RO116768B1

RO116768B1 - Compozitie lipozomica

Info

Publication number: RO116768B1
Application number: RO97-00792A
Authority: RO
Inventors: Michael Mezei; Jozsef Gaal; Gabor Szekacs; Gyula Szebeni; Tamasne Marmarosi; Kalman Magyar; Jozsef Lengyel; Istvan Szatmari; Agnes Turi
Original assignee: Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet
Priority date: 1994-10-24
Filing date: 1995-10-20
Publication date: 2001-06-29
Also published as: EE03418B1; ZA958999B; PL183104B1; CZ287349B6; CZ114797A3; PT788349E; HUT76053A; WO1996012472A1; FI971743A0; EP0788349A1; FI971743A; YU67195A; KR970706797A; RU2159106C2; NO971870D0; TW412420B; IL115754A; SK51797A3; CN1163563A; YU49313B

Abstract

A liposome composition which comprises 0.1...40% by weight of (-)-N-alpha-dimethyl-N-(2-propynylphenylethylamine) and/or a salt thereof as an active ingredient, 2...40%by weight of lipids, preferably phospholipids,, 30...90% by weight of water, with or without up to 10% by weight of cholesterol, up to 20% by weight of an alcohol, up to 25% by weight of a glycol, up to 3% by weight of an antioxidant, up to 3% by weight of a preserving agent, up to 2% by weight of a viscosity influencing agent, up to 50% by weight cyclodextrin or a cyclodextrin derivative and, optionally, usual filling and diluting agents and other pharmaceutically acceptable auxiliary compounds is claimed.

Description

Invenția se referă la o compoziție lipozomică, utilizată în terapeutică.

Se cunosc un număr mare de compoziții lipozomice și procedee de preparare a acestora.

Asemenea compoziții sunt, de fapt, “sisteme de eliberare a medicamentelor” (DDS], după cum a descris G.Gregoriadis ș.a. (Receptor-mediated targeting ofdrugs, Plenum Press, New York, 243-266, 1980). Ele conțin ingredientul activ similar cu starea de încapsulare în una sau mai multe membrane lamelare, adică în lipozomi. Absorbția bună și biodispunerea ingredientului(ților) activ(i) poate fi influențată, printre altele, de compoziție și de metoda de preparare a lipozomilor, astfel că ei pot elibera ingredientul activ într-o suprafață anumită. în compozițiile lipozomice ingredientul activ este înconjurat de una sau mai multe lamele lipide, care servesc drept purtător al ingredientului activ.

Veziculele lipide multilamelare (MLV) au fost preparate prima dată de către Bancham ș.a. [J.Mol.Biol. 13,238-252, 1965). Când substanțele biologic active sunt încapsulate în vezicule lipide unilamelare, substanțele solubile în apă pot fi încapsulate cu eficiență mai mică, datorită volumului mic de apă încapsulat în SUV (vezicule lipide unilamelare mici) (US 4089801).

Veziculele lipide unilamelare au fost preparate prin alte metode, adică prin injectarea etanolului (S.Batzri și E.D.Korn:B/ochem.B/ophys.Acta.298:1015-1019, (1973) sau eterului (D.Deamer și A.D.Bancham:Biochem. Biophys.Acta 443,629634, (1976) astfel că soluția de lipide dintr-un solvent organic s-a injectat rapid într-o soluție tampon și în felul acesta s-au format spontan lipozomii unilamelari. Metoda este rapidă și larg folosită, dar conduce la preparate lipozomice diluate și la o eficacitate slabă a încapsulării.

Lipozomii unilamelari pot fi formați și prin sistemul de îndepărtare a detergentului (H.G.Weder și O.Zumbuehl, Liposome Technology, ed.G.Gregoriadis, CRC Press Inc., Boca Raton, Florida, vol.1, Cap.7.pg.79-107, (1984)), în cursul căruia lipidele și alte substanțe sunt dizolvate împreună cu detergenții, și apoi detergenții se îndepărtează prin dializă.

încapsularea lipozomică multilamelară se efectuează conform brevetului US 4234871 (Papahadjopoulos), prin tehnica evaporării cu fază inversă (REV), și conform brevetului US 4016100 (Suzuki), prin liofilizarea dispersiei lipidice apoase și a substanței active biologic.

în WO 93/20934 este prezentată prepararea unei suspensii lipozomice apoase stabile, care poate fi stocată timp de 6 luni la 40°C.

în timpul preparării compozițiilor lipozomice de mai sus, dispersia lipidelor și faza apoasă sunt contactate pe un material inert solid, în majoritatea cazurilor perle de sticlă (US 4485054).

Conform brevetului US 4761288, inclus ca referință în prezenta invenție, sistemele multifazice se prepară prin îmbunătățirea absorbției substanțelor biologic active cu solubilitate slabă în apă, care conțin ingredientul activ sub formă de soluție suprasaturată, în formă solidă, și încapsularea în vezicule lipidice multilamelare. Veziculele, soluția și forma solidă a compusului biologic activ se dispersează într-un gel hidrocoloidal. Gelul hidrocoloidal se prepară prin metoda de preparare a veziculelor lipide multilamelare, descrisă în brevetul US 4485054, inclus în mod special ca referință. Astfel, compozițiile lipozomice se pot prepara la concentrații mai mari ale ingredientului activ decât cele la care ne-am putea aștepta pe baza hidro- și/sau liposolubilității.

RO 116768 Bl în brevetul US 4937078 sunt prezentate compoziții lipozomice de aplicare locală a ingredienților activi, anestezici sau analgezici. S-a găsit că ingredienții activi 50 aplicați local sunt mai eficienți în stare încapsulată lipozomică decât compozițiile uzuale de unguente, creme sau lichide. Formarea lipozomuluî însuși s-a efectuat conform brevetelor US 4485054 și 47612878.

Prepararea tuturor compozițiilor lipozomice a fost orientată spre ingredienții activi cu solubilitate mică în apă, în primul rând pentru creșterea capacității de 55 absorbție și a concentrației locale și/sau pentru absorbția dorită.

Compoziția lipozomică conform invenției, conține ca ingredient activ 0,1 ...40% în greutate(-)-N-a-dimetil-N-(2-propinilfeniletilamină) și/sau o sare a acesteia, 2...40% în greutate lipide, de preferință fosfolipide, 30...90% în greutate apă, cu sau fără, până la 10% în greutate colesterol, până la 20% în greutate un alcool, până la 25% 6o în greutate un glicol, până la 3% în greutate un antioxidant, până la 3% în greutate un agent de conservare, până la 2% în greutate un agent de influențare a viscozității, până la 50% în greutate ciclodextrină sau un derivat de ciclodextrină și, opțional, agenți de umplere și de diluție uzuali și alți compuși auxiliari, acceptabili farmaceutic.

Compoziția conține 0,1.. .20% în greutate, de preferință 0,1... 10% în greutate (-)-N-a- 65 dimetil-N-{2-propinilfeniletilamină) și/sau o sare a acestuia; conține cel puțin 10% în greutate(-)-N-a-dimetil-N-(2-propinilfeniletilamină) și/sau o sare a acesteia într-o veziculă uni sau multilamelară și până la 100% în greutate (-)-N-a-dimetil-N-{2-propinilfeniletilamină) în soluție sau în formă solidă; conține ca lipidă o fosfolipidă, de preferință fosfatidil colină și/sau lisofosfatidil colină și/sau fosfatidil serină și/sau fosfatidil 70 etanolamină și/sau fosfatidil inozitol; conține ca alcool, de preferință, etanol sau izopropanol, ca glicol, de preferință, propilen glicol sau polietilen glicol, ca antioxidant, de preferință, tocoferol sau butilhidroxianisol, ca agent de conservare, de preferință, germaben și ca agent de influențare a viscozității, de preferință carbopol; conține ca ciclodextrină și/sau un derivat de ciclodextrină, de preferință, α-, β-, γ-ciclodextrină, 75 un polimer ciclodextrinic solubil în apă, un derivat ciclodextrinic metilat, hidroxipropilat sau succinilmetilat sau orice amestec al acestora; se folosește pentru tratamentul bolii Alzheimer, bolii Parkinson, depresiei, accidentului vascular cerebral, afecțiunilor locomotorii sau mielitelor.

Prezenta invenție se referă la prepararea compozițiilor lipozomice din selegilină 8 o sau din sărurile acesteia, care sunt ușor solubile în apă și solvenți (1g/3 ml apă, 1g/5 ml în cloroform sau 1g/3 ml în metanol), la aplicațiile terapeutice orale, parenterale sau locale, eventual în compoziții transdermice cu eliberare controlată.

Selegilină este o compoziție farmaceutică cunoscută, comercializată sub denumirea de Jumex, Deprenyl, Eldepryl sau L-Deprenyl, având eficacitate mare, de 85 exemplu în tratamentul tuberculozei sau în modularea imunității/A.Dow:The Deprenyl Story, Toronto: Stoddart (1990); Inhibitors of Monoamine Oxidase B, Ed.l.Szeleny, Birkhauser Verlag, Basel-Boston-Berlin, 237-358(1993)/-Unul dintre efectele importante îl constituie efectul antidepresiv, psihostimulator și cel de inhibare MA0, mai precis, efectul de inhibare selectivă a MAO-B. Se cunosc mai multe procedee de pre- 90 parare, vezi de exemplu brevetele HU 151090, 154655 și 187775. L-Deprenylul a fost aprobat de FDA în 1989, ca agent pentru tratamentul bolii Parkinson.

Compoziția lipozomică conform invenției conține, de preferință, 0,1 la 40% în greutate selegilină (-)-[N-a-dimetil-N-(2-propinilfeniletilamină)] și/sau o sare a acesteia,

RO 116768 Bl până la 40% în greutate lipide, de preferință fosfolipidă, O până la 10% în greutate colesterol, O până la 20% în greutate alcool, O până la 25% în greutate glicol, O până la 3% în greutate antioxidant, O până la 3% în greutate agent de conservare, O până la 2% în greutate agent de influențare a viscozității, O până la 50% în greutate ciclodextrină sau un derivat de ciclodextrină și 30 până la 90% în greutate apă.

Compozițiile lipozomice conform invenției conțin, de preferință, 0,1 la 20%, mai preferat 0,1 la 10% în greutate selegilină și/sau o sare a acesteia, și cel puțin 10% în greutate din această cantitate sub formă de vezicule lipide uni- și/sau multilamelare și restul cantității până la 100% în stare liberă și/sau ca soluție saturată. Compoziția lipozomică conform invenției conține ca lipide, de preferință, o fosfolipidă, de preferință, fosfatidil colină și/sau lisofosfatidil-colină și/sau fosfatidil serină și/sau fosfatidil etanolamină și/sau fosfatidil inozitol; ca alcool, de preferință, etanol sau izopropanol; ca glicol, de preferință, un propilen glicol sau polietilen glicol; ca antioxidant se preferă tocoferolul sau BHA (butilhidroxianisol); ca agent de conservare se preferă germaben (Internațional Speciality Product, Vienna, Austria); ca agent de influențare a viscozității se preferă o hidrocarbură sau un derivat de celuloză, de preferință, carbopol (Carbomer, Goodrich, Cleveland); ca ciclodextrină și/sau ca derivat de ciclodextrină se preferă α-, β- sau γ- ciclodextrină, un polimer ciclodextrinic solubil în apă, un derivat ciclodextrinic metilat, hidroxipropilat sau succinilmetilat, sau orice amestec al acestora.

Compoziția conform invenției poate conține compoziția lipozomică, dacă se dorește, împreună cu agenți de umplutură, de diluare sau auxiliari, care se folosesc în mod uzual. Ea poate fi administrată, de preferință, oral, parenteral sau transdermic. Când se prepară o formulare transdermică, compoziția lipozomică poate fi aplicată pe suprafața unui purtător, de preferință pe o folie, film sau plasture.

Compoziția lipozomică poate fi preparată așa cum s-a descris în US 4485054 și 4761288, solventul organic se evaporă dintr-un amestec de solvent organic conținând componente liposolubile, care cuprind cel puțin o lipidă, și selegilină, apoi se combină cu o soluție apoasă de componente solubile în apă, sub agitare. Ca amestec de solvenți organici se preferă amestecul de cloroform și metanol.

Compozițiile lipozomice conform invenției pot fi folosite, de preferință, pentru tratamentul bolii lui Alzheimer, bolii Parkinson, depresiilor, accidentelor vasculare, afecțiunilor motorii sau mielitelor.

Compoziția lipozomică ca atare conține ingredientul activ în vezicule unilamelare și/sau multilamelare, multifazice, în stare liberă și în soluție saturată, adică este un sistem lipozomic de eliberare a medicamentelor multifazic. Sistemul pilozomic astfel obținut este stabil și poate fi diluat cu apă. Proprietățile lui reologice pot fi variate, de la o stare lichidă diluată la una gelatinoasă.

Din punct de vedere farmacologic, scopul urmărit a fost acela de a prepara compoziții lipozomice care să conțină selegilină și care să reprezinte sisteme de eliberare controlată a medicamentelor, astfel încât să dea posibilitatea administrării dozelor exacte prin tratament transdermic chiar la o dozare de o dată pe săptămână. Modul de administrare și doza depinde, printre altele, de boala care trebuie tratată (boala lui Alzheimer, boala lui Parkinson, depresia, accidentul vascular, afecțiuni motorii sau mielite), de gravitatea acesteia, de starea generală a pacientului etc.

RO 116768 Bl

Examinarea farmacologică și farmacocinetică in vivo, a compozițiilor lipozomice s-a efectuat pe cobai cu greutatea între 300 și 350 g (linia charless-River, SPF: calitatea patogenului specific) prin tratament local, pe grupe formate dint trei animale alese aleator dintre animalele de testat.

A doua fază a experimentului s-a efectuat pe porci de 20 până la 22 kg, prin tratarea a trei animale cu câte o doză unică a uneia dintre formulări.

Animalele au fost lăsate separat, în cuști din lemn, la o temperatură medie $ de 23°C, și au fost alimentate cu același nutreț și adăpate.

S-au testat compozițiile din exemplele 1, 2, 3 și 6.

Preparatele lipozomice Deprenyl s-au aplicat pe spatele fără păr (la cobai) sau pe pielea gâtului (la porci) pe o suprafață de 1,5 x 1,5 și respectiv 3x3 cm² și, după uscare timp de câteva minute, s-a fixat Tegardem (produs de 3M, SUA). Drept control, porcii au fost tratați oral, cu tablete de selegilină, o dată pe zi.

în timpul evaluării, s-a măsurat inhibarea MAOÎn sânge, creier, ficat și intestine, apoi s-a măsurat concentrația ingredientului activ și a metaboliților săi în sânge. Acumularea ingredientului activ și a metaboliților săi în diferite organe ale porcului (sânge, creier, inimă, ficat, rinichi, plămâni și splină) s-a examinat după tratare cu lipozomi-selegilină, marcați cu izotopul ³H, prin tehnica de detectare a radioactivității.

în probele de sânge s-a determinat concentrația de ser înainte de tratament și la 6, 24, 48, 72, 96, 120, 144 și la 168 ore după administrare. S-au măsurat cantitatea de selegilină și a metaboliților săi și activitatea MAO-B a plăcuțelor.

Plasturii Tagederm s-au îndepărtat după 6 ore și, din extractul alcoolic, s-a determinat cantitatea de selegilină neabsorbită.

După terminarea experimentelor, s-a determinat și activitatea MA0 din creierul izolat, din ficat și din intestinele animalelor sacrificate. Prin determinarea activității MAO-A și MAO-B s-a examinat și selectivitatea inhibării enzimei.

Concentrația combinată a Deprenylului și a metaboliților săi s-a măsurat în sânge și în organele izolate: creier, plămâni, splină, ficat, inimă, stomac, intestinul subțire și gros, și în rinichii ale animalelor sacrificate, cât și pe suprafața pielii unde s-a efectuat tratamentul lipozomic. Probele de sânge s-au luat la intervale determinate din canthus, în cazul cobailor, și din vena jugulară, în cazul porcilor.

La sfârșitul celei de-a șaptea zi cobaii au fost sacrificați și s-a luat probă de sânge imediat, direct din inimă. în cazul porcilor, probele de sânge s-au luat înainte de sacrificare, în modul menționat anterior.

Organele și țesuturile îndepărtate s-au măsurat și omogenizat cu un volum de 4 ori mai mare de soluție fiziologică de clorură de sodiu. S-au pipetat 3 x 5 μ\ în cuve conținând 2 ml solune 350 și 0,5 ml izopropanol. Probele s-au prelucrat în modul descris la probele de sânge.

Radioactivitatea organelor s-a determinat prin scintilație, datele obținute dând cantitatea totală de Deprenyl măsurabilă și cantitatea de metaboliți.

Cantitatea de medicament rămasă pe parafilm și Tegaderm s-a determinat tot prin tehnică radioactivă.

Radioactivitatea specifică s-a determinat din probele preparatelor lipozomice originale, care s-au folosit pentru calculul valorilor din organe și țesuturi.

Activitatea MA0 în creier s-a determinat prin metoda Wurtman și Axelrod/Biochem.Pharmacol. 12, 1414-1419(1963)/și conținutul de proteină al omogenizatelor s-a determinat prin metoda lui Lowry ș.a./J.biol.Chem. 193,265275(1951)/.

140

145

150

155

160

165

170

175

180

185

RO 116768 Bl

Activitatea MAO a plăcuțelor s-a examinat prin metoda lui Willberg și Oreland/Med. Biol.54,137-144(1976)/.

Concentrația de selegilină și din metaboliții săi, a celei de amfetamină, metamfetamină și dezmetil-selegilină, s-a determinat prin cromatografie de gaz.

Rezultatele farmacologice biologice sunt prezentate în următoarele figuri.

Fig. 1 și 2 prezintă nivelul principalului metabolit al selegilinei în sânge, adică metamfetamina, după o aplicare transdermică a compoziției lipozomice care conține selegilină.

Când s-a aplicat compoziția lipozomică unilamelară cu o distribuție mai mică a veziculelor, conform exemplului 6, absorbția și metabolismul este rapid și după 24 ore s-a măsurat nivelul din sânge în funcție de doză.

Lipozomii multilamelari, cu mărimea particulelor mai mare în intervalul de distribuție (exemplele 1 la 3), produc un nivel în sânge retardat, mai lent; componentele, având un număr mai mic de lamele, asigură un nivel relativ ridicat în sânge timp de 72 ore și compoziția multilamelară asigură un nivel în sânge măsurabil chiar după 168 ore (Fig.2).

în cazul aceleiași compoziții, se poate afirma că compoziția care asigură o absorbție rapidă a produs o inhibare MAO stabilă, în timp ce absorpția lentă produce o inhibare care se regenerează relativ rapid în sânge; (Fig.3 și 4). Date similare s-au măsurat și în creier (Fig.5 și 6).

Nivele similare în sânge s-au măsurat în testele radioactive la cobai (selegilină împreună cu metaboliții ei) (Fig.7). în cazul lipozomilor cu absorpție lentă, pot fi măsurate nivele semnificative în organe, în ciuda faptului că nivelul în sânge descrește după 168 ore în creier, fiind important în ceea ce privește efectul, ficatul jucând un rol important atât în metabolism, cât și în toate celelalte organe liofilice (Fig. 8 și tabelul). Aceste organe pot juca rol de depozit care eliberează ingredientul activ ulterior. Intestinele conțin o cantitate relativ mică de substanță, susținând în felul acesta datele de inhibare și de lipsă a inhibării MAO-A (Fig.5). în Fig. 9 (tabelul) se compară nivelele măsurate în organe cu cantitatea de substanțe acumulate în piele. Se poate vedea că, deși semnificativ, peste 10 mg/g pot fi măsurate în organe, care sunt mai mari decât datele cunoscute postmortem (linia întreruptă în figură); în piele, există încă rezerve semnificative, care să asigure o rezervă de ingredient activ pentru o durată lungă. Dozele diferite, 10 și 140 mg, produc o diferență semnificativ mai mare în sânge (de aproximativ 100 ori) decât în creier (numai de 2 la 3 ori) (Comparativ, Fig.7 și 8).

Compozițiile lipozomice conținând selegilină prezintă următoarele avantaje.

Ingredientul activ evită tractul gastro-intestinal, producând o descreștere semnificativă în inhibarea enzimei MAO-A concentrată acolo și care joacă un rol important în metabolismul tiraminei, deoarece ea nu întâlnește ingredientul activ.

Prin orice altă cale de administrare decât cea orală (intravenoasă, intramusculară, picături oftalmice, spray nazal, evaporator, etc.), ingredientul activ evită vena portă și astfel primul metabolism de trecere. în acest fel, se produce o creștere a nivelului de seligilină și o descreștere a nivelului de metabolit, iar inhibarea MAO-A scade. Este puțin probabil să se producă efectul de “brânză”. Se pot aplica doze mai mari, fără a se produce efecte secundare și, de exemplu, indicația antidepresivă poate fi lărgită. Metaboliții sunt stimulați și produc insomnie, nivelul scăzut al acestora însemnând scăderea efectelor secundare.

RO 116768 Bl

Când sunt administrate transdermic, pielea stochează cantitatea de ingredient activ necesară pentru absorpția continuă, într-o manieră care nu limitează funcția ei.

Absorbția compoziției lipozomice (în funcție de formulare) durează aproximativ 1 la 20 minute, după care orice legare sau acoperire (plasture, Tegaderm) este superfluă, ea nu poate fi spălată, astfel că nu este împiedicată spălarea, îndepărtarea neputând fi făcută nici chiar în demență. Prin schimbarea formulării (compoziția sau mărimea particulelor) se poate obține o retardare optimă (o zi, 1 săptămână, câteva săptămâni). Prin varierea raportului ingredient activ încapsulat la ingredient activ liber, se poate obține un raport stabil ingredient:metabolit care este optim din punct de vedere al efectelor neuroprotectorii și neurorecuperatorii.

Figura 1: Nivelele medii de metamfetamină în plasmă (±SD, n=3) la porc, după tratament oral și transdermic cu (-) Deprenil (CHL-10).

Figura 2: Nivelele medii de metamfetamină în plasmă (±SD, n=3) la porc după tratament transdermic cu o compoziție lipozomică conținând (-) Deprenil.

Figura 3: Inhibarea MAO-B a plăcuțelor după administrarea transdermică a unei compoziții lipozomice (CHL-10) și administrarea orală a tabletelor tradiționale.

Figura 4: Inhibarea MAO-B în plăcuțe la 168 ore după administrarea transdermică a unei compoziții lipozomice multilamelare.

Figura 5: Inhibarea MAOîn creier, ficat și în intestinul subțire, la 168 ore după administrarea transdermică a compoziției lipozomice CHL-2.

Figura 6: Inhibarea MAO în creier și ficat la 168 ore după administrarea transdermică a compozițiilor lipozomice.

Figura 7: Concentrațiile în ser calculate din radioactivitate (substanță nemodificată și metabolit) după administrarea transdermică a diferitelor doze de compoziție CHL-2.

Figura 8: Concentrația unei substanțe radioactive (selegilină+metaboliți) la 168 ore după administrarea transdermică a compoziției CHL-2.

Figura 9: Radioactivitatea diferitelor organe de cobai și cea a locului aplicării locale la 168 ore după administrarea transdermică compoziției CHL-2.

Se dau mai jos 6 exemple de realizare a invenției:

Exemplele 1 la 6. Prepararea compozițiilor lipozomice Deprenyl

Exemplul 1. într-un balon cu fund rotund, se dizolvă 20 g Fosfolipon 90-G (fosfolipidă nesaturată) și 10 g clorhidrat de selegilină în 20 ml amestec 2:1 de cloroform și metanol, la o temperatură de 40°C. La soluție se adaugă 100 g perle de sticlă mici. Solventul se evaporă sub vid într-un Rotavapor și în timpul acestei operații se formează un film subțire pe peretele balonului de sticlă și pe suprafața perlelor de sticlă. Se adaugă apoi 70 g amestec 1:3 etanol și apă încălzit la 40°C. Conținutul balonului este apoi agitat la o viteză medie de 200 rotații/minut timp de 30 minute la 35°C. Se separă perlele de sticlă prin filtrare pe o pâlnie Buchner fără hârtie de filtru. Filtratul se lasă o oră la temperatura camerei, pentru a se forma sistemul lipozomic. Formarea lipozomilor este confirmată prin examinare prin microscopie optică. Greutatea totală a produsului lipozomic este 100 g.

Structura lipozomică s-a pus în evidență prin examinare microscopică și prin măsurarea distribuției mărimii particulelor.

Exemplul 2. Se prepară o compoziție lipozomică cu selegilină, în modul descris în exemplul 1, cu diferența că se folosește ca fosfolipidă Phosfolipon 90-H.

235

240

245

250

255

260

265

270

275

RO 116768 Bl

S-au obținut 100 g produs (CH-L-2). Structura lipozomică s-a pus în evidență prin examen microscopic și prin măsurarea distribuției mărimii particulelor.

Exemplul 3. Se lucrează ca în exemplul 1, cu diferența că fosfolipida, într-o cantitate mai mică de 1 g, și colesterolul, în cantitate de 1 g, se dizolvă într-un amestec de solvenți organici. Produsul obținut este denumit (CH-L-3).

Exemplul 4. Se lucrează ca în exemplul 1, cu diferența că s-au folosit 20 g selegilină și 30 g fosfolipidă. Prin examen microscopic și prin măsurători ale distribuției mărimii particulelor, s-a dovedit că produsul obținut în cantitate de 118 g este o compoziție lipozomică.

Exemplul 5. Se lucrează ca în exemplul 2, cu diferența că s-au folosit 30 g selegilină, 40 g fosfolipidă și 40 ml amestec de cloroform și metanol. S-au obținut 135 g produs care, prin examen microscopic și prin măsurarea distribuției mărimii particulelor, s-a dovedit a fi o compoziție lipozomică.

Exemplul 6. Se lucrează ca în exemplul 1, cu diferența că s-au folosit 16 g Fosfolipon 90-h, 4 g colesterol, 10 g clorhidrat de selegilină, 50 g apă distilată și 5 g propilenglicol, care s-au agitat la o viteză de 250 rotații/minut.

Prin examen microscopic și prin măsurarea distribuției mărimii particulelor, produsul obținut (CH-L-10) s-a dovedit a fi o compoziție lipozomică. Mărimea medie a particulelor este mai mică decât cea a produsului obținut conform exemplelor 1 la 5.

Conținutul de radioactivitate al diferitelor organe (în /vgeq/g țesut) la cobai timp de o săptămână după administrarea a 140 mg deprenil ³H formulat lipozomic (conționând 14 mg deprenil, aprox.42 mg/kg). Primele valori (subliniate) s-au măsurat după 24 ore, nu sunt incluse în valoarea medie.

Organe	Radiactivitate măsurată țugeq/g) CHL-1 CHL-2 CHL-3
	valoare	media	S.D	valoare	media S.D	S.D	Valoare	media	S.D
creier	0.942 0,123 0,069	0,096	0,038	0,416 0,217 0,080	0,238	0,169	0,168 0,335 0,273	0,259	0,084
plămân	2.370 0,252 0,188	0,220	0,045	0,150 0,496 0,167	0,271	0,195	0,285 1,016 0,497	0,599	0,376
inimă	3,572 0,160 0,191	0,175	0,021	0,555 0,855 0,239	0,550	0,308	0,447 2,074 0,441	0,987	0,941
splină	0,199 0,191	0,195	0,005	0,630 0,376 0,179	0,395	0,226	0,367 0,707 0,770	0,615	0,217
ficat	1,069 0,052 0,053	0,052	0,0007	0,143 0,121 0,065	0,110	0,040	0,102 0,124 0,153	0,126	0,026

RO 116768 Bl

330

Tabel (continuare)

Organe	Radiactivitate măsurată (/xgeq/g)
CHL-1	CHL-2 CHL-3
	valoare	media	S.D	valoare	media S.D	S.D	Valoare	media	S.D
rinichi	1,704 0,229 0,167	0,198	0,043	0,417 0,330 0,178	0,308	0,121	0,353 0,421 0,491	0,422	0,069
stomac	0,975 0,018 0,024	0,021	0,004	0,019 0,030 0,039	0,029	0,010	0,063 0,037 0,063	0,054	0,015
intestin subțire	0,1 Ș? 0.016 0,009	0,012	0,004	0,021 0,021 0,009	0,017	0,007	0,025 0,015 0,015	0,018	0,006
colon	0,164 0,005 0,019	0,012	0,009	0,031 0,034 0,016	0,027	0,010	0,014 0,008 0,016	0,013	0,004
piele	80.493 5,856 97,741	51,798	64,972	53,521 25,633 107,327	62,160	41,527	22,550 19,081 16,599	19,410	2,989

Revendicări

Claims

1. Compoziție lipozomică, caracterizată prin aceea că, conține ca ingredient activ 0,1...40%în greutate(-]-N-a-dimetil-N-(2-propinilfeniletilamină] și/sau o sare a acesteia, 2...40% în greutate lipide, de preferință fosfolipide, 30...90% în greutate apă, cu sau fără, până la 10% în greutate colesterol, până la 20% în greutate un alcool, până la 25% în greutate un glicol, până la 3% în greutate un antioxidant, până la 3% în greutate un agent de conservare, până la 2% în greutate un agent de influențare a viscozității, până la 50% în greutate ciclodextrină sau un derivat de ciclodextrină și, opțional, agenți de umplere și de diluție uzuali și alți compuși auxiliari, acceptabili farmaceutic.

2. Compoziție lipozomică, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, conține 0,1...20%în greutate, de preferință 0,1...10%în greutate (-)-N-a-dimetilN-{2-propinilfeniletilamină) și/sau o sare a acestuia.

3. Compoziție lipozomică, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, conține cel puțin 10% în greutate(-)-N-a-dimetil-N-(2-propinilfeniletilamină) și/sau o sare a acesteia într-o veziculă uni sau multilamelară, și până la 100% în greutate (-)-N-a-dimetil-N-(2-propinilfeniletilamină) în soluție sau în formă solidă.

4. Compoziție lipozomică, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, conține ca lipidă o fosfolipidă, de preferință fosfatidilcolină și/sau lisofosfatidilcolină și/sau fosfatidilserină și/sau fosfatidiletanolamină și/sau fosfatidilinozitol.

5. Compoziție lipozomică, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, conține ca alcool, de preferință, etanol sau izopropanol, ca glicol, de preferință, propilenglicol sau polietilenglicol, ca antioxidant, de preferință, tocoferol sau butilhidroxianisol, ca agent de conservare, de preferință, germaben și ca agent de influențare a viscozității, de preferință, un polimer de carboxivinil.

350

355

360

365

370

RO 116768 Bl

6. Compoziție lipozomică, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea ca, conține ca ciclodextrină și/sau un derivat de ciclodextrină, de preferință α-, β-, γciclodextrină, un polimer ciclodextrinic solubil în apă, un derivat ciclodextrinic metilat,

375 hidroxipropilat sau succinilmetilat sau orice amestec al acestora.

7. Compoziție lipozomică, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că se folosește pentru tratamentul bolii Alzheimer, bolii Parkinson, depresiei, accidentului vascular cerebral, afecțiunilor locomotorii sau mielitelor.