su tri izoforme. Humani CYP3A4 je prepoznat kao najvažnija izoforma za metabolizam lekova. Do danas, metabolizam u kome ulogu katalizatora igra CYP3A4 predstavlja put eliminacije za skoro 50% lekova na tržištu.
Zbog svoje važnosti za metabolizam lekova, i CYP3A4 i CYP2D6 često učestvuju u međusobnim interakcijama lekova, a nekoliko klinički korišćenih jeđinjenja identifikovano je kao moćan inhibitor ovih CYP 450 izoformi, na primer, ketokonazol, terfenadin, eritromicin, mikonazol propanolol i kvinidin, redom. Usled te Činjenice postoji veoma jasno ograničenje za upotrebu ovih lekova.
Dalji problem, koji se sastoji u nagloj smrti kao posledici neželjenog dejstva ne-antiaritmika, predstavlja veliki razlog za zabrinutost u farmakološkom smislu i problem sa kojim se suočavaju famraceutska industrija i zdravstvena regulatorna tela. Poslednjih godina, najmanje pet veoma rasprostranjenih lekova (astemizol, sertindol, terfenadin, cisaprid, grepafloksacin) povučeno je sa tržišta usled izveštaja o slučajevima nagle smrti. U svim slučajevima, impliciran je sindrom dugog QT intervala (LQTS), koji predstavlja abnormalnost repolarizacije srčanog mišića koja se odlikuje produženjem QT intervala na elektrokardiogramu, kao faktor predispozicije za "torsades de pointes", polimorfnu ventrikulamu tahikardiju koja može spontano da pređe u ventrikularnu fibrilaciju i dovede do nagle smrti. Urođeni LQTS može da se dovede u vezu sa nekoliko mogućih mutacija koje dovode do defekata natrijumskih kanala i dva različita kalijumska kanala: brzoaktivirajuće ispravljače sa odloženom aktivnošću (IKr) i sporoaktivirajuće ispravljače sa odloženom aktivnošću (IKs). Ono što je važno, skoro svaki slučaj produženog trajanja srčanog akcionog potencijala koji se može dovesti u vezu sa izlaganjem lekovima (stečeni LQTS) može da se poveže sa jednim specifičnim mehanizmom: blokadom IKr struja u srcu. Ovu struju, koja je važna komponenta repolarizacije u fazi 3 na kraju QT intervala, provode tetramerne pore, sa pojedinačnim podjedinicama enkodiranim na HERG. Kako postoji rašireno uverenje da je blokada HERG K+ kanala glavni uzrok produženja QT intervala izazvanog lekovima. rana detekcija jeđinjenja sa neželjenim sporednim dejstvima postala je važan cilj farmaceutske industrije.
Verovatnoća da su jeđinjenja sa snažnom inhibicijom enzima koji metabolišu lekove, posebno enzima CYP 450 i sa svojstvima blokiranja HERG kanala toksična je veoma velika, kao i verovatnoća da njihov dalji razvoj treba da se zaustavi u ranoj fazi.
Kao što je prikazano u Tabeli 1, nečistoće (Ha) i (11b), kao i metansulfonatne soli (IIc) i (Ud), snažno inhibiraju, u mikro i sumbikromoiarnom opsegu, CYP3A4, CYP2D6, CYP2C19, CYP2C9 i HERG stmje i veoma su citotoksične, u poređenju sa safinamid metansulfonatom (Ic) i ralfinamid metansulfonatom (Id) sa visokim stepenom čistoće, sintetisanim u skladu sa procesom prema predmetnom pronalasku.
Tabela 2 pokazuje komparativne rezultate (IC50)0inhibiciji citohroma CYP3A4 primenom safinamid i ralfinamid metansulfonata visoke čistoće, sintetisahnih korišćenjem novog procesa prema predmetnom pronalasku, sa safinamidom i ralfinamidom dobijenim u istom procesu u prisustvu 0,3% nečistoća IIc i Ud, redom.
Kada se 0,3% nečistoća IIc i Ud doda u safinamid i ralfinamid metansulfonat visoke čistoće, primećuje se značajno smanjenje u ICso na CYP3A4 u oba slučaja, što znači da ove nečistoće doprinose snažnoj inhibiciji enzimske aktivnosti.
Kao što je prikazano u tabeli 3, nečistoća (IIc) povećava, počev od 3 mg/kg i.p., smrtnost u testu maksimalnog elektrošoka (MES) kod miševa, bez bilo kakve farmakološke aktivnosti, tj. zaštite od konvulzija.
Tabela 4 prikazuje da nečistoća Ud, kada se daje p.o. pri dozama od 10 i 20 mg/kg, u testu maksimalnog elektrošoka (MES) ne štiti miševe od konvulzija u poređenju sa istim dozama raldinamid metansulfonata.
Na osnovu ovih podataka, nečistoće IIc i Ud, prisutne u safinamidu i ralfmamidu, redom, sintetisanim u procesu opisanom u WO 90/14334 i od strane Pevarello et al., u J. Med. Chem, 1998, 41, 579-590 prikazujuin vitroneke neželjene odlike, kao što su ćelijska toksičnost, snažna inhibicija neke od izoformi CYP 450, blokada HERG kanala i odsustvo zaštitne aktivnosti u" in vivo"modelu epilepsije,
Jedan od važnih aspekata CYP sistema je varijacija medu različitim grupama u populaciji. Varijacije u metabolizmu lekova su od izuzetnog značaja u kliničkim studijama. Pokazano je da postoji značajna varijacija u enzimskoj aktivnosti CYP3A4 i C YP2D6 između različitih etničkih grupa, ali čak i između različitih pojedinaca u istoj etničkoj grupi. CYP aktivnost kod različitih pojedinaca značajno se razlikuje, u zavisnosti od različitih izoenzima. Promene u nivou ekspresije CYP među različitim pojedincima mogu da dovedu do varijacija u metabolizmu lekova. Sto je još važnije, polimorfizam takođe može da dovede do pojave enzimskih varijanti CYP sa nižom ili višom enzimskom aktivnošću koja vodi do varijacija u metabolizmu lekova. Polimorfizam CYP2D6 je dobro proučena tema u oblasti metabolizma lekova. U kliničkim studijama, naglašene varijacije medu pojedincima prvi put su uočene pri metabolizmu antihipertenzivnih lekova i antiepileptika. Eliminacija lekova koji se metabolišu dejstvom CYP2D6 sporija je kod onih pojedinaca koji nose defektne alele za CYP2D6. Pojedinci sa sporijim metabolizmom klasifikuju se kao lošiji metabolizeri (PM), dok su katalitički kompetentni pojedinci nazvani izraziti metabolizeri (EM). Incidencija PM fenotipa u populaciji razlikuje se među grupama sa različitim rasnim poreklom: približno 5 do 10% belaca su nosioci PM fenotipa, alisamo ] Yoazijata. CYP2C19 je još jedna važna polimorfna izoforma sa kliničkim implikacijama.
Uzimajući u obzir ove uočene činjenice, jedinjenje koje ne pokazuje interferenciju sa izoformama CYP450 (ni inhibiciju, ni indukciju) nosi veoma nizak rizik od interakcija sa drugim lekovima u kliničkoj praksi te ga lekari mogu jednostavno i bezbedno prepisivati.
Konkretnije, lekovi koji ne pokazuju interakcije sa sistemom citohroma CYP450 posebno su indikovani za terapeutski tretman pojedinaca koji su kiasifikocani kao loši metabolizeri (PM) ili za terapeutski tretman pacijenata koji istovremeno uzimaju druge lekove za koje se zna da interaguju sa navedenim citohromima, kao što su ketokonazol, terfenadin. eritromicin, mikonazol, propanolol i kvinidin, i(li) za koje se zna da imaju svojstva blokade HERG kanala.
Prema ustaljenoj kliničkoj praksi, safinamid i ralfinamid metansulfonati (Ic i Id) obično se primenjuju kod pacijenta kojem je takav tretman neophodan tokom dužeg vremenskog perioda, podeljeni u nekoliko doza na dan. Ovo je posebno tačno za terpeutske primene u kojima je bolest koja se leci: Parkinsonova bolest, Alchajmerova bolest i sindrom nemirnih nogu (za upotrebu safinamida) ili hronični ili neuropatski bol, kardiovaskularni ili zapaljenski poremećaji (za upotrebu ralfinamida). Iako dnevna doza može da varira u skladu sa specifičnim uslovima i potrebama pacijenata, dnevna doza safinamid metansulfonata može obično da se kreće od 10 mg/dan do 800 mg/dan, dok dnevna doza ralfinamid metasulfonata može obično da se kreće od 10 mg/dan do 1 g/dan. U ovim uslovima, te imajući u vidu prethodno iznesene podatke, izrazito se preporučuje da se koncentracije nečistoća (Ha) i (Ilb) ili njihovih soli, posebno metansulfonatnih soli (IIc) i (Ilđ) u doznim oblicima safinamida i ralfinamida ili njihovih soli održavaju na što nižem nivou, u svakom slučaju na koncentracijama nižim od 0,03%, poželjno je da budu niže od 0,01% u masenim procentima u odnosu na količinu, redom, safinamida i ralfinamida ili njihovih soli, posebno metansulfonatnih soli.
Ispitivanja i eksperimentalne studije koje su sproveli pronalazači pokazale su da safinamid i ralfinamid i njihove odgovarajuće soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama. pripremljeni u skladu sa postupcima poznatim iz stanja tehnike sadrže određenu količinu odgovarajućih nečistoća (Ha) i (Ilb) ili njihovih soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama, kao što su (IIc) i (Ud), koja prevazilazi 0,03% u masenim procentima. Stoga su prethodno opisani proizvodi neprikladni za upotrebu u terapeutskim primenama. Konkretnije, farmaceutski preparati koji sadrže safinamid ili ralfinamid ili njihove soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama, gde sadržaj nečistoća (Ha), (Ilb) i njihovih odgovarajućih soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama nije manji od 0.03%, a poželjno je da to bude ne manje od 0,01% u masenim procentima u odnosu na navedenu aktivnu supstancu, nisu pogodni kao lekovi.
U predmetnom opisu i patentnim zahtevima vrednosti za prethodno naznačene opsege, osim ukoliko je drugačije naznačeno, treba da se smatraju vrednostima kojima se izražava procentualni udeo, u masenim procentima, u odnosu na masu" aktivnih supsfcrnci",tj. delotvomi sadržaj biološki aktivne nečistoće (Ha. Ilb) u odnosu na delotvorni sadržaj terapeutski aktivne supstance (la, lb).
Proces opisan u predmetnom pronalasku, intenzivno smanjujući nastanak nečistoća, dovodi do proizvoda visoke hemijske čistoće i bezbednijeg biološkog profila. Druge nečistoće, koje jedva mogu da se detektuju, potiču od veoma malih količina 2- i 4-fluorbenzil hiorida i 3-i 4-fluorbenzil hiorida koji su sadržani u komercijalno dostupnom 3-fluorbenzil hloridu i 2-fluorbenzil hloridu, redom, koji se koriste za sintezu intermedijera 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida (IVa) i 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida (IVb), koji su intermedijeri za dobijanje, redom, jeđinjenja (Ia) i (lb).
U skladu sa procesom opisanim u predmetnom pronalasku, safinamid i ralfinamid se dobijaju u visokim prinosima i sa visokom čistoćom u kojoj je sadržaj (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamida (Ha) i (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorobenziloksi)-benzilamino]propanamida (Ilb) i njihovih soli, posebno sa metansulfonskom kiselinom (pod generičkim imenom "dibenzil derivati") u safmamiđu i ralfinamidu ili njihovim solima, posebno sa metansulfonskom kiselinom, manji ili jednak 0,03%, a poželjno je da to bude 0,01% (u masenim procentima).
Proces prema predmetnom pronalasku polazi od 4-hidroksibenzaldehida i podrazumeva sledeća tri koraka: a) O-benzilovanje 4-hidroksibenzaldehida derivatima sa sledećom opštom formulom 3- ili 2- F-C6H4-CH2-Y, gde je Y odlazeća grupa (Cl, Br, I, OSO2CH3itd. ); ovo O-benzilovanje se sprovodi pod uslovima koji su veoma selektivni za O-alkilovanje i daje 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid) i 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid) visoke čistoće;
b) reduktivno alkilovanje L-aianinamida, baze ili soli, pomoću 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida i 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida, gde je
redukujući sistem vodonik u gasovitom stanju i heterogeni katalizator, zadobijanje, nakon kristalizacije, safinamida i ralfinamida veoma velike enantiomerne i hemijske čistoće.
c) dobijanje soli safinamida i ralfinamida sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom salifikacijom safinamida i ralfinamida, redom, koji su dobijeni u prethodnom
koraku. Farmaceutski prihvatjive kiseline su, na primer, izabrane iz grupe koja se sastoji od azotne, hlorovodonične, bromovodonične. sumporne, perhlome. fosforne, metansulfonske, p-toluensulfonske, sirćetne, trifluorsirćetne, propionske, glikolne, mlečne, oksalne, malonske, jabučne, maleinske, vinske, limunske, benzoeve, cimetne, mandelinske i salicilne kiseline.
Dalji cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi safinamid (a) ili ralfinamid (b) visokog stepena čistoće, ili njihove odgovarajuće soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom, u kojima je koncentracija nečistoća. (S)-2-[3-(3-fiuorbenzil)-4-(3-fiuorbenziloksi)-benzilaminojpropanamida (Ha) ili (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziIoksi)-benzilaminojpropanamida (Ilb), redom, ili njihovih soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom manja od 0,03% (u masenim procentima) za leČenje, redom, (a) epilepsije. Parkinsonove bolesti, Alchajmerove bolesti, depresija, sindroma nemirnih nogu i migrene ili (b) bolnih stanja, uključujući hronični bol i neuropatski bol, migrenu, bipolarne poremećaje, depresije, kardiovaskularne, zapaljenske, urogenitalne, metaboličke i gastrointestinalne poremećaje, pod uslovima u kojima ne dolazi do interferencije sa citohromima CYP450 sistema, posebno CYP3 A4, CYP2D6, CYP2C19, CYP2C9 i bez pokazivanja svojstava blokade HERG kanala kod pacijenata koji su klasifikovani kao loši metabolizeri (PM) ili kod pacijenata kod kojih se istovremeno primenjuju drugi lekovi za koje se zna da interaguju sa citohromima CYP450 sistema, ili da imaju svojstva blokade HERG kanala.
Dalje, još jedan cilj predmetnog pronalaska je da se obezbede farmaceutski preparati koji sadrže safinamid ili ralfinamid ili njihove soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom, poželjno je da to bude metansulfonska kiselina, kao aktivne sastojke, gde tretman odgovarajućim dibenzil derivatima (Ha) kod Parkinsonove bolesti ili sindroma nemirnih nogu može da sadrži jedan ili veći broj dodatnih aktivnih sastojaka za lečenje Parkinsonove bolesti, kao što su oni opisani u WO 04/089353 i WO 05/102300, poželjno je da to bude agonist dopamina i(li) levodopa i(li) inhibitor katehol-O-metiltrasnferaze (COMT inhibitor), uz safinamid ili njegovu so sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom, poželjno je da to bude metansulfonska kiselina, odgovarajućeg prethodno opisanog visokog stepena čistoće.
Kao dalji primer, novi farmaceutski preparat prema predmetnom pronalasku za upotrebu u tretmanu bolnih stanja, uključujući hronični bol i neuropatski bol i migrenu može da sadrži dalji aktivni sastojak kao što su gabapentin i pregabalin, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli kao što je opisano u EP 1423168. uz ralfinamid ili njegovu so sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom, poželjno je da to bude metansulfonska kiselina, odgovarajućeg prethodno opisanog visokog stepena čistoće.
Farmaceutski preparati koji sadrže safinamid ili ralfinamid visokog stepena čistoće prema predmetnom pronalasku mogu da se dobiju konvencionalnim procedurama koje su u struci poznate, na primer, mešanjem aktivnih sastojaka sa farmaceutski i terapeutski inertnim organskim ili neorganskim nosiocima. Preparati prema predmetnom pronalasku mogu da budu u tečnom obliku, npr. u obliku rastvora, suspenzije, emulzije; ili u čvrstom obliku, npr. tablete, trošeje, kapsule, flasteri.
Pogodni farmaceutski i terapeutski inertni organski i(Ii) neorganski nosioci korisni u dobijanju preparata prema predmetnom pronalasku obuhvataju, na primer, vodu, želatin, gumu arabiku, laktozu, škrob, celulozu, magnezijum stearat, talk, biljna ulja, polialkilengiikole, ciklodekstrine i slične. Farmaceutski preparati prema predmetnom pronalasku mogu da se sterilišu i mogu da sadrže, osim aktivog(ih) sastoj(a)ka, dalje sastojke koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti, kao što su, na primer, konzervansi, stabilizatori, sredstva za kvašenje ili emulgatori, npr. parafinsko ulje, manit monooleat, soli za prilagođavanje osmotskog pritiska, pufere i slične.
Prethodno opisani farmaceutski preparat je za upotrebu u lečenju bolnih stanja, uključujući hronični bol i neuropatski bol i migrenu, sa ralfinamidom visokog stepena čistoće ili njegovom soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom, poželjno je da to bude metansulfonska kiselina, opciono zajedno sa gabapentinom ili pregabalinom.
Stanje tehnike
U WO 90/14334 i u radu autora Pevarello et al., u J. Med. Chem. 1998, 41, 579-590, opisan je proces za dobij anje benziloksibenzilamino-alkanamida u tri koraka: a) sinteza međuproizvoda 4-benziloksibenzaldehida O-benzitovanjem odgovarajućeg 4-hidroksibenzaldehida pomoću odgovarajućeg benzil hiorida; b) reduktivno alkilovanje a-aminoamida pomoću 4-benziloksibenzalđehida uz upotrebu natrij um cijanoborhidrida kao reduku jućeg sredstva, kao što je šematski prikazano
ispod
gde R predstavlja, među drugim supstituentima, 3-F i 2-F; R' predstavlja, među drugim supstituentima, vodonik; R<2>predstavlja, među drugim supstituentima, vodonik; R- predstavlja, među drugim supstituentima, CFh; i R<4>i R^ predstavljaju, među drugim supstituentima, vodonik.
Konkretnije, kada je reč o dobijanju safinamida i ralfinamida, reduktivno alkilovanje je reduktivno alkilovanje L-alaninamida pomoću 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida i 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldebida redom, kao što je prikazano ispod.
U J. Med. Chem. (Pevarello et al.), 1998, 41, 579-590 opisani su prinosi od 45% do 60% za dobijanje safinamid i ralfinamid metansulfonata, redom, počev od odgovarajućih (fluorbenziloksi)benzaldehida.
Proces opisan u WO 90/14334 i u prethodno citiranom radu je isti, i obezbeđuje sistem u jednom reakcionom sudu gde se iminoalkilovanje i redukcija odvijaju u istom reaktoru. Pogodni aldehid se dodaje, sav odjednom, u smeđu L-alaninamid hiđrohlorida, natrij um cijanoborhidrida, metanola i molekulskih sita u prahu.
U skladu sa Pevarello et al., u Org. Prep. Proc. Int. 1996, 28, 179-183 (gde je opisana sinteza nekih a-benzilaminoamidnih derivata reduktivnim alkilovanjem), upotreba određenog a-aminoamida kao hiđrohlorida je važna za formiranje iminijum jona na mestu odgovarajućeg imina, kako iminijumski jon reaguje lakše sa natrijum cijanoborhidridom nego sa aldehidnom karbonilnom grupom.
Prema prethodno navedenim autorima, čini se da se procedurom u jednom reakcionom sudu izbegavaju problemi racemizacije Šifove baze a molekulska sita ubrzavaju reakciju (iako su prinosi slabi).
Cijanoborhidrid je jedino redukujuće sredstvo koje se koristi, i čini se daje izabran zbog svoje male reaktivnosti i svoje selektivnosti (videti pregled "Sodium Cvanoborohvdriđe - A Highlv Selective Reducing Agent for Organic Functional Groups" - C.F. Lane, Svnthesis 1975, 132-146), koje mu omogućavaju da pravi razliku između protonovane Šifove baze i početnog aldehida.
Sinteza opisana u radu autora Pevarello et al. obezbeđuje izolovanje proizvoda hromatografijom u koloni, nakon čega sledi prevođenje u odgovarajuće soli tretmanom kiselinama. Nisu dati podaci o enantiomernoj i(li) hemijskoj čistoći safinamida i ralfinamida i(li) njihovih soli.
Postupak opisan u stanju tehnike ima mnogo nedostataka, koji ograničavaju njegovu upotrebu u većim razmerama; slede neki primeri ovih nedostataka: - izgradnja cijanida; - izgradnja bornih derivata, koje je teško razdvojiti od aktivnih supstanci; - upotreba molekulskih sita u prahu, koja su fizički promenljiva i skupa; - niski prinosi; - niska konačna koncentracija proizvoda u reakcionoj smeši za reduktivno alkilovanje (oko 2-3% masa/zapremini); - izolovanje proizvoda hromatografijom u koloni, koje se smatra problematičnim i skupim postupkom prečišćavanja kada je reč o dobijanju aktivnih sastojaka hemijskom sintezom u velikim razmerama.
Uz to, kao što je prikazano u primerima koji će uslediti nakon ovog opisa, proizvodi koji se dobijaju u skladu sa postupcima opisanim u stanju tehnike sadrže određenu količinu nečistoća (Ha), (Ilb). (IIc) i (Ud) koja je veća od 0,03% u masenim procentima u odnosu na odgovarajuću aktivnu supstancu, (Ia), (lb), (Ic) ili (Id). Takođe, pokazano je da je teško eliminisati navedene nečistoće iz konačnih proizvoda safinamida i ralfinamida ili njihovih soli, primenom uobičajenih postupaka prečišćavanja kao što su kristalizacija iz rastvarača ili hromatografija, što bi u svakom slučaju dovodilo do smanjenja prinosa.
Sinteza intermediiera 4-( fluorbenziloksi)- benzaldehida
Prema poznatim postupcima, fluorbenziloksi-benzaldehidni međuproizvodi za sintezu safinamida i ralfinamida dobijaju se benzilovanjem 4-hidroksibenzaldehida u baznoj sredini, to jest. benzilovanjem fenolnih soli koje, budući da su ambidentni nukleofili, daju dva različita proizvoda, tj. željene O-alkilovane derivate i neželjene C-alkilovane derivate.
Pronađeno je, zapravo, da fluorbenzilovanje 4-hidroksibenzaldehida 3-fluorbenzil hloriđom, koje se izvodi u skladu sa stanjem tehnike, daje 4-(3-fluorbenziloksi)benzaidehid (IVa) kao glavni proizvod zajedno sa 3-(3-fluorbenzir)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehidom (Va) koji nastaje alkilovanjem i hidroksi grupe u položaju 4 i ugljenika u položaju 3 4-hidroksibenzaldehida. Isto se dešava i prilikom fluorobenzilovanja 4-hidroksibenzaldehida 2-fluorbenzil hloriđom prema šemi koja sledi:
Reduktivno alkilovanje L-alaninamida aldehidom koji sadrži dialkilovanu nečistoću daje safinamidni i ralfinamiđni konačni proizvod koji takođe sadrži nečistoće odgovarajućih dialkilovanih jeđinjenja - dibenzil derivata, bilo daje reČ o slobodnoj bazi (Ha) ili (Ilb) ili o salifikovanim jedinjenjima, poželjno je da to bude sa metansulfonskom kiselinom (IIc) ili (Ud), kao što je prikazano na šemi koja sledi:
Druge farmaceutski prihvatjive kiseline, npr. azotna, hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, perhlorna, fosforna, metansulfonska, p-toluensulfonska, sirćetna, trifluorsirćetna, propionska, glikolna, mlečna, oksalna, malonska, jabučna, maleinska, vinska, limunska, benzoeva, cimetna, mandelinska i salicilna kiselina, mogu da se koriste umesto poželjnije metansulfonske kiseline.
Monoalkilovani derivat (safinamid ili ralfinamid) i odgovarajuće dialkilovane nečistoće imaju slična fizičko-hemijska svojstva što otežava prečišćavanje safinamida i ralfinamida tradicionalnim postupcima.
Dalje, poznati postupci podrazumevaju i sledeće dodatne nedostatke:
1) upotrebu niskomolekulskog alkohola kao rastvarača; u baznim uslovima, rastvarač - na primer, metanol - može i sam da reaguje kao nukleofilni reagens i da, sa 3- ili 2-fluorbenzil hloriđom, određene količine metil-fluorbenzil-etra; 2) ekstrakciju konačnog proizvoda pomoću organskog rastvarača nemešljivog s vodom, koja je moguća samo nakon što se reakcioni rastvarač - alkohol eliminiše iz reakcione smeše.
Sada je pronađeno da bi upotrebom navedenih postupaka iz stanja tehnike, kako bi se dobio konačni proizvod sa formulom (la) ili (lb), gde je sadržaj nečistoća (Ha) ili (Ilb), redom, manji od 0,03% (u masenim procentima), bilo neophodno drastično prečišćavanje intennedijera 4-(3-fluorbenziIoksi)benzaldehida (IVa) ili 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida (IVb) kako bi se smanjio sadržaj odgovarajućih nečistoća sa formulama (Va) i (Vb). Poželjno je da se navedeno prečišćavanje izvodi podvrgavanjem reakcionih proizvoda kristalizaciji, još poželjnije je da to bude dodatkom mešljivog inertnog organskog nerastvarača u rastvor sirovog jeđinjenja (IVa) ili (IVb) u inertnom organskom rastvaraču. Organski inertni rastvarač poželjno je izabran iz grupe koja se sastoji od aromatičnih ugljovodonika, a još poželjnije je da to bude toluen. Poželjno je da mešljivi inertni organski nerastvarač bude izabran iz grupe koja se sastoji od nižih alifatičnih ugljovodonika, još poželjnije je da to bude n-heksan. Dalja procedura kristalizacije može da se sastoji od rastvaranja prethodno navedenih jeđinjenja (IVa) ili (IVb) u vrućem rastvaraču, npr. cikloheksanu ili di(C3-C4)alkil etru, kao što je diizopropil etar uz refluks, a zatim hlađenja rastvora do sobne temperature, poželjno je do temperature od 10-15°C. a najpoželjnije je da to bude uz indukciju kristalizacije dodavanjem čistih kristala čistog jeđinjenja (IVa) ili (IVb).
Prema jednom rešenju predmetnog pronalaska, sada je pronađeno, sto je predstavljalo iznenađenje, da kada se reakcija između alkilujućeg sredstva sa formulom (lila) ili (IHb) (videti šemu ispod gde je atom F u položaju 2 ili 3. a Y je odlazeća grupa, kao što su, na primer, Cl, Br, I, OSO2CH3, OSO2C6H4-PCH3itd) sa 4-hidroksibenzaldehidom izvodi u uslovima faznog prelaza, dobijaju se odgovarajući 4-(fluorbenziloksi)benzaldehidi u visokim prinosima i sa veoma niskim koncentracijama C,0-bis-alkilovanih nečistoća.
Ovo novo fluorbenzulovanje 4-hidroksibenzaldehida u uslovima faznog prelaza može da se izvrši i u sistemu čvrsto/tečno, gde su u tečnoj organskoj fazi rastvoreni reagensi i katalizator faznog prelaza, a čvrstu fazu čini neorganska baza ili 4-hidroksibenzaldehidna so (potencijalno nastalain siluiz 4-hidroksibenzaldehida i same neorganske baze), kao i u sistemu tečno/tečno - organska/vodena sredina, gde se neorganska baza rastvara u vodenoj fazi.
Poželjni sistem je sistem čvrsto/tečno gde je poželjno da neorganska baza bude izabrana iz grupe koja se sastoji od Na2C03, K2CO3, KOH i NaOH.
Organski rastvarači koji se koriste u reakciji, kako u slučaju tečno-tečnog sistema, tako i u slučaju čvrsto-tečnog sistema, mogu da budu dialkil etri kao što su, na primer, di-terc-butil etar, etil-terc-butil etar, ili aromatični ugljovodonici kao što su, na primer, toluen, etilbenzen. izopropil benzen i ksileni. Svi ovi rastvarači mogu lako da se regenerišu iz reakcione smeše destilacijom.
Katalizatori faznog prelaza koji se koriste mogu da budu kvarternerne amonijum ili fosfonijum soli kao što su, na primer. tetrabutil amonijum bromid, tetradeciltrimetil amonijum bromid, heksadeciltributil fosfonijum bromid, trikaprililmetil amonijum hloricl (Alikvat), metiltrialkil (Cs-Cio) amonijum hlorid (Adogen), pri čemu je najpoželjniji tetradeciltrimetil amonijum bromid.
Kao katalizatori faznog prelaza mogu da se koriste i polietilenglikoli niske molekulske mase, kao što su, na primer, PEG-200 (CAS 25322-68-3) ili PEG-400 (CAS 25322-68-3).
Količina katalizatora faznog prelaza koja se koristi je između 0,02-1 mol po molu 4-hidroksibenzalđehida, poželjno je da to bude između 0,1 i 1 mol po molu 4-hidroksibenzaldehida budući da, u tim uslovima, može da se dobije količina C,0-bisfluorbenzilovanih nečistoća manja od 0,03%, a poželjno je da bude jednaka ili manja od 0,01%, u masenim procentima.
Odnos između alkilujućih sredstava sa formulama (lila) ili (Illb) i 4-hidroksibenzaldehida kreće se u opsegu od 0,6 do 1,5, dok je poželjan opseg između 0,9 i 1,1.
Reakciona temperatura je u opsegu između 60°C i 160°C, poželjni interval je od 80°C do 120°C.
Vreme reakcije obično se kreće između 4 i 8 časova.
Reakcioni prinosi su veoma visoki, po pravilu viši od 90%.
Reakciona produktivnost, tj. koncentracija reakcionih proizvoda u reakcionoj smeši je veoma visoka u opisanim reakcionim uslovima, obično je veća ili jednaka 25%
(masa/zapremini).
Sinteza safinamida i ralfinamida reduktivnim alkilovanjem cc-aminoamida
Stanje tehnike bi ukazivalo stručnjacima u ovoj oblasti da reduktivno alkilovanje a-aminoamida pomoću 4-(3- ili 2-fluorbenziloksi)benzaldehida primenom vodonika i heterogenog katalizatora kao redukcionog sredstva ne bi trebalo da bude pogodno za dobij anje safinamida i ralfinamida zbog nekompatibilnosti reagenasa i konačnih proizvoda, kao i zbog redukcionih uslova.
Zapravo, dobro je poznato koliko lako se benzaldehidi redukuju do benzil alkohola ili Čak do odgovarajućih ugljovodonika, kao što je poznato da uslovi koji bi trebalo da se koriste za izvođenje reduktivnog alkilovanja vodonikom i heterogenim katalizatorom u normalnim okolnostima jesu isti oni uslovi koji se koriste za raskidanje veza između benzilnog ugljenikovog atoma i heteroatoma kao što su azot ili kiseonik, što su vrste veza koje su prisutne i u safinamidu i u ralfinamidu, ali i u njihovim prekursorima.
Zapravo, benzilna grupa se obično koristi kao zaštitna grula za fenole i amine (videti "Protective Groups in Organic Svnthesis", T.W. Greene & P.G.M. Wuts, 3. izdanje, 1999, John Wiley & Sons, Inc.) zbog lakoće uvođenja i kasnijeg uklanjanja katalitičkom redukcijom.
U ređuktivnom alkilovanju za dobijanje safinamida i ralfinamida, očekivao bi se nastanak mnogih sporednih proizvoda, od kojih su neki ovde navedeni:
Činjenica da su safinamid i ralfinamid dobijem' sa veoma visokim prinosima i čistoćom reduktivnim alkilovanjem L-alaninamida pomoću 4-(3 ili 2-fluorbenziloksi)benzaldehida, uz upotrebu vodonika i heterogenog katalizatora kao redukcionog sistema, je iznenađujuć i inovativan aspekt ove sintetske procedure.
Štaviše, reakcioni uslovi koji se koriste u skladu sa ovom procedurom lako se primenjuju i na proizvodnju na veliko.
Reduktivno alkilovanje, cilj predmetnog pronalaska, sprovodi se u dva koraka:
a) nastanak Šifove baze
b) katalitička redukcija Šifove baze.
Ova dva koraka mogu da se izvode jedan za drugim u istom reakcionom sudu (reakcija
u jednom reaktoru), bilo sa bilo bez izolovanja Šifove baze, u oba slučaja uz visoke prinose,
U slučaju izolovanja Šifove baze, eksperimentalni uslovi koji se primenjuju na njenu izgradnju omogućavaju dobijanje izolovane Šifove baze u obliku taloga u visokim prinosima i veoma čistom obliku.
Dobijanje Šifove baze se izvodi, na odgovarajući način, u organskom protičnom rastvaraču koji mora da bude inertan u odnosu na reagense i proizvode, ali i inertan u odnosu na redukcione uslove iminske dvogube veze, kao što je na primer. niskomolekulski (C1-C5) alkanol, poželjno je da to budu metanol, etanol i izopropanol.
Nastanak Šifove baze mora da bude potpun i to je relevantan faktor za visoke prinose u kasnijim koracima katalitičke redukcije. Stoga je poželjno da se Šifove baze (Via) i (VIb) izoluju pre izvođenja koraka redukcije dvostruke iminske veze.
Izolovana imino jeđinjenja (Via) i (VIb) su korisni intermedijeri za dobijanje safinamida i ralfinamida, redom, prema predmetnom pronalasku.
Alternativno, moguće je dati prednost završetku reakcije iminoalkilovanja, izvođenjem reakcije u takvim uslovima da se izazove taloženje imino jeđinjenja (Via) i (VIb) i da se suspenzija koja sadrži intermedijerni imino derivat podvrgne katalitickoj redukciji.
Odnos između L-alaninamida (baze ili soli) i 4-(3- ili 2-fluorbenziloksi)benzaldehida može da bude 1:1, ali je korisno primeniti i 10% višak L-alaninamida. L-alaninamid može da se uvede ili u obliku slobodne baze, ili u obliku njene adicione soli kiseline. Poželjno je da se uvede u reakcionu smešu u obliku soli, najpoželjnije je da to bude hidrohloridna so. zajedno sa stehiometrijskom količinom baze, poželjno je da to bude tercijerni amin kao stoje, na primer, trietilamin ili diizopropiletilamin.
Reakciona temperatura u preparatu Šifove baze kreće se od 0°C do 60°C, poželjno je da bude između 20°C i 30°C.
Vremena reakcije kreću se u opsegu između I čas i 15 časova, poželjno je da to bude između 4 časa i 6 časova.
Redukcija Šifove baze vodonikom i heterogenim katalizatorom počinje tek kada je završen nastanak Šifove baze: ukoliko počne pre toga, sekundarne reakcije postaju značajne, a nekad i prevalentne. uz gubitak u prinosu i čistoći. Jedna od ovih sekundarnih reakcija, ona važnija, dovodi do izgradnje benzil alkohola redukcijom karbonilne grupe (fluorbenziloksi)benzaldehida koji je odabran.
Poželjni heterogeni katalizatori su niklovi, rodijumski, paladijumski ili platinski katalizatori, ili inertne površine kao što su, na primer. ugljenik, aluminijum ili silicijum, poželjno je da to budu ugljenik i aluminijum, i koriste se u količinama koje se kreću između 2% i 20% 4-(3- ili 2-fluorbenziloksi)benzaldehida, poželjno je da to bude između 5% i 10%.
Platinski i paladijumovi katalizatori su najpoželjniji.
Platina na aktivnom uglju, konkretnije, daje odlične rezultate i u pogledu prinosa, koji je skoro kvantitativan, i u pogledu selektivnosti, jer se redukuje samo dvostruka imino veza. dok veza između benzilnog ugljenikovog atoma i heteroatoma ostaje nepromenjena. Pronađeno je da su safinamid i ralfinamid iznenađujuće stabilni u redukcionim reakcionim uslovima i to je važan element u industrijskoj proizvodnji velikih količina safinamida ili ralfinamida. jer slučajno produženje vremena reakcije ne bi dovelo do oštećenja konačnih proizvoda.
Najbolji rezultati dobijeni su sa vlažnim 5% Pt/C (50% H2O). a posebno sa 5% Pt na ugljenom prahu proizvođača Engelhard S.r.l.. Rim, Italija.
Reakcija hidrogenacije se obično izvodi pod pritiskom vodonika koji se kreće između 1 bar i 10 bara, poželjno je da to bude između 3 bara i 6 bara, na temperaturama koje se kreću između 10°C i 70°C, poželjno je da to bude između 25°C i 40°C.
Redukciono vreme može da varira od l čas do 20 časova, u zavisnosti od temperature, pritiska, koncentracije, turbulencije itd, što su sve faktori koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti.
Najbolji rezultati dobijeni su sa reakcionim vremenima od 4 do 6 časova.
Na kraju reakcije, katalizator se vraća iz reakcione smeše filtracijom i ponovo koristi ili regeneriše: reakcioni rastvarač se destiluje pod sniženim pritiskom, ostatak se rastvara u organskom rastvaraču nemešljivom s vodom a neorganske soli se uklanjaju ispiranjem vodom.
Konačni sirovi safinamid ili ralfinamid se dobijaju uklanjanjem organskog rastvarača u kome su rastvoreni destilacijom.
Sirovi safinamid ili ralfinamid se potom prečišćavaju kristalizacijom. Kristalizacija se izvodi dodavanjem mešl jivog organskog inertnog nerastvarača u rastvor odgovarajućeg sirovog jeđinjenja sa formulom (Ia) ili (lb) u inertnom organskom rastvaraču. Poželjno je da inertni organski rastvarač bude izabran iz grupe koja se sastoji od aromatičnih ugljovodonika kao što su benzen, toluen, dimetil benzen i etilbenzen, kao i niskomolekulskih alkil acetata, a poželjnije je da bude etilacetat. Poželjno je da mešljivi inertni organski nerastvarač bude izabran iz grupe koja se sastoji od niskomolekulskih alifatičnih ugljovodonika, kao što su heksan i heptan, kao i cikloheksan, a još poželjnije je da to bude n-heksan.
Baze se zatim prevode u željene soli prema poznatim postupcima, a posebno se transformišu u metansulfonatnu so koja ima fizičke i hemijske osobine (stabilnost, granulometriju, osobine lakog protoka itd) koje su pogodne za kasnije formulisanje u farmaceutske preparate za upotrebu u lekovima.
Primer 1
Pobijanje prečišćenog 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVb) katalizom faznog
prenosa
Smeša 2-fluorbenzil hiorida {5 kg, 34,58 mol), 4-hidroksibenzaldehida (3,9 kg, 31,94 mol), kalijum karbonata (4,3 kg, 31,11 mol) i tetradecil trimetilamonijum bromida (0,41 kg, 1,22 mol) u toluenu (9,5 kg) polako se dovede do refluksa, uz mešanje i u atmosferi azota. a zatim refluktuje 6 časova.
Rastvor se potom koncentruje pri atmosferskom pritisku, doda se 3 kg toluena koji se zatim udalji destilacijom, te se ista procedura ponovi još jedanput.
Heterogena smeša se zatim ohladi do sobne temperature pa se čvrsta supstanca izdvoji filtracijom. Zaostali rastvarač se potom udalji pod sniženim pritiskom, te se u uljani ostatak doda 1,2 kg toluena. Smeša se zagreje na oko 40°C i zaseje sa nekoliko grama čistog 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida.
Heterogena smeša se meša 15 minuta na 35-40°C a zatim joj se na istoj temperaturi doda n-heksan (9 kg), u toku 30 minuta. Nakon hlađenja do 0-5°C i mešanja još jedan čas na ovoj temperaturi, čvrsta supstanca se prikupi filtracijom i osuši pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 6,5 kg (prinos 87,6%) 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida; tačka topljenja (t.t.): 56,7°C (DSC, 5° C/min).
Prethodno opisana reakcija ponovi se na skali od 1:100 upotrebom 39 g (0,319 mol) 4-hidroksibenzaldehida kao početne supstance i uz praćenje prethodno opisane procedure, uz taj izuzetak Što se, nakon uklanjanja reakcionog rastvarača i dodatka toluena u uljani ostatak, dobijena smeša zagreva do oko 30-35 (umesto 40°C), te se nakon zasejavanja malom količinom čistog 4-(2-fluorbenziIoksi)benzaldehida heterogena smeša meša 15 minuta na 30°C (umesto 35-40°C) pre dodatka n-heksana.
Prinos je 66,8 g (90%) 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida, t.t. 56,7°C (DSC, 5°C/min), sa GC Čistoćom od 92,2 (% površine, videti primer 16A) i uz sadržaj 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,01% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B). (<*>) Prinosi koji su navedeni u ovom i sledećim primerima, ukoliko nije drugačije naznačeno, namenjeni su kao molarni prinosi.
1. 1 Dalje prečišćavanje 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehida kristalizacijom
Jedan kilogram proizvoda pripremljenog prema proceduri opisanoj u primeru 1 rastvori se u 2 kg diizopropil etra uz refluks i mešanje.
Rastvor se ohladi do 50-55°C u toku 10-15 minuta i zaseje sa nekoliko grama čistog 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida.
Suspenzija se ohladi do 10-15°C u toku 45-60 minuta i meša još jedan Čas.
Talog se konačno sakupi filtracijom, ispere hladnim diizopropil etrom (0,2 kg) i osuši pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 0,93 kg 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehiđa sa GC čistoćom od 99,8% (% površine, videti primer I6A) i uz sadržaj 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida (Vb) od 0,005% u masenim procentima određen pomoću GC u skladu sa primerom 16B.
1. 2 Pobijanje 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVb) katalizom faznog prenosa
( PTC) pomoću različitih katalizatora
4-(2-Fluorbenziloksi)benzaldehid se dobija alkilovanjem 4-hidroksibenzaldehida (0,39 g) 2-fluorbenziI hloriđom uz praćenje iste procedure kao u primeru 1, ali uz primenu tri različita katalizatora faznog prenosa.
Dobijeni rezultati predstavljeni su u tabeli 4 koja sledi.
Sadržaj Vb određuje se pomoću GC u skladu sa primerom 16B.
1. 3 Pobijanje 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVb) katalizom faznog prenosa ( PTC)
u ksilenu
4-(2-Fluorbenziloksi)benzaldehid se dobija uz prinos od 86,6% i uz sadržaj 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenzi]oksi)benzaldehida od 0,02% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B), reakcijom 4-hidroksibenzaldehida (0,39 g) sa 2-fluorbenziI hloriđom uz istu proceduru kao stoje navedeno u primeru 1, ali uz supstituciju toluena ksilenom kao rastvaračem.
1. 4 Pobijanje 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVb) katalizom uz fazni prenos uz
upotrebu kalijum hidroksida kao baze
4-(2-Fluorbenziloksi)benzaldehid se dobija uz prinos od 86,7% i uz sadržaj 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,51% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B), reakcijom 4-hidroksibenzaldehida (0,39 g) sa 2-fluorbenzil hloriđom uz istu proceduru kao što je navedeno u primeru 1, ali uz upotrebu kalijum hidroksida (0,35 mol) umesto kalijum karbonata.
Ovaj proizvod može dalje da se prečisti kristalizacijom u skladu sa primerom 1.1.
1. 5 Pobijanje 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVb) katalizom faznog transfera
pomoću 2- fluorbenzil bromida
4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid se dobija uz prinos od 88,6% i uz sadržaj 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,07% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B), reakcijom 4-hidroksibenzaldehida (15,6 g) sa 2-fluorbenzil bromidom umesto 2-fluorbenzil hiorida, uz istu proceduru kao sto je navedeno u primeru 1.
Primer 2
Pobijanje ( S)- 2- f4-( 2- fluorbenziloksi) benziIamino1propanamida ( ralfinamida, lb)
visokog stepena čistoće ( procedura u jednom reaktoru)
U autoklav se doda 4-(2-fluorbenziloksi)benzalđehid (2.0 kg, 8,69 mol) dobijen u skladu sa primerom 1. nakon Čega mu se doda odvojeno pripremljeni rastvor L-alaninamid hidrohlorida (1,2 kg, 9,63 mol) i trietilamina (0,97 kg, 9,63 mol) u metanolu (9,5 kg).
Smeša se meša na 20-25°C 1 čas a potom, nakon zasejavanja sa nekoliko grama (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilidenamino]propanamida, mešanje se nastavlja dodatnih 15 minuta. U pomešanu heterogenu smešu, dodaju se metanol (1,6 kg) i vlažni (50% H2O) Pt/C 5%
(Engelhard cod.Escat 22, Engelhard S.r.l., Rim, Italija) (0.28 kg) na temperaturi od 20-25°C.
Vazduh se istera iz autoklava azotom nakon čega se uvede vodonik uz pritisak od 5,0 bara, te se pritisak održava na toj vrednosti u toku hidrogenacije.
Nakon 5 časova na temperaturi od 30-35°C. reakciona smeša se ohladi do 15°C te se, nakon dodatka metanol a (4,8 kg) i zagrevanja do 40-45°C suspenzija procedi a čvrsti ostatak ispere metanolom (1.6 kg).
Rastvarač se udalji pod sniženim pritiskom na oko 30°C te se u ostatak doda voda (5 1) na 20-25°C uz hlađenje i mešanje, jer je dodatak vode egzoterman proces. Heterogena smeša se zatim dalje ohladi do 15-20°C i održava na toj temperaturi još 1 čas, nakon čega se procedi. Odvojena Čvrsta supstanca ispere se hladnom vodom (4 1) i osuši pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 2,23 kg (prinos 85,0%) ralfinamida sa HPLC čistoćom od 98,8 (% površine), određenom u skladu sa postupkom iz primera 17A, i sa sadržajem C,0-diaIkilovanog (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida od 0.01% u masenim procentima, određenim pomoću HPLC u skladu sa postupkom iz primera 17B.
2. 1 Pobijanje ( S)- 2-[ 4-( 2- fluorbenziloksi) benzilamino1propanamida ( lb) visoko<g>
stepena čistoće uz upotrebu paladiiumskog katalizatora
Smeša 5 g 4-(2-fluorbenziloksi)benzalđehida, dobijenog u skladu sa primerom 1 i odgovarajuća količina L-alaninamid hidrohlorida i trietilamina hidrogenuju se u skladu sa istom procedurom opisanom u primeru 2, ali uz upotrebu vlažnog (50% H?0) Pd/C 10% umesto vlažnog (50% H20) Pt/C 5%, kako bi se dobio (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (lb) u prinosu od 70%.
Primer 3
Pobijanje ( S)- 2- r4-( 2- lfuorbenziloksi) benzilaminolpropanamid metansulfonata
( ralfinamid metansulfonata, Id) visokog stepena Čistoće
Ralfinamid (2,8 kg, 9,26 mol), dobijen kao što je opisano u primeru 2, rastvori se u izopropanolu (19,5 kg) i održava na temperaturi od 65-70 °C i uz mešanje u inertnoj atmosferi.
Nakon tretmana ugljem (150 g) i filtracije, rastvor se zaseje čistim ralfinamid metansulfonatom te se, u toku 30 minuta, doda metansulfonska kiselina (900 g, 9,36 mol) uz mešanje i na temperaturi od 50-55 °C. Suspenzija se zatim ohladi do 15-20 °C u toku 2 časa, a mešanje se zatim nastavi još jedan dodatni čas. Čvrsta supstanca se konačno odvoji filtracijom i osuši pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 3,59 kg (prinos 97,3%) ralfinamid metansulfonata.
HPLC Čistoća dobijenog proizvoda je 99,8 (% površine, videti primer 17A) i uz sadržaj C,0-dialkilovanog (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorobenziloksi)benzilaminol-propanamid metansulfonata od 0,005% u masenim procentima (videti primer 17B); t.t. 240,6 °C putem DSC (5°C/min).
Enantiomerna čistoća ralfinamid metansulfonata određena pomoću hiralne HPLC kolone viša je od 99,8 (% površine, videti primer 18).
Primer 4
Pobijanje prečićenog 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVa) u etanolnom rastvoru
U smešu 4-hidroksibenzaldehida (1,52 kg, 12,45 mol), kalijum karbonata (1.72 kg, 12,45 mol), kalijum jodida (0,2 kg, 1,20 mol) u etanolu (13,0 kg) doda se 1.8 kg 3-fluorbenzil hiorida (1,80 kg, 12,45 mol) uz mešanje na sobnoj temperaturi.
Smeša se postepeno zagreva do refluksa a zatim održava na toj temperaturi 6 časova.
Reakciona smeša se zatim ostavi da se ohladi do 25 °C, suspenzija se procedi a čvrsti ostatak ispere etanolom (1,0 kg); etanolni rastvori se spoje a zatim koncentruju pod sniženim pritiskom sve dok se ne dobije ostatak od približno 3,5 kg.
U ovaj ostatak se dodaju toluen (5,0 kg) i voda (1,7 kg), smeša rastvarača se energično meša 30 minuta te se, nakon razdvajanja vodene faze. organski sloj upari do suva pod sniženim pritiskom kako bi se dobio sirovi 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid.
U ovaj proizvod, rastvoren u 2 kg toluena, doda se seme 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida uz mešanje na 20-25 °C, nakon čega se u toku 30 minuta doda n-heksan (3,8 kg) i smeša se ohladi do 0°C uz mešanje.
Nakon 2 časa, čvrsta supstanca se odvoji ceđenjem i ispere n-heksanom (1,3 kg). Nakon sušenja, dobija se 2,6 kg (prinos 90,7%) željenog proizvoda, sa čistoćom na gasnoj hromatografiji od 99,9 (% površine, videti primer 16A) i uz sadržaj 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,005% u masenim procentima određen pomoću GC (% površine, videti primer 16B); t.t. 43,1°C putem PSC (5°C7min).
Primer 5
Pobijanje 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVa) katalizom faznog prenosa
Smeša 3-fluorbenzil hiorida (5 kg, 34,58 mol), 4-hidroksibenzaldehida (3,9 kg, 31,94 mol), kalijum karbonata (4,3 kg, 31,11 mol) i tetradecil trimetilamonijum bromida (0,41 kg, 1,22 mol) u toluenu (13,5 kg) polako se dovede do refluksa, uz mešanje i u atmosferi azota, a zatim refluktuje 6 časova.
Rastvor se koncentruje na atmosferskom pritisku, nakon čega se doda 3 kg toluena koji se potom udalji destilacijom. Ova procedura se ponovi još jednom.
Heterogena smeša se zatim ohladi do sobne temperature pa se čvrsta supstanca izdvoji filtracijom. Zaostali rastvarač se potom udalji pod sniženim pritiskom, te se u uljani ostatak doda 1,2 kg toluena.
Smeša se meša na 20-25 °C i zaseje sa nekoliko grama čistog 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida, nakon čega se smeši doda n-heksan (9 kg) na istoj temperaturi, u toku 30 minuta.
Nakon hlađenja do 0-5°C i mešanja još jedan čas na istoj temperaturi, čvrsta supstanca se odvoji filtracijom i osuši pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 6.5 kg (prinos 85%, čistoća na GC 99,9% (% površine, videti primer 16A) i uz sadržaj 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,008% u masenim procentima (videti primer 16B).
5. 1 Dalje prečišćavanje 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVa) kristalizacijom
Jedan kilogram 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida, dobijenog u skladu sa primerom 5, rastvoren je u 2 kg diizopropil etra uz refluks i mešanje. Rastvor je ohlađen do 50-55 °C u toku 10-15 minuta i zasejan sa nekoliko grama čistog 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida.
Suspenzija je ohlađena do 10-15°C u toku 45-60 minuta i mešana još jedan Čas.
Talog je na kraju odvojen filtracijom. ispran hladnim diizopropil etrom (0.2 kg) i osušen pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 0,95 kg 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida sa GC čistoćom od 99,9% (% površine, videti primer 16A) i uz sadržaj 3-(3-fIuorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida niži od 0.005% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B).
5. 2 Pobijanje 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVa) katalizom faznog prenosa uz
upotrebu 3- fluorbenzil bromida
4-(3-Fluorbenziloksi)benzaldehid se dobija uz prinos od 86,1% i uz sadržaj 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,07% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B), reakcijom 4-hidroksibenzaldehida (15,6 g) sa 3-fluorbenzil bromidom umesto 3-fluorbenzil hiorida, uz istu proceduru kao što je navedeno u primeru 5.
Tako dobijeni 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid se prečišćava u skladu sa procedurom opisanom u primeru 5.1. kako bi se dobilo naslovno jedinjenje u prinosu od 97,3% i uz sadržaj 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,07% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B).
5. 3 Pobijanje 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVa) katalizom faznog prenosa uz
upotrebu 3- fluorbenzil metansulfonata
4-(3-Fluorbenziloksi)benzaldehid se dobija uz prinos od 97,5% i uz sadržaj 3-(3-fluorbenziI)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,45% u masenim procentima određen
pomoću GC (videti primer 16B), reakcijom 4-hidroksibenzaldehida (15.6 g) sa 3-fluorbenzil metansulfonatom umesto 3-fluorbenzil hiorida, uz istu proceduru kao sto je navedeno u primeru 5. Ovaj proizvod se dalje prečišćava u skladu sa procedurom navedenom u primeru 5.1.
Primer 6
Pobijanje ( S)- 2-| 4-( 3- lfuorbenziloksi) benzilamino] propanamida ( safinamida, Ia)
visokog stepena čistoće ( procedura u jednom reaktoru)
U autoklav se doda 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid (2,0 kg, 8.69 mol) dobijen u skladu sa primerom 4, nakon čega mu se doda odvojeno pripremljeni rastvor L-alaninamid hidrohlorida (1,2 kg, 9,63 mol) i trietilamina (0,97 kg, 9,63 mol) u metanolu (7,1 kg).
Smeša se meša na 20-25 °C jedan čas, te se, nakon zasejevanja sa nekoliko grama (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilidenmino]propanamida, mešanje nastavlja dodatnih 15 minuta. U mešanu heterogenu smešu dodaju se metanol (1,8 kg) i vlažni (50% HiO) Pt/C 5% (Engelhard cod. Escat 22) (0,33 kg), na temperaturi od 20-25°C.
Vazduh se istera iz autoklava azotom nakon čega se uvede vodonik uz pritisak od 5,0 bara.
Nakon 5 časova na 30-35°C, smeša se ohladi do 15°C, te se u smešu doda metanol (4,8 kg), nakon čega se smeša zagreje do 40-45 °C; konačno, Čvrsti ostatak se odvaja filtracijom i ispira metanolom (1,6 kg).
Rastvarač se udaljava pod sniženim pritiskom na približno 30°C. nakon čega se u ostatak dodaje smeša etilacetata (23,0 kg) i vode (18,0 kg). Nakon 15 minuta mešanja, vodena faza je izdvojena i estrahovana etil acetatom (7,0 kg). Sakupljene organske faze se koncentruju dok se ne dobije ostatak od približno 6,0 kg. U ovaj ostatak doda se n-heptan (10,8 kg), te se smeša meša na 20°C približno 2 Časa. Čvrsta supstanca se zatim odvoji filtracijom i ispere n-heptanom.
Nakon sušenja pod sniženim pritiskom, do hijeno je 2,41 kg (prinos 91,8 %) naslovnog jeđinjenja sa HPLC čistoćom od 98,4 (procenat %, videti primer 17A), uz sadržaj C,0-dibenzilovanog (S)-2-[3-(3-f]uorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benziIamino]propanamida 0,005% u masenim procentima (videti primer 17B).
6. 1 Pobijanje ( S)- 2-[ 4-( 3- fluorbenziloksi) benzilamino] propanamida ( Ia) visoko<g>
stepena čistoće uz upotrebu Pd katalizatora
(S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzaIdehid (5g) u prisustvu odgovarajuće količine L-alaninamid hidrohlorida i trietilamina podvrgava se hidrogenizaciji u skladu sa procedurom
opisanom u primeru 6, uz upotrebu vlažnog (50% IhO) Pd/C 10% umesto vlažnog (50% IhO) Pt/C 5%, kako bi se dobilo jedinjenje Ia u prinosu od 72%.
6. 2 Pobijanje ( S)- 2- f4-( 3- fluorbenziloksi) benzilamino] propanamida ( Ia) visokog
stepena čistoće hidrogenizacijom na pritisku od 1 bar
Smeša (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida, L-alaninamid hidrohlorida i trietilamina se hidrogenizuje u skladu sa procedurom opisanom u primeru 6, ali na pritisku od 1 bar/H2umesto 5 bar/H?.
Prinos (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida je 90% uz HPLC čistoću od 98,7% (% površine, videti primer 17A) i uz sadržaj (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida od 0,005% u masenim procentima određen HPLC-om (videti primer I7B).
6. 3 Pobijanje ( S)- 2- f4-( 3- fluorbenziloksi) henzilamino1propanarnida ( Ia) visokog
stepena čistoće ( reakcija u jednom reaktoru) uz upotrebu baze L- alaninamida
(S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid (10 g) se podvrgava reakciji u skladu sa procedurom iz primera 6, ali uz upotrebu baze L-alaninamida umesto njenog hidrohlorida i trietilamina. Prinos (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida je 92%, uz HPLC čistoću od 99,7 (% površine, videti primer 17A) i uz sadržaj (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida manji od 0,005% u masenim procentima, određen pomoću HPLC-a (videti primer 17B).
Primer 7
Pobijanje ( S)- 2-[ 4-( 3- lfuorbenziloksi) benzilamino[ propanamid metansulfonata
( safinamid metansulfonata, Ic) visokog stepena čistoće
Safinamid (2,41 kg, 7,97 mol), pripremljen kao što je opisano u primeru 6, rastvoren je u etil acetatu (56,5 kg) na 65°C i obezbojen ugljem (100 g).
Nakon filtracije, rastvor je mešan i zasejan sa nekoliko grama safinamid metansulfonata te je, nakon 15 minuta, dodata metansulfonska kiselina (850 g, 8,84 mol) u toku 30 minuta na temperaturi od 50-55 °C. Suspenzija je ohlađena do 20-25°C u toku 2 časa a zatim mešana još jedan čas. Čvrsta supstanca je konačno odvojena filtracijom i osušena pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 2,83 kg (prinos 89,1%) safinamid metansulfonata.
Sadržaj nečistoće (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]-propanamid metansulfonata (IIc) izmeren HPLC-om iznosio je 0,005% u masenim procentima (videti primer 17B). Naslovno jedinjenje ima t.t. 216,8°C putem DSC (5°C/min).
Enantiomerna čistoća, merena pomoću hiralne kolone HPLC-om je preko 99,9 (% površine, videti primer 19).
'H-NMR (D2O) (Bruker A V300) 5 (ppm, u odnosu na H?0 na 4,7 ppm): 1,43 (3H, d, J = 7 Hz, CH3); 2,66 (3H, s, CH3SO3H); 3,87 (IH, q, J = 7 Hz, H-2); 3,97 (2H, bs, CH2NR); 4,89 (2H, s, CH2OR); 6,88 i 7.23 (4H, AA'XX' aromatični p-distribuisani sistem; 6,90-7.22 (4H, aromatični H).
<13>C-NMR (D20) (Bruken AV300) 5 (ppm): 15,68 (CH3); 38,27 (CH3SO3H); 48,99 (CH2NR); 54,81 (CH); 69,00 (OCH2); 114,15 (d, Jcf = 21 Hz, aromatični CH); 114,76 (d, Jef= 20 Hz, aromatični CH); 115,38 (aromatični CH); 123.06 (đ, Jc-f= 24 Hz. aromatični CH); 123,24; 130,29 (d, JC-r = 6 Hz, aromatični CH); 131,54 (aromatični CH); 138,76 (d, JC-f=7 Hz, aromatični CH); 158,52; 162,89 (d, JC-f = 245 Hz, C-F); 171,92 (CO).
Primer 8
Pobijanje ( S)- 2- f4-( 3- fluorbenziloksi) benzilaminolpropanamida ( safinamida, Ia)
visokog stepena čistoće uz izolovanje intermedijera Šifove baze ( S)- 2-[ 4-( 3-fluorbenziloksi) benzilamino1propanamida ( Via)
a) ( SV2- f4-( 3- fluorbenziloksi) benzilidenamino] propanamid ( Via)
U suspenziju 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida (60,0 g. 0,26 mol), pripremljenog u
skladu sa primerom 5 i L-alaninamid hidrohlorida (35,7 g. 0,29 mol) u metanolu (280 ml), dodat je trietilamin (29,1 g, 0,29 mol) na sobnoj temperaturi uz mešanje u atmosferi azota. Mešanje je nastavljeno još jedan čas.
Rastvor je zatim zasejan sa nekoliko mg (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilidenamino]propanamida, temperatura je spuštena do 5-10 °C a mešanje nastavljeno još 2 časa.
Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana metanolom na 0 °C.
Nakon sušenja na sniženom pritisku, dobijeno je 57,3 g (prinos 73,2%) naslovnog jeđinjenja sa t.t. 112,0 "C, određenom pomoću PSC (5°C /min).
'H-NMR (PMSO-d6) (Bruker AV300) 5 (ppm, u odnosu na TMS na 2,55 ppm; PMSO rastvarač na 3,35 ppm): 1,31 (3H, d. J = 7 Hz, CH3); 3,86 (IH, q, J = 7 Hz, H-2); 5,18 (2H, s, CH2OR); 7,08 i 7,79 (4H, AA'X' p-distribuisani aromatični sistem); 7,10-7,50 (4H, m, aromatični H); 8,27 (IH, s, CH=NR).
<13>C-NMR (DMSO-d6) (Bruken AV300) 5 (ppm): 20,5 (CH3); 67.6 (CH); 68,4 (OCH2); 114,1 -114,4( d,Jc-f = 21 Hz, aromatični CH); 114.5 - 114,8 (d, JC-f= 21 Hz; aromatični CH); 114,8 (aromatični CH); 123,5 (d, JC-f= 2 Hz, aromatični CH); 129,0 i 129,9 (aromatični CH): 130,4 i 130,5( d,Jcf= 7 Hz, aromatični CH); 139,6 i 139,7 (d, JC-f= 6 Hz aromatični kvarternerni C); 160,2; 160,5 i 163,8 (d, JC.F= 245 Hz C-F); 160,6 (CH=N); 174,8 (CO).
b) ( S)- 2- f4-( 3- Fluorben2iloksi) benzilamino] propanamid ( Ia)
U autoklav je dodat (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benziliden-aminol propanamid (16,0 g,
0,053 mol) dobijen kao što je prethodno opisano, kome je dodat vlažni (50% H2O) Pt/C 5%
(1,7 kg: Engelhard S.r.l., Rim, Italija) i metanol (90 ml). Vazduh je isteran iz autoklava azotom nakon čega je uveden vodonik uz pritisak od 5,0 bara. Reakcija je održavana na pritisku od 5,0 bara i na 35°C 1 čas. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu i uklanjanja katalizatora filtracijom. rastvarač je udaljen destilacijom pod sniženim pritiskom dok nije dobijen ostatak od približno 30 g. U ovaj ostatak dodata je smeša etilacetata (150 ml) i H2O (110 ml) pa je heterogena smeša zagrevana na 40°C sve dok nisu dobijene dve bistre faze. Ove dve faze su razdvojene pa je vodeni sloj estrahovan pomoću 50 ml etilacetata na 40 °C. Organske faze su sakupljene i uparene do suva. Procedura je ponovljena dva puta, pri čemu je svaki put dodato 90 ml etilacetata kako bi se proizvod anhidrovao. Zatim je u ostatak polako đodato 95 ml n-heptana uz mešanje. Smeša je potom održavana, uz mešanje, 3 časa na temperaturi od 20 °C. Pobijena čvrsta supstanca izdvojena je filtracijom, isprana n-heptanom (15 ml) i osušena pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 15,2 g (prinos 94,8%) safinamida sa HPLC Čistoćom od 99,8 (% površine, videti primer 17A) i sa sadržajem (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida manjim od 0,005% u masenim procentima, merenim pomoću HPLC (videti primer 17B).
Primer 9
Pobijanje ( S)- 2- f4-(2-fluorbenz iloksi) benzilamino1propanamida ( ralfinamida. Ib)
visoko<g>stepena čistoće uz izolovanje intermedijera Šifove baze ( S)- 2- f4-( 2-fl uorbenzi loksijbenzi laminoj propanamida ( VIb)
a) ( S)- 2-[ 4-( 2- fluorbenziloksi) benzilidenaminolpropanamid ( VIb)
(S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilidenamino]propanamid je dobijen sa prinosom od
88%, t.t. 121°C (kapilarna), primenom iste procedure kao u primeru 8, korak a), ali uz upotrebu 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida umesto 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida.
'H-NMR: (CDCI3, 300 MHz, 298K) 8 (ppm, u odnosu na TMS): 1,46 (3H, d, J= 7,0 Hz, CH3); 3,91 (IH, q, J= 7,0 Hz, CH-CO); 5,17 (2H, s. O-CH2); 7,02 (2H. d. J=8,9 Hz aromatični H orto u odnosu na O-CH2); 7,09 (IH, ddd. Jh-f = 9,78 Hz J orto - 8.55 Hz, .Um = 1,23 Hz aromatični H orto u odnosu na F); 7,15 (IH, dt. Jorto= 7,35 Hz Jmeta= 1.23 Hz aromatični H para u odnosu na F); 7.27-7,40 (IH, m, aromatični H para u odnosu na CH2); 7,48 (1H, dt, Jorto= Ju-f= 7,35 Hz Jmeta= 1,53 Hz aromatični H orto u odnosu na CH2); 7,71 (2H, d, J=8,9 Hz aromatični H orto u odnosu na CH=N); 8.17 (IH, s, C=N).
<I3>C-NMR: (CDCb, 75,4 MHz, 298K) 8 (ppm): 21.4 (CH3); 63,8 (OCH2); 68,4 (H2NCOCH); 115,0 (d, JC-f= 22.4 Hz, aromatični CH), 115,5 (d. Jc--f=20,7 Hz, aromatični CH): 123,7 (d, Jc-f= 14,4 Hz, kvarternerni aromatični C); 124,5 (bd, aromatični CH); 129,0 (kvarternerni aromatični C); 129,8 (bd, aromatični CH); 130,1 (bd, 2 aromatični CH); 160,5 (d, Jc-f=246,4 Hz, kvarternerni aromatični C); 161,1 (aromatični C-O); 161,1 (C=N); 176,9 (CONH2).
b) ( S)- 2-|' 4-( 2- fluorbenziloksi) benzilamino1propanamid ( lb)
(S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzi!amino]propanamid se dobija u prinosu od 93% iz(S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilidenamino]propanamida primenom iste procedure kao u primeru 8, korak b). Sadržaj (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamidaje 0,02% u masenim procentima, određen pomoću HPLC (videti primer 17B).
Primer 10
Pobijanje ( S)- 2-[ 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi)- benzilaminolpropanamid
metansulfonata ( IIc)
a) 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehid ( Va)
U balon sa okruglim dnom od 4 1, u atmosferi azota, sipani su 4-hidroksi-benzaldehid
(400 g, 3,28 mol), kalijum karbonat (453 g, 3,28 mol), toluen (2 1) i 3-fluorbenzilhlorid (1400 g, 9,68 mol), jedan za drugim, pa je smeša refluktovana uz mešanje 5 dana. U tom trenutku, GC analiza je otkrila da ova smeša sadrži 4-(3-fluorbenziloksi)benzaIdehiđ i 3-(3-fhiorbenzi!)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid u odnosu 91,4: 8,6 (površina/površina, videti primer 16A).
Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, te joj je dođato 21 vode uz mešanje. Organska faza je odvojena, te je rastvarač destilovan pod sniženim pritiskom (20 mmHg) na 35 °C sve dok nije prestalo izdvajanje rastvarača. Pritisak je zatim spušten do 3 mmHg, a spoljašnja temperatura povećana do 300°C, te je sakupljena frakcija koja destiluje između 255°C i 265°C (40,6 g).
GC analiza pokazuje odnos površina/površina C.O-dibenzilovanog derivata (Va) naslovnog jeđinjenja i monoalkilovanog derivata (IVa) od 99.6:0,4 (površina/površina, videti primer 16A).
'H-NMR (CDCb) (Bruker AV300) 5 (ppm. u odnosu na TMS): 4,05 (2H, s, CH2); 5.13 (2H, s, OCH2); 6,85-7,40 (9H, m, aromatic H); 7.73-7,79 (2H, m, aromatic H orto u odnosu na CO); 9,88 (s, CHO).
,<3>C-NMR (CDCb) (Bruken AV300) 8 (ppm): 36,1 (CH2); 69,4 (CH20); 111,4 (aromatični CH); 112,9 i 113.2( d,JC-f= 20 Hz, aromatični CH), 113.9 i 114,2( d, Jc-k= 22 Hz, aromatični CH); 114.9 i 115,0( d,JC-f= 21 Hz. aromatični CH ; i 15,7 i 115,9( d,Jc-f= 25 Hz aromatični CH); 122,6( d,Jc-f= 3 Hz, aromatični CH); 124,4[ d,Jc-f= 3 Hz. aromatični CH); 129,6 i 129,8( d,Jc-f= 8 Hz, aromatični CH);( d,Jc-f= 7 Hz, kvarternerni aromatični C); 129,9 (C kvarternerni aromatični C); 130,0 (kvarternerni aromatični C); 130,1 i 130,2( d,Jc-f7Hz, CH aromatični); 131,2 (aromatični CH); 131,5 (aromatični CH); 138.3( d,Jc-f= 7 Hz, kvarternerni aromatični C); 142,3( d,Jc-f= 7 Hz, kvartemerni aromatični C); 161,0, 161,2 i 164,4( d,Jc-f = 240, 2 C-F preklapajući); 190,8 (CHO).
b) ( S)- 2-[ 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziIoksi)- benzilamino1propanamid ( Ha)
U 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenzi!oksi)benzaldehid (35,6 g, 0.105 mol) u erlenmajeru
od 500 ml dodat je rastvor koji je prethodno pripremljen pažljivim dodavanjem, uz mešanje. trietilamina (12 g, 0,119 mol) u 170 ml metanolnog rastvora L-alaninamid hidrohlorida (14,8 g, 0,119 mol), na sobnoj temperaturi.
Ova reakciona smeša mešana je 1 čas na sobnoj temperaturi a zatim prenesena u autoklav od 1,8 1, nakon čega joj je dodato 3,4 g vlažnog (50% H20) Pt/C 5%.
Vazduhje isteran iz autoklava azotom nakon čega je uveden vodonik uz pritisak od 5,0 bara.
Reakcija je izvođena na temperaturi od 35 °C 3-5 časova.
Nakon hlađenja na sobnu temperaturu i uklanjanja katalizatora filtracijom, rastvarač je udaljen destilacijom pod sniženim pritiskom dok nije dobijen ostatak od približno 65 g. U ovaj ostatak dodata je smeša etilacetata (340 ml) i vode (250 ml) pa je heterogena smeša zagrejana na 40°C i održavana na toj temperaturi bez mešanja sve dok nisu dobijene dve bistre faze. Dve faze su razdvojene, te je organska faza destilovana pod sniženim pritskom sve dok nije dobijen ostatak od približno 50 g.
Ovaj ostatak je rastvoren u 220 ml etilacetata, te je rastvarač udaljen destilacijom pod sniženim pritiskom uz spoljašnju temperaturu od 40°C. Ova procedura ponovljena je dva puta. te je naslovno jedinjenje dobijeno u obliku čvrstog ostatka.
c) ( SV2- r3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi)- benzilamino1propanamid metansulfonat ( IIc)
U staklenom reaktoru od 2 1 rastvoreno je 42,4 g (0,103 mol) (S)-3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamidne baze u 950 ml etilacetata.
Rastvor je zagrejan uz mešanje na 50-55°C i održavan na toj temperaturi jedan čas. U ovaj rastvor dodato je 14,5 g (0,15 mol) metansulfonske kiseline u toku 20 minuta, te je temperatura snižena do 20 °C u toku 90 minuta. Nakon 30 minuta, čvrsta supstanca je odvojena filtracijom, osušena na 50 °C pod sniženim pritiskom a zatim kristalisana iz metanola (metanol: proizvod 1:5, maseno) kako bi se dobilo 25,1 g (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-ftuorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid metansulfonata, t.t.l81 °C (kapilarno).
'H-NMR (DMSO-d6) (Bruker AV300) 8 (ppm, u odnosu na TMS): 1,44 (3H. d, J = 7Hz, CH3); 2,35 (3H, s, CH3SO3); 3,81 (1H, q, J = 7 Hz, H-2). 3,99 (2H. bs, CH2benzilni); 4,02 (2H, AB sistem, CH2K) ; 5,17 (2H, s, CH2OR); 6,98-7,63 (1 IH, m, aromatični H); 7,62 i 7,75 (2H, bs. NH2amid); 9,02 (2H, široki, NH2<+>).
<I3>C-NMR (DMSO-d(,) (Bruken AV300) 5 (ppm): 15.9 (CH3); 35,5 (CH2); 39,7 (CH3SO3H); 48,1 (CH2NR); 54,4(CH); 68,4(OCH2); 112,2 (aromatični CH); 112,7 (d, Jc-f - 22Hz, aromatični CH); 113.8 (d, Jc-f= 22Hz, aromatični CH); 114,5 (d, JC-f= 22 Hz, aromatični CH); 115,2 (d, JC-f= 22Hz, aromatični CH); 123,2 (aromatični CH); 123,8; 124,6 (aromatični CH); 128,7 i 130,0 (d, JhC-f = 6Hz, aromatični CH); 130,04 (aromatični CH); 130,3 (d, Jc-f= 6Hz, aromatični CH); 132,6 (aromatični CH); 139,8 (d, Jc-f= 7Hz); 143,4 (d, JC-f = 7 Hz); 158,1, 160,5 i 163,7 (d, JC-f= 240, C-F); 160,6 i 163,8 (d, Jcf= 240, C-F); 170,5 (CON).
Uzorak (90 mg) (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]-propanamida (Ha) takođe je izolovan preparativnom HPLC iz 200 g safinamid metansulfonata (1c) dobijenog kao što je opisano u J. Med. Chem., 1998, 41, 579, postupak A, koji ga sadrži, u obliku metansulfonata (IIc), u koncentraciji od 0,12%, u masenim procentima.
Razdvajanje se izvodi u dva koraka (korak 1 i korak 2), prema siedećoj šemi: Izolovanje Ha preparativnom HPLC safinamid metansulfonata ( Ic) kontaminiranog sa
0. 12% masenih procenata IIc
Korak 1
Opseg prvog koraka je izolovanje sirovog proizvoda obogaćenog Ila/TFA (trifluorsirćetna kiselina).
Uslovi za preparativnu HPLC navedeni su ispod:
Uslovi za preparativnu HPLC:
Korak 2
Ovaj korak neophodan je za uklanjanje TFA iz lla'TFA i za dalje prečišćavanje Na.
Ila/TFA se hromatografski razdvaja pomoću preparativne HPLC sa uslovima koji su opisani ispod.
Frakcije 4 i 5 se spajaju i uparavaju na 40°C u vakuumu do potpunog uklanjanja acetonitrila. Zaostali vodeni rastvor čuva se u frižideru na 4°C. Nerastvorljiva supstanca izoluje se filtracijom i suši u vakuumu na sobnoj temperaturi, kako bi se dobilo jedinjenje Ha (90 mg; HPLC čistoća 100%).
Uslovi za preparativnu HPLC:
Primer 11
Pobijanje (S)-2- r3-( 2- fluorbenzil)- 4-( 2- fluorbenziloksi)- benzilamino1propanamid
metansulfonata ( Hd)
a) 3-( 2- fluorbenzil)- 4-( 2- fluorbenziloksi)- benzaldehid ( Vb)
3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzaldehid se dobija primenom iste procedure
koja je opisana u primeru 10, korak a) u razmeri 1:10, ali uz upotrebu 2-fluorbenzil hiorida umesto 3-fluorbenzil hiorida. Molarni prinos je 3% sa čistoćom od 98.1 određenom pomoću GC analize (% površine, videti primer 16A). Proizvod ima t.t. 71°C (kapilarna).
'H-NMR: (CDCb, 300 MHz, 298K) 5 (ppm, u odnosu na TMS): 4,06 (2H, s, CH2); 5,23 (2H, s, OCH2); 6,95-7,40 (9H, m, aromatični H); 7,67 (IH, bd, J= 0.9 Hz, aromatični H orto u odnosu na C=0 i CH2); 7,76 (IH, dd, Ji= 2,1 Hz, .12= 8,3 Hz, aromatični H orto u odnosu na C=0 i aromatični CH); 9,84 (IH, s, CHO).
<I3>C-NMR: (CDCb, 75,4 MHz, 298K) 8 (ppm): 29,2 (CH2); 64,1 (OCH2); 111,4 (aromatični CH); 115,4 (d, JC-f= 22,0 Hz, aromatični CH), 115,5 (d, JC-r= 21,1 Hz, aromatični CH); 123,3 (d, Jc-f= 14,2 Hz. kvarternerni aromatični C); 124,1 (d, JC-f= 2,6 Hz, aromatični CH); 124,5 (d, JC-f= 3,2 Hz, aromatični CH); 126,6 (d, Jc-i=15,5 Hz, kvarternerni aromatični C); 128,2 (d, JC-f=8,1 Hz, aromatični CH); 129,6 (d, JC-f=6,2 Hz, aromatični CH); 129,6 (kvarternerni aromatični C); 130,0 (kvarternerni aromatični C); 130,2 (d, Jc-f=8,3 Hz, aromatični CH); 131,1 (aromatični CH); 131,3 (d, JC-f= 4,1 Hz, aromatični CH); 131,8 (aromatični CH); 160,5 (d, Jc-f= 246,8 Hz, kvarternerni aromatični C); 161,2 (d, Jc-f- 245,1 Hz, kvarternerni aromatični C); 161,3 (kvarternerni aromatični C); 191,1 (CHO).
b) ( S)- 2- r3-( 2- fluorbenzil)- 4-( 2- fluorbenziloksi)- benzilamino1propanamid ( Ilb)
(S)-2-[3-(2-fluorbenziI)-4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]-propanamid se dobija
primenom iste procedure koja je opisana u primeru 10, korak b), uz upotrebu 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida umesto 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida. Prinos je 83%; t.t. 161 °C (kapilarna).
'H-NMR: (CDCb. 300 MHz, 298K) 5 (ppm, u odnosu na TMS): 1,32 (3H, d, J= 6,7 Hz, CH3); 1,97 (IH, bs, NH); 3,22 (IH, q, J= 6,7 Hz. CH-CO); 3,67 (2H, ABq, J - 12,8 Hz, dijastereotopni H iz NCH2); 4,03 (2H, s, CH2); 5,12 (2H, s, OCH2); 5,98 (IH, bs, NH2); 6,89 (IH, d, J0no= 8,3 Hz, aromatični H orto u odnosu na CH2NH i aromatični CH); 6.95-7.40 (10H, m, aromatični H).
,<3>C-NMR: (CDCb, 75,4 MHz, 298K) 5 (ppm): 19.6 (Clb); 29,2 (CH2); 52,0 (NHCH2); 57,7 (H2NCOCH); 63,8 (OCH2); 111,7 (aromatični CH); 115.2 (d, JC-f= 21,9 Hz, aromatični CH), 115,3 (d, Jc-f=21,3 Hz, aromatični CH); 124,0 (d, JC-f= 3,5 Hz, aromatični CH); 124,3 (d, Jc-f= 2,9 Hz, aromatični CH); 124,3 (d, Jc-f=14,4 Hz, kvarternerni aromatični C); 127,5 (aromatični CH); 127,6 (d, Jc-f=15,0 Hz, kvarternerni aromatični C); 127.8 (d, Jc-f=7,5 Hz, aromatični CH); 128,8 (kvarternerni aromatični C); 129,0-130,0 (m, 2 aromatični CH); 130,5 (aromatični CH); 131,3 (d, Jc-f=4,6 Hz, aromatični CH); 131,8 (kvarternerni aromatični C); 155,6 (kvarternerni aromatični C); 160,4 (d, Jc-f= 245,8 Hz, kvarternerni aromatični C); 161,2 (d, JC-f= 244,6 Hz, kvarternerni aromatični C); 178,2 (CONH2).
c) ( S)- 2-[ 3-( 2- fluorbenzil)- 4-( 2- fluorbenziIoksi)- benzilaminolpropanarnid metansulfonat ( Ud)
(S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzilaiTiinojpropanamid metansulfonat se dobija primenom iste procedure koja je opisana u primeru 10, korak c), uz upotrebu (S)-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida kao polazne supstance. Prinos je 89%; t.t. 190 "C (kapilarna).
'H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz, 298K) 5 (ppm, u odnosu na TMS): 1,42 (3H, d, J= 6,8 Hz, CH3CH); 2,33 (3H, s, CH3SO3); 3,50-4,20 (5H, m, CH-CO, CH2, dijastereotopni II iz NCH2)); 5,19 (2H, s, OCH2); 6,95-8,00 (1 IH, m, aromatični H); 9,02 (2H. bs, NH<2+>).
<I3>C-NMR: (DMSO-d6, 75,4 MHz, 298K) 5 (ppm): 16,5 (CH3): 28,8 (CH2); 48,6 (NHCH2); 54,9 (H2NCOCH); 64,3 (OCH2); 112,8 (aromatični CH); 115,0-117.0 (2 aromatični CH); 124,2 (d, Jc-r=14,4 Hz, kvarternerni aromatični C); 124,4 (kvarternerni aromatični C); 124.8 (aromatični CH); 125,0 (aromatični CH); 127,3 (d, Je-f= 16,1 Hz, kvarternerni aromatični C); 128,6 (kvarternerni aromatični C); 128,8 (aromatični CH); 129,0-133,0 (m, 5 aromatični CH); 156,9 (kvarternerni aromatični C); 160,8 (d, Jc-r= 245,2 Hz, kvarternerni aromatični C); 160.9 (d, JC-f=243,5 Hz, kvarternerni aromatični C); 171,1 (CONH2).
Primer 12
Pobijanje ( S)- 2- f4- 3- fluorbenziIoksi)- benzilamino] propanamid ( safinamid)
metansulfonata ( Ic) iz 4-( 3- fluorbenziloksi)- benzaldehida ( IVa) kontaminiranog sa 1 % masenih
procenata nečistoće 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida ( Va)
U 4-(3-fluorbenziIoksi)benzaldehid (10 g, GC čistoća 98,8, % površine) dodato je 1% 3-(3-fluorbenziI)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida te je smeša prevedena u (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid safinamidnu bazu, primenom procedure opisane u primeru 6. Prinos je 84% sa sadržajem nečistoće Ha od 0.84% (videti primer 17B) u masenim procentima.
Slobodna baza (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamida (Ia) je prevedena u odgovarajući metansulfonat primenom procedure iz primera 7, kako bi se dobio metansulfonat (Ic) u prinosu od 98% sa sadržajem nečistoće (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamid metansulfonata (IIc) od 0,62% u masenim procentima, određenim pomoću HPLC (videti primer 17B).
Primer 13
Kristalizacija safinamid metansulfonata ( Ic) kontaminiranog nečistoćom ( IIc)
Safinamid metansulfonat kontaminiran (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid metansulfonatom (IIc) u količini od 0,62%, u masenim procentima. određenoj pomoću HPLC (videti primer 17B), dobijen u skladu sa primerom 12, kristališe se pomoću pet različitih sistema rastvarača, rastvaranjem na temperaturi refluktovanja a zatim hlađenjem na sobnoj temperaturi.
Dobijeni rezultati predstavljeni su u tabeli 5 koja sledi.
Primer 14
Pobijanje ( S)- 2-[ 4-( 3- fluorbenziloksi) benzilaminojpropanamid ( safinamid, Ia)
metansulfonata ( Ic) u skladu sa postupcima opisanim u stanju tehnike
14. 1 Pobijanje 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVa)
14. 1a) Procedura iz primera la iz US 6, 335. 354 B2
4-(3-fluorbenziloksi)benzaIdehid (IVa) se dobija u proceduri opisanoj u primeru la publikacije US 6,335,354 B2.
Prema toj proceduri, smeša 3-fluorbenzil hiorida (2,86 g, 19,80 mmol), 4-hidroksibenzaldehida (3,03 g, 24,80 mmol), K2CO3(10.30 g, 74,50 mmol), Nal (137,1 mg, 0,91 mmol) i etanola (40 ml) zagreva se do refluksa u toku 70 minuta a zatim održava na temperaturi refluktovanja 4 časa i 15 minuta.
Nakon obrade reakcione smeše, 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid se izoluje u obliku žutog ulja u prinosu od 95%.
Proizvod ima GC čistoću od 97,6 (% površine, videti primer 16A) i sadržaj 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida (Va) od 0.14% u masenim procentima, određenu pomoću GC (videti primer 16B).
14. 1. b) Procedura iz J. Agric. Food Chem, 27, 4, 1979
4-(3-fIuorbenziloksi)benzaldehiđ (IVa) se dobija u skladu sa procedurom objavljenom u J. Agric. Food Chem, 27, 4. 1979.
U skladu sa tom procedurom, 3-fluorobenzil hlorid (14,5g, 100 mmol) se dodaje, uz mešanje i u atmosferi azota, u rastvor 4-hidroksibenzaldehida (12,2g, 100 mmol) i NaOH (4,0g, 100 mmol) u etanolu (100 ml).
Smeša se postepeno zagreva u toku 25 minuta do refluksa i meša na temperaturi refluktovanja 6 časova i 20 minuta. Reakciona smeša se procedi a potom koncentruje pri sniženom pritisku kako bi se dobio 4-(3-fluorobenziloxi)benzaldehid (23.43 g) u obliku žutog čvrstog ostatka. U taj ostatak se doda đihlormetan (250mL), nerastvorna supstanca se odvoji filtracijom a dobijeni rastvor koncentruje pod sniženim pritiskom kako bi se dobio 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid u obliku žute čvrste supstance. u prinosu od 80,4%. Proizvod ima čistoću od 91,6 (% površine, videti primer 16A) i sadržaj 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida (Va) od 0,13 % u masenim procentima, određen pomoću GC (videti primer 16B).
14. 2 Pobijanje ( S)- 2-[ 4-( 3- fluorbenziloksi) benzilamino] propanamida ( Ia) i njegove
metansulfonatne soli ( Ic)
14. 2. a) Procedura iz J. Med. Chem.. 1998, 41, 579,<p>ostupak A
(S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (Ia) se dobija u reakciji 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida (10 mmol), dobijenog kao što je opisano u primeru 14.1 .a i L-alaninamid hidrohlorida (l,37g, 11 mmol), nakon čega sledi redukcija pomoću NaBHjCN (0,50g, 8 mmol). Nakon obrade reakcione smeše i prečišćavanja hromatografijom pod pritiskom gasa, (S)-2[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino)propanamid se izoluje u obliku bele Čvrste supstance u prinosu od 68,7%. Proizvod ima HPLC čistoću od 96,2 (% površine, videti primer 17A) i sadržaj (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]-propanamida (Ha) od 0,15% u masenim procentima (videti primer 17B).
Smeša (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida (1,50 g, 4,96 mmol) i etilacetata (40,2 ml) zagrevana je na 50°C dok nije dobijen bistar rastvor. U taj rastvor je, uz mešanje. dodata metansulfonska kiselina (0,53 g, 5,51 mmol) u toku 15 minuta te je dobijena heterogena smeša hlađena uz mešanje na 20°C u toku 90 minuta. Nakon 30 minuta na 20°C, Čvrsta supstanca je odvojena filtracijom, isprana etil acetatom (6 ml) i osušena na 50°C pri sniženom pritisku u toku 15 časova kako bi se dobio (S)-2[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonat (Ic) u obliku bele čvrste supstance sa prinosom od 96,1%. Proizvod ima HPLC čistoću od 98,6 (% površine, videti primer 17A) i sadržaj (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamid metan-sulfonata (IIc) od 0.10% u masenim procentima, određen pomoću HPLC (videti primer 17B).
14. 1. P) Procedura iz J. A<g>ric. Chem., 1998, 41, 579, postupak A
(S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (Ia) se dobija u skladu sa primerom 14.2.a iz 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida (10 mmol), koji je dobijen kao što je opisano u primeru 14.1 .b i L-alaninamid hidrohlorida (l,37g. 11 mmol), nakon čega sledi redukcija pomoću NaBHaCN (0,50g, 8 mmol).
(S)-2[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (Ia) se dobija u obliku bele čvrste supstance u prinosu od 66,5%. Proizvod ima HPLC čistoću od 88,5 (% površine, videti primer 17A) i sadržaj (S)-2-[3-(3-fIuorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]-propanamida (Ha) od 0,064% u masenim procentima određen putem HPLC (videti primer 17B). (S)-2[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (Ia) je preveden u odgovarajući metansulfonat (Ic) u prinosu od 88,9% tretmanom sa metansulfonskom kiselinom u skladu sa primerom 14.2.a. Proizvod ima HPLC čistoću od 97,7 (% površine, videti primer 17A) i sadržaj (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]-propanamid metan-sulfonata (IIc) od 0,05% u masenim procentima (videti primer 17B).
Primer 15
Pobijanje ( S)- 2- f4-( 2- fluorbenziloksi) benzilamino1propanamid ( ralfinamid, lb)
meta ns ulfonata ( Id) u skladu sa postupcima opisanim u stanju tehnike
15. 1 Pobijanje 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehida ( IVb)
15. 1a) Procedura iz primera la iz US 6, 335, 354 B2
4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid (IVb) se dobija u skladu sa primerom 14.1.a) iz 2-fluorobenzvl hiorida (14,3 g, 98 mmol), 4-hidroksibenzaldehida (15.1 g, 123 mmol), K2CO3(51 g, 369 mmol), Nal (500 mg, 3,3 mmol) i etanola (75 ml).
Smeša se refluktuje 12 časova. Nakon obrade reakcione smeše, 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid se dobija u prinosu od 75% u obliku žutog ulja. Proizvod ima GC čistoću od 92,1 (% površine, videti primer 16A) i sadržaj 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida od 0,25% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B).
15. l. b) Procedura iz J. Agric. Food Chem. 27. 4. 1979
4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid (IVb) se dobija u skladu sa primerom 14.l.b iz 2-fluorobenzil hiorida (18,0 g, 123 mmol), 4-hidroksi-benzaIdehida (15,3 g, 125 mmol), NaOH (5,0 g, 12 mmol) i etanola (125 ml).
Smeša se zagreva 25 minuta do refluksa i održava na temperaturi refluksa uz mešanje 12 časova.
Nakon obrade reakcione smeše u skladu sa primerom 14. l.b, 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid se dobija u obliku žute čvrste supstance u prinosu od 90.0%. Proizvod ima GC Čistoću od 90,4 (% površine, videti primer 16A) i sadržaj 3-(2-fluorbenzil)4-(2-fluorbenziloksi)benzalđehida (Vb) od 0,14% u masenim procentima određen pomoću GC (videti primer 16B).
15. 2 Pobijanje ( S)- 2- r4-( 2- fIuorbenziloksi) benzilamino1propanamida ( lb) i njegove
metansulfonatne soli ( Id)
15. 2. a) Procedura iz J. Med. Chem., 1998. 41. 579.<p>ostupak A
(S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (lb) se dobija u skladu sa procedurom iz primera 14.2.a uz upotrebu 4-(2-fluorbenziloksi)benzaIdehida (10 mmol, dobijenog kao u primeru 15.1a) umesto 4-(3-fluorbenziIoksi)benzaIdehida.
(S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid se dobija u prinosu od 67,3% u obliku bele čvrste supstance. Proizvod ima HPLC čistoću od 86,7 (% površine, videti primer 17A) i sadržaj (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzilamino]-propanamid metansulfonata (Ilb) od 0,22% u masenim procentima, određen pomoću HPLC (videti primer 17B).
Smeša (S)-2-[4-(2-lfuorbenziloksi)benzilamino]propanamida (1,50 g, 4,96 mmol) i propan-2-oIa (10,5 ml) zagrejana je na 50°C i održavana na toj temperaturi dok nije dobijen bistar rastvor. Podata je metansulfonska kiselina (0,48 g, 5,01 mmol) uz mešanje u toku 15 minuta.
Heterogena smeša je zatim ohlađena uz mešanje do 20°C u toku 2 časa. Nakon 1 čas na 20°C, čvrsta supstanca je odvojena filtracijom, osušena na sniženom pritisku kako bi se dobio (S)-2-[4-(2-lfuorbenziloksi)benzilaminojpropanamid metansulfonat kao bela čvrsta supstanca u prinosu od 89,1%. Proizvod ima HPLC čistoću od 96,9 (% površine, videti primer 17A) i sadržaj (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamid metansulfonata (Ud) od 0,14% u masenim procentima, određen pomoću HPLC (videti primer 17B).
15. 2. b) Procedura iz J. Agric. Chem. 1998, 41, 579. postupak A
(S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (lb) se dobija u skladu sa procedurom iz primera 14.2.b uz upotrebu 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehiđa (10 mmol, dobijenog kao u primeru 15.1 .b) umesto 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida.
(S)-2[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid se dobija u obliku bele Čvrste supstance u prinosu od 58,8%. Proizvod ima HPLC čistoću od 83,8 (% površine, videti primer 17A) i sadržaj (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]-propanamida (Ilb) od 0,15% u masenim procentima određen putem HPLC (videti primer 17B).
(S)-2-[4-(2-lfuorbenziloksi)benzilamino]propanamid (lb) je preveden u odgovarajući metansulfonat (Id) u prinosu od 89,4% u obliku bele čvrste supstance. Proizvod ima HPLC Čistoću od 95,2 (% površine, videti primer 17A) i sadržaj (S)-2-[3-(2-fluorbenzi!)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamid metansulfonata od 0,11% u masenim procentima, određen pomoću HPLC (videti primer 17B).
Primer 16A
Određivanje čistoće 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaIdehida i 4-( 2- fluorbenziloksi)-benzaldehida pomoću GC
Priprema testa
Rastvoriti oko 100 mg uzorka u 10 ml metilen hiorida.
Hromatografski uslovi
Hromatografska procedura se sprovodi pomoću:
fuzionisane silikonske kapilarne kolone duge 60 m sa unutrašnjim prečnikom 0,32 mm. RTX 35 (35% difenil- 65% dimetil polisiloksan), debljina filma = 0,25 um;
helijum kao noseći gas pri pritisku od 150 kPa;
razdvojeni tok 25 ml/min;
temperatura brizgalice 290°C:
- temp. detektora (FID) 290°C:
sa sledećim temperaturnim programom:
Procedura
Ubrizgati 1 ul test preparata. Snimiti hromatogram i izračunati čistoću proizvoda izračunavanjem procenta površine.
Identifikacija nečistoća
4-(3-fluorbenziIoksi)benzaldehid (IVa):
Retenciona vremena:
Retenciono vreme za 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid je oko 17.
Relativno retenciono vreme za 4-hidroksibenzaldehid je oko 0,52.
Relativno retenciono vreme za 4-(2-fluorbenziioksi)benzaIdehid je oko 0,98. Relativno retenciono vreme za4-(4-fluorbenziloksi)benzaldehid je oko 1,01. Relativno retenciono vreme za 4-benziIoksibenzaIdehid je oko 1,02.
Relativno retenciono vreme za 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid je oko 1,78.
4-(2-fIuorbenziloksi)benzaldehid (IVb):
Retenciona vremena:
Retenciono vreme za4-(2-fluorbenziIoksi)benzaldehid je oko 17.
Relativno retenciono vreme za 4-hidroksibenzaldehid je oko 0,53.
Relativno retenciono vreme za 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid je oko 1,02. Relativno retenciono vreme za 4-(4-fluorbenziloksi)benzaldehid je oko 1,03. Relativno retenciono vreme za 4-hidroksibenzaldehid je oko 1,04.
Relativno retenciono vreme za 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-f!uorbenziloksi)benzaldehid je oko 1,81.
Primer 16B
Određivanje sadržaja 3-( 2- lfuorbenzil)- 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaIdehida ( Vb) u 4-( 2-fluorbenziloksi) benzaldehidu ( IVb) i 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida ( Va)
u 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehidu ( IVa) pomoću GC
Poznata srodna supstanca uzeta u obzir za 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid je 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid a za 4-(3-f!uorbenziloksi)benzaldehiđ je 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid. Određivanje je izvedeno u skladu sa sledećim uslovima: Rastvor unutrašnjeg standarda
Pripremiti rastvor 3,4,5-trimetoksibenzaldehida koncentracije 1,5 mg/ml u metilen hloridu (IS).
Referentni rastvor za određivanje 3-( 2- fluorbenzil)- 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehida
je 4-( 2- fluorbenziloksi) benzaldehid:
Precizno izmeriti oko 20 mg referentnog standarda 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehida i 20 mg referentnog standarda 4-(2-fluorbenziloksi)-benzaldehida u volumetrijski sud od 20 ml, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem; preneti 500 ul ovog rastvora u volumetrijski sud od 5 ml, dodati 500 u.1 rastvora IS i razblažiti do zadate zapremine razblaživačem, kako bi se dobio rastvor koji sadrži 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid i 4-(2-fluorbenziloksi)-benzaldehid u koncentraciji od oko 100 ug/ml (što odgovara oko 0,10%).
Referentni rastvor za određivanje 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi) benzaldehida
je 4-( 3- fluorbenziloksi)- benzaldehid:
Precizno izmeriti oko 20 mg referentnog standarda 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaIdehida i 20 mg referentnog standarda 4-(3-fluorbenziloksi)-benzaldehida u volumetrijski sud od 20 ml, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem; preneti 500 ul ovog rastvora u volumetrijski sud od 5 ml, dodati 500 pl rastvora IS i razblažiti do zadate zapremine razblaživačem, kako bi se dobio rastvor koji sadrži 3-(3-fluorbenziI)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid i 4-(3-fluorbenziloksi)-benzaldehid u koncentraciji od oko 100 pg/ml (što odgovara oko 0,10%).
Ispitivani rastvor:
Precizno izmeriti oko 500 mg ispitivanog proizvoda u volumetrijski sud od 5 ml, dodati 500 ul rastvora IS, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem kako bi se dobio rastvor koji sadrži poznatu koncentraciju od oko 100 mg/ml. Hromatografski uslovi:
Hromatografska procedura se sprovodi pomoću:
- Kolona: fuzionisana silikonska kapilarna kolona RTX 35 (35% difenil-65% dimetil polisiloksan) dužine 60 m, 0,32 mm un. preč., debljina filma 0,25 pm;
- nosilac (helijum) pri pritisku od 150 kPa:
- razdvojeni tok 25 ml/min; - temperatura brizgalice 290°C; - temp. detektora (FID) 290°C; - Temperaturni program: 0-5 min izotermalni na 150°C, 5-11 min linearni od 50°C do 240°C pri brzini od 15°C/min; 11-19 min izotermalni na 240°C, 19-21 min linearni od 240°C do 290°C pri brzini od 30°C/min, 21-40 min izotermalni na 290°C;
- razblaživač: metilen hlorid
- zapremina za ubrizgavanje 1 ul
Procedura:
Ubrizgati šlepu probu (razblaživač), referentni rastvor, ispitivani rastvor i snimiti hromatograme.
Kada je reč o hromatogramima, proveriti da lije:
Relativno retenciono vreme za 4-(2-fluorbenziIoksi)benzaldehid oko 18 min;
za 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziIoksi)benzaldehid relativno retenciono vreme oko 1,7 ili je za 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid retenciono vreme oko 18 min;
relativno retenciono vreme za 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid oko 1,7.
3,4,5-trimethoksibenzaIdehid (IS) relativno retenciono vreme oko 0,7.
Izračunati procentualni sadržaj 3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziIoksi)benzaldehida u 4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehidu koji je ispitivan, ili sadržaj 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehida u 4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehidu koji je ispitivan pomoću izračunavanja sa unutrašnjim standardom.
Granična vrednost kvantitativnog određivanja (LOQ) za (3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzaldehid i za 3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzaldehid je 0,005% u masenim procentima. Granična vrednost određivanja (LOD) za obe ispitivane nečistoće je 0,0025% u masenim procentima.
Primer 17A
HPLC određivanje čistoće ( S)- 2- f4-( 3- lfuorbenziloksi) benzilamino1propanamida
( safinamida Ia), njegovog metansulfonata ( Ic), ( S)- 2-[ 4-( 2- fluorbenziloksi) benzilamino]-propanamida ( ralfinamida, lb) i njegovog metansulfonata ( Id)
Sledeća hromatografska procedura pogodna je i za oblik slobodne baze (Ia, lb) i za metansulfonatne soli (Ic, Id) proizvoda.
Razblaživač
Mobilna faza.
Ispitivani rastvor
Precizno izmeriti oko 25 mg proizvoda u volumetrijski sud od 25 ml, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem kako bi se dobio rastvor koji poznatu koncentraciju od oko 1,0 mg/ml. Hromatografski uslovi
Hromatografska procedura se sprovodi pomoću:
- Kolone: Waters Symmetry C8, 150x4,6 mm, 5p;
- detekcija: UV 220 nm:
- temperatura kolone: 30°C; - mobilna faza: 40% rastvarač A + 10% rastvarač B + 50% rastvarač C, koji sadrže 1,0 g/l natrijum oktansulfonata;
rastvarač A: puferski rastvor = KH2PO40.05M:
rastvarač B: acetonitril; rastvarač C: metanol; - izokratsko eluiranje, vreme trajanja hromatografije: 60 minuta;
- brzina protoka: 1,0 ml/min
zapremina za ubrizgavanje: 10 ul.
Procedura
Ubrizgati ispitivani rastvor, snimiti hromatogram i izračunati čistoću proizvoda izračunavanjem procenta površine.
Identifikacija fS)- 2-|" 4-( 3- fluorbenziloksi) benzilamino1propanamida ( safinamida) i
srodnih nečistoća
Retenciona vremena:
Retenciono vreme za (S)-2-[4-(3-ifuorbenziloksi)benzilamino]propanarnid je oko 5,5 min.
Relativno retenciono vreme za (S)-2-[4-(3-lfuorbenziloksi)benzilamino]propionsku kiselinu je oko 0,73.
Relativno retenciono vreme za (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid relativno je oko 4,08.
Identifikacija ( S)- 2- r4-( 2- lfuorbenziloksi) benzilamino] propanamida ( ralfinamida) i
srodnih nečistoća
Retenciona vremena:
Retenciono vreme za (S)-2-[4-(2-lfuorbenziloksi)benzilamino3propanamid je oko 5,5 min.
Relativno retenciono vreme za (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propionsku kiselinu je oko 0,73.
Relativno retenciono vreme za (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid relativno je oko 4,08.
Primer 17B
HPLC određivani e ( SV2- [ 3 -( 2- fluorbenzil)- 4-( 2- fluorbenziloksi ) benzilamino] -
propanamida ( slobodne baze, Ilb i metansulfonata, Ud) u ( S)- 2- f4-( 2-fluorbertziloksi) benzilamino] propanamidu ( slobodna baza. Ib i metansulfonat, Id), kao i ( S)- 2-
| 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi) benzilaminolpropanamida ( slobodne baze. Ha i
metansulfonata, IIc) u ( S)- 2-[ 4-( 3- lfuorbenziloksi) benzilaminolpropanamidu ( slobodna baza,
Ia i metansulfonat, Ic)
Određivanje (S)-2-[3-(2-fiuorbenzil)-4-(2-fluorbenzilok.si)benzilamino]propanamida (slobodne baze i metansulfonata) u uzorcima (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino|-propanamida (slobodne baze i metansulfonata), kao i (S)-2-[3~(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida (slobodne baze i metansulfonata) u uzorcima (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida (slobodne baze i metansulfonata) sprovodi se prema sledećim uslovima: Referentni rastvor za određivanje ( S)- 2- f3-( 2- fluorbenzil)- 4-( 2- fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamida u ( S)- 2-| 4-( 2- fluorbenziloksi) benzilaminolpropanamidu: Precizno izmeriti oko 30 mg referentnog standarda (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benziIamino]propanamiđ metansulfonata i 20 mg referentnog standarda (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida u volumetrijski sud od 50 ml, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem; razblažiti 1,0 ml razblaživačem do 20 ml (prvo razblaženje); razblažiti 1.0 ml poslednjeg rastvora razblaživačem do 20 ml (drugo razblaženje), kako bi se dobio rastvor koji sadrži 2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziIoksi)benzilamino]propanamid (oko 0,12%) u koncentraciji od oko 1,20 pg/ml i (S)-2-(4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonat u koncentraciji oko 1,00 pg/ml (što odgovara oko 0,10%).
Referentni rastvor za određivanje ( S)- 2- f3-( 2- fluorhenzil)- 4-( 2- fluorbenziloksi)-benzilaminolpropanamid metansulfonata u ( S)- 2-[ 4-( 2- fluorbenziloksi) benzilamino]-propanamid metansulfonatu: Precizno izmeriti oko 30 mg referentnog standarda (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonata i 20 mg referentnog standarda (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonata u volumetrijski sud od 50 ml, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem; razblažiti 1,0 ml razblaživačem do 20 ml (prvo razblaženje); razblažiti 1,0 ml poslednjeg rastvora razblaživačem do 20 ml (drugo razblaženje), kako bi se dobio rastvor koji sadrži 2-[3-(2-fluorbenziI)-4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (oko 0,15% u obliku metansulfonatne soli) u koncentraciji od oko 1,20 |ig/ml i (S)-2-(4-(2-lfuorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonat u koncentraciji oko 1,00 ug/ml (što odgovara oko 0,10%).
Referentni rastvor za ( S)- 2-| 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi) benziiamino]-propanamid u ( S)- 2-[ 4-( 3- lfuorbenziloksi) benzilamino1propanamidu
Precizno izmeriti oko 24 mg referentnog standarda (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida i 20 mg referentnog standarda (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida u volumetrijski sud od 50 ml, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem; razblažiti 1,0 ml ovog rastvora razblaživačem do 20 ml (prvo razblaženje); razblažiti 1,0 ml poslednjeg rastvora razblaživačem do 20 ml (drugo razblaženje), kako bi se dobio rastvor koji sadrži 2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (oko 0,12%) u koncentraciji od oko 1,20 pg/ml i (S)-2-(4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonat u koncentraciji oko 1,00 ug/ml (što odgovara oko 0,10%).
Referentni rastvor za ( S)- 2-[ 3-( 3- fluorbenzil)- 4-( 3- fluorbenziloksi) benzilamino1-propanamid metansulfonat u ( S)- 2-[ 4-( 3- fluorbenziloksi) benzilaminojpropanamid
metansulfonatu:
Precizno izmeriti oko 24 mg referentnog standarda (S)-2-[3-(3-fIuorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida i 20 mg referentnog standarda (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonata u volumetrijski sud od 50 ml, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem; razblažiti 1,0 ml ovog rastvora razblaživačem do 20 ml (prvo razblaženje); razblažiti 1,0 ml poslednjeg rastvora razblaživačem do 20 ml (drugo razblaženje), kako bi se dobio rastvor koji sadrži 2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid (oko 0,15% u obliku metansulfonatne soli) u koncentraciji od oko 1,20 pg/nil i (S)-2-(4-(3-fluorbenziloksi)-benzilamino]propanamid metansulfonat u koncentraciji oko 1,00 pg/ml (oko 0,10%).
Ispitivani rastvor:
Precizno izmeriti oko 25 mg proizvoda za ispitivanje u volumetrijski sud od 25 ml, rastvoriti i dopuniti do zadate zapremine razblaživačem kako bi se dobio rastvor koji poznatu koncentraciju od oko 1,0 mg/ml.
Hromatografski uslovi:
Hromatografska procedura se sprovodi uz sledeće parametre:
Kolona: \Vaters Simmetrv C8 150 x 4,6 mm. 5p. ili ekvivalentna
- temperatura kolone: 30°C; - mobilna faza: smeša 40% rastvarača A: 10% rastvarača B: 50% rastvarača C, koji sadrži 1 g/l natrij um oktansulfonata
rastvarač A: puferski rastvor 0.05 M KH2PO4;
rastvarač B: acetonitril;
rastvarač C: metanol;
izokratska elucija;
vreme trajanja liromatografije: 60 min;
brzina protoka: 1,0 ml/min
- detekcija: UV 220 nm; - zapremina za ubrizgavanje: 100 ul;
- razblaživač: mobilna faza
Procedura:
Ubrizgati šlepu probu (razblaživač), referentni rastvor, ispitivani rastvor i snimiti hromatograme.
U referentnom hromatogramu, proveriti sledeće parametre pogodnosti sistema: Retenciono vreme (S)-2-[4-(2-lfuorbenziloksi)benzilamino]propanamida je oko 5,2 minuta;
USP rep za maksimum (S)-2-f4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida je u opsegu od 0,8 do 1,5;
Relativno retenciono vreme za (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid je oko 5,1, ili je retenciono vreme za (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid oko 5,5 minuta;
USP rep za maksimum (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida je u opsegu od 0,8 do 1,5;
Relativno retenciono vreme za (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benziIamino]propanamid je oko 4,1.
Podesiti mobilnu fazu kako bi se dobila pogodnost sistema.
Izračunati procentualni sadržaj (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamida (slobodne baze i metansulfonata) u ispitivanim uzorcima (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida (slobodne baze i metansulfonata). kao i (S)-2-[3-(3-fluorbenziI)-4-(3-fluorbenziloksi)benziIaminolpropanamida (slobodne baze i metansulfonata) u ispitivanim uzorcima (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]-propanamida (slobodne baze i metansulfonata) pomoću izračunavanja za spoljašnji standard.
Granična vrednost kvantitativnog određivanja (LOQ) za (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid i za (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid u odgovarajućem (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]-propanamidu i (S)-2-[4-(3-lfuorbenziloksi)benzilamino]propanamidu je 0,004% u masenim procentima. Granična vrednost određivanja (LOQ) (S)-2-[3-(2-f!uorbenziI)-4-(2-fluorbenziIoksi)benzilamino]propanamid metansulfonata i (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonata u odgovarajućem (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonatu i (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid metansulfonatu je 0,005% u masenim procentima. Granična vrednost određivanja za sve ispitivane nečistoće je 0,001% u masenim procentima.
Primer 18
Određivanje enantiomerne čistoće ( S)- 2-|" 4-( 2- fluorbenziloksi) benzilamino1-propanamid ( ralfinamid) metansulfonata ( Id) pomoću HPLC
Enantiomerna Čistoća uzorka ocenjivana je pomoću HPLC. Određivanje je izvedeno u skladu sa sledećim uslovima:
Standardni rastvor 1:
Rastvoriti oko 5,3 mg referentnog standarda (R)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid metansulfonata u 25 ml mobilne faze.
Standardni rastvor 2:
Rastvoriti oko 8,0 mg referentnog standarda (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)-benzilaminojpropanamid metansulfonata i 0,2 ml standardnog rastvora 1 u 50 ml mobilne faze.
Koncentracija (R)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonata je oko 0,5%, izračunato u odnosu na koncentraciju (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)-benzi laminojpropanam id metansulfonata.
Ispitivani rastvori 1 i 2:
U duplikatu, rastvoriti oko 8,0 mg ispitivanog proizvoda u 50 ml mobilne faze.
Hromatografski uslovi:
- Kolona: Chiralpak WH 250mm x 4,6 mm, I.D. 5um; - temperatura kolone: 45°C; - mobilna faza: 0.25 mM C11SO4(precizno odmeriti oko 40 mg CuSCm u 1000 ml vodeVMeOH 60/40; - izokratska elucija;
- brzina protoka: 1,0 ml/min
- detekcija: UV 230 nm; - zaprem ina za ubrizgavanje: 10 ul;
vreme trajanja hromatografije: 15 minuta.
Procedura:
Analizirati šlepu probu (mobilnu fazu) jednom, standardni rastvor 2 dva puta, rastvore za ispitivanje 1 i 2 po jednom i proveriti da: - za ubrizgavanja standarda, RSD% procentualna površina za (R)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid metansulfonat iznosi manje od 2,0%; - i za rastvore standarda i za rastvore uzorka, za svako ubrizgavanje, procenat površine za svaki glavni maksimum je u opsegu prosečne vrednosti ± 0,1%.
Izračunati sadržaj (R)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino3propanamid metansulfonata (procenat površine) kao srednju vrednost dva određivanja.
Retenciona vremena:
Retenciono vreme za (S)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamid je oko 5,7 min.
Relativno retenciono vreme (R)-2-[4-(2-fluorbenziloksi)benzilaminojpropanamida je oko 1,7.
Primer 19
Određivanje enantiomeme čistoće ( S)- 2-[ 4-( 3- fluorbenziloksi) benzilamino1 -
propanamid ( safinamid) metansulfonata ( Ic) pomoću HPLC
Enantiomerna čistoća uzorka ocenjivana je pomoću HPLC. Određivanje je izvedeno u skladu sa sledećim uslovima:
Ispitivani rastvor:
Rastvoriti oko 10 mg ispitivanog uzorka u 10 ml mobilne faze.
Hromatografski uslovi:
- Kolona: Chiralpak WH 250mm x 4,6 mm, I.D. lOpm; - temperatura kolone: 50°C;
- mobilna faza: 0,25 mM CuS04
- izokratska elucija;
- brzina protoka: 1,0 ml/min
- detekcija: UV 200 nm; - zapremina za ubrizgavanje: 10 ul;
- vreme trajanja hromatografije: 30 minuta.
Procedura:
Ubrizgati ispitivani rastvor i izračunati odgovore maksimuma enantiomera u obliku procenta površine.
Retenciono vreme (S)-2-[4-(3-fluorbenziloksi)benzilamino]propanamida je oko 9,2 minuta;
Relativno retenciono vreme (R)-2-[4-(3-lfuorbenziloksi)benzilamino]propanamida je oko 1,9.
Primer 20
Test cito hroma P450
Inhibicija pet najvažnijih izoformi citohroma P450 (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19. CYP2D6 i CYP3A4) koje učestvuju u metabolizmu lekova merena je primenom specifičnih supstrata koji postaju fluorescentni nakon što su metabolisani pomoću CYP (Gentest Kit test).
Jeđinjenja su ispitivana u ploči sa 96 bunara koja sadrži inkubacioni/NADPH regenerišući pufer. Specifični humani rekombinantni izoenzimi i supstrati su dodavani i inkubirani na 37°C 15 minuta za CYP1A2/CEC. 40 minuta za CYP2E1/MFC. 45 minuta za CYP2C9/MFC i 30 minuta za ostale CYP450.
Specifični supstrati su sledeći: 3-cijano-7-etoksikumarin (CYP2C19 i CYP1A2), 7-metoksi-4-trifluormetilkumarin (CYP2C9), 3[2(N,N-dietil-N-metiIamino)etil]-7-metoksi-4-metilkumarin (CYP2D6), benzilfenilkumarin (CYP3A4). Ploča je čitana na čitaču ploča Victor (Perkin Elmer) na odgovarajućim talasnim dužinama emisije/ekscitacije, te je određena IC 50 (koncentracija koja inhibira aktivnost enzima za 50%). Rezultati su navedeni u tabelama 1 i 2.
Primer 21
Test citotoksičnosti kod ćelijske linije humanog neuroblastoma SH- SY- 5Y
U nultom vremenskom trenutku, ćelije su zasejane pri gustini od lxl0<4>/cm<2>u pločama sa po 96 bunara u DMEM podlozi + 10% toplotno đeaktiviranog FBS + 2mM 1-glutamin + 100 U/ml - lOOpg/ml penicilina/streptomicina.
Nakon 72 časa u subkonfluentnoj fazi rasta, podloga je uklonjenja a ćelije su inkubirane 24 časa na 37°C u 180 pl neurobazalne podloge + 2 mM 1-Glutamina (Life Techonologies) sa ili bez ispitivanih jeđinjenja (20 jul, najmanje 5 koncentracija u triplikatu ).
Na kraju inkubacije, u ćelijsku podlogu direktno je dodato 20 p.1 Alamar Blue plave boje (AlamarBlue™ test komplet, Promega).
Nakon četiri Časa, citotoksičnost je ocenjivana merenjem fluorescencije na 530 nm (ekscitacija) i 595 nm (emisija) pomoću čitača ploča Tečan Spectrafluor.
Pre i na kraju tretmana, kulture su posmatrane mikroskopski pod mikroskopom sa invertnom svetlošću Olvmpus 1X70 uparenim sa analizatorom slike Image Analvzer (Image Pro Plus, 5.1) kako bi se ocenila ćelijska morfologija.
Rezultati su prikazani u tabeli 1 kao koncentracija koja dovodi do 50% mortaliteta.
Primer 22
HERG struja u transficiranim CHO ćelijskim linijama
Inhibicija HERG struje ispitivana je u CHO ćelijama koje stabilno eksprimiraju rekombinantni HERG kanal.
Kako bi se ocenilo dejstvo ispitivanih jeđinjenja na HERG struje, ćelije su pričvršćene na -80 Mv, depolarizovane na 0 mV 5 sekundi, omogućavajući aktivaciju HERG struje i zatim repolarizovane na -50 mV u toku 50 sekundi kako bi se omogućilo repu HERG struje da se deaktivira. Ova procedura ponovljena je pri frekcenciji od 0,06 Hz. Amplituda struje nakon repolarizacije (repna struja HERG) izmerena je pre i nakon izlaganja ispitivanom jedinjenju.
Inhibicija struje izračunata je kao razlika između amplituda repne struje HERG merene na kraju perioda perfuzije eksterne kupke i repne struje HERG merene na kraju perioda perfuzije ispitivanog jeđinjenja (kada se dostigne efekat stabilnog stanja), podeljena kontrolnom repnom strujom HERG.
Inhibicione krive leka dobijene su izradom grafika funkcije toničnog bloka u zavisnosti od koncentracije leka. Krive zavisnosti odgovora od doze fitovane su u podatke o toničnom bloku, u skladu sa logističkom jednačinom: y = A2+(Al-A2)/[l+(x/ICso)<p>] Al i A2 su fiksne vrednosti od 0 i 1 koje odgovaraju inhibiciji struje od 0 i 100%, x je koncentracija leka, ICso je koncentracija leka koja dovodi do 50% inhibicije struje a p je odgovarajući faktor nagiba. Dobijeni rezultati predstavljeni su u tabeli 1.
Primer 23
Test maksimalnog električnog Šoka ( MES) kod miševa
Test maksimalnog električnog šoka (MES) se obično koristi pri skriningu antiepileptika u modelima kod glodara.
Životinje i aparatura: Korišćeni su mužjaci CD1 miševa telesne mase 25 g. Praćena je procedura je opisana od strane White et al. (White H. S., Woodhead J. H.. Franklin M. R., Swinyard E. A., & Wolf H. H. Antiepileptic Drugs (1995) 4. izdanje: 99-110. Raven Press, Ltd., New York). Elektrokonvulzivni generator Ugo Basile (Model ECT UNIT 7801) korišćen je za predaju električnog stimulusa dovoljnog da dovede do odgovora toničnog ekstenzora zadnjih udova u najmanje 97% kontrolnih životinja. Stimulus je dostavljen intra-auralno preko klema-elektroda kod miševa (0,7 sekundi šoka od 40 mA, sa pulsnom sekvencom od 80 Hz i trajanjem pulsa od 0,4 ms). Akutno dejstvo jeđinjenja primenjenih intraperitonealno ili oralno 15 do 60 minuta pre indukcije MES ispitano je i upoređeno sa kontrolnom grupom koja je primila nosilac. Ispitano je deset miševa po grupi. Kao dokaz antikonvulzantne aktivnosti uzimana je potpuna supresija tonične komponente napada kod ekstenzora zadnjih udova.
Jeđinjenja prema predmetnom pronalasku primenjivana su oralno ili intraperitonealno pri dozama od 3-30 mg/kg.
Rezultati su izraženi u tabelama 3 i 4 kao % zaštite.

Claims (8)

1. Safinamid (a) ili ralfinamid (b) visokog stepena čistoće ili so takvog jeđinjenja sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom, naznačeni time što su odgovarajuće nečistoće (S)-2-[3-(3-fluorbenzil)-4-(3-lfuorbenziloksi)-benzilamino]propanamid (Ha) i (S)-2-[3-(2-fluorbenzil)-4-(2-fluorobenziloksi)-benzilamino]propanamid (Ilb) ili njihove soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama, koje su u koncentraciji manjoj od 0,03% (u masenim procentima) za upotrebu u lečenju, redom, (a) epilepsije, Parkinsonove bolesti, Alchajmerove bolesti, depresija, sindroma nemirnih nogu i migrene ili (b) bolnih stanja, uključujući hronični bol i neuropatski bol. migrenu, bipolarne poremećaje, depresije, kardiovaskularne, zapaljenske, urogenitalne, metaboličke i gastrointestinalne poremećaje, pod uslovima u kojima ne dolazi do interferencije sa citohromima CYP450 sistema, posebno CYP3A4, CYP2D6, CYP2C19, CYP2C9 i bez pokazivanja svojstava blokade HERG kanala kod pacijenata koji su klasifikovani kao loši metabolizeri (PM) ili kod pacijenata kod kojih se istovremeno primenjuju drugi lekovi za koje se zna da interaguju sa citohromima CYP450 sistema, ili da imaju svojstva blokade HERG kanala.
2. Safinamid ili ralfinamid visokog stepena čistoće ili so takvog jeđinjenja sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom za lečenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeni time što je farmaceutski prihvatljiva kiselina metansulfonska kiselina a sadržaj odgovarajuće nečistoće sa formulom (Ha) ili (Ilb) u obliku soli sa metansulfonskom kiselinom jeste manji od 0,01% (u masenim procentima).
3. Farmaceutski preparat koji sadrži safinamid ili ralfinamid visokog stepena čistoće ili so takvog jeđinjenja sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom iz patentnog zahteva I.
4. Farmaceutski preparat prema patentnom zahtevu 3, naznačen time što je farmaceutski prihvatljiva kiselina metansulfonska kiselina a sadržaj odgovarajućih nečistoća sa formulom (Ha) ili (Ilb) u obliku soli sa metansulfonskom kiselinom jeste manji od 0.01% (u masenim procentima).
5. Farmaceutski preparat prema patentnom zahtevu 3, naznačen time što sadrži jedan ili veći broj dodatnih aktivnih sredstava uz safinamid ili ralfinamid visokog stepena čistoće ili so takvog jeđinjenja sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom, gde je sadržaj odgovarajućih nečistoća sa formulom (Ila) ili (Ilb) ili soli takvih jeđinjenja sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom manji od 0,03% (u masenim procentima).
6. Farmaceutski preparat prema patentnom zahtevu 5. naznačen time što je farmaceutski prihvatljiva kiselina metansulfonska kiselina a sadržaj odgovarajućih nečistoća sa formulom (Ila) ili (Ilb) u obliku soli sa metansulfonskom kiselinom jeste manji od 0,01% (u masenim procentima).
7. Farmaceutski preparat koji sadrži safinamid visokog stepena čistoće ili njegovu so sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom prema bilo kom od patentnih zahteva 5 i 6, naznačen time što je dodatno aktivno sredstvo agonist dopamina i(li) levodopa i(li) inhibitor katehol-O-metiltransferaze (COMT).
8. Farmaceutski preparat koji sadrži ralfinamid visokog stepena čistoće ili njegovu so sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom prema bilo kom od patentnih zahteva 5 i 6, naznačen time što je dodatno aktivno sredstvo gabapentin ili pregabalin ili farmaceutski prihvatljiva adiciona so kiseline ovih jeđinjenja.
RS20160965A 2006-06-19 2007-06-08 2-[4-(3- i 2 fluorbenziloksi) benzilamino] propanamidi visokog stepena čistoće za upotrebu kao lekovi i farmaceutski preparati koji ih sadrže RS55464B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP06012565 2006-06-19
EP12163085.9A EP2474521B1 (en) 2006-06-19 2007-06-08 High purity degree 2-[4-(3- and 2-fluorobenzyloxy)benzylamino]propanamides for use as medicaments and pharmaceutical formulations containing them

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS55464B1 true RS55464B1 (sr) 2017-04-28

Family

ID=37101658

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20150114A RS53824B1 (sr) 2006-06-19 2007-06-08 Proces za dobijanje 2-[4-(3-i 2-fluorbenziloksi) benzilamino] propanamida
RS20160965A RS55464B1 (sr) 2006-06-19 2007-06-08 2-[4-(3- i 2 fluorbenziloksi) benzilamino] propanamidi visokog stepena čistoće za upotrebu kao lekovi i farmaceutski preparati koji ih sadrže

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20150114A RS53824B1 (sr) 2006-06-19 2007-06-08 Proces za dobijanje 2-[4-(3-i 2-fluorbenziloksi) benzilamino] propanamida

Country Status (26)

Country Link
US (2) US8076515B2 (sr)
EP (2) EP2474521B1 (sr)
JP (2) JP5240476B2 (sr)
KR (2) KR101491541B1 (sr)
CN (2) CN101472880B (sr)
AR (1) AR061510A1 (sr)
AU (1) AU2007263328C1 (sr)
BR (1) BRPI0712936B8 (sr)
CA (1) CA2653012C (sr)
CY (2) CY1115951T1 (sr)
DK (2) DK2474521T3 (sr)
EA (2) EA017123B1 (sr)
ES (2) ES2602069T3 (sr)
HR (2) HRP20150136T1 (sr)
HU (1) HUE030233T2 (sr)
IL (1) IL195294A (sr)
LT (1) LT2474521T (sr)
MX (2) MX342698B (sr)
NO (2) NO342018B1 (sr)
NZ (2) NZ572798A (sr)
PL (2) PL2029524T3 (sr)
PT (2) PT2029524E (sr)
RS (2) RS53824B1 (sr)
SI (2) SI2474521T1 (sr)
TW (2) TWI412512B (sr)
WO (1) WO2007147491A1 (sr)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ545502A (en) * 2003-08-25 2010-04-30 Newron Pharm Spa Alpha-aminoamide derivatives useful as anti-inflammatory agents
CN101472880B (zh) * 2006-06-19 2013-04-24 纽朗制药有限公司 生产2-[4-(3-和2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺类的方法
EA019898B1 (ru) * 2007-12-11 2014-07-30 Ньюрон Фармасьютикалс С.П.А. Способ получения 2-[4-(3- или 2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамидов с высокой степенью чистоты
EP2314569A1 (en) 2009-10-22 2011-04-27 Merck Patent GmbH Novel polymorphic forms of (S)-2-[4-(3-Fluoro-benzyloxy)-benzylamino]-propionamide mesylate salt and processes of manufacturing thereof
BR112012027623B1 (pt) * 2010-04-27 2021-07-06 Newron Pharmaceuticals S.P.A. Processo para a produção de sais de ralfinamida metanossulfonato ou seus renantiômeros, forma pseudopolimorfa de hemi-hidrato cristalino h do sal de metanossulfonato de ralfinamida, ou seu r-enantiômero, seu uso e formulação farmacêutica que o compreende
BR112015007312A2 (pt) 2012-12-03 2017-08-08 Hoffmann La Roche composto, composição farmacêutica, utilização de um composto, método para o tratamento de câncer e invenção
US9475757B2 (en) 2013-05-03 2016-10-25 Council Of Scientific & Industrial Research Synthesis of anti-Parkinson agent
CN104292128A (zh) * 2014-07-01 2015-01-21 南京正科制药有限公司 一种沙芬酰胺晶型a
JP6466109B2 (ja) * 2014-09-09 2019-02-06 東ソー・ファインケム株式会社 ２−ベンジルオキシ−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン誘導体及びその製造方法
CN105017060B (zh) * 2015-07-03 2017-06-16 南京正大天晴制药有限公司 一种沙芬酰胺新晶型及其制备方法
CN113072436A (zh) * 2015-07-24 2021-07-06 上海医药集团股份有限公司 一种苄基芳基醚的制备方法
CN105061245A (zh) * 2015-08-25 2015-11-18 成都维恒医药科技有限公司 一种高纯度沙芬酰胺的制备方法
CN106220525A (zh) * 2016-07-31 2016-12-14 合肥远志医药科技开发有限公司 一种工业化沙芬酰胺甲磺酸盐的制备方法
CN106336363B (zh) * 2016-08-22 2018-10-30 上海医药集团股份有限公司 一种沙芬酰胺甲磺酸盐晶型c及其制备方法
CN106565521B (zh) * 2016-08-24 2019-03-08 浙江美诺华药物化学有限公司 (s)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺及其盐的制备方法
CN106596828B (zh) * 2016-12-15 2018-09-25 扬子江药业集团有限公司 一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法
CN107271600B (zh) * 2017-07-28 2019-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种4-(3-氟苄氧基)苯甲醛中异构体杂质含量的检测方法
CN107759487A (zh) * 2017-11-23 2018-03-06 江苏恒盛药业有限公司 一种沙芬酰胺盐酸盐及其一种晶型以及制备方法
CN107857713A (zh) * 2017-11-23 2018-03-30 江苏恒盛药业有限公司 一种沙芬酰胺氢溴酸盐及其一种晶型
WO2019167085A1 (en) * 2018-03-01 2019-09-06 Msn Laboratories Private Limited, R&D Center Process for the preparation of (s)-2-[[4-[(3-fluorophenyl)methoxy]phenyl]methyl]amino propanamide methanesulfonate
US11111208B2 (en) 2019-06-17 2021-09-07 RK Pharma Solutions LLC Process for the preparation of safinamide mesylate intermediate
EP3772510B1 (en) * 2019-08-06 2024-02-14 Medichem, S.A. Process for preparing safinamide
CN111122736B (zh) * 2019-12-30 2021-03-12 北京鑫开元医药科技有限公司海南分公司 一种用于检测布瓦西坦中间体中对映异构体的方法
CN113214097B (zh) * 2020-01-21 2022-08-30 厦门大学 治疗阿尔茨海默病的化合物
CN112028754A (zh) * 2020-06-17 2020-12-04 浙江美诺华药物化学有限公司 一种甲磺酸沙芬酰胺中间体的制备方法
CN114088830B (zh) * 2021-11-10 2022-09-23 石家庄四药有限公司 一种4-(3-氟苄氧基)苯甲醛中异构体的检测方法
CN117923998A (zh) * 2022-10-24 2024-04-26 中国石油化工股份有限公司 苯甲醛及其衍生物的制备方法
CN116008439B (zh) * 2023-02-20 2023-10-27 山东绿叶制药有限公司 一种检测2,6-二氧杂螺[4,5]癸烷类化合物或其盐中杂质的方法
WO2025022300A1 (en) 2023-07-25 2025-01-30 Intas Pharmaceuticals Ltd. An orodispersible pharmaceutical solid dosage form of safinamide

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL94466A (en) * 1989-05-25 1995-01-24 Erba Carlo Spa Pharmaceutical preparations containing the history of A-amino carboxamide N-phenylalkyl are converted into such new compounds and their preparation
GB9727523D0 (en) 1997-12-31 1998-02-25 Pharmacia & Upjohn Spa Alpha-aminoamide derivatives useful as analgesic agents
EP0974351A3 (en) * 1998-04-24 2000-12-13 Jouveinal Medicament for preventing and treating gastrointestinal damage
AU2001249610B2 (en) 2000-03-31 2005-03-24 Euro-Celtique S.A. Aminopyridines and their use as anticonvulsants and sodium channel blockers
CA2459470C (en) 2001-09-03 2010-10-12 Patricia Salvati Pharmaceutical composition comprising gabapentin or an analogue thereof and an .alpha.-aminoamide and its analgesic use
EP1438956A1 (en) 2003-01-16 2004-07-21 Newron Pharmaceuticals S.p.A. Alpha-aminoamide derivatives useful as antimigraine agents
WO2004066987A2 (en) * 2003-01-30 2004-08-12 Dynogen Pharmaceuticals, Inc. Use of sodium channel modulators for treating gastrointestinal tract disorders
AU2004207010A1 (en) * 2003-01-30 2004-08-12 Dynogen Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating lower urinary tract disorders using sodium channel modulators
AR044007A1 (es) 2003-04-11 2005-08-24 Newron Pharmaceuticals Inc Metodos para el tratamiento de la enfermedad de parkinson
TW200507850A (en) * 2003-07-25 2005-03-01 Kyowa Hakko Kogyo Kk Pharmaceutical composition
NZ545502A (en) 2003-08-25 2010-04-30 Newron Pharm Spa Alpha-aminoamide derivatives useful as anti-inflammatory agents
EP1524267A1 (en) 2003-10-15 2005-04-20 Newron Pharmaceuticals S.p.A. Substituted benzylaminoalkylene heterocycles
EP1557166A1 (en) * 2004-01-21 2005-07-27 Newron Pharmaceuticals S.p.A. Alpha-aminoamide derivatives useful in the treatment of lower urinary tract disorders
EP1588704A1 (en) 2004-04-22 2005-10-26 Newron Pharmaceuticals S.p.A. Alpha-aminoamide derivatives useful in the treatment of restless legs syndrome and addictive disorders
JP5319920B2 (ja) 2004-09-10 2013-10-16 ニユーロン・フアーマシユーテイカルズ・エツセ・ピー・アー ナトリウムおよび／またはカルシウムチャンネル選択的調節因子として活性のある医薬の製造のための（ハロベンジルオキシ）ベンジルアミノ−プロパンアミドの使用
EP1870097A1 (en) 2006-06-15 2007-12-26 Newron Pharmaceuticals S.p.A. Alpha-aminoamide derivatives useful in the treatment of cognitive disorders
CN101472880B (zh) * 2006-06-19 2013-04-24 纽朗制药有限公司 生产2-[4-(3-和2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺类的方法
EA019898B1 (ru) 2007-12-11 2014-07-30 Ньюрон Фармасьютикалс С.П.А. Способ получения 2-[4-(3- или 2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамидов с высокой степенью чистоты
KR101500962B1 (ko) 2007-12-19 2015-03-10 뉴론 파마슈티칼즈 에스. 피. 에이. 정신 장애의 치료에 유용한 알파­아미노아미드 유도체

Also Published As

Publication number Publication date
MX2008015704A (es) 2009-01-09
US8278485B2 (en) 2012-10-02
IL195294A0 (en) 2009-08-03
IL195294A (en) 2015-03-31
DK2474521T3 (en) 2016-10-31
DK2029524T3 (da) 2015-02-23
CA2653012C (en) 2014-08-05
SI2474521T1 (sl) 2016-12-30
US20120157712A1 (en) 2012-06-21
TWI412512B (zh) 2013-10-21
HRP20150136T1 (xx) 2015-03-13
NZ595737A (en) 2013-04-26
NZ572798A (en) 2011-11-25
MX342698B (es) 2016-10-10
CN103284984B (zh) 2016-08-03
TW201313662A (zh) 2013-04-01
US8076515B2 (en) 2011-12-13
TW200815322A (en) 2008-04-01
KR20140027563A (ko) 2014-03-06
ES2527437T3 (es) 2015-01-26
EP2474521B1 (en) 2016-08-10
JP5240476B2 (ja) 2013-07-17
NO20090231L (no) 2009-01-16
EA201101308A1 (ru) 2012-02-28
NO342018B1 (no) 2018-03-12
NO20171916A1 (no) 2009-01-16
PL2029524T3 (pl) 2015-04-30
AR061510A1 (es) 2008-09-03
CN101472880A (zh) 2009-07-01
ES2602069T3 (es) 2017-02-17
BRPI0712936B1 (pt) 2021-02-23
CA2653012A1 (en) 2007-12-27
US20090156678A1 (en) 2009-06-18
KR101491541B1 (ko) 2015-02-09
AU2007263328A1 (en) 2007-12-27
KR20090021392A (ko) 2009-03-03
KR101410291B1 (ko) 2014-06-20
HK1130245A1 (en) 2009-12-24
HRP20161456T1 (hr) 2016-12-16
JP5795342B2 (ja) 2015-10-14
EP2474521A1 (en) 2012-07-11
BRPI0712936A2 (pt) 2012-12-18
EP2029524B1 (en) 2014-11-26
AU2007263328B2 (en) 2012-03-22
PT2474521T (pt) 2016-11-10
NO342644B1 (no) 2018-06-25
PL2474521T3 (pl) 2017-01-31
CN101472880B (zh) 2013-04-24
CY1115951T1 (el) 2017-01-25
RS53824B1 (sr) 2015-06-30
LT2474521T (lt) 2016-11-25
PT2029524E (pt) 2015-03-09
CN103284984A (zh) 2013-09-11
CY1118113T1 (el) 2017-06-28
SI2029524T1 (sl) 2015-03-31
JP2009541232A (ja) 2009-11-26
EA200970028A1 (ru) 2009-06-30
EP2029524A1 (en) 2009-03-04
JP2013139446A (ja) 2013-07-18
TWI393700B (zh) 2013-04-21
AU2007263328C1 (en) 2012-09-06
HUE030233T2 (en) 2017-04-28
EA017123B1 (ru) 2012-10-30
AU2007263328A2 (en) 2009-02-19
BRPI0712936B8 (pt) 2021-05-25
WO2007147491A1 (en) 2007-12-27
EA025326B1 (ru) 2016-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS55464B1 (sr) 2-[4-(3- i 2 fluorbenziloksi) benzilamino] propanamidi visokog stepena čistoće za upotrebu kao lekovi i farmaceutski preparati koji ih sadrže
US8530701B2 (en) High purity 2-[4-(3- OR 2-fluorobenzyloxy)benzylamino]propanamides and methods of use thereof
JP2009541232A5 (sr)
HK1246770A1 (en) Process for the production of 2-[4-(3- or 2-fluorobenzyloxy)benzylamino]propanamides with high purity degree
HK1130245B (en) Process for the production of 2-[4-(3-and 2-fluorobenzyloxy) benzylamino] propanamides
HK1188942B (en) Process for the production of 2-[4-(3-and 2-flu0r0benzyl0xy) benzylamin0]propanamides
HK1188942A (en) Process for the production of 2-[4-(3-and 2-flu0r0benzyl0xy) benzylamin0]propanamides