PT86654B

PT86654B - Processo para a preparacao de 3-fenil-7h-tiazolo{3,2-b} {1,2,4}triazinas-7-ona substituidas, dos seus intermediarios e de composicoes farmaceuticas que as contem

Info

Publication number: PT86654B
Application number: PT86654A
Authority: PT
Inventors: Ulrich Gebert; Werner Thorwart; Rudolf Schleyerbach; Robert R Bartlett
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1987-01-30
Filing date: 1988-01-28
Publication date: 1992-02-28
Also published as: PT86654A; CA1317293C; MX10256A; FI880385A0; SU1591808A3; CN88100518A; US4908364A; DD287506A5; EP0276805B1; NO880405L; DE3879234D1; CS53688A2; JPS63192782A; JPH07626B2; DE3702758A1; DK47988D0; EP0276805A3; AU600080B2; DK47988A; FI880385A

Description

Memória descritiva

A presente invenção refere-se a novas 3-fenil-7H-tiazolo £ 3,2-b__/2. 1,2,4__/ trlazinas-7-ona poli-substituídas, a processos para a sua preparação e â sua utilização como ingredientes activos em composições farmacêu ticas, em especial para o tratamento de doenças reumáticas; além disso, a invenção refere-se ainda a alguns produtos intermediários formados na preparação dos compostos acima mencionados .

Os antiflogísticos não esteróides aplicados até agora de preferência na reumoterapia tratam-se quase exclusivamente de inibidores da cicloxigenase, relativamente fortes, que inibem a degradação endógena do ácido araquidónico às prostaglandinas responsáveis por estados inflamatórios e dolorosos. Aliás, em relaçao causal com uma inibição demasiado forte da actividade da cicloxigenase, encontram-se uma série de efeitos secundários graves, como

queixas gastrointestinais, distúrbios da função renal e reacções alérgicas (por exemplo alergias cutâneas e casos de asna), que, em especial num tratamento prolongado como é normalmente necessário, obrigam frequentemente à interrupção da terapia (vide K. Brune, Eur. J. Reumatol. Inflam. 5, 335-349, 1982).

Uma outra desvantagem destes antiflogísticos clássicos nao esteróides, ligada causalmente como mecanismo de efeitos atrás descritos, é que eles permitem combater ou aliviar os sintomas, dores, inflamação e inchaço, mas não têm qualquer influência sobre os processos imunopatológicos que estão na base das doenças reumáticas in. flamatórias, não permitindo por isso deter o decurso progres, sivo da reacção.

Existe por isso a necessidade urgente de anti-reumáticos de utilização terapêutica, que devido a um perfil de acção favorável, se distingam com vantagem dos antiflogísticos não esteróides conhecidos, por um lado por uma melhor assimilibilidade, e por outro lado, por um ataque mais causal aos fenómenos reumáticos. Bastante pro, missores para este fim são os fármacos que actuam fortemente na via alternativa da degradação do ácido araquidónico, inibindo por exemplo a 5~lipoxigenase e impedidndo assim a formação excessiva dos leucotrienos proinflamatórios; desactivam radicais oxigénio altamente reactivos que, como mediadores de inflamação, mantém perpetuamente a destruição de células e tecidos nas articulações reumáticas inflamatórias; e/ou restauram o sistema imunológico alterado, abrindo assim a possibilidade de combater mais causalmente as doenças reumáticas por via medicamentosa.

Descobriu-se então surpreendentemente, que por introdução de determinados grupos 5-ter-butil-4-hidroxifenilo 3-substituídos na posição 3 de 7H-tiazolo / 3,2-b__/-/_ 1,2,4_/ triazinas-7-ona, conforme o caso substituídas na posição 2- e/ou 6-, se obtêm um novo tipo de compostos que devido ãs suas propriedades farmacológicas, preenchem os requisitos acima mencionados sendo por isso extraordinariamente apropriados para o tratamento de doenças reumáticas. Estes compostos, também muito bem assimiláveis pelo estômago, inibem, ao contrário dos antiflogísticos não esteróldes conhecidos, o enzima 5-lipoxigenase redutor do ácido araquidónico, não se verificando ao mesmo tempo qualquer influência sobre a cicloxigenase. A capacidade dos compostos desactivaram radicais oxigénio manifesta-se por exemplo no odeio da inflamação induzida por Adriamicina (R) (firma Farmitalia) e pela inibição de lipidoperoxidação.

Além disso, estes compostos actuam com vantagem sobre o sistema imunológico alterado, como se pode demonstrar pela supressão da reacção de Árthus e pela normalização da imunoactividade suprimida nos modelos patológicos da artrite induzida com o adjuvante de Freund ou com colagênio do tipo II.

Conhecem-se já da literatura algumas 7H-tiazolo £ 3,2-b_/ J_ triazinas-7-ona, Assim,

F. Soliman et al·, na sua investigação sobre compostos com actividade antineoplástica, prepararam a 6-(3-idoestril)-3-metil-7H-tiazolo £ 3,2-b_7* £, 1,2,4_/triazina-5-on’a, mas não descreveram as respectivas propriedades farmacológicas (Phar. azie 34 (1979), pág. 392-394). W. Klose et ai. (Liebigs Ann. Chem. 1984» pág. 1302-1307) sintetizaraA o mesmo sistema cíclico com um grupo alquilo ou fenilo na posição 6, possuindo estes compostos uma acção herbicida. Na DE-OS 31 46 300 descreve-se finalmente, para além de uma gama completa de 7H-tiazolo 1»2,4_7 triazinas-7-ona parcialmente hidrogenadas, a 3,6-difenil- 7H-tiazolo £ 3»2-b£7 £ l,2,4_7triazina-7-ona e menciona-se o correspondente 3-metil-6-fenil-derivado, possuindo também estes compostos uma actividade herbicida.

A presente invenção refere-se pelo contrário a novas 7H-tiazolo )/. 3>2-b_~ 2. 1»2,4_7 triazinas7-ona, que possuem na posição 3 um grupo 5-ter-butil-4-hidroxifenílico 3- substituído e, conforme o caso, têm outros substituintes na posição 2- e/ou 6-, conduzindo aliás a introdução de um grupo fenilo na posição 6 do sistema bicícli. co a uma perda total do efeito. Devido às suas propriedades farmacológicas já referidas os compostos de acordo com a invenção são adequados ã aplicação em composições farmacêuticas em especial naquelas que estão indicadas para doenças reumáticas inflamatórias.

objectivo da invenção são por isso

3-fenil-7H-tiazolo-/_> 3,2-b_/ 1,2,4_/ triazinas-7-ona substituídas, de fórmula geral I

HO

(I) na qual significa um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, linear ou ramificado, um grupo hidroximetilo ou aminometilo de fórmula II

(II) * * significa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com a 3 átomos de carbono e κ significa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo com 1

a 4 átomos de carbono, linear ou ramificado, um grupo hidroxi. metilo ou aminometilo de fórmula II, em que

5- *

R e R sao iguais ou diferentes e representam um atomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, linear ou ramificado, ou formam ambos em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligadas um anel saturado de 5 a 7 membros com 4 a 6 átomos de carbono ou com 4 a 5 átomos de carbono e um novo heteroátomo na forma de 0, S ou NR , e κ tem o significado de hidrogénio ou de um grupo alquilo (C^-C^), bem como os sais de adição de ácido fisiologicamente assimiláveis dos compostos com o elemento estrutural de fórmula II nas posiçoes de R e/ou R .

Quando R^ e R^, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel saturado com 4 ou 5 átomos de carbono contendo ainda um outro heteroátomo, os heteroátomos devem estar separados um do outro de pelo menos 1 átomo de carbono.

Preferem-se os compostos de fórmula 1

I nos quais R significa um grupo ter-butilo ou um grupo ami aometilo de fórmula II ou R^x e R , independentemente um do outro, representam hidrogénio ou metilo. Preferem-se ainda 1 em especial os compostos de formula I nos quais K represen2 3 ta um grupo ter-butilo e ao mesmo tempo R e R , independentem'ente entre si, representam hidrogénio ou metilo, como por exemplo a 3-(3.5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-7H-tiazolo / 3,2-b_/ £ 1,2,4_7triazina-7-ona.

Como grupos alquilo para os grupos 13 6

R e R a R referem-se os grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo e ter-butilo e para o grupo os grupos metilo, etilo, n-propilo e isoprilo. Grupos aminometilo cíclicos apropriados para o elemento estrutural de fórmula XI são os grupos pirrolidino, piperidi^ no, hexametilenoimino, morfolino, tioraorfolino, bem como pi5

perazi.no- e homopiperazinometilo, conforme ο caso, alquilados no segundo átomo de azoto» objectivo da invenção é ainda um processo para a preparação das novas 7H-tiazolo (2) 3,2-b_/ / 1,2,4__/ triazinas-7-ona.

Uma forma de execução a) consiste em fazer reagir uma 3-mercapto-2H-l,2,4-triazina-5-ona de fórmula III

(III j na qual

R possui o significado acima mencionado, com 2-halo-l-fenilalcanonas de fórmula IV

(IV) na qual

2

R significa o grupo alquilo acima definido, R possui o significado acima mencionado e X é um átomo de halogénio, de preferência cloro ou bromo, de modo a obter-se os correspondentes compostos de fórmula I de acordo com a invenção.

Uma outra forma de execução b) consiste em se fazer reagir em primeiro lugar compostos de for. mula III com um composto de fórmula IV (com R^ « alquilo (0^”64))» em condições básicas, para se obter 2H-1,2,4-triazinas-5-ona, S-alquiladas, de fórmula V

(V) e se transformar estes por desidratação nos correspondentes compostos de fórmula I de acordo com a invenção; os produtos intermediários de fórmula V são compostos novos.

Uma outra forma de execução c) consiste em se fazer reagir em primeiro lugar 2-halo-l-fenilalcanonas de fórmula IV (com R^ » alquilo (G^-C^) com tiosemicarbazida, obtendo-se 2-amino-6H-l,3,4-tiadizinas- também novas - de fórmula VI

e se proceder à transposição destas, em condições ácidas, obtendo-se 3-amino-2-imino-2,3-dihidrotiazolos de fórmula VII

II II (VIII) ο ο em que κ representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, linear ou ramificado, ou um gru, * — po hldroximetilo e R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 3 átomos de carbono, obtendo-se os compostos de fórmula I, de acordo com a invenção, correspondentes .

Uma forma de execução também praticável d) consiste em partindo dos compostos de fórmula I de acordo com a invenção, que contém na posição de R e/ou Rr um grupo hidroximetilo, se substituir em primeiro lugar o grupo (ou grupos) hidroxilo por halogénio ou se transformar esse grupo num éster activado do ácido sulfúrico ou fosfórico, e se fazer reagir em seguida com aminas de fórmula IX

(IX)

k 5 em que R e R possuem os significados anteriormente mencionados, de modo a obter-se compostos de fórmula I de acordo com a invenção, com o elemento estrutural de fórmula II na posição

2 de R e/ou R , isolando-se estes compostos aminometilados na forma livre ou transformando-se com ãcidos apropriados em sais de adição de ácido fisiológicamente assimiláveis.

Oma outra forma de execução e) aprjo priada para a preparação de compostos de fórmula I com o ele, mento estrutural de formula II ou com o grupo hidroximetilo na posição de r\ consiste em se fazer reagir compostos de fórmula I, em que R^ é hidrogénio, para a introdução do grupo hidroximetilo, com formaldeído, para a introdução de grupos aminometilo N-substituídos, de formula II, em que ainda R* e R° nao significam simultâneamente hidrogénio, com as aminas correspondentes de fórmula IX, na presença de formaldeído, ou para a introdução do grupo aminometilo não substituído k 5 (R «R «H), se condensar em primeiro lugar com N-hidroximetilacetamidas de formula X

I r⁸-co-nh-ch₂-oh

Q em que R° é trifluorometilo, triclorometilo ou clorometilo, em condições ácidas e desidratadas, e se eliminar em seguida o grupo acilo R⁸ -CO - por via hidrolítica, isolando~se os compostos aminometilados, assim obtidos, na forma livre ou transformando-se com ãcidos apropriados em sais de adição de ácido fisiológicamente assimiláveis.

Para a preparação destes sais de adição de ácido referem-se por exemplo ácidos minerais como ácido sulfúrico ou fosfórico, ou ácidos halídricos, em particular o ácido bromídrico e o ácido clorídrico, bem como . ácidos orgânicos, como ãcidos mono- a tri-carboxílicos,por

exemplo acido acético, láctico, maleico, fumãrico, oxálico, tartárico, cítrico e outros ácidos assimiláveis como ácidos sulfónicos (benzenosulfónico, 4-toluenosulfónico, metanosul fónico, trifluorometilsulfónico, ciclohexilamidosulfónico, etc.).

As 3-mercapto-2H-l,2,4-triazinas-5-ona de fórmula III, utilizadas como reagentes de partida nos processos de acordo com a invenção, são conhecidas (H. Neunhoeffer e P.Z. Niley em A. Weirberger e h.C. Taylor, The Chemistry of Heterocyclic Gompounds, Wiley-Interciencé, New York, vol. 33 (1978), pág. 430-465) ou podem preparar-se de modo análogo,

As 2-halo-l-fenilalcanonas de fórmula IV, também utilizadas como reagentes de partida são também conhecidas da literatura ou podem facilmente preparar-se, por exemplo a partir das l-(3-alquil-5-ter-butil-4-hidroxifen±l)-alcanonas, por reacçao com um agente halogenan— te adequado, de acordo com os métodos descritos em Houben-Weil, vol. V 14, pág. 171-189 (1960).

Como compostos de fórmula IV apropriados referem-se por exemplo a 2-bromo-l-(3.5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-etanona e a 2-bromo-l-(3-metil-5-ter-butil-4-hidroxi-fenil)etanona, que se podem preparar por halogenação das 1-fenilalcanonas substituídas correspondentes com bromo elementar ou com brometo de cobre (II), de acordo com um processo de L.C.King e G.K. Ostruin, J. Org. Chem. 29 (1964) pág. 3459-3461.

Para a preparação de compostos de fórmula IV, em que X é um átomo de cloro, emprega-*se de preferência o cloreto de sulfurilo, que se faz reagir, de preferência a temperaturas entre cerca de 10 e 30°C na presença de solventes inertes como por exemplo cloreto de netileno ou clorofórmio, com as 1-fenilalcanonas correspondei!

tes. Um outro processo de preparaçao consiste na acilaçao de Friedel-crafts de 2-alguÍl-6-ter-butilfenóis, de preferência com cloreto de cloroacetilo, na presença de ácidos de ácidos de Lewis como por exemplo cloreto de alumínio ou trifluoreto de boro.

Na reacção das 3-mercapto-2H-l,2,4-triazinas-5-ona de fórmula III com a 2-halo-l-fenilalcanonas de fórmula IV, de acordo com a variante de processo a), trabalha-se habitualmente com quantidades equimolares dos reagentes, num solvente ou meio de dispersão. Para este fim referem-se principalmente solventes polares, por exemplo ácidos carboxílicos alifáticos de cadeia pequena, como ácido fórmico ou ácido acético, álcoois como metanol, etanol os vários propanóis ou butanóis. Podem no entanto utilizar-se também etilenoglicol e os seus éteres, acetato de etilo acetona, 2-butanona, dimetilformamida ou acetonítrilo, bem como misturas dos solventes referidos ou misturas destes com água. As temperaturas reaccionais situam-se em geral entre cerca de 20°C e o ponto de ebulição da mistura reaccio nal em causa. De preferência, trabalha-se em ácido acético entre cerca de 70 e 100°C, oscilando os tempos de reacção em geral entre menos do que 1 hora e cerca de 6 horas,

A preparação das 2H-1,2,4-triazinas-5-ona 5-alqui.ladas de fórmula V, utilizadas como produtos intermediários na variante de processo b), pode efectuar-se fazendo reagir 3-mercapto-2il-l,2,4-triazinas-5-ona de fórinu la III, por conveniência com uma quantidade equimolar de uma 2-halo-l-fenilalcanona de fórmula V, na presença de um agente básico como um hidróxido alcalinoterroso, um carbonato, hidreto ou alcoóxido alcalino ou alcalino terroso, ou uma base orgânica, por exemplo uma trialquilamina, como trietil ou tributilamina.

A reacçao efectua-se de preferência num solvente ou num meio de dispersão inerte em relação aos reagentes, ou numa sua mistura. Como exemplos refere-se água álcoois como metanol, etanol, os vários propanóis e butanóis, éteres como éter dietllico ãter diisopropílico, tetrahidrofurano e dioxano, nitrilos como acetonitrilo, cetonas como acetona e butanona, bem como dimetilformamida, dimetilacetamida e sulfôxido dimetílico. A reacção efectua-se em geral entre cerca de 0 C e a temperatura de ebulição da mistura reaccional, de preferência entre cerca de 30 e 90°, sendo necessários tempos de reacção médios situados entre uma e várias horas.

A desidratação subsequente dos compostos de fórmula V, com fecho de anel, conduzindo aos compostos de fórmula I de acordo com a invenção, efectua-se de preferência na presença de um acido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, p-toluenosulfónico, polifosfórico ou acético, num éter como éter diisopropílico, tetrahidrofurano e dioxano, ou num álcool como metanol, etanol ou propanol, ou em misturas destes com água, a temperaturas entre cerca de 0 e 80°C, em particular de cerca de 10 a 40°C, com tempos de reacção de cerca de uma hora a vários dias.

A variante de processo c) conduz a produtos intermediários - as 2-amino-6K-l,3,4-tiadiazinas de fórmula VI - que se podem preparar fácil/aente a partir de 2-halo-l-fenilalcanonas de formula IV e de tiosemicarbazida, de acordo com métodos conhecidos da literatura. A sua transposição aos correspondentes 3-aaiino-2-imino-2,3-dihidrotiazoles de fórmula VII, efectua-se de preferência em meio ácido, como por exemplo em ácido clorídrico, bromídrico, sul furico ou acético, bem como em misturas destes entre si ou com água*

A ciclocondensaçao final para se obterem os compostos de formula I efectua-se era geral seà se

proceder ao isolamento dos 3-amxno-2-iiaxao-2,3—dihxdrotxazoles de fórmula VII formados como intermediários, adicionan. do-se à mistura reaccional um ácido (V -cetocarboxílico ou os seus ésteres alquxlicos de fórmula ¥111, como por exemplo o ácido glioxálico ou o ácido -oxofenilacético ou os respectivos ésteres metílicos ou etílicos, em quantidades até 2 vezes equimolares. Neste caso, as temperaturas da reacção situam-se de preferência entre cerca de ãO°C e o ponto de ebulição do meio reaccional em causa, variando os tempos de reacçao em geral entre cerca de 5 e cerca de 30 horas.

A transformação dos compostos de fórmula I de acordo com a invenção, que contêm na posição 1 3 de R e/ou de R um grupo hidroximetilo, nos compostos de fórmula I aminometilados, de acordo com a forma de execução d), efectua-se do modo habitual. Deste modo, pode proceder-se ã activação do grupo hidroximetilo por exemplo por reacção com agentes halogenados, como cloreto do tionilo e tri. cloreto de ou tribrometo de fósforo, de modo a obterem-se compostos halometilados, ou por esteriixcação por exemplo com cloreto de metanosulfonilo ou de 4-toluenosulfonilo. Na reacçao de condensação final com as arainas de fórmula IX é vantajoso trabalhar na presença de uma quantidade molar pelo menos dupla da amina utilizada, em relação ao grupo hidroximetilo derivatizadoj á também possível utilizar quantidades equivalentes de ambos os reagentes, sendo no entanto aconselhável a adição de um agente captor de ácido, por exemplo um hidróxido alcalino ou alcalinoterroso cu um carbonato alcalino ou alcalinoterroso ou ainda uma base orgânica como trietilamina ou piridina, em quantidade pelo menos estequiométrica.

A reacção efectua-se por conveniência num solvente ou num meio de dispersão inerte em relação aos reagentes* Como exemplos referem-se álcoois como metanol, etanol, isopropanol, n-propanol, os vários outanóis, bem como misturas destes entre si ou ainda misturas destes com

éteres como tetrahidrofurano e dioxano, ou iiidrocarbonatos como benzeno, tolueno e xileno, bem como solventes aprÓticos como piridina, dimetuilformamida, dimetilacetamida, sulfóxido dimetílico e hexametilfosfotriamida. A reacção leva-se a cabo em geral a temperaturas entre cerca de 0°C e o ponto de ebulição do solvente em causa, de preferência entre cerca de 20 e 100°C, atingindo o tempo de reacção até várias horas.

Para a introdução dos grupos aminometilo de acordo com a formula II, nos compostos de fórmula I, era que R¹ é hidrogénio, de acordo com a variante de processo a), utiliza-se com vantagem no caso das reacções com aminas primárias e em particular com aminas secundarias de fórmula IX, a reacção de Mannich conhecida da literatura (vide por exemplo Houben-Weyl. vol. XI/1 (1957), pág. 755-763). 0 formaldeído utilizado na reacção pode empregar-se tanto na foraa sólida (por exemplo porformaldeído). Em geral trabalha-se cora uma quantidade 4 a 10 vezes molar de formaldeído e ura excesso até 40 vezes molar da amina em causa, que se pode empregar também na forma de correspondente halohidrato. Como meios reaccionais utilizam-se de preferência água ou álcoois como metanol, etanol ou propanol, ou misturas destes. A reacção efectua-se de preferência a temperaturas entre cerca de 20 e 100°C, variando os tempos de reacção entre uma hora e vários dias.

A condensação com os N-hidroximetilacetamidas de fórmula X constitui a via preferencial para a introdução do grupo arainometilo não substituído no átomo de azoto. Como agentes de condensação referem-se ácidos como o ácido metanosulfÓnico ou misturas de ácido sulfúrico concentrado e ácido acético, que podem servir ao mesmo tempo como meio reaccional, decorrendo a reacção em geral entre cerca 0°C e a temperatura ambiente durante um período de 30 minutos a 6

horas. A remoção do grupo acilo dos compostos aninouetílicoo N-acilados primários formados, efectua-se por processos ραdrão conhecidos dc especialista, por meio de hidrólise,obten do-se um bom resultado, em especial, trabalhando em ácido clorídrico, bromídrico ou sulfurico aquoso, a tem.epratura elevada, de preferência à temperatura do ponto de ebulição do meio reaccional em causa.

As 7il-tiazolo 2. 3,n-L__/ 2. l,2,4_/tria zinas-7-ona de fórmula I, de acordo com a invenção e os respectivos sais de adiçao de ácido, são particularmente adequados, devido ãs suas valiosas propriedades farmacológicas e ao mesmo tempo á sua extraordinária assimibllidade, à utilização como ingredientes activos em composiçoes farmacêuticas, em particular nas destinadas ao tratamento de doenças reumáticas inflamatórias. Podem administrar-se quer isoladamente por exemplo na forma de microcápsulas, em misturas entre si, quer em combinação com veículos e/ou aditivos adequados.

objectivo da invenção sao também por isso composiçoes farmacêuticas, constituídas por pelo menos um composto de fórmula I e/ou pelo menos um dos seus sais de adição de ácido, ou que contêm pelo menos um destes ingredientes activos conjuntamente com veículos, aditivos e/ /ou outros adjuvantes farmaceuticamente adequados e fisiologicamente assimiláveis.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem aplicar-se por via oral, tópica, rec. tal ou ainda com forma o caso, por via parenteral, preferindo-se a apluicaçao oral. Formas de preparação galénica sólidas ou líquidas adequadas são, por exemplo, granulados, pós, drageias, comprimidos, (micro)cápsulas, supositórios, xaropes, soluções, suspensões, emulsões, gotas ou soluções injectáveis, bem como preparados com libertação retardada de in gradiente activo, em cuja preparação se empregam ãaoicualmen• te aditivos como veículos, humectantes, homogeneizantes

agentes de cobertura, lubrificantes, sabores, adoçantes ou solubilizantes. Como aditivos frequentemente empregues referem-se por exemplo carbonato de magnésio, dióxido de titânio, lactose, manitol e outros açúcares, talco, albumina, gelatina, amido, celulose e seus derivados, óleos animais e vegetais, polietilexioglicói3 e solventes co no água esterilizada e álcoois mono- ou poli-funcionais, como por exemplo glicerina.

De preferência, as composições farmacêuticas preparam-se e administram-se em a.iidades de dosagem em unidades de dosagem tais que cada uaiúade contém como componentes activo uma determinada dose la poio menos um composto de acordo com a fórmula I e/ou pelo menos de um dos seus sais de adição de ácido. Bm unidadesdde dosagem sólidas como comprimidos, cápsulas, drageias ou supositórios esta dose pode ser até cerca de 300 mg, de preferência contudo de cerca de 100 a 500 mg.

Para o tratamento de um paciente sofrendo de uma doença reumática inflamatória, indicam-se - segundo a eficácia dos compostos de acordo com a fórmula I e/ou dos respectivos sais de adiçao da ácido cm seres humanos - doses diárias de cerca de 100 a 2000 mg de ingrediente activo, de preferência de 300 a 1000 mg, em administração oral, dm casos especiais podem contudo aplicar-se também doses diárias superiores ou inferiores. A administração da dose diária pode efectuar-se tanto de uma vez só, na forma de uma unidade de dosagem única, ou ainda em vários unidades de dosagem mais pequenas e também por administração múltipla de doses parciais em determinadas intervalos de tempo.

finalmente, podem tauuém formular-se os compostos de fórmula I e os respectivos sais de adiçao de ácido, para a preparação das composições galénicas acima mencionadas, conjuntamente com outros ingredientes activos apropriados, como por exemplo antiuricopáticos, inibidores

da agregação de trombócitos, analgésicos ε outros antiflogísticos esteróides ou não esteroides.

A estrutura de todos os compostos descritos a seguir foi confirmada por análise elementar e por espectroecopia de IV (infravermelhos) e de H-NMR,

Os compostos de formula I preparados de acordo com os exemplos 1 a 5 ou 12 e 13 ae^.uintes, bem como os preparados de modo análogo, encontr_: i-sc resumidos na Tabela I»

Exemplo 1;

3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxif ei. il)-7í:-tiazolo / 3,2-b_7 l_ 1,2,4_7 triazina-7-ona

Secundo a variante de processo a)

2-bromo-l-(3,5-di-t er-butil-4-hidroxi fértil)-et anona

Dissolvem-se 206g (0,ΰ3 mol) de 1-3,5-di-ter-L>util-4-hidroxifenil)~etanona. sob agitação, em 415 ml de cloreto de metileno, aquece-se à ebulição e adiciona-se gota, durante 30 minutos, 144g (0,9 mol) de bromo. Aqueceu-se em seguida durante mais 2 horas, sobre fluxo, arrefeceu-se a mistura, adicionaram-se 400 ml de água, separou-se a fase orgânica e secou-se sobre sulfato dc sódio. Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, recristaliza-se o produto bruto obtido de 540 ml de metxlciclohGxano

Agitaram-se 197g (0,6 mol) de 2-bromo-l-(3,5-di-te£-butil-4-hidroxifenil)etanona, preparada no passo a^ e 80g (0,62 mol) de 3-mercapto-2d-l,2,4-triazina-5-ona, em 700 ml de ácido acético, durante 4 horas a 90°C.

Em seguida, deixou-searrefecer lentamente a mistura reaccional e filtrou-se o precipitado cristalino formado, que se lavou depois com água e se agitou em 1000 ml de água, à tem peratura máxima de 90°C, durante 30 minutos. A recristalização da massa cristalina ainda húmida efectuou-se em 7000 ml de etanol.

Rendimento: 171,6 g (80% do teórico) Ponto de FUsão 257°C (decomposição) ^C19^H23^N3°2^{S (f>M}“ 357,5)

Análise; Calculado C 63,84% II 6,49% N 11,75% S 8,99:· Encontrado 63,55% 6,44% 12,03% 9,00% segundo a variante de processo b) b^) 3-2. (3,5-íli-ter.-butil-4-hidroxi feaacíl)-tio_J722-l,2,4triazina-5-ona

A uma suspensão de 12,9g (0,1 mol) de 3-j»ercapto-2H-l,2,4-triazina-5-ona em 250 ml de água, adi. cionou-se 5,3g (0,05 mol) de carbonato de sodio e agitou-se durante 30 minutos; adicionou-se então gota a gota uma solução de 32,7g (0,1 mol) de 2-bromo-l-(3.S-di-ter-butil-A-hidroxif enil)-etanona em 250 ml de metanol e manteve-se a mistura reaccional durante 1 hora a 75°C. Após arrefecimento filtrou-se o precipitado formado e recristalizou-se de aceta to de etilo.

Rendimento: 26,6 g (71% do teórico) Ponto de Fusão: 209-211°C ^C19^H25^N3°3^{S (PM} “ ³⁷⁵’⁵⁾

Analise: Calculado C 60,78%, H 6,71% N 11,19% S 8,54% Encontrado: C 60,45% H 6,82% N 11,06% S 8,68% b₂) Z~3,2-b_7 / 1,2,4__/triazina-7-ona

Agitaram-se 3,7g (0,01 mol) do 3“Z (3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenacil)-tic /-zu-l,2,4-triazina-5-ona, preparado no passo b^), iium L.ssturi' de 60 í;1 de tetrahidrofurano e 50 ml de ácido clorídrico 22«, durante 36 horas á temperatura ambiente. Filtrou-se u produto de ciclocondensaçao lentamenta precipitado e raerisualizoc-ee

a 3 vezes de tetrahidrofurano/etanol (3:2). Rendimento: l,5g (422 do teórico) Ponto de Fusão; 256-257° (decomp.) ^G19^tí23^N3°2^{S (MP} * ³⁵⁷»⁵>

Os dados analíticos e espectroscopicos confirmaram a identidade do produto obtido com o composto preparado de acordo com a variante de processo a).

Segundo a variante do processo c) (

Cj) Bromidrato de 2-amino-5-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-6H-1,3,4-tiadiazina

Agitou-se uma solução de 32,7g (0,1 mol) de 2-bromo-l-(3,5^,-di-ter-butÍl-4-hidroxifenil)-etanona (exemplo la^) e 9,1 g (0,1 mol) de tiosemicarbazida), em 250 ml de acido acético, durante 1 hora à temperatura ambiente, filtrou-se o precipitado formado e dissolveu-se em 500 ml de etanol a quente. ApÓs arrefecimento filtraram-se os cristais, lavaram-se várias vezes com acetato de etilo e secaram-se em vácuo.

Rendimento: 27,2g (682 do teórico) Ponto de fusão 255-257°C C₁₇H₂₆BrN₃0S (PM « 400,4)

Análise: Calculado C 51,002 H 6,552 Br 19,962 N 10,492 • Encontrado C 50,712 H 6,522 Br 19,922 N 10,462 S 8,012

S 8,172

c^) 3-(3,5-di-ter-butil—4-hidroxif enil )-7.d-tiazolo-/ 3,2-b.// 1,2,4_/triazina-7-ona

A uma solução de 10,0g (0,025 mol) de bromidrato de 2-amino-5-(3.5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-6H-l ,3 ,4-tiadiazina, preparada no passo c^), em 250 ml de ácido acético e 25 ml de ácido clorídrico 4N, adicionaram-se gota agota, a 80°C, 4,8 g (o,05 mol) de monohidrato de ácido glioxálico em 75 ml de água. Após 20 horas de agitação a 80°C evaporou-se sob pressão reduzida. 0 resíduo sólido purificou-se com vantagem por cromatografia em coluna de sílica gel com cloreto de metileno/Aetanol (25:1) como eluente e por fim por recristalização de etanol e revelou-se com base nos testes analíticos e espectroscópicos, idêntico ao produto preparado de acordo com as variantes de processo a) e b). Rendimento:3.9g (422 do teórico) Ponto de Fusão: 255-256°C (dec.) ^c ₁₉h₂₃h₃o₂ ^s

EXEMPLO 2: 3-(3-ter-butil-5-metil)-4-hidroxifenil)-7H-tiazolo Z*3,2-b_/ Z 1,2,4__/-triazina-7-ona ) 2-bromo-l-(3-ter-butil-5-metil-4-hidroxifenil )-etanona

Adicionou-se gota a gota, sob agitação, uma suspensão aquecida à ebulição, de 179g (o,8 mol) de brometo de cobre (II) e*m 360 ml de acetato de etilo a uma solução de 82,5 mg (0,4 mol) de l-(3-ter-butil)-5-metil-4-hidroxifenil)-etanona em 360 ml de clorofórmio. Em seguida

aqueceu-se sob refluxo durante 4 horas até cessar a libertação de brometo de hidrogénio. Após arrefecimento até à tempe_ ratura ambiente, filtraram-se os sais de cobre, levou-se o resíduo de filtração várias vezes com acetato de etilo, concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida e recristalizou-se o resíduo sólido de ciclohexano.

Rendimento: 81,9g (72% de teórico)

Ponto de Fusão: 90-92°C

C₁₃h₁₇BrO₂ (PM « 285,2) a^) 3-(3-ter-butil-5-metil~4~hidroxifenil)-7H-tiazolo-/ 3,2-b_/ / 1,2,4_/triazina-7-ona

| Aqueceu-se uma solução de 28,5g (0,1 mol) de 2-bromo-l-(3-ter-butil-5-metil-4-hidroxifenil)-etanona, preparada no passo a^) e 12,9g (0,1 mol) de 3-mercapto-2H-1,2,4-triazina-5-ona, em 250 ml de etanol, durante 8 horas sob refluxo. Após remoção do solvente em vácuo dissoiveu-se o resíduo sólido em 200 ml de acetato de etilo ã ebulição e filtrou-se a quente. Apôs concentração do filtrado precipitaram cristais incolores que se recristalízaram mais uma vez de isopropanol.

Rendimento: 18,9g (61% de teórico) Ponto de Fusão: 225-226°C (decomposição) ^C16^1Í17^N3°2^S (PM « 315,4)

Análise: Calculado: C 59,23% H 8,08% N 12,95% S 9,88% ; Encontrado C 59,51% H 8,17% N 12,83% S 9,82%

EXEMPLO 3: 3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-6-hidroxiiae til-7fl-tiazolo 2~3,2-bJ7~l»2_T4_7triazina-7-ona ap

6-hidroximetil-3-mercapto-2H-l,2,4-triazina-5-ona

Suspenderam-se 4,0g (0,18 mol) de borohidreto de sódio em 100 ml de tetrahidrofurano anidro e adicionou-se, sob agitaçao e arrefecimento em gelo, uma solução de 19,0g (0,094 mol) de 6-etoxicarbonil-3-mercapto-2H-1,2,4-triazina-5-ona em 40 ml de tetrahidrofurano absoluto, gota a gota.

Em seguida aqueceu-se a mistura reac^ cional durante 4 horas sob refluxo. Após arrefecimento adicionou-se agua a pouco e pouco, continuando a agitar-se e, após terminada a libertação de hidrogénio, ajustou-se a mis. tura a pHl com ácido sulfurico a 10%. Após evaporação do tetrahidrofurano sob pressão reduzida, extraiu-se a solução com acetato de etilo. Por evaporação da fase orgânica seca sobre sulfato de sódio e recristalização do resíduo sólido em água, obteve-se o produto na forma de agulhas amarelas* Rendimento: 9,5 (632 do teórico) Ponto de Fusão: 233-235°C C₄H₅N₃0₂S (PM - 159,2) a₂) 3-(3.5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-6-hidroximetil-7H-tiazolo 2. 3,2-b_/ / 1,2,4_/triazina-7-ona

Aquecem-se 14,4g (0,C44 mol) de 2-bro mo-l-(3.5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-etanona (exemplo la^) e 7,0g (0,044 mol) de 6-hidroximetil-3-mercapto-2H-l,2,4-triazina-5-ona, preparada no passo a^) em 300 ml de etanol, durante 4 horas a ebulição. A mistura reaccional, concentrada sob prpssão reduzida, dissolveu-se em 300 ml de clorofórmio e tratou-se com 100 ml de uma solução de hidrogenocarbonato de sódio com 100 ml de uma solução de hidrogenocarbonato de sódio saturada. Separou-se em seguida a fase de clorofórmio, secou-se e concentrou-se. Por filtração do produto bruto sobre sílica gel, com acetato de etilo/Aetanol (99x1) como eluente, obtiveram-se agulhas incolores* Rendimento: 11,lg (65% do teórico)

I Ponto de Fusão: 215 - 217°C ^G20^H25^N3°3^{S (PM} ³⁸⁷’⁵⁾

Análise: Calculado; C 61,99% Η 6,50% N 10,84% S 8,27% Encontrado: C 61,98% Ά 6,65% N 10,75% S 8,25%

EXEMPLO 4: Cloridrato de 3(3.5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-6-pírrolidinomet±l-7H-tiazolo 3,2-b__7 J_ I,2,4__/ trÍazina-7-ona (de acordo com a variante de processo d)) d^) 3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-6-clorometil-7H-tiazolo / 3,2-b. / / 1,2,4__/triazina-7-ona

Dissolveram-se 9,5g (0,025 mol) da tiazolotriazinona preparada de acordo com o exemplo 3a₂ anterior, cm 230 ml de cloreto de metileno seco e, após adição de 2,1 ml de piperidina, juntaram-se gota a gota 7,0g (0,06 mol) de cloreto de tionilo. Após 1 hora de aquecimento a refluxo e arrefecimento até à temperatura ambiente, adicionaram-se 200 ml de éter dietílico e deixou-se em repouso durante a noite no frigorífico. 0 cristalizado precipitado filtrou-se e secou-se em vácuo.

Rendimento: 6,7g (662 do teórico) Ponto de fusão: 238-240°C ^C20^H24^C1N3°2^{S (PM} ⁴⁰⁵»⁹>

d₂) Cloridrato de 3-(3.5-di-ter-butil-4-hidroxifenil-6-pirrolidinometil-7H-tiazolo [_ 3,2-b_—/ £ 1,2,4_/triazina-7-ona

Aqueceu-se à ebulição uma solução de 6,7g (0,017 mol) do composto clorometilato do passo d^) em 100 ml de cloreto de metileno, durante 2,5 horas, após se ter adicionado 2,5g (0,035 mol) de pirrolidina; arrefeceu-se em seguida, lavou-se 2 vezes com água, secou-se sobre sulfato de sódio e adicionou-se uma quantidade equimolar de ãcido clorídrico etanólico para formar o cloridrato.

Filtrou-se o produto bruto cristalino precipitado e recristalizou-se de uma mistura de isopropanol/acetato de etilo (1:1).

Rendimento: 87,5g (52% do teórico)

Ponto de fusão: 222-223°C

C₂₄H₃₃C1»₄O₂S (PM - 477,1)

Analise: Calculado C 60,42% H 6,97% Cl 7,43% N 11,74% S 6,72% Encontrado: C 60,46% H 7,25% Cl 7,24% N 11,49% S 6,45%

EXEMPLO 5: 3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-2,6-dimetil-7H-tiazolo £ 3,2-bJ7£ 1,2,4_/triazina-7-ona ) 2-bromo-l-(3.5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-propanona

A uma suspensão à ebulição de 139,Og (0,62 mol) de brometo de cobre (II) em 300 ml de acetato de etilo adicionou-se gota a gota, sob agitação uma solução de 82,0 (0,31 mol) de l-(3.5-dí-ter-butil-4-hidroxifenil)-propanona em 300 ml de clorofórmio. Aqueceu-se em seguida, durante 3 horas sob refluxo, até cessar a libertação de brometo

de hidrogénio. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, filtraram-se os sais de cobre, lavou-se o resiãuo de filtração duas vezes com acetato de etilo e concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida. A recristallzaçao do resíduo sólido efectuou-se em éter de petróleo (40-60°)

Rendimento: 87,5g (822 do teórico)

Ponto de Fusão: 130-132°C

C_1?H₂₅BrO₂ (PM - 341,3) a₂) 3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-2,ò-dimetil-7H-tiazolo 3,2-b_/ [_ 1,2,4_/triazina-7-ona

%

Agitaram-se 17,Ig (0,05 mol) de 2-bromo-1-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-propanona, preparada no passo a^), e 7,2g (0,05 mol) de 3-mercapto-6-metil-2H-l,2,4-triazina-5-ona em 6o ml de ácido acético, durante 4 horas a 90°C. A mistura reaccional, evaporada sob pressão reduzida, dissolveu-se em 300 al de clorofórmio d tratou-se com 100 ml de uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio.

Após separação de fases, secagem e concentração da fase de clorofórmio, seguiram-se duas recristalizaçôes de isopropanol.

Rendimento: 10,8g (562 do teórico) Ponto de Fusão - 256 - 257°C °21^Η27^Ν3°2^δ ³⁸⁵»⁵>

Análise: Calculado C 65,422 Π 7,062 N 10,902 S 8,322

Enciontrado C 65,112 H 7,152 N 10,752 S 8,162

EXEMPLO 12: Cloridrato de 3-(3-arainometil-5~ter-butil-4-hidroxifenil)-7H-tiazolo £ 3,2-b_/ £ l,2,4_/triazina-7-ona (de acordo com a variante de processo e))

Cj) Bromidrato de 3-(3-ter-butil-4-hidroxifenxl)-7H-tiazolo L 3,2-b_/ [_ triazina-7-ona

De acordo cora a variante de processo agitaram-se 47,5g (0,175 mol) de 2-bromo-l-(3-ter-butil-4-hidroxifenil)-etanona e 20,6g (0,16 mol) de 3-mercapto-2H-1,2,4-triazina-5-ona, em 190 ml de ácido acético, durante 1 hora a 90°C. Filtrou-se o precipitado formado por arrefecimento e recristalizou-se de uma mistura de acetato de etilo/ /etanol.

Rendimento: 44,Og (722 do teórico) Ponto de Fusão: 250-252°C (dec.) C₁₅H₁₆BrN₃0₂S (PM - 382,3)

Análise: Calculado C 47,132 H 4,222 Br 20,892 N 10,982 S 8,362 Encontrado C 47,222 H 4,252 Br 20,432 N 11,172 S 8,602 e^) Cloridrato de 3-(3-aminometil-5-ter-butil-4-hidroxifenil)-7H-tiazolo £ 3,2-b_/ 1,2,4_/triazina-7~ona ιακ&

Adicionou-se a pouco e pouco uma solução, arrefecida a 5°C, de 15,lg (0,05 mol) de 3-(3-ter-butil-4-hidroxifenil)-7H-tiazolo £ 3,2-b_/ / 1,2,4__/triazina~7~ona em 240 ml de ácido metanosulfónico a 7,lg (0,05 jhoI) de 2,2,2-trifluoro-N-(hidroximetil)-acetamida e continuou a agitar-se durante mais 3 horas à temperatura ambiente, Em seguida agitou-se a mistura reaccional em 1 1 de água gelada e filtrou-se a massa cristalina.

Para remover o grupo trifluorometilo aqueceu-se o composto aminometilato «-acilado obtido em 600 ml de ácido clorídrico 6N, durante 1 hora sob refluxo. Filtrou-se a quente a solução de ácido clorídrico, evaporou-se o filtrado à secura e recristalizou-se fraccionadamente o resíduo em acetato de etilo/metanol.

Rendimento: 8,4g (46% do teórico) Ponto de Fusão: 210-212°C

C₁₆H₁₉C1N₄O₂S (PM - 366,9)

Análise: Calculado: C 52.38% H 5.22% Cl 9,66% N 15,27% 8 8,74% Encontrado: C 51.55% H 5.40% Cl 9,17% N 14,98% 8 8,54%

EXEMPLO 13: Cloridrato de 3-(3-dimetilaminometil-5-ter-butil-4-hidroxifenil)-7H-tiazolo /3,2-6^//. 1,2,4__/-triazina-7-ona (de acordo com a variante de processo e)

Adicionaram-^se gota a gota 12,8 ml (0,28 mol) de uma solução aquosa a 402 cie dín etilamina a 6,4 ml (0,086 mol) de uma solução aquosa a 3/ de formaldeído, sob arrefecimento em gelo. Após adição de 4,2g (0,11 mol) de bromidrato de 3-(3-ter-butil-4-hidroxifenil)-7H~tiazolo-[_ 3,2-b_/ £ 1,2,4_/ triazina-7-ona, preparada no exemplo 12, passo e^) e 70 ml de etanol, aqueceu-se durante 19 horas ã ebulição. Após o arrefecimento adicionou-se gta a gota hidróxido de sódio 2N até se separar a base de ílannich. Filtrou-se esta, adicionou-se uma quantidade equimolar de acido clorídrico etanólico para a formação do cloridrato e finalmente recristalizou-se em água.

Rendimento: 3,0g (692 do teórico) Ponto de Fusão: 260-261°C ^C18^H23^C1N4°2^S <^PM * ³⁹⁴»⁹>

Análise; Calculado: G 54,752 H 5,872 Cl 8,982 N 14,192 S 8,122 Encontrado: C 54,582 H 5,892 Cl 9,222 N 13,902 S 8,112

TABELA 1: Compostos de acordo com a fórmula I (vide reivindicação 1).

EXEM PLO	R¹	R²	R³	PONTO DE FUSÃO oC
1	(H₃C)₃C-	H	11	257 (decomposição)
2	h₃c	H	H	225-226 (dec.)
3	(H₃C)₃C-	H	-CH₂-OH	215-217 222-
4	(H₃C)₃C-	H	-CH₂-nJ	-223 (como cloridrato)
5	(H₃C)₃C	-CH₃	-ch₃	256-257
6	(h₃O₃c-	H	-ch₃	219-220
7	(H₃C)₃C-	-CH₃	H	249-251
8	(H₃C)₃C	H	-ch₂-ch₃	240-242
9	(H₃C)₃C-	H	-Ch₂-CH₂-CH₃	216-217
10	(H₃C)₃C-	H	-CH(CH₃)₂	237-238
11	h₃c	H	-ch₃	232-233
12	h/-ch₂-	H	H	210-212 (como cloridrato)
13	(H₃C)₃N-Ctí₂-	H	H	260-261 (como cloridrato)
14	<^h5^c2>2^N-^ch:		H	234-236 (como cloridrato)

Lnsaío farmacológico e resultados ensaio dos compostos de fórmula I de acordo com a invenção em relação ao efeito antiflogístico, influencia sobre processos imunopatologicos, potência desacti vante de radicais oxigénio, actividade ulcerogénica e toxicidade aguda efectuou-se com os modelos animais a seguir descri tos, tendo-se utilizado também nos testes, como substância de comparação o antiflogístico Naproxen (ácido 2-(6-metoxi~ -2-naftl)-propiónico) preparado padrão de primeira linha na reumoterapia.

1. Artrite adjuvante

Os testes efectuaram-se de acordo com o método de Pearson (Arthrit Rheum. 2 (1959) pág. 44). Como animais de laboratório utilizaram-se ratos machos de uma estirpe Wistar-Lewis com um peso corporal entre 130 e 200g. Os compostos a testar aplicaram-se em doses de 50 mg por Kg de peso corporal, uma vez por dia do I^a ao 5^a dia de teste, por via oral (p.o.). Os animais de um grupo de controle receberam apenas o veículo. Cada grupo de teste bem como o grupo de controle continha 8 animais. Como critério de efeito utilizou-se a diminuição percentual do aumento de volume da pata em relação ao do grupo de controle nao tratado.

2. Ulcerogenidade gástrica aguda teste efectuou-se em grupos de 10 ratos Sprague-Dawley machos com a mucosa do estômago sensibilizada pelo stress da fome. 0 peso corporal dos animais situava-se entre 200 e 300 g. 48 horas antes da aplicação do pre_ parado a testar ate ã morte dos animais retirou-se-lhes a alimentação continuando a permitir-lhes livre acesso à água para beber. Mataram-se os ratos 24 horas após a administração oral da substância, retiraram-se-lhes os estômagos, lavaram-ee em água corrente e verificaram-se as lesões da mucosa

estomacal. Consideravam-se como úlceras todas as lesões visíveis macroscopicamente.

Calculou-se o número de animais com úlcera por dose e determinaram-se a partir daí os valores de UD_5o. luto é, as doses co» as quais se verificara» l.»e. e. 502 dos animais, de acordo com o método de Litehfiel e Wilcoxon (J. Pharmacol. exp. Ther. 96 (1949), pág 99).

3. Toxicidade aguda

U calculo dos valores tuou-se de acordo com o método padrao a partir ef ecde mortalidade verificada no decorrer de 7 dias em ratos NMRI (Naval Medicai

Research Institut) (6 animais por dose), após administração intraperitoneal (i.p.) única.

Os resultados destes testes, que provam claramente a superioridade dos compostos de fórmula 1 de acordo com a invenção em relação ao preparado padrao Naproxen, apresentam-se na Tabela 2 que se segue.

TABELA 2t Efeito antiflogístico, ulcerigenidade e toxicidade aguda

Composto do exemplo	Artrite adjuvante (2 inibição c/5(hng/ /Kg p.o.)	Ulcerogenidade aguda UD₅₀(»g/tg)	Tox icidade agut.a LD₅₀(mg/Kg)
1	67	>400 *)	>1200
2	41	>400 *)	>1200
3	41	>200	>1200
6	50	>200 ♦)	>1200
9	45	> 200 *)	>1200
Naproxen	55	23	500

♦) dose mais elevada administrada em cada caso.

A partir da curva <la efeito de d use no modelo da artrite adjuvante obteve-se, por exemplo para o composto do exemplo 1, um valor de ΕΒ^θ de 10,9 mg/Kg, que é claramente melhor do que o valor comparativo correspondente de 17,5 mg/Kg obtido para o preparado padrão Naproxen. Em relação â ulcerogenidade aguda obtém-se pelo quociente de UD^ por uma gama terapêutica de >36,7 para o composto do exemplo 1, que é apenas de 1,3 para o preparado de comparação Naproxen, que mostra de forma impressionante a extraordinária assimibilidade gástrica dos compostos de acordo com a invenção. Uma outra superioruidade também evidente em relação ao composto de comparação verifica-se quando, no cálculo da gama terapêutica, se calculam os valores de LJ5U θ o quociente υυ^θ/Εϋ^θ, que é superior a 110 para o composto de exemplo 1 e de 28,6 para o Naproxen.

Os compostos de acordo com a invenção mostraram-se superiores ao preparado padrão Naproxen em vários outros ensaios especiais.

4. Inibição de processos imunopatolÓgicos £ hoje geralmente reconhecido que o decurso progressivo das doenças reumáticas inflamatórias é causado principalmente pelo desgaste do sistema imunológico e que uma terapia causal apenas pode ter sucesso com medicamentos que permitam interromper estes processos imunopatológicos.

a) Artrite adjuvante

No modelo de ratos descrito no ponto 1, para a artrite induzida pelo adjuvante de Freund, verifica-se habitualmente uma redução drástica de imunoactividade dos linfócitos em relação a certos agentes mitogénicos, como Concavalina-A, fitohemaglutina-A e sulfato de dextram. Inves35 -

tigou-se por isso o efeito estimulante sotre esta resposta imunológica fortemente suprimida. Neste caso, por exemplo o composto do exemplo 1, provocou uma normalização prolongada da reactividade imunológica, após administração oral de 3,15 e 6,3 mg/Kg, enquanto que o Naproxen se revelou ineficaz em doses até 25 mg/Kg«

b) Artrite induzida por cologénio do tipo II

Neste teste, provocou-se a artrite em ratos Wistar machos, com colagênio do tipo II que, de acordo com os métodos padrão de Miller e xhodes (Meth. Enzymol. 82 (1982) pág. 33), se obteve a partir do septo nasal da vitela e que se injectou nos animais em misturas com adjuvante de Freund incompleto, por via intradermal. liste procejs so de imunização repetiu-se 7 dias mais tarde. 20 dias após a primeira imunização dividiram-se os ratos doentes em grupos de 7 animais cada, que receberam nos 20 dias seguintes da fase de tratamento, uma vez por dia a substância a testar ou apenas o veículo (grupo de controle), por via oral. No 41^adia do teste, isto é, um dia apÓs a ultima administração de substância, determinou-se o aumento de volume de ambas as pa. tas traseiras. Neste caso, o composto do exemplo 1 mostrou provocar uma inibição do aumento de volume da pata, dependente da dose, significativa a partir de doses de 25 mg/Kg p.o., enquanto que com o Naproxen, em dosagem idêntica, apenas se verificou um efeito inibitório não significativo.

Neste modelo de artrite induzida por colagênio, o estado imunológico dos linfócitos está sensivelmente destruído. Por isso, retiraram-se linfócitos do baço dos animais em teste e investigou-se a sua imunoactividade em relaçao a agentes mitogenicos, tendo-se obtido mais uma vez, para os compostos de acordo com a invenção, efeitos curativos dependentes da dose, sobre o sistema imunológico enfraquecido, enquanto que o Naproxen não revelou qualquer eficácia. Assim, por exemplo com uma dose de 12 mg/Kfe p.o. do

composto do exemplo 1,obteve-se uma nor ;»ilicaçao total d.i função imunológica tanto dos linfocitos 1' como los liníócitos d.

c) Reacção de Arthus activa loco animais pira c> teste utilizaram-se ratos Sprague-Dawley machos e fêmeas com um peso corporal entre 30 e lOOg, aos quais se inj. x-.ni 0,5 ml de uma emulsão da vacina de Pertussis e de íLtuf.ina de ovo em óleo de parafina, por via subcutânea na ase da cauda. Após duas semanas dividiram-se os ratos em g: .o:.-. de 3 animais cada. 24 horas e 1 hora antes de se provocar a reacção de Arthus por injecção de 0,1 ml de uma soLiçio de albumina de ovo a 0,42 na pata posterior direita, e.tectuou-se a adminis. tração oral da substância a testar ou a, in.is do veículo (cJn. trole positivo). Na pata esquerda injectoj-se uma solução de cloreto de sódio. Tratou-se também u ^fupa àe animais não sensibilizados (controle negativo) com albumina de ovo, para se poder distinguir reacções não específicas em relação ã proteína.

Como parâmetro de medida do efeito do preparado utilizou-se a inibição do aumento de volume da pata em relação ao do grupo de controle sensibilizado mas não tratado (controle positivo), 4 horas após a administração de albumina de ovo, quando o inchaço atinge o seu valor máximo.

Os antiflogísticos nao esteróides, incluindo o Naproxen, são inactivos nestes testes. Pelo contrário, conseguiu-se uma inibição impressionante da reacção de Arthus após administração oral, por exemplo do composto de acordo com o exemplo 1, com um valor de entre 10 e mg/Kg.

5· Efeito antioxidante oegundo opinioes avalizadas actuais, no decurso progressivo multlfactorial da artrite reu íatói-.la e de outras doenças inflamatórias, encontrari-se envolvidos radicais oxigénio agressivos, que se for.nam era excesso duraii te o processo inflamatório crónico a que, coao mediadores inflamatórios de alta toxicidade, mantêm perpetuamente a dejs truiçao dos tecidos dos ligamentos atra. ie uma lipidoperoxidação irreversível das membranas celulares. Em consequêii cia disto devem conseguir-se farmacos activos antioxidantos com a capacidade de desactivar estes ra . _Lcai.·'» oxigénio extremamente citotoxicos, permitindo um c· ;„i.! adequado aos processos inflamatórios crónicos, dia «io 1 ; animal adequado para uma destruição de tecidos deste ti. , provocada por radicais oxigénio, é o representado pela iitíEuaçdo induzida no rato com Adriamicina (Doxorubicina).

a) Inflamaçao induzida por Adriamicina

Os testes efectoaram-se, de acordo com o método de D.M. Siegel et al. (Inflamination 4. (1980), pág. 233), era ratos Sprague-Oawley machos com um peso corporal entre 200 e 230 g, em grupos de 7 animais cada, que receberam 0,lmg de adriamicina, dissolvida era 0,1 ml de uma solução de cloreto de sódio a 0,9%, por injecção subcutânea na pata posterior esquerda. 72 horas depois determinou-se o aumento de volume da pata como medida do grau de inflamaçao por medição pletismográfica.

A administração oral dos preparados a testar, numa suspensão aquosa de carboximetilcelulose a 1%, efectuou-se uma vez por dia durante 4 dias consecutivos a contar do dia da injecção de adriamicina.

Como se verifica na Tabela 3, por exemplo o composto do exemplo 1, mostrou também neste teste

u.n forte efeito protector, dependente Ji dose, contra a destruição de tecidos provocada pela adriamicina. Js antiflogis. ticos, tanto esteróides como nao esteroídes, incluindo o Naproxen, revelaram-se ineficazes nestes testes,

TABELA 3?Inibição da inflamação induzida por Adriamicina

COLECTIVO DOS ANIMAIS	DOSE EM MG/KG p.o.	AUMENTO D0 VOLUME DA	-xjito protector em Á ·
PATA EM

CONTROLE	-	430		-
COMPOSTO DO EXEMPLO 1	20 40 80	220 200 10		49* 54* 98*

♦ significativo ρ<0,05

b) Inibição in vítro da lipidoperoxidação

Uma outra prova convincente do notável efeito protector dos compostos de acorod com a invenção contra os radicais oxigénio agressivos foi dada pelo teste do ácido tiobarbitúrico de acordo com A. uttolenghi (Arcn. Biochem, Biohhys. 79 (1959) pág. 355-363). Com este método in vitro pode determinar-se, por meio de malonaldeído formado na degradação oxidativa de ácidos gordos poliinsaturados ligados à membrana, a influência de preparados de acção antioxidante sobre a lipidoperoxidação tanto microsomal comomitocondrial.

Também neste caso os compostos de fórmula I manifestaram um forte efeito inibitório. Para o composto do exemplo 1 obtiveram-se por exemplo, tanto com microsomas como com mitocõndrias do fígado do rato, valores de IC,._A de 6.10-7 ou 3.10“^ó mol/1.

ύ. Inibição úa J-lipuxixenase

C· efeito inibitório dos compostos de acordo com a invenção sobre a degradaçao co ácido araquidónico catalizada ^ela 5-lipoxigenase cotprovcu-se, couo habitualmente, em ensaios in vitro em granulócitos humanos de núcleos poliiaórficos. Para tal incubaram-se com ácido araquidónicu marcado com as células estimuladss por cãlcio-ionofhor A 23 187 (Calbiochem. Gmblí, Fr. s' lurt/ílain, RFA, Biochemical e Immunochemical Catalog 19<.t, .iÚg. 2b4) e determinou-se quantitativamente os produtos r ioactivos principais da degradaçao do ácido araquidonicc fúr^aôos por biotransf oriaação a 37°C, após 15 minutos, t úeieo 5-hittroxioicosatetraenóico (5-ilETi.) e o leucotrieno . ηϊ1·4) de forte acção proinflamatória, após separação por rro<útografia líquida de alta pressão (íiPLC), por meio de u.. rodio-monitor.

deste teste conseguiu-se uma inibição significativa da formação tanto do como do 5-iSTB e da consequente degradaçao do ácido ara^uidónico pela 5-lipoxigenase, por meio de pré—incubaçao de 15 minutos dos gra— nulócitos com o composto do exemplo 1 na gama de concentra— — S —*6 çoes entre 10~ e 10 mol/1·

Claims

- lá Processo para a oreparação de 3-fenll-7H-tiazolo 2. 3,2-b_/ / 1,2,4_7triazinas-7-ona substituí· das, de fórmula geral I (D na qual P significa um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, linear ou ramificado, um grupo hidroximetilo ou arainometilo de fórmula II (II) 2 * * R significa um átomo de hidrogénio ou u r grupo alquilo com 1 a 3 átomos de carbono e o κ significa u» átomo de hidrogénio, u® grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, linear ou ramificado, um grupo hidroximetilo ou aminometilo de fórmula II, em que 4 5- - R e R sao iguais ou diferentes e representam um atomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, linear ou ramificado, ou formam ambos em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados um anel saturado de 5 ou 7 membros com 4 a ó átomos de carbono ou com 4 ou 5 átomos de carbono e um novo heteroátomo na forma ueu, S ou NR° e 1<υ tem o significado de hidrogénio ou de um grupo alquilo(C^-C^) e dos sais de adição de acido fisiológicamente assimiláveis dos compostos com o elemento estrutural de fórmula II nas posiçoes de R e/ou R , caracterizado por a) se fazer reagir uma 3-mercapto-2H-l,2,4-triazina-5-ona de fórmula III (III) com uma 2-halo-l-fenilalcanona de fórmula IV (IV) para se obter um composto de formula I representado R o grupo alquilo (C.-C,) definido anteriormen. 2 3 . te possuindo R e R os significados mencionados anteriormeii te e sendo X um átomo de halogéneo, ou b) se fazer reagir em primeiro lugar um composto de fórmula III com um composto de fórmula IV (com os significados aí mencionados para os grupos RÃ, κ e X), em condiçoes básicas, para se obter uma 2H-1,2,4-triazina-5-ona S-alquilada de fórmula V e se transformar esta por desidratação num composto de fórmula I, em que R^ representa o grupo alquilo (Cj-C^) definido anteriormente e R e R possuem os significados mencionados na fórmula I, ou c) se fazer reagir em primeiro lugar uma 2-halo-l-fenilalcanona de fórmula IV (com os significados aí mencionados para 1 2 os grupos R , R e X) com uma tiosemicarbazida, para se obter a 2-amido-6H-l,3,4-tiadiazina correspondente, de fórmula VI (VI) e se proceder á transposição desta, em condições ácidas, obtendo-se um 3-amino-2-imino-2,3-dihidrotiazolo de fórmula VII (VII) que por fim se ciclocondensa com um ácido -Ύ-cetocarboxílico ou com os seus esteres alquílicos de fórmula VIII k3-c-c-o-r7 η n 0 0 (VIII) obtendo-se um composto de fórmula I, em que Rx representa o grupo alquilo (C^-C^) definido anteriormente, R tem os significados mencionados para a fórmula I, R3 significa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbo7 no, linear ou ramificado, ou um grupo hidroximetilo e R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 3 átomos de carbono, ou d) a partir de um composto de formula I, que contem na posiçao R e/ou R um grupo hidroximetilo, se substituir em primeiro lugar o grupo (ou grupos) hidroxilo por halogéneo ou se transformar esse grupo num éster activado de um ácido sulfónico ou fosfórico, e se fazer reagir em seguida com uma amina de fórmula IX (IX) para se obter um composto de fórmula I com o elemento de estrutura de fórmula II na posição de Rx e/ou R , possuindo Rz R*, R3 e conforme o caso ainda R1 ou R3 os significados mencionados anteriormente, e se isolar este composto aminometílico na forma livre ou se transformar em sais de adição de ácido fisiológicamente assimiláveis, com ácidos apropriados, ou e) para a preparação de um compostp de fórmula I com a característica etrutural da fórmula II ou com o grupo hidroximetilo na posição de R^, se partir de um composto de fórmula 1 * ·* I, em que R e hidrogénio, e se fazer reagir este com formaldeído para a introdução do grupo hidroximetilo, se fazer reagir com as aminas correspondentes de fórmula IX na presença de formaldeído para a introdução de grupos aminometilo N-substituídos de fórmula II, ou para a introdução do grupo aminometilo não substituído, se condensar em primeiro lugar com N-hidroximetilacetamidas de fórmula X, R8-C0-NH-CH2-0H (X) na qual R8 ê trifluorometilo, triclorometilo ou clorometilo, em condições ácidas, e se eliminar em seguida o grupo acilo R -GO- por via hidrolítica, possuindo R a R os significados acima mencionados, e se isolar os compostos aminometílicos assim obtidos na forma livre ou se transformarem nos seus sais de adição de ácido fisiológicamente assimiláveis, com ácido apropriados. - 2» Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se prepararem compostos de fórmula I, em que pelo menos se verifica uma das seguintes condições: r! é um grupo ter-butilo ou um grupo aminometilo de fórmula 2 3 - * II e R e R independentemente entre si, sao átomos de hidrogénio ou grupo metilo. - 3a - Processo de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracterizado por se prepararem compostos de fórmula I, em que R representa um grupo ter-butilo e simul2 3 tâneamente R e R , independentemente entre si, significam hidrogénio ou metilo. - 4» - Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por se preparar o composto de fórmula I com R^· ter-butilo e R3 « R3-hidrogénio (*3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-7H-tiazolo / 3,2-b_/ £ 1>2,4_7-triazina-7-ona. - 5« - Processo para a preparação de compostos de fórmula I e de sais de adição destes compostos, fisiológicamente. assimiláveis, caracterizado por possuírem o elemento estrutural de fórmula II na posição R* e/ou R , de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 4, para aplicação com medicamentos. - 6» - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo, pelo menos um composto de fórmula I como definido na reivindicação 1, e/ou pelo menos um sal de adição de ácido, fisiológicamente assimilável, de um desses compostos, com o elemento estrutural de fórmula II na posição 1 3 R e/ou R , e/ou pelo menos um dos compostos preoparados de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 4, com um veículo farmacêutico fisiológicamente assimilável e, conforme o caso, com outros aditivos ou excipientes, de forma a obter uma forma de administração adequada* - 7« - Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por a composição farmacêutica preparada de acordo com o processo ser indicada para a profilaxia e tra tamento de doenças para as quais se efectua uma aplicação terapêutica de antiinflamatóríos, imunomodeladores, agentes desactivantes de radicais oxigénio e/ou inibidores da diminui, ção do ácido araquidónico provocada pela 5-lipoxigenase, - 8a - Processo de acordo com a reivindicação 6, ou 7, caracterizado por a composição farmacêutica preparada de acordo com o processo ser adequada para a profilaxia e tratamento de doenças inflamatórias, em particular de doenças reumáticas inflamatórias. - 9* Processo para a preparaçao de 2H-1,2,4-triazinas-5-ona S-alquiladas de fórmula V na qual 1 2 3 R significa aleuilo-(Cj-C^) e R e R possuem os mesmos significados que na reivincluação 1 (fórmula I), caracterizado por se fazer reagir 3-mercapto-2H~l,2,4-triazinas-5-ona de fórmula III em que R possui o mesmo significado que na formula I, com 2-halo-1-fenilalcanona de fórmula IV na qual 1 2 R significa alquil-(C1-C,) e R possui o mesmo significado X que na fórmula I e X « halcgénio, em condições básicas. 10a Processo para a preparaçao de 2-amino-óH-l, 3,4-tiadiazinas de fórmula VI (VI) na qual r! significa alquílo-(Cj-C^) e R^ possui o mesmo significado que na fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se fazer reagir 2-halo-l-fenilalcanos de fórmula IV (IV) na qual

1

2 R representa alquilo-(Cj-C^) e R possui o mesmio significado que na fórmula I e X ** halogénio, com tiosemicarbazida

A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi apresentado na República Federal Alemã, em 30 de Janeiro de 1987, sob ο η®. P 37 02 758.1.