RO120338B1 - Derivaţi analogi ai vitaminei d - Google Patents

Abstract

Invenţia se referă la derivaţi analogi ai vitaminei D, reprezentaţi prin formula generală (I), în care X este hidrogen sau hidroxi; R 1 şi R 2 reprezintă metil sau etil; Q este metilen, etilen, tri- sau tetra-metilen, care, opţional, pot fi substituite cu o grupare oxi, -OR 3 în care R 3 este hidrogen, metil sau etil; Y este fie o legătură simplă, fie o grupare hidrocarbilen C 1 -C 2 şi unul sau mai mulţi atomi de carbon din R 1 , R 2 şi/sau Y pot fi, în mod opţional, substituite cu unul sau mai mulţi atomi de fluor sau cu o grupare hidroxil. Derivaţii au efecte antiinflamatorii şi de imunomodulare, precum şi o puternică activitate în inducerea diferenţierii şi inhibării proliferării nedorite, a anumitor celule.

Description

Invenția se referă la derivați analogi ai vitaminei D, care prezintă o puternică activitate în inducerea diferențierii și inhibării proliferării nedorite a anumitor celule, incluzând celule ale pielii și celule canceroase, precum și efecte de imunomodulare și antiinflamatorii, la compoziții farmaceutice conținând acești compuși, procedeul de obținere al acestora și la utilizarea lor în tratamentul și/sau profilaxia unor afecțiuni. în particular, acești compuși se folosesc în tratamentul unor boli caracterizate prin diferențierea anormală a celulelor și/sau proliferarea celulelor cum ar fi psoriazis și alte perturbări de cheratinizare, dermatoze asociate cu HIV, vindecarea rănilor, cancer, incluzând cancerul pielii, a bolilor sau a dezechilibrului sistemului imunologic, cum ar fi reacția gazdei față de grefă și a grefei față de gazdă și respingerea transplantului, a bolilorautoimunologice, cum arfi lupus erythematosus discoid și sistemic, diabetul mellitus și dermatozele cronice de tipul autoimunologic, de exemplu scleroderma și pemphigus vulgaris, a maladiilor inflamatorii, cum ar fi artrita reumatoidă și astmul, precum și a unui număr de alte stări de boală incluzând hiperparatiroidism, în special hiperparatiroidismul secundar asociat cu insuficiență renală, deteriorarea cognitivă sau demența senilă (maladia Alzheimer) și altor maladii neurodegenerative, hipertensiune, acnee, alopecie, atrofia pielii, de exemplu, atrofia pielii indusă steroid, îmbătrânirea pielii, incluzând îmbătrânirea, datorită fotoexpunerii, dar și la utilizarea lor pentru accelerarea osteogenezei și tratamentul / prevenirea osteoporozei și osteomalaciei.

Au fost descriși în stadiul tehnicii un număr de analogi ai vitaminei D care prezintă un anumit grad de selectivitate în favoarea activității de inducere a diferențierii celulelor / activității de inhibare a proliferării celulelor in vitro în comparație cu efectele asupra metabolismului calciului in vivo (așa cum s-a măsurat într-un ser cu concentrație crescută de ser de calciu și/sau o excreție urinară de calciu crescută), care în mod nefavorabil limitează dozajul care ar putea fi administrat în condiții de siguranță. Unul dintre primii dintre aceștia, calcipotriol (INN) sau calcipotrien (USAN), a fost obținut pe baza acestei selectivități și este acum recunoscut pe plan mondial ca un medicament eficient și sigur pentru tratamentul topic al maladiei psoriazis.

Un studiu efectuat cu un alt analog (EB 1089) selectat pe această bază confirmă conceptul că analogi ai vitaminei D administrați în mod sistemic pot inhiba proliferarea celulelor cancerului de sân in vivo la doze sub limita de toxicitate, așa cum se arată în Colston, K. W. ș.a., Biochem. Pharmacol. 44, 1992, 2273-2280.

Activitățile imunosupresive ale analogilor vitaminei D au fost revizuite de Binderup, L., în Biochem Pharmacol., 43, 1992, 1885-1892. Astfel, o serie de analogi ai 20-epivitaminei D au fost identificați drept inhibitori potenți ai activării T-limfocitelor in vitro, precizează Binderup, L. ș.a., Biochem. Pharmacol., 42,1991, 1569-1575. Doi dintre acești analogi, MC 1228 și KH 1060 administrați sistemic, au arătat activități imuno-represive in vivo pe modele experimentale de animale. Efecte aditive sau sinergice au fost observate în combinație cu doze mici de ciclosporin A. KH 1060, singur sau în combinație cu ciclosporin A, poate preveni distrugerea autoimunologică a insulițelor transplantate la șoarece NOD diabetic se arată în Bouillon, R, ș.a.: Vitamin D, Proceedings of the Ninth Workshop on Vitamin D, Orlando; Florida, Walter de Gruyter, Berlin, 1994, pag. 551-552. MC 1288 a fost capabil să prelungească supraviețuirea unor grefe cardiace și a intestinului mic la șobolani susțin Johnsson, C. ș.a., în Vitamin D, Proceedings of the Ninth Workshop on Vitamin D, Orlando, Florida, Walter de Gruyter, Berlin, 1994, pag. 549-550. Totuși, în toate aceste studii, dozajele analogilor care au produs o imunorepresie, au indus de asemenea creșteri ale nivelelor de calciu în ser. Există, prin urmare, o continuă cerință de noi analogi care să conducă la o combinație acceptabilă în ceea ce privește o activitate terapeutică prelungită și efecte toxice minime.

RO 120338 Β1

O serie de analogi ai 20-epi-vitaminei D care nu conțin duble legături în catena 1 laterală sau o dublă legătură C₂₂-C₂₃ (C₂₂ este legat direct la C₂₀) este descrisă în Cererea de brevet internațional cu numărul de publicație WO 91 / 00271. Au apărut mai multe 3 raportări privind compuși având configurația naturală la C₂₀ și conținând o dublă legătură C₂₃C₂₄ sau o dublă legătură C₂₄-C_24a în Uskokovic, M. R. ș.a. în: Vitamin D: Gene Regulation, 5 Structure-Function Analysis and Clinical Application, editat de Norman, A. W. Bouillon, R.

și Thomasset, M. Berlin: Walter de Gruyter, 1991, pag. 139-145, Baggiolini, E. G. ș.a.,7 brevetul US 5.087.619-A (1992), Chodynski, M. ș.a., Steroids 56, 311-3154 (1991)). De la înregistrarea acestei cereri de brevet, a fost publicată o cerere de brevet, Kutner, A. ș.a.,9

EP 742.203, 1996, care descrie o serie ce pare formal să se suprapună cu compușii I. Cu toate acestea, inspectarea încă o dată a numitei cereri de brevet scoate în evidență faptul11 că sunt luați în considerare în mod exclusiv compuși având configurația naturală la C₂₀, întrucât în ciuda ambiguității formulei generale nu s-a făcut nici o mențiune privind 13 configurația și au fost invocați numai intermediari având configurația naturală. Se poate menționa că singurul compus exemplificat este de fapt epimerul-20 al compusului 0106. 15

Compusul exemplificat este menționat a fi mai eficient (în mod egal activ pag. 13, rândul

27) decât hormonul vitaminei naturale D (calcitriol) în ceea ce privește efectul său asupra 17 diferențierii celulelor canceroase. Prin contrast, testele noastre cu compusul 0106 îl arată a fi de cel puțin zece ori mai eficient. în mod similar, trei alți compuși din prezenta invenție 19 (0101, 0103, 0105) au fost găsiți a fi în mod considerabil mai eficienți în ceea ce privește efectele lor asupra celulelor canceroase decât epimerii-20 sintetizați ai acestora pentru 21 scopuri comparative.

în plus două serii de analogi ai 20-epi-vitaminei D, care conțin o legătură triplă distală 23 carbon-carbon în catena laterală, sunt descrise în WO92/03414 și WO93/19044, acești compuși fiind utili ca antiinflamatori, imunomodulatori și diferențiatori celulari și ca inhibitori 25 ai proliferării celulare nedorite.

în fine, anumiți compuși cu formula generală I (dacă R¹ și R² ar avea înțelesul de 27 izopropil) sunt prezentați în EP-A-633245 (Duphar Internațional Research BV). Această formulă cuprinde și selecții din cadrul stadiului cunoscut al tehnicii descris în WO 92/03414, 29

WO 93/19044 și în mai sus menționatul WO 91/00271. Utilizarea acestora este indicată în farmacoterapie. 31

Problema pe care invenția își propune să o rezolve este aceea de a furniza o alternativă neevidentă a derivaților analogi ai vitaminei D cu activitate terapeutică prelungită 33 și efecte toxice minime.

Derivatul analog al vitaminei D, conform invenției, constituie o nouă clasă a analogilor 35 vitaminei D reprezentați prin formula generală I:

RO 120338 Β1 formulă în care X este hidrogen sau hidroxi; R¹ și R² reprezintă metil sau etil; Q este metilen, etilen, tri- sau tetra-metilen care, opțional, potfi substituite cu o grupare oxi, -OR³, în care R³ este hidrogen, metil sau etil; Y este fie o legătură simplă fie o grupare hidrocarbilen C₄-C ₂ saturată sau nesaturată; și unul sau mai mulți atomi de carbon în R¹, R², și/sau Y pot fi în mod opțional substituiți cu unul sau mai mulți atomi de fluor sau cu o grupare hidroxil.

Procedeul de obținere al derivatului analog al vitaminei D, conform invenției, constă în aceea că o aldehidă aleasă dintre 1 (S),3(R)-bis-(terț-butildimetilsililoxi)-20(S)-formilmetil9,10-seco-pregna-5(E),7(E),10(19)-trien sau 1(S),3(R)-b/s-(terȚ-butildimetilsililoxi)-20(S)-(2formileti I )-9,10-seco-pregna-5(E),7(E), 10(19)-trien sau 1 (S),3(R)-b/s-(terf-butildimetilsililoxi)20(R)-(3-formilpropil)-9,10-seco-pregna-5(E),7(E),10(19)-trien sau derivatul corespunzător al uneia dintre acestea în care gruparea metilen legată la C₂₀ poartă un substituient metoxi, etoxi sau terț-butildimetilsililoxi, reacționează fie cu un reactiv Wittig conținând o grupare carbonil cum este metil (trifenilfosforaniliden) acetat iar compusul rezultat reacționeză cu un compus organolitiu, cu un reactiv Grignard sau cu un agent reducător, fie cu un litiu derivat al unei alchil fenilsulfone în mod opțional hidroxilată, reacția fiind urmată de eliminare reductivă, de exemplu cu amalgam de sodiu, pentru a se obține un produs, care este supus etapei opționale de izomerizare cu lumină ultravioletă în prezența unui agent de sensibilizare a tripletului, de preferință antracen, și îndepărtarea grupărilor silii, de preferință, cu fluorură de tetrabutilamoniu.

Compoziția farmaceutică, conform invenției, conține o cantitate eficientă din unul sau mai mulți dintre compușii revendicați și purtători netoxici sau agenți auxiliari, acceptabili farmaceutic.

Un ultim obiect al invenției se referă la utilizarea oricăruia dintre compușii conform invenției pentru obținerea unui medicament pentru sau profilaxia bolilor caracterizate prin diferențierea anormală a celulelor și/sau proliferarea celulelor ca de exemplu psoriazis și alte tulburări de cheratinizare, dermatoze asociate cu HIV, vindecarea rănilor, cancer, incluzând cancerul de piele și a maladiilor sau a dezechilibrării sistemului imunologic, precum reacția gazdă contra grefă și grefă contra gazdă și respingerea transplantului și maladiile autoimunologice cum este erythematosus lupus discoid și sistemic, diabetul mellitus și dermatozele cronice autoimune, precum scleroderma și pemphigus vulgaris, și a bolilor inflamatorii, cum este artrita reumatoidă și astmul, precum și a unui număr de alte stări de boală incluzând hiperparatiroidism, în mod deosebit hiperparatiroidismul secundar asociat cu insuficiență renală, deteriorare cognitivă sau demență senilă cum ar fi maladia Alzheimer și alte maladii neurodegenerative, hipertensiune, acnee, alopecie, atrofia pielii, cum arfi atrofia pielii indusă de steroizi, îmbătrânirea pielii, incluzând îmbătrânirea pielii datorită expunerii la lumină, și, de asemenea, pentru stimularea osteogenezei și tratarea/prevenirea osteoporozei și osteomalaciei.

Prin aplicarea invenției, se obțin derivați analogi ai vitaminei D, printr-un procedeu care decurge cu randamente ridicate cu o eficiență crescută în inhibarea proliferării celulelor canceroase, combinată cu o activitate imunodepresivă crescută.

în contextul acestei invenții, expresia hidrocarbil (hidrocarbilen) indică radicalul (/ diradicalul) obținut după îndepărtarea a 1 (/ 2) atomi de hidrogen dintr-o hidrocarbură liniară, ramificată sau ciclică, saturată sau nesaturată.

Exemple de R¹ și R² când sunt luați separat includ, dar nu se limitează la, hidrogen, metil, trifluorometil, hidroximetil, etil, (1-sau 2-) hidroxietil, vinii, etinil, normal-, izo- și cînd sunt luați împreună includ etilen, tri-, tetra- și pentametilen.

Exemple de Q cu un substituient oxi includ, dar nu se limitează la, hidroximetilen, (1sau 2-) hidroxietilen, (1-, 2- sau 3-) hidroxitrimetilen și diradicalii corespunzători în care gruparea hidroxi este eterificată cu metil sau etil.

RO 120338 Β1

Exemple de Y (atunci când nu este o legătură simplă) includ, dar nu se limitează la, 1 metilen, hidroximetilen, difluorometilen, etilen, etiliden (= CH-CH₃), CH = CH, C = C, (1-sau 2-) hidroxietilen. 3

Compușii reprezentați prin formula I cuprind mai mult decât o formă diastereoizomerică (configurațiile E și Z ale legăturilor duble a lanțului lateral și, în mod adițional, de 5 exemplu configurațiile R și S de la carbonul care poartă gruparea X, atunci când R¹ și R² sunt diferiți unul față de celălalt și față de X, și configurațiile E sau Z atunci când dubla legătură 7 este prezentă în grupările Y sau R (1 sau 2)). Invenția de față include toți acești diastereoizomeri în formă pură și de asemeni amestecuri ale acestora. în plus, substanțele medi- 9 camentoase precursoare ale compușilor I, în care una sau mai multe dintre grupările hidroxi sunt mascate ca grupări care pot fi reconvertite în grupări hidroxi in vivo, sunt de asemenea 11 luate în considerare.

Compușii I în care X este hidroxi sunt cei preferați, dar compușii I în care X este 13 hidrogen reprezintă, de fapt, un nou tip de substanță precursoare de medicamente. Acești compuși sunt relativ inactivi in vitro, dar sunt convertiți în compuși activi reprezentați prin 15 formula I prin hidroxilarea enzimatică a lanțului lateral în unul sau mai multe locuri în porțiunea -(Y)CHR¹R² a moleculei după administrarea la pacient. 17

Compușii reprezentați prin formula I pot fi obținuți sub formă cristalină fie direct prin concentrarea dintr-un solvent organic, fie prin cristalizare sau recristalizare dintr-un solvent 19 organic sau un amestec al numitului solvent și un co-solvent care poate fi organic sau anorganic, cum este apa. Cristalele pot fi izolate sub o formă practic liberă de solvent sau 21 sub formă de solvat, cum ar fi cea de hidrat. Invenția de față include toate aceste modificări și forme cristaline și de asemenea amestecuri ale acestora. 23

Compușii din prezenta invenție asigură o serie nedescrisă până în prezent de analogi ai 1 a-hidroxi-20-epi-vitaminei D caracterizați prin prezența unei duble legături carbon-carbon 25 distal în catena laterală, respectiv astfel poziționată încât nici un atom dublu legat să nu fie conectat direct la C₂₀. 27

Compusul reprezentat prin formula I poate fi preparat prin metoda generală arătată în Schema 1. în această schemă, aldehida II care formează nucleul vitaminei D, în care 29 atomul de carbon al aldehidei este poziționat în mod adecvat pentru a genera dubla legătură a catenei laterale indicată în formula I, este materialul de pornire. în cele ce urmează, sim- 31 bolul Q_a indică faptul că această grupare de legătură poate fi fie identică cu Q în compusul reprezentat prin formula I, fie ca o alternativă, poate fi o grupare care poate fi convertită în 33 Q într-o fază următoare din cadrul sintezei. Mai mult decât atât, identitatea lui Q_a se poate modifica de la intermediar la intermediar de-a lungul secvenței de reacție. Totuși, identitatea 35 actuală este evidentă din contextul individual.

Urmărind schema 1, procedeul de obținere cuprinde următoarele etape: 37

1. Compusul II reacționează cu un reactiv pentru formarea dublei legături în catena laterală și a extinde lanțul. în mod tipic, aceasta ar fi o reacție Wittig 39 (sau de tipul Wittig) sau o reacție de tipul Julia. Aceste metode sunt bine cunoscute în domeniul chimiei vitaminei D. Intermediarii având configurația 41 E sau Z a dublei legături formate în condiții de reacție ne-stereospecifice pot fi în mod avantajos separați în această fază. 43

Simbolul Y_a este utilizat pentru a indica identitatea opțională cu, sau convertibilitatea în, Y (vezi mai sus pentru utilizarea analoagă a Q_a), și simbolul W poartă o relație analoagă 45 cu gruparea C(R¹)(R²)(X) în I.

2. Conversia opțională a grupării Q_a în Q; 47

3. Conversia opțională a grupării Y_a în Y;

RO 120338 Β1

4. Conversia opțională a grupării W în C(R¹ )(R²)(X);

5. Fotoizomerizarea sensibilizată a tripletului trienei vitaminei D (5E în 5Z); și

6. îndepărtarea grupărilor protectoare silii din nucleul vitaminei D.

Secvența etapelor 1 până la 6 poate fi modificată (de exemplu etapa de fotoizomerizare 5 poate precede etapa de reacție 1 introducând dubla legătură, sau mai multe etape pot fi combinate (de exemplu în condițiile etapei de desililizare 6 pot efectua de asemenea o deprotejare a grupării alcoolice X etapa 4. Exemple de condiții și reactivi pentru reacțiile specifice (respectiv pentru etapele 5 și 6) sunt bine cunoscute în practica anterioară a sintezei analogilor vitaminei D. Sunt disponibile căi alternative față de cele ilustrate pentru oricare dintre intermediarii reprezentați prin formulele II, III sau IV sau compusul reprezentat prin formula I, acest lucru fiind evident specialiștilor în domeniu.

Compușii de față se intenționează a fi utilizați în compoziții farmaceutice care sunt utilizabile în tratamentul local sau sistemic al tulburărilor umane sau veterinare, așa cum a fost descris aici mai înainte.

în continuare se prezintă schema de sinteză 1.

Schema 1

II iii

(Qa)—CH-CH—W

Compușii de față pot fi utilizați în combinație cu alte substanțe farmaceutice sau modalități de tratament. în tratamentul bolii psoriazis compușii din prezenta invenție pot fi utilizați în combinație, de exemplu, cu substanțe steroide sau în combinație cu alte tratamente ca de exemplu tratamentul cu expunere la lumină sau la lumină cu ultra-violete

RO 120338 Β1 sau în combinație cu un tratament PUVA. în tratamentul cancerului, compușii de față pot fi 1 utilizați în combinație cu alte medicamente anticancer sau cu tratamente anti-cancer, cum ar fi tratamentul cu radiații. în prevenirea respingerii grefelor și a reacției grefă față de gazdă 3 sau în tratamentul bolilor autoimunologice, compușii din prezenta invenție pot fi utilizați în mod avantajos în combinație cu alte medicamente sau tratamente imunorepresive / 5 imunoregulatoare, ca de exemplu cu ciclosporin A.

Cantitatea necesară din compusul reprezentat prin formula I (considerat aici în 7 continuare ca substanță activă) în vederea obținerii unui efect terapeutic variază, desigur, atât cu compusul particular ce urmează a fi utilizat, cu calea de administrare, cât și cu tipul 9 de mamifer ce se află sub tratament. Compușii din prezenta invenție pot fi administrați pe cale parenterală, intraarticulară, enterală sau topică. Ei sunt bine absorbiți atunci când se 11 administrează enteral și aceasta este calea preferată de administrare în tratamentul tulburărilor sistemice. în tratamentul tulburărilor dermatologice, cum ar fi psoriazisul sau 13 afecțiuni ale ochilor, sunt preferate formele topice sau enterale de administrare.

Cu toate că este posibil ca substanța activă să fie administrată singură drept15 substanță chimică brută, este preferabil ca aceasta să fie prezentată sub forma unei formulări farmaceutice. în mod convenabil, în formulare, ingredientul activ reprezintă de la 17 0,1 ppm până la 0,1% în greutate.

Formulările, atât cele pentru uz medical veterinar cât și cele pentru uz medical uman,19 din prezenta invenție cuprind o substanță activă în asociație cu un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic și, în mod opțional, și alți compuși terapeutici. Agentul sau21 agenții purtători trebuie să fie acceptabili în sensul de a fi compatibili cu celelalte componente ale formulărilor și să nu fie vătămători pentru recipientul acestora.23

Formulările includ, de exemplu, pe cele într-o formă adecvată pentru administrare orală, oftalmică, rectală, parenterală (incluzând pe cea subcutanată, intramusculară și 25 intravenoasă), transdermală, intraarticulară și topică, nazală sau bucală.

Prin termenul de doză unică se înțelege o singură doză care este administrată unui 27 pacient și care poate fi cu ușurință manipulată și ambalată, rămânând ca o doză unică fizic și chimic stabilă, cuprinzând fie materialul activ ca atare, fie în amestec cu diluanți sau agenți 29 purtători farmaceutici în stare solidă sau lichidă.

Formulările pot fi în mod convenabil prezentate sub formă de doze unice și pot fi 31 preparate prin oricare dintre metodele bine cunoscute în domeniul farmaceutic. Toate metodele includ faza de aducere a substanței active în asociere cu agentul purtător care este 33 constituit dintr-una sau mai multe componente. în general, formulările sunt preparate prin aducerea in mod uniform și intim a compusului activ în asociere cu un agent purtător lichid 35 sau cu un agent purtător solid în stare fin divizată sau cu amândoi, și apoi, dacă este necesar, dozarea produsului în formularea dorită. 37

Formulările din prezenta invenție, adecvate pentru o administrare orală, pot fi sub forma unor unități distincte cum sunt capsule, casete, tablete sau pastile, conținând fiecare 39 o cantitate predeterminată din compusul activ; sub formă de pulbere sau granule; sub formă de soluție sau suspensie într-un lichid apos sau un lichid neapos; sau sub forma unei emulsii 41 ulei-în-apă sau a unei emulsii apă-în-ulei. Compusul activ poate fi de asemenea administrat sub formă de bol, excipient sau pastă. 43

Formulările pentru administrare rectală pot fi sub forma unor supozitoare care incorporează substanța activă și agentul purtător, sau sub formă de clismă. 45

Formulările adecvate pentru administrare parenterală conțin în mod convenabil un ulei steril sau un preparat apos al compusului activ care este de preferință izotonic cu 47 sângele din recipient. Formulările transdermale pot fi sub forma unui plasture.

RO 120338 Β1

Formulările adecvate pentru administrare intraarticulară sau oftalmică pot fi sub forma unui preparat apos steril al substanței active care poate fi sub formă cristalină, de exemplu, o suspensie microcristalină apoasă. Formulări liposomale sau sisteme de polimer biodegradabil pot fi de asemenea utilizate pentru prezentarea substanței active atât în administrarea intraarticulară, cât și în cea oftalmică.

Formulările adecvate pentru administrarea topică sau oftalmică includ preparate lichide sau semilichide cum sunt alifii, loțiuni, geluri, aplicații locale, emulsii ulei-în-apă sau emulsii apă-în-ulei cum sunt creme unguente sau paste; sau soluții sau suspensii sub formă de picături.

Formulările adecvate pentru administrare în nas sau în cavitatea bucală includ pulberi, formulări care se auto-propulsează sau formulări sub formă de spray-uri, cum sunt aerosoli și substanțe atomizate.

Suplimentar față de componentele mai sus menționate, formulările din prezenta invenție pot include una sau mai multe componente adiționale, cum sunt diluanți, agenți de legare, agenți de stabilizare, etc.

Compozițiile pot conține suplimentar și alți compuși activi din punct de vedere terapeutic care se utilizează în mod obișnuit în tratamentul condițiilor patologice menționate mai sus cum ar fi alți imunorepresivi în tratamentul maladiilor imunologice sau substanțe steroide în tratamentul maladiilor dermatologice.

Invenția se referă, în continuare, la o metodă pentru tratarea pacienților care suferă de condițiile patologice menționate mai sus, numita metodă constând din administrarea la un pacient care are nevoie de un asemenea tratament a unei cantități eficiente din unul sau mai mulți compuși reprezentați prin formula I, singur sau în combinație cu unul sau mai mulți alți compuși activi din punct de vedere terapeutic utilizați în mod obișnuit în tratamentul numitelor condiții patologice. Tratamentul cu compuși din prezenta invenție și/sau cu alți compuși activi din punct de vedere terapeutic poate fi simultan sau la anumite intervale.

în tratamentul sistemic sunt administrate doze zilnice de la 0,001 până la 2 pg/kg corp, preferabil de la 0,02 până la 0,3 pg/kg corp de mamifer, de exemplu 0,003 până la 0,3 pg/kg corp dintr-un compus reprezentat prin formula I, corespunzând în general unei doze zilnice pentru un adult uman de la 0,2 până la 25 pg. în tratamentul topic al tulburărilor dermatologice se administrează unguente, creme sau loțiuni conținând de la 0,1 până la 500 pg/g, dar preferabil de la 0,1 până la 100 pg/g, dintr-un compus reprezentat prin formula

I. Pentru utilizare topică în oftalmologie se administrează unguente, picături sau geluri conținând de la 0,1 până la 500 pg/g, dar preferabil de la 0,1 până la 100 pg/g dintr-un compus reprezentat prin formula I. Compozițiile orale sunt formulate, preferabil sub formă de tablete, capsule sau picături, conținând de la 0,05 până la 50 pg, preferabil de la 0,1 până la 25 pg, de compus reprezentat prin formula I, per doză.

Se dau în continuare, exemple de compuși și compoziții nelimitative.

Preparate și Exemple

Compușii I exemplificați sunt prezentați în Tabelul 1, în timp ce materiile prime și intermediarii, reprezentați prin formulele generale I, III și IV sunt prezentați în Tabelul 2. Tabelul 3 prezintă compuși care sunt intermediari în interconversia ilustrată a Compușilor II. Structurile acestor intermediari sunt reprezentate în Schema 2 și reacțiile implicate sunt bine cunoscute în domeniul sintezei vitaminei D.

Sunt utilizate pe parcursul acestei descrieri următoarele abreviațiuni standard:

Me = metil; Et = etil; TBS = terț-butildimetilsilil.

RO 120338 Β1

Tabelul 1 1

Exemple de compuși reprezentați de formula structurală I.

(Sunt furnizate detalii pentru compuși la care este dat Numărul Exemplului; ceilalți compuși pot fi preparați folosind secvențe de reacții analoage din compusul corespunzător din Tabelul 2)

Numărul compusului	Numărul exemplului	Q	Configurația dublei legături
0101	01	ch2	E
0102	02	ch2	Z
0103	03	ch2	E
0104	04	ch2	Z
0105	05	(CH2)2	E
0106	06	(CH2)3	E
0107	07	(CH2)3	Z
0108	08	CH(OH)#	E
0109	09	CH(OH)##	E
0110	10	CH (Oet)#	E
0111	11	CH(OH)-CH2	E
0112	12	CH(OMe)-CH2	E
0113	13	(CH2)4	E
		ch2	E
		ch2	E
0114	14	ch2	E
	(14)	ch2	E
	(14)	ch2	E
		ch2	E
		ch2	E
0115	15	ch2	E
0116	16	ch2	E
		ch2	E
		ch2	E
		ch2	E

Notă la Tabelul 1 # Configurația 22: S; ## Configurația 22: R;

RO 120338 Β1

Tabelul 1 (continuare)

Numărul compusului	Y	X	R1	R2
0101	legătură simplă	OH	Me	Me
0102	legătură simplă	OH	Me	Me
0103	legătură simplă	OH	Et	Et
0104	legătură simplă	OH	Et	Et
0105	legătură simplă	OH	Et	Et
0106	legătură simplă	OH	Me	Me
0107	legătură simplă	OH	Me	Me
0108	legătură simplă	OH	Me	Me
0109	legătură simplă	OH	Me	Me
0110	legătură simplă	OH	Me	Me
0111	legătură simplă	OH	Et	Et
0112	legătură simplă	OH	Et	Et
0113	legătură simplă	OH	Me	Me
	legătură simplă	OH	-(CH2)4-
	legătură simplă	OH	etinil	etinil
0114	legătură simplă	OH	H###	ciclopropil
	legătură simplă	OH	1—Itttt ti tt 1 ΙΠ TrTT tr	ciclopropil
	legătură simplă	OH	H#####	ciclopropil
	legătură simplă	OH	H###	3-pentil
	legătură simplă	OH	Me	Me
0115	ch2	OH	Et	Et
0116	CH=CH(E)	OH	Et	Et
	cf2	OH	Et	Et
	(CH(OH)	OH	Et	Et
	legătură simplă	OH	1 * 11 i· 11 1—1 tt rt tt tt 1 Irt tt tVTT	1 -fluorociclo-propil

Notă la Tabelul 1 ### Amestec de epimeri; #### Configurație-R; ##### Configurație-S

RO 120338 Β1

Tabelul 2 1

Materii prime și intermediari reprezentați prin formulele generale II, III și IV.

(Detaliile sunt furnizate pentru compuși în care numărul exemplului de obținere este dat;

ceilalți compuși pot fi obținuți folosind secvențe de reacție analoage din compusul corespunzător II)

Numărul preparatului	Numărul compusului	Tipul	Q(a)
*	0201	II	legătură simplă
	0202	II	ch2
**	0203	II	(CH2)2
**	0204	II	(CH2)3
05	0205	II	CH(OEt)#
06	0206	II	CH(O-TBS)#
07	0207	II	CH(O-TBS)-CH2##
08	0208	II	CH(O-TBS)##
09	0301a	III	ch2
	0302a	III	ch2
10	0303a	III	(CH2)2
11	0304a	III	(CH2)3
11	0305a	III	(CH2)3
12	0306a	III	CH(O-TBS)#
13	0307a	III	CH(O-TBS)##
14	0308a	III	CH(OEt)#
15	0309a	III	CH(O-TBS)-CH2##
16	0301b	III	ch2
17	0302b	III	ch2
18	0303b	III	(CH2)2
19	0304b	III	(CH2)3
20	0305b	III	(CH2)3
21	306b	III	CH(O-TBS)#
22	307b	III	CH(O-TBS)##
23	308b	III	CH(OEt)#
24	309b	llll	CH(O-TBS)-CH2##
25	0401b	IV	ch2
26	0405b	IV	(CH2)2

RO 120338 Β1

Tabelul 2 (continuare)

Numărul preparatului	Numărul compusului	Tipul	Q(a)
27	0406b	IV	(CH2)3
28	0407b	IV	(CH2)3
29	0408b	IV	CH(O-TBS)#
30	0409b	IV	CH(O-TBS)##
31	0410b	IV	CH(OEt)#
32	0411b	IV	CH(O-TBS)-CH2##
33	0402b	IV	ch2
34	0401a	IV	ch2
35	0402a	IV	ch2
36	0403b	IV	ch2
37	0404b	IV	ch2
38	0207a	II	CH(O-TBS)-CH2##
39	0310a	III	CH(O-TBS)-CH2##
40	0310b	III	CH(O-OMeCH2##
41	0412b	IV	CH(O-OMeCH2##
42	0204a	II	(CH2)4
43	0311a	III	(CH2)4
44	0311b	III	(CH2)4
45	0431b	IV	(CH2)4
46	0312a	III	ch2
47	0312b	III	ch2
48	0414b	IV	ch2
49	0313b	III	ch2
50	0415b	IV	ch2
51	0314a	III	ch2
52	0314b	III	ch2
53	0416b	IV	ch2

Notă la Tabelul 2

Descrierile se referă la Schema 1, acolo unde sunt aplicabile.

* Materia primă, descrisă în: Calverley, M. J.,Tetrahedon, Voi. 43, pag. 4609-4619 (1987) ** Materia primă, descrisă în: Calverley, M. J. și Pedersen, H. Novei vitamin D analogues, WO 9.410.139-A1 (1994), Preparatele 1,2 și respectiv 3.

# Configurația-22: S ## Configurația-22: R

RO 120338 Β1

Tabelul 2 (continuare)

Numărul preparatului	Numărul compusului	Configurația dublei legături	Y(a)	W
★	0201
★*	0202
	0203
**	0204
05	0205
06	0206
07	0207
08	0208
09	0301a	E	legătură simplă	CO2Me
09	0302a	Z	legătură simplă	CO2Me
10	0303a	E	legătură simplă	CO2Me
11	0304a	E	legătură simplă	CO2Me
11	0305a	Z	legătură simplă	CO2Me
12	0306a	E	legătură simplă	CO2Me
13	0307a	E	legătură simplă	CO2Me
14	0308a	E	legătură simplă	CO2Me
15	0309a	E	legătură simplă	CO2Me
16	0301b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
17	0302b	Z	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
18	0303b	E	legătură simplă	CO(OH)(Et)2
19	0304b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
20	0305b	Z	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
21	0306b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
22	0307b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
23	0308b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
24	0309b	E	legătură simplă	CO(OH)(Et)2
25	0401b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
26	0405b	E	legătură simplă	CO(OH)(Et)2

RO 120338 Β1

Tabelul 2 (continuare)

27	0406b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
28	0407b	Z	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
29	0408c	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
30	0409b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
31	0410b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
32	0411b	E	legătură simplă	CO(OH)(Et)2
33	0402b	Z	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
34	0401a	E	legătură simplă	CO2Me
35	0402a	Z	legătură simplă	CO2Me
36	0403b	E	legătură simplă	CO(OH)(Et)2
37	0404b	Z	legătură simplă	CO(OH)(Et)2
38	0207a
39	0310a	E	legătură simplă	CO2Me
40	0310b	E	legătură simplă	CO(OH)(Et)2
41	0412b	E	legătură simplă	CO(OH)(Et)2
42	0204a
43	0311a	E	legătură simplă	CO2Me
44	0311b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
45	0413b	E	legătură simplă	CO(OH)(Me)2
46	0312a	E	legătură simplă	C(O)C3H5
47	0312b	E	legătură simplă	CH(OH)C3H5
48	0414b	E	legătură simplă	CH(OH)C3H5
49	0313b	E	ch2	CO(OH)(Et)2
50	0415b	E	ch2	CO(OH)(Et)2
51	0314a	E	CH=CH(E)	CO2Me
52	0314b	E	CH=CH(E)	CO(OH)(Et)2
53	0416b	E	CH=CH(E)	CO(OH)(Et)2

Notă la Tabelul 2

Descrierile se referă la Schema 1, acolo unde sunt aplicabile.

* Materia primă, descrisă în: Calverley, M. J., Tetrahedron, Voi. 43, pag. 4609-4619 (1987).

“ Materia primă, descrisă în: Calverley, M. J. și Pedersen, H. Novei vitamin D analogues, WO 9.410.139-A1 (1994), Preparatele 1, 2 și respectiv 3.

# Configurația-22: S ## Configurația-22: R

RO 120338 Β1

Schema 2

Tabelul 3

Intermediari utilizați în interconversia compușilor II (Schema 2) 27

Numărul preparatului	Numărul compusului	Configurația-22	n	R4
1	0001	R	0	-
1	0002	S	0	-
*	0003	R	1	Et
2a	0004	R	0	TBS
2b	0005	R	0	TBS
+	0006	R	1	TBS
2c	0006a	R	1	Me
*	0007	S	0	TBS
3a	0008	R	0	Et
3b	0009	R	0	TBS
	0010	R	1	TBS
3c	0010a	S	1	Me

RO 120338 Β1

Tabelul 3 (continuare)

Numărul preparatului	Numărul compusului	Configurația-22	n	R4
*	0011	S	0	TBS
4a	0014	S	0	Et
4b	0013	S	0	TBS
*	0014	R	1	TBS
4c	0014a	R	1	Me
*	0015	R	0	TBS

Notă la Tabelul 3

Descrierile se referă la Schema 2, acolo unde sunt aplicabile. Aductele de bioxid de sulf (compușii de la 0088 până la 0015) au fost formate și utilizate ca amestecuri epimerice la C₆.

Prima etapă în fiecare secvență este reacția cu reactiv Grignard CH₂=CH-(CH₂)_nMgBr, urmată de separarea intermediarului de la 001 până la 003 având configurația - 22, iar secvențele rămase sunt:

0001 -> 0004 -> 0008 ->0012 -> 0205;

0001 -> 0005 -> 0009 -> 0013 -> 0206;

0003 -> 0006 -> 0010 -> 0014 -> 0207;

0003 -> 0006a -> 0010a -> 0014a -> 0207a;

0002 -> 0007 -> 0011 -> 0015 -> 0208.

* Preparate prin reacții analoage față de preparatele ilustrate.

Generalități

Prin denumirea de eter se înțelege dietileter. Denumirea de eter de petrol se referă la fracția de pentan.

Tetrahidrofuranul (THF) a fost uscat pe sodiu/benzofenonă.

Reacțiile au fost efectuate, pe căi cunoscute, în atmosferă de argon în cazul în care nu este specificat altfel. Pentru purificarea pe coloană cromatografică a produselor este specificat doar eluentul final: în mod obișnuit eluția a început cu un amestec conținând mai mult eter de petrol.

Pentru spectrul de rezonanță magnetică nucleară ¹H (300 MHz) sunt menționate valorile de mutație chimică (δ) (în ppm), dacă nu se specifică altfel, pentru soluțiile de deuteriocloroform în raport cu tetrametilsilanul intern (δ = 0,00) sau cloroform (δ = 7,25). Valorile pentru un multiplet, fie că este definit (dublet (d), triplet (t), cvartet (q)) fie nu, (m) este dat pentru aproximativ punctul mediu în cazul în care nu este specificat domeniul (s = singlet, b = lat (broad)). Constantele de cuplare aparente (J) sunt estimate ca valori absolute (adesea la unitatea cea mai apropiată) în Hertz pentru multipleții definiți selectați. Următoarele spectre parțiale au fost comune tipurilor individuale de compuși descriși și ca urmare nu sunt raportate individual:

Pentru compușii de tipul II (incluzând intermediarii de la 0001 până la 0007 din Schema 2) și III; δ 0,05 (12H, bs), 0,86 (9H, s), 0,89 (9 H, s), 2,30 (1H, bd, J = 14), 2,55 (1H dd, J = 5; J = 14), 2,86 (1H, bd), 4,21 (1H, m), 4,52 (1H, m), 4,93 (1H, m), 4,98 (1H, m), 5,81 (1H, d, J= 11), 6,45 (1H,d, J= 11);

RO 120338 Β1 pentru compușii de tipul IV: 0,05 (12H, m), 0,87 (18 H, s), 2,20 (1H, dd), 2,44 (1H,1 dd), 2,81 (1H, bd, J = 11)4,18 (1H, m), 4,36 (1H, m), 4,85 (1H, m), 5,17 (1H, m), 6,00 (1H, d, J = 11), 6,22 (1H, d, J = 11);3 pentru compușii de tipul I: 2,31 (1H, dd, J = 6,5; J = 13), 2,59 (1H, dd, J = 3; J = 13), 2,83 (1H, dd, J=04; J = 11), 4,22 (1H, m), 4,42 (1H, m), 5,00 (1H, bs), 5,33 (1H, bs), 6,025 (1H,d, J = 11), 6,37 (1H, d, J = 11).

Unele sau toate semnalele caracteristice care nu sunt incluse în acest spectru comun7 sunt raportate pentru compușii individuali.

Preparatul 01: Compușii 0001 și 00029

La o soluție, menținută la o temperatură de aproximativ 25’C, de 2,013 g (3,5 mmol) de compus 0201 în 6 ml tetrahidrofuran uscat s-a adăugat prin intermediul unei seringi 911 mmol bromură de vinii magneziu 1M în tetrahidrofuran. După agitare la aceeași temperatură timp de 30 min, amestecul de reacție a fost porționat între eter și o soluție saturată de clorură13 de amoniu. Stratul organic a fost separat, spălat cu o soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de magneziu anhidru, apoi filtrat și concentrat în vacuum pentru a se obține 15 un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 100 g folosind drept eluant 20% eter în eter de petrol a condus la compusul din titlu. 17

0001 (primul elutat): δ 0,57 (3H, s), 0,83 (3H, d, J = 6,6), 1,25 până la 2 (14H, m), 2,07 (1H, J = 9), 4,41 (1H, bs), 5,13 (1H, dt, J = 11), 5,22 (1H, dt, J = 2; J = 17), 5,86 (1H,19 ddd, J = 5; J=11; J = 17);

0002: δ 0,58 (3H, s), 0,85 (3H, d, J = 7), 1,2 până la 2,1 (15H, m), 4,36 (1H, m), 5,221 (1H, bd, J = 11), 5,28 (1H, bd; J = 17), 5,92 (1H, ddd, J = 5;J = 11;J = 17).

Preparatul 02a: Compusul 000423

La o soluție, menținută la o temperatură de aproximativ -40'C, de 0,35 g, 1,33 mmol

18-coroană-6 și 0,637 g, 1,06 mmol compus 0001 în 20 ml tetrahidrofuran uscat s-a adăugat,25 în porțiuni, 3 mmol hidrură de potasiu, dispersie 20% în ulei, urmată de 1 ml, 14 mmol brometan. După agitare la aceeași temperatură, timp de 10 min și apoi la temperatura de 27 25°C timp de 90 de min, amestecul de reacție a fost porționat între eter și apă. Stratul organic a fost separat, spălat cu soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de 29 magneziu anhidru, apoi filtrat și concentrat în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 150 g, eluant 20% eter în eter 31 de petrol, a condus la produsul din titlu.

δ 0,54 (3H, s), 0,8 până la 0,97 (3H, d), 1,05 până la 1,97 (13H, m), 1,16 (3H, t, J =33

7), 2,04 (1H, t, J = 9), 3,25 (1H, m), 3,51 (1H, m), 3,75 (1H, dd, J = 3,4; J = 7), 5,13 (1H, m), 5,15 (1H, m), 5,76 (1H, m).35

Preparatul 02b: Compusul 0005

La o soluție menținută la o temperatură de aproximativ 5°C, de 0,75 ml, 6,5 mmol 2,6-37 lutidină și 0,955 g, 1,67 mmol compus 0001 în 5 ml diclormetan uscat s-a adăugat cu ajutorul unei seringi 0,860 g, 3,3 mmol terț-butildimetilsilil trifluorometansulfonat. După o agitare la 39 aceeași temperatură timp de 1 h, amestecul de reacție a fost porționat între eter și apă. Stratul organic a fost separat, spălat cu o soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat 41 de magneziu anhidru, apoi filtrat și concentrat în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 100 g, eluant 20% eter în eter 43 de petrol a condus la compusul din titlu.

Preparatul 2c: Compusul 0006a 45

La o soluție menținută la o temperatură de aproximativ -40”C, de 0,35 g, 1,33 mmol

18-coroană-6 și 0,617 g, 1,0 mmol compus 0003 în 20 ml tetrahidrofuran uscat s-a adăugat 47 în porțiuni 3 mmol hidrură de potasiu, 20% dispersie în ulei, urmată de 0,9 ml, 14 mmol

RO 120338 Β1 iodometan. După agitare la aceeași temperatură, timp de 10 min și apoi la temperatura de 25’C, timp de 90 de min, amestecul de reacție a fost porționat între eter și apă. Stratul organic a fost separat, spălat cu o soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de magneziu anhidru, apoi filtrat și concentrat în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 0150 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Preparatul 03a: Compusul 0008

La o soluție, menținută la o temperatură de aproximativ -40°C, de 0,630 g, 1 mmol compus 0004 în 6 ml eter s-a adăugat rapid 100 mmol bioxid de sulf lichid. După agitare la aceeași temperatură, timp de 10 min și apoi la temperatura de -WC, timp de 40 min, amestecul de a fost concentrat în vacuum. Reziduul a fost uscat în vacuum avansat pentru a se obține un produs solid. Fără vreo purificare ulterioară, acest produs conținând compusul din titlu a fost utilizat în faza următoare.

Preparatul 03b: Compusul 0009

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog procedurii Preparatului 03a, dar folosind 1,060 g, 1,48 mmol compusul 0005 în 3 ml eter drept materie primă.

Preparatul 03c: Compusul 0010a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog cu Preparatului 03a, dar folosind 0,820 g, 1,3 mmol compusul 0006a în 3 ml eter drept materie primă.

Preparatul 04a: Compusul 0012

O soluție, menținută la temperatura de aproximativ -70°C, de compus 0008 obținut ca produs brut din 0,630 g, 1 mmol compus 0004 în 8 ml diclormetan și 3 ml metanol a fost tratată cu oxigen ozonizat până când materia primă nu a mai putut fi detectată cu ajutorul cromatografiei în strat subțire. Soluția a fost apoi purjată cu azot și s-au adăugat 0,4 g trifenilfosfină. După agitarea la aceeași temperatură timp de 10 min și după aceea la temperatura de 0°C, timp de 30 min, amestecul de reacție a fost concentrat în vacuum. Reziduul a fost uscat sub vacuum ridicat pentru a se obține un solid. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 100 g, eluant 30% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Preparatul 04b: Compusul 0013

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 03a, dar utilizând drept materie primă compusul 0009 obținut ca produs brut din 1,48 mmol compus 0005 în 12 ml diclormetan și 4 ml metanol. S-au folosit 0,650 g trifenilfosfină.

Preparatul 04c: Compusul 0014a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 03a, dar folosind ca materie primă compusul 0010a obținut ca produs brut din 1,3 mmol compus 0006a în 12 ml diclormetan și 4 ml metanol. S-a folosit 0,650 g trifenilfosfină.

Preparatul 05: Compusul 0205

La un amestec menținut sub agitare puternică și la o temperatură de aproximativ 25°C, de 0,300g, 0,43 mmol compus 0012 în 5 ml toluen s-au adăugat 5 ml soluție apoasă de bicarbonat de sodiu 5% și amestecul a fost degazat. După agitare la aceeași temperatură timp de 5 min și apoi la temperatura de 85°C timp de 90 de min, amestecul de reacție a fost porționat între eter și apă. Stratul organic a fost separat, spălat cu soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de magneziu anhidru și concentrat în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 30 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

RO 120338 Β1 δ 0,59 (3Η, s), 0,75 până la 0,95 (3H, d), 1,15 până la 2,15 (14 H, m), 1,26 (3 H, t, 1 J =7), 3,42 (1H, m), 3,71 (1H, m), 3,82 (1H, m), 9,72 (1H, d, J = 1)

Preparatul 06: Compusul 0206 3

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog procedurii Preparatului 05, dar folosind 0,468 g, 0,59 mmol compus 0013 drept materie primă în 7 ml toluen și 7 ml soluție 5 apoasă de bicarbonat de sodiu 5%. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe 50 g silicagel, eluant 20% eter în eter de petrol a condus la compusul din titlu. 7 δ 0,06 (6 H, s), 0,55 (3 H, s), 0,8 până la 0, 95 (3H, d), 0,94 (9H, s), 1,15 până la 2,1 (14H, m), 4,09 (1H,m), 9,62 (1H,m).9

Preparatul 07: Compusul 0207

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 06, dar folosind 11 compusul 0014 ca materie primă.

δ 0,05 (6H, s), 0,49 (3H, s), 0,85 (3H, d), 0,88 (9H, s), 1,15 până la 2,05 (14 H, m),13

2,52 (2H, m), 4,24 (1H, m), 9,77 (1H, t, J = 2).

Preparatul 08: Compusul 020815

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 06, dar folosind compusul 0015 drept materie primă.17

Preparatul 09: Compușii 0301a și 0302a

La un amestec menținut la o temperatură de aproximativ -20°C, de 10 mg acid 19 benzoic și 0,646 g, 1,93 mmol metil(trifenilfosforaniliden) acetat în 8 ml metanol uscat s-a adăugat prin picurare 0,630 g, 1,07 mmol compusul 0202 în 2 ml tetrahidrofuran uscat. După 21 agitare la aceeași temperatură timp de 15 min și apoi la temperatura de 22’C peste noapte, amestecul de reacție a fost porționat între acetat de etil și apă. Stratul organic a fost separat, 23 spălat cu soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de magneziu anhidru și concentrat în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei 25 pe silicagel, 100 g, eluant 20% acetat de etil în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

0301a (primul elutat): δ 0,56 (3H, s), 0,84 (3H, d), 1,1 până la 2,15 (15H, m), 2,4927 (1H, m), 3,71 (3H, s), 5,8 (1H, d, J = 17), 6,94 (1H, m);

0302a: δ 0,57 (3 H, s), 0,75 până la 1 (3 H, d), 1,2 până la 2,1 (14 H, m), 2,6 (1H, m),29

2,86 (1H, m), 3,69 (3 H, s), 5,82 (1H, m); 6,25 (1H, d).

Preparatul 10: Compusul 0303a31

La o soluție menținută la temperatura de aproximativ 25°C, din 0,360 g, 0,6 mmol compus 0203 în 20 ml toluen degazat s-a adăugat într-o singură porțiune 0,400 g, 1,2 mmol 33 metil(trifenilfosforaniliden) acetat. După agitare la aceeași temperatură timp de 5 min și apoi la temperatura de 100°C, timp de 2 h, amestecul de reacție a fost parțial concentrat în 35 vacuum și diluat cu eter și metanol. Soluția a fost lăsată de o parte să cristalizeze și a fost filtrată pentru a se obține compusul din titlu sub formă de cristale aciculare având punct de 37 topire 82-83°C;

δ 0,53 (3H m, s), 0,85 (3H, d), 1,2 până la 2,15 (17H, m), 2,27 (1H, m), 3,72 (3H, s), 39

5,81 (1H, d, J = 16), 6,97 (1H, dt, J = 7; J = 16).

Preparatul 11: Compușii 0304a și 0305a 41

La o soluție, menținută la temperatura de aproximativ 25’C, de 0,110 g, 0,16 mmol compus 0204 în 6 ml toluen degazat s-a adăugat într-o singură porție 0,130 g, 0,39 mmol 43 metil(fenilfosforaniliden) acetat. După agitare la aceeași temperatură timp de 5 min și apoi la temperatura de 100°C timp de 3 h, amestecul de reacție a fost parțial concentrat în 45 vacuum și diluat cu eter. Soluția a fost lăsată în repaus să cristalizeze și apoi filtrată și concentrată în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul 47 cromatografiei pe coloană de silicagel, 30 g, eluant 0,5% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu. 49

RO 120338 Β1

0304a: δ 0,52 (3H, s), 0,83 (3 H, d, J = 6,4), 1,1 până la 2,05 (18H, m), 3,71 (3H, s),

5,8 (1H, d, J = 16), 6,97 (1H, dt, J = 7; J = 16);

0305a (primul elutat): δ 0,52 (3H, s), 0,84 (3H, d), 1,1 până la 2,05 (18H, m), 2,63 (2H, m), 3,69 (3H, s), 5,76 (1H,

Preparatul 12: Compusul 0306a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 11, dar folosind 0,520 g, 0,72 mmol compus 0206 drept materie primă. S-a folosit 0,500 g,1,5 mmol metil (trifenilfosforaniliden) acetat.

δ 0,05 (56H, s), 0,48 (3H, s), 0,8 până la 0,95 (3H, d), 0,92 (9H, s), 1,1 până la 2,05 (14H, m), 3,74 (3H, s)4,24 (1H, m), 5,94 (1H, dd, J = 1,5; J = 16), 6,95 (1H,dd,J = 5; J = 16).

Preparatul 13: Compusul 0307a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 12, dar folosind compusul 0208 drept materie primă.

Preparatul 14: Compusul 0308a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 11, darfolosind 0,216 g, 0,34 mmol compus 0205 drept materie primă. S-a folosit 0,220 g, 0,66 mmol metil (trifenilfosforaniliden) acetat. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 0,5% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,53 (3H, s), 0,85 (3H, d), 1,15 până la 2 (13H, m), 1,18 (3H, t, J = 7), 2,05 (1H, t, J = 9), 3,31 (1H, m), 3,48 (1H, m), 3,74 (3 H, s), 4,01 (1H, m), 5,93 (1H, dd, J = 1, J = 16), 6,87 (1H, dd, J = 6; J = 16).

Preparatul 15: Compusul 0309a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 11, darfolosind 0,045 g, 0,06 mmol compus 0207 drept materie primă în 2 ml toluen degazat. S-a folosit 0,045 g, 0,12 mmol metil (trifenilfosforaniliden) acetat. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 30 g, eluant 10% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,05 (6 H, s), 0,46 (3 H, s), 0,83 (3H, d, J = 7), 0,88 (9H, s), 1,2 până la 2,1 (14H, m), 2,32 (2H, m), 3,72 (3H, s), 3,81 (1H, d, J = 16), 6,9 (1H, dt, J = 8; J = 16).

Preparatul 16: Compusul 0301b

La o soluție, menținută la temperatura de aproximativ -20°C, de 0,091 g, 0,14 mmol compus 0301a în 5 ml eter uscat s-a adăugat cu ajutorul unei seringi 1,6 mmol metil-litiu 1,6 M în eter. După agitare la aceeași temperatură timp de o oră, amestecul de reacție a fost răcit brusc cu apă și porționat între eter și apă. Stratul organic a fost separat, spălat cu soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de magneziu anhidru și concentrat în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 50 g, eluant 05% acetat de etil în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,55 (3H, s), 0,81 (3H, d), 1 până la 2,06 (16H, m), 1,29 (6H, s), 2,3 (1H, m), 5,57 (2H, m).

Preparatul 17: Compusul 0302b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar folosind 0,184 g, 0,286 mmol compus 0302a drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat. S-a utilizat drept eluant 10% acetat de etil în eter de petrol.

δ 0,55 (3H, s), 0,85 (3H, d), 1 până la 2,08 (15H, m), 1,35 (6H, s), 2,18 (1H, m), 5,28 (1Hm), 5,5 (1H, d,J = 12).

Preparatul 18: Compusul 0303b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, darfolosind 0,237 g, 0,36 mmol compus 0303a în 3 ml tetrahidrofuran uscat drept materie primă și 0,9 mmol etillitiu 1,4M în eter ca reactiv. S-a folosit ca eluant 20% eter în eter de petrol.

RO 120338 Β1 δ 0,52 (3H, s), 0,85 (6H, t, J = 7,5), 0,85 (3H, d),1,1 până la 2,25 (19H, m), 1,51 (2H,1 q, J = 7,5), 1,52 (2H, q, J = 7,5), 5,38 (1H, d, J = 16), 5,57 (1H, dt, J = 7; J = 16).

Preparatul 19: Compusul 0304b3

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, darfolosind 0,067 g,

0,1 mmol compus 0304a drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat și 0,5 mmol metil- 5 litiu 1,6 M în eter. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant

20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.7 δ 0,52 (3H, s), 0,83 (3H, d, J = 6,5), 1,1 până la la 2,1 (21H, m), 1,29 (6H, s), 5,59 (2H, m).9

Preparatul 20: Compusul 0305b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, darfolosind 0,055 g, 11 0,082 mmol compus 0305a drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat și metil-litiu

1,6 M în eter. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel (15 g), eluant 13 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,53 (3H, s), 0,83 (3H, d, J = 6,4), 1,1 până la 2,1 (19H,m), 1,36 (6H, s), 2,15 până 15 la 2,37 (2H, m), 5,3 (1H, dt, J = 7,4; J = 12), 5,47 (1H, bd, J = 12).

Preparatul 21: Compusul 0306b 17

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar folosind 0,100 g,

0,13 mmol compus 0306a drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat și 0,64 mmol 19 metil-litiu 1,6 M în eter. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu. 21 δ 0,00 (3H, s), 0,03 (3H, s), 0,49 (3H, s), 0,82 (3H, d), 0,9 (9H, s), 1,15 până la 2,05 (15H, m), 1,31 (6H, s), 4,08 (1H, dd, J = 3; J = 6), 5,6 (1H, dd, J = 6; J = 16), 5,68 (1H, d, J 23 = 16).

Preparatul 22: Compusul 0307b 25

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar folosind 0,073 g,

0,094 mmol compus 0307a drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat și 0,5 mmol 27 metil-litiu 1,6 M în eter. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu. 29 δ 0,00 (3H, s), 0,03 (3H, s), 0,54 (3H, s), 0,8 (3H, d, J = 6,8), 0,89 (9H, s), 1,15 până la 2,05 (15 H, m), 1,32 (6H, s), 4,3 (1H, m), 5,64 (1H, dd, j = 5; J = 16), 5,79 (1H, dd, J = 1,31

J = 16).

Preparatul 23: Compusul 0308b33

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar folosind 0,133 g,

0,19 mmol compus 0308a drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat și 0,96 mmol 35 metil-litiu 1,6 M în eter. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.37 δ 0,53 (3H, s), 0,85 (3H, d), 1 până la 1,97 (14H, m), 1,16 (3H, t, J = 7), 1,33 (6H, s),

2,03 (1H, t, J = 9,5), 3,24 (1H, m) 3,77 (1H, dd, J = 3; J = 7), 3,48 (1H, m), 3,77 (1H, dd, J 39 = 3, J = 7), 5,57 (1H, dd, J = 7; J = 16), 5,73 (1H, d, J = 16).

Preparatul 24: Compusul 0309b41

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar folosind 0,024 g,

0,03 mmol compus 0309a în 2 ml tetrahidrofuran uscat și 0,1 mmol etil-litiu 1.2M în eter ca 43 reactiv. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 10% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.45 δ 0,05 (6H, s), 0,46 (3H, s), 0,83 (3H, d), 0,85 (6H, t), 0,89 (9H, s), 1,15 până la 2,05 (15 H, m), 1,51 (4H, q, J = 7,5), 2,2 (2H, m), 3,82 (1H, t, J = 7), 5,42 (1H, d, J = 16), 5,53 (1H,47 dt, J = 7, J = 16).

RO 120338 Β1

Preparatul 25: Compusul 0401b

La o soluție, menținută la temperatura de aproximativ 10’C, de 0,091 g, 0,141 mmol compus 0301b în 10 ml dicloretan degazat s-a adăugat 0,091 g, 0,512 mmol antracen și 0,1 ml trietilamină. După ce a fost iradiat cu ajutorul unei lămpi de ultra-violete (de tipul Hanau TQ 718Z2) la aceeași temperatură timp de 22 de min, amestecul de reacție a fost parțial concentrat în vacuum și diluat cu eter de petrol. Soluția a fost filtrată și concentrată în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 50 g, eluant 20% acetat de etil în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,54 (3H, s), 0,81 (3H, d), 1,15 până la 2,05 (16 H, m), 1,3 (6 H, s), 2,32 (1H, m), 5,57 (2 H, m).

Preparatul 26: Compusul 0405b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25, dar folosind 0,120 g, 0,17 mmol compus 0303b drept materie primă în 7 ml diclormetan cu 0,150 g, 0,84 mmol antracen. Durata de iradiere a fost de 35 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 10% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Preparatul 27: Compusul 0406b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25, dar folosind 0,063 g, 0,093 mmol compus 0304b drept materie primă în 4 ml toluen degazat cu 0,75 g, 0,42 mmol antracen. Durata de iradiere a fost de 35 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,51 (3H, s), 0,82 (3H, d, J = 6,4), 1,05 până la 2,05 (21H, m), 1,29 (5H, s), 5,59 (2H, m).

Preparatul 28: Compusul 0407b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 27, dar folosind 0,033 g, 0,049 mmol compus 0305b drept materie primă cu 0,033 g, 0,049 mmol antracen. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Preparatul 29: Compusul 0408b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 27, dar folosind 0,080 g, 0,103 mmol compus 0306b drept materie primă cu 0,030 g, 0,17 mmol antracen. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,01 (3H, s), 0,02 (3H, s), 0,48 (3H, s), 0,82 (3H, d, J = 6,8), 0,88 (9H, s), 1,15 până la 2,0 (15H, m), 1,3 (3H, s), 1,31 (3H, s), 4,07 (1H, dd, J = 3; J = 6), 5,6 (1H, dd, J = 6; J = 16), 5,67 (1H,d, J = 16).

Preparatul 30: Compusul 0409b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 27, dar folosind compus 0307 drept materie primă.

Preparatul 31: Compusul 0410b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 27, dar folosind 0,060 g, 0,087 mmol compus 0308b drept materie primă cu 0,020 g, 0,12 mmol antracen.

δ 0,52 (3H, s), 0,86 (3H, d), 1,05 până la 1,95 (14H, m), 1,16 (3H, t, J = 7), 1,32 (3H, s), 1,98 (1H, t, J = 9), 3,24 (1H, m), 3,48 (1H, m), 3,76 (1H, dd, J = 3; J = 7), 5,57 (1H, dd, J = 7;J = 16), 5,73 (1H, d, J = 16).

Preparatul 32: Compusul 0411b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 27, dar utilizând 0,020 g, 0,025 mmol compus 0309b drept materie primă cu 0,010 g, 0,06 mmol antracen.

RO 120338 Β1

Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel (15 g) eluant 10% eter în eter 1 de petrol, a condus la compusul din titlu.

Prepararea 33: Compusul 0402b 3

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25 dar utilizând 0,137 g,

0,213 mmol compus 0302b drept materie primă în 6 ml diclormetan cu 0,137 g, 077 mmol 5 antracen. Durata de iradiere a fost de 25 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 50 g, eluant 0,5% acetat de etil în eter de petrol, a condus la compusul 7 din titlu.

δ 0,54 (3H, s), 0,8 până la 1,0 (3H, d), 1,15 până la 2,08 (15H, m), 1,36 (6H, s), 2,18 9 (1H, m), 2,59 (1H, m), 5,28 (1H, m), 5,5 (1H, d, J = 12).

Preparatul 34: Compusul 0401a 11

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25, dar folosind 0,389 g,

0,6 mmol compus 0302a drept materie primă în 6 ml diclormetan cu 0,389 g, 2,2 mmol 13 antracen. Durata de iradiere a fost de 30 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe silicagel, 50 g, eluant 0,2% acetat de etil în eter de petrol, a condus la compusul din titlu. 15 δ 0,54 (3H, s), 0,84 (3H, d), 1,2 până la 2,15 (15H, m), 2,45 (1H, m), 3,72 (3H, s), 5,8 (1H, d, J = 16), 6,94 (1H, d). 17

Preparatul 35: Compusul 0402a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25, dar folosind 0,153 g, 19

0,238 mmol compus 0,301a drept materie primă în 6 ml diclormetan cu 0,153 g, 0,858 mmol antracen. Durata de iradiere a fost de 25 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe 21 coloană de silicagel, 50 g, eluant 0,1% acetat de etil în eter de petrol, a condus la compusul din titlu. 23 δ 0,56 (3H, s), 0,8 până la 1,0 (3H, d), 1,2 până la 2,1 (14H, m), 2,61 (1H, m), 2,84 (1H, m), 3,69 (3 H, s), 5,8 (1H, d), 6,24 (1H, m).25

Preparatul 36: Compusul 0403 b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar folosind 0,252 g,27

0,392 mmol compus 0401a ca materie primă în 8 ml tetrahidrofuran (THF) uscat și 2,4 mmol etil-litiu 1,4M în eter drept reactiv. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe silicagel, 50 g, 29 eluant 05% acetat de etil în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,54 (3 H, s), 0,83 (3 H, d), 0,85 (6 H, t), 1,2 până la 2,1 (20H, m), 2,2 (1H, dd), 2,3531 (1H, m), 5,35 (1H, d, J = 16), 5,54 (1H, m).

Preparatul 37: Compusul 0404b33

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar utilizând

0,082 g, 0,127 mmol compus 0402a drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat (THF) 35 și etil-litiu 1,4 M în eter drept reactiv. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 50 g, eluant acetat de etil 0,2% în eter de petrol, a condus la compusul din titlu. 37 δ 0,54 (3H, s), 0,85 (3H, d), 0,89 (6H, t), 1,15 până la 2,08 (19H, m), 2,18 (1H, m),

2,6 (1H, m), 5,25 (1H, d, J = 12), 5,39 (1H, m).39

Preparatul 38: Compusul 0207a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 06, dar folosind 41 compusul 0014a drept materie primă.

Preparatul 39: Compusul 0310a43

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 11, dar folosind 0,050 g,

0,08 mmol compus 0207a drept materie primă în 2 ml toluen degazat. A fost utilizat 0,045 g,45

0,12 mmol metil (trifenilfosforaniliden) acetat. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 30 g, eluant 10% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.47

RO 120338 Β1

Preparatul 40: Compusul 0310b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar folosind 0,034 g, 0,05 mmol compus 0310a în 2 ml tetrahidrofuran uscat drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat și 0,1 mmol etil-litiu 1,2 M în eter drept reactiv. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 10% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Preparatul 41: Compusul 0412b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 27, dar folosind 0,018 g, 0,025 mmol compus 0310b drept materie primă cu 0,010 g, 0,06 mmol antracen. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 10% erter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Preparatul 42: Compusul 0204a

Compusul din titlu a fost preparat printr-un procedeu analog procedurii de omologare iterativă descrisă în: Calverley, M. J. și Pedersen, H. Novei vitamin D analogues, \NO 9.410.139-A1 (1994), Preparatul 3, dar folosind tosilat preparat din compusul 10 al acestui brevet. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 100 g, eluant acetat de etil 0,5% în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,53 (3H, s),0,83 (3H, d), 1,1 până la 2,05 (20H, m), 2,41 (2H, dt), 9,76 (1H, t).

Preparatul 43: Compusul 0311a

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 11, darfolosind 0 380 g, 0,6 mmol compus 0204a drept materie primă. S-au folosit 0,500 g, 1,5 mmol metil (trifenilfosforaniliden) acetat.

δ 0,52 (3H, s), 0,83 (3H, d, J = 6,4), 1,1 până la 2,05 (20H, m), 2,16 (2H, m), 3,71 (3H, s), 5,8 (1H, d, J = 16), 7,0 (1H, dt, J = 7; J = 16).

Preparatul 44: Compusul 0311b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, darfolosind 0,069 g, 0,1 mmol compus 0311a drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat și 0,5 mmol metillitiu 1,6 M în eter. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 20% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,52 (3H, s), 0,83 (3H, d, J = 6,5),1,1 până la 2,1 (23H, m), 1,29 (6H, s), 5,6 (2H,m).

Preparatul 45: Compusul 0413b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25, dar utilizând 0,055 g, 0,08 mmol compusul 0311b drept materie primă în 4 ml toluen degazat cu 0,038 g, 0,21 mmol antracen. Timpul de iradiere a fost de 35 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 20% eter îh eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

δ 0,51 (3H, s), 0,82 (3H, d, J = 6,4), 1,5 până la 2,05 (23H, m), 1,29 (6H, s), 5,6 (2H, m).

Preparatul 46: Compusul 0312a

La o soluție, menținută la o temperatură de aproximativ 25°C, de 0,120 g, 0,20 mmol compus 0202 în 6 ml toluen degazat, s-a adăugat într-o porție 0,138 g, 0,40 mmol ciclopropilcarbonilmetilentrifenilfosforan. După agitarea la aceeași temperatură, timp de 5 min și apoi la temperatura de 100’C, timp de 3 h, amestecul de reacție a fost parțial concentrat în vacuum și diluat cu eter. Soluția a fost lăsată de o parte, apoi filtrată și concentrată în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 30 g, eluant facându-se cu 0,5% eterîn eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

RO 120338 Β1 δ 0,57 (3Η, s), 0,8 până la 0,9 (3H, d), 0,8 până la 0,9 (4H, m), 1,07 (1H, m), 2,52 1 (1H, m), 6,21 (1H, d, J = 16), 6,88 (1H, ddd).

Preparatul 47: Compusul 0312b 3

La o soluție, menținută la temperatura de aproximativ 5°C de 0,090 g, 0,14 mmol compus 0312a în 1 ml tetrahidrofuran și 2 ml metanol conținând 0,2 mmol clorură de ceriu 5 heptahidrat s-a adăugat într-o singură porțiune 0,02 g, 0,5 mmol borohidrură de sodiu. După agitare la aceiași temperatură timp de 10 min, amestecul de reacție a fost porționat între 7 acetat de etil și apă. Stratul organic a fost separat, spălat cu soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de magneziu anhidru, și concentrat în vacuum pentru a se obține un 9 produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 30 g, eluant acetat de etil 10% în eter de petrol, a condus la compusul din titlu sub forma unui amestec 11 de aproximativ 1:1 de epimeri. Epimerii pot fi separați cu ajutorul cromatografiei în această fază în cazul în care este necesar. 13 δ 0,22 (1H, m), 0,32 (1H, m), 0,5 (2H, m), 0,56 (3H, s), 0,8 până la 0,9 (3H, d), 0,98 (1H, m), 2,34 (1H, m), 3,46 (1H, m), 5,52 (1H, dd, J = 6,5; J = 15), 5,62 (1H, dt, J = 7; J= 15).15

Preparatul 48: Compusul 0414 b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25, dar folosind 0,078 g, 17 0,12 mmol compus 0,312b drept materie primă în 5 ml diclormetan cu 0,015 g, 0,084 mmol antracen.19

Durata de iradiere a fost de 35 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant facându-se cu acetat de etil 10% în eter de petrol, a condus21 la compusul din titlu.

Preparatul 49: Compusul 0313b23

La o soluție, menținută la temperatura de aproximativ -25’C, de 155 mg, 0,60 mmol 3-etil-3-hidroxipentilfenil sulfonă în 4 ml tetrahidrofuran uscat s-a adăugat cu ajutorul unei 25 seringi litiu diizopropilamidă, 3 ml, 1,2 mmol dintr-o soluție de 0,4 M în tetrahidrofuran / hexan în raport de 3:1. După agitare la aceeași temperatură timp de 30 de min, amestecul de 27 reacție a fost răcit la temperatura de -40’C în vederea adăugării unei soluții din 0,293 g, 0,50 mmol compusul 0202 în 2 ml tetrahidrofuran. După agitare la aceeași temperatură timp 29 de 30 mins-a adăugat prin picurare 0,15 ml, 1,3 mmol clorură de benzoil și amestecul a fost lăsat să se încălzească la temperatura camerei timp de 30 min suplimentare. Amestecul de 31 reacție a fost porționat între eter și apă. Stratul organic a fost separat, spălat cu soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de sodiu anhidru, apoi filtrat și concentrat în 33 vacuum pentru a se obține un produs uleios. Acesta a fost redizolvat în 2 ml acetat de etil și diluat cu 12 ml metanol, saturat cu și conținând fosfat acid disodic suspendat. 35

La această soluție, menținută la temperatura de aproximativ 5’C, s-a adăugat 4 g amalgam de sodiu de aproximativ 5% și agitarea a fost continuată la aceeași temperatură 37 timp de 15 h. Amestecul de reacție a fost porționat între acetat de etil și apă (decantată din mercur) și stratul organic a fost separat, uscat cu soluție saturată de clorură de sodiu, uscat 39 pe sulfat de magneziu anhidru, apoi filtrat și concentrat în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 50 g, eluant 41 10% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Preparatul 50: Compusul 0415b 43

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25, dar folosind 0,120 g,0,18 mmol compus 0313b drept materie primă în 7 ml diclormetan cu 0,075 g, 45 0,042 mmol antracen. Durata de iradiere a fost de 35 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 10% eter în eter de petrol, a condus la 47 compusul din titlu.

RO 120338 Β1

Preparatul 51: Compusul 0314a

La o soluție, menținută la temperatura de aproximativ 25’C din 1,00 g, 1,70 mmol compusul 0202 în 6 ml cloroform s-a adăugat într-o singură porțiune 0,645 g, 1,79 mmol metil 4-(trifenilfosforaniliden) crotonat. După agitare la aceeași temperatură timp de 5 min și apoi la temperatura de 60°C timp de 24 de h, amestecul de reacție a fost parțial concentrat în vacuum și diluat cu eter. Soluția a fost lăsată în repaus pentru a cristaliza, apoi filtrată și concentrată în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 100 g, eluant acetat de etil 0,1% în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Preparatul 52: Compusul 0314b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 16, dar folosind 0,20 g, 0,3 mmol compus 0314a în 3 ml tetrahidrofuran uscat drept materie primă în 3 ml tetrahidrofuran uscat și 0,9 mmol etil-litiu 1, 4 M în eter drept reactiv. A fost folosit drept eluant 20% eter în eter de petrol.

Preparatul 53: Compusul 0416b

Compusul din titlu a fost preparat în mod analog preparatului 25, darfolosind 0,104 g, 0,15 mmol compusul 0314b drept materie primă în 7 ml diclormetan cu 0,075 g, 0,42 mmol antracen. Durata de iradiere a fost de 35 de min. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant 10% eter în eter de petrol, a condus la compusul din titlu.

Exemplele de la 01 până la 16

A fost folosită următoarea procedură generală pentru îndepărtarea grupărilor protectoare silii și pentru izolare și purificare: la o soluție, menținută la temperatura de aproximativ 5°C, din aproximativ 0,02 până la 0,16 mmol compusul IV ca materie primă în 2 până la 5 ml; x ml tetrahidrofuran uscat s-au adăugat, într-o singură porție, aproximativ 0,2 până la 1,6 mmol, y g fluorură de tetrabutilamoniu trihidrat. După agitare la aceeași temperatură timp de 5 min și apoi la temperatura de 60*C, timp de o oră, amestecul de reacție a fost porționat între acetat de etil și soluție de carbonat acid de sodiu 5%. Stratul organic a fost separat, spălat cu soluție saturată de clorură de sodiu, uscat pe sulfat de magneziu anhidru, apoi concentrat în vacuum pentru a se obține un produs uleios. Purificarea cu ajutorul cromatografiei pe coloană de silicagel, 15 g, eluant acetat de etil, a condus la compusul din titlu.

Exemplul 01:1(S),3(R),25-Trihidroxi-20(S)-9,10-seco-colesta-5(Z), 7(E), 10(19)-23(E)tetraen (Compusul 0101)

Materie primă: Compusul 0401b, 0,063 g, 0,098 mmol; x = 5; y = 0,308.

δ 0,56 (3H, s), 0,82 (3H, d), 1,2 până la 2,1 (18H, m), 1,31 (6H, s), 2,31 (1H, m), 5,57 (2H, m).

Exemplul 02:1(S),3(R),25-Trihidroxi-20(S)-9,10-seco-colesta-5(Z), 7(E), 10(19), 23(Z) -tetraen (Compusul 0102)

Materie primă: Compusul 0402 b, 0,024 g, 0,037 mmol; x =5; y = 0,132.

δ 0,56 (3H, s), 0,86 (3H, d), 1,1 până la 1,2 (17 H, m), 1,37 (6H, s), 2,18 (1H, m), 2,6 (1H, m), 5,28 (1H, m), 5,51 (1H, d, J = 12).

Exemplul 03: 26,27-Dimetil-1(S),3(R),25-tri-hidroxi-20(S)-9,10-seco-colesta-5 (Z), 7(E), 10(19), 23(E)-tetraen (Compusul 0103)

Materie primă: Compusul 0403b, 0,108 g, 0,16 mmol; x = 5; y = 0,51.

δ 0,57 (3H, s), 0,83 (3H, d), 0,86 (6H, t), 1,15 până la 2,1 (22H, m), 2,34 (1H, m), 5,36 (1H, d), 5,55 (1H, m).

RO 120338 Β1

Exemplul 04: 26,27-Dimetil-1(S),3(R),25-tri-hidroxi-20(S)-9,10-seco-colesta-5(Z)71 (E),10(19),23(Z)-tetraen (Compusul 0104)

Materie primă: Compusul 0404b, 0,036 g, 0,054 mmol; x = 5, y = 0,17.3 δ 0,56 (3H, s), 0,86 (3H, d). 0,9 (6H, t), 1,2 până la 2,1 (21H, m), 2,18 (1H, m), 2,6 (1H, m), 5,26 (1H, d, J = 12), 5,4 (1H, m).5

Exemplul 05: 1(S),3(R)-Dihidroxi-20(S)-(5'-hidroxi-5 '-etil-3'(E)-hepten-T-il)-9,10seco-pregna-5(Z),7(E),10(19)-trien (Compusul 0105)7

Materie primă: Compusul 0405b, 0,048 g, 0,07 mmol; x = 4; y = 0,10.

δ 0,54 (3H, s), 0,85 (6H, t, J = 7,5), 0,85 (3H, d, J = 6),1,5 până la 2, 25 (21H, m),9

1, 51 (2H, J = 7,5), 1,52 (2H, q, J = 7,5), 5,38 (1H, d, J = 16), 5, 57 (1H, dt, J = 7; J = 16). Exemplul 06: 1(S),3(R)-Dihidroxi-20(S)-(6'-hidroxi-6'-metil-4'-(E)-hepten-T-il)-9,1011 seco-pregna-5(Z)-7(E),10(19)-trien (Compusul 0106)

Materie primă: Compusul 0406b, 0,043 g, 0,06 mmol; x = 3; y = 0,21.13 δ 0,54 (3H, s), 0,83 (3H, d), 1,05 până la 2,1 (23H, m), 1,3 (6H, s), 5,6 (2H,m).

Exemplul 07:1(S),3(R)-Dihidroxi-20(S)-(6'-metil-4'(Z)-hepten-1'-il)-9,10-seco-pregna- 15 5(Z), 7(E), 10(19)-trien (Compusul 0107)

Materialul de pornire: Compusul 0407 b, 0,026 g, 0,04 mmol; x = 3; y = 0,13.17 δ 0,54 (3H, s), 0,83 (3H, d), 1,05 până la 2,1 (21H, m), 1,36 (6H, s),2,3 (2H, m), 5,3 (1H, dt, J = 7; J = 12), 5,47 (1H, bd, J = 12).19

Exemplul 08: 1(S),3(R),22(S),25-Tetrahidroxi-20(R)-9,10-seco-colesta-5 (z), 7(E), 10(19),23(E)-tetraen (Compusul 0108)21

Materie primă: Compusul 0408b, 0,069 g, 0,09 mmol; x = 3; y = 0,25.

δ 0,57 (3 H, s), 0,82 (3 H, d, J = 6,5), 1,2 până la 2,1 (18H, m), 1,33 (6H, s), 4,42 (1H, 23 m), 5,67 (1H, dd, J = 5; J = 16), 5,81 (1H, dd, J = 1; J = 16).

Exemplul 09: 1(S),3(R),22(R),25-Tetrahidroxi-20(R)-9,10-seco-colesta-5(2), 7(E),25

10(19),23(E)-tetraen (Compusul 0109)

Materie primă: Compusul 0409b, 0,039 g, 0,05 mmol; x = 3; y = 0,1027 δ 0,58 (3H, s), 0,85 (3H, d, J = 6,8), 1,2 până la 2,1 (18H, m), 1,35 (6H, s), 4,36 (1H, t, J = 4,5), 5,74 (1H, dd, J = 5, 5; J = 16), 5,87 (1H, d, J = 16).29

Exemplul 10: 22(S)-Etoxi-1(S),3 (R),25-trihidroxi-20(R)-9,10-seco-colesta-5 (2),

7(E), 10(19),23(E)-tetraen (Compusul 0110)31

Materie primă: Compusul 0410b, 0,040 g, 0,058 mmol; x = 3; y = 0,07.

δ 0,54 (3H,s), 0,86 (3H, d, J = 7), 1,1 până la 2,1 (17H, m), 1,17 (3H, t, J = 7), 1,3433 (6H, s), 3,25 (1H, m), 3,48 (1H, m), 3,76 (1H, dd, J = 3; J = 7), 5,58 (1H, dd, J = 7; J = 16), 5,74 (1H, d, J = 16).35

Exemplul 11:1(S),3(R)-Dihidroxi-20(R)-(1 '(R)-5'-dihidroxi-5'-etil-3'(E)-hepten-1'-il)-

9,10-seco-pregna-5(Z),7(E)10(19)-trien (Compusul 0111)37

Materie primă: Compusul 0411b, 0,015 g, 0,018 mmol; x - 2; y - 0,05.

Exemplul 12:1(S)_l3(R)-Dihidroxi-20(R)-(1'(R)-metoxi-5'-hidroxi-5'-etil-3'(E)-hepten-T-39 il)-9,10-seco-pregna-5(Z), 7(E),10(19)-trien (Compusul 0112)

Materie primă: Compusul 0412b, 0,015 g, 0,021 mmol; x = 2; y = 0,05.41

Exemplul 13: 1(S),3(R)-Dihidroxi-20(S)-(7'-hidroxi-7'-metil-5'(E)-octen-1'-il)-9, 10seco-pregna-S(Z), 7(E), 10(19)-trien (Compusul 0113)43

Materie primă: Compusul 0413b, 0,034 g, 0,05 mmol; x = 3; y = 0,21.

δ 0,4 (3H, s), 0,83 (3H, d), 1,05 până la 2,1 (25H, m), 1,3 (6H, s), 5,6 (2H, m).45

Exemplul 14: 1(S),3(R)-Dihidroxi-20(S)-(4'-ciclopropil-2'(E)-buten-T-il)-9,10-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trienă (Compusul 0114)47

Materie primă: Compusul 0414b, 0,035 g, 0,053 mmol; x = 3; y = 0,15.

RO 120338 Β1 δ 0,22 (1 Η, πί), 0,32 (1 Η, m), 0,5 (2Η, m), 0,56 (3Η, s), 0,83 (3Η, d), 0,98 (1H, m),

2,34 (1H, m), 3,46 (1H, m), 5,52 (1H, dd), 5,62 (1H, dt).

Exemplul 15: 1(S),3(R)-Dihidroxi-20-(S)-(5'-hidroxi-5'-etil-2'(E)-hepten-1'-il)-9,10seco-pregna-5(Z), 7(E), 10(19)-trienă (Compusul 0115)

Materie primă: Compusul 0415 b, 0,050 g, 0,073 mmol; x = 3; y = 0,18.

Exemplul 16: 1 (S),3(R)-Dihidroxi-20 (S)-(6'-hidroxi-6 '-etilocta-2'(E),4'(E)-dien-1-il)-

9,10-seco-pregna-5(Z),7(E)10(19)-trienă (Compusul 0116)

Materie primă: Compusul 0416b, 0,052 g, 0,075 mmol; x = 3; y = 0,20.

Exemplul 17: Capsule conținând Compusul 0110

Compusul 0110a fost dizolvat în ulei de arahide până la o concentrație finală de 1 pg de compus 0110 /ml de ulei. Zece părți în greutate de gelatină, cinci părți în greutate de glicerină, 0,08 părți în greutate de sorbat de potasiu, și paisprezece părți în greutate de apă distilată au fost amestecate împreună sub încălzire și formate în capsule de gelatină moale. Acestea au fost apoi umplute fiecare cu 100 microlitri de compus 0110 în soluție de ulei, astfel încât fiecare capsulă să conțină 0,1 pg de compus 0110 C.

Exemplul 18: Cremă dermatologică conținând Compusul 0110 în 1 g de ulei de migdale au fost dizolvate 0,05 mg de compus 0110. La această soluție s-a adăugat 40 g de ulei mineral și 20 g de ceară de albine autoemulsifiată. Amestecul a fost încălzit până la lichefiere. După adăugarea a 40 ml de apă fierbinte, amestecul a fost bine amestecat. Crema rezultată conține aproximativ 0,5 pg de compus 0110 /g cremă.

Claims (9)

1. Revendicări

   1. Derivat analog al vitaminei D, reprezentat prin formula I:

   R1 caracterizat prin aceea că X estre hidrogen sau hidroxi; R¹ și R² reprezintă metil sau etil; Q este metilen, etilen, tri- sauie/ra-metilen, care, opțional, pot fi substituite cu o grupare oxi, -OR³, în care R³ este hidrogen, metil sau etil; Y este fie o legătură simplă fie o grupare hidrocarbilen C^-C^ saturată sau nesaturată; și unul sau mai mulți atomi de carbon din R¹, R², și/sau Y pot fi în mod opțional substituite cu unul sau mai mulți atomi de fluor sau cu o grupare hidroxil.
2. 2. Derivat reprezentat prin formula I, în conformitate cu revendicarea 1, caracterizat prin aceea că X este hidroxi, iar Y este o legătură simplă.
3. 3. Derivat reprezentat prin formula I, în conformitate cu revendicările 1-2, caracterizat prin aceea că R¹ și R² sunt identici și reprezintă metil sau etil.
4. 4. Derivat analog al vitaminei D, în conformitate cu oricare dintre revendicările 1 și 2, care este un diastereoizomeral acestuia, în formă pură sau un amestecai unor asemenea diastereoizomeri, caracterizat prin aceea că compusul poate fi recuperat fie direct sub formă cristalină, fie sub formă de solvat, cum ar fi un hidrat sau sub o formă amorfă.

   RO 120338 Β1
5. 5. Derivat în conformitate cu revendicarea 1, caracterizat prin aceea că reprezintă:1

   a) 1(S),3(R),25-Trihidroxi-20 (S)-9,10-seco-colesta-5(Z),7(E),10(19),23(E)- tetraen,3

   b) 1(S),3(R)-Dihidroxi-20(S)-(6'-hidroxi-6'-metil-4'(E)-hepten-1'-il)-9,10-seco- pregna-5(Z),7(E),10(19)-trien,5

   c) 1 (S),3(R),22(S),25-Tetrahidroxi-20(R)-9,10-seco-colesta-5(Z),7(E), 10 (19),23(E)-tetraen,7

   d) 22(S)-Etoxi-1(S),3(R),25-trihidroxi-20(R)-9,10-seco-colesta-5(Z),7(E)_l10 (19),23(E)-tetraen9

   e) 1(S),3(R)-Dihidroxi-20(R)-(r(R)-metoxi-5'hidroxi-5'etil-3'(E)-hepten-1'-il)-9,10- seco-pregna-5(Z),7(E),10(19)-trien11
6. 6. Procedeu de obținere a derivatului analog al vitaminei D, reprezentat prin formula

   I, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că o aldehidă aleasă dintre 1 (S),3(R)-b/s-13 (te/j-butildimetilsililoxi)-20(S)-formilmetil-9,10-seco-pregna-5(E),7(E),10(19)-trien sau 1(S),3(R)-bis-(terț-butildimetilsililoxi)-20(S)-(2-formiletil)-9,10-seco-pregna-5(E),7(E),10(19)- 15 triensau 1(S),3(R)-bis-(terț-butildimetilsililoxi)-20(R)-(3-formilpropil)-9,10-seco-pregna-5(E), 7(E),10(19)-trien sau derivatul corespunzător al uneia dintre acestea în care gruparea 17 metilen legată la C₂₀ poartă un substituient metoxi, etoxi sau terț-butildimetilsililoxi, reacționează fie cu un reactiv Wittig conținând o grupare carbonil cum este metil (trifenil- 19 fosforaniliden) acetat iar compusul rezultat reacționeză cu un compus organolitiu, cu un reactiv Grignard sau cu un agent reducător, fie cu un litiu derivat al unei alchilfenilsulfone în 21 mod opțional hidroxilată, reacția fiind urmată de o eliminare reductivă, de exemplu cu amalgam de sodiu, pentru a se obține un produs, care este supus etapei opționale de izo- 23 merizare cu lumină ultravioletă în prezența unui agent de sensibilizare a tripletului, de preferință antracen, și îndepărtarea grupărilor silii, de preferință, cu fluorură de tetra- 25 butilamoniu.
7. 7. Compoziție farmaceutică, caracterizată prin aceea că aceasta conține o cantitate 27 eficientă din unul sau mai mulți dintre compușii conform revendicărilor 1...5 și purtători netoxici și/sau agenți auxiliari, acceptabili farmaceutic. 29
8. 8. Compoziție farmaceutică, în conformitate cu revendicarea 7, pentru administrare în doză unică, caracterizată prin a ceea că aceasta conține de la 0,1 ppm până la 0,1 % în 31 greutate dintr-un compus reprezentat prin formula I.
9. 9. Utilizarea oricăruia dintre derivații din revendicările 1 ...5, în vederea obținerii unui 33 medicament pentru tratamentul sau profilaxia bolilor caracterizate prin diferențierea anormală a celulelor și/sau proliferarea celulelor ca de exemplu psoriazis și alte tulburări de cherati- 35 nizare, dermatoze asociate cu HIV, vindecarea rănilor, cancer, incluzând cancerul de piele și a maladiilor sau a dezechilibrării sistemului imunologic, precum reacția gazdă contra grefă 37 și grefă contra gazdă și respingerea transplantului și maladiile autoimunologice cum este erythematosus lupus discoid și sistemic, diabetul mellitus și dermatozele cronice autoimune, 39 precum scleroderma și pemphigus vulgaris, și a bolilor inflamatorii, cum este artrita reumatoidă și astmul, precum și a unui număr de alte stări de boală incluzând hiperparatiroidism, 41 în mod deosebit hiperparatiroidismul secundar asociat cu insuficiență renală, deteriorare cognitivă sau demență senilă cum ar fi maladia Alzheimer și alte maladii neurodegenerative, 43 hipertensiune, acnee, alopecie, atrofia pielii, cum ar fi atrofia pielii indusă de steroizi, îmbătrânirea pielii, incluzând îmbătrânirea pielii datorită expunerii la lumină, și, de asemenea, 45 pentru stimularea osteogenezei și tratarea/prevenirea osteoporozei și osteomalaciei.